FI103258B - Menetelmä turpeesta johdettujen bioaktiivisten tuotteiden valmistamise ksi - Google Patents

Description

5 103258

Menetelmä turpeesta johdettujen bioaktiivisten tuotteiden valmistamiseksi - Förfarande för framställning av bioaktiva produkter härrörande frän torv

Esillä oleva keksintö kohdistuu ensisijaisesti turpeesta johdettujen bioaktiivisten tuotteiden valmistusmenetelmiin. Keksintö kohdistuu myös menetelmiin sanottuja turpeesta johdet-10 tuja bioaktiivisia tuotteita sisältävien farmaseuttisten ja/tai kosmeettisten formulointien tai koostumusten valmistamiseksi .

Turpeen uuttaminen erilaisilla menetelmillä käyttäen erilai-15 siä uuttamisvällaineita sekä tällaisten turpeesta johdettuja bioaktiivisia aineosia sisältävien uutteiden käyttäminen kosmeettisiin ja farmaseuttisiin tarkoituksiin on tunnettua.

Näitä tunnettuja menetelmiä selostetaan puolalaisessa patent-20 tijulkaisussa 124 110 (Chemical Abstracts 101(10), 78854e).

Tämän tekniikan tason mukaisella menetelmällä turpeesta johdettuja bioaktiivisia tuotteita saadaan ilmakuivatun raaka-turvemateriaalin primaarisella ja sekundaarisella aikaiisella hydrolyysillä, jota seuraa täten saadun hydrolysaatin hapot-25 taminen ja liukenemattomien kiinteiden osien erottaminen seu-raavalla toisella alkalisoinnilla, kirkkaan nestefaasin ha-pottaminen ja sorasubstanssien eliminointi alkoholi- ja eet-teriuuttamisen avulla. Mainitussa menetelmässä orgaanisesta uuttamisesta peräisin oleva vesifaasi on nestemäinen turpees-30 ta johdettu bioaktiivinen tuote.

t . Tunnettu nestemäinen tuote, joka on turpeesta johdettujen aktiivisten aineosien liuos erittäin konsentroituneessa lähes kyllästetyssä natriumkloridin vesiliuoksessa ja joka 35 saadaan edellä mainitun puolalaisen patenttijulkaisun mu- 2 103258 kaisesti, on epävakaata, kun sitä varastoidaan pitkä aika ja lisäksi se sisältää, mitä tulee koostumuksen biologiseen aktiivisuuteen, suuren ylimäärän neutraaleja ei-orgaanisia substansseja. Irtotavarana sitä on vaikeaa käsitellä, va-5 rastoida ja työstää.

Esillä olevan keksinnön pääkohteena on saada aikaan tuote, jossa ei ole näitä haittoja, so. tuote, joka on vakaata ja joka voidaan formuloida helposti farmaseuttisiksi ja eläin-10 lääkintätuotteiksi sekä joka voidaan sisällyttää joko kiinteässä tilassa tai minä tahansa sopivana liuoksena kosmeettisiin valmisteisiin.

Erityisesti turpeesta johdetun bioaktiivisen tuotteen käy-15 tön farmaseuttisiin tarkoituksiin suhteen, so. farmaseuttisten koostumusten valmistamiseen tarvitaan kovasti kiinteää muotoa, joka sopii tähän tarkoitukseen. Koska aikaisemmat yritykset, joissa on pyritty turpeesta johdettujen bioaktiivisten substanssien tunnettujen vesiliuosten kon-20 sentraatioon ja suolanpoistoon niistä, eivät ole tuottaneet positiivista tulosta johtuen aktiivisten aineosien okkluu-siosta kiteytyskiintofaasiin, mikä aiheuttaa koostumuksen biologisen aktiivisuuden vähenemisen, oli vaikeaa löytää sopiva menetelmä nestemäisen koostumuksen muuttamiseksi 25 jauhemuotoon.

Odottamatta havaittiin, että positiivinen tulos on saavutettavissa, jos nestemäinen koostumus ennen konsentrointia laimennetaan ensin useita kertoja, so. vesitilavuuksilla, 30 jotka ovat monta kertaa koostumuksen tilavuus.

: Näin ollen keksintö saa aikaan menetelmän, jolla turpeesta johdettu bioaktiivinen tuote, jolla on edellä olevat edulliset ominaispiirteet, on saatavissa erittäin konsentroi-35 dusta ei-orgaanisen suolan, erityisesti natriumkloridin, vesiliuoksesta, joka sisältää turpeesta johdettuja bioaktiivisia aineosia, laimentamalla kyseinen liuos vedellä, : josta on poistettu suola, esim. tislatulla vedellä, mitä seuraa käänteisosmoosi, konsentrointi ja selkeyttäminen.

3 103258 Täten saatu liuos voidaan muuttaa helposti steriloimalla ja spraykuivaamalla steriiliksi ja kiinteäksi tuotteeksi, joka sopii hyvin aiottuihin tarkoituksiin. Laimentaminen suoritetaan edullisesti veden määrillä, jotka ovat useita 5 kertoja, edullisesti 5-8 kertaa, laimennettavan konsentroidun liuoksen määrä.

Tämä menetelmä, jota käytetään puolalaisen patenttijulkaisun nro 124 110 mukaisesti saadun tuotteen käsittelemiseen, 10 koostuu jäljelle jääneiden orgaanisten liuottimien erottamisesta uuttamisen jälkeisestä vesifaasista, liukenemattomien osien erottamisesta suodattamalla lasketussa paineessa sintratun keraamisen materiaalin läpi, permeaatin laimentamisesta useita kertoja tislatun veden tilavuudella ja sen 15 alistamista suolanpoistoon käänteisosmoosilla ylimääräisten mineraalisuolojen, pääasiassa natriumkloridin, erottamiseksi permeaattina. Sitten liuos, josta suola on poistettu, konsentroidaan, selkiytetään sentrifuoimalla ja steriloidaan suodattamalla kalvosuodattimen, esim. Millipore (r)-20 suodattimen, läpi. Saatu mikrobiologisesti puhdas liuos voidaan optionaalisesti spraykuivata. Steriloitu tuote (neste tai kiintoaine) voidaan formuloida kosmeettiseksi tai eläinlääkekoostumukseksi. Konsentroitua ja selkiytettyä liuosta voidaan käyttää optionaalisesti steriloimatta ja 25 spraykuivaamatta minä tahansa sopivana laimennoksena komponenttina lukuisissa kosmeettisissa koostumuksissa.

Spraykuivausvaiheessa tulolämpötila asetetaan edullisesti noin 180 °C:een, kun taas ulosvirtauslämpötila asetetaan 30 noin 90 °C:een.

Vaikkakin esillä olevan keksinnön menetelmää selostetaan edellä yhdistettynä puolalaisen patenttijulkaisun nro 124 110 mukaiseen menetelmään, sen käyttö ei rajoitu tällaiseen 35 yhdistelmään, vaan se on käytettävissä yleisesti menetelmän yhteydessä, jossa saadaan turpeesta johdettua bioaktiivista tuotetta ei-orgaanisten suolojen, erityisesti natriumklori-din erittäin konsentroidusta vesiliuoksesta, joka sisältää turpeesta johdettuja bioaktiivisia aineosia.

103258 4

Sopivimmin esillä olevalla keksinnöllä aikaansaadut turpeesta johdetut bioaktiiviset tuotteet eivät sisällä yli 70 paino-%, edullisesti yli 60 paino-%, ei-orgaanisia suoloja, erityisesti natriumkloridia. Koska niin alhainen natriumkloridikonsen-5 traatio kuin mahdollista on haluttua optimaaliseen tuotteeseen, erityisesti farmaseuttisiin käyttöihin, ja sellaisiin kosmeettisiin käyttöihin, joissa tarvitaan suurempia kon-sentraatioita, so. kasvojen hoitoon, alhaisemmat natriumklo-ridikonsentraatiot, kuten 55 % tai jopa sen alle, ovat edul-10 lisimpia, erityisesti kun ne saadaan laimennus- ja käänteis-osmoosivaiheilla.

Jos menetelmä päätetään konsentrointi- ja selkiytysvaiheilla, tuote on konsentroitu (tai paksunnettu) liuos. "Konsentroitu turveuute" tässä selityksessä mainittuna, on tumman ruskea 15 neste, jonka tiheys on 1,02-10,9 g/ml ja sen kuiva-ainepitoisuus ei alita 5 paino-%. Kloridi-ionipitoisuus kuivissa kiintoaineissa NaCl-.na laskettuna ei ylitä 70 %, edullisesti 60 %, ja 1 % vesiliuoksen pH-arvo on 5,0-6,5, tavallisesti noin 6,0. Lisästerilointivaiheen puuttuminen ei ole vahingol-20 lista tietyissä tapauksissa, esim. kyseisen konsentroidun turve-uutteen tietyissä kosmeettisissa käytöissä.

Toisaalta sterilointivaihe on pakollinen, jos tuote on tarkoitettu farmaseuttisten koostumusten valmistamiseen. Erityisesti tällaisessa tapauksessa spraykuivauksen lisävaihe on 25 edullisin, joskaan ei pakollinen. Tällaisen spraykuivaus-vaiheen jälkeen saatu tuote on jauhemuodossa ja siten se sopii erityisesti tiettyjen farmaseuttisten koostumusten valmistamiseen. Edullisin tämän tyyppinen tuote on tuote, joka on kaupallistunut nimityksellä "TOLPA(R) Torf Preparation" 30 TOLPA(R):n ollessa Torf Corporation, ui. Mydlana 2, Wroclaw, Puola, rekisteröity tavaramerkki. Tässä selityksessä käytetään lyhennystä ΊΤΡ mainitun tuotteen kuvaamiseen.

Esillä oleva keksintö kohdistuu myös sellaisten farmaseuttisten koostumusten valmistusmenetelmiin, jotka sisältävät 35 aktiivisena aineosana turpeesta 5 103258 johdettua bioaktiivista tuotetta, joka on kuvattu edellä, erityisesti tuotetta, joka ei sisällä yli 70 painot» edullisesti yli 60 paino-%, ei-orgaanisia suoloja, erityisesti natriumkloridia, laskettuna kuivista kiintoaineista, 5 yhdessä farmaseuttisesti hyväksyttävän kantoaineen kanssa.

, Turpeesta johdettu bioaktiivinen tuote, joka on sisällytet ty tällaisiin farmaseuttisiin koostumuksiin, on edullisesti TTP, joka määriteltiin edellä. Farmaseuttinen valmiste sisältää turpeesta johdetun bioaktiivisen tuotteen ja farma-10 seuttisesti hyväksyttävän kantoainemateriaalin, edullisesti painosuhteessa noin 1:5-1,25 ja edullisimmin 1:9-1:19.

Esillä oleva keksintö kohdistuu lisäksi menetelmään turpeesta johdettua bioaktiivista tuotetta sisältävän geeli-15 muodossa olevan farmaseuttisen formuloinnin valmistamiseksi. Tälle menetelmälle on tunnusomaista, että steriiliin alkoholipitoiseen yrttiuutteeseen yhdistetään steriiliä glyserolia, aiemmin jauhemaiseksi tehdyn turpeesta johdetun bioaktiivisen tuotteen steriiliä, edullisesti konsentroi-20 tua, vesiliuosta ja steriiliä mentoliliuosta ja että saatuun seokseen yhdistetään asteittain kolloidista piidioksidia nestekoostumuksen muuttamiseksi geelimuotoon neste-seoksen painosuhteen piidioksidiin ollessa 90:10-94:6. TTP:tä käytetään edullisesti jauhemaisena tai konsentroitu-25 na turpeesta johdettuna bioaktiivisena tuotteena.

Esillä oleva keksintö kohdistuu myös menetelmään turpeesta johdettua bioaktiivista tuotetta sisältävän voiteen muodossa olevan farmaseuttisen formuloinnin valmistamiseksi. Täl-30 le menetelmälle on tunnusomaista, että steriiliin yrttiuutteeseen yhdistetään asteittain jauhemaiseksi tehdyn tur-: peesta johdetun bioaktiivisen tuotteen steriiliä liuosta, että saatu seos geeliytetään lisäämällä kolloidista piidioksidia ja että täten saatu geeli trituroidaan aiemmin 35 steriloidulla rasvakomponenttien, kuten euseriini ja vaseliini, seoksella, nestekomponenttien painosuhteen piidioksidiin ollessa noin 30:20 ja geelin rasvakoostumukseen . 32:68-34:66. Myös tällöin käytetään TTP:tä jauhemaisena tai 6 103258 konsentroituna turpeesta johdettuna bioaktiivisena tuotteena .

