DK155943B

DK155943B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af 7-d-(-)-alfa-amino-alfa-(p-acetoxyphenyl)acetamidocephalosporansyrer

Info

Publication number: DK155943B
Application number: DK236275AA
Authority: DK
Inventors: Daniel Bouzard; Abraham Weber
Original assignee: Bristol Myers Co
Priority date: 1974-06-05
Filing date: 1975-05-28
Publication date: 1989-06-05
Also published as: LU72618A1; HU174102B; HU172448B; YU143775A; DE2524320A1; HU173040B; IN142267B; IE43052L; IL47360A0; YU45103B; GB1476981A; SE7803860L; DK155943C; JPS6219160B2; ZA752504B; DK236275A; ZA753387B; FI60867C; FI751595A; JPS6260079B2

Description

i

DK 155943 B

Den foreliggende opfindelse angår en anal ogi fremgangsmåde til fremstilling af to hidtil ukendte 7-D-(-)-a-amino-a-(p-acetoxyphenyl)-acetamidocephalosporansyrer, som er nyttige antibakteriel le forbindelser.

5 De hidtil ukendte cephalosporinderivater, der fremstilles ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse, er D-(-)-forbindel ser med formlen

ch3JLo—^ —-S SN

10 NH2 £-NVs^J-CH2Y

COOH

15 hvori Y betegner hydrogen eller l,2,3-triazol-5-ylthio.

Opfindelsen angår endvidere fremstillingen af farmaceutisk anvendelige salte deraf, idet forbindelserne i hovedsagen er fri for den L-(+)-isomere. .

De ovenfor omtalte farmaceutisk acceptable salte omfatter ikke-20 toxiske carboxyl syresal te, f.eks. ikke-toxiske metalsalte, såsom natrium-, kalium, calcium- og aluminiumsalte, ammoniumsalte og salte af ikke-toxiske aminer, f.eks. tri al kyl aminer, procain, dibenzylamin, N-benzyl-jS-phenethylami η, 1-ephenami n, N,N'-di benzyl ethylendi ami η, N-alkylpiperidin og andre aminer, som anvendes til saltdannelse med 25 penicilliner og cephalosporiner. Blandt de farmaceutisk acceptable salte er også de ikke-toxiske syreadditionssalte (aminsalte), f.eks. salte med mineralsyrer, såsom saltsyre, brombrintesyre, iodbrintesyre, phosphor-syre, svovlsyre og salte med organiske syrer, såsom maleinsyre, eddikesyre, citronsyre, oxalsyre, ravsyre, benzoesyre, vinsyre, fumarsyre, 30 mandelsyre, ascorbinsyre og æblesyre.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til fremstilling af forbindelserne med formlen I er ejendommelig ved, at man på i og for sig kendt måde omsætter en forbindelse med formlen 35 _/®\ h2n ii J-'

COOH

2

DK 155943 B

hvor Y har den ovenfor angivne betydning, eller en silylester eller et salt deraf med et D-(-)-acyleringsmiddel svarende til en syre med formlen 5 ii J/~~111 CH3 -C-0-( y— (jlH-GOOH /

'-' NHB

10 hvor B er en konventionel aminobeskyttende gryppe, og derefter fjerner den aminobeskyttende gruppe B til fremstilling af forbindelsen med formlen I eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf, og endelig på i og for sig kendt måde omdanner produktet, der forefindes som den fri syre eller en silylester eller salt deraf til en tilsvarende fri syre eller 15 et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

Ved fremstilling af de hidtil ukendte cephalosporinforbindelser ifølge den foreliggende opfindelse acyleres en passende 7-amino-cepha-losporansyre med formlen II eller et salt deraf på i og for sig kendt måde med et passende D-(-)-acyleringsmiddel med formlen III.

20 Med hensyn til det 3-thiolerede 7-aminocephalosporansyremellempro dukt med formlen II, hvori Y er l,2,3-triazol-5-ylthio, kan dette mellemprodukt fremstilles ved substitution af 3-acetoxygruppen i en 7-aminøcephalosporansyre eller salt deraf med en passende heterocyklisk thiol eller et salt deraf. Substitutionen af en estergruppe med en 25 thiolgruppe er en kendt reaktion og udføres fortrinsvis i vandig opløsning under opvarmning.

Mellemproduktet II kan om ønsket omdannes til en silylester eller et syreadditionssalt deraf før acyleringsreaktionen. Silylestrene kan fremstilles ved fremgangsmåder, der er beskrevet i litteraturen, f.eks.

30 U.S.A. patentskrift nr. 3.249.622. Silylestergruppen kan fjernes efter acyleringsreaktionen ved hydrolyse.

Før acyleringsreaktionen kan aminogruppen i acyleringsmidlet III beskyttes med en konventionel aminobeskyttende gruppe B, der på i ag for sig kendt måde nemt kan fjernes, når reaktionen er løbet til ende. Ek-35 sempler på egnede aminobeskyttende eller -blokerende grupper er t-but-oxycarbonyl, carbobenzyloxy, 2-hydroxy-l-naphthcarbonyl, trichlorethoxy-carbonyl, 2-ethoxycarbonyl-l-methylvinyl og 2-methoxycarbonyl-1-methyl-vinyl. En særligt værdifuld blokerende gruppe er en proton, som i for- 3

DK 155943 B

bindeisen med formlen 5 CH3-U-0 (f 'S—CH - COC1 \-/ NH2 * HC1

Protonen kan efter acyleringsreaktionen let fjernes ved neutralisering. Det er klart, at andre funktionelt ækvivalente aminoblokerende 10 grupper kan benyttes, og sådanne grupper anses for at falde indenfor opfindelsens rammer.

