CN104394877A - 用于输注短暂植入的同种异体淋巴细胞的选定群体来治疗癌症的方法和组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供用于施用同种异体淋巴细胞作为内源性肿瘤反应性CD8+T细胞的CD4+T细胞辅助的外部来源的方法和组合物。由供体淋巴细胞输注引起的CD8+T细胞的耗竭减少持续植入和移植物抗宿主疾病的风险。从输注群体中去除调控性T细胞可增进非调控性T细胞为抗肿瘤免疫力的内源性效应物提供辅助的能力。同种异体T细胞疗法通常在同种异体干细胞移植的情况下给予，其中患者接收高度免疫抑制调节，随后输注含有未经选择的成熟T细胞的群体的干细胞移植物。在本文描述的治疗中，移植物经过工程改造以将持续供体细胞植入的可能性减少到最低限度，并且抗肿瘤效应T细胞从宿主获得。

Description

用于输注短暂植入的同种异体淋巴细胞的选定群体来治疗癌症的方法和组合物

发明背景

发明领域

本发明大体上涉及免疫学，并且更具体地说，涉及用于治疗癌症的方法和含有同种异体淋巴细胞的组合物。

背景信息

宿主的免疫系统提供迅速并特异性地发动针对致病微生物的保护性反应并且还促成恶性肿瘤的排斥的手段。免疫反应大体上描述为包括体液反应，其中对于抗原具有特异性的抗体由分化的B淋巴细胞产生，和细胞介导的反应，其中各种类型T淋巴细胞通过各种机制来消除抗原。举例来说，能够识别特异性抗原的CD4(也称为CD4+)辅助T细胞可通过释放可溶性介体如细胞因子来募集免疫系统的其他细胞参与免疫反应而作出反应。CD8(也称为CD8+)细胞毒性T细胞也能够识别特异性抗原并且可结合并破坏或摧毁携带抗原的细胞或颗粒。具体地说，包括细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应在内的细胞介导免疫反应对于消除肿瘤细胞和由微生物如病毒、细菌或寄生虫感染的细胞可为至关重要的。

癌症包括广泛范围的疾病并且在世界范围内影响大约四分之一的个体。CTL反应是有效癌症疫苗的关键特征；有效CD4T细胞辅助也可能在生成性CD8T细胞活化中发挥关键作用，因而提供临床益处。

关于微生物感染，疟疾、结核病、HIV-AIDS和其它病毒感染如单纯性疱疹病毒(HSV)感染(在世界范围内，生殖器溃疡的主要病因)持续造成全球性健康问题。HSV-2发病率在世界各地以惊人的速度增加。在美国，总HSV-2血清发病率超过20％，并且在发展中国家中，HSV-2发病率估计在30％与50％之间。除了HSV-2感染在成人中的深重负担以外，新生儿HSV-2感染的发病率也在不断增加。甚至在治疗时，由HSV-2感染引起的新生儿脑炎具有>15％的死亡率，并且HSV-2感染婴幼儿之中的神经系统发病率也占存活病例中的30％至50％。与HSV-2流行病同时出现的十分明显的现实是，HSV-2感染大大增加HIV-1获得和传播的风险。来自非洲的数据表明HSV-2感染可增加HIV传播的风险多达7倍并且多达一半的新获得HIV病例直接归因于HSV-2感染。总体上，在HSV-2感染个体中，HIV获得的相对风险增加超过2倍。

新出现的证据暗示在对于由癌症独特表达的抗原具有特异性的淋巴细胞中，癌症诱导无反应状态。然而，此无反应状态应能够逆转。一些人肿瘤由CD8+T细胞浸润，并且CD8+T细胞浸润程度经常与不存在转移和存活提高相关。然而，这些CD8+T细胞可能因肿瘤特异性CD4+T细胞的功能迟滞而不能消除癌症。

发明概述

本发明基于以下重大发现：输注含有CD4+T细胞的同种异体淋巴细胞可破坏宿主抗肿瘤CD8+T细胞的耐受性，即使供体细胞不长期植入接受者中也是如此。在同种异体细胞输注之前施用化学疗法可通过促进转移淋巴细胞的稳态扩增，且/或通过耗竭宿主调控性T细胞和髓源性抑制细胞来增进短暂植入淋巴细胞的抗肿瘤效应。针对癌症的免疫反应受到患者CD4+T细胞的功能缺陷所阻碍。输注同种异体淋巴细胞可提供用于内源性的肿瘤反应性CD8+T细胞的CD4+T细胞辅助的外部来源。由供体淋巴细胞输注引起的CD8+T细胞的耗竭减少持续植入和移植物抗宿主疾病的风险。从输注群体中去除调控性T细胞可增进非调控性T细胞为抗肿瘤免疫力的内源性效应物提供辅助的能力。

同种异体T细胞疗法通常在同种异体干细胞移植的情况下给予，其中患者接收高度免疫抑制调节，随后输注含有未经选择的成熟T细胞群体的干细胞移植物。alloSCT的目标是获得供体细胞的持续植入并且伴有移植物抗宿主疾病引起的死亡风险。在本文描述的治疗中，移植物经过工程改造以将持续供体细胞植入的可能性减少到最低限度，并且抗肿瘤效应T细胞从宿主获得。因此，此疗法需要在短暂供体细胞植入期间宿主和供体淋巴细胞的独特配合。

这是可应用于任何人类或动物癌症的治疗。本发明的变化包括：1)在输注同种异体淋巴细胞之前给予的化疗方案的变化(可包括环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、达沙替尼、其组合；2)供体淋巴细胞来源的变化(可来自相关或不相关的供体，可包括I类或II类HLA基因座处的限定错配；3)对于输注所选择的细胞类型的变化，如耗竭CD4+CD25+调控性T细胞、耗竭CD8+T细胞。供体可在淋巴细胞输注之前针对限定抗原进行免疫或可离体用细胞因子极化以富集I型(产生IFN-γ)或17型(产生IL-17)T细胞。

在第一个实施方案中，本发明提供制造同种异体淋巴细胞组合物的方法，其包括：提供来自相对于接受者来说为同种异体的人供体的外周血细胞组合物，所述外周血细胞组合物包括CD4+T细胞、CD8+T细胞和自然杀伤细胞，其中(i)在供体抗接受者的方向中，供体包括相对于接受者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因错配，并且HLA II类等位基因错配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，并且(ii)接受者不具有对供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体；并且通过使外周血细胞组合物中的CD8+T细胞的数目减少至少一个数量级来从外周血细胞组合物制造同种异体淋巴细胞组合物，其中(a)同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，并且(b)同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，其限制条件是同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。

在另一个实施方案中，本发明提供由本发明方法制成的组合物。在另一个实施方案中，本发明提供同种异体人淋巴细胞组合物，其包括：来自供体的外周血细胞组合物的CD4+T细胞和自然杀伤细胞，其中(i)在供体抗接受者的方向中，供体包括相对于接受者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因错配，并且HLA II类等位基因错配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，(ii)接受者不具有对供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体，(iii)同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，(iv)基于以公斤(kg)为单位的接受者理想体重的供体CD4+T细胞的数目在约1X10⁵个CD4+T细胞/kg与约1X10⁹个CD4+T细胞/kg之间，(v)同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，并且(vi)同种异体淋巴细胞组合物具有比外周血细胞组合物少至少一个数量级的CD8+T细胞；其限制条件是同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。

