FI103972B - Menetelmä puriininukleosidifosforylaasi-inhibiittorien valmistamiseksi - Google Patents

Description

103972

Menetelmä puriininukleosidifosforylaasi-inhibiittorien valmistamiseksi Tämä keksintö koskee 2-amino-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-onin johdannais-5 ten valmistusmenetelmää.

Puriininukleosidifosforylaasi (PNP) katalysoi puriininukleosidien fosforolyysiä käänteisessä reaktiossa. Yksilöillä, joilla on PNP-puutetta, on huonontunut T-solun kehittyminen, mistä seuraa alentunut soluvälitteinen immuunisuus, mutta normaali 10 B-solun kehittyminen mistä seuraa normaali humoraalinen immuniteetti. Niinpä PNP:n spesifiset inhibiittorit, jotka inhiboivat T-solun kehityksen selektiivisesti hu-moraalista immuniteettia vahingoittamatta, voisivat mahdollisesti olla tehokkaita häiriöitä vastaan, joissa aktivoidut T-solut ovat patogeenisiä.

15 Keksinnön mukaisella menetelmällä saaduille yhdisteille rakenteeltaan läheisiä 2-amino-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidiini-4-oni-johdannaisia on esitetty suomalaisissa patenttijulkaisuissa 85856 ja 95259. Julkaisuissa FI-95259 ja FI-85856 yhdiste on aryylisubstituoitu, minkä katsotaan olevan olennaista aktiivisuudelle. Esillä olevan keksinnön mukaisesti saaduissa yhdisteissä ei aryyli-ryhmää esiinny.

20 Tämä keksintö koskee yhdistettä, jolla on kaava 0 ’·* ‘ \ :··: \ (II) ·’· : // * * * \

• · · K

• « · • · ·

Iti • · · \ 25 jossa R2 on mahdollisesti substituoitu fenyyli tai sykloheksyyli, X on CH2CN, CH2COR5, jossa R5 on OH, NH2 tai OCM-alkyyli. Yhdiste on käyttökelpoinen PNP-inhibiittorina. Esitetään myös farmaseuttinen koostumus nisäkkään T-soluim- ,. |. muniteetin selektiivistä suppressiota varten, joka koostumus sisältää farmaseuttisesti • · · tehokkaan määrän keksinnön mukaisesti saatua yhdistettä ja farmaseuttisesti hy-"·' 30 väksyttävää väliainetta tai laimennusainetta, ja menetelmä nisäkkään T-soluimmuni- teetin selektiivistä suppressiota varten ilman alentunutta vaikutusta humoraaliseen 2 103972 immuniteettiin, joka menetelmä käsittää keksinnön mukaisesti saadun yhdisteen farmaseuttisesti tehokkaan määrän antamisen kohteelle.

Edellä olevalle kaavalle esitettyyn mahdollisesti substituoituun sykliseen ryhmään 5 (kutsutaan tämän jälkeen nimellä syklo) luetaan mukaan aromaattiset, heteroaro-maattiset, alisykliset ja heteroalisykliset ryhmät, jotka sisältävät edullisesti 5-9 atomia. Edullisia mahdollisia substituentteja ovat mm. halogeeni, hydroksi, alkoksi, al-kyyli ja trifluorimetyyli. Esimerkinomaisia substituentteja ovat mm. kloori, fluori, metoksi, etoksi, propoksi, butoksi, metyyli, etyyli, propyyli ja butyyli. Edullisia he-10 teroatomeja ovat mm. happi, typpi ja rikki, jotka voivat olla läsnä samassa ryhmässä yhdistelmänä. Edullisia aromaattisia ja heteroaromaattisia ryhmiä ovat fenyyli, 2- tai 3-tienyyli, 2- tai 3-furanyyli, 2-, 3- tai 4-pyridinyyli, 2- tai 3-pyrrolyyli, 2-, 4-, tai 5-tiatsolyyli, 2-pyratsinyyli, 3- tai 4-pyridatsinyyli, ja 3-, 4- tai 5-pyratsolyyli. Edullisia alisyklisiä ja heteroalisyklisiä ryhmiä ovat 1- tai 2-adamantyyli, sykloheksyyli, 15 sykloheptyyli, 2- tai 3-tetrahydrofuranyyli, 2- tai 3-tetrahydrotienyyli, 2- tai 3-tetra-hydropyranyyli, 2-, 3- tai 4-piperidinyyli, 3- tai 4-pyratsolidinyyli, tai 5-tiatsolidi-nyyli, 2- tai 3-piperatsinyyli, 2- tai 3-morfolinyyli tai 3- tai 4-heksahydropyridatsi-nyyli.

20 Edullisia farmaseuttisia koostumuksia ovat tabletit ja gelatiinikapselit, jotka sisältä- . · ·. vät aktiivista valmistusainetta yhdessä a) laimennusaineiden, esimerkiksi laktoosin, • · dekstroosin, sakkarosin, mannitolin, sorbitolin, selluloosan ja/tai glysiinin; b) voite-luaineiden, esimerkiksi silikageelin, talkin, steariinihapon, sen magnesium- tai kai- · · '·' ] siumsuolan ja/tai polyetyleeniglykolin kanssa; tabletteja varten myös c) sideainei- ' ' 25 den, esimerkiksi magnesiumaluminiumsilikaatin, tärkkelystahnan, gelatiinin, tragan- tin, metyyliselluloosan, natriumkarboksimetyyliselluloosan ja/tai polyvinylpyrroli- • · · : donin kanssa; haluttaessa d) hajoamista edistävien aineiden kanssa, esimerkiksi tärk kelysten, agarin, algiinihapon tai sen natriumsuolan, tai poreseosten; ja/tai e) absor-benttien, väriaineiden, aromiaineiden ja makeutusaineiden kanssa. Injisoitavat koos- 30 tumukset ovat edullisesti vesipohjaisia isotonisia liuoksia tai suspensioita, ja perä-• ,, ·. puikot valmistetaan edullisesti rasvaemulsioista tai -suspensioista. Mainitut koostu- • · · mukset voidaan steriloida ja/tai ne voivat sisältää apuaineita, kuten säilöntäaineita, • · » stabilointiaineita, kostutus- tai emulgoimisaineita, liuoksen edistäjiä, suoloja os-moottisen paineen säätelyyn ja/tai puskureita. Lisäksi ne voivat sisältää myös muita 35 terapeuttisesti arvokkaita aineita. Mainitut koostumukset valmistetaan tavanomaisil- • · · la sekoitus-, granulointi- tai päällystysmenetelmillä, vastaavasti, ja ne sisältävät noin 0,1-75 %, edullisesti noin 1-50 % aktiivista valmistusainetta.

3 103972

Sopiva formulaatiot transdermaaliseen antoon sisältävät tehokkaan määrän keksinnön mukaista yhdistettä väliaineen kanssa. Edullisia väliaineita ovat mm. absorboituvat farmakologisesti hyväksyttävät liuottimet auttamaan kulkua isännän ihon läpi. Transdermaaliset laitteet ovat tunnusomaisesti siteen muodossa, joka sisältää taus-5 taelimen, säiliön, joka sisältää yhdisteen mahdollisesti väliaineiden kanssa, mahdollisesti nopeutta kontrolloivan esteen vapauttamaan yhdisteen isännän ihoon kontrolloidulla ja ennalta määrätyllä nopeudella pidennetyn ajanjakson ajan, ja välineen varmistamaan laitteen ihoon.

10 Tämä keksintö mahdollistaa menetelmän puriininukleosidifosforylaasiaktiivisuuden inhiboimiseksi nisäkkäissä ja sille vastetta omaavien sairauksien ja tilojen hoitamiseksi, esimerkiksi autoimmuunihäiriöiden, siirrännäisten hylkimisen tai psoriasiksen, jossa menetelmässä sitä tarvitsevalle nisäkkäälle annetaan tehokas määrä keksinnön mukaisesti saatua yhdistettä tai farmaseuttista koostumusta, joka sisältää 15 mainittua yhdistettä yhdistelmänä 1 tai usean farmaseuttisesti hyväksyttävän väliaineen kanssa.

Keksinnön edelleen eräs näkökanta koskee tapaa inhiboida virusten tai kasvainten vastaisten puriininukleosidien fosforolyysiä ja hajoamista nisäkkäissä, jossa mene-20 telmässä sitä tarvitsevalle nisäkkäälle annetaan sen yhteydessä joko erikseen tai yh-distelmänä sen kanssa tehokas puriininukleosidifosforylaasia inhiboiva määrä kek- • · ^ sinnön mukaisesti saatua yhdistettä tai mainittua yhdistettä yhdistelmänä 1 tai usean • · !il farmaseuttisesti hyväksyttävän väliaineen kanssa. Erityisemmin tällainen liittyy me- ' | netelmään tekniikan tasolla tunnettujen puriininukleosidien, esimerkiksi 2'-deoksi-

• I I I I

j [ 25 guanosiinin, 2',3'-dideoksi-inosiinin, 2',3'-dideoksiguanosiinin tai 2',3'-dideoksiade- • t » ’ · ” nosiinin fosforolyysin ja metabolisen hajoamisen inhiboimiseksi.

• · · • · · t « ·

Hakemuksessa esitetään lisäksi menetelmä 2'- tai 3'-monodeoksipuriininukleosidien :T: tai 2',3'-dideoksipuriininukleosidien viruksen vastaisen tai kasvaimen vastaisen vai- 30 kutuksen potensoimiseksi nisäkkäissä, jossa menetelmässä sen yhteydessä sitä tar-*. vitsevalle nisäkkäälle annetaan joko erikseen tai yhdistelmänä mainitun nukleosidin ^ ;;;* kanssa tehokas puriininukleosidifosforylaasia inhiboiva määrä keksinnön mukaisesti ' ; ·' saatua yhdistettä edullisesti yhdistelmänä 1 tai usean farmaseuttisesti hyväksyttävän :': ’: väliaineen kanssa. Erityisemmin tällainen koskee menetelmää tekniikan tasolla tun- 35 nettujen 2',3'-dideoksipuriininukleosidien, esimerkiksi 2',3'-dideoksi-inosiinin, 2',3'-

IM

dideoksiguanosiinin tai 2',3'-dideoksiadenosiinin vaikutuksen lisäämiseksi tai potensoimiseksi käsittelemään retrovirusinfektioita, esimerkiksi HIV-retrovirusinfektioita 4 103972 (immuunikato, AIDS). 2',3'-dideoksipuriininukleosidien tunnetaan tekniikan tasolla olevan HIV-retrovirusinfektoivuuden estäjiä ja PNP:n hajottavan sitä metabolisesti, kuten kuvataan esimerkiksi julkaisussa Biochemical Pharmacology 22 (1987) 3797. Tällaisia annetaan farmaseuttisesti hyväksyttävä annos, joka on tehokas inhiboimaan 5 HIV-retrovirusinfektioita. Edullisesti käytetään alhaisinta mahdollista tehokasta annosta.

Annettavan yhdisteen farmaseuttisesti hyväksyttävä tehokas annos riippuu lämminverisen eläimen (nisäkkään) lajista, kehonpainosta, iästä ja yksilöllisestä tilasta, ja 10 antomuodosta.

Farmaseuttinen koostumus voi olla oraalinen, parenteraalinen, peräpuikkona tai muussa muodossa, joka vapauttaa yhdisteen hoidettavan nisäkkään verivirtaan. Oraalisessa muodossa on noin 1 - noin 150 mg yhdistettä aikuista varten (50-70 kg), 15 joka sekoitetaan yhteen farmaseuttisesti hyväksyttävien laimennusaineiden kuten laktoosin kanssa. Tyypillisessä kapselissa 25 mg yhdistettä sekoitetaan yhteen 192 mg:n kanssa laktoosia, 80 mg:n kanssa modifioitua tärkkelystä ja 3 mg:n kanssa magnesiumstearaattia. Myös yhdisteen injisoitavat muodot otetaan huomioon antoa varten.

20 Tämän keksinnön mukaisesti saatu yhdiste on käyttökelpoinen myös muiden tera- .* >. peuttisten aineiden kanssa. 50-70 kg:n painoisella ihmisellä päivittäisannos 1- * « y, ',m 50mg/kg inhiboi määrättyjen antikasvainaineiden, kuten P-2'-deoksi-6-tioguanosii- ' . ninja antiviraalisten aineiden, kuten 2',3'-dideoksi-inosimm, AIDSin vastaisen lääk- ] | 25 keen metabolisen hajoamisen. Tämän tyyppisten aineiden tiedetään olevan alttiita · 1 hajoamiselle. Hajotessaan aineet menettävät tehokkuuden. Keksinnön mukaisesti v * saadut yhdisteet voivat vähentää tällaista hajoamista. Tämän vuoksi tämä suojaus li sää muiden kemoterapeuttisten aineiden tehokkuutta.

• · · • « * • · · • :T: 30 Yhdessä menetelmässä keksinnön mukaisesti saadun yhdisteen (I) valmistamiseksi # käytetään lähtöaineina 3-substituoituja propionitriilejä. Tällaiset lähtöaineet voidaan • · · saada joukolla erilaisia menetelmiä, jotka ovat kirjallisuudessa hyvin dokumentoi-y' tuja. Sitten yhdiste (I) valmistetaan lähtöaineesta soveltamalla synteettistä metodo- :§Γ: logiaa, joka kuvataan julkaisuissa: M. I. Lim, R. S. Klein, ja J. J. Fox, J. Org. Chem.

j'": 35 44 (1979) 3826; M.I. Lim, R.S. Klein, ja J.J. Fox, Tetrahedron Lett. 21 (1980) 1013; M.I. Lim ja R.S. Klein, Tetrahedron Lett. 22 (1981) 25; M. I. Lim, W. Y. Ren, B.A. Otter, ja R.S. Klein, J. Org. Chem., 48 (1983) 780.

5 103972

Eräässä menetelmässä yhdisteen (II) valmistamiseksi käytetään lähtöaineena 3-(py-ridinyyli)propionitriiliä. Sopiva 3-(pyridinyyli)propionitriili voidaan tuottaa muuttamalla vastaava 3-(pyridinyyli)propionyylikloridi vastaavaksi amidiksi ammono-lyysillä esimerkiksi ammoniumhydroksidilla, joka sitten dehydratoidaan halutuksi 5 nitriiliksi tislaamalla dehydroivan aineen, kuten POCl3:n tai SOCl2:n kanssa. Vaihtoehtoisesti lähtöaine tuotetaan kondensoimalla 3-aldehydin syaanietikkahapon kanssa, minkä jälkeen seuraa dekarboksylointi, jolloin saadaan vastaava substituoitu akrylonitriili, joka hydrogenoidaan, jolloin saadaan vastaava 3-(pyridinyyli)propio-nitriili joko katalyyttisellä hydrogenoinnilla tai magnesiummetalliliuotuksella me-10 tanolissa 0 °C:ssa, kuten kuvataan julkaisussa: Profitt, J., et ai.; J. Org. Chem. 40 (1975) 127. Sitten valmistetaan yhdiste (II) lähtöaineesta soveltamalla synteettistä metodologiaa tavalla, joka kuvataan julkaisuissa: M. I. Lim, R. S. Klein, ja J. J. Fox, J. Org. Chem. 44 (1979) 3826; M.I. Lim, R.S. Klein, ja J.J. Fox, Tetrahedron Lett. 21 (1980) 1013; M.I. Lim ja R.S. Klein, Tetrahedron Lett. 22 (1981) 25; M. I. Lim, 15 W. Y. Ren, B.A. Otter, ja R.S. Klein, J. Org. Chem. 48 (1983) 780.

Toisessa menetelmässä yhdisteen valmistamiseksi lähtöaineena käytetään tunnettua yhdistettä, ts. sykloheksenyyliasetonitriiliä. Yhdiste (III) valmistetaan saattamalla lähtöaine reagoimaan soveltamalla synteettistä metodologiaa, joka kuvataan julkai-20 suissa: M. I. Lim, R. S. Klein, ja J. J. Fox, J. Org. Chem. 44 (1979) 3826; M.I. Lim, R.S. Klein, ja J.J. Fox, Tetrahedron Lett. 21 (1980) 1013; M.I. Lim ja R.S. Klein, ,· Tetrahedron Lett. 22 (1981) 25; M.I. Lim, W. Y. Ren, B.A. Otter, ja R.S. Klein, J.

Org. Chem. 48 (1983) 780. Joko (IIIA):n, (IIIB):n tai (IIIC):n katalyyttisellä hydro- • · 1 ' . genoinnilla saadaan yhdiste (IIID).

25 * 1 1 ...

*· Menetelmässä yhdisteen (IV) valmistamiseksi käytetään lähtöaineina 3-substituoi- V 1 tuja propionitriilejä. Tällaisia lähtöaineita voidaan saada joukolla erilaisia menetel miä, jotka ovat kirjallisuudessa hyvin dokumentoituja. Sitten lähtöaineesta valmis-L· 1 tetaan yhdiste (IV) soveltamalla synteettistä metodologiaa, joka kuvataan julkai- :T: 30 suissa: M. I. Lim, R. S. Klein, ja J. J. Fox, J. Org. Chem. 44 (1979) 3826; M.I. Lim, < R.S. Klein, ja J.J. Fox, Tetrahedron Lett. 21 (1980) 1013; M.I. Lim ja R.S. Klein,

Tetrahedron Lett. 22 (1981) 25; M. I. Lim, W. Y. Ren, B.A. Otter ja R.S. Klein, J. !·:·: Org. Chem. 48 (1983) 780.

• I I

« « » · 1 t · • · • · • · · 6 103972

Keksinnön toinen näkökanta, joka koskee yhdistettä, jolla on kaava o \ (II)

l/^X

5 aikaansaa tavan 2-aminoyhdisteen (R1 = NH2) ja sen välituotteiden valmistamiseksi.

Tavan ensimmäiseen vaiheeseen liittyy mahdollisesti substituoidun syklisen alde-hydin saattaminen reagoimaan syaanietikkahapon kanssa moolisuhteessa noin 1/1-1/5 ammoniumasetaatin läsnä ollessa suunnilleen refluksointilämpötilassa noin 10 tuntia - 8 päivää 3-syklo-substituoidun pentaanidinitriilin valmistamiseksi välituot-10 teeksi. Toisessa vaiheessa 3-syklo-pentaanidinitriili saatetaan reagoimaan alkyyli-formiaatin, kuten etyyliformiaatin, ja voimakkaan emäksen, kuten metallipitoisten emästen natriumhydridi tai natriumalkoksidi, kanssa, esimerkiksi natriumme-toksidin, moolisuhteessa noin 1-2/3-6/1-3 ja lämpötilassa noin 20-65 °C noin 10 tuntia - 8 päivää 3-syklo-2-formyylipentaanidinitriilin valmistamiseksi edelleen 15 muuna välituotteena. Seuraavaan vaiheeseen liittyy 3-syklo-2-formyylipentaanidi-nitriilin saattaminen reagoimaan glysiinialkyyliesterihydrokloridin ja natrium- tai ammoniumasetaatin kanssa moolisuhteessa noin 1-2/1,5-4/1,5-4 ja lämpötilassa noin « · * v : 20-60 °C noin 10-48 tunnin ajan metyyli-N-[(3-syklo-2,4-disyaani)-2-butenyyli]gly- "'•J siinin valmistamiseksi väliaineena. Seuraavassa vaiheessa metyyli-N-[(3-syklo-2,4- 20 disyaani)-2-butenyyli]glysiini saatetaan reagoimaan alkyyliklooriformiaatin kuten etyyliklooriformiaatin ja l,5-diatsabisyklo[4.3.0]non-5-eenin (DBN) tai 1,8-diatsa-bisyklo[5.4.0]undek-7-eenin (DBU) kanssa moolisuhteessa noin 1-2/1,5-5/1,5-4 ja lämpötilassa noin 0-50 °C ja noin 10 tuntia - 10 päivää metyyli-3-amino-4-(2-syaa- * * * m‘..m ni-l-sykloetyyli)-l-etyyli-lH-pyrroli-l,2-dikarboksylaatin valmistamiseksi välituot- ' · · · « *. 25 teenä. Seuraavaan vaiheeseen liittyy metyyli-3-amino-4-(2-syaani-l-sykloetyyli)-l- etyyli-lH-pyrroli-l,2-dikarboksylaatin saattaminen reagoimaan emäksen kuten nat- •.. |: riumkarbonaatin kanssa moolisuhteessa noin 2/1-1/5 ja suunnilleen huoneenlämpöti- .···. lassa noin 10-48 tunnin ajan metyyli-3-amino-4-(2-syaani-l-sykloetyyli)-lH-pyrro- • · # li-2-karboksylaatin valmistamiseksi välituotteena. Seuraavassa vaiheessa metyyli-3-30 amino-4-(2-syaani-l-sykloetyyli)-lH-pyrroli-2-karboksylaatti saatetaan reagoimaan bentsoyyli-isotiosyanaatin kanssa moolisuhteessa noin 2/1-1/2 ja suunnilleen huo- 7 103972 neenlämpötilassa noin 30 min - 3 tuntia N-bentsoyyli-N-[4-(2-syaani-1-sykloetyyli)-2-metoksikarbonyyli-lH-pyrrol-3-yyli]tiourean valmistamiseksi välituotteena. Seu-raavassa vaiheessa N-bentsoyyli-N-[4-(2-syaani-l-sykloetyyli)-2-metoksikarbonyy-li-lH-pyrrol-3-yyli]tiourea saatetaan reagoimaan alkyylihalogenidin kuten metyyli-5 jodidin kanssa mooli suhteessa noin 1/1-1/6 ja lämpötilassa noin 0-30 °C noin lOmin - 10 tunnin ajan N-bentsoyyli-N-[4-(2-syaani-l-sykloetyyli)-2-metoksikar-bonyyli-1 H-pyrrol-3-yyli]-S-metyylitiourean valmistamiseksi välituotteena. Seuraa-vassa vaiheessa N-bentsoyyli-N'-[4-(2-syaani- l-sykloetyyli)-2-metoksikarbonyyli-lH-pyrrol-3-yyli]-S-metyylitiourea (noin 1-2 mol) saatetaan reagoimaan metanoli-10 sen tai etanolisen ammoniakin kanssa suhteessa noin 1/1-1/20 ja lämpötilassa noin 20-130 °C noin 16-60 tuntia seoksen valmistamiseksi, jossa on keksinnön mukaista 2-aminoyhdistettä 3-syklo-3-[2-amino-4-okso-3H-5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-7-yy-lijpropaaninitriili ja 3-syklo-3-[2-metyylimerkapto-4-okso-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]py-rimidin-7-yyli]propaaninitriiliä välituotteeksi keksinnön mukaisen toisen yhdisteen 15 valmistukseen.

