ES3054462T3

ES3054462T3 - Antibody against activin receptor type ii receptor for use in treating heart failure

Info

Publication number: ES3054462T3
Application number: ES18719334T
Authority: ES
Inventors: Anthony Rosenzweig; Jason Roh; David Glass
Original assignee: Novartis AG; Beth Israel Deaconess Medical Center Inc
Current assignee: Novartis AG; Beth Israel Deaconess Medical Center Inc
Priority date: 2017-03-24
Filing date: 2018-03-20
Publication date: 2026-02-03
Anticipated expiration: 2038-03-20
Also published as: US10982000B2; HRP20251505T1; SI3600415T1; US20210309749A1; EP3600415B1; AU2018240117B2; FI3600415T3; IL269083B1; US20200031940A1; CN110461359B; IL269083A; KR20190131096A; PT3600415T; JP7339159B2; US20240158514A1; CN119971025A; RU2019129858A3; EP3600415A1; JP2023100919A; LT3600415T

Abstract

La divulgación se refiere a nuevos usos y métodos para prevenir y/o tratar enfermedades cardíacas, que emplean una cantidad terapéuticamente eficaz de un antagonista del receptor ActRII, por ejemplo, una molécula de unión al receptor ActRII, por ejemplo, un anticuerpo del receptor ActRII, tal como el anticuerpo bimagrumab. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0002] Anticuerpo contra el receptor de activina de tipo II para su uso en el tratamiento de insuficiencia cardíaca

[0003] Esta solicitud reivindica prioridad sobre la solicitud provisional US-62/476.054, presentada el 24 de marzo de 2017.

[0004] Campo técnico

[0005] Esta descripción se refiere al campo de los antagonistas del receptor de activina de tipo II (ActRll), por ejemplo, moléculas capaces de antagonizar la unión de activinas, factores de diferenciación del crecimiento (GDF), proteínas morfogénicas óseas (BMP) y miostatina al receptor Actll humano, por ejemplo, un anticuerpo antagonista contra ActRIIA y/o ActRIIB, por ejemplo, bimagrumab. En particular, se refiere a la prevención y/o el tratamiento de la insuficiencia cardíaca incluyendo la insuficiencia cardíaca con fracción de eyección reducida (HFrEF) y la insuficiencia cardíaca con fracción de eyección conservada (HFpEF) y al tratamiento de una anomalía cardíaca estructural y/o funcional asociada a esta afección tal como la cardiopatía valvular, la enfermedad de las arterias coronarias, la hipertensión, la diabetes, el envejecimiento, la arritmia, la miocardiopatía periparto, la miocardiopatía por estrés, la miocardiopatía por estrés, agente infeccioso o tóxico y miocardiopatías dilatadas genéticas o idiopáticas, mediante la administración a un sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un antagonista del receptor ActRII, como se define en la reivindicación 1. Cabe destacar que estas afecciones abarcan síndromes clínicos que con frecuencia coexisten, pero que pueden ocurrir de forma aislada y, a veces, se denominan insuficiencia cardíaca sistólica y/o diastólica, insuficiencia cardíaca izquierda y/o derecha e insuficiencia cardíaca congestiva.

[0006] Antecedentes de la descripción

[0007] El receptor de activina tipo IIB (ActRIIB) es un receptor de señalización para varios miembros de la superfamilia del factor de crecimiento transformante beta (TGF-β). Los miembros de esta familia incluyen activina A, nodal, BMP2, BMP6, BMP7, BMP9, GDF5, GDF8 (miostatina) y GDF11, todos los cuales están implicados en la regulación negativa del músculo (Akpan et al., 2009).

[0008] La miostatina (GDF8) actúa a través del receptor de activina tipo II (principalmente a través del ActrllB) y su señalización propuesta es a través de la vía SMAD 2/3, que participa en la inhibición de la síntesis de proteínas y en la diferenciación y proliferación de los miocitos. La inhibición de la miostatina o la ablación genética aumentan la masa muscular y la fuerza (Lee et al 2005, Lee y McPherron 2001, Whittemore et al 2003).

[0009] El bimagrumab, también conocido como BYM338, es un anticuerpo monoclonal desarrollado para unirse competitivamente al receptor de activina tipo IIB (ActRll) con mayor afinidad que la miostatina o la activina, sus ligandos naturales. El bimagrumab se describe en el documento WO2010/125003. El bimagrumab es un anticuerpo completamente humano (IgG1 modificada, 234-235-Ala-Ala, λ<2>) que se une al dominio de unión al ligando de los ActRIIA y B, impidiendo de este modo la unión y la posterior señalización de sus ligandos,

[0010] incluyendo miostatina y activina que actúan como inhibidores naturales del crecimiento del músculo esquelético. El bimagrumab presenta reactividad cruzada con el ActRIIB humano y de ratón y es eficaz en las células del músculo esquelético de humanos, macacos cangrejeros, ratones y ratas. ActRIIB se distribuye ampliamente en el músculo esquelético, el tejido adiposo y diversos órganos incluyendo el corazón (Rebbapragada et al., 2003). Además, el documento WO2016/171948 A1 describe el uso de polipéptidos híbridos ActRIIB para su uso en el tratamiento de insuficiencia cardíaca crónica, atrofia cardíaca y miocardiopatía.

[0011] La insuficiencia cardíaca es un síndrome clínico en el que las alteraciones de la función cardíaca provocan una perfusión sistémica inadecuada para satisfacer las demandas metabólicas del cuerpo. La insuficiencia cardíaca se divide en dos tipos principales: (1) insuficiencia cardíaca con fracción de eyección reducida (HFrEF) (también conocida como “insuficiencia cardíaca sistólica”) e (2) insuficiencia cardíaca con fracción de eyección preservada (HFpEF) (también conocida como “insuficiencia cardíaca diastólica”). En la HFrEF, la reducción de la contractilidad cardíaca es el mecanismo principal que altera el gasto cardíaco y conduce a una subperfusión sistémica. En el HFpEF, la contractilidad cardíaca en reposo se conserva en general. Sin embargo, muchos otros defectos de la función cardíaca, incluyendo las reservas cardíacas y la función diastólica, alteran el rendimiento funcional del corazón, lo que produce fenotipos similares de insuficiencia cardíaca clínica. Diversas afecciones pueden dañar o debilitar el corazón y provocar insuficiencia cardíaca, incluyendo, por ejemplo, enfermedad cardíaca valvular, enfermedad de las arterias coronarias, hipertensión, diabetes, envejecimiento, arritmias, la miocardiopatía periparto, la miocardiopatía por estrés, los agentes tóxicos o infecciosos y las miocardiopatías dilatadas genéticas y/o idiopáticas.

[0012] La insuficiencia cardíaca de etiologías tales como diabetes, envejecimiento, hipertensión, cardiopatía isquémica, enfermedad coronaria, enfermedad cardíaca valvular y miocardiopatías genéticas e idiopáticas es una de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el mundo. Hay terapias farmacológicas limitadas disponibles para este proceso patológico cada vez más prevalente. El tratamiento habitual para la insuficiencia cardíaca incorpora múltiples terapias farmacológicas que se dirigen a diversos mecanismos implicados en la compleja fisiopatología de esta enfermedad. Desafortunadamente, incluso con las terapias dirigidas por las pautas, el pronóstico de estos pacientes sigue siendo malo, con tasas de mortalidad a los 5 años que se acercan al 50 %. En la insuficiencia cardíaca sistólica avanzada, los pacientes con frecuencia pueden no tolerar los tratamientos farmacológicos orales habituales debido a los efectos secundarios hemodinámicos, nefrogénicos y arritmogénicos, o pueden no lograr un alivio suficiente con dichos tratamientos. Para estos pacientes, las terapias avanzadas, tales como los inótropos i.v., los dispositivos de soporte mecánico y el trasplante cardíaco, son muy limitadas, costosas y están asociadas a riesgos significativos.

[0014] Antes de la presente descripción, la inhibición dirigida de los receptores de activina de tipo II (ActRIIA/b) no se había investigado como un profiláctico o terapia para la insuficiencia cardíaca o las afecciones anteriormente mencionadas que pueden conducir a la insuficiencia cardíaca. Como se describe en la presente memoria, ahora hay pruebas de que la administración sistémica de un antagonista del receptor ActRIIA/B, como el CDD866, que es una versión murinizada del BYM338 (en que la región Fc humana del anticuerpo se ha reemplazado por una Fc de ratón), tiene un efecto beneficioso significativo sobre la función cardíaca en ratones sometidos a una constricción aórtica transversa (TAC). TAC es un modelo experimental de uso común para la hipertrofia cardíaca y la insuficiencia cardíaca inducidas por la sobrecarga de presión. Validado por primera vez por Rockman et al., 1991, el modelo TAC murino se ha utilizado ampliamente desde entonces como una herramienta valiosa para imitar las enfermedades cardiovasculares humanas y comprender los procesos de señalización fundamentales implicados en la respuesta hipertrófica cardíaca y el desarrollo de la insuficiencia cardíaca (DeAlmeida et al.2010). Como se describe en la presente memoria, CDD866 no solo previene la disfunción cardíaca mediada por TAC, sino que también es capaz de restaurar la función cardíaca después de una insuficiencia cardíaca establecida dentro de 1-2 semanas de la administración del fármaco. También aumenta el crecimiento del músculo esquelético, que a menudo se atrofia en las formas avanzadas de insuficiencia cardíaca, e induce efectos cardíacos mínimos en los ratones de control que no están sujetos al estrés o lesión patológicos de TAC.

[0016] En la presente memoria se describen antagonistas del receptor ActRII, como se definen en la reivindicación 1, para su uso en el tratamiento y/o la prevención de la insuficiencia cardíaca, incluyendo la insuficiencia cardíaca provocada por una afección como la cardiopatía valvular, la cardiopatía isquémica, la enfermedad de las arterias coronarias, la hipertensión, la diabetes, el envejecimiento, las arritmias, la miocardiopatía periparto, la miocardiopatía por estrés, los agentes tóxicos o infecciosos y las miocardiopatías dilatadas genéticas y/o idiopáticas. También se describen antagonistas del receptor ActRII para su uso en el tratamiento de una anomalía cardíaca estructural y/o funcional asociada a una afección anteriormente mencionada. También se proporcionan métodos que utilizan dichos antagonistas de ActRll, como se definen en la reivindicación 1, para tratar y/o prevenir la insuficiencia cardíaca y para tratar una anomalía cardíaca estructural y/o funcional asociada a una afección anteriormente mencionada.

[0018] Resumen de la descripción

[0020] La invención es como se define en las reivindicaciones y cualquier otro aspecto, configuración o realización expuestos en la presente memoria que no estén dentro del alcance de las reivindicaciones es solo a título informativo. De forma adicional. cualquier referencia en la descripción a métodos de tratamiento se refiere a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un método de tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia (o para el diagnóstico).

[0022] En la presente memoria se describen antagonistas del receptor ActRII para su uso en el tratamiento y/o la prevención de la insuficiencia cardíaca. La insuficiencia cardíaca puede estar provocada por diversas afecciones tales como, por ejemplo, enfermedades valvulares tales como estenosis aórtica, enfermedad de las arterias coronarias, hipertensión, diabetes, envejecimiento, arritmias, miocardiopatía periparto, miocardiopatía por estrés, agentes tóxicos o infecciosos y miocardiopatías dilatadas genéticas o idiopáticas. Aquí se incluyen tanto la insuficiencia cardíaca con fracción de eyección reducida (HFrEF) como la insuficiencia cardíaca con fracción de eyección preservada (HFpEF).

[0024] También se describen en la presente memoria antagonistas del receptor ActRII para su uso en el tratamiento de una anomalía cardíaca estructural y/o funcional asociada a una afección tal como enfermedad cardíaca valvular, enfermedad de las arterias coronarias, hipertensión, diabetes, envejecimiento, arritmias, miocardiopatía periparto, miocardiopatía por estrés, agentes tóxicos o infecciosos y miocardiopatías dilatadas genéticas o idiopáticas. En algunos casos, la miocardiopatía periparto se presenta al final del embarazo o 6 meses después del parto. La miocardiopatía por estrés se presenta con frecuencia en mujeres mayores después de la menopausia. Un ejemplo de enfermedad cardíaca valvular es la estenosis aórtica, que puede ir acompañada de fragilidad y/o sarcopenia. La miocardiopatía por estrés puede ocurrir después de un estrés psicológico, patológico o físico.

[0026] En la presente memoria se describen métodos para tratar y/o prevenir insuficiencia cardíaca. Los métodos comprenden administrar a un sujeto que tiene insuficiencia cardíaca, o que está en riesgo de desarrollar insuficiencia cardíaca, una cantidad terapéuticamente eficaz de un antagonista del receptor ActRII, tal como, por ejemplo, Bimagrumab. Aquí se incluyen tanto la insuficiencia cardíaca con fracción de eyección reducida (HFrEF) como la insuficiencia cardíaca con fracción de eyección preservada (HFpEF). La insuficiencia cardíaca se puede diagnosticar en un paciente utilizando metodologías bien conocidas que incluyen, por ejemplo, la medición del péptido natriurético cerebral seguido de una ecografía del corazón si es positiva, y la obtención de imágenes tales como ecocardiografía.

[0027] Un sujeto corre el riesgo de desarrollar insuficiencia cardíaca cuando tiene una afección tal como una enfermedad cardíaca valvular, una enfermedad de las arterias coronarias (incluido un infarto de miocardio previo), hipertensión, diabetes, envejecimiento, arritmias, miocardiopatía periparto, miocardiopatía por estrés y miocardiopatías dilatadas genéticas o idiopáticas.

[0028] También se describen en la presente memoria métodos para el tratamiento de una anomalía cardíaca estructural y/o funcional asociada a una afección tal como enfermedad cardíaca valvular, enfermedad de las arterias coronarias, hipertensión, diabetes, envejecimiento, arritmias, miocardiopatía periparto, miocardiopatía por estrés, agente tóxico o infeccioso y miocardiopatías dilatadas genéticas o idiopáticas. Los métodos comprenden administrar a un sujeto que tiene dicha anomalía cardíaca estructural y/o funcional asociada a dicha afección, una cantidad eficaz de un antagonista del receptor ActRII.

[0029] Un ejemplo de un antagonista del receptor ActRII para su uso o en un método descrito en la presente memoria es una molécula de unión al receptor ActRII, que puede bloquear el acceso de los ligandos que interactúan con ActRll, tales como miostatina, GDF11 y Activina A, a ActRII. La molécula de unión al receptor ActRII puede unirse al receptor ActRIIA y/o al receptor ActRIIB. Los ejemplos de moléculas de unión a ActRII incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos que se unen al receptor ActRIIA y/o ActRIIB, por ejemplo, un anticuerpo contra el receptor ActRll. Preferiblemente, el anticuerpo contra el receptor ActRII es el BYM338, también conocido como bimagrumab.

[0030] Un ejemplo adicional de un antagonista del receptor ActRII para su uso en un método descrito en la presente memoria es una forma soluble del dominio extracelular del receptor ActRIIA o ActRIIB, que puede unirse a ligandos que interactúan con ActRll, tales como miostatina, GDF11 y Activina A. Este “cuerpo receptor” inhibe la función de los receptores ActRll unidos a las células compitiendo con sus ligandos.

[0031] En la presente memoria se describen antagonistas del receptor ActRII para su uso o en un método descrito en la presente memoria en donde el antagonista del receptor ActRII es un anticuerpo anti-ActRll que se une a un epítopo de ActRIIB que consiste en los aminoácidos 19-134 de la Id. de sec. n.º: 181 (Id. de sec. n.º: 182).

[0032] En la presente memoria se describen antagonistas del receptor ActRII para su uso o en un método descrito en la presente memoria en donde el anticuerpo anti-ActRII se une a un epítopo de ActRIIB que comprende o consiste en: (a) los aminoácidos 78-83 de la Id. de sec. n.º: 181 (WLDDFN - Id. de sec. n.º:188);

[0033] (b) los aminoácidos 76-84 de la Id. de sec. n.º: 181 (GCWLDDFNC - Id. de sec. n.º:186);

[0034] (c) los aminoácidos 75-85 de la Id. de sec. n.º: 181 (KGCWLDDFNCY - Id. de sec. n.º:190);

[0035] (d) los aminoácidos 52-56 de la Id. de sec. n.º: 181 (EQDKR - Id. de sec. n.º:189);

[0036] (e) los aminoácidos 49-63 de la Id. de sec. n.º: 181 (CEGEQDKRLHCYASW - Id. de sec. n.º:187);

[0037] (f) los aminoácidos 29-41 de la Id. de sec. n.º: 181 (CIYYNANWELERT - Id. de sec. n.º:191);

[0038] (g) los aminoácidos 100-110 de la Id. de sec. n.º: 181 (YFCCCEGNFCN - Id. de sec. n.º:192); o

[0039] (h) los aminoácidos 78-83 de la Id. de sec. n.º: 181 (WLDDFN) y los aminoácidos 52-56 de la Id. de sec. n.º: 181 (EQDKR).

[0040] Los anticuerpos anti-ActRIIB adicionales para su uso o en un método descrito en la presente memoria incluyen, por ejemplo,

[0041] a) un anticuerpo anti-ActRIIB que se une a un epítopo de ActRIIB que comprende:

[0042] (a) los aminoácidos 78-83 de la Id. de sec. n.º: 181 (WLDDFN - Id. de sec. n.º:188);

[0043] (b) los aminoácidos 76-84 de la Id. de sec. n.º: 181 (GCWLDDFNC - Id. de sec. n.º:186);

[0044] (c) los aminoácidos 75-85 de la Id. de sec. n.º: 181 (KGCWLDDFNCY - Id. de sec. n.º:190);

[0045] (d) los aminoácidos 52-56 de la Id. de sec. n.º: 181 (EQDKR - Id. de sec. n.º:189);

[0046] (e) los aminoácidos 49-63 de la Id. de sec. n.º: 181 (CEGEQDKRLHCYASW - Id. de sec. n.º:187);

[0047] (f) los aminoácidos 29-41 de la Id. de sec. n.º: 181 (CIYYNANWELERT - Id. de sec. n.º:191);

[0048] (g) los aminoácidos 100-110 de la Id. de sec. n.º: 181 (YFCCCEGNFCN - Id. de sec. n.º:192); o

[0049] (h) los aminoácidos 78-83 de la Id. de sec. n.º: 181 (WLDDFN) y los aminoácidos 52-56 de la Id. de sec. n.º: 181 (EQDKR); y

[0050] b) un anticuerpo antagonista contra ActRIIB que se une a un epítopo de ActRIIB que comprende los aminoácidos 78-83 de la Id. de sec. n.º: 181 (WLDDFN - Id. de sec. n.º:188);

[0051] (b) los aminoácidos 76-84 de la Id. de sec. n.º: 181 (GCWLDDFNC - Id. de sec. n.º:186);

[0052] (c) los aminoácidos 75-85 de la Id. de sec. n.º: 181 (KGCWLDDFNCY - Id. de sec. n.º:190);

[0053] (d) los aminoácidos 52-56 de la Id. de sec. n.º: 181 (EQDKR - Id. de sec. n.º:189);

[0054] (e) los aminoácidos 49-63 de la Id. de sec. n.º: 181 (CEGEQDKRLHCYASW - Id. de sec. n.º:187);

[0055] (f) los aminoácidos 29-41 de la Id. de sec. n.º: 181 (CIYYNANWELERT - Id. de sec. n.º:191);

[0056] (g) los aminoácidos 100-110 de la Id. de sec. n.º: 181 (YFCCCEGNFCN - Id. de sec. n.º:192); o

[0057] (h) los aminoácidos 78-83 de la Id. de sec. n.º: 181 (WLDDFN) y los aminoácidos 52-56 de la Id. de sec. n.º: 181 (EQDKR), en donde el anticuerpo tiene una K<D>de aproximadamente 2 pM.

[0058] En un ejemplo, un antagonista del receptor ActRII para su uso o en un método descrito en la presente memoria es un anticuerpo que se une a ActRIIB con una afinidad de aproximadamente 10 veces o mayor que la que se une a ActRIIA. Un antagonista del receptor ActRII para su uso o en un método descrito en la presente memoria puede ser un anticuerpo que comprende una CDR1 de la región variable de la cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 1-14; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 15-28; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 29-42; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 43-56; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 57-70; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 71-84.

[0059] Un antagonista del receptor ActRII para su uso o en un método descrito en la presente memoria puede ser un anticuerpo que comprende:

[0060] (a) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 1; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 15; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 29; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 43; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 57; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 71, (b) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 2; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 16; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 30; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 44; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 58; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 72, (c) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 3; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 17; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 31; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 45; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 59; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 73, (d) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 4; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 18; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 32; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 46; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 60; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 74, (e) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 5; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 19; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 33; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 47; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 61; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 75, (f) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 6; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 20; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 34; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 48; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 62; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 76, (g) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 7; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 21; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 35; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 49; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 63; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 77, (h) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 8; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 22; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 36; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 50, una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 64; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 78, (i) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 9; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 23; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 37; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 51; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 65; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 79, (j) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 10; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 24; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 38; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 52; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 66; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 80, (k) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 11; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 25; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 39; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 53; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 67; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 81, (l) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 12; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 26; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 40; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 54; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 68; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 82, (m) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 13; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 27; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 41; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 55; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 69; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 83, o (n) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 14; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 28; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 42; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 56; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 70; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 84. En otra realización, un antagonista del receptor ActRII para su uso o en un método descrito en la presente memoria puede ser un anticuerpo que comprende una secuencia de aminoácidos de cadena pesada de longitud completa que tiene al menos un 95 % de identidad de secuencia con al menos una secuencia seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 146-150 y 156-160.

[0061] Un antagonista del receptor ActRII para su uso o en un método descrito en la presente memoria puede ser un anticuerpo que comprende una secuencia de aminoácidos de cadena ligera de longitud completa que tiene al menos un 95 % de identidad de secuencia con al menos una secuencia seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 141-145 y 151-155.

[0062] Un antagonista del receptor ActRII para su uso o en un método descrito en la presente memoria puede ser un anticuerpo que comprende:

[0063] (a) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 99 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 85;

[0064] (b) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 100 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 86;

[0065] (c) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 101 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 87;

[0066] (d) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 102 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 88;

[0067] (e) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 103 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 89;

[0068] (f) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 104 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 90;

[0069] (g) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 105 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 91;

[0070] (h) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 106 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 92;

[0071] (i) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 107 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 93;

[0072] (j) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 108 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 94;

[0073] (k) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 109 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 95;

[0074] (l) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 110 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 96;

[0075] (m) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 111 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 97; o

[0076] (n) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 112 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 98.

[0077] Un antagonista del receptor ActRII para su uso o en un método descrito en la presente memoria puede ser un anticuerpo que comprende:

[0078] (a) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 146 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 141;

[0079] (b) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 147 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 142;

[0080] (c) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 148 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 143;

[0081] (d) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 149 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 144;

[0082] (e) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 150 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 145;

[0083] (f) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 156 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 151;

[0084] (g) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 157 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 152;

[0085] (h) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 158 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 153;

[0086] (i) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 159 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 154; o

[0087] (j) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 160 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 155.

[0088] También se describen antagonistas del receptor ActRII para su uso o en un método descrito en la presente memoria, que son anticuerpos anti-receptor ActRll, que bloquean de forma cruzada o son bloqueados de forma cruzada por al menos un anticuerpo descrito anteriormente en la presente memoria.

[0089] Un antagonista del receptor ActRII para su uso o en un método descrito en la presente memoria puede ser un anticuerpo contra el receptor ActRII, que tiene una función efectora alterada a través de la mutación de la región Fc. Los ejemplos de anticuerpos para su uso o en un método descrito en la presente memoria son los anticuerpos anti-ActRll codificados por pBW522 (DSM22873) o pBW524 (DSM22874).

[0090] Los ejemplos de trabajo expuestos en la presente memoria utilizan CDD866, que es una versión murinizada de BYM338 en que la región Fc humana del anticuerpo se ha reemplazado por una Fc de ratón.

[0091] Sin embargo, el anticuerpo preferido para su uso o en un método descrito en la presente memoria es Bimagrumab (BYM338), que es un anticuerpo totalmente humano (IgG1 modificada, 234-235-Ala-Ala, λ<2>).

[0092] Por “molécula de unión a ActRII” se entiende cualquier molécula capaz de unirse al receptor ActRII humano (ActRII A y/o ActRIIB) sola o asociada a otras moléculas. La reacción de unión puede mostrarse mediante métodos convencionales (ensayos cualitativos) que incluyen, por ejemplo, un ensayo de unión, un ensayo de competición o un bioensayo para determinar la inhibición de la unión del receptor ActRII a miostatina o cualquier tipo de ensayo de unión, con referencia a un ensayo de control negativo en el cual se utiliza un anticuerpo de especificidad no relacionada, pero idealmente del mismo isotipo, por ejemplo, un anticuerpo anti-CD25. Los ejemplos no limitativos de moléculas de unión al receptor ActRII incluyen moléculas pequeñas tales como aptámeros u otras moléculas de ácido nucleico diseñadas y/o sometidas a unirse al receptor, señuelos de ligandos y anticuerpos contra el receptor ActRII producidos por células B o hibridomas y anticuerpos quiméricos, injertados con CDR o humanos o cualquier fragmento de los mismos, por ejemplo, fragmentos F(ab')<2>y Fab, así como anticuerpos monocatenarios o de dominio único. Preferiblemente la molécula de unión al receptor ActRII antagoniza (por ejemplo, reduce, inhibe, disminuye, retrasa) la unión de los ligandos naturales al receptor ActRII. En algunas realizaciones de los métodos, regímenes, kits, procesos, usos y composiciones descritos, se emplea una molécula de unión al receptor ActRIIB.

[0093] En otra realización, la composición comprende un anticuerpo anti-ActRII que se une a un dominio de unión que consiste en los aminoácidos 19-134 de la Id. de sec. n.º: 181 (Id. de sec. n.º:182), o a un epítopo que comprende o consiste en (a) los aminoácidos 78-83 de la Id. de sec. n.º: 181 (WLDDFN - Id. de sec. n.º:188); (b) los aminoácidos 76-84 de la Id. de sec. n.º:181 (GCWLDDFNC - Id. de sec. n.º:186); (c) los aminoácidos 75-85 de la Id. de sec. n.º:181 (KGCWLDDFNCY - Id. de sec. n.º:190); (d) los aminoácidos 52-56 de la Id. de sec. n.º:181 (EQDKR - Id. de sec. n.º:189); (e) los aminoácidos 49-63 de la Id. de sec. n.º:181 (CEGEQDKRLHCYASW - Id. de sec. n.º:187); (f) los aminoácidos 29-41 de la Id. de sec. n.º:181 (CIYYNANWELERT - Id. de sec. n.º:191); (g) los aminoácidos 100-110 de la Id. de sec. n.º:181 (YFCCCEGNFCN - Id. de sec. n.º:192); o (h) los aminoácidos 78-83 de la Id. de sec. n.º:181 (WLDDFN) y los aminoácidos 52-56 de la Id. de sec. n.º:181 (EQDKR).

[0094] En una realización alternativa adicional, las composiciones mencionadas anteriormente comprenden un anticuerpo anti-ActRII que se une a ActRIIB con una afinidad 10 veces o mayor de la que se une a ActRIIA.

[0095] De forma adicional, la descripción se refiere a una composición en donde el anticuerpo anti-ActRIIB comprende una CDR1 de la región variable de la cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 1-14; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 15-28; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 29-42; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 43-56; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 57-70; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 71-84.

[0096] En determinadas realizaciones, la descripción proporciona composiciones en donde el anticuerpo anti-ActRII comprende: (a) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 1; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 15; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 29; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 43; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 57; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 71, (b) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 2; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 16; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 30; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 44; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 58; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 72, (c) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 3; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 17; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 31; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 45; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 59; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 73, (d) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 4; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 18; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 32; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 46; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 60; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 74, (e) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 5; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 19; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 33; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 47; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 61; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 75, (f) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 6; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 20; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 34; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 48; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 62; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 76, (g) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 7; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 21; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 35; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 49; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 63; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 77, (h) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 8; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 22; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 36; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 50, una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 64; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 78, (i) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 9; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 23; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 37; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 51; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 65; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 79, (j) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 10; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 24; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 38; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 52; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 66; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 80, (k) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 11; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 25; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 39; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 53; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 67; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 81, (l) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 12; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 26; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 40; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 54; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 68; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 82, (m) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 13; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 27; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 41; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 55; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 69; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 83, (n) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 14; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 28; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 42; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 56; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 70; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 84.

