FI101793B - Menetelmä uusien, terapeuttisesti käyttökelpoisten 9-purinyylifosfonih appojohdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Description

101793

Menetelmä uusien, terapeuttisesti käyttökelpoisten 9-puri-nyylifosfonihappojohdannaisten valmistamiseksi Tämän keksinnön kohteena on menetelmä uusien, tera-5 peuttisesti käyttökelpoisten 9-purinyylifosfonihappojohdannaisten valmistamiseksi, joilla on kaava 1 io | J V-H, R ^ * N | CH2-Ar-Z-P(O ) ( OH )2 15 jossa Ar-silta, joka yhdistää CH2- ja Z-ryhmät on I^-subs-tituoitu fenyyli, furaani tai tiofeeni, jolloin fenyyli voi muodostaa sillan sen 1,2-, 1,3- tai 1,4-asemissa ja 20 kumpikin furaanista ja tiofeenistä voi muodostaa sillan 2,3-, 2,4-, 2,5- tai 3,4-aseman rengashiiliatomien kautta; Rg-substitutio voi olla mono- tai di-substituoitu, jolloin substituointi toteutuu missä tahansa muissa vapaissa ren-gashiiliatomeissa, Z on osaryhmä (a), (b), (c), (d) tai 25 (e) jolloin

R4 X X

I I I

(a) on - C - C - , (b) on - O -(CH,) - C - ,

II I

R*4 y y 30 (c) on R7\ /r8

X Y C X

35 I I H I

- C - C -, (d) on - C - C -, ja (e) on - C - C -

Y

101793 2 edellyttäen, että kun Z on osaryhmä (b), niin Ar on muu kuin £uraani tai tiofeeni, n on kokonaisluku 1-5 tai 0,

Ri on -OH tai -SH, R2 on H tai -NH2, 5 R3 on H, -NH2, -OH tai -NH-NH2, R4 on H, R'4 on H, OH tai F, tai R4 ja R'4 muodostavat yhdessä hiiliatomin kanssa, johon ne ovat sitoutuneet, ketoryh-män, 10 kumpikin R7 ja Re on H, F tai 01-4 alkyyli,

Rg on H, Cl, Br, Ci.g alkyyli, C^ alkoksi, OH, NH2 tai CH3, edellyttäen että kun Ar on furaani tai tiofeeni, R, on muu kuin OH tai NH2, X ja Y ovat H, F tai Cl, edellyttäen, että kun n on 15 0, X ja Y ovat molemmat H.

Puriininukleosidifosforylaasi (PNP) katalysoi normaaleissa in vivo olosuhteissa guaniinin ja hypoksantiinin ribo- ja deoksiribonukleosidien fosforolyyttistä lohkaisua vastaavaksi sokerifosfaatiksi ja guaniiniksi tai hypoksan-20 tiiniksi. PNP:n poissaollessa virtsahappopitoisuus on melko alhainen kun taas PNP:n tiettyjen nukleosidisubstraat-tien, kuten (dGuotn) pitoisuus plasmassa ja virtsassa kohoaa. dGuo on myrkyllinen varhaisimusoluille, kuitenkin T-solut ovat alttiimpia kuin B-solut. Tosiaan, potilaissa, 25 joilla on geneettisesti saatu PNP vajaus, B-solu-immuno-globuliinin tuotanto on normaali tai jopa kohonnut, mutta näillä potilailla on valkosolukato ja T-imusolutoiminta puuttuu joko kokonaan tai on huomattavasti heikentynyt. Koska ei-kontrolloitu PNP vajaus on tietenkin ei-toivotta-30 vaa, on olemassa monia tapauksia, joissa immuunijärjestelmän kontrolloitu heikentäminen ja erityisesti kontrolloitu T-solujen tukahduttaminen olisi hyvin toivottavaa, kuten T-soluleukemian hoidossa, isäntä/siirre-reagoinnin heikentämisessä elinsiirtopotilaissa ja kihdin hoidossa. Hakijat 35 ovat löytäneet 9-purinyylifosfonihappojohdannaisten luo- 101793 3 kan, jotka yhdisteet ovat tehokkaita PNP inhibitoijia ja ovat täten hyödyllisiä hylkimistä vastustavina aineina.

EP-hakemusjulkaisu 338 168 koskee guaniinin ja hy-poksantiinin 6-fosfonoalkyylipuruunijohdannaisten käyttöä 5 puriininukleosidifosforylaasl-inhibiittoreina. Yhdisteet ovat käyttökelpoisia immunosuppressanteina, antiparasiit-tisina aineina, virtsa-aineen muodostusta estävinä aineina ja T-soluleukemian hoidossa. Chemical Abstracts, voi. 107 (1987), 108 918x: Biochem. Pharmacol. (1987), 36(8), 1237 10 - 1244 koskee ihmisen puriininukleosidifosforylaasin inhi- bitointa asyklisillä nukleosideilla ja nukleotideilla. Chemical Abstracts, voi. 107 (1987), 228 453p: Agent Actions (1987), 21 (3 - 4), 253 - 256 koskee 8-amino-9-subs-tituoitujen guaniinien käyttöä puriininukleosidifosfory-15 laasi-inhibiittoreina.

Tässä käytettynä termit C^ tai alkyyli käsittävät sekä suorat että haarautuneet tyydytetyt alemmat ali-faattiset hiilivetyryhmät, joissa on jopa 4 tai 6, vastaavasti, hiiliatomia, mukaanlukien metyylin, etyylin, pro-20 pyylin, isopropyylin, sek-butyylin, n-butyylin, t-butyylin, pentyylin ja vastaavat; C^ alkoksiryhmät ovat niiden eetterijohdannaisia. "Ar"-silta, sen jatkuvat CH2- ja Z-ryhmät ovat R9-substituoitu fenyyli, furaani tai tiofeeni, jolloin fenyyli voi muodostaa sillan sen 1,2-, 1,3- tai 25 1,4-asemissa ja kumpikin furaanista ja tiofeenistä voi muodostaa sillan 2,3-, 2,4-, 2,5- tai 3,4-aseman rengas-hiiliatomien kautta; Rg-substitutio voi olla mono- tai di-substituoitu, substituointi toteutuu missä tahansa muissa vapaissa rengashiiliatomeissa. Tautomeeriset enoli-keto-30 muodot voivat olla olemassa puriiniytimen 6-asemassa.

Ilmaisulla "farmaseuttisesti hyväksyttävät happo-additiosuolat" on tarkoitus kattaa mitkä tahansa kaavan 1 perusyhdisteiden ei-myrkylliset orgaaniset tai epäorgaaniset happoadditiosuolat. Kuvaavia epäorgaanisia happoja, 35 jotka muodostavat sopivia suoloja, ovat vetykloridi-, ve- 4 1C 1753 tybromidi-, rikki- ja fosforihapot ja happoraetallisuolat, kuten natriummonovetyortofosfaatti ja kaliumvetysulfaatti. Kuvaavia orgaanisia happoja, jotka muodostavat sopivia suoloja, ovat mono-, di- ja trikarboksyylihapot. Kuvaavia 5 tällaisia happoja ovat esimerkiksi etikka-, glykoli-, maito-, palorypäle-, meloni-, meripihka-, glutaari-, fumaa-ri-, hydroksimeripihka-, viini-, sitruuna-, askorbiini-, omena-, hydroksiomena-, bentsoe-, hydroksibentsoe-, fenyy-lietikka-, kaneli-, salisyyli- ja fenoksibentsoehapot.

10 Muita orgaanisia happoja, jotka voivat muodostaa sopivia suoloja, ovat sulfonihapot, kuten metaanisulfonihappo ja 2-hydroksietaanisulfonihappo. Joko mono- tai di-happo-suoloja voidaan muodostaa ja tällaiset suolat voivat esiintyä joko hydratoidussa tai pääosin vedettömässä muo-15 dossa. Happosuolat valmistetaan standardimenetelmien avulla, kuten liuottamalla vapaa emäs vesipitoiseen tai vesi-alkoholipitoiseen liuokseen tai muuhun sopivaan liuotti-meen, joka sisältää tarkoituksenmukaista happoa ja eristetään haihduttamalla liuos tai saattamalla vapaa emäs rea-20 goimaan orgaanisen liuottimen kanssa, jolloin suola erottuu välittömästi tai se voidaan saada väkevöimällä liuos, yleisesti tämän keksinnön yhdisteiden happoadditiosuolat ovat kiteisiä aineita, jotka ovat liukoisia veteen ja moniin hydrofiilisiin orgaanisiin liuottimiin ja joilla, 25 verrattuna niiden vapaisiin emäsmuotoihin, on korkeammat sulamispisteet ja kohonnut stabiilisuus.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että yhdiste, jolla on kaava 30 Rx o>·· 35 2 N | CH2-Ar-Z-P( 0) (OCj^g )2 5 Ί 01793 saatetaan reagoimaan trimetyylisilyylibromidin kanssa standardireaktio-olosuhteissa, ja haluttaessa muutetaan tuote sen farmaseuttiseksi suolaksi.

Kaavan I yhdisteiden valmistus voidaan yleensä suo-5 rittaa kondensaatioreaktiolla, jossa 6-klooripuriinia (2) käsitellään aktivoidulla (-CH2-Ar-Z-)-substituoidulla fos-fonaatilla (3) ja muodostunut Ia välituote muutetaan tarkoituksenmukaiseksi kaavan I Rt-, R2-, R3-substituoiduksi puriinijohdannaiseksi. Yleistä kondensaatioreaktiota kuva-10 taan seuraavassa reaktiokaaviossa.

Cl 15 I f y * Q-CH2-Ar-Z-P -►

Rl X'*'" » ^0R6

N I

H

: (2) (3) 20

Cl __. n Modifioinnit \ iP χΝ> -* JL· I I / puriiniryhmäksi " 25 iS» CH2-Ar-Z-^ ^0R6 (Ia) f1

: 30 I

L li VR3

Ri nSRs 35 CH2-Ar-Z-^ ^0R6 (I) 101793 6 jossa Rx, R2, R3/ Ar ja Z ovat kuten edellä on määritetty, paitsi että R'4, joka esiintyy kun Z on osaryhmä (a), voi myös olla silyylieetteri, R5 ja R6 tarkoittavat C1_6-alkyy-liä tai vetyä, ja Q on bromi, jodi tai hydroksi.

5 Niissä tapauksissa, joissa halutaan toteuttaa 6-klooripuriini-välituotteen (2) kondensaatio fosfonoaryy-lillä (3), jossa Q on halidi, kondensaatio toteutetaan saattamalla reagoimaan pieni ylimäärä (n. 10 %) 6-C1 pu-riinilähtöainetta (2) emäksen, kuten natriumhydridin 10 (NaH), kaliumkarbonaatin (K2C03) tai kesiumfluoridin (CsF) (2 ekvivalentin määrinä) läsnäollessa ei-reaktiivisessa liuottimessa, kuten dimetyyliformamidissa (DMF) lämpötila-alueella n. 0 °C - 60 eC, edullisesti huoneen lämpötilassa n. 4-18 tuntia.

15 Tapauksessa, jossa Q on OH, kondensaatio toteute taan neutraaleimmissa olosuhteissa Mitsunobu-tyyppisen reaktion mukaisesti käyttäen dietyyliatsodikarboksylaattia (DEAD) P(R')3:n läsnäollessa, jossa R* on edullisesti fe-nyyli, mutta voi myös olla metyyli tai isopropyyli, mai-20 nittu reaktio toteutetaan sopivassa ei-reaktiivisessa liuottimessa 0-60 °C:ssa.

Tietenkin jokaisessa tapauksessa, jossa Ar-ryhmä sisältää R9-substituentin, johon näiden kondensaatioiden reaktio-olosuhteet (tai puriiniemäksen modifioinnit) voi-25 vat vaikuttaa, tällaiset substituentit modifioidaan estämään mitä tahansa ei-toivottuja sivureaktioita ja tarkoituksenmukaisessa vaiheessa, muutetaan takaisin haluttuun muotoon. Esimerkiksi, jos R9 on OH, niin välituote esteri-tai eetterijohdannainen voidaan muodostaa ja tarkoituksen-30 mukaisessa vaiheessa esteri tai eetteri voidaan hydrolysoida takaisin alkoholikseen. Normaalisti alaan perehtyneet ymmärtävät nämä menetelmät hyvin eikä niitä tarvitse tässä kuvata yksityiskohtaisesti.

101793 7

Erityisessä tapauksessa, jossa R«, R'4, X ja Y kaavassa (3) ovat vety, on edullista kondensoida fosfonyyli-aryylin bromimetyylijohdannainen, jolla on kaava 5 Br ' I ||/0R5

Ar'-Λ J» nor6 (4) 10 puriinilla (2) ja hydrata saadut tuotteet edullisesti käyttäen vetykaasua palladium/hiilen läsnäollessa (H2-Pd/C) standardimenetelmien mukaisesti.