Acylering af en 7-aminogruppe i en cephalosporin er en velkendt reaktion og et hvilket som helst funktionelt derivat afledt af formlen III eller III(a), der normalt anvendes som acyleringsmidler til primære 15 aminogrupper, kan anvendes. Eksempler på egnede acyleringsmidler afledt af den fri syre er de tilsvarende syreandydrider, blandede anhydrider; såsom alkoxymyresyreanhydrider, syrehal ider, syreazider, aktive estere og aktive thioestere. Den fri syre kan kobles med forbindelse II efter, at kan først har reageret den frie syre med N,N'-dimethylchlorfominium-20 chlorid eller under anvendelse af enzymer eller et N,Ν'-carbonyldi imida-zol- eller N,Ν'-carbonylditriazol- eller et carbodiimid-reagens, såsom N,N-diisopropylcarbodiimid, Ν,Ν'-dicyclohexylcarbodiimid eller N-cyclo-hexylcarbodiimid eller N-cyclohexyl-N'-(2-morpholinoethyl)carbodiimid eller under anvendelse af et alkylylaminreagens eller et isoxasolium-25 saltreagens. En anden slags derivat af den fri syre er at azolid, dvs. et amid af den tilsvarende syre, hvori amid-nitrogenet indgår i en kva-siaromati sk fem-leddet ring med mindst to nitrogenatomer, dvs. imidazol, pyrazol, triazolerne, benzimidazol, benzotriazol og substitutionsderivater deraf. Et reaktivt derivat af phenylglycin med formlen III er N-car-30 boxyanhydridet (Leuch's anhydrid). I denne forbindelse tjener gruppen, som aktiverer carboxyl gruppen, også til at beskytte aminogruppen. Et særligt foretrukket acyleringsmiddet er syrechloridhydrochloridet med formlen ^ O , .....\ h /T\_ ch3 - c - o-// y— ch - coci ' NH2 · HCl 4

DK 155943 B

som også har en dobbeltfunktion, nemlig carboxyl aktivering og aminobe-skyttelse. Oet nævnes ovenfor, at man kan benytte enzymer til at koble den fri syre, hvor aminogruppen er blokeret med forbindelse II. Benyttelsen af en ester regnes at ligge indenfor rækkevidden af disse frem-5 gangsmåder. F.eks. kan methylesteren af den fri syre benyttes i forbindelse med enzymer, der tilvejebringes af forskellige mikroorganismer, f.eks. dem, der er beskrevet at T. Takahashi et al., J. Amer. Chem. Soc. 93(11), 4035-4037 (1972) og af T. Nara et al., J. Antibiotics (Japan), 24(5), 321-323 (1971) i vesttysk patentskrift nr. 2.216.113.

10 De nøjagtige reaktionsbetingelser, dvs. temperatur, opløsningsmid del, reaktionstid, osv., der vælges for udførelse af koblingsreaktionen, bestemmes af arten af acyleringsmetoden og kendes af kemikere. Almindeligvis er det nyttigt at tilsætte en organisk tertiær amin, f.eks. tri-ethylamin, Ν,Ν-dimethylanilin, ethylpiperidin, 2,6-lutidin eller quino-15 lin, som skal virke som protonacceptor eller saltdannende middel.

Forbindelserne, fremstillet ifølge opfindelsen, kan isoleres på en hvilken som helst af de måder, der almindeligvis benyttes for isolering af lignende cephalosporiner. Således kan produktet fås som det neutrale molekyle, og hvor det drejer sig om forbindelser med formlen I, drejer 20 det sig sandsynligvis om zwitterionen, eller det kan isoleres som et salt. Fremstilling af den ønskede farmaceutisk acceptable carboxylsyre eller syreadditionssaltet udføres ved kendte metoder, f.eks. reaktion af syren med en passende base eller syre.

Efter acyleringsreaktionen kan det opnåede reaktionsprodukt omdan-25 nes (før eller efter fjernelse af den aminobeskyttende gruppe) ved metoder, der i sig selv er kendte til et andet ønsket produkt med formlen I.

F.eks. kan produktet med formlen I eller 1(a) i form af en silylester eller et salt deraf omdannes til den frie syre eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf ved fjernelse af silylestergruppen, f.eks. ved hy-30 drolyse.

De farmaceutisk aktive forbindelser, fremstillet ifølge den foreliggende opfindelse, er kraftigt virkende antibakterielle forbindelser, som er nyttige ved behandlingen af infektionssygdomme hos fjerkræ og dyr, inklusiv mennesket, forårsaget af mange Gram-positive og Gram-nega-35 ti ve bakterier. De aktive forbindelser er også værdifulde som midler til behandling af mastitis hos kvæg. De foretrukne forbindelser har også u-ventet vist sig at absorberes effektivt ved oral indgivelse.

De hidtil ukendte medikamenter, som tilvejebringes ved den fore- 5

DK 155943 B

liggende opfindelse, kan indgå i farmaceutiske præparater, som ud over den aktive forbindelse indeholder et farmaceutisk acceptabelt bærer- eller fortyndingsmiddel. Forbindelserne kan indgives både oralt og paren-teralt. De farmaceutiske præparater kan foreligge i fast form, såsom 5 kapsler, tabletter eller emulsioner. Ved behandlingen af bakterielle infektioner hos mennesket kan forbindelserne ifølge opfindelsen indgives parenteralt i en mængde på fra ca. 5 til ca. 200 mg/kg/dag i delte doser, f.eks. 3-4 gange pr. dag. De indgives i doser på f.eks. 125, 250 eller 500 mg aktiv forbindelse sammen med egnede fysiologisk acceptable 10 bæremidler eller excipienser.

