ES2969901T3 - Cocristal de ácido benzoico y compuesto de sulfonamida para el tratamiento de tumores - Google Patents

Abstract

La presente divulgación se refiere a nuevas formas cristalinas de compuestos de sulfonamida, composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos en forma cristalina y métodos para preparar y usar los mismos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Cocristal de ácido benzoico y compuesto de sulfonamida para el tratamiento de tumores

Campo técnico

La presente divulgación se refiere a una novedosa forma cristalina de un compuesto de sulfonamida que tiene actividad inhibidora de ribonucleótido reductasa, a composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos de forma cristalina y a métodos de preparación y uso de las mismas.

Antecedentes

La ribonucleótido reductasa (a continuación en el presente documento también denominada “RNR”) está compuesta por un hetero-oligómero de una subunidad grande M1 y una subunidad pequeña M2, en la que se requiere la expresión de ambas para la actividad enzimática. RNR reconoce al ribonucleósido 5'-difosfato (a continuación en el presente documento también denominado “NDP”) como sustrato y cataliza su reducción para dar 2'-desoxirribonucleósido 5'-difosfato (a continuación en el presente documento también denominado “dNDP”). RNR es una enzima limitante de la velocidad en la ruta de síntesis de dNTPde novoy desempeña un papel esencial en la síntesis y la reparación del ADN.

La actividad enzimática de RNR está estrechamente relacionada con la proliferación celular, y se ha notificado que su actividad enzimática es particularmente alta en cáncer. En diversos tipos de tumores sólidos y cánceres hemáticos, se han notificado numerosas correlaciones con la sobreexpresión de la subunidad M2 de RNR y su impacto sobre el pronóstico del cáncer. Además, se han notificado la inhibición del crecimiento celular lograda mediante la inhibición de RNR y un efecto antitumoralin vivoen líneas celulares derivadas de varios tipos de cánceres y en modelos no clínicos. Por tanto, se sugiere fuertemente que RNR es una molécula diana importante para el tratamiento del cáncer.

Convencionalmente, se sabe que la hidroxiurea (a continuación en el presente documento también denominada “HU”) y la 3-aminopiridin-2-carboxaldehído tiosemicarbazona (a continuación en el presente documento también denominada “3-AP”) presentan actividad inhibidora de RNR. Sin embargo, estos compuestos difieren en cuanto a estructura de los compuestos de sulfonamida de la presente divulgación. Aunque HU se ha usado clínicamente durante más de 30 años, su actividad inhibidora de RNR es débil y su efecto es limitado. La resistencia al uso de HU también se considera un problema. 3-AP puede formar un quelato con iones metálicos, especialmente iones de hierro (Fe), inhibiendo de ese modo RNR, pero se ha sugerido que 3-AP tiene un efecto inespecífico sobre otras diversas proteínas que contienen iones de Fe, dando como resultado efectos secundarios tales como hipoxia, disnea, metahemoglobinemia y similares en casos clínicos.

Por tanto, existe la necesidad de desarrollar un potente inhibidor de RNR que no forme un quelato con iones metálicos y pueda usarse para el tratamiento de enfermedades asociadas con RNR, tales como el cáncer.

Además, existe el deseo de desarrollar un inhibidor de RNR que pueda manipularse fácilmente. Se sabe que la capacidad de carga y la higroscopicidad de un compuesto biológicamente activo afectan a la manipulación del compuesto durante su incorporación en una composición farmacéutica potencial. Por ejemplo, los compuestos activos que se someten a electricidad estática pueden crear problemas durante la fabricación, tales como un rendimiento reducido y un acondicionamiento irregular. Por tanto, es preferible un compuesto químico activo que tenga una baja carga electrostática. Los compuestos higroscópicos presentan problemas debido a su absorción de humedad, lo que conduce a variaciones en la masa del compuesto dependiendo de la cantidad de agua presente en el entorno circundante, lo que dificulta evaluar con precisión la eficacia biológica del compuesto y garantizar la uniformidad de las composiciones farmacéuticas que contienen el compuesto. Por tanto, es deseable un compuesto químico activo con baja higroscopicidad.

Sumario de la divulgación

Uno de los objetivos de la presente divulgación es proporcionar una forma cristalina, un cocristal y/o una sal de un compuesto novedoso, estable y menos estático que sea un inhibidor de RNR potente y selectivo y pueda usarse como agente antitumoral o agente terapéutico en el tratamiento de otras enfermedades asociadas con RNR.

Como resultado de extensos estudios para identificar un compuesto químico que satisfaga los requisitos mencionados anteriormente, los inventores de la presente divulgación han descubierto formas estables, poco electrostáticas y no higroscópicas de compuestos de sulfonamida que tienen actividad inhibidora de RNR y uso excelentes como agente terapéutico para tratar tumores y otras enfermedades asociadas con RNR. Estos compuestos de sulfonamida existen como forma cristalina, concretamente como cocristales.

La presente invención se refiere a un cocristal de ácido benzoico y el compuesto:

5-cloro-2-(N-((1S,2R)-2-(6-fluoro-2,3-dimetilfenil)-1-(5-oxo-4,5-dihidro-1,3,4-oxadiazol-2-il)propil)sulfamoil)benzamida.

Los cocristales de la presente divulgación presenta una estabilidad y una actividad inhibidora de RNR excelentes y también son fáciles de manipular porque no son higroscópicos y/o no son electrostáticos. Por consiguiente, los cocristales descritos en el presente documento son adecuados para su uso en el tratamiento de enfermedades asociadas con RNR.

Breve descripción de los dibujos

La figura 1 representa un diagrama que ilustra las variaciones diarias en el volumen tumoral relativo (a continuación en el presente documento también denominado “VTR”) después del tratamiento con un compuesto a modo de ejemplo dado a conocer en el presente documento que incluye el cocristal de la presente invención. La figura 2 representa un diagrama que ilustra las variaciones diarias en el VTR después del tratamiento con un compuesto a modo de ejemplo dado a conocer en el presente documento.

La figura 3 representa un diagrama que ilustra las variaciones diarias en el VTR después del tratamiento con un compuesto a modo de ejemplo dado a conocer en el presente documento.

La figura 4 representa un diagrama que ilustra las variaciones diarias en el VTR después del tratamiento con un compuesto a modo de ejemplo dado a conocer en el presente documento.

La figura 5 representa una forma cristalina a modo de ejemplo dada a conocer en el presente documento. La forma cristalina a modo de ejemplo tenía un tamaño de cristal de 0,15 * 0,20 * 0,25 mm, era incolora y tenía forma de placa.

La figura 6 representa un diagrama de difracción de rayos X de polvo (XRD) del cocristal según la presente invención.

La figura 7 representa una curva de calorimetría diferencial de barrido (DSC) del cocristal según la presente invención.

La figura 8 representa curvas isotérmicas de adsorción/desorción de humedad de un cocristal de un compuesto a modo de ejemplo (A) y de una forma libre del mismo compuesto (B).

La figura 9 representa un resultado de simulación de patrón de difracción de rayos X basado en un resultado de análisis de monocristal de un cocristal de ácido benzoico a modo de ejemplo.

Las figuras 10-12 representan datos de medición de pureza óptica de una forma cristalina a modo de ejemplo.Descripción detallada de la divulgación

La presente divulgación se refiere a cocristales de un compuesto que es:

5-cloro-2-(N-((1S,2R)-2-(2,3-dimetilfenil)-1-(5-oxo-4,5-dihidro-1,3,4-oxadiazol-2-il)propil)sulfamoil)benzamida. Los cocristales de la presente divulgación y los productos intermedios de los mismos pueden aislarse y purificarse mediante técnicas de separación y purificación bien conocidas tales como recristalización, cristalización, destilación y cromatografía en columna.

Tal como se usa en el presente documento y a menos que se especifique lo contrario, el término “cristal” y términos relacionados usados en el presente documento, cuando se usan para describir un compuesto, una sustancia, una modificación, un material, un componente o un producto, significan que el compuesto, la sustancia, la modificación, el material, el componente o el producto es sustancialmente cristalino tal como se determina mediante difracción de rayos X. Véanse, por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21a edición, Lippincott, Williams and Wilkins, Baltimore, MD (2005); Farmacopea de Estados Unidos, 23a ed. 1843-1844 (1995).

Tal como se usa en el presente documento y a menos que se especifique lo contrario, el término “forma cristalina” y términos relacionados en el presente documento se refieren a formas sólidas que son cristalinas. Las formas cristalinas incluyen formas cristalinas monocomponente y formas cristalinas multicomponente, y opcionalmente pueden incluir, pero no se limitan a, cocristales, sales (incluyendo sales farmacéuticamente aceptables), polimorfos, solvatos, hidratos y/u otros complejos moleculares. En determinadas realizaciones, una forma cristalina de una sustancia puede estar sustancialmente libre de formas amorfas y/u otras formas cristalinas. En determinadas realizaciones, una forma cristalina de una sustancia puede contener menos de aproximadamente el 0,1, 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ó 50 % de una o más formas amorfas y/u otras formas cristalinas, basado en el peso.

El término “cocristal” se refiere a un complejo molecular derivado de varios formadores de cocristal conocidos en la técnica. A diferencia de una sal, un cocristal normalmente no implica la transferencia de hidrógeno entre el formador de cocristal y el fármaco, sino que implica interacciones intermoleculares, tales como enlaces de hidrógeno, apilamiento de anillos aromáticos o fuerzas dispersivas, entre el formador de cocristal y el compuesto de sulfonamida en la estructura cristalina. En algunas realizaciones, la presente divulgación se refiere a un cocristal que comprende o que consiste en ácido benzoico y un compuesto de sulfonamida tal como se describe en el presente documento.

Tal como se usa en el presente documento y a menos que se especifique lo contrario, los términos “polimorfos”, “formas polimórficas” y términos relacionados en el presente documento se refieren a dos o más formas cristalinas que consisten esencialmente en la misma molécula, las mismas moléculas y/o los mismos iones. Al igual que las diferentes formas cristalinas, los diferentes polimorfos pueden tener propiedades físicas diferentes tales como, por ejemplo, temperatura de fusión, calor de fusión, solubilidad, propiedades de disolución y/o espectros vibracionales, como resultado de la disposición o conformación de las moléculas y/o los iones en la red cristalina. Las diferencias en las propiedades físicas pueden afectar a parámetros farmacéuticos tales como la estabilidad en almacenamiento, la compresibilidad y la densidad (importantes en la formulación y fabricación de productos) y la velocidad de disolución (un factor importante en la biodisponibilidad). Las diferencias en la estabilidad pueden resultar de cambios en la reactividad química (por ejemplo, oxidación diferencial, de manera que una forma de dosificación se decolora más rápidamente cuando está compuesta por un polimorfo que cuando está compuesta por otro polimorfo) o cambios mecánicos (por ejemplo, los comprimidos se desmoronan durante el almacenamiento a medida que un polimorfo cinéticamente favorecido se convierte en un polimorfo termodinámicamente más estable) o ambos (por ejemplo, los comprimidos de un polimorfo son más susceptibles a descomponerse con alta humedad). Como resultado de las diferencias de solubilidad/disolución, en el caso extremo, algunas transiciones de estado sólido pueden dar como resultado una falta de potencia o, en el otro extremo, toxicidad. Además, las propiedades físicas pueden ser importantes en el procesamiento (por ejemplo, un polimorfo podría tener más probabilidades de formar solvatos o podría ser difícil de filtrar y lavar para dejarlo libre de impurezas, y la forma y la distribución de tamaño de las partículas podrían ser diferentes entre polimorfos).

