FI58159C - Foerfarande foer framstaellning av tumoerfoerhindrande baumycinkomplexet och dess komponenter - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av tumoerfoerhindrande baumycinkomplexet och dess komponenter Download PDFInfo
- Publication number
- FI58159C FI58159C FI771686A FI771686A FI58159C FI 58159 C FI58159 C FI 58159C FI 771686 A FI771686 A FI 771686A FI 771686 A FI771686 A FI 771686A FI 58159 C FI58159 C FI 58159C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- baumycin
- chloroform
- streptomyces
- complex
- methanol
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/20—Carbocyclic rings
- C07H15/24—Condensed ring systems having three or more rings
- C07H15/252—Naphthacene radicals, e.g. daunomycins, adriamycins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/56—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen atom of the saccharide radical directly bound to a condensed ring system having three or more carbocyclic rings, e.g. daunomycin, adriamycin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/886—Streptomyces
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Virology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
Γβ1 KUULUTUSJULKAISU cQ*rQ w <11> UTLÄGCNINGSSKIUFT 3Ö Ί 5 9 C (4¾ Fatrr.t : ’ Int 'S—(51) Kv.ik?/i«.a.3 c 12 P 19/56, C 07 H 15/24 SUOMI —FINLAND (21) Ptt*nttnwk«mn —PMtntaraeicnlni 771666 (22) HakamlipUvi—An»ftknlng«d»| 26.05.77 (23) AlkupUvi—GIM|h«tsdaf 26.05.77 (41) Tullut JulklMfctf — BIMt offmtllg 01.12.77
PfttMttU j» rekisterihallitut (44) NVMMMfmen
Ja kuuLJuHulaun pvm. — β Q
Patent- och ragisterttyraltan AnaMan utlagd oeh utUkrtftan pubiicarad 29*00. Ö0 — (32)(33)(31) Pyydetty atuolkau*—Bagird prlorltet 31.05*76
Japani-Japan(JP) Showa 51-63810 —* (71) Zaidanhojin Biseibutsu Kagaku Kenkyukai, 3-Chome, 14-23 Kamiohsaki,
Shinagawaku, Tokyo, Japani-Japan(JP) (72) Hamao Umezawa, Tokyo, Tornio Takeuchi, Tokyo, Masa Hamada, Tokyo,
Masaaki Ishizuka, Tokyo, Hiroshi Naganawa, Tokyo, Toshikazu Oki, Kanagawa-ken, Taiji Inui, Kanagawa-ken, Japani-Japan(JP) (74) Oy Kolster Ab (54) Menetelmä kasvaintenvastaisen baumysiinikompleksin ja sen komponenttien valmistamiseksi - Förfarande för framställning av tumörförhindrande baumycinkanplexei och dess komponenter
Keksinnön kohteena on menetelmä kasvaintenvastaisen baumysiinikompleksin valmistamiseksi, jolla on kaava
0 HO
^ Il I "''OH I
^ΛγλνΛ/ 0CH3 o ho '0 yzf R-0 NH2 2 58159 ja sen stereoisomeeristen komponenttien ja valmistamiseksi, joilla on kaava I, jossa R on -ch-o-ch-ch3
CH CH OH CHOH
-3 ja sen stereoisomeeristen komponenttien ja valmistamiseksi, joilla on kaava I, jossa R on
-ch-o-ch-ch3 ch2 COOH CHOH
i„3
Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että jotakin seuraavista baumysiiniä tuottavista Streptomyces-kannoista
Streptomyces coeruleorubidus ME 130-Al* (FERM P-35^0, ATCC 31276),
Streptomyces peucetius subsp. carneus ATCC 2135^,
Streptomyces peucetius subsp. caestus NRRL B-5337,
Streptomyces peuceti us NRRL B-3826 tai viljellään submersisissa aerobisissa olosuhteissa assimiloituvia hiilen ja typen lähteitä ja epäorgaanisia suoloja sisältävässä ravintoliemessä, kunnes organismi on tuottanut olennaisen määrän baumysi i nikompleksi a, joka eristetään viljelylie-mestä tavanomaisella tavalla, edullisesti uuttamalla veden kanssa sekoittumatto-malla orgaanisella liuottimena tai kromatografoimalla, ja josta haluttaessa erotetaan baumysiinikomponentit A^, ja standarditekniikalla, kuten uutta malla ja kromatografoimalla.
Keksinnössä on käytetty baumysiini-nimitystä tarkoittamaan antibioottia, joka sisältää ainakin yhtä baumysiinikomponenteista A1, A2, B1 ja B2·
Baumysiini kuuluu antrasykliiniantibiootteihin, joita tuotetaan Streptomyces-lajien käymisen avulla. Tunnettuja antrasykliiniantibiootteja ovat esim. dauno-mysiini, adriamysiini ja karminomysi ini .
FI-patenttijulkaisussa 1*3 θ6θ on kuvattu kasvaintenvastaisten antibiootin 9865 RP ja sen komponenttien valmistus viljelemällä Streptomyces coeruleorubidus kantaa 8899 (NRRL 301*6) tai Streptomyces coeruleorubidus kantaa 31 723 (NRRL 301+5), FI-patenttihakemuksessa 760 61+5 on kuvattu kasvaintenvastaisen antibiootin valmistus viljelemällä jotakin seuraavista mikro-organi smei sta Streptomyces coeruleorubidus PS 7126 (NRRL 8098), Streptomyces coeruleorubi dus DS 31 723 (NRRL 301*5)·. Streptomyces coeruleorubi dus, DS 8899 (NRRL 30U6) tai Streptomyces bifurcus DS 23 219 (NRRL 3539)· 58159
Erityisen edullinen baumysiiniä tuottava kanta Streptomyces coeruleorubidus ME 130-AL eristettiin maanäytteestä ja talletettiin laitokseen Institute of Microbial Chemistry (Osaki, Tokio, Japani). Tämän kannan viljelmät on myös talletettu laitosten American Type Culture Collection (Rockville, Maryland) ja Fermentation Research Institute (Japani) pysyviin mikro-organismikokoelmiin, jolloin kantojen merkinnät ovat vastaavasti ATCC 31276 ja FERM P-35^0.
Maut keksinnössä käytettävät kannat ovat ennalta tunnettuja ja ne on talletettu pysyviin mikro-organismikokoelmiin laitoksen American Type Culture Collection tai laitoksen Northern Regional Research Laboratory of Peoria, Illinois, United States of America· Näiden kantojen talletusmerkinnät ja niihin liittyvät kirjallisuusviitteet ovat seuraavat:
Streptomyces peucetius subsp. carneus. ATCC 21351*, US-patentti 3 686 163
Streptomyces peucetius subsp. caestus. NRRL B-533T, Chemical Abstracts, ^ Voi. 72, 1970, 77389c
Streptomyces peucetius, NRRL B-3826, Chemical Abstracts, Voi. 72, 1970, 20607t.
Kannan ME 130-AU ominaisuudet ovat seuraavat: 1. Morfologiset ominaisuudet:
Mikroskoopissa havaitaan avoimia spiraaleja ja sirppejä kehittyvän haaroittuneesta perushuovastosta. Kierteitä ei esiinny, ja kypsät itiöketjut ovat kohtuullisen pitkiä ja sisältävät korkeintaan 10 itiötä. Itiöiden mitat ovat 0,6-0,8 μ x 1,0-1,2 μ ja niiden pinta on piikkimäinen.
2. Kasvu erilaisissa elatusaineissa:
Suluissa esitetty värien kuvaus noudattaa väristandardia "Color Harmony Manual", julkaisija: Container Corporation of America, USA.
a) Glyseroli-asparagiiniagarilla (ISP elatusaine n:o 5), kasvatettu 27°C:ssa:
Vaalean punertavankeltaisesta tummanpunaiseen (4 ie, pastellin oranssinvärisestä 6 1/2 nc:hen, punaiseen) kasvu; vaaleanharmaa (l7ge, samean vedensinisestä 19 fe:hen, vedenharmaaseen) ilmarihmasto; vaalean punertavankeltainen, liukoinen väriaine.
b) Sokeri-nitraatti-agarilla, kasvatettu 27°C:ssa:
Vaalean punertavankeltainen, vaaleanpunaisesta tummanpunaiseen 4 58159 (6 1/2 le, 8eetri) kasvuun; vähäinen valkoinen ilmarlhmasto; vähäinen tummanpunainen liukoinen väriaine· c) Glukoosi-asparagiiniagarilla, kasvatettu 27°C:ssa: Väritön, vaaleankeltaisesta vaalean oranssinväriseen kasvuun; vähäinen valkoinen tai harmaa ilmarlhmasto, josta tulee runsas 14 päivän kasvatuksen jälkeen, ei liukoista väriainetta.