Erityisessä tapauksessa, jossa halutaan valmistaa 15 kaavan Ia yhdisteitä, joissa R4 on H ja R'4 on OH tai R4 ja R'4 muodostavat keto-ryhmän (kuten edellä on määritetty), ne valmistetaan käyttäen silyylieetteriä (edullisesti t-butyylidimetyylisilyylieetteriä) suojaamaan fosfonyyli-halidin hydroksiosaa, ts.

20 —Si +

Br | 1 I o x 0R5 L im

-Ar - CH - C - P = O

25 I I

25 Y or6 (5) I. , jossa — OSi-J— 30 * on t-butyylidimetyylisilyylieetteri, ja kondensaation jälkeen, kuten edellä on kuvattu, poistetaan sllyyli-suojary-hmä happohydrolyysillä. Mikäli muodostunut alkoholi on 35 hapetettava, alkoholi voidaan hapettaa halutuksi ketoniksi 8 101795 käyttäen Swern-hapetusreaktiota. Käytännössä on edullista muodostaa sllyylieettteri ennen kaavan 3 lähtöaineiden aktivointia, kuten seuraavassa on kuvattu.

Kaavan 3 "Q-aktivoidut" lähtöaineet voidaan valmis-5 taa alalla hyvin tunnettujen menetelmien avulla, edullisesti hyödyntäen välituotteita, joissa OH-ryhmät (mikäli läsnä) ovat reaktio-suojattuja ennen aktivointia joko halo- tai hydroksiryhmillä.

Edullisesti bromaus toteutetaan N-bromisukkiini-10 imidillä (NBS) tai muilla sopivilla N-bromiamideilla kata-' lyyttisen määrän bentsoyyliperoksidia läsnäollessa, reaktio toteutetaan edullisesti CC14 (hiilitetrakloridi) -liu-ottimessa. Edullisesti kaavan 3 lähtöaineet, joissa Q on OH, voidaan valmistaa suoraan (6:sta) reaktiolla CeAmN03 15 (serium(IV)ammoniumnitraatti) kanssa tai muuttamalla bent- syylibromidi (7) asetaatikseen, mitä seuraa asetaatin hyd-rolysointi katalyyttisillä määrillä natriummetoksidia me-tanolissa, mainittu reaktio käyttäen standardimenetelmiä on hyvin tunnettu alalla.

20 ORs 0R5

... Λ NBS I

CH3-Ar-Z-fj = 0 -^ BrCH2-Ar-Z-P = 0 ORg Bentsoyyliperoksidi ^ 25 <6» or5 <7>

CeAmN03 H0CH2Ar-Z-P = 0 1J asetylointi —i _ 2> 0R6 ^- 30 (8) jossa Ar, Z, R5 ja R6 ovat kuten edellä on määritetty, paitsi että R'4 on silyylieetteri (OH:n asemesta) ja R, on 101793 9 mieluummin suojattu hydroksiryhmä kuin OH (mikäli tarkoituksenmukaista ).

Kun 6-klooripuriiniemäksen (2) kondensaatio on toteutettu kaavan Ia yhdisteiden muodostamiseksi, 8,6-5 ja/tai 2-asemien modifioinnit voidaan toteuttaa vaiheittain muodostamaan halutut kaavan I Rx-, R2- ja R3-ryhmät.

Kaavan I yhdisteiden valmistamiseksi, joissa sekä R5 ja R6 ovat H ja Rx on OH, kaavan Ia (ts. R5 ja R6 ovat alkyyli) vastaavat fosfonaattidiesterit saatetaan reagoi-10 maan peräkkäisesti trimetyylisilyylibromidin (TMSBr) kanssa CH2Cl2:ssa, veden kanssa asetonitriilissä ja lopuksi HClrssä (IN) 90 °C:ssa. Monoesterin valmistamiseksi (R5 on H ja R6 on alkyyli) ja Rx on OH, Ia:n yhdisteet altistetaan välittömästi HC1/H20 hydrolyysille 90 °C:ssa.

15 Kaavan I yhdisteiden, joissa Rt on SH, valmistami seksi kaavan Ia yhdisteet saatetaan reagoimaan tiourean kanssa etikkahapossa. Saatujen 6-SH tuotteiden de-eette-röinti käsittelemällä TMSBr:11a ja hydrolyysi antaa yhdisteitä, joissa R2 on SH ja R5 ja R6 ovat H.

20 Kaavan I yhdisteiden valmistamiseksi, joissa Rx on SH, R2 ja R3 ovat kuten on määritetty (kaava I) ja R'4 on H tai silyylieetteri (-0-SiMe3), vastaava 6-OH analogi saatetaan reagoimaan dimeerisen fosforipentasulfidin kanssa. Saadut yhdisteet, joissa R'4 on silyylieetteri, voidaan * 25 muuttaa alkoholikseen ja haluttaessa, alkoholi voidaan hapettaa ketoanalogikseen tässä kuvattujen menetelmien avulla. Samoja lähtöaineita (paitsi että R3 on H) voidaan käyttää kaavan I yhdisteiden valmistamiseksi, joissa R3 on NH2 tai -NH-NH2, halogenoimalla (puriiniryhmän 8-asemassa) 30 käyttäen bromaus- tai jodausainetta, kuten bromia vedessä, N-bromi- tai N-jodi-imidiä (esim. 1,3-dibromi-5,5-dimetyy-lihydantoiini, l,3-dijodi-5,5-dimetyylihydantoiini, N-jo-diasetamidi, edullisesti NBS tai NIS ja edullisimmin N-bromiasetamidi (NBA). Näin valmistetut 8-haloanalogit 35 saatetaan reagoimaan hydratsiinin kanssa sopivassa liuot- 10 Λ Π < '7 p / I u I / v 0 tlmessa (esim. vedessä, eetterissä, THF:ssa, p-dioksaanis-sa, alemmissa alkanoleissa, etyleenlglykollssa, klooratuissa hiilivedyissä (CC14, CH2C12), DMFrssä, HMPA:ssa tai DMS0:ssa lämpötiloissa n. 50 - 100 °C, edullisesti, mutta 5 ei välttämättä, käyttäen 2-3 kertaa ylimäärin hydrat-siinia. Vastaavat 8-NH2 yhdisteet voidaan valmistaa pelkistämällä hydratsiini käyttäen Raney-nikkeliä. 8-haloanalo-geja, joita käytettiin reaktiossa hydratsiinin kanssa, voidaan käyttää yhdisteiden valmistuksessa, joissa R3 on 10 OH, saattamalla 8-haloyhdiste reagoimaan bentsyylialkoho-lin (esim. bentsyylialkoholin) alkalimetalli- tai maa-al-kalimetallisuolan kanssa, mitä seuraa välituotteen pelkistys vetykaasulla ilman paineessa jalometallikatalyytin (esim. Pd/C) läsnäollessa.

15 Jotta saataisiin kattavampi kuva valmistustiestä ja helpommin ymmärrettäisiin vaihtoehtoiset reitit, joilla osaryhmän (a) yhdisteitä, joissa R4 on H ja R*4 on OH, tai R4 ja R'4 muodostavat määritetyn ketoryhmän, esitetään seu-raava kaavio.

20 101793 11

ci ci OH

5 n/vxv νΛτ\ H RsO y^Ar ^Ar + lii 0 = P-C- CH HO x 10 I m

Br-CH2Ar X OR5 RgO Y O—OSi —I— 0 = P-C-CH

III ~ III

CH-C-P = O (10) HO Y OH

-f-OSi—O Y OR5 (11) 15 (9)

Tiourea 1) Bu4NF

SH 2)oksidi SH

20 | 3)TMSBr * I

a6cx> rxXn> HA1 » R: N ? L HO SAr

RsO ^Ar I I x !r 25 0=P-C- CH OH 0=PrC|- C=° r60 J i—OSi -j- HÄ« h<^y (12) Rj^^N <13) 30 HO χΆΓ

I i I

o=p-c- c=o

HO

Y

(14) 35 ' 101793 12 \' jossa —Sx-|— on t-butyylidimetyylisilyyli ja Ar, X, Y, Bu4NF, TMSBr ovat kuten edellä on määritetty.

5 Kaavan 6 aryylifosfonaattien valmistus voidaan to teuttaa käyttäen standardimenetelmiä, jotka ovat analogisia alalla tunnettujen kanssa; erityinen valmistustie riippuu tietenkin Z-ryhmän määritelmästä.

Tapauksessa, jolloin halutaan valmistaa kaavan 6 10 välituotteita, joissa Z on osaryhmä (a), ts. yhdisteitä, ' joilla on kaava R. X OR.

M

CH, - Ar - C - C - P = O

15 I II

R\ Y 0R6 (15) jossa Ar, R4, R'4, X, Y, H5 ja R6 ovat kuten kaavassa I on 20 kuvattu, spesifinen valmistustie riippuu ensisijaisesti R4:n, R'4:n, X:n ja Y:n spesifisistä määritelmistä. Tapauksessa, jossa R4 ja R'4 ovat vety, menetelmä on kaavio-maisesti esitetty seuraavassa: 25 X ORs H.C-Ar-CH,Br + M - C- P =0 (16) Y0R‘ (17) 30 ,, X OR.

• Il H,C-Ar-CH2 - C - P =0

I I

Y OR.

35 (15) 101793 13

Jossa M on Li, Na, -ZnBr, MgBr (edullisesti litium) Ja X ja Y ovat H, F tai Cl. Tässä reaktiossa litium johdannainen (17), joka on valmistettu saattamalla tarkoituksenmukainen fosfonaatti reagoimaan litiumdi-isopropyyliamidin (LDA) 5 tai butyylilitiumin kanssa, inertissä ilmakehässä (argon) vedettömässä liuottimessa (esim. THF) n. -78 eC:ssa, kon-densoidaan aryylibromidilla (16) 10-20 tunnin reaktiolla ja reaktio jäähdytetään kyllästetyllä vesipitoisella am-moniumkloridilla (NH4C1). Lähtöaineiden kondensaatio (16 ja 10 17), jossa M on -ZnBr, toteutetaan edullisesti katalyyt tisten määrien kuparibromidia läsnäollessa 20 9C:ssa. Zn ja Mg bromidijohdannaiset valmistetaan myös standardimenetelmien avulla.

Tapauksessa, jossa R4 on H ja R'4 on OH tai F, tai 15 R4 ja R\ muodostavat keto-ryhmän (kuten on määritetty), yhdisteet valmistetaan kuten seuraavassa on kaaviomaisesti esitetty:

OH X 0RS

20 CH3- Ar - CHO CH3 - Ar-CH - C-P = O

(18) | | Y OR6 (20) + -►

25 X0R5 jDAST

LiC-P = 0

I I

Y °R6 X OR.

Ill 30 CH3 - Ar - CH - C - P = 0 (19) I | Y or6 (21) 35 101793 14

Aldehydien (18) reaktio litiumjohdannaisen (19) kanssa toteutetaan THF:ssa -78 °C:ssa argonin paineessa n. kolmen tunnin aikana ja reaktio jäähdytetään sitten kyllästetyllä vesipitoisella NH4Cl:lla n. -78 eC:ssa 5 -30 °C:ssa muodostamaan yhdisteet (20). Käsiteltäessä yh disteitä (20) DAST:lla (dietyyliaminorikkitrifluoridi) reaktio toteutetaan dikloorimetaanissa n. 0 °C:ssa n. 15-25 tunnin aikana ja reaktio jäähdytetään käyttäen ylimäärää metanolia. Alkoholit (20) voidaan myös hapettaa 10 ketomuodoikseen käyttäen Swern-hapetusreaktiota oksalyyli- 'kloridilla DMS0:ssa) tai käyttäen tetrapropyyliammonium-perrutenaattia ja N-metyylimorfOliini N-oksidia. Vaihtoehtoisesti ketonit voidaan muodostaa suoraan yhdisteiden (19) reaktiosta (jossa M on Li tai -ZnBr) yhdisteiden 15 kanssa, joilla on kaava

HjC-Ar-C-X”'

II

O

20 jossa X" on kloori tai alkoksi.

Toteutettaessa tämä viimeksi mainittu reaktio keto-nien valmistamiseksi suoraan, on spesifisesti edullista, että X" on alkoksi (esim. metoksi) ja M on litium, kun 25 molemmat X ja Y ovat H, ja kun molemmat X ja Y ovat F, on erityisen edullista, että X" on kloori ja M on -ZnBr.