Tal como se usa en el presente documento y a menos que se especifique lo contrario, el término “amorfo”, “forma amorfa” y términos relacionados usados en el presente documento significan que la sustancia, el componente o el producto en cuestión no es sustancialmente cristalino tal como se determina mediante difracción de rayos X. En particular, el término “forma amorfa” describe una forma sólida desordenada, es decir, una forma sólida que carece de un orden cristalino de largo alcance.

El término “sal farmacéuticamente aceptable” se refiere a sales derivadas de una variedad de contraiones orgánicos e inorgánicos conocidos en la técnica. La sal farmacéuticamente aceptable puede ser segura para el consumo por parte de animales o seres humanos.

En un aspecto, la divulgación se refiere a una forma cristalina de un compuesto de sulfonamida tal como se describió anteriormente. En algunas realizaciones, una estructura de un cristal de un compuesto de sulfonamida dado a conocer en el presente documento comprende una estructura cristalina en forma de listón, en forma de placa y/o plana.

Las técnicas para caracterizar formas cristalinas y formas amorfas incluyen, pero no se limitan a, análisis termogravimétrico (TGA), calorimetría diferencial de barrido (DSC), difractometría de rayos X de polvo (XRPD), difractometría de rayos X de monocristal, espectroscopía vibracional, por ejemplo, espectroscopia de infrarrojos (IR) y Raman, espectroscopia de resonancia magnética nuclear (RMN) en estado sólido y en disolución, microscopía óptica, microscopía óptica de platina caliente, microscopía electrónica de barrido (SEM), cristalografía electrónica y análisis cuantitativo, análisis del tamaño de partícula (PSA), análisis del área de superficie, mediciones de solubilidad, mediciones de disolución, análisis elemental y análisis de Karl Fischer. Los parámetros característicos de la celda unitaria pueden determinarse usando una o más técnicas tales como, pero sin limitarse a, difracción de rayos X y difracción de neutrones, incluyendo difracción de monocristal y difracción de polvo. Las técnicas útiles para analizar datos de difracción de polvo incluyen el refinamiento de perfiles, tal como el refinamiento de Rietveld, que puede usarse, por ejemplo, para analizar picos de difracción asociados con una única fase en una muestra que comprende más de una fase sólida. Otros métodos útiles para analizar datos de difracción de polvo incluyen la indexación de celdas unitarias, que permite a un experto en la técnica determinar parámetros de celdas unitarias a partir de una muestra que comprende polvo cristalino.

En el espectro de difracción de rayos X de polvo, el ángulo de difracción y el patrón general pueden ser importantes para identificar la identidad del cristal debido a la naturaleza de los datos. La intensidad relativa del espectro de difracción de rayos X de polvo puede variar dependiendo de la dirección de crecimiento del cristal, el tamaño de partícula o las condiciones de medición y, por tanto, no debe interpretarse de manera estricta. Además, algunos valores obtenidos de diversos patrones pueden producir algunos errores dependiendo de la dirección de crecimiento del cristal, el tamaño de partícula, las condiciones de medición, y similares. Por ejemplo, el ángulo de difracción puede ser un ángulo de difracción (29 ± 0,2°) en el espectro de difracción de rayos X de polvo, lo que significa que el ángulo de difracción puede estar por separado dentro de ± 0,2° de cualquier valor particular a menos que se indique lo contrario.

En algunas realizaciones, la divulgación se refiere a una forma cristalina de 5-cloro-2-(N-((1S,2R)-2-(6-fluoro-2,3-dimetilfenil)-1-(5-oxo-4,5-dihidro-1,3,4-oxadiazol-2-il)propil)sulfamoil)benzamida. En realizaciones adicionales, el patrón de difracción de rayos X de esta forma cristalina tiene dos o más, tres o más, cuatro o más, cinco o más, seis o más, siete o más, ocho o más o nueve picos a (29 ± 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 ó 1,0°) de 6,8°, 7,8°, 11,2°, 13,4°, 13,7°, 16,0°, 17,1°, 17,8° y 23,2°. En realizaciones adicionales, la forma cristalina de 5-cloro-2-(N-((1S,2R)-2-(6-fluoro-2,3-dimetilfenil)-1-(5-oxo-4,5-dihidro-1,3,4-oxadiazol-2-il)propil)sulfamoil)benzamida tiene un pico endotérmico desde aproximadamente 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160 ó 161 °C hasta aproximadamente 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169 ó 170 °C tal como se mide mediante DSC. En algunas realizaciones, la forma cristalina de 5-cloro-2-(N-((1S,2R)-2-(6-fluoro-2,3-dimetilfenil)-1-(5-oxo-4,5-dihidro-1,3,4-oxadiazol-2-il)propil)sulfamoil)benzamida tiene un pico endotérmico desde 155 °C hasta 168 °C, desde 158 °C hasta 162 °C, desde 159 °C hasta 161 °C, desde 159 °C hasta 165 °C o desde 160 °C hasta 163 °C tal como se mide mediante DSC. En realizaciones adicionales, la forma cristalina de 5-cloro-2-(N-((1S,2R)-2-(6-fluoro-2,3-dimetilfenil)-1-(5-oxo-4,5-dihidro-1,3,4-oxadiazol-2-il)propil)sulfamoil)benzamida tiene un pico endotérmico a aproximadamente 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169 ó 170 °C medido mediante DSC. En realizaciones adicionales, la pureza óptica de esta forma cristalina es del 100 % de ee.

En algunas realizaciones, el patrón de difracción de rayos X de la forma cristalina de la presente divulgación tiene dos o más picos a (29 ± 0,2°) de 6,8°, 7,8°, 11,2°, 13,4°, 13,7°, 16,0°, 17,1°, 17,8° y 23,2°. En algunas realizaciones, la forma cristalina tiene un pico endotérmico desde 155 °C hasta 168 °C tal como se mide mediante DSC. En realizaciones adicionales, la forma cristalina de la presente invención puede estar caracterizada por una combinación de las realizaciones descritas anteriormente que no sean incompatibles entre sí. Por ejemplo, la forma cristalina puede estar caracterizada por una combinación de los picos descritos anteriormente del patrón de difracción de rayos X y el pico endotérmico descrito anteriormente medido mediante DSC.

El término “aproximadamente” usado para la temperatura máxima del pico endotérmico en la curva de DSC significa ese valor temperatura dentro de ± 2, 3, 4 ó 5 °C del valor.

A menos que se especifique lo contrario en el presente documento, el término “aproximadamente”, cuando se usa junto con un valor numérico o un intervalo de valores que se proporciona para caracterizar una forma sólida particular, por ejemplo, una temperatura específica o un intervalo de temperatura; un cambio de masa, tal como, por ejemplo, un cambio de masa en función de la temperatura o la humedad; un contenido de disolvente o agua en términos de, por ejemplo, masa o porcentaje; o una posición de pico, tal como, por ejemplo, en el análisis mediante XRPD o espectroscopia IR o Raman; indica que el valor o intervalo de valores puede desviarse en un grado considerable razonable para un experto habitual en la técnica sin dejar de describir la forma sólida particular. Por ejemplo, en realizaciones particulares, el término “aproximadamente”, cuando se usa en este contexto y a menos que se especifique lo contrario, indica que el valor numérico o el intervalo de valores puede variar dentro del 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0,5 ó 0,25 % del valor o intervalo de valores mencionado.

En algunas realizaciones, la forma cristalina, el cocristal o la sal de ácido benzoico dado a conocer en el presente documento puede comprender una pluralidad de cristales (polimorfos cristalinos) que tienen disposiciones atómicas espacialmente regulares y pueden dar como resultado propiedades fisicoquímicas diferentes. En realizaciones adicionales, la forma cristalina, el cocristal o la sal de ácido benzoico descrito en el presente documento puede ser una mezcla con los polimorfos cristalinos.

En algunas realizaciones, en la forma cristalina, el cocristal o la sal de ácido benzoico de la presente divulgación, la razón molar del compuesto de sulfonamida con respecto al ácido benzoico es de aproximadamente 0,4 a aproximadamente 1,6, de aproximadamente 0,6 a aproximadamente 1,4, de aproximadamente 0,8 a aproximadamente 1,2, de aproximadamente 0,9 a aproximadamente 1,1 o de aproximadamente 1 a aproximadamente 1. En realizaciones adicionales, en la forma cristalina, el cocristal o la sal de ácido benzoico de la presente divulgación, la razón molar del compuesto de sulfonamida con respecto al ácido benzoico es de desde aproximadamente 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 1,1, 1,2 ó 1,3 hasta aproximadamente 1,3, 1,2, 1,1, 1,0, 0,9, 0,8, 0,7, 0,6, 0,5 ó 0,4. En realizaciones adicionales, la razón molar del compuesto de sulfonamida y el ácido benzoico es de aproximadamente 1:1.

Según algunas realizaciones de las formas cristalinas, los cocristales o las sales de ácido benzoico de la presente divulgación, el compuesto de sulfonamida o el ácido benzoico puede estar sustituido con uno o más isótopos radiactivos o un isótopo no radiactivo.

En algunas realizaciones, la pureza óptica de la forma cristalina, el cocristal o la sal de ácido benzoico dado a conocer en el presente documento es de al menos aproximadamente el 70, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99,5 ó 99,8 %. Tal como se usa en el presente documento, la pureza óptica o pureza quiral se refiere a la razón de la rotación óptica observada de una muestra que tiene una mezcla de enantiómeros con respecto a la rotación óptica de un enantiómero puro. En realizaciones adicionales, la pureza óptica es de aproximadamente el 95 % o más. En realizaciones adicionales, la pureza óptica es de aproximadamente el 98 % o más. En realizaciones aún adicionales, la pureza óptica es de aproximadamente el 100 %. En algunas realizaciones, la pureza óptica puede medirse usando HPLC. En algunas realizaciones, la presente divulgación se refiere a métodos para aumentar la pureza óptica de un compuesto de sulfonamida dado a conocer en el presente documento mezclando el compuesto de sulfonamida con ácido benzoico o formando una forma cristalina, un cocristal o una sal de ácido benzoico mediante los métodos descritos en el presente documento.

