ES3060293T3 - Analysis method for analyzing a coagulation characteristics of a blood specimen - Google Patents

Abstract

La presente invención permite un análisis superior de las características de coagulación de muestras de sangre. Este método de análisis de las características de coagulación de muestras de sangre comprende: la adquisición de datos para una curva de reacción de coagulación que indica la magnitud de la reacción, en relación con el tiempo de reacción, para un líquido mixto que incluye una muestra de sangre y un reactivo; el cálculo de datos para una curva diferencial obtenida a partir de una derivada con respecto a la curva de reacción de coagulación; el cálculo de información relacionada con el punto central de la curva diferencial; y la evaluación de las características de coagulación de la muestra de sangre utilizando la información relacionada con el punto central. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0002] Método de análisis para analizar características de coagulación de un espécimen de sangre

[0003] Campo de la invención

[0004] La presente invención se refiere a un método de análisis. También se dan a conocer un aparato de análisis y un programa de análisis.

[0005] Antecedentes de la invención

[0006] Se realiza una prueba de coagulación sanguínea con el fin de diagnosticar una función de coagulación sanguínea de un paciente. En la prueba de coagulación sanguínea, se añade un reactivo predeterminado a un espécimen de sangre de un paciente, y se examina una función de coagulación sanguínea, tal como el tiempo de coagulación. La prueba de coagulación sanguínea puede determinar un estado de capacidad hemostática o fibrinolítica de un paciente. Los ejemplos de una causa de la prolongación del tiempo de coagulación sanguínea incluyen un efecto de un inhibidor de la coagulación, una disminución en un componente relacionado con la coagulación, una deficiencia congénita en los factores de coagulación sanguínea y la presencia de un autoanticuerpo adquirido que inhibe una reacción de coagulación.

[0007] Por ejemplo, la gravedad clínica de un síntoma hemorrágico en la hemofilia A se determina usando el 1 % como límite cuando se supone que la actividad del factor VIII de coagulación (en lo sucesivo, por ejemplo, el factor VIII de coagulación se denomina factor VIII) de una persona normal es del 100 %. Como método para medir la actividad del factor VIII, se conoce un método para añadir un reactivo predeterminado a un espécimen de sangre de un paciente y realizar la medición basándose en una curva de reacción de coagulación obtenida a partir de una cantidad de reacción de coagulación con respecto al tiempo de reacción en este momento.

[0008] Los documentos de patente 1 a 3 describen las siguientes técnicas. Se determina una tasa de coagulación máxima basándose en una curva de tasa de coagulación obtenida a partir de la diferenciación de primer orden de una curva de reacción de coagulación que indica una cantidad de reacción de coagulación con respecto al tiempo de reacción. Una aceleración de coagulación máxima y una desaceleración de coagulación máxima se determinan basándose en una curva de aceleración de coagulación obtenida a partir de la segunda diferenciación de la curva de reacción de coagulación. Los tiempos requeridos para alcanzar los estados respectivos desde el inicio de la reacción de coagulación se determinan como un tiempo de tasa de coagulación máxima, un tiempo de aceleración de coagulación máxima y un tiempo de desaceleración de coagulación máxima. Estos valores se denominan parámetros de forma de onda de coagulación obtenidos a partir de la curva de reacción de coagulación, la curva de tasa de coagulación o la curva de aceleración de coagulación y, por ejemplo, la presencia o ausencia de anomalía del factor de coagulación se determina basándose en estos valores.

[0009] El documento de patente 2 da a conocer un método para distinguir entre coagulopatía congénita y coagulopatía adquirida realizando una prueba (prueba de mezcla cruzada) para medir el tiempo de coagulación de una muestra obtenida mezclando un plasma normal con un plasma de prueba que presenta una prolongación del tiempo de coagulación. En general, cuando se observa una extensión del tiempo de tromboplastina parcial activado (TTPa) en la medición del TTPa, se realiza una prueba de mezcla cruzada para identificar una causa de la extensión del TTPa. En la prueba de mezcla cruzada, se realizan las siguientes dos pruebas en cada uno de un plasma de prueba, un plasma normal y un plasma mixto del plasma de prueba y el plasma normal.

[0010]  Prueba de tipo inmediato en la que cada uno de los plasmas se mide sin tratamiento térmico para examinar una reacción inmediata

[0011]  Prueba de tipo retrasado en la que cada uno de los plasmas se somete a tratamiento térmico (incubación) a 37 °C durante dos horas y luego se mide para examinar una reacción retrasada

[0012] Basándose en el resultado de la prueba de mezcla cruzada, se determina cuál de un inhibidor del factor de coagulación (inhibidor), un anticoagulante lúpico (AL) y una deficiencia del factor de coagulación tal como hemofilia, extiende el TTPa. El resultado de la prueba de mezcla cruzada se expresa mediante un gráfico en el que el eje vertical indica un valor de medición del TTPa (segundo) y el eje horizontal indica una razón de mezcla de volumen entre el plasma de prueba y el plasma normal. Los gráficos creados indican los siguientes patrones cuando las causas del retraso de la coagulación son las siguientes.

[0013]  Inhibidor del factor de coagulación (denominado en lo sucesivo inhibidor): En una reacción inmediata, se obtienen diversos patrones tales como un patrón de "curva convexa hacia abajo", un patrón de "línea recta" y un patrón de "curva convexa hacia arriba". En una reacción retrasada, se obtiene un patrón de "línea recta" o un patrón aparente de "curva convexa hacia arriba".

[0014]  Anticoagulante lúpico (denominado en lo sucesivo AL): Tanto en una reacción inmediata como en una reacción retrasada, se obtiene un patrón de "curva convexa hacia arriba" o un patrón de "línea recta".

[0015]  Deficiencia del factor de coagulación, como la hemofilia (denominado en lo sucesivo deficiencia del factor): Tanto en una reacción inmediata como en una reacción retrasada, se obtiene un patrón de "curva convexa hacia abajo". Por tanto, se determina una causa del retraso de la coagulación mediante el siguiente método basándose en el resultado de la prueba de mezcla cruzada en un plasma de prueba en el que se desconoce una causa del retraso de la coagulación. Cuando se obtiene un resultado de "curva convexa hacia abajo" en la prueba de tipo inmediato, una causa del retraso de la coagulación es la deficiencia del inhibidor o factor. Sin embargo, no es posible distinguir entre deficiencia del inhibidor y factor. En este caso, cuando se obtiene un resultado de "curva convexa hacia abajo" en la prueba de tipo retrasado, puede determinarse que una causa del retraso de la coagulación es deficiencia del factor, y cuando se obtiene un resultado de "línea recta" o un resultado de "curva convexa hacia arriba", puede determinarse que una causa del retraso de la coagulación es un inhibidor. Cuando se obtiene un resultado de "curva convexa hacia arriba" en la prueba de tipo inmediato, una causa del retraso de la coagulación es un inhibidor o AL. Sin embargo, no es posible distinguir entre inhibidor y AL. En este caso, cuando se obtiene un resultado de "curva convexa hacia arriba" más claramente en la prueba de tipo retrasado que en la prueba de tipo inmediato, puede determinarse que una causa del retraso de la coagulación es un inhibidor.

[0016] Tal como se describió anteriormente, dado que la prueba de mezcla cruzada convencional se determina mediante un patrón gráfico cualitativo, un patrón gráfico que dificulta la determinación puede obtenerse dependiendo de un plasma de prueba. Además, dado que se requiere medir el TTPa después de someter el plasma mixto a tratamiento térmico (incubación) a 37 °C durante dos horas, se necesita mucho tiempo de aproximadamente 2,5 horas para la prueba cuando se tienen en cuenta el tiempo de calentamiento y el tiempo de medición.

[0017] Lista de menciones

[0018] Literatura de Patente

[0019] Documento de patente 1: JP 2016-194426 A

[0020] Bibliografía de patente 2: JP 2016-118442 A

[0021] Bibliografía de patente 3: JP 2017-106925 A

[0022] El documento EP3287791A1 da a conocer un método para evaluar la coagulabilidad de un espécimen de sangre obtenido de un sujeto al que se le administra una sustancia que tiene una actividad de sustitución del factor VIII de la coagulación.

[0023] El documento US2018031539A1 da a conocer un método para determinar la gravedad de la hemofilia, incluyendo el método las etapas de coagular un espécimen de sangre para adquirir una forma de onda de coagulación, adquirir una tasa de cambio promedio de una tasa de coagulación a partir de la forma de onda de coagulación y determinar la gravedad de la hemofilia en el espécimen de sangre basándose en la tasa de cambio promedio de la tasa de coagulación.

[0024] P. O. SEVENET ET AL, INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY HEMATOLOGY, vol. 39, no. 6, 6 de septiembre de 2017 (06-09-2017), páginas 561-568 revisa el análisis de la forma de onda del coágulo. El documento US5967994A da a conocer un método para caracterizar la calidad de las señales indicativas de la función cardíaca, donde tales señales indicativas de la función cardíaca se derivan de mediciones electrocardiográficas.

[0025] Sumario de la invención

[0026] El alcance de la invención se define por las reivindicaciones adjuntas. Las realizaciones y descripciones que ya no se encuentran dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas se consideran simplemente como ejemplos adecuados para comprender la invención.

[0027] La presente invención proporciona:

[0028] [1] Un método para analizar una característica de coagulación de un espécimen de sangre, incluyendo el método: (1) adquirir datos para una curva de reacción de coagulación que indica una cantidad de reacción de coagulación de una disolución mixta que contiene una muestra de sangre y un reactivo con respecto al tiempo de reacción, en el que los datos de la curva de reacción de coagulación se adquieren midiendo un tiempo de coagulación;

[0029] (2) calcular datos para una curva diferencial obtenida diferenciando la curva de reacción de coagulación; (3) calcular información relacionada con un punto del centro de gravedad de la curva diferencial; y (4) evaluar la característica de coagulación de la muestra de sangre usando la información relacionada con el punto del centro de gravedad, en la que la curva diferencial es al menos una seleccionada del grupo que consiste en una curva diferencial de primer orden relacionada con la curva de reacción de coagulación y una curva diferencial de segundo orden relacionada con la curva de reacción de coagulación, en el que el punto del centro de gravedad de la curva diferencial es un punto del centro de gravedad de la curva diferencial de primer orden representada por coordenadas (vT, vH) definidas por el tiempo del centro de gravedad vT y la altura del centro de gravedad vH, y vT y vH se representan mediante las siguientes fórmulas cuando la curva diferencial de primer orden se representa mediante F(t) (t: tiempo) y el tiempo cuando F(t) es un valor predeterminado x se representa mediante t1 o t2 (t1 < t2)

[0030] Fórmula numérica 1

[0033]

[0035] en la que

[0038]

[0040] o

[0041] en el que el punto del centro de gravedad de la curva diferencial es un punto del centro de gravedad de un pico positivo de la curva diferencial de segundo orden representado por coordenadas (pT, pH) definidas por el tiempo del centro de gravedad pT y la altura del centro de gravedad pH, y pT y pH se representan mediante las siguientes fórmulas cuando la curva diferencial de segundo orden se representa mediante F'(t) (t: tiempo) y el tiempo cuando F'(t) es un valor predeterminado x se representa mediante t1 o t2 (t1 < t2)

[0042] Fórmula numérica 3

[0045]

[0048] en la que

[0051]

[0053] o

[0054] en el que el punto del centro de gravedad de la curva diferencial es un punto del centro de gravedad de un pico negativo de la curva diferencia de segundo orden representado por coordenadas (mT, mH) definidas por el tiempo del centro de gravedad mT y la altura del centro de gravedad mH, y mT y mH se representan mediante las siguientes fórmulas cuando la curva diferencial de segundo orden se representa mediante F'(t) (t: tiempo) y el tiempo cuando F'(t) es un valor predeterminado x se representa mediante t1 o t2 (t1 < t2).

[0055] Fórmula numérica 4

[0056]

[0058] en la que

[0061]

[0063] [2] El método de análisis según [1], en el que

[0064] la información relacionada con el punto del centro de gravedad incluye uno o más parámetros seleccionados del grupo que consiste en vT, vH, la anchura de pico vB, la anchura de pico del centro de gravedad vW, la razón de aplanamiento B vAB, la razón de tiempo B vTB, la razón de aplanamiento W vAW, la razón de tiempo W vTW, el tiempo promedio vTa, la altura promedio vHa, vTm, vABa y vAWa,

[0065] la anchura de pico vB es una duración de tiempo donde F(t) ≥ x dentro de un período desde t1 hasta t2, la anchura de pico del centro de gravedad vW es una duración de tiempo donde F(t) ≥ vH dentro de un período desde t1 hasta t2,

[0066] vAB representa una razón entre vH y vB,

[0067] vTB representa una razón entre vT y vB,

[0068] vAW representa una razón entre vH y vW,

[0069] vTW representa una razón entre vT y vW,

[0070] vTa, vHa y vTm se representan mediante las siguientes fórmulas, respectivamente, cuando F(t), t1 y t2 tienen las mismas definiciones que las descritas anteriormente, y el número de puntos de datos de F(t1) a F(t2) es n, Fórmula numérica 2

[0073]

[0075] vABa representa una razón entre vHa y vB, y

[0076] vAWa representa una razón entre vHa y vW.

[0077] [3] El método de análisis según [1], en el que

[0078] la información relacionada con el punto del centro de gravedad incluye uno o más parámetros seleccionados del grupo que consiste en pT, pH, la anchura de pico pB, la anchura de pico del centro de gravedad pW, la razón de aplanamiento B pAB, la razón de tiempo B pTB, la razón de aplanamiento W pAW y la razón de tiempo W pTW, la anchura de pico pB es una duración de tiempo donde F' (t) ≥ x dentro de un período desde t1 hasta t2, la anchura de pico del centro de gravedad pW es una duración de tiempo donde F' (t) ≥ pH dentro de un período desde t1 hasta t2,

[0079] pAB representa una razón entre pH y pB,

[0080] pTB representa una razón entre pT y pB,

[0081] pAW representa una razón entre pH y pW, y

[0082] pTW representa una razón entre pT y pW.

[0083] [4] El método de análisis según [1], en el que

[0084] la información relacionada con el punto del centro de gravedad incluye uno o más parámetros seleccionados del grupo que consiste en mT, mH, la anchura de pico mB, la anchura de pico del centro de gravedad mW, la razón de aplanamiento B mAB, la razón de tiempo B mTB, la razón de aplanamiento W mAW y la razón de tiempo W mTW,

[0085] la anchura de pico mB es una duración de tiempo donde F' (t) ≤ x dentro de un período desde t1 hasta t2, la anchura de pico del centro de gravedad mW es una duración de tiempo donde F' (t) ≤ mH dentro de un período desde t1 hasta t2,

[0086] mAB representa una razón entre mH y mB,

[0087] mTB representa una razón entre mT y mB,

[0088] mAW representa una razón entre mH y mW, y

[0089] mTW representa una razón entre mT y mW.

[0090] [5] El método de análisis según uno cualquiera de [1] a [4], en el que el valor predeterminado x es un valor que es del 0,5 % al 99 % de un valor máximo de la curva diferencial de primer orden F(t).

[0091] [6] El método de análisis según uno cualquiera de [2]a [4], en el que la característica de coagulación es una concentración de factor de coagulación, y el factor de coagulación es al menos uno seleccionado del grupo que consiste en factor V de la coagulación, factor VIII de la coagulación, factor IX de la coagulación, factor X de la coagulación, factor XI de la coagulación y factor XII de la coagulación.

[0092] [7] El método de análisis según uno cualquiera de [2] a [4], en el que la etapa (4) anterior incluye calificar un componente objetivo de análisis y cuantificar la concentración del componente objetivo de análisis basándose en una relación entre la concentración del componente objetivo de análisis y la razón de aplanamiento, y la razón de aplanamiento obtenida.

[0093] [8] El método de análisis según uno cualquiera de [2] a [4], en el que la etapa (4) anterior incluye un análisis que usa una razón (razón de tiempo) entre el tiempo del centro de gravedad y la anchura de pico.

[0094] [9] El método de análisis según [8], en el que la etapa (4) anterior incluye determinar si una causa de la prolongación del tiempo de coagulación es o no el factor VIII de coagulación basándose en la razón de tiempo.

[0095] [10] El método de análisis según [8] o [9], en el que la etapa (4) anterior incluye calificar un componente objetivo de análisis y cuantificar la concentración del componente objetivo de análisis basándose en una relación entre la concentración del componente objetivo de análisis y la razón de tiempo, y la razón de tiempo obtenida.

[0096] [11] El método de análisis según uno cualquiera de [1] a [10], en el que los datos de la curva de reacción de coagulación se obtienen midiendo el tiempo de tromboplastina parcial activado.

[0097] [12] El método de análisis según uno cualquiera de [1] a [11], en el que

[0098] la etapa (2) anterior incluye además realizar un proceso de corrección basándose en un valor máximo de los datos adquiridos de la curva de reacción de coagulación para calcular los datos corregidos de la curva de reacción de coagulación, y

[0099] en la etapa (2) anterior, los datos corregidos de la curva de reacción de coagulación se usan para calcular los datos de la curva diferencial.

[0100] [13] El método de análisis según uno cualquiera de [1] a [12], en el que la etapa (1) anterior incluye: preparar un plasma mixto obtenido mezclando un plasma de prueba y un plasma normal;

[0101] medir el tiempo de coagulación del plasma mixto sin tratamiento térmico; y

[0102] medir el tiempo de coagulación del plasma mixto después del tratamiento térmico,

[0103] la etapa (3) anterior incluye:

[0104] calcular un primer parámetro relacionado con un estado de reacción de coagulación basándose en los datos de medición del tiempo de coagulación del plasma mixto sin tratamiento térmico; y

[0105] calcular un segundo parámetro relacionado con un estado de reacción de coagulación basándose en los datos de medición del tiempo de coagulación del plasma mixto después del tratamiento térmico; y

[0106] la etapa (4) anterior incluye

[0107] identificar una causa de la prolongación del tiempo de coagulación basándose en una razón o una diferencia entre el primer parámetro y el segundo parámetro.

[0108] [14] El método de análisis según [13], en el que la identificación incluye determinar si la causa de la prolongación del tiempo de coagulación es un efecto de un inhibidor del factor de coagulación o un efecto de un anticoagulante lúpico.

[0109] [15] El método de análisis según [13] o [14], en el que el tiempo de calentamiento del plasma mixto es de 2 minutos o más y de 30 minutos o menos.

[0110] [16] El método de análisis según uno cualquiera de [13] a [15], en el que el primer parámetro y el segundo parámetro incluyen cada uno al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un valor máximo de la curva diferencial de primer orden, la altura del centro de gravedad vH, el tiempo del centro de gravedad vT, la anchura de pico vB, la anchura de pico del centro de gravedad vW, la razón de aplanamiento B vAB, la razón de tiempo B vTB, la razón de aplanamiento W vAW, la razón de tiempo W vTW, el tiempo promedio vTa, la altura promedio vHa, vTm, vABa y vAWa.

[0111] [17] El método de análisis según uno cualquiera de [13] a [16], en el que la identificación incluye determinar que una causa de la prolongación del tiempo de coagulación es un efecto de un inhibidor del factor de coagulación cuando una razón entre el primer parámetro y el segundo parámetro no cae dentro de un intervalo predeterminado que incluye 1.

[0112] [18] El método de análisis según uno cualquiera de [13] a [16], en el que la identificación incluye determinar que una causa de la prolongación del tiempo de coagulación es un efecto de un anticoagulante lúpico cuando una razón entre el primer parámetro y el segundo parámetro cae dentro de un intervalo predeterminado que incluye 1.

[0113] [19] El método de análisis según uno cualquiera de [13] a [18], en el que una razón de mezcla entre el plasma de prueba y el plasma normal es 1:1.

[0114] Breve descripción de los dibujos

[0115] La figura 1 es un diagrama de flujo que ilustra un esquema de un ejemplo de un método de análisis relacionado con la coagulación sanguínea según una realización.

[0116] La figura 2 es un diagrama de flujo que ilustra un esquema de un ejemplo de un método de análisis de datos relacionado con la coagulación de la sangre según una realización.

[0117] La figura 3 es un diagrama que ilustra un ejemplo de una curva de reacción de coagulación.

[0118] La figura 4 es un diagrama que ilustra un ejemplo de una curva de reacción de coagulación después del ajuste de la referencia.

[0119] La figura 5A es un diagrama ampliado de una parte de un ejemplo de una curva de reacción de coagulación. La figura 5B es un diagrama ampliado de una parte de un ejemplo de una curva de reacción de coagulación después del ajuste de la referencia.

[0120] La figura 6 es un diagrama que ilustra un ejemplo de una curva de reacción de coagulación corregida.

[0121] La figura 7 es un diagrama que ilustra un ejemplo de una curva de primer orden corregida.

[0122] La figura 8 es un diagrama que ilustra un ejemplo de una curva de segundo orden corregida.

[0123] La figura 9 es un diagrama para explicar el tiempo de coagulación, y es un diagrama que ilustra un ejemplo de una curva de reacción de coagulación después del ajuste de la referencia.

[0124] La figura 10A es un diagrama para explicar un parámetro de evaluación, y es un diagrama que ilustra un ejemplo de una curva de tasa de coagulación.

[0125] La figura 10B es un diagrama conceptual que ilustra un punto del centro de gravedad, vTs, vTe, vB y vW. La línea de puntos indica un área objetivo de cálculo del 10 % de una curva de primer orden.

[0126] La figura 10C es un diagrama que ilustra un punto del centro de gravedad de una curva de segundo orden. La figura 10D es un diagrama conceptual que ilustra vTa, vHa y vTm. La línea de puntos indica un área objetivo de cálculo del 10 % de una curva de primer orden.

[0127] La figura 11 es un diagrama para explicar un valor del área objetivo de cálculo, intervalos de una curva de orden 0 corregida y una curva de primer orden corregida que va a analizarse, y un punto del centro de gravedad.

[0128] La figura 12A es un diagrama para explicar, por ejemplo, un punto del centro de gravedad cuando un valor del área objetivo de cálculo se establece en el 10 %.

[0129] La figura 12B es un diagrama para explicar, por ejemplo, un punto del centro de gravedad cuando un valor del área objetivo de cálculo se establece en el 80 %.

[0130] La figura 13 es un diagrama de bloques que ilustra un esquema de un ejemplo de configuración de un aparato de análisis automático según una realización.

[0131] La figura 14 es un diagrama de flujo que ilustra un esquema de un ejemplo de funcionamiento de un aparato de análisis automático según una realización.

[0132] La figura 15 es un diagrama de flujo que ilustra un esquema de un ejemplo de un proceso de medición según una realización.

[0133] La figura 16 es un diagrama de flujo que ilustra un esquema de un ejemplo de un proceso de análisis según una realización.

[0134] La figura 17A es un diagrama que ilustra ejemplos de curvas de orden 0 no corregidas de un plasma normal y un plasma deficiente en factor de coagulación.

[0135] La figura 17B es un diagrama que ilustra ejemplos de curvas de orden 0 corregidas de un plasma normal y un plasma deficiente en factor de coagulación.

[0136] La figura 18A es un diagrama que ilustra ejemplos de curvas de primer orden no corregidas de un plasma normal y un plasma deficiente en factor de coagulación.

[0137] La figura 18B es un diagrama que ilustra ejemplos de curvas de primer orden corregidas de un plasma normal y un plasma deficiente en factor de coagulación.

[0138] La figura 19A es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de una concentración de factor VIII y cada uno de un tiempo VmaxT que indica un valor diferencial máximo de primer orden y tiempo del centro de gravedad vT10%.

[0139] La figura 19B es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de una concentración de factor IX y cada uno de tiempo VmaxT que indica un valor diferencial máximo de primer orden y tiempo del centro de gravedad vT10%.

[0140] La figura 19C es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de una concentración de factor VIII y cada uno de un valor diferencial máximo de primer orden Vmax y altura del centro de gravedad vH60%. La figura 19D es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de una concentración de factor IX y cada uno de un valor diferencial máximo de primer orden Vmax y altura del centro de gravedad vH60%.

[0141] La figura 20A es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de una concentración de factor VIII y anchura de pico vB10%.

[0142] La figura 20B es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de una concentración de factor IX y anchura de pico vB10%.

[0143] La figura 21A es un diagrama que ilustra la posición de un punto del centro de gravedad según un valor del área objetivo de cálculo en un ejemplo de una curva de primer orden corregida de un plasma normal.

[0144] La figura 21B es un diagrama que ilustra la posición de un punto del centro de gravedad según un valor del área objetivo de cálculo en un ejemplo de una curva de primer orden corregida de un plasma deficiente en factor VIII. La figura 21C es un diagrama que ilustra la posición de un punto del centro de gravedad según un valor del área objetivo de cálculo en un ejemplo de una curva de primer orden corregida de un plasma deficiente en factor IX. La figura 22A es un diagrama que ilustra un ejemplo de tiempo del centro de gravedad según un valor del área objetivo de cálculo.

[0145] La figura 22B es un diagrama que ilustra un ejemplo de una diferencia relativa en el tiempo del centro de gravedad según un valor del área objetivo de cálculo.

[0146] La figura 22C es un diagrama que ilustra un ejemplo de altura del centro de gravedad según un valor del área objetivo de cálculo.

[0147] La figura 23 es un diagrama para explicar un ejemplo de comportamiento de un punto del centro de gravedad según un valor del área objetivo de cálculo que difiere dependiendo de una muestra.

[0148] La figura 24A es un diagrama que ilustra un ejemplo de una curva de primer orden corregida calculada basándose en un método de diferencia.

[0149] La figura 24B es un diagrama que ilustra un ejemplo de una curva de primer orden corregida calculada basándose en una pendiente promedio dentro de la sección.

[0150] La figura 25A es un diagrama que ilustra un ejemplo de razón de aplanamiento vAB80% obtenida realizando un proceso de corrección en un logaritmo de una concentración de factor VIII.

[0151] La figura 25B es un diagrama que ilustra un ejemplo de razón de aplanamiento RvAB80% obtenida sin realizar un proceso de corrección en un logaritmo de una concentración de factor VIII.

[0152] La figura 25C es un diagrama que ilustra un ejemplo de un logaritmo de razón de aplanamiento vAB80% obtenido realizando un proceso de corrección en un logaritmo de una concentración de factor VIII.

[0153] La figura 25D es un diagrama que ilustra un ejemplo de un logaritmo de razón de aplanamiento RvAB80% obtenido sin realizar un proceso de corrección en un logaritmo de una concentración de factor VIII.

[0154] La figura 26 es un diagrama que ilustra un ejemplo de una curva de primer orden corregida para cada concentración de factor VIII.

[0155] La figura 27 es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de una concentración de factor VIII y un logaritmo de altura del centro de gravedad vH60%.

[0156] La figura 28A es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de razón de tiempo vTB5%.

[0157] La figura 28B es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de razón de tiempo vTB10%.

[0158] La figura 28C es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de razón de tiempo vTB20%.

[0159] La figura 28D es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de razón de tiempo vTB30%.

[0160] La figura 28E es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de razón de tiempo vTB40%.

[0161] La figura 28F es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de razón de tiempo vTB50%.

[0162] La figura 28G es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de razón de tiempo vTB60%.

[0163] La figura 28H es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de razón de tiempo vTB70%.

[0164] La figura 28I es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de razón de tiempo vTB80%.

[0165] La figura 28J es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de razón de tiempo vTB90%.

[0166] La figura 28K es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de razón de tiempo vTB95%.

[0167] La figura 29 ilustra un ejemplo de una relación entre una concentración de factor VIII y la razón de tiempo vTB para cada valor del área objetivo de cálculo.

[0168] La figura 30 ilustra un ejemplo del orden de las razones de tiempo obtenidas para los factores VIII que tienen concentraciones respectivas entre las razones de tiempo obtenidas para las concentraciones de diversos factores de coagulación.

[0169] La figura 31 ilustra un ejemplo de una correlación entre un logaritmo de una concentración de factor VIII y un logaritmo de una razón de tiempo.

[0170] La figura 32 es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación de un coeficiente de correlación entre un logaritmo de una concentración de factor VIII y un logaritmo de una razón de tiempo, obtenido para cada valor del área objetivo de cálculo.

[0171] La figura 33 es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un valor del área objetivo de cálculo obtenido para cada concentración de factor VIII y cada una de la altura del centro de gravedad vH y el valor diferencial máximo de primer orden Vmax.

[0172] La figura 34 es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un valor del área objetivo de cálculo obtenido para cada concentración de factor VIII y la anchura de pico vB.

[0173] La figura 35A es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un valor del área objetivo de cálculo obtenido para cada concentración de factor VIII y la razón de aplanamiento vAB.

[0174] La figura 35B es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un valor del área objetivo de cálculo obtenido para cada concentración de factor VIII y un logaritmo de razón de aplanamiento vAB.

[0175] La figura 36A es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de razón de aplanamiento vAB5%.

[0176] La figura 36B es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de razón de aplanamiento vAB10%.

[0177] La figura 36C es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de razón de aplanamiento vAB20%.

[0178] La figura 36D es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de razón de aplanamiento vAB30%.

[0179] La figura 36E es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de razón de aplanamiento vAB40%.

[0180] La figura 36F es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de razón de aplanamiento vAB50%.

[0181] La figura 36G es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de razón de aplanamiento vAB60%.

[0182] La figura 36H es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de razón de aplanamiento vAB70%.

[0183] La figura 36I es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de razón de aplanamiento vAB80%.

[0184] La figura 36J es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de razón de aplanamiento vAB90%.

[0185] La figura 36K es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de razón de aplanamiento vAB95%.

[0186] La figura 37A es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de valor diferencial máximo de primer orden Vmax.

[0187] La figura 37B es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de altura del centro de gravedad pH90% de un pico positivo de una curva de segundo orden corregida.

[0188] La figura 38 ilustra un ejemplo de una relación entre una concentración de factor VIII y cada una de razón de aplanamiento vAB para cada valor del área objetivo de cálculo y el valor diferencial máximo de primer orden Vmax. La figura 39 ilustra un ejemplo de una correlación entre un logaritmo de una concentración de factor VIII y cada uno de un logaritmo de una razón de aplanamiento y un logaritmo de valor diferencial máximo de primer orden Vmax.

[0189] La figura 40 ilustra un ejemplo de una razón (razón de recuperación) entre la concentración conocida de factor VIII y una concentración calculada determinada a partir de una curva de calibración que usa los valores ilustrados en la figura 39.

[0190] La figura 41A es un diagrama que ilustra ejemplos de curvas de orden 0 no corregidas (cantidades de luz dispersa no corregidas) de un plasma normal y plasmas deficientes en diversos factores de coagulación y curvas de primer orden no corregidas de los mismos.

[0191] La figura 41B es un diagrama que ilustra ejemplos de curvas de orden 0 no corregidas de un plasma normal y plasmas deficientes en diversos factores de coagulación y curvas de primer orden corregidas de los mismos. La figura 42A es un diagrama que ilustra ejemplos de curvas de segundo orden no corregidas de un plasma normal y plasmas deficientes en diversos factores de coagulación. El diagrama a la derecha es un diagrama obtenido cambiando la escala del diagrama a la izquierda en la dirección del eje y.

[0192] La figura 42B es un diagrama que ilustra ejemplos de curvas de segundo orden corregidas de un plasma normal y plasmas deficientes en diversos factores de coagulación. El diagrama a la derecha es un diagrama obtenido cambiando la escala del diagrama a la izquierda en la dirección del eje y.

[0193] El diagrama superior de la figura 43A es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de TTPa. El diagrama central a la izquierda de la figura 43A ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43A ilustra gráficos logarítmicos entre una concentración medida y una concentración calculada. El diagrama superior de la figura 43B es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de T5. El diagrama central a la izquierda de la figura 43B ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43B ilustra gráficos logarítmicos entre una concentración medida y una concentración calculada.

