FI120261B - PNA-synteesi käyttämällä heikkojen happojen suhteen labiilia aminonsuojaryhmää - Google Patents
PNA-synteesi käyttämällä heikkojen happojen suhteen labiilia aminonsuojaryhmää Download PDFInfo
- Publication number
- FI120261B FI120261B FI951130A FI951130A FI120261B FI 120261 B FI120261 B FI 120261B FI 951130 A FI951130 A FI 951130A FI 951130 A FI951130 A FI 951130A FI 120261 B FI120261 B FI 120261B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- formula
- amino
- acid
- polymer
- amino acid
- Prior art date
Links
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 21
- 239000002253 acid Substances 0.000 title claims description 18
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 title description 22
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title description 20
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 title description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 24
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 22
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims abstract description 22
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims abstract description 21
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims abstract description 21
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims abstract description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 9
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 claims abstract description 5
- 125000001589 carboacyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims abstract description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 125000004103 aminoalkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 125000003435 aroyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 125000002768 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- -1 alkynyl cytosine Chemical compound 0.000 claims description 77
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 33
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 19
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 19
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 17
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 14
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 10
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 8
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- PEHVGBZKEYRQSX-UHFFFAOYSA-N 7-deaza-adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1C=CN2 PEHVGBZKEYRQSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 5
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 5
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 claims description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 230000037429 base substitution Effects 0.000 claims description 4
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 4
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 claims description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 4
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- BWKMGYQJPOAASG-UHFFFAOYSA-N 1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-3-carboxylic acid Chemical compound C1=CC=C2CNC(C(=O)O)CC2=C1 BWKMGYQJPOAASG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- YZEUHQHUFTYLPH-UHFFFAOYSA-N 2-nitroimidazole Chemical compound [O-][N+](=O)C1=NC=CN1 YZEUHQHUFTYLPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 5-methylcytosine Chemical compound CC1=CNC(=O)N=C1N LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- LOSIULRWFAEMFL-UHFFFAOYSA-N 7-deazaguanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1CC=N2 LOSIULRWFAEMFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 claims description 3
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 claims description 3
- 125000004453 alkoxycarbonyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 claims description 3
- CQYBNXGHMBNGCG-RNJXMRFFSA-N octahydroindole-2-carboxylic acid Chemical compound C1CCC[C@H]2N[C@H](C(=O)O)C[C@@H]21 CQYBNXGHMBNGCG-RNJXMRFFSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 150000003852 triazoles Chemical class 0.000 claims description 3
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 claims description 3
- PIINGYXNCHTJTF-UHFFFAOYSA-N 2-(2-azaniumylethylamino)acetate Chemical compound NCCNCC(O)=O PIINGYXNCHTJTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 claims description 2
- UWYZHKAOTLEWKK-UHFFFAOYSA-N 1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline Chemical compound C1=CC=C2CNCCC2=C1 UWYZHKAOTLEWKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 claims 2
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 claims 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 abstract description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 abstract description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 abstract description 5
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 abstract 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 35
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 9
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 8
- 125000000022 2-aminoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 7
- HVCNXQOWACZAFN-UHFFFAOYSA-N 4-ethylmorpholine Chemical compound CCN1CCOCC1 HVCNXQOWACZAFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 7
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 6
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 6
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 6
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000007821 HATU Substances 0.000 description 5
- 239000012317 TBTU Substances 0.000 description 5
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 5
- 239000005289 controlled pore glass Substances 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- OISVCGZHLKNMSJ-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethylpyridine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=N1 OISVCGZHLKNMSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 4
- HQABUPZFAYXKJW-UHFFFAOYSA-N butan-1-amine Chemical compound CCCCN HQABUPZFAYXKJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 4
- ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N psoralen Chemical compound C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OC=C2 ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 4
- 125000005500 uronium group Chemical group 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AHVYPIQETPWLSZ-UHFFFAOYSA-N N-methyl-pyrrolidine Natural products CN1CC=CC1 AHVYPIQETPWLSZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FPQVGDGSRVMNMR-JCTPKUEWSA-N [[(z)-(1-cyano-2-ethoxy-2-oxoethylidene)amino]oxy-(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium;tetrafluoroborate Chemical compound F[B-](F)(F)F.CCOC(=O)C(\C#N)=N/OC(N(C)C)=[N+](C)C FPQVGDGSRVMNMR-JCTPKUEWSA-N 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MCTWTZJPVLRJOU-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-1H-imidazole Chemical compound CN1C=CN=C1 MCTWTZJPVLRJOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 4',5'-Dihydropsoralen Natural products C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OCC2 VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TVRGHZKBZMVMKV-UHFFFAOYSA-N 4-(2-hydroxyethylsulfonyl)benzoic acid Chemical compound OCCS(=O)(=O)C1=CC=C(C(O)=O)C=C1 TVRGHZKBZMVMKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DBGXTSYRXHDCKZ-UHFFFAOYSA-N 6-(n-benzhydryl-4-methoxyanilino)hexan-1-ol Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1N(CCCCCCO)C(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 DBGXTSYRXHDCKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RWQUWTMOHXGTNN-UHFFFAOYSA-N 9-n,10-n-bis(4-butylphenyl)-9-n,10-n-bis(4-methylphenyl)phenanthrene-9,10-diamine Chemical compound C1=CC(CCCC)=CC=C1N(C=1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C=1N(C=1C=CC(C)=CC=1)C=1C=CC(CCCC)=CC=1)C1=CC=C(C)C=C1 RWQUWTMOHXGTNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 9H-purine-2,6-diamine Chemical compound NC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZMGYPLQYOPHEL-UHFFFAOYSA-N Boron trifluoride etherate Chemical compound FB(F)F.CCOCC KZMGYPLQYOPHEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 2
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 2
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 2
- PNKUSGQVOMIXLU-UHFFFAOYSA-N Formamidine Chemical compound NC=N PNKUSGQVOMIXLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001251 acridines Chemical class 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- JXTHNDFMNIQAHM-UHFFFAOYSA-N dichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)Cl JXTHNDFMNIQAHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HPYNZHMRTTWQTB-UHFFFAOYSA-N dimethylpyridine Natural products CC1=CC=CN=C1C HPYNZHMRTTWQTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 125000001601 guanosyl group Chemical group 0.000 description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002367 halogens Chemical group 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- LNOLJFCCYQZFBQ-UHFFFAOYSA-N n-[(4-nitrophenyl)-phenylmethylidene]hydroxylamine Chemical compound C=1C=C([N+]([O-])=O)C=CC=1C(=NO)C1=CC=CC=C1 LNOLJFCCYQZFBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- RDOWQLZANAYVLL-UHFFFAOYSA-N phenanthridine Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=CC=C3C=NC2=C1 RDOWQLZANAYVLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 2
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 2
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001834 xanthenyl group Chemical group C1=CC=CC=2OC3=CC=CC=C3C(C12)* 0.000 description 2