d) Tärkkelystä ja epäorgaanisia suoloja sisältävällä agarilla (iSP elatusaine n:o 4)» kasvatettu 27°Csssas
Vaalean kellanruskeasta vaalean punertavankeltaiseen kasvuun; vaaleanharmaa (19 dc, vedenharmaa) ilmarlhmasto; ei liukoista pigmenttiä. — e) Tyrosiiniagarilla (ISP elatusaine n:o 7) kasvatettu 27°Csssa:
Harmahtavan punaruskeasta ruskeaan (4 ni, kastanjanruskea) kasvuun; sinivalkoisesta vaaleansiniseen (19 do, vedenharmaa) ilmarihmastoon; turn-manruskea liukoinen väriaine.
f) Ravintoagarilla, kasvatettu 27°Cissai kellahtavanruskea kasvu; valkoinen ilmarlhmasto; ruskea liukoinen väriaine.
g) Hiivauute-mallaeuuteagarilla (ISP elatusaine n:o 2), kasvatettu 27°C:ssa:
Kasvu himmeän oranssinvärinen (5 ne, tiilenpunainen); ilmarlhmasto vaaleanharmaa (19 fe, vedenharmaa); vähäinen ruskea, liukoinen väriaine.
h) Kaurajauhoagarilla (ISP elatusaine n:o 3), kasvatettu 27°C:ssa:
Kasvu värittömästä vaaleaan oranssinkeltaiseen; ilmarlhmasto vaaleanharmaa (19 fe, vedenharmaa); ei liukoista väriainetta.
i) Glyseroli-nitraattiagarilla, kasvatettu 27°C>sea:
Kasvu värittömästä vaaleanoranssiin; ilmarlhmasto valkoisesta vaa- — leanharmaaseen; ei liukoista väriainetta.
j) Tärkkelysagarilla, kasvatettu 27°C:ssa:
Vaalea oranssinvärinen kasvu; ilmarlhmasto valkoisesta vaaleanhar-maaseen, joka on heikkoa 14 päivän kasvatuksesta huolimatta; vähäinen vaalea oranssinvärinen, liukoinen väriaine.
k) Kalsiummalaattiagarilla, kasvatettu 27°C:ssa:
Kasvu väritöntä, vaalean oranssinvärisestä himmeän oranssinväriseen, ilmarlhmasto valkoisesta vaaleanharmaaseen (17 ge, samean vedensininen) heikko vaaleanpunainen väriaine.
l) Selluloosalla, kasvatettu 27°Cssea: Väritön kasvu; ilmarlhmasto valkoisesta himmeän sinivihreään; ei il-marihmaetoa.
5 58159 m) Gelatiinissa pistoviljelmänä, kasvatettu 20°C:ssa:
Kasvu heikosti kellahtavanruskeaa; ei ilmarihmastoa, heikosti ruskea, liukoinen väriaine.
n) Glukoosi-peptoni-gelatiinissa pistoviljelmänä, kasvatettu 27°Csssa:
Kasvu vaalean kellahtavanruskeasta kellahtavanruskeaan; heikko, valkoinen ilmarihmasto; tummanruskea liukoinen väriaine.
o) Kuoritussa maidossa, kasvatettu 27°C:ssa:
Kasvu vaalean kellahtavanruskeasta ja kellahtavanruskeasta vaaleanpunaiseen; heikko, valkoinen ilmarihmasto; ruskea, liukoinen väriaine.
3. Fysiologiset ominaisuudet: a) Kasvulämpötila tutkittiin glukoosi-asparagiini-agarilla 20, 24, 27, 30, 37 ja 50°C:ssa ja suotuisin lämpötila on noin 30-37°C.
_ b) Gelatiinin nesteyttäminen 15 # gelatiinilla pistoviljelmänä 20°C:ssa ja glukoosi-peptoni-gelatiinilla 27°C:ssa:
Ensiksi mainitussa elatusaineessa gelatiinin nesteytyminen havaittiin heikosti 20 päivän kasvatuksen jälkeen, mutta viimeksi mainitussa elatusaineessa nesteytyminen alkoi heikosti tai kohtuullisesti 14 vuorokauden kasvatuksen jälkeen.
c) Tärkkelyksen hydrolyysi tärkkelystä ja epäorgaanisia suoloja sisältävällä agarilla ja tärkkelysagarilla 27°C:ssa:
Voimakas hydrolyysi todettiin kolmen vuorokauden kasvatuksen jälkeen edellisellä elatusaineella ja viiden vuorokauden kasvatuksen jälkeen viimeksi mainitulla elatusaineella.
d) Kuoritun maidon peptisoituminen ja juoksettuminen 37°C:ssa:
Heikko tai kohtalainen peptisoituminen alkoi seitsemän vuorokauden —' kasvatuksen jälkeen ja juoksettuminen päättyi noin 10-14 vuorokauden kas vatuksen jälkeen.
e) Melaniinin muodostuminen tryptoni-hiivauute-lihaliemessä (ISF elatusaine n:o l), peptoni-hiivauute-rauta-agarilla (ISP elatusaine n:o 7) 27°Cissa:
Positiivinen kaikilla elatusalneilla.
f) Pridham-Gottlieb perueelatusaineen hiilihydraattien hyväksikäyttö (ISP elatusaine n:o 9)* kasvatettu 27°C:ssa, runsas kasvu glukoosilla, L-arabinooeilla, D-ksyloosilla, sakkaroosilla, raffinoosilla.
g) Kalsiummalaatin nesteytyminen kalsiummalaattiagarilla 27°C:sea:
Kolmen vuorokauden viljelyn jälkeen oli nesteytyminen kasvun ympärillä voimakkaasta kohtalaiseen.
6 58159 h) Nitraatin pelkistyminen peptonivedessä, joka sisältää 1 i natriumnitraattia (ISP elatusaine n:o 9), kasvatettu 27°CsssaJ Kielteinen.
Edellä esitettyjen ominaisuuksien yhteenvedon perusteella kanta n:o ME I3O-A4 kuuluu Streptomyces-sukuun. Ilmarihmasto muodostaa avoimia spiraaleja, mutta ei kierteitä. Itiön pinta on piikikäs. Erilaisilla elatus-aineilla kasvua on todettu olevan vaalean oranssinvärisestä himmeän punaiseen, ja ilmarihmasto on vaaleanharmaa. Kanta tuottaa erittäin vaaleaa oranssinväristä väriainetta. Melaniinin muodostuminen on selvä. Proteiineja hajoittava toiminta on heikosta kohtalaiseen, ja tärkkelyksen hydrolysoin-ti on voimakasta. Tunnetuista Streptomyces-lajeista kanta ns o ME 13O-A4 muistuttaa Actinomyces coeruleorubidusta edellä mainittujen ominaisuuksien perusteella (Viite Is International Journal of Systematic Bactoriology, 18, 312, 1968, Viite 2: G.F. Gause Zur Klassifizierung der Actinomyceten, s.
98 Veb. Gustav Fischer Verlag Jena, 195®)*
Kantoja ME I3O-A4 ja Act, ooeruleobidus ISP 5145 verrattiin rinnak-kaisviljelmin. Tulokset ovat eeuraavats
Ominaisuudet ME 130-A4 Aot. coeruleorubldus ISP 5145
Spiraalit positiivinen positiivinen
Itiön pinta piikikäs piikikäs
Ilmarihmasto vaaleanharmaa vaaleanharmaa
Kasvu vaaleanoranssin- vaalean kellahtavanrus- värinen himmeän- keasta himmeänpunaiseen punainen
Melaniinin muodostuminen ISP elatusaine n:o 1 postiviinen positiivinen ISP elatusaine n.*o 6 positiivinen positiivinen ISP elatusaine ns o 7 positiivinen positiivinen Tärkkelyksen hydrolyysi positiivinen positiivinen
Maidon koaguloituminen positiivinen positiivinen
Maidon peptonisoituminen positiivinen positiivinen
Gelatiinin nesteytyminen positiivinen positiivinen
Nitraatin pelkistyminen negatiivinen positiivinen 7 58159
Hiilihydraattien hyväksikäyttö
Glukoosi positiivinen positiivinen L-Arabinoosi positiivinen positiivinen D-Ksyloosi positiivinen positiivinen D-Fruktoosi positiivinen positiivinen
Sakkaroosi positiivinen positiivinen
Inositoli positiivinen positiivinen L-Ramnoosi positiivinen positiivinen
Raffinoosi positiivinen positiivinen D-Mannitoli positiivinen positiivinen
Suotuisa kasvulämpötila noin 37°C noin 37°C
Tuotetut antibiootit Baumysiini Rubidomysiini
Daunomysiini (Daunomysiini)* *Viite, Journal of Pharmaceutical Soienoe $6, 16$1 p, 1967
Tuloksista voidaan nähdä, että kyseessä oleva kanta ME 13O-A4 on hyvin läheisesti Actinomyces ooeruleorubiduksen kaltainen morfologisilta ja fysiologisilta ominaisuuksiltaan. Kasvun värissä ainoastaan on pieni ero, ME 130-A4-kanta on vähän punaisempi kuin Act, coeruleorubidus.
Viitteen 2 mukaan St. coeruleorublduksella nitraatin pelkistyminen vaihtelee riippuen tämän lajin kannasta. Täten kanta n:o ME I3O-A4 voidaan tunnistaa uudeksi Strentomyces ooeruleorubiduksen kannaksi.
