CN107921064A - 用于t细胞疗法的诊断方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了在有此需要的患者中增加T细胞疗法功效的方法。本发明包括鉴定对T细胞疗法反应良好的患者或在T细胞疗法之前对患者进行调理以使患者对T细胞疗法反应良好的方法。调理包括在T细胞疗法之前施用一种或多种预调理剂，并在施用T细胞疗法之前鉴定生物标志物细胞因子。

Description

用于T细胞疗法的诊断方法
政府利益的声明
本发明是在与美国国家癌症研究所(NCI)(卫生和人类服务部门的机构)进行合作研究和开发协议的情况下完成的。美国政府拥有本发明中的某些权利。
发明领域
本发明涉及通过用一种或多种能够增加一种或多种表明T细胞疗法功效的细胞因子的血清水平的预调理剂预调理患者来鉴定适用于T细胞疗法的患者的方法或使受试者准备好进行T细胞疗法的方法。
发明背景
人类癌症在本质上是由发生基因转换或非遗传性转换而变成异常癌细胞的正常细胞组成。在这情况下，癌细胞开始表现不同于正常细胞所表现的蛋白质及其他抗原。人体先天免疫系统可将这些异常肿瘤抗原用来特异性靶向与杀死癌细胞。然而，癌细胞使用各种机制来阻止免疫细胞(例如T淋巴细胞与B淋巴细胞)成功靶向癌细胞。
人T细胞疗法依赖于富集或修饰的人T细胞靶向和杀死患者的癌细胞。已经开发了各种技术来富集能够靶向肿瘤抗原的天然存在的T细胞的浓度或者基因修饰的T细胞以特异性靶向已知的癌症抗原。已经证明这些疗法对肿瘤大小和患者存活有适度但有希望的效果。然而，已经证明难以预测给定的T细胞疗法是否对每位患者有效。因此，有必要鉴定会对T细胞疗法反应良好的患者，或者使对T细胞疗法反应良好的患者准备好。
发明概述
本公开内容提供了用于治疗适用于T细胞疗法的患者的癌症的方法，包括(i)向患者施用一种或多种预调理剂，其能够增加白介素-15(“IL-15”)、白介素-7(“IL-7”)和至少一种选自单核细胞趋化蛋白1(“MCP-1”)、C-反应蛋白(“CRP”)、胎盘生长因子(“PLGF”)、干扰素γ诱导的蛋白10(“IP-10”)及其任何组合的另外的细胞因子的血清水平，和(ii)当患者表现出增加的IL-15、IL-7和至少一种另外的细胞因子的血清水平时，施用T细胞疗法。
本公开内容进一步提供了用于治疗适用于T细胞疗法的患者的癌症的方法，包括向患者施用一种或多种预调理剂，其能够增加IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子的血清水平，其中当患者表现出增加的IL-15、IL-7和至少一种另外的细胞因子的血清水平时，用T细胞疗法治疗患者。
本公开还提供了用于治疗适用于T细胞疗法的患者的癌症的方法，包括(i)向患者施用一种或多种预调理剂，其能够增加IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子的血清水平，(ii)施用额外量的一种或多种预调理剂或施用有效量的IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子，和(iii)当患者表现出增加的IL-15、IL-7和至少一种另外的细胞因子的血清水平时，施用T细胞疗法。
本公开内容还提供了用于鉴定适用于T细胞疗法的患者的方法，包括向患者施用一种或多种预调理剂，其能够增加IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子的血清水平。
本公开内容还提供了用于鉴定适用于T细胞疗法的患者的方法，包括(i)向患者施用一种或多种预调理剂，其能够增加IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子的血清水平，并且(ii)当患者表现出增加的IL-15、IL-7和至少一种另外的细胞因子的血清水平时，施用T细胞疗法。
本公开内容还提供了用于鉴定适用于T细胞疗法的患者的方法，包括(i)向患者施用一种或多种预调理剂，其能够增加IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子的血清水平，(ii)施用额外量的一种或多种预调理剂或施用有效量的IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子，和(iii)当患者表现出增加的IL-15、IL-7和至少一种另外的细胞因子的血清水平时，施用T细胞疗法。
本发明还提供了用于增加IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子的血清水平以预调理需要T细胞疗法的患者的方法，包括向患者施用一种或多种预调理剂，其中当患者表现出增加的IL-15、IL-7和至少一种另外的细胞因子的血清水平时，用T细胞疗法治疗患者。
本公开内容还提供了用于增加IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子的血清水平以预调理需要T细胞疗法的患者的方法，包括(i)向患者施用一种或多种预调理剂，和(ii)当患者表现出增加的IL-15、IL-7和至少一种另外的细胞因子的血清水平时，施用T细胞疗法。
本公开内容还提供了用于增加IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子的血清水平以预调理需要T细胞疗法的患者的方法，包括(i)向患者施用一种或多种预调理剂，(ii)施用额外量的一种或多种预调理剂或施用有效量的IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子，和(iii)当患者表现出增加的IL-15、IL-7和至少一种另外的细胞因子的血清水平时，施用T细胞疗法。
在某些实施方案中，本文公开的方法进一步包括在施用一种或多种预调理剂之后测量IL-15、IL-7和至少一种细胞因子的血清水平。
在一个具体的实施方案中，本文公开的一种或多种预调理剂包含环磷酰胺和嘌呤类似物。在一个实施方案中，嘌呤类似物选自喷司他丁和氟达拉滨。
在某些实施方案中，T细胞疗法选自肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)免疫疗法，自体细胞疗法，工程改造的自体细胞疗法(eACT)，同种异体T细胞移植，及其任何组合。
附图简要说明
图1显示示例性CAR工程改造的T细胞及其构建的示意图。在此示例性CAR工程改造的T细胞中，靶结合结构域包含抗体衍生的scFv结构域，共刺激结构域衍生自CD28，并且必需活化结构域衍生自CD3ζ(zeta)。CAR载体构建体可以由病毒载体携带，然后合并到T细胞基因组中。CAR构建体然后可以被T细胞表达为跨膜蛋白。
图2A与2B显示在用抗CD-19 CAR+T细胞治疗后的患者疾病反应。患有B细胞恶性肿瘤的患者的最佳反应请参见图2A，以疾病症状中的变化百分比表示。虚线条表明完全反应(CR)。阴影条表明部分反应。白色条表明稳定疾病(SD)。黑色条表明疾病进展(PD)。图2B显示在CAR+T细胞输注后数月的患者疾病反应。实心黑色条表明部分反应(PR)，而灰色条表明完全反应(CR)。在标记“PD”的条中的断裂处表明患者经历疾病进展。倒三角表示T细胞输注时间。实心圆表明B细胞恢复时间。白色圆表明CAR+T细胞从患者血液中清除的时间。水平箭头表明患者的反应是持续的。
图3提供1期临床试验的样品图，其涉及确定用500mg/m2/天环磷酰胺、30mg/m2/天氟达拉滨、与2×106个抗-CD19 CAR+T细胞/kg治疗患者的安全性、功效、与剂量限制性毒性。
图4A至4H显示在用300mg/m2/天环磷酰胺及30mg/m2/天氟达拉滨调理前与后选定细胞因子分析物的血清水平。显示下列在施用300mg/m2环磷酰胺及30mg/m2氟达拉滨前与后的血清水平：白介素15(IL-15；图4A)、单核球化学吸引因子(chemoattractant)蛋白1(MCP-1；图4B)、γ诱导蛋白10(IP-10；图4C)、胎盘生长因子(PLGF；图4D)、可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1；图4E)、C-反应蛋白(CRP；图4F)、血管内皮生长因子D(VEGF-D；图4G)、和巨噬细胞炎症蛋白1β(MIP-1b；图4H)。施用前血清是在施用T细胞疗法前的第-12至-5天采集，而施用后血清是在第0天采集(图4A至4H)。
图5A至5H显示在用300mg/m2/天环磷酰胺与30mg/m2/天氟达拉滨调理后，在对后续T细胞疗法有反应或没有反应的患者中的选定细胞因子分析物的血清水平的倍数变化。显示有反应者及无反应者的IL-15(图5A)、MCP-1(图5B)、IP-10(图5C)、PLGF(图5D)、sICAM-1(图5E)、CRP(图5F)、VEGF(图5G)、与MIP-1b(图5H)的血清水平的倍数变化。水平线表明平均值(图5A至5H)。图5A显示个别患者IL-15变化，及在各数据点旁边把各个患者的疾病反应性标示为部分反应(PR)、完全反应(CR)、稳定疾病(SD)、或疾病进展(PD)(图5A)。
图6A至6V显示对在第0天接受T细胞疗法前被施用300mg/m2/天环磷酰胺与30mg/m2/天氟达拉滨的患者在第-10天至第18天不同时间点测得的选定细胞因子分析物的血清浓度。显示粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF；图6A)、IL-2(图6B)、MCP-1(图6C)、IL-6(图6D)、IL-10(图6E)、MCP-4(图6F)、CRP(图6G)、干扰素γ(IFNγ；图6H)、颗粒酶A(图6I)、IL-15(图6J)、IL-5(图6K)、颗粒酶B(图6L)、IL-8(图6M)、IP-10(图6N)、MIP-1b(图6O)、PLGF(图6P)、IL-16(图6Q)、胸腺和活化调节趋化因子(TARC；图6R)、嗜酸性粒细胞趋化因子-3(图6S)、sICAM-1(图6T)、可溶性血管粘附分子1(sVCAM-1；图6U)、与(SAA；图6V)的血清浓度。
图7A至7I显示在施用300mg/m2/天环磷酰胺与30mg/m2/天氟达拉滨前与后测得的选定细胞因子分析物的血清浓度。施用后血清是在正要T细胞输注前采集。显示IL-15(图7A)、IL-7(图7B)、PLGF(图7C)、CRP(图7D)、IL-5(图7E)、IL-10(图7F)、MCP-1(图7G)、IP-10(图7H)、和sICAM-1(图7I)的血清浓度。每个数据点代表一个患者。水平条显示平均值(图7A至7I)。将威尔科克森配对符号秩检验(Wilcoxon matched-pairs signed rank test)的P值应用于在调理前与后被测量的分析物，及显示对应的P值(图7A至7I)。某些IL-7值大于定量的上限(ULOQ；图7B)。
图8A至8L显示相较于经K562细胞刺激之后的负对照组(K562-NGFR)，CD19 CAR+T细胞产生的各种细胞因子分析物(K562-CD19)的体外产生。显示用于对照组与抗CD19 CAR+T细胞，GM-CSF(图8A)、IL-2(图8B)、IFNγ(图8C)、IL-5(图8D)、IL-4(图8E)、IL-13(图8F)、肿瘤坏死因子α(TNFα；图8G)、IL-6(图8H)、颗粒酶B(图8I)、MIP-1β(图8J)、MIP-1α(图8K)、与可溶性CD137(图8L)浓度。据此来标记T1、T2、与免疫体内恒定性细胞因子(图8A至8F)及促炎细胞因子与趋化因子(图8G至8L)。将产品T细胞与K562-CD19或对照组K562-NGFR细胞共培养并测量在培养基中的所列举的分析物浓度来采集输注前的数据(图8A至8L)。
图9A至9C显示与负对照组(K562-NGFR)相比，在与靶抗原结合后表达各种细胞因子的抗CD19 CAR+T细胞(K562-CD19)百分比。显示表达CD107α(图9A)、4-1BB(图9B)、与程序性死亡1(PD-1；图9C)的细胞百分比。将产品T细胞与K562-CD19或对照组K562-NGFR细胞共培养并测量在培养基中的选定活化标志物浓度来采集输注前的数据(图9A至9C)。所显示的P值表明将K562-CD19测试细胞与K562-NGFR负对照组细胞相比较的配对T检验结果(图9A至9C)。
图10说明从制造时间(天数)来看的产品T细胞与外周血淋巴细胞(PBL)的各种特性。该数据包括在产品对PBL中被检测到的抗CD19 CAR+T细胞百分比；在产品对PBL中之CD8对CD4比值；在抗CD19 CAR+CD8+T细胞群体中初始中央记忆T细胞(Tcm)、效应记忆T细胞(Tem)、与效应T细胞(Teff)的相对出现率；及在抗CD19 CAR+CD4+T细胞群体中初始中央记忆T细胞(Tcm)、效应记忆T细胞(Tem)、与效应T细胞(Teff)的相对出现率(图10)。在抗CD19CAR+T细胞上进行输注前产品T细胞及血液中增殖高峰期间的PBL的表型分析(图10)。p值代表在制造时间与T细胞亚群组成之间的关联的秩检验结果。
图11显示在根据本发明调理NHL患者后观察到的细胞因子、趋化因子与其他标志物的表达谱。CRP：C-反应蛋白。PLGF：胎盘生长因子。MCP-1：单核细胞趋化蛋白-1。
图12描述在用根据本发明的环磷酰胺与氟达拉滨调理后在细胞因子、趋化因子与其他标志物中观察到的变化的定量。
图13显示在与客观反应相关的调理性化疗后循环IL-15与穿孔素的变化倍数。p值不作倍数调整。对CAR T细胞输注前所测得的标志物执行分析。
图14描述细胞因子、趋化因子与效应分子的生物标志物分析。将标志物用威尔科克森符号秩检验在各类生物标志物内按照从低至高的p值来排序。呈现在大多数患者中经修饰且p值<0.05的标志物。在所测得的41个标志物中只有7个在大多数患者中显出变化且与p值<0.05相关。对CAR T细胞输注前所测得的标志物执行分析。
图15描述免疫体内恒定性、炎症与调节性细胞因子、趋化因子与免疫效应分子的顺序诱导及清除。显示出代表性标志物。在所测得的41个标志物中总共有22个显示在至少50％患者中在CAR T细胞治疗后比基线值提高至少2倍，该22个标志物是IL-15、IL-7、IL-2、颗粒酶B、颗粒酶A、CRP、IL-6、GM-CSF、IL-5、IFNg、IL-10、MCP-1、MCP-4、IP-10、IL-8、TARC、MIP1a、MIP1b、PLGF、VEGF-D、sICAM-1和FGF-2。对免疫体内恒定性细胞因子与趋化因子而言，在第3至4天观察到高峰。
图16描述免疫体内恒定性、炎症与调节性细胞因子、趋化因子与免疫效应分子的顺序诱导及清除。显示出代表性标志物。在所测得的41个标志物中总共有22个显示在至少50％患者中在CAR T细胞治疗后比基线值提高至少2倍，该22个标志物是IL-15、IL-7、IL-2、颗粒酶B、颗粒酶A、CRP、IL-6、GM-CSF、IL-5、IFNg、IL-10、MCP-1、MCP-4、IP-10、IL-8、TARC、MIP1a、MIP1b、PLGF、VEGF-D、sICAM-1与FGF-2。对免疫调节性细胞因子与趋化因子而言，在第5至7天观察到高峰。“ULOQ”：定量的上限。
图17显示由根据本发明的抗CD19 CAR T细胞诱导的治疗相关生物标志物与临床反应的变化。在CAR T细胞治疗后的标志物量对基线值(预调理)的最大倍数变化。每一条线代表一个个体受试者。使用威尔科克森秩和检验(Wilcoxon rank-sum test)对经评估的所有41个标志物比较有反应者组对无反应者组的最大倍数变化值。p值不经倍数调整，并且只显示p<0.10的生物标志物：用于IL-7与sICAM-1的p值<0.05。这种关联也适用于在IL-7(p＝0.0165)、IL-15(p＝0.0314)与IL-15(p＝0.041)的绝对量中的变化。
图18A至18G显示在用环磷酰胺与氟达拉滨调理前与后的分析物中量的变化。图18A至18F显示下列的前水平与后水平：IL-15(图18A)、IP-10(图18B)、CRP(图18C)、IL-7(图18D)、MCP-1(图18E)、和穿孔素(图18F)。图18G总结了在各种分析物的血清水平中的变化及对应的p值。
图19A至19D显示对IL-15(图19A)、IP-10(图19B)、和穿孔素(图19C)而言，在调理后分析物水平的变化及对CAR T细胞疗法的客观反应之间的关联。图19D总结了在图19A至19C每一个中所提供的数据的统计显著性。
发明详述
本发明涉及鉴定适用于T细胞疗法(例如工程改造的CAR T细胞疗法，例如自体细胞疗法(eACTTM))的患者的方法，然后用T细胞疗法治疗患者。因此，该方法包括通过施用能够增加某些细胞因子(例如IL-15、IL-7和至少一种另外的生物标志物细胞因子)的血清水平的一种或多种预调理剂来预调理患者。在用一种或多种预调理剂进行T细胞疗法之前，通过减少患者中存在的内源淋巴细胞的数量和增加体内恒定性的细胞因子和/或促免疫因子包括IL-15和IL-7的血清水平来改善T细胞疗法的功效，对患者进行预调理。这为移植的T细胞在一旦给予患者后增殖提供了更优化的微环境。
本发明进一步涉及在有此需要的患者中为T细胞疗法产生更适合的环境的方法，包括(i)向患者施用一种或多种预调理剂，其能够增加某些细胞因子例如IL-15、IL-7和至少一种另外的生物标志物细胞因子的血清水平；(ii)向患者施用经鉴定与T细胞疗法的增加的有效性相关的一种或多种细胞因子(例如IL-15、IL-7和至少一种另外的生物标志物细胞因子)；或(iii)向患者施用另外的治疗，例如另外的细胞因子，额外剂量的一种或多种预调理剂或工程改造为表达一种或多种细胞因子的T细胞，其中另外的治疗增加经鉴定与T细胞疗法的增加的有效性相关的一种或多种细胞因子(例如IL-15、IL-7和至少一种另外的生物标志物细胞因子)的血清水平。
定义
为了可以更容易理解本发明，首先对某些术语加以定义。除了本文另外明确提供外，在本申请中所用的下列术语中每一种应该具有下述意义。额外的定义在整个申请中被明示。
本发明所用的术语“和/或”被理解为在有或无另一种情况下，两种具体指定的特征或成分中每一种的具体公开。所以，在本文的短语例如“A和/或B”中所用的术语“和/或”旨在包括“A与B”、“A或B”、“A”(单独)、与“B”(单独)。同样，在短语例如“A、B、和/或C”中所用的术语“和/或”旨在包含下列方面中每一种：A、B、和C；A、B、或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A与B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。
应当理解，在用术语“包含”来描述的情况下的方面，另外提供其他用术语“由……组成”和/或“实质上由……组成”描述的类似方面。
除非另外定义，否则本文所用的所有技术术语与科学术语具有与本公开内容有关的技术领域中具有一般技术的人员所一般理解的相同的意义。例如，the ConciseDictionary of Biomedicine and Molecular Biology,Juo,Pei-Show,2nd ed.,2002,CRCPress；The Dictionary of Cell and Molecular Biology,3rd ed.,1999,AcademicPress；和the Oxford Dictionary Of Biolchemistry And Molecular Biology,Revised,2000,Oxford University Press为本领域技术人员提供许多本发明所用的术语的通用词典。
单位、前缀、和符号以其Système International de Unites(SI)接受的形式表示。数值范围包括限定该范围的数字在内。本文提供的标题不是可通过参考整个说明书而得知的本发明各种方面的限制。所以，下列所定义的术语通过参考整个说明书被更完整地定义。
术语“活化”是指免疫细胞(例如T细胞)的状态，该免疫细胞被充分刺激以诱导可检测的细胞增生。活化也可以和被诱导的细胞因子产生与可检测的效应功能相关。此外，术语“经活化的T细胞”还指发生细胞分裂的T细胞。
“施用”是指使用本领域技术人员熟知的各种方法及递送系统中任一种将药剂物理性导入受试者。用于本文所公开的制剂的示范性施用途径包括静脉内、肌内、皮下、腹膜内、脊柱、或其他胃肠道外施用途径(例如，利用注射或输注)。本文所用的短语“胃肠道外施用”意指肠内与局部施用以外的施用模式(通常利用注射)，及包括但不限于：静脉内、肌内、动脉内、鞘内、淋巴管内、病灶内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、皮内、关节内、囊下、蛛网膜下、椎管内、硬膜外与胸骨内注射及输注，及体内电穿孔法。在某些实施方案中，利用非胃肠道外途径(例如口服)施用制剂。其他非胃肠道外途径包括局部、表皮、或粘膜给药途径，例如鼻内、阴道、直肠、舌下、或局部施用。还可以，例如，一次、多次、和/或在一个或多个长时间段内施用。
本文所用的“不良事件”(AE)是和医疗的使用相关的任何不利的且通常为非计划或不良的病征(包括异常实验结果)、症状、医学上的出现率、或疾病。不良事件的定义包括已存在的医疗状况恶化。恶化表明已存在的医疗状况的严重程度、频率、和/或持续时间增加，或和更恶化的结果相关。
术语“抗体”(Ab)包括但不限于特异性结合至抗原的糖蛋白免疫球蛋白。通常，抗体可包含通过二硫键互连的至少二个重(H)链及二个轻(L)链，或其抗原结合部分。每一H链包含一个重链可变区(本文缩写成VH)及一个重链恒定区。该重链恒定区包含三个恒定域CH1、CH2与CH3。每一轻链包含一个轻链可变区(本文缩写成VL)及一个轻链恒定区。该轻链恒定区包含一个恒定域CL。VH区与VL区可进一步分成高度可变区(称为互补决定区(CDR))与保留区(称为框架区(FR))。每一VH与VL包含三个CDR及四个FR，按照下列顺序从氨基端排到羧基端：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链可变区与轻链可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。Ab的恒定区可介导免疫球蛋白结合至宿主组织或因子，其包括各种免疫系统的细胞(例如效应细胞)与典型补体系统的第一成分(C1q)。
免疫球蛋白可从众所皆知的同种型得到，该同种型包括但不限于IgA、分泌性IgA、IgG、与IgM。IgG亚类也是该技术领域中熟知的且包括但不限于人IgG1、IgG2、IgG3、与IgG4。“同种型”是指重链恒定区基因编码的Ab类或亚类(例如IgM或IgG1)。术语“抗体”包括，例如，天然Ab与非天然Ab；单克隆Ab与多克隆Ab；嵌合Ab与人源化Ab；人Ab或非人Ab；全合成Ab；和单链Ab。可利用重组方法将非人Ab人源化以减少其在人体内的免疫原性。在不明确说明时，除非另行指出，否则术语“抗体”还包括上述免疫球蛋白中任一种的抗原结合片段或抗原结合部分，及包括单价与双价片段或部分，和单链Ab。
“抗原结合分子”或“抗体片段”是指少于全部的抗体的任何部分。抗原结合分子可包括抗原性互补决定区(CDR)。抗体片段实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、dAb、线性抗体、scFv抗体、与由抗原结合分子形成的多特异性抗体。
“抗原”是指任何可诱导免疫反应或能被抗体结合的分子。免疫反应可包含抗体产生或特异免疫活性细胞活化，或二者。本领域技术人员会容易地理解到任何大分子(包括差不多所有的蛋白质或肽)可具有抗原的作用。抗原可被内源表达(即由基因组DNA表达)，或可被重组表达。抗原可对某些组织(例如癌细胞)具特异性，或可被广泛地表达。此外，较大分子的片段可具有抗原的作用。在一个实施方案中，抗原是肿瘤抗原。
术语“自体的”是指由受试者衍生的任何物质，该物质后来又被导入同一受试者。例如，本文所述的工程改造的自体细胞疗法(eACTTM)包含从患者采集淋巴细胞，然后将该淋巴细胞工程改造以表达(例如)CAR构建体，并且然后施用回同一患者。
术语“同种异体的”是指由一个体衍生的任何物质，该物质后来被导入同种的另一个体，例如同种异体T细胞移植。
“癌”是指许多特征为身体中异常细胞失控生长的各种疾病。失控的细胞分裂与生长导致侵袭邻近组织及还可以通过淋巴系统或血流转移到身体的远距部分的恶性肿瘤形成。“癌”或“癌组织”可包括肿瘤。可利用本发明的方法治疗的癌实例包括但不限于免疫系统癌症，其包括淋巴瘤、白血病、与其他白细胞恶性肿瘤。在某些实施方案中，可利用本发明的方法使由下列衍生的肿瘤大小减少：例如骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈部癌、皮肤或眼内恶性黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛区癌、胃癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、原发性纵膈大B细胞淋巴瘤(PMBC)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、转化滤泡性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤(SMZL)、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、慢性或急性白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴母细胞白血病(ALL)(包括非T细胞ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、儿童实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)癌瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊轴肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、环境诱导的癌症(包括由石棉诱导的癌)、其他B细胞恶性肿瘤、及以上癌的组合。特定癌症可对化疗或放射治疗有反应，或该癌症可为难治性癌症。难治性癌症是指不可进行手术改善的癌症及一开始对化疗或放射治疗无反应的癌症，或该癌症随时间而变得没有反应。