- VNDYJBBGRKZCSX-UHFFFAOYSA-L zinc bromide Chemical compound Br[Zn]Br VNDYJBBGRKZCSX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(2-ethylhexyl) sulfosuccinate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)CC(S(O)(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OBOHMJWDFPBPKD-UHFFFAOYSA-N 1-[chloro(diphenyl)methyl]-4-methoxybenzene Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C(Cl)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 OBOHMJWDFPBPKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DFPYXQYWILNVAU-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1.C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 DFPYXQYWILNVAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AVFZOVWCLRSYKC-UHFFFAOYSA-N 1-methylpyrrolidine Chemical compound CN1CCCC1 AVFZOVWCLRSYKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 2'-deoxyguanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- YKBGVTZYEHREMT-UHFFFAOYSA-N 2'-deoxyguanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1CC(O)C(CO)O1 YKBGVTZYEHREMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHDSRXYHVZECER-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-tris[(dimethylamino)methyl]phenol Chemical compound CN(C)CC1=CC(CN(C)C)=C(O)C(CN(C)C)=C1 AHDSRXYHVZECER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001917 2,4-dinitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C(=C1*)[N+]([O-])=O)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- YEJVELVPUKSYEB-UHFFFAOYSA-N 2-[9-(hydroxymethyl)-9h-fluoren-1-yl]acetic acid Chemical compound C1=CC(CC(O)=O)=C2C(CO)C3=CC=CC=C3C2=C1 YEJVELVPUKSYEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HJBLUNHMOKFZQX-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-1,2,3-benzotriazin-4-one Chemical compound C1=CC=C2C(=O)N(O)N=NC2=C1 HJBLUNHMOKFZQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SFYDWLYPIXHPML-UHFFFAOYSA-N 3-nitro-1-(2,4,6-trimethylphenyl)sulfonyl-1,2,4-triazole Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)N1N=C([N+]([O-])=O)N=C1 SFYDWLYPIXHPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSFYYWJRJJCOEB-UHFFFAOYSA-N 4-(2-hydroxyethyl)-3-nitrobenzoic acid Chemical compound OCCC1=CC=C(C(O)=O)C=C1[N+]([O-])=O MSFYYWJRJJCOEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001999 4-Methoxybenzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1OC([H])([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- UIVWXNPUCAHAJX-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-1,1-dioxo-2,5-diphenylthiophen-3-one Chemical compound O=S1(=O)C(C=2C=CC=CC=2)C(=O)C(O)=C1C1=CC=CC=C1 UIVWXNPUCAHAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QJNLUNBGDFUULX-UHFFFAOYSA-N 4-n,4-n'-dimethyl-3h-pyridine-4,4-diamine Chemical compound CNC1(NC)CC=NC=C1 QJNLUNBGDFUULX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SUTWPJHCRAITLU-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexan-1-ol Chemical compound NCCCCCCO SUTWPJHCRAITLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BIMYVSJMIZFNNL-UHFFFAOYSA-N 9-(hydroxymethyl)-9h-fluorene-4-carboxylic acid Chemical compound C1=CC=C(C(O)=O)C2=C1C(CO)C1=CC=CC=C12 BIMYVSJMIZFNNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 102400000967 Bradykinin Human genes 0.000 description 1
- 101800004538 Bradykinin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- XPDXVDYUQZHFPV-UHFFFAOYSA-N Dansyl Chloride Chemical compound C1=CC=C2C(N(C)C)=CC=CC2=C1S(Cl)(=O)=O XPDXVDYUQZHFPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N Daunomycin Natural products CCC1(O)CC(OC2CC(N)C(O)C(C)O2)c3cc4C(=O)c5c(OC)cccc5C(=O)c4c(O)c3C1 WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N Digoxigenin Natural products C1CC(C2C(C3(C)CCC(O)CC3CC2)CC2O)(O)C2(C)C1C1=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg-OH Natural products NC(N)=NCCCC(N)C(=O)N1CCCC1C(=O)N1C(C(=O)NCC(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CO)C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002841 Lewis acid Substances 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930192627 Naphthoquinone Natural products 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical class [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical class [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 1
- 229930003316 Vitamin D Natural products 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N [1,10]phenanthroline Chemical compound C1=CN=C2C3=NC=CC=C3C=CC2=C1 DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-O acridine;hydron Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3[NH+]=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000007825 activation reagent Substances 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 1
- 229940027998 antiseptic and disinfectant acridine derivative Drugs 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 1
- 125000000319 biphenyl-4-yl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C1=C([H])C([H])=C([*])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N bradykinin Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 125000000609 carbazolyl group Chemical class C1(=CC=CC=2C3=CC=CC=C3NC12)* 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000000170 chemical ionisation mass spectrum Methods 0.000 description 1
- AOGYCOYQMAVAFD-UHFFFAOYSA-N chlorocarbonic acid Chemical class OC(Cl)=O AOGYCOYQMAVAFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol group Chemical group [C@@H]1(CC[C@H]2[C@@H]3CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@H]3CC[C@]12C)[C@H](C)CCCC(C)C HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 1
- 239000012230 colorless oil Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 150000001893 coumarin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N dcm dichloromethane Chemical compound ClCCl.ClCCl DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 229960005215 dichloroacetic acid Drugs 0.000 description 1
- QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N digitoxigenin Natural products CC12CCC(C3(CCC(O)CC3CC3)C)C3C11OC1CC2C1=CC(=O)OC1 QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N digoxigenin Chemical compound C1([C@@H]2[C@@]3([C@@](CC2)(O)[C@H]2[C@@H]([C@@]4(C)CC[C@H](O)C[C@H]4CC2)C[C@H]3O)C)=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N 0.000 description 1
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000010265 fast atom bombardment Methods 0.000 description 1
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002143 fast-atom bombardment mass spectrum Methods 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000002224 folic acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- VKYKSIONXSXAKP-UHFFFAOYSA-N hexamethylenetetramine Chemical compound C1N(C2)CN3CN1CN2C3 VKYKSIONXSXAKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 1
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 150000007517 lewis acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 150000002791 naphthoquinones Chemical class 0.000 description 1
- XUZLXCQFXTZASF-UHFFFAOYSA-N nitro(phenyl)methanol Chemical compound [O-][N+](=O)C(O)C1=CC=CC=C1 XUZLXCQFXTZASF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- RGSFGYAAUTVSQA-UHFFFAOYSA-N pentamethylene Natural products C1CCCC1 RGSFGYAAUTVSQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004817 pentamethylene group Chemical group [H]C([H])([*:2])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[*:1] 0.000 description 1
- RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N phenyl 10-methylacridin-10-ium-9-carboxylate Chemical compound C12=CC=CC=C2[N+](C)=C2C=CC=CC2=C1C(=O)OC1=CC=CC=C1 RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGTNSSLYPYDJGL-UHFFFAOYSA-N phenyl isocyanate Chemical compound O=C=NC1=CC=CC=C1 DGTNSSLYPYDJGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-O phosphonium Chemical compound [PH4+] XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 239000002213 purine nucleotide Substances 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 125000006853 reporter group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical group 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- JDVPQXZIJDEHAN-UHFFFAOYSA-N succinamic acid Chemical compound NC(=O)CCC(O)=O JDVPQXZIJDEHAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHRNULOCNSKMGB-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran thf Chemical compound C1CCOC1.C1CCOC1 WHRNULOCNSKMGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000383 tetramethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SIOVKLKJSOKLIF-HJWRWDBZSA-N trimethylsilyl (1z)-n-trimethylsilylethanimidate Chemical compound C[Si](C)(C)OC(/C)=N\[Si](C)(C)C SIOVKLKJSOKLIF-HJWRWDBZSA-N 0.000 description 1
- FMHHVULEAZTJMA-UHFFFAOYSA-N trioxsalen Chemical compound CC1=CC(=O)OC2=C1C=C1C=C(C)OC1=C2C FMHHVULEAZTJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000850 trioxysalen Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Chemical group 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Chemical group 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 235000019166 vitamin D Nutrition 0.000 description 1
- 239000011710 vitamin D Substances 0.000 description 1
- 150000003710 vitamin D derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 1
- 229940046008 vitamin d Drugs 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical group 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 229940102001 zinc bromide Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
- C07D473/02—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6
- C07D473/18—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6 one oxygen and one nitrogen atom, e.g. guanine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
- C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
- C07D473/32—Nitrogen atom
- C07D473/34—Nitrogen atom attached in position 6, e.g. adenine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/001—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof by chemical synthesis
- C07K14/003—Peptide-nucleic acids (PNAs)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G69/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic amide link in the main chain of the macromolecule
- C08G69/02—Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids
- C08G69/08—Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids derived from amino-carboxylic acids
- C08G69/10—Alpha-amino-carboxylic acids
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
PNÄ--synteesi käyttämällä heikkojen happojen suhteen labiilia aminonsuoj aryhmää
Peptidi- tai polyamidinukleiinihapot (PNA) ovat 5 DNA-analogiyhdisteitä, joissa deoksiriboosifosfaattirunko on korvattu peptidioligomeerillä. Tähän mennessä kirjallisuudessa [Michael Egholm, Peter E. Nielsen, Ole Buchardt ja Rolf H. Berg, J♦ Am. Chem. Soc. 114 (1992) 9677 - 9678; Ole Buchardt, Michael Egholm, Peter E. Nielsen ja Rolf H. 10 Berg, W0 92/20702] kuvatuissa synteeseissä käytetään mono-meerin aminoryhmän tilapäiseksi suojaamiseksi happolabii-lia tert-butoksikarbonyyli- (Boc-) suojaryhmää, joka lohkotaan pois keskivahvoilla hapoilla, kuten esim. trifluo-rietikkahappo. Oligomeerien kiinteätaasisynteesi noudat-15 taa tällöin tavanomaista peptidisynteesimenetelmää esim.
Merrifieldin [B. Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 85 (1963) 2149] kuvaaman mukaisesti. PNA-oligomeerin lohkaiseminen kiinteästä kantajasta tapahtuu tällöin voimakkaalla hapolla, tavallisesti nestemäisellä fluorivedyllä. Toistuva kä-20 sittely trifluorietikkahapolla ja sitä seuraava pilkkominen fluorivedyllä ei sovi seka-PNA/DNA-sekvenssien synteesiin, sillä näissä olosuhteissa nukleosidisidos ei ole stabiili. Erityisesti puriininukleotidit desoksiguanosiini ja desoksiadenosiini tulevat voimakkailla hapoilla nopeas-25 ti pilkotuiksi N-glykosidisidoksesta. Lisäksi olisi tämän tapaisten molekyylien synteesiin tavallisten DNA-synteti-saattorien käyttäminen ja pitkälle menevä näissä laitteissa käytetyn kemian säilyttäminen erityisen toivottavaa.
Keksinnön päämäärä on kehittää synteesimenetelmä, 30 jossa käytetään heikkojen happojen suhteen labiilia tilapäistä aminonsuojaryhmää PNA-oligomeerien rakentamiseksi, joka menetelmä tekee mahdolliseksi pilkkomisen kiinteästä kantajasta käyttämällä tavanomaisesti oligonukleotideille käytettyä emäksistä menetelmää.
Seuraava keksintö kuvaa menetelmää PNA-oligomeerien valmistamiseksi, j oiden kaava on I: 2 (I) 5 R'-t a k- [ x 1 „- ( o ) I -0“ jolloin B/X on
B
10 CH2 c - o N H -(C H 2) ,-CHj-N-(CHj) (-C0
15 B
(ch2), nh-ch-co-nh-ch2-co
B
20 (Ϊ H 2) I
nh-ch-ch2-ch2-ch2-co
B
(CHZ),
25 NH-CH2-CO-N-CH2-CO
B
CH, c - o 20 1 nh-ch2-ch2-ch-ch2-co o ?