[0098] En otra realización más, el anticuerpo anti-ActRII mencionado anteriormente comprende (i) una secuencia de aminoácidos de cadena pesada de longitud completa que tiene al menos un 95 % de identidad de secuencia con al menos una secuencia seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 146-150 y 156-160, (ii) una secuencia de aminoácidos de cadena ligera de longitud completa que tiene al menos un 95 % de identidad de secuencia con al menos una secuencia seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 141-145 y 151-155 o (iii) (a) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 99 y la secuencia de cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 85; (b) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 100 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 86; (c) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 101 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 87; (d) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 102 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 88; (e) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 103 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 89; (f) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 104 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 90; (g) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 105 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 91; (h) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 106 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 92; (i) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 107 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 93; (j) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 108 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 94; (k) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 109 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 95; (l) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 110 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id.

[0099] de sec. n.º: 96; (m) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 111 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 97; o (n) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 112 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 98.

[0100] En determinados aspectos la descripción se refiere a las composiciones descritas anteriormente, en donde el anticuerpo anti-ActRII comprendido comprende (a) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 146 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 141; (b) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 147 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 142; (c) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 148 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 143; (d) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 149 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 144; (e) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 150 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 145; (f) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 156 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 151; (g) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 157 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 152; (h) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 158 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 153; (i) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 159 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 154; o (j) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 160 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 155.

[0101] Una materia adicional de la descripción se refiere a la composición, en donde (i) el anticuerpo anti-ActRII bloquea de forma cruzada o es bloqueado de forma cruzada por uno de los anticuerpos descritos anteriormente, (ii) tiene una función efectora alterada mediante la mutación de la región Fc y/o (iii) se une a un epítopo reconocido por uno de los anticuerpos descritos anteriormente.

[0102] En una realización alternativa adicional, las composiciones mencionadas anteriormente comprenden un anticuerpo anti-ActRII que se une a ActRIIB con una afinidad 10 veces o mayor de la que se une a ActRIIA.

[0103] En otra realización más, la composición descrita comprende un anticuerpo anti-ActRII codificado por pBW522 (DSM22873) o pBW524 (DSM22874).

[0104] Breve descripción de las figuras

[0105] La Figura 1A representa gráficamente los niveles en plasma de CDD866 medidos en ratones C57BL/6 de tipo silvestre tratados con inyecciones semanales de CDD866 o Ab de control de isótropos durante ocho semanas.

[0106] La Figura 1B representa gráficamente la relación peso del corazón/longitud tibial (HW/TL) tanto para los ratones del grupo control, isotipo Ab (n=3) barra gris, como para los ratones del grupo experimental CDD866 Ab (n=3) * p<0,05, barra negra, que indica que CDD866 no aumenta significativamente la masa cardíaca en ratones C57BL/6 de tipo silvestre adultos.

[0107] La Figura 1C es un gráfico de barras que muestra el % de fibrosis en ratones tanto del grupo control (isotipo Ab, barra gris) como ratones en el grupo experimental (CDD866 Ab [n=3].* p<0,05, barra negra). CDD866 reduce la fibrosis miocárdica, aunque el % de fibrosis fue notablemente bajo en el valor de referencia en ratones C57BL/6 adultos de tipo silvestre.

[0108] La Figura 1D muestra fotomicrografías representativas del miocardio teñido con PAS, destacando el tamaño de los cardiomiocitos.

[0109] La Figura 1E representa gráficamente el descubrimiento de que CDD866 no aumenta significativamente el tamaño de los cardiomiocitos en animales de tipo silvestre. Los datos se presentan como media ± desviación estándar. Gris = grupo de control, isotipo Ab (n = 3). Negro = grupo experimental, CDD866 Ab (n = 3). * p<0,05

[0110] La Figura 2A demuestra gráficamente que la función sistólica, medida mediante el % de acortamiento fraccionario (FS), disminuye de forma esperada con TAC (barra horizontal), pero permanece conservada en los animales tratados con CDD866 sometidos a TAC (barra diagonal). SHAM isotipo Ab (n=7), barra negra; SHAM CDD866 Ab (n=7), barra gris; TAC Isotipo Ab (n = 10), barra horizontal; TAC CDD866 Ab (n = 10), barra diagonal. #p<0,01.

[0111] La Figura 2B muestra imágenes ecocardiográficas representativas después de 11 semanas de cirugía SHAM o TAC y demuestran la conservación de la función sistólica en animales con TAC tratados con CDD866.

[0112] La Figura 2C representa gráficamente la relación peso pulmonar/longitud tibial (LW/TL) para ratones en diferentes grupos de tratamiento. SHAM isotipo Ab (n=7), barra negra; SHAM CDD866 Ab (n=7), barra gris; TAC Isotipo Ab (n = 10), barra horizontal; TAC CDD866 Ab (n = 10), barra diagonal. *p<0,01. Existe una tendencia hacia la disminución del peso pulmonar en los animales tratados con CDD866, lo que indica una menor congestión pulmonar (un sustituto de la insuficiencia cardíaca en modelos murinos).

[0113] La Figura 2D representa gráficamente una disminución significativa en el criterio de valoración primario (supervivencia o % FS<20 %) con el tratamiento de CDD866.

[0114] La Figura 3A representa gráficamente los niveles en plasma de CDD866 para los diversos grupos de tratamiento: TAC isotipo; TAC CDD866; Sham isotipo; y Sham CDD866.

[0115] La Figura 3B es un gráfico de barras que muestra que la expresión de folistatina tipo 3 (FSTL3) cardíaca aumenta con TAC, lo que indica que la señalización de los ActRII-a/B cardíacos aumenta en este modelo de lesión cardíaca. El tratamiento con CDD866 disminuye la expresión cardíaca del FSTL3, lo que indica que bloquea eficazmente la señalización de ActRII-A/B inducida por TAC en el corazón. Negro = SHAM isotipo Ab (n=7). Gris = SHAM CDD866 Ab (n = 7). Barra horizontal = TAC Isotipo Ab (n = 10). Barra diagonal = TAC CDD866 Ab (n = 10). * p<0,05. # p<0,01.

[0116] La Figura 3C representa gráficamente que la expresión relativa del ARNm de los genes de hipertrofia cardíaca patológica disminuye con el tratamiento con CDD866. ANP (péptido natriurético auricular); BNP (péptido natriurético cerebral); aMHC (cadena pesada de alfa miosina); bMHC (cadena pesada de beta miosina). Negro = SHAM isotipo Ab (n=7). Gris = SHAM CDD866 Ab (n = 7). Barra horizontal = TAC Isotipo Ab (n = 10). Barra diagonal = TAC CDD866 Ab (n = 10). * p<0,05. # p<0,01.

[0117] La Figura 3D es un gráfico de barras que ilustra que la expresión relativa del ARNm de los genes de la fibrosis cardíaca patológica en la insuficiencia cardíaca inducida por TAC disminuye con el tratamiento con CDD866. COL1 (colágeno tipo 1); CTGF (factor de crecimiento del tejido conectivo). Negro = SHAM isotipo Ab (n=7). Gris = SHAM CDD866 Ab (n = 7). Barra horizontal = TAC Isotipo Ab (n = 10). Barra diagonal = TAC CDD866 Ab (n = 10). * p<0,05. # p<0,01.

[0118] La Figura 4A demuestra gráficamente los niveles en plasma medidos de CDD866 en ratones que desarrollaron la función sistólica después de TAC y a continuación fueron tratados con ocho semanas de inyecciones semanales de CDD866.

[0119] La Figura 4B es un gráfico de barras que muestra el nivel relativo de expresión de ARNm para FSTL3 (similar a folistatina 3), Activina A, MSTN (miostatina), ACVR2A (receptor de Activina A tipo 2A) y ACVR2B (receptor de Activina A tipo 2B). Este gráfico demuestra que un enfoque de tratamiento con CDD866 puede reducir la expresión cardíaca de FSTL3, lo que indica que CDD866 puede bloquear eficazmente la señalización de ActRII-A/B inducida por TAC en el corazón.

[0120] La Figura 4C es un gráfico con el % de acortamiento fraccional representado contra el tiempo en semanas, que muestra que CDD866 revierte la disfunción sistólica en la insuficiencia cardíaca inducida por TAC tan pronto como 1 semana después del tratamiento con una mejora progresiva.

[0121] La Figura 4D representa gráficamente que CDD866 también reduce la relación entre el peso pulmonar y la longitud tibial, un marcador sustituto de la insuficiencia cardíaca en un modelo murino. Gris = TAC isotipo Ab. Negro = TAC CDD866 Ab. * p<0,05. # p<0,01. LW/TL (relación peso pulmonar/longitud tibial).

[0122] La Figura 5A es un gráfico que representa el grosor de la pared frente a las semanas posteriores a TAC, mostrando que el grosor de la pared aumenta progresivamente con el tratamiento con CDD866. La flecha indica el inicio de CDD866.

[0123] La Figura 5B muestra imágenes de eco en serie de secciones del ventrículo medio durante el curso del tratamiento que demuestran diferencias en el crecimiento cardíaco en los animales tratados con isotipo frente a los tratados con CDD866. El crecimiento cardíaco mediado por CDD866 evita la remodelación excéntrica asociada a disfunción sistólica progresiva.

[0124] La Figura 5C es un gráfico en que se muestra la relación peso cardiaco/longitud tibial (HW/TL) tanto para los ratones tratados con TAC isotipo Ab (barra gris) como con TAC CDD866 Ab (barra negra), lo que indica que CDD866 aumenta la masa cardíaca en el modelo TAC. * p<0,05. # p<0,01.

[0125] La Figura 5D muestra fotomicrografías del miocardio teñido con PAS que destacan el tamaño de los cardiomiocitos tanto para los ratones tratados con TAC Isotipo Ab como con TAC CDD866 Ab.

[0126] La Figura 5E es un gráfico en que se muestra el área de sección transversal de los cardiomiocitos de ratones para los tratamientos con TAC isotipo Ab (gris) y TAC CDD866 Ab (negro), lo que indica que CDD866 aumenta el crecimiento de los cardiomiocitos en TAC. * p<0,05. # p<0,01.

[0127] La Figura 6A es un gráfico que muestra que la expresión del ARNm de los genes asociados con la hipertrofia patológica disminuye con el tratamiento con CDD866. ANP (péptido natriurético auricular); BNP (péptido natriurético cerebral); αMHC (cadena pesada de alfa miosina); βMHC (cadena pesada de beta miosina). TAC isotipo Ab (gris); TAC CDD866 Ab (negro) se muestran. * p<0,05. # p<0,01.

[0128] La Figura 6B representa el acortamiento fraccionado, el grosor de la pared y el peso corporal de los ratones frente al tiempo en semanas. Flecha = momento de administración de la dosis única; línea discontinua = trayectoria prevista sin tratamiento con CDD866. Los gráficos demuestran que los efectos del CDD866 sobre el crecimiento cardíaco y el peso corporal se producen rápidamente y son transitorios y reversibles. Los efectos de una dosis única de CDD866 también se producen en un período de 1 a 2 semanas y se mantienen durante al menos 6 semanas.

[0129] La Figura 6C muestra fotomicrografías del miocardio teñido con tricromo de Masson (azul = fibrosis; rojo = músculo), lo que demuestra una disminución de la fibrosis cardíaca en ratones con TAC tratados con CDD866.

[0130] La Figura 6D es un gráfico de barras que muestra el % de fibrosis con TAC isotipo Ab (gris) y TAC CDD866 Ab (negro), lo que indica una tendencia hacia una disminución de la fibrosis miocárdica con el tratamiento con CDD866. * p<0,05. # p<0,01.

[0131] La Figura 7A es una transferencia Western de muestras de gastrocnemio sondadas con anticuerpos contra p-SMAD3 y GAPDH. Se recogieron muestras de ratones C57BL/6 con disfunción cardíaca confirmada después de TAC y las 8 semanas posteriores de tratamiento con CDD866 (TT-2 a TT-10) o con un control de isotipo Ab (TT-11 a TT-20). Esta Figura demuestra en general que CDD866 disminuye la señalización de ActRII-A/B en el músculo esquelético en el modelo murino de insuficiencia cardíaca mediada por TAC. La estimulación con MSTN en células C2C12 se usó como control positivo para el ensayo.

[0132] La Figura 7B es un gráfico en que el % de cambio en el peso de los ratones con respecto al valor de referencia se mide en comparación con las semanas posteriores al tratamiento. Los puntos de datos de diamante (rojo) indican el TAC isotipo Ab. Los puntos de datos cuadrados (azul) indican TAC CDD866 Ab. * p<0,05. # p<0,01. CDD866 aumenta progresivamente el peso corporal total, probablemente a través del aumento de la masa muscular.

[0133] La Figura 7C representa gráficamente el % de cambio con respecto al control de la masa muscular para varios grupos de músculos esqueléticos; EDL (extensor largo de los dedos), gastrocnemio y tibial. Rojo indica TAC isotipo Ab. Azul indica TAC CDD866 Ab. * p<0,05. # p<0,01. El CDD866 aumenta en general la masa de los tres grupos de músculos esqueléticos.

[0134] La Figura 7D es un gráfico en que el % de distribución de fibras se representa frente a secciones histológicas en serie, lo que indica que el CDD866 aumenta el tamaño de los miocitos esqueléticos. Rojo indica el tratamiento TAC isotipo Ab. Azul indica el tratamiento TAC CDD866 Ab. * p<0,05. # p<0,01.

[0135] La Figura 7E muestra cuatro gráficos donde el % de distribución de fibras se representa frente a secciones histológicas en serie, lo que indica que CDD866 induce múltiples cambios de tipo de fibra en el músculo esquelético. Rojo indica el tratamiento TAC isotipo Ab. Azul indica el tratamiento TAC CDD866 Ab.

[0136] La Figura 8A es un gráfico que representa los cambios en el % de acortamiento fraccional (FS) con respecto al tiempo en ratones con una mutación sin sentido (F764L) en el gen αMHC (un modelo murino de miocardiopatía dilatada). Doce semanas de tratamiento con CDD866 dieron como resultado una tendencia modesta hacia el aumento de la función sistólica. Gris = Isotipo Ab. Negro = CDD866 Ab. * p<0,05. # p<0,01.

[0137] La Figura 8B es un gráfico de barras que muestra los niveles relativos de expresión de ARNm de diversos genes relevantes para la vía ActRII en el tejido cardíaco de estos ratones tratados con CDD866 (negro) o con un isotipo Ab (gris). Existe una tendencia hacia una disminución de la expresión del FSTL3 cardíaco con el CDD866, lo que sugiere una inhibición de la señalización del receptor ActRII en el corazón. * p<0,05. # p<0,01.

[0138] La Figura 8C es un gráfico de barras que muestra los niveles relativos de expresión de ARNm de los genes asociados con la hipertrofia patológica en ratones tratados con isotipo Ab o CDD866 Ab. * p<0,05. # p<0,01. Gris = Isotipo Ab. Negro = CDD866 Ab. * p<0,05. # p<0,01. ANP (péptido natriurético auricular); BNP (péptido natriurético cerebral); αMHC (cadena pesada de alfa miosina); βMHC (cadena pesada de beta miosina). No hay diferencias significativas en los perfiles de expresión génica de la hipertrofia patológica.

[0139] Definiciones

[0140] Para que la presente descripción pueda entenderse más fácilmente, primero se definen ciertos términos. Se exponen definiciones adicionales a lo largo de la descripción detallada.

[0141] La expresión “que comprende” significa “que incluye”, por ejemplo, una composición “que comprende” X puede consistir exclusivamente en X o puede incluir algo adicional, por ejemplo, X Y.

[0142] El término “aproximadamente” en relación con un valor numérico x significa, por ejemplo, x 10 %.

[0143] A continuación se ejemplifican los posibles regímenes de tratamiento preclínico para evaluar los posibles efectos de un tratamiento con una molécula de unión a ActRII, más preferiblemente un anticuerpo antagonista contra ActRII, por ejemplo, bimagrumab.

[0145] El tratamiento se ejemplifica mediante el uso de ratones sometidos a una constricción aórtica transversa (TAC), un modelo experimental de uso común para la hipertrofia cardíaca y la insuficiencia cardíaca inducidas por la sobrecarga de presión. El experto sabe cómo establecer experimentos o regímenes de dosificación adecuados para otras especies, en particular para los seres humanos. Para los estudios en primates, el anticuerpo anti-ActRII, por ejemplo, bimagrumab, se puede administrar una vez a la semana durante un máximo de 3 meses a macacos cangrejeros machos y hembras mediante inyección intravenosa. Se pueden asignar 32 macacos cangrejeros (16 por sexo) a uno de los cuatro grupos de tratamiento (de 3 a 5 animales/sexo/grupo) y se les pueden administrar inyecciones intravenosas del vehículo o del anticuerpo ActRIIB, por ejemplo, BYM338, a 10, 30 o 100 mg/kg una vez a la semana durante 13 semanas (14 dosis en total); las dosis se seleccionarán en función de la sintomatología de la enfermedad cardíaca).

[0147] Los términos “ActRIIA” y “ActRIIB” se refieren a los receptores de Activina. Las activinas señalizan a través de un complejo heterodimérico de receptores de serina quinasas que incluyen al menos dos receptores de tipo I (I y IB) y dos de tipo II (IIA y IIB, también conocidos como ACVR2A y ACVR2B). Todos estos receptores son proteínas transmembrana, compuestas por un dominio extracelular de unión a ligandos con una región rica en cisteína, un dominio transmembrana y un dominio citoplasmático con una especificidad prevista de serina/treonina. Los receptores de tipo I son esenciales para la señalización, mientras que los receptores de tipo II son necesarios para la unión de los ligandos y para la expresión/reclutamiento de los receptores de tipo I. Los receptores de tipo I y II forman un complejo estable después de la unión del ligando, lo que resulta en la fosforilación de los receptores de tipo I por parte de los receptores de tipo II. El receptor de activina II B (ActRIIB) es un receptor de la miostatina. El receptor de activina II A (Act RIIA) también es un receptor de la misostatina. El término receptor ActRIIB o ActIIB se refiere al ActRIIB humano tal como se define en la Id. de sec. n.º: 181 (AAC64515.1, GI:3769443). Los anticuerpos anti-ActRIIB policlonales y monoclonales de calidad investigadora son conocidos en la técnica, tales como los fabricados por R&D Systems<®>, MN, EE. UU. Por supuesto, los anticuerpos podrían generarse contra el ActRIIB de otras especies y utilizarse para tratar afecciones patológicas en esas especies.

[0149] La expresión “respuesta inmunitaria” se refiere a la acción de, por ejemplo, los linfocitos, las células presentadoras de antígenos, las células fagocíticas, los granulocitos y las macromoléculas solubles producidas por las células anteriores o el hígado (por ejemplo, anticuerpos, citocinas y complemento) que produce un daño selectivo, la destrucción o la eliminación del cuerpo humano de patógenos, células o tejidos invasores infectados con patógenos, células cancerosas o, en casos de autoinmunidad o inflamación patológica, células o tejidos humanos normales.

[0151] Una “actividad de señalización” se refiere a una relación causal bioquímica generalmente iniciada por una interacción proteína-proteína tal como la unión de un factor de crecimiento a un receptor, lo que resulta en la transmisión de una señal de una parte de una célula a otra parte de una célula. En general, la transmisión implica la fosforilación específica de uno o más residuos de tirosina, serina o treonina en una o más proteínas en la serie de reacciones que provocan la transducción de señales. Los penúltimos procesos suelen incluir eventos nucleares, lo que resulta en un cambio en la expresión génica.

[0153] El término “anticuerpo” tal como se menciona en la presente memoria incluye anticuerpos completos y cualquier fragmento de unión a antígeno (es decir,“porción de unión a antígeno”) o cadenas individuales del mismo. Un “anticuerpo” de origen natural es una glicoproteína que comprende al menos dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L) interconectadas por enlaces disulfuro. Cada cadena pesada (HC) comprende una región variable de la cadena pesada (abreviada en la presente memoria como V<H>) y una región constante de la cadena pesada. La región constante de la cadena pesada comprende tres dominios, CH1, CH2 y CH3. Cada cadena ligera comprende una región variable de la cadena ligera (abreviada en la presente memoria como V<L>) y una región constante de la cadena ligera. La región constante de la cadena ligera está compuesta por un dominio, C<L.>Las regiones V<H>y V<L>se pueden subdividir además en regiones de hipervariabilidad, llamadas regiones determinantes de complementariedad (CDR), intercaladas con regiones que son más conservadas, llamadas regiones marco (FR). Cada V<H>y V<L>se compone de tres CDR y cuatro FR, dispuestas desde el amino-terminal hasta el carboxi-terminal en el siguiente orden: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Las regiones variables de las cadenas pesada y ligera contienen un dominio de unión que interactúa con un antígeno. Las regiones constantes de los anticuerpos pueden mediar en la unión de la inmunoglobulina a los tejidos o factores del hospedador, incluyendo diversas células del sistema inmunitario (por ejemplo, células efectoras) y el primer componente (Clq) del sistema clásico del complemento.

[0155] La expresión “porción de unión a antígeno” de un anticuerpo (o simplemente “porción de antígeno”), como se utiliza en la presente memoria, se refiere a la longitud completa o a uno o más fragmentos de un anticuerpo que conservan la capacidad de unirse específicamente a un antígeno (por ejemplo, una porción de ActRIIB). Se ha demostrado que la función de unión al antígeno de un anticuerpo puede realizarse mediante fragmentos de un anticuerpo de longitud completa. Los ejemplos de fragmentos de unión abarcados en la expresión “porción de unión al antígeno” de un anticuerpo incluyen un fragmento Fab, un fragmento monovalente que consiste en los dominios V<L>, V<H>, C<L>y CH1; un fragmento F(ab)<2>, un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab, cada uno de los cuales se une al mismo antígeno, unidos por un puente disulfuro en la región bisagra; un fragmento Fd que consiste en los dominios V<H>y CH1; un fragmento Fv que consiste en los dominios V<L>y V<H>de un único brazo de un anticuerpo; un fragmento dAb (Ward et al., 1989 Nature 341:544-546), que consiste en un dominio V<H>; y una región determinante de complementariedad (CDR) aislada.

[0157] Adicionalmente, aunque los dos dominios del fragmento Fv, V<L>y V<H>, están codificados por genes separados, pueden unirse, utilizando métodos recombinantes, mediante un enlazador sintético que les permite formarse como una cadena proteica única en que las regiones V<L>y V<H>se emparejan para formar moléculas monovalentes (conocidas como Fv monocatenario (scFv); véase, por ejemplo,Bird et al., 1988 Science 242:423-426; y Huston et al., 1988 Proc. Natl. Acad. Sci.85:5879-5883). También se pretende que dichos anticuerpos monocatenarios estén incluidos dentro de la expresión “región de unión al antígeno” de un anticuerpo. Estos fragmentos de anticuerpos se obtienen utilizando técnicas convencionales conocidas por los expertos en la técnica y los fragmentos se seleccionan para determinar su utilidad de la misma manera que los anticuerpos intactos.

[0159] Un “anticuerpo aislado”, como se utiliza en la presente memoria, se refiere a un anticuerpo que está sustancialmente libre de otros anticuerpos que tienen diferentes especificidades antigénicas (por ejemplo, un anticuerpo aislado que se une específicamente a ActRIIB está sustancialmente libre de anticuerpos que se unen específicamente a antígenos distintos de ActRIIB). Sin embargo, un anticuerpo aislado que se une específicamente a ActRIIB puede tener reactividad cruzada con otros antígenos, como las moléculas de ActRIIB de otras especies. Además, un anticuerpo aislado puede estar sustancialmente libre de otro material celular y/o productos químicos.

[0161] Las expresiones “bloquear de forma cruzada”, “bloqueado de forma cruzada” y “bloqueo cruzado” se utilizan indistintamente en la presente memoria para referirse a la capacidad de un anticuerpo u otro agente de unión para interferir con la unión de otros anticuerpos o agentes de unión al ActRIIB, particularmente el dominio de unión al ligando, en un ensayo de unión competitiva estándar.

[0163] Las expresiones “anticuerpo monoclonal” o “composición de anticuerpos monoclonales” como se utilizan en la presente memoria se refieren a una preparación de moléculas de anticuerpos de composición molecular única. Una composición de anticuerpos monoclonales muestra una única especificidad de unión y afinidad por un epítopo particular.

[0165] La expresión “anticuerpo humano”, como se utiliza en la presente memoria, pretende incluir anticuerpos que tienen regiones variables en las que tanto las regiones marco como las CDR derivan de secuencias de origen humano. Adicionalmente, si el anticuerpo contiene una región constante, la región constante también deriva de dichas secuencias humanas, por ejemplo, secuencias de línea germinal humana o versiones mutadas de secuencias de línea germinal humana o anticuerpos que contienen secuencias marco de consenso derivadas del análisis de secuencias marco humanas, por ejemplo, como se describe en Knappik, et al. (2000. J Mol Biol 296, 57-86). Los anticuerpos humanos de la descripción pueden incluir residuos de aminoácidos no codificados por secuencias humanas (por ejemplo, mutaciones introducidas por mutagénesis aleatoria o específica de sitioin vitroo por mutación somáticain vivo).Sin embargo, la expresión “anticuerpo humano”, como se utiliza en la presente memoria, no pretende incluir anticuerpos en que las secuencias de CDR derivadas de la línea germinal de otra especie de mamífero, tal como un ratón, se hayan injertado en secuencias marco humanas.

[0167] La expresión “anticuerpo monoclonal humano” se refiere a anticuerpos que muestran una especificidad de unión única que tienen regiones variables en las que tanto las regiones marco como las CDR derivan de secuencias humanas. En una realización, los anticuerpos monoclonales humanos son producidos por un hibridoma que incluye una célula B obtenida de un animal no humano transgénico, por ejemplo, un ratón transgénico, que tiene un genoma que comprende un transgén de cadena pesada humana y un transgén de cadena ligera fusionados con una célula inmortalizada.

[0169] La expresión “anticuerpo humano recombinante”, como se utiliza en la presente memoria, incluye todos los anticuerpos humanos que se preparan, se expresan, se crean o se aíslan por medios recombinantes, tales como los anticuerpos aislados de un animal (por ejemplo, un ratón) que es transgénico o transcromosómico para los genes de la inmunoglobulina humana o un hibridoma preparado a partir de los mismos, anticuerpos aislados de una célula hospedadora transformada para expresar el anticuerpo humano, por ejemplo, de un transfectoma, anticuerpos aislados de una biblioteca de anticuerpos humanos recombinante y combinatoria y anticuerpos preparados, expresados, creados o aislados por cualquier otro medio que implique el corte y empalme de todo o una parte de un gen de inmunoglobulina humana, secuencias a otras secuencias de ADN. Dichos anticuerpos humanos recombinantes tienen regiones variables en las cuales las regiones marco y CDR derivan de secuencias de inmunoglobulina de la línea germinal humana. Sin embargo, en determinados casos, dichos anticuerpos humanos recombinantes pueden someterse a mutagénesisin vitro(o, cuando se utiliza un animal transgénico para secuencias de Ig humanas, a mutagénesis somáticain vivo) y, por lo tanto, las secuencias de aminoácidos de las regiones V<H>y V<L>de los anticuerpos recombinantes son secuencias que, si bien derivan de y están relacionadas con las secuencias V<H>y V<L>de la línea germinal humana, pueden no existir de forma natural dentro del repertorio de la línea germinal de anticuerpos humanosin vivo.

[0170] Como se utiliza en la presente memoria, “isotipo” se refiere a la clase de anticuerpo (por ejemplo, IgM, IgE, IgG, tal como IgG1 o IgG2) que proporcionan los genes de la región constante de la cadena pesada.

[0171] Las frases “un anticuerpo que reconoce un antígeno” y “un anticuerpo específico para un antígeno” se utilizan indistintamente en la presente memoria con la expresión “un anticuerpo que se une específicamente a un antígeno”. Como se utiliza en la presente memoria, un anticuerpo que “se une específicamente al polipéptido ActRIIB” pretende referirse a un anticuerpo que se une al polipéptido ActRIIB humano con una K<D>de aproximadamente 100 nM o menos, aproximadamente 10 nM o menos, aproximadamente 1 nM o menos. Un anticuerpo que “reacciona de forma cruzada con un antígeno distinto del ActRIIB” se refiere a un anticuerpo que se une a ese antígeno con una K<D>de aproximadamente 10 x 10<-9>M o menos, aproximadamente 5 x 10<-9>M o menos, o aproximadamente 2 x 10<-9>M o menos. Un anticuerpo que “no reacciona de forma cruzada con un antígeno en particular” pretende referirse a un anticuerpo que se une a ese antígeno, con una K<D>de aproximadamente 1,5 x 10<-8>M o más, o una K<D>de aproximadamente 5-10 x 10<-8>M, o aproximadamente 1 x 10<-7>M o más. En determinados casos, dichos anticuerpos que no reaccionan de forma cruzada con el antígeno muestran una unión esencialmente indetectable contra estas proteínas en los ensayos de unión estándar. La K<D>se puede determinar utilizando un sistema de biosensor, tal como un sistema Biacore<®>o una valoración volumétrica en equilibrio de la solución.