本文所用的“抗肿瘤效应”是指可以下列形式存在的生物效应：肿瘤体积减少、肿瘤细胞数量减少、肿瘤细胞增生减少、转移数量减少、总存活期或无进展存活期增加、预期寿命增加、或与肿瘤相关的各种身体症状改善。抗肿瘤效应还可指预防肿瘤出现(例如疫苗)。
本文所用的“无进展存活期”(可缩写成PFS)是指从治疗日期到根据修订的IWGResponse Criteria for Malignant Lymphoma的疾病进展或任何原因的死亡的日期的时间。
通过测量在放射线照片上的恶性病灶或其他方法来评估“疾病进展”，其不应被报告为不良事件。在没有病征与症状情况下因疾病进展造成的死亡应被报告为原发肿瘤型(例如DLBCL)。
本文所用的“反应持续时间”(可缩写成DOR)是指从受试者的第一客观反应到经确定的疾病进展(根据修订的IWG Response Criteria for Malignant Lymphoma)日期或死亡日期的时间。
本文所用的术语“总存活期”(可缩写成OS)是指从治疗日期到死亡日期的时间。
本文所用的“细胞因子”是指一个细胞对接触特异性抗原作出反应所释放的非抗体蛋白，其中该细胞因子与第二个细胞相互作用以介导在该第二个细胞中的反应。细胞因子可由细胞内源性表达或被施用于受试者。细胞因子可由免疫细胞(包括巨噬细胞、B细胞、T细胞、与肥胖细胞)释放以扩展免疫反应。细胞因子可诱导在受体细胞中的各种反应。细胞因子可包括体内恒定性细胞因子、趋化因子、促炎细胞因子、效应子、和急性期蛋白。例如，体内恒定性细胞因子(包括白介素(IL)7与IL-15)促进免疫细胞存活与增生，并且促炎细胞因子可促进炎症反应。体内恒定性细胞因子实例包括但不限于：IL-2、IL-4、IL-5、IL-7、IL-10、IL-12p40、IL-12p70、IL-15、与干扰素(IFN)γ。促炎细胞因子实例包括但不限于：IL-1a、IL-1b、IL-6、IL-13、IL-17a、肿瘤坏死因子(TNF)-α、TNF-β、成纤维细胞生长因子(FGF)2、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)、可溶性血管粘附分子1(sVCAM-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、VEGF-C、VEGF-D、和胎盘生长因子(PLGF)。效应子实例包括但不限于颗粒酶A、颗粒酶B、可溶性Fas配体(sFasL)、和穿孔素。急性期蛋白实例包括但不限于C-反应蛋白(CRP)与血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A(SAA))。
“趋化因子”是一类细胞因子，其介导细胞趋化性或定向运动。趋化因子实例包括但不限于：IL-8、IL-16、嗜酸性粒细胞趋化因子、嗜酸性粒细胞趋化因子3、巨噬细胞衍生趋化因子(MDC或CCL22)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1或CCL2)、MCP-4、巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α，MIP-1a)、MIP-1β(MIP-1b)、γ诱导蛋白10(IP-10)、以及胸腺和活化调节趋化因子(TARC或CCL17)。
本发明的分析物与细胞因子的其他实例包括但不限于：趋化因子(C-C基序)配体(CCL)1、CCL5、单核细胞特异性趋化因子3(MCP-3或CCL7)、单核细胞趋化蛋白2(MCP-2或CCL8)、CCL13、IL-1、IL-3、IL-9、IL-11、IL-12、IL-14、IL-17、IL-20、IL-21、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、白血病抑制因子(LIF)、抑癌蛋白M(OSM)、CD154、淋巴毒素(LT)β、4-1BB配体(4-1BBL)、增生诱导配体(APRIL)、CD70、CD153、CD178、糖皮质素诱导的TNFR相关配体(GITRL)、肿瘤坏死因子超家族成员14(TNFSF14)、OX40L、TNF-与ApoL-相关白细胞表达配体1(TALL-1)、或TNF相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)。
本文将术语“血清水平”与“血清浓度”可互换使用且是指在受试者血清中的分析物的量。使用本领域内已知的任何方法可测量给定分析物的血清水平。例如，使用酶联免疫吸附法(ELISA)可测量细胞因子的血清水平。在一个特定实施方案中，使用EMDmillipore多重测定法可测量细胞因子的血清水平。
本文所用的“给药间距”意指对受试者施用多个剂量的本文所公开的制剂中间所经过的时间。所以，给药间距可被表明为范围。
本文所述的剂量可以“以重量为基础计的剂量”或“以体表面积(BSA)为基础计的剂量”表示。以重量为基础计的剂量是以患者体重为基础计所计算出的对患者施用的剂量，例如mg/kg。以BSA为基础计的剂量是以患者的表面积为基础计所计算出的对患者施用的剂量，例如mg/m2。对人类给药而言，把以重量为基础计的剂量乘37或把以BSA为基础计的剂量除以37可将这两种剂量测量形式转换。例如，对人类受试者施用60mg/kg的环磷酰胺的剂量相当于对同一受试者施用2220mg/m2的剂量的同一药物。
本文所用的术语“给药频率”是指在给定时间内施用本文所公开的制剂剂量的频率。给药频率可被表明为每个给定时间内剂量数。例如，可以按照下列来施用预调理剂如环磷酰胺：连续5天每天施用一次剂量、连续4天每天施用一次剂量、连续3天每天施用一次剂量、连续2天每天施用一次剂量、或1天施用一次剂量。此外，可以按照下列来施用第二预调理剂如氟达拉滨：连续8天每天施用一次剂量、连续7天每天施用一次剂量、连续6天每天施用一次剂量、连续5天每天施用一次剂量、连续4天每天施用一次剂量、连续3天每天施用一次剂量、连续2天每天施用一次剂量、或1天施用一次剂量。在其他实施方案中，按照连续5天每天施用一次剂量或连续3天每天施用一次剂量来施用氟达拉滨。
药物、预调理剂或治疗剂如工程改造的CAR T细胞的“治疗有效量”、“有效剂量”、“有效量”、或“治疗有效剂量”是当单独使用与另一种治疗剂组合使用时保护受试者免于发病或促进疾病消退(证据是疾病症状严重程度减少、疾病无症状期的频率与持续时间增加)、或预防由疾病痛苦造成的病弱或失能的药物的任何量。通过将熟练医师熟悉的各种方法用于，例如，在临床试验期间的人类受试者，预示出在人类中的功效的动物模型系统，或通过分析在体外测定中的药剂的活性可评估治疗剂促进疾病消退的能力。
本文所用的术语“淋巴细胞”包括自然杀伤(NK)细胞、T细胞、或B细胞。NK细胞是一类细胞毒性(cytotoxic)(细胞毒性(cell toxic))淋巴细胞，其代表先天免疫系统的主要成分。NK细胞排斥肿瘤与受病毒感染的细胞。NK细胞通过细胞凋亡或程序性细胞死亡方法来起作用。NK细胞被称为“自然杀伤”是因为其不需要活化就能杀伤细胞。T细胞在细胞介导免疫(不涉及抗体)中起着主要作用。T细胞的T细胞受体(TCR)使得T细胞与其他淋巴细胞型不同。胸腺(免疫系统的特化器官)是T细胞成熟的主要因素。T细胞有下列六种类型：辅助T细胞(例如CD4+细胞)、细胞毒性T细胞(也称为TC、细胞毒性T淋巴细胞、CTL、T-杀伤细胞、溶细胞性T细胞、CD8+T细胞、或杀伤T细胞)、记忆T细胞((i)干记忆TSCM细胞(类似初始细胞)是CD45RO-、CCR7+、CD45RA+、CD62L+(L-选凝素)、CD27+、CD28+、与IL-7Rα+，但是也表现大量的CD95、IL-2Rβ、CXCR3、与LFA-1，及显出很多有记忆细胞特色的功能属性)；(ii)中央记忆TCM细胞表达L-选凝素和CCR7，其分泌IL-2，但不产生IFNγ或IL-4；与(iii)效应记忆TEM细胞不表达L-选凝素或CCR7，但产生像IFNγ与IL-4的效应细胞因子)、调节T细胞(Treg、抑制T细胞、或CD4+CD25+调节T细胞)、自然杀伤T细胞(NKT)及γδT细胞。另一方面，B细胞在体液免疫(涉及抗体)中起着主要作用。B细胞产生抗体与抗原及具有抗原呈递细胞(APC)作用和在被抗原相互作用活化后转变成记忆B细胞。对哺乳动物而言，在骨髓中形成未成熟B细胞，这是其名称的由来。
术语“基因工程改造的”或“工程改造的”是指改造细胞的基因组的方法，其包括但不限于缺失编码区或非编码区或其一部分，或插入编码区或其一部分。在某些实施方案中，经修饰的细胞是淋巴细胞(例如T细胞)，其可从患者或供体得到。可将细胞修饰以表达外源性构建体，例如嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)，其被并入细胞的基因组中。
“免疫反应”是指免疫系统的细胞(例如T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、树突状细胞、与嗜中性白细胞)及由这些细胞或肝脏中任一种产生的可溶性大分子(包括Ab、细胞因子、和补体)的作用，其引起选择性靶向、结合至、破坏、消灭、和/或消除入侵脊椎动物的身体的病原体、受病原体感染的细胞或组织、癌细胞或其他异常细胞，或在自体免疫或病理性炎症、正常人类细胞或组织情况下的作用。
术语“免疫疗法”是指利用包含诱导、增强、抑制、或改良免疫反应的方法来治疗受疾病之苦或有得到或体验到疾病复发的风险的受试者。免疫疗法实例包括但不限于T细胞疗法。T细胞疗法可包括过继性T细胞疗法、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)免疫疗法、自体细胞疗法、工程改造的自体细胞疗法(eACT)、与同种异体T细胞移植。然而，本领域技术人员能理解本文所公开的调理方法会增强任何T细胞移植疗法的有效性。T细胞疗法实例描述于：美国专利公开号2014/0154228和2002/0006409，美国专利号5,728,388和国际公开号WO 2008/081035。
免疫疗法的T细胞可以来自本领域中熟知的任何来源。例如，T细胞可以从造血干细胞群体在体外分化，或可以从受试者得到T细胞。可以从下列得到T细胞：外周血单核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织、和肿瘤。此外，T细胞可以由一或多种本领域中可得到的T细胞系衍生。使用本领域技术人员熟知的某些技术(例如FICOLLTM分离和/或单采血液法)从受试者采集的单位血液也可以得到T细胞。另外的分离用于T细胞疗法的T细胞的方法公开于美国专利公开号2013/0287748，以引用方式将其全部内容并入本文作为参考。
术语“工程改造的自体细胞疗法”(可缩写成“eACTTM”，也称为过继性细胞转移法)是一种通过采集患者T细胞及接着基因改造以识别及靶向在一或多种特异肿瘤细胞或恶性肿癌的细胞表面上表达的一或多种抗原之方法。可将T细胞工程改造以表达，例如，嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)。将CAR阳性(+)T细胞工程改造以表达细胞外单链变异片段(scFv)，其对链接至细胞内信号传导部分的特定肿瘤抗原具有特异性，该细胞内信号传导部分包含共刺激结构域与活化结构域。该共刺激结构域可以由(例如)CD28衍生，及该活化结构域可以由(例如)CD3ζ衍生(图1)。在某些实施方案中，将CAR设计成具有二、三、四、或更多个共刺激结构域。可将CAR scFv设计成靶向(例如)CD19，该CD19是在B细胞谱系中的细胞所表达的跨膜蛋白，该B细胞谱系包括所有正常B细胞与B细胞恶性肿瘤(包括但不限于NHL、CLL、与非T细胞ALL)。CAR+T细胞疗法与构建体实例描述于美国专利公开号2013/0287748、2014/0227237、2014/0099309、与2014/0050708，以引用方式将其全部内容并入本文作为参考。
本文所用的“患者”包括罹患癌症(例如淋巴瘤或白血病)的任何人。本文将术语“受试者”与“患者”可互换使用。
术语“肽”、“多肽”、与“蛋白质”可互换使用，并且是指由肽键共价连接的氨基酸残基组成的化合物。蛋白质或肽必须含有至少两个氨基酸，及氨基酸的最大数量不受限制且可包含蛋白质或肽的序列。多肽包括任何肽或蛋白质，其包含通过肽键彼此连接的两个或更多个氨基酸。本文所用的该术语既指短链(通常也称为肽、寡肽、和寡聚物)也指长链(通常也称为蛋白质)。“多肽”包括，例如，生物活性片段、实质同源多肽、寡肽、同二聚体、异二聚体、多肽变体、经修饰多肽、衍生物、类似物、融合蛋白等。多肽包括天然肽、重组肽、合成肽、或其组合。
本文所用的“刺激”是指由刺激分子与其同源配体结合所诱导的初次反应，其中该结合介导信号传导事件。“刺激分子”是T细胞上的分子(例如T细胞受体(TCR)/CD3复合体)，其与存在于抗原呈递细胞上的同源刺激配体特异性结合。“刺激配体”是一种配体，当存在于抗原呈递细胞(例如APC、树突状细胞、B细胞等)上时可与T细胞上的刺激分子特异性结合，由此由T细胞介导初次反应，其包括但不限于活化、免疫反应启动、增生等。刺激配体包括但不限于装载有肽的I类MHC分子、抗CD3抗体、超激动剂抗CD28抗体、和超激动剂抗CD2抗体。
本文所用的“共刺激信号”是指信号和初始信号组合(例如TCR/CD3接合)而导致T细胞反应，例如但不限于关键分子的增生和/或上调或下调。
本文所用的“共刺激配体”包括抗原呈递细胞上的分子，其与T细胞上的同源共刺激分子特异性结合。共刺激配体的结合提供介导T细胞反应(包括但不限于增生、活化、分化等)的信号。共刺激配体诱导由刺激分子提供的除初始信号以外的信号，例如，由T细胞受体(TCR)/CD3复合体与装载有肽的主要组织兼容性复合体(MHC)分子结合所提供的信号。共刺激配体可包括但不限于：CD7、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、程序性死亡(PD)L1、PD-L2、4-1BB配体、OX40配体、可诱导共刺激配体(ICOS-L)、细胞间粘附分子(ICAM)、CD30配体、CD40、CD70、CD83、人类白细胞抗原G(HLA-G)、I类MHC链相关蛋白质A(MICA)、I类MHC链相关蛋白质B(MICB)、疱疹病毒入侵介质(HVEM)、淋巴毒素β受体、3/TR6、免疫球蛋白样转录物(ILT)3、ILT4、结合Toll配体受体的激动剂或抗体、与B7-H3特异性结合的配体。共刺激配体包括但不限于与存在于T细胞上的共刺激分子特异性结合的抗体，例如但不限于：CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1)、CD2、CD7、肿瘤坏死因子超家族成员14(TNFSF14或LIGHT)、自然杀伤细胞受体C(NKG2C)、B7-H3、以及与CD83特异性结合的配体。
“共刺激分子”是T细胞上的同源结合伴侣，其与共刺激配体特异性结合，由此由T细胞介导共刺激反应(例如但不限于增生)。共刺激分子包括但不限于：CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、CD83、PD-1、ICOS、LFA-1、CD2、CD7、TNFSF14(LIGHT)、NKG2C、B7-H3、I类MHC分子、B-与T-淋巴细胞衰减因子(BTLA)、和Toll配体受体。
本文术语“调理”与“预调理”可互换使用且表明使需要针对合适的病况的T细胞疗法的患者准备好。本文所用的调理包括但不限于：在调理后使内源淋巴细胞数量减少、除去细胞因子积储(sink)、增加一种或多种生物标志物细胞因子或促炎因子的血清水平、增强所施用的T细胞效应功能、在T细胞疗法前增强抗原呈递细胞活化和/或有效性、或其任何组合。在一个实施方案中，“调理”包含增加一种或多种细胞因子的血清水平，该细胞因子例如白介素7(IL-7)、白介素15(IL-15)、白介素10(IL-10)、白介素5(IL-5)、γ诱导蛋白10(IP-10)、白介素8(IL-8)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、胎盘生长因子(PLGF)、C-反应蛋白(CRP)、可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)、可溶性血管粘附分子1(sVCAM-1)、或其任何组合。在另一个实施方案中，“调理”包含增加IL-7、IL-15、IP-10、MCP-1、PLGF、CRP、或其任何组合的血清水平。
本文将术语“减少(reducing)”与“减少(decreasing)”可互换使用且表明比原本少的任何变化。“减少(reducing)”与“减少(decreasing)”是需要在测量前与后之间作比较的相对术语。“减少(reducing)”与“减少(decreasing)”包括完全耗尽。
“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”受试者是指对该受试者执行任何类型的干预或过程或施用活性剂，目的是反转、缓和、改善、抑制、减缓、或预防与疾病相关的症状、并发症、或病况、或生物化学指针征候的发作、进展、发展、严重程度或复发。在一个实施方案中，“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”包括部分缓解。在另一个实施方案中，“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”包括完全缓解。
择一使用(例如，“或”)是指备选者中的一种、二者或其任何组合。本文所用的不定冠词“一(a)”或“一(an)”是指任何详述或列举的成分中的“一种或多种”。
术语“约”或“基本上包含”是指本领域技术人员所测定的特定值或组成的可接受误差范围内的值或组成，该值或组成一部分取决于如何测量或测定得到该值或组成，即测量系统的限制。例如，“大约”或“基本上包含”意指每个本领域的实践的标准偏差在1以内或多于1。或者，“约”或“基本上包含”可以表示至多10％(即±10％)的范围。例如，约3mg可包括2.7mg至3.3mg(对于10％)的任何数目。另外，特别地，就生物系统或过程而言，该术语可意指至多一个数量级或至多5倍的值。当在本申请与权利要求中提供特定值或组成时，除非另外指出，否则“约”或“基本上包含”的含义应被假定为在该特定值或组成的可接受误差范围内。
除非另外指出，否则本文所述的任何浓度范围、百分比范围、比例范围或整数范围应理解为包括在所述范围内的任何整数及，在合适情况下，其分数(例如整数的十分之一与百分之一)的值。
在以下小节中进一步详细描述本发明的各个方面。
本发明的方法
本发明涉及在初始预调理步骤之后鉴定适用于T细胞疗法的患者的方法。因此，本发明涉及在第一个预调理步骤之后将患者分层成亚群，并用适当的下一步处理群体。通过本发明方法鉴定的一组患者可以是那些在施用第一预调理方案之后适用于T细胞疗法的患者，但是没有任何额外的预调理方案。另一组患者可以是那些用第一预调理步骤不适合进行T细胞疗法的患者，并且需要第二个预调理步骤。第三组患者可能是那些即使在接下来的预调理步骤之后仍然不适合进行T细胞疗法的患者。本发明还包括使用一个或多个预调理步骤通过增加患者中的某些生物标志物细胞因子来使受试者准备好进行T细胞疗法。
本发明鉴定了已经接受预调理方案的患者中某些细胞因子的表达增加表明T细胞疗法的功效增加。表明T细胞疗法功效增加的细胞因子包括IL-15、IL-7和至少一种选自下列的另外的细胞因子：单核细胞趋化蛋白1(“MCP-1”)，C-反应蛋白(“CRP”)，胎盘生长因子(“PLGF”)，干扰素γ诱导蛋白10(“IP-10”)，及其任何组合。在一个实施方案中，生物标志物细胞因子是IL-15、IL-7和MCP-1。在另一个实施方案中，生物标志物细胞因子是IL-15、IL-7和CRP。在其他实施方案中，生物标志物细胞因子是IL-15、IL-7和PLGF。在其他实施方案中，生物标志物细胞因子是IL-15、IL-7、MCP-1和IP-10。在其他实施方案中，生物标志物细胞因子是IL-15、IL-7、MCP-1和CRP。在一些实施方案中，生物标志物细胞因子是IL-15、IL-7、MCP-1和PLGF。在某些实施方案中，生物标志物细胞因子是IL-15、IL-7、IP-10和CRP。在其他实施方案中，生物标志物细胞因子是IL-15、IL-7、PLGF和IP-10。在其他实施方案中，生物标志物细胞因子是IL-15、IL-7、MCP-1、IP-10和CRP。在其他实施方案中，生物标志物细胞因子是IL-15、IL-7、MCP-1、IP-10和PLGF。在某些实施方案中，生物标志物细胞因子是IL-15、IL-7、MCP-1、CRP和PLGF。在一些实施方案中，生物标志物细胞因子是IL-15、IL-7、IP-10、CRP和PLGF。在其他实施方案中，生物标志物细胞因子是IL-15、IL-7、IP-10、MCP-1、CRP和PLGF。
除了生物标志物细胞因子的血清表达增加之外，适用于T细胞疗法的患者还可以表现出另外的特征：(i)内源淋巴细胞的数量减少；(ii)T细胞的效应功能增加；(iii)增加的抗原呈递细胞活化和/或可用性；或(iv)其任何组合。
通过预调理方案减少的内源淋巴细胞可以包括但不限于内源性调节T细胞，B细胞，自然杀伤细胞，CD4+T细胞，CD8+T细胞，或其任何组合，其可以抑制过继转移的T细胞的抗肿瘤作用。内源淋巴细胞可以与过继转移的T细胞竞争以接近抗原和支持性细胞因子。用一种或多种预调理剂预处理消除了这种竞争，导致内源性细胞因子(包括IL-15和IL-7)水平的增加。一旦将过继转移的T细胞施用于患者，它们暴露于水平增加的内源性IL-15和IL-7以及其他体内恒定性的细胞因子或促炎因子。另外，预调理处理可以引起肿瘤细胞死亡，导致患者血清中肿瘤抗原增加。不受任何理论束缚，用一种或多种预调理剂(包括但不限于环磷酰胺和嘌呤类似物)的调理通过诱导IL-15、IL-7和一种或多种其他生物标志物细胞因子来改良免疫环境，有利于体内恒定性扩张、活化和运输T细胞。
在一个实施方案中，本发明包括用于鉴定适用于T细胞疗法的患者的方法，其包括向患者施用一种或多种预调理剂，其能够增加IL-15、IL-7和至少一种选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10及其任何组合的另外的生物标志物细胞因子的血清水平。
在另一个实施方案中，本发明包括用于鉴定适用于T细胞疗法的患者的方法，包括(i)向患者施用一种或多种预调理剂，其能够增加IL-15、IL-7和至少一种选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10及其任何组合的另外的生物标志物细胞因子的血清水平，并且(ii)当患者表现出增加的IL-15、IL-7和至少一种另外的生物标志物细胞因子的血清水平时，施用T细胞疗法。
本发明还包括用于鉴定适用于T细胞疗法的患者的方法，包括(i)向患者施用一种或多种预调理剂，其能够增加IL-15、IL-7和至少一种选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10及其任何组合的另外的生物标志物细胞因子的血清水平，(ii)测量IL-15、IL-7和至少一种另外的生物标志物细胞因子的血清水平，和(iii)当患者表现出增加的IL-15、IL-7和至少一种另外的生物标志物细胞因子的血清水平时，施用T细胞疗法。
在某些实施方案中，本发明还包括用于鉴定适用于T细胞疗法的患者的方法，包括(i)向患者施用一种或多种预调理剂，其能够增加IL-15、IL-7和至少一种选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10及其任何组合的另外的生物标志物细胞因子的血清水平，(ii)施用额外量的一种或多种预调理剂或直接施用有效量的IL-15、IL-7和/或至少一种选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10及其任何组合的另外的生物标志物细胞因子，和(iii)当患者表现出增加的IL-15、IL-7和至少一种另外的生物标志物细胞因子的血清水平时，施用T细胞疗法。
在一些实施方案中，本发明还包括用于鉴定适用于T细胞疗法的患者的方法，其包括(i)向患者施用一种或多种预调理剂，其能够增加IL-15、IL-7和至少一种选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10及其任何组合的另外的生物标志物细胞因子的血清水平，(ii)测量IL-15、IL-7和至少一种另外的生物标志物细胞因子的血清水平，(iii)施用额外量的一种或多种预调理剂或直接施用有效量的IL-15、IL-7和/或至少一种选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10及其任何组合的另外的生物标志物细胞因子，(iv)任选地测量IL-15、IL-7和至少一种另外的生物标志物细胞因子的血清水平，和(v)当患者表现出增加的IL-15、IL-7和至少一种另外的生物标志物细胞因子的血清水平时，施用T细胞疗法。
本发明进一步包括用于增加IL-15、IL-7和至少一种选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10及其任何组合的另外的生物标志物细胞因子的血清水平以预调理需要T细胞疗法的患者的方法，包括向所述患者施用一种或多种预调理剂，其中当患者表现出增加的IL-15、IL-7和至少一种另外的生物标志物细胞因子的血清水平时，患者被用T细胞疗法治疗。