Kosmeettiset valmisteet, jotka voivat sisältää yrttiuuttei-5 ta sekä muita apu- ja rikastuskomponentteja, tuoksuaine-koostumuksia ja kantoainemateriaaleja, joita sallitaan kosmeettiseen käyttöön, sisältävät esillä olevan keksinnön mukaista turpeesta johdettua bioaktiivista tuotetta määränä 0,01-10 paino-?», edullisesti 0,05-1 ,00 paino-% ja edulli-10 simmin 0,05-0,10 paino-%.

Kantoainemateriaalit voivat olla alkoholien vesiliuoksia, kaiken tyyppisiä emulsioita, geelejä, vaahdotuskoostumuksia ja rasvakantoaineita. Edellä mainittujen substanssien ryh-15 mästä valitun yhden spesifisen kantoaineen käyttö sallii erityyppisten keksinnön mukaisten kosmeettisten valmisteiden formuloinnin, kuten päivittäiseen kehon hoitoon tarkoitetut kasvovedet, vaahdot, balsamit, puhdistusmaidot jne, sekä shampoot, hiusbalsamit, kylpyvaahtokoostumukset, joi-20 hin kaikkiin on lisätty turpeesta johdettuja bioaktiivisia tuotteita.

Turpeesta johdetut bioaktiiviset tuotteet (turveuutteet lyhennetyssä muodossa), joiden alkuperä juontaa raakatur-25 vemateriaalista, kuten (muun muassa) lääkemuta, sisältävät hyvin tasapainotettuina määrinä mineraali- ja orgaanisia yhdisteitä, kuten seuraavien alkuaineiden mineraalisuoloja: B, Si, Ab, Fe, Mg, Mn, Cu, Sn, Ni, Ca, Ag ja Na; orgaanisia yhdisteitä, kuten aminohappoja vapaassa muodossa ja 30 suoloina; polysakkarideja, osittain hajonneina/reagoineina hydrolyysin aikana desoksisakkarideiksi ja/tai aminosakka-: rideiksi. Turve, erityisesti lääkemuta, tunnetaan ja se tunnistetaan biologisen kasvi-ja mikro-organismialkuperän materiaaliksi; johtuen ravinnollisten ja stimuloivien kom-35 ponenttiensa pitoisuudesta, sillä on edullisia vaikutuksia ihmisiin ja nisäkkäisiin; siten turpeesta johdetut bioaktiiviset koostumukset sisältävät edellä mainittuja substansseja osuuksina, jotka ovat tunnusomaisia eläville organismeille; tämän katsotaan olevan turpeesta johdettuja 7 103258 aktiivisia tuotteita ja koostumuksia sisältävien kosmeettisten ja farmaseuttisten valmisteiden edullisten vaikutusten selitys. Uusien kosmeettisten koostumusten erityisen hyviä vaikutuksia havaitaan, kun formuloinnissa on myös 5 läsnä yrttiuutetta. Sopivan yrttiuutteen valinta perustuu tällaisten uutteiden tunnettuun tavanomaiseen käyttöön kosmetiikassa, mikä modifioi valmisteiden aktiivisuutta ja mahdollistaa siten kosmeettisten valmisteiden sisällön olevan yhteneväinen hoidettavien henkilöiden vaaatimusten ja 10 tarpeiden kanssa.

Esillä olevaa keksintöä luonnehditaan ja selitetään paremmin seuraavissa esimerkeissä.

15 Esimerkki 1

Aloittamalla 1 000 kg:11a ilmakuivattua raakaa turvemateri-aalia seuraten esim. puolalaisen patentin no 124110 mukaista menetelmää saatiin turpeesta johdettujen bioaktiivisten aineosien liuos natriumkloridin kyllästetyssä vesiliuokses-20 sa määränä noin 1 0 litraa. Liuos suodatettiin sintratun keraamisen suodattimen läpi lasketussa paineessa liuoksen kirkastamiseksi ennen sen suolanpoistoa. Täten saatu kirkas liuos sisältää noin 95 % NaCl kuivassa massassa. Kuiva massa muodostuu liuoksen noin 32 paino-?,. Tämä kirkkaan liuok-25 sen tilavuus on noin 7 litraa.

Kirkas liuos laimennetaan 5-8 kertaa tislatun veden tilavuudella ja se alistetaan laimennetussa muodossa suolan-poistovaiheeseen, joka suoritetaan käyttämällä käänteisos-30 moositekniikkaa käyttämällä DDS-laitetta. Suolanpoistoa suoritetaan 3-4 tuntia, jolloin mineraali suoloj en, pää-: asiassa NaCl:n, ylimäärä erotetaan permeaatin muodossa.

Koostumus, josta oli poistettu suola, sisälsi suunnilleen 65-70 % natriumkloridia kiintoaineissa. Täten saatu liuos, 35 6-7 tilavuuslitraa, konsentroitiin 4-5 kertaa Buechi-kier- tohaihduttimessa niin, että saatiin konsentroitu liuos, joka sisältää suunnnilleen 20 % kuivamassaa. Saatu konsent-. roitu liuos selkeytettiin käyttämällä Biofuga-Heraeus-sen- 8 103258 trifugilaitetta (virtausseparaattori) ja sitten se steriloitiin suodattamalla Millipore(R)-suodattimen läpi.

Saatu mikrobiologisesti puhdas liuos spraykuivattiin Anhy-5 dro-kuivaimessa ulostulovirtauksen ollessa asetettu 90 °C:ksi ja tulolämpötilan ollessa asettu 180 °C:een. Kuivatun jauheen saanto oli suunnilleen 200 g.

Esimerkki 2 10 Esimerkissä 1 saatua tuotetta käytettiin farmaseuttisten geeli- ja voidekoostumusten valmistamiseen, jotka sisältävät myös yrttiuutteita synergisesti, mikä parantaa terapeuttista vaikutusta joidenkin sairauksien suhteen. Säärihaavan vastainen geeli ja voide valmistettiin seuraavasti: 15 20 g hevoskastanjauutetta, 10 g kehäkukkauutetta, 60 g gly serolia, 0,1 TTP:tä, joka on saatu esimerkissä 1 kuvatusti jauheen muodossa, 0,1 g salisyylihappoa, 1 ,0 g tislattua vettä ja 8,8 g Aerosiliä(R) (kolloidinen piidioksidi) käytettiin valmisteen geelimuodon saamiseksi.

20

Nestemäiset (ei-haihtuvat) aineosat steriloitiin ennen käyttöä kuumentaen refluksoimalla kaksi tuntia. Yrttiuutteisiin yhdistettiin glyseroli ja TTP:n vesiliuos sekä mentoli ja piidioksidi lisättiin asteittain sekoittamalla jat-25 kuvasti.

Samalla tavoin voidekoostumuksen saamiseksi käytettiin seu-raavia aineosia: 22 g hevoskastanjauutetta, 10 g kehäkukkauutetta, 0,1 g salisyylihappoa, 0,1 g TTP:tä jauhemuo-30 dossa, joka saatiin esimerkissä 1 kuvatusti sekä 2,0 Aero-siliä(R).

«

Rasvakomponentteina käytettiin seuraavien substanssien seosta: 22 g euseriinia ja 45,8 g vaseliinia. Yrttiuutteet 35 steriloitiin kuumentamalla suunnilleen 2 tuntia refluksoi-den. Euseriini ja vaseliini steriloitiin samalla tavalla. Nestemäisiin aineosiin yhdistettin varovasti piidioksidi geelin saamiseksi, joka puolestaan trituroitiin steriloiduilla ja rasvakomponenteilla jäähdytettynä huoneenlämpö- 9 103258 tilaan. Saatiin stabiili voide, joka ei erottunut varastoitaessa.

Edellä saatua geeliä ja voidetta käytettiin samanaikaisesti 5 säärihaavan hoitoon. Haavoja käsiteltiin geelivalmisteella, kun taas ympäröivää vahingoittumatonta ihoa käsiteltiin voiteella. Kolloidisen piidioksidin lisäämisen uskotaan olevan vastuussa oikeasta kuivumisesta, kun taas yrttiaine-osien ja turpeesta johdettujen aineosien uskotaan olevan 10 vastuussa valmisteen parantavasta vaikutuksesta. Rasvakom-ponentit auttoivat pitämään ruven ja ihon elastisena. Saatuja tuloksia verrattiin verrokkipotilasryhmään, jota hoidettiin klassisella tavalla. Ne, jotka saivat uutta hoitoa, valittiin potilasryhmästä, joka oli kärsinyt sairaudesta 15 monta kuukautta (joskus vuosia) ilman huomattavissa olevia positiivisia vaikutuksia. Potilaissa, joita hoidettiin keksinnön mukaisilla koostumuksilla, esiintyi parempia tuloksia jo muutaman ensimmäisen viikon aikana kuin verrokkipo-tilaissa.

20

Esimerkki 3

Esimerkissä 1 saatuja tuotteita käytettiin tablettien tai kapseleihin sijoitettavien granuloiden muodossa olevien farmaseuttisten formulointien valmistamiseen.

25

Jauhemuodossa olevaan steriiliin turpeesta johdettuun bioaktiiviseen koostumukseen yhdistettiin kantoainetta paino-suhteessa 1:9. Kantoaineena käytettiin MYVATEx(R)TL:ää (Eastman-Kodakin kauppanimi), laktoosin ja liukastusainei-30 den seosta, painosuhteessa 44:1. 50 meshin partikkelikoon laktoosi ja MYVATEX(r)tl hienonnettiin hienoksi siten, että suunnilleen 70 % sen massasta kulki läpi 100 meshin seulan. Aktiivisen koostumuksen ja kantoaineen saadun seoksen osa formuloitiin tableteiksi, jotka sisältävät 5 mg aktiivisia 35 aineosia. Jokaisen tabletin kokonaismassa oli 50 mg. Aktiivisen koostumuksen ja kantoaineen saman seoksen toinen osa granuloitiin käyttämällä q.s. etanolia (40 tilavuus-%). Granulat seulottiin ja jauhettiin tarvittaessa ja niillä täytettiin kapselit sellaisessa määrässä, että jokainen ίο 103258 kapseli sisälsi 5 mg aktiivisia aineita, käyttämällä TTP:tä seoksena kantoaineen kanssa suhteessa 19:1.

Edellä saadut tabletit testattiin niiden keinotekoisessa 5 mahanesteessä 37 +/- 2 °C:ssa hajoamisajan mittaamiseksi käyttämällä Erweka-laitetta. Keinotekoinen mahaneste valmistettiin seuraavasti: 2,0 mg natriumkloridia ja 3,2 g pepsiiniä liuotettiin kloorivetyhappoon ja tislattua vettä lisättiin kokonaistilavuuteen 1000 ml. Saadun liuoksen pH-10 arvo oli suunnilleen 1,2. Halkaisijaltaan 5,1 mm suuruisen ja kokonaismassaltaan 0,0498 g olevan tabletin hajoamisaika oli 6 minuuttia.

Muut esimerkit kohdistuvat lukuisiin keksinnön mukaisiin 15 kosmeettisiin valmisteisiin, joilla on erilaisia komposi-tiomuotoja ja jotka on tehty eri tarkoituksiin ja jotka sisältävät turpeesta johdettujen bioaktiivisten aineiden edullisia lisäyksiä. Kuvataan muun muassa erilaisia kasvovesiä, balsameita, voiteita, maitoja, shampoita, vaahtokyl-20 pykoostumuksia jne.