Kuten ammattimies ymmärtää, ovat edellä mainittujen menetelmien variaatiot käyttökelpoisia keksinnön mukaisten yhdisteiden laajan joukon valmistamiseksi keksinnön hengestä poikkeamatta. Myös reaktiot, joihin liittyy joitain välituotteita, vaativat 20 typpi- tai happiatomien suojausta välituotteissa tunnetuilla menetelmillä.

• « * '; ” ’ Keksinnön oleelliset tunnusmerkit on esitetty oheisissa patenttivaatimuksissa.

I I > v : Keksinnön kuvaamiseksi täydellisemmin esitetään seuraavat ei-rajoittavat esimerkit.

"'' 25 Esimerkeissä kaikki osat ja %-osuudet ovat painon mukaan ellei muuta ilmaista.

Kromatografisina eluentteina käytettyjen liuotinseosten suhteet ovat tilavuuden mu-:***; kaan.

Esimerkki 1 * · < 30 Tässä esimerkissä valmistetaan 3-(3-pyridinyyli)propionitriiliä. 3-kaulaiseen kolviin, • · · jossa on magneettinen sekoitinsauva, sovitetaan lämpömittari, paineen tasaava li-säyssuppilo, ja refluksointikondensoija, jossa on argoninlisäysputki. Juuri jauhettua kaliumhydroksidia (6,6 g, 0,1 mol) ja vedetöntä asetonitriiliä (150 ml) lisätään kol-.···. viin, ja kuumennetaan refluksoiden samalla, kun lisätään tipoittain noin 5 minuutin "... 35 aikana 3-pyridiinikarboksaldehydiä (10,7 g, 0,1 mol) vedettömässä asetonitriilissä (50 ml), ja refluksointia jatketaan vielä noin 3 min ajan. Tulokseksi saatu kuuma re-aktioseos kaadetaan jää/vesiseokseen (100 g), ja tulokseksi saatu liuos uutetaan 8 103972 CH2Cl2:Ila (3 x 100 ml), kuivataan Na2S04:lla ja haihdutetaan, jolloin saadaan raaka 3-(3-pyridinyyli)akrylonitriili, joka puhdistetaan pylväskromatografialla käyttämällä eluenttina CHCl3:a; saanto 3,3 g (25,6 %).

5 Argonilmakehässä sekoitettu liuos, jossa on akrylonitriiliä (2,662 g, 0,02 mol) 99-prosenttisessa etanolissa (100 ml), käsitellään tipalla 4-prosenttista natriumhydrok-sidin vesiliuosta, ja sen jälkeen natriumborohydridillä (0,378 g, 0,01 mol). Lisätään vielä kahdesti natriumborohydridiä (0,378 g) 4 tunnin välein. Seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa yön yli, laimennetaan vedellä, uutetaan EtOAc.llä ja kuivataan 10 Na2S04:llä. Liuotin poistetaan alennetussa paineessa, ja saatu raakatuote kromato-grafoidaan silikageelipylväällä käyttäen kloroformi/metanolia (40/1) eluenttina, jolloin saadaan 2,2 g (84,6 %) tuotetta värittömänä öljynä.

Esimerkki 2 15 Esimerkin 1 3-(3-pyridinyyli)propionitriiliä käsitellään edelleen keksinnön mukaisessa synteesissä. Kuivassa N2-ilmakehässä seosta, jossa on 3-(3-pyridinyyli)propio-nitriiliä (0,661 g, 5,0 mmol), natriumhydridiä (0,240 g, 10,0 mmol) ja etyyliformi-aattia (1,11 g, 15,0 mmol), sekoitetaan vedettömässä tetrahydrofuraanissa (20 ml) 48 tunnin ajan ilmalta ja kosteudelta suojaten. Haihtuva aines haihdutetaan, ja kiin-20 teän jäännöksen liuos 15 ml:ssa kylmää vettä säädetään 0 °C:ssa pH-arvoon 6 kylmällä 6 N HCLllä. Tulokseksi saatu öljymämen seos uutetaan CHCl3:lla, ja uute

f I

pestään vedellä, kuivataan Na2S04:ää käyttämällä ja haihdutetaan, jolloin saadaan '.. ' tumma öljy, joka on seos 2-formyyli-3-(3-pyridinyyli)propionitriilistä ja nitriililäh- v : töaineesta. Tätä raakatuotetta käytetään seuraavassa reaktiossa puhdistamatta edel- ': : 25 leen.

• · « • · · • ·

Esimerkki 3

Glysiinimetyyliesterihydrokloridia (0,942 g, 7,5 mmol) ja vedetöntä natriumasetaat-tia (0,615 g, 7,5 mmol) lisätään liuokseen, jossa on raakaa formyyliyhdistettä 30 (0,89 g) MeOH/H20:ssa (4:1, 50 ml). 24 tunnin kuluttua MeOH haihdutetaan tyh- • Il jössä, ja veden ja öljyn seos uutetaan CHCl3:lla. CHCl3-kerros kuivataan (Na2S04) ja haihdutetaan, jolloin saadaan kullanruskeaa öljyä, joka lisätään silikageelipylvää-

Ml seen. Eluoitiin CHCl3:lla, jolloin saatiin 2 päävyöhykettä: (1) 3-(3-pyridinyyli)-. ·: ·. propionitriili (käytettiin lähtöaineena edellisessä vaiheessa), ja (2) haluttu enamiini.

35 9 103972

Esimerkki 4

Typpi-ilmakehässä lisätään etyyliklooriformiaattia (0,521 g, 4,8 mmol) tipoittain ‘ liuokseen, jossa on esimerkin 3 enamiinia (0,513 g, 3,2 mmol) ja 1,5-diatsabisyk- lo[4.3.0]non-5-eenia (DBN, 1,37 g, 11,1 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (15 ml) ulkoi-5 sella jäähdytyksellä jäähauteessa. Kun on sekoitettu 0 °C:ssa 1 tunti, liuoksen annetaan seistä huoneenlämpötilassa yön yli. Kun edistyminen on tarkastettu TLC:llä, lisätään vielä ClC02Et:ä (0,1 ml) ja DBN:ää (1,0 ml) konversion saattamiseksi loppuun, ja liuos saa seistä 24 tuntia. Haihtuva aines haihdutetaan tyhjössä ja viskoosi jäännös puhdistetaan lyhyellä silikageelikolonnilla (jonka päätarkoitus on poistaa 10 vähemmän liikkuva DBN), jolloin saadaan N-suojattu pyrroli, jota käytetään seu-raavaan vaiheeseen puhdistamatta enempää.

Esimerkki 5

Liuokseen, jossa on esimerkin 4 N-suojattua pyrrolia (0,635 g, 2,0 mmol) Me-15 OH:ssa (50 ml), lisätään kiinteää Na2CC>3:a (0,212 g, 2,0 mmol), ja reaktioseosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 48 tunnin ajan erottaen tulokseksi saadun suo-jauksenpoistokäsitellyn pyrrolin. Seos haihdutetaan kuiviin, ja jäännös trituroidaan läpikotaisin H20:lla (25 ml) epäorgaanisten ainesten liuottamiseksi, ja uutetaan CHCl3:lla (3 x 100 ml). Uute kuivataan (Na2S04) ja haihdutetaan, jolloin saadaan 20 viskoosia kumia, joka kiteytyi kuivattaessa tyhjössä käytettäväksi välituotteena puhdistamatta edelleen. Parempi puhdistus voidaan kuitenkin suorittaa käyttämällä joko pylväskromatografiaa käyttämällä silikageeli/CHCl3:a tai uudelleenkiteytystä ' · · ’ tolueeni/sykloheksaanista (1:3).

• t » • · · 25 Esimerkki 6

Bentsoyyli-isotiosyanaattia (0,232 g, 1,42 mmol) lisätään tipoittain liuokseen, jossa :T: on esimerkin 5 suojauksenpoistokäsiteltyä pyrrolia (0,290 g, 1,18 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (100 ml). 1 tunnin jälkeen huoneenlämpötilassa liuos haihdutetaan, ja kumimaista jäännöstä sekoitetaan Et20/sykloheksaanissa (1:1, 20 ml). Tulokseksi 30 saatu keltaisen kiinteän aineen suspensio suodatetaan N2-paineen alla, ja tioureido- ; « · · tuote kuivataan tyhjössä P205:llä.

• · · • · · « · · • · «

Esimerkki 7

Metyylijodidia (0,228 g, 1,61 mmol) lisätään liuokseen, jossa on esimerkin 6 tio-.···. 35 ureidotuote (0,383 g, 0,94 mmol) ja DBN:ää (0,140 g, 1,12 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (10 ml) 0 °C:ssa. Liuosta sekoitetaan 0 °C:ssa 15 min ajan, ympäristön lämpötilassa 1 tunnin ajan, ja haihdutetaan sitten tyhjössä. Jäännöksen liuos 10 103972 CHCl3:ssa kromatografoidaan silikageelikolonnilla CHCl3/metanolilla (97:3) eluent-tina, jolloin saadaan metyylitiovälituoteyhdisteen homogeenisia fraktioita.

Esimerkki 8 5 Esimerkin 7 metyylitioyhdisteen (0,358 g, 0,85 mmol) liuosta 100 ml:ssa MeOH:ta, joka on kyllästetty NH3:lla 0 °C:ssa, kuumennetaan 90-95 °C:ssa 24 tunnin ajan lasilla vuoratussa ruostumattomasta teräksestä valmistetussa astiassa. Jäähdytetyn astian sisältö haihdutetaan tyhjössä, jolloin saadaan seos, jossa on haluttua 2-amino-välituoteyhdiste bentsamidia, ja sivutuotetta, joka on 2-metyylitiojohdannainen, 10 vastakohtana 2-aminoyhdisteelle. Seos liuotetaan metanoliin, ja liuos haihdutetaan silikageelin (noin 5 g) kanssa. Sitten seos lisätään varovasti kerrokseksi silikagee-likromatografiapylvään päälle, jota sitten eluoidaan CHCl3/MeOH:lIa (9:1), jolloin saadaan metyylitiosivutuote ja haluttu 2-amino-7-(3-pyridinyylimetyyli)-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-onivälituote. Edelleen puhdistumista saavutetaan uudel-15 leenkiteyttämällä kiehuvasta isopropyyliasetaatista Soxhlet-laitteessa.

Pyridinyylimetyylivälituotteen liuosta 0,1 N HClissa hydrogenoidaan Pt-katalysaat-torilla H2-paineessa 414 kPa. Katalysaattori muodostetaan hydrogenoimalla Pt02:ta 0,1 N HCkllä. Kun reaktio on edennyt loppuun, katalysaattori poistetaan suodatta-20 maila N2-paineen alla, ja suodos haihdutetaan. Jäännöksen liuos minimimäärässä etanolia laimennetaan hitaasti suurella määrällä Et02:ta, ja hydrokloridisuola saa-'; · -' daan yhdisteen (IC) valkoisena hygroskooppisena kiinteänä aineena.

* I f : Esimerkki 9 * ϊ" * 25 Testataan esimerkin 8 yhdisteen (IC) entsyymi-inhibitioaktiivisuus. Suoritetaan pu- :\j riininukleosidifosforylaasi (PNP)-entsyymimääritys, jossa tarkkaillaan yhdisteen PNP-aktiivisuutta (IC50), joka määritetään radiokemiallisesti mittaamalla [14C]-hypoksantiinin muodostus [14C]-inosiinista (katso Biomedicine 33, 39 (1980)) käyt-. ·: ·. täen entsyymilähteenä vasikan pernaa.

30

Esimerkit 10-14

Valmistetaan seuraavat keksinnön mukaiset yhdisteet, jotka ovat 2-amino-7-(R)- t · · 3H,5H-pyrrolo[3,2-d]-pyrimidin-4-oneja, joissa R on -CH2Ri, jossa ryhmä Ri on .···. seuraava:

Esimerkki 10 R! = 2-metyyli-3-piperidinyyli Esimerkki 11 R] = 2-kloori-3-piperidinyyli /··! 35 11 103972

Esimerkki 12 Rj = 2-trifluorimetyyli-3-piperidinyyli Esimerkki 13 Ri = 2-metoksi-3-piperidinyyli Esimerkki 14 R[ = 2-fluori-3-piperidinyyli 5 Yhdisteet valmistetaan esimerkeissä 1-8 esitetyillä tavoilla käyttäen lähtöaineina sopivia 3-(substituoitu-3-pyridinyyli)propionitriilejä.

Esimerkki 15 Tässä esimerkissä valmistetaan 3-(2-pyridinyyli)propionitriiliä käyttämällä menette-10 lytapaa, jonka on kuvannut V. Boekelheide et ai, J. Am. Chem. Soc. 75 (1953) 3243. Liuos, jossa on kaliumsyanidia (83,74 g) vedessä (160 ml), lisätään liuokseen, jossa on juuri tislattua 2-vinyylipyridiiniä (67,59 g) etikka-anhydridissä (131,30 g) lisäysnopeuden ollessa säädetty varovaisen refluksoimisen ylläpitämiseksi. Kun lisäys on suoritettu loppuun, tulokseksi saatua tummanpunaista seosta kuumennetaan 15 noin 17 tunnin ajan 105 °C:ssa öljyhauteessa kiivaasti sekoittaen. Jäähdytetyn reak-tioseoksen pH säädetään kylläisellä Na2C03-liuoksella pH-arvoon 8. Seos uutetaan CHClsdla (4 x 150 ml), pestään vedellä, kuivataan Na2S04:llä ja haihdutetaan, jolloin saadaan tummaa viskoosia öljyä, öljy fraktiotislataan tyhjössä Vigreaux-kolonnin läpi. 2-vinyylipyridiiniä (0,35 g) sisältävän pienen esijakeen jälkeen kerä-20 tään haluttu 3-(2-pyridinyyli)propionitriili kirkkaana, fluoresoivana keltavihreänä viskoosina öljynä: saanto 59,8 g; 70,4 %; kp. 86°C/133 Pa.

Esimerkit 16-20 v : Valmistetaan seuraavat keksinnön mukaiset yhdisteet, jotka ovat 2-amino-7-(R)- 25 3H,5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-oneja, joissa R on -CH2R!, jossa ryhmä Rj on seuraava: • · • · · • · · • · ·

Esimerkki 16 Ri = 2-piperidinyyli . ·: . Esimerkki 17 Ri = 4-piperidinyyli 30 Esimerkki 18 Ri = 3-trifluorimetyyli-4-piperidinyyli • · ·

Esimerkki 19 Rt = 3-metoksi-2-piperidinyyli :: Esimerkki 20 Ri = 3 -fluori-4-piperidinyyli • · · • · ·

Yhdisteet valmistetaan käyttämällä esimerkeissä 1-8 ja 15 kuvattuja menettelytapoja 35 käyttäen lähtöaineina sopivia 3-(2- tai 4-pyridinyyli)-propionitriilejä.

•»· 12 103972

Esimerkki 21

Valmistetaan farmaseuttinen koostumus vatsaontelonsisäistä injektiota varten yhdisteen (IC) testaamiseksi. Vatsaontelonsisäinen injektioliuos, joka sisältää esimerkin 8 yhdisteen, liuotetaan vesipohjaiseen väliaineeseen, joka sisältää 10 % DMSO:ta.

5

Esimerkki 22

Yhdiste (IC) injisoidaan vatsaontelonsisäisesti Lewis-rottiin esimerkin 21 testikoos-tumuksen kautta aikaansaamaan 30 mg yhdistettä (IC), injisoiden kahdesti päivässä. Käytetään kontrolleja, jotka saavat vain väliainetta. Spesifisillä ajanhetkillä annon 10 jälkeen eläimet tapetaan ja valmistetaan plasmanäytteet. Plasma uutetaan kylmällä 0,5 N HC104:llä ja säädetään neutraaliin pH-arvoon kiinteällä NH4HC03:lla. Per-kloraattisuolojen poistamisen jälkeen uute alistetaan HPLCille käänteisfaasikolon-nilla (Spherisorb ODSI). Havaitaan merkittävä plasmainosiinin kohoaminen plasmassa, joka on otettu eläimiltä, jotka saivat yhdistettä (IC).

15

Esimerkit 23-33

Esimerkkien 10-20 tavalla valmistetut yhdisteet valmistetaan kukin farmaseuttiseksi formulaatioksi esimerkin 21 valmistuksen mukaan, ja tulokseksi saadut injisoitavat liuokset testataan esimerkin 22 menettelytavan mukaisesti. Havaitaan merkittävä 20 plasmainosiinin kohoaminen plasmassa, joka on otettu eläimiltä, jotka saivat keksinnön mukaisia yhdisteitä.

> < «

Esimerkki 34 v · Tässä esimerkissä valmistetaan 3-(2-furanyyli)propionitriiliä. 3-kaulaisessa kolvissa, 25 joka on varustettu kondensoijalla ja kuivausputkella, lisätään magnesiumlastuja (20 g) liuokseen, jossa on 3-(2-furanyyli)akrylonitriiliä (67,2 g) kuivassa metano-lissa (2 1). Lisätään lisää magnesiumia erissä reaktionopeuden salliessa, kunnes on lisätty yhteensä 145 g. Noin 5 tunnin kuluttua liuotin haihdutetaan, kunnes sisältö kovettuu kiinteäksi tahnaksi, jonka pH säädetään jäähdyttäen 6 N HCkllä pH-arvoon 30 noin 6,5. Seos uutetaan useilla CHCl3-erillä, kuivataan Na2S04:llä ja konsentroidaan • Il tummaksi öljyksi. Tislataan tyhjössä lyhyen Vigreaux-kolonnin läpi, jolloin saadaan propionitriili värittömänä öljynä; saanto 49,5 g (72 %); kp. 46,0-46,5 °C/67 Pa.

• · · t 9 « 4 • « · I __

Esimerkki 35 I ( f 35 Esimerkin 34 3-(2-furanyyli)propionitriilia käsitellään edelleen keksinnön mukaiset- • * la synteesillä. Kuivassa ^-ilmakehässä propionitriiliä (48,7 g), natriumhydridiä (10,28 g), etyyliformiaattia (32,74 g) ja vedetöntä tetrahydrofuraania (200 ml) sekoi- 13 103972 tetaan huoneenlämpötilassa kosteudelta suojaten noin 18 tuntia. Sitten haihtuva aine haihdutetaan, tulokseksi saatu keltainen kiinteä aine liuotetaan noin 20 ml :aan kylmää vettä jäähauteessa jäähdyttäen, ja liuoksen pH säädetään kylmällä 6 N HCl:llä pH-arvoon 6,0. Tulokseksi saatu raskas öljysaostuma uutetaan CHCl3:een, ja uute 5 pestään vedellä, kuivataan Na2S04:llä ja haihdutetaan, jolloin saadaan ohutta öljyä, joka sisältää raakaformyyliyhdisteen; saanto 53,06 g.

Esimerkki 36

Glysiinimetyyliesterihydrokloridia (67,05 g) ja vedetöntä natriumasetaattia (43,79 g) 10 lisätään liuokseen, jossa on edellisen esimerkin raakaformyyliyhdiste (53,05 g) Me-0H/H20:ssa (4:1, 1500 ml). 24 tunnin kuluttua MeOH haihdutetaan tyhjössä, ja veden ja öljyn seos uutetaan CHCl3:IIa. CHCl3-kerros kuivataan (Na2S04) ja haihdutetaan, jolloin saadaan kullanruskeaa öljyä (59,1 g).