在一个实施方案中，本发明包括用于增加IL-15、IL-7和至少一种选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10及其任何组合的另外的生物标志物细胞因子的血清水平以预调理需要T细胞疗法的患者的方法，包括(i)向所述患者施用一种或多种预调理剂和(ii)当患者表现出增加的IL-15、IL-7和至少一种另外的生物标志物细胞因子的血清水平时，施用T细胞疗法。
在另一个实施方案中，本发明包括用于增加IL-15、IL-7和至少一种选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10及其任何组合的另外的生物标志物细胞因子的血清水平以预调理需要T细胞疗法的患者的方法，包括(i)向所述患者施用一种或多种预调理剂，(ii)施用额外量的一种或多种预调理剂或施用有效量的IL-15、IL-7和至少一种选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10及其任何组合的另外的生物标志物细胞因子，和(iii)当患者表现出增加的IL-15、IL-7和至少一种另外的生物标志物细胞因子的血清水平时，施用T细胞疗法。
在某些实施方案中，该方法进一步包括在施用一种或多种预调理剂之后测量IL-15、IL-7和至少一种另外的生物标志物细胞因子的血清水平。在一个实施方案中，测量了IL-15的血清水平。在另一个实施方案中，测量了IL-7的血清水平。在另一个实施方案中，测量了IL-15和IL-7的血清水平。
本发明还提供了治疗患者的方法，所述患者在施用一种或多种预调理剂后表现出增加的IL-15、IL-7和另外的生物标志物细胞因子的血清水平，所述方法包括向患者施用T细胞疗法。本发明的方法还包括进一步预调理在施用第一剂量的一种或多种预调理剂之后没有表现出足够IL-15、IL-7和至少一种另外的生物标志物细胞因子的血清水平的患者，包括施用第二剂量的一种或多种预调理剂。在施用一种或多种预调理剂之后，在某些不表现出任何增加的IL-15、IL-7和至少另外的生物标志物细胞因子的血清水平的患者中，本发明包括进一步直接向患者施用有效量的生物标志物细胞因子。
在其他实施方案中，本发明包括鉴定在施用一种或多种预调理剂之后患者血清中增加的一种或多种细胞因子，其中一种或多种细胞因子的增加的血清水平与对随后的T细胞疗法增加的反应相关。在一个实施方案中，一种或多种细胞因子的血清水平可以在施用预调理剂后测量。没有表现出一种或多种细胞因子的增加的血清水平的患者可以进行另外的治疗。在一个实施方案中，另外的治疗包括向患者施用能够增加某些细胞因子(例如IL-15、IL-7和至少一种另外的生物标志物细胞因子)的血清水平的第二剂量的一种或多种预调理剂。在另一个实施方案中，另外的治疗包括向患者施用一种或多种增加一种或多种细胞因子的血清水平的其它治疗，包括向患者施用一种或多种另外的细胞因子，一种或多种之前未施用于患者的预调理剂或经工程改造以表达一种或多种细胞因子(例如IL-15、IL-7和至少一种另外的生物标志物细胞因子)的T细胞。
在另一个实施方案中，本发明提供了鉴定在施用T细胞疗法之前其在患者中上调时增加T细胞疗法的有效性的细胞因子的方法，其中所鉴定的细胞因子在T细胞疗法之前向或不向患者施用其它预调理剂的情况下施用，或者其中一种或多种预调理剂的剂量增加以进一步增加所鉴定的细胞因子的血清水平。在另一个实施方案中，本发明提供了在调理期间连续监测某些生物标志物细胞因子的血清水平的方法，并相应地调整时机和剂量，例如继续预调理，直到达到所需的生物标志物细胞因子的血清水平，并且使患者准备好进行T细胞疗法。
在其它实施方案中，本发明包括增加需要T细胞疗法的患者中一种或多种生物标志物细胞因子的血清水平的方法。在一些实施方案中，通过向患者施用一种或多种预调理剂来增加一种或多种生物标志物细胞因子的血清水平。在一些实施方案中，通过向患者施用选自IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子的一种或多种细胞因子来增加一种或多种生物标志物细胞因子的血清水平。在一些实施方案中，通过向患者施用经工程改造以表达选自IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子的一种或多种细胞因子的T细胞来增加一种或多种生物标志物细胞因子的血清水平。
在一个实施方案中，本发明包括治疗适用于T细胞疗法的患者的癌症的方法，包括通过向患者施用一种或多种预调理剂预调理患者，所述预调理剂能够增加IL-15、IL-7和至少一种另外的生物标志物细胞因子的血清水平，其中当患者表现出增加的IL-15、IL-7和至少一种另外的生物标志物细胞因子的血清水平时，用T细胞疗法治疗患者。本发明显示，用一种或多种能够增加IL-15、IL-7和至少一种选自MCP-1，CRP，PLGF，IP-10及其任何组合的另外的生物标志物细胞因子的血清水平的预调理剂预调理患者，增强了随后施用于患者的T细胞疗法的有效性。在另一个实施方案中，本发明包括用于治疗适合T细胞疗法的患者的癌症的方法，其包括向患者施用一种或多种预调理剂，其能够增加IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子的血清水平，其中当患者表现出增加的IL-15、IL-7和至少一种另外的生物标志物细胞因子的血清水平时，用T细胞疗法治疗患者。
在其他实施方案中，本发明包括用于治疗适用于T细胞疗法的患者的癌症的方法，其包括(i)向患者施用一种或多种预调理剂，其能够增加IL-15、IL-7和至少一种选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10及其任何组合的另外的生物标志物细胞因子的血清水平，和(ii)当患者表现出增加的IL-15、IL-7和至少一种另外的生物标志物细胞因子的血清水平时，施用T细胞疗法。
在另一个实施方案中，本发明包括用于治疗适于T细胞疗法的患者的癌症的方法，其包括(i)向患者施用一种或多种预调理剂，其能够增加IL-15、IL-7和至少一种选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10及其任何组合的另外的生物标志物细胞因子的血清水平，(ii)施用额外量的一种或多种预调理剂或施用有效量的IL-15、IL-7和至少一种选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10及其任何组合的另外的生物标志物细胞因子，和(iii)当患者表现出增加的IL-15、IL-7和至少一种另外的生物标志物细胞因子的血清水平时，施用T细胞疗法。
在另一个实施方案中，本发明包括鉴定一种或多种预调理剂的剂量的方法，所述一种或多种预调理剂有效用于使受试者准备好进行T细胞疗法的受试者，所述方法包括(i)向患者施用一种或多种预调理剂(例如，环磷酰胺和/或氟达拉滨)，(ii)测量IL-7，IL-15，IL-10，IL-5，IP-10，IL-8，MCP-1，PLGF，CRP，sICAM-1，sVCAM-1，穿孔素，MIP-1b，或其任何组合的血清水平，和(iii)表征一种或多种预调理剂(例如环磷酰胺和/或氟达拉滨)为有效用于使受试者准备好进行T细胞疗法，其中在施用一种或多种预调理剂之后，受试者表现出增加的IL-7，IL-15，IL-10，IL-5，IP-10，IL-8，MCP-1，PLGF，CRP，sICAM-1，sVCAM-1，或其任何组合(例如IL-15，IP-10和/或IL-7)的血清水平，和/或降低的穿孔素和/或MIP-1b的血清水平。在一些实施方案中，所述方法进一步包括向表现出增加的IL-7，IL-15，IL-10，IL-5，IP-10，IL-8，MCP-1，PLGF，CRP，sICAM-1，sVCAM-1，或其任何组合(例如IL-15，IP-10和/或IL-7)的血清水平和/或降低的穿孔素和/或MIP-1b的血清水平的受试者施用一种或多种预调理剂。在其它实施方案中，所述方法进一步包括向表现出增加的IL-7，IL-15，IL-10，IL-5，IP-10，IL-8，MCP-1，PLGF，CRP，sICAM-1，sVCAM-1，或其任何组合(例如IL-15，IP-10和/或IL-7)的血清水平和/或降低的穿孔素和/或MIP-1b的血清水平的受试者的患者施用T细胞疗法。
在另一个实施方案中，本发明包括验证一种或多种预调理剂用于使受试者准备好进行T细胞疗法的有效性的方法，其包括(i)向患者施用一种或多种预调理剂(例如环磷酰胺和/或氟达拉滨)，(ii)测量IL-7，IL-15，IL-10，IL-5，IP-10，IL-8，MCP-1，PLGF，CRP，sICAM-1，sVCAM-1，穿孔素，MIP-1b，或其任何组合的血清水平，和(iii)表征一种或多种预调理剂(例如环磷酰胺和/或氟达拉滨)为有效用于使受试者准备好进行T细胞疗法，其中在施用一种或多种预调理剂之后，受试者表现出增加的IL-7，IL-15，IL-10，IL-5，IP-10，IL-8，MCP-1，PLGF，CRP，sICAM-1，sVCAM-1，或其任何组合(例如IL-15，IP-10和/或IL-7)的血清水平，和/或降低的穿孔素和/或MIP-1b的血清水平。在一些实施方案中，所述方法进一步包括向表现出增加的IL-7，IL-15，IL-10，IL-5，IP-10，IL-8，MCP-1，PLGF，CRP，sICAM-1，sVCAM-1，或其任何组合(例如IL-15，IP-10和/或IL-7)的血清水平和/或降低的穿孔素和/或MIP-1b的血清水平的受试者施用一种或多种预调理剂。在其它实施方案中，所述方法进一步包括向表现出增加的IL-7，IL-15，IL-10，IL-5，IP-10，IL-8，MCP-1，PLGF，CRP，sICAM-1，sVCAM-1，或其任何组合(例如IL-15，IP-10和/或IL-7)的血清水平和/或降低的穿孔素和/或MIP-1b的血清水平的受试者的患者施用T细胞疗法。
在一些实施方案中，一种或多种预调理剂的施用减少了患者的内源淋巴细胞的数量。在某些实施方案中，内源淋巴细胞包含调节T细胞，B细胞，自然杀伤细胞，CD4+T细胞，CD8+T细胞，或其任何组合。在一些实施方案中，一种或多种预调理剂的施用增加了体内恒定性细胞因子(例如IL-15和/或IL-7)的可用性。在一些实施方案中，所述一种或多种预调理剂的施用增强调理后施用的T细胞的效应功能。在一些实施方案中，一种或多种预调理剂的施用增强了抗原呈递细胞活化和/或可用性。
在某些实施方案中，与不施用一种或多种预调理剂的T细胞疗法的抗肿瘤功效相比，一种或多种预调理剂的施用诱导改善的T细胞疗法的抗肿瘤功效。
细胞因子水平
本发明描述了生物标志物细胞因子在T细胞疗法中用于有效治疗癌症的用途。特别是，本申请鉴定了一组细胞因子，这些细胞因子是为转移的T细胞提供适当的环境的关键因素，从而改善了T细胞疗法的功效。在一个实施方案中，本发明涉及诱导生物标志物细胞因子的上调或增加血清水平。在施用T细胞疗法之前施用一种或多种预调理剂增加生物标志物细胞因子的水平，以有利于体内恒定性扩张，活化和运输T细胞的方式改良免疫环境。一旦过继转移的T细胞被施用于患者，它们就暴露于增加水平的内源性细胞因子。表明T细胞功效的生物标志物细胞因子包括但不限于IL-15、IL-7和至少一种选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10的另外的生物标志物细胞因子，及其任何组合。
本发明还包括增加需要T细胞疗法的患者中生物标志物细胞因子的可用性的方法。在某些实施方案中，生物标志物细胞因子是IL-15、IL-7和至少一种选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10及其任何组合的另外的生物标志物细胞因子。
在某些实施方案中，本发明提供了确定患者的治疗选择的方法，其包括(i)在施用第一剂量的一种或多种预调理剂之后测量生物标志物细胞因子(例如IL-15或IL-7)的血清水平，和(ii)向表现出增加的一种或多种生物标志物细胞因子水平的患者(例如，更可能对T细胞疗法有反应的患者)施用T细胞疗法。在其他实施方案中，本发明提供了确定患者治疗选择的方法，其包括(i)在施用第一剂量的一种或多种预调理剂之后测量生物标志物细胞因子(例如IL-15或IL-7)的血清水平，(ii)将第二剂量的一种或多种预调理剂施用于没有表现出一种或多种生物标志物细胞因子水平增加的患者或表现出低于一种或多种生物标志物细胞因子阈值水平的患者(例如，不太可能对T细胞疗法有反应的患者)。在一些实施方案中，本发明提供了确定患者的治疗选择的方法，其包括(i)在施用一种或多种预调理剂后测量生物标志物细胞因子(例如IL-15或IL-7的血清水平，ii)将一种或多种生物标志物细胞因子施用于没有表现出一种或多种生物标志物细胞因子水平增加的患者或表现出低于一种或多种生物标志物细胞因子阈值水平的患者，(iii)将T细胞疗法施用于表现出一种或多种生物标志物细胞因子水平增加的患者或表现出超过一种或多种细胞因子阈值水平的患者。
在一个实施方案中，在施用一种或多种预调理剂之后血清IL-15水平增加超过约5倍，超过约10倍，超过约15倍，超过约20倍，超过约25倍，超过约30倍，超过约35倍，超过约40倍，超过约45倍，超过约50倍，超过约60倍，超过约70倍，超过约80倍，或超过约90倍，表明患者更可能对T细胞疗法有反应。在具体的实施方案中，施用一种或多种预调理剂后血清IL-15水平增加超过约10倍表明患者更可能对T细胞疗法有反应。在另一个实施方案中，施用一种或多种预调理剂后血清IL-15水平增加超过约20倍表明患者更可能对T细胞疗法有反应。在另一个实施方案中，在施用一种或多种预调理剂后血清IL-15水平增加超过约30倍表明患者更可能对T细胞疗法有反应。为了增加IL-15的血清水平，可以向患者施用外源性IL-15和/或另外量的一种或多种预调理剂。
在另一个实施方案中，在施用一种或多种预调理剂之后血清IL-7水平增加超过约2倍，超过约3倍，超过约4倍，超过约5倍，超过约10倍，超过约15倍，超过约20倍，超过约25倍，超过约30倍，超过约35倍，超过约40倍，超过约45倍，超过约50倍，超过约60倍，超过约70倍，超过约80倍，或超过约90倍表明患者更可能对T细胞疗法有反应。在具体的实施方案中，施用一种或多种预调理剂后血清IL-7水平增加超过约2倍表明患者更可能对T细胞疗法有反应。为了增加IL-7的血清水平，可以向患者施用外源性IL-7和/或另外剂量的一种或多种预调理剂。
在其它实施方案中，在施用一种或多种预调理剂后血清IP-10水平的增加超过约2倍，超过约3倍，超过约4倍，超过约5倍，超过约6倍，超过约7倍，超过约8倍，超过约9倍，超过约10倍，超过约15倍，超过约20倍，或超过约30倍表明患者更可能对T细胞疗法有反应。在具体的实施方案中，在施用一种或多种预调理剂后血清IP-10水平增加超过约2倍表明患者更可能对T细胞疗法有反应。在另一个实施方案中，在施用一种或多种预调理剂后血清IP-10水平增加超过约3倍表明患者更可能对T细胞疗法有反应。在另一个实施方案中，在施用一种或多种预调理剂后血清IP-10水平增加超过约4倍表明患者更可能对T细胞疗法有反应。在另一个实施方案中，在施用一种或多种预调理剂后，血清IP-10水平增加超过约7倍表明患者更可能对T细胞疗法有反应。为了增加IP-10的血清水平，可以向患者施用外源性IP-10和/或另外量的一种或多种预调理剂。
在一些实施方案中，在施用一种或多种预调理剂之后血清MCP-1水平的增加超过约1.5倍，超过约2倍，超过约3倍，超过约4倍，超过约5倍，超过约6倍，超过约7倍，超过约8倍，超过约9倍，超过约10倍，超过约15倍，或超过约20倍表明患者更可能对T细胞疗法有反应。在其他实施方案中，施用一种或多种预调理剂后血清MCP-1水平增加超过约2倍表明患者更可能对T细胞疗法有反应。在另一个实施方案中，施用一种或多种预调理剂后血清MCP-1水平增加超过约3倍表明患者更可能对T细胞疗法有反应。在另一个实施方案中，施用一种或多种预调理剂后血清MCP-1水平增加超过约5倍表明患者更可能对T细胞疗法有反应。在另一个实施方案中，在施用一种或多种预调理剂之后血清MCP-1水平增加超过约7倍表明患者更可能对T细胞疗法有反应。为了增加MCP-1的血清水平，可以向患者施用外源MCP-1和/或另外量的一种或多种预调理剂。
在某些实施方案中，在施用一种或多种预调理剂后，血清PLGF水平增加超过约1.5倍，超过约2倍，超过约3倍，超过约4倍，超过约5倍，超过约10倍，超过约15倍，超过约20倍，超过约25倍，超过约30倍，超过约35倍，超过约40倍，超过约45倍，超过约50倍，超过约60倍，超过约70倍，超过约80倍，超过约90倍，或超过约100倍表明患者更可能对T细胞疗法。在具体的实施方案中，施用一种或多种预调理剂后血清PLGF水平增加超过约1.5倍表明患者更可能对T细胞疗法有反应。在另一个实施方案中，施用一种或多种预调理剂后血清PLGF水平增加超过约2倍表明患者更可能对T细胞疗法有反应。在另一个实施方案中，施用一种或多种预调理剂后血清PLGF水平增加超过约3倍表明患者更可能对T细胞疗法有反应。为了增加PLGF的血清水平，可以向患者施用外源性PLGF和/或另外量的一种或多种预调理剂。
在其他实施方案中，在施用一种或多种预调理剂后血清CRP水平增加超过约1.5倍，超过约2倍，超过约3倍，超过约4倍，超过约5倍，超过约9倍，超过约10倍，超过约15倍，超过约20倍，超过约25倍，超过约30倍，超过约35倍，超过约40倍，超过约45倍，超过约50倍，超过约60倍，超过约70倍，超过约80倍，超过约90倍，或超过约100倍表明患者更可能应对T细胞疗法。在具体的实施方案中，在施用一种或多种预调理剂后血清CRP水平增加超过约1.5倍表明患者更可能对T细胞疗法有反应。在另一个实施方案中，在施用一种或多种预调理剂之后血清CRP水平增加超过约2倍表明患者更可能对T细胞疗法有反应。在另一个实施方案中，在施用一种或多种预调理剂后，血清CRP水平增加超过约5倍表明患者更可能对T细胞疗法有反应。在另一个实施方案中，施用一种或多种预调理剂后血清CRP水平增加超过约9倍表明患者更可能对T细胞疗法有反应。在另一个实施方案中，在施用一种或多种预调理剂之后血清CRP水平增加超过约10倍表明患者更可能对T细胞疗法有反应。在另一个实施方案中，在施用一种或多种预调理剂之后，适用于T细胞疗法的患者中的CRP水平增加了至少超过约25倍的血清CRP水平，表明患者更可能应对T细胞疗法。为了增加CRP的血清水平，可以向患者施用外源性CRP和/或另外剂量的一种或多种预调理剂。
在一些实施方案中，所述一种或多种预调理剂进一步增加白介素10(“IL-10”)，白介素5(“IL-5”)，白介素8(“IL-8”)，细胞间粘附分子1(“sICAM-1”)，可溶性血管粘附分子1(“sVCAM-1”)或其任何组合的血清水平。
在一些实施方案中，在施用一种或多种预调理剂时或之前一天或多天和在选自施用T细胞疗法当天到施用T细胞疗法后21天的一天或多天中测量任何一种或多种细胞因子的血清水平。
本领域技术人员将认识到，生物标志物细胞因子的水平可以通过许多不同的方法增加，包括但不限于使用如本文所述的一种或多种预调理剂，向患者施用一种或多种外源性细胞因子，施用诱导一种或多种内源性细胞因子表达或防止一种或多种内源性细胞因子降解的一种或多种组合物，施用能够表达一种或多种重组细胞因子的一种或多种转基因细胞，和具有提高患者中生物标志物细胞因子水平作用的任何其他方法。
在一些实施方案中，本发明包括预调理需要T细胞疗法的患者的方法，包括向患者施用一种或多种预调理剂和有效量的IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子。待施用于患者的细胞因子可以通过本领域已知的任何方法获得。例如，细胞因子可以是分离的细胞因子或重组细胞因子。一个或多个剂量的分离的细胞因子或重组细胞因子可以在T细胞疗法之前或在T细胞疗法之后或其任何组合施用。
在一个实施方案中，调理需要T细胞疗法的患者的方法，包括向患者施用一种或多种预调理剂和一种或多种剂量的IL-2。在一些实施方案中，IL-2的剂量为至少约10,000IU/kg，至少约50,000IU/kg，至少约100,000IU/kg，至少约200,000IU/kg，至少约400,000IU/kg，至少约600,000IU/kg，至少约700,000IU/kg，至少约800,000IU/kg，或至少约1,000,000IU/kg。在一个实施方案中，IL-2的剂量是至少约700,000IU/kg。在一个具体的实施方案中，IL-2的剂量是约720,000IU/kg。在一些实施方案中，IL-2将每8小时施用于患者直至15个剂量或毒性排除另外的剂量。
在施用一种或多种预调理剂和/或T细胞疗法后，可以在患者血清中富集多种细胞因子。在一些实施方案中，施用一种或多种预调理剂和/或T细胞疗法后的患者显示增加的选自下列的细胞因子或促炎因子的血清浓度：白介素(IL)15，IL-7，IL-10，IL-5，IL-8，IL-1，IL-1b，IL-2，IL-3，IL-4，IL-6，IL-9，IL-11，IL-12，IL-12p40，IL-12p70，IL-13，IL-14，IL-16，IL-17，IL-17a，IL-20，IL-21，粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，粒细胞集落刺激因子(G-CSF)，单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)，MCP-4，γ诱导蛋白10(IP-10)，胎盘生长因子(PLGF)，可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)，可溶性血管粘附分子1(sVCAM-1)，C-反应蛋白(CRP)，血管内皮生长因子(VEGF)，VEGF-C，VEGF-D，巨噬细胞炎症蛋白1β(MIP-1β，MIP-1b)，白血病抑制因子(LIF)，抑癌蛋白M(OSM)，干扰素(IFN)α，IFN-β，IFN-γ，肿瘤坏死因子(TNF)α，TNF-β，CD154，淋巴毒素(LT)β，4-1BB配体(4-1BBL)，增殖诱导配体(APRIL)，CD70，CD153，CD178，糖皮质激素诱导的TNFR相关配体(GITRL)，肿瘤坏死因子超家族成员14(TNFSF14)，OX40L，TNF-和ApoL-相关的白细胞表达配体1(TALL-1)，TNF相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)，趋化因子(C-C基序)配体(CCL)1，巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1a或CCL3)，CCL5，单核细胞特异性趋化因子3(MCP3或CCL7)，单核细胞趋化蛋白2(MCP-2或CCL8)，CCL13，胸腺和活化调节趋化因子(TARC或CCL17)，CCL22，FGF2，嗜酸性粒细胞趋化因子，MDC，颗粒酶(granzine)A，颗粒酶B，穿孔素，SAA，MCP-4，及其任何组合。在一些实施方案中，在施用环磷酰胺和氟达拉滨之后，患者表现出增加的IL-15和/或IP-10的血清水平。在一些实施方案中，在施用环磷酰胺和氟达拉滨之后，患者表现出穿孔素的血清水平降低。
预调理剂
本发明的一种或多种预调理剂可以是能够增加IL-15、IL-7和至少一种选自MCP-1，CRP，PLGF，IP-10和/或其任何组合的另外的细胞因子的血清水平的任何预调理剂。例如，一种或多种预调理剂可以包含烷化剂。在某些实施方案中，烷化剂可以选自美法仑，苯丁酸氮芥，环磷酰胺，双氯乙基甲胺，氮芥(HN2)，乌拉莫司汀，尿嘧啶氮芥，美法仑，苯丁酸氮芥，异环磷酰胺，苯达莫司汀，卡莫司汀，洛莫司汀，链佐星，烷基磺酸盐，白消安，噻替派或它的类似物，其任何类似物或功能衍生物，及其任何组合。在一个具体的实施方案中，一种或多种预调理剂包含环磷酰胺。
环磷酰胺( )是具有强力免疫抑制活性的氮芥衍生物烷化剂。环磷酰胺具有抗肿瘤药作用，并且它被用来治疗各种癌症，包括淋巴瘤、多发性骨髓瘤、白血病、蕈样肉芽肿病、神经母细胞瘤、卵巢癌、眼癌、和乳腺癌、以及自体免疫疾病。
一旦对患者施用，环磷酰胺便在肝脏内被转变成丙烯醛与磷酰胺。将烷基加到在咪唑环的7号氮原子位置的DNA的鸟嘌呤碱基使这些代谢产物在静息细胞与分裂细胞中一起与DNA交联。所以，DNA复制被抑制而导致细胞死亡。
在另一个实施方案中，一种或多种预调理剂可以包括铂基化学治疗剂。在某些实施方案中，铂基化学治疗剂选自铂，顺铂，卡铂，奈达铂，奥沙利铂，沙铂，四硝酸三铂，丙卡巴肼，六甲蜜胺，三氮烯，达卡巴嗪，米托唑胺，替莫唑胺，达卡巴嗪，替莫唑胺，其任何类似物或功能衍生物，及其任何组合。
在另一个实施方案中，一种或多种预调理剂可以包括嘌呤类似物。在某些实施方案中，嘌呤类似物选自硫唑嘌呤，6-巯基嘌呤，巯基嘌呤，硫嘌呤，硫鸟嘌呤，氟达拉滨，喷司他丁，克拉屈滨，其任何类似物或功能衍生物，及其任何组合。在一个实施方案中，一种或多种预调理剂包括氟达拉滨。
磷酸氟达拉滨是合成的嘌呤核苷，其不同于生理核苷之处在于糖部分是阿拉伯糖而不是核糖或脱氧核糖。氟达拉滨作为嘌呤拮抗剂抗代谢药，并且它被用于治疗各种恶性血液病，包括各种淋巴瘤和白血病。
一旦对患者施用，氟达拉滨便被快速脱磷酸化成2-氟-ara-A，然后在细胞内被脱氧胞苷激酶磷酸化成活性三磷酸盐2-氟-ara-ATP。然后此代谢产物干扰DNA复制(像是抑制DNA聚合酶α、核糖核苷酸还原酶、和DNA引发酶)，从而抑制DNA合成。所以，施用氟达拉滨导致分裂细胞中的细胞死亡增加。
在一些实施方案中，一种或多种预调理剂可以包括环磷酰胺和嘌呤类似物。嘌呤类似物可选自硫唑嘌呤，6-巯基嘌呤，巯基嘌呤，硫嘌呤，硫鸟嘌呤，氟达拉滨，喷司他丁，克拉屈滨，其任何类似物或功能衍生物，及其任何组合。在一个具体的实施方案中，一种或多种预调理剂包括环磷酰胺和喷司他丁。在一个具体的实施方案中，一种或多种预调理剂包括环磷酰胺和氟达拉滨。