V\H
35 NH-CH.-CH.-N^^co 3
B
(c h 2) ( I-> NH-CHj-C0-Nn3^C0 "r5 / N . ^CH ) -C° Γ ^ 10 (CH ) 'υη2'f NH-(CH ) 2 g
B
CH„ I2 15 C=0 edullisesti NH- (CH^) ^-d^-N- (CI^) ^-C0 jolloin f = 1 - 4, edullisesti 1 tai 2; ja g = O -3, edullisesti 0-2; 20 R° on vety, Cj^g-alkanoyyli, C^g-alkoksikarbonyyli, C3_8-sykloalkanoyyli, C7_15-aroyyli, C3_13-heteroaroyyli tai ryhmä, joka suosii oligomeerin solunsisäistä ottoa, tai joka hybridisaation yhteydessä on vuorovaikutuksessa koh-deaminohapon kanssa; 25 A on aminohappotähde, edullisesti ryhmästä glysii- ni, leusiini, histidiini, fenyylialaniini, kysteiini, ly-siini, arginiini, asparagiinihappo, glutamiinihappo, pro-liini, tetrahydroisokinoliini-3-karboksyylihappo, oktahyd-roindoli-2-karboksyylihappo ja N-(2-aminoetyyli)glysiini; 30 k on kokonaisluku 0 - 10, edullisesti 0 - 6; Q on aminohappotähde, edullisesti ryhmästä glysii-ni, leusiini, histidiini, fenyylialaniini, kysteiini, ly-siini, arginiini, asparagiinihappo, glutamiinihappo, pro-liini, tetrahydroisokinoliini-3-karboksyylihappo, oktahyd- 35 roindoli-2-karboksyylihappo ja N-(2-aminoetyyli)glysiini; 4 1 on kokonaisluku 0-10, edullisesti 0-6; B on nukleotidikemiassa tavallinen nukleoemäs, esimerkiksi luonnollinen nukleoemäs kuten adeniini, syto-siini, guaniini, tyrniini ja urasiili, tai ei-luonnollinen 5 nukleoemäs kuten puriini, 2,6-diaminopuriini, 7-deatsa-adeniini, 7-deatsaguaniini, N4N4-etanosytosiini, N6N6-etano-2, 6-diaminopuriini, 5-metyylisytosiini, 5-C3_6-alkinyyliura-siili, 5-C3_6~alkinyylisytosiini, 5-fluoriurasiili tai pseu-doisosytosiini, 2-hydroksi-5-metyyli-4-triatsolopyrimidii- 10 ni tai niiden esilääkemuoto, tai myös emäskorvausyhdiste, kuten esim. imidatsoli, nitroimidatsoli ja triatsoli; Q° on hydroksi, NH2 tai NHR", jossa R" on C1_18-al-kyyli, C2_18-aminoalkyyli tai C2_18-hydroksialkyyli; ja n on kokonaisluku 1-50, edullisesti 4-35; 15 jolloin menetelmälle on tunnusomaista, että a) polymeerikantajaan, jonka kaava on II: L-[polymeeri] (II) 20 joka on varustettu ankkuriryhmällä L, joka sisältää latenttina tähteen Q°, joko ensin kytketään kiinteäfaasi-synteesille tavanomaisella menetelmällä aminohappoja (Q'), b) mahdollisesti lohkaistaan heikkojen happojen suhteen labiili suojaryhmä PG sopivalla reagenssilla, 25 c) toistetaan vaiheet a ja b (1 - 1) kertaa, d) tällöin välituotteena syntyneeseen yhdisteeseen, jonka kaava on III: ( Q ' )1-L-[polymeeri] (III) 30 jossa L määritellään kuten edellä, Q' on aminohappo Q, jonka sivuketju on mahdollisesti suojattu, ja 1 on kokonaisluku 0 - 10, tai suoraan kaavan II mukaiseen polymeerikantajaan kytketään yhdiste, jonka kaava on IV: 5 PG-X -OH (IV) !l B’ jossa PG on heikkojen happojen suhteen labiili ami-nonsuojaryhmä ja B' /X on kaavassa I määritellyn mukainen 5 rakenneosa, jossa on mahdollisesti eksosyklisessä amino-tai hydroksifunktiossa suojattu nukleoemäs, jolloin B' on nukleotidikemiassa tavallinen emäs, esimerkiksi luonnollinen emäs kuten adeniini, sytosiini, guanii-ni, tumiini ja urasiili, tai ei-luonnollinen emäs kuten 10 puriini, 2,6-diaminopuriini, 7-deatsa-adeniini, 7-deatsa-guaniini, N4N4-etanosytosiini, N6N6-etano-2,6-diaminopuriini, 5-metyylisytosiini, 5-C3,.6-alkinyyliurasiili, 5-C3_6-al-kinyylisytosiini, 5-fluoriurasiili tai pseudoisosytosiini, joiden eksosykliset amino- tai hydroksiryhmät on mahdolli-15 sesti suojattu sopivilla tutuilla suojaryhmillä, kuten bentsoyyli-, isobutanoyyli-, asetyyli-, fenoksiasetyyli-, 4- (t-butyyli ) bentsoyyli -, 4- (t-butyyli ) fenoksiasetyyli-, 4- (metoksi )bentsoyyli- , 2- ( 4-nitrofenyyli )etyylioksikar-bonyyli, 2-(2,4-dinitrofenyyli)etyylioksikarbonyyli- , 20 9-fluorenyylimetoksikarbonyyli-, difenyylikarbamoyyli-tai formamidiiniryhmällä, edullisesti bentsoyyli-, isobutanoyyli-, 4-(t-butyyli )bentsoyyli-, 2-( 4-nitrofenyyli )etyyli-oksikarbonyyli-, 2-(2,4-dinitrofenyyli)etyylioksikarbonyy-li-, 9-fluorenyylimetoksikarbonyyliryhmällä, jaguaniinil-25 le 2-N-asetyylin ja 6-0-difenyylikarbamoyyliryhmän yhdis telmällä, tai myös emäskorvausyhdiste, kuten esim. imidat-soli, nitroimidatsoli tai triatsoli, käyttämällä peptidikemiassa tavanomaisia kytkentä-reagensseja, 30 e) tilapäinen, heikkojen happojen suhteen labiili suojaryhmä PG lohkaistaan käyttämällä sopivaa reagenssia, f) toistetaan vaiheet d ja e (n-1) kertaa, g) kiinteäfaasisynteesille tavallisella menetelmällä kytketään lisää aminohappoja (A'), 6 h) heikkojen happojen suhteen labiili suojaryhmä PG lohkaistaan käyttämällä sopivaa reagenssia, i) vaiheet g ja h toistetaan (k-1) kertaa, j ) siinä tapauksessa, että R° ei ole vety, lisätään 5 tähde R° tavanomaisella menetelmällä, k) välituotteena saadusta kaavan Ia mukaisesta yhdisteestä : B ' 10 R 0 -( A ') k- I x I „ -( o ' ) | - L - [polymeeri 1 (|a) jossa R°, k, B' /X, n, Q' ja 1 määritellään kuten edellä, A' merkitsee aminohappoa A, jonka sivuketju on mahdollisesti suojattu, ja L on ankkuriryhmä, 15 kaavan I mukainen yhdiste lohkaistaan käyttämällä lohkaisureagenssia polymeerikantajasta, jolloin samanaikaisesti tai myös seuraavaksi nukleoemästen eksosyklises-sä amino- tai hydroksifunktiossa ja aminohappojen sivuketjuissa mahdollisesti esiintyvät suojaryhmät lohkaistaan 20 pois.
PNA:n seuraava synteesikaavio käsittää tämän reak-tiokulun: [L]-[polymeeri] a) PG-(Q')-0H:n kytkeminen; -» 25 PG-(Q' )-[L]-[polymeeri]; -> b) suojaryhmän PG lohkaisu; -> H-(Q')-[L]-[polymeeri]; -> c) vaiheiden a ja b toistaminen (1-1) kertaa; -» H-(Q' )j_— [L] — [polymeeri]; -> 30 d) PG-[B'/X]-OH:n kytkeminen; -» PG- [B ' /X] - (Q' ) - [L] - [polymeeri] ; -> e) suojaryhmän PG lohkaiseminen; -» H- [B ' /X] — (Q ' )j - [L] - [polymeeri] ; -» f) vaiheiden d ja e toistaminen (n-1) kertaa; -» 35 H-[B'/X]n-(Q' )χ-[L] - [polymeeri]; -» 7 g) PG-(A' )-OH:n kytkeminen; -> PG- (A' )- [B' /X] n-(Q' )χ-1L] - [polymeeri] ; -> h) suojaryhmän PG lohkaiseminen; -» H- (A' )-[B'/X]n-(Q' )Χ-[Β] - [polymeeri]; -* 5 i) vaiheiden g ja h toistaminen (k-1) kertaa; -> H- (A' )k-[B'/X]n-(Q' )i-CL] - [polymeeri]; -j ) ryhmän R° kytkeminen; -> R°-(A' )k- [B ' /X] n- (Q' )X-[L] - [polymeeri] : -> k) polymeerin ja suojaryhmien lohkaisu; 10 RMAVCB/X^-tQ^-Q0.
Ryhmiä, jotka suosivat oligomeerin solunsisäistä ottoa, ovat esimerkiksi alkanoyyli- ja alkoksikarbonyyli-yhdisteet, joissa on erilaisia lipofiilisiä tähteitä kuten -(CH2)x-CH3, jossa x on kokonaisluku 6 - 18, - (CH2 )n-CH=CH-15 (CH2)m-CH3, jossa n ja m toisistaan riippumatta ovat kokonaisluku 6 - 12, -(CH2CH20)4-(CH2)9-CH3, - (CH2CH20 )8-(CH2 )13- CH3 ja -(CH2CH20)7 -(CH2) 15-CH3, mutta myös steroiditähteet kuten kolesteryyli tai vitamiinitähteet kuten vitamiini E, vitamiini A tai vitamiini D, ja muut konjugaatit, jotka 20 käyttävät luonnollisia kantajasysteemejä kuten sappihapot, foolihapot, 2-(N-alkyyli,N-alkoksi)-aminoantrakinoni, ja mannoosikonjugaatit ja vastaavien reseptorien peptidit, jotka johtavat oligomeerien reseptorivälitteiseen endosy-toosiin, kuten EGF (orvaskeden kasvutekijä), bradykiniini 25 ja PDGF (verihiutaleperäinen kasvutekijä). Merkkiryhmiä ovat fluoresoivat ryhmät esimerkiksi dansyyli-(N-dimetyy-li-l-aminonaftyyli-5-sulfonyyli-), fluoreseiini- tai kumariini johdannaisista tai kemiluminoivat ryhmät esimerkiksi akridiinijohdannaisista, kuten ELISA:11a osoitettava 30 digoksigeniinisysteemi, joka sisältää biotiini/avidiini-systeemillä osoitettavan biotiiniryhmän, tai myös funktionaalisia ryhmiä käsittävät liittovarret, jotka sallivat jälkeen päin tapahtuvan johdannaismuodostuksen osoitettavilla reportteriryhmillä, esimerkiksi aminoalkyyliliittä- 8 jä, joka akridiniumaktiiviesterillä muuttuu kerniluminoin-tikoettimeksi. Tyypillisiä merkkiryhmiä ovat: CH ,
- itX
5 c i :0 Λ ό
10 I
akridiniumesteri R = H tai aminosuojaryhmä 15 0 Λ
R - N N H
Cwy 0 20 biotiinikonjugaatti ( = "biotiini" R = Boc:lle)
CgO
C » 0 I
25 karbatsolijohdannainen 0 H ° Cy0 30
f T J °H
°xA
35 digoksigeenikonjugaatti 9 ryhmät, jotka oligomeerin hybridisoituessa kohde-nukleiinihappoon käyvät näiden kimppuun sitoutumisen, ris-tikytkemisen tai lohkaisun tapahtuessa ovat esimerkiksi akridiini-, psoraleeni-, fenantridiini-, naftokinoni-, 5 daunomysiini- tai kloorietyyliaminoaryylikonjugaatit. Tyypillisiä väliin meneviä tai ristikytkeviä tähteitä ovat: /ΓΛ o \_/
·, /-> H
10 -c-o-(ch,),-<v.n akridiinijohdannainen, x = 2 - 12, edullisesti 4
0 C H
15 νΛ
0 Q
- C - ( C H , ) , - N H -IN
C I
20 x = 2 - 12, edullisesti 4 o
C H j II
1 CH,X-(CHj),-NH-C- /ΥγΥ X -NH tai “°- 25 CHj trimetyylipsoraleenikonjugaatti (= "psoraleeni" X:n ollessa O) 0 30 0 fenantroliinikonj ugaatti 10
C I - C H 2 C H 2 r -Λ I I
nAl>(ch2)«-o-c-
HaC7
X
5
x = 1 - 18, X = alkyyli, halogeeni, N02, CN, -C-R
fl 0 C I - C H 2 C H 2 \ r λ || N —, (CH2)x-0-C- 10 CI -C H 2 C H 2
X
x = 1 - 18, X = alkyyli, halogeeni, N02, CN, -C-R
II
0
Ankkuriryhmiä L, jotka sisältävät latenttina funk-15 tion Q°, kuvaavat esimerkiksi George Barany, Nancy KneibC-ordonier ja Daniel G. Mullen, Int. J. Peptide Protein Res. 30 (1987) 705 - 739.
