ES2944962T3 - Métodos de diagnóstico para tratamiento con linfocitos T - Google Patents

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Rajul JAIN
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Abstract

La invención proporciona métodos para aumentar la eficacia de una terapia con células T en un paciente que lo necesite. La invención incluye métodos para identificar a un paciente que respondería bien a una terapia con células T o acondicionar a un paciente antes de una terapia con células T para que el paciente responda bien a una terapia con células T. El acondicionamiento implica administrar uno o más agentes de preacondicionamiento antes de una terapia con células T e identificar biomarcadores de citoquinas antes de administrar una terapia con células T. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Métodos de diagnóstico para tratamiento con linfocitos T
Declaración de interés gubernamental
Esta invención se realizó en cumplimiento de un Acuerdo de Investigación y Desarrollo Cooperativo con el Instituto Nacional del Cáncer (NCI), una agencia del Departamento de Salud y Servicios Humanos. El gobierno de Estados Unidos tiene determinados derechos en esta invención.
Campo de la invención
Esta invención se refiere a la preparación de pacientes con cáncer para que sean adecuados para un tratamiento con linfocitos T al preacondicionar a los pacientes con uno o más agentes de preacondicionamiento que pueden aumentar el nivel sérico de una o más citocinas que son indicativas de la eficacia del tratamiento con linfocitos T.
Antecedentes de la invención
Los cánceres humanos están compuestos por su naturaleza de células normales que han experimentado una conversión genética o epigenética para convertirse en células cancerosas anómalas. Al hacerlo, las células cancerosas comienzan a expresar proteínas y otros antígenos que son distintos de los expresados por células normales. Estos antígenos tumorales aberrantes puede usarlos el sistema inmunitario innato del organismo para abordar específicamente y destruir las células cancerosas. Sin embargo, las células cancerosas emplean diversos mecanismos para evitar que los inmunocitos, tales como los linfocitos T y B, aborden con éxito las células cancerosas.
Los tratamientos con linfocitos T humanos se basan en linfocitos T humanos enriquecidos o modificados para abordar y destruir las células cancerosas en un paciente. Se han desarrollado diversas tecnologías para enriquecer la concentración de linfocitos T de origen natural que pueden abordar un antígeno tumoral o para modificar genéticamente los linfocitos T para que aborden específicamente un antígeno canceroso conocido. Estos tratamientos han demostrado tener efectos moderados, aunque prometedores, sobre el tamaño del tumor y la supervivencia del paciente. Sin embargo, ha resultado difícil predecir si un tratamiento con linfocitos T dado será eficaz en cada paciente. Por lo tanto, existe la necesidad de identificar a un paciente que responda bien a un tratamiento con linfocitos T o preparar a un paciente para que responda bien a un tratamiento con linfocitos T.
Se proporciona un comentario sobre inmunoterapia de transferencia celular personalizada para neoplasias malignas de linfocitos B y cánceres sólidos en Rosenberg, S.A. y Kochenderfer, J.N., Mol Ther. 2011; 19(11): 1928­ 1930.
La eficacia terapéutica de los linfocitos T, solos o con genoterapia de proteína-10 inducible (IP-10) por la quimiocina interferón y (IfN-y), se investiga en Huang Hui et al., Cell Immunol. 2002; 217(1-2): 12-22.
Sumario de la invención
La presente divulgación proporciona uno o más agentes de preacondicionamiento para usar un método para tratar un cáncer en un paciente adecuado para un tratamiento con linfocitos T, comprendiendo el método (i) administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento que pueden aumentar el nivel sérico de interleucina-15 ("IL-15"), interleucina-7 ("IL-7") y al menos una citocina adicional seleccionada del grupo que consiste en proteína quimiotáctica de monocitos 1 ("MCP-1"), proteína C-reactiva ("CRP"), factor de crecimiento placentario ("PLGF"), proteína 10 inducida ("IP-10") por interferón gamma, y cualquier combinación de las mismas y (ii) administrar un tratamiento con linfocitos T cuando el paciente presenta un nivel sérico elevado de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina adicional.
La presente divulgación proporciona uno o más agentes de preacondicionamiento para su uso en un método para tratar un cáncer en un paciente adecuado para un tratamiento con linfocitos T, comprendiendo el método administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento que pueden aumentar un nivel sérico de IL-15, IL-7 y al menos una citocina adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas, en donde el paciente se trata con un tratamiento con linfocitos T cuando presenta un nivel sérico aumentado de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina adicional.
El uso puede comprender (i) administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento que pueden aumentar el nivel sérico de IL-15, IL-7 y al menos una citocina adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas, (ii) administrar una cantidad adicional de uno o más agentes de preacondicionamiento o administrar una cantidad eficaz de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas y (iii) administrar un tratamiento con linfocitos T cuando el paciente presenta un nivel sérico aumentado de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina adicional.
La presente divulgación también describe un método para identificar a un paciente adecuado para un tratamiento con linfocitos T, que comprende administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento que pueden aumentar el nivel sérico de IL-15, IL-7 y al menos una citocina adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas.
La presente divulgación también describe un método para identificar a un paciente adecuado para un tratamiento con linfocitos T, que comprende (i) administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento que pueden aumentar el nivel sérico de IL-15, IL-7 y al menos una citocina adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas y (ii) administrar un tratamiento con linfocitos T cuando el paciente presenta un nivel sérico aumentado de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina adicional.
La presente divulgación también describe un método para identificar a un paciente adecuado para un tratamiento con linfocitos T, que comprende (i) administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento que pueden aumentar el nivel sérico de IL-15, IL-7 y al menos una citocina adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas, (ii) administrar una cantidad adicional de uno o más agentes de preacondicionamiento o administrar una cantidad eficaz de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas y (iii) administrar un tratamiento con linfocitos T cuando el paciente presenta un nivel sérico aumentado de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina adicional.
La presente divulgación también describe un método para aumentar el nivel sérico de IL-15, IL-7 y al menos una citocina adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas para preacondicionar a un paciente que necesita tratamiento con linfocitos T, que comprende administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento, en donde el paciente se trata con un tratamiento con linfocitos T cuando presenta un nivel sérico aumentado de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina adicional.
La presente divulgación también describe un método para aumentar el nivel sérico de IL-15, IL-7 y al menos una citocina adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas para preacondicionar a un paciente que necesita tratamiento con linfocitos T, que comprende (i) administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento y (ii) administrar un tratamiento con linfocitos T cuando el paciente presenta un nivel sérico aumentado de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina adicional.
La presente divulgación también describe un método para aumentar el nivel sérico de IL-15, IL-7 y al menos una citocina adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas para preacondicionar a un paciente que necesita tratamiento con linfocitos T, que comprende (i) administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento, (ii) administrar una cantidad adicional de uno o más agentes de preacondicionamiento o administrar una cantidad eficaz de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas y (iii) administrar un tratamiento con linfocitos T cuando el paciente presenta un nivel sérico aumentado de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina adicional. Los usos
divulgados en el presente documento comprenden además medir el nivel sérico de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina después de la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento.
En una realización particular, el uno o más agentes de preacondicionamiento divulgados en el presente documento comprenden ciclofosfamida y un análogo de purina. En una realización, el análogo de purina se selecciona de pentostatina y fludarabina.
En determinadas realizaciones, el tratamiento con linfocitos T se selecciona del grupo que consiste en inmunoterapia con linfocitos oncoinfiltrantes (TIL), citoterapia con células autólogas, citoterapia con células autólogas genomanipuladas (eACT), trasplante alogénico de linfocitos T y cualquier combinación de las mismas.
Breve descripción de las figuras
La figura 1 muestra una representación esquemática de un ejemplo de linfocito T genomanipulado con CAR y su construcción. En este linfocito T genomanipulado con CAR de ejemplo, el dominio de unión a la diana comprende un dominio scFv derivado de un anticuerpo, el dominio coestimulador se obtiene de CD28 y el dominio activador esencial se obtiene de CD3Z (zeta). Una construcción de vector CAR puede transportarse por un vector vírico y luego incorporarse en un genoma de linfocitos T. La construcción CAR luego puede expresarse por el linfocito T como una proteína transmembranaria.
Las figuras 2A y 2B muestran las respuestas de la enfermedad del paciente después del tratamiento con linfocitos T-CAR anti-CD-19. Las mejores respuestas de pacientes con neoplasias malignas de linfocitos B se muestran en la figura 2A como un cambio porcentual en el estado patológico. Las barras discontinuas indican una respuesta completa (RC). Las barras sombreadas indican una respuesta parcial. Las barras blancas indican una enfermedad estable (EE). Las barras negras indican enfermedad progresiva (EP). La figura 2B muestra las respuestas de la enfermedad del paciente con respecto a los meses tras la infusión de linfocitos T-CAR. Las barras negras rellenas indican una respuesta parcial (RP) y las barras grises indican una respuesta completa (RC). Las discontinuidades en las barras marcadas con "EP" indican que el paciente experimentó una enfermedad progresiva. Los triángulos invertidos marcan el momento de la infusión de linfocitos T. Los círculos rellenos indican el momento de recuperación de linfocitos B. Los círculos blancos indican el momento de eliminación de los linfocitos T-CAR de la sangre del paciente. Una flecha horizontal indica que la respuesta del paciente está en curso.
La figura 3 proporciona un diagrama de muestra de un ensayo clínico de fase 1 dirigido a determinar la seguridad, eficacia y toxicidades limitantes de la dosis del tratamiento de un paciente con 500 mg/m2/día de ciclofosfamida, 30 mg/m2/día de fludarabina y 2 x 106 linfocitos T-CAR anti-CD19/kg.
Las figuras 4A-4H muestra los niveles séricos de analitos de citocinas seleccionados antes y después del acondicionamiento con 300 mg/m2/día de ciclofosfamida y 30 mg/m2/día de fludarabina. Los niveles séricos de interleucina 15 (IL-15; figura 4A), proteína quimiotáctica de monocitos 1 (MCP-1; figura 4B), proteína 10 inducida por gamma (IP-10; figura 4C), factor de crecimiento placentario (PLGF; figura 4D), molécula de adhesión intercelular soluble 1 (sICAM-1; figura 4E), proteína C-reactiva (CRP; figura 4F), factor de crecimiento del endotelio vascular D (VEGF-D; figura 4G) y proteína inflamatoria de macrófagos 1 p (MIP-1 b; figura 4H) se muestran antes de la administración y después de la administración de 300 mg/m2 de ciclofosfamida y 30 mg/m2 de fludarabina. El suero antes de la administración se recogió entre el día -12 y el día -5, y el suero después de la administración se recogió el día 0 antes de la administración del tratamiento con linfocitos T (figuras 4A-4H).
Las figuras 5A-H muestran el factor de cambio en los niveles séricos de analitos de citocinas seleccionados después del acondicionamiento con 300 mg/m2/día de ciclofosfamida y 30 mg/m2/día de fludarabina en pacientes que respondieron o no respondieron al tratamiento con linfocitos T posterior. El factor de cambio en los niveles séricos de IL-15 (figura 5A), MCP-1 (figura 5B), IP-10 (figura 5C), PLGF (figura 5D), sICAM-1 (figura 5E), CRP (figura 5F), VEGF (figura 5G) y MIP-1 b (figura 5H) se muestran para pacientes que responden y pacientes que no responden. Las líneas horizontales indican el promedio (figuras 5A-H). Los cambios individuales de IL-15 en los pacientes se muestran en la figura 5A, y el grado de respuesta a la enfermedad de cada paciente se indica junto a cada dato puntual como una respuesta parcial (RP), respuesta completa (RC), enfermedad estable (EE) o enfermedad progresiva (EP) (figura 5A).
Las figuras 6A-6V muestran la concentración sérica de analitos de citocinas seleccionados medidos en diversos momentos puntuales desde el día -10 hasta el día 18 para pacientes a los que se les administró 300 mg/m2/día de ciclofosfamida y 30 mg/m2/día de fludarabina antes de recibir un tratamiento con linfocitos T el día 0. La concentración sérica de factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF; figura 6A), IL-2 (figura 6B), MCP-1 (figura 6C), IL-6 (figura 6D), IL-10 (figura 6E), MCP-4 (figura 6F), CRP (figura 6G), interferón gamma (IFNy; figura 6H), granzima A (figura 6I), IL-15 (figura 6J), IL-5 (figura 6K), granzima B (figura 6L), IL-8 (figura 6M), IP-10 (figura 6N), MIP-1 b (figura 6O), PLGF (figura 6P), IL-16 (figura 6Q), quimiocina regulada por el timo y activación (TARC; figura 6R), eotaxina-3 (figura 6S), sICAM-1 (figura 6T), molécula de adhesión vascular soluble 1 (sVCAM; figura 6U) y (SAA; figura 6V) se muestra.
Las figuras 7A-7I muestran la concentración sérica de analitos de citocinas seleccionados medidos antes y después de la administración de 300 mg/m2/día de ciclofosfamida y 30 mg/m2/día de fludarabina. Los sueros después de la administración se recogieron justo antes de la infusión de linfocitos T. Las concentraciones séricas de IL-15 (figura 7A), IL-7 (figura 7B), PLGF (figura 7C), CRP (figura 7D), IL-5 (figura 7E), IL-10 (figura 7F), MCP-1 (figura 7G), IP-10 (figura 7H) y sICAM-1 (figura 7I) se muestran. Cada dato puntual representa un solo paciente. Las barras horizontales muestran el promedio (figuras 7A-7I). Se aplicó el valor de p de la prueba del orden con signo para datos emparejados de Wilcoxon a los analitos medidos antes y después del acondicionamiento, y se muestran los valores de p correspondientes (figuras 7A-7I). Algunos valores de IL-7 estaban por encima del límite superior de cuantificación (LSDC; figura 7B).
Las figuras 8A-8L muestran la producción in vitro de diversos analitos de citocinas producidos por linfocitos T-CAR anti-CD19 (K562-CD19) en comparación con un control negativo (K562-NGFR) después de estimulación con células K562. Las concentraciones de GM-CSF (figura 8A), IL-2 (figura 8B), If Ny (figura 8C), IL-5 (figura 8D), IL-4 (figura 8E), IL-13 (figura 8F), factor de necrosis tumoral alfa (TNFα; figura 8G), IL-6 (figura 8H), granzima B (figura 8I), MIP-1 p (figura 8J), MIP-1 a (figura 8K) y CD137 soluble (figura 8L) se muestran para el control y linfocitos T-CAR anti-CD19. T1, T2 y citocinas homeostáticas inmunitarias (figuras 8A-8F) y citocinas proinflamatorias y quimiocinas (figuras 8G-8L) están marcados correspondientemente. Los datos se recopilaron antes de la infusión coincubando linfocitos T de producto con células K562-CD19 o K562-NGFR de control y midiendo la concentración de los analitos enumerados en el medio (figuras 8A-8L).
Las figuras 9A-9C muestran el porcentaje de linfocitos T-CAR anti-CD19 (K562-CD19) que expresan diversas citocinas después de la interacción con un antígeno diana en comparación con un control negativo (K562-NGFR). El porcentaje de células que expresan CD107a (figura 9A), 4-1BB (figura 9B) y molécula de muerte programada 1 (PD-1; figura 9C) se muestra. Los datos se recopilaron antes de la infusión coincubando linfocitos T de producto con células K562-CD19 o K562-NGFR de control y midiendo la concentración de los marcadores de activación seleccionados en el medio (figuras 9A-9C). Los valores de p que mostrados indican los resultados de una prueba de la t para datos emparejados que compara células de ensayo K562-CD19 con células de control negativo K562-NGFR (figuras 9A-9C).
La figura 10 ilustra las diversas características de los linfocitos T de producto y linfocitos de sangre periférica (PBL) en vista del tiempo de fabricación (días). Los datos incluyen el porcentaje de linfocitos T-CAR anti-CD-19 detectados en el producto frente a PBL; la relación de CD8 a CD4 en el producto frente a PBL; la aparición relativa de linfocitos T vírgenes, de memoria central (Tern), de memoria efectores (Tern) y efectores (Teff) dentro de la población de linfocitos T-CAR CD8+ anti-CD19; y la aparición relativa de linfocitos T vírgenes, de memoria central (Tern), de memoria efectores (Tern) y efectores (Teff) dentro de la población de linfocitos T-CAR CD4+ anti-CD19 (figura 10). El análisis fenotípico de los linfocitos T de producto antes de la infusión y de PBL durante la expansión máxima en la sangre se realizó en linfocitos T-CAr anti-CD19 (figura 10). El valor de p representa los resultados de una prueba del orden de la asociación entre el tiempo de fabricación y la composición del subconjunto de linfocitos T.
La figura 11 muestra el perfil de expresión de citocinas, quimiocinas y otros marcadores observados después del acondicionamiento del paciente con NHL de acuerdo con la invención. CRP: proteína C-reactiva. PLGF: factor de crecimiento placentario. MCP-1: proteína-1 quimioatrayente de monocitos.
La figura 12 expone la cuantificación de los cambios observados en citocinas, quimiocinas y otros marcadores después del acondicionamiento con ciclofosfamida y fludarabina de acuerdo con la invención.
La figura 13 muestra la magnitud del cambio en IL-15 y perforina circulantes después de la quimioterapia de acondicionamiento asociada con la respuesta objetiva. Los valores de p no se ajustaron para la multiplicidad. El análisis se ejecutó sobre marcadores medidos antes de la infusión de linfocitos T-CAR.
La figura 14 expone un análisis de biomarcadores de citocinas, quimiocinas y moléculas efectoras. Los marcadores se ordenaron dentro de cada categoría de biomarcadores por valor de p de bajo a alto usando la prueba del orden con signo de Wilcoxon. Se presentaron los modificados en la mayoría de los pacientes y con valores de p <0,05. Solo 7 de los 41 marcadores medidos mostraron cambios en una mayoría de pacientes, asociados con p <0,05. El análisis se ejecutó sobre marcadores medidos antes de la infusión de linfocitos T-CAR.
La figura 15 expone la inducción secuencial y la eliminación de citocinas homeostáticas inmunitarias, inflamatorias y moduladoras, quimiocinas y moléculas inmunoefectoras. Se muestran marcadores representativos. Un total de 22 de 41 marcadores medidos mostraron una elevación después del tratamiento con linfocitos T-CAR en al menos un 50 % de los pacientes, al menos 2 veces mayor que los valores de referencia: IL-15, IL-7, IL-2, granzima B, granzima A, CRP, IL-6, GM-CSF, IL-5, IFNg, IL-10, MCP-1, MCP-4, IP-10, IL-8, TARC, MIP1a, MIP1b, PLGF, VEGF-D, sICAM-1 y FGF-2. Se observó un pico en los días 3-4 para las citocinas homeostáticas inmunitarias y quimiocinas.
La figura 16 expone la inducción secuencial y la eliminación de citocinas homeostáticas inmunitarias, inflamatorias y moduladoras, quimiocinas y moléculas inmunoefectoras. Se muestran marcadores representativos. Un total de 22 de 41 marcadores medidos mostraron elevación después del tratamiento con linfocitos T-CAR en al menos un 50 % de los pacientes, al menos 2 veces mayor que los valores de referencia: IL-15, IL-7, IL-2, granzima B, granzima A, c Rp , IL-6, Gm -CSF, IL-5, IFNg, IL-10, MCP-1, MCP-4, IP-10, IL-8, TARC, MIp1a, MIP1b, PLGF, VEGF-D, sICAM-1 y fGf -2. Se observó un pico en los días 5-7 para las citocinas inmunomoduladoras y quimiocinas. "LSDC": límite superior de cuantificación.
La figura 17 muestra el cambio en los biomarcadores relacionados con el tratamiento y la respuesta clínica inducida por linfocitos T-CAR anti-CD19 de acuerdo con la invención. Factor de cambio máximo de los niveles de marcador después del tratamiento con linfocitos T-CAR frente al valor de referencia (preacondicionamiento). Cada línea representa un sujeto individual. Se utilizó la prueba del orden para datos independientes de Wilcoxon para comparar los valores de factor de cambio máximo entre los grupos de pacientes que responden y pacientes que no responden, para los 41 biomarcadores evaluados. Los valores de p no se ajustaron para la multiplicidad, y se mostraron solamente aquellos biomarcadores con p <0,10: los valores de p para IL-7 y sICAM-1 fueron <0,05. La asociación también fue aplicable a cambios en los niveles absolutos de IL-7 (p = 0,0165), IL-15 (p = 0,0314) e IL-15 (p = 0,041).
Las figuras 18A-18G muestran el cambio en el nivel de analitos antes y después del acondicionamiento con ciclofosfamida y fludarabina. Las figuras 18A-18F muestran los niveles previos y posteriores de IL-15 (figura 18A), IP-10 (figura 18B), CRP (figura 18C), IL-7 (figura 18D), MCP-1 (figura 18E) y perforina (figura 18F). La figura 18G resume el cambio en los niveles séricos de diversos analitos y los valores de p correspondientes. La figura 19A-19E muestra la correlación entre el cambio en el nivel de analito después del acondicionamiento y la respuesta objetiva al tratamiento con linfocitos T-CAR para IL-15 (figura 19A), IP-10 (figura 19B) y perforina (figura 19C). La figura 19D proporciona un sumario de la significación estadística de los datos proporcionados en cada una de las figuras 19A-19C.
Descripción detallada de la invención
La presente invención se refiere al tratamiento de un paciente adecuado para un tratamiento con linfocitos T, por ejemplo, un tratamiento con linfocitos T-CAR genomanipulados, por ejemplo, una citoterapia con células autólogas (eACT™) y luego tratamiento del paciente con un tratamiento con linfocitos T. Por lo tanto, el método comprende el preacondicionamiento del paciente mediante la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento que pueden aumentar el nivel sérico de determinadas citocinas, por ejemplo, IL-15, IL-7 y al menos una citocina biomarcadora adicional. El preacondicionamiento de los pacientes antes de los tratamientos con linfocitos T con uno o más agentes de preacondicionamiento mejora la eficacia del tratamiento con linfocitos T al reducir la cantidad de linfocitos endógenos y aumentar el nivel sérico de citocinas homeostáticas y/o factores proinmunitarios presentes en el paciente, incluyendo IL-15 e IL-7. Esto crea un microentorno más óptimo para que los linfocitos T trasplantados proliferen una vez administrados al paciente.
La presente invención se refiere además a métodos para crear un entorno más adecuado para una tratamiento con linfocitos T en un paciente que lo necesite, que comprende (i) administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento que pueden aumentar el nivel sérico de determinadas citocinas, por ejemplo, IL-15, IL-7 y al menos una citocina biomarcadora adicional; (ii) administrar al paciente una o más citocinas identificadas como asociadas con una eficacia aumentada de un tratamiento con linfocitos T, por ejemplo, IL-15, IL-7 y al menos una citocina biomarcadora adicional; o (iii) administrar al paciente un tratamiento adicional, por ejemplo, citocinas adicionales, una dosis adicional de uno o más agentes de preacondicionamiento, o linfocitos T genomanipulados para que expresen una o más citocinas, en donde el tratamiento adicional aumenta el nivel sérico de una o más citocinas identificadas como asociadas con una eficacia aumentada de un tratamiento con linfocitos T, por ejemplo, IL-15, IL-7 y al menos una citocina biomarcadora adicional.
La presente invención proporciona uno o más agentes de preacondicionamiento para su uso en un método para tratar un cáncer en un paciente adecuado para un tratamiento con linfocitos T, comprendiendo el método (i) administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento que pueden aumentar el nivel sérico de interleucina-15 ("IL-15"), interleucina-7 ("IL-7") y al menos una citocina adicional seleccionada del grupo que consiste en proteína quimiotáctica de monocitos 1 ("MCP-1"), proteína C-reactiva ("CRP"), factor de crecimiento placentario ("PLGF"), proteína 10 inducida ("IP-10") por interferón gamma, y cualquier combinación de las mismas y (ii) administrar un tratamiento con linfocitos T cuando el paciente presenta un nivel sérico elevado de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina adicional.
Definiciones
Con el fin de que se pueda entender más fácilmente la presente divulgación, en primer lugar se definen determinados términos. Como se usa en la presente solicitud, excepto que se indique expresamente lo contrario en el presente documento, cada uno de los siguientes términos tendrá el significado que se establece a continuación. Se establecen definiciones adicionales en toda la solicitud.
La expresión "y/o" cuando se usa en el presente documento debe tomarse como divulgación específica de cada uno de los dos rasgos característicos o componentes especificados con o sin el otro. Por tanto, la expresión "y/o" como se usa en una la expresión tal como "A y/o B" del presente documento pretende incluir "A y B", "A o B", "A" (solo) y "B" (solo). Asimismo, la expresión "y/o" como se usa en una expresión tal como "A, B y/o C" pretende abarcar cada uno de los siguientes aspectos: A, B y C; A, B o C; A o C; A o B; B o C; A y C; A y B; B y C; A (solo); B (solo); y C (solo).
Se entiende que siempre que se describan aspectos en el presente documento con la expresión "que comprende", se proporcionan también aspectos por lo demás análogos descritos en términos de "que consiste/n en" y/o "que consiste/n esencialmente en".
A menos que se definan de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que el que entiende comúnmente un experto habitual en la materia a la que se refiere la presente divulgación. Por ejemplo, el Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2.a ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3.a ed., 1999, Academic Press; y el Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revisado, 2000, Oxford University Press, proporcionan al experto un diccionario general de muchos de los términos usados en la presente divulgación.
Las unidades, los prefijos y los símbolos se indican en su forma aceptada del Sistema Internacional de Unidades (SI). Los intervalos numéricos incluyen los números que definen el intervalo. Los títulos proporcionados en el presente documento no son limitaciones de los diversos aspectos de la divulgación, que se pueden obtener por referencia a la memoria descriptiva en su conjunto. Por consiguiente, los términos definidos inmediatamente a continuación se definen con más detalle por referencia a la memoria descriptiva en su totalidad.
El término "activación" se refiere al estado de un inmunocito, por ejemplo, un linfocito T, que se ha estimulado suficientemente para inducir proliferación celular detectable. La activación también puede estar asociada con la producción de citocinas inducida y funciones efectoras detectables. La expresión "linfocitos T activados" se refiere a, entre otras cosas, linfocitos T que están experimentando división celular.
"Administrar" se refiere a la introducción física de un agente en un sujeto, usando cualquiera de los diversos métodos y sistemas de administración conocidos por los expertos en la materia. Las vías de administración ilustrativas para las formulaciones divulgadas en el presente documento incluyen intravenosa, intramuscular, subcutánea, intraperitoneal, raquídea u otras vías de administración parenterales, por ejemplo, mediante inyección o infusión. La expresión "administración parenteral" como se usa en el presente documento significa modos de administración diferentes de la administración enteral y tópica, habitualmente mediante inyección e incluye, sin limitación, intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal, intralinfática, intralesional, intracapsular, intraorbitaria, intracardíaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutánea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoidea, intrarraquídea, epidural e intraesternal e infusión, así como electroporación in vivo.
En algunas realizaciones, la formulación se administra por vía no parenteral, por ejemplo, por vía oral. Otras vías no parenterales incluyen una vía de administración tópica, epidérmica o mucosa, por ejemplo, intranasal, vaginal, rectal, sublingual o tópica. La administración también puede realizarse, por ejemplo, una vez, una pluralidad de veces y/o durante uno o más períodos prolongados.
Un "acontecimiento adverso" (AA), como se usa en el presente documento, es cualquier signo desfavorable y generalmente no intencionado o indeseable (incluido un hallazgo anómalo de laboratorio), síntoma, manifestación médica o enfermedad asociada con el uso de un tratamiento médico. La definición de acontecimientos adversos incluye el empeoramiento de una afección médica preexistente. Empeoramiento indica que una afección médica preexistente ha aumentado en gravedad, frecuencia y/o duración o tiene una asociación con un peor resultado.
El término "anticuerpo" (Ab) incluye, sin limitación, una inmunoglobulina glucoproteínica que se une específicamente a un antígeno. En general, un anticuerpo puede comprender al menos dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L) interconectadas por enlaces disulfuro, o una parte de unión a antígeno de las mismas. Cada cadena H comprende una región variable de la cadena pesada (abreviada en el presente documento como VH) y una región constante de la cadena pesada. La región constante de la cadena pesada comprende tres dominios constantes, CH1, CH2 y CH3. Cada cadena ligera está formada por una región variable de la cadena ligera (abreviada en el presente documento como VL) y una región constante de la cadena ligera. La región constante de la cadena ligera comprende un dominio constante, CL. Las regiones VH y VL pueden subdividirse adicionalmente en regiones de hipervariabilidad, denominadas regiones determinantes de la complementariedad (CDR), intercaladas con regiones que están más conservadas, denominadas regiones flanqueantes (FR). Cada VH y VL comprende tres CDR y cuatro FR, dispuestas desde el extremo amínico hasta el extremo carboxílico en el siguiente orden: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Las regiones variables de las cadenas pesadas y ligeras contienen un dominio de unión que interactúa con un antígeno. Las regiones constantes de los Ab pueden mediar la unión de la inmunoglobulina a tejidos o factores del hospedador, incluyendo diversas células del sistema inmunitario (por ejemplo, células efectoras) y el primer componente (C1q) del sistema clásico del complemento.