En determinadas realizaciones, la forma cristalina, el cocristal o la sal de ácido benzoico de un compuesto dado a conocer en el presente documento puede ser física y/o químicamente puro. En determinadas realizaciones, la forma cristalina, el cocristal o la sal de ácido benzoico de un compuesto dado a conocer en el presente documento puede ser al menos aproximadamente el 100, 99, 98, 97, 96, 95, 94, 93, 92, 91, 90, 89, 88, 87, 86, 85, 84, 83, 82, 81 u 80 % física y/o químicamente puro. En algunas realizaciones, la forma cristalina, el cocristal o la sal de ácido benzoico de un compuesto dado a conocer en el presente documento es sustancialmente puro. Tal como se usa en el presente documento y a menos que se especifique lo contrario, una muestra que comprende una forma cristalina o forma amorfa particular que es “sustancialmente pura”, por ejemplo, está sustancialmente libre de otras formas sólidas y/o de otros compuestos químicos, contiene, en realizaciones particulares, menos de aproximadamente el 25 %, el 20 %, el 15 %, el 10 %, el 9 %, el 8 %, el 7 %, el 6 %, el 5 %, el 4 %, el 3 %, el 2 %, el 1 %, el 0,75 %, el 0,5 %, el 0,25 % o el 0,1 % en peso de una o más de otras formas sólidas y/o de otros compuestos químicos.

En algunas realizaciones, la forma cristalina, el cocristal o la sal de ácido benzoico dado a conocer en el presente documento es estable tras la exposición a condiciones de aproximadamente 30, 40, 50, 60, 70 u 80 °C y aproximadamente el 65, 70, 75, 80 u 85 % de humedad relativa durante aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 12, 16, 24, 36, 48, 60, 72, 84, 96, 108, 120, 132, 144 ó 156 semanas o más y durante aproximadamente 160, 156, 150, 138, 126, 114, 102, 90, 78, 66, 54, 42, 30, 24, 18, 12 ó 6 semanas o menos. La condición puede ser en una condición cerrada o abierta. Tal como se usa en el presente documento, una condición “cerrada” puede significar que la tapa de un frasco que contiene la muestra está cerrada o sellada durante el experimento de estabilidad, y una condición “abierta” puede significar que la tapa está abierta. En realizaciones adicionales, la forma cristalina, el cocristal o la sal de ácido benzoico dado a conocer en el presente documento es estable tras la exposición a condiciones de aproximadamente 40 °C y aproximadamente el 75 % de humedad relativa durante al menos aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 ó 22 semanas. En algunas realizaciones, la condición es una condición cerrada. En realizaciones adicionales, la forma cristalina, el cocristal o la sal de ácido benzoico dado a conocer en el presente documento es estable tras la exposición a condiciones de aproximadamente 40 °C y aproximadamente el 75 % de humedad relativa durante aproximadamente 4 semanas. En algunas realizaciones, la condición es una condición cerrada. Por tanto, las formas cristalinas, los cocristales o las sales de ácido benzoico dados a conocer en el presente documento presentan una excelente estabilidad en almacenamiento durante un periodo prolongado. En el presente documento, ser “estable” significa que (i) el cambio en la pureza óptica es de aproximadamente el 1,0, 0,5, 0,3, 0,1, 0,05 ó 0,01 % o menos en comparación con la pureza óptica inicial, (ii) el aumento en las impurezas es de aproximadamente el 1,0, 0,5, 0,3, 0,1, 0,05 ó 0,01 % o menos en comparación con la cantidad inicial de impurezas y/o (iii) el patrón de difracción de rayos X mantiene el 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 ó 90 % o más de los picos iniciales a (29 ± 0,2°).

Otro aspecto de la presente divulgación se refiere a un método para preparar la forma cristalina, el cocristal y/o la sal de ácido benzoico descrito en el presente documento, comprendiendo el método: disolver ácido benzoico y el compuesto de sulfonamida descrito en el presente documento en un sistema de disolventes que comprende al menos dos disolventes; y sobresaturar el sistema de disolventes hasta que se forme la forma cristalina, el cocristal y/o la sal de ácido benzoico y se aísle a partir del sistema de disolventes. En otro aspecto, la presente divulgación se refiere a un método para preparar una forma cristalina de un compuesto de sulfonamida dado a conocer en el presente documento a partir de una forma no cristalina, comprendiendo el método: disolver ácido benzoico y el compuesto de sulfonamida en un sistema de disolventes que comprende al menos dos disolventes; y sobresaturar el sistema de disolventes hasta que el producto cristalice a partir del sistema de disolventes.

En algunas realizaciones, el método puede comprender además añadir o mezclar ácido benzoico con un compuesto de sulfonamida dado a conocer en el presente documento. En realizaciones adicionales, con el compuesto de sulfonamida pueden mezclarse desde aproximadamente 0,8, 0,9, 1, 2, 3, 4 ó 5 hasta aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ó 9 equivalentes molares de ácido benzoico en comparación con el compuesto de sulfonamida. En algunas realizaciones, el método puede comprender además añadir o mezclar desde aproximadamente 0,8 hasta aproximadamente 5, desde aproximadamente 2 hasta aproximadamente 5, desde aproximadamente 3 hasta aproximadamente 5, desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 4 o desde aproximadamente 1 hasta 6 equivalentes molares de ácido benzoico con un compuesto de sulfonamida dado a conocer en el presente documento. En realizaciones adicionales, con el compuesto de sulfonamida pueden mezclarse aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6 ó 7 equivalentes molares de ácido benzoico en comparación con el compuesto de sulfonamida.

En realizaciones adicionales, la etapa de disolución puede comprender añadir o mezclar el sistema de disolventes con el ácido benzoico y el compuesto de sulfonamida, en la que el sistema de disolventes está en una cantidad desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 40 veces, desde aproximadamente 20 hasta aproximadamente 30 veces o desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 30 veces en volumen, incluyendo aproximadamente 10, 11, 12, 13, 14, 15, 18, 20, 22, 25, 27, 30, 35, 38 ó 40 veces. En realizaciones adicionales, la etapa de disolución puede comprender añadir el sistema de disolventes al ácido benzoico y el compuesto de sulfonamida, en la que el sistema de disolventes está en una cantidad de desde aproximadamente 10, 15, 20, 25, 30, 35 ó 40 hasta aproximadamente 60, 55, 50, 45, 40, 35 ó 30 veces en volumen. En realizaciones adicionales, al menos uno de los al menos dos disolventes en el sistema de disolventes es heptano o tolueno. En realizaciones adicionales, el sistema de disolventes comprende heptano y tolueno.

En realizaciones adicionales, en el sistema de disolventes o en la disolución mixta de heptano y tolueno, la razón de tolueno es de desde aproximadamente el 5, 6 , 7, 8, 9, 10 u 11 hasta aproximadamente el 10, 15, 17 ó 20 %, incluyendo aproximadamente el 5, 8, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 y 20 %. En realizaciones adicionales, en la disolución mixta de heptano y tolueno, la razón de tolueno es de desde el 5 hasta el 20 %, desde el 10 hasta el 20 %, desde el 5 hasta el 10 % o desde el 8 hasta el 15 %.

En algunas realizaciones, la etapa de sobresaturación comprende calentar el sistema de disolventes. En realizaciones adicionales, la etapa de sobresaturación comprende mezclar la suspensión procedente de la etapa de disolución a una temperatura superior a temperatura ambiente o desde aproximadamente 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55 ó 56 °C hasta aproximadamente 50, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65 ó 66 °C durante desde aproximadamente 1, 2, 3, 4 ó 5 horas hasta aproximadamente 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30 ó 40 horas. En realizaciones aún adicionales, la etapa de sobresaturación comprende mezclar la suspensión a una temperatura de desde aproximadamente 40 hasta aproximadamente 60 °C, desde aproximadamente 50 hasta aproximadamente 60 °C, desde aproximadamente 40 hasta aproximadamente 50 °C o desde aproximadamente 38 hasta aproximadamente 65 °C durante desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 40 horas, desde aproximadamente 3 hasta aproximadamente 4 horas, desde aproximadamente 4 hasta aproximadamente 5 horas o desde aproximadamente 3 hasta aproximadamente 10 horas. En realizaciones adicionales, la etapa de sobresaturación comprende mezclar la suspensión a una temperatura de desde aproximadamente 40 hasta aproximadamente 60 °C durante desde aproximadamente 3 hasta aproximadamente 10 horas.

En algunas realizaciones, el método para preparar la forma cristalina, el cocristal y/o la sal de ácido benzoico descrito en el presente documento comprende además lavar el producto obtenido a partir de la etapa de sobresaturación para retirar el ácido benzoico en exceso restante.

Aunque en la presente divulgación también se incluyen profármacos de las formas cristalinas, los cocristales o las sales de ácido benzoico tal como se describen en el presente documento, el término “profármaco” se refiere a compuestos que se convierten en un compuesto dado a conocer en el presente documento o una sal del mismo mediante una reacción con una enzima o un ácido gástrico en condiciones fisiológicasin vivo,es decir, compuestos que se convierten en un compuesto de la presente divulgación o una sal del mismo mediante oxidación, reducción o hidrólisis enzimática, y similares, o compuestos que se convierten en un compuesto dado a conocer en el presente documento o una sal del mismo mediante la acción de un ácido gástrico. Además, un profármaco de un compuesto dado a conocer en el presente documento o una sal del mismo puede ser un compuesto que se convierte en un compuesto dado a conocer en el presente documento o una sal del mismo en condiciones fisiológicas tal como se describe en Hirokawa Shoten 1990 annual “Development of Pharmaceuticals” vol. 7, Molecular Design, páginas 163-198.

Además, las formas cristalinas, los cocristales o las sales de ácido benzoico de la presente divulgación pueden ser un solvato (por ejemplo, hidrato, etc.) o un no solvato, quedando abarcados ambos en el compuesto dado a conocer en el presente documento o una sal del mismo. Los compuestos marcados con isótopos (por ejemplo, deuterio, 3H, 14C, 35S, 125I, etc.) y similares también quedan abarcados por los compuestos dados a conocer en el presente documento o una sal de los mismos.

La forma cristalina, el cocristal o la sal de ácido benzoico descrito en el presente documento presenta actividad inhibidora contra RNR. La forma cristalina, el cocristal o la sal de ácido benzoico tal como se describe en el presente documento es útil como medicamento para la prevención o el tratamiento de enfermedades relacionadas con RNR sin provocar efectos secundarios basados en los efectos inespecíficos de los iones de hierro que requieren proteínas debido a su excelente actividad inhibidora de RNR y a su estructura y a que no forma un quelato con iones metálicos. La “enfermedad relacionada con RNR” incluye enfermedades cuya incidencia puede disminuir o cuyos síntomas están en remisión o aliviados y/o completamente curados eliminando o suprimiendo y/o inhibiendo funciones de RNR. Tales enfermedades incluyen, por ejemplo, tumores malignos. Los tumores malignos de interés no están particularmente limitados y pueden incluir cánceres de cabeza y cuello, cánceres gastrointestinales (por ejemplo, cáncer de esófago, cáncer gástrico, cáncer de duodeno, cáncer de hígado, cáncer de vías biliares (por ejemplo, cáncer de vesícula biliar o de conducto biliar, etc.), cáncer de páncreas, cáncer colorrectal (por ejemplo, cáncer de colon, cáncer rectal, etc.), etc.), cáncer de pulmón (por ejemplo, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de pulmón de células pequeñas, mesotelioma, etc.), cáncer de mama, cáncer genital (por ejemplo, cáncer de ovario, cáncer de útero (por ejemplo, cáncer de cuello uterino, cáncer de endometrio, etc.), etc.), cáncer urinario (por ejemplo, cáncer de riñón, cáncer de vejiga, cáncer de próstata, tumor testicular, etc.), tumores hematopoyéticos (por ejemplo, leucemia, linfoma maligno, mieloma múltiple, etc.), tumores de huesos y tejidos blandos, cáncer de piel, tumores cerebrales, y similares.