Tapauksessa, jossa R4 on H, R’4 on OH tai R4 ja R’4 muodostavat määritetyn ketonin, on edullista, että yhdisteen (20) silyylieetteriä (esim. t-butyylidimetyylisilyy-30 lioksijohdannainen) hyödynnetään kuten jo kuvattiin lähtö-: aineiden (2) ja (3) kondensaatiossa. Nämä silyylijohdan- naiset valmistetaan saattamalla yhdisteet 19 reagoimaan t-butyylidimetyylisilyylikloridin kanssa imidatsolin läsnäollessa ja saadut tuotteet aktivoidaan NBS:lla. Silyyli-35 suojaryhmän selektiivinen poisto myöhemmässä vaiheessa 101793 15 toteutetaan käsittelemällä tetrabutyyliammoniumf luoridilla (Bu4NF), kuten edellä on yksityiskohtaisesti esitetty.

Erityisessä tapauksessa, kun valmistetaan Ia yhdisteitä, joissa R4 ja R'4 muodostavat halutun ketonin ja X ja 5 Y ovat H, on edullista käyttää seuraavaa reaktiokaaviota: 101793 16 o or5

Il I

CH3- Ar- C - OCH3 + LiCH2P = 0

5 I

(22) 0Re (23) O OR5

10 il I

CH3 - Ar - C - CH2 - P = O

or6 (24) 15 TBDMSCl/ imidatsoli

V

OR5 H3C - Ar C = CHP =0

20 I I

O OR6 H3C-S1-CH3 :Bu (25) 25 OR5

30 BrCH2Ar - C = C - P = O

I I

o , ORe H3C-SI-CH3 (26) 35 Bu 101793 17

On huomattava, että tapauksessa, jossa halutaan valmistaa kondensoimalla kaavan la yhdisteitä, joissa Z on osaryhmä (a), jossa Q kaavassa 3 on OH ja jokainen R4, R'4, X ja Y ovat H, on edullista pelkistää välituotteet, joilla 5 on osaryhmä (c), muodostamaan tarkoituksenmukaisia reagoivia aineita yleisen kaavan 3 mukaisesti.

Tapauksessa, jossa halutaan valmistaa välituotteita, jotka ovat samanlaisia kaavan 6 kanssa, jossa Z on osaryhmä (b), ts. yhdisteitä, joilla on kaava 10 X OR5

I I

CHj - Ar’ - 0 - (CHj)n - C - P = O

15 Y °*« jossa Ar’ on muu kuin furaani- tai tiofeenisiltaosa, standardimenetelmiä, jotka ovat analogisesti tunnettuja alalla, voidaan hyödyntää. Tavallisesti välituotteet valmiste- 20 taan seuraavien reaktiokaavioiden avulla:

Ts X OR, h3 c\T I |5

|^4}— OH + Q'-(CH2)n-C-P = O

25 Y OR6 28 29 30 T9 X or5 H3Cvk I I ’ ^^-0-(CH2)„-C-P = 0 y or6 30 35 101793 18 jossa R’9 on kuten kaavassa I on määritetty R,:lle paitsi OH, Q* on jodi, bromi, tosylaatti, mesylaatti tai tri-flaatti jättäviä ryhmiä ja n on kokonaisluku 1-5. Konden-saatio toteutetaan emäksen (esim. NaH, K2C03 tai KH) läs-5 näollessa ei-vesipitoisessa liuottimessa (esim. DMF:ssä, THF:ssä tai DMSO:ssa) käyttäen alalla hyvin tunnettuja standardimenetelmiä. Erityisessä tapauksessa, jossa n on 2, kresolit (ts. o-,m- tai p-kresolit) saatetaan reagoimaan etyleenikarbonaatin kanssa KF:n läsnäollessa muodos- 10 tamaan bentsoksietyyli-l-oli-eetteri, joka muutetaan 1-bromijohdannaisekseen saattamalla se reagoimaan bromin kanssa trifenyylifosfiinin (P 3) läsnäollessa bentseenissä emäksen läsnäollessa muodostamaan bentsoksietyylibromidi, joka saatetaan reagoimaan standardimenetelmien avulla kaa- 15 van (17) litiumjohdannaisen kanssa muodostamaan yhdisteet (30a), joissa n on 2.

Tietenkin, kun n on 0 ja X ja Y ovat molemmat H, on edullista käyttää menetelmää, jossa Q’ on tosylaatti (yhdisteet 29) käyttäen NaH emäksenä DMF:ssä.

20 Niissä tapauksissa, joissa halutaan valmistaa kaa van 6 yhdisteitä, joissa Z on osaryhmä (c), ts. yhdisteitä, joilla on kaava Y x or5

25 IM

D CH.-Ar-C = C-P = 0 °R6 31 30 jossa Ar, X, Y, R5 ja R6 ovat kuten kaavassa I on määri-·, tetty, mainitut yhdisteet voidaan valmistaa alalla tunnet tujen menetelmien kanssa analogisilla menetelmillä.

Tapauksessa, jossa Y on H ja X on H, F tai Cl, aryylialdehydi (32) kondensoidaan Z-substituoidun difos- 101793 19 fonaattijohdannaisen litiumjohdannaisen (33) kanssa reak-tiokaavion mukaisesti: H OR5

5 I

CHb-Ar-CHO + Li C-(» = 0)2 32 X OR6 33 10 H Γ

15 CH3-Ar-C = C-P= O

I I

x ORe 34 20

Reaktio toteutetaan -78 eC:ssa THFrssä ja ennen jäähdyttämistä seoksen annetaan lämmetä n. 20 eC:seen ennen hydrolyysiä kyllästetyllä vesipitoisella NH4Cl:lla.

Kun Y on F ja X on H, F tai Cl, valmistus toteutetaan . 25 käyttäen osaryhmän (a) yhdistettä (ts. yhdistettä (35), jossa X' on F tai Cl), jota käsitellään emäksellä, edullisesti tBu0K:lla, DMAP:n DBUtlla ei-reaktiivisessa liuotti-messa (DMF tai DMSO) n. 40 eC:n - 80 °C:n lämpötiloissa. Tässä reaktiossa kaksoissidos muodostetaan poistamalla 30 HX'. Valitsemalla tarkoituksenmukaiset yhdisteiden (35) analogit ja seuraten edeltävää käsittelyä emäksellä, halutut Y ja X yhdisteet (34a) voidaan valmistaa kun joko HF tai HC1 on lohkaistu pois. Reaktiota kuvataan seuraavasti: 35 101793 20 X' or5

I I I

CH3-Ar-CH -C-P = O

5 I I

35 x OR6 10 1 ?Rs

CH3 - Ar-^^C - P = O

X OR6 15 34a

Tapauksessa, jossa halutaan valmistaa kaavan 6 välituotteita, joissa Z on osaryhmä (d), ts. yhdisteitä, joilla on kaava 20 ORs

CH3 -Ar-C = C- P = O

ORe 25 36 yhdisteet valmistetaan käsittelemällä kaavan (24) yhdisteitä kahdella ekvivalentilla DAST’ia 0-20 eC:ssa 30 CH2Cl2:ssa 1-5 tuntia ja reaktio jäähdytetään ylimäärällä metanolia antamaan halutut tuotteet 36.

Niissä tapauksissa, joissa halutaan valmistaa kaavan 6 yhdisteitä, joissa Z on osaryhmä (e), ts. yhdisteet, joilla on kaava 35 101793 21 R7 Ro \ / * C ORs U » „ 5 CHa-Ar-C-C- P = 0 X^\\)R6 37

Niiden valmistus voidaan toteuttaa yhden tai kahden 10 vaiheen olefinointimenetelmällä käyttäen kaavan 38 yhdisteitä O X ORs n II ft CH3-Ar-C-C-P = 0 15 || Y ORe 38

Wittig-tyyppisessäyksivaiheolefinointimenetelmässä 20 käytetään fosfoniumylidiä, jolla on kaava R7 \ θ Θ -P03 "· 39 25 joka saatetaan reagoimaan kaavan 38 yhdisteen (erityisesti kun X ja Y ovat F) kanssa; reaktio toteutetaan THF:ssä -78 *C:ssa - 0 °C;ssa muodostamaan kaksoissidos. Vaihtoehtoisesti lähtöaine 39 voidaan korvata lähtöaineella (40), 30 jolla on kaava *7 V Θ -Het r8^ 40 35 101793 22 jossa Het on -S , SiMe3, Se , -SMe tai SeMe, ja kun se saatetaan reagoimaan se muodostaa kaavan (41) yhdisteitä.

OH Het 5 CH3-Ar--^-R? r &8 χ/ \

X Y

r60 - p · 0R5 !0 «' 41

Niissä tapauksissa, joissa Het on SiMe3, Peterson olefinointia hyödynnetään käyttäen (a) 41: n käsittelyä 15 NaH:lla DMFissä 0-60 eC:ssa tai (b) 41:n käsittelyä hapolla, esim. PTSAtlla (p-tolueenisulfonihapolla) kohotetuissa lämpötiloissa. Kun Het on muu kuin SiMe3, 41 käsitellään SOCl2:lla, POCl3:lla tai PI3:lla, Et3N:lla tai pyridiinil-lä CH2C12: ssa lämpötiloissa n. -20 eC - 20 eC.

20 Seuraavat esimerkit kuvaavat menetelmiä, joiden avulla tämän keksinnön yhdisteitä voidaan valmistaa. Yhdisteen 1 valmistus: [2- [2- [ (2-amino-l, 6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yy-li )me tyyli] fenyyli] -1,1-difluorietyyli] fosfonihappo . 25 Yhdisteen IA valmistus: [2-[2-metyylifenyyli]-l,1- difluorietyyli]fosfonihappo, dietyyliesteri 30 mmoolia (5,64 g) dietyylidifluorimetaanifosfo-naattia, liuotettuna 30 ml:aan vedetöntä tetrahydrofuraa-nia (THF), lisättiin hitaasti sekoituksenalaiseen liuok-30 seen, jossa oli (LDA) litiumdi-isopropyyliamidia (valmistettu 0 eC:ssa 31 mmoolista n-butyylilitiumia ja 30 mmoo-lista di-isopropyyliamiinia 30 ml:ssa vedetöntä THF) -78 eC:ssa argonin paineessa. 30 minuutin kuluttua lisättiin 45 mmoolia (8,33 g) 2-bromi-o-ksyleeniä reaktioseok-35 seen, jota sekoitettiin -78 eC:ssa 15 tuntia ja jäähdytet- 10179ο 23 tiin lisäämällä 20 ml vesipitoista kyllästettyä ammonium-kloridiliuosta. Raaka seos haihdutettiin kuiviin; jäännös suspendoitiin 50 ml:aan vettä ja uutettiin kolme kertaa 100 ml:11a etyyliasetaattia. Orgaaniset kerrokset kuivat-5 tiin natriumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin antamaan n. 8 g raakaa tuotetta, joka puhdistettiin flash-kromatografisesti silikageelillä antamaan 3,6 g IA (41 %:n saanto).

Yhdisteen IB valmistus: [2-[2-[(2-amino-l,6-dihyd-10 ro-6-kloori-9H-purin-9-yyli Jmetyyli] fenyyli] -1,1- difluorietyyli]fosfonihappo, dietyyliesteri N-bromisukkiini-imidiä (3 mmoolia, 0,53 g) ja bentsoyyliperoksidia (5 mg) lisättiin liuokseen, jossa oli IA (3 mmoolia, 0,88 g 20 ml:ssa hiilitetrakloridia). Seos-15 ta palautusjäähdytettiin kuumentamalla lampulla 90 minuuttia, kunnes kiinteä sukkiini-imidi muodostui. Reaktioseos suodatettiin sukkiini-imidin poistamiseksi ja suodos haihdutettiin kuiviin antamaan 1,1 g öljyä, joka sitten lisättiin sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli 6-kloorigua-20 niinin natriumsuolaa (valmistettu 5 ml:ssa DMF lisäämällä 3,2 mmoolia natriumhydridiä 3,9 mmooliin 6-klooriguaniinia 20 °C:ssa argonin paineessa). Reaktioseosta sekoitettiin 20 °C:ssa 20 tuntia, haihdutettiin alennetussa paineessa ja puhdistettiin flashkromatografisesti silikageelillä 25 antamaan 1,15 g odotettua IB (42 %).

Yhdisteen 1 valmistus: [2-[2-[(2-amino-l,6-dihyd- ro-6-okso-9H-purin-9-yyli)metyyli]fenyyli]-1,1-di-fluorietyyli]fosfonihappo 4 mmoolia (0,5 ml) trimetyylisilyylibromidia 30 (TMSBr) lisättiin sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli ) 1C (0,6 g; 1,3 mmoolia) 5 ml:ssa vedetöntä dikloorimetaa- nia 20 °C:ssa argonin paineessa. Reaktioseosta sekoitettiin 20 tuntia ja 0,5 ml TMSBr lisättiin reaktioseokseen.