本发明还提供治疗人受试者的疾病或病状的方法，其包括：向受试者施用淋巴细胞减少性非致淋巴细胞衰竭的疗法以诱导受试者的短暂淋巴细胞减少；并且随后向受试者施用从人同种异体供体的外周血细胞组合物获得的第一同种异体淋巴细胞组合物，所述第一同种异体淋巴细胞组合物包括来自供体的外周血细胞组合物的一定数目的CD4+T细胞和一定数目的自然杀伤细胞，其中(i)在供体抗受试者的方向中，供体包括相对于受试者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因错配，并且HLA II类等位基因错配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，(ii)受试者不具有对供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体，(iii)第一同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，(iv)基于以公斤(kg)为单位的受试者理想体重的供体CD4+T细胞的数目在约1X10⁵个CD4+T细胞/kg与约1X10⁹个CD4+T细胞/kg之间，(v)第一同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，并且(vi)第一同种异体淋巴细胞组合物具有比外周血细胞组合物少至少一个数量级的CD8+T细胞，其限制条件是第一同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。

在一个方面，在向受试者施用第一同种异体淋巴细胞组合物之后，所述方法还包括向受试者施用连续淋巴细胞减少性非致淋巴细胞衰竭疗法以诱导受试者的短暂淋巴细胞减少；并且随后向受试者施用从另外人同种异体供体的另外外周血细胞组合物获得的连续同种异体淋巴细胞组合物，所述连续同种异体淋巴细胞组合物包括来自另外供体的另外外周血细胞组合物的一定数目的CD4+T细胞和一定数目的自然杀伤细胞，其中(i)在另外供体抗受试者的方向中，所述另外供体包括相对于受试者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因错配，并且HLA II类等位基因错配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，(ii)受试者不具有对另外供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体，(iii)连续同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与另外外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，(iv)基于以公斤(kg)为单位的受试者理想体重的另外供体CD4+T细胞的数目在约1X10⁵个CD4+T细胞/kg与约1X10⁹个CD4+T细胞/kg之间，(v)连续同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于另外外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，并且(vi)连续同种异体淋巴细胞组合物具有比另外外周血细胞组合物少至少一个数量级的CD8+T细胞。

本发明还提供制造施用至人接受者的同种异体淋巴细胞组合物的方法，其包括：提供来自相对于接受者为同种异体的人供体的外周血细胞组合物，所述外周血细胞组合物包括一定数目的CD4+T细胞、一定数目的CD8+T细胞和一定数目的自然杀伤细胞，其中(i)供体具有相对于存在于接受者体内的抗原的CD4+T细胞免疫力，(ii)供体包括相对于接受者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因匹配并且HLA II类等位基因匹配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，并且(iii)接受者不具有对供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体；并且通过使外周血细胞组合物中的CD8+T细胞的数目减少至少一个数量级来从外周血细胞组合物制造同种异体淋巴细胞组合物，其中(a)同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，并且(b)同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，其限制条件是同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。

在另一个实施方案中，本发明提供用于施用至人接受者的从人同种异体供体的外周血细胞组合物获得的同种异体淋巴细胞组合物，所述同种异体淋巴细胞组合物包括：来自供体的外周血细胞组合物的一定数目的CD4+T细胞和一定数目的自然杀伤细胞，其中(i)供体具有相对于存在于接受者体内的抗原的CD4+T细胞免疫力，(ii)供体包括相对于接受者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因匹配并且HLA II类等位基因匹配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，(iii)接受者不具有对供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体，(iv)同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，(v)基于以公斤(kg)为单位的接受者理想体重的供体CD4+T细胞的数目在约1X105个CD4+T细胞/kg与约1X109个CD4+T细胞/kg之间，(vi)同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，并且(vii)同种异体淋巴细胞组合物具有比外周血细胞组合物少至少一个数量级的CD8+T细胞；其限制条件是同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。

本发明还提供用于施用至人接受者的从人同种异体供体的外周血细胞组合物获得的同种异体淋巴细胞组合物，所述同种异体淋巴细胞组合物包括：来自供体的外周血细胞组合物的一定数目的CD4+T细胞和一定数目的自然杀伤细胞，其中(i)供体具有相对于不存在于接受者体内的抗原的CD4+T细胞免疫力，(ii)供体包括相对于接受者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因匹配并且HLA II类等位基因匹配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，(iii)接受者不具有对供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体，(iv)同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，(v)基于以公斤(kg)为单位的接受者理想体重的供体CD4+T细胞的数目在约1X105个CD4+T细胞/kg与约1X109个CD4+T细胞/kg之间，(vi)同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，并且(vii)同种异体淋巴细胞组合物具有比外周血细胞组合物少至少一个数量级的CD8+T细胞；其限制条件是同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。

在一个实施方案中，本发明提供用于治疗受试者的疾病或病状的试剂盒，所述试剂盒包括：淋巴细胞组合物，其中受试者是人接受者；以及纳米颗粒组合物，其包括包含不存在于人接受者体内的抗原的纳米颗粒。

此外，存在治疗人受试者的疾病或病状的方法，其包括向受试者施用从人同种异体供体的外周血细胞组合物获得的同种异体淋巴细胞组合物，所述同种异体淋巴细胞组合物包括来自供体的外周血细胞组合物的一定数目的CD4+T细胞和一定数目的自然杀伤细胞，其中(i)供体具有相对于存在于受试者体内的抗原的CD4+T细胞免疫力，(ii)供体包括相对于受试者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因匹配并且HLA II类等位基因匹配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，(iii)受试者不具有对供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体，(iv)同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，(v)基于以公斤(kg)为单位的受试者理想体重的供体CD4+T细胞的数目在约1X105个CD4+T细胞/kg与约1X109个CD4+T细胞/kg之间，(vi)同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，并且(vii)同种异体淋巴细胞组合物具有比外周血细胞组合物少至少一个数量级的CD8+T细胞；其限制条件是同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。

在一个方面，本发明提供治疗人受试者的疾病或病状的方法，其包括向肿瘤中注入纳米颗粒组合物，其中所述纳米颗粒组合物包括包含不存在于受试者体内的抗原的纳米颗粒，由此将抗原引入受试者体内；向受试者施用从人同种异体供体的外周血细胞组合物获得的同种异体淋巴细胞组合物，所述同种异体淋巴细胞组合物包括来自供体的外周血细胞组合物的一定数目的CD4+T细胞和一定数目的自然杀伤细胞，其中(i)供体具有相对于抗原的CD4+T细胞免疫力，(ii)供体包括相对于受试者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因匹配并且HLA II类等位基因匹配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，(iii)受试者不具有对供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体，(iv)同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，(v)基于以公斤(kg)为单位的受试者理想体重的供体CD4+T细胞的数目在约1X105个CD4+T细胞/kg与约1X109个CD4+T细胞/kg之间，(vi)同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，并且(vii)同种异体淋巴细胞组合物具有比外周血细胞组合物少至少一个数量级的CD8+T细胞；其限制条件是同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。

