FI106385B - Menetelmiä proteiini C:n tuottamiseksi - Google Patents
Menetelmiä proteiini C:n tuottamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI106385B FI106385B FI945877A FI945877A FI106385B FI 106385 B FI106385 B FI 106385B FI 945877 A FI945877 A FI 945877A FI 945877 A FI945877 A FI 945877A FI 106385 B FI106385 B FI 106385B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- protein
- cell line
- human
- adenovirus
- cells
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6464—Protein C (3.4.21.69)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21069—Protein C activated (3.4.21.69)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
- C12N2510/02—Cells for production
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2523/00—Culture process characterised by temperature
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
1 106385
Menetelmiä proteiini C:n tuottamiseksi Tämä keksintö koskee molekyylibiologiaa, erityisesti menetelmiä tuottaa suuria määriä toiminnallista rekom-5 binanttia proteiini C:tä nisäkässolulinjoissa.
Monet proteiinit käyvät läpi laajoja translaation-jälkeisiä modifikaatioita kypsymisen aikana. Ihmisen proteiini C (HPC) gamma-karboksyloidaan, beeta-hydroksyloi-daan ja glykosyloidaan joko primaarisen RNA-transkriptin 10 translaation aikana tai pian sen jälkeen. Monet solulin-jat, kuten Syrian Hamster (syyrialainen hamsteri) AV12 -solulinja, eivät kykene tehokkaasti tuottamaan näitä translaationjälkeisiä modifikaatioita, jolloin näissä so-lulinjoissa tuotetut proteiini C -molekyylit eivät ole 15 täysin toiminnallisia. Muut solulinjat, kuten Human Kidney (ihmisen munuainen) 293 -solulinja, tuottavat täysin toiminnallisia proteiini C -molekyylejä, mutta proteiini C -molekyylien ekspressiotasot näissä solulinjoissa ovat melko matalia. Esillä oleva keksintö koskee menetelmiä 20 täysin toiminnallisen proteiini C:n tuotantotason nostamiseksi niissä solulinjoissa, jotka eivät tavallisesti tuota täysin toiminnallisia molekyylejä. Keksintö koskee myös menetelmiä proteiini C -molekyylien kokonaistuotantotason lisäämiseksi niissä solulinjoissa, jotka tavallisesti • 25 tuottavat täysin toiminnallisia molekyylejä. Esillä olevan keksinnön menetelmät koskevat proteiini C:tä tuottavien solulinjojen viljelemisen korkeammissa lämpötiloissa kuin yleisessä 37 °C:n inkubointilämpötilassa.
Esillä olevan keksinnön tarkoituksiin, kuten tässä 30 on kuvattu ja väitetty, seuraavat termit ovat kuten jäljempänä on määritetty.
Adenovirus-transformoitu solulinja - solulinja, ' joka ekspressoi adenoviruksen ElA-geenituotetta.
Ihmisen proteiini C - ihmisen proteiini C -tsymo-35 geeni ja aktivoitu ihmisen proteiini C.
2 106385
Muodostuva proteiini - mRNA-transkriptin translaatiolla tuotettu polypeptidi, ennen mitään translaationjälkeisiä modifikaatioita. Translaationjälkeiset modifikaatiot, kuten glutamiinihappotähteiden gamma-karboksylaatio 5 ja asparagiinihappotähteiden hydroksylaatio saattaa kuitenkin alkaa tapahtua ennen kuin proteiini on täysin transloitu mRNA-transkriptistä.
Proteiini C -aktiivisuus - mikä tahansa ihmisen proteiini C:n ominaisuus, joka saa aikaan proteolyyttistä, 10 amidolyyttistä, esterolyyttistä ja biologista (antikoagu-lanttista tai profibrinolyyttistä) aktiivisuutta. Menetelmät proteiinin antikoagulanttisen aktiivisuuden testaamiseksi ovat alalla hyvin tunnettuja, esim. katso Grinnell et ai. Bio/Technology 5 (1987) 1189 - 1192.
15 Tsymogeeni - proteolyyttisen entsyymin entsymaatti sesti inaktiivinen prekursori. Proteiini C -tsymogeeni, kuten tässä käytetään, viittaa proteiini C:n erittynei-siin, inaktiivisiin muotoihin, joko yksi- tai kaksiket-juisiin.