I det følgende beskrives fremstillingen af udgangsmaterialer, som benyttes ved fremgangsmåden ifølge opfindelser.

Udgangsmaterialer 15 Syntese af kalium 1.2.3-triazol-5-thio1at i? n —\ ØC-N=*.C=S + CH2N2 -> \_NHCO -°H> 163,19 42,04 205,24

20 SH <5K

Γ\

N N 7 NN

\n/^

Η H

101,13 139,23 25

Syntesen af thiolen gennemførtes ved en fremgangsmåde, der i det store og hele er identisk med den, der er beskrevet i litteraturen [J. Goerdler og G. Gnad, Chem. Ber. 99, 1618 (1966)].

30 5-benzamido-1.2.3-thiadiazol

Til en opløsning af benzoylisothiocyanat (50,6 g, 310 mmol) i kommercielt tilgængelig vandfri ether (400 ml), som holdtes ved 0°C under nitrogen, sattes dråbevis under kraftig omrøring en 0,685 normal opløsning af diazomethan i ether (453 ml, 310 mmol). Efter at tilsætningen 35 var færdig, omrørtes blandingen i 1 time ved 0°C, og bundfaldet filtreredes fra og tørredes i vakuum. Smeltepunktet af det således opnåede råprodukt (23,3 g) lå i området 232 - 257°C. Goerdler opgav smeltepunkt 267°C for det rene produkt. En lille yderligere portion (2,1 g) opnåedes

DK 155943B

6 ved inddampning af moderluden i vakuum. Det totale udbytte var således 40%.

1.2.3-triazol-5-thiol 5 En opløsning af ovennævnte benzamido-forbindelse (8,2 g, 40 mmol) i 2N natriumhydroxid (80 ml, 160 mmol) opvarmedes til tilbagesvaling under nitrogen i 24 timer. Opløsningen afkøledes til 0°C i isbad, og koncentreret saltsyre (26 ml) tilsattes, mens en jævn strøm af nitrogen ledtes gennem opløsningen. Benzoesyre, som udfældedes, filtreredes fra.

10 Yderligere portion benzoesyre, som udskiltes, fjernedes ved filtrering. Filtratet ekstraheredes straks med ethyl acetat. Ekstrakten vaskedes med mættet saltopløsning, tørredes over magnesiumsulfat og inddampedes så i vakuum. Den viskose olie, som blev tilbage, destilleredes straks i vakuum (70-75°C/0,001 mm Hg), hvorved man fik en olie (2,84 g, 70%), som 15 størknede spontant (smeltepunkt 52-59°C; Goerdler opgav smeltepunkt 60°C).

Kalium 1.2.3-triazol-5-thiolat

Til en opløsning af ovennævnte thiol (2,84 g, 28,1 mmol) i absolut 20 ethanol (28 ml) sattes 1,93 N alkoholisk kaliumhydroxidopløsning (14,5 ml). Opløsningen fortyndedes så med vandfri ether, til udkrystalliseringen af saltet var tilendebragt. Bundfaldet filtreredes fra, vaskedes med ether og tørredes i vakuum. Det således opnåede salt (3,65 g, 93%) smeltede ved 225°C under dekomponering.

25 Det er vigtigt at bemærke, at omdannelsen af benzamidothiadiazol til triazolthiolen vides at foregå over 5-amino-l,2,3-thiadiazol [G.

Goerdler og G. Gnad, Chem. Ber. 99, 1618 (1966)].

!,Ov f o.

NHCOØ NH2 S- ^ - Γ\ r\ 93» VsA --> 87%

H «®2 H

7

DK 155943 B

5-amino-l,2,3-thiadiazol kan fremstilles ved en anden fremgangsmåde, hvor der ikke benyttes diazomethan [D.L. Pain og R. Slack, J. Chem. Soc.

5166 (1965)].

‘ ιαΛ i J N-CH2CHO + H2NNHC02Et -j

W

" fÅ ( 1 N-CH2CH-N-NHC02Et 93%

O

15

O

socl2 , ~ Dy O — 89% jT\ 25 S NH2 77%

Syntese af 7-amino-3-(l,2,3-triazol-5-vlthiomethvl)-3-ceDhem-4-carboxvl-30 svre

Reaktionerne udførtes under nitrogen i en reaktionsbeholder under udelukkelse af alt lys. Vand og phosphatpuffer gennembobledes grundigt med nitrogen før brugen for at fjerne oxygen.

5-amino-l,2,3-thiadiazol (10,3 g, 0,102 mol) sattes til en opløs-35 ning af 8,16 g natriumhydroxid i 100 ml vand. Blandingen opvarmedes hurtigt til tilbagesvaling og holdtes der i 10 minutter for at gennemføre omlejringen af 5-amino-l,2,3-thiadiazol til 5-mercapto-l,2,3-triazol.