在某些实施方案中，将第一剂量的一种或多种预调理剂施用于患者。例如，在一些实施方案中，第一剂量的环磷酰胺为约300mg/m2/天至约2000mg/m2/天。在另一个实施方案中，第一剂量的环磷酰胺高于300mg/m2/天且低于2000mg/m2/天。在其它实施方案中，环磷酰胺的剂量为约350mg/m2/天-约2000mg/m2/天，至少约400mg/m2/天-约2000mg/m2/天，约450mg/m2/天-约2000mg/m2/天，约500mg/m2/天-约2000mg/m2/天，约550mg/m2/天-约2000mg/m2/天，或约600mg/m2/天-约2000mg/m2/天。在其他实施方案中，环磷酰胺的剂量为约350mg/m2/天-约1500mg/m2/天，约350mg/m2/天-约1000mg/m2/天，约400mg/m2/天-约900mg/m2/天，约450mg/m2/天-约800mg/m2/天，约450mg/m2/天-约700mg/m2/天，约500mg/m2/天-约600mg/m2/天，或约300mg/m2/天-约500mg/m2/天。在另一个实施方案中，环磷酰胺的剂量为约350mg/m2/天，约400mg/m2/天，约450mg/m2/天，约500mg/m2/天，约550mg/m2/天，约600mg/m2/天，约650mg/m2/天，约700mg/m2/天，约800mg/m2/天，约900mg/m2/天，或约1000mg/m2/天。
在其它实施方案中，第一剂量的环磷酰胺为约200mg/m2/天至约3000mg/m2/天。在另一个实施方案中，第一剂量的环磷酰胺高于200mg/m2/天且低于3000mg/m2/天。在其它实施方案中，环磷酰胺的剂量为约200mg/m2/天-约3000mg/m2/天，约300mg/m2/天-约3000mg/m2/天，约400mg/m2/天-约3000mg/m2/天，约500mg/m2/天-约3000mg/m2/天，约600mg/m2/天-约3000mg/m2/天，约700mg/m2/天-约3000mg/m2/天，约800mg/m2/天-约3000mg/m2/天，约900mg/m2/天-约3000mg/m2/天，约1000mg/m2/天-约3000mg/m2/天，约1100mg/m2/天-约3000mg/m2/天，约1200mg/m2/天-约3000mg/m2/天，约1300mg/m2/天-约3000mg/m2/天，约1400mg/m2/天-约3000mg/m2/天，约1500mg/m2/天-约3000mg/m2/天，约1600mg/m2/天-约3000mg/m2/天，约1700mg/m2/天-约3000mg/m2/天，约1800mg/m2/天-约3000mg/m2/天，约1900mg/m2/天-约3000mg/m2/天，约2000mg/m2/天-约3000mg/m2/天，约200mg/m2/天-约2900mg/m2/天，约400mg/m2/天-约2800mg/m2/天，约500mg/m2/天-约2700mg/m2/天，约600mg/m2/天-约2600mg/m2/天，约700mg/m2/天-约2500mg/m2/天，约800mg/m2/天-约2400mg/m2/天，约900mg/m2/天-约2350mg/m2/天，约1000mg/m2/天-约2300mg/m2/天，约1100mg/m2/天-约2250mg/m2/天，或约1110mg/m2/天-约2220mg/m2/天。在一个实施方案中，第一剂量的环磷酰胺为200mg/m2/天。在另一个实施方案中，第一剂量的环磷酰胺为300mg/m2/天。在另一个实施方案中，第一剂量的环磷酰胺为500mg/m2/天。
在一些实施方案中，第一剂量的氟达拉滨为约20mg/m2/天至约900mg/m2/天。在一些实施方案中，氟达拉滨的剂量高于30mg/m2/天且低于900mg/m2/天。在一些实施方案中，氟达拉滨的剂量为约35mg/m2/天-约900mg/m2/天，约40mg/m2/天-约900mg/m2/天，约45mg/m2/天-约900mg/m2/天，约50mg/m2/天-约900mg/m2/天，约55mg/m2/天-约900mg/m2/天，或约60mg/m2/天-约900mg/m2/天。在一些实施方案中，氟达拉滨的剂量为约35mg/m2/天-约900mg/m2/天，约35mg/m2/天-约800mg/m2/天，约35mg/m2/天-约700mg/m2/天，约35mg/m2/天-约600mg/m2/天，约35mg/m2/天-约500mg/m2/天，约35mg/m2/天-约400mgm2/天，约35mg/m2/天-约300mg/m2/天，约35mg/m2/天-约200mg/m2/天，约35mg/m2/天-约100mg/m2/天，约40mg/m2/天-约90mg/m2/天，约45mg/m2/天-约80mg/m2/天，约45mg/m2/天-约70mg/m2/天，或约50mg/m2/天-约60mg/m2/天。在一些实施方案中，氟达拉滨的剂量为约20mg/m2/天，约25mg/m2/天，约30mg/m2/天，约35mg/m2/天，约40mg/m2/天，约45mg/m2/天，约50mg/m2/天，约55mg/m2/天，约60mg/m2/天，约65mg/m2/天，约70mg/m2/天，约75mg/m2/天，约80mg/m2/天，约85mg/m2/天，约90mg/m2/天，约95mg/m2/天，约100mg/m2/天，约200mg/m2/天，或约300mg/m2/天。在一些实施方案中，氟达拉滨的剂量为约20mg/m2/天，约25mg/m2/天，约30mg/m2/天，约35mg/m2/天，约40mg/m2/天，约45mg/m2/天，约50mg/m2/天，约55mg/m2/天，约60mg/m2/天，约65mg/m2/天，约70mg/m2/天，约75mg/m2/天，约80mg/m2/天，约85mg/m2/天，约90mg/m2/天，约95mg/m2/天，或约100mg/m2/天。在其它实施方案中，氟达拉滨的剂量为约110mg/m2/天，120mg/m2/天，130mg/m2/天，140mg/m2/天，150mg/m2/天，160mg/m2/天，170mg/m2/天，180mg/m2/天，或190mg/m2/天。在一些实施方案中，氟达拉滨的剂量为约210mg/m2/天，220mg/m2/天，230mg/m2/天，240mg/m2/天，250mg/m2/天，260mg/m2/天，270mg/m2/天，280mg/m2/天，或290mg/m2/天。在一个具体的实施方案中，氟达拉滨的剂量为约20mg/m2/天。在一个特定的实施方案中，氟达拉滨的剂量为约25mg/m2/天。在另一个实施方案中，氟达拉滨的剂量为约30mg/m2/天。在另一个实施方案中，氟达拉滨的剂量为约60mg/m2/天。
在一些实施方案中，环磷酰胺的剂量是100mg/m2/天(或110mg/m2/天，120mg/m2/天，130mg/m2/天，或140mg/m2/天)，而氟达拉滨的剂量为5mg/m2/天，10mg/m2/天，15mg/m2/天，20mg/m2/天，25mg/m2/天，30mg/m2/天，35mg/m2/天，40mg/m2/天，45mg/m2/天，50mg/m2/天，55mg/m2/天，60mg/m2/天，65mg/m2/天，70mg/m2/天，或75mg/m2/天。
在一些实施方案中，环磷酰胺的剂量是150mg/m2/天(或160mg/m2/天，170mg/m2/天，180mg/m2/天，或190mg/m2/天)，而氟达拉滨的剂量为5mg/m2/天，10mg/m2/天，15mg/m2/天，20mg/m2/天，25mg/m2/天，30mg/m2/天，35mg/m2/天，40mg/m2/天，45mg/m2/天，50mg/m2/天，55mg/m2/天，60mg/m2/天，65mg/m2/天，70mg/m2/天，或75mg/m2/天。
在一些实施方案中，环磷酰胺的剂量为约200mg/m2/天(或210mg/m2/天，220mg/m2/天，230mg/m2/天，或240mg/m2/天)，而氟达拉滨的剂量为5mg/m2/天，10mg/m2/天，15mg/m2/天，20mg/m2/天，25mg/m2/天，30mg/m2/天，35mg/m2/天，40mg/m2/天，45mg/m2/天，50mg/m2/天，55mg/m2/天，60mg/m2/天，65mg/m2/天，70mg/m2/天，或75mg/m2/天。
在一些实施方案中，环磷酰胺的剂量是250mg/m2/天(或260mg/m2/天，270mg/m2/天，280mg/m2/天，或290mg/m2/天)，而氟达拉滨的剂量为5mg/m2/天，10mg/m2/天，15mg/m2/天，20mg/m2/天，25mg/m2/天，30mg/m2/天，35mg/m2/天，40mg/m2/天，45mg/m2/天，50mg/m2/天，55mg/m2/天，60mg/m2/天，65mg/m2/天，70mg/m2/天，或75mg/m2/天。
在一些实施方案中，环磷酰胺的剂量是300mg/m2/天(或310mg/m2/天，320mg/m2/天，330mg/m2/天，或340mg/m2/天)，而氟达拉滨的剂量为5mg/m2/天，10mg/m2/天，15mg/m2/天，20mg/m2/天，25mg/m2/天，30mg/m2/天，35mg/m2/天，40mg/m2/天，45mg/m2/天，50mg/m2/天，55mg/m2/天，60mg/m2/天，65mg/m2/天，70mg/m2/天，或75mg/m2/天。
在一些实施方案中，环磷酰胺的剂量是350mg/m2/天(或360mg/m2/天，370mg/m2/天，380mg/m2/天，或390mg/m2/天)，而氟达拉滨的剂量为5mg/m2/天，10mg/m2/天，15mg/m2/天，20mg/m2/天，25mg/m2/天，30mg/m2/天，35mg/m2/天，40mg/m2/天，45mg/m2/天，50mg/m2/天，55mg/m2/天，60mg/m2/天，65mg/m2/天，70mg/m2/天，或75mg/m2/天。
在一些实施方案中，环磷酰胺的剂量是400mg/m2/天(或410mg/m2/天，420mg/m2/天，430mg/m2/天，或440mg/m2/天)，而氟达拉滨的剂量为5mg/m2/天，10mg/m2/天，15mg/m2/天，20mg/m2/天，25mg/m2/天，30mg/m2/天，35mg/m2/天，40mg/m2/天，45mg/m2/天，50mg/m2/天，55mg/m2/天，60mg/m2/天，65mg/m2/天，70mg/m2/天，或75mg/m2/天。
在一些实施方案中，环磷酰胺的剂量是450mg/m2/天(或460mg/m2/天，470mg/m2/天，480mg/m2/天，或490mg/m2/天)，而氟达拉滨的剂量为5mg/m2/天，10mg/m2/天，15mg/m2/天，20mg/m2/天，25mg/m2/天，30mg/m2/天，35mg/m2/天，40mg/m2/天，45mg/m2/天，50mg/m2/天，55mg/m2/天，60mg/m2/天，65mg/m2/天，70mg/m2/天，或75mg/m2/天。
在一些实施方案中，环磷酰胺的剂量是500mg/m2/天(或510mg/m2/天，520mg/m2/天，530mg/m2/天，或540mg/m2/天)，而氟达拉滨的剂量为5mg/m2/天，10mg/m2/天，15mg/m2/天，20mg/m2/天，25mg/m2/天，30mg/m2/天，35mg/m2/天，40mg/m2/天，45mg/m2/天，50mg/m2/天，55mg/m2/天，60mg/m2/天，65mg/m2/天，70mg/m2/天，或75mg/m2/天。
在一些实施方案中，环磷酰胺的剂量是550mg/m2/天(或560mg/m2/天，570mg/m2/天，580mg/m2/天，或590mg/m2/天)，而氟达拉滨的剂量为5mg/m2/天，10mg/m2/天，15mg/m2/天，20mg/m2/天，25mg/m2/天，30mg/m2/天，35mg/m2/天，40mg/m2/天，45mg/m2/天，50mg/m2/天，55mg/m2/天，60mg/m2/天，65mg/m2/天，70mg/m2/天，或75mg/m2/天。
在一些实施方案中，环磷酰胺的剂量是600mg/m2/天(或610mg/m2/天，620mg/m2/天，630mg/m2/天，或640mg/m2/天)，而氟达拉滨的剂量为5mg/m2/天，10mg/m2/天，15mg/m2/天，20mg/m2/天，25mg/m2/天，30mg/m2/天，35mg/m2/天，40mg/m2/天，45mg/m2/天，50mg/m2/天，55mg/m2/天，60mg/m2/天，65mg/m2/天，70mg/m2/天，或75mg/m2/天。
在一些实施方案中，环磷酰胺的剂量是650mg/m2/天(或660mg/m2/天，670mg/m2/天，680mg/m2/天，或690mg/m2/天)，而氟达拉滨的剂量为5mg/m2/天，10mg/m2/天，15mg/m2/天，20mg/m2/天，25mg/m2/天，30mg/m2/天，35mg/m2/天，40mg/m2/天，45mg/m2/天，50mg/m2/天，55mg/m2/天，60mg/m2/天，65mg/m2/天，70mg/m2/天，或75mg/m2/天。
在一些实施方案中，环磷酰胺的剂量是700mg/m2/天(或710mg/m2/天，720mg/m2/天，730mg/m2/天，或740mg/m2/天)，而氟达拉滨的剂量为5mg/m2/天，10mg/m2/天，15mg/m2/天，20mg/m2/天，25mg/m2/天，30mg/m2/天，35mg/m2/天，40mg/m2/天，45mg/m2/天，50mg/m2/天，55mg/m2/天，60mg/m2/天，65mg/m2/天，70mg/m2/天，或75mg/m2/天。
在一些实施方案中，环磷酰胺的剂量是750mg/m2/天(或760mg/m2/天，770mg/m2/天，780mg/m2/天，或790mg/m2/天)，而氟达拉滨的剂量为5mg/m2/天，10mg/m2/天，15mg/m2/天，20mg/m2/天，25mg/m2/天，30mg/m2/天，35mg/m2/天，40mg/m2/天，45mg/m2/天，50mg/m2/天，55mg/m2/天，60mg/m2/天，65mg/m2/天，70mg/m2/天，或75mg/m2/天。
在一些实施方案中，环磷酰胺的剂量为800mg/m2/天(或810mg/m2/天，820mg/m2/天，830mg/m2/天，或840mg/m2/天)，而氟达拉滨的剂量为5mg/m2/天，10mg/m2/天，15mg/m2/天，20mg/m2/天，25mg/m2/天，30mg/m2/天，35mg/m2/天，40mg/m2/天，45mg/m2/天，50mg/m2/天，55mg/m2/天，60mg/m2/天，65mg/m2/天，70mg/m2/天，或75mg/m2/天。
在一些实施方案中，环磷酰胺的剂量是850mg/m2/天(或860mg/m2/天，870mg/m2/天，880mg/m2/天，或890mg/m2/天)，而氟达拉滨的剂量为5mg/m2/天，10mg/m2/天，15mg/m2/天，20mg/m2/天，25mg/m2/天，30mg/m2/天，35mg/m2/天，40mg/m2/天，45mg/m2/天，50mg/m2/天，55mg/m2/天，60mg/m2/天，65mg/m2/天，70mg/m2/天，或75mg/m2/天。
在一些实施方案中，环磷酰胺的剂量是900mg/m2/天(或910mg/m2/天，920mg/m2/天，930mg/m2/天，或940mg/m2/天)，而氟达拉滨的剂量为5mg/m2/天，10mg/m2/天，15mg/m2/天，20mg/m2/天，25mg/m2/天，30mg/m2/天，35mg/m2/天，40mg/m2/天，45mg/m2/天，50mg/m2/天，55mg/m2/天，60mg/m2/天，65mg/m2/天，70mg/m2/天，或75mg/m2/天。
在一些实施方案中，环磷酰胺的剂量是950mg/m2/天(或960mg/m2/天，970mg/m2/天，980mg/m2/天，或990mg/m2/天)，而氟达拉滨的剂量为5mg/m2/天，10mg/m2/天，15mg/m2/天，20mg/m2/天，25mg/m2/天，30mg/m2/天，35mg/m2/天，40mg/m2/天，45mg/m2/天，50mg/m2/天，55mg/m2/天，60mg/m2/天，65mg/m2/天，70mg/m2/天，或75mg/m2/天。
在一些实施方案中，环磷酰胺的剂量是1000mg/m2/天(或1010mg/m2/天，1020mg/m2/天，1030mg/m2/天，或1040mg/m2/天)，而氟达拉滨的剂量为5mg/m2/天，10mg/m2/天，15mg/m2/天，20mg/m2/天，25mg/m2/天，30mg/m2/天，35mg/m2/天，40mg/m2/天，45mg/m2/天，50mg/m2/天，55mg/m2/天，60mg/m2/天，65mg/m2/天，70mg/m2/天，或75mg/m2/天。
在其他实施方案中，环磷酰胺的剂量在100mg/m2/天至650mg/m2/天，氟达拉滨的剂量在10mg/m2/天至50mg/m2/天。在其他实施方案中，环磷酰胺的剂量在150mg/m2/天至600mg/m2/天，氟达拉滨的剂量在20mg/m2/天至50mg/m2/天。在其他实施方案中，环磷酰胺的剂量在200mg/m2/天至550mg/m2/天，氟达拉滨的剂量在20mg/m2/天至40mg/m2/天。在其它实施方案中，环磷酰胺的剂量在250mg/m2/天至550mg/m2/天，氟达拉滨的剂量在15mg/m2/天至45mg/m2/天。
在某些实施方案中，环磷酰胺的剂量为1000mg/m2/天，氟达拉滨的剂量为60mg/m2/天，65mg/m2/天，70mg/m2/天，75mg/m2/天，80mg/m2/天，85mg/m2/天，90mg/m2/天，95mg/m2/天，100mg/m2/天，105mg/m2/天，110mg/m2/天，115mg/m2/天，120mg/m2/天，125mg/m2/天，130mg/m2/天，135mg/m2/天，140mg/m2/天，145mg/m2/天，150mg/m2/天，155mg/m2/天，160mg/m2/天，165mg/m2/天，175mg/m2/天，180mg/m2/天，185mg/m2/天，190mg/m2/天，195mg/m2/天，200mg/m2/天，205mg/m2/天，210mg/m2/天，215mg/m2/天，220mg/m2/天，225mg/m2/天，230mg/m2/天，235mg/m2/天，240mg/m2/天，245mg/m2/天，或250mg/m2/天。
在一个实施方案中，环磷酰胺的剂量是约500mg/m2/天，氟达拉滨的剂量是约60mg/m2/天。在另一个实施方案中，环磷酰胺的剂量是约300mg/m2/天，氟达拉滨的剂量是约30mg/m2/天。在另一个实施方案中，环磷酰胺的剂量是约200mg/m2/天，氟达拉滨的剂量是约20mg/m2/天。在另一个实施方案中，环磷酰胺的剂量是约200mg/m2/天，氟达拉滨的剂量是约30mg/m2/天。在另一个实施方案中，环磷酰胺的剂量是约500mg/m2/天，氟达拉滨的剂量是约30mg/m2/天。在另一个实施方案中，环磷酰胺的剂量是约300mg/m2/天，氟达拉滨的剂量是约60mg/m2/天。在另一个实施方案中，环磷酰胺的剂量是约500mg/m2/天，氟达拉滨的剂量是约60mg/m2/天。在另一个实施方案中，环磷酰胺的剂量为约1110mg/m2/天，氟达拉滨的剂量为约25mg/m2/天。在另一个实施方案中，环磷酰胺的剂量为约2220mg/m2/天，氟达拉滨的剂量为约25mg/m2/天，其中施用环磷酰胺和氟达拉滨后，患者表现出增加的IL-7，IL-15，IL-10，IL-5，IP-10，IL-8，MCP-1，PLGF，CRP，sICAM-1，sVCAM-1，或其任何组合(例如IL-15，IP-10和/或IL-7)的血清水平或降低的穿孔素和/或MIP-1b的血清水平。在另一个实施方案中，环磷酰胺的剂量是约60mg/kg/天，氟达拉滨的剂量是约25mg/m2/天，其中施用环磷酰胺和氟达拉滨后，患者表现出增加的IL-7，IL-15，IL-10，IL-5，IP-10，IL-8，MCP-1，PLGF，CRP，sICAM-1，sVCAM-1，或其任何组合(例如IL-15，IP-10和/或IL-7)的血清水平或降低的穿孔素和/或MIP-1b的血清水平。在另一个实施方案中，环磷酰胺的剂量是约30mg/kg/天，氟达拉滨的剂量是约25mg/m2/天。在一个具体的实施方案中，环磷酰胺在氟达拉滨之前、之后或同时施用。在某个实施方案中，环磷酰胺在氟达拉滨之前施用。
可以调节一种或多种预调理剂的施用时机以使效果最大化。在某些实施方案中，一种或多种预调理剂包含两种或更多种预调理剂。两种或更多种预调理剂可以同时或顺序施用。在一个具体的实施方案中，在第二种预调理剂例如氟达拉滨之前或之后，将第一预调理剂例如环磷酰胺施用于患者。
环磷酰胺和氟达拉滨的剂量可以一起或独立升高或降低。例如，在氟达拉滨的剂量降低的同时，可以增加环磷酰胺的剂量，而在氟达拉滨的剂量增加的同时可以降低环磷酰胺的剂量。或者，环磷酰胺和氟达拉滨的剂量可一起增加或减少。在一些实施方案中，环磷酰胺的剂量是300mg/m2/天，氟达拉滨的剂量是20mg/m2/天。在其他实施方案中，环磷酰胺的剂量是300mg/m2/天，氟达拉滨的剂量是30mg/m2/天。在其他实施方案中，环磷酰胺的剂量是300mg/m2/天，氟达拉滨的剂量是60mg/m2/天。在其他实施方案中，环磷酰胺的剂量是500mg/m2/天，氟达拉滨的剂量是20mg/m2/天。在其他实施方案中，环磷酰胺的剂量是500mg/m2/天，氟达拉滨的剂量是30mg/m2/天。在其他实施方案中，环磷酰胺的剂量是500mg/m2/天，氟达拉滨的剂量是60mg/m2/天。在其他实施方案中，环磷酰胺的剂量是200mg/m2/天，氟达拉滨的剂量是20mg/m2/天。在其他实施方案中，环磷酰胺的剂量为200mg/m2/天，氟达拉滨的剂量为30mg/m2/天。在其他实施方案中，环磷酰胺的剂量为200mg/m2/天，氟达拉滨的剂量为60mg/m2/天。
如本文所述，将施用T细胞疗法的那天指定为第0天。可以在施用T细胞疗法之前的任何时间施用一种或多种预调理剂。在一些实施方案中，从施用T细胞疗法之前至少七天，至少六天，至少五天，至少四天，至少三天，至少两天，或至少一天开始施用一种或多种预调理剂。在其它实施方案中，从施用T细胞疗法之前至少八天，至少九天，至少十天，至少十一天，至少十二天，至少十三天或至少十四天开始施用一种或多种预调理剂。在一个实施方案中，在施用T细胞疗法之前约七天开始施用一种或多种预调理剂。在另一个实施方案中，在T细胞疗法施用之前约五天开始施用一种或多种预调理剂。
在一个实施方案中，在施用T细胞疗法之前约七天开始施用第一预调理剂，并且在施用T细胞疗法之前约五天开始施用第二预调理剂。在一个具体的实施方案中，在施用T细胞疗法之前约七天和约六天向患者施用第一预调理剂，施用两天。在另一个实施方案中，在施用T细胞疗法之前约五天，四天，三天，两天和一天，向患者施用第二预调理剂，施用五天。在另一个实施方案中，在施用T细胞疗法之前约五天，四天和三天，向患者施用第一预调理剂，施用三天。
在一个具体的实施方案中，在施用T细胞疗法之前大约七天开始施用环磷酰胺，并且在施用嘌呤类似物(例如氟达拉滨或喷司他丁)之前大约五天开始施用T细胞疗法。在另一个实施方案中，在施用T细胞疗法之前约五天开始施用环磷酰胺，并且在施用T细胞疗法之前大约五天开始施用嘌呤类似物(例如氟达拉滨或喷司他丁)。
可以调整每种组分的施用时机以使效果最大化。通常，一种或多种预调理剂可以每天施用。在一些实施方案中，一种或多种预调理剂每天施用，施用至少一天，至少两天，至少三天，至少四天，至少五天，至少六天，或至少七天。在一些实施方案中，一种或多种预调理剂可以每天施用，施用至少一天，至少两天，至少三天，至少四天，至少五天，至少六天，或至少七天。在一个具体的实施方案中，一种或多种预调理剂每天施用，施用约三天。
如本文所述，将T细胞疗法施用于患者的那天指定为第0天。在一些实施方案中，在在第0天之前的第7天和第6天(即，第-7天和第-6天)向患者施用一种或多种预调理剂，例如环磷酰胺。在其它实施方案中，在第-5天，第-4天和第-3天将一种或多种预调理剂例如环磷酰胺施用于患者。在一些实施方案中，在第-5天，第-4天，第-3天，第-2天和第-1天向患者施用一种或多种预调理剂，例如氟达拉滨。在其他实施方案中，在第-5天，第-4天和第-3天向患者施用一种或多种预调理剂，例如氟达拉滨。
一种或多种预调理剂例如环磷酰胺和氟达拉滨可以在相同或不同的天数施用。如果在同一天施用环磷酰胺和氟达拉滨，则可以在氟达拉滨剂量之前或之后施用环磷酰胺剂量。在一个实施方案中，在第-7天和第-6天将环磷酰胺剂量施用于患者，并且在第-5天，第-4天，第-3天，第-2天和第-1天将氟达拉滨剂量施用于患者。在另一个实施方案中，在第-5天，第-4天和第-3天将环磷酰胺剂量施用于患者，并且在第-5天，第-4天和第-3天将氟达拉滨剂量施用于患者。
在某些实施方案中，一种或多种预调理剂例如环磷酰胺和氟达拉滨可以同时或顺序施用。在一个实施方案中，在氟达拉滨之前将环磷酰胺施用于患者。在另一个实施方案中，在氟达拉滨之后将环磷酰胺施用于患者。
一种或多种预调理剂可以通过任何途径给药，包括静脉内(IV)或口服。在一些实施方案中，通过IV在以下时间施用一个或多个预调理剂如环磷酰胺：约30分钟，约35分钟，约40分钟，约45分钟，约50分钟，约55分钟，约60分钟，约90分钟，约120分钟。在一些实施方案中，通过IV在以下时间施用一个或多个预调理剂如氟达拉滨：约10分钟，约15分钟，约20分钟，约25分钟，约30分钟，约35分钟，约40分钟，约45分钟，约50分钟，约55分钟，约60分钟，约90分钟，约120分钟。