Polymeerikantajia, jotka on varustettu ankkuriryh-mällä, jotka sisältävät latenttina ryhmän Q°, ovat esi-20 merkiksi p-nitrobentsofenonoksiimipolystyrolihartsi [E.T. Kaiser, S.H. Nakagawa, J. Org. Chem. 48 (1983) 678 - 685], 4-( 2-hydroksietyylisulfonyyli )bentsoyylihartsi tai primäärisellä aminoryhmällä funktionaaliseksi tehty polymeeri-kantaja, kuten esim. polyHIPER, TentagelR, Controlled Pore 25 Glass", polystyroli, johon on kytketty latentisti ryhmän Q° sisältävä ankkuriryhmä, kuten esim. 4-hydroksimetyylibent-soehappo [E. Atherton, C.J. Logan, R.C. Sheppard, J. Chem. Soc., Perkin Trans I 1981 538 - 546], 9-hydroksimetyyli-fluoreeni-4-karboksyylihappo [M. Mutter, D. Bellof, Hely. 30 Chim. Acta 67 (1984) 2009 - 2016], 4-(2-hydroksietyylisulfonyyli )bentsoehappo [R. Schwyzer, E. Felder, P. Failli, Hely. Chim. Acta 67 (1984) 1316 - 1327]; (9-(hydroksime- tyyli)-2-fluorenyylietikkahappo [Y.Z. Liu, S.H. Ding, J.Y. Chu, A.M. Felix, Int. J. Peptide Protein Res. 35 ( 1990) 35 95 - 98]; N-[9-(hydroksimetyyli)-2-fluorenyyli)meripihka- 11 happomonoamidi; 4-(2-hydroksietyyli)-3-nitrobentsoehappo [F. Albericio, E. Giralt, R. Eritja, Tetrahedron Lett. 1991 1515 - 1518], meripihkahappomono( amino-C2_16-alkyyli ) -esteri, oksaalihappomono(amino-C2_16-alkyyli )esteri ja muut 5 samankaltaiset.
Edullisesti käytetään seuraavia ankkuriryhmiä tai jo polymeerikantajaan sidottuja ankkuriryhmiä: p-nitrobentsofenonoksiimipolystyrolihartsi, 4- (2- hydroksietyyliaulfonyyli)bentsoyylihartsi tai primaari-10 sellä aminoryhmällä funktionaaliseksi tehty kantaja tyyp piä Tentagel, Controlled Pore Glass, polystyroli, latentisti ryhmän Q° sisältävät kytketyt ankkuriryhmät, kuten 4-hydroksimetyylibentsoehappo, 4- (2-hydroksietyylisulfo-nyyli)bentsoehappo, N- [9-(hydroksimetyy1i)-2-fluorenyy1i]-15 meripihkahappomonoamidi, meripihkahappomono( amino-C2.16-al- kyyli)esteri tai oksaalihappomono(amino-C2_16-alkyyli )este-ri.
Heikkojen happojen suhteen labiileja suojaryhmiä PG ovat esim. 1-(1-adamantyyli)-1-metyylietoksikarbonyyli 20 (Adpoc), l-(3,5-di-tert-butyylifenyyli)-1-metyylietoksi karbonyyli (t-Bumeoc), 1-metyyli-l-(4-bifenyyli)etyyliok-sikarbonyyli (Bpoc), 3,5-dimetoksifenyyli-2-propyyli-2-oksikarbonyyli (Ddz) tai trityylityyppi, kuten trifenyy-limetyyli (Trt), (4-metoksifenyyli)difenyylimetyyli (Mmt), 25 (4-metyylifenyyli)difenyylimetyyli (Mtt), di-( 4-metoksifenyyli ) fenyylimetyyli (Dmt), 9-(9-fenyyli)ksantenyyli (Pixyl), erityisen edullisesti käytetään trityylityypin suojaryhmät kuten Trt, Mmt, Dmt, aivan erityisen edullisesti käytetään suojaryhmää Mmt.
30 Edeltävän synteesimenetelmän vaiheessa a) käytet tyjä peptidisynteesissä tavanomaisia aktivointimenetelmiä kuvaavat esim. Houben-Weyl, "Methoden der Organischen Chemie", osa 15/2, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974 tai muita reagensseja kuten esim. BOP [B. Castro, J.R. Dormoy, 35 G. Evin ja C. Selve, Tetrahedron Lett. 1975 1219 - 1222), 12
PyBOP [J. Coste, D. Le-Nguyen ja B, Castro, Tetrahedron Lett. 1990 205 - 208] , BroP [ J. Coste, M. -N. Dufour, A. Pantaloni ja B. Castro, Tetrahedron Lett. 1990 659 - 672], PyBroP [J. Coste, E. Frerot, P. Jouin ja B. Castro, Tetra-5 hedron Lett. 1991 1967 - 1970] ja uroniumregenssit ku ten esim. HBTU [V. Dourtoglou, B. Gross, V. Lambropou-lou, C. Zioudrou, Synthesis 1984 572 - 574], TBTU, TPTU, TSTU, TNTU [R. Knorr, A. Trzeciak, W. Bannwarth ja D. Gillesen, Tetrahedron Lett. 1989 1927 - 1930], TOTU 10 (EP-A-0 460 446), HATU [ L. A. Carpino, J. Am. Chem. Soc.
115 (1993) 4397 - 4398], HAPyU, TAPipU [A. Ehrlich, S.
Rothemund, M. Brudel, M. Beyermann, L.A. Carpino ja M. Bienert, Tetrahedron Lett. 1993 4781 - 4784], BOI [K. Aka-ji, N. Kuriyama, T. Kimura, Y. Fujiwara ja Y. Kiso, Tetra-15 hedron Lett. 1992 3177 - 3180] tai 2,4,6-mesityleenisulfo-nyyli-3-nitro-l,2,4-triatsolidi (MSNT) [B. Blankemeyer-Menge, M. Nimitz ja R. Frank, Tetrahedron Lett. 1990 1701 -1704], 2,5-difenyyli-2,3-dihydro-3-okso-4-hydroksi-tiofendioksidi (TDO) [R. Kirstgen, R.C. Sheppard, W. Steg-20 lich, J. Chem. Soc. Chem. Commun. 1987 1870 - 1871] tai aktivoidut esterit [D. Hudson, Peptide Res. 1990 51 - 55] kulloisessakin kirjallosuuskohdassa.
Edullisesti käytetään karbodi-imidejä, esim. di-sykloheksyylikarbodi-imidiä tai di-isopropyylikarbodi-25 imidiä. Edullisesti käytetään myös fosfoniumreagensseja, kuten esim. PyBOP tai PyBroP, uroniumreagensseja, kuten esim. HBTU, TBTU, TPTU, TSTU, TNTU, TOTU, HATU tai BOI.
Kytkeminen voidaan tällöin suorittaa suoraan lisäämällä aminohappojohdannainen tai PNA-monomeeri, jonka 30 kaava on IV, aktivointireagenssiin ja mahdollisesti lisäten lisäaineita kuten esim. 1-hydroksibentsotriatsoli (HOBt) [W. König, R. Geiger, Chem. Ber. 103 (1970) 788] tai 3-hydroksi-4-okso-3,4-dihydrobentsotriatsiini (HOObt) [W. König, R. Geiger, Chem. Ber. 103 (1970) 2034] hart-35 siin, tai kuitenkin myös rakenneosan esiaktivointi akti- 13 voiduksi esteriksi voi tapahtua erikseen ja aktivoidun lajin liuos sopivassa liuottimessa voidaan lisätä kytken-täkelpoiseen polymeeriin.
Suojaryhminä suojatun nukleoemäksen B' eksosykli-5 selle aminofunktiolle käytetään heikkojen happojen suhteen labiilien aminosuojaryhmiin PG sopivia suojaryhmiä. Edullisesti käytetään suojaryhmiä kuten bentsoyyli-, isobuta-noyyli-, asetyyli, fenoksiasetyyli-, 4-(t-butyyli)bentso-yyli-, 4-(t-butyyli)fenoksiasetyyli-, 4-(metoksi)bentsoyy-10 li-, 2-(4-nitrofenyyli)etyylioksikarbonyyli-, 2-(2,4-di-nitrofenyyli )etyylioksikarbonyyli-, 9-fluorenyylimetoksi-karbonyyli-, difenyylikarbamoyyli- tai formamidiiniryh-miä. Erityisen edullisia ovat bentsoyyli-, isobutanoyyli-, 4-(t-butyyli)bentsoyyli-, 2-(4-nitrofenyyli)etyylioksi- 15 karbonyyli-, 2-(2,4-dinitrofenyyli)etyylioksikarbonyyli-, 9- fluorenyylimetoksikarbonyyli-, 4-(metoksi)bentsoyyli-tai para-(t-butyyli)fenoksiasetyyli-, para-nitrofenyyli-2-etyylioksikarbonyyliryhmät ja guaniinille 2-N-asetyylin yhdistelmä 6-0-difenyylikarbamoyyliryhmän kanssa.
20 Lohkomisreagensseja heikkojen happojen suhteen la biilille aminonsuojaryhmälle PG ovat esimerkiksi 1 10- %:inen trifluorietikkahappoliuos dikloorimetaanissa, 1 - 10-%:inen trikloorietikkahappoliuos dikloorimetaanissa, 2 - 15-%:inen dikloorietikkahappoliuos dikloorimetaa- 25 nissa tai 1 - 5-%:inen p-tolueenisulfonihappoliuos dikloorimetaanissa. Lisäksi kyseeseen tulevat myös Lewis-hapot, kuten esimerkiksi booritrifluoridieteraatti tai sinkkibro-midi dikloorimetaani/isopropanolissa.
Kaavan Ia mukaisten aminohappotähteiden Q' tai A' 30 kytkeminen tapahtuu aminohappojohdannaisilla, jotka edullisesti käsittävät saman aminonsuojaryhmän PG, jota käytetään myös kaavan IV mukaisille yhdisteille. Aminohapoissa mahdollisesti esiintyvät sivuketjufunktiot on varustettu emästen tai alkalilipeän suhteen labiileilla 35 suojaryhmillä, kuten esim. 9-fluorenyylimetyyli (Fm) tai 14 9-fluorenyy1imetoksikarbonyyli (Fmoc). Edullisia ovat tällöin aminohappojohdannaiset kuten PG-Gly-OH, PG-Tic-OH, PG-Pro-OH, PG-Phe-OH, PG-Oic-OH, PG-Lys(Fmoc)-OH, PG-Arg-(Fmoc)-OH, PG-Cys(Fm)-OH, PG-Asp(OFm)-OH, PG-Glu(OFm)-OH, 5 PG-Aeg(Fmoc)-OH, PG-His(Trt)-OH, jossa PG määritellään kuten edellä. Aivan erityisen edullisia ovat tässä seuraavat aminohappojohdannaiset: Mmt-Gly-OH, Mmt-Tic-OH, Mmt-Pro- OH, Mmt-Phe-OH, Mmt-Oic-OH, Mmt-Lys(Fmoc)-0H, Mmt-Arg-(Fmoc)-OH, Mmt-Cys(Fm)-OH, Mmt-Asp(OFm)-OH, Mmt-Glu(OFm)- 10 OH, Mmt-Aeg(Fmoc)-OH, Mmt-His(Fmoc)-OH.
