ES2980175T3 - Compuestos anulares fusionados en 6,5 sustituidos con diarilo como inhibidores de C5aR - Google Patents

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Abstract

La presente divulgación proporciona, entre otros, compuestos de fórmula (I) o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos que son moduladores del receptor C5a. También se proporcionan composiciones farmacéuticas y métodos de uso que incluyen el tratamiento de enfermedades o trastornos que implican la activación patológica de C5a y aplicaciones no farmacéuticas. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos anulares fusionados en 6,5 sustituidos con diarilo como inhibidores de C5aR
REFERENCIAS CRUZADAS A SOLICITUDES RELACIONADAS
La presente solicitud es una solicitud que reivindica el beneficio según 35 U.S.C. § 119(e) de la solicitud provisional de Estados Unidos N° 62/609.834, presentada el 22 de diciembre de 2017.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
El sistema del complemento desempeña un papel central en la eliminación del organismo de complejos inmunitarios y en las respuestas inmunitarias a agentes infecciosos, antígenos extraños, células infectadas por virus y células tumorales. La activación inadecuada o excesiva del sistema del complemento puede tener consecuencias dañinas e incluso potencialmente mortales debido a una inflamación grave y la destrucción del tejido resultante. Estas consecuencias se manifiestan clínicamente en diversos trastornos, incluido choque séptico; lesión miocárdica, así como intestinal, por isquemia/reperfusión; rechazo de injerto; insuficiencia orgánica; nefritis; inflamación patológica; y enfermedades autoinmunitarias.
El sistema del complemento está compuesto por un grupo de proteínas que normalmente están presentes en el suero en un estado inactivo. La activación del sistema del complemento abarca principalmente tres vías distintas, es decir, la vía clásica, la vía alternativa y la vía de la lectina (V. M. Holers, In Clinical Immunology: Principles and Practice, ed. RR Rich, Mosby Press; 1996, 363-391): 1) La vía clásica es una cascada dependiente de calcio/magnesio, que normalmente se activa mediante la formación de complejos antígeno-anticuerpo. También puede activarse de forma independiente de los anticuerpos mediante la unión de la proteína C reactiva, complejada con un ligando, y mediante muchos patógenos, incluidas las bacterias gram-negativas. 2) La vía alternativa es una cascada dependiente de magnesio que se activa mediante la deposición y activación de C3 en determinadas superficies susceptibles (por ejemplo, polisacáridos de la pared celular de levaduras y bacterias, y determinados materiales biopoliméricos). 3) La vía de la lectina implica la unión inicial de la lectina de unión a manosa y la posterior activación de C2 y C4, que son comunes a la vía clásica (Matsushita, M. et al., J. Exp. Med.176: 1497-1502 (1992); Suankratay, C. et al., J. Immunol.
160: 3006-3013 (1998)).
La activación de la vía del complemento genera fragmentos biológicamente activos de proteínas del complemento, por ejemplo anafilatoxinas C3a, C4a y C5a y complejos de ataque a membrana (MAC) C5b-9, todos los cuales median respuestas inflamatorias al afectar a la quimiotaxis de los leucocitos; activar macrófagos, neutrófilos, plaquetas, mastocitos y células endoteliales, y aumentar la permeabilidad vascular, la citólisis y la lesión tisular.
El complemento C5a es uno de los mediadores proinflamatorios más potentes del sistema del complemento. (El péptido anafiláctico C5a es 100 veces más potente, en términos molares, en provocar respuestas inflamatorias que el C3a.) C5a es la forma activada de C5 (190 kD, peso molecular). C5a está presente en el suero humano en aproximadamente 80 µg/ml * (Kohler, P. F. et al., J. Immunol.99: 1211-1216 (1967)). Está compuesto por dos cadenas polipeptídicas, α y β, con pesos moleculares aproximados de 115 kD y 75 kD, respectivamente (Tack, B. F. et al., Biochemistry 18: 1490-1497 (1979)). Biosintetizado como una promolécula monocatenaria, C5 se escinde enzimáticamente en una estructura de dos cadenas durante el procesamiento y la secreción. Después de la escisión, las dos cadenas se mantienen unidas mediante al menos un enlace disulfuro, así como por interacciones no covalentes (Ooi, Y. M. et al., J. Immunol.124: 2494-2498(1980)).
C5 se escinde en fragmentos C5a y C5b durante la activación de las vías del complemento. Las enzimas convertasas responsables de la activación de C5 son complejos de múltiples subunidades de C4b, C2a y C3b para la vía clásica y de (C3b)2, Bb y P para la vía alternativa (Goldlust, M. B. et al., J. Immunol.113: 998-1007 (1974); Schreiber, R. D. et al, Proc. Natl. Acad. Sci.75: 3948-3952 (1978)). C5 se activa por escisión en la posición 74-75 (Arg-Leu) en la cadena α. Después de la activación, se libera el péptido C5a de 74 aminoácidos y 11,2 kD de la porción amino terminal de la cadena α. Tanto C5a como C3a son potentes estimuladores de neutrófilos y monocitos (Schindler, R. et al., Blood 76: 1631-1638 (1990); Haeffner-Cavaillon, N. et al., J. Immunol. 138: 794-700 (1987); Cavaillon, J. M. et al., Eur. J. Immunol.20: 253-257 (1990)).
Además de sus propiedades anafiláxicas, C5a induce la migración quimiotáctica de neutrófilos (Ward, P. A. et al., J. Immunol.102: 93-99 (1969)), eosinófilos (Kay, A. B. et al., Immunol.24: 969- 976 (1973)), basófilos (Lett-Brown, M. A. et al., J. Immunol. 117: 246-2521976)), y monocitos (Snyderman, R. et al., Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 138: 387-390 1971)). Tanto C5a como C5b-9 activan las células endoteliales para expresar moléculas de adhesión esenciales para el secuestro de leucocitos activados, que median en la inflamación y la lesión tisular (Foreman, K. E. et al., J. Clin. Invest. 94: 1147-1155 (1994 ); Foreman, K. E. et al., Inflammation 20: 1-9 (1996); Rollins, S. A. et al., Transplantation 69: 1959-1967 (2000)). C5a también media en reacciones inflamatorias al provocar la contracción del músculo liso, aumentar la permeabilidad vascular, inducir la desgranulación de basófilos y mastocitos e inducir la liberación de proteasas lisosomales y radicales libres oxidativos (Gerard, C. et al., Ann. Rev. Inmunol.12: 775-808 (1994)). Además, C5a modula la expresión génica de fase aguda hepática y aumenta la respuesta inmunitaria general al aumentar la producción de TNF-α, IL-1-β, IL-6, IL-8, prostaglandinas y leucotrienos (Lambris, J. D. et al., en: The Human Complement System in Health and Disease, Volanakis, J. E. ed., Marcel Dekker, Nueva York, páginas 83-118).
Se cree que los efectos anafilácticos y quimiotácticos del C5a están mediados por su interacción con el receptor de C5a. El receptor de C5a humano (C5aR) es un receptor acoplado a proteína G unido a una membrana de 52 kD y se expresa en neutrófilos, monocitos, basófilos, eosinófilos, hepatocitos, células endoteliales y de músculo liso pulmonar y tejidos glomerulares renales (Van-Epps, D. E. et al., J. Immunol. 132: 2862-2867 (1984); Haviland, D. L. et al., J. Immunol. 154: 1861-1869 (1995); Wetsel, R. A., Immunol. Leff.44: 183-187 (1995); Buchner, R. R. et al., J. Immunol.
155: 308-315 (1995); Chenoweth, D. E. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 75: 3943-3947 (1978); Zwirner, J. et al., Mol. Immunol.36:877-884 (1999)). El sitio de unión al ligando de C5aR es complejo y consta de al menos dos dominios de unión físicamente separables. Uno se une al extremo amino-terminal de C5a (aminoácidos 1-20) y al núcleo unido por puentes disulfuro (aminoácidos 21-61), mientras que el segundo se une al extremo carboxi-terminal de C5a (aminoácidos 62-74) (Wetsel, R. A., Curr. Opin. Inmunol.7: 48-53 (1995)).
C5a desempeña un papel importante en la inflamación y la lesión tisular. En la derivación cardiopulmonar y la hemodiálisis, C5a se forma como resultado de la activación de la vía alternativa del complemento cuando la sangre humana entra en contacto con la superficie artificial de la máquina cardiopulmonar o de la máquina de diálisis renal (Howard, R. J. et al., Arch. Surg.123: 1496-1501 (1988); Kirklin, J. K. et al., J. Cardiovasc. Surg.86: 845-857 (1983); Craddock, P. R. et al., N. Engl. J. Med. 296: 769-774 (1977)). C5a provoca el aumento de la permeabilidad capilar y edema, broncoconstricción, vasoconstricción pulmonar, activación de leucocitos y plaquetas e infiltración en los tejidos, en particular el pulmón (Czermak, B. J. et al., J. Leukoc. Biol. 64: 40-48 (1998)). Se ha demostrado que la administración de un anticuerpo monoclonal anti-C5a reduce la derivación cardiopulmonar y la disfunción endotelial coronaria inducida por cardioplejía (Tofukuji, M. et al., J. Thorac. Cardiovasc. Surg.116: 1060-1068 (1998)).
C5a también está involucrado en el síndrome de dificultad respiratoria aguda (SDRA), el trastorno pulmonar obstructivo crónico (EPOC) y la insuficiencia orgánica múltiple (MOF) (Hack, C. E. et al., Am. J. Med. 1989: 86: 20-26; Hammerschmidt DE et al. Lancet 1980; 1: 947-949; Heideman M. et al. J. Trauma 1984; 4: 1038-1043; Marc, MM, et al., Am. J. Respir. Cell and Mol. Biol., 2004: 31: 216-219). C5a aumenta la producción de monocitos de dos importantes citocinas proinflamatorias, TNF-α e IL-1. También se ha demostrado que C5a desempeña un papel importante en el desarrollo de lesión tisular, y particularmente lesión pulmonar, en modelos animales de choque séptico (Smedegard G et al. Am. J. Pathol.1989; 135: 489-497; Markus, S., et al., FASEB Journal (2001), 15: 568-570). En modelos de sepsis que utilizan ratas, cerdos y primates no humanos, los anticuerpos anti-C5a administrados a los animales antes del tratamiento con endotoxina o E. coli dieron como resultado una disminución de la lesión tisular, así como una disminución en la producción de IL-6 (Smedegard, G. et al., Am. J. Pathol.135: 489-497 (1989); Hopken, U. et al., Eur. J. Immunol.26: 1103-1109 (1996); Stevens, J. H. et al., J. Clin. Invest.77: 1812-1816 (1986)). Más importante aún, se ha demostrado que el bloqueo de C5a con anticuerpos policlonales anti-C5a mejora significativamente las tasas de supervivencia en un modelo de ligadura/punción cecal de sepsis en ratas (Czermak, B.J. et al., Nat. Med. 788-792 (1999)). Este modelo comparte muchos aspectos de la manifestación clínica de sepsis en seres humanos. (Parker, S.J. et al., Br. J. Surg. 88: 22-30 (2001)). En el mismo modelo de sepsis, se demostró que los anticuerpos anti-C5a inhiben la apoptosis de los timocitos (Guo, R.F. et al., J. Clin. Invest.106: 1271-1280 (2000)) y previenen MOF (Huber-Lang, M. et al., J. Immunol.166: 1193-1199 (2001)). Los anticuerpos anti-C5a también fueron protectores en un modelo de factor de veneno de cobra de lesión pulmonar en ratas, y en lesión pulmonar inducida por complejos inmunitarios (Mulligan, M. S. et al. J. Clin. Invest. 98: 503-512 (1996)). La importancia de C5a en la lesión pulmonar mediada por complejos inmunitarios se confirmó posteriormente en ratones (Bozic, C. R. et al., Science 26: 1103-1109 (1996)).
Se ha descubierto que C5a es un mediador importante en la lesión por isquemia-reperfusión del miocardio. El agotamiento del complemento redujo el tamaño del infarto de miocardio en ratones (Weisman, H. F. et al., Science 249: 146-151 (1990)), y el tratamiento con anticuerpos anti-CSa redujo la lesión en un modelo de rata de isquemiareperfusión de las extremidades posteriores (Bless, N. M. et al., Am. J. Physiol. 276: L57-L63 (1999)). La lesión por reperfusión durante el infarto de miocardio también se redujo notablemente en cerdos que fueron tratados nuevamente con una IgG monoclonal anti-C5a (Ámsterdam, E. A. et al., Am. J. Physiol.268:H448-H457 (1995)). Un antagonista de C5aR humano recombinante reduce el tamaño del infarto en un modelo porcino de revascularización quirúrgica (Riley, R. D. et al., J. Thorac. Cardiovasc. Surg.120: 350-358 (2000)).
Los neutrófilos estimulados por C5a también contribuyen a muchas enfermedades ampollosas (por ejemplo, penfigoide ampolloso, pénfigo vulgar y pénfigo foliáceo). Se trata de trastornos inflamatorios crónicos y recurrentes caracterizados clínicamente por ampollas estériles que aparecen en el espacio subepidérmico de la piel y las mucosas. Si bien se cree que los autoanticuerpos contra los queratinocitos ubicados en las membranas basales cutáneas subyacen al desprendimiento de los queratinocitos basales epidérmicos de la membrana basal subyacente, las ampollas también se caracterizan por la acumulación de neutrófilos tanto en las capas dérmicas superiores como dentro de las cavidades de las ampollas. En modelos experimentales, una reducción de neutrófilos o la ausencia de complemento (total o selectiva para CS) puede inhibir la formación de ampollas subepidérmicas, incluso en presencia de títulos elevados de autoanticuerpos.
Los niveles de complemento se encuentran elevados en pacientes con artritis reumatoide (Jose, P. J. et al., Ann. Rheum. Dis.49: 747-752 (1990); Grant, E.P., et al., J. of Exp. Med., 196(11): 1461-1471, (2002)), nefritis lúpica (Bao, L., et al., Eur. J. of Immunol., 35(8), 2496-2506, (2005)) y lupus eritematoso sistémico (LES) (Porcel, J. M. et al., Clin. Immunol. Immunopathol. 74: 283-288 (1995)). Los niveles de C5a se correlacionan con la gravedad del estado patológico. La artritis inducida por colágeno en ratones y ratas se parece a la enfermedad artrítica reumatoide en seres humanos. Los ratones deficientes en el receptor de C5a mostraron una protección completa contra la artritis inducida por inyección de anticuerpos anticolágeno monoclonales (Banda, N.K., et al., J. of Immunol., 2003, 171: 2109-2115). Por lo tanto, la inhibición de C5a y/o del receptor de C5a (C5aR) podría ser útil en el tratamiento de estas enfermedades crónicas.
Se cree que el sistema del complemento se activa en pacientes con enfermedad inflamatoria intestinal (EII) y se cree que desempeña un papel en la patogénesis de la enfermedad. Se encontraron productos del complemento activados en la cara luminal de células epiteliales de la superficie, así como en la mucosa muscular y los vasos sanguíneos submucosos en pacientes con EII (Woodruff, T.M., et al., J of Immunol., 2003, 171: 5514-5520).
La expresión de C5aR se regula al alza en astrocitos reactivos, microglía y células endoteliales en un sistema nervioso central humano inflamado (Gasque, P. et al., Am. J. Pathol. 150: 31-41 (1997)). C5a podría estar implicado en enfermedades neurodegenerativas, tal como la enfermedad de Alzheimer (Mukherjee, P. et al., J. Neuroimmunol. 105: 124-130 (2000); O'Barr, S. et al., J. Neuroimmunol. (2000) 105: 87-94; Farkas, I., et al. J. Immunol. (2003) 170:5764-5771), enfermedad de Parkinson, enfermedad de Pick y encefalopatías espongiformes transmisibles. La activación del C5aR neuronal puede inducir la apoptosis (Farkas I et al. J. Physiol.1998; 507: 679-687). Por lo tanto, la inhibición de C5a y/o C5aR también podría ser útil en el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas.
Existe cierta evidencia de que la producción de C5a empeora la inflamación asociada con la dermatitis atópica (Neuber, K., et al., Immunology 73:83-87, (1991)) y la urticaria crónica (Kaplan, A.P., J. Allergy Clin. Immunol. 114; 465-474, (2004).
Ahora se sabe que la psoriasis es una enfermedad mediada por células T (Gottlieb, E. L. et al., Nat. Med.1: 442-447 (1995)). Sin embargo, los neutrófilos y los mastocitos también pueden estar implicados en la patogénesis de la enfermedad (Terui, T. et al., Exp. Dermatol. 9: 1-10; 2000); Werfel, T. et al., Arch. Dermatol. Res. 289: 83-86 (1997)). La acumulación de neutrófilos debajo del estrato córneo se observa en las zonas altamente inflamadas de las placas psoriásicas, y los extractos de lesiones psoriásicas (escamas) contienen niveles muy elevados de C5a y muestran una potente actividad quimiotáctica hacia los neutrófilos, un efecto que puede inhibirse mediante la adición de un anticuerpo C5a. Las células T y los neutrófilos son quimioatraídos por C5a (Nataf, S. et al., J. Immunol. 162: 4018-4023 (1999); Tsuji, R. F. et al., J. Immunol.165: 1588-1598 (2000); Cavaillon, J. M. et al., Eur. J. Immunol.20: 253-257 (1990)). Además, se ha demostrado la expresión de C5aR en células dendríticas plasmocitoides (pDC) aisladas de lesiones de lupus eritematoso cutáneo y se demostró que estas células muestran un comportamiento quimiotáctico hacia C5a, lo que sugiere que el bloqueo de C5aR en pDC podría ser eficaz para reducir la infiltración de pDC en la piel inflamada, tanto en LES como en psoriasis. Por lo tanto, C5a podría ser una diana terapéutica importante para el tratamiento de la psoriasis.
Los complejos inmunitarios (CI) que contienen inmunoglobulina G contribuyen a la fisiopatología de una serie de enfermedades autoinmunitarias, como el lupus eritematoso sistémico, la artritis reumatoide, la enfermedad de Sjogren, el síndrome de Goodpasture y la neumonitis por hipersensibilidad (Madaio, M. P., Semin. Nephrol. 19: 48-56 (1999); Korganow, A. S. et al., Immunity 10: 451-459 (1999); Bolten, W. K., Kidney Int. 50: 1754-1760 (1996); Ando, M. et al., Curr. Opin. Pulm. Med.3: 391-399 (1997)). Estas enfermedades son muy heterogéneas y generalmente afectan a uno o más de los siguientes órganos: piel, vasos sanguíneos, articulaciones, riñones, corazón, pulmones, sistema nervioso e hígado (incluidas la cirrosis y la fibrosis hepática). El modelo animal clásico para la respuesta inflamatoria en estas enfermedades del CI es la reacción de Arthus, que presenta infiltración de células polimorfonucleares, hemorragia y exudación de plasma (Arthus, M., C.R. Soc. Biol. 55: 817-824 (1903)). Estudios recientes muestran que los ratones con deficiencia de C5aR están protegidos de lesión tisular inducida por CI (Kohl, J. et al., Mol. Inmunol. 36: 893-903 (1999); Baumann, U. et al., J. Immunol. 164: 1065-1070 (2000)). Los resultados concuerdan con la observación de que un pequeño antagonista peptídico anti-C5aR inhibe la respuesta inflamatoria provocada por la deposición de CI (Strachan, A. J. et al., J. Immunol.164: 6560-6565 (2000)). Junto con su receptor, C5a desempeña un papel importante en la patogénesis de las enfermedades del CI. Los inhibidores de C5a y C5aR podrían resultar útiles para tratar estas enfermedades.
Descripción de la técnica relacionada:
Se ha informado que los antagonistas del receptor de C5a no basados en péptidos son eficaces para tratar el choque endotóxico en ratas (Stracham, A.J., et al., J. of Immunol. (2000), 164(12): 6560-6565); y para tratar EII en un modelo de rata (Woodruff, T.M., et al., J of Immunol., 2003, 171: 5514-5520). También se han descrito moduladores del receptor de C5a no basados en péptidos en la literatura de patentes de Neurogen Corporation (por ejemplo, los documentos WO2004/043925, WO2004/018460, WO2005/007087, WO03/082826, WO03/08828, WO02/49993, WO03/084524); Dompe S.P.A. (documento WO02/029187); la Universidad de Queensland (documento WO2004/100975); y ChemoCentryx (documento WO2010/075257). El documento WO2013/016197 divulga compuestos de tetrahidropiridopiridina y tetrahidropiridopirimidina y su uso como moduladores del receptor de C5A.
Existe una considerable evidencia experimental en la literatura que involucra niveles elevados de C5a con una serie de enfermedades y trastornos, en particular en enfermedades y trastornos autoinmunitarios e inflamatorios. Por lo tanto, sigue existiendo una necesidad en la técnica de nuevos moduladores de moléculas orgánicas pequeñas, por ejemplo, agonistas, preferentemente antagonistas, agonistas parciales, del receptor de C5a (C5aR) que sean útiles para inhibir eventos patógenos, por ejemplo, quimiotaxis, asociados con niveles aumentados de actividad de anafilatoxina. La presente invención satisface esta y otras necesidades.
BREVE SUMARIO DE LA INVENCIÓN
En un aspecto, la presente invención proporciona compuestos de fórmula (I):
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en la que los símbolos, letras y subíndices n, m, a, b, e, X<1>, R<1>, R<2a>, R<2b>, R<3>, R<4>y R<5>tienen los significados proporcionados en la descripción siguiente.
Además de los compuestos proporcionados en el presente documento, la presente invención proporciona además composiciones farmacéuticas que contienen uno o más de estos compuestos, así como procedimientos para el uso de estos compuestos en procedimientos terapéuticos, principalmente para tratar enfermedades asociadas con la actividad de señalización de C5a.
En otro aspecto más, la presente invención proporciona compuestos para su uso en procedimientos de diagnóstico de enfermedades en un individuo. En estos procedimientos, los compuestos proporcionados en el presente documento se administran en forma marcada a un sujeto, seguido de formación de imágenes de diagnóstico para determinar la presencia o ausencia de C5aR y/o la localización de células que expresan un receptor C5aR. En un aspecto relacionado, los compuestos se usan en un procedimiento de diagnóstico de enfermedades que se lleva a cabo poniendo en contacto una muestra de tejido o sangre con un compuesto marcado tal como se proporciona en el presente documento y determinando la presencia, ausencia, cantidad o localización de C5aR en la muestra.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS NO APLICABLE DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
I. Abreviaturas y definiciones
El término "alquilo", por sí mismo o como parte de otro sustituyente, significa, a menos que se indique lo contrario, un radical hidrocarburo de cadena lineal o ramificada, que tiene el número de átomos de carbono designado (es decir, C1-8significa de uno a ocho carbonos). Los ejemplos de grupos alquilo incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, nbutilo, t-butilo, isobutilo, sec-butilo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo y similares. El término "alquenilo" se refiere a un grupo alquilo insaturado que tiene uno o más enlaces dobles. De forma similar, el término "alquinilo" se refiere a un grupo alquilo insaturado que tiene uno o más enlaces triples. Los ejemplos de dichos grupos alquilo insaturados incluyen vinilo, 2-propenilo, crotilo, 2-isopentenilo, 2-(butadienilo), isobutenilo, 2,4-pentadienilo, 3-(1,4-pentadienilo), etinilo, 1- y 3- propinilo, 3-butinilo y los homólogos e isómeros superiores. El término "cicloalquilo" se refiere a anillos de hidrocarburos que tienen el número indicado de átomos de anillo (por ejemplo, cicloalquilo C3-6) y que están completamente saturados o que no tienen más de un doble enlace entre los vértices del anillo. "Cicloalquilo" también se refiere a anillos de hidrocarburos bicíclicos y policíclicos tales como, por ejemplo, biciclo[2.2.1]heptano, biciclo[2.2.2]octano, etc. El término "heterocicloalquilo" se refiere a un grupo cicloalquilo que contiene de uno a cinco heteroátomos seleccionados entre N, O y S, en el que los átomos de nitrógeno y azufre están opcionalmente oxidados, y el átomo o los átomos de nitrógeno están opcionalmente cuaternizados. El heterocicloalquilo puede ser un sistema anular monocíclico, bicíclico o policíclico. Los ejemplos no limitantes de grupos heterocicloalquilo incluyen pirrolidina, imidazolidina, pirazolidina, butirolactama, valerolactama, imidazolidinona, hidantoína, dioxolano, ftalimida, piperidina, 1,4-dioxano, morfolina, tiomorfolina, S-óxido de tiomorfolina, S,S-óxido de tiomorfolina, piperazina, pirano, piridona, 3-pirrolina, tiopirano, pirona, tetrahidrofurano, tetrahidrotiofeno, quinuclidina y similares. Un grupo heterocicloalquilo puede unirse al resto de la molécula a través de un carbono del anillo o un heteroátomo.
El término "alquileno" por sí mismo o como parte de otro sustituyente significa un radical divalente derivado de un alcano, tal como se ejemplifica mediante -CH2CH2CH2CH2-. Normalmente, un grupo alquilo (o alquileno) tendrá de 1 a 24 átomos de carbono, prefiriéndose en la presente invención aquellos grupos que tengan 10 o menos átomos de carbono. Un "alquilo inferior" o "alquileno inferior" es un grupo alquilo o alquileno de cadena más corta, que generalmente tiene cuatro o menos átomos de carbono. De forma similar, "alquenileno" y "alquinileno" se refieren a las formas insaturadas de "alquileno" que tienen enlaces dobles o triples, respectivamente.
El término "heteroalquilo", por sí mismo o en combinación con otro término, significa, a menos que se indique lo contrario, un radical hidrocarburo estable de cadena lineal o ramificada o cíclico, o combinaciones de los mismos, que consta del número indicado de átomos de carbono y de uno a tres heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en O, N, Si y S, y en el que los átomos de nitrógeno y azufre pueden estar opcionalmente oxidados y el heteroátomo de nitrógeno puede estar opcionalmente cuaternizado. El heteroátomo o los heteroátomos O, N y S pueden estar ubicados en cualquier posición interior del grupo heteroalquilo. El heteroátomo Si puede estar ubicado en cualquier posición del grupo heteroalquilo, incluida la posición en la que el grupo alquilo está unido al resto de la molécula. Los ejemplos incluyen -CH2-CH2-O-CH3, -CH2-CH2-NH-CH3, -CH2-CH2-N(CH3)-CH3, -CH2-S-CH2-CH3, - CH2-CH2,-S(O)-CH3, -CH2-CH2-S(O)2-CH3, -CH=CH-O-CH3, -Si(CH3)3, -CH2-CH=N-OCH3y -CH=CH-N(CH3)-CH3. Hasta dos heteroátomos pueden ser consecutivos, tales como, por ejemplo, -CH2-NH-OCH3y -CH2-O-Si(CH3)3. De forma similar, los términos "heteroalquenilo" y "heteroalquinilo" por sí mismos o en combinación con otro término, significan, a menos que se indique lo contrario, un grupo alquenilo o grupo alquinilo, respectivamente, que contiene el número indicado de carbonos y que tiene de uno a tres heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en O, N, Si y S, y en los que los átomos de nitrógeno y azufre pueden estar opcionalmente oxidados y el heteroátomo de nitrógeno puede estar opcionalmente cuaternizado. El heteroátomo o los heteroátomos O, N y S pueden estar ubicados en cualquier posición interior del grupo heteroalquilo.
El término "heteroalquileno" por sí mismo o como parte de otro sustituyente significa un radical divalente, saturado o insaturado o poliinsaturado, derivado de heteroalquilo, tal como se ejemplifica mediante -CH2-CH2-S-CH2CH2- y -CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-, -O-CH2-CH=CH-, -CH2-CH=C(H)CH2-O-CH2- y -S-CH2-C≡C-. Para los grupos heteroalquileno, los heteroátomos también pueden ocupar uno o ambos extremos de la cadena (por ejemplo, alquilenoxi, alquilendioxi, alquilenamino, alquilendiamino y similares).
Los términos "alcoxi", "alquilamino" y "alquiltio" (o tioalcoxi) se utilizan en su sentido convencional y se refieren a aquellos grupos alquilo unidos al resto de la molécula mediante un átomo de oxígeno, un grupo amino o un átomo de azufre, respectivamente. Además, para los grupos dialquilamino, las porciones alquilo pueden ser iguales o diferentes y también pueden combinarse para formar un anillo de 3 a 7 miembros con el átomo de nitrógeno al que cada una está unida. En consecuencia, un grupo representado como -NR<a>R<b>incluye piperidinilo, pirrolidinilo, morfolinilo, azetidinilo y similares.
El término "hidroxialquilo" se usa en su sentido convencional y se refiere a un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada sustituido con al menos un grupo hidroxilo. El grupo hidroxilo puede estar en cualquier posición del grupo alquilo. Por ejemplo, el término "hidroxilalquilo C1-4" incluye hidroximetilo, hidroxietilo, hidroxipropilo, hidroxiisopropilo y similares.
Los términos "halo" o "halógeno", por sí mismos o como parte de otro sustituyente, significan, a menos que se indique lo contrario, un átomo de flúor, cloro, bromo o yodo. Además, términos tales como "haloalquilo" incluyen monohaloalquilo y polihaloalquilo. Por ejemplo, el término "haloalquilo C1-4" incluye trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 4-clorobutilo, 3-bromopropilo y similares.
El término "arilo" significa, a menos que se indique lo contrario, un grupo hidrocarburo poliinsaturado, típicamente aromático, que puede ser un único anillo o múltiples anillos (hasta tres anillos) que están fusionados o unidos covalentemente. El término "heteroarilo" se refiere a grupos (o anillos) arilo que contienen de uno a cinco heteroátomos seleccionados de entre N, O y S, en los que los átomos de nitrógeno y azufre están opcionalmente oxidados, y el átomos o los átomos de nitrógeno están opcionalmente cuaternizados. Un grupo heteroarilo puede unirse al resto de la molécula a través de un heteroátomo. Los ejemplos no limitantes de grupos arilo incluyen fenilo, naftilo y bifenilo, mientras que los ejemplos no limitantes de grupos heteroarilo incluyen piridilo, piridazinilo, pirazinilo, pirimindinilo, triazinilo, quinolinilo, quinoxalinilo, quinazolinilo, cinnolinilo, ftalaziniilo, benzotriazinilo, purinilo, bencimidazolilo, benzopirazolilo, benzooxazolilo, benzotriazolilo, benzoisoxazolilo, isobenzofurilo, isoindolilo, indolizinilo, benzotriazinilo, tienopiridinilo, tienopirimidinilo, pirazolopirimidinilo, pirrolopiridilo, imidazopiridinas, benzotiaxolilo, benzofuranilo, benzotienilo, indolilo, quinolilo, quinolilo, isotiazolilo, pirazolilo, indazolilo, pteridinilo, imidazolilo, triazolilo, tetrazolilo , oxazolilo, isoxazolilo, tiadiazolilo, pirrolilo, tiazolilo, furilo, tienilo y similares. Los sustituyentes para cada uno de los sistemas anulares de arilo y heteroarilo mencionados anteriormente se seleccionan del grupo de sustituyentes aceptables que se describen a continuación.
El término "sales farmacéuticamente aceptables" incluye sales de los compuestos activos que se preparan con ácidos o bases relativamente no tóxicos, dependiendo de los sustituyentes particulares que se encuentran en los compuestos descritos en el presente documento. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente ácidas, se pueden obtener sales de adición de bases poniendo en contacto la forma neutra de dichos compuestos con una cantidad suficiente de la base deseada, ya sea pura o en un disolvente inerte adecuado. Ejemplos de sales derivadas de bases inorgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen aluminio, amonio, calcio, cobre, férrico, ferroso, litio, magnesio, mangánico, manganoso, potasio, sodio, zinc y similares. Las sales derivadas de bases orgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, incluidas aminas sustituidas, aminas cíclicas, aminas naturales y similares, tales como arginina, betaína, cafeína, colina, N,N'-dibenciletilendiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilendiamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperadina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina y similares. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente básicas, se pueden obtener sales de adición de ácidos poniendo en contacto la forma neutra de dichos compuestos con una cantidad suficiente del ácido deseado, ya sea puro o en un disolvente inerte adecuado. Los ejemplos de sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables incluyen aquellas derivadas de ácidos inorgánicos tales como los ácidos clorhídrico, bromhídrico, nítrico, carbónico, monohidrógenocarbónico, fosfórico, monohidrogenofosfórico, dihidrogenofosfórico, sulfúrico, monohidrogenosulfúrico, yodhídrico o fosfórico y similares, así como las sales derivadas de ácidos orgánicos relativamente no tóxicos tales como acético, propiónico, isobutírico, malónico, benzoico, succínico, subérico, fumárico, mandélico, ftálico, bencenosulfónico, p-tolilsulfónico, cítrico, tartárico, metanosulfónico y similares. También se incluyen sales de aminoácidos tales como arginato y similares, y sales de ácidos orgánicos tales como ácidos glucurónico o galactunórico y similares (véase, por ejemplo, Berge, S.M., et al, "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19). Determinados compuestos específicos de la presente invención contienen funcionalidades tanto básicas como ácidas que permiten que los compuestos se conviertan en sales de adición de bases o de ácidos.
Las formas neutras de los compuestos se pueden regenerar poniendo en contacto la sal con una base o ácido y aislando el compuesto original de la manera convencional. La forma original del compuesto difiere de las diversas formas de sal en determinadas propiedades físicas, tales como la solubilidad en disolventes polares, pero por lo demás las sales son equivalentes a la forma original del compuesto para los fines de la presente invención.
Determinados compuestos de la presente invención pueden existir en formas no solvatadas así como en formas solvatadas, incluidas formas hidratadas. En general, las formas solvatadas son equivalentes a las formas no solvatadas y se pretende que estén incluidas dentro del alcance de la presente invención. Determinados compuestos de la presente invención pueden existir en múltiples formas cristalinas o amorfas. En general, todas las formas físicas son equivalentes para los usos contemplados por la presente invención, y se pretende que se encuentren dentro del alcance de la presente invención.
Determinados compuestos de la presente invención poseen átomos de carbono asimétricos (centros ópticos) o dobles enlaces; se pretende que todos los racematos, diastereómeros, isómeros geométricos, regioisómeros e isómeros individuales (por ejemplo, enantiómeros separados) estén incluidos dentro del alcance de la presente invención. Los compuestos de la presente invención también pueden contener proporciones no naturales de isótopos atómicos en uno o más de los átomos que constituyen dichos compuestos. Por ejemplo, los compuestos pueden estar radiomarcados con isótopos radiactivos, tal como por ejemplo tritio (<3>H), yodo-125 (<125>I) o carbono-14 (<14>C). Se pretende que todas las variaciones isotópicas de los compuestos de la presente invención, ya sean radiactivas o no, estén incluidas dentro del alcance de la presente invención.
Tal como se utiliza en el presente documento, una línea ondulada, "
", que intersecta un enlace simple, doble o triple en cualquier estructura química representada en el presente documento, representa el punto de unión del enlace simple, doble o triple al resto de la molécula.
II. Descripción de las formas de realización
A. Compuestos
En un aspecto, la presente invención proporciona compuestos de fórmula (I):
a sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en los que,
el vértice de anillo a es N o C(R<2c>), el vértice de anillo b es N o C(R<2d>), y el vértice de anillo e es N o C(R<2e>), en los que no más de uno de a, b y e es N;
X<1>se selecciona del grupo que consiste en un enlace, alquileno C1-8, C(O), C(O)-alquileno C1-4y S(O)2; R<1>se selecciona del grupo que consiste en
a) heteroarilo de 5 a 10 miembros que tiene de 1 a 4 heteroátomos como vértices de anillo seleccionados de entre N, O y S;
b) arilo C6-10
c) cicloalquilo C3-8;
d) heterocicloalquilo de 4 a 8 miembros que tiene de 1 a 2 heteroátomos como vértices de anillo seleccionados de entre N, O y S; y
e) alquilo C1-8, alcoxi C1-8, haloalquilo C1-8, -C(O)NR<1a>R<1b>y -CC2R<1a>; en los que R<1a>y R<1b>se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-8, arilo C6-10y -alquilen C1-6-arilo C6-10; en los que el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 5 sustituyentes R<x>;
R<2a>y R<2e>se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, haloalquilo C1-6,-O-haloalquilo C1-6, -S-alquilo C1-6, -alquil C1-6-O-alquilo C1-6, -alquil C1-6-S-alquilo C1-6, CN y halógeno, y al menos uno de R<2a>y R<2e>es distinto de hidrógeno;
R<2b>, R<2c>y R<2d>se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, haloalquilo C1-6, -O-haloalquilo C1-6, -S-alquilo C1-6, -alquil C1-6-O-alquilo C1-6, -alquil C1-6-S-alquilo C1-6, ciano y halógeno;
cada R<3>se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidroxilo, alquilo C1-4, haloalquilo C1-4e hidroxialquilo C1-4, y opcionalmente dos grupos R<3>en el mismo átomo de carbono se combinan para formar oxo (=O), y opcionalmente dos grupos R<3>y los átomos de carbono a los que están unidos forman un anillo de 3 a 6 miembros con 0 a 2 heteroátomos como miembros del anillo seleccionados de entre O, N y S; R<4>se selecciona independientemente del grupo que consiste en -X<2>-OR<4a>, -X<2>-NR<4a>R<4b>, -X<2>-CONR<4a>R<4b>, -X<2>-NR<4a>_C(O)R<4a>, -X<2>-NR<4a>-C(O)NR<4a>R<4b>, -X<2>-NR<4a>-C(O)OR<4a>,
-X<2>-NR<4a>-C(O)-C1-3alquileno-OR<4a>y -X<2>-NR<4a>-C(O)-alquilen C1-3-NR<4a>R<4b>; en los que cada X<2>es independientemente un enlace, C(O), alquileno C1-4, C(O)-alquileno C1-4y alquilen C1-4-C(O), y cada R<4a>y R<4b>se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-4y haloalquilo C1-4; cada R<5>se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-8, alcoxi C1-8, haloalquilo C1-8, haloalcoxi C1-8, hidroxialquilo C1-8, halógeno, OH, CN, C(O)R<5a>y CO2R<5a>; en los que cada R<5a>se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-4y haloalquilo C1-4;
cada R<x>se selecciona independientemente del grupo que consiste en halógeno, CN, alquilo C1-4, alcoxi C1-4, haloalquilo C1-4, haloalcoxi C1-4, hidroxi C1-4, alquenilo C2-4, cicloalquilo C3-6, CO2-alquilo C1-4y CONH2; el subíndice m es 0, 1, 2, 3 o 4; y
el subíndice n es 0, 1, 2 o 3.
En un grupo de formas de realización para los compuestos de fórmula (I), R<4>se selecciona del grupo que consiste en
En otro grupo de formas de realización para los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, R<4>se selecciona del grupo que consiste en
En otro grupo más de formas de realización para los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, R<4>se selecciona del grupo que consiste en
Con referencia a los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, así como cualquiera de los grupos de formas de realización mencionados anteriormente, en determinadas formas de realización seleccionadas, X<1>es un enlace; en otras formas de realización seleccionadas, X<1>es C(O); en otras formas de realización seleccionadas más, X<1>es alquileno C1-8; en otras formas de realización seleccionadas más, X<1>es C(O)-alquileno C1-4o S(O)2.
Con referencia a los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, así como cualquiera de los grupos o formas de realización seleccionadas mencionadas anteriormente, en algunas formas de realización adicionales, R<1>es un heteroarilo de 5 a 10 miembros que tiene de 1 a 4 heteroátomos como vértices de anillo seleccionados de entre N, O y S; y el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes R<x>. En otras formas de realización más, R<1>se selecciona del grupo que consiste en pirazolilo, piridilo, pirimidinilo, imidazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo y pirazinilo; y el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes R<x>.
Con referencia a los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, así como cualquiera de los grupos o formas de realización seleccionadas mencionadas anteriormente, en algunas formas de realización adicionales, R<1>es C6-10arilo; y el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes R<x>. En otras formas de realización más, R<1>es fenilo; y el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes R<x>.
Con referencia a los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, así como cualquiera de los grupos o formas de realización seleccionadas mencionadas anteriormente, en algunas formas de realización adicionales, R<1>es cicloalquilo C3-8; y el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes R<x>. En otras formas de realización más, R<1>se selecciona del grupo que consiste en ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo; y el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes R<x>.
Con referencia a los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, así como cualquiera de los grupos o formas de realización seleccionadas mencionadas anteriormente, en algunas formas de realización adicionales, R<1>es un heterocicloalquilo de 4 a 8 miembros que tiene de 1 a 2 heteroátomos como vértices de anillo seleccionados de entre N, O y S; y el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes R<x>. En otras formas de realización seleccionadas más, R<1>se selecciona del grupo que consiste en oxetanilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo y morfolinilo; y el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes R<x>.
Con referencia a los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, así como cualquiera de los grupos o formas de realización seleccionadas mencionadas anteriormente, en algunas formas de realización adicionales, R<1>se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-8, alcoxi C1-8, haloalquilo C1-8, -C(O)NR<1a>R<1b>y -CO2R<1a>; en los que R<1a>y R<1b>se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-8, arilo C6-10y -alquilen C1-6-arilo C6-10; y el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes R<x>.
Con referencia a los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, así como cualquiera de los grupos o formas de realización seleccionadas mencionadas anteriormente, en algunas formas de realización adicionales, R<1>se selecciona del grupo que consiste en fenilo, piridilo, pirimidinilo, y pirazinilo; y el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes R<x>.
Con referencia a los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, así como a cualquiera de las formas de realización mencionadas anteriormente, en algunas formas de realización adicionales, los vértices de anillo a y b son CH; R<2b>es H; el vértice de anillo e es C(R<2e>), y R<2a>y R<2e>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-6, alcoxi C1-6, haloalquilo C1-6, -O-haloalquilo C1-6, -S-alquilo C1-6, -alquil C1-6-O-alquilo C1-6, -alquilo C1-6-S-alquilo C1-6, CN y halógeno.
Con referencia a los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, así como a cualquiera de las formas de realización mencionadas anteriormente, en algunas formas de realización adicionales, los vértices de anillo a y b son CH; R<2b>es H; el vértice de anillo e es C(R<2e>), y R<2a>y R<2e>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-6, alcoxi C1-6y halógeno.
Con referencia a los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, así como a cualquiera de las formas de realización mencionadas anteriormente, en algunas formas de realización adicionales, el subíndice n es 0, 1 o 2 y cada R<5>, cuando está presente, se selecciona del grupo que consiste en F, Cl, CN, alquilo C1-4y alcoxi C1-4. En otras formas de realización seleccionadas más, el subíndice n es 0, 1 o 2 y cada R<5>, cuando está presente, se selecciona del grupo que consiste en F, Cl, CN, CH3y OCH3.
Con referencia a los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, así como a cualquiera de las formas de realización mencionadas anteriormente, en algunas formas de realización adicionales, el subíndice m es 0, 1 o 2 y cada R<3>, cuando está presente, es alquilo C1-4.
En un grupo particular de formas de realización de los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, R<1>se selecciona del grupo que consiste en fenilo o piridilo, el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes R<x>; los vértices de anillo a y b son CH; R<2b>es H; el vértice de anillo e es C(R<2e>), y R<2a>y R<2e>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-6, alcoxi C1-6y halógeno; m es 0, 1 o 2 y cada R<3>, cuando está presente, es CH3; R<4>se selecciona del grupo que consiste en
n es 0, 1 o 2 y cada R<5>, cuando está presente, se selecciona del grupo que consiste en F, Cl, CN, CH3y OCH3. En algunas formas de realización de los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, R<1>se selecciona del grupo que consiste en
En algunas formas de realización de los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, -X<1>-R<1>se selecciona del grupo que consiste en:
En algunas formas de realización de los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, R<1>se selecciona del grupo que consiste en:
En algunas formas de realización de los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, R<1>se selecciona del grupo que consiste en:
En algunas formas de realización de los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, R<1>se selecciona del grupo que consiste en:
Con referencia a los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, así como a cualquiera de las formas de realización mencionadas anteriormente, en algunas formas de realización adicionales, el grupo
se selecciona del grupo que consiste en
Con referencia a los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, así como cualquiera de las formas de realización mencionadas anteriormente, en algunas formas de realización adicionales, n es 0.
Con referencia a los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, así como a cualquiera de las formas de realización mencionadas anteriormente, en algunas formas de realización adicionales, el subíndice n es 2 y los dos grupos R<3>están en el mismo átomo de carbono y se combinan para formar oxo (=O).
En algunas formas de realización seleccionadas, en el presente documento se proporciona un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En algunas formas de realización, el compuesto de fórmula (I) es un compuesto descrito en la sección de ejemplos y las tablas adjuntas.
Preparación de compuestos
Determinados compuestos de la invención se pueden preparar siguiendo la metodología descrita en la sección de Ejemplos del presente documento. Además, también se describen las síntesis de determinados compuestos intermedios que son útiles en la preparación de compuestos de la invención.
B. Composiciones farmacéuticas
Además de los compuestos proporcionados anteriormente, las composiciones para modular la actividad de C5a en humanos y animales contendrán normalmente un vehículo o diluyente farmacéutico.
El término "composición", tal como se utiliza en el presente documento, se pretende que abarque un producto que comprende los ingredientes especificados en las cantidades especificadas, así como cualquier producto que resulte, directamente o indirectamente, de la combinación de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas. Por "farmacéuticamente aceptable" se entiende que el vehículo, diluyente o excipiente debe ser compatible con los demás ingredientes de la formulación y no perjudicial para el receptor de la misma.
Las composiciones farmacéuticas para la administración de los compuestos de la presente invención pueden presentarse convenientemente en forma de dosificación unitaria y pueden prepararse mediante cualquiera de los procedimientos bien conocidos en la técnica de la farmacia y la administración de fármacos. Todos los procedimientos incluyen la etapa de asociar el principio activo con el vehículo, que constituye uno o más ingredientes accesorios. En general, las composiciones farmacéuticas se preparan asociando de manera uniforme e íntima el principio activo con un vehículo líquido o un vehículo sólido finamente dividido, o ambos, y después, si es necesario, dando forma al producto en la formulación deseada. En la composición farmacéutica, el compuesto objeto activo se incluye en una cantidad suficiente para producir el efecto deseado sobre el proceso o estado de las enfermedades.
Las composiciones farmacéuticas que contienen el principio activo pueden encontrarse en una forma adecuada para uso oral, por ejemplo, como comprimidos, pastillas, pastillas para chupar, suspensiones acuosas u oleosas, polvos o gránulos dispersables, emulsiones y autoemulsiones tal como se describen en la solicitud de patente de Estados Unidos 2002-0012680, cápsulas duras o blandas, jarabes, elixires, soluciones, parche bucal, gel oral, chicles, comprimidos masticables, polvos efervescentes y comprimidos efervescentes. Las composiciones destinadas al uso oral pueden prepararse según cualquier procedimiento conocido en la técnica para la fabricación de composiciones farmacéuticas y dichas composiciones pueden contener uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste en agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes colorantes, antioxidantes y agentes conservantes, con el fin de proporcionar preparaciones farmacéuticamente elegantes y agradables al gusto. Los comprimidos comprenden el principio activo mezclado con excipientes no tóxicos farmacéuticamente aceptables que son adecuados para la fabricación de comprimidos. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes inertes, tales como celulosa, dióxido de silicio, óxido de aluminio, carbonato de calcio, carbonato de sodio, glucosa, manitol, sorbitol, lactosa, fosfato de calcio o fosfato de sodio; agentes granulantes y disgregantes, por ejemplo, almidón de maíz o ácido algínico; agentes aglutinantes, por ejemplo PVP, celulosa, PEG, almidón, gelatina o goma arábiga, y agentes lubricantes, por ejemplo estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Los comprimidos pueden estar sin recubrir o pueden estar recubiertos, entéricamente o de otro modo, mediante técnicas conocidas para retrasar la disgregación y absorción en el aparato gastrointestinal y proporcionar así una acción mantenida durante un periodo más largo. Por ejemplo, se puede emplear un material retardante, tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo. También pueden recubrirse mediante las técnicas descritas en las patentes de Estados Unidos Nº 4.256.108, 4.166.452 y 4.265.874 para formar comprimidos terapéuticos osmóticos para liberación controlada.
Las formulaciones para uso oral también pueden presentarse como cápsulas de gelatina dura en las que el principio activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín, o como cápsulas de gelatina blanda en las que el principio activo se mezcla con agua o un medio oleoso, por ejemplo aceite de cacahuete, parafina líquida o aceite de oliva. Además, las emulsiones se pueden preparar con un ingrediente no miscible con agua, tales como aceites, y estabilizarse con tensioactivos, tales como monodiglicéridos, ésteres de PEG, y similares.
Las suspensiones acuosas contienen los materiales activos mezclados con excipientes adecuados para la fabricación de suspensiones acuosas. Dichos excipientes son agentes de suspensión, por ejemplo carboximetilcelulosa sódica, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato sódico, polivinilpirrolidona, goma tragacanto y goma arábiga; los agentes dispersantes o humectantes pueden ser una fosfatida natural, por ejemplo lecitina, o productos de condensación de un óxido de alquileno con ácidos grasos, por ejemplo estearato de polioxietileno, o productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, por ejemplo heptadecaetilenoxicetanol, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y un hexitol tal como monooleato de polioxietilensorbitol, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo monooleato de polietilensorbitol. Las suspensiones acuosas también pueden contener uno o más conservantes, por ejemplo p-hidroxibenzoato de etilo o n-propilo, uno o más agentes colorantes, uno o más agentes saborizantes, y uno o más agentes edulcorantes, tales como sacarosa o sacarina.
Las suspensiones oleosas se pueden formular suspendiendo el principio activo en un aceite vegetal, por ejemplo aceite de cacahuete, aceite de oliva, aceite de sésamo o aceite de coco, o en un aceite mineral tal como parafina líquida. Las suspensiones oleosas pueden contener un agente espesante, por ejemplo cera de abejas, parafina dura o alcohol cetílico. Se pueden añadir agentes edulcorantes, tales como los expuestos anteriormente, y agentes saborizantes, para proporcionar una preparación oral agradable al gusto. Estas composiciones pueden conservarse mediante la adición de un antioxidante tal como ácido ascórbico.
Los polvos y gránulos dispersables adecuados para la preparación de una suspensión acuosa mediante adición de agua proporcionan el principio activo mezclado con un agente dispersante o humectante, un agente de suspensión y uno o más conservantes. Los agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados son, por ejemplo, los ya mencionados anteriormente. También pueden estar presentes excipientes adicionales, por ejemplo agentes edulcorantes, saborizantes y colorantes.
Las composiciones farmacéuticas de la invención también pueden estar en forma de emulsiones de aceite en agua. La fase oleosa puede ser un aceite vegetal, por ejemplo aceite de oliva o aceite de cacahuete, o un aceite mineral, por ejemplo parafina líquida, o mezclas de los mismos. Agentes emulsionantes adecuados pueden ser gomas naturales, por ejemplo goma arábiga o goma tragacanto, fosfatidas naturales, por ejemplo soja, lecitina, así como ésteres o ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo monooleato de sorbitán, y productos de condensación de los mencionados ésteres parciales con óxido de etileno, por ejemplo monooleato de polioxietilensorbitán. Las emulsiones también pueden contener agentes edulcorantes y saborizantes.
Los jarabes y elixires se pueden formular con agentes edulcorantes, por ejemplo glicerol, propilenglicol, sorbitol o sacarosa. Dichas formulaciones también pueden contener un demulcente, un conservante y agentes aromatizantes y colorantes. Las disoluciones de uso oral se pueden preparar en combinación con, por ejemplo, ciclodextrina, PEG y tensioactivos.
Las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de una suspensión acuosa u oleaginosa inyectable estéril. Esta suspensión se puede formular según la técnica conocida usando los agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados que se han mencionado anteriormente. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo como una solución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que se pueden emplear, se encuentran agua, solución de Ringer y solución isotónica de cloruro de sodio. Además, convencionalmente se emplean aceites fijos estériles como disolvente o medio de suspensión. Para este fin, se puede emplear cualquier aceite fijo suave, incluidos monoglicéridos o diglicéridos sintéticos. Además, se pueden utilizar ácidos grasos tales como el ácido oleico en la preparación de preparaciones inyectables.
Los compuestos de la presente invención también se pueden administrar en forma de supositorios para la administración rectal del fármaco. Estas composiciones se pueden preparar mezclando el fármaco con un excipiente no irritante adecuado que sea sólido a temperaturas normales pero líquido a la temperatura rectal y que, por lo tanto, se derretirá en el recto para liberar el fármaco. Dichos materiales incluyen manteca de cacao y polietilenglicoles. Además, los compuestos se pueden administrar por vía ocular mediante soluciones o ungüentos. Además, la administración transdérmica de los compuestos en cuestión se puede realizar por medio de parches iontoforéticos y similares. Para uso tópico, se emplean cremas, ungüentos, jaleas, soluciones o suspensiones, etc., que contienen los compuestos de la presente invención. Tal como se utiliza en el presente documento, la aplicación tópica también incluye el uso de colutorios y gárgaras.
Los compuestos de la presente invención también pueden estar acoplados a un vehículo que sea un polímero adecuado como vehículo de fármaco dirigible. Dichos polímeros pueden incluir polivinilpirrolidona, copolímero de pirano, polihidroxipropilmetacrilamida-fenol, polihidroxietilaspartamida-fenol u óxido de polietileno-polilisina sustituida con residuos de palmitoílo. Además, los compuestos de la invención se pueden acoplar a un vehículo que sea una clase de polímeros biodegradables útiles para llevar a cabo la liberación controlada de un fármaco, por ejemplo ácido poliláctico, ácido poliglicólico, copolímeros de ácido poliláctico y poliglicólico, poliepsilon caprolactona, ácido polihidroxibutírico, poliortoésteres, poliacetales, polidihidropiranos, policianoacrilatos y copolímeros de bloques reticulados o anfipáticos de hidrogeles. Los polímeros y las matrices poliméricas semipermeables pueden conformarse para dar artículos conformados, tales como válvulas, endoprótesis vasculares, tubos, prótesis y similares. En una forma de realización de la invención, el compuesto de la invención se acopla a un polímero o una matriz polimérica semipermeable que se conforma como una endoprótesis vascular o un dispositivo de endoprótesis vascular-injerto.
Las composiciones farmacéuticas de la presente divulgación se pueden formular con uno o más agentes terapéuticos adicionales. Los, uno o más, agentes terapéuticos adicionales se seleccionan del grupo que consiste en corticosteroides, esteroides, inmunosupresores, agonistas de inmunoglobulina G, inhibidores de la dipeptidil peptidasa IV, antagonistas del receptor del antígeno 3 de la función linfocitaria, ligandos de interleucina-2, inhibidores del ligando beta de interleucina-1, inhibidores de la subunidad alfa del receptor de IL-2, estimuladores del gen HGF, antagonistas de IL-6, antagonistas de IL-5, estimuladores de antitripsina alfa 1, antagonistas de los receptores de cannabinoides, inhibidores de histona desacetilasa, inhibidores de proteína quinasa AKT, inhibidores de CD20, inhibidores de tirosina quinasa Abl, inhibidores de tirosina quinasa JAK, inhibidores del ligando de TNF alfa, moduladores de hemoglobina, antagonistas de TNF, inhibidores de proteasoma, moduladores de CD3, inhibidores de la familia Hsp 70, agonistas de inmunoglobulina, antagonistas de CD30, antagonistas de tubulina, agonistas del receptor 1 de esfingosina-1-fosfato, inhibidores del ligando del factor de crecimiento del tejido conectivo, inhibidores de caspasa, ligandos de la hormona adrenocorticotrófica, inhibidores de tirosina quinasa Btk, inhibidores del subcomponente C1s del complemento, agonistas del receptor de eritropoyetina, inhibidores del ligando estimulador de linfocitos B, inhibidores de quinasa 2 dependiente de ciclina, estimuladores del ligando 1 de la glicoproteína P-selectina, inhibidores de mTOR, inhibidores del factor de elongación 2, inhibidores de la molécula de adhesión celular, agonistas del factor XIII, inhibidores de la calcineurina, agonistas de la inmunoglobulina G1, inhibidores de la inosina monofosfato deshidrogenasa, inhibidores del subcomponente C1s del complemento, moduladores de timidina quinasa, moduladores de la proteína 4 de los linfocitos T citotóxicos, antagonistas del receptor de angiotensina II, moduladores del receptor de angiotensina II, antagonistas del receptor 12A de la superfamilia de TNF, antagonistas de CD52, inhibidores de adenosina desaminasa, inhibidores del antígeno CD6 de diferenciación de células T, ligandos de FGF-7, inhibidores de la dihidroorotato deshidrogenasa, inhibidores de tirosina quinasa Syk, antagonistas del receptor de interferón tipo I, inhibidores del ligando de interferón alfa, inhibidores del factor inhibidor de la migración de macrófagos, antagonistas de integrina alfa-V/beta-6, estimuladores de cisteína proteasa, inhibidores de quinasa MAP p38, inhibidores del gen TP53, inhibidores de la toxina I similar a Shiga, estimuladores de la fucosiltransferasa 6, ligandos de interleucina 22, inhibidores del gen IRS1, estimuladores de proteína quinasa C, inhibidores de proteína quinasa C alfa, antagonistas de CD74, antagonistas del receptor IIB de inmunoglobulina gamma Fc, inhibidores del antígeno de células T CD7, antagonistas de CD95, estimuladores de N acetilmanosamina quinasa, ligandos de cardiotrofina-1, inhibidores de elastasa leucocitaria, antagonistas del receptor del ligando CD40, moduladores del ligando CD40, antagonistas de IL-17, antagonistas de TLR-2, inhibidores de lectina serina proteasa-2 de unión a manano (MASP-2), inhibidores del factor B, inhibidores del factor D, moduladores de C3aR, moduladores de C5aR2, antagonistas del receptor de células T, inhibidores de PD-1, inhibidores de PD-L1, inhibidores de TIGIT, inhibidores de TIM-3, inhibidores de LAG-3, inhibidores de VISTA, agonistas de STING, inhibidores de IDO, moduladores del receptor de adenosina, inhibidores de CD39, inhibidores de CD73, antagonistas de los receptores de quimiocinas, especialmente CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR7, CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR7, CCR7, CCR9, CX3CR1 y CXCR6, y combinaciones de los mismos.
En algunas formas de realización, los, uno o más, agentes terapéuticos adicionales se seleccionan del grupo que consiste en obinutuzumab, rituximab, ocrelizumab, ciclofosfamida, prednisona, hidrocortisona, acetato de hidrocortisona, acetato de cortisona, pivalato de tixocortol, prednisolona, metilprednisolona, acetonida de triamcinolona, alcohol de triamcinolona, mometasona, amcinonida, budesonida, desonida, fluocinonida, acetonida de fluocinolona, halcinonida, betametasona, fosfato sódico de betametasona, dexametasona, fosfato sódico de dexametasona, fluocortolona, 17-valerato de hidrocortisona, halometasona, dipropionato de alclometasona, beclometasona, valerato de betametasona, dipropionato de betametasona, prednicarbato, 17-butirato de clobetasona, 17-propionato de clobetasol, caproato de fluocortolona, pivalato de fluocortolona, acetato de fluprednideno, 17-butirato de hidrocortisona, 17-aceponato de hidrocortisona, 17-buteprato de hidrocortisona, ciclesonida y prednicarbato, GB-0998, immuglo, begelomab, alefacept, aldesleucina, gevokizumab, daclizumab, basiliximab, inolimomab, perplásmido beperminógeno, sirukumab, tocilizumab, clazakizumab, mepolizumab, fingolimod, panobinostat, triciribina, nilotinib, imatinib, tofacitinib, momelotinib, peficitinib, itacitinib, infliximab, PEG-bHb-CO, etanercept, ixazomib, bortezomib, muromonab, otelixizumab, gusperimus, brentuximab vedotina, ponesimod, KRP-203, FG-3019, emricasan, corticotropina, ibrutinib, cinryze, conestat, metoxi polietilengicol-epoetina beta, belimumab, blisibimod, atacicept, seliciclib, neihulizumab, everolimus, sirolimus, denileucina diftitox, LMB-2, natalizumab, catridecacog, ciclosporina, tacrolimus, voclosporina, voclosporina, canakinumab, micofenolato, mizoribina, CE-1145, TK-DLI, abatacept, belatacept, olmesartan medoxomilo, esparsentan, TXA-127, BIIB-023, alemtuzumab, pentostatina, itolizumab, palifermina, leflunomida, PRO-140, cenicriviroc, fostamatinib, anifrolumab, sifalimumab, BAX-069, BG-00011, losmapimod, QPI-1002, ShigamAbs, TZ-101, F-652, reparixina, ladarixina, PTX-9908, aganirsen, APH-703, sotrastaurina, sotrastaurina, milatuzumab, SM-101, T-Guard, APG-101, DEX-M74, cardiotrofina-1, tiprelestat, ASKP-1240, BMS-986004 , HPH-116, KD-025, OPN-305, TOL-101, defibrotida, pomalidomida, timoglobulina, laquinimod, remestemcel-L, inmunoglobulina antitimocítica equina, Stempeucel, LIV-Gamma, Octagam 10%, t2c-001, 99mTcsestamibi, Clairyg, Prosorba, pomalidomida, laquinimod, teplizumab, FCRx, solnatida, foralumab, ATIR-101, BPX-501, ACP-01, ALLO-ASC-DFU, irbesartan propagermanio, ApoCell, cannabidiol, RGI-2001, saratina, conjugado de anticuerpo bivalente anti-CD3-toxina diftérica, NOX-100, LT-1951, OMS721, ALN-CC5, ACH-4471, AMY-101, gel Acthar y células T reguladoras CD4+CD25+, MEDI7814, P32, P59, pembrolizumab, nivolumab, atezolizumab, avelumab, durvalumab, CCX354, CCX721, CCX9588, CCX140, CCX872, CCX598, CCX6239, CCX587, CCX624, CCX282, CCX025, CCX507, CCX430, CCX765, CCX758, CCX771, CCX662, CCX650 y combinaciones de los mismos. Se incluyen una exposición más detallada sobre la politerapia en la sección "Procedimientos de uso" de la presente solicitud.
A. Procedimientos de uso
Los compuestos de la invención se pueden usar como agonistas, (preferentemente) antagonistas, agonistas parciales, agonistas inversos de receptores de C5a en una diversidad de contextos, tantoin vitrocomoin vivo. En una forma de realización, los compuestos de la invención son antagonistas de C5aR que pueden usarse para inhibir la unión del ligando del receptor de C5a (por ejemplo, C5a) al receptor de C5ain vitrooin vivo. En general, dichos procedimientos comprenden la etapa de poner en contacto un receptor de C5a con una cantidad suficiente de uno o más moduladores del receptor de C5a tal como se proporciona en el presente documento, en presencia de ligando del receptor de C5a en solución acuosa y en condiciones que de otro modo serían adecuadas para la unión del ligando al receptor de C5a. El receptor de C5a puede estar presente en suspensión (por ejemplo, en una membrana aislada o preparación celular), en una célula cultivada o aislada, o en un tejido u órgano.
Preferentemente, la cantidad de modulador del receptor de C5a en contacto con el receptor debe ser suficiente para inhibir la unión de C5a al receptor de C5ain vitromedida, por ejemplo, usando un ensayo de unión de radioligando, un ensayo de movilización de calcio o un ensayo de quimiotaxis tal como se describe en el presente documento.
Los moduladores de C5a de la invención pueden modular, preferentemente inhibir, la actividad de transducción de señales de un receptor de C5a, por ejemplo, poniendo en contacto uno o más compuestos de la invención con un receptor de C5a (ya seain vitrooin vivo) en condiciones condiciones adecuadas para la unión del modulador o de los moduladores al receptor. El receptor puede estar presente en solución o suspensión, en una preparación celular cultivada o aislada o dentro de un paciente. Cualquier modulación de la actividad de transducción de señales puede evaluarse detectando un efecto sobre la movilización del ion calcio o detectando un efecto sobre la quimiotaxis celular mediada por el receptor de C5a. En general, una cantidad eficaz de modulador o moduladores de C5a es una cantidad suficiente para modular la actividad de transducción de señales del receptor de C5ain vitrodentro de un ensayo de movilización de calcio o quimiotaxis celular mediada por el receptor de C5a dentro de un ensayo de migración.
Cuando se usan compuestos de la invención para inhibir la quimiotaxis celular mediada por el receptor de C5a, preferentemente quimiotaxis de leucocitos (por ejemplo, neutrófilos), en un ensayo de quimiotaxisin vitro, tales procedimientos comprenden poner en contacto glóbulos blancos (particularmente glóbulos blancos de primates, especialmente glóbulos blancos humanos) con uno o más compuestos de la invención Preferentemente la concentración es suficiente para inhibir la quimiotaxis de glóbulos blancos en un ensayo de quimiotaxisin vitro, de modo que los niveles de quimiotaxis observados en un ensayo de control son significativamente más elevados, tal como se ha descrito anteriormente, que los niveles observados en un ensayo al que se ha añadido un compuesto de la invención.
En otra forma de realización, los compuestos de la presente invención pueden usarse también en el tratamiento de pacientes humanos que padecen afecciones que responden a la modulación del receptor de C5a, en los que la afección es una enfermedad o trastorno inflamatorio, una enfermedad autoinmunitaria, una enfermedad o trastorno oncológico, un trastorno cardiovascular o un trastorno cerebrovascular. Tal como se utiliza en el presente documento, el término "tratar" o "tratamiento" abarca tanto el tratamiento modificador de la enfermedad como el tratamiento sintomático, cualquiera de los cuales puede ser profiláctico (es decir, antes de la aparición de los síntomas, con el fin de prevenir, retrasar o reducir la gravedad de los síntomas) o terapéutico (es decir, después de la aparición de los síntomas, con el fin de reducir la gravedad y/o la duración de los síntomas). Tal como se utiliza en el presente documento, una afección se considera "que responde a la modulación del receptor de C5a" si la modulación de la actividad del receptor de C5a da como resultado la reducción de la actividad inapropiada de un receptor de C5a. Tal como se utiliza en el presente documento, el término "pacientes" incluye primates (especialmente seres humanos), animales de compañía domesticados (tales como perros, gatos, caballos y similares) y ganado (tales como vacas, cerdos, ovejas y similares), con dosis tal como se describen en el presente documento.
Afecciones que pueden tratarse mediante la modulación de C5a:
Trastornos autoinmunitarios: por ejemplo, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, síndrome de Guillain-Barré, pancreatitis, nefritis lúpica, glomerulonefritis lúpica, psoriasis, enfermedad de Crohn, vasculitis, síndrome del intestino irritable, dermatomiositis, esclerosis múltiple, asma bronquial, enfermedad de depósitos densos, pénfigo, penfigoide, esclerodermia, miastenia gravis, estados hemolíticos y trombocitopénicos autoinmunitarios, síndrome de Goodpasture (y glomerulonefritis y hemorragia pulmonar asociadas), glomerulopatía C3, glomerulonefritis C3, glomerulonefritis membranoproliferativa, enfermedad de Kawasaki, nefropatía IG, inmunovasculitis, rechazo de injerto de tejido, enfermedad de injerto contra huésped, rechazo hiperagudo de órganos trasplantados; y similares.
Trastornos inflamatorios y afecciones relacionadas, por ejemplo, neutropenia, sepsis, choque séptico, enfermedad de Alzheimer, esclerosis múltiple, neutrofilia, accidente cerebrovascular, enfermedad inflamatoria intestinal (EII), inflamación asociada con quemaduras graves, lesión pulmonar y lesión por isquemia-reperfusión, osteoartritis, así como síndrome de dificultad respiratoria aguda (adulto) (SDRA), trastorno obstructivo pulmonar crónico (EPOC), síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SRIS), dermatitis atópica, psoriasis, urticaria crónica y síndrome de disfunción orgánica múltiple (MODS), síndrome urémico hemolítico atípico, síndrome urémico hemolítico (SHUa). También se incluyen las secuelas patológicas asociadas con diabetes mellitus insulinodependiente (incluida retinopatía diabética), nefropatía lúpica, nefritis de Heyman, nefritis membranosa y otras formas de glomerulonefritis, las respuestas de sensibilidad al contacto y la inflamación resultante del contacto de la sangre con superficies artificiales que pueden provocar la activación del complemento, tal como sucede, por ejemplo, durante la circulación extracorpórea de la sangre (por ejemplo, durante la hemodiálisis o por medio de una máquina cardio-pulmonar, por ejemplo, en asociación con cirugía vascular tal como injerto de derivación de arteria coronaria o reemplazo de válvula cardiaca), o en asociación con el contacto con otras superficies artificiales de recipientes o contenedores (por ejemplo, dispositivos de asistencia ventricular, máquinas de corazón artificial, tubos de transfusión, bolsas de almacenamiento de sangre, plasmaféresis, plaquetoféresis y similares). También se incluyen enfermedades relacionadas con lesión por isquemia/reperfusión, tales como las resultantes de trasplantes, incluido el trasplante de órganos sólidos, y síndromes tales como lesión por reperfusión isquémica, colitis isquémica e isquemia cardiaca. Los compuestos de la presente invención también pueden ser útiles en el tratamiento de la degeneración macular relacionada con la edad (Hageman et al, P.N.A.S.102: 7227-7232, 2005).
Trastornos cardiovasculares y cerebrovasculares: por ejemplo, infarto de miocardio, trombosis coronaria, oclusión vascular, reoclusión vascular posquirúrgica, aterosclerosis, lesión traumática del sistema nervioso central y cardiopatía isquémica. En una forma de realización, se puede administrar una cantidad eficaz de un compuesto de la invención a un paciente con riesgo de sufrir infarto de miocardio o trombosis (es decir, un paciente que tiene uno o más factores de riesgo reconocidos de infarto de miocardio o trombosis, tales como, pero sin limitación, obesidad, tabaquismo, presión arterial alta, hipercolesterolemia, antecedentes genéticos o previos de infarto de miocardio o trombosis) con el fin de reducir el riesgo de infarto de miocardio o trombosis.
Enfermedades o trastornos oncológicos: por ejemplo, melanoma, cáncer de pulmón, linfoma, sarcoma, carcinoma, fibrosarcoma, liposarcoma, condrosarcoma, sarcoma osteogénico, angiosarcoma, linfangiosarcoma, sinovioma, mesotelioma, meningioma, leucemia, linfoma, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células basales, adenocarcinoma, carcinoma papilar, cistadenocarcinoma, carcinoma broncogénico, carcinoma de células renales, carcinoma hepatocelular, carcinoma de células de transición, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embrionario, tumor de Wilm, adenoma pleomórfico, papiloma de células hepáticas, adenoma tubular renal, cistadenoma, papiloma, adenoma, leiomioma, rabdomioma, hemangioma, linfangioma, osteoma, condroma, lipoma y fibroma.
Enfermedades de vasculitis: las enfermedades vasculíticas se caracterizan por la inflamación de los vasos. La infiltración de leucocitos produce la destrucción de las paredes de los vasos, y se cree que la vía del complemento desempeña un papel importante en el inicio de la migración de leucocitos, así como en el daño resultante que se manifiesta en el sitio de la inflamación (Vasculitis, segunda edición, editado por Ball and Bridges, Oxford University Press, páginas 47-53, 2008). Los compuestos proporcionados en la presente invención se pueden usar para tratar vasculitis leucoclástica, vasculitis asociada a anticuerpos anticitoplasma de neutrófilo (ANCA), vasculitis inmunitaria, granulomatosis de Wegener, poliangeítis microscópica, síndrome de Churg-Strauss, púrpura de Henoch-Schonlein, poliateritis nodosa, glomerulonefritis rápidamente progresiva (RPGN), crioglobulinemia, arteritis de células gigantes (ACG), enfermedad de Behcet y arteritis de Takayasu (TAK).
Infección por VIH y SIDA: los moduladores del receptor de C5a proporcionados en el presente documento pueden usarse para inhibir la infección por VIH, retrasar la progresión del SIDA o disminuir la gravedad de los síntomas de la infección por VIH y SIDA.
Trastornos neurodegenerativos y enfermedades relacionadas: dentro de aspectos adicionales, los antagonistas de C5a proporcionados en el presente documento pueden usarse para tratar la enfermedad de Alzheimer, la esclerosis múltiple y la disminución de la función cognitiva asociada con la cirugía de derivación cardiopulmonar y procedimientos relacionados.
En una forma de realización de la invención, los compuestos de la invención se pueden utilizar en el tratamiento de enfermedades seleccionadas del grupo que consiste en sepsis (y trastornos asociados), EPOC, artritis reumatoide, nefritis lúpica y esclerosis múltiple.
Los compuestos proporcionados en el presente documento pueden usarse en procedimientos de tratamiento que incluyen, en general, la administración a un paciente de una cantidad eficaz de dicho uno o más compuestos adecuados para su uso proporcionados en el presente documento. Los pacientes adecuados incluyen aquellos pacientes que padecen o son susceptibles a (es decir, tratamiento profiláctico) un trastorno o enfermedad identificada en el presente documento. Los pacientes típicos para el tratamiento tal como se describe en el presente documento incluyen mamíferos, particularmente primates, especialmente seres humanos. Otros pacientes adecuados incluyen animales de compañía domesticados tales como perros, gatos, caballos y similares, o un animal de ganado tal como ganado vacuno, porcino, ovino y similares.
En general, los compuestos proporcionados en el presente documento pueden usarse en procedimientos de tratamiento que comprenden administrar a un paciente una cantidad eficaz de uno o más de dichos compuestos adecuados para su uso proporcionados en el presente documento. En una forma de realización preferida, el compuesto o compuestos de la invención se administran preferentemente a un paciente (por ejemplo, un ser humano) por vía oral o tópica. La cantidad eficaz puede ser una cantidad suficiente para modular la actividad del receptor de C5a y/o una cantidad suficiente para reducir o aliviar los síntomas que presenta el paciente. Preferentemente, la cantidad administrada es suficiente para producir una concentración plasmática del compuesto (o su metabolito activo, si el compuesto es un profármaco) lo suficientemente alta como para inhibir de forma detectable la quimiotaxis de los glóbulos blancos (por ejemplo, neutrófilos)in vitro. Los regímenes de tratamiento pueden variar según el compuesto utilizado y la afección particular que se va a tratar; para el tratamiento de la mayoría de los trastornos, se prefiere una frecuencia de administración de 4 veces al día o menos. En general, se prefiere más un régimen de dosificación de 2 veces al día, prefiriéndose particularmente la dosificación una vez al día. Se entenderá, sin embargo, que el nivel de dosis específico y el régimen de tratamiento para cualquier paciente en particular dependerán de una diversidad de factores que incluyen la actividad del compuesto específico empleado, la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo, la dieta, el tiempo de administración, la vía de administración, la tasa de excreción, la combinación de fármacos (es decir, otros fármacos que se administran al paciente) y la gravedad de la enfermedad particular sometida a tratamiento, así como el criterio del médico prescriptor. En general, se prefiere el uso de la dosis mínima suficiente para proporcionar un tratamiento eficaz. En general, se puede controlar la eficacia terapéutica de los pacientes utilizando criterios médicos o veterinarios adecuados para la afección que se está tratando o previniendo.
Niveles de dosificación del orden de aproximadamente 0,1 mg a aproximadamente 140 mg por kilogramo de peso corporal por día son útiles en el tratamiento o la prevención de afecciones que involucran actividad patógena de C5a (aproximadamente 0,5 mg a aproximadamente 7 g por paciente humano por día). La cantidad de principio activo que se puede combinar con los materiales vehículo para producir una forma de dosificación única variará dependiendo del huésped tratado y del modo particular de administración. Las formas unitarias de dosificación contendrán generalmente entre aproximadamente 1 mg y aproximadamente 500 mg de un principio activo. Para los compuestos administrados por vía oral, transdérmica, intravenosa o subcutánea, se prefiere administrar una cantidad suficiente del compuesto para lograr una concentración sérica de 5 ng (nanogramos)/ml - 10 µg (microgramos)/ml de suero, de forma más preferida deberá administrarse suficiente compuesto para alcanzar una concentración sérica de 20 ng/ml-1 µg/ml de suero, de la forma más preferida se deberá administrar suficiente compuesto para alcanzar una concentración sérica de 50 ng/ml-200 ng/ml de suero. Para la inyección directa en la membrana sinovial (para el tratamiento de la artritis), se deberán administrar compuestos suficientes para alcanzar una concentración local de aproximadamente 1 micromolar.
La frecuencia de la dosificación también puede variar según el compuesto utilizado y la enfermedad particular tratada. Sin embargo, para el tratamiento de la mayoría de los trastornos, se prefiere un régimen de dosificación de 4 veces al día, tres veces al día o menos, siendo particularmente preferido un régimen de dosificación de una vez al día o 2 veces al día. Se entenderá, sin embargo, que el nivel de dosis específico para cualquier paciente en particular dependerá de una diversidad de factores que incluyen la actividad del compuesto específico empleado, la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo, la dieta, el tiempo de administración, la vía de administración y la tasa de excreción, la combinación de fármacos (es decir, otros fármacos que se administran al paciente), la gravedad de la enfermedad particular sometida a tratamiento y otros factores, incluido el criterio del médico prescriptor.
Politerapia
Los compuestos divulgados en el presente documento se pueden usar en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales que se usan en el tratamiento, la prevención, la supresión o la mejora de las enfermedades o afecciones para las cuales los compuestos y las composiciones de la presente invención son útiles. Dichos, uno o más, agentes terapéuticos adicionales pueden administrarse, por una vía y en una cantidad comúnmente utilizada para ello, de forma contemporánea o secuencial con un compuesto o una composición de la presente invención. Cuando un compuesto o una composición de la presente invención se usa simultáneamente con uno o más fármacos diferentes, se prefiere una composición farmacéutica que contenga dichos otros fármacos además del compuesto o composición de la presente invención. En consecuencia, las composiciones farmacéuticas de la presente invención incluyen aquellas que también contienen uno o más principios activos o agentes terapéuticos diferentes, además de un compuesto o composición de la presente invención.
Ejemplos de los, uno o más, agentes terapéuticos adicionales son corticosteroides, esteroides, inmunosupresores, agonistas de inmunoglobulina G, inhibidores de la dipeptidil peptidasa IV, antagonistas del receptor del antígeno 3 de la función linfocitaria, ligandos de interleucina-2, inhibidores del ligando beta de interleucina-1, inhibidores de la subunidad alfa del receptor de IL-2, estimuladores del gen HGF, antagonistas de IL-6, antagonistas de IL-5, estimuladores de antitripsina alfa 1, antagonistas de los receptores de cannabinoides, inhibidores de histona desacetilasa, inhibidores de proteína quinasa AKT, inhibidores de CD20, inhibidores de tirosina quinasa Abl, inhibidores de tirosina quinasa JAK, inhibidores del ligando de TNF alfa, moduladores de hemoglobina, antagonistas de TNF, inhibidores de proteasoma, moduladores de CD3, inhibidores de la familia Hsp 70, agonistas de inmunoglobulina, antagonistas de CD30, antagonistas de tubulina, agonistas del receptor 1 de esfingosina-1-fosfato, inhibidores del ligando del factor de crecimiento del tejido conectivo, inhibidores de caspasa, ligandos de la hormona adrenocorticotrófica, inhibidores de tirosina quinasa Btk, inhibidores del subcomponente C1s del complemento, agonistas del receptor de eritropoyetina, inhibidores del ligando estimulador de linfocitos B, inhibidores de quinasa 2 dependiente de ciclina, estimuladores del ligando 1 de la glicoproteína P-selectina, inhibidores de mTOR, inhibidores del factor de elongación 2, inhibidores de la molécula de adhesión celular, agonistas del factor XIII, inhibidores de la calcineurina, agonistas de la inmunoglobulina G1, inhibidores de la inosina monofosfato deshidrogenasa, inhibidores del subcomponente C1s del complemento, moduladores de timidina quinasa, moduladores de la proteína 4 de los linfocitos T citotóxicos, antagonistas del receptor de angiotensina II, moduladores del receptor de angiotensina II, antagonistas del receptor 12A de la superfamilia de TNF, antagonistas de CD52, inhibidores de adenosina desaminasa, inhibidores del antígeno CD6 de diferenciación de células T, ligandos de FGF-7, inhibidores de la dihidroorotato deshidrogenasa, inhibidores de tirosina quinasa Syk, antagonistas del receptor de interferón tipo I, inhibidores del ligando de interferón alfa, inhibidores del factor inhibidor de la migración de macrófagos, antagonistas de integrina alfa-V/beta-6, estimuladores de cisteína proteasa, inhibidores de quinasa MAP p38, inhibidores del gen TP53, inhibidores de la toxina I similar a Shiga, estimuladores de la fucosiltransferasa 6, ligandos de interleucina 22, inhibidores del gen IRS1, estimuladores de proteína quinasa C, inhibidores de proteína quinasa C alfa, antagonistas de CD74, antagonistas del receptor IIB de inmunoglobulina gamma Fc, inhibidores del antígeno de células T CD7, antagonistas de CD95, estimuladores de N acetilmanosamina quinasa, ligandos de cardiotrofina-1, inhibidores de elastasa leucocitaria, antagonistas del receptor del ligando CD40, moduladores del ligando CD40, antagonistas de IL-17, antagonistas de TLR-2, inhibidores de lectina serina proteasa-2 de unión a manano (MASP-2), inhibidores del factor B, inhibidores del factor D, moduladores de C3aR, moduladores de C5aR2, antagonistas del receptor de células T, inhibidores de PD-1, inhibidores de PD-L1, inhibidores de TIGIT, inhibidores de TIM-3, inhibidores de LAG-3, inhibidores de VISTA, agonistas de STING, inhibidores de IDO, moduladores del receptor de adenosina, inhibidores de CD39, inhibidores de CD73, antagonistas de los receptores de quimiocinas, especialmente CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR7, CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR7, CCR7, CCR9, CX3CR1 y CXCR6, y combinaciones de los mismos.
En algunas formas de realización, el agente terapéutico adicional usado en los procedimientos terapéuticos del presente documento se selecciona del grupo que consiste en obinutuzumab, rituximab, ocrelizumab, ciclofosfamida, prednisona, hidrocortisona, acetato de hidrocortisona, acetato de cortisona, pivalato de tixocortol, prednisolona, metilprednisolona, acetonida de triamcinolona, alcohol de triamcinolona, mometasona, amcinonida, budesonida, desonida, fluocinonida, acetonida de fluocinolona, halcinonida, betametasona, fosfato sódico de betametasona, dexametasona, fosfato sódico de dexametasona, fluocortolona, 17-valerato de hidrocortisona, halometasona, dipropionato de alclometasona, beclometasona, valerato de betametasona, dipropionato de betametasona, prednicarbato, 17-butirato de clobetasona, 17-propionato de clobetasol, caproato de fluocortolona, pivalato de fluocortolona, acetato de fluprednideno, 17-butirato de hidrocortisona, 17-aceponato de hidrocortisona, 17-buteprato de hidrocortisona, ciclesonida y prednicarbato, GB-0998, immuglo, begelomab, alefacept, aldesleucina, gevokizumab, daclizumab, basiliximab, inolimomab, perplásmido beperminógeno, sirukumab, tocilizumab, clazakizumab, mepolizumab, fingolimod, panobinostat, triciribina, nilotinib, imatinib, tofacitinib, momelotinib, peficitinib, itacitinib, infliximab, PEG-bHb-CO, etanercept, ixazomib, bortezomib, muromonab, otelixizumab, gusperimus, brentuximab vedotina, ponesimod, KRP-203, FG-3019, emricasan, corticotropina, ibrutinib, cinryze, conestat, metoxi polietilengicolepoetina beta, belimumab, blisibimod, atacicept, seliciclib, neihulizumab, everolimus, sirolimus, denileucina diftitox, LMB-2, natalizumab, catridecacog, ciclosporina, tacrolimus, voclosporina, voclosporina, canakinumab, micofenolato, mizoribina, CE-1145, TK-DLI, abatacept, belatacept, olmesartan medoxomilo, esparsentan, TXA-127, BIIB-023, alemtuzumab, pentostatina, itolizumab, palifermina, leflunomida, PRO-140, cenicriviroc, fostamatinib, anifrolumab, sifalimumab, BAX-069, BG-00011, losmapimod, QPI-1002, ShigamAbs, TZ-101, F-652, reparixina, ladarixina, PTX-9908, aganirsen, APH-703, sotrastaurina, sotrastaurina, milatuzumab, SM-101, T-Guard, APG-101, DEX-M74, cardiotrofina-1, tiprelestat, ASKP-1240, BMS-986004 , HPH-116, KD-025, OPN-305, TOL-101, defibrotida, pomalidomida, timoglobulina, laquinimod, remestemcel-L, inmunoglobulina antitimocítica equina, Stempeucel, LIV-Gamma, Octagam 10%, t2c-001, 99mTc-sestamibi, Clairyg, Prosorba, pomalidomida, laquinimod, teplizumab, FCRx, solnatida, foralumab, ATIR-101, BPX-501, ACP-01, ALLO-ASC-DFU, irbesartan propagermanio, ApoCell, cannabidiol, RGI-2001, saratina, conjugado de anticuerpo bivalente anti-CD3-toxina diftérica, NOX-100, LT-1951, OMS721, ALN-CC5, ACH-4471, AMY-101, gel Acthar y células T reguladoras CD4+CD25+, MEDI7814, P32, P59, pembrolizumab, nivolumab, atezolizumab, avelumab, durvalumab, CCX354, CCX721, CCX9588, CCX140, CCX872, CCX598, CCX6239, CCX587, CCX624, CCX282, CCX025, CCX507, CCX430, CCX765, CCX758, CCX771, CCX662, CCX650 y combinaciones de los mismos.
La enfermedad o trastorno que se está tratando determinará qué agente o agentes terapéuticos adicionales se administran más apropiadamente en combinación con los compuestos de la presente invención; dicha determinación puede realizarse por un experto en la técnica.
La relación en peso del compuesto de la presente invención con respecto al segundo principio activo puede variarse y dependerá de la dosis eficaz de cada principio activo. Generalmente, se usará una dosis eficaz de cada uno. Así, por ejemplo, cuando un compuesto de la presente invención se combina con un AINE, la relación en peso del compuesto de la presente invención con respecto al AINE generalmente variará entre aproximadamente 1000: 1 y aproximadamente 1: 1000, preferentemente aproximadamente 200: 1 a aproximadamente 1:200. Las combinaciones de un compuesto de la presente invención y otros principios activos generalmente también estarán dentro del intervalo mencionado anteriormente, pero en cada caso, se debe usar una dosis eficaz de cada principio activo.
Aplicaciones no farmacéuticas
Los compuestos de la invención se pueden usar en una diversidad de aplicaciones no farmacéuticasin vitroein vivo. Por ejemplo, los compuestos de la invención pueden marcarse y usarse como sondas para la detección y localización del receptor de C5a (preparaciones de células o muestras de secciones de tejido). Los compuestos de la invención también se pueden usar como controles positivos en ensayos de actividad del receptor de C5a, es decir, como patrones para determinar la capacidad de un agente candidato para unirse al receptor de C5a, o como radiotrazadores para la formación de imágenes de tomografía por emisión de positrones (PET) o para tomografía computarizada por emisión de fotón único (SPECT). Estos procedimientos pueden utilizarse para caracterizar los receptores de C5a en sujetos vivos. Por ejemplo, un modulador del receptor de C5a puede marcarse usando cualquiera de una variedad de técnicas bien conocidas (por ejemplo, radiomarcarse con un radionúclido tal como tritio) e incubarse con una muestra durante un tiempo de incubación adecuado (por ejemplo, determinado sometiendo a ensayo en primer lugar un curso temporal de unión). Después de la incubación, el compuesto no unido se elimina (por ejemplo, mediante lavado) y el compuesto unido se detecta usando cualquier procedimiento adecuado para el marcador empleado (por ejemplo, autorradiografía o recuento de centelleo para compuestos radiomarcados; se pueden usar procedimientos espectroscópicos para detectar grupos luminiscentes y grupos fluorescentes). Como control, se puede procesar de la misma manera una muestra coincidente que contenga compuesto marcado y una cantidad mayor (por ejemplo, 10 veces mayor) de compuesto no marcado. El que quede en la muestra de ensayo una mayor cantidad de marcador detectable que en el control indica la presencia del receptor de C5a en la muestra. Los ensayos de detección, incluida la autorradiografía del receptor (mapeo del receptor) del receptor de C5a en células cultivadas o muestras de tejido, se pueden realizar tal como se describe por Kuhar en las secciones 8.1.1 a 8.1.9 de Current Protocols in Pharmacology (1998) John Wiley & Sons, Nueva York.
Los compuestos proporcionados en el presente documento también se pueden usar dentro de una diversidad de procedimientos de separación celular bien conocidos. Por ejemplo, los moduladores pueden unirse a la superficie interior de una placa de cultivo de tejidos u otro soporte, para su uso como ligandos de afinidad para inmovilizar y, por lo tanto, aislar, receptores de C5a (por ejemplo, aislar células que expresan receptores)in vitro. En una aplicación preferida, un modulador unido a un marcador fluorescente, tal como fluoresceína, se pone en contacto con las células, que después se analizan (o aíslan) mediante clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS).
I. Ejemplos
Los siguientes ejemplos se ofrecen para ilustrar, pero no para limitar, la invención reivindicada.
Los reactivos y disolventes utilizados a continuación se pueden obtener de fuentes comerciales tales como Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, Wisconsin, Estados Unidos). Los espectros de RMN de<1>H se registraron en un espectrómetro de RMN Varian Mercury de 400 MHz. Se proporcionan picos significativos con respecto a TMS y se tabulan en el orden: multiplicidad (s, singlete; d, doblete; t, triplete; q, cuarteto; m, multiplete) y número de protones. Los resultados de la espectrometría de masas se comunican como la relación entre la masa y la carga, seguida de la abundancia relativa de cada ion (entre paréntesis). En los ejemplos, se comunica un único valor m/e para el ion M+H (o, tal como se ha indicado, M-H) que contiene los isótopos atómicos más comunes. Los patrones isotópicos corresponden a la fórmula esperada en todos los casos. El análisis de espectrometría de masas de ionización por electropulverización (ESI) se realizó en un espectrómetro de masas por electropulverización MSD de Hewlett-Packard utilizando el HPLC HP1100 para la administración de muestras. Normalmente, el analito se disolvió en metanol a 0,1 mg/ml y se infundió 1 microlitro con el disolvente de suministro en el espectrómetro de masas, que escaneaba de 100 a 1500 daltons. Todos los compuestos se pudieron analizar en el modo ESI positivo, usando acetonitrilo/agua con ácido fórmico al 1% como disolvente de suministro. Los compuestos proporcionados a continuación también podrían analizarse en el modo ESI negativo, usando NH4OAc 2 mM en acetonitrilo/agua como sistema de suministro.
Las siguientes abreviaturas se utiizan en los Ejemplos y a lo largo de la descripción de la invención:
EtOH:
Etanol
EtONa:
Etóxido de sodio
THF:
Tetrahidrofurano
TLC:
Cromatografía de capa fina
MeOH:
Metanol
Los compuestos dentro del alcance de la presente invención se pueden sintetizar tal como se describe a continuación, usando una diversidad de reacciones conocidas por el experto en la técnica. Un experto en la técnica también reconocerá que se pueden emplear procedimientos alternativos para sintetizar los compuestos objetivo de la presente invención, y que los enfoques descritos en el cuerpo del presente documento no son exhaustivos, pero proporcionan rutas prácticas y ampliamente aplicables para los compuestos de interés.
Determinadas moléculas reivindicadas en esta patente pueden existir en diferentes formas enantioméricas y diastereoméricas y se reivindican todas esas variantes de estos compuestos.
La descripción detallada de los procedimientos experimentales utilizados para sintetizar compuestos clave en este texto da lugar a moléculas que se describen mediante los datos físicos que las identifican, así como mediante las representaciones estructurales asociadas con las mismas.
Los expertos en la técnica también reconocerán que durante los procedimientos de elaboración estándar en química orgánica, se utilizan con frecuencia ácidos y bases. A veces se producen sales de los compuestos originales, si poseen la acidez o basicidad intrínseca necesaria, durante los procedimientos experimentales descritos en esta patente.Ejemplo 1
Síntesis de 1-(4-(5-(3,5-dicloropiridin-2-il)-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)urea
Etapa a: Una mezcla de 3-metil-2-nitrofenol (50,0 g, 326,5 mmol), 1-yodo-2-metil-propano (184,0 g, 1,0 mol) y Cs2CO3(326,0 g, 1,0 mol) en acetona (500 ml) se agitó durante la noche a reflujo. Después se enfrió a temperatura ambiente y se filtró a través de Celite. El filtrado se recogió y se concentró a presión reducida. El sólido obtenido se disolvió en EtOAc, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4y se concentró a presión reducida para proporcionar 1-isobutoxi-3-metil-2-nitrobenceno.<1>H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7.26 (t,J= 8.0 Hz, 1H), 6.82 (m, 2H), 3.78 (d,J= 6.8 Hz, 2H), 2.94 (s, 3H), 2.07 (m, 1H), 0.98 (d,J= 6.4 Hz, 6H).
Se agitó en una atmósfera de hidrógeno un recipiente a presión que contenía 1-isobutoxi-3-metil-2-nitrobenceno (130,4 g, 623,2 mmol), Pd al 10%/C (25 g, 50% de humedad) y EtOH (750 ml) a 45 psi durante 3 h. La mezcla se filtró a través de Celite. El filtrado se recogió y se concentró a presión reducida para producir 2-isobutoxi-6-metil-anilina. C11H18NO [M H]<+>180,2, hallado 180.2.
Precaución: La formación de diazonio podría ser potencialmente peligrosa; manipule con cuidado y utilice el equipo de protección personal adecuado.
Etapa b: A 100 ml de HCl concentrado a -10 °C se añadió isobutoxi-6-metilanilina (26,4 g, 147,3 mmol) en porciones para obtener una suspensión agitable. Después de agitar durante 30 min a la misma temperatura, se añadió gota a gota una solución de NaNO2(12,2 g, 176,8 mmol) en agua (25 ml) durante 20 min para obtener la sal de diazonio. A la sal de diazonio anterior se añadió cloruro de estaño (II) dihidratado (83,0 g, 367,8 mmol) en HCl concentrado (120 ml) en porciones. Después, la mezcla obtenida se agitó durante 10 min a -10 °C seguidos de 1 h a temperatura ambiente. Después la mezcla se diluyó en DCM (400 ml) y agua. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4y se concentró en un evaporador rotatorio a presión reducida para producir clorhidrato de (2-isobutoxi-6-metilfenil)hidrazina. C11H19N2O [M H]<+>195,1, hallado 195,1.
Etapa c: A una suspensión agitada de clorhidrato de (2-isobutoxi-6-metilfenil)hidrazina (8,0 g, 39,9 mmol) en EtOH (60 ml) y ácido acético glacial (12 ml, 208 mmol) se añadió 3-ciano-4-oxopiperidin-1-carboxilato de terc-butilo (5,0 g, 22,3 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla resultante se agitó a reflujo durante 16 h. Después de eliminar el disolvente a presión reducida, el residuo se disolvió en EtOAc y se lavó con NaOH acuoso 2 N y salmuera y se secó sobre MgSO4. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 5 al 55% de EtOAc en hexanos) para dar 3-amino-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo. EM: (ES)m/zcalculado para C22H33N4O3[M H]<+>401,2, hallado 401,2.
Precaución: La formación de diazonio podría ser potencialmente peligrosa; manipule con cuidado y utilice el equipo de protección personal adecuado.
Se añadió lentamente nitrito de isoamilo (96%, 4,0 ml, 28,6 mmol) a temperatura ambiente a una mezcla de 3-amino-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo (3,0 g, 8,1 mmol), CuBr (4,0 g, 27,9 mmol) y MeCN (50 ml) en un matraz de fondo redondo de 250 ml con agitación magnética. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, se diluyó con EtOAc, se filtró a través de Celite, se lavó con solución acuosa saturada de NH4Cl y se secó sobre MgSO4. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 2 al 25% de EtOAc en hexanos) para dar 3-bromo-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo. EM: (ES)m/zcalculado para C22H31BrN3O3[M H]<+>464,1, hallado 464,2.
Etapa d: Se agitó una mezcla de 4-bromo-2,5-difluoroanilina (1,5 g, 7,2 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (2,2 g, 8,7 mmol), KOAc (1,8 g, 18,3 mmol) y complejo de Pd(dppf)Cl2con diclorometano (580,0 mg, 0,7 mmol) en dioxano (12 ml) a 95 °C durante 2 h en atmósfera de nitrógeno. Después se enfrió la mezcla a temperatura ambiente y se filtró sobre Celite. El filtrado se recogió, se concentró a presión reducida y se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 0 al 50% de EtOAc en hexanos) para dar 2,5-difluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)anilina. EM: (ES)m/zcalculado para C12H17BF2NO2[M H]<+>256,1, hallado 256,2.
A una suspensión de 3-bromo-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo (125,0 mg, 0,3 mmol), 2,5-difluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)anilina (75,0 mg, 0,3 mmol), Na2CO3(85,0 mg, 0,8 mmol) en dioxano (4 ml) y agua (1 ml) se añadió complejo de Pd(dppf)Cl2con diclorometano (26,0 mg, 0,03 mmol). La mezcla de reacción se desgasificó (N2) durante 2 min y se agitó en N2a 95 °C durante 6 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, se filtró a través de Celite, se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO4. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 5 al 40% de EtOAc en hexanos) para dar 3-(4-amino-2,5-difluorofenil)-2-(2- isobutoxi-6-metilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo. EM: (ES)m/zcalculado para C28H35F2N4O3[M H]<+>513,3, hallado 513,3.
Etapa e: A una solución agitada de 3-(4-amino-2,5-difluorofenil)-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo (0,5 g, 2,0 mmol) en THF anhidro (5 ml) se añadióN,N-disopropiletilamina (0,6 g, 4,8 mmol) e isocianato de trimetilsililo (0,3 g, 2,6 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Una vez completada, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO4. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 5 al 40% de EtOAc en hexanos) para proporcionar 3-(2,5-difluoro-4-ureidofenil)-2-(2 -isobutoxi-6-metilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo. EM: (ES)m/zcalculado C29H36F2N5O4[M H]<+>556,3, hallado 556,3.
Etapa f: A una solución de 3-(2,5-difluoro-4-ureidofenil)-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo (1,2 g, 3,6 mmol) en diclorometano (10 ml) se añadió HCl 4 N en dioxano (3,0 ml, 12,0 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después de completar la reacción, el disolvente se diluyó con agua y NaHCO3acuoso saturado y se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO4. El disolvente se eliminó a presión reducida para dar 1-(2,5-difluoro-4-(2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)fenil)urea. EM: (ES)m/zcalculado para C24H28F2N5O2[M H]<+>456,2, hallado 456,2.
Etapa g: A una suspensión de 1-(2,5-difluoro-4-(2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)fenil)urea (3,0 g, 6,6 mmol) en DMSO (10 ml) se añadió 3,5-dicloro-5-fluoropiridina (1,6 g, 9,9 mmol) y Li2CO3(1,9 g, 25,7 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla resultante se agitó a 90 °C durante 4 h. Después de completarse la reacción, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO4. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 10 al 60% de EtOAc en hexanos) para proporcionar 1-(4-(5-(3,5-dicloropiridin-2-il)-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)urea.<1>H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 8.15 (d,J= 2.3 Hz, 1H), 8.02 (dd,J= 7.1, 12.5 Hz, 1H), 7.84 (d,J= 2.3 Hz, 1H), 7.32 (t,J= 7.8 Hz, 1H), 6.92 (d,J= 8.2 Hz, 1H), 6.89 (d,J= 7.5 Hz, 1H), 6.82 (dd,J= 6.3, 11.3 Hz, 1H), 4.87 (a, 2H), 4.39 (s, 2H), 3.70 - 3.82 (m, 4H), 3.65 (dd,J= 7.1, 9.0 Hz, 1H), 3.07 (t,J= 6.7 Hz, 2H), 2.02 (s, 3H), 1.85-1.95 (m, 1H), 0.85 (d,J= 7.0 Hz, 6H). MS: (ES)m/zcalculado C29H29Cl2F2N6O2[M H]<+>601,2, hallado 601,5.
Ejemplo 2
Síntesis de 4-(5-(5-(terc-butil)-2-metilfenil)-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)benzamida
Etapa a: Una mezcla de 3-bromo-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo (120,0 mg, 0,26 mmol), ácido (4-cianofenil)borónico (100,0 mg, 0,68 mmol), Pd(PPh3)4(45,0 mg, 0,04 mmol) y K2CO3(125,0 mg, 0,9 mmol) en tolueno (2 ml) y agua (0,3 ml) se agitó a 110 °C durante 3 h en atmósfera de N2. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 0 al 40% de EtOAc en hexanos) para producir 3-(4-cianofenil)-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de tercbutilo. EM: (ES)m/zcalculado para C29H35N4O3[M H]<+>487,3, hallado 487,2.
Etapa b: Una mezcla de 3-(4-cianofenil)-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo (92,0 mg, 0,2 mmol) y HCl 4 N en dioxano (2,0 ml, 8,0 mmol) en diclorometano (2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se basificó con NaHCO3acuoso saturado y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 0 al 25% de MeOH en diclorometano) para producir 4-(2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)benzonitrilo. EM: (ES)m/zcalculado para C24H27N4O [M H]<+>387,2, hallado 387,2.
Etapa c: Una mezcla de 4-(2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)benzonitrilo (56,0 mg, 0,15 mmol), 2-bromo-4-(terc-butil)-1-metilbenceno (131,0 mg, 0,58 mmol), Pd(OAc)2(12,0 mg, 0,05 mmol), X-Phos (60,0 mg, 0,13 mmol) y Cs2CO3(141,0 mg, 0,43 mmol) en dioxano (2 ml) se agitó a 110 °C durante 1 h en N2. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 0 al 35% de EtOAc en hexanos) para producir 4-(5-(5-(terc-butil)-2-metilfenil)-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)benzonitrilo. EM: (ES)m/zcalculado para C35H41N4O [M H]<+>533,3, hallado 533,3.
Etapa d: A una mezcla de 4-(5-(5-(terc-butil)-2-metilfenil)-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)benzonitrilo (36,0 mg, 0,07 mmol) en DCM (1 ml) y DMSO (6 ml) se añadió NaOH acuoso 4 N (1,0 ml, 4,0 mmol) y H2O2(0,40 ml, 35% en agua). La mezcla se agitó durante 30 min a temperatura ambiente, se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 0 al 65% de EtOAc en hexanos) para producir 4-(5-(5-(terc-butil)-2-metilfenil)-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)benzamida.<1>H RMN (400 MHz, CDCl3): δ 7.65 (dd,J= 8.0, 8.4 Hz, 2H), 7.12-7.24 (m, 5H), 7.05 (dd,J= 8.0, 2.0 Hz, 1H), 6.81 (d,J= 7.2 Hz, 1H), 6.70 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 6.05 (s a, 1H), 5.73 (s a, 1H) 4.11 (m, 2H), 3.56 (m, 2H), 3.36 (m, 2H), 3.01 (m, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.86 (m, 1H), 1.31 (s, 9H), 0.81 (m, 6H). MS: (ES)m/zcalculado para C35H43N4O2[M H]<+>551,3, hallado 551,3.
Ejemplo 3
Síntesis de 1-(4-(5-(3,5-dicloropiridin-2-il)-2-(2,6-dimetilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-
Etapa a: A una mezcla de ácido 2,5-difluoro-4-nitrobenzoico (35,5 g, 174,8 mmol) en diclorometano (400 ml) a temperatura ambiente, se añadió lentamente cloruro de oxalilo (16,0 ml, 186,3 mmol), seguido de la adición de DMF (0,2 ml, 2,6 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después se concentró al vacío para producir cloruro de 2,5-difluoro-4-nitrobenzoílo y se usó directamente para la etapa siguiente.
Etapa b: A una mezcla de 4-oxopiperidin-1-carboxilato de terc-butilo (35,6 g, 175,8 mmol) en diclorometano (500 ml) a 0 °C se añadió MgCl2(34,0 g, 357,1 mmol), cloruro de 2,5-difluoro-4-nitrobenzoílo (38,8 g, 175,1 mmol) y trietilamina (50,0 ml, 355,8 mmol) secuencialmente. La mezcla se agitó durante 30 min a 0 °C seguidos de 7 h a temperatura ambiente. Después se enfrió a 0 °C, se inactivó con NH4Cl acuoso saturado y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se concentró a presión reducida para proporcionar 3-(2,5-difluoro-4-nitrobenzoil)-4-oxopiperidin-1-carboxilato de terc-butilo. EM: (ES)m/zcalculado para C17H19F2N2O6Na [M Na]<+>385,1, hallado 385,1.
Etapa c: Una mezcla de 3-(2,5-difluoro-4-nitrobenzoil)-4-oxopiperidin-1-carboxilato de terc-butilo (30,0 g, 78,1 mmol) y clorhidrato de (2,6-dimetilfenil)hidrazina (17,5 g, 101,5 mmol) en EtOH (30 ml) se calentó a 75 °C durante 4 h. Después, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 0 al 30% de EtOAc en hexanos) para dar 3-(2,5-difluoro-4-nitrofenil)2-(2,6-dimetilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo. EM: (ES)m/zcalculado para C25H26F2N4O4[M H]<+>485,2, hallado 485,2.
Etapa d: Una mezcla de 3-(2,5-difluoro-4-nitrofenil)-2-(2,6-dimetilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo (10,0 g, 20,6 mmol) y PtO2(0,5 g, 2,2 mmol) en EtOAc (100 ml) se agitó en una botella de agitación Parr en atmósfera de hidrógeno a 40 psi durante la noche. La mezcla se filtró a través de Celite y se concentró al vacío para proporcionar 3-(4-amino-2,5-difluorofenil)-2-(2,6-dimetilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo. EM: (ES)m/zcalculado para C25H28F2N4O2[M H]<+>455,2, hallado 455,2.
Etapa e: Una mezcla de 3-(4-amino-2,5-difluorofenil)-2-(2,6-dimetilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato (7,9 g, 17,3 mmol) e isocianato de benzoílo (2,6 g, 17,3 mmol) en THF (40 ml) se agitó durante 3 h a temperatura ambiente. La mezcla se concentró a presión reducida para obtener 3-(4-(3-benzoilureido)-2,5-difluorofenil)-2-(2,6-dimetilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo.
Una mezcla del 3-(4-(3-benzoilureido)-2,5-difluorofenil)-2-(2,6-dimetilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo (~17,3 mmol) de antes y K2CO3(7,1 g, 51,3 mmol) en MeOH (100 ml) se agitó durante 2 h a temperatura ambiente seguidas de 20 min a 50 °C. La mezcla se extrajo con IPA:CHCl3(1:3). La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4, se concentró a presión reducida y se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 0 al 70% de EtOAc en hexanos) para proporcionar 3-(2,5-difluoro-4-ureidofenil)-2-(2,6-dimetilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo. EM: (ES)m/zcalculado para C26H29F2N5O3[M H]<+>498,2, hallado 498,2
Etapa f: Una mezcla de 3-(2,5-difluoro-4-ureidofenil)-2-(2,6-dimetilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo (7,0 g, 14,1 mmol) y HCl 4 N en dioxano (14,0 ml, 56,0 mmol) en diclorometano (20 ml) se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después, la mezcla se concentró al vacío para producir clorhidrato de 1-(4-(2-(2,6-dimetilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il-2,5-difluorofenil)urea. EM: (ES)m/zcalculado para C21H21F2N5O [M H]<+>398,2, hallado 398,2.
Etapa g: Se añadió trietilamina (3,9 ml, 27,7 mmol) a una suspensión de clorhidrato de 1-(4-(2-(2,6-dimetilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)urea (4 g, 9,23 mmol), 3,5-dicloro-2-fluoropiridina (1,7 g, 10,2 mmol) y Li2CO3(2,0 g, 27,7 mmol) en DMSO (14 ml) con agitación magnética. La mezcla resultante se agitó a 90 °C durante 4 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con DCM, se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO4. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 20% al 50% de EtOAc en hexanos, seguido del 0% al 50% de EtOAc en diclorometano) seguida de recristalización en MeOH/diclorometano/EtOAc para proporcionar 1-(4-(5-(3,5-dicloropiridin-2-il)-2-(2,6-dimetilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)urea.<1>H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 8.16 (d,J= 2.3 Hz, 1H), 8.01 (dd,J= 6.6, 12.5 Hz, 1H), 7.83 (d,J= 2.3 Hz, 1H), 7.25 (dd,J= 7.0, 8.2 Hz, 1H), 7.06 - 7.16 (m, 2H), 6.70 (dd,J= 6.6, 11.4 Hz, 1H), 4.86 (a, 3H), 4.37 (s, 2H), 3.76 (t,J= 5.8 Hz, 2H), 3.03 (t,J= 5.8 Hz, 2H), 1.99 (s, 6H). MS: (ES)m/zcalculado para C26H23Cl2F2N6O [M H]<+>543,1, hallado 543,1.
Ejemplo 4
Síntesis de 1-(4-(2-(2,6-dietilfenil)-5-(terc-pentil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-ifl r f nil r
Precaución: La formación de diazonio podría ser potencialmente peligrosa; manipule con cuidado y use el equipo de protección personal adecuado.
Etapa a: A un matraz de 250 ml cargado con 90 ml de ácido clorhídrico concentrado con agitación magnética se añadió 2,6-dietilanilina (10,0 g, 67 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 30 min y se enfrió con un baño de hielo y sal hasta que la temperatura interna alcanzó -5 °C. Se añadió lentamente una solución de nitrito de sodio (5,5 g, 80 mmol) en agua (60 ml) a la mezcla anterior mientras se mantenía la temperatura interna por debajo de 5 °C.
Por separado, se añadió cloruro de estaño (II) dihidratado (31,6 g, 140 mmol) a un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 500 ml cargado con ácido clorhídrico concentrado (60 ml) con agitación mecánica. Después se enfrió la solución resultante con un baño de hielo.
Después se filtró la suspensión de diazonio al matraz de 500 ml que contenía la solución enfriada de cloruro de estaño con agitación vigorosa. Después de 90 minutos, la mezcla de reacción se transfirió a un matraz Erlenmeyer de 500 ml y el matraz se enjuagó con agua (20 ml) y cloroformo (8 ml). La mezcla combinada se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se decantó toda la capa líquida para dar un sólido húmedo. El material recuperado se secó al vacío durante un día y después se transfirió a un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 500 ml equipado con un agitador mecánico superior y se agitó con éter (180 ml). La mezcla resultante se enfrió en un baño de hielo y se añadió lentamente una solución de NaOH (10 N, 30 ml) a la mezcla anterior mientras se mantenía la temperatura interna por debajo de 12 °C. Después de la adición, la mezcla se dejó reposar durante 2 h en hielo. La capa de éter se decantó en un matraz de 500 ml y se borboteó una corriente de cloruro de hidrógeno gaseoso en la solución de éter mientras se agitaba. El precipitado resultante se recogió por filtración para dar clorhidrato de (2,6-dietilfenil)hidrazina. EM: (ES)m/zcalculado para C10H17N2[M H]<+>165,1, hallado 165,1.
Etapa b: Una mezcla de 3-(2,5-difluoro-4-nitrobenzoil)-4-oxopiperidin-1-carboxilato de terc-butilo (60,0 g, 156,1 mmol) y clorhidrato de (2,6-dietilfenil)hidrazina (30,0 g, 149,5 mmol) en EtOH (560 ml) se calentó a 50 °C durante 3 h. Después se enfrió la mezcla a temperatura ambiente y se inactivó con NaHCO3acuoso saturado. La mezcla se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 0 al 50% de EtOAc en hexanos) para proporcionar 2-(2,6-dietilfenil)-3-(2,5-difluoro- 4-nitrofenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo. EM: (ES)m/zcalculado para C27H31F2N4O4[M H]<+>513,2, hallado 513,5. Etapa c: Una mezcla de 2-(2,6-dietilfenil)-3-(2,5-difluoro-4-nitrofenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridina-5-carboxilato de terc-butilo (9,6 g, 18,7 mmol), hierro en polvo (10,0 g, 179,1 mmol) y NH4Cl (15,0 g, 280,4 mmol) en EtOH (200 ml) y agua (20 ml) se calentó a 80 °C durante 1 h. Después se enfrió la mezcla a temperatura ambiente, se filtró sobre Celite y se lavó con EtOAc. El filtrado se repartió entre EtOAc y NaHCO3acuoso saturado. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se concentró al vacío para proporcionar 3-(4-amino-2,5-difluorofenil)-2-(2,6-dietilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridina-5-carboxilato de terc-butilo. EM: (ES)m/zcalculado para C27H33F2N4O2[M H]<+>483,3, hallado 483,3.
Etapa d: Una mezcla de 3-(4-amino-2,5-difluorofenil)-2-(2,6-dietilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo (9,2 g, 19,1 mmol) e isocianato de benzoílo (11,3 g, 76,8 mmol) en THF (100 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. Después, la mezcla se concentró al vacío para proporcionar 3-(4-(3-benzoilureido)-2,5-difluorofenil)-2-(2,6-dietilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo.
Una mezcla del 3-(4-(3-benzoilureido)-2,5-difluorofenil)-2-(2,6-dietilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo (~19,1 mmol) de antes y K2CO3(10,0 g, 72,3 mmol) en MeOH (100 ml) se agitó durante 7 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se extrajo con IPA:CHCl3(1:3). La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 0 al 100% de EtOAc en diclorometano seguido del 0 al 20% de MeOH en diclorometano) para proporcionar 2-(2,6-dietilfenil)-3-(2,5-difluoro-4-ureidofenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo. EM: (ES)m/zcalculado para C28H34F2N5O3[M H]<+>526,3, hallado 526,3. Etapa e: Una mezcla de 2-(2,6-dietilfenil)-3-(2,5-difluoro-4-ureidofenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo (2,9 g, 5,5 mmol) y HCl 4 N en dioxano (35,0 ml, 140,0 mmol) en diclorometano (30 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 h. Después, la mezcla se concentró al vacío para producir clorhidrato de 1-(4-(2-(2,6-dietilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)urea. EM: (ES)m/zcalculado para C23H26F2N5O [M H]<+>426,2, hallado 426,2.
Etapa f: A una mezcla de clorhidrato de 1-(4-(2-(2,6-dietilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)urea (115,0 mg, 0,3 mmol) en THF (2,5 ml) a 0 °C, se añadió 3-cloro-3-metilbut-1-ino (32 mg, 0,3 mmol), NEt3(88 µl, 0,6 mmol) y CuCl (30 mg, 0,3 mmol) secuencialmente. La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 30 min. Después la mezcla se basificó con NaHCO3acuoso saturado y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 0 al 100% de EtOAc en hexanos) para proporcionar 1-(4-(2-(2,6-dietilfenil)-5-(2-metilbut-3-in-2-il)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)urea. EM: (ES)m/zcalculado para C28H32F2N5O [M H]<+>492,3, hallado 492,2.
Etapa g: Una mezcla de 1-(4-(2-(2,6-dietilfenil)-5-(2-metilbut-3-in-2-il)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)urea (66,0 mg, 0,13 mmol) y Pd/C (50 mg, 50% en agua) en EtOAc (35 ml) se agitó en una botella de agitación Parr en atmósfera de hidrógeno a 53 psi durante 1,5 h. La mezcla se filtró sobre Celite. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC (MeCN/H2O, con el 0,1% de TFA), se basificó con NaHCO3acuoso saturado y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se trató con HCl 1,0 M en dietil éter. El disolvente se concentró al vacío para producir 1-(4-(2-(2,6-dietilfenil)-5-(terc-pentil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)urea como sal clorhidrato.<1>H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 8.15 (s a, 1H), 7.47 (dd,J= 7.4, 7.4 Hz, 1H), 7.29 (m, 2H), 6.68 (s a, 1H), 4.57 (s a, 2H), 4.18 (s a, 1H), 3.62 (s a, 1H), 3.32 (s a, 2H), 2.38 (s a, 2H), 2.22 (s a, 2H), 1.98 (s a, 2H), 1.70 (s, 1H), 1.55 (s a, 6H), 1.55 (s a, 6H), 1.32-1.42 (m, 3H), 1.00-1.22 (m, 9H). MS: (ES)m/zcalculado para C28H36F2N5O [M H]<+>496,3, hallado 496,3.
Sintesis de N-(4-(5-(2,4-bis(trifluorometil)bencil)-2-(2,6-dietilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)formamida
Etapa a: Una mezcla de 3-(4-amino-2,5-difluorofenil)-2-(2,6-dietilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo (1,7 g, 3,5 mmol), cloruro de acetilo (1,4 ml, 19,6 mmol) y NEt3(3,7 ml, 26,1 mmol) en THF (120 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se inactivó con NaHCO3acuoso saturado y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 0 al 80% de EtOAc en hexanos) para proporcionar 3-(4-acetamido-2,5-difluorofenil)-2-(2,6-dietilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo. EM: (ES)m/zcalculado para C29H35F2N4O3[M H]<+>525,3, hallado 525,6.
Etapa b: Una mezcla de 3-(4-acetamido-2,5-difluorofenil)-2-(2,6-dietilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo (1,3 g, 2,4 mmol) y HCl 4 N en dioxano (20,0 ml, 80,0 mmol) en diclorometano (20 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 h. Después, la mezcla se concentró al vacío para producir clorhidrato de N-(4-(2-(2,6-dietilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)acetamida EM: (ES)m/zcalculado para C24H27F2N4O [M H]<+>425,2, hallado 425,2.
Etapa c: Una mezcla de clorhidrato de N-(4-(2-(2,6-dietilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)acetamida (0,45 g, 1,0 mmol), 2,4-bis(trifluorometil)benzaldehído (0,7 g, 2,9 mmol), NaBH(OAc)3(0,8 g, 3,8 mmol), NEt3(0,5 ml, 3,6 mmol) y HOAc (0,2 ml, 3,3 mmol) en diclorometano (5 ml) se agitó a 30 °C durante 1 h. La reacción se inactivó con NaHCO3acuoso saturado y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 0 al 80% de EtOAc en hexanos) para proporcionar N-(4-(5-(2,4-bis(trifluorometil)bencil)-2-(2,6-dietilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)acetamida. EM: (ES)m/zcalculado para C33H30F8N4O [M H]<+>651,3, hallado 651,6.
Etapa d: Una mezcla de N-(4-(5-(2,4-bis(trifluorometil)bencil)-2-(2,6-dietilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)acetamida (0,5 g, 0,8 mmol) y HCl 4 N en dioxano (3,0 ml, 12,0 mmol) en agua (0,6 ml) se agitó a 80 °C durante 40 min. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se basificó con NaHCO3acuoso saturado y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 0 al 70% de EtOAc en hexanos) para proporcionar 4-(5-(2,4-bis(trifluorometil)bencil)-2-(2, 6-dietilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluoroanilina. EM: (ES)m/zcalculado para C31H29F8N4[M H]<+>609,2, hallado 609,2.
Etapa e: Una mezcla de 4-(5-(2,4-bis(trifluorometil)bencil)-2-(2,6-dietilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluoroanilina (25,0 mg, 0,04 mmol) y HCO2H (1 ml) se agitó a 75 °C durante 40 min. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se basificó con NaHCO3acuoso saturado y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 0 al 70% de EtOAc en hexanos) para proporcionar N-(4-(5-(2,4-bis(trifluorometil)bencil)-2-(2,6-dietilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)formamida.<1>H RMN (400 MHz, CDCl3): δ 8.38 (d,J= 1.2 Hz, 1H), 8.15 (m, 2H), 7.89 (s a, 1H), 7.79 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.53 (s a, 1H), 7.28 (dd,J= 7.6, 7.6 Hz, 1H), 7.10 (d,J= 7.6 Hz, 2H), 6.55 (m, 1H), 3.95 (s, a, 2H), 3.58 (s a, 2H), 2.93 (m, 4H), 2.31 (sextet,J= 7.6 Hz, 2H), 2.19 (sextet,J= 7.2 Hz, 2H), 1.08 (t,J= 7.4 Hz, 6H). MS: (ES)m/zcalculado para C32H29F8N4O [M H]<+>637,2, hallado 637,2.
Ejemplo 6
Síntesis de 1-(4-(2-(2,6-dietilfenil)-5-(2-hidroxi-2-metil-1-fenilpropil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)urea
Etapa a: Una mezcla de 2-(2,6-dietilfenil)-3-(2,5-difluoro-4-nitrofenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo (1,0 g, 2,0 mmol) y HCl 4 N en dioxano (5,0 ml, 20,0 mmol) en diclorometano (10 ml) a temperatura ambiente durante 1,5 h. Después, la mezcla se concentró al vacío para producir clorhidrato de 2-(2,6-dietilfenil)-3-(2,5-difluoro-4-nitrofenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridina. EM: (ES)m/zcalculado para C22H23F2N4O2[M H]<+>413,2, hallado 413,2.
Se añadióN,N-diisopropiletilamina (3,0 ml, 17,3 mmol) a una suspensión de clorhidrato de 2-(2,6-dietilfenil)-3-(2,5-difluoro-4-nitrofenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridina anterior (~2,0 mmol) y 2-bromo-2-fenilacetato de etilo (2,0 ml, 11,4 mmol) en acetonitrilo (6 ml) con agitación magnética. La mezcla resultante se agitó a 90 °C durante 3 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO4. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 10% al 30% de EtOAc en hexanos) para proporcionar 2-(2-(2,6-dietilfenil)-3-(2,5-difluoro-4-nitrofenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-il)-2-fenilacetato de etilo. EM: (ES)m/zcalculada para C32H33F2N4O4[M Na]<+>575,2, hallado 575,3.
Etapa b: Una mezcla de 2-(2-(2,6-dietilfenil)-3-(2,5-difluoro-4-nitrofenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-il)-2-fenilacetato de etilo (1,0 g, 1,7 mmol), hierro en polvo (1,0 g, 17,9 mmol) y NH4Cl (1,5 g, 26,9 mmol) en EtOH (20 ml) y agua (2 ml) se calentó a 80 °C durante 1 h. Después se enfrió la mezcla hasta temperatura ambiente, se filtró sobre Celite y se lavó con EtOAc. El filtrado se repartió entre EtOAc y NaHCO3acuoso saturado. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se concentró al vacío para proporcionar 2-(3-(4-amino-2,5difluorofenil)-2-(2,6-dietilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-il)-2-fenilacetato de etilo. EM: (ES)m/zcalculado para C32H35F2N4O2[M H]<+>545,3, hallado 545,3.
Etapa c: Una mezcla de 2-(3-(4-amino-2,5-difluorofenil)-2-(2,6-dietilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-il)-2-fenilacetato de etilo (800,0 mg, 1,5 mmol) e isocianato de benzoílo (1,1 g, 7,7 mmol) en THF (10 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. Después, la mezcla se concentró al vacío para proporcionar 2-(3-(4-(3-benzoilureido)-2,5-difluorofenil)-2-(2,6-dietilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-il)-2-fenilacetato de etilo.
Una mezcla de 2-(3-(4-(3-benzoilureido)-2,5-difluorofenil)-2-(2,6-dietilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-il)-2-fenilacetato de etilo anterior (~1,5 mmol) y K2CO3(1,0 g, 7,2 mmol) en MeOH (10 ml) se agitó a temperatura ambiente durante la noche.. La mezcla de reacción se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 10 al 45% de EtOAc en hexanos) para proporcionar 2-(2-(2,6-dietilfenil)-3-(2,5-difluoro-4-ureidofenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-il)-2-fenilacetato de etilo. EM: (ES)m/zcalculado para C33H36F2N5O3[M H]<+>588,3, hallado 588,3.
Etapa d: A una solución de 2-(2-(2,6-dietilfenil)-3-(2,5-difluoro-4-ureidofenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-il)-2-fenilacetato de etilo (100,0 mg, 0,2 mmol) en THF (5 ml) se añadió solución de CH3Li 1,6 M en dietil éter (0,7 ml, 1,1 mmol) a 0 °C. La mezcla obtenida se agitó a la misma temperatura durante 30 min, se inactivó con NH4Cl saturado y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante TLC preparativa (EtOAc al 40% en hexanos seguido de EtOAc al 30% en diclorometano) para proporcionar 1-(4-(2-(2,6-dietilfenil)-5-(2-hidroxi-2-metil-1-fenilpropil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)urea.<1>H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 7.93 (dd,J= 6.6, 12.4 Hz, 1H), 7.10-7.50 (m, 8H), 6.54 (dd,J= 6.6, 11.6 Hz, 1H), 4.86 (a, 3H), 3.41-3.67 (m, 4H), 2.63-2.92 (m, 3H), 2.02-2.32 (m, 4H), 1.32 (s, 3H), 1.28 (s a, 1H), 1.16 (s, 3H), 1.10 (t,J= 7.8 Hz, 3H), 1.01 (t,J= 7.8 Hz, 3H). MS: (ES)m/zcalculado para C33H38F2N5O2[M H]<+>574,3, hallado 574,5.
Síntesis de 1-(4-(5-(2,4-bis(trifluorometil)bencil)-2-(2,6-dietilfenil)-6,6-dimetil-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)urea
Etapa a: A una mezcla de 3,3-dimetil-4-oxopiperidin-1-carboxilato de terc-butilo (4,0 g, 17,6 mmol) en DCM (50 ml) a 0 °C se añadió MgCl2(3,4 g, 35,2 mmol), cloruro de 2,5-difluoro-4-nitrobenzoílo (4,3 g, 19,4 mmol) y trietilamina (4,9 ml, 35,2 mmol) secuencialmente. La mezcla se agitó durante 30 min a 0 °C seguidos de 1,5 h a temperatura ambiente. Después, la mezcla se enfrió a 0 °C, se inactivó con NH4Cl acuoso saturado y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se concentró a presión reducida para proporcionar 5-(2,5-difluoro-4-nitrobenzoil)-3,3-dimetil-4-oxopiperidina-1-carboxilato de terc-butilo. EM: (ES)m/zcalculado para C19H22F2N2O6Na [M Na]<+>435,1, hallado 435,1.
Etapa b: Una mezcla de 5-(2,5-difluoro-4-nitrobenzoil)-3,3-dimetil-4-oxopiperidina-1-carboxilato de terc-butilo (~17,6 mmol, bruto de la etapa a), (clorhidrato de 2,6-dietilfenil)hidrazina (3,5 g, 17,6 mmol) y piridina (2,1 ml, 26,4 mmol) en MeOH (100 ml) se calentó a 45 °C durante la noche. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se añadió agua. La mezcla se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 0 al 60% de EtOAc en hexanos) para proporcionar 2-(2,6-dietilfenil)-3-(2,5-difluoro- 4-nitrofenil)-6,6-dimetil-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo. EM: (ES)m/zcalculado para C29H35F2N4O4[M H]<+>541,3, hallado 541,6.
Etapa c: Una mezcla de 2-(2,6-dietilfenil)-3-(2,5-difluoro-4-nitrofenil)-6,6-dimetil-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo (6,7 g, 6,2 mmol), hierro en polvo (12,0 g, 214,9 mmol) y NH4Cl (40,0 g, 742,1 mmol) en EtOH (100 ml) y agua (10 ml) se calentó a 90 °C durante 30 min. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se filtró sobre Celite y se lavó con EtOAc. El filtrado se repartió entre EtOAc y NaHCO3acuoso saturado. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 0 al 80% de EtOAc en hexanos, después del 0 al 30% de EtOAc en diclorometano) para proporcionar 3-(4-amino-2,5)-difluorofenil)-2-(2,6-dietilfenil)-6,6-dimetil-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo. EM: (ES)m/zcalculado para C29H37F2N4O2[M H]<+>511,3, hallado 511,6.
Etapa d: Una mezcla de 3-(4-amino-2,5-difluorofenil)-2-(2,6-dietilfenil)-6,6-dimetil-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo (1,0 g, 2,0 mmol) e isocianato de benzoílo (0,5 g, 3,4 mmol) en THF (6 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se concentró en un evaporador rotatorio a presión reducida para obtener 3-(4-(3-benzoilureido)-2,5-difluorofenil)-2-(2,6-dietilfenil)-6,6-dimetil- 2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo.
Una mezcla de 3-(4-(3-benzoilureido)-2,5-difluorofenil)-2-(2,6-dietilfenil)-6,6-dimetil-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo (~2,0 mmol) anterior y K2CO3(1,0 g, 7,2 mmol) en MeOH (20 ml) se agitó durante 2 h a temperatura ambiente. La mezcla se extrajo con IPA:CHCl3(1:3). La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 0 al 80% de EtOAc en diclorometano) para proporcionar 2-(2,6-dietilfenil)-3-(2,5-difluoro-4-ureidofenil)-6,6-dimetil-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo. EM: (ES)m/zcalculado para C30H38F2N5O3[M H]<+>554,3, hallado 554,2
Etapa e: Una mezcla de 2-(2,6-dietilfenil)-3-(2,5-difluoro-4-ureidofenil)-6,6-dimetil-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo (0,6 g, 1,1 mmol) y HCl 4 N en dioxano (30,0 ml, 120,0 mmol) en diclorometano (10 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 h. La mezcla se concentró a presión reducida para obtener clorhidrato de 1-(4-(2-(2,6-dietilfenil)-6,6-dimetil-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)urea. EM: (ES)m/zcalculado para C25H30F2N5O [M H]<+>454,2, hallado 454,2.
Etapa f: A una mezcla de clorhidrato de 1-(4-(2-(2,6-dietilfenil)-6,6-dimetil-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)urea (100,0 mg, 0,2 mmol), 2,4-bis(trifluorometil)benzaldehído (100,0 mg, 0,8 mmol) yN,N-diisopropiletilamina (0,3 ml, 1,7 mmol) en dicloroetano (10 ml) con agitación magnética se añadió NaBH(OAc)3(250,0 mg, 1,2 mmol) seguido de AcOH (dos gotas). La mezcla resultante se agitó a 45 °C durante 3 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se inactivó con MeOH, se diluyó con EtOAc, se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO4. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante TLC preparativa (EtOAc al 50% en hexanos), seguido de HPLC (MeCN/H2O, con TFA al 0,1%) para proporcionar 1-(4-(5-(2,4 -bis(trifluorometil)bencil)-2-(2,6-dietilfenil)-6,6-dimetil-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)urea.<1>H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 8.30 (d,J= 8.2 Hz, 1H), 7.83-7.95 (m, 3H), 7.36 (t,J= 7.5 Hz, 1H), 7.20 (d,J= 7.7 Hz, 2H), 6.50 (dd,J= 6.5, 11.6 Hz, 1H), 4.87 (a, 3H), 4.00 (s, 2H), 3.57 (s, 2H), 2.79 (s, 2H), 2.22-2.78 (m, 4H), 1.35 (s, 6H), 1.08 (t,J=7.8 Hz, 6H). MS: (ES)m/zcalculado C34H34F8N5O [M H]<+>680,3, hallado 680,6.Ejemplo 8
Síntesis de 1-(4-(2-(2,6-dietilfenil)-5-isobutiril-6,6-dimetil-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazol[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)urea
Una mezcla de clorhidrato de 1-(4-(2-(2,6-dietilfenil)-6,6-dimetil-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)urea (25 mg, 0,05 mmol), ácido isobutírico (80,0 mg, 1,1 mmol), HATU (100 mg, 0,26 mmol) y NEt3(0,1 ml, 0,71 mmol) en DMF (1,5 ml) se agitó a 50-70 °C durante 40 min. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se basificó con NaHCO3acuoso saturado y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 0 al 100% de EtOAc en hexanos) para proporcionar 1-(4-(2-(2,6-dietilfenil)-5-isobutiril-6,6-dimetil-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2,5-difluorofenil)urea.<1>H RMN (400 MHz, CDCl3): δ 8.06 (m, 1H), 7.38 (dd,J= 7.6, 7.6 Hz, 1H), 7.21 (d,J= 8.0 Hz, 2H), 6.55 (m, 1H), 4.58 (s, 2H), 3.30 (m, 3H), 2.95 (s, 2H), 2.92 (m, 1H), 2.24 (c,J= 7.6 Hz, 4H), 1.58 (s, 6H), 1.04 (m, 12H). MS: (ES)m/zcalculado para C29H36F2N5O2[M H]<+>524,3, hallado 524,6.
Síntesis de 1-(4-(5-(2-cloro-4-(trifluorometil)-fenil)-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2-fluorofenil)urea
Etapa a: A una solución agitada de 4-oxopiperidina-1-carboxilato de terc-butilo (5,0 g, 25,1 mmol) en THF anhidro (30 ml) a -78 °C en atmósfera de N2se añadió una solución de LiHMDS 1,0 M en THF (27,5 ml, 27,5 mmol) gota a gota. Después de agitar la solución durante 30 minutos, se añadió a la mezcla una solución de cloruro de 3-fluoro-4-nitrobenzoílo (5,1 g, 25,1 mmol) en THF (6 ml). La mezcla de reacción se agitó a -78 °C durante 1 h, y después se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 2 h. Después de completarse, la mezcla de reacción se inactivó con NaHSO41 M (50 ml), se agitó durante 10 minutos y después se diluyó con EtOAc. La capa orgánica se lavó con H2O y salmuera, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se concentró al vacío y el material bruto se usó directamente para la siguiente etapa sin purificación adicional.
Etapa b: A una solución agitada de 3-(3-fluoro-4-nitrobenzoil)-4-oxopiperidina-1-carboxilato de terc-butilo (6,0 g, 16,4 mmol) en EtOH (120 ml) y ácido acético glacial (12,0 ml, 207,9 mmol) se añadió clorhidrato de (2-isobutoxi-6-metilfenil)hidrazina (3,8 g, 16,4 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante 15 min y después se mantuvo a reflujo durante 3 h. Después de completarse la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida y el residuo se diluyó con EtOAc (100 ml). La capa orgánica se lavó con NaOH acuoso 2 N y salmuera, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 5 al 20% de diclorometano en MeOH) para dar 3-(3-fluoro-4-nitrofenil)-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo. EM: (ES)m/zcalculado para C28H34FN4O5[M H]<+>525,2, hallado 525,3
Etapa c: A una solución de 3-(3-fluoro-4-nitrofenil)-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]pirdin-5-carboxilato de terc-butilo (0,8 g, 1,5 mmol) en metanol (20 ml) se añadió Pd al 10%/C (250 mg) a temperatura ambiente. La mezcla resultante se agitó en una atmósfera de hidrógeno (30 psi) durante 1 h. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 3-(4-amino-3-fluorofenil)-2-(2-isobutoxi6-metilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo, que se usó directamente en la etapa siguiente sin purificación adicional.
Etapa d: A la solución de 3-(4-amino-3-fluorofenil)-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridina-5-carboxilato de terc-metilo de la etapa anterior (0,7 g, 1,4 mmol) en THF anhidro (10 ml) K2CO3(0,8 g 5,7 mmol) y cloruro de acetilo (0,4 g, 5,1 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h y después se diluyó con agua. La mezcla se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron al vacío para dar 3-(4-acetamido-3-fluorofenil)-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo.
Etapa e: A una solución de 3-(4-acetamido-3-fluorofenil)-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo (0,8 g, 1,5 mmol) en diclorometano (10 ml) se añadió TFA (0,4 g, 3,6 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después de completarse la reacción, el disolvente se diluyó con agua y NaHCO3acuoso saturado y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4. El disolvente se eliminó a presión reducida para dar N-(2-fluoro-4-(2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)fenil)acetamida. EM: (ES)m/zcalculado para C25H30FN4O2[M H]<+>437,2, hallado 437,3.
Etapa f: A una mezcla de A-(2-fluoro-4-(2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridina-3-il)fenil)acetamida (100,0 mg, 0,25 mmol), 1-bromo-2-cloro-4-(trifluorometil)benceno (85,0 mg, 0,37 mmol), NaOtBu (47,0 mg, 0,49 mmol) y BINAP (80,0 mg, 0,05 mmol) en tolueno (3 ml) se añadió Pd2(dba)3(22 mg, 0,02 mmol). La mezcla de reacción se desgasificó (N2) durante 5 min y se agitó en N2a 105 °C durante 6 h. Después de completarse la reacción, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con EtOAc y se filtró a través de Celite. El filtrado se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 5 al 20% de EtOAc en hexanos) para dar N-(4-(5-(2-cloro-4-(trifluorometil)fenil)-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2-fluorofenil)acetamida. EM: (ES)m/zcalculado para C32H32ClF4N4O2[M H]<+>615,2, hallado 615,3.
Etapa g: A una solución de N-(4-(5-(2-cloro-4-(trifluorometil)fenil)-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2-fluorofenil)acetamida (100,0 mg, 0,4 mmol) en MeOH (3 ml) se añadió HCl 4 N en dioxano (2,5 ml, 10,0 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después de completarse la reacción, la mezcla se diluyó con NaHCO3acuoso saturado y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica combinada se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4. El disolvente se eliminó a presión reducida para dar 4-(5-(2-cloro-4-(trifluorometil)fenil)-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2-fluoroanilina. EM: (ES)m/zcalculado para C30H30ClF4N4O [M H]<+>573,2, hallado 573,2.
Etapa h: A una solución agitada de 4-(5-(2-cloro-4-(trifluorometil)fenil)-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2-fluoroanilina (75,0 mg, 0,13 mmol) en THF anhidro (5 ml), se añadió N,N-disopropiletilamina (75,0 mg, 0,65 mmol) y isocianato de trimetilo (140,0 mg, 1,2 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Una vez completada, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 20 al 60% de EtOAc en hexanos) para proporcionar 1-(4-(5-(2-cloro-4-(trifluorometil)fenil)-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)-2-fluorofenil)urea.<1>H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 8.00 (t,J= 8.6 Hz, 1H), 7.69 (d,J= 2.0 Hz, 1H), 7.54 (d,J= 8.6 Hz, 1H), 7.39 (d,J= 8.2 Hz, 1H), 7.33 (t,J= 7.8 Hz, 1H), 7.0 (d,J= 8.2 Hz, 1H), 6.80-6.95 (m, 3H), 4.87 (a, 3H), 4.32 (c,J=9.4 Hz, 2H), 3.65-3.75 (m, 2H), 3.61 (t,J= 5.8 Hz, 2H), 2.95-3.10 (m, 2H), 2.01 (s, 3H), 1.85 -1.98 (m, 1H), 0.86 (d ,J= 6.6 Hz, 6H). MS: (ES)m/zcalculado para C31H31ClF4N5O2[M H]<+>616,2, hallado 616,2.
Síntesis de 1-(2-fluoro-4-(2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-5-((2-(trifluorometil)fenil)sulfonil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)fenil)urea
Etapa a: Una mezcla de 3-(4-amino-3-fluorofenil)-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3 -c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo (2,4 g, 4,9 mmol), isocianatotrimetilsilano (7,5 g, 65,6 mmol) y ácido acético (2,87 ml, 47,8 mmol) en diclorometano (60 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 8 h. Después la mezcla se basificó con NaHCO3acuoso saturado y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4y se filtró. El disolvente se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 0 al 100% de EtOAc en hexanos) para producir 3-(3-fluoro-4-ureidofenil)-2-(2-isobutoxi- 6-metilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo. EM: (ES)m/zcalculado para C29H37FN5O4[M H]<+>538,3, hallado 538,3.
Etapa b: Una mezcla de 3-(3-fluoro-4-ureidofenil)-2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo (1,8 g, 3,3 mmol) y HCl 4 N en dioxano (17,0 ml, 68,0 mmol) en diclorometano (20 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Después, la mezcla se concentró al vacío para producir clorhidrato de 1-(2-fluoro-4-(2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)fenil)urea. EM: (ES)m/zcalculado para C24H29FN5O2[M H]<+>438,2, hallado 438,3
Etapa c: Una mezcla de clorhidrato de 1-(2-fluoro-4-(2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)fenil)urea (25,0 mg, 0,05 mmol), cloruro de 2-(trifluorometil)bencenosulfonilo (30,0 mg, 0,12 mmol) y NEt3(0,1 ml, 0,7 mmol) en diclorometano (1,5 ml) se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. La mezcla se inactivó con agua. La mezcla obtenida se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 0 al 100% de EtOAc en hexanos) para producir 1-(2-fluoro-4-(2-(2-isobutoxi-6-metilfenil)-5-((2-( trifluorometil)fenil)sulfonil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)fenil)urea.<1>H RMN (400 MHz, CDCl3): δ 8.17 (m, 1H), 7.97 (dd,J= 8.4, 8.4 Hz, 1H), 7.89 (m, 1H), 7.70 (m, 2H), 7.18 (dd,J= 8.0, 8.0 Hz, 1H), 7.07 (d,J= 2.8 Hz, 1H), 6.68-6.84 (m, 4H), 4.87 (s, 2H), 4.50 (c,J= 13.6 Hz, 2H), 3.73 (m, 2H), 3.58 (d,J= 6.8 Hz, 2H), 2.92 (m, 2H), 1.94 (s, 3H), 1.85 (m, 1H), 0.78 (d,J= 6.8 Hz, 6H). MS: (ES)m/zcalculado para C31H32F4N5O4S[M H]<+>646,2, hallado 646,2.
Síntesis de 4-(5-(5-(terc-butil)-2-metilfenil)-2-(2,6-dimetilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il
Etapa a: A una solución agitada de 4-oxopiperidina-1-carboxilato de terc-butilo (3,0 g, 15,1 mmol) en THF anhidro (30 ml) a -78 °C en atmósfera de N2se añadió una solución de LiHMDS 1,0 M en THF (16,5 ml, 16,5 mmol) gota a gota. Después de que la mezcla de reacción se agitara durante 30 minutos, se añadió a la mezcla una solución de cloruro de 4-metoxibenzoílo (2,6 g, 15,1 mmol) en THF (3 ml). La mezcla de reacción se agitó a -78 °C durante 1 h, y después la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 2 h. Una vez completada, la mezcla de reacción se diluyó con EtOH: AcOH (3:1) y se añadió clorhidrato de (2,6 dimetilfenil)hidrazina (2,6 g, 15,1 mmol). La mezcla se agitó durante 30 min y después a 100 °C durante 16 h. Después de completarse la reacción, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc. La capa orgánica se lavó con H2O y después con salmuera. La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 5 al 20% de EtOAc en hexanos) para dar 2-(2,6-dimetilfenil)-3-(4-metoxifenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-carboxilato de terc-butilo. EM: (ES)m/zcalculado para C26H32N3O3[M H]<+>434,2, hallado 434,3
Etapa b: A una solución de 2-(2,6-dimetilfenil)-3-(4-metoxifenil)-2,4,6,7-tetrahidro-5H-pirazolo[4,3-c]piridina-5-carboxilato de terc-butilo (3,5 g, 8,1 mmol) en diclorometano (30 ml) se añadió TFA (1,8 g, 16,1 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después de completarse la reacción, el disolvente se diluyó con agua y NaHCO3acuoso saturado y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4. El disolvente se eliminó al vacío para dar 2-(2,6-dimetilfenil)-3-(4-metoxifenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridina. EM: (ES)m/zcalculado para C21H24N3O [M H]<+>334,2, hallado 334,2.
Etapa c: A una mezcla de 2-(2,6-dimetilfenil)-3-(4-metoxifenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridina (500,0 mg, 1,5 mmol), 4-terc-butil-2-bromo-1-metilbenceno (502,0 mg, 2,2 mmol), NaOtBu (280,0 mg, 2,9 mmol) y X-Phos (70,0 mg, 2,2 mmol) en tolueno (10 ml) se añadió Pd(OAc)2(17,0 mg, 0,07 mmol). La mezcla de reacción se desgasificó (N2) durante 5 min y se agitó en N2a 110 °C durante 16 h. Después de completarse la reacción, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc y después se filtró a través de Celite. El filtrado se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 5 al 20% de EtOAc en hexanos) para dar 5-(5-(terc-butil)-2-metilfenil)-2-(2,6)-dimetilfenil)-3-(4-metoxifenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridina.<1>H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 7.22 (m, 1H), 7.18 (d,J= 1.9 Hz,1H), 7.13 (s a, 1H), 7.10 (d,J= 2.7 Hz, 1H), 7.09 (s, 1H), 7.05-7.07 (m, 2H), 7.0-7.02 (m, 1H), 6.83 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 6.81 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 4.13 (s, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.38 (t,J=5.8 Hz, 2H), 2.89 (t,J=5.8 Hz, 2H), 2.29 (s, 3H), 1.98 (s, 6H), 1.26 (s, 9H). MS: (ES)m/zcalculado para C32H38N3O [M H]<+>480,3, hallado 480,3.
Etapa d: A una solución agitada de 5-(5-(terc-butil)-2-metilfenil)-2-(2,6-dimetilfenil)-3-(4-metoxifenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridina (400,0 mg, 0,8 mmol) en diclorometano anhidro (10 ml) a -78 °C en una atmósfera de N2se añadió solución de BBr31,0 M en diclorometano (2,1 ml, 2,1 mmol) gota a gota. La mezcla de reacción se agitó a -78 °C durante 1 h, y después se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 2 h. Una vez completada, la mezcla de reacción se inactivó con MeOH (2 ml), se agitó durante 10 minutos y después se diluyó con diclorometano. La capa orgánica se lavó con H2O y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (del 5 al 25% de EtOAc en hexanos) para dar 4-(5-(5-(terc-butil)-2-metilfenil)-2-(2,6-dimetilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-3-il)fenol.<1>H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 7.49 (s a, 1H), 7.25-7.35 (m, 4H), 7.14 (d,J= 7.4 Hz, 2H), 6.98 (d,J= 2.0 Hz, 1H), 6.96 (d,J= 2.0 Hz, 1H), 6.69 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 6.67 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 4.69 (s a, 2H), 3.80-3.90 (m, 2H), 3.12 (bt,J= 7.0 Hz, 2H), 2.44 (s, 3H), 1.99 (s, 6H), 1.30 (s, 9H). MS: (ES)m/zcalculado para C31H36N3O [M H]<+>466,3, hallado 466,3.
Ejemplo 12
Este ejemplo ilustra la evaluación de la actividad biológica asociada con compuestos específicos de la invención.MATERIALES Y PROCEDIMIENTOS
A. Células
1. 1. Células que expresan el receptor de C5a
a) Células U937
Las células U937 son una línea celular monocítica que expresa C5aR y están disponibles en ATCC (VA). Estas células se cultivaron como una suspensión en medio RPMI-1640 suplementado con L-glutamina 2 mM, bicarbonato de sodio 1,5 g/l, glucosa 4,5 g/l, HEPES 10 mM, piruvato de sodio 1 mM y FBS al 10%. Las células se cultivaron en una atmósfera del 5% de CO2/95% de aire, 100% de humedad a 37 °C y se subcultivaron dos veces por semana a una proporción de 1:6 (las células se cultivaron en un intervalo de densidad de 1 × 10<5>a 2 × 10<6>células/ml) y se recolectaron a 1 × 10<6>células/ml. Antes del ensayo, las células se tratan durante la noche con 0,5 mM de AMP cíclico (Sigma, OH) y se lavan una vez antes de su uso. Las células U937 tratadas con AMPc se pueden utilizar en ensayos funcionales y de unión al ligando C5aR.
b) Neutrófilos humanos aislados
Opcionalmente, pueden usarse neutrófilos humanos o murinos para analizar la actividad del compuesto. Los neutrófilos pueden aislarse de sangre humana fresca mediante separación por densidad y centrifugación. Brevemente, se incuba sangre completa con partes iguales de dextrano al 3% y se deja separar durante 45 minutos. Después de la separación, la capa superior se coloca encima de 15 ml de Ficoll (15 ml de Ficoll por cada 30 ml de suspensión sanguínea) y se centrifuga durante 30 minutos a 400 x g sin freno. Después se aísla el sedimento en el fondo del tubo y se resuspende en tampón de lisis PharmLyse RBC (BD Biosciences, San José, CA), después de lo cual la muestra se centrifuga nuevamente durante 10 minutos a 400 × g con freno. El sedimento celular restante se resuspende según sea apropiado y consiste en neutrófilos aislados.
B. Ensayos
1. 1. Inhibición de la unión del ligando C5aR
Las células U937 tratadas con AMPc que expresaban C5aR se centrifugaron y se resuspendieron en tampón de ensayo (HEPES 20 mM, pH 7,1, NaCl 140 mM, CaCl21 mM, MgCl25 mM y con albúmina de suero bovino al 0,1%) hasta una concentración de 3 x 10<6>células/ml. Los ensayos de unión se establecieron de la forma siguiente. Se añadieron 0,1 ml de células a las placas de ensayo que contenían 5 µl del compuesto, dando una concentración final de ~2-10 µM de cada compuesto para el cribado (o parte de una respuesta a la dosis para determinaciones de la CI50del compuesto). Después se añadieron 0,1 ml de C5a marcado con<125>I (obtenido de Perkin Elmer Life Sciences, Boston, MA) diluido en tampón de ensayo hasta una concentración final de ~50 pM, produciendo ~30.000 cpm por pocillo, se sellaron las placas y se incubaron durante aproximadamente 3 horas a 4 °C sobre una plataforma agitadora. Las reacciones se aspiraron sobre filtros de vidrio GFB previamente impregnados en una solución de polietilenimina (PEI) al 0,3%, en un recolector de células al vacío (Packard Instruments; Meriden, CT). Se añadió líquido de centelleo (40 µl; Microscint 20, Packard Instruments) a cada pocillo, se sellaron las placas y se midió la radioactividad en un contador de centelleo Topcount (Packard Instruments). Se utilizaron pocillos de control que contenían únicamente diluyente (para recuentos totales) o C5a en exceso (1 µg/ml, para unión no específica) para calcular el porcentaje de inhibición total para el compuesto. El programa informático Prism de GraphPad, Inc. (San Diego, Ca) se utilizó para calcular los valores de CI50. Los valores de CI50son las concentraciones necesarias para reducir la unión de C5a radiomarcado al receptor en un 50%. (Para obtener descripciones adicionales de la unión de ligandos y otros ensayos funcionales, véase Dairaghi, et al., J. Biol. Chem.274:21569-21574 (1999), Penfold, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA.
96:9839-9844 (1999), and Dairaghi, et al,. J. Biol. Chem.272:28206-28209 (1997)).
2. 2. Movilización de calcio
Opcionalmente, se pueden someter a ensayo adicionalmente los compuestos para determinar su capacidad para inhibir el flujo de calcio en las células. Para detectar la liberación de reservas intracelulares de calcio, se incuban células (por ejemplo, U937 estimuladas con AMPc o neutrófilos) con 3 µM de colorante INDO-1AM (Molecular Probes; Eugene, OR) en medio celular durante 45 minutos a temperatura ambiente y se lavan con solución salina tamponada con fosfato (PBS). Después de la carga de INDO-1AM, las células se resuspenden en tampón de flujo (solución salina equilibrada de Hank (HBSS) y FBS al 1%). La movilización de calcio se mide utilizando un espectrofotómetro Photon Technology International (Photon Technology International; Nueva Jersey) con excitación a 350 nm y registro dual simultáneo de emisión de fluorescencia a 400 nm y 490 nm. Los niveles relativos de calcio intracelular se expresan como la relación de emisión de 400 nm/490 nm. Los experimentos se realizan a 37 °C con mezcla constante en cubetas que contienen cada una 10<6>células en 2 ml de tampón de flujo. Los ligandos de quimiocina se pueden usar en un intervalo de 1 a 100 nM. La relación de emisión se representa gráficamente a lo largo del tiempo (normalmente 2-3 minutos). Se añaden compuestos de bloqueo de ligandos candidatos (hasta 10 µM) a los 10 segundos, seguidos de quimiocinas a los 60 segundos (es decir, C5a; R&D Systems; Minneapolis, MN) y quimiocina de control (es decir, SDF-1α; R&D Systems; Minneapolis, MN) a los 150 segundos.
3. Ensayos de quimiotaxis
Opcionalmente, los compuestos pueden someterse adicionalmente a ensayo para determinar su capacidad para inhibir la quimiotaxis en células. Los ensayos de quimiotaxis se realizan utilizando filtros de policarbonato recubiertos de polivinilpirrolidona de 5 µm de poro en cámaras de quimiotaxis de 96 pocillos (Neuroprobe; Gaithersburg, MD) utilizando tampón de quimiotaxis (solución salina equilibrada de Hank (HBSS) y FBS al 1%). Los ligandos de C5aR (es decir, C5a, R&D Systems; Minneapolis, MN) se utilizan para evaluar la inhibición mediada por compuesto de la migración mediada por C5aR. Otras quimiocinas (es decir, SDF-1α; R&D Systems; Minneapolis, MN) se utilizan como controles de especificidad. La cámara inferior se carga con 29 µl de quimiocina (es decir, C5a 0,03 nM) y cantidades variables de compuesto; la cámara superior contiene 100.000 células U937 o de neutrófilos en 20 µl. Las cámaras se incuban durante 1,5 horas a 37 °C y el número de células en la cámara inferior se cuantifica mediante recuentos celulares directos en cinco campos de alta potencia por pocillo o mediante el ensayo CyQuant (Molecular Probes), un procedimiento de colorante fluorescente que mide el contenido de ácidos nucleicos y observación microscópica.C. Identificación de inhibidores de C5aR
1. Ensayo
Para evaluar moléculas orgánicas pequeñas que impiden que el receptor de C5a se una al ligando, se empleó un ensayo que detectó la unión del ligando radiactivo (es decir, C5a) a células que expresan C5aR en la superficie celular (por ejemplo, células U937 estimuladas por AMPc o neutrófilos humanos aislados). Para los compuestos que inhibieron la unión, ya sean competitiva o no, se observan menos recuentos radiactivos en comparación con los controles no inhibidos.
Se añadió el mismo número de células a cada pocillo de la placa. Después, las células se incubaron con C5a radiomarcado. El ligando no unido se eliminó lavando las células y el ligando unido se determinó mediante cuantificación de los recuentos radiactivos. Las células que se incubaron sin ningún compuesto orgánico dieron recuentos totales; la unión no específica se determinó incubando las células con ligando no marcado y ligando marcado. El porcentaje de inhibición se determinó mediante la ecuación:
2. 2. Curvas de respuesta a la dosis
Para determinar la afinidad de un compuesto candidato por C5aR, así como para confirmar su capacidad para inhibir la unión del ligando, la actividad inhibidora se tituló en un intervalo de concentraciones de compuesto de 1 × 10<-10>a 1 × 10<-4>M. En el ensayo, se varió la cantidad de compuesto; mientras que el número de células y la concentración de ligando se mantuvieron constantes.
D. Modelos de eficacia in vivo
Los compuestos de interés pueden evaluarse para determinar su eficacia potencial en el tratamiento de afecciones mediadas por C5a determinando la eficacia del compuesto en un modelo animal. Además de los modelos descritos a continuación, se pueden encontrar otros modelos animales adecuados para estudiar el compuesto de interés en Mizuno, M. et al., Expert Opin. Investig. Drugs (2005), 14(7), 807-821.
1. Modelos de leucopenia inducida por C5a.
a) Leucopenia inducida por C5a en un modelo de ratón con C5aR humano insertado (knock-in)
Para estudiar la eficacia de los compuestos de la presente invención en un modelo animal, se puede crear un ratón recombinante usando técnicas estándar, en las que la secuencia genética que codifica el C5aR de ratón se reemplaza por la secuencia que codifica el C5aR humano, para crear un ratón hC5aR-KI. En este ratón, la administración de hC5a da lugar a una regulación al alza de las moléculas de adhesión en las paredes de los vasos sanguíneos que se unen a los leucocitos sanguíneos y los secuestran del torrente sanguíneo. Se administran a los animales 20 ug/kg de hC5a y 1 minuto después se cuantifican los leucocitos en sangre periférica mediante técnicas estándar. El tratamiento previo de ratones con dosis variables de los presentes compuestos puede bloquear casi por completo la leucopenia inducida por hC5a.
b) Leucopenia inducida por C5a en un modelo de mono Cynomolgus
Para estudiar la eficacia de los compuestos de la presente invención en un modelo de primate no humano, se estudia la leucopenia inducida por C5a en un modelo de mono cynomolgus. En este modelo, la administración de hC5a da lugar a una regulación al alza de las moléculas de adhesión en las paredes de los vasos sanguíneos que se unen a los leucocitos sanguíneos y, por lo tanto, los secuestran del torrente sanguíneo. Se administran a los animales 10 ug/kg de hC5a y 1 minuto después se cuantifican los leucocitos en sangre periférica.
Modelo de ratón de vasculitis inducida por ANCA
El día 0, se inyecta a los ratones hC5aR-KI por vía intravenosa 50 mg/kg de anticuerpo contra mieloperoxidasa purificado (Xiao et al, J. Clin.955-963 (2002)). Se administran a los ratones además dosis orales diarias de compuestos de la invención o vehículo durante siete días, después se sacrifican los ratones y se recogen los riñones para examen histológico. El análisis de las secciones de riñón puede mostrar una cantidad y una gravedad significativamente reducidas de las lesiones semilunares y necróticas en los glomérulos en comparación con los animales tratados con vehículo.
2. Modelo de ratón de neovascularización coroidea
Para estudiar la eficacia de los compuestos de la presente invención en el tratamiento de la degeneración macular relacionada con la edad (DMAE), la membrana de Bruch en los ojos de ratones hC5aR-KI se rompe mediante fotocoagulación con láser (Nozika et al, PNAS 103: 2328-2333 (2006). Los ratones se tratan con vehículo o una dosis oral diaria o intravítrea apropiada de un compuesto de la invención durante una a dos semanas. La reparación del daño inducido por láser y la neovascularización se evalúan mediante histología y angiografía.
3. Modelos de artritis reumatoide
a) Modelo de conejo de inflamación articular destructiva
Para estudiar los efectos de los compuestos candidatos sobre la inhibición de la respuesta inflamatoria de conejos a una inyección intraarticular del componente de la membrana bacteriana lipopolisacárido (LPS), se utiliza un modelo de conejo de inflamación articular destructiva. El diseño de este estudio imita la inflamación destructiva de las articulaciones que se observa en la artritis. La inyección intraarticular de LPS provoca una respuesta inflamatoria aguda caracterizada por la liberación de citocinas y quimiocinas, muchas de las cuales se han identificado en articulaciones artríticas reumatoides. Se producen aumentos marcados de leucocitos en el líquido sinovial y en la membrana sinovial en respuesta a la elevación de estos mediadores quimiotácticos. Los antagonistas selectivos de los receptores de quimiocinas han demostrado eficacia en este modelo (véase Podolin, et al., J. Immunol.
169(11):6435-6444 (2002)).
Se realiza un estudio de LPS en conejos esencialmente tal como se describe en Podolin, et al.ibid., se tratan intraarticularmente conejos de Nueva Zelanda (aproximadamente 2 kilogramos) en una rodilla con LPS (10 ng) junto con únicamente vehículo (solución salina tamponada con fosfato con DMSO al 1%) o con la adición del compuesto candidato (dosis 1 = 50 µM o dosis 2 = 100 µM) en un volumen total de 1,0 ml. Dieciséis horas después de la inyección de LPS, se lavan las rodillas y se realizan recuentos de células. Los efectos beneficiosos del tratamiento se determinaron mediante evaluación histopatológica de la inflamación sinovial. Para la evaluación histopatológica se utilizan puntuaciones de inflamación: 1 - mínima, 2 - leve, 3 - moderada, 4 - moderada marcada.
b) Evaluación de un compuesto en un modelo de rata de artritis inducida por colágeno
Se lleva a cabo un estudio de artritis por colágeno tipo II en desarrollo de 17 días para evaluar los efectos de un compuesto candidato sobre la inflamación clínica del tobillo inducida por artritis. La artritis por colágeno en ratas es un modelo experimental de poliartritis que se ha utilizado ampliamente para pruebas preclínicas de numerosos agentes antiartríticos (véase Trentham, et al., J. Exp. Med. 146(3):857-868 (1977), Bendele, et al., Toxicologic Pathol. 27:134-142 (1999), Bendele, et al., Arthritis Rheum.42:498-506 (1999)). Las características distintivas de este modelo son el inicio y la progresión confiables de una inflamación poliarticular robusta y fácilmente medible, una marcada destrucción del cartílago en asociación con la formación de pannus y una resorción ósea y proliferación ósea perióstica de leve a moderada.
Se anestesian ratas Lewis hembra (aproximadamente 0,2 kilogramos) con isoflurano y se les inyecta adyuvante incompleto de Freund que contiene 2 mg/ml de colágeno bovino de tipo II en la base de la cola y dos sitios en la espalda los días 0 y 6 de este estudio de 17 días. Un compuesto candidato se dosifica diariamente por vía subcutánea desde el día 0 hasta el día 17 a una dosis eficaz. Se tomaron medidas con un calibre del diámetro de la articulación del tobillo y la reducción de la inflamación de la articulación se toma como medida de la eficacia.
4. Modelo de sepsis en ratas
Para estudiar el efecto de los compuestos de interés en la inhibición de la respuesta inflamatoria generalizada que se asocia con una enfermedad similar a la sepsis, se utiliza el modelo de sepsis en ratas por ligadura y punción cecal (CLP). Se realiza un estudio de CLP en ratas esencialmente tal como se describe por Fujimura N, et al. (American Journal Respiratory Critical Care Medicine 2000; 161: 440-446). De una forma descrita brevemente, las ratas Wistar Albino de ambos sexos que pesan entre 200 y 250 g se mantienen en ayunas durante doce horas antes de los experimentos. Los animales se mantienen en ciclos normales de luz y oscuridad de 12 horas y se alimentan con pienso estándar para ratas hasta 12 horas antes del experimento. Después los animales se dividen en cuatro grupos; (i) dos grupos de operaciones simuladas y (ii) dos grupos CLP. Cada uno de estos dos grupos (es decir, (i) y (ii)) se divide en un grupo de control de vehículo y un grupo de compuesto de ensayo. La sepsis se induce mediante el procedimiento CLP. Bajo anestesia breve se realiza una laparotomía de la línea media utilizando una disección mínima y se liga el ciego justo debajo de la válvula ileocecal con seda 3-0 de modo que se mantenga la continuidad intestinal. La superficie antimesentérica del ciego se perfora con una aguja de calibre 18 en dos lugares separados por 1 cm y el ciego se aprieta suavemente hasta que se extruye la materia fecal. Después se devuelve el intestino al abdomen y se cierra la incisión. Al final de la operación, todas las ratas se reaniman con solución salina, 3 ml/100 g de peso corporal, administrada por vía subcutánea. Después de la operación, las ratas se privan de alimento, pero tienen libre acceso a agua durante las siguientes 16 horas hasta que son sacrificadas. A los grupos operados de forma simulada se les realiza una laparotomía y se manipula el ciego, pero no se liga ni se perfora. Los efectos beneficiosos del tratamiento se miden mediante la puntuación histopatológica de tejidos y órganos, así como mediante la medición de varios indicadores clave de la función hepática, la función renal y la peroxidación lipídica. Para evaluar la función hepática se miden la aspartato transaminasa (AST) y la alanina transaminasa (ALT). Se estudian las concentraciones de nitrógeno ureico y creatinina en sangre para evaluar la función renal. Las citocinas proinflamatorias tales como TNF-alfa e IL-1beta también se analizan mediante ELISA para determinar los niveles séricos.
5. Modelo de LES en ratón de nefritis lúpica experimental.
Para estudiar el efecto de compuestos de interés sobre el lupus eritematoso sistémico (LES), se utiliza el modelo de LES murino MRL/lpr. La cepa MRL/Mp-Tmfrsf6lpr</lpr>es un modelo de ratón de LES humano de uso común. Para evaluar la eficacia de los compuestos en este modelo, se dividen ratones macho MRL/lprequitativamente entre los grupos de control y de antagonistas de C5aR a las 13 semanas de edad. Después, a lo largo de las siguientes 6 semanas, se administra el compuesto o vehículo a los animales mediante bombas osmóticas para mantener la cobertura y minimizar los efectos del estrés en los animales. Se recolectan muestras de suero y orina cada dos semanas durante las seis semanas de inicio y progresión de la enfermedad. En una minoría de estos ratones se desarrolla glomeruloesclerosis que conduce a la muerte del animal por insuficiencia renal. Seguir la mortalidad como indicador de insuficiencia renal es uno de los criterios medidos y el tratamiento exitoso generalmente dará como resultado un retraso en la aparición de la muerte súbita entre los grupos de ensayo. Además, la presencia y la magnitud de la enfermedad renal también se puede controlar de forma continua con mediciones de nitrógeno ureico en sangre (BUN) y albuminuria. También se recolectaron tejidos y órganos a las 19 semanas y se sometieron a histopatología e inmunohistoquímica y se calificaron basándose en el daño tisular y la infiltración celular.
6. Modelo de rata de EPOC
La inflamación de las vías respiratorias inducida por el humo en modelos de roedores puede utilizarse para evaluar la eficacia de compuestos en la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC). Los antagonistas selectivos de quimiocinas han demostrado eficacia en este modelo (véase Stevenson, et al., Am. J. Physiol Lung Cell Mol Physiol.
288 L514-L522, (2005)). Se lleva a cabo un modelo agudo de EPOC en ratas tal como se describe por Stevenson et al. Un compuesto de interés se administra sistémicamente mediante dosificación oral o intravenosa; o localmente con compuesto nebulizado. Se colocan ratas Sprague-Dawley macho (350-400 g) en cámaras de Perspex y se exponen al humo de cigarrillo aspirado mediante una bomba (50 ml cada 30 segundos con aire fresco en el medio). Las ratas se exponen durante un periodo total de 32 minutos. Las ratas se sacrifican hasta 7 días después de la exposición inicial. Cualquier efecto beneficioso del tratamiento se evalúa mediante una disminución del infiltrado de células inflamatorias y una disminución de los niveles de quimiocinas y citocinas.
En un modelo crónico, los ratones o las ratas están expuestos a exposiciones diarias al humo del tabaco durante hasta 12 meses. El compuesto se administra sistémicamente mediante una dosificación oral una vez al día, o potencialmente de forma local mediante un compuesto nebulizado. Además de la inflamación observada con el modelo agudo (Stevensen et al.), los animales también pueden presentar otras patologías similares a las observadas en la EPOC humana, tales como enfisema (como se indica mediante el aumento de la intersección lineal media), así como una química pulmonar alterada (véase Martorana et al, Am. J. Respir. Crit Care Med.172(7): 848-53.
7. Modelo EAE de ratón de esclerosis múltiple
La encefalomielitis autoinmunitaria experimental (EAE) es un modelo de esclerosis múltiple humana. Se han publicado variaciones del modelo que son bien conocidas en el campo. En un protocolo típico, se utilizan ratones C57BL/6 (Charles River Laboratories) para el modelo EAE. Los ratones se inmunizan con 200 µg de glicoproteína de oligodendrocitos de mielina (MOG) 35-55 (Peptide International) emulsionada en adyuvante completo de Freund (CFA) que contiene 4 mg/ml de Mycobacterium tuberculosis (Sigma-Aldrich) s.c. el día 0. Además, el día 0 y el día 2, los animales reciben 200 ng de toxina pertussis (Calbiochem) i.v. La puntuación clínica se basa en una escala de 0 a 5: 0, sin signos de enfermedad; 1, cola flácida; 2, debilidad de las extremidades traseras; 3, parálisis de las extremidades traseras; 4, debilidad o parálisis de las extremidades anteriores; 5, moribundo. La dosificación de los compuestos de interés que hay que evaluar puede iniciarse el día 0 (profiláctico) o el día 7 (terapéutico, cuando existe evidencia histológica de enfermedad pero pocos animales presentan signos clínicos) y dosificarse una o más veces por día en concentraciones apropiadas para su actividad y propiedades farmacocinéticas, por ejemplo, 100 mg/kg s.c. La eficacia de los compuestos se puede evaluar mediante comparaciones de gravedad (puntuación clínica media máxima en presencia del compuesto en comparación con el vehículo) o midiendo una disminución en el número de macrófagos (F4/80 positivos) aislados de la médula espinal. Las células mononucleares de la médula espinal se pueden aislar mediante gradiente de Percoll discontinuo. Las células pueden teñirse usando F4/80-PE anti-ratón de rata o IgG2b-PE de rata (Caltag Laboratories) y cuantificarse mediante análisis FACS usando 10 ul de Polybeads por muestra (Polysciences).
8. Modelo de ratón de trasplante de riñón
Se pueden realizar modelos de trasplante en ratones, por ejemplo, un modelo de trasplante de riñón alogénico de ratones C57BL/6 a BALB/c se describe en Faikah Gueler et al, JASN Express, 27 de agosto de 2008. Brevemente, los ratones se anestesian y se une el riñón izquierdo del donante a un manguito de la aorta y la vena renal con un pequeño manguito de la cava, y se extraen los uréteres en bloque. Después de la nefrectomía izquierda del receptor, los manguitos vasculares se anastomosan a la aorta abdominal y la vena cava del receptor, respectivamente, por debajo del nivel de los vasos renales nativos. El uréter se anastomosa directamente con la vejiga. El tiempo de isquemia fría es de 60 min y el tiempo de isquemia caliente es de 30 min. El riñón nativo derecho se puede extirpar en el momento del trasplante de aloinjerto o el día 4 posterior al trasplante para estudios de supervivencia a largo plazo. Se supervisa el estado físico general de los ratones para detectar evidencia de rechazo. El tratamiento con compuesto de animales puede iniciarse antes de la cirugía o inmediatamente después del trasplante, por ejemplo mediante inyección subcutánea una vez al día. Se estudia la función renal y la supervivencia de los ratones. Los niveles de creatinina sérica se miden mediante un procedimiento automatizado (Beckman Analyzer, Krefeld, Alemania).
9. Modelo de ratón de isquemia/reperfusión
Se puede realizar un modelo de ratón de lesión por isquemia/reperfusión tal como se describe por Xiufen Zheng et al, Am. J. Pathol, volumen 173:4, octubre de 2008. Brevemente, se anestesian ratones CD1 de entre 6 y 8 semanas de edad y se colocan sobre una almohadilla térmica para mantener el calor durante la cirugía. Después de las incisiones abdominales, se diseccionan los pedículos renales con un instrumento romo y se coloca una pinza microvascular en el pedículo renal izquierdo durante 25 a 30 minutos. Después de la isquemia, se retiran las pinzas junto con el riñón derecho, se suturan las incisiones y se permite que los animales se recuperen. Se recolecta sangre para el análisis de creatinina sérica y BUN como indicador de la salud renal. Alternativamente, la supervivencia de los animales se supervisa a lo largo del tiempo. El compuesto se puede administrar a animales antes y/o después de la cirugía y los efectos sobre la creatinina sérica, el BUN o la supervivencia animal se pueden usar como indicadores de la eficacia del compuesto.
10. Modelo de ratón de crecimiento tumoral
Se inyectan a ratones C57BL/6 de 6-16 semanas de edad por vía subcutánea 1x10<5>células TC-1 (ATCC, VA) en el flanco trasero derecho o izquierdo. A partir de aproximadamente 2 semanas después de la inyección de células, los tumores se miden con calibres cada 2 a 4 días hasta que se obtiene el tamaño del tumor requerido para sacrificar los ratones. En el momento del sacrificio los animales se someten a una necropsia completa y se les extraen bazos y tumores. Los tumores extirpados se miden y se pesan. Los compuestos pueden administrarse antes y/o después de las inyecciones tumorales, y se puede utilizar un retraso o inhibición del crecimiento del tumor para evaluar la eficacia del compuesto.
Ejemplo 13
Los compuestos de la tabla 1 a continuación se prepararon usando los procedimientos descritos anteriormente. Se proporcionan datos de caracterización para cada compuesto enumerado. La actividad se proporciona de la siguiente manera para el ensayo de quimiotaxis usando células U937 tal como se describe en el presente documento (ejemplo 12): , 500 nM < CI50- +, 50 nM < CI50≤ 500 nM; ++, 5 nM < CI50≤ 50 nM y +++, CI50≤ 5 nM.
Tabla 1 Estructura, datos de caracterización y datos de actividad biológica de formas de realización específicas

Claims (20)

  1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto de fórmula (I)
    o una forma hidratada o solvatada del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que, el vértice de anillo a es C(R<2c>) o N, el vértice de anillo b es C(R<2d>) o N, y el vértice de anillo e es C(R<2e>) o N, en el que no más de uno de a, b y e es N; X<1>se selecciona del grupo que consiste en un enlace, alquileno C1-8, C(O), C(O)-alquileno C1-4y S(O)2; R<1>se selecciona del grupo que consiste en a) heteroarilo de 5 a 10 miembros que tiene de 1 a 4 heteroátomos como vértices de anillo seleccionados de entre N, O y S; b) arilo C6-10 c) cicloalquilo C3-8; d) heterocicloalquilo de 4 a 8 miembros que tiene de 1 a 2 heteroátomos como vértices de anillo seleccionados de entre N, O y S; y e) alquilo C1-8, alcoxi C1-8, haloalquilo C1-8, -C(O)NR<1a>R<1b>y -CO2R<1a>; en los que R<1a>y R<1b>se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-8, arilo C6-10y -alquilen C1-6-arilo C6-10; en el que el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 5 sustituyentes R<x>; R<2a>y R<2e>se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-6, alcoxi C1-6, hidrógeno, haloalquilo C1-6,-O-haloalquilo C1-6, -S-alquilo C1-6, -alquil C1-6-O-alquilo C1-6, -alquil C1-6-S-alquilo C1-6, CN y halógeno y al menos uno de R<2a>y R<2e>es distinto de hidrógeno; R<2b>, R<2c>y R<2d>se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, haloalquilo C1-6, -O-haloalquilo C1-6, -S-alquilo C1-6, -alquil C1-6-O-alquilo C1-6, -alquil C1-6-S-alquilo C1-6, ciano y halógeno; cada R<3>se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-4, hidroxilo, haloalquilo C1-4e hidroxialquilo C1-4, y opcionalmente dos grupos R<3>en el mismo átomo de carbono se combinan para formar oxo (=O), y opcionalmente dos grupos R<3>y los átomos de carbono a los que están unidos forman un anillo de 3 a 6 miembros con 0 a 2 heteroátomos como miembros del anillo seleccionados de entre O, N y S; R<4>se selecciona independientemente del grupo que consiste en -X<2>-OR<4a>, -X<2>-NR<4a>R<4b>, -X<2>-CONR<4a>R<4b>, -X<2>-NR<4a>_C(O)R<4a>, -X<2>-NR<4a>-C(O)NR<4a>R<4b>, -X<2>-NR<4a>-C(O)OR<4a>, -X<2>-NR<4a>-C(O)-C1-3alquileno-OR<4a>y -X<2>-NR<4a>-C(O)-alquilen C1-3-NR<4a>R<4b>; en los que cada X<2>es independientemente un enlace, C(O), alquileno C1-4, C(O)-alquileno C1-4y alquilen C1-4-C(O), y cada R<4a>y R<4b>se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-4y haloalquilo C1-4; cada R<5>se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-8, halógeno, alcoxi C1-8, haloalquilo C1-8, haloalcoxi C1-8, hidroxialquilo C1-8, OH, CN, C(O)R<5a>y CO2R<5a>; en los que cada R<5a>se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-4y haloalquilo C1-4; cada R<x>se selecciona independientemente del grupo que consiste en halógeno, haloalquilo C1-4, alquilo C1-4, CN, alcoxi C1-4, haloalcoxi C1-4, hidroxi C1-4, alquenilo C2-4, cicloalquilo C3-6, CO2-alquilo C1-4y CONH2; el subíndice m es 0, 1, 2, 3 o 4; y el subíndice n es 0, 1, 2 o 3.
  2. 2. El compuesto de la reivindicación 1, o una forma hidratada o solvatada del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R<4>se selecciona del grupo que consiste en (a)
    y
    o (b)
    o (c)
  3. 3. El compuesto de la reivindicación 1 o 2, o una forma hidratada o solvatada del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que X<1>es un enlace o alquileno C1-8, o C(O), o C(O)-alquileno C1-4o S(O)2.
  4. 4. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o una forma hidratada o solvatada del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que (a) R<1>es un heteroarilo de 5 a 10 miembros que tiene de 1 a 4 heteroátomos como vértices de anillo seleccionados de entre N, O y S; y en el que el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes R<x>; opcionalmente en el que R<1>se selecciona del grupo que consiste en pirazolilo, piridilo, pirimidinilo, imidazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo y pirazinilo; y en el que el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes R<x>; o (b) R<1>es arilo C6-10; y en el que el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes R<x>, opcionalmente en el que R<1>es fenilo; y en el que el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes R<x>; o (c) R<1>es cicloalquilo C3-8; y en el que el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes R<x>; opcionalmente, en el que R<1>se selecciona del grupo que consiste en ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo; y en el que el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes R<x>; o (d) R<1>es un heterocicloalquilo de 4 a 8 miembros que tiene de 1 a 2 heteroátomos como vértices de anillo seleccionados de entre N, O y S; y en el que el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes R<x>; opcionalmente en el que R<1>se selecciona del grupo que consiste en oxetanilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo y morfolinilo; y en el que el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes R<x>; o (e) R<1>se selecciona del grupo que consiste en alquilo Ci-s, alcoxi C1-8, haloalquilo C1-8, -C(O)NR<1a>R<1b>y -CO2R<1a>; en los que R<1a>y R<1b>se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-8, arilo C6-10y -alquenil C1-6-arilo C6-10; y en el que el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes R<x>.
  5. 5. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o una forma hidratada o solvatada del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R<1>se selecciona del grupo que consiste en fenilo, piridilo, pirimidinilo y pirazinilo; y en el que el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes R<x>.
  6. 6. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una forma hidratada o solvatada del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que (a) los vértices de anillo a y b son CH; R<2b>es H; el vértice de anillo e es C(R<2e>), y R<2a>y R<2e>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-6, alcoxi C1-6, haloalquilo C1-6,-O-haloquilo C1-6, -S-alquilo C1-6, -alquil C1-6-O-alquilo C1-6, -alquil C1-6-S-alquilo C1-6, CN y halógeno; o (b) los vértices de anillo a y b son CH; R<2b>es H; el vértice de anillo e es C(R<2e>), y R<2a>y R<2e>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-6, alcoxi C1-6y halógeno.
  7. 7. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, o una forma hidratada o solvatada del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que (a) n es 0, 1 o 2 y cada R<5>, cuando está presente, se selecciona del grupo que consiste en F, Cl, CN, alquilo C1-4y alcoxi C1-4; o (b) n es 0, 1 o 2 y cada R<5>, cuando está presente, se selecciona del grupo que consiste en F, Cl, CN, CH3y OCH3; o (c) m es 0, 1 o 2 y cada R<3>, cuando está presente, es alquilo C1-4.
  8. 8. El compuesto de la reivindicación 1, o una forma hidratada o solvatada del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R<1>se selecciona del grupo que consiste en fenilo o piridilo, en el que el grupo -X<1>-R<1>está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes R<x>; los vértices de anillo a y b son CH; R<2b>es H; el vértice de anillo e es C(R<2e>), y R<2a>y R<2e>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-6, alcoxi C1-6y halógeno; m es 0, 1 o 2 y cada R<3>, cuando está presente, es CH3; R<4>se selecciona del grupo que consiste en
    n es 0, 1 o 2 y cada R<5>, cuando está presente, se selecciona del grupo que consiste en F, Cl, CN, CH3y OCH3.
  9. 9. El compuesto de la reivindicación 1, o una forma hidratada o solvatada del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que (a) R<1>se selecciona del grupo que consiste en
    ; o (b) -X<1>-R<1>se selecciona del grupo que consiste en:
    ; o (c) en el que R<1>se selecciona del grupo que consiste en:
    ; o (d) R<1>se selecciona del grupo que consiste en:
    o (e) R<1>se selecciona del grupo que consiste en:
  10. 10. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o una forma hidratada o solvatada del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que
    se selecciona del grupo que consiste en
  11. 11. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, o una forma hidratada o solvatada del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que (a) n es 0; o (b) n es 2 y los dos grupos R<3>están en el mismo átomo de carbono y se combinan para formar oxo (=O).
  12. 12. El compuesto de la reivindicación 1, o una forma hidratada o solvatada del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que dicho compuesto se selecciona del grupo que consiste en
  13. 13. Un compuesto de la reivindicación 1, que tiene la fórmula
    o una forma hidratada o solvatada del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  14. 14. Un compuesto de la reivindicación 1, que tiene la fórmula
    o una forma hidratada o solvatada del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  15. 15. Un compuesto de la reivindicación 1, que tiene la fórmula
    o una forma hidratada o solvatada del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  16. 16. Un compuesto de la reivindicación 1, que tiene la fórmula
    o una forma hidratada o solvatada del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  17. 17. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 o una forma hidratada o solvatada del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un vehículo farmacéuticamente aceptable, cuya composición se formula opcionalmente para administración oral, intravenosa, transdérmica o subcutánea.
  18. 18. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 o una forma hidratada o solvatada del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica de la reivindicación 17, para su uso en un procedimiento para tratar a un ser humano que padece o es susceptible a una enfermedad o trastorno que involucra la activación patológica de receptores de C5a, que comprende administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de dicho compuesto o composición, en el que (a) la enfermedad o trastorno es una enfermedad o trastorno inflamatorio, una enfermedad autoinmunitaria o una enfermedad o trastorno oncológico; o (b) la enfermedad o trastorno es un trastorno cardiovascular o cerebrovascular.
  19. 19. El compuesto, forma hidratada o forma solvatada del mismo, o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o composición para su uso según la reivindicación 18, en el que la enfermedad o trastorno se selecciona del grupo que consiste en (a) neutropenia, neutrofilia, granulomatosis de Wegener, poliangeítis microscópica, glomerulopatía C3, glomerulonefritis C3, enfermedad de depósito denso, glomerulonefritis membranoproliferativa, enfermedad de Kawasaki, síndrome urémico hemolítico, síndrome urémico hemolítico atípico (SHUa), rechazo de injerto de tejido, rechazo hiperagudo de órganos trasplantados, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, nefritis lúpica, glomerulonefritis lúpica, vasculitis, vasculitis ANCA, estados hemolíticos y trombocitopénicos autoinmunitarios, inmunovasculitis, enfermedad de injerto contra huésped, nefropatía lúpica, nefritis de Heyman, nefritis membranosa, glomerulonefritis, nefropatía IGA, hidradenitis supurativa y glomerulonefritis membranoproliferativa; o (b) melanoma, cáncer de pulmón, linfoma, sarcoma, carcinoma, fibrosarcoma, liposarcoma, condrosarcoma, sarcoma osteogénico, angiosarcoma, linfangiosarcoma, sinovioma, mesotelioma, meningioma, leucemia, linfoma, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células basales, adenocarcinoma , carcinoma papilar, cistadenocarcinoma, carcinoma broncogénico, carcinoma de células renales, carcinoma hepatocelular, carcinoma de células de transición, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embrionario, tumor de Wilm, adenoma pleomórfico, papiloma de células hepáticas, adenoma tubular renal, cistadenoma, papiloma, adenoma, leiomioma, rabdomioma , hemangioma, linfangioma, osteoma, condroma, lipoma y fibroma.
  20. 20. El compuesto, forma hidratada o forma solvatada del mismo, o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o composición para su uso según la reivindicación 18 o 19, en el que el procedimiento comprende además administrar al ser humano una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más agentes terapéuticos adicionales, opcionalmente (a) en el que los, uno o más, agentes terapéuticos adicionales se seleccionan del grupo que consiste en corticosteroides, esteroides, inmunosupresores, agonistas de inmunoglobulina G, inhibidores de la dipeptidil peptidasa IV, antagonistas del receptor del antígeno 3 de la función linfocitaria, ligandos de interleucina-2, inhibidores del ligando beta de interleucina-1, inhibidores de la subunidad alfa del receptor de IL-2, estimuladores del gen HGF, antagonistas de IL-6, antagonistas de IL-5, estimuladores de antitripsina alfa 1, antagonistas de los receptores de cannabinoides, inhibidores de histona desacetilasa, inhibidores de proteína quinasa AKT, inhibidores de CD20, inhibidores de tirosina quinasa Abl, inhibidores de tirosina quinasa JAK, inhibidores del ligando de TNF alfa, moduladores de hemoglobina, antagonistas de TNF, inhibidores de proteasoma, moduladores de CD3, inhibidores de la familia Hsp 70, agonistas de inmunoglobulina, antagonistas de CD30, antagonistas de tubulina, agonistas del receptor 1 de esfingosina-1-fosfato, inhibidores del ligando del factor de crecimiento del tejido conectivo, inhibidores de caspasa, ligandos de la hormona adrenocorticotrófica, inhibidores de tirosina quinasa Btk, inhibidores del subcomponente C1s del complemento, agonistas del receptor de eritropoyetina, inhibidores del ligando estimulador de linfocitos B, inhibidores de quinasa 2 dependiente de ciclina, estimuladores del ligando 1 de la glicoproteína P-selectina, inhibidores de mTOR, inhibidores del factor de elongación 2, inhibidores de la molécula de adhesión celular, agonistas del factor XIII, inhibidores de la calcineurina, agonistas de la inmunoglobulina G1, inhibidores de la inosina monofosfato deshidrogenasa, inhibidores del subcomponente C1s del complemento, moduladores de timidina quinasa, moduladores de la proteína 4 de los linfocitos T citotóxicos, antagonistas del receptor de angiotensina II, moduladores del receptor de angiotensina II, antagonistas del receptor 12A de la superfamilia de TNF, antagonistas de CD52, inhibidores de adenosina desaminasa, inhibidores del antígeno CD6 de diferenciación de células T, ligandos de FGF-7, inhibidores de la dihidroorotato deshidrogenasa, inhibidores de tirosina quinasa Syk, antagonistas del receptor de interferón tipo I, inhibidores del ligando de interferón alfa, inhibidores del factor inhibidor de la migración de macrófagos, antagonistas de integrina alfa-V/beta-6, estimuladores de cisteína proteasa, inhibidores de quinasa MAP p38, inhibidores del gen TP53, inhibidores de la toxina I similar a Shiga, estimuladores de la fucosiltransferasa 6, ligandos de interleucina 22, inhibidores del gen IRS1, estimuladores de proteína quinasa C, inhibidores de proteína quinasa C alfa, antagonistas de CD74, antagonistas del receptor IIB de inmunoglobulina gamma Fc, inhibidores del antígeno de células T CD7, antagonistas de CD95, estimuladores de N acetilmanosamina quinasa, ligandos de cardiotrofina-1, inhibidores de elastasa leucocitaria, antagonistas del receptor del ligando CD40, moduladores del ligando CD40, antagonistas de IL-17, antagonistas de TLR-2, inhibidores de lectina serina proteasa-2 de unión a manano (MASP-2), inhibidores del factor B, inhibidores del factor D, moduladores de C3aR, moduladores de C5aR2, antagonistas del receptor de células T, inhibidores de PD-1, inhibidores de PD-L1, inhibidores de TIGIT, inhibidores de TIM-3, inhibidores de LAG-3, inhibidores de VISTA, agonistas de STING, inhibidores de IDO, moduladores del receptor de adenosina, inhibidores de CD39, inhibidores de CD73, antagonistas de los receptores de quimiocinas, especialmente CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR7, CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR7, CCR7, CCR9, CX3CR1 y CXCR6, y combinaciones de los mismos; y/o (b) en el que los, uno o más, agentes terapéuticos adicionales se seleccionan del grupo que consiste en obinutuzumab, rituximab, ocrelizumab, ciclofosfamida, prednisona, hidrocortisona, acetato de hidrocortisona, acetato de cortisona, pivalato de tixocortol, prednisolona, metilprednisolona, acetonida de triamcinolona, alcohol de triamcinolona, mometasona, amcinonida, budesonida, desonida, fluocinonida, acetonida de fluocinolona, halcinonida, betametasona, fosfato sódico de betametasona, dexametasona, fosfato sódico de dexametasona, fluocortolona,17-valerato de hidrocortisona, halometasona, dipropionato de alclometasona, beclometasona, valerato de betametasona, dipropionato de betametasona, prednicarbato, 17-butirato de clobetasona, 17-propionato de clobetasol, caproato de fluocortolona, pivalato de fluocortolona, acetato de fluprednideno, 17-butirato de hidrocortisona, 17-aceponato de hidrocortisona, 17-buteprato de hidrocortisona, ciclesonida y prednicarbato, GB-0998, immuglo, begelomab, alefacept, aldesleucina, gevokizumab, daclizumab, basiliximab, inolimomab, perplásmido beperminógeno, sirukumab, tocilizumab, clazakizumab, mepolizumab, fingolimod, panobinostat, triciribina, nilotinib, imatinib, tofacitinib, momelotinib, peficitinib, itacitinib, infliximab, PEG-bHb-CO, etanercept, ixazomib, bortezomib, muromonab, otelixizumab, gusperimus, brentuximab vedotina, ponesimod, emricasan, corticotropina, ibrutinib, cinryze, conestat, metoxi polietilengicol-epoetina beta, belimumab, blisibimod, atacicept, seliciclib, neihulizumab, everolimus, sirolimus, denileucina diftitox, natalizumab, catridecacog, ciclosporina, tacrolimus, voclosporina, voclosporina, canakinumab, micofenolato, mizoribina, abatacept, belatacept, olmesartan medoxomilo, esparsentan, alemtuzumab, pentostatina, itolizumab, palifermina, leflunomida, cenicriviroc, fostamatinib, anifrolumab, sifalimumab, losmapimod, reparixina, ladarixina, aganirsen, sotrastaurina, sotrastaurina, milatuzumab, cardiotrofina-1, tiprelestat, defibrotida, pomalidomida, timoglobulina, laquinimod, inmunoglobulina antitimocítica equina, LIV-Gamma, 99mTc-sestamibi, pomalidomida, laquinimod, teplizumab, solnatida, foralumab, irbesartan propagermanio, cannabidiol, saratina, conjugado de anticuerpo bivalente anti-CD3-toxina diftérica, gel Acthar y células T reguladoras CD4+CD25+, pembrolizumab, nivolumab, atezolizumab, avelumab, durvalumab, y combinaciones de los mismos.
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