FI117925B - Farmaseuttinen valmiste, jossa on plasminogeeniaktivaattoreita - Google Patents

Description

117925

Farmaseuttinen valmiste, jossa on plasminogeeniaktivaatto-reita - Farmaceutiskt preparat innehällande plasminogen ak-tivatorer 5

Keksintö koskee farmaseuttisia valmisteita, joissa on vaiku-tusaineena plasminogeeniaktivaattoreita ja niiden johdannaisia, samoin kuin vastaavia farmaseuttisia lääkkeenantomuoto-ja lyofilisaattien tai injektio- tai infuusioliuosten muo-10 dossa.

Ihmisen kudoksen plasminogeeniaktivaattorilla (t-PA) on suuri terapeuttinen vaikutus verihyytymien, esim. sydäninfarktin hajoamisessa. t-PA vaikuttaa verihyytymien hajoamisiin 15 plasminogeenin aktivoitumisesta plasmiiniksi. Plasmiini taas puolestaan liuottaa fibriinin, joka on hyytyneen veren pro-teiinimatriisin pääkomponentti.

Luonnon t-PA koostuu useammasta toiminnallisesta domeenista 20 F, E, ΚΙ, K2 ja P. Domeenissa P on proteolyyttinen aktiivinen keskus, joka saa aikaan plasminogeenin pilkkomisen plasmiiniksi. Plasminogeeniaktivaattorien (PA) geeniteknologinen valmistus, erityisesti t-PA:n tai erilaisten t-PA-mutaatioi-·:**: den, tunnetaan jo eukaryoottisissa ja prokaryoottisissa so- • 25 luissa. Tällöin t-PA-johannaiset syntetisoidaan prokaryoo- • · · ♦ teista vastakohtana luonnolliselle t-PA:lie ei-glykolisoi- * · · dussa muodossa.

* · • 1 * • · · • · 1 *.1.1. Plasminogeeniaktivaattoreina tulevat keksinnön mielessä ky-

• J J

30 symykseen pääasiassa sellaiset, erityisesti rekombinantti-sesti tuotetut t-PA:n johdannaiset, jotka käsittävät olen-naisesti sellaiset proteiinialueet luonnollisesta prote- * · · !.; 1· iinista, jotka ovat vastuussa trombiinin fibrinolyysistä.

• 1 .·,·. Tällöin voidaan käyttää myös sellaisia t-PA:n johdannaisia, # · ···, 35 joissa on t-PA:n sekvenssissä yksittäisen tai useamman ami- * · nohapon deleetio tai substituutio.

• « · « · • ♦ • · · • · · «M • · 117925 2

Keksinnön mukaisesti voidaan esimerkin vuoksi käyttää seu-raavia plasminogeeniaktivaattoreita: t-PA (esim. Altaplase), LY 210825 (K2P, jota saadaan solulinjasta "Syyrian hamsteri", Circ. 1990, 82, 930-940? aFE3x ja aFEI X (K1K2P, Blood 5 1988, 71, 216-219)? aFEKI (K2P hiirisoluista C127, J. Car- diovasc. Pharmacol. 1990, 16, 197209); E-6010 (Jap. Circ. J. 1989, 53, s. 918); t-pA-Varianten (Thromb. Haemost., 1989, 62, s. 542); K2P ja D-K2P (Thromb. Haemost., 1989, 62, s. 393); MB-1018 (FK2K2P, Thromb. Haemost., 1989, 62, s. 543)? 10 FK2P (FASEB J., 1989, 3, A1031, tiivistelmä 4791); δΙχ (Circulation, 1988, 4, 11-15); K1K2P (Thromb. Res., 1988, 50, 33-41)? FK1K2P (J. Biol. Chem. 1988, 263, 1599-1602); t-PA:n TNK-muunnokset (WO 93/24635); bat-PA (Witt et al.,

Blood 1992; 79:1213-1217 ja Mullot et al., Arterioscler.

15 Thrombos. 1992;12:212-221). Erityisesti sellaiset plasmino-geeniaktivaattorit tulevat kysymykseen, joissa on t-PA:n ja/tai seriiniproteaasidomeenin ("P") kehä-2-domeeni ("K2"). Esimerkillisesti on mainittu tähän kuuluva t-PA-mutantti "r-PA" tyypistä K2P, joka on kuvattu EP 0 382 174:ssä (WO 90/0-20 9437).

Tämä keksintö koskee erityisesti plasminogeeniaktivaattoreita, jotka ovat tyyppiä K2P, K1K2P, FK1K2P ja FK2K2P, kuten ne kuvataan seuraavissa kirjoituksissa: Protein Engineering • :1; 25 5(1), 93-100 (1992); DE-OS-39 23 339.1; Circ. 1990, 82, 930- • · · ♦ 940; J. Cardiovasc. Pharmacol. 1990, 16, 197-203; Blood • · 1988, 71, 216-219; J. Biol. Chem. 1988, 263, 1599-1602; . Thromb. Haemost. 1989, 62, S. 543. Erityisesti käytetään * « · ·|·. rekorabinantti plasminogeeniaktivaattoreita tyyppiä K2P, ku- * · 1 30 ten ne on kuvattu EP-A-0 382 174:ssä ja Protein Engineering , vol. 5(1), S. 93-100 (1992). Muita tämän kaltaisia t-PA-mu- • · · *♦··’ tantteja on kuvattu seuraavissa patenttihakemuksissa: US 4 * · · : 970 159, EP-A-0 196 920, EP-A-0 207 589; AU 61804/86? EP-A-0 ;Υ· 231 624; EP-A-0 289 508; JP 63 133 988; EP-A-0 234 051; EP- * # ,1·1. 35 A-0 263 172; EP-A-0 241 208; EP-A-0 292 009; EP-A-0 297 066; EP-A-0 302 456; EP-A-0 379 890.

• ·· • · 1 ··· · • · · .

• ·· • · 3 ..

117925

Tekniikan tasosta tiedetään, että sokeriosalla on huomattava vaikutus proteiinin liukoisuuteen ja aggregaatioihin (J. Biol. Chera. 263 (1988), 8832-8837). Siten EP-B-458 950:ssä osoitettiin, että esim. ei-glykolisoidulla rekombinantti 5 plasminogeeniaktivaattorilla, jonka domeenin koostumus on K2P, on olennaisesti huonompi liukoisuus kuin glykolisoidul-la t-PA-johdannaisella. Ei-glykolisoidut plasminogeeniakti-vaattorit, kuten esim. r-PA, liukenevat yleensä vain vähäisemmässä määrin tavallisesti proteiinien liuottamiseen tar-10 koitettuun puskuriin, kuten esim. 50 mmol/1 Na-sitraatti pH 6, 50 mmol/1 fosfaattipuskuri tai fysiologinen Nacl-liuos. Käyttöön terapeuttisena vaikutusaineena on kuitenkin tarpeellista, että plasminogeeniaktivaattoreita on riittävän korkeana konsentraationa, esimerkiksi 10 mg/ml konsentraati-15 oon asti.