Edellä kuvatussa synteesimenetelmässä käytettyjen yhdisteiden, joiden kaava on IV: PG-X -OH (IV)
M
15 B' erityisesti merkityksessä B ' V « P G —H—, 11 A.
H OH
20 valmistusta kuvataan samanaikaisesti jätetyssä patenttihakemuksessa, jonka otsikko on "PNA-synteesejä käyttämällä emäslabiilia aminonsuojaryhmää" (HOE 94/F 059, DE-patenttijulkaisu 4 408 535.8).
25 Edellä kuvatut PNA:t rakennettiin kiinteäfaasisyn- teesillä sopivaan kantomateriaaliin (esim. polystyroli, polyoksietyleenillä modifioitu polystyroli, kuten esim. TentagelR, Controlled Pore GlassR), joka on varustettu ankkuriryhmällä L, joka sisältää latentisti tähteen Q°.
30 Kiinteäfaasisynteesi alkaa PNA:n C-päästä kytkemällä hap- polabiililla suojaryhmällä suojattu monomeeri tai aminohappo, jonka sivuketjufunktio on mahdollisesti suojattu, vastaavaan hartsiin.
Hartsiin kytketyn rakenneosan suojaryhmän lohkaisun 35 sopivalla reagenssilla edellä kuvatun mukaisesti jälkeen 15 kytketään seuraavat suojatut rakenneosat (PNA-monomeerit ja aminohappojohdannaiset) toinen toisensa perään halutussa järjestyksessä. Välituotteena syntyvästä, happolabii-lilla suoj aryhmällä N-päässä suojatuista PNA-hartseista 5 poistetaan suojaryhmä ennen kytkemistä seuraavaan PNA-mo-nomeeriin edellä kuvatuilla reagensseilla.
Aminohappojohdannaisten kytkeminen tai aktivointi jollain edellä mainituista aktivointireagensseista voidaan suorittaa dimetyyliformamidissa, N-metyylipyrrolidinonis-10 sa, asetonitriilissä tai metyleenikloridissa tai mainittujen liuottimien seoksessa. Edellä mainittuihin liuottimiin voidaan myös lisätä lisäksi apuemäksiä, kuten esim. pyri-diini, N-etyylimorfOliini tai trietyyliamiini. Aktivoitua johdannaista käytetään tavallisesti 1,5 - 10-kertaisena 15 ylimääränä. Tapauksissa, joissa ei tapahdu täydellistä kytkemistä, kytkentäreaktio toistetaan ilman, että jo kytketyn rakennosan aminoryhmästä poistetaan suojaryhmä.
Menetelmiä tähteen R° lisäämiseksi ovat esimerkiksi tapauksessa, jossa tämä tähde sisältää karboksyylihappo-20 funktion, edellä aminohappojen ja PNA-monomeerien kytkemiseksi kuvatut menetelmät. Muita menetelmiä ovat isosyanaattien kuten esim. fenyyli-isosyanaatti, isotiosyanaat-tien kuten esim. fluoreseiini-isotiosyanaatti, kloorimuu-rahaishappojohdannaisten kuten esim. klooriformyylikarbat-25 soli, hiilihappoaktiiviesterien kuten esim. kolesteroli- (4-nitrofenyyli)karbonaatti, akridiniumsukkinimidyylikar-bonaatti, sulfokloridien kuten esim. dansyylikloridi jne. muutos.
Mahdollisesti voidaan jatkovaiheessa kaavan I mu-30 kaisten yhdisteiden amino- ja karboksyylipäät sitoa myös toisiinsa. Tämä kytkeminen tapahtuu edullisesti amidisi-doksen välityksellä aminohappotähteiden A tai Q merkityksessä Lys, Glu, Asp, Aeg sivuketjufunktioiden välillä tai valmistamalla disulfidisilta kulloinkin aminohapon A ja Q 35 merkityksessä Cys välille.
16
Edellä kuvattu synteesikulku voidaan myös suorittaa kaupallisesti saatavilla synteesiautomaateilla, kuten esim. peptidisyntetisaattorit, monipeptidisyntetisaatto-rit, DNA-syntetisaattorit suorittaen kevyitä tavallisesti 5 käytettyjen synteesiohjelmien modifikaatioita.
PNA:n synteesin jälkeen edellä kuvatulla tavalla voidaan PNA-oligomeeri lohkaista hartsista sopivilla rea-gensseilla, kuten esim. konsentroitu ammoniakkiliuos, etyleenidiamiini, hydratsiini, butyyliamiini, metyyliamii-10 ni tai etanoliamiini. Aina käytetyn liittäjän ja käytettyjen suojaryhmien luonteen mukaan oligomeeri ja muut nuk-leiiniemästen sivuketjusuojaryhmät lohkaistaan samanaikaisesti. Lohkaisureagenssia voidaan tällöin käyttää myös sopivilla liuottimilla, kuten esim. asetonitriili, etanoli 15 tai metanoli, laimennettuna.
Lohkaisun jälkeen saadun raakaoligomeerin puhdistaminen tapahtuu peptidi- tai nukleotidikemiassa tavallisilla menetelmillä, kuten esim. HPLC, ioninvaihtokromatogra-fia jne.
20 Aminohapoista käytetyt lyhenteet vastaavat pepti- dikemiassa tavallista kolmikirjainkoodia kuten kuvataan julkaisussa Europ. J. Biochem. 138 (1984) 9. Muut käytetyt lyhenteet luetellaan alla.
Aeg N-( 2-aminoetyyli )glysyyli, -NH-CH2-CH2-NH- 25 CH2-C0-
Aeg( AMeOBz) N-( 2-aminoetyyli ) -N- ((9-( N6-4-metoksibent- soyyli)adenosyyli)asetyyli)glysyyli Aeg(CBz) N-( 2-aminoetyyli)-N-((l-(N4-bentsoyyli)- sytosyyli)asetyyli)glysyyli 30 Aeg(CMeOBz) N-( 2-aminoetyyli)-N-((1-( N4-4-metoksi- bentsoyyli)sytosyyli)asetyyli)glysyyli Aeg( CtBuBz) N- ( 2-aminoetyyli ) -N- ((1-( N4-4-tert-butyy- libentsoyyli)sytosyyli)asetyyli)glysyyli Aeg( GlBu) N- ( 2-aminoetyyli ) -N- ((9-( N2-isobutanoyyli) - 35 guanosyyli)asetyyli)glysyyli 17
Aeg- (G2"Ac,4_Dpc) N- ( 2-aminoetyyli ) -N- ( (9-( Nz-asetyyli-04- difenyylikarbamoyyli)guanosyyli)glysyyli Aeg(T) N- ( 2-aminoetyyli)-N-((1-tyminyyli)asetyy- 5 li)glysyyli
Bnpeoc 2,2- [bis( 4-nitrofenyyli ) ] etoksikarbonyyli )
Boc tert-butoksikarbonyyli BOI 2-( bentsotriatsol-1-yyli )oksi-l, 3-dimetyy- li-imidatsolidiniumheksafluorifosfaatti 10 BOP bentsotriatsolyyli-l-oksi-tris(dimetyyli- amlno)fosfoniumheksafluorifosfaatti BroP bromi-tris( dimetyyliamino)fosfoniumheksa- fluorifosfaatti BSA N,0-bis(trimetyylisilyyli)asetamidi 15 But tert-butyyli
Bz bentsoyyli
Bzl bentsyyli
Cl-Z 4-klooribentsyylioksikarbonyyli CPG Controlled Pore Glass (kontrolloitu huokos- 20 Iasi) DBU 1,8-diatsabisyklo[5.4.0]undes-7-eeni DCM dikloorimetaani
Ddz 3,5-dimetoksifenyyli-2-propyyli-2-oksi- karbonyyli 25 DMF dimetyyliformamidi
Dmt di(4-metoksifenyyli)fenyylimetyyli
Dnpeoc 2-(2,4-dinitrofenyyli)etoksikarbonyyli
Dpc difenyylikarbamoyyli FAM fluoreseiinitähde 30 Fm 9-fluorenyylimetyyli
Fmoc 9-fluorenyylimetyylioksikarbonyyli H-Aeg-OH N-(2-aminoetyyli)glysiini HAPyU 0-(7-atsabentsotriatsol-l-yyli)-1,1,3,3- bis( tetrammetyleeni )uroniumheksaf luorifos-35 faatti 18 HATU O-(7-atsabentsotriatsol-l-yyli)-1,1,3,3- tetrametyyliuroniumheksafluorifosfaatti HBTU 0- ( bentsotriatsol-1-yyli)-1,1,3,3-tetra- metyyliuroniumheksafluorifosfaatti 5 HOBt 1-hydroksibentsotriatsoli HONSu N-hydroksisukkinimidi HOObt 3-hydroksi-4-okso-3,4-dihydrobentsotriat- siini iBu isobutanoyyli 10 MeOBz 4-metoksibentsoyyli
Mmt 4-metoksitrifenyylimetyyli
Moz 4-metoksibentsyylioksikarbonyyli MSNT 2,4, 6-mesityleenisulfonyyli-3-nitro-l, 2,4- triatsolidi 15 Mtt 4-(metyylifenyyli)difenyylimetyyli NBA nitrobentsyylialkoholi NMP N-metyylipyrrolidiini
Pixyl 9-(9-fenyyli)ksantenyyli
PyBOP bentsotriatsolyyli-l-oksitripyrrolidino- 20 fosfoniumheksafluorifosfaatti
PyBroP bromitripyrrolidinofosfoniumheksafluori fosf aatti TAPipU 0-(7-atsabentsotriatsol-l-yyli)-1,1,3,3- bis(pentametyleeni)uroniumtetrafluoribo-25 raatti TBTU 0-(bentsotriatsol-1-yyli)-1,1,3,3-tetra- metyyliuroniumtetrafluoriboraatti tBu tert-butyyli tBuBz 4-tert-butyylibentsoyyli 30 TDBTU 0-(3,4-dihydro-4-okso-l,2,3-bentsotriatsin- 3-yyli)-1,1,3,3-tetrametyyliuroniumtetra-fluoriboraatti TDO 2, 5-difenyyli-2,3-dihydro-3-okso-4-hydrok- sitiofendioksidi 35 TFA trifluorietikkahappo 19 THF tetrahydrofuraani TNTU 0-[ ( 5-norborneeni-2,3-dikarboksimido]-1, - 1,3,3-tetrametyyliuroniumtetrafluoriboraat-ti 5 TOTU 0-[ ( syano(etoksikarbonyyli)metyleeni)ami no] -1,1,3,3-tetrametyyliuroniumtetrafluori-boraatti TPTU 0-(1,2-dihydro-2-okso-l-pyridyyli)-1,1,- 3,3'-tetrametyyliuroniumtetrafluoriboraatti 10 Trt trityyli TSTU 0- (N-sukkinimidyyli )-1,1,3,3-tetrametyyli uroniumtetraf luoriboraatti Z bentsyylioksikarbonyyli MS(ES+) elektronisuihkumassaspektri (positiivinen 15 ioni) MS(ES') elektronisuihkumassaspektri (negatiivinen ioni ) MS(DCI) desorptio-kemiallinen ionisaatiomassaspekt- ri 20 MS(FAB) nopea atomipommitusmassaspektri
Seuraavien esimerkkien on tarkoituksena selventää edullisia menetelmiä keksinnön mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi ilman, että keksintö rajoittuisi niihin.
