FI106463B

FI106463B - Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten rapamysiinikarbamaattijohdannaisten valmistamiseksi

Info

Publication number: FI106463B
Application number: FI934501A
Authority: FI
Inventors: Robert Lewis Vogel; Kao Wenling; Magid Abdel Abou-Gharbia
Original assignee: American Home Prod
Priority date: 1992-10-13
Filing date: 1993-10-12
Publication date: 2001-02-15
Also published as: BR9304211A; HUT70199A; ATE321053T1; EP1266900A1; FI934501A; EP0593227B1; DK0593227T3; AU679931B2; HU222575B1; HK1048809A1; EP0593227A1; SG47580A1; DE69333995T2; AU4894293A; NZ248909A; FI934501A0; DE69333995D1; ES2258763T3; HU9302880D0

Description

1 106463

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten rapamysiinikar-bamaa11i j ohdannais ten valmi s tami seksi Tämä keksintö koskee menetelmää rapamysiinikarba-5 maattien valmistamiseksi. Nämä yhdisteet ovat käyttökelpoisia immunosuppression aikaansaamiseksi ja hoidettaessa kudossiirteen hyljintää, käänteishyljintätautia, autoimmuunitauteja, tulehdustauteja, kiinteitä kasvaimia, sieni-infektioita ja hyperproliferatiivisia verisuonihäiriöitä.

10 Rapamysiini on makrosyklinen trieeniantibiootti, jota tuottaa Strentomvces hygroscopicus, jonka antibiootin havaittiin sisältävän sienten vastaisen aktiivisuuden, erikoisesti Candida albicans -sientä vastaan, sekä in vitro että in vivo [C. Vezina et ai., J. Antibiot. 28, 721 15 (1975); S.N. Sehgal et ai., J. Antibiot. 28, 727 (1975); H.A. Baker et ai., J. Antibiot. 31, 539 (1978); US-patent-tijulkaisut 3 929 992 ja 3 993 749] .

Rapamysiinin yksinään (US-patenttijulkaisu nro 4 885 171) tai yhdessä pisibaniilin (US-patenttijulkaisu 20 4 401 653) kanssa on osoitettu sisältävän kasvaimen vas taista aktiivisuutta. R. Martel et ai. [Can. J. Physiol. Pharmacol. 55, 48 (1977)] kuvasivat, että rapamysiini on tehokas allergisessa aivo-selkäydintulehduskoemallissa, pesäkekovettumatautimallissa, adjuvantti-niveltulehdus- •( 25 mallissa ja nivelreumamallissa ja inhiboi tehokkaasti

IgE:n kaltaisten vasta-aineiden muodostumista.

Rapamysiinin immunosuppressiiviset vaikutukset on kuvattu julkaisussa FASEB 3, 3411 (1989). Syklosporiini A:n ja FK-506:n, jotka ovat muita makrosyklisiä molekyyle-30 jä, on myös osoitettu olevan tehokkaita immunosuppressii-visina aineina ja sen vuoksi käyttökelpoisia ehkäistäessä kudossiirteen hyljintää [FASEB 3, 3411 (1989); FASEB 3, 5256 (1989); R.Y. Calne et ai., Lancet 1183 (1978) ja US-patenttijulkaisu 5 100 899] . 1 · « 2 106463

Rapamysiinin on myös osoitettu olevan käyttökelpoinen ehkäistäessä tai hoidettaessa systeemistä punahukkaa (US-patenttijulkaisu 5 078 999), keuhkotulehdusta (US-patenttijulkaisu 5 080 899), insuliinista riippuvais-5 ta sokeritautia [Fifth Int. Conf. Inflamm. Res. Assoc. 121 (abstrakti), (1990)] ja sileiden lihassolujen lisääntymistä ja suonen sisäkalvon paksuuntumista, jotka seuraavat verisuonivauriota [Morris, R.J. Heart Lung Transplant 11 (osa 2): 197 (1992)].

10 Rapamysiinin mono- ja diasyloitujen johdannaisten (esteröity kohtiin 28 ja 43) on osoitettu olevan käyttökelpoisia sienten vastaisina aineina (US-patenttijulkaisu 4 316 885) ja niitä on käytetty valmistettaessa rapamysiinin veteen liukenevia esilääkkeitä (US-patenttijulkaisu 15 4 650 803) . Äskettäin rapamysiinin numerointisopimus on muuttunut; sen vuoksi yllä kuvatut esterit ovat Chemical Abstract -nimistön mukaisesti kohdilla 31 ja 42. US-patenttijulkaisu 5 118 678 kuvaa sellaiset rapamysiinikarba-maatit, jotka ovat käyttökelpoisia immunosuppressiivisia, 20 tulehduksen vastaisia, sienten vastaisia ja kasvainten vastaisia aineita.

Tämä keksintö koskee menetelmää sellaisten rapa-mysiini johdannaisten valmistamiseksi, jotka ovat käyttökelpoisia immunosuppressiivisina, tulehduksen vastaisina, ; 25 sienten vastaisina, solujen lisääntymisen vastaisina ja • V - kasvainten vastaisina aineina, joilla on kaava

Of1 'OMe 30 .1

Qy° 35 Η°ίΐ 0 0 Me°' J0 OMe i (I) 3 106463 jossa R1 on ryhmä, jolla on jokin kaavoista Ha - Ilf ja

III

-CONHB (Ha) 5 -C0NH-CH2-B (Hb) -CONH-CH2CH2-B (Ile) -CONH- (CH2)3-B (Ild) -C0NH-0CH2-B (Ile) -CONHNHB (Ilf) 10 -CO-N ) (m); 15 B on pyridyyli, kinoksalyyli, pyrimidinyyli, pyrat- sinyyli, piperidinyyli, morfolinyyli, piperatsinyyli tai pyrrolidinyyli, jolloin B-ryhmä voi olla mahdollisesti mono-, di- tai trisubstituoitu ryhmällä, joka valitaan 1 -6 hiiliatomia sisältävästä alkyylistä, 7-10 hiiliatomia 20 sisältävästä aryylialkyylistä, 1-6 hiiliatomia sisältävästä alkoksista, syaanista, halosta, hydroksista, nitrosta, 2-7 hiiliatomia sisältävästä karbalkoksista, tri-fluorimetyylistä, aminosta, dialkyyliaminosta, jossa on 1 - 6 hiiliatomia kummassakin alkyyliryhmässä, 3-12 hii-. 25 liatomia sisältävästä dialkyyliaminoalkyylistä, 1-6 hii liatomia sisältävästä hydroksialkyylistä, 2-12 hiili-atomia sisältävästä alkoksialkyylistä, 1-6 hiiliatomia sisältävästä alkyylitiosta ja -S03H-, -P03H- ja -C02H-ryh-mästä; ja 30 -N J on typen sisältävä heterorengas, joka on | _>· 1 morfolino, piperatsino, 5,6-dihydro-4H-pyrimidin-l-yyli tai pyrrolidino ja joka voi mahdollisesti olla mono-, di- 35 tai trisubstituoitu ryhmällä, joka valitaan 1-6 hii- ·. .

4 106463 liatomia sisältävästä alkyylistä, 7-10 hiiliatomia sisältävästä aryylialkyylistä, 1 - 6 hiiliatomia sisäl tävästä alkoksista, syaanista, halosta, hydroksista, nitrosta, 2-7 hiiliatomia sisältävästä karbalkoksista, 5 trifluorimetyylistä, aminosta, dialkyyliaminosta, jossa on 1-6 hiiliatomia kummassakin alkyyliryhmässä, 3-12 hiiliatomia sisältävästä dialkyyliaminoalkyylistä, 1-6 hiiliatomia sisältävästä hydroksialkyylistä, 2-12 hiili-atomia sisältävästä alkoksialkyylistä, 1-6 hiiliatomia 10 sisältävästä alkyylitiosta ja -S03H-, -P03H- ja -C02H-ryh-mästä; tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi, jolloin menetelmälle on tunnusomaista, että

(a) karbamyloidaan rapamysiini käyttäen isosyanaat-15 tia, jolla on kaava IV

0=C=N-Q (IV) jossa Q on B, -CH2B, -(CH2)2B, -(CH2)3B, -OCH2B tai -NHB, 20 jolloin B on kuten yllä on määritelty, tai

(b) saatetaan rapamysiinikarbonaattijohdannainen, jolla on kaava V

rV1"

• 25 I I

r' ' omc

n'VyS

ί\° 0 Λν 30 Vo ° MeO'V0 <V> OMe » 35 :

jossa R11 on ryhmä, jolla on kaava VI

• » 5 106463

O

-C-O-aryyli (VI)

jossa aryyli on fenyyliryhmä, joka mahdollisesti on sub-5 stituoitu yhdellä tai useammalla elektroneja vetävällä substituentilla, reagoimaan amiinin kanssa, jolla on jokin kaavoista Vila - Vllf ja VIII

H2N-B (Vila) 10 H2NNCH2B (VI Ib) H2N(CH2)2B (VIIc) H2N(CH2)3B (Vlld) H2NOCH2B (VI Ie) H2NNHB (Vllf) 15 (VIII) HN » S e / 20 jolloin -N j ja B ovat kuten yllä on määritelty, ja

^ S

haluttaessa saatu yhdiste muutetaan farmaseutti sesti hyväksyttäväksi suolaksi.

Farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat ovat niitä, 25 jotka ovat peräisin sellaisista epäorgaanisista kationeista kuin natriumista, kaliumista ja niiden kaltaisista; orgaanisista emäksistä, kuten mono-, di- ja trialkyyli-amiineista, joissa on 1 - 6 hiiliatomia per alkyyliryhmä, ja mono-, di- ja trihydroksialkyyliamiineista, joissa on 30 1-6 hiiliatomia per alkyyliryhmä, ja niiden kaltaisista; ja orgaanisista ja epäorgaanisista hapoista, kuten etikka-, maito-, sitruuna-, viini-, meripihka-, maleiini-, maloni-, glukoni-, suola-, vetybromi-, fosfori-, typpi-, rikki-, metaanisulfoni- ja niiden kaltaisista tunnetuista 35 hyväksytyistä hapoista. 1 · € 6 106463

Kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistuksessa käytetyt amiinit ja isosyanaatit ovat kaupallisesti saatavissa tai ne voidaan valmistaa menetelmillä, jotka on kuvattu kirj allisuudessa.