“RNR” en el presente documento incluye una RNR humana o no humana, preferiblemente una RNR humana.

Por consiguiente, la presente divulgación proporciona un inhibidor de RNR que incluye la forma cristalina, el cocristal o la sal de ácido benzoico descrito en el presente documento como principio activo. Además, la presente divulgación se refiere al uso de la forma cristalina, el cocristal o la sal descrito en el presente documento para la fabricación de los inhibidores de RNR.

Además, la presente divulgación proporciona la forma cristalina, el cocristal o la sal de ácido benzoico descrito en el presente documento para su uso en la prevención o el tratamiento de trastornos asociados con inhibidores de RNR.

En aún otra realización, la presente divulgación proporciona un medicamento que contiene la forma cristalina, el cocristal o la sal de ácido benzoico descrito en el presente documento como principio activo. Además, la presente divulgación se refiere al uso de la forma cristalina, el cocristal o la sal de ácido benzoico descrito en el presente documento para la fabricación de un medicamento. Además, la presente divulgación proporciona el uso como medicamento de la forma cristalina, el cocristal o la sal de ácido benzoico descrito en el presente documento. Además, la presente divulgación proporciona la forma cristalina, el cocristal o la sal de ácido benzoico descrito en el presente documento para su uso como medicamento.

En aún otra realización, la presente divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende la forma cristalina, el cocristal o la sal de ácido benzoico descrito en el presente documento y un portador farmacéuticamente aceptable. La forma cristalina, el cocristal o la sal de ácido benzoico dado a conocer en el presente documento tiene baja o nula higroscopicidad y baja capacidad de carga, lo que da como resultado excelentes propiedades de manipulación. A medida que se reduce la higroscopicidad, se alivia el problema de conservación y control de calidad de la humedad presente en el estado de almacenamiento, y en el momento de fabricación de una preparación sólida, tal como un comprimido o una cápsula, puede controlarse fácilmente la calidad de la preparación (uniformidad) mediante el control de la masa. Además, puesto que la capacidad de carga es baja, la adherencia al equipo de fabricación y al envase es insignificante.

En algunas realizaciones, el medicamento o la composición farmacéutica es un agente terapéutico para enfermedades relacionadas con RNR, y en una realización más preferida, el medicamento o la composición farmacéutica es un agente antitumoral.

Se da a conocer la administración de una cantidad eficaz del cocristal descrito en el presente documento a un sujeto que lo necesita para proporcionar un método de supresión de la actividad de RNR. También se da a conocer la administración de una cantidad eficaz del cocristal descrito en el presente documento al sujeto para proporcionar un método de prevención, mejora o tratamiento de enfermedades relacionadas con RNR. Además, un método de prevención, mejora o tratamiento de enfermedades relacionadas con RNR es un método de prevención, mejora o tratamiento de tumores. En este método, los sujetos incluyen animales humanos o no humanos (por ejemplo, vacas, cerdos, caballos, perros, gatos, y similares) que necesitan un método de este tipo. En realizaciones adicionales, el sujeto puede ser un sujeto que padece una enfermedad relacionada con RNR descrita en el presente documento.

Cuando se usa el cocristal descrito en el presente documento como producto farmacéutico, se formula opcionalmente con un portador farmacéuticamente aceptable, y pueden adoptarse diversas formas de dosificación dependiendo de los propósitos de prevención o terapéuticos, y como formas de dosificación se incluyen, por ejemplo, agentes orales, inyecciones, supositorios, pomadas y cualquiera de tales parches. Puesto que el cocristal descrito en el presente documento tiene una excelente capacidad de absorción oral, son preferibles los agentes orales. Estas formas de dosificación pueden prepararse mediante métodos convencionales habitualmente conocidos en la técnica.

Con respecto a los portadores farmacéuticamente aceptables, se usan diversas sustancias portadoras orgánicas o inorgánicas convencionales como materiales farmacéuticos, formuladas como: excipientes, aglutinantes, agentes disgregantes, lubricantes, agentes colorantes para preparaciones sólidas; y disolventes, agentes solubilizantes, agentes de suspensión, agentes isotonizantes, tampones, agentes calmantes para preparaciones líquidas, y similares. Además, si es necesario, también pueden usarse aditivos farmacéuticos, que incluyen agentes conservantes, antioxidantes, agentes colorantes, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes y agentes estabilizantes.

Con respecto a los portadores farmacéuticamente aceptables y los aditivos farmacéuticos, en general, incluyen, por ejemplo, como excipientes: lactosa, sacarosa, cloruro de sodio, glucosa, almidón, carbonato de calcio, caolín, celulosa microcristalina, ácido silícico, y similares; como aglutinantes: agua, etanol, propanol, jarabe simple, disolución de glucosa, disolución de almidón, disolución de gelatina, carboximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropil almidón, metilcelulosa, etilcelulosa, goma laca, fosfato de calcio, polivinilpirrolidona, y similares; como disgregantes: almidón seco, alginato de sodio, polvo de agar, hidrogenocarbonato de sodio, carbonato de calcio, laurilsulfato de sodio, monoglicérido de ácido esteárico, lactosa, y similares; como lubricantes: estearato de talco purificado, bórax, polietilenglicol, y similares; como colorantes: óxido de titanio, óxido de hierro, y similares; como agentes aromatizantes: sacarosa, cáscara de naranja, ácido cítrico, ácido tartárico, y similares. Una preparación sólida oral puede prepararse añadiendo un excipiente al cocristal descrito en el presente documento, y si es necesario pueden añadirse además aglutinantes, disgregantes, lubricantes, colorantes o agentes aromatizantes, y similares, seguido de formular para dar comprimidos, comprimidos recubiertos, gránulos, polvos, cápsulas, y similares.

Las formas inyectables pueden prepararse añadiendo agentes de control del pH, tampones, estabilizadores, agentes isotónicos, agentes anestésicos locales, y similares, a la forma cristalina, al cocristal o a la sal de ácido benzoico descrito en el presente documento, seguido de formular para dar inyecciones subcutáneas, intramusculares e intravenosas de manera convencional.

Cuando se prepara un supositorio rectal, un supositorio puede fabricarse mediante un método convencional después de añadir un excipiente y, si es necesario, un tensioactivo, y similares, al principio activo descrito en el presente documento. Cuando se prepara en forma de pomada, por ejemplo, pasta, crema y gel, la base, el estabilizador, el agente humectante, el conservante y similares se mezclan según sea necesario y se formulan mediante un método convencional. Por ejemplo, como base puede usarse vaselina blanca, parafina, glicerina, derivados de celulosa, polietilenglicol, silicio, bentonita, y similares. Como conservantes pueden usarse parahidroxibenzoato de metilo, parahidroxibenzoato de etilo, parahidroxibenzoato de propilo, y similares. En el caso de preparar un parche, puede aplicarse pomada, crema, gel, pasta o similar a un soporte mediante un método conocido. Como soporte, puede ser adecuado un material textil tejido de algodón, hilado, fibra química, un material textil no tejido, una película de cloruro de vinilo blando, polietileno, poliuretano o similar, o una lámina de espuma.

La cantidad del cocristal descrito en el presente documento que va a formularse en cada forma unitaria de dosificación descrita anteriormente puede ser, en general, según la forma unitaria de dosificación, de desde aproximadamente 0,05, 0,1, 1, 5, 10 ó 20 hasta aproximadamente 100, 500 ó 1000 mg para una dosificación oral, desde aproximadamente 0,01 ó 0,1 hasta aproximadamente 200, 300 ó 500 mg para inyección y desde aproximadamente 1, 5 ó 10 hasta aproximadamente 100, 500 ó 1000 mg para supositorios, con la condición de que estas cantidades puedan alterarse dependiendo de los síntomas de los pacientes sobre los cuales van a aplicarse o sus formas de dosificación.

Además, la dosis diaria de un fármaco con la forma de dosificación es, con respecto al cocristal descrito en el presente documento, de 0,05 a 5000 mg al día para un adulto (peso corporal: 50 kg), preferiblemente de 0,1 a 2000 mg, y preferiblemente la cantidad mencionada anteriormente se administra una vez o de 2 a 3 veces al día con la condición de que pueda alterarse dependiendo de los síntomas de los pacientes, el peso, la edad o el género, y similares.

Las sustancias análogas descritas en las figuras 10 a 12 pueden sintetizarse mediante métodos conocidos o pueden obtenerse a partir de productos disponibles comercialmente. Las sustancias análogas pueden identificarse comparando los tiempos de retención en cromatografía de líquidos de alto rendimiento, en los espectros de masas y en los resultados de una matriz de fotodiodos (PDA) entre las sustancias análogas así obtenidas y las sustancias análogas detectadas.

Además, estas sustancias análogas pueden medirse cuantitativamente o bien mediante un método convencional externo o bien mediante un método convencional interno.

Cuando estas sustancias análogas están contenidas posiblemente como impurezas en una preparación medicinal o farmacéutica, estas sustancias análogas están reguladas según las directrices ICH-Q3A del Consejo Internacional de Armonización de los requisitos técnicos para el registro de medicamentos de uso humano. El método es muy útil puesto que es posible confirmar si se satisface la norma de la directriz.

Las sustancias análogas se muestran en la siguiente tabla.

[Tabla 1]

Ejemplos

A continuación se describe en más detalle la presente invención según algunas realizaciones con ejemplos experimentales, pero no se pretende que la presente invención esté limitada a estos ejemplos.

Diversos reactivos usados en los ejemplos eran productos disponibles comercialmente, a menos que se indique lo contrario. Se usó una columna preempaquetada de sílice SNAP-ULTRA (marca registrada) de Biotage Ltd. para una cromatografía en columna de gel de sílice, o se usó una columna preempaquetada de sílice SNAP KP-C18-HS (marca registrada) fabricada por Biotage para una cromatografía en columna de gel de sílice de fase inversa. La HPLC purificada mediante cromatografía en columna de fase inversa preparativa se realizó en las siguientes condiciones. El gradiente y el volumen de inyección se llevaron a cabo de manera apropiada.