25 Peptidinukleiinihappojen synteesi PNA-synteesi tapahtuu esimerkiksi Ecosyn D-300 -DNA-syntetisaattorilla (Fa. Eppendorf/Biotronik, Maintal) tai ABI 380B -DNA-syntetisaattorilla (Fa. Applied Biosys-tems, Weitersstadt). Seuraavaksi esitetään kuvaus syntee-30 sisykleistä.
Synteesi tapahtuu yrityksen Applied Biosystems va-kio-DNA-synteesikolonneissa, jotka on täytetty Mmt-hex-succ-Tentagel- tai Mmt-hex-succ-CPG-valmisteella. Käytetään kolonneja synteeseihin 3 pmol:n tai 6 pmol:n mitta-35 kaavassa. Reagenssina Mmt-suojaryhmän lohkaisemiseksi 20 käytetään 3-%:ista trikloorietikkahappoliuosta dikloori-metaanissa. Kantajan pesun asetonitriilillä jälkeen suoritetaan neutralointi 4-etyylimorfoliinin 3,5 M liuoksella asetonitriilissä. Kytkemistä varten synteesikolonniin pa-5 nostetaan seos, joka koostuu Mmt-Aeg-johdannaisen 0,3 tai 0,4 M liuoksesta asetonitriili/DMF:ssä, DMF/NMP:ssä, jossa on 1 % Triton X-100 -valmistetta, DMF:ssä, jossa on N-etyylimorfoliinia, DMF:ssä, jossa on pyridiiniä, PyB0P:n 0,9 M liuoksesta asetonitriilissä ja 4-etyylimorfoliinin 10 3,5 M liuoksesta asetonitriilissä tai HATU:n 0,3 M liuok sesta DMF:ssä NEM:n 0,3 M liuoksen DMFrssä kanssa. Seuraa-va salpaaminen suoritetaan käyttämällä l:l-seosta tavanomaisista DNA-synteesin salpausreagensseista (asetanhyd-ridi/lutidiini/N-metyyli-imidatsoliliuos THFrssä). PNA 15 lohkaistaan kantajasta käsittelemällä konsentroidulla am-moniakkiliuoksella syntetisaattorissa, jolloin emässuoja-ryhmien poistamiseksi yhdistettyjä ammoniakkialkalisia liuoksia lämmitetään suojetussa ampullissa 5 tunnin ajan 55 °C:ssa. Sitten suoritetaan mahdollisesti aminopään Mmt-20 ryhmän lohkaiseminen 80-%:isella etikkahapolla huoneenlämpötilassa.
PNA:t analysoidaan Beckman System Gold -HPLC-lait-teessa Dionex Nucleopac PA-100 (4 x 250 mm) -kolonnissa käyttäen lineaarista gradienttia 0 -> 0,75 M NaCl 20 mM 25 NaOH-liuoksessa.
Puhdistaminen suoritettiin Pharmacia Biopilot -FPLC-laitteessa Pharmacia Mono Q HR 10/10 -kolonnissa käyttäen lineaarista gradienttia 0 -> 0,5 M NaCl 20 mM NaOH-liuoksessa eluenttina. Suolojen poistaminen puhdis-30 tetuista PNA-yhdisteistä onnistuu BondElut-C18-kolonnin avulla (Fa. Analytichem Int'1) tai BiogelR-valmisteessa (Fa. Biorad).
21
Esimerkki 1 l-hydroksi-6-((4-metoks i fenyy1i)difenyylimetyyli-amino)heksaani (Mmt-hex) 6-aminoheksan-l-olia (1 g, 8,55 mmol) liuotetaan 5 vedettömään pyridiiniin (7 ml) ja lisätään trietyyli-amiinia (0,2 ml). Tähän liuokseen lisätään 45 minuutissa liuos, jossa on (4-metoksifenyyli)difenyylimetyylikloridia (2,5 g, 8,12 mmol) vedettömässä pyridiinissä (9 ml). Reak-tioliuosta sekoitetaan edelleen 30 minuuttia 22 °C:ssa, 10 minkä jälkeen reaktio keskeytetään lisäämällä metanolia (3 ml). Liuos haihdutetaan kuiviin pyöröhaihduttimessa ja saatu jäännös haihdutetaan pyridiinin poistamiseksi kolmasti tolueenin kanssa kuiviin. Saatu jäännös liuotetaan etyyliasetaattiin ja tämä liuos pestään peräkkäin kylläs-15 tetyllä natriumbikarbonaattiliuoksella, vedellä ja kyllästetyllä kaliumkloridiliuoksella. Orgaaninen faasi kuivataan Na2S04:llä, minkä jälkeen liuos suodatetaan ja haihdutetaan tyhjössä kuiviin. Raakatuote voidaan puhdistaa kro-matografisesti kieselgeelissä käyttäen heptaani/etyyliase-20 taatti/trietyyliamiinia, 49,5:49,5:1.
Saanto 1,54 g.
MS (FAB, NBA/LiCl) 396,3 (M + Li) + , 390,3 (M + H) + , 273,2 (MMT)+
Rf 0,44 (heptaani/etyyliasetaatti, 1:1).
25 Esimerkki 2 6-((4-metoksifenyyli)difenyylimetyyliamino)heks-l-yylihemisukkinaatti (Mmt-hex-succ) l-hydroksi-6-((4-metoksifenyyli )difenyylimetyyli-amino)heksaania (1,00 g, 2,57 mmol) liuotetaan vedettömään 30 pyridiiniin (10 ml). Tähän liuokseen lisätään meripihka-happoanhydridiä (0,257 g, 2,57 mmol) ja 4-dimetyyliamino-pyridiiniä (31,3 mg, 0,257 mmol). 3 tunnin sekoituksen 22 °C:ssa jälkeen lisätään lisää meripihkahappoanhydridiä (25,7 mg, 0,257 mmol) ja 4,4-dimetyyliaminopyridiiniä 35 (62,6 mg, 0,56 mmol) ja tätä liuosta lämmitetään 6 tunnin 22 ajan 50 °C:ssa. Edelleen 15 tunnin jälkeen 22 °C:ssa liuos haihdutetaan kuiviin, jäännös liuotetaan etyyliasetaattiin ja saatu liuos pestään sitruunahapon jääkylmällä 5-%:isella vesiliuoksella. Orgaaninen faasi kuivataan 5 (Na2S04), minkä jälkeen liuos haihdutetaan pyöröhaihdutti- messa kuiviin. Puhdistamalla jäännöstä kromatografisesti kieselgeelissä käyttäen 50 % CH2C12/1 % trietyyliamiini -liuosta etyyliasetaatissa ja sitten 5 % metanoli/1 % trietyyliamiini -liuosta dikloorimetaanissa saadaan haluttu 10 yhdiste värittömänä öljynä.
MS (ES') 978,0 (2M - H)', 488,3 (M - H)-
Rf 0,30 (CH2Cl2/etyyliasetaatti, 1:1).
Esimerkki 3 6-((4-metoksifenyyli)difenyylimetyyliamino)heks-1-15 yylisukkinyyliamido-Tentagel (Mmt-hex-succ-Tentagel)
TentagelR-valmisteen (Rapp Polymere) (0,5 g, 0,11 mmol aminoryhmiä) aminomuodon annetaan turvota 10 minuutin ajan 4-etyylimorfoliinissa (0,1 ml) ja DMFrssä (5 ml). Sitten lisätään liuos, jossa on 6-((4-metoksifenyyli)dife-20 nyylimetyyliamino)heks-l-yylihemisukkinaattia (97,4 mg, 0,165 mmol), 4-etyylimorfoliinia (15,9 mg, 0,138 mmol, 17,4 ml) ja TBTU:ta (52,9 mg, 0,165 mmol) DMF:ssä (3 ml), ja suspensiota ravistellaan 16 tunnin ajan 22 °C:ssa. Joh-dannaistettu Tentagel-kantaja suodatetaan eroon ja pestään 25 peräkkäin DMFrllä (3 x 3 ml), CH2Cl2:lla (3 x 1 ml) ja di-etyylieetterillä (3 x 1 ml) ja kuivataan. Reagoimatta jääneet aminofunktiot salvataan käsittelemällä 1 tunnin ajan asetanhydridi/lutidiini/l-metyyli-imidatsolilla THF:ssä (1 ml). Valmis kantaja pestään CH2Cl2:lla (3 x 1 ml) ja di-30 etyylieetterillä (3 x 1 ml) ja kuivataan tyhjössä. Saalis laskettuna käytetystä monometoksitrityylifunktiosta on 168 pmol/g.
23
Esimerkki 4 6-((4-metoksifenyyli)difenyylimetyyliamino)heks-1-yylisukkinyyliamidopropyyli-Controlled Pore Glass (Mmt-hex-succ-CPG) 5 Valmistus tapahtuu analogisesti esimerkissä 3 ku vattuun nähden käyttäen aminopropyyli-CPG:tä (valmistaja Fluka) (550 Ä; 1,0 g) ja 6-((4-metoksifenyyli)difenyyli- metyyliamino)heks-l-yylihemisukkinaatista (48,7 mg, 0,082 mmol), 4-etyylimorfoliinista (7,6 ml) ja TBTU:sta (26,4 10 mg, 0,082 mmol) DMF:ssä (3 ml). MMT-hex-succ-CPG-kuorma on 91 pmol/g.