Til reaktionsblandingen indeholdende 5-mercapto-l,2,3-triazol sattes ef- 8

DK 155943 B

ter afkøling i isbad 1100 ml isafkølet 0,1M phosphatpuffer med pH-værdi-en 6,4. Opløsningen, som havde en pH-værdi på 10,5, indstilledes til pH-værdien 8,5 med 42% phosphorsyre. 7-aminocephalosporansyre (21,8 g, 0,08 mol) sattes til, og blandingen opvarmedes til 50°C i 4 timer. Den klare 5 opløsning afkøledes i isbad og indstilledes til pH-værdien 4,5 med koncentreret HC1. Det udfældede produkt filtreredes fra, vaskedes med vand og lufttørredes; 16,2 g.

Råproduktet (15,2 g) bragtes i opløsning i 600 ml methanol og 40 ml koncentreret saltsyre. Efter behandling med aktivt kul fortyndedes 10 opløsningen med 1,5 liter isvand og ekstraheredes en gang med ethylace-tat. Den vandige fase inddampedes ved reduceret tryk for at fjerne methanol. Det kolde vandige koncentrat indstilledes langsomt til pH-værdi-en 4,0 med 20% natriumhydroxid, hvilket bevirkede udkrystallisation af produktet. Produktet filtreredes fra, vaskedes med vand og methanol og 15 tørredes i vakuum over phosphorpentoxid; 11,4 g. IR- og NMR-spektrene var i fuld overensstemmelse med det ønskede produkt.

Analyse:

Beregnet for C, 38,42; H, 3,55; N, 22,40.

Fundet: C, 38,27, H, 3,76, N, 21,02, HgO, 1,70 20 38,26; 3,40; 21,00;

Rensning af 7-amino-3-n.2.3-tnazol-5-vlthiomethvl)-3-cephem-4-carbo-xvlsvre fill

Det rå 7-amino-3-(l,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbo-25 xylsyre (16,1 g), som indeholdt ca. 20 molprocent 7-aminocephalosporansyre som urenhed, bragtes i opløsning med 600 ml methanol og 40 ml koncentreret saltsyre. Efter behandling med aktivt kul fortyndedes opløsningen med 1,5 liter isvand og ekstraheredes en gang med ethylacetat.

Den vandige fase koncentreredes ved reduceret tryk for at fjerne metha-30 nol. Det kolde vandige koncentrat indstilledes så langsomt til pH-værdi-en 4,0 med 20% natriumhydroxid, hvilket fik produktet til at udkrystallisere. Produktet filtreredes fra, vaskedes med vand og methanol og tørredes i vakuum over phosphorpentoxid; 11,4 g. NMR-spektret viste, at dette produkt indeholdt ca. 7 molprocent 7-aminocephalosporansyre som 35 urenhed.

Ovennævnte oprensningsprocedure blev gentaget på 11,4 g af produktet under anvendelse af 425 ml methanol, 28 ml koncentreret saltsyre og 1 liter isvand, hvilket gav 8,0 g produkt. NMR-spektret var i fuld over- 9

DK 155943 B

ensstemmelse med det ønskede produkt og viste ikke tegn på 7-aminocepha-losporansyre som urenhed.

Analvse:

Beregnet for CjQHjgNgOjSg.* C, 38,42; H, 3,55; N, 22,40.

5 Fundet: C, 39,06, H, 3,56, N, 22,05, HgO, 1,78 38,53; 3,51; 21,60; 7-amino-3-(1.2.3-triazol-5-vithiomethvl1-3-ceohem-4-carboxvlsvre fil) 10 g (0,075 mol) 5-mercapto-1,2,3-triazol kaliumsalt sattes under 10 omrøring til en opslæmning af 19 g (0,07 mol) renset 7-aminocephalospo-ransyre og 5,9 g (0,07 mol) NaHC03 i 350 ml 0,1 M phosphatpuffer (pH-værdi 6,4), og blandingen omrørtes ved 55°C i 3½ time under nitrogen.

Den fremkomne opløsning afkøledes til 22°C og indstilledes til pH-værdi -en 5,5 med 40% H^PO^. Det fremkomne bundfald filtreredes fra, vaskedes 15 med koldt vand, (50 ml) og lufttørredes. Udbyttet af 7-amino-3-(l,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre var 8 g, dekomponer!ngs-punkt 230°C. IR-spektret viste nogen dekomponering af /Mactamringen, men produktet benyttedes direkte i næste trin.

Analyse: 20 Beregnet for CjqHjjNjjO^: C, 38,39; H, 3,54.

Fundet: C, 38,36; H, 3,78.

7-ami no-3-11.2.3-triazol-5-vi thi omethvl)-3-cephem-4-carboxv1svre Π Π 272 g (1,0 mol) 7-amino-cephalosporansyre opslæmmedes i 3000 ml 25 0,1M phosphatpuffer, pH-værdi 6,4, og 150 ml methyl isobutylketon efterfulgt af 84 g (1,0 mol) natriumbicarbonat (bemærk: Natriumbicarbonatet tilsattes portionsvis). Derefter tilsattes 143 g (1,0 mol) 5-mercapto-l(H)-l,2,3-triazolkaliumsalt, og blandingen omrørtes ved 55°C ± 1°C under nitrogen i 4 timer. Efter 1 time justeredes pH-værdien til 6,4 ved 30 tilsætning af lidt 40% HgPO^. Ved slutningen af de 4 timer tilsattes 50 g "Darco KB" aktivt kul, og efter omrøring i 15 minutter ved 55°C filtreredes opslæmningen varmt gennem et lag diatomejord. ("Celite"). Laget vaskedes med 3 x 100 ml vand. pH-værdien af de kombinerede filtrater indstilledes i varm tilstand til 4,5 ved langsom tilsætning af 6N HC1.