5 Tämän keksinnön mukaisesti valmistettavien edusta vien yhdisteiden immunosuppressiivinen aktiivisuus arvioitiin standardissa farmakologisessa in vitro testimenetelmässä mitaten lymfosyyttien lisääntymistä (LAF) ja standardissa farmakologisessa in vivo testimenetelmässä, jossa 10 arvioitiin pienen ihosiirteen elinaikaa.

Komitogeenilla indusoitujen tymosyyttien lisääntymismenetelmää (LAF) käytettiin edustavien yhdisteiden im-munosuppressiivisten vaikutusten in vitro mittana. Lyhyesti, normaalien BALB/c-hiirten kateenkorvan soluja viljel-15 lään 72 tuntia PHA:n ja IL-l:n läsnäollessa ja ne pulssi-leimataan tritioidulla tymidiinillä viimeisen kuuden tunnin aikana. Soluja viljellään eri rapamysiinin, syklospo-riini A:n tai testiyhdisteen konsentraatioissa tai ilman niitä. Solut kerätään ja inkorporoitunut radioaktiivisuus 20 määritetään. Lymfosyyttien lisääntymisen inhibitio määri tetään muutosprosenttina radioaktiivisuudessa verrattuna lääkkeellä käsittelemättömiin kontrolleihin. Rapamysiini arvioitiin myös vertailun vuoksi kullekin arvioidulle yhdisteelle. Kullekin testiyhdisteelle kuin myös rapamysii-. 25 nille saatiin IC50-arvo. Kun arvioitiin vertaimena tätä keksintöä edustaville yhdisteille, rapamysiinin ICS0-arvo vaihteli välillä 2,2 - 9,9 nM. Tulokset, jotka saatiin tätä keksintöä edustaville yhdisteille, ilmaistiin myös suhteena verrattuna rapamysiiniin. Positiivinen suhde 30 osoittaa immunosuppressiivista aktiivisuutta. Suhde, joka on suurempi kuin 1 osoittaa, että testiyhdiste inhiboi » tymosyyttien lisääntymistä enemmän kuin rapamysiini. Suhteen laskenta on esitetty alla.

35 7 106463

Kateenkorvan 3H-kont- Rapamysiinillä käsitellyt rollisolut kateenkorvan 3H-solut

Kateenkorvan 3H-kont- Testiyhdisteellä käsitellyt 5 rollisolut 3H-solut Tätä keksintöä edustavat yhdisteet arvioitiin myös in vivo testimenetelmällä, joka on suunniteltu määrittämään sellaisen pienen ihosiirteen elinikä, jotka on siir-10 retty BAB/c-luovuttajauroksilta C3H(H-2K)-vastaanotta-jauroksille. Menetelmä on sovellettu siitä, jonka ovat kuvanneet Billingham, R.E. ja Medawar, P.B., J. Exp. Biol. 28: 385 - 402 (1951). Lyhyesti, luovuttajan pieni ihosiir-re istutettiin vastaanottajan selkään allograftina ja iso-15 graftia käytettiin samalla alueella kontrollina. Vastaanottajia käsiteltiin vaihtelevilla konsentraatioilla tes-tiyhdisteitä, jotka annettiin joko vatsakalvononteloon tai suun kautta. Rapamysiiniä käytettiin testikontrollina. Käsittelemättömät vastaanottajat toimivat hyijintäkontrol-20 Iina. Ihosiirrettä tarkkailtiin päivittäin ja havainnot rekisteröitiin, kunnes ihosiirre kuivui ja muodosti mustuneen ruven. Tätä pidettiin hyijintäpäivänä. Lääkkeellä käsitellyn ryhmän ihosiirteen keskimääräistä elinikää (vuorokausien määrä ± keskihajonta) verrattiin kontrolli-25 ryhmään. Seuraava taulukko osoittaa saadut tulokset. Tulokset on ilmoitettu keskimääräisenä elinikänä vuorokausissa. Käsittelemättömät (kontrolli) pienet ihosiirteet hyijitään 6 -7 vuorokauden sisällä. Taulukossa 1 esitetyt tulokset perustuvat testiyhdisteen annokseen 4 mg/kg. Ra-30 pamysiinin konsentraatiolla 4 mg/kg saatiin elinikä 12,0 + 1,7 vuorokautta.

Seuraavassa taulukossa on yhteenveto tätä keksintöä edustavien yhdisteiden, yhdisteet 6 - 14, 23 ja 26 - 28, tuloksista näissä kahdessa standarditestimenetelmässä. 35 Yhdisteet 1 - 5, 21 ja 24 edustavat tunnetun tekniikan mukaisia vertailuyhdisteitä.

»· · β 106463

Taulukko 1

Immunosuppressiivisen aktiivisuuden arviointi*

Yhdiste LAF Ihosiirre 5 esim. IC50 (nM) (suhde) (vuorokautta ± kes- nro kihajonta) 1 1,7 1,29 11,7 ± 0,5 2 1,8 1,22 10,3 ±0,8 10 4,4 1,09 3 6,5 0,34 4 10,5 0,45 9,8 ±0,8 5 2,1 1,19 6 0,8 5,1 11,40 ± 0,6 15 7 1,2 2,3 10,33 ± 0,5 8 0,2 4,4 10 0,1 3,8 10,17 ± 1,0 11 0,7 5,0 11,40 ± 0,9 12 1,1 3,8 9,80 ± 1,1 20 13 0,9 3,8 9,50 ± 0,6 14 0,5 3,8 9,17 ± 1,7 21 6,0 0,6 10,4 ± 0,5 22 1,1 1,5 9,3 ± 0,8 23 3,4 1,4 11,2 ± 1,0 25 24 40,0 0,1 26 0,2 6,2 9,7 ± 0,8 27 1,2 1,2 10,0 ± 0,0 28 4,2 1,1 12,0 ±1,0 30 ‘Suhteen laskenta on kuvattu yllä.

Näiden standardien farmakologisten testimenetelmien tulokset osoittavat, että tämän keksinnön mukaisesti valmistettavilla yhdisteillä on immunosuppressiivista aktii-35 visutta sekä in vitro että in vivo. Positiiviset suhteet « 9 106463 LAF-testimenetelmissä osoittavat T-solujen lisääntymisen suppression osoittaen näiden yhdisteiden immunosuppressii-visen aktiivisuuden. Istutettuja pieniä ihosiirteitä hyl-jitään tyypillisesti 6-7 vuorokauden sisällä, jos ei 5 käytetä immunosuppressiivista ainetta, ihosiirteen kohonnut elinikä käsiteltäessä kaavan I mukaisilla yhdisteillä osoittaa edelleen niiden käyttökelpoisuuden immunosuppres-siivisina aineina.

Perustuen näiden standardien farmakologisten testi-10 menetelmien tuloksiin yhdisteet ovat käyttökelpoisia hoidettaessa tai ehkäistäessä kudossiirteen, kuten munuais-, sydän-, maksa-, keuhko-, luuydin-, haima- (saarekesolut), sarveiskalvo-, ohutsuoli- ja ihoallograftien ja sydänpump-puksenograftien hyljintää; hoidettaessa autoimmuunitaute-15 ja, kuten punahukkaa, nivelreumaa, sokeritautia, lihasheikkoutta ja pesäkekovettumatautia; ja tulehdustauteja, kuten psoriasista, ihotulehdusta, ihottumaa, talinvuotoa, suolitulehdustautia, keuhkotulehdusta, astmaa ja silmän suonikalvoston tulehdusta.

20 Koska tämän keksinnön mukaisesti valmistettavat yh disteet ovat rakenteellisesti samankaltaisia rapamysiinin ja niiden rapamysiinikarbamaattien kanssa, jotka on kuvattu US-patenttijulkaisussa 5 118 678, ja koska niillä on samankaltainen aktiivisuusprofiili rapamysiinin ja US-pa-25 tenttijulkaisussa 5 118 678 kuvattujen karbamaattien kans sa, tämän keksinnön mukaisilla yhdisteillä ajatellaan myös olevan kasvaimen vastaista, sienten vastaista ja solujen lisääntymisen vastaista aktiivisuutta. Sen vuoksi yhdisteet ovat myös käyttökelpoisia hoidettaessa kiinteitä kas-30 vaimia, sieni-infektioita ja hyperproliferatiivisia verisuonitauteja, kuten uudelleen ahtaumia ja valtimoiden haurauskovetustautia.

On suunniteltu, että kun tämän keksinnön mukaisesti valmistettavia yhdisteitä käytetään immunosuppressiivisena 35 tai tulehduksen vastaisena aineena, ne Voidaan antaa yh- ·· 10 106463 dessä yhden tai useamman muun immunoregulatiivisen aineen kanssa. Sellaiset muut immunoregulatiiviset aineet sisältävät, mutta eivät ole rajoittuneet, atsatiopriinin, kor-tikosteroidit, kuten prednisonin ja metyyliprednisolonin, 5 syklofosfamidin, rapamysiinin, syklosporiini A:n, FK- 506:n, OKT-3:n ja ATG:n. Yhdistettäessä tämän keksinnön mukaisesti valmistettavat yhdisteet sellaisten muiden lääkkeiden tai aineiden kanssa immunosuppression indusoi-miseksi tai tulehdustilojen hoitamiseksi, tarvitaan vähem-10 män kutakin ainetta halutun vaikutuksen aikaansaamiseksi. Perustan sellaiselle yhdistelmäterapialle muodosti Step-kowski, jonka tulokset osoittivat, että rapamysiinin ja syklosporiini A:n subterapeuttisten annosten käyttö yhdessä pidensi merkittävästi sydänallograftin elinikää 15 [Transplantation Proc. 23: 507 (1991)].

Yhdisteet voidaan formuloida sellaisen tarpeessa olevalle nisäkkäälle sekoittamattomana tai farmaseuttisen kantajan kanssa. Farmaseuttinen kantaja voi olla kiinteä aine tai neste.