在某些实施方案中，在施用一种或多种预调理剂例如环磷酰胺和氟达拉滨之后，向患者施用T细胞疗法。在一些实施方案中，T细胞疗法包括过继性细胞疗法。在某些实施方案中，过继性细胞治疗选自肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的免疫治疗，自体细胞治疗，工程改造的自体细胞治疗(eACT)，和同种异体T细胞移植。在一个具体的实施方案中，eACT包括施用工程改造的抗原特异性嵌合抗原受体(CAR)阳性(+)T细胞。在另一个实施方案中，eACT包括施用工程改造的抗原特异性T细胞受体(TCR)阳性(+)T细胞。在一些实施方案中，工程改造的T细胞疗法患者的肿瘤。
本文所述的方法中可以包括各种其他干预。例如，众所周知，预调理剂如环磷酰胺和氟达拉滨可能在施用后引起患者的不良事件。在本发明的范围内，还可以将组合物施用于患者以减少这些不良事件中的一些。在一些实施方案中，该方法还包括向患者施用盐溶液。盐溶液可以在施用一种或多种预调理剂之前或之后，或者在施用一种或多种预调理剂之前和之后施用于患者。在某些实施方案中，盐溶液与一种或多种预调理剂同时施用。在一个特定的实施方案中，在每次输注当天在施用一种或多种预调理剂之前和施用一种或多种预调理剂之后，向患者施用盐溶液。
盐溶液可以通过任何途径施用于患者，包括例如静脉内或口服。在一些实施方案中，所述方法包括施用约0.1L，约0.2L，约0.3L，约0.4L，约0.5L，约0.6L，约0.7L，约0.8L，约0.9L，约1L，约1.1L，约1.2L，约1.3L，约1.4L，约1.5L，约1.6L，约1.7L，约1.8L，约1.9L，或约2.0L盐水溶液。可以将盐溶液的NaCl溶解至约0.1％，约0.2％，约0.3％，约0.4％，约0.5％，约0.6％，约0.7％，约0.8％，约0.9％，约1.0％，约1.1％，约1.2％，约1.3％，约1.4％，约1.5％，约1.6％，约1.7％，约1.8％，约1.9％，或约2.0％的终浓度。在一个实施方案中，该方法包括向患者施用1.0L的0.9％NaCl盐溶液。在一个具体的实施方案中，所述方法包括在每次输注当天在施用一种或多种预调理剂之前和施用一种或多种预调理剂之后，向患者施用1.0L的0.9％NaCl盐溶液。
另外，还可对患者施用佐剂与赋形剂。例如，美司钠(mesna，2-巯基乙烷磺酸钠)是一种具有解毒剂作用以抑制在用环磷酰胺治疗后可能发生的出血性膀胱炎与血尿的佐剂。环磷酰胺在体内会被转化为尿毒性代谢产物(例如丙烯醛)。通过美司钠的巯基与乙烯基反应将这些代谢产物解毒。美司钠还使尿液中半胱胺酸增加。在某些实施方案中，该方法另外包含对患者施用美司钠。可在施用环磷酰胺与/或氟达拉滨前，及在施用环磷酰胺与/或氟达拉滨后，或在施用环磷酰胺与/或氟达拉滨前与后施用美司钠。在一个实施方案中，静脉内注射或口服(经口)美司钠。例如，可将口服美司钠与口服环磷酰胺一起给予。
此外，在本文所述的方法中还可对患者施用外源性细胞因子。如上述，假设减少内源淋巴细胞数量使内源性分子(例如细胞因子)的生物可用率增加，可有利于经过继性转移的T细胞的增殖、活化与运输。所以，可对患者施用各种细胞因子。在一个实施方案中，该方法另外包含施用一或多剂的IL-2、IL-15、IL-7、IL-10、IL-5、IP-10、IL-8、MCP-1、PLGF、CRP、sICAM-1、sVCAM-1、或其任何组合。在一个特定实施方案中，该方法包含施用一或多剂IL-2。IL-2剂量可为至少约10,000IU/kg、至少约50,000IU/kg、至少约100,000IU/kg、至少约200,000IU/kg、至少约400,000IU/kg、至少约600,000IU/kg、至少约700,000IU/kg、至少约800,000IU/kg、或至少约1,000,000IU/kg。
T细胞疗法
本发明提供了用于治疗适用于T细胞疗法的患者的癌症的方法，其包括通过向患者施用一种或多种预调理剂预调理患者，所述一种或多种预调理剂能够增加IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子的血清水平，其中当患者表现出增加的IL-15、IL-7和至少一种另外的细胞因子的血清水平时，用T细胞疗法治疗患者。由于预调理方案通过诱导通常有利于T细胞的体内恒定性扩张、活化和运输的IL-15、IL-7和至少一种另外的细胞因子来改良免疫环境，所以各种不同的T细胞疗法可以受益于本文描述的调理方法。本领域技术人员将理解，所述方法可以应用于治疗患者的任何方法，包括对患者施用一种或多种T细胞。
例如但不限于，本文所述的方法能够增强T细胞疗法有效性，该T细胞疗法可为选自下列的过继性T细胞疗法：肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)免疫疗法、自体细胞疗法、工程改造的自体细胞疗法(eACT)、同种异体T细胞移植、非T细胞移植、及其任何组合。过继性T细胞疗法大体上包括将能识别且结合至肿瘤细胞的自体或同种异体T细胞选出、在体外富集、和向患者施用的任何方法。TIL免疫疗法是一种过继性T细胞法，其中将能浸润肿瘤组织的淋巴细胞分离、在体外富集、和向患者施用。TIL细胞可为自体的或同种异体的。自体细胞疗法是一种过继性T细胞疗法，其包含从患者中分离能靶向肿瘤细胞的T细胞、在体外将该T细胞富集、和将该T细胞施用回同一患者。同种异体T细胞移植可包括在离体扩增的天然T细胞或基因工程改造的T细胞。如上面更详细说明的，工程改造的自体细胞疗法是一种过继性T细胞疗法，其中将患者的淋巴细胞分离、基因改造以表达肿瘤靶向分子、在体外扩增、和施用回同一患者。非T细胞移植可包括利用非T细胞(例如但不限于自然杀伤(NK)细胞)的自体或同种异体疗法。
在一个具体的实施方案中，本发明的T细胞疗法是工程改造的自体细胞疗法(eACTTM)。根据该实施方案，该方法可以包括在施用一种或多种预调理剂之前从患者收集血细胞。然后可以将分离的血细胞(例如T细胞)工程改造以表达嵌合抗原受体(“工程改造的CAR T细胞”)或T细胞受体(“工程改造的TCR T细胞”)。在一些实施方案中，T细胞疗法包括工程改造的CAR T细胞疗法或工程改造的TCR T细胞疗法。在具体实施方案中，在施用一种或多种预调理剂之后，将工程改造的CAR T细胞或工程改造的TCR T细胞施用于患者。在一些实施方案中，工程改造的CAR T细胞或工程改造的TCR T细胞治疗患者的肿瘤。在一个实施方案中，工程改造的CAR T减小肿瘤的大小。在另一个实施方案中，工程改造的TCR T细胞减小肿瘤的大小。
在一个实施方案中，T细胞被工程改造以表达嵌合抗原受体。嵌合抗原受体可以包含结合肿瘤抗原的结合分子。结合分子可以是抗体或其抗原结合分子。例如，抗原结合分子可以选自scFv，Fab，Fab'，Fv，F(ab')2和dAb，及其任何片段或组合。
嵌合抗原受体可以进一步包含铰链区。铰链区可以衍生自IgG1，IgG2，IgG3，IgG4，IgA，IgD，IgE，IgM，CD28或CD8α的铰链区。在一个具体的实施方案中，铰链区衍生自IgG4的铰链区。
嵌合抗原受体还可以包含跨膜结构域。跨膜结构域可以是任何跨膜分子的跨膜结构域，其是免疫细胞上的共受体或免疫球蛋白超家族成员的跨膜结构域。在某些实施方案中，跨膜结构域衍生自CD28，CD8α，CD4或CD19的跨膜结构域。在一个具体实施方案中，跨膜结构域包含衍生自CD28跨膜结构域的结构域。
嵌合抗原受体还可以包含一个或多个共刺激信号传导区。例如，共刺激信号传导区可以是CD28，OX-40，4-1BB，CD27，诱导型T细胞共刺激物(ICOS)，CD3γ，CD3δ，CD3ε，CD247，Igα(CD79a)，或Fcγ受体。在一个具体的实施方案中，共刺激信号传导区是CD28信号传导区。
在一个实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含CD3ζ信号传导结构域。
可以工程改造嵌合抗原受体以靶向特定的肿瘤抗原。在一些实施方案中，肿瘤抗原选自CD19，CD20，ROR1，CD22，癌胚抗原，甲胎蛋白，CA-125，5T4，MUC-1，上皮肿瘤抗原，前列腺特异性抗原，黑素瘤相关抗原，突变p53，突变ras，HER2/Neu，叶酸结合蛋白，HIV-1包膜糖蛋白gp120，HIV-1包膜糖蛋白gp41，GD2，CD123，CD33，CD138，CD23，CD30，CD56，c-Met，间皮素，GD3，HERV-K，IL-11Rα，κ链，λ链，CSPG4，ERBB2，EGFRvIII，VEGFR2，HER2-HER3组合，HER1-HER2组合，及其任何组合。在一个具体的实施方案中，肿瘤抗原是CD19。
在另一个实施方案中，T细胞疗法包括向患者施用表达T细胞受体的工程改造的T细胞(“工程改造的TCR T细胞”)。T细胞受体(TCR)可以包含针对肿瘤抗原的结合分子。在一些实施方案中，肿瘤抗原选自CD19，CD20，ROR1，CD22，癌胚抗原，甲胎蛋白，CA-125，5T4，MUC-1，上皮肿瘤抗原，前列腺特异性抗原，黑素瘤相关抗原，突变p53，突变ras，HER2/Neu，叶酸结合蛋白，HIV-1包膜糖蛋白gp120，HIV-1包膜糖蛋白gp41，GD2，CD123，CD33，CD138，CD23，CD30，CD56，c-Met，间皮素，GD3，HERV-K，IL-11Rα，κ链，λ链，CSPG4，ERBB2，EGFRvIII，VEGFR2，HER2-HER3组合，HER1-HER2组合，及其任何组合。
在一个实施方案中，TCR包含结合病毒癌基因的结合分子。在一个具体的实施方案中，病毒癌基因选自人类乳头瘤病毒(HPV)，EB病毒(EBV)和人嗜T淋巴细胞病毒(HTLV)。
在又一个实施方案中，TCR包含结合睾丸、胎盘或胎儿肿瘤抗原的结合分子。在一个具体的实施方案中，睾丸、胎盘或胎儿肿瘤抗原选自NY-ESO-1，滑膜肉瘤X断裂点2(SSX2)，黑素瘤抗原(MAGE)，及其任何组合。
在另一个实施方案中，TCR包含结合谱系特异性抗原的结合分子。在一个具体的实施方案中，谱系特异性抗原选自T细胞识别的黑素瘤抗原1(MART-1)，gp100，前列腺特异性抗原(PSA)，前列腺特异性膜抗原(PSMA)，前列腺干细胞抗原(PSCA)，及其任何组合。
在一个实施方案中，T细胞疗法包括向患者施用表达与CD19结合的嵌合抗原受体的工程改造的CAR T细胞，并进一步包含CD28共刺激结构域和CD3-zeta信号传导区。在一个具体的实施方案中，T细胞疗法包括向患者施用KTE-C19。
包括在本发明中的T细胞疗法包括将T细胞转移给患者。T细胞可以以治疗有效量施用。例如，治疗有效量的T细胞，例如工程改造的CAR+T细胞或工程改造的TCR+T细胞，可以是至少约104个细胞，至少约105个细胞，至少约106个细胞，至少约107个细胞，至少约108个细胞，至少约109个细胞，或至少约1010个细胞。在另一个实施方案中，治疗有效量的T细胞，例如工程改造的CAR+T细胞或工程改造的TCR+T细胞为约104个细胞，约105个细胞，约106个细胞，约107个细胞，或约108个细胞。在一个具体的实施方案中，治疗有效量的T细胞(例如工程CAR+T细胞或工程改造的TCR+T细胞)为约1×105个细胞/kg，约2×105个细胞/kg，约3×105个细胞/kg，约4×105个细胞/kg，约5×105个细胞/kg，约6×105个细胞/kg，约7×105个细胞/kg，约8×105个细胞/kg，约9×105个细胞，约1×106个细胞/kg，约2×106个细胞/kg，约3×106个细胞/kg，约4×106个细胞/kg，约5×106个细胞/kg，约6×106个细胞/kg，约7×106个细胞/kg，约8×106个细胞/kg，约9×106个细胞/kg，约1×107个细胞/kg，约2×107个细胞/kg，约3×107个细胞/kg，约4×107个细胞/kg，约5×107个细胞/kg，约6×107个细胞/kg，约7×107个细胞/kg，约8×107个细胞/kg，或约9×107个细胞/kg。在一个具体的实施方案中，治疗有效量的T细胞，例如工程改造的CAR+T细胞或工程改造的TCR+T细胞是约2×106个细胞/kg。
在其他实施方案中，治疗有效量T细胞的(例如，工程改造的CAR+T细胞或工程改造的TCR+T细胞)为约1.0×105个细胞/kg至约2×108个细胞/kg，约2.0×105个细胞/kg至约2×108个细胞/kg，约3.0×105个细胞/kg至约2×108个细胞/kg，约4.0×105个细胞/kg至约2×108个细胞/kg，约5.0×105个细胞/kg至约2×108个细胞/kg，约6.0×105个细胞/kg至约2×108个细胞/kg，约7.0×105个细胞/kg至约2×108个细胞/kg，约8.0×105个细胞/kg至约2×108个细胞/kg，约9.0×105个细胞/kg至约2×108个细胞/kg，约0.5×106个细胞/kg至约2×108个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约3×106个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约4×106个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约5×106个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约6×106个细胞/kg到约9×107个细胞/kg，约7×106个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约8×106个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约9×106个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约1×107个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约2×107个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约3×107个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约4×107个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约5×107个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约6×107个细胞/kg至约9×107个细胞，约7×107个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约8×107个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约8×107个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约7×107个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约6×107个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约5×107个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约4×107个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约3×107个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约2×107个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约1×107个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约9×106个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约8×106个细胞/kg，约2×106个细胞/kg到约7×106个细胞/kg，约2×106个细胞/kg到约6×106个细胞/kg，从约2×106个细胞/kg到约5×106个细胞/kg，从约2×106个细胞/kg至约4×106个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约3×106个细胞/kg，约3×106个细胞/kg至约8×107个细胞/kg，约4×106个细胞/kg至约7×107个细胞/kg，约5×106个细胞/kg至约6×107个细胞/kg，约6×106个细胞/kg至约5×107个细胞/kg，约7×106个细胞/kg至约4×107个细胞/kg，约8×106个细胞/kg至约3×107个细胞/kg，或约9×106个细胞/kg至约2×107个细胞/kg。在一个实施方案中，治疗有效量的工程改造的CAR T细胞为约0.8×106个细胞/kg至约1.2×106个T细胞/kg。在一个具体的实施方案中，治疗有效量的工程改造的CAR T细胞为2.0×105个细胞/kg。在一个具体的实施方案中，治疗有效量的工程改造的CAR T细胞为1.0×106个细胞/kg。
癌症治疗
本发明的方法可用于治疗受试者中的癌症，减小肿瘤的大小，杀死肿瘤细胞，防止肿瘤细胞增殖，防止肿瘤生长，消除患者的肿瘤，防止肿瘤复发，防止肿瘤转移，诱导患者缓解，或其任何组合。在某些实施方案中，所述方法诱导完全反应。在其他实施方案中，所述方法诱导部分反应。
可以治疗的癌症包括没有血管化、尚未实质血管化或血管化的肿瘤。癌症也可能包括实体瘤或非实体瘤。在某些实施方案中，癌症可选自衍生自以下的肿瘤：骨癌，胰腺癌，皮肤癌，头或颈部癌，皮肤或眼内恶性黑素瘤，子宫癌，卵巢癌，直肠癌，肛区癌，胃癌，睾丸癌，子宫癌，输卵管癌，子宫内膜癌，宫颈癌，阴道癌，外阴癌，霍奇金病，富含T细胞的B细胞淋巴瘤(TCRBCL)，原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)，非霍奇金淋巴瘤，食管癌，小肠癌，内分泌系统癌，甲状腺癌，甲状旁腺癌，肾上腺癌，软组织肉瘤，尿道癌，阴茎癌，慢性或急性白血病，急性骨髓性白血病，慢性骨髓性白血病，急性淋巴母细胞白血病，慢性淋巴母细胞白血病，儿童实体瘤，淋巴细胞性淋巴瘤，膀胱癌，肾或输尿管癌，肾盂癌，中枢神经系统(CNS)肿瘤，原发性CNS淋巴瘤，肿瘤血管生成，脊轴肿瘤，脑干胶质瘤，垂体腺瘤，卡波西肉瘤，表皮样癌，鳞状细胞癌，T细胞淋巴瘤，环境诱导的癌症，包括由石棉诱导的癌症，以及所述癌症的组合。
在一个实施方案中，该方法可用于治疗肿瘤，其中肿瘤是淋巴瘤或白血病。淋巴瘤和白血病是特异性影响淋巴细胞的血液癌症。血液中的所有白细胞衍生自骨髓中发现的单一类型的多能造血干细胞。这种干细胞产生髓样祖细胞和淋巴祖细胞，然后产生在体内发现的各种类型的白细胞。由髓样祖细胞产生的白细胞包括T淋巴细胞(T细胞)，B淋巴细胞(B细胞)，自然杀伤细胞和浆细胞。来自淋巴祖细胞的白细胞包括巨核细胞，肥大细胞，嗜碱性粒细胞，嗜中性粒细胞，嗜酸性粒细胞，单核细胞和巨噬细胞。淋巴瘤和白血病可影响患者的这些细胞类型中的一种或多种。
通常，淋巴瘤可分为至少两个亚组：霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。非霍奇金淋巴瘤(NHL)是起源于B淋巴细胞，T淋巴细胞或自然杀伤细胞的异质性癌症组。在美国，B细胞淋巴瘤占报告病例的80-85％。据估计，2013年约有69,740例NHL新病例和超过19,000例与该病相关的死亡病例发生。非霍奇金淋巴瘤是最普遍的血液恶性肿瘤，是男性和女性中新癌症的第七位主要部位，占所有新癌症病例的4％和与癌症相关的死亡人数的3％。
弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是NHL最常见的亚型，约占NHL病例的30％。DLBCL每年在美国新增约22,000个诊断。它被归类为侵袭性淋巴瘤，大部分患者常规化疗治愈(NCCN指南NHL 2014)。
DLBCL的一线疗法通常包括含利妥昔单抗的含蒽环类方案，如R-CHOP(利妥昔单抗，环磷酰胺，多柔比星，长春花新碱，和泼尼松)，其具有约80％的客观反应率和完全反应率约为50％(Coiffier 2002)，约三分之一的患者有初始疗法或在R-CHOP之后复发的难治性疾病(Sehn 2005)。对于一线疗法后复发的患者，约40-60％的患者可以通过另外的化疗获得第二次反应。符合自体干细胞移植(ASCT)二线疗法护理标准的患者包括利妥昔单抗和联合化疗，如R-ICE(利妥昔单抗，异环磷酰胺，卡铂，和依托泊苷)和R-DHAP(利妥昔单抗，地塞米松，阿糖胞苷，和顺铂)，每个患者的客观反应率约为63％，完全反应率约为26％(Gisselbrecht 2010)。对二线疗法有反应并被认为适合移植的患者接受高剂量化疗和ASCT巩固治疗，约有一半的移植患者有疗效(Gisselbrecht 2010)。ASCT失败的患者预后很差，没有治愈的选择。
与DLBCL相比，原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)具有不同的临床、病理和分子特征。PMBCL被认为是由胸腺(髓)B细胞产生的，代表约3％的被诊断为DLBCL的患者。PMBCL通常在生命的第四个十年中的年轻成年人群中被鉴定，并且具有轻微的女性倾向性。基因表达谱分析表明PMBCL中的去调节途径与霍奇金淋巴瘤重叠。PMBCL的初始疗法通常包括使用利妥昔单抗的含蒽环类方案，如输注剂量调整的依托泊苷，多柔比星和环磷酰胺与长春花新碱，泼尼松和利妥昔单抗(DA-EPOCH-R)，联用或不联用区域放疗(field radiotherapy)。
滤泡性淋巴瘤(FL)(B细胞淋巴瘤)是NHL最常见的惰性(生长缓慢)形式，占所有NHL的约20％至30％。一些FL患者将组织学上转化(TFL)为DLBCL，其更具侵袭性且与不良结果相关。组织学上转化至DLBCL 15年来以每年约3％的速度发生，随后几年转化的风险继续下降。组织学转化的生物学机制尚不清楚。TFL的初始治疗受到之前滤泡性淋巴瘤疗法的影响，但一般包括含有蒽环类药物的利妥昔单抗方案以消除疾病的侵袭性成分。
复发/难治性PMBCL和TFL的治疗选择类似于DLBCL中的那些。鉴于这些疾病的低发病率，在这些患者人群中没有进行大的前瞻性随机研究。化疗难治性疾病患者与难治性DLBCL患者预后相似或更差。
总之，具有难治性侵袭性NHL(例如DLBCL，PMBCL和TFL)的受试者具有重大的未满足的医疗需求，并且在这些人群中需要进一步的研究以及新的治疗。
因此，在一些实施方案中，该方法可用于治疗淋巴瘤或白血病，其中淋巴瘤或白血病是B细胞恶性肿瘤。在一些实施方案中，淋巴瘤或白血病选自B细胞慢性淋巴细胞性白血病/小细胞淋巴瘤，B细胞幼淋巴细胞性白血病，淋巴浆细胞性淋巴瘤(例如瓦氏巨球蛋白血症)，脾边缘区淋巴瘤，多毛细胞白血病，浆细胞瘤(例如浆细胞骨髓瘤(即多发性骨髓瘤)或浆细胞瘤)，结外边缘区B细胞淋巴瘤(例如MALT淋巴瘤)，结节边缘区B细胞淋巴瘤，滤泡性淋巴瘤(FL)，转化的滤泡性淋巴瘤(TFL)，原发性皮肤滤泡中心淋巴瘤，套细胞淋巴瘤，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)，EB病毒阳性DLBCL，淋巴瘤样肉芽肿病，原发性纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤(PMBCL)，血管内大B细胞淋巴瘤，ALK+大B细胞淋巴瘤，浆母细胞性淋巴瘤，原发性渗出性淋巴瘤，HHV8相关多中心Castleman病中产生的大B细胞淋巴瘤，伯基特淋巴瘤/白血病，T细胞幼淋巴细胞白血病，T细胞大颗粒淋巴细胞白血病，侵袭性NK细胞白血病，成人T细胞白血病/淋巴瘤，结外NK/T细胞淋巴瘤，肠病相关T细胞淋巴瘤，肝脾T细胞淋巴瘤，母细胞性NK细胞淋巴瘤，蕈样肉芽肿病/塞扎里综合征，原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤，淋巴瘤样丘疹病，外周T细胞淋巴瘤，血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤，间变性大细胞淋巴瘤，B淋巴母细胞性白血病/淋巴瘤，具有复发性遗传异常的B淋巴母细胞性白血病/淋巴瘤，T淋巴母细胞性白血病/淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤。在一些实施方案中，癌症对一种或多种在先治疗是难治的，和/或癌症在一种或多种在先治疗后已经复发。
在某些实施方案中，癌症选自滤泡性淋巴瘤，转化的滤泡性淋巴瘤，弥漫性大B细胞淋巴瘤，和原发性纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤。在一个具体的实施方案中，癌症是弥漫性大B细胞淋巴瘤。
在一些实施方案中，癌症对化疗，放疗，免疫疗法(包括T细胞疗法和/或用抗体或抗体-药物缀合物的治疗)，自体干细胞细胞移植，或其任何组合是难治性的或在其后已经复发。在一个具体的实施方案中，癌症是难治性弥漫性大B细胞淋巴瘤。
通过以下实施例进一步说明本发明，其不应被解释为进一步的限制。本申请通篇引用的所有参考文献的内容明确地并入本文作为参考。
实施例
实施例1
设计一项临床1/2期、单臂、非盲试验以测定对患B细胞恶性肿瘤的受试者施用的抗CD19 CAR+T细胞的安全性与可行性。
签署知后同意书且符合研究资格的受试者参加研究并接受白细胞单采以得到用于产生抗CD19 CAR+T细胞的PBMC。在入院前用调理性化疗治疗受试者为在第0天的抗CD19CAR+T细胞单一输注做准备。然后在抗CD19 CAR+T细胞输注后3小时，对某些受试者用白介素2治疗(仅第1组)。若在第一次输注后有部分反应(PR)或完全反应(CR)然后疾病进展的反应，则用第二剂量的抗CD19 CAR+T细胞再治疗。
