PT98198B

PT98198B - Processo para a preparacao de novos derivados do acido 9-purinil-fosfonico e de composicoes farmaceuticas que os contem

Info

Publication number: PT98198B
Application number: PT98198A
Authority: PT
Inventors: Charles Danzin; Serge Halazy
Original assignee: Merrell Dow Pharma
Priority date: 1990-07-04
Filing date: 1991-07-03
Publication date: 1998-12-31
Also published as: DK0465297T3; DE69116750T2; NO180541B; US5527803A; FI913236A; TW199896B; IL98702A0; NO912606L; NZ238774A; JP3006919B2; NO912606D0; DE69116750D1; HU912253D0; EP0465297B1; GR3019793T3; ATE133678T1; JPH04253989A; EP0465297A1; HUT59151A; PT98198A

Description

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE NOVOS DERIVADOS DO ÁCIDO 9-PURINIL-FOSFÓNICO E DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS

QUE OS CONTÊM

ÂMBITO DA INVENÇÃO

A presente invenção diz respeito a novos inibidores da purina-nucleósido-fosforilase, a processos e a compostos intermédios para a sua preparação e à sua utiliza ção como agentes imuno-supressores, anti-linfomáticos, anti-leucémicos, anti-virais e anti-protozoáricos.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

A purina-nucleósido-fosforilase (PNP), sob condições normais in vivo catalisa a clivagem fosforolítica dos ribo- e desoxirribonucleósidos da guanina e da hipoxantina nos correspondentes fosfatos de açúcar e guanina ou hipo xantina. Na ausência de PNP, a concentração do ácido úrico é bastante baixa, enquanto a concentração de certos substratos nucleoEÍdiccs de PNP tais como (dGuo), no plasma e na urina é elevada. Porém, o dGuo é tóxico para os linfoblas-

tos, sendo as células T muito mais afectadas do que as células B. De facto, nos doentes com deficiência de PNP, adquirida geneticamente, a produção de imunoglobulina nas cé lulas B é normal ou mesmo elevada, mas estes doentes são leucopénicos e a função linfocítica T ou está totalmente ausente ou está grandemente diminuída. Embora a deficiência de PNP não controlada seja obviamente indesejável, há muitos exemplos em que a supressão controlada do sistema imunológico, em particular na supressão controlada, das células T, deverá ser altamente desejável, tal como no tratamento da leucemia de células T, na supressão da resposta do hospedeiro versus enxerto em receptores de órgãos transplantados e no tratamento da gota. A Requerente descobriu um grupo de derivados do ácido 9-purinil-fosfónico que são inibidores potentes da PNP e, assim, são utilizáveis como agentes imuno-supressores.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Mais especificamente, a presente invenção diz respeito a novos derivados do ácido purinil-fosfónico de fór mula geral

R

R (I)

- 3 na qual o símbolo R representa um grupo de fórmula geral

na qual

Ar representa uma ponte à qual o grupo Cí^ adjacente se liga através de um átomo de carbono do anel e o grupo A está ligado a um segundo átomo de carbono do anel de um grupo fenilo tiofeno ou furano R^-substituído; Z representa um grupo de sub-tipos (a), (b), (c), (d) ou (e)

R₄ X (a) representa - C - C

R’₄ Y (b) representa - 0 -(Cl^) - C

X Y

I I (c) representa - C = C (d) representa 4 ^R7\ / ^R8 ,, ff Ϊ (e) representa - C - C com a condição de que, quando o símbolo Z representa um grupo de sub-tipo (b), então o símbolo Ar não representa um grupo furano nem tiofeno, o símbolo n representa zero ou um número inteiro de 1 a 5, o símbolo R^ representa um grupo -OH ou -SH, o símbolo representa um átomo de hidrogénio ou um grupo

-nh₂, o símbolo Rg representa um átomo de hidrogénio ou um grupo -ΝΗ₂, -OH ou -NH-NH₂, o símbolo Rjj representa um átomo de hidrogénio, o símbolo R’ representa um átomo de hidrogénio ou de flúor ou um grupo OH, ou os símbolos R^ e R'^, considerados conjuntamente com o átomo de carbono ao qual estão ligados, formam um grupo ceto, o símbolo R^ representa um grupo alquilo C^-g ^ou o símbolo Rg representa um grupo alquilo ou R’g eom os símbolos R’^ e R’g representando um átomo de hidrogénio, os símbolos R? e Rg representam, cada um, um átomo de hidrogénio ou de flúor ou um grupo alquilo , o símbolo R9 representa um átomo de hidrogénio, cloro, ou de bromo ou um grupo alquilo g, alcoxi

OH, NH₂ ou CH^, com a condição de que, quando 0 símbolo Af representa um grupo furano ou tiofeno, o símbolo R não reprey senta um grupo OH nem NH₂, e os símbolos X e Y representam, cada um, um átomo de hidro génio, flúor ou de cloro, com a condição de que, quando o símbolo n representa zero, os símbolos X e Y representam, cada um, um átomo de hidrogénio às suas formas tautoméricas e aos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.

Utilizadas aqui, as designações alquilo

C.j jj θ alquilo & incluem os grupos hidrocarbonados alifáticos inferiores, saturados, lineares e ramificados, com 4 ou 6, átomos de carbono, respectivamente, incluindo os grupos metilo, etilo, propilo, isopropilo, seo-butilo, n-butilo, t-butilo, pentilo e similares; sendo os grupos alcoxi C₁ g os seus derivados éter. 0 grupo Ar ligado em ponte ao grupo CH^ contíguo e os grupos Z são grupos fenilo furano ou tiofeno Rg-substituídos, em que o grupo fenilo pode estar ligado em ponte nas suas posições 1,2-, 1,3- ou 1,4- e cada um dos grupos furano e tiofeno pode estar ligado em ponte através dos átomos de carbono das posi ções 2,3-, 2,4-, 2,5- ou 3,4- do núcleo; a substituição Rg pode ser mono- ou dissubstituída, sendo a substitui ção em qualquer dos outros átomos de carbono do núcleo, disponíveis. As formas tautoméricas enol-ceto podem existir na

posição 6 do núcleo de purina.

A expressão sais de adição de ácidos, aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico aplica-se a quaisquer sais de adição de ácidos inorgânicos ou orgânicos, não-tóxicos, de bases dos compostos de fórmula geral (I).Os exemplos de ácidos inorgânicos que formam sais apropriados incluem os ácidos clorídrico, bromídrico, sulfúrico e fosfórico e os sais metálicos ácidos, tais como mono-hidrogeno-ortofosfato de sódio e hidrogeno-sulfato de potássio. Os ácidos orgânicos representativos que formam sais apropriados incluem os ácidos mono-, di- e tricarboxílicos. Representativos de tais ácidos são, por exemplo, os ácidos acético, glicólico, láctico, pirúvico, malónico, succínico, glutárico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, ascérbico, maleico, hidroximaleico, benzóico, hidroxibenzóico, fenil_ acético, cinâmico, salicílico e 2-fenoxibenzóico. Outros ácidos orgânicos que formam sais apropriados são os ácidos sulfónicos, tais como o ácido metano-sulfónico e o ácido 2-hidroxietano-sulfónico. Tanto se podem formar sais mono-, como sais diácidos, podendo esses sais existir quer sob uma forma hidratada, quer sob uma forma substancialmente anidra. Os sais ácidos preparam-se por meio de técnicas convencionais, tais como por meio da dissolução da base livre em uma solução aquosa ou aquoso-alcoólica ou em outros dissolventes apropriados contendo o ácido apropriado e isolamento por meio de evaporação da solução , ou por meio da reacção da base livre no seio de um dissolvente orgânico, caso em que o sal se

separa directamente ou pode obter-se por meio da concentração da solução. Em geral, os sais de adição de ácidos dos compostos da presente invenção são, sais cristalinos que são solúveis na água e em vários dissolventes orgânicos hldrofílicos e que, em comparação com as suas formas básicas livres, têm pontos de fusão mais elevados e uma maior estabilidade .

A preparação de compostos de fórmula geral (I) pode, em geral, efeetuar-se por meio de uma reacção de condensação em que uma 6-cloro-purina (2) é tratada com um fosfonato (3) activado (CH2~Ar-Z-)-substituído e o composto intermédio resultante (Ia) se converte nos

dos, de fórmula geral (I). A reacção de condensação geral está descrita no esquema reaccional seguinte.

Ç1 |l

OR

OR (2) (3)

Cl

or₆ (I) em que os símbolos , R₂, R^, Ar, Z, R^ e Rg têm-os significados anteriormente definidos, excepto que o símbolo R^, que ocorre quando o símbolo Z representa um grupo do sub-tipo (a), pode representar também um éter silílico e o símbolo Q representa um átomo de bromo ou de iodo ou um grupo hidroxi.

Nos casos em que se deseja efectuar uma condensação do composto intermédio (2) 6-cloro-purina com um fosfonoarilo (3) em que o símbolo Q representa um halogeneto, a condensação efectua-se por meio da reacção de um ligeiro excesso (cerca de 10 %) do reagente (2) 6-cloro-purina na presença de uma base, tal como hidreto de sódio (NaH), carbonato de potássio (K^CO^) ou fluoreto de césio (CsF) (em quantidades de cerca de 2 equivalentes) no seio de um dissolvente não reactivo, tal como a dimetilformamida (DMF), a uma temperatura compreendida entre cerca de 0°C e 60°C, de preferência à temperautra ambiente durante cerca de 4 a 18 horas.

No caso em que o símbolo Q representa um grupo OH, a condensação efectua-se sob condições neutrais, de acordo com a reacção do tipo Mitsunobu utilizando azodicarboxilato de dietilo (DEAD) na presença de P(R’)g em que o símbolo R’ representa, de preferência, um grupo fenilo mas incluindo os grupos metilo e isopropilo, sendo a referida reacção efectuada no seio de um dissolvente apropriado, não reactivo, a uma temperatura compreendida entre 02C e 602C.

Naturalmente, em cada caso, nas reacções em que o grupo Ar possui um substituinte R_n que pode ser y afectado pelas condições da reacção dessas condensações (ou modificações da base purina), então esses substituintes são modificados para evitar quaisquer reacções paralelas indesejáveis e no passo apropriado são reconvertidos na forma desejada. Por exemplo, se o símbolo R_n representar um grupo y

OH então pode formar-se um derivado éster ou éter intermédio e no passo apropriado, o éster ou o éter pode ser hidrolisado originando o respectivo álcool. Estes princípios são bem compreendidos pelos entendidos na matéria e não necessitam de ser pormenorizados aqui.

No caso especial em que os símbolos R^ , R’5 X e Y da fórmula geral (3) representam todos átomos de hidrogénio, é preferível condensar um derivado bromometílico do fosfonilarilo de fórmula geral

Br

(4) com a purina (2) e hidrogenar os compostos resultantes, de preferência utilizando hidrogénio gasoso na presença de paládio sobre carvão (H^-Pd/C), de acordo com técnicas ·con vencionais.

No caso especial em que se deseja preparar compostos de fórmula geral (Ia), na qual o símbolo'R^-representa um átomo de hidrogénio e o símbolo R’^ representa um grupo OH ou os símbolos R^ e R’, conjuntamente,formam um grupo ceto (com a definição anterior), é usual utilizar-se um éter silílico (de preferência, éter t-butil-dimetilsilílico para proteger o grupo hidroxi do halogeneto de fosfonilo, isto •Si

Br

Ο X OR,

'Ar - CH - C - P=O

Y OR, (5) em que -OSi-- representa um grupo eter t-butil-dimetilsilílico e a'seguir à condensação, como se descreveu previamente, eliminar o grupo protector sililo mediante hidrólise ácida. Se o álcool resultante tiver de ser oxidado, este álcool pode ser oxidado, para originar a cetona desejada, por meio da utilização da reacção de oxidação de Swern. Na prática, é preferivel formar o éter silílico antes de se activarem os reagentes de fórmula geral (3), como aqui se des_ creve a seguir.