20 Kiinteä kantaja voi sisältää yhden tai useamman aineen, jotka voivat toimia myös makuaineina, voiteluaineina, liuottavina aineina, suspendoivina aineina, täyteaineina, liukastavina aineina, puristuksen apuaineina, sitoja-aineina tai tabletin hajotusaineina; se voi myös 25 olla kapselointimateriaalia. Jauheissa kantaja on hieno jakoista kiinteätä ainetta, joka on seoksena yhdessä hienojakoisen aktiivisen aineen kanssa. Tableteissa aktiivinen aine on sekoitettu sopivassa suhteessa sellaisen kantajan kanssa, jolla on tarpeelliset puristusominaisuudet, 30 ja puristettu haluttuun muotoon ja kokoon. Jauheet ja tab-, letit sisältävät suositeltavasti aina 99 prosenttiin asti aktiivista ainetta. Sopivat kiinteät kantajat sisältävät esimerkiksi kalsiumfosfaatin, magnesiumstearaatin, talkin, sokerit, laktoosin, dekstriinin, tärkkelyksen, gelatiinin, 35 selluloosan, metyyliselluloosan, natriumkarboksimetyy- « * * 106463 liselluloosan, polyvinyylipyrrolidonin, alhaisen sulamispisteen sisältävät vahat ja ioninvaihtoresiinit.

Nestemäisiä kantajia käytetään valmistettaessa liuos-, suspensio-, emulsio-, siirappi-, eliksiiri- ja 5 puristettuja koostumuksia. Aktiivinen aine voidaan liuottaa tai suspendoida farmaseuttisesti hyväksyttävään nestemäiseen kantajaan, kuten veteen, orgaaniseen liuottimeen tai molempien seokseen, tai farmaseuttisesti hyväksyttäviin öljyihin tai rasvoihin. Nestemäinen kantaja voi si-10 sältää muita sopivia farmaseuttisia lisäaineita, kuten liuottavia aineita, emulsifioivia aineita, puskureita, säilöntäaineita, makeutusaineita, makuaineita, suspendoi-via aineita, sakeutusaineita, väriaineita, viskoosisuuden säätelyaineita, stabilointiaineita tai osmolaarisuuden 15 säätelyaineita. Sopivat esimerkit suun kautta tai parente-raalista antoa varten olevista nestemäisistä kantajista sisältävät veden (joka osittain sisältää yllä olevia lisäaineita, esim. selluloosajohdannaisia, suositeltavasti natriumkarboksimetyyliselluloosaliuos) , alkoholit (sisäl-20 täen monohydroalkoholit ja polyhydroalkoholit, esim. glykolit) ja niiden johdannaiset, ja öljyt (esim. fraktioitu kookosöljy ja maapähkinäöljy). Parenteraalista antoa varten kantaja voi myös olla öljyesteri, kuten etyylioleaatti ja isopropyylimyristaatti. Steriilit nestemäiset kantajat . 25 ovat käyttökelpoisia steriileissä nestekoostumuksissa pa renteraalista antoa varten. Nestemäinen kantaja puristettuja koostumuksia varten voi olla halogenoitu hiilivety tai muu farmaseuttisesti hyväksyttävä aine.

Nestemäisiä farmaseuttisia koostumuksia, jotka ovat 30 steriilejä liuoksia tai suspensioita, voidaan käyttää esi- , merkiksi lihaksen sisäistä, vatsakalvonontelon sisäistä tai ihonalaista injektiota varten. Steriilit liuokset voidaan myös antaa laskimon sisäisesti. Yhdiste voidaan myös antaa suun kautta joko nestemäisenä tai kiinteänä koos-35 tumuksena.

• * 12 106463

Yhdisteet voidaan antaa peräsuolen kautta tavanomaisen peräpuikon muodossa. Annettaessa nenän tai keuhkon kautta sisään hengittämällä tai sisään puhaltamalla, yhdisteet voidaan formuloida vesipohjaiseksi tai osit-5 tain vesipohjaiseksi liuokseksi, jota sitten voidaan käyttää aerosolin muodossa. Yhdisteet voidaan myös antaa ihon läpi käyttäen iholappua, joka sisältää aktiivisen yhdisteen ja aktiiviselle yhdisteelle inertin kantajan, joka on myrkytön iholle ja sallii aineen kuljetuksen systeemisellä 10 absorptiolla vereen ihon kautta. Kantaja voi olla minkä tahansa muotoinen, kuten ihovoide ja voide, tahna, geeli ja suljettu väline. Ihovoiteet ja voiteet voivat olla viskooseja nesteitä tai puolikiinteitä emulsioita, jotka ovat joko öljy-vesi- tai vesi-öljy-tyyppiä. Tahnat, jotka koos-15 tuvat vaseliiniin tai hydrofiiliseen vaseliiniin disper-soiduista absortiivisista jauheista, jotka sisältävät aktiivisen aineen, voivat myös olla sopivia. Useita erilaisia suljettuja välineitä voidaan käyttää aktiivisen aineen vapauttamiseksi vereen, kuten puoliläpäisevällä membraa-20 nilla päällystettyä säiliötä, joka sisältää aktiivisen aineen kantajan kanssa tai ilman sitä, tai matriksia, joka sisältää aktiivisen aineen. Kirjallisuudessa tunnetaan muita suljettuja välineitä.

Lisäksi yhdisteitä voidaan käyttää liuoksena, iho-25 voiteena tai nestemäisenä ihovoiteena formuloimalla far-maseuttisesti hyväksyttävien vehikkelien kanssa, jotka sisältävät 0,1 - 5 %, suositeltavasti 2 %, aktiivista yhdistettä, jotka voidaan antaa sienen vaikutusalueelle.

Annosmäärä vaihtelee tietyn käytetyn koostumuksen, 30 antoreitin, oireiden vakavuuden ja tietyn hoidettavan potilaan mukaan. Standardeissa farmakologisissa testimene- • « telmissä saatujen tulosten perusteella aktiivisen yhdisteen suunnitellut päivittäiset annokset olisivat 0,1 Mg/kg - 100 mg/kg, suositeltavasti välillä 0,001 - 25 mg/kg ja 35 vielä suositeltavammin välillä 0,01 - 5 mg/kg. Hoito aloi- » 13 106463 tetaan yleensä pienillä annoksilla, jotka ovat pienempiä kuin yhdisteen optimiannos. Sen jälkeen annoksen määrää nostetaan, kunnes saavutetaan niissä olosuhteissa optimi-vaikutus; tarkat annokset suun kautta, parenteraalista, 5 nenän kautta tai keuhkon sisäistä antoa varten määrittää hoitava lääkäri perustuen hoidettavasta yksittäisestä potilaasta saatuihin kokemuksiin. Farmaseuttinen koostumus on suositeltavasti yksikköannosmuodossa, esim. tabletteina tai kapseleina. Sellaisessa muodossa koostumus jaetaan 10 yksikköannoksiin, jotka sisältävät sopivat määrät aktiivista ainetta; yksikköannosmuodot voidaan pakata koostumuksiksi, esimerkiksi pakatuiksi jauheiksi, pieniksi lääkepulloiksi, ampulleiksi, esitäytetyiksi ruiskuiksi tai nestettä sisältäviksi pieniksi pusseiksi. Yksikköannosmuo-15 to voi olla esimerkiksi kapseli tai tabletti itse tai se voi olla sopiva määrä mitä tahansa sellaisia koostumuksia pakatussa muodossa.

Seuraavat esimerkit kuvaavat tämän keksinnön mukaisesti valmistettavien edustavien yhdisteiden, yhdisteet 20 6 - 20, 22, 23 ja 26 - 28, valmistusta. Esimerkit 1-5, 21 ja 24 kuvaavat tunnetun tekniikan mukaisia vertailuyh-disteitä.

Esimerkki 1

Rapamysiini-42-esteri karbamiinihapon kanssa 25 Liuos, jossa oli 2,0 g rapamysiiniä 10 ml:ssa di- kloorimetaania ja 2 ml:ssa vedetöntä pyridiiniä, jäähdytettiin -78 °C:seen typpi-ilmakehän alla. Tähän liuokseen lisättiin 662 mg 4-nitrofenyyliklooriformaattia; tuloksena syntynyttä liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa typen 30 alla 20 tuntia. Seos laimennettiin vedellä ja uutettiin dikloorimetaanilla. Dikloorimetaaniuute pestiin vedellä, kuivattiin MgS04:n yllä ja haihdutettiin. Jäännös kromato-grafoitiin piimaageelissä. Eluointi 33 % etyyliasetaatilla < n-heksaanissa antoi 2,07 g rapamysiini-42-p-nitrofenyyli-35 karbonaattia valkoisena vaahtona.

1 · 106463

Liuosta, jossa oli 630 mg rapamysiini-42-p-nitro-fenyylikarbonaattia 25 ml:ssa dikloorimetaania, käsiteltiin 0 °C:ssa ammoniakkikaasulla yhden tunnin ajan. Tuloksena syntynyt keltainen suspensio suodatettiin ja suodos 5 haihdutettiin. Jäännös kromatografoltiin piimaageelissä. Eluointi 25 % n-heksaanilla etyyliasetaatissa antoi 430 mg otsikon yhdistettä valkoisena vaahtona, sp. 101 - 103 °C.

IR (KBr): 3450 (OH ja NH), 1720 (laktoni ja ketoni C = 0) , 1645 (amidi C = 0) , 1460, 1190, 890, 760 cm'1.

10 ΧΗ NMR (CDC13, 400 MHz): δ 4,6 (s, 2H, NH2) , 3,40, 3,33, 3,14 (kaikki s, 3H, -0CH3) ppm. MS (neg. ioni-FAB) : 956 (M'1, 590, 364.

Esimerkki 2

Rapamys iini-42-esteri 2-hydroksietyylikarbamiini-15 hapon kanssa

Liuosta, jossa oli 270 mg rapamysiini-42-p-nitro-fenyylikarbonaattia 8 ml:ssa dikloorimetaania, käsiteltiin -10 °C:ssa typpi-ilmakehässä 0,5 ml:ssa dikloorimetaania olevalla 61 mg:11a etanoliamiinia. Keltaista liuosta se-20 koitettiin 0 °C:ssa typpi-ilmakehässä 45 minuuttia. Reak-tioseos laimennettiin 120 ml :11a dikloorimetaania, pestiin 1 N HCl:lla, vedellä, kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin. Jäännös kromatografoitiin piimaageelissä. Eluointi etyyliasetaatti/n-heksaanilla (2/1) antoi 85 mg otsikon 25 yhdistettä valkoisena vaahtona, sp. 100 - 105 °C.

IR (KBr) : 3430 (OH, NH) , 1720 (laktoni ja ketoni C = 0), 1640 (amidi C = 0), 1520, 1450, 1240, 1080, 985 ja 760 cm'1. XH NMR (CDC13, 400 MHz): 3,70 (m, 2H, -CH2-OH) , 3,65 (m, 2H, -NH-CH2) , 3,38, 3,33, 3,14 (kaikki s, 3H, 30 -OCH3) ppm. MS (neg. ioni-FAB): 1000 (M'>, 590, 408, 297.