Esimerkki 4:

Sekoittimella varustettuun reaktioastiaan panostettiin 150 mg kamomillauutetta, joka saatiin uuttamalla kamomillaku-25 kinto 1:1 etanoli:vesiliuoksella, sekä 1 g edellä kuvattua TTP:tä. Saatuun seokseen lisättiin 50 g glyserolia. Kolme substanssia sekoitettiin yhtenäisen seoksen saamiseksi. Seuraavaksi samaa reaktioastiaan vietiin toinen seos, joka oli formuloitu kuten aiemmin. Se käsitti 340 g 95:5 etano-30 li:vesiliuosta, 1 g salisyylihappoa ja 0,5 g mentolia. Nämä kaksi seosta yhdistettiin sekoittamalla yhtenäisen liuoksen saamiseksi. Seuraavaksi lisättiin 3 g tuoksuainekoostumsuta TILIANA H4308. TILIANA H4308 on Fabryka Syntetykow Zapacho-wych Pollena-Aroma:n (Syntetic Fragrance Works Pollena-Aro-35 ma), Varsova, Puola tuote. Sitten liuos saatettiin kokonaistilavuuteen 1000 ml lisäämällä 454,5 g tislattua vettä; sekoittamista jatkettiin, kunnes saatiin homogeeninen seos.

n 103258

Edellä olevassa menettelyssä käytettiin 86 %, mentolia ja vettä puolalaisen Pharmacopea FP IV:n mukaisesti ja etanolia konsentraatiossa 95 % Puolan teollisuusstandardin BN-75/6193-01 mukaisesti.

5 Käytetty konsentroitu turveuute oli tumman ruskea neste, jonka tiheys oli 1 ,020-1 ,090 g/ml ja kiintoainepitoisuus yli 5 %; 1 % vesiliuoksen pH-arvo oli 5,0-6,5. Kamomilla-uute oli punaruskea neste, jonka tiheys oli 0,9160-0,9503 10 g/ml ja etanolipitoisuus 52-56 tilavuus-%.

Edellä saatu kasvovesivalmiste sopii kaikille ihotyypeille. Se on kirkas neste, jossa ei ole mitään kiintoaineita. Sen väri on keltainen. pH-arvo on 4,28 ja etanolipitoisuus on 15 45,92 tilavuus-%. Kokonaishappamuus laskettuna salisyyli- happopitoisuutena oli yli 0,1 paino-%, nimittäin 0,23 paino-%. Valmiste ei menettänyt mitään edellä mainituista ominaispiirteistään varastoitaessa 12 kuukautta.

20 Esimerkki 5

Esimerkissä 4 kuvattu menetelmä toistettiin ainoan eron ollessa se, että kamomillauutteen ja TILIANA H4308-tuoksu-ainekoostumuksen asemasta käytettiin kehäkukkauutetta ja koostumusta FINUS H4625 (joka on myös Fabryka Syntetykow 25 Zapachowych Pollena-Aromajn tuote) samalla tavalla ja samoissa mooli- ja painosuhteissa. Saatu kasvovesivalmiste sopii kuivalle ja herkälle iholle. Se oli samaten kirkas neste, jossa ei ole mitään kiinteitä partikkeleita. pH-arvo oli 4,30, kokonaisetanolipitoisuus oli 45,82 tilavuus-% ja 30 kokonaishappamuus oli 0,27 paino-%. Varastoituna valmiste säilyi muuttumattomana 12 kuukautta, kuten esimerkin 4 mukaisesti saatu valmiste.

Esimerkki 6

35 Esimerkissä 4 kuvattu menetelmä toistettiin paitsi, että kamomillauutteen asemesta valittiin salvianlehtiuute ja LELIA 90368 (Pollena-Aroma, Varsova) valittiin TILIANA

t> H4308:n asemasta. Salvianlehtiuute saatiin uuttamalla kuivatut salvian lehdet etanolilla 50 °C:ssa ja sen väri oli ,2 103258 ruskea, sillä oli luonteenomainen salvian tuoksu ja sen tiheys oli 0,9503; se sisälsi 52-56 % etanolia. Saatu kas-vojenhoitoaine on erityisen sopiva rasvaiselle iholle. Se on kirkas ja homogeeninen neste, joka väri on tumman kel-5 täinen; pH-arvo, etanolipitoisuus ja happamuus oli verrattavissa esimerkin 4 mukaisen hoitoaineen kanssa.

Esimerkki 7

Seuraavan koostumuksen osoitettiin olevan erityisen tehokas 10 vältettäessä tai hoidettaessa hampaan nopeaa kiinnityska-toa: 24,0 g kamomillauutetta 3,0 g salvianlehtiuutetta 0,3 g salisyylihappoa 15 0,2 g mentolia

0,1 g TTP

100.0 g:aan saakka kaupallista geeliperustaa.

Esimerkki 8 20 Seuraavat huolellisesti punnitut komponentit vietiin reak-tioastiaan, jonka tilavuus 200 ml ja joka on varustettu mekaanisella sekoittimella: 270 g kamomillauutetta, joka on saatu uuttamalla kamomil-lakukintoa 50 % etanolilla; uute oli punaruskeaa nestettä, 25 jonka tiheys oli 0,9160-0,9503 g/ml ja etanolipitoisuus suunnilleen 55 tilavuus-%, i 50 g glyserolia, 86 % puolalaisen Pharmacopean FP IV mukaisesti , 30 g saponaria officinalis -uutetta, joka saatiin uuttamal-30 la saponaria officinaliksen juuria 70 % etanolissa; uute oli punaruskea neste, tiheys oli 0,9630-0,9810 g/ml ja etanolipitoisuus suunnilleen 75 tilavuus-%, • .

t 1.0 g keksinnöllistä konsentroitua turveuutetta, joka oli tumman ruskea neste, jonka tiheys on 1,02-1,09 g/ml, ei yli 35 2 % kloridi-ioneita laskettuna natriumkloridina; kuivien kiintoaineiden pitoisuus oli yli 5 %’, uutteen 1 % vesiliuoksen pH-arvo oli 6,0.

• » 13 103258

Edellä luetellut aineosat sekoitettiin kauttaaltaan. Aiemmin valmistettu liuos, jossa oli 1 g salisyylihappoa 260 g:ssa 95-%:ista etanolia, lisättiin siihen. Yhdistetty liuos, 383 g tislattua vettä ja 5 tuoksuainekoostumusta 5 TILIANA H4308 lisättiin ja sekoitettiin kunnes saatiin yhtenäinen liuos. Valmiste analysoitiin ja sitä varastoitiin tilavuudeltaan 200 ml vähittäismyyntipulloissa. Saatu valmiste oli sopivaa hiustenhoitovalmisteena. Se oli kirkas, hieman opaloitunut neste, joka sisälsi suunnilleen 45 tila-10 vuus-% etanolia: pH-arvo oli 4,5; kokonaishappamuus laskettuna salisyylihappona oli yli 0,1 %. Valmiste sopii vaaleille hiuksille. 12 kuukauden varastoinnin aikana valmiste pysyi piirteiltään muuttumattomana.

15 Esimerkki 9

Esimerkissä 8 kuvattu menetelmä toistettiin paitsi, että kamomillauutteen ja TILIANA H4308-koostumuksen asemasta käytettiin samassa jaksossa ja suhteessa: korteyrttiuutetta ja tuoksuainekoostumusta FINUS H4625. Korteyrttiuute oli 20 vihreän ruskea neste, jonka tiheys oli 0,9160-0,9503 g/ml ja etanolipitoisuus 55 tilavuus-%.

Saatu valmiste on erityisen sopivaa kaikentyyppisille hiuksille. Se oli kirkas ja läpikuultava neste, jossa ei ole 25 mitään kiinteitä osia, väriltään on keltaisen ruskea; pH-arvo, etanolipitoisuus ja kokonaishappamuus sekä stabiilius 12 kuukauden varastoinnin jälkeen olivat samat kuin esimerkin 6 mukaisessa valmisteessa.

30 Esimerkki 10

Esimerkissä 8 kuvattu menetelmä toistettiin vertailtavissa olevin tuloksin. Ainoa ero oli se, että kamomillauutteen ja TILIANA H4308-koostumuksen asemasta käytettiin samassa jaksossa ja suhteessa nokkosenlehtiuutetta ja tuoksuaine-35 koostumusta LELIA 90368 (saman Fabryka Syntetykow Zapacho-wych Pollena-Aroman tuote). Käytetty yrttiuute oli oliivin vihreää väriltään, sen tiheys oli 0,91 60-0,9503 g/ml ja etanolipitoisuus 55 tilavuus-%. Valmiste oli sopivaa kaikentyyppisille hiuksille.

14 103258

Esimerkki 11

Yleisesti kosmeettiset maidot ovat rasvasubstanssien dispersioita, jotka vaikuttavat sekä kemiallisesti että mekaanisesti ihoon. Itse asiassa johtuen antamisen sopivasta 5 tavasta ja paremmasta nesteen ja ihon vuorovaikutuksesta on hyvin tarkoituksen mukaista käyttää nestemäisiä, erityisemmin emulsiovoiteita. Ne voivat tunkeutua helposti ihon syvempiin kerroksiin ja estää siten iästä johtuvia ihonmuu-toksia. Kosmeettisia maitoja käytetään pääasiassa kuivan 10 ja herkän ihon puhdistamiseen. Näin ollen ne eivät saa sisältää mitään aggressiivisia haihtuvia öljyjä, kun taas ne sisältävät usein sopivia yrttiuutteita kuten kamomillauu-tetta tai vehnänalkiouutetta. Turpeesta johdettujen bioaktiivisten aineiden lisääminen tällaisiin koostumuksiin pa-15 rantaa lisäksi niiden positiivisia vaikutuksia. Uusi resepti on seuraava: TTP 0,05 g aaloeuute 20,00 g glyseroli 3,00 g 20 euseriini 2,00 g valkoinen parafiiniöljy 1,00 g trietyyliamiini 1,00 g

Aerosil(R) (kolloidinen piidioksidi) 4,00 g 25

Esimerkki 12

Parannetut virkistävät tulokset saatiin, kun TTP:tä ja huolellisesti valittuja rasvakantoaineita käytettiin klassisessa ravitsevassa ja virkistävässä voidekaavassa. TTP:tä 30 käytetään määränä 0,01-1,00 paino-% yhdistettynä yrttiuutteeseen (valinta riippuu ihon tyypistä, johon voide on tar-. koitettu), jota on määränä vähintään 0,05-1,00 paino-%, bakteerien vastaiseen aineeseen, jota on määränä 0,05-1,00 paino-%, synteettiseen tuoksuaineyhdisteeseen määränä 0,01-35 0,05 paino-% ja rasvahappokantoaineeseen, joka on vesiemul- sion muodossa, joka muodostaa 97,00-99,50 paino-% koko koostumuksesta. Rasvahappokoostumuksen täytyy olla hyvä aktiivisten aineiden kantoaine ja sopia hyvin iholle. Se on edullisesti emulsio (kaikki määrät paino-%:na), jossa ,5 103258 on 35-45 euseriiniä, 8-14 vaseliinia, 2,5-4 oliiviöljyä, 6-10 glyserolia ja 35-40 vettä. Edulliset yrttiuutteet ovat kehäkukan kukkauute, kamomillauutte, ajuruohouute ja niiden kaltaiset. Edulliset reseptit ovat seuraavat: 5 Euseriini 39,00 paino-osaa

Vaseliini 11,50 paino-osaa

Oliiviöljy 3,13 paino-osaa

Glyseroli 7,80 paino-osaa

Vesi 38,00 paino-osaa 10 NIPAGINA A (bakteerien vastainen valmiste) 0,40 paino-osaa TTP 0,05 paino-osaa

Kehäkukkauute 0,10 paino-osaa

Synteettinen tuoksuaine _0,02 paino-osaa 15 Kaikkiaan 100,000 paino-osaa

Euseriini 42,00 paino-osaa

Vaseliini 8,50 paino-osaa

Oliiviöljy 3,08 paino-osaa 20 Glyseroli 7,90 paino-osaa

Vesi 38,00 paino-osaa NIPAGINA A (bakteerien vastainen valmiste) 0,40 paino-osaa TTP 0,05 paino-osaa 25 Kamomillauute 0,02 paino-osaa . Synteettinen tuoksuaine _0,05 paino-osaa