[0194] El diagrama superior de la figura 43C es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de T95-T5. El diagrama central a la izquierda de la figura 43C ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43C ilustra gráficos logarítmicos entre una concentración medida y una concentración calculada. El diagrama superior de la figura 43D es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de VmaxT. El diagrama central a la izquierda de la figura 43D ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43D ilustra gráficos logarítmicos entre una concentración medida y una concentración calculada. El diagrama superior de la figura 43E es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de Vmax. El diagrama central a la izquierda de la figura 43E ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43E ilustra gráficos logarítmicos entre una concentración medida y una concentración calculada. El diagrama superior de la figura 43F es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de AmaxT. El diagrama central a la izquierda de la figura 43F ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43F ilustra gráficos logarítmicos entre una concentración medida y una concentración calculada. El diagrama superior de la figura 43G es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de Amax. El diagrama central a la izquierda de la figura 43G ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43G ilustra gráficos logarítmicos entre una concentración medida y una concentración calculada. El diagrama superior de la figura 43H es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de vAUC20%. El diagrama central a la izquierda de la figura 43H ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43H ilustra gráficos logarítmicos entre una concentración medida y una concentración calculada. El diagrama superior de la figura 43I es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de vH5%. El diagrama medio de la izquierda de la figura 43I ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43I ilustra gráficos logarítmicos entre una concentración medida y una concentración calculada. El diagrama superior de la figura 43J es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de vT50%. El diagrama central a la izquierda de la figura 43J ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43J ilustra gráficos logarítmicos entre una concentración medida y una concentración calculada. El diagrama superior de la figura 43K es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de vTs50%. El diagrama central a la izquierda de la figura 43K ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43K ilustra gráficas logarítmicas entre una concentración medida y una concentración calculada. El diagrama superior de la figura 43L es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de vTe80%. El diagrama central a la izquierda de la figura 43L ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43L ilustra gráficos logarítmicos entre una concentración medida y una concentración calculada. El diagrama superior de la figura 43M es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de vTr20%. El diagrama central a la izquierda de la figura 43M ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43M ilustra gráficos logarítmicos entre una concentración medida y una concentración calculada. El diagrama superior de la figura 43N es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de vH95%/vB95%. El diagrama central a la izquierda de la figura 43N ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43N ilustra gráficas logarítmicas entre una concentración medida y una concentración calculada.

[0195] El diagrama superior de la figura 43O es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de pH5%. El diagrama central a la izquierda de la figura 43O ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43O ilustra gráficos logarítmicos entre una concentración medida y una concentración calculada. El diagrama superior de la figura 43P es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de pT50%. El diagrama central a la izquierda de la figura 43P ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43P ilustra gráficos logarítmicos entre una concentración medida y una concentración calculada. El diagrama superior de la figura 43Q es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de pB70%. El diagrama central a la izquierda de la figura 43Q ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43Q ilustra gráficos logarítmicos entre una concentración medida y una concentración calculada. El diagrama superior de la figura 43R es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de pH5%/pB5%. El diagrama central a la izquierda de la figura 43R ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43R ilustra gráficos logarítmicos entre una concentración medida y una concentración calculada. El diagrama superior de la figura 43S es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de pAUC90%. El diagrama central a la izquierda de la figura 43S ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43S ilustra gráficos logarítmicos entre una concentración medida y una concentración calculada. El diagrama superior de la figura 43T es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de mH20%. El diagrama central a la izquierda de la figura 43T ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43T ilustra gráficas logarítmicas entre una concentración medida y una concentración calculada. El diagrama superior de la figura 43U es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de mH20%/mB20%. El diagrama central a la izquierda de la figura 43U ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43U ilustra gráficos logarítmicos entre una concentración medida y una concentración calculada.

[0196] El diagrama superior de la figura 43V es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de mAUC30%. El diagrama central a la izquierda de la figura 43V ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43V ilustra gráficas logarítmicas entre una concentración medida y una concentración calculada. El diagrama superior de la figura 43W es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de vHa50%. El diagrama central a la izquierda de la figura 43W ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43W ilustra gráficas logarítmicas entre una concentración medida y una concentración calculada. El diagrama superior de la figura 43X es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de vTm50%. El diagrama central a la izquierda de la figura 43X ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43X ilustra gráficos logarítmicos entre una concentración medida y una concentración calculada. El diagrama superior de la figura 43Y es un diagrama que ilustra un ejemplo de una relación entre un logaritmo de cada una de las concentraciones de diversos factores de coagulación y un logaritmo de RvH50%/RvB50%. El diagrama central a la izquierda de la figura 43Y ilustra gráficos de una concentración calculada basándose en una curva de calibración con respecto a la concentración medida de un factor de coagulación. El diagrama central a la derecha de la figura 43Y ilustra gráficos logarítmicos entre una concentración medida y una concentración calculada.

[0197] La figura 44A es un diagrama que ilustra curvas de primer orden corregidas de un plasma de AL con y sin calentamiento.

[0198] La figura 44B ilustra curvas de primer orden corregidas de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII con y sin calentamiento.

[0199] La figura 45A es un diagrama que ilustra curvas de primer orden corregidas de un plasma mixto (AL-NP) de un plasma de AL y un plasma normal sin y con calentamiento.

[0200] La figura 45B es un diagrama que ilustra curvas de primer orden corregidas de un plasma mixto (IN-NP) de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal sin y con calentamiento.

[0201] La figura 46A es un diagrama que ilustra un valor Pa en un plasma no calentado, un valor Pb en un plasma calentado, una razón entre los mismos Pa/Pb y una diferencia entre los mismos Pb-Pa para TTPa de cada uno de diversos plasmas.

[0202] La figura 46B es un diagrama que ilustra un valor Pa en un plasma no calentado, un valor Pb en un plasma calentado, una razón entre los mismos Pa/Pb y una diferencia entre los mismos Pb-Pa para Vmax de cada uno de diversos plasmas.

[0203] La figura 46C es un diagrama que ilustra un valor Pa en un plasma no calentado, un valor Pb en un plasma calentado, una razón entre los mismos Pa/Pb y una diferencia entre los mismos Pb-Pa para Amax de cada uno de diversos plasmas.

[0204] La figura 46D es un diagrama que ilustra un valor Pa en un plasma no calentado, un valor Pb en un plasma calentado, una razón entre los mismos Pa/Pb y una diferencia entre los mismos Pb-Pa para vB10% de cada uno de diversos plasmas.

[0205] La figura 46E es un diagrama que ilustra un valor Pa en un plasma no calentado, un valor Pb en un plasma calentado, una razón entre los mismos Pa/Pb y una diferencia entre los mismos Pb-Pa para vT10% de cada uno de diversos plasmas.

[0206] La figura 46F es un diagrama que ilustra un valor Pa en un plasma no calentado, un valor Pb en un plasma calentado, una razón entre los mismos Pa/Pb y una diferencia entre los mismos Pb-Pa para vAB10% de cada uno de diversos plasmas.

[0207] La figura 46G es un diagrama que ilustra un valor Pa en un plasma no calentado, un valor Pb en un plasma calentado, una razón entre los mismos Pa/Pb y una diferencia entre los mismos Pb-Pa para vTB10% de cada uno de diversos plasmas.

[0208] La figura 47A es un diagrama que ilustra curvas de primer orden corregidas de "plasma normal" cuando el tiempo de calentamiento se establece en 0 minutos, 10 minutos, 30 minutos y 120 minutos.

[0209] La figura 47B es un diagrama que ilustra curvas de primer orden corregidas de "plasma positivo para AL" cuando el tiempo de calentamiento se establece en 0 minutos, 10 minutos, 30 minutos y 120 minutos.

[0210] La figura 47C es un diagrama que ilustra curvas de primer orden corregidas de "plasma positivo para el inhibidor del factor VIII" cuando el tiempo de calentamiento se establece en 0 minutos, 10 minutos, 30 minutos y 120 minutos. La figura 47D es un diagrama que ilustra curvas de primer orden corregidas de "plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para AL y un plasma normal" cuando el tiempo de calentamiento se establece en 0 minutos, 10 minutos, 30 minutos y 120 minutos.

[0211] La figura 47E es un diagrama que ilustra curvas de primer orden corregidas de "plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal" cuando el tiempo de calentamiento se establece en 0 minutos, 10 minutos, 30 minutos y 120 minutos.

[0212] La figura 48 es un diagrama que ilustra un ejemplo de una tabla que ilustra diversos parámetros de evaluación obtenidos a partir de datos de medición del TTPa de cada uno de cinco tipos de muestras después del tratamiento térmico durante 10 minutos, diversos parámetros de evaluación obtenidos a partir de datos de medición del TTPa de cada una de las cinco muestras sin tratamiento térmico y resultados de cálculo de razones entre ambos de los diversos parámetros de evaluación.

[0213] La figura 49A es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con la muestra A de un plasma positivo para AL sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0214] La figura 49B es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con la muestra B de un plasma positivo para AL sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0215] La figura 49C es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con la muestra C de un plasma positivo para AL sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0216] La figura 49D es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con la muestra D de un plasma positivo para AL sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0217] La figura 49E es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con la muestra H de un plasma positivo para AL sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0218] La figura 49F es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con la muestra I de un plasma positivo para AL sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0219] La figura 49G es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con la muestra J de un plasma positivo para AL sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0220] La figura 49H es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con la muestra K de un plasma positivo para AL sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0221] La figura 49I es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con la muestra O de un plasma positivo para AL sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0222] La figura 49J es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con la muestra P de un plasma positivo para AL sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0223] La figura 49K es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con la muestra Q de un plasma positivo para AL sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0224] La figura 49L es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con la muestra R de un plasma positivo para AL sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0225] La figura 50A es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con la muestra E de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0226] La figura 50B es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con la muestra F de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0227] La figura 50C es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con la muestra G de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0228] La figura 50D es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con la muestra L de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0229] La figura 50E es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con la muestra M de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0230] La figura 50F es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con la muestra N de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0231] La figura 50G es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con la muestra S de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0232] La figura 50H es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con la muestra T de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0233] La figura 50I es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con la muestra U de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0234] La figura 51A es un diagrama que ilustra ejemplos de TTPa de cada muestra de un plasma de prueba (sustancia única) sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0235] La figura 51B es un diagrama que ilustra ejemplos de TTPa de un plasma mixto de cada muestra de un plasma de prueba y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos. La figura 52A es un diagrama que ilustra ejemplos de curvas de primer orden corregidas de un plasma mixto de igual volumen de la muestra A de un plasma positivo para AL y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0236] La figura 52B es un diagrama que ilustra ejemplos de una curva de primer orden corregida de un plasma mixto de igual volumen de la muestra B de un plasma positivo para AL y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0237] La figura 52C es un diagrama que ilustra ejemplos de una curva de primer orden corregida de un plasma mixto de igual volumen de la muestra C de un plasma positivo para AL y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0238] La figura 52D es un diagrama que ilustra ejemplos de una curva de primer orden corregida de un plasma mixto de igual volumen de la muestra D de un plasma positivo para AL y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0239] La figura 52E es un diagrama que ilustra ejemplos de una curva de primer orden corregida de un plasma mixto de igual volumen de la muestra H de un plasma positivo para AL y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0240] La figura 52F es un diagrama que ilustra ejemplos de una curva de primer orden corregida de un plasma mixto de igual volumen de la muestra I de un plasma positivo para AL y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0241] La figura 52G es un diagrama que ilustra ejemplos de una curva de primer orden corregida de un plasma mixto de igual volumen de la muestra J de un plasma positivo para AL y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0242] La figura 52H es un diagrama que ilustra ejemplos de una curva de primer orden corregida de un plasma mixto de igual volumen de la muestra K de un plasma positivo para AL y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0243] La figura 52I es un diagrama que ilustra ejemplos de una curva de primer orden corregida de un plasma mixto de igual volumen de la muestra O de un plasma positivo para AL y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0244] La figura 52J es un diagrama que ilustra ejemplos de una curva de primer orden corregida de un plasma mixto de igual volumen de la muestra P de un plasma positivo para AL y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0245] La figura 52K es un diagrama que ilustra ejemplos de una curva de primer orden corregida de un plasma mixto de igual volumen de la muestra Q de un plasma positivo para AL y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0246] La figura 52L es un diagrama que ilustra ejemplos de una curva de primer orden corregida de un plasma mixto de igual volumen de la muestra R de un plasma positivo para AL y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0247] La figura 53A es un diagrama que ilustra ejemplos de una curva de primer orden corregida de un plasma mixto de igual volumen de la muestra E de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0248] La figura 53B es un diagrama que ilustra ejemplos de una curva de primer orden corregida de un plasma mixto de igual volumen de la muestra F de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0249] La figura 53C es un diagrama que ilustra ejemplos de una curva de primer orden corregida de un plasma mixto de igual volumen de la muestra G de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0250] La figura 53D es un diagrama que ilustra ejemplos de una curva de primer orden corregida de un plasma mixto de igual volumen de la muestra L de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0251] La figura 53E es un diagrama que ilustra ejemplos de una curva de primer orden corregida de un plasma mixto de igual volumen de la muestra M de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0252] La figura 53F es un diagrama que ilustra ejemplos de una curva de primer orden corregida de un plasma mixto de igual volumen de la muestra N de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0253] La figura 53G es un diagrama que ilustra ejemplos de una curva de primer orden corregida de un plasma mixto de igual volumen de la muestra S de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0254] La figura 53H es un diagrama que ilustra ejemplos de una curva de primer orden corregida de un plasma mixto de igual volumen de la muestra T de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0255] La figura 53I es un diagrama que ilustra ejemplos de una curva de primer orden corregida de un plasma mixto de igual volumen de la muestra U de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0256] La figura 54A es un diagrama que ilustra una razón entre un valor sin tratamiento térmico y un valor después del tratamiento térmico durante 10 minutos (razón vAB10% 10/0) para "razón de aplanamiento cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 10 %" en relación con un plasma mixto de igual volumen de cada una de las muestras de un plasma positivo para AL y un plasma normal, y una razón entre un valor sin tratamiento térmico y un valor después del tratamiento térmico durante 10 minutos (razón vAB10% 10/0) para "razón de aplanamiento cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 10 %" en relación con un plasma mixto de igual volumen de cada una de las muestras de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal.

[0257] La figura 54B es un diagrama que ilustra una razón entre un valor sin tratamiento térmico y un valor después del tratamiento térmico durante 10 minutos (razón vH60% 10/0) para "altura del centro de gravedad cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 60 %" en relación con un plasma mixto de igual volumen de cada una de las muestras de un plasma positivo para AL y un plasma normal, y una razón entre un valor sin tratamiento térmico y un valor después del tratamiento térmico durante 10 minutos (razón vH60% 10/0) para "altura del centro de gravedad cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 60 %" en relación con un plasma mixto de igual volumen de cada una de las muestras de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal.

[0258] La figura 55A es un diagrama que ilustra una diferencia entre un valor sin tratamiento térmico y un valor después del tratamiento térmico durante 10 minutos (diferencia vAB10% 10/0) para la "razón de aplanamiento cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 10 %" en relación con un plasma mixto de igual volumen de cada una de las muestras de un plasma positivo para AL y un plasma normal, y una diferencia entre un valor sin tratamiento térmico y un valor después del tratamiento térmico durante 10 minutos (diferencia vAB10% 10/0) para la "razón de aplanamiento cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 10 %" en relación con un plasma mixto de igual volumen de cada una de las muestras de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal.

[0259] La figura 55B es un diagrama que ilustra una diferencia entre un valor sin tratamiento térmico y un valor después del tratamiento térmico durante 10 minutos (diferencia vH60% 10/0) para la "altura del centro de gravedad cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 60 %" en relación con un plasma mixto de igual volumen de cada una de las muestras de un plasma positivo para AL y un plasma normal, y una diferencia entre un valor sin tratamiento térmico y un valor después del tratamiento térmico durante 10 minutos (diferencia vH60% 10/0) para la "altura del centro de gravedad cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 60 %" en relación con un plasma mixto de igual volumen de cada una de las muestras de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal.

[0260] La figura 55C es un diagrama que ilustra una diferencia entre un valor sin tratamiento térmico y un valor después del tratamiento térmico durante 10 minutos (diferencia vT60% 10/0) para "tiempo del centro de gravedad cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 60 %" en relación con un plasma mixto de igual volumen de cada una de las muestras de un plasma positivo para AL y un plasma normal, y una diferencia entre un valor sin tratamiento térmico y un valor después del tratamiento térmico durante 10 minutos (diferencia vT60% 10/0) para "tiempo del centro de gravedad cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 60 %" en relación con un plasma mixto de igual volumen de cada una de las muestras de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal.

[0261] La figura 56 es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con una muestra de un plasma positivo para AL sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 2 minutos.

[0262] La figura 57 es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con una muestra de un plasma positivo para AL después del tratamiento térmico a 37 °C durante 2 minutos y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0263] La figura 58 es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con una muestra de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 2 minutos.

[0264] La figura 59 es un diagrama que ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada relacionada con una muestra de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII después del tratamiento térmico a 37 °C durante 2 minutos y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0265] La figura 60 es un diagrama que ilustra ejemplos de curvas de primer orden corregidas de un plasma mixto de igual volumen de una muestra de un plasma positivo para AL y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 2 minutos.

[0266] La figura 61 es un diagrama que ilustra ejemplos de curvas de primer orden corregidas de un plasma mixto de igual volumen de una muestra de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 2 minutos.

[0267] La figura 62 es un diagrama que ilustra un ejemplo de una tabla que ilustra diversos parámetros de evaluación obtenidos a partir de datos de medición del TTPa de cada uno de cinco tipos de muestras después del tratamiento térmico durante 2 minutos, diversos parámetros de evaluación obtenidos a partir de datos de medición del TTPa de cada una de las cinco muestras sin tratamiento térmico y resultados de cálculo de razones entre ambos de los diversos parámetros de evaluación.

[0268] La figura 63A es un diagrama que ilustra una diferencia (Pb-Pa) y una razón (Pb/Pa) entre un plasma no calentado y un plasma calentado durante el tiempo de TTPa (T50) y Vmax de un plasma mixto. AL: plasma mixto de plasma positivo para AL y plasma normal, inhibidor: plasma mixto de plasma inhibidor del factor VIII positivo y plasma normal.

[0269] La figura 63B es un diagrama que ilustra una diferencia (Pb-Pa) y una razón (Pb/Pa) entre un plasma no calentado y un plasma calentado para vAB40% y vABa40% de un plasma mixto (AL e inhibidor).

[0270] La figura 63C es un diagrama que ilustra una diferencia (Pb-Pa) y una razón (Pb/Pa) entre un plasma no calentado y un plasma calentado para vH40% y vHa40% de un plasma mixto (AL e inhibidor).

[0271] La figura 63D es un diagrama que ilustra una diferencia (Pb-Pa) y una razón (Pb/Pa) entre un plasma no calentado y un plasma calentado para vAUC90% y vW10%/vB10% de un plasma mixto (AL e inhibidor).

[0272] La figura 63E es un diagrama que ilustra una diferencia (Pb-Pa) y una razón (Pb/Pa) entre un plasma no calentado y un plasma calentado para pAUC80% y mAUC20% de un plasma mixto (AL e inhibidor).

[0273] Descripción detallada de la invención

[0274] La presente invención se refiere a un método para analizar una característica de coagulación de una muestra de sangre a la que se aplica el análisis de forma de onda. Además, la presente invención se refiere al acortamiento del tiempo de prueba de una prueba de coagulación sanguínea.

[0275] Según la presente invención, puede implementarse un análisis excelente de una característica de coagulación de una muestra de sangre. Según la presente invención, por ejemplo, pueden estimarse un estado de deficiencia de un factor de coagulación en un espécimen de un paciente, la concentración del factor de coagulación y los efectos de diversos factores de coagulación. Además, según la presente invención, puede acortarse el tiempo de prueba de una prueba de mezcla cruzada. Por ejemplo, al identificar la presencia o ausencia de un inhibidor del factor de coagulación, el tiempo de calentamiento puede establecerse en, por ejemplo, 10 minutos, que es inferior a dos horas. Además, al identificar la presencia o ausencia de un inhibidor del factor de coagulación, puede realizarse una determinación cuantitativa determinando una razón o una diferencia entre parámetros.

[0276] Se describirá una realización de la presente invención con referencia a los dibujos. La presente realización se refiere al análisis de las características de un espécimen en relación con la coagulación sanguínea. En particular, se realiza la medición del tiempo de tromboplastina parcial activado (TTPa) usada para una prueba de función de coagulación endógena y se analizan los datos obtenidos. Esto también puede aplicarse de manera similar al análisis de datos obtenidos midiendo otros elementos de prueba usando una curva de reacción de coagulación que incluye el tiempo de protrombina (TP) usado para una prueba de función de coagulación extrínseca.

[0277] 1. Método de análisis

[0278] 1.1. Esquema del método de análisis

[0279] Un esquema de un método de análisis según la presente realización se describirá con referencia al diagrama de flujo ilustrado en la figura 1. Primero, para un espécimen, se prepara una muestra usada para una prueba (etapa S101). La medición del tiempo de coagulación se ejecuta en la muestra preparada (etapa S102). Los ejemplos de la medición del tiempo de coagulación incluyen la medición del TTPa y TP. Se realiza un análisis predeterminado sobre los datos obtenidos mediante la medición del tiempo de coagulación (etapa S103). Basándose en los resultados del análisis, se evalúa el espécimen para determinar una función de coagulación sanguínea (etapa S104).

[0280] 1.2. Preparación de la muestra y medición del tiempo de coagulación

[0281] Se describirá la preparación de la muestra realizada en la etapa S101 y la medición del tiempo de coagulación realizada en la etapa S102. En este caso, como medición del tiempo de coagulación, la medición del TTPa se describirá como un ejemplo.

[0282] Un espécimen que va a examinarse es, por ejemplo, un espécimen de sangre derivado de un sujeto que requiere examinarse para detectar anomalías causadas por un factor de coagulación. Más específicamente, se usa plasma del sujeto como el espécimen de sangre. Un anticoagulante bien conocido comúnmente usado en una prueba de coagulación puede añadirse al espécimen de sangre. Por ejemplo, se recoge la sangre usando un tubo de recogida de sangre que contiene citrato de sodio, y el plasma puede centrifugarse rápidamente.

[0283] Se añaden un activador basado en el factor de contacto y un fosfolípido al plasma de prueba. Como activador, por ejemplo, puede usarse ácido elágico, Celite, caolín, sílice o un compuesto de polifenol. Como fosfolípido, se usan fosfolípidos derivados de animales, derivados de plantas y derivados sintéticos. Los ejemplos del fosfolípido derivado de animales incluyen los derivados de cerebro de conejo, pollo y cerdo. Los ejemplos del fosfolípido derivado de plantas incluyen aquellos derivados de la soja. Además, se puede añadir apropiadamente una disolución tampón tal como Tris-ácido clorhídrico.

[0284] Con el fin de medir el TTPa, por ejemplo, puede usarse un reactivo de medición del TTPa comercialmente disponible o un kit de reactivos. Como ejemplo, se usa Coagpia APTT-N (fabricado por Sekisui Medical Co., Ltd.). Se calienta una muestra obtenida añadiendo el activador y el fosfolípido al plasma de prueba descrito anteriormente y se activa un factor de contacto en el plasma. Una condición de temperatura es, por ejemplo, 30 °C o superior y 40 °C o inferior, y preferiblemente 35 °C o superior y 39 °C o inferior.

[0285] A continuación, se añade una disolución de cloruro de calcio (ion calcio) a la muestra y se inicia una reacción de coagulación. Puede medirse una reacción de coagulación de la disolución mixta después de la adición de la disolución de cloruro de calcio. Para la medición, por ejemplo, puede usarse un método óptico para medir la cantidad de luz dispersa o la transmitancia (puede ser la absorbancia) de la luz o un método mecánico para medir la viscosidad del plasma. El tiempo de medición es, por ejemplo, de aproximadamente varias decenas de segundos a cinco minutos cuando se usa el tiempo de adición de un reactivo final como punto de tiempo de inicio. Durante este período, por ejemplo, la medición se repite periódicamente. Por ejemplo, cuando se usa un método óptico, la fotometría puede realizarse en un ciclo de 0,1 segundos. Por ejemplo, el punto de tiempo en el que se añade la disolución de cloruro de calcio puede establecerse como un tiempo de inicio de reacción. Puede definirse otro tiempo como el tiempo de inicio de la reacción. Una condición de temperatura durante la medición es, por ejemplo, 30 °C o superior y 40 °C o inferior, y preferiblemente 35 °C o superior y 39 °C o inferior.

[0286] La medición descrita anteriormente puede realizarse usando un dispositivo capaz de realizar automáticamente una serie de mediciones. Los ejemplos de un dispositivo de este tipo incluyen un aparato de análisis automático de coagulación sanguínea CP3000 (fabricado por Sekisui Medical Co., Ltd.). Además, algunas operaciones pueden realizarse mediante un método manual. Por ejemplo, una muestra puede prepararse mediante un método manual y puede medirse con un aparato de análisis óptico. Varias condiciones pueden establecerse de manera apropiada según un método de mezcla y un método de medición.

[0287] 1.3. Análisis de datos

[0288] 1.3.1. Esquema del análisis de datos

[0289] Se describirá el análisis de datos realizado en la etapa S103. La figura 2 es un diagrama de flujo que ilustra un esquema del análisis de datos.

[0290] En la etapa S201, se adquieren los datos que van a analizarse. Estos datos se obtienen mediante la medición de la coagulación sanguínea y, por ejemplo, reflejan un proceso de reacción de coagulación obtenido mediante la medición del TTPa descrita anteriormente. Por ejemplo, se añade una disolución de cloruro de calcio a una muestra obtenida añadiendo un activador y un fosfolípido a un plasma de prueba, y se adquieren datos que indican un cambio de tiempo de la cantidad de luz dispersa a partir de entonces. Los datos pueden analizarse inmediatamente después de la medición, o los datos medidos por adelantado y almacenados pueden analizarse posteriormente. La figura 3 ilustra un ejemplo de los datos adquiridos. En este dibujo, el eje horizontal indica el tiempo transcurrido después de añadir la disolución de cloruro de calcio, y el eje vertical indica la cantidad de luz dispersa. Dado que una reacción de coagulación de la disolución mixta progresa con el transcurso del tiempo, la cantidad de luz dispersa aumenta. En la presente realización, la curva que indica un cambio de tiempo de la cantidad de luz medida se denomina curva de reacción de coagulación.

[0291] El ejemplo ilustrado en la figura 3 es un resultado de medición de la cantidad de luz dispersa, e ilustra una curva de reacción de coagulación de forma sigmoidea. Sin embargo, cuando se mide la cantidad de luz transmitida, se obtiene una curva de reacción de coagulación de forma sigmoidea inversa. En la siguiente descripción, se describirá como ejemplo un caso en el que se mide la cantidad de luz dispersa. Sin embargo, también puede realizarse un proceso similar cuando se miden la cantidad de luz transmitida y la absorbancia. Pueden analizarse los datos que indican una cantidad de reacción de coagulación obtenida mediante un método para obtener una curva de reacción de coagulación mediante un cambio en la viscosidad de la disolución mixta y otros métodos. En la etapa S202, se realiza el ajuste de la referencia. El ajuste de la referencia incluye un proceso de suavizado y un ajuste del punto cero. La figura 4 ilustra un ejemplo de datos después de realizar el ajuste de la referencia en los datos ilustrados en la figura 3. La figura 5A ilustra un diagrama ampliado de los datos antes del ajuste de la referencia ilustrado en la figura 3. La figura 5B ilustra un diagrama ampliado de los datos después del ajuste de la referencia ilustrado en la figura 4. Tal como puede observarse comparando la figura 5A con la figura 5B, en el ajuste de la referencia, se realiza un proceso de suavizado que incluye la eliminación de ruido. Para el proceso de suavizado, puede usarse cualquiera de los diversos métodos conocidos relacionados con la eliminación de ruido. Tal como se ilustra en la figura 3, la cantidad de luz dispersa en un punto de tiempo de inicio de medición es superior a 0. Esto se debe a que la disolución mixta que contiene el plasma de prueba dispersa originalmente la luz. En el ajuste de la referencia, la cantidad de luz dispersa en el punto de tiempo de inicio de medición se ajusta a 0 tal como se ilustra en la figura 4.

[0292] En la etapa S203, se realiza un proceso de corrección en los datos después del ajuste de la referencia. En la presente realización, la corrección se realiza de tal manera que un valor máximo de la curva de reacción de coagulación después del ajuste de la referencia sea 100. La figura 6 ilustra un resultado de realizar un proceso de corrección en los datos ilustrados en la figura 4.

[0293] Específicamente, se realiza el siguiente proceso en el proceso de corrección. La curva de reacción de coagulación después del ajuste de la referencia se denomina D(t). Un valor máximo de D(t) se denomina Dmax y un valor mínimo de D(t) se denomina Dmin. Una anchura de cambio de D(t), es decir, Dmax-Dmin, se denomina Dintervalo. Cuando un valor corregido se denomina P(t), P(t) se expresa mediante la siguiente fórmula (1).

[0294] P(t) = [(D(t) – Dmin) / Dintervalo] × 100 (1)

[0295] Una curva de reacción de coagulación obtenida a partir de los datos corregidos se denomina curva de reacción de coagulación corregida. Un propósito de este proceso de corrección es tal como sigue. La altura de la curva de reacción de coagulación después del ajuste de la referencia depende de la concentración de fibrinógeno de un espécimen. La concentración de fibrinógeno varía de una persona a otra y puede variar de un espécimen a otro. Con esta corrección, es posible determinar, por ejemplo, un parámetro de forma de onda de coagulación que no depende de la concentración de fibrinógeno. Es decir, esta corrección hace posible comparar cuantitativamente una diferencia de la forma de la curva de reacción de coagulación después del ajuste de la referencia entre especímenes. Obsérvese que en este caso, la corrección se realiza de tal manera que un valor corregido va desde 0 hasta 100. Sin embargo, el valor corregido puede ser otro valor. Este proceso de corrección no tiene que realizarse necesariamente.

[0296] En la etapa S204, se calcula una curva diferencial obtenida diferenciando la curva de reacción de coagulación. La figura 7 ilustra una curva diferencial de primer orden obtenida realizando un proceso correspondiente a la diferenciación de primer orden en la curva de reacción de coagulación corregida ilustrada en la figura 6. Un método para calcular la curva diferencial de primer orden se describirá en detalle posteriormente. La diferenciación de primer orden (diferenciación de primer orden corregida) para la curva de reacción de coagulación corregida es una anchura de cambio por tiempo cuando una anchura de cambio de reacción total es 100 y, por tanto, puede decirse que es una tasa de progreso de reacción de coagulación (tasa de progreso de coagulación). La integración de la tasa de progreso de coagulación en toda el área da 100. Mientras tanto, la diferenciación de primer orden para la curva de reacción de coagulación no corregida indica un valor de una anchura de cambio de reacción medida por tiempo, e indica una tasa de coagulación.

[0297] La curva diferencial de primer orden de la curva de reacción de coagulación corregida ilustrada en la figura 7 puede diferenciarse adicionalmente para adquirir una curva diferencial de segundo orden tal como se ilustra en la figura 8. La curva diferencial de primer orden de la curva de reacción de coagulación no corregida puede diferenciarse adicionalmente para adquirir una curva diferencial de segundo orden que indica una aceleración de coagulación. Obsérvese en este caso, la curva de reacción de coagulación corregida y la curva de reacción de coagulación no corregida también se denominan curva de orden 0 corregida y curva de orden 0 no corregida, respectivamente, y estas también se denominan colectivamente "curva de orden 0". En este caso, las curvas diferenciales de primer orden de la curva de orden 0 corregida y la curva de orden 0 no corregida también se denominan curva de primer orden corregida y curva de primer orden no corregida, respectivamente, y estas también se denominan colectivamente "curva de primer orden". En este caso, las curvas diferenciales de segundo orden de la curva de orden 0 corregida y la curva de orden 0 no corregida, o las curvas diferenciales de primer orden de la curva de primer orden corregida y la curva de primer orden no corregida también se denominan curva de segundo orden corregida y curva de segundo orden no corregida, respectivamente, y estas también se denominan colectivamente "curva de segundo orden".

[0298] En este caso, la tasa de progreso de coagulación, la tasa de coagulación y otros valores que indican el progreso de coagulación se denominan colectivamente valor diferencial de primer orden. Los asuntos descritos al ejemplificar la tasa de progreso de coagulación o la tasa de coagulación pueden aplicarse de manera similar al valor diferencial de primer orden en general. En este caso, la aceleración de coagulación y otros valores que indican una razón de cambio del valor diferencial de primer orden se denominan conjuntamente valor diferencial de segundo orden.

[0299] En la etapa S205, se calculan diversos parámetros de evaluación. Los parámetros de evaluación indican una característica de coagulación sanguínea de un espécimen. Los parámetros de evaluación se describirán con detalle posteriormente.

[0300] 1.3.2. Cálculo de la curva diferencial

[0301] Se describirá un ejemplo de cálculo de una curva diferencial de una curva de reacción de coagulación (curva de orden 0) realizada en la etapa S204. Como proceso diferencial para obtener una curva de primer orden B(n) a partir de una curva de reacción de coagulación A(n), puede usarse un método de diferencia que usa la siguiente fórmula (2).

[0303]

[0305] Sin embargo, una curva de reacción de coagulación de un espécimen de coagulación anómala en la que se retrasa significativamente el tiempo de coagulación tiene una pendiente más suave en el momento del aumento que la de un espécimen normal, y la curva de reacción de coagulación en una etapa final de reacción también tiene una forma de meseta suave. En un caso de este tipo, dado que una diferencia entre A(n) y A(n-1) es pequeña, un valor de B(n) es pequeño incluso alrededor de un valor máximo de la curva de primer orden. En tal estado, una relación señal-ruido S-N se deteriora y se ve fácilmente afectada por el ruido en el cálculo numérico, y la información causada por una reacción de coagulación se oculta fácilmente en el ruido.