Os reagentes activados Q” de fórmula geral (3) podem preparar-se por métodos bem conhecidos na técnica, de preferência utilizando compostos intermédios, em que os grupos OH (se existirem) são protegidos da reacção, antes da acti_ vação, com grupos halogenados ou com grupos hidroxi.

De preferência, as bromações efectuam-se com

N-bromo-succinimida (NBS) ou outras N-bromoamidas apropriadas na presença de quantidades catalíticas de peróxido de benzoilo, e as reacções decorrem, de preferência, no seio de CCl^ (tetracloreto de carbono), como dissolvente. A preparação dos

reagentes da fórmula geral (3), na qual o símbolo Q representa um grupo OH, pode efectuar-se directamente a partir de (6) por meio da reacção com CeAmNO^ (nitrato de amónio cérico) ou por meio da conversão do brometo de benzilo (7) no seu acetato, seguida de hidrólise do acetato com quantidades catalíticas de metóxido de sódio em metanol, utilizando procedimen tos convencionais nas reacções bem conhecidos na técnica.

^0Rq 1⁵

CH₃-Ar-Z-P=O _^NBS_j j Peróxido de benzoilo or₆

OR

BrCH₂-Ar-Z-P=:0 or₆ (6) (7)

CeAmNOg

H0CH₂Ar-Z-P= 0

1) Acetilação

2)

0R₆ <

(8) em que os símbolos Ar, Z, R^ e Rg têm os significados previamente definidos, excepto que o símbolo R'^ representa um grupo éter silílico (em vez de OH) e o símbolo Rg representa um grupo hidroxi protegido em vez de um grupo OH (se apropriado ).

Uma vez efectuada a condensação da base (2) 6-cloro-purina para se obterem os compostos de fórmula

geral (Ia), as modificações nas posições 8,6 e/ou 2 podem efectuar-se por passos para se originarem os grupos desejados Rp ^R2 ^{e R}3’ ^da fórmula geral (I).

Para se prepararem compostos de fórmula geral (I), na qual os símbolos Rg e Rg representam, cada um, um átomo de hidrogénio e o símbolo representa um grupo

OH, fazem-se reagir, sucessivamente, os correspondentes di-ésteres fosfonatos de fórmula geral (la) (isto é, os símbo los Rg e Rg representam grupos alquilo) com brometo de trimetilsililo (TMSBr) em (^Cl , água em actonitrilo e, fina^ mente, com HCl (IN) à temperatura de 90°C. Para se preparar um msnoéster (o símbolo R._ representa um átomo de hidrogénio b e o símbolo Rg representa um grupo alquilo e o símbolo R^ representa o grupo OH), os compostos de fórmula geral (Ia) são submetidos, directamente, à hidrólise HC1/H₂O à temperatura de 90°C.

Para se prepararem compostos de fórmula geral (I), na qual o símbolo R^ representa um grupo SH, fazem-se reagir os compostos de fórmula geral (Ia) com tiureia em ácido acético. A deseterificação dos compostos 6-SH resultantes por meio de tratamento com TMSBr e hidrólise deverá originar compostos em que o símbolo R^ representa um grupo SH e os símbolos Rg e Rg representam, cada um, um átomo de hidrogénio.

Para se prepararem os compostos de fórmula geral (I), na qual o símbolo R^ representa um grupo SH, os símbolos R^ θ R^ têm os significados definidos na fórmula

geral (I) e o símbolo R’^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo éter silílico (-O-SiMe^), faz-se reagir o cor respondente análogo 6-OH com pentassulfureto fosforoso dimé rico. Os compostos resultantes, em que o símbolo R’^ representa um grupo éter silílico, podem ser convertidos no corres pondente álcool e, eventualmente, o álcool pode ser oxidado para se obter o seu análogo ceto por meio de métodos descritos aqui. Podem utilizar-se os mesmos reagentes (excepto que o símbolo R^ representa um átomo de hidrogénio) para se prepararem os compostos de fórmula geral (I), na qual o símbolo R^ representa um grupo NH₂ ou um grupo -NH-NH₂, por meio de halogenação (na posição 8 do grupo purina) utilizando um agente de bromação ou de iodação, tal como bromo em água, uma N-bromo ou N-iodo-imida (por exemplo, 1,3— -dibromo-5,5-dimetil-hidantoína, 1,3-diiodo-5,5-dimetil-hidantoína, N-iodo-acetamida, de preferência NBS ou NIS, e com mais preferência N-bromoacetamida (NBA)). Os análogos 8-halogenados assim obtidos reagem eom a hidrazina, no seio de um dissolvente apropriado (por exemplo, água,éter, THF, p-dioxano, alcanóis inferiores, etilenoglicol, hidrocarbone tos clorados (CCl^, CH₂C1₂), DMF, HMPA ou DMSO,a temperaturas de cerca de 50 °0 a 100°C, de preferência, mas não necessariamente, utilizando 2 a 3 vezes de excesso de hidrazina. Os compostos correspondentes 8-NH₂ podem ser preparados por meio da redução da hidrazina, utilizando níquel de Raney. Os análogos 8-halogenados utilizados para a reacção com a hidrazina podem utilizar-se para se prepararem os compostos, em que o símbolo R^ representa um grupo OH, por meio da reacção do composto 8-halogenado com um sal de metal alcalino ou de metal alcalino-terroso de um álcool benzílico (por exemplo, álcool benzílico), seguida da subsequente redu ção do composto intermédio com hidrogénio gasoso à pressão atmosférica, na presença de um metal nobre como catalisador por exemplo, Pd/C).

Para visualizar os conceitos em que se baseia a via da síntese e, mais rapidamente, explicar os passos alternativos pelos quais se podem obter os compostos do sub-tipo (a), em que o símbolo R^ representa um átomo de hidrogénio e o símbolo R’^ representa um grupo OH, ou os símbolos R^ e R’^ eonjuntamente, formam o grupo ceto definido, apresenta-se o esquema seguinte.

O=p-C- c=o

HO

Y (14) em.que -Si-Ar, X, Y, 'bu^NF representa um grupo t-butildimetilsililo e TMSBr têm os singifiçados definidos antes.

A preparação dos arilfosfonatos de fórmula geral (6) pode efectuar-se utilizando processos e técnicas convencionais analogamente conhecidos na técnica; a via particular da síntese, naturalmente, está dependente da definição do grupo Z.

No caso em que se deseja preparar compos tos intermédios de fórmula geral (6), na qual o grupo Z é representado pelo sub-tipo (a), isto é, compostos de fórmula geral

R’_u Y ORg (15) na qual os símbolos Ar, R^, R’^, X, Y, Rg θ Rg têm os significados descritos para a fórmula geral (I), a via específica da síntese depende principalmente das definições específicas dos símbolos R^, R’^, X e Y. No caso em que os símbolos Rjj e R’^, representam, cada um, um átomo de hidrogénio, o processo representa-se,esquematicamente, como se segue:

X

I

HgC - Ar - CH₂Br + M - C

Y (16) V

OR,

Lg

HóC - Ar - CH₀ - C - P = 0 d ζ I I

Y ORz(15) (17)

X

em que o símbolo M representa Li, Na, -ZnBr e MgBr (de prefe. rência, lítio), e os símbolos X e Y representam, cada um, um átomo de hidrogénio, flúor ou de cloro. Nesta reacção, o derivado de lítio (17) preparado por meio da reacção do fosfonato apropriado com diisopropilamideto de lítio (LDA) ou butil -lítio,sob atmosfera inerte (argon), no seio de um dissolvente anidro (por exemplo, THF) e à temperatura de cerca de -78^QC, é condensado com o brometo de arilo (16) por meio de reacção durante 10 a 20 horas e a reacção é interrompida com cloreto de amónio (NH^Cl) aquoso, saturado.

A condensação dos reagentes (16 e 17) em que o símbolo M representa -ZnBr, efectua-se de preferência na presença de quantidades catalíticas de brometo de cobre à temperatura de 20^PC. Os derivados brometo de zinco e de magnésio preparam-se,também, por meio de processos convencionais .

No caso em que o símbolo R^ representa um átomo de hidrogénio e o símbolo R' representa-ungrupoQH cu urrátanode flúor,ou os símbolos R^ e R’^ formam um grupo ceto (como se definiu), os compostos preparam-se de acordo com o seguinte esquema:

OH X

0R_r

CH^-Ar - CHO (18) +

X ORI l ⁵LiC - P = 0

I I

Y OR,

CH_O-Ar - CH - C - P ³ I ¹ (20) ^Y )R,

DAST X 0R_r

CH₃ -‘Ar - CH - C - P (19) (21)

0R6

A reacção dos aldeídos (18) com o derivado de lítio (19) efectua-se em THF à temperatura de -78°C, sob atmosfera de árgon, durante cerca de 3 horas e, depois, interrompe-se a reacção com ΝΗμΟΙ aquoso, saturado, a uma temperatura cenpreendida entre cerca de -78^0 e -30°C para obter os compostos (20). No tratamento dos compostos (20) oom DAST trifluoreto de dietilamino-enxofre, a reacção efectua-se em diclorometano à temperatura de cerca de 0°C durante cerca de 15 a 25 horas e interrompe-se a reacção uti lizando metanol em excesso. Os álcoois (20) podem ser oxidados, também, para as suas formas ceto por meio da utilização da reacção de oxidação de Swern utilizando cloreto de oxalilo em DMSO ou por meio da utilização do perrutenato de tetrapropilamónio e N-óxido de N-metil-morfolina. Como anternativa, as cetonas podem formar-se directamente pela reacção dos com postos (19) (em que o símbolo M representa Li ou -ZnBr) com os compostos de fórmula.geral H^C-Ar-C-X’,' na qual o símbolo X” representa um átomo de cloro ou um θ grupo alcoxi.

Ao efectuar-se esta última reacção para preparar as oetonas directamente, é especificamente preferível que o símbolo X” represente um grupo alcoxi (por exemplo, um grupo metoxi) e que o símbolo M represente um átomo de lítio, quando ambos os símbolos X e Y representam átomos de hidrogénio e quando ambos os símbolos X e Y representam átomos de flúor, é especificamente preferível que o símbolo X” represente um átomo de cloro e que o símbolo M represente

-ZnBr.

No caso em que o símbolo R^, representa um átomo de hidrogénio e o símbolo R’^ representa um grupo OH ou os símbolos R^ θ considerados conjuntamente, formam a cetona definida, é preferível que se utilize um éter silílico do composto (20) (por exemplo, um derivado t-butil-dimetilsililoxi), como já se^descreveu para a condensação dos reagentes (2) e (3). Estes derivados silílicos preparam-se por meio da reacção dos compostos (19) com o cloreto de t-butil-dimetilsililo na presença de imidazol e os compostos resultantes são activados com NBS. A eliminação selectiva do grupo protector sililo, em um último passo, efecttia-se por meio de tratamento com fluoreto de tetrabutilamónio (Bu^NF), como se referiu antes.