Keksinnön mukaisesti baumysiiniä tuotetaan viljelemällä baumysiiniä tuottavaa. Streptomycee-kantaa tavanomaisessa nestemäisessä el&tusaineessa, jossa on Actinomycetes-lajien tunnettuja ravintolähteitä, esim. hiilen ja typen lähteet sekä epäorgaanisia suoloja. Suuria määriä tuotettaessa käytetään nestepinnan alaista aerobista viljelyä, kuten muitakin antibiootteja tuo-tettaesaa. Keksinnön mukaiseen viljelyyn soveltuvat yleiset menetelmät, joita käytetään muiden Actinomycetes-lajien viljelyyn.
8 581 59
Elatusaine sisältää mieluummin kaupallisesti saatavia hiilen lähteitä, kuten glyserolia, glukoosia, tärkkelystä, dekstriiniä, sakkaroosia, maltoosia, öljyjä, rasvoja ja muita samankaltaisia hiilen lähteitä, joko puhdistettuina tai raakoina, ja kaupallisesti saatavia typen lähteitä, kuten soijapapujauhetta, hiivauutet-ta, peptonia, puuviliasiemenjauhetta, kuivattua hiivaa, maissiuutetta tai epäorgaanisia suoloja, kuten ammoniumsulfaattia, natriumnitraattia tai ammonium-kloridia. Mieluummin käytetään epäorgaanisia suoloja, kuten natriumkloridi a, kaliumkloridia tai fosfaatteja, ja tarvittaessa lisätään hivenmetalleja ja vaahtoani! sta estävää ainetta, kuten Adekanolia (tavaramerkki, Asaki, Denka Ind. Co.) tai silikonia (tavaramerkki, Shinetsu Chem. Ind. Co.). Kasvatuslämpötilan tulisi olla noin 20-35°C:en alueella, mieluummin noin 25-30°C. Baumysiinin tuoton — huippu viljelyliemessä saavutetaan 3~T vuorokauden kuluttua viljeltäessä joko ravistelupullossa tai nesteen submersisti aerogisesti ilmastaen tai ravistellen, kuten seuraavissa esimerkeissä osoitetaan. ^
Keksinnön mukaisesti baumysiiniyhdisteet voidaan ottaa talteen viljely-liemestä ja erottaa toisistaan seuraavilla menetelmillä.
Käymistäetä tuotettua baumysiiniä esiintyy sekä soluissa että viljelyliemessä, kuitenkin pääasiallisesti huovastossa. Kun baumysiinikompleksi otetaan talteen viljelyliemestä, niin viljelyliemi voidaan suodattaa ja suodos uuttaa veteen sekoittumattomalla orgaanisella liuottimena, kuten etyyliasetaatilla, butyyliasetaati11a, kloroformilla tai n-butanoli11a. Huovaston sisältämä baumysi ini voidaan ottaa talteen uuttamalla orgaanisella liuottimena kuten kloroformilla, asetonilla, n-butanoli11a, metanolilla, etanolilla, etyyliasetaatilla tai metyyli etyyli ketoni 11a, tai orgaanisen hapon tai epäorgaanisen hapon, kuten kloorivetyhapon, rikkihapon tai etikkahapon, vesiliuoksella. Vaihtoehtoisesti baumysiini voidaan uuttaa suoraan viljelyliemestä edellä mainituilla menetelmillä ilman uuttoa edeltävää huovaston erottamista. Baumysiiniä sisältävää uutetta käsi- ~ tellään esimerkiksi seuraavasti. Uute konsentroidaan tyhjössä ja uutetaan sitten pH-arvossa 7~9 veteen sekoittumattomalla orgaanisella liuottimena. Baumysiini liuotetaan vesiliuokseen, jonka pH-^h, liuos tehdään heikosti emäksiseksi, ja — baumysiini uutetaan jälleen orgaanisella liuottimena. Tarvittaessa edellä esitetyt menettelyt toistetaan baumysiinikompleksin saamiseksi puhdistetussa muodossa. Uuttamisen sijasta tai. siihen yhdistettynä baumysi ini pi toi sta viljely-lientä voidaan käsitellä pylväskromatografian avulla, jolloin absorboivana aineena voi olla aktivoitu hiili, aluminiumoksidi, piihappo tai muunnettu dekstraani, 9 58159 kuten kaupallisesti saatava, kauppanimeltään Sephadex LH-20 (Pharmacia Fine Chemical Co., New York), vastavirtajakaantumisen tai nestekromatografian avulla käyttäen sopivia orgaanisia liuottimia. Näillä menetelmillä saadut aktiiviset uutteet konsentroidaan alipaineessa, jolloin baumysiinikompleksi a saadaan epäpuhtaana punaisena jauheena.
Baumysiinikompleksista saadaan edelleen puhdistamalla ja eristämällä baumysiini komponentit , A^, ja B^, standardi eristystekniikalla, kuten pylväs- kromatografialla käyttäen erilaisia absorboivia aineita, kuten pii happoa, muunnettuja dekstraaneja (esim. Sephadex LH-20), heikosti happamia ioninvaihtohartseja tai aktivoitua hiiltä, vastavirtajakaantumisen tai nestekromatografian avulla, ^ käyttäen sopivia orgaanisia liuottimia, tai yhden tai useamman edellä mainitun menetelmän yhdistelmän avulla. Sopivassa eristämismenetelmässä baumysiinikompleksi liuotetaan pieneen määrään kloroformia, imeytetään piihappopylvääseen ja eluoidaan sopivalla orgaanisella liuottimena, esim. kloroformi -met anoli 11a, jolloin saadaan baumysiinin komponentit A1, A^, B^ ja B^. Aktiiviset eluaatit erotetaan, konsentroidaan alipaineessa ja baumysiinikomponentit puhdistetaan kromatografian avulla käyttäen Sephadex LH-20:tä. Aktiiviset eluaatit konsentroidaan, jolloin baumysiinikomponentit A1, A^, B1 ja B^ saadaan kiteyttämällä sopivasta orgaanisesta liuottimesta puhtaina kiteisinä tuotteina.
Baumysiinien A1, ja fysikokemialli set ominaisuudet ovat seuraavat: 10 581 59
Baumysiini _A^___
Ulkonäkö Heikosti emäksinen, amorfinen jauhe
Alkuaineanalyysi C H N 0 C H N 0
Havaittu 59,85 6,65 2.04 29*83 60,27 6,72 2,31 29,52
Laskettu 60,6l 6,43 2:,08 30,88 60,61 6,43 2,08 30,88
Empiirinen kaava C-.H.-NO._ ____54 45 13______
Molekyylipaino _^73,7_
Sulamispiste (Oc) 182-185 185-189
Ominai skiertokyky ra]20 +150° +135° D (CHC1,, C - 0,1) 5
Liukoisuus Liukoinen happameen veteen, dimetyylisulfoksidiin, 2- metoksietanoliin, metanoliin, etanoliin, n-propanoliin, n-butanoliin, etyyliasetaattiin, butyyliasetaattiin, asetoniin, metyylietyyliketoniin, metyleenikloridiin ja ~ kloroformiin. Liukenematon veteen, n-heksaaniin, sykloheksaaniin ja petrolieetteriin
R^-arvotXX
XC:M - 10:1 0,25 0,08 C:M:B - 7*3*3 0,39 0,28 C:M:F - 90:10:1 0,26 0,17 C:M:A - 80:20:4 0,74 0,64 11 58159
Baumysiini |
Reaktio Hapan vesi- Ja metanoliliuos on punainen ja liuos muuttuu purppuranpunaiseksi, kun se on alkalinen. Baumysiini A^ ja A^ antavat positiivisen ninhydrii-nireaktion eivätkä pelkistä Fehlingin liuosta W ja näkyvän va- Kuva 1 Kuva 2 l°n absorptiospektri 234,5 (452), 252,5 (327), 234,5 (427), 252,5 (311), - ja maksimi 289 (120), 478 (127), 289 (108), 478 (125), (E* * ) 497 (128)» 552 (76) 497 (128), 532 (84) v 1 cm7 metanolissa (graafinen käyrä 1) 0,1N HCl-MeOH:ssa 234,5 (459), 252,5 (326), 234,5 (447), 252,5 (311), (graafinen käyrä 2) 289 (121), 479 (133), 289 (lii), 478 (131), 497 (133), 532 (78) 497 (131). 532 (70) 0,1N HCl-MeOH:ssa 250,5 (416), 350 (83), 250,5 (42l), 350 (80), (graafinen käyrä 3) 558 (164), 597 (152) 558 (170), 596 (164)
Infrapuna absorptio- Kuva 2 Kuva 5 _ spektri (KBr) NMR-spektri Kuva 3 | Kuva 6 ^PMH^ (100 MHz, CDCljSssa) x C 5 NMR- Tunnusomainen C-l" huip- Tunnusomainen C-l" huip- spektri pu 106,7 miljoonasosal- pu 101,6 miljoonasosalle le « 58159 X C kloroformi, M - metanoli, B » bentseen!, F - muurahaishappo, A - etikkahappo
** Ohutlevykromatografian olosuhteet: piihappo-ohutkerros 60F254 (Merck Co.), 23°C
X3CX Spektri mitattu Varian XL 100 laitteella 25,2 MHzillä. Sisäinen standardi on CDCl^ baumyeiini A^lle ja TMS baumysiini A2:lle. Näytteet: Αχ - 27 mg/O,5 ml CDCljj Ag - 44 mg/0,6 ml CDClj.