[0172] Como se utiliza en la presente memoria, la expresión “anticuerpo antagonista” pretende referirse a un anticuerpo que inhibe la actividad de señalización inducida por ActRIIB en presencia de miostatina o de otros ligandos de ActRIIb tales como activinas o GDF-11 y/o a un anticuerpo que inhibe la actividad de señalización inducida por ActRIIA en presencia de miostatina o de otros ligandos de ActRIIA tales como activinas o GDF-11. Los ejemplos de un ensayo para detectar esto incluyen la inhibición de la señalización inducida por la miostatina (por ejemplo, mediante un ensayo del gen indicador dependiente de Smad), la inhibición de la fosforilación de Smad inducida por la miostatina (ELISA de P-Smad) y la inhibición de la inhibición de la diferenciación de las células del músculo esquelético inducida por la miostatina (por ejemplo, mediante un ensayo de creatina quinasa).

[0173] En algunas realizaciones, los anticuerpos inhiben la señalización inducida por la miostatina, medida en un ensayo del gen indicador dependiente de Smad a una CI<50>de aproximadamente 10 nM o menos, aproximadamente 1 nM o menos, o aproximadamente 100 pM o menos.

[0174] Como se utiliza en la presente memoria, un anticuerpo “sin actividad agonista” pretende referirse a un anticuerpo que no aumenta significativamente la actividad de señalización mediada por ActRIIB en ausencia de miostatina en un ensayo basado en células, tal como la inhibición de la señalización inducida por la miostatina (por ejemplo, mediante un ensayo del gen indicador dependiente de Smad), la inhibición de la fosforilación de Smad inducida por la miostatina (ELISA de P-Smad) y la inhibición de la inhibición inducida por miostatina de la diferenciación de las células musculares esqueléticas (por ejemplo, mediante un ensayo de creatina quinasa).

[0175] El término “K<asoc>” o “K<a>”, como se utiliza en la presente memoria, pretende referirse a la tasa de asociación de una interacción anticuerpo-antígeno particular, mientras que el término “K<dis>” o “K<d>”, como se utiliza en la presente memoria, pretende referirse a la tasa de disociación de una interacción anticuerpo-antígeno particular. El término “K<D>”, como se utiliza en la presente memoria, pretende referirse a la constante de disociación, que se obtiene de la relación de K<d>a K<a>(es decir,K<d>/K<a>) y se expresa como una concentración molar (M). Los valores de K<D>para los anticuerpos se pueden determinar utilizando métodos bien establecidos en la técnica. Un método para determinar la K<D>de un anticuerpo consiste en utilizar la resonancia de plasmón superficial, tal como el sistema de biosensores de Biacore<®>, o la valoración en equilibrio de la solución (SET) (véase Friguet B et al. (1985) J. Immunol Methods; 77(2): 305-319 y Hanel C et al. (2005) Anal Biochem; 339(1): 182-184).

[0176] Como se utiliza en la presente memoria, el término “Afinidad” se refiere a la fuerza de la interacción entre el anticuerpo y el antígeno en sitios antigénicos individuales. Dentro de cada sitio antigénico, la región variable del “brazo” del anticuerpo interactúa a través de fuerzas débiles no covalentes con el antígeno en numerosos sitios; cuantas más interacciones, más fuerte es la afinidad.

[0177] Como se utiliza en la presente memoria, el término “Avidez” se refiere a una medida informativa de la estabilidad o fuerza global del complejo anticuerpo-antígeno. Está controlado por tres factores principales:

[0178] afinidad por el epítopo del anticuerpo; la valencia tanto del antígeno como del anticuerpo; y la disposición estructural de las partes que interactúan. En última instancia, estos factores definen la especificidad del anticuerpo, es decir, la probabilidad de que el anticuerpo particular se una a un epítopo antigénico preciso.

[0179] Como se utiliza en la presente memoria, el término “ADCC” o actividad de “citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos” se refiere a la actividad de agotamiento de las células B humanas. La actividad de ADCC se puede medir mediante los ensayos de agotamiento de células B humanas conocidos en la técnica.

[0180] Para obtener una sonda de avidez más alta, se puede construir un conjugado dimérico (dos moléculas de una proteína de anticuerpo acopladas a un marcador FACS), lo que hace que las interacciones de baja afinidad (como con el anticuerpo de la línea germinal) sean detectadas más fácilmente por FACS. Además, otro medio para aumentar la avidez de unión al antígeno implica generar dímeros, trímeros o multímeros de cualquiera de las construcciones descritas en la presente memoria de los anticuerpos anti-ActRIIB. Dichos multímeros pueden generarse a través de la unión covalente entre módulos individuales, por ejemplo, imitando la unión natural del extremo C al extremo N o imitando los dímeros de anticuerpos que se mantienen unidos a través de sus regiones constantes. Los enlaces diseñados en la interfaz Fc/Fc pueden ser covalentes o no covalentes. Además, se pueden utilizar parejas dimerizantes o multimerizantes distintas del Fc en los híbridos ActRIIB para crear tales estructuras de orden superior. Por ejemplo, es posible utilizar dominios de multimerización tales como el dominio de trimerización descrito en el documento WO2004/039841 o el dominio de pentamerización descrito en el documento WO98/18943.

[0181] Como se utiliza en la presente memoria, el término “selectividad” para un anticuerpo se refiere a un anticuerpo que se une a un determinado polipéptido diana, pero no a polipéptidos estrechamente relacionados.

[0182] Como se utiliza en la presente memoria, la expresión “alta afinidad” por un anticuerpo se refiere a un anticuerpo que tiene una K<D>de 1 nM o menos para un antígeno diana. Como se utiliza en la presente memoria, el término “sujeto” incluye cualquier animal humano o no humano.

[0183] La expresión “animal no humano” incluye todos los vertebrados, por ejemplo, mamíferos y no mamíferos, tales como primates no humanos, ovejas, perros, gatos, ratones, caballos, vacas, pollos, anfibios, reptiles, etc.

[0184] Como se utiliza en la presente memoria, el término “optimizado” significa que una secuencia de nucleótidos se ha alterado para codificar una secuencia de aminoácidos utilizando codones que se prefieren en la célula u organismo de producción, generalmente una célula eucariota, por ejemplo, una célula dePichia, una célula deTrichoderma,una célula de ovario de hámster chino (CHO) o una célula humana. La secuencia de nucleótidos optimizada está diseñada para retener completamente o tanto como sea posible la secuencia de aminoácidos codificada originalmente por la secuencia de nucleótidos de partida, que también se conoce como secuencia “parental”. Las secuencias optimizadas de la presente memoria se han diseñado para que tengan codones que se prefieren en las células CHO de mamíferos, sin embargo, también se prevé en la presente memoria la expresión optimizada de estas secuencias en otras células eucariotas. Las secuencias de aminoácidos codificadas por secuencias de nucleótidos optimizadas también se denominan optimizadas.

[0185] Descripción detallada de la invención

[0186] Se ha descubierto que los anticuerpos dirigidos a los receptores ActRII, por ejemplo, bimagrumab, pueden disminuir la señalización a través de estos receptores y dar como resultado la prevención y/o el tratamiento de la enfermedad cardíaca.

[0187] Por lo tanto, en un aspecto, la descripción proporciona una composición que comprende una molécula de unión a ActRIIA o ActRIIB, por ejemplo, bimagrumab o una proteína funcional que comprende una porción de unión al antígeno de dicho anticuerpo. La molécula de unión puede ser una molécula de unión a ActRIIB, por ejemplo, ActRIIB humana. La secuencia polipeptídica del ActRIIB humano se cita en la Id. de sec. n.º: 181 (AAC64515.1, GI:3769443). En un ejemplo, el anticuerpo o la proteína funcional proviene de un mamífero, que tiene un origen tal como un ser humano o un camélido. Por lo tanto, el anticuerpo comprendido en la composición descrita puede ser un anticuerpo quimérico, humano o humanizado. En una realización particular, el anticuerpo anti-ActRIIB comprendido en la composición descrita se caracteriza por tener una región de unión al antígeno que es específica para la proteína diana ActRIIB y se une a ActRIIB o a un fragmento de ActRIIB.

[0188] En una realización, los anticuerpos comprendidos en la composición descrita son antagonistas de ActRII sin actividad agonista o con baja actividad agonista. En otra realización, el anticuerpo o fragmento funcional comprendido en la composición descrita se une a la proteína diana ActRII y disminuye la unión de la miostatina a ActRII a un nivel basal. En un aspecto adicional de esta realización, el anticuerpo o fragmento funcional comprendido en la composición descrita evita por completo que la miostatina se una a ActRII. En una realización adicional, el anticuerpo o fragmento funcional comprendido en la composición descrita inhibe la activación de Smad. En otra realización, el anticuerpo o fragmento funcional comprendido en la composición descrita inhibe la inhibición de la diferenciación esquelética inducida por la miostatina mediada por el receptor de activina tipo IIB a través de la vía dependiente de SMAD. La unión puede determinarse mediante uno o más ensayos que pueden utilizarse para medir una actividad que es antagonismo o agonismo por parte del anticuerpo. Preferiblemente, los ensayos miden al menos uno de los efectos del anticuerpo sobre ActRIIB que incluyen: la inhibición de la unión de la miostatina al ActRIIB mediante ELISA, la inhibición de la señalización inducida por la miostatina (por ejemplo, mediante un ensayo del gen indicador dependiente de Smad), la inhibición de la fosforilación de Smad inducida por la miostatina (ELISA de P-Smad) y la inhibición de la inhibición de la diferenciación de las células del músculo esquelético inducida por la miostatina (por ejemplo, mediante un ensayo de creatina quinasa).

[0189] En una realización, la descripción proporciona composiciones que comprenden anticuerpos que se unen específicamente a la región de unión a la miostatina (por ejemplo, el dominio de unión a ligando) del ActRIIB. Este dominio de unión a ligando consiste en los aminoácidos 19-134 de la Id. de sec. n.º: 181 y se le ha asignado Id. de sec. n.º: 182 en la presente memoria. El dominio de unión al ligando comprende varios epítopos descritos a continuación.

[0190] En una realización, los anticuerpos comprendidos en la composición descrita se unen a ActRIIB con una K<D>de aproximadamente 100 nM o menos, aproximadamente 10 nM o menos, aproximadamente 1 nM o menos. Preferiblemente, los anticuerpos comprendidos en la composición descrita se unen a ActRIIB con una afinidad de 100 pM o menos (es decir, aproximadamente 100 pM, aproximadamente 50 pM, aproximadamente 10 pM, aproximadamente 2 pM, aproximadamente 1 pM o menos). En una realización, los anticuerpos comprendidos en la composición descrita se unen a ActRIIB con una afinidad de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10 pM. En una realización, los anticuerpos comprendidos en la composición descrita no reaccionan de forma cruzada con una proteína relacionada con ActRIIB, particularmente no reaccionan de forma cruzada con ActRIIA humano (NP_001607.1, GI:4501897). En otra realización, los anticuerpos comprendidos en la composición descrita reaccionan de forma cruzada con ActRIIA y se unen a ActRIIB con una afinidad equivalente, o aproximadamente 1, 2, 3, 4 o 5 veces mayor de la que se unen a ActRIIA, más preferiblemente de aproximadamente 10 veces, aún más preferiblemente de aproximadamente 20, 30, 40 o 50 veces, aún más preferiblemente de aproximadamente 100 veces. En una realización, los anticuerpos comprendidos en la composición descrita se unen a ActRIIA con una afinidad de 100 pM o más (es decir, aproximadamente 250 pM, aproximadamente 500 pM, aproximadamente 1 nM, aproximadamente 5 nM o más).

[0191] En una realización, los anticuerpos comprendidos en la composición descrita son del isotipo IgG<2>.

[0192] En otra realización, los anticuerpos comprendidos en la composición descrita son del isotipo IgG<1>. En otra realización, los anticuerpos comprendidos en la composición descrita son del isotipo IgG1 y tienen una función efectora alterada a través de la mutación de la región Fc. Dicha función efectora alterada puede ser una actividad reducida de ADCC y CDC. En una realización, dicha función efectora alterada es una actividad de ADCC y CDC silenciada.

[0193] En otra realización relacionada, los anticuerpos comprendidos en la composición descrita son anticuerpos IgG1 completamente humanos o humanizados sin actividad de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) o actividad de CDC y se unen a una región de ActRIIB que consiste en los aminoácidos 19-134 de la Id. de sec. n.º: 181. En otra realización relacionada, los anticuerpos comprendidos en la composición descrita son anticuerpos IgG1 completamente humanos o humanizados con actividad reducida de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) o actividad de CDC y se unen a una región de ActRIIB que consiste en los aminoácidos 19-134 de la Id. de sec. n.º: 181.

[0194] La presente descripción también se refiere a composiciones que comprenden anticuerpos anti-ActRIIB humanos o humanizados para su uso en la prevención y/o el tratamiento de enfermedades cardíacas como las enfermedades cardíacas descritas anteriormente en la presente memoria.

[0195] En determinadas realizaciones, los anticuerpos comprendidos en la composición descrita derivan de secuencias de cadena pesada y ligera particulares y/o comprenden características estructurales particulares, tales como regiones CDR que comprenden secuencias de aminoácidos particulares. La descripción proporciona anticuerpos ActRIIB aislados, métodos para fabricar dichos anticuerpos, inmunoconjugados y moléculas multivalentes o multiespecíficas que comprenden dichos anticuerpos y composiciones farmacéuticas que contienen los anticuerpos, inmunoconjugados o moléculas biespecíficas.

[0196] En algunos casos adicionales, el antagonista del receptor ActRII o el anticuerpo anti-ActRII, tal como bimagrumab, se administrará a una dosis de aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 5, 6, 7, 8, 9, 10 mg/kg de peso corporal.

[0197] En la presente memoria se describen antagonistas del receptor ActRII para la fabricación de un medicamento para tratar y/o prevenir la insuficiencia cardíaca y para tratar una anomalía cardíaca estructural y/o funcional asociada a una afección tal como enfermedad cardíaca valvular, hipertensión, enfermedad de las arterias coronarias, diabetes, envejecimiento, arritmias, miocardiopatía periparto, miocardiopatía por estrés y otras formas de miocardiopatía dilatada genética o idiopática.

[0198] En realizaciones adicionales, todos los aspectos descritos en la presente memoria pueden utilizarse en combinación uno con cualquiera de los otros.

[0199] Diversos aspectos de la descripción se describen con más detalle en las siguientes subsecciones. En la técnica se conocen ensayos estándar para evaluar la capacidad de unión de los anticuerpos contra ActRII de diversas especies, que incluyen, por ejemplo, ELISA, transferencias Western y RIA. La afinidad de unión de los anticuerpos también puede evaluarse mediante ensayos estándar conocidos en la técnica, tales como mediante el análisis de Biacore o la valoración del equilibrio de la solución. Las técnicas basadas en la resonancia de plasmones superficiales tales como Biacore pueden determinar la cinética de unión, lo que permite el cálculo de la afinidad de unión.

[0201] En consecuencia, un anticuerpo que “inhibe” una o más de estas propiedades funcionales de ActRII (por ejemplo, actividades bioquímicas, inmunoquímicas, celulares, fisiológicas u otras actividades biológicas, o similares), determinadas según las metodologías conocidas en la materia y descritas en la presente memoria, se entenderá que se refiere a una disminución estadísticamente significativa de la actividad particular en relación con la observada en ausencia del anticuerpo (por ejemplo, o cuando esté presente un anticuerpo de control de especificidad irrelevante). Un anticuerpo que inhibe la actividad de ActRII produce una disminución estadísticamente significativa de al menos un 10 % del parámetro medido, de al menos un 50 %, un 80 % o un 90 % y, en determinados casos, un anticuerpo de la descripción puede inhibir más del 95 %, el 98 % o el 99 % de la actividad funcional de ActRIIB.

[0203] La capacidad o el grado en que un anticuerpo u otro agente de unión es capaz de interferir con la unión de otro anticuerpo o molécula de unión a ActRII y, por lo tanto, si se puede decir que produce un bloqueo cruzado según la descripción, se puede determinar utilizando ensayos de unión competitiva estándar. Un ensayo adecuado implica el uso de la tecnología Biacore (por ejemplo,utilizando un instrumento BIAcore (Biacore, Uppsala, Suecia)), que puede medir el alcance de las interacciones mediante la tecnología de resonancia de plasmón superficial. Otro ensayo para medir el bloqueo cruzado utiliza un enfoque basado en ELISA. Un ensayo adicional utiliza el análisis FACS, en donde se prueba la competencia de varios anticuerpos por unirse a células que expresan ActRIIB.

[0205] Según la descripción, un anticuerpo de bloqueo cruzado u otro agente de unión según la descripción se une a ActRII en el ensayo de bloqueo cruzado BIAcore descrito de tal modo que la unión registrada de la combinación (mezcla) de los anticuerpos o agentes de unión está entre el 80 % y el 0,1 % (por ejemplo, del 80 % al 4 %) de la unión teórica máxima, específicamente entre el 75 % y el 0,1 % (por ejemplo, del 75 % al 4 %) de la unión teórica máxima, y más específicamente entre el 70 % y el 0,1 % (por ejemplo, del 70 % al 4 %)., y más específicamente entre el 65 % y el 0,1 % (por ejemplo,del 65 % al 4 %) de la unión teórica máxima (como se definió anteriormente) de los dos anticuerpos o agentes de unión en combinación.

[0207] Un anticuerpo se define como el bloqueo cruzado de un anticuerpo anti-ActRIIB descrito en un ensayo ELISA, si el anticuerpo de prueba es capaz de provocar una reducción de la unión del anticuerpo anti-ActRII a ActRIIB de entre el 60 % y el 100 %, específicamente entre el 70 % y el 100 %, y más específicamente entre el 80 % y el 100 %, en comparación con los pocillos de control positivo (es decir, el mismo anticuerpo anti-ActRIIB y ActRIIB, pero ningún anticuerpo de bloqueo cruzado “de prueba”). Los ejemplos de anticuerpos de bloqueo cruzado como los citados en la presente memoria son MOR08159 y MOR08213 (descritos en el documento WO2010/125003). Por lo tanto, la descripción proporciona composiciones que comprenden anticuerpos que bloquean de forma cruzada a MOR08159 o MOR08213 para unirse a ActRIIB.

[0209] Anticuerpos recombinantes

[0211] Los anticuerpos, por ejemplo, los anticuerpos antagonistas contra ActRII, tales como bimagrumab, comprendidos en las composiciones utilizadas en esta descripción incluyen los anticuerpos recombinantes humanos, aislados y caracterizados estructuralmente, como se describe en la presente memoria. Las secuencias de aminoácidos de V<H>de los anticuerpos comprendidos en las composiciones de la invención se muestran en la Id. de sec. n.º: 99-112. Las secuencias de aminoácidos de V<L>de los anticuerpos comprendidos en las composiciones de la invención se muestran en la Id. de sec. n.º: 85-98 respectivamente. Los ejemplos de secuencias de aminoácidos de cadena pesada de longitud completa preferidas de los anticuerpos comprendidos en las composiciones de la invención se muestran en la Id. de sec. n.º: 146-150 y 156-160. Los ejemplos de secuencias de aminoácidos de cadena ligera de longitud completa preferidas de los anticuerpos comprendidos en las composiciones de la invención se muestran en la Id. de sec. n.º: 141-145 y 151-155, respectivamente. Otros anticuerpos comprendidos en las composiciones de la invención incluyen aminoácidos que han sido mutados por deleción, inserción o sustitución de aminoácidos, pero que tienen al menos 60, 70, 80, 90, 95, 97 o 99 por ciento de identidad en las regiones CDR con las regiones CDR representadas en las secuencias descritas anteriormente. En algunos casos, incluye secuencias de aminoácidos mutantes en las que no se han mutado más de 1, 2, 3, 4 o 5 aminoácidos por deleción, inserción o sustitución de aminoácidos en las regiones CDR en comparación con las regiones CDR representadas en la secuencia descrita anteriormente.

[0213] Además, las secuencias nucleotídicas parentales de cadena pesada variable se muestran en la Id. de sec. n.º: 127-140. Las secuencias nucleotídicas parentales de cadena ligera variable se muestran en la Id. de sec. n.º: 113-126. Las secuencias de nucleótidos de cadena ligera de longitud completa optimizadas para la expresión en una célula de mamífero se muestran en la Id. de sec. n.º: 161-165 y 171-175. Las secuencias de nucleótidos de cadena pesada de longitud completa optimizadas para la expresión en una célula de mamífero se muestran en la Id. de sec. n.º: 166-170 y 176-180. Otros anticuerpos comprendidos en las composiciones de la invención incluyen aminoácidos o están codificados por ácidos nucleicos que han sido mutados, pero que tienen al menos un 60 o más (es decir, 80, 90, 95, 97, 99 o más) por ciento de identidad con las secuencias descritas anteriormente. En algunos casos, incluye secuencias de aminoácidos mutantes en las que no se han mutado más de 1, 2, 3, 4 o 5 aminoácidos por deleción, inserción o sustitución de aminoácidos en las regiones variables en comparación con las regiones variables representadas en la secuencia descrita anteriormente.

[0214] Dado que cada uno de estos anticuerpos se une al mismo epítopo y son progenies del mismo anticuerpo parental, las secuencias V<H>, V<L>, cadena ligera de longitud completa y cadena pesada de longitud completa (secuencias de nucleótidos y secuencias de aminoácidos) pueden “mezclarse y combinarse” para crear otras moléculas de unión anti-ActRIIB de la descripción. La unión a ActRIIB de dichos anticuerpos “mezclados y combinados” se puede probar utilizando los ensayos de unión descritos anteriormente y en métodos bien conocidos, tales como, por ejemplo, los ELISA. Cuando estas cadenas se mezclan y se emparejan, una secuencia V<H>de un apareamiento V<H>/V<L>particular debe reemplazarse por una secuencia V<H>estructuralmente similar. Del mismo modo, una secuencia de cadena pesada de longitud completa de un emparejamiento particular de cadena pesada de longitud completa/cadena ligera de longitud completa debe reemplazarse por una secuencia de cadena pesada de longitud completa estructuralmente similar. Igualmente, una secuencia V<L>de un apareamiento V<H>/V<L>particular debe reemplazarse por una secuencia V<H>estructuralmente similar. Del mismo modo, una secuencia de cadena ligera de longitud completa de un emparejamiento particular de cadena pesada de longitud completa/cadena ligera de longitud completa debe reemplazarse por una secuencia de cadena ligera de longitud completa estructuralmente similar. En consecuencia, en un aspecto, la descripción proporciona composiciones que comprenden un anticuerpo anti-ActRII recombinante o una región de unión al antígeno del mismo que tiene: una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 99-112; y una región variable de la cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 85-98.

[0215] En otro aspecto, la descripción proporciona composiciones que comprenden:

[0217] (i) un anticuerpo anti-ActRll recombinante aislado que tiene: una cadena pesada de longitud completa que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 99-112; y una cadena ligera de longitud completa que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 85-98, o

[0219] (ii) una proteína funcional que comprende una porción de unión a antígeno de la misma.

[0221] En otro aspecto, la descripción proporciona composiciones que comprenden:

[0223] (i) un anticuerpo anti-ActRll recombinante aislado que tiene una cadena pesada de longitud completa codificada por una secuencia de nucleótidos que se ha optimizado para la expresión en la célula de un mamífero seleccionado del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 127-140, y una cadena ligera de longitud completa codificada por una secuencia de nucleótidos que se ha optimizado para la expresión en la célula de un mamífero seleccionado del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 113-126, o

[0225] (ii) una proteína funcional que comprende una porción de unión a antígeno de la misma.

[0227] Los ejemplos de secuencias de aminoácidos de las CDR1 de la V<H>de los anticuerpos comprendidos en las composiciones de la invención se muestran en la Id. de sec. n.º: 1-14. Las secuencias de aminoácidos de las CDR2 de la V<H>de los anticuerpos se muestran en la Id. de sec. n.º: 15-28. Las secuencias de aminoácidos de las CDR3 de la V<H>de los anticuerpos se muestran en la Id. de sec. n.º: 29-42. Las secuencias de aminoácidos de las CDR1 de la V<L>de los anticuerpos se muestran en la Id. de sec. n.º: 43-56. Las secuencias de aminoácidos de las CDR2 de la V<L>de los anticuerpos se muestran en la Id. de sec. n.º: 57-70. Las secuencias de aminoácidos de las CDR3 de la V<L>de los anticuerpos se muestran en la Id. de sec. n.º: 71-84. Las regiones CDR se delinean utilizando el sistema de Kabat (Kabat, E. A., et al., 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest, quinta edición, U.S. Department of Health and Human Services, Publicación NIH N.º 91-3242). Un método alternativo para determinar las regiones CDR utiliza el método ideado por Chothia (Chothia et al. 1989, Nature, 342:877-883). La definición de Chothia se basa en la ubicación de las regiones del bucle estructural. Sin embargo, debido a los cambios en el sistema de numeración utilizado por Chothia (véase, por ejemplo, http://www.biochem.ucl.ac.uk/~martin/abs/Generallnfo.html and http://www.bioinf.org.uk/abs/), este sistema ahora se utiliza con menos frecuencia. Existen otros sistemas para definir los CDR y también se mencionan en estos dos sitios web.

[0229] Dado que cada uno de estos anticuerpos puede unirse a ActRII y que la especificidad de unión a antígeno la proporcionan principalmente las regiones CDR1, 2 y 3, las secuencias CDR1, 2 y 3 de la V<H>y las secuencias CDR1, 2 y 3 de la V<L>pueden “mezclarse y combinarse” (es decir, Las CDR de diferentes anticuerpos pueden mezclarse y combinarse, conteniendo cada anticuerpo una CDR1, 2 y 3 de V<H>y una CDR1, 2 y 3 de V<L>crea otras moléculas de unión anti-ActRII de la descripción. La unión a ActRIIB de dichos anticuerpos “mezclados y combinados” puede ensayarse utilizando los ensayos de unión descritos anteriormente y en los ejemplos (por ejemplo, ELISA). Cuando las secuencias de CDR de V<H>se mezclan y se combinan, la secuencia de CDR1, CDR2 y/o CDR3 de una secuencia de V<H>particular debe reemplazarse por una secuencia o secuencias de CDR estructuralmente similares. Igualmente, cuando las secuencias de CDR de V<L>se mezclan y se combinan, la secuencia de CDR1, CDR2 y/o CDR3 de una secuencia de V<L>particular debe reemplazarse por una secuencia o secuencias de CDR estructuralmente similares. Será fácilmente evidente para el experto en la técnica que se pueden crear secuencias V<H>y V<L>novedosas sustituyendo una o más secuencias de la región CDR de V<H>y/o V<L>por secuencias estructuralmente similares de las secuencias CDR mostradas en la presente memoria para anticuerpos monoclonales.

[0230] El anticuerpo anti-ActRll comprendido en las composiciones descritas, o la región de unión a antígeno del mismo, tiene: una CDR1 de la región variable de la cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 1-14; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 15-28; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 29-42; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 43-56; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 57-70; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 71-84.

[0231] En una realización, el anticuerpo comprendido en la composición de la invención comprende: una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 1; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 15; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 29; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 43; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 57; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 71.

[0232] En una realización, el anticuerpo comprendido en la composición de la invención comprende: una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 2, una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 16; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 30; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 44; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 58; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 72.

[0233] En una realización, el anticuerpo comprendido en la composición de la invención comprende: una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 3; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 17; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 31; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 45; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 59; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 73.

[0234] En una realización, el anticuerpo comprendido en la composición de la invención comprende: una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 4; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 18; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 32; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 46; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 60; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 74.

[0235] En una realización, el anticuerpo comprendido en la composición de la invención comprende: una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 5; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 19; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 33; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 47; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 61; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 75.

[0236] En una realización, el anticuerpo comprendido en la composición de la invención comprende: una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 6; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 20; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 34; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 48; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 62; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 76.

[0237] En una realización, el anticuerpo comprendido en la composición de la invención comprende: una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 7; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 21; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 35; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 49; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 63; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 77.

[0238] En una realización, el anticuerpo comprendido en la composición de la invención comprende: una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 8; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 22; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 36; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 50, una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 64; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 78.