. Seuraavat edustavat yhdisteet voidaan valmistaa rapamysiini-42-p-nitrofenyylikarbonaatista (valmistettu, kuten on kuvattu esimerkissä 1) ja sopivasta amiinista käyttäen menetelmää, jota käytettiin valmistettaessa esi-35 merkin 2 otsikon yhdiste.

is 106463

Rapamysiini-42-esteri sykloheksyylikarbamiinihapon kanssa Rapamysiini-42-esteri naftyylikarbamiinihapon kanssa Rapamysiini-42-esteri 1-(2-naftyylietyyli)karbamiinihapon kanssa 5 Rapamysiini-42-esteri 3-syaanipropyylikarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri 2-hydroksiheksafluori-isopropyyli-karbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri 2-metoksikarbonyyli-2-(4-hydroksi-10 fenyyli)etyylikarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri 1-(2-hydroksi-isoksatsolyyli)me-tyylikarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri 2-metoksi-isopropyylikarbamiiniha-pon kanssa 15 Rapamysiini-42-esteri 2,2-dimetoksietyylikarbamiiniha- pon kanssa

Rapamysiini-42-esteri 2-fosfonoetyylikarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri 2-sulfinoetyylikarbamiinihapon 20 kanssa

Rapamysiini-42-esteri 2-metoksietyylikarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri l-karboksi-3-(metyylisulfinyyli)- propyylikarbamiinihapon kanssa ··· 25 Rapamysiini-42-esteri l-metoksikarbonyyli-3- (metyyli- tio)propyylikarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri 1/3-(bisetoksikarbonyyli)propyy likarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri 1-etoksikarbonyyli-2-metyylipro- 30 pyylikarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri l-butoksikarbonyyli-2-hydroksi- etyylikarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri l-metoksikarbonyyli-2-{4-hydr- oksifenyyli)etyylikarbamiinihapon kanssa is 106463

Rapamysiini-42-esteri l-metoksikarbonyyli-2-(5-imidatso-lyyli)etyylikarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri 1-(fenoksikarbonyyli)metyylikarba-miinihapon kanssa 5 Rapamysiini-42-esteri l-karboksi-2-metyyli-2-fosfonoksi- etyylikarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri 1-karbofenyylimetoksi-2-(fenyylime-toksi)etyylikarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri 1-(4-bromifenoksimetyyli)etyylikar-10 bamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri 2-(fenyylikarbonyylioksi)etyylikarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri 1-propyylikarbonyylioksi-3-metyyli-propyylikarbamiinihapon kanssa 15 Rapamysiini-42-esteri l-fenyylimetoksikarbonyyli-3-(3-in- dolyyli)propyylikarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri l-propyylioksikarbonyyli-3-(metyy-lisulfinyyli)propyylikarbamiinihapon kanssa Rapamysiini-42-esteri 1-(butyylioksikarbonyyli)-3-(metyy-20 litio)propyylikarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri 1-((4-kloorifenyyli)metoksikarbonyy-li)-2-(fenyylimetyylitio)etyylikarbamiinihapon kanssa Rapamysiini-42-esteri 1-metoksikarbonyyli-l-(trifluorime-tyyli)metyylikarbamiinihapon kanssa 25 Rapamysiini-42-esteri 1-(2-metyylipropoksikarbonyyli)-2- kloorietyylikarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri l-etoksikarbonyyli-3-(aminokarbo-nyyli)propyylikarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri l-metoksikarbonyyli-2-(P(2,3-dihyd-30 roksipropyylioksi)fosfonoksi)etyylikarbamiinihapon kanssa ·· Rapamysiini-42-esteri 1-syaani-l-(etoksikarbonyyli)metyy likarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri l-metoksikarbonyyli-2-(karboksime-tyylitio)etyylikarbamiinihapon kanssa * 17 106463

Rapamysiini-42-esteri 1-fenoksikarbonyyli-l-(2-tienyyli)-metyylikarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri l-fenyylimetoksikarbonyyli-2-(sul-fo)etyylikarbamiinihapon kanssa 5 Rapamysiini-42-esteri 4-(etyylitio)butyyliamiinin kanssa

Rapamysiini-42-esteri 2-fenyylitioetyylikarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri 2-sulfotioetyylikarbamiinihapon kanssa 10 Rapamysiini-42-esteri 2-tioetyylikarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri 2-bentsotioetyylikarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri 2-fosfonotioetyylikarbamiinihapon kanssa 15 Rapamysiini-42-esteri 2-(metyylitio)propyylikarbamiiniha- pon kanssa

Rapamys i ini-42-esteri 1-etoksikarbonyyli-2-sulf inoetyy1i-karbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri 2-(2-kloori-6-fluorifenyylimetyyli- 20 tio)etyylikarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri N-(2-imidatsolyyli)aminokarbamiini- hapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri 2-(N,N-dipropyyliamino)etyylikarbamiinihapon kanssa 25 Rapamysiini-42-esteri 2-(Ν,Ν-bis(2-hydroksietyyli)amino)- etyylikarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri 2-(N-fenyylimetyyli-N-((3-etyyli-5-metyyli)-4-isoksatsolyylimetyyli)etyylikarbamiinihapon kanssa 30 Rapamysiini-42-esteri 1-((N-metyyli-N-karboksimetyyli)- amino)karbonyylimetyylikarbamiinihapon kanssa Rapamysiini-42-esteri syaanimetyylikarbamiinihapon kanssa Rapamysiini-42-esteri 1-fenyyli-1-syaanimetyylikarbamii nihapon kanssa • „ .

106463

Rapamysiini-42-esteri 1-kloori-l-(fenyylisulfonyyli)me-tyylikarbamiinihapon kanssa

Rapamysiini-42-esteri 1-isokinolyylikarbamiinihapon kanssa 5 Rapamysiini-42-esteri 1-(4-kloorifenyyli)-1-(2-(1,2,3,4-tetrahydroisokinolyyli))-metyylikarbamiinihapon kanssa Esimerkki 3

Rapamysiini-42-esteri 2-(dimetyyliamino)etyyli- karbamiinihapon kanssa 10 Liuosta, jossa oli 100 mg rapamysiini-42-p-nitro- fenyylikarbonaattia 2 ml:ssa dikloorimetaania, käsiteltiin 0 °C:ssa typpi-ilmakehässä 44 mg:11a N,N-dimetyylietylee-nidiamiinia, joka oli 0,5 ml:ssa dikloorimetaania. Reak-tioseosta sekoitettiin 0 °C:ssa typen alla 0,5 tuntia.

15 Reaktioseos laimennettiin dikloorimetaanilla, pestiin vedellä ja kuivattiin MgS04:n yllä. Suodatuksen jälkeen di-kloorimetaaniliuos jäähdytettiin 0 °C:seen typpi-ilmakehän alla ja sitä käsiteltiin 1,5 ml :11a 0,1 N HCl-liuosta, joka oli eetterissä. Kiteinen materiaali kerättiin suodat-20 tamalla, pestiin eetterillä ja kuivattiin 56 °C:ssa tyhjiössä saaden 88 mg otsikon yhdistettä valkoisena kiinteänä aineena, joka eristettiin hydroklorididihydraattina, sp. 125 - 130 °C (hajoaminen).

IR (KBr): 3400 (OH ja NH), 1720 (laktoni ja ketoni 25 C = 0) , 1640 (amidi C = 0) , 1450, 1240, 1090 ja 980 cm'1.

NMR (DMSO-D6, 400 MHz) δ 7,36 (1H, -OC(O)NH), 3,34 (m, 2H, -NHCH2) , 3,10 (m, 2H, CH2-N+H (CH3) 2) , 3,26, 3,14, 3,04

(kaikki s, 3H, -OCH3) , 2,76 (s, 6H, -N+H(CH3)2) ppm. MS

(neg. ioni-FAB) : 1027 (M'1, 590, 435, 167.

30 Analyysissä laskettu yhdisteelle C56H89N3014 . HCl. 2H20 ; . C, 61,09; H, 8,60; N, 3,81. Löydetty: C, 61,06; H, 8,55; N, 3,91.

♦ • . .

is 106463

Esimerkki 4

Rapamysiini-42-esteri aminokarbamiinihapon kanssa

Liuosta, jossa oli 108 mg rapamysiini-42-p-nitro-fenyylikarbonaattia 5 mlrssa dikloorimetaania jäähdytet-5 tynä -10 °C:seen tyypi-ilmakehän alla, käsiteltiin 6,4 mg:11a hydratsiinia, joka oli 0,4 ml:ssa dikloorimetaania. Reaktioseosta sekoitettiin -10 °C:ssa typen alla viisi tuntia. Keltainen suspensio suodatettiin, suodos haihdutettiin ja keltainen jäännös kromatografoitiin piimaagee-10 Iissä. Eluointi etyyliasetaatti/n-heksaanilla (4/1) antoi 52 mg otsikon yhdistettä valkoisena kiinteänä aineena, sp. 110 - 115 °C.

IR (KBr): 3400 (OH ja NH), 1720 (laktoni ja ketoni C = 0) , 1640 (amidi C = 0) , 1450, 1090 ja 750 cm'1. XH NMR 15 (CDC13, 400 MHz): δ 3,37, 3,34, 3,14 (kaikki s, 3H, -OCH3) ppm. MS (neg. ioni-FAB) : 971 (M"’, 590, 167.

Esimerkki 5

Rapamysiini-42-esteri hydroksikarbamiinihapon kanssa 20 Liuos, jossa oli 210 mg hydroksyyliamiinihydroklo- ridia 3 ml:ssa vesipohjaista 1 N KOH-liuosta, laimennettiin 3 ml :11a tetrahydrofuraania. Liuosta sekoitettiin -78 °C:ssa typen alla ja lisättiin 110 mg rapamysiini-42-p-nitrofenyylikarbonaattia. Tuloksena syntynyttä seosta 25 sekoitettiin 0 °C:ssa typen alla kolme tuntia, laimennettiin vedellä ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin suolavedellä, kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin. Jäännös kromatografoitiin piimaageelissä. Eluointi etyyliase-taatti/n-heksaanista (2/l) antoi 20 mg otsikon yhdistettä 30 vaahtona, sp. 107 - 110 °C.