20 tunnin kuluttua reaktioseos haihdutettiin; jäännös 10179ο 24 liuotettiin 3 ml:aan asetonitriiliä ja jäähdytettiin n. 0,2 ml:11a vettä.

Seos haihdutettiin ja jäännöstä kuumennettiin 7 ml:ssa IN HC1 100 eC:ssa 20 tuntia. Seos haihdutettiin 5 ja tuote saatiin kahden uudelleenkiteyttämisen jälkeen kuumasta vedestä: 200 mg (38 %:n saanto; emäliuokset sisälsivät pääosin puhdasta tuotetta myöhempää eristämistä varten).

Yhdisteen 2 valmistus: 10 [2- [2- [ (2-amino-l, 6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yy- li)metyyli]fenyyli]-1-fluorietenyyli]fosfonihappo Yhdisteen 2A valmistus: [2-(2-metyylifenyyli)-l- fluorietenyyli]fosfonihappo, dietyyliesteri 20 mmoolia (6,72 g) bis(dietyylifosfonyyli)fluori-15 metaania, liuotettuna 20 ml:aan vedetöntä THF, lisättiin hitaasti -78 °C:teiseen liuokseen, jossa oli litiumdi- isopropyyliamidia (valmistettu lisäämällä 22 mmoolia n-bu-tyylilitiumia liuokseen, jossa oli 22 mmoolia di-isopro-pyyliamiinia 16 ml:ssa THF 0 °C:ssa). 30 minuutin kuluttua 20 -78 °C:ssa liuos, jossa oli 30 mmoolia (3,5 ml) vastatis- lattua o-tolualdehydiä 20 ml:ssa THF, lisättiin reaktio-seokseen, jota sekoitettiin -78 °C:ssa kolme tuntia ja 20 °C:ssa viisi tuntia, jäähdytettiin 20 ml:11a vesipitoista kyllästettyä ammoniumkloridia ja haihdutettiin kuiviin.

25 Jäännös suspendoitiin 30 ml:aan vettä ja uutettiin kolme kerta 100 ml:11a etyyliasetaattia. Orgaaniset kerrokset pestiin suolaliuoksella, kuivattiin natriumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin antamaan 5 g raakaa ainetta, joka puhdistettiin flashkromatografisesti silikageelillä 30 antamaan 70 mmoolia (50 %) 2A.

“ Yhdisteen 2D valmistus: [2-[2-(2-amino-l,6-dihyd- ro-6-kloori-9H-purin-9-yyli)metyyli]fenyyli]-1-fluorietenyyli]fosfonihappo, dietyyliesteri Bentsoyyliperoksidia (10 mg) lisättiin suspensioon, 35 jossa oli NBS (10 mmoolia) ja 2A (10 mmoolia) 15 ml:ssa 25 10179ο vedetöntä hiilitetrakloridia. Seos kuumennettiin palautus-jäähdytyslämpötilaan lampulla kunnes kiinteä aine nousi pinnalle. Reaktioseos suodatettiin ja haihdutettiin antamaan 2C öljynä, joka sitten liuotettiin 4 ml:aan vedetöntä 5 DMF ja lisättiin sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli 6-klooriguaniinin natriumsuolaa (valmistettu lisäämällä 10 mmoolia NaH (60-%:sena liuoksena paino/tilav.) 10 mmoo-liin 6-klooriguaniinia 10 ml:ssa vedetöntä DMF 20 °C:ssa argonin paineessa). 20 tunnin kuluttua 20 eC:ssa reaktio-10 seos haihdutettiin kuiviin ja raaka jäännös puhdistettiin välittömästi flashkromatografisesti silikageelillä antamaan 4 mmoolia tuotetta 2D (40 %:n saanto).

Yhdisteen 2 valmistus: [2-[2-[(2-amino-l,6-dihyd- ro-6-okso-9H-purin-9-yyli)metyyli]fenyyli]-1-fluo-15 rietenyyli]fosfonihappo

Yhdisteen 2 valmistus yhdisteestä 2D suoritettiin käyttäen menetelmää, jota on kuvattu jo yhdisteen 1C muuttamisessa yhdiste l:ksi.

Yhdisteen 3 valmistus: 20 [ 2- [2- [ (2-amino-l, 6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yy- li)metyyli]fenyyli]-1,1,2-trifluorietyyli]fosfonihappo

Yhdisteen 3A valmistus: [2-hydroksi-2-(2-metyyli- fenyyli)-l,1-difluorietyyli]fosfonihappo,dietyyli-4 25 esteri 42,5 mmoolia dietyylifosfinyylidifluorimetaania (8 g) liuotettuna 42 ml:aan vedetöntä THF, lisättiin hitaasti sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli vastaval-mistettua litiumdi-isopropyyliamidia (42,5 mmoolia) 30 40 ml:ssa THF -78 °C:ssa argonin paineessa. Reaktioseosta *; sekoitettiin -78 °C:ssa 35 minuuttia ja 7,65 g o-tolu- aldehydiä (63,75 mmoolia), liuotettuna 42 ml:aan THF, lisättiin reaktioseokseen, jota sekoitettiin -78 °C:ssa neljä tuntia, jäähdytettiin -78 eC:ssa lisäämällä 40 ml kyl-35 lästettyä vesipitoista ammoniumkloridia ja haihdutettiin 101793 26 alennetussa paineessa. Jäännös suspendoitiin veteen ja uutettiin kolme kertaa 200 ml:n annoksilla etyyliasetaattia. Orgaaniset kerrokset pestiin suolaliuoksella, kuivattiin natriumsulfaatilla, suodatettiin, haihdutettiin ja 5 puhdistettiin flashkromatografisesti silikageelillä antamaan 10,67 g 3A valkoisina kiteinä (81 %:n saanto).

Yhdisteen 3B valmistus: [2-fluori-2-[2-metyylife- nyyli] -1, 1-difluorietyyli] fosfonihappo, dietyylies-teri 10 2,3 ml dietyyliaminorikkitrifluoridia (DAST) lisät tiin tipoittain sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli 3Ά (4,6 g; 15 mmoolia) 20 ml:ssa vedetöntä dikloorimetaa-nia 20 eC:ssa argonin paineessa. Kahden tunnin kuluttua 20 °C:ssa reaktioseosta jäähdytettiin hitaasti 0 °C:ssa 15 ylimäärällä metanolia (5 ml), haihdutettiin kuiviin ja puhdistettiin välittömästi flashkromatografisesti silikageelillä antamaan 4,22 g tuotetta 3B (91 %:n saanto).

Yhdisteen 3C valmistus: [2-[2-[(2-amino-l,6-dihyd-ro-6-kloori-9H-purin-9-yyli )metyyli] fenyyli] -1,1,2-20 trifluorietyyli]fosfonihappo, dietyyliesteri

Yhdisteen 3B bromausreaktio ja sitä seurannut kon-densaatio 6-klooriguaniinilla toteutettiin täsmälleen kuten on kuvattu yhdisteen 1C valmistuksessa lB:stä.

Yhdisteen 3 valmistus: [2-[2-[(2-amino-l,6-dihydro-25 6-okso-9H-purin-9-yyliJmetyyli]fenyyli]-1,1,2-tri- fluorietyyli]fosfonihappo

Lopputuote 3 eristettiin suojauksen poiston jälkeen TMSBr/CH2Cl2:11a ja IN HCl:llä vedessä, kuten on kuvattu yhdisteen 1 valmistuksessa yhdisteestä 1C.

101793 27

Yhdisteen 4 valmistus: [2-[2-[ (2-amino-l, 6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yy- 11 )metyyli]fenyyli]-2-hydroksi-l, 1-difluorietyyli]-fosfonihappo 5 Yhdisteen 4A valmistus: [2-(t-butyylidimetyylisi- lyylioksi)-2-(2-metyylifenyyli )-l, 1-difluorietyy-li]fosfonihappo, dietyyliesteri

Dietyylifosfinyylidifluorimetaania (4,7 g, 25 mmoo-lia) liuotettuna 25 ml:aan vedetöntä THF, lisättiin ti-10 poittain -78 eC: teiseen litiumdi-isopropyyliamidiliuokseen (LDA) (valmistettu saattamalla 25 mmoolia n-butyylilitiu-mia reagoimaan 25 mmoolin kanssa di-isopropyyliamiinia 0 °C:ssa 25 ml:ssa THF) argonin paineessa. 35 minuutin kuluttua -78 °C:ssa reaktioseokseen lisättiin liuos, jossa 15 oli o-tolualdehydiä (30 mmoolia, 3,6 g) 20 ml:ssa vedetöntä THF. Kolmen tunnin kuluttua -78 °C:ssa lisättiin 30 mmoolia t-butyylidimetyylisilyylikloridia reaktioseokseen, jota sekoitettiin -20 eC:ssa kaksi tuntia, jäähdytettiin 10 ml:11a vettä, haihdutettiin, uutettiin kolme 20 kertaa 120 ml:n annoksilla etyyliasetaattia. Orgaaniset kerrokset kerättiin, kuivattiin natriumsulfaatilla, suodatettiin, haihdutettiin ja puhdistettiin flashkromatografi-sesti silikageelillä antamaan 8,8 g tuotetta 4A (21 mmoolia, 84%:n saanto).

25 Yhdisteen 4B valmistus: [2-(2-amino-l,6-dihydro-6- okso-9H-purin-9-yyli)metyyli]fenyyli]-[2-(t-butyy-lidimetyylisilyylioksi )-l, 1-dif luorietyyli] fosfonihappo, dietyyliesteri

Yhdisteen 4B valmistus yhdisteestä 4A toteutettiin 30 käyttäen jo kuvattua menetelmää A:n muuttamisessa lC:ksi.

Yhdisteen 4C valmistus: [2-[2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yyli Jmetyyli] fenyyli] -2-hydroksi- 1,1-difluorietyyli]fosfonihappo, dietyyliesteri 12 mmoolia (3,85 g) tetrabutyyliammoniumfluoridia 35 lisättiin yhtenä annoksena sekoituksenalaiseen liuokseen, 101793 28 jossa oli 4B (6 mmoolia) liuotettuna 150 ml:aan THF. Re-aktioseosta sekoitettiin 20 °C:ssa 20 tuntia, haihdutettiin kuiviin ja puhdistettiin flashkromatografisesti si-likageelillä antamaan 4,8 mmoolia 4C (80 %:n saanto).

5 Yhdisteen 4 valmistus: [2-[2-[(2-amino-l,6-dihydro- 6-okso-9H-purin-9-yyli )metyyli] fenyyli] -2-hydroksi- 1,1-difluorietyyli]fosfonihappo

Yhdiste 4 saatiin yhdisteestä 4C jo kuvattujen kahden kemiallisen suojauksen poistovaiheen (TMSBr; H30+) 10 avulla.

Yhdisteen 5 valmistus: [2- [2- [ ( 2-amino-l, 6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yy-li)metyyli]fenyyli]-2,2-dihydroksi-l,1-difluorietyyli] fosfonihappo 15 Yhdisteen 5A valmistus yhdisteestä 4C: [2-[2-(2- amino-1,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yyli)metyyli]-fenyyli]-2-hydroksi-1,1-difluorietyylifosfonihappo, dietyyliesteri 60 mmoolia (4,3 ml) DMSO liuotettuna 25 ml:aan ve-20 detöntä dikloorimetaania, lisättiin tipoittain -65 °C:ssa sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli 30 mmoolia oksa-lyylikloridia (26 ml) 25 ml:ssa vedetöntä dikloorimetaania argonin paineessa. Reaktioseosta sekoitettiin -65 °C:ssa viisi minuuttia ja 20 mmoolia 4C liuotettuna 25 ml:aan * 25 CH2C12 lisättiin. Reaktiopullo poistettiin jäähauteesta muutamaksi minuutiksi ja seosta sekoitettiin -65 °C:ssa 15 minuuttia. Tällöin 100 mmoolia (13,8 ml) trietyyliamii-nia lisättiin reaktioseokseen, jota sekoitettiin 10 minuuttia -65 °C:ssa, jäähdytettiin vesipitoisella sitruuna-30 hapolla, sekoitettiin muutama minuutti 20 °C:ssa, uutet-·; tiin dikloorimetaanilla (3 x 75 ml:n annoksilla), pestiin suolaliuoksella, kuivattiin Na2S04:llä, suodatettiin, haihdutettiin ja puhdistettiin flashkromatografisesti silika-geelillä antamaan 13,5 mmoolia tuotetta 4C (67 %).

101793 29

Yhdisteen 5 valmistus: [2-[2-[(2-amino-l,6-dihyd- ro-6-okso-9H-purin-9-yyli)metyyli]fenyyli]-2,2-di-hydroksi-1,1-difluorietyyli]fosfonihappo Lopputuote 5 saatiin yhdisteestä 5Λ kahdella suo-5 jauksen poistovaiheella toteutettuna kuten yhdisteen 1 valmistuksessa yhdisteestä 1C.