[0239] En una realización, el anticuerpo comprendido en la composición de la invención comprende: una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 9; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 23; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 37; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 51; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 65; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 79.

[0240] En una realización, el anticuerpo comprendido en la composición de la invención comprende: una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 10; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 24; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 38; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 52; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 66; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 80.

[0242] En una realización, el anticuerpo comprendido en la composición de la invención comprende: una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 11; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 25; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 39; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 53; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 67; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 81.

[0244] En una realización, el anticuerpo comprendido en la composición de la invención comprende: una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 12; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 26; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 40; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 54; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 68; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 82.

[0246] En una realización, el anticuerpo comprendido en la composición de la invención comprende: una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 13; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 27; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 41; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 55; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 69; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 83.

[0248] En una realización, el anticuerpo comprendido en la composición de la invención comprende: una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 14; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 28; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 42; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 56; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 70; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 84.

[0250] En una realización, la descripción proporciona una composición que comprende un anticuerpo que comprende: (a) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 85 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 99; (b) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 86 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 100; (c) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 87 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 101; (d) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 88 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 102; (e) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 89 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 103; (f) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 90 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 104; (g) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 91 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 105; (h) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 92 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 106; (i) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 93 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 107; (j) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 94 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 108; (k) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 95 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 109; (l) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 96 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 110; (m) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 97 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 111; o (n) la secuencia de la cadena pesada variable de la Id. de sec. n.º: 98 y la secuencia de la cadena ligera variable de la Id. de sec. n.º: 112.

[0252] En una realización, la descripción proporciona una composición que comprende un anticuerpo que comprende: (a) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 146 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 141; (b) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 147 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 142; (c) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 148 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 143; (d) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 149 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 144; (e) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 150 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 145; (f) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 156 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 151; (g) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 157 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 152; (h) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 158 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 153; (i) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 159 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 154; o (j) la secuencia de la cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 160 y la secuencia de la cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 155.

[0254] Como se utiliza en la presente memoria, un anticuerpo humano comprende regiones variables de cadena pesada o ligera o cadenas pesadas o ligeras de longitud completa que son “el producto de” o “derivan de” una secuencia de la línea germinal particular si las regiones variables o cadenas de longitud completa del anticuerpo se obtienen de un sistema que utiliza genes de inmunoglobulina de línea germinal humana. Dichos sistemas incluyen la inmunización de un ratón transgénico que porta genes de inmunoglobulina humana con el antígeno de interés o la selección de una biblioteca de genes de inmunoglobulina humana mostrada en un fago con el antígeno de interés. Un anticuerpo humano que es “el producto de” o “derivado de” una secuencia de inmunoglobulina de la línea germinal humana puede identificarse como tal comparando la secuencia de aminoácidos del anticuerpo humano con las secuencias de aminoácidos de las inmunoglobulinas de la línea germinal humana y seleccionando la secuencia de inmunoglobulina de la línea germinal humana que está más cerca de la secuencia (es decir, el mayor % de identidad) con respecto a la secuencia del anticuerpo humano. Un anticuerpo humano que es “el producto” o “derivado de” una secuencia de inmunoglobulina de la línea germinal humana en particular puede contener diferencias de aminoácidos en comparación con la secuencia de la línea germinal, debido, por ejemplo, a mutaciones somáticas naturales o a la introducción intencional de una mutación dirigida al sitio. Sin embargo, un anticuerpo humano seleccionado normalmente es al menos un 90 % idéntico en la secuencia de aminoácidos a una secuencia de aminoácidos codificada por un gen de inmunoglobulina de línea germinal humana y contiene residuos de aminoácidos que identifican al anticuerpo humano como humano en comparación con las secuencias de aminoácidos de inmunoglobulina de línea germinal de otras especies (por ejemplo, secuencias de línea germinal murina). En determinados casos, un anticuerpo humano puede ser al menos un 80 %, un 90 % o al menos un 95 %, o incluso al menos un 96 %, 97 %, 98 % o 99 % idéntico en la secuencia de aminoácidos a la secuencia de aminoácidos codificada por el gen de la inmunoglobulina de la línea germinal. Normalmente, un anticuerpo humano derivado de una secuencia particular de la línea germinal humana no mostrará más de 10 diferencias de aminoácidos con respecto a la secuencia de aminoácidos codificada por el gen de la inmunoglobulina de la línea germinal humana. En determinados casos, el anticuerpo humano puede mostrar no más de 5, o incluso no más de 4, 3, 2 o 1 diferencias de aminoácidos con respecto a la secuencia de aminoácidos codificada por el gen de la inmunoglobulina de la línea germinal.

[0256] En una realización, el anticuerpo comprendido en las composiciones de la descripción es el codificado por pBW522 o pBW524 (depositado en DSMZ, Inhoffenstr.7B, D-38124 Braunschweig, Alemania, el 18 de agosto de 2009 con los números de depósito DSM22873 y DSM22874, respectivamente).

[0258] Anticuerpos homólogos

[0260] En otra realización más, un anticuerpo comprendido en la composición de la invención tiene secuencias de aminoácidos de cadena pesada y ligera de longitud completa; secuencias de nucleótidos de cadena pesada y ligera de longitud completa, secuencias de nucleótidos de cadena pesada y ligera de región variable o secuencias de aminoácidos de cadena pesada y ligera de región variable que son homólogas a las secuencias de aminoácidos y nucleótidos de los anticuerpos descritos en la presente memoria, y en donde los anticuerpos conservan las propiedades funcionales deseadas de los anticuerpos anti-ActRIIB de la descripción.

[0262] Por ejemplo, la descripción proporciona una composición que comprende un anticuerpo anti-ActRIIB recombinante aislado (o una proteína funcional que comprende una porción de unión a antígeno del mismo) que comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera, en donde: la región variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 80 %, o al menos un 90 % (preferiblemente al menos un 95, 97 o 99 %) idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 99-112; la región variable de la cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica al menos en un 80 %, o al menos en un 90 % (preferiblemente al menos en un 95, 97 o 99 %) a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 85-98; alternativamente, las composiciones comprenden un anticuerpo anti-ActRIIB recombinante (o una proteína funcional que comprende una porción de unión a antígeno del mismo) que comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera, en donde: la región variable de cadena pesada comprende no más de 5 aminoácidos, o no más de 4 aminoácidos, o no más de 3 aminoácidos, o no más de 2 o no más de 1 cambio de aminoácido en comparación con la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º.: 99-112; la región variable de la cadena ligera comprende no más de 5 aminoácidos, o no más de 4 aminoácidos, o no más de 3 aminoácidos, o no más de 2 o no más de 1 cambio de aminoácido en comparación con la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 85-98 y el anticuerpo presenta al menos una de las siguientes propiedades funcionales: (i) inhibe la unión a la miostatinain vitrooin vivo,(ii) disminuye la inhibición de la diferenciación muscular a través de la vía dependiente de SMAD y/o (iii) no induce cambios hematológicos, en particular ningún cambio en los glóbulos rojos. En este contexto, el término “cambio” se refiere a inserciones, deleciones y/o sustituciones.

[0264] En un ejemplo adicional, la descripción proporciona una composición que comprende un anticuerpo anti-ActRII recombinante aislado (o una proteína funcional que comprende una porción de unión a antígeno del mismo) que comprende una cadena pesada de longitud completa y una cadena ligera de longitud completa, en donde: la cadena pesada de longitud completa comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 80 %, o al menos un 90 % (preferiblemente al menos un 95, 97 o 99 %) idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 146-150 y 156-160; la cadena ligera de longitud completa comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica al menos en un 80 %, o al menos en un 90 % (preferiblemente al menos en un 95, 97 o 99 %) a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 141-145 y 151-155; alternativamente, las composiciones comprenden un anticuerpo anti-ActRII recombinante (o una proteína funcional que comprende una porción de unión a antígeno del mismo) que comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera, en donde: la región variable de cadena pesada comprende no más de 5 aminoácidos, o no más de 4 aminoácidos, o no más de 3 aminoácidos, o no más de 2 o no más de 1 cambio de aminoácido en comparación con la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º.: 146-150 y 156-160; la región variable de la cadena ligera comprende no más de 5 aminoácidos, o no más de 4 aminoácidos, o no más de 3 aminoácidos, o no más de 2 o no más de 1 cambio de aminoácido en comparación con la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 141-145 y 151-155 y el anticuerpo presenta al menos una de las siguientes propiedades funcionales: (i) inhibe la unión a la miostatinain vitrooin vivo,(ii) disminuye la inhibición de la diferenciación muscular a través de la vía dependiente de SMAD y/o (iii) no induce cambios hematológicos, en particular ningún cambio en los glóbulos rojos. Preferiblemente dicho anticuerpo se une al dominio de unión al ligando de ActRIIB y/o ActRIIA. En este contexto, el término “cambio” se refiere a inserciones, deleciones y/o sustituciones.

[0266] En otro ejemplo, la descripción proporciona una composición que comprende un anticuerpo anti-ActRII recombinante aislado (o una proteína funcional que comprende una porción de unión a antígeno del mismo) que comprende una cadena pesada de longitud completa y una cadena ligera de longitud completa, en donde: la cadena pesada de longitud completa está codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos un 80 %, o al menos un 90 % (preferiblemente al menos un 95, 97 o 99 %) idéntica a una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 166-170 y 176-180; la cadena ligera de longitud completa está codificada por una secuencia de nucleótidos que es idéntica al menos en un 80 %, o al menos en un 90 % (preferiblemente al menos en un 95, 97 o 99 %) a una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 161-165 y 171-175; alternativamente, las composiciones comprenden un anticuerpo anti-ActRIIB recombinante (o una proteína funcional que comprende una porción de unión a antígeno del mismo) que comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera, en donde: la región variable de cadena pesada comprende no más de 5 aminoácidos, o no más de 4 aminoácidos, o no más de 3 aminoácidos, o no más de 2 o no más de 1 cambio de aminoácido en comparación con la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º.: 166-170 y 176-180; la región variable de la cadena ligera comprende no más de 5 aminoácidos, o no más de 4 aminoácidos, o no más de 3 aminoácidos, o no más de 2 o no más de 1 cambio de aminoácido en comparación con la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 161-165 y 171-175 y el anticuerpo presenta al menos una de las siguientes propiedades funcionales: (i) inhibe la unión a la miostatinain vitrooin vivo,(ii) disminuye la inhibición de la diferenciación muscular a través de la vía dependiente de SMAD y/o (iii) no induce cambios hematológicos, en particular ningún cambio en los glóbulos rojos. Preferiblemente dicho anticuerpo se une al dominio de unión al ligando de ActRIIB. En este contexto, el término “cambio” se refiere a inserciones, deleciones y/o sustituciones.

[0268] En diversas realizaciones, el anticuerpo comprendido en la composición de la invención puede presentar una o más, dos o más o tres de las propiedades funcionales descritas anteriormente. El anticuerpo puede ser, por ejemplo, un anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado o un anticuerpo quimérico. Preferiblemente, el anticuerpo es un anticuerpo IgG1 completamente humano.

[0270] En otras realizaciones, las secuencias de aminoácidos V<H>y/o V<L>pueden ser al menos un 80 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % idénticas a las secuencias expuestas anteriormente. En otras realizaciones, las secuencias de aminoácidos V<H>y/o V<L>pueden ser idénticas excepto una sustitución de aminoácidos en no más de 1, 2, 3, 4 o 5 posiciones de aminoácidos. Un anticuerpo que tiene regiones V<H>y V<L>que tienen alta identidad (es decir, 80 % o más) con las regiones V<H>y V<L>de la Id. de sec. n.º 99-112 y la Id. de sec. n.º: 85-98, respectivamente, se puede obtener mediante mutagénesis (por ejemplo, mutagénesis dirigida al sitio o mediada por PCR) de moléculas de ácido nucleico la Id. de sec. n.º: 127-140 y 113-126, respectivamente, seguida de la prueba del anticuerpo alterado codificado para determinar la función retenida (es decir las funciones expuestas anteriormente) utilizando los ensayos funcionales descritos en la presente memoria.

[0272] En otras realizaciones, las secuencias de aminoácidos de la cadena pesada de longitud completa y/o la cadena ligera de longitud completa pueden ser al menos un 80 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % idénticas a las secuencias expuestas anteriormente o pueden ser idénticas excepto un cambio de aminoácido en no más de 1, 2, 3, 4 o 5 posiciones de aminoácidos. Un anticuerpo que tiene una cadena pesada de longitud completa y una cadena ligera de longitud completa que tiene alta identidad (es decir, al menos el 80 % o más) con las cadenas pesadas de longitud completa de cualquiera de la Id. de sec. n.º: 146-150 y 156-160 y las cadenas ligeras de longitud completa de cualquiera de la Id. de sec. n.º: 141-145 y 151-155, respectivamente, se puede obtener mediante mutagénesis (por ejemplo, mutagénesis dirigida al sitio o mediada por PCR) de moléculas de ácido nucleico la Id. de sec. n.º: 166-170 y 176-180 y la Id. de sec. n.º: 161-165 y 171-175 respectivamente, seguidos de una prueba del anticuerpo alterado codificado para determinar la función retenida (es decir, las funciones expuestas anteriormente) utilizando los ensayos funcionales descritos en la presente memoria.

[0274] En otras realizaciones, las secuencias de nucleótidos de cadena pesada de longitud completa y/o cadena ligera de longitud completa pueden ser al menos un 80 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % idénticas a las secuencias expuestas anteriormente.

[0276] En otras realizaciones, las regiones variables de las secuencias de nucleótidos de cadena pesada y/o cadena ligera pueden ser al menos un 80 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % idénticas a las secuencias expuestas anteriormente o pueden ser idénticas excepto un cambio de aminoácido en no más de 1, 2, 3, 4 o 5 posiciones de aminoácidos.

[0278] Como se utiliza en la presente memoria, el porcentaje de identidad entre las dos secuencias es una función del número de posiciones idénticas compartidas por las secuencias (es decir, % de identidad = n.º de posiciones idénticas/n.º total de posiciones x 100), teniendo en cuenta el número de espacios y la longitud de cada espacio, que deben introducirse para una alineación óptima de las dos secuencias. La comparación de secuencias y la determinación del porcentaje de identidad entre dos secuencias se pueden lograr utilizando un algoritmo matemático, como se describe a continuación.

[0280] El porcentaje de identidad entre dos secuencias de aminoácidos se puede determinar utilizando el algoritmo de E. Meyers y W. Miller (Comput. Appl. Biosci., 4:11-17, 1988), que se ha incorporado al programa ALIGN (versión 2.0), utilizando una tabla de peso y residuos PAM120, una penalización por longitud de hueco de 12 y una penalización por hueco de 4. Además, el porcentaje de identidad entre dos secuencias de aminoácidos se puede determinar utilizando el algoritmo de Needleman y Wunsch (J. Mol, Biol. 48:444-453, 1970) que se ha incorporado al programa GAP del paquete de software GCG (disponible en http://www.gcg.com), que utiliza una matriz Blossom 62 o una matriz PAM250, y un peso de espacio de 16, 14, 12, 10, 8, 6 o 4 y un peso de longitud de 1, 2, 3, 4, 5 o 6.

[0282] Anticuerpos con modificaciones conservadoras

[0284] En determinados casos, un anticuerpo comprendido en la composición de la invención tiene una región variable de cadena pesada que comprende secuencias de CDR1, CDR2 y CDR3 y una región variable de cadena ligera que comprende secuencias de CDR1, CDR2 y CDR3, en donde una o más de estas secuencias de CDR tienen secuencias de aminoácidos especificadas basadas en los anticuerpos descritos en la presente memoria o secuencias variantes de los mismos que comprenden 1, 2, 3, 4 o 5 cambios de aminoácidos o modificaciones conservativas de los mismos. y en donde los anticuerpos conservan las propiedades funcionales deseadas de los anticuerpos anti-ActRIIB de la descripción. En consecuencia, la descripción proporciona composiciones que comprenden un anticuerpo anti-ActRIIB recombinante aislado, o una proteína funcional que comprende una porción de unión a antígeno del mismo, que consiste en una región variable de cadena pesada que comprende secuencias de CDR1, CDR2 y CDR3 y una región variable de cadena ligera que comprende secuencias de CDR1, CDR2 y CDR3, en donde: las secuencias de aminoácidos de la CDR1 de la región variable de la cadena pesada se seleccionan del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 1-14 o secuencias variantes de las mismas que comprenden 1, 2, 3, 4 o 5 cambios de aminoácidos, y modificaciones conservativas de los mismos; las secuencias de aminoácidos de la CDR2 de la región variable de la cadena pesada se seleccionan del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 15-28 o secuencias variantes de las mismas que comprenden 1, 2, 3, 4 o 5 cambios de aminoácidos y modificaciones conservativas de los mismos; las secuencias de aminoácidos de la CDR3 de la región variable de la cadena pesada se seleccionan del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 29-42 o secuencias variantes de las mismas que comprenden 1, 2, 3, 4 o 5 cambios de aminoácidos y modificaciones conservativas de los mismos; las secuencias de aminoácidos de la CDR1 de las regiones variables de la cadena ligera se seleccionan del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 43-56 o secuencias variantes de las mismas que comprenden 1, 2, 3, 4 o 5 cambios de aminoácidos y modificaciones conservativas de los mismos; las secuencias de aminoácidos de la CDR2 de las regiones variables de la cadena ligera se seleccionan del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 57-70 o secuencias variantes de las mismas que comprenden 1, 2, 3, 4 o 5 cambios de aminoácidos y modificaciones conservativas de los mismos; las secuencias de aminoácidos de la CDR3 de las regiones variables de la cadena ligera se seleccionan del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 71-84 o secuencias variantes de las mismas que comprenden 1, 2, 3, 4 o 5 cambios de aminoácidos y modificaciones conservativas de los mismos. Preferiblemente, el anticuerpo presenta al menos una de las siguientes propiedades funcionales: (i) inhibe la unión a la miostatinain vitrooin vivo,(ii) disminuye la inhibición de la diferenciación muscular a través de la vía dependiente de SMAD y/o (iii) no induce cambios hematológicos, en particular ningún cambio en los glóbulos rojos.

[0285] En diversas realizaciones, el anticuerpo puede presentar una o ambas de las propiedades funcionales enumeradas anteriormente. Dichos anticuerpos pueden ser, por ejemplo, anticuerpos humanos, anticuerpos humanizados o anticuerpos quiméricos.

[0287] En otras realizaciones, un anticuerpo comprendido en la composición inventiva optimizado para la expresión en una célula de mamífero tiene una secuencia de cadena pesada de longitud completa y una secuencia de cadena ligera de longitud completa, en donde una o más de estas secuencias tienen secuencias de aminoácidos específicas basadas en los anticuerpos descritos en la presente memoria o en modificaciones conservativas de los mismos, y en donde los anticuerpos conservan las propiedades funcionales deseadas de los anticuerpos anti-ActRIIB de la descripción. En consecuencia, la descripción proporciona composiciones que comprenden un anticuerpo monoclonal anti-ActRll aislado optimizado para la expresión en una célula de mamífero que consiste en una cadena pesada de longitud completa y una cadena ligera de longitud completa en donde: la cadena pesada de longitud completa tiene secuencias de aminoácidos seleccionadas del grupo de la Id. de sec. n.º: 146-150 y 156-160 o secuencias variantes de las mismas que comprenden 1, 2, 3, 4 o 5 cambios de aminoácidos y modificaciones conservativas de los mismos; y la cadena ligera de longitud completa tiene secuencias de aminoácidos seleccionadas del grupo de la Id. de sec. n.º: 141-145 y 151-155 o secuencias variantes de las mismas que comprenden 1, 2, 3, 4 o 5 cambios de aminoácidos y modificaciones conservativas de los mismos; y el anticuerpo presenta al menos una de las siguientes propiedades funcionales: (i) inhibe la unión a la miostatinain vitrooin vivo,(ii) disminuye la inhibición de la diferenciación muscular a través de la vía dependiente de SMAD y/o (iii) no induce cambios hematológicos, en particular ningún cambio en los glóbulos rojos.

[0288] En diversas realizaciones, el anticuerpo puede presentar una o ambas de las propiedades funcionales enumeradas anteriormente. Dichos anticuerpos pueden ser, por ejemplo, anticuerpos humanos, anticuerpos humanizados o anticuerpos quiméricos.

[0289] Como se utiliza en la presente memoria, la expresión “modificaciones de secuencia conservativas” pretende referirse a modificaciones de aminoácidos que no afectan ni alteran significativamente las características de unión del anticuerpo que contiene la secuencia de aminoácidos. Dichas modificaciones conservadoras incluyen sustituciones, adiciones y eliminaciones de aminoácidos. Se pueden introducir modificaciones en un anticuerpo de la descripción mediante técnicas estándar conocidas en la materia, tales como la mutagénesis dirigida al sitio y la mutagénesis mediada por PCR.

[0290] Las sustituciones conservativas de aminoácidos son aquellas en las cuales el residuo de aminoácido se reemplaza por un residuo de aminoácido que tiene una cadena lateral similar. En la técnica se han definido familias de residuos de aminoácidos que tienen cadenas laterales similares. Estas familias incluyen aminoácidos con cadenas laterales básicas (por ejemplo lisina, arginina, histidina), cadenas laterales ácidas (por ejemplo ácido aspártico, ácido glutámico), cadenas laterales polares no cargadas (por ejemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína, triptófano), cadenas laterales no polares (por ejemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina), cadenas laterales ramificadas beta (por ejemplo, treonina, valina, isoleucina) y cadenas laterales aromáticas (por ejemplo, tirosina, fenilalanina, triptófano, histidina). Por lo tanto, uno o más residuos de aminoácidos dentro de las regiones CDR de un anticuerpo de la descripción pueden reemplazarse por otros residuos de aminoácidos de la misma familia de cadenas laterales, y el anticuerpo alterado puede analizarse para determinar su función retenida utilizando los ensayos funcionales descritos en la presente memoria.

[0291] Anticuerpos que se unen al mismo epítopo que los anticuerpos anti-ActRll comprendidos en la composición descrita En otra realización, la descripción proporciona composiciones que comprenden anticuerpos que se unen al mismo epítopo que los diversos anticuerpos anti-ActRll específicos descritos en la presente memoria. Todos los anticuerpos descritos en los ejemplos que son capaces de bloquear la unión de la miostatina a ActRIIA y ActRIIB se unen a uno de los epítopos de ActRIIA y ActRIIB con alta afinidad, estando dicho epítopo comprendido entre los aminoácidos 19-134 de la Id. de sec. n.º: 181.

[0292] Por lo tanto, se pueden identificar anticuerpos adicionales en función de su capacidad para competir de forma cruzada (por ejemplo, para inhibir competitivamente la unión, de una manera estadísticamente significativa) con otros anticuerpos descritos en los ensayos de unión a ActRIIB estándar. La capacidad de un anticuerpo de ensayo para inhibir la unión de los anticuerpos comprendidos en las composiciones de la invención al ActRIIB humano demuestra que el anticuerpo de ensayo puede competir con dicho anticuerpo por la unión al ActRIIB humano; dicho anticuerpo puede, según una teoría no limitante, unirse al mismo epítopo del ActRIIB humano o a uno relacionado (por ejemplo, un epítopo estructuralmente similar o espacialmente proximal) del ActRIIB humano que el anticuerpo con el que compite. En cierta realización, el anticuerpo que se une al mismo epítopo de la ActRIIA y la ActRIIA humanas que los anticuerpos comprendidos en las composiciones de la invención es un anticuerpo recombinante humano. Dichos anticuerpos recombinantes humanos pueden prepararse y aislarse como se describe en los ejemplos. Por lo tanto, la descripción proporciona una composición que comprende un anticuerpo que se une a un epítopo reconocido por y/o que compite por la unión con un anticuerpo que tiene la secuencia de cadena pesada variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 85 y la secuencia de cadena ligera variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 99.

[0293] Por lo tanto, la descripción proporciona una composición que comprende un anticuerpo que se une a un epítopo reconocido por un anticuerpo que tiene la secuencia de cadena pesada variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 86 y la secuencia de cadena ligera variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 100.

[0294] Por lo tanto, la descripción proporciona una composición que comprende un anticuerpo que se une a un epítopo reconocido por un anticuerpo que tiene la secuencia de cadena pesada variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 87 y la secuencia de cadena ligera variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 101. Por lo tanto, la descripción proporciona una composición que comprende un anticuerpo que se une a un epítopo reconocido por un anticuerpo que tiene la secuencia de cadena pesada variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 88 y la secuencia de cadena ligera variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 102. Por lo tanto, la descripción proporciona una composición que comprende un anticuerpo que se une a un epítopo reconocido por un anticuerpo que tiene la secuencia de cadena pesada variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 89 y la secuencia de cadena ligera variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 103. Por lo tanto, la descripción proporciona una composición que comprende un anticuerpo que se une a un epítopo reconocido por un anticuerpo que tiene la secuencia de cadena pesada variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 90 y la secuencia de cadena ligera variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 104.

[0295] Por lo tanto, la descripción proporciona una composición que comprende un anticuerpo que se une a un epítopo reconocido por un anticuerpo que tiene la secuencia de cadena pesada variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 91 y la secuencia de cadena ligera variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 105.

[0296] Por lo tanto, la descripción proporciona una composición que comprende un anticuerpo que se une a un epítopo reconocido por un anticuerpo que tiene la secuencia de cadena pesada variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 92 y la secuencia de cadena ligera variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 106.

[0297] Por lo tanto, la descripción proporciona una composición que comprende un anticuerpo que se une a un epítopo reconocido por un anticuerpo que tiene la secuencia de cadena pesada variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 93 y la secuencia de cadena ligera variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 107.

[0298] Por lo tanto, la descripción proporciona una composición que comprende un anticuerpo que se une a un epítopo reconocido por un anticuerpo que tiene la secuencia de cadena pesada variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 94 y la secuencia de cadena ligera variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 108.

[0299] Por lo tanto, la descripción proporciona una composición que comprende un anticuerpo que se une a un epítopo reconocido por un anticuerpo que tiene la secuencia de cadena pesada variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 95 y la secuencia de cadena ligera variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 109.

[0300] Por lo tanto, la descripción proporciona una composición que comprende un anticuerpo que se une a un epítopo reconocido por un anticuerpo que tiene la secuencia de cadena pesada variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 96 y la secuencia de cadena ligera variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 110.

[0301] Por lo tanto, la descripción proporciona una composición que comprende un anticuerpo que se une a un epítopo reconocido por un anticuerpo que tiene la secuencia de cadena pesada variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 97 y la secuencia de cadena ligera variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 111.

[0302] Por lo tanto, la descripción proporciona una composición que comprende un anticuerpo que se une a un epítopo reconocido por un anticuerpo que tiene la secuencia de cadena pesada variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 98 y la secuencia de cadena ligera variable enumerada en la Id. de sec. n.º: 112.

[0303] Tras experimentos de mapeo de epítopos más detallados, las regiones de unión de los anticuerpos preferidos de las composiciones de la invención se han definido más claramente.

[0304] Por lo tanto, la descripción proporciona una composición que comprende un anticuerpo que se une a un epítopo que comprende los aminoácidos 78-83 de la Id. de sec. n.º: 181 (WLDDFN - Id. de sec. n.º: 188). La descripción también proporciona una composición que comprende un anticuerpo que se une a un epítopo que comprende los aminoácidos 76-84 de la Id. de sec. n.º: 181 (GCWLDDFNC - Id. de sec. n.º: 186).

[0305] La descripción también proporciona una composición que comprende un anticuerpo que se une a un epítopo que comprende los aminoácidos 75-85 de la Id. de sec. n.º: 181 (KGCWLDDFNCY - Id. de sec. n.º: 190).

[0306] La descripción también proporciona una composición que comprende un anticuerpo que se une a un epítopo que comprende los aminoácidos 52-56 de la Id. de sec. n.º: 181 (EQDKR - Id. de sec. n.º: 189). La descripción también proporciona una composición que comprende un anticuerpo que se une a un epítopo que comprende los aminoácidos 49-63 de la Id. de sec. n.º: 181 (CEGEQDKRLHCYASW - Id. de sec. n.º: 187).

[0307] La descripción también proporciona una composición que comprende un anticuerpo que se une a un epítopo que comprende o que consiste en los aminoácidos 29-41 de la Id. de sec. n.º: 181 (CIYYNANWELERT- Id. de sec. n.º: 191).

[0308] La descripción también proporciona una composición que comprende un anticuerpo que se une a un epítopo que comprende o que consiste en los aminoácidos 100-110 de la Id. de sec. n.º: 181 (YFCCCEGNFCN - Id. de sec. n.º: 192).