. ·· IR (KBr) : 3400 (OH ja NH) , 1740 (laktoni C = 0) , 1720 (ketoni C = 0), 1640 (amidi C = 0), 1450, 1100, 985, 750 cm'1. 1H NMR (CDC13, 400 MHz): δ 3,37, 3,35, 3,14 (kaikki s, 3H, .-OCH3) ppm. MS (neg. ioni-FAB) : 972 (M_>, 913, 35 950.

> « 20 106463

Esimerkki 6

Rapamysiini-42-esteri 2-(pyridin-2-yyli)etyyli- karbamiinihapon kanssa

Liuosta, jossa oli 210 mg rapamysiini-42-p-nitro-5 fenyylikarbonaattia 8 ml:ssa dikloorimetaania, käsiteltiin -10 °C:ssa typen alla 122 mg:11a 2-(2-aminoetyyli)pyridii-niä, joka oli 1 ml.-ssa dikloorimetaania. Reaktioseosta sekoitettiin 0 °C:ssa typen alla yksi tunti, laimennettiin 200 ml :11a dikloorimetaania, pestiin jääkylmällä 1 N 10 HCl:lla, vedellä ja kuivattiin MgS04:lla. Liuotin haihdutettiin ja jäännös kromatografoitiin piimaageelissä. Elu-ointi etyyliasetaatti/n-heksaanilla (4/1) antoi 70 mg otsikon yhdistettä valkoisena kiinteänä aineena, sp. 95 -98 °C.

15 IR (KBr): 3400 (OH ja NH), 1720 (laktoni ja ketoni C = 0), 1645 (amidi C = 0), 1450, 1250; 1090, 1100 ja 990 cm'1. XH NMR (CDC13, 400 MHz): δ 8,52 (d, J = 12 cps, 1H, protoni c), 7,59 (t, 1H, protoni b), 7,12 (m, 2H, protonit a), 3,32, 3,31 ja 3,12 (kukin s, 3H, OCH3) , 3,58 (t, 20 2H, protonit e), 2,97 (t, 2H, protonit d) ppm. MS (neg.

ioni-FAB) : 1061 (M'1, 590, 469.

Ha - 25 : . . Hc Hd

Esimerkki 7

Rapamysiini-42-esteri 2-(pyridin-2-yyli)efcyyli-30 karbamiinihapon hydrokloridisuolan kanssa

Liuosta, jossa oli 330 mg 2-(pyridin-2-yyli)etyyli- • « karbamiinihapon kanssa olevaa rapamysiini-42-esteriä seoksessa, joka sisälsi 1 ml etyyliasetaattia ja 4 ml eetteriä, käsiteltiin -78 °C:ssa typen alla 0,5 ml :11a 1 N 35 HCl:oa (kaasu), joka oli eetterissä. Hydrokloridisuola • 106463 muodostui välittömästi. Sekoitusta jatkettiin -78 °C:ssa typen alla 1/4 tuntia. Tuote kerättiin suodattamalla, pestiin eetterillä ja kuivattiin tyhjiössä saaden 198 mg otsikon yhdistettä valkoisena kiinteänä aineena, sp. 102 -5 110 °C (haj.).

IR (KBr): 3400 (OH, NH), 1720 (laktoni ja ketoni C = 0), 1640 (amidi C = 0) , 1520, 1450, 1150, 1100, 990 cm'1.

XH NMR (DMSO-D6, 400 MHz): δ 8,77 (d, J = 12 cps, 10 1H, protoni c), 8,40 (t, 1H, protoni b), 7,83 (m, 2H, pro tonit a), 3,63 (t, 2H, protonit 3, 3,00 (t, 2H, protonit d) , 3,43, 3,29, 3,03 (kukin s, 3H, -OCH3) ppm. MS (neg. ioni-FAB) : 1061 (M'1, 590, 469.

15 Ha η,Αν^^νηΑΑ

Hd 20 Esimerkki 8

Rapamysiini-42-esteri 2-(pyridin-2-yyli)etyyli- karbamiinihapon metaanisulfonaattisuolan kanssa

Liuos, jossa oli 16 mg (0,16 mmol) metaanisulfoni-happoa 1 ml:ssa eetteriä, lisättiin liuokseen, jossa oli 25 160 mg (0,15 mmol) 2-(pyridin-2-yyli)etyylikarbamiinihapon kanssa olevaa rapamysiini-42-esteriä seoksessa, joka sisälsi 2 ml etyyliasetaattia ja 4 ml eetteriä -78 °C:ssa typen alla. Kun oli lämmitetty 20 °C:seen, liuotin dekan-toitiin ja jäännös trituroitiin kolmesti eetterillä saaden 30 108 mg otsikon yhdistettä vaalean keltaisena kiinteänä aineena, sp. 95 - 110 °C (haj.).

106463 IR (KBr) : 3520, 2950, 1725, 1650, 1460 ja 778 cm’1.

XH NMR (CDCI3, 400 MHz): 6 8,74 (d, 1H, 6-pyridyyli) , 3,35 (s, 3H, OMe), 3,34 (s, 3H, OMe), 3,14 (s, 3H, OMe), 2,92 (s, 3H, metaanisulfonaatti) ppm. MS (neg. ioni-FAB): 1061 5 (M-), 590.

Esimerkki 9

Rapamysiini-42-esteri 2-{pyridin-2-yyli)efcyyli- karbamiinihapon maleiinisuolan kanssa

Liuos, jossa oli 21 mg (0,18 mmol) maleiinihappoa 10 1 mlrssa eetteriä, lisättiin liuokseen, jossa oli 185 mg (0,17 mmol) 2- (pyridin-2-yyli) etyylikarbamiinihapon kanssa olevaa rapamysiini-42-esteriä seoksessa, joka sisälsi 3 ml etyyliasetaattia ja 2 ml eetteriä -78 °C:ssa typen alla.

Kun oli lämmitetty 15 °C:seen, seos laimennettiin eette-15 rillä, liuotin dekantoitiin ja jäännös trituroitiin eette rillä. Suodatus, jota seurasi suodoksen laimennus heksaa-nilla ja uudelleen suodatus antoi otsikon yhdisteen valkoisena kiinteänä aineena, sp. 101 - 117 °C.

IR (KBr): 3430, 2950, 1725, 1645, 1460 ja 870 cm'1.

20 Ή NMR (CDCI3, 400 MHz): δ 8,76 (d, 1H, 6-pyridyyli), 6,40 (s, 2H, maleiinihappovinyyli), 3,35 (s, 3H, OMe), 3,34 (s, 3H, OMe), 3,15 (s, 3H, OMe) ppm. MS (neg. ioni-FAB): 1061 (M-), 590.

Esimerkki 10 25 Rapamysiini-42-es'teri 2-pyridinyylimetyylikarba- miinihapon kanssa

Liuosta, jossa oli 1,05 g rapamysiini-42-p-nitro-fenyylikarbonaattia 20 ml:ssa dikloorimetaania, käsiteltiin -10 °C:ssa typen alla liuoksella, jossa oli 620 mg 30 2-aminometyylipyridiiniä 1 ml:ssa dikloorimetaania. Reak- , tioseosta sekoitettiin 0 °C:ssa typen alla kolme tuntia, « laimennettiin 180 ml :11a dikloorimetaania, pestiin kyllästetyllä NaHC03:lla (3 x 30 ml) ja kuivattiin MgS04:lla. Liuotin haihdutettiin ja jäännös kromatografoitiin piimaa-35 geelissä. Eluointi etyyliasetaatti/n-heksaanilla (4/1) * ♦ 23 106463 antoi 560 mg otsikon yhdistettä valkoisena kiinteänä aineena, sp. 94 - 97 °C.

IR (KBr): 3420 (OH, NH), 1720 (laktoni ja ketoni C = 0), 1645 (amidi C = 0) , 1520, 1450, 1250, 1100, 5 990 cm'1.

XH NMR (CDC13, 400 MHz): δ 8,53 (d, J = 12 cps, 1H, protoni d), 7,65 (m, 1H, protoni c), 7,27 (d, J = 12 cps, 1H, protoni a), 7,17 (m, 1H, protoni b) , 5,72 (m, 1H, -NH) , 4,49 (d, J = 10 cps, 2H, protonit e), 3,37, 3,32, 10 3,13 (kukin s, 3H, -OCH3) ppm. MS (neg. ioni-FÄB) : 1047 (M'}, 590, 455.

Hb '^vSr'”3

Esimerkki 11

Rapamysiini-42-esteri 2-pyridinyylimetyylikarba-20 miinihapon hydrokloridisuolan kanssa

Liuosta, jossa oli 305 mg 2-pyridinyylimetyylikar-bamiinihapon kanssa olevaa rapamysiini-42-esteriä seoksessa, joka sisälsi 1 ml etyyliasetaattia ja 4 ml eetteriä, käsiteltiin -78 °C:ssa typen alla 0,55 ml :11a 1 N HCl-». 25 liuosta. Kiteinen materiaali muodostui välittömästi. Reak-

tioseosta sekoitettiin -78 °C:ssa typen alla 1/2 tuntia, kiinteä materiaali kerättiin suodattamalla, pestiin eetterillä ja kuivattiin tyhjiössä saaden 270 mg otsikon yhdistettä valkoisena kiinteänä aineena, sp. 109 - 113 °C

30 (haj.).

• ·· IR (KBr): 3430 (OH, NH) , 1740 (laktoni, ketoni ** C = 0) , 1645 (amidi C = 0) , 1520, 1455, 1250, 1100, 995 cm'1.

XH NMR (DMSO-Dg, 400 MHz): δ 8,70 (d, J = 12 cps, 35 1H, protoni d), 8,28 (t, 1H, protoni c), 7,91 (t, 1H, pro- • » .

106463 24 töni b), 7,69 (t, 1H, protoni b), 7,65 (d, 1H, protoni a), 4,39 (d, 2H, protonit e), 3,28, 3,14, 3,05 (kukin s, 3H, -OCH3) ppm. MS (neg. ioni-FAB) : 1061 (M'1; 590, 469.

5 Hb H°vVa "JvYYy 10 Esimerkki 12

Rapamysiini-42-esteri 3-pyridinyylimetyylikarba-miinihapon kanssa

Otsikon yhdiste valmistettiin esimerkin 1 menetelmän mukaisesti. Sp. 109 - 111 °C.

