FI102768B - Hybridi-DNA-molekyyli ja menetelmä fibronektiiniä sitovan proteiinin v almistamiseksi - Google Patents
Hybridi-DNA-molekyyli ja menetelmä fibronektiiniä sitovan proteiinin v almistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI102768B FI102768B FI902350A FI902350A FI102768B FI 102768 B FI102768 B FI 102768B FI 902350 A FI902350 A FI 902350A FI 902350 A FI902350 A FI 902350A FI 102768 B FI102768 B FI 102768B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- protein
- fibronectin
- binding protein
- fibronectin binding
- gene
- Prior art date
Links
- 101000815632 Streptococcus suis (strain 05ZYH33) Rqc2 homolog RqcH Proteins 0.000 title claims description 41
- 102000036072 fibronectin binding proteins Human genes 0.000 title claims description 26
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 title claims description 15
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 title claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 52
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 24
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 24
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 11
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 8
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims 1
- 238000010397 one-hybrid screening Methods 0.000 claims 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 abstract description 28
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 24
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 15
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 14
- 101100227488 Staphylococcus aureus (strain USA300) fnbB gene Proteins 0.000 description 8
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 8
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 8
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 8
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- 101150098467 fnbA gene Proteins 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 5
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- -1 D Asp Chemical compound 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 3
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 3
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 3
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 3
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 3
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 3
- 208000004396 mastitis Diseases 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 101001027553 Bos taurus Fibronectin Proteins 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- 206010041925 Staphylococcal infections Diseases 0.000 description 2
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 2
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N chloramine T Chemical compound [Na+].CC1=CC=C(S(=O)(=O)[N-]Cl)C=C1 VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 108010052305 exodeoxyribonuclease III Proteins 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000026045 iodination Effects 0.000 description 2
- 238000006192 iodination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 230000004853 protein function Effects 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- NNRFRJQMBSBXGO-CIUDSAMLSA-N (3s)-3-[[2-[[(2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]acetyl]amino]-4-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NNRFRJQMBSBXGO-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- OJHZNMVJJKMFGX-RNWHKREASA-N (4r,4ar,7ar,12bs)-9-methoxy-3-methyl-1,2,4,4a,5,6,7a,13-octahydro-4,12-methanobenzofuro[3,2-e]isoquinoline-7-one;2,3-dihydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)C(O)C(O)C(O)=O.O=C([C@@H]1O2)CC[C@H]3[C@]4([H])N(C)CC[C@]13C1=C2C(OC)=CC=C1C4 OJHZNMVJJKMFGX-RNWHKREASA-N 0.000 description 1
- LVSPDZAGCBEQAV-UHFFFAOYSA-N 4-chloronaphthalen-1-ol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=CC=C(Cl)C2=C1 LVSPDZAGCBEQAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150096316 5 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100022524 Alpha-1-antichymotrypsin Human genes 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N D-cystine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CSSC[C@@H](N)C(O)=O LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 108010017707 Fibronectin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101000678026 Homo sapiens Alpha-1-antichymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108010042918 Integrin alpha5beta1 Proteins 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229910020284 Na2SO4.10H2O Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N Phosgene Chemical compound ClC(Cl)=O YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010072170 Skin wound Diseases 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 1
- 241000589884 Treponema pallidum Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010089975 arginyl-glycyl-aspartyl-serine Proteins 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L calcium chloride dihydrate Chemical compound O.O.[Cl-].[Cl-].[Ca+2] LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000005546 dideoxynucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000003709 heart valve Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 1
- 238000011540 hip replacement Methods 0.000 description 1
- 150000004678 hydrides Chemical group 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- NQXWGWZJXJUMQB-UHFFFAOYSA-K iron trichloride hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Cl-].Cl[Fe+]Cl NQXWGWZJXJUMQB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000000741 isoleucyl group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000357 manganese(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 210000004898 n-terminal fragment Anatomy 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- RSIJVJUOQBWMIM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfate decahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O RSIJVJUOQBWMIM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003685 thermal hair damage Effects 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 108010050327 trypticase-soy broth Proteins 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000011686 zinc sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000009529 zinc sulphate Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/305—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Micrococcaceae (F)
- C07K14/31—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Micrococcaceae (F) from Staphylococcus (G)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70546—Integrin superfamily
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/82—Proteins from microorganisms
- Y10S530/825—Bacteria
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
102768 5
Hybridi-DNA-molekyyli ja menetelmä fibronektiiniä sitovan proteiinin valmistamiseksi - Hybrid-DNA-molekyl och förfa-rande för framställning av ett fibronektinbindande protein
Esillä oleva keksintö kohdistuu hybridi-DNA-molekyyleihin, esim. plasmideihin tai faageihin, jotka käsittävät nukleoti-disekvenssin, joka koodaa fibronektiiniä sitovaa proteiinia. 10 Lisäksi keksintö kohdistuu näitä molekyylejä sisältäviin mikro-organismeihin. Keksintö kohdistuu myös menetelmään fibronektiiniä sitovan proteiinin valmistamiseksi.
Esillä olevan keksinnön kohteena on saada aikaan minimaali-15 nen fibronektiiniä sitova proteiini.
Lisäkohteena on saada aikaan kyseinen proteiini geeniteknologialla käyttäen esimerkiksi plasmidia, joka sisältää tätä proteiinia koodaavan nukleotidisekvenssin.
20
Muut kohteet ilmenevät seuraavasta selostuksesta.
WO-A1-85/05553:ssa selostetaan bakteerisolupintaproteiineja, : : : joilla on kyky sitoa fibronektiiniä, fibrinogeeniä, kolla- : 25 geeniä ja/tai laminiinia. Täten on osoitettu, että erilai- :\j silla bakteereilla on kyky sitoutua fibronektiiniin, fibri- • · .·*·. nogeeniin, kollageeniin ja/tai laminiiniin. Lisäksi on osoi- • 9 .···. tettu, että f ibronektiiniä sitovan proteiinin molekyylipaino « « · on 165 kD ja/tai 87 kD, jolloin on todennäköistä, että pie- . . 30 nempi proteiini on suuremman proteiinin osa.
« · · • · · • · 9 99 9 9 9 *·’ * Fibronektiini on suuri glykoproteiini (Mr noin 450 kD) , jos- :*·*: sa on kaksi samanlaista alayksikköä, joiden molekyylikoko voi vaihdella prekursori-mRNA:n kompleksisilmikointiraken- • · 4 35 teestä riippuen (1). Ruumiinnesteistä, veritulpista ja solu- j väliaineista löydetyn fibronektiinin päätehtävä näyttää • « 2 102768 liittyvän proteiinin kykyyn välittää useimpien eykaryoot-tisolujen substraattiadheesiota (2, 3, 4, 5).
70-luvun lopulla Kuusela havaitsi, että fibronektiini ei 5 pelkästään toimi vuorovaikutuksessa eukaryoottisolujen kanssa vaan se sitoutuu sen lisäksi Staphylococcus aureuk-sen soluihin (6). Tämän havainnon jälkeen lukuisten patogeenisten mikro-organismien on osoitettu sitoutuvan fibro-nektiiniin erittäin spesifisesti ja suurella affiniteetil-10 la, kuten streptokokit (ryhmä A, C ja G), koagulaasinega-tiiviset stafylokokit, E. coli ja Treponema pallidum. Fib-ronektiini näyttää myös toimivan soluväliaineessa erilaisten mikro-organismien adheesiosubstraattina. Fibronektii-niin sitoutumisen voidaan sanoa olevan joillekin mikro-or-15 ganismeille ratkaiseva vaihe kolonisoitaessa isännän kudosta ja infektion kehityksessä.
Useat erilaiset solupintakomponentit on päätelty Gram-posi-tiivisten bakteerien fibronektiinireseptoreiksi mukaan lu-20 kien lipotekiohappo (8, 9) ja proteiini (10). Fibronektii-nia sitova proteiini, jonka Mr on 197-210 kD, on eristetty aiemmissa tutkimuksissa S. aureus -lajista Newman (11, 12) ja se on identifioitu alustavasti fibronektiinireseptorik-si. Eukaryoottisolujen fibronektiinin sitoutumispaikka on 25 paikallistettu tetrapeptidiin (ArgGlyAspSer), joka on kunkin kahden, fibronektiinin muodostavan alayksikön keski-osassa ja joka on erilainen kuin useampien tähän mennessä • « · ·...: tutkittujen bakteerien sitoutumispaikka. Bakteerit näyttä- : vät sitoutuvan fibronektiinialayksikön aminoterminaaliseen 30 29 kD domeeniin.
Eukaryoottinen reseptori on identifioitu solukalvossa ole- ... vaksi 140 kD kompleksiksi, kun taas Staphylococcus aureus • · -lajin Newman bakteeritibronektiiniä sitova proteiini ·’ 35 (FNBP) on identifioitu 210 kD proteiiniksi. Aiemmissa tut- ; : kimuksissa (SE-A-8702272-9) on raportoitu Staphylococcus aureuksessa olevan FNBP:n geenin kloonaamisesta, ilmentämisestä ja täydellisestä nukleotidisekvenssistä (nimitetään tässä geeniksi 1).
3 102768
Esillä olevassa sovellutuksessa on toisen geenin, geenin 2, joka sijaitsee myötävirtaan aiemmin tutkitusta ja raportoidusta fibronektiiniä sitovasta proteiinisekvenssistä, kloonaaminen, ilmentäminen ja nukleotidisekvenssi. Tämän 5 S. aureuksesta peräisin olevan fibronektiiniä sitovan proteiinin lisäkarakteroimiseksi tämän proteiinin geeni kloonattiin E. colissa. Tässä proteiinissa oleva fibronektiiniä sitova alue on myös paikallistettu.