有三组受试者参加。第1组包括8个受试者(包括1个受试者经再治疗)，用从3×106个至30×106个抗CD19 CAR+T细胞/kg范围内的抗CD19CAR+T细胞进行给药。抗CD19 CAR+T细胞的给药之后的调理方案由下述组成：60至120mg/kg(2220至4440mg/m2)的高剂量环磷酰胺二天，接着25mg/m2的氟达拉滨五天。在施用抗CD19 CAR+T细胞后，这些受试者还接受720,000IU/kg的高剂量白介素2(IL-2)(每8小时直到15个剂量或毒性阻碍另外的给药为止)以刺激其增生。
第2组包括15个受试者(包括来自第1组且经再治疗2个受试者)，其接受变化剂量的抗CD19 CAR+T细胞施用1×106个至5×106个抗CD19 CAR+T细胞/kg，接着接受高剂量环磷酰胺与氟达拉滨但不施用白介素2。
第3组包括11个受试者，其接受300mg/m2的环磷酰胺及30mg/m2的氟达拉滨的减少调理方案，二者施用3个并发日但不施用IL-2。这些受试者的前面7个与后面4个分别接受1×106个抗CD19 CAR+T细胞与2×106个抗CD19 CAR+T细胞的抗CD19 CAR+T细胞输注。
人口统计学
在表1中提供了受试者人口统计特征与疾病特性。三十二(32)个受试者参加，其中19个受试者(59％)患DLBCL或PMBCL，7个受试者(22％)患CLL，及6个受试者(19％)患其他惰性NHL(包括惰性滤泡性淋巴瘤与脾边缘区淋巴瘤)。大多数受试者患难治之症(84％)，且已经接受3种先前一线疗法的中值的治疗。所有患侵袭性NHL的受试者先前接受过抗CD20治疗、铂联合化疗，并且95％的先前接受过以蒽环类为基础的化疗。
药代动力学
使用qPCR分析评估在第0天初次施用后在各种时间点在外周血中的抗CD19 CAR+T细胞数量，及利用对于存在于抗CD19 CAR构建体中的scFv具有特异性的抗体试剂通过流式细胞术所产生的标准曲线确认(Kochenderfer et al.,"B-cell depletion andremissions of malignancy along with cytokine-associated toxicity in aclinical trial of anti-CD19 chimeric-antigen-receptor-transduced T cells,"Blood 119:2709-20(2012))。
表1——临床试验受试者的人口统计学。
在第1组中，输注3×106个至30×106个抗CD19 CAR+T细胞/kg。在前面6个受试者中，在输注后2周内检测出血液循环中的抗CD19CAR+T细胞在较高的量，达到总PBMC的至多0.02至1％，然后快速衰退并在50天后不可测。受试者7与8，其被给药最高数量的抗CD19CAR+T细胞(分别是28×106个与30×106个抗CD19 CAR+T细胞/kg)，具有达到总PBMC的抗CD19 CAR+T细胞的>10％的较高的高峰百分率，和在血液中抗CD19 CAR+T细胞的较长期持久性(分别是>130与180天)。
在第2组中(没有白介素2治疗)，在2周内抗CD19 CAR+T细胞在外周血中显示类似的扩增，然后在数周内衰退并从血液循环中完全消失(表2)。
总的来说，在抗CD19 CAR+T细胞的剂量与其在外周血中的扩增与持久性之间没有明显的关系。同样，至今在抗CD19 CAR+T细胞的剂量、抗CD19 CAR+T细胞在血液中的扩增或持久性、和与此治疗有关的临床反应或毒性之间没有明显的关系。
表2——第2组受试者外周血中抗CD19 CAR+T细胞扩增和持久性。
在第1和2组中，在输注后7至14天的初始扩增后，抗CD19 CAR+T细胞没有继发扩增。至今，没有证据显示在测试受试者中致癌转化归因于CAR表达逆转录病毒的基因组插入。在数据截止时第3组结果尚不可得。
功效
临床医师对32个受试者评估安全性并对29个受试者评估功效。可评估功效的29个受试者的总反应率是76％。在29个受试者中有十一(11)个(38％)达到CR及11/29个受试者(38％)达到PR(图2A与2B；表3)。
在29个可评估的受试者中有十六(16)个(55％)自其第一次治疗保持反应，有12个受试者(包括经再治疗的受试者)的治疗反应持续时间超过1年(表3)。将三个有反应受试者在进展后再治疗，全部都有持续的反应(17.4个月至52.2个月以上)。
如表3中所示，在19个患难治性侵袭性DLBCL/PMBCL的受试者中有17个可评估疾病反应(有1个受试者不可评估；1个受试者尚未被评估)。在这17个受试者中，有11个(65％)有反应而有6/17受试者(35％)达到CR。反应中值持续时间是7.3个月。
表3——肿瘤类型的客观反应率和反应持续时间。
“+”表示仍然在进行中的反应
在7个患CLL的可评估受试者中有6个(86％)有反应，有4/7受试者(57％)达到CR(表3)。反应中值持续时间是22.2个月，有4/7受试者(57％)仍有反应，包括有3个持续有反应超过27个月(表3)。
在5个患惰性NHL的可评估受试者中有5个(100％)有反应，有1/5个(20％)达到CR。反应中值持续时间是18.8个月(表3)。有5个受试者(5/5；100％)持续有反应，其中有2个有反应超过45个月(表4)。
安全
不良事件
用抗CD19 CAR+T细胞治疗32个受试者，在最后一个受试者治疗时仍没有报告不良事件。整体安全性总结包括32个经治疗的受试者全部。根据群组的总结包括受试者1010003与1010004两次的安全数据，一次是当这些受试者在第1组中被治疗时及第二次是当这些受试者在第2组中被治疗时(用抗CD19 CAR+T细胞再治疗)。
不良事件总结
不良事件总结请参见表4。总的来说，31个受试者(97％)经历任何不良事件，0个受试者(0％)经历最差的第3级，29个受试者(91％)经历最差的第4级，及2个受试者(6％)有致死性不良事件。二十个受试者(63％)经历抗CD19 CAR+T细胞相关的不良事件；6个受试者(19％)经历最差的第3级，8个受试者(25％)经历最差的第4级，及没有受试者经历第5级事件。十六(16)个受试者(50％)经历严重不良事件；3个受试者(9％)经历最差的第3级，9个受试者(28％)经历最差的第4级，及2个受试者(6％)经历最差的第5级。
剂量限制性毒性
在第1、2和3组中的DLT发生率分别是38％、40％、和0％。除受试者1010002之外，DLT主要是神经毒性，2例的高肌酸酐，和1例的缺氧症与低血压中的每一个。表6提供DLT列表。在第3组中没有报告DLT。在第3组中的调理方案是用2×106个抗CD19 CAR+T细胞/kg研究。
表4——不良事件的总结。
细胞因子释放综合征
在结合CD19靶后经活化的T细胞诱导细胞因子释放。使用广泛检索策略，可归因于CRS的治疗时突发性不良事件包括发烧、发热性嗜中性粒细胞减少症、低血压、急性血管渗漏综合征、高肌酸酐、肾功能衰竭、缺氧症、和胸腔积液。二十八(28)个受试者(88％)报告可归因于细胞因子释放的不良事件，其中24个受试者(75％)报告一个≥第3级事件，并且6个受试者(19％)经历严重事件。起因于共治疗(例如IL-2(用于第1组)和调理性化疗(引起发热性嗜中性粒细胞减少症))的不良事件可能混淆此分析。
CRS的临床表现典型地在抗CD19 CAR+T细胞输注后的第一周内出现，而在第3组受试者中较不常见。在第3组的11个受试者中只有1个经历第3级低血压，和4个经历第3级发烧。只有在第1与2组受试者中报告急性血管渗漏综合征、少尿症、高肌酸酐、和肾功能衰竭事件。
表5——剂量限制性毒性。
神经性不良事件
在所有三组中都观察到神经性不良事件，主要是失语症/言语障碍症、意识错乱、运动神经病变及嗜睡。十三个受试者(41％)有严重的≥第3级神经毒性，和11个受试者(34％)经历严重事件。
因神经毒性而死亡的受试者在病毒性A型流行性感冒感染情况下有CNS脑血管缺血事件。研究员认为这事件与抗CD19 CAR+T细胞无关。
对神经性不良事件而言，五个有神经毒性事件的受试者(16％)为了保护气道而需要机械换气法；这些受试者全都在第1与2组。在第3组中没有受试者被插管。
神经性不良事件在抗CD19 CAR+T细胞输注后的第2至17天之间有6天的中值发病时间(除在1个受试者中出现第4级脊髓炎之外)，并且在抗CD19 CAR+T细胞输注后的第110天发病。考虑到发病时间、表现与脑部MRI发现，研究员认为这事件与氟达拉滨有关而非归因于抗CD19 CAR+T细胞。神经性不良事件消退成第1级或更好的中值时间是输注后14天。
死亡
两个受试者在化疗与抗CD19 CAR+T细胞输注30天内死亡。受试者2在研究中治疗后18天死亡，死因是脑梗塞并发病毒性肺炎、甲型流感感染、大肠杆菌感染、呼吸困难、和缺氧症。受试者11患有PMBCL合并广泛纤维化纵膈淋巴瘤，在研究中治疗后16天死亡。在验尸时未确定死因并且该验尸报告推断死因很可能是心律不齐并PMBCL侵犯纵膈。研究员认为无一事件与抗CD19 CAR+T细胞有关。
实施例2
对选定患者施用调理性化疗法，该调理性化疗法包含300mg/m2/天的环磷酰胺及30mg/m2/天的氟达拉滨。从第-5至-3天施用该调理性化疗法，施用三天。在第0天，第一亚群患者(患者22至28)(表6)接受10天制造的新鲜抗CD19 CAR+T细胞，并且第二亚群患者(患者29至32)接受6天制造的经冷冻保存抗CD19 CAR+T细胞。
使用Millipore HCD8MAG15K17PMX试剂盒(T1、T2、免疫调节性细胞因子、趋化因子、免疫效应子)由luminex来测试患者血清。在调理前与后测量下列的量：白介素15(IL-15)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、γ诱导蛋白10(IP-10)、胎盘生长因子(PLGF)、可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)、C-反应蛋白(CRP)、血管内皮生长因子D(VEGF-D)、巨噬细胞炎症蛋白1β(MIP-1β)。
表6——患者22-28的病况及结果数据
患者 病况 结果
22 DLBCL PR
23 FL PR
24 DLBCL PR
25 DLBCL PR
26 DLBCL PD
27 DLBCL CR
28 DLBCL PD
DLBCL＝弥漫性大B细胞淋巴瘤；FL＝滤泡性淋巴瘤；PR＝部分反应；CR＝完全反应；PD＝疾病进展
在患者22至28中，患者22至25和27显示至少部分反应，并且患者26与28显示在治疗后进行性疾病。对患者22至26而言，IL-15、MCP-1、和PLGF水平显示在患者血清中至少有些增加(图4A、4B、与4D)，而IP-10、sICAM-1、CRP、VEGF-D、和MIP-1β水平在某些患者中增加并在其余患者中保持稳定或减少(图4C与4E至4H)。对患者27和28只测量IL-15(图4A)。
在有反应患者(有部分反应或完全反应)和无反应患者(有进行性疾病)之间观察到标志物水平有些差异。相对于基线值而言，IL-15水平在有反应患者中平均增加到约35倍(从增加到约10倍至增加到约55倍不等)，而在无反应患者中的IL-15水平各自增加到少于约10倍(图5A)。MCP-1量在有反应患者中平均增加到约5倍(从增加到约2倍至增加到约7倍不等)，而在无反应患者(患者26)中的MCP-1水平增加到少于4倍(图5B)。IP-10水平在有反应患者中平均增加到约3.5倍(从增加到约2倍至增加到约7倍不等)，而在无反应患者中的IP-10的血清水平实质上没有变化(图5C)。PLGF水平在有反应患者中平均增加到约30倍(从稍微增加到约2倍或更少至增加到约100倍以上不等)，而在无反应患者中的血清PLGF水平只有稍微增加(图5D)。sICAM-1水平在有反应患者中平均增加到约3倍(从实质上没有变化至增加到约4.5倍不等)，而在无反应患者中的sICAM-1的血清水平实质上没有变化(图5E)。CRP水平在有反应患者中平均增加到约10倍(从实质上没有变化至增加到约25倍不等)，而在无反应患者中的CRP的血清水平实质上没有变化(图5F)。VEGF-D水平在有反应患者中平均增加到约3倍(从实质上没有变化至增加到约6倍不等)，而在无反应患者中的VEGF-D的血清水平实质上没有变化(图5G)。MIP-1β的血清水平在有反应患者中平均增加到约1.5倍(从实质上没有变化至增加到约3倍不等)，而在无反应患者中的MIP-1β的血清水平减少约50％(图5H)。
对患者30至33施用6天制造的经冷冻保存细胞，在选定的第-6天至第18天选定之日测量下列的水平：各种炎症细胞因子、趋化因子、效应子、炎症标志物、和粘附分子，其包括粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、干扰素γ(IFNγ或IFNG)、白介素10(IL-10)、IL-15、白介素2(IL-2)、白介素5(IL-5)、白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)、IP-10、MCP-1、MIP-1β、血清颗粒酶A(GRNZA)、血清颗粒酶B(GRNZB)、PLGF、CRP、单核细胞趋化蛋白4(MCP-4)、白介素16(IL-16)、胸腺和活化调节趋化因子(TARC)、嗜酸性粒细胞趋化因子-3、sICAM-1、可溶性血管粘附分子1(sVCAM-1)、和血清淀粉样蛋白A(SAA)(图6A至6V)。
实施例3
为改善在实施例1的第3组中观察到的淋巴细胞耗尽的深度与持续期间，将队列A1中的调理性化疗剂量增加到500mg/m2的环磷酰胺及30mg/m2的氟达拉滨，连同靶剂量2×106个抗CD19 CAR+T细胞/kg施用3天。用于此方案(队列A1)的环磷酰胺剂量比实施例1的第2组30mg/kg的环磷酰胺调理方案(剂量限制性毒性(DLT)发生率为29％)低了约38％，氟达拉滨剂量与实施例1的第3组的一样低。
根据DLT发生率与利弊评估来评估较高的调理性化疗剂量与/或变化的抗CD19CAR+T细胞剂量。CAR载体构建体与实施例1中所述的构建体相同。本实施例描述被设计来测试利用快速、封闭及无珠(bead-less)过程产生的抗CD19 CAR+T细胞的安全性与功效。封闭该过程保留T细胞产品的特征。
研究设计
执行一项临床1/2期多中心、非盲研究以评估在患有难治性NHL的受试者中的KTE-C19的安全性及功效。本研究会分成被命名为第1阶段与第2阶段的二个不同阶段。
在第1阶段期间内，有约6至24个患有DLBCL、PMBCL或TFL之受试者参加以评估KTE-C19方案的安全性。研究主办者内部的安全审查小组(SRT)将审查安全性数据并作出建议在第1阶段进一步研究与进展到第2阶段，如图3所示。
在第2阶段期间内，受试者参加被命名为队列1与队列2的二个分开的队列。队列1纳入患有难治性DLBCL的成年受试者，并且队列2纳入患有难治性PMBCL与TFL的成年受试者。TFL被定义为接受用于滤泡性淋巴瘤的先前化疗的受试者。
不受研究的阶段支配，各个受试者会按照相同研究疗程及程序要求。各个受试者会进行下列研究时间段：筛选/白细胞单采时间段；调理性化疗时间段；研究用产品(IP)治疗时间段；治疗后评估时间段；长期追踪时间段。
研究时间
对个体受试者而言，参加期间包括28天的筛选时间段、5至7天的调理性化疗治疗时间段、KTE-C19治疗时间段(包括7天的院内恢复时间段)、治疗后评估时间段、和长期追踪时间段(存活监测至多15年)。
在治疗后3个月会追踪受试者的所有不良事件。在3个月后，会按照评估量表(SOA)中概括的不时监测受试者的靶向不良事件/严重不良事件(例如血液疾病、神经疾病、继发性恶性肿瘤、感染或自体免疫疾病)和在受试者血液中的具复制力的逆转录病毒(RCR)。延长追踪的要求是根据在经治疗受试者中的基因转移载体的潜在持久性。
研究完成被定义为最后的受试者完成长期追踪时间段回诊、被认为失去追踪、撤回同意、或死亡。当在第2阶段的队列1中的所有受试者及全体研究群体分别已完成6个月的疾病反应评估、失去追踪、从研究中退出、或死亡(无论哪个先发生)时，将进行主要分析。
受试者资格
用于受试者的纳入标准包括：
a)组织学检查证实为侵袭性B细胞NHL，包括由WHO 2008定义的下列类型：DLBCL(不另加规定)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤、慢性炎症相关DLBCL、老人EB病毒(EBV)+DLBCL、原发性纵膈(胸腺)大B细胞淋巴瘤、或滤泡性淋巴瘤转化DLBCL；
b)化疗难治性疾病，被定义为下列的一或多个：对含有最新式化疗法的方案有最佳反应的稳定疾病(稳定疾病期间必须≤12个月)或进行性疾病；及先前自体SCT的疾病进展或复发≤12个月；
c)受试者先前必须接受过适当疗法(至少包括抗CD20单克隆抗体，除非研究员确定肿瘤是CD20阴性)和含有蒽环类的化疗方案；
d)患有转化FL的受试者先前必须接受过滤泡性淋巴瘤化疗法且后来在转化DLBCL后患有化疗难治之症；
e)根据修订的IWG Response Criteria for Malignant Lymphoma，至少1个可测量病灶；只有在完成放射治疗后进展已被记载时，才会认为先前经放射线照射过的病灶可测得；
f)脑部MRI显示没有中枢神经系统淋巴瘤存在的证据；
g)在受试者计划白细胞单采时，从先前任何放射治疗或全身性治疗起必须已经过大于或等于2周；
h)由于先前疗法造成的毒性必须是稳定的或回复至≤第1级(除临床上不显著的毒性(例如毛发脱落)外)；
i)受试者必须年满18岁；
j)美国东部肿瘤合作组织(ECOG)日常体能状态评估得分为0或1；
k)受试者必须具有以下实验室值：i)ANC≥1000/μL；ii)血小板计数≥50,000个/μL；iii)适当肾、肝、与心脏功能，定义为血清肌酸酐≤1.5mg/dL，血清ALT/AST≤2.5ULN，和总胆红素≤1.5mg/dl，除了患有吉尔伯特综合征的受试者以外；及iv)心脏射血分数≥50％且没有心包积液(利用ECHO测定)存在的证据；和
l)具生育能力妇女必须血清或尿液怀孕测试是阴性的。
用于受试者的排除标准包括：
a)除了非黑素瘤的皮肤癌或原位癌(例如宫颈癌、膀胱癌、乳腺癌)或滤泡性淋巴瘤之外的恶性肿瘤病史，除非疾病消失至少3年；
b)CLL的里氏转化病史；
c)在签署知后同意书6周内自体干细胞移植；
d)同种异体干细胞移植病史；
e)先前CD19靶向疗法(除在本研究中接受过KTE-C19且符合再治疗资格的受试者外)；
f)先前嵌合抗原受体疗法或其他基因修饰的T细胞疗法；
g)归因于氨基糖苷的严重速发型超敏反应病史；
h)临床上显著的主动感染(例如允许单纯UTI，细菌性咽炎)或目前接受IV抗生素或在参加前7天内接受过IV抗生素(允许预防性抗生素、抗病毒药物与抗真菌药物)；
i)受HIV、乙型肝炎病毒(HBsAg阳性)或丙型肝炎病毒(抗HCV阳性)感染的已知病史；
j)患有可检测的脑脊液恶性肿瘤细胞或脑转移的受试者，或有脑脊液恶性肿瘤细胞或脑转移病史的受试者；
k)癫痫、脑血管缺血/出血、痴呆、小脑疾病、或任何自体免疫疾病合并CNS侵犯的病史；
l)患有心房或心室淋巴瘤侵犯的受试者；
m)需要起因于肿瘤块效应(例如肠梗阻或血管压迫)的紧急疗法；
n)原发性免疫缺陷；
o)任何可能干扰评估研究治疗的安全性或功效的医学病况；
p)目前或预期需要全身性皮质类固醇疗法；允许标准剂量和用于患有肾上腺机能不全的受试者的生理替代剂量的局部与吸入性皮质类固醇；不允许大于或等于5mg/天的泼尼松的皮质类固醇剂量或等剂量的其他皮质类固醇；
q)对任何在本研究中使用的药剂有严重速发型超敏反应的病史；
r)在调理方案开始前≤6周的活疫苗；
s)怀孕或母乳哺育的具生育能力妇女，由于该准备性化疗对胎儿或婴儿的潜在危险效果；已接受绝育手术或停经至少2年的妇女不被认为具生育能力；
t)从签署同意书开始到KTE-C19完成后6个月期间无意愿实施节育的两种性别的受试者；和
u)研究员判断受试者不太可能完成所有操作方案需要的研究回诊或程序，包括追踪回诊或服从参与研究的需要。
此外，还会对血液样品与肿瘤样品进行生物标志物分析以评估用于KTE-C19的预测性及药效学标志物。也可评估在侵袭性NHL中的预后标志物。将基线白细胞单采与最终KTE-C19样品存入库中及可利用免疫表型分型和/或基因表达谱来分析。可将剩余样品储存用于未来DNA、RNA、或蛋白质标志物的探索分析。将收集归档的肿瘤组织用于中央路径审查(central path review)。另外的分析可包括CD19表达、基因表达谱、和DNA变异分析。可将剩余肿瘤样品储存用于未来DNA、RNA、或蛋白质标志物的探索分析。
治疗操作方案
时间表
利用白细胞单采从受试者得到白细胞(12至15升单采，目标是靶向用于制造KTE-C19的约5×109至10×109个单核细胞)。将各个受试者的经白细胞单采的产物处理以富集含有T细胞的PBMC级分。接着刺激T细胞来扩增并用逆转录病毒载体转导T细胞以导入CAR基因。接着使T细胞扩增并冷冻保存以产生研究用产品。在完成各个受试者的调理性化疗方案后，受试者将各自接受KTE-C19输注。
研究治疗
受试者将接受非清髓调理方案(由环磷酰胺与氟达拉滨组成)以诱导淋巴细胞耗尽及产生对KTE-C19体内扩增来说优化的环境。在第-5天(或对于队列B是第-7天)至第-1天为受试者开始利用环磷酰胺与氟达拉滨的调理性化疗。该5天调理性化疗方案是在门诊时施用。根据研究员的裁量，该7天调理性化疗方案可以门诊病人或住院病人方案施用。
第1阶段：
在队列A1与A2中，受试者将接受下列5天调理性化疗方案：在输注日在施用环磷酰胺前先静脉输注1L的0.9％NaCl盐溶液；接着在第-5、-4、与-3天在60分钟内静脉输注500mg/m2环磷酰胺；接着在第-5、-4、与-3天在30分钟内静脉输注30mg/m2氟达拉滨；接着在氟达拉滨输注完毕时加输注1L的0.9％NaCl盐溶液(图3)。在某些情况中，根据院内指南可添加美司钠(mesna)(2-巯基乙烷磺酸钠)。
在队列A3中，受试者将接受下列5天化疗方案：在输注日在施用环磷酰胺前先静脉输注1L的0.9％NaCl盐溶液；接着在第-5、-4、与-3天在60分钟内静脉输注300mg/m2环磷酰胺；接着在第-5、-4、与-3天在30分钟内静脉输注30mg/m2氟达拉滨；接着在氟达拉滨输注完毕时加输注1L的0.9％NaCl盐溶液。在某些情况中，根据院内指南可添加美司钠。
对参加队列A1、A2或A3的受试者而言，在KTE-C19输注(第0天)前的第-2与-1天是休息日。
在队列B1和B2中，受试者将接受下列7天化疗方案：静脉输注0.9％NaCl盐溶液，建议为2.6ml/kg/hr(最大值200ml/hr)，按照从环磷酰胺输注前的11小时开始连续输注到最后的环磷酰胺输注后的24小时为止来施用；在第-7与-6天在120分钟内静脉输注30mg/kg(1110mg/m2)环磷酰胺；接着在第-5、-4、-3、-2与-1天在30分钟内静脉输注25mg/m2氟达拉滨。在某些情况中，根据院内指南可添加美司钠。
对参加队列B1或B2的受试者而言，在化疗最后一天(第-1天)与KTE-C19输注(第0天)之间没有休息日。
对KTE-C19而言，在队列A1、A3或B1中的受试者将接受由下列组成的KTE-C19治疗：一次静脉输注CAR转导的自体T细胞，靶剂量为2×106个抗CD19 CAR+T细胞/kg(±20％；从1.6×106个抗CD19 CAR+T细胞/kg至2.4×106个抗CD19 CAR+T细胞/kg)。可施用最小剂量的1×106个抗CD19 CAR+T细胞/kg。对体重超过100kg的受试者而言，要施用最大固定剂量(flat dose)的2×108个抗CD19 CAR+T细胞/kg。
在队列A2或B2中的受试者将接受由下列组成的KTE-C19治疗：一次静脉输注CAR转导的自体T细胞，靶剂量为1×106个抗CD19 CAR+T细胞/kg(±20％；从0.8×106个抗CD19CAR+T细胞/kg至1.2×106个抗CD19 CAR+T细胞/kg)。可施用最小剂量的0.5×106个抗CD19CAR+T细胞/kg。对体重超过100kg的受试者而言，要施用最大固定剂量的1×108个抗CD19CAR+T细胞/kg。
第2阶段：
在第1阶段中通过SRT确定为安全的KTE-C19方案将被转入研究的第2阶段部分。
再治疗
达到PR或CR的受试者如果后来他们的疾病发生进展(并且尚未能确定该复发是CD19恶性细胞)的话，可以接受第二次调理性化疗与KTE-C19疗程。要符合第二次疗程的资格，受试者应该被再次评估且继续符合原先研究资格标准(除了与先前CAR疗法有关的排除标准外)，且应该未接受过后续用于治疗淋巴瘤的化疗。另外，与氟达拉滨或环磷酰胺有关的任何毒性应该是稳定的且在再治疗前回复至第1级以下(除毛发脱落外)。每个受试者最多可有一次再治疗疗程。参加第2阶段的受试者将接受同一KTE-C19方案。参加第1阶段的受试者将接受为第2阶段所选定的KTE-C19方案。如果尚未选定该第2阶段方案，则受试者将接受被SRT确定是安全的最后KTE-C19方案。
在第1阶段经历DLT或在第2阶段经历可相提并论的毒性的受试者不符合再治疗资格。另外，如果受试者具有已知的中和抗体，则该受试者不符合再治疗资格。然而，如果发展出非中和HAMA或HABA抗体，则受试者在符合该资格标准情况下可被再治疗。
治疗后评估
在完成KTE-C19输注及出院(典型地在第8天)后，在治疗后评估期间会追踪所有受试者。从第0天(KTE-C19输注)算起，受试者将在第2周、第4周(±3天)、第2个月(±1周)、与第3个月(±1周)回诊。评估可以包括MMSE(简易精神状况检查)；用于疾病评估的PET-CT；体格检查与生命体征；实验室医学，包括Chemistry Panel、CBC with differential、对所有具生育能力的妇女的β-HCG怀孕测试(血清或尿液)、抗KTE-C19抗体、淋巴细胞亚群、细胞因子水平、抗CD19 CAR+T细胞、和具复制力的逆转录病毒(RCR)分析；不良事件/严重不良事件报告；合并用药文件制作；和为签署同意书可选择部分的受试者采集新鲜肿瘤样品。