15 IR (KBr) : 3400 (OH, NH) , 1720 (laktoni, ketoni C = 0) , 1645 (amidi C = 0), 1450, 1250, 1100, 990 cm'1.

*H NMR (CDC13, 400 MHz): δ 8,53 (m, 2H, protoni c) , 7,65 (m, 1H, protoni b), 7,26 (m, 1H, protoni a), 4,39 (d, J = 12 cps, 2H, protonit e), 3,36 (m), 3,32 (s), 3,12 (s) 20 (kaikki 3H, -OCH3) ppm. MS (neg. ioni-FAB): 1047 (M_), 590.

Hb

HcvVHa

, - VsrV

Esimerkki 13

Rapamysiini-42-esteri 3-pyridinyylimetyylikarba- miinihapon hydrokloridisuolan kanssa 30 Otsikon yhdiste valmistettiin esimerkin 7 menetel män mukaisesti. Sp. 106 - 110 °C (haj.).

IR (KBr): 3400 (OH, NH) , 1720 (laktoni, ketoni C = 0) , 1645 (amidi C = 0) , 1460, 1250, 1100, 990 cm'1.

XH NMR (DMS0-D6, 400 MHz): δ 8,71 (m, 2H, protonit 35 c), 8,25 (d, J = 12 cps, 1H, protoni a), 7,91 (m, 1H, pro- » • Λ 106463 töni b), 4,34 (d, 2H, protonit e), 3,26, 3,14, 3,04 (kukin s, 3H, -OCH3) ppm. MS (neg. ioni-FAB) : 1047 (M'1, 590.

Ha O

5

Hc^N^Hc Esimerkki 14 10 Rapamysiini-42-esteri 4-pyridinyylimetyylikarba- miinihapon kanssa

Otsikon yhdiste valmistettiin esimerkin 6 menetelmän mukaisesti. Sp. 109 - 113 °C.

IR (KBr) : 3400 (OH, NH) , 1720 (laktoni, ketoni 15 C = 0) , 1645 (amidi C = 0) , 1520, 1450, 1250, 1100, 990 cm'1.

XH NMR (CDC13, 400 MHz): δ 8,56 (d, J = 12 cps, 2H, protonit b) , 7,24 (d, J = 12 cps, 2H, protonit a), 4,40 (d, J = 13 cps, 2H, protonit c) , 3,38, 3,33, 3,14 (kukin 20 s, 3H, -OCH3) ppm. MS (ne g. ioni-FAB): 1047 (M_), 590.

Ha O

HbvV"NHi°'% V^Ha 25 Hb

Esimerkki 15

Rapamysiini-42-esteri 4-pyridinyylimetyylikarba-miinihapon hydrokloridisuolan kanssa 30 Otsikon yhdiste valmistettiin esimerkin 7 menetel- ^ män mukaisesti. Sp. 109 - 114 °C.

“ IR (KBr): 3400 (OH, NH) , 1720 (laktoni, ketoni C = 0) , 1645 (amidi C = 0) , 1510, 1455, 1250, 1100, 990 cm'1.

26 106463 XH NMR (DMSO-D6/ 400 MHz): δ 8,81 (d, J = 13 cps, 2H, protonit b), 7,81 (d, J = 13 cps, 2H, protonit a), 4,43 (d, J = 12 cps, 2H, protonit e) , 3,30, 3,14, 3,04 (kukin s, 3H, -OCH3) ppm. MS (neg. ioni - FAB) : 1047 (M'!, 5 590.

Ha O

1 Ηθ Π V

Hb lV^NH ° V^H.

10 Hb

Esimerkki 16

Rapamysiini-42-esteri 2-furyylimetyylikarbamiini-hapon kanssa 15 Otsikon yhdiste valmistettiin esimerkin 6 menetel män mukaisesti. Sp. 103 - 105 °C.

IR (KBr) : 3400 (OH, NH) , 1720 (laktoni, ketoni C = 0) , 1645 (amidi C = 0) , 1520, 1460, 1250, 1100, 990 cm"1.

20 ΧΗ NMR (CDC13, 400 MHz): δ 7,35 (d, 1H, protoni b) , 6,32 (m, 1H, protoni a), 6,24 (d, 1H, protoni c), 4,36 (d, J = 13 cps, 2H, protonit c) , 3,36, 3,33, 3,14 (kukin s, 3H, -OCH3) ppm. MS (neg. ioni-FAB) : 1036 (M"’, 590.

i 25 Ha _ He

Hb-ζ^ΝΗ O 0 He 5 s* 30 Esimerkki 17 : Rapamysiini-42-esteri 2-pyridinyylimetyylikarba- miinihapon metaanisulfonaattisuolan kanssa

Otsikon yhdiste valmistettiin esimerkin 10 yhdisteestä ja metaanisulfonihaposta ja eristettiin trihydraat- 35 tina. Sp. 92 - 95 °C.

« 106463 27 IR (KBr) : 3400 (OH, NH) , 1720 (laktoni, ketoni C = 0), 1640 (amidi C = 0), 1520, 1450, 1450, 1240 - 1160 (sulfonaatti), 1100, 1040 (sulfonaatti), 990 cm"1.

ΧΗ NMR (DMSO-D6, 400 MHz): δ 8,72 (d, J = 13 cps, 5 1H, protoni e) , 8,31 (t, 1H, protoni c) , 7,93 (t, 1H, -NH) , 7,73 (t, 1H, protoni b) , 7,69 (d, J = 15 cps, 1H, protoni a), 4,44 (d, J = 10 cps, 2H, protonit f), 3,29, 3,14, 3,04 (kukin s, 3H, -0CH3) , 2,31 (s, 3H,

O

10 CH3-S-C-O-) ppm.

II

0 C/H/N-analyysi yhdisteelle C59H29N3017S1.3H20 Laskettu 59,12/7,99/3,50.

Löydetty 59,48/7,95/3,41.

15

Hb

Hc-^K^Ha

L 1 ^NH .0.j Hf J

20

Esimerkki 18

Rapamysiini-42-esteri 4-hydroksibutyylikarbamiini-hapon kanssa

Liuosta, jossa oli 600 mg rapamysiini-42-p-nitro--25 fenyylikarbonaattia 7,5 ml:ssa dikloorimetaania, käsitel-tiin 0 °C:ssa typen alla liuoksella, jossa oli 300 mg 4-aminobutanolia 0,5 ml:ssa dikloorimetaania. Keltaista liuosta sekoitettiin 0 °C:ssa typen alla kaksi tuntia. Seos laimennettiin 120 ml :11a dikloorimetaania, pestiin 3 0 IN HCl:lla, vedellä ja kuivattiin MgS04:lla. Liuotin haihdutettiin ja jäännös kromatografoitiin piimaageeIissä.

- **' Eluointi etyyliasetaatti/n-heksaanilla (2/1) antoi 245 mg otsikon yhdistettä kiinteänä aineena, sp. 105 - 108 °C.

28 106463 IR (KBr): 3420 (OH ja NH), 1720 (laktoni ja ketoni C = 0) , 1650 (amidi C = 0) , 1530, 1455, 1250, 1110 ja 990 cm"1.

1H NMR (CDC13, 400 MHz): δ 3,65 (t, 2H, -CH2OH) , 3,2 5 (m, 2H, -NHCH2-), 3,37, 3,33 ja 3,14 (kaikki s, kukin 3H, -OCH3) ppm. MS (neg. ioni - FAB) : 1028 (M">, 996, 590, 436, 167 .

Esimerkki 19

Rapamysiini-42-esteri (S)-l-metyyli-2-hydroksi-10 etyylikarbaxniinihapon kanssa

Liuosta, jossa oli 600 mg rapamysiini-42-p-nitro-fenyylikarbonaattia 7,5 ml:ssa dikloorimetaania, käsiteltiin 0 °C:ssa typen alla liuoksella, jossa oli 500 mg (S) -(+)-2-amino-l-propanolia 0,5 ml:ssa dikloorimetaania. Kel-15 täistä liuosta sekoitettiin 0 °C:ssa typen alla kaksi tuntia. Seos laimennettiin 200 ml :11a dikloorimetaania, pestiin 1 N HCl:lla, vedellä ja kuivattiin MgS04:lla. Liuotin haihdutettiin ja jäännös kromatografoitiin piimaageelissä. Eluointi etyyliasetaatti/n-heksaanilla (3/1) antoi 156 mg 20 otsikon yhdistettä valkoisena kiinteänä aineena, sp. 99 -103 °C.

IR (KBr): 3440 (OH ja NH), 1720 (laktoni ja ketoni C = 0), 1650 (amidi C = 0), 1520, 1455, 1110 ja 995 cm"1.

Ή NMR (CDCI3, 400 MHz): δ 3,70 (m, 2H, -CH2OH) , ; 25 3,38, 3,20 ja 3,16 (kaikki s, kukin 3H, -OCH3) , 1,15 (d, 3H, CH3CH-) ppm. MS (neg. ioni-FAB) : 1014 (M"’, 983, 590, 422, 167.

Esimerkki 20

Rapamysiini-42-esteri (R) -l-metyyli-2-hydroksietyy-30 likarbamiinihapon kanssa

Liuosta, jossa oli 600 mg rapamysiini-42-p-nitro-fenyylikarbonaattia 7,5 ml:ssa dikloorimetaania, käsiteltiin 0 °C:ssa typen alla liuoksella, jossa oli 600 mg (R) -(-)-2-amino-l-propanolia 0,5 ml:ssa dikloorimetaania. Kel-35 täistä liuosta sekoitettiin 0 °C:ssa typen alla kaksi tun- « • 29 106463 tia. Seos laimennettiin 200 ml :11a dikloorimetaania, pestiin kyllästetyllä vesipohjaisella NaHC03-liuoksella, 1 N • HCl-liuoksella ja kuivattiin MgS04:lla. Liuotin haihdutet tiin ja jäännös kromatografoitiin piimaageelissä. Eluointi 5 etyyliasetaatti/n-heksaanilla (3/1) antoi 260 mg otsikon yhdistettä valkoisena kiinteänä aineena, sp. 102 -106 °C.

IR (KBr): 3440 (OH ja NH), 1720 (laktoni ja ketoni C = 0) , 1650 (amidi C = 0) , 1520, 1460, 1110 ja 1000 cm'1.

XH NMR (CDC13, 400 MHz): δ 3,70 (m, 2H, -CH2OH) , 10 3,37, 3,33 ja 3,14 (kaikki s, 3H, -OCH3) , 1,17 (d, 3H, CH3CH-) Ppm. MS (neg. ioni-FAB) : 1014 (M_), 893, 590.