No caso particular em que se preparam compostos de fórmula geral (Ia), na qual os símbolos R^ e R^f^ formam a cetona definida e os símbolos X e Y representam át£ mos de hidrogénio, é preferível utilizar o esquema de reacção seguinte;

II

OR

CH^-Ar - C - 0CH₃

LiCH₂P=0

(22)

OR

CH^-Ar - C - CH₂ (24)

OR

Ή03. Cl/Imidazol (23)

II

OR,

H^C - Ar - C = CHP—0 O ORg .H_S-Si-CH_o3 5 tBu (25)

OR,

BrCH^Ar = C = C - P=O

OR,

HgC-Si-CHg tBu (26)

Deve notar-se que no caso em que se deseja preparar compostos de fórmula geral (Ia) na qual o sím bolo Z representa um sub-tipo (a), por meio de uma condensação em que o símbolo Q da fórmula geral (3) representa um grupo OH e os símbolos R^, R’, X e Y representam, cada um, um átomo de hidrogénio, é preferível reduzir os compostos intermédios do sub-tipo (o) para obter os reagentes apropriados incluídos na fórmula genérica (3).

No caso em que se deseje preparar compostos intermédios incluídos dentro da fórmula geral (6), na qual o símbolo Z é do sub-tipo (b), isto é, compostos de fórmula geral

X OR | 5

CH₃ - Ar’ - 0 - (CH₂)_n - C - P—0

Y OR, (27) na qual o símbolo Ar’ não representa um grupo de ligação em ponte furano ou tiofeno, podem utilizar-se processos convencionais, analogamente conhecidos na técnica. Em geral, os compostos intermédios preparam-se de acordo com o seguinte esquema de reacção:

^R*9

(30)

§m que o símbolo R’g tem o mesmo significado do símbolo Rg na fórmula geral (I), mas não representa um grupo OH, o símbolo Q’ representa um átomo de bromo ou de iodo ou um grupo removível tosilato, mesilato ou triflato e o símbolo R representa um número inteiro de 1 a 5. A condensação efectua-se na presença de uma base (por exemplo, NaH, KgCO^ ou KH) e no seio de um dissolvente não aquoso (por exemplo, DMF, THF ou DMSO), utilizando procedimentos convencionais bem conhecidos na técnica. No caso especial, em que o símbolo n representa o número inteiro 2, os cresóis (isto é, cresóis o, m ou p) reagem com carbonato de etileno, na presença de KF, para se obter o etil-1-ol-éter benzoxi que se converte no seu derivado 1-bromo por meio da reacção com bromo na presença de trifenilfosfina (P03) ^em benzeno e na presença de uma base para se obter o brometo de etil-benzoxi, que por meio de procedimentos convencionais reage eom um derivado de lítio de fórmula geral (17) para se obte rem compostos (30a) em que o símbolo n representa o número inteiro 2.

Naturalmente, quando o símbolo n repre senta zero e os símbolos X e Y representam, ambos, átomos de hidrogénio, é preferível utilizar o processo em que o sím bolo Q representa um grupo tosilato (dos compostos 29), utilizando NaH como uma base em DMF.

Nos casos em que se deseja preparar com postos de fórmula geral (6), na qual o símbolo Z é representado pelo sub-tipo (c), isto é, compostos de fórmula geral

CH₃ - Ar

Y X 0R_n

C=C - P=0

OR_C o

(31) na qual os símbolos Ar, X, Y, R^ e R^ têm os significados definidos na fórmula geral (I), os citados compostos podem preparar-se por meio de métodos e processos, analogamente conhe eidos na técnica.

No caso em que o símbolo Y representa um átomo de hidrogénio e o símbolo X representa um átomo de hidrogénio, flúor cu de cloro , condensa-se um arilaldeído (32) com um derivado de litio de um derivado (33) difosfonato X-substituído, de acordo com o esquema da reacção:

H OR,

CH_O-Ar - CHO + Li C - ( =0).

(32)

X OR,

OR,

CH₃- Ar - C=.C - P=0 (33)

X OR, (34)

A reacção e conduzida a temperatura de -78¾ em THF, antes de se interromper a reacção, aquece-se a mistura à temperatura de cerca de 20°C antes da hidrólise com NH^Cl aquoso, saturado. Quando 0 símbolo Y representa um átomo de flúor e o símbolo X representa um átomo de hidrogénio, flúor ou de cloro, a preparação efectua-se utilizando um composto do sub-tipo (a) (isto é, um composto (35) em que o símbolo X’ representa um átomo de flúor ou de cloro) que é tratado com uma base, de preferência tBuOK, DBU ou DMAP, no seio de um dissolvente não reac_ tivo (DMF ou DMSO), a uma temperatura compreendida entre cerca de 40°C e 80°C. Nesta reacção, a dupla ligação é criada por meio da perda de HX'. Por meio da escolha dos análogos apropriados dos compostos (35) ¹com uma base, podem preparar-se X e Y , libertando-se HF ou HC1 do modo seguinte:

X

CHg- Ar - CH - C

X (35) apos 0 tratamento anterior os desejados compostos (34a)

A reacção é representada

- P=0 or₆

X

- E=zO

0R_r (34a)

preparar compostos o símbolo Z reprede fórmula geral:

Quando s© deseja intermédios de fórmula geral (6) na qual senta o sub-tipo (d), isto é, compostos

0R_r

CH₃ - Ar - C=C - P—0

OR, (36) os compostos preparam-se por-meio do tratamento dos compostos de fórmula geral (24) com dois equivalentes de DAST a uma tem peratura compreendida entre 0^QC e 20°C, em CHgCl^» durante 1 a 5 horas e depois interrompe-se a reacção com metanol em excesso para se obterem os desejados compostos (36).

Nos casos em que se deseja preparar com postos de fórmula geral (6) na qual o símbolo Z representa o sub-tipo (e), isto é, compostos de fórmula geral ^R8

- P=?0

Y OR. 6

CH₃ - Ar

X (37)

a sua preparação pode efectuar-se em um ou dois passos do pro cesso de olefinação, utilizando compostos de fórmula geral

X OR ll | l

CH₃ - Ar - C - C - P=o f I

Y or₆ (38)

No primeiro passo do processo, efeotua-se uma olefinação do tipo Wittig utilizando um ilido fos fónio de fórmula geral

Θ © - ^p0 3 (39) que se faz reagir com um composto de fórmula geral (38) (espe cialmente quando os símbolos Xe Y representam átomos de flúor). A reacção é realizada em THF a uma temperatura compreendida entre -78°C e 0°C e origina a dupla ligação. Como alternativa, o reagente (39) pode ser substituído por um reagente de fórmula geral

Θ

--Het (40)

na qual Het representa -S0, SiMe^, Se0, -SMe ou SeMe, e quando reage dá compostos de fórmula geral

OH Het

CH^-Ar ~R_r

R<0 - p - OR.

(41)

Nos casos em que o símbolo Het representa SlMe^j efectua-se uma olefinação de Peterson, mediante (a) tratamento do composto (41) com NaH em DMF a uma temperatura compreendida entre C°C e óO^C ou (b) tratamento do composto (41) oom um ácido, por exemplo, PTSA (ácido £-tolueno-sulfónico) a temperaturas elevadas. Quando o sím bolo Het não representa SiMe^, trata-se o composto (41) com SOC1₂, POCl^ ou PI^ com Et^N ou piridina em CH₂C1₂, a uma temperatura compreendida entre cerca de -2C°C e 20°Q.

Os exemplos seguintes ilustram os processos pelos quais se podem preparar os compostos da presente invenção

SÍNTESE DE 1:

Ácido [2-[2-[(2-amino-1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)-metil]-fenil]-1,1-difluoroetil]-fosfónioo

PREPARAÇÃO DE IA; éster dietílico do ácido [2-[2-metilfenilj-1,1-difluoroetil]-fosfónico

Adicionam-se, lentamente, 30 mmoles (5,64 g) de difluorometano-fosfonato de dietilo, dissolvidos em 30 ml de tetra-hidrofurano anidro (THF), a uma solução agitada de diisopropilamideto de lítio (LDA) (preparada à

O _f temperatura de 0 C a partir de 31 mmoles de n-butil-litio e 30 mmoles de diisopropilamina em 30 ml de THF anidro) à temperatura de -78°C, sob atmosfera de árgon. Após 30 minutos, adicionam-se 45 mmoles (8,33 g) de 2-bromo-o-xileno à mistura reaccional, agita-se à temperatura de -78°C durante 15 horas e interrompe-se a reacção por meio da adição de 20 ml de uma solução aquosa saturada de cloreto de amónio. Evapora-se a mistura impura até à secura; suspende-se o resíduo em 50 ml de água e extrai-se 3 vezes com 100 ml de acetato de etilo. Secam-se as camadas orgânicas sobre sulfato de sódio, filtra-se e evapora-se até se obterem, aproximadamente, 8 g do composto impuro que se purifica por meio de cromatografia rápida sobre gel de sílica, para se obterem 3,6 g do composto 1A (41 % de rendimento).

PREPARAÇÃO DE 1B: éster dietilico do ácido [2-[2-[(2-

-amino-1,6-di-hidro-6-cloro-9H-purin-9-il)-metil]-fenil]-1,1-difluoroetil]-fosfónico

Adiciona-se 0,53 g (3 mmoles) de N-bromo-succinimida e 5 mg de peróxido de benzoilo a uma solu ção do compostos 1A (3 mmoles, 0,88 g em 20 ml de tetracloreto de carbono). Submete-se a mistura a refluxo por meio de aquecimento com uma lâmpada durante 90 minutos, até toda a succinimida sólida estar evidente. Filtra-se a mistura reaccional para eliminar a succinimida e evapora-se o filtrado até à secura para se obterem 1,1 g de um óleo que, depois, se adiciona a uma solução agitada do sal de sódio de 6-cloro-guanina (preparada em 5 ml de DMF por meio da adição de 3,2 mmoles de hidreto de sódio a 3,9 mmoles de 6-cloroguanina à temperatura de 20°C, sob atmosfera de árgon). Agita-se a mistura reaccional à temperatura de 20°C durante 20 horas, evapora-se sob pressão reduzida e purifica-se por meio de cromatografia rápida sobre gel de sílica para se obterem 1,15 g do esperado composto 1B (42 %).

PREPARAÇÃO DE 1: ácido [2-[2-[(2-amino-1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)metil]-fenil]-1,1-difluoroetil]-fosfónico

Adicionam-se 4 mmoles (0,5 ml) de brometo de trimetilsililo (TMSBr) a uma solução agitada do composto 1C (0,6 g; 1,3 mmoles) em 5 ml de diclorometano anidro à temperatura de 20-C, sob atmosfera de árgon. Agi- 31

ta-se a mistura reaccional durante 20 horas e adiciona-se 0,5 ml de TMSBr à mistura reaccional. Após 20 horas, evapora-se a mistura reaccional: dissolve-se o resíduo em 3 ml de acetonitrilo e dilui-se com aproximadamente 0,2 ml de água.

Evapora-se a mistura e aquece-se o resíduo em 7 ml de HCl 1N à temperatura de 100?C durante 20 horas. Evapora-se a mistura e obtém-se o composto após 2 recristalizações em água quente: 200 mg (38 $ de rendimento; os líquidos-mãe contêm, essencialmente, o composto puro para subsequente isolamento).

SÍNTESE DE 2:

Áeido [2-[2-[(2-amino-1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)-metil]-fenil]--1-fluoroetenil]-fosfónico

PREPARAÇÃO DE 2A: éster dietílico do ácido [2-(2-metilfenil)-1-fluoroetenil]-fosfónico

Adicionam-se, lentamente, 20 mmoles (6,72 g) de bis(dietilfosfonil)-fluorometano, dissolvidos em 20 ml de THF anidro, a uma solução de diisopropilamideto de lítio, à temperatura de -78% (preparada por meio da adição de 22 minoles de n-butil-lítio a uma solução de 22 mmoles de diisopropilamina em 16 ml de THF à temperatura de 0'°C). Após 30 minutos à temperatura de -78%, adiciona-se uma solução de 30 mmoles (3,5 ml) de o-tolualdeído, recen temente destilado, em 20 ml de THF à mistura reaccional que se agita à temperatura de -78°C durante 3 horas e à tempe-

- 32ratura de 20% durante 5 horas, interrompe-se a reacção com 20 ml de cloreto de amónio aquoso saturado e evapora-se até à secura. Suspende-se o resíduo em 30 ml de água e extrai-se três vezes oom 100 ml de acetato de etilo. Lavam-se as camadas orgânicas com uma solução concentrada de cloreto de sódio, secam-se sobre sulfato de sódio, filtram-se e evaporam-se para se obterem 5 g do composto impuro que se purifi^ cam por cromatografia rápida sobre gel de sílica, obtendo-se 70 mmoles (50 $ ) do composto 2A.