首先利用PCR分析(配合以流式细胞术)监测血液中的转导抗CD19 CAR+T细胞的存在、扩增、持久性、和免疫表型。还评估血液中的细胞因子的血清水平。在小组(panel)中可包括下列细胞因子：促炎与免疫调节性细胞因子IL-6、TNFα、IL-8、IL-1、IL-2、GM-CSF、IL-15、IL-17a、IFNγ、IL-12p40/p70；免疫效应分子颗粒酶A、B、穿孔素、sFasL；急性期反应CRP、SAA与趋化因子MIP-1α、MIP-3α、IP-10、嗜酸性粒细胞趋化因子、MCP-4的相关物。当KTE-C19包含逆转录病毒载体转导的T细胞时，还监测被治疗患者血液中的具复制力的逆转录病毒(RCR)的存在。
如果受试者符合用KTE-C19再治疗的资格，则将再治疗前的最后一次扫瞄作为评估对再治疗的反应的基线值。
在治疗后评估期间内的任何时候，如果受试者在治疗后没有好转(即CR或PR)或在有反应后又进展，则该受试者直接进入第3个月回诊且在长期追踪时间段内就疾病结果而被追踪。
如果适用的话，在长期追踪时间段内追踪所有受试者的存活期与疾病状态。受试者在完成治疗后评估时间段的第3个月回诊后将开始长期追踪时间段(不管他们是否在治疗后好转或由于疾病进展而直接进入第3个月回诊)。从第0天(KTE-C19输注)算起到第18个月，受试者将每3个月(±2周)回诊；第24个月至第60个月每6个月(±1个月)回诊；及从第6年(第72个月)(±3个月)开始到至多15年，受试者将每年回诊一次。在这次回诊时将完成下列程序：体格检查；PET-CT扫描；疾病评估；实验室医学，包括CBC with differential、抗KTE-C19抗体、淋巴细胞亚群、抗CD19 CAR+T细胞、和RCR分析；靶向不良事件/严重不良事件报告(24个月内或到疾病进展为止，无论哪个先发生)，包括神经疾病、血液疾病、感染、自体免疫疾病、和继发性恶性肿瘤直到疾病进展；靶向合并用药文件制作(在疾病进展后的2年内)，包括γ球蛋白、免疫抑制剂、抗感染剂、疫苗接种、和用于治疗进行性疾病的任何疗法。
评估会包括颈、胸部、腹部与骨盆的基线PET-CT扫描，连同疾病的所有其它部位的适当影像。受试者将会有第一份在KTE-C19输注后4周及如上述定期的KTE-C19输注后计划PET-CT肿瘤评估。
对为CR进行评估的受试者进行骨髓穿刺和活检。根据修订的IWG ResponseCriteria for Malignant Lymphoma，只有当受试者在治疗前就患有淋巴瘤侵犯骨髓时或如果在外周血细胞计数或血涂片中的新异常导致临床上诊断为淋巴瘤侵犯骨髓时，才应该进行骨髓穿刺和活检。骨髓穿刺和活检必须显示在形态上没有疾病存在的证据，或者如果在形态上不能确定，则在免疫组织化学上必须是阴性的，以把CR指定给治疗。
研究终点
主要终点
第1阶段的主要终点是发生不良事件(被定义为剂量限制性毒性(DLT))。第2阶段的主要终点是客观反应率(ORR)，被定义为由研究员根据修订的IWG Response Criteriafor Malignant Lymphoma确定的完全反应或部分反应发生率。在分析截止日期前不符合客观反应标准的所有受试者将被认为是无反应者。
次要终点
将第1期受试者中的客观反应率作出总结。根据IRRC测定第2阶段受试者中的客观反应率，其被定义为由IRRC根据修订的IWG Response Criteria for Malignant Lymphoma确定的完全反应或部分反应的发生率。在分析截止日期前不符合客观反应标准之所有受试者将被认为是无反应者。经历客观反应的受试者的反应持续时间(DOR)定义为他们的第一次客观反应或死亡(不论原因)的日期，该第一次客观反应随后根据修订的IWG ResponseCriteria for Malignant Lymphoma被确定为疾病进展。在分析数据截止日期前不符合进展标准或死亡之受试者将在其最后可评估的疾病评估日被审查及将其反应用进展中表示。
剂量限制性毒性(DLT)
剂量限制性毒性被定义为下列在KTE-C19输注后30天内发病之KTE-C19相关事件：
a)从细胞转移日起持续21天以上的第4级嗜中性粒细胞减少症。
b)从细胞转移日起持续35天以上的第4级血小板减少症。
c)任何需要插管的KTE-C19相关不良事件(包括为了保护气道而需要插管的第4级意识错乱)被认为是DLT。
d)持续3天以上的其他所有3级毒性及所有第4级毒性，除下列被认为不是DLT的病况外：i)在2周内消退至第1级或更少和在4周内消退至基线值的失语症/言语障碍症或意识错乱/认知障碍；ii)第3级发烧；iii)骨髓抑制(包括在血小板数少于50×109个/L的条件成立下流血及在嗜中性粒细胞减少症的条件成立下确定细菌感染)，被定义为淋巴细胞减少症、血红蛋白减少、嗜中性粒细胞减少症、血小板减少症，除非嗜中性粒细胞减少症与血小板减少症符合上述DLT定义；iv)在细胞输注的2小时内发生的速发型超敏反应(与细胞输注有关)，其可用标准疗法在细胞输注的24小时内回复至第2级或更少；及v)第3级或第4级低丙种球蛋白血症。
将CRS根据修订版分级系统(Lee 2014)即新分级。将归因于CRS的不良事件对应到总CRS分级评估来确定DLT。
在第1阶段期间内，约6至24个患有DLBCL、PMBCL、或TFL的受试者参加以评估KTE-C19方案的安全性。在完成各自的KTE-C19输注后30天内为DLT而评估各个队列的受试者。如果6个受试者的DLT发生率≤1，则可探索队列B1或该研究可进入试验的第2期。这个决定是根据总利弊比和可用的生物标志物数据。
然而，如果6个受试者中有2个在第1阶段期间内出现操作方案所定义之DLT，则SRT可建议加入每组各3个受试者的2个另外的组(总计至多12个受试者)，所施用的剂量与前面6个受试者一样。在此情况下，如果前面9个受试者中有≤2个或如果12个受试者中有≤3个出现DLT，则发展到另一队列或进入研究的第2期。
如果受试者的DLT发生率>2/6、>3/9、或>4/12个，则可在另外的6至12个受试者中探索其他KTE-C19方案(图3)。相同DLT规则如上述地适用。
实施例4
用携带抗CD19 CAR构建体基因的g-鼠类逆转录病毒转导自体淋巴细胞，接着扩增达到所需细胞剂量而产生T细胞产品。在收获时或在与CD19+细胞共同培养后对共同培养液的上清液进行流式细胞术与多重细胞因子分析来评估抗CD19 CAR+T细胞产品。用K562-CD19细胞或K562-NGFR对照组细胞在效应细胞对靶细胞比例为1:1下进行CAR+T细胞共同培养液的产品特征分析。标准培养时间是18小时。用环磷酰胺与氟达拉滨调理患有复发/难治性B细胞恶性肿瘤的患者，接着施用抗CD19 CAR+T细胞。
使用EMDmillipore多重分析测量细胞因子水平与趋化因子水平。使用Luminex 200TM仪器与3.1数据分析软件进行数据采集与分析。对IL-7而言，在纯净样品下根据制造业者的指南使用人IL-7 Quantikine HS ELISA Kit(HS750)。利用定量PCR分析测量循环中CAR T细胞的频率。对患者施用预调理方案，该方案包含在第-5与-4天施用300mg/m2环磷酰胺及在第-5、-4、与-3天施用30mg/m2氟达拉滨。在下列日期采集患者血清：在第-12至-5天之间施用环磷酰胺与氟达拉滨前(“前”)、在第0天之间施用CAR+T细胞前(“后”)、和在施用CAR+T细胞后至第18天之间的选定日。在调理前与后和在施用CAR+T细胞后的选定日测量GM-CSF、IL-2、MCP-1、IL-6、IL-10、MCP-4、CRP、IFNγ、颗粒酶A、IL-15、IL-5、颗粒酶B、IL-8、IP-10、MIP-1b、PLGF、IL-16、TARC、嗜酸性粒细胞趋化因子3、sICAM-1、sVCAM-1、和SAA的血清浓度，如图6所示。发现在用300mg/m2环磷酰胺及30mg/m2氟达拉滨调理后，患者血清中的某些细胞因子浓度增加(图7A至7I及18A至18E)。特别是，在用环磷酰胺及氟达拉滨调理后，IL-15、IL-7、PLGF、CRP、和MCP-1浓度显著增加(图7A至7D、7G、18A、及18C至18E)。还观察到IL-5、IL-10、IP-10、和sICAM-1浓度增加(图7E至7F、7H至7I、与18B)。相反地，发现在用环磷酰胺及氟达拉滨调理后穿孔素减少(图18F)。观察到在预调理后，各种其他分析物的血清浓度增加或减少，如图18G所示。治疗另外的患者，并且结果请参见图11至17。此外，发现在预调理后，IL-15(图19A)与IP-10(图19B)的增加的血清水平及穿孔素(图19C)的减少的血清水平与经CAR T细胞治疗的患者中的正向客观反应显著相关。
分别通过流式细胞术及多重细胞因子分析评估CAR+T细胞输注后的外周血淋巴细胞(PBL)与血清。将输注前抗CD19 CAR+T细胞的细胞因子生产与K562-NGFR负对照组作比较(图8)。在T1、T2、和免疫体内恒定性细胞因子GM-CSF、IL-2、IFNγ、IL-5、IL-4、与IL-13、及促炎细胞因子与趋化因子TNFα、IL-6、颗粒酶B、MIP-1b(β)、MIP-1a(α)、及SCD137浓度方面，抗CD19 CAR+T细胞样品比负对照组更高(图8A至8L)。此外，靶抗原与输注前T细胞产品结合导致可调节其活性的受体(例如CD107a(α)、401BB、与PD-1)上调(图9A至9C)。
在BD FACSCanto II(利用FlowJo软件作数据采集与分析)上进行多色流式细胞术。较短的制造程序产生具有CD4+、初始及中央记忆T细胞较高表达的CAR+T细胞产品(图10)。输注后CAR+T细胞显出多元化亚群组成，其主要包含已分化T细胞及一些中央记忆或初始T细胞(图10)。
抗CD19 CD28ζ CAR+T细胞是临床上有效的并且诱导在淋巴瘤与白血病中的持续反应。持续临床反应可在循环中没有耐久CAR+T细胞情形下出现而使正常B细胞能恢复。用环磷酰胺及氟达拉滨调理通过引入能有利于T细胞的体内恒定性扩增、活化及运输的分子来改良免疫环境。CAR+T细胞治疗导致治疗后3周内循环细胞因子与趋化因子快速升高且随后消退。
实施例5
进行研究以测试用非清髓调理方案治疗受试者的安全性及功效，该调理方案是由剂量大于或等于300mg/m2的环磷酰胺及剂量大于或等于30mg/m2的氟达拉滨组成。这些调理性化疗剂的剂量被用来进一步诱导淋巴细胞耗尽及产生对KTE-C19体内扩增更优化的环境。
参加的受试者接受白细胞单采以得到用于产生抗CD19 CAR+T细胞的PBMC。然后受试者接受调理性化疗，该调理性化疗包含在第-5至-3天施用500mg/m2/天的环磷酰胺及60mg/m2/天的氟达拉滨。在第0天，受试者通过IV接受抗CD19 CAR+T细胞/kg剂量。受试者可接受2×106个抗CD19 CAR+T细胞/kg(±20％)作为起始剂量，接着可根据受试者反应性增加或减少剂量。
在调理性化疗和施用抗CD19 CAR+T细胞后，监测受试者的副作用、细胞因子的血清水平、T细胞计数、和疾病反应。在调理前与后测量下列血清水平以确定该调理性化疗效果：各种炎症细胞因子、趋化因子、效应子、炎症标志物、和粘附分子，其包括但不限于IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、IL-21、MCP-1、IP-10、PLGF、sICAM-1、CRP、VEGF、VEGF-C、VEGF-D、sVCAM-1、MIP-1β、FGF2、IL-1b、嗜酸性粒细胞趋化因子、GM-CSF、IFNγ、IL-12p40、MDC、IL-12p70、IL-13、IL-17A、MIP-1a、TNFa、TNFb、颗粒酶A、颗粒酶B、穿孔素、SAA、MCP-4、和TARC。在施用环磷酰胺、氟达拉滨、和抗CD19 CAR+T细胞中的每一个前或后采集血清，并将所有血清水平与在调理性化疗前的血清水平作比较。将疾病反应性与各个患者的调理后细胞因子谱作比较以鉴定出在疾病反应性与调理后一或多种细胞因子水平之间的任何关联。
严密监测副作用出现率以确定环磷酰胺与氟达拉滨的最大耐受剂量。视需要可医学控制副作用。可增加或减少环磷酰胺与氟达拉滨中的一种或两种剂量以改善临床疗效并限制副作用。显出最初部分反应接着疾病进展的任何受试者可接受在相同或不同环磷酰胺与/或氟达拉滨水平下的第二次治疗。在整个申请中，在括号中注明作者名称与日期、或专利号、或专利公开号来引用各种出版物。在专利申请范围前面的说明书末尾可发现这些出版物的完全引用。将这些出版物的公开以引用方式将其全部内容并入本申请作为参考以更完全地说明截至本文所描述和保护的发明日期为止本领域技术人员熟知的技术状态。然而，此处引用的参考文献不应被理解成承认该参考文献是本发明的现有技术。此处描述的各种方面、实施方案、和选项皆可被结合于任何与全部变型中。
实施例6
将进行研究以基于对用一种或多种预调理剂预调理的细胞因子反应性来预测患者对T细胞疗法的反应的可能性。本研究将选择患有适合T细胞疗法的癌症患者。
在任何干预之前将收集患者血液。然后通过向患者施用根据本发明的一种或多种预调理剂来预调理患者。例如，在T细胞疗法之前，患者可以用300或500mg/m2/天的环磷酰胺治疗2或3天，30或60mg/m2/天的氟达拉滨治疗3天、4天或5天。然后在预调理之后和即将施用T细胞疗法之前，例如在施用T细胞疗法的同一天再次收集患者血液。然后向患者施用T细胞疗法并监测疾病反应性，例如疾病进展，部分反应或完全反应。
分析预调理前与后收集的血液中各种细胞因子(包括但不限于IL-15、IL-7和选自MCP-1，CRP，PLGF，IP-10及其任何组合的至少一种另外的细胞因子)。记录每种细胞因子的倍数变化，并与整体疾病反应性进行比较。将进行相关研究以确定任何一种或多种细胞因子的增加或减少是否预示整体疾病反应性。
本专利说明书中提到的所有出版物、专利、或专利申请以引用方式将其内容并入本文作为参考，在某种程度上彷佛个别出版物、专利、或专利申请被具体且逐个地指明并入本文作为参考。然而，此处引用的参考文献不应被理解成承认该参考文献是本发明的现有技术。
现在已概括描述完本发明，通过参考本文提供的实施例可得到进一步的理解。这些实施例仅用于说明而非加以限制。

Claims (122)

1.用于治疗适用于T细胞疗法的患者的癌症的方法，包括(i)向患者施用一种或多种预调理剂，其能够增加白介素-15(“IL-15”)、白介素-7(“IL-7”)和选自单核细胞趋化蛋白1(“MCP-1”)、C-反应蛋白(“CRP”)、胎盘生长因子(“PLGF”)、干扰素γ诱导蛋白10(“IP-10”)、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子的血清水平，和(ii)当患者表现出增加的IL-15、IL-7和所述至少一种另外的细胞因子的血清水平时，施用T细胞疗法。
2.用于治疗适用于T细胞疗法的患者的癌症的方法，包括向患者施用一种或多种预调理剂，其能够增加IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子的血清水平，其中当患者表现出增加的IL-15、IL-7和所述至少一种另外的细胞因子的血清水平时，用T细胞疗法治疗患者。
3.用于治疗适用于T细胞疗法的患者的癌症的方法，包括(i)向患者施用一种或多种预调理剂，其能够增加IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子的血清水平，(ii)施用额外量的所述一种或多种预调理剂或施用有效量的IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子，和(iii)当患者表现出增加的IL-15、IL-7和所述至少一种另外的细胞因子的血清水平时，施用T细胞疗法。
4.用于鉴定适用于T细胞疗法的患者的方法，包括向患者施用一种或多种预调理剂，其能够增加IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子的血清水平。
5.用于鉴定适用于T细胞疗法的患者的方法，包括(i)向患者施用一种或多种预调理剂，其能够增加IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子的血清水平，并且(ii)当患者表现出增加的IL-15、IL-7和所述至少一种另外的细胞因子的血清水平时，施用T细胞疗法。
6.用于鉴定适用于T细胞疗法的患者的方法，包括(i)向患者施用一种或多种预调理剂，其能够增加IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子的血清水平，(ii)施用额外量的所述一种或多种预调理剂或施用有效量的IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子，和(iii)当患者表现出增加的IL-15、IL-7和所述至少一种另外的细胞因子的血清水平时，施用T细胞疗法。
7.用于增加IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子的血清水平以预调理需要T细胞疗法的患者的方法，包括向患者施用一种或多种预调理剂，其中当患者表现出增加的IL-15、IL-7和所述至少一种另外的细胞因子的血清水平时，用T细胞疗法治疗患者。
8.用于增加IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子的血清水平以预调理需要T细胞疗法的患者的方法，包括(i)向患者施用一种或多种预调理剂，和(ii)当患者表现出增加的IL-15、IL-7和所述至少一种另外的细胞因子的血清水平时，施用T细胞疗法。
9.用于增加IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子的血清水平以预调理需要T细胞疗法的患者的方法，包括(i)向患者施用一种或多种预调理剂，(ii)施用额外量的一种或多种预调理剂或施用有效量的IL-15、IL-7和选自MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何组合的至少一种另外的细胞因子，和(iii)当患者表现出增加的IL-15、IL-7和所述至少一种另外的细胞因子的血清水平时，施用T细胞疗法。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其进一步包括在施用一种或多种预调理剂之后测量IL-15、IL-7和所述至少一种细胞因子的血清水平。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中一种或多种预调理剂减少患者的内源淋巴细胞的数量。
12.根据权利要求11所述的方法，其中内源淋巴细胞包含调节T细胞、B细胞、自然杀伤细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞或其任何组合。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中与施用一种或多种预调理剂之前的IL-7血清水平相比，施用后患者的IL-7的血清水平增加至少2倍，至少3倍，至少4倍，至少5倍，至少10倍，至少15倍，至少20倍，至少25倍，至少30倍，至少35倍，至少40倍，至少45倍，至少50倍，至少60倍，至少70倍，至少80倍，或至少90倍。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中与施用一种或多种预调理剂之前的IL-15血清水平相比，施用后患者的IL-15的血清水平增加至少5倍，至少10倍，至少15倍，至少20倍，至少25倍，至少30倍，至少35倍，至少40倍，至少45倍，至少50倍，至少60倍，至少70倍，至少80倍，或至少90倍。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中与施用一种或多种预调理剂之前的MCP-1血清水平相比，施用后患者的MCP-1的血清水平增加至少1.5倍，至少2倍，至少3倍，至少4倍，至少5倍，至少6倍，至少7倍，至少8倍，至少9倍，至少10倍，至少15倍，或至少20倍。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中与施用一种或多种预调理剂之前的PLGF血清水平相比，施用后患者的PLGF的血清水平增加至少1.5倍，至少2倍，至少3倍，至少4倍，至少5倍，至少10倍，至少15倍，至少20倍，至少25倍，至少30倍，至少35倍，至少40倍，至少45倍，至少50倍，至少60倍，至少70倍，至少80倍，至少90倍，或至少100倍。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中与施用一种或多种预调理剂之前的CRP血清水平相比，施用后患者的CRP的血清水平增加至少1.5倍，至少2倍，至少3倍，至少4倍，至少5倍，至少约9倍，至少10倍，至少15倍，至少20倍，至少25倍，至少30倍，至少35倍，至少40倍，至少45倍，至少50倍，至少60倍，至少70倍，至少80倍，至少90倍，或至少100倍。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中与施用一种或多种预调理剂之前的IP-10血清水平相比，施用后患者的IP-10的血清水平增加至少2倍，至少3倍，至少4倍，至少5倍，至少6倍，至少7倍，至少8倍，至少9倍，至少10倍，至少15倍，至少20倍，或至少30倍。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中预调理剂进一步增加患者的白介素10(“IL-10”)、白介素5(“IL-5”)、白介素8(“IL-8”)、可溶性细胞间粘附分子1(“sICAM-1”)、可溶性血管粘附分子1(“sVCAM-1”)或其任何组合的血清水平。
20.根据权利要求19所述的方法，其中与施用一种或多种预调理剂之前的IL-10血清水平相比，施用后患者的IL-10的血清水平增加至少2倍，至少3倍，至少4倍，至少5倍，至少6倍，至少7倍，至少8倍，至少9倍，至少10倍，或至少20倍。
21.根据权利要求19或20所述的方法，其中与施用一种或多种预调理剂之前的IL-5血清水平相比，施用后患者的IL-5的血清水平增加至少2倍，至少3倍，至少4倍，至少5倍，至少6倍，至少7倍，至少8倍，至少9倍，至少10倍，至少15倍，至少20倍，至少30倍，至少40倍，至少50倍，至少60倍，至少70倍，至少80倍，至少90倍，或至少100倍。
22.根据权利要求19至21中任一项所述的方法，其中与施用一种或多种预调理剂之前的IL-8血清水平相比，施用后患者的IL-8的血清水平增加至少2倍，至少5倍，至少10倍，至少15倍，至少20倍，至少25倍，至少30倍，至少35倍，至少40倍，至少45倍，至少50倍，至少60倍，至少70倍，至少80倍，至少90倍，或至少100倍。
23.根据权利要求19至22中任一项所述的方法，其中与施用一种或多种预调理剂之前的sICAM-1血清水平相比，施用后患者的sICAM-1的血清水平增加至少1.5倍，至少2倍，至少3倍，至少4倍，至少5倍，至少6倍，至少7倍，至少8倍，至少9倍，至少10倍，至少15倍，至少20倍，至少25倍，或至少30倍。
24.根据权利要求19至23中任一项所述的方法，其中与施用一种或多种预调理剂之前的sVCAM-1血清水平相比，施用后患者的sVCAM-1的血清水平增加至少1.5倍，至少2倍，至少2.5倍，至少3倍，至少3.5倍，至少4倍，至少4.5倍，或至少5倍。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的方法，其中一种或多种预调理剂包含烷化剂。
26.根据权利要求24所述的方法，其中烷化剂选自美法仑，苯丁酸氮芥，环磷酰胺，双氯乙基甲胺，氮芥(HN2)，乌拉莫司汀，尿嘧啶氮芥，美法仑，苯丁酸氮芥，异环磷酰胺，苯达莫司汀，卡莫司汀，洛莫司汀，链佐星，烷基磺酸盐，白消安，噻替派或它的类似物，及其任何组合。
27.根据权利要求26所述的方法，其中一种或多种预调理剂是铂基预调理剂。
28.根据权利要求27所述的方法，其中铂基预调理剂选自铂，顺铂，卡铂，奈达铂，奥沙利铂，沙铂，四硝酸三铂，丙卡巴肼，六甲蜜胺，三氮烯，达卡巴嗪，米托唑胺，替莫唑胺，达卡巴嗪，替莫唑胺，及其任何组合。
29.根据权利要求1至26中任一项所述的方法，其中一种或多种预调理剂是环磷酰胺。
30.根据权利要求1至29中任一项所述的方法，其中一种或多种预调理剂是嘌呤类似物。
31.根据权利要求30所述的方法，其中嘌呤类似物选自硫唑嘌呤，6-巯基嘌呤，巯基嘌呤，硫嘌呤，硫鸟嘌呤，氟达拉滨，喷司他丁，克拉屈滨，及其任何组合。
32.根据权利要求1至24中任一项所述的方法，其中一种或多种预调理剂是环磷酰胺和嘌呤类似物。
33.根据权利要求32所述的方法，其中嘌呤类似物选自硫唑嘌呤，6-巯基嘌呤，巯基嘌呤，硫嘌呤，硫鸟嘌呤，氟达拉滨，喷司他丁，克拉屈滨，及其任何组合。
34.根据权利要求32所述的方法，其中一种或多种预调理剂是环磷酰胺和喷司他丁。
35.根据权利要求32所述的方法，其中一种或多种预调理剂是环磷酰胺和氟达拉滨。
36.根据权利要求32至35所述的方法，其中有效量的环磷酰胺为约300mg/m2/天至约2000mg/m2/天。
37.根据权利要求32至35所述的方法，其中有效量的环磷酰胺高于300mg/m2/天且低于2000mg/m2/天。
38.根据权利要求35至37中任一项所述的方法，其中有效量的氟达拉滨为约20mg/m2/天至约900mg/m2/天。
39.根据权利要求35至37中任一项所述的方法，其中有效量的氟达拉滨高于30mg/m2/天且低于900mg/m2/天。
40.根据权利要求32至39中任一项所述的方法，其中有效量的环磷酰胺为约350mg/m2/天-约2000mg/m2/天，至少约400mg/m2/天-约2000mg/m2/天，约450mg/m2/天-约2000mg/m2/天，约500mg/m2/天-约2000mg/m2/天，约550mg/m2/天-约2000mg/m2/天，或约600mg/m2/天-约2000mg/m2/天。