EP-A-0 217 379:stä tiedetään, että prokaryootin t-PA:n liukoisuutta lisätään neutraaleilla tai hieman alkaalisilla arginiini-formuloinneilla. Eräs tämän menetelmän haitta on 20 kuitenkin, että prokaryootin t-PA:n hyvä liukoisuus voidaan saavuttaa vain hyvin korkealla arginiinikonsentraatiolla.

Muita galeenisia plasminoaktivaattoreiden tai niiden johdan-naisten formulointeja tunnetaan WO 90/01333:sta, WO 89/0503-: 25 47:stä, WO 90/08557:stä, EP 0 297 294.stä, EP 0 156 169:stä ja EP 0 228 862:sta.

• · • · : * : « · , ,·. Siten W0 90/01333 :ssa (Invitron) kuvataan lysiinin, histi- * · · ···. diinin, arginiinin yhdistelmä sitraatin kanssa t-PA:lie ja • · * 30 johdannaisille bakteereista. Sitraattia käytetään 5 mmol/1, lysiiniä, histidiiniä, arginiiniä 150 mmol/1 pH:ssa 6. Li- **:· säksi lisätään albumiinia.

• · * • · · • · · « .*.*· WO 89/050347:ssä (Invitron) kuvataan arginiinin (20-200 • · ,**·. 35 mmol/1) ja sitraatin (20-80 mmol/1) yhdistelmä pH:ssa 5-8.

• * · « · · • · ‘•••* WO 90/08557 (Genetics Institute) ilmoittaa kreatiinin yhdis- • · :.’*ϊ telmän erilaisten lisäaineiden, kuten histidiinin, arginii- : 4 117925 nin, proliinin, betaiinin, kolliinin, imidatsoliinin, tryp-tofaanin, sitraatin kanssa, mahdollisesti glutamiinihappo-, asparagiinihappo- ja meripihkahappolisäyksella.

5 EP 0 297 294:ssä (Behring) ilmoitetaan ainakin kahden aminohapon, kuten lysiinin, ornitiinin, arginiini, traneksaami-hapon ja muiden lisäaineiden yhdistelmä pH:ssa 5-10.

EP 0 156 169 (Asahi) kuvaa ornitiinin ja/tai lysiinin, mah-10 dollisesti sitraatti-, glysiini- tai fosfaattilisäyksellä ja EP 0 228 862 (Genentech) ilmoittaa formuloinnin, jossa on arginiinia ilman kloridia tai sen kanssa, samoin kuin ilman detergenttiä tai sen kanssa.

15 Vaihtoehtoisia formulointeja r-PA:sta - lysiinin tai lysii-ni-analogien läsnäollessa kuvataan myös EP 0 458 950:ssa (Boehringer Mannheim). Uudemmat tutkimukset osoittavat kuitenkin, että r-PA:n liukoisuus ei myöskään näissä formuloinneissa ole riittävä. On osoitettu, että liukoisuu tosin pa-20 ranee lisäämällä sitraattikonsentraatiota paranee, kuitenkin laskimot sietävät sen kaltaisia formulointeja vain rajallisesti tai ei lainkaan. Sen ohella johtavat korkeat suolakon-sentraatiot ja siihen liittyvä alhainen lasittumislämpötila (Tg') siihen, että näiden formulointien lyofilisaatio täytyy it* · 25 suorittaa alle -45°C - -50°C:ssa. Nämä lämpötilat ovat tekni- sesti usein vain erittäin suurilla kuluilla toteutettavissa • · ;*·*· ja vaativat kalliit säätö- ja valvontaelementit, jotta lyö- • · . .·, filisaatiota varten mitataan ja säädellään optimaaliset olo- • ·· *:·. suhteet. Lisäksi tähän on sidottu suhteellisen korkea ener- t · · 30 gian käyttö. Lisäksi tulee, että usein käytetään suuren mit- , takaavan tuotannossa vanhempia lyofilisaatiolaitteita, jois- • · · **··* sa ei ole vaadittavaa monimutkaista mittaus- ja säätötek-

• · * J

• · **! * nilkkaa, ja joissa voidaan sen seurauksena tavallisesti taa- ta vain noin -45°C työskentelylämpötila.

,·····: 35 • · ·

Keksinnön tehtävä on valmistaa plasminoaktivaattoriformu- « · *"·* lointeja ja niiden johdannaisia, joita laskimo sietää hyvin, • · · *· " ja joissa vaikutusainetta on riittävän korkeana konsentraa- » 117925 5 tiona, ja joilla on hyvä vaikutusaineen liukoisuus, jolloin PA:n stabiilisuuden pitäisi pysyä pidemmän ajanjakson lyofi-lisaatissa. Lisäksi keksinnön kohde on kehittää formulointeja, jotka ovat myös teknisessä tuotantomittakaavassa varmas-5 ti lyofilisoitavia, jolloin lyofilisaatin tuotelaadun hyvä toistettavuus pitäisi taata.

Keksinnön mukainen tehtävä ratkaistaan plasminogeeniakti-vaattoria sisältävän farmaseuttisen valmisteen avulla, jol-10 loin valmisteessa on ainakin yksi sokeri ja traneksaamihap-po. Valmiste kestää varastointia lyofilisoidussa muodossa pidemmän ajanjakson. Myös uudelleen liuokseen saatettu vesipitoinen injektioliuos täyttää tämän pidemmän varastointi-ajan vaatimuksen. Tämän on erityisesti tapaus, kun liuoksen 15 pH-arvo säädetään arvoon, joka on 5,5-6,6. Muina lisäaineina voi farmaseuttisessa valmisteessa olla tavallisia puskuriai-neita tai pinta-aktiivisia aineita (anionisia, kationisia tai neutraaleja tensidejä).

20 Esimerkillisesti tämän keksinnön mielessä kysymykseen tulevia plasminogeeniaktivaattoreita (PA) varten käytettiin eu-roopplaisessa patenttihakemuksessa EP-A-0 382 174 tarkemmin kuvattua plamsinogeeniaktivaattoria K2P (BM 06.022). Se ·:**! koostuu ihmisen t-PA:n kehä 2 (K2)- ja proteaasi-domeenista • 25 (P) ja on Escherichia coli-soluissa tapahtuvan ekspression IM · takia ei-glykolisoidussa muodossa.

* * • · * * · • * t ,·. Sokerina keksinnönraukaisissa formuloinneissa on ensi sijassa mono- tai disakkarideja. Disakkarideina tulevat erityisesti S · .

* 30 kysymykseen sakkaroosi, trehaloosi, maltoosi tai laktoosi.