Yhdisteen 6 valmistus: [3-[2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-kloori-9H-purin-9-yyli )metyyli] fenoksi]-l, l-difluoripropyyli]fosfoni-10 happo

Yhdisteen 6A valmistus: 3-(2-metyylifenoksi)-l-pro-panoli 300 mmoolia ortokresolia, 334 mmoolia etyleenikar-bonaattia ja 325 mmoolia kaliumfluoridia lisättiin 15 100 ml:aan vedetöntä DMF ja sekoitettiin 125 °C:ssa 50 tuntia argonin paineessa. 40 mmoolia etyleenikarbonaat-tia ja 40 mmoolia KF lisättiin reaktioseokseen, jota sitten sekoitettiin vielä 24 tuntia 125 °C:ssa.

Reaktioseos jäähdytettiin 20 °C:seen, suodatettiin 20 ja haihdutettiin. Jäännös puhdistettiin flashkromatografi-sesti silikageelillä antamaan 38,6 g odotettua tuotetta (85 %:n saanto).

Yhdisteen 6B valmistus: 3-(2-metyylifenoksi)-l- bromipropaani * 25 10 g bromia (62,5 mmoolia) liuotettuna 30 ml:aan bentseeniä (tai asetonitriiliä) lisättiin hitaasti sekoi-tuksenalaiseen liuokseen, jossa oli trifenyylifosfiinia (64 mmoolia) 100 ml:ssa bentseeniä (tai asetonitriiliä).

15 minuutin kuluttua trietyyliamiinia (64 mmoolia) liu-30 otettuna 35 ml:aan bentseeniä (tai asetonitriiliä) lisättiin reaktioseokseen, mitä seurasi lähtöaineen 6A (9,68 g; 63,7 mmoolia) lisääminen liuotettuna 50 ml:aan bentseeniä (tai asetonitriiliä). Reaktioseosta sekoitettiin 20 °C:ssa 20 tuntia, suodatettiin (suurimman osan trifenyylifos-35 fiinioksidia poistamiseksi), haihdutettiin ja puhdistet- 101793 30 tiin flashkromatografisesti silikageelillä antamaan 9,8 g odotettua tuotetta.

Yhdisteen 6C valmistus: [3-(2-metyylifenoksi)-1,1-difluoripropyyli]fosfonihappo, dietyyliesteri 5 30 mmoolia (5,64 g) difluorimetyyli-O,O-dietyyli- fosfonaattia, liuotettuna 30 ml:aan vedetöntä THF, lisättiin hitaasti sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli 37 mmoolia LDA (valmistettu 31 mmoolista n-butyylilitiumia ja 31 mmoolista di-isopropyyliamiinia 30 ml:ssa THF) 10 -78 °C:ssa argonin paineessa. Reaktioseosta sekoitettiin -78 eC:ssa 30 minuuttia ja lähtöainetta 6B (20 mmoolia) liuotettuna 10 ml:aan vedetöntä THF, lisättiin reak-tioseokseen. Sekoittamista jatkettiin kolme tuntia -78 °C:ssa, lämpötila nostettiin hitaasti 20 °C:seen ja 15 reaktioseos jäähdytettiin kyllästetyllä vesipitoisella ammoniumkloridilla. Raaka seos haihdutettiin sitten ja uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaniset kerrokset kerättiin, pestiin vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin nat-riumsulfaatilla, suodatettiin, haihdutettiin ja puhdistet-20 tiin flashkromatografisesti silikageelillä antamaan 40 % (16 mmoolia) odotettua kondensaatiotuotetta.

Yhdisteen 6D valmistus: [3-[2-[(2-amino-l,6-dihyd-ro-6-kloori-9H-purin-9-yyli )metyyli] fenoksi] -1,1-difluoripropyyli]fosfonihappo, dietyyliesteri • 25 6 mmoolia lähtöainetta 6C liuotettuna 15 ml:aan vedetöntä hiilitetrakloridia, kuumennettiin lampulla 6 mmoolin N-bromisukkiini-imidiä ja muutaman mg:n bentso-yyliperoksiolia kanssa 35 minuuttia. Raaka seos suodatettiin sukkiini-imidin poistamiseksi ja suodos haihdutettiin 30 kuiviin, liuotettiin 8 ml:aan vedetöntä DMF ja sekoitet-; tiin 20 °C:ssa argonin paineessa 6,5 mmoolin kanssa 6-klooriguaniinia ja 13 mmoolin kanssa kaliumkarbonaattia 24 tuntia. Seos haihdutettiin kuiviin ja jäännös suspen-doitiin 50 ml:aan etyyliasetaattia, pestiin ammoniumklori-35 dilla ja suolaliuoksella, kuivattiin natriumsulfaatilla, 101793 31 suodatettiin, haihdutettiin ja puhdistettiin flashkromato-grafisesti silikageelillä antamaan 3 mmoolia odotettua tuotetta.

Yhdisteen 6 valmistus: [3-[2-[(2-amino-l,6-dihyd- 5 ro-6-kloori-9H-purin-9-yyli )metyyli] fenoksi] -1,1- difluoripropyyli]fosfonihappo 9 mmoolia vastatislattua TMSBr lisättiin hitaasti sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli lähtöainetta 6D (3 mmoolia) liuotettuna 10 ml:aan vedetöntä dikloorimetaa-10 nia 20 °C:ssa argonin paineessa. Reaktioseosta sekoitettiin 20 °C:ssa 20 tuntia ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin 8 ml:aan vedetöntä asetonitriiliä ja jäähdytettiin 10 mmoolilla vettä. Muodostui valkoinen sakka, joka erotettiin suodattamalla ja kerättiin antamaan odo-15 tettu tuote, jota käytettiin ilman lisäpuhdistusta seuraa-vassa vaiheessa.

2 mmoolia lähtöainetta, liuotettuna 10 ml:aan IN HC1 ja 2 ml:aan THF, kuumennettiin 90-100 °C:ssa 20 tuntia. Reaktioseos jäähdytettiin 20 °C:seen, haihdutettiin 20 kuiviin, liuotettiin kyllästettyyn vesipitoiseen tri-etyyliammoniumbikarbonaattiin, suodatettiin ja kiteytettiin lisäämällä IN HC1.

Valkoinen kiinteä aine kerättiin, kuivattiin alennetussa paineessa antamaan 1,7 mmoolia odotettua tuotetta 25 hemihydraattina.

Yhdisteen 7 valmistus: [2- [( 2-amino-l, 6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yyli )-metyyli]fenoksi]metyylifosfonihappo Yhdisteen 7A valmistus: 2-metyylifenoksimetyylifos-30 fonihappo, dietyyliesteri

Natriumhydridiä (8 mmoolia 60-%:sena suspensiona öljyssä) lisättiin sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli o-kresolia (8 mmoolia, 864 mg) 10 ml:ssa vedetöntä DMF 20 °C:ssa argonin paineessa. 45 minuutin kuluttua Ο,Ο-di-35 etyylimetyylifosfonaattitosylaatti-johdannaista (8 mmoo- 101793 32 lia, 2,54 g) liuotettuna 3 ml:aan DMF, lisättiin reaktio-seokseen, jota sekoitettiin 60 eC:ssa 20 tuntia, haihdutettiin alennetussa paineessa ja puhdistettiin flashkro-matografisesti silikageelillä antamaan 1,1 g tuotetta 5 (69 %:n saanto).

Yhdisteen 7B valmistus: [2—[(2-amino-l,6-dihydro- 6-kloori-9H-purin-9-yyli )metyyli] fenoksi]metyyli-fosfonihappo, dietyyliesteri

Fosfonaattia 7A (1,03 g, 4 mmoolia), N-bromisuk-10 kiini-imidiä (4,2 mmoolia; 743 mg) ja muutama milligramma bentsoyyliperoksidia 10 ml:ssa CC14 kuumennettiin palautus jäähdytyslämpötilaan kuumennuslampulla. 35 minuutin kuluttua reaktioseos suodatettiin ja haihdutettiin antamaan 1,3 g öljyä, joka liuotettiin 3 ml:aan vedetöntä DMF 15 ja lisättiin sekoituksenalaiseen suspensioon, jossa oli 6-klooriguaniinia (4,4 mmoolia; 745 mg) ja kaliumkarbonaattia (10 mmoolia; 1,38 g) 6 ml:ssa vedetöntä DMF 20 °C:ssa argonin paineessa. 40 tunnin kuluttua reaktioseos haihdutettiin alennetussa paineessa ja puhdistet-20 tiin flashkromatografisesti silikageelillä antamaan 1,25 g odotettua tuotetta (74 %:n saanto).

Yhdisteen 7 valmistus: [2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yyli)metyyli]fenoksi]metyylifosfo-nihappo 25 Suorittamalla kemiallinen suojauksen poisto käyt täen TMSBr ja sitten vesipitoinen hydrolyysi, kuten aikaisemmin on kuvattu, saatiin otsikkoyhdiste.

Yhdisteen 8 valmistus: [2-[2-[(2-amino-l, 6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yy-30 li)metyyli]fenyyli]-1,1-difluori-2-propenyyli]fos- • fonihappo

Yhdisteen 8A valmistus: [2-[2-metyylifenyyli]-1,1-difluorioksoetyyli]fosfonihappo, dietyyliesteri 50 mmoolia (13,35 g) O,O-dietyylibromidifluorime-35 taanifosfonaattia, liuotettuna 50 ml:aan dimetoksietaania 101793 33 (DME), lisättiin hitaasti sekoituksenalaiseen suspensioon, jossa oli vasta-aktivoitua sinkkiä (55 mmoolia) 15 ml:ssa DMF nopeudella, jolla ylläpidettiin varovainen palautus-jäähdytys. Reaktioseosta sekoitettiin 20 °C:ssa kaksi tun-5 tia ja 60 mmoolia o-tolueenihappokloridia (25 g) liuotettuna 15 ml:aan DME, lisättiin reaktioseokseen, jota sekoitettiin 20 °C:ssa 20 tuntia. Raaka aine suodatettiin pii-maalla ja suodos haihdutettiin kuiviin ja puhdistettiin välittömästi flashkromatografisesti silikageelillä anta-10 maan 30 mmoolia tuotetta 8A (60 %).

Yhdisteen 8B valmistus: [2-[2-metyylifenyyli]-l,1-difluori-2-propenyyli]fosfonihappo, dietyyliesteri 35 mmoolia n-butyylilitiumia (21,8 ml 1,6N liuoksena hekseenissä) lisättiin hitaasti sekoituksenalaiseen 15 suspensioon, jossa oli 35 mmoolia metyylitrifenyylifosfo-niumbromidia 50 ml:ssa THF -78 °C:ssa argonin paineessa. Reaktioseosta sekoitettiin kaksi tuntia 0 °C:ssa ja 30 mmoolia yhdistettä 8A, liuotettuna 30 ml:aan THF, lisättiin tähän reaktioseokseen -78 °C:ssa. Sekoittamisen 20 jälkeen -78 °C:ssa kaksi tuntia ja 0 °C:ssa kaksi tuntia, reaktioseos hydrolysoitiin kyllästetyllä vesipitoisella ammoniumkloridilla. Raaka tuote haihdutettiin alennetussa paineessa ja uutettiin kolme kertaa 100 ml:11a etyyliasetaattia. Tavallinen käsittely ja puhdistus flashkromato-.. 25 grafisesti silikageelillä antoi 18 mmoolia 8B (60 %:n saanto).

Yhdisteen 8C valmistus: [2-[2-[(2-amino-l,6-dihyd-ro-6-kloori-9H-purin-9-yyli )metyyli] fenyyli] -1,1-difluori-2-propenyyli]fosfonihappo, dietyyliesteri 30 Yhdisteen 8B bromausreaktio ja myöhempi kondensaa- | tio 6-klooriguaniinilla toteutettiin aivan kuten on kuvat tu yhdisteen 1C valmistuksessa yhdisteestä IB.

34 <1 r - r' -7 IM: ' V -, * *-> IV V,'

Yhdisteen 8 valmistus: [2-[2-[(2-amino-1,6-dihyd- ro-6-okso-9H-purin-9-yyli)metyyli]-1,l-difluori-2-propenyyli]fosfonihappo

Lopputuote yhdiste 8 eristettiin yhdisteestä 8C 5 suojauksenpoiston jälkeen TMSBr/CH2Cl2:11a ja IN HCl:llä vedessä, kuten on kuvattu yhdisteen 1 valmistuksessa yhdisteestä 1C.