Baumysiini B^ B^
Yleiset [ ominaisuudet Heikosti emäksinen, amorfinen, punainen jauhe
Alkuaineanalyysi CHNO CHN O
Havaittu 57,32 6,45 2,01 32,58 $6,59 5,96 1,92 31,91
Laskettu__59,58 [β,ΟΙ 2,04132,57 | 59,38 6,01 2,04 52,57
Empiirinen kaava C34H41^®14
Molekyylipaino 687,7
Sulamispiste (Ocj 181-189 197-201
Ominaiskiertokyky r -|20 +170° +170°
L°tJD
(CHClj : MeOH - 1*1, C - 0,1)
Liukoisuus Liukoinen happameen veteen, metyylisellosolviin, meta- noliin, etanoliin, n-propanoliin ja n-butanoliin. Liukenematon veteen, etyyliasetaattiin, asetoniin, metyleenikloridiin, kloroformiin, hiilitetraklori-diin, bentseeniin, tolueeniin, etyylieetteriin ja n-heksaaniin, (Baumyeiini B? on liukoinen [veteen). ____ 13 581 59
Baumyslini___B2
Rj.-arvotxx XC*M - 10si 0,07 0,01
CsMsB - 7*3*3 0,39 0,14
CsMsF - 90:10:1 0,18 0,10
CsMjA - 80:20:4 0,64 0,30
Reaktio Hapan vesi- ja metanoliliuos ovat punaisia ja muuttu vat purppuranpunaisiksi liuoksen ollessa alkalinen. Baumysiini B^ ja Bg antavat positiivisen ninhydriini-reaktion eivätkä pelkistä Fehlingin liuosta UV ja näkyvän valon Kuva 7 Kuva 10 ^ absorptiospektri ja 234,5 (552), 253 (385), 234 (575), 252 (414), maksimi 290 (132), 476 (179), 290 (130), 478 (176), ) 495 (181), 530 (101) 495 (183), 530 (120) v 1 cm ' metanolissa (graafinen käyrä 1) 0,1N HCl-MeOH:ssa 234 (580), 253 (397), 234 (6l6), 253 (419), (graafinen käyrä 2) 290 (140), 476 (182), 290 (145), 476 (195), 495 (184), 530 (100) 494 (191), 529 (105) 0,IN NaOE-MeOH:ssa 251 (453), 350 (65), 251 (499), 350 (74), (graafinen käyrä 3) 556 (206), 594 (195) 556 (231), 594 (218)
Infrapuna absorptio- spektri (Or) *UTa 8 KuT» 11 KMR-spektri Kuva 9 Kuva 12 (100 MHz, CDCljin ja CD^ODsn seoksessa) NMR-spektri Tunnusomainen C-l" huippu Tunnusomainen C-l" huip- 107,1 miljoonasosalla pu 102,1 miljoonasosal la 111 58159 C = kloroformi, M = metanoil, B = bentseeni, F = muurahaishappo, A = etikkahappo XX Ohutlevykromatografian olosuhteet: piihappo-ohutkerros (Merck Co.),
23°C
XXX · ♦ . ·
Spektri mitattu Varian XL 100 laitteella, 25,2 MHz:llä. Sisäinen standardi on TMS. Näytteet: = U5 mg/0,6 ml. CDCl^:metanoli (5:1); = 30 mg/0,6 ml.
CDCl^:metanoli (1:1).
Kuvien selitys
Kuva 1. metanoliin liuotetun baumysiinin A^ ultravioletti- ja näkyvän valon absorp-ti ospektri.
Kuva 2. baumysiini A^ infrapuna-absorptiospektri kaliumbromiditabletissa. '
Kuva 3. CDCl^ren liuotetun baumysiinin A^ NMR-spektri (100 MHz).
Kuva metanoliin liuotetun baumysiinin A^ ultravi oletti- ja näkyvän valon absorp-tiospektri.
Kuva 5* baumysiinin Ainfrapuna-absorptiospektri kaliumbromiditabletissa.
Kuva 6. CDCl^:en liuotetun baumysiinin A^ NMR-spektri (100 MHz).
Kuva T· metanoliin liuotetun baumysiinin B^ ultravioletti - ja näkyvän valon absorpti ospektri.
Kuva 8. baumysiinin B^ infrapuna-absorptiospektri kaliumbromidi tabletissa.
Kuva 9· CDCl^:n ja CD^ODin seokseen liuotetun baumysiinin B^ NMR-spektri (100 MHz).
Kuva 10. metanoliin liuotetun baumysiinin B2 ultravioletti- ja näkyvän valon absorptiospektri.
Kuva 11. baumysiinin B^ infrapuna-absorptiospektri kaliumbromiditabletissa.
Kuva 12. CDCl^n ja CD^ODrn seokseen liuotetun baumysiinin NMR-spektri (100 MHz).
Kuva 13· baumysiinin A antama kentän desorption massaspektri (emitterin virta: 11 mA).
Kuva 14. baumysiinin Aantama kentän desorption massaspektri (emitterin virta: 12 mA).
Kuva 15· baumysiinin B^ metyyliesterijohdannaisen antama kentän desorption massa-spektri (emitterin virta: 1U mA).
Kuva 16. baumysiinin B^ metyyli esterijohdannaisen antama kentän desorption massa-spektri (emitterin virta: 1^ mA).
Baumysiinien A^, A^, B^ ja B2 rakenne määrättiin keksinnössä seuraavasti: Hydrolysoitaessa 0,1N HCl:lla 30 minuutin ajan 85°C:ssa baumysiineistä A^, A^, B^ ja B2 muodostuu daunomysinonia ja daunosamiinia. Daunomysiini saadaan edellä mainituista baumysiinikomponenteista osittaisella hydrolyysillä, joka suo- 15 5 81 5 9 ritetaan 1 %:lla rikkihapolla 15 minuutin ajan 32°C:ssa. Happamella hydrolyysillä haumysiinistä A ja baumysiinistä B saadun daunomysinonin, daunosamiinin ja dauno-mysiinin fysi kokemiani set ominaisuudet kuten NMR, massa- ja infrapuna-absorptio-spektri , sulamispiste ja R^-arvot ohutlevykromatografialla ovat täysin yhtäpitävät ennalta tunnetun daunomysiinin ominaisuuksien kanssa (Journal of American Chemical Society, 86, 5334-5335, 5335-5336 (1964)).
Baumysiinien A^ ja A^ rakenteiden lisäselvistys suoritettiin seuraavasti: Baumysiinin A^ Pd/BaSO^:llä metanolissa suoritetussa hydrauksessa muodostui aglukoni- sekä sokeriosa. PMR-analyysin ja massaspektrin mittaustulosten perusteella aglukoniosa määriteltiin 7-deoksidaunomysinoniksi. Baumysiinien A^ ja A^ sokeriosan rakenne saatiin käsittelemällä jompaa kumpaa osaa (ts. sitä sokeriosaa, joka on saatu A :stä tai A2:sta) etikkahappoanhydridillä pyridiinissä ja analysoimalla tetra-asetyylijohdannainen PMRrllä tai CI (kemiallinen ioni saati o)-massa-spektrin avulla, joilla saatiin seuraava rakennekaava:
/CH V^OCOCH
CH3\ ^ ° \ ^ 0 >|-/
Ph nh
^H2 H J?H2 COCH ococh3 o-ch3 J
OCOCH3
Baumysiinien A^ ja A^ rakenteiden varmistamiseksi määritettiin kummallekin molekyyli-ionihuippu äskettäin kehitetyn FD-(kenttä desorptio) massaspektrianalyysin avulla ja sen todettiin olevan m/e = 674 (M + 1) kuten on nähtävissä kuvista 13 ja 14. Sen mukaan molekyyli kaava sekä baumysi ini lie A^ että A^ on C^H^NO^.
Niiden erojen perusteella, jotka ovat sulamispisteissä, ominaiskiertokyvyissä, —- . ..13 ohutkerroskromatografla R^-arvoassa ja C NMR-huipuissa, baumysiini A^ ja on määritelty toistensa stereoisomeereiksi.