[0306] Dependiendo de la cantidad de cambio y el tiempo de medición, un resultado de cálculo de diferenciación de primer orden usando la fórmula (2) anterior puede ser un valor discreto. Por ejemplo, para una curva de reacción de coagulación sanguínea obtenida por fotometría realizada cada 0,1 segundos, se considera determinar un valor diferencial de primer orden para el valor n-ésimo como diferencia entre el valor n-ésimo y el valor n-1-ésimo. Cuando la altura de la curva de reacción de coagulación es baja, la curva diferencial de primer orden obtenida puede tener valores discretos. Por ejemplo, cuando una concentración de fibrinógeno es baja, la altura de la curva de reacción de coagulación es baja. En el análisis de sangre como en la presente realización, un fenómeno de este tipo puede ocurrir con frecuencia. Como una solución, es concebible acortar un intervalo de tiempo de medición para aumentar la sensibilidad de medición. Sin embargo, acortar el intervalo de tiempo de medición puede no ser preferible porque aumenta el coste de un dispositivo.

[0307] Por tanto, la curva de primer orden puede obtenerse de la siguiente manera. Se determina un valor de pendiente promedio para cada punto de medición N en una curva de reacción de coagulación no corregida o una curva de reacción de coagulación corregida. Los datos de medición dentro de un período de tiempo determinado pueden usarse para calcular el valor de pendiente promedio. Es decir, puede usarse un número constante de piezas de datos de medición antes y después de cada punto de medición N, por ejemplo, 2K+1 piezas de datos de medición de N-K a N+K. Por ejemplo, pueden usarse datos de medición en cinco puntos de N-2, N-1, N, N 1 y N+2. El valor de pendiente promedio significa un valor de pendiente cuando esta pluralidad de puntos de medición se aproximan linealmente. Puede usarse un método bien conocido tal como un método de mínimos cuadrados para el método de cálculo de aproximación lineal. El valor de pendiente promedio de estas piezas de datos de medición puede considerarse como un valor diferencial de primer orden en un punto de medición N.

[0308] A continuación, se describe un ejemplo del método de cálculo de aproximación lineal. x representa el tiempo fotométrico e y representa la altura de una curva de reacción de coagulación. Por ejemplo, cuando un punto de medición es (xi, yi), en el que i = N-K, ..., N+K), se considera la diferenciación parcial de la siguiente fórmula (3). Fórmula numérica 5

[0311]

[0313] Una pendiente promedio dentro de la sección a se representa mediante la siguiente fórmula (4).

[0314] Fórmula numérica 6

[0317]

[0319] Sustituyendo los datos relacionados con cada punto de tiempo N en la fórmula (4) anterior, puede calcularse la pendiente promedio dentro de la sección a.

[0320] Usando una serie de pendientes promedio dentro de la sección a obtenidas a partir de la curva de reacción de coagulación como curva de primer orden, puede obtenerse información más detallada que en el caso de usar la curva de primer orden calculada usando la fórmula (2) anterior. Lo mismo se aplica cuando se determina una curva de segundo orden a partir de una curva de primer orden.

[0321] 1.3.3. Parámetro de evaluación

[0322] En la presente realización, se calculan diversos parámetros de evaluación basándose en la curva de orden 0, la curva de primer orden y la curva de segundo orden anteriores. Se describirán estos parámetros.

[0323] 1.3.3.1. Tiempo de coagulación

[0324] El tiempo de coagulación, que es uno de los parámetros de evaluación en la presente realización, se describirá con referencia a la curva de reacción de coagulación después del ajuste de la referencia ilustrado en la figura 9. Un punto de tiempo en el que la cantidad de cambio en la cantidad de luz dispersa en la curva de reacción de coagulación después del ajuste de la referencia satisface una condición predeterminada se define como un punto de determinación de fin de coagulación Te. Por ejemplo, un punto de tiempo cuando la cantidad de cambio en la cantidad de luz dispersa por unidad de tiempo alcanza un valor igual a o menor que un valor predeterminado se define como el punto de determinación de fin de coagulación Te. Cuando la cantidad de luz dispersa en el punto de determinación de fin de coagulación Te es del 100 %, el tiempo transcurrido de reacción correspondiente a la cantidad de luz dispersa de c% se define como tiempo de coagulación Tc. Por ejemplo, el tiempo transcurrido de reacción correspondiente a la cantidad de luz dispersa del 50 % se define como tiempo de coagulación T50. Definiendo el tiempo de coagulación Tc de esta manera, cuando se detecta el punto de determinación de fin de coagulación Te (= T100) en el que la curva de reacción de coagulación después del ajuste de la referencia satisface una condición predeterminada durante la medición del TTPa, el tiempo de coagulación Tc puede determinarse inmediatamente. Obsérvese que el método para determinar el tiempo de coagulación Tc no está limitado a este método. El tiempo de coagulación puede definirse mediante otro método. Por ejemplo, el tiempo en el que la tasa de coagulación es un valor máximo puede definirse como el tiempo de coagulación, o el tiempo transcurrido de reacción T50 en el que la cantidad de luz dispersa corregida es del 50 %, tal como se ilustra en la figura 6, puede definirse como el tiempo de coagulación Tc.

[0325] 1.3.3.2. Valor del área objetivo de cálculo

[0326] El valor del área objetivo de cálculo se describirá con referencia a la figura 10A. La figura 10A ilustra un ejemplo de una curva de primer orden corregida. El valor máximo Vmax de la diferenciación de primer orden corregida (tasa de progreso de coagulación) también puede ser un parámetro de evaluación. En este caso, se ejemplifica la curva de primer orden corregida. Sin embargo, lo mismo se aplica a una curva de primer orden no corregida. Una tasa de coagulación máxima también puede ser un parámetro de evaluación.

[0327] En la presente realización, cuando el valor máximo Vmax del valor diferencial de primer orden se establece en el 100 % y los datos cuyo valor diferencial de primer orden es el S% o más van a analizarse posteriormente, el valor S se denomina valor del área objetivo de cálculo S (%). El valor del área objetivo de cálculo S puede ajustarse para limitar un intervalo de pico que refleja las características de una forma de pico de la curva de primer orden. Con el fin de limitar la forma de pico de forma relativamente ancha, el valor del área objetivo de cálculo S puede establecerse entre el 5 % y el 20 %. Cuando el valor del área objetivo de cálculo S aumenta, una influencia de la forma de una parte superior del pico se refleja en un resultado de análisis de forma relativamente importante. Con el fin de analizar la forma de una parte superior del pico, el valor del área objetivo de cálculo S puede establecerse entre el 20 % y el 95 %. El valor del área objetivo de cálculo S puede aplicarse de manera similar a una curva de tasa de coagulación. El valor del área objetivo de cálculo S también puede aplicarse a una curva de segundo orden. Tal como se ilustra en la figura 8, la curva de segundo orden tiene picos tanto en la dirección positiva como en la negativa. El valor del área objetivo de cálculo S puede establecerse para cada uno del pico positivo y el pico negativo de la curva de segundo orden.

[0328] 1.3.3.3. Punto de centro de gravedad

[0329] Se describirá un punto del centro de gravedad en la curva de primer orden con referencia a la figura 10A. En la figura 10A, una curva de primer orden corregida se indica mediante F(t). En este momento, para F(t), una posición correspondiente a "valor promedio ponderado" usando valores para los cuales el valor del área objetivo de cálculo S es igual o superior a x% como datos que van a calcularse se define como un punto del centro de gravedad (vTx, vHx).

[0330] En la curva de primer orden, el tiempo que indica el punto del centro de gravedad se define como el tiempo del centro de gravedad vT. Es decir, el tiempo del centro de gravedad vT de la curva de primer orden es el tiempo desde el tiempo de inicio de la reacción hasta el punto del centro de gravedad, y es la coordenada x del punto del centro de gravedad en el gráfico tal como se ilustra en la figura 10A. En la curva de primer orden, un valor diferencial de primer orden que indica el punto del centro de gravedad se define como la altura del centro de gravedad vH. Es decir, la altura del centro de gravedad vH de la curva de primer orden es la coordenada y del punto del centro de gravedad en el gráfico tal como se ilustra en la figura 10A.

[0331] Más específicamente, el tiempo del centro de gravedad vT y la altura del centro de gravedad vH se determinan de la siguiente manera. Un valor máximo de V = F(t) se representa mediante Vmax. Un grupo de datos de tiempo t que satisface F(t) ≥ Vmax × S × 0,01 se representa mediante t[t1,... t2] usando el valor del área objetivo de cálculo S (%). Es decir, tal como se ilustra en la figura 10A, cuando se satisfacen t1 < t2, F(t1) = Vmax × S × 0,01 y F(t2) = Vmax × S × 0,01, un grupo de datos desde el tiempo t1 hasta el tiempo t2 se representa mediante t[t1,... t2]. En este momento, el valor integrado M se representa mediante la siguiente fórmula (5).

[0332] Fórmula numérica 7

[0335]

[0337] En este momento, el tiempo del centro de gravedad vT y la altura del centro de gravedad vH se calculan mediante las siguientes fórmulas (6) y (7), respectivamente.

[0338] Fórmula numérica 8

[0339]

[0342] En la descripción anterior, el caso de la curva de primer orden corregida se ha descrito con referencia a la figura 10A. Sin embargo, en el caso de una curva de primer orden no corregida, el punto del centro de gravedad, el tiempo del centro de gravedad vT y la altura del centro de gravedad vH pueden definirse de manera similar. Es decir, el punto del centro de gravedad, el tiempo del centro de gravedad vT y la altura del centro de gravedad vH pueden definirse para un valor diferencial de primer orden que incluye una tasa de coagulación y diferenciación de primer orden corregida. El tiempo del centro de gravedad vT y la altura del centro de gravedad vH descritos anteriormente pueden ser parámetros de evaluación. Obsérvese que t1 y t2 (t1 < t2) que satisfacen los anteriores F(t1) = Vmax × S × 0,01 y F(t2) = Vmax × S × 0,01 también pueden ser parámetros de evaluación, y en lo sucesivo, t1 y t2 relacionados con la curva de primer orden pueden denominarse tiempo de inicio de área vTs y tiempo de finalización de área vTe (vTs < vTe), respectivamente (figura 10A).

[0344] La figura 11 ilustra, para una determinada pieza de datos, una relación entre el valor del área objetivo de cálculo S, los intervalos de una curva de orden 0 corregida y una curva de primer orden corregida que va a analizarse en este momento, y un punto del centro de gravedad obtenido. En la figura 11, las filas superior, media e inferior ilustran los casos en los que los valores del área objetivo de cálculo S son del 10 %, 50 % y 80 %, respectivamente. La columna izquierda ilustra una curva de orden 0 corregida, y la columna derecha ilustra una curva de primer orden corregida y un punto del centro de gravedad. La posición del punto del centro de gravedad cambia a medida que cambia el valor del área objetivo de cálculo S tal como se ilustra en la figura 11.

[0346] De manera similar, para una curva de segundo orden, pueden definirse un punto del centro de gravedad, un tiempo del centro de gravedad y una altura del centro de gravedad. La curva de segundo orden tiene picos tanto en la dirección positiva como en la negativa de un valor diferencial de segundo orden tal como se ilustra en la figura 8. Por tanto, puede calcularse un punto del centro de gravedad de la curva de segundo orden tanto para el pico positivo como para el negativo. Por ejemplo, para el pico positivo, cuando un valor máximo de la curva de segundo orden A = F' (t) es Amax y un valor del área objetivo de cálculo es S (%), se determina el tiempo t[t1, ..., t2] (t1 < t2) que satisface F' (t) ≥ Amax × S × 0,01, y el tiempo del centro de gravedad pT y la altura del centro de gravedad pH del pico positivo se calculan según las fórmulas (5) a (7) anteriores. Para el pico negativo, cuando un valor mínimo de una curva de segundo orden A = F' (t) es Amin y un valor del área objetivo de cálculo es S (%), se determina el tiempo t[t1,..., t2] (t1 < t2) que satisface F' (t) ≤ Amin × S × 0,01, y el tiempo del centro de gravedad mT y la altura del centro de gravedad mH del pico negativo se calculan según las fórmulas (5) a (7) anteriores. La posición del punto del centro de gravedad cambia a medida que cambia el valor del área objetivo de cálculo S.

[0348] 1.3.3.4. Anchura de pico, punto promedio, razón de aplanamiento y razón de tiempo

[0350] De un período desde un tiempo de reacción mínimo en el que un valor diferencial de primer orden es igual o superior al valor del área objetivo de cálculo S en un área donde el tiempo de reacción es más corto que el tiempo del centro de gravedad vT hasta un tiempo de reacción máximo en el que el valor diferencial de primer orden es igual o superior al valor del área objetivo de cálculo S en un área donde el tiempo de reacción es más largo que el tiempo del centro de gravedad vT, una duración de tiempo que satisface F(t) ≥ S (valor obtenido restando 1 del número de puntos de datos que satisfacen F(t) ≥ S y multiplicando el valor obtenido por un intervalo de tiempo fotométrico) se define como la anchura de pico vB de una curva de primer orden. En el ejemplo ilustrado en la figura 10A, la anchura de pico vB es desde el tiempo vTs hasta el tiempo vTe. De manera similar, de un período desde pTs hasta pTe en el que pTs y pTe representan un tiempo de reacción mínimo y un tiempo de reacción máximo en el que un valor diferencial de segundo orden en un pico positivo de una curva de segundo orden es igual o superior al valor del área objetivo de cálculo S, respectivamente, una duración de tiempo que satisface F' (t) ≥ S (valor obtenido restando 1 del número de puntos de datos que satisfacen F' (t) ≥ S y multiplicando el valor obtenido por un intervalo de tiempo fotométrico) se define como la anchura de pico pB del pico positivo de la curva de segundo orden. De manera similar, de un período desde mTs hasta mTe en el que mTs y mTe representan un tiempo de reacción mínimo y un tiempo de reacción máximo en el que un valor diferencial de segundo orden en un pico negativo de una curva de segundo orden es igual a o menor que el valor del área objetivo de cálculo S, respectivamente, una duración de tiempo que satisface F' (t) ≤ S (valor obtenido restando 1 del número de puntos de datos que satisfacen F' (t) ≤ S y multiplicando el valor obtenido por un intervalo de tiempo fotométrico) se define como la anchura de pico mB del pico negativo de la curva de segundo orden.

[0352] Los ejemplos de los parámetros usados en la presente invención incluyen además la anchura de pico del centro de gravedad vW. Tal como se ilustra en la figura 10B, vW es una anchura de pico que satisface la curva de primer orden F(t) ≥ vH (una duración de tiempo que satisface F(t) ≥ vH durante un período desde un tiempo mínimo hasta un tiempo máximo que satisface F(t) ≥ vH). Los ejemplos de los parámetros usados en la presente invención incluyen además vTr. vTr es una anchura de vTs a vTe. La figura 10B ilustra un área objetivo de cálculo (línea de puntos) de una curva de primer orden cuando el valor del área objetivo de cálculo S es del 10 %. Un punto del centro de gravedad (vT, vH) (círculo negro), vTs y vTe se ilustran en el dibujo superior de la figura 10B, y vB y vW se ilustran en el dibujo inferior de la figura 10B. De manera similar, para el pico positivo de la curva de segundo orden, una anchura de pico que satisface F'(t) ≥ pH se define como la anchura de pico del centro de gravedad pW. Para el pico negativo de la curva de segundo orden, una anchura de un tiempo de reacción de coagulación que satisface F'(t) ≤ mH se define como la anchura de pico del centro de gravedad mW. La figura 10C ilustra un punto del centro de gravedad (pT, pH) del pico positivo y un punto del centro de gravedad (mT, mH) del pico negativo de la curva de segundo orden cuando el valor del área objetivo de cálculo S es del 10 %.

[0353] Los ejemplos de los parámetros usados en la presente invención incluyen además el tiempo promedio vTa, la altura promedio vHa y el tiempo de centro de área vTm. La figura 10D ilustra un punto promedio (vTa, vHa) (rombo blanco), un punto del centro de gravedad (vT, vH) (círculo negro), vTs, vTe y vTm de la curva de primer orden cuando el valor del área objetivo de cálculo S es del 10 %. vTa, vHa y vTm se representan mediante las siguientes fórmulas, respectivamente, cuando n es el número de puntos de datos de F(vTs) a F(vTe). De manera similar, puede determinarse el tiempo de centro de área vTm para los picos positivo y negativo de la curva de segundo orden.

[0354] Fórmula numérica 9

[0357]

[0359] En la presente realización, las razones de aplanamiento vAB y vABa basadas en una anchura de pico de una curva de primer orden y las razones de aplanamiento vAW y vAWa basadas en una anchura de pico del centro de gravedad se definen como las siguientes fórmulas (8a), (8b), (8c) y (8d) usando la altura del centro de gravedad vH, la altura promedio vHa, la anchura de pico vB y la anchura de pico del centro de gravedad vW de la curva de primer orden.

[0362]

[0364] En la presente realización, la razón de tiempo vTB basada en una anchura de pico de una curva de primer orden y la razón de tiempo vTW basada en una anchura de pico del centro de gravedad se definen como las siguientes fórmulas (9a) y (9b) usando el tiempo del centro de gravedad vT, la anchura de pico vB y la anchura de pico del centro de gravedad vW de la curva de primer orden.

[0367]

[0369] Obsérvese que para la razón de aplanamiento, pueden satisfacerse vAB = vB/vH y vAW = vW/vH o pueden satisfacerse vABa = vB/vHa y vAWa = vW/vHa. Es decir, la razón de aplanamiento solo necesita ser una razón entre la altura del centro de gravedad vT o la altura promedio vHa y la anchura de pico vB o vW. De manera similar, para la razón de tiempo, pueden satisfacerse vTB = vB/vT y vTW = vW/vT. Es decir, la razón de tiempo solo necesita ser una razón entre el tiempo del centro de gravedad vT y la anchura de pico vB o vW. Cada una de estas relaciones puede multiplicarse por una constante K. Es decir, por ejemplo, para la razón de aplanamiento, pueden satisfacerse vAB = (vH/vB) K, vAB = (vB/vH) K, vAW = (vH/vW) K, o vAW = (vW/vH) K, o vABa = (vHa/vB) K, vABa = (vB/vHa) K, vAWa = (vHa/vW) K o vAWa = (vW/vHa) K, y para la razón de tiempo, pueden satisfacerse vTB = (vT/vB) K, vTB = (vB/vT) K, vTW = (vT/vW) K o vTW = (vW/vT) K.

[0370] La anchura de pico vB, la anchura de pico del centro de gravedad vW, el tiempo promedio vTa, la altura promedio vHa, el tiempo de punto de inicio de área vTs, el tiempo de finalización de área vTe, el tiempo de centro de área vTm, la anchura de pico vTr, las razones de aplanamiento vAB, vAW, vABa y vAWa, y las razones de tiempo vTB y vTW tal como se describió anteriormente también son parámetros relacionados con un punto del centro de gravedad, y pueden ser parámetros de evaluación en la presente invención.

[0371] La razón de aplanamiento y la razón de tiempo tal como se describieron anteriormente también pueden determinarse para una curva de segundo orden. Por ejemplo, para un pico positivo de la curva de segundo orden, la razón de aplanamiento pAB basada en una anchura de pico o la razón de aplanamiento pAW basada en una anchura de pico del centro de gravedad puede determinarse como una razón entre pH y pB o pW, mientras que la razón de tiempo pTB basada en una anchura de pico o razón de tiempo pTW basada en una anchura de pico del centro de gravedad puede determinarse como una razón entre pT y pB o pW. De manera similar, para un pico negativo de la curva de segundo orden, la razón de aplanamiento mAB basada en una anchura de pico o la razón de aplanamiento mAW basada en una anchura de pico del centro de gravedad puede determinarse como una razón entre mH y mB o mW, mientras que la razón de tiempo mTB basada en una anchura de pico o la razón de tiempo mTW basada en una anchura de pico del centro de gravedad puede determinarse como una razón entre mT y mB o mW.

[0372] En este caso, con el fin de distinguir los parámetros derivados de diferentes áreas objetivo de cálculo entre sí, cada uno de los parámetros puede representarse añadiendo el valor del área objetivo de cálculo S del que se deriva cada uno de los parámetros. Por ejemplo, un parámetro relacionado con un punto del centro de gravedad de una curva de primer orden cuando S es x (%) puede denominarse vHx, vTx, vBx o vWx. Por ejemplo, los parámetros vH, vT, vB, vW, vTa, vHa, vTs, vTe, vTm, vTr, vAB, vAW, vABa, vAWa, vTB y vTW relacionados con un punto del centro de gravedad de una curva de primer orden cuando S es del 10 % pueden denominarse vH10%, vT10%, vB10%, vW10%, vTa10%, vHa10%, vTs10%, vTe10%, vTm10%, vTr10%, vAB10%, vAW10%, vABa10%, vAWa10%, vTB10% y vTW10%, respectivamente. Lo mismo se aplica a un parámetro relacionado con un punto del centro de gravedad de una curva de segundo orden.

[0373] Las figuras 12A y 12B ilustran parámetros cuando se establecen diferentes valores del área objetivo de cálculo S para la misma curva de primer orden. La figura 12A ilustra un caso en el que el valor del área objetivo de cálculo S es del 10 %, y la figura 12b ilustra un caso en el que el valor del área objetivo de cálculo S es del 80 %. En el caso de la figura 12A, donde el valor del área objetivo de cálculo S es del 10 %, la altura del centro de gravedad vH10% de la curva de primer orden es de 0,4, el tiempo del centro de gravedad vT10% es de 149 segundos y la anchura máxima vB10% es de 200 segundos. En cambio, en el caso de la figura 12b, donde el valor del área objetivo de cálculo S es del 80 %, la altura del centro de gravedad vH80% es de 0,72, el tiempo del centro de gravedad vT80% es de 119 segundos y la anchura de pico vB80% es de 78 segundos.

[0374] 1.3.3.5. Otros

[0375] Los ejemplos de parámetros relacionados con el punto del centro de gravedad usado en la presente invención incluyen además un área bajo una curva (AUC) en un área objetivo de cálculo de una curva de primer orden o una curva de segundo orden. Dado que la curva de segundo orden tiene un pico positivo y un pico negativo, un área bajo una curva (AUC) en un área objetivo de cálculo en la que una altura de pico máxima de la curva de segundo orden es del 100 % puede ser la AUC en un área objetivo de cálculo para el pico positivo (pAUC) y la AUC en un área objetivo de cálculo del pico negativo (mAUC). En este caso, con el fin de distinguir las AUC derivadas de diferentes áreas objetivo de cálculo entre sí, la AUC puede denominarse AUCx según el valor del área objetivo de cálculo S a partir del cual se deriva la AUCx. Por ejemplo, vAUC, pAUC y mAUC de un área objetivo de cálculo en la que S es del 5 % son vAUC5%, pAUC5% y mAUC5%, respectivamente. Además, pueden incluirse parámetros adicionales distintos de los parámetros descritos anteriormente relacionados con el punto del centro de gravedad en los parámetros usados en la presente invención. Los ejemplos de los parámetros incluyen el tiempo de coagulación Tc descrito anteriormente, el valor diferencial máximo de primer orden Vmax, el valor diferencial máximo de segundo orden Amax, el valor diferencial mínimo de segundo orden Amin y VmaxT, AmaxT y AminT que representan el tiempo requerido para alcanzar estos valores. Estos parámetros también pueden usarse como parámetros de evaluación.

[0376] La serie de parámetros descrita anteriormente puede incluir parámetros derivados de una curva de reacción de coagulación corregida (curvas de orden 0 a segundo corregidas) y parámetros derivados de una curva de reacción de coagulación no corregida (curvas de orden 0 a segundo no corregidas).

[0377] 1.4. Evaluación

[0378] Se describirá un ejemplo de evaluación realizada en la etapa S104.

[0379] Los parámetros ilustrados en la tabla 1 a continuación, es decir, el tiempo de coagulación Tc, el valor diferencial máximo de primer orden Vmax, el valor diferencial máximo de segundo orden Amax, el valor diferencial mínimo de segundo orden Amin, VmaxT, AmaxT y AminT que representan el tiempo requerido para alcanzar estos valores, los parámetros relacionados con un punto del centro de gravedad de una curva de primer orden (tiempo del centro de gravedad vT, altura del centro de gravedad vH, tiempo promedio vTa, altura promedio vHa, anchura de pico vB, anchura de pico del centro de gravedad vW, razón de aplanamiento vAB, vAW, vABa o vAWa y razón de tiempo vTB o vTW determinada a partir de estos valores, vAUC vTs, vTe, vTr y vTm), los parámetros relacionados con un punto del centro de gravedad de una curva de segundo orden (tiempo del centro de gravedad pT o mT, altura del centro de gravedad pH o mH, anchura de pico pB o mB, anchura de pico del centro de gravedad pW o mW, razón de aplanamiento pAB, pAW, mAB o mAW y razón de tiempo pTB, pTW, mTB o mTW determinada a partir de estos valores, pAUC, mAUC, pTs, pTe, pTm, mTs, mTe y mTm) reflejan las características relacionadas con la coagulación sanguínea. En este momento, el tiempo del centro de gravedad, la altura del centro de gravedad, la anchura de pico, el tiempo promedio, la altura promedio, la razón de aplanamiento, la razón de tiempo y el AUC de la curva de primer orden y la curva de segundo orden pueden cambiar un resultado de reflexión de las características relacionadas con la coagulación sanguínea también dependiendo de la configuración del valor del área objetivo de cálculo S. Una combinación de los parámetros anteriores también puede reflejar las características relacionadas con la coagulación sanguínea. Por ejemplo, los resultados de una operación aritmética de cuatro y otras diversas operaciones entre estos parámetros también pueden reflejar de manera más significativa las características relacionadas con la coagulación sanguínea. Por ejemplo, basándose en el tiempo de coagulación Tc, el tiempo del centro de gravedad vT, la altura del centro de gravedad vH, la anchura de pico vB, la anchura de pico del centro de gravedad vW, el tiempo promedio vTa, la altura promedio vHa, la razón de aplanamiento vAB, vAW, vABa o vAWa, la razón de tiempo vTB o vTW, vAUC o una combinación de los mismos, pueden determinarse las características relacionadas con la coagulación sanguínea, tales como la presencia o ausencia de coagulación sanguínea anómala que incluye un estado de deficiencia de un factor de coagulación, la presencia de un anticuerpo antifosfolípido tal como un anticoagulante lúpico o un anticuerpo anticardiolipina, la presencia de un inhibidor del factor de coagulación y la reducción de un factor de von Willebrand, y la concentración de cada componente.

[0380] Los parámetros de evaluación ilustrados en la tabla 1 a continuación, tales como tiempo de coagulación Tc, tiempo del centro de gravedad vT, altura del centro de gravedad vH, anchura de pico vB, anchura de pico del centro de gravedad vW, tiempo promedio vTa, altura promedio vHa, razón de aplanamiento vAB, vAW, vABa o vAWa, razón de tiempo vTB o vTW, vTm y vAUC, pueden correlacionarse con la concentración de un componente tal como un factor de coagulación. Por tanto, puede crearse una curva de calibración mediante la adquisición de un parámetro de evaluación de una muestra en la que se conoce la concentración de un componente tal como un factor de coagulación. Usando esta curva de calibración, puede calcularse la concentración de un componente tal como un factor de coagulación basándose en un parámetro de evaluación de un espécimen de un paciente que se ha medido y analizado.

[0382] Una razón o una diferencia entre los parámetros anteriores puede correlacionarse con la concentración de un componente tal como un factor de coagulación. Los ejemplos de la razón entre los parámetros de evaluación incluyen la razón de aplanamiento vAB, vAW, vABa o vAWa, la razón de tiempo vTB o vTW y el tiempo de centro de área vTm descritos anteriormente. Los ejemplos de las diferencias entre los parámetros de evaluación incluyen una diferencia entre el tiempo de coagulación Tc y el tiempo del centro de gravedad vT, una diferencia entre una anchura de pico y una anchura de pico del centro de gravedad, y una diferencia entre vT en diferentes S. Puede crearse una curva de calibración adquiriendo la razón o la diferencia entre estos parámetros. Usando esta curva de calibración, puede calcularse la concentración de un componente tal como un factor de coagulación basándose en un parámetro de evaluación de un espécimen de un paciente que se ha medido y analizado.

[0384] Por ejemplo, cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 0 % o más y el 70 % o menos, preferiblemente el 5 % o más y el 70 % o menos, la razón de tiempo vTB tiene una alta correlación con una concentración de factor VIII. Cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 0 % o más y el 80 % o menos, preferiblemente el 5 % o más y el 80 % o menos, la razón de aplanamiento vAB tiene una alta correlación con la concentración de factor VIII. En particular, por ejemplo, cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 70 %, la razón de aplanamiento vAB tiene una alta correlación con la concentración de factor VIII en un caso en el que la concentración es relativamente alta, y cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 80 %, la razón de aplanamiento vAB tiene una alta correlación con la concentración de factor VIII en un caso en el que la concentración es relativamente baja.

[0386] Los parámetros de evaluación tales como el valor diferencial máximo de primer orden Vmax, el valor diferencial máximo de segundo orden Amax y el tiempo VmaxT y AmaxT requeridos para alcanzar estos valores pueden exhibir una correlación con la concentración de un componente tal como un factor de coagulación. Por tanto, puede crearse una curva de calibración mediante la adquisición de un parámetro de evaluación de una muestra en la que se conoce la concentración de un componente tal como un factor de coagulación. Usando esta curva de calibración, puede calcularse la concentración de un componente tal como un factor de coagulación basándose en un parámetro de evaluación de un espécimen de un paciente que se ha medido y analizado.

[0387] Además, el comportamiento del tiempo de coagulación Tc y el comportamiento del tiempo del centro de gravedad vT pueden diferir dependiendo de la forma de la curva de primer orden. En particular, la curva de primer orden de un espécimen de coagulación anómala puede tener una forma bimodal con dos picos o una forma similar a un hombro en la que uno de los picos bimodales es un pico incompleto en lugar de tener una forma monomodal. Debido a una forma de este tipo de la curva de primer orden, en un espécimen de coagulación anómala, por ejemplo, una diferencia d entre el tiempo de coagulación Tc y el tiempo del centro de gravedad vT ilustrado en la figura 10A es grande. Por tanto, basándose en esta diferencia d, pueden determinarse características relacionadas con la coagulación sanguínea, tales como la presencia o ausencia de coagulación sanguínea anómala. Dependiendo de la forma de la curva de primer orden, una relación entre la altura del centro de gravedad vH o el tiempo del centro de gravedad vT y el valor diferencial máximo de primer orden Vmax o el tiempo que indica Vmax puede cambiar de diversas maneras. Por tanto, basándose en la relación entre la altura del centro de gravedad vH o el tiempo del centro de gravedad vT y el valor diferencial máximo de primer orden Vmax o el tiempo VmaxT que indica Vmax, pueden determinarse las características relacionadas con la coagulación sanguínea, tales como la presencia o ausencia de coagulación sanguínea anómala o el grado de coagulación sanguínea anómala.

[0389] Los parámetros de evaluación tales como la altura del centro de gravedad vHx o el tiempo del centro de gravedad vTx determinados cambiando el valor del área objetivo de cálculo S (= x (%)) de varias maneras, y la razón de aplanamiento vABx o la razón de tiempo vTBx determinada usando estos valores pueden exhibir características de, por ejemplo, un factor de coagulación u otro componente relacionado con la función de coagulación. Por tanto, las características relacionadas con la coagulación sanguínea, tales como la presencia o ausencia de coagulación sanguínea anómala o el grado de coagulación sanguínea anómala, pueden determinarse basándose en el comportamiento de los parámetros de evaluación determinados cambiando el valor del área objetivo de cálculo x de diversas maneras.

[0391] Las diversas características descritas anteriormente también pueden diferir dependiendo del tipo de, por ejemplo, factor de coagulación o componente relacionado con la función de coagulación. Por tanto, basándose en los parámetros de evaluación descritos anteriormente, es posible identificar, por ejemplo, qué factor de coagulación provoca una anomalía.

[0393] Por ejemplo, en un caso en el que el factor VIII es deficiente, la cantidad de cambio en el tiempo del centro de gravedad vTx es más significativa cuando se cambia el valor del área objetivo de cálculo S (= x (%)) que, por ejemplo, en un caso en el que el factor IX es deficiente. Por tanto, es posible identificar un factor de coagulación sanguínea deficiente a partir de una razón de cambio del tiempo del centro de gravedad vTx cuando se cambia el valor del área objetivo de cálculo S (= x (%)).