Una inmunoglobulina puede provenir de cualquiera de los isotipos comúnmente conocidos, incluyendo, pero sin limitación, IgA, IgA secretora, IgG e IgM. Las subclases de IgG también son bien conocidas por los expertos en la materia e incluyen, pero sin limitación, IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 humanas. "Isotipo" se refiere a la clase o subclase Ab (por ejemplo, IgM o IgG1) que está codificada por los genes de la región constante de la cadena pesada. El término "anticuerpo" incluye, a modo de ejemplo, tanto Ab de origen natural como de origen no natural; Ab monoclonales y policlonales; Ab quiméricos y humanizados; Ab humanos y no humanos; Ab completamente sintéticos; y Ab monocatenarios. Un Ab no humano puede humanizarse por métodos recombinantes para reducir su inmunogenicidad en el ser humano. Cuando no se indique expresamente, y a menos que el contexto indique lo contrario, el término "anticuerpo" también incluye un fragmento de unión a antígeno o una parte de unión a antígeno de cualquiera de las inmunoglobulinas mencionadas anteriormente, e incluye un fragmento o parte monovalente y una divalente, y un Ab monocatenario.
Una "molécula de unión a antígeno" o "fragmento de anticuerpo" se refiere a cualquier parte de un anticuerpo menos que la totalidad. Una molécula de unión a antígeno puede incluir las regiones determinantes de la complementariedad antigénica (CDR). Ejemplos de fragmentos de anticuerpo incluyen, pero sin limitación, Fab, Fab', F(ab')2 y fragmentos Fv, dAb, anticuerpos lineales, anticuerpos scFv y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de moléculas de unión a antígeno.
Un "antígeno" se refiere a cualquier molécula que provoque una respuesta inmunitaria o que pueda unirse por un anticuerpo. La respuesta inmunitaria puede implicar la producción de anticuerpos o la activación de células inmunológicamente competentes específicas, o ambas. Un experto en la materia entendería fácilmente que cualquier macromolécula, incluyendo casi todas las proteínas o péptidos, puede servir como antígeno. Un antígeno puede expresarse de forma endógena, es decir, expresarse por ADN genómico, o puede expresarse de forma recombinante. Un antígeno puede ser específico para un determinado tejido, tal como una célula cancerosa, o puede expresarse ampliamente. Además, fragmentos de moléculas más grandes pueden actuar como antígenos. En una realización, los antígenos son antígenos tumorales.
El término "autólogo" se refiere a cualquier material que proviene del mismo individuo en el que posteriormente se volverá a introducir. Por ejemplo, el método de citoterapia con células autólogas genomanipuladas (eACT™) descrito en el presente documento implica la recogida de linfocitos de un paciente, que luego se genomanipulan para que expresen, por ejemplo, una construcción CAR, y luego se vuelven a administrar al mismo paciente.
El término "alogénico" se refiere a cualquier material que proviene de un individuo que luego se introduce en otro individuo de la misma especie, por ejemplo, trasplante alogénico de linfocitos T.
Un "cáncer" se refiere a un amplio grupo de diversas enfermedades caracterizadas por el crecimiento incontrolado de células anómalas en el organismo. La división y el crecimiento celular no regulados dan como resultado la formación de tumores malignos que invaden los tejidos vecinos y también pueden metastatizar en partes distantes del organismo a través del sistema linfático o del torrente sanguíneo. Un "cáncer" o "tejido canceroso" puede incluir un tumor. Ejemplos de cánceres que pueden tratarse mediante los métodos de la presente invención incluyen, pero sin limitación, cánceres del sistema inmunitario, incluyendo linfoma, leucemia y otras neoplasias malignas leucocitarias. En algunas realizaciones, los métodos de la presente invención pueden usarse para reducir el tamaño del tumor de un tumor derivado de, por ejemplo, cáncer de hueso, cáncer de páncreas, cáncer de piel, cáncer de cabeza o cuello, melanoma maligno cutáneo o intraocular, cáncer de útero, cáncer de ovario, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer testicular, cáncer de útero, carcinoma de las trompas de Falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma del cuello uterino, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, enfermedad de Hodgkin, linfoma no hodgkiniano (NHL), linfoma primario de linfocitos B grandes mediastínicos (PBMC), linfoma difuso de linfocitos B grandes (DLBCL), linfoma folicular (FL), linfoma folicular transformado, linfoma esplénico de la zona marginal (SMZL), cáncer del esófago, cáncer del intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroidea, cáncer de la glándula paratiroidea, cáncer de la glándula suprarrenal, sarcoma de partes blandas, cáncer de la uretra, cáncer del pene, leucemia crónica o aguda, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, leucemia linfocítica aguda (ALL) (incluyendo la ALL que no es de linfocitos T), leucemia linfocítica crónica (CLL), tumores sólidos infantiles, linfoma linfocítico, cáncer de la vejiga, cáncer del riñón o del uréter, carcinoma de la pelvis renal, neoplasia del sistema nervioso central (SNC), linfoma primario del SNC, angiogénesis tumoral, tumor del tronco vertebral, glioma del tronco encefálico, adenoma hipofisario, sarcoma de Kaposi, cáncer epidermoide, cáncer de células escamosas, linfoma de linfocitos T, cánceres inducidos por el medio ambiente, incluyendo aquellos inducidos por amianto, otras neoplasias malignas de linfocitos B y combinaciones de dichos cánceres. El cáncer particular puede ser sensible quimioterapia o radioterapia o el cáncer puede ser resistente. Un cáncer resistente se refiere a un cáncer que no se puede modificar con intervención quirúrgica y el cáncer inicialmente es insensible a quimioterapia o radioterapia o el cáncer se vuelve insensible con el tiempo.
Un "efecto antitumoral", como se usa en el presente documento, se refiere a un efecto biológico que puede presentarse como una disminución del volumen tumoral, una disminución de la cantidad de células tumorales, una disminución de la proliferación de células tumorales, una disminución del número de metástasis, un aumento de la supervivencia global o sin progresión, un aumento de la esperanza de vida o una mejoría de diversos síntomas fisiológicos asociados con el tumor. Un efecto antitumoral también puede referirse a la prevención de la aparición de un tumor, por ejemplo, una vacuna.
La expresión "supervivencia sin progresión", que puede abreviarse como SSP, como se usa en el presente documento, se refiere al tiempo desde la fecha del tratamiento hasta la fecha de progresión de la enfermedad según los Criterios de Respuesta de IWG revisados para linfoma maligno o muerte por cualquier causa.
La "progresión de la enfermedad" se evalúa midiendo las lesiones malignas en radiografías u otros métodos que no deben documentarse como acontecimientos adversos. La muerte debida a la progresión de la enfermedad en ausencia de signos y síntomas debe documentarse como el tipo de tumor primario (por ejemplo, DLBCL).
La "duración de la respuesta", que puede abreviarse como DDR, como se usa en el presente documento, se refiere al período de tiempo entre la primera respuesta objetiva de un sujeto y la fecha de progresión confirmada de la enfermedad, según los Criterios de Respuesta de IWG revisados para linfoma maligno, o muerte.
La expresión "supervivencia global", que puede abreviarse como SG, se define como el tiempo desde la fecha del tratamiento hasta la fecha de la muerte.
Una "citocina", como se usa en el presente documento, se refiere a una proteína que no es un anticuerpo que se libera por una célula en respuesta al contacto con un antígeno específico, en donde la citocina interactúa con una segunda célula para mediar una respuesta en la segunda célula. Una citocina puede expresarse de forma endógena por una célula o administrarse a un sujeto. Los inmunocitos pueden liberar citocinas, incluyendo macrófagos, linfocitos B, linfocitos T y mastocitos para propagar una respuesta inmunitaria. Las citocinas pueden inducir diversas respuestas en la célula destinataria. Las citocinas pueden incluir citocinas homeostáticas, quimiocinas, citocinas proinflamatorias, efectores y proteínas de fase aguda. Por ejemplo, las citocinas homeostáticas, incluyendo interleucina (IL) 7 e IL-15, promueven la supervivencia y proliferación de los inmunocitos, y las citocinas proinflamatorias pueden promover una respuesta inflamatoria. Ejemplos de citocinas homeostáticas incluyen, pero sin limitación, iL-2, IL-4, IL-5, IL-7, IL-10, IL-12p40, IL-12p70, IL-15 e interferón (IFN) gamma. Ejemplos de citocinas proinflamatorias incluyen, pero sin limitación, IL-1 a, IL-1b, IL-6, IL-13, IL-17a, factor de necrosis tumoral (TNF)-alfa, TNF-beta, factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) 2, factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF), molécula de adhesión intercelular soluble 1 (sICAM-1), molécula de adhesión vascular soluble 1 (sVCAM-1), factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF), VEGF-C, VEGF-D y factor de crecimiento placentario (PLGF). Los ejemplos de efectores incluyen, pero sin limitación, granzima A, granzima B, ligando Fas soluble (sFasL) y perforina. Ejemplos de proteínas de fase aguda incluyen, pero sin limitación, proteína C-reactiva (CRP) y amiloide sérico A (SAA).
Las "quimiocinas" son un tipo de citocina que media la quimiotaxis celular o el movimiento direccional. Ejemplos de quimiocinas incluyen, pero sin limitación, IL-8, IL-16, eotaxina, eotaxina-3, quimiocina derivada de macrófagos (MDC o CCL22), proteína quimiotáctica de monocitos 1 (MCP-1 o CCL2), MCP-4, proteína inflamatoria de macrófagos 1a (MIP-1a, MIP-1a), MIP-1 p (MIP-1b), proteína 10 inducida por gamma (IP-10) y quimiocina regulada por el timo y activación (TARC o CCL17).
Otros ejemplos de analitos y citocinas de la presente invención incluyen, pero sin limitación, ligando de quimiocina (motivo C-C) (CCL) 1, CCL5, quimiocina 3 específica de monocitos (MCP3 o CCL7), proteína quimioatrayente de monocitos 2 (MCP-2 o CCL8), CCL13, IL-1, IL-3, IL-9, IL-11, IL-12, iL-14, IL-17, IL-20, IL-21, factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), factor inhibidor de leucemia (LIF), oncostatina M (OSM), CD154, linfotoxina (LT) beta, ligando 4-1BB (4-1BBL), un ligando inductor de proliferación (APRIL), CD70, CD153, CD178, proteína relacionada con TNFR inducida por glucocorticoides (GITRL), miembro 14 de la superfamilia del factor de necrosis tumoral (TNFSF14), OX40L, ligando 1 expresado en leucocitos relacionado con TNF y ApoL (TALL-1), o ligando inductor de apoptosis relacionado con TNF (TRAIL).
Las expresiones "nivel sérico" y "concentración sérica" se usan indistintamente, como se usan en el presente documento, y se refieren a la cantidad de un analito en el suero de un sujeto. Los niveles séricos de un analito dado pueden medirse usando cualquier método conocido en la técnica. Por ejemplo, los niveles séricos de citocinas pueden medirse mediante un ensayo de inmunoadsorción enzimática (ELISA). En una realización particular, los niveles séricos de citocinas pueden medirse con un ensayo múltiple LUMINEX® xMAP® de EMDmillipore.
"Intervalo de dosificación", como se usa en el presente documento, significa la cantidad de tiempo que transcurre entre múltiples dosis de una formulación divulgada en el presente documento que se administra a un sujeto. El intervalo de dosificación puede indicarse como intervalos.
Las dosis descritas en el presente documento pueden presentarse como una "dosis basada en el peso" o como una "dosis basada en el área de superficie corporal (ASC)". Una dosis basada en el peso es una dosis que se administra a un paciente y que se calcula en función del peso del paciente, por ejemplo, mg/kg. Una dosis basada en el ASC es una dosis que se administra a un paciente y que se calcula en función del área de superficie del paciente, por ejemplo, mg/m2. Las dos formas de medición de dosis pueden convertirse para dosificación humana multiplicando la dosis basada en el peso por 37 o dividiendo la dosis basada en ASC por 37. Por ejemplo, una dosis de 60 mg/kg de ciclofosfamida a administrar a un sujeto humano es equivalente a una dosis de 2220 mg/m2 del mismo fármaco a administrar al mismo sujeto.
La expresión "frecuencia de dosificación", como se usa en el presente documento, se refiere a la frecuencia de administración de dosis de una formulación divulgada en el presente documento en un tiempo dado. La frecuencia de dosificación puede indicarse como el número de dosis por tiempo determinado. Por ejemplo, un agente de preacondicionamiento, por ejemplo, ciclofosfamida, puede administrarse como una sola dosis al día en cada uno de 5 días consecutivos, como una sola dosis al día en cada uno de 4 días consecutivos, como una sola dosis al día en cada uno de 3 días consecutivos, como una sola dosis al día en cada uno de 2 días consecutivos o como una sola dosis en 1 día. Además, un segundo agente de preacondicionamiento, por ejemplo, fludarabina, puede administrarse como una sola dosis al día en cada uno de 8 días consecutivos, como una sola dosis al día en cada uno de 7 días consecutivos, como una sola dosis al día en cada uno de 6 días consecutivos, como una sola dosis al día en cada uno de 5 días consecutivos, como una sola dosis al día en cada uno de 4 días consecutivos, como una sola dosis al día en cada uno de 3 días consecutivos, como una sola dosis al día en cada uno de 2 días consecutivos o como una sola dosis en 1 día. En otras realizaciones, la fludarabina se administra como 1 dosis al día durante 5 días consecutivos o como 1 dosis al día durante 3 días consecutivos.
Una "cantidad terapéuticamente eficaz", "dosis eficaz", "cantidad eficaz", o "dosis terapéuticamente eficaz" de un fármaco, un agente de preacondicionamiento o un agente terapéutico, por ejemplo , linfocitos T-CAR, es cualquier cantidad del fármaco que, cuando se usa en solitario o en combinación con otro agente terapéutico, protege a un sujeto contra la aparición de una enfermedad o promueve la regresión de la enfermedad evidenciada por una disminución en la gravedad de los síntomas de la enfermedad, un aumento en la frecuencia y duración de los períodos sin síntomas de la enfermedad o una prevención del deterioro o discapacidad debido a la enfermedad. La capacidad de un agente terapéutico de promover la regresión de la enfermedad puede evaluarse usando una diversidad de métodos conocidos por el profesional experto, tal como en sujetos humanos durante ensayos clínicos, en sistemas de modelos animales que predicen la eficacia en seres humanos o ensayando la actividad del agente en ensayos in vitro.
El término "linfocito", como se usa en el presente documento, incluye linfocitos citolíticos naturales (NK), linfocitos T y linfocitos B. Los linfocitos NK son un tipo de linfocitos citotóxicos (tóxicos para las células) que representan un componente principal del sistema inmunitario inherente. Los linfocitos NK rechazan los tumores y las células infectadas por virus. Actúan mediante el proceso de apoptosis o muerte celular programada. Se les denominó "linfocitos citolíticos naturales" porque no requieren activación para destruir células. Los linfocitos T desempeñan una función importante en la inmunidad mediada por células (sin participación de anticuerpos). Sus receptores de linfocitos T (TCR) los diferencia de otros tipos de linfocitos. El timo, un órgano especializado del sistema inmunitario, es el principal responsable de la maduración de los linfocitos T. Hay seis tipos de linfocitos T, en concreto: linfocitos T auxiliares (por ejemplo, células CD4+), linfocitos T citotóxicos (también conocidos como TC, linfocitos T-citotóxicos, CTL, linfocito T-citolítico, linfocito T citolítico, linfocitos T CD8+ o linfocito citolítico T), linfocitos T de memoria ((i) linfocitos Tscm de memoria progenitores, como células indiferenciadas, son CD45RO-, CCR7+, CD45RA+, CD62L+ (L-selectina), CD27+, CD28+ e IL-7Ra+, pero también expresan grandes cantidades de CD95, IL-2Rp, CXCR3 y LFA-1, y muestran numerosos atributos funcionales distintivos de las células de memoria); (ii) linfocitos Tcm de memoria central, expresan L-selectina y CCR7, secretan IL-2, pero no IFNy o IL-4, y (iii) linfocitos Tem de memoria efectores, sin embargo, no expresan L-selectina o CCR7, pero producen citocinas efectoras como IFNy e IL-4), linfocitos T reguladores (Treg, linfocitos T supresores o linfocitos T reguladores CD4+CD25+), linfocitos T citolíticos naturales (NKT) y linfocitos T gamma delta. Los linfocitos B, por otro lado, desempeñan una función principal en la inmunidad humoral (con participación de anticuerpos). Producen anticuerpos y antígenos y realizan la función de células presentadoras de antígenos (APC) y se convierten en linfocitos B de memoria después de la activación por interacción con el antígeno. En mamíferos, los linfocitos B inmaduros se forman en la médula ósea, de donde proviene su nombre (en inglés).
La expresión "manipulado genéticamente" o "genomanipulado" se refiere a un método para modificar el genoma de una célula, incluyendo, pero sin limitación, eliminar una región codificante o no codificante o una parte de la misma o insertar una región codificante o una parte de la misma. En algunas realizaciones, la célula que se modifica es un linfocito, por ejemplo, un linfocito T, que puede obtenerse de un paciente o de un donador. La célula puede modificarse para que exprese una construcción exógena, tal como, por ejemplo, un receptor quimérico de antígeno (CAR) o un receptor de linfocitos T (TCR), que se incorpora en el genoma de la célula.
Una "respuesta inmunitaria" se refiere a la acción de una célula del sistema inmunitario (por ejemplo, linfocitos T, linfocitos B, linfocitos citolíticos naturales (NK), macrófagos, eosinófilos, mastocitos, células dendríticas y neutrófilos) y de macromoléculas solubles producidas por cualquiera de estas células o el hígado (incluyendo Ab, citocinas y complemento) que da como resultado el direccionamiento selectivo, la unión con, el daño a, la destrucción de y/o eliminación del organismo de un vertebrado de los patógenos invasores, células o tejidos infectados por patógenos, células cancerosas u otras anómalas o, en casos de autoinmunidad o inflamación patológica, células o tejidos humanos normales.
El término "inmunoterapia" se refiere al tratamiento de un sujeto afectado por o en riesgo de contraer o padecer una recaída de, una enfermedad mediante un método que comprende inducir, potenciar, suprimir o modificar de otro modo una respuesta inmunitaria. Los ejemplos de inmunoterapia incluyen, pero sin limitación, tratamientos con linfocitos T. El tratamiento con linfocitos T puede incluir tratamiento adoptivo con linfocitos T, inmunoterapia con linfocitos oncoinfiltrantes (TIL), citoterapia con células autólogas, citoterapia con células autólogas genomanipuladas (eACT) y trasplante alogénico de linfocitos T. Sin embargo, un experto en la materia reconocería que los métodos de acondicionamiento divulgados en el presente documento potenciarían la eficacia de cualquier tratamiento con linfocitos T trasplantados. Se describen ejemplos de tratamientos con linfocitos T en las publicaciones de patentes de Estados Unidos n.° 2014/0154228 y 2002/0006409, la patente de Estados Unidos n.° 5.728.388 y la publicación internacional WO 2008/081035.
Los linfocitos T de la inmunoterapia pueden provenir de cualquier fuente conocida en la técnica. Por ejemplo, los linfocitos T pueden diferenciarse in vitro a partir de una población de hemocitoblastos o pueden obtenerse de linfocitos T de un sujeto. Las linfocitos T pueden obtenerse de, por ejemplo, leucocitos monomorfonucleares en la sangre periférica, médula ósea, tejido de ganglios linfáticos, sangre del cordón umbilical, tejido de timo, tejido de un sitio de infección, ascitis, derrame pleural, tejido del bazo y tumores. Además, los linfocitos T pueden obtenerse de una o más líneas de linfocitos T disponibles en la técnica. Los linfocitos T también pueden obtenerse de una unidad de sangre extraída de un sujeto usando cualquier técnica conocida para el experto, tal como la separación en FICOLL™ y/o aféresis. En la publicación de patente de Estados Unidos n.° 2013/0287748 se describen métodos adicionales para aislar linfocitos T para una tratamiento con linfocitos T.
La expresión "citoterapia con células autólogas genomanipuladas", que puede abreviarse como "eACT™", también conocido como transferencia celular adoptiva, es un proceso por el que se recogen linfocitos T del propio paciente y, posteriormente, se alteran genéticamente para que reconozcan y se dirijan a uno o más antígenos expresados en la superficie celular de una o más células tumorales o neoplasias malignas específicas. Los linfocitos T pueden modificarse para que expresen, por ejemplo, receptores quiméricos de antígeno (CAR) o receptores de linfocitos T (TCR). Los linfocitos T-CAR se genomanipulan para que expresen un fragmento variable monocatenario (scFv) extracelular con especificidad por un antígeno tumoral particular ligado a una parte de señalización intracelular que comprende un dominio coestimulador y un dominio activador. El dominio coestimulador puede obtenerse de, por ejemplo, CD28, y el dominio activador puede obtenerse de, por ejemplo, CD3-zeta (figura 1). En determinadas realizaciones, el CAR está diseñado para que tenga dos, tres, cuatro o más dominios coestimuladores. El scFv CAR puede diseñarse para que aborde, por ejemplo, CD19, que es una proteína transmembranaria expresada por células del linaje de linfocitos B, incluyendo todos los linfocitos B normales y neoplasias malignas de linfocitos B, incluyendo, pero sin limitación, NHL, CLL y ALL que no es de linfocitos T. Se describen tratamientos y construcciones de linfocitos T-CAR de ejemplo en las publicaciones de patente de Estados Unidos n.° 2013/0287748, 2014/0227237, 2014/0099309 y 2014/0050708.
Un "paciente", como se usa en el presente documento, incluye cualquier ser humano que esté afectado por un cáncer (por ejemplo, un linfoma o una leucemia). Los términos "sujeto" y "paciente" se usan indistintamente en el presente documento.
Los términos "péptido", "polipéptido", y "proteína" se usan indistintamente y se refieren a un compuesto comprendido de residuos aminoacídicos unidos covalentemente por enlaces peptídicos. Una proteína o un péptido debe contener al menos dos aminoácidos, y no se establece ninguna limitación en cuanto al número máximo de aminoácidos que puede comprender la secuencia de una proteína o péptido. Los polipéptidos incluyen cualquier péptido o proteína que comprenda dos o más aminoácidos unidos entre sí por enlaces peptídicos. Como se usa en el presente documento, el término se refiere tanto a cadenas cortas, que también se denominan comúnmente en la técnica péptidos, oligopéptidos y oligómeros, por ejemplo, y a cadenas más largas, que generalmente se denominan en la técnica proteínas, de las que hay muchos tipos. Los "polipéptidos" incluyen, por ejemplo, fragmentos biológicamente activos, polipéptidos sustancialmente homólogos, oligopéptidos, homodímeros, heterodímeros, variantes de polipéptidos, polipéptidos modificados, derivados, análogos, proteínas de fusión, entre otros. Los polipéptidos incluyen péptidos naturales, péptidos recombinantes, péptidos sintéticos o una combinación de los mismos.
"Estimulación", como se usa en el presente documento, se refiere a una respuesta primaria inducida por la unión de una molécula estimuladora con su ligando afín, en donde la unión media un acontecimiento de transducción de señales. Una "molécula estimuladora" es una molécula en un linfocito T, por ejemplo, el complejo de receptor de linfocitos T (TCR)/CD3, que se une específicamente con un ligando estimulador afín presente en una célula presentadora de antígeno. Un "ligando estimulador" es un ligando que, cuando está presente en una célula presentadora de antígeno (por ejemplo, una aAPC, una célula dendrítica, un linfocito B y similares) puede unirse específicamente con una molécula estimuladora en un linfocito T, mediando de ese modo una respuesta primaria por el linfocito T, incluyendo, pero sin limitación, activación, inicio de una respuesta inmunitaria, proliferación y similares. Los ligandos estimuladores incluyen, pero sin limitación, una molécula MHC de clase I cargada con un péptido, un anticuerpo anti-CD3, un anticuerpo superagonista anti-CD28 y/o un anticuerpo superagonista anti-CD2.
Una "señal coestimuladora", como se usa en el presente documento, se refiere a una señal, que, en combinación con la señal primaria, tal como ligamiento de TCR/CD3, da lugar a una respuesta de linfocitos T, tal como, pero sin limitación, proliferación y/o regulación por aumento o disminución de moléculas clave.
Un "ligando coestimulador", como se usa en el presente documento, incluye una molécula en una célula presentadora de antígeno que se une específicamente a una molécula coestimuladora afín en un linfocito T. La unión del ligando coestimulador proporciona una señal que media una respuesta de linfocitos T, incluyendo, pero sin limitación, proliferación, activación, diferenciación y similares. Un ligando coestimulador induce una señal que se suma a la señal primaria proporcionada por una molécula estimuladora, por ejemplo, mediante la unión de un complejo de receptor de linfocitos T (TCR)/CD3 con una molécula del complejo principal de histocompatibilidad (MHC) cargada con péptido. Un ligando coestimulador puede incluir, pero sin limitación, CD7, B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), L1 de muerte programada (PD), PD-L2, ligando de 4-1BB, ligando de OX40, ligando coestimulador inducible (ICOS-L), molécula de adhesión intercelular (ICAM, ligando de CD30, CD40, CD70, CD83, antígeno leucocitario humano G (HLA-G), proteína A relacionada con la cadena de MHC de clase I (MICA), proteína B relacionada con la cadena de MHC de clase I (MICB), mediador de entrada del virus del herpes (HVEM), receptor de linfotoxina beta, 3/TR6, transcrito 3 similar a inmunoglobulina (ILT), ILT4, un agonista o anticuerpo que se une al receptor de ligando Toll y un ligando que se une específicamente con B7-H3. Un ligandos coestimulador incluye, sin limitación, un anticuerpo que se une específicamente con una molécula coestimuladora presente en un linfocito T, tal como, pero sin limitación, CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, antígeno-1 asociado a la función de linfocitos (LFA-1), CD2, CD7, miembro 14 de la superfamilia del factor de necrosis tumoral (T'NFSF14 o LIGHT), receptor C de linfocitos citolíticos naturales (NKG2C), B7-H3 y un ligando que se une específicamente con CD83.
Una "molécula coestimuladora" es un compañero de unión afín en un linfocito T que se une específicamente con un ligando coestimulador, mediando de ese modo una respuesta coestimuladora por el linfocito T, tal como, pero sin limitación, proliferación. Las moléculas coestimuladoras incluyen, pero sin limitación, CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40, CD83, PD-1, ICOS, LFA-1, CD2, CD7, TNFSF14 (LIGHT), NKG2C, B7-H3, una molécula MHC de clase 1, atenuador de linfocitos B y T (BTLA) y un receptor de ligando Toll.
Los términos "acondicionamiento" y "preacondicionamiento" se usan indistintamente en el presente documento e indican preparar a un paciente que necesita tratamiento con linfocitos T para una afección adecuada. El acondicionamiento, como se usa en el presente documento incluye, pero sin limitación, reducir el número de linfocitos endógenos, eliminar un disipador de citocinas, aumentar el nivel sérico de una o más citocinas biomarcadoras o factores proinflamatorios, potenciar una función efectora de los linfocitos T administrados después del acondicionamiento, potenciar la activación y/o disponibilidad de células presentadoras de antígeno, o cualquier combinación de las mismas antes de un tratamiento con linfocitos T. En una realización, el "acondicionamiento" comprende aumentar el nivel sérico de una o más citocinas, por ejemplo, interleucina 7 (IL-7), interleucina 15 (IL-15), interleucina 10 (IL-10), interleucina 5 (IL-5), proteína 10 inducida por gamma (IP-10), interleucina 8 (IL-8), proteína quimiotáctica de monocitos 1 (MCP-1), factor de crecimiento placentario (PLGF), proteína C-reactiva (CRP), molécula de adhesión intercelular soluble 1 (sICAM-1), molécula de adhesión vascular soluble 1 (sVCAM-1) o cualquier combinación de las mismas. En otra realización, el "acondicionamiento" comprende aumentar el nivel sérico de IL-7, IL-15, IP-10, MCP-1, PLGF, CRP o cualquier combinación de los mismos.
Los términos "reducir" y "disminuir" se usan indistintamente en el presente documento e indican cualquier cambio que sea menor que el original. "Reducir" y "disminuir" son términos relativos, que requieren una comparación entre las mediciones previas y posteriores. "Reducir" y "disminuir" incluyen agotamientos completos.
"Tratamiento" o "tratar" a un sujeto se refiere a cualquier tipo de intervención o proceso realizado en, o la administración de un agente activo a, el sujeto con el objetivo de invertir, aliviar, mejorar, inhibir, ralentizar o prevenir la aparición, progresión, desarrollo, gravedad o reaparición de un síntoma, complicación o afección o indicios bioquímicos asociados con una enfermedad. En una realización, "tratamiento" o "tratar" incluye una remisión parcial. En otra realización, "tratamiento" o "tratar" incluye una remisión completa.