Yhdisteen 9 valmistus: [ 2- [2- [ (2-amino-1,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yy-10 li)metyylifenyyli]etynyyli]fosfonihappo

Yhdisteen 9A valmistus: [2-[2-metyylifenyyli]-2- oksoetaani fos fonihappo, dietyy1iesteri 100 mmoolia n-butyylilitiumia lisättiin hitaasti sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli 100 mmoolia me-15 tyylifosfonihappo, dietyyliesteriä liuotettuna 100 ml:aan THF -78 °C:ssa argonin paineessa. Reaktioseosta sekoitettiin -78 °C:ssa kaksi tuntia ja 50 mmoolia o-tolueenihap-pometyyliesteriä, liuotettuna 50 ml:aan THF, lisättiin reaktioseokseen, jota sekoitettiin -78 eC:ssa 20 tuntia ja 20 0 °C:ssa kaksi tuntia ennen hydrolysointia kyllästetyllä vesipitoisella ammoniumkloridilla. Tavallinen käsittely ja flashkromatografointi silikageelillä antoi 45 mmoolia (90 %:n saanto) tuotetta 9A.

Yhdisteen 9B valmistus: [2-[2-metyylifenyyli]- 25 etynyylifosfonihappo, dietyyliesteri 61 mmoolia (8 ml) dietyyliaminorikkitrifluoridia (DAST) lisättiin hitaasti liuokseen, jossa oli 30 mmoolia 9A 50 ml:ssa vedetöntä dikloorimetaania 0 °C:ssa. Reaktio-seosta sekoitettiin 20 °C:ssa 30 tuntia ja jäähdytettiin 30 hitaasti ylimäärällä metanolia (5 ml) 0 °C:ssa. Reaktio-seos haihdutettiin kuiviin ja puhdistettiin välittömästi flashkromatografisesti silikageelillä antamaan 24 mmoolia tuotetta 9B (80 %:n saanto).

35 1 ο 17 r 7

Yhdisteen 9C valmistus:[2-[2-[(2-amino-l,6-dihyd-ro-6-kloori-9H-purin-9-yyli )metyyli]fenyylijetynyy-li]fosfonihappo, dietyyliesteri 9B:n bromausreaktio ja myöhempi kondensaatio 6-5 klooriguaniinilla toteutettiin aivan kuten on kuvattu 1C:n valmistuksessa lB:stä.

Yhdisteen 9 valmistus: [2-[2-[(2-amino-l,6-dihyd- ro-6-okso-9H-purin-9-yyli )metyylifenyyli]etynyyli] -fosfonihappo 10 20 mmoolia (2,5 ml) TMSBr lisättiin sekoituksen- alaiseen liuokseen, jossa oli 9C (5 mmoolia) 25 ml:ssa vedetöntä dikloorimetaania 20 °C:ssa argonin paineessa. Re-aktioseosta sekoitettiin 20 tuntia ja haihdutettiin alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin 20 ml:aan asetonit-15 riiliä ja valkoinen kiinteä aine saostettiin lisäämällä 0,5 ml vettä. Valkoinen kiinteä aine kerättiin suodattamalla ja liuotettiin seokseen, jossa oli 15 ml 0,2M HC1 ja 6 ml THF. Tätä liuosta kuumennettiin 60 °C:ssa 8 tuntia ja lopputuote 9 saatiin kiteyttämisen jälkeen jäähdyttäen 20 (1,4 mmoolia, 28 %:n saanto).

Yhdisteen 10 valmistus: [ 2- [2- [ (2-amino-l, 6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yy-li)metyylifenyyli]etenyyli]fosfonihappo Yhdisteen 10A valmistus: [2-[2-metyylifenyyli]ete-25 nyyli]fosfonihappo, dietyyliesteri 38 mmoolia (10,95 g) bis(dietyylifosfonyyli)metaa-nia, liuotettuna 25 ml:aan vedetöntä tetrahydrofuraania, lisättiin hitaasti suspensioon, jossa oli NaH (42 mmoolia) 20 ml:ssa vedetöntä tetrahydrofuraania -15 °C:ssa argonin 30 paineessa. 45 minuutin kuluttua 38 mmoolia (4,6 g) o-tolu-aldehydiä, liuotettuna 40 ml:aan tetrahydrofuraania, lisättiin reaktioseokseen 0 °C:ssa. 18 tunnin sekoittamisen jälkeen 20 °C:ssa raaka reaktioseos jäähdytettiin 20 ml:11a vesipitoista kyllästettyä ammoniumkloridia ja 35 haihdutettiin kuiviin. Jäännös suspendoitiin 35 ml:aan 10179ο 36 vettä ja uutettiin kolme kertaa 100 ml:11a etyyliasetaattia. Orgaaniset kerrokset pestiin suolaliuoksella, kuivattiin natriumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin antamaan 11 g raakaa ainetta, joka sitten puhdistettiin 5 flashkromatografisesti silikageelillä antamaan 7,53 g tuotetta 10A (75 %:n saanto).

Yhdisteen 10B valmistus: [2-[2-[(2-amino-l,6-di- hydro-6-kloori-9H-purin-9-yyli )metyyli]fenyyli]ete-nyyli]fosfonihappo, dietyyliesteri 10 Bentsoyyliperoksidia (20 mg) lisättiin suspensioon, jossa oli N-bromisukkiini-imidiä (20 mmoolia) ja [2-[2-metyylifenyyli]etenyyli]fosfonihappo, dietyyliesteriä (20 mmoolia) 15 ml:ssa vedetöntä hiilitetrakloridia. Seosta kuumennettiin lampulla kunnes kaikki kiinteä aine nousi 15 pinnalle. Reaktioseos suodatettiin ja haihdutettiin antamaan öljy, joka sitten liuotettiin 10 ml:aan vedetöntä dimetyyliformamidia ja lisättiin sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli 6-klooriguaniinin natriumsuolaa (valmistettu lisäämällä 20 mmoolia NaH 20 mmooliin 6-kloorigua-20 niiniä 10 ml:ssa vedetöntä dimetyyliformamidia 20 °C:ssa argonin paineessa). Reaktioseosta sekoitettiin 20 tuntia 20 eC:ssa, haihdutettiin kuiviin ja raaka jäännös puhdistettiin välittömästi flashkromatografisesti silikageelillä antamaan 12 mmoolia tuotetta 10B (60 %:n saanto).

25 Yhdisteen 10 valmistus: [2-[2-[(2-amino-l,6-dihyd- ro-6-okso-9H-purin-9-yyli )metyylifenyyli]etenyyli] -fosfonihappo

Yhdisteen 10 valmistus yhdisteestä 10B toteutettiin käyttäen jo kuvattua menetelmää yhdisteen 1 valmis-30 tuksessa yhdisteestä IB valmistusmenetelmässä 1.

Biologinen hyöty Tämän keksinnön yhdisteiden kyky toimia hylkimistä vastustavina, imukudoskasvaimia vastustavina, leukemiaa vastustavina, viruksia vastaan toimivina ja alkueläimiä 35 vastustavina aineina ja aineina, jotka ovat hyödyllisiä 101793 37 kihdin, psoriasiksen Ja itseimmunointisairauksien hoidossa, voidaan osoittaa niiden kyvyllä estää puriininukleo-sidifosforylaasi (PNP). Puriininukleosidifosforylaasin (PNP) inhibitoiva aktiivisuus voidaan määrittää Kalckarin 5 kytketyllä ksantiinioksidaasimenetelmällä käyttäen ino-siinia substraattina [H.M. Kalckar, J. Biol. Chem. 167, 429-443 (1947)]. Dissosiaatiovakiot (Kj) määritettiin ImM epäorgaanisessa fosfaatissa käyttäen 0,1 M HEPES puskuria (pH 7,4), neljälle pitoisuudelle inosiinia 0,05 mM:sta 10 0,15 mM:ään ja eri pitoisuuksille inhibiittiä. Kj kaavan I yhdisteiden edustaville yhdisteille on taulukoitu taulukossa 1 ja niitä verrataan substraatin inosiinin KM arvoihin käyttäen PNP:tä eri lähteistä. Lisäksi on osoitettu, että tämän keksinnön yhdisteet ovat tehokkaita imuku-15 doskasvaimia (ihmis-MoLT-4 soluja) vastaan ja täten ne ovat aktiivisia imukudoskasvaimia ja leukemiaa vastaan.

2'-deoksiguanosiinin läsnäolo (n. 1-10 μΜ), luonnon meta-boliitti, vaikuttaa olevan erittäin tärkeä aktiivisuutta varten imukudoskasvainsoluja vastaan viljelmässä.

101793 38

Yhdiste (M) PHP lähde

Naudsn Rotan Ihnlsen E.coli 5 J perna puna- punasoluja soluja [2-12-1(2-aalno-l.6- 4xl0"9 2xl0'9 13xlO'9 15xl0'9 dihydro-6-okeo-9H-purin-10 9-yyll)metyyli]fenyyll]- 1.1- difluorietyyli]foefo-nihappo [2- [2-1 (2-an>ino-l,6-dihydro- 8xl0'10 4xl0'10 1.8xl0-9 2.6xlO“10 15 6-okeo-9H-purln-9-yyli)metyy- li]fenyyli]-l-fluorietenyy-li]foefonihappo [2-[2-[(2-amino-l,6-dihydro-6- - - 3.2xl0'9 5x10'^® 20 okeo-9H-purln-9-yyli)metyyli]fe- nyy11]fluorietenyyli]foefonihappo [2-[2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-okao- 6xl0"10 5xl0*10 l,3xl0'9 7xl0'10 9H-purin-9-yyli)metyyli]fenyyli]-25 1.1,2-tri f luorie tyyli] f oef onihappo [2-[2-[(2-amino-1,6-dihydro-6-okso- 2.5xl0*7 3,7x10'® 2.1xl0'7 9H-purin-9-yyll)metyyli)fenoksi]- 1.1- di fluoripropyy1i)foefonihappo 30 [2-((2-amino-l,6-dlhydro-6-okso-9H- 7.5xl0'9 7.3xl0*9 7.9x10'® 4.5xlO~9 purin-9-yyli)metyyli]fenokeijme-tyylifosfonihappo 35 Inoeiini 3xlO'5 l,5xl0*4 l,5xl0'4 8xl0'5 Tässä käytettynä termi potilas, koskien immuunijär jestelmän heikentymistä, tarkoittaa nisäkkäitä, kuten hii-40 riä, rottia, kissoja, koiria, karjaa, lampaita, sikoja ja kädellisiä, ihmiset mukaanlukien. Termi potilas, koskien loistulehdusten hoitoa, käsittää nisäkkäiden lisäksi myös muut lämminveriset eläimet, kuten linnut, mukaanlukien kanat ja kalkkunat.

101793 39

Termillä alkueläin on tarkoitus kattaa ne alku-eläinpääjakson Protozoa alajaksot Sarcomastigophora ja Sprozoa. Yksityiskohtaisemmin tässä käytettynä termin alkueläin on tarkoitus kattaa ne loisalkueläinten suvut, 5 jotka ovat tärkeitä ihmiselle, koska ne joko aiheuttavat sairautta ihmisessä tai hänen kotieläimissään. Nämä suvut löydetään suuremmalta osaltaan luokiteltuna Sarcomastigophora alaluokan Mastigophora yläluokasta ja Sporazoa alaluokan luokasta Telosporea Baker'in luokituksen mukaisesti 10 (1969). Kuvaavia sukuja näistä loisalkueläimistä ovat His- tomonas, Trypanosoma, Giardia, Trichomonas, Eimeria, Iso-pora, Toxoplasma ja Plasmodium.

Tosiaan, tämän keksinnön edullinen suoritusmuoto on näiden yhdisteiden käyttö alkueläimiä vastustavina aineina 15 suolistokokkidian hoidossa kaupallisessa siipikarjassa.

Suolistokokkidia-infektiot ovat vastuussa monien miljoonien dollarien tappioista siipikarjateollisuudelle Yhdysvalloissa joka vuosi. Johtuen kokkidian lääkeresistenssin nopeasta kehityksestä ja johtuen joidenkin lääk-20 keiden suhteellisen korkeasta myrkyllisyydestä kokkidi- osiksen hoidossa, on olemassa tarve tehokkaille kokkidio-staateille, jotka ovat ei-myrkyllisiä ja joihin suolisto-kokkidia ei nopeasti kehitä lääkevastustuskykyä.

Vaikka immuunijärjestelmä on tärkeä suoja-aineita vas-25 taan, jotka voivat aiheuttaa sairautta, se ei pysty erottamaan hyödyllisiä ja haitallisia vieraita aineita ja tuhoaa molemmat. Olisi hyödyllistä monissa tapauksissa säätää immuunijärjestelmää vahingoittamatta yksilöä. Tämän keksinnön yhdisteet osoittavat tällaisia sääteleviä ja 30 moduloivia vaikutuksia ja potentiaalia käytettäväksi erilaisten immuunihäiriöiden, kuten nivelreuman ja punahukan hoitoa varten.