[0395] Por ejemplo, en el caso en el que la concentración de factor VIII es baja, la razón de tiempo vTB80% determinada cuando el valor del área objetivo de cálculo x se establece en el 80 % es significativamente menor que en el caso en el que otro factor de coagulación es deficiente. Por tanto, la razón de tiempo vTB80% determinada cuando el valor del área objetivo de cálculo x se establece en el 80 % puede usarse para determinar la deficiencia del factor VIII.

[0397] Los ejemplos específicos de elementos de identificación relacionados con un factor de coagulación y los parámetros usados para la identificación incluyen los siguientes (se omite el subíndice x del valor del área objetivo de cálculo x añadido al final):

[0399]  Para la concentración de factor T50, vH, vT, vTe, vTr, vTa, vHa, vTm, vB, vW, vAB, vTB, vAW, pH, pAB, pAW, pAUC, VmaxT, Amax, AmaxT, mAUC o una combinación de dos o más de estos valores. El área objetivo de cálculo S en este momento es preferiblemente del 0,5 % al 99 %, más preferiblemente del 1 % al 95 %, todavía más preferiblemente del 5 % al 80 %, además todavía más preferiblemente del 30 % al 80 %, y además todavía más preferiblemente del 30 % al 70 % o del 50 % al 80 % cuando Vmax es del 100 %.

[0401]  Para la concentración de factor IX, T50, vT, vTs, vTa, vTm, pT o una combinación de dos o más de estos valores. El área objetivo de cálculo S en este momento es del 0,5 % al 99 %, más preferiblemente del 10 % al 95 %, y todavía más preferiblemente del 10 % al 80 % cuando Vmax es del 100 %.

[0403] Los parámetros de evaluación anteriores pueden determinarse a partir de curvas de orden 0 a segundo corregidas, o pueden determinarse a partir de curvas de orden 0 a segundo no corregidas. Por ejemplo, la curva de orden 0 corregida representa una tasa de coagulación como valor relativo, y una determinada anomalía de coagulación sanguínea se refleja en la magnitud de la tasa de coagulación. Por tanto, algunos parámetros de evaluación, preferiblemente parámetros relacionados con la tasa de coagulación, tales como la altura del centro de gravedad, la altura promedio, la razón de aplanamiento y el AUC, determinados a partir de curvas de orden 0 a segundo no corregidas, pueden reflejar las características de coagulación sanguínea de una mejor manera que los determinados a partir de curvas de orden 0 a segundo corregidas.

[0405] 1.5. Respecto al punto del centro de gravedad

[0406] La forma de pico de la curva de primer orden es a menudo monomodal en espécimen normal, sin embargo, puede ser bimodal o una curva en forma de hombro dependiendo de, por ejemplo, el tipo de reactivo o diferencia en el efecto de un componente relacionado con la función de coagulación contenido en un espécimen. Por ejemplo, en un caso en el que se usa una tasa de coagulación máxima como parámetro de evaluación como en las técnicas dadas a conocer en los documentos de patente 1 a 3, incluso cuando una curva de tasa de coagulación no es realmente monomodal, puede obtenerse una curva de tasa de coagulación monomodal mediante un potente proceso de suavizado, y puede especificarse una tasa de coagulación máxima. Sin embargo, un proceso de suavizado de este tipo puede dar como resultado la pérdida de información útil incluida en los datos de medición. Diversos factores actúan de manera compleja en una reacción de coagulación sanguínea. La curva de primer orden y la curva de segundo orden que tienen diversas formas pueden incluir información relacionada con tales diversos factores. El método de análisis según la presente realización no necesita realizar, por ejemplo, un proceso de suavizado excesivo hasta el punto de que se pierda información necesaria usando un parámetro de evaluación relacionado con un punto del centro de gravedad. Por tanto, el método de análisis según la presente realización hace posible obtener un resultado de análisis que refleja los estados de diversos factores en detalle.

[0407] El cálculo de un punto del centro de gravedad según la presente realización incluye el cálculo relacionado con un promedio. Por tanto, la influencia del ruido aleatorio incluido en los datos de medición puede reducirse mediante cálculo. Por tanto, no es necesario realizar excesivamente el proceso de suavizado para la eliminación de ruido, y se mantiene mucha información. Este método es un método de análisis con una buena relación S-N. En particular, los datos relacionados con la curva de primer orden o la curva de segundo orden tienden a incluir mucho ruido. Sin embargo, según este método que usa un punto del centro de gravedad, puede obtenerse información útil también a partir de los datos de la curva de primer orden o la curva de segundo orden.

[0408] En el cálculo de un punto del centro de gravedad según la presente realización, el valor del área objetivo de cálculo S puede establecerse de diversas maneras, y pueden calcularse diferentes puntos del centro de gravedad dependiendo del establecimiento del valor del área objetivo de cálculo S. Por ejemplo, si el valor del área objetivo de cálculo S cambia del 0 % al 99 % a intervalos del 1 %, pueden obtenerse 100 puntos del centro de gravedad, y pueden obtenerse diversos parámetros de evaluación tales como la altura del centro de gravedad vH para cada uno de los puntos del centro de gravedad. Además, tal como se describió anteriormente, una combinación de estos parámetros de evaluación también puede ser información útil. Por tanto, puede obtenerse mucha información usando un punto del centro de gravedad.

[0409] La curva de reacción de coagulación, que son datos a partir de los cuales se determina un punto del centro de gravedad en la presente realización, se mide diariamente en la práctica clínica, tal como la medición del TTPa. Por tanto, el análisis según la presente realización puede usarse fácilmente en la práctica clínica solo introduciendo un método de análisis de datos.

[0410] Por ejemplo, un parámetro tal como un valor máximo (Vmax) de una curva de primer orden es un parámetro que representa un cierto punto de valores diferenciales de primer orden, mientras que un punto del centro de gravedad es un parámetro que refleja un amplio intervalo de datos con respecto a un eje de tiempo. Por tanto, por ejemplo, los datos que son asimétricos con respecto al eje de tiempo pueden ser un parámetro que indica asimetría. En el método de análisis según la presente realización, se realiza el proceso de corrección ilustrado como etapa S203. Este proceso de corrección cancela una diferencia en la magnitud de la concentración de fibrinógeno entre los especímenes, y hace posible comparar cuantitativamente una diferencia de la forma de una curva de reacción de coagulación entre los especímenes.

[0411] En la presente realización, la pendiente promedio dentro de la sección representada por la fórmula (4) anterior se usa en un proceso diferencial para determinar una curva de primer orden o una curva de segundo orden a partir de una curva de reacción de coagulación (curva de orden 0). Según este método, puede obtenerse información más detallada que en el caso en el que se usa el método de diferencia indicado en la fórmula (2) anterior. En particular, puede obtenerse una buena relación S-R incluso cuando la cantidad de cambio en un valor en la curva de reacción de coagulación es pequeña.

[0412] 2. Identificación de la causa de la prolongación del tiempo de coagulación

[0413] Otro aspecto de la presente invención se refiere a un método para analizar una característica de coagulación de un espécimen de sangre, incluyendo el método:

[0414] preparar un plasma mixto obtenido mezclando un plasma de prueba y un plasma normal;

[0415] medir el tiempo de coagulación del plasma mixto sin tratamiento térmico;

[0416] medir el tiempo de coagulación del plasma mixto después del tratamiento térmico;

[0417] calcular un primer parámetro relacionado con un estado de reacción de coagulación basándose en los datos de medición del tiempo de coagulación del plasma mixto sin tratamiento térmico;

[0418] calcular un segundo parámetro relacionado con un estado de reacción de coagulación basándose en los datos de medición del tiempo de coagulación del plasma mixto después del tratamiento térmico; e

[0419] identificar una causa de la prolongación del tiempo de coagulación basándose en una razón o una diferencia entre el primer parámetro y el segundo parámetro.

[0420] Se describirá la presente realización con referencia a los dibujos. La presente realización se refiere al análisis de las características de un espécimen en relación con la coagulación sanguínea. En particular, se realiza la medición del TTPa usado para una prueba de una función de coagulación intrínseca, se analizan los datos obtenidos y se identifica una causa de la extensión del TTPa.

[0421] 2.1. Esquema del método de análisis

[0422] Un esquema de un método de análisis según la presente realización se describirá con referencia al diagrama de flujo ilustrado en la figura 1.

[0423] Primero, se prepara una muestra usada para una prueba (etapa S101). Como muestra, se usan un plasma de un espécimen (plasma de prueba), un plasma normal y al menos un plasma mixto en el que se cambia una razón de mezcla entre el plasma de prueba y el plasma normal. A continuación, se realizan en las muestras preparadas la medición del TTPa del plasma mixto sin tratamiento térmico y la medición del TTPa del plasma mixto después del tratamiento térmico (etapa S102).

[0424] A continuación, se realiza un análisis predeterminado sobre los datos obtenidos mediante la medición del TTPa (etapa S103). En este caso, se calcula un primer parámetro a partir del resultado de medición del TTPa del plasma mixto sin tratamiento térmico, y se calcula un segundo parámetro a partir del resultado de medición del TTPa del plasma mixto después del tratamiento térmico.

[0425] Finalmente, basándose en los resultados del análisis, se evalúa el espécimen para determinar una función de coagulación sanguínea (etapa S104). En este caso, se identifica una causa de la extensión del TTPa basándose en una razón o una diferencia entre el primer parámetro calculado y el segundo parámetro calculado y, por ejemplo, se identifica la presencia o ausencia de un inhibidor. Por ejemplo, cuando la razón entre el primer parámetro y el segundo parámetro no se encuentra dentro de un intervalo predeterminado que incluye 1, se determina que la causa de la extensión del TTPa es un efecto de un inhibidor, tal como la presencia del inhibidor. Cuando la razón entre el primer parámetro y el segundo parámetro cae dentro de un intervalo predeterminado que incluye 1, se determina que la causa de la extensión del TTPa no es un efecto de un inhibidor sino un efecto de AL, tal como la presencia de AL. Por ejemplo, cuando la diferencia entre el primer parámetro y el segundo parámetro no se encuentra dentro de un intervalo predeterminado que incluye 0, se determina que la causa de la extensión del TTPa es un efecto de un inhibidor. Cuando la diferencia entre el primer parámetro y el segundo parámetro cae dentro de un intervalo predeterminado que incluye 0, se determina que la causa de la extensión del TTPa no es un efecto de un inhibidor sino un efecto de, por ejemplo, AL. Obsérvese que el efecto de un inhibidor o AL puede cambiar no solo dependiendo de la presencia o ausencia del inhibidor o AL, sino también dependiendo de la cantidad del inhibidor o AL.

[0426] 2.2. Preparación de la muestra y medición del TTPa

[0427] Se describirá la preparación de la muestra realizada en la etapa S101 y la medición del TTPa realizada en la etapa S102. Un espécimen que va a examinarse es tal como se describió anteriormente en 1.2. En la preparación de la muestra, se mezclan un plasma de prueba y un plasma normal preparado por separado a una razón de volumen predeterminada. La razón de mezcla entre el plasma de prueba y el plasma normal es una razón de volumen en la que la cantidad total se define como 10 volúmenes, y solo necesita estar dentro de un intervalo de plasma de prueba:plasma normal = 1:9 a 9:1, preferiblemente dentro de un intervalo de 4:6 a 6:4, y más preferiblemente 5:5. Por ejemplo, la razón de mezcla es de 1:1, 1:4 ó 4:1.

[0428] La medición del TTPa se realiza rápidamente en una parte del plasma mixto preparado, y la medición del TTPa se realiza en otra parte del plasma mixto preparado después de que el plasma mixto se somete a tratamiento térmico durante un tiempo predeterminado. La temperatura cuando se calienta el plasma mixto es, por ejemplo, de 30 °C o superior y de 40 °C o inferior, preferiblemente de 35 °C o superior y de 39 °C o inferior, y más preferiblemente de 37 °C. El tiempo de calentamiento solo necesita estar, por ejemplo, dentro de un intervalo de desde 2 hasta 30 minutos, y es preferiblemente desde 5 hasta 30 minutos. Por ejemplo, el tiempo de calentamiento es de aproximadamente 2 a 10 minutos. El tiempo de calentamiento puede ser mayor, tal como 30 minutos o una hora, sin embargo, preferiblemente se encuentra dentro de una hora y como máximo dos horas. A continuación, el procedimiento básico para la medición del TTPa de un plasma mixto no calentado o calentado es tal como se describió anteriormente en 1.2. En el presente documento, el plasma mixto obtenido mediante el tratamiento térmico anterior también se denomina “plasma calentado”. Mientras tanto, el plasma mixto que no se ha sometido al tratamiento térmico anterior también se denomina "plasma no calentado". Sin embargo, el "plasma no calentado" puede someterse a tratamiento térmico del espécimen en la medición de la reacción de coagulación normal, por ejemplo, calentamiento a 30 °C o superior y 40 °C o inferior durante un minuto o menos.

[0429] 2.3. Análisis de datos

[0430] Según el procedimiento descrito anteriormente en 1.3., se adquieren datos sobre el plasma mixto no calentado y el plasma mixto calentado, que son objetivos de análisis. Según el procedimiento descrito anteriormente en 1.3.1. y 1.3.2., puede realizarse un proceso de suavizado y un ajuste de punto cero en las curvas de reacción de coagulación del plasma mixto no calentado y el plasma mixto calentado, o puede obtenerse una curva de reacción de coagulación corregida. Además, puede adquirirse una curva de primer orden o una curva de segundo orden a partir de la curva de reacción de coagulación corregida así obtenida y la curva de reacción de coagulación no corregida (curva de orden 0). Se calculan diversos parámetros de evaluación a partir de las curvas obtenidas. Los detalles de los parámetros de evaluación adquiridos son los descritos anteriormente en 1.3.3.

[0431] 2.4. Evaluación

[0432] Se describirá un ejemplo de evaluación realizada en la etapa S104. En la presente realización, cuando un anticuerpo antifosfolípido tal como AL es una causa de la extensión, no se observa tanto cambio en el TTPa dependiendo de la presencia o ausencia de tratamiento térmico. Mientras tanto, cuando un inhibidor es una causa, la extensión del TTPa después del tratamiento térmico se detecta con alta sensibilidad.

[0433] Por ejemplo, para cada uno de los parámetros de evaluación descritos anteriormente, la evaluación se realiza basándose en una razón (Pb/Pa) o una diferencia (Pb-Pa) entre un valor obtenido con un plasma no calentado (primer parámetro, Pa) y un valor obtenido con un plasma calentado (segundo parámetro, Pb).

[0434] Por ejemplo, para el tiempo de coagulación, la razón (Pb/Pa) es de aproximadamente 1 en un plasma mixto de un plasma positivo para AL y un plasma normal, mientras que la razón (Pb/Pa) es claramente superior a 1 en un plasma mixto de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal.

[0435] Por ejemplo, para el valor máximo Vmax de la diferenciación de primer orden corregida, la razón (Pb/Pa) es de aproximadamente 1 en un plasma mixto de un plasma positivo para AL y un plasma normal, mientras que la razón (Pb/Pa) es claramente inferior a 1 en un plasma mixto de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal.

[0436] Por ejemplo, para la anchura de pico vB, la razón (Pb/Pa) es de aproximadamente 1 en un plasma mixto de un plasma positivo para AL y un plasma normal, mientras que la razón (Pb/Pa) es claramente superior a 1 en un plasma mixto de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal.

[0437] Por ejemplo, para la razón de aplanamiento vAW, la razón (Pb/Pa) es de aproximadamente 1 en un plasma mixto de un plasma positivo para AL y un plasma normal, mientras que la razón (Pb/Pa) es claramente inferior a 1 en un plasma mixto de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal.

[0438] Por ejemplo, para el tiempo del centro de gravedad vT, la razón (Pb/Pa) es de aproximadamente 1 en un plasma mixto de un plasma positivo para AL y un plasma normal, mientras que la razón (Pb/Pa) es claramente superior a 1 en un plasma mixto de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal.

[0439] Por ejemplo, para la altura del centro de gravedad vH, la razón (Pb/Pa) es de aproximadamente 1 en un plasma mixto de un plasma positivo para AL y un plasma normal, mientras que la razón (Pb/Pa) es claramente inferior a 1 en un plasma mixto de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal.

[0440] Por ejemplo, para la razón de tiempo vTW, la razón (Pb/Pa) es de aproximadamente 1 en un plasma mixto de un plasma positivo para AL y un plasma normal, mientras que la razón (Pb/Pa) es inferior a 1 en un plasma mixto de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal.

[0441] Lo mismo se aplica no solo a la razón (Pb/Pa) sino también a la diferencia (Pb-Pa). Por ejemplo, para el tiempo del centro de gravedad vT, la diferencia (Pb-Pa) es de aproximadamente 0 en un plasma mixto de un plasma positivo para AL y un plasma normal, mientras que la diferencia (Pb-Pa) es claramente superior a 0 en un plasma mixto de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal.

[0442] Mediante el uso de estas tendencias, por ejemplo, puede identificarse si un espécimen de un sujeto es positivo para AL o positivo para un inhibidor del factor VIII basándose en la razón (Pb/Pa) o la diferencia (Pb-Pa). Para esta identificación, puede usarse cualquiera de los parámetros de evaluación descritos anteriormente, puede usarse cualquier combinación de estos parámetros, o puede usarse una combinación de cualquiera de estos parámetros y otro parámetro de evaluación. Por ejemplo, los resultados de una operación aritmética de cuatro y otras diversas operaciones entre los parámetros de evaluación descritos anteriormente también pueden reflejar si un espécimen de un sujeto es positivo para AL o positivo para un inhibidor del factor VIII.

[0443] Cuando la deficiencia del factor de coagulación es una causa, la extensión del TTPa también se corrige independientemente de la presencia o ausencia de tratamiento térmico y, por tanto, la razón (Pb/Pa) es de aproximadamente 1. Por tanto, puede decirse que este método puede determinar si una causa de la extensión del TTPa es un inhibidor, AL o deficiencia de factor.

[0444] El valor del área objetivo de cálculo S establecido en el análisis puede establecerse en diversos valores. El tiempo de tratamiento térmico puede establecerse en diversos valores. El tiempo de calentamiento es preferiblemente de 2 minutos o más y de 30 minutos o menos en un plazo de dos horas, y más preferiblemente de aproximadamente 10 minutos. La razón de mezcla del plasma mixto no se limita a 1:1, sino que puede ser cualquier otra razón. Según la presente realización, puede acortarse el tiempo de prueba de una prueba de mezcla cruzada de tipo retrasado. Por ejemplo, puede acortarse el tiempo de calentamiento de un espécimen al identificar la presencia o ausencia de un inhibidor. Además, puede realizarse una determinación cuantitativa usando un indicador tal como una razón o una diferencia entre parámetros de evaluación al identificar la presencia o ausencia de un inhibidor.

[0445] 3. Aparato de análisis automático

[0446] El análisis y la evaluación de datos descritos anteriormente pueden realizarse automáticamente usando un ordenador. Además, la serie de análisis descrita anteriormente que incluye la preparación de la muestra y la medición del tiempo de coagulación puede realizarse automáticamente mediante un aparato de análisis automático. Se describirá un aparato de análisis automático que realiza tales análisis.

[0447] 3.1. Configuración del aparato

[0448] La figura 13 es un diagrama de bloques que ilustra un esquema de un ejemplo de configuración de un aparato de análisis automático 1 según la presente realización. El aparato de análisis automático 1 incluye una unidad de control 10, una unidad de medición 30 y una pantalla táctil 90.

[0449] La unidad de control 10 controla el funcionamiento general del aparato de análisis automático 1. La unidad de control 10 está constituida, por ejemplo, por un ordenador personal (PC). La unidad de control 10 incluye una unidad de procesamiento central (CPU) 12, una memoria de acceso aleatorio (RAM) 14, una memoria de solo lectura (ROM) 16, un almacenamiento 18 y una interfaz (I/F) de comunicación 20 conectadas entre sí a través de una línea de bus 22. La CPU 12 realiza, por ejemplo, diversos procesos de señal. La RAM 14 funciona como un dispositivo de almacenamiento principal de la CPU 12. Para la RAM 14, por ejemplo, puede usarse RAM dinámica (DRAM) o RAM estática (SRAM). La ROM 16 registra, por ejemplo, diversos programas de arranque. Para el almacenamiento 18, por ejemplo, puede usarse una unidad de disco duro (HDD) o una unidad de estado sólido (SSD). Diversos tipos de información tales como programas y parámetros usados por la CPU 12 se registran en el almacenamiento 18. Los datos adquiridos por la unidad de medición 30 se registran en el almacenamiento 18. La RAM 14 y el almacenamiento 18 no se limitan a estos, y pueden reemplazarse con diversos dispositivos de almacenamiento. La unidad de control 10 se comunica con un dispositivo externo tal como la unidad de medición 30 o la pantalla táctil 90 a través de la I/F de comunicación 20.

[0450] La pantalla táctil 90 incluye un dispositivo de visualización 92 y un panel táctil 94. El dispositivo de visualización 92 puede incluir, por ejemplo, una pantalla de cristal líquido (LCD) o una pantalla EL orgánica. El dispositivo de visualización 92 muestra diversas pantallas bajo el control de la unidad de control 10. Las diversas pantallas pueden incluir diversas pantallas tales como una pantalla de operación del aparato de análisis automático 1, una pantalla que visualiza un resultado de medición y una pantalla que visualiza un resultado de análisis. El panel táctil 94 está dispuesto en el dispositivo de visualización 92. El panel táctil 94 adquiere una entrada de un usuario y transmite la información de entrada obtenida a la unidad de control 10.

[0451] La unidad de control 10 puede conectarse a otro dispositivo tal como una impresora, un lector de código práctico o un ordenador central a través de la I/F de comunicación 20.

[0452] La unidad de medición 30 incluye un circuito de control 42, un circuito de procesamiento de datos 44, un baño de temperatura constante 52, un recipiente de reacción 54, una fuente de luz 62, un detector de luz dispersa 64, un detector de luz transmitida 66, un recipiente de espécimen 72, un recipiente de reactivo 74, una sonda de espécimen 76 y una sonda de reactivo 78.

[0453] El circuito de control 42 controla una operación de cada una de las unidades de la unidad de medición 30 basándose en un comando de la unidad de control 10. Aunque no se ilustra, el circuito de control 42 está conectado a, por ejemplo, el circuito de procesamiento de datos 44, el baño de temperatura constante 52, la fuente de luz 62, el detector de luz dispersa 64, el detector de luz transmitida 66, la sonda de espécimen 76 y la sonda de reactivo 78, y controla una operación de cada una de las unidades.

[0454] El circuito de procesamiento de datos 44 está conectado al detector de luz dispersa 64 y al detector de luz transmitida 66, y adquiere resultados de detección del detector de luz dispersa 64 y del detector de luz transmitida 66. El circuito de procesamiento de datos 44 realiza diversos procesos en los resultados de detección adquiridos y emite los resultados de procesamiento. El proceso realizado por el circuito de procesamiento de datos 44 incluye, por ejemplo, un proceso de conversión A/D para cambiar el formato de salida de datos del detector de luz dispersa 64 y del detector de luz transmitida 66 a un formato que la unidad de control 10 puede procesar.

[0455] El circuito de control 42 y el circuito de procesamiento de datos 44 pueden incluir, cada uno, por ejemplo, una CPU, un circuito integrado para aplicaciones específicas (ASIC) o una matriz de compuertas de campo programable (FPGA). El circuito de control 42 y el circuito de procesamiento de datos 44 pueden estar constituidos, cada uno, por ejemplo, por un circuito integrado o una combinación de una pluralidad de circuitos integrados. Además, el circuito de control 42 y el circuito de procesamiento de datos 44 pueden estar constituidos, por ejemplo, por un circuito integrado. Las operaciones del circuito de control 42 y el circuito de procesamiento de datos 44 pueden realizarse, por ejemplo, según un programa registrado en un dispositivo de almacenamiento o áreas de registro en los circuitos.

[0456] El recipiente de espécimen 72 contiene un espécimen, tal como la sangre de un paciente. El recipiente de reactivos 74 contiene diversos reactivos usados para la medición. Puede disponerse de cualquier número de recipientes de espécimen 72 y cualquier número de recipientes de reactivo 74. Normalmente, se usa una pluralidad de tipos de reactivos en una prueba y, por tanto, generalmente hay una pluralidad de recipientes de reactivo 74. La sonda de espécimen 76 dispensa un espécimen contenido en el recipiente de espécimen 72 en el recipiente de reacción 54 bajo el control del circuito de control 42. La sonda de reactivo 78 dispensa un reactivo contenido en el recipiente de reactivo 74 en el recipiente de reacción 54 bajo el control del circuito de control 42. Puede disponerse de cualquier número de sondas de espécimen 76 y cualquier número de sondas de reactivo 78.

[0457] El baño de temperatura constante 52 mantiene la temperatura del recipiente de reacción 54 a una temperatura predeterminada bajo el control del circuito de control 42. En el recipiente de reacción 54, reacciona una disolución mixta obtenida mezclando el espécimen dispensado por la sonda de espécimen 76 y el reactivo dispensado por la sonda de reactivo 78. Obsérvese que puede disponerse de cualquier número de recipientes de reacción 54. La fuente de luz 62 emite luz que tiene una longitud de onda predeterminada bajo el control del circuito de control 42. La fuente de luz 62 puede emitir luz cuya longitud de onda difiere dependiendo de una condición de medición. Por tanto, la fuente de luz 62 puede incluir una pluralidad de elementos de fuente de luz. La luz emitida desde la fuente de luz 62 se guía, por ejemplo, mediante una fibra óptica, y el recipiente de reacción 54 se irradia con la luz. La luz con la que se irradia el recipiente de reacción 54 se dispersa parcialmente y pasa parcialmente a través del recipiente de reacción 54 dependiendo de los componentes de una disolución mixta en el recipiente de reacción 54 y un estado de distribución de los componentes. El detector de luz dispersa 64 detecta la luz dispersa en el recipiente de reacción 54 y, por ejemplo, detecta la cantidad de luz. El detector de luz transmitida 66 detecta la luz que ha pasado a través del recipiente de reacción 54 y, por ejemplo, detecta la cantidad de luz. El circuito de procesamiento de datos 44 procesa información con respecto a la cantidad de luz dispersa detectada por el detector de luz dispersa 64, y procesa información con respecto a la cantidad de luz transmitida detectada por el detector de luz transmitida 66. Cualquiera del detector de luz dispersa 64 y el detector de luz transmitida 66 puede funcionar dependiendo de una condición de medición. Por tanto, el circuito de procesamiento de datos 44 puede procesar información con respecto a la cantidad de luz dispersa detectada por el detector de luz dispersa 64 o información con respecto a la cantidad de luz transmitida detectada por el detector de luz transmitida 66 dependiendo de una condición de medición. El circuito de procesamiento de datos 44 transmite datos procesados a la unidad de control 10. Obsérvese que la unidad de medición 30 ilustrada en la figura 13 incluye tanto el detector de luz dispersa 64 como el detector de luz transmitida 66, pero puede incluir solo uno de estos.

[0458] La unidad de control 10 realiza diversos análisis basándose en los datos adquiridos de la unidad de medición 30. Los diversos análisis incluyen, por ejemplo, el cálculo de los parámetros de evaluación descritos anteriormente y la evaluación de un objeto de prueba basándose en los parámetros de evaluación. El circuito de procesamiento de datos 44 puede realizar algunos o todos los análisis.

[0459] Obsérvese que en este caso se ha descrito el caso en el que el PC que controla el funcionamiento de la unidad de medición 30 y el PC que realiza el análisis y la evaluación de datos son la misma unidad de control 10, sin embargo, estas pueden ser unidades separadas. Dicho de otro modo, un PC en el que se introduce un resultado de medición y que realiza el análisis y la evaluación de datos puede existir como una sola unidad.

[0460] 3.2. Funcionamiento del aparato de análisis

[0461] 3.2.1. Esquema de funcionamiento

[0462] Se describirá una operación del aparato de análisis d automático 1 según la presente realización. La figura 14 es un diagrama que ilustra un esquema de una operación de la unidad de control 10.

[0463] En la etapa S301, la unidad de control 10 determina si un usuario ha seleccionado o no un modo de configuración. La unidad de control 10 detecta, como selección de un usuario, que se ha seleccionado un modo de configuración, por ejemplo, en una pantalla de menú visualizada en el dispositivo de visualización 92 de la pantalla táctil 90 usando el panel táctil 94. Si no se ha seleccionado el modo de configuración, el proceso avanza a la etapa S303. Si se ha seleccionado el modo de configuración, el proceso avanza a la etapa S302.

[0464] En la etapa S302, la unidad de control 10 realiza un proceso de configuración. En el proceso de configuración, la unidad de control 10 ejecuta diversas configuraciones en función de una entrada de un usuario. Por ejemplo, se configuran una condición de medición, información con respecto a un objeto de prueba, información con respecto a un reactivo, un parámetro de medición y un parámetro de análisis. Después del proceso de configuración, el proceso avanza a la etapa S303.

[0465] En la etapa S303, la unidad de control 10 determina si se ha introducido o no una instrucción de inicio de medición. Cuando no se ha introducido la instrucción de inicio de medición, el proceso avanza a la etapa S306. Cuando se ha introducido la instrucción de inicio de medición, el proceso avanza a la etapa S304.

[0466] En la etapa S304, la unidad de control 10 emite una instrucción de inicio de medición a la unidad de emisión 30. Basándose en esta instrucción, la unidad de medición 30 ejecuta una operación relacionada con un proceso de medición descrito posteriormente. Mediante esta operación, se realiza la medición usando la unidad de medición 30. A continuación, el proceso avanza a la etapa S305. En la etapa S305, la unidad de control 10 ejecuta un proceso de análisis descrito posteriormente. En el proceso de análisis, la unidad de control 10 analiza los datos obtenidos mediante la medición basada en la configuración. A continuación, el proceso avanza a la etapa S306. En la etapa S306, la unidad de control 10 determina si se ha seleccionado o no otro proceso. Si no se ha seleccionado ningún otro proceso, el proceso avanza a la etapa S308. Si se ha seleccionado otro proceso, el proceso avanza a la etapa S307. En la etapa S307, la unidad de control 10 realiza el proceso seleccionado. Por ejemplo, la unidad de control 10 puede realizar un análisis de nuevo basándose en los datos almacenados en el almacenamiento 18. La unidad de control 10 puede emitir una instrucción para el mantenimiento de la unidad de medición 30. A continuación, el proceso avanza a la etapa S308.

[0467] En la etapa S308, la unidad de control 10 determina si finalizar o no el proceso. Por ejemplo, si se realiza una entrada de un fin del proceso, la unidad de control 10 determina finalizar el proceso. Si no se finaliza el proceso, el proceso vuelve a la etapa S301. Como resultado, los procesos anteriores se repiten. Si la unidad de control 10 determina que el proceso ha finalizado, el proceso actual finaliza.

[0468] 3.2.2. Operación de medición

[0469] La figura 15 es un diagrama de flujo que ilustra un esquema de una operación relacionada con la medición realizada por la unidad de medición 30.

[0470] En la etapa S401, el circuito de control 42 hace que la sonda de espécimen 76 succione una cantidad predeterminada de un objeto de prueba en el recipiente de espécimen 72 y luego descargue el objeto de prueba en el recipiente de reacción 54. Antes o después de la descarga del objeto de prueba en el recipiente de reacción 54, la temperatura del recipiente de reacción 54 se ajusta a una temperatura según una condición de medición mediante el baño de temperatura constante 52.

[0471] En la etapa S402, el circuito de control 42 hace que la sonda de reactivo 78 succione una cantidad predeterminada de un reactivo en el recipiente de reactivo 74 y luego descargue el reactivo en el recipiente de reacción 54, y prepara una disolución mixta con el objeto de prueba. Puede descargarse una pluralidad de reactivos, y pueden descargarse diversos tipos de reactivos dependiendo de, por ejemplo, el tipo de prueba. Se inicia una reacción de coagulación de la disolución mixta mediante la descarga de un reactivo que inicia la reacción.

[0472] En la etapa S403, el circuito de control 42 hace que cada unidad comience a detectar una cantidad de reacción (fotometría). Es decir, el circuito de control 42 hace que la fuente de luz 62 comience a emitir luz que tiene una longitud de onda apropiada según una condición de medición. El circuito de control 42 hace que uno o ambos del detector de luz dispersa 64 y el detector de luz transmitida 66 inicien la detección de luz según una condición de medición. El detector de luz dispersa 64 comienza a detectar luz dispersa en el recipiente de reacción 54. El detector de luz transmitida 66 comienza a detectar la luz transmitida en el recipiente de reacción 54.