10 Nyt on yllättäen havaittu mahdolliseksi saada aikaan hybri-di-DNA-molekyyli, joka käsittää nukleotidisekvenssin, joka koodaa proteiinia tai polypeptidiä, jolla on fibronektiiniä sitovia ominaisuuksia. Kuten jäljempänä olevasta ilmenee, seuraava nukleotidisekvenssi on geenissä, joka koodaa 15 mainittua proteiinia:
GTTAACAACA ATCTTAACTT TTT ATT AACT CGCTTTTTTT CATTGCTTTT AAAAACCGAA CAATATAGAA TTGCATTTAT TGAGTTTTTA AAATAAATGA ATTTTGCATT TAAGGGAGAA TATTATAGTG AAAAGCAATC TTAGATACGG CATAAGAAAA CACAAATTGG GAGCGGCCTC AGTATTCTTA GGAACAATGA 20 TCGTTGTTGG AATGGGACAA GAAAAAGAAG CTGCAGCATC GGAACAAAAC AATACTACAG TAGAGGAAAG TGGGAGTTCA GCTACTGAAA GTAAAGCAAG CGAAACACAA ACAACTACAA ATAACGTTAA TACAATAGAT GAAACACAAT CATACAGCGC GACATCAACT GAGCAAC CAT CACAATCAAC ACAAGTAACA ACAGAAGAAG CAC CGAAAAC TGTGCAAGCA C CAAAAGTAG AAACTTCGCG : ·’ 25 AGTTGATTTG CCATCGGAAA AAGTTGCTGA TAAGGAAACT ACAGGAACTC
AAGTTGACAT AGCTCAACAA AGTAAAGTCT CAGAAATTAA ACCAAGAATG 1./ AAAAGATCAA CTGACGTTAC AGCAGTTGCA GAGAAAGAAG TAGTGGAAGA
AACTAAAGCG ACAGGTACAG ATGTAACAAA TAAAGTGGAA GTAGAAGAAG
• I ·
GTAGTGAAAT TGTAGGACAT AAACAAGATA CGAATGTTGT AAATC CT CAT 30 AACGCAGAAA GAGTAAC CTT GAAATATAAA TGGAAATTTG GAGAAGGAAT TAAGGCGGGA GATTATTTTG ATTTCACATT AAGCGATAAT GTTGAAACTC ATGGTATCTC AACACTGCGT AAAGTTC CGG AGATAAAAAG T ACAGATGGT CAAGTTATGG CGACAGGAGA AATAATTGGA GAAAGAAAAG TTAGATATAC GTTTAAAGAA TATGTACAAG AAAAGAAAGA TTTAACTGCT GAATTATCTT V 35 TAAATCTATT TATTGATCCT ACAACAGTGA CGCAAAAAGG TAACCAAAAT GTTGAAGTTA AATTGGGTGA GACTACGGTT AGCAAAATAT TTAATATTCA ' ATATTTAGGT GGAGTTAGAG ATAATTGGGG AGTAACAGCT AATGGTCGAA
4 102768
TT6ATACTTT AAATAAAGTA GATGGGAAAT TTAGTCATTT TGCGTACATG
AAACCTAACA ACCAGTCGTT AAGCT CTGTG ACAGTAACTG GTCAAGTAAC
TAAAGGAAAT AAACCAGGGG TTAATAATCC AACAGTTAAG GTATATAAAC
ACATTGGTTC AGACGATTTA GCTGAAAGCG TATATGCAÄA GCTTGATGAT
5 GTCAGCAAAT TTGAAGATGT GACTGATAAT ATGAGTTTAG ATTTTGATAC
TAATGGTGGT TATTCTTTAA ACTTTAATAA TTTAGACCAA AGTAAAAATT
ATGTAATAAA ATATGAAGGG TATTATGATT CAAATGCTAG CAACTTAGAA
TTTCAAACAC AC CTTTTTGG ATATTATAAC TATTATTATA CAAGTAATTT
AACTTGGAAA AATGGCGTtG CATTTTACTC TAATAACGCT CAAGGCGACG
1 0
GCAAAGATAA ACTAAAGGAA C CT ATTATAG AACATAGTAC TCCTATCGAA
CTTGAATTTA AATCAGAGCC GCCAGTGGAG AAGCATGAAT TGACTGGTAC
AATCGAAGAA AGTAATGATT CTAAGCCAAT TGATTTTGAA TATCATACAG
CTGTTGAAGG TGCAGAAGGT CATGCAGAAG GTACCATTGA AACTGAAGAA
GATTCTATTC ATGTAGACTT TGAAGAATCG ACACATGAAA ATTCAAAACA
1 5
TCATGCTGAT GTTGTTGAAT ATGAAGAAGA TACAAACCCA GGTGGTGGTC
AGGTTACTAC TGAGTCTAAC CTAGTTGAAT TTGACGAAGA TTCTACAAAA
GGTATTGTAA CTGGTGCTGT TAGCGATCAT ACAACAATTG AAGATACGAA
AGAATATACG ACTGAAAGTA ACTTGATTGA ACTAGTAGAT GAACTACCTG
AAGAACATGG TCAAGCGCAA GGACCAATCG AGGAAATTAC TGAAAACAAT
20
CATCATATTT CTCATTCTGG TTTAGGAACT GAAAATGGTC ACGGTAATTA
TGGCGTGATT GAAGAAATCG AAGAAAATAG CCACGTGGAT ATTAAGAGTG
AATTAGGTTA CGAAGGTGGC CAAAATAGCG GTAATCAGTC ATTTGAGGAA
GACACAGAAG AAGATAAACC GAAATATGAA CAAGGTGGCA ATATCGTAGA
: TATCGATTTC GATAGTGTAC CTCAAATTCA TGGTCAAAAT AATGGTAACC
25
··’: AATCATTCGA AGAAGATACA GAGAAAGACA AACCTAAGTA TGAACAAGGT
: GGTAATATCA TTGATATCGA CTTCGACAGT GTGCCACATA TTCACGGATT
• · ·
.♦♦·.* CAATAAGCAC ACTGAAATTA TTGAAGAAGA TACAAATAAA GATAAACCAA
• ·
ATTATCAATT CGGTGGACAC AATAGTGTTG ACTTTGAAGA AGATACACTT
» » t * CCACAAGTAA GTGGTCATAA TGAAGGTCAA CAAACGATTG AAGAAGAT AC 30
AACACCTCCA ATCGTGCCAC CAACGCCACC GACACCAGAA GTACCAAGCG
AGC CGGAAAC ACCAACACCA CCGACACCAG AAGTACCAAG CGAGC CGGAA
ACACCAACAC CGCCAACGCC AGAGGTACCA ACTGAACCTG GTAAACCAAT
ACCACCTGCT AAAGAAGAAC CTAAAAAACC TTCTAAACCA GTGGAACAAG
35 GTAAAGTAGT AACAC CTGTT ATTGAAATCA ATGAAAAGGT TAAAGCAGTG
* ·. GTACCAACTA AAAAAGCACA ATCTAAGAAA TCTGAACTAC CTGAAACAGG
. TGGAGAAGAA TCAACAAACA ACGGCATGTT GTTCGGCGGA TTATTTAGCA
TTTTAGGTTT AGCGTTATTA CGCAGAAATA AAAAGAATCA CAAAGCATAA
TCAATCCAAA ATTGACAGGT TTATTTCATA AATTATATGA AGTAAGCCTG
5 102768
TTTTTTAAAA TTAAAACAAA TTTCCCAA6A AATAATTACA TACTCAAT6A CACTATGAAG 6CGTTCTAAT TAGTGTTAAA ATGACGTTGA TACATAGATT TAATACTTAG GAAAAGGAGC ACATTAACTT TGAAAAAAAT AAAAAAGGCA 5 ATCATTCCCG CTGCTGGTTT AGGGACTAGA TTTTTACCAG CAACTAAAGC GATGCCAAAG GAAATGCTTC CTATCTTAGA TAAACCCACA ATACAATATA TCGTTGAAGA AGCTGCAAGA GCTGGAATTG AAGATATTAT TATAGTGACA GGTCGCCACA AACGCGCGAT TGAAGATCAT TTTGATAGTC AAAAAGAATT AGAAATGGTG TTAAAAGAAA AAGGTAAATC TGAATTACTA GAGAAAGTTC 10 AGTATTCAAC GGAACTTGCG AATATTTTTT ATGTAAGGCA GAAAGAACAA AAAGGTTTAG GGCATGC
jolloin tämä nukleotidisekvenssi koodittaa seuraavaa proteiinia alkaen nukleotidista no 128 luettaessa edellistä, 15 jolloin edeltävät nukleotidit ovat signaalijärjestelmän osa: VKSNLRYGIR KHKLGAASVF LGTMIVVGMG QEKEAAASEQ NNTTVEESGS SATESKASET QTTTNNVNTI DETQSYSATS TEQPSQSTQV TTEEAPKTVO 20 APKVETSRVD LPSEKVADKE TTGTQVDIAQ QSKVSEIKPR MKR STDVTAV AEKEVVEETK ATGTDVTNKV EVEEGSEIVG HKQDTNVVNP HNAERVTLKY KWKFGEGIKA GDYFDFTLSD NVETHGISTL RKVPEIKSTD GQVMATGE11
GERKVRYTFK EYVQEKKDLT AELSLNLFID PTTVTQKGNQ NVEVKLGETT
VSKIFNIQYL GGVRDNWGVT ANGRIDTLNK VDGKFSHFAY MKPNNQSLSS
; 25 VTVTGQVTKG NKPGVNNPTV KVYKHIGSDD LAESVYAKLD DVSK FEOVTD
: V NMSLDFDTNG GYSLNFNNLD QSKNYVIKYE GYYDSNASNL EFQTHLFGYY
NY YYTSNLTW KNGVAFYSNN AQGDGKDKLK EPIIEHSTPI ELE FKSEPPV O EKHELTGTIE ESNDSKPIDF EYHTAVEGAE GHAEGTIETE EDSIHVDFEE
STHENSKHHA DVVEYEEDTN PGGGQVTTES NLVEFDEOST KGIVTGAVSD 30 HTTIEDTKEY TTESNLIELV DELPEEHGQA QGPIEEITEN NHHISHSGLG
TENGHGNYGV IEEIEENSHV DIKSELGYEG GQNSGNQSFE EDTEEDKPKY
EQGGNIVDID FDSVPQIHGQ NNGNQSFEED TEKDKPKYEQ GGNIIDIDFD
. — . SVPHIHGFNK HTEIIEEDTN KDKPNYQFGG HNSVD FEEDT LPQVSGHNEG
QQTIEEDTTP PIVPPTPPTP EVPSEPETPT PPTPEVPSEP ETPTPPT PEV 35 PTEPGKPIPP AKEEPKKPSK PVEQGKVVTP VIEINEKVKA VVPTKKAQSK KSELPETGGE ESTNNGML FG GLFSILGLAL LRRNKKNHKA
6 102768
Edellä olevassa yhden kirjaimen aminohapposekvenssissä on käytetty seuraavia lyhenteitä: A Ala, alaniini 5 R Arg, arginiini N Asn, asparagiini, D Asp, asparagiinihappo, C Cys, kysteiini C Cys, kystiini 10 G Gly, glysiini E Glu, glutaamihappo Q Gin, glutamiini H His, histidiini I Ile, isoleusiini 15 L Leu, leusiini K Lys, lysiini M Met, metioniini F Phe, fenyylialaniini P Pro, proliini 20 S Ser, seriini T Thr, treoniini W Trp, tryptofaani Y Tyr, tyrosiini V Vai, väliini 25 : . Edellä olevassa alkusignaalin nukleotidisekvenssi päättyy nukleotidiin 235 ja nukleotidista no 1735 alkava sekvenssi ··· osoittaa sitovan alueen nukleotidi sekvenssin, joka vastaa :V. seuraavaa aminohapposekvenssiä 30
IETEEDSIHV DFEESTHHEN SKHHADVVEY EEDTNPGGGQ VTTESNLVEF
DEDSTKGIVT GAVSDHTTIE DTKEYTTESN LIELVDELPE EHGQAQGPIE
EITENNHHIS HSGLGTENGH GNYGVIEEIE ENSHVDIKSE LGYEGGQNSG
*··· NQSFEEOTEE DKPKYEQGGG NIVDIDFDSV PQIHGQNNGN QSFEEDTEKD
35 KPKYEQGGNI IDIDFDSVPH IHGFNKHTEI IEEDTNKDKP NYQ FGGHNSV
;1:" OFEEDTLPQV SGHNEGQQTI EEDTTPPIVP PTPPTPEVPS EPETPTPPTP
EVPSEPETPT PPTPEVPTEP GKPIPPAKEE PKKPSKPVEQ GKVVTPVIEI
NEKVKAVVPT KKAQSKKSEL PETGGEESTN NGMLFGGLFS ILGLALLRRN KKNHKA
7 102768
Keksinnön pääasialliset tunnusmerkit ilmenevät oheisista patenttivaatimuksista.