35 Efter afkøling i 30 minutter til 0°C filtreredes råproduktet fra, vaskedes med 2 x 200 ml koldt vand efterfulgt af 2 x 1000 ml methanol og lufttørredes.

Råproduktet opslæmmedes i 3000 ml 50% methanol-vand, og 300 g (1,5

DK 15S943B

ίο mol) p-toluensulfonsyre tilsattes. Blandingen omrørtes i 15 minutter, og 50 g "Darco KB" aktivt kul sattes så til. Efter omrøring i 15 minutter ved 22°C filtreredes opslæmningen gennem et "Celite"-lag, og laget vaskedes med 2 x 100 ml 50% methanol-vand. pH-værdien af de kombinerede 5 filtrater indstilledes til 4,0 ved tilsætning af 210 ml triethylamin.

Efter afkøling til 0°C i 1 time filtreredes produktet fra, vaskedes med 2 x 400 ml 50% methanol-vand og derefter med 2 x 1000 ml methanol og lufttørredes.

Dette produkt opslæmmedes i 2000 ml vand, og 84 g (1 mol) natrium-10 bicarbonat tilsattes. Efter omrøring i 10 minutter ved 22°C tilsattes 50 g "Darco KB" aktivt kul, og efter omrøring i 15 minutter ved 22°C filtreredes opslæmningen gennem et "Celite"-lag. Produktet vaskedes med 2 x 100 ml vand, og pH-værdien af de kombinerede filtrater indstilledes til 3,5 ved langsom tilsætning af 6N HC1. Efter omrøring i 10 minutter ved 15 22°C alkøledes blandingen til 0°C i l time. Produktet filtreredes fra, vaskedes med 2 x 200 ml koldt vand og 2 x 1000 ml acetone. Efter tørring over P20g exsikkator i 14 timer ved stuetemperatur var udbyttet 100 g; dekomponeringspunkt 230°C. IR- og NMR-spektrene var i overensstemmelse med det ønskede produkt........

20

Fremstilling af D-M-2-amino-2-(4-acetoxvphenvHeddikesvre Metode A (eddikesyre som opløsningsmiddel) 203,5 g (1 mol) D-(-)-p-hydroxyphenylglycinhydrochlorid, 800 ml eddikesyre og 314 g (4 mol) acetylchlorid omrøres i 48 timer ved stue-25 temperatur. Bundfaldet filtreres fra, vaskes 3 gange med acetone (3 x 250 ml) og to gange med ethanol (2 x 250 ml) og tørres ved 40°C. Udbytte 210 g (85,4%). Dette hydrochlorid opløses i 3,0 liter vand, opløsningen afkøles til 5 - 10°C, og pH-værdien indstilles til 4,5 med 20% ammoniakvand. Opslæmningen omrøres i en time ved 5°C, og bundfaldet filtreres 30 fra, vaskes to gange med vand og to gange med acetone og tørres ved 40°C. Udbytte 133 g (64% i forhold til D-(-)-p-hydroxyphenylglycin).

[a]D (1% HC1 N/10) = -104,5.

Metode B (i methylenchlorid) 35 4,07 g (0,02 mol) D-(-)-p-hydroxyphenylglycinhydrochlorid, 30 ml methylenchlorid og 6,28 g (0,08 mol) acetylchlorid omrørtes i 48 timer ved stuetemperatur. Bundfaldet filtreres fra, vaskes to gange med acetone og to gange med ethanol. Udbytte 4,17 g (84,5%):

DK 155943 B

π

Analvse; Cl = 14,8% (beregnet 14,4%)

Metode C (i tri fluoreddikesyre) 1.67 g (0,01 mol) D-(-)-p-hydroxyphenylglycin sættes under omrø-, 5 ring til 10 ml tri fluoreddikesyre ved stuetemperatur. Efter opløsning tilsættes 1,57 g (0,02 mol) acetylchlorid. Efter en let eksotermisk reaktion udfældes et fast stof. Opslæmningen omrøres i \ time ved stuetemperatur, og tri fluoreddikesyren fjernes i vakuum. Det tilbageblevne faste stof opsamles og vaskes med methylenchlorid og med ethanol. Det 10 fremkomne D-(-)-2-amino-2-(4-acetoxyphenyl)eddikesyre er identisk med det, fremstillet ved metoderne A eller B.

Udbytte: 1,9 g (75%).

Fremstilling af D-M-2-amino-2-(4-Divalvloxvohenvl leddikesvrehvdrochlo-15 rid 1.67 g (0,01 mol) D-(-)-p-hydroxyphenylglycin sættes til 10 ral tri fluoreddikesyre, efterfulgt af 2,4 g (0,02 mol) pivalylchlorid. Den fremkomne opløsning omrøres i 24 timer ved stuetemperatur og inddampes så i vakuum til tørhed. Det faste stof samles og vaskes så med ether.

20 Udbytte: 2,56 g (89%).

Dette hydrochlorid omkrystalliseres fra isopropanol.

Analyse: Cl = 11,8% (beregnet 12,3 %).

UV λ max 205 nm og 220 nm 25 Fremstilling af D-M-2-amino-2-(4-benzovloxvohenv1 leddikesvrehvdrochlo-rid

Denne forbindelse fremstilles efter samme fremgangsmåde som benyttet for pivalyloxyderivatet. Udbytte: 2,7 g (87%). En analyseprøve om-krystalliseres fra ethanol.