[0473] En la etapa S404, el circuito de control 42 adquiere datos de detección de uno requerido del detector de luz dispersa 64 y el detector de luz transmitida 66. En la etapa S405, el circuito de control 42 determina si finalizar o no la medición. Por ejemplo, si se cumple una condición final predeterminada, el circuito de control 42 determina que la medición ha finalizado. La condición final puede ser, por ejemplo, que el tiempo transcurrido desde la adición de un reactivo sea un tiempo predeterminado. Si el circuito de control 42 determina que la medición no ha finalizado, el proceso vuelve a la etapa S404. De esta manera, por ejemplo, los datos se adquieren continuamente a intervalos predeterminados.

[0474] Si el circuito de control 42 determina en la etapa S405 que la medición ha finalizado, el proceso avanza a la etapa S406. En la etapa S406, el circuito de control 42 finaliza la medición. Por ejemplo, el circuito de control 42 hace que la fuente de luz 62 deje de emitir luz. El circuito de control 42 hace que el detector de luz dispersa 64 y el detector de luz transmitida 66 detengan la detección de luz.

[0475] En la etapa S407, el circuito de control 42 hace que el circuito de procesamiento de datos 44 realice el procesamiento de datos sobre los datos adquiridos. En la etapa S408, el circuito de control 42 transmite los datos procesados a la unidad de control 10. Con esto se completa el proceso de medición.

[0476] 3.2.3. Proceso de análisis

[0477] Un ejemplo del proceso de análisis realizado en la etapa S305 se describirá con referencia al diagrama de flujo ilustrado en la figura 16. El proceso de análisis descrito en este caso es un proceso para analizar datos de medición del tiempo de coagulación descrito anteriormente, tal como TTPa, para un objetivo de análisis, calcular diversos parámetros de evaluación y analizar características relacionadas con la coagulación sanguínea, tal como la presencia o ausencia de coagulación sanguínea anómala basándose en los parámetros de evaluación obtenidos. En este caso, el objetivo de análisis puede ser el plasma de prueba tal como se describió anteriormente en 1.2. o el plasma mixto (plasma calentado y plasma no calentado) tal como se describió anteriormente en 2.2.

[0478] En la etapa S501, la unidad de control 10 adquiere datos de medición del tiempo de coagulación del objetivo de análisis. Los datos pueden adquirirse, por ejemplo, de la unidad de medición 30. La unidad de control 10 puede adquirir datos de medición de otro dispositivo, por ejemplo, a través de una red o un medio, o puede adquirir datos almacenados en un dispositivo de almacenamiento.

[0479] En la etapa S502, la unidad de control 10 realiza el ajuste de la referencia. En este ajuste de la referencia, la unidad de control 10 realiza el proceso descrito anteriormente en la etapa S202. En la etapa S503, la unidad de control 10 realiza un proceso de corrección de datos. En este proceso de corrección de datos, la unidad de control 10 realiza el proceso descrito anteriormente en la etapa S203. En la etapa S504, la unidad de control 10 realiza un proceso para calcular una curva diferencial tal como una curva de primer orden o una curva de segundo orden. En este proceso de cálculo de curva diferencial, la unidad de control 10 realiza el proceso descrito anteriormente en la etapa S204.

[0480] En la etapa S505, la unidad de control 10 realiza un proceso de cálculo de parámetros de evaluación. En este proceso de cálculo de parámetro de evaluación, la unidad de control 10 realiza el proceso descrito anteriormente en la etapa S205. En este caso, cuando se analiza un plasma mixto (plasma calentado y plasma no calentado), la unidad de control 10 calcula una razón o una diferencia entre un primer parámetro de un plasma no calentado y un segundo parámetro de un plasma calentado basándose en los diversos parámetros de evaluación calculados para cada uno del plasma calentado y el plasma no calentado. En la etapa S506, la unidad de control 10 realiza un proceso de evaluación. En este proceso de evaluación, la unidad de control 10 realiza el proceso descrito anteriormente en la etapa S104 para derivar un resultado de evaluación.

[0481] En la etapa S507, la unidad de control 10 hace que el resultado de la evaluación se registre en el almacenamiento 18, se emita al dispositivo de visualización 92 o se transmita a un ordenador central.

[0482] Tal como se describió anteriormente, el análisis según la presente realización puede realizarse automáticamente mediante el aparato de análisis automático 1.

[0483] Ejemplos

[0484] Se describirán ejemplos relacionados con un método de análisis para la coagulación sanguínea usando el método descrito anteriormente.

[0485] Los parámetros usados en los siguientes ejemplos representan parámetros derivados de curvas de orden 0 a segundo corregidas a menos que se especifique lo contrario. Mientras tanto, los parámetros derivados de curvas de orden 0 a segundo no corregidas se representan añadiendo R al principio del nombre de cada uno de los parámetros. Por ejemplo, cuando la altura del centro de gravedad de la curva de primer orden corregida es vH, la altura del centro de gravedad de la curva de primer orden no corregida se representa mediante RvH, y cuando el tiempo del centro de gravedad de la curva de primer orden corregida es vT, el tiempo del centro de gravedad de la curva de primer orden no corregida se representa mediante RvT. La tabla 1 a continuación ilustra una lista de parámetros. En la siguiente descripción, la razón de aplanamiento B, la razón de aplanamiento W, la razón de tiempo B y la razón de tiempo W, que son parámetros de forma de onda combinados, pueden expresarse de modo que pueda entenderse el contenido de cálculo de los parámetros con un coeficiente k omitido.

[0486] Tabla 1

[0487]

[0489] Parámetros de forma de onda de curva de primer orden y curva de segundo orden

[0491]

[0493] Parámetros de forma de onda combinados

[0495]

[0497] 4. Primer ejemplo

[0498] 4.1. Método

[0499] 4.1.1. Método para medir la reacción de coagulación de un espécimen de sangre

[0500] Se realizó un análisis según la presente realización en una pluralidad de muestras mixtas, cada una obtenida mezclando un espécimen de sangre derivado de un sujeto que tiene una anomalía debido a un factor de coagulación sanguínea y un espécimen de sangre normal (plasma normal) en una razón específica. Es decir, se preparó una muestra objetivo de medición mezclando cada una de la pluralidad de muestras mixtas con un reactivo de medición del tiempo de coagulación. Como datos de reacción de coagulación de la muestra objetivo de medición, se adquirieron los datos fotométricos de la cantidad de luz dispersa. Se realizó un análisis según la presente realización en los datos fotométricos adquiridos.

[0501] En el presente ejemplo, como espécimen, se usó una disolución mixta de plasma deficiente en factor VIII (fabricado por George King Bio-Medical, Inc.) o plasma deficiente en factor IX (fabricado por George King Bio-Medical, Inc.) con un plasma de combinación normal (denominado en lo sucesivo plasma normal) que podría considerarse que tiene una concentración de factor VIII y una concentración de factor IX del 100 %. Al cambiar una razón de mezcla entre el plasma deficiente en factor VIII que tiene una concentración de factor VIII del 0,1 % o menos o el plasma deficiente en factor IX que tiene una concentración de factor IX del 0,1 % o menos y un plasma normal, se prepararon plasmas mixtos de modo que la concentración de factor VIII y la concentración de factor IX fueron cada una del 50 %, el 25 %, el 10 %, el 5 %, el 2,5 %, el 1 %, el 0,75 %, el 0,5 %, el 0,25 % y el 0,1 % o menos.

[0502] En el presente ejemplo, como reactivos de medición, se usaron Coagpia APTT-N (fabricado por Sekisui Medical Co., Ltd.) y 50 µL de disolución de cloruro de calcio Coagpia APTT-N (fabricado por Sekisui Medical Co., Ltd.), que son reactivos para la medición del TTPa.

[0503] En el presente ejemplo, la reacción de coagulación se midió usando un aparato de análisis automático de coagulación sanguínea CP3000 (fabricado por Sekisui Medical Co., Ltd.). En el presente ejemplo, a 50 µl de una muestra descargada en una cubeta (recipiente de reacción) y calentada a 37 °C durante 45 segundos, se añadieron (descargaron) 50 µl de un reactivo TTPa calentado hasta aproximadamente 37 °C, y se añadieron adicionalmente 50 µl de una disolución de cloruro de calcio 25 mM a la misma después de un transcurso de 171 segundos para iniciar una reacción de coagulación. La reacción se realizó mientras la temperatura se mantenía a 37 °C. La detección (fotometría) de la reacción de coagulación se realizó emitiendo luz desde una luz LED con una longitud de onda de 660 nm como fuente de luz y detectando la cantidad de luz dispersa lateralmente a 90 grados a intervalos de 0,1 segundos. El tiempo de detección era de 360 segundos.

[0504] 4.1.2. Método para analizar los datos fotométricos

[0505] Usando los datos fotométricos cronológicos de la reacción de coagulación adquiridos tal como se describió anteriormente, se formó una curva de reacción de coagulación. Se analizó esta curva de reacción de coagulación. En primer lugar, se realizó un ajuste de la referencia para la curva de reacción de coagulación. Es decir, se realizó un proceso de suavizado que incluye la eliminación de ruido en la curva de reacción de coagulación, y se realizó un ajuste de manera que la cantidad de luz dispersa en un punto de tiempo de inicio de medición fuera cero. Posteriormente, se realizó la corrección de manera que una altura máxima de la curva de reacción de coagulación (curva de orden 0 no corregida) fuera 100 para obtener una curva de reacción de coagulación corregida (curva de orden 0 corregida). La curva de orden 0 corregida se sometió a una diferenciación de primer orden para obtener una curva de primer orden corregida. La pendiente promedio dentro de la sección según la fórmula (4) anterior se usó para calcular la curva de primer orden corregida.

[0506] Para la curva de primer orden corregida obtenida, se determinaron el valor diferencial máximo de primer orden Vmax y el tiempo VmaxT en el que el valor diferencial de primer orden era un valor máximo. Además, la anchura de pico vB descrita anteriormente se especificó basándose en la curva de primer orden corregida. Además, el tiempo del centro de gravedad vT y la altura del centro de gravedad vH se calcularon usando la curva de primer orden corregida y las fórmulas (5), (6) y (7) anteriores.

[0507] 4.2. Resultado de análisis y discusión

[0508] 4.2.1. Curva de orden 0 y curva de primer orden

[0509] La figura 17A ilustra un ejemplo de la curva de reacción de coagulación obtenida (curva de orden 0 no corregida). La línea continua indica una curva de orden 0 no corregida de un plasma normal, la línea discontinua indica una curva de orden 0 no corregida de un plasma que tiene una concentración de factor VIII del 0,1 % o menos, y la línea discontinua de trazos alternos largo y cortos indica una curva de orden 0 no corregida de un plasma que tiene una concentración de factor IX del 0,1 % o menos. La figura 17B ilustra curvas de orden 0 corregidas obtenidas corrigiendo las curvas de orden 0 no corregidas de los especímenes ilustrados en la figura 17A de manera que un valor máximo de la cantidad de cantidad de luz dispersa fuera 100.

[0510] En el plasma deficiente en factor VIII y el plasma deficiente en factor IX, cada factor de coagulación es deficiente y, por tanto, se observa una prolongación del tiempo de coagulación. Es decir, en cada uno de estos plasmas deficientes en factor de coagulación, el tiempo en el que la cantidad de luz dispersa comienza a aumentar y el tiempo en el que el aumento de la cantidad de luz dispersa finaliza son posteriores a los del caso del plasma normal. Además, la pendiente cuando aumenta la cantidad de luz dispersa es menor que en el caso del plasma normal.

[0511] La figura 18A ilustra curvas de primer orden no corregidas obtenidas diferenciando las curvas de orden 0 del plasma normal y los plasmas deficientes en factor de coagulación ilustrados en la figura 17A. La figura 18B ilustra curvas de primer orden corregidas obtenidas diferenciando las curvas de orden 0 corregidas del plasma normal y los plasmas deficientes en factor de coagulación ilustrados en la figura 17B.

[0512] En cada uno del plasma deficiente en factor VIII y el plasma deficiente en factor IX, el valor diferencial máximo de primer orden es menor y el tiempo en el que el valor diferencial de primer orden es un valor máximo es posterior a los del caso del plasma normal.

[0513] 4.2.2. Relación entre la concentración de factor de coagulación y el parámetro de evaluación

[0514] La figura 19A ilustra una relación del tiempo de coagulación con un logaritmo de una concentración de factor VIII. Obsérvese que cuando se realizó la conversión logarítmica para una concentración del 0,1 % o menos, el cálculo se realizó suponiendo que la concentración era del 0,1 %. Esto mismo se aplica a otros dibujos. En este dibujo, el triángulo (Δ) indica el tiempo (VmaxT) en el que el valor diferencial de primer orden es un valor máximo, y el círculo (∘) indica el tiempo del centro de gravedad vT. Para determinar el tiempo del centro de gravedad vT, el valor del área objetivo de cálculo S se estableció en el 10 %. La figura 19B ilustra una relación del tiempo de coagulación con un logaritmo de una concentración de factor IX. En este dibujo, el triángulo (Δ) indica el tiempo (VmaxT) en el que el valor diferencial de primer orden es un valor máximo, y el círculo (∘) indica el tiempo del centro de gravedad vT. Para determinar el tiempo del centro de gravedad vT, el valor del área objetivo de cálculo S se estableció en el 10 %.

[0515] La figura 19C ilustra una relación de un valor diferencial de primer orden con un logaritmo de una concentración de factor VIII. La figura 19D ilustra una relación de un valor diferencial de primer orden con un logaritmo de una concentración de factor IX. En estos dibujos, el triángulo (Δ) indica el valor máximo Vmax del valor diferencial de primer orden, y el círculo (∘) indica la altura del centro de gravedad vH. Para determinar la altura del centro de gravedad vH, el valor del área objetivo de cálculo S se estableció en el 60 %.

[0516] Tal como resulta evidente a partir de las figuras 19A y 19B, el tiempo del centro de gravedad vT presenta una alta correlación con la concentración de factor VIII y la concentración de factor IX. Tal como resulta evidente a partir de las figuras 19C y 19D, la altura del centro de gravedad vH también presenta una alta correlación con la concentración de factor VIII y la concentración de factor IX.

[0517] La descripción anterior indica que la concentración de factor VIII o la concentración de factor IX de un espécimen de un paciente puede calcularse determinando el tiempo del centro de gravedad vT o la altura del centro de gravedad vH de un espécimen de un paciente, y usando una curva de calibración que indica la relación determinada tal como se ilustra en las figuras 19A, 19B, 19C y 19D.

[0518] Tal como se describió anteriormente, dado que el punto del centro de gravedad se calcula a partir del cálculo relacionado con un promedio, una influencia de ruido aleatorio incluida en los datos de medición se reduce mediante el cálculo. Por tanto, este método que usa el punto del centro de gravedad no se ve afectado fácilmente por el ruido, y se espera que la concentración del factor de coagulación pueda adquirirse con alta precisión según este método. Además, los ejemplos ilustrados en las figuras 19A y 19B son los casos en los que el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 10 %, y los ejemplos ilustrados en las figuras 19C y 19D son los casos en los que el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 60 %. Sin embargo, el valor del área objetivo de cálculo S puede establecerse en diversos valores sin limitación a estos valores. Por tanto, pueden obtenerse diversos parámetros, y pueden obtenerse diversos tipos de información.

[0519] La figura 20A ilustra una relación de la anchura de pico vB con un logaritmo de una concentración de factor VIII. Para determinar la anchura de pico vB, el valor del área objetivo de cálculo S se estableció en el 10 %. La figura 20B ilustra una relación de la anchura de pico vB con un logaritmo de una concentración de factor IX. Para determinar la anchura de pico vB, el valor del área objetivo de cálculo S se estableció en el 10 %.

[0520] Tal como se ilustra en las figuras 20A y 20B, la anchura de pico vB presentó una alta correlación con la concentración de factor VIII y la concentración de factor IX. Por tanto, basándose en la curva de calibración determinada a partir de estos, la concentración de factor VIII y la concentración de factor IX contenidas en un espécimen de un paciente pueden calcularse midiendo la anchura de pico vB del espécimen del paciente. Se ha indicado que puede determinarse un estado de deficiencia de un factor de coagulación basándose en estas concentraciones calculadas.

[0521] 4.2.3. Relación entre el valor del área objetivo de cálculo y el punto del centro de gravedad

[0522] La figura 21A ilustra una curva de primer orden corregida del plasma normal. La figura 21B ilustra una curva de primer orden corregida del plasma deficiente en factor VIII (plasma deficiente en factor VIII). La figura 21C ilustra una curva de primer orden corregida del plasma deficiente en factor IX (plasma deficiente en factor IX). En cada uno de los dibujos, los círculos negros indican puntos del centro de gravedad cuando los valores del área objetivo de cálculo S se establecen en el 10 %, el 20 %, el 30 %, el 40 %, el 50 %, el 60 %, el 70 %, el 80 % y el 90 %, respectivamente, en orden de abajo hacia arriba.

[0523] La curva de primer orden corregida en la figura 21A tiene una forma monomodal con un pico. En este caso, el tiempo del centro de gravedad vT se acorta monótona y ligeramente a medida que aumenta el valor del área objetivo de cálculo S. En cambio, las curvas de primer orden corregidas en las figuras 21B y 21C tienen, cada una, una forma bimodal con dos picos. Por tanto, bajo la influencia del primer pico pequeño, el tiempo del centro de gravedad vT se acorta en una proporción relativamente grande hasta el centro a medida que aumenta el valor del área objetivo de cálculo S. Cuando el valor del área objetivo de cálculo S excede el valor máximo del primer pico pequeño, el tiempo del centro de gravedad vT se extiende en una proporción relativamente grande. De esta manera, por ejemplo, aquellos valores, contenidos de cambio, una razón y una diferencia obtenidos mediante la determinación de una pluralidad de puntos del centro de gravedad que tienen diferentes valores del área objetivo de cálculo S también pueden ser parámetros de evaluación.

[0524] Como en los ejemplos ilustrados en las figuras 21B y 21C, la curva de primer orden corregida puede tener dos valores máximos. El valor máximo relativamente amplio en el lado derecho, que se observa a aproximadamente 80 segundos en el ejemplo ilustrado en la figura 21B y a aproximadamente 60 segundos en el ejemplo ilustrado en la figura 21C, se denomina pico principal, y el valor máximo relativamente estrecho en el lado izquierdo, que se observa a aproximadamente 50 segundos en el ejemplo ilustrado en la figura 21B y a aproximadamente 50 segundos en el ejemplo ilustrado en la figura 21C, se denomina pico lateral. Se ha encontrado que cuando el valor del área objetivo de cálculo S es inferior al 10 %, una influencia de la forma del pico principal de la curva de primer orden corregida se refleja en gran medida en el resultado de análisis, y una influencia de la forma del pico lateral no se refleja tanto en el mismo. Además, se ha encontrado que cuando el valor del área objetivo de cálculo S es del 60 % al 70 %, aparece una influencia de la forma del pico lateral de la curva de primer orden corregida en el resultado de análisis.

[0525] Cómo establecer el valor del área objetivo de cálculo S tiene un significado importante. En la medición del plasma deficiente en factor VIII, se ha encontrado que cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece entre el 50 % y el 70 %, el pico lateral que aparece en la curva de primer orden corregida está estrechamente relacionado con la concentración de factor VIII. Por tanto, para analizar el plasma deficiente en factor VIII, es una configuración preferible establecer el valor del área objetivo de cálculo S entre el 50 % y el 70 %.

[0526] Mediante el análisis de los picos que aparecen en las curvas de primer orden de plasmas deficientes en diversos factores de coagulación, es posible estimar los efectos de diversos factores implicados en la coagulación.

[0527] La figura 22A ilustra una relación entre un valor establecido (del 10 % al 90 %) del valor del área objetivo de cálculo S y el tiempo del centro de gravedad vT. La figura 22B ilustra una diferencia entre el tiempo del centro de gravedad vT obtenido cuando el valor del área objetivo de cálculo S es del 10 % y el tiempo del centro de gravedad vT obtenido cuando un valor establecido del valor del área objetivo de cálculo S es, cada uno, del 20 % al 90 %. La figura 22C ilustra una relación entre el valor establecido (del 10 % al 90 %) del valor del área objetivo de cálculo S y la altura del centro de gravedad vH.

[0528] Tal como se ilustra en las figuras 22A y 22B, se ha revelado que el tiempo del centro de gravedad vT del plasma normal es significativamente diferente del tiempo del centro de gravedad vT de cada uno de los plasmas deficientes en factor de coagulación. Es decir, se ha revelado que, por ejemplo, comparando el tiempo del centro de gravedad vT del plasma normal con el tiempo del centro de gravedad vT de un espécimen del paciente, puede detectarse un estado de deficiencia de un factor de coagulación.

[0529] Además, tal como se ilustra en la figura 22B, se ha revelado que, en particular, en el plasma deficiente en factor VIII, el tiempo del centro de gravedad vT depende más del valor del área objetivo de cálculo S que en los otros plasmas. Es decir, se ha revelado que puede detectarse un estado de deficiencia de factor VIII examinando la dependencia del tiempo del centro de gravedad vT de un espécimen de un paciente del valor del área objetivo de cálculo S.

[0530] Tal como se ilustra en la figura 22C, se ha revelado que la altura del centro de gravedad vH del plasma normal es significativamente diferente de la altura del centro de gravedad vH de cada uno de los plasmas deficientes en factor de coagulación. Es decir, se ha revelado que, por ejemplo, comparando la altura del centro de gravedad vH del plasma normal con la altura del centro de gravedad vH de un espécimen de un paciente, puede detectarse un estado de deficiencia de un factor de coagulación.

[0531] Otro ejemplo que ilustra la utilidad de la altura del centro de gravedad vH se describirá con referencia a la figura 23. La columna a la izquierda de la figura 23 ilustra curvas de primer orden corregidas obtenidas para un plasma de prueba que contiene solo el plasma deficiente en factor VIII. La columna a la derecha de la figura 23 ilustra curvas de primer orden corregidas obtenidas para un plasma de prueba que tiene una concentración de factor VIII del 0,25 %. El valor diferencial máximo de primer orden Vmax se indica mediante un triángulo (Δ) en cada una de las curvas. La fila superior ilustra un caso en el que el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 70 %, la fila central ilustra un caso en el que el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 80 %, y la fila inferior ilustra un caso en el que el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 90 %, en el que un punto del centro de gravedad se indica mediante un círculo (∘). En las curvas de primer orden corregidas obtenidas en el caso en que solo está contenido el plasma deficiente en factor VIII, ilustrado en la columna a la izquierda, el valor diferencial máximo de primer orden Vmax se encuentra en el pico lateral estrecho en el lado izquierdo. Cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 70 % u el 80 %, el punto del centro de gravedad se encuentra en el pico principal ancho en el lado derecho. Mientras tanto, cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 90 %, el punto del centro de gravedad se encuentra en el pico lateral que indica el valor diferencial máximo de primer orden Vmax. En cambio, en las curvas de primer orden corregidas obtenidas en el caso del plasma de prueba que tiene una concentración de factor VIII del 0,25 %, ilustrada en la columna a la derecha, el valor diferencial máximo de primer orden Vmax se encuentra en el pico principal en el lado derecho. Cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en uno cualquiera del 70 %, el 80 % y el 90 %, el punto del centro de gravedad se encuentra en el pico principal ancho en el lado derecho, y está cerca del tiempo que indica el valor diferencial máximo de primer orden Vmax. Tal como se describió anteriormente, según el método de la presente realización, es posible identificar el factor VIII incluso en un plasma que tiene una concentración de factor VIII del 0,25 %.

[0532] 4.2.4. Respecto a la pendiente promedio dentro de la sección

[0533] La figura 24A ilustra un ejemplo de una curva de primer orden corregida del plasma deficiente en factor IX calculado usando la fórmula (2) anterior. La figura 24B ilustra un ejemplo de una curva de primer orden corregida del plasma deficiente en factor IX calculado usando la fórmula (4) anterior. Tal como resulta evidente a partir de una comparación entre las figuras 24A y 24B, el valor diferencial de primer orden puede comprenderse con más detalle en el ejemplo basado en la fórmula (4) anterior en la figura 24B. Por ejemplo, en la figura 24B, puede comprenderse en detalle la información con respecto al pico lateral alrededor del tiempo de 45 segundos. De esta manera, se ha revelado que puede obtenerse información más detallada mediante el análisis descrito anteriormente usando la curva de primer orden corregida basándose en la pendiente promedio dentro de la sección.

[0534] La curva de primer orden corregida basada en la pendiente promedio dentro de la sección puede calcularse a partir de una serie de piezas de datos de medición. El cálculo del valor de la pendiente promedio dentro de la sección es adecuado para el análisis en un aparato de análisis que usa un detector óptico para reducir un cambio en la cantidad fotométrica, por ejemplo, un aparato de análisis de coagulación sanguínea.

[0535] 5. Segundo ejemplo

[0536] 5.1. Método

[0537] 5.1.1. Método para medir la reacción de coagulación de un espécimen de sangre

[0538] Como plasma de prueba, se usó una mezcla de un plasma deficiente en factor VIII y un plasma normal. Para el plasma deficiente en factor VIII, se usó plasma deficiente en factor VIII (fabricado por George King Bio-Medical, Inc.). Para el plasma normal, se usó un plasma de combinación normal que podría considerarse que tiene una concentración de factor VIII y una concentración de factor IX del 100 %. Como plasmas de prueba, se usó una muestra obtenida mezclando el plasma deficiente en factor VIII (fabricado por George King Bio-Medical, Inc.) y el plasma normal y ajustando una concentración de factor VIII al 50 %, 25 %, 10 %, 5 %, 2,5 %, 1 %, 0,75 %, 0,5 % o 0,25 %, y un plasma deficiente en factor VIII (que tiene una concentración de factor VIII del 0,1 % o menos). De manera similar, también se preparó como plasma de prueba una muestra obtenida mezclando un plasma deficiente en otro factor de coagulación (que tiene una concentración del 0,1 % o menos) y el plasma normal, y ajustando cada concentración de factor al 50 %, 25 %, 10 %, 5 %, 2,5 %, 1 %, 0,75 %, 0,5 % o 0,25 %. Como el plasma deficiente en otro factor de coagulación, se usaron un plasma deficiente en factor V, un plasma deficiente en factor IX, un plasma deficiente en factor X, un plasma deficiente en factor XI, un plasma deficiente en factor XII y un plasma deficiente en precalicreína. Obsérvese que cuando se realizó la conversión logarítmica para el caso que contenía solo un plasma deficiente en un factor, el cálculo se realizó suponiendo que la concentración era del 0,1 %.

[0539] Para el plasma deficiente en factor V, se usó plasma deficiente en factor V (fabricado por George King Bio-Medical, Inc.). Para el plasma deficiente en factor IX, se usó plasma deficiente en factor IX (fabricado por George King Bio-Medical, Inc.). Para el plasma deficiente en factor X, se usó plasma deficiente en factor X (fabricado por George King Bio-Medical, Inc.). Para el plasma deficiente en factor XI, se usó plasma deficiente en factor XI (fabricado por George King Bio-Medical, Inc.). Para el plasma deficiente en factor XII, se usó plasma deficiente en factor XII (fabricado por George King Bio-Medical, Inc.). Para el plasma deficiente en precalicreína, se usó plasma deficiente en precalicreína (fabricado por George King Bio-Medical, Inc.). Obsérvese que la medición del factor V, factor XI y factor XII tiene la siguiente importancia clínica, y se espera que el factor V, factor XI y factor XII puedan medirse usando una técnica de análisis de forma de onda. La deficiencia congénita del factor V de la coagulación es una enfermedad hemorrágica causada por una deficiencia cuantitativa del factor V de la coagulación causada por una mutación o disfunción de un gen del factor V de la coagulación, y la medición del factor V de la coagulación es necesaria para el diagnóstico de la deficiencia congénita del factor V de la coagulación. Cuando se sospecha deficiencia del factor XI, se requiere la medición del factor XI de la coagulación. Además, la deficiencia congénita del factor XII que recientemente se ha informado que está asociada con aborto espontáneo recurrente se examina mediante la medición del factor XII de la coagulación.

[0540] Como reactivos de medición del TTPa, se usaron Coagpia APTT-N (fabricado por Sekisui Medical Co., Ltd.) y disolución de cloruro de calcio Coagpia APTT-N (fabricado por Sekisui Medical Co., Ltd.).

[0541] La medición del TTPa para cada uno de los plasmas de prueba anteriores se realizó usando un aparato de análisis automático de coagulación sanguínea CP3000 (fabricado por Sekisui Medical Co., Ltd.). El procedimiento para medir el TTPa con CP3000 fue el mismo que en el primer ejemplo.

[0542] 4.1.2. Método para analizar los datos fotométricos

[0543] El procedimiento para obtener la curva de primer orden corregida basada en los datos fotométricos fue el mismo que en el primer ejemplo.

[0544] Cuando una curva que indica el valor diferencial de primer orden obtenido V se expresa mediante V = F(t) y un valor máximo del valor diferencial de primer orden V se representa mediante Vmax, estableciendo el valor del área objetivo de cálculo S (%) y usando datos que satisfacen F(t) ≥ Vmax × S × 0,01, se calcularon el tiempo del centro de gravedad vT y la altura del centro de gravedad vH basándose en las fórmulas (5), (6) y (7) anteriores. Además, se calculó la anchura de pico vB. Usando estos parámetros, se calcularon la razón de aplanamiento vAB y la razón de tiempo vTB basándose en las fórmulas (8) y (9) anteriores.

[0545] 5.2. Resultado de análisis y discusión

[0546] 5.2.1. Respecto a la eficacia del proceso de corrección

[0547] Se examinó un efecto del proceso de corrección en la etapa S203. La medición del TTPa se realizó en plasmas de prueba que tenían diferentes concentraciones de factor VIII, y la razón de aplanamiento vAB80% cuando el valor del área objetivo de cálculo era del 80 % se calculó basándose en una curva de primer orden corregida obtenida a partir de una curva de orden 0 corregida. Obsérvese que la razón de aplanamiento vAB en este momento se calculó multiplicándose por una constante de 100, de manera que el valor fue de 1 o más. Además, basándose en una curva de primer orden no corregida obtenida a partir de una curva de orden 0 no corregida, se calculó la razón de aplanamiento RvAB80% cuando el valor del área objetivo de cálculo era del 80 %. La figura 25A ilustra una relación entre una concentración de factor VIII y vAB80% basada en la curva de primer orden corregida. La figura 25B ilustra una relación entre una concentración de factor VIII y RvAB80% basada en la curva de primer orden no corregida. En cada uno de los gráficos, el eje horizontal indica un logaritmo de una concentración de factor VIII. La curva de primer orden corregida ilustrada en la figura 25A fue ligeramente más compatible con una curva de regresión que la curva de primer orden no corregida ilustrada en la figura 25B.

[0548] Las figuras 25C y 25D ilustran ejemplos en los que la conversión logarítmica también se realizó en el eje vertical en las figuras 25A y 25B, respectivamente. Se ha encontrado que la curva de primer orden corregida ilustrada en la figura 25C tiene una pendiente mayor de una fórmula de regresión lineal y una ordenada en el origen más cercana a 0 que la curva de primer orden no corregida ilustrada en la figura 25D. Normalmente, en una curva de calibración lineal con una concentración como eje horizontal, la reproducibilidad es mejor cuando la pendiente es mayor, y la restricción de un área de concentración de medición es menor cuando la ordenada en el origen está más cerca de 0. A partir de estos resultados, si se considera que la concentración de factor VIII se calcula a partir de la curva de calibración basada en vAB80%, la pendiente es preferiblemente mayor, y la ordenada en el origen es preferiblemente más cercana a 0 tal como se ilustra en la figura 25C.

[0549] A partir de lo anterior, se ha revelado que el proceso de corrección es útil. Por tanto, en el análisis descrito a continuación, se usó una curva de primer orden corregida obtenida a partir de una curva de reacción de coagulación corregida. Además, en el siguiente resultado de análisis, los parámetros de evaluación se muestran con un gráfico log-log.

[0550] 5.2.2. Respecto a la curva de primer orden corregida

[0551] Como plasmas de prueba, se prepararon plasmas deficientes en factor VIII que tenían concentraciones de factor VIII del 50 %, 25 %, 10 %, 5 %, 2,5 %, 1 %, 0,75 %, 0,5 %, 0,25 % y 0 %, respectivamente (en lo sucesivo denominados FVIII (50 %), FVIII (25 %), FVIII (10 %), FVIII (5 %), FVIII (2,5 %), FVIII (1 %), FVIII (0,75 %), FVIII (0,5 %), FVIII (0,25 %) y FVIII (0 %)), y se realizó la medición del TTPa en los plasmas de prueba para obtener una curva de primer orden corregida, que se ilustra en la figura 26. Tal como se ilustra en la figura 26, la forma de la curva de primer orden corregida es la siguiente. A medida que la concentración de factor VIII disminuía, la altura de pico máxima disminuía y la forma de pico se aplanaba. Además, a medida que disminuía la concentración de factor VIII, aparecía un pico bimodal.