Columna: YMC-Actus Triart C18, 30 x 50 mm, 5 |am

Detección por UV: 254 nm

Velocidad de flujo de la columna: 40 ml/min

Fase móvil: agua/acetonitrilo (ácido fórmico al 0,1 %)

Cantidad de inyección: 1,0 ml

Gradiente: agua/acetonitrilo (del 10 % al 90 %)

Se usaron los dispositivos AL400 (400 MHz; JEOL (JEOL)) y Mercury400 (400 MHz; Agilent Technologies) para los espectros de RMN, y se usó tetrametilsilano como patrón interno cuando se incluyó tetrametilsilano en el disolvente pesado, de lo contrario se midió usando disolvente de RMN como patrón interno, mostrándose todos los valores de 8 en ppm. Además, los espectros de CL-EM se midieron en las siguientes condiciones usando un dispositivo ACQUITY SQD (cuadrupolo) fabricado por Waters.

Columna: ACQUITY UPLC (marca registrada) BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 |am fabricada por Waters Detección por EM: ESI negativo

Detección por UV: 254 y 280 nm

Velocidad de flujo de la columna: 0,5 ml/min

Fase móvil: agua/acetonitrilo (ácido fórmico al 0,1 %)

Cantidad de inyección: 1 |al

[Tabla 2] Gradiente

Tiempo (min) Agua Acetonitrilo

0 95 5

0,1 95 5

2,1 5 95

3,0 PARADA

A continuación se muestran los significados de las abreviaturas.

s: singlete

d: doblete

t: triplete

q: cuartete

dd: doblete doble

dt: triplete doble

td: doblete triple

tt: triplete triple

ddd: doblete doble doble

ddt: triplete doble doble

dtd: doblete triple doble

tdd: doblete doble triple

m: multiplete

a: amplio

s a: singlete amplio

DMSO-d6: dimetilsulfóxido deuterado

CDCb: cloroformo pesado

CD3OD: metanol pesado

CDI: 1,1 '-carboximetilsulfonildiimidazol

DAST: trifluoruro de N,N-dietilaminoazufre

DIBAL-H: hidruro de diisobutilaluminio

DMF: dimetilformamida

DMSO: dimetilsulfóxido

THF: tetrahidrofurano

WSC = EDCI = 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida

HOBt = 1-hidroxibenzotriazol

Ejemplo de referencia A1: 2-(1-bromoetil)-1-fluoro-3,4-dimetilbenceno [Fórmula I]

(Etapa 1) 1-(6-Fluoro-2,3-dimetilfenil)etanol

Después de hacer gotear una disolución en dietil éter de bromuro de metilmagnesio (3,0 M, 70 ml) en una disolución en THF de 6-fluoro-2,3-dimetil-benzaldehído (22,0 g) (300 ml) a 0 °C, se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 1 hora. Bajo una condición de baño de hielo, se añadió una disolución acuosa saturada de cloruro de amonio (150 ml) gota a gota y se añadió acetato de etilo (200 ml), y se separó el resultante en diferentes fases. Se lavó sucesivamente la fase orgánica con HCl (1 M, 200 ml), agua (200 ml) y salmuera (200 ml), y luego se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró a presión reducida para obtener 1-(6-fluoro-2,3 dimetilfenil)etanol (23,7 g).

(Etapa 2) Se añadió tribromuro de fósforo (26,5 ml) gota a gota a 0 °C a una disolución en cloroformo (120 ml) de 1-(6-fluoro-2,3-dimetilfenil)etanol (23,7 g) obtenido en la etapa 1 anterior, y se agitó la disolución de reacción durante 30 minutos a 0 °C. Se añadió la mezcla de reacción a hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado helado (1 l). Después de añadir cloroformo (500 ml) a la mezcla, se separó el resultante en diferentes fases, y se lavó sucesivamente la fase orgánica con agua (200 ml) y salmuera (200 ml). Se secó la fase orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro para dar el compuesto del título (29,5 g) mediante concentración a presión reducida. Ejemplo de referencia B1: ácido (2S,3R)-2-amino-3-(6-fluoro-2,3-dimetilfenil)butanoico

[Fórmula III]

Se añadió una disolución en DMF (50 ml) de 2-(1-bromoetil)-1-fluoro-3,4-dimetilbenceno (14,0 g) obtenido en el ejemplo de referencia A1 gota a gota a una disolución en DMF (50 ml) de (S)-2-[o-[(N-bencilprolil)amino]fenil]-bencilidenamino-acetato de (2-)-N,N,N-níquel (II) (14,5 g) e hidróxido de potasio (16,3 g), y se agitó la mezcla a la misma temperatura durante 1 hora. Se añadieron una disolución saturada de cloruro de amonio (50 ml) y acetato de etilo (50 ml) a la disolución de reacción, se separaron las fases y se extrajo la fase acuosa dos veces con acetato de etilo (50 ml). Se lavaron las fases orgánicas combinadas sucesivamente con agua (50 ml) y salmuera (50 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: acetato de etilo/hexano). Se disolvió el compuesto obtenido en metanol (120 ml), se añadió ácido clorhídrico (3 M, 90 ml) y se agitó la mezcla a 80 °C durante 45 minutos. Se eliminó por destilación el metanol a presión reducida y se añadieron cloroformo (50 ml) y agua (50 ml) al residuo. Se lavó la fase acuosa con cloroformo (50 ml) y se concentró a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna de gel de sílice de fase inversa (metanol/agua) para dar el compuesto del título (2,0 g). 1H-RMN (CDsOD) 8: 7,03 (dd, J=8,2, 5,7 Hz, 1H), 6,79 (dd, J=11,7, 8,4 Hz, 1H), 3,74-3,87 (m, 2H), 2,29 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,40 (dd, J=6,8, 2,4 Hz, 3H)

Ejemplo de referencia D1: monoclorhidrato de 5-((1S,2R)-1-amino-2-(6-fluoro-2,3-dimetilfenil)propil)-1,3,4-oxadiazol-2 (3H)-ona

[Fórmula V]

(Etapa 1) Ácido (2S,3R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-(6-fluoro-2,3-dimetilfenil)butanoico

Se añadieron secuencialmente agua (9 ml), 1,4-dioxano (9 ml) y trietilamina (955 |al) a ácido (2S,3R)-2-amino-3-(6-fluoro-2,3-dimetilfenil)butanoico (515 mg) obtenido en el ejemplo de referencia<b>1 y se enfrió la mezcla hasta 0 °C. Se añadió dicarbonato de di-terc-butilo (650 mg) a la disolución de reacción a la misma temperatura y se agitó la mezcla durante 45 minutos. Se añadió la disolución de reacción a ácido clorhídrico (1 M, 20 ml) y se extrajo con acetato de etilo (20 ml). Se lavó la fase orgánica con salmuera (20 ml), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: hexano/acetato de etilo/ácido acético al 2 %) para obtener ácido (2S,3R)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)-3-(6-fluoro-2,3-dimetilfenil)butanoico (745 mg).

(Etapa 2) ((1S,2R)-2-(6-fluoro-2,3-dimetilfenil)-1-(5-oxo-4,5-dihidro-1,3,4-oxadiazol-2-il)propil)carbamato de tercbutilo

A una disolución en THF (14,0 ml) de ácido (2S,3R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-(6-fluoro-2,3-dimetilfenil)butanoico (440 mg) obtenido en la etapa 1 anterior, se le añadió CDI (302 mg) y se agitó la disolución de reacción a temperatura ambiente durante 20 minutos. Se enfrió la disolución de reacción hasta 0 °C, se añadió hidrazina monohidratada (200 |il) y se agitó la mezcla a la misma temperatura durante 30 minutos. Se añadió la disolución de reacción a agua (20 ml) y se extrajo con acetato de etilo (20 ml). Se lavó la fase orgánica con salmuera (20 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida. Se añadió CDI (560 mg) a una disolución en 1,4-dioxano (14 ml) del residuo obtenido y se agitó la disolución de reacción a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadió la disolución de reacción a agua (20 ml) y se extrajo con acetato de etilo (20 ml). Se lavó la fase orgánica con salmuera (20 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida. Se purificó el residuo obtenido mediante cromatografía en columna de gel de sílice mediante purificación (eluyente: hexano/acetato de etilo) para obtener ((1S,2R)-2-(6-fluoro-2,3-dimetilfenil)-1-(5-oxo-4,5-dihidro-1,3,4-oxadiazol-2-il)propil)carbamato de terc-butilo (356 mg).

(Etapa 3) Se disolvió ((1S,2R)-2-(6-fluoro-2,3-dimetilfenil)-1-(5-oxo-4,5-dihidro-1,3,4-oxadiazol-2-il)propil)carbamato de terc-butilo (550 mg) obtenido en la etapa 2 anterior en ácido clorhídrico-1,4-dioxano (4 M, 5,0 ml) y se agitó la disolución de reacción a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Se concentró la disolución de reacción a presión reducida para obtener el compuesto del título.

Ejemplo 1 (REFERENCIA): 5-bromo-2-(N-((1S,2R)-2-(6-fluoro-2,3-dimetilfenil)-1-(5-oxo-4,5-dihidro-1,3,4-oxadiazol-2-il)propil)sulfamoil)benzamida

(Etapa 1) A una disolución en 1,4-dioxano (5,0 ml) y agua (5,0 ml) de ácido (2S,3R)-2-amino-3-(6-fluoro-2,3-dimetilfenil)butanoico (300 mg) obtenido en el ejemplo de referencia B1, se le añadió trietilamina (570 |il) y luego se enfrió hasta 0 °C. Se añadió cloruro de 4-bromo-2-cianobenceno-1-sulfonilo (362 mg) a la disolución de reacción y se agitó la mezcla a la misma temperatura durante 45 minutos. Se añadió la disolución de reacción a ácido clorhídrico (1 M, 15 ml) y se extrajo con acetato de etilo (15 ml). Se lavó la fase orgánica con salmuera (20 ml), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: hexano/acetato de etilo/ácido acético al 2 %) para obtener ácido (2S,3R)-2-(4-bromo-2-cianofenilsulfonamido)-3-(6-fluoro-2,3-dimetilfenil)butanoico (465 mg). (Etapa 2) A una disolución en THF (5,0 ml) de ácido (2S,3R)-2-(4-bromo-2-cianofenilsulfonamido)-3-(6-fluoro-2,3-dimetilfenil)butanoico (465 mg) obtenido en la etapa 1 anterior, se le añadió CDI (210 mg) y se agitó la disolución de reacción a temperatura ambiente durante 20 minutos. Se enfrió la disolución de reacción hasta 0 °C, se añadió hidrazina monohidratada (200 |il) y se agitó la mezcla a la misma temperatura durante 20 minutos. Se añadió la disolución de reacción a agua (20 ml) y se extrajo con acetato de etilo (20 ml). Se lavó la fase orgánica con salmuera (20 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida. Se añadió CDI (211 mg) a una disolución en 1,4-dioxano (4,0 ml) del residuo obtenido y se agitó la disolución de reacción a 45 °C durante 1 hora. Se añadió la disolución de reacción a agua (20 ml) y se extrajo con acetato de etilo (20 ml). Se lavó la fase orgánica con salmuera (20 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida. Se purificó el residuo obtenido mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: hexano/acetato de etilo) para obtener 4-bromo-2-ciano-N-((1S,2R)-2-(6-fluoro-2,3-dimetilfenil)-1-(5-oxo-4,5-dihidro-1,3,4-oxadiazol-2-il)propil)bencenosulfonamida (386 mg).