20 Kaikki tässä esityksessä käytetyt aminihappolyhen- teet ovat United States Patent and Trademark Office’n hyväksymiä, kuten on esitetty seuraavassa: 37 C.F.R. §1.822 (b) (2) (1990).
Esillä oleva keksintö koskee menetelmää proteiini * 25 C:n tuotannon lisäämiseksi adenovirus-transformoidussa
rekombinantissa nisäkäsisäntäsolussa. Menetelmä sisältää adenovirus-transformoidun rekombinantin nisäkäsisäntäsolun viljelemisen noin 38 - 39 °C:n lämpötilassa. Keksintö koskee myös menetelmää toiminnallisen proteiini C:n tuotannon 30 lisäämiseksi adenovirus-transformoidussa rekombinantissa . nisäkäsisäntäsolussa, mikä sisältää isäntäsolun viljelyn T
noin 38 - 39 °C:n lämpötilassa.
Monia solulinjoja on käytetty rekombinantin ihmisen proteiini C:n tuottamiseksi. Kuitenkin, koska ihmisen pro-35 teiini C -molekyyli käy läpi laajan translaationjälkeisen 3 106385 modifikaation, yleisimmät solulinjat eivät joko tuota täysin toiminnallista proteiini C:tä tai mikäli solulinja tuottaa täysin toiminnallista proteiini C:tä, ekspressio-tai eritystasot jäävät suhteellisen alhaisiksi. Esimerkik-5 si Syrian Hamster AV12 -solulinja ei yleensä kykene tuottamaan proteiini C -molekyylejä, jotka sisältävät kaikki yhdeksän gamma-karboksiglutamiinihappotähdettä, joita täysin aktiivinen proteiini tarvitsee. Toisaalta Human Embryonic Kidney 293 -soluissa tuotetut proteiini C -mole-10 kyylit ovat yleensä täysin gamma-karboksyloituja ja beeta-hydroksyloituja, kuitenkin ihmisen proteiini C:n tuotanto-tasot näillä solulinjoilla ovat suhteellisen matalat.
Yleensä nisäkässoluviljelmiä inkuboidaan 37 °C:ssa. Kun adenovirus-transformoitua Syrian Hamster AV12-664 15 -solulinjaa (ATCC CRL 9595), joka sisältää plasmidin, joka koodaa ihmisen proteiini C -geeniä, inkuboitiin 37 °C:ssa, solulinja tuotti proteiini C:tä, joka oli vain 40 -50-%:isesti täysin gamma-karboksyloitu, jolloin raakakas-vatusalustaan muodostui vain vähän toiminnallista proteii-20 ni C:tä. Kun tätä samaa solulinjaa inkuboitiin 38,5 - 39 °C:ssa, erittyvän proteiini C:n toiminnallinen anti-koagulanttiaktiivisuus ilmastetussa kasvatusalustassa lisääntyi. Proteiini C:n erittymisnopeus tästä solulinjasta, jota inkuboitiin kohotetussa lämpötilassa, oli noin 20 -25 30 % alhaisempi kuin erittymisnopeus 37 °C:ssa, vaikka tämän erittymisnopeuden laskun korvaa erittyvän proteiini C:n toiminnallisuuden paraneminen.