30 Analyse: Cl = 11,3% (beregnet 11,5%).

UV λ max 205 nm og 234 nm.

Fremstilling af D-M-2-amino-2-(4-acetoxvphenv1 lacetvlchloridhvdrochlo-rid 35 83,6 g (0,40 mol) D-(-)-2-amino-2-(4-acetoxyphenyl)eddikesyre og 1,25 liter vandfri methylenchlorid afkøles til -5°C under omrøring. Derefter tilsættes langsomt 152 g phosphorpentachlorid efterfulgt af 4 ml dimethyl formamid. Blandingen omrøres i 4 timer ved 0°C. Bundfaldet fil- 12

DK 155943 B

treres fra, vaskes med vandfri methylenchlorid og tørres i vakuum ved stuetemperatur. Udbytte: 61 g (57,5%).

Analyse: Total chlor = 27,2% (teoretisk 26,9%).

5 Fremstilling af D-M-2-formvloxy-2-(4-formvloxvphenvl)eddikesyre

En opløsning af 3,5 g (0,02 mol) D-(-)-2-hydroxy-2-(4-hydroxyphe-nyl)eddikesyre i 50 ml 97% vandig myresyre omsattes ved 22°C i ca. 68 timer. Overskud af myresyre fjernedes ved destillation ved 22°C under reduceret tryk. Remanensen ekstraheredes med di ethyl ether, etherfasen 10 tørredes over natriumsulfat, filtreredes og inddampedes, hvilket gav det ønskede produkt.

Fremstilling af D-M-2-formv1oxv-2-(4-acetoxvphenv1 ^eddikesyre

Det ovenfor fremkomne D-(-)-2-formyloxy-2-(4-formyloxyphenyl)eddi-15 kesyre opløses i 10 ml acetylchlorid, og den fremkomne blanding fik lov at stå ved 22°C i 20 timer. Overskud af acetylchlorid afdestilieredes under reduceret tryk, remanensen behandledes med benzen, og benzenet fjernedes så i vakuum, hvilket gav det ønskede produkt, som viste sig at være 60% rent ifølge NMR-spektret.

20 Opfindelsen belyses i det følgende med eksempler. Alle temperatu rer er i °C. 7-aminocephalosporansyre forkortes til 7-ACA og 7-aminodes-acetoxycephalosporansyre til 7-ADCA.

Eksempel 1 25 7-D-(-)-2-ami no-2-(4-acetoxvphenvlacetamidoldesacetoxvcephalosporansvre - facetoxvcephalexin) - RN 1394 15,27 g (0,0714 mol) 7-ADCA omrøres i 500 ml vandfri methylenchlo-rid; 120 ml methylenchlorid afdestilieres, og 11,8 ml hexamethyldisila-zan tilsættes. Blandingen omrøres og tilbagesvales i 20 timer (efter ca.

30 10-15 timer er alt 7-ADCA gået i opløsning). Den således fremkomne opløsning afkøles til 0°C, og 120 ml methylenchlorid afdestilieres, hvorefter der tilsættes 9,5 ml dimethyl anil in og 7 ml af en opløsning af dimethyl anil inhydrochlorid i methylenchlorid (30%). Derefter tilsættes 20 g (0,0756 mol) D-(-)-2-amino-2-(4-acetoxyphenyl)acetylchlorid,hydrochlo-35 rid i små portioner (ca. 1¾ time) ved 0°C. Blandingen omrøres i 30 minutter ved 10°C og 4 timer ved 20°C og henstilles så natten over ved 5°C. Derefter tilsættes 5 ml methanol, efterfulgt af 240 ml vand. pH-værdien indstilles til 2,5 med triethylamin, og blandingen filtreres 13

DK 155943 B

gennem et "Celite"-lag; pH-værdien afprøves, og den vandige fase skilles fra, vaskes to gange (2 x 150 ml) med methylenchlorid og behandles med aktivt kul.

Opløsningen indstilles til pH-værdi 4,5 og inddampes i vakuum til 5 et rumfang på ca. 150 ml. Opslæmningen henstilles natten over ved 5°C, og bundfaldet samles og vaskes med vand og acetone og tørres ved 40°C. Udbytte: 15,1 g (ca. 50% 75-80% rent produkt).

[aJD (1% H20) = +107.

14 g af dette råprodukt opslæmmes i 30 ml vand (pH-værdi = 3,2); 10 saltsyre (36%) tilsættes til en pH-værdi på 1,3, og den fremkomne opløsning behandles med aktivt kul og filtreres gennem et "Cel i te''-lag og indstilles til pH-værdien 4-4,5 under omrøring. Efter 2 timer ved 0-5°C filtreres det fremkomne RN 1394 fra, vaskes med vand og acetone og tørres ved 40°C.

15 Udbytte: 7 g.

(1% H20) = +133.

IR- og NMR-spektrene er i overensstemmelse med det ønskede produkt.

20 Biologiske data

Tabel I viser sammenlignende MIC-data for BL-S 578-4 (p-hydroxy-analog til cephalexin) og p-acetoxycephalexin (RN 1394). Laveste inhi bi-torisk virkningsfulde koncetrationer (MIC) bestemtes ved den metode, der går ud på dobbelt substratfortynding under anvendelse af ækvimolære kon- 25 centrationer af begge forbindelser.