[0309] La descripción también proporciona una composición que comprende anticuerpos que se unen a epítopos que consisten en estas secuencias o epítopos que comprenden combinaciones de estas regiones epitópicas.

[0310] Por lo tanto, la descripción también proporciona una composición que comprende un anticuerpo que se une a un epítopo que comprende o que consiste en los aminoácidos 78-83 de la Id. de sec. n.º: 181 (WLDDFN) y los aminoácidos 52-56 de la Id. de sec. n.º: 181 (EQDKR).

[0311] Anticuerpos diseñados y modificados

[0312] Un anticuerpo comprendido en las composiciones de la invención puede prepararse además utilizando un anticuerpo que tenga una o más de las secuencias V<H>y/o V<L>mostradas en la presente memoria como material de partida para diseñar un anticuerpo modificado, cuyo anticuerpo modificado puede tener propiedades alteradas con respecto al anticuerpo de partida. Un anticuerpo puede diseñarse modificando uno o más residuos dentro de una o ambas regiones variables (es decir, V<H>y/o V<L>), por ejemplo, dentro de una o más regiones CDR y/o dentro de una o más regiones marco. De forma adicional o alternativamente, un anticuerpo puede modificarse modificando los residuos dentro de la región o regiones constantes por ejemplo, para alterar la función o funciones efectoras del anticuerpo.

[0313] Un tipo de modificación por ingeniería de región variable que se puede realizar es el injerto de CDR. Los anticuerpos interactúan con los antígenos diana predominantemente a través de residuos de aminoácidos que se encuentran en las seis regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de la cadena pesada y ligera. Por esta razón, las secuencias de aminoácidos dentro de las CDR son más diversas entre los anticuerpos individuales que las secuencias fuera de las CDR. Debido a que las secuencias de CDR son responsables de la mayoría de las interacciones anticuerpo-antígeno, es posible expresar anticuerpos recombinantes que imitan las propiedades de anticuerpos naturales específicos mediante la construcción de vectores de expresión que incluyen secuencias de CDR del anticuerpo natural específico injertadas en secuencias marco de un anticuerpo diferente con propiedades diferentes (véase, por ejemplo, Riechmann, L. et al., 1998 Nature 332:323-327; Jones, P. et al., 1986 Nature 321:522-525; Queen, C. et al., 1989 Proc. Natl. Acad. Sci. EE. UU.86:10029-10033; la Patente US-5.225.539 de Winter y las Patentes US-5.530.101; 5.585.089; 5.693.762 y 6.180.370 de Queen et al.).

[0315] En consecuencia, otra realización de la descripción se refiere a composiciones que comprenden un anticuerpo monoclonal anti-ActRII, o una proteína funcional que comprende una porción de unión al antígeno del mismo, que comprende una región variable de cadena pesada que comprende secuencias de CDR1 que tienen una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 1-14; secuencias de CDR2 que tienen una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 15-28; secuencias de CDR3 que tienen una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 29-42, respectivamente; y una región variable de la cadena ligera que tiene secuencias de CDR1 que tienen una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 43-56; secuencias de CDR2 que tienen una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 57-70; y secuencias de CDR3 que consisten en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 71-84, respectivamente. Por lo tanto, dichos anticuerpos contienen las secuencias de CDR V<H>y V<L>de los anticuerpos monoclonales, aunque pueden contener secuencias marco diferentes de estos anticuerpos.

[0317] Dichas secuencias marco pueden obtenerse de bases de datos de ADN públicas o referencias publicadas que incluyen secuencias génicas de anticuerpos de línea germinal. Por ejemplo, las secuencias de ADN de la línea germinal para los genes de la región variable de la cadena pesada y ligera humana pueden encontrarse en la base de datos de secuencias de la línea germinal humana “vBase” (disponible en Internet en www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase), así como en Kabat, E. A.,et al.,[supra]; Tomlinson, I. M., et al., 1992 J. fol. Biol.227:776-798; y Cox, J. P. L. et al., 1994 Eur. J Immunol.24:827-836. Un ejemplo de secuencias marco para su uso en los anticuerpos de la descripción son aquellas que son estructuralmente similares a las secuencias marco utilizadas por los anticuerpos seleccionados de la descripción, por ejemplo, las secuencias de consenso y/o las secuencias marco utilizadas por los anticuerpos monoclonales de la descripción. Las secuencias CDR1, 2 y 3 de V<H>y las secuencias CDR1, 2 y 3 de V<L>se pueden injertar en regiones marco que tienen la secuencia idéntica a la que se encuentra en el gen de inmunoglobulina de la línea germinal del que deriva la secuencia marco, o las secuencias CDR se pueden injertar en regiones marco que contienen una o más mutaciones en comparación con las secuencias de la línea germinal.

[0319] Por ejemplo, se ha descubierto que, en determinados casos, es beneficioso mutar los residuos dentro de las regiones marco para mantener o mejorar la capacidad de unión al antígeno del anticuerpo (véanse, por ejemplo, las Patentes US- 5.530.101; 5.585.089; 5.693.762 y 6.180.370 de Queen et al).

[0321] Otro tipo de modificación de la región variable consiste en mutar los residuos de aminoácidos dentro de las regiones CDR1, CDR2 y/o CDR3 de V<H>y/o V<L>para mejorar de este modo una o más propiedades de unión (por ejemplo, la afinidad) del anticuerpo de interés, lo que se conoce como “maduración por afinidad”. La mutagénesis dirigida al sitio o la mutagénesis mediada por PCR se puede realizar para introducir la mutación o mutaciones y el efecto sobre la unión de los anticuerpos, u otra propiedad funcional de interés, se puede evaluar en ensayosin vitrooin vivotal como se describe en la presente memoria y se proporciona en los Ejemplos. Se pueden introducir modificaciones conservadoras (como se ha descrito anteriormente). Las mutaciones pueden ser sustituciones, adiciones o deleciones de aminoácidos. Además, normalmente no se alteran más de uno, dos, tres, cuatro o cinco residuos dentro de una región CDR.

[0323] En consecuencia, en otra realización, la descripción proporciona anticuerpos monoclonales anti-ActRII aislados, o una proteína funcional que comprende una porción de unión a antígeno de los mismos, que consiste en una región variable de cadena pesada que tiene: una región CDR1 de V<H>que consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que tiene Id. de sec. n.º: 1-14 o una secuencia de aminoácidos que tiene una, dos, tres, cuatro o cinco sustituciones, deleciones o adiciones de aminoácidos en comparación con la Id. de sec. n.º: 1-14; una región CDR2 de V<H>que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 15-28, o una secuencia de aminoácidos que tiene una, dos, tres, cuatro o cinco sustituciones, deleciones o adiciones de aminoácidos en comparación con la Id. de sec. n.º: 15-28; una región CDR3 de V<H>que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 29-42, o una secuencia de aminoácidos que tiene una, dos, tres, cuatro o cinco sustituciones, deleciones o adiciones de aminoácidos en comparación con la Id. de sec. n.º: 29-42; una región CDR1 de V<L>que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 43-56, o una secuencia de aminoácidos que tiene una, dos, tres, cuatro o cinco sustituciones, deleciones o adiciones de aminoácidos en comparación con la Id. de sec. n.º: 43-56; una región CDR2 de V<L>que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 52-70, o una secuencia de aminoácidos que tiene una, dos, tres, cuatro o cinco sustituciones, deleciones o adiciones de aminoácidos en comparación con la Id. de sec. n.º: 52-70; y una región CDR3 de V<L>que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 71-84, o una secuencia de aminoácidos que tiene una, dos, tres, cuatro o cinco sustituciones, deleciones o adiciones de aminoácidos en comparación con la Id. de sec. n.º: 71-84.

[0325] Anticuerpos de camélidos

[0327] Las proteínas de anticuerpos obtenidas de miembros de la familia de los camellos y dromedarios (Camelus bactrianusyCamelus dromaderius) incluyendo los miembros del nuevo mundo tales como las especies de llamas (Lama paccos, Lama glamayLama vicugna)se han caracterizado con respecto al tamaño, la complejidad estructural y la antigenicidad en sujetos humanos. Determinados anticuerpos IgG de esta familia de mamíferos según se encuentran en la naturaleza carecen de cadenas ligeras y, por lo tanto, son estructuralmente distintos de la estructura cuaternaria típica de cuatro cadenas que tiene dos cadenas pesadas y dos ligeras, para los anticuerpos de otros animales (véase el documento WO94/04678).

[0329] Una región del anticuerpo del camélido, que es el pequeño dominio variable único identificado como V<HH>se puede obtener mediante ingeniería genética para producir una proteína pequeña que tenga una alta afinidad por una diana, lo que da como resultado una proteína derivada de un anticuerpo de bajo peso molecular conocida como “nanocuerpo de camélido” (véase el documento US5.759.808; Stijlemans, B. et al., 2004 J Biol Chem 279: 1256-1261; Dumoulin, M. et al., 2003 Nature 424: 783-788; Pleschberger, M. et al.2003 Bioconjugate Chem 14: 440-448; Cortez-Retamozo, V. et al.2002 Int J Cancer 89: 456-62; y Lauwereys, M. et al.1998 EMBO J 17: 3512-3520). Las bibliotecas diseñadas por ingeniería de anticuerpos y fragmentos de anticuerpos de camélidos están comercialmente disponibles, por ejemplo, en Ablynx, Gante, Bélgica. Como ocurre con otros anticuerpos de origen no humano, la secuencia de aminoácidos de un anticuerpo de camélido se puede alterar de forma recombinante para obtener una secuencia que se parezca más a una secuencia humana, es decir, el nanocuerpo se puede “humanizar”. Por lo tanto, la baja antigenicidad natural de los anticuerpos de los camélidos contra los seres humanos puede reducirse aún más.

[0330] El nanocuerpo del camélido tiene un peso molecular de aproximadamente una décima parte del de una molécula de IgG humana, y la proteína tiene un diámetro físico de solo unos pocos nanómetros. Una consecuencia del pequeño tamaño es la capacidad de los nanocuerpos de los camélidos para unirse a sitios antigénicos que son funcionalmente invisibles para las proteínas de los anticuerpos más grandes, es decir, los nanocuerpos de los camélidos son útiles como reactivos para detectar antígenos que de otro modo serían crípticos utilizando técnicas inmunológicas clásicas y como posibles agentes terapéuticos. Por lo tanto, otra consecuencia más del pequeño tamaño es que un nanocuerpo de camélido puede inhibir como resultado de la unión a un sitio específico en un surco o hendidura estrecha de una proteína diana y, por lo tanto, puede desempeñar una función que se parece más a la función de un fármaco clásico de bajo peso molecular que a la de un anticuerpo clásico.

[0332] El bajo peso molecular y el tamaño compacto hacen que los nanocuerpos de los camélidos sean extremadamente termoestables, estables a pH extremos y a la digestión proteolítica, y poco antigénicos. Otra consecuencia es que los nanocuerpos de los camélidos pasan fácilmente del sistema circulatorio a los tejidos, e incluso cruzan la barrera hematoencefálica y pueden tratar trastornos que afectan al tejido nervioso. Los nanocuerpos pueden facilitar aún más el transporte de fármacos a través de la barrera hematoencefálica (véase el documento US2004/0161738). Estas características, combinadas con la baja antigenicidad para los seres humanos, indican un gran potencial terapéutico. Además, estas moléculas pueden expresarse completamente en células procariotas tales comoE.coliy se expresan como proteínas de fusión con bacteriófagos y son funcionales.

[0334] En consecuencia, en una realización, la presente descripción se refiere a una composición que comprende un anticuerpo o nanocuerpo de camélido que tiene una alta afinidad por ActRIIB. En determinados casos en la presente memoria, el anticuerpo o nanocuerpo de camélido se produce de forma natural en el animal camélido, es decir, se produce por el camélido después de la inmunización con ActRIIB o un fragmento peptídico del mismo, utilizando las técnicas descritas en la presente memoria para otros anticuerpos. Alternativamente, el nanocuerpo de camélido anti-ActRIIB se diseña por ingeniería genética, es decir, se produce mediante selección, por ejemplo, a partir de una biblioteca de fagos que muestran proteínas de nanocuerpos de camélido mutagenizadas de manera apropiada utilizando procedimientos de selección con ActRIIB como diana como se describe en los ejemplos de la presente memoria. Los nanocuerpos diseñados se pueden personalizar además mediante ingeniería genética para que tengan una semivida en un sujeto receptor de 45 minutos a dos semanas. En una realización específica, el anticuerpo o nanocuerpo de camélido se obtiene injertando las secuencias de CDR de la cadena pesada o ligera de los anticuerpos humanos de la descripción en secuencias marco de anticuerpos de nanocuerpos o de un solo dominio, como se describe, por ejemplo, en el documento WO94/04678.

[0335] Estructura base sin anticuerpos

[0336] Los marcos o estructuras base no inmunoglobulínicos conocidos incluyen, pero no se limitan a, Adnectinas (fibronectina) (Compound Therapeutics, Inc., Waltham, MA), Anquirina (Molecular Partners AG, Zúrich, Suiza), anticuerpos de dominio (Domantis, Ltd (Cambridge, MA) y Ablynx nv (Zwijnaarde, Bélgica)), lipocalina (Anticalin) (Pieris Proteolab AG, Freising, Alemania), inmunofármacos modulares pequeños (Trubion Pharmaceuticals Inc., Seattle, WA), maxicuerpos (Avidia, Inc. (Mountain View, CA)), Proteína A (Affibody AG, Suecia) y afilina (gammacristalina o ubiquitina) (Scil Proteins GmbH, Halle, Alemania), miméticos de epítopos de proteínas (Polyphor Ltd, Allschwil, Suiza).

[0337] (i) Estructura base de fibronectina

[0338] Los andamios de fibronectina se basan preferiblemente en el dominio de fibronectina de tipo III (por ejemplo, el décimo módulo de la fibronectina de tipo III (dominio 10 Fn3)). El dominio de la fibronectina de tipo III tiene 7 u 8 cadenas beta que se distribuyen entre dos láminas beta, que a su vez se empaquetan una contra la otra para formar el núcleo de la proteína, y además contienen bucles (análogos a las CDR) que conectan las cadenas beta entre sí y están expuestas al disolvente. Hay al menos tres bucles de este tipo en cada borde del sándwich de lámina beta, donde el borde es el límite de la proteína perpendicular a la dirección de las cadenas beta (documento US 6.818.418).

[0339] Estos andamios basados en fibronectina no son una inmunoglobulina, aunque el pliegue general está estrechamente relacionado con el del fragmento de anticuerpo funcional más pequeño, la región variable de la cadena pesada, que comprende toda la unidad de reconocimiento de antígenos en la IgG de camello y llama. Debido a esta estructura, el anticuerpo que no es inmunoglobulina imita las propiedades de unión al antígeno que son similares en naturaleza y afinidad a las de los anticuerpos. Estos andamios se pueden utilizar en una estrategia de aleatorización y mezcla de buclesin vitroque es similar al proceso de maduración por afinidad de los anticuerposin vivo.Estas moléculas basadas en fibronectina pueden utilizarse como armazones en los que las regiones de bucle de la molécula pueden reemplazarse por las CDR de la descripción utilizando técnicas de clonación estándar.

[0340] (ii) Anquirina: Compañeros moleculares

[0341] La tecnología se basa en el uso de proteínas con módulos de repetición derivados de la anquirina como estructuras base para contener regiones variables que pueden utilizarse para unirse a diferentes dianas. El módulo de repetición de la anquirina es un polipéptido de 33 aminoácidos que consiste en dos hélices α antiparalelas y un giro β. La unión de las regiones variables se optimiza principalmente mediante el uso de la visualización de ribosomas.

[0342] (iii) Maxicuerpos/Avímeros - Avidia

[0343] Los avímeros derivan de una proteína que contiene un dominio A natural tal como LRP-1. Estos dominios se utilizan por naturaleza para las interacciones proteína-proteína y, en el ser humano, más de 250 proteínas se basan estructuralmente en los dominios A. Los avímeros consisten en varios monómeros de “dominio A” diferentes (2-10) unidos mediante enlazadores de aminoácidos. Se pueden crear avímeros que puedan unirse al antígeno diana utilizando la metodología descrita, por ejemplo, en el documento US2004/0175756; el documento US2005/0053973; el documento US2005/0048512; y el documento US2006/0008844.

[0344] (vi) Proteína A - Affibody

[0345] Los ligandos de afinidad Affibody<®>son proteínas pequeñas y simples compuestas por un haz de tres hélices basado en la estructura base de uno de los dominios de unión a IgG de la proteína A. La proteína A es una proteína de superficie de la bacteriaStaphylococcus aureus.Este dominio de andamiaje consiste en 58 aminoácidos, 13 de los cuales se distribuyen al azar para generar bibliotecas de Affibody<®>con un gran número de variantes de ligandos (véase, por ejemplo, el documento US 5.831.012). Las moléculas Affibody<®>imitan a los anticuerpos, tienen un peso molecular de 6 kDa, en comparación con el peso molecular de los anticuerpos, que es de 150 kDa. A pesar de su pequeño tamaño, el sitio de unión de las moléculas de Affibody<®>es similar al de un anticuerpo.

[0346] (v) Anticalins - Pieris

[0347] Las Anticalins<®>son productos desarrollados por la empresa Pieris ProteoLab AG. Se derivan de las lipocalinas, un grupo muy extendido de proteínas pequeñas y robustas que suelen participar en el transporte o almacenamiento fisiológico de compuestos químicamente sensibles o insolubles. Varias lipocalinas naturales se encuentran en los tejidos humanos o en los líquidos corporales.

[0348] La arquitectura de la proteína recuerda a la de las inmunoglobulinas, con bucles hipervariables en la parte superior de un marco rígido. Sin embargo, a diferencia de los anticuerpos o sus fragmentos recombinantes, las lipocalinas están compuestas por una única cadena polipeptídica con 160 a 180 residuos de aminoácidos, siendo ligeramente más grandes que un solo dominio de inmunoglobulina.

[0349] El conjunto de cuatro bucles, que forma el bolsillo de encuadernación, muestra una plasticidad estructural pronunciada y tolera una diversidad de cadenas laterales. Por lo tanto, el sitio de unión se puede remodelar en un proceso patentado para reconocer las moléculas diana prescritas de diferente forma con alta afinidad y especificidad.

[0350] Una proteína de la familia de las lipocalinas, la proteína de unión a bilina (BBP) dePieris brassicae, se ha utilizado para desarrollar anticalinas mediante la mutagenización del conjunto de cuatro bucles. Un ejemplo de una solicitud de patente que describe “anticalinas” es el documento WO1999/16873.

[0351] (vi) Afilina - Proteínas Scil

[0352] Las moléculas AFFILIN<™>son pequeñas proteínas no inmunoglobulínicas que están diseñadas para tener afinidades específicas hacia proteínas y moléculas pequeñas. Las nuevas moléculas AFFILIN<™>se pueden seleccionar muy rápidamente de dos bibliotecas, cada una de las cuales se basa en una proteína de andamiaje diferente de origen humano.

[0353] Las moléculas AFFILIN<™>no muestran ninguna homología estructural con las proteínas de inmunoglobulina. Las proteínas Scil emplean dos estructuras base de AFFILIN<™>, una de los cuales es gamma cristalina, una proteína estructural del cristalino humano, y la otra son proteínas de la superfamilia de la “ubiquitina”. Ambas estructuras base humanas son muy pequeñas, muestran estabilidad a altas temperaturas y son casi resistentes a los cambios de pH y a los agentes desnaturalizantes. Esta alta estabilidad se debe principalmente a la estructura expandida de la lámina beta de las proteínas. Los ejemplos de proteínas derivadas de gama cristalina se describen en el documento WO2001/004144 y los ejemplos de proteínas “similares a la ubiquitina” se describen en el documento WO2004/106368.

[0354] (vii) Miméticos de epítopos de proteínas (PEM)

[0355] Los PEM son moléculas cíclicas similares a péptidos de tamaño mediano (PM 1-2 kDa) que imitan las estructuras secundarias en forma de horquilla beta de las proteínas, la principal estructura secundaria implicada en las interacciones proteína-proteína.

[0356] Injertar dominios de unión a antígenos en marcos o estructuras base alternativos

[0357] Se puede emplear una amplia diversidad de marcos o estructuras base de anticuerpo/inmunoglobulina siempre que el polipéptido resultante incluya al menos una región de unión que se una específicamente a ActRIIB. Dichos marcos o estructuras base incluyen los 5 idiotipos principales de las inmunoglobulinas humanas, o fragmentos de las mismas (tales como los descritos en otra parte de la presente memoria), e incluyen inmunoglobulinas de otras especies animales, preferiblemente con aspectos humanizados. Los anticuerpos de cadena pesada individuales, tales como los identificados en los camélidos, son de particular interés a este respecto. Los expertos en la técnica siguen descubriendo y desarrollando marcos, estructuras base y fragmentos novedosos.

[0358] En un aspecto, las composiciones de la descripción pueden comprender anticuerpos no basados en inmunoglobulinas que utilizan andamios no inmunoglobulínicos en los que se pueden injertar las CDR de los anticuerpos descritos. Se pueden emplear estructuras y armazones no inmunoglobulínicos conocidos o futuros, siempre que comprendan una región de unión específica para la proteína diana de la Id. de sec. n.º: 181 (preferiblemente, su dominio de unión al ligando tal como se muestra en la Id. de sec. n.º: 182). Tales compuestos se conocen en la presente memoria como “polipéptidos que comprenden una región de unión específica a la diana”. Los ejemplos de estructuras no inmunoglobulínicas se describen con más detalle en las secciones siguientes (anticuerpos de camélidos y armazón sin anticuerpos).

[0359] Ingeniería de marco o Fc

[0360] Los anticuerpos diseñados comprendidos en las composiciones de la descripción incluyen aquellos en los cuales se han realizado modificaciones en los residuos estructurales dentro de V<H>y/o V<L>, por ejemplo, para mejorar las propiedades del anticuerpo. Normalmente, tales modificaciones estructurales se realizan para disminuir la inmunogenicidad del anticuerpo. Por ejemplo, un enfoque es “retromutar” uno o más residuos marco a la secuencia de la línea germinal correspondiente. Más específicamente, un anticuerpo que ha sufrido una mutación somática puede contener residuos estructurales que difieren de la secuencia de la línea germinal de la que deriva el anticuerpo. Dichos residuos pueden identificarse comparando las secuencias marco del anticuerpo con las secuencias de la línea germinal de las que deriva el anticuerpo. Para devolver las secuencias de la región marco a su configuración de línea germinal, las mutaciones somáticas pueden “retromutarse” en la secuencia de la línea germinal mediante, por ejemplo, mutagénesis dirigida al sitio o mutagénesis mediada por PCR. Dichos anticuerpos “retromutados” también pueden estar comprendidos en las composiciones de la descripción.

[0361] Otro tipo de modificación estructural implica mutar uno o más residuos dentro de la región estructural, o incluso dentro de una o más regiones CDR, para eliminar los epítopos de las células T y reducir así la inmunogenicidad potencial del anticuerpo. Este enfoque también se denomina “desinmunización” y se describe con más detalle en el documento US2003/0153043.

[0362] Además o como alternativa a las modificaciones realizadas dentro del marco o las regiones CDR, los anticuerpos de la descripción pueden diseñarse para incluir modificaciones dentro de la región Fc, normalmente para alterar una o más propiedades funcionales del anticuerpo, tales como la semivida sérica, la fijación del complemento, la unión al receptor Fc y/o la citotoxicidad celular dependiente del antígeno. Adicionalmente, un anticuerpo comprendido en las composiciones de la descripción puede modificarse químicamente (por ejemplo, pueden unirse una o más fracciones químicas al anticuerpo) o modificarse para alterar su glicosilación, nuevamente para alterar una o más propiedades funcionales del anticuerpo. Cada una de estas realizaciones se describe en más detalle a continuación. La numeración de los residuos en la región Fc es la del índice EU de Kabat.

[0363] En una realización, la región bisagra de CH1 se modifica de tal modo que el número de residuos de cisteína en la región bisagra se altere, por ejemplo, aumente o disminuya. Este enfoque se describe con más detalle en el documento US5.677.425. El número de residuos de cisteína en la región bisagra del CH1 se altera para, por ejemplo, facilitar el ensamblaje de las cadenas ligera y pesada o para aumentar o disminuir la estabilidad del anticuerpo. En otra realización, la región bisagra Fc de un anticuerpo se muta para disminuir la semivida biológica del anticuerpo. Más específicamente, se introducen una o más mutaciones de aminoácidos en la región de interfaz del dominio CH2-CH3 del fragmento de bisagra Fc de tal modo que el anticuerpo tiene una unión alterada a la proteína A (SpA) estafilocócica en relación con la unión SpA del dominio bisagra de Fc nativo. Este enfoque se describe con más detalle en el documento US 6.165.745.

[0364] En otra realización, el anticuerpo se modifica para aumentar su semivida biológica. Son posibles varios enfoques. Por ejemplo, se pueden introducir una o más de las siguientes mutaciones: T252L, T254S, T256F, como se describe en el documento US6.277.375. Alternativamente, para aumentar la semivida biológica, el anticuerpo puede alterarse dentro de la región CH1 o CL para que contenga un epítopo de unión al receptor recuperado tomado de dos bucles de un dominio CH2 de una región Fc de una IgG, como se describe en los documentos US5.869.046 y US6.121.022. En otras realizaciones más, la región Fc se altera reemplazando al menos un residuo de aminoácido por un residuo de aminoácido diferente para alterar las funciones efectoras del anticuerpo. Por ejemplo, uno o más aminoácidos pueden reemplazarse por un residuo de aminoácido diferente de tal modo que el anticuerpo tenga una afinidad alterada por un ligando efector pero conserve la capacidad de unión al antígeno del anticuerpo original. El ligando efector con el que se altera la afinidad puede ser, por ejemplo, un receptor Fc o el componente C1 del complemento. Este enfoque se describe con más detalle en los documentos US 5.624.821 y US 5.648.260, ambos de Winter et al. En particular, los residuos 234 y 235 pueden estar mutados. En particular, estas mutaciones pueden ser en alanina. Por lo tanto, en una realización, el anticuerpo comprendido en las composiciones de la descripción tiene una mutación en la región Fc en uno o ambos de los aminoácidos 234 y 235. En otra realización, uno o ambos de los aminoácidos 234 y 235 pueden sustituirse por alanina. La sustitución de los aminoácidos 234 y 235 por alanina da como resultado una actividad de ADCC reducida.

[0365] En otro caso, uno o más aminoácidos seleccionados entre los residuos de aminoácidos de los anticuerpos descritos pueden reemplazarse por un residuo de aminoácido diferente de tal modo que el anticuerpo altere la unión a C1q y/o reduzca o suprima la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC). Este enfoque se describe con más detalle en el documento US6.194.551.

[0366] En otra realización, uno o más residuos de aminoácidos de los anticuerpos descritos se alteran para alterar así la capacidad del anticuerpo para fijar el complemento. Este enfoque se describe con más detalle en el documento WO94/29351.

[0367] En otra realización más, la región Fc de los anticuerpos descritos se modifica para aumentar la capacidad del anticuerpo para mediar en la citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo (ADCC) y/o para aumentar la afinidad del anticuerpo por un receptor Fcγ modificando uno o más aminoácidos. Este enfoque se describe con más detalle en el documento WO00/42072. Además, se han mapeado los sitios de unión del FcγRI, FcγRII, FcγRIII y FcRn en la IgG1 humana y se han descrito variantes con una unión mejorada (véase Shields, R.L. et al., 2001 J. Biol. Chen.276:6591-6604).

[0368] En otra realización más, se modifica la glicosilación de un anticuerpo comprendido en las composiciones de la descripción. Por ejemplo, se puede producir un anticuerpo aglicoslado (es decir, el anticuerpo carece de glicosilación). La glicosilación puede alterarse para, por ejemplo, aumentar la afinidad del anticuerpo por el antígeno. Dichas modificaciones de carbohidratos se pueden lograr mediante; por ejemplo, alterar uno o más sitios de glicosilación dentro de la secuencia del anticuerpo. Por ejemplo, se pueden realizar una o más sustituciones de aminoácidos que den como resultado la eliminación de uno o más sitios de glicosilación del marco de la región variable para eliminar así la glicosilación en ese sitio. Tal aglicosilación puede aumentar la afinidad del anticuerpo por el antígeno. Tal enfoque se describe con más detalle en las patentes US-5714.350 y 6.350.861 de Co et al.