Kaikkiaan 100,000 paino-osaa

Esimerkki 13 30 Partavesivalmiste sisältää TTPttä turveuutteena määränä 0,01-1 paino-?,, yrttiuutteita määränä 1-30 paino-X, glyse-; rolia määränä 1-8 paino-?,, salisyylihappoa ja mentolia vesi-alkoholiliuoksessa. Edulliset yrttiuutteet ovat: kamo-milla-, kehäkukka-, ajuruoho-, aaloeuute ja niiden kaltai-35 set edulliset yrttiuutteet. Glyserolin lisääminen on myös edullista johtuen sen vaikutuksesta ihon kimmoisuuteen. Se nopeuttaa valmisteen leviämistä kasvoille sekä sen tunkeu-. tumista ihon syvempiin kerroksiin tehostaen siten aktiivi- 16 103258 sen turvekoostumuksen ja yrttiuutteiden edullisia vaikutuksia. Edulliset reseptit ovat seuraavat: TTP 0,10 paino-osaa

Kamomillauute 15,00 paino-osaa 5 Glyseroli 5,00 paino-osaa

Mentoli 0,10 paino-osaa

Salisyylihappo 0,10 paino-osaa

Etanoli (kons. 95 %) 10,00 paino-osaa

Tuoksuainekoostumus 0,30 paino-osaa 10 Tislattu vesi ad 100,00 paino-osaa

Esimerkki 14

Valmistettiin shampookoostumus seuraavan reseptin mukaisesti: 15 Fullerin yrttiuute 15,00 g 7,50 paino-%

Nokkosenlehtiuute 20,00 g 10,00 paino-% GAMAL SBS-11 (pesuaine) 3,00 g 15,00 paino-% GAMAL NO-3 (pesuaine) 20,00 g 10,00 paino-%

Aseptina 0,40 g 0,20 paino-% 20 Etanoli 1,60 g 3,80 paino-% BRONOPOL (säilöntäaine) 0,04 g 0,02 paino-%

Natriumkloridi 6,00 g 3,00 paino-%

Vesi 106,96 g 53,48 paino-%

Kaikkiaan 200,00 g 100,00 paino-% 25 92 paino-osaan edellä olevaa shampookoostumusta lisättiin 8 paino-osaa TTP:tä 100 paino-osan keksinnön mukaista shampoota saamiseksi. Muita yrttiuutteita voidaan käyttää nok-kosenlehtiuutteen asemasta.

30

Esimerkki 15

Valmistettiin seuraava shampookoostumus:

Hevoskastanjauute 13,00 g

Kehäkukkauute 22,00 g 35 GAMAL SBS-11 30,00 g GAMAL NO-3 20,00 g

Aseptina 0,40 g

Etanoli 1,60 g BRONOPOL 0,04 g 17 103258

Natriumkloridi 6,00 g

Vesi 106,96 g

Kaikkiaan 200,00 g 5 95 paino-osaan edellä olevaa shampookoostumusta lisättiin 5 paino-osaa TTP:tä 100 paino-osan keksinnön mukaista shampoota saamiseksi.

Esimerkki 16 10 Hammastahna sisältää TTPitä konsentroituna turveuutteena määränä 0,01-0,10 paino-%, eteerisiä öljyjä tai niiden koostumuksia tai muita hedelmäesansseja määränä 1-10 paino-%, yrttiuutteita määränä 0,10-10 paino-% ja puhdistavia substansseja määränä 20-35 paino-% dispergoituna veteen 15 määränä 45-60 paino-% ja väriaineita ja valkaisukompo-nentteja määränä 1-2 paino-%.

Titaanidioksidia voidaan käyttää valkaisukomponenttina; TTP:tä itsessään voidaan käyttää bakteerien vastaisena 20 lisäaineena; salvianlehti-, kamomilla- tai kehäkukan kuk-kauutteita voidaan käyttää hyödyllisinä edullisina yrtti-uutteina. Edullinen resepti on seuraava:

Saostettu kalsiumkarbonaatti 150,00 g

Magnesiumkarbonaatti 60,00 g 25 Glyseroli 70,00 g

Yrttiuute 5,00 g TTP 0,50 g

Titaanidioksidi 10,00 g

Eteeriset öljyt (minttu- sitruu-30 na jne. esanssit) 5,00 g

Vesi 400,00 g . Väri hivenen

Esimerkki 17 35 Kylpysuolavalmiste: Menetelmän turpeesta johdetun bioaktiivisen tuotteen saamiseksi keksinnön mukaisesti kuluessa erityisesti muutettaessa nestemuoto jauhemuodoksi on suo-. lanpoistovaihe, jossa natriumkloridi erotetaan sivutuottee na. Sanotussa sivutuotteessa 95 % koostuu natriumkloridis- 18 103258 ta, muut erotetut mineraalisuolat ovat kalsiumsuoloja, mag-nesiumsuoloja, pääasiassa klorideja ja sulfaattjea; suolaiset tuotteet sisältävät myös joitakin orgaanisia turpeesta johdettuja alhaisen molekyylin yhdisteitä sulkeutuneina 5 näiden ei-orgaanisten suolojen kiteiseen rakenteeseen. Nämä orgaaniset yhdisteet ovat TTP:n komponentteja ja ne ovat muun muassa polysakkarideja, aminohappoja, fulvohappoja ja niiden kaltaisia. Näiden komponenttien läsnäolo suolaisissa sivutuotteissa on hyödyllistä, jos suolaa käytetään kylpy-10 suolana, koska ne voivat lisätä muita hyödyllisiä vaikutuksia kylpysuolan vakioaktiivisuuteen. Näin ollen tämä sivutuote testattiin kemiallisilta ja fysikaalisilta ominaisuuksiltaan Poznanin balneologisessa insituutissa Puolassa sen havaitsemiseksi, voidaanko sitä käyttää kosmeettisissa 15 kylvyissä. Koska instituutti ei löytänyt mitään ei-toivot-tua kokonaisuutta suolasta, se hyväksyttiin kosmeettiseen käyttöön. Edullinen resepti on seuraava:

Suola (NaCl), joka sisältää sulkeutunutta TTPrtä 97,00 g 20 Eteerinen mäntyöljy tai eteeristen öljyjen koostumus 3,00 g

Esimerkki 18

Uusi hiusbalsami sisältää TTP:tä määränä 0,01-1 paino-%, 25 yrttiuutteita määränä 0,01-10 paino-%, sähköisyyden esto-. , aineita määränä 3-4 paino-%, komponentteja, jotka estävät hiusten ja ihon liiallisen kuivamisen, määränä 2 paino-%:iin saakka, glyserolia määränä 1-5 paino-%, säilöntäainetta ja stabilointiaineita määränä 0,05-0,50 paino-% ja 30 vettä 100 paino-%:iin saakka.

Esillä oleva balsami sisältää sähköisyyttä estävänä ainee-na trimetyyliamiinin ja ammoniumkloridisuolan alkoholiliu-oksen, joka on saatu rasvaeläimestä johdetuista amiineista, 35 paksunnosaineena kosmeettisen alkoholin, joka toimii myös stabilointiaineena; hiusten ja ihon liiallista kuivumista estävänä aineena kasviöljyjä, jotka toimivat samanaikaisesti koemulgointiaineina; ja glyserolia balsamin, erityises-ti sen aktiivisten aineiden TTP:n ja yrttiuutteiden, leviä- is 103258 misen ja tunkeutumisen helpottamiseksi. Koska hapan ympäristö pysäyttää bakteerien kasvun, keksinnön mukainen balsami sisältää sitruunahappoa tai fumaarihappoa määränä 0,1 % sekä säilöntäainetta, joka tunnettaan BRONOPOLina, ja 5 tuoksuainekoostumuksia. Edullinen resepti on seuraava: Trimetyyliamiinin ja ammonium- kloridin alkoholiliuos 3-4 paino-%

Kosmeettiset alkoholit 3-4 paino-% TTP 0,01-10 paino-% 10 Paksunnetut yrttiuutteet 0,01-10 paino-%

Glyseroli 1,5 paino-%

Kasviöljyt 2 paino-% saakka

Sitruuna- tai fumaarihappo 0,1 paino-% BRONOPOL 0,1 paino-% 15 Tuoksuainekoostumus 0,3 paino-%

Tislattu vesi 1 00,00 paino-% saakka

Esimerkki 19

Kauneusnaamiot ovat hyvin tunnettuja kosmeettisia valmis-20 teitä, jotka käyvät moniin tarkoituksiin. Lääkemudalla on tunnettua hyödyllistä vaikutusta ihoon ja kehoon, uskottiin, että jälkiuuttoturvetta, joka on saatu menetelmässä bioaktiivisten turpeesta johdettujen koostumusten erottamiseksi turpeesta, voidaan käyttää kosmeettisiin sovellu-25 tuksiin. Jälkiuuttoturve sisältää aktiivisten kappaleiden , liuoksen vapautettuna alkalisessa hydrolyysimenetelmässä johtuen turpeen äärimmäisen suurista sorptio-ominaisuuksis-ta neutraloinnin jälkeen. Siten sen havaittiin olevan kau-neusnaamioiden arvokas komponentti. Jälkiuuttoturpeen ri-30 kastamiseksi useammalla arvokkaalla komponentilla lisättiin luonnollista lääkemutaa ja humushapon fraktioita, joita on läsnä luonnollisessa turpeessa ja ne erotettiin menetelmässä turpeesta johdettujen bioaktiivisten koostumusten saamiseksi alkalisesta hydrolysaatista. Tällainen koostumus 35 testattiin edellä mainitussa balneologisessa instituutissa ja sen havaittiin olevan sopivaa kosmeettiseen käyttöön. Edullinen resepti on seuraava: Jälkiuuttoturve 100,0 g

Luonnollinen lääkemuta tai turve 20,0 g 20 103258

Humushappofraktio 10,0 g

Magnesiumkarbonaatti 10,0 g

Sinkkioksidi 5,0 g

Sitruunahappo tai sen kaltainen 0,1 g 5 Yrttiuute tai jauhettu kasvimateriaali 5,0 g

Tislattu vesi q.s.

Seuraavat selonteot ja selitykset liittyvät esillä olevan 10 keksinnön mukaisten tuotteiden biologiseen aspektiin, so. näiden tuotteiden bioaktiivisiin piirteisiin ja yhteensopi-vaisuuteen, erityisesti ottaen huomioon niiden käyttö lääkeaineina. Jäljempänä käytetään seuraavia lyhennyksiä: 15 TTP TOLPA<r) -turvevalmiste (Torf Corporationin, Wroclaw, ui. Mydlana 2, Puola tavaramerkki) IFN Interferoni on olemassa kaikkialle levinneenä sytokii-ninä (kudoshormoni). IFN-geenejä on läsnä kaikissa soluis-20 sa. Proteiinit ja glykoproteiinit indusoivat pääasiassa IFNrää. Substansseja, jotka stimuloivat IFN-geenejä IFN:n tuotantoon, kutsutaan indusoijiksi. IFN-induktion prosessi on erittäin säädelty, sofistikoitunut biokemiallinen prosessi, negatiiviset ja positiiviset IFN-tuotantoa ohjaavat 25 säätelevät geenit on tunnistettu. Pieniä määriä IFNrää voi-. daan tuottaa spontaanisti ilman havaittavaa indusoi jaa.

Tällaisia iFNriää nimitetään joskus fysiologisiksi IFNrk-si". IFN on luonnossa kolmessa pääasiallisessa molekyyli-muodossa : 30 IFN-alfa (tai leukosyytti-IFN) IFN-β (tai fibroblasti-IFN), ja ; IFN-gamma (immuuni-IFN).

* »

IFN-alfa ja IFN-β ovat I-IFN:iä, IFN-gamma on tyyppiä II-35 IFN

IFN:ien pääasialliset biologiset aktiivisuudet ovat virusten vastaisia, antiproliferatiivisia (syövän vastainen) ja • · immunomoduloivia aktiivisuuksia.

21 103258

Erilaisia IFN-muotoja on tuotettu kaupallisesti luonnollisina ja yhdistelmävalmisteina ja niitä käytetään lääkkeinä neoplastisten, virus- tai useiden muiden sairauksien hoitoon.