El uso de la alternativa (por ejemplo, "o") debe entenderse que significa una, ambas o cualquier combinación de las alternativas. Como se usa en el presente documento, debe entenderse que los artículos indefinidos "un" o "uno/a" se refieren a "uno o más" de cualquier componente citado o enumerado.
Las expresiones "aproximadamente" o "que comprende esencialmente", se refieren a un valor o composición que está dentro de un intervalo de error aceptable para el valor o composición particular según lo determine un experto en la materia, que dependerá en parte de cómo se mida o determine el valor o la composición, es decir, de las limitaciones del sistema de medición. Por ejemplo, "aproximadamente" o "que comprende esencialmente" puede significar dentro de 1 o más de 1 desviación estándar según la práctica en la técnica. Como alternativa, "aproximadamente" o "que comprende esencialmente" puede significar un intervalo de hasta un 10 % (es decir, ±10 %). Por ejemplo, aproximadamente 3 mg puede incluir cualquier número entre 2,7 mg y 3,3 mg (para un 10 %). Además, particularmente con respecto a los sistemas o procesos biológicos, las expresiones pueden significar hasta un orden de magnitud o hasta 5 veces un valor. Cuando se proporcionan valores o composiciones particulares en la solicitud y las reivindicaciones, a menos que se indique lo contrario, se debe asumir que el significado de "aproximadamente" o "que comprende esencialmente" está dentro de un intervalo de error aceptable para ese valor o composición particular.
Como se describe en el presente documento, cualquier intervalo de concentración, intervalo de porcentaje, intervalo de relación o intervalo de números enteros se entiende que incluye el valor de cualquier número entero dentro del intervalo citado y, cuando sea adecuado, fracciones del mismo (tal como una décima y una centésima de un número entero), a menos que se indique de otro modo.
Diversos aspectos de la invención se describen con más detalle en las siguientes subsecciones.
Usos de la invención
La presente invención se refiere al tratamiento de pacientes adecuados para un tratamiento con linfocitos T después de una etapa de preacondicionamiento inicial. Por tanto, la invención se refiere a estratificar a los pacientes en subpoblaciones después de la primera etapa de preacondicionamiento y tratar las poblaciones con las siguientes etapas apropiadas. Un grupo de pacientes que se identifican mediante los presentes métodos pueden ser aquellos que son adecuados para un tratamiento con linfocitos T después de administrar la primera pauta de preacondicionamiento, pero sin ninguna pauta de preacondicionamiento adicional. Otro grupo de pacientes pueden ser aquellos que son inadecuados para una tratamiento con linfocitos T con la primera etapa de preacondicionamiento y requieren una segunda etapa de preacondicionamiento. Un tercer grupo de pacientes pueden ser aquellos que son inadecuados para un tratamiento con linfocitos T incluso después de las etapas de preacondicionamiento posteriores. La invención también incluye la preparación de un paciente para un tratamiento con linfocitos T mediante el aumento de determinadas citocinas biomarcadoras en los pacientes usando una o más etapas de preacondicionamiento.
La invención identifica que una expresión aumentada de determinadas citocinas en pacientes que han recibido una pauta de preacondicionamiento es indicativa de una eficacia aumentada de un tratamiento con linfocitos T. Las citocinas que son indicativas de una eficacia aumentada del tratamiento con linfocitos T comprenden IL-15, IL-7 y al menos una citocina adicional seleccionada del grupo que consiste en proteína quimiotáctica de monocitos 1 ("MCP-1"), proteína C-reactiva ("CRP"), factor de crecimiento placentario ("PLGF"), proteína 10 inducida por interferón gamma ("IP-10") y cualquier combinación de las mismas. En una realización, las citocinas biomarcadoras son IL-15, IL-7 y MCP-1. En otra realización, las citocinas biomarcadoras son IL-15, IL-7 y CRP. En otras realizaciones, las citocinas biomarcadoras son IL-15, IL-7 y PLGF. En otras realizaciones adicionales, las citocinas biomarcadoras son IL-15, IL-7, MCP-1 y IP-10. Incluso en otras realizaciones, las citocinas biomarcadoras son IL-15, IL-7, MCP-1 y CRP. En algunas realizaciones, las citocinas biomarcadoras son IL-15, IL-7, MCP-1 y PLGF. En determinadas realizaciones, las citocinas biomarcadoras son IL-15, IL-7, IP-10 y CRP. En otras realizaciones, las citocinas biomarcadoras son IL-15, IL-7, PLGF e IP-10. Incluso en otras realizaciones, las citocinas biomarcadoras son IL-15, IL-7, MCP-1, IP-10 y CRP. En otras realizaciones adicionales, las citocinas biomarcadoras son IL-15, IL-7, MCP-1, IP-10 y PLGF. En determinadas realizaciones, las citocinas biomarcadoras son IL-15, IL-7, MCP-1, CRP y PLGF. En algunas realizaciones, las citocinas biomarcadoras son IL-15, IL-7, IP-10, CRP y PLGF. En otras realizaciones, las citocinas biomarcadoras son IL-15, IL-7, IP-10, MCP-1, CRP y PLGF.
Además de la expresión sérica aumentada de las citocinas biomarcadoras, los pacientes adecuados para un tratamiento con linfocitos T también pueden presentar características adicionales: (i) un número reducido de linfocitos endógenos; (ii) una función efectora aumentada de los linfocitos T; (iii) una activación y/o disponibilidad aumentadas de células presentadoras de antígeno; o (iv) cualquier combinación de las mismas.
Los linfocitos endógenos que se reducen mediante una pauta de preacondicionamiento pueden incluir, pero sin limitación, linfocitos T reguladores endógenos, linfocitos B, linfocitos citolíticos naturales, linfocitos T CD4+, linfocitos T CD8+ o cualquier combinación de los mismos, que pueden inhibir el efecto antitumoral de los linfocitos T transferidos adoptivamente. Los linfocitos endógenos pueden competir con los linfocitos T transferidos adoptivamente por el acceso a antígenos y citocinas de apoyo. El pretratamiento con uno o más agentes de preacondicionamiento elimina esta competencia, dando como resultado un aumento en el nivel de citocinas endógenas, incluyendo IL-15 e IL-7. Una vez que los linfocitos T transferidos adoptivamente se han administrado al paciente, se exponen a niveles aumentados de IL-15 e IL-7 endógenas y otras citocinas homeostáticas o factores proinflamatorios. Además, un tratamiento de preacondicionamiento puede provocar la muerte de células tumorales, lo que da lugar a un aumento del antígeno tumoral en el suero del paciente. No sujeto a teoría alguna, el acondicionamiento con uno o más agentes de preacondicionamiento, incluyendo, pero sin limitación, ciclofosfamida y un análogo de purina, modifica el entorno inmunitario mediante la inducción de IL-15, IL-7 y una o más citocinas biomarcadoras, lo que puede favorecer la expansión homeostática, activación y tráfico de linfocitos T.
En el presente documento se describe un método para identificar a un paciente adecuado para un tratamiento con linfocitos T, que comprende administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento que pueden aumentar el nivel sérico de IL-15, IL-7 y al menos una citocina biomarcadora adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas.
En el presente documento se describe un método para identificar a un paciente adecuado para un tratamiento con linfocitos T, que comprende (i) administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento que pueden aumentar el nivel sérico de IL-15, IL-7 y al menos una citocina biomarcadora adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas y (ii) administrar un tratamiento con linfocitos T cuando el paciente presenta un nivel sérico aumentado de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina biomarcadora adicional.
En el presente documento se describe un método para identificar a un paciente adecuado para un tratamiento con linfocitos T, que comprende (i) administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento que pueden aumentar el nivel sérico de IL-15, IL-7 y al menos una citocina biomarcadora adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas, (ii) medir el nivel sérico de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina biomarcadora adicional y (iii) administrar un tratamiento con linfocitos T cuando el paciente presenta un nivel sérico aumentado de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina biomarcadora adicional.
En el presente documento se describe un método para identificar a un paciente adecuado para un tratamiento con linfocitos T, que comprende (i) administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento que pueden aumentar el nivel sérico de IL-15, IL-7 y al menos una citocina biomarcadora adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas, (ii) administrar una cantidad adicional de uno o más agentes de preacondicionamiento o administrar directamente una cantidad eficaz de IL-15, IL-7 y/o la al menos una citocina biomarcadora adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas y (iii) administrar un tratamiento con linfocitos T cuando el paciente presenta un nivel sérico aumentado de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina biomarcadora adicional.
En el presente documento se describe un método para identificar a un paciente adecuado para un tratamiento con linfocitos T, que comprende (i) administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento que pueden aumentar el nivel sérico de IL-15, IL-7 y al menos una citocina biomarcadora adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas, (ii) medir el nivel sérico de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina biomarcadora adicional, (iii) administrar una cantidad adicional de uno o más agentes de preacondicionamiento o administrar directamente una cantidad eficaz de IL-15, IL-7 y/o la al menos una citocina biomarcadora adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas, (iv) opcionalmente medir el nivel sérico de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina biomarcadora adicional y (v) administrar un tratamiento con linfocitos T cuando el paciente presenta un nivel sérico aumentado de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina biomarcadora adicional.
La invención incluye además uno o más agentes de preacondicionamiento para su uso en un método para aumentar el nivel sérico de IL-15, IL-7 y al menos una citocina biomarcadora adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas para preacondicionar a un paciente que necesita una tratamiento con linfocitos T, comprendiendo el método administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento, en donde el paciente se trata con un tratamiento con linfocitos T cuando presenta un nivel sérico aumentado de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina biomarcadora adicional.
En una realización, la invención incluye uno o más agentes de preacondicionamiento para su uso en un método para aumentar el nivel sérico de IL-15, IL-7 y al menos una citocina biomarcadora adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas para preacondicionar a un paciente que necesita una tratamiento con linfocitos T, comprendiendo el método (i) administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento y (ii) administrar un tratamiento con linfocitos T cuando el paciente muestra un nivel sérico elevado de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina biomarcadora adicional.
En el presente documento se describe un método para aumentar el nivel sérico de IL-15, IL-7 y al menos una citocina biomarcadora adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas para preacondicionar a un paciente que necesita tratamiento con linfocitos T, que comprende (i) administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento, (ii) administrar una cantidad adicional de uno o más agentes de preacondicionamiento o administrar una cantidad eficaz de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina biomarcadora adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas y (iii) administrar un tratamiento con linfocitos T cuando el paciente presenta un nivel sérico aumentado de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina biomarcadora adicional.
El uso comprende además medir el nivel sérico de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina biomarcadora adicional después de la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento. Puede medirse el nivel sérico de IL-15. Puede medirse el nivel sérico de IL-7. Se miden los niveles séricos de IL-15 e IL-7.
La presente invención proporciona un uso para tratar a un paciente con cáncer que presenta un nivel sérico aumentado de IL-15, IL-7 y al menos una citocina biomarcadora adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas, después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento, que comprende administrar un tratamiento con linfocitos T al paciente. El uso de la invención también incluye el preacondicionamiento adicional de un paciente que no presenta un nivel sérico suficiente de IL-15, IL-7 y al menos una citocina biomarcadora adicional después de la administración de una primera dosis de uno o más agentes de preacondicionamiento, que comprende administrar una segunda dosis de uno o más agentes de preacondicionamiento. En determinados pacientes que no presentan ningún aumento en el nivel sérico de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina biomarcadora adicional después de la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento, puede administrarse una cantidad eficaz de las citocinas biomarcadoras directamente al paciente.
La invención incluye identificar una o más citocinas que están aumentadas en el suero de un paciente después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento, en donde los niveles séricos aumentados de la una o más citocinas se correlacionan con una sensibilidad aumentada a un tratamiento con linfocitos T posterior. En una realización, los niveles séricos de la una o más citocinas pueden medirse después de la administración de los agentes de preacondicionamiento. Los pacientes que no presentan niveles séricos aumentados de la una o más citocinas pueden someterse a un tratamiento adicional. En una realización, el tratamiento adicional incluye administrar al paciente una segunda dosis del uno o más agentes de preacondicionamiento que pueden aumentar el nivel sérico de determinadas citocinas, IL-15, IL-7 y al menos una citocina biomarcadora adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas. El tratamiento adicional puede incluir administrar al paciente uno o más tratamientos distintos que aumenten el nivel sérico de una o más citocinas, incluyendo la administración al paciente de una o más citocinas adicionales, uno o más agentes de preacondicionamiento no administrados previamente al paciente, o linfocitos T genomanipulados para que expresen la una o más citocinas, por ejemplo, IL-15, IL-7 y al menos una citocina biomarcadora adicional.
En el presente documento se describen métodos para identificar citocinas que aumentan la eficacia de un tratamiento con linfocitos T cuando están reguladas por aumento en pacientes antes de la administración del tratamiento con linfocitos T, en donde las citocinas identificadas se administran a un paciente antes del tratamiento con linfocitos T con o sin administración al paciente de otros agentes de preacondicionamiento, o en donde la dosis del uno o más agentes de preacondicionamiento se aumenta para aumentar aún más el nivel sérico de las citocinas identificadas. En otra realización, el uso incluye controlar continuamente los niveles séricos de determinadas citocinas biomarcadoras durante el acondicionamiento y ajustar el ritmo y la dosificación en consecuencia, por ejemplo, continuar el preacondicionamiento hasta que se alcancen los niveles séricos deseados de citocinas biomarcadoras y el paciente esté listo para un tratamiento con linfocitos T.
En el presente documento se describe un método para aumentar los niveles séricos de una o más citocinas biomarcadoras en un paciente que necesita un tratamiento con linfocitos T. En algunas realizaciones, los niveles séricos de la una o más citocinas biomarcadoras aumentan al administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento. Los niveles séricos de la una o más citocinas biomarcadoras pueden aumentarse administrando al paciente una o más citocinas seleccionadas de IL-15, IL-7 y al menos una citocina adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas. Los niveles séricos de la una o más citocinas biomarcadoras pueden aumentarse administrando al paciente linfocitos T genomanipulados para que expresen una o más citocinas seleccionadas de IL-15, IL-7 y al menos una citocina adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas.
En una realización, la invención incluye uno o más agentes de preacondicionamiento para su uso en un método para tratar un cáncer en un paciente adecuado para un tratamiento con linfocitos T, que comprende preacondicionar al paciente administrando al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento que pueden aumentar el nivel sérico de IL-15, IL-7 y al menos una citocina biomarcadora adicional, seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas, en donde el paciente se trata con un tratamiento con linfocitos T cuando presenta un nivel sérico aumentado de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina biomarcadora adicional. La presente invención muestra que el preacondicionamiento de un paciente con uno o más agentes de preacondicionamiento que pueden aumentar el nivel sérico de IL-15, IL-7 y al menos una citocina biomarcadora adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas potencia la eficacia de un tratamiento con linfocitos T administrado posteriormente al paciente. La invención incluye uno o más agentes de preacondicionamiento para su uso en un método para tratar un cáncer en un paciente adecuado para un tratamiento con linfocitos T, que comprende administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento que pueden aumentar el nivel sérico de IL-15, IL-7 y al menos una citocina adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas, en donde el paciente se trata con un tratamiento con linfocitos T cuando presenta un nivel sérico aumentado de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina biomarcadora adicional.
La invención incluye uno o más agentes de preacondicionamiento para su uso en un método para tratar un cáncer en un paciente adecuado para un tratamiento con linfocitos T, que comprende (i) administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento que pueden aumentar el nivel sérico de IL-15, IL-7 y al menos una citocina biomarcadora adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas y (ii) administrar un tratamiento con linfocitos T cuando el paciente presenta un nivel sérico aumentado de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina biomarcadora adicional.
El uso puede comprender (i) administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento que pueden aumentar el nivel sérico de IL-15, IL-7 y al menos una citocina biomarcadora adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas, (ii) administrar una cantidad adicional de uno o más agentes de preacondicionamiento o administrar una cantidad eficaz de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina biomarcadora adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas y (iii) administrar un tratamiento con linfocitos T cuando el paciente presenta un nivel sérico aumentado de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina biomarcadora adicional.
En el presente documento se describe un método para identificar una dosis de uno o más agentes de preacondicionamiento que es eficaz para preparar a un sujeto para un tratamiento con linfocitos T, que comprende (i) administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento (por ejemplo, ciclofosfamida y/o fludarabina), (ii) medir los niveles séricos de IL-7, IL-15, IL-10, IL-5, IP-10, IL-8, MCP-1, PLGF, CRP, sICAM-1, sVCAM-1, perforina, MIP-1b o cualquier combinación de los mismos y (iii) caracterizar el uno o más agentes de preacondicionamiento (por ejemplo, ciclofosfamida y/o fludarabina) como eficaces para preparar a un sujeto para un tratamiento con linfocitos T, en donde después de la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento, el sujeto presenta un nivel sérico aumentado de IL-7, IL-15, IL-10, IL-5, IP-10, IL-8, MCP-1, PLGF, CRP, sICAM-1, sVCAM-1 o cualquier combinación de los mismos, por ejemplo, IL-15, IP-10 y/o IL-7 y/o un nivel sérico disminuido de perforina y/o MIP-1b. Como se describe en el presente documento, el método comprende además administrar el uno o más agentes de preacondicionamiento al paciente que presentaba un nivel sérico aumentado de IL-7, IL-15, IL-10, IL-5, IP-10, IL-8, MCP-1, PLGF, CRP, sICAM-1, sVCAM-1 o cualquier combinación de los mismos, por ejemplo, IL-15, IP-10 y/o IL-7 y/o un nivel sérico disminuido de perforina y/o MIP-1 b. Como se describe en el presente documento, el método comprende además administrar un tratamiento con linfocitos T al paciente que presentaba un nivel sérico aumentado de IL-7, IL-15, IL-10, IL-5, IP-10, IL-8, MCP-1, PLGF, CRP, sICAM-1, sVCAM-1 o cualquier combinación de los mismos, por ejemplo, IL-15, IP-10 y/o IL-7 y/o un nivel sérico disminuido de perforina y/o MIP-1 b.
En el presente documento se describe un método para verificar la eficacia de uno o más agentes de preacondicionamiento para preparar a un sujeto para un tratamiento con linfocitos T, que comprende (i) administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento (por ejemplo, ciclofosfamida y/o fludarabina), (ii) medir los niveles séricos de IL-7, IL-15, IL-10, IL-5, IP-10, IL-8, mCp-1, PlGf, CRP, sICAM-1, sVCAM-1, perforina, MIP-1b o cualquier combinación de los mismos y (iii) caracterizar uno o más agentes de preacondicionamiento (por ejemplo, ciclofosfamida y/o fludarabina) como eficaces para preparar a un sujeto para un tratamiento con linfocitos T, donde después de la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento, el sujeto presenta un nivel sérico aumentado de IL-7, IL-15, IL-10, IL-5, IP-10, IL-8, MCP-1, PLGF, CRP, sICAM-1, sVcAm-1 o cualquier combinación de los mismos, por ejemplo, IL-15, IP-10 y/o IL-7 y/o un nivel sérico disminuido de perforina y/o MIP-1 b. Como se describe en el presente documento, el método comprende además administrar el uno o más agentes de preacondicionamiento al paciente que presentaba un nivel sérico aumentado de IL-7, IL-15, IL-10, IL-5, IP-10, IL-8, MCP-1, PLGF, CRP, sICAM-1, sVc Am -1 o cualquier combinación de los mismos, por ejemplo, IL-15, IP-10
y/o IL-7 y/o un nivel sérico disminuido de perforina y/o MIP-1 b. Como se describe en el presente documento, el
método comprende además administrar un tratamiento con linfocitos T al paciente que presentaba un nivel sérico aumentado de IL-7, IL-15, IL-10, IL-5, IP-10, IL-8, MCP-1, PLGF, CRP, sIc Am -1, sVCAM-1 o cualquier combinación
de los mismos, por ejemplo, IL-15, IP-10 y/o IL-7 y/o un nivel sérico disminuido de perforina y/o MIP-1b.
En algunas realizaciones, la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento reduce el número de
linfocitos endógenos en el paciente. En determinadas realizaciones, los linfocitos endógenos comprenden linfocitos
T reguladores, linfocitos B, linfocitos citolíticos naturales, linfocitos T CD4+, linfocitos T CD8+ o cualquier combinación de los mismos. En algunas realizaciones, la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento aumenta la disponibilidad de una citocina homeostática, por ejemplo, IL-15 y/o IL-7. En
algunas realizaciones, la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento potencia la función
efectora de los linfocitos T administrados después del acondicionamiento. En algunas realizaciones, la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento potencia la activación y/o disponibilidad de las
células presentadoras de antígeno.
En determinadas realizaciones, la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento induce una
eficacia antitumoral mejorada del tratamiento con linfocitos T en comparación con la eficacia antitumoral del tratamiento con linfocitos T sin la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento.
Niveles de citocinas
La invención describe el uso de citocinas biomarcadoras para el tratamiento eficaz de un cáncer en un tratamiento
con linfocitos T. En particular, la presente solicitud identifica un grupo de citocinas que son factores clave para proporcionar un entorno adecuado para los linfocitos T transferidos, lo que mejora la eficacia del tratamiento con
linfocitos T. En una realización, el uso induce una regulación por aumento o aumenta el nivel sérico de las citocinas biomarcadoras. La administración de uno o más agentes de preacondicionamiento antes de la administración de
un tratamiento con linfocitos T aumenta el nivel de las citocinas biomarcadoras, lo que modifica el entorno inmunitario de manera que favorezca la expansión homeostática, activación y tráfico de linfocitos T. Una vez que
los linfocitos T transferidos adoptivamente se han administrado al paciente, se exponen a niveles aumentados de
citocinas endógenas. Las citocinas biomarcadoras que son indicativas de la eficacia de los linfocitos T pueden
incluir, IL-15, IL-7 y al menos una citocina biomarcadora adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1,
CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas.
En el presente documento se describe un método para aumentar la disponibilidad de una citocina biomarcadora
en un paciente que necesita un tratamiento con linfocitos T. La citocina biomarcadora es IL-15, IL-7 y al menos una
citocina biomarcadora adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas.
En el presente documento se describe un método para determinar una opción de tratamiento para un paciente,
que comprende (i) medir un nivel sérico de una citocina biomarcadora (por ejemplo, IL-15 o IL-7) después de la administración de una primera dosis de uno o más agentes de preacondicionamiento y (ii) administrar un tratamiento con linfocitos T a un paciente que presenta un nivel aumentado de una o más citocinas biomarcadoras
(por ejemplo, un paciente que es más probable que responda a un tratamiento con linfocitos T). En el presente documento se describe un método para determinar una opción de tratamiento para un paciente, que comprende
(i) medir un nivel sérico de una citocina biomarcadora (por ejemplo, IL-15 o IL-7) después de la administración de
una primera dosis de uno o más agentes de preacondicionamiento y (ii) administrar una segunda dosis de uno o
más agentes de preacondicionamiento a un paciente que no presenta un nivel elevado de una o más citocinas biomarcadoras o que presenta menos de un nivel umbral de la una o más citocinas biomarcadoras (por ejemplo,
un paciente que no es probable que responda a un tratamiento con linfocitos T). En el presente documento se
divulga un método para determinar una opción de tratamiento para un paciente, que comprende (i) medir un nivel
sérico de una citocina biomarcadora (por ejemplo, IL-15 o IL-7) después de la administración de uno o más agentes
de preacondicionamiento, (ii) administrar una o más citocinas biomarcadoras al paciente que no presenta un nivel aumentado de una o más citocinas biomarcadoras o que presenta menos de un nivel umbral de la una o más
citocinas biomarcadoras, (iii) administrar un tratamiento con linfocitos T al paciente que presenta un nivel aumentado de una o más citocinas biomarcadoras o que presenta más de un nivel umbral de una o más citocinas.
En una realización, más de aproximadamente 5 veces, más de aproximadamente 10 veces, más de aproximadamente 15 veces, más de aproximadamente 20 veces, más de aproximadamente 25 v aproximadamente 30 veces, más
Figure imgf000016_0002
aproximadamente 35 veces, más
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aproximadamente 40 v aproximadamente 45 veces, más de aproximadamente 50 veces, más de aproximadamente 60 v aproximadamente 70 veces, más de aproximadamente 80 veces o más de aproximadamente 90 veces de aumento
en el nivel sérico de IL-15 después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que
es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. En una realización particular, más de aproximadamente 10 veces de aumento en el nivel sérico de IL-15 después de la administración de uno o más
agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. En otra realización, más de aproximadamente 20 veces de aumento en el nivel sérico de IL-15 después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. En otra realización, más de aproximadamente 30 veces de aumento en el nivel sérico de IL-15 después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. Para aumentar el nivel sérico de IL-15, puede administrarse al paciente IL-15 exógena y/o una cantidad adicional de uno o más agentes de preacondicionamiento.
En otra realización, más de aproximadamente 2 veces, más de aproximadamente 3 veces, más de aproximadamente 4 veces, más de aproximadamente 5 veces, más de aproximadamente 10 veces, más de aproximadamente 15 veces, más de aproximadamente 20 veces, más de aproximadamente 25 veces, más de aproximadamente 30 veces, más de aproximadamente 35 veces, más de aproximadamente 40 veces, más de aproximadamente 45 veces, más de aproximadamente 50 veces, más de aproximadamente 60 veces, más de aproximadamente 70 veces, más de aproximadamente 80 veces o más de aproximadamente 90 veces de aumento en el nivel sérico de IL-7 después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. En una realización particular, más de aproximadamente 2 veces de aumento en el nivel sérico de IL-7 después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. Para aumentar el nivel sérico de IL-7, puede administrarse al paciente una IL-7 exógena y/o una dosis adicional de uno o más agentes de preacondicionamiento.
En otras realizaciones, más de aproximadamente 2 veces, más de aproximadamente 3 veces, más de aproximadamente 4 veces, más de aproximadamente 5 veces, más de aproximadamente 6 veces, más de aproximadamente 7 veces, más de aproximadamente 8 veces, más de aproximadamente 9 veces, más de aproximadamente 10 veces, más de aproximadamente 15 veces, más de aproximadamente 20 veces o más de aproximadamente 30 veces de aumento en el nivel sérico de IP-10 después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. En una realización particular, más de aproximadamente 2 veces de aumento en el nivel sérico de IP-10 después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. En otra realización, más de aproximadamente 3 veces de aumento en el nivel sérico de IP-10 después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. En otra realización, más de aproximadamente 4 veces de aumento en el nivel sérico de IP-10 después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. En otra realización, más de aproximadamente 7 veces de aumento en el nivel sérico de IP-10 después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. Para aumentar el nivel sérico de IP-10, puede administrarse al paciente IP-10 exógena y/o una cantidad adicional de uno o más agentes de preacondicionamiento.
En algunas realizaciones, más de aproximadamente 1,5 veces, más de aproximadamente 2 veces, más de aproximadamente 3 veces, más de aproximadamente 4 veces, más de aproximadamente 5 veces, más de aproximadamente 6 veces, más de aproximadamente 7 veces, más de aproximadamente 8 veces, más de aproximadamente 9 veces, más de aproximadamente 10 veces, más de aproximadamente 15 veces o más de aproximadamente 20 veces de aumento en el nivel sérico de MCP-1 después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. En otras realizaciones, más de aproximadamente 2 veces de aumento en el nivel sérico de MCP-1 después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. En otra realización, más de aproximadamente 3 veces de aumento en el nivel sérico de MCP-1 después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. En otra realización, más de aproximadamente 5 veces de aumento en el nivel sérico de MCP-1 después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. En otra realización, más de aproximadamente 7 veces de aumento en el nivel sérico de MCP-1 después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. Para aumentar el nivel sérico de MCP-1, puede administrarse al paciente MCP-1 exógena y/o una cantidad adicional de uno o más agentes de preacondicionamiento.
En determinadas realizaciones, más de aproximadamente 1,5 veces, más de aproximadamente 2 veces, más de aproximadamente 3 veces, más de aproximadamente 4 veces, más de aproximadamente 5 veces, más de aproximadamente 10 veces, más de aproximadamente 15 veces, más de aproximadamente 20 veces, más de aproximadamente 25 veces, más de aproximadamente 30 veces, más de aproximadamente 35 veces, más de aproximadamente 40 veces, más de aproximadamente 45 veces, más de aproximadamente 50 veces, más de aproximadamente 60 veces, más de aproximadamente 70 veces, más de aproximadamente 80 veces, más de aproximadamente 90 veces o más de aproximadamente 100 veces de aumento en el nivel sérico de PLGF después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. En una realización particular, más de aproximadamente 1,5 veces de aumento en el nivel sérico de PLGF después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. En otra realización, más de aproximadamente 2 veces de aumento en el nivel sérico de PLGF después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. En otra realización, más de aproximadamente 3 veces de aumento en el nivel sérico de PLGF después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. Para aumentar el nivel sérico de PLGF, puede administrarse al paciente PLGF exógeno y/o una cantidad adicional de uno o más agentes de preacondicionamiento.