(Etapa 3) A una disolución en DMSO (5,0 ml) de 4-bromo-2-ciano-N-((1S,2R)-2-(6-fluoro-2,3-dimetilfenil)-1-(5-oxo-4,5-dihidro-1,3,4-oxadiazol-2-il)propil)bencenosulfonamida (386 mg) obtenida en la etapa 2 anterior, se le añadieron secuencialmente peróxido de hidrógeno acuoso (1,0 ml) y carbonato de potasio (420 mg) en un baño de hielo y se agitó la disolución de reacción a 60 °C durante 2,5 horas. Se añadió lentamente la disolución de reacción a ácido clorhídrico (1 M, 15 ml) en un baño de hielo y luego se extrajo con acetato de etilo (15 ml). Se lavó la fase orgánica con salmuera (20 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: hexano/acetato de etilo) para dar el compuesto del título.

Ejemplo 2 (INVENCIÓN)

Se sintetizó el compuesto del ejemplo 2 según el método del ejemplo 1 (REFERENCIA), etapas 1 a 3. En la siguiente tabla se enumeran las materias primas necesarias.

[Tabla 7]

Como ejemplo comparativo, se obtuvo un compuesto de la siguiente fórmula.

[Fórmula VI]

1H-RMN (CD3OD) 8: 7,54 (d, J=8,4 Hz, 2H), 7,17-7,29 (m, 5H), 7,08-7,14 (m, 2H), 4,55-4,61 (m, 1H), 3,00-3,13 (m, 2H), 2,39 (s, 3H)

A continuación en el presente documento, se muestran las fórmulas estructurales y las propiedades físicas de los compuestos de los ejemplos 1 a 10.

[Tabla 10]

Ejemplo experimental: Se evaluó el compuesto según la presente divulgación usando el siguiente método de prueba.

Ejemplo experimental 1: Efecto de inhibición de RNR humana

Se determinó la actividad inhibidora contra la reacción de reducción de ribonucleótidos (a continuación en el presente documento denominada reacción de RNR) del compuesto de prueba midiendo la formación de desoxicitidina difosfato (a continuación en el presente documento denominado dCDP) a partir de citidina difosfato (a continuación en el presente documento denominado CDP) mediante el siguiente método.

La subunidad M1 humana y la subunidad M2 humana (mutante que carece de los aminoácidos 59 aminoterminales), que se fusionan con una etiqueta de histidina en el extremo amino-terminal, se sobreexpresan enEscherichia coliy se solubilizan después de la recogida, y se purificaron proteínas M1 y M2 humanas etiquetadas con histidina en una columna de quelato de níquel.

Para medir la actividad inhibidora del compuesto de prueba contra la reacción de RNR, se hizo referencia al método descrito en Cancer Research 64, 1-6 (2004).

En primer lugar, se diluyeron en serie los compuestos de prueba con DMSO. A continuación, se añadieron proteína M1 humana y proteína M2 humana a una disolución acuosa de albúmina derivada de suero bovino fetal al 0,02 %, se añadió disolución en DMSO del compuesto de la presente divulgación o la disolución de DMSO de control (la concentración final de DMSO era del 1 %) y se dejó reposar la mezcla durante 20 minutos. Después de eso, se añadieron el tampón de reacción [tampón HEPES 50 mM (pH 7,2) a la concentración final, acetato de magnesio 4 mM a la concentración final, cloruro de potasio 100 mM a la concentración final, ditiotreitol 6 mM a la concentración final, adenosina trifosfato 2 mM a la concentración final, nicotinamida adenina dinucleótido fosfato 0,24 mM a la concentración final] y CDP 10 p,M a la concentración final y se incubaron a 37 °C durante 30 minutos para realizar la reacción de RNR. Inmediatamente después de la reacción, se detuvo la reacción mediante calentamiento a 100 °C durante 15 minutos, seguido de centrifugación a 10.000 rpm durante 10 minutos. Después de la centrifugación, se analizó una porción (5 p,l) del sobrenadante resultante con cromatografía de líquidos de alto rendimiento (Shimadzu Corporation, Prominence) usando una columna Shimpack XR-ODS (fabricada por Shimadzu GLC Co., 3,0 * 100 mm). La elución se llevó a cabo a una longitud de onda de medición de 265 nm a una velocidad de flujo de 0,5 ml/min mediante un gradiente de concentración de 9 minutos desde la mezcla 12:13 de fase móvil A (dihidrogenofosfato de potasio 10 mM (pH 6,7), tetrabutilamonio 10 mM, metanol al 0,25 %) y fase móvil B (dihidrogenofosfato de potasio 50 mM (pH 6,7), tetrabutilamonio 5,6 mM, metanol al 30 %) hasta la misma mezcla 2:3 para medir el sustrato CDP (TR 5,9 min) y el producto de reacción dCDP (TR 6,2 min).

Se determinó la actividad inhibidora del compuesto de prueba mediante la siguiente ecuación, y las concentraciones de los compuestos de prueba que inhiben la reacción de RNR en un 50 % se muestran como CI50 (pM) en las tablas 11 y 12.

[Fórmula matemática 1]

Tasa de inhibición (%) =

se añade compuesto de prueba

xl00 ducido de control

Como resultado, resulta evidente a partir de la siguiente tabla que el compuesto de la presente invención tiene una excelente acción inhibidora de RNR. En cambio, el compuesto del ejemplo comparativo 1 tuvo una CI50 de 43 |iM y no mostró actividad inhibidora contra RNR tal como se halla en los compuestos de ejemplo de la presente invención.

[Tabla 11]

Ejemplo experimental 2: Efecto inhibidor de la proliferación celular sobre la línea celular de cáncer de mama humano

Se realizó el pase diario de las células de la línea celular de cáncer de mama de origen humano HCC 1806 a una densidad celular no superior al 80 % en medio Roswell Park Memorial Institute recomendado por la ATCC (RPMI-1640) que contenía suero bovino fetal (FBS) al 10 %. Con el fin de iniciar la prueba de actividad inhibidora de la proliferación celular, se suspendieron las células HCC 1806 en el medio anterior, después se sembraron a 180 |il en cada pocillo de una placa de fondo plano de 96 pocillos de modo que el número de células por pocillo fuera de 2.000, se cultivaron las células a 37 °C durante 1 día en una incubadora que contenía el 5 % de gas de dióxido de carbono. Al día siguiente, se disolvió el compuesto de prueba en DMSO y se añadieron 20 |il de una disolución de aditivo de fármaco diluida en serie con agua destilada hasta 10 veces de la concentración final a cada pocillo de la placa de cultivo de las células, y se cultivaron las células a 37 °C durante 72 horas en una incubadora que contenía el 5 % de gas de dióxido de carbono. Después de cultivar durante 72 horas, se añadieron 20 |il de glutaraldehído a cada pocillo y se dejó reposar durante 30 minutos, luego se lavó la placa 10 veces con agua y se secó. Se añadieron 100 |il de una disolución de tinte (violeta de cristal al 0,05 % en una disolución de metanol al 20 %) a cada pocillo y se dejó reposar durante 30 minutos, luego se lavó la placa 10 veces con agua y se secó. Se añadieron 100 |il de una disolución de extracto (NaH2PO4 0,1 N:etanol al 100 %=1:1) a cada pocillo y se mezcló, y se midió la mezcla a una longitud de onda de 540 nm usando un lector de placas (MTP-450 fabricado por Corona Electric Co., Ltd.). Se calculó la tasa de inhibición de crecimiento a partir de la siguiente fórmula, y se determinó la concentración (CI50 (|iM)) de un compuesto de prueba que inhibe en un 50 %. Los resultados se muestran en la tabla 11.

Tasa de inhibición de crecimiento (%) = {(C-B) - (T-B)}/(C-B) x 100 T: Absorbancia de pocillo al que se le añadió compuesto de prueba

C: Absorbancia de pocillos a los que no se les añadió compuesto de prueba

B: Absorbancia de pocillos a los que no se les añadió suspensión celular

Como resultado, tal como resulta claro a partir de la siguiente tabla, se reveló que los compuestos de la presente divulgación tienen actividad inhibidora de crecimiento contra células cancerosas.

[Tabla 12]

Ejemplo experimental 3: Efecto inhibidor de la proliferación celular sobre líneas celulares de cáncer derivadas de cáncer humano

Según el método del ejemplo experimental 2, se evaluó el efecto inhibidor de la proliferación celular sobre diversas líneas celulares de cáncer tal como se describe en las tablas 12 y 13.

Como resultado, tal como resulta claro a partir de la siguiente tabla, se reveló que los compuestos de la presente divulgación tienen actividad inhibidora de crecimiento contra diversos tipos de células cancerosas de origen humano.

[Tabla 13]

[Tabla 14]

Ejemplo experimental 4: Evaluación del efecto antitumoral usando un modelo de trasplante subcutáneo de línea celular de cáncer hemático de origen humano (MV-4-11)(in vivo)

Se trasplantó por vía subcutánea la línea celular de cáncer hemático de origen humano MV-4-11 en un ratón desnudo, y en el momento en que el volumen tumoral del ratón desnudo en el que se injertó el tumor alcanzó de aproximadamente 100 a 300 mm3, se asignaron cuatro ratones a cada grupo mediante estratificación aleatoria de modo que el promedio de los volúmenes tumorales de cada grupo fue uniforme (día 0), y se administró por vía oral el compuesto de la presente divulgación diariamente a 100 mg/kg/día una vez al día durante 14 días.

Con el fin de comparar la transición cronológica de la proliferación del tumor para la administración de cada compuesto de prueba, se calculó el volumen tumoral relativo (VTR) que establece el volumen tumoral en el momento de la agrupación como 1 como tasa de proliferación tumoral según la siguiente fórmula, y la transición del valor promedio de VTR de cada individuo se muestra en las figuras 1 a 4.

VTR=(volumen tumoral en el día de medición del volumen tumoral)/(volumen tumoral en el momento de la agrupación)

El valor promedio de VTR del grupo administrado con compuesto de la presente divulgación en el día de evaluación final es más pequeño que el valor promedio de VTR del grupo de control, y cuando se muestra una diferencia estadísticamente significativa (prueba de la t de Student), se determinó que el compuesto de la presente divulgación era significativamente eficaz, y la diferencia estadísticamente significativa se marca con * en la figura (*: p<0,05).

Como resultado, se reveló que el compuesto de la presente divulgación muestra un efecto antitumoral significativo.