Baumysiinien ja B2 rakenteet määriteltiin seuraavasti: Baumysiinin B1 Pd/BaSO^:llä metanolissa suoritetussa hydrauksessa vapautui aglukoni- sekä sokeriosa. PMR-analyysin ja massaspektrin mittaustulosten perusteella aglukoniosa määriteltiin 7-desoksidaunomysinoniksi. Sokeriosan diasetyylijohdannainen, joka saatiin käsittelemällä kutakin sokeriosaa etikkahappoanhydridillä pyridiinissä, analysoitiin PMR:n tai CI-massaspektrin avulla. Di asetyyli johdannai selle saatiin seuraava rakennekaava: 58159 16 H (^3 VC0Cli3 u3c\o^°\r
\ H COCH
H J
Baumysiinien ja B^ rakenteiden varmistamiseksi määritettiin kummallekin molekyy li-ionihuippu FD-massaspektrianalyysin perusteella. Koska molekyyli-ionihuippua ei voitu saada baumysiinistä B^ ja B^ per se, analysoitiin niiden metyyli esteri-johdannaiset, jotka saatiin käsittelemällä diatsometäänillä, ja analyysien perus- — teella saatu ionihuippu m/e = 702 (M + l):llä on esitetty kuvassa 15 ja kuvassa 16. Huiput seuraavilla m/e:n arvoilla T16, 730 ja 7^ on esitetty kuvissa 15 ja 16 ja ne osoittavat aminotähteiden metylointia daunosamiinin aminotähteissä. Bau- mysiinillä B ja baumysiinillä B on sama molekyylikaava. Sulamispisteiden, ohut-1 . 13 .
kerroskromatografuan Rf-arvojen ja C NMR-huappujen erojen perusteella ne ovat toistensa stereo:someerejä.
Edellä esitetyn tutkimuksen tulosten perusteella baumysiinin komponenteilla A1, A , B ja B2 on edellä esitetyt rakenteet.
Kuten edellä mainittiin baumysiinit A^ ja sekä B^ ja ovat toistensa stereo:someerejä ja ne voidaan helposti erottaa fysikaalisissa ominaisuuksissa, kuten sulamispisteissä, ominaiskiertokyvyssä (A ja A ), ohutkerroskromatografian 13 . ' . d
Rf-arvo:ssa ja C NMR-huipuissa olev:en eroavuuks:en perusteella.
Baumysiin:komponentit A^, A^, B1 ja ovat uusia antrasykliin:-glukosidi -antibiootteja, joissa on sama aglukoniosa ja sama aminosoker.i (so. daunosamiini) kuin daunomysiinillä, mutta ne eroavat daunomysiinistä siinä suhteessa, että niissä on lisäsokeriosia. Keksinnön mukaisesti valmistetuilla baumysiiniantibiooteilla ja tunnetuilla antrasykliiniantibiooteilla on myös erilaiset R^-arvot silikageeli ohutlevykromatografiässä erilaisilla liuot:njärjestelmillä.
Baumysiine.illä A^, Ag, B^ ja B^ on erilaisten mikro-organismien kasvua estävää aktiivisuutta. Näiden antibioottien vähimmäispitoisuudet, jotka estävät mikro-organismien kasvua, määritettynä viljelyliemilaimennusmenetelmällä, on esitetty taulukossa 1.
17 581 59
Taulukko 1
Baumysiinien A^f A^, B^ ja B^ mikrobien kasvua estävä spektri
Kasvua estävä vähimmäispitoisuus Koeorganismi (ug/ml) BM-A^ BM-Ag BM-Bj^ BM-B2
Staph, aureus FDA209P 1*56 5*12 50 100
Staph, aureus Smith 0,78 1*56 50 50 ^ B. sublltls ATCC 6635 0,78 3.12 100 >100 B. cereus ATCC 9634 1*56 3.12 100 >100 B. megaterium NHHL B-938 1.56 6,25 100 >100 ^ Sareina lutea ATCC 9341 0,78 3.12 50 25
Micrococcus flavs 0,78 1.56 50 50
Coryne. bovis 1810 1.56 6,25 50 50
Ps. fluoresoens NIHJB-254 >100 100 100 > 100
Proteus morganii > 100 > 100 > 100 > 100
Mycobaoterium smegmatls ATCC 607 6,25 12,5 100 >100
Candida albicans IAM 4905 100 100 100 > 100
Candida tropicalis 100 100 100 >100 BM: baumysiini
Baumysiinikomponenteilla A^, A2, B^ ja B2 on mikrobien kasvua estävää aktiivisuutta erityisesti gram-positiivisia bakteereita kohtaan ja " niitä voidaan käyttää eläinten, mukaan luettuna ihminen, käsittelyssä, kun hoidetaan kurkkumätää, tuberkuloosia, keuhkokuumetta, jäykkäkouristusta ja muita tarttuvia tauteja, joita graa-positiivieet bakteerit —· aiheuttavat.
Baumysiinikomponenteilla A^, A2, ja B2 on eläinkokeissa osoitettu olevan huomattava kasvaimien kasvua estävä aktiivisuus ja alhainen myrkyllisyys, ja ne ovat täten terapeuttisesti käyttökelpoisia estettäessä nisäkkäiden kasvaimien kasvua. Erityisesti baumysiineillä A^, A2> B^ ja S2 on huomattava inhiboiva vaikutus hiiren L-1210 leukemiaa kohtaan. Esimerkiksi ruiskutettaessa BBF^-hiiriin vatsanntelonsisälsestä 1 x 10^ L-1210 solua/hiiri ja sen jälkeen lääkettä vatsaontelona!- ie 5 815 9 säisesti kerran päivässä kymmenenä peräkkäisenä päivänä. Eloonjäämisajat pitenivät 30 päivässä kontrolliin verrattuna seuraavasti:
Annos mg/kg/vuorokausi Eloonjäämisajan piteneminen T/C (%) BM-A^ BM-A^ BM-B.J BM-B^ Daunomysiini 8 1 UT 155 6 165 135 myrkyllinen
k 136 111 10U
2 117 99 16U
1 167 105 99 182 0,5 173 99 158 0,25 163 99 137 0,125 151 93 121 0,06 >300 ll+1 109 0,03 187 0,015 155 0,008 131 0,00U 131 Äkillinen myrkyllisyys
Keksinnön mukaisesti valmistettujen antibioottien LD^-arvot, kun antibiootteja ruiskutetaan vatsaontelonsisäisesti, on esitetty seuraavassa taulukossa.
LT>50 (mg/kg) BM-A1 1,5-2,5 BM-A2 15-20 BM-B1 k0-60 BM-B2 75-100 BM: baumysiini
Kuten edellä on esitetty, baumysiinikomponentit A^, A2> B1 ja 19 581 59 ovat uusia antibiootteja, jotka ovat käyttökelpoisia sekä .ihmis- että eläinlääketieteessä ja joilla on huomattavaa estävää vaikutusta nisäkkäiden pahanlaatuisten kasvainten, erityisesti ascitis- ja kiinteiden kasvaimien suhteen.
Keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet muodostavat myrkyttömiä happo-addit.iosuoloja erilaisten orgaanisten ja epäorgaanisten suoloja muodostavien reagenssien kanssa, ja ne muodostavat myrkyttömiä komplekseja desoksir.ibonukle-iin.ihapon kanssa. Täten farmaseuttisesti hyväksyttävien happojen, kuten rikki-, fosfori-, suola-, etikka-, propioni-, öljy-, palmiti.ini-, sitruuna-, meripihka-, viini-, glutamiini- ja pantoteenihapon jne. kanssa muodostettuja happoadditio-suoloja ja myrkyttömiä komplekseja desoksiribonuklei.inihapon kanssa voidaan käyt-tää samalla tavalla kuten baumysiiniyhdisteitä per se. Suolat muodostetaan, eristetään, puhdistetaan ja formuloidaan yleisillä antibioottien suolanmuodostukseen käytetyillä menetelmillä. DNA-kompleksien ollessa kysymyksessä, voidaan käyttää DNA:a, joka on uutettu eläimistä ja mikro-organismeista, kuten vasikan kateen-korvasta, Hela-soluista, ihmis- tai eläins.ik.iön soluista, hiivoista jne. Baumysiini-DNA-komplekse ja voidaan valmistaa menetelmillä, joita on kuvattu kirjallisuudessa muiden antrasykli.ini antibiootti en, kuten adiamysiinin, daunorubi s.i i ni n jne. DNA-kompleks.ien valmistamisen yhteydessä /katso esim. Nature, New Biol.
239:110 (1973) ja Europ. J. Cancer _1C^:399 (197MJ7· Vapaassa emäsmuodossa olevat baumysiiniyhdisteet ovat terapeuttisesti samanarvoisia niiden myrkyttömien happo-addit.iosuolojen ja DNA-kompleksien kanssa.
Seuraavat esimerkit on tarkoitettu valaisemaan keksintöä.
Esimerkki 1
Valmistettiin elatusaine, jolla oli seuraava koostumus:
Perunatärkkelys 1 %
Glukoosi 1 % " "Prorich" (so.ijapapujauhe) 1,5 %
KgHPO^ 0,1 %
MgS0u.7H20 0,1 %
NaCl 0,3 %
SuolatX 0,125 % (pH 7,M
20 5 81 5 9 xSuolat CuSO^'SHgO 2,8 g
FeS04*7H20 0,4 g
MhCl2.4E20 3,2 g
ZnS04.7H20 0,8 g 300 mltsea vettä 30 ml tätä elatusalnetta steriloitiin 120°C:ssa noin 13 minuutin ajan 500 ml pullossa ja elatusaineeseen siirrostettiin Streptomyoes ooeruleorubidus ME 13O-A4 kasvustoa agar-vinopinnalta platinasilmukan avulla.