15 Esimerkki 37

Etyyliklooriformiaattia (43,68 g) lisätään typpi-ilmakehässä tipoittain liuokseen, jossa on esimerkin 36 kullanruskea öljy (59,1 g) ja DBN:ää (133 g) kuivassa CH2Cl2:ssa (400 ml) ulkoisella jäähdytyksellä jäähauteessa. Kun on sekoitettu 0 °C:ssa 1 tunnin ajan liuos saa seistä huoneenlämpötilassa yön yli. Etenemisen tar-20 kastamisen jälkeen TLC:llä lisätään lisää ClC02Et:ä ja DBN:ää konversion saattamiseksi loppuun, ja liuos saa seistä 24 tuntia. Haihtuva aines haihdutetaan tyhjössä, viskoosi jäännös puhdistetaan silikageelipylväällä (jonka päätarkoitus on poistaa huonommin liikkuva DBN), jolloin saadaan N-suojattu pyrroli, vastaavaa pyrrolia ’ ilman etoksikarbonyylisuojaryhmää pyrrolitypessä, ja propionitriililähtöaine.

25

Esimerkki 38 :T: Liuokseen, jossa on esimerkin 37 N-suojattua pyrrolia (11,66 g) MeOH:ssa (200 ml), lisätään kiinteää Na2C03:a (4,23 g), ja reaktioseosta sekoitetaan huoneenläm-Potilassa 24 tuntia erottaen tulokseksi saadun suojauksenpoistokäsitellyn pyrrolin. 30 Seos haihdutetaan kuiviin, ja jäännös trituroidaan läpikotaisin H20:lla (200 ml) epäorgaanisten aineiden liuottamiseksi ja uutetaan CHCl3:lla (3 x 200 ml). Uute kuiva-\i.: taan (Na2S04) ja haihdutetaan, jolloin saadaan viskoosia kumia, joka kiteytyy kui- M» vattaessa tyhjössä käytettäväksi välituotteena puhdistamatta edelleen. Perusteelli-sempi puhdistus voidaan kuitenkin suorittaa käyttämällä joko pylväskromatografiaa « ,· ·. 35 käyttämällä silikageeli/CHCl3:ää tai uudelleenkiteyttämällä tolueeni/sykloheksaanis- ta (1:3).

14 103972

Esimerkki 39

Bentsoyyli-isotiosyanaattia (4,58 g) lisätään tipoittain liuokseen, jossa on esimerkin 38 suojaamatonta pyrroli (5,15 g) kuivassa CH2Cl2:ssa (75 ml). 1 tunnin jälkeen huoneenlämpötilassa liuos haihdutetaan, ja kumimainen jäännös liuotetaan Et20:hon 5 (100 ml) kiteisen kiinteän aineen erottuessa lähes välittömästi, joka kiinteä aine ke rätään suodattamalla. Et20-suodos kuumennetaan kiehuvaksi ja laimennetaan yhtä suurella tilavuudella lämmintä sykloheksaania. Liuosta jäähdytetään hitaasti, jolloin saadaan lisää tioureidotuotetta.

10 Esimerkki 40

Metyylijodidia (8,70 g) lisätään liuokseen, jossa on esimerkin 39 tioureidotuotetta (10,68 g) ja DBN:ää (4,15 g) kuivassa CH2Cl2:ssa (250 ml) 0 °C:ssa. Liuosta sekoitetaan 0 °C:ssa 15 min ajan, ympäristön lämpötilassa 1 tunti, ja haihdutetaan sitten tyhjössä. Jäännöksen liuos CHCl3:ssa kromatografoidaan silikageelipylväällä 15 CHCl3:lla eluenttina, jolloin saadaan metyylitiovälituoteyhdisteen homogeenisiä fraktioita.

Esimerkki 41

Esimerkin 40 metyylitioyhdisteen (0,80 g, 2,0 mmol) liuosta 25 ml:ssa MeOH:ta, 20 joka on kyllästetty NH3:lla 0 °C:ssa, kuumennetaan 90-95 °C:ssa 24 tuntia lasilla vuoratussa ruostumattomasta teräksestä olevassa astiassa. Jäähdytetyn astian sisältö :: haihdutetaan tyhjössä, jolloin saadaan seos, jossa on 2-aminoyhdistettä, bentsamidia • · · ja sivutuotetta, joka on 2-metyylitiojohdannaista, vastakohtana 2-aminoyhdisteelle. Seosta sekoitetaan kiivaasti useiden minuuttien ajan 30 ml:n kanssa 2:1 Et20/syklo-:··: 25 heksaania, ja liukenematon valkoinen kiinteä aine suodatetaan pois ja pestään

Et20:lla. Suodos sisälsi suurimman osan bentsamidi- ja 2-metyylitiokomponenteista.

• · .·:·. Et20/sykloheksaaniin liukenemattoman kiinteän aineen (0,425 g) liuos MeOHissa haihdutetaan noin 10 g:n kanssa silikageelia. Jauhettu jäännös kerrostetaan tasai-... seksi silikageelipylvään päälle, jota eluoidaan sitten CHCl3/MeOH/HOAc:llä 30 (95:5:1), jolloin saadaan 2-metyylitiosivutuote ja haluttu furanyylivälituote. Välituo- * * * te uudelleenkiteytetään uuttamalla kiehuvaan isopropyyliasetaattiin Soxhlet-laittees-: sa. Valkoiset kiteet kerätään kolmena satona ja kuivataan tyhjössä P205:llä 110 °C:ssa 7 tunnin ajan.

r l * • « * 35 Välituotteen (116 g, 0,5 mmol) liuos metanolissa (50 ml) hydrogenoidaan 30-pro-senttisellä Pd/C:llä (40 mg) H2-paineessa 427 kPa noin 36 tuntia. Katalysaattori poistetaan suodattamalla N2-paineessa, ja suodos haihdutetaan ja haihdutetaan uu- 15 103972 delleen tolueenin kanssa. Kiinteä jäännös uudelleenkiteytetään uuttamalla kiehuvaan isopropyyliasetaattiin Soxhlet-laitteessa. Saadaan 2-tetrahydrofuranyyliyhdiste (IE) valkoisena kiinteänä aineena, joka kuivataan tyhjössä P205:llä 110 °C:ssa noin 6 tunnin ajan; saanto 73 mg (61,8 %); sp. 284-286 °C hajoaa.

5

Esimerkki 42

Testataan esimerkin 41 tuotteen entsyymi-inhibitioaktiivisuus esimerkin 9 menettelytavalla, ja yhdisteellä havaitaan PNP-aktiivisuutta (IC50).

10 Esimerkki 43

Valmistetaan farmaseuttinen koostumus vatsaontelonsisäistä injektiota varten yhdisteen (IE) testaamiseksi. Vatsaontelonsisäistä injektioliuosta, joka sisältää esimerkin 41 yhdisteen, liuotetaan vesipohjaiseen väliaineeseen, joka sisältää 10 % DMSOita.

15 Esimerkki 44

Esimerkkiä 16 käyttämällä yhdiste (IE) injisoidaan vatsaontelonsisäisesti Lewis-rottiin esimerkin 43 testikoostumuksen kautta antamaan käyttöön 30 mg yhdistettä (IE), ja tulokset analysoidaan verrattuna kontrolleihin. Havaitaan merkittävä plas-mainosiinin kohoaminen plasmassa, joka on otettu eläimiltä, jotka saivat yhdistettä 20 (IE).

• · ·

Esimerkit 45-49

• I I

:>1,: Valmistetaan seuraavat keksinnön mukaiset yhdisteet, jotka ovat 2-amino-7-(R)- i i : 3H,5H-pyrrolo[3,2-d]-pyrimidin-4-oneja, joissa R on -CH2-Ri, jossa ryhmä Ri on : 25 seuraava: • · · • · · • ·

Esimerkki 45 Ri = 3-tetrahydrofuranyyli Esimerkki 46 Ri = 3-kloori-2-tetrahydrofuranyyli e.;. t Esimerkki 47 Ri = 3 -trifluorimetyyli-2-tetrahydrofuranyyli 30 Esimerkki 48 Ri = 3-metoksi-3-tetrahydrofuranyyli ’ Esimerkki 49 Ri = 3-fluori-2-tetrahydrofuranyyli • · ·

t I I

• M

Yhdisteet valmistetaan käyttämällä esimerkeissä 34-41 kuvattuja menettelytapoja .. J.# käyttäen lähtöaineina sopivia 3-(furanyyli)akrylonitriilejä.

ϊ.: 35 • · · 16 103972

Esimerkki 50

Sekoitetaan typpi-ilmakehässä 18 tunnin ajan 40 °C:ssa liuosta, jossa on esimerkistä 41 saatu tetrahydrofuranyyliyhdiste (IE) (500 mg) ja fenolikide 2 N HBrissä (20 ml). Liuos haihdutetaan tyhjössä alhaisessa lämpötilassa, ja jäännös pestään 5 muutamalla ml:lla Et20:ta dekantoimalla kaiken tribromifenolin poistamiseksi. Jäännöksen suspensio H20:ssa säädetään pH-arvoon 7 1 N NaOH:lla, jolloin saadaan bromialkoholi vapaana emäksenä. Kiinteä aine kerätään, pestään kylmällä vedellä ja kuivataan huoneenlämpötilassa.

10 Bromialkoholin liuosta vedettömässä dimetyyliasetamidissa jäähdytetään jäähau-teessa ja käsitellään yhtä suurella osalla PBr3:a. Liuos saa sekoittua huoneenlämpötilassa 1 tunnin ajan, sitten dimetyyliasetamidi haihdutetaan tyhjössä alhaisessa lämpötilassa ilmapumppua ja hiilihappojääloukkua käyttäen. Jäännöksen suspensio jää/vedessä säädetään pH-arvoon 7 käyttämällä 1 N NaOH, jolloin saadaan raaka 15 reaktiotuote, joka sisältää 1,4-dibromiyhdisteen. Suodatuksen, kylmällä vedellä pesun ja huoneenlämpötilassa kuivaamisen jälkeen tulokseksi saatua tuotetta refluk-soidaan natriumsulfidin kanssa 50-prosenttisessa etanoli/vedessä, tai lämmitetään vaihtoehtoisesti Na2S:n kanssa Ν,Ν-dimetyyliasetamidiliuoksessa; liuotin poistetaan tyhjössä, jäännös pestään vedellä NaBr:n poistamiseksi, ja säädetään pH-arvoon 20 noin 7 2-tetrahydrotienyyliyhdisteen (IG) saostamiseksi.

'···· Esimerkki 51 • 1 »

Testataan esimerkin 50 yhdisteen entsyymi-inhibitioaktiivisuus kuten esimerkissä 9, v : ja yhdisteellä havaitaan PNP-aktiivisuutta (IC50).

·:·:' 25 :1·.· Esimerkki 52

Valmistetaan farmaseuttinen koostumus vatsaontelonsisäistä injektiota varten yhdisteen (IG) testaamiseksi. Valmistetaan vatsaontelonsisäinen injektioliuos sisältäen esimerkin 50 yhdistettä liuotetaan vesipohjaiseen väliaineeseen, joka sisältää 10 % 30 DMSO:ta.

I I | • · t » • · · • · « • « ·

Mt • · · • « · • 1 · «Il

IM

f 1 » 17 103972

Esimerkki 53

Esimerkin 16 mukaista menettelytapaa käyttämällä yhdistettä (IG) injisoidaan vatsa-ontelonsisäisesti Lewis-rottiin esimerkin 52 testikoostumuksen kautta antamaan käyttöön 30 mg yhdistettä (IG), ja tulokset analysoidaan kontrolleihin verraten. Ha-5 valtaan merkittävä plasmainosiinin kohoaminen plasmassa, joka on otettu eläimiltä, jotka saivat yhdistettä (IG).

Esimerkit 54-58

Valmistetaan seuraavat keksinnön mukaiset yhdisteet, jotka ovat 2-amino-7-(R)-10 3H,5H-pyrrolo[3,2-d]-pyrimidin-4-oneja, joissa R on -CH2-Ri, jossa ryhmä Ri on seuraava:

Esimerkki 54 Ri = 3-tetrahydrotienyyli Esimerkki 55 Ri = 3-kloori-2-tetrahydrotienyyli 15 Esimerkki 56 Ri = 3-trifluorimetyyIi-2-tetrahydrotienyyli Esimerkki 57 Rt = 3-metoksi-2-tetrahydrotienyyli Esimerkki 58 R! = 3-fluori-2-tetrahydrotienyyli

Yhdisteet valmistetaan käyttämällä esimerkeissä 34-41 ja 50 kuvattuja menettelyta-20 poja käyttäen lähtöaineina sopivia 3-(furanyyli)akrylonitriilejä.

’. .' Esimerkki 59 f « » 3-(2-pyrrolyyli)propionitriili valmistetaan käyttämällä esimerkin 1 menettelytapaa v ’ käyttäen lähtöaineena pyrroli-2-karboksaldehydiä. Välituote 2-amino-7-(2-pyrrolyy- :"i 25 limetyyli)-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-oni valmistetaan esimerkkien 2-8 mu- kaisesti propionitriilistä, josta saadaan 2-pyrrolidinyyliyhdiste (II) välituotteen pel- • · kistyksellä.

··· Esimerkki 60 • · · • · · 30 3-(3-pyrrolyyli)propionitriili valmistetaan käyttämällä esimerkin 1 menettelytapaa ·. ’ käyttämällä lähtöaineena pyrroli-3-karboksaldehydiä. Välituote 2-amino-7-(3-pyrro- !,·.! lyylimetyyli)-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-oni valmistetaan esimerkkien 2-8 mukaisesti propionitriilistä, josta 3-pyrrolidinyyliyhdiste (IJ) saadaan välituotteen t.J.t pelkistyksellä.

I I I 1 35 · • · » · 18 103972

Esimerkki 61 3-(2-pyranyyli)propionitriili valmistetaan käyttämällä esimerkin 1 menettelytapaa käyttämällä lähtöaineena 2-pyrankarboksaldehydiä. Välituote 2-amino-7-(2-pyra-nyylimetyyli)-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-oni valmistetaan esimerkkien 2-8 5 mukaisesti propionitriilistä, josta 2-tetrahydropyranyyliyhdiste (IL) saadaan välituotteen pelkistyksellä.

Esimerkki 62 3-(3-pyranyyli)propionitriili valmistetaan käyttämällä esimerkin 1 menettelytapaa 10 käyttämällä 1 lähtöaineena 3-pyraanikarboksaldehydiä. Välituote 2-amino-7-(3-pyranyylimetyyli)-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-oni valmistetaan esimerkkien 2- 8 mukaisesti propionitriilistä, josta 3-tetrahydropyranyyliyhdiste (IM) saadaan välituotteen pelkistyksellä.

15 Esimerkki 63 3- (4-pyranyyli)propionitriili valmistetaan käyttämällä esimerkin 1 menettelytapaa käyttämällä lähtöaineena 4-pyraanikarboksaldehydiä. Välituote 2-amino-7-(4-pyra-nyylimetyyli)-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-oni valmistetaan esimerkkien 2-8 mukaisesti propionitriilistä, joska 4-tetrahydropyranyyliyhdiste (IN) saadaan väli- 20 tuotteen pelkistyksellä.

’ ' Esimerkki 64 • * *

Esimerkin 7 metyylitioyhdisteen (0,358 g, 0,85 mmol) liuosta 100 ml:ssa MeOH:ta, • I · v ’ joka on kyllästetty NH3:lla 0 °C:ssa, kuumennetaan 90-95 °C:ssa 24 tuntia lasilla 25 vuoratussa ruostumattomasta teräksestä olevassa astiassa. Jäähdytetyn astian sisältö haihdutetaan tyhjössä, jolloin saadaan seos, jossa on haluttu 2-aminovälituote- • · yhdiste, bentsamidi, ja sivutuote, joka on 2-metyylitiojohdannainen, vastakohtana 2-aminoyhdisteelle. Seos liuotetaan metanoliin, ja liuos haihdutetaan silikageelin kanssa (noin 5 g). Sitten seos lisätään varovasti kerroksena silikageelikromatogra- • · · l..t 30 fiapylvään huipulle, jota sitten eluoidaan CHCl3/MeOH:lla (9:1), jolloin saadaan metyylitiosivutuote ja haluttu 2-amino-7-(3-pyridinyylimetyyli)-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-oni, yhdiste (HA). Edelleen puhdistumista saavutetaan uudelleen-: ” *: kiteyttämällä kiehuvasta i sopropyyliasetaatista Soxhlet-laitteessa.

• t · • · · "... 35 Esimerkki 65

Testataan esimerkin 64 yhdisteen (HA) entsyymi-inhibitioaktiivisuus. Suoritetaan puriininukleosidifosforylaasi (PNP) -entsyymimääritys, jossa yhdisteellä havaitaan 19 103972 PNP-aktiivisuutta (IC50), joka määritetään radiokemiallisesti mittaamalla [14C]-hypoksantiinin muodostuminen [14C]-inosiinista (katso Biomedicine 33, 39 (1980)) käyttäen entsyymilähteenä vasikan pernaa.

5 Esimerkit 66-68

Valmistetaan seuraavat keksinnön mukaiset yhdisteet, jotka ovat 2-amino-7-(R)-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]-pyrimidin-4-oneja, joissa R on -CH2-Ri, jossa Ri ryhmä on seuraava: 10 Esimerkki 66 Ri = 2-pyridinyyli Esimerkki 67 Ri = 4-pyridinyyli Esimerkki 68 Ri = 3-kloori-2-pyridinyyli

Yhdisteet valmistetaan käyttämällä esimerkeissä 1-7 ja 64 kuvattuja menettelytapoja 15 käyttäen lähtöaineina sopivia 3-(pyridyyli)akrylonitriilejä.

Esimerkki 69

Valmistetaan farmaseuttinen koostumus vatsaontelonsisäiseen injektioon yhdisteen (HA) testausta varten. Vatsaontelonsisäinen injektioliuos, joka sisältää esimerkin 64 20 yhdistettä, liuotetaan vesipohjaiseen väliaineeseen, joka sisältää 10 % DMSO:ta.

• 1 · ’ .: Esimerkki 70 :: Yhdiste (HA) injisoidaan vatsaontelonsisäisesti Lewis-rottiin esimerkin 69 testikoos- v : tumuksen kautta antamaan käyttöön 30 mg yhdistettä (HA), antaen injektion kah- ·:··: 25 desti päivässä. Käytetään kontrolleja, jotka saavat vain väliainetta. Spesifisillä ajan- hetkillä annon jälkeen eläimet tapetaan, ja valmistetaan plasmanäytteet. Plasma uu- • · tetaan kylmällä 0,5 N HC104:llä ja säädetään neutraaliin pH-arvoon kiinteällä NFLjHCOsdla. Perkloraattisuolojen poistamisen jälkeen, uute alistetaan HPLC:lle käänteisfaasikolonnilla (Spherisorb ODSI). Havaitaan merkittävä plasmainosiinin • · « I.. 30 kohoaminen plasmassa, joka on otettu eläimiltä, jotka saivat yhdistettä (HA).

• » « # •

Esimerkit 71-73

Esimerkkien 66-68 tavalla valmistetut yhdisteet valmistetaan kukin esimerkin 69 valmistuksen mukaan farmaseuttiseksi formulaatioksi, ja tulokseksi saadut injisoita- • · · 35 vat liuokset testataan esimerkin 70 menettelytavan mukaisesti. Havaitaan merkittävä ’· ·* plasmainosiinin kohoaminen plasmassa, joka on otettu eläimiltä, jotka saivat kek sinnön mukaisia yhdisteitä.

20 103972

Esimerkki 74 1-sykloheksenyyliasetonitriiliä käsitellään keksinnön mukaisessa synteesissä. Kuivassa N2-ilmakehässä liuos, jossa on 1-sykloheksenyyliasetonitriiliä (9,2 g; 75,92 mmol) vedettömässä tetrahydrofuraanissa (THF, 10 ml), lisätään sekoitettuun 5 liuokseen, jossa on natriumhydridiä (3,18 g; 132,86 mmol) ja etyyliformiaattia (30,14 g; 406,93 mmol) 50 ml:ssa THF:ää, ja tulokseksi saatua seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa noin 18 tuntia. Haihtuva aines haihdutetaan tyhjössä huoneenlämpötilassa. Jäännökseen lisätään vettä (30 ml) 0 °C:ssa, ja liuoksen pH säädetään pH-arvoon 6 lisäämällä tipoittain 6 N HCl:ää. Tulokseksi saatu saostuma raskasta 10 öljyä uutetaan CHCl3:een. Uute pestään vedellä ja kuivataan Na2S04:llä, ja tulokseksi saatu orgaaninen kerros haihdutetaan, jolloin saadaan raaka formyyliyhdiste punaruskeana öljynä (9,6 g).