5 Niinpä keksintö käsittää lisäksi plasmidin tai faagin, joka käsittää mainitun fibronektiiniä sitovaa proteiinia koodaa-van nukleotidisekvenssin.
Lisäksi keksintö käsittää mikro-organismin, joka sisältää 10 vähintään yhden, edellä olevan mukaisen hydridi-DNA-mole-kyylin. E. coli -lajissa 259 oleva plasmidi pFROOl on tallennettu Deutsche Sammlung von Mikroorganismeniin (DSM), ja sille on annettu talletusnumero DSM 4124.
15 Sopivat kantajaproteiinit voidaan kytkeä yhtä hyvin aminohapposekvenssiin, kuten proteiini A:n IgG:tä sitovat alueet.
Keksintö kuvataan seuraavassa annettujen esimerkkien avul-20 la, muttei kuitenkaan niihin rajoittuen.
Esimerkki
Fibronektiiniä sitovaa domeenia koodaavaan nukleotidisek- * : venssiin perustuvan polypeptidin kemiallinen synteesi suo- : 25 ritettiin rakentamalla aminohapposekvenssi, joka vastaa sa- V·· nottua nukleotidisekvenssiä lähtien C-terminaalisesta ala- : ] : niinistä ja antaen sen reagoida vaiheittain sopivan amino- hapon kanssa ja antamalla sen lopuksi reagoida isoleusiinin kanssa N-terminaalisessa päässä kiintofaasisynteesissä K.B. 30 Merrifieldin, J. Am. Chem. Soc. ££, s. 304, (1964) mukai- • · · ·.! sesti.
• · · • · · 1 · · • · · • · · 8 102768 MATERIAALIT JA MENETELMÄT Mikro-organismien vilj elyväliaine.
E. coli -bakteerien viljelyyn käytettiin seuraavaa väliainetta. Annetut määrät kuuluvat litraan väliainetta.
5
Trypton soijalihaliemi (Oxoid Ltd,
Basingstoke, Hants, GB) 30 g
Hiivauute (Oxoid) 10 g D-glukoosi 40 g 10 NH4CI 2,5 g
Na2HP04.2H20 7,5 g KH2PO4 3,0 g
Na2SO4.10H2O 2,5 g
MgS04.7H20 0,2 g 15 CaCl2.2H20 0,5 mg
FeCl3.6H20 16,7 mg
ZnS04.7H20 0,18 mg CUSO4.5H2O 0,16 mg
MnS04.4H20 0,15 mg 20 C0CI2 0,10 ng
NaEDTA 20,1 mg
Fibronektiiniä sitovan proteiinin (FNBP) testaaminen E. coli -kloonilysaatit, jotka valmistettiin Tris-HCl-pus-25 kurissa, joka sisälsi lysotsyymi-EDTA:a, kuten aiemmin on kuvattu (13), analysoitiin fibronektiiniä sitovan toiminnan ·.toteamiseksi mittaamalla niiden kyky kilpailla stafylokok-kisolujen kanssa 1 ^Sj^merkityn 29 kD NH2~terminaalisen fib-: : ronektiinifragmentin sitomisessa. FNBP-määrää, joka kykenee 30 inhiboimaan sitomista 50 %, pidetään yhtenä toimintayksikkönä. Naudan fibronektiini hankittiin tri S. Johanssonilta, Department of Medical and Physiological Chemistrystä, Uni- .···. verisity of Upsalasta, Upsala, Ruotsi. Yön yli viljellyt * · !'! E. coli -viljelmät konsentroitiin 10-kertaisesti ja sitä 35 seurasi lyysi 0,01 M Tris-HCl:ssä, 0,001 EDTAissa, pH 7,9, 1 mg/ml:ssa lysotsyymiä. 100 μ1:33η lysaattia sekoitettiin 100 μΐ stafylokokkisoluja, 100 μΐ ^25i_nautafibronektiiniä (20000 cpm/ml), 200 μΐ PBS, ja seosta inkuboitiin 2 tuntia 20 °C:ssa. 0,1 % BSAita ja 0,05 % Tweeniä sisältävässä 9 102768 PBS:ssä kahdesti pesemisen jälkeen seoksen radioaktiivisuus mitattiin gammalaskijassa.
Jodaaminen 5 Fibronektiinin ja fibronektiinifragmenttien 1 251«.merkitseminen suoritettiin käyttäen kloramiini-T-menetelmää.
Bakteerilajit ja plasmidit E. coli TG-1:ä ja DH-5-alfaa käytettiin bakteeri-isäntinä. 10 Plasmidivektorit olivat pBR322 ja pUC18. Plasmidit luetellaan taulukossa 1.
Väliaine ia viljelyolosuhteet E. coli -klooneja viljeltiin Luria-lihaliemessä (LB), jota 15 oli täydennetty ampisilliinilla 50 pg/ml:ssa, ja sitä ravistettiin 37 °C:ssa. Optinen tiheys mitattiin Linson 3,1 -fotometrillä luettuna 540 nm:ssä. S. aureus viljeltiin Trypticase-soijalihaliemessä (TSB).
20 Restriktioendonukleaasit ja muut entsyymit
Restriktioentsyymit, T4-DNA-ligaasi ja Bal31 hankittiin Promegasta (Madison, WI), International Biotechnologies Incrsta (New Haven, CT) ja Boehringer Mannheim Biochemicals ·;' Scandinavia AB:stä. Restriktiokartoitus ja fragmentin eris- : 25 täminen suoritettiin LiCl^lla uutetulla plasmidi-DNA:11a.
: pUC18:ssa kloonaaminen suoritettiin kuten Maniatis et ai.
ovat kuvanneet. Sekvensointiin tarkoitettujen subkloonien • · · generoiminen suoritettiin ExoIII-hajotuksella käyttämällä Erase-a-Base-Systemiä, joka hankittiin Promegasta. E. coli 30 -kloonit varmistettiin restriktioanalyysillä, sekvenssianalyysillä ja täplähybridoinnilla. DNA-sekvensointi tehtiin Sanger et al.:n dideoksinukleotidimenetelmällä, sekvenaasi-DNA-sekvensointivälinesarjalla, joka oli hankittu United • ·
States Biochemical Corporation Cleveland Ohiosta, ja Pro-. . 35 megasta hankitulla K/RT-yleissekvensointijärjestelmällä.
:t·,' Sekvensointinäytteet analysoitiin kiilamuotoisilla gee- leiliä käyttämällä 6 % polyakryyliamidia. Sekvenssitietojen ·[ ’. tallentamiseen ja analysoimiseen käytettiin tietokoneohjel- mia.
10 102768 E. coli -kloonin eristäminen, joka klooni sisälsi geeniä 1 ja osan geenistä 2, S. aureus -lajista 8325-4 peräisin olevaa FNBPjtä varten, on kuvattu aiemmin. Plasmidi pFR050 konsturoitiin S. aureusksesta pilkkomalla 8325-4-kromoso-5 maalinen DNA HindIII:lla ja Xbal:llä. Fragmentit, joiden koko oli 3-4 kep, eristettiin agaroosi-geelielektroforeesin jälkeen ja ligatoitiin pUC18:aan. Klooni, joka sisälsi fnbB-sekvenssejä, eristettiin koloniahybridisaatiolla käyttäen koettimena synteettistä oligonukleotidiä, joka sijait-10 see myötävirtaan Hindlll-paikasta fnbB:ssa. Oligonukleotidi syntetoitiin Applied Biosystem 380A -oligonukleotidisynte-toijalla käyttäen fosfoamidiittimenetelmää. Sevenssitieto-jen tallentamiseen ja analysointiin käytettiin tietokoneohjelmia.