附图简述

图1展示BMT之后的相同五个患者的红细胞压积，其中锯齿状部分反映输注效应(曲线图)。

图2展示非植入DLI诱导抗肿瘤免疫力(曲线图)。

图3a展示植入作为疫苗的供体细胞加上alloCD4延长存活(曲线图)。图3b展示具有供体CD4+T细胞嵌合体和移植后天数的曲线图。

图4展示使用白细胞分离产物和放血样本的CD8耗竭的验证操作(流式细胞术结果)。

发明详述

本公开至少部分地产生于以下重大发现：对于癌症的免疫反应受到患者CD4+T细胞的功能缺陷所阻碍。输注同种异体淋巴细胞可提供用于内源性肿瘤反应性CD8+T细胞的CD4+T细胞辅助的外部来源。由供体淋巴细胞输注引起的CD8+T细胞的耗竭减少持续植入和移植物抗宿主疾病的风险。从输注群体中去除调控性T细胞可增进非调控性T细胞为抗肿瘤免疫力的内源性效应物提供辅助的能力。同种异体T细胞疗法通常在同种异体干细胞移植的情况下给予，其中患者接收高度免疫抑制调节，随后输注含有未经选择的成熟T细胞的群体的干细胞移植物。在本文描述的治疗中，移植物经过工程改造以将持续供体细胞植入的可能性减少到最低限度，并且抗肿瘤效应T细胞从宿主获得。因此，此疗法需要在短暂供体细胞植入期间宿主和供体淋巴细胞的独特配合。

在一个实施方案中，本发明提供制造用于施用至人接受者的同种异体淋巴细胞组合物的方法，优选地，供体和接受者不是同一人。所述方法包括提供来自相对于接受者为同种异体的人供体的外周血细胞组合物，所述外周血细胞组合物包括一定数目的CD4+T细胞、一定数目的CD8+T细胞和一定数目的自然杀伤细胞，一些自然杀伤细胞具有CD8+抗原并且可通过“减少”步骤来去除；然而，本发明的优选淋巴细胞组合物包括来自供体的至少一些自然杀伤细胞。在一方面，(i)在供体抗接受者方向上，供体包括相对于接受者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因错配(HLA II类等位基因错配在供体抗接受者方向上，即，“移植物抗宿主方向上)，并且HLA II类等位基因错配是在如HLA-DRB1、HLA-DQB1或HLA-DPB1等基因处。接受者不具有对于供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体(在这种情况下，“可检测抗体”使用进行此确定的标准方法来定义(例如，接受者不具有可通过补体依赖性细胞毒性来检测的针对供体HLA分子的抗体，在流式细胞交叉匹配测定中，阳性结果是不合需要的，或在固相免疫测定中，3000或更大的平均荧光强度(MFI)是不可接受的)。

同种异体淋巴细胞组合物通过使外周血细胞组合物中的CD8+T细胞的数目减少至少一个数量级来从外周血细胞组合物制得，其中(a)同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％。在一个优选实施例中，淋巴细胞组合物中的CD4+数目/CD8+T细胞数目的比率优选地大于或等于约30。一些实施方案的实例包括但不限于以下每公斤接受者理想体重的剂量：包括105个CD4+细胞的淋巴细胞组合物通常具有不大于3.2X 10³个CD8+细胞、10⁶个CD4+细胞通常具有不大于3.2X10⁴个CD8+细胞，10⁷个CD4+细胞通常具有不大于3.2X 10⁵个CD8+细胞，10⁸个CD4+细胞通常具有不大于3.2X 10⁶个CD8+细胞，并且5X 10⁸个CD4+细胞通常具有不大于1.6X 10⁷个CD8+细胞。

同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，其限制条件是同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。减少一个数量级，优选地约两个数量级，更优选地约五个数量级。在一个实施方案中，CD8+细胞的数目减少约2.5个数量级(例如，使用磁性珠粒细胞分选方法)。

在一方面，其中如果供体和接受者是ABO血型不相容的并且外周血细胞组合物包括一定数目的红细胞，那么制造同种异体淋巴细胞组合物还包括减少红细胞数目。如本文使用，“ABO血型不相容”是指当接受者具有相对于供体的主要ABO红细胞不相容性时，例如，接受者是血型O并且供体是血型A、B或AB，接受者是A型并且供体是B型或AB型，或接受者是B型并且供体是A型或AB型。

在一方面，红细胞的数目包括小于或等于约50ml压积。例如，小于或等于约50ml压积，优选地小于或等于约30ml压积，此外“压积”应加以定义，例如，淋巴细胞组合物的离心产生50ml或更小压积的红细胞；也可筛选淋巴细胞组合物的测量体积样品以提供压缩血细胞的按比例代表性体积。

在一方面，同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约20％。在一些实施方案中，CD4+T细胞小于约50％，小于约40％，优选地小于约20％，更优选地小于约10％。在一些实施方案中，可执行CD4+T细胞的离体扩增，在这些实施方案中CD4+T细胞的数目可极大地超过原始数目。这类扩增是替代实施方案。

在一些实施方案中，从供体获得的CD4+T细胞未有意地扩增或有意地离体分化。有意地扩增或有意地分化不同于仅仅是方法的副作用(并非有意的、不注意的)的CD4+T细胞的扩增或分化，例如，CD4+T细胞可有时通过接触到塑料、这类不注意的事件的其它实例而经历分化。在另一个实施方案中，进一步限制条件是干细胞在对于接受者为同种异体的外周血细胞组合物供体体内没有经历动员。

在一些方面，减少外周血细胞组合物中的CD8+T细胞包括使用与磁性颗粒相关联的抗CD8+抗体或抗CD8+抗体加上补体。外周血细胞组合物可为例如全血产物或单采产物。此外，供体抗接受者方向上的HLA II类等位基因错配可为HLA-DRB1处的错配。供体抗接受者方向上的对于HLA II类等位基因错配的此限制是例如“移植物抗宿主方向”，其中同种异体供体抗接受者方向上的至少一个HLA II类等位基因错配还包括同种异体供体与接受者的一个或多个第一近亲之间的相同HLA II类等位基因错配，这对于保持从第一近亲至接受者的骨髓移植的机会；理想地，供体与接受者之间的所有错配不存在于潜在家族骨髓供体与接受者之间。

在一些方面，进行一个或多个选择特征的筛选并且对于选自由接受者、供体和一个或多个潜在同种异体供体组成的组的受试者来执行筛选。举例来说，针对感染物抗原的血清反应性来筛选选择特征。感染物抗原选自由以下组成的组：人免疫缺陷病毒(HIV)抗原、肝炎病毒抗原和巨细胞病毒抗原。欲筛选的重要试剂包括例如HIV-1抗原、HIV-2抗原、甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原、丙型肝炎病毒抗原、CMV抗原、感染性疾病等。如果病毒或感染物或其抗原是治疗标靶，那么不排除具有针对此试剂的所需CD4+介导免疫反应的供体。

在一方面，感染物抗原是巨细胞病毒抗原，对接受者和供体加以筛选，并且在接受者或供体中没有巨细胞病毒抗原的血清反应性。在一方面，病毒抗原是流感抗原并且流感抗原是血凝素抗原或神经氨酸酶抗原。

在另一方面，针对一种以上HLA II类等位基因来筛选选择特征。在某些情况下，基于在一种以上HLA II类等位基因处、在潜在同种异体供体抗接受者方向上、潜在同种异体供体与接受者之间的最大化错配来选择潜在同种异体供体，并且将潜在同种异体供体选为供体。在某些情况下，针对一个或多个HLA I类等位基因来筛选选择特征。