[0553] Se determinó un punto del centro de gravedad (vT, vH) estableciendo el valor del área objetivo de cálculo S en el 60 %. La figura 27 es un gráfico que ilustra una relación entre un valor de conversión logarítmica de una concentración de factor VIII (%) y un valor de conversión logarítmica de la altura del centro de gravedad vH60%. Se ha revelado que existe una buena relación lineal entre un valor de conversión logarítmica de una concentración de factor VIII (%) y un valor de conversión logarítmica de la altura del centro de gravedad vH60%. A partir de esto, se ha revelado que puede calcularse la concentración de factor VIII, es decir, puede determinarse un nivel de deficiencia de factor VIII mediante el uso de un parámetro de evaluación relacionado con un punto del centro de gravedad tal como la altura del centro de gravedad vH.

[0555] 5.2.3. Respecto a la razón de tiempo vTB

[0557] Se analizó la razón de tiempo vTB para plasmas deficientes en diversos factores de coagulación. Como parámetros de evaluación obtenidos cuando el valor del área objetivo de cálculo se establece en x%, el tiempo del centro de gravedad vT de un punto del centro de gravedad se representa mediante vTx%, la anchura de pico vB se representa mediante vBx%, y la razón de tiempo vTB se representa mediante vTBx%. La razón de tiempo vTB se representa mediante vTBx% = (vTx%/vBx%) × 100.

[0559] Con respecto a plasmas deficientes en diversos factores, para los casos en los que las concentraciones de diversos factores son del 0 %, el 0,25 %, el 0,5 %, el 0,75 %, el 1 %, el 2,5 %, el 5 %, el 10 %, el 25 % y el 50 %, cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 5 %, el 10 %, el 20 %, el 30 %, el 40 %, el 50 %, el 60 %, el 70 %, el 80 %, el 90 % y el 95 %, se ilustra una relación entre las concentraciones de los diversos factores deficientes y la razón de tiempo vTB en las figuras 28A, 28B, 28C, 28D, 28E, 28F, 28G, 28H, 28I, 28J y la figura 28K, respectivamente. En cada uno de los dibujos, el eje horizontal indica un logaritmo de la concentración (%) de un factor de coagulación. En cada uno de los dibujos, el eje vertical indica un logaritmo de razón de tiempo vTB. En cada uno de los dibujos, se ilustran datos relacionados con un plasma deficiente en factor V (FV), un plasma deficiente en factor VIII (FVIII), un plasma deficiente en factor IX (FIX), un plasma deficiente en factor X (FX), un plasma deficiente en factor XI (FXI), un plasma deficiente en factor XII (FXII) y un plasma deficiente en precalicreína (PK). Obsérvese que en la medición del TTPa en la que la concentración de factor XII del plasma deficiente en factor XII fue del 0 % y el 0,25 %, no se representaron gráficamente los datos de la misma porque la reacción de coagulación no finalizó dentro del tiempo de medición.

[0561] La figura 29 ilustra, para cada concentración de factor VIII, un valor de razón de tiempo vTBx% cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en cada valor. La figura 30 ilustra, para cada concentración de factor VIII, el orden de un valor de cada razón de tiempo vTBx% cuando se cuenta desde la más baja entre las razones de tiempo vTBx% para todos los plasmas deficientes en factor de coagulación ilustrados en un dibujo correspondiente de las figuras 28A a 28K. Por ejemplo, en el resultado ilustrado en la figura 28A, cuando las razones de tiempo vTB están dispuestas en orden ascendente, FVIII (0 %), FVIII (0,25 %), FVIII (0,5 %), FVIII (0,75 %), FVIII (1 %), FVIII (2,5 %), FIX (0 %), FVIII (5 %), FXI (0 %), FXI (0,25 %), FVIII (10 %),..., y por tanto los órdenes de FVIII (0 %), FVIII ( 0,25 %), FVIII (0,5 %), FVIII (0,75 %), FVIII (1 %), FVIII (2,5 %), FVIII (5 %), y FVIII (10 %), son 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8 y 11, respectivamente. La figura 31 ilustra, para el plasma deficiente en factor VIII, un coeficiente de correlación entre log (vTB) y log (concentración de factor VIII), y una pendiente y una ordenada en el origen de una fórmula de regresión lineal, obtenida basándose en las figuras 28A a 28K y la figura 29. La figura 32 ilustra un gráfico que indica los coeficientes de correlación ilustrados en la figura 31.

[0563] Basándose en las figuras 28A y 30, puede decirse lo siguiente. Por ejemplo, cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 5 %, log (vTB5%) ≤ 0 se satisface solo cuando el factor VIII es deficiente, y solo cuando la concentración de factor VIII es del 2,5 % o menos. Es decir, a una concentración de factor VIII del 2,5 % o menos, los datos del plasma deficiente en factor VIII pueden distinguirse de los datos de un plasma deficiente en otro factor de coagulación. Es decir, puede identificarse que una causa de la prolongación del tiempo de coagulación es la deficiencia de factor VIII. Hay algunos puntos poco claros aparte de los factores examinados en este caso, pero puede observarse que entre los diversos factores examinados en este caso, puede identificarse al menos la deficiencia de factor VIII. Incluso si no pueden identificarse otros factores mediante este método, este método es eficaz porque pueden identificarse otros factores mediante otro método.

[0565] Cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece entre el 5 % y el 30 %, de manera similar, a una concentración de factor VIII del 2,5 % o menos, los datos del plasma deficiente en factor VIII pueden distinguirse de los datos de un plasma deficiente en otro factor de coagulación. Es decir, puede identificarse que una causa de la prolongación del tiempo de coagulación es la deficiencia de factor VIII. Esto corresponde al hecho de que en las figuras 28A a 28D, la razón de tiempo vTB obtenida para el plasma deficiente en factor VIII es claramente menor que la razón de tiempo vTB obtenida para un plasma deficiente en otro factor de coagulación. Tal como se ilustra en la figura 31, cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece entre el 5 % y el 30 %, se obtiene un alto coeficiente de correlación. Por tanto, puede observarse que la concentración de factor VIII puede calcularse usando una línea de regresión obtenida mediante un método de mínimos cuadrados como curva de calibración. Cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece entre el 40 % y el 70 %, a una concentración de factor VIII del 1 % o menos, los datos del plasma deficiente en factor VIII pueden distinguirse de los datos de un plasma deficiente en otro factor de coagulación. Es decir, puede identificarse que una causa de la prolongación del tiempo de coagulación es la deficiencia de factor VIII. Esto corresponde al hecho de que en las figuras 28E a 28H, a una concentración de factor VIII del 1 % o menos, la razón de tiempo vTB obtenida para el plasma deficiente en factor VIII es menor que la razón de tiempo vTB obtenida para un plasma deficiente en otro factor de coagulación. Tal como se ilustra en la figura 31, cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece entre el 40 % y el 70 %, se obtiene un alto coeficiente de correlación. Por tanto, puede observarse que la concentración de factor VIII puede calcularse usando una línea de regresión obtenida mediante un método de mínimos cuadrados como curva de calibración. Obsérvese que tal como se ilustra en las figuras 31 y 32, se obtuvo un coeficiente de correlación máximo cuando el valor del área objetivo de cálculo S fue del 70 %.

[0566] Cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 80 %, a una concentración de factor VIII del 10 % o menos, los datos del plasma deficiente en factor VIII pueden distinguirse de los datos de un plasma deficiente en otro factor de coagulación. Es decir, puede identificarse que una causa de la prolongación del tiempo de coagulación es la deficiencia de factor VIII. Sin embargo, tal como se ilustra en la figura 31, el coeficiente de correlación es relativamente bajo, lo que no es adecuado para calcular la concentración de factor VIII.

[0567] Obsérvese que cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 90 % o más, los datos del plasma deficiente en factor VIII no pueden distinguirse de los datos de un plasma deficiente en otro factor de coagulación. Es decir, no puede identificarse una causa de la prolongación del tiempo de coagulación.

[0568] A partir de lo anterior, se ha revelado que al establecer el valor del área objetivo de cálculo S en el 80 % o menos y determinar la razón de tiempo vTB, es posible identificar si el TTPa se extiende o no en una concentración de factor VIII baja. Además, se ha revelado que la concentración de factor VIII puede calcularse basándose en la razón de tiempo vTB obtenida estableciendo el valor del área objetivo de cálculo S en el 70 % o menos. En particular, se ha revelado que al establecer el valor del área objetivo de cálculo S en el 80 % y realizar un análisis, es posible identificar si una causa de la extensión del TTPa es o no deficiencia de factor VIII incluso a una concentración de factor VIII del 10 % o menos, que es relativamente alta. Además, se ha encontrado que al establecer el valor del área objetivo de cálculo S al 70 % y realizar un análisis, puede calcularse la concentración de factor VIII con alta precisión.

[0569] Además, en referencia a las figuras 28A a 28K, se observa una dependencia de la razón de tiempo vTB en la concentración para el factor IX. Por tanto, se ha encontrado que cuando la deficiencia de factor IX puede identificarse mediante algún método, la concentración de factor IX también puede calcularse basándose en la razón de tiempo vTB.

[0570] 5.2.4. Respecto a la razón de aplanamiento vAB

[0571] Se analizó la razón de aplanamiento vAB para plasmas deficientes en diversos factores de coagulación. Como parámetros de evaluación obtenidos cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en x%, la altura del centro de gravedad vH del punto del centro de gravedad W se representa mediante vHx%, la anchura de pico vB se representa mediante vBx% y la razón de aplanamiento vAB se representa mediante vABx%. La razón de aplanamiento vAB se representa mediante vABx% = vHx%/vBx%, multiplicado por una constante de 100.

[0572] Con respecto al plasma deficiente en factor VIII, para los casos en que las concentraciones de factor VIII son el 0 %, el 0,25 %, el 0,5 %, el 0,75 %, el 1 %, el 2,5 %, el 5 %, el 10 %, el 25 % y el 50 %, cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 5 %, el 10 %, el 20 %, el 30 %, el 40 %, el 50 %, el 60 %, el 70 %, el 80 %, el 90 % y el 95 %, se ilustra una relación entre las diversas concentraciones del factor deficiente y la altura del centro de gravedad vH en la figura 33. La figura 33 también ilustra el valor diferencial máximo de primer orden Vmax de cada concentración de factor VIII. La figura 34 ilustra una relación entre las diversas concentraciones del factor deficiente y la anchura de pico vB cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en las mismas condiciones. La figura 35A ilustra la razón de aplanamiento vAB obtenida en función de la altura del centro de gravedad vH y la anchura de pico vB. La figura 35B ilustra un logaritmo de la razón de aplanamiento vAB.

[0573] Las relaciones entre las concentraciones de diversos factores deficientes y la razón de aplanamiento vAB cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en las mismas condiciones se ilustran en las figuras 36A, 36B, 36C, 36D, 36E, 36F, 36G, 36H, 36I, 36J y 36K, respectivamente. En cada uno de los dibujos, el eje horizontal indica un logaritmo de la concentración (%) de un factor de coagulación, y el eje vertical indica un logaritmo de la razón de aplanamiento vAB. En cada uno de los dibujos, se ilustran datos relacionados con un plasma deficiente en factor V (FV), un plasma deficiente en factor VIII (FVIII), un plasma deficiente en factor IX (FIX), un plasma deficiente en factor X (FX), un plasma deficiente en factor XI (FXI), un plasma deficiente en factor XII (FXII) y un plasma deficiente en precalicreína (PK). Obsérvese que en la medición del TTPa en la que la concentración de factor XII del plasma deficiente en factor XII fue del 0 % y el 0,25 %, no se representaron gráficamente los datos de la misma porque la reacción de coagulación no finalizó dentro del tiempo de medición.

[0574] El valor diferencial máximo de primer orden Vmax se ilustra en la figura 37A de manera similar. Obsérvese que Vmax corresponde a la altura del centro de gravedad vH100% cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 100 %. Además, con respecto a una curva de segundo orden corregida obtenida sometiendo una curva de primer orden corregida a diferenciación de primer orden, la altura del centro de gravedad pH90% de un pico positivo obtenido cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 90 % se ilustra en la figura 37B de manera similar.

[0575] La figura 38 ilustra, para cada concentración de factor VIII, un valor de la razón de aplanamiento vABx% y valor diferencial máximo de primer orden Vmax (vH100 %) cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en cada valor. La figura 39 ilustra, para el plasma deficiente en factor VIII, los valores relacionados con la correlación entre log (concentración de factor VIII) y log (vAB) y la correlación entre log (concentración de factor VIII) y log (Vmax), obtenidos basándose en las figuras 36A a 36K y la figura 38.

[0576] Tal como se ilustra en la figura 39, en particular, cuando el valor del área objetivo de cálculo S se estableció en el 80 % o menos, se obtuvo un alto coeficiente de correlación entre log (concentración de factor VIII) y log (vAB). Es decir, se ha revelado que la concentración de factor VIII puede cuantificarse usando la razón de aplanamiento vAB. Además, se ha revelado que la curva de calibración que usa la razón de aplanamiento vAB tiene una pendiente mayor que la curva de calibración que usa el valor diferencial máximo de primer orden Vmax ilustrado en la figura 37A y es altamente cuantitativa. Se ha revelado que la curva de calibración que usa la razón de aplanamiento vAB tiene una pendiente mayor que la altura del centro de gravedad pH90% del pico positivo de la curva de segundo orden corregida ilustrada en la figura 37B y es altamente cuantitativa.

[0577] La figura 40 ilustra una razón (razón de recuperación) entre una concentración de factor VIII y una concentración calculada determinada a partir de la curva de calibración que usa los valores ilustrados en la figura 39. En este dibujo, los valores sombreados indican valores cuyas concentraciones calculadas están dentro del ± 10 % de la concentración de factor VIII. Haciendo referencia a la figura 40, la razón de recuperación del valor diferencial máximo de primer orden Vmax se deteriora a una concentración de factor VIII del 0,25 % o menos. En cambio, vAB80% tiene una buena razón de recuperación a una concentración de factor VIII del 0,25 % o menos, sin embargo, disminuye la razón de recuperación a una concentración de factor VIII del 0,5 %, el 2,5 % y el 50 % cuando la concentración de factor VIII es del 0,5 % o más. Mientras tanto, vAB70% tiene una buena razón de recuperación a una concentración de factor VIII del 0,5 % o más, excluyendo el 0,75 %. Es decir, mediante el uso de vAB70% y vAB80%, la concentración de factor VIII puede cuantificarse con una alta razón de recuperación dentro de un intervalo en el que la concentración de factor VIII es del 0 % al 50 %.

[0578] Tal como se describió anteriormente, se ha revelado que para la razón de aplanamiento vAB, puede seleccionarse una curva de calibración apropiada para cada área de concentración cambiando el valor del área objetivo de cálculo S. Mediante la selección de una curva de calibración apropiada, puede determinarse la concentración de factor VIII con precisión.

[0579] Obsérvese que un intervalo de distribución de la razón de aplanamiento vAB para el plasma deficiente en factor VIII no pudo distinguirse de un intervalo de distribución de la razón de aplanamiento vAB para un plasma deficiente en otro factor. Es decir, se ha revelado que es difícil identificar que una causa de la prolongación del tiempo de coagulación es la deficiencia de factor VIII basándose en la razón de aplanamiento vAB.

[0580] Además, en referencia a las figuras 36A a 36K, se observa una dependencia de la razón de aplanamiento vAB en la concentración para muchos factores de coagulación. Por tanto, se ha encontrado que las concentraciones de estos factores de coagulación también pueden calcularse basándose en la razón de aplanamiento vAB. En particular, para el factor V y el factor X, la razón de aplanamiento vAB presentó una buena correlación con las concentraciones de factor independientemente del valor del área objetivo de cálculo S. Para el factor IX, la razón de aplanamiento vAB presentó una buena correlación con la concentración de factor cuando el valor del área objetivo de cálculo S se estableció en un valor distinto del 95 %. Para el factor XI, la razón de aplanamiento vAB mostró una buena correlación con la concentración de factor cuando el valor del área objetivo de cálculo x se estableció en un valor del 50 % o más y el 80 % o menos.

[0581] Haciendo referencia a la figura 37B, la altura del punto del centro de gravedad pH (después de la conversión logarítmica) de la curva de segundo orden corregida con respecto a la concentración de factor de coagulación (después de la conversión logarítmica) presentó una correlación muy alta en todas las concentraciones en el caso del factor VIII, y se observó una buena correlación en el orden del factor V, factor X, factor IX y factor XI también en los casos de otros factores. Por tanto, se ha revelado que las concentraciones de estos factores también pueden calcularse usando la altura del punto del centro de gravedad pH de la curva de segundo orden corregida.

[0582] 6. Tercer ejemplo

[0583] 6.1. Método

[0584] 6.1.1. Método para medir la reacción de coagulación de un espécimen de sangre

[0585] Como plasma de prueba, se preparó un plasma mixto de un plasma deficiente en factor de coagulación y un plasma normal de una manera similar al segundo ejemplo. Como plasma deficiente en factor de coagulación, se usaron el plasma deficiente en factor V (V), el plasma deficiente en factor VIII (VIII), el plasma deficiente en factor IX (IX), el plasma deficiente en factor X (X), el plasma deficiente en factor XI (XI) y el plasma deficiente en factor XII (XII) usados en el segundo ejemplo. Se usó un plasma normal (PNP) para la comparación. Cuando se realizó la conversión logarítmica en una concentración de factor de coagulación en un plasma de prueba (que tenía una concentración del 0 %) que contenía solo el plasma deficiente en factor de coagulación, el cálculo se realizó suponiendo que la concentración era del 0,1 %. La medición del TTPa de cada plasma de prueba se realizó en el mismo procedimiento que en el primer ejemplo.

[0586] 6.1.2. Método para analizar los datos fotométricos

[0587] Se obtuvieron una curva de orden 0 no corregida y una curva de orden 0 corregida a partir de datos fotométricos en el mismo procedimiento que en el primer ejemplo. Al determinar la pendiente promedio dentro de la sección según la fórmula (4) anterior en un procedimiento similar al primer ejemplo a partir de la curva de orden 0 no corregida y la curva de orden 0 corregida obtenidas, se calcularon una curva de primer orden no corregida y una curva de primer orden corregida, respectivamente. El mismo cálculo se repitió adicionalmente para las curvas de primer orden obtenidas para calcular una curva de segundo orden no corregida y una curva de segundo orden corregida, respectivamente. Los parámetros se calcularon a partir de la curva de orden 0 corregida, la curva de primer orden corregida y la curva de segundo orden corregida.

[0588] 6.2. Resultado de análisis y discusión

[0589] 6.2.1. Cambio en la forma de la curva dependiendo del factor de coagulación

[0590] La figura 41A ilustra ejemplos de una curva de orden 0 no corregida y una curva de primer orden no corregida obtenidas mediante el uso de la deficiencia de factor de coagulación (en el ejemplo, se suponía que la concentración de factor era del 0,1 %) como plasma de prueba. La figura 41B ilustra ejemplos de una curva de orden 0 corregida y una curva de primer orden corregida obtenidas a partir del mismo plasma de prueba. La figura 42A ilustra un ejemplo de una curva de segundo orden no corregida obtenida a partir del mismo plasma de prueba. El dibujo a la derecha en la figura 42A es un diagrama en el que se cambia la escala en la dirección del eje y del dibujo a la izquierda en la figura 42A. La figura 42B ilustra un ejemplo de una curva de segundo orden corregida obtenida a partir del mismo plasma de prueba. El dibujo a la derecha en la figura 42B es un diagrama en el que se cambia la escala en la dirección del eje y del dibujo a la izquierda en la figura 42B. Tal como puede observarse a partir de las figuras 41 y 42, el tiempo de coagulación y la altura y el tiempo del pico máximo en cada una de la curva de primer orden y la curva de segundo orden diferían dependiendo del tipo de factor de coagulación deficiente.

[0591] 6.2.2. Relación entre la concentración de factor de coagulación y el parámetro de evaluación

[0592] La tabla 2 ilustra parámetros calculados a partir de curvas de orden 0 a segundo corregidas. El valor del área objetivo de cálculo x se estableció entre el 0 % y el 99 % cuando el valor máximo del pico (Vmax, Amax, Amin) se estableció en el 100 %. Obsérvese que TTPa representa T50 (tiempo necesario para que la curva de orden 0 alcance el 50 % de la altura máxima). En las figuras 43A a 43V, el dibujo superior ilustra una relación entre un logaritmo de cada una de las diversas concentraciones de factor de coagulación y un logaritmo de un valor de parámetro. Se creó una curva de calibración a partir de esta relación. Se calculó una concentración calculada a partir de un valor de parámetro basado en la curva de calibración. En el dibujo central a la izquierda, se representaron gráficamente las correlaciones de diversos factores de coagulación de manera que el eje x indica una concentración medida, y el eje y indica una concentración calculada. En el dibujo central a la derecha, el gráfico se realizó con ambos ejes en visualización logarítmica de modo que pudo confirmarse una correlación a una concentración baja. Las fórmulas descritas a continuación en las figuras centrales son una fórmula de regresión lineal de una concentración calculada y un coeficiente de correlación para cada concentración de factor de coagulación.

[0593] Tabla 2

[0596]

[0597]

[0600] Para el factor VIII, el factor IX, el factor V, el factor X, el factor XI y el factor XII, un parámetro en el que una fórmula de regresión lineal de una concentración calculada (eje y) con respecto a una concentración de factor de coagulación (eje x) tiene una pendiente de 1 ± 0,1 y una ordenada en el origen de ± 1 y un coeficiente de correlación (R) es de 0,9 o más se indica mediante "+" en las tablas 3 a 8. La tabla 9 ilustra el número de valores S para los que se obtuvo una fórmula de regresión lineal con una condición "+" para cada factor de coagulación para cada parámetro. El parámetro para el que se obtuvo la fórmula de regresión lineal de la condición "+" puede usarse para medir la concentración de un factor de coagulación o determinar la deficiencia.

[0601] Tabla 9

[0603]

[0605] 7. Cuarto ejemplo

[0606] La realización de la presente invención descrita en el presente ejemplo es un método para determinar una causa de la extensión del TTPa usando los parámetros descritos anteriormente relacionados con la curva de orden 0 a la curva de segundo orden cuando el plasma de prueba presenta una coagulación anormal (extensión del TTPa), o identificar el tipo de un inhibidor del factor de coagulación (anticuerpo del factor anticoagulante) cuando la causa de la extensión del TTPa es el inhibidor del factor de coagulación.

[0607] En la presente realización, se usa un plasma mixto de un plasma de prueba que tiene coagulación anormal y un plasma normal. En la preparación del plasma mixto, se mezclan el plasma de prueba y el plasma normal preparado por separado a una razón predeterminada. Una razón de mezcla entre el plasma de prueba y el plasma normal es una razón de volumen en la que la cantidad total se define como 10 volúmenes, y solo necesita estar dentro de un

[0610] 55

[0611] intervalo de plasma de prueba:plasma normal = de 1:9 a 9:1, preferiblemente dentro de un intervalo de 4:6 a 6:4, y más preferiblemente 5:5.

[0612] Se calienta una parte del plasma mixto preparado. La temperatura de calentamiento solo necesita ser, por ejemplo, de 30 °C o superior y de 40 °C o inferior, y es preferiblemente de 35 °C o superior y de 39 °C o inferior, y más preferiblemente de 37 °C. El tiempo de calentamiento solo necesita estar, por ejemplo, dentro de un intervalo de desde 2 hasta 30 minutos, y es preferiblemente desde 5 hasta 30 minutos. El tiempo de calentamiento puede ser mayor, sin embargo, preferiblemente se encuentra dentro de una hora y como máximo dos horas.

[0613] En la presente realización, la medición del TTPa se realiza en el plasma calentado y el plasma no calentado, y se adquieren datos fotométricos. Por tanto, en la presente realización, una parte del plasma mixto preparado puede someterse a medición del TTPa después del tratamiento térmico anterior, y otra parte del plasma mixto preparado puede someterse a medición del TTPa sin tratamiento térmico.

[0614] A partir de los datos fotométricos obtenidos, pueden obtenerse curvas de orden 0 no a curvas de segundo orden corregidas y corregidas para el plasma calentado y el plasma no calentado. El proceso de corrección de datos y la diferenciación pueden realizarse en un procedimiento similar al primer ejemplo. Los parámetros ilustrados en la tabla 1 pueden calcularse a partir de las curvas de orden 0 a curvas de segundo orden no corregidas y corregidas para cada uno de los plasma calentado y plasma no calentado obtenidos. En el presente ejemplo, un parámetro adquirido del plasma no calentado se denomina primer parámetro, y un parámetro adquirido del plasma calentado se denomina segundo parámetro. Basándose en una razón o una diferencia entre el primer y segundo parámetros, o una combinación de los mismos, puede identificarse una causa de la extensión del TTPa, o cuando la causa de la extensión del TTPa es un inhibidor del factor de coagulación, puede identificarse el tipo del inhibidor del factor de coagulación.

[0615] 7.1. Método

[0616] 7.1.1. Plasma de prueba

[0617] El plasma de prueba usado en el presente ejemplo se describe a continuación. Como plasma normal (NP), se usó un plasma con ácido cítrico añadido obtenido de una persona sana. Para un plasma de AL (AL), se usó Positive Lupus Anticoagulant Plasma fabricado por George King Biomedical, Inc. Para un plasma deficiente en factor VIII (HA) y un plasma deficiente en factor IX (HB), se usaron Factor VIII Deficient y Factor IX Deficient fabricados por George King Biomedical. Para un plasma inhibidor del factor VIII (InL, InM e InH), se usó Factor VIII Deficient with Inhibitor fabricado por George King Biomedical, Inc.

[0618] N.º de grupo Tipo de espécimen Número de especímenes 1 Plasma normal (NP) 23

[0619] 2 Plasma de AL (AL) 6

[0620] 3 Hemofilia A (HA) 14

[0621] 4 Hemofilia B (HB) 12

[0622] 5 Plasma de título bajo de inhibidor del factor VIII (InL) 12

[0623] 6 Plasma de título medio de inhibidor del factor VIII (InM) 35

[0624] 7 Plasma de título alto de inhibidor del factor VIII (InH) 8

[0626] Obsérvese que "bajo", "medio" y "alto" del título de inhibidor significa lo siguiente:

[0627] Medio: 2 a 40 (BU/ml) (BU/ml: unidad Bethesda)

[0628] Bajo: Título menor que el medio

[0629] Alto: Título mayor que el medio

[0630] 7.1.2. Preparación de plasma mixto

[0631] Se preparó un plasma mixto mezclando cada plasma de prueba y el plasma normal (mezcla de NP) en una razón de volumen de 1:1.

[0632] 7.1.3. Medición del TTPa

[0633] Como reactivos de medición del TTPa, se usó Coagpia APTT-N (fabricado por Sekisui Medical Co., Ltd.), y como disolución de cloruro de calcio, se usó disolución de cloruro de calcio Coagpia APTT-N (fabricado por Sekisui

[0636] 56

[0637] Medical Co., Ltd.). Para la medición del TTPa, se usó un aparato de análisis automático de coagulación sanguínea CP3000 (fabricado por Sekisui Medical Co., Ltd.). Se descargaron 50 µL del plasma mixto en una cubeta (recipiente de reacción) del dispositivo y se trató en un modo normal (sin calentamiento) o un modo de calentamiento según el siguiente procedimiento:

[0638] (Modo normal) Calentamiento a 37 °C durante 45 segundos

[0639] (Modo de calentamiento) Calentamiento a 37 °C durante 600 a 720 segundos

[0640] A continuación, se añadieron 50 µl de reactivo TTPa calentado a aproximadamente 37 °C a la cubeta, y se añadieron 50 µl de disolución de cloruro de calcio 25 mM después de un transcurso de 171 segundos para iniciar una reacción de coagulación. Se realizó la reacción de coagulación manteniendo la cubeta a aproximadamente 37 °C. Se realizó la detección de la reacción de coagulación emitiendo luz desde un LED con una longitud de onda de 660 nm como fuente de luz y midiendo la cantidad de luz dispersa lateralmente a 90 grados a intervalos de 0,1 segundos. El tiempo fotométrico fue de 360 segundos. Para el mismo plasma mixto, se realizó la medición del TTPa en condiciones de no calentamiento (modo normal) y calentamiento (modo de calentamiento), respectivamente, y se obtuvieron datos fotométricos.

[0641] 7.1.4. Análisis de datos fotométricos

[0642] Para los datos fotométricos obtenidos para cada uno del plasma no calentado y el plasma calentado, se obtuvieron curvas de orden 0 a segundo corregidas en un procedimiento similar al primer ejemplo. Se calcularon los parámetros ilustrados en la tabla 1 a partir de las curvas obtenidas. Se determinó una razón de parámetros Pb/Pa representando un parámetro para el plasma no calentado por Pa y representando el mismo parámetro para el plasma calentado por Pb.

[0643] 7.2. Resultado de análisis y discusión

[0644] La figura 44A ilustra curvas de primer orden corregidas del plasma de AL (AL) con y sin calentamiento. En AL, casi no hubo cambios en la forma de la curva debido al calentamiento.

[0645] La figura 44B ilustra curvas diferenciales de primer orden corregidas del plasma inhibidor del factor VIII (IN) con y sin calentamiento. En IN, casi no hubo cambios en la forma de la curva debido al calentamiento como en AL. La figura 45A ilustra curvas diferenciales de primer orden corregidas de un plasma mixto 1:1 (AL-NP) del plasma de AL y el plasma normal con y sin calentamiento. Al mezclar el plasma de AL con el plasma normal, aparece un pico antes (se acorta el tiempo de coagulación) y la forma es más nítida que en la figura 45A. En AL-NP, casi no hubo cambios en la forma de la curva debido al calentamiento como en AL.

[0646] La figura 45B ilustra curvas diferenciales de primer orden corregidas de 1:1 (IN-NP) del plasma inhibidor del factor VIII (IN) y el plasma normal con y sin calentamiento. En el plasma mixto no calentado, al mezclar el plasma inhibidor del factor VIII con el plasma normal, aparece un pico antes y la forma es más nítida que en la figura 44B como en AL-NP. Mientras tanto, en el plasma mixto calentado, aparece un pico más tarde, la altura de pico es más baja y la anchura de pico es más ancha. Se ha determinado que este cambio de forma es causado por el hecho de que una reacción antígeno-anticuerpo del inhibidor (anticuerpo anti-factor VIII) contenido en IN con el factor VIII contenido en el plasma normal ocurrió durante el tratamiento térmico, y de ese modo se inhibió la reacción de coagulación del plasma mixto. Se ha confirmado que IN puede distinguirse de AL expresando el cambio de forma entre el plasma no calentado y el plasma calentado con un indicador como un cambio en el parámetro.

[0647] La tabla 10 ilustra diversos valores de parámetros obtenidos del plasma no calentado y el plasma calentado (calentado durante 10 minutos) y las razones (Pb/Pa) entre ellos. La Pb/Pa del plasma mixto (IN-NP) del plasma inhibidor del factor VIII se desvía en gran medida de 1, que es claramente diferente del plasma normal (NP), el plasma de AL (AL) y el plasma mixto de AL (AL-NP). Por tanto, se ha indicado que puede identificarse un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII basándose en Pb/Pa para diversos parámetros.

[0648] Tabla 10

[0650]

[0654] 57

[0655]

[0659]

[0661] Las figuras 46A a 46G ilustran, cada una, un parámetro Pa para diversos parámetros en una condición no calentada, un parámetro Pb para diversos parámetros en una condición calentada, una relación Pa/Pb entre los mismos y una diferencia Pb-Pa entre los mismos en un caso de uso de un plasma de una persona sana (NP) y un plasma mixto obtenido mezclando cada uno de un plasma de AL, un plasma de HA, un plasma de HB, un plasma de título bajo de inhibidor del factor VIII (InL), un plasma de título medio de inhibidor del factor VIII (InL) y un plasma de título alto de inhibidor del factor VIII (InH) con un plasma normal en una razón de volumen de 1:1. El plasma de título medio de inhibidor del factor VIII (InM) tendió a tener una Pa/Pb superior o inferior a 1. El plasma de título bajo de inhibidor del factor VIII (InL) tendió a tener una distribución similar a HA tanto para Pa/Pb como para Pb-Pa, sin embargo, tuvo una distribución más amplia que HA para algunos parámetros. Mientras tanto, el plasma de título alto de inhibidor del factor VIII (InH) tendía a tener una Pa/Pb superior o inferior a 1 en general, o tendía a tener una Pb-Pa que se desviaba de 0, sin embargo, tenía una Pa/Pb cerca de 1 para algunos parámetros (TTPa, vT). Sin embargo, para TTPa de InH, Pb-Pa no era 0 incluso cuando Pa/Pb fue aproximadamente 1, y se extendió durante al menos 5 segundos. Por tanto, se ha indicado que puede identificarse InH usando TTPa usando una razón y una diferencia entre Pa y Pb en combinación.