DK 155943 B

14 I g

>rH

X X co oo O H) "J o o vo vo -pi—i CTt >k *k ·» ^ <D <ϋ oo ooooHcacsjcocvjrovorvjcommminooin

0 xi H 00 (<i « ri Π Μ N Μ M CN

(ϋΟι η η η η h 1 © s ^ λ /s.

ft O K

^ i g

1 H

ω x X oo t" o Φ vo o ro oo ιπ Μ H ^ ^

Ό Id OOHrlNNlDffllONICNCOininininifilil CO SÆ H H 00 H 00 N N N CM ri N

I Λ ft f—I H I-I !—I I—I

(P I QJ Λ A, A Λ A

ffl fto Μ

<D

!> Ο *—Ν Η δ φ \ +j

γ-H θ') jJ

® ? « Λ λ π! ^ . _ Β γ** σ» ο oo rflj - σ> .ρ

Ο ir)'3,r^r'VovoovHHinr«-oooinooHvot^cn <D

η ooooooooooooHr^r>rHOHHominm <χΰ

S iniDlfllfllBlDinWlfllflillilffllflCOOWlClC +J

σισισιοισ\σιΗσιΗσιο\Ησ\ΗσΐΜσισισι Μ rijrijrtjrijrtjcirtlrijrijrijrijrijrijrijfsjfijifijrtj.cu g 0) Λ

U

m p s -p «Η Λ dP d f O Λ! i in +> O r-v (¾

K X W r"' —v I +J

X X --I (O Μ O 'ί —v g m —^ 'tf g I I r—I I , Λ 'φ 3 ft OOOOIPOO^O rtf I ^ 3 ft I I O ft Η H Η Ί1 'f rv I Or-^r~---, Q) tø 0) Ο Ο H d) '— '—* ω — 'ςί· I I I "ί Ο Η Ί1 vf rf tø « HH'— in <D i oooiH'-'iii m m wv-. CO 00 pi tø Ο HHHO'-' OOOdPia H XjdPOOOOlHH — H UlHHHin ft ΚΚ-ΡονονοΛΌ'^'-' wnjfjv-^-w tji <D Ο) WHUOHH-PH *tf (1) Q) U) tø Q)

01 (fl <U g XX<D -PHI(dnJHHOOQ)<l>CD H

ft HfiCQ + rtmS H^OHHHHCWlOnJm ¢0 Ό

p SSI ftPHGG-HG-HCDUOOrfG

i otjiojwwwojajhj'-oojanjovoianjia 2>i -P gOPPPPP-P ggfdfcriftftOOO -ft id P>i<U<l)<l)<])a)ftHHPpftftft(OHHH <#> ft

ft O&ftftftftftiDHHOO-HOOgOOO UOO

+> G Ρ Ρ Ρ Ρ Ρ O O G G g g <d to ft«(d(d(d(tj(d*ooaiCii «...

>3 H ^ · · · ft +* +* +> P · -P.....<e***»ftftin<l)GGft s$

03 QCQCQWC0CQC0C0WHW«CUftftc0WHH XX

15

DK 155943 B

Eksempel 2 7-ΓΡ-(-)-2-amino-2-(4-acetoxvphenvlacetamidol-3-Γ(1,2,3-triazol-5-vl1 -thiomethvn-3-ceDhem-4-carboxvlsvre: RN 1396 62,6 g (0,2 mol) 7-amino-3-[(l,2,3-triazol-5-yl)thiomethyl]-3-5 cephem-4-carboxylsyre (7-TACA), 1,5 liger methylenchlorid og 60,2 g (0,374 mol) hexamethyldisilazan omrøres under tilbagesvaling i 20 timer under nitrogen i et svagt overtryk (efter ca. 2 timer er alt 7-TACA gået i opløsning.

Opløsningen afkøles til 0°C, og 30,4 ml dimethyl anil in efterfulgt 10 af 20,4 ml af en opløsning af dimethyl anilinhydrochlorid i methylenchlo-rid (30%) og 1,35 g imidazol tilsattes.

Derefter tilsættes 60,5 g (0,229 mol) 2-amino-2-(4-acetoxyphenyl)-acetylchloridhydrochlorid i små portioner (ca. \\ time) ved 0°C. Blandingen omrøres så i 3 timer ved 20°C og efterlades natten over ved 5°C.

15 25 ml methanol efterfulgt af 750 ml vand sættes så til. pH-værdien indstilles til 2,3 - 2,5 med triethylamin, og blandingen filtreres gennem et "Celite"-lag. Den vandige fase skilles fra, vaskes to gange med methylenchlorid og behandles med aktivt kul. Opløsningen indstilles til pH-værdi 4,3 og omrøres i 2 timer ved 5°C. Bundfaldet filtreres fra, 20 vaskes to gange med vand og tørres ved 40°€. Udbytte: 53 g (ca. 50%).

Dette råprodukt renses to gange på følgende måde:

Stoffet behandles med otte rumgang 0,5N saltsyre, og opslæmningen affarves med aktivt kul. Samme rumfang methanol sættes til opløsningen, og pH-værdien indstilles til 2 - 2,1; efter 15 minutter frafiltreres en 25 ringe mængde bundfald, som ikke bruges. Filtratet indstilles til pH-vær-dien 4. Det udfældede faste stof frafiltreres, vaskes med MeOH/HgO (50/50) og ren methanol.

Udbytte: 25 g (efter to rensningsprocesser) - IR i overensstemmelse med den forventede struktur 30 - Fugtighedsindhold (KF) : 5,1% - Kemisk bestemmelse - Iodometrisk bestemmelse 885 fiq/mg - Potentiometrisk aminbestemmelse: 97%.