Esimerkki 5 H-[Aeg(T)]3-(hex) H-[Aeg(T)]3-( hex) syntetisoidaan edellä kuvatulla 15 synteesimenetelmällä 3 pmol:n mittakaavassa Mmt-Hex-Succ-Tentagel-valmisteelle. Monomeerinä käytetään Mmt-Aeg(T)-0H:ta. Raakasaanto on 71 O.D. 260. 2 O.D.rstä otettu mas-saspektri osoittaa halutun tuotteen kohdassa m/e 915,8 (M + H)+, ja sivutuotteena H- [Aeg( Y) ]2-(hex):n kohdassa m/e 20 650,5.
Esimerkki 6 H-[Äeg(T)]-[Aeg(C)]-[Aeg(T) ] -[Äeg(C)]-[Aeg(T)]2- (hex) H-[Aeg(T)]-[Aeg(C)]- [ Aeg ( T)]-[Aeg(C)]-[Aeg(T ) ]2-25 (hex) syntetisoidaan edellä kuvatulla synteesimenetelmällä 3 pmol:n mittakaavassa Mmt-Hex-Succ-Tentagel-valmisteel-le. Monomeerinä käytetään Mmt-Aeg( T )-OH: ta ja Mmt-Aeg(CBz)-OH:ta. Raakasaanto on 98,6 O.D.260 . 35 O.D. 260 raakatuotetta puhdistetaan ja siitä poistetaan suolat, jolloin saadaan 30 14,5 O.D. 250 haluttua yhdistettä. Puhdistetun tuotteen mas saspektrometrinen analyysi osoittaa halutun tuotteen kohdassa m/e 1685,0 (M + H)+ ainoana pääasiallisena piikkinä.
24
Esimerkki 7 H-[Aeg(T)]-[Aeg(C) ] - [Aeg(T)]-[Aeg(C)]-[Äeg(T)]2- (hex) H- [Aeg( T ) ] - [Aeg( C) ] - [ Aeg( T ) ] - [Aeg(C ) ] - [Aeg( T ) ] 2-5 (hex) syntetisoidaan edellä kuvatulla synteesimenetelmällä 3 pmol:n mittakaavassa Mmt-Hex-Succ-Tentagel-valmisteelle. Monomeerinä käytetään Mmt-Aeg(T)-OH:ta ja Mmt-Aeg(CtBuBz )-OH:ta.
Esimerkki 8 10 H-[Aeg(A)]- EAeg(C)] — [Aeg(A)]-[Aeg(T)]-[Aeg(C) ] - [Aeg(A)]-[Aeg(T)]-[Aeg(G)]-[Aeg(G)]-[Aeg(T)]-[Aeg(C)]-[Aeg(G)]-(hex) PNA-synteesi tapahtuu Ecosyn D-300 -DNA-synteti-saattorilla (Fa. Eppendorf/Biotronik, Maintal) 130 mg:lie 15 (5 pmol) Mmt-Hex-Succ-aminopropyyli-CPG:tä.
Synteesissä käytettiin seuraavia liuoksia: 1) aktivaattoriliuos: 0,3 molaarinen HATU-liuos kuivatussa DMF:ssä 2) aktivointiemäs: 0,3 molaarinen NEM-liuos kuiva- 20 tussa DMF:ssä 3) Mmt:n lohkominen: 3-%:inen trikloorietikkahappo-liuos dikloorimetaanissa 4) neutralointiliuos: tetrahydrofuraani/vesi/pyri-diini, 7:2:1 25 5) Mmt-Aeg(T)-OH: 0,3 molaarinen liuos NEM:n 0,3 molaarisessa liuoksessa kuivatussa DMF:ssä 6) Mmt-Aeg( AMe0Bz )-0H: 0,3 molaarinen liuos NEM:n 0,3 molaarisessa liuoksessa kuivatussa DMF:ssä 7) Mmt-Aeg(CMe0Bz )-OH: 0,3 molaarinen liuos NEM:n 0,3 30 molaarisessa liuoksessa kuivatussa DMF:ssä 8) Mmt-Aeg(GlBu)-0H: 0,3 molaarinen liuos NEM:n 0,3 molaarisessa liuoksessa kuivatussa DMF:ssä
Synteesin päättämisen jälkeen PNA-CPG-kantaja kuivataan ja sitä jatkotyöstetään edellä kuvatun mukaisesti. 35 Saanto: 245 O.D.260 MS 3369,6 ( ES+): (M) +
Claims (2)
1. Menetelmä PNA-oligomeerien valmistamiseksi, joiden kaava on I: 5 B I (I) RO-(A)k-[X|n-(0)I-Q° jossa B/X on 10 8 CH, C - 0 I NH-(CH,),-CH,-N-(CH,),-CO 15 8 ( C H 2 ) , NH-CH-CO-NH-CHj-CO 8 2 0 1 (CH,), N H - C H - C H j - C H , - C H j - C 0 8 (CH,),
25 NH-CHj-C0-N-CH,-C0 B C H , C - 0 I nh-ch2-ch2-ch-ch2-co 30 o e y-CH NH-CHj-CHj 0
35 B /—\ tai HH-CH,-C0-N 26 τ » \/(cli2VC0 5 ' _ (C H 2) f NH-(CH2)g jolloin f = 1 - 4; ja g = 0 - 3; R° on vety, Cx-is-alkanoyyli, Ci-i8-alkoksikarbonyyli, 10 C3_8-sykloalkanoyyli, C7-15-aroyyli, C3-i3-heteroaroyyli tai ryhmä, joka suosii oligomeerin solunsisäistä ottoa; tai joka hybridisaation yhteydessä on vuorovaikutuksessa koh-deaminohapon kanssa; A on aminohappotähde; 15. on kokonaisluku 0 - 10; Q on aminohappotähde; 1 on kokonaisluku 0 - 10; B on nukleotidikemiassa tavallinen luonnollinen nukleoemäs tai ei-luonnollinen nukleoemäs tai niiden esi-20 lääkemuoto, tai myös emäskorvausyhdiste; Q° on hydroksi, NH2 tai NHR", jossa R" on CVis-alkyyli, C2-i8-aminoalkyyli tai C2-i8-hydroksialkyyli; ja n on kokonaisluku 1 - 50; joka menetelmä on tunnettu siitä, että 25 joko a) polymeerikantajaan, jonka kaava on II: L-[polymeeri] (II) 30 joka on varustettu ankkuriryhmällä L, joka sisältää latenttina tähteen Q°, ensin kytketään kiinteätaasisyntee-sille tavanomaisella menetelmällä aminohappoja (Q'), joiden sivuketjut on mahdollisesti suojattu, b) lohkaistaan heikkojen happojen suhteen labiili 35 suojaryhmä PG sopivalla reagenssilla, c) toistetaan vaiheet a ja b (1 - 1) kertaa, ja 27 d) näin välituotteena syntyneeseen yhdisteeseen, jonka kaava on III: (Q')i-L-[polymeeri] (III) 5 jossa L määritellään kuten edellä, Q' on aminohappo Q, jonka mahdollisesti läsnäolevat sivuketjufunktiot on suojattu, ja 1 on kokonaisluku 0-10, tai suoraan kaavan II mukaiseen polymeerikantajaan 10 kytketään yhdiste, jonka kaava on IV: PG-X -OH (IV) !1 B ' jossa PG on heikkojen happojen suhteen labiili ami-15 non suojaryhmä ja B1 /X on kaavassa I määritellyn mukainen rakenneosa, jossa on nukleoemäs, jonka eksosyklinen amino-tai hydroksifunktio on suojattu, jolloin B' on nukleotidikemiassa tavallinen luonnollinen nukleoemäs tai ei-luonnollinen nukleoemäs, tai niiden esi-20 lääkemuoto, tai myös emäskorvausyhdiste, joiden eksosykli-set amino- tai hydroksiryhmät on mahdollisesti suojattu sopivilla tunnetuilla suojaryhmillä, käyttämällä peptidikemiassa tavanomaisia kytkentä-reagensseja, 25 e) tilapäinen, heikkojen happojen suhteen labiili suojaryhmä PG lohkaistaan käyttämällä sopivaa reagenssia, f) toistetaan vaiheet d ja e (n-1) kertaa, g) kiinteäfaasisynteesille tavallisella menetelmällä kytketään lisää aminohappoja (A1), joiden sivuketjut on 30 mahdollisesti suojattu, h) heikkojen happojen suhteen labiili suojaryhmä PG lohkaistaan käyttämällä sopivaa reagenssia, i) vaiheet g ja h toistetaan (k-1) kertaa, j) siinä tapauksessa, että R° ei ole vety, lisätään 35 tähde R° tavanomaisella menetelmällä, 28 k) välituotteena saadusta kaavan Ia mukaisesta yhdisteestä : 8 ' I (la)
5 R°-(A,)t-(X]n-(0')|-L - [polymeeri 1 jossa R°, k, B'/X/ n, Q' ja 1 määritellään kuten edellä, A' merkitsee aminohappoa A, jonka sivuketju on mahdollisesti suojattu, ja L on ankkuriryhmä, 10 lohkaistaan kaavan I mukainen yhdiste polymeerikan- tajasta käyttämällä lohkaisureagenssia, jolloin samanaikaisesti tai myös seuraavaksi nukleoemästen eksosyklisessä amino- tai hydroksifunktiossa ja aminohappojen sivuketjuissa mahdollisesti esiintyvät suojaryhmät lohkaistaan pois.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan I mukaisten PNA-oligomeerien valmistamiseksi, tunnettu siitä, että A on aminohappotähde ryhmästä glysiini, leusiini, histidiini, fenyylialaniini, kysteiini, lysiini, arginiini, 20 asparagiinihappo, glutamiinihappo, proliini, tetrahydroiso-kinoliini-3 -karboksyylihappo, oktahydroindoli-2 -karboksyy-lihappo ja N-(2-aminoetyyli)glysiini; k on kokonaisluku 0-6; Q on aminohappotähde ryhmästä glysiini, leusiini, 25 histidiini, fenyylialaniini, kysteiini, lysiini, arginiini, asparagiinihappo, glutamiinihappo, proliini, tetrahyd-roisokinoliini-3-karboksyylihappo, oktahydroindoli-2 -karboksyylihappo ja N-(2-aminoetyyli)glysiini; 1 on kokonaisluku 0-6; 30. on luonnollinen nukleoemäs ryhmästä adeniini, sy- tosiini, guaniini, tyrniini ja urasiili tai ei-luonnollinen nukleoemäs ryhmästä puriini, 2,6-diaminopyriini, 7-deatsa-adeniini, 7-deatsaguaniini, N4N4-etanosytosiini, N6N6-etano- 2,6-diaminopuriini, 5-metyylisytosiini, 5-C3-6-alkinyyliura-35 siili, 5-C3_6-alkinyylisytosiini, 5-fluoriurasiili tai pseu-doisosytosiini, 2-hydroksi-5-metyyli-4-triatsolopyrimidiini 29 tai niiden esilääkemuoto, tai imidatsoli, nitroimidatsoli tai triatsoli; ja n on kokonaisluku 4-35. 30
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4408531 | 1994-03-14 | ||
| DE4408531A DE4408531A1 (de) | 1994-03-14 | 1994-03-14 | PNA-Synthese unter Verwendung einer gegen schwache Säuren labilen Amino-Schutzgruppe |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI951130A0 FI951130A0 (fi) | 1995-03-10 |
| FI951130A FI951130A (fi) | 1995-09-15 |
| FI120261B true FI120261B (fi) | 2009-08-31 |
Family
ID=6512696
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI951130A FI120261B (fi) | 1994-03-14 | 1995-03-10 | PNA-synteesi käyttämällä heikkojen happojen suhteen labiilia aminonsuojaryhmää |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6046306A (fi) |
| EP (1) | EP0672700B1 (fi) |
| JP (1) | JP4098837B2 (fi) |
| AT (1) | ATE180805T1 (fi) |
| AU (1) | AU695931B2 (fi) |
| CA (1) | CA2144477C (fi) |
| DE (2) | DE4408531A1 (fi) |
| DK (1) | DK0672700T3 (fi) |
| ES (1) | ES2132450T3 (fi) |
| FI (1) | FI120261B (fi) |
| GR (1) | GR3030883T3 (fi) |