Monosakkarideja ovat erityisesti galaktoosi tai vastaavat • · *·!· aminosokerit, kuten esim. galaktoosiamiini. Edullisesti käy- V * tetään ei-pelkistäviä sokereita sakkaroosia tai trehaloosia.

Sokerin konsentraatio vesipitoisessa injektioliuoksessa on * · j·". 35 ensi sijassa 40-100 mg/ml, edullisesti 50-70 mg/ml.

M» ·» • * *···* Puskuriaineina farmaseuttisessa valmisteessa voi olla ta- • · *,*'*· vallisia tätä tarkoitusta varten kysymykseen tulevia ainei- •) 6 117925 ! ta, vahvojen happojen suoloja valmistetaan heikkojen emästen kanssa tai heikkojen happojen suoloja vahvojen emästen kanssa. Esimerkillisesti mainitaan: fosforihapon aikaiisuolat, viinihappo, omenahappo ja sen kaltaiset. Samoin voivat ami-5 nohapot tulla kysymykseen. Keksinnön mukaisissa valmisteissa on fosfaattipuskuria. Fosfaattipuskurin konsentraatio valmiissa injisoitavassa vesipitoisessa liuoksessa on erityisesti 50-300 mmol/1, edullisesti 80-220 mmol/1 ja erityisen edullisesti 130-170 mmol/1. Fosfaattipuskurina käytetään 10 ensi sijassa dinatrium- tai dikaliumvetyfosfaattia, joka säädetään fosforihapolla kulloiseenkin pH-arvoon.

Liuokoisuuden välittäjännä on keksinnön mukaisessa valmisteessa traneksaamihappoa (TES). Traneksaamihapon konsentraa-15 tio valmiissa injisoitavassa vesipitoisessa liuoksessa on edullisesti 1-50 mmol/1, edullisesti 8-12 mmol/1. Erityisen edullisesti käytetään 10 mmol/1 konsentraatiota. Yllättäen on havaittu, että traneksaamihappo lisää plasminoaktivaatto-reiden, erityisesti ei-glykolisoitujen plasminoaktivaatto-20 reiden, liukoisuutta vesipitoisessa väliaineessa. Esimerkin vuoksi lisättiin plasminoaktivaattorijohdannaisen r-PA:n tapauksessa liukoisuutta ainakin kertoimella 1,5 verrattuna liuokseen, jossa ei ollut traneksaamihappoa. Liukoisuuden ψ lisääntymisen kerroin on ensi sijassa alueella 2-3. Tämä · ;*: 25 vaikutus on etuna ennen kaikkea lyofilisoitujen farmaseut- tisten plasminogeeniaktivaattoreiden valmistuksessa, koska • · mahdollisuudella kohottaa plasminoaktivaattorin konsentraa- ’ ,·. tiota käytetyssä liuoksessa valmistusprosessissa voidaan vä- * « · hentää vesimäärää huomattavasti ja yhdessä saavutetaan ener- * 30 giaa säästävä ja huokeampi valmistus. Tämän avulla lyhenevät erityisesti lyofilisaatioajat valmistusprosessissa.

*:; • · a # * ♦ v v * V ' Pinta-aktiivisina aineina voidaan käyttää ei-ionisia, anio- * ;*.*» nisiä tai kationisia pinta-aktiivisia aineita, ensi sijassa • » ,··*. 35 kuitenkin ei-ionisia tensidejä, kuten esimerkiksi Tween 80 tai Tween 20. Tensidikonsentraatio on 0,005-0,1 % (w/v), • * ··* ensi sijassa 0,01 %.

• 9 i » i r ** • · 117925 7

Keksinnönmukaiselle farmaseuttiselle valmisteelle vesipitoisessa muodossa on sopiva pH-arvo 5,5-6,5, edullisesti pH-arvo 5,8-6,2.

5 Keksinnön mukaisessa valmisteessa on vaikutusainetta 10 mg/ ml, ensi sijassa 3-5 rag/ml konsentraationa.

Keksinnön mukaisia farmaseuttisia valmisteita käytetään injektio- tai infuusioliuoksina. Tämä voi tapahtua siten, että 10 käyttöön asetetaan injektiovalmis liuos, jossa on keksinnön mukainen koostumus. On kuitenkin myös mahdollista asettaa käyttöön farmaseuttinen valmiste lyofilisoidussa muodossa.

Nämä saatetaan sitten sinänsä tunnetuin tavoin injektiotar-koituksiin sopivilla aineilla tai liuoksilla (esim. vesi).

15 Injektiovällaineena käytetään keksinnön mukaiseen valmistee seen ensi sijassa vettä, jossa voi mahdollisesti olla tavallisia isotonisia lisäaineita, kuten esimerkiksi fysiologinen NaCl-konsentraatio.

20 Keksinnön kohteena on myös menetelmä valmistaa farmaseuttista valmistetta, jossa on plasminogeeniaktivaattoreita tai niiden johdannaisia pH-arvon ollessa 5,5-6,5, samoin kuin niiden käyttö valmistamaan keksinnön mukaisia farmaseuttisia m "·**’ valmisteita.

• i‘: 25 ··« e

Keksinnön kohteena on lisäksi tiettyjen farmaseuttisten apu- 9 · aineiden, jotka ovat sokerien ja traneksaamihapon ryhmästä, , .·, seoksen käyttö plasminoaktivaattoreiden pitkäaikaiseen sta- " * · ··· biilisuuteen. Erityisen edullista on etenkin apuaineiden ί * · * 30 sokerin, fosfaattipuskurin, traneksaamihapon ja pinta-aktii- , visen aineen yhdistelmä saavuttamaan hyvä varastoinnin kes- • fc * "···* tävyys.

j!': • > * ;V: Stabiilisuustutkimukset osoittavat, että keksinnönmukaiset • * 35 valmisteet ovat liuoksina 4°C:ssa vähintään 30 d stabiileja.