En otras realizaciones, más de aproximadamente 1,5 veces, más de aproximadamente 2 veces, más de aproximadamente 3 veces, más de aproximadamente 4 veces, más de aproximadamente 5 veces, más de aproximadamente 9 veces, más de aproximadamente 10 veces, más de aproximadamente 15 veces, más de aproximadamente 20 veces, más de aproximadamente 25 veces, más de aproximadamente 30 veces, más de aproximadamente 35 veces, más de aproximadamente 40 veces, más de aproximadamente 45 veces, más de aproximadamente 50 veces, más de aproximadamente 60 veces, más de aproximadamente 70 veces, más de aproximadamente 80 veces, más de aproximadamente 90 veces o más de aproximadamente 100 veces de aumento en el nivel sérico de CRP después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. En una realización particular, más de aproximadamente 1,5 veces de aumento en el nivel sérico de CRP después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. En otra realización, más de aproximadamente 2 veces de aumento en el nivel sérico de CRP después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. En otra realización, más de aproximadamente 5 veces de aumento en el nivel sérico de CRP después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. En otra realización, más de aproximadamente 9 veces de aumento en el nivel sérico de CRP después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. En otra realización, más de aproximadamente 10 veces de aumento en el nivel sérico de CRP después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. En otra realización, el nivel de CRP en un paciente adecuado para un tratamiento con linfocitos T está aumentado en al menos más de aproximadamente 25 veces de aumento del nivel sérico de CRP después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento, que indica que es más probable que un paciente responda a un tratamiento con linfocitos T. Para aumentar el nivel sérico de CRP, puede administrarse al paciente CRP exógena y/o una dosis adicional de uno o más agentes de preacondicionamiento.
En algunas realizaciones, el uno o más agentes de preacondicionamiento aumentan aún más el nivel sérico de interleucina 10 ("IL-10"), interleucina 5 ("IL-5"), interleucina 8 ("IL-8"), molécula de adhesión intercelular soluble 1 ("sICAM-1"), molécula de adhesión vascular soluble 1 ("sVCAM-1") o cualquier combinación de las mismas.
En algunas realizaciones, el nivel sérico de una cualquiera o más citocinas se mide en o uno o más días antes de la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento y en uno o más días seleccionados desde el día de la administración del tratamiento con linfocitos T hasta 21 días después de la administración del tratamiento con linfocitos T.
Un experto en la materia reconocería que el nivel de citocinas biomarcadoras puede aumentarse mediante varios métodos diferentes, que incluyen, pero sin limitación, el uso del uno o más agentes de preacondicionamiento como se describe en el presente documento, la administración de una o más citocinas exógenas al paciente como se describe en el presente documento, la administración de una o más composiciones que inducen la expresión de o evitan la degradación de una o más citocinas endógenas, la administración de una o más células transgénicas que pueden expresar una o más citocinas recombinantes, y cualquier otro método que tenga el efecto de aumentar el nivel de citocinas biomarcadoras en un paciente.
La invención implica preacondicionar a un paciente que necesita una tratamiento con linfocitos T administrando al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento y al menos una citocina adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas. La citocina a administrar al paciente puede obtenerse por cualquier método conocido en la técnica. Por ejemplo, la citocina puede ser una citocina aislada o una citocina recombinante. La una o más dosis de una citocina aislada o recombinante pueden administrarse antes del tratamiento con linfocitos T o después del tratamiento con linfocitos T o cualquier combinación de los mismos.
En una realización, el uso comprende administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento y una o más dosis de IL-2. En algunas realizaciones, la dosis de IL-2 es de al menos aproximadamente 10000 UI/kg, al menos aproximadamente 50000 UI/kg, al menos aproximadamente 100000 UI/kg, al menos aproximadamente 200 000 UI/kg, al menos aproximadamente 400000 UI/kg, al menos aproximadamente 600000 UI/kg, al menos aproximadamente 700000 Ul/kg, al menos aproximadamente 800000 Ul/kg o al menos aproximadamente 1 000000 UI/kg. En una realización, la dosis de IL-2 es de al menos aproximadamente 700000 UI/kg. En una realización particular, la dosis de IL-2 es de aproximadamente 720000 UI/kg. En algunas realizaciones, se administrará IL-2 al paciente cada 8 horas hasta 15 dosis o la toxicidad impide dosis adicionales.
Pueden enriquecerse diversas citocinas en el suero del paciente después de la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento y/o un tratamiento con linfocitos T. En algunas realizaciones, el paciente, después de la administración de uno o más agentes de preacondicionamiento y/o un tratamiento con linfocitos T, presenta una concentración sérica aumentada de una citocina o un factor proinflamatorio seleccionado del grupo que consiste en interleucina (IL) 15, IL-7, IL-10, IL-5, IL-8, IL-1, IL-1b, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-9, IL-11, IL-12, lL-12p40, IL-12p70, IL-13, IL-14, IL-16, IL-17, IL-17a, iL-20, IL-21, factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF), factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), proteína quimiotáctica de monocitos 1 (MCP-1), MCP-4, proteína 10 inducida por gamma (IP-10), factor de crecimiento placentario (PLGF), molécula de adhesión intercelular soluble 1 (sICAM-1), molécula de adhesión vascular soluble 1 (sVCAM-1), proteína C-reactiva (CRP), factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF), VEGF-C, VEGF-D, proteína inflamatoria de macrófagos 1p (MIP-1 p, MIP-1 b), factor inhibidor de leucemia (LIF), oncostatina M (OSM), interferón (IFN) alfa, IFN-beta, IFN-gamma, factor de necrosis tumoral (TNF) alfa, TNF-beta, CD154, linfotoxina (LT) beta, ligando 4-1BB (4-1BBL), un ligando inductor de proliferación (APRIL), CD70, CD153, CD178, proteína relacionada con TNFR inducida por glucocorticoides (GITRL), miembro 14 de la superfamilia del factor de necrosis tumoral (TNFSF14), OX40L, ligando 1 expresado en leucocitos relacionado con TNF y ApoL (TALL-1), ligando inductor de apoptosis relacionado con TNF (TRAIL), ligando 1 de quimiocina (motivo C-C) (CCL), proteína inflamatoria de macrófagos 1 alfa (MIP-1a o CCL3), CCL5, quimiocina 3 específica de monocitos (MCP3 o CCL7), proteína quimioatrayente de monocitos 2 (MCP-2 o CCL8), CCL13, quimiocina regulada por el timo y activación (TARC o CCL17), CCL22, FGF2, eotaxina, MDC, granzima a, granzima b, perforina, sAa, MCP-4 y cualquier combinación de las mismas. En algunas realizaciones, después de la administración de ciclofosfamida y fludarabina, el paciente presenta niveles séricos aumentados de IL-15 y/o IP-10. En algunas realizaciones, después de la administración de ciclofosfamida y fludarabina, el paciente presenta una un nivel sérico disminuido de perforina.
Agentes de preacondicionamiento
El uno o más agentes de preacondicionamiento de la presente invención pueden ser cualquier agente de preacondicionamiento que pueda aumentar el nivel sérico de IL-15, IL-7 y al menos una citocina adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y/o cualquier combinación de las mismas. Por ejemplo, el uno o más agentes de preacondicionamiento pueden comprender un agente alquilante. En determinadas realizaciones, el agente alquilante puede seleccionarse del grupo que consiste en melfalán, clorambucilo, ciclofosfamida, mecloretamina, clormetina (HN2), uramustina, mostaza de uracilo, melfalán, clorambucilo, ifosfamida, bendamustina, carmustina, lomustina, estreptozocina, sulfonatos de alquilo, busulfán, tiotepa o sus análogos, cualquier análogo o derivado funcional de los mismos, y cualquier combinación de los mismos. En una realización particular, el uno o más agentes de preacondicionamiento comprenden ciclofosfamida.
Ciclofosfamida (ENDOXAN®, CYTOXAN®, PROCYTOX®, NEOSAR®, REVIMMUNE®, CYCLOBLASTIN®) es un agente alquilante derivado de mecloretamina con una potente actividad inmunosupresora. La ciclofosfamida actúa como antineoplásico y se usa para tratar diversos tipos de cáncer, incluyendo linfoma, mieloma múltiple, leucemia, micosis fungoide, neuroblastoma, cáncer de ovario, cáncer de ojos y cáncer de mama, así como trastornos autoinmunitarios.
Una vez administrada a un paciente, la ciclofosfamida se convierte en acroleína y fosforamida en el hígado. En conjunto, estos metabolitos entrecruzan el ADN tanto en células en reposo como en división al añadir un grupo alquilo a las bases de guanina del ADN en el átomo de nitrógeno número siete del anillo de imidazol. Como resultado, la replicación del ADN se inhibe, lo que da lugar a muerte celular.
En otra realización, el uno o más agentes de preacondicionamiento pueden incluir agentes quimioterápicos basados en platino. En determinadas realizaciones, los agentes quimioterápicos basados en platino se seleccionan del grupo que consiste en platino, cisplatino, carboplatino, nedaplatino, oxaliplatino, satraplatino, tetranitrato de triplatino, procarbazina, altretamina, triazenos, dacarbazina, mitozolomida, temozolomida, dacarbazina, temozolomida, cualquier análogo o derivado funcional de los mismos, y cualquier combinación de los mismos.
En otra realización, el uno o más agentes de preacondicionamiento pueden incluir análogos de purina. En determinadas realizaciones, los análogos de purina se seleccionan del grupo que consiste en azatioprina, 6-mercaptopurina, mercaptopurina, tiopurinas, tioguanina, fludarabina, pentostatina, cladribina, cualquier análogo o derivado funcional de los mismos, y cualquier combinación de los mismos. En una realización, el uno o más agentes de preacondicionamiento incluyen fludarabina.
El fosfato de fludarabina (FLUDARA®) es un nucleósido de purina sintético difiere de los nucleósidos fisiológicos en que la parte glucídica es arabinosa en lugar de ribosa o desoxirribosa. La fludarabina actúa como un antimetabolito antagonista de purina y se usa para tratar diversos tipos de neoplasias malignas hemáticas, incluyendo diversos linfomas y leucemias.
Una vez administrada a un paciente, la fludarabina se desfosforila rápidamente en 2-fluoro-ara-A y luego se fosforila de forma intracelular por la desoxicitidina cinasa en el trifosfato activo, 2-fluoro-ara-ATP. Este metabolito luego interfiere con la replicación del ADN, probablemente al inhibir la ADN polimerasa alfa, la ribonucleótido reductasa y la ADN primasa, inhibiendo, por tanto, la síntesis de ADN. Como resultado, la administración de fludarabina da lugar a muerte celular aumentada en las células en división.
En algunas realizaciones, el uno o más agentes de preacondicionamiento pueden incluir ciclofosfamida y un análogo de purina. Los análogos de purina pueden seleccionarse del grupo que consiste en azatioprina, 6-mercaptopurina, mercaptopurina, tiopurinas, tioguanina, fludarabina, pentostatina, cladribina, cualquier análogo o derivado funcional de los mismos, y cualquier combinación de los mismos. En una realización particular, el uno o más agentes de preacondicionamiento incluyen ciclofosfamida y pentostatina. En una realización particular, el uno o más agentes de preacondicionamiento incluyen ciclofosfamida y fludarabina.
En determinadas realizaciones, se administra al paciente una primera dosis del uno o más agentes de preacondicionamiento. Por ejemplo, en algunas realizaciones, una primera dosis de ciclofosfamida es de aproximadamente 300 mg/m2/día a aproximadamente 2000 mg/m2/día. En otra realización, la primera dosis de ciclofosfamida es mayor de 300 mg/m2/día y menor de 2000 mg/m2/día. En otras realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de aproximadamente 350 mg/m2/día - aproximadamente 2000 mg/m2/día, al menos aproximadamente 400 mg/m2/día - aproximadamente 2000 mg/m2/día, aproximadamente 450 mg/m2/día -aproximadamente 2000 mg/m2/día, aproximadamente 500 mg/m2/día - aproximadamente 2000 mg/m2/día, aproximadamente 550 mg/m2/día - aproximadamente 2000 mg/m2/día o aproximadamente 600 mg/m2/día -aproximadamente 2000 mg/m2/día. En otras realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de aproximadamente 350 mg/m2/día - aproximadamente 1500 mg/m2/día, aproximadamente 350 mg/m2/día - aproximadamente 1000 mg/m2/día, aproximadamente 400 mg/m2/día - aproximadamente 900 mg/m2/día, aproximadamente 450 mg/m2/día - aproximadamente 800 mg/m2/día, aproximadamente 450 mg/m2/día - aproximadamente 700 mg/m2/día, aproximadamente 500 mg/m2/día - aproximadamente 600 mg/m2/día o aproximadamente 300 mg/m2/día -aproximadamente 500 mg/m2/día. En otra realización, la dosis de ciclofosfamida es de aproximadamente 350 mg/m2/día, aproximadamente 400 mg/m2/día, aproximadamente 450 mg/m2/día, aproximadamente 500 mg/m2/día, aproximadamente 550 mg/m2/día, aproximadamente 600 mg/m2/día, aproximadamente 650 mg/m2/día, aproximadamente 700 mg/m2/día, aproximadamente 800 mg/m2/día, aproximadamente 900 mg/m2/día o aproximadamente 1000 mg/m2/día.
En otras realizaciones, la primera dosis de ciclofosfamida es de aproximadamente 200 mg/m2/día a aproximadamente 3000 mg/m2/día. En otra realización, la primera dosis de ciclofosfamida es mayor de 200 mg/m2/día y menor de 3000 mg/m2/día. En otras realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de aproximadamente 200 mg/m2/día - aproximadamente 3000 mg/m2/día, aproximadamente 300 mg/m2/día - aproximadamente 3000 mg/m2/día, aproximadamente 400 mg/m2/día - aproximadamente 3000 mg/m2/día, aproximadamente 500 mg/m2/día - aproximadamente 3000 mg/m2/día, aproximadamente 600 mg/m2/día - aproximadamente 3000 mg/m2/día, aproximadamente 700 mg/m2/día - aproximadamente 3000 mg/m2/día, aproximadamente 800 mg/m2/día - aproximadamente 3000 mg/m2/día, aproximadamente 900 mg/m2/día - aproximadamente 3000 mg/m2/día, aproximadamente 1000 mg/m2/día - aproximadamente 3000 mg/m2/día, aproximadamente 1100 mg/m2/día - aproximadamente 3000 mg/m2/día, aproximadamente 1200 mg/m2/día - aproximadamente 3000 mg/m2/día, aproximadamente 1300 mg/m2/día - aproximadamente 3000 mg/m2/día, aproximadamente 1400 mg/m2/día - aproximadamente 3000 mg/m2/día, aproximadamente 1500 mg/m2/día - aproximadamente 3000 mg/m2/día, aproximadamente 1600 mg/m2/día - aproximadamente 3000 mg/m2/día, aproximadamente 1700 mg/m2/día - aproximadamente 3000 mg/m2/día, aproximadamente 1800 mg/m2/día - aproximadamente 3000 mg/m2/día, aproximadamente 1900 mg/m2/día - aproximadamente 3000 mg/m2/día, aproximadamente 2000 mg/m2/día - aproximadamente 3000 mg/m2/día, aproximadamente 200 mg/m2/día - aproximadamente 2900 mg/m2/día, aproximadamente 400 mg/m2/día - aproximadamente 2800 mg/m2/día, aproximadamente 500 mg/m2/día - aproximadamente 2700 mg/m2/día, aproximadamente 600 mg/m2/día - aproximadamente 2600 mg/m2/día, aproximadamente 700 mg/m2/día - aproximadamente 2500 mg/m2/día, aproximadamente 800 mg/m2/día - aproximadamente 2400 mg/m2/día, aproximadamente 900 mg/m2/día - aproximadamente 2350 mg/m2/día, aproximadamente 1000 mg/m2/día - aproximadamente 2300 mg/m2/día, aproximadamente 1100 mg/m2/día - aproximadamente 2250 mg/m2/día o aproximadamente 1110 mg/m2/día - aproximadamente 2220 mg/m2/día. En una realización, la primera dosis de ciclofosfamida es de 200 mg/m2/día. En otra realización, la primera dosis de ciclofosfamida es de 300 mg/m2/día. En otra realización, la primera dosis de ciclofosfamida es de 500 mg/m2/día.
En algunas realizaciones, una primera dosis de fludarabina es de aproximadamente 20 mg/m2/día a aproximadamente 900 mg/m2/día. En algunas realizaciones, una dosis de fludarabina es mayor de 30 mg/m2/día y menor de 900 mg/m2/día. En algunas realizaciones, una dosis de fludarabina es de aproximadamente 35 mg/m2/día - aproximadamente 900 mg/m2/día, aproximadamente 40 mg/m2/día - aproximadamente 900 mg/m2/día, aproximadamente 45 mg/m2/día - aproximadamente 900 mg/m2/día, aproximadamente 50 mg/m2/día aproximadamente 900 mg/m2/día, aproximadamente 55 mg/m2/día - aproximadamente 900 mg/m2/día o aproximadamente 60 mg/m2/día - aproximadamente 900 mg/m2/día. En algunas realizaciones, una dosis de fludarabina es de aproximadamente 35 mg/m2/día - aproximadamente 900 mg/m2/día, aproximadamente 35 mg/m2/día - aproximadamente 800 mg/m2/día, aproximadamente 35 mg/m2/día - aproximadamente 700 mg/m2/día, aproximadamente 35 mg/m2/día - aproximadamente 600 mg/m2/día, aproximadamente 35 mg/m2/día -aproximadamente 500 mg/m2/día, aproximadamente 35 mg/m2/día - aproximadamente 400 mg/m2/día, aproximadamente 35 mg/m2/día - aproximadamente 300 mg/m2/día, aproximadamente 35 mg/m2/día -aproximadamente 200 mg/m2/día, aproximadamente 35 mg/m2/día - aproximadamente 100 mg/m2/día, aproximadamente 40 mg/m2/día - aproximadamente 90 mg/m2/día, aproximadamente 45 mg/m2/día -aproximadamente 80 mg/m2/día, aproximadamente 45 mg/m2/día - aproximadamente 70 mg/m2/día o aproximadamente 50 mg/m2/día - aproximadamente 60 mg/m2/día. En algunas realizaciones, una dosis de fludarabina es de aproximadamente 20 mg/m2/día, aproximadamente 25 mg/m2/día, aproximadamente 30 mg/m2/día, aproximadamente 35 mg/m2/día, aproximadamente 40 mg/m2/día, aproximadamente 45 mg/m2/día, aproximadamente 50 mg/m2/día, aproximadamente 55 mg/m2/día, aproximadamente 60 mg/m2/día, aproximadamente 65 mg/m2/día, aproximadamente 70 mg/m2/día, aproximadamente 75 mg/m2/día, aproximadamente 80 mg/m2/día, aproximadamente 85 mg/m2/día, aproximadamente 90 mg/m2/día, aproximadamente 95 mg/m2/día, aproximadamente 100 mg/m2/día, aproximadamente 200 mg/m2/día o aproximadamente 300 mg/m2/día. En algunas realizaciones, una dosis de fludarabina es de aproximadamente 20 mg/m2/día, aproximadamente 25 mg/m2/día, aproximadamente 30 mg/m2/día, aproximadamente 35 mg/m2/día, aproximadamente 40 mg/m2/día, aproximadamente 45 mg/m2/día, aproximadamente 50 mg/m2/día, aproximadamente 55 mg/m2/día, aproximadamente 60 mg/m2/día, aproximadamente 65 mg/m2/día, aproximadamente 70 mg/m2/día, aproximadamente 75 mg/m2/día, aproximadamente 80 mg/m2/día, aproximadamente 85 mg/m2/día, aproximadamente 90 mg/m2/día, aproximadamente 95 mg/m2/día o aproximadamente 100 mg/m2/día. En otras realizaciones, la dosis de fludarabina es de aproximadamente 110 mg/m2/día, 120 mg/m2/día, 130 mg/m2/día, 140 mg/m2/día, 150 mg/m2/día, 160 mg/m2/día, 170 mg/m2/día, 180 mg/m2/día o 190 mg/m2/día. En algunas realizaciones, la dosis de fludarabina es de aproximadamente 210 mg/m2/día, 220 mg/m2/día, 230 mg/m2/día, 240 mg/m2/día, 250 mg/m2/día, 260 mg/m2/día, 270 mg/m2/día, 280 mg/m2/día o 290 mg/m2/día. En una realización particular, la dosis de fludarabina es de aproximadamente 20 mg/m2/día. En una realización particular, la dosis de fludarabina es de aproximadamente 25 mg/m2/día. En otra realización, la dosis de fludarabina es de aproximadamente 30 mg/m2/día. En otra realización, la dosis de fludarabina es de aproximadamente 60 mg/m2/día.
En algunas realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 100 mg/m2/día (o 110 mg/m2/día, 120 mg/m2/día, 130 mg/m2/día o 140 mg/m2/día) y la dosis de fludarabina es de 5 mg/m2/día, 10 mg/m2/día, 15 mg/m2/día, 20 mg/m2/día, 25 mg/m2/día, 30 mg/m2/día, 35 mg/m2/día, 40 mg/m2/día, 45 mg/m2/día, 50 mg/m2/día, 55 mg/m2/día, 60 mg/m2/día, 65 mg/m2/día, 70 mg/m2/día o 75 mg/m2/día.
En algunas realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 150 mg/m2/día (o 160 mg/m2/día, 170 mg/m2/día, 180 mg/m2/día o 190 mg/m2/día) y la dosis de fludarabina es de 5 mg/m2/día, 10 mg/m2/día, 15 mg/m2/día, 20 mg/m2/día, 25 mg/m2/día, 30 mg/m2/día, 35 mg/m2/día, 40 mg/m2/día, 45 mg/m2/día, 50 mg/m2/día, 55 mg/m2/día, 60 mg/m2/día, 65 mg/m2/día, 70 mg/m2/día o 75 mg/m2/día.
En algunas realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de aproximadamente 200 mg/m2/día (o 210 mg/m2/día, 220 mg/m2/día, 230 mg/m2/día o 240 mg/m2/día) y la dosis de fludarabina es de 5 mg/m2/día, 10 mg/m2/día, 15 mg/m2/día, 20 mg/m2/día, 25 mg/m2/día, 30 mg/m2/día, 35 mg/m2/día, 40 mg/m2/día, 45 mg/m2/día, 50 mg/m2/día, 55 mg/m2/día, 60 mg/m2/día, 65 mg/m2/día, 70 mg/m2/día o 75 mg/m2/día.
En algunas realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 250 mg/m2/día (o 260 mg/m2/día, 270 mg/m2/día, 280 mg/m2/día o 290 mg/m2/día) y la dosis de fludarabina es de 5 mg/m2/día, 10 mg/m2/día, 15 mg/m2/día, 20 mg/m2/día, 25 mg/m2/día, 30 mg/m2/día, 35 mg/m2/día, 40 mg/m2/día, 45 mg/m2/día, 50 mg/m2/día, 55 mg/m2/día, 60 mg/m2/día, 65 mg/m2/día, 70 mg/m2/día o 75 mg/m2/día.
En algunas realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 300 mg/m2/día (o 310 mg/m2/día, 320 mg/m2/día, 330 mg/m2/día o 340 mg/m2/día) y la dosis de fludarabina es de 5 mg/m2/día, 10 mg/m2/día, 15 mg/m2/día, 20 mg/m2/día, 25 mg/m2/día, 30 mg/m2/día, 35 mg/m2/día, 40 mg/m2/día, 45 mg/m2/día, 50 mg/m2/día, 55 mg/m2/día, 60 mg/m2/día, 65 mg/m2/día, 70 mg/m2/día o 75 mg/m2/día.
En algunas realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 350 mg/m2/día (o 360 mg/m2/día, 370 mg/m2/día, 380 mg/m2/día o 390 mg/m2/día) y la dosis de fludarabina es de 5 mg/m2/día, 10 mg/m2/día, 15 mg/m2/día, 20 mg/m2/día, 25 mg/m2/día, 30 mg/m2/día, 35 mg/m2/día, 40 mg/m2/día, 45 mg/m2/día, 50 mg/m2/día, 55 mg/m2/día, 60 mg/m2/día, 65 mg/m2/día, 70 mg/m2/día o 75 mg/m2/día.
En algunas realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 400 mg/m2/día (o 410 mg/m2/día, 420 mg/m2/día, 430 mg/m2/día o 440 mg/m2/día) y la dosis de fludarabina es de 5 mg/m2/día, 10 mg/m2/día, 15 mg/m2/día, 20 mg/m2/día, 25 mg/m2/día, 30 mg/m2/día, 35 mg/m2/día, 40 mg/m2/día, 45 mg/m2/día, 50 mg/m2/día, 55 mg/m2/día, 60 mg/m2/día, 65 mg/m2/día, 70 mg/m2/día o 75 mg/m2/día.
En algunas realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 450 mg/m2/día (o 460 mg/m2/día, 470 mg/m2/día, 480 mg/m2/día o 490 mg/m2/día) y la dosis de fludarabina es de 5 mg/m2/día, 10 mg/m2/día, 15 mg/m2/día, 20 mg/m2/día, 25 mg/m2/día, 30 mg/m2/día, 35 mg/m2/día, 40 mg/m2/día, 45 mg/m2/día, 50 mg/m2/día, 55 mg/m2/día, 60 mg/m2/día, 65 mg/m2/día, 70 mg/m2/día o 75 mg/m2/día.
En algunas realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 500 mg/m2/día (o 510 mg/m2/día, 520 mg/m2/día, 530 mg/m2/día o 540 mg/m2/día) y la dosis de fludarabina es de 5 mg/m2/día, 10 mg/m2/día, 15 mg/m2/día, 20 mg/m2/día, 25 mg/m2/día, 30 mg/m2/día, 35 mg/m2/día, 40 mg/m2/día, 45 mg/m2/día, 50 mg/m2/día, 55 mg/m2/día, 60 mg/m2/día, 65 mg/m2/día, 70 mg/m2/día o 75 mg/m2/día.
En algunas realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 550 mg/m2/día (o 560 mg/m2/día, 570 mg/m2/día, 580 mg/m2/día o 590 mg/m2/día) y la dosis de fludarabina es de 5 mg/m2/día, 10 mg/m2/día, 15 mg/m2/día, 20 mg/m2/día, 25 mg/m2/día, 30 mg/m2/día, 35 mg/m2/día, 40 mg/m2/día, 45 mg/m2/día, 50 mg/m2/día, 55 mg/m2/día, 60 mg/m2/día, 65 mg/m2/día, 70 mg/m2/día o 75 mg/m2/día.
En algunas realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 600 mg/m2/día (o 610 mg/m2/día, 620 mg/m2/día, 630 mg/m2/día o 640 mg/m2/día) y la dosis de fludarabina es de 5 mg/m2/día, 10 mg/m2/día, 15 mg/m2/día, 20 mg/m2/día, 25 mg/m2/día, 30 mg/m2/día, 35 mg/m2/día, 40 mg/m2/día, 45 mg/m2/día, 50 mg/m2/día, 55 mg/m2/día, 60 mg/m2/día, 65 mg/m2/día, 70 mg/m2/día o 75 mg/m2/día.
En algunas realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 650 mg/m2/día (o 660 mg/m2/día, 670 mg/m2/día, 680 mg/m2/día o 690 mg/m2/día) y la dosis de fludarabina es de 5 mg/m2/día, 10 mg/m2/día, 15 mg/m2/día, 20 mg/m2/día, 25 mg/m2/día, 30 mg/m2/día, 35 mg/m2/día, 40 mg/m2/día, 45 mg/m2/día, 50 mg/m2/día, 55 mg/m2/día, 60 mg/m2/día, 65 mg/m2/día, 70 mg/m2/día o 75 mg/m2/día.
En algunas realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 700 mg/m2/día (o 710 mg/m2/día, 720 mg/m2/día, 730 mg/m2/día o 740 mg/m2/día) y la dosis de fludarabina es de 5 mg/m2/día, 10 mg/m2/día, 15 mg/m2/día, 20 mg/m2/día, 25 mg/m2/día, 30 mg/m2/día, 35 mg/m2/día, 40 mg/m2/día, 45 mg/m2/día, 50 mg/m2/día, 55 mg/m2/día, 60 mg/m2/día, 65 mg/m2/día, 70 mg/m2/día o 75 mg/m2/día.
En algunas realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 750 mg/m2/día (o 760 mg/m2/día, 770 mg/m2/día, 780 mg/m2/día o 790 mg/m2/día) y la dosis de fludarabina es de 5 mg/m2/día, 10 mg/m2/día, 15 mg/m2/día, 20 mg/m2/día, 25 mg/m2/día, 30 mg/m2/día, 35 mg/m2/día, 40 mg/m2/día, 45 mg/m2/día, 50 mg/m2/día, 55 mg/m2/día, 60 mg/m2/día, 65 mg/m2/día, 70 mg/m2/día o 75 mg/m2/día.