[0370] De forma adicional o alternativamente, se puede utilizar un anticuerpo que tenga un tipo alterado de glicosilación, tal como un anticuerpo hipofucosilado que tenga cantidades reducidas de residuos de fucosilo o un anticuerpo que tenga estructuras de GlcNAc bisecantes aumentadas. Se ha demostrado que dichos patrones de glucosilación alterados aumentan la capacidad de ADCC de los anticuerpos. Dichas modificaciones de carbohidratos pueden lograrse, por ejemplo, expresando el anticuerpo en una célula hospedadora con maquinaria de glucosilación alterada. Las células con maquinaria de glucosilación alterada se han descrito en la técnica y pueden utilizarse como células hospedadoras para expresar los anticuerpos recombinantes descritos para producir así un anticuerpo con glicosilación alterada. Por ejemplo, el documento EP 1.176.195 de Hang et al. describe una línea celular con un gen FUT8 funcionalmente alterado, que codifica una fucosiltransferasa, de tal modo que los anticuerpos expresados en dicha línea celular muestran hipofucosilación. Por lo tanto, en un ejemplo, los anticuerpos comprendidos en las composiciones de la descripción se producen mediante expresión recombinante en una línea celular que presenta un patrón de hipofucosilación, por ejemplo, una línea celular de mamífero con una expresión deficiente del gen FUT8 que codifica la fucosiltransferasa. El documento WO03/035835 describe una variante de la línea celular CHO, las células Lecl3, con una capacidad reducida para unir la fucosa a los carbohidratos unidos a Asn (297), lo que también resulta en la hipofucosilación de los anticuerpos expresados en esa célula huésped (véase también Shields, R.L. et al., 2002 J. Biol. Chem. 277:26733-26740). El documento WO99/54342 describe líneas celulares diseñadas para expresar glicosiltransferasas modificadoras de la glicoproteína (por ejemplo, beta(1,4)-N acetilglucosaminiltransferasa III (GnTLLL)) de tal modo que los anticuerpos expresados en las líneas celulares diseñadas muestran un aumento de las estructuras de GlcNAc bisecantes, lo que resulta en un aumento de la actividad ADCC de los anticuerpos (véase también Umana et al., 1999 Nat. Biotech. 17:176-180). Alternativamente, los anticuerpos comprendidos en las composiciones de la descripción se pueden producir en una levadura o un hongo filamentoso diseñado para un patrón de glicosilación similar al de los mamíferos, y pueden producir anticuerpos que carecen de fucosa como patrón de glicosilación (véase, por ejemplo, el documento EP1297172B1).

[0372] Otra modificación de los anticuerpos de la presente memoria que se contempla en la descripción es la pegilación. Un anticuerpo puede pegilarse para, por ejemplo, aumentar la semivida biológica (por ejemplo, en suero) del anticuerpo. Para pegilar un anticuerpo, el anticuerpo, o fragmento del mismo, normalmente se hace reaccionar con polietilenglicol (PEG), tal como un derivado de éster o aldehído reactivo del PEG, en condiciones en las que uno o más grupos PEG se unen al anticuerpo o fragmento de anticuerpo. La pegilación se puede llevar a cabo mediante una reacción de acilación o una reacción de alquilación con una molécula de PEG reactiva (o un polímero soluble en agua reactivo análogo). Tal como se utiliza en la presente memoria, el término “polietilenglicol” pretende abarcar cualquiera de las formas de PEG que se han utilizado para derivatizar otras proteínas, tales como el monoalcoxi- o ariloxipolietilenglicol (C1-C10) o la polietilenglicol-maleimida. En determinados casos, el anticuerpo utilizado que se va a pegilar es un anticuerpo aglicosilado. Los métodos para pegilar proteínas son conocidos en la técnica y se pueden aplicar a los anticuerpos descritos (véanse, por ejemplo, los documentos EP0154316 y EP0401384).

[0374] Otra modificación de los anticuerpos que se contempla en la descripción es un conjugado o una fusión de proteínas de al menos la región de unión al antígeno del anticuerpo comprendida en la composición de la descripción con la proteína sérica, tal como la albúmina sérica humana o un fragmento de la misma para aumentar la semivida de la molécula resultante (véase, por ejemplo, el documento EP0322094).

[0376] Otra posibilidad es una fusión de al menos la región de unión al antígeno del anticuerpo comprendida en la composición de la descripción con proteínas capaces de unirse a proteínas séricas, tales como la albúmina sérica humana, para aumentar la semivida de la molécula resultante (véase, por ejemplo, el documento EP0486525).

[0378] Métodos de ingeniería de anticuerpos alterados

[0380] Como se discutió anteriormente, los anticuerpos anti-ActRIIB que tienen secuencias CDR, secuencias V<H>y V<L>o secuencias de cadena pesada y ligera de longitud completa mostrados en la presente memoria se pueden utilizar para crear nuevos anticuerpos anti-ActRIIB modificando las secuencias de CDR, secuencias de cadena pesada y/o cadena ligera de longitud completa, secuencias V<H>y/o V<L>, o la región o regiones constantes unidas a las mismas. Por lo tanto, en otro aspecto de la descripción, las características estructurales de un anticuerpo anti-ActRIIB comprendido en las composiciones de la descripción se utilizan para crear anticuerpos anti-ActRIIB relacionados estructuralmente que conservan al menos una propiedad funcional de los anticuerpos comprendidos en las composiciones de la descripción, tales como la unión al ActRIIB humano, pero también inhiben una o más propiedades funcionales del ActRIIB (por ejemplo, la inhibición de la activación del Smad).

[0382] Por ejemplo, una o más regiones CDR de los anticuerpos comprendidos en las composiciones de la presente descripción, o mutaciones de las mismas, pueden combinarse de forma recombinante con regiones marco conocidas y/u otras CDR para crear anticuerpos anti-ActRIIB adicionales, diseñado por ingeniería recombinante, comprendidos en las composiciones de la descripción, como se describió anteriormente. Otros tipos de modificaciones incluyen las descritas en la sección anterior. El material de partida para el método de ingeniería es una o más de las secuencias V<H>y/o V<L>proporcionadas en la presente memoria, o una o más regiones CDR de las mismas. Para crear el anticuerpo diseñado, no es necesario preparar realmente (es decir, expresar como una proteína) un anticuerpo que tenga una o más de las secuencias V<H>y/o V<L>proporcionadas en la presente memoria, o una o más regiones CDR de las mismas. Más bien, la información contenida en la secuencia o secuencias se utiliza como material de partida para crear una secuencia o secuencias de “segunda generación” derivadas de la secuencia o secuencias originales y, a continuación, la secuencia o secuencias de “segunda generación” se preparan y se expresan como una proteína.

[0383] La secuencia de anticuerpos alterada también se puede preparar mediante el cribado de bibliotecas de anticuerpos que tienen secuencias de CDR3 fijas seleccionadas entre el grupo que consiste en la Id. de sec. n.º: 29-42 y la Id. de sec. n.º: 71-84 o determinantes de unión esenciales mínimos como se describe en el documento US2005/0255552 y la diversidad en las secuencias de CDR1 y CDR2. El cribado se puede realizar según cualquier tecnología de cribado apropiada para el cribado de anticuerpos de bibliotecas de anticuerpos, tal como la tecnología de presentación en fagos.

[0384] Se pueden utilizar técnicas de biología molecular estándar para preparar y expresar la secuencia de anticuerpos alterada. El anticuerpo codificado por la secuencia o secuencias de anticuerpos alteradas es aquel que conserva una, algunas o todas las propiedades funcionales de los anticuerpos anti-ActRIIB descritos en la presente memoria, cuyas propiedades funcionales incluyen, pero no se limitan a, la unión específica al ActRIIB humano y la inhibición de la activación de Smad.

[0385] El anticuerpo alterado puede presentar una o más, dos o más, o tres o más de las propiedades funcionales descritas anteriormente.

[0386] Las propiedades funcionales de los anticuerpos alterados pueden evaluarse utilizando ensayos estándar disponibles en la técnica y/o descritos en la presente memoria, tales como los expuestos en los ejemplos (por ejemplo, ELISA). Las mutaciones se pueden introducir de forma aleatoria o selectiva a lo largo de toda o parte de una secuencia codificante del anticuerpo anti-ActRIIB y los anticuerpos anti-ActRIIB modificados resultantes se pueden analizar para determinar la actividad de unión y/u otras propiedades funcionales como se describe en la presente memoria. Los métodos mutacionales se han descrito en la técnica. Por ejemplo, el documento WO02/092780 describe métodos para crear y seleccionar mutaciones de anticuerpos utilizando mutagénesis por saturación, ensamblaje por ligación sintética o una combinación de los mismos. Alternativamente, el documento WO03/074679 describe métodos de uso de métodos de cribado computacional para optimizar las propiedades fisicoquímicas de los anticuerpos.

[0387] Moléculas de ácido nucleico que codifican anticuerpos comprendidas en las composiciones de la descripción Los ejemplos de secuencias de nucleótidos de cadena ligera de longitud completa optimizadas para la expresión en una célula de mamífero se muestran en la Id. de sec. n.º: 161-165 y 171-175. Los ejemplos de secuencias de nucleótidos de cadena pesada de longitud completa optimizadas para la expresión en una célula de mamífero se muestran en la Id. de sec. n.º: 166-170 y 176-180.

[0388] Los ácidos nucleicos pueden estar presentes en células enteras, en un lisado celular o pueden ser ácidos nucleicos en una forma parcialmente purificada o sustancialmente pura. Un ácido nucleico se “aísla” o “se vuelve sustancialmente puro” cuando se purifica para separarlo de otros componentes celulares u otros contaminantes, por ejemplo, otros ácidos nucleicos o proteínas celulares, mediante técnicas estándar, que incluyen el tratamiento alcalino/SDS, la formación de bandas de CsCl, la cromatografía en columna, la electroforesis en gel de agarosa y otras bien conocidas en la técnica. Véase, F. Ausubel, et al., ed.1987 Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, Nueva York. Los ácidos nucleicos se pueden obtener utilizando técnicas de biología molecular estándar. Para los anticuerpos expresados por hibridomas (por ejemplo, hibridomas preparados a partir de ratones transgénicos que portan genes de inmunoglobulina humana como se describe más adelante), los ADNc que codifican las cadenas ligera y pesada del anticuerpo producido por el hibridoma pueden obtenerse mediante técnicas estándar de amplificación por PCR o clonación de ADNc. Para los anticuerpos obtenidos de una biblioteca de genes de inmunoglobulinas (por ejemplo, utilizando técnicas de presentación en fagos), el ácido nucleico que codifica el anticuerpo se puede recuperar de varios clones de fagos que son miembros de la biblioteca.

[0389] Una vez que se obtienen los fragmentos de ADN que codifican los segmentos V<H>y V<L>, estos fragmentos de ADN pueden manipularse adicionalmente mediante técnicas de ADN recombinante estándar, por ejemplo, para convertir los genes de la región variable en genes de cadena de anticuerpos de longitud completa, en genes de fragmentos Fab o en un gen scFv. En estas manipulaciones, un fragmento de ADN que codifica V<L>o V<H>se une operativamente a otra molécula de ADN, o a un fragmento que codifica otra proteína, tal como una región constante de un anticuerpo o un enlazador flexible. El término “unido operativamente” tal como se utiliza en este contexto, pretende significar que los dos fragmentos de ADN se unen de una manera funcional, por ejemplo, de tal modo que las secuencias de aminoácidos codificadas por los dos fragmentos de ADN permanezcan dentro del marco, o de tal modo que la proteína se exprese bajo el control de un promotor deseado.

[0390] El ADN aislado que codifica la región V<H>se puede convertir en un gen de cadena pesada de longitud completa uniendo operativamente el ADN que codifica la V<H>a otra molécula de ADN que codifica las regiones constantes de la cadena pesada (CH1, CH2 y CH3). Las secuencias de los genes de la región constante de la cadena pesada humana son conocidas en la técnica (véase, por ejemplo, Kabat, E. A.,et al.[supra]) y los fragmentos de ADN que abarcan estas regiones se pueden obtener mediante amplificación por PCR estándar. La región constante de la cadena pesada puede ser una región constante de IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM o IgD. La región constante de la cadena pesada se puede seleccionar entre los isotipos de IgG1. Para un gen de cadena pesada de un fragmento Fab, el ADN que codifica la V<H>puede unirse operativamente a otra molécula de ADN que codifica solo la región constante CH1 de la cadena pesada.

[0391] El ADN aislado que codifica la región V<L>se puede convertir en un gen de cadena ligera de longitud completa (así como en un gen de cadena ligera Fab) uniendo operativamente el ADN que codifica V<L>a otra molécula de ADN que codifica la región constante de cadena ligera, CL. Las secuencias de los genes de la región constante de la cadena ligera humana son conocidas en la técnica (véase por ejemplo, Kabat, E. A.,et al.[supra]) y los fragmentos de ADN que abarcan estas regiones se pueden obtener mediante amplificación por PCR estándar. La región constante de la cadena ligera puede ser una región constante kappa o lambda.

[0392] Para crear un gen scFv, los fragmentos de ADN que codifican V<H>y V<L>se unen operativamente a otro fragmento que codifica un conector flexible, por ejemplo, que codifica la secuencia de aminoácidos (Gly4 -Ser)<3>, de tal modo que las secuencias V<H>y V<L>se pueden expresar como una proteína monocatenaria contigua, con las regiones V<L>y V<H>unidas por el enlazador flexible (véase, por ejemplo, Bird et al., 1988 Science 242:423-426; Huston et al., 1988 Proc. Natl. Acad. Sci. utiliza 85:5879-5883; McCafferty et al., 1990 Nature 348:552-554).

[0393] Generación de anticuerpos monoclonales

[0394] Los anticuerpos monoclonales (mAb) se pueden producir mediante una variedad de técnicas, incluyendo la metodología convencional de anticuerpos monoclonales, por ejemplo, la técnica estándar de hibridación de células somáticas de Kohler y Milstein (1975 Nature 256: 495). Se pueden emplear muchas técnicas para producir anticuerpos monoclonales, por ejemplo, la transformación viral u oncogénica de los linfocitos B.

[0395] Un sistema animal para preparar hibridomas es el sistema murino. La producción de hibridomas en el ratón es un procedimiento bien establecido. Los protocolos de inmunización y las técnicas para el aislamiento de los esplenocitos inmunizados para su fusión son conocidos en la materia. También se conocen los compañeros de fusión (por ejemplo, células de mieloma murino) y los procedimientos de fusión.

[0396] Los anticuerpos quiméricos o humanizados comprendidos en las composiciones de la presente descripción se pueden preparar basándose en la secuencia de un anticuerpo monoclonal murino preparado como se describió anteriormente. El ADN que codifica las inmunoglobulinas de cadena pesada y ligera puede obtenerse del hibridoma murino de interés y diseñarse para que contenga secuencias de inmunoglobulina no murinas (por ejemplo, humanas) utilizando técnicas de biología molecular estándar. Por ejemplo, para crear un anticuerpo quimérico, las regiones variables murinas pueden unirse a regiones constantes humanas utilizando métodos conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, el documento US4.816.567). Para crear un anticuerpo humanizado, las regiones CDR murinas pueden insertarse en una estructura humana utilizando métodos conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, la Patente US-5225539; 5530101; 5585089; 5693762 y 6180370).

[0397] En una determinada realización, los anticuerpos comprendidos en las composiciones de la descripción son anticuerpos monoclonales humanos. Dichos anticuerpos monoclonales humanos dirigidos contra ActRIIB pueden generarse utilizando ratones transgénicos o transcromosómicos que portan partes del sistema inmunitario humano en lugar del sistema del ratón. Estos ratones transgénicos y transcromosómicos incluyen ratones denominados en la presente memoria ratones HuMab y ratones KM, respectivamente, y se denominan colectivamente en la presente memoria “ratones Ig humanos”.

[0398] El HuMab mouse<®>(Medarex, Inc.) contiene miniloci del gen de la inmunoglobulina humana que codifican secuencias de inmunoglobulinas de cadena pesada (µ y γ) y de cadena ligera κ humanas no reordenadas, junto con mutaciones específicas que inactivan los loci endógenos de las cadenas µ y κ (véase, por ejemplo, Lonberg, et al., 1994 Nature 368(6474): 856-859). En consecuencia, los ratones muestran una expresión reducida de IgM o de ratón y, en respuesta a la inmunización, los transgenes de cadena pesada y ligera humana introducidos sufren un cambio de clase y una mutación somática para generar una IgGκ humana monoclonal de alta afinidad (Lonberg, N.et al., 1994 [supra]; revisado en Lonberg, N., 1994 Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101; Lonberg, N. y Huszar, D., 1995 Intern. Rev. Immunol.13: 65-93 y Harding, F. y Lonberg, N., 1995 Ann. N. Y. Acad. Sci.764:536-546). La preparación y el uso de ratones HuMAb, y las modificaciones genómicas portadas por dichos ratones, se describen con más detalle en Taylor, L. et al., 1992 Nucleic Acids Research 20:6287-6295; Chen, J. et al., 1993 International Immunology 5: 647-656; Tuaillon et al., 1993 Proc. Natl. Acad. Sci. utiliza 94:3720-3724; Choi et al., 1993 Nature Genetics 4:117-123; Chen, J. et al., 1993 EMBO J.12: 821-830; Tuaillon et al., 1994 J. Immunol.152:2912-2920; Taylor, L. et al., 1994 International Immunology 579-591; y Fishwild, D. et al., 1996 Nature Biotechnology 14: 845-851. Véanse además, las patentes US-5.545.806; 5.569.825; 5.625.126; 5.633.425; 5.789.650; 5.877.397; 5.661.016; 5.814.318; 5.874.299; 5.770.429; y 5.545.807; así como los documentos WO92/103918, WO93/12227, WO94/25585, WO97/113852, WO98/24884; WO99/45962; y WO01/14424.

[0399] En otro caso, los anticuerpos humanos comprendidos en las composiciones de la descripción pueden generarse utilizando un ratón que porta secuencias de inmunoglobulina humana en transgenes y transcromosomas, tal como un ratón que porta un transgén de cadena pesada humana y un transcromosoma de cadena ligera humana. Dichos ratones, denominados en la presente memoria “ratones KM”, se describen en detalle en el documento WO02/43478. Además, los sistemas animales transgénicos alternativos que expresan genes de inmunoglobulina humana están disponibles en la técnica y pueden utilizarse para generar los anticuerpos anti-ActRIIB descritos en la presente descripción. Por ejemplo, se puede utilizar un sistema transgénico alternativo denominado Xenomouse (Abgenix, Inc.). Dichos ratones se describen, por ejemplo, en las patentes US-5.939.598; 6.075.181; 6.114.598; 6.150.584 y 6.162.963.

[0400] Por otro lado, los sistemas animales transcromosómicos alternativos que expresan genes de inmunoglobulina humana están disponibles en la técnica y pueden utilizarse para generar los anticuerpos anti-ActRIIB descritos en la presente descripción. Por ejemplo, pueden utilizarse ratones que portan tanto un transcromosoma de cadena pesada humana como un transcromosoma de cadena ligera humana, denominados “ratones TC”; dichos ratones se describen en Tomizuka et al., 2000 Proc. Natl. Acad. Sci. utiliza 97:722-727. Adicionalmente, se han descrito en la técnica vacas portadoras de transcromosomas de cadena pesada y ligera humanas (Kuroiwa et al., 2002 Nature Biotechnology 20:889-894) y pueden utilizarse para producir anticuerpos anti-ActRIIB.

[0401] Los anticuerpos recombinantes humanos comprendidos en las composiciones de la descripción también se pueden preparar utilizando métodos de presentación en fagos para seleccionar bibliotecas de genes de inmunoglobulinas humanas. Dichos métodos de presentación en fagos para aislar anticuerpos humanos están establecidos en la técnica o se describen en los ejemplos siguientes. Véanse, por ejemplo: las patentes US-5.223.409; 5.403.484; 5.571.698; 5.427.908; 5.580.717; 5.969.108; 6.172.197; 5.885.793; 6.521.404; 6.544.731; 6.5 55.313; 6.582.915 y 6.593.081.

[0402] Los anticuerpos monoclonales humanos comprendidos en las composiciones de la descripción también se pueden preparar utilizando ratones SCID en los que se han reconstituido células inmunitarias humanas de tal modo que se pueda generar una respuesta de anticuerpos humanos tras la inmunización. Dichos ratones se describen, por ejemplo, en las patentes US-5.476.996 y 5.698.767.

[0403] Generación de hibridomas productores de anticuerpos monoclonales humanos

[0404] Para generar hibridomas que produzcan anticuerpos monoclonales humanos comprendidos en las composiciones de la descripción, los esplenocitos y/o las células de los ganglios linfáticos de ratones inmunizados pueden aislarse y fusionarse con una línea celular inmortalizada apropiada, tal como una línea celular de mieloma de ratón. Los hibridomas resultantes se pueden analizar para determinar la producción de anticuerpos específicos para el antígeno. Por ejemplo, las suspensiones unicelulares de linfocitos esplénicos de ratones inmunizados pueden fusionarse a una sexta parte del número de células de mieloma de ratón no secretoras P3X63-Ag8.653 (ATCC, CRL 1580) con PEG al 50 %. Las células se siembran en placas de aproximadamente 2 x 145 en placas de microtitulación de fondo plano, seguidas de una incubación de dos semanas en un medio selectivo que contiene un 20 % de suero clónico fetal, un 18 % de medio acondicionado “653”, un 5 % de origen (IGEN), L-glutamina 4 mM, piruvato de sodio 1 mM, HEPES 5 mM, 2-mercaptoetanol 0:055 mM, 50 unidades/ml de penicilina, 50 mg/ml de estreptomicina, 50 mg/ml de gentamicina y 1 x HAT (Sigma; el HAT se añade 24 horas después de la fusión). Después de aproximadamente dos semanas, las células se pueden cultivar en un medio en el cual el HAT se reemplaza por HT. A continuación, los pocillos individuales pueden seleccionarse mediante ELISA para detectar anticuerpos IgM e IgG monoclonales humanos. Una vez que se produce un crecimiento extenso del hibridoma, se puede observar el medio normalmente después de 10-14 días. Los hibridomas secretores de anticuerpos pueden replantarse, examinarse nuevamente y, si aún son positivos para la IgG humana, los anticuerpos monoclonales pueden subclonarse al menos dos veces mediante dilución limitante. Los subclones estables pueden cultivarse a continuaciónin vitropara generar pequeñas cantidades de anticuerpo en el medio de cultivo tisular para su caracterización. Para purificar los anticuerpos monoclonales humanos, los hibridomas seleccionados se pueden cultivar en frascos giratorios de dos litros para la purificación de los anticuerpos monoclonales. Los sobrenadantes pueden filtrarse y concentrarse antes de la cromatografía de afinidad con proteína A-sefarosa (Pharmacia). La IgG eluida se puede comprobar mediante electroforesis en gel y cromatografía líquida de alta resolución para garantizar la pureza. La solución tampón se puede intercambiar por PBS y la concentración se puede determinar mediante DO<280>utilizando un coeficiente de extinción de 1,43. Los anticuerpos monoclonales pueden dividirse en alícuotas y almacenarse a -80 °C.

[0405] Generación de transfectomas productores de anticuerpos monoclonales

[0406] Los anticuerpos comprendidos en las composiciones de la descripción también se pueden producir en un transfectoma de la célula huésped utilizando, por ejemplo, una combinación de técnicas de ADN recombinante y métodos de transfección génica, como es bien conocido en la materia (por ejemplo, Morrison, S. (1985) Science 229:1202).

[0407] Por ejemplo, para expresar los anticuerpos, o fragmentos de anticuerpos de los mismos, se pueden obtener ADN que codifican cadenas ligeras y pesadas de longitud parcial o completa mediante técnicas de biología molecular estándar (por ejemplo, amplificación por PCR o la clonación del ADNc utilizando un hibridoma que exprese el anticuerpo de interés) y los ADN se pueden insertar en vectores de expresión de forma que los genes se unan operativamente a las secuencias de control de la transcripción y la traducción. En este contexto, la expresión “unido operativamente” pretende significar que un gen de anticuerpo está ligado a un vector de tal modo que las secuencias de control de la transcripción y la traducción dentro del vector cumplen su función prevista de regular la transcripción y traducción del gen del anticuerpo. El vector de expresión y las secuencias de control de la expresión se eligen para que sean compatibles con la célula huésped de expresión utilizada. El gen de la cadena ligera del anticuerpo y el gen de la cadena pesada del anticuerpo pueden insertarse en un vector separado o, más típicamente, ambos genes se insertan en el mismo vector de expresión. Los genes del anticuerpo se insertan en el vector de expresión mediante métodos estándar (por ejemplo, ligación de sitios de restricción complementarios en el fragmento del gen del anticuerpo y el vector, o ligación con extremos romos si no hay sitios de restricción presentes). Las regiones variables de cadena ligera y pesada de los anticuerpos descritos en la presente memoria pueden utilizarse para crear genes de anticuerpos de longitud completa de cualquier isotipo de anticuerpo insertándolos en vectores de expresión que ya codifican las regiones constantes de cadena pesada y cadena ligera del isotipo deseado, de tal modo que el segmento V<H>esté unido operativamente al segmento o segmentos CH dentro del vector y el segmento V<L>esté unido operativamente al segmento CL dentro del vector. De forma adicional o alternativamente, el vector de expresión recombinante puede codificar un péptido señal que facilite la secreción de la cadena de anticuerpos desde una célula hospedadora. El gen de la cadena del anticuerpo se puede clonar en el vector de tal modo que el péptido señal se enlace en marco al extremo amino del gen de la cadena del anticuerpo. El péptido señal puede ser un péptido señal de inmunoglobulina o un péptido señal heterólogo (es decir, un péptido señal de una proteína no inmunoglobulina).

[0409] Además de los genes de la cadena del anticuerpo, los vectores de expresión recombinantes de la descripción portan secuencias reguladoras que controlan la expresión de los genes de la cadena del anticuerpo en una célula huésped. El término “secuencia reguladora” pretende incluir promotores, potenciadores y otros elementos de control de la expresión (por ejemplo, señales de poliadenilación) que controlan la transcripción o traducción de los genes de la cadena de anticuerpos. Dichas secuencias reguladoras se describen, por ejemplo, en Goeddel (Gene Expression Technology. Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA 1990). Los expertos en la técnica apreciarán que el diseño del vector de expresión, incluyendo la selección de secuencias reguladoras, puede depender de factores tales como la elección de la célula huésped que se va a transformar, el nivel de expresión de la proteína deseado,etc.Las secuencias reguladoras para la expresión de las células huésped de mamíferos incluyen elementos víricos que dirigen niveles altos de expresión de proteínas en células de mamíferos, tales como promotores y/o potenciadores derivados del citomegalovirus (CMV). El virus simio 40 (SV40), el adenovirus (por ejemplo, el promotor tardío principal de adenovirus (AdMLP)) y polioma. Alternativamente, se pueden utilizar secuencias reguladoras no víricas, tales como el promotor de ubiquitina o el promotor de P-globina. Además, los elementos reguladores están compuestos por secuencias de diferentes fuentes, tales como el sistema promotor SRa, que contiene secuencias del promotor temprano del SV40 y la repetición terminal larga del virus de la leucemia de células T humanas de tipo 1 (Takebe, Y. et al., 1988 Mol. Cell. Biol.8:466-472).

[0411] Además de los genes de la cadena de anticuerpos y las secuencias reguladoras, los vectores de expresión recombinantes pueden llevar secuencias adicionales, tales como secuencias que regulan la replicación del vector en las células hospedadoras (por ejemplo, los orígenes de la replicación) y genes marcadores seleccionables. El gen marcador seleccionable facilita la selección de las células hospedadoras en las que se ha introducido el vector (véase, por ejemplo, las patentes US-4.399.216, 4.634.665 y 5.179.017). Por ejemplo, normalmente el gen marcador seleccionable confiere resistencia a fármacos, tales como G418, higromicina o metotrexato, a una célula hospedadora en la cual se ha introducido el vector. Los genes marcadores seleccionables incluyen el gen de la dihidrofolato reductasa (DHFR) (para su uso en células huéspedes de la dhfr con selección/amplificación con metotrexato) y el gen neo (para la selección de G418).