PREPARAÇÃO DE 2D: éster dietílico do ácido [2-[2-[(2-amino-1,6-di-hidro-6-cloro-9H-purin-9-il)-metil]-fenil]-1-fluoroetenil]-fosfónico

Adicionam-se 10 mg de peróxido de ben zoilo a uma suspensão de 10 mmoles de NBS e 10 mmoles de 2A em 15 ml de tetracloreto de carbono anidro. Aquece-se a mistura sob refluxo com uma lâmpada até todo o material sólido estar a flutuar. Filtra-se a mistura reaccional e evapora-se até se obter o composto 2C, sob a forma de um óleo que, depois, se dissolve em 4 ml de DMF anidro e se adiciona a uma solução agitada do sal de sódio da 6-cloro-guanina (preparada por meio da adição de 10 mmoles de NaH (sob a forma de uma solução a 60 $ p/v.a,'10 mmoles de 6-cloro-guanina em 10 ml de DMF anidra à temperaturade 20%, sob atmosfera de árgon). Após 20 horas à temperatura de 20%, evapora-se a mistura reaccio nal até à secura e purifica-se, directamente o resíduo impuro por cromatografia rápida sobre gel de sílica para se obterem

mmoles do composto 2D (40 $ de rendimento).

PREPARAÇÃO DE 2; ácido[2-[2-[(2-amino-1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)-etil]-fenil-1-fluoroetenil]-fosfónico

A preparação do composto 2 a partir do composto 2D efectuou-se, utilizando o processo já descrito,; para a transformação do composto 1C no composto 1.

SÍNTESE DE 3?

Ácido [2-Ç2-Ç(2-amino-1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)-metil]-fenil]-1,1,2-trifluoroetil]-fosfónico

PREPARAÇÃO DE 3A: éster dietílico do ácido [2-hidroxi-2-(2-metilfenil)-l-difluoro-etil]-fosfónico

Adicionam-se, lentamente, 42,5 mmoles de dietilfosfonildifluorometano (8 g),dissolvidas em 42 ml de THF anidro, a uma solução agitada de 42,5 mmoles de diisopropilamideto de lítio, recentemente preparada, em 40 ml de THF à temperatura de -78^0, sob atmosfera de árgon. Agita-se a mistura reaccional à temperatura de -78°C durante 35 minutos e adicionam-se 7,65 g de o-tolualdeído (63,75 mmoles), dissolvidos em 42 ml de THF, à mistura reaccional que se agita à temperatura de -78°C durante 4 horas, e depois interrompe-se a reacção à temperatura de 78°C por meio da adição de 40 ml de cloreto de amónio aquosa, saturado, e evapora-se sob pressão reduzida. Suspende-se o resíduo em água e extrai-se três vezes com 200 ml, de cada vez, de

acetato de etilo. Lavam-se as camadas orgânicas com uma solu ção concentrada de cloreto de sódio, secam-se sobre sulfato de sódio, filtram-se, evaporam-se e purificam-se por meio de cromatografia rápida sobre gel de sílica para se obterem 10,67 g do composto 3A, sob a forma de cristais brancos (81 % de rendimento).

PREPARAÇÃO DE 3B: éster dietílico do ácido [2-fluoro-2-(2-metilfenil)-1,1-difluoroetil]-fosfónico

Adicionam-se, gota a gota, 2,3 ml de sulfurtrifluoreto de dietilamino (DAST) a uma solução agitada do composto 3A (4,6 g; 15 mmoles) em 20 ml de diclorometano anidro, à temperatura de 20°C, sob atmosfera de árgon. Após 2 horas à temperatura de 20°C, interrompe-se a reacção à temperatura de 0°C adicionando lentamente metanol em excesso (5 ml), evapora-se até à secura e purifica-se directamente por cromatografia rápida sobre gel de sílica para se obterem 4,22 g do composto 3B (91 de rendimento).

PREPARAÇÃO DE 3C= éster dietílioo do áoido [2-[2-(2-amino-1,6-di-hidro-6-cloro-9H-purin-9-il)nietil]-fenil]-1,1,2-trifluoroetil]-fosfónico

A reacção de bromação do composto 3B e subsequente condensação com 6-cloroguanina decorre exactamente como se descreveu para a preparação do composto 1C a partir do composto 1B.

PREPARAÇÃO DE 3¾ ácido [2-[2-[(2-amino-1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)-metil]-fenil]-1,1,2-trifluoroetil]-fosfónico

Isola-se o composto final 3, após desprotecção com TMSBr/CHgCl^ e HC1 1N em água, como se descreveu para a preparação do composto 1 a partir do composto 1C.

SINTESE DE 4:

Acido Ç2-E2-Ç(amino-1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)-metil]~

-fenil]-2-hidroxi-1,1-difluoroetil]-fosfónico

PREPARAÇÃO DE 4A; éster dietílico do ácido [2-(t-butildimetilsililoxi)-2-(2-metil-fenil)-1,1-difluoroetil]-fosfónico

Adicionam-se, gota a gota, 4,7 g (25 mmoles) de dietilfosfinil-difluorometano, dissolvidos em 25 ml de THF anidro, a uma solução de diisopropilamideto de lítio (LDA) à temperatura de -78°C; (preparada por meio da reacção de 25 mmoles de n-butil-lítio com 25 mmoles de diisopropilamina, à temperatura de O^C, em 25 ml de THF), sob atmosfera de árgon. Após 35 minutos à temperatura de -78^QC, adiciona-se uma solução de o-tolualdeído (30 mmoles; 3,6 g), em 20 ml de THF anidro, à mistura reaccional. Após 3 horas à temperatura de -78^QC adicionam-se 30 mmoles de cloreto de t-butildimetilsililo à mistura reaccional que se agita à temp£ ratura de -20°C durante 2 horas, interrompe-se a reacção com 10 ml de água, evapora-se e extrai-se 3 vezes com 120 ml, de cada vez, de acetato de etilo. Reunem-se as camadas orgâ

- 36 nicas , secam-se sobre sulfato de sódio, filtram-se, evaporam-se e purificam-se por cromatografia rápida sobre gel de sílica para se obterem 8,8 g do composto 4A (21 mmoles;

? de rendimento).

PREPARAÇÃO DE 4B: éster dietílico do ácido [2-[(2-amino-1 ,6-di-hidro-6-oxo-9H“puriii-9-il)-metil]-fenil]-[2-(t-butildimetilsililoxi)-1,1-difluoroetil]-fosfónioo

A preparação do composto 4B a partir do composto 4A, efectua-se utilizando o processo, já descrito, para a transformação do composto 1A no composto 1C.

PREPARAÇÃO DE 4C; éster dietílico do ácido [2-[(2-amino-1 ,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)metil]-fenil]-[2-hidroxi-1 ,1-difluoroetil]-fosfónico

Adicionam-se, em porção única, 3,85g de (12 mmoles) de fluoreto de tetrabutilamónio a uma solução agitada do composto 4B (6 mmoles) em 150 ml de THF. Agita-se a mistura reaccional à temperatura de 20°C durante 20 horas, evapora-se até à secura e purifica—.se por cromatografia rápida sobre gel de sílica para se obterem 4,8 mmoles do composto 40 (80 % de rendimento).

PREPARAÇÃO DE 4: ácido [2-[2-[(2-amino-1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)-metil]-fenil]-2-hidroxi-1,1-difluoroetil]-fosfónioo

Obtém-se o composto 4 a partir do com- 37

posto 4C por meio de dois passos (TMSBr ; ^H3°⁺) ^de desprotecção química, já descritos.

SÍNTESE DE 5:

Ácido [2—[2—E(2—amino—1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)-metil]-fenil]-2,2-di-hidroxi-1,1-difluoroetil]-fosfónico

PREPARAÇÁO DE 5A A PARTIR DE 4C: éster dietílico do ácido [2-[2-(2-amino-1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)-metil]-fenil]-2-hidroxi-1,1-difluoroetilfosfónico

Adicionam-se, gota a gota, 4,3 g (60 mmoles) de DMSO, dissolvidos em 25 ml de diclorometano anidro, à temperatura de -65°C, a uma solução agitada de 30 mmoles de cloreto de oxalilo (26 ml) em 25 ml de diclorometano anidro, sob atmosfera de ârgon. Agita-se a mistura reacconal à temperatura de -65¾ durante 5 minutos e adicionam-se 20 mmoles do composto 4C, dissolvidos em 25 ml de ^CH2^¹2‘ Retira-se o balão de reacção do banho de arrefecimento durante alguns minutos e agita-se a mistura outra vez à temperatura de -65¾ durante 15 minutos. Em seguida, adicionam-se 100 mmoles (13,8 ml) de trietilamina à mistura reaccional, agita-se durante 10 minutos à temperatura de -65°C, interrompe-se a reacção com ácido cítrico aquoso, agita-se durante alguns minutos à temperatura de 20°C, extrai-se com diclorometano (3 vezes com porções de 75 ml), lava-se com uma solução concentrada de cloreto de sédio, seca-se sobre Na^SO^-,

filtra-se, evapora-se e purifica-se por cromatografia rápida sobre gel de sílica para se obterem 13,5 mmoles do composto 4C (67 Ϋ).

PREPARAÇÃO DE 5: ácido [2-[2-[(2-amino-1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)-metil]-fenil]-2,2-di-hidroxi-1,1-difluoroetil]-fosfónico

Obtém-se o composto final 5 a partir do composto 5A por meio de dois passos de desprotecção efec tuados como na preparação do composto 1 a partir do composto

1C.

SÍNTESE DE 6:

Ácido [3-[2-[(2-amino-1,6-di-hidro-6-cloro-9H-purin-9-il)-metil]-fenoxi]-1,1-difluoropropil]-fosfónico

PREPARAÇÃO DE 6A: 3-(2-metilfenoxi)-1-propanol

Adicionam-se 300 mmoles de orto-oresol, 334 mmoles de carbonato de etileno e 325 mmoles de fluoreto de potássio a 100 ml de DMF anidra e agita-se à temperatura de 125^QC durante 50 horas, sob atmosfera de árgon. Adicionam-se 40 mmoles de carbonato de etileno e 40 mmoles de KF à mistura reaccional que se agita, depois, durante outras 24 horas à temperatura de 125°C.

Arrefece-se a mistura reaccional até à temperatura de 20°C, filtra-se e evapora-se. Purifica-se o resíduo por cromatografia rápida sobre gel de sílica para se obterem 38,6 g do composto pretendido (85 1» de rendimento).

PREPARAÇAO DE 6B: 3-(2-meiiLfenoxi)-1 -bromopropano

Adicionam-se, lentamente, 10 g de bro mo (62,5 mmoles), dissolvidos em 30 ml de benzeno (ou acetonitrilo), a uma solução agitada de trifenilfosfina (64 mmoles) em 100 ml de benzeno (ou acetonitrilo). Após 15 minutos adicionam-se 64 mmoles de trietilarnina, dissolvidas em 35 ml de benzeno (ou acetonitrilo), à mistura reaccional, a que se segue a adição do composto inicial 6A (9>68 g; 63>7 mmoles), dissolvido em 50 ml de benzeno (ou acetonitrilo). Agita-se a mistura reaccional à temperatura de 20°C, filtra-se (para eliminar a maior parte do óxido de trifenilfosfina), evapora-se e purifica-se por cromatografia rápida sobre gel de sílica para se obterem 9,8 g do composto pretendido.