Ejemplo experimental 5: Formación de muestra a modo de ejemplo de forma cristalina, cocristal o sal

Se intentó cristalizar un compuesto seleccionado de los ejemplos 1 (REFERENCIA) o 2 (INVENCIÓN) anteriores con un total de 47 compuestos secundarios (hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, L-arginina, hidróxido de calcio, hidróxido de colina, dietilamina, L-lisina, dietanolamina, trometamina, etilendiamina, ácido oxálico, ácido dibenzoil-L-tartárico, ácido maleico, ácido glutámico, ácido malónico, ácido fumárico, ácido L-tartárico, 4-hidroxibenzamida, nicotinamida, isonicotinamida, sacarina, ácido galactárico, ácido cítrico, ácido D-glucurónico, ácido L-málico, etilendiamina, ácido glutárico, ácido succínico, urea, arginina, ácido benzoico, ácido ascórbico, metilparabeno, vanilina, ácido glicólico, ácido clorhídrico, ácido hipúrico, ácido L-láctico, ácido metanosulfónico, ácido fosfórico, ácido p-toluenosulfónico monohidratado, ácido sulfúrico, L-alanina, glicina, meglumina, L-prolina, L-serina, L-valina), pero sólo la combinación con ácido benzoico formó una muestra a modo de ejemplo de forma cristalina, cocristal o sal.

Inicialmente, se disolvieron 93 mg del compuesto seleccionado de los ejemplos 1 (REFERENCIA) o 2 (INVENCIÓN) en 500 |il de acetato de isopropilo y se agitó la disolución a 60 °C; se añadieron 233 |il de una disolución de ácido benzoico en metanol (concentración: 0,8672 mmol/ml) a la muestra. Se agitó la mezcla a 60 °C durante 10 minutos, se filtró a través de un filtro de jeringa precalentado (0,2 |im, nailon) y luego se enfrió hasta temperatura ambiental, seguido de almacenamiento en condiciones por debajo de las ambientales, evaporación y agitación del gel resultante de la evaporación en 1 ml de heptano en condiciones ambientales durante 30 días para obtener la muestra a modo de ejemplo que contenía 1 equivalente de ácido benzoico. Sin embargo, en este método de producción, el periodo de fabricación duró más de 30 días y sólo se obtuvieron aproximadamente 10 mg de la muestra a modo de ejemplo.

En otro ejemplo, se obtuvieron 3 g de una muestra a modo de ejemplo mediante un método de suspensión de una cantidad similar del mismo compuesto en un disolvente mixto de heptano-tolueno y agitación a 40 °C o superior. Por ejemplo, a 3000 mg del compuesto seleccionado de los ejemplos 1 ó 2 se le añadieron 1518 mg de ácido benzoico y se le añadieron 57 ml de heptano y 3 ml de tolueno. Se agitó la suspensión durante aproximadamente 4,5 horas bajo calentamiento a 60 °C. Se recogió la suspensión mediante filtración, se lavó con una mezcla 19:1 de heptano y tolueno y se calentó a 60 °C. Se recuperó el sólido y se secó para obtener 3420,6 mg (tasa de recuperación del 91 %) del producto con una pureza química del 98,67 % y una pureza óptica del 100 % de ee. 1H-RMN (CDCla) 8: 8,77 (s, 1H), 8,09 (d, J=8,0 Hz, 2H), 7,89 (d, J=8,0 Hz, 1H), 7,60 (t, J=7,2 Hz, 1H), 7,54 (d, J=2 Hz, 1H), 7,40-7,51 (m, 3H), 6,91 (dd, J=6,0 Hz, 8,4 Hz, 1H), 6,87 (d, 9,6 Hz, 1H), 6,67 (dd, J=8,0 Hz, 8,4 Hz, 1H), 6,55 (s a, 1H), 6,34 (s a, 1H), 4,88 (dd, J=9,6 Hz , 10,4 Hz, 1H), 3,40-3,55 (m, 1H), 2,15 (s, 6H), 1,42 (d, J=6,8 Hz, 3H).

Se filtró la suspensión, y se enjuagó el sólido con la mezcla de heptano y tolueno y se calentó a 60 °C. Como resultado de evaluar las propiedades fisicoquímicas de la forma cristalina, el cocristal o la sal obtenido, se halló sorprendentemente que este producto es excelente en cuanto a estabilidad en almacenamiento, además de tener una higroscopicidad y una capacidad de carga bajas y ser fácil de manipular.

En otro ejemplo, a 1000 mg del compuesto seleccionado de los ejemplos 1 (REFERENCIA) o 2 (INVENCIÓN) se le añadieron 506 mg de ácido benzoico y se le añadieron 19 ml de heptano y 1 ml de tolueno. Se agitó la suspensión durante aproximadamente 3,5 horas bajo calentamiento a 60 °C. Se recogió la suspensión mediante filtración, se lavó con una mezcla 19:1 de heptano y tolueno y se calentó a 60 °C. Se recuperó el sólido y se secó para obtener 947 mg (tasa de recuperación del: 75,6 %) de una muestra a modo de ejemplo.

Además, de entre las 47 clases de compuestos secundarios usados para el estudio de cristalización, había compuestos secundarios que contenían un grupo funcional básico (o catión), pero el presente compuesto, que es ácido, no formó ningún cristal con estos compuestos secundarios básicos. Por tanto, fue inesperado que el compuesto ácido formara una forma cristalina, un cocristal o una sal sólo con ácido benzoico, que es un compuesto ácido. Además, es imprevisible qué clase de propiedades fisicoquímicas tiene la forma cristalina, el cocristal o la sal obtenido.

Ejemplo experimental 6: Características estructurales

Análisis de monocristal: se añadieron 5 ml de heptano, 3 ml de acetato de n-propilo y 203,3 mg de ácido benzoico a 100 mg de la muestra del ejemplo experimental 5 usando el compuesto del ejemplo 2 (a continuación en el presente documento también denominada “la muestra de la presente invención”) y se disolvieron a 80 °C.

Al producto disuelto se le añadieron 810 mg de ácido benzoico y se disolvieron. Se añadió una pequeña cantidad del producto y se dejó reposar la mezcla durante la noche a 60 °C. Después de eso, se redujo la temperatura hasta 50 °C y se dejó reposar durante 6 días para obtener cristales para el análisis de monocristal.

La medición se realizó en las siguientes condiciones de medición, y el procesamiento de datos se llevó a cabo usando el software de medición y procesamiento de datos CrysAlisPro, el paquete de programa de análisis de estructuras CrystalStructure y el software de análisis de rayos X de polvo integrado PDXL.

Aparato: XtaLAB PRO MM 007

Fuente de rayos X: Cu Ka (X=1,54184 A)

Tensión de tubo ■ corriente de tubo: 40 kV - 30 mA

Temperatura de medición: -173 °C (usando dispositivo de pulverización a baja temperatura)

Diámetro de colimador: O 0,3 mm

Longitud de cámara: 39,71 mm

Ángulo de vibración: 0,25°

Tiempo de exposición: 0,25 s/pieza

Número total de mediciones: 14476 láminas

Tiempo total de medición: 1 hora 35 minutos

Los resultados se muestran a continuación y en la figura 5.

Sistema cristalino: sistema monoclínico

Grupo espacial: P21/n (n.° 4)

Constante de red: a=13,89023 (9) A

b=7,77623 (4) A

c=14,00408 (9) A

a=90°

P=110,5202 (7)°

y=90°

Volumen de celda unitaria: 1416,653 (16) A3

Los datos de difracción de rayos X de polvo de la muestra de la presente invención se midieron según las siguientes condiciones de prueba.

Aparato: EMPYREAN fabricado por PANalytical

Método de reflexión (método intensivo)

Objetivo: Cu

Corriente de tubo de rayos X: 40 mA

Tensión de tubo de rayos X: 45 kV

Intervalo de barrido: 29=de 5,0 a 40,0°

Paso: 29=0,0131°

Tiempo promedio/paso: 8,670 s

Velocidad de barrido: 0,0015°/s

Ranura de divergencia: 1°

Ranura de dispersión: 2,0 mm

Ranura de recepción: 8,0 mm

El espectro de difracción de rayos X se muestra en la figura 6. El patrón de difracción de rayos X de polvo de la muestra tiene un ángulo de difracción (29 ± 0,2°) de 6,8°, 7,8°, 11,2°, 13.4°, 13,7°, 16,0°, 17,1°, 17,8° y 23,2°. Ejemplo experimental 7: Calorimetría diferencial de barrido (medición por DSC)

La medición por DSC de la muestra de la presente invención se realizó según las siguientes condiciones de prueba.

Aparato: DSC 1 STAR System fabricado por METTLER TOLEDO

Muestra: aproximadamente 1 mg

Recipiente de muestra: fabricado de aluminio

Intervalo de aumento: de 25 a 290 °C

Velocidad de aumento de temperatura: 10 °C/min

Gas atmosférico: nitrógeno

Velocidad de flujo de gas de nitrógeno: 50 ml/min

La manipulación de dispositivos incluyendo el procesamiento de datos fue según el manual proporcionado con el dispositivo de DSC. La curva de DSC resultante se muestra en la figura 7. Tal como se muestra en el resultado de DSC, se mostró un pico endotérmico (parte superior del pico) a 162 °C.

La figura 9 muestra el resultado de simular el patrón de difracción de XRD a partir del resultado del análisis de monocristal, y los picos característicos del ángulo de difracción (29 ± 0,2°) (6,8°, 7,8°, 11,2°, 13,4°, 13,7°, 16,0°, 17,1°, 17,8° y 23,2°) coinciden con el ejemplo anterior.

Ejemplo experimental 8: Higroscopicidad

La prueba de adsorción/desorción de humedad se llevó a cabo según las siguientes condiciones.

Con de aproximadamente 10 a 15 mg de la muestra se llenó un portamuestras de cuarzo dedicado, y se midió y registró continuamente el peso de cada muestra a cada humedad en las siguientes condiciones. La manipulación del dispositivo incluyendo el procesamiento de datos fue según las instrucciones del método y el procedimiento para cada dispositivo.

Aparato: VTI SA (fabricado por TA Instruments Inc.)

Temperatura de secado: 60 °C

Tasa de calentamiento: 1 °C/min

Equilibrio de secado: en el intervalo no superior a 300 minutos, confirmar que no disminuya en un 0,01 % en peso en 5 minutos

Temperatura de medición: 25 °C

Equilibrio de humidificación: en el intervalo no superior a 120 minutos, confirmar que no aumente en un 0,01 % en peso en 5 minutos

Programa de humedad relativa: aumentar en un 5 % de HR hasta del 5 al 95 % de HR y disminuir en un 5 % de HR desde el 95 % de HR hasta el 5 % de HR

Cuando inicialmente se obtuvo una forma libre del compuesto como sustancia amorfa, la forma libre tenía higroscopicidad (figura 8) y también tenían una alta propiedad de carga. En este caso, “forma libre” se refiere a una sustancia amorfa por la sustancia farmacológica sola. Sin embargo, tal como se describió anteriormente, se obtuvo la forma cristalina, el cocristal o la sal de la forma libre del compuesto del ejemplo 2, y esta muestra no tenía higroscopicidad (figura 8) y una débil propiedad de carga.