♦ * f ;f Vaikutusaineen stabiilisuus keksinnönmukaisissa lyofilisaa- • · r·»'* teissä on 4°C:ssa 2-5 vuotta. Edullisesti vaikuttaa erityi- sesti tosiasia, että lääkeamevalmisteilla on myös korkeam- 117925 8 massa termisessä rasituksessa erinomainen stabiilisuus, mikä tekee ne suurin piirtein riippumattomaksi lämpötilan heilahteluille, joita voi esiintyä erityisesti maapallon lämpimim-millä ilmastoalueilla, erityisesti jäähdytysketjun häiriöis-5 sä. Usein pitkien jakelureittien perusteella farmaseuttisten antomuotojen tapauksessa lääkeaineen valmistajalta loppukäyttäjälle eri maissa ei voida sulkea pois, että valmisteet altistetaan tarkoituksettomasti mahdollisesti myös pidemmän ajanjakson lämpötilaheilahteluille, mikä johtaa proteiinin 10 aktiivisuuden häviämiseen ja siten ääritapauksessa asettaa terapeuttisen käsittelyn onnistumisen kyseen alaiseksi. Keksinnön mukaiset antomuodot ovat kuitenkin suhteessa sellaisiin lämpötilan heilahteluihin suurin piirtein riippumattomia. Väliaikaisissa stabiilisuustutkimuksissa voitiin osoit-15 taa, että valmisteilla itsellään 35°C:een lämpötilassa, jossa ne olivat 30 d ajanjakson, ei voitu osoittaa mainittavaa haittaa mitä tulee proteiinin stabiilisuuteen. Sen mukaan on lähdettävä siitä, että valmisteilla on sääntöjen mukaisessa varastoinnissa jääkaappilämpötilassa 2-5 vuoden stabiili-20 suus.

Keksinnön mukaisilla valmisteilla on lisäksi etuna, että jäätyneen liuoksen lyofilisaatin tuottamiseksi lasittumista | lämpötila (Tg') on suhteellisen korkea ja -33°C - -40°C, si- 25 ten että lyof ilisaatin tuotelaadun toistettavuus taataan • · :*·*; myös tuotantomittakaavassa riittävällä varmuudella. Suhteel- » · . lisen korkea lasittumislämpötila on siksi erityisesti edul- • · · linen, koska teknisesti rajoittavien tai aavistamattomien • · · lämpötilan kohoamisten, usein hyvin pitkien lyofilisaatio- . 30 aikojen aikana, on riski tarkoituksettomasta jäätyneen li- • » · ;·1 uoksen sulamisesta vähemmän todennäköistä. Tapauksissa, • · · *·* * joissa lasittumislämpötila on alle -40°C ja nämä lämpötilat lyofilisaatioprosessin aikana ylittyvät ylöspäin, mikä eri- • · .·*·. tyisesti seuraa teknisissä lyofilisaatiolaitteissa, jotka • · « 35 työskentelevät lämpötilassa lähellä -45°C, voi tämä ei-toi- • · *···* vottu lasittumislämpötilan ylittyminen johtaa jäädytetyn • * * *· liuoksen haitallisiin muutoksiin. Riittävää tuotelaatua ei siten enää taata. Etenkin proteiinia sisältävissä lyofi- 117925 ::.-.9.- lisaateissa voi esiintyä proteiinin aktiivisuuden katoamista tai aggregaattien muodostumista. Eräs lisäetu keksinnön mukaisessa valmisteessa lasittumislämpötilassa -35°C - -40°C on siinä, että tarpeellinen energiantarve lyofilisatioprosessia 5 varten minimoidaan, koska lyofilisaatiotapahtumaa ei tarvitse suorittaa välttämättömästi alle -50"C lämpötilassa.

Tämän keksinnön mielessä on sitten mahdollista tavoitella erityisesti suhteellisen korkeita lasittumislämpötiloja jää-10 tyneille liuoksille, kun fosfaattipuskurina lyofilisaatioon tarvittavaan liuokseen käytetään kaliumsuolaa, kuten esimerkiksi dikaliumvetyfosfaattia tai kaliumvetyfosfaattia. Erityisesti tähän kuuluva dikaliumvetyfosfaatti tulee kysymykseen 20-40 mg/ml konsentraationa, ensi sijassa 20-30 mg/ml. 15 Lasittumislämpötilaa on mahdollista vahvistaa lisäämällä sakkaroosia. Sakkaroosia lisätään tällöin ensi sijassa 60-90 mg/ml, erityisesti 60-80 mg/ml konsentraationa. Erityisen edullisesti käytetään liuosta, jossa on noin 26 mg/ml dikaliumvetyfosfaattia (K2HP04 x 12HZ0) ja noin 70 mg/ml sakka-20 roosia. Liuoksen pH-arvo säädetään ensi sijassa 85 %:lla fosforihapolla (noin 12 mg/ml) arvoon 6. Lisäksi liuoksessa on noin 0,5-5 mg/ml, edullisesti 1-2 mg/ml traneksaamihap-poa, erityisesti noin 1,6 mg/ml. Muuten voi mukana olla li- • · ·.: * sänä tensidiä, kuten esimerkiksi Tween 80, jota käytetään 25 edullisesti 0,01-0,3 mg/ml, erityisesti noin 0,1 mg/ml kon-sentraationa.

• · • · * • · · • · ·

Keksinnön mukaisen lyofilisaatin lisäetu on, että siinä on « · · suhteellisen vähäinen jäännöskosteus lyofilisoinnin päätyt- . 30 tyä. Jäännöskosteuden suuruus on alle 5 %, ensi sijassa 0,5- “* 4 %, erityisesti 1-3 %. Tavallisesti lyofilisaateilla suu- • · « \ ruus on arvoissa, jotka ovat yli 6 %. Alhaisempi jäännöskos- :V: teus johtaa siihen, että valmisteilla on parempi varastoin- t”*: tistabiilisuus, valmisteet joilla on korkeampi jäännöskos- »»» 35 teus, johtavat usein proteiinin epästabiilisuuteen, joka • · huomataan biologisen aktiivisuuden häviämisenä tai aggre- ♦ * · 1 *"· gaattien muodostumisena.

1 1 7925 ίο

Keksinnön mukaisen valmisteen lisäetu on siinä, että valmistettaessa lyofilisaattia sen perusteella, että traneksaami-happolisäyksellä ei-glykolisoitujen plasminoaktivaattorei-den, etenkin mutanttien tyyppiä K2P, K1K2P tai P tapaukses-5 sa, voidaan lähteä pienemmistä jäädytettävän liuoksen tilavuuksista (esimerkiksi noin 5 ml/yksittäisantomuoto) tavoiteltu liukoisuuden lisääntyminen siten, että lyofilisaatio-aika verrattuna tähän mennessä lyofilisaattien valmistukseen käytettyyn liuokseen (esimerkiksi noin 10 ml/antomuoto), 10 lyhenee selvästi. Ensi sijassa lähdetään liuoksista, joissa on vaikutusainetta noin kaksinkertaisesti korkeampi konsen-traatio verrattuna mitä injektiovalmiissa vesipitoisissa an-tomuodoissa on siten, että tähän mennessä tavallisen liuoksen 10 ml:n sijasta voidaan käyttää 5 ml vesipitoista liuos-15 ta.

Laskiraonsietokyvyn tutkimukset osoittavat erittäin hyvää keksinnön raukaisen valmisteen sietämistä.