En algunas realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 800 mg/m2/día (u 810 mg/m2/día, 820 mg/m2/día, 830 mg/m2/día u 840 mg/m2/día) y la dosis de fludarabina es de 5 mg/m2/día, 10 mg/m2/día, 15 mg/m2/día, 20 mg/m2/día, 25 mg/m2/día, 30 mg/m2/día, 35 mg/m2/día, 40 mg/m2/día, 45 mg/m2/día, 50 mg/m2/día, 55 mg/m2/día, 60 mg/m2/día, 65 mg/m2/día, 70 mg/m2/día o 75 mg/m2/día.
En algunas realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 850 mg/m2/día (u 860 mg/m2/día, 870 mg/m2/día, 880 mg/m2/día u 890 mg/m2/día) y la dosis de fludarabina es de 5 mg/m2/día, 10 mg/m2/día, 15 mg/m2/día, 20 mg/m2/día, 25 mg/m2/día, 30 mg/m2/día, 35 mg/m2/día, 40 mg/m2/día, 45 mg/m2/día, 50 mg/m2/día, 55 mg/m2/día, 60 mg/m2/día, 65 mg/m2/día, 70 mg/m2/día o 75 mg/m2/día.
En algunas realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 900 mg/m2/día (o 910 mg/m2/día, 920 mg/m2/día, 930 mg/m2/día o 940 mg/m2/día) y la dosis de fludarabina es de 5 mg/m2/día, 10 mg/m2/día, 15 mg/m2/día, 20 mg/m2/día, 25 mg/m2/día, 30 mg/m2/día, 35 mg/m2/día, 40 mg/m2/día, 45 mg/m2/día, 50 mg/m2/día, 55 mg/m2/día, 60 mg/m2/día, 65 mg/m2/día, 70 mg/m2/día o 75 mg/m2/día.
En algunas realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 950 mg/m2/día (o 960 mg/m2/día, 970 mg/m2/día, 980 mg/m2/día o 990 mg/m2/día) y la dosis de fludarabina es de 5 mg/m2/día, 10 mg/m2/día, 15 mg/m2/día, 20 mg/m2/día, 25 mg/m2/día, 30 mg/m2/día, 35 mg/m2/día, 40 mg/m2/día, 45 mg/m2/día, 50 mg/m2/día, 55 mg/m2/día, 60 mg/m2/día, 65 mg/m2/día, 70 mg/m2/día o 75 mg/m2/día.
En algunas realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 1000 mg/m2/día (o 1010 mg/m2/día, 1020 mg/m2/día, 1030 mg/m2/día o 1040 mg/m2/día) y la dosis de fludarabina es de 5 mg/m2/día, 10 mg/m2/día, 15 mg/m2/día, 20 mg/m2/día, 25 mg/m2/día, 30 mg/m2/día, 35 mg/m2/día, 40 mg/m2/día, 45 mg/m2/día, 50 mg/m2/día, 55 mg/m2/día, 60 mg/m2/día, 65 mg/m2/día, 70 mg/m2/día o 75 mg/m2/día.
En otras realizaciones, la dosis de ciclofosfamida está entre 100 mg/m2/día y 650 mg/m2/día, y la dosis de fludarabina está entre 10 mg/m2/día y 50 mg/m2/día. En otras realizaciones, la dosis de ciclofosfamida está entre 150 mg/m2/día y 600 mg/m2/día, y la dosis de fludarabina está entre 20 mg/m2/día y 50 mg/m2/día. En otras realizaciones, la dosis de ciclofosfamida está entre 200 mg/m2/día y 550 mg/m2/día, y la dosis de fludarabina está entre 20 mg/m2/día y 40 mg/m2/día. En otras realizaciones, la dosis de ciclofosfamida está entre 250 mg/m2/día y 550 mg/m2/día, y la dosis de fludarabina está entre 15 mg/m2/día y 45 mg/m2/día.
En determinadas realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 1000 mg/m2/día, y la dosis de fludarabina es de 60 mg/m2/día, 65 mg/m2/día, 70 mg/m2/día, 75 mg/m2/día, 80 mg/m2/día, 85 mg/m2/día, 90 mg/m2/día, 95 mg/m2/día, 100 mg/m2/día, 105 mg/m2/día, 110 mg/m2/día, 115 mg/m2/día, 120 mg/m2/día, 125 mg/m2/día, 130 mg/m2/día, 135 mg/m2/día, 140 mg/m2/día, 145 mg/m2/día, 150 mg/m2/día, 155 mg/m2/día, 160 mg/m2/día, 165 mg/m2/día, 170 mg/m2/día, 175 mg/m2/día, 180 mg/m2/día, 185 mg/m2/día, 190 mg/m2/día, 195 mg/m2/día, 200 mg/m2/día, 205 mg/m2/día, 210 mg/m2/día, 215 mg/m2/día, 220 mg/m2/día, 225 mg/m2/día, 230 mg/m2/día, 235 mg/m2/día, 240 mg/m2/día, 245 mg/m2/día o 250 mg/m2/día.
En una realización, una dosis de ciclofosfamida es de aproximadamente 500 mg/m2/día y una dosis de fludarabina es de aproximadamente 60 mg/m2/día. En otra realización, una dosis de ciclofosfamida es de aproximadamente 300 mg/m2/día y una dosis de fludarabina es de aproximadamente 30 mg/m2/día. En otra realización, una dosis de ciclofosfamida es de aproximadamente 200 mg/m2/día y una dosis de fludarabina es de aproximadamente 20 mg/m2/día. En otra realización, una dosis de ciclofosfamida es de aproximadamente 200 mg/m2/día y una dosis de fludarabina es de aproximadamente 30 mg/m2/día. En otra realización, una dosis de ciclofosfamida es de aproximadamente 500 mg/m2/día y una dosis de fludarabina es de aproximadamente 30 mg/m2/día. En otra realización, una dosis de ciclofosfamida es de aproximadamente 300 mg/m2/día y una dosis de fludarabina es de aproximadamente 60 mg/m2/día. En otra realización, una dosis de ciclofosfamida es de aproximadamente 500 mg/m2/día y una dosis de fludarabina es de aproximadamente 60 mg/m2/día. En otra realización, una dosis de ciclofosfamida es de aproximadamente 1110 mg/m2/día y una dosis de fludarabina es de aproximadamente 25 mg/m2/día. En otra realización, una dosis de ciclofosfamida es de aproximadamente 2220 mg/m2/día y una dosis de fludarabina es de aproximadamente 25 mg/m2/día, en donde el paciente presenta niveles séricos aumentados de IL-7, IL-15, IL-10, IL-5, IP-10, IL-8, MCP-1, PLGF, CRP, sICAM-1, sVcAm-1 o cualquier combinación de los mismos, por ejemplo, IL-15, IP-10 y/o IL-7, o niveles séricos disminuidos de perforina y/o MIP-1b después de la administración de ciclofosfamida y fludarabina. En otra realización, una dosis de ciclofosfamida es de aproximadamente 60 mg/kg/día y una dosis de fludarabina es de aproximadamente 25 mg/m2/día, en donde el paciente presenta niveles séricos aumentados de IL-7, IL-15, IL-10, iL-5, IP-10, IL-8, MCP-1, PLGF, CRP, sICAM-1, sVCAM-1 o cualquier combinación de los mismos, por ejemplo, IL-15, IP-10 y/o IL-7, o niveles séricos disminuidos de perforina y/o MIP-1 b después de la administración de ciclofosfamida y fludarabina. En otra realización, una dosis de ciclofosfamida es de aproximadamente 30 mg/kg/día y una dosis de fludarabina es de aproximadamente 25 mg/m2/día. En una realización particular, la ciclofosfamida se administra antes, después o simultáneamente con fludarabina. En una determinada realización, la ciclofosfamida se administra antes de la fludarabina.
El ritmo de administración del uno o más agentes de preacondicionamiento puede ajustarse para maximizar el efecto. En determinadas realizaciones, el uno o más agentes de preacondicionamiento comprenden dos o más agentes de preacondicionamiento. Los dos o más agentes de preacondicionamiento pueden administrarse simultánea o secuencialmente. En una realización particular, un primer agente de preacondicionamiento, por ejemplo, ciclofosfamida, se administra al paciente antes o después de un segundo agente de preacondicionamiento, por ejemplo, fludarabina.
Las dosis de ciclofosfamida y fludarabina pueden subirse o reducirse conjuntamente o de forma independiente. Por ejemplo, la dosis de ciclofosfamida puede aumentarse mientras se disminuye la dosis de fludarabina, y la dosis de ciclofosfamida puede disminuirse mientras se aumenta la dosis de fludarabina. Como alternativa, la dosis tanto de ciclofosfamida como de fludarabina puede aumentarse o disminuirse conjuntamente. En algunas realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 300 mg/m2/día y la dosis de fludarabina es de 20 mg/m2/día. En otras realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 300 mg/m2/día y la dosis de fludarabina es de 30 mg/m2/día. En otras realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 300 mg/m2/día y la dosis de fludarabina es de 60 mg/m2/día. En otras realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 500 mg/m2/día y la dosis de fludarabina es de 20 mg/m2/día. En otras realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 500 mg/m2/día y la dosis de fludarabina es de 30 mg/m2/día. En otras realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 500 mg/m2/día y la dosis de fludarabina es de 60 mg/m2/día. En otras realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 200 mg/m2/día y la dosis de fludarabina es de 20 mg/m2/día. En otras realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 200 mg/m2/día y la dosis de fludarabina es de 30 mg/m2/día. En otras realizaciones, la dosis de ciclofosfamida es de 200 mg/m2/día y la dosis de fludarabina es de 60 mg/m2/día.
Como se describe en el presente documento, el día en que se administra el tratamiento con linfocitos T se asigna como día 0. El uno o más agentes de preacondicionamiento pueden administrarse en cualquier momento antes de la administración del tratamiento con linfocitos T. En algunas realizaciones, la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento comienza al menos siete días, al menos seis días, al menos cinco días, al menos cuatro días, al menos tres días, al menos dos días o al menos un día antes de la administración del tratamiento con linfocitos T. En otras realizaciones, la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento comienza al menos ocho días, al menos nueve días, al menos diez días, al menos once días, al menos doce días, al menos trece días o al menos catorce días antes de la administración del tratamiento con linfocitos T. En una realización, la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento comienza aproximadamente siete días antes de la administración del tratamiento con linfocitos T. En otra realización, la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento comienza aproximadamente cinco días antes de la administración del tratamiento con linfocitos T.
En una realización, la administración de un primer agente de preacondicionamiento comienza aproximadamente siete días antes de la administración del tratamiento con linfocitos T, y la administración de un segundo agente de preacondicionamiento comienza aproximadamente cinco días antes de la administración del tratamiento con linfocitos T. En una realización particular, se administra al paciente un primer agente de preacondicionamiento durante dos días a aproximadamente siete días y aproximadamente seis días antes de la administración del tratamiento con linfocitos T. En otra realización, se administra al paciente un segundo agente de preacondicionamiento durante cinco días a aproximadamente cinco, cuatro, tres, dos y un día antes de la administración del tratamiento con linfocitos T. En otra realización, se administra al paciente un primer agente de preacondicionamiento durante tres días a aproximadamente cinco, cuatro y tres días antes de la administración del tratamiento con linfocitos T.
En una realización particular, la administración de ciclofosfamida comienza aproximadamente siete días antes de la administración del tratamiento con linfocitos T, y la administración de un análogo de purina (por ejemplo, fludarabina o pentostatina) comienza aproximadamente cinco días antes de la administración del tratamiento con linfocitos T. En otra realización, la administración de ciclofosfamida comienza aproximadamente cinco días antes de la administración del tratamiento con linfocitos T, y la administración de un análogo de purina (por ejemplo, fludarabina o pentostatina) comienza aproximadamente cinco días antes de la administración del tratamiento con linfocitos T.
El ritmo de administración de cada componente puede ajustarse para maximizar el efecto. En general, el uno o más agentes de preacondicionamiento pueden administrarse diariamente. En algunas realizaciones, el uno o más agentes de preacondicionamiento se administran diariamente durante aproximadamente dos días, durante aproximadamente tres días, durante aproximadamente cuatro días, durante aproximadamente cinco días, durante aproximadamente seis días o durante aproximadamente siete días. En algunas realizaciones, el uno o más agentes de preacondicionamiento pueden administrarse diariamente durante al menos un día, al menos dos días, al menos tres días, al menos cuatro días, al menos cinco días, al menos seis días o al menos siete días. En una realización particular, el uno o más agentes de preacondicionamiento se administran diariamente durante aproximadamente tres días.
Como se describe en el presente documento, el día en que se administra al paciente el tratamiento con linfocitos T se asigna como día 0. En algunas realizaciones, el uno o más agentes de preacondicionamiento, por ejemplo, la ciclofosfamida, se administra al paciente el día 7 y el día 6 antes del día 0 (es decir, día -7 y día -6). En otras realizaciones, el uno o más agentes de preacondicionamiento, por ejemplo, la ciclofosfamida, se administra al paciente el día -5, día -4 y día -3. En algunas realizaciones, el uno o más agentes de preacondicionamiento, por ejemplo, la fludarabina, se administra al paciente el día -5, día -4, día -3, día -2 y día -1. En otras realizaciones, el uno o más agentes de preacondicionamiento, por ejemplo, fludarabina, se administra al paciente el día -5, día -4 y día -3.
El uno o más agentes de preacondicionamiento, por ejemplo, la ciclofosfamida y la fludarabina, pueden administrarse en el mismo día o en días diferentes. Si la ciclofosfamida y la fludarabina se administran el mismo día, la dosis de ciclofosfamida puede administrarse antes o después de la dosis de fludarabina. En una realización, la dosis de ciclofosfamida se administra al paciente el día -7 y el día -6, y la dosis de fludarabina se administra al paciente el día -5, día -4, día -3, día -2 y día -1. En otra realización, la dosis de ciclofosfamida se administra al paciente el día -5, día -4 y día -3, y la dosis de fludarabina se administra al paciente el día -5, día -4 y día -3.
En determinadas realizaciones, el uno o más agentes de preacondicionamiento, por ejemplo, ciclofosfamida y fludarabina, pueden administrarse simultánea o secuencialmente. En una realización, la ciclofosfamida se administra al paciente antes que la fludarabina. En otra realización, la ciclofosfamida se administra al paciente después de la fludarabina.
El uno o más agentes de preacondicionamiento pueden administrarse por cualquier vía, incluyendo vía intravenosa (IV) o vía oral. En algunas realizaciones, el uno o más agentes de preacondicionamiento, por ejemplo, la ciclofosfamida, se administra por vía intravenosa durante aproximadamente 30 minutos, durante aproximadamente 35 minutos, durante aproximadamente 40 minutos, durante aproximadamente 45 minutos, durante aproximadamente 50 minutos, durante aproximadamente 55 minutos, durante aproximadamente 60 minutos, durante aproximadamente 90 minutos, durante aproximadamente 120 minutos. En algunas realizaciones, el uno o más agentes de preacondicionamiento, por ejemplo , la fludarabina, se administra por vía intravenosa durante aproximadamente 10 minutos, durante aproximadamente 15 minutos, durante aproximadamente 20 minutos, durante aproximadamente 25 minutos, durante aproximadamente 30 minutos, durante aproximadamente 35 minutos, durante aproximadamente 40 minutos, durante aproximadamente 45 minutos, durante aproximadamente 50 minutos, durante aproximadamente 55 minutos, durante aproximadamente 60 minutos, durante aproximadamente 90 minutos, durante aproximadamente 120 minutos.
En determinadas realizaciones, un tratamiento con linfocitos T se administra al paciente después de la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento, por ejemplo, ciclofosfamida y fludarabina. En algunas realizaciones, el tratamiento con linfocitos T comprende una citoterapia adoptiva. En determinadas realizaciones, la citoterapia adoptiva se selecciona de inmunoterapia con linfocitos oncoinfiltrantes (TIL), citoterapia con células autólogas, citoterapia con células autólogas genomanipuladas (eACT) y trasplante alogénico de linfocitos T. En una realización particular, la eACT comprende la administración de linfocitos T positivos (+) para el receptor quimérico de antígeno (CAR) específico de antígeno genomanipulado. En otra realización, la eACT comprende la administración de linfocitos T positivos (+) para el receptor de linfocitos T (TCR) específico de antígeno. En algunas realizaciones, los linfocitos T genomanipulados tratan un tumor en el paciente.
Pueden incluirse otras diversas intervenciones en los usos descritos en el presente documento. Por ejemplo, es bien sabido que los agentes de preacondicionamiento, por ejemplo, ciclofosfamida y fludarabina, pueden provocar acontecimientos adversos en los pacientes después de la administración. Está dentro del alcance de la invención que las composiciones también puedan administrarse al paciente para reducir algunos de estos acontecimientos adversos. En algunas realizaciones, el uso comprende además administrar una solución salina al paciente. La solución salina puede administrarse al paciente antes o después de la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento, o tanto antes como después de la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento. En determinadas realizaciones, la solución salina se administra simultáneamente con el uno o más agentes de preacondicionamiento. En una realización particular, se administra al paciente una solución salina antes de la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento y después de la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento el día de cada infusión.
La solución salina puede administrarse al paciente por cualquier vía, incluyendo, por ejemplo , por vía intravenosa o vía oral. En algunas realizaciones, el uso comprende administrar aproximadamente 0,1 l, aproximadamente 0,2 l, aproximadamente 0,3 l, aproximadamente 0,4 l, aproximadamente 0,5 l, aproximadamente 0,6 l, aproximadamente 0,7 l, aproximadamente 0,8 l, aproximadamente 0,9 l, aproximadamente 1 l, aproximadamente 1,1 l, aproximadamente 1,2 l, aproximadamente 1,3 l, aproximadamente 1,4 l, aproximadamente 1,5 l, aproximadamente 1,6 l, aproximadamente 1,7 l, aproximadamente 1,8 l, aproximadamente 1,9 l o aproximadamente 2,0 l de solución salina. El NaCl de la solución salina puede disolverse hasta una concentración final de aproximadamente un 0,1 %, aproximadamente un 0,2 %, aproximadamente un 0,3 %, aproximadamente un 0,4 %, aproximadamente un 0,5 %, aproximadamente un 0,6 %, aproximadamente un 0,7 %, aproximadamente un 0,8 %, aproximadamente un 0,9 %, aproximadamente un 1,0 %, aproximadamente un 1,1 %, aproximadamente un 1,2 %, aproximadamente un 1,3 %, aproximadamente un 1,4 %, aproximadamente un 1,5 %, aproximadamente un 1,6 %, aproximadamente un 1,7 %, aproximadamente un 1,8 %, aproximadamente un 1,9 % o aproximadamente un 2,0 %. En una realización, el uso comprende administrar 1,0 l de solución salina de NaCl al 0,9 % al paciente. En una realización particular, el uso comprende administrar 1,0 l de solución salina de NaCl al 0,9 % al paciente antes de la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento y después de la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento el día de cada infusión.
Además, también pueden administrarse al paciente adyuvantes y excipientes. Por ejemplo, mesna (2-sulfaniletanosulfonato de sodio) es un adyuvante que actúa como agente destoxificante para inhibir la cistitis hemorrágica y la hematuria, que pueden producirse después del tratamiento con ciclofosfamida. La ciclofosfamida, in vivo, puede convertirse en metabolitos urotóxicos, tales como acroleína. Mesna ayuda a destoxificar estos metabolitos por reacción de su grupo sulfhidrilo con el grupo vinilo. También aumenta la excreción urinaria de cisteína. En determinadas realizaciones, el uso comprende además administrar mesna al paciente. El mesna puede administrarse antes de la administración de ciclofosfamida y/o fludarabina, después de la administración de ciclofosfamida y/o fludarabina, o tanto antes como después de la administración de ciclofosfamida y/o fludarabina. En una realización, el mesna se administra por vía intravenosa o vía oral (por la boca). Por ejemplo, el mesna oral puede administrarse con ciclofosfamida oral.
Además, también pueden administrarse al paciente citocinas exógenas en el uso descrito en el presente documento. Como se analiza anteriormente, se plantea la hipótesis de que reducir el número de linfocitos endógenos aumenta la biodisponibilidad de moléculas endógenas, tales como citocinas, que pueden favorecer la expansión, activación y tráfico de linfocitos T transferidos adoptivamente. Por consiguiente, pueden administrar al paciente diversas citocinas. En una realización, el uso comprende además administrar una o más dosis de IL-2, IL-15, IL-7, IL-10, IL-5, IP-10, IL-8, MCP-1, PLGF, CRP, sICAM-1, sVCAM-1 o cualquier combinación de los mismos. En una realización particular, el uso comprende administrar una o más dosis de IL-2. La dosis de IL-2 puede ser de al menos aproximadamente 10000 UI/kg, al menos aproximadamente 50000 UI/kg, al menos aproximadamente 100000 UI/kg, al menos aproximadamente 200000 UI/kg, al menos aproximadamente 400 000 UI/kg, al menos aproximadamente 600000 UI/kg, al menos aproximadamente 700000 UI/kg, al menos aproximadamente 800000 UI/kg o al menos aproximadamente 1000000 UI/kg.
Tratamiento con linfocitos T
La presente invención proporciona uno o más agentes de preacondicionamiento para su uso en un método para tratar un cáncer en un paciente adecuado para un tratamiento con linfocitos T, que comprende preacondicionar al paciente al administrar administración al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento que pueden aumentar el nivel sérico de IL-15, IL-7 y al menos una citocina adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas, en donde el paciente se trata con un tratamiento con linfocitos T cuando presenta un nivel sérico aumentado de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina adicional. Debido a que la pauta de preacondicionamiento sirve para modificar el entorno inmunitario mediante inducción de IL-15, IL-7 y al menos una citocina adicional, lo que puede favorecer la expansión homeostática, activación y tráfico de linfocitos T en general, diversos tratamientos con linfocitos T diferentes pueden beneficiarse de los métodos de acondicionamiento descritos en el presente documento. Un experto en la materia comprendería que los usos pueden aplicarse a cualquier método de tratamiento de un paciente que comprenda administrar al paciente uno o más linfocitos T.
Por ejemplo, y sin limitación, los usos descritos en el presente documento pueden potenciar la eficacia de un tratamiento con linfocitos T, que puede ser un tratamiento adoptivo con linfocitos T seleccionado del grupo que consiste en inmunoterapia con linfocitos oncoinfiltrantes (TIL), citoterapia con células autólogas, citoterapia con células autólogas genomanipuladas (eACT), trasplante alogénico de linfocitos T, trasplante no de linfocitos T y cualquier combinación de los mismos. El tratamiento adoptivo con linfocitos T incluye ampliamente cualquier método de selección, enriquecimiento in vitro y administración a un paciente de linfocitos T autólogos o alogénicos que reconocen y pueden unirse a células tumorales. La inmunoterapia TIL es un tipo de tratamiento adoptivo con linfocitos T, en donde se aíslan linfocitos que pueden infiltrarse en tejido tumoral, se enriquecen in vitro y se administran a un paciente. Las linfocitos TIL pueden ser autólogos o alogénicos. La citoterapia con células autólogas es una tratamiento adotivo con linfocitos T que consiste en aislar linfocitos T que pueden abordar células tumorales de un paciente, enriquecer los linfocitos T in vitro y administrar los linfocitos T de nuevo al mismo paciente. El trasplante alogénico de linfocitos T puede incluir el trasplante de linfocitos T de origen natural expandidos ex vivo o linfocitos T genomanipulados. La citoterapia con células autólogas genomanipuladas, como se describe con mayor detalle anteriormente, es una tratamiento adoptivo con linfocitos T en donde se aíslan los linfocitos del propio paciente, se genomaniopulan para que expresen una molécula dirigida al tumor, se expanden in vitro y se vuelven a administrar al paciente. El trasplante no de linfocitos T puede incluir tratamientos autólogos o alogénicos con linfocitos que no son T, tales como, pero sin limitación, linfocitos citolíticos naturales (NK).
En una realización particular, el tratamiento con linfocitos T de la presente invención es citoterapia con células autólogas genomanipuladas (eACT™). De acuerdo con la presente realización, el uso puede incluir recoger glóbulos sanguíneos del paciente antes de la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento. Los glóbulos sanguíneos aislados (por ejemplo, linfocitos T) entonces pueden genomanipularse para que expresen un receptor quimérico de antígeno ("linfocitos T-CAR genomanipulados") o un receptor de linfocitos T ("linfocitos T-TCR genomanipulados"). En algunas realizaciones, el tratamiento con linfocitos T comprende tratamiento con linfocitos T-CAR genomanipulados o el tratamiento con linfocitos T-TCR genomanipulados. En una realización particular, los linfocitos T-CAR genomanipulados o los linfocitos T-TCR genomanipulados se administran al paciente después de administrar el uno o más agentes de preacondicionamiento. En algunas realizaciones, los linfocitos T-CAR genomanipulados o los linfocitos T-TCR genomanipulados tratan un tumor en el paciente. En una realización, los T-CAR genomanipulados reducen el tamaño de un tumor. En otra realización, las linfocitos T-TCR genomanipulados reducen el tamaño de un tumor.
En una realización, los linfocitos T están genomanipulados para que expresen un receptor quimérico de antígeno. El receptor quimérico de antígeno puede comprender una molécula de unión a un antígeno tumoral. La molécula de unión puede ser un anticuerpo o una molécula de unión a antígeno del mismo. Por ejemplo, la molécula de unión a antígeno puede seleccionarse de scFv, Fab, Fab', Fv, F(ab')2 y dAb, y cualquier fragmento o combinación de los mismos.
El receptor quimérico de antígeno puede comprender además una región de bisagra. La región de bisagra puede obtenerse de la región de bisagra de IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgD, IgE, IgM, CD28 o CD8 alfa. En una realización particular, la región de bisagra se obtiene de la región de bisagra de IgG4.
El receptor quimérico de antígeno también puede comprender un dominio transmembranario. El dominio transmembranario puede ser un dominio transmembranario de cualquier molécula transmembranaria que sea un correceptor en inmunocitos o un dominio transmembranario de un miembro de la superfamilia de las inmunoglobulinas. En determinadas realizaciones, el dominio transmembranario se obtiene de un dominio transmembranario de CD28, CD8 alfa, CD4 o CD19. En una realización particular, el dominio transmembranario comprende un dominio derivado de un dominio transmembranario de CD28.
El receptor quimérico de antígeno puede comprender además una o más regiones de señalización coestimuladoras. Por ejemplo, la región de señalización coestimuladora puede ser una región de señalización de CD28, OX-40, 4-1BB, CD27, coestimulador de linfocitos T inducible (ICOS), CD3 gamma, CD3 delta, CD3 épsilon, CD247, Ig alfa (CD79a) o receptor de Fc gamma. En una realización particular, la región de señalización coestimuladora es una región de señalización de CD28.
En una realización, el receptor quimérico de antígeno comprende además un dominio de señalización de CD3 zeta.
El receptor quimérico de antígeno puede genomanipularse para que aborde un antígeno tumoral particular. En algunas realizaciones, el antígeno tumoral se selecciona de CD19 CD20, ROR1, CD22, antígeno carcinoembrionario, alfafetoproteína, CA-125, 5T4, MUC-1, antígeno tumoral epitelial, antígeno prostático específico, antígeno asociado a melanoma, p53 mutado, ras mutado, HER2/Neu, proteína de unión al folato, glucoproteína gμl20 de la envoltura del VIH-1, glucoproteína gp41 de la envoltura del VIH-1, GD2, CD123, CD33, CD138, CD23, CD30, CD56, c-Met, mesotelina, GD3, HERV-K, II,-llRalfa, cadena kappa, cadena lambda, CSPG4, ERBB2, EGFRvIII, v Eg FR2, HER2-HER3 en combinación, HER1-HER2 en combinación y cualquier combinación de los mismos. En una realización particular, el antígeno tumoral es CD19.
En otra realización, el tratamiento con linfocitos T comprende administrar al paciente linfocitos T genomanipulados que expresan el receptor de linfocitos T ("linfocitos T-TCR genomanipulados"). El receptor de linfocitos T (TCR) puede comprender una molécula de unión a un antígeno tumoral. En algunas realizaciones, el antígeno tumoral se selecciona del grupo que consiste en CD19, CD20, ROR1, CD22, antígeno carcinoembrionario, alfafetoproteína, CA-125, 5T4, MUC-1, antígeno tumoral epitelial, antígeno prostático específico, antígeno asociado a melanoma, p53 mutado, ras mutado, HER2/Neu, proteína de unión al folato, glucoproteína gμl20 de la envoltura del VIH-1, glucoproteína gp41 de la envoltura del VIH-1, GD2, CD123, CD33, CD138, CD23, CD30, CD56, c-Met, mesotelina, GD3, HERV-K, IL-llRalfa, cadena kappa, cadena lambda, CSPG4, ERBB2, EGFRvIII, VEGFR2, HER2-HER3 en combinación, HER1-HER2 en combinación y cualquier combinación de los mismos.
En una realización, el TCR comprende una molécula de unión a un oncogén vírico. En una realización particular, el oncogén vírico se selecciona del virus del papiloma humano (VPH), virus de Epstein-Barr (VEB) y virus linfotrópico de linfocitos T humanos (VLTH).
