ES3030985T3 - Composition comprising inotodiol compound as effective ingredient for prevention or treatment of allergy disease - Google Patents

Composition comprising inotodiol compound as effective ingredient for prevention or treatment of allergy disease

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ES3030985T3 ES18919964T ES18919964T ES3030985T3 ES 3030985 T3 ES3030985 T3 ES 3030985T3 ES 18919964 T ES18919964 T ES 18919964T ES 18919964 T ES18919964 T ES 18919964T ES 3030985 T3 ES3030985 T3 ES 3030985T3
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Abstract

La presente invención se refiere a un compuesto de inotodiol y a una composición que comprende un extracto de Inototus obliquus que contiene dicho compuesto como ingrediente eficaz para la prevención o el tratamiento de enfermedades alérgicas. Más específicamente, al administrar un compuesto de inotodiol o un extracto de Inototus obliquus que contiene dicho compuesto como ingrediente eficaz a modelos murinos con alergia alimentaria inducida, se observó una reducción o tratamiento de los síntomas causados por la alergia. Por lo tanto, se espera que el compuesto de inotodiol o el extracto de Nototus obliquus que contiene dicho compuesto como ingrediente eficaz, según la presente invención, sea de gran utilidad en una composición para la prevención o el tratamiento de enfermedades alérgicas. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Composición que comprende el compuesto inotodiol como ingrediente eficaz para la prevención o el tratamiento de la enfermedad alérgica
Campo técnico
La presente divulgación se refiere a una composición farmacéutica para su uso en la prevención o el tratamiento de una enfermedad alérgica, incluyendo la composición farmacéutica un compuesto inotodiol representado por la Fórmula 1 como principio activo.
[Fórmula 1]
en donde la enfermedad alérgica es el asma bronquial o la dermatitis atópica.
Antecedentes de la técnica
Una alergia es una reacción de hipersensibilidad, que se refiere a un fenómeno que se produce rápidamentein vivodebido a una reacción de los anticuerpos hacia los antígenos cuando un organismo entra en contacto con una materia extraña. Un antígeno que induce una respuesta alérgica se denomina alérgeno. Los alérgenos típicos son el polen, los medicamentos, las fibras vegetales, las bacterias, los alimentos, los colorantes y los productos químicos.
Con el desarrollo de la civilización moderna, la posibilidad de exposición a diversos alérgenos ha aumentado, y el número de pacientes que se quejan de síntomas de alergia crece rápidamente. Se sabe que el número de pacientes con alergias es mayor en los países avanzados y en Corea, aunque no existen datos estadísticos precisos, el número de pacientes aumenta cada año. En particular, se sabe que el número de pacientes pediátricos aumenta rápidamente. Por esta razón, muchas empresas farmacéuticas e institutos de investigación nacionales y extranjeros han invertido muchos recursos en el desarrollo de fármacos causales que puedan reducir la carga económica, fisiológica y psicológica causada por las enfermedades alérgicas. Sin embargo, aún no se ha logrado el desarrollo de tratamientos fundamentales.
Hasta ahora, la hipersensibilidad inmunitaria se ha clasificado en cuatro tipos principales. La hipersensibilidad de tipo I es una hipersensibilidad alérgica mediada por anticuerpos IgE específicos. Los anticuerpos IgE específicos se unen a los mastocitos o a los receptores de superficie de los basófilos, seguido de la secreción de mediadores por parte de las células, lo que provoca reacciones de hipersensibilidad inmediata tales como asma, rinitis alérgica y anafilaxia. La hipersensibilidad de tipo II es una respuesta mediada por anticuerpos IgG específicos, y la reacción se inicia por anticuerpos que reaccionan con un componente antigénico en una superficie celular. La hipersensibilidad de tipo III es una reacción citotóxica que se produce cuando hay mucho antígeno, en donde los antígenos y anticuerpos forman complejos y activan el complemento. La hipersensibilidad de tipo IV es la hipersensibilidad mediada por linfocitos T.
Los mastocitos son las principales células causantes de las reacciones alérgicas. Los mastocitos se activan cuando la inmunoglobulina E (IgE) se combina con un alérgeno. Los mastocitos secretan diversos mediadores y provocan edema de la mucosa, contracción del músculo liso bronquial y secreción de moco, contribuyendo así a la reacción. Se ha descubierto que estos mastocitos desempeñan un papel importante en el mantenimiento y la defensa del sistema inmunitario del cuerpo humano, y se ubican en los tejidos que rodean los órganos respiratorios, órganos digestivos, órganos genitourinarios, dermis y vasos sanguíneos (Rivera, J.,et al.,2008; Moon, T. C.,et al.,2010; Blank, U.,et al.,2013; Boyce, J. A., 2004).
Debido a la estimulación externa, los mastocitos producen y secretan mediadores que provocan respuestas inflamatorias alérgicas. Dichos mediadores incluyen mediadores preformados en gránulos producidos antes de la estimulación, y mediadores recién sintetizados producidos tras la estimulación (Schwartz, L. B.,et al.,1998).
La histamina, los proteoglicanos, las serina proteasas, la carboxipeptidasa A, las sulfatasas y las exoglucosidasas están preformadas y presentes en los gránulos de los mastocitos. Tras la estimulación, estas sustancias son secretadas al exterior de las células. Una de las sustancias más importantes que se producen y sintetizan tras la estimulación de los mastocitos es un metabolito derivado del ácido araquidónico, p. ej., prostaglandina D2 (PGD2) y leucotrieno C4 (LTC4), LTD4 y LTE4. Asimismo, el factor activador de plaquetas (PAF,Platelet-Activating Factor)también es importante (Kangmo Ahn, 2004).
Se descubrió que los mastocitos no solo se limitan a las respuestas alérgicas tempranas, sino que también están profundamente relacionados con las respuestas alérgicas tardías y las respuestas alérgicas crónicas. Dicho de otro modo, el factor de necrosis tumoral-a (TNF-a) producido y secretado por los mastocitos aumenta la expresión de moléculas de adhesión de las células endoteliales vasculares y favorece la afluencia de eosinófilos y linfocitos T a un órgano diana. Asimismo, las interleucinas (IL)-4, IL-13 e IL-6 producidas por los mastocitos aumentan la respuesta de los linfocitos T cooperadores de tipo 2 (Th2) y, finalmente, aumentan la producción de IgE, contribuyendo así a las respuestas alérgicas crónicas. De esta manera, los mastocitos desempeñan un papel fundamental en la provocación y el mantenimiento de una respuesta inflamatoria alérgica (Kangmo Ahn, 2004).
Tradicionalmente, los tres métodos de tratamiento, tal como la evitación de alérgenos, la farmacoterapia y la inmunoterapia con alérgenos, son conocidos como los principales métodos de tratamiento de las enfermedades alérgicas. De hecho, la terapia farmacológica más utilizada para las enfermedades alérgicas es el uso de inhibidores (agente antihistamínico, agente antileucotrieno, etc.) para mediadores químicos (histamina, leucotrieno, etc.) que intervienen en las respuestas alérgicas o el uso de antiinflamatorios (esteroides, inmunosupresores, etc.) que inhiben la inflamación de los tejidos causada por las respuestas alérgicas. Sin embargo, estas terapias farmacológicas tienen el inconveniente de que solo es posible mantener la mejoría de los síntomas clínicos cuando el fármaco se administra de forma continuada (Nahm, D. H., 2015). Es bien sabido que el uso prolongado de esteroides provoca diversos efectos secundarios. Por tanto, es necesario prestar mucha atención cuando se utilizan esteroides.