Esimerkki 75 15 Glysiinimetyyliesterihydrokloridia (16,68 g, 132,85 mmol) ja vedetöntä natriumase-taattia (10,89 g, 132,85 mmol) lisätään liuokseen, jossa on esimerkin 74 raaka for-myyliyhdistettä (9,6 g) ilman lisäpuhdistusta MeOH/H20:ssa (4:1, 150 ml). 24 tunnin jälkeen MeOH haihdutetaan tyhjössä, ja veden ja öljyn seos uutetaan CHCl3:lla. CHCl3-kerros kuivataan (Na2S04) ja haihdutetaan, jolloin saadaan kullanruskeaa 20 öljyä, joka lisätään silikageelipylvääseen. Eluoitiin CHCl3:lla, jolloin saatiin haluttu enamiini: saanto 4,5 g.

: Esimerkki 76 } *

Etyyliklooriformiaattia (3,04 g; 28,06 mmol) lisätään typpi-ilmakehässä tipoittain 25 liuokseen, jossa on esimerkin 75 enamiinia (4,12 g, 18,70 mmol) ja 1,5-diatsabisyk- ,·, ; lo[4,3,0]-non-5-eeniä (DBN, 6,96 g, 56,11 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (100 ml) ui- • ·« koisella jäähdytyksellä jäähauteessa. 0 °C:ssa 1 tunnin ajan sekoittamisen jälkeen ' liuos saa seistä huoneenlämpötilassa yön yli. Edistymisen tarkastamisen jälkeen TLC:llä lisätään lisää ClC02Et:tä (0,5 ml) ja DBN:ää (3,0 ml) konversion loppuun : 30 saattamiseksi, ja liuos saa seistä 24 tuntia. Haihtuva aines haihdutetaan tyhjössä, V * viskoosi jäännös puhdistetaan lyhyellä silikageelipylväällä (jonka päätarkoitus on . huonommin liikkuvan DBN:n poistaminen), jolloin saadaan N-suojattu pyrroli, jota , * \ käytetään seuraavassa vaiheessa puhdistamatta enempää.

• · · « • 4 · v : 35 Esimerkki 77 « t

Liuokseen, jossa on esimerkin 76 N-suojattua pyrrolia (3,0 g, 10,26 mmol) Me-OH:ssa (100 ml), lisätään kiinteää Na2C03:a (2,71 g, 25,65 mmol), ja reaktioseosta 21 103972 sekoitetaan huoneenlämpötilassa 48 tunnin ajan tulokseksi saadun suojauksenpoisto-käsitellyn pyrrolin erotuksella. Seos haihdutetaan kuiviin, ja jäännös trituroidaan läpikotaisin H20:lla (50 ml) epäorgaanisten aineiden liuottamiseksi ja uutetaan CHCl3:lla (3 x 50 ml). Uute kuivataan (Na2S04) ja haihdutetaan, jolloin saadaan 5 viskoosia kumia, joka puhdistetaan silikageelipylväällä käyttäen eluenttina CHCl3:a; saanto 2,04 g; sp. 125 °C.

Esimerkki 78

Bentsoyyli-isotiosyanaattia (0,76 g, 4,65 mmol) lisätään tipoittain liuokseen, jossa 10 on esimerkin 77 suojaamatonta pyrrolia (0,91 g, 4,13 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (30 ml). 1 tunnin jälkeen huoneenlämpötilassa liuos haihdutetaan, ja kumimainen jäännös trituroidaan metanolilla, jolloin saadaan tioureidotuote; saanto 0,70 g; sp. 170 °C.

15 Esimerkki 79

Metyylijodidia (0,678 g, 4,78 mmol) lisätään liuokseen, jossa on esimerkin 78 tiou-reidotuotetta (0,630 g, 1,64 mmol) ja DBN (0,230 g, 1,85 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (50 ml) 0 °C:ssa. Liuosta sekoitetaan 0 °C:ssa 15 min ajan, ympäristön lämpötilassa 1 tunnin ajan, ja haihdutetaan sitten tyhjössä. Jäännöksen liuos 20 CHCl3:ssa kromatografoidaan silikageelipylväässä CHCl3:lla eluenttina, jolloin saadaan metyylitiovälituotteen homogeenisiä fraktioita; saanto 0,7 g.

Esimerkki 80 : Esimerkin 79 metyylitioyhdisteen (0,70 g, 1,76 mmol) liuosta 50 ml:ssa MeOH:ssa, "’*·* 25 joka on kyllästetty NH3:lla 0 °C:ssa, kuumennetaan 90-95 °C:ssa 24 tunnin ajan la- silla vuoratussa ruostumattomasta teräksestä olevassa astiassa. Jäähdytetyn pommin sisältö haihdutetaan tyhjössä, jolloin saadaan seos, jossa on yhdistettä (IIIA), bent-samidia ja sivutuotetta, joka on 2-metyylitiojohdannainen, vastakohtana 2-amino-yhdisteelle (IIIA). Seosta sekoitetaan kiivaasti useiden minuuttien ajan noin 50 ml:n • · · 30 kanssa Et20:ta, ja liukenematon valkoinen kiinteä aine suodatetaan pois ja pestään • · · *. Et20:lla. Suodos sisälsi suurimman osan bentsamidi- ja 2-metyylitiokomponenteista.

m

Liuos, jossa oli Et20:hon liukenematon kiinteä aine (0,342 g) MeOH:ssa, haihdute- I < | :.t<: taan noin 10 g:n kanssa silikageeliä. Jauhemainen jäännös lisätään tasaisena kerrok- .··. sena silikageelipylvään huipulle, jota sitten eluoidaan CHCl3/MeOH/HOAc:llä • « i ... 35 (95:5:1), jolloin saadaan 2-metyylitiosivutuotetta ja haluttua 2-aminotuotetta (IIIA).

(IIIA) uudelleenkiteytetään uuttamalla kiehuvaan isopropyyliasetaattiin Soxhlet- 22 103972 laitteessa. Valkoiset kiteet kerätään kolmena satona ja kuivataan tyhjössä P205:llä 110 °C:ssa 7 tunnin ajan; saanto 44 %; sp. 280 hajoaa.

Alkuaineanalyysi C^H^^O-O^i^Oille: 5 Laskettu: C, 59,78; H, 6,35; N, 23,23.

Saatu: C, 59,98; H, 6,46; N, 23,15.

Esimerkki 81

Testataan esimerkin 80 yhdisteen entsyymi-inhibitioaktiivisuus. Suoritetaan puriini-10 nukleosidifosforylaasi (PNP)-entsyymimääritys, jossa yhdisteen PNP-aktiivisuus määritetään radiokemiallisesti mittaamalla [I4C]-hypoksantiinin muodostuminen [I4C]-inosiinista (katso Biomedicine 33, 39 (1980) käyttäen entsyymilähteenä vasikan pernaa. Tasolla 1 mM fosfaattia IC50 on 1,9 μΜ, ja tasolla 50 mM fosfaattia IC50 on 19 μΜ.

15

Esimerkki 82

Yhdisteet (IIIB) ja (IIIC) valmistetaan esimerkeissä 74-80 esitetyillä menettelytavoilla käyttämällä lähtöaineina vastaavasti 2- ja 3-sykloheksenyyliasetonitriiliä. Yhdisteet testataan kuten esimerkissä 81, ja havaitaan merkittävää entsyymi-inhibitio-20 aktiivisuutta.

> · ··.' Esimerkit 83-87 • * ·

Valmistetaan seuraavat keksinnön mukaiset yhdisteet, jotka ovat 2-amino-7-(R)-'/· 3H,5H-pyrrolo[3,2-d]-pyrimidin-4-oneja, joissa ryhmä R on seuraava: 25 :*·,· Esimerkki 83 R = 3-metyyli-2-sykloheksenyyli • · . ·: *. Esimerkki 84 R = 2-kloori-3-sykloheksenyyli

Esimerkki 85 R = 3-trifluorimetyyli-l-sykloheksenyyli #, Esimerkki 86 R = 3 -metoksi-1 -sykloheksenyyli < 30 Esimerkki 87 R = 2-fluori-3-sykloheksenyyli • · « •, ·,' Yhdisteet valmistetaan esimerkeissä 74-81 esitetyillä menettelytavoilla käyttäen läh- Γ ": töaineina sopivia substituoituja sykloheksenyyliasetonitriilejä.

«« · « · · M t 23 103972

Esimerkki 88

Valmistetaan farmaseuttinen koostumus vatsaontelonsisäiseen injektioon yhdisteen (IIIA) testaamiseksi. Vatsaontelonsisäistä injektioliuosta, joka sisältää yhdisteen (IIIA), liuotetaan vesipohjaiseen väliaineeseen, joka sisältää 10 % DMSO:ta.

5

Esimerkki 89

Yhdiste (IIIA) injisoidaan vatsaontelonsisäisesti Lewis-rottiin esimerkin 88 testi-koostumuksen kautta antamaan käyttöön 30 mg yhdistettä (IIIA), injisoiden kahdesti päivässä. Käytetään kontrolleja, jotka saavat vain väliainetta. Spesifisinä ajankohti-10 na annon jälkeen eläimet tapetaan ja valmistetaan plasmanäytteet. Plasma uutetaan kylmällä 0,5 N HC104:llä ja neutraloidaan kiinteällä NH^HCOadla. Perklo-raattisuolojen poistamisen jälkeen uute alistetaan HPLC:lle käänteisfaasikolonnilla (Spherisorb ODSI). Havaitaan merkittävä plasmainosiinin kohoaminen plasmassa, joka on otettu eläimiltä, jotka saivat yhdistettä (IIIA).

15

Esimerkit 90-94

Esimerkkien 83-87 tavalla valmistetut yhdisteet valmistetaan esimerkin 88 valmistuksen mukaisesti farmaseuttiseksi formulaatioksi, ja tulokseksi saadut injisoitavat liuokset testataan esimerkin 89 menettelytavalla. Havaitaan merkittävä plasma-20 inosiinin kohoaminen plasmassa, joka on otettu eläimiltä, jotka saivat keksinnön mukaisia yhdisteitä.

· · * :; Esimerkki 95 v : Yhdiste (IIID) valmistetaan käyttämällä välituotteena 2-amino-7-(l-sykloheksenyy- *:·: 25 li)-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-onia. Välituotteen (0,2 g; 0,86 mmol) liuos etanolissa (50 ml) hydrogenoidaan 10-prosenttisella Pd/C:llä (50 mg) 310 kPa:ssa 16 tunnin ajan ja suodatetaan kuumana seliitin läpi. Suodos haihdutetaan kuiviin, ja jäännös kiteytetään kuumasta etanolista, jolloin saadaan yhdiste (IIID); ..... saanto 157 mg (78 %), sp. >300 °C hajoaa.

30 • · ·

Alkuaineanalyysi Ci2H16N4O0. EtOH:lle: :.·*ί Laskettu: C, 61,80; H, 7,10; N, 23,51.

f": Saatu: C, 61,95; H, 7,43; N, 23,56.

• · · *

I · I

24 103972

Esimerkki 96

Testataan esimerkissä 95 valmistetun yhdisteen (IIID) entsyymi-inhibitioaktiivisuus kuten esimerkissä 81. Tasolla 1 mM fosfaattia ICso on 1,3 μΜ, ja tasolla 50 mM fosfaattia IC50 on 145 μΜ.

5

Esimerkki 97 Tässä esimerkissä valmistetaan 3-(2-adamantyyli)propionitriili käyttämällä modifikaatiota menettelytavasta, jonka on kuvannut M. Ohno et ai., J. Org. Chem. 53 (1988) 1285. Liuosta, jossa on 2-bromiadmantaania (20 g; 92,96 mmol); Bu3SnH:ta 10 (32,46 g; 111,5 mmol), akrylonitriiliä (9,86 g; 185,92 mmol) ja AIBN:ää (740 mg) tolueenissa (280 ml), sekoitetaan refluksointilämpötilassa 3 tunnin ajan. Reaktioseos pestään ammoniakkivedellä (0,4 M, 500 ml), orgaaninen kerros pestään H20:lla ja kuivataan MgSO^llä ja haihdutetaan. Jäännös tislataan välillä 110-118 °C (ja noin 27 Pa:ssa); yhdistetään fraktioita, jolloin saadaan raakanäyte, jossa on kontaminoi-15 tumitta 3-(2-adamantyyli)propionitriiliä tinakompleksien kanssa ja joka puhdistetaan silikageelipylväällä heksaaneilla; sen jälkeen heksaanit/etyyliasetaatilla 97:3 ja hek-saanit/etyyliasetaatilla 95:5, saanto 9,4 g (53,4 %); sp. puolikiinteä.

Esimerkki 98 20 Esimerkin 97 3-(2-adamantyyli)propionitriiliä käsitellään edelleen keksinnön synteesillä. Kuivassa N2-ilmakehässä kuumennetaan vesihauteessa 15 min ajan • · '··' 52°C:ssa seosta, jossa on 3-(2-adamantyyli)propionitriiliä (7,0 g, 36,99 mmol), natriumhydridiä (1,7 g, 73,95 mmol) ja vedetöntä tetrahydrofuraania (75 ml), ja lisä- * * * v : tään 45 min aikana liuos, jossa on etyyliformiaattia (13,69 g, 184,89 mmol) THF:ssä 25 (100 ml). Kahden tunnin jälkeen 50-55 °C:ssa lisätään toinen erä NaH:ta (0,8 g) ja HC02Et:tä (7,5 ml), ja reaktioseosta sekoitetaan noin kahden päivän ajan. Lisätään f·*; kolmas erä HC02Et:tä (7,5 ml) ja NaH:ta (0,8 g) ja jätetään huoneenlämpötilaan noin 24 tunniksi (reagoimaton nitriili on inerttiä seuraavassa vaiheessa ja voidaan ottaa talteen ensimmäisessä puhdistus vaiheessa). Paksua tahnaa sekoitetaan yön yli • · · l..' 30 ja annetaan jäähtyä huoneenlämpötilaan. Haihtuva aines haihdutetaan alennetussa • · » paineessa, ja vaaleankeltainen jäännöskuori liuotetaan minimitilavuuteen kylmää vettä (noin 150 ml) 0 °C:ssa. Liuoksen pH säädetään 6 N HCl.ää lisäämällä pH- arvoon 6,0, ja uutetaan CHC^lla (3 x 100 ml). Uute pestään H20:lla, kuivataan .·♦.·, Na2S04:lla, ja haihdutetaan tyhjössä paksuksi kullanruskeaksi öljyksi. Tätä raaka- • · · "... 35 tuotetta käytetään seuraavassa reaktiossa puhdistamatta edelleen.

• *

IM

25 103972

Esimerkki 99

Glysiinimetyyliesterihydrokloridia (6,96 g, 55,46 mmol) ja vedetöntä natriumase-taattia (4,55 g, 55,46 mmol) lisätään liuokseen, jossa on raakaa formyyliyhdistettä (8,0 g) MeOH/H20:ssa (4:1, 500 ml). 24 tunnin kuluttua MeOH haihdutetaan tyh-5 jössä, ja veden ja öljyn seos uutetaan CHCl3:lla. CHCl3-kerros kuivataan (Na2S04) ja haihdutetaan, jolloin saadaan kullanruskeaa öljyä, joka lisätään silikageelipylvää-seen. Eluoitiin CHCl3:lla, jolloin saatiin 2 päävyöhykettä: (1) 3-(2-adamantyyli)propionitriili (käytetään lähtöaineena edellisessä vaiheessa), ja 10 (2) haluttu enamiini; saanto 6 g.

Esimerkki 100

Etyyliklooriformiaattia (2,82 g, 26,0 mmol) lisätään typpi-ilmakehässä tipoittain liuokseen, jossa on esimerkin 99 enamiinia (5,0 g, 17,34 mmol) ja 1,5-diatsabisyklo-15 [4.3.0]non-5-eenia ("DBN," 6,46 g, 52,0 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (50 ml) ulkoi sella jäähdytyksellä jäähauteessa. Tunnin sekoittamisen jälkeen 0 °C:ssa liuos saa seistä huoneenlämpötilassa yön yli. Edistymisen jälkeen TLC:llä lisätään lisää ClC02Et:ä (1,81 ml) ja DBN:ää (3,23 g) konversion saattamiseksi loppuun, ja liuos saa seistä 24 tuntia. Haihtuva aines haihdutetaan tyhjössä, viskoosi jäännös puhdis-20 tetaan lyhyellä silikageelipylväällä (jonka päätarkoitus on poistaa huonommin liikkuva DBN), jolloin saadaan N-suojattu pyrroli, jota käytetään seuraavaan vaihee- • · '-** seen puhdistamatta enempää.

« · f · • i v’: Esimerkki 101 25 Liuokseen, jossa on esimerkin 100 raakaa N-suojattua pyrrolia (6,0 g, 16,59 mmol) MeOH:ssa (100 ml), lisätään kiinteää Na2C03:a (4,39 g, 41,49 mmol), ja reaktiose-osta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 48 tunnin ajan tulokseksi saadun suojauksen- • poistokäsitellyn pyrrolin erotuksella. Seos haihdutetaan kuiviin, ja jäännös trituroi- daan läpikotaisin H20:lla (50 ml) epäorgaanisten aineiden liuottamiseksi ja uutetaan m’yt 30 CHCl3:lla (3 x 100 ml). Uute kuivataan (Na2S04) ja haihdutetaan, jolloin saadaan • · · viskoosia kumia, joka kiteytettiin tnturoimalla eetterillä; saanto 4 g; sp. 162-163 °C.

• · · • · · •« · L..: Esimerkki 102 .···. Bentsoyyli-isotiosyanaattia (1,22 g, 7,47 mmol) lisätään tipoittain liuokseen, jossa • t · '..f 35 on esimerkin 101 suojaamatonta pyrrolia (1,91 g, 6,62 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa • · (50 ml). 1 tunnin jälkeen huoneenlämpötilassa liuos haihdutetaan, ja kumimainen jäännös liuotetaan Et20:hon (100 ml) kiteisen kiinteän aineen erottuessa lähes välit 26 103972 tömästi. Et20-suodos kuumennetaan kiehumaan ja laimennetaan yhtä suurella tilavuudella lämmintä sykloheksaania. Liuosta hitaasti jäähdytettäessä saadaan lisää ti-oureidotuotetta; saanto 2,81 g (95 %); sp. 193-194 °C.

5 Esimerkki 103

Metyylijodidia (2,46 g, 17,39 mmol) lisätään liuokseen, jossa on esimerkin 102 ti-oureidotuotetta (2,7 g, 5,98 mmol) ja DBN.ää (0,82 g, 6,57 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (50 ml) 0 °C:ssa. Liuosta sekoitetaan 0 °C:ssa 15 min ajan, ympäristön lämpötilassa 1 tunnin ajan, ja haihdutetaan sitten tyhjössä, jolloin saadaan metyyli-10 tiovälituoteyhdisteen raakanäyte; saanto 2,78 g (raaka).

Esimerkki 104

Liuosta, jossa on esimerkin 103 metyylitioyhdistettä (2,78 g, 5,18 mmol) 150 ml:ssa MeOH:ta, joka on kyllästetty NH3:lla 0 °C:ssa, kuumennetaan 90-95 °C:ssa 24 tun-15 nin ajan lasilla vuoratussa ruostumattomasta teräksestä olevassa pommissa. Jäähdytetyn pommin sisältö haihdutetaan tyhjössä, jolloin saadaan seos, jossa on yhdiste (IVA), bentsamidi ja sivutuote, joka on 2-metyylitiojohdannainen, vastakohtana 2-aminoyhdisteelle (IVA). Seosta sekoitetaan kiivaasti useiden minuuttien ajan noin 75 ml:n kanssa Et20:ta, ja liukenematon valkoinen kiinteä aine suodatetaan pois ja 20 pestoon Et20:lla. Suodos sisälsi suurimman osan bentsamidi- ja 2-metyylitiokom-ponenteista. Liuos, jossa on Et20:hon liukenematon kiinteä aine (1,38 g) MeOHissa, • · haihdutetaan noin 25 g:n kanssa silikageeliä. Jauhettu jäännös lisätään tasaiseksi kerrokseksi silikageelipylvään päälle, jota eluoidaan sitten CHCl3/MeOH/HOAc:llä • · * : (95:5:1), jolloin saadaan 2-metyylitiosivutuote ja haluttu 2-aminotuote (IVA). (IVA) *"'·* 25 uudelleenkiteytetään uuttamalla kiehuvaan isopropyyliasetaattiin Soxhlet-laitteessa.

Kerätään valkoisia kiteitä kolmena satona ja kuivataan tyhjössä P205:llä 110 °C:ssa 7 tunnin ajan; saanto 51,6 %; sp. >350 °C hajoaa.

•

Alkuaineanalyysi Ci7H22N4O0,21MeOH0,22H2O:lle: yv[ 30 Laskettu: C, 66,88; H, 7,59; N, 18,12.

\ ‘ Saatu: C, 66,86; H, 7,59; N, 18,12.