En aún otra realización, el TCR comprende una molécula de unión a un antígeno tumoral testicular, placentario o fetal. En una realización particular, el antígeno tumoral testicular, placentario o fetal se selecciona del grupo que consiste en NY-ESO-1, punto de rotura 2 del X del sarcoma sinovial (SSX2), antígeno de melanoma (MAGE) y cualquier combinación de los mismos.
En otra realización, el TCR comprende una molécula de unión a un antígeno específico de linaje. En una realización particular, el antígeno específico de linaje se selecciona del grupo que consiste en antígeno de melanoma reconocido por linfocitos T 1 (MART-1), gp100, antígeno prostático específico (PSA), antígeno de membrana prostático específico (PSMA), antígeno de células madre prostáticas (PSCA) y cualquier combinación de los mismos.
En una realización, el tratamiento con linfocitos T comprende administrar al paciente linfocitos T-CAR genomanipulados que expresan un receptor quimérico de antígeno que se une a CD19 y además comprende un dominio coestimulador de CD28 y una región de señalización de CD3-zeta. En una realización particular, el tratamiento con linfocitos T comprende administrar a un paciente KTE-C19.
El tratamiento con linfocitos T incluido en la presente invención implica la transferencia de linfocitos T a un paciente. Las linfocitos T pueden administrarse en una cantidad terapéuticamente eficaz. Por ejemplo, una cantidad terapéuticamente eficaz de linfocitos T, por ejemplo, linfocitos T-CAR genomanipulados o linfocitos T-TCR genomanipulados, puede ser de al menos aproximadamente 104 células, al menos aproximadamente 105 células, al menos aproximadamente 106 células, al menos aproximadamente 107 células, al menos aproximadamente 108 células, al menos aproximadamente 109 o al menos aproximadamente 1010. En otra realización, la cantidad terapéuticamente eficaz de los linfocitos T, por ejemplo, linfocitos T-CAR genomanipulados o linfocitos T-TCR genomanipulados, es de aproximadamente 104 células, aproximadamente 105 células, aproximadamente 106 células, aproximadamente 107 células o aproximadamente 108 células. En una realización particular, la cantidad terapéuticamente eficaz de los linfocitos T, por ejemplo, linfocitos T-CAR genomanipulados o linfocitos T-TCR genomanipulados, es de aproximadamente 1 x 105 células/kg, aproximadamente 2 x 105 células/kg, aproximadamente 3 x 105 cé aproximadamente 4 x 105 células/kg, aproximadamente 5 x 105 células/kg, aproximadamente 6 x 105 cé aproximadamente 7 x 105 células/kg, aproximadamente 8 x 105 células/kg, aproximadamente 9 x 105 cé aproximadamente 1 x 106 células/kg, aproximadamente 2 x 106 células/kg, aproximadamente 3 x 106 cé aproximadamente 4 x 106 células/kg, aproximadamente 5 x 106 células/kg, aproximadamente 6 x 106 cé aproximadamente 7 x 106 células/kg, aproximadamente 8 x 106 células/kg, aproximadamente 9 x 106 cé aproximadamente 1 x 107 células/kg, aproximadamente 2 x 107 células/kg, aproximadamente 3 x 107 cé
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aproximadamente 4 x 107 células/kg, aproximadamente 5 x 107 células/kg, aproximadamente 6 x 107 células/kg, aproximadamente 7 x 107 células/kg, aproximadamente 8 x 107 células/kg o aproximadamente 9 x 107 células/kg. En una realización particular, la cantidad terapéuticamente eficaz de los linfocitos T, por ejemplo, linfocitos T-CAR genomanipulados o linfocitos T-TCR genomanipulados, es de aproximadamente 2 x 106 células/kg.
En otras realizaciones, la cantidad terapéuticamente eficaz de los linfocitos T, por ejemplo, linfocitos T-CAR genomanipulados o linfocitos T-TCR genomanipulados, es de aproximadamente 1,0 x 105 células/kg a aproximadamente 2 x 108 células/kg, de aproximadamente 2,0 x 105 células/kg a aproximadamente 2 x 108 células/kg, de aproximadamente 3,0 x 105 células/kg a aproximadamente 2 x 108 células/kg, de aproximadamente 4,0 x 105 células/kg a aproximadamente 2 x 108 células/kg, de aproximadamente 5,0 x 105 células/kg a aproximadamente 2 x 108 células/kg, de aproximadamente 6,0 x 105 células/kg a aproximadamente 2 x 108 células/kg, de aproximadamente 7,0 x 105 células/kg a aproximadamente 2 x 108 células/kg, de aproximadamente 8,0 x 105 células/kg a aproximadamente 2 x 108 células/kg, de aproximadamente 9,0 x 105 células/kg a aproximadamente 2 x 108 células/kg, de aproximadamente 0,5 x 106 células/kg a aproximadamente 2 x 108 células/kg, de aproximadamente 2 x 106 células/kg a aproximadamente 9 x 107 células/kg, de aproximadamente 3 x 106 células/kg a aproximadamente 9 x 107 células/kg, de aproximadamente 4 x 106 células/kg a aproximadamente 9 x 107 células/kg, de aproximadamente 5 x 106 células/kg a aproximadamente 9 x 107 células/kg, de aproximadamente 6 x 106 células/kg a aproximadamente 9 x 107 células/kg, de aproximadamente 7 x 106 células/kg a aproximadamente 9 x 107 células/kg, de aproximadamente 8 x 106 células/kg a aproximadamente 9 x 107 células/kg, de aproximadamente 9 x 106 células/kg a aproximadamente 9 x 107 células/kg, de aproximadamente 1 x 107 células/kg a aproximadamente 9 x 107 células/kg, de aproximadamente 2 x 107 células/kg a aproximadamente 9 x 107 células/kg, de aproximadamente 3 x 107 células/kg a aproximadamente 9 x 107 células/kg, de aproximadamente 4 x 107 células/kg a aproximadamente 9 x 107 células/kg, de aproximadamente 5 x 107 células/kg a aproximadamente 9 x 107 células/kg, de aproximadamente 6 x 107 células/kg a aproximadamente 9 x 107 células/kg, de aproximadamente 7 x 107 células/kg a aproximadamente 9 x 107 células/kg, de aproximadamente 8 x 107 células/kg a aproximadamente 9 x 107 células/kg, de aproximadamente 2 x 106 células/kg a aproximadamente 8 x 107 células/kg, de aproximadamente 2 x 106 células/kg a aproximadamente 7 x 107 células/kg, de aproximadamente 2 x 106 células/kg a aproximadamente 6 x 107 células/kg, de aproximadamente 2 x 106 células/kg a aproximadamente 5 x 107 células/kg, de aproximadamente 2 x 106 células/kg a aproximadamente 4 x 107 células/kg, de aproximadamente 2 x 106 células/kg a aproximadamente 3 x 107 células/kg, de aproximadamente 2 x 106 células/kg a aproximadamente 2 x 107 células/kg, de aproximadamente 2 x 106 células/kg a aproximadamente 1 x 107 células/kg, de aproximadamente 2 x 106 células/kg a aproximadamente 9 x 106 células/kg, de aproximadamente 2 x 106 células/kg a aproximadamente 8 x 106 células/kg, de aproximadamente 2 x 106 células/kg a aproximadamente 7 x 106 células/kg, de aproximadamente 2 x 106 células/kg a aproximadamente 6 x 106 células/kg, de aproximadamente 2 x 106 células/kg a aproximadamente 5 x 106 células/kg, de aproximadamente 2 x 106 células/kg a aproximadamente 4 x 106 células/kg, de aproximadamente 2 x 106 células/kg a aproximadamente 3 x 106 células/kg, de aproximadamente 3 x 106 células/kg a aproximadamente 8 x 107 células/kg, de aproximadamente 4 x 106 células/kg a aproximadamente 7 x 107 células/kg, de aproximadamente 5 x 106 células/kg a aproximadamente 6 x 107 células/kg, de aproximadamente 6 x 106 células/kg a aproximadamente 5 x 107 células/kg, de aproximadamente 7 x 106 células/kg a aproximadamente 4 x 107 células/kg, de aproximadamente 8 x 106 células/kg a aproximadamente 3 x 107 células/kg o de aproximadamente 9 x 106 células/kg a aproximadamente 2 x 107 células/kg. En una realización, la cantidad terapéuticamente eficaz de los linfocitos T-CAR genomanipulados es de aproximadamente 0,8 x 106 células/kg a aproximadamente 1,2 x 106 linfocitos T/kg. En una realización particular, la cantidad terapéuticamente eficaz de los linfocitos T-CAR genomanipulados es de 2,0 x 105 células/kg. En una realización particular, la cantidad terapéuticamente eficaz de los linfocitos T-CAR genomanipulados es de 1,0 x 106 células/kg.
Tratamiento del cáncer
Los usos de la invención pueden usarse para tratar un cáncer en un sujeto, reducir el tamaño de un tumor, destruir células tumorales, prevenir la proliferación de células tumorales, prevenir el crecimiento de un tumor, eliminar un tumor de un paciente, prevenir la recaída de un tumor, prevenir la metástasis tumoral, inducir la remisión en un paciente o cualquier combinación de los mismos. En determinadas realizaciones, los usos inducen una respuesta completa. En otras realizaciones, los usos inducen una respuesta parcial.
Los cánceres que pueden tratarse incluyen tumores que no están vascularizados, aún no están sustancialmente vascularizados o están vascularizados. El cáncer también puede incluir tumores sólidos o hemáticos. En determinadas realizaciones, el cáncer puede seleccionarse de un tumor derivado de cáncer de hueso, cáncer de páncreas, cáncer de piel, cáncer de cabeza o cuello, melanoma maligno cutáneo o intraocular, cáncer de útero, cáncer de ovario, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer testicular, cáncer de útero, carcinoma de las trompas de Falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma del cuello uterino, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, enfermedad de Hodgkin, linfoma de linfocitos B rico en linfocitos T (TCRBCL), linfoma primario de linfocitos B grandes mediastínicos (PMBCL), linfoma no hodgkiniano, cáncer del esófago, cáncer del intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroidea, cáncer de la glándula paratiroidea, cáncer de la glándula suprarrenal, sarcoma de partes blandas, cáncer de la uretra, cáncer del pene, leucemia crónica o aguda, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica crónica, tumores sólidos infantiles, linfoma linfocítico, cáncer de la vejiga, cáncer del riñón o del uréter, carcinoma de la pelvis renal, neoplasia del sistema nervioso central (SNC), linfoma primario del SNC, angiogénesis tumoral, tumor del tronco vertebral, glioma del tronco encefálico, adenoma hipofisario, sarcoma de Kaposi, cáncer epidermoide, cáncer de células escamosas, linfoma de linfocitos T, cánceres inducidos por el medio ambiente, incluyendo aquellos inducidos por amianto.
En una realización, el uso puede usarse para tratar un tumor, en donde el tumor es un linfoma o una leucemia. El linfoma y la leucemia son cánceres de la sangre que afectan específicamente a los linfocitos. Todos los leucocitos de la sangre se originan a partir de un solo tipo de hemocitoblastos multipotentes que se encuentran en la médula ósea. Esta célula madre produce células progenitoras mieloides y células progenitoras linfoides, que luego dan lugar a los diversos tipos de leucocitos que se encuentran en el organismo. Los leucocitos que surgen de las células progenitoras mieloides incluyen linfocitos T (células T), linfocitos B (células B), linfocitos citolíticos naturales y plasmocitos. Los leucocitos que surgen de las células progenitoras linfoides incluyen megacariocitos, mastocitos, basófilos, neutrófilos, eosinófilos, monocitos y macrófagos. Los linfomas y las leucemias pueden afectar a uno o más de estos tipos de células en un paciente.
En general, los linfomas pueden dividirse en al menos dos subgrupos: linfoma de Hodgkin y linfoma no hodgkiniano. El linfoma no hodgkiniano (NHL) es un grupo heterogéneo de cánceres que se originan en los linfocitos B, los linfocitos T o los linfocitos citolíticos naturales. En Estados Unidos, los linfomas de linfocitos B representan el 80­ 85 % de los casos notificados. En 2013 se estimó que se produjeron aproximadamente 69740 casos nuevos de NHL y más de 19000 muertes relacionadas con la enfermedad. El linfoma no hodgkiniano es la neoplasia maligna hemática más predominante y es el séptimo sitio principal de cánceres nuevos entre hombres y mujeres y representa el 4 % de todos los casos nuevos de cáncer y el 3 % de las muertes relacionadas con el cáncer.
El linfoma difuso de linfocitos B grandes (DLBCL) es el subtipo más común de NHL, que representa aproximadamente el 30 % de los casos de NHL. Hay aproximadamente 22000 nuevos diagnósticos de DLBCL en Estados Unidos cada año. Se clasifica como un linfoma agresivo y la mayoría de los pacientes se curan con quimioterapia convencional (directrices del NCCN de NHL 2014).
El tratamiento de primera línea para DLBCL generalmente incluye una pauta que contiene antraciclina con rituximab, tal como R-CHOP (rituximab, ciclofosfamida, doxorrubicina, vincristina y prednisona), que tiene una tasa de respuesta objetiva de aproximadamente un 80 % y una tasa de respuesta completa de aproximadamente un 50 % (Coiffier 2002), y aproximadamente un tercio de los pacientes tiene con enfermedad resistente al tratamiento inicial o recaída después de R-CHOP (Sehn 2005). Para aquellos pacientes que recaen después de la respuesta al tratamiento de primera línea, aproximadamente un 40-60 % de los pacientes pueden lograr una segunda respuesta con quimioterapia adicional. El procedimiento de referencia para el tratamiento de segunda línea para pacientes elegibles para trasplante autólogo de células madre (ASCT) incluye rituximab y poliquimioterapia tal como R-ICE (rituximab, ifosfamida, carboplatino y etopósido) y R-DHAP (rituximab, dexametasona, citarabina y cisplatino), que tiene cada uno de una tasa de respuesta objetiva de aproximadamente un 63 % y una tasa de respuesta completa de aproximadamente un 26 % (Gisselbrecht 2010). Los pacientes que responden al tratamiento de segunda línea y que se consideran lo suficientemente aptos para el trasplante reciben consolidación con quimioterapia de dosis alta y ASCT, que es curativo en aproximadamente la mitad de los pacientes trasplantados (Gisselbrecht 2010). Los pacientes que fracasaron en el ASCT tienen un pronóstico muy malo y no tienen opciones curativas.
El linfoma primario de linfocitos B grandes mediastínicos (PMBCL) tiene características clínicas, patológicas y moleculares distintivas en comparación con DLBCL. Se cree que el PMBCL surge de los linfocitos B tímicos (medulares) y representa aproximadamente un 3 % de los pacientes diagnosticados con DLBCL. El PMBCL se identifica normalmente en la población adulta más joven en la cuarta década de su vida con un ligero predominio femenino. El perfil de expresión génica sugiere que las vías desreguladas en PMBCL se superponen con el linfoma de Hodgkin. El tratamiento inicial de PMBCL en general incluye pautas que contienen antraciclina con rituximab, tal como el etopósido de dosis ajustada por infusión, doxorrubicina y ciclofosfamida con vincristina, prednisona y rituximab (DA-EPOCH-R), con o sin radioterapia del campo afectado.
El linfoma folicular (FL), un linfoma de linfocitos B, es la forma de escasa malignidad (de crecimiento lento) más común de NHL, que representa de aproximadamente un 20 % a un 30 % de todos los NHL. Algunos pacientes con FL se transformarán histológicamente (TFL) en DLBCL, que es más agresivo y está asociado con un mal desenlace. La transformación histológica en DLBCL se produce a una tasa anual de aproximadamente un 3 % durante 15 años y el riesgo de transformación sigue disminuyendo en los años posteriores. Se desconoce el mecanismo biológico de la transformación histológica. El tratamiento inicial de TFL se ve influido por los tratamientos previos para el linfoma folicular, pero en general incluye pautas que contienen antraciclina con rituximab para eliminar el componente agresivo de la enfermedad.
Las opciones de tratamiento para PMBCL recidivante/resistente y TFL son similares a las de DLBCL. Dada la baja predominancia de estas enfermedades, no se han realizado grandes estudios prospectivos aleatorizados en estas poblaciones de pacientes. Los pacientes con enfermedad resistente a quimioterapia tienen un pronóstico similar o peor que aquellos con DLBCL resistente.
Resumiendo, los sujetos que tienen NHL agresivo, resistente (por ejemplo, DLBCL, PMBCL y TFL) tienen una importante necesidad médica insatisfecha y merecen una mayor investigación con tratamientos novedosos en estas poblaciones.
Por consiguiente, en algunas realizaciones, el uso puede usarse para tratar un linfoma o una leucemia, en donde el linfoma o la leucemia es una neoplasia maligna de linfocitos B. En algunas realizaciones, el linfoma o la leucemia se selecciona de leucemia linfocítica crónica de linfocitos B/linfoma microcítico, leucemia prolinfocítica de linfocitos B, linfoma linfoplasmocitario (por ejemplo, macroglobulinemia de Waldenstrom), linfoma esplénico de la zona marginal, tricoleucemia, neoplasias de plasmocitos (por ejemplo, mieloma de plasmocitos (es decir, mieloma múltiple) o plasmocitoma), linfoma de linfocitos B de la zona marginal extraganglionar (por ejemplo, linfoma MALT), linfoma de linfocitos B de la zona marginal ganglionar, linfoma folicular (FL), linfoma folicular transformado (TFL), linfoma cutáneo primario del centro folicular, linfoma de células del manto, linfoma difuso de linfocitos B grandes (DLBCL), DLBCL positivo para el virus de Epstein-Barr, granulomatosis linfomatoide, linfoma primario de linfocitos B grandes mediastínicos (tímicos) (PMBCL), linfoma intravascular de linfocitos B grandes, linfoma de linfocitos B grandes ALK+, linfoma plasmoblástico, linfoma de derrame primario, linfoma de linfocitos B grandes que surge en enfermedad de Castleman multicéntrica asociada con HHV8, linfoma/leucemia de Burkitt, leucemia prolinfocítica de linfocitos T, leucemia de linfocitos T granulares grandes, leucemia agresiva de linfocitos NK, leucemia/linfoma de linfocitos T en el adulto, linfoma de linfocitos NK/T extraganglionar, linfoma de linfocitos T asociado a enteropatía, linfoma hepatoesplénico de linfocitos T, linfoma blástico de linfocitos NK, micosis fungoide/síndrome de Sezary, linfoma anaplásico cutáneo primario de células grandes, papulosis linfomatoide, linfoma periférico de linfocitos T, linfoma angioinmunoblástico de linfocitos T, linfoma anaplásico de células grandes, leucemia/linfoma linfoblástico B, leucemia/linfoma linfoblástico B con anomalías genéticas recurrentes, leucemia/linfoma linfoblástico T y linfoma de Hodgkin. En algunas realizaciones, el cáncer es resistente a uno o más tratamientos previos, y/o el cáncer ha recaído después de uno o más tratamientos previos.
En determinadas realizaciones, el cáncer se selecciona de linfoma folicular, linfoma folicular transformado, linfoma difuso de linfocitos B grandes y linfoma primario de linfocitos B grandes mediastínicos (tímicos). En una realización particular, el cáncer es un linfoma difuso de linfocitos B grandes.
En algunas realizaciones, el cáncer es resistente o el cáncer ha recaído después de uno o más de quimioterapia, radioterapia, inmunoterapia (incluyendo un tratamiento con linfocitos T y/o un tratamiento con un anticuerpo o un conjugado de anticuerpo-fármaco), un trasplante de células madre autólogas o cualquier combinación de los mismos. En una realización particular, el cáncer es un linfoma difuso de linfocitos B grandes resistente.
La presente invención se ilustra adicionalmente mediante los siguientes ejemplos que no deben interpretarse como adicionalmente limitantes.
Ejemplos
EJEMPLO 1
Se diseñó ensayo en fase 1/2, de un solo grupo, sin enmascaramiento, para determinar la seguridad y viabilidad de linfocitos T-CAR anti-CD19 administrados a sujetos con neoplasias malignas de linfocitos B.
Los sujetos que firmaron el consentimiento informado y cumplieron los requisitos del estudio se incluyeron en el estudio y se sometieron a leucocitaféresis para obtener PBMC para la producción de linfocitos T-CAR anti-CD19. Los sujetos se trataron con quimioterapia de acondicionamiento antes de la hospitalización en la preparación para una sola infusión de linfocitos T-CAR anti-CD19 el día 0. Luego, algunos sujetos se trataron con interleucina-2 (solo grupo 1), 3 horas después de la infusión de linfocitos T-CAR anti-CD19. Se permitió la repetición del tratamiento de una segunda dosis de linfocitos T-CAR anti-CD19 si había una respuesta de respuesta parcial (RP) o respuesta completa (RC) después de la primera infusión y luego progresión posterior de la enfermedad.
Se incluyeron tres grupos de sujetos. El grupo 1 incluye 8 sujetos, incluyendo 1 sujeto que se volvió a tratar, dosificados con linfocitos T-CAR anti-CD19 que varían de 3 x 106 a 30 x 106 linfocitos T-CAR anti-CD19/kg. La dosis de linfocitos T-CAR anti-CD19 siguió una pauta de acondicionamiento que consistía en dosis altas de ciclofosfamida a 60-120 mg/kg (2220-4440 mg/m2) durante dos días seguida de fludarabina a 25 mg/m2 durante cinco días. Estos sujetos también recibieron dosis altas de interleucina-2 (IL-2) a 720000 Ul/kg (cada 8 horas hasta 15 dosis o la toxicidad impidió dosis adicionales) después de la administración de linfocitos T-CAR anti-CD19 para estimular su proliferación.
El grupo 2 incluye 15 sujetos, incluyendo 2 sujetos del grupo 1 que se volvieron a tratar, que recibieron dosis altas de ciclofosfamida y fludarabina y nada de interleucina-2 después de la administración de dosis variables de linfocitos T-CAR anti-CD19 (de 1 x 106 a 5 x 106 linfocitos T-CAR anti-CD19/kg).
El grupo 3 incluye 11 sujetos, que han recibido una pauta de acondicionamiento reducido de ciclofosfamida a 300 mg/m2 y fludarabina a 30 mg/m2, ambos administrados durante 3 días simultáneos sin IL-2. Los primeros 7 y los últimos 4 de estos sujetos recibieron una infusión de linfocitos T-CAR anti-CD19 de 1 x 106 linfocitos T-CAR anti-CD19 y 2 x 106 linfocitos T-CAR anti-CD19, respectivamente.
Datos demográficos
Las características demográficas y de la enfermedad de los sujetos se proporcionan en la tabla 1. Se incluyeron treinta y dos (32) sujetos, 19 sujetos (59 %) tenían DLBCL o PMBCL, 7 sujetos (22 %) tenían CLL y 6 sujetos (19 %) tenían otro NHL de escasa malignidad, incluyendo el linfoma folicular de escasa malignidad y el linfoma esplénico de la zona marginal. La mayoría de los sujetos tenían enfermedad resistente (84 %) y habían recibido una mediana de 3 líneas previas de tratamiento. Todos los sujetos con NHL agresivo recibieron tratamiento anti-CD20 previo, poliquimioterapia con platino y el 95 % recibió quimioterapia previa basada en antraciclina.
Farmacocinética
El número de linfocitos T-CAR anti-CD19 en la sangre periférica en diversos puntos temporales después de la administración inicial el día 0 se evaluó usando análisis de qPCR y se corroboró mediante curvas patrón generadas por citometría de flujo con un reactivo de anticuerpo específico para scFv presente en la construcción de CAR anti-CD19 (Kochenderfer et al., "B-cell depletion and remissions of malignancy along with cytokine-associated toxicity in a clinical trial of anti-CD19 chimeric-antigen-receptortransduced T cells", Blood 119: 2709-20 (2012)).
T l 1 - D m r fi l l n líni .
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En el grupo 1, se infundieron de 3 x 106 a 30 x 106 linfocitos T-CAR anti-CD19/kg. En los primeros 6 sujetos, los linfocitos T-CAR anti-CD19 en la circulación sanguínea se detectaron en niveles más altos dentro de las 2 semanas después a la infusión, alcanzando hasta un 0,02-1 % del total de PBMC, luego disminuyeron rápidamente y fueron indetectables después de 50 días. Los sujetos 7 y 8, dosificados con el número más alto de linfocitos T-CAr anti-CD19 (28 y 30 x 106 linfocitos T-CAR anti-CD19/kg, respectivamente), tuvieron porcentajes máximos más altos que alcanzaron >10 % de linfocitos T-CAR anti-CD19 del total de PBMC, y persistencia a más largo plazo de linfocitos T-CAR anti-CD19 en la sangre (>130 y 180 días, respectivamente).
En el grupo 2, en ausencia de tratamiento con interleucina-2, los linfocitos T-CAR anti-CD19 mostraron una expansión similar en la sangre periférica en 2 semanas, seguida de descomposición y desaparición completa de la circulación en varias semanas (tabla 2).
En conjunto, no hubo una relación manifiesta entre la dosis de linfocitos T-CAR anti-CD19 y su expansión y persistencia en la sangre periférica. Asimismo, hasta la fecha, no hubo una relación aparente entre la dosis de linfocitos T-CAR anti-CD19, la expansión o persistencia de los linfocitos T-CAR anti-CD19 en la sangre y la respuesta clínica o las toxicidades relacionadas con este tratamiento, respectivamente.
- - -
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En los grupos 1 y 2, no hubo expansión secundaria de los linfocitos T-CAR anti-CD19 después de su expansión primaria a los 7-14 días después de la infusión. No hay evidencia de transformación oncógena atribuible a la inserción genómica del retrovirus de expresión de CAR en los sujetos analizados hasta la fecha. Los resultados del grupo 3 aún no estaban disponibles en el momento de la fecha tope para la inclusión de datos.
Eficacia
Los médicos evaluaron la seguridad de 32 sujetos y la eficacia de 29 sujetos. La tasa de respuesta global para los 29 sujetos evaluables para la eficacia fue de un 76 %. Once (11) de 29 sujetos (38 %) consiguieron una RC y 11/29 sujetos (38 %) consiguieron una RP (figuras 2A y 2B; tabla 3).
Dieciséis de los 29 (55 %) sujetos evaluables permanecen en respuesta desde su primer tratamiento, con una duración de la respuesta de 12 sujetos (incluyendo los sujetos retratados) superior a 1 año (tabla 3). Tres sujetos que respondieron se volvieron a tratar después de la progresión, todos tienen respuestas en curso (de 17,4 a más de 52,2 meses).
Como se indica en la tabla 3, 17 de los 19 sujetos con DLBCL/PMBCL agresivo resistente fueron evaluables para la respuesta de la enfermedad (1 sujeto no fue evaluable; 1 sujeto aún no se había evaluado). Entre estos 17 sujetos, 11 (65 %) tuvieron una respuesta, consiguiendo 6/17 sujetos (35 %) una RC. La mediana de la duración de la respuesta es de 7,3 meses.
T l - T r iv r i n l r r i m r.
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Seis de los 7 sujetos evaluables (86 %) con CLL tuvieron una respuesta, consiguiendo 4/7 sujetos (57 %) una RC (tabla 3). La mediana de la duración de la respuesta es de 22,2 meses, con 4/7 sujetos (57 %) todavía en respuesta, incluyendo 3 sujetos con respuestas en curso durante más de 27 meses (tabla 3).
Cinco de los 5 sujetos evaluables (100 %) con NHL con escasa malignidad tuvieron una respuesta, consiguiendo 1/5 sujetos (20 %) una RC. La mediana de la duración de la respuesta es de 18,8 meses (tabla 3). Cinco sujetos (5/5; 100 %) permanecen en respuesta, respondiendo 2 sujetos más de 45 meses (tabla 4).
Seguridad
Acontecimientos adversos
32 sujetos se habían tratado con linfocitos T-CAR anti-CD19 sin que se hubieran informado acontecimientos adversos para el último sujeto tratado. Los sumarios globales de seguridad incluyen a los 32 sujetos tratados. Los sumarios por grupo incluyen datos de seguridad para los sujetos 1010003 y 1010004 dos veces, una vez cuando estos sujetos se trataron en el grupo 1 y la segunda cuando estos sujetos se trataron en el grupo 2 (retratamiento con linfocitos T-CAR anti-CD19).
Sumario de acontecimientos adversos
En la tabla 4 se proporciona un sumario de los acontecimientos adversos. En conjunto, 31 sujetos (97 %) experimentaron algún acontecimiento adverso, experimentando 0 sujetos (0 %) el peor grado del grado 3, experimentando 29 sujetos (91 %) el peor grado del grado 4 y 2 sujetos (6 %) con acontecimientos adversos mortales. Veinte sujetos (63 %) experimentaron un acontecimiento adverso relacionado con los linfocitos T-CAR anti-CD19; 6 sujetos (19 %) con el peor grado de 3, 8 sujetos (25 %) con el peor grado de 4 y ningún sujeto experimentó un acontecimiento de grado 5. Dieciséis (16) sujetos (50 %) experimentaron un acontecimiento adverso grave; 3 sujetos (9 %) con el peor grado de 3, 9 sujetos (28 %) con el peor de 4 y 2 sujetos (6 %) con el peor grado de 5.