Human Kidney 239 -solut (ATCC CRL 1573) ovat transformoituja primaareja embrionaalisia ihmisen munuaissolu-30 ja, jotka sisältävät ja ekspressoivat adenovirus 5:n transformoivan geenin. Näitä soluja on käytetty useiden tärkeiden geenituotteiden ekspressoimiseen ja niitä ovat käyttäneet monet eri laboratoriot sekä yliopistossa että teollisuudessa. Esimerkiksi Yan US-patenttijulkaisussa 35 4 981 952 ja Bang et ai. US-patenttijulkaisussa 4 992 373 4 106385 esittävät 293-solulinjan käytön ihmisen proteiini C:n tuottamiseksi. Human Embryonic Kidney 293 -solulinja erittää täysin gamma-karboksyloitua ihmisen proteiini C:tä, kun siinä on ekspressioplasmidi, joka koodaa ihmisen pro-5 teiini C -geeniä. Kun tätä 293-solulinjaa viljeltiin 37 °C:ssa, se eritti rekombinanttia ihmisen proteiini C:tä, jonka spesifinen aktiivisuus oli noin 350 U/mg. Näiden rekombinanttien 293-solujen kasvulämpötilan kohottaminen ei johtanut erittyvän proteiini C:n toiminnallisuuden 10 lisääntymiseen (koska tästä solulinjasta oleva proteiini C on jo täysin gamma-karboksyloitu). Kuitenkin rekombinantit 38 - 39 °C:ssa kasvatetut 293-solut osoittivat proteiini C:n erittymisnopeuden kasvua verrattuna samoihin soluihin, jotka oli kasvatettu 37 °C:ssa. Esillä olevan esityksen 15 tarkoituksiin proteiini C -tuotannon kasvu voi tarkoittaa joko proteiini C:n erittymisen kokonaislisäystä solulinjasta tai lisäystä erittyneen proteiini C:n toiminnallisuudessa.
Alan ammattimies ymmärtää, että esillä oleva kek-20 sintö ei rajoitu adenovirus-transformoidun Human Embryonic Kidney -solulinjan tai adenovirus-transformoidun Syrian Hamster AV12-664 solulinjan käyttöön. On saatavissa useita nisäkässolulinjoja ihmisen proteiini C:n tuottamiseksi. Esimerkiksi HepG2-solulinja on ihmisen maksasolulinja, 25 jota on käytetty ihmisen proteiini C:n tuottamiseen. BHK-solulinjaa (Baby Hamster Kidney) (hamsterinpoikasen munuainen), SA7-solulinjaa, SV20-solulinjaa, FAZA-solulinjaa ja MK2-solulinjaa on myös käytetty ihmisen proteiini C:n tuottamiseen. Vaikka kaikki edellisessä virkkeessä luet-30 teloidut solulinjat eivät ole adenovirus-transformoituja .* solulinjoja, alan ammattimies ymmärtää, että monet nisä- kässolulinjat voidaan transformoida adenoviruksella spesifisen adenovirus-transformoidun solulinjan luomiseksi, jota voidaan sen jälkeen käyttää esillä olevan keksinnön 35 menetelmässä.
5 106385
Tulisi myös ymmärtää, ettei esillä oleva keksintö rajoitu vain 38 ja 39 °C:n lämpötiloihin. Useimmat nisä-' käsfermentaatiot suoritetaan 37 °C:ssa, on kuitenkin ha vaittu, että noin 38 °C:n fermentointilämpötila johtaa 5 suurempaan proteiini C -tuotantoon adenovirus-transformoiduissa soluissa. Koska monissa fermentointisäiliöissä ja lämpöhuoneissa lämpötilat voivat vaihdella jopa 0,5 CC, termi "noin" pitäisi nähdä lämpötilana, joka on 0,5 °C:n sisällä asetetusta lämpötilasta. Siksi termin "noin" 38 °C 10 voi laajentaa 37,5 °C:sta 38,5 °C:seen. Lisäksi termi "noin" 39 °C voidaan laajentaa 38,5 °C:sta 39,5 °C:seen. Useimmat nisäkässolut eivät kasva hyvin, kun inkubointi-lämpötila saavutte noin 40 °C. Edulliset lämpötilat esillä olevan keksinnön menetelmälle ovat noin 38 - 39 °C, kun 15 taas esillä olevan keksinnön edullisin suoritusmuoto löy-tyy, kun adenovirus-transformoidun solulinjan inkubointi-lämpötila on noin 39 °C.
Alan ammattimies havaitsee myös, että esillä olevan keksinnön menetelmä antaa vaivatta valita ne kloonit, jot-20 ka ekspressoivat suuria määriä proteiini C:tä. Esimerkiksi kun solulinjasta erittyvä proteiini C -taso nousee, on helpompi raakamateriaalista määrittää molekyyli, siksi on helpompi valita klooni, joka ekspressoi korkeinta tasoa haluttua tuotetta. Ekspressiotasojen keskimääräinen lisäys 25 klooneilla, jotka oli eristetty 39 °C:ssa, oli noin 69 -93 % verrattuna niiden kloonien ekspressiotasoihin, jotka oli eristetty 37 °C:ssa.