20 Seuraavien suoritusmuotoesimerkkien pitäisi valaista keksintöä lähemmin rajoittamatta sitä: *·**· Esimerkki 1 | | : Sameutuminen mekaanisen rasituksen jälkeen/ 25 Keksinnön mukaisen ^valmisteen valon sironnan mittaus • · • · • · · • · • * j .·. r-PA (BM 06.022) säädettiin proteiinikonsentraatioon (Cprot;.) • ·« 6 rag/ml (Ultrasuodatus Araicon YM 10-membraanilla) ja dia- • · · lysoitiin annettua puskuria vastaan. Lopuksi säädettiin , 30 näytteet C,^*. « 4 mg/ml ja a)jätettiin muuttamatta, b) ra- • » · **··' kennettiin kerros lisää 0,01 %:lla Tween 80:llä c) 0,01 *·* * %:lla Tween 20:llä.

• · * * * • · · • · ,*·*. Näytteiden rasitus tapahtui kulloinkin 10 s Whirl Mix (Janke • · · 35 & Kunkel, IKA-Labortechnik VF2, maksimaalinen pyörimisno- « · *···'# peus). Lopuksi näytteitä inkuboitiin 2 min huoneenlämpöti- *. " lassa.

117925 11

Valon sironta rasittomattoraalle ja rasituksessa olevalle näytteelle mitattiin 25“C:ssa fluorimetrisesti (Ex. 360 nm, EH.: 360 nm; Ex.-juovan kulkurata: 3 nm; Em.-juovan kulkurata: 10 nm; mittausväli: 10 s yli 3 min). Kuviossa 1 on an-5 nettu näytteen sironta-arvo, joka on kulloinkin korjattu puskurin fluoresenssilla.

Tulos: Olemassa oleva materiaali osoittaa, että ilman deter-genttien lisäystä mekaanisessa rasituksessa tapahtuu huomat-10 tava kasvu näytteen valon sironnassa (kuvio 1). Kasvua voidaan pitkälle painaa alas lisäämällä detergenttejä. Mittaustarkkuuden puitteissa ei eroa huomata Tween 80:n ja Tween 20:n välillä.

15 Kuviossa 1 (näytteiden A, B, C, D mekaaninen rasitus) on tiivistettynä saadut tulokset. Kuviossa 1 käytetyt lyhennykset tarkoittavat yksitellen: A) 150 mM Na2HP04/H3P04, pH 6,0

20 10 mM TES

50 mg/ml sakkaroosi a) ilman detergenttiä b) 0,01 % Tween 80 ♦ · : c) 0,OI % Tween 20 25 * * B) 150 mM Na2HP04/H3P04, pH 6,0 • »

1 10 mM TES

• · · 50 mg/ml trehaloosi 4 a) ilman detergenttiä 30 b) 0,01 % Tween 80 c) 0,01 % Tween 20 • * * « :V: c) iso mM k2hpo4/h3po4, pH 6,o

»*’*: 10 mM TES

··· 35 50 mg/ml sakkaroosi */·' a) ilman detergenttiä • · ’· "· b) 0,01 % Tween 80 c) 0,01 % Tween 20 . . . ·;3 ΐ2 1 1 7925

D) 150 mM K2HP04/H3P04, pH 6,0 10 UH TES

50 mg/ml trehaloosi 5 a) ilman detergenttiä b) 0,01 % Tween 80 c) 0,01 % Tween 20

Esimerkki 2 10 r-PA (BM 06.022) TES :ssä varastointi/sakkaroosi-oitoiset keksin nonmukaiset formuloinnit//useampaan kextaan..tapahtuva jäädyttäminen ia sulattaminen r-PA dialysoitiin taulukossa 1 annettua puskuria (ilman 15 Tween 80) vastaan, säädettiin Cp*,*. = 4 mg/ml, tehtiin uusi kerros Tween 80:llä C= 0,01 %, jaettiin annoksiin ja sterii-lisuodatettiin. Kulloinkin jäädytettiin 9 näytettä -20°C:ssa tai -70°C:ssa. Taulukossa annettuina päivinä sulatettiin kaikki näytteet paitsi kontrolli (15 min 25°C:ssa vesi-20 hauteessa). Kulloinkin analysoitiin näyte (Cp*,*, ja amido- lyyttinen aktiivisuus). Loput näytteet syväjäädytettiin jälleen -20 tai -70°C:ssa. Sarjan lopussa määritettiin ei-stres- ' * satun kontrollin aktiivisuus.

• · • * * i · «•Φ * :/.· 25 Tulos: Kuten käsillä olevessa materiaalissa taulukosta 1 käy :*·*: ilmi, voidaan r-PA jäädyttää ja sulattaa ainakin 8 kertaa • · i ilman, että aktiivisuudessa on häviötä.

• «· ♦ ♦* * · · • · »

Taulukko 1 t . 30 150 mM Na2HP04/H3P04, pH 6,0

10 mM TES

• · · ‘ 50 mg/ml sakkaroosi 0,01 % Tween 80 * · r • · · t : · ·

35 -20°C -70°C

* · * · _____ _____ päivä cprot. aa Cprot. aa [mg/ml] [MU/ml] [mg/ml] [MU/ml] 117925 13 0 4,1 3,1 4,1 3,1 1 4,5 3,1 4,6 3,0 2 4,6 3,2 4,8 3,1 3 4,3 3,1 4,0 3,0 5 4 4,8 3,1 4,7 3,1 5 4,1 3,3 4,1 3,2 6 4,2 3,0 4,2 3,1 7 4,1 3,1 4,3 3,2 8 4,0 2,9 4,3 3,1 10 kontrolli 4,3 3,0 4,3 3,1

Kontrolli: näyte mitattu ilman käsittelyä.

AA: amidolyyttinen aktiivisuus Cptot.: proteiinikonsentraatio 15 Esimerkki 3 r-PA-liuoksen stabiilisuus

Erilaisten formulointien vertailu Cr,„. = 4 mg/ml »···· • « : r-PA (BM 06.022) konsentroitiin Araicon YM 10-suodattimella 5

Mt · 20 mg/ml:ksi ja dialysoitiin taulukossa 2 annettua puskuria • * (ilman Tween 80) vastaan. Dialysaatti säädettiin Cprot. = 4 • · mg/ml, tehtiin uusi kerros Tween 80 :llä C= 0,01 %, jaettiin I · · annoksiin ja varastoitiin -20 ja -4°C:ssa. 7, 14, 20 ja 30 d • · » kuluttua rasitettujen näytteiden amidolyytinen aktiivisuus 25 ja proteiinikonsentraatio määritettiin.

• · ♦

Tulos: -20 ja 4°C:ssa varastoidut näytteet olivat yli 30 d ··· • · · *·* * muuttumattomiksi.

• ♦ • · · ··· -.