5 CTL = sytotoksinen T-lymfosyytti NK-solut = luonnolliset tappajasolut 11-1, IL-2 = hyvin tunnetut interleukiinit, jotka stimuloi-10 vat T-solujen ja muiden imusolujen mukaan lukien B-solut proliferäätiota; RPMI 1640 = kudosviljelyväliaine ihmisen ja muiden leukosyyttien kasvattamiseksi (Roswell Park Memorial Instituten, Buffalo, lyhennys); 15 FCS = fetaalinen vasikan seerumi (leukosyyttien kanssa testaamisen osalta se on esitestattava, koska se voi sisältää mitogeenisiä substansseja, jotka jäljittelevät interleukii-nien toimintaa); EMCV = enkefalomyokardiittivirus, hiiren picorna-virus, 20 joka ei ole patogeeninen ihmiselle, sitä käytetään usein herätysviruksena IFN-biotesteissä; A-549 = ihmisen adenokarsinoomasolulinja, jota käytetään IFN-biotesteissä, koska sen herkkä IFN-alfalle, beetalle ja gammalle. WHO:n asiantuntijat suosittelevat IFN-standar-25 dissa linjaa tällaiseen käyttöön; ; MTT = 3[ 4,5-dimetyylitiatsol-2-yyli]-2,5-difenyylitetrat- soliumbromidi. Reagenssi, jota käytetään solukuoleman tai solukasvun mittaamiseen useissa biotesteissä, joissa käytetään ELISA-skannereita (Hansen et ai., J. Imrauno. Meth. 30 1989, 119, 203-219); L929 = hiiren solulinja, jota käytetään yleisesti hiiren . IFN:n ja ihmisen tai hiiren TNF:n testaamiseen; TNF kasvainnekroositekijä, sytokiini (suhteellisen pieni proteiini, erittäin altis proteolyyttisille entsyymeille), 35 jota monosyytit ja makrofagit tuottavat (TNF-alfa tunnetaan myös näivettymistekijänä, joka aiheuttaa ihmisten ja eläinten näivetystautia); tuotettu LPS:llä (lipopolysakkaridit), viruksilla, bakteereilla ja monilla muilla aineilla stimuloinnin jälkeen, 22 103258 hyvin toksisia monille virusten infektoimille ja neoplas-tisille soluille; voi toimia myös fibroblastien kasvutekijänä. Liittyy tulehdusreaktioihin. Sukulaismuotoa TNF-fi (lymfotoksiini) tuottavat pääasiassa T-solut ja jotkin muut 5 solut.

PBL - periferaaliset veren leukosyytit, normaalit ihmisen leukosyytit, jotka ovat peräisin terveistä verenluovuttajista, eristetty "läpitunkemattomista kalvoista" (punasolu-10 jen ja plasman välinen välivaihe). Yksittäisistä luovuttajista peräisin olevan PBL:n reaktiivisuus erilaisiin syto-kiini-indusoijiin näyttää riippuvan luovuttajan geneettisestä rakenteesta. Suuresti reagoivat ja reagoimattomat on identifioitu. Tämä tarkoittaa myös PBL;n reaktiota TTPihen. 1 5

Yksittäisen reaktion vaihtelu IFN:n tai TNF:n indusoijiin on enemmän näkyvissä käytettäessä heikkoja indusoijia kuin jos käytetään voimakkaita indusoijia kuten viruksia. Tämä johtuu siitä, että reaktio heikkoihin indusoijiin on "kaik-20 kea tai ei mitään" -tyyppiä, kun virukset lähes aina indusoivat havaittavia määriä sytokiinejä.

Toleranssi indusoijaan: Kutsutaan myös hyporeaktiiviseksi tilaksi. Esiintyy yksittäisen annoksen indusoijaa antamisen 25 jälkeen, esimerkiksi 20 h PBL:n altistamista indusoijalle . jälkeen (esimerkiksi virus); solut lopettavat IFN:n lisä- tuotannon. Hyporeaktiivisuustila kestää tavallisesti noin seitsemän päivää. Tällainen reaktiivisuus tekee voimakkaiden indusoijien terapeuttisen soveltamisen vaikeaksi ja/tai 30 tehottomaksi. Heikot IFN-indusoijat eivät indusoi hyporeak-tiivista tilaa tai toleranssi on pieni.

: Lukuisilla luonnonlääkkeillä, jotka on uutettu lääkekas veista, on immunomoduloivia ominaisuuksia. TTP näyttää ole-35 van yksi niistä. TTP muuttaa monia erilaisia immuunitoimin-toja in vitro ja in vivo. Se aloittaa tasapainotetun immuu-nistimuloinnin, jossa on kyky ei-spesifisesti aktivoida kaikki effektorireitit (CD4-auttaja, heikosti CD8-suppres- 23 103258 sori, CTL, NK-solu ja aktivoitu makrofagi) ilman sytotok-sisuutta normaaleille kudoksille.

TTP:llä on palauttava vaikutus normaalissa haavan paranta-5 misessa. Alhaiset annoksset TTP:tä stimuloivat heikosti IL-1- ja IL-2-tuotantoa. Suuret annokset voivat inhiboida sy-tokiinisynteesiä.

Vastaavat testit TTP:llä suoritettiin seuraavilla menetel-10 millä:

Terveistä verennluovuttajista peräisin oleva PBL puhdistettiin ammoniumkloridikäsittelyllä. Viljelyväliaine oli RPMI 1640 ynnä 10 % FCS. Suunnilleen 8 x 10 6 solua/ml viljel-15 tiin 20 tuntia 37 °C:ssa, 5 % CO2. Interferonin viruksen vastainen aktiivisuus testattiin EMCV-sytopaattisella vai-kutusinhiboinnilla ihmisen A549-soluissa. Solukuoleman mit-tamiseen käytettiin myös MTT-menetelmää.

20 TNF-aktiivisuus mitattiin 11929-soluissa. IFN-tyypin määrittämiseksi yksittäisiä IFN-näytteitä käsiteltiin erilaisilla anti-IFN-seerumeilla 1 tunti. Niiden viruksen vastaisia aktiivisuuksia verrattiin käsittelemättömiin valmisteisiin.

25 Testit osoittavat, että TTP stimuloi endogeenisten inter-feronien (IFN) ja kasvainnekroositekijän (TNF) tuotantoa. Vaste on annokseen liittyvä.

Seitsemässä testatussa kaupallissa TTP-erässä oli verrat-30 tavissa olevaa biologista aktiivisuutta immunostimulanttina ja sytokiini-indusoijina.

Yksittäisten verenluovuttajien leukosyyttien TTP-vasteessa havaittiin huomattavaa vaihtelua. Useiden luovuttajien 35 PBL:n havaittiin olevan reagoimaton. Tämä voi heijastaa geneettistä taustaa. Käytettiin voimakkaita polyklonaalisia antiseerumeita, kuten anti-IFN-alfaa (Cantell), anti-IFN-·' alfa-ly:tä (Namalwa) K. Fantesilta ja anti-IFN-gamma (Can- 24 1 0 3 2 5 8 teli) viruksen vastaisen aktiivisuuden neutraloimiseksi PBL:n supernatanteissa, joita oli käsitelty 20 h TTPtllä.

Neutralointitestien tulosten havaittiin muistuttavan yksit-5 täisen verenluovuttajien sormen jälkiä. Toisin sanoen yksilöiden tuottamien IFN-tyyppien osuudet vaihtelivat merkittävästi. PBL:n erottaminen kiinnikasvettuneisiin ja kiinnikasvettumattomiin fraktioihin voi vahvistaa indusoitua sytokiinisynteesiä.

10

Hyporeaktiivisuus (toleranssi) IFN:n induktioon NDV:llä, joka havaittiin 20 h PBL:n TTP:llä aloitusstimuloinnin jälkeen, oli joko minimaalinen tai se puuttui.

15 Kaikkien seitsemän TTP:n erän, jotka testattiin ihmisen PBLrssä IFN- ja TNF-indusoijan, havaittiin olevan aktiivista indusoitaessa IFN:ää ja/tai TNF:ää. TTP:n optimaalinen konsentraatio IFN-induktioon oli 30-100 pg/ml ja TNF-induk-tioon 100-200 yg/ml. 200 pg/ml:n annos voi olla subtoksista 20 PBL:lle mutta TNF:n synteesi esiintyy nopeammin kuin IFN:n ja nopeammin kuin kohtalaisen sytotoksisuuden kehittyminen.

Johtopäätös edellä olevasta on kokemus, että aktiivinen periaate TTP-lääkeaineissa on immunoreakti ivien fraktio 25 uutteesta, joka on turpeesta, joka sisältää orgaanisia, , ensisijaisesti sitoutuneita sokereita, aminohappoja, uroni- happoja, humushapposubstansseja ja mineraalisuoloja mukaan lukien hivenaineet. ld50 on eläimissä >2400 mg/kg per os.

30 TTP:ssä ei havaittu mitään mutageenistä, genotoksista, em-bryotoksista teratogeenistä tai karsinogeenistä aktiivi-. suutta. TTP:ssä ei ole mitään allergeenistä ominaisuuksia eikä siinä ole paikallisesti ärsyttävää aktiivisuutta.

35 Terapeuttiset indikaatiot sisältävät krooniset ja uusiutuvat hengitystietulehdukset ja säärihaavat, emätinsieretty-mähoidon täydentämisen ja hampaanympäryskudossairaudet.

25 1 0 3 2 5 8

On kliinisiä havaintoja, jotka johdattavat mieleen, että TTP:tä voidaan käyttää immunomodulaattorina tuettaessa useiden neoplastisten sairauksien hoitoa. TTPrtä käytetään oraalisesti (5 mg tabletit) tai tooppisesti.

5

Erityistä relevanssia ja tärkeyttä näyttää olevan asiassa, että TTP:llä 20 h 37 °C:ssa käsitelty PBL ei kehitä hypo-reaktiivista tilaa, koska ne säilyttävät kyvyn tuottaa IFN:ää NVD:llä (Newcastle Disease Virus), joka on hyvin 10 voimakas IFN-indusoija, indusoinnin jälkeen.

Oheiset taulukot 1-24 kohdistuvat erilaisiin biologisiin, esimerkiksi toksikologisiin, hematologisiin ja immunologisiin testeihin. Nämä taulukot näyttävät olevan itsensä se-15 littäviä ja antavat biologille TTP:n yhteensopivuuteen ja biologiseen aktiivisuuteen liittyvää tietoa.

On arvokasta huomata, että lääkeaineissa olevien aktiivisten aineosien konsentraatio, joka on osoitettu patenttivaa-20 timuksessa 13, on suurempi kuin kosmeettisissa koostumuksissa (osoitettu patenttivaatimuksessa 14) seuraavista syistä johtuen.

Lääkeaineet valmistetaan yksikköannoksissa, jolloin aktii-25 visten aineosien pitoisuus on tiukassa kontrollissa; esi-. . merkiksi tableteissa konsentraatio on sovitettu aktiivisen aineosan tehokkaan päiväannoksen (tai sen osan) sisältävän tabletin kokoon.

30 Aktiivisen aineosan, esimerkiksi TTP:n, konsentraatio gra-nuloissa, joilla kapselit on täytetty, on edullisesti vain . 5 paino-% riittävän tablettikoon saavuttamiseksi ja kapse- lointikoneen tarkoituksen mukaisen toiminnan sallimiseksi.

35 Toinen syy on se, että useimmat lääkeaineet annetaan oraalisesti ja aktiivinen aine leviää koko kehoon. Vaikka se saavuttaa ihosolut hyvin alhaisessa konsentraatiossa, terapeuttinen vaikutus on huomattava.

26 103258

Lisäksi kosmeettisia koostumuksia käytetään päinvastoin kuin lääkeaineita verraten säätelemättöminä määrinä paikallisesti erilaisiin soluihin tunkeutumismäärän ollessa erilainen.

5

Joillakin koostumuksilla, kuten shampoolla, joka pestään lähes heti pois, on lyhyet kosketusajat kehon tai ihon kanssa ja ne voivat sisältää suhteellisesti enemmän hyödyllistä komponenttia; muita käytetään useita kertoja päivässä 10 ja siten niissä tulee olla aktiivisen aineen pienempi pitoisuus .

Lisäksi suun limakalvoon kosketuksissa olevan hammastahnan tapauksessa aktiivisen aineen tunkeutuminen on helpompaa 15 kuin ihon läpi ja aktiivisen aineen konsentraatio voi olla alhainen.