Inkubointi kesti 72 tuntia 28°Ctssa pyörivässä ravistelijassa (23Ο rpm). Tämä on ymppiviljelmä. Seurasvaa elatusalnetta valmistettiin seit seinän litraa ja elatusaine jaettiin 50 ml »n eriin 500 ml: n pulloihin, joissa se steriloitiin ja siirrostettiin aseptisesti 1 milliä edellä mai- _ nittua ymppiviljelmää. Käyminen suoritettiin 28°C:ssa seitsemän vuorokauden ajan pyörivässä ravistelijassa (230 rpm).
Sakkaroosi 4 96 "Prorich" (Soijapapuproteiini,
Ajinomoto Co.) 2,5 96 ffaCl 0,25 $>
Kalsiumkarbonaatti 0,32 $>
Suoloja* 0,125 % (pH 7,4) XSuolat CuS04*5H20 1,25 g
MnCl2-4H20 1,25 fif
ZnS04«7H20 12,5 g 500 mlsssa vettä
Saatu ravintoliuos suodatettiin viljelmän suodoksen ja hiivaston erottamiseksi. Suodos uutettiin kolme kertaa l/5 tilavuudella kloroformia.
Euovaeto uutettiin kolme kertaa 2 1:11a asetonia 2 kg kohti huovastoa ja saatu asetoniuute väkevöitettiin puoleen tilavuuteen alipaineessa.
Konsentraatti uutettiin kolme kertaa 2 1 kloroformia, yhdistettiin kloroformilluoksen kanssa, joka saatiin viljelmäsuodoksesta ja haihdutettiin alipaineessa. Kymmenen grammaa öljymäistä ainetta, joka saatiin, liuotettiin 50 mitään kloroformia ja sakka, joka muodostui, kun lisättiin 300 ml n-heksaania, sentrifugoitiin viisi minuuttia 3 000 rpm n-heksaaniin liukoisten epäpuhtauksien poistamiseksi. Saatu sakka (1,4 g) liuotettiin 100 21 53159 ml kloroformia ja uutettiin kolme kertaa 150 ml 0,01M etikkahappoa happoliukoisten aineiden saamiseksi. Uutteeseen lisättiin 2M trishydroksiaminometaani-liuosta, jolla säädettiin pH 8,5, ja liuos uutettiin kolme kertaa 100 ml:11a kloroformia. Kloroformikerroksesta, haihduttamalla se alipaineessa, saatiin 250 mg punaista raakaa jauhetta (baumysiini-kompleksi).
Esimerkki 2
Esimerkissä 1 saatu raaka jauhe (230 mg) liuotettiin 2 ml kloroformi-metanoliseosta (10:1), vietiin pylvääseen, jonka pituus oli 65 cm, läpimitta 8 cm, ja joka oli täytetty 80 g:11a piihappoa ja pesty kloroformi-metanoliseok-sella (10:1). Baumysiini A^-fraktio eluoitiin ensin, sitä seurasivat peräkkäin ^ baumysiini A^, ja B^ käytettäessä vastaavana eluenttina kloroformi-metanoli- seoksia 8:1, 5:1 ja 2:1.
Aktiiviset fraktiot yhdistettiin erikseen ja haihdutettiin kuivattiin ali-*' paineessa. Kukin fraktio pantiin Sephadex LH-20:llä täytetyn pylvääseen (pylvään pituus oli 25 cm ja läpimitta 1,8 cm), ja pylväs pestiin 3:1 tolueeni-metanoli-seoksella. Saadut fraktiot konsentroitiin, konsentraattiin lisättiin n-heksaania, jolloin saatiin punaisina jauheina, baumysiini A^ 10 mg, baumysiini A^ 18 mg, baumysiini 3 mg ja baumysiini 1 mg.
Esimerkki 3
Valmistettiin elatusaine, jolla oli seuraava koostumus:
Perunatärkkelys 2 %
Glukoosi 2 %
Hiivauute (Daigo Ey° Co.) 0,5 %
NaCl 0,25 !
Kalsiumkarbonaatti 0,32 %
Soijajauho (Nishin Oil KK) 2 %
Suolatx 0,2 % (pH 7,k) χ
Suolat ovat samat kuin esimerkissä 1.
Valmistettiin kahdeksan litraa, edellä mainittua elatusainetta, joka jaettiin 50 ml:n erissä 500 ml:n pulloihin, steriloitiin 120°C:ssa 15 minuuttia ja siirrostettiin 1 ml:11a, esimerkissä 1 mainitulla menetelmällä valmistettua Streptomyces peucetius subsp. carneus ATCC 2135^:n ymppiviljelmää.
Käyminen suoritettiin pyörivässä ravistelijassa 28°C:ssa kuuden 22 5 81 5 9 vuorokauden ajan. Viljelty ravintoliuos suodatettiin huovaston erottamiseksi viljelmän suodoksesta. Uuttaminen suoritettiin kloroformilla ja asetonilla, kuten esimerkissä 1 ja saatiin 10 g öljymäistä ainetta. Öljymäinen aine liuotettiin 100 ml:aan metanolia ja saatiin sakkaa 1,2 g, sen jälkeen, kun n-heksaaniin liukoiset aineet oli poistettu lisäämällä 100 ml n-heksaania. Punainen sakka liuotettiin 100 ml kloroformia ja uutettiin 600 ml:11a natriumasetaatti-puskuria (pH 3,0) happoon liukenevan aineen saamiseksi. Sen jälkeen, kun uutteeseen lisättiin 0,5M etyleeni-diamiinitetraetikkahappoa siten, että uute tuli mainitun hapon suhteen 0,01M:ksi, säädettiin pH 8:aan 1+M natriumhydrokloridilla.
Tämän vesiliuoksen aktiiviset aineosat uutettiin neljä kertaa 500 ml:11a n-butanolia. Muodostuneet kloroformi- ja n-butanoli-kerrokset väkevöitiin erikseen alipaineessa ja saatiin 200 mg punaista jauhetta, joka oli pääasiallisesti bau-mysiiniä B2· Tämä raaka jauhe liuotettiin 5 ml kloroformi-metanolia, pantiin 80 g:lla piihappoa täytetyn pylvään päälle (pylvään pituus oli 23 cm ja läpimitta 3,0 cm) ja pylväs pestiin kloroformin ja metanolin seoksella 20:1. Baumysiini B1 ja B2 eluoitiin peräkkäin kloroformin ja metanolin seoksilla 5:1 ja 2:1. Baumysii-nien B^ ja B^ fraktiot erikseen konsentroitiin alipaineessa ja saatiin baumysiini B1 50 mg ja baumysiini 8 mg. Saadut baumysiinit B1 ja B^ kiteytettiin uudelleen metanolista, ja saatiin vastaavasti 31 mg ja 6,5 mg kiteistä ainetta. Tämä menetelmä tuottaa hyvin vähän baumysiiniä A1 ja A^.
Esimerkki U
Valmistettiin elatusaine, jolla on seuraava koostumus:
Perunatärkkelys 1 %
Glukoosi 1 % "Prorich" (soijapapujauhe) 1,5 % k2hpou 0,1 %
MgS0v7H20 0,1 %
NaCl 0,3 %
Suolat X 0,125 % (pH 7,1+) XSuolat
CuS0u.5H20 2,8 g
FeS0u.7H20 0,1+ g
MnCl2.l+H20 3,2 g
ZnS0u.7H20 0,8 g 500 ml:ssa vettä 23 581 59 50 ml tätä elatusainetta steriloitiin 120°C:ssa noin 15 minuutin ajan 500 ml pullossa ja elatusaineeseen siirrostettiin Streptomyces peucetius subsp.
caestus NRRL B-5337 kasvustoa agar-vinopinnalta platinasilmukan avulla.
Inkubointi kesti 72 tuntia 28°C:ssa pyörivässä ravistelijassa (230 rpra).
Tämä on ymppiviljelmä. Seuraavaa elatusainetta valmistettiin seitsemän litraa, ja elatusaine jaettiin 50 ml:n eriin 500 ml:n pulloihin, joissa se steriloitiin ja siirrostettiin aseptisesti 1 ml:lla edellä mainittua ymppiviljelmää. Käyminen suoritettiin 28°C:ssa seitsemän vuorokauden ajan pyörivässä ravistelijassa (230 rpm).
Sakkaroosi ^ % "Prorich" (soijapapuprote-iini, Ajinomoto Co.) 2,5 %
NaCl 0,25 %
Kalsiumkarbonaatti 0,32 %
Suoloja X 0,125 % (pH T,k) xSuolat
CuSO^.5Η^0 1,25 g
MnCl2.l+H20 1,25 g
ZnS0v7H20 12,5 g 500 ml:ssa vettä
Saatu ravintoliuos suodatettiin viljelmän suodoksen ja hiivaston erottamiseksi. Suodos uutettiin kolme kertaa 1/5 tilavuudella kloroformia. Huovasto uutettiin kolme kertaa 2 1:11a asetonia 1 kg kohti huovastoa ja saatu asetoniuute väke-vöitettiin puoleen tilavuuteen alipaineessa.