可基于最小化一种以上HLA I类等位基因处、潜在同种异体供体与接受者之间的错配来选择潜在同种异体供体，并且将潜在同种异体供体选为供体。

在一个实施方案中，本发明提供通过如本文描述的本发明方法获得的用于施用至人接受者的同种异体淋巴细胞组合物。

如果接受者对于CMV抗原是血清阳性的，那么供体状态不重要。在某些实施方案中，其中供体未针对存在于接受者体内或将要递送至接受者的抗原进行免疫接种，递送CD4+T细胞辅助取决于接受者细胞上的同种异体HLA II类分子的供体CD4+T细胞识别。出于例证本发明的这些实施方案的目的的“理想供体”的实例则在HLA II类等位基因(尤其，HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1)处完全错配并且对于I类等位基因来说完全匹配(以最大化接受者中的供体细胞的存活并且最小化针对I类分子的同种抗体形成)。此外，理想供体与同种异体干细胞移植的潜在供体的接受者的第一近亲的不共享HLA完全错配。

在一个实施方案中，存在从人同种异体供体的外周血细胞组合物获得的同种异体淋巴细胞组合物用于施用至人接受者，所述同种异体淋巴细胞组合物包括来自供体的外周血细胞组合物的一定数目的CD4+T细胞和一定数目的自然杀伤细胞，其中(i)在供体抗接受者的方向中，供体包括相对于接受者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因错配，并且HLA II类等位基因错配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，(ii)接受者不具有对供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体，(iii)同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％(包括但不限于小于约50％、小于约40％、优选小于约20％、更优选小于约10％)。此外，“外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％”意指外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目加或减小于50％。举例来说，如果外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目是1X10⁵个CD4+细胞，那么“外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％”意指CD4+T细胞的数目在1.5X10⁵与0.5X10⁵之间。在组合物中，基于以公斤(kg)为单位的接受者的理想体重(理想体重(IBW)是基于身高。对于男性，IBW＝50+2.3kg/英寸，在5英尺内。对于女性，IBW＝45.5+2.3kg/英寸，在5英尺内)的供体CD4+T细胞的数目在约1X10⁵个CD4+T细胞/kg与约1X10⁹个CD4+T细胞/kg之间(在一个优选实施方案中，在约1X10⁶个CD4+T细胞/kg与约5X10⁸个CD4+T细胞/kg之间)；(v)同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，并且(vi)同种异体淋巴细胞组合物具有比外周血细胞组合物少至少一个数量级的CD8+T细胞；其限制条件是同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。

还提供治疗人受试者的疾病或病状的方法，包括将淋巴细胞减少性(在本发明的这一方面的一些实施方案中，需要提供淋巴细胞减少性非致淋巴细胞衰竭的疗法来促进所施用淋巴细胞组合物的稳态扩增和分化；在其它实施方案中，需要治疗也为骨髓细胞减少性的(即，抑制或耗竭抑制性骨髓群体包括髓源性抑制细胞、肿瘤相关巨噬细胞和或N2嗜中性粒细胞)非致淋巴细胞衰竭的疗法施用至受试者以诱导受试者的短暂淋巴细胞减少；随后向受试者施用从人同种异体供体的外周血细胞组合物获得的第一同种异体淋巴细胞组合物，所述第一同种异体淋巴细胞组合物包括来自供体的外周血细胞组合物的一定数目的CD4+T细胞和一定数目的自然杀伤细胞，其中(i)在供体抗受试者的方向中，供体包括相对于受试者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因错配，并且HLA II类等位基因错配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，(ii)受试者不具有对供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体，(iii)第一同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，(iv)基于以公斤(kg)为单位的受试者理想体重的供体CD4+T细胞的数目在约1X10⁵个CD4+T细胞/kg与约1X10⁹个CD4+T细胞/kg之间，(v)第一同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，并且(vi)第一同种异体淋巴细胞组合物具有比外周血细胞组合物少至少一个数量级的CD8+T细胞，其限制条件是第一同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。

虽然不希望受具体理论约束，但是输注的CD4+细胞为其它细胞类型提供信号，主要是受试者的CD8+、巨噬细胞和/或增进这些细胞在受试者中的细胞毒性功能的抗原呈递细胞(受试者的耐受CD4+/受试者的排出CD8+)；通过此方法的治疗疾病或病状的实例应例示为至少治疗骨髓增生异常综合征。

在一方面，淋巴细胞减少性非致淋巴细胞衰竭的疗法包括用选自由以下组成的组的一种或多种细胞减少性试剂来治疗受试者：烷化剂、烷基磺酸盐、亚硝基脲、三氮烯、抗代谢物、嘧啶类似物、嘌呤类似物、长春花生物碱、表鬼臼毒素、抗生素、二溴甘露醇、脱氧精胍菌素、二甲基马利兰和塞替派。在一方面，淋巴细胞减少性非致淋巴细胞衰竭的疗法包括用烷化剂治疗受试者并且烷化剂是环磷酰胺。在一方面，在将第一同种异体淋巴细胞组合物施用至受试者之后，所述方法还包括将抗肿瘤单克隆抗体或抗肿瘤单克隆抗体/药物缀合物施用至受试者。

在一方面，提供用于治疗受试者的疾病或病状的试剂盒，试剂盒包括：如本文描述的淋巴细胞组合物，其中受试者是人接受者；和纳米颗粒组合物，其包括包含不存在于人接受者体内的抗原的纳米颗粒。在一方面，纳米颗粒还包括细胞因子，例如，白介素或干扰素。细胞因子可为白介素并且选自由以下组成的组：IL-2、IL-7、IL-12和IL-15。细胞因子可为干扰素例如干扰素γ、干扰素β、干扰素α、干扰素、τ、干扰素Ω和复合干扰素。

纳米颗粒可还包括选自由以下组成的组的化合物：趋化因子、成像剂、光天线分子、热天线分子和Toll样受体配体、促进CD4+T细胞分化成I型(例如产生IFN-γ)CD4+记忆T细胞的配体、诱导抗原呈递细胞(例如，抗CD40抗体或适体)活化的受体的配体。此外，纳米颗粒可包括将纳米颗粒靶向输送至肿瘤细胞或抗原呈递细胞的试剂。

在一方面，方法还包括施用抗肿瘤单克隆抗体并且抗肿瘤单克隆抗体选自由以下组成的组：利妥昔单抗、西妥昔单抗、曲妥珠单抗和培妥珠单抗。在一方面，本发明包括施用抗肿瘤单克隆抗体/药物缀合物并且抗肿瘤单克隆抗体/药物缀合物选自由以下组成的组：布妥昔单抗维多汀(brentuximab vedotin)、吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumab ozogamicin)、曲妥珠单抗艾美坦辛(trastuzumabemtansine)、伊妥珠单抗奥佐米星(inotuzumab ozogamicin)、格雷帕珠单抗维多汀(glembatumumab vedotin)、罗佛珠单抗莫登素(lorvotuzumab mertansine)、坎妥珠单抗莫登素(cantuzumab mertansine)和米拉珠单抗-多柔比星(milatuzumab-doxorubicin)。在一些方面，首先施用同种异体淋巴细胞组合物，然后将化学治疗剂施用至受试者。举例来说，化学治疗剂选自由以下组成的组：达沙替尼、尼罗替尼、帕纳替尼、伊马替尼、拉帕替尼和维莫德吉。