Kiertävillä vasta-aineilla ja soluinunuunireaktioilla on merkitystä siirrettyjen kudosten ja elinten hylkäämi-35 sessä. Jollei luovuttaja ole vastaanottajan identtinen 40 >ϋΊ, 95 kaksonen tai itse henkilö, vastaanottajan imusolut tunnistavat siirteen "ei omaksi" ja reagoivat välittömästi sen tuhoamiseksi. Tällaisen tilanteen poikkeukset ovat siirteet ei-verisuonialueisiin (etuoikeutetut kohdat), kuten 5 silmän sarveiskalvo, jossa imusolut eivät kierrä ja täten eivät herkisty eivätkä altistu immuunireaktiolle. Tällä hetkellä on vaikeaa tukahduttaa immuunireaktiota siirteen hylkäämisen estämiseksi vahingoittamatta vakavasti potilasta toisin tavoin. Potilaalle on lisäksi annettava valio tavia määriä antibiootteja, koska hänen oma suojansa tulehduksia vastaan on heikentynyt. Tämän keksinnön yhdisteet voisivat olla arvokkaita siirteen vastustuskyvyn vahvistamisessa immuunijärjestelmän valvotulla moduloinnilla. Lisäksi nämä yhdisteet osoittavat viruksia vastaan toimi-15 vaa aktiivisuutta.

Annettava määrä aktiivista aineosaa voi vaihdella laajalti käytetyn kyseisen yksikköannoksen, hoitojakson, hoidettavan potilaan iän ja sukupuolen ja hoidettavan sairauden luonteen ja etemisen mukaisesti. Annettava koko-20 naismäärä aktiivista aineosaa on tavallisesti n. 1 mg/kg - 100 mg/kg ja edullisesti 3 mg/kg - 25 mg/kg. Yksikkö-annos voi sisältää 25-500 mg aktiivista aineosaa ja se voidaan ottaa kerran tai useampia kertoja päivässä. Kaavan I aktiivista yhdistettä voidaan antaa farmaseuttisen kan-25 toaineen kanssa käyttäen tavallisia yksikköannosmuotoja, joko oraalisesti, ruoansulatuskanavan ulkopuolisesta tai paikallisesti. Edullisessa muodossa 2-deoksiguanosiinia annetaan rinnakkaisesti tämän keksinnön yhdisteen kanssa.

Mitä tahansa vaikuttavaa ei-myrkyllistä 2-deoksiguanosii-30 niannosta voidaan käyttää, tavallisesti annetaan n. 0,5 -n. 50 mg/kg päivässä. Rinnakkaisella antomuodolla hakijat eivät tarkoita pelkästään niitä annosmuotoja, jotka sisältävät sekä 2-deoksiguanosiinia että kaavan I yhdistettä, vaan myös erillisiä annosmuotoja. Yhdisteitä voidaan antaa 35 myös erillisinä yksikköannoksina.

41 10 Ί/ 9ό

Edullinen antotle on oraalinen antomuoto. Oraalista antomuotoa varten yhdisteet voidaan formuloida kiinteiksi tai nestemäisiksi valmisteiksi, kuten kapseleiksi, pillereiksi, tableteiksi, sulatteiksi, jauheiksi, liuoksiksi, 5 suspensioiksi tai emulsioiksi. Kiinteät yksikköannosmuodot voivat olla kapseli, joka voi olla tavallista kova- tai pehmeäkuorista gelatiinityyppiä, sisältäen esimerkiksi plnta-aktiivisia aineita, voiteluaineita ja inerttejä täyteaineita, kuten laktoosia, sakkaroosia, kalsiumfosfaattia 10 ja maissitärkkelystä. Toisessa suoritusmuodossa tämän keksinnön yhdisteet voidaan tabletoida tavallisten tabletti-pohjien, kuten laktoosin, sakkaroosin ja maissitärkkelyk-sen kanssa yhdessä sideaineiden, kuten akaasian, maissi-tärkkelyksen tai gelatiinin, hajottavien aineiden, kanssa, 15 joiden tarkoituksena on helpottaa tabletin hajoamista ja liukenemista antamisen jälkeen, kuten perunatärkkelyksen, algiinihapon, maissitärkkelyksen ja guar-kumin, kanssa, voiteluaineiden kanssa, joiden tarkoituksena on parantaa tablettigranulaattien virtausta ja estää tablettiaineiden 20 tarttumista tabletin väriaineiden ja puristimien pintoihin, esimerkiksi talkin, steariinihapon tai magnesium-, kalsium- tai sinkkistearaatin, väriaineiden ja makuaineiden, kanssa, joiden tarkoituksena on parantaa tablettien esteettisiä ominaisuuksia ja tehdä niistä hyväksyttävämpiä 25 potilaalle. Sopivia täyteaineita oraalisia nestemäisiä annosmuotoja varten ovat laimentimet, kuten vesi ja alkoholit, esimerkiksi etanoli, bentsyylialkoholi ja polyety-leenialkoholit, joko yhdessä farmaseuttisesti hyväksyttävän pinta-aktiivisen aineen, suspendointiaineen tai emul-30 gointiaineen kanssa, tai ilman niitä.

Tämän keksinnön yhdisteitä voidaan antaa myös ruoansulatuskanavan ulkopuolisesta, ts. ihonalaisesti, laskimonsisäisesti, lihaksensisäisesti tai vatsaontelon sisäisesti, injektoitavina annoksina yhdistettä fysiologisesti 35 hyväksyttävässä laimentimessa farmaseuttisen kantoaineen 42 ιοί:ρ3 kanssa, joka voi olla steriili neste tai nesteiden seos, kuten vesi, suolaliuos, vesipitoinen dekstroosi ja vastaavat sokeriliuokset, alkoholi, kuten etanoli, iso-propanoli, tai heksadekyylialkoholi, glykolit, kuten pro-5 pyleeniglykoli tai polyetyleeniglykoli, glyseroliketaalit, kuten 2,2-dimetyyli-l,3-dioksolaani-4-metanoli, eetterit, kuten poly(etyleeniglykoli) 400, öljy, rasvahappo, rasva-happoesteri tai glyseridi tai asetyloitu rasvahappoglyse-ridi yhdessä farmaseuttisesti hyväksyttävän pinta-aktiivi-10 sen aineen, kuten saippuan tai pesuaineen, suspendointi-aineen, kuten pektiinin, karbomeerien, metyyliselluloosan, hydroksipropyylimetyyliselluloosan tai karbok s ime tyyli selluloosan, tai emulgointiaineen ja muiden farmaseuttisten apuaineiden kanssa, tai ilman niitä. Esimerkkejä öljyistä, 15 joita voidaan käyttää tämän keksinnön ruoansulatuskanavan ulkopuolisissa formuloinneissa, ovat petroli-, eläin-, kasvi- tai synteettistä alkuperää olevat öljyt, esimerkiksi maapähkinäöljy, soijapapuöljy, seesamiöljy, puuvillan-siemenöljy, maissiöljy, oliviöljy, vaseliini ja mineraa-20 liöljy. Sopivia rasvahappoja ovat oleiinihappo, steariini- happo ja isosteariinihappo. Sopivia rasvahappoestereitä ovat esimerkiksi etyylioleaatti ja isopropyylimyristaatti. Sopivia saippuoita ovat rasva-alkalimetalli-, ammonium- ja trietanoliamiinisuolat ja sopivia detergenttejä ovat ka-25 tioniset detergentit, esimerkiksi dimetyylidialkyyliam- moniumhalidit, alkyylipyridiniumhalidit ja alkyyliamiinien asetaatit; anioniset detergentit, esimerkiksi alkyyli-, aryyli- ja olefiinisulfonaatit, alkyyli-, olefiini-, eetteri- ja monoglyseridisulfaatit ja sulfosukkinaatit; ei-30 ioniset detergentit, esimerkiksi rasva-amiinioksidit, ras- vahappoalkanoliamidit ja polyoksietyleenipolypropyleeni-kopolymeerit; ja amfoteeriset detergentit, esimerkiksi alkyyli-β-aminopropionaatit ja 2-alkyyli-imidatsoliini-kvaternaariset ammoniumsuolat, kuten myös seokset. Tämän 35 keksinnön ruoansulatuskanavan ulkopuoliset koostumukset 101793 43 sisältävät tavallisesti n. 0,5 - n. 25 paino-% aktiivista aineosaa liuoksessa. Edullisesti voidaan käyttää myös säilöntäaineita ja puskureita. Ärsytyksen minimoimiseksi tai poistamiseksi injektiokohdassa tällaiset koostumukset voi-5 vat sisältää ei-ionista pinta-aktiivista ainetta, jonka hydrofiilinen-lipofiilinen tasapaino (HLB) on n. 12 - n. 17. Pinta-aktiivisen aineen määrä tällaisissa formuloinneissa on n. 5 - n. 15 paino-%. Pinta-aktiivinen aine voi olla yksittäinen aineosa, jolla on edeltävä HLB tai se 10 voi olla kahden tai useamman aineosan seos, jolla on haluttu HLB. Esimerkkejä ruoansulatuskanavan ulkopuolisissa formuloinneissa käytetyistä pinta-aktiivisista aineista ovat polyetyleenisorbitaanirasvahappoestereiden luokka, esimerkiksi sorbitaanimono-oleaatti ja korkean molekyyli-15 painon etyleenioksidiadduktit hydrofobisen emäksen kanssa, jotka ovat muodostuneet propyleenioksidin kondensaatiosta propyleeniglykolilla.

Aerosoli tai sumut inkoos tunnuksia, jotka sisältävät tämän keksinnön yhdisteitä, voidaan levittää iholle tai 20 limakalvoille. Tällaiset koostumukset voivat sisältää hienojakoista kiinteää tai nestemäistä kaavan I yhdistettä ja myös liuottimia, puskureita, pinta-aktiivisia aineita, hajusteita, antimikrobisia aineita, antioksidantteja ja ponnekaasuja. Tällaisia koostumuksia voidaan levittää pon-25 nekaasujen paineella tai niitä voidaan levittää puristettavien muovisuihkepullojen, sumuttimien tai hajottimien avulla käyttämättä kaasumaista ponnekaasua. Edullinen aerosoli tai suihkekoostumus on nenäsuihke.

Aktiivista aineosaa voidaan myös antaa viivästynyt 30 vapautus-järjestelmällä, jossa kaavan I yhdiste vapautuu asteittain säädetyllä, tasaisella nopeudella inertistä tai biologisesti hajoavasta kantoaineesta diffuusion, osmoosin tai kantoaineen hajoamisen avulla hoitojakson aikana. Kontrolloidut lääkkeen vapautusjärjestelmät voivat olla si-35 teen tai laastarin muodossa, joka kiinnitetään ihoon tai 101793 44 poski-, kielen alaiselle tai nenänsisäiselle kalvolle, okulaari, joka asetetaan paikoilleen silmän umpipussiin, tai asteittain hajoava tabletti tai kapseli tai oraalisesti annettava maha-suolisäiliö. Antamalla tällaisia tasai-5 sesti vapautuvia järjestelmiä, mahdollistuu kehon kudosten jatkuva altistuminen pidennettynä ajanjaksona terapeuttisesti tai ennalta ehkäisevästi vaikuttavalle kaavan I yhdisteen annokselle. Yhdisteen yksikköannos annettuna tasaisesti vapautuvalla järjestelmällä on n. vaikuttavan 10 päivittäisen annoksen määrä kerrottuna päivien maksimilukumäärällä, jona aikana kantoaine pysyy potilaalla. Tasaisesti vapautuva kantoaine voi olla kiinteän tai huokoisen matriisin tai säiliön muodossa ja se voidaan muodostaa yhdestä tai useammasta luonnon tai synteettisestä polymee-15 ristä, mukaanlukien modifioitu tai ei-modifioitu selluloosa, tärkkelys, gelatiini, kollageeni, kumi, polyolefiinit, polyamidit, polyakrylaatit, polyalkoholit, polyeetterit, polyesterit, polyuretaanit, polysulfonit, polysiloksaanit ja polyimidit, kuten myös näiden polymeerien seokset ja 20 sekapolymeerit. Kaavan I yhdisteitä voidaan yhdistää ta saisesti vapauttavaan kantoaineeseen puhtaassa muodossaan tai ne voidaan liuottaa mihin tahansa sopivaan nesteeseen tai kiinteään apuaineeseen, mukaanlukien polymeeri, josta tasaisesti vapautuva kantoaine on muodostettu.