• · · • · · • · · < « »

Esimerkki 105

Testataan esimerkin 104 yhdisteen entsyymi-inhibitioaktiivisuus. Suoritetaan purii- .···. 35 ninukleosidifosforylaasi (PNP)-entsyymimääritys, jossa yhdisteellä havaitaan PNP- • · 11 aktiivisuutta (IC50), joka määritetään radiokemiallisesti mittaamalla [ C]-hypoksan-tiinin muodostuminen [14C]-inosiinista (katso Biomedicine. 33, 39 (1980)) käyttäen 27 103972 entsyymilähteenä vasikan pernaa. Tasolla 1 mM fosfaattia ICs0 on 0,090 μΜ, ja tasolla 50 mM fosfaattia IC50 on 2,5 μΜ.

Esimerkit 106-110 5 Valmistetaan seuraavat keksinnön mukaiset yhdisteet, jotka ovat 2-amino-7-(R)-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]-pyrimidin-4-oneja, joissa R on -CH2-Rb jossa ryhmä Ri on seuraavanlainen 2-adamantyyliryhmä:

Esimerkki 106 Rt = 2-(l-metyyli)adamantyyli 10 Esimerkki 107 Rj = 2-(l-kloori)adamantyyli

Esimerkki 108 Ri = 2-(l-trifluorimetyyli)adamantyyli Esimerkki 109 Rj = 2-(l-metoksi)adamantyyli Esimerkki 110 Ri = 2-(l-fluori)adamantyyli 15 Yhdisteet valmistetaan käyttämällä esimerkeissä 98-104 kuvattuja menettelytapoja käyttäen lähtöaineina sopivia 3-(2-adamantyyli)propionitriilejä.

Esimerkit 111-116

Valmistetaan seuraavat keksinnön mukaiset yhdisteet, jotka ovat 2-amino-7-(R)-20 3H,5H-pyrrolo[3,2-d]-pyrimidin-4-oneja, joissa R on -CH2-Ri, jossa ryhmä Ri on seuraavanlainen 1-adamantyyliryhmä: « < • 4 · • · _ ' · ·' Esimerkki 111 Rj = 1 -(2-metyyli)adamantyyli v : Esimerkki 112 R! = l-(2-kloori)adamantyyli 25 Esimerkki 113 R] = l-(2-trifluorimetyyli)adamantyyli Esimerkki 114 Rj = l-(2-metoksi)adamantyyli Esimerkki 115 Rj = l-(2-fluori)adamantyyli Esimerkki 116 Rx = 1-adamantyyli • · · i i · • · · .···, 30 Yhdisteet valmistetaan käyttämällä esimerkeissä 98-104 kuvattuja menettelytapoja • · käyttäen lähtöaineina sopivia 3-(l-adamantyyli)propionitriilejä.

* I » · • · * • · · • · «

Esimerkki 117 . ·: ·, Valmistetaan farmaseuttinen koostumus vatsaontelonsisäistä injektiota varten yhdis- .···, 35 teen (IVA) testaamiseksi. Vatsaontelonsisäinen injektioliuos, joka sisältää yhdisteen (IVA), liuotetaan vesipohjaiseen väliaineeseen, joka sisältää 10 % DMSOita.

28 103972

Esimerkki 118

Yhdiste (IVA) injisoidaan vatsaontelonsisäisesti Lewis-rottiin esimerkin 117 testi-koostumuksen kautta aikaansaamaan 30 mg yhdistettä (IVA), injisoiden kahdesti päuivässä. Käytetään kontrolleja, jotka saavat vain väliainetta. Spesifisillä ajanhet-5 kiliä annon jälkeen eläimet tapetaan ja valmistetaan plasmanäytteet. Plasma uutetaan kylmällä 0,5 N HC104:llä ja neutraloidaan kiinteällä NH4HCO3.Ha. Perkloraattisuo-lojen poistamisen jälkeen uute alistetaan HPLCille käänteisfaasikolonnilla (Spherisorb ODSI). Havaitaan merkittävä plasmainosiinin kohoaminen plasmassa, joka on otettu eläimiltä, jotka saivat yhdistettä (IVA).

10

Esimerkit 119-129

Esimerkeissä 106-116 valmistetut yhdisteet valmistetaan kukin farmaseuttiseksi formulaatioksi esimerkin 117 valmistuksen mukaiseksi, ja tulokseksi saadut injisoi-tavat liuokset testataan esimerkin 118 menettelytavan mukaisesti. Havaitaan merkit-15 tävä plasmainosiinin kohoaminen plasmassa, joka on otettu eläimiltä, jotka saivat keksinnön mukaisia yhdisteitä.

Esimerkki 130 Tässä esimerkissä valmistetaan 3-syklopentyylipropionitriili. 3-syklopentyylipropio-20 nyylikloridia (57,7 g, 0,36 mol) lisätään tipoittain suureen ylimäärään konsentroitua ammoniumhydroksidia (400 ml), jota jäähdytetään jää/suola-hauteessa. Valkoisen ' · ' kiinteään aineen raskasta suspensiota sekoitetaan yön yli, kerätään suodattamalla, pestään kylmällä vedellä ja uudelleenkiteytetään noin 2 litrasta kiehuvaa vettä. : : Amidin kiiltävät valkoiset levyt kuivataan tyhjössä Ρ205:Μ; saanto 31,6 g (62,3 %); 25 sp. 122 °C.

• · · • · t • ·

Amidin (23,5 g, 0,166 mol) liuosta POCl3:ssa (150 ml) kuumennetaan ilman kosteu-delta suojaten 120 °C:ssa 1 tunnin ajan. öljyhaude jäähdytetään noin 70 °C:seen, ja POCl3-ylimäärä tislataan pois tyhjössä, ja jäähdytetty jäännös kaadetaan jäähän 30 (noin 300 g). Seos neutraloidaan lisäämällä varovasti kiinteää Na2C03:a ja uutetaan • · · * useilla Et20-erillä. Kuivattu (Na2S04) uute haihdutetaan, jolloin saadaan kirkas, \i.: vaaleankeltainen öljy, joka tislataan tyhjössä, jolloin saadaan haluttu nitriili; saanto 16,86 g (82 %) kp. 88,0-88,5 °C/1,16 kPa). MS (EI): m/z 122 (M-H)+; IR (cap. film), 2245 cm'1 (CN); Ή-NMR, δ 1,67 (q, 2, -CH2CH2CN), 2,36 (t, 2, -CH2CN), · « 35 monimutkaisia multippeleita keskittyen kohtiin noin 1,11, 1,63, 1,86 (syklopentyyli-protonit).

29 103972

Esimerkki 131

Edellisen esimerkin 3-syklopentyylipropionitriiliä käsitellään edelleen keksinnön mukaisessa synteesissä. Kuivassa N2-ilmakehässä seosta, jossa on 3-syklopentyylipropionitriiliä (14,8 g, 0,12 mol), natriumhydridiä (5,8, 0,24 mol) ja vedetöntä tetra-5 hydrofuraania (300 ml), kuumennetaan 52 °C:ssa vesihauteessa 15 min ajan, ja lisätään 45 min aikana etyyliformiaatin (13,3 g, 0,18 mol) liuos THF:ssä (100 ml). Kahden tunnin kuluttua 50-55 °C:ssa lisätään toinen erä NaH:a (1,9 g) ja HC02Et:ä (5,0 ml), minkä jälkeen 30 min kuluttua kolmas erä HC02Et:ä (reagoimaton nitriili on inerttiä seuraavassa vaiheessa ja voidaan saada talteen ensimmäisessä puhdistus-10 vaiheessa). Paksua tahnaa sekoitetaan yön yli ja annetaan jäähtyä huoneenlämpötilaan. Haihtuva aines haihdutetaan alennetussa paineessa ja jäljelle jäävä vaaleankeltainen kuori liuotetaan minimimäärään kylmää vettä (noin 150 ml) 0 °C:ssa. Liuoksen pH säädetään pH-arvoon 6,0 lisäämällä 6N HCl:ää ja uutetaan CHCl3:lla (3 x 100 ml). Uute pestään H20:lla, kuivataan Na2S04:llä ja haihdutetaan tyhjössä pak-15 suksi kullanruskeaksi öljyksi. Tätä raakatuotetta (15,6 g) käytetään seuraavassa reaktiossa puhdistamatta enempää.

Esimerkki 132

Glysiinimetyyliesterihydrokloridia (19,31 g, 0,154 mol) ja vedetöntä natriumase-20 taattia (12,61 g, 0,154 mol) lisätään liuokseen, jossa on edellisen esimerkin raaka formyyliyhdiste (15,6 g) MeOH/H20:ssa (4:1, 500 ml). 24 tunnin kuluttua MeOH

• · ’;;;' haihdutetaan tyhjössä, ja veden ja öljyn seos uutetaan CHCl3:lIa. CHCl3-kerros kui- vataan (Na2S04) ja haihdutetaan, jolloin saadaan kullanruskeaa öljyä, joka lisätään • i · v ; silikageelipylvääseen. Eluoitiin CHCl3:lla, jolloin saatiin 2 päävyöhykettä: (1) 3- * 25 syklopentyylipropionitriili (8,22 g, 66,7 mmol tai 55,6 % edellisessä vaiheessa läh-töaineena käytettyä nitriiliä), ja (2) haluttua enamiinia (3,45 g; 29,1 % perustuen teoreettiseen saantoon korjattuna lähtöaineessa läsnä olevan nitriilimäärän suhteen; MS (FAB): 223 (M+H)+).

« * ·

I I I

• ( I

.···. 30 Esimerkki 133 • · *

Etyyliklooriformiaattia (2,53 g, 23,3 mmol) lisätään typpi-ilmakehässä tipoittain *.i.: liuokseen, jossa on edellisen esimerkin enamiinia (3,45 g, 15,5 mmol) ja DBN:ää « « « (5,78 g, 46,6 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (50 ml) jäähdyttäen ulkoisesti jäähauteella.

1 tunnin 0 °C:ssa sekoituksen jälkeen liuos saa seistä huoneenlämpötilassa yön yli. ,···, 35 Etenemisen TLCillä tarkastuksen jälkeen, lisätään lisää ClC02Et:ä (0,5 ml) ja * t DBN:ää (3,0 ml) konversion saattamiseksi loppuun, ja liuos saa seistä 24 tuntia. Haihtuva aines haihdutetaan tyhjössä, viskoosi jäännös puhdistetaan lyhyellä kroma- 30 103972 togiapylväällä (jonka päätarkoitus on poistaa huonommin liikkuva DBN), jolloin saadaan N-suojattu pyrroli (4,50 g; 98 %), jota käytetään seuraavaan vaiheeseen puhdistamatta enempää.

5 Esimerkki 134

Liuokseen, jossa on edellisen esimerkin N-suojattua pyrrolia (4,50 g, 15,3 mmol) MeOH:ssa (100 ml) lisätään kiinteää Na2C03:a (1,62 g, 15,3 mmol), ja reaktioseosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 48 tunnin ajan tulokseksi saadun suojauksenpoisto-käsitellyn pyrrolin erottuessa. Seos haihdutetaan kuiviin ja jäännös trituroidaan läpi-10 kotaisin H2O.Ha (50 ml) epäorgaanisten ainesten liuottamiseksi ja uutetaan CHCl3:lla (3 x 100 ml). Uute kuivataan (Na2S04) ja haihdutetaan jolloin saadaan viskoosia kumia, joka kiteytyy kuivattaessa tyhjössä; saanto 2,97 g (87,4 %) materiaalia, joka soveltuu käytettäväksi välituotteena puhdistamatta enempää. Perusteellisempi puhdistus voidaan kuitenkin suorittaa käyttämällä joko pylväskromatografiaa 15 käyttämällä silikageeli/CHCl3:ää tai uudelleenkiteyttämällä tolueeni/sykloheksaanis-ta (1:3).

Esimerkki 135

Bentsoyyli-isotiosyanaattia (2,62 g, 16,03 mmol) lisätään tipoittain liuokseen, jossa 20 on esimerkin 134 suojaamaton pyrroli (2,97 g, 13,36 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (100 ml). 1 tunnin jälkeen huoneenlämpötilassa liuos haihdutetaan ja kumimainen 1 t jäännös liuotetaan Et20:hon (100 ml) kiteisen kiinteän aineen erottuessa lähes välit- « · '«··’ tömästi; saanto 1,75 g. Et20-suodos kuumennetaan kiehumaan ja laimennetaan yhtä I « « v : suurella tilavuudella lämmintä sykloheksaania. Liuosta jäähdytettiin hitaasti, jolloin 25 saatiin vielä 1,58 g tioureidotuotetta; kokonaissaanto 3,33 g (64,6 %). Pieni määrä tioureidotuotetta uudelleenkiteytetään lämpimästä Et20/sykloheksaanista (15 ml ίΤ: kumpaakin); sp. 123-125 °C. MS (FAB): 386 (M+H)+.

Alkuaineanalyysi C2oH23N303SO,45C6Hi2:lle: 30 Laskettu: C, 64,40; H, 6,76; N, 9,93.

’ Saatu: C, 64,51; H, 7,10; N, 9,93.

• · · • · · • « · :>lt! Esimerkki 136

Metyylijodidia (2,60 g, 18,32 mmol) lisätään liuokseen, jossa on esimerkin 135 ti-35 oureidotuotetta (3,21 g, 8,33 mmol) ja DBN:ää (1,24 g, 9,99 mmol) kuivassa « · CH2Cl2:ssa (80 ml) 0 °C:ssa. Liuosta sekoitetaan 0 °C:ssa 15 min ajan, ympäristön lämpötilassa 1 tunnin ajan ja haihdutetaan sitten tyhjössä. Jäännöksen liuos m 31 103972 CHCl3:ssa kromatografoidaan silikageelipylväällä CHCl3-eluentilla, jolloin saadaan metyylitiovälituoteyhdisteen homogeenisiä fraktioita; saanto 2,46 g (74 %).

Esimerkki 137 5 Esimerkin 136 metyylitioyhdisteen (2,07 g, 5,18 mmol) liuosta 150 ml:ssa MeOH:ta, joka on kyllästetty NH3:lla 0 °C:ssa, kuumennetaan 90-95 °C:ssa 24 tunnin ajan lasilla vuoratussa ruostumattomasta teräksestä olevassa astiassa. Jäähdytetyn astian sisältö haihdutetaan tyhjössä, jolloin saadaan seosta, jossa on yhdiste (IVC), bentsamidia ja sivutuotetta, joka on 2-metyylitiojohdannaista, vastakohtana 10 2-aminoyhdisteelle (IVC). Seosta sekoitetaan kiivaasti useiden minuuttien ajan noin 75 ml:n kanssa Et20:a, ja liukenematon valkoinen kiinteä aine suodatetaan pois ja pestään Et20:lla. Suodos sisälsi suurimman osan bentsamidi-ja 2-metyylitiokompo-nenteista. Et20:hon liukenemattoman kiinteään aineen (1,13 g) liuos

MeOH:ssa haihdutetaan noin 10 g:n kanssa silikageeliä. Jauhettu jäännös lisätään 15 tasaiseksi kerrokseksi silikageelipylvään huipulle, jota sitten eluoidaan CHC13/-MeOH/HOAc;lla (95:5:1), jolloin saadaan 2-metyylitiosivutuote (252 mg; MS (FAB): 264 (M+H)+) ja haluttu 2-aminotuote (IVC) (679 mg, 56,4 %). (IVC) uudel-leenkiteytetään uuttamalla kiehuvaan isopropyyliasetaattiin Soxhlet-laitteessa. Valkoiset kiteet kerätään kolmena satona ja kuivataan tyhjössä P205:llä 110 °C:ssa 7 20 tunnin ajan; saanto 540 mg (44,9 %); sp. 324-326 °C hajoaa; MS (FAB): 233 (M+H)+.

« « I • I < i · · L'.' Alkuaineanalyysi Ci2H16N40:lle:

Laskettu: C, 62,05; H, 6,94; N, 24,12.

T; 25 Saatu: C, 62,04; H, 7,11; N, 24,48.

• · · • · t · ··· v ' Esimerkki 138

Testataan esimerkin 137 yhdisteen entsyymi-inhibitioaktiivisuus esimerkin 9 menet-telytavan mukaisesti. Tasolla 1 mM fosfaattia IC50 on 0,029 μΜ, ja tasolla 50 mM :T: 30 fosfaattia IC50 on 1,8 μΜ.

9 9 • · ·

Esimerkit 139-142 • ·

Valmistetaan seuraavat keksinnön mukaiset yhdisteet, jotka ovat 2-amino-7-(R)-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]-pyrimidin-4-oneja, joissa R on -CH2-Ri, jossa ryhmä Ri on 35 seuraavanlainen: 1 · 32 103972

Esimerkki 139 Rj = 3-metyylisyklopentyyli Esimerkki 140 R! = 2-kloorisyklopentyyli Esimerkki 141 Rt = 3-trifhiorimetyylisyklopentyyli Esimerkki 142 Ry = 3-metoksisyklopentyyli 5

Yhdisteet valmistetaan käyttämällä esimerkeissä 130-137 kuvattuja menettelytapoja käyttäen lähtöaineina sopivia 3-(substituoitu syklopentyyli)propionitriilejä.

Esimerkki 143 10 Valmistetaan farmaseuttinen koostumus vatsaontelonsisäiseen injektioon yhdisteen (IVC) testaamiseksi. Valmistetaan vatsaontelonsisäinen injektioliuos, joka sisältää yhdisteen (IVC), ja se liuotetaan vesipohjaiseen väliaineeseen, joka sisältää 10 % DMSO:ta.

15 Esimerkki 144

Yhdiste (IVC) injisoidaan esimerkin 112 menettelytapaa käyttämällä vatsaontelonsi-säisesti Lewis-rottiin esimerkin 143 testikoostumuksen kautta ja tuloksia verrataan kontrollien kanssa. Havaitaan merkittävä plasmainosiinin kohoaminen plasmassa, joka on otettu eläimiltä, jotka saivat yhdistettä (IVC).

20

Esimerkki 145 1 < ,·<, Tässä esimerkissä valmistetaan 3-sykloheksyylipropionitriili. Sykloheksaanipro-

• I

pionihapon (50 g; 0,32 mol) ja tionyylikloridin (152 g; 1,28 mol) liuos 100 ml:ssa bentseeniä saa seistä yön yli ja haihdutetaan sitten öljymäiseksi jäännökseksi. Jään- | 25 nös lisätään erissä 28-prosenttiin ammoniakin vesiliuokseen (270 ml) 25 °C:ssa ja • · · *· “ seosta sekoitetaan noin 2 tuntia. Tulokseksi saatu tuote kerätään suodattamalla, • · · : pestään kylmällä vedellä ja uudelleenkiteytetään noin 2 lista kiehuvaa vettä. Amidin kiiltävät valkoiset levyt kuivataan tyhjössä P205:llä; saanto 45,5 g.

• · · • ♦ t • ♦ « :T: 30 Suojaten ilman kosteudelta liuosta, joka sisältää amidin (45,5 g, 0,293 mol) , SOCl2:ssa (200,3 g; 1,68 mol), refluksoidaan noin 6 tuntia, öljyhaude jäähdytetään .*.*;* noin 70 °C:seen, ja SOCl2-ylimäärä tislataan pois tyhjössä, ja jäähdytetty jäännös • · kaadetaan jäähän (noin 300 g). Seos neutraloidaan lisäämällä varovasti kiinteää ::: Na2C03ia ja uutetaan useilla Et20-erillä. Kuivattu (Na2S04) uute haihdutetaan, jol- 35 loin saadaan kirkasta, vaaleankeltaista öljyä, joka tislataan tyhjössä, jolloin saadaan • » ♦ haluttu nitriili; saanto 42,0 g.

33 103972

Esimerkki 146

Esimerkin 145 3-sykloheksyylipropionitriili käsitellään edelleen keksinnön synteesissä. Seosta, jossa on 3-sykloheksyylipropionitriiliä (22,3 g, 0,16 mol), nat-riumhydridiä (5,38, 0,224 mol) ja vedetöntä tetrahydrofuraania (120 ml), kuumenne-5 taan kuivassa N2-ilmakehässä 52 °C:ssa vesihauteessa 15 min ajan, ja lisätään 45 min aikana liuos, jossa on etyyliformiaattia (55,4 g, 0,75 mol) THF:ssä (50 ml). Kahden tunnin kuluttua 50-55 °C:ssa lisätään toinen erä NaH:a (2,0 g) ja HC02Et:ä (5,0 ml) (reagoimaton nitriili on inerttiä seuraavassa vaiheessa ja voidaan saada talteen ensimmäisessä puhdistus vaiheessa), ja reaktioseosta sekoitetaan noin 3 päivää 10 55 °C:ssaja annetaan sitten jäähtyä huoneenlämpötilaan. Haihtuva aines haihdute taan alennetussa paineessa, ja jäljelle jäävä vaaleankeltainen kuori liuotetaan mi-nimitilavuuteen kylmää vettä (noin 75 ml) 0 °C:ssa. Liuos säädetään pH-arvoon 6,0 lisäämällä 6 N HCl:ää ja uutetaan CHCl3:lla (3 x 100 ml). Uute pestään H20:lla, kuivataan Na2S04:llä ja haihdutetaan tyhjössä paksuksi kullanruskeaksi öljyksi. Tätä 15 raakatuotetta käytetään seuraavassa reaktiossa puhdistamatta edelleen.