1 5
Western-taplitys
Erotettuja komponentteja sähkötäplitettiin NC-levyjen päällä (nitroselluloosalevyt) (Schleicher ja Schnell) 2 tuntia, 200 V, käyttäen minitäplitysjärjestelmää (LKB) ja puskuri-20 järjestelmää, jonka on kuvannnut Towbin. Lisäksi NC-levyjä kyllästettiin 1 % BSAjlla, joka oli TBSissä, pH 7,4, 30 minuuttia, ja niitä inkuboitiin 2,4 pg/ml:ssa naudan fibro-nektiiniä, joka oli TBSissä, pH 7,4, 2 tuntia. Sen jälkeen .kun NC-levyjä oli pesty kolmesti käyttäen PBS-Tweeniä (0,1 : 25 %), niitä inkuboitiin 1,5 tuntia kanin anti-nauta-fibronek- : ·’ tiiniseerumilla, joka oli laimennettu suhteessa 1 :1 000, joka seerumi oli saatu lahjana Biochemical Centrestä, Uni- • · · versity of Uppsala, mitä seurasi peseminen ja lopullinen : inkubointi proteiini A -peroksidaasikonjugaatilla (valmis- 30 tettu S. aureus A676 -proteiinista konjugoimalla piparjuu-riperokdidaasiin (Boehringer) moolisuhteessa 1:2) 1,5 tuntia.
• · · • ·
Sen jälkeen, kun täplitys pestiin lopuksi 3 kertaa PBS-. 35 Tweenillä ja kerta PBSrllä, se kehitetttiin 4-kloori-1-naf- tolilla (Sigma).
11 102768
Toista fibronektiiniä sitovaa proteiinia koodaavan geenin kloonaaminen
Edellisessä työssämme kuvattiin fibronektiiniä sitovaa pro-teeiinia koodaavan geenin (geeni 1) sekvenssin kloonaami-5 nen, ilmentäminen ja määrittäminen. Näiden vanhempien sek-venssitietojen lisäanalyysissä löydettiin alue, joka sijaitsee myötävirtaan geenistä 1 , ja joka oli erittäin homologinen geenin 1 alun kanssa. Sen määrittämiseksi, onko tällä geenin 1 myötävirtaan olevalla alueella fibronektii-10 niä sitovaa toimintaa, pFR001:stä peräisin oleva 2,8 ke:n Pstl-fragmentti, joka sisälsi sekvenssin lähtien 680 ep:stä geenin 1 lopetuskodonista myötävirtaan, vietiin pUC18:n multiliittäjään. Koska geenin 2 transkriptiosuunta ja se lukujärjestys (vasemmalta oikealle kuviossa 1) tiedettiin, 15 oli mahdollista yhdistää fragmentti oikeassa lukujärjestyksessä pUC18:n lac-Z-promoottoriin. Tällä pFR035:ksi nimetyllä plasmidilla on fibronektiiniä sitovaa toimintaa (taulukko 1). Täten on olemassa kaksi erilaista FnBPitä koodattavaa geeniä. Kuitenkaan pFR035:tä sekvensoitaessa ei löy-20 detty mitään lopetuskodonia insertoidussa S. aureus -DNAis-sa, ja vertaamalla fnbAita (geeni 1 ) oli ilmeistä, että läsnä ei ollut täydellistä fnbB:tä. Kun tehtiin pelkästään HindIII:lla ja sillä yhdessä muiden entsyymien kanssa pil-, kotun kromosomaalisen DNA:n southern-täplitys, generoitiin 25 3,5 kepin fragmentti (joka sisälsi 65 ep, joka oli jo läs- : ·’ nä pFR035:ssä), joka myös pelkästään sisälsi puuttuvan *. *: fnbB-3'-osan. Fragmentti kloonattiin, kuten edellä kuvat- • · · tiin, ja se nimettiin pFR050:ksi. Plasmidin subkloonit joh- «·· · dettiin hajottamalla pFR035 ExoIIIllla 3'-päästä erilaisina 30 ajanjaksoina, ja sitä seurasi DNAin uudelleenligatointi, kuten edellä materiaaleissa ja menetelmisssä kuvattiin.
.···, Taulukko 1 • « Tässä keksinnössä selostettujen kloonien fibronektiiniä 35 sitovan toiminnan alkuperä ja ilmentäminen. Fibronektiinin sitomistesti on selostettu aiemmin materiaaleissa ja mene-: telmissä.
12 102768
Klooni Johdos Fn-sitominen pFR001 alkuperäinen isolaatti + pFR035 pFR001:stä peräisin oleva 2,8 ke Pstl-fragmentti + 5 pFR036 pFR001:stä peräisin oleva 2.3 ke Hpal/EcoRl-fragmentti + pFR035e31 pFR035, josta on deletetoitu 1.3 ke 3'-Pstl-paikasta (josta 1,1 ke on vektori- 10 DNA) pFR035e35 kuten pFR35e31, mutta siitä on deletoitu 1,47 ke pFR050 alkuperäinen isolaatti + pFR060 pFR050:stä peräisin oleva 15 2,0 kep Nhel/SphI-fragmentti, joka on liitetty pFR035:een, joka on avattu Nhel/Sphl:llä +
Sekvenssianalyysi 20 1928 ep:n nukleotidisekvenssi, joka sisälsi domeenin, joka koodittaa fibronektiiniä sitovaa proteiinia, määritettiin sekvensoimalla pFR035:stä ja pFR001:stä johdetut limittyvät subkloonit (kuvio 2.) Yksi avoin lukujärjestys koodittaa 940 aminohapon polypeptidiä, joka alkaa nukleotidissä 25 520 olevasta GTG-kodonista ja päättyy nukleotidissä 3342 olevaan kloonin päähän (kuvio 2). FnbB:llä, kuten fnbAtlla (geeni 1), on kaksi mahdollista transkription aloitussig- • · i naalia ja potentiaalinen ribosomin sitomispaikka (merkit- • « « ::ϊ ty kuvioon 2). Aloituskodonia seuraa mahdollinen signaali- 30 sekvenssi, joka on 85-prosenttisesti homologinen fnbArlla kooditetun kanssa (kuviot 2 ja 4). Verrattuna FnBPA:han signaalisekvenssin pilkontapaikka sijaitsee toisen ja kol- ,···, mannen välissä kolmen alaniinitähteen rivissä. Tämä vastaa « · S. aureus -lajista Newman eristetyn luontaisen proteiinin 35 pilkontapaikkaa. Signaalisekvenssistä myötävirtaan on noin V, 66 aminohapon alue, joka on 75-prosenttisesti homologinen fnbA:ssa olevan samanlaisen alueen kanssa. Seuravaat 444 ·’ * aminohappoa ovat vain 40-prosenttisesti homologisia FnBPArn kanssa ja niissä on useita deleetioita/insertioita, joten n 102768
FnBPA:sta löydettyjä B-toistoja ei ole havaittu FnBPBtssä (kuviot 2 ja 4). Kuitenkin peptidin (394 aa) jäännös on lähes identtinen FnBPAjn kanssa pääeron olessa FnBPBjssä olevan 14 aminohapon deleetio. Tämä erittäin homologinen 5 alue sisältää saman toiston (D1-D4 ja Wr1-5)f joka on havaittu FbBPArssa poikkeuksella, että Wr1 puuttuu. Wc-alue ja hydrofobinen alue M -domeeni samoin kuin pääasiassa C-terminaalinen perusalue ovat säilyneet FnBPBrssä.
10 Fibronektiiniä sitovan proteiinin ilmentäminen ia sitomis-toiminnan identifioiminen E. coli -kloonit pFR035 ja pFR036 sekä subkloonit, jotka oli johdettu deletoimalla pFR035:n geeni 2 -fragmentti, lysoitiin ja niiden fibronektiiniä sitova proteiinitoiminta 15 testattiin inhibitiotestissä. Kummankin kloonin lysaatti inhiboi 25]; .merkittyä fibronektiiniä sitoutumasta S. au-reukseen, kun taas subklooni pFR035e31, joka oli deletoitu geeni 2 -fragmentin 3'-terminaalista, oli kadottanut aktiivisuuden (kuvio 3). Fibronektiiniä sitova proteiinitoiminta 20 sijaitsee aminohapoissa myötävirtaan aminohaposta no 535 (kuvio 1). Yksikään näistä klooneista ei sisällä D-toisto-ja, joiden on todettu olevan ainoa Fn-sitova domeeni FnBPA:ssa. Tämä tarkoittaa, että FnBPB sisältää kaksi eri-laista Fn-sitovaa domeenia yksi alue vastavirtaan aminoha-... 25 posta 600, ja D-alueesta.
.···. FnBptn testaaminen « · II'.' E. coli -kloonit, jotka sisältävät erilaisia fnbB-osia, ’ analysoitiin niiden Fn-sitovan toiminnan osalta mittaamal- 30 la niiden kyky kilpailla stafylokokkisolujen kanssa 125j_ merkityn intaktin naudan Fn:n tai 29 kD:n N-terminaalisen fragmentin sitomisessa. Yön yli viljellyt E. coli -viljel- • · · mät konsentroitiin 1 0-kertaisesti ja ne lysoitiin 10 mM:ssa ‘ : Tris-HCl, 1 mM:ssa EDTA, pH 7,9, ja 1 mg/ml:ssa lysotsyy- 35 miä. 100 pl:aan sentrifugoidun lysaatin supernatanttia li-M sättiin 100 μΐ stafylokokkisoluja (5x100), 100 μΐ 125i_nau_ tafibronektiiniä (20000 cpm, 190 MBq/mg), 200 μΐ PBS ja sitä inkuboitiin 2 tuntia 20 °C:ssa. Kun seos oli pesty kahdesti PBStssä, joka sisälsi 0,1 % BSA:ta ja 0,05 % ,4 102768
TweenR 20:a, bakteerisoluihin sitoutunut radioaktiivisuus mitattiin gammalaskijassa.
Pn:n ja Fn-fragmenttien jodaus ja 125i_merkitseminen teh-5 tiin kloramiini-T-menetelmän mukaisesti.
Molekyylipainon määrittäminen pFR035:stM peräisin olevan lysaatin western-tMplitys osoittaa kaistan, joka vastaa 100 kD:n molekyylipainoa ja useita 10 kaistoja, joissa molekyylipaino on alhaisempi ja joista useimmat ovat 100 kD:n tuotteen degradaatiotuoteeita, koska siirtymä alempaan molekyylipainoon havaitaan materiaalia varastoitaessa. Käsittelyssä havaittu ero johtuu luultavasti siitä, että pFR035:ssä FnBPB on yhtynyt beeta-Gal-prote-15 iiniin, mutta pFR036:ssa se käyttää omia aloitussignaalei-taan, joten proteiinit ovat hieman erilaiset.