在一方面，在将第一同种异体淋巴细胞组合物施用至受试者之后，所述方法还包括将单克隆抗体/CD4+T细胞表位缀合物施用至受试者。在一个方面，在向受试者施用第一同种异体淋巴细胞组合物之后，所述方法还包括向受试者施用连续淋巴细胞减少性非致淋巴细胞衰竭的疗法以诱导受试者的短暂淋巴细胞减少；随后向受试者施用从另外人同种异体供体的另外外周血细胞组合物获得的连续同种异体淋巴细胞组合物，所述连续同种异体淋巴细胞组合物包括来自另外供体的另外外周血细胞组合物的一定数目的CD4+T细胞和一定数目的自然杀伤细胞，其中(i)在另外供体抗受试者的方向中，所述另外供体包括相对于受试者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因错配，并且HLA II类等位基因错配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，(ii)受试者不具有对另外供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体，(iii)连续同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与另外外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，(iv)基于以公斤(kg)为单位的受试者理想体重的另外供体CD4+T细胞的数目在约1X10⁵个CD4+T细胞/kg与约1X10⁹个CD4+T细胞/kg之间，(v)连续同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于另外外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，并且(vi)连续同种异体淋巴细胞组合物具有比另外外周血细胞组合物少至少一个数量级的CD8+T细胞。此方法的限制条件是连续同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。在将第一同种异体淋巴细胞组合物施用至受试者之后，所述方法还包括施用阻断T细胞中的负信号转导的试剂。阻断T细胞中的负信号转导的试剂选自由以下组成的组：抗PD-1抗体、伊匹木单抗、抗PD-L2抗体和PD-1融合蛋白质。疾病或病状选自由以下组成的组：癌症、自身免疫病症、器官移植、同种异体移植物排斥和病毒感染。举例来说，疾病或病状是癌症并且癌症是骨髓增生异常综合征。

在一个实施方案中，本发明提供制造用于施用至人接受者的同种异体淋巴细胞组合物的方法，其包括提供来自相对于接受者为同种异体的人供体的外周血细胞组合物，所述外周血细胞组合物包括一定数目的CD4+T细胞、一定数目的CD8+T细胞和一定数目的自然杀伤细胞，其中(i)供体具有相对于存在于接受者体内的抗原的CD4+T细胞免疫力，(ii)供体包括相对于接受者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因匹配并且HLA II类等位基因匹配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，并且(iii)接受者不具有对供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体；并且通过减少外周血细胞组合物中的CD8+T细胞的数目至少一个数量级来从外周血细胞组合物制造同种异体淋巴细胞组合物，其中(a)同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，并且(b)同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，其限制条件是同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。

在一方面，存在于接受者中的抗原选自由以下组成的组：赘生性抗原(赘生性抗原是与赘生物相关联的抗原，其中赘生物定义为任何新的和异常细胞生长，尤其是细胞复制不受控制并且渐进性的生长。赘生物可为良性、恶性前或恶性，并且癌症是恶性赘生物。因此，所有癌症抗原是赘生性抗原但是并非所有赘生性抗原是癌症抗原。赘生性独特型(Id)是肿瘤特异性目标，例如，在其细胞表面上表达此分子的那些B细胞恶性肿瘤中，例如，淋巴瘤或多发性骨髓瘤，并且包括病毒抗原、细菌抗原、真菌抗原、寄生虫抗原和非人类动物抗原。

在一方面，潜在同种异体供体基于最小化一种以上HLA II类等位基因处潜在同种异体供体与接受者之间的错配来选自一个或多个潜在同种异体供体，并且将潜在同种异体供体选为供体。潜在同种异体供体基于最小化一种或多种HLA I类等位基因处潜在同种异体供体与接受者之间的错配来选自一个或多个潜在同种异体供体，并且将潜在同种异体供体选为供体。

在一方面，供体对其具有免疫力的存在于接受者中的抗原是病毒抗原并且病毒抗原选自由以下组成的组：人乳头状瘤病毒抗原、爱泼斯坦巴尔病毒抗原、卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)抗原、甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原和丙型肝炎病毒抗原。举例来说，病毒抗原是人乳头状瘤病毒抗原并且人乳头状瘤病毒抗原是E6或E7抗原性肽。在一方面，同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约20％。

在一个实施方案中，提供从人同种异体供体的外周血细胞组合物获得的同种异体淋巴细胞组合物用于施用至人接受者，所述同种异体淋巴细胞组合物包括来自供体的外周血细胞组合物的一定数目的CD4+T细胞和一定数目的自然杀伤细胞，其中(i)供体具有相对于存在于接受者体内的抗原的CD4+T细胞免疫力，(ii)供体包括相对于接受者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因匹配并且HLA II类等位基因匹配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，(iii)接受者不具有对供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体，(iv)同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，(v)基于以公斤(kg)为单位的接受者理想体重的供体CD4+T细胞的数目在约1X10⁵个CD4+T细胞/kg与约1X10⁹个CD4+T细胞/kg之间，(vi)同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，并且(vii)同种异体淋巴细胞组合物具有比外周血细胞组合物少至少一个数量级的CD8+T细胞；其限制条件是同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。

本发明提供从人同种异体供体的外周血细胞组合物获得的同种异体淋巴细胞组合物用于施用至人接受者，所述同种异体淋巴细胞组合物包括：来自供体的外周血细胞组合物的一定数目的CD4+T细胞和一定数目的自然杀伤细胞，其中(i)供体具有相对于不存在于接受者体内的抗原的CD4+T细胞免疫力，(ii)供体包括相对于接受者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因匹配并且HLA II类等位基因匹配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，(iii)接受者不具有对供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体，(iv)同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，(v)基于以公斤(kg)为单位的接受者理想体重的供体CD4+T细胞的数目在约1X105个CD4+T细胞/kg与约1X109个CD4+T细胞/kg之间，(vi)同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，并且(vii)同种异体淋巴细胞组合物具有比外周血细胞组合物少至少一个数量级的CD8+T细胞；其限制条件是同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。

本发明提供治疗人受试者的疾病或病状的方法，其包括向受试者施用从人同种异体供体的外周血细胞组合物获得的同种异体淋巴细胞组合物，所述同种异体淋巴细胞组合物包括来自供体的外周血细胞组合物的一定数目的CD4+T细胞和一定数目的自然杀伤细胞，其中(i)供体具有相对于抗原的CD4+T细胞免疫力，(ii)供体包括相对于受试者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因匹配并且HLA II类等位基因匹配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，(iii)受试者不具有对供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体，(iv)同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，(v)基于以公斤(kg)为单位的受试者理想体重的供体CD4+T细胞的数目在约1X10⁵个CD4+T细胞/kg与约1X10⁹个CD4+T细胞/kg之间，(vi)同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，并且(vii)同种异体淋巴细胞组合物具有比外周血细胞组合物少至少一个数量级的CD8+T细胞；其限制条件是同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。