[0662] Más específicamente, el presente ejemplo indica los siguientes resultados para TTPa (segundos). Obsérvese que la "extensión" del TTPa significa que el TTPa es más largo que el de un plasma normal, y el "acortamiento" del TTPa significa que el TTPa es igual o cercano al del plasma normal.

[0663]  Un plasma mixto que contiene AL extiende tanto Pa como Pb, en el que Pb/Pa es de aproximadamente 1.  Un plasma mixto que contiene HA y un plasma mixto que contiene HB acortan tanto Pa como Pb, en el que Pb/Pa es de aproximadamente 1.

[0664]  Un plasma mixto que contiene InL acorta tanto Pa como Pb, en el que Pb/Pa es de aproximadamente 1.  Un plasma mixto que contiene InM extiende ligeramente Pa y extiende Pb más que Pa, en el que Pb/Pa es superior a 1.

[0665]  Un plasma mixto que contiene InH extiende Pa y extiende Pb en la misma medida que PA o más que Pa, en el que Pb/Pa es de aproximadamente 1 o superior a 1.

[0666] Se resumen los resultados anteriores en la tabla 11. Se indica que puede identificarse el plasma de prueba contenido en el plasma mixto de la siguiente manera basándose en TTPa con y sin calentamiento.

[0667] (1) Cuando están extendidos tanto Pa como Pb y Pb/Pa es de aproximadamente 1, el plasma de prueba es AL o InH.

[0668] (2) Cuando están acortados tanto Pa como Pb y Pb/Pa es de aproximadamente 1, el plasma de prueba es HAB (HA o HB) o InL.

[0669] (3) Cuando están extendidos tanto Pa como Pb y Pb/Pa es superior a 1, el plasma de prueba es InM o InH.

[0672] 58

[0673] Tabla 11

[0675]

[0677] Tal como puede observarse a partir de la figura 46B, Pb/Pa para Vmax es de aproximadamente 1 en AL, HA, HB, InL y algunos plasmas que contienen InH tal como Pb/Pa para TTPa, mientras que Pb/Pa para Vmax es inferior a 1 en InM y plasmas que contienen InH excluyendo dichos algunos plasmas que contienen InH. Cuando se inhibe la reacción de coagulación mediante un inhibidor, se extiende el TTPa y se reduce la velocidad de coagulación según un título de inhibidor y, como resultado, las razones de parámetros Pb/Pa del mismo se desvían de 1. Por tanto, en plasmas que contienen InM e InH, excluyendo algunos plasmas que contienen InH, Pb/Pa para TTPa es superior a 1, y Pb/Pa para Vmax es inferior a 1. Algunos plasmas que contienen InH corresponden a un espécimen de título alto (espécimen de título ultra alto) en un grupo de título alto. Tal como se ilustra en la figura 44B, Vmax cae hasta alrededor de 1 en una condición no calentada (Pa), y casi no cambia en una condición calentada (Pb). Por tanto, una razón de parámetros Pb/Pa es de alrededor de 1. Con el fin de identificar un espécimen de título ultra alto entre plasmas que contienen InH, como ejemplo, el espécimen de título ultra alto solo necesita definirse como un espécimen que tiene Vmax de 2 o menos en una condición no calentada (Pa).

[0678] Tal como se ilustra en las figuras 46C a 46G, Amax presentó una tendencia similar a Vmax, vB y vT presentaron una tendencia similar a TTPa, y vAB y vTB presentaron una tendencia similar a Vmax y Amax.

[0679] A partir de los resultados anteriores, se indica que puede identificarse un espécimen en el que una causa de la extensión del TTPa es un inhibidor del factor de coagulación basándose en una razón o una diferencia entre Pa y Pb para diversos parámetros, o una combinación de los mismos.

[0680] 8. Quinto ejemplo

[0681] 8.1. Método

[0682] 8.1.1. Espécimen de sangre

[0683] Los siguientes cinco tipos de muestras objetivo de medición se prepararon usando un espécimen de sangre derivado de un sujeto que tiene una anomalía en un factor de coagulación sanguínea y un espécimen de sangre normal (plasma normal).

[0684] (1) Plasma normal

[0685] Como plasma normal, se usó CRYOcheck Pooled Normal Plasma (Precision BioLogic Incorporated).

[0686] (2) Plasma positivo para AL

[0687] Como plasma positivo para AL, se usó Positive Lupus Anticoagulant Plasma (George King Biomedical, Inc.).(3) Plasma positivo para el inhibidor del factor VIII

[0688] Como plasma positivo para el inhibidor del factor VIII, se usó Factor VIII Deficient with Inhibitor (George King Biomedical, Inc.).

[0689] (4) Plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para AL y un plasma normal

[0690] Se preparó un plasma mixto mezclando "(2) plasma positivo para AL" y "(1) plasma normal" descritos anteriormente a una razón de volumen de 1:1.

[0691] (5) Plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal

[0694] 59

[0695] Se preparó un plasma mixto mezclando "(3) plasma positivo para el inhibidor del factor VIII" y "(1) plasma normal" descritos anteriormente a una razón en volumen de 1:1.

[0696] 8.1.2. Método para medir la reacción de coagulación de un espécimen de sangre

[0697] Para cada uno de los cinco tipos de muestras anteriores, se realizaron la medición del TTPa sin tratamiento térmico, la medición del TTPa después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos, la medición del TTPa después del tratamiento térmico a 37 °C durante 30 minutos y la medición del TTPa después del tratamiento térmico a 37 °C durante 120 minutos.

[0698] En el presente ejemplo, cada una de las mediciones de TTPa se realizó usando un aparato de análisis automático de coagulación sanguínea CP3000 (fabricado por Sekisui Medical Co., Ltd.). En el presente ejemplo, a 50 µl de una muestra descargada en una cubeta (recipiente de reacción) y calentada a 37 °C durante 45 segundos, se añadieron (descargaron) 50 µl de un reactivo TTPa calentado hasta aproximadamente 37 °C, y se añadieron (descargaron) adicionalmente 50 µl de una disolución de cloruro de calcio 25 mM a la misma después de un transcurso de 171 segundos para iniciar una reacción de coagulación. La reacción se realizó mientras la temperatura se mantenía a 37 °C. La detección (fotometría) de la reacción de coagulación se realizó emitiendo luz desde una luz LED con una longitud de onda de 660 nm como fuente de luz y detectando la cantidad de luz dispersa lateralmente a 90 grados a intervalos de 0,1 segundos. El tiempo de detección era de 360 segundos.

[0699] 8.1.3. Método para analizar los datos fotométricos

[0700] Se adquirió información óptica cronológica, es decir, datos fotométricos que indican el resultado de medición del TTPa sin tratamiento térmico, el resultado de medición del TTPa después del tratamiento térmico durante 10 minutos, el resultado de medición del TTPa después del tratamiento térmico durante 30 minutos y el resultado de medición del TTPa después del tratamiento térmico durante 120 minutos, realizado para cada uno de los cinco tipos de muestras anteriores, para obtener una curva de reacción de coagulación.

[0701] Se realizó un ajuste de la referencia en la curva de reacción de coagulación. Es decir, se realizó un proceso de suavizado que incluye la eliminación de ruido en la curva de reacción de coagulación, y se realizó un ajuste de manera que la cantidad de luz dispersa en un punto de tiempo de inicio de medición fuera cero. Posteriormente, se realizó la corrección de manera que la altura máxima de la curva de reacción de coagulación fuera 100 para obtener una curva de orden 0 corregida. La curva de orden 0 corregida se sometió a una diferenciación de primer orden para obtener una curva de primer orden corregida. La pendiente promedio dentro de la sección según la fórmula (4) anterior se usó para calcular la curva de primer orden corregida.

[0702] El tiempo de coagulación se calculó basándose en la curva de reacción de coagulación después del ajuste de la referencia.

[0703] Se calculan el valor máximo Vmax de la curva de primer orden corregida y el tiempo VmaxT en el que el valor diferencial de primer orden era un valor máximo. Se determinó una curva de segundo orden corregida y se calcularon el valor máximo Amax de la curva de segundo orden corregida y el tiempo AmaxT en el que el valor diferencial de segundo orden era un valor máximo.

[0704] Se calculó la anchura de pico vB10% cuando el valor del área objetivo de cálculo S se estableció en el 10 % basándose en la curva de primer orden corregida. Se calcularon el tiempo del centro de gravedad vT60% y la altura del centro de gravedad vH60% cuando el valor del área objetivo de cálculo S se estableció en el 60 %. Se calculó la razón de aplanamiento vAB10% cuando el valor del área objetivo de cálculo S se estableció en el 10 %. Se calculó la razón de tiempo vTB5% cuando el valor del área objetivo de cálculo S se estableció en el 5 %.

[0705] 8.2. Resultado de análisis y discusión

[0706] Las figuras 47A a 47E ilustran curvas de primer orden corregidas representativas de los cinco tipos de muestras descritos anteriormente, respectivamente. Las cuatro curvas M0, M10, M30 y M120 en cada uno de los dibujos indican una curva de primer orden corregida de un plasma mixto sin tratamiento térmico, una curva de primer orden corregida del plasma mixto después del tratamiento térmico durante 10 minutos, una curva de primer orden corregida del plasma mixto después del tratamiento térmico durante 30 minutos, y una curva de primer orden corregida del plasma mixto después del tratamiento térmico durante 120 minutos, respectivamente.

[0707] La figura 47A ilustra las curvas de primer orden corregidas de "(1) plasma normal". Cada una de estas curvas tiene una altura de pico más alta y una anchura de pico más estrecha que las de otras muestras. Cada una de estas curvas tiene una forma monomodal. En cuanto a la influencia de una diferencia en el tiempo de tratamiento térmico, casi no hay cambios en la forma de la curva entre las curvas M0, M10, M30 y M120.

[0708] La figura 47B ilustra las curvas de primer orden corregidas de "(2) plasma positivo para AL". Cada una de estas

[0711] 60

[0712] curvas tiene más extensión observada, una altura de pico más baja y una anchura de pico más ancha que las del plasma normal. Cada una de estas curvas tiene una forma de hombro en la que uno de los picos bimodales es un pico incompleto o una forma bimodal. En cuanto a la influencia de una diferencia en el tiempo de tratamiento térmico, hay un ligero cambio de forma de la curva entre las curvas M0, M10, M30 y M120, sin embargo, no hay un gran cambio particular.

[0714] La figura 47C ilustra las curvas de primer orden corregidas de "(3) plasma positivo para el inhibidor del factor VIII". Cada una de estas curvas tiene más extensión observada, una altura de pico más alta y una anchura de pico más ancha que las del plasma normal, y cada una tiene una forma bimodal significativa. Cada una de estas curvas tiene una altura de pico más baja y una anchura de pico más ancha que las del plasma positivo para AL. En cuanto a la influencia de una diferencia en el tiempo de tratamiento térmico, hay un pequeño cambio de forma, por ejemplo, en una parte superior entre las curvas M0, M10, M30 y M120, sin embargo, no hay un gran cambio particular.

[0715] La figura 47D ilustra las curvas de primer orden corregidas de "(4) plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para AL y un plasma normal". Cada una de estas curvas tiene una altura de pico más alta y una anchura de pico más estrecha que el "(2) plasma positivo para AL" ilustrado en la figura 47B. En cuanto a la influencia de una diferencia en el tiempo de tratamiento térmico, hay un ligero cambio de forma de la forma de onda entre las curvas M0, M10, M30 y M120, sin embargo, no hay un cambio grande particular.

[0717] La figura 47E ilustra las curvas de primer orden corregidas de "(5) plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal". En estas curvas, particularmente la curva de M0 sin tratamiento térmico tiene una altura de pico significativamente mayor y una anchura de pico más estrecha que las de "(3) plasma positivo para el inhibidor del factor VIII" ilustrado en la figura 47C. Mientras tanto, cada una de estas curvas tiene una altura de pico más baja y una anchura de pico más ancha, ya que el tiempo de tratamiento térmico es más largo. En particular, hay un gran cambio de forma entre las curvas M0 y M10. Por ejemplo, en la curva después del tratamiento térmico durante 10 minutos (M10), la altura de pico es igual a o menor que la mitad de la de la curva sin tratamiento térmico (M0), y aparece un pico bimodal. La curva después del tratamiento térmico durante 10 minutos (M10) se aplana y hay un gran cambio de forma. Pudo confirmarse un cambio de forma hasta el momento después del tratamiento térmico durante 30 minutos (M30), pero no se observó ningún cambio de forma a partir de entonces.

[0719] De esta manera, hay un gran cambio de forma entre las curvas M0 y M10. Por tanto, en "(5) plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal", se ha encontrado que puede identificarse el inhibidor del factor VIII positivo analizando la curva de primer orden corregida incluso después del tratamiento térmico durante 10 minutos, que es inferior a dos horas. Tal como se ilustra en la figura 47E, la forma de la curva sin tratamiento térmico (M0) es claramente diferente de la forma de la curva después del tratamiento térmico durante 10 minutos (M10). Puede haber diversos parámetros de evaluación que indiquen esta diferencia de forma. Para identificar el inhibidor del factor VIII positivo, es deseable encontrar y usar un parámetro de evaluación que sea eficaz como indicador para la identificación a partir de cada curva de primer orden corregida.

[0720] La figura 48 ilustra un ejemplo de una tabla que ilustra, para cada uno de los cinco tipos de muestras descritos anteriormente, diversos parámetros de evaluación obtenidos a partir de la medición del TTPa de un plasma mixto después del tratamiento térmico durante 10 minutos, diversos parámetros de evaluación obtenidos a partir de la medición del TTPa del plasma mixto sin tratamiento térmico, y resultados de cálculo de razones entre ambos de los diversos parámetros de evaluación.

[0722] Obsérvese que en la figura 48, “NP” representa “plasma normal”, “AL” representa “plasma positivo para AL”, “AL M” representa un plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para AL y un plasma normal ”, “IN ”representa “ plasma positivo para el inhibidor del factor VIII” e “IN M” representa “plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal ”. "10 min" representa "tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos", y "0 min" representa "sin tratamiento térmico".

[0724] Los diversos parámetros de evaluación ilustrados en la figura 48 son los siguientes. El tiempo de coagulación indica el tiempo transcurrido de reacción en el que la cantidad de luz dispersa de la curva de reacción de coagulación después del ajuste de la referencia alcanza el 50 %. Vmax indica un valor máximo de una curva de primer orden corregida. VmaxT indica el tiempo desde el inicio de la fotometría hasta alcanzar Vmax. Amax indica un valor máximo de una curva de segundo orden corregida. AmaxT indica el tiempo desde el inicio de la fotometría hasta alcanzar Amax. vB10% indica una anchura de pico cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 10 %. vAB10% indica una razón de aplanamiento cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 10 %, y un valor obtenido dividiendo la altura del centro de gravedad vH10 % cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 10 % entre la anchura de pico vB10% (vH10 %/vB10%). vTB5% indica una razón de tiempo cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 5 %, y un valor obtenido dividiendo el tiempo del centro de gravedad vT5% cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 5 % entre la anchura de pico vB5% (vT5%/vB5%). vT60% indica el tiempo del centro de gravedad cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 60 %. vH60% indica la altura del centro de gravedad cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 60 %.

[0727] 61

[0728] Dado que se sabe que no hay diferencia entre una reacción inmediata y una reacción retrasada en el plasma positivo para AL, se esperaba que una razón (Pb/Pa) fuera cercana a 1 en el plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para AL y un plasma normal (AL M). Tal como se ilustra en la figura 48, el resultado de análisis indicó que la razón (Pb/Pa) estaba cerca de 1, excluyendo la razón (Pb/Pa) para Amax. Se presume que un motivo por el cual la razón (Pb/Pa) para Amax se desvía en gran medida de 1,0 es una influencia del deterioro de una relación S-N debido a una disminución en los valores de Pb y Pa por la segunda diferenciación. Para los otros parámetros de evaluación, se examinó una razón (Pb/Pa) de valores de "plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para AL y un plasma normal (AL M)" y valores de "plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal (IN M)".

[0730] En cuanto al tiempo de coagulación, la razón (Pb/Pa) en AL M es de 0,988, mientras que la razón (Pb/Pa) en IN M es de 1,596, que es claramente más que la de AL M. La razón (Pb/Pa) en IN M de 1,596 indica que la acción de la reacción inhibidora de la coagulación del inhibidor del factor VIII se ve reforzada por el tratamiento térmico durante 10 minutos en este espécimen. La razón (Pb/Pa) en AL M de 0,988 indica que la reacción de coagulación de AL no se ve afectada por el tratamiento térmico durante 10 minutos.

[0732] En cuanto a la diferencia entre Vmax sin tratamiento térmico y Vmax después del tratamiento térmico durante 10 minutos, Vmax casi no cambia en AL M tal como se ilustra en la figura 47D, mientras que Vmax se reduce claramente mediante tratamiento térmico durante 10 minutos en IN M tal como se ilustra en la figura 47E. Como reflejo de esto, la razón (Pb/Pa) para Vmax es de 1,038 en AL M, mientras que la razón (Pb/Pa) para Vmax es de 0,435 en IN M, que es claramente menor que la de AL M. Tal como se describió anteriormente, se considera que Vmax es un ejemplo preferible como parámetro de evaluación para determinar un efecto del inhibidor del factor VIII tal como la presencia del inhibidor del factor VIII.

[0734] En cuanto a la diferencia entre VmaxT sin tratamiento térmico y VmaxT después del tratamiento térmico durante 10 minutos, VmaxT casi no cambia en AL M tal como se ilustra en la figura 47D, mientras que VmaxT se extiende claramente mediante tratamiento térmico durante 10 minutos en IN M tal como se ilustra en la figura 47E. Como reflejo de esto, la razón (Pb/Pa) para VmaxT es de 0,998 en AL M, mientras que la razón (Pb/Pa) para VmaxT es de 1,589 en IN M. Sin embargo, tal como se ilustra en la figura 47E, la bimodalidad de la curva de primer orden corregida es significativa después del tratamiento térmico, y un valor de VmaxT depende en gran medida de cuál del primer pico y el segundo pico tiene un valor máximo. Por tanto, se considera que VmaxT es desfavorable como parámetro de evaluación para determinar un efecto del inhibidor del factor VIII tal como la presencia del inhibidor del factor VIII.

[0736] Los ejemplos de un parámetro que indica una tasa de progreso de la reacción de coagulación incluyen la altura del centro de gravedad vH. La razón (Pb/Pa) para la altura del centro de gravedad vH60% es de 1,052 en AL M, mientras que la razón (Pb/Pa) para la altura del centro de gravedad vH60% es de 0,427 en IN M, que es claramente menor que la de AL M. Tal como se describió anteriormente, se considera que la altura del centro de gravedad vH es un ejemplo preferible como parámetro de evaluación para determinar un efecto del inhibidor del factor VIII tal como la presencia del inhibidor del factor VIII.

[0738] Los ejemplos de un parámetro que refleja un cambio temporal en el estado de progreso de la reacción de coagulación incluyen el tiempo del centro de gravedad vT. La razón (Pb/Pa) para el tiempo del centro de gravedad vT60% es de 0,988 en AL M, mientras que la razón (Pb/Pa) para el tiempo del centro de gravedad vT60% es de 1,592 en IN M, que es claramente más que la de AL M. Tal como se describió anteriormente, se considera que el tiempo del centro de gravedad vT es un ejemplo preferible como parámetro de evaluación para determinar un efecto del inhibidor del factor VIII tal como la presencia del inhibidor del factor VIII. VmaxT se ve fácilmente afectado por un pico bimodal, mientras que el tiempo del centro de gravedad vT es un parámetro que refleja la forma promediada de toda la curva de primer orden corregida y, por tanto, puede ser un parámetro de evaluación mejor que VmaxT.

[0740] Tal como se ilustra en la figura 47D, la forma de la curva apenas cambia incluso después del tratamiento térmico durante 10 minutos en AL M, mientras que tal como se ilustra en la figura 47E, la curva se aplana mediante tratamiento térmico durante 10 minutos en IN M. Como reflejo de esto, la razón (Pb/Pa) para la anchura de pico vB10% es de 0,958 en AL M, mientras que la razón (Pb/Pa) para la anchura de pico vB10% es de 2,270 en IN M, que es claramente más que la de AL M. Tal como se describió anteriormente, se considera que la anchura de pico vB es un ejemplo preferible como parámetro de evaluación para determinar un efecto del inhibidor del factor VIII tal como la presencia del inhibidor del factor VIII.

[0742] De manera similar, la razón (Pb/Pa) para la razón de aplanamiento vAB10% es de 1,087 en AL M, mientras que la razón (Pb/Pa) para la razón de aplanamiento vAB10% es de 0,191 en IN M, que es claramente menor que la de AL M. Tal como se describió anteriormente, se considera que la razón de aplanamiento vAB es un ejemplo preferible como parámetro de evaluación para determinar un efecto del inhibidor del factor VIII tal como la presencia del inhibidor del factor VIII.

[0745] 62

[0746] La razón (Pb/Pa) para la razón de tiempo vTB5% es de 1,019 en AL M, mientras que la razón (Pb/Pa) para la razón de tiempo vTB5% es de 0,718 en IN M, que es menor que la de AL M. En IN M, el tiempo del centro de gravedad vTx se extiende y la anchura de pico vB aumenta mediante el tratamiento térmico, y por tanto estos cambios se cancelan entre sí y la razón (Pb/Pa) no se desvía tanto de 1,0 en comparación con las razones (Pb/Pa) para los otros parámetros.

[0747] También con respecto a una diferencia (Pb-Pa) para cada parámetro, cuando Pb y Pa están cerca uno de otro, la diferencia es un valor alrededor de 0, y cuando Pb y Pa no están cerca uno de otro, la diferencia es un valor que se desvía de 0. Por tanto, puede observarse que la diferencia también puede usarse como indicador de determinación.

[0748] A partir de estos resultados, se ha encontrado que puede identificarse si un espécimen de un sujeto es positivo para el inhibidor del factor VIII o positivo para AL basándose en parámetros relacionados con un estado de reacción de coagulación, particularmente tales como valor diferencial máximo de primer orden Vmax, anchura de pico vB, razón de aplanamiento vAB, tiempo del centro de gravedad vT, altura del centro de gravedad vH y razón de tiempo vTB.

[0749] En la identificación de si un espécimen de un sujeto es positivo para el inhibidor del factor VIII o positivo para AL, con el fin de confirmar que los parámetros relacionados con la curva de primer orden corregida son eficaces, se realizó una prueba de mezcla cruzada y un análisis según este método en una pluralidad de especímenes. En este caso, el tiempo de tratamiento térmico a 37 °C se estableció en 10 minutos a diferencia de una prueba de mezcla cruzada de tipo retrasado habitual. En una prueba de tipo inmediato, no se realiza el tratamiento térmico como prueba de tipo inmediato convencional.

[0750] Las figuras 49A a 49L ilustran los resultados de las pruebas de mezcla cruzada de diferentes especímenes positivos para AL. Las figuras 49A a 49L ilustran los resultados de las muestras A, B, C, D, H, I, J, K, O, P, Q y R, respectivamente. El eje horizontal de cada gráfico indica una razón de mezcla entre un plasma positivo para AL y un plasma normal, e indica que la razón del plasma positivo para AL es del 0 %, 50 % o 100 %. El eje vertical indica el tiempo de coagulación del TTPa medido. En cada uno de los dibujos, m0 ilustrado por la línea continua indica un resultado de medición del TTPa sin tratamiento térmico, y m10 ilustrado por la línea discontinua indica un resultado de medición del TTPa en un caso en el que un plasma mixto se somete a tratamiento térmico durante 10 minutos.

[0751] Se sabe que el plasma positivo para AL no exhibe ninguna diferencia entre una reacción inmediata y una reacción retrasada. Tal como se describe en este hallazgo, en cualquiera de los casos ilustrados en las figuras 49A a 49L, casi no hubo diferencia en el resultado de medición dependiendo de la presencia o ausencia de tratamiento térmico. Cada uno de los gráficos ilustra un patrón de "curva convexa hacia arriba" independientemente de la presencia o ausencia de tratamiento térmico, excepto para los casos de la muestra O ilustrada en la figura 49I y la muestra R ilustrada en la figura 49L. La muestra O muestra un patrón de "curva convexa hacia abajo" en m0 y m10. La muestra R presenta ligeramente un patrón de curva convexa hacia abajo en m0, sin embargo presenta un patrón "lineal" en m10.

[0752] Las figuras 50A a 50I ilustran los resultados de pruebas de mezcla cruzada de diferentes especímenes positivos para el inhibidor del factor VIII. Las figuras 50A a 50I ilustran los resultados de las muestras E, F, G, L, M, N, S, T y U, respectivamente. El eje horizontal de cada gráfico indica una razón de mezcla entre un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal, e indica que la razón del plasma positivo para el inhibidor del factor VIII es del 0 %, 50 % o 100 %. El eje vertical indica el tiempo de coagulación del TTPa medido. En cada uno de los dibujos, m0 ilustrado por la línea continua indica un resultado de medición del TTPa sin tratamiento térmico, y m10 ilustrado por la línea discontinua indica un resultado de medición en un caso en el que un plasma mixto se somete a tratamiento térmico durante 10 minutos.

[0753] Se sabe que el plasma positivo para el inhibidor del factor VIII presenta un patrón de "curva convexa hacia arriba" en una reacción retrasada. Tal como se describe en este hallazgo, en cualquiera de los casos ilustrados en las figuras 50A a 50I, en un plasma mixto del plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y el plasma normal, se prolongó el tiempo de coagulación después del tratamiento térmico y se presentó un patrón de "curva convexa hacia arriba" en m10, excepto para la muestra T ilustrada en la figura 50H. En el caso de la muestra T ilustrada en la figura 50H, aunque se observó una prolongación del tiempo de coagulación en m10 en comparación con la de m0, se presentó un patrón de "curva convexa hacia abajo" en m10.

[0754] La figura 51A ilustra, para cada una de las muestras, un resultado de medición del TTPa sin tratamiento térmico y un resultado de medición del TTPa con tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos en un plasma de prueba al 100 %.

[0755] En cualquiera de las muestras de plasma positivas para AL A, B, C, D, H, I, J, K, O, P, Q y R y las muestras de plasma positivas para el inhibidor del factor VIII E, F, G, L, M, N, S, T y U, un cambio en el resultado de medición del TTPa por el tratamiento térmico estuvo dentro del 5 %, y se ha confirmado que la influencia del tratamiento

[0758] 63

[0759] térmico es leve.

[0760] La figura 51B ilustra, para cada una de las muestras, un resultado de medición del TTPa sin tratamiento térmico y un resultado de medición del TTPa con tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos en un plasma mixto de igual volumen de un plasma de prueba y un plasma normal.

[0761] En la figura 51B, en las muestras de plasma positivas para AL A, B, C, D, H, I, J, K, O, P, Q y R, un cambio en el resultado de medición del TTPa por el tratamiento térmico estuvo dentro del 5 %, y se ha confirmado que una influencia del tratamiento térmico es leve. Mientras tanto, en las muestras de plasma positivas al inhibidor del factor VIII E, F, G, L, M, N, S, T y U, los cambios en los resultados de medición del TTPa debido al tratamiento térmico difirieron en función de una muestra, sin embargo, todos los cambios superaron el 10 %. Por tanto, se ha confirmado que existe una influencia del tratamiento térmico.

[0762] En una prueba de mezcla cruzada convencional, las condiciones de tratamiento térmico se establecen de manera que se observa una prolongación del tiempo de coagulación en un espécimen positivo para el inhibidor del factor VIII sometiendo una muestra a tratamiento térmico a 37 °C durante dos horas. En cambio, el método de la presente solicitud intenta detectar un inhibidor del factor VIII incluso con tratamiento térmico durante solo 10 minutos en el espécimen positivo para el inhibidor del factor VIII (muestra T) que presenta un patrón de "curva convexa hacia abajo" después del tratamiento térmico durante 10 minutos.

[0763] Para cada uno de la pluralidad descrita anteriormente de plasmas positivos para AL y plasmas positivos para el inhibidor del factor VIII, se calculó una curva de primer orden corregida basándose en datos de medición del TTPa con respecto a un plasma mixto de igual volumen con un plasma normal sin tratamiento térmico y con tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0764] Las figuras 52A a 52L ilustran curvas de primer orden corregidas de los 12 ejemplos descritos anteriormente de plasmas mixtos en cada uno de los cuales se mezclan un plasma positivo para AL y un plasma normal en una razón de volumen de 1:1, es decir, muestras A, B, C, D, H, I, J, K, O, P, Q y R sin tratamiento térmico y con tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos. En cada una de las curvas, la línea continua M0 ilustra el caso sin tratamiento térmico, y la línea discontinua M10 ilustra el caso de tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos. En cualquiera de las muestras, casi no hay cambio de forma entre las curvas M0 y M10, y se ha confirmado que no se observa influencia en la forma de la curva debido al tratamiento térmico.

[0765] Las Figuras 53A a 53I ilustran curvas de primer orden corregidas de los 9 ejemplos descritos anteriormente de plasmas mixtos en cada uno de los cuales se mezclan un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal en una razón de volumen de 1:1, es decir, las muestras E, F, G, L, M, N, S, T y U sin tratamiento térmico y con tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos. En cada una de las curvas, la línea continua M0 ilustra el caso sin tratamiento térmico, y la línea discontinua M10 ilustra el caso de tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos.

[0766] En todas las muestras, hay un gran cambio de forma entre las curvas M0 y M10, y se ha confirmado que se observa una influencia significativa en la forma de la curva debido al tratamiento térmico. En particular, el tratamiento térmico redujo la altura de pico y amplió la anchura de pico en todas las muestras. Tal cambio de forma se ha confirmado tal como se ilustra en la figura 53H incluso en la muestra T que presenta un patrón de "curva convexa hacia abajo" en la prueba de mezcla cruzada con tratamiento térmico durante 10 minutos.

[0767] Basándose en cada uno de los datos sin tratamiento térmico y los datos con tratamiento térmico durante 10 minutos, ilustrados en las figuras 52A a 52L, se calculó la "razón de aplanamiento vAB10% cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 10 %" en relación con "plasma mixto de volumen igual de un plasma positivo para AL y un plasma normal". Luego, se calculó una razón entre la razón de aplanamiento vAB10% sin tratamiento térmico y la razón de aplanamiento vAB10% con tratamiento térmico durante 10 minutos (razón vAB10% 10/0). De manera similar, basándose en cada uno de los datos sin tratamiento térmico y los datos con tratamiento térmico durante 10 minutos, ilustrados en las figuras 53A a 53I, se calculó la "razón de aplanamiento vAB10% cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 10 %" en relación con "plasma mixto de volumen igual de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal". Luego, se calculó una razón entre la razón de aplanamiento vAB10% sin tratamiento térmico y la razón de aplanamiento vAB10% con tratamiento térmico durante 10 minutos (razón vAB10% 10/0). Los resultados de cálculo de los mismos se ilustran en la figura 54A.

[0768] Tal como se ilustra en la figura 54A, en los datos (AL) de "plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para AL y un plasma normal", se ha encontrado que los valores de "razón vAB10% 10/0" se distribuyen dentro de un determinado intervalo que incluye 1,0. Mientras tanto, en los datos (inhibidor) de "plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal", se ha encontrado que los valores de "razón vAB10% 10/0" se distribuyen dentro de un intervalo de menos de 0,6. Por tanto, se ha revelado que puede identificarse si un espécimen de un sujeto es positivo para AL o positivo para el inhibidor del factor VIII

[0771] 64

[0772] estableciendo un umbral entre ambas distribuciones. Por ejemplo, se ha confirmado que puede identificarse correctamente incluso un espécimen tal como la muestra T mediante este método.

[0774] Tal como se describió anteriormente, se ha confirmado que la razón entre la razón de aplanamiento vAB determinada a partir de los datos obtenidos mediante la medición del TTPa sin tratamiento térmico y la razón de aplanamiento vAB determinada a partir de los datos obtenidos mediante la medición del TTPa después del tratamiento térmico durante 10 minutos (razón vAB 10/0) puede ser un indicador eficaz para identificar si un espécimen de un sujeto es positivo para AL o positivo para el inhibidor del factor VIII.