PREPARAÇÃO DE 6C: éster dietílico do ácido [3-(2-metilfenoxi)-1 ,1-difluoropropil]-fosfónieo

Adicionam-se, lentamente, 5,64 g (30 mmoles) de 0,0-dietilfosfonato de difluorometilo, dissolvidos em 30 ml de THF anidro, a uma solução agitada de 37 mmoles de LDA (preparada a partir de 31 mmoles de n-butil-lítio e 31 mmoles de diisopropilamina em 30 ml de THF) à temperatura de -78°C, sob atmosfera de árgon. Agita-se a mistura reaccional à temepratura de -78°C durante 30 minutos e adiciona-se o composto inicial 6B (20 mmoles),dissolvido em 10 ml de THF anidro, à mistura reaccional. Continua-se a agitação durante 3 horas à temperatura de -78°C; eleva-se lentamente a tempera- 40

Wras-até3D°C e interraiçe-se a^; reacçãoccaí cloreto de amónio aquoso saturado. Depois evapora-se a mistura impura e extrai-se com acetato de etilo. Reunem-se as camadas orgânicas, lavam-se com água e com uma solução concentrada de cloreto de sódio, secam-se sobre sulfato de sódio, filtram-se, evaporam-se e purificam-se por cromatografia rápida sobre gel de sílica para se obterem 16 mmoles (40 %) do composto de condensação esperado.

PREPARAÇÃO DE 6D: éster dietilico do ácido [3-Ç2-Ç(2-amino-1,6-di-hidro-6-cloro-9H-purin-9-il)-metil]-fenoxi]-1-1-difluoropropil]-fosfónico

Aquecem-se com uma lâmpada 6 mmoles de composto inicial 6C, dissolvidas em 15 ml de tetracloreto de carbono anidro, com 6 mmoles de N-hEomo-succinimida e alguns miligramas de peróxido de benzoílo durante 35 minutos. Filtra-se a mistura impura para eliminar a succinimida e evapora-se o filtrado até à secura, dissolve-se em 8 ml de DMF anidra e agita-se à temperatura de 20°C, sob atmosfera de árgon, com 6,5 mmoles de 6-cloro-guanina e 13 mmoles de carbonato de potássio durante 24 horas.

Evapora-se a mistura até à secura e suspende-se o resíduo em 50 ml de acetato de etilo, lava-se eom cloreto de amónio e com uma solução concentrada de cloreto de sódio, seca-se sobre sulfato de sódio, filtra-se, evapora-se e purifica-se por cromatografia rápida sobre gel de sílica para se obterem 3 mmoles do composto esperado.

PREPARAÇÃO DE 6; acido [3-[2-[(2-amino-1,6-di-hidro-6-oloro-9H-purin-9-il)-metil]-fenoxi]-1,1-difluoropropil·]-fosfónico

Adicionam-se, lentamente, 9 mmoles de TMSBr, recentemente destilado, a uma solução agitada de composto inicial 60 (3 mmoles) em 10 ml de diclorometano anidro, à temperatura de 20°C, sob atmosfera de árgon. Agita-se a mistura reaccional à temperatura de 20®C durante 20 horas e evapora-se até à secura. Dissolve-se o resíduo em 8 ml de acetonitrilo anidro e interrompe-se a reacção com 10 mmoles de água. Forma-se um precipitado branco que se separa por meio de filtração e se recolhe para se obter o composto espe rado que se utiliza, sem mais purificação, no passo seguinte.

Aquecem-se a uma temperatura compreendida entre 90?C e 100?C durante 20 horas, 2 mmoles do composto inicial, dissolvidas em 10 ml de HCl 1N e 2 ml de THF. Arrefece-se a mistura reaccional até à temperatura de 20°C, evapora-se até à secura, dissolve-se em hidrogenocarbonato de trietilamónio aquoso, saturado, filtra-se e cristaliza-se por adição de HCl 1N.

Recolhe-se o sólido branco e seca-se sobre pressão reduzida para se obterem 1,7 mmoles do composto pretendido, sob à forma dehemi-hidratado.

SÍNTESE DE 7:

Ácido [2-[(2-amino-1, 6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)-metil]-fenoxi]-metilfosfónico

PREPARAÇÃO DE 7A: éster dietílico do ácido 2-metilfenoximetilfosfénico

Adiciona-se hidreto de sódio (8 mmoles de uma suspensão a 60 $ em óleo) a uma solução agitada de o-cresol (8 mmoles, 864 mg) em 10 ml de DMF anidra à temperatura de 20°C sob atmosfera de árgon. Após 45 minutos, adicionam-se 2,54 g (8 mmoles) do derivado tosilato 0,O-dietilmetilfosfonato , dissolvidos em 3 ml de DMF, à mistura reaccional que se agita à temperatura de 60° C durante 20 horas, se evapora sob pressão reduzida e se purifica por cromatografia rápida sobre gel de sílica para se obterem 1,1 g do composto (69 $ de rendimento).

PREPARAÇÃO DE 7B: éster dietílico do ácido [2-[(2-amino— 1,6-di-hidro-6-cloro-9H-purin-9-il)-metil]-fenôxi]-metilfosfónico

Aquecem-se sob refluxo, com uma lâmpada de aquecimento, 1,03 g (4 mmoles) do fosfonato 7A, 743 mg (4,2 mmoles) de N-bromo-succinimida e alguns miligramas de peróxido de benzoilo em 10 ml de CCl^. Após 35 minutos, fil^ tra-se a mistura reaccional e evapora-se para se obterem 1,3g de um óleo que se dissolve em 3 ml de DMF anidra e se adiciona a uma suspensão agitada de 745 mg ( 4,4 mmoles) de 6-cloroguanina e 1,38 g (10 mmoles) de carbonato de potássio em 6 ml

- 43 de DMF anidra, à temperatura de 20°C, sob atmosfera de árgon.

Após 40 horas, evapora-se a mistura reaccional sob pressão reduzida e purifica-se por cromatografia rápida sobre gel de sílica para se obterem 1,25 g do composto pretendido (74 % de rendimento).

PREPARAÇÃO DE 7: ácido [2-[(2-amino-1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-ll)-metil]-fenoxi]-metilfosfónico

Mediante desprotecção química utilizando TMSBr e, depois, hidrólise aquosa efectuada como se descreveu antes, obtém-se o composto em título.

SÍNTESE DE 8:

Ácido [2-E2-Ç(2-amino-1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)-metil]-fenil]-1,1-difluoro-2-propenil]-fosfónico

PREPARAÇÃO DE 8A; éster dietílico do áoido [2-(2-metilfenil)-1,1-difluorooxoetil]-fosfónico

Adicionam-se, lentamente, 13,35 g (50 mmoles) de o,Ο-dietilbromodifluorometano-fosfonato dissolvidos em 50 ml de dimetoxietano (DME), a uma suspensão agitada de 55 mmoles de zinco, activado recentemente, em 15 ml de DME, a uma velocidade tal que mantém um refluxo suave. Agita-se a mistura reaccional à temperatura de 2O'°C durante 2 horas e. adicionam-se 60 mmoles de cloreto do ácido o-toluíco (25 g), dissolvidos em 15 ml de DME, à mistura reaccional que se agita à temperatura de 20°C durante 20 horas. Filtra-se o composto

impuro sobre celite e evapora-se o filtrado até à secura e purifica-se , directamente, por cromatografia rápida sobre gel de sílica para se obterem 30 mmoles do composto 8A (60$).

PREPARAÇÃO DE 8B: éster dietílico do ácido [2-[2-metilfenil]-1,1-difluoro-2-propenil]-fosfónioo

Adicionam-se, lentamente, 35 mmoles de n-butil-lítio (21,8 ml de uma solução 1,6 N em hexano) a uma sus pensão agitada de 35 mmoles de brometo de metiltrifenilfosfónio em 50 ml de THF à temperatura de -78 °C, sob atmosfera de árgon. Agita-se a mistura reaccional durante 2 horas à temperatura de 0^QC e adicionam-se 30 mmoles do composto 8A, dissolvidas em 30 ml de THF, a esta mistura reaccional à temperatura de -78^qC. Após agitação à temperatura de -78°C durante 2 horas e à temperatura de 0°C durante 2 horas, hidroliza-se a mistura reaccional com cloreto de amónio aquoso, saturado. Evapora-se o composto impuro sob pressão reduzida e extrai-se 3 vezes com 100 ml de acetato de etilo. A operação habitual e a purificação por meio de cromatografia rápida sobre gel de sílica originaram 18 mmoles do composto 8b (60 1 de rendimento).

PREPARAÇÃO DE 8C: éster dietílico do ácido [2-[2-[(2-amino-1,6-di-hidro-6-cloro-9H-purin-9-il)-metil]-fenil]-1 ,1-difluoro-2-propenil]-fosfónico

A reacção de bromação do composto 8B e a condensação subsequente com 6-cloroguanina decorrem, exacta— mente, como se descreveu para a preparação do composto 1C a partir do composto 1B.

PREPARAÇÃO DE 8: ácido [2-[2-[(2-amino-1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)-metil]-fenil]-1,1-difluoro-2-propenil]-fosfónioo

Isola-se o composto 8 final a partir do composto 8C após desprotecção com TMSBr/CH₂Cl e HCl 1N em água, como se descreveu para a preparação do composto 1 a partir do composto 1C.

SÍNTESE DE 9:

Ácido [2-[2-[(2-amino-1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)-metil]-fenil]-etinil]-fosfónico

PREPARAÇÃO DE 9A: éster dietílico do ácido [2-(2-metilfenil)-2-oxoetano]-fosfónico

Adicionam-se lentamente 100 mmoles de n-butil-lítio a uma solução agitada de 100 mmoles do éster dietílico do ácido metilfosfónioo, dissolvidas em 100 ml de THF, à temperatura de -78^QC, sob atmosfera de árgon. Agita-se a mistura reaccional à temperatura de -78°C durante 2 horas e adicionam-se 50 mmoles do éster metílico do ácido o-tolúico dissolvidas em 50 ml de THF, à mistura reaccional que se agita à temperatura de -78 C durante 20 horas e à temperatura de 0°C durante 2 horas, antes de se hidrolisar com cloreto de amónio aquoso, saturado. A operçaão habitual e a cromatografia rápida sobre gel de sílica originam 45 mmoles do composto 9A (90 $ de rendimento).

PREPARAÇÃO DE 9B: éster dietílico do ácido [2-(2-metilfenil)-etinil]-fosfónico

Adicionam-se, lentamente, 8 ml (61 mmoles) de trifluoreto de dietilamino-enxofre (DAST) a uma solução de 30 mmoles do composto 9A em 50 ml de diclorometano anidro à temperatura de 0°C. Agita-se a mistura reaccional à temperatura de 20°C durante 30 horas e interrompe-se a reacção adicio nando, lentamente, metanol em excesso (5 ml) à temperatura de 0°C. Evapora-se a mistura reaccional até à secura e purifica-se directamente por cromatografia rápida sobre gel de sílica para se obterem 24 mmoles do composto 9B (80 % de rendimento ).