25 Toisena tämän keksinnön kohteena on kaavan 1 pu- riininukleosidifosforylaasi-inhibiittien käyttö konjunktiivisessa hoidossa, mikä mahdollistaa viruksia vastaan toimivien nukleosidianalogien tehokkuuden, mikä muutoin olisi puriininukleosidifosforylaasin entsymaattisen toi-30 minnan kohteena.

Erityisesti, tämä keksintö kattaa kaavan I yhdisteen käytön konjunktiivisessa hoidossa retrovirustulehdusten hoidossa, erityisesti ihmisissä, erityisesti ihmis-immuu-nipuutosviruksen hoidossa. Erityisen edullisia 2',3'-di-35 deoksipuriininukleosideja ovat 2',3'-dideoksiadenosiini, 101793 45 2',3'-dideoksiguanosiini, 2',3'-dideoksitioinosiini ja 2', 3'-dideoksi-inosiini.

Dideoksipuriininukleosidin, esim. kaavan I, anti-ret-rovirusvaikutuksen voimakkuus PNP inhibiitillä voidaan 5 määrittää esim. soluviljelmillä (esim. H9-solut, ATH8 solut) altistettuna retrovirukselle (esim. HIV) menetelmän avulla, joka on hyvin tunnettu alalla, kuten on kuvattu julkaisussa Proc. Nat. Acad. Sei, U.S.A., 83, 1911 (1986). Tehokkuus voidaan määrittää myös in vivo (esim. rotilla) 10 mittaamalla dideoksipuriininukleosidin kasvu plasmatasos-sa, mikä saavutetaan aikaisemmalla tai samanaikaisella erityisen PNP inhibiitin antamisella, alalla hyvin tunnetun menetelmän mukaisesti.

Kahta aktiivista aineosaa (2', 3'-dideoksipuriininuk-15 leosidia ja PNP inhibiittiä) voidaan antaa samanaikaisesti samaa tai eri tietä, samassa tai eri formuloinnissa tai niitä voidaan antaa eri aikoina edellyttäen, että esiintyy tehokasta PNP inhibitiota kun 2',3 *-dideoksipuon läsnä. Annettavien aktiivisten aineiden aikaerotuksen toteutetta-20 vissa oleva suuruus riippuu saatavissa olevan PNP:n määrästä ja nopeudesta, jolla PNP inhibiitti itse heikkenee. Näistä syistä johtuen edullinen annos on jaettuina annoksina 2-4 kertaa päivässä, edullisimmin niin, että molemmat aineet annetaan samanaikaisesti.

25 Tiedetään, että puriininukleosidijohdannaiset, annet taessa virusta vastaan toimivina aineina, altistuvat pu-riininukleosidifosforylaasikatalyysille, mikä ei-toivo-tusti muuttaa tällaisten aineiden tehokkuutta. Tosiaan, katalyysi voi johtaa vahingollisiin sivuvaikutuksiin. Tie-30 detään myös, että virusta vastaan toimivat yhdisteet, jotka sinänsä eivät ole puriininukleosidifosforylaasin kohteena, (joko hyvin tunnettujen mekanismien avulla, esim. adenosiinideaminaasin entsymaattisella toiminnalla tai ei-ymmärretyillä mekanismeilla) altistuvat puriininukleosi-35 difosforylaasille ja täten tällaisen yhdisteen virusta 101793 46 vastaan toimiva tehokkuus vastaavasti muuttuu. Täten, ottaen huomioon keksinnön tämä puoli, termi virusta vastaan toimivat aineet, jotka altistetaan puriininukleosidifosfo-rylaasille, käsittää keksinnön molemmat virusta vastaan 5 toimivat aineet.

Keksinnön tämä puoli voidaan vaihtoehtoisesti ilmaista näin: virustulehdusten hoitomenetelmässä virusta vastaan toimivilla aineilla, jotka altistetaan nukleosidifosfory-laasille, parannus on tunnettu siitä, että konjunktiivi-10 sesti annetaan terapeuttisesti vaikuttava määrä puriini-" nukleosidifosforylaasi-inhibiittiä, erityisesti niitä in-hibiittejä, jotka kuuluvat kaavan I yleisen piirin yhdisteisiin.

Tässä keksinnön osassa termi "virusta vastaan toimiva 15 aine" käsittää virusten ja sairauksien hoidon, joka aiheutuu niistä, joiden tavallisesti tiedetään olevan mukautuvia hoidolle nukleosidianalogeilla, kuten esimerkiksi HIV-virukset, jotka ovat aiheuttava tekijä AIDS:ssa, hepatitis B virus ja herpes.

20 Erityisiä tällä hetkellä mielenkiintoisia virusta vas taan toimivia aineita, joiden avulla kohonnut virusta vastustava tehokkuus saavutettaisiin konjunktiivisella hoidolla PNPaasi inhibiiteillä, ovat sellaiset yhdisteet kuin (a) dideoksinukleosidit, joilla on kaava 25 r.

χΥχ> 30 R2^ N ' 35 x 10179ο 47 jossa

Rl, R2, X Nimi Kohdevirus

OH,H,H dideoksi-inosiini HIV

5 OH,NH2, H dideoksiguanosiini HIV, hepatiitis B

OH,NHj, F 3'-F-dideoksi- HIV

guanosiini

OH,NH2,N3 3’-atsidodideoksi- HIV, hepatiitis B

guanosiini

10 NH2,NH2,H dideoksidiamino- HIV, HBV

puriiniribosidi

NH2,H,H dideoksiadenosiini HIV

NH2,NH2,N3 3'-atsidodideoksi- HIV, HBV

diaminopuriini-15 ribosiidi

Viimeiset kolme yhdistettä ovat ensimmäisiä ade- nosiinideaminaasisubstraatteja, (b) dideoksidehydronukleosidit, joilla on kaava 20 Γ.

χϊχ>

25 D

. R2 N

O

HO-V/ S

u 30 101793 48 jossa

Rj,Rj Nimi Kohdevirus

5 OH,H dideoksidehydro- HIV

inosiini

OH,NH2 dideoksidehydro- HIV

guanosiinl

NH2,H dideoksidehydro- HIV

10 adeniini (c) dioksolaanipuriinijohdannaiset, joilla on kaava ti

15 X N

R2 n 20 H0— O-' jossa vaihdellaan R2:tä ja R2:ta, jolloin Rx on OH tai NH2 ja R2 on H tai NH2, missä mainitut yhdisteet kohdistetaan 25 HIV:tä ja HBV:tä (ts. hepatitis B) vastaan, ja (d) oksetaanityyppiset johdannaiset, joilla on kaava

Rl i .

30 N^V Niv R2 n

O

ho—\y \ 35 =

=-OH

10179ο 49 jossa Rx on OH tai NH2 ja R2 on H tai NH2. Kohdevirus on HIV.

On huomattava, että tällä hetkellä kaksi parasta virusta vastaan toimivaa ainetta hepatitis B:lle (HBV) ovat 5 dideoksiguanosiini (ddGuo) ja 2,6-di-iminodideoksipuriini-ribosidi, joka on "esilääke" dideoksiguanosiinille.

Erityisen hyödyllisiä tämän keksinnön yhdisteitä ovat PNP inhibiitit, joilla on kaava

10 OH

h2 n 1

15 L

Z" 20 jossa R3 on H, Ar on 2,3-tiofeeni, 2,5-furaani tai 3,4-furaani ja Z" on -CH2CF2-P(OH)2, ja jossa Ar on 1,2-fenyyli ja R3 on H tai NH2 ja Z" on: CH2CF2PO(OH)2, 25 CH2CHFPO(OH)2, CHFCF2PO(OH)2, CHOHCF2PO(OH)2, CH = CFP0(0H)2, CH = CHP0(0H)2, tai 30 COCF2PO(OH)2.

• Λ

Kuten on totta suurimmalle osalle kemoterapeuttisten aineiden luokista, tietyt alaluokat ja tietyt spesifiset suoritusmuodot ovat edullisempia kuin toiset. Tässä kaavan 35 I PNP inhibiittien luokassa edullisia yhdisteitä ovat ne, 101793 50 joissa R2 on OH, R2 on NH2, R3 on H tai NH2, Ar on 1,2-fe-nyyli tai 2,3-furaani tai tiofeeni, r5 ja R6 ovat H. Edullisia Z ryhmiä ovat ne (a) joissa X ja Y ovat F, R4 on H ja R'4 on H tai F, ne (b), joissa n on 0 ja X ja Y ovat molem-5 mat H, ne (c), joissa X on F ja Y on F tai H, ne (d), joissa X on F ja Y on F tai H, ne (e), joissa X ja Y ovat F ja R7 ja R8 ovat H. Edullisia spesifisiä yhdisteitä ovat ne esimerkkien 1-10 lopputuotteet, kuten myös niiden 3-asema-aminoanalogit.

10

Claims (8)

101793 Patentt ivaat imukset

1. Menetelmä uusien, terapeuttisesti käyttökelpoisten kaavan I mukaisten 9-purinyylifosfonlhappojohdannais-5 ten ja niiden tautomeeristen muotojen ja farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, Ri

10 N ^ N\\ \)—(I) R \ /"’"'N K2 N I CH2-Ar-Z-P(0)(0H)2 15 jossa Ar-silta, joka yhdistää CH2- ja Z-ryhmät on R,-subs-tituoitu fenyyli, furaanl tai tiofeeni, jolloin fenyyli voi muodostaa sillan sen 1,2-, 1,3- tai 1,4-asemissa ja 20 kumpikin furaanista ja tiofeenistä voi muodostaa sillan 2,3-, 2,4-, 2,5- tai 3,4-aseman rengashiiliatomien kautta; R,-substitutio voi olla mono- tai di-substituoitu, jolloin substituointi toteutuu missä tahansa muissa vapaissa ren-gashiiliatomeissa, Z on osaryhmä (a), (b), (c), (d) tai 25 (e) jolloin f* ΐ ϊ (a) on - C - C - , (b) on - O -(CH,)n- C - , Il 2 n I r*4 y Y 30 (c) on R7 \ /R8 X Y NC X

35 I | Il | ~ ^ ~ C -, (d) on “ C = C —, ja (e) on — C — C — Y 101/93 edellyttäen, että kun Z on osaryhmä (b), niin Ar on muu kuin furaani tai tiofeeni, n on kokonaisluku 1-5 tai 0, R2 on -OH tai -SH, R2 on H tai -NH2,

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, ;; 30 tunnettu siitä, että Ri on OH.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että R2 on NH2.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että R3 on H.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että R3 on NH2. 10179ο

5 R3 on H, -NH2, -OH tai -NH-NH2, R4 on H, R'4 on H, OH tai F, tai R4 ja RT4 muodostavat yhdessä hiiliatomin kanssa, johon ne ovat sitoutuneet, ketoryh-män, 10 kumpikin R7 ja Ra on H, F tai Cx_4 alkyyli, Rg on H, Cl, Br, Cx.6 alkyyli, alkoksi, OH, NH2 tai CH3, edellyttäen että kun Ar on furaani tai tiofeeni, R9 on muu kuin OH tai NH2, X ja Y ovat H, F tai Cl, edellyttäen, että kun n on 15 0, X ja Y ovat molemmat H, tunnettu siitä, että yhdiste, jolla on kaava Ri

20 N ” v L JL >~R3 CH2-Ar-Z-P(0) (OCx_6)2 25 saatetaan reagoimaan trimetyylisilyylibromidin kanssa standardireaktio-olosuhteissa, ja haluttaessa muutetaan tuote sen farmaseuttiseksi suolaksi.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että Ar on fenyyli tai tiofeeni.

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että Z on CHFCF2, CH-CF tai CH*CH.

8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan [2-[2-[(2-amino-1,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yyli)metyyli] fenyyli]-1,1-difluorietyyli]fosfonihappo, [2-[2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yyli)metyy-10 li]fenyyli]-1-fluorietenyyli]fosfonihappo, [2-[2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yyli)metyyli] fenyyli]-1,1,2-trifluorietyyli]fosfonihappo, [2-[2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yyli)metyyli] fenyyli]-2-hydroksi-1,1-difluorietyyli]fosfonihappo, 15 [2-[2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yyli)metyy li] fenyyli]-2,2-dihydroksi-l,1-difluorietyyli]fosfonihappo, [3- [2- [ (2-amino-l, 6-dihydro-6-kloori-9H-purin-9-yyli Metyyli] f enoksi] -1 ,1-difluoripropyyli]fosfonihappo, 20 [2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yyli)metyyli]- fenoksi]metyyli fosfonihappo, [2-[2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yyli)metyyli] fenyyli]-1,1-difluori-2-propenyyli]fosfonihappo, [2-[2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yyli Jmetyy-25 lifenyyli]etynyyli]fosfonihappo tai [2-[2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yyli)metyyli fenyyli] etenyyli]fosfonihappo. 10179c-