[0776] Basándose en cada uno de los datos sin tratamiento térmico y los datos con tratamiento térmico durante 10 minutos, ilustrados en las figuras 52A a 52L, se calculó la "altura del centro de gravedad vH60% cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 60 %" en relación con "plasma mixto de volumen igual de un plasma positivo para AL y un plasma normal". Luego, se calculó la razón entre la altura del centro de gravedad vH60% sin tratamiento térmico y la altura del centro de gravedad vH60% con tratamiento térmico durante 10 minutos (razón vH60% 10/0). De manera similar, basándose en cada uno de los datos sin tratamiento térmico y los datos con tratamiento térmico durante 10 minutos, ilustrados en las figuras 53A a 53I, se calculó la "altura del centro de gravedad vH60% cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 60 %" en relación con "plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal". Luego, se calculó la razón entre la altura del centro de gravedad vH60% sin calentamiento y la altura del centro de gravedad vH60% con tratamiento térmico durante 10 minutos (razón vH60% 10/0). Los resultados de cálculo de los mismos se ilustran en la figura 54B.

[0778] Como se ilustra en este dibujo, en los datos (AL) de "plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para AL y un plasma normal", se ha encontrado que los valores de "razón vH60% 10/0" se distribuyen dentro de un determinado intervalo que incluye 1,0. Mientras tanto, en los datos (inhibidor) de "plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal", se ha encontrado que los valores de "razón vH60% 10/0" se distribuyen dentro de un intervalo de menos de 0,8. Por tanto, se ha revelado que puede identificarse si un espécimen de un sujeto es positivo para AL o positivo para el inhibidor del factor VIII estableciendo un umbral entre ambas distribuciones. Por ejemplo, se ha confirmado que puede identificarse correctamente incluso un espécimen tal como la muestra T mediante este método.

[0780] Tal como se describió anteriormente, se ha confirmado que la razón entre la altura del centro de gravedad vH determinada a partir de los datos obtenidos mediante la medición del TTPa sin tratamiento térmico y la altura del centro de gravedad vH determinada a partir de los datos obtenidos mediante la medición del TTPa después del tratamiento térmico durante 10 minutos (razón vH 10/0) puede ser un indicador eficaz para identificar si un espécimen de un sujeto es positivo para AL o positivo para el inhibidor del factor VIII.

[0782] Basándose en cada uno de los datos sin tratamiento térmico y los datos con tratamiento térmico durante 10 minutos, ilustrados en las figuras 52A a 52L, se calculó la "razón de aplanamiento vAB10% cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 10 %" en relación con "plasma mixto de volumen igual de un plasma positivo para AL y un plasma normal". Luego, se calculó una diferencia entre la razón de aplanamiento vAB10% sin tratamiento térmico y la razón de aplanamiento vAB10% con tratamiento térmico durante 10 minutos (diferencia vAB10% 10/0). De manera similar, basándose en cada uno de los datos sin tratamiento térmico y los datos con tratamiento térmico durante 10 minutos, ilustrados en las figuras 53A a 53I, se calculó la "razón de aplanamiento vAB10% cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 10 %" en relación con "plasma mixto de volumen igual de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal". Luego, se calculó una diferencia entre la razón de aplanamiento vAB10% sin tratamiento térmico y la razón de aplanamiento vAB10% con tratamiento térmico durante 10 minutos (diferencia vAB10% 10/0). Los resultados de cálculo de los mismos se ilustran en la figura 55A.

[0784] Tal como se ilustra en la figura 55A, en los datos (AL) de "plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para AL y un plasma normal", se ha encontrado que los valores de "diferencia vAB10% 10/0" se distribuyen dentro de un intervalo de desde -0,2 hasta 0,2. Mientras tanto, en los datos (inhibidor) de "plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal", se ha encontrado que los valores de "diferencia vAB10% 10/0" se distribuyen dentro de un amplio intervalo de desde -1,2 hasta 0,0. No puede proporcionarse un umbral entre las dos distribuciones, y se ha revelado que no puede identificarse si un espécimen de un sujeto es positivo para AL o positivo para un inhibidor del factor VIII con "diferencia vAB10% 10/0".

[0786] Basándose en cada uno de los datos sin tratamiento térmico y los datos con tratamiento térmico durante 10 minutos, ilustrados en las figuras 52A a 52L, se calculó la "altura del centro de gravedad vH60% cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 60 %" en relación con "plasma mixto de volumen igual de un plasma positivo para AL y un plasma normal". Luego, se calculó la diferencia entre la altura del centro de gravedad vH60% sin tratamiento térmico y la altura del centro de gravedad vH60% con tratamiento térmico durante 10 minutos (diferencia vH60% 10/0). De manera similar, basándose en cada uno de los datos sin tratamiento térmico y los datos con tratamiento térmico durante 10 minutos, ilustrados en las figuras 53A a 53I, se calculó la "altura del centro de gravedad vH60% cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 60 %" en relación con

[0789] 65

[0790] "plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal". Luego, se calculó la diferencia entre la altura del centro de gravedad vH60% sin calentamiento y la altura del centro de gravedad vH60% con tratamiento térmico durante 10 minutos (diferencia vH60% 10/0). Los resultados de cálculo de los mismos se ilustran en la figura 55B.

[0791] Tal como se ilustra en este dibujo, en los datos (AL) de "plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para AL y un plasma normal", se ha encontrado que los valores de "diferencia vH60% 10/0" se distribuyen dentro de un intervalo de desde -0,05 hasta 0,05. Mientras tanto, en los datos (inhibidor) de "plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal", se ha encontrado que los valores de "diferencia vH60% 10/0" se distribuyen dentro de un amplio intervalo de desde -0,30 hasta 0,00. Por tanto, no puede proporcionarse un umbral entre las dos distribuciones, y se ha revelado que no puede identificarse si un espécimen de un sujeto es positivo para AL o positivo para un inhibidor del factor VIII con "diferencia vH60% 10/0". Basándose en cada uno de los datos sin tratamiento térmico y los datos con tratamiento térmico durante 10 minutos, ilustrados en las figuras 52A a 52L, se calculó el "tiempo del centro de gravedad vT60% cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 60 %" en relación con "plasma mixto de volumen igual de un plasma positivo para AL y un plasma normal". Luego, se calculó la diferencia entre el tiempo del centro de gravedad vT60% sin tratamiento térmico y el tiempo del centro de gravedad vT60% con tratamiento térmico durante 10 minutos (diferencia vT60% 10/0). De manera similar, basándose en cada uno de los datos sin tratamiento térmico y los datos con tratamiento térmico durante 10 minutos, ilustrados en las figuras 53A a 53I, se calculó el "tiempo del centro de gravedad vT60% cuando el valor del área objetivo de cálculo S se establece en el 60 %" en relación con "plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal". Luego, se calculó la diferencia entre el tiempo del centro de gravedad vT60% sin calentamiento y el tiempo del centro de gravedad vT60% con tratamiento térmico durante 10 minutos (diferencia vT60% 10/0). Los resultados de cálculo de los mismos se ilustran en la figura 55C.

[0792] Tal como se ilustra en este dibujo, en los datos (AL) de "plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para AL y un plasma normal", se ha encontrado que los valores de "diferencia vT60% 10/0" se distribuyen dentro de un determinado intervalo que incluye 0,0. Mientras tanto, en los datos (inhibidor) de "plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal", se ha encontrado que los valores de "diferencia vT60% 10/0" se distribuyen dentro de un intervalo de más de 10. Por tanto, se ha revelado que puede identificarse si un espécimen de un sujeto es positivo para AL o positivo para el inhibidor del factor VIII estableciendo un umbral entre ambas distribuciones. Por ejemplo, se ha confirmado que puede identificarse correctamente incluso un espécimen tal como la muestra T mediante este método.

[0793] Tal como se describió anteriormente, se ha confirmado que la razón entre el tiempo del centro de gravedad vT determinado a partir de los datos obtenidos mediante medición del TTPa sin tratamiento térmico y el tiempo del centro de gravedad vT determinado a partir de los datos obtenidos mediante medición del TTPa después del tratamiento térmico durante 10 minutos (diferencia vT 10/0) puede ser un indicador eficaz para identificar si un espécimen de un sujeto es positivo para AL o positivo para el inhibidor del factor VIII.

[0794] 9. Sexto ejemplo

[0795] 9.1. Método

[0796] En el quinto ejemplo, se han descrito los resultados experimentales cuando el tiempo de tratamiento térmico del plasma mixto se estableció en 10 minutos. Sin embargo, en el sexto ejemplo, se describirán resultados experimentales cuando el tiempo de tratamiento térmico de un plasma mixto se estableció en 2 minutos. Las condiciones diferentes de las del quinto ejemplo son los plasmas de prueba y el número de los mismos, y el tiempo de tratamiento térmico de un plasma mixto, y las otras condiciones son las mismas.

[0797] 9.2. Resultado de análisis y discusión

[0798] La figura 56 ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada de un espécimen positivo para AL. En el dibujo, m0 ilustrado por la línea continua indica un resultado de medición del TTPa sin tratamiento térmico, y m2 ilustrado por la línea discontinua indica un resultado de medición del TTPa en un caso en el que un plasma mixto se somete a tratamiento térmico durante 2 minutos. En la figura 56, casi no hay diferencia entre el resultado de medición en el que el tiempo de tratamiento térmico de plasma mixto es de 0 minutos (no calentado) y el resultado de medición en el que el tiempo de tratamiento térmico de plasma mixto es de 2 minutos, y el gráfico muestra un patrón de "curva convexa hacia arriba".

[0799] La figura 57 también ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada de un espécimen positivo para AL. En el dibujo, m10 ilustrado por la línea continua indica un resultado de medición del TTPa en un caso en el que un plasma mixto se somete a tratamiento térmico durante 10 minutos, y m2 ilustrado por la línea discontinua indica un resultado de medición del TTPa en un caso en el que un plasma mixto se somete a tratamiento térmico durante 2 minutos. En la figura 57, casi no hay diferencia entre el resultado de medición en el que el tiempo de tratamiento

[0802] 66

[0803] térmico de plasma mixto es de 10 minutos y el resultado de medición en el que el tiempo de tratamiento térmico de plasma mixto es de 2 minutos. Es decir, casi no hay diferencia entre el resultado de medición en el que el tiempo de tratamiento térmico de plasma mixto es de 0 minutos (no calentado), el resultado de medición en el que el tiempo de tratamiento térmico de plasma mixto es de 2 minutos y el resultado de medición en el que el tiempo de tratamiento térmico de plasma mixto es de 10 minutos.

[0804] La figura 58 ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada de un espécimen positivo para el inhibidor del factor VIII. En el dibujo, m0 ilustrado por la línea continua indica un resultado de medición del TTPa sin tratamiento térmico, y m2 ilustrado por la línea discontinua indica un resultado de medición del TTPa en un caso en el que un plasma mixto se somete a tratamiento térmico durante 2 minutos. En la figura 58, tanto el resultado de medición en el que el tiempo de tratamiento térmico de plasma mixto es de 0 minutos (no calentado) como el resultado de medición en el que el tiempo de tratamiento térmico de plasma mixto es de 2 minutos presentan patrones de "curva convexa hacia arriba", y el tiempo de coagulación después del tratamiento térmico durante 2 minutos se prolonga en comparación con el del plasma no calentado para hacer que el patrón de "curva convexa hacia arriba" sea más fuerte.

[0805] La figura 59 también ilustra los resultados de una prueba de mezcla cruzada de un espécimen positivo para el inhibidor del factor VIII. En el dibujo, m10 ilustrado por la línea continua indica un resultado de medición del TTPa en un caso en el que un plasma mixto se somete a tratamiento térmico durante 10 minutos, y m2 ilustrado por la línea discontinua indica un resultado de medición del TTPa en un caso en el que un plasma mixto se somete a tratamiento térmico durante 2 minutos. En la figura 59, casi no hay diferencia entre el resultado de medición en el que el tiempo de tratamiento térmico de plasma mixto es de 10 minutos y el resultado de medición en el que el tiempo de tratamiento térmico de plasma mixto es de 2 minutos.

[0806] La figura 60 ilustra curvas de primer orden corregidas de un plasma mixto de un plasma positivo para AL y un plasma normal a una razón de volumen de 1:1 sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 2 minutos. La línea continua AL_0 ilustra el caso sin tratamiento térmico, y la línea discontinua AL_2 ilustra el caso de tratamiento térmico a 37 °C durante 2 minutos. Casi no hay cambio de forma entre las curvas AL_0 y AL_2, y se ha confirmado que no se observa influencia en la forma de la curva debido al tratamiento térmico. La figura 61 ilustra curvas de primer orden corregidas de un plasma mixto de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal en una razón de volumen de 1:1 sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 2 minutos. El significado de cada curva es el mismo que el de la figura 60. Hay un gran cambio de forma entre las curvas 8M_0 y 8M_2, y se ha confirmado que se observa una influencia significativa en la forma de la curva debido al tratamiento térmico. El tratamiento térmico durante 2 minutos también redujo la altura de pico y amplió la anchura de pico como el tratamiento térmico durante 10 minutos en el quinto ejemplo.

[0807] La figura 62 ilustra un ejemplo de una tabla que ilustra, para cada uno de cinco tipos de muestras como en el quinto ejemplo, diversos parámetros de evaluación obtenidos a partir de la medición del TTPa de un plasma mixto después del tratamiento térmico durante 2 minutos, diversos parámetros de evaluación obtenidos a partir de la medición del TTPa del plasma mixto sin calentamiento y resultados de cálculo de razones entre ambos de los diversos parámetros de evaluación.

[0808] Cabe observar que en la figura 62, "2 min" representa "tratamiento térmico a 37 °C durante 2 minutos", y los otros tienen el mismo significado que en la figura 48.

[0809] En cuanto al tiempo de coagulación, la razón (Pb/Pa) en AL M es de 1,045, mientras que la razón (Pb/Pa) en IN M es de 1,082, y no hay diferencia entre ellas. Este resultado indica que la reacción de coagulación del espécimen positivo para AL no se ve afectada por el tratamiento térmico durante 2 minutos, y que una reacción inhibidora de la coagulación del espécimen positivo para el inhibidor del factor VIII no tiene un efecto fuerte.

[0810] En cuanto a la diferencia entre Vmax sin tratamiento térmico y Vmax después del tratamiento térmico durante 2 minutos, Vmax casi no cambia en AL M, mientras que Vmax se reduce claramente en IN M, tal como se ilustra en la figura 62. Como reflejo de esto, la razón (Pb/Pa) para Vmax es de 0,953 en AL M, mientras que la razón (Pb/Pa) para Vmax es de 0,731 en IN M, que es claramente menor que la de AL M.

[0811] En cuanto a la diferencia entre VmaxT sin tratamiento térmico y VmaxT después del tratamiento térmico durante 2 minutos, VmaxT casi no cambia en AL M, mientras que VmaxT se extiende claramente en IN M, tal como se ilustra en la figura 62. Como reflejo de esto, la razón (Pb/Pa) para VmaxT es de 1,020 en AL M, mientras que la razón (Pb/Pa) para VmaxT es de 1,182 en IN M. Tal como se ilustra en la figura 61, incluso mediante el tratamiento térmico durante 2 minutos, la bimodalidad de la curva de primer orden corregida es significativa después del tratamiento térmico tal como en el tratamiento térmico durante 10 minutos en el quinto ejemplo.

[0812] La razón (Pb/Pa) para la altura del centro de gravedad vH60% es de 0,947 en AL M, mientras que la razón (Pb/Pa) para la altura del centro de gravedad vH60% es de 0,737 en IN M, que es claramente menor que la de AL M.

[0815] 67

[0816] La razón (Pb/Pa) para el tiempo del centro de gravedad vT60% es de 1,044 en AL M, mientras que la razón (Pb/Pa) para el tiempo del centro de gravedad vT60% es de 1,146 en IN M, que es más que la de AL M.

[0817] Tal como se ilustra en la figura 60, la forma de la curva apenas cambia incluso después del tratamiento térmico durante 2 minutos en AL M, mientras que tal como se ilustra en la figura 61, la curva se aplana en IN M. Tal como se ilustra en la figura 62, como reflejo de esto, la razón (Pb/Pa) para la anchura de pico vB10% es de 1,076 en AL M, mientras que la razón (Pb/Pa) para la anchura de pico vB10% es de 1,405 en IN M, que es claramente mayor que la de AL M.

[0818] De manera similar, la razón (Pb/Pa) para la razón de aplanamiento vAB10% es de 0,864 en AL M, mientras que la razón (Pb/Pa) para la razón de aplanamiento vAB10% es de 0,490 en IN M, que es claramente menor que la de AL M.

[0819] La razón (Pb/Pa) para la razón de tiempo vTB es de 0,975 en AL M, mientras que la razón (Pb/Pa) para la razón de tiempo vTB es de 0,840 en IN M, que es menor que la de AL M.

[0820] A partir de estos resultados, también mediante el tratamiento térmico durante 2 minutos, de manera similar al tratamiento térmico durante 10 minutos en el quinto ejemplo, se ha encontrado que puede identificarse si un espécimen de un sujeto es positivo para el inhibidor del factor VIII o positivo para AL basándose en parámetros relacionados con un estado de reacción de coagulación, particularmente tales como valor diferencial máximo de primer orden Vmax, anchura de pico vB, razón de aplanamiento vAB, tiempo del centro de gravedad vT, altura del centro de gravedad vH y razón de tiempo vTB.

[0821] Obsérvese que aquí, se han mencionado "razón vAB10% 10/0", "razón vH60% 10/0" y "diferencia vT60% 10/0" como parámetros de evaluación que pueden ser indicadores eficaces. Sin embargo, sin limitación a los mismos, los parámetros de evaluación distintos de estos parámetros también pueden ser indicadores eficaces para identificar si un espécimen de un sujeto es positivo para AL o positivo para un inhibidor del factor VIII. Por ejemplo, el valor del área objetivo de cálculo S establecido para calcular la razón de aplanamiento vABx no se limita al 10 % y puede ser otro valor. De manera similar, el valor del área objetivo de cálculo S establecido para calcular la altura del centro de gravedad vHx no se limita al 60 % y puede ser otro valor. El valor del área objetivo de cálculo S establecido para calcular el tiempo del centro de gravedad vTx no se limita al 60 % y puede ser otro valor. De manera similar, puede identificarse si un espécimen de un sujeto es positivo para AL o positivo para un inhibidor del factor VIII no solo basándose en la razón de aplanamiento vABx, la altura del centro de gravedad vHx y el tiempo del centro de gravedad vTx, sino también basándose en, por ejemplo, el valor diferencial máximo de primer orden Vmax, la anchura de pico vBx y la razón de tiempo vTBx. El tiempo de calentamiento no se limita a 10 minutos. Según la curva de primer orden corregida en la figura 47E, se considera que el tiempo de tratamiento térmico no necesita ser mayor de 30 minutos. Mientras tanto, dado que es necesario tiempo para que el inhibidor reaccione, el calentamiento se realiza preferiblemente durante 2 minutos o más. Por tanto, el tiempo de calentamiento puede cambiarse de manera apropiada dentro de un intervalo de 2 minutos o más y 30 minutos o menos. En cualquier caso, el tiempo de prueba se acorta suficientemente en comparación con el tiempo de prueba convencional de dos horas.

[0822] 10. Séptimo ejemplo

[0823] 10.1. Método

[0824] Se preparó un plasma mixto (12 especímenes para un plasma positivo para AL y 9 especímenes para un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII) con el mismo procedimiento que en el quinto ejemplo, y se realizó la medición del TTPa sin tratamiento térmico y después del tratamiento térmico a 37 °C durante 10 minutos. Se calcularon diversos parámetros de evaluación a partir de los datos fotométricos adquiridos, y se determinaron una razón (Pb/Pa) y una diferencia (Pb-Pa) entre cada uno de los parámetros de un plasma no calentado (Pa) y cada uno de los parámetros de un plasma calentado (Pb). Se evaluó una diferencia significativa en un valor promedio de cada una de las distribuciones de la razón (Pb/Pa) y la diferencia (Pb-Pa) entre un plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para AL y un plasma normal (AL) y un plasma mixto de igual volumen de un plasma positivo para el inhibidor del factor VIII y un plasma normal (inhibidor). Para cada una de las distribuciones, se determinaron la varianza igual y la varianza desigual mediante la prueba F (nivel de significación del 1 %), y luego se calculó un valor P de una diferencia entre un valor promedio de la distribución de AL y un valor promedio de la distribución de inhibidor mediante la prueba T (ambos lados).

[0825] 10.2. Resultado

[0826] Las figuras 63A a 63E ilustran ejemplos de diferencias (Pb-Pa) y razones (Pb/Pa) para diversos parámetros de evaluación entre un plasma no calentado y un plasma calentado para AL e inhibidor. La figura 63A ilustra los resultados del tiempo de TTPa (T50) y Vmax, la figura 63B ilustra los resultados de vAB40% y vABa40%, la figura 63C ilustra los resultados de vH40% y vHa40%, la figura 63D ilustra los resultados de vAUC90% y vW10%/vB10%, y la figura 63E ilustra los resultados de pAUC80% y mAUC20%.

[0829] 68

[0830] Las tablas 12 a 15 ilustran una diferencia (valor P) en cada una de las distribuciones de Pb/Pa y Pb-Pa para diversos parámetros entre AL e inhibidor. Los valores de las tablas indican: valor de p ≥ 1 %, 1: 0,1 % ≤ valor de p < 1 %, 2: 0,01 % ≤ valor de p < 0,1 %, 3: 0,001 % ≤ valor de p < 0,01 %, 4: 0,0001 % ≤ valor de p < 0,001 %, y 5: valor de p < 0,0001 %. Tal como se ilustra en las tablas 13 a 15, en general, la razón (Pb/Pa) tuvo una mayor diferencia de distribución entre AL e inhibidor que la diferencia (Pb-Pa). Las distribuciones de la razón (Pb/Pa) para muchos parámetros fueron diferentes entre AL e inhibidor al nivel de valor de p < 0,01 %. Mientras tanto, también se encontró un parámetro en el que la distribución de la diferencia (Pb-Pa) fue diferente entre AL e inhibidor a nivel de valor de p < 0,1 %.

[0832] Tabla 12

[0835]

[0839] 69

[0840] Valor de p: Pb-Pa

[0842]

[0844] En las realizaciones y ejemplos descritos anteriormente, la medición del TTPa se ha descrito como un ejemplo, pero la presente invención no se limita a ello. La técnica descrita anteriormente puede aplicarse de manera similar a otras mediciones del tiempo de coagulación, tal como la medición del tiempo de protrombina, la medición del tiempo de protrombina diluido, la medición del tiempo de tromboplastina parcial diluido, la medición del tiempo de coagulación del caolín y la medición del tiempo de veneno de víbora de Russell diluido.

[0845] Además, en las realizaciones y ejemplos descritos anteriormente, el inhibidor del factor VIII se ha descrito como un ejemplo del inhibidor del factor de coagulación. Sin embargo, la técnica descrita anteriormente puede aplicarse de manera similar a inhibidores de factores distintos del factor VIII.

[0846] Lista de signos de referencia

[0847] 1 Aparato de análisis automático

[0848] 10 Unidad de control

[0849] 12 Unidad central de procesamiento (CPU)

[0850] 14 Memoria de acceso aleatorio (RAM)

[0853] 72

Claims (19)

1. REIVINDICACIONES

1. Método para analizar una característica de coagulación de un espécimen de sangre, comprendiendo el método:

(1) adquirir datos para una curva de reacción de coagulación que indica una cantidad de reacción de coagulación de una disolución mixta que contiene una muestra de sangre y un reactivo con respecto al tiempo de reacción, en el que los datos de la curva de reacción de coagulación se adquieren midiendo un tiempo de coagulación;

(2) calcular datos para una curva diferencial obtenida diferenciando la curva de reacción de coagulación; (3) calcular información relacionada con un punto del centro de gravedad de la curva diferencial; y (4) evaluar la característica de coagulación de la muestra de sangre usando la información relacionada con el punto del centro de gravedad,

en el que la curva diferencial es al menos una seleccionada del grupo que consiste en una curva diferencial de primer orden relacionada con la curva de reacción de coagulación y una curva diferencial de segundo orden relacionada con la curva de reacción de coagulación,

en el que el punto del centro de gravedad de la curva diferencial es un punto del centro de gravedad de la curva diferencial de primer orden representado por coordenadas (vT, vH) definidas por el tiempo del centro de gravedad vT y la altura del centro de gravedad vH, y vT y vH se representan mediante las siguientes fórmulas cuando la curva diferencial de primer orden se representa mediante F(t) (t: tiempo) y el tiempo cuando F(t) es un valor predeterminado x se representa mediante t1 o t2 (t1 < t2):

Fórmula numérica 1

en la que

o

en el que el punto del centro de gravedad de la curva diferencial es un punto del centro de gravedad de un pico positivo de la curva diferencial de segundo orden representado por coordenadas (pT, pH) definidas por el tiempo del centro de gravedad pT y la altura del centro de gravedad pH, y pT y pH se representan mediante las siguientes fórmulas cuando la curva diferencial de segundo orden se representa mediante F'(t) (t: tiempo) y el tiempo cuando F'(t) es un valor predeterminado x se representa mediante t1 o t2 (t1 < t2):

Fórmula numérica 3

73

en la que

o

en el que el punto del centro de gravedad de la curva diferencial es un punto del centro de gravedad de un pico negativo de la curva diferencia de segundo orden representado por coordenadas (mT, mH) definidas por el tiempo del centro de gravedad mT y la altura del centro de gravedad mH, y mT y mH se representan mediante las siguientes fórmulas cuando la curva diferencial de segundo orden se representa mediante F'(t) (t: tiempo) y el tiempo cuando F'(t) es un valor predeterminado x se representa mediante t1 o t2 (t1 < t2):

Fórmula numérica 4

en la que

2. Método de análisis según la reivindicación 1, en el que

la información relacionada con el punto del centro de gravedad incluye uno o más parámetros seleccionados del grupo que consiste en vT, vH, la anchura de pico vB, la anchura de pico del centro de gravedad vW, la razón de aplanamiento B vAB, la razón de tiempo B vTB, la razón de aplanamiento W vAW, la razón de tiempo W vTW, el tiempo promedio vTa, la altura promedio vHa, vTm, vABa y vAWa, la anchura de pico vB es una duración de tiempo donde F(t) ≥ x dentro de un período desde t1 hasta t2, la anchura de pico del centro de gravedad vW es una duración de tiempo donde F(t) ≥ vH dentro de un período desde t1 hasta t2,

vAB representa una razón entre vH y vB,

vTB representa una razón entre vT y vB,

vAW representa una razón entre vH y vW,

vTW representa una razón entre vT y vW,

vTa, vHa y vTm se representan mediante las siguientes fórmulas, respectivamente, cuando F(t), t1 y t2 tienen las mismas definiciones que las descritas anteriormente, y el número de puntos de datos de F(t1) a F(t2) es n,

Fórmula numérica 2

74

vABa representa una razón entre vHa y vB, y

vAWa representa una razón entre vHa y vW.

3. Método de análisis según la reivindicación 1, en el que

la información relacionada con el punto del centro de gravedad incluye uno o más parámetros seleccionados del grupo que consiste en pT, pH, la anchura de pico pB, la anchura de pico del centro de gravedad pW, la razón de aplanamiento B pAB, la razón de tiempo B pTB, la razón de aplanamiento W pAW y la razón de tiempo W pTW,

la anchura de pico pB es una duración de tiempo donde F'(t) ≥ x dentro de un período desde t1 hasta t2, la anchura de pico del centro de gravedad pW es una duración de tiempo donde F'(t) ≥ pH dentro de un período desde t1 hasta t2,

pAB representa una razón entre pH y pB,

pTB representa una razón entre pT y pB,

pAW representa una razón entre pH y pW, y

pTW representa una razón entre pT y pW.

4. Método de análisis según la reivindicación 1, en el que

la información relacionada con el punto del centro de gravedad incluye uno o más parámetros seleccionados del grupo que consiste en mT, mH, la anchura de pico mB, la anchura de pico del centro de gravedad mW, la razón de aplanamiento B mAB, la razón de tiempo B mTB, la razón de aplanamiento W mAW y la razón de tiempo W mTW,

la anchura de pico mB es una duración de tiempo donde F'(t) ≤ x dentro de un período desde t1 hasta t2, la anchura de pico del centro de gravedad mW es una duración de tiempo donde F'(t) ≤ mH dentro de un período desde t1 hasta t2,

mAB representa una razón entre mH y mB,

mTB representa una razón entre mT y mB,

mAW representa una razón entre mH y mW, y

mTW representa una razón entre mT y mW.

5. Método de análisis según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el valor predeterminado x es un valor que es del 0,5 % al 99 % de un valor máximo de la curva diferencial de primer orden F(t).

6. Método de análisis según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que la característica de coagulación es una concentración de factor de coagulación, y el factor de coagulación es al menos uno seleccionado del grupo que consiste en factor V de la coagulación, factor VIII de la coagulación, factor IX de la coagulación, factor X de la coagulación, factor XI de la coagulación y factor XII de la coagulación.

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7. Método de análisis según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que la etapa (4) anterior incluye, basándose en una relación entre la concentración de un componente objetivo de análisis y la razón de aplanamiento, y en la razón de aplanamiento obtenida, calificar el componente objetivo de análisis y cuantificar una concentración del componente objetivo de análisis.

8. Método de análisis según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que la etapa (4) anterior incluye un análisis que usa una razón entre el tiempo del centro de gravedad y la anchura de pico (razón de tiempo).

9. Método de análisis según la reivindicación 8, en el que la etapa (4) anterior incluye determinar si una causa de la prolongación del tiempo de coagulación es o no el factor VIII de coagulación basándose en la razón de tiempo.

10. Método de análisis según la reivindicación 8 ó 9, en el que la etapa (4) anterior incluye, basándose en una relación entre la concentración de un componente objetivo de análisis y la razón de tiempo, y en la razón de tiempo obtenida, calificar el componente objetivo de análisis y cuantificar una concentración del componente objetivo de análisis.

11. Método de análisis según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que los datos de la curva de reacción de coagulación se obtienen midiendo el tiempo de tromboplastina parcial activado.

12. Método de análisis según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que

la etapa (2) anterior incluye además realizar un proceso de corrección basándose en un valor máximo de los datos adquiridos de la curva de reacción de coagulación para calcular los datos corregidos de la curva de reacción de coagulación, y

en la etapa (2) anterior, los datos corregidos de la curva de reacción de coagulación se usan para calcular los datos de la curva diferencial.

13. Método de análisis según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que

la etapa (1) anterior incluye:

preparar un plasma mixto obtenido mezclando un plasma de prueba y un plasma normal;

medir el tiempo de coagulación del plasma mixto sin tratamiento térmico; y

medir el tiempo de coagulación del plasma mixto después del tratamiento térmico,

la etapa (3) anterior incluye:

calcular un primer parámetro relacionado con un estado de reacción de coagulación basándose en los datos de medición del tiempo de coagulación del plasma mixto sin tratamiento térmico; y

calcular un segundo parámetro relacionado con un estado de reacción de coagulación basándose en los datos de medición del tiempo de coagulación del plasma mixto después del tratamiento térmico; y la etapa (4) anterior incluye

identificar una causa de la prolongación del tiempo de coagulación basándose en una razón o una diferencia entre el primer parámetro y el segundo parámetro.

14. Método de análisis según la reivindicación 13, en el que la identificación incluye determinar si la causa de la prolongación del tiempo de coagulación es un efecto de un inhibidor del factor de coagulación o un efecto de un anticoagulante lúpico.

15. Método de análisis según la reivindicación 13 ó 14, en el que el tiempo de calentamiento del plasma mixto es de 2 minutos o más y de 30 minutos o menos.

16. Método de análisis según una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15, en el que el primer parámetro y el segundo parámetro incluyen cada uno al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un valor máximo de la curva diferencial de primer orden, la altura del centro de gravedad vH, el tiempo del centro de gravedad vT, la anchura de pico vB, la anchura de pico del centro de gravedad vW, la razón de aplanamiento B vAB, la razón de tiempo B vTB, la razón de aplanamiento W vAW, la razón de tiempo W

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vTW, el tiempo promedio vTa, la altura promedio vHa, vTm, vABa y vAWa.

17. Método de análisis según una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 16, en el que la identificación incluye determinar que una causa de la prolongación del tiempo de coagulación es un efecto de un inhibidor del factor de coagulación cuando una razón entre el primer parámetro y el segundo parámetro no cae dentro de un intervalo predeterminado que incluye 1.

18. Método de análisis según una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 16, en el que la identificación incluye determinar que una causa de la prolongación del tiempo de coagulación es un efecto de un anticoagulante lúpico cuando una razón entre el primer parámetro y el segundo parámetro cae dentro de un intervalo predeterminado que incluye 1.

19. Método de análisis según una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 18, en el que una razón de mezcla entre el plasma de prueba y el plasma normal es de 1:1.

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