41.根据权利要求32至39中任一项所述的方法，其中有效量的环磷酰胺为约350mg/m2/天-约1500mg/m2/天，约350mg/m2/天-约1000mg/m2/天，约400mg/m2/天-约900mg/m2/天，约450mg/m2/天-约800mg/m2/天，约450mg/m2/天-约700mg/m2/天，约500mg/m2/天-约600mg/m2/天，或约300mg/m2/天-约500mg/m2/天。
42.根据权利要求41所述的方法，其中有效量的环磷酰胺为约350mg/m2/天，约400mg/m2/天，约450mg/m2/天，约500mg/m2/天，约550mg/m2/天，约600mg/m2/天，约650mg/m2/天，约700mg/m2/天，约800mg/m2/天，约900mg/m2/天，或约1000mg/m2/天。
43.根据权利要求35至42中任一项所述的方法，其中有效量的氟达拉滨为约35mg/m2/天-约900mg/m2/天，约40mg/m2/天-约900mg/m2/天，约45mg/m2/天-约900mg/m2/天，约50mg/m2/天-约900mg/m2/天，约55mg/m2/天-约900mg/m2/天，或约60mg/m2/天-约900mg/m2/天。
44.根据权利要求35至42中任一项所述的方法，其中有效量的氟达拉滨为约35mg/m2/天-约900mg/m2/天，约35mg/m2/天-约800mg/m2/天，约35mg/m2/天-约700mg/m2/天，约35mg/m2/天-约600mg/m2/天，约35mg/m2/天-约500mg/m2/天，约35mg/m2/天-约400mg/m2/天，约35mg/m2/天-约300mg/m2/天，约35mg/m2/天-约200mg/m2/天，约35mg/m2/天-约100mg/m2/天，约40mg/m2/天-约90mg/m2/天，约45mg/m2/天-约80mg/m2/天，约45mg/m2/天-约70mg/m2/天，或约50mg/m2/天-约60mg/m2/天。
45.根据权利要求44所述的方法，其中有效量的氟达拉滨为约35mg/m2/天，约40mg/m2/天，约45mg/m2/天，约50mg/m2/天，约55mg/m2/天，约60mg/m2/天，约65mg/m2/天，约70mg/m2/天，约75mg/m2/天，约80mg/m2/天，约85mg/m2/天，约90mg/m2/天，约95mg/m2/天，约100mg/m2/天，约200mg/m2/天，或约300mg/m2/天。
46.根据权利要求35所述的方法，其中有效量的环磷酰胺为约500mg/m2/天，有效量的氟达拉滨为60mg/m2/天。
47.根据权利要求1至46中任一项所述的方法，其中一种或多种预调理剂每天施用，施用至少一天，至少两天，至少三天，至少四天，至少五天，至少六天，或至少七天。
48.根据权利要求1至46中任一项所述的方法，其中一种或多种预调理剂每天施用，施用约三天。
49.根据权利要求35至48中任一项所述的方法，其中环磷酰胺在氟达拉滨之前、之后或同时施用。
50.根据权利要求49所述的方法，其中环磷酰胺在氟达拉滨之前施用。
51.根据权利要求1至50中任一项所述的方法，还包括施用一剂或多剂IL-2。
52.根据权利要求51所述的方法，其中每剂IL-2为至少约10,000IU/kg，至少约50,000IU/kg，至少约100,000IU/kg，至少约200,000IU/kg，至少约400,000IU/kg，至少约600,000IU/kg，至少约700,000IU/kg，至少约800,000IU/kg，或至少约1,000,000IU/kg。
53.根据权利要求1至52中任一项所述的方法，其中所述T细胞疗法选自肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)免疫疗法，自体细胞疗法，工程改造的自体细胞疗法(eACT)，同种异体T细胞移植，及其任何组合。
54.根据权利要求1至53中任一项所述的方法，进一步包括在施用一种或多种预调理剂之前从患者采集血细胞。
55.根据权利要求54所述的方法，进一步包括工程改造血细胞以表达嵌合抗原受体(“工程改造的CAR细胞”)或T细胞受体(“工程改造的TCR细胞”)。
56.根据权利要求1至55中任一项所述的方法，其中T细胞疗法包括工程改造的CAR细胞疗法或工程改造的TCR细胞疗法。
57.根据权利要求56所述的方法，其中工程改造的CAR细胞或工程改造的TCR细胞疗法治疗患者的肿瘤。
58.根据权利要求1至57中任一项所述的方法，其中从施用T细胞疗法之前至少七天，至少六天，至少五天，至少四天，至少三天，至少两天，或至少一天开始施用一种或多种预调理剂。
59.根据权利要求58所述的方法，其中在施用T细胞疗法之前约七天开始施用第一预调理剂，并且其中在施用T细胞疗法之前约五天开始施用第二预调理剂。
60.根据权利要求58所述的方法，其中在施用T细胞疗法之前约七天和约六天时向患者施用第一预调理剂，施用两天。
61.根据权利要求60所述的方法，其中在施用T细胞疗法之前约五天，四天，三天，两天和一天，向患者施用第二预调理剂，施用五天。
62.根据权利要求1至57中任一项所述的方法，其中在T细胞疗法施用之前约五天开始施用一种或多种预调理剂。
63.根据权利要求62所述的方法，其中在施用T细胞疗法之前约五天，四天和三天向所述患者施用第一预调理剂，施用三天。
64.根据权利要求1至63中任一项所述的方法，其中与不施用一种或多种预调理剂的T细胞疗法的抗肿瘤功效相比，施用一种或多种预调理剂诱导改善T细胞疗法的抗肿瘤功效。
65.根据权利要求1至64中任一项所述的方法，其中在施用一种或多种预调理剂和T细胞疗法之后，患者表现出增加的选自以下的细胞因子或促炎因子的血清水平：IL-15，IL-7，IL-10，IL-5，IP-10，IL-8，MCP-1，PLGF，CRP，sICAM-1，sVCAM-1，IL-1，IL-2，IL-3，IL-4，IL-6，IL-9，IL-11，IL-12，IL-13，IL-14，IL-15，IL-16，IL-17，IL-20，粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，粒细胞集落刺激因子(G-CSF)，血管内皮生长因子D(VEGF-D)，巨噬细胞炎症蛋白1β(MIP-1β)，白血病抑制因子(LIF)，抑癌蛋白M(OSM)，干扰素(IFN)α，IFN-β，IFN-γ，肿瘤坏死因子(TNF)α，TNF-β，CD154，淋巴毒素(LT)β，4-1BB配体(4-1BBL)，增殖诱导配体(APRIL)，CD70，CD153，CD178，糖皮质激素诱导的TNFR相关配体(GITRL)，肿瘤坏死因子超家族成员14(TNFSF14)，OX40L，TNF-和ApoL-相关白细胞表达配体1(TALL-1)，TNF相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)，趋化因子(C-C基序)配体(CCL)1，巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1a或CCL3)，CCL5，单核细胞特异性趋化因子3(MCP3或CCL7)，单核细胞趋化蛋白2(MCP-2或CCL8)，CCL13，胸腺和活化调节趋化因子(TARC或CCL17)，CCL22，及其任何组合。
66.根据权利要求1至65中任一项所述的方法，其中两种或更多种预调理剂同时或顺序施用。
67.根据权利要求66所述的方法，其中在第二预调理剂之前或之后向患者施用第一预调理剂。
68.根据权利要求55至67中任一项所述的方法，其中工程改造的CAR细胞表达嵌合抗原受体。
69.根据权利要求68所述的方法，其中嵌合抗原受体包含与肿瘤抗原的结合分子。
70.根据权利要求69所述的方法，其中结合分子是抗体或其抗原结合分子。
71.根据权利要求70所述的方法，其中结合分子是选自scFv，Fab，Fab'，Fv，F(ab')2，dAb，及其任何组合的抗原结合分子。
72.根据权利要求68至71中任一项所述的方法，其中嵌合抗原受体包含铰链区。
73.根据权利要求72所述的方法，其中铰链区是IgG1，IgG2，IgG3，IgG4，IgA，IgD，IgE，IgM，CD28或CD8α的铰链区。
74.根据权利要求73所述的方法，其中铰链区是IgG4的铰链区。
75.根据权利要求68至74中任一项所述的方法，其中嵌合抗原受体包含跨膜结构域。
76.根据权利要求75所述的方法，其中跨膜结构域是衍生自CD28，CD8α，CD4或CD19的跨膜结构域。
77.根据权利要求76所述的方法，其中跨膜结构域是CD28的跨膜结构域。
78.根据权利要求68至77中任一项所述的方法，其中嵌合抗原受体进一步包含共刺激信号传导区。
79.根据权利要求78所述的方法，其中共刺激信号传导区是衍生自CD28，OX-40，4-1BB，CD27，诱导型T细胞共刺激物(ICOS)，CD3γ，CD3δ，CD3ε，CD247，Igα(CD79a)，或Fcγ受体的信号传导区。
80.根据权利要求79所述的方法，其中共刺激信号传导区是CD28的信号传导区。
81.根据权利要求68至80中任一项所述的方法，其中嵌合抗原受体进一步包含CD3ζ信号传导结构域。
82.根据权利要求69至81中任一项所述的方法，其中肿瘤抗原选自CD19，CD20，1型受体酪氨酸激酶样孤儿受体(“ROR1”)，CD22，癌胚抗原，甲胎蛋白，CA-125，5T4，粘蛋白1(MUC-1)，上皮肿瘤抗原，前列腺特异性抗原，黑素瘤相关抗原，突变p53，突变ras，HER2/Neu，叶酸结合蛋白，HIV-1包膜糖蛋白gp120，HIV-1包膜糖蛋白gp41，GD2，CD123，CD33，CD138，CD23，CD30，CD56，c-Met，间皮素，GD3，HERV-K，IL-11Rα，κ链，λ链，硫酸软骨素蛋白聚糖(“CSPG4”)，ERBB2，EGFRvIII，VEGFR2，HER2-HER3组合，HER1-HER2组合，及其任何组合。
83.根据权利要求68至82中任一项所述的方法，其中工程改造的CAR细胞减小肿瘤大小。
84.根据权利要求55至67中任一项所述的方法，其中工程改造的TCR细胞表达T细胞受体。
85.根据权利要求84所述的方法，其中T细胞受体包含与肿瘤抗原的结合分子。
86.根据权利要求85所述的方法，其中肿瘤抗原选自CD19，CD20，ROR1，CD22，癌胚抗原，甲胎蛋白，CA-125，5T4，MUC-1，上皮肿瘤抗原，前列腺特异性抗原，黑素瘤相关抗原，突变p53，突变ras，HER2/Neu，叶酸结合蛋白，HIV-1包膜糖蛋白gp120，HIV-1包膜糖蛋白gp41，GD2，CD123，CD33，CD138，CD23，CD30，CD56，c-Met，间皮素，GD3，HERV-K，IL-11Rα，κ链，λ链，CSPG4，ERBB2，EGFRvIII，VEGFR2，HER2-HER3组合，HER1-HER2组合，及其任何组合。
87.根据权利要求84所述的方法，其中T细胞受体包含与病毒癌基因的结合分子。
88.根据权利要求87所述的方法，其中病毒癌基因选自人乳头瘤病毒(HPV)，EB病毒(EBV)和人嗜T淋巴细胞病毒(HTLV)。
89.根据权利要求84所述的方法，其中T细胞受体包含与睾丸、胎盘或胎儿肿瘤抗原的结合分子。
90.根据权利要求89所述的方法，其中睾丸、胎盘或胎儿癌症抗原选自NY-ESO-1，滑膜肉瘤X断裂点2(SSX2)和黑素瘤抗原(MAGE)。
91.根据权利要求84所述的方法，其中T细胞受体包含与谱系特异性抗原的结合分子。
92.根据权利要求91所述的方法，其中谱系特异性抗原选自T细胞识别的黑素瘤抗原1(MART-1)，gp100，前列腺特异性抗原(PSA)，前列腺特异性膜抗原(PSMA)和前列腺干细胞抗原(PSCA)。
93.根据权利要求55至67和84至92中任一项所述的方法，其中工程改造的TCR细胞减小患者的肿瘤大小。
94.根据权利要求55至93中任一项所述的方法，其中治疗有效量的工程改造的CAR细胞或工程改造的TCR细胞为至少约104个细胞，至少约105个细胞，至少约106个细胞，至少约107个细胞，至少约108个细胞，至少约109个细胞，或至少约1010个细胞。
95.根据权利要求55至93中任一项所述的方法，其中治疗有效量的工程改造的CAR细胞为约104个细胞，约105个细胞，约106个细胞，约107个细胞，约108个细胞，约109个细胞，或约1010细胞。
96.根据权利要求55至93中任一项所述的方法，其中治疗有效量的工程改造的CAR细胞为约2×106个细胞/kg，约3×106个细胞/kg，约4×106个细胞/kg，约5×106个细胞/kg，约6×106个细胞/kg，约7×106个细胞/kg，约8×106个细胞/kg，约9×106个细胞/kg，约1×107个细胞/kg，约2×107个细胞/kg，约3×107个细胞/kg，约4×107个细胞/kg，约5×107个细胞/kg，约6×107个细胞/kg，约7×107个细胞/kg，约8×107个细胞/kg，或约9×107个细胞/kg。
97.根据权利要求83或93中任一项所述的方法，其中肿瘤选自衍生自以下的肿瘤：骨癌，胰腺癌，皮肤癌，头或颈部癌，皮肤或眼内恶性黑素瘤，子宫癌，卵巢癌，直肠癌，肛区癌，胃癌，睾丸癌，子宫癌，输卵管癌，子宫内膜癌，宫颈癌，阴道癌，外阴癌，霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤，食管癌，小肠癌，内分泌系统癌，甲状腺癌，甲状旁腺癌，肾上腺癌，软组织肉瘤，尿道癌，阴茎癌，慢性或急性白血病，急性骨髓性白血病，慢性骨髓性白血病，急性淋巴母细胞白血病，慢性淋巴母细胞白血病，儿童实体瘤，淋巴细胞性淋巴瘤，膀胱癌，肾或输尿管癌，肾盂癌，中枢神经系统(CNS)肿瘤，原发性CNS淋巴瘤，肿瘤血管生成，脊轴肿瘤，脑干胶质瘤，垂体腺瘤，卡波西肉瘤，表皮样癌，鳞状细胞癌，T细胞淋巴瘤，环境诱导的癌症，包括由石棉诱导的癌症，以及所述癌症的组合。
98.根据权利要求69至97中任一项所述的方法，其中肿瘤抗原是CD19。
99.根据权利要求98所述的方法，其中肿瘤是淋巴瘤或白血病。
100.根据权利要求99所述的方法，其中淋巴瘤或白血病选自B细胞慢性淋巴细胞性白血病/小细胞淋巴瘤，B细胞幼淋巴细胞性白血病，淋巴浆细胞性淋巴瘤(例如瓦氏巨球蛋白血症)，脾边缘区淋巴瘤，多毛细胞白血病，浆细胞瘤(例如浆细胞骨髓瘤(即多发性骨髓瘤)或浆细胞瘤)，结外边缘区B细胞淋巴瘤(例如MALT淋巴瘤)，结节边缘区B细胞淋巴瘤，滤泡性淋巴瘤，转化的滤泡性淋巴瘤，原发性皮肤滤泡中心淋巴瘤，套细胞淋巴瘤，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)，EB病毒阳性DLBCL，淋巴瘤样肉芽肿病，原发性纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤，血管内大B细胞淋巴瘤，ALK+大B细胞淋巴瘤，浆母细胞性淋巴瘤，原发性渗出性淋巴瘤，HHV8相关多中心Castleman病中产生的大B细胞淋巴瘤，伯基特淋巴瘤/白血病，T细胞幼淋巴细胞白血病，T细胞大颗粒淋巴细胞白血病，侵袭性NK细胞白血病，成人T细胞白血病/淋巴瘤，结外NK/T细胞淋巴瘤，肠病相关T细胞淋巴瘤，肝脾T细胞淋巴瘤，母细胞性NK细胞淋巴瘤，蕈样肉芽肿病/塞扎里综合征，原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤，淋巴瘤样丘疹病，外周T细胞淋巴瘤，血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤，间变性大细胞淋巴瘤，B淋巴母细胞性白血病/淋巴瘤，具有复发性遗传异常的B淋巴母细胞性白血病/淋巴瘤，T淋巴母细胞性白血病/淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤。
101.根据权利要求1至100中任一项所述的方法，进一步包括向患者施用盐溶液。
102.根据权利要求101所述的方法，其中在施用一种或多种预调理剂之前施用盐溶液。
103.根据权利要求1至102中任一项所述的方法，进一步包括向患者施用美司钠(2-巯基乙磺酸钠)。
104.根据权利要求103所述的方法，其中在施用一种或多种预调理剂之前施用美司钠。
105.根据权利要求35所述的方法，其中有效量的环磷酰胺为约200mg/m2/天。
106.根据权利要求35所述的方法，其中有效量的环磷酰胺为200mg/m2/天至3000mg/m2/天，并且其中在施用环磷酰胺和氟达拉滨之后，患者表现出增加的IL-7，IL-15，IL-10，IL-5，IP-10，IL-8，MCP-1，PLGF，CRP，sICAM-1，sVCAM-1，或其任何组合的血清水平或降低的穿孔素和/或MIP-1b的血清水平。
107.根据权利要求35至39、43至45、47至104和106中任一项所述的方法，其中有效量的环磷酰胺为1000mg/m2/天至2000mg/m2/天。
108.根据权利要求35至41、43至45、47至104、106和107所述的方法，其中有效量的环磷酰胺为约1110mg/m2/天。
109.根据权利要求35至39、47至104、106和107中任一项所述的方法，其中有效量的环磷酰胺为约300mg/m2/天。
110.根据权利要求35至41、43至45、47至104、106和107中任一项所述的方法，其中有效量的环磷酰胺为约30mg/kg/天。
111.根据权利要求35至42和47至110中任一项所述的方法，其中有效量的氟达拉滨为约20mg/m2/天。
112.根据权利要求35至42和47至110中任一项所述的方法，其中有效量的氟达拉滨为约25mg/m2/天。
113.根据权利要求35至42和47至110中任一项所述的方法，其中有效量的氟达拉滨为约30mg/m2/天。
114.根据权利要求35至39和47至104中任一项所述的方法，其中有效量的环磷酰胺为约200mg/m2/天，并且有效量的氟达拉滨为约20mg/m2/天。
115.根据权利要求35至39和47至104中任一项所述的方法，其中有效量的环磷酰胺为约300mg/m2/天，并且有效量的氟达拉滨为约30mg/m2/天。
116.根据权利要求35至39和47至104中任一项所述的方法，其中有效量的环磷酰胺为约300mg/m2/天，并且有效量的氟达拉滨为约60mg/m2/天。
117.根据权利要求35至41和47至104中任一项所述的方法，其中有效量的环磷酰胺为约500mg/m2/天，并且有效量的氟达拉滨为约30mg/m2/天。
118.根据权利要求35至41、47至104和106中任一项所述的方法，其中有效量的环磷酰胺为约1110mg/m2/天，并且有效量的氟达拉滨为约25mg/m2/天。
119.根据权利要求106所述的方法，其中有效量的环磷酰胺为约2220mg/m2/天，并且有效量的氟达拉滨为约25mg/m2/天，并且其中在施用环磷酰胺和氟达拉滨之后，患者表现出增加的IL-7，IL-15，IL-10，IL-5，IP-10，IL-8，MCP-1，PLGF，CRP，sICAM-1，sVCAM-1，或其任何组合的血清水平或降低的穿孔素和/或MIP-1b的血清水平。
120.根据权利要求55至93和97至116中任一项所述的方法，其中治疗有效量的工程改造的CAR T细胞为约1.0×105个细胞/kg至约2×108个细胞/kg，约2.0×105个细胞/kg至约2×108个细胞/kg，约3.0×105个细胞/kg至约2×108个细胞/kg，约4.0×105个细胞/kg至约2×108个细胞/kg，约5.0×105个细胞/kg至约2×108个细胞/kg，约6.0×105个细胞/kg至约2×108个细胞/kg，约7.0×105个细胞/kg至约2×108个细胞/kg，约8.0×105个细胞/kg至约2×108个细胞/kg，约9.0×105个细胞/kg至约2×108个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约3×106个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约4×106个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约5×106个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约6×106个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约7×106个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约8×106个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约9×106个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约1×107个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约2×107个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，从约3×107个细胞/kg到约9×107个细胞/kg，从约4×107个细胞/kg到约9×107个细胞/kg，从约5×107个细胞/kg到约9×107个细胞/kg，约6×107个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约7×107个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约8×107个细胞/kg至约9×107个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约8×107个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约7×107个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约6×107个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约5×107个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约4×107个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约3×107个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约2×107个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约1×107个细胞/kg，从约2×106个细胞/约9×106个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约8×106个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约7×106个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约6×106个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约5×106个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约4×106个细胞/kg，约2×106个细胞/kg至约3×106个细胞/kg，约3×106个细胞/kg至约8×107个细胞/kg，约4×106个细胞/kg至约7×107个细胞/kg，约5×106个细胞/kg至约6×107个细胞/kg，约6×106个细胞/kg至约5×107个细胞/kg，约7×106个细胞/kg至约4×107个细胞/kg，约8×106细胞/kg至约3×107个细胞/kg，或约9×106个细胞/kg至约2×107个细胞/kg。
121.用于鉴定有效用于使受试者准备好进行T细胞疗法的一种或多种预调理剂的剂量的方法，包括(i)向患者施用一种或多种预调理剂，(ii)测量IL-7，IL-15，IL-10，IL-5，IP-10，IL-8，MCP-1，PLGF，CRP，sICAM-1，sVCAM-1，穿孔素，MIP-1b，或其任意组合的血清水平，以及(ⅲ)表征一种或多种预调理剂为有效用于使受试者准备好进行T细胞疗法，其中在施用一种或多种预调理剂之后，受试者表现出增加的IL-7，IL-15，IL-10，IL-5，IP-10，IL-8，MCP-1，PLGF，CRP，sICAM-1，sVCAM-1，或其任何组合，例如IL-15，IP-10和/或IL-7的血清水平，和/或降低的穿孔素和/或MIP-1b的血清水平。
122.用于验证一种或多种预调理剂用于使受试者准备好进行T细胞疗法的有效性的方法，包括(i)向患者施用一种或多种预调理剂，(ii)测量IL-7，IL-15，IL-10，IL-5，IP-10，IL-8，MCP-1，PLGF，CRP，sICAM-1，sVCAM-1，穿孔素，MIP-1b，或其任意组合的血清水平，以及(ⅲ)表征一种或多种预调理剂为有效用于使受试者准备好进行T细胞疗法，其中在施用一种或多种预调理剂之后，受试者表现出增加的IL-7，IL-15，IL-10，IL-5，IP-10，IL-8，MCP-1，PLGF，CRP，sICAM-1，sVCAM-1，或其任何组合，例如IL-15，IP-10和/或IL-7的血清水平，和/或降低的穿孔素和/或MIP-1b的血清水平。
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