Toxicidad limitante de la dosis
La incidencia de la DLT dentro de los grupos 1, 2 y 3 fue de un 38 %, un 40 % y un 0 %, respectivamente. Con la excepción del sujeto 1010002, las DLT fueron principalmente neurotoxicidades, 2 casos de creatinina elevada y 1 acontecimiento de hipoxia e hipotensión. La tabla 6 proporciona un listado de DLT. En el grupo 3 no se informaron DLT. La pauta de acondicionamiento en el grupo 3 se estudió con 2 x 106 linfocitos T-CAR anti-CD19/kg.
Tabla 4 - Sumario de acontecimientos adversos.
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Síndrome de liberación de citocinas
La liberación de citocinas se induce por los linfocitos T activados al interactuar con la diana CD19. Usando una estrategia de búsqueda amplia, los acontecimientos adversos que surgen por el tratamiento que pueden atribuirse al CRS incluyen fiebre, neutropenia febril, hipotensión, síndrome de extravasación vascular aguda, creatinina elevada, insuficiencia renal, hipoxia y derrame pleural. Veintiocho (28) (88 %) sujetos informaron de acontecimientos adversos que podrían atribuirse a la liberación de citocinas, donde 24 sujetos (75 %) informaron de un acontecimiento de grado >3 y 6 sujetos (19 %) experimentaron un acontecimiento grave. Los acontecimientos adversos debidos a cotratamientos tales como IL-2 (usada en el grupo 1) y quimioterapia de acondicionamiento (que provoca neutropenia febril) pueden frustrar este análisis.
Las manifestaciones clínicas de CRS se produjeron normalmente en la primera semana después de la infusión de linfocitos T-CAR anti-CD19 y fueron menos comunes en los sujetos del grupo 3. Solo 1 de los 11 sujetos del grupo 3 experimentó hipotensión de grado 3, y 4 experimentaron fiebre de grado 3. Los acontecimientos de síndrome de extravasación vascular aguda, oliguria, creatinina elevada e insuficiencia renal se informaron solo en sujetos de los grupos 1 y 2.
Tabla 5 - Toxicidades limitantes de la dosis.
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Acontecimientos adversos neurológicos
Se observaron acontecimientos adversos neurológicos en los tres grupos, predominantemente afasia/disfasia, confusión, neuropatía motora y somnolencia. Trece sujetos (41 %) tuvieron neurotoxicidad grave >grado 3 y 11 sujetos (34 %) experimentaron un acontecimiento grave.
El sujeto que falleció con neurotoxicidad tuvo un acontecimiento de isquemia cerebrovascular del SNC en el contexto de una infección vírica por gripe A. El investigador consideró que esto no estaba relacionado con los linfocitos T-CAR anti-CD19.
Cinco sujetos (16 %) con acontecimientos de neurotoxicidad requirieron ventilación mecánica para la protección de las vías respiratorias por acontecimientos adversos neurológicos; todos estos sujetos estaban en los grupos 1 y 2. No ha habido sujetos intubados en el grupo 3.
Los acontecimientos adversos neurológicos tuvieron una mediana de aparición de 6 días que variaron entre los días 2 y 17 después de la infusión de linfocitos T-CAR anti-CD19, con la excepción de la mielitis de grado 4 que se produjo en 1 sujeto y tuvo un inicio el día 110 después de la infusión de linfocitos T-CAR anti-CD19. Dado el momento de la aparición, la presentación y los hallazgos de RM cerebral, el investigador consideró que este acontecimiento estaba relacionado con fludarabina y no atribuido a los linfocitos T-CAR anti-CD19. La mediana de tiempo hasta la resolución del acontecimiento adverso neurológico a grado 1 o mejor fue de 14 días después de la infusión.
Muertes
Dos sujetos murieron en los 30 días de quimioterapia y la infusión de linfocitos T-CAR anti-CD19. El sujeto 2 murió 18 días después del tratamiento en investigación debido a un infarto cerebral concurrente con neumonía vírica, infección por gripe A, infección por E. coli, disnea e hipoxia. El sujeto 11 tenía PMBCL, con afectación extensa de linfoma mediastínico fibrótico, murió 16 días después del tratamiento en investigación. No se determinó la causa de la muerte en la autopsia y el informe de la autopsia concluyó que la causa probable de la muerte fue una arritmia cardíaca dada la afectación mediastínica de PMBCL. El investigador consideró que ninguno de los acontecimientos estaba relacionado con los linfocitos T-CAR anti-CD19.
EJEMPLO 2
A los pacientes seleccionados se les administró una quimioterapia de acondicionamiento que comprende ciclofosfamida 300 mg/m2/día y fludarabina 30 mg/m2/día. La quimioterapia de acondicionamiento se administró durante tres días desde el día -5 hasta el día -3. El día 0, un primer subconjunto de pacientes (pacientes 22-28) (tabla 6) recibió linfocitos T-CAR anti-CD19 recientes, de 10 días de fabricación, y un segundo subconjunto de pacientes (pacientes 29-32) recibieron linfocitos T-CAR anti-CD19 crioconservados, de 6 días de fabricación.
Los sueros de los pacientes se sometieron a prueba por luminex usando el kit Millipore HCD8MAG15K17PMX (T1, T2, citocinas inmunomoduladoras, quimiocinas, inmunoefectores). Los niveles de interleucina 15 (IL-15), proteína quimiotáctica de monocitos 1 (MCP-1), proteína inducida por gamma 10 (IP-10), factor de crecimiento placentario (PLGF), molécula de adhesión intercelular soluble 1 (sICAM-1), proteína C-reactiva (CRP), factor de crecimiento del endotelio vascular D (VEGF-D), proteína inflamatoria de macrófagos 1 p (MIP-1 p) se midieron antes y después del acondicionamiento.
T l - D f i n nl r l i n 22-2 .
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De los pacientes 22-28, los pacientes 22-25 y 27 mostraron al menos una respuesta parcial y los pacientes 26 y 28 mostraron enfermedad progresiva después del tratamiento. Para los pacientes 22-26, los niveles de IL-15, MCP-1 y PLGF mostraron al menos algún aumento en los sueros de los pacientes (figuras 4A, 4B y 4D), mientras que los niveles de IP-10, sICAM-1, CRP, VEGF-D y MIP-1 p aumentaron en algunos pacientes y permanecieron estables o disminuyeron en otros (figuras 4C y 4E-4H). Solo se midió IL-15 para los pacientes 27 y 28 (figura 4A).
Se observaron algunas diferencias en los niveles de marcadores entre los pacientes que respondieron, que tienen una respuesta parcial o completa, y los pacientes que no responden, que tiene enfermedad progresiva. Los niveles de IL-15 aumentaron en un promedio de aproximadamente 35 veces en los pacientes que respondieron, que varían de aproximadamente 10 veces a aproximadamente 55 veces, con respecto a los valores de referencia, mientras que los pacientes que no respondieron tenían cada uno un aumento de menos de aproximadamente 10 veces en los niveles de IL-15 (figura 5A). Los niveles de MCP-1 en los que respondieron aumentaron en un promedio de aproximadamente 5 veces, que varían de aproximadamente 2 veces a aproximadamente 7 veces, mientras que el que no respondió (paciente 26) tuvo un aumento de menos de 4 veces en el nivel de MCP-1 (figura 5B). Los niveles de IP-10 en los que respondieron aumentaron en un promedio de aproximadamente 3,5 veces, que varían de aproximadamente 2 veces a aproximadamente 7 veces, mientras que el que no respondió esencialmente no tuvo cambios en el nivel sérico de IP-10 (figura 5C). Los niveles de PLGF en los que respondieron aumentaron en un promedio de aproximadamente 30 veces, que varían de un ligero aumento de aproximadamente 2 veces o menos a un aumento de aproximadamente más de 100 veces, mientras que el que no respondió tuvo solo un ligero aumento en el nivel sérico de PLGF (figura 5D). Los niveles de sICAM-1 en los que respondieron aumentaron en un promedio de aproximadamente 3 veces, que varían de esencialmente ningún cambio a un aumento de aproximadamente 4,5 veces, mientras que el que no respondió esencialmente no tuvo cambios en el nivel sérico de sICAM-1 (figura 5E). Los niveles de CRP en los que respondieron aumentaron en un promedio de aproximadamente 10 veces, que varían de esencialmente ningún cambio a un aumento de aproximadamente 25 veces, mientras que el que no respondió esencialmente no tuvo cambios en el nivel sérico de CRP (figura 5F). Los niveles de VEGF-D en los que respondieron aumentaron en un promedio de aproximadamente 3 veces, que varían de esencialmente ningún cambio a un aumento de aproximadamente 6 veces, mientras que el que no respondió esencialmente no tuvo cambios en el nivel sérico de VEGF-D (figura 5G). Los niveles de MIP-1 p en los que respondieron aumentaron en un promedio de aproximadamente 1,5 veces, que varían de esencialmente ningún cambio a un aumento de aproximadamente 3 veces, mientras que el nivel sérico de MIP-1 p disminuyó aproximadamente un 50 % en el que no respondió (figura 5H).
Los pacientes 30-33 recibieron dosis de células crioconservadas de 6 días de fabricación y los niveles de diversas citocinas, quimiocinas, efectores, marcadores de inflamación y moléculas de adhesión, incluyendo factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF), interferón y (IFNy o IFNG), interleucina 10 (IL-10), IL-15, interleucina 2 (IL-2), interleucina 5 (IL-5), interleucina 6 (IL-6), interleucina 8 (IL-8), IP-10, MCP-1, MIP-1 p, granzima A sérica (GRNZA), granzima B sérica (GRNZB), PLGF, CRP, proteína quimiotáctica de monocitos 4 (MCP-4), interleucina 16 (IL-16), quimiocina regulada por el timo y activación (TARC), eotaxina-3, sICAM-1, molécula de adhesión vascular soluble 1 (sVCAM-1) y amiloide sérico A (SAA), se midieron en días seleccionados desde el día -6 hasta el día 18 (figuras 6A-6V).
EJEMPLO 3
Para mejorar la profundidad y duración del agotamiento de los linfocitos observado en el grupo 3 del ejemplo 1, la dosis de quimioterapia de acondicionamiento en la cohorte A1 se aumentará a ciclofosfamida a 500 mg/m2 y fludarabina a 30 mg/m2, ambos administrados durante 3 días simultáneos con la dosis diana de 2 x 106 linfocitos T-CAR anti-CD19/kg. La dosis de ciclofosfamida usada en esta pauta (cohorte A1) es aproximadamente un 38 % más baja que la usada en la pauta de acondicionamiento de 30 mg/kg de ciclofosfamida del grupo 2 del ejemplo 1 (incidencia de toxicidad limitante de la dosis (DLT) 29 %), con la misma dosis más baja de fludarabina que el grupo 3 del ejemplo 1.
La evaluación de dosis más altas de quimioterapia de acondicionamiento y/o dosis variables de linfocitos T-CAR anti-CD19 transcurriría en función de la incidencia de DLT y la evaluación de la relación de beneficio-riesgo. La construcción del vector de CAR es idéntica a la construcción descrita en el ejemplo 1. Este ejemplo describe un ensayo clínico diseñado para probar la seguridad y la eficacia de los linfocitos T-CAR anti-CD19 generados por un proceso rápido, cerrado y sin microesferas. El cierre del proceso conserva las características del producto de linfocitos T.
Diseño del estudio
Se realizará un estudio abierto de fase 1/2, multicéntrico para evaluar la seguridad y la eficacia de KTE-C19 en sujetos con NHL resistente. El estudio se dividirá en dos fases distintas designadas como fase 1 y fase 2.
Durante la fase 1, de aproximadamente 6 a 24 sujetos con DLBCL, PMBCL o TFL se incluirán para evaluar la seguridad de las pautas de KTE-C19. Un equipo de revisión de seguridad (SRT), interno al promotor del estudio, revisará los datos de seguridad y hará recomendaciones sobre la realización de estudios adicionales de fase 1 y la progresión a la fase 2 como se muestra en la figura 3.
Durante la fase 2, los sujetos se incluirán en dos cohortes separadas designadas como cohorte 1 y cohorte 2. La cohorte 1 incluirá sujetos adultos con DLBCL resistente y la cohorte 2 incluirá sujetos adultos con PMBCL y TFL resistente. TFL se define como sujetos que recibieron quimioterapia previa para linfoma folicular.
Independientemente de la fase del estudio, cada sujeto seguirá el mismo programa de tratamiento del estudio y las mismas exigencias del procedimiento. Cada sujeto pasará por los siguientes períodos de estudio: período de selección/leucocitaféresis; período de quimioterapia de acondicionamiento; período de tratamiento con producto en investigación (PI); período de evaluación posterior al tratamiento período de seguimiento a largo plazo.
Duración del estudio
Para un sujeto individual, la duración de la participación incluye un período de selección de hasta 28 días, un período de tratamiento con quimioterapia de acondicionamiento de 5-7 días, un período de tratamiento con KTE-C19 (que incluye un período de recuperación hospitalaria de 7 días), un período de evaluación posterior al tratamiento y un período de seguimiento a largo plazo (vigilancia de la supervivencia durante hasta 15 años).
Los sujetos tendrán un seguimiento de todos los acontecimientos adversos durante 3 meses después del tratamiento. Después de 3 meses, se controlará los sujetos para detectar acontecimientos adversos específicos/acontecimientos adversos graves (por ejemplo, neoplasias malignas hemáticas, neurológicas, secundarias, infecciones o trastornos autoinmunitarios) y la presencia de retrovirus competentes para la replicación (RCR) en la sangre de los sujetos en los intervalos descritos en el programa de evaluaciones (PDE). La necesidad de un seguimiento prolongado se basa en la posible persistencia de los vectores de transferencia de genes en los sujetos tratados.
La finalización del estudio se define como el momento en que el último sujeto completa la visita del período de seguimiento a largo plazo, se considera ilocalizable para realizar el seguimiento, retira el consentimiento o muere. Los análisis principales se realizarán cuando todos los sujetos de la cohorte 1 de la fase 2 y la población del estudio global, respectivamente, han completado la evaluación de la respuesta de la enfermedad de 6 meses, están ilocalizables para realizar el seguimiento, se retiran del estudio o mueren, lo primero que se produzca.
Elegibilidad del sujeto
Los criterios de inclusión para los sujetos incluyen:
a) NHL agresivo de linfocitos B confirmado histológicamente, incluyendo los siguientes tipos definidos por la OMS 2008: DLBCL no especificado de otra manera, linfoma de linfocitos B grandes rico en linfocitos T/histiocitos, DLBCL asociado con inflamación crónica, DLBCL positivo a virus de Epstein-Barr (VEB) en edad avanzada; linfoma primario de linfocitos B grandes mediastínicos (tímicos); o transformación de linfoma folicular a DLBCL;
b) Enfermedad resistente a la quimioterapia, definida como una o más de enfermedad estable (la duración de la enfermedad estable debe ser <12 meses) o enfermedad progresiva como la mejor respuesta a la pauta que contiene quimioterapia más reciente; y progresión o recaída de la enfermedad <12 meses de SCT autólogo previo;
c) los sujetos deben haber recibido un tratamiento previo adecuado que incluya, como mínimo, anticuerpos monoclonales anti-CD20, a menos que el investigador determine que el tumor es CD20 negativo y una pauta de quimioterapia que contiene antraciclina;
d) los sujetos con FL transformado deben haber recibido quimioterapia previa para el linfoma folicular y posteriormente tener enfermedad quimiorresistente después de la transformación a DLBCL;
e) al menos 1 lesión medible de acuerdo con los Criterios de Respuesta del IWG revisados para linfoma maligno; las lesiones que se han irradiado previamente se considerarán medibles solo si se ha documentado la progresión después de completarse la radioterapia;
f) Rm del cerebro que no muestra evidencia de linfoma del sistema nervioso central;
g) deben haber transcurrido más de o igual a 2 semanas desde cualquier radioterapia previa o tratamiento sistémico en el momento en que se planifique que el sujeto reciba leucocitaféresis;
h) las toxicidades debidas al tratamiento previo deben ser estables o recuperarse a <grado 1 (excepto las toxicidades clínicamente no significativas, tales como alopecia);
i) los sujetos deben tener 18 años o más;
j) estado funcional del grupo oncológico cooperativo oriental (ECOG) de 0 o 1
k) los sujetos deben tener los siguientes valores de laboratorio: i) ANC >1000/ul; ii) recuento de plaquetas >50000/ul; iii) función renal, hepática y cardíaca adecuada definida como creatinina sérica <1,5 mg/dl, ALT/AST sérica <2,5 LSN y bilirrubina total <1,5 mg/dl, excepto en sujetos con síndrome de Gilbert; y iv) fracción de expulsión cardíaca >50 % y sin evidencia de derrame pericárdico según lo determinado por una ecocardiografía; y
l) las mujeres con capacidad gestante deben tener una prueba de embarazo en suero u orina negativa.
Los criterios de exclusión para los sujetos incluyen:
a) Antecedentes de neoplasia maligna que no sea cáncer o carcinoma de piel que no sea melanoma in situ (por ejemplo, de cuello uterino, vejiga, mama) o linfoma folicular a menos que haya estado sin enfermedad durante al menos 3 años;
b) Antecedentes de transformación de Richter de CLL;
c) Trasplante autólogo de células madre en las 6 semanas desde el consentimiento informado;
d) Antecedentes de trasplante alogénico de células madre;
e) Tratamiento dirigida a CD19 previo con la excepción de sujetos que recibieron KTE-C19 en este estudio y son elegibles para un nuevo tratamiento;
f) Tratamiento previo con receptores quiméricos de antígeno u otro tratamiento con linfocitos T genomanipulados;
g) Antecedentes de reacción de hipersensibilidad inmediata grave atribuida a aminoglucósidos;
h) Infección activa clínicamente significativa (por ejemplo, UTI simple, faringitis bacteriana permitida) o que actualmente recibe antibióticos por vía intravenosa o ha recibido antibióticos por vía intravenosa en los 7 días anteriores a la inscripción (se permiten antibióticos de profilaxis, antivíricos y antifúngicos);
i) Antecedentes conocidos de infección por VIH o hepatitis B (HBsAg positivo) o virus de la hepatitis C (anti-VHC positivo);
j) Sujetos con células malignas detectables en líquido cefalorraquídeo o metástasis cerebrales, o con antecedentes de células malignas en líquido cefalorraquídeo o metástasis cerebrales;
k) Antecedentes de un trastorno convulsivo, isquemia/hemorragia cerebrovascular, demencia, enfermedad cerebelosa o cualquier enfermedad autoinmunitaria con afectación del SNC;
l) Sujetos con afectación de linfoma cardíaco auricular o ventricular;
m) Necesidad de tratamiento urgente por efectos de masa tumoral, tales como obstrucción intestinal o compresión de vasos sanguíneos;
n) Inmunodeficiencia primaria;
o) Cualquier afección médica que pueda interferir con la evaluación de la seguridad o la eficacia del tratamiento del estudio;
p) Necesidad actual o esperada de tratamiento con corticoesteroides sistémicos; se permiten corticoesteroides tópicos e inhalados en dosis convencionales y sustitución fisiológica para sujetos con insuficiencia suprarrenal; no se permiten dosis de corticoides mayores de o iguales a 5 mg/día de prednisona o dosis equivalentes de otros corticoides;
q) Antecedentes de reacción de hipersensibilidad inmediata grave a cualquiera de los agentes usados en este estudio;
r) Vacuna viva <6 semanas antes del inicio de la pauta de acondicionamiento;
s) Mujeres con capacidad gestante que estén embarazadas o amamantando, debido a los efectos potencialmente peligrosos de la quimioterapia preparatoria sobre el feto o el lactante; las mujeres que se han sometido a esterilización quirúrgica o que han sido posmenopáusicas durante al menos 2 años no se consideran con capacidad gestante;
t) Sujetos de ambos sexos que no estén dispuestos a practicar el control de la natalidad desde el momento del consentimiento hasta los 6 meses posteriores a la finalización de KTE-C19; y
u) A criterio de los investigadores, el sujeto tiene poca probabilidad de completar todas las visitas o procedimientos del estudio requeridos por el protocolo, incluyendo las visitas de seguimiento, o de cumplir los requisitos del estudio para participar.
Además, el análisis de biomarcadores se realizará en muestras de sangre y tumor para evaluar marcadores predictivos y farmacodinámicos para KTE-C19. También pueden evaluarse marcadores de pronóstico en el NHL agresivo. Las muestras de leucocitaféresis de referencia y de KTE-C19 final se almacenarán en un banco y pueden analizarse mediante inmunofenotipado y/o perfiles de expresión génica. Las muestras restantes pueden almacenarse para futuros análisis exploratorios de ADN, ARN o marcadores proteínicos. El tejido tumoral archivado se recogerá para la revisión anatomopatológica central. El análisis adicional puede incluir la expresión de CD19, perfiles de expresión génica y análisis de alteraciones del ADN. Las muestras tumorales restantes pueden almacenarse para futuros análisis exploratorios de ADN, ARN o marcadores proteínicos.
Protocolo de tratamiento
Programa
Los leucocitos se obtendrán de sujetos mediante leucocitaféresis (aféresis de 12-15 litros con el objetivo de alcanzar aproximadamente 5-10 x 109 leucocitos monomorfonucleares para la fabricación de KTE-C19. El producto sometido a leucocitaféresis de cada sujeto se procesará para enriquecer la fracción de PBMC que contiene linfocitos T. Luego, los linfocitos T se estimulan para que se expandan y se transducen con un vector retrovírico para introducir el gen de CAR. Luego, los linfocitos T se expanden y se crioconservan para generar el producto de investigación. Después de completar la pauta de quimioterapia de acondicionamiento de cada sujeto, los sujetos recibirán su respectiva infusión de KTE-C19.
Tratamiento del estudio
Los sujetos recibirán una pauta de acondicionamiento no mieloablativo que consiste en ciclofosfamida y fludarabina para inducir el agotamiento de los linfocitos y crear un entorno óptimo para la expansión de KTE-C19 in vivo. Los sujetos iniciarán la quimioterapia de acondicionamiento con ciclofosfamida y fludarabina empezando el día -5 (o el día -7 para la cohorte B) hasta el día -1. La pauta de quimioterapia de acondicionamiento de 5 días se administrará en un contexto ambulatorio. La pauta de quimioterapia de acondicionamiento de 7 días puede administrarse como una pauta ambulatoria u hospitalaria según el criterio del investigador.
Fase 1:
En las cohortes A1 y A2, los sujetos recibirán la siguiente pauta de quimioterapia de acondicionamiento de 5 días: hidratación IV con 1 l de solución salina de NaCl al 0,9 % antes de la ciclofosfamida el día de la infusión; seguida de ciclofosfamida 500 mg/m2 IV durante 60 minutos el día -5, el día -4 y el día -3; seguida de fludarabina 30 mg/m2 IV durante 30 minutos el día -5, el día -4 y el día -3; seguida de 1 l adicional de solución salina de NaCl al 0,9 % al finalizar la infusión de fludarabina (figura 3). En determinados casos, puede añadirse mesna (2-mercaptoetanosulfonato de sodio) según las directrices institucionales.
En la cohorte A3, los sujetos recibirán la siguiente pauta de quimioterapia de 5 días: hidratación IV con 1 l de solución salina de NaCl al 0,9 % antes de la ciclofosfamida el día de la infusión; seguida de ciclofosfamida 300 mg/m2 IV durante 60 minutos el día -5, el día -4 y el día -3; seguida de fludarabina 30 mg/m2 IV durante 30 minutos el día -5, el día -4 y el día -3; seguida de 1 l adicional de solución salina de NaCl al 0,9 % al finalizar la infusión de fludarabina. En determinados casos, puede añadirse mesna según las directrices institucionales.
Para los sujetos incluidos en las cohortes A1, A2 o A3, el día -2 y el día -1 serán días de descanso antes de la infusión de KTE-C19 el día 0.
En las cohortes B1 y B2, los sujetos recibirán la siguiente pauta de quimioterapia de 7 días: hidratación IV con solución salina de NaCl al 0,9 %, recomendada a 2,6 ml/kg/h (máximo 200 ml/h), administrada como una infusión continua comenzando 11 horas antes de la infusión de ciclofosfamida y continuando la hidratación hasta 24 horas después de la última infusión de ciclofosfamida; ciclofosfamida 30 mg/kg (1110 mg/m2) IV administrada los días -7 y -6, infundida durante 120 minutos; seguida de fludarabina 25 mg/m2 IV administrada el día -5, día -4, día -3, día -2 y día -1, infundida durante 30 minutos. En determinados casos, puede añadirse mesna según las directrices institucionales.
Para los sujetos incluidos en la cohorte B1 o B2, no habrá días de descanso entre el último día de quimioterapia (día -1) y la infusión de KTE-C19 el día 0.
Para KTE-C19, los sujetos de las cohortes A1, A3 o B1 recibirán tratamiento con KTE-C19 que consiste en una sola infusión de linfocitos T autólogos transducidos con CAR administrados por vía intravenosa a una dosis diana de 2 x 106 linfocitos T-CAR anti-CD19/kg (±20 %; de 1,6 x 106 linfocitos T-CAR anti-CD19/kg a 2,4 x 106 linfocitos T-CAR anti-CD19/kg). Puede administrarse una dosis mínima de 1 x 106 de linfocitos T-CAR anti-CD19/kg. Para sujetos que pesan más de 100 kg, se administrará una dosis plana máxima de 2 x 108 linfocitos T-CAR anti-CD19.
Los sujetos de las cohortes A2 o B2 recibirán tratamiento con KTE-C19 que consiste en una sola infusión de linfocitos T autólogos transducidos con CAR administrados por vía intravenosa a una dosis diana de 1 x 106 linfocitos T-CAR anti-CD19/kg (±20 %; de 0,8 x 106 linfocitos T-CAR anti-CD19/kg a 1,2 x 106 linfocitos T-CAR anti-CD19/kg). Puede administrarse una dosis mínima de 0,5 x 106 de linfocitos T-CAR anti-CD19/kg. Para sujetos que pesan más de 100 kg, se administrará una dosis plana máxima de 1 x 108 linfocitos T-CAR anti-CD19. Fase 2:
Una pauta de KTE-C19 determinada por el SRT como segura en la fase 1 se pasará a la parte de la fase 2 del estudio.
Retratamiento
Los sujetos que consiguieron una RP o RC pueden recibir un segundo ciclo de quimioterapia de acondicionamiento y KTE-C19 si su enfermedad progresa posteriormente (y no se sabe que la recaída sea de células malignas CD19). Para ser elegible para un segundo ciclo de tratamiento, los sujetos deben reevaluarse y continuar cumpliendo los criterios de elegibilidad del estudio original, con la excepción de los criterios de exclusión relacionados con el tratamiento previo con CAR, y no deben haber recibido quimioterapia posterior para el tratamiento del linfoma. Además, cualquier toxicidad relacionada con fludarabina o ciclofosfamida debe ser estable y resolverse a menos de grado 1 antes del retratamiento, con la excepción de la alopecia. Puede producirse un máximo de 1 ciclo de retratamiento por sujeto. Los sujetos incluidos en la fase 2 recibirán la misma pauta de KTE-C19. Los sujetos incluidos en la fase 1 recibirán la pauta de KTE-C19 seleccionada para la fase 2. Si aún no se ha seleccionado la pauta de la fase 2, los sujetos recibirán la última pauta de KTE-C19 que el SRT determinó que era segura.
Los sujetos que experimenten una DLT en la fase 1 o una toxicidad comparable en la fase 2 no serán elegibles para un nuevo tratamiento. Además, si un sujeto tiene un anticuerpo neutralizante conocido, el sujeto no será elegible para un nuevo tratamiento. Sin embargo, si se desarrolla un anticuerpo HAMA o HABA no neutralizante, los sujetos pueden volver a tratarse si cumplen los criterios de elegibilidad.
Evaluación posterior al tratamiento
Después de completar la infusión de KTE-C19 y recibir el alta del hospital (normalmente el día 8), se realizará un seguimiento de todos los sujetos en el período de evaluación posterior al tratamiento. Contando desde el día 0 (infusión de KTE-C19), los sujetos regresarán a la clínica en la semana 2, semana 4 (±3 días), mes 2 (±1 semana) y mes 3 (±1 semana). La evaluación puede incluir MMSE (minievaluación del estado mental); TEP-TAC para evaluación de enfermedades; exploración física y constantes vitales; analíticas, incluyendo el panel de química, CBC con fórmula leucocitaria, prueba de embarazo de p-HCG (suero u orina) en todas las mujeres con capacidad gestante, anticuerpos anti-KTE-C19, subconjuntos de linfocitos, niveles de citocinas, linfocitos T-CAR anti-CD19 y análisis de retrovirus competente para la replicación (RCR); notificación de acontecimientos adversos/adversos graves; documentación de medicamentos concomitantes; y recogida de una o más muestras tumorales frescas para los sujetos que firmaron la parte opcional del consentimiento.