PREPARAÇÃO DE 90? éster dietílico do ácido [2-[2-[(2-amino-1,6-di-hidro-6-cloro-9H-purin-9-il)-metil]-fenil]-etinil]-fosfónico

A reacção de bromação do composto 9B e a condensação subsequente com 6-cloroguanína são efectuadas, exactamente, do modo descrito para a preparação do composto 10 a partir do composto 1B.

PREPARAÇÃO DE 9? ácido [2-[2-[(2-amino-1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)-metil]-fenil]-etinil]-fosfónico

Adicionam-se 2,5 ml (20 mmoles) de TMSBr a uma solução agitada do composto 9C (5 mmoles) em 25 ml de diclorometano anidro à temperatura de 20^DC sob atmos fera de árgon. Agita-se a mistura reaccional durante 20 horas

e evapora-se sob pressão reduzida. Dissolve-se o resíduo em 20 ml de acetonitrilo e precipita-se o sólido branco resultante por meio da adição de 0,5 ml de água. Recolhe-se o sólido branco por filtração e dissolve-se em uma mistura de 15 ml de HC1-O,2N e 6 ml de THF. Aquece-se esta mistura à temperatura de 60¾ durante 8 horas e obtém-se o composto 9 final, após cristalização com arrefecimento (1,4 mmoles;

$ de rendimento).

SÍNTESE DE 10:

Ácido [2-[2-[(2-amino-1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)-metil]-fenil]-etenil]-fosfónico

PREPARAÇÃO DE 10A : éster dietílico do ácido [2-(2únetilfenil)-etenil]-fosfónico

Adicionam-se, lentamente, 10,95 g (38 mmoles de bis(dietilfosfonil)-metano, dissolvidos em 25 ml de tetra-hidrofurano anidro, a uma suspensão de NaH (42 mmoles) em 20 ml de tetra-hidrofurano anidro, à temperatura de -15°C, sob atmosfera de árgon. Após 45 minutos, adicionam-se 4,6 g (38 mmoles) de o-tolualdeído, dissolvidos em 40 ml de tetra-hidrofurano, à mistura reaccional à temperatura de 0°C. Após agitação à temperatura de 20°C durante 18 horas, interrompe-se a reacção adicionando à mistura reaccional impura 20 ml de cloreto de amónio aquoso, saturado, e evapora-se até à secura. Suspende-se o resíduo em 35 ml de água e extrai -se 3 vezes com 100 ml de acetato de etilo. Lavam-se as cama- 48 -

das orgânicas com uma solução concentrada de oloreto de sódio, secam-se sobre sulfato de sódio, filtram-se e evaporam-se para se obterem 11 g de produto impuro que se purifica por cromatografia rápida sobre gel de sílica.para se obterem 7,53 g do composto 10A (75 $ de rendimento).

PREPARAÇÃO DE 1OBs éster dietílico do ácido [2-[2-[(2-amino-1,6-di-hidro-6-oloro-9H-purin-9-il)-metil]-fenil]-etenil]-fosfónico

Adicionam-se 20 mg de peroxido de benzoílo a uma suspensão de 20 mmoles de N-bromo-succinimida?e 20 mmoles do éster dietílico do ácido [2-[2-metilfenil]-etenil]-fosfónico em 15 ml de tetracloreto de carbono ani dro. Aquece-se a mistura sob refluxo com uma lâmpada até • todo o produto sólido estar a flutuar. Filtra-se a mistura reaccional e evapora-se até se obter um óleo que, depois, se dissolve em 10 ml de dimetilformamida anidra e se adiciona a uma solução agitada do sal de sódio de 6-cloro-guanina (preparado por meio da adição de 20 mmoles de NaH a 20 mmoles de 6-cloro-guanina em 10 ml de de dimetilformamida anidra à temperatura de 20°C, sob atmosfera de árgon). Agita-se a mistura reaccional durante 20 horas à temperatura de 20°C, evapora-se até à secura e purifica-se o resíduo impuro, direc tamente por cromatografia rápida sobre gel de sílica para se obtrerem 12 mmoles do composto 10B (60 $ de rendimento).

PREPARAÇÃO DE 10: ácido [2-[2-[(2-amino-1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)-metil]-fenil3-etenil]-fosfónico

A preparação do composto 10 a partir do composto efectua-se utilizando o procedimento já descrito para a transformação do composto 1B no composto 1 da Síntese 1.

UTILIZAÇÃO BIOLÓGICA

A capacidade dos compostos da presente invenção para actuarem como agentes imunossupressores, anti-linfomatosos, anti-leucémicos antivirais e anti-protozoários e como agentes úteis no tratamento da gota, da psoríase e das doenças de auto-imunidade pode demonstrar-se por intermédio da sua capacidade de inibir a purina-nucleósido-fosforilase (PNP). A actividade inibidora da purina-nueleósido-fosforilase (PNP) pode determinar-se pelo método de Kalckar da ligação da xantina oxidase, utilizando inosina como substrato [H.M. Kalckar, M. Biol. Chem., 167 (1947), 429-4433As constantes de dissociação aparentes (Kj) foram determinadas com fosfato inorgânico 1 mM, utilizando tampão HEPES 0,1 M (pH = 7,4), 4 concentrações de inosina de 0,05 mM a

0,15 mM e várias concentrações do inibidor. Os valores de Kj para os compostos representativos de fórmula geral (I) estão indicados no Quadro 1 e são comparados com os valores K^ do substrato de inosina utilizando PNP de várias origens. Além disso, os compostos da presente invenção mostram ser eficazes contra os linfomas (células humanas MoLT-4) e,

assim, têm actividade anti-linfomatosas e anti-leucémicas.

A presença de 2’-desoxiguanosina (eerca de 1 a 10yuM), um metabolito natural, parece ser importante para a actividade contra as células linfomatosas em cultura.

COMPOSTO	K; (M) ORIGEM DE PNP
Baço Bovino	Eritró- citos de Ratos	Eritró- citos Humanos	E. Coli
Ácido [2-[2-[(2-amino-1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)-metil]-fenil]-1,1difluoroetil]-fosfónico	4x10^-9	2χ1θ⁹	13x1O^-9	15x10⁹
Ácido [2-[2-[(2- -amino-1,6-di- -hidro-6-oxo-9H- -purin-9-il)- -metil]-fenil]- -1-fluoroetenil]- -fosfónico	8x10^-1°	4χ1θ”^1θ	1 ,8x10^-9	2,5x10^-1°
Ácido [2[2[(2- -amino-1,6-di- -hidro-6-oxo-9H- -purin-9-il)-me- til]-fenil]- -fluoroetenil]- -fosfónico			3,2x10^-9	5x10^_1°

(Continuação do Quadro)

COMPOSTO	K; (M) ORIGEM DE PNP
Baço Bovino	Eritrócitos de Ratos	Eritró- citos Humanos	E. Coli
Ácido [2-[2-[(2-amino-1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-ϋ)-metil]-fenil]-1 ,1 , 2-trifluoroetilí-fosfónico	6x10^_1°	5x10^-1°	1,3x10“⁹	7x10¹°
Ácido [2-[2-[(2-amino-1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)-metil ]-fenoxi' -1 ,1-dilfuoropropil]-fosfónico	2,5x10^-7	3,7x10⁸	2,1x10^-7
Ácido [2-E(2-amino-1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)-metil]-fenoXi -metilfosfónico	7,5x10^-	7,3x10'⁹	7,9x10^-8	4,5x10^_9
inosina	3x10⁵	-4 1,5x10	-4 1,5x10	8x10“⁵

Utilizado aqui, o termo doente, em rela ção à supressão do sistema imunológico, refere-se a mamíferos, tais como murganhos, ratos, gatos, cães, ovelhas, carnei_ ros, porcos e primatas, incluindo os seres humanos. 0 termo doente, em relação ao tratamento de infecções parasitárias, inclui não apenas mamíferos, mas também outros animais de sangue quente, tais como aves ide capoeira, incluindo galinhas e perus.

termo protozoário, inclui os membros dos sub-grupos Sarcomastigophora e Sprozoa do grupo Protozoa. Mais particularmente, o termo protozoário utilizado aqui, inclui os géneros de protozoários parasitários que são importantes para os seres humanos porque podem causar doenças nos seres humanos ou nos seus animais domésticos. Estes géneros, na sua maior parte, encontram-se classificados na super-classe dos Mastigophora do sub-grupo Sarcomastigophora e na classe dos Pelosporea do sub-grupo Sporozoa, na classificação de acordo com Baker (1969)· Géneros ilustrativos destes protozoários parasitários incluem: Histomonas

Trypanosoma, Giardia, Trychomonas, Eimeria, Isopora, Toxoplasma e Plasmodium.

De facto, um aspecto preferido da presente invenção é a utilização destes compostos como agentes anti-protozoários no tratamento da coccidia intestinal nas aves domésticas comerciais. As infecções da coccidia intestinal são responsáveis por perdas de muitos milhões de dólares na indústria das aves domésticas nos Estados Unidos

- 52 da América, em cada ano. Devido ao rápido desenvolvimento da resistência aos medicamentos pela coccídia e devido à toxicidade relativamente alta de alguns dos medicamentos utilizados no tratamento da coccidiose, há uma necessidade de cocci diostáticos eficazes que não sejam tóxicos e relativamente aos quais a coccidia intestinal não desenvolva rápida resistência aos medicamentos.

Ainda que o sistema imunológico seja uma grande defesa contra as substâncias que podem originar doenças, não pode distinguir entre substâncias estranhas, úteis e nocivas, e destrói ambas. Seria útil, em muitos casos , haver um meio de regular o sistema imunológico sem prejudicar o indivíduo. Os compostos da presente invenção mostram essa modulação ou efeitos reguladores e possuem potencial para a utilização no tratamento de várias perturbações imunológicas, tais como a artrite reumatoide e o lupos eritematoso.,

Os anticorpos circulantes e as respostas imunológicas celulares desempenham um papel na rejeição dos órgãos e tecidos transplantados. A menos que o dador seja o gêmeo idêntico ao receptor ou o próprio indivíduo, os linfócitos do receptor reconhecem o transplante como não próprio e respondem, imediatamente, destruindo-o. As excepções a esta situação são os transplantes para áreas não vascularizadas (locais privilegiados), tais como a córnea do olho, onde os linfócitos não circulam e, por conseguinte, não são sensibilizados e não provocam uma resposta

imunológica. É difícil, correntemente, suprimir a reacção imunológica para evitar a rejeição do transplante sem lesar severamente o doente por outras vias. 0 doente deve receber também doses maciças de antibióticos porque as suas próprias defesas contra as infecções foram suprimidas.

Os compostos da presente invenção podem ser valiosos no estabelecimento da tolerância para o transplante através da modulação controlada do sistema imunológioo. Como complemento, estes compostos mostram actividades anti-virais.

A quantidade do ingrediente activo a administrar pode variar muito de acordo com a dosagem uni tária particular utilizada,com o período de tratamento,com a idade e o sexo do doente tratado e com a natureza e exten são da perturbação a tratar. A quantidade total do ingrediente activo a administrar está geralmente compreendida entre cerca de 1 mg/kg e 100 mg/kg e, de preferência, entre 3 mg/ /kg e 25 mg/kg. A unidade de dosagem pode conter 25 mg a 500 mg de ingrediente activo e podem administrar-se uma ou mais vezes por dia. 0 composto activo de fórmula.geral (1) pode administar-se com um veículo farmacêutico utilizando formas unitárias de dosagem convencionais, que por via oral, quer por via parentérica ou via tópica. De um modo preferido, a 2-desoxiguanosina deverá administrar-se conjuntamente com um composto da presente invenção. Pode utilizar-se qualquer dose eficaz não tóxica, de 2-desoxiguanosina; tipicamente poderão administar-se cerca de 0,5 mg a cerca de 50 mg/kg por dia. Pcr-meio de estudos conjuntos,

contemplam-se não apenas aquelas formas de dosagem que contêm, não só a 2-desoxiguanosina, mas também um composto de fórmula geral (1), mas ainda as formas de dosagem separadas. Os compostos podem administrar-se também em unidades e dosagem separadas.