Esitetyt tiedot osoittavat, että S. aureuksessa on kaksi erilaista FnBPjta koodittavaa geeniä. fnbBjn aloituskodoni 20 sijaitsee 682 ep myötävirtaan fnbAin lopetuskodonista. Tämä fnbA:n ja fnbBsn välinen sekvenssi sisältää mahdollisen transkription lopetussignaalin, joka sijaitsee juuri muu-: tamia emäspareja myötävirtaan sanotusta lopetuskodonista.
Samoin transkription aloitussignaalit sijaitsevat 90 emäs-25 parissa, joka edeltää aloituskodonia fnbBjssä. Tämä osoittaa, että geenit translatoituvat erilaisista lähetti-,···. RNArista. Näiden transkriptiosignaalien välinen alue ei sisällä mitään avoimia lukujärjestyksiä, joita edeltää ri- • · · bosomaalinen sitoumispaikka jommassa kummassa juosteessa. 30 350 ep:a alue, joka on vastavirtaan fnbB:n promoottorisek- venssistä, on erittäin homologinen fnbA:n analogisen alueen kanssa. fnbA:ssa oleva sitomistoiminta on paikallistet- • · · tu D-toistoalueeseen (aa 745:n ja 872:n väliin) lähelle • · v ; molekyylin soluseinään liittynyttä aluetta, ja subklooni, .V. 35 josta aminohapot 746-1018 olivat poissuljettuja, oli Fn- ·.! sitomisnegatiivinen. Kun näitä kahta geeniä verrattiin, oli ilmeistä, että pFR035:ssä ja pFR036:ssa ei ollut yhtään toistoaluetta. Silti molemmilla on Fn-sitovaa toimintaa, 15 102768 mikä osoittaa, että läsnä on ei-homologinen nukleotidisek-venssi, joka koodittaa Fn-sitovaa toimintaa.
Fibronektiiniä sitovan proteiinin ilmentyminen E. colin 5 geenistä 2, oli alhaisempaa kuin geenin 1 ilmentäminen.
Tätä fibronektiiniä sitovaa proteiinia voidaan käyttää im-munointiin, jolloin proteiini, edullisesti yhdistettynä fuusioproteiinin laajan antigeenin luomiseksi vasteeksi, 10 injektoidaan annoksina, jotka aiheuttavat immunologisen reaktion isäntänisäkkäässä. Täten fibronektiiniä sitovaa proteiinia voidaan käyttää märehtijöiden rokottamiseksi stafylokokki-infektioiden aiheuttamia utaretulehduksia vastaan.
1 5
Lisäksi fibronektiiniä sitovaa proteiinia voidaan käyttää estämään avoimien ihohaavojen infektoitumista haavahoidolla käyttäen fibronektiiniä sitovaa proteiinia suspensiossa. Tällöin fibronektiiniä sitovaa proteiinia voidaan käyttää 20 haavojen hoitoon, esim. suojaamaan proteiinireseptoreita, tai immunointiin (rokotus). Viimeksi mainitussa tapauksessa isännän ruumis tuottaa spesifisiä vasta-aineita, jotka suojaavat bakteerilajien hyökkäykseltä, jotka lajit sisäl-: tävät tällaista fibronektiiniä sitovaa proteiinia. Tällöin 25 vasta-aineet estävät bakteerilajien kiinnittymisen vahingoittuneeseen kudokseen.
* · · • · XI Esimerkit kudosvaurioiden kolonisoimisesta ovat: • · · t · · a) ihon ja sidekudosten haavojen kolonisointi, jotka haavat 30 aiheutuvat mekaanisista vammoista, kemiallisista vaurioista ja/tai lämmön aiheuttamista vaurioista; b) limakalvohaavojen kolonisointi, kuten suuontelon, tai « · · ·,..· nisien, virtsarakon tai vaginan haavat; • · '/· * sidekudosproteiinien kolonisointi, jotka kudokset ovat al- 35 tistuneet minimaalisille kudosvaurioille (mikroleesio) yh-M dessä epiteelin tai endoteelin kanssa (utaretulehdus, sy- dänläppätulehdus, lonkanvaihtokirurgia).
16 102768
Kun käytetään kyseistä FNBP:tä tai polypeptidiä nisäkkäiden immunointitarkoituksessa (rokotus) mukaan lukien ihminen, proteiini tai polypeptidi dispergoidaan isotoniseen suolaliuokseen ja siihen lisätään optionaalisesti samalla farma-5 seuttisesti hyväksyttävää dispergointiainetta. Lisäksi voidaan käyttää erityyppisiä apuaineita, jotta pidetään yllä kudokseen vapautumista, ja täten altistetaan proteiini tai peptidi pitemmäksi ajaksi ruumiin immuunipuolustusjärjes-telmälle.
10
Sopiva annos immunoinnin saamiseksi on 0,5-5 pg FNBP:a tai polypeptidiä ruumiin painokiloa kohti ja immunoinnin injek-tointi. Jotta saadaan kestävä immunointi, rokottaminen pitää suorittaa usempana kuin yhtenä peräkkäisenä kertana 1-15 3 viikon välein, edullisesti kolmena kertana.
Kun kyseistä FNBP:a tai polypeptidiä käytetään tooppiseen, paikalliseen antamiseen, proteiini dispergoidaan isotoniseen suolaliuokseen pitoisuutena 25-250 pg millilitraa koh-20 ti. Sitten haavoja käsitellään pelkästään sellaisella määrällä, että haavan pinta kostuu täydellisesti. Keskimääräiseen haavan käytetään täten vain muutamia millitlitroja liuosta tällä tavoin. Proteiiniliuoksella käsittelyn jälkeen haavat pestään sopivasti isotonisella suolaliuoksella 25 tai muulla sopivalla haavankäsittelyliuoksella.
.···. Lisäksi keksinnön mukaista fibronektiiniä sitovaa proteii- • · ,···, nia samoin kuin minimaalista fibronektiinisitomispaikka- • » 4 polypeptidiä voidaan käyttää stafylokokkilajien aiheutta-30 mien bakteeri-infektioiden diagnostisoimiseen, jolloin keksinnön mukainen fibronektiiniä sitova proteiini immobili-soidaan kiinteään kantoaineeseen, kuten pieniin lateksi- • * ** · tai SepharoseR-pallosiin, jonka jälkeen vasta-aineita si-v sältävän seerumin annetaan ohittaa immobilisoitu FNBP ja .·.· 35 reagoida täten sen kanssa. Sitten agglutinaatio mitataan .··’ tunnetuilla menetelmillä.
’·, Lisäksi FNBPia tai polypeptidiä voidaan käyttää ELlSA-tes- • tissä (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay; E. Engvall, Med.
102768 1 7
Biol. 5ί5, 1 93, (1 977)). Tällöin polystyreenimikrotiitteri-levyn kolot päällystetään FNBPjlla, ja niitä inkuboidaan yön yli 4 °C:ssa. Sitten levyt pestään kauttaaltaan käyttäen 0,05 % Tween 20:a sisältävää PBS:ää ja ne kuivataan.
5 Potilaan seerumin sarjalaimennokset, jotka oli tehty PBS-Tweenissä, lisättiin koloihin, ja niitä inkuboitiin 30 °C:ssa 1,5 tuntia. Huuhtelemisen jälkeen antihumaani-IgG:tä entsyymiin konjugoituna, tai antinaudan IgG:tä kon-jugoituna entsyymiin, vastaavasti, piparjuuriperoksidaasia 10 tai alkalista fosfataasia lisättiin koloihin ja niitä inkuboitiin 30 °C:ssa 1,5 tuntia, jonka jälkeen kun IgG oli sitoutunut niihen ja huuhtelemisen jälkeen lisättiin entsyymi substraattia , alkalisen fosfataasin tapauksessa p-nit-rofosfataasia, tai ortofenyleenidiamiinisubstraattia (OPD) 15 siinä tapauksessa, että käytettiin peroksidaasia. Sitten kolot käsittävät levyt huuhdeltiin käyttäen sitraattipus-kuria, joka sisälsi 0,055 % OPD:tä kja 0,005 % H2O2, ja niitä inkuboitiin 30 °C:ssa 10 minuuttia. Entsyymireaktio pysäytettiin lisäämällä kuhunkiin koloon 4 N H2SC>4-liuosta. 20 Värin kehittyminen mitattiin käyttämällä spektrofotometriä.
Käytetyn entsyymisubstraatin tyypistä riippuen voidaan käyttää myös fluoresenssimittausta.
25 Toinen menetelmä stafylokokki-infektioiden diagnosoimiseksi on käyttää DNA-geenikoetinmenetelmää, joka perustuu FNBP-sekvenssiin tai polypeptidisekvenssiin. Tällöin luonnolli- I” nen tai synteettinen DNA-sekvenssi kiinnitetään kiinteään • · · *·’ ’ kantoaineeseen, kuten edellä mainittuun polystyreenilevyyn, 30 esim. lisäämällä maitoa pinnalle siinä tapauksessa kun diagnosoidaan utaretulehdusta. DNA-geenikoetin, joka on optionaalisesti entsymaattisesti merkitty tai radioisotoo- • · « pilla merkitty, lisätään sitten kiinteään pintalevyyn, joka käsittää DNA-sekvenssin, jolloin DNA-geenikoetin kiinnittyy 35 sekvenssiin siellä, missä sitä esiintyy. Entsyymi tai ra-dioaktiivinen isotooppi voidaan määrittää helposti tunne-tuilla menetelmillä.
18 102768
Edellä käytetty termi "fibronektiiniä sitova proteiini" sisältää samaten polypeptidisekvenssin, joka muodostaa täydellisen proteiinin minimaalisen fibronektiiniä sitovan paikan.
·»· • · • » • · · • · · • » · • · · • · · • # • · · 19 102768
Viitteet 8. Beachey, E.H. and Simpson, W.A(1982). Infection 10, 107-110.
9. Courtney, H.S., Ofek,I., Simpson, W.A., Hasty, D.L. and Beachey, E.H. (1986). Infect. Immun. 5_3, 454-459.
11. Espersen, F. and C l emmensen, I. (1982). Infect. Immun.
37, 526-531.