[0413] Para la expresión de las cadenas ligera y pesada, el vector o vectores de expresión que codifican las cadenas pesada y ligera se transfectan en una célula hospedadora mediante técnicas estándar. Las diversas formas del término “transfección” pretenden abarcar una amplia variedad de técnicas comúnmente utilizadas para la introducción de ADN exógeno en una célula huésped procariota o eucariota, por ejemplo, la electroporación, la precipitación con fosfato de calcio, la transfección con DEAE-dextrano y similares. Teóricamente, es posible expresar los anticuerpos de la descripción en células hospedadoras procariotas o eucariotas. Se discute la expresión de anticuerpos en células eucariotas, en particular células hospedadoras de mamíferos, porque tales células eucariotas, y en particular células de mamíferos, tienen más probabilidades que las células procariotas de ensamblar y secretar un anticuerpo adecuadamente plegado e inmunológicamente activo. Se ha informado que la expresión procariótica de genes de anticuerpos es ineficaz para la producción de altos rendimientos de anticuerpos activos (Boss, M. A. y Wood, C. R., 1985 Immunology Today 6:12-13).

[0415] Las células hospedadoras de mamíferos para expresar los anticuerpos recombinantes comprendidos en las composiciones de la descripción incluyen células de ovario de hámster chino (CHO) (incluyendo las células dhfr-CHO), descritas en Urlaub y Chasin, 1980 Proc. Natl. Acad. Sci. utiliza 77:4216-4220 utilizadas con un marcador seleccionable DH FR, por ejemplo, como se describe en R.J. Kaufman y P.A. Sharp, 1982 Mol. Biol. 159:601-621), células de mieloma NSO, células COS y células SP2. En un ejemplo, las células hospedadoras son células CHO K1PD. En particular, para su uso con células de mieloma NSO, otro sistema de expresión es el sistema de expresión del gen GS mostrado en los documentos WO87/04462, WO89/01036 y EP 338,841. Las células hospedadoras de mamíferos para expresar los anticuerpos recombinantes comprendidos en las composiciones de la descripción incluyen líneas celulares de mamíferos deficientes para la expresión del gen FUT8, por ejemplo, como se describe en el documento US6.946.292B2. Cuando se introducen vectores de expresión recombinantes que codifican genes de anticuerpos en células huéspedes de mamíferos, los anticuerpos se producen cultivando las células huéspedes durante un período de tiempo suficiente para permitir la expresión del anticuerpo en las células huéspedes o la secreción del anticuerpo en el medio de cultivo en el cual crecen las células huéspedes. Los anticuerpos se pueden recuperar del medio de cultivo utilizando métodos estándar de purificación de proteínas.

[0417] Inmunoconjugados

[0419] En otro aspecto, la presente descripción describe composiciones características que comprenden un anticuerpo anti-ActRIIB, o un fragmento del mismo, conjugado con un resto terapéutico, tal como una citotoxina, un fármaco (por ejemplo, un inmunosupresor) o una radiotoxina. Dichos conjugados se denominan en la presente memoria “inmunoconjugados”. Los inmunoconjugados que incluyen una o más citotoxinas se denominan “inmunotoxinas”. Una citotoxina o agente citotóxico incluye cualquier agente que sea perjudicial para (por ejemplo, destruya) las células.

[0420] Las citotoxinas se pueden conjugar con los anticuerpos de la descripción utilizando la tecnología enlazadora disponible en la técnica. Los ejemplos de tipos de enlazadores que se han utilizado para conjugar una citotoxina con un anticuerpo incluyen, pero no se limitan a, hidrazonas, tioéteres, ésteres, disulfuros y enlazadores que contienen péptidos. Se puede elegir un enlazador que sea, por ejemplo, susceptible a la escisión por un pH bajo dentro del compartimento lisosómico o susceptible a la escisión por proteasas, tales como las proteasas que se expresan preferiblemente en el tejido tumoral, tales como las catepsinas (por ejemplo, las catepsinas B, C, D).

[0422] Para un análisis más detallado de los tipos de citotoxinas, enlazadores y métodos para conjugar agentes terapéuticos con anticuerpos, véase también Saito, G. et al., 2003 Adv. Drug Deliv. Rev.55:199-215; Trail, P.A. et al., 2003 Cancer Immunol. Immunother.52:328-337; Payne, G.2003 Cancer Cell 3:207-212; Allen, T.M., 2002 Nat. Rev. Cancer 2:750-763; Pastan, I. y Kreitman, R. J., 2002 Curr. Opin. Investig. Drugs 3:1089-1091; Senter, P.D. y Springer, C.J., 2001 Adv. Drug Deliv. Rev.53:247-264.

[0424] Los anticuerpos comprendidos en las composiciones de la presente descripción también pueden conjugarse con un isótopo radiactivo para generar radiofármacos citotóxicos, también denominados radioinmunoconjugados. Los ejemplos de isótopos radiactivos que pueden conjugarse con anticuerpos para su uso diagnóstico o terapéutico incluyen, pero no se limitan a, yodo<131>, indio<111>, itrio<90>y lutecio<177>. Los métodos para preparar radioinmunoconjugados están establecidos en la técnica. Los ejemplos de radioinmunoconjugados son comercializados, incluyendo Zevalin<™>(DEC Pharmaceuticals) y Bexxar<™>(Corixa Pharmaceuticals), y se pueden utilizar métodos similares para preparar radioinmunoconjugados utilizando los anticuerpos de la descripción.

[0426] Los conjugados de anticuerpos comprendidos en las composiciones de la descripción pueden utilizarse para modificar una respuesta biológica dada, y la fracción farmacológica no debe interpretarse como limitada a los agentes terapéuticos químicos clásicos. Por ejemplo, la fracción farmacológica puede ser una proteína o un polipéptido que posea una actividad biológica deseada. Dichas proteínas pueden incluir, por ejemplo, una toxina enzimáticamente activa o un fragmento activo de la misma, tal como abrina, ricina A, exotoxina de pseudomonas o toxina diftérica; una proteína tal como el factor de necrosis tumoral o el interferón-γ; o modificadores de la respuesta biológica tales como, por ejemplo, linfocinas, interleucina-1 (“IL-1”), interleucina-2 (“IL-2”), interleucina-6 (“IL-6”), factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (“GM-CSF”), factor estimulante de colonias de granulocitos (“G-CSF”) u otros factores de crecimiento.

[0428] Las técnicas para conjugar dicha fracción terapéutica con anticuerpos son bien conocidas; véase, por ejemplo, Amon et al., “Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy”, en Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), pág. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., “Antibodies For Drug Delivery”, en Controlled Drug Delivery (2ª Ed.), Robinson et al. (eds.), pág.623-53 (Marcel Dekker, Inc.1987); Thorpe, “Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review”, en Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), pág.475-506 (1985); “Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy”, en Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al. (eds.), pág.303-16 (Academic Press 1985) y Thorpe et al., “The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates”, Inmunol. Rev., 62:119-58 (1982).

[0430] Moléculas biespecíficas

[0432] En otro aspecto, la presente descripción presenta composiciones que comprenden moléculas biespecíficas o multiespecíficas que comprenden un anticuerpo anti-ActRIIB, o un fragmento del mismo, de la descripción. Un anticuerpo comprendido en las composiciones de la descripción, o regiones de unión al antígeno del mismo, puede derivatizarse o unirse a otra molécula funcional, por ejemplo, otro péptido o proteína (por ejemplo, otro anticuerpo o ligando para un receptor) para generar una molécula biespecífica que se une a al menos dos sitios de unión o moléculas diana diferentes. De hecho, el anticuerpo de la descripción puede derivatizarse o unirse a más de otra molécula funcional para generar moléculas multiespecíficas que se unen a más de dos sitios de unión y/o moléculas diana diferentes; también se pretende que dichas moléculas multiespecíficas estén abarcadas por el término “molécula biespecífica” tal como se utiliza en la presente memoria. Para crear una molécula biespecífica de la descripción, un anticuerpo de la descripción puede unirse funcionalmente (por ejemplo, mediante acoplamiento químico, fusión genética, asociación no covalente o de otro modo) a una o más moléculas de unión diferentes, tales como otro anticuerpo, fragmento de anticuerpo, péptido o mimético de unión, de tal modo que resulte una molécula biespecífica. En consecuencia, la presente descripción incluye composiciones que comprenden moléculas biespecíficas que comprenden al menos una primera especificidad de unión para ActRIIB y una segunda especificidad de unión para un segundo epítopo diana. Por ejemplo, el segundo epítopo diana puede ser otro epítopo de ActRIIB diferente del primer epítopo diana.

[0433] De forma adicional, para las composiciones en las que la molécula biespecífica es multiespecífica, la molécula puede incluir además una tercera especificidad de unión, además del primer y segundo epítopo diana.

[0434] En una realización, las moléculas biespecíficas de las composiciones descritas comprenden como especificidad de unión al menos un anticuerpo, o un fragmento de anticuerpo del mismo, que incluye, por ejemplo, un Fab, Fab', F(ab')<2>, Fv o un Fv monocatenario. El anticuerpo también puede ser un dímero de cadena ligera o cadena pesada, o cualquier fragmento mínimo del mismo, tal como un Fv o una construcción de cadena sencilla como se describe en Ladner et al. documento US4.946.778.

[0435] Otros anticuerpos que pueden emplearse en las moléculas biespecíficas son los anticuerpos monoclonales murinos, quiméricos y humanizados.

[0436] Las moléculas biespecíficas comprendidas en las composiciones de la presente descripción se pueden preparar conjugando las especificidades de unión a los constituyentes, utilizando métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, cada especificidad de unión de la molécula biespecífica puede generarse por separado y después conjugarse entre sí. Cuando las especificidades de unión son proteínas o péptidos, se puede utilizar una variedad de agentes de acoplamiento o reticulación para la conjugación covalente. Los ejemplos de agentes de reticulación incluyen proteína A, carbodiimida, N-succinimidil-S-acetil-tioacetato (SATA), ácido 5,5'-ditiobis(2-nitrobenzoico) (DTNB), ofenilendimaleimida (OPdM), N-succinimidil-3-(2-piridilditio)propionato (SPDP) y 4-(N-maleimidometil)ciclohaxano-I-carboxilato de sulfosuccinimidilo (sulfo-SMCC) (véase, por ejemplo, Karpovsky et al., 1984 J. Exp. Med.160:1686; Liu, MA et al., 1985 Proc. Natl. Acad. Sci. utiliza 82:8648). Otros métodos incluyen los descritos en Paulus, 1985 Behring Ins. Mitt. N.º 78,118-132; Brennan et al., 1985 Science 229:81-83) y Glennie et al., 1987 J. Immunol.139: 2367-2375). Los agentes de conjugación son SATA y sulfo-SMCC, ambos comercializados por Pierce Chemical Co. (Rockford, IL). Cuando las especificidades de unión son anticuerpos, pueden conjugarse mediante enlaces de sulfhidrilo de las regiones bisagra del extremo C de las dos cadenas pesadas. En una realización particular, la región bisagra se modifica para contener un número impar de residuos de sulfhidrilo, por ejemplo uno, antes de la conjugación.

[0437] Alternativamente, ambas especificidades de unión pueden codificarse en el mismo vector y expresarse y ensamblarse en la misma célula hospedadora. Este método es particularmente útil cuando la molécula biespecífica es una proteína de fusión mAb x mAb, mAb x Fab, Fab x F(ab')<2>o ligando x Fab. Una molécula biespecífica comprendida en las composiciones de la descripción puede ser una molécula monocatenaria que comprende un anticuerpo monocatenario y un determinante de unión, o una molécula biespecífica monocatenaria que comprende dos determinantes de unión. Las moléculas biespecíficas pueden comprender al menos dos moléculas monocatenarias. Los métodos para preparar moléculas biespecíficas se describen, por ejemplo, en los números de Patente US-5.260.203; 5.455.030; 4.881.175; 5.132.405; 5.091.513; 5.476.786; 5.013.653; 5.258.498; y 5.482.858.

[0438] La unión de las moléculas biespecíficas a sus dianas específicas puede confirmarse, por ejemplo, mediante un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), un radioinmunoensayo (RIA), un análisis FACS, un bioensayo (por ejemplo, inhibición del crecimiento) o un ensayo por transferencia Western. Cada uno de estos ensayos generalmente detecta la presencia de complejos proteína-anticuerpo de particular interés empleando un reactivo marcado (por ejemplo, un anticuerpo) específico para el complejo de interés.

[0439] Anticuerpos multivalentes

[0440] En otro aspecto, la presente descripción se refiere a composiciones que comprenden anticuerpos multivalentes que comprenden al menos dos porciones de unión a antígeno idénticas o diferentes de los anticuerpos descritos que se unen a ActRIIB. En un ejemplo, los anticuerpos multivalentes proporcionan al menos dos, tres o cuatro porciones de los anticuerpos que se unen al antígeno. Las porciones de unión al antígeno se pueden unir entre sí mediante fusión de proteínas o enlace covalente o no covalente. Alternativamente, se han descrito métodos de enlace para las moléculas biespecíficas. En diversas realizaciones, la composición puede ser mono-, bi- o multivalente (por ejemplo, capaz de unirse a uno, dos o varios antígenos) y/o mono-, bi- o multiespecífica (por ejemplo, tener una región o regiones de unión capaces de unirse a uno, dos o varios antígenos diferentes). Una composición puede ser cualquier combinación de estos, por ejemplo, monovalente y monoespecífica (que tiene una región de unión que se une a un antígeno o epítopo); o bivalente y biespecífica (que tiene dos regiones de unión, cada una de las cuales se une a un epítopo o antígeno diferente); o bivalente y monoespecífica (que tiene dos regiones de unión, cada una de las cuales se une al mismo epítopo o antígeno); o multivalente y monoespecífica (que tiene varias regiones de unión que se unen todas al mismo antígeno o epítopo); o multivalente y multiespecífica (que tiene varias regiones de unión que se unen a varios antígenos o epítopos diferentes).

[0442] Composiciones farmacéuticas

[0444] En otro aspecto, la presente descripción proporciona una composición, por ejemplo, una composición farmacéutica, que contiene uno o una combinación de los anticuerpos/anticuerpos monoclonales descritos anteriormente, o una porción o porciones de unión al antígeno de los mismos, formulada junto con un portador farmacéuticamente aceptable. Dichas composiciones pueden incluir uno o una combinación de (por ejemplo, dos o más diferentes) de los anticuerpos descritos, o inmunoconjugados o moléculas biespecíficas. Por ejemplo, una composición farmacéutica de la descripción puede comprender una combinación de anticuerpos que se unen a diferentes epítopos del antígeno diana o que tienen actividades complementarias.

[0446] Las composiciones farmacéuticas de la descripción también se pueden administrar en terapia de combinación, es decir, combinadas con otros agentes. Por ejemplo, la terapia de combinación puede incluir un anticuerpo anti-ActRll de la presente descripción combinado con al menos otro agente que aumenta la masa/fuerza muscular, por ejemplo, IGF-1, IGF-2 o variantes de IGF-1 o IGF-2, un anticuerpo antimiostatina, un propéptido de miostatina, una proteína señuelo de miostatina que se une a ActRIIB pero no lo activa, un agonista de la beta 2, un agonista de la grelina un SARM, agonistas/miméticos de GH o folistatina. Los ejemplos de agentes terapéuticos que pueden utilizarse en la terapia de combinación se describen con mayor detalle a continuación en la sección sobre los usos de los anticuerpos de la descripción.

[0448] Como se utiliza en la presente descripción, “portador farmacéuticamente aceptable” incluye cualquiera y todos los disolventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes retardadores isotónicos y de absorción, y lo similar que son fisiológicamente compatibles. El portador debe ser adecuado para la administración intravenosa, intramuscular, subcutánea, parenteral, espinal o epidérmica (por ejemplo, mediante inyección o perfusión), preferiblemente para inyección o perfusión intravenosa. Dependiendo de la vía de administración, el compuesto activo, es decir, el anticuerpo, el inmunoconjugado o la molécula biespecífica, puede recubrirse con un material para proteger el compuesto de la acción de los ácidos y otras condiciones naturales que pueden inactivar el compuesto.

[0450] Las composiciones farmacéuticas de la descripción pueden incluir una o más sales farmacéuticamente aceptables. Una “sal farmacéuticamente aceptable” se refiere a una sal que retiene la actividad biológica deseada del compuesto original y no confiere ningún efecto toxicológico no deseado (véase, por ejemplo, Berge, S.M., et al., 1977 J. Pharm. Sci.66:1-19). Los ejemplos de tales sales incluyen sales de adición de ácidos y sales de adición de bases. Las sales de adición de ácidos incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos no tóxicos, tales como clorhídrico, nítrico, fosfórico, sulfúrico, bromhídrico, yodhídrico, fósforo y similares, así como de ácidos orgánicos no tóxicos tales como ácidos mono y dicarboxílicos alifáticos, ácidos alcanoicos sustituidos con fenilo, ácidos hidroxialcanoicos, ácidos aromáticos, ácidos sulfónicos alifáticos y aromáticos y similares. Las sales de adición de bases incluyen las derivadas de metales alcalinotérreos, tales como sodio, potasio, magnesio, calcio y similares, así como de aminas orgánicas no tóxicas, tales como N,N'-dibenciletilendiamina, N-metilglucamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilendiamina, procaína y similares.

[0452] Una composición farmacéutica de la descripción también puede incluir un antioxidante farmacéuticamente aceptable. Los ejemplos de antioxidantes farmacéuticamente aceptables incluyen: antioxidantes solubles en agua, tales como ácido ascórbico, clorhidrato de cisteína, bisulfato de sodio, metabisulfito de sodio, sulfito de sodio y similares; antioxidantes solubles en aceite, tales como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, galato de propilo, alfa-tocoferol y similares; y agentes quelantes de metales, tales como ácido cítrico, ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico y similares.

[0454] Los ejemplos de portadores acuosos y no acuosos adecuados que pueden emplearse en las composiciones farmacéuticas de la descripción incluyen agua, etanol, polioles (tales como glicerol, propilenglicol, polietilenglicol y similares) y mezclas adecuadas de los mismos, aceites vegetales, tales como aceite de oliva, y ésteres orgánicos inyectables, tales como oleato de etilo. La fluidez adecuada se puede mantener, por ejemplo, mediante el uso de materiales de recubrimiento, tales como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de dispersiones y mediante el uso de tensioactivos.

[0456] Estas composiciones también pueden contener adyuvantes tales como conservantes, agentes humectantes, agentes emulsionantes y agentes dispersantes. La prevención de la presencia de microorganismos puede garantizarse tanto mediante procedimientos de esterilización, anteriormente mencionados, como mediante la inclusión de diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabeno, clorobutanol, fenol, ácido sórbico y similares. También puede ser deseable incluir agentes isotónicos, tales como azúcares, cloruro de sodio y similares en las composiciones. Además, la absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable puede lograrse mediante la inclusión de agentes que retrasan la absorción, tales como el monoestearato de aluminio y la gelatina.

[0458] Los portadores farmacéuticamente aceptables incluyen soluciones o dispersiones acuosas estériles y polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables estériles. El uso de dichos medios y agentes para sustancias farmacéuticamente activas es conocido en la técnica. Excepto en la medida en que cualquier medio o agente convencional sea incompatible con el compuesto activo, se contempla el uso del mismo en las composiciones farmacéuticas de la descripción. Los compuestos activos suplementarios también se pueden incorporar en las composiciones.

[0460] Las composiciones terapéuticas normalmente deben ser estériles y estables en las condiciones de fabricación y almacenamiento. La composición se puede formular como una solución, microemulsión, liposoma u otra estructura ordenada adecuada para una alta concentración de fármaco. El portador puede ser un disolvente o medio de dispersión que contenga, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido y similares) y mezclas adecuadas de los mismos. La fluidez adecuada se puede mantener, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento tal como la lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de la dispersión y mediante el uso de tensioactivos. En muchos casos, se pueden incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol o cloruro de sodio en la composición. La absorción prolongada de las composiciones inyectables puede lograrse incluyendo en la composición un agente que retrase la absorción, por ejemplo, sales de monoestearato y gelatina.

[0462] Las soluciones inyectables estériles se pueden preparar incorporando el compuesto activo en la cantidad requerida en un disolvente apropiado con uno o una combinación de los agentes enumerados anteriormente, según sea necesario, seguido de una microfiltración de esterilización. En general, las dispersiones se preparan incorporando el compuesto activo en un vehículo estéril que contiene un medio de dispersión básico y los otros agentes requeridos de entre los enumerados anteriormente. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos de preparación son secado al vacío y secado por congelación (liofilización) que producen un polvo del principio activo más cualquier agente adicional deseado a partir de una solución previamente filtrada de forma estéril del mismo.

[0464] La cantidad de principio activo que se puede combinar con un material portador para producir una forma de dosificación única variará dependiendo del sujeto que se está tratando y del modo particular de administración. La cantidad de principio activo que se puede combinar con un material portador para producir una forma de dosificación única será generalmente la cantidad de la composición que produce un efecto terapéutico. Generalmente, del cien por cien, esta cantidad variará de aproximadamente el 0,01 por ciento a aproximadamente el noventa y nueve por ciento de principio activo, de aproximadamente el 0,1 por ciento a aproximadamente el 70 por ciento, o de aproximadamente el 1 por ciento a aproximadamente el 30 por ciento de principio activo en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable.

[0466] Los regímenes de dosificación se ajustan para proporcionar la respuesta deseada óptima (por ejemplo, una respuesta terapéutica). Por ejemplo, un único bolo se puede administrar, varias dosis divididas se pueden administrar a lo largo del tiempo o la dosis se puede reducir o aumentar proporcionalmente según lo indiquen las exigencias de la situación terapéutica. Es especialmente ventajoso formular composiciones parenterales en forma farmacéutica unitaria para facilitar la administración y la uniformidad de la dosificación. La forma farmacéutica unitaria como se utiliza en la presente memoria se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis unitarias para los sujetos a tratar; cada unidad contiene una cantidad predeterminada de compuesto activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el portador farmacéutico requerido. La especificación de las formas de dosificación unitarias de la descripción viene dictada y depende directamente de las características únicas del compuesto activo y del efecto terapéutico particular que se va a lograr, y de las limitaciones inherentes a la técnica de componer dicho compuesto activo para el tratamiento de la sensibilidad en individuos.

[0468] Para la administración de la composición que comprende el anticuerpo, la dosificación del anticuerpo varía de aproximadamente 0,0001 a aproximadamente 100 mg/kg, y más habitualmente de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 30 mg/kg, del peso corporal del huésped. Por ejemplo, las dosis son de aproximadamente 1 mg/kg de peso corporal, aproximadamente 3 mg/kg de peso corporal, aproximadamente 5 mg/kg de peso corporal o aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal dentro de los intervalos de aproximadamente 1 a 10 mg/kg, por ejemplo, aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 mg/kg de peso corporal. Las dosis se repiten según sea necesario y pueden estar en el intervalo de aproximadamente una vez por semana hasta aproximadamente una vez cada 10 semanas, por ejemplo, una vez cada 4 a 8 semanas. Sin embargo, dependiendo de la afección, se puede utilizar la terapia de pulsos, donde, por ejemplo, se administra una inyección del antagonista del receptor Actll a un paciente con exacerbación aguda de una enfermedad cardíaca, por ejemplo, en la sala de emergencias.

[0470] La administración se lleva a cabo preferiblemente por vía intravenosa. Los regímenes de dosificación para un anticuerpo anti-ActRll de la descripción, por ejemplo, bimagrumab, incluyen aproximadamente 1 mg/kg de peso corporal o aproximadamente 3 mg/kg de peso corporal o aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal, una vez cada cuatro semanas mediante administración intravenosa.

[0471] En algunos métodos, las composiciones de la descripción comprenden dos o más anticuerpos monoclonales con diferentes especificidades de unión y, por lo tanto, se administran simultáneamente, en cuyo caso la dosificación de cada anticuerpo administrado cae dentro de los intervalos indicados. Por lo general, un anticuerpo se administra en múltiples ocasiones. Los intervalos entre dosis únicas pueden ser, por ejemplo, semanales, mensuales, cada tres meses, cada seis meses o anualmente. Los intervalos también pueden ser irregulares, como se indica al medir los niveles sanguíneos de anticuerpos contra el antígeno diana en el paciente. En algunos métodos, la dosificación se ajusta para lograr una concentración de anticuerpos en plasma de aproximadamente 1 a aproximadamente 1000 µg/ml y en algunos métodos de aproximadamente 25 a aproximadamente 300 µg/ml. Por ejemplo, un anticuerpo ActRll de la descripción podría coadministrarse con un anticuerpo antimiostatina.

[0472] La dosis y la frecuencia varían según la vida media del anticuerpo en el paciente. En general, los anticuerpos humanos muestran la semivida más larga, seguidos de los anticuerpos humanizados, los anticuerpos quiméricos y los anticuerpos no humanos. La dosis y la frecuencia de administración pueden variar dependiendo de si el tratamiento es profiláctico o terapéutico. En aplicaciones profilácticas, se administra una dosis relativamente baja a intervalos relativamente poco frecuentes durante un largo período de tiempo. Algunos pacientes siguen recibiendo tratamiento por el resto de sus vidas. En aplicaciones terapéuticas, a veces se requiere una dosificación relativamente alta a intervalos relativamente cortos hasta que la progresión de la enfermedad se reduzca o termine o hasta que el paciente muestre una mejoría parcial o completa de los síntomas de la enfermedad. Posteriormente, se puede administrar al paciente un régimen profiláctico.

[0473] La administración de una “dosis terapéuticamente eficaz” de un anticuerpo anti-ActRll comprendido en las composiciones de la descripción puede dar como resultado una disminución de la gravedad de los síntomas de la enfermedad, un aumento de la frecuencia y la duración de los períodos sin síntomas de la enfermedad o una prevención del deterioro o la discapacidad debido a la afección de la enfermedad, es decir, un aumento de la función cardíaca.

[0474] Los compuestos activos se pueden preparar con portadores que protegerán al compuesto contra la liberación rápida, tal como una formulación de liberación controlada, que incluye implantes, parches transdérmicos y sistemas de administración microencapsulados. Se pueden utilizar polímeros biodegradables y biocompatibles, tales como etilenoacetato de vinilo, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres y ácido poliláctico. Muchos métodos para la preparación de tales formulaciones están patentados o son conocidos en general por los expertos en la técnica. Véase, por ejemplo, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., Nueva York, 1978.

[0475] Las composiciones terapéuticas se pueden administrar con dispositivos médicos conocidos en la técnica.

[0476] Usos y métodos de la descripción

[0477] Las composiciones de la presente descripción y los anticuerpos descritos tienen utilidades terapéuticas, porque tienen un impacto en el tratamiento de la enfermedad cardíaca o en la mejora del estado de los pacientes afectados por una enfermedad cardíaca o en la reducción de los síntomas asociados con la enfermedad cardíaca.

[0478] El término “sujeto” o “individuo” como se utiliza en la presente memoria pretende incluir animales humanos y no humanos. Los animales no humanos incluyen todos los vertebrados, por ejemplo, mamíferos y no mamíferos, tales como primates no humanos, ovejas, perros, gatos, ratones, vacas, caballos, pollos, anfibios y reptiles.

[0479] Por lo tanto, la descripción también se refiere a métodos de tratamiento en los que las composiciones de la descripción o los antagonistas del receptor ActRII descritos, por ejemplo, las moléculas que se unen a ActRII, más preferiblemente los anticuerpos contra ActRII, por ejemplo, bimagrumab o BYM338, inhiben, es decir, antagonizan, la función de ActRll y, por lo tanto, dan como resultado la mejora en varios tipos de enfermedades cardíacas. La descripción proporciona un método para prevenir y/o tratar la enfermedad cardíaca que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un antagonista del receptor ActRII, por ejemplo, preferiblemente una molécula de unión a ActRIIB, más preferiblemente un anticuerpo antagonista contra ActRIIB, por ejemplo, bimagrumab o BYM338 o las composiciones descritas.

[0480] Los ejemplos de antagonistas del receptor ActRII, por ejemplo, moléculas de unión a ActRII, preferiblemente anticuerpos antagonistas contra ActRIIB, por ejemplo, bimagrumab o BYM338, que pueden utilizarse en los métodos de tratamiento descritos son los divulgados o descritos en detalle anteriormente. En determinados casos, los anticuerpos ActRII (por ejemplo, bimagrumab o BYM338) están comprendidos en las composiciones inventivas descritas en la presente memoria.

[0481] La descripción también se refiere al uso de un antagonista del receptor ActRII, por ejemplo, una molécula de unión al receptor ActRIIA o ActRIIB, preferiblemente un anticuerpo antagonista contra ActRII, por ejemplo, BYM338, en la fabricación de un medicamento para tratar diversas formas de enfermedad cardíaca como se describió anteriormente en la presente memoria.