A via de administração preferida é a via oral. Para a administração oral, os compostos podem ser formulados em preparações sólidas ou líquidas, tais como cápsulas, pílulas, comprimidos, trociscos, pastilhas, rebu çados, pós, soluções, suspensões e emulsões. As formas só lidas de unidades de dosagem podem ser representadas por uma cápsula que pode ser do tipo vulgar, revestida de gelatina endurecida ou mole, contendo, por exemplo, agentes tensioactivos, lubrificantes e agentes de enchimento, tais como lactose, sacarose, fosfato de cálcio e amido de cereais.

Sob outro aspecto, os compostos da presente invenção podem apresentar-se sob a forma de comprimidos com bases convencionais, tais como lactose, sacarose e amido de cereais em asso oiação oom agentes de ligação, tais como acácia, amido de cereais ou gelatina, agentes desintegrantes para auxiliar a desagregação e a dissolução dos comprimidos, após a administração, tais como amido de batata, ácido alginico, amido de cereais e goma de guar, agentes lubrificantes para aumentar a fluidez das granulações dos comprimidos e para evitar a ade são dos componentes dos comprimidos às superfícies das fiei_ ras e punções dos comprimidos, por exemplo, talco, ácido esteárico ou estearato de magnésio, cálcio ou de zinco, coran tes, agentes de coloração e agentes correctivos do sabor, para aumentar as qualidades estéticas dos comprimidos e tor55

ná-los mais aceitáveis para os doentes. Excipientes apropriados para utilização nas formas orais de dosagem líquidas incluem diluentes, tais como água e álccois, por exemplo, etanol, álcool benzílico e álcoois polietilénicos, com ou sem a adição de um agente tensioactivo, um agente de suspensão ou um agente emulsionante, aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.

Os compostos da presente invenção podem administrar-se também por via parentérica, ou seja, por via subcutânea, endovenosa, intramuscularau intraperitoneal , sob a forma de doses injectáveis do composto em um diluente, aceitável sob o ponto de vista fisiológico, com um veículo farmacêutico que pode ser um líquido esterilizado ou uma mistura de líquidos, tais como água, uma solução de cloreto de sódio, dextrose aquosa e soluções açucaradas apro priadas,um álcool tal como etanol, isopropanol ou álcool hexa decílico, glicóis,tais como propilenoglicol ou polietilenoglicol, cetais glicerólicos , tais como 2,2-dimetil-1 ,3-dioxolano-4-metanol, éteres,tais como poli(etilenoglicol) 400, um óleo, um ácido gordo, um éster de um ácido gordo ou um gli cérido de ácido gordo ou'um glicérido de:ácido gprdo acetilâdo «m cu san a adição de un agente tensioactivo, aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, tal como um sabão ou um detergente, um agente de suspensão, tal como a pectina, carbómeros, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose ou carboximetilcelulose, ou um agente emul sionante e outros adjuvantes farmacêuticos. São exemplos de óleos que se podem utilizar nas formulações parentéricas da

da presente invenção óleo de petróleo, óleo de origem animal, óleos vegetais e os óleos de origem sintética, por exemplo, óleo de amendoim, óleo de soja, óleo de sésamo, óleo de semente e algodão, óleo de cereais, azeite, petrolatum e óleo mineral. Os ácidos gordos apropriados incluem o ácido oleico, o ácido esteárico e o ácido isoesteárico. Os ésteres de áci dos gordos apropriados são, por exemplo, o oleato de etilo e o miristato isopropílico. Os sabões apropriados incluem os sais gordos de metais alcalinos, de amónio e da trietanolamina e os detergentes apropriados incluem os detergentes catiónicos, por exemplo, halogenetos de dimetil-dialquilamónio, halogenetos de alquil-piridínio e acetatos de alquilaminas; os detergentes aniónicos, por exemplo, sulfonatos de alquilo, de arilo ou de olefina, sulfatos de alquilo, de olefina, de éter e de monoglicéridos e sulfossuccinatos; os detergentes não ió^ nicos, por exemplo, óxidos de aminas gordas, aloanolamidas de ácidos gordos e copolímeros polioxietileno-polipropileno; os detergentes anfotéricos, por exemplo alquil-beta-aminopropiona tos e sais quaternários de amónio de 2-alquilimidazolina, assim como as suas misturas. As composições parentéricas da presente invenção poderão conter, tipicamente, cerca de 0,5 % a cerca de 25 % em peso do ingrediente activo na solução. Também se podem utilizar, com vantagem, conservantes e tampões. Com a finalidade de diminuir ou eliminar a irritação no local da injecção, estas composições podem conter um agente tensioactivo não iónico possuindo um equilíbrio hidrófilo-lipo''filo (HLB) de cerca de 12 a.cerca de 17· A quantidade de agente tensioactivo em tais formulações está compreendida entre

cerca de 5 $ e cerca de 15 $ em peso. 0 agente tensioactivo pode ser um simples componente possuindo o HLB anterior ou pode ser uma mistura de dois ou mais componentes possuindo o HLB desejado. São exemplos de agentes tensioactivos utilizados nas formulações parentéricas o grupo dos ésteres dos ácidos gordos de polietileno-sorbitano por exemplo, o monooleato de sorbitano e os compostos de adição de alto peso mole cular do óxido de etileno e de uma base hidrófoba, formados por meio da condensação do óxido de propileno com propilenoglicol .

As composições em aerossol ou para pul^ verizar contendo os compostos da presente invenção podem aplicar-se na pele ou nas membranas mucosas. Estas composições podem conter um sólido micronizado ou uma solução de um composto de fórmula geral (1) e podem conter também dissolventes, tampões, agentes tensioactivos, perfumes, agentes antimicro bianos, anti-oxidantes e agentes propulsores. Estas composições podem aplicar-se por meio de um agente propulsor sob pressão ou podem aplicar-se por meio de uma garrafa de plástico contendo uma pulverização compressível, um nebulizador ou um atomizador, sem a utilização de um propulsor gasoso. Uma composição preferida em aerossol ou para pulverizar é uma pulverização nasal.

ingrediente activo pode administrar-se também por meio de um sistema de libertação retardada,em que o composto de fórmula geral (1) é liberto gradualmente

sob uma forma controlada e com velocidade constante, em um veí_ culo inerte ou biodegradável por meio de difusão, osmose ou desintegração do veículo durante o período de tratamento. Os sistemas de libertação controlada dos medicamentos podem ser sob a forma de um penso ou de uma ligadura, aplicados na pele ou nas membranas bocal, sub-lingual ou intranasal, uma inserção ocular colocada no fundo de saco do olho ou um compri^ mido ou cápsula de erosão gradual ou um reservatório intestinal administrado por via oral. A administração por meio destes sistemas de libertação retardada permite aos tecidos do corpo humano estarem expostos constantemente, durante um intervalo de tempo prolongado, a uma dosagem eficaz, sob o ponto de vista terapêutico ou profiláctico, de um composto de fórmula geral (1). A unidade de dosagem do composto administrado por meio de um sistema de libertação retardada deverá conter aproximadamente a quantidade de uma dose diária eficaz multiplicada pelo número máximo de dias durante os quais o veículo permanece sobre ou no interior do corpo do hospedeiro. 0 veículo de libertação retardada pode apresentar-se sob a forma de um sólido ou de uma matriz porosa ou de um reservatório e pode ser formado por um ou mais polímeros naturais ou sin téticos, incluindo a celulose modificada ou não modificada, amido, gelatina, coiagénio, borracha, poliolefinas, poliamidos, poliacrilatos, poliálcoois, poliéteres, poliésteres, poliuretanos, polissulfonas, polissiloxanos e poliimidas, assim como as suas misturas e os copolímeros destes polímeros. Os compostos de fórmula geral (1) podem ser incor porados nos veículos de libertação retardada, sob uma forma pura ou podem ser dissolvidos em qualquer veículo líquido ou sólido apropriado incluindo o polímero de que o veículo de libertação retardada é formado.

Outro aspecto da presente invenção é a uti lização de inibidores de purina-nucleósido-fosforilase de fórmula geral (1) em terapia conjunta para potenoiar a eficácia dos análogos nucleosídicos antivirais que poderão, por outro lado, ficar sujeitos à acção enzimática da purina-nucleósido-fosforilase.

Em particular, a presente invenção engloba a utilização de um composto de fórmula geral (1) em terapia conjugada no tratamento das infecções retrovirais, especialmente nos seres humanos, particularmente no tratamento contra o vírus da imunodeficiência humana. Particularmente preferidos entre os 2’,3’-didesoxi-purina-nucleósidos são: 2’ ,3’didesoxiadenosina, 2',3’-didesoxiguanosina, 2’,3’-didesoxitioinosina e 2’,3’-didesoxiinosina.

A potenciação do efeito anti-retroviral de um didesoxi purina-nucleósido, por exemplo, de fórmula geral (1), por meio de um inibidor PNP, pode determinar-se, por exemplo, culturas celulares (por exemplo, eélulas H9, eélulas ATH8) expostas a um retrovirus (por exemplo, HIV) de acordo com a metodologia bem conhecida na técnica, tal como se descreve em PROC. Nat. Acad. Sei., U.S.A., 83 (1986) 1911. A potenciação pode determinar-se também in vivo (por exemplo,

nos ratos) por meio da medição do aumento, no nível plasmático, do didesoxipurina-nuoleósido que se obtém por intermédio .da: :adininistraç2c> prévia ou simultânea do inibidor particular PNP, de acordo com a metodologia bem conhecida na técnica.

Os dois ingredientes activos (2',3’-didesoxipurina-nucleósido e inibidores PNP) podem administrar-se simultaneamente pela mesma ou por diferentes vias, na mesma ou em diferentes formulações, ou podem administrar-se em oca siões distintas, contanto que haja inibição eficaz de PNP quan do o 2’,3’-didesoxipurina-nueleósido está presente. A extensão em que esta separaçãode tempo dos agentes activos admnistradcs se, pode efectuar depende da quantidade de PNP eficaz e da velocidade com que o inibidor de PNP se degrada, ele próprio.

Por estas razões, a dosagem preferida e dividida em doses, duas a quatro vezes por dia, com mais preferência com a a d mi. nistração simultânea de ambos os agentes.

Sabe-se que os derivados purina-nucleósi_ dos, administrados como agentes antivirais, estão sujeitos a uma catálise da purina-nucleosido-fosforilase que altera inde sejavelmente a eficácia destes agentes. Sabe-se também que os compostos antivirais que, per se, não estão sujeitos à purina-nucleósido-fosforilase poderão (por meio de mecanismos bem conhecidos, por exemplo, a acção enzimática da adenosina desaminase quer por meio de mecanismos não conhecidos) tornar-se susceptíveis à acção da purina-nucleósido-fosforilase e,assim, a eficácia antiviral deste tipo de compostos poderá, de igual modo, ser alterada. Assim, para a finalidade

deste aspecto da presente invenção, ambos os tipos de agentes antivirais estão englobados no termo agentes antivirais sujeitos à purina-nucleósido-fosforilase.

Este aspecto da presente invenção pode, como alternativa, ser expresso do seguinte modo: no processo para tratamento de infecções virais com agentes antivirais sujeitos à nucleósido fosforilase a melhoria que compreende em conjugação a administração de uma quantidade eficaz, sob o ponto de vista terapêutico, de um inibidor da purina-nucleósido-fosforilase, particularmente os inibidores, constituídos pelos compostos incluídos do âmbito genérico de fórmula geral (1).