Esimerkki 147

Glysiinimetyyliesterihydrokloridia (30,60 g, 0,24 mol) ja vedetöntä natriumasetaat-tia (19,99 g, 0,24 mol) lisätään liuokseen, jossa on edellisen esimerkin raaka for-20 myyliyhdiste (25,22 g) Me0H/H20:ssa (4:1, 500 ml). 24 tunnin kuluttua MeOH ; ’' *. haihdutetaan tyhjössä, ja veden ja öljyn seos uutetaan CHCl3:Ila. CHCl3-kerros kui- I I « , · ’, vataan (Na2S04) ja haihdutetaan, jolloin saadaan kullanruskeaa öljyä, joka lisätään silikageelipylvääseen. Eluoitiin CHC13:11a, jolloin saatiin 2 päävyöhykettä: (1) 3-

• I I

' . sykloheksyylipropionitriili (käytetty lähtöaineena edellisessä vaiheessa), ja (2) halut- , \ 25 tu enamiini; saanto 16 g.

• · · • · · • ·

Ml '·* ; Esimerkki 148

Etyyliklooriformiaattia (1,38 g, 12,7 mmol) lisätään typpi-ilmakehässä tipoittain • » · v : liuokseen, jossa on esimerkin 147 enamiini (2,0 g, 8,46 mmol) ja DBN:ää (2,1 g, 30 16,9 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (50 ml) jäähdyttäen ulkoisesti jäähauteella. Yhden , \f tunnin 0 °C:ssa sekoittamisen jälkeen liuos saa seistä huoneenlämpötilassa yön yli.

I I f

Etenemisen TLC:llä tarkastuksen jälkeen, lisätään lisää ClC02Et:ä (0,5 ml) ja DBN:ää (1,5 ml) konversion saattamiseksi loppuun, ja liuos saa seistä 24 tuntia.

·', i : Haihtuva aines haihdutetaan tyhjössä, viskoosi jäännös puhdistetaan lyhyellä kroma- 35 togiapylväällä (jonka päätarkoitus on poistaa huonommin liikkuva DBN), jolloin saadaan N-suojattu pyrroli, jota käytetään seuraavassa vaiheessa puhdistamatta enempää.

34 103972

Esimerkki 149

Liuokseen, jossa on esimerkin 148 N-suojattu pyrroli (2,6 g, 8,43 mmol) MeOH.ssa (100 ml), lisätään kiinteää Na2C03:a (2,23 g, 21,07 mmol), ja reaktioseosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 48 tunnin ajan tulokseksi saadun suojauksenpoistokäsitel-5 lyn pyrrolin erottumisella. Seos haihdutetaan kuiviin, ja jäännös trituroidaan läpikotaisin H20:lla (50 ml) epäorgaanisten aineiden liuottamiseksi ja uutetaan CHCl3:lla (3 x 100 ml). Uute kuivataan (Na2S04) ja haihdutetaan, jolloin saadaan viskoosia kumia, joka puhdistetaan silikageelipylväällä käyttäen eluenttina CHCl3:a; saanto 1,67 g (84 %); sp. 73-74 °C.

10

Esimerkki 150

Bentsoyyli-isotiosyanaattia (0,74 g, 4,02 mmol) lisätään tipoittain liuokseen, jossa on esimerkin 149 suojaamatonta pyrrolia (0,95 g) kuivassa CH2Cl2:ssa (20 ml).

1 tunnin jälkeen huoneenlämpötilassa liuos haihdutetaan, ja kumimainen jäännös 15 liuotetaan Et20:hon (100 ml) kiteisen kiinteän aineen erottuessa lähes välittömästi. Et20-suodos kuumennetaan kiehumaan ja laimennetaan yhtäsuurella tilavuudella lämmintä sykloheksaania. Liuos jäähdytetään hitaasti, jolloin saadaan lisää tiourei-dotuotetta; kokonaissaanto 1,41 g (88 %); sp. 156-157 °C.

20 Esimerkki 151 .· ·. Metyylijodidia (1,1 g, 7,6 mmol) lisätään liuokseen, jossa on esimerkin 150 tiourei- ,··’·. dotuote (0,96 g, 2,61 mmol) ja l,5-diatsabisyklo[4.3.0]non-5-eenia (0,38 g, y.'.' 3,0mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (20 ml) 0 °C:ssa. Liuosta sekoitetaan 0 °C:ssa • · » 15 min ajan, ympäristön lämpötilassa 1 tunnin ajan, ja haihdutetaan sitten tyhjössä.

’ ] 25 Jäännöksen liuos CHCl3:ssa kromatografoidaan silikageelipylväässä CHCl3:lla elu- • · · enttina, jolloin saadaan metyylitiovälituoteyhdisteen homogeenisia fraktioita; saanto V ; 0,92 g.

: : : Esimerkki 152 • 30 Esimerkin 151 metyylitioyhdisteen (0,8 g, 1,93 mmol) liuosta 50 ml:ssa MeOHita, m\t joka oli kyllästetty NH3:lla 0 °C:ssa, kuumennetaan 90-95 °C:ssa 24 tunnin ajan • · · lasilla vuoratussa ruostumattomasta teräksestä olevassa astiassa. Jäähdytetyn astian • · sisältö haihdutetaan tyhjössä, jolloin saadaan seos, jossa on yhdiste (IVD), bentsa-: midi ja sivutuote, joka on 2-metyylitiojohdannainen, vastakohtana 2-aminoyhdis- 35 teelle (IVD). Seosta sekoitetaan kiivaasti useiden minuuttien ajan noin 75 ml:ssa Et20:ta, ja liukenematon valkoinen aine suodatetaan pois ja pestään Et20:lla. Suo-dos sisälsi suurimman osan bentsamidi- ja 2-metyylitiokomponenteista. Et20.hon 35 103972 liukenemattoman kiinteään aineen (0,390 g) liuos MeOH:ssa haihdutetaan noin 10 g:n kanssa silikageelia. Jauhettu jäännös lisätään tasaiseksi kerrokseksi silikageeliko-lonnin huipulle, jota sitten eluoidaan CHCl3/MeOH/HOAc:lIa (95:5:1), jolloin saadaan 2-metyylitiosivutuote ja haluttu 2-aminotuote (IVD). (IVD) uudelleenkiteyte-5 tään uuttamalla kiehuvaan isopropyyliasetaattiin Soxhlet-laitteessa. Valkoiset kiteet kerätään kolmena satona ja kuivataan tyhjössä P205:llä 110 °C:ssa 7 tunnin ajan; saanto 49 %, sp. >300 °C;

Alkuaineanalyysi CnHigN^lle: 10 Laskettu: C, 63,39; H, 7,36; N, 22,74.

Saatu: C, 63,50; H, 7,74; N, 22,67.

Esimerkki 153

Testataan esimerkin 152 yhdisteen entsyymi-inhibitioaktiivisuus kuten esimerkissä 15 105. Tasolla 1 mM fosfaattia IC50 on 0,037 μΜ, ja tasolla 50 mM fosfaattia IC50 on 2,2 μΜ.

Esimerkki 154

Testataan esimerkin 152 yhdiste sen tehokkuuden määrittämiseksi deoksiguanosii-20 nin (d-Guo) toksisuuden potensoimisessa (katso D. A. Schewach et ai., Cancer Res.

.···. 46 (1986) 519; ja J. C. Sircar et ai, Agents and Actions 21 (1987) 253). CCRF- CEM-soluja kasvatetaan RPMI-1640-väliaineessa. Näiden solujen suspensiovil-

• I

jelmiin lisätään d-Guo:a vakiokonsentraatiolla (5,62 μΜ), ja yhdistettä vaihtelevilla 1 f ' , konsentraatioilla, ja solujen lukumäärä määritetään Coulter-laskulaitteessa 24, 48 ja I l 25 72 tuntia tämän jälkeen. Näistä tiedoista ICsoiksi lasketaan 2,0 μΜ yhdisteen kon- • * 1 '· *·' sentraationa, joka vaaditaan vähentämään solujen lukumäärän kasvua välillä 0 ja 72 v : tuntia 50 %:iin kontrolli viljelmien solujen lukumäärästä.

•V : Esimerkki 155 :T: 30 Valmistetaan yhdiste 2-amino-7-(3-metyylisykloheksyylimetyyli)-3H,5H-pyrrolo- . [3,2-d]pyrimidin-4-oni. Ensin valmistetaan aryylijohdannainen 2-amino-7-(3-metyy- • · · libentsyyli)-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]-pyrimidin-4-oni käyttämällä edellä esimerkeissä 146-152 kuvattuja menettelytapoja, mutta 3-(3-metyylibentsyyli)propionitriilillä : lähtöaineena. Aryylijohdannaisen (0,2 g, 0,78 mmol) liuos trifluorietikkahapossa 35 (TFA) (20 ml) hydrogenoidaan PtC^lla 414 kPa:ssa 24 tunnin ajan. Katalysaattori suodatetaan pois seliittikerroksen läpi, ja suodos haihdutetaan. Jäännös trituroidaan metanolilla ja jätetään yöksi jääkaappiin. Tulokseksi saatu kiteytynyt trifluoriase- 36 103972 taattisuola saostuu liuoksesta ja kerätään suodattamalla. TFA-suola suspendoidaan 8 ml:aan H20:ta, säädetään pH-arvoon 8 konsentroidulla NFLtOFkllä ja sonikoidaan. Puhdas tuote kerätään, pestään H20:lla ja kuivataan: saanto 165 mg (81 %); sp. 282 °C.

5

Alkuaineanalyysi Ci4H2oN40:lle:

Laskettu: C, 64,60; H, 7,74; N, 21,52.

Saatu: C, 64,24; H, 7,96; N, 21,51 %.

10 Esimerkki 156

Toistetaan esimerkissä 155 kuvattu menettelytapa 2-amino-7-(3-trifluorimetyylisyk-loheksyylimetyyli)-3H,5H-pyrrolo-[3,2-d]pyrimidin-4-onin valmistamiseksi käyttämällä 3-(3-trifluorimetyylibentsyyli)propionitriiliä lähtöaineyhdisteenä: saanto 69 %; sp. 165 °C.

15

Alkuaineanalyysi Ci4Hi7N4OF3 0,6H2O:lle:

Laskettu: C, 51,72; H, 5,64; N, 17,23.

Saatu: C, 51,82; H, 5,71; N, 16,81 %.

20 Esimerkki 157

Testataan esimerkissä 155 valmistetun yhdisteen entsyymi-inhibitioaktiivisuus kuten .··. esimerkissä 105. Tasolla 1 mM fosfaattia IC50 on 0,025 μΜ, ja tasolla 50 mM fos- . ”, faattia IC50 on 0,0,820 μΜ.

. ’ 25 Esimerkki 158 • · ·

Testataan esimerkissä 156 valmistetun yhdisteen entsyymi-inhibitioaktiivisuus kuten *·* : esimerkissä 105. Tasolla 1 mM fosfaattia IC50 on 0,020 μΜ, ja tasolla 50 mM fos faattia IC50 on 0,740 μΜ.

• · · • · • · · 30 Esimerkki 159 . ]·. Tässä esimerkissä valmistetaan 3-sykloheptyylipropionitriili esimerkin 97 mukai- • · * sesti käyttämällä liuosta, jossa on 2-bromisykloheptaania (25,57 g; 144,38 mmol); Bu3SnH:ta (50,42 g; 173,26 mmol), akrylonitriiliä (15,32 g; 288,77 mmol), ja • « » v · AIBN:ää (1,13 g) tolueenissa (300 ml). Saanto on 16 g; sp. öljy.

· 35 37 103972

Esimerkki 160

Esimerkin 159 3-sykloheptyylipropionitriili käsitellään edelleen keksinnön synteesissä. Seosta, jossa on 3-sykloheptyylipropionitriiliä (8,5 g, 56,19 mmol), nat-riumhydridiä (2,6 g, 112,39 mmol) ja vedetöntä tetrahydrofuraania (100 ml), kuu-5 mennetaan kuivassa N2-ilmakehässä 52 °C:ssa vesihauteessa 15 min ajan, ja lisätään 45 min aikana liuos, jossa on etyyliformiaattia (20,81 g, 280,99 mmol) THF:ssä (100 ml). Kahden tunnin kuluttua 50-55 °C:ssa lisätään toinen erä NaH:a (1,35 g) ja HC02Et:ä (10,4 g), minkä jälkeen 30 min kuluttua kolmas erä HC02Et:ä (reagoimaton nitriili on inerttiä seuraavassa vaiheessa ja voidaan saada talteen en-10 simmäisessä puhdistus vaiheessa). Paksua tahnaa sekoitetaan yön yli ja annetaan jäähtyä huoneenlämpötilaan. Haihtuva aines haihdutetaan alennetussa paineessa, ja jäljelle jäävä vaaleankeltainen kuori liuotetaan minimitilavuuteen kylmää vettä (noin 150 ml) 0 °C:ssa. Liuoksen pH säädetään pH-arvoon 6,0 lisäämällä 6 N HCl:ää ja uutetaan CHCl3:lla (3 x 100 ml). Uute pestään H20:lla, kuivataan Na2S04:llä, ja 15 haihdutetaan tyhjössä paksuksi kullanruskeaksi öljyksi. Tätä raakatuotetta käytetään seuraavassa reaktiossa puhdistamatta enempää.

Esimerkki 161

Glysiinimetyyliesterihydrokloridia (9,35 g, 74,47 mmol) ja vedetöntä natriumase-20 taattia (6,10 g, 74,47 mmol) lisätään liuokseen, jossa on esimerkin 160 raaka for-myyliyhdiste (8,9 g; 49,65 mmol) MeOH/H20:ssa (4:1, 250 ml). 24 tunnin kuluttua .··. MeOH haihdutetaan tyhjössä, ja veden ja öljyn seos uutetaan CHCl3:lla. CHCI3- . ·, kerros kuivataan (Na2S04) ja haihdutetaan, jolloin saadaan kullanruskeaa öljyä, joka ’ ; lisätään silikageelipylvääseen. Eluoitiin CHCl3:lla, jolloin saatiin 2 päävyöhykettä: [ 25 (1) 3-sykloheptyylipropionitriili (käytetty lähtöaineena edellisessä vaiheessa), ja (2) • ( 1 haluttu enamiini, joka uudelleenkiteytetään CHCl3/Et20-seoksesta; saanto 6,18 g; sp. 57-58 °C.

:.ί ·’ Esimerkki 162 30 Etyyliklooriformiaattia (4,01 g, 37,03 mmol) lisätään typpi-ilmakehässä tipoittain , liuokseen, jossa on esimerkin 161 enamiini (6,18 g, 24,69 mmol) ja DBN:ää (9,19 g, 74,04 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (100 ml) jäähdyttäen ulkoisesti jäähauteella. 1 ;·’ tunnin 0 °C:ssa sekoituksen jälkeen liuos saa seistä huoneenlämpötilassa yön yli.

: Etenemisen TLCillä tarkastuksen jälkeen lisätään lisää ClC02Et:ä (0,5 ml) ja 35 DBN:ää (3,0 ml) konversion ajamiseksi loppuun, ja liuos saa seistä 24 tuntia. Haihtuva aines haihdutetaan tyhjössä, viskoosi jäännös puhdistetaan lyhyellä kromato-giapylväällä (jonka päätarkoitus on poistaa huonommin liikkuva DBN), jolloin saa 38 103972 daan N-suojattu pyrroli, jota käytetään seuraavaan vaiheeseen puhdistamatta enempää.

Esimerkki 163 5 Liuokseen, jossa on esimerkin 162 N-suojattu pyrroli (7,8 g, 24,19 mmol) MeOH:ssa (100 ml), lisätään kiinteää Na2C03:a (6,41 g, 60,48 mmol), ja reaktiose-os sekoitetaan huoneenlämpötilassa 48 tuntia tulokseksi saadun suojauksenpoisto-käsitellyn pyrrolin erottuessa. Seos haihdutetaan kuiviin, ja jäännös trituroidaan läpikotaisin H^Oilla (50 ml) epäorgaanisten aineiden liuottamiseksi ja uutetaan 10 CHCl3.Ha (3 x 100 ml). Uute kuivataan (Na2S04) ja haihdutetaan, jolloin saadaan viskoosia kumia, joka puhdistetaan pylväskromatografialla käyttämällä silikagee-li/CHCl3:a; saanto 4 g; sp. 88-89 °C.

Esimerkki 164 15 Bentsoyyli-isotiosyanaattia (1,5 g, 8,96 mmol) lisätään tipoittain liuokseen, jossa on esimerkin 163 suojaamatonta pyrrolia (1,99 g, 7,95 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (50 ml). 1 tunnin kuluttua huoneenlämpötilassa liuos haihdutetaan, ja kumimainen jäännös liuotetaan Et20:hon (100 ml) kiteisen kiinteän aineen erottuessa lähes välittömästi. Et20-suodos kuumennetaan kiehumaan ja laimennetaan yhtäsuurella tila-20 vuudella lämmintä sykloheksaania. Jäähdytettiin hitaasti, jolloin saatiin lisää tio-ureidotuotetta; saanto 2,89 g (88 %); sp. 158-159°C.

• · * ♦ »

Esimerkki 165 • j ·

Metyylijodidia (1,7 g, 11,96 mmol) lisätään liuokseen, jossa on esimerkin 164 tio-25 ureidotuote (1,7 g, 4,1 mmol) ja DBN:ää (0,56 g, 4,52 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (80 ml) 0 °C:ssa. Liuosta sekoitetaan 0 °C:ssa 15 min ajan, ympäristön lämpötilassa • · · *·’ * 1 tunnin ajan, ja haihdutetaan sitten tyhjössä. Jäännöksen liuos CHCly.ssa kromato- grafoidaan silikageelipylväällä CHCl3:lla eluenttina, jolloin saadaan metyylitioväli- ·· · v : tuoteyhdisteen homogeenisia fraktioita.

30 , Esimerkki 166 • ·

Esimerkin 165 metyylitioyhdisteen (1,72 g, 4,02 mmol) liuosta 50 ml:ssa MeOH:ta, • l joka oli kyllästetty NH3:lla 0 °C:ssa, kuumennetaan 90-95 °C:ssa 24 tuntia lasilla < < v : vuoratussa ruostumattomasta teräksestä olevassa astiassa. Jäähdytetyn pommin sisäl- « ·« e 35 tö haihdutetaan tyhjössä, jolloin saadaan seos, jossa on yhdistettä (IVE), bentsami-dia ja sivutuotetta, joka on 2-metyylitiojohdannaista, vastakohtana 2-aminoyhdis-teelle (IVE). Seosta sekoitetaan kiivaasti useiden minuuttien ajan noin 75 ml:ssa 39 103972

Et20:ta, ja liukenematon valkoinen kiinteä aine suodatetaan pois ja pestään Et20:lla. Suodos sisälsi suurimman osan bentsamidi- ja 2-metyylitiokomponenteista. Et20:hon liukenemattoman kiinteän aineen (0,850 g) liuos MeOH:ssa haihdutetaan noin 10 g:n kanssa silikageeliä. Jauhettu jäännös levitetään tasaiseksi kerrokseksi si-5 likageelipylvään huipulle, ja sitten sitä eluoidaan CHCl3/MeOH/HOAc:lla (95:5:1), jolloin saadaan 2-metyylitiosivutuote ja haluttu 2-aminotuote (IVE). (IVE) uudel-leenkiteytetään uuttamalla kiehuvaan isopropyyliasetaattiin Soxhlet-laitteessa. Valkoiset kiteet kerätään kolmena satona ja kuivataan tyhjössä P205:llä 110 °C:ssa 7 tunnin ajan; saanto 54 %, sp. >300 °C hajoaa; 10

Alkuaineanalyysi Ci4H2oN40:lle:

Laskettu: C, 64,60; H, 7,74; N, 21,52.

Saatu: C, 64,78; H, 8,01; N, 21,61.

15 Esimerkki 167

Testataan esimerkin 166 yhdisteen entsyymi-inhibitioaktiivisuus kuten esimerkissä 105. Tasolla 1 mM fosfaattia IC50 on 0,030 μΜ, ja tasolla 50 mM fosfaattia IC5o on 0,840 μΜ.

20 Esimerkki 168 3-(l-norbomanyyli)propionitriili valmistetaan esimerkin 97 menettelytapaa käyttä-.···. mällä 97 1-brominorbomaanista ja 3-(2-norbomanyyli)propionitriili (2-ekso-ja 2- endo-seos) valmistetaan 2-brominorbomaanista. Propionitriilit muutetaan esimerk-' . kien 98-104 mukaisesti yhdisteiksi (IVF), IV(G) ja (IVH).