Recientemente, como agentes terapéuticos para las enfermedades alérgicas, existe un interés creciente por los estabilizadores de mastocitos que inhiben su desgranulación. Un estabilizador de mastocitos inhibe la desgranulación de los mastocitos y tiene la ventaja de que obtiene los efectos de un agente antihistamínico y de un agente antileucotrieno al mismo tiempo, pero se ha desarrollado insuficientemente en comparación con otros fármacos. Se han desarrollado materiales cromogénicos como el cromoglicato y el nedocromil como estabilizadores de mastocitos, pero sus usos son limitados debido a la inconveniencia de su uso por la baja biodisponibilidad cuando se administra por vía oral y la ambigüedad del mecanismo (Finn, D. F.,et al.,2013). Por lo tanto, es necesario desarrollar un estabilizador de mastocitos que sea selectivo para ellos, seguro y eficaz.
El hongo Chaga(Inonotusobliquus) pertenece a Hymenochaetaceae (Basidiomycota, Aphyllophorales), que crece silvestre en tallos y tocones de abedul, aliso y serbal en el hemisferio norte, donde el clima es frío y húmedo, tal como en Siberia, en Rusia, Finlandia, Noruega, Ucrania, Hokkaido, en Japón, y el monte Odae, en Corea. El hongo Chaga es un hongo de podredumbre blanca que descompone la lignina, celulosa y hemicelulosa. Se sabe que el hongo Chaga es parásito y forma esclerocios negros en los tallos de hospedadores como el abedul. (Guk M. H.,et al.,2013).
Desde finales de los años cincuenta, cuando comenzó la investigación en Rusia, se ha informado de que sustancias como el p-glucano, los polifenoles y los esteroles extraídos de los cuerpos fructíferos del hongo Chaga han mostrado actividad fisiológica en el organismo humano. Además de los efectos antineoplásicos (Youn M. J.,et al.,2008; Nomura M.,et al.,2008), se observó que el hongo Chaga presentaba actividad antioxidante (Park YK,et al.,2004), actividad antihiperlipidémica, actividad antidiabética (Kim M. A.,et al.,2009), actividad antifúngica, actividad antivírica, actividad antiinflamatoria y efectos analgésicos.
Se han realizado estudios para aislar compuestos útiles de los hongos Chaga con diversas actividades fisiológicas. Se aislaron varios compuestos como el inotodiol, el ácido trametenólico, el lanosterol y la inonotsulida (Ma L.,et al.,2013). Entre estos compuestos, se descubrió que el compuesto inotodiol presentaba actividades antineoplásicas, antiinflamatorias y de inhibición de la melanogénesis.
Por consiguiente, los presentes inventores descubrieron que un compuesto inotodiol aislado de un extracto de hongo Chaga o un extracto de hongo Chaga que contiene un compuesto inotodiol como principio activo mejora y trata los síntomas provocados por una alergia en un modelo de ratón inducido por alergia alimentaria e inhibe la inmunorreactividad de los mastocitos, completando de este modo la presente divulgación.
Como técnica anterior, la publicación japonesa de patente abierta 2006-347991 divulga que los materiales derivados de micelios de hongos, incluido el hongo Chaga, inhiben la liberación de histamina, que es una sustancia relacionada con la inducción de alergias. Sus características son similares a las de la presente divulgación; sin embargo, el compuesto inotodiol no se describe en la misma. Asimismo, el registro de patente coreano n.° 11351054 divulga que una composición herbal que contiene hongo Chaga tiene un efecto de tratamiento de la dermatitis atópica, y que el hongo Chaga mejora la inmunidad general para tratar fundamentalmente la dermatitis atópica. Sin embargo, el compuesto inotodiol no se describe en la misma. La publicación de patente coreana n.° 2018-0003002 divulga que un compuesto inotodiol aislado de un extracto de hongo Chaga tiene un efecto antiinflamatorio o terapéutico. Sin embargo, la prevención o el tratamiento de la alergia y los efectos inhibidores sobre la inmunorreactividad de los mastocitos no se describen ni están implícitos en la misma.
Yoonet al."Inhibitory effect of chaga mushroom extract on compound 48/80-induced anaphylactic shock and IgE production in mice",International Immunopharmacology,vol. 15, n.° 4, 2013, páginas 666-670, divulgan un extracto de hongo Chaga como alimento funcional antialérgico.
Nguyetet al."The mast cell stabilizing activity of Chaga mushroom critical for its therapeutic effect on food allergy is derived from inotodiol",International Immunopharmacology,vol. 54, 2017, páginas 286-295, divulgan un efecto antialérgico del hongo Chaga.
Descripción de las realizaciones
Problema técnico
Se proporciona una composición farmacéutica para su uso en la prevención o el tratamiento de una enfermedad alérgica, incluyendo la composición farmacéutica un compuesto inotodiol representado por la Fórmula 1 como principio activo.
[Fórmula 1]
en donde la enfermedad alérgica es el asma bronquial o la dermatitis atópica. También se proporciona una composición alimenticia funcional saludable para su uso en la prevención o mejora de una enfermedad alérgica, incluyendo la composición alimenticia funcional saludable un compuesto inotodiol representado por la Fórmula 1 como principio activo.
[Fórmula 1]
en donde la enfermedad alérgica es el asma bronquial o la dermatitis atópica.
Solución al problema
Se divulga una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento de una enfermedad alérgica que puede incluir un extracto de hongo Chaga(Inonotus obliquus)que incluye un compuesto inotodiol representado por la Fórmula 1 como principio activo.
El extracto de hongo Chaga puede ser al menos uno seleccionado del grupo que consiste en fracciones de diclorometano o fracciones de cloroformo obtenidas añadiendo diclorometano o cloroformo a un extracto obtenido extrayendo hongo Chaga con un 70 por ciento (%) de etanol como disolvente, respectivamente.
De acuerdo con un aspecto de la presente divulgación, una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento de una enfermedad alérgica puede incluir un compuesto inotodiol representado por la Fórmula 1 como principio activo.
La composición farmacéutica puede inhibir la desgranulación de los mastocitos.
La enfermedad alérgica puede ser inducida por al menos uno de los componentes del grupo que consiste en polen, medicamentos, fibras vegetales, bacterias, alimentos, los colorantes y los productos químicos. Preferentemente, la enfermedad alérgica puede ser inducida por alimento.
La enfermedad alérgica puede ser al menos una seleccionada del grupo que consiste en asma bronquial y dermatitis atópica.
De acuerdo con un aspecto de la presente divulgación, una composición alimenticia funcional saludable para la prevención o mejora de una enfermedad alérgica puede incluir un extracto de hongo Chaga(Inonotus obliquus)que incluya un compuesto inotodiol representado por la Fórmula 1 como principio activo.
De acuerdo con un aspecto de la presente divulgación, una composición alimenticia funcional saludable para la prevención o mejora de una enfermedad alérgica puede incluir un compuesto inotodiol representado por la Fórmula 1 como principio activo.
Se describirá la presente divulgación con más detalle.
La presente divulgación se refiere a una composición para la prevención o el tratamiento de una enfermedad alérgica, en donde la composición puede incluir un extracto de hongo Chaga(Inonotus obliquus)que incluye un compuesto inotodiol representado por la Fórmula 1 como principio activo.
El extracto de hongo Chaga puede ser una fracción obtenida añadiendo un disolvente orgánico a un extracto obtenido por extracción del hongo Chaga con un 70 por ciento (%) de etanol como disolvente.
El disolvente orgánico puede ser al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un alcohol inferior C1 a C4, diclorometano, cloroformo, acetato de etilo, acetato de dietilo, éter dietílico, acetona y hexano. Sin embargo, el disolvente orgánico no se limita a los mismos. Los alcoholes inferiores C1 a C4 pueden ser metanol, etanol, propanol, isopropanol o butanol.
Preferentemente, el extracto de hongo Chaga puede ser al menos uno seleccionado del grupo que consiste en fracciones de diclorometano o fracciones de cloroformo obtenidas añadiendo diclorometano o cloroformo a un extracto obtenido extrayendo el hongo Chaga con un 70 por ciento (%) de etanol como disolvente, respectivamente.