Esimerkki 21

Rapamysiini-42-esteri 2-(2-aminoetoksx)etyylx- karbamiinihapon kanssa 15 Liuosta, jossa oli 600 mg rapamysiini-42-p-nitro- fenyylikarbonaattia 7,5 ml:ssa dikloorimetaania, käsiteltiin 0 °C:ssa typen alla liuoksella, jossa oli 500 mg 2-(2-aminoetoksi)etanolia 0,5 ml:ssa dikloorimetaania. Keltaista liuosta sekoitettiin 0 °C:ssa typen alla puoli-2 0 toista tuntia. Seos laimennettiin 150 ml :11a dikloorime taania, pestiin kyllästetyllä vesipohjaisella NaHC03-liuok-sella, 1 N HCl-liuoksella ja kuivattiin MgS04:lla. Liuotin haihdutettiin ja jäännös kromatografoitiin piimaageelissä. Eluointi etyyliasetaatti/n-heksaanilla (3/1) antoi 265 mg ; €· 25 otsikon yhdistettä valkoisena kiinteänä aineena, sp. 100 - 102 °C.

IR (KBr): 3430 (OH ja NH), 1720 (laktoni ja ketoni C = 0) , 1650, 1520, 1455, 1110, 1020 ja 990 cm’1.

Ή NMR (CDC13, 400 MHz): δ 3,74 (t, 2H, -CH20H) , 30 3,58 (m, 6H, -CH20CH2CH2-0-) , 3,38, 3,33 ja 3,14 (kaikki s, kukin 3H, -0CH3) ppm. MS (neg. ioni-FAB): 1044 (M'1, 590, 452, 167.

30 1 0 6 4 6 3

Esimerkki 22

Rapamysiini-42-esteri 4-(2-hydroksietyyli)piperat- siini-l-karboksyylihapon kanssa

Liuos, jossa oli 1-(2-hydroksietyyli)piperatsiinia 5 (130 mg, 1,0 mmol) 1 ml:ssa vedetöntä dikloorimetaania, lisättiin liuokseen, jossa oli 330 mg rapamysiini-42-p-nitrofenyylikarbonaattia (0,31 mmol) 6 ml:ssa vedetöntä dikloorimetaania -8 °C:ssa typen alla ja sekoitettiin -8 °C:ssa puolitoista tuntia. Reaktioseos jaettiin dikloo-10 rimetaanin ja vesi/suolaveden kesken, vesipohjainen osa uutettiin dikloorimetaanilla, yhdistetty orgaaninen osa pestiin suolavedellä, kuivattiin MgS04:n yllä ja haihdutettiin valkoiseksi kiinteäksi vaahdoksi. Nopea kromatografia piimaageelin läpi käyttäen dikloorimetaanissa olevaa 2 % 15 metanolia antoi 140 mg otsikon yhdistettä valkoisena kiinteänä aineena, sp. 112 - 120 °C.

IR (KBr) : 3450, 2950, 1725, 1650, 1460, 1250 ja 995 cm"1.

NMR (CDC13, 400 MHz): 6 3,64 (t (J = 5,2 Hz), 2H, 20 Hd) , 3,51 (leveä, 4H, Ha) , 3,39 (s, 3H, Ome) , 3,33 (s, 3H, OMe), 3,14 (s, 3H, OMe), 2,57 (t(J = 5,2 Hz), 2H, Hc) , 2,49 (leveä, 4H, Hb) ppm. MS (neg. ioni-FÄB) : m/z kohdalla 1069 (nr\ 590.

25 /“\ X % ho-'Va /

Hc Hd ' Ha 30 Esimerkki 23

Rapamysiini-42-esteri 4-(3-hydroksipropyyli)pipe- ratsiini-l-karboksyylihapon kanssa

Liuos, jossa oli 130 mg (0,90 mmol) 1-(3-hydroksi-propyyli)piperatsiinia 2 ml:ssa dikloorimetaania, lisät-35 tiin liuokseen, jossa oli 320 mg (0,30 mmol) rapamysiini- « 31 106463 42-(4-nitrofenyyli)karbonaattia 6 ml:ssa dikloorimetaania -5 °C:ssa typen alla ja sallittiin lämmetä 20 °C:seen sekoittaen. Neljän tunnin kuluttua reaktioseos jaettiin di-kloorimetaanin ja vesi/suolaveden kesken. Orgaaninen osa 5 pestiin suolavedellä ja suoritettiin nopea kromatografia piimaageelin läpi käyttäen dikloorimetaanissa olevaa meta-nolia (2,0 - 3,0 %) saaden 115 mg tuotetta valkoisena kiinteänä aineena, sp. 104 - 113 °C.

IR (KBr) : 3430, 2930, 1715, 1640, 1450, 1240 ja 10 985 cm'1.

NMR (CDC13, 400 MHz): δ 3,81 (t (J = 5,2 Hz), 2H,

Hd), 3,49 (leveä, 4H, Ha), 3,38 (s, 3H, Ome), 3,33 (s, 3H, OMe) , 3,13 (s, 3H, OMe) , 2,62 (t (J = 5,4 Hz), 2H, He), 2,48 (leveä, 4H, Hkb) ppm. MS (neg. ioni-FAB) : 1083 (M_), 15 590.

/—\ J5 Ή,

Hdy^Y-N VN/ 20 H° HC Hb^Ha

Esimerkki 24

Rapamysiini-42-esteri [3-[bis(2-hydroksietyyli)-amino]propyyli]karbamiinihapon kanssa 25 Liuos, jossa oli 130 mg (0,80 mmol) N-(3-aminopro- • · * * _ pyyli)dietanoliamiinia 2 ml:ssa dikloorimetaania, lisättiin liuokseen, jossa oli 330 mg (0,31 mmol) rapamysiini-42-(4-nitrofenyyli)karbonaattia 8 ml:ssa dikloorimetaania 0 °C:ssa typen alla ja sekoitettiin siinä lämpötilassa 30 yksi tunti. Reaktioseos jaettiin dikloorimetaanin ja suo- ·., ' laveden kesken. Orgaaninen osa pestiin suolavedellä ja •« * * suoritettiin nopea kromatografia piimaageelin läpi käyt täen dikloorimetaanissa olevaa 5 % metanolia saaden 150 mg tuotetta valkoisena kiinteänä aineena, sp. 93 - 107 °C.

35 IR (KBr) : 3420, 2935, 1715, 1640, 1450 ja 985 cm'1.

t 106463 32 NMR (CDC13, 400 MHz): δ 5,69 (leveä, 1Η, Hj), 3,67 (mult., 6H, He ja Hh) , 3,3 6 (s, 3H, Ome) , 3,33 (s, 3H, OMe), 3,14 (s, 3H, OMe), 2,68 (mult., 6H, Hf ja Hg) ppm.

MS (neg. ioni-FAB) : 1101 (M'J, 590.

Λ5 He^ Hf Hg h L Hh

OH

10

Esimerkki 25

Rapamysiini-42-esteri dihydroksi-isopropyylikarba-miinihapon kanssa

Liuokseen, jossa oli 600 mg serinolia 3 ml:ssa me-15 tanoliliuosta -10 °C:ssa typen alla, lisättiin liuosta, jossa oli 250 mg rapamysiini-42-p-nitrofenyylikarbonaattia 1 ml:ssa kloroformia. Tuloksena syntynyttä liuosta sekoitettiin -10 °C:ssa typen alla kaksi tuntia, laimennettiin 12 0 ml :11a kloroformia, pestiin vedellä (3 x 20 ml) ja 20 kuivattiin MgS04:lla. Liuotin haihdutettiin ja jäännös kro-matografoitiin piimaageelissä. Eluointi etyyliasetaatti/n-heksaanilla (4/1) antoi 90 mg otsikon yhdistettä kiinteänä aineena, sp. 108 - 113 °C.

IR (KBr): 3450 (OH ja NH), 1730 (ketoni ja lakto-.. 25 ni) , 1655 (amidi C = 0) , 1520, 1460, 1250, 1100, 1000 cm'1.

XU NMR (CDCI3, 400 MHz): δ 4,69 (m, 1H, C-42-proto-ni) , 3,75 - 3,84 (m, 4H, -CH2-) ppm. MS (neg. ioni-FAB): 1030 (M-1, 590, 438.

Esimerkki 26 30 Rapamysiini-42-esteri morfoliini-4-karboksyyli- " hapon kanssa * * · • Liuos, jossa oli 95 mg (1,1 mmol) morfoliinia 1 ml:ssa vedetöntä dikloorimetaania, lisättiin sekoitettuun liuokseen, jossa oli 330 mg (0,31 mmol) rapamysiini-35 42-(4-nitrofenyyli)karbonaattia 6 ml:ssa dikloorimetaania 4 33 106463 -5 °C:ssa typen alla; sekoitusta jatkettiin 4,5 tuntia -5 °C:ssa ja kaksi tuntia 20 °C:ssa. Reaktioseos jaettiin dikloorimetaanin ja vesi/suolaveden kesken; orgaaninen osa pestiin suolavedellä ja suoritettiin nopea kromatografia 5 piimaageelin läpi käyttäen dikloorimetaanissa olevaa meta-nolia (1,0 - 1,6 %) saaden 70 mg tuotetta valkoisena kiinteänä aineena, sp. 105 - 115 °C.

IR (KBr) : 3450, 2950, 1710, 1650, 1250 ja 993 cm'1.

NMR (CDC13, 400 MHz): 6 3,64 (4H, 3 -morf Oliini) , 10 3,46 (t (J = 4,9 Hz), 4H, 2-morfOliini) , 3,37 (s, 3H, OMe), 3,32 (s, 3H, OMe), 3,12 (s, 3H, OMe) ppm. MS (neg. ioni-FAB) : 1026 (M_>, 590.

Esimerkki 27

Rapamysiini-42-esteri 4-metyylipiperatsiini-l-15 karboksyylihapon kanssa

Liuos, jossa oli 95 mg (0,95 mmol) 1-metyylipipe-ratsiinia 2 ml.-ssa dikloorimetaania, lisättiin liuokseen, jossa oli 310 mg (0,29 mmol) rapamysiini-42-(4-nitrofenyy-li)karbonaattia 6 ml:ssa dikloorimetaania 0 °C:ssa typen 20 alla ja sekoitettiin 0 °C:ssa kaksi tuntia ja 20 °C:ssa kaksi tuntia. Reaktioseos jaettiin dikloorimetaanin ja vesi/suolaveden kesken. Orgaaninen osa pestiin suolavedellä ja suoritettiin nopea kromatografia piimaageelin läpi käyttäen dikloorimetaanissa olevaa metanolia (2,0 - 3,0 %) . , 25 saaden 120 mg tuotetta valkoisena kiinteänä aineena, • sp. 108 - 116 °C.