Seuraavat esimerkit on tarkoitettu valaisemaan esillä olevaa keksintöä, eikä niitä tule tulkita keksintöä 30 rajoittavina.
Esimerkki 1
Ihmisen proteiini C:n tuotanto 293-soluissa
Rekombinanttia ihmisen proteiini C:tä (rHPC) tuotettiin Human Kidney 293 -soluissa alan ammattimiehen hy-35 vin tuntemilla menetelmillä, kuten Yan on esittänyt US- 6 106385 patenttijulkaisussa 4 981 952, joka kokonaisuudessaan liitetään tähän viitteenä. Bang et ai. ovat esittäneet ja vaatineet geenin, joka koodaa ihmisen proteiini C:tä, US-patenttijulkaisussa 4 775 624, joka kokonaisuudessaan lii-5 tetään tähän viitteenä. Plasmidi, jota on käytetty eks-pressoimaan ihmisen proteiini C:tä 293-soluissa, oli plasmidi pLPC, jonka Bang et ai. kuvaavat US-patenttijulkaisussa 4 992 373, joka kokonaisuudessaan liitetään tähän viitteenä. Plasmidin pLPC rakenne kuvataan myös EP-patent-10 tijulkaisussa 0 445 939 ja sen kuvaavat Grinnell et ai., Bio/Technology 5 (1987) 1189 - 1192, jotka liitetään myös tähän viitteenä. Lyhyesti, plasmidi pLPC transfektoitiin 293-soluihin, jonka jälkeen stabiilit transformantit identifioitiin ja jatkoviljeltiin. Klooneille, jotka osoitti-15 vat korkeinta ekspressiotasoa, annettiin erilaisia nimiä (esim. CC35 ja CC31-1) ja niitä kasvatettiin standardeissa soluviljelyolosuhteissa. Vaihtoehtoisesti plasmidi pGTC:tä käytettiin luomaan stabiilisti transformoitua solulinjaa GT-21:tä. Plasmidi pGTC:n rakenne esitettiin EP-patentti-20 julkaisussa 0 445 939. Viljelyn jälkeen 37 °C:ssa ihmisen proteiini C voidaan eristää kasvatusliuoksesta Yan'n tekniikoilla, US-patenttijulkaisu 4 981 952. Näin tuotettua ihmisen proteiini C:tä voidaan käyttää ei-aktivoidussa tsymogeenimuodossa tai se voidaan aktivoida alan ammatti-' 25 miehen hyvin tuntemilla menetelmillä. Samoja klooneja kas vatettiin myös samoissa olosuhteissa 39 °C:ssa. Tulokset esitetään taulukossa I.
• · ** 7 106385
Taulukko 1
Kasvatuslämpötilan vaikutus 293-solujen erittämän proteiini C:n määrään
Klooni ng/106/ ng/106/ Prosentuaalinen 5 päivä® 37 °C päivä® 39°C kasvu CC35 395 663 68 CC35 425 664 56 GT-21 237 747 215 CC31-1 1 164 2 361 103 10 CC35 824 1 227 49 CC35 2 100 3 906 86
Jopa silloin, kun soluja kasvatettiin eri soluti-heyksissä, jolloin saatiin erilaisia ekspressiotasoja so-15 lua kohti (esim. CC35), erittymisen prosentuaalinen lisäys 39 °C:ssa havaittiin vastaavasti.
Esimerkki 2
Ihmisen proteiini C:n tuotanto AV12-664-soluissa
Ihmisen proteiini C:tä tuotettiin käyttäen plasmidi 20 pLPC:tä oleellisesti esimerkin 1 mukaisesti, paitsi Syrian
Hamster AV12-664 -soluja käytettiin mieluummin kuin Human Embryonic Kidney 293 -soluja. Toiminnallinen antikoagu-lanttiaktiivisuus mitattiin Grinnell et ai.:n tekniikoilla, Bio/Technology 5 (1987) 1189 - 1192. Tulokset esite-25 tään taulukossa II.