,···. Taulukko 2 \\\ 30 150 mM Na2HP04/H3P04, pH 6,0

:·*·: 10 mM TES

• · *. *: 50 mg/ml trehaloosi 0,01 % Tween 80

-20°C -70°C

14 117925

Päivä Cprot;. AA Cprot;. AA

[mg/ml] [MU/ml] [mg/ml] [MU/ml] 0 3,9 2,1 57 3,9 2,3 3,97 2,4 14 3,9 2,3 3,98 2,4 20 3,9 2,3 3,9 2,4 30 3,9 2,3 3,9 2,4 AA: amidolyyttinen aktiivisuus 10 Cprot.: proteiinikonsentraatio

Esimerkki 4 r-PA-liuoksen stabiilisuus

Erilaisten formulointien vertailu CI—. = 6 mg/ml 15 r-PA (BM 06.022) dialysoitiin yön yli alla esitettyä puskuria vastaan ja konsentroimalla Amicon YM 10-suodattimella säädettiin Cprot.=6 mg/ml. Näytteet täytettiin 1 ml annoksiin ja varastoitiin yli 30 d -20 ja 4°C:ssa. 1, 2,5, 9, 15 ja 29 • · !.: : 20 d kuluttua aktiivisuus ja proteiinisisältö määritettiin.

• · « 1 · • ·· • · ·'·*: Taulukko 3 ft , .·. 200 mM NaaHP04/H3P04, pH 6,0

10 mM TES

• · ♦ 25 50 mg/ml sakkaroosi , 0,01 % Tween 80 • · · • · * • · · • *t » » t

-20°C —70°C

· ----- 1. ——,—............. .......: —— ................ 'm • · t , I., 1

Päivä Cprot. AA Cprot. AA

·;·' [mg/ml] [MU/ml] [mg/ml] [MU/ml] ··« . - - '.......-......... .. . _________________ _ ’:***, 30 0 6,0 3,3 6,0 3,3 • * • · IM·· I ......11.......... -- * · 1 5,7 3,3 5,7 3,6 15 117925 2 5,8 3,3 5,9 3,4 5 5,9 3,2 6,0 3,6 9 6,0 3,3 5,9 3,7 15 5,8 3,5 5,9 3,5 5 29 5,9 3,6 5,9 3,8 AA: amidolyyttinen aktiivisuus Cp*ot.: proteiinikonsentraatio

Taulukko 4 10 150 mM Na2HP04/H3P0«, pH 6,0

10 mM TES

50 mg/m L sakkaroosi 0,01 % Tween 80

15 -20eC -70°C

Päivä Cprot. AA Cprot. AA

[mg/ml] [MU/ml] [mg/ml] [MU/ml] 0 5,9 3,5 5,9 3,5 • ' L1_ ...........-imr-irnn. ..... ........... - - . . .. .

1 5,5 3,5 5,6 3,4 • * • * · - - - ------------- I——-— .1.1111 ί 2 5,6 3,4 5,5 3,5 * · · * · · ------------- . _ . ____________ ______ .

• · 20 5 6,0 3,5 6,2 3,6 • l.V 9 6,0 3,3 6,0 3,3 • · · | · · """..................................... ..” 15 6,0 3,6 5,9 3,1 , .·. 29 5,9 3,5 6,0 3,6 • · · _ .....________ .*;*· AA: amidolyyttinen aktiivisuus 25 Cprot.: proteiinikonsentraatio • * · • · t • * · | ·

···* Tulos: Taulukkojen tiedoista käy ilmi, että vaikutusaine BM

:***: 06.022 mainituissa formuloinneissa -20°C:ssa ja 4°C:ssa on ··* : vähintään 29 d stabiili.

• *# • · 30 117925 16

Esimerkki 5 r-PA:n liukoisuus keksinnön mukaisissa formuloinneissa 5 r-PA (BM 06.022) konsentroitiin YM 10:llä 6 mg/ml:ksi ja dialysoitiin alla mainittua puskuria vastaan. Dialysaattia konsentroitiin puolestaan Amicon YM 10-suodattimella niin pitkään, kunnes ilmeni sameutta. Näytteen sentrifugaation jälkeen supernatantteja varastoitiin 5 d 4°C:ssa. Varastoin-10 nin aluksi ja lopuksi määritettiin amidolyyttinen aktiivisuus ja Cprot..

Taulukko 5

150 mM Na2HP04/H3P04, pH 6,0 15 10 mM TES

50 mg/ml sakkaroosi ο,οι % Tween 80

Päivä Cpr<>t. AA

[mg/ml] [MU/ml] 20 0 10,2 4,8 * · II.- ^__ i :*· 5 10,2 4,9 m* · L, 1 ____ I _ _ _l AA: amidolyyttinen aktiivisuus • ·

Cprot. ‘ proteiinikonsentraatio t · • · i :: 25 Tulos: r-PA:n liukoisuus on noin 10 mg/ml. Maksimaalisella I · * • proteiinikonsentraatiolla voidaan näytettä varastoida 4°C:ssa vähintään 5 d ilman että on muutoksia amidolyyttisessä ak- • · t ’»·' tiivisuudessa.

»·· • · · f · * •V. 30 Esimerkki 6 · ,*··. Nestemäisten antomuotoien valmistus • · * • · ·

Seuraavat antomuodot valmsitettiin liuoksina ennen lyofi- • * V*: lisaatiota: 35 Liuosten koostumus ennen lyofilisaatiota Λ 117925 17

Liuos A: r BM 06.022 4 mg/ml

Na2HP04xl2H20 53,72 mg/ml 5 H3PO4 85 % 11,3 mg/ml traneksaamihappo 1,6 mg/ml sakkaroosi 50 mg/ml

Tween 80, pH 6 0,1 mg/ml 10 Liuos B: BM 06.022 4 mg/ml K2HP04 26,2 mg/ml H3P04 85 % 11,6 mg/ml 15 traneksaamihappo 1,6 mg/ml sakkaroosi 70 mg/ml

Tween 80, pH 6 0,1 mg/ml

Lyofilisaattien valmistus: 20

Steriilisuodatuksen jälkeen täytettiin 5 ml eriä 20 ml lasi- , pulloihin. Lyofilisaatio suoritettiin seuraavasti: täytetyt lasipullot laitetaan jäädytyskuivaajaan ja jäädytettiin 5.ί l -40 - -50°C levylämpötilassa 10 h ilmakehän paineessa. Lopuk- • · :.1'i 25 si kammioon ohjataan tyhjöarvo p=0,01-0,1 mbar. Levylämpö- • · • tila säädetään sen jälkeen siten, että tuottolämpötila on lii kaikkina aikoina varmasti alle kulloisenkin lasittumislämpö- 11»1» tilan. Sen jälkeen, kun koko jäämäärä on sublimoitu pois, kohotetaan levylämpötila 20-40°C:een ja lopuksi suoritetaan . 30 jälkikuivaus tyhjössä. Jäännöskosteus määritettiin tavaili- • · · sen menetelmän mukaisesti (Karl Fischer in menetelmän mukai- • t · *, sesti) ja nousee liuoksessa A 6 %:iin ja liuoksessa B 3 %: • · V,1 iin. Lyofilisaattien varastointi stabiilisuustutkimuksia */tt: varten tapahtuu 4°C:een lämpötilassa (jääkaappilämpötila), f···. 35 20°C:ssa (huoneenlämpötila) ja 35°C:ssa. Lyofilisaatin sta- • 1 V\ biilisuus 4-12 viikon varastointiajän jälkeen on annetuissa 1 1 » 1 lämpötiloissa täytetty, kuten käy ilmi analyyttisen tutki- 117925 18 muksen amidolyyttisen aktiivisuuden ja proteiinikonsentraa-tion suhteesta.