本发明的组合物和方法可针对广泛范围的癌症和肿瘤类型来使用，包括但不限于膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结直肠癌、宫颈癌、胃肠癌、生殖泌尿癌、头和颈癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、肾脏癌、皮肤癌和睾丸癌。更具体地讲，可通过本文所述的组合物和方法治疗的癌症包括但不限于以下：心脏癌症，包括，例如肉瘤，例如，血管肉瘤，纤维肉瘤，横纹肌肉瘤和脂肪肉瘤；粘液瘤；横纹肌瘤；纤维瘤；脂肪瘤和畸胎瘤；肺癌，包括，例如，支气管癌，例如鳞状细胞、未分化小细胞、未分化大细胞和腺癌；肺泡和细支气管癌；支气管腺瘤；肉瘤；淋巴瘤；软骨瘤型错构瘤；和间皮瘤；胃肠癌，包括，例如，食道癌，如鳞状细胞癌，腺癌，平滑肌肉瘤和淋巴瘤；胃癌，例如，癌，淋巴瘤和平滑肌肉瘤；胰腺癌，例如导管腺癌，胰岛瘤，胰高血糖素瘤，胃泌素瘤，类癌瘤，以及舒血管肠肽瘤；小肠癌，例如，腺癌，淋巴瘤，类癌瘤，卡波济氏肉瘤，平滑肌肉瘤，血管瘤，脂肪瘤，神经纤维瘤和纤维瘤；大肠癌，如腺癌，管状腺瘤，绒毛状腺瘤，错构瘤和平滑肌肉瘤；泌尿生殖道的癌症，包括，例如，肾癌，如腺癌，威廉氏肿瘤(肾母细胞瘤)，淋巴瘤和白血病；膀胱和尿道癌，如鳞状细胞癌，移行细胞癌和腺癌；前列腺癌，例如，腺癌和肉瘤；睾丸癌，如精原细胞瘤，畸胎瘤，胚胎癌，畸胎癌，绒毛膜癌，肉瘤，间质细胞癌，纤维瘤，纤维腺瘤，腺瘤样瘤和淋巴瘤；肝癌，包括，例如，肝细胞瘤，例如，肝细胞癌；胆管癌；肝母细胞瘤；血管肉瘤；肝细胞腺瘤；和血管瘤；骨癌，包括，例如，骨原性肉瘤(骨肉瘤)，纤维肉瘤，恶性纤维组织细胞瘤，软骨肉瘤，尤因氏肉瘤，恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)，多发性骨髓瘤，恶性巨细胞瘤脊索瘤，骨软骨瘤(骨软骨外生骨疣)，良性软骨瘤，软骨母细胞瘤，软骨肌瘤样纤维瘤，骨样骨瘤和骨巨细胞瘤；神经系统的癌症，包括，例如，颅骨癌症，如骨瘤，血管瘤，肉芽肿，黄色瘤，和畸形性骨炎；脑膜癌，如脑膜瘤，脑膜肉瘤和神经胶质瘤；脑癌，如星形细胞瘤，髓母细胞瘤，神经胶质瘤，室管膜瘤，生殖细胞瘤(松果体瘤)，多形胶质母细胞瘤，少突神经胶质细胞瘤，神经鞘瘤，视网膜母细胞瘤和先天性肿瘤；和脊髓癌，例如，神经纤维瘤，脑膜瘤，神经胶质瘤和肉瘤；妇科癌症，包括，如子宫癌，例如子宫内膜癌；子宫颈的癌症，例如，宫颈癌，和预肿瘤宫颈发育不良；卵巢的癌症，如卵巢癌，包括浆液性囊腺癌，粘液性囊腺癌，未分类癌，颗粒腱鞘细胞瘤，睾丸支持间质细胞瘤，无性细胞瘤和恶性畸胎瘤；外阴的癌症，如鳞状细胞癌，上皮内癌，腺癌，纤维肉瘤和黑色素瘤；阴道癌症，如透明细胞癌，鳞状细胞癌，葡萄状肉瘤和胚胎性横纹肌肉瘤；和输卵管癌，例如癌；血液系统癌症，包括，例如，血癌，如急性髓细胞性白血病，慢性髓细胞性白血病，急性淋巴细胞性白血病，慢性淋巴细胞性白血病，骨髓增生性疾病，多发性骨髓瘤和骨髓增生异常综合征，何杰金氏淋巴瘤，非何杰金氏淋巴瘤(恶性淋巴瘤)和华氏巨球蛋白血症；皮肤癌，包括，例如，恶性黑色素瘤，基底细胞癌，鳞状细胞癌，卡波济氏肉瘤，痣发育异常痣，脂肪瘤，血管瘤，皮肤纤维瘤，瘢痕瘤，银屑病；和肾上腺的癌症，包括，例如，神经母细胞瘤。在某些实施方案中，当疾病是癌症时，它可包括例如肺癌肿瘤、乳腺癌肿瘤、前列腺癌肿瘤、脑癌肿瘤或皮肤癌肿瘤。

本发明的组合物也可与现有治疗癌症方法，例如化疗、照射或手术组合施用。因此，进一步提供治疗癌症的方法，包括将有效量的本发明组合物施用至需要这类治疗的个体，其中将有效量的至少另一种癌症化学治疗剂施用至个体。合适的化学治疗剂的实例包括以下任何一种：阿巴瑞克，阿地白介素，阿仑单抗，阿利维A酸，别嘌呤醇，六甲蜜胺，阿那曲唑，三氧化二砷，门冬酰胺酶，阿扎胞苷，贝伐单抗，贝沙罗汀，博来霉素，硼替佐米(bortezombi)，硼替佐米(bortezomib)，静脉内白消安，口服白消安，卡普睾酮，卡培他滨，卡铂，卡莫司汀，西妥昔单抗，苯丁酸氮芥，顺铂，克拉屈滨，氯法拉滨，环磷酰胺，阿糖胞苷，达卡巴嗪，更生霉素，达肝素钠，达沙替尼，柔红霉素，地西他滨，地尼白介素，地尼白介素融合毒素(denileukin diftitox)，右雷佐生，多西紫杉醇，阿霉素，屈他雄酮丙酸酯，依库珠单抗，表柔比星，埃罗替尼，雌莫司汀，磷酸依托泊苷，依托泊苷，依西美坦，柠檬酸芬太尼，非格司亭，氟尿苷，氟达拉滨，氟尿嘧啶，氟维司群，吉非替尼，吉西他滨，吉妥珠单抗奥唑米星，醋酸戈舍瑞林，组氨瑞林乙酸酯，替伊莫单抗，伊达比星，异环磷酰胺，伊马替尼甲磺酸酸，重组人干扰素α2a，伊立替康，拉帕替尼二甲苯磺酸酸，来那度胺，来曲唑，亚叶酸钙，醋酸亮丙瑞林，左旋咪唑，洛莫司汀，氮芥，醋酸甲地孕酮，美法仑，巯嘌呤，甲氨蝶呤，甲氧沙林，丝裂霉素C，米托坦，米托蒽醌，诺龙苯丙酸酯，奈拉滨，诺非单抗，奥沙利铂，紫杉醇，帕米膦酸，帕尼单抗，培门冬酶，培非司亭，培美曲塞二钠，喷司他丁，哌泊溴烷，普卡霉素，丙卡巴肼，喹吖因，拉布立酶，利妥昔单抗，索拉非尼，链佐星，舒尼替尼，马来酸舒尼替尼，他莫昔芬，替莫唑胺，替尼泊苷，睾内酯，沙利度胺，硫鸟嘌呤，塞替派，托泊替康，托瑞米芬，托西莫单抗，曲妥珠单抗，维A酸，尿嘧啶氮芥，戊柔比星，长春碱，长春新碱，长春瑞滨，伏立诺他和唑来膦酸盐。