Taulukko II
Kasvatuslämpötilan vaikutus AVl2-soluissa tuotetun ihmisen proteiini C:n toiminnalliseen antikoagulanttiaktiivisuu- 30 teen Lämpötila Yksikköä/milligramma 37 °C 216 ± 62 39 °C 460 + 19
Claims (10)
1. Menetelmä proteiini C:n tuotannon lisäämiseksi adenovirus-transformoidussa rekombinantissa nisäkäsisäntä- 5 solussa, tunnettu siitä, että mainitussa menetelmässä kasvatetaan mainittua adenovirus-transformoitua re-kombinanttia nisäkäsisäntäsolua noin 38 - 39 °C:n lämpötilassa.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 10 tunnettu siitä, että rekombinantti nisäkäsisäntä- solu on 293-solu.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että inkubointilämpötila on noin 38 °C.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että inkubointilämpötila on noin 39 °C.
5. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että inkubointilämpötila on noin 20 38 °C.
6. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että inkubointilämpötila on noin 38,5 °C.
7. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, 25 tunnettu siitä, että inkubointilämpötila on noin 39 °C.
8. Menetelmä rekombinantisti tuotetun proteiini C -molekyylin gamma-karboksylaatiotason lisäämiseksi, tunnettu siitä, että mainitussa menetelmässä vil- 30 jellään mainittua rekombinantisti tuotettua proteiini C .· -molekyyliä rekombinantissa AV12-isäntäsolussa noin 38 - 39 °C:n lämpötilassa.
8 106385
9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että rekombinanttia AV12-isäntäso- 35 lua viljellään noin 38 °C:ssa. 9 106385
10. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että rekombinanttia AV12-isäntäso-v lua viljellään noin 39 °C:ssa. f? » 10 106385
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US16803593 | 1993-12-15 | ||
| US08/168,035 US5618714A (en) | 1993-12-15 | 1993-12-15 | Methods for producing protein C |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI945877A0 FI945877A0 (fi) | 1994-12-14 |
| FI945877A FI945877A (fi) | 1995-06-16 |
| FI106385B true FI106385B (fi) | 2001-01-31 |
Family
ID=22609820
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI945877A FI106385B (fi) | 1993-12-15 | 1994-12-14 | Menetelmiä proteiini C:n tuottamiseksi |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5618714A (fi) |
| EP (1) | EP0658626B1 (fi) |
| JP (1) | JP3662614B2 (fi) |
| KR (1) | KR950018454A (fi) |
| CN (1) | CN1107887A (fi) |
| AT (1) | ATE196165T1 (fi) |
| AU (1) | AU687914B2 (fi) |
| BR (1) | BR9404991A (fi) |
| CA (1) | CA2138101A1 (fi) |
| CO (1) | CO4340654A1 (fi) |
| CZ (2) | CZ315794A3 (fi) |
| DE (1) | DE69425809T2 (fi) |
| DK (1) | DK0658626T3 (fi) |
| ES (1) | ES2149244T3 (fi) |
| FI (1) | FI106385B (fi) |
| GR (1) | GR3034909T3 (fi) |
| HU (1) | HU219508B (fi) |
| IL (1) | IL111983A0 (fi) |
| NO (1) | NO944846L (fi) |
| NZ (1) | NZ270140A (fi) |
| PE (1) | PE42695A1 (fi) |
| PL (1) | PL176381B1 (fi) |
| PT (1) | PT658626E (fi) |
| RU (1) | RU2110574C1 (fi) |
| SI (1) | SI0658626T1 (fi) |
| UA (1) | UA26870C2 (fi) |
| YU (1) | YU73494A (fi) |
| ZA (1) | ZA949981B (fi) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19724543A1 (de) * | 1997-06-11 | 1998-12-17 | Philips Patentverwaltung | Wechsler-Gerät für Informationsplatten |
| ES2309167T3 (es) | 2001-02-19 | 2008-12-16 | Merck Patent Gmbh | Metodo para identificar epitotes de celulas t y metodo para preparar moleculas con inmunogenicidad reducida. |
| AU2003226012B2 (en) | 2002-03-29 | 2007-05-24 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Methods of virus production |
| US20070142272A1 (en) * | 2003-01-24 | 2007-06-21 | Zlokovic Berislav V | Neuroprotective activity of activated protein c independent of its anticoagulant activity |