Taulukko 1

Akuutti toksisuus. Oraalisesti annetun TTP:n vaikutus kanien veren bio-20 kemiallisiin parametreihin

Suku- Annos Testaus- Tutkitut parametrit puoli ΊΤΡ päivä Kreatiniini Kokonais- gamma-globu- g/kg (mg-%) proteiini liini 25 _(g/1) (g-%) 0,0 0 1,09*0,03 65,0±3,49 0,53*0,00 7 1,03±0,02 62,0±0,33 0,56*0,01

Naaras 2,0 0 1,06*0,01 58,0*1,46 0,50±0,02 30 7 1,14±0,38 57,8±1,54 0,54*0,01 5,0 0 0,96*0,12 70,3*3,52 0,55*0,00 _7_0,94*0,13 60,0*2,34 0,57*0,00 0,0 0 0,80*0,11 73,8*3,23 0,72*0,06 35 7 0,82*0,13 75,3*1,02 0,79*0,03

Uros 2,0 0 0,88*0,05 64,6*2,86 0,62*0,10 7 1,24*0,34 64,6*2,03 0,67*0,07 ·! 40 5,0 0 0,85*0,03 58,5*3,19 0,57*0,02 _7_1 ,04*0,12 57,6*4,68 0,56*0,01 45 50 27 103258

Taulukko 2

Akuutti toksisuus. Oraalisesti annetun ΊΊΡίη vaikutus kanien seerumissa olevien transaminaasien aktiivisuuteen 5 Suku- Annos Testaus- Tutkitut parametrit puoli ΤΊ5? päivä Alaniini Asparagiini- g/kg aminotransferääsi aminotransf erääsi _IU_IU_ 0,0 0 8,67±1,20 22,33±2,60 10 7 9,67*0,33 28,67±3,75

Naaras 2,0 0 10,33*1,76 18,33±4,09 7 12,33*3,52 20,00±5,03 15 5,0 0 11,33±1,66 22,33±3,52 _7_11,00*3,05_20,67*4,66 0,0 0 10,33*1,76 23,00±3,05 7 12,00*2,64 25,67*4,17 20 Uros 2,0 0 9,00*1,00 18,00±1,52 7 9,00*0,57 20,66*3,52 5,0 0 8,00*1,00 18,00*1,00 _7_11,33*1,66_23,00*1 ,99 25

Taulukko 3

Akuutti toksisuus. Oraalisesti annetun TTP:n vaikutus kanien hematologisiin parametreihin 30 Suku- Annos Testaus- Tutkitut parametrit puoli TTP päivä Hemoglo- Hemato- Leuko- Erytro- g/kg biini kriitti syytit syytit _(mg-%)_(%) x 10-3 x 1Q-6 0,0 0 12,4*0,44 38,3*1,85 7,32*0,43 5,21*0,20 35 7 11,8*0,63 37,7*1,20 6,30*0,66 5,11*0,11

Naaras 2,0 0 11,5*0,31 36,7*0,88 5,69*0,58 5,86*0,55 7 12,3*0,48 38,3*0,66 5,74*0,76 5,69*0,11 • ' 40 5,0 0 12,3*0,14 40,7*2,6 7,35*0,99 5,42*0,20 _7 11,6*0.23 37,3*0,33 8,55*1 ,79 5,08*0,19 0,0 0 12,0*0,85 37,3*1,20 11,10*0,634,53*0,23 7 11,09*0,6137,5*1,85 10,80*0,944,54*0,19 45 Uros 2,0 0 12,8*0,26 43,7*4,80 9,94*2,00 4,46*0,65 7 11,8*0,38 34,7*2,02 11,06*1,08 5,37*0,56 : 5,0 0 12,7*0,63 38,7*2,40 9,52*1,36 4,59*0,16 _7 10,6*1,04 4,0*2,08 8,87*1 ,73 5.72*0,66 50 55 28 103258

Taulukko 4

Krooninen toksisuus. Oraalisesti annetun TIP:n vaikutus kanin elimien massaan 5 TIP:n annos (mg/kg) 0,0 50 150 0,0 50 150

Sukupuoli Naaras Uros

Elin Elimen massa prosentteina kokonaismassasta 10 Keuhko 0,72*0,08 0,61*0,17 0,67*0,? 0,56±0,05 0,54*0,09 0,71*0,14

Sydän 0,23*0,01 0,22*0,02 0,25*0,03 0,24±0,02 0,23*0,01 0,23*0,02

Perna 0,057*0,01 0,051*0,00 0,079±0,02 0,05*0,01 0,06±0,01 0,04*0,01

Maksa 2,85±0,15 3,02*0,08 3,22*0,37 2,82*0,09 2,77*0,28 3,12*0,06

Munu- 15 ainen 0,59±0,03 0,52*0,02 0,50*0,01 0,48*0,03 0,55*0,01 0,49*0,03

Adrenal, rauhanen 0,016*0,01 0,015*0,01 0,020*0,01 0,013*0,01 0,013*0,02 0,012*0,0 20 Mura-sarjat ja kohtu 0,58*0,04 0,39*0,02 0,60*0,04

Kivek- 25 set 0,30*0,01 0,32*0,03 0,36*0,02

Taulukko 5

Krooninen toksisuus. Oraalisesti annetun 1TP:n vaikutus kanien hematologisiin parametreihin 30

Suku- Annos Testaus- Tutkitut parametrit puoli TCP päivä Hemoglo- Hemato- Leuko- Erytro- g/kg biini kriitti syytit syytit _(mg-%)_(%) x 10-3 χ 10~6 35 Uros 0,0 0 12,2*0,05 38,2*1,71 9,33*0,79 5,10*0,56 7 12,3*0,15 40,7*0,33 9,39*1,18 6,34*0,23 6 3,0*0,35 41 ,7*1 ,30 9,58*1,12 7,32*0,70 12 13,5*0,19 40,7*0,67 11,23*1,106,30*0,46 40 Uros 50 0 12,9*0,55 35,7*1,82 7,52*0,78 5,14*0,47 3 - 6 13,3*0,35 41 ,0*2,10 8,08*1 ,17 6,38*0,11 12 13,7*0,11 39,3*0,94 9,36*1 ,01 6,19*0,19 45 Uros 150 0 14,20*0,21 36,7*1 ,81 8,19*0,16 5,34*0,16 3 11,05*0,2638,5*1,53 8,83*0,78 5,68*0,40 6 12,40*0,6337,3*1,45 8,18*0,06 6,84*0,10 ; _12 13,70*0,32 39,0*0,68 8,24*0,04 6,54*0,54

Naaras 0,0 0 12,6*0,27 40,2*0,83 7,07*1,16 5,63*0,17 50 3 12,1*0,23 39,8*0,72 8,16*1,01 5,74*0,12 6 12,4*0,86 42,3*1,20 9,78*1,69 5,86*0,24 12 12,5*0,87 37,7*2,18 10,90*2,16 4,60*0,29

Naaras 50 0 13,2*1,20 35,0*1,70 7,44*0,98 5,47*0,50 55 3 - 5 13,0*0,55 39,3*1,20 7,25*0,98 5,47*0,60 12 12,8*0,21 37,7*4,33 9,31*0,35 6,02*0,32 29 103258

Naaras 150 O 15,2±1,15 38,3±1,40 8,50±0,54 6,09±0,08 3 13,01±1,10 47,0±2,80 8,10±0,76 5,85±0,57 6 12,5±0,82 41,0±1,15 6,85±0,31 5,61±0,30 _12 13,1 ±0,70 41 ,0±1 ,00 8,15±1,68 5,92±0,13 5

Taulukko 6 TEP:n vaikutus kanien perifeerisessä veressä olevien neutrofiilien fago-syyttiseen aktiivisuuteen 10 Fägosyyttinen aktiivisuus

Ryhmä n Neutrofiilit Neutrofiilit L.H. L.W.

(1000/1 mm3) %, NBT

0360360360 3 6

Verrok-15 ki 1 ml PBS iv. 6 1,9 2,3 2,414,315,117,654,560,659,8 7,53 7,53 7,61 ±0,9 ±1,1 ±0,4 ±4,6 4,6 ±3,0 ±9,4 ±4,8 ±6,8 ±0,77 ±0,86 ±0,4 20 ΊΤΡ (testi 1 ) *o *o*o * * * 5 mg/kg 15 2,0 1,2 1,7 18,4 26,8 27,2 59,2 69,3 74,9 8,75 10,3 9,88 iv ±0,9 ±0,7 ±7,1 ±7,1 ±6,7 ±7,0 ±6,7 ±7,0 ±7,8 ±1,18 ±1,25 ±1,0

25 TEP

(testi 2) *o*o *o*o *o 5 mg/kg 8 2,8 1,6 1,615,522,126,563,069,576,5 7,768,52 8,56 iv ±0,8 ±0,6 ±1,0 ±4,9 ±7,0 ±9,1 ±7,0 ±7,1 ±8,9 ±0,83 ±1,04 ±1,0 30 n Koe-eläinten lukumäärä PBS fosfaattipuskuriliuos 0 ennen TTP:n antamista 3 3 päivää ΊΤΡ:η antamisen jälkeen 6 6 päivää TTP:n antamisen jälkeen 35 * Tilastollisesti merkittävä vaihtelu p<0,05:ssä suhteessa arvoon ennen TTP:n antamista o Tilastollisesti merkittävä vaihtelu p<0,05:ssä verrattaessa verrokkiryh-: mään 40

Taulukko 7 TTP:n vaikutus kanien periferaalisessa veressä olevien lymfosyyttien lukumäärään ja T-lymfosyyttien (E-rosetit) ja B-lymfosyyttien (EAC-rosetit) prosenttiin 45

Ryhmä n Lymfosyytit E-rosetit % EAC-rosetit % x 10-3/mnP) 0 6 0 6 0 6

Verrokki 50 1 ml PBS 6 6,6 6,0 19,0 20,1 42,1 42,3 iv. ±2,0 ±1,9 ±5,7 ±5,5 ±6,3 ±2,05 ΊΤΡ (testi 1) *o 5 mg/kg 15 6,6 5,4 19,2 27,1 43,7 47,7 55 iv ±1,5 ±1,4 ±4,1 ±3,2 ±2,6 ±4,9 30 103258 ΊΤΡ (testi 2) 1ο 5 mg/kg 8 6,0 6,8 17,0 24,8 41,6 41,0 iv ±1,0 ±0,6 ±1,9 ±2,9 ±1,3 ±2,1 5 n Koe-eläinten lukumäärä PBS fosfaattipuskuriliuos 0 ennen TTP:n antamista 6 6 päivää TTP:n antamisen jälkeen 10 * Tilastollisesti merkittävä vaihtelu p<0,05:ssä suhteessa arvoon ennen TTP:n antamista o Tilastollisesti merkittävä vaihtelu p<0,05:ssä verrattaessa verrokkiryhmään 15

Taulukko 8

Splenosyyttien lukumäärä pitkäaikaisen ΤΓΡ-hoidon jälkeen

Verrokki ΊΤΡ 10 mg/kg TTP 50 mg/kg 20 päivässä päivässä n = 10 n = 10 ΤΓΡ-annosten PFC/106 splenosyyttiä aika viikoissa 4. päivä 7. päivä 4.päivä 7 päivä 4. päivä 7.päivä 3 367±157 156±41 1120±3281 336±2401 772±2361 151±57 25 5 572±134 138±47 1528±3461 292±621 1239±2801 232±90 7 518±45 133±40 699±1361 159±44 722±2581 141±63 9 466±185 175±75 395±94 132±36 412±138 167±62 12 287±18 153±30 287±131 156±39 376±130 167±69 30 1 Tilastollisesti merkittävä vaihtelu p<0,05:ssä verrattuna verrokkiryh mään

Taulukko 9

Anti-SRBC-(19S+7S)-vasta-aineiden konsentraatio pitkäaikaisen ΤΓΡ-hoidon 35 jälkeen