La presencia, expansión, la persistencia e inmunofenotipo de los linfocitos T-CAR anti-CD 19 transducidos se controlarán en la sangre principalmente mediante análisis de PCR, complementado por citometría de flujo. También se evaluarán los niveles de citocinas séricas en la sangre. Las siguientes citocinas pueden incluirse en el panel: citocinas proinflamatorias e inmunomoduladoras IL-6, TNFα, IL-8, IL-1, IL-2, GM-CSF, IL-15, IL-17a, If Ny, IL-12p40/p70; moléculas inmunoefectoras granzima A, B, perforina, sFasL; correlatos de CRP de respuesta de fase aguda, SAA y quimiocinas MIP-1a, MIP-3a, IP-10, eotaxina, MCP-4. Como KTE-C19 comprende linfocitos T transducidos con vector retrovírico, también se controlará la presencia de retrovirus competentes para la replicación (RCR) en la sangre de los pacientes tratados.
Si el sujeto es elegible para el retratamiento con KTE-C19, la última exploración antes del retratamiento se considerará el valor de referencia a los efectos de evaluar la respuesta al retratamiento.
En cualquier momento durante el período de evaluación posterior al tratamiento, si un sujeto no respondió al tratamiento (es decir, RC o RP) o progresa después de una respuesta, el sujeto proseguirá directamente a la visita del mes 3 y se hará un seguimiento de los desenlaces de la enfermedad en el período de seguimiento a largo plazo.
Se hará seguimiento de todos los sujetos en el período de seguimiento a largo plazo para la supervivencia y el estado de la enfermedad, cuando proceda. Los sujetos comenzarán el período de seguimiento a largo plazo después de haber completado la visita del mes 3 del período de evaluación posterior al tratamiento (ya sea que hayan respondido al tratamiento o hayan ido directamente a la visita del mes 3 debido a la progresión de la enfermedad). Contando desde el día 0 (infusión de KTE-C19), los sujetos regresarán a la clínica cada 3 meses (±2 semanas) hasta el mes 18; cada 6 meses (±1 mes) entre el mes 24 y el mes 60; y, a partir del año 6, el mes 72 (±3 meses), los sujetos volverán a la clínica 1 vez al año hasta 15 años. El siguiente procedimiento se completará en esta visita: exploración física; exploración por TEP-TAC; evaluación de enfermedades; analíticas, incluyendo CBC con fórmula leucocitaria, anticuerpos anti-KTE-C19, subconjuntos de linfocitos, linfocitos T-CAR anti-CD19 y análisis de RCR; notificación de acontecimientos adversos/adversos graves específicos (durante 24 meses o hasta la progresión de la enfermedad, lo que ocurra primero), incluyendo neurológicos, hematológicos, infecciones, trastornos autoinmunitarios y neoplasias malignas secundarios hasta la progresión de la enfermedad; documentación de medicación concomitante dirigida (durante dos años después de la progresión de la enfermedad), incluyendo gammaglobulina, medicamentos inmunosupresores, antiinfecciosos, vacunas y cualquier tratamiento para el tratamiento de enfermedades progresivas.
La evaluación incluirá exploraciones por TEP-TAC iniciales del cuello, el pecho, el abdomen y la pelvis, junto con las imágenes apropiadas de todos los demás sitios de la enfermedad. Los sujetos tendrán su primera evaluación del tumor por TEP-TAC planificada después de la infusión de KTE-C19, 4 semanas después de la infusión de KTE-C19 y a intervalos regulares como se describe anteriormente.
Se realizará un aspirado de médula ósea y una biopsia en sujetos que se están evaluando para RC. Según los Criterios de Respuesta de IWG revisados para linfoma maligno, debe realizarse un aspirado de médula ósea y una biopsia solo cuando el sujeto tenía afectación de la médula ósea con linfoma antes del tratamiento o si nuevas anomalías en el hemograma periférico o frotis de sangre general la sospecha clínica de afectación de la médula ósea con linfoma después del tratamiento. El aspirado de médula ósea y la biopsia no deben mostrar evidencia de enfermedad por morfología, o si es indeterminada por morfología, debe ser negativo por inmunohistoquímica para asignar una RC al tratamiento.
Criterios de valoración del estudio
Primario
El criterio principal de valoración para la fase 1 es la incidencia de acontecimientos adversos definidos como toxicidades limitantes de la dosis (DLT). El criterio principal de valoración para la fase 2 es la tasa de respuesta objetiva (TRO), definida como la incidencia de una respuesta completa o una respuesta parcial según los Criterios de Respuesta de IWG revisados para linfoma maligno según lo determinado por los investigadores del estudio. Todos los sujetos que no cumplan los criterios para una respuesta objetiva para la fecha tope del análisis se considerará que no responden.
Secundario
Se resumirá la tasa de respuesta objetiva entre los sujetos en la fase 1. La tasa de respuesta objetiva entre los sujetos en la fase 2 se determinará por el IRRC, que se define como la incidencia de una respuesta completa o una respuesta parcial según los Criterios de Respuesta de IWG revisados para linfoma maligno según lo determinado por el IRRC. Todos los sujetos que no cumplan los criterios para una respuesta objetiva para la fecha tope para la inclusión de datos del análisis se considerará que no responden. La duración de la respuesta (DDR) para sujetos que experimentan una respuesta objetiva definida como la fecha de su primera respuesta objetiva que posteriormente se confirma como progresión de la enfermedad según los Criterios de Respuesta de IWG revisados para linfoma maligno o muerte, independientemente de la causa. Los sujetos que no cumplan los criterios de progresión o muerte para la fecha tope para la inclusión de datos del análisis serán censurados en la última fecha evaluable de evaluación de la enfermedad y su respuesta se anotará como en curso. Toxicidad limitante de la dosis (DLT)
La toxicidad limitante de la dosis se define como los siguientes acontecimientos relacionados con KTE-C19 que aparecen dentro de los primeros 30 días después de la infusión de KTE-C19:
a) Neutropenia de grado 4 que dura más de 21 días desde el día de la transferencia celular
b) Trombocitopenia de grado 4 que dura más de 35 días desde el día de la transferencia celular
c) Cualquier acontecimiento adverso relacionado con KTE-C19 que requiera intubación, incluyendo confusión de grado 4 que requiere intubación para la protección de las vías respiratorias, se considera una DLT. d) Todas las demás toxicidades de grado 3 que duren más de 3 días y todas las toxicidades de grado 4, con la excepción de las siguientes afecciones que no se consideran DLT: i) Afasia/disfasia o confusión/alteración cognitiva que se resuelve a grado 1 o menos en 2 semanas y al valor de referencia en 4 semanas; ii) Fiebre grado 3; iii) Mielosupresión (incluye hemorragia en el contexto de un recuento de plaquetas inferior a 50 x 109/l e infecciones bacterianas documentadas en el contexto de neutropenia), definido como linfopenia, disminución de la hemoglobina, neutropenia y trombocitopenia a menos que la neutropenia y la trombocitopenia cumplan con la definición de DLT descrita anteriormente; iv) Reacciones de hipersensibilidad inmediata que se producen en las 2 horas posteriores a la infusión de las células (relacionadas con la infusión de las células) que son reversibles a un grado 2 o menos en las 24 horas posteriores a la administración de las células con tratamiento convencional; y v) Hipogammaglobulinemia de grado 3 o 4.
El CRS se clasificará de acuerdo con un sistema de clasificación revisado (Lee 2014). Los acontecimientos adversos atribuidos a CRS se asignarán a la evaluación de clasificación general de CRS para la determinación de DLT.
Durante la fase 1, aproximadamente 6-24 sujetos con DLBCL, PMBCL o TFL se incluirán para evaluar la seguridad de las pautas de KTE-C19. Los sujetos en cada cohorte se evaluarán para DLT en los primeros 30 días posteriores a la finalización de su respectiva infusión de KTE-C19. Si la incidencia de DLT en el sujeto es <1 de los 6 sujetos, se puede explorar la cohorte B1 o el estudio puede progresar a la fase 2 del ensayo. Esta decisión se basará en el beneficio/riesgo global y en los datos de biomarcadores disponibles.
Sin embargo, si 2 de los 6 sujetos incluidos presentan DLT definida por protocolo durante la fase 1, el SRT puede recomendar incluir 2 conjuntos adicionales de 3 sujetos (hasta 12 sujetos en total) a la misma dosis que se administró en los primeros 6 sujetos. En este escenario, la progresión a una cohorte adicional o a la fase 2 del estudio procederá si <2 de los primeros 9 o si <3 de los 12 sujetos presentan DLT.
Si la incidencia de DLT en los sujetos es >2/6, >3/9 o >4/12 sujetos, pueden explorarse otras pautas de KTE-C19 en 6-12 sujetos adicionales (figura 3). Se aplican las mismas reglas de DLT que anteriormente.
EJEMPLO 4
Los productos de linfocitos T se generaron por transducción de linfocitos autólogos con un retrovirus g-murino que porta un gen de construcción de CAR anti-CD19, seguido de expansión para conseguir la dosis de células deseada. Las características del producto de linfocitos T-CAR anti-CD19 se evaluaron en el momento de la recogida o después del cocultivo con células CD19+, por citometría de flujo y análisis múltiple de citocinas de sobrenadantes de cocultivo. El cocultivo de linfocitos T-CAR para la caracterización del producto se realizó con células K562-CD19 o células de control K562-NGFR, a una relación de efector a diana de 1:1. El tiempo de incubación convencional fue de 18 horas. Los pacientes con neoplasias malignas de linfocitos B recidivantes/resistentes se acondicionaron con ciclofosfamida y fludarabina, luego se les dosificó linfocitos T-CAR anti-CD19.
Los niveles de citocinas y quimiocinas se midieron usando ensayos múltiples Luminex® xMAP® de EMDmillipore. La adquisición y el análisis de los datos se realizaron usando un instrumento Luminex 200™ y el programa informático de análisis de datos xPONENT® 3.1. Para IL-7, se usó un kit de ELISA HS Quantikine de IL-7 humana (HS750) con muestras procesadas puras según las directrices del fabricante. La frecuencia de linfocitos T-CAR en la circulación se midió mediante un análisis de PCR cuantitativo. A los pacientes se les administró una pauta de preacondicionamiento que comprende 300 mg/m2 de ciclofosfamida los días -5 y -4, y 30 mg/m2 de fludarabina en los días -5, -4 y -3. El suero de los pacientes se recogió antes de la administración de ciclofosfamida y fludarabina entre los días -12 y -5 ("antes"), inmediatamente antes de la administración de los linfocitos T-CAR el día 0 ("después") y en días seleccionados después de la administración de los linfocitos T-CAR hasta el día 18. Las concentraciones séricas de GF-CSF, IL-2, MCP-1, IL-6, IL-10, MCP-4, CRP, IFN gamma, granzima A, IL-15, IL-5, granzima B, IL-8, IP-10, MIP-1 b, PlGf , iL-16, TARC, eotaxina-3, sICAM-1, sVCAM-1 y SAA se midieron antes y después del acondicionamiento y en días seleccionados después de la administración de los linfocitos T-CAR, como se muestra en la figura 6. Se encontró que la concentración de determinadas citocinas aumentaba en el suero de pacientes después del acondicionamiento con 300 mg/m2 de ciclofosfamida y 30 mg/m2 de fludarabina (figura 7A-7I y 18A-18E). En particular, las concentraciones de IL-15, IL-7, PLGF, CRP y MCP-1 aumentaron significativamente después del condicionamiento con ciclofosfamida y fludarabina (figuras 7A-7D, 7G, 18A y 18C-18E). También se observaron aumentos en las concentraciones de IL-5, IL-10, IP-10 y s-ICAM1 (figura 7E-7F, 7H-7I y 18B). Por el contrario, se encontró que la perforina disminuía después del acondicionamiento con ciclofosfamida y fludarabina (figura 18F). Se observó que las concentraciones séricas de otros diversos analitos aumentaron o disminuyeron después del preacondicionamiento, como se muestra en la figura 18G. Se trataron pacientes adicionales y los resultados se exponen en las figuras 11-17. Además, se encontró que los niveles séricos aumentados de IL-15 (figura 19A) e IP-10 (figura 19B) y los niveles séricos disminuidos de perforina (figura 19C) después del preacondicionamiento se correlacionan significativamente con una respuesta objetiva positiva en pacientes tratados con linfocitos T-CAR.
Después de la infusión de linfocitos T-CAR, los linfocitos en la sangre periférica (PBL) y los sueros se evaluaron mediante citometría de flujo y análisis múltiple de citocinas, respectivamente. La producción de citocinas antes de la infusión de linfocitos T-CAR anti-CD19 se comparó con un control negativo K562-NGFR (figura 8). La concentración de T1, T2 y citocinas homeostáticas inmunitarias GM-CSF, IL-2, IFN gamma, IL-5, IL-4 e IL-13, y citocinas proinflamatorias y quimiocinas TNF alfa, IL-6, granzima B, MIP-1 b (beta), MIP-1a (alfa) y sCD137 fue más alta en las muestras de linfocitos T-CAR anti-CD19 con respecto a los controles negativos (figuras 8A-8L). Además, la interacción del antígeno diana con los linfocitos T de producto antes de la infusión da lugar a la regulación por aumento de los receptores que pueden modular su actividad, tales como CD107a (alfa), 401BB y PD-1 (figuras 9A-9C).
Se realizó citometría de flujo de múltiples colores en un BD FACSCanto II utilizando el programa informático FlowJo para la adquisición y el análisis de los datos. Un proceso de fabricación más corto produjo productos de linfocitos T-CAR con una mayor representación de linfocitos T CD4+, vírgenes y de memoria central (figura 10). Después de la infusión, los linfocitos T-CAR muestran una composición de subconjuntos diversificada que comprende principalmente linfocitos T diferenciados y algunos linfocitos T de memoria central o vírgenes (figura 10).
Los linfocitos T-CAR CD28zeta anti-CD19 son clínicamente eficaces e inducen respuestas duraderas tanto en linfoma como en leucemia. Pueden producirse respuestas clínicas duraderas sin linfocitos T-CAR de larga duración en circulación, lo que permite la recuperación de linfocitos B normales. El acondicionamiento con ciclofosfamida y fludarabina modifica el entorno inmunitario mediante la inducción de moléculas que pueden favorecer la expansión homeostática, activación y tráfico de linfocitos T. El tratamiento con linfocitos T-CAR da como resultado una elevación rápida y la posterior resolución de las citocinas y quimiocinas circulantes en las tres semanas después del tratamiento.
EJEMPLO 5
Se realizará un estudio para someter a prueba la seguridad y eficacia de tratar sujetos con una pauta de acondicionamiento no mieloablativo que consiste en dosis de ciclofosfamida mayores o iguales a 300 mg/m2 y fludarabina mayores o iguales a 30 mg/m2. Las dosis de estos agentes quimioterápicos de acondicionamiento se usarán para inducir aún más el agotamiento de los linfocitos y crear un entorno más óptimo para la expansión de KTE-C19 in vivo.
Los sujetos incluidos se someterán a leucocitaféresis para obtener PBMC para la producción de linfocitos T-CAR anti-CD19. Luego, los sujetos recibirán una quimioterapia de acondicionamiento que comprende 500 mg/m2/día de ciclofosfamida y 60 mg/m2/día de fludarabina administradas del día -5 al día -3. Luego, los sujetos recibirán una dosis de linfocitos T-CAR anti-CD19/kg por vía IV el día 0. Como dosis inicial, los sujetos pueden recibir 2 x 106 linfocitos T-CAR anti-CD19/kg (±20 %), que luego puede aumentarse o disminuirse dependiendo de la sensibilidad del sujeto.
Después de la quimioterapia de acondicionamiento y la administración de los linfocitos T-CAR anti-CD19, se controlará a los sujetos en cuanto a los efectos adversos, niveles séricos de citocinas, recuento de linfocitos T y respuesta de la enfermedad. Los niveles séricos de diversas citocinas, quimiocinas, efectores, marcadores de inflamación y moléculas de adhesión, incluyendo, pero sin limitación, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-15, IL-16, IL-21, MCP-1, IP-10, PLGF, sICAM-1, CRP, VEGF, VEGF-C, VEGF-D, sVCAM-1, MIP-1 p, FGF2, IL-1 b, eotaxina, GM-CSF, IFN gamma, IL-12p40, MDC, IL-12p70, IL-13, IL-17A, MIP-1a, TNFa, TNFb, granzima A, granzima B, perforina, SAA, MCP-4 y TARC, se medirán antes y después del acondicionamiento para determinar el efecto de la quimioterapia de acondicionamiento. Se recogerá suero antes o después de la administración de cada uno de ciclofosfamida, fludarabina y linfocitos T-CAR anti-CD19, y todos los niveles se compararán con los niveles previos a la quimioterapia de acondicionamiento. La respuesta de la enfermedad se comparará con el perfil de citocinas de cada paciente después del condicionamiento para identificar cualquier correlación entre la sensibilidad de la enfermedad y los niveles de una o más citocinas después del condicionamiento.
La aparición de efectos adversos se controlará de cerca para determinar la dosis máxima tolerable de ciclofosfamida y fludarabina. Los efectos adversos pueden controlarse médicamente según corresponda. Las dosis de una o ambas de ciclofosfamida y fludarabina pueden aumentarse o disminuirse para mejorar la eficacia clínica y limitar los efectos adversos. Cualquier sujeto que muestre una respuesta parcial inicial seguida de progresión de la enfermedad puede recibir un segundo tratamiento con el mismo nivel o un nivel diferente de ciclofosfamida y/o fludarabina.
EJEMPLO 6
Se realizará un estudio para predecir la probabilidad de respuesta de un paciente al tratamiento con linfocitos T en función de la sensibilidad de las citocinas al preacondicionamiento con uno o más agentes de preacondicionamiento. Los pacientes que padezcan un cáncer que sea adecuado para el tratamiento con linfocitos T se seleccionarán para este estudio.
Se recogerá sangre del paciente antes de cualquier intervención. Luego, se preacondicionará a los pacientes administrando al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento de acuerdo con la presente invención. Por ejemplo, los pacientes pueden tratarse con 300 o 500 mg/m2/día de ciclofosfamida durante dos o tres días y 30 o 60 mg/m2/día de fludarabina durante tres, cuatro o cinco días antes de un tratamiento con linfocitos T. Luego se volverá a recoger sangre del paciente después del preacondicionamiento e inmediatamente antes de, por ejemplo, el mismo día que, la administración del tratamiento con linfocitos T. Luego, a los pacientes se les administrará un tratamiento con linfocitos T y se controlará la sensibilidad de la enfermedad, por ejemplo, enfermedad progresiva, respuesta parcial o respuesta completa.
La sangre recogida antes y después del preacondicionamiento se analizará para determinar los niveles séricos de diversas citocinas, incluyendo, pero sin limitación, IL-15, IL-7 y al menos una citocina adicional seleccionada del grupo que consiste en MCP-1, CRP, PLGF, IP-10 y cualquier combinación de las mismas. El factor de cambio en cada citocina se registrará para cada paciente y se comparará con la sensibilidad global de la enfermedad. Se llevarán a cabo estudios correlativos para determinar si el aumento o la disminución de una cualquiera o más citocinas predice la sensibilidad global de la enfermedad.
Habiendo descrito de manera general la presente invención, se puede obtener una mayor comprensión por referencia a los ejemplos proporcionados en el presente documento.

Claims (17)

REIVINDICACIONES
1. Uno o más agentes de preacondicionamiento para su uso en un método para tratar un cáncer en un paciente adecuado para un tratamiento con linfocitos T, comprendiendo el método (i) administrar al paciente uno o más agentes de preacondicionamiento que pueden aumentar el nivel sérico de interleucina-15 ("IL-15"), interleucina-7 ("IL-7") y al menos una citocina adicional seleccionada del grupo que consiste en proteína quimiotáctica de monocitos 1 ("MCP-1"), proteína C-reactiva ("CRP"), factor de crecimiento placentario ("PLGF"), proteína 10 inducida ("IP-10") por interferón gamma, y cualquier combinación de las mismas y (ii) administrar un tratamiento con linfocitos T cuando el paciente presenta un nivel sérico elevado de IL-15, IL-7 y la al menos una citocina adicional.
2. El uno o más agentes de preacondicionamiento para el uso de la reivindicación 1, en donde
(a) el nivel sérico de IL-7 en el paciente se aumenta al menos 2 veces después de la administración en comparación con el nivel sérico de IL-7 antes de la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento;
(b) el nivel sérico de IL-15 en el paciente se aumenta al menos 5 veces después de la administración en comparación con el nivel sérico de IL-15 antes de la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento;
(c) el nivel sérico de MCP-1 en el paciente se aumenta al menos 1,5 veces después de la administración en comparación con el nivel sérico de MCP-1 antes de la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento;
(d) el nivel sérico de PLGF en el paciente se aumenta al menos 1,5 veces después de la administración en comparación con el nivel sérico de PLGF antes de la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento;
(e) el nivel sérico de CRP en el paciente se aumenta al menos 1,5 veces después de la administración en comparación con el nivel sérico de CRP antes de la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento; y/o
(f) el nivel sérico de IP-10 en el paciente se aumenta al menos 2 veces después de la administración en comparación con el nivel sérico de IP-10 antes de la administración del uno o más agentes de preacondicionamiento.
3. El uno o más agentes de preacondicionamiento para el uso de la reivindicación 1 o reivindicación 2, en donde los agentes de preacondicionamiento aumentan aún más el nivel sérico de interleucina 10 ("IL-10"), interleucina 5 ("IL-5"), interleucina 8 ("IL-8"), molécula de adhesión intercelular soluble 1 ("sICAM-1"), molécula de adhesión vascular soluble 1 ("sVCAM-1") o cualquier combinación de las mismas en el paciente.
4. El uno o más agentes de preacondicionamiento para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el uno o más agentes de preacondicionamiento comprenden un agente alquilante seleccionado del grupo que consiste en melfalán, clorambucilo, ciclofosfamida, mecloretamina, clormetina (HN2), uramustina, mostaza de uracilo, melfalán, clorambucilo, ifosfamida, bendamustina, carmustina, lomustina, estreptozocina, sulfonatos de alquilo, busulfán, tiotepa o sus análogos, y cualquier combinación de los mismos.
5. El uno o más agentes de preacondicionamiento para el uso de la reivindicación 4, en donde uno o más agentes de preacondicionamiento comprenden un agente de preacondicionamiento basado en platino seleccionado del grupo que consiste en platino, cisplatino, carboplatino, nedaplatino, oxaliplatino, satraplatino, tetranitrato de triplatino, procarbazina, altretamina, triazenos, dacarbazina, mitozolomida, temozolomida, dacarbazina, temozolomida y cualquier combinación de los mismos.
6. El uno o más agentes de preacondicionamiento para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el uno o más agentes de preacondicionamiento comprenden ciclofosfamida.
7. El uno o más agentes de preacondicionamiento para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde el uno o más agentes de preacondicionamiento comprenden un análogo de purina seleccionado del grupo que consiste en azatioprina, 6-mercaptopurina, mercaptopurina, tiopurinas, tioguanina, fludarabina, pentostatina, cladribina y cualquier combinación de los mismos.
8. El uno o más agentes de preacondicionamiento para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde el uno o más agentes de preacondicionamiento comprenden ciclofosfamida y fludarabina.
9. El uno o más agentes de preacondicionamiento para el uso de la reivindicación 8, en donde:
(i) se administra al sujeto una dosis de ciclofosfamida de 300 mg/m2/día a 2000 mg/m2/día;
(ii) se administra al sujeto una dosis de fludarabina de 20 mg/m2/día a 900 mg/m2/día; o
iii) tanto (i) como (ii).
10. El uno o más agentes de preacondicionamiento para el uso de la reivindicación 8, en donde:
(i) se administra al sujeto una dosis de ciclofosfamida de 350 mg/m2/día, 400 mg/m2/día, 450 mg/m2/día, 500 mg/m2/día, 550 mg/m2/día, 600 mg/m2/día, 650 mg/m2/día, 700 mg/m2/día, 800 mg/m2/día, 900 mg/m2/día o 1000 mg/m2/día;
(ii) se administra al sujeto una dosis de fludarabina de 35 mg/m2/día, 40 mg/m2/día, 45 mg/m2/día, 50 mg/m2/día, 55 mg/m2/día, 60 mg/m2/día, 65 mg/m2/día, 70 mg/m2/día, 75 mg/m2/día, 80 mg/m2/día, 85 mg/m2/día, 90 mg/m2/día, 95 mg/m2/día, 100 mg/m2/día, 200 mg/m2/día o 300 mg/m2/día; o
(iii) cualquier combinación de los mismos.
11. El uno o más agentes de preacondicionamiento para el uso de la reivindicación 8, en donde:
(i) se administra al sujeto una dosis de ciclofosfamida de 500 mg/m2/día y se administra al sujeto una dosis de fludarabina de 30 mg/m2/día; o
(ii) se administra al sujeto una dosis de ciclofosfamida de 900 mg/m2/día y se administra al sujeto una dosis de fludarabina de 25 mg/m2/día.
12. El uno o más agentes de preacondicionamiento para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, en donde se administra una dosis de ciclofosfamida diariamente durante tres días.
13. El uno o más agentes de preacondicionamiento para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12, en donde se administra una dosis de fludarabina diariamente durante al menos un día.
14. El uno o más agentes de preacondicionamiento para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, que comprende además administrar una o más dosis de IL-2.
15. El uno o más agentes de preacondicionamiento para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en donde el tratamiento con linfocitos T se selecciona del grupo que consiste en inmunoterapia con linfocitos oncoinfiltrantes (TIL), citoterapia con células autólogas, citoterapia con células autólogas genomanipuladas (''eACT''), trasplante alogénico de linfocitos T y cualquier combinación de las mismas, en donde, opcionalmente, la eACT comprende el tratamiento con células CAR genomanipuladas o la tratamiento con linfocitos TCR genomanipulados.
16. El uno o más agentes de preacondicionamiento para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en donde el tratamiento con linfocitos T comprende administrar linfocitos T-CAR genomanipulados a una dosis de 1 x 106 a 5 x 106 linfocitos T-CAR genomanipulados/kg.
17. El uno o más agentes de preacondicionamiento para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, en donde el cáncer se selecciona de cáncer de hueso, cáncer de páncreas, cáncer de piel, cáncer de cabeza o cuello, melanoma maligno cutáneo o intraocular, cáncer de útero, cáncer de ovario, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer testicular, cáncer de útero, carcinoma de las trompas de Falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma del cuello uterino, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, enfermedad de Hodgkin, linfoma no hodgkiniano, cáncer del esófago, cáncer del intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroidea, cáncer de la glándula paratiroidea, cáncer de la glándula suprarrenal, sarcoma de partes blandas, cáncer de la uretra, cáncer del pene, leucemia crónica o aguda, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica crónica, tumores sólidos infantiles, linfoma linfocítico, leucemia linfocítica crónica de linfocitos B/linfoma microcítico, leucemia prolinfocítica de linfocitos B, linfoma linfoplasmocitario (por ejemplo, macroglobulinemia de Waldenstrom), linfoma esplénico de la zona marginal, tricoleucemia, neoplasias de plasmocitos (por ejemplo, mieloma de plasmocitos o plasmocitoma), linfoma de linfocitos B de la zona marginal extraganglionar (por ejemplo, linfoma MALT), linfoma de linfocitos B de la zona marginal ganglionar, linfoma folicular, linfoma folicular transformado, linfoma cutáneo primario del centro folicular, linfoma de células del manto, linfoma difuso de linfocitos B grandes (''DLBCL''), DLBCL positivo para el virus de Epstein-Barr, granulomatosis linfomatoide, linfoma primario de linfocitos B grandes mediastínicos, linfoma intravascular de linfocitos B grandes, linfoma de linfocitos B grandes ALK+, linfoma plasmoblástico, linfoma de derrame primario, linfoma de linfocitos B grandes que surge en enfermedad de Castleman multicéntrica asociada con HHV8, linfoma/leucemia de Burkitt, leucemia prolinfocítica de linfocitos T, leucemia de linfocitos T granulares grandes, leucemia agresiva de linfocitos NK, leucemia/linfoma de linfocitos T en el adulto, linfoma de linfocitos NK/T extraganglionar, linfoma de linfocitos T asociado a enteropatía, linfoma hepatoesplénico de linfocitos T, linfoma blástico de linfocitos NK, micosis fungoide/síndrome de Sezary, linfoma anaplásico cutáneo primario de células grandes, papulosis linfomatoide, linfoma periférico de linfocitos T, linfoma angioinmunoblástico de linfocitos T, linfoma anaplásico de células grandes, leucemia/linfoma linfoblástico B, leucemia/linfoma linfoblástico B con anomalías genéticas recurrentes, leucemia/linfoma linfoblástico T y linfoma de Hodgkin, cáncer de la vejiga, cáncer del riñón o del uréter, carcinoma de la pelvis renal, neoplasia del sistema nervioso central (''SNC''), linfoma primario del SNC, angiogénesis tumoral, tumor del tronco vertebral, glioma del tronco encefálico, adenoma hipofisario, sarcoma de Kaposi, cáncer epidermoide, cáncer de células escamosas, linfoma de linfocitos T, cánceres inducidos por el medio ambiente, incluyendo aquellos inducidos por amianto.
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