| CA2574598A1 (en) * | 2004-07-23 | 2006-02-09 | The University Of Rochester | Activated protein c inhibits undesirable effects of plasminogen activator in the brain |
| US20090148458A1 (en) * | 2005-06-23 | 2009-06-11 | The University Of British Columbia | Coagulation factor iii polymorphisms associated with prediction of subject outcome and response to therapy |
| WO2007140625A1 (en) * | 2006-06-09 | 2007-12-13 | The University Of British Columbia | Interferon gamma polymorphisms as indicators of subject outcome in critically ill subjects |
| US20110171200A1 (en) * | 2008-01-15 | 2011-07-14 | Walley Keith R | Protein c rs2069915 as a response predictor to survival and administration of activated protein c or protein c-like compound |
| WO2012068519A2 (en) | 2010-11-19 | 2012-05-24 | Sirius Genomics Inc. | Markers associated with response to activated protein c administration, and uses thereof |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4775624A (en) * | 1985-02-08 | 1988-10-04 | Eli Lilly And Company | Vectors and compounds for expression of human protein C |
| US4968626A (en) * | 1985-08-15 | 1990-11-06 | Board Of Reagents Of The University Of Washington | DNA sequence coding for protein C |
| US4959318A (en) * | 1985-06-27 | 1990-09-25 | Zymogenetics, Inc. | Expression of protein C |
| EP0245949B1 (en) * | 1986-04-09 | 1997-10-29 | Eli Lilly And Company | A method of using eukaryotic expression vectors comprising the bk virus enhancer |
| AU8339187A (en) * | 1986-11-17 | 1988-06-16 | New England Medical Center Hospitals, Inc., The | Enhancing gamma-carboxylation of recombinant vitamin k-dependent proteins |
| US4992373A (en) * | 1987-12-04 | 1991-02-12 | Eli Lilly And Company | Vectors and compounds for direct expression of activated human protein C |
| ZA889497B (en) * | 1987-12-28 | 1990-08-29 | Lilly Co Eli | Vectors and compounds for expression of zymogen forms of human protein c |
| JPH0246296A (ja) * | 1988-08-09 | 1990-02-15 | Hoechst Japan Ltd | 雑種プロテインｃ及びその製造方法 |
| US4981952A (en) * | 1988-10-04 | 1991-01-01 | Eli Lilly And Company | Method for the purification of vitamin K-dependent proteins |
| CA1332049C (en) * | 1988-10-07 | 1994-09-20 | Eli Lilly And Company | Eukaryotic expression |
| DE69004964T2 (de) * | 1989-08-11 | 1994-03-24 | Zymogenetics Inc | Zellenzuchtverfahren für die produktion von aktiviertem protein-c. |
| IL97312A (en) * | 1990-02-23 | 1999-01-26 | Lilly Co Eli | A method of generating a polypeptide in an eukaryotic vector AND recombinant surrogate cell containing an enhanced transcriptional control unit based on the primary late adenovirus coefficient |
| CA2078667A1 (en) * | 1991-01-29 | 1992-07-30 | Masahiko Suzuki | Human protein c expression vector |
-
1993
- 1993-12-15 US US08/168,035 patent/US5618714A/en not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-12-14 NO NO944846A patent/NO944846L/no not_active Application Discontinuation
- 1994-12-14 IL IL11198394A patent/IL111983A0/xx unknown
- 1994-12-14 ZA ZA949981A patent/ZA949981B/xx unknown
- 1994-12-14 EP EP94309314A patent/EP0658626B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-14 BR BR9404991A patent/BR9404991A/pt not_active Application Discontinuation
- 1994-12-14 CA CA002138101A patent/CA2138101A1/en not_active Abandoned
- 1994-12-14 DK DK94309314T patent/DK0658626T3/da active
- 1994-12-14 CZ CZ943157A patent/CZ315794A3/cs unknown
- 1994-12-14 DE DE69425809T patent/DE69425809T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-14 PE PE1994257065A patent/PE42695A1/es not_active Application Discontinuation
- 1994-12-14 YU YU73494A patent/YU73494A/sh unknown