Konsentraatti uutettiin kolme kertaa 2 1 kloroformia, yhdistettiin klorofor-miliuoksen kanssa, joka saatiin viljelmäsuodoksesta ja haihdutettiin alipaineessa. Kymmenen grammaa öljymäistä ainetta, joka saatiin, liuotettiin 50 ml:aan kloroformia ja sakka, joka muodostui, kun lisättiin 300 ml n-heksaania, sentrifugoitiin viisi minuuttia 3 000 rpm n-heksaaniin liukoisten epäpuhtauksien poistamiseksi.
Saatu sakka (1,8 g) liuotettiin 100 ml:aan kloroformia ja uutettiin kolme kertaa 200 ml:11a 0,01M etikkahappoa happoliukoisten aineiden saamiseksi. Uutteeseen lisättiin 2M trishydroksiaminometaani-liuosta, jolla säädettiin pH 8,5, ja liuos uutettiin kolme kertaa 100 ml:11a kloroformia. Kloroformikerroksesta, haihduttamalla se alipaineessa, saatiin 185 mg punaista raakaa jauhetta (baumysiini-komp-leksi). Saatu raaica jauhe (185 mg) liuotettiin 2 ml:aan kloroformi-metanoliseosta 2k 58159 (10:1 ), liuos vietiin pylvääseen, jonka korkeus oli 65 cm, läpimitta 8 cm, ja joka oli täytetty 80 g:lla piihappoa ja pesty kloroformi-metanoliseoksella (10:1). Bau-mysiini A^-fraktio eluoitiin ensin, sitä seurasivat peräkkäin baumysiini A^, B1 ja Bp käytettäessä vastaavana eluenttina kloroformi-metanoliseoksia 8:1, 5:1 ja 2:1.
Sen jälkeen, kun aktiiviset fraktiot oli erikseen yhdistetty ja haihdutettu kuiviin alipaineessa, jokainen fraktio vietiin Sephadex LH-20:llä täytettyyn pylvääseen (pylvään korkeus oli 25 cm ja läpimitta 1,8 cm) ja pylväs pestiin 3:1 tolueeni-metanoliseoksella. Kunkin edellä saadun fraktion konsentroinnin jälkeen lisäämällä n-heksaania konsentraattiin saatiin punaisina jauheina 11 mg baumysiini A^ 10 mg baumysiini A^, 7 mg baumysiini B^ ja 3 mg baumysiini B^.
Esimerkki 5
Valmistettiin elatusaine, jolla on seuraava koostumus:
Perunatärkkelys 1 %
Glukoosi 1 % "Prorich" (soijapapujauhe) 1,5 %
KgHPO^ 0,1 %
MgSO^.THgO 0,1 %
NaCl 0,3 ί
Suolat x 0,125 % (pH 7,M
χ
Suolat
CuS0u.5H20 2,8 g
FeS0v7H20 0,k g
MnU2.UH20 3,2 g
ZnSO^.THgO 0,8 g 500 ml:ssa vettä 50 ml tätä elatusainetta steriloitiin 120°C:ssa noin 15 minuutin ajan 500 ml pullossa ja elatusaineeseen siirrostettiin Streptomyces peucetius NRRL B-3826 kasvustoa agar-vinopinnalta platinasilmukan avulla.
Inkubointi kesti 72 tuntia 28°C:ssa pyörivässä ravistelijassa (230 rpm). Tämä on ymppiviljelmä. Seuraavaa elatusainetta valmistettiin seitsemän litraa ja elatusaine jaettiin 50 ml:n eriin 500 ml:n pulloihin, joissa se steriloitiin ja siirrostettiin aseptisesti 1 ml:11a edellä mainittua ymppiviljelmää. Käyminen suoritettiin 28°C:ssa seitsemän vuorokauden ajan pyörivässä ravistelijassa (230 rpm). Sakkaroosi k % "Prorich" (soijapapuprote-iini, Ajinomoto Co.) 2,5 %
NaCl 0,25 %
Kalsiumkurbonaatti 0,32 %
Suoloja x 0,125 % (pH '(,k ) 25 58159 xSuolat
CuS0u.5H20 1,25 g
MnCl2.UH20 1,25 g
ZnSO^.THgO 12,5 g 500 ml:ssa vettä
Saatu ravintoliuos suodatettiin viljelmän suodoksen ja huovaston erottamiseksi. Suodos uutettiin kolme kertaa 1/5 tilavuudella kloroformia. Huovasto uutettiin kolme kertaa 2 1:11a asetonia 1 kg kohti huovastoa ja saatu asetoniuute väke-vöitettiin puoleen tilavuuteen alipaineessa.
Konsentraatti uutettiin kolme kertaa 2 1 kloroformia, yhdistettiin klorofor-„ miliuoksen kanssa, joka saatiin viljelmäsuodoksesta ja haihdutettiin alipaineessa.
Kymmenen grammaa öljymäistä ainetta, joka saatiin, liuotettiin 50 mlraan kloroformia ja sakka, joka muodostui, kun lisättiin 300 ml n-heksaania, sentrifugoitiin viisi minuuttia 3 000 rpm n-heksaaniin liukoisten epäpuhtauksien poistamiseksi.
Saatu sakka (1,2 g) liuotettiin 100 ml:aan kloroformia ja uutettiin kolme kertaa 150 ml:lla 0,01M etikkahappoa happoliukoisten aineiden saamiseksi. Uutteeseen lisättiin 2M trishydroksiaminometaani-liuosta, jolla säädettiin pH 8,5, ja liuos uutettiin kolme kertaa 100 ml :11a kloroformia. Kloroformikerroksesta, haihduttamalla se alipaineessa, saatiin 97 mg punaista raakaa jauhetta (haumysiini-kompleksi). Saatu raaka jauhe (97 mg) liuotettiin 2 ml:aan kloroformi-metanoliseosta (10:1 ), liuos vietiin pylvääseen, jonka korkeus oli 65 cm, läpimitta 8 cm, ja joka oli täytetty 60 g:11a piihappoa ja pesty kloroformi-metanoliseoksella (10:1). Baumysiini A -fraktio eluoitiin ensin, sitä seurasivat peräkkäin baumysiini A2, B1 ja B2 käytettäessä vastaavana eluenttina kloroformi-metanoliseoksia 8:1, 5:1 ja 2:1.
Sen jälkeen, kun aktiiviset fraktiot oli erikseen yhdistetty ja haihdutettu kuiviin alipaineessa, jokainen fraktio vietiin Sephadex LH-20:llä täytettyyn pyl-- vääseen (pylvään korkeus oli 25 cm ja läpimitta 1,8 cm) ja pylväs pestiin 3:1 tolueeni-metanoliseoksella. Kunkin edellä saadun fraktion konsentroinnin jälkeen lisäämällä n-heksaania konsentraattiin saatiin punaisina jauheina 10 mg baumysii-ni A.j , 5 mg baumysiini Ag, 1 mg, baumysiini ja 3 mg baumysiini Bg.