Verrokki TTP 10 mg/kg TTP 50 mg/kg päivässä päivässä n = 10 n = 10 40 ΊΤΡ-an- Hemagglutiini, tiitterin -log2 nosten aika vk 4. päivä 7. päivä 4.päivä 7 päivä 4. päivä 7.päivä 3 3,75±1,78 7,12±1,36 8,80±0,971 9,20±1,461 8,20±0,401 6,90±1,37 5 5,82±1,40 6,50±1,00 7,70±0,841 9,10±2,021 7,70±0,641 9,33±2,901 45 7 3,60±0,48 5,20±0,74 4,40±1,111 4,10±0,831 3,50±0,831 3,55±1,21 9 3,20±1,40 4,66±1,24 3,50±1,28 4,00±0,81 2,90±1,22 6,33±1,52 12 4,80±0,74 4,40±1 ,01 5,11±1,09 5,50±1,51 5,50±1,51 6,10±1,74 55

Tilastollisesti merkittävä vaihtelu p<0,05:ssä verrattuna verrckkiryh-50 mään 31 103258

Taulukko 10

Anti-SKBC-(7S)-vasta-aineiden konsentraatio pitkäaikaisen ΊΤΡ-hoidon jälkeen 5 Verrokki TTP 10 mg/kg TTP 50 mg/kg n = 10 n = 10 ΤΓΡ-an- Hemagglutiini, tiitterin -log2 nosten aika 10 viikoissa 4. päivä 7. päivä 4.päivä 7 päivä 4. päivä 7.päivä 3 1,75±0,60 6,37*0,85 3,20±0,87* 5,90*1,70 3,80*0,87* 4,90±1,74* 5 2,50±0,70 6,12*1,16 2,20*0,97 5,70*1,10 2,30*1,41 5,33*0,74* 7 1,00*0,893,80*1,090,60*0,80 2,50*1,11*0,55*0,83 2,55*0,68* 15 9 0,40*0,483,66*1,240,30*0,64 3,25*0,96 0,00 4,33*1,24 12 0,80*0,973,80*0,761,11*0,99 4,40*1,35 1,55*1,49 4,30*1,26 * Tilastollisesti merkittävä vaihtelu p<0,05:ssä verrattuna verrokkiryhmään 20

Taulukko 11 TTP:n iirmuroTioduLatorinen vaikutus

Annos n n NPC/10^ E-rosetti-% Hemaggluti- Hemaggluti- 25 TTP splenosvy- 4. päivä niini* niini* tyyppi

mg/kg syyttiä tyyppi 19S+ tyyppi 7S

4. päivä 7S 4. päivä 7. päivä verrokki 30 469 13,6 5,4 8,2 30 ±111 ±3,2 ±1,1 ±1/3 0,5 10 997x 15,6 6,8X 8,4 ±139 ±1,4 ±1,0 ±1,1

35 2,5 10 839x 20,3X 6,9X 9,7X

±177 ±4,1 ±1,0 ±1,4

5.0 10 746x 23,2X 7,2X 9,2X

: ±129 ±4,7 ±0,6 ±1,4 40 10.0 10 795x 18,4X 8,3X 10,4”x ±129 ±4,0 ±1,8 ±1,1

25.0 10 560 16,3X 6,1 9,3X

45 ±145 ±2,5 ±1,1 ±1,1 50.0 10 400 14,7 5,3 6,7 : ±57 ±4,0 ±1,0 ±1,9

50 100,0 10 375x 11,3X 5,1 5,7X

±67 ±2,2 ±0,8 ±1,6

250.0 10 305X 9,5X 4,8 5,3X

±67 ±2,0 ±1,1 ±1,7 55 x Tilastollisesti merkittävä vaihtelu kokonaisvertailussa 0,05 (opiskelija . t-testi) * tiitterin -lcg2 32 103258

Taulukko 12 Päivittäin kolmena annoksena annosteltu ΊΤΡ 4. päivä SRBCrllä imnunoinnin 10. päivä 5 jälkeen SRBCrllä iirimi- noinnin j älkeen ΊΤΡ-annos n E-roset- PFC/10^ Hemagglutiniini Hemagglutiniini

ti-% spleno- tiitterin -log2 tiitterin -log2 syyttiä 19S +7S 7S 19S + 7S 7S

10 Verrokki I 15 13,7 469 5,7 0,8 9,8 8,4 1 x 0,3 ml ±3,0 ±125 ±1,3 ±1,0 ±1,3 ±1,6

Verrokki I 15 15,3 579 6,1 0,6 9,0 8,6 3 x 0,1 ml ±4,0 ±143 ±1,1 ±0,9 ±1,7 ±1,8 15 2.5 mg/kg 15 19,4* 864* 7,4* 1 ,1 10,4* 9,6* 1 * 0,3 ml ±3,8 ±190 ±1,1 ±1,1 ±1,6 ±1,2 2.5 mg/kg 15 19,0* 769* 7,1* 0,5 9,5 9,0 20 3 * 0,1 ml ±5,0 ±132 ±0,8 ±0,8 ±1,0 ±2,0 10 mg/kg 10 15 19,3* 795* 7,0* 0,8 10,4* 9,4* 1 x 0,3 ml ±4,1 ±102 ±0,7 ±1,0 ±1,6 ±1,0 25 10 mg/kg 15 17,5 656 7,3* 1 ,3 8,9 8,8 3 x 0,1 ml ±3,7 ±128 ±1,4 ±1,2 ±1,8 ±1,5 33 103258

Taulukko 13

Oraalisesti 12 viikkoa annetun ΤΓΡ:η vaikutus SRBC:llä immunisoitujan hiirten immunologiseen vasteeseen 5 4 päivän kuluttua 10 päivän kuluttua

Viik- EFC/106 hemagglutiniini FFC/10^ hemagglutiniini

koa E-roset- Spleno- Tiitterin -log2 E-roset- Spleno- Tiitteri-log2 ti-X syytit 19S+/S 7S ti-% syytit 19S+7S 7S

15,2 565 6,0 1,6 14,7 256 8,7 7,9 10 3 ±3,8 ±56 ±0,9 ±1,3 ±3,4 ±67 ±1,0 ±1,0 23,7* 1035* 7,5* 2,9* 23,5* 406* 10,4* 9,7* ±7,8 ±177 ±0,5 ±0,2 ±3,7 ±88 1,2 ±1,0 13.8 422 5,1 0 12,7 209 7,1 6,7 15 5 ±2,4 ±63* ±0,9 0 ±2,1 ±41 ±1,4 ±1,6 23,0* 933* 7,6* 2,7* 20,5* 430* 11,0* 11,0* ±6,1 ±248 ±1,5 ±1,5 ±2,7 ±86 ±1,2 ±1,0 12.8 495 4,6 0,5 14,0 245 8,8 7,9 20 7 ±2,9 ±85* ±1,1 ±0,9 ±5,1 ±48 ±1,6 ±1,6 20,5* 1120* 7,9* 2,1* 26,9* 437* 11,3* 10,3* ±5,3 ±214 ±0,6 ±1,5 ±7,7 ±117 ±1,0 ±0,4 15.0 531 6,2 0,5 14,1 294 8,7 8,4 25 9 ±2,1 ±67 ±0,8 ±0,9 ±2,8 ±58 ±1,5 ±1,5 18,6* 1049* 7,7* 1,9 18,2* 515* 11,9* 10,5* ±2,8 ±184 ±0,7 ±1,3 ±3,4 ±530 ±0,8 ±1,0 15.0 573 7,2 1,4 16,5 266 7,5 7,1 30 12 ±2,6 ±143 ±1,0 ±1,2 ±2,6 ±58 ±1,1 ±0,8 14.1 770* 7,2 1,7 19,0 294 11,8* 10,6* ±2,7 ±132 ±1,4 ±1,7 ±4,1 ±65 ±0,4 ±1,0 * Tilastollisesti merkittävä vaihtelu p=0.05:ssä verrattuna verrokkiryh-35 mään. Jokaisessa ryhmässä oli 40 eläintä.

Taulukko 14

Varastointiolosuhteiden vaikutus TTP:n aktiivisuuteen ottaen huomioon kyky : muodostaa E-rosetteja 40 E-rosetti-2,

Annos n Lähtö- 2 kuukauden varastoinnin jälkeen aktiivisuus Lämpötila Huon.lämpö- Huon.lämpö- + 4 °C tilassa pääs- tilassa 45 syt valo pimeässä

Verrokki 8 13,6±2,4 12,8±2,3 12,8±2,3 12,8±2,3 : 0,1 mg/kg 8 15,8±1,7 16,1±3,04 15,1±2,9 16,0±5,5 50 1 mg/kg 8 18,0±0,8* 19,8±4,1* 15,3±2,8 19,8±2,7* 10 mg/kg 8 20,4±4,2* 18,0±4,5* 16,8±2,4* 16,9±3,5* * Tilastollisesti merkittävä vaihtelu p=0,05:ssä verrattuna verrokkiryh- n n ···· · 55 maan.

34 103258

Taulukko 15 _

Varastointiolosuhteiden vaikutus TTP:n aktiivisuuteen ottaen huomioon tyypin 19S vasta-aineita tuottavien solujen lukumäärä 5 PFC/1 C)6 splenosyytit

Annos n Lähtö- 2 kuukauden varastoinnin jälkeen aktiivisuus Lämpötila Huon.lämpö- Huon.lämpö- + 4 °C tilassa pääs- tilassa syt valo pimeässä 10 Verrokki 8 571 ±69 514±128 514±128 514±128 0,1 mg/kg 8 747±144 1039±3261 718±135 1002±2101 1 mg/kg 8 1204±1551 1026±3141 793±1861 1046±3311 15 10 mg/kg 8 1075±2321 1070±2491 869±1601 848±1371 * Tilastollisesti merkittävä vaihtelu alfa = 0,5:ssä verrattuna verrokkiryhmään.

20

Taulukko 16

Varastointiolosuhteiden vaikutus TTPln aktiivisuuteen ottaen huomioon vaikutus muodostaa tyypin anti-SRBC-19S+7S vasta-aineita 25 Annos n Lähtö- 2 kuukauden varastoinnin jälkeen aktiivisuus Lämpötila Huon. lämpö- Huon.lämpö- + 4 °C tilassa pääs- tilassa päässyt valo syt valo pv 4. 10. 4. 10. 4. 10. 4. 10.

30 Verrokki 8 5,6 9,8 5,0 9,5 5,0 9,5 5,0 9,6 ±0,9 ±0,6 ±1,1 ±2,1 ±1,1 ±2,1 ±1,1 ±2,1 0,1 mg/kg 8 7,4 11 ,4 7,8 10,5 5,4 10,8 6,5 12,6 ±0,41 ±1,31 ±1,01 ±1,71 ±0,8 ±0,71 ±0,71 ±2,21 35 1 mg/kg 8 6,8 12,2 6,7 13,8 6,2 13,2 6,5 13,1 ±6,31 ±1,11 ±0,41 ±2,11 ±0,3 ±0,41 ±1,31 ±1,31 : 10 mg/kg 8 6,4 11,0 6,2 12,0 4,8 10,6 6,0 13,6 40 ±1,21 ±1,41 ±0,6 ±2,31 ±1,3 ±2,41 ±0,5 ±1,31

Tilastollisesti merkittävä vaihtelu p=0.05:ssä verrattuna verrokkiryhmään.

35 103258

Taulukko 17

Varastointiolosuhteiden vaikutus ΊΤΡ:η aktiivisuuteen ottaen huomioon vaikutus muodostaa tyypin anti-SRBC-7S vasta-aineita 5 Annos n Lähtö- 2 kuukauden varastoinnin jälkeen aktiivisuus Lämpötila Huon. lämpö- Huon.lämpö- + 4 °C tilassa pääs- tilassa päässyt valo syt valo pv 4. 10. 4. 10. 4. 10. 4. 10.

10 Verrokki 8 0,4 9,2 0,3 8,1 0,3 8,1 0,3 8,1 ±0,8 ±0,7 ±0,7 ±1/4 ±0,7 ±1,4 ±0,7 ±1,4 0,1 mg/kg 8 0 10,8 0,7 9,8 0,8 10,0 0,7 11,3 ±1,01 ±0,9 ±0,91 ±0,9 ±0,61 ±0,9 ±1,41 15 1 mg/kg 8 0,8 10,6 0,3 11,5 0,7 10,3 0,7 11,0 ±0,9 ±0,41 ±0,7 ±1,81 ±0,9 ±0,71 ±0,9 ±1,01 10 mg/kg 8 0 10,2 0,3 9,8 0,3 10,7 0,7 10,3 20 ±1,31 ±0,7 ±1,0 ±0,7 ±2,01 ±0,9 ±0,91 * Tilastollisesti merkittävä vaihtelu p=0.05:ssä verrattuna verrokkiryhmään.