| NO (1) | NO321034B1 (fi) |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7825215B1 (en) | 1993-04-26 | 2010-11-02 | Peter E. Nielsen | Substituted nucleic acid mimics |
| US6133444A (en) * | 1993-12-22 | 2000-10-17 | Perseptive Biosystems, Inc. | Synthons for the synthesis and deprotection of peptide nucleic acids under mild conditions |
| DE4438918A1 (de) * | 1994-11-04 | 1996-05-09 | Hoechst Ag | Modifizierte Oligonukleotide, deren Herstellung sowie deren Verwendung |
| US6150510A (en) | 1995-11-06 | 2000-11-21 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Modified oligonucleotides, their preparation and their use |
| JP2001518054A (ja) * | 1995-06-07 | 2001-10-09 | パーセプティブ バイオシステムズ，インコーポレーテッド | Ｐｎａ−ｄｎａキメラと、このキメラ合成用のｐｎａシントン |
| US20040171030A1 (en) * | 1996-06-06 | 2004-09-02 | Baker Brenda F. | Oligomeric compounds having modified bases for binding to cytosine and uracil or thymine and their use in gene modulation |
| US20050032068A1 (en) * | 2002-11-05 | 2005-02-10 | Prakash Thazha P. | Sugar and backbone-surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation |
| US9096636B2 (en) * | 1996-06-06 | 2015-08-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Chimeric oligomeric compounds and their use in gene modulation |
| US5898031A (en) * | 1996-06-06 | 1999-04-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligoribonucleotides for cleaving RNA |
| US20040266706A1 (en) * | 2002-11-05 | 2004-12-30 | Muthiah Manoharan | Cross-linked oligomeric compounds and their use in gene modulation |
| US7812149B2 (en) | 1996-06-06 | 2010-10-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2′-Fluoro substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations |
| US20050118605A9 (en) * | 1996-06-06 | 2005-06-02 | Baker Brenda F. | Oligomeric compounds having modified bases for binding to adenine and guanine and their use in gene modulation |
| US20050042647A1 (en) * | 1996-06-06 | 2005-02-24 | Baker Brenda F. | Phosphorous-linked oligomeric compounds and their use in gene modulation |
| US6331618B1 (en) * | 1999-05-13 | 2001-12-18 | Pe Corporation (Ny) | Compositions of solvents and high concentrations of nucleic acid analogs |
| DE10019136A1 (de) * | 2000-04-18 | 2001-10-31 | Aventis Pharma Gmbh | Polyamidnukleinsäure-Derivate, Mittel und Verfahren zu ihrer Herstellung |
| DE10019135A1 (de) * | 2000-04-18 | 2001-10-31 | Aventis Pharma Gmbh | Polyamidnukleinsäure-Derivate, Mittel und Verfahren zu ihrer Herstellung |
| US9150605B2 (en) * | 2002-11-05 | 2015-10-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation |
| WO2004044136A2 (en) * | 2002-11-05 | 2004-05-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions comprising alternating 2’-modified nucleosides for use in gene modulation |
| WO2004041889A2 (en) * | 2002-11-05 | 2004-05-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation |
| US9150606B2 (en) * | 2002-11-05 | 2015-10-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions comprising alternating 2'-modified nucleosides for use in gene modulation |
| US8569474B2 (en) | 2004-03-09 | 2013-10-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Double stranded constructs comprising one or more short strands hybridized to a longer strand |
| EP1765415A4 (en) * | 2004-06-03 | 2010-03-24 | Isis Pharmaceuticals Inc | OLIGOMERIC COMPOUNDS FACILITATING THE "RISC" LOAD |
| US8394947B2 (en) | 2004-06-03 | 2013-03-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Positionally modified siRNA constructs |
| US7884086B2 (en) | 2004-09-08 | 2011-02-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugates for use in hepatocyte free uptake assays |
| DK1966130T3 (da) | 2005-12-23 | 2014-02-10 | Zealand Pharma As | Modificerede lysin-mimetiske forbindelser |
| WO2008079266A2 (en) | 2006-12-21 | 2008-07-03 | Wyeth | Synthesis of pyrrolidine compounds |
| JP6989864B2 (ja) | 2017-05-05 | 2022-02-03 | ジーランド ファーマ，アー／エス | ギャップ結合細胞間コミュニケーションモジュレータ及び糖尿病性眼疾患の治療のためのそれらの使用 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5015733A (en) * | 1983-12-20 | 1991-05-14 | California Institute Of Technology | Nucleosides possessing blocked aliphatic amino groups |
| US5367066A (en) * | 1984-10-16 | 1994-11-22 | Chiron Corporation | Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites |
| DE4016596A1 (de) * | 1990-05-23 | 1991-11-28 | Hoechst Ag | Ein neues kupplungsreagenz fuer die peptidsynthese |
| DK51092D0 (da) * | 1991-05-24 | 1992-04-15 | Ole Buchardt | Oligonucleotid-analoge betegnet pna, monomere synthoner og fremgangsmaade til fremstilling deraf samt anvendelser deraf |
| MX9207334A (es) * | 1991-12-18 | 1993-08-01 | Glaxo Inc | Acidos nucleicos peptidicos y formulacion farma- ceutica que los contiene |
-
1994
- 1994-03-14 DE DE4408531A patent/DE4408531A1/de not_active Withdrawn
-
1995
- 1995-03-08 ES ES95103318T patent/ES2132450T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-03-08 DK DK95103318T patent/DK0672700T3/da active
- 1995-03-08 DE DE59506063T patent/DE59506063D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-03-08 EP EP95103318A patent/EP0672700B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-03-08 AT AT95103318T patent/ATE180805T1/de active
- 1995-03-10 FI FI951130A patent/FI120261B/fi not_active IP Right Cessation
- 1995-03-10 AU AU14801/95A patent/AU695931B2/en not_active Ceased
- 1995-03-13 NO NO19950957A patent/NO321034B1/no not_active IP Right Cessation
- 1995-03-13 CA CA002144477A patent/CA2144477C/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-03-14 JP JP05464295A patent/JP4098837B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-09-11 US US08/927,178 patent/US6046306A/en not_active Expired - Lifetime
-
1999
- 1999-07-30 GR GR990401964T patent/GR3030883T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO950957D0 (no) | 1995-03-13 |
| FI951130A0 (fi) | 1995-03-10 |
| GR3030883T3 (en) | 1999-11-30 |
| DE59506063D1 (de) | 1999-07-08 |
| EP0672700A1 (de) | 1995-09-20 |
| ATE180805T1 (de) | 1999-06-15 |
| FI951130A (fi) | 1995-09-15 |
| CA2144477C (en) | 2007-09-18 |
| JPH07285989A (ja) | 1995-10-31 |
| AU695931B2 (en) | 1998-08-27 |
| DE4408531A1 (de) | 1995-09-28 |
| ES2132450T3 (es) | 1999-08-16 |
| DK0672700T3 (da) | 1999-11-29 |
| NO321034B1 (no) | 2006-03-06 |
| US6046306A (en) | 2000-04-04 |
| EP0672700B1 (de) | 1999-06-02 |
| JP4098837B2 (ja) | 2008-06-11 |
| CA2144477A1 (en) | 1995-09-15 |
| NO950957L (no) | 1995-09-15 |
| AU1480195A (en) | 1995-09-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI120261B (fi) | PNA-synteesi käyttämällä heikkojen happojen suhteen labiilia aminonsuojaryhmää | |
| US6710163B1 (en) | Peptide nucleic acid synthons | |
| US5539082A (en) | Peptide nucleic acids | |
| US6451968B1 (en) | Peptide nucleic acids | |
| US6403763B1 (en) | Chiral peptide nucleic acids | |
| US6441130B1 (en) | Linked peptide nucleic acids | |
| JP4620810B2 (ja) | ポリアミド−オリゴヌクレオチド誘導体、その製造及び使用 | |
| CA2184681C (en) | Process for preparing substituted n-ethylglycine derivatives | |
| US5849893A (en) | Nucleic acid-binding oligomers possessing C-branching for therapy and diagnostics | |
| US6713602B1 (en) | Synthetic procedures for peptide nucleic acids | |
| US6355726B1 (en) | Method for producing polymers having nucleo-bases as side-groups | |
| FI120262B (fi) | PNA-synteesi käyttämällä emästen suhteen labiilia aminonsuojaryhmää | |
| US7485421B2 (en) | Polyamide-oligonucleotide derivatives, their preparation and use | |
| US6716961B2 (en) | Chiral peptide nucleic acids with a N-aminoethyl-d-proline backbone | |
| Aviñó et al. | Synthesis of Oligonucleotide–Peptide Conjugates for Biomedical and Technological Applications | |
| Hudson et al. | The detrimental effect of orotic acid substitution in the peptide nucleic acid strand on the stability of PNA2: NA triple helices | |
| US20030105286A1 (en) | Linked peptide nucleic acids | |
| Ferrer et al. | Synthesis of peptide nucleic acid oligomers carrying 5-methylcytosine derivatives by postsynthetic substitution |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG | Patent granted |
Ref document number: 120261 Country of ref document: FI |
|
| MM | Patent lapsed |