Neste aspecto da presente invenção, o termo antiviral inclui o tratamento de viroses e doenças causadas por esse eio -vulgarmente conhecidas por serem susceptiveis de tratamento com análogos nucleosídicos tais como, por exemplo, os vírus HIV, consideradas como factores causadores da SIDA, vírus da hepatite B e do herpes.

São agentes antivirais particulares de interesse corrente, com os quais se poderá aumentar a eficácia antiviral com a terapia conjugada com os inibidores da PNPase, os compostos:

(a) didesoxi-nucleósidos de fórmula geral:

na qual

P-\| > ^2 ’ X	Nome	Virus Alvo
OH, Η, H	didesoxíinosina	HIV
OH, NH₂, H	didesoxiguanosina	HIV, Hepatite B
OH, NH₂, F	3 ’ -F-didesoxiguanosina	HIV
OH, NH₂, N₃	3 ’-azidodidezoxiguanosina	HIV, Hepatite B
nh₂, nh₂, h	didesoxidiamino purina ribosido	HIV, HBV
nh₂, h, h	didesoxiadenosina	HIV
nh₂v nh₂, n₃	3'-azidodidezoxidianú nopurina ribosido	HIV, HBV

Os últimos três compostos são os primeiros substratos da adenosina desaminase,

(b) didesoxi-desidro-nucleósidos de fórmula geral

na qual

R , Rg	Nome	Virus Alvo
OH, H	didesoxidesidro inoslna	HIV
OH, NHg	dldesoxidesidro guanosina	HIV
NHg, H	didesoxidesidro adenina	HIV

(c) derivados de dloxalano-purina de fórmula geral:

HO

na qual representa um grupo OH ou NH₂ e R₂ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo NH₂; os citados compostos têm como alvo os vírus HIV e HBV (isto é, hepatite Β) , e

(d) derivados tipo oxetano de fórmula geral:

na qual R₁ representa um grupo OH ou um grupo NH₂ e R₂representa um átomo de hidrogénio ou um grupo NH₂. Os vírus em alvo são os HIV.

É de notar que presentemente os dois melhores agentes antivirais para a hepatite B (HBV) são a didesoxiguanosina (ddGuo) e a 2,6-diimino-didesoxipurina-ribosido que é um pró-fármaco” da didesoxiguanosina.

Compostos particularmente úteis da presente invenção são os inibidores da PNP de fórmula geral:

Ζ na qual representa um átomo de hidrogénio. Ar representa um grupo 2,3-tiofeno, 2,5-furano ou 3,4-furano e o símbolo Z” representa um grupo -CHgCFg-P (OH)g, e em que Ar representa um grupo 1,2-fenilo e representa um átomo de hidro génio ou o grupo NHg e Z representa um grupo ch₂cf₂po(oh)₂, ch chfpo(oh)₂, chfcf₂po(oh)₂, CH0HCF₂P0(0H)₂, CH=CFP0(0H)₂, CH=CHPO(OH)₂, ou

C0CF₂P0(0H)₂.

Tal como sucede com a maioria dos grupos de agentes rapêuticos, certos aspectos sub-genéricos e certos específicos mostram um perfil mais benéfico do que grupo de inibidores da PNP de fórmula geral (I), quimioteaspeotos outros. Neste os compostos

-66preferidos são os compostos em que R₁ representa um grupo OH, R₂ representa um grupo NH_2? R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo NH₂, Ar representa um grupo 1,2-fenilo, 2,3-furano ou tiofanoeR^ e Rg representam, cada um, um átomo de hidrogénio. Os grupos Z preferidos são os de (a) em que X e Y representam cada um, um átomo de flúor,

R^ representa um átomo de hidrogénio e R’^ representa um átomo de hidrogénio ou de flúor, os de (b) em que o símbolo n representa zero e os símbolos X e Y representam, cada um, átomos de hidrogénio, os de (c) em que X representa um átomo de flúor e Y representa um átomo de flúor ou de hidrogénio, os de (d) em que X representa um átomo de flúor Y representa um átomo de flúor ou de hidrogénio e os de (e) em que X e Y representam, cada um, átomos de flúor e R^ e Rg representam cada um, um átomo de hidrogénio. Os compostos específicos preferidos são as. compostos finais dos Exemplos 1 a 10, assim como os seus análogos aminados na posição 3.

-6Ίmula geral·

1.

Claims

REIVINDICAÇÕES

Processo para a preparação de compostos de fór-

R representa um grupo de fórmula geral

-Μ- ''-/ζ

Π ΠΡ

-CH₂-Ar-Z-p;

na qual

Ar representa uma ponte à qual o grupo adjacente CH₂ se liga através de um átomo de carbono; Z que se liga a um segundo átomo de carbono de um grupo fenilo, tiofeno ou furano Rg-substituído representando Rg um átomo de hidrogénio, cloro ou de bromo ou um grupo alquilo C^-6 · ^aí-^{coxi C}]_ 5 r hidroxi, NH₂ ou CH^ com a condição de Rg não representar um grupo OH ou NH₂ quando Ar representa um grupo furano ou tiofeno; R representa um grupo -G-C- (d) ou um grupo de fórmula .geral ç --C - 0 -<CH₂)_n - Ç

R.

(a)

R.

'8 em que (b) (c)

II (e)

R4 representa um átomo de hidrogénio, R^, represen

-69ta um· átomo de hidrogénio ou de flúor ou um grupo hidroxi ou R^ e R^, formam, considerados conjunta mente com o átomo de carbono a que estão ligados, um grupo ceto, R₇ e Rg representam, cada um, um átomo de hidrogénio ou de flúor ou um grupo alqui 1° , n representa um número inteiro de 1 a 5, e X e Y representam, cada um, um ãtomo de hidrogé. nio, flúor ou cloro com a condição de X e Y repre sentarem ambos um ãtomo de hidrogénio quando n re presenta zero, com a condição de Ar não representar um grupo furano ou tiofeno quando Z representa um grupo de fórmula geral <b) como definido an tes; Rj representa um ãtomo de hidrogénio designa do por R₅,.ou um grupo alquilo C^^.; e R_g represen ta um átomo de hidrogénio designado por R_g, ou um grupo alquilo C^__g;

R^ representa um grupo -OH ou -SH;

R₂ representa um- átomo de hidrogénio ou um grupo

-NH₂; e

R3 representa um ãtomo de hidrogénio ou um grupo -nh₂, -OH ou -nh-nh₂, ou dos seus tautõmeros, caracterizado pelo facto (a) para a preparação de compostos de formula geral

I, na qual R representa um grupo de fórmula geral

-CH₂~AR-Z-P(0)(0H)₂, de se fazer contactar um composto de fórmu-70la geral na qual

R representa um grupo de fórmula geral ^Ο-alquilo C^_g

-CH2“Ar-Z-P_x , na qual ll\

Q 0-alquilo

Ar e Z têm os significados definidos antes, com brometo de-trimetilsililo sob condições reaccionais convencionais e de se converterem, eventualmente, os produtos resultantes em um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
2.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R^ e Rg representam, cada um, um átomo de hidrogénio, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
3.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para

-71a preparação de compostos de fórmula geral I na qual represen ta um grupo OH, caracterizado pelo facto de se utilizarem compos. tos iniciais correspondentemente substituídos.
4. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R₂ represen ta um grupo NH₂, caracterizado.. pelo facto de se utilizarem compos tos iniciais correspondentemente substituídos.
5. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R₃ represen ta um átomo de hidrogénio, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
6. - Processo.de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de-fórmula geral I na qual.R^ represen ta um grupo NH^, caracterizado pelo facto de se. utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
7. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual Ar represen ta um grupo fenilo ou tiofeno, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
8.- Processo de acordo cora a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual Z representa um grupo CHFCF₂,· CH=CF ou CH=CH, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
9. - Processo de acordo com a reivindicação 2, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R^ represen ta um grupo hidroxi, R₂ representa um grupo NH₂, Rg representa um ãtomo de hidrogénio, Ar representa um grupo fenilo e Z repre senta um grupo -CHgCFg, -CHgCHF, -CHFCFg, CH(OH)CF₂, -C(O)CF₂, -CH=CF ou -CH=CH, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
10. - Processo de acordo com a reivindicação 2,. para a preparação de compostos de fórmula, geral I na qual R^ representa um grupo hidroxi, R₂ representa um grupo NH₂, Rg representa um grupo NH₂, Ar representa um grupo fenilo e Z representa um grupo -CH₂CF₂, -CH₂CHF, -GHFCFg, CS(OH)CF₂, -C(O)CF₂, -CH=CF e -CH=CH, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos»'
11. — Processo.de acordo.com a reivindicação 1, para a preparação de ãcido (2-(2- ((2-amino-l,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)-metil] fenil] -1,1-difluoroetil]fosfónico;

ãcido (2-(2-( (2-amino-l,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il) -metil] fenil] -1-fluoroetenil]fosfónico;

acido [2- (2-[ (2-amino-l,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il) metil] fenil] -1,1,2-trif luoroetil].f osf ónico;

ãc ido [ 2- [ 2- [ (2-amino—1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il) metil] f enil] -2-hidroxi-l, 1-dif luoroetil] f osf ónico;

ãcido [2- [2- [ (2-amino-L, 6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)metil] fenil]-2,2-di-hidroxi-l, 1-dif luoroetil] f osf ónico; ãcido (3- [2- [ (2-amirio-l,6-di-hidro-6-cloro-9H-purin-9-il)metil] fe noxi] -1,1-difluoropropil] f osf ónico;

ãcido (2- [ (2-amino-l, 6,di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)metil] feno xiJmetilfosfónico;

ãcido [2- [2- [ (2-amino-l,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)metil] fenil] -1,1-difluoro-2-propenil] f osf ónico;

ãcido [2- [2- [ (2-amino-l,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)metil] fenil] etinil]fosfónico;

ácido [2- [2- [ (2-amino-l, 6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il) metil] fenil] etenil]fosfónico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais cor respondentemente substituídos.
12.- Processo para a preparação de composições farmacêuticas com acção imunossupressora, antilinfoma, antileucémica, antiviral e antiprotozoãria, caracterizado pelo facto de se misturar uma quantidade eficaz sob o ponto de vista terapêutico de um composto de fórmula geral I, preparado pelo processo de acordo com a reivindicação 1 e que apresenta uma acção inibido* ra da purina-nucleosido-fosforilase (PNP) , ou dos seus tautomeros com um veículo ou um excipiente aceitável em farmácia.
13.- Método para o tratamento de infecções protozoárias ou virais ou da gota, caracterizado pelo facto de se admini£ trar diariamente a um doente uma quantidade' compreendida entre 1 mg e 100 mg/Kg do. corpo do doente de um composto de fórmula geral I preparado pelo, processo de acordo com a reivindicação 1, ou dos seus tautomeros, eventualmente em associação com um 2',3’-didesoxipurina-nucleosido em situações de infecções virais, especialmente retrovirais.

O Aeentrt Oficial da Propriedade industrial

RESUMO

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE NOVOS DERIVADOS DO ÁCIDO 9-PURINIL—FOSFÓNICO Ξ DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE OS CONTÊM”

Descreve-se um processo para a preparação de compos- ou dos seus tautómeros que consiste em fazer contactar um compo£ to de fórmula geral ^7 ” com brometo de trimetilsililo sob condições reaccionais convencio

-76Γ' nais e em converter, eventualmente, os produtos resultantes em um sal aceitável sob o. ponto de vista farmacêutico.

Estes compostos que exibem acção inibidora da purina-nucleosido-fosforilase (PNP) utilizam-se no tratamento de infec-