12. Fröman, G., Switalski, L.M., Speziale, P. and Hook, M.
(1987). J. Biol. Chem. 26j?, 2564-2571 1. Hynes, R.O. (1985) Annu. Rev. Cell Biol. 1_, 67-90.
2. Hynes, R.O. (1986) Sei. Ann. 254, 42-51.
6. Kuusela, P. (1978) Nature 276, 718-720.
13. Löfdahl, S., Guss B., Uhl6n, M., Philipson, L. and Lindberg, M. (1983) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 8_0, 697-701 .
3. Ruoslahti, E. and Pierschbacher, M.D. (1986). Cell, 44, 517-518.
10. Ryd6n, C., Rubin, K., Speziale, P., Höök, M., Lindberg, M. and Wadstrom, T. (1983), J. Biol. Chem. 258, 3396-3401.
4. Woods, A., Couchman, J.R., Johansson, S., and Höök, M. (1986), ΕΜΒ0 J. 5, 665-670.
5. Yamada, K.M. (1983), Annu. Rev. Biochem. 52_, 761-799.
< · ·♦· • « • « • · · ·»· • ♦ · • · · • · « • · « · 9 • i » 20 1 0 2 7 6 8
Kuvioiden selitykset
Kuvio 1. Fibronektiinia sitovaa proteiinia koodaavan nukleotidin sekvenssi
Esitetään fibronektiinia sitovaa proteiinia koodaava nuk-5 leotidisekvenssi.
Kuvio 2. Aminohapposekvenssien vertailu
Geenin 1 ja geenin 2 aminohapposekvenssit esitetään rinnattaan.
10
Kuvio 3. Restriktiokartta (A) Alkuperäisten kloonien pFR001 ja pFR050 sekä subkloo-nien pFR035 ja pFR036 restriktiokartta. fnbA:n ja fnbB:n sijainti on osoitettu. Insertin sekvensoitu fragmentti on 15 esitetty yksityiskohtaisemmin. Kussakin kloonissa oleva koodaava sekvenssi on esitetty paksunnetuilla viivoilla.
Kuvio 4. S. aureus -lajista 8325-4 peräisin olevan kloonatun fnbB:n dedusoitu aminohapposekvenssi 20
Kuvio 5. Kaaviomainen piirros, joka vertaa FnBPA:n ja FnBPB:n domeeniorganisaatiota.
• · · • · • · • · · • · · • · · • « • · • · · 1 ·
Claims (4)
1. Hybridi-DNA-molekyyli, tunnettu siitä, että se käsittää seuraavan nukleotidisekvenssin:
5 GTTAACAACA ATCTTAACTT TTTATTAACT CGCTTTTTTT CATTGCTTTT AAAAACCGAA CAATATAGAA TTGCATTTAT TGAGTTTTTA AAATAAATGA ATTTTGCATT TAAGGGAGAA TATTATAGTG AAAAGCAATC TTAGATACGG CATAAGAAAA CACAAATTGG GAGCGGCCTC AGTATTCTTA GGAACAATGA TCGTTGTTGG AATGGGACAA GAAAAAGAAG CTGCAGCATC GGAACAAAAC
10 AATACTACAG TAGAGGAAAG TGGGAGTTCA GCTACTGAAA GTAAAGCAAG CGAAACACAA ACAACTACAA ATAACGTTAA TACAATAGAT GAAACACAAT CATACAGCGC GACATCAACT GAGCAACCAT CACAATCAAC ACAAGTAACA ACAGAAGAAG CACCGAAAAC TGTGCAAGCA CCAAAAGTAG AAACTTCGCG AGTTGATTTG CCATCGGAAA AAGTTGCTGA TAAGGAAACT ACAGGAACTC
15 AAGTTGACAT AGCTCAACAA AGTAAAGTCT CAGAAATTAA ACCAAGAATG AAAAGATCAA CTGACGTTAC AGCAGTTGCA GAGAAAGAAG TAGTGGAAGA AACTAAAGCG ACAGGTACAG ATGTAACAAA TAAAGTGGAA GTAGAAGAAG GTAGTGAAAT TGTAGGACAT AAACAAGATA CGAATGTTGT AAATCCTCAT AACGCAGAAA GAGTAACCTT GAAATATAAA TGGAAATTTG GAGAAGGAAT
20. TAAGGCGGGA GATTATTTTG ATTTCACATT AAGCGATAAT GTTGAAACTC ATGGTATCTC AACACTGCGT AAAGTTC CGG AGATAAAAAG TACAGATGGT CAAGTTATGG CGACAGGAGA AATAATTGGA GAAAGAAAAG TTAGATATAC GTTTAAAGAA TATGTACAAG AAAAGAAAGA TTTAACTGCT GAATTATCTT TAAATCTATT TATTGATCCT ACAACAGTGA CGCAAAAAGG TAACCAAAAT *25' GTTGAAGTTA AATTGGGTGA GACTACGGTT AGCAAAATAT TTAATATTCA : ATATTTAGGT GGAGTTAGAG ATAATTGGGG AGTAACAGCT AATGGTCGAA TTGATACTTT AAATAAAGTA GATGGGAAAT TTAGTCATTT TGCGTACATG • · ; AAACCTAACA ACCAGTCGTT AAGCTCTGTG ACAGTAACTG GTCAAGTAAC TAAAGGAAAT AAACCAGGGG TTAATAATCC AACAGTTAAG GTATATAAAC 310; ACATTGGTTC AGACGATTTA GCTGAAAGCG TATATGCAAA GCTTGATGAT • · · I..' GTCAGCAAAT TTGAAGATGT GACTGATAAT ATGAGTTTAG ATTTTGATAC • I V' TAATGGTGGT TATTCTTTAA ACTTTAATAA TTTAGACCAA AGTAAAAATT ..!·1 ATGTAATAAA ATATGAAGGG TATTATGATT CAAATGCTAG CAACTTAGAA TTTCAAACAC ACCTTTTTGG ATATTATAAC TATTATTATA CAAGTAATTT
35 AACTTGGAAA AATGGCGTTG CATTTTACTC TAATAACGCT CAAGGCGACG GCAAAGATAA ACTAAAGGAA CCTATTATAG AACATAGTAC TCCTATCGAA CTTGAATTTA AATCAGAGCC GCCAGTGGAG AAGCATGAAT TGACTGGTAC 22 102768 AATC6AA6AA AGTAATGATT CTAAGCCAAT TGATTTTGAA TATCATACAG CTGTTGAAGG TGCAGAAGGT CATGCAGAAG GTACCATTGA AACTGAAGAA GATTCTATTC ATGTAGACTT TGAAGAATCG ACACATGAAA ATTCAAAACA c TCATGCTGAT GTTGTTGAAT ATGAAGAAGA TACAAACCCA GGTGGTGGTC D AGGTTACTAC TGAGTCTAAC CTAGTTGAAT TTGACGAAGA TTCTACAAAA GGTATTGTAA CTGGTGCTGT TAGCGATCAT ACAACAATTG AAGATACGAA AGAATATACG ACTGAAAGTA ACTTGATTGA ACTAGTAGAT GAACTACCTG AAGAACATGG TCAAGCGCAA GGACCAATCG AGGAAATTAC TGAAAACAAT CATCATATTT CTCATTCTGG TTTAGGAACT GAAAATGGTC ACGGTAATTA TGGCGTGATT GAAGAAATCG AAGAAAATAG CCACGTGGAT ATTAAGAGTG AATTAGGTTA CGAAGGTGGC CAAAATAGCG GTAATCAGTC ATTTGAGGAA GACACAGAAG AAGATAAACC GAAATATGAA CAAGGTGGCA ATATCGTAGA TATCGATTTC GATAGTGTAC CTCAAATTCA TGGTCAAAAT AATGGTAACC 15 AATCATTCGA AGAAGATACA GAGAAAGACA AACCTAAGTA TGAACAAGGT GGTAATATCA TTGATATCGA CTTCGACAGT GTGCCACATA TTCACGGATT CAATAAGCAC ACTGAAATTA TTGAAGAAGA TACAAATAAA GATAAACCAA ATTATCAATT CGGTGGACAC AATAGTGTTG ACTTTGAAGA AGATACACT.T CCACAAGTAA GTGGTCATAA TGAAGGTCAA CAAACGATTG AAGAAGATAC 2Ö": AACACCTCCA ATCGTGCCAC CAACGCCACC GACACCAGAA GTACCAAGCG AGCCGGAAAC ACCAACACCA CCGACACCAG AAGTACCAAG CGAGCCGGAA ACACCAACAC CGCCAACGCC AGAGGTACCA ACTGAACCTG GTAAACCAAT ACCACCTGCT AAAGAAGAAC CTAAAAAACC TTCTAAACCA GTGGAACAAG GTAAAGTAGT AACACCTGTT ATTGAAATCA ATGAAAAGGT TAAAGCAGTG 25':' GTACCAACTA AAAAAGCACA ATCTAAGAAA TCTGAACTAC CTGAAACAGG TGGAGAAGAA TCAACAAACA ACGGCATGTT GTTCGGCGGA TTATTTAGCA TTTTAGGTTT AGCGTTATTA CGCAGAAATA AAAAGAATCA CAAAGCATAA • · :.: : tcaatccaaa attgacaggt ttatttcata aattatatga agtaagcctg • · · ? TTTTTTAAAA TTAAAACAAA TTTCCCAAGA AATAATTACA TACTCAATGA 3^.; CACTATGAAG GCGTTCTAAT TAGTGTTAAA ATGACGTTGA TACATAGATT .···. TAATACTTAG GAAAAGGAGC ACATTAACTT TGAAAAAAAT AAAAAAGGCA • 4 *·[ ATCATTCCCG CTGCTGGTTT AGGGACTAGA TTTTTACCAG CAACTAAAGC GATGCCAAAG GAAATGCTTC CTATCTTAGA TAAACCCACA ATACAATATA TCGTTGAAGA AGCTGCAAGA GCTGGAATTG AAGATATTAT TATAGTGACA 35 GGTCGC CACA AACGCGCGAT TGAAGATCAT TTTGATAGTC AAAAAGAATT AGAAATGGTG TTAAAAGAAA AAGGTAAATC TGAATTACTA GAGAAAGTTC AGTATTCAAC GGAACTTGCG AATATTTTTT ATGTAAGGCA GAAAGAACAA AAAGGTTTAG GGCATGC 23 102768