.·. : 25 ’· 1: Esimerkki 169 ·1·1 Käyttämällä esimerkin 97 menettelytapaa 3-(l-bisyklo[3.2.1]oktanyyli)propionitrii-li, 3-(2-bisyklo[3.2.l]oktanyyli)propionitriili, 3-(3-bisyklo[3.2.l]oktanyyli)propio- M» : nitriili ja 3-(8-bisyklo[3.2.1]oktanyyli)propionitriili valmistetaan vastaavasti 1-bro- ·,·1ί 30 mibisyklo[3.2.1]oktaanista, 2-bromibisyklo[3.2.1]oktaanista, 3-bromibisyklo[3.2.1]- . oktaanista ja 8-bromibisyklo[3.2.11oktaanista. Propionitriilit muutetaan esimerkkien • · « ,’2, 98-104 mukaisesti yhdisteeksi (IVL) ja sen sukuisiksi 2-bisyklo[3.2.1]oktanyyli-, 3- bisyklo[3.2. ljoktanyyli-ja 8-bisyklo[3.2.1 joktanyylijohdannaisiksi.

· · • t « • · · ; 35 Esimerkki 170 2 »1 Käyttämällä modifikaatiota menettelytavasta, joka kuvataan julkaisussa: D. Farca-siu; Synthesis, 615 (1972), 6-bisyklo[3.2.1]oktaanikarboksaldehydi valmistetaan 40 103972 saattamalla bisyklo[3.2.1]oktan-6-oni reagoimaan trimetyylisulfoksoniumjodidin kanssa, jolloin saadaan välituote-epoksidi, joka sitten muutetaan aldehydiksi boori-trifluoridieteraatilla käsittelemällä. NL-patenttijulkaisim 6610204 menettelytavan mukaisesti aldehydi kondensoidaan syaanietikkahapon kanssa refluksoimalla pyri-5 diini/tolueeni-liuoksessa katalyyttisen ammoniumasetaattimäärän kanssa 48-72 tunnin ajan, jolloin saadaan vastaava akrylonitriili. Sitten akrylonitriili hydrogenoidaan käyttämällä Pd/C-katalysaattoria metanoli, kuten kuvataan julkaisussa: Profitt, et ai.; J. Org. Chem. 40 (1975) 127, jolloin saadaan 3-(6-bisyklo[3.2.1]oktanyyli)propio-nitriili. Propionitriili muutetaan esimerkkien 98-104 mukaisesti yhdisteen (IVL) su-10 kuiseksi 6-bisyklo[3.2.1]oktanyylijohdannaiseksi.

Esimerkki 171

Esimerkin 97 menettelytapaa käyttämällä 3-(l-bisyklo[3.3.1]nonanyyli)propionitriili ja 3-(3-bisyklo[3.3. l]nonanyyli)propionitriili valmistetaan vastaavasti 1-bromibisyk-15 lo[3.3.1]nonaanista ja 3-bromibisyklo[3.3.1]nonaanista. Propionitriilit muutetaan esimerkkien 98-104 mukaisesti yhdisteeksi (IVM) ja sen sukuiseksi 3-bisyklo-[3.3. ljnonanyylijohdannaiseksi.

Esimerkki 172 20 Esimerkin 171 menettelytapaa käyttämällä bisyklo[3.3.1]nonaani-9-oni saatetaan . . reagoimaan vastaavan aldehydin muodostamiseksi, josta valmistetaan vastaava 3- substituoitu propionitriili, joka sitten muutetaan yhdisteen (IVM) sukuiseksi 9-bisyklo[3.3. ljnonanyylijohdannaiseksi.

• · · 25 Esimerkki 173 • · :.*·· Esimerkin 170 menettelytavan mukaisesti 2-bisyklo[3.3.1]nonaanikarboksaldehydi saatetaan reagoimaan muodostamaan vastaavan 3-substituoidun propionitriilin, joka sitten muutetaan yhdisteen (IVM) sukuiseksi 2-bisyklo[3.3.1]nonanyylijohdannai-seksi.

• « · 30

Esimerkki 174 ’ ·: · ’ Esimerkin 97 menettelytapaa käyttämällä 3 -(1 -noradamantyyli)propionitriili valmis- « «· :: tetaan 1-brominoradamantaanista, ja 3-(2-noradamantyyli)propionitriili valmistetaan 2-brominoradamantaanista. Propionitriili muutetaan esimerkkien 98-104 mukaisesti . · · ·. 35 lopputuoteyhdisteeksi (IVN).

41 103972

Esimerkki 175

Esimerkin 170 menettelytavan mukaisesti 3-noradamantaanikarboksaldehydi saatetaan reagoimaan muodostamaan vastaavan 3-substituoidun propionitriilin, joka sitten muutetaan yhdisteen (IVN) sukuiseksi 3-noradamantyylijohdannaiseksi.

5

Esimerkki 176

Esimerkin 170 menettelytavan mukaisesti noradamantaani-7-oni saatetaan reagoimaan muodostamaan vastaavan aldehydin, josta tehdään vastaava 3-substituoitu propionitriili, joka sitten muutetaan yhdisteen (IVN) sukuiseksi 7-noradamantyyli-10 johdannaiseksi.

Esimerkki 177

Esimerkin 97 menettelytapaa käyttämällä 3-(l-bisyklo[2.2.2]oktanyyli)propionitriili valmistetaan l-bromibisyklo[2.2.2]oktaanista ja 3-(2-bisyklo[2.2.2]oktanyyli)pro-15 pionitriili valmistetaan 2-bromibisyklo[2.2.2]oktaanista. Propionitriilit muutetaan esimerkkien 98-104 mukaisesti yhdisteeksi (IVK) ja sen sukuiseksi 2-bisyklo- [2.2.2]oktanyylijohdannaiseksi.

Esimerkki 178 20 Esimerkin 97 menettelytapaa käyttämällä valmistetaan 3-(l-norbomenyyli)propio- ... nitriili 1-brominorbomeenista. Propionitriili muutetaan esimerkkien 98-104 mukai- ;;; sesti yhdisteeksi (IVI).

• · * ' Esimerkki 179 ""· 25 Esimerkin 170 mukaisesti 5-norbomeeni-2-karboksaldehydi (2-endo- ja 2-ekso- « · seos) saatetaan reagoimaan muodostamaan vastaavan 3-substituoidun propionitrii-Iin, joka muutetaan sitten yhdisteeksi (IVJ).

Esimerkki 180 30

V * I-OH

: ci JL

. : ·. τ:ι C1 • · · 42 103972 Tässä esimerkissä valmistetaan yllä oleva välituoteyhdiste modifioimalla menetelmää, jonka on kuvannut: Schiemenz, G. P., Engelhard, H.; Chem. Ber. 95 (1962) 195.

5 Seosta, jossa on syaanietikkahappoa (25,38 g, 298,38 mmol), 2,3,5-trikloori-bentsaldehydiä (25,0 g, 119,35 mmol), ammoniumasetaattia (500 mg), tolueenia (120 ml) ja pyridiiniä (65 ml), kuumennetaan refluksoiden 16 tunnin ajan kolvissa, joka on varustettu Dean-Stark-loukulla ja kondensoijalla. Liuottimet haihdutetaan tyhjössä, jäännös uutetaan CHCl3:lla, joka pestään H20:lla, kuivataan (Na2S04) ja 10 haihdutetaan, jolloin saadaan raakatuote, joka puhdistetaan silikageelipylväskroma-tografialla käyttämällä eluenttina heksaani/EtOAc-seosta. Saanto 23,69 g (73 %); sp. 90-91 °C.

Esimerkki 181 15

-OH

0H

Cl

I · I

;;; Tässä esimerkissä valmistetaan yllä oleva välituoteyhdiste. Sekoitettuun seokseen, jossa on NaH:ta (1,56 g, 65,05 mmol) ja etyyliformiaattia (14,78 g, 199,51 mmol)

• I I

' 20 THF:ssä (100 ml) lisätään esimerkin 180 substituoitua pentaanidinitriiliä (10,17 g, : ' 37,17 mmol) huoneenlämpötilassa typpi-ilmakehässä, ja tulokseksi saatua reaktiose- • · \1·· osta sekoitetaan 24 tunnin ajan. Haihtuva aines haihdutetaan tyhjössä huoneenläm- v : pötilassa. Jäännökseen lisätään vettä (50 ml) 0-5 °C:ssa, ja liuoksen pH säädetään 20-% konsentroidulla HClillä (tilavuus/tilavuus) pH-arvoon 5-6. Raskas öljy uute-25 taan etyyliasetaattiin, pestään H20:lla (1 x 100 ml) ja kuivataan (MgS04). Etyyliase-taattikerros haihdutetaan, jolloin saadaan punaruskeaa öljyä (11,0 g), jota käytetään seuraavassa vaiheessa puhdistamatta enempää.

* · · • · · • ·

Ml • · · · 1 · 1 • · 1

Esimerkki 182 43 103972 ci I H ° ‘ OMe

Ci/^SvJ//NSn C1 \

CN

5 Tässä esimerkissä valmistetaan yllä oleva välituoteyhdiste. Glysiinimetyyliesteri-hydrokloridia (8,17 g, 65,06 mmol) ja natriumasetaattia (5,33 g, 65,06 mmol) lisätään liuokseen, jossa on esimerkin 181 raaka formyyliyhdiste (11,0 g) seoksessa, jossa on MeOHrta (80 ml) ja H20:ta (20 ml), ja tulokseksi saatua liuosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 22 tunnin ajan. Liuottimen huoneenlämpötilassa liuottamisen 10 jälkeen jäännös uutetaan etyyliasetaatilla. Pesty (H20) ja kuivattu (MgS04) orgaani nen kerros haihdutetaan, jolloin saadaan öljyä. Flash-kromatografoidaan (silikagee-li) käyttäen CHCl3:a eluenttina, jolloin saadaan puhdas haluttu enamiini cis/trans-isomeerien seoksena, joka uudelleenkiteytetään MeOH:sta, saanto 10,41 g (75 %), sp. 142-143 °C.

15

Esimerkki 183 • ci : : : T Et2oc 0

=:··ι JOI

: : : cr^ V-— V

• nh2

Cl I

:T: « · · • · « • I · 20 Tässä esimerkissä valmistetaan yllä oleva välituoteyhdiste. Esimerkin 182 enamiinin • · · liuos (10,0 g, 26,84 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (100 ml) jäähdytetään 0 °C:seen ja käsitellään l,5-diatsabisyklo[4,3,0]non-5-eenilla (10,53 g, 84,79 mmol) typpi-ilmakehässä, minkä jälkeen etyyliklooriformiaatilla (6,90 g, 63,57 mmol). Liuosta ;*·. sekoitetaan 0 °C:ssa 1 tuntija sitten huoneenlämpötilassa 48 tunnin ajan. Haihtuvat 25 aineet haihdutetaan tyhjössä, jolloin saadaan viskoosia tummaa kumia, joka puhdite-taan flash-kromatografialla silikageelillä käyttämällä CHCl3:a eluenttina. Kaikki 44 103972 haluttua N-suojattua pyrrolia sisältävät fraktiot yhdistetään ja haihdutetaan, jolloin saadaan vaahtomainen kevyt vaaleankeltainen materiaali, joka sekoitetaan MeOH.hon (100 ml), jolloin saadaan kiteinen materiaali, joka uudelleenkiteytetään CHCb/MeOHista, saanto 8,92 g (74,7 %), sp. 160-161 °C.

5

Esimerkki 184 JL N f

JuA

T ^nh2

Cl s» Tässä esimerkissä valmistetaan yllä oleva välituoteyhdiste. Esimerkin 183 N-10 suojatun pyrrolin (8,6 g, 19,34 mmol) suspensio MeOH:ssa (300 ml) käsitellään Na2C03:lla (5,12 g, 48,34 mmol), ja reaktioseosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 17 tunnin ajan suojauksenpoistokäsitellyn pyrrolin erottuessa ensimmäisen tunnin aikana. Kiinteä natriumkarbonaatti poistetaan suodattamalla ja pestään hyvin MeOHdla. Suodoksen tilavuus pienennetään 25 ml:aan ja pidetään jääkaapissa 1 15 tunnin ajan, jolloin saadaan 5,23 g kiteistä tuotetta. Emäliuoksen konsentroimisella edelleen saatiin vielä 0,14 g puhdasta tuotetta; kokonaissaanto 6,45 g (89,5 %), sp. 178-181°C.

Esimerkki 185 20 3·. 0^ ·.1 · NH—C—NHCOPh k I il : : : \ s

CN

: Tässä esimerkissä valmistetaan yllä oleva välituoteyhdiste. Esimerkin 184 pyrrolin (5,83 g, 15,64 mmol) suspensioon dikloorimetaanissa (100 ml) lisätään bentsoyyli- 25 isotiosyanaattia (2,88 g, 17,64 mmol) huoneenlämpötilassa typen alla. Reaktioseosta sekoitetaan 30 min ajan halutun tioureidoyhdisteen erottuessa. Siihen lisätään lisää * · · 45 103972 bentsoyyli-isotiosyanaattia (0,5 ml), ja sekoitetaan jälleen 30 min ajan. Liuotin haihdutetaan kuiviin, ja vaaleankeltainen jäännös trituroidaan metanolilla. Valkoinen kiteinen materiaali eristetään suodattamalla ja uudelleenkiteytetään klorofor-mi/eetteri-seoksesta, jolloin saadaan vaadittu tioureidoyhdiste analyyttisesti puhtaa-5 na näytteenä, saanto 7,71 g (92 %), sp. 210-211 °C.

Esimerkki 186

Cl

H II

\ Y

T ^NH=C—NHCOPh

Cl I II

V. SMe

CN

10 Tässä esimerkissä valmistetaan yllä oleva välituoteyhdiste. Esimerkin 185 tiourei-doyhdisteen (6,75 g, 12,6 mmol) ja l,5-diatsabisyklo[4,3,0]non-5-eenin (1,76 g, 14,20 mmol) liuos kuivassa CH2Cl2:ssa (200 ml) jäähdytetään 0 °C:seen ja käsitellään metyylijodidilla (5,20 g, 36,65 mmol). Reaktioseosta sekoitetaan 0 °C:ssa 10 15 min ajan ja sitten 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Liuotin haihdutetaan huoneenlämpötilassa, ja jäännös uutetaan CHCl3:lla, pestään H20:lla (2 x 50 ml), kuivataan (Na2S04) ja haihdutetaan, jolloin saadaan lasimaista vaahtoa (6,95 g), jota käytetään seuraavassa vaiheessa puhdistamatta enempää.

• · • · · · · • · • · · • · « • · · • · · lit 0 0 0 • 0 0 0 • 0 « • · 0 0 1

* · I

· · • · 0 0 0 0 • · · • · · * · · « · ·

Esimerkki 187 46 103972 »Λλ f'V\ λΛ/

H/ MeS I

Cl Cl

A B

5 Tässä esimerkissä valmistetaan yllä olevat yhdisteet A ja B. Yhdiste A on tämän keksinnön mukainen yhdiste, ja yhdiste B on välituote. Esimerkin 186 metyylitio-välituotteen (6,90 g, 12,54 mmol) liuosta MeOH:ssa (200 ml) kyllästetään 0 °C:ssa ammoniakilla ja kuumennetaan 100 °C:ssa 20 tunnin alan lasilla vuoratussa ruostumattomasta teräksestä olevassa astiassa. Reaktioseos saatetaan huoneenlämpötilaan, 10 ja liuotin haihdutetaan huoneenlämpötilassa. Raakaseos puhdistettiin flash-kroma-tografialla silikageelillä käyttämällä CHCl3:a eluenttina, jolloin saatiin 8B (1,1 g, '” 1 21 %), sp. 290-291 °C, sitten CHCl3/MeOH:lla (95:5) saatiin puhdas 8A (2,76 g, C: 57,5 %), sp. 284-285 °C.

• I « '!"! 15 Esimerkki 188

Testataan keksinnön esimerkin 187 mukaisen yhdisteen entsyymi-inhibitioaktiivi-·1:1: suus. Suoritetaan puriininukleosidifosforylaasi (PNP)-entsyymimääritys, jossa yh- disteellä (8A) havaitaan PNP-aktiivisuutta (IC50), joka määritetään radiokemiallisesti mittaamalla [14C]-hypoksantiinin muodostumisen [,4C]-inosiinista (katso Biomedi- • » · t 20 eine 33 (1980) 39) käyttäen entsyymilähteenä vasikan pernaa. Tasolla 1 mM fosfaattia IC50 on 0,64 μΜ ja tasolla 50 mM fosfaattia IC50 on 10 μΜ.

i « i • · · • · ·

• · · T

• · • · • • 4 · ♦ · 9 f · · « · · • · • · • · ·

Esimerkki 189 47 103972 .Aj hn \ h2n (oA" ci

IC

5 Esimerkeissä 180-187 kuvatulla menettelytavalla 3-(3-kloorifenyyli)-3-(2-amino-4-okso-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-7-yyli)propaaninitriili valmistetaan käyttämällä lähtöaineena 3-(3-kloorifenyyli)pentaanidinitriiliä, saanto 54,5 %, sp. 157-158 °C.

10 Esimerkki 190

Esimerkeissä 180-187 kuvatun menettelytavan mukaisesti valmistetaan myös seu-raavat yhdisteet (1-9).

.·. : h2n

Ar '* ’ 15 3-aryyli-3-(2-amino-4-okso-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]-pyrimidin-7-yyli)propaaninitriili • · « ♦ · • · t : Jossa Ar on kussakin tapauksessa seuraava: (1) fenyyli, 2,3-dikloorifenyyli, 3-me- m : tyylifenyyli ja 3-metoksifenyyli, (2) tienyyli (2- ja 3-), (3) furanyyli (2- ja 3-), (4) .···. 20 pyridinyyli (2-, 3-, ja 4-), (5) pyrrolyyli (2-ja 3-), (6) tiatsolyyli (2-, 4-, ja 5-), (7) 2- "·] pyratsinyyli, (8) pyridatsinyyli (3- ja 4-), ja (9) pyratsolyyli.

tl· • · * « • tl

Esimerkki 191

Esimerkeissä 180-187 esitetyn menettelytavan mukaisesti valmistetaan seuraavat 25 yhdisteet 10-14 ja 21 sopivasti substituoidusta pentaanidinitriilistä lähtien. Yhdisteet 48 103972 15-20 ja 22 valmistetaan vastaavista esimerkissä 190 mainituista tyydyttymättömistä Ar-analogeista. Tässä menettelytavassa tyydyttymättömän analogin nitriiliryhmä muutetaan ensin amidiryhmäksi happo- tai emäskatalysoidulla hydrolyysillä, sitten tyydyttymätön Ar-ryhmä muutetaan tyydyttyneeksi R2-ryhmäksi tunnetulla kata-5 lyyttisellä hydrogenoinnilla, minkä jälkeen amidi muutetaan jälleen takaisin nitrii-liksi tunnetuilla dehydratointimenetelmillä.

HN \

H2N

R ^ 10 3-(substituoitu)-3-(2-amino-4-okso-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-7-yyli)propaani-nitriili jossa R2 on kukin seuraavista: 10) 1-adamantyyli, 11) 2-adamantyyli, 12) syklohek-syyli, 13) sykloheptyyli, 14) syklopentyyli, 15) tetrahydrofuranyyli, 16) tetrahydro-15 tienyyli, 17) tetrahydropyranyyli, 18) pyratsolidinyyli, 19) tiatsolidinyyli, 20) pipe-ratsinyyli, 21) morfolinyyli ja 22) heksahydropyridatsinyyli.

; ; Esimerkki 192 4 · f :···· A*.

• /N

H2N I

:;Γ: [ϋι cn : 20 • · · • · · !!!f Tässä esimerkissä valmistetaan yllä oleva yhdiste, 3-(2-amino-4-okso-3H,5H- pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-7-yyli)-3-fenyylipropaaninitriili. Esimerkissä 187 saadun % I · v : yhdisteen A (2,0 g, 5,22 mmol) liuos lämpimässä etanolissa (250 ml) ja dime- 25 tyyliformamidissa (DMF) (150 ml) hydrogenoidaan 30-% Pd/C-katalysaattorilla (1,0 g) trietyyliamiinin (2,64 g, 5,0 ekvivalenttia) läsnä ollessa ilmakehän paineessa. 5 tunnin kuluttua reaktio on edennyt loppuun, ja katalysaattori suodatetaan pois N2- 49 103972 paineen alla. Suodoksen haihdutuksella saatu kiinteä aine trituroidaan ja sonikoi-daan H20:lla ja kuivataan, saanto 1,28 g (88 %), sp. 168-170 °C.

Esimerkki 193 5 Testataan esimerkissä 192 valmistetun yhdisteen entsyymi-inhibitioaktiivisuus kuten esimerkissä 188. Tasolla 1 mM fosfaattia IC50 on 0,023 μΜ ja tasolla 50 mM fosfaattia IC50 on 4,7 μΜ.