IR (KBr): 3450, 2945, 1710, 1650, 1460, 1240, 1110 ja 990 cm-1.

NMR (CDCI3, 400 MHz): δ 3,50 (leveä, 4H, 2-piperat-30 siini), 3,39 (s, 3H, OMe), 3,33 (s, 3H, OMe), 3,14 (s, 3H, ’ OMe), 2,36 (leveä, 4H, 3-piperatsiini) , 2,30 (s, 3H, NMe) ppm. MS (neg. ioni-FAB): 1039 (M’1, 590.

34 106463

Esimerkki 28

Rapamysiini-42-esteri piperatsiini-l-karboksyyli- hapon kanssa

Liuos, jossa oli 190 mg (2,2 mmol) piperatsiinia 5 4 ml:ssa dikloorimetaania, lisättiin liuokseen, jossa oli 550 mg (0,51 mmol) rapamysiini-42-(4-nitrofenyyli)karbonaattia 12 mlrssa dikloorimetaania 0 °C:ssa typen alla ja sekoitettiin 45 minuuttia. Jakaminen dikloorimetaanin ja vesi/suolaveden kesken, pesu suolavedellä ja nopea kroma-10 tografia piimaageelin läpi käyttäen dikloorimetaanissa olevaa 5 % metanolia antoi 350 mg tuotetta vaalean keltaisena kiinteänä aineena, sp. 120 - 131 °C.

IR (KBr) : 3460, 2950, 1705, 1650, 1460, 1245 ja 990 cm'1.

15 NMR (CDC13, 400 MHz): δ 4,8 (leveä, 1H, NH) , 3,46 (leveä, 4H, 2-piperatsiini) , 3,39 (s, 3H, OMe) , 3,33 (s, 3H, OMe), 3,14 (s, 3H, OMe), 2,83 (leveä, 4H, 3-piperat- siini) ppm. MS (neg. ioni-FAB) : 1025 (M'1, 590.

« • · • ·

Claims

35 106463

1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen rapa-mysiinikarbamaattijohdannaisen valmistamiseksi, jolla on 5 kaava I j2T f 'OMe rrvvi τΓ° 0 -V0H o , 1 o ho i 0 Me0‘ r" jL (i)

15. OMe * I t jossa

20 R1 on ryhmä, jolla on jokin kaavoista Ha - Ilf ja III -CONHB (Ha) -CONH-CH2-B (Ilb) -CONH-CH2CH2-B (Ile)

25 -CONH- (CH2) 3~B (Ild) -CONH-OCH2-B ' (Ile) -CONHNHB (Ilf) 30. co-n" ) (m); .. N - ^ • · ·. B on pyridyyli, kinoksalyyli, pyrimidinyyli, pyrat- sinyyli, piperidinyyli, morfolinyyli, piperatsinyyli tai 35 pyrrolidinyyli, jolloin B-ryhmä voi olla mahdollisesti « ,fi 106463 3 6 mono-, di- tai trisubstituoitu ryhmällä, joka valitaan 1 -6 hiiliatomia sisältävästä alkyylistä, 7-10 hiiliatomia sisältävästä aryylialkyylistä, 1-6 hiiliatomia sisältävästä alkoksista, syaanista, halosta, hydroksista, 5 nitrosta, 2-7 hiiliatomia sisältävästä karbalkoksista, trifluorimetyylistä, aminosta, dialkyyliaminosta, jossa on 1-6 hiiliatomia kummassakin alkyyliryhmässä, 3-12 hiiliatomia sisältävästä dialkyyliaminoalkyylistä, 1-6 hiiliatomia sisältävästä hydroksialkyylistä, 2-12 hiili-10 atomia sisältävästä alkoksialkyylistä, 1-6 hiiliatomia sisältävästä alkyylitiosta ja -S03H-, -P03H- ja -C02H-ryh-mästä; ja / \ -N 1 on typen sisältävä heterorengas, joka on 15 morfolino, piperatsino, 5,6-dihydro-4H-pyrimidin-l-yyli tai pyrrolidino ja joka voi mahdollisesti olla mono-, di-tai trisubstituoitu ryhmällä, joka valitaan 1-6 hiiliatomia sisältävästä alkyylistä, 7-10 hiiliatomia 20 sisältävästä aryylialkyylistä, 1-6 hiiliatomia sisältävästä alkoksista, syaanista, halosta, hydroksista, nitrosta, 2-7 hiiliatomia sisältävästä karbalkoksista, trifluorimetyylistä, aminosta, dialkyyliaminosta, jossa on 1-6 hiiliatomia kummassakin alkyyliryhmässä, 3-12 . 25 hiiliatomia sisältävästä dialkyyliaminoalkyylistä, 1-6 hiiliatomia sisältävästä hydroksialkyylistä, 2-12 hiili-atomia sisältävästä alkoksialkyylistä, 1-6 hiiliatomia sisältävästä alkyylitiosta ja -S03H-, -P03H- ja -C02H-ryh-mästä; 30 tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistami- ϊ seksi, tunnettu siitä, että ·· (a) karbamyloidaan rapamysiini käyttäen isosyanaattia, jolla on kaava IV 35 0=C=N-Q (IV) • · • - 106463 37 jossa Q on B, -CH2B, -(CH2)2B, -(CH2)3B, -0CH2B tai -NHB, jolloin B on kuten yllä on määritelty, tai (b) saatetaan rapamysiinikarbonaattijohdannainen, jolla on kaava V j0-OR" firYi S-V° 0 Λτ°· O. X O O fvl HoX° Me0' J i jossa R11 on ryhmä, jolla on kaava VI

20 O -C-O-aryyli (VI) jossa aryyli on fenyyliryhmä, joka mahdollisesti on sub-stituoitu yhdellä tai useammalla elektroneja vetävällä . φ 25 substituentilla, reagoimaan amiinin kanssa, jolla on jokin kaavoista Vila - Vllf ja VIII H2N-B (Vila) H2NNCH2B (VI Ib)

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa r ~ v 10 on mahdollisesti substituoitu morfolinyyli- tai piperat-sinyyliryhmä.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä yh- 15 disteen valmistamiseksi, joka on rapamysiini-42-esteri 4-(2-hydroksietyyli)piperatsiini-l-karboksyylihapon kanssa, tunnettu siitä, että rapamysiini-42-p-nitro-fenyylikarbonaatti saatetaan reagoimaan 1-(2-hydroksietyyli) piperatsiinin kanssa.

3. H2N(CH2)2B (VIIc) H2N(CH2)3B (VI Id) *’ H2NOCH2B (Vile) H2NNHB (VI If) 35 ' (VIII) HN i v ' ; , V ' 38 106463 / ~ \ jolloin -N j ja B ovat kuten yllä on määritelty, ja haluttaessa saatu yhdiste muutetaan farmaseutti-5 sesti hyväksyttäväksi suolaksi.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä yhdis teen valmistamiseksi, joka on rapamysiini-42-esteri 4-(3-hydroks ipropyy1i) piperat s i ini-1-karboksyy1ihapon kanssa, tunnettu siitä, että rapamysiini-42-p-nitrofenyy-likarbonaatti saatetaan reagoimaan 1- (3-hydroksipropyyli) - . 25 piperatsiinin kanssa.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä yhdisteen valmistamiseksi, joka on rapamysiini-42-esteri 4-me-tyylipiperatsiini-l-karboksyylihapon kanssa, tunnet -t u siitä, että rapamysiini-42-p-nitrofenyylikarbonaatti 30 saatetaan reagoimaan 1-metyylipiperatsiinin kanssa. 1'

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä yhdis teen valmistamiseksi, joka on rapamysiini-42-esteri morfo-1iini-4-karboksyylihapon kanssa, tunnettu siitä, että rapamysiini-42-p-nitrofenyylikarbonaatti saatetaan 35 reagoimaan morfoliinin kanssa. • „ 106463 ό y

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä yhdisteen valmistamiseksi, joka on rapamysiini-42-esteri piper-atsiini-l-karboksyylihapon kanssa, tunnettu siitä, että rapamysiini-42-p-nitrofenyylikarbonaatti saate- 5 taan reagoimaan piperatsiinin kanssa.

8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä yhdisteen valmistamiseksi, joka on rapamysiini-42-esteri 2-(py-ridin-2-yyli)etyylikarbamiinihapon kanssa tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola, tunnettu siitä, 10 että rapamysiini-42-p-nitrofenyylikarbonaatti saatetaan reagoimaan 2-(2-aminoetyyli)pyridiinin kanssa ja haluttaessa tuote muutetaan hydrokloridi-, metaanisulfonaatti-tai maleaattisuolaksi.

9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä yhdis- 15 teen valmistamiseksi, joka on rapamysiini-42-esteri 2-py- ridinyylimetyylikarbamiinihapon kanssa tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola, tunnettu siitä, että rapamysiini-42-p-nitrofenyylikarbonaatti saatetaan reagoimaan 2-aminometyylipyridiinin kanssa ja haluttaessa 20 tuote muutetaan hydrokloridi- tai metaanisulfonaatti- suolaksi.

10. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä yhdisteen valmistamiseksi, joka on rapamysiini-42-esteri 3-py-ridinyylimetyylikarbamiinihapon kanssa tai sen farmaseut- . 25 tisesti hyväksyttävä suola, tunnettu siitä, et tä rapamysiini-42-p-nitrofenyylikarbonaatti saatetaan reagoimaan 3-aminometyylipyridiinin kanssa ja haluttaessa tuote muutetaan hydrokloridisuolaksi.

11. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä yhdis- 30 teen valmistamiseksi, joka on rapamysiini-42-esteri 4-py- . ridinyylimetyylikarbamiinihapon kanssa tai sen farmaseut- *“ tisesti hyväksyttävä suola, tunnettu siitä, et tä rapamysiini-42-p-nitrofenyylikarbonaatti saatetaan ' c reagoimaan 4-aminometyylipyridiinin kanssa ja haluttaessa 35 tuote muutetaan hydrokloridisuolaksi. 106463 40