25 Taulukko 18

Terveiden vapaaehtoisten hematologiset parametrit ennen ja jälkeen kaksiviikkoisen TTP-antamisen annoksena 1 mg/päivä

Parametri Plasebo n-5 TEP n-5 30 0 14 päivää 0 14päivää

Erytrosyytit x 1θ6/μ1 4,44±0,46 4,32±0,42 4,32±0,32 4,18±0,32

Hemoglobiini 12,4±2,5 11,9±2,8 12,8±0,8 11,8±0,6 35

Hematokriitti % 38,1 ±6,7 38±6,9 38,7±2,1 38,1±1,6 : Leukosyytit 40 x 103/μ1 5,25±0,59 5,27±0,8 5,23±0,6 4,86±0,6

Neutrofiilit % 52,6±12 57,6±11 54,2±2,5 55±3,6 45 Lymfosyytit % 26±7,5 30,4±8,3 34±4,1 32,4±5,3

Trombosyytit x 103/μ1 220±40,4 214±35,8 221±38 314±39,6 50

Veren lasko mm/1h 7,6±9 5,6±1,9 7,8±2,7 6,8±3,1 36 103258

Taulukko 19

Terveiden vapaaehtoisten biokemialliset parametrit ennen ja jälkeen kaksiviikkoisen ΊΤΡ-antamisen annoksena 1 mg/päivä 5 Parametri Plasebo n=5 ΤΓΡ n=5 0 14 päivää 0 14päivää

Kokonais- proteiini g/1 72,8±1,76 68,42±3,2 73,8±1,92 70±5,5 10 Albumiini,% 63,2±2,5 63,8±2,3 63,6±1,8 64,4±2,1

Globuliini, alfal % 3,1±0,4 3±065,9 2,8±0,5 2,8±0,45 15 Glcbuliini, alfa2 % 5,95±1,97 6,8±1,5 6,93±0,9 06,9±0,9

Globuliini, gairnia % 12,2±1,5 12,1±1,3 13,7±0,9 12,3±1 20

IgG g/1 10,3±1,1 10,2±1 11,7±1,6 11,1 ±1,4

IgA g/1 1,8±0,6 1,9±0,5 1,8±0,5 1,9±0,5 25 IgM g/1 1,4±0,3 1,4±0,2 1,1±0,2 1,9±0,5

Komplementti C3 g/1 1,1 ±0,1 1,1 ±0,1 1,1 ±0,1 0,2±0,2 30 Konplementti C4 g/1 0,2±0,5 9,3±0,04 0,2±0,0 0,2±0,03

Alaniini U/l 34,2±0,05 0,3±0,04 30,2±8,2 31,2±3,2 35 Asparagiini U/l 32,8±4,4 40,2±6,6 30,4±7,1 39,6±6,6 1 37 103258

Taulukko 20

Hengitysteiden akuuttien infektioiden taajuuden vertailu vuosien 1989 ja 1990 viimeisten neljännesten aikan ottaen huomioon kaksi potilasryhmää, joita hoidettiin TIP:llä ja vastaavasti plasebolla lokakuun 1990 aikana 5 ΤΓΡ annettu viimeisen neljänneksen aikana 1990 n 4 neljännes 4. neljännes tilastollinen 1989 (ei TIP) 1990 (ΤΊΡ) merkitys 10 infektioiden infektioiden "p" keskimäärä keskimäärä per potilas per potilas

Vilustuminen 20 4,0±1,3 1,0±0,5 < 0,01 15

Kipeä kurkku 20 3,3±1,3 0,8±0,6 < 0,01

Kiuume- 20 puuskia 20 2,1±2,2 0,3±0,4 < 0,01

Yskä 20 1,4±1,1 0,3±0,6 < 0,01

Keuhkoput- 25 kentulehd. 20 0,3±0,5 0

Keuhkokuume 20 0,2±0,9 0

Plasebo 30 annettu viimeisen neljänneksen aikana 1990 n 4 neljännes 4. neljännes tilastollinen 1989 (ei TIP) 1990 (TTP) merkitys infektioiden infektioiden "p" keskimäärä keskimäärä 35 per potilas per potilas

Vilustuminen 20 3,9±1,4 3,1±1,5 > 0,05 : Kipeä 40 kurkku 20 2,3±2,0 2,6±1,7 > 0,05

Kuume- puuskia 20 2,3±1,8 1,7±2,1 > 0,05 45 Yskä 20 1,5±1,5 1,9±2,0 > 0,05

Keuhkoput- ; kentulehd. 20 0,1±0,3 0,1±0,3 50 Keuhkokuume 20 0,1±0,3 0,1±0,3 38 103258

Taulukko 21

Bakteerientigeaiien tai PHA:n (fytohemagglutiniini) intradermaalisen injektion vaikutus potilaissa, joita on hoidettu TTP:11S

5 Sarja Potilaat Tuberku- Streptoly- stafylckit/ PHA NaCl nro (aloitus) liiniRT23 lysiini 0 anatoksiini 0,9 % pre 3 pre 3 pre 3 pre 3 pre 3 1 B.T + + ±± - t --- 2 P.E - + +± ± - - - - - 10 3 M.H ++++++++ ± - - _ 4 W.H - - + - - - - - - 5 W.H - ±__ ± _ ____ 6 Z.N ++++-- - — - - 7 P.J - +++++ - + --- 15 8 S.M +-+++- ± + --- pre esihoito 3 3 viikon kuluttua 20 Taulukko 22

Bakteeriantigeenien tai PHA:n intradermaalisen inj ektion vaikutus hoitamattomissa (plasebo) potilaissa

Sarja Potilaat Tuberku- Streptoly- stafylckit/ PHA NaCl 25 nro (aloitus) liiniRT23 lysiini 0 anatoksiini 0,9 % pre 3 pre 3 pre 3 pre 3 pre 3 1 M.M - - + + ± - - - - - 2 O.T ++- - ± ± ____ 3 O.H ++ +++ ++ ++ ± - --- 30 4 W.J ---± - - ____ 5 K.C — — + + ± + - - — - 6 M.J +++++++ - + - - - 7 B.W - - +++ - + --- 8 K.T - - ++ + + - - - 35 pre esihoito 3 3 viikon kuluttua 39 103258

Taulukko 23

Imrrunoglcbuliinit potilaiden seerumissa, joilla on TTP:llä hoidettu säärihaava 5 n Testiryhmä Imnunoglobuliinia mg-%:na ennen hoitoa hoidon jälkeen 1 IgG 1732,87*207,52 7 IgG 1732,87*207,52 8 A 2 IgA 304,25*47,50 8 IgA 283,87*44,10 3 IgM 202,87*71,12 9 IgM 189,75*75,15 10 4 IgG 1924,37*246,25 10 IgG 1972,87*239,33 8 B 5 IgA 296,50*59,84 11 IgA 285,50*56,76 6 IgM 242,12*56,95 12 IgM 232,87*65,45 15 1 vs 7 p > 0,05 4 vs 10 p >0,05 2 vs 8 p > 0,05 5 vs 11 p >0,05 3 vs 9 p > 0,05 6 vs 12 p >0,05 1 vs 4 p > 0,05 7 vs 10 p >0,05 20 2 vs 5 p > 0,05 8 vs 11 p >0,05 3 vs 6 p > 0,05 9 vs 12 p >0,05

Claims (10)

103258 40

1. Menetelmä turpeesta johdettujen bioaktiivisten tuotteiden valmistamiseksi ei-orgaanisten suolojen, erityisesti 5 natriumkloridin erittäin konsentroidusta liuoksesta, joka sisältää turpeesta johdettuja bioaktiivisia aineosia, tunnettu siitä, että sanottu liuos laimennetaan vedellä, josta on poistettu suolat, ja alistetaan käänteisosmoosiin suolojen poistamiseksi liuoksesta, jolloin epäorgaanisia suoloja 10 poistuu, ja että saatu liuos konsentroidaan ja selkeytetään ja optionaalisesti steriloidaan ja/tai spraykuivataan vähintään yhdessä vaiheessa.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu sii- 15 tä, että sanottu konsentroitu liuos saadaan ilmakuivatun raa'an turvemateriaalin primaarisella ja sekundaarisella alkalisella hydrolyysillä, mitä seuraa hydrolysaatin hapot-taminen, liukenemattomien osien erottaminen ja sorasub-stanssien eliminoiminen uuttamalla orgaanisilla liuottimil-20 la ja jäljelle jääneiden orgaanisten liuottimien poistaminen jälkiuuttovesifaasista, minkä jälkeen liuos suodatetaan sintratun keraamisen suodattimen läpi alennetussa paineessa.

3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että sanottu liuos laimennetaan vedellä - parhaiten tislatulla - vesitilavuuksilla useita kertoja, edullisesti 5-8 kertaa, sanotun liuoksen tilavuus.

4. Minkä tahansa edellisen patenttivaatimuksen mukainen 1 menetelmä, tunnettu siitä, että liuos steriloidaan kalvo- suodattimen, esim. Millipore®-suodattimen, avulla.

5. Minkä tahansa edellisen patenttivaatimuksen mukainen 35 menetelmä, tunnettu siitä, että liuos spraykuivataan tulo-lämpötilalla noin 180 °C ja ulosvirtauslämpötilalla noin 90 °C. 4i 103258

6. Minkä tahansa edellisen patenttivaatimuksen mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että turpeesta johdettu bioaktiivinen tuote pidetään konsentroidun liuoksen muodossa.

7. Jonkin patenttivaatimuksen 1-5 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että sanottu tuote pidetään jauheen muodossa.

8. Menetelmä farmaseuttisen formuloinnin valmistamiseksi, joka sisältää turpeesta johdettua jonkin patenttivaatimuk- 10 sen 1-7 mukaisesti valmistettua bioaktiivista tuotetta ja joka on geelin muodossa, tunnettu siitä, että steriiliin alkoholiyrttiuutteeseen yhdistetään ennalta jauhemaiseksi tehdyn turpeesta johdetun bioaktiivisen tuotteen steriiliä liuosta, makuaineyhdisteen steriiliä liuosta, joka on par-15 haiten valittu ryhmästä, joka käsittää mentolin, tymolin, mintun, sitruunan ja eukalyptuksen, ja geelinmuodostuskoos-tumusta, kuten steriiliä glyserolia kolloidisen piidioksidin kanssa, nestemäisen koostumuksen muuttamiseksi geeli-muotoon nesteseoksen painosuhteen ollessa piidioksidiin 20 edullisesti 90:10-94:6.

9. Menetelmä farmaseuttisen formuloinnin valmistamiseksi, joka sisältää turpeesta johdettua jonkin patenttivaatimuksen 1-7 mukaisesti valmistettua bioaktiivista tuotetta 25 ja joka on voiteen muodossa, tunnettu siitä, että steriiliin yrttiuutteeseen yhdistetään asteittain jauhemaiseksi tehdyn turpeesta johdetun bioaktiivisen tuotteen steriiliä liuosta, että saatu seos geeliytetään lisäämällä geeliä muodostavaa aineosaa, kuten kolloidista piidioksia ja, että 30 täten saatu geeli trituroidaan ennalta steriloidulla rasva-komponenttien seoksella, kuten euseriini ja vaseliini, edullisesti nestekomponenttien painosuhteessa piidioksidiin noin 30:2 ja geelin rasvakoostumukseen 32:68-34:66.

10. Menetelmä farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että minkä tahansa patenttivaatimuksen 1-7 mukaisella menetelmällä valmistettua turpeesta johdettua bioaktiivista tuotetta sekoitetaan farmaseuttisesti hyväk 42 103258 syttävän kantoainemateriaalin kanssa edullisesti painosuhteessa noin 1:5-1:25 ja edullisimmin 1:9-1:19. 5