Lyofilisaatin uudelleen liuokseen saattamikseksi käyttöä 5 varten: lyofilisaatit täytetään vedellä ruiskutustarkoituk-seen. Tämä vastaa laimennusta kertoimella 2 suhteessa liuoksen alkuperäiseen tilavuuteen ennen lyofilisaatiota.

Esimerkki 7

Laskimon· keksinnön mukaisten formulointien sietokyvyn-.testaus

Valmistettiin kaksi oikeaa ja 2 plaseboliuosta taulukossa 6 esitetyillä koostumuksilla ja annettiin kaniinille laskimon-15 sisäisesti. Käyttömääränä käytettiin 0,5 ml/eläin, jokaiselle neljälle testiliuokselle käytettiin 5 eläintä.

Taulukko 6

Oikean ja plaseboliuosten koostumus 20 l. Oikea liuos

Koe nro. 93/1292 Koe nro. 93/1294 • · ' -"______ • * * ..... .....—---—-—

j BM 06.022 10 MU 10 MU

ί ·.:----- * *

Dikaliumvetyfos- 131,0 mg 131,0 mg 25 faatti » * i

Mi — — ... -------------- iT: Fosforihappo 85 % 58 mg 58 mg

Traneksaamihappo 8,0 mg 8,0 mg t:\t ----—------

Sakkaroosi 250,0 mg 350,o mg • · « « ........ —— --- ---

Polysorbaatti 80 0,5 mg 0,5 mg • · ϊ • · — - — — - »***; 30 Injektiotarkoituk- lis. 10,0 ml lis. 10,0 ml M» 9 siin vesi * « • « __ __ « · · 'r 1 — —— I I — pH 6,o 6,o * »

Osmolaarisuus 320 mOsmol 351 mOsmol 117925 19 2. Plaseboliuos

Koe nro. 93/1291 Koe nro. 93/1293

Dikaliumvetyfos- 131,0 mg 131,0 mg 5 faatti

Fosforihappo 85 % 58 mg 58 mg

Traneksaamihappo 8,0 mg 8,0 mg

Sakkaroosi 250,0 mg 350,0 mg

Polysorbaatti 80 0,5 mg 0,5 mg 10 Injektiotarkoituk- lis. 10,0 ml lis. 10,0 ml siin vesi pH 6,0 6,0

Osmolaarisuus 322 mosraol 343 mOsmol 15 Tulos: Eläinten reaktio injektiosta ja histologiset löydöt osoittavat, että käytetyt koeliuokset ovat kaikki hyvin siedettäviä.

··1·· • · • · » · « • 1 · ♦ »1 · « « a 1 · « · * m * 1 t • 1 f ä · 1 * H 1 H · 4 * : : t ...

f 1 1 * · · m «·· • 1 « 1 1 * 1 • 1 · Ψ · · V 4 f » · i : * 1 · * f t * « tm· 9 I·1 ·1♦· 4 ·

Claims (21)

1. Plasminogeeniaktivaattorin farmaseuttinen valmiste, jossa on sokeria ja traneksaamihappoa ainoana aminohiilihappona, eikä sitraattia.

2. Preparat enligt patentkrav 1, kännetecknat av att sockret är disackarid.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen valmiste, tunnettu siitä, että sokeri on 5 disakkaridi.

3. Preparat enligt patentkrav 2, kännetecknat av att sockret är sackaros el-ler trehalos.

3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen valmiste, tunnettu siitä, että sokeri on sakkaroosi tai trehaloosi.

4. Preparat enligt nägot av patentkraven 1-3, kännetecknat av att det des-sutom innefattar ett buffertämne och detta buffertämne är kaliumsalt av fos- 10 forsyra, särskilt dikaliumvätefosfat.

4. Jonkin patenttivaatimuksista 1-3 mukainen valmiste, tunnettu siitä, että siinä on lisäksi puskuriaine ja tämä puskuriaine on fosforihapon kaliumsuo- 10 la, erityisesti dikaliumvetyfosfaatti.

5. Preparat enligt nägot av patentkraven 1-4, kännetecknat av att prepara-tet är en nedfryst lösning.

5. Jonkin patenttivaatimuksista 1-4 mukainen valmiste, tunnettu siitä, että valmiste on jäädytettynä liuoksena.

6. Preparat enligt nägot av patentkraven 1-5, kännetecknat av att det innefattar 40-100 mg/ml socker, företrädesvis 50-70 mg/ml.

6. Jonkin patenttivaatimuksista 1-5 mukainen valmiste, tunnettu siitä, että siinä on 40-100 mg/ml sokeria, ensi sijassa 50-70 mg/ml.

7. Preparat enligt nägot av patentkraven 1-6, kännetecknat av att det inne fattar 50-300 mmol/l fosforbuffert, företrädesvis 80-220 mmol/l. *:··: 8. Preparat enligt nägot av patentkraven 1-7, kännetecknat av att det inne- : **· fattar 1-50 mmol/l tranexamsyra, företrädesvis 8-12 mmol/l. • · • · · !: / 9. Preparat enligt nägot av patentkraven 1-8, kännetecknat av att det inne- ·* ;* 20 fattar 0,005-0,1 % tensid, företrädesvis 0,01 %. • · · * · ♦ • « ·

7. Jonkin patenttivaatimuksista 1-6 mukainen valmiste, tunnettu siitä, että siinä on 50-300 mmol/l fosforipuskuria, ensi sijassa 80-220 mmol/l.

8. Jonkin patenttivaatimuksista 1-7 mukainen valmiste, tunnettu siitä, että j.:’: siinä on 1-50 mmol/l traneksaamihappoa, ensi sijassa 8-12 mmol/l.