[0482] La molécula de unión a ActRII, preferiblemente un anticuerpo antagonista contra ActRII, por ejemplo, bimagrumab o BYM338, se puede administrar como el único principio activo o junto con, por ejemplo, como adyuvante o en combinación con otros fármacos, por ejemplo, IGF-1, IGF-2 o variantes de IGF-1 o IGF-2, un anticuerpo antimiostatina, un propéptido de miostatina, una proteína señuelo de la miostatina que se une a ActRIIB pero no lo activa, un agonista beta 2, un agonista de la grelina, un SARM, agonistas/miméticos de la GH o folistatina. Por ejemplo, los antagonistas de la descripción pueden utilizarse en combinación con un mimético del IGF-1 como se describe en el documento WO2007/146689.

[0483] Según lo anterior, la presente descripción proporciona, en otro aspecto, un método o uso tal como se definió anteriormente que comprende la coadministración, por ejemplo, de forma concomitante o secuencial, de una cantidad terapéuticamente eficaz de un antagonista del receptor ActRll, preferiblemente una molécula de unión a ActRll, más preferiblemente un anticuerpo antagonista contra ActRII, por ejemplo, bimagrumab o BYM338, y al menos una segunda sustancia farmacológica, siendo dicha segunda sustancia farmacológica IGF-1, IGF-2 o variantes de IGF-1 o IGF-2, un anticuerpo antimiostatina, un propéptido de miostatina, una proteína señuelo de miostatina que se une a ActRll pero no lo activa, un agonista beta 2, un agonista de la grelina, un SARM, agonistas/miméticos de GH o folistatina.

[0484] Kits

[0485] La invención también abarca kits que pueden comprender un antagonista del receptor ActRll, por ejemplo, una molécula de unión al receptor ActRII (por ejemplo, un anticuerpo contra el receptor ActRII o un fragmento de unión al antígeno del mismo, por ejemplo, bimagrumab o BYM338) o una molécula de unión al receptor ActRII (es decir, el receptor ActRIIB) (por ejemplo, un anticuerpo anti-ActRIIB o un fragmento de unión al antígeno del mismo) (por ejemplo, en forma líquida o liofilizada) o un producto farmacéutico composición que comprende el antagonista del receptor ActRll (descrito anteriormente). Además, dichos kits pueden comprender medios para administrar el antagonista de ActRll (por ejemplo, una jeringa y un vial, una jeringa precargada, una pluma precargada) e instrucciones de uso. Estos kits pueden contener agentes terapéuticos adicionales (descritos anteriormente), por ejemplo, para su administración en combinación con el antagonista ActRII adjunto, por ejemplo, BYM338.

[0486] La frase “medios de administración” se utiliza para indicar cualquier instrumento disponible para administrar sistémicamente un medicamento a un paciente, incluidos, entre otros, una jeringa precargada, un vial y una jeringa, un bolígrafo inyector, un autoinyector, una bolsa y goteo i.v., una bomba, etc. Con estos artículos, el paciente puede autoadministrarse el medicamento (es decir, administrar el medicamento por su cuenta) o un médico puede administrar el medicamento.

[0487] Cada componente del kit se incluye usualmente dentro de un recipiente individual, y todos los diversos recipientes están dentro de un único paquete junto con instrucciones de uso.

[0488] Secuencias

[0489] Tabla 1: Lista de secuencias

[0491]

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[0510] Las realizaciones de los métodos, tratamientos, regímenes, usos y kits descritos emplean un antagonista del receptor ActRII, por ejemplo, una molécula de unión a ActRIIB. En realizaciones adicionales, la molécula de unión a ActRIIB es un anticuerpo antagonista de ActRIIB.

[0511] En algunas realizaciones de los métodos, tratamientos, regímenes, usos y kits descritos, el anticuerpo anti-ActRIIB se selecciona del grupo que consiste en: a) un anticuerpo anti-ActRIIB que se une a un epítopo de ActRIIB que comprende la Id. de sec. n.º: los aminoácidos 78-83 de la Id. de sec. n.º: 181 (WLDDFN - Id. de sec. n.º: 188);

[0512] (b) los aminoácidos 76-84 de la Id. de sec. n.º: 181 (GCWLDDFNC - Id. de sec. n.º:186);

[0513] (c) los aminoácidos 75-85 de la Id. de sec. n.º: 181 (KGCWLDDFNCY - Id. de sec. n.º:190);

[0514] (d) los aminoácidos 52-56 de la Id. de sec. n.º: 181 (EQDKR - Id. de sec. n.º:189);

[0515] (e) los aminoácidos 49-63 de la Id. de sec. n.º: 181 (CEGEQDKRLHCYASW - Id. de sec. n.º:187);

[0516] (f) los aminoácidos 29-41 de la Id. de sec. n.º: 181 (CIYYNANWELERT - Id. de sec. n.º:191);

[0517] (g) los aminoácidos 100-110 de la Id. de sec. n.º: 181 (YFCCCEGNFCN - Id. de sec. n.º:192); o

[0518] (h) los aminoácidos 78-83 de la Id. de sec. n.º: 181 (WLDDFN) y los aminoácidos 52-56 de la Id. de sec. n.º: 181 (EQDKR); y

[0519] b) un anticuerpo antagonista contra ActRIIB que se une a un epítopo de ActRIIB que comprende los aminoácidos 78-83 de la Id. de sec. n.º: 181 (WLDDFN - Id. de sec. n.º:188);

[0520] (b) los aminoácidos 76-84 de la Id. de sec. n.º: 181 (GCWLDDFNC - Id. de sec. n.º:186);

[0521] (c) los aminoácidos 75-85 de la Id. de sec. n.º: 181 (KGCWLDDFNCY - Id. de sec. n.º:190);

[0522] (d) los aminoácidos 52-56 de la Id. de sec. n.º: 181 (EQDKR - Id. de sec. n.º:189);

[0523] (e) los aminoácidos 49-63 de la Id. de sec. n.º: 181 (CEGEQDKRLHCYASW - Id. de sec. n.º:187);

[0524] (f) los aminoácidos 29-41 de la Id. de sec. n.º: 181 (CIYYNANWELERT - Id. de sec. n.º:191);

[0525] (g) los aminoácidos 100-110 de la Id. de sec. n.º: 181 (YFCCCEGNFCN - Id. de sec. n.º:192); o

[0526] (h) los aminoácidos 78-83 de la Id. de sec. n.º: 181 (WLDDFN) y los aminoácidos 52-56 de la Id. de sec. n.º: 181 (EQDKR), en donde el anticuerpo tiene una K<D>de aproximadamente 2 pM.

[0527] En algunas realizaciones de los métodos, tratamientos, regímenes, usos y kits descritos, el anticuerpo antagonista contra ActRIIB es un anticuerpo humano.

[0528] En algunas realizaciones de los métodos, tratamientos, regímenes, usos y kits descritos, el anticuerpo es bimagrumab o BYM338.

[0529] Los detalles de una o más realizaciones de la descripción se exponen en la descripción adjunta anterior. Puede utilizarse cualquier método y material similar o equivalente a los descritos en la presente memoria en la práctica o el ensayo de la presente descripción. Otras características, objetivo y ventajas de la descripción resultarán evidentes a partir de la descripción y de las reivindicaciones. En la memoria descriptiva y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares incluyen referentes plurales a menos que el contexto indique claramente de cualquier otro modo Salvo que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente memoria tienen el mismo significado que el que entiende comúnmente un experto en la técnica a la que pertenece esta descripción. Los siguientes ejemplos pretenden ilustrar más completamente la descripción y no pretenden en modo alguno limitar el alcance de la misma.

[0530] Ejemplos

[0531] Metodología general

[0532] Los anticuerpos ActRIIB, su caracterización y métodos relacionados con los mismos, como (i) Ensayos funcionales, (ii) ENSAYOS DE GEN INDICADOR (RGA), (iii) Cultivo de líneas celulares HEK293T/17, (iv) Ensayos del gen indicador de luciferasa inducidos por miostatina, (v) ELISA DE ESPECIFICIDAD, (vi) ELISA de interacción de unión de ActRIIB/Fc-miostatina, (vii) valoración volumétrica FACS en células que expresan HACTRIIB y HactRIIA, (viii) Unión a células primarias del músculo esquelético humano, (ix) Determinación de la afinidad de Fab anti-ActRIIB humanos seleccionados mediante resonancia de plasmón superficial (Biacore), (x) ENSAYO CK, (xi) modelos animales, (xii) PROTOCOLOS DE TRATAMIENTO, (xiii) Análisis estadístico, (xiiii) Panning, (xv) identificación y caracterización de anticuerpos, (xvi) Optimización de anticuerpos derivados de la primera maduración por afinidad, (xvii) Conversión de IgG2 de Fab madurados por afinidad (1ª maduración), (xviiii) Segunda maduración por afinidad, (xx) Conversión de IgG2 y caracterización de IgG2 (2ª maduración), (xxi) Caracterización de Anticuerpos anti-ActRIIB en estudios murinosin vivo, (xxii) confirmación de la afinidad mediante SET, (xxiii) estudios de bloqueo cruzado y (xxiv) Detalles y tecnologías de mapeo de epítopos se han descrito en el documento WO 2010/125003.

[0533] El modelo experimental TAC (constricción aórtica transversal) en el ratón es un modelo experimental de uso común para la hipertrofia cardíaca y la insuficiencia cardíaca inducidas por sobrecarga de presión, y se describe, por ejemplo, en Rockman et al. (1991) y deAlmeida et al. (2010).

[0534] Ejemplo 1: Estudio de prevención del TAC

[0535] Materiales y métodos:

[0536] Este estudio evalúa si CDD866 previene el desarrollo de disfunción cardíaca en un modelo murino establecido de insuficiencia cardíaca con constricción aórtica transversa (TAC).

[0537] Los siguientes 4 grupos de ratones C57BL/6 machos de 16 semanas de edad (n = 7-10/grupo) forman parte del estudio:

[0538] 1. SHAM Isotipo Ab

[0539] 2. SHAM CDD866 Ab

[0540] 3. TAC Isotipo Ab

[0541] 4. TAC CDD866 Ab

[0542] El anticuerpo se administra por vía subcutánea (SQ), 20 mg/kg, una vez a la semana, con la última dosis dada < 24 h antes del sacrificio.

[0543] La ecocardiografía se realiza cada dos semanas.

[0544] Criterio de valoración primario: criterio de valoración pre-especificado de 11 semanas después del TAC o % de acortamiento fraccionario (FS) < 20 %

[0545] Resultados:

[0546] Como se muestra en las Figuras 1A-1E, el tratamiento con CDD866 Ab tiene efectos cardíacos mínimos en ratones C57BL/6 de tipo silvestre. Específicamente, como se representa en la Figura 1A, los niveles en plasma medidos de CDD866 confirman que el fármaco se administró adecuadamente. El CDD866 no aumenta significativamente la masa cardíaca (Figura 1B). CDD866 reduce la fibrosis miocárdica (Figura 1C), aunque el % de fibrosis fue notablemente bajo en el valor de referencia en controles de tipo silvestre sanos. Las fotomicrografías representativas del miocardio teñido con PAS (Figura 1D) destacan el tamaño de los cardiomiocitos. La Figura 1E representa gráficamente el descubrimiento de que CDD866 no aumenta significativamente el tamaño de los cardiomiocitos en animales de tipo silvestre. Los datos se presentan como media ± desviación estándar. Gris = grupo de control, isotipo Ab (n = 3). Negro = grupo experimental, CDD866 Ab (n = 3). * p<0,05

[0547] Como se muestra en las Figuras 2A-2D, el tratamiento con CDD866 previene la insuficiencia cardíaca inducida por TAC en ratones. La Figura 2A representa gráficamente que la función sistólica (medida mediante el % de FS), disminuye de forma esperada con TAC (barra horizontal), pero permanece conservada en los animales tratados con CDD866 sometidos a TAC (barra diagonal). La Figura 2B son imágenes ecocardiográficas representativas después de 11 semanas de cirugía SHAM o TAC, que demuestran la conservación de la función sistólica en animales con TAC tratados con CDD866. Existe una tendencia hacia la disminución del peso pulmonar en los animales tratados con CDD866 indicando una menor congestión pulmonar (sustituta de la insuficiencia cardíaca) en modelos de ratón (Figura 2C). Hay una disminución significativa en el criterio de valoración primario (supervivencia o % FS<20 %) con el tratamiento de CDD866 (Figura 2D). Los datos se presentan como media ± desviación estándar. Negro = SHAM isotipo Ab (n=7). Gris = SHAM CDD866 Ab (n = 7). Barra horizontal = TAC Isotipo Ab (n = 10). Barra diagonal = TAC CDD866 Ab (n = 10). * p<0,05. # p<0,01 (negro indica comparación con SHAM grupo isotipo, rojo indica comparación con TAC grupo isotipo.

[0548] Como se representa en las Figuras 3A-3D, CDD866 Ab bloquea eficazmente la señalización de los ActRII-A/B cardíacos en un modelo TAC de insuficiencia cardíaca. En la Figura 3(A), los niveles en plasma medidos de CDD866 indican que el fármaco se administra de forma apropiada. La expresión de folistatina tipo 3 (FSTL3) cardíaca aumenta con TAC, lo que indica que la señalización de los ActRII-A/B cardíacos aumenta en este modelo de lesión cardíaca. El tratamiento con CDD866 disminuye la expresión cardíaca del FSTL3, lo que indica que bloquea eficazmente la señalización de ActRII-A/B inducida por TAC en el corazón (Figura 3B). La expresión de los genes de hipertrofia cardiaca patológica disminuye con el tratamiento con CDD866 (Figura 3C). Como se muestra en la Figura 3D, el perfil de fibrosis cardíaca patológica en la insuficiencia cardíaca inducida por TAC disminuye con el tratamiento con CDD866. Los datos se presentan como media ± desviación estándar. Negro = SHAM isotipo Ab (n=7). Gris = SHAM CDD866 Ab (n = 7). Barra horizontal = TAC Isotipo Ab (n = 10). Barra diagonal = TAC CDD866 Ab (n = 10). * p<0,05. # p<0,01 (negro indica comparación con SHAM grupo isotipo, rojo indica comparación con TAC grupo isotipo. En resumen, (i) el CDD866 tiene efectos mínimos sobre el crecimiento/función cardíacos en los controles de tipo silvestre; (ii) CDD866 previene eficazmente el desarrollo de insuficiencia cardíaca inducida por TAC y (iii) CDD866 mejora la supervivencia general en un modelo de insuficiencia cardíaca con TAC.

[0549] Ejemplo 2: Estudio de tratamiento con TAC

[0550] Materiales y métodos:

[0551] Este estudio prueba si CDD866 puede rescatar a los animales de la insuficiencia cardíaca alrevertirla disfunción cardíaca establecida en animales sometidos a TAC.

[0552] Los siguientes 2 grupos de ratones C57BL/6 machos de 16 semanas de edad (n = 10/grupo) se estudian:

[0553] TAC Isotipo Ab

[0554] TAC CDD866 Ab

[0555] El tratamiento con anticuerpos se inicia solo después de una disminución en el % de acortamiento fraccional > 4 desviaciones estándar.

[0556] El anticuerpo se administra SQ, 20 mg/kg/sem x 8 semanas (última dosis dada <24 h antes del sacrificio)

[0557] La ecocardiografía se realiza cada dos semanas.

[0558] Criterio de valoración primario: criterio de valoración pre-especificado de 8 semanas de tratamiento o % de FS < 25 % Resultados:

[0559] Como muestran las Figuras 4A-4D, el tratamiento con CDD866 restaura la función cardíaca y rescata a los animales de la insuficiencia cardíaca inducida por TAC. Los niveles en plasma medidos de CDD866 indican que el fármaco se administra adecuadamente en la función sistólica (Figura 4A). La Figura 4B representa gráficamente el descubrimiento de que la expresión cardíaca del FSTL3 disminuye con el tratamiento con CDD866, lo que indica que bloquea eficazmente la señalización de ActRII-A/B inducida por TAC en el corazón. CDD866 revierte la disfunción sistólica en la insuficiencia cardíaca inducida por TAC y se observa tan pronto como 1 semana después del tratamiento con una mejoría progresiva (Figura 4C). CDD866 también disminuye el peso pulmonar, un marcador sustituto de la insuficiencia cardíaca en el modelo murino (Figura 4D). Los datos se presentan como media desviación estándar. Gris = TAC isotipo Ab. Negro = TAC CDD866 Ab. * p<0,05. # p<0,01.

[0560] El tratamiento con CDD866 induce el crecimiento cardíaco en el modelo TAC. Como representa gráficamente la Figura 5A, el grosor de la pared aumenta progresivamente con el tratamiento con CDD866 (la flecha negra indica el inicio de la Rx). La Figura 5B muestra imágenes de eco en serie de secciones del ventrículo medio durante el curso del tratamiento que demuestran diferencias en el crecimiento cardíaco en los animales tratados con isotipo frente a los tratados con CDD866. CDD866 aumenta la masa cardíaca en el modelo TAC como se muestra en la Figura 5C. La Figura 5D muestra fotomicrografías del miocardio teñido con PAS, destacando el tamaño de los cardiomiocitos. CDD866 también aumenta el crecimiento de cardiomiocitos en TAC (Figura 5E). Los datos se presentan como media ± desviación estándar. Gris = TAC isotipo Ab. Negro = TAC CDD866 Ab. * p<0,05. # p<0,01.

[0561] Los resultados también indican que el CDD866 induce un crecimiento cardiaco fisiológico que es protector en la insuficiencia cardiaca. La Figura 6A representa gráficamente que la expresión del ARNm de los genes asociados con la hipertrofia patológica disminuye con el tratamiento con CDD866. Los efectos del CDD866 sobre el crecimiento cardiaco y el peso corporal son transitorios y reversibles, como se muestra en la Figura 6B. Las mejoras en la función cardíaca inducidas por una dosis única de CDD866 se mantienen durante al menos 6 semanas. (Figura 6B flecha = temporización de la dosis única; línea discontinua = trayectoria prevista sin tratamiento con CDD866). La Figura 6C muestra fotomicrografías del miocardio teñido con tricromo de Masson (azul = fibrosis; rojo = músculo). Existe una tendencia hacia una disminución de la fibrosis miocárdica con el tratamiento con CDD866, como se muestra en la Figura 6D. Los datos se presentan como media ± desviación estándar. Gris = TAC isotipo Ab. Negro = TAC CDD866 Ab. * p<0,05. # p<0,01.

[0562] CDD866 induce el crecimiento del músculo esquelético en la insuficiencia cardíaca mediada por TAC como se muestra en las Figuras 7A-7E. CDD866 reduce la expresión de p-SMAD3 en el músculo esquelético, lo que indica que bloquea eficazmente la señalización de ActRII-A/B en el músculo esquelético en este modelo de insuficiencia cardíaca (Figura 7A). CDD866 aumenta progresivamente el peso corporal total; probablemente a través del aumento de la masa muscular (Figura 7B). La Figura 7C muestra que CDD866 aumenta la masa total de varios grupos de músculos esqueléticos (EDL, gas, TC). El tamaño de los miocitos esqueléticos también aumenta con CDD866 (Figura 7D). El cambio de tipo de fibra en el músculo esquelético también es inducido por el CDD866 (Figura 7E). Rojo = TAC isotipo Ab. Azul = TAC CDD866 Ab. * p<0,05. # p<0,01.

[0563] En resumen, CDD866revierteeficazmente la disfunción sistólica establecida inducida por TAC. CDD866 aumenta el crecimiento cardíaco y disminuye la fibrosis miocárdica, datos indicativos de una hipertrofia cardíaca fisiológica que protege en la insuficiencia cardíaca. CDD866 aumenta el crecimiento del músculo esquelético en un modelo TAC de insuficiencia cardíaca, lo que indica su uso para mejorar la caquexia cardíaca en la insuficiencia cardíaca avanzada. Ejemplo 3: Estudio cronológico del MHCF764L

[0564] Materiales y métodos:

[0565] Este estudio evalúa si CDD866 podría mejorar la función cardíaca en un modelo genético de miocardiopatía dilatada (MHCF764L).

[0566] Se estudian 2 grupos de ratones mutantes MHC F764L /- machos de 14-24 semanas de edad:

[0567] Isotipo Ab (n=3)

[0568] CDD866 Ab (n=3)

[0569] El anticuerpo se administra SQ, 20 mg/kg/sem x 12 semanas (última dosis dada <24 h antes del sacrificio)

[0570] La ecocardiografía se realiza cada dos semanas (q2wk).

[0571] Criterio de valoración primario: criterio de valoración pre-especificado de 12 semanas de tratamiento o % de FS < 20 %

[0572] Resultados:

[0573] CDD866 tiene efectos cardíacos mínimos en un modelo de miocardiopatía dilatada genética (aunque solo tiene un fenotipo cardíaco modesto en el valor de referencia). Como se representa gráficamente en la Figura 8A, CDD866 induce una tendencia hacia un aumento leve de la función sistólica en ratones MHCF74L. La Figura 8B ilustra una tendencia hacia una disminución de la expresión cardíaca del FSTL3 con el tratamiento con CDD866, lo que indica que está bloqueando eficazmente la señalización de ActRII-A/B en el corazón. Como se muestra en la Figura 8C, no se observa ninguna diferencia significativa en el perfil de expresión génica de la hipertrofia patológica. Los datos se presentan como media desviación estándar. Gris = Isotipo Ab. Negro = CDD866 Ab. * p<0,05. # p<0,01.

[0574] En resumen, se observa un leve aumento de la función sistólica con el tratamiento con CDD866. No se detectaron diferencias significativas en los perfiles de expresión génica de la insuficiencia cardíaca.

[0575] Referencias

[0576] Akpan I, Goncalves MD, Dihr R, Yin X, Pistilli E, Bogdanovich S, Khurana, T, Ucran, J, Lachey, J, Ahima, RS. The effects of a soluble activin type IIB receptor on obesity and insulin sensitivity. Int J Obes (Lond) nov de 2009; 33(11):1265-1273.

[0577] deAlmeida AC, van Oort RJ, Wehrens XH. Constricción aórtica transversa en ratones. J Vis Exp 21 de abr de 2010; (38). http://www.jove.com/details.php?id=1729, doi:10.3791/1729.

[0578] Lee SJ, McPherron AC. Regulation of myostatin activity and muscle growth. Proc Natl Acad Sci U S A.31 de jul de 2001; 98(16):9306-11.

[0579] Lee SJ, Reed LA, Davies MV, Girgenrath S, Goad ME, Tomkinson KN, Wright JF, Barker C, Ehrmantraut G, Holmstrom J, Trowell B, Gertz B, Jiang MS, Sebald SM, Matzuk M, Li E, Liang LF, Quattlebaum E, Stotish RL, Wolfman NM. Regulation of muscle growth by multiple ligands signaling through activin type II receptors. Proc Natl Acad Sci U S A.

[0580] 13 de dic de 2005;102(50):18117-22.

[0581] Rebbapragada A, Benchabane H, Wrana JL, Celeste AJ, Attisano L. Myostatin signals through a transforming growth factor beta-like signaling pathway to block adipogenesis. Mol Cell Biol.2003; 23:7230-7242.

[0582] Rockman HA, Ross RS, Harris AN, Knowlton KU, Steinhelper ME, Field LJ, Ross Jr. J, Chien KR. Segregation of atrialspecific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy. Proc Natl Acad Sci USA. septiembre de 1991; 88:8277-8281.

[0583] Whittemore LA, Song K, Li X, Aghajanian J, Davies M, Girgenrath S, Hill JJ, Jalenak M, Kelley P, Knight A, Maylor R, O'Hara D, Pearson A, Quazi A, Ryerson S, Tan XY, Tomkinson KN, Veldman GM, Widom A, Wright JF, Wudyka S, Zhao L, Wolfman NM. Inhibition of myostatin in adult mice increases skeletal muscle mass and strength. Biochem Biophys Res Commun.24 de ene de 2003; 300(4):965-71.

Claims

1. REIVINDICACIONES

1. Un antagonista del receptor ActRII para su uso en el tratamiento y/o prevención de insuficiencia cardíaca, en el que la insuficiencia cardíaca está provocada por al menos una de las siguientes causas: enfermedad de las válvulas cardíacas, enfermedad de las arterias coronarias, hipertensión, diabetes, envejecimiento, arritmia, miocardiopatía periparto, miocardiopatía por estrés, agentes tóxicos o infecciosos, miocardiopatía genética o miocardiopatía dilatada idiopática, en el que el antagonista del receptor ActRII es un anticuerpo anti-receptor ActRII.

2. Un antagonista del receptor ActRII para su uso en el tratamiento y/o prevención de la insuficiencia cardíaca según la reivindicación 1, en el que dicha enfermedad de las válvulas cardíacas es estenosis aórtica.

3. Un antagonista del receptor ActRII para su uso según la reivindicación 2, en en el que el tratamiento de la estenosis aórtica trata una anomalía cardíaca estructural y/o funcional.

4. Un antagonista del receptor ActRII para su uso según cualquier reivindicación anterior, en el que el antagonista del receptor ActRII es un anticuerpo anti-ActRII que se une a un epítopo de ActRIIB que consiste en los aminoácidos 19-134 de la SEQ ID NO: 181 (SEQ ID NO: 182).

5. Un antagonista del receptor ActRII para su uso según cualquier reivindicación anterior, en el que el anticuerpo comprende:

(a) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 1; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 15; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 29; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 43; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 57; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 71,

(b) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 2; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 16; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 30; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 44; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 58; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 72,

(c) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 3; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 17; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 31; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 45; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 59; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 73,

(d) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 4; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 18; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 32; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 46; una CDR2 de la región variable 35 de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 60; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 74,

(e) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 5; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 19; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 33; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 47; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 61; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 75,

(f) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 6; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 20; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 34; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 48; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 62; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 76,

(g) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 7; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 21; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 35; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 49; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 63; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 77,

(h) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 8; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 22; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ

ID NO: 36; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 50, una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 64; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 78,

(i) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 9; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 23; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 37; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 51; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 65; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 79,

(j) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 10; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 24; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 38; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 52; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 66; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 80,

(k) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 11; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 25; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 39; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 53; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 67; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 81,

(l) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 12; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 26; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 40; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 54; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 68; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 82,

(m) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 13; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 27; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 41; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 55; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 69; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 83, o

(n) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 14; una CDR2 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 28; una CDR3 de la región variable de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 42; una CDR1 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 56; una CDR2 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 70; y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 84.

6. Un antagonista del receptor ActRII para su uso según la reivindicación 5, en el que el anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos de cadena pesada de longitud completa que tiene al menos un 95 % de identidad de secuencia con al menos una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 146-150 y 156-160.

7. Un antagonista del receptor ActRII para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 5 o 6, en el que el anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos de cadena ligera de longitud completa que tiene al menos un 95 % de identidad de secuencia con al menos una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 141-145 y 151-155.

8. Un antagonista del receptor ActRII para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 5-7, en el que el anticuerpo comprende:

(a) la secuencia de la cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 99 y la secuencia de la cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 85;

(b) la secuencia de la cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 100 y la secuencia de la cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 86;

(c) la secuencia de la cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 101 y la secuencia 30 de la cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 87;

(d) la secuencia de la cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 102 y la secuencia de la cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 88;

(e) la secuencia de la cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 103 y la secuencia de la cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 89;

(f) la secuencia de la cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 104 y la secuencia de la cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 90;

(g) la secuencia de la cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 105 y la secuencia de la cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 91;

(h) la secuencia de la cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 106 y la secuencia de la cadena 5 ligera variable de la SEQ ID NO: 92;

(i) la secuencia de la cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 107 y la secuencia de la cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 93;

(j) la secuencia de la cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 108 y la secuencia de la cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 94;

(k) la secuencia de la cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 109 y la secuencia de la cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 95;

(l) la secuencia de la cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 110 y la secuencia de la cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 96;

(m)la secuencia de la cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 111 y la secuencia de la cadena 15 ligera variable de la SEQ ID NO: 97; o

(n) la secuencia de la cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 112 y la secuencia de la cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 98.

9. Un antagonista del receptor ActRII para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 5-8, en el que el anticuerpo comprende:

(a) la secuencia de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 146 y la secuencia de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 141;

(b) la secuencia de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 147 y la secuencia de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 142;

(c) la secuencia de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 148 y la secuencia de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 143;

(d) la secuencia de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 149 y la secuencia de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 144;

(e) la secuencia de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 150 y la secuencia de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 145;

(f) la secuencia de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 156 y la secuencia de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 151;

(g) la secuencia de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 157 y la secuencia de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 152;

(h) la secuencia de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 158 y la secuencia de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 153;

(i) la secuencia de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 159 y la secuencia de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 154; o

(j) la secuencia de la cadena pesada de la SEQ ID NO: 160 y la secuencia de la cadena ligera de la SEQ ID NO: 155.

10. Un antagonista del receptor ActRII para su uso según cualquier reivindicación anterior, en el que el anticuerpo es Bimagrumab.