在本文描述的本发明方法中，任选地在向受试者施用同种异体淋巴细胞组合物之前，所述方法还包括施用耗竭或抑制髓源性抑制细胞的疗法。耗竭或抑制髓源性抑制细胞的疗法可包括施用选自由以下组成的组的药物：例如达沙替尼、5-氟尿嘧啶、泰索帝、氯膦酸盐和吉西他滨。任选地，在向受试者施用同种异体淋巴细胞组合物之前，所述方法还包括施用耗竭或抑制肿瘤相关巨噬细胞的疗法。任选地，在向受试者施用同种异体淋巴细胞组合物之前，所述方法还包括施用耗竭调控性T细胞的疗法。耗竭调控性T细胞的疗法可包括施用选自由以下组成的组的药物：环磷酰胺、地尼白介素融合毒素和达利珠单抗。

在另一个实施方案中，本发明提供治疗人受试者的疾病或病状的方法，其包括向肿瘤中注入纳米颗粒组合物(纳米颗粒可注入或输注至受试者体内，其中纳米颗粒还包括靶向输送剂，并且靶向输送剂结合至靶细胞例如分散/非定域肿瘤(例如淋巴瘤或白血病)，其中直接注射至所有可能位点是不实际或不可行的)，其中所述纳米颗粒组合物包括包含不存在于受试者体内的抗原的纳米颗粒，由此将抗原引入受试者体内；向受试者施用从人同种异体供体的外周血细胞组合物获得的同种异体淋巴细胞组合物，所述同种异体淋巴细胞组合物包括来自供体的外周血细胞组合物的一定数目的CD4+T细胞和一定数目的自然杀伤细胞，其中(i)供体具有相对于抗原的CD4+T细胞免疫力，(ii)供体包括相对于受试者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因匹配并且HLA II类等位基因匹配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，(iii)受试者不具有对供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体，(iv)同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，(v)基于以公斤(kg)为单位的受试者理想体重的供体CD4+T细胞的数目在约1X10⁵个CD4+T细胞/kg与约1X10⁹个CD4+T细胞/kg之间，(vi)同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，并且(vii)同种异体淋巴细胞组合物具有比外周血细胞组合物少至少一个数量级的CD8+T细胞；其限制条件是同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。在一方面，抗原是非人类动物抗原并且非人类动物抗原是匙孔血蓝蛋白抗原。在另一方面，抗原是病毒抗原并且病毒抗原选自由以下组成的组：人乳头状瘤病毒抗原、爱泼斯坦巴尔病毒抗原、卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)抗原、甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原和丙型肝炎病毒抗原。

本发明的组合物可通过各种途径来施用至个体，例如，口服、局部、肠胃外、阴道内、全身、肌肉内、直肠或静脉内。在某些实施方案中，组合物与药用载剂一起配制。优选地，组合物是静脉内施用。

在一些实施方案中，组合物与其它抗病毒或抗癌疗法组合，如施用抗病毒或抗癌剂、辐射疗法、光线疗法或免疫疗法。抗病毒或抗癌剂可在同一制剂或单独制剂中与本发明组合物一起施用，以增强治疗。在这些实施方案中，组合物和其它疗法可在同一时间(同时)或在单独时间(依序)施用，只要其以具有所需效应的方式并且在时间上充分接近来施用即可。

以下实施例旨在说明而不是限制本发明。

实施例

骨髓增生异常综合征(MDS)是以血细胞的增生异常和无效骨髓产生以及转化成急性白血病的可变风险为特征的一组不同恶性干细胞病症。这些病症可重新患上或在暴露于潜在致突变的化疗之后数年出现。

在美国今年诊断大约12,000-20,000个新的MDS病例，中值发病年龄在60与72岁之间。骨髓增生异常综合征的当前治疗结果是使人失望的。如通过国际预后评分系统(IPSS)确定的年龄、体能状态和疾病风险类别通常确定治疗方式的选择。具有良好或极好体能状态并且处于IPSS中间-2或高风险类别中的<60岁的患者主要考虑进行高强度疗法，因为这些IPSS类别分别赋予1.2和0.4年的中值存活。高强度疗法定义为要求住院治疗，包括化疗和造血细胞移植的密集组合。

处于低或中间-1类别中的患者总体上考虑进行低强度疗法。这些疗法包括可在门诊病人诊所中施用的疗法，如造血生长因子、分化诱导剂、生物反应调节剂和低强度化疗。具有不佳体能状态的患者考虑进行支持性护理或低强度疗法。

实施例1-IDE设备

用于此试验中的研究剂是具有CD8试剂的CliniMACS系统，用于富集或耗竭来自人血液产物的CD8+T细胞的医疗设备。用于选择CD8+细胞的系统包括四个主要组成部分：1)CD8试剂–连接至针对人CD8的鼠科抗体的胶状超顺磁性葡聚糖铁珠粒；2)CliniMACSplus仪器–处理血液样品(细胞产物)的软件控制仪器；3)导管集，(标准或LS)–具有两个专有细胞选择柱的一次性使用、无菌、抛弃式导管集；和4)PBS/EDTA缓冲液–无菌、等渗磷酸缓冲1mM EDTA盐水溶液，用作用于体外制备血细胞的外部洗涤和传输液。所述系统利用磁性细胞分选一种分离许多细胞类型的强大工具，以选择性富集或耗竭所感兴趣的细胞群体。在这种情况下，CD8+T细胞用连接至超顺磁性颗粒的单克隆抗体标记，然后通过传经CliniMACS系统来从血液产物中耗竭，所述CliniMACS系统并入有强永磁铁和去除标记细胞的具有铁磁基体的分离柱。值得注意的是，此试验中的治疗剂，耗竭了CD8+T细胞的血细胞来自设备并且不欲含有设备的任何组分。

实施例2-短暂植入供体淋巴细胞诱导临床肿瘤反应

迄今为止，只有两种疗法能够延长患有MDS的患者的存活。第一种疗法，即同种异体BMT实现一些长期治愈，以及疾病进展的延迟。由于年龄、供体可用性和合并症，此疗法只可适用于小部分受影响患者。第二种疗法是甲基转移酶抑制剂，5-阿扎胞苷。与支持性护理单独相比，此疗法已被证明可延长中值存活7个月10。一些患有MDS的患者对于免疫抑制方案有反应，如环孢素、抗胸腺细胞球蛋白(ATG)或类固醇，并且血液计数持续增加。此结果类似于再生障碍性贫血，其中免疫抑制治疗自身免疫组分导致血细胞减少。以特异性靶向免疫系统的试剂获得的有利结果表明MDS是对于免疫调节敏感的疾病。ATG、环孢素和类固醇的益处的一个潜在解释是这些药物通过选择性抑制或杀灭抑制抗肿瘤免疫力的淋巴细胞来将内源性抗肿瘤免疫反应的活性去屏蔽。存在针对MDS的隐秘、内源性免疫反应的另外潜在证据发现于我们的非清髓性、部分HLA错配(半相合)同种异体骨髓移植术试验中，其中尽管移植排斥，但五个患者经历疾病反应。所有五个患者具有骨髓胚细胞百分比的至少短暂减少，并且各自在移植之前依赖于红细胞+/-小板输注的五个患者中的三个变得不依赖于输注。表1展示，尽管在BMT之后30天不存在供体细胞植入，五个患者中的至少三个具有在BMT之后持续至少六个月的髓胚细胞减少。