• · • · · / 9. Jonkin patenttivaatimuksista 1-8 mukainen valmiste, tunnettu siitä, että : :* 20 siinä on 0,005-0,1 % tensidiä, ensi sijassa 0,01 %. • · · • · « ··« :T: 10. Jonkin patenttivaatimuksista 1-9 mukainen valmiste, tunnettu siitä, että siinä on rekombinantti plasminogeeniaktivaattori tyyppiä K2P, ensi sijassa BM 06.022. • ♦♦ * *·♦

10. Preparat enligt nagot av patentkraven 1-9, kännetecknat av att det in-nefattar en rekombinant plasminogenaktivator av typ K2P, företrädesvis BM *\ 06.022. • tt ♦ II. Preparat enligt nägot av patentkraven 1-9, kännetecknat av att det in-25 nefattar t-PA eller dess derivat i en koncentration upp till 10 mg/ml. * ♦ φ · · *···: 12. Preparat enligt nägot av patentkraven 1-4 eller 9-11, kännetecknat av : V: att dess farmaceutiska administreringsform är lyofilisat. φ · · • · • φ • · · 117925

11. Jonkin patenttivaatimuksista 1-9 mukainen valmiste, tunnettu siitä, että :'·*! 25 siinä on t-PA:ta tai sen johdannaista 10 mg/ml konsentraatioon asti.

*·· • · **:·* 12. Jonkin patenttivaatimuksista 1-4 tai 9-11 mukainen valmiste, tunnettu :T: siitä, että farmaseuttinen antomuoto on lyofilisaatti. « · · • · *"* 13. Jonkin patenttivaatimuksista 1-4 tai 6-11 mukainen valmiste, tunnettu siitä, että antomuoto on vesipitoinen liuos ja liuoksen pH-arvo on 5,5-6,5. 117925

13. Preparat enligt nägot av patentkraven 1-4 eller 6-11, kännetecknat av att dess administreringsform är en vattenhaltig lösning och att lösningens pH-värde är 5,5-6,5.

14. Förfarande för att framställa ett farmaceutiskt preparat enligt nägot av 5 patentkraven 1-13, kännetecknat av att plasminogenaktivatorn omvandlas tili en med sockret och tranexamsyran kompatibel farmaceutisk administreringsform.

14. Menetelmä jonkin patenttivaatimuksen 1-13 mukaisen farmaseuttisen valmisteen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että plasminogeeniaktivaattori muutetaan yhdessä sokerin ja traneksaamihapon kanssa sopivaan farmaseuttiseen antomuotoon.

15. Förfarande för att framställa ett lyofiliserat farmaceutiskt preparat enligt patentkrav 14, kännetecknat av att man framställer en vattenhaltig lösning, 10 innefattande en plasminogenaktivator, socker och tranexamsyra, lösningen nedkyls, den nedkylda lösningens temperatur regleras tili ett värde som är under glasövergangstemperaturen, företrädesvis -40 °C - -50 °C, och den nedkylda lösningen lyofiliseras i vakuum.

15. Menetelmä patenttivaatimuksen 14 mukaisen lyofilisoidun farmaseuttisen valmisteen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että valmistetaan vesipitoinen liuos, jossa on plasminogeeniaktivaattori, sokeria ja traneksaa-mihappoa, liuos jäädytetään, jäätyneen liuoksen lämpötila säädetään arvoon, joka on alle lasittumislämpötilan, ensi sijassa -40°C - -50°C, ja jääty-10 nyt liuos lyofilisoidaan tyhjössä.

16. Förfarande enligt patentkrav 15, kännetecknat av att lyofiliseringen ut-15 gar frän en lösning vars aktiva ämne har en 3 ganger sä hög koncentration jämfört med en bruksfärdig vattenhaltig injektions- eller infusionslösning.

16. Patenttivaatimuksen 15 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lyofili-saatiossa lähdetään liuoksesta, jossa on vaikutusainetta 3 kertaa korkeampi konsentraatio verrattuna käyttövalmiiseen vesipitoiseen injektio- tai in-fuusioliuokseen.

17. Användning av en kombination av farmaceutiska tillsatsämnen socker, fosfatbuffert, tranexamsyra och ytaktivt medel för att framställa en farma-ceutisk administreringsform av ett preparat enligt patentkrav 1 som venen .* / 20 täi, och som innefattar en plasminogenaktivator och dessa tillsatsämnen, » » t : likväl inte citrat. * · • · · • *· • · [*·*: 18. Användning enligt patentkrav 17 för att framställa en administrerings- . form som har ätminstone 2 ars lagringsstabilitet. *M • · · *·** : 19. En farmaceutisk administreringsform av preparatet enligt patentkrav 1 i 25 lyofilisatform, vars restfuktighet är mindre än 5 %, särskilt 1-3 %, och som ·· : *·· innefattar en plasminogenaktivator, socker, fosfatbuffert, tranexamsyra och tensid, varvid administreringsformen likväl inte innehäller citrat. • · ♦ : V* 20. Farmaceutisk administreringsform enligt patentkrav 19, vars lagrings- • · · stabilitet är ätminstone 2 är. »·· • « ·

17. Farmaseuttisten apuaineiden sokerin, fosfaatipuskurin, traneksaamiha pon ja pinta-aktiivisen aineen yhdistelmän käyttö valmistamaan sellaista patenttivaatimuksen 1 mukaisen valmisteen farmaseuttista antomuotoa, jota laskimo sietää ja jossa on plasminogeeniaktivaattori ja näitä apuaineita, ei kuitenkaan sitraattia. • Λ m m ·

18. Patenttivaatimuksen 17 mukainen käyttö valmistamaan antomuotoa, jol- : la on ainakin 2 vuoden varastointistabiilius. • ♦ • ♦ ♦ ♦ ♦♦ • ·

19. Patenttivaatimuksen 1 mukaisen valmisteen farmaseuttinen antomuoto • · . lyofilisaatin muodossa, jonka jäännöskosteus on vähemmän kuin 5 %, eri- • · ♦ tyisesti 1-3 %, ja jossa on plasminogeeniaktivaattori, sokeria, fosfaattipusku- 25 ria, traneksaamihappoa ja tensidiä, jolloin antomuodossa ei kuitenkaan ole „ sitraattia. * » • ·· :***; 20. Patenttivaatimuksen 19 mukainen farmaseuttinen antomuoto, jonka va- ♦ ·· · * rastointistabiilius on ainakin 2 vuotta. ♦ · · • · • * :***: 21. Patenttivaatimuksen 19 tai 20 mukainen farmaseuttinen antomuoto vält- *»· .···. 30 tämään biologisen aktiivisuuden häviötä tai aggregaattien muodostumisen • · ♦ I.. välttämiseksi. • · • · • · · 22 1 1 7925 I. Farmaceutiskt preparat av en plasminogenaktivator, vilket preparat inne-häller socker och tranexamsyra som enda aminokolsyra och som inte inne-häller citrat.

20 1 1 7925

21. Farmaceutisk administreringsform enligt patentkrav 19 eller 20 för att undvika förlust av biologisk aktivitet eller uppkomst av aggregat.