Claims (2)
- 58159 26 Patenttivaatimus : Menetelmä kasvaintenvastaisen baumysiinikompleksin valmistamiseksi, jolla on kaava
- 0 HO il 1 ✓v C0CH_ 3 OCH 0 HO 0 E-0 iK2 ja sen stereoisomeeristen komponenttien ja Ag valmistamiseksi, joilla on kaava I, jossa R on -ch-o-ch-ch3 CH_ CH_0H oh™ CH3 ja sen stereoisomeeristen komponenttien ja Bg valmistamiseksi, joilla on kaava I, jossa R on -CH-0-CH-CH3 CHg COOH CHOH »3 tunnettu siitä, että jotakin seuraavista baumysiiniä tuottavista Streptomyces-kannoista Streptomyces coeruleorubidus ME Iso-Ait (FERM P-35^0, ATCC 31276), Streptomyces peucetius subsp. carneus ATCC 2135^» Streptomyces peucetius subsp. caestus NRRL B-5337» Streptomyces peucetius NRRL B-3Ö26 viljellään submersisissa aerobisissa olosuhteissa assimiloituvia hiilen ja typen lähteitä ja epäorgaanisia suoloja sisältävässä ravintoliemessä, kunnes organismi on tuottanut olennaisen määrän baumysiinikompleksia, joka eristetään viljelylie-mestä tavanomaisella tavalla, edullisesti uuttamalla veden kanssa sekoittumatto-malla orgaanisella liuottimena tai kromatografoimalla, ja josta haluttaessa erotetaan baumysiinikomponentit A^, Ag, B1 ja Bg standarditekniikalla, kuten uuttamalla ja kromatografoimalla.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6381076A JPS52148064A (en) | 1976-05-31 | 1976-05-31 | Antitumors |
| JP6381076 | 1976-05-31 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI771686A7 FI771686A7 (fi) | 1977-12-01 |
| FI58159B FI58159B (fi) | 1980-08-29 |
| FI58159C true FI58159C (fi) | 1980-12-10 |
Family
ID=13240090
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI771686A FI58159C (fi) | 1976-05-31 | 1977-05-26 | Foerfarande foer framstaellning av tumoerfoerhindrande baumycinkomplexet och dess komponenter |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4147778A (fi) |
| JP (1) | JPS52148064A (fi) |
| AU (1) | AU512372B2 (fi) |
| BE (1) | BE855098A (fi) |
| CA (1) | CA1093998A (fi) |
| CH (1) | CH634079A5 (fi) |
| DE (1) | DE2724441C2 (fi) |
| DK (1) | DK144569C (fi) |
| FI (1) | FI58159C (fi) |
| FR (1) | FR2353564A1 (fi) |
| GB (1) | GB1544195A (fi) |
| GR (1) | GR73592B (fi) |
| IE (1) | IE45070B1 (fi) |
| LU (1) | LU77449A1 (fi) |
| NL (1) | NL7705812A (fi) |
| SE (1) | SE436043B (fi) |
| SU (1) | SU867318A3 (fi) |
| YU (6) | YU40479B (fi) |
| ZA (1) | ZA773228B (fi) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK160616C (da) * | 1979-02-03 | 1991-09-02 | Zaidan Hojin Biseibutsu | Fremgangsmaade til fremstilling af anthracyclinderivater eller syreadditionssalte deraf |
| JPS5648893A (en) * | 1979-09-07 | 1981-05-02 | Sanraku Inc | Preparation of anthracycline glycoside |
| JPS5643293A (en) * | 1979-09-14 | 1981-04-21 | Ishihara Sangyo Kaisha Ltd | Novel antibiotics fa-1180 a, b, c, or their salts, and their preparation |
| US4439477A (en) * | 1980-10-30 | 1984-03-27 | Lignotock Verfahrenstechnik Gmbh | Fiber mat for producing a three dimensional molded molding by the dry process |
| JPS5921394A (ja) * | 1982-07-24 | 1984-02-03 | Sanraku Inc | ダウノマイシンの製造法 |
| DK356087A (da) * | 1987-07-09 | 1989-01-10 | Biogal Gyogyszergyar | Fremgangsmaade til isolering af et antibiotikum |
| JP2779652B2 (ja) * | 1988-12-27 | 1998-07-23 | 武田薬品工業株式会社 | 生理活性物質ｔａｎ―１１２０，その還元体，それらの製造法および用途ならびに微生物 |
| US4977084A (en) * | 1989-02-16 | 1990-12-11 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Production, isolation, and identification of novel antifungal compounds |
| GB9727546D0 (en) | 1997-12-31 | 1998-03-18 | Pharmacia & Upjohn Spa | Anthracycline glycosides |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB846130A (en) | 1956-03-23 | 1960-08-24 | Ciba Ltd | New antibiotic and derivatives and salts thereof, preparations containing the same and process for the manufacture of these substances |
| CH362490A (de) | 1957-10-29 | 1962-06-15 | Ciba Geigy | Verfahren zur Herstellung eines neuen Antibiotikums |
| US3092550A (en) * | 1957-10-29 | 1963-06-04 | Ciba Geigy Corp | Antibiotic danubomycin and process for its manufacture |
| US3989598A (en) * | 1962-05-18 | 1976-11-02 | Rhone-Poulenc S.A. | Antibiotic daunorubicin and its preparation |
| FR1533151A (fr) | 1962-05-18 | 1968-07-19 | Rhone Poulenc Sa | Nouvel antibiotique et sa préparation |
| US4012284A (en) * | 1962-11-16 | 1977-03-15 | Societa' Farmaceutici Italia, S.p.A. | Process of preparation of antibiotic F.I. 1762 derivatives |
| FR1527892A (fr) | 1967-03-15 | 1968-06-07 | Rhone Poulenc Sa | Nouveau procédé de préparation de l'antibiotique 13057 r.p. |
| US3803124A (en) * | 1968-04-12 | 1974-04-09 | Farmaceutici It Soc | Process for the preparation of adriamycin and adriamycinone and adriamycin derivatives |
| US3686163A (en) * | 1968-05-14 | 1972-08-22 | Farmaceutici Italia | Dihydrodaunomycin antibiotic and derivatives thereof |
| FR1593235A (fi) | 1968-11-18 | 1970-05-25 | ||
| US3590026A (en) * | 1969-01-03 | 1971-06-29 | Phillips Petroleum Co | Recovery of polymers from solution |
| US3864480A (en) * | 1974-05-06 | 1975-02-04 | Merck & Co Inc | Cinerubin A and B As Antiparasitic Agents |
| US4039663A (en) * | 1975-03-19 | 1977-08-02 | Societa' Farmaceutici Italia S.P.A. | Daunomycins, process for their uses and intermediates |
-
1976
- 1976-05-31 JP JP6381076A patent/JPS52148064A/ja active Pending
-
1977
- 1977-05-16 US US05/797,201 patent/US4147778A/en not_active Expired - Lifetime
- 1977-05-20 GR GR53520A patent/GR73592B/el unknown
- 1977-05-23 AU AU25412/77A patent/AU512372B2/en not_active Expired
- 1977-05-25 GB GB22138/77A patent/GB1544195A/en not_active Expired
- 1977-05-26 CA CA279,217A patent/CA1093998A/en not_active Expired
- 1977-05-26 BE BE177960A patent/BE855098A/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-05-26 DK DK233477A patent/DK144569C/da not_active IP Right Cessation
- 1977-05-26 FI FI771686A patent/FI58159C/fi not_active IP Right Cessation
- 1977-05-26 NL NL7705812A patent/NL7705812A/xx not_active Application Discontinuation
- 1977-05-27 FR FR7716432A patent/FR2353564A1/fr active Granted
- 1977-05-27 ZA ZA00773228A patent/ZA773228B/xx unknown
- 1977-05-27 LU LU77449A patent/LU77449A1/xx unknown
- 1977-05-30 YU YU1342/77A patent/YU40479B/xx unknown
- 1977-05-30 SU SU772491882A patent/SU867318A3/ru active
- 1977-05-30 IE IE1106/77A patent/IE45070B1/en not_active IP Right Cessation
- 1977-05-31 DE DE2724441A patent/DE2724441C2/de not_active Expired
- 1977-05-31 CH CH665877A patent/CH634079A5/de not_active IP Right Cessation
- 1977-05-31 SE SE7706350A patent/SE436043B/xx not_active IP Right Cessation
-
1978
- 1978-03-15 US US05/886,987 patent/US4198480A/en not_active Expired - Lifetime
-
1985
- 1985-07-10 YU YU1144/85A patent/YU42643B/xx unknown
- 1985-07-10 YU YU1145/85A patent/YU43412B/xx unknown
- 1985-07-10 YU YU1142/85A patent/YU42641B/xx unknown
- 1985-07-10 YU YU1146/85A patent/YU43413B/xx unknown
- 1985-07-10 YU YU1143/85A patent/YU42642B/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1055866A (en) | Antitumor antibiotics aclacinomycins from streptomyces galilaeus | |
| CA1156578A (en) | Rhodomycin-group of antibiotics and process for preparing same | |
| US5278052A (en) | Process for the simultaneous production of benanomicins A and B | |
| US4207313A (en) | Anthracycline antibiotics | |
| FI58159C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av tumoerfoerhindrande baumycinkomplexet och dess komponenter | |
| US4219622A (en) | Process for producing antibiotics MA 144-M1 and MA 144-M2 | |
| KR910005631B1 (ko) | Bu-3420t 항종양 항생제 | |
| CA1099652A (en) | Antitumor antibiotics | |
| US4550159A (en) | Anthracycline compounds | |
| US4204038A (en) | Process for preparing antibiotics MA 144-M1 and MA 144-M2 | |
| Kim et al. | Isoverrucarol production by Fusarium oxysporum CJS-12 isolated from corn | |
| CA1207692A (en) | Anthracycline compound, process for production thereof, and uses thereof | |
| CA2017276C (en) | Carcinostatic or antitumor antibiotic, conagenin, and production and uses thereof | |
| JPS61145145A (ja) | アントラサイクリン誘導体およびそれらの微生物学的製法 | |
| CA1125746A (en) | Antitumor antiobiotics ma 144-m.sub.1 and ma 144- m.sub.2 | |
| CA1056747A (en) | Antibiotics neothramycin a and b from streptomyces | |
| IE913058A1 (en) | Antibiotic ge1655 complex and its factors a, b, and c | |
| US4192915A (en) | Anthracycline glycosides from streptomyces | |
| JPS62138196A (ja) | アンスラサイクリン化合物およびその製造法 | |
| JPH05125090A (ja) | 新規アントラサイクリン系抗生物質 | |
| JPS6121088A (ja) | 新規抗癌抗生物質ｋ−８０２−４及びその製造法 | |
| JPH06256281A (ja) | 新規物質デフォスタチン |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: ZAIDANHOJIN BISEIBUTSU KAGAKU KENKYUKAI |