表1

图1展示BMT之后的相同五个患者的红细胞压积，其中锯齿状部分反映输注效应。五个患者中的三个变得不依赖于输注，其中患者#1保持形态和血液缓解至少三年。更引起关注的是，患者#2展示延迟的血液反应，在BMT之后四个月并且在记录移植排斥之后三个月变得不依赖于输注。鉴于MDS对于免疫疗法的敏感性，我们提出以下可能性：内源性(即宿主源性)抗肿瘤免疫反应通过由短暂植入供体淋巴细胞提供的免疫干扰来重新唤醒。此假设机制，在移植排斥之后内源性反反应的唤醒，也可能是在没有调节或只100cGy全身辐照之后接收白细胞输注的患者中诱导白血病缓解的原因。引起关注的是，在后一个研究中，在不存在可测量供体嵌合体的情况下，发生三个主要临床反应。非何杰金氏的临床反应和图2展示具有存活百分率和肿瘤接种之后天数的曲线图以展示非植入DLI诱导抗肿瘤免疫力。BALB/c x C57BL/6F1小鼠(H-2b/d；＝10/组)在第–1天用Cy 200mg/kgIP调节。在第0天，其接收106A20淋巴瘤细胞IV+/-来自部分MHC错配B6x C3H F1供体(H-2b/k)的5x 107脾细胞+/-自体肿瘤细胞疫苗sc(106经过照射的A20+2x 105经过照射的B78H1-GM-CSF)。也已经描述尽管在同种异体BMT之后损失供体嵌合体的何杰金氏淋巴瘤；在一些这些情况下，在短暂植入供体淋巴细胞输注之后观察到肿瘤消退。24虽然供体T细胞在其被排斥之前当然可诱导抗白血病效应，但是短暂GVH反应也可在宿主T细胞中破坏白血病的功能耐受性。我们最近测试以下假设：短暂植入供体淋巴细胞输注(DLI)可在小鼠模型中诱导来自宿主T细胞的抗肿瘤免疫反应。在第-1天，BALB/c x C57BL/6F1小鼠用Cy处理，并且在第0天，其IV接受106A20淋巴瘤细胞(来自BALB/c)，所述细胞不具有任何添加物、具有单独半相合DLI、单独自体肿瘤细胞疫苗，或DLI+疫苗。与在Cy调节之后未接受治疗或单独疫苗的动物相比，用Cy调节，然后用单独DLI或DLI+疫苗处理的动物存活显著更长时间，并且明显治愈分别在五个和四个动物中获得(图2)。当在DLI之后测试>100天时，九个治愈动物中没有一个具有任何可检测到的供体嵌合体，表明供体T细胞被排斥。这些结果证明Cy与随后部分MHC错配DLI的组合诱导显著抗肿瘤效应。为了表征供体CD4+相比于CD8+T细胞在抗肿瘤效应中的作用，在Cy+疫苗+未处理或耗竭CD4+T细胞、CD8+T细胞或两者的5千万错配脾细胞的接受者中重复实验。在此实验中，全脾DLI的接受者在第20天之前全部死于GVHD(图3)。相比之下，与小鼠接收疫苗加上全T细胞耗竭脾细胞相比，接收疫苗加上CD8+T细胞耗竭脾细胞的小鼠活得显著更长时间(p＝0.04)，指示CD8+T细胞的耗竭消除致死GVHD而不消除抗肿瘤免疫力。为了明白为什么耗竭来自同种异体DLI的CD8+T细胞可消除GVHD，我们在用Cy调节然后输注未处理或耗竭一种或两种T细胞子集的错配脾细胞的小鼠中研究供体细胞的存活。引起关注地，CD8+T细胞耗竭脾细胞仅短暂植入，并且供体CD4+T细胞嵌合体在DLI之后第7天达到高峰并且到第21天下降至不可检测的水平(如下)。相比之下，在接收含有CD8+T细胞的DLI的所有小鼠中观察到供体细胞的持续植入，并且大多数这些动物最后死于GVHD。总之，动物研究证明Cy随后CD8+T细胞耗竭DLI诱导供体细胞的短暂植入和显著抗肿瘤效应而不诱导急性GVHD。最近，我们发现在“Cy+DLI”之前，宿主CD8+T细胞的耗竭显著减弱治疗效应，强烈暗示宿主CD8+T细胞是抗肿瘤效应的关键介体。

实施例3-使用CD8+T细胞耗竭同种异体干细胞或淋巴细胞输 注的临床经验

没有用Cy处理随后输注来自半相合供体的CD8+T细胞耗竭PBC的患者的报告，因此不可提供预先安全数据。然而，已经有接受CD8+T细胞耗竭移植物的经历alloBMT的患者或接受CD8+T细胞耗竭PBMC输注的在alloBMT之后复发的患者的报告。CD8+T细胞耗竭的目标是减少GVHD的发病率，同时保持输注的抗白血病作用。关于GVHD，研究未产生决定性的答案，其中一些研究展示可能的益处并且其它研究展示没有一个益处。引起关注的是，输注CD8+T细胞耗竭DLI诱导内源性CD8+T细胞的活化，这一发现结果与CD8+T细胞耗竭DLI可有效地唤醒针对癌症的宿主CD8+T细胞反应的假设一致。

两个其它研究的结果与所建议临床试验的安全性的考虑有关。在第一个研究中，患有各种血液恶性肿瘤的患者接受来自一个HLA-DR等位基因或一个HLA I类(HLA-A或HLA-B)抗原错配的不相关供体的骨髓。患者接受含有滴定剂量CD8+T细胞的CD4+T细胞耗竭移植物。与所提出研究相关的主要发现结果是在接受含有<3.1x 10⁶CD8+T细胞/kg接受者体重的移植物的十个患者中的六个中尽管清髓调节，仍发生移植排斥，但是在接受>3.1x 10⁶CD8+T细胞/kg的十五个患者中没有一个发生移植排斥。因此，甚至在清髓调节之后，CD8+T细胞耗竭显著增加移植排斥的风险，从而抵消移植物诱导发育不全和GVHD的风险。在第二个研究中，患者接收T细胞耗竭、半相合外周血干细胞(PBSC；n＝15)或PBSC加上骨髓移植物(n＝28)，其分别含有平均2.7x 10⁴或3.5x 10⁴个CD3+T细胞/kg，转化成大约1-1.5x 10⁴/kg的CD8+T细胞剂量。为了即使T细胞耗竭仍促进植入，对患者进行密集调节并且分别对于仅PBSC相比于PBSC加上骨髓的接受者，接受含有平均14.0x 10⁶或10.6x 10⁶个CD34+细胞/kg的“特大剂量”干细胞移植物。鉴于T细胞含量较低，不施用GVHD预防法。植入在所有43个患者中发生，并且没有患者由于移植程序而经历急性或慢性GVHD。这些数据表明甚至在接