La presente divulgación se refiere a una composición para la prevención o el tratamiento de una enfermedad alérgica, en donde la composición puede incluir un compuesto inotodiol representado por la Fórmula 1 como principio activo. El compuesto inotodiol puede sintetizarse de acuerdo con un método comúnmente conocido y prepararse como una sal farmacéuticamente aceptable, o aislarse o purificarse a partir de un extracto de hongo Chaga.
El compuesto inotodiol aislado del hongo Chaga puede purificarse mediante cromatografía. La cromatografía puede seleccionarse a partir de la cromatografía en columna de gel de sílice, cromatografía en columna HP-20, cromatografía en columna RP-18, cromatografía en columna LH-20 y cromatografía líquida de alto rendimiento.
La alergia es un fenómeno que se produce bruscamentein vivocausado por una reacción de los anticuerpos a los antígenos al entrar en contacto con un alérgeno que es un material inductor de alergia. El alérgeno puede ser al menos uno seleccionado del grupo que consiste en polen, medicamentos, fibras vegetales, bacterias, alimentos, colorantes y productos químicos, y preferentemente, alimentos. Sin embargo, el alérgeno no se limita a ellos.
También, la enfermedad alérgica está causada por una alergia, y entre sus ejemplos se incluye el asma bronquial, rinitis alérgica, dermatitis atópica, urticaria, alergia alimentaria, alergia a medicamentos, enfermedad del suero y similares. La enfermedad alérgica presenta varios tipos en función del tipo de alérgeno y tipo de tejido que provocan una respuesta alérgica.
La enfermedad alérgica puede ser al menos una seleccionada del grupo que consiste en asma bronquial y dermatitis atópica.
El compuesto inotodiol o el extracto de hongo Chaga que contiene un principio activo puede inhibir la desgranulación de los mastocitos.
Cuando el mastocito recibe una estimulación por parte de un alérgeno, una sustancia inductora de la respuesta inflamatoria alérgica, tal como histamina, serina proteasas, proteoglicanos, prostaglandinas D2y leucotrienos pueden ser secretados al exterior de una célula, y esta reacción se denomina desgranulación de los mastocitos. Por lo tanto, la inhibición de la desgranulación de los mastocitos por el compuesto inotodiol o el extracto de hongo Chaga que contiene un compuesto inotodiol como principio activo puede inhibir la secreción de una sustancia inductora de la respuesta inflamatoria a la alergia debido a la estimulación del alérgeno, previniendo o tratando así la alergia. Se denomina "estabilizador de mastocitos".
En particular, el compuesto inotodiol de la presente divulgación no influye en la regulación de la actividad de los linfocitos CD4+ y CD8 , linfocitos B y macrófagos, sino que solo inhibe selectivamente la desgranulación de los mastocitos, entre linfocito T CD4+, célula CD8+, linfocito B, macrófago y un mastocito, relacionados con el tratamiento de las alergias.
La presente divulgación se refiere a una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento de una enfermedad alérgica, en donde la composición farmacéutica puede incluir un compuesto inotodiol o un extracto de hongo Chaga que incluya un compuesto inotodiol como principio activo.
La composición farmacéutica puede incluir un compuesto inotodiol o un extracto de hongo Chaga que incluya un compuesto inotodiol como principio activo en un intervalo del 0,001 por ciento en peso (% en peso) al 100 % en peso.
La composición farmacéutica puede formularse en forma de preparados orales, tales como polvos, gránulos, comprimidos, cápsulas, suspensiones, emulsiones, jarabes y aerosoles, preparaciones externas, supositorios o soluciones de inyección estériles, de acuerdo con un método convencional. La composición farmacéutica puede incluir un portador, un excipiente y un diluyente, p. ej., lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, xilitol, eritritol, maltitol, almidón, goma arábiga, alginato, gelatina, fosfato de calcio, silicato de calcio, celulosa, metilcelulosa, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, agua, hidroxibenzoato de metilo, hidroxibenzoato de propilo, talco, estearato de magnesio o aceite mineral. En el caso de la formulación, pueden usarse un diluyente o un excipiente, p. ej., una carga, un extensor, un aglutinante, un agente humectante, un desintegrante y un tensioactivo, que se suelen utilizar. Una preparación sólida para la administración oral puede incluir un comprimido, una píldora, polvo, gránulos y una cápsula. Dicha preparación sólida puede prepararse mezclando el compuesto inotodiol o el extracto de hongo Chaga que incluye un compuesto inotodiol como principio activo con al menos uno seleccionado entre un excipiente, p. ej., almidón, carbonato de calcio, sacarosa, lactosa o gelatina. Además de los excipientes simples, lubricantes, tales como estearato de magnesio talco. Una preparación líquida para administración oral puede incluir una suspensión, una solución oral, una emulsión y un jarabe, e incluir, además, diferentes excipientes, p. ej., un humectante, un edulcorante, un agente aromatizante y un conservante, además de diluyentes simples, p. ej., agua y parafina líquida, que se utilizan generalmente. Una preparación para la administración parenteral puede incluir soluciones acuosas esterilizadas, soluciones no acuosas, suspensiones, emulsiones, preparados liofilizados o supositorios. Entre los ejemplos de solución y suspensión no acuosas se incluye propilenglicol, polietilenglicol, aceite vegetal tal en forma de aceite de oliva, éster inyectable tal como oleato de etilo y similares. Una base del supositorio puede ser witepsol, macrogol, Tween 61, manteca de cacao, manteca de laurina o glicerogelatina.
La dosis de la composición farmacéutica de la presente divulgación puede variar en función de la edad, el sexo, el peso corporal del sujeto que se va a tratar, la enfermedad o proceso patológico particular que se va a tratar, la gravedad de la enfermedad o proceso patológico, la vía de administración y el criterio del médico prescriptor. La dosis puede determinarse basándose en estos factores dentro del nivel de un experto en la materia y, en general, la dosis puede variar de 0,01 mg/kg/día a aproximadamente 2000 mg/kg/día. Una dosis preferible está en un intervalo de 1 mg/kg/día a 500 mg/kg/día. La composición puede administrarse una vez al día o varias veces al día. La dosis no limita en ningún aspecto el alcance de la presente divulgación.
La composición farmacéutica puede administrarse a mamíferos tales como ratas, ganado o seres humanos a través de diferentes vías. Cabe esperar todos los modos de administración. Por ejemplo, la administración puede ser por vía oral, rectal, o por inyección intravenosa, intramuscular, subcutánea, endocervical o intracerebral. Dado que el compuesto de la presente divulgación tiene poca toxicidad y efectos secundarios, el compuesto puede utilizarse con seguridad a largo plazo con fines preventivos.
La presente divulgación se refiere a una composición alimenticia funcional saludable para la prevención o mejora de una enfermedad alérgica, en donde el compuesto alimenticio funcional saludable puede incluir un compuesto inotodiol o un extracto de hongo Chaga que contenga un compuesto inotodiol como principio activo y un aditivo alimenticio aceptable para la alimentación.
El compuesto alimenticio funcional saludable puede incluir el compuesto inotodiol o el extracto de hongo Chaga que contiene un compuesto inotodiol como principio activo en un intervalo del 0,001 % en peso al 100 % en peso.
El alimento funcional saludable puede presentarse en forma de un comprimido, una cápsula, una pastilla o una preparación líquida. Se pueden añadir alimentos al extracto de la presente divulgación, por ejemplo, diferentes alimentos, bebidas, goma, té y complejos vitamínicos.
Efectos ventajosos de la divulgación
La presente divulgación se refiere a una composición para la prevención o el tratamiento de una enfermedad alérgica, en donde la composición puede incluir un compuesto inotodiol o un extracto de hongo Chaga que contenga el compuesto inotodiol como principio activo. Se descubrió que cuando el compuesto inotodiol o el extracto de hongo Chaga que contiene un compuesto inotodiol como principio activo se administra a un modelo de ratón inducido por alergia alimentaria, se alivian y curan los síntomas inducidos por la alergia y se inhibe la inmunorreactividad de los mastocitos.
Por consiguiente, se espera que el compuesto inotodiol y el extracto de hongo Chaga que incluye un compuesto inotodiol como principio activo sean útiles como composición para la prevención o el tratamiento de una enfermedad alérgica.
Breve descripción de los dibujos
La FIG. 1 muestra la mejora de los síntomas de la alergia seguida de la inducción de la alergia alimentaria y el tratamiento con un compuesto inotodiol y una fracción de hongo Chaga que incluye un compuesto inotodiol; la FIG.
1(A) muestra el cambio de la temperatura rectal; la FIG. 1(B) muestra un nivel de alivio o tratamiento de los síntomas de la anafilaxia; y la FIG. 1(C) muestra la puntuación de la diarrea;
la FIG. 2 muestra cambios en (A) el número de eosinófilos infiltrados en el intestino delgado; y (B) el número de mastocitos en el intestino delgado tras la inducción de la alergia alimentaria y el tratamiento con un compuesto inotodiol y una fracción de hongo Chaga que incluye un compuesto inotodiol;
la FIG. 3 muestra el cambio en la concentración de IgE relacionada con la alergia (A); y MCPT-I (B) en un suero seguido de inducción de alergia alimentaria y tratamiento con un compuesto inotodiol y una fracción de hongo Chaga que incluye un compuesto inotodiol;
la FIG. 4 muestra los resultados de la inmunorreactividad de linfocitos T CD4+ tras la inducción de alergia alimentaria y el tratamiento con un compuesto inotodiol y una fracción de hongo Chaga que incluye un compuesto inotodiol; la FIG. 4(A) muestra los cambios de expresión de la IL-13, IL-5 e IFN-y, que son citocinas producidas por los linfocitos Th2 CD4+; y la FIG. 4(B) muestra un nivel de activación por ovoalbúmina de linfocitos T CD4+ que expresan D011.00TCR, es decir, un receptor de linfocitos T específico del péptido derivado de la ovoalbúmina y un nivel de la siguiente división celular; y
la FIG. 5 muestra los resultados de las pruebas de inmunorreactividad de los mastocitos tras la inducción de la alergia alimentaria y el tratamiento con un compuesto inotodiol y una fracción de hongo Chaga que incluye un compuesto inotodiol, y muestra el cambio de la temperatura rectal en ratones en los que se induce la desgranulación de los mastocitos (A) y el cambio de MCPT-1 en sangre, mediante un método de anafilaxia sistémica pasiva.
Mejor modo
En lo sucesivo en el presente documento, la presente divulgación se describirá en más detalle con referencia a ejemplos preferibles. Sin embargo, la presente divulgación no se limita al ejemplo descrito en el presente documento, sino que puede plasmarse de otras formas. En lugar de ello, el ejemplo se proporciona en el presente documento para que la descripción presentada en el presente documento sea exhaustiva y completa, y el concepto de la presente divulgación se transmita plenamente a un experto en la materia.
< Ejemplo 1. Aislamiento del compuesto inotodiol>
Ejemplo 1-1. Preparación de la extracción del hongo Chaga y comprobación del contenido del compuesto inotodiol
El compuesto inotodiol de la presente divulgación se aisló de un extracto de hongo Chaga(Inonotus obliquus).
Se pulverizaron 630 gramos (g) de hongo Chaga en partículas finas, se añadieron 3000 ml de etanol al 70 % [v/v] y se realizó la extracción bajo agitación ultrasónica a 40 °C y 90 hercios (Hz) tres veces para obtener un extracto de etanol al 70 % (3 * 3,0 litros (l)). A continuación, se obtuvieron 58 g de extracto de etanol marrón seco al 70 % utilizando un evaporador rotatorio.
Se disolvieron 58 g de extracto de etanol al 70 % de hongo Chaga en agua, seguido de la adición de (diclorometano, CH2Cl2) para obtener 6,0 g de una fracción de diclorometano. Después de aislar la fracción de diclorometano, se añadió acetato de etilo (EtOAc) a la fracción restante para obtener 3,2 g de una fracción de acetato de etilo y 48,5 g de una fracción de agua.
Se realizó cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) para medir el contenido del compuesto inotodiol incluido en el extracto de hongo Chaga obtenido y en las fracciones. La HPLC se realizó en condiciones de gradiente de concentración de acetonitrilo (0-30 minutos; 60 % ^ 95 % [v/v], 30-60 minutos; 95 % [v/v] constantemente) utilizando LC-10AD (Shimadzu Co. Kyoto, Japón). Se disolvieron tanto el extracto de hongo Chaga como la fracción en metanol hasta una concentración de 2 mg/ml, seguido de filtración con un filtro de jeringa de 0,2 pm. A continuación, se inyectaron 10 pl de esto. El contenido del compuesto inotodiol se midió utilizando una columna de HECTOR-M C18 (4,6 x 250 mm, tamaño de partícula de 5 |jm, RStech, Corea), a un flujo de 1 ml/minuto, con detección UV (210 nm). Como resultado, se encontró que aproximadamente el 1 % del compuesto inotodiol estaba presente en el extracto de etanol al 70 % (Ext. De EtOH), el 7,8 % del compuesto inotodiol estaba presente en la fracción de diclorometano (Frac. de CH2CI2), el 0,9 % del compuesto inotodiol estaba presente en la fracción de acetato de etilo (Frac. De EtOAc), y el 0,05 % del compuesto inotodiol estaba presente en la fracción de agua (Frac. De H2O) que tenía el contenido más bajo de compuesto inotodiol.
En el caso de una fracción de cloroformo obtenida utilizando cloroformo en lugar de diclorometano, se observó que la fracción de cloroformo contenía una cantidad similar del compuesto inotodiol que la fracción de diclorometano. Ejemplo 1-2. Aislamiento del compuesto inotodiol
El compuesto inotodiol se aisló de la fracción de diclorometano del hongo Chaga obtenida en el Ejemplo 1-1.
Se sometieron 2,5 g de la fracción de diclorometano a fraccionamiento mediante cromatografía en columna de gel de sílice utilizando 1 l de cada uno de los disolventes mezclados en los que se mezcló n-hexano con acetato de etilo en una proporción de 20:1, 9:1, 4:1, 2:1 y 1:2 [v/v] según una condición de disolución en gradiente de concentración, obteniendo así 13 fracciones menores (Frac. C1-C13). Se mezcló la Frac. C6 con la Frac. C7, y la mezcla se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice según una condición de disolvente de una solución en la que se mezcla n-hexano con acetato de etilo a 20:1 [v/v|, aislando así 210 mg del compuesto inotodiol.
<Ejemplo 2. Confirmación de la estructura fisicoquímica del compuesto inotodiol>
Inotodiol;
Polvo amorfo blanco;
EM-IEN: [M+ Na]+ 465,37m/z(C30H50O2: 442,27);
RMN de 1H y RMN de 13C (véase la Tabla 1 para los datos);
Según el resultado del análisis EM-IEN y los datos de RMN de 13C, la fórmula molecular resultó ser C30H50O2.
En la RMN de 13C para el inotodiol, se observaron 30 picos de carbono, y se comprobó que, en los picos de 8c 121,2, 134,0, 134,4 y 134,8, estaban presentes 2 dobles enlaces, y en los picos de 8<c>73,2 y 78,7, 2 grupos hidroxilo (véase la Tabla 2). En el espectro de RMN de 1H (véase la Tabla 2), a 0,67, 0,76, 0,82, 0,88, 0,93, 1,60 y 1,69 (3H, s) se observó un pico singlete de metilo, y a 8<h>0,88, se observó un pico doblete de metilo. También, se observó un pico olefínico correspondiente a H-24 en 8h 5,16 (1H, t, J = 7,2 Hz), y se observó un pico de oximetina unido a oxígeno en 8h 3,18 (1H, m, H-3) y a 8h 3,65 (1H, H-22).
El resultado anterior se comparó con los datos publicados en un artículo (Du. D.,et al.,2011) para verificar la estructura del compuesto inotodiol.
T l 1
(continuación)
<Ejemplo experimental 1. Preparación del modelo de alergia en ratones y administración del extracto)
Preparar modelos de ratones alérgicos, se utilizaron ratones BALB/C macho de 5 semanas de vida. Se prepararon modelos de alergia alimentaria utilizando ovoalbúmina de pollo como material inductor de alergia (alérgeno).
Para la inmunización de los ratones, se mezclaron 20 |jg de ovoalbúmina con 2 mg de alumbre, y la mezcla se inyectó por vía intraperitoneal a los ratones dos veces cada dos semanas. La inducción de la alergia alimentaria se indujo al realizar la segunda inyección de inmunización y, dos semanas después, se le administraron por vía oral 50 mg de ovoalbúmina cinco veces cada tres días para provocar una respuesta alérgica. Asimismo, para confirmar el efecto terapéutico de la alergia, se administraron el extracto de hongo Chaga, la fracción y el compuesto inotodiol obtenido en el Ejemplo 1 por vía oral a los ratones todos los días durante el período de administración de la ovoalbúmina. En este caso, como control positivo, se utilizó un grupo de ratones a los que se administró dexametasona todos los días. Por último, se administraron 50 mg de ovoalbúmina sola o el extracto de hongo Chaga, la fracción o el compuesto inotodiol, seguido de la observación de los síntomas causados por la alergia una hora después. Para cada grupo experimental, se utilizaron seis ratones, y cada grupo experimental se muestra en la Tabla 2.
<Ejemplo experimental 2. Confirmación de la mejoría de los síntomas de la alergia)
Ejemplo experimental 2-1. Confirmación de cambios en la temperatura rectal
Para ver el cambio de la temperatura rectal seguido de la inducción de la alergia alimentaria y el tratamiento farmacológico, se sometieron los ratones correspondientes a cada grupo a una medición de la temperatura rectal. Se midió la temperatura rectal introduciendo la punta del sensor de un termómetro rectal en el recto. Los resultados de esto se muestran en la FIG. 1(A).
Como se muestra en la FIG. 1(A), se observó que un grupo en el que se indujo la alergia (Alergia) tenía una temperatura rectal más baja que un grupo normal (Normal). Por otra parte, se comprobó que el grupo tratado con dexametasona (Dexa.) o el grupo tratado con el compuesto inotodiol aislado del hongo Chaga (Inotodiol), el grupo tratado con el extracto de etanol del hongo Chaga que incluye un compuesto inotodiol (Ext. de EtOH), y el grupo tratado con la fracción de diclorometano (Frac. de CH2C12) de la presente divulgación tuvieron una temperatura rectal más alta que el grupo en el que se indujo la alergia alimentaria (Alergia). En particular, se observó que el grupo tratado con el compuesto inotodiol y el grupo tratado con la fracción de diclorometano presentaban un nivel de temperatura rectal similar al del grupo normal. Por otra parte, se observó que el grupo tratado con la fracción acuosa del hongo Chaga (Frac. de H2O) presentaba un nivel de temperatura rectal similar al del grupo en el que se indujo la alergia alimentaria.
Por consiguiente, se descubrió que el compuesto inotodiol y la fracción de diclorometano del hongo Chaga que incluye un compuesto inotodiol de la presente divulgación mejoraron una temperatura rectal baja, es decir, uno de los síntomas provocados por la inducción de la alergia.
Ejemplo experimental 2-2. Observación de la anafilaxia
Para ver la mejora o el efecto terapéutico del compuesto inotodiol aislado del hongo Chaga y de la fracción de diclorometano del hongo Chaga que incluye el compuesto inotodiol de la presente divulgación con respecto a un síntoma de anafilaxia causado por alergia alimentaria, se observaron las respuestas de los ratones de cada grupo experimental y se puntuaron los síntomas de anafilaxia de acuerdo con la Tabla 3. Los resultados de las mismas se muestran en la FIG. 1(B).
Como se muestra en la FIG. 1(B), el grupo en el que se indujo la alergia alimentaria (Alergia) tuvo una puntuación de anafilaxia más alta que el grupo normal (Normal). Por otra parte, el grupo tratado con dexametasona (Dexa.), el grupo tratado con el extracto de etanol del hongo Chaga (Ext. de EtOH), el grupo tratado con la fracción de diclorometano (Frac. de CH2C12) y el grupo tratado con el compuesto inotodiol (Inotodiol) tuvieron una puntuación de anafilaxia más baja que el grupo en el que se indujo la alergia alimentaria. En particular, se observó que el grupo tratado con la fracción de diclorometano del hongo Chaga y el grupo tratado con el compuesto inotodiol presentaban puntuaciones de anafilaxia más bajas. Por otra parte, se observó que el grupo tratado con la fracción acuosa del hongo Chaga (Frac. de H2O) presentaba un nivel similar de puntuación de anafilaxia a la del grupo en el que se indujo la alergia alimentaria.
Por consiguiente, se descubrió que el compuesto inotodiol y la fracción de diclorometano del hongo Chaga que incluye un compuesto inotodiol de la presente divulgación mejoraban los síntomas de anafilaxia causados por la inducción de la alergia.
Ejemplo experimental 2-3. Observación de las heces en el intestino grueso
Se observó un cambio en la forma de las heces debido a una alergia alimentaria tras el tratamiento con el compuesto inotodiol aislado del hongo Chaga y la fracción de diclorometano del hongo Chaga que incluye el compuesto inotodiol de la presente divulgación. Se observaron las formas de las heces en el intestino grueso de los ratones de cada grupo experimental a simple vista, y los síntomas se puntuaron de acuerdo con la Tabla 4, cuyos resultados se muestran en la FIG. 1(C).
T l 41
Como se muestra en la FIG. 1(A), se descubrió que un grupo en el que se indujo la alergia alimentaria (Alergia) tenía una puntuación más alta de síntomas de diarrea que un grupo normal (Normal). Las puntuaciones de los síntomas de diarrea del grupo tratado con dexametasona (Dexa.) o del grupo tratado con el compuesto inotodiol aislado del hongo Chaga (Inotodiol) y del grupo tratado con la fracción de diclorometano del hongo Chaga que incluye un compuesto inotodiol (Frac. CH2Ch) fueron inferiores a las del grupo en el que se indujo la alergia alimentaria. Por otra parte, el grupo tratado con el extracto de etanol del hongo Chaga (Ext. de EtOH) y el grupo tratado con la fracción acuosa (Frac. de H2O) tuvieron menores efectos de alivio de los síntomas de diarrea que la fracción de diclorometano del hongo Chaga. En el caso de la fracción acuosa, tenía un nivel similar al grupo en el que se indujo la alergia.
Por consiguiente, se descubrió que el compuesto inotodiol aislado del hongo Chaga y la fracción de diclorometano del hongo Chaga que incluye un compuesto inotodiol de la presente divulgación mejoraban los síntomas de diarrea causados por la inducción de la alergia.
También, aunque no se muestra en la FIG. 1, un grupo tratado con la fracción de cloroformo del hongo Chaga mostró una temperatura rectal, puntuación de anafilaxia y puntuación de síntomas de heces similares a los de la fracción de diclorometano de la presente divulgación. Por otra parte, cuando un grupo se trata con 20 mg/kg de colesterol, que tiene una estructura similar a la del compuesto inotodiol, se encontró que, a diferencia del compuesto inotodiol, el grupo mostró un nivel similar de temperatura rectal, puntuación de anafilaxia y puntuación de síntomas de heces a los del grupo en el que se indujo la alergia.
Por lo tanto, a través de la temperatura rectal, el síntoma de anafilaxia y la observación de las heces, se descubrió que el compuesto inotodiol aislado del hongo Chaga es uno de los principales principios activos que alivian los síntomas de la alergia. Asimismo, se descubrió que la fracción de diclorometano y la fracción de cloroformo del hongo Chaga que incluye el compuesto inotodiol como principio activo tienen excelentes efectos de alivio de los síntomas de la alergia.
<Ejemplo experimental 3. Observación de los cambios celulares en el intestino delgado debidos a una alergia alimentaria>
Ejemplo experimental 3-1. Observación de eosinófilos en el intestino delgado
Se sabe que el eosinófilo desempeña un papel importante en la alergia alimentaria. Es decir, el eosinófilo induce la inflamación alérgica en el intestino delgado. Observando los cambios de eosinófilos en el intestino delgado, se confirmaron la prevención de la alergia y los efectos terapéuticos del compuesto inotodiol y de la fracción de diclorometano del hongo Chaga que incluye el compuesto inotodiol de la presente divulgación.
Se anestesiaron los ratones de cada grupo experimental del Ejemplo experimental 1 y se les realizó un corte en el abdomen. A continuación, se extirpó el intestino delgado, se fijó con formol, se trató con parafina, se impregnó con parafina y se microseccionó con un micrótomo, obteniendo así secciones de tejido. Las secciones de intestino delgado obtenidas se tiñeron con hematoxilina y eosina (H y E) para observar las células eosinófilas. Los resultados de esto se muestran en la FIG. 2(A).
Según los resultados de la medición del número de células eosinófilas teñidas mediante tinción tisular, como se muestra en la FIG. 2(A), el grupo en el que se indujo la alergia alimentaria (Alergia) mostró una mayor infiltración de eosinófilos en el intestino delgado, en comparación con el grupo normal y el grupo tratado con dexametasona (Dexa.), el grupo tratado con el compuesto inotodiol aislado del hongo Chaga (Inotodiol), y la fracción de diclorometano que incluye un compuesto inotodiol aislado del hongo Chaga (Frac. de CH2Ch) mostraron una disminución de la infiltración de eosinófilos. Sin embargo, la fracción acuosa del hongo Chaga (Frac. de H2O) tuvo escasos efectos reductores.
Por consiguiente, se descubrió que el compuesto inotodiol aislado del hongo Chaga y la fracción de diclorometano del hongo Chaga que incluye un compuesto inotodiol de la presente divulgación previenen o tratan la alergia aliviando la inflamación causada por la alergia.
Ejemplo experimental 3-2. Observación sobre los mastocitos del intestino delgado
Observando los mastocitos, conocidos por inducir una respuesta alérgica, se confirmaron la prevención de la alergia y los efectos terapéuticos del compuesto inotodiol y la fracción de diclorometano del hongo Chaga, incluida la fracción del compuesto inotodiol de la presente divulgación.
Para observar los mastocitos, se tiñeron las secciones de tejido de intestino delgado obtenidas en el Ejemplo experimental 3-1 con toluidina. A continuación, se observaron los mastocitos con un microscopio y se midió el número de mastocitos, que se muestran en la FIG. 2(B).
Según los resultados de la medición del número de mastocitos teñidos mediante tinción con toluidina, como se muestra en la FIG. 2(B), el grupo en el que se indujo la alergia alimentaria (Alergia) mostró un aumento del número de mastocitos en el intestino delgado, en comparación con el grupo normal y el grupo tratado con dexametasona (Dexa.), el grupo tratado con el compuesto inotodiol aislado del hongo Chaga (Inotodiol), y la fracción de diclorometano que incluye un compuesto inotodiol aislado del hongo Chaga (Frac. de CH2Ch) mostraron una disminución del número de mastocitos. Sin embargo, la fracción de agua (Frac. de H2O) tuvo escasos efectos decrecientes.
También, aunque no se muestra en la FIG. 2, un grupo tratado con la fracción de cloroformo mostró un nivel similar de disminución del número de eosinófilos y mastocitos que la fracción de diclorometano del hongo Chaga de la presente divulgación. Por otra parte, cuando un grupo se trata con 20 mg/kg de colesterol, que tiene una estructura similar a la del compuesto inotodiol, se encontró que, a diferencia del compuesto inotodiol, el grupo mostró escasa disminución del número de eosinófilos y mastocitos.
Por consiguiente, se descubrió que el compuesto inotodiol aislado del hongo Chaga y la fracción de diclorometano del hongo Chaga que incluye un compuesto inotodiol de la presente divulgación previenen o tratan la alergia.
<Ejemplo experimental 4. Confirmación de la expresión de IgE y MCPT-1 debido a la alergia>
Las respuestas alérgicas se deben a la expresión de IgE que responde al alérgeno y a la combinación de alérgeno e IgE, los mastocitos segregan materiales granulares asociados a la inflamación alérgica, tales como histamina, serina proteasa o proteoglicano. Por lo tanto, para confirmar la prevención de la alergia y el efecto terapéutico del compuesto inotodiol y la fracción de diclorometano del hongo Chaga que incluye el compuesto inotodiol de la presente divulgación, se midió una concentración de cada una de IgE y una mastoproteasa-1 (MCPT-I), es decir, una serina proteasa específica de los mastocitos, en el suero de un ratón.
El suero se obtuvo de la sangre de un ratón un día después de la administración de 50 mg de ovoalbúmina sola o del extracto de hongo Chaga, la fracción o el compuesto inotodiol del Ejemplo experimental 1. El suero obtenido se diluyó 100 veces y se utilizó.
La concentración de IgE en el suero se midió utilizando un kit de ensayo de inmunoadsorción enzimática (ELISA). Se añadieron 100 pl de un tampón de recubrimiento de carbonato (pH 9,5) que contenía 2 pg/ml de ovoalbúmina a cada pocillo de una placa de 96 pocillos y, a continuación, se sometieron a reacción a una temperatura de 4 °C durante toda la noche para el recubrimiento. La placa se lavó tres veces con un tampón de lavado (0,05 % de Tween 20 en PBS), se añadió una solución salina tamponada con fosfato (PBS) con un 1 % de albúmina sérica bovina (ASB) a 200 pl por pocillo, seguido del tratamiento a temperatura ambiente durante 1 hora y el bloqueo. Después de esto, se realizaron tres lavados con un tampón de lavado. Después del lavado, se añadieron a cada pocillo 100 pl de suero, se hicieron reaccionar a temperatura ambiente durante 2 horas, y se lavaron con tampón de lavado. Se añadieron 100 pl de 1 pg/ml de IgE antirratón conjugada con biotina a cada pocillo y se hicieron reaccionar durante una hora, seguido del lavado con tampón de lavado y tratamiento con estreptavidina-HRP a la que se conjugó una peroxidasa de rábano picante (HRP) durante 30 minutos. La placa se lavó cinco veces con tampón de lavado y se trató con 100 pl de tetrametilbencidina para inducir el desarrollo del color. Una vez desarrollada la coloración, se añadió ácido sulfúrico 2 N (H2SO4) a cada pocillo para detener la reacción de coloración. Se midió la absorbancia a 450 nm y se analizó la concentración de IgE en el suero. Los resultados de esto se muestran en la FIG. 3(A).
Se midió una concentración de una mastoproteasa-1 (MCPT-1), es decir, una serina proteasa utilizando un kit ELISA mMCP-1 (eBioscience) de acuerdo con el protocolo proporcionado por el fabricante. Los resultados de las mismas se muestran en la FIG. 3(B).
Como se muestra en la FIG. 3, el grupo en el que se indujo la alergia alimentaria (Alergia) presentó concentraciones aumentadas de IgE específica de proteína de clara de huevo (FIG. 3(A)) y MCPT-1 (FIG. 3(B)) en suero, en comparación con el grupo normal (Normal). El grupo tratado con el extracto de etanol del hongo Chaga (Ext. de EtOH) y el grupo tratado con la fracción de diclorometano (Frac. de CH2Ch) habían disminuido significativamente las concentraciones de IgE y MCPT-1. El grupo tratado con la fracción acuosa del hongo Chaga (Frac. de H2O) no presentó cambios sustanciales en las concentraciones de IgE y MCPT-1. El grupo tratado con dexametasona (Dexa.) y el grupo tratado con el compuesto inotodiol (Inotodiol) no presentaron cambios sustanciales en la concentración de IgE, sin embargo, la concentración de MCPT-1 de estos grupos disminuyó significativamente.
También, aunque no se muestra en la FIG. 3, un grupo tratado con la fracción de cloroformo mostró un nivel similar de disminución de la concentración de IgE y MCPT-1 en suero al de la fracción de diclorometano del hongo Chaga de la presente divulgación.
Este resultado demuestra que los efectos de la regulación/inhibición de la actividad de los mastocitos están más directamente relacionados con la prevención o el tratamiento de los síntomas de la alergia que los efectos reductores de la expresión de IgE específica del alérgeno.
<Ejemplo experimental 5. Confirmación de los efectos de inhibición específicos de los mastocitos>
Ejemplo experimental 5-1. Confirmación de los efectos reguladores de la actividad de los linfocitos T CD4+
Se sabe que las citocinas producidas por los linfocitos T cooperadores 2 (Th2) CD4+ favorecen la producción de IgE y promueven la diferenciación de mastocitos y eosinófilos, agravando así los síntomas alérgicos. También se ha informado de que los extractos de plantas, que se ha informado que tienen efectos antialérgicos, tienen efectos de inhibición de la activación de los linfocitos T CD4+ y de la producción de citocinas de los linfocitos T Th2 CD4+.
Para examinar el efecto de un compuesto inotodiol o de un extracto de hongo Chaga que contiene un compuesto inotodiol sobre la regulación de la actividad de los linfocitos T CD4+, se realizó el análisis del nivel de expresión de la citocina producida por el linfocito T Th2 CD4+ y experimentos de transferencia adoptiva utilizando linfocitos T transgénicos TCR CD4+ que expresan DO11.00 t Cr , es decir, el receptor de linfocitos T (TCR) específico del péptido derivado de la ovoalbúmina.
Para la expresión de citocinas, se trató una muestra de la misma manera que en el Ejemplo experimental 1, y se aislaron las células del nódulo linfático mesentérico (NLM) de ratones de cada grupo después de un día. En este momento, se añadió un grupo tratado con 10 mg/kg de dexametasona, un grupo tratado con 20 mg/kg de imatinib (Gleevec), que se utiliza como agente terapéutico para la hipertermia de mastocitos, y un grupo tratado con 20 mg/kg de colesterol, que tiene una estructura similar a la del compuesto inotodiol. Las células aisladas se dispensaron en pocillos de una placa de 96 pocillos a razón de 1 * 106 células/pocillo. Se inoculó medio completo RPMI (que contiene suero fetal bovino al 10 %, penicilina, estreptomicina y glutamina) con ovoalbúmina o medio completo RPMI con 100 |jg/ml de ovoalbúmina y se cultivó durante tres días a 37 °C y 5 % de CO2. Después de tres días, se recogió la solución de cultivo celular, seguido de un análisis utilizando un kit ELISA según el protocolo proporcionado por el fabricante para analizar la cantidad de IL-5, IL-13 e IFN-<y>correspondiente a cada citocina secretada como solución de cultivo celular. Los resultados de ello se muestran en la Fig. 4 (A).
Los experimentos para medir un grado de respuesta inmunitaria de los linfocitos T específicos de péptidos derivados de la ovoalbúmina a partir de un experimento con animales se realizaron de la siguiente manera. Se aislaron células de los ganglios linfáticos de ratones transgénicos que expresaban DO11.10TCR. Las células aisladas se tiñeron con fluorescencia con éster succinimidílico de carboxifluoresceína (CFSE), y se inyectaron 2 * 106 células por vía intravenosa en ratones BALB/C. Se inyectaron células por vía intraperitoneal con ovoalbúmina (50 jg ) y alumbre para inducir la división de los linfocitos T c D4+ que expresaban el DOII.00 TCR. Se administraron por vía oral 20 mg/kg del compuesto inotodiol, 320 mg/kg del extracto de etanol del hongo Chaga, 10 mg/kg de dexametasona, 10 mg/kg de imatinib o 20 mg/kg del colesterol una vez al día durante cuatro días a partir del día siguiente a la inyección de ovoalbúmina. Después de cinco días de inyección de ovoalbúmina, las células se aislaron de ganglios linfáticos BALB/C, se tiñeron con anticuerpo anti-CD4 y anticuerpo anti-DO11.10, y se midió la intensidad de fluorescencia de CFSF del linfocito T CD4+ que expresaba el DOII.00 TCR mediante citometría de flujo para determinar el grado de división celular. A continuación, se midió el número de células. Los resultados de ello se muestran en la FIG. 4(B), respectivamente. En este caso, la intensidad de fluorescencia de CFSF disminuye a medida que aumenta la división celular.
Como se muestra en la FIG. 4(A), no se observó una expresión sustancial de IL-5, IL-13 e IFN-y en ninguno de los grupos en el caso de las células cultivadas en medio completo RPMI sin ovoalbúmina (sin OVA). Sin embargo, en el caso de células cultivadas en medio RPMI completo con ovoalbúmina (OVA), la cantidad de cada una de IL-5, IL-13 e IFN-y aumentó en el grupo en el que se indujo la alergia (Alergia). Sin embargo, la cantidad de citocina del grupo tratado con el extracto de etanol del hongo Chaga (Ext. de EtOH) fue similar a la del grupo normal (Normal). Sin embargo, la cantidad de citocinas del grupo tratado con el compuesto inotodiol (Inotodiol) no fue sustancialmente diferente de la cantidad de expresión de IL-5, IL-13 y IFN-y.
Asimismo, como en el análisis de linfocitos T CD4+ que expresan DO11.00TCR, es decir, un TCR específico del péptido derivado de la ovoalbúmina mostrado en la FIG. 4(B), el grupo tratado con ovoalbúmina (Alergia) presentó una disminución significativa de la intensidad de fluorescencia de CFSe de los linfocitos T CD4+ que expresaban el DOII.00 TCR de y un aumento significativo del número de linfocitos T CD4+, en comparación con el grupo no inmune con ovoalbúmina (Normal). Sin embargo, el grupo tratado con extracto de etanol de hongo Chaga (Ext. de EtOH) y el grupo tratado con imatinib (Imat.) no presentaron diferencias en la intensidad de fluorescencia de CFSE ni en el número de células, en comparación con el grupo no inmune. El grupo tratado con el compuesto inotodiol (Inotodiol) presentó un nivel similar de disminución de la intensidad de fluorescencia de CFSE de los linfocitos T CD4+ que expresaban el DOII.00 TCR, en comparación con el grupo tratado con ovoalbúmina, y aumentó significativamente el número de linfocitos T CD4+.
También, aunque no se muestra en la FIG. 4, se observó que un grupo tratado con la fracción de diclorometano del hongo Chaga y un grupo tratado con la fracción de cloroformo del hongo Chaga de acuerdo con la presente divulgación inhibían la expresión de citocinas debida a los linfocitos T Th2 CD4+ al igual que el extracto de hongo Chaga.
Por consiguiente, de los resultados anteriores, se descubrió que la fracción de diclorometano del hongo Chaga y la fracción de cloroformo del hongo Chaga de acuerdo con la presente divulgación tienen una capacidad significativa de regulación de la actividad de los linfocitos T Th2 CD4+ (inducida por alérgenos), mientras que el compuesto inotodiol no.
Ejemplo experimental 5-2. Confirmación de los efectos de regulación de la inmunorreactividad de los mastocitos
En el Ejemplo experimental 4, se descubrió que la reducción de la expresión de MCPT-1 de un compuesto inotodiol o de un extracto de hongo Chaga que contiene un compuesto inotodiol está relacionada con la inhibición de la inmunorreactividad de los mastocitos debida a un compuesto inotodiol.
Para confirmar los efectos de inhibición de la desgranulación de los mastocitos del compuesto inotodiol o del extracto de hongo Chaga que contiene el compuesto inotodiol de la presente divulgación, se realizó un experimento de anafilaxia sistémica pasiva.
Se administraron por vía oral el compuesto inotodiol (20 mg/kg), el extracto de etanol de hongo Chaga (320 mg/kg), colesterol (20 mg/kg) similar en estructura al compuesto inotodiol, dexametasona (10 mg/kg) como control positivo e imatinib (20 mg/kg) a ratones macho BALB/C de 5 semanas de vida del Ejemplo experimental 1 una vez al día durante 3 días. Al tercer día de la administración oral, se inyectaron por vía intravenosa 3 |jg de IgE antidinitrofenol (DNP), y al cabo de 24 horas, se indujo la desgranulación de mastocitos mediante la inyección intravenosa de 80 jg de albúmina de suero bovino (ASB) conjugada con DNP. Se midió la temperatura rectal de los ratones inducidos a la desgranulación de mastocitos y se analizó la cantidad de MCPT-1 en la sangre. Los resultados se muestran en la FIG.
5.
Como se muestra en la FIG. 5, al medir la temperatura rectal de los ratones (FIG. 5(A)), cuando se indujo la desgranulación de los mastocitos (tratamiento con ASB-DNP) se redujo la temperatura del recto, mientras que el compuesto inotodiol (Inotodiol) y el extracto de etanol del hongo Chaga (Ext. de EtOH) no disminuyeron la temperatura rectal.
Asimismo, se analizó la cantidad de MCPT-1 secretada durante la desgranulación de los mastocitos (FIG. 5(B)), y cuando se indujo la desgranulación de los mastocitos (tratados con ASB-DNP), aumentó la concentración de MCPT-1 en la sangre del ratón. Cuando se trató con dexametasona (Dexa.), imatinib (Imat.), el compuesto inotodiol (Inotodiol) y el extracto de etanol del hongo Chaga (Ext. de EtOH), se redujo significativamente el nivel de aumento de la concentración de MCPT-1. Cuando se trata el colesterol, que es similar en estructura al compuesto inotodiol (Col.), a diferencia del compuesto inotodiol, MCPT-1 no disminuyó.
Aunque no se muestra en la FIG. 5, la fracción de diclorometano del hongo Chaga y la fracción de cloroformo del hongo Chaga que contiene el compuesto inotodiol de acuerdo con la presente divulgación también redujeron la cantidad de MCPT-1 en un grado similar.
Por consiguiente, se descubrió que la fracción de diclorometano del hongo Chaga y la fracción de cloroformo del hongo Chaga de acuerdo con la presente divulgación inhibían la desgranulación de los mastocitos.
Por lo tanto, de los resultados anteriores, se descubrió que la fracción de diclorometano y la fracción de cloroformo del hongo Chaga de acuerdo con la presente divulgación regulan la actividad de los linfocitos T CD4+ e inhiben la desgranulación de los mastocitos, teniendo así una inhibición inmunitaria múltiple. Por otra parte, a diferencia de la dexametasona o la fracción de diclorometano y la fracción de cloroformo que tienen inhibición inmunitaria múltiple, el compuesto inotodiol de acuerdo con la presente divulgación inhibe selectivamente la desgranulación de los mastocitos, proporcionando así un tratamiento relativamente selectivo y seguro de una enfermedad alérgica.
<Ejemplo de preparación 1. Preparación farmacéutica>
Ejemplo de Preparación 1-1. Preparación de comprimido
Se mezclaron 200 g de la fracción de diclorometano del hongo Chaga de acuerdo con la presente divulgación con 175,9 g de lactosa, 180 g de fécula de patata y 32 g de ácido silícico coloidal. Se añadió una solución de gelatina al 10 % a esta mezcla, que luego se pulverizó y se pasó por un tamiz de malla 14. El resultado se secó y se añadieron 160 g de fécula de patata, 50 g de talco y 5 g de estearato de magnesio para preparar una mezcla que luego se convirtió en comprimidos.
Ejemplo de preparación 1-2. Preparación de solución inyectable
Se disolvieron 1 g del compuesto inotodiol de la presente divulgación, 0,6 g de cloruro de sodio y 0,1 g de ácido ascórbico en agua destilada de modo que la solución fuera de 100 ml. La solución se añadió a un frasco y se calentó durante 30 minutos a 20 °C para su esterilización.
<Ejemplo de preparación 2. Preparación de alimentos>
Ejemplo de preparación 2-1. Preparación de condimentos para cocinar
El compuesto inotodiol de la presente divulgación se añadió a un condimento de cocina al 1 % en peso para preparar un condimento de cocina saludable.
Ejemplo de preparación 2-2. Preparación de alimentos de harina
El compuesto inotodiol de la presente divulgación se añadió a harina de trigo al 0,1 % en peso, y se prepararon pan, pasteles, galletas,crackersy fideos utilizando esta mezcla saludable para preparar alimentos.
Ejemplo de preparación 2-3. Preparación de sopas y salsas
El compuesto inotodiol de la presente divulgación se añadió a sopas y salsas al 0,1 % en peso para preparar sopas y salsas saludables.
Ejemplo de preparación 2-4. Preparación de productos lácteos
El compuesto inotodiol de la presente divulgación se añadió a leche al 0,1 % en peso, y esta leche se utilizó para preparar diferentes productos lácteos tales como mantequilla y helado.
Ejemplo de preparación 2-5. Preparación de zumo vegetal
Se añadieron 0,5 g del compuesto inotodiol de la presente divulgación a 1000 ml de zumo de tomate o zanahoria para preparar zumo vegetal saludable.
Ejemplo de preparación 2-6. Preparación del zumo de fruta
Se añadió 1 g del compuesto inotodiol de la presente divulgación a 1000 ml de zumo de manzana o de uva para preparar zumo de fruta saludable.

Claims (4)

  1. REIVINDICACIONES 1. Una composición farmacéutica para usar en la prevención o el tratamiento de una enfermedad alérgica, incluyendo la composición farmacéutica un compuesto inotodiol representado por la Fórmula 1 como principio activo, [Fórmula 1]
    en donde la enfermedad alérgica es el asma bronquial o la dermatitis atópica.
  2. 2. La composición farmacéutica para el uso de la reivindicación 1, en donde la enfermedad alérgica es inducida por alimento.
  3. 3. Una composición alimenticia funcional saludable para usar en la prevención o mejora de una enfermedad alérgica, incluyendo la composición alimenticia funcional saludable un compuesto inotodiol representado por la Fórmula 1 como principio activo, [Fórmula 1]
    en donde la enfermedad alérgica es el asma bronquial o la dermatitis atópica.
  4. 4. La composición alimenticia funcional saludable para el uso de la reivindicación 3, en donde la enfermedad alérgica es inducida por alimento.
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CN112321664B (zh) * 2020-11-04 2021-08-24 北京浩鼎瑞健康科技中心(有限合伙) 提取分离纯化桦褐孔菌醇的方法
WO2023128481A1 (ko) * 2021-12-27 2023-07-06 ㈜카보엑스퍼트 이노토디올 및 이를 함유하는 차가버섯 추출물을 포함하는 피부 상태의 개선을 위한 조성물
WO2024229097A2 (en) * 2023-05-02 2024-11-07 Gerosynth Laboratories, Inc. Chaga mushroom-related formulations, chemical compounds, compositions and methods of production and use thereof
KR20250104109A (ko) * 2023-12-29 2025-07-08 (주)카보엑스퍼트 이노토디올 또는 이의 전구약물을 포함하는 호산구 증가증 또는 호산구성 염증 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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KR20060023227A (ko) 2004-09-09 2006-03-14 전현철 달콤한 새콤한 바이오 차가버섯(糖尿患者用) 침출(浸出)차
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