- 1994-12-14 NZ NZ270140A patent/NZ270140A/en unknown
- 1994-12-14 KR KR1019940034085A patent/KR950018454A/ko not_active Application Discontinuation
- 1994-12-14 AU AU80452/94A patent/AU687914B2/en not_active Ceased
- 1994-12-14 ES ES94309314T patent/ES2149244T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-14 RU RU94043769A patent/RU2110574C1/ru active
- 1994-12-14 PT PT94309314T patent/PT658626E/pt unknown
- 1994-12-14 UA UA94129175A patent/UA26870C2/uk unknown
- 1994-12-14 AT AT94309314T patent/ATE196165T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-12-14 HU HU9403600A patent/HU219508B/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-12-14 FI FI945877A patent/FI106385B/fi active
- 1994-12-14 CO CO94056544A patent/CO4340654A1/es unknown
- 1994-12-14 SI SI9430347T patent/SI0658626T1/xx unknown
- 1994-12-15 PL PL94306291A patent/PL176381B1/pl unknown
- 1994-12-15 JP JP31160994A patent/JP3662614B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1994-12-15 CN CN94119106A patent/CN1107887A/zh active Pending
-
2000
- 2000-11-24 GR GR20000402615T patent/GR3034909T3/el not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-06-22 CZ CZ20012322A patent/CZ290724B6/cs not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR920010871B1 (ko) | 동물세포의 배양 | |
| US5510261A (en) | Method of controlling the degradation of glycoprotein oligosaccharides produced by cultured Chinese hamster ovary cells | |
| AU2008345231B2 (en) | Cell culture processes | |
| Avgerinos et al. | Spin filter perfusion system for high density cell culture: production of recombinant urinary type plasminogen activator in CHO cells | |
| FI106385B (fi) | Menetelmiä proteiini C:n tuottamiseksi | |
| Chen et al. | Temperature shift as a process optimization step for the production of pro-urokinase by a recombinant Chinese hamster ovary cell line in high-density perfusion culture | |
| EP2451963B1 (en) | Method of increasing the expression yield of vitamin k-dependent proteins | |
| Yonemura et al. | Preparation of recombinant α-thrombin: high-level expression of recombinant human prethrombin-2 and its activation by recombinant ecarin | |
| Vatandoost et al. | Efficient expression of functional human coagulation factor IX in stably-transfected Drosophila melanogaster S2 cells; comparison with the mammalian CHO system | |
| Tharmalingam et al. | High yields of monomeric recombinant β‐interferon from macroporous microcarrier cultures under hypothermic conditions | |
| Roychoudhury et al. | Synthesis, regulation and production of urokinase using mammalian cell culture: a comprehensive review | |
| US9175281B2 (en) | Process for the purification of tissue plasminogen activator | |
| EP0756003B1 (en) | Method of culturing animal cells | |
| KR100267720B1 (ko) | 사람 글루타민 합성효소 유전자를 포함하는 발현벡터 및 이를 이용하여 동물세포에서 에리트로포이에틴을 고수율로 생산하는 방법 | |
| CN100392079C (zh) | 蛋白c或活化的蛋白c-样分子 | |
| Chun et al. | Stable expression of recombinant human coagulation factor XIII in protein-free suspension culture of Chinese hamster ovary cells | |
| AU2014274601B2 (en) | Cell Culture Processes | |
| RU1838411C (ru) | Способ получени рекомбинантной плазмидной ДНК и способ получени зимогенной формы белка С человека | |
| US10301611B2 (en) | Process for refolding recombinant chymotrypsin | |
| Gudzenko et al. | Thermal stability of Cryptococcus albidus α-L-rhamnosidase | |
| CN117025542A (zh) | 一种激活剂促进hek293细胞蛋白产量提高的方法 | |
| Pak | Expression of autocrine growth factors in Chinese Hamster ovary (CHO) cells. | |
| WO2016198499A1 (en) | IMPROVED METHOD FOR PRODUCTION OF γ-CARBOXYLATED POLYPEPTIDES | |
| JPS6336782A (ja) | ヒト組織プラスミノゲン活性化因子の産生法 |