35 Biologiske data

Tabel II viser sammenlignende MIC-data for det ovenfor fremstillede 7-[D-(-)-2-ami no-2-(4-acetoxyphenylacetamido)]-3-[1,2,3-tri azol-5-yl)-thiomethyl]-3-cephem-4-carboxylsyre, RN-1396 og dets p-hydroxyanalo- 16

DK 155943 B

ge, BL-S 640. Laveste inhibitorisk virkningsfulde koncentrationer bestemtes ved den metode, der går ud på dobbelt substratfortynding under benyttelse af ækvimolære koncentrationer af begge forbindelser.

s* 0 o WJ ^ Tf « +i Tf 4J a\ o o »-) v£> ro m d) vo id ro » »· * » ·*

OWJ-iHOoor-toTfooocNcoHcNomininini-HCN

i æ n N N ro

1 >(2 I-I >H H

OjCQ λ S

0

Tf Tf io o o ro id td in m m m k, % ** ^ ^ cnoooiHoHTfooTfoHoromininoo) 1 ίο μ μ οι m jjj Η H ri m u O) > o

H H

H ^ - jS

H Di <D 2 2 Λ "v id — . " ~ ,.

Ph t"· (Ti O .(O rij ΟΊ -P

O Ln^pt^r^ioiDc^r-iiHinr'foomfOiHiDr'CTi d) i—] GOororooooMfHr-r-r-io^Tj'oininin °<d S ιηιοιηιηιοιοιηιηιηιοίΛίησιιηοοοιοιοιο ·Ρ σ*σισισϊσ>σΐι-ισ»Ησ>σ%Ησ>Ησ\ΓΊσ>σ»σ> w Λ

U

CQ ø

2! -P

H

^ rt> Pi

Tf O &

i in -P

o — id

H ro + H

K X ^ ro n o ^ ^ S ω K ~ Tf g I I Η I — ^ P fl

^ ro 1 3 o o ^ O Tf I P P

H rO | O P r-l iH H — Tf Tf Tf ^ I O'--'-'-'-' 0)01 m | O r-l d) — '— 01 ^ Tf I i I Tf O H Tf Tf Tf 01 g o i~i *— w m i oooir—i'-'iii «y CQ H '—· ro ro 1¾ 01 O iH H H o — O O O dP id •rf — Xldprorol-HH —' — —' H 01 H H Γ-H m C K+joidio.cO^'·'-' " « cl ^ ^ ^ 5> id X is -w in η h +J -Η Tf a) a) oi w <D +C5 o> aiaig xxa)'4JHiidid-H-HOoa)a)a> -h p idCco + PQmgHxio-H-WH-ridoiididid p 'd 0 -η οι ndHcc^Hd-Ha)oggrfd

1 cti'»i«iiiffloi(DbvQOflidtJ'pididii <C

4J oodpjpJdd-P egidtndPooo +> id §>iaja)<Da)a)d-^-Hpi3MVi}-ifdHrHH op p p 3&pppppa>HHd>a>-Hoa>gooomo +i Φ ddddd oocdggid oi cj»itiidididid*000tGu · · · ·

n Q. p H · · · P -P -P -P

ζ) • -p*»*,*id,*,,PPo)d)ddd Η

ta QCOCQWltOWWCOHHtfiKiPPiftiaiPWW KK

17

DK 155943 B

Forbindelserne, fremstillet ifølge den foreliggende opfindelse, er også værdifulde som mellemprodukter ved fremstillingen af andre farmaceutisk aktive forbindelser. Omhandlede a-amino-a-(p-acetoxyphenyl)acet-amidocephalosporansyrer kan f.eks. omdannes til de tilsvarende p-hydro^-5 xyforbindel ser, der er kendt som kraftigt virkende antibakteriel le forbindelser, der er nyttige til behandling af fjerkræ, dyr og mennesker for infektionssygdomme, forårsaget af mange Gram-positive og Gram-negative bakterier. Omdannelsen kan i de fleste tilfælde udføres kemisk ved simpel sur eller basisk hydrolyse i vandigt medium.

10

Claims

1. Anal ogifremgangsmåde til fremstilling af 7-D-(-)a-amino-a(p- acetoxyphenylacetamido)-cephalosporansyre med den almene formel 5 /Γ\ - 10 «3-C-of Vh-C-NH-1-f \==/ NH2 J_ch2y 1 COOH 15 hvori Y betegner hydrogen eller l,2,3-triazol-5-ylthio eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf, KENDETEGNET ved, AT man omsætter en forbindelse med formlen H2N-—

20 I >-N. CH2Y o i I1, COOH 25 eller en si lylester eller et salt deraf, hvori Y har den ovenfor angivne betydning med et D-(-)-acyleringsmiddel, afledt af en syre med formlen ° f~\ CH3-C-0-(/ y-CH-COOH III 30 \-—/ NHB hvori B er en konventionel aminobeskyttende gruppe, og fjerner den ami-nobeskyttende gruppe til fremstilling af forbindelsen med formel I eller 35 et farmaceutisk acceptabelt salt deraf, og om ønsket omdanner den opnåede forbindelse, der forefindes som den fri syre eller si lylester eller salt deraf, til den tilsvarende fri syre eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

0 DK 155943 B

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, AT acylerings-midlet har formlen

5 CH3 -c-o-r y-CH “ COC1 NH2#HC1 10 15 20