Esimerkki 194 10

/ N O

H2N II

Tässä esimerkissä valmistetaan yllä oleva yhdiste 3-(2-amino-4-okso-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-7-yyli)-3-fenyylipropaanihappo. Esimerkissä 192 saadun 15 yhdisteen (0,200 g, 0,72 mmol) liuosta 6N HCkssä (3,0 ml) kuumennetaan refluk-soiden 18 tunnin ajan. Liuotin haihdutetaan tyhjössä ja jäännös trituroidaan TkOilla ; \. (6 ml), säädetään emäksiseksi pH-arvoon 10 konsentroidulla ammoniumhydroksidil- la. Liukenematon materiaali kerätään suodattamalla ja suodoksen pH säädetään jäl-.\ : leen pH-arvoon 6,8. Saostunutta valkoista materiaalia kerätään talteen, pestään ve- 20 della ja kuivataan, saanto 0,19 g (89 %), sp. 290 °C hajoaa.

• ... Esimerkki 195 m m t ’; 1,' Testataan esimerkissä 194 valmistetun yhdisteen entsyymi-inhibitioaktiivisuus kuten • · · *·] 1 esimerkissä 188. Tasolla 1 mM fosfaattia IC50 on 0,012 μΜ ja tasolla 50 mM fos- : 25 faattia IC50 on 0,19 μΜ.

% 1 i » · • # • t · • t · t

• « I

• 1 · » 1 • 4 • · • ’ ·

Esimerkki 196 50 103972

'A'rA

HN ^ \

O

H2N II

5 Tässä esimerkissä valmistetaan yllä oleva yhdiste 3-(2-amino-4-okso-3H,5H-pyrro-lo[3,2-d]pyrimidin-7-yyli)-3-fenyylipropanamidi. Esimerkissä 192 saadun yhdisteen (0,200 g, 0,72 mmol) liuosta konsentroidussa F^SOxssä (0,5 ml) sekoitetaan huoneenlämpötilassa 20 tunnin ajan ja kaadetaan sitten jäämurskaan (5,0 g) ja säädetään sitten konsentroidulla NH4OH:lla pH-arvoon 6,8. Saostunut kiinteä aine otetaan 10 talteen, pestään H20:lla ja kuivataan, saanto 0,180 g, sp. 199-201 °C hajoaa.

Esimerkki 197

Testataan esimerkissä 196 valmistetun yhdisteen entsyymi-inhibitioaktiivisuus kuten esimerkissä 188. Tasolla 1 mM fosfaattia IC50 on 0,20 μΜ ja tasolla 50 mM fos-15 faattia IC50 on 6,6 μΜ.

• » • » · • t » • « !! Esimerkki 198 • · · • · Ί": o * &>.

h2n H

Oi * · # • * * • · · • M • · • · « * · • « · ;**; Tässä esimerkissä valmistetaan yllä oleva yhdiste 3-(2-amino-4-okso-3H,5H- pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-7-yyli)-3-fenyylipropaanihapon metyyliesteri. Tionyyliklo-ridia (0,2 g, 0,17 mmol) lisätään sekoitettuun metanoliin (4,0 ml) 0 °C:ssa. Lisätään

Ui

VM

51 103972 esimerkissä 194 saatu yhdiste (0,2 g, 0,67 mmol), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 18 tunnin ajan. Liuotin poistetaan vedenimulaitteella (30 °C) ja tyhjö-pumpulla (lyofilisoi), jolloin saadaan puolikiinteää massa, joka puhdistetaan silika-geelipylväällä käyttäen eluenttina CHCl3/MeOH:ta, saanto 0,1 g.

5

Esimerkki 199

Testataan esimerkissä 198 valmistetun yhdisteen entsyymi-inhibitioaktiivisuus. Havaitaan merkittävää aktiivisuutta (IC50).

10 Esimerkki 200 -ΛγΛ λΧ>

/ N I O

H,N II

Tässä esimerkissä valmistetaan 3-(2-amino-4-okso-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-15 7-yyli)-3-sykloheksyylipropaanihappo. Esimerkissä 194 saadun yhdisteen (83 mg, 0,28 mmol) liuos trifluorietikkahapossa (TFA) (15 ml) hydrogenoidaan Pt02:lla (83 mg) 414 kPa 24 tunnin ajan. Katalysaattori suodatetaan pois seliittikerroksen • · läpi ja suodos haihdutetaan 25 °C:ssa. Jäännös suspendoidaan H20:hon (8 ml), ja : säädetään konsentroidulla NH4OH:lla pH-arvoon 8,5 ja suodatetaan Whatman- 20 suodatinpaperin läpi ruskeanväristen epäpuhtauksien poistamiseksi. Väritön suodos ·*,*.: säädetään pH-arvoon 6,8, ja saostunut yhdiste suodatetaan, pestään H20:lla ja kui- vataan, saanto 65 mg (77 %), sp. >300 °C.

Esimerkki 201 . : ·. 25 Testataan esimerkissä 200 valmistetun yhdisteen entsyymi-inhibitioaktiivisuus kuten • · · esimerkissä 188. Tasolla 1 mM fosfaattia IC50 on 0,097 μΜ ja tasolla 50 mM fos-faattia IC50 on 1,0 μΜ.

•«· • · • « •««

Esimerkki 202 « · 1 .···. 30 Valmistetaan keksinnön mukainen yhdiste, jossa X on PO(OH)2. Esimerkin 192 yhdisteen nitriiliryhmä muutetaan vastaavaksi amidiksi käsittelemällä rikkihapolla. Hoffman-degradaatioreaktiota käyttämällä amidi muutetaan vastaavaksi amiiniksi, 52 103972 joka sitten muutetaan pyrilliumsuolaa käyttämällä vastaavaksi pyridiniumsuolaksi. Suola muutetaan natriumbromidia käyttämällä vastaavaksi halogenidiksi, joka sitten muutetaan fosfoniesteriksi trietyylifosfiittia käyttämällä. Esteri hydrolysoidaan tri-metyylisilyylibromidia käyttämällä, jolloin saadaan vastaava fosfonihappo, jossa "n" 5 on 1 ja "m" on 0.

Esimerkki 203 Tässä esimerkissä valmistetaan keksinnön mukainen yhdiste kohottamalla hiiliatomien lukumäärän "m" on 0:sta "m" on l:een. Esimerkin 192 yhdisteen nitriiliryhmä 10 pelkistetään vastaavaksi aldehydiksi, joka sitten muutetaan vastaavaksi alkoholiksi. Alkoholi muutetaan fosforitribromidia käyttämällä vastaavaksi alkyylibromidiksi, joka sitten muutetaan kaliumsyanidia käyttämällä keksinnön mukaiseksi nitriiliyh-disteeksi, jossa m on 1.

15 Esimerkki 204 Tässä esimerkissä valmistetaan keksinnön mukainen yhdiste, jossa "p" on 1 ja "Y" on happi. Edellisessä esimerkissä välituotteena valmistettu alkoholi muutetaan vastaavaksi dietyylifosfonometyylieetteriksi dietyylikloorimetyylifosfonaattia käyttämällä. Esterin etyyliryhmien poistaminen suoritetaan käyttämällä trimetyylisilyy-20 libromidia, jolloin saadaan fosfonihappo.

Esimerkki 205 Tässä esimerkissä valmistetaan keksinnön mukainen yhdiste, jossa "Y" on NH ja "X" on SO2NH2. Esimerkin 192 yhdisteen nitriiliryhmä pelkistetään amiiniksi käyt- : 25 tämällä katalyyttistä vakiohydrogenointia Pd:llä happamassa väliaineessa (tavalli- : sesti 0,01-1 N HC1), joka sitten muutetaan sulfamidiksi sulfamoyylikloridia käyttä- * · mällä.

• * ·

Esimerkki 206 ’;]/ 30 Tässä esimerkissä valmistetaan keksinnön mukainen yhdiste, jossa "X" on COOH ja • · · *·) * "Y" on NH, saattamalla edellisessä esimerkissä valmistetun metyyliamiinivälituot- : teen reagoimaan kloorietikkahapon kanssa.

r « f I f

Esimerkki 207 • · · 35 Tässä esimerkissä valmistetaan keksinnön mukainen yhdiste, jossa "X" on PO(OH)2 ··' ja "Y" on NH, saattamalla esimerkissä 206 valmistetun metyyliamiinivälituotteen 53 103972 reagoimaan dietyylikloorimetyylifosfonaatin kanssa ja saattamalla tulokseksi saatu tuote reagoimaan trimetyylisilyylibromidin kanssa.

Esimerkki 208 5 Tässä esimerkissä keksinnön mukainen yhdiste, jossa SO2NH2 ja "Y" on happi, valmistetaan saattamalla esimerkissä 203 valmistettu alkoholivälituote reagoimaan sulfamoyylikloridin kanssa.

Esimerkki 209 10 Tässä esimerkissä valmistetaan keksinnön mukainen yhdiste, R1 on H, R2 on fenyy-li, R3 ja R4 ovat vety, m on 0, n on 1, p on Oja X on CN. Käytetään modifikaatiota menetelmästä, jonka kuvataan julkaisussa: Mu-Ill Lim, et ai.; J. Org. Chem. voi. 44. No. 22, 3826 (1979). Esimerkin 184 yhdisteen ja dimetyyliformamididimetyyliase-taalin seos saatetaan reagoimaan huoneenlämpötilassa 2 päivän ajaksi ja haihdute-15 taan sitten kuiviin tyhjössä. Jäännös kiteytetään, jolloin saadaan puhdas N-(dimetyy-liamino)metyleenijohdannainen, joka syklisoidaan kylläisellä metanolisella ammoniakilla, jolloin saadaan haluttu lopputuote.

Esimerkki 210 20 Tässä esimerkissä valmistetaan keksinnön mukainen yhdiste, jossa R1 on OCH3, R2 on fenyyli, R3 ja R4 ovat vety, m on 0, n on 1, p on 0 ja X on CN. Esimerkin 187 yhdistettä B käyttämällä S-metyyliryhmä hapetetaan metyylisulfoniksi, joka sitten muutetaan metoksilopputuoteyhdisteeksi käsittelemällä natriummetoksidilla meta-nolissa.

25

Esimerkki 211 .·:] Tässä esimerkissä valmistetaan keksinnön mukainen yhdiste, jossa X on tetratsoli.

• · ·

Esimerkin 192 yhdiste käsitellään litiumatsidilla ammoniumkloridin läsnä ollessa katalysaattorina dimetyyliformamidissa (DMF) 100 °C:ssa, jolloin saadaan haluttu • * · "·* 30 tetratsoli.

• · * • « I I « 9 9 f Esimerkki 212

< i I

:‘: Tässä esimerkissä valmistetaan keksinnön mukainen yhdiste, jossa X on triatsoli.

Esimerkin 198 yhdiste käsitellään hydratsiinihydraatilla, jolloin saadaan vastaava • · t ’;" ’ 35 hydratsidi, joka sitten käsitellään iminoeetterillä, jolloin saadaan haluttu triatsoli.

• · 54 103972

Esimerkki 213

Testataan esimerkissä 189 valmistetun yhdisteen entsyymi-inhibitioaktiivisuus kuten esimerkissä 188. Tasolla 1 mM fosfaattia IC50 on 0,012 μΜ ja tasolla 50 mM fosfaattia IC50 on 2,0 μΜ.

5

Esimerkki 214 Tässä esimerkissä valmistetaan keksinnön mukainen amidiiniyhdiste, ts. jossa X mainitussa yleisessä kaavassa on CNHNH2. Yhdiste A esimerkistä 187 saatetaan reagoimaan natriummetoksidin kanssa metanolissa huoneenlämpötilassa noin 2 päi-10 vän ajaksi, jolloin saadaan metyyli-imidaattivälituote. Välituote saatetaan sitten reagoimaan ammoniakin kanssa metanolissa, jolloin saadaan amidiinituote.

* » ( • •lii * · • · • Φ · • · » • 9 • 1 «

• I I

• · · • · · • ·

• I I

· ·

• · I

• · I

« * m • 99

« » I

• I I

• « « • · • « · • I ·

Ml

Claims (4)

103972 Patenttivaatimus Menetelmä puriininukleosidifosforylaasi-inhibiittorina käyttökelpoisen substituoi-dun 2-amino-7-(R)-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-onin valmistamiseksi, jolla on kaava (II) 5 o \ (II) NH^ λ R^X jossa R^ on substituoitu tai substituoimaton fenyyli tai sykloheksyyli, ja 10 sivuketju X on CH2CN, CbbjCOR^, jossa R^ on OH, NH2 tai OC 1.4-alkyyli, tunnettu siitä, että valmistettaessa kaavan Π yhdistettä menetelmä käsittää vaiheet: a) saatetaan mahdollisesti substituoitu syklinen aldehydi reagoimaan syaanietikka- · ··. 15 hapon kanssa ammoniumasetaatin läsnä ollessa 3-substituoidun pentaanidinitriilin . · ·. valmistamiseksi, jolla on kaava • » « • · • · » • · · • · : : : \ cn • · r « • « · • ♦ * • · · 20 b) saatetaan 3-pentaanidinitriili reagoimaan alkyyliformaatin ja emäksen kanssa 2- ;. I.: formyyli-3 -substituoidun pentaanidinitriilin valmistamiseksi, jolla on kaava « * « a • · • « · 103972 α. CN c) saatetaan 2-formyyli-3-substituoitu-pentaanidinitriili reagoimaan glysiinime-tyyliesterihydrokloridin ja natrium- tai ammoniumasetaatin kanssa metyyli-N-[(3- 5 substituoitu-2,4-disyaani)-2-butenyyli]glysiinin valmistamiseksi, jolla on kaava rZv. J. ^CN X d) saatetaan metyyIi-N-[(3-substituoitu-2,4-disyaani)-2-butenyyli]glysiini reagoimaan alkyyliklorofonnaatin ja DBN:n tai DBU:n kanssa l-etyyli-2-metyyli-3- 10 amino-4-substituoitu-lH-pyrroli-l,2-dikarboksylaatin valmistamiseksi, jolla on kaava • · • · I Et2oc ·:··· nh, ··' £ • · • · « :.. k • · · \ ^CN » » » ( < t — 15 e) saatetaan l-etyyli-2-metyyli-3-amino-4-substituoitu-lH-pyrroli-l,2-dikarboksy-laatti reagoimaan emäksen kanssa metyyli-3-amino-4-substituoitu-lH-pyrroli-2- * * * '·’ * karboksylaatin valmistamiseksi, jolla on kaava • · 103972 AA nh2 f) saatetaan metyyli-3-amino-4-substituoitu-lH-pyrroli-2-karboksylaatti reagoimaan bentsoyyli-isotiosyanaatin kanssa N-bentsoyyli-N'-[2-metoksikarbonyyli-4-5 substituoitu-lH-pyrrol-3-yyli]tiourean valmistamiseksi, jolla on kaava NH-C-NHCOPh II \ 3 CN ... g) saatetaan N-bentsoyyli-N'-[2-metoksikarbonyyli-4-substituoitu-lH-pyrrol-3- ;;; 10 yylijtiourea reagoimaan alkyylihalogenidin kanssa N-bentsoyyli-N'-[2-metoksi- " karbonyyli-4-substituoitu-lH-pyrrol-3-yyli]-S-alkyylitiourean valmistamiseksi, '* * jolla on kaava • · : o ··=·'· AA r2 -U :.i: v n I I SMe x:n :,..: 15 h) saatetaan N-bentsoyyli-N'-[2-metoksikarbonyyli-4-substituoitu- lH-pyrrol-3-yy- li]-S-alkyylitiourea reagoimaan metanolisen tai etanolisen ammoniakin kanssa 3-substituoitu-3-[2-amino-4-okso-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-7-yyli]propaani-nitriilin ja 3-substituoitu-3-[2-metyylitio-4-okso-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin- 7-yyli]propaaninitriilin seoksen valmistamiseksi, jolla on kaava 103972 O II H O JL « L } Nfff N \ /^. \ / N \ X^/CN SC«3 V^CN R ja R2 ja valmistettaessa kaavan Π mukaista yhdistettä, jossa X on CH2COR5 ja R5 on 5 OH, hydrolysoidaan yhdiste, jossa X on CH2CN, hapon läsnäollessa, tai kun R5 on NH2, hydrolysoidaan osittain yhdiste, jossa X on CH2CN, hapon läsnäollessa; ja kun R5 on OCi-4-alkyyli, annetaan yhdisteen, jossa R5 on OH, reagoida tionyy-likloridin ja CM-alkanolin kanssa; 10 ja valmistettaessa kaavan Π mukaista yhdistettä, jossa R2 on sykloheksyyli, hydro-genoidaan R2:n fenyyliryhmä edelleen sykloheksyyliryhmäksi.

15 Förfarande för framställning av substituerad 2-amino-7-(R)-3H,5H-pyrrolo[3,2-d]-pyrimidin-4-on, som är tillämplig som purinnukleocidfosforylasinhibitor, enligt formel (II) « < o Il H • # · n ·. ·; hn \ Ntq \ • « o c \ « · * \ • \ »il X • · « / \ • · · / > v R2 X ' *’* 20 : i vilken , ·: , R2 är en substituerad eller osubstituerad fenyl eller cyklohexyl, och f.. sidokedjan X är CH2CN, C^COR^, i vilken är OH, NH2 eller OC 1.4-alkyl, kännetecknat av att vid framställning av föreningen enligt formel II omfattar för-25 farandet följande steg: 103972 a) den eventuellt substituerade cykliska aldehyden far reagera med cyanättikssyra i närvaro av ammoniumacetat för framställning av 3-substituerad pentandinitril en-ligt formeln

5 CN b) 3-pentandinitrilen far reagera med alkylformat och bas för framställning av 2-formyl-3-substituerad pentandinitril enligt formeln c» io CN c) den 2-formyl-3-substituerade pentandinitrilen far reagera med glycinmetyles-terhydroklorid och natrium- eller ammoniumacetat för framställning av metyl-N- : [(3-substituerad-2,4-dicyan)-2-butenyl]glycin enligt formeln f: * · • · · • «· p2 ··· K V /S. ·.· · CN : 15 • M III • · · r -·, d) metyl-N-[(3-substituerad-2,4-dicyan)-2-butenyl]glycin far reagera med alkyl- kloroformat och DBN eller DBU för framställning av l-etyl-2-metyl-3-amino-4-substituerad- lH-pyrrol-1,2-dikarboxylat enligt formeln 0'! 20 « I · « « • « « I · 103972 Et2OC , " nh2 \c» e) l-etyl-2-metyI-3-amino-4-substituerat-lH-pynOl-l,2-dikarboxylat fär reagera med bas för framställning av metyl-3-amino-4-substituerat-lH-pyrrol-2-karboxy- 5 lat enligt formeln TT 0 \\ // OMe r2 \-IJ nh2 • * t f) metyl-3-amino-4-substituerat-lH-pyrrol-2-karboxylat far reagera med bensoyl-10 isotiocyanat för framställning av N-bensoyl-N'-[2-metoxikarbonyl-4-substituerad- : lH-pyrrol-3-yl]tiourea enligt formeln ; *·.- ... NH-C-NHCOPh ! II \ s 15 g) N-bensoyl-N'-[2-metoxikarbonyl-4-substituerad-lH-pyrrol-3-yl]tiourea far rea- ,···, gera med alkylhalogenid för framställning av N-bensoyl-N'-[2-metoxikarbonyl-4- • « substituerad- lH-pyrrol-3-yl]-S-alkyltiourea enligt formeln 103972 N=C-NHCOPh •s. SMe T!N h) N-bensoyl-N'-[2-metoxikarbonyl-4-substituerad-lH-pyrrol-3-yl]-S-alkyltiourea far reagera med metanolisk eller etanolisk ammoniak för framställning av en 5 blandning av 3-substituerad-3-[2-amino-4-oxo-3H,5H-pyrrc>lo[3,2-d]pyrimidin-7-yl]propannitril och 3-substituerad-3-[2-metyltio-4-oxo-3H, 5H-pyrrolo[3,2-d]pyri-midin-7-yl]propannitril enligt foimeln ° O

1 H SCH* V^CN R och R2 io .···. och vid framställning av föreningen enligt formel II, i vilken X är CH^COR^ och . : ·, r5 är OH, hydrolyseras en förening i vilken X är CH2CN, i närvaro av en syra, f'"'. eller da R·5 är NH2, hydrolyseras delvis en förening, i vilken X är CH2CN, i när- . . varo av en syra; och da R^ är OCi_4-alkyl, far en förening i vilken R^ är OH rea- *;, / 15 gera med tionylklorid och Ci_4-alkanol; • · « • · I m och vid framställning av föreningen enligt formel II, i vilken R2 är cyklohexyl, • ·· _ v : hydrogeneras en fenylgrupp av R2 vidare tili en cyklohexylgrupp. » · · • 1 < • · · 20 » < « I < I • * ·