2. Plasmidi tai faagi, tunnettu siitä, että se käsittää patenttivaatimuksen 1 mukaisen nukleotidisekvenssin.
3. Mikro-organismi, tunnettu siitä, että käsittää vähintään 5 patenttivaatimuksen 2 mukaisen plasmidin tai faagin.
4. Fibronektiiniä sitovan proteiinin tai polypeptidin valmistusmenetelmä, tunnettu siitä, että a) vähintään yksi patenttivaatimuksen 1 mukainen hybridi-DNA-molekyyli viedään 10 mikro-organismiin, b) kyseinen mikro-organismi viljellään kasvua edistävässä väliaineessa, ja c) täten muodostunut proteiini eristetään affiniteettikromatografiällä pylväässä, jossa on fibronektiiniä, joka on sitoutunut liukenemattomaan kantoai-neeseen, mitä seuraa ioninvaihtokromatografia. « t * · » « • *4 · • 4 4 • * · 4 * ’ a r « · i * · t • · • · · • · • · · « • · · «i«a 24 102768 Pal-pnt-.krav
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE8901687A SE8901687D0 (sv) | 1989-05-11 | 1989-05-11 | Fibronectin binding protein as well as its preparation |
| SE8901687 | 1989-05-11 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI902350A0 FI902350A0 (fi) | 1990-05-10 |
| FI102768B true FI102768B (fi) | 1999-02-15 |
| FI102768B1 FI102768B1 (fi) | 1999-02-15 |
Family
ID=20375920
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI902350A FI102768B1 (fi) | 1989-05-11 | 1990-05-10 | Hybridi-DNA-molekyyli ja menetelmä fibronektiiniä sitovan proteiinin valmistamiseksi |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US5175096A (fi) |
| EP (1) | EP0397633B1 (fi) |
| JP (1) | JP3077993B2 (fi) |
| AT (1) | ATE125867T1 (fi) |
| AU (1) | AU630950B2 (fi) |
| CA (1) | CA2016521C (fi) |
| DE (1) | DE69021263T2 (fi) |
| DK (1) | DK0397633T3 (fi) |
| ES (1) | ES2077666T3 (fi) |
| FI (1) | FI102768B1 (fi) |
| GR (1) | GR3017946T3 (fi) |
| IE (1) | IE72968B1 (fi) |
| NO (1) | NO300069B1 (fi) |
| NZ (1) | NZ233614A (fi) |
| SE (1) | SE8901687D0 (fi) |
Families Citing this family (67)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE8801894D0 (sv) * | 1988-05-20 | 1988-05-20 | Alfa Laval Agri Int | Fibronektinbindande protein |
| SE8901687D0 (sv) * | 1989-05-11 | 1989-05-11 | Alfa Laval Agri Int | Fibronectin binding protein as well as its preparation |
| US5440014A (en) * | 1990-08-10 | 1995-08-08 | H+E,Uml/Oo/ K; Magnus | Fibronectin binding peptide |
| US5851794A (en) * | 1990-10-22 | 1998-12-22 | Alfa Laval Ab | Collagen binding protein as well as its preparation |
| US7279162B1 (en) | 1990-10-22 | 2007-10-09 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Isolated broadly reactive opsonic immunoglobulin for treating a pathogenic coagulase-negative staphylococcus infection |
| US5610148A (en) * | 1991-01-18 | 1997-03-11 | University College London | Macroscopically oriented cell adhesion protein for wound treatment |
| US5629287A (en) * | 1991-01-18 | 1997-05-13 | University College London | Depot formulations |
| US5980908A (en) * | 1991-12-05 | 1999-11-09 | Alfa Laval Ab | Bacterial cell surface protein with fibronectin, fibrinogen, collagen and laminin binding ability, process for the manufacture of the protein and prophylactic treatment |
| DE69434437T2 (de) * | 1993-02-05 | 2006-04-06 | Smithkline Beecham P.L.C., Brentford | Fibronektinbindungsprotein, monoklonaler antikoerper und ihre verwendung zur verhuetung der adhäsion von bakterien |
| US5492819A (en) * | 1993-09-23 | 1996-02-20 | Genencor International, Inc. | Recovery of insoluble biosynthetic products |
| US7083979B1 (en) | 1994-03-25 | 2006-08-01 | Indiana University Foundation | Methods for enhanced retroviral-mediated gene transfer |
| US6033907A (en) * | 1995-09-29 | 2000-03-07 | Indiana University Foundation | Enhanced virus-mediated DNA transfer |
| US6933366B2 (en) * | 1996-12-27 | 2005-08-23 | Tripep Ab | Specificity exchangers that redirect antibodies to bacterial adhesion receptors |
| US6660842B1 (en) | 1994-04-28 | 2003-12-09 | Tripep Ab | Ligand/receptor specificity exchangers that redirect antibodies to receptors on a pathogen |
| US6040137A (en) * | 1995-04-27 | 2000-03-21 | Tripep Ab | Antigen/antibody specification exchanger |
| US20040247611A1 (en) * | 1994-05-23 | 2004-12-09 | Montana State University | Identification of pathogen-ligand interactions |
| GB9415902D0 (en) * | 1994-08-05 | 1994-09-28 | Smithkline Beecham Plc | Method of treatment |
| WO1997011604A1 (en) * | 1995-09-29 | 1997-04-03 | Indiana University Foundation | Methods for enhanced virus-mediated dna transfer using molecules with virus- and cell-binding domains |
| US6013482A (en) | 1996-10-15 | 2000-01-11 | Smithkline Beecham Plc | Cell surface protein compounds |
| US5858709A (en) * | 1996-10-15 | 1999-01-12 | Smithkline Beecham P.L.C. | Fibronectin binding protein B compounds |
| GB2306483B (en) * | 1995-10-16 | 1998-09-23 | Smithkline Beecham Plc | Cell surface polypeptides of Staphylococcus aureus |
| GB9521146D0 (en) * | 1995-10-16 | 1995-12-20 | Smithkline Beecham Plc | Novel compounds |
| US6274376B1 (en) * | 1996-02-20 | 2001-08-14 | Smithkline Beecham Corporation | ClpL |
| US6348584B1 (en) * | 1996-10-17 | 2002-02-19 | John Edward Hodgson | Fibronectin binding protein compounds |
| US6685943B1 (en) | 1997-01-21 | 2004-02-03 | The Texas A&M University System | Fibronectin binding protein compositions and methods of use |
| JP5124062B2 (ja) * | 1997-01-21 | 2013-01-23 | ザ・テキサス・エイ・アンド・エム・ユニバーシテイ・システム | フィブロネクチン結合タンパク質組成物および使用法 |
| US6610293B1 (en) * | 1997-06-16 | 2003-08-26 | The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Opsonic and protective monoclonal and chimeric antibodies specific for lipoteichoic acid of gram positive bacteria |
| US6270992B1 (en) * | 1997-07-29 | 2001-08-07 | Smithkline Beecham Corporation | Histidine kinase of Staphylococcus aureus |
| GB9720633D0 (en) * | 1997-09-29 | 1997-11-26 | Univ Bristol | BHV-2 vector |
| US7250494B2 (en) * | 1998-06-15 | 2007-07-31 | Biosynexus Incorporated | Opsonic monoclonal and chimeric antibodies specific for lipoteichoic acid of Gram positive bacteria |
| US6692739B1 (en) | 1998-08-31 | 2004-02-17 | Inhibitex, Inc. | Staphylococcal immunotherapeutics via donor selection and donor stimulation |
| US6703025B1 (en) | 1998-08-31 | 2004-03-09 | Inhibitex, Inc. | Multicomponent vaccines |
| US20020092987A1 (en) * | 1998-09-05 | 2002-07-18 | Taehee Cho | Photo detect device using quantum dots and materialization method thereof |
| SK782002A3 (en) | 1999-07-21 | 2003-08-05 | Lexigen Pharm Corp | FC fusion proteins for enhancing the immunogenicity of protein and peptide antigens |
| WO2002090502A2 (en) * | 2001-05-08 | 2002-11-14 | The Texas A & M University System | Highly conserved proteins from gram-positive bacteria |
| EP1395272A4 (en) | 2001-05-11 | 2005-10-26 | Texas A & M Univ Sys | METHOD AND COMPOSITIONS FOR INHIBITING THE THROMBIN-INDUCED BLOOD GRINDING |
| CA2450939C (en) | 2001-06-15 | 2012-11-06 | Inhibitex, Inc. | Cross-reactive monoclonal and polyclonal antibodies which recognize surface proteins from coagulase-negative staphylococci and staphylococcus aureus |
| US7115264B2 (en) * | 2001-11-05 | 2006-10-03 | Inhibitex | Monoclonal antibodies to the fibronectin binding protein and method of use in treating or preventing infections |
| US7335359B2 (en) * | 2003-02-06 | 2008-02-26 | Tripep Ab | Glycosylated specificity exchangers |
| AU2004209457A1 (en) * | 2003-02-06 | 2004-08-19 | Tripep Ab | Antigen/antibody or ligand/receptor glycosylated specificity exchangers |
| US9296795B2 (en) * | 2003-03-07 | 2016-03-29 | Wyeth Holdings, Llc. | Polysaccharide-staphylococcal surface adhesin carrier protein conjugates for immunization against nosocomial infections |
| CA2522690A1 (en) * | 2003-05-06 | 2004-11-25 | Syntonix Pharmaceuticals, Inc. | Inhibition of drug binding to serum albumin |
| TWI353991B (en) | 2003-05-06 | 2011-12-11 | Syntonix Pharmaceuticals Inc | Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids |
| EP3552627A1 (en) * | 2003-05-06 | 2019-10-16 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Clotting factor-fc chimeric proteins to treat hemophilia |
| US7348004B2 (en) * | 2003-05-06 | 2008-03-25 | Syntonix Pharmaceuticals, Inc. | Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids |
| EP2301957A3 (en) * | 2004-05-21 | 2011-05-18 | Wyeth LLC | Altered fibronectin-binding protein of staphylococcus aureus |
| EP2305294B1 (en) | 2004-09-22 | 2015-04-01 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Immunogenic composition for use in vaccination against staphylococcei |
| EA015833B1 (ru) | 2006-03-30 | 2011-12-30 | Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. | Иммуногенная композиция |
| US20090092631A1 (en) * | 2007-03-26 | 2009-04-09 | Tripep Ab | Glycosylated specificity exchangers that induce an antibody dependent cellular cytotoxicity (adcc) response |
| US9181329B2 (en) | 2007-08-31 | 2015-11-10 | The University Of Chicago | Methods and compositions related to immunizing against Staphylococcal lung diseases and conditions |
| WO2009029831A1 (en) * | 2007-08-31 | 2009-03-05 | University Of Chicago | Methods and compositions related to immunizing against staphylococcal lung diseases and conditions |
| WO2010014304A1 (en) * | 2008-07-29 | 2010-02-04 | University Of Chicago | Compositions and methods related to staphylococcal bacterium proteins |
| US20110262477A1 (en) | 2008-10-06 | 2011-10-27 | University Of Chicago | Compositions and Methods Related to Bacterial EAP, EMP, and/or ADSA Proteins |
| PT3281947T (pt) | 2009-04-03 | 2020-05-07 | Univ Chicago | Composições e métodos relacionados com variantes da proteína a (spa) |
| GB0913680D0 (en) | 2009-08-05 | 2009-09-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
| US9364516B2 (en) | 2010-02-03 | 2016-06-14 | University Of Rochester | Treatment of fibrosis-related disorders using fibronectin binding proteins and polypeptides |
| US8808699B2 (en) | 2010-04-05 | 2014-08-19 | The University Of Chicago | Compositions and methods related to protein A (SpA) antibodies as an enhancer of immune response |
| AU2011274367B2 (en) | 2010-07-02 | 2015-04-23 | The University Of Chicago | Compositions and methods related to protein A (SpA) variants |
| US9095540B2 (en) | 2010-09-09 | 2015-08-04 | The University Of Chicago | Methods and compositions involving protective staphylococcal antigens |
| US8945588B2 (en) | 2011-05-06 | 2015-02-03 | The University Of Chicago | Methods and compositions involving protective staphylococcal antigens, such as EBH polypeptides |
| AU2012296576B2 (en) | 2011-08-15 | 2017-09-07 | The University Of Chicago | Compositions and methods related to antibodies to staphylococcal protein a |
| US9968668B2 (en) | 2012-04-26 | 2018-05-15 | The University Of Chicago | Staphylococcal coagulase antigens and methods of their use |
| WO2013162751A1 (en) | 2012-04-26 | 2013-10-31 | University Of Chicago | Compositions and methods related to antibodies that neutralize coagulase activity during staphylococcus aureus disease |
| US10588949B2 (en) | 2013-03-15 | 2020-03-17 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Factor IX polypeptide formulations |
| CN105384800B (zh) * | 2015-12-07 | 2019-01-25 | 黑龙江八一农垦大学 | 金黄色葡萄球菌taf融合蛋白制备方法及其应用 |
| EP3257862A1 (en) * | 2016-06-16 | 2017-12-20 | ETH Zürich | Fibronectin-binding peptides for use in tumor or fibrosis diagnosis and therapy |
| KR20220107166A (ko) | 2019-10-02 | 2022-08-02 | 얀센 백신스 앤드 프리벤션 비.브이. | 스타필로코커스 펩티드 및 사용 방법 |
Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3917818A (en) * | 1970-01-14 | 1975-11-04 | Agricura Labor Ltd | Treatment of mastitis in cows, the product for this treatment and to the production of said product |
| DE2644622C3 (de) * | 1976-10-02 | 1979-11-29 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Extraktion von Mikroorganismen und diese enthaltende diagnostische Mittel |
| SE445013B (sv) * | 1979-06-21 | 1986-05-26 | Landstingens Inkopscentral | Medel for att forebygga eller behandla infektioner hos menniskor och djur |
| US4425330A (en) * | 1981-05-20 | 1984-01-10 | Cornell Research Foundation, Inc. | Bovine mastitis vaccine and method for detecting efficacy thereof |
| SE446688C (sv) * | 1982-09-14 | 1989-10-16 | Magnus Hoeoek | Medel foer avlaegsnande av mikroorganismer fraan vaevnader, vilket bestaar av ett protein som kan bindas till mikroorganismerna |
| DK219084D0 (da) * | 1984-05-02 | 1984-05-02 | Frederik Carl Peter Lindberg | Antigen |
| SE454403B (sv) * | 1984-05-30 | 1988-05-02 | Alfa Laval Agri Int | Anvendning av ett cellyteprotein med fibronektin-, fibrinogen-, kollagen-, och/eller lamininbindande egenskaper vid framstellning av sarbehandlingsmedel |
| US5189015A (en) * | 1984-05-30 | 1993-02-23 | Alfa-Laval Agri International Ab | Method for prophylactic treatment of the colonization of a Staphylococcus aureus bacterial strain by bacterial cell surface protein with fibronectin and fibrinogen binding ability |
| US5571514A (en) * | 1987-06-01 | 1996-11-05 | Alfa Laval Ab | Fibronectin binding protein as well as its preparation |
| US5320951A (en) * | 1987-06-01 | 1994-06-14 | Hoeoek Magnus | Fibronectin binding protein as well as its preparation |
| SE8702272L (sv) * | 1987-06-01 | 1988-12-02 | Alfa Laval Agri Int | Fibronektinbindande protein samt dess framstaellning |
| SE8801723D0 (sv) * | 1988-05-06 | 1988-05-06 | Staffan Normark | Fibronectin binding protein as well as its preparation |
| SE8801894D0 (sv) * | 1988-05-20 | 1988-05-20 | Alfa Laval Agri Int | Fibronektinbindande protein |
| SE8901687D0 (sv) * | 1989-05-11 | 1989-05-11 | Alfa Laval Agri Int | Fibronectin binding protein as well as its preparation |
| SE9002617D0 (sv) * | 1990-08-10 | 1990-08-10 | Alfa Laval Agri Int | A fibronectin binding peptide |
-
1989
- 1989-05-11 SE SE8901687A patent/SE8901687D0/xx unknown
-
1990
- 1990-05-04 AT AT90850166T patent/ATE125867T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-05-04 DE DE69021263T patent/DE69021263T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-05-04 ES ES90850166T patent/ES2077666T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-05-04 EP EP90850166A patent/EP0397633B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-05-04 DK DK90850166.1T patent/DK0397633T3/da active
- 1990-05-09 US US07/520,808 patent/US5175096A/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-05-09 AU AU54818/90A patent/AU630950B2/en not_active Expired
- 1990-05-09 NZ NZ233614A patent/NZ233614A/en unknown
- 1990-05-10 CA CA002016521A patent/CA2016521C/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-05-10 NO NO902082A patent/NO300069B1/no not_active IP Right Cessation
- 1990-05-10 IE IE169690A patent/IE72968B1/en not_active IP Right Cessation
- 1990-05-10 FI FI902350A patent/FI102768B1/fi active IP Right Grant
- 1990-05-11 JP JP02120158A patent/JP3077993B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-11-14 US US08/340,458 patent/US5652217A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-11-01 GR GR950403055T patent/GR3017946T3/el unknown
-
1996
- 1996-10-04 US US08/725,492 patent/US5840846A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NZ233614A (en) | 1991-12-23 |
| FI902350A0 (fi) | 1990-05-10 |
| US5652217A (en) | 1997-07-29 |
| DE69021263T2 (de) | 1996-01-04 |
| EP0397633A2 (en) | 1990-11-14 |
| JPH03272687A (ja) | 1991-12-04 |
| ATE125867T1 (de) | 1995-08-15 |
| CA2016521A1 (en) | 1990-11-11 |
| IE72968B1 (en) | 1997-05-07 |
| SE8901687D0 (sv) | 1989-05-11 |
| DE69021263D1 (de) | 1995-09-07 |
| IE901696L (en) | 1990-11-11 |
| GR3017946T3 (en) | 1996-02-29 |
| CA2016521C (en) | 2002-02-05 |
| US5840846A (en) | 1998-11-24 |
| EP0397633A3 (en) | 1991-07-31 |
| FI102768B1 (fi) | 1999-02-15 |
| ES2077666T3 (es) | 1995-12-01 |
| NO902082L (no) | 1990-11-12 |
| US5175096A (en) | 1992-12-29 |
| JP3077993B2 (ja) | 2000-08-21 |
| AU630950B2 (en) | 1992-11-12 |
| NO300069B1 (no) | 1997-04-01 |
| AU5481890A (en) | 1990-11-15 |
| EP0397633B1 (en) | 1995-08-02 |
| DK0397633T3 (da) | 1996-01-02 |
| NO902082D0 (no) | 1990-05-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI102768B (fi) | Hybridi-DNA-molekyyli ja menetelmä fibronektiiniä sitovan proteiinin v almistamiseksi | |
| US5866541A (en) | Fibronection binding protein from Streptococcus dysgalactiae | |
| EP1117772B1 (en) | Polypeptides and polynucleotides from coagulase-negative staphylococci | |
| US5440014A (en) | Fibronectin binding peptide | |
| EP0668871A1 (en) | Amino-acid sequence homologies between selectins and b. pertussis toxin-peptidesderived therfrom, antibodies thereto and pharmaceutical compositions | |
| US6733758B1 (en) | Fibrinogen binding protein originating from coagulase-negative staphylococcus | |
| US5851794A (en) | Collagen binding protein as well as its preparation | |
| FI101552B (fi) | Hybridi-DNA-molekyyli, joka koodaa fibronektiiniä sitovaa proteiinia s ekä menetelmä proteiinin valmistamiseksi | |
| FI105333B (fi) | Kollageeniä sitova proteiini tai polypeptidi sekä sen valmistaminen | |
| AU632001B2 (en) | A fibronectin binding peptide | |
| US5789549A (en) | Fibronectin binding protein | |
| US20020173462A1 (en) | Fibrinogen binding protein | |
| WO1996002566A9 (en) | Vitronectin binding protein | |
| WO2004071422A2 (en) | Streptococcal serum opacity factors and fibronectin-binding proteins and peptides thereof for the treatment and detection of streptococcal infection | |
| IE83742B1 (en) | Fibronectin binding protein |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG | Patent granted |
Owner name: ALFA-LAVAL AGRI INTERNATIONAL AKTIEBOLAG |