Tal como se muestra en la figura 8, la higroscopicidad del producto obtenido (producto pulverizado) fue un cambio de masa de aproximadamente el 0,1 % bajo una humedad relativa del 95 % en la prueba de adsorción/desorción de humedad y, por tanto, el producto apenas presentaba higroscopicidad. Estas propiedades fisicoquímicas son superiores a la higroscopicidad y a la capacidad de carga de la forma libre del mismo compuesto.

El producto sólido obtenido del ejemplo 2 tenía una baja propiedad de carga y se observó una pequeña cantidad de adherencia a una espátula o a un frasco de vidrio.

Como ejemplo comparativo, se llevó a cabo secado por pulverización del compuesto anterior con el fin de eliminar el disolvente residual. Se disolvieron 2 g del compuesto en 18 g de etanol y se llevó a cabo secado por pulverización en las siguientes condiciones.

Calentamiento después de aporte de calor: progresión

Temperatura de calor de escape: 78 °C

Velocidad de flujo de alimentación: 5 ml/min

Velocidad de flujo de nitrógeno de pulverización: 350 l/hora

Se secó a presión reducida el producto secado por pulverización obtenido en una atmósfera a 90 °C durante 1 hora para obtener una forma libre del compuesto, que era amorfa, tenía una alta propiedad de carga y presentada mucha adherencia cuando se transfirió mediante una espátula o un frasco de vidrio. Además, tal como se muestra en la figura 8, se observó un aumento de masa de aproximadamente el 3,8 % bajo una humedad relativa del 95 % en la prueba de adsorción/desorción de humedad. Este ejemplo comparativo también se usó para la prueba de estabilidad a continuación.

Ejemplo experimental 9: Prueba de estabilidad

Inicialmente, se midió la pureza química mediante los siguientes métodos.

Se midió la cantidad de sustancias análogas en la disolución de muestra mediante análisis por HPLC. La manipulación del dispositivo incluyendo el procesamiento de datos fue según el manual proporcionado con el dispositivo (es decir, Prominence-i). Se disolvieron aproximadamente 2 mg de la muestra a modo de ejemplo de la presente invención en 4 ml de mezcla de fase móvil A/fase móvil B (17:3), y se usó la mezcla resultante como disolución de muestra.

Columna: CAPCELL PAK ADME fabricada por Shiseido (4,6 * 150 mm, 3 |im)

Detección por UV: 220 nm

Temperatura de la columna: 40 °C

Velocidad de flujo de la columna: 1,0 ml/min

Fase móvil: A: tampón fosfato 5 mM, pH 6,2/acetonitrilo (4:1); B: acetonitrilo

Volumen de inyección: 5 |il

Temperatura de enfriador de muestra: 5 °C

Tiempo de recogida: 40 minutos

[Tabla 15] Gradiente para HPLC

Se sometió a prueba la estabilidad de sólido de la muestra a modo de ejemplo de la presente invención y la forma libre obtenida anteriormente después de almacenar la muestra a 40 °C/75 % de HR (condición cerrada y abierta) durante 2 semanas o 4 semanas. Condición abierta significa que se retiró la tapa del frasco de vidrio y se cubrió con Kimwipe.

Puntos de medición: 2 semanas y 4 semanas

Cantidad de almacenamiento: de aproximadamente 50 a 60 mg

Recipiente de almacenamiento: frasco de vidrio marrón

[Tabla 16]

Después del almacenamiento, la muestra produjo sólo una pequeña cantidad de sustancias análogas, presentando una estabilidad superior en comparación con el ejemplo comparativo que tenía una forma libre. Por tanto, se confirmó que la muestra de la presente divulgación presenta una excelente estabilidad.

La pureza óptica también se midió mediante las siguientes condiciones de HPLC.

Detector: UV a 240 nm

Columna: CHIRALPAK IE (4,6 * 250 mm, 5 |im)/Daicel Corp.

Temperatura de la columna: 40 °C

Fase móvil: n-hexano/etanol/etanolamina/ácido acético (65:35:0,5:0,2)

Velocidad de flujo: 1,0 ml/min

Inyección: 5 |il

Temperatura de la muestra: 5 °C

Intervalo de tiempo de medición: 40 min

Límite de cuantificación (LOQ):

Compuesto - RR,RS,SS: 0,05 %

La pureza óptica también se midió con la adición de isómero óptico al 0,2 %.

Se sometió a prueba la estabilidad de sólido de la muestra de la presente invención y la forma libre obtenida anteriormente antes y después de almacenar la muestra a 40 °C/75 % de HR (condición cerrada y abierta) durante 24 horas. No se observó ningún cambio significativo en la pureza óptica después de 24 horas.

Los resultados del estudio de medición de la pureza óptica se muestran en las figuras 10-12.

Ejemplo experimental 10: Prueba de solubilidad

Se añadieron aproximadamente 15 mg de la muestra de la presente invención a 1 ml de cada disolvente y se hincharon a 37 °C durante 2 horas bajo una condición resistente a la luz. Después de la centrifugación, se filtró cada sobrenadante y se añadieron 0,7 ml de una mezcla de agua y acetonitrilo (1:1) a 0,1 ml del filtrado. Se realizó la prueba de solubilidad con 5 |il del disolvente según las siguientes condiciones.

Detector: espectrofotómetro de ultravioleta (longitud de onda: 230 nm)

Columna: CAPCELPAK ADME (4,6 * 150 mm, 3 mm)

Temperatura de la columna: temperatura constante de aproximadamente 40 °C

Fase móvil A:

A: mezcla de tampón fosfato 5 mM (pH 6,52) y acetonitrilo (4:1)

B: acetonitrilo

Seguimiento de la fase móvil: controlar el gradiente mezclando las fases móviles A y B tal como se indica en la siguiente tabla a continuación

Velocidad de flujo: 1,0 ml/minuto

Intervalo de tiempo de la medición: durante 12 minutos después de la inyección

[Tabla 17] Gradiente para HPLC

Los resultados de la prueba de solubilidad se muestran en la tabla 18 a continuación.

[Tabla 18] Datos de solubilidad

No se observó ningún cambio significativo en el patrón de XRD después de un estudio de solubilidad de 2 h y no se observó ninguna diferencia significativa entre una forma de ácido libre y la muestra de la presente invención. Ejemplo experimental 11: Prueba de estabilidad de sólido

Se sometió a prueba la estabilidad de sólido de la muestra a modo de ejemplo de la presente invención y la forma libre obtenida anteriormente después de almacenar la muestra a 40 °C/75 % de HR (condición abierta), 70 °C (cerrada) y 80 °C (cerrada) después de 2 semanas o 4 semanas. Condición abierta significa que se retiró la tapa del frasco de vidrio y se cubrió con Kimwipe, 70 °C y 80 °C (cerrada).

Puntos de medición: 2 semanas y 4 semanas

Cantidad de almacenamiento: aproximadamente 30 mg

Storage container: frasco de vidrio marrón

Se midió la cantidad de sustancias análogas en la disolución de muestra mediante análisis por HPLC. La manipulación del dispositivo incluyendo el procesamiento de datos fue según el manual proporcionado con el dispositivo (es decir, Prominence-i). Se disolvieron aproximadamente 2 mg de la muestra de la presente invención en 4 ml de mezcla de fase móvil A/fase móvil B (17:3), y se usó la mezcla resultante como disolución de muestra.

Columna: CAPCELL PAK ADME fabricada por Shiseido (4,6 * 150 mm, 3 |im)

Detección por UV: 220 nm

Temperatura de la columna: 40 °C

Velocidad de flujo de la columna: 1,0 ml/min

Fase móvil: A: tampón fosfato 5 mM, pH 6,5/acetonitrilo (4:1); B: acetonitrilo

Volumen de inyección: 5 |il

Temperatura de enfriador de muestra: 5 °C

Tiempo de recogida: 40 minutos

[Tabla 19] Gradiente para HPLC

[Tabla 20]

Claims (10)

REIVINDICACIONES

1. Cocristal de ácido benzoico y 5-cloro-2-(N-((1S,2R)-2-(6-fluoro-2,3-dimetilfenil)-1-(5-oxo-4,5-dihidro-1,3,4-oxadiazol-2-il)propil)sulfamoil)benzamida,

en el que un patrón de difracción de rayos X de polvo del cocristal medido mediante rayos X característicos de Cu Ka tiene dos o más picos a (29 ± 0,2°) de 6,8°, 7,8°, 11,2°, 13,4°, 13,7°, 16,0°,17,1°, 17,8° y 23,2°.

2. Cocristal según la reivindicación 1, en el que un patrón de difracción de rayos X de polvo del cocristal es a (29 ± 0,2°) de 6,8°, 7,8°, 11,2°, 13,4°, 13,7°, 16,0°, 17,1°, 17,8° y 23,2°.

3. Cocristal según la reivindicación 1, en el que el cocristal tiene un pico endotérmico desde 155 °C hasta 168 °C tal como se mide mediante DSC usando una velocidad de aumento de temperatura de 10 °C/min.

4. Cocristal según la reivindicación 3, en el que un patrón de difracción de rayos X de polvo del cocristal es a (29 ± 0,2°) de 6,8°, 7,8°, 11,2°, 13,4°, 13,7°, 16,0°, 17,1°, 17,8° y 23,2°, y en el que el cocristal tiene un pico endotérmico a 162 °C tal como se mide mediante DSC.

5. Cocristal según la reivindicación 1, en el que la razón molar de 5-cloro-2-(N-((1S,2R)-2-(6-fluoro-2,3-dimetilfenil)-1-(5-oxo-4,5-dihidro-1,3,4-oxadiazol-2-il)propil)sulfamoil)benzamida y ácido benzoico es de 1:1.

6. Cocristal según la reivindicación 5, en el que un patrón de difracción de rayos X de polvo del cocristal es a (29 ± 0,2°) de 6,8°, 7,8°, 11,2°, 13,4°, 13,7°, 16,0°, 17,1°, 17,8° y 23,2°.

7. Cocristal según la reivindicación 6, en el que el cocristal tiene un pico endotérmico desde 155 °C hasta 168 °C tal como se mide mediante DSC (velocidad de aumento de temperatura de 10 °C/min).

8. Cocristal según la reivindicación 7, en el que un patrón de difracción de rayos X de polvo del cocristal es a (29 ± 0,2°) de 6,8°, 7,8°, 11,2°, 13,4°, 13,7°, 16,0°, 17,1°, 17,8° y 23,2°, y en el que el cocristal tiene un pico endotérmico a 162 °C tal como se mide mediante DSC.

9. Composición farmacéutica que comprende

(i) el cocristal según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, y

(ii) un portador farmacéuticamente aceptable.

10. Cocristal según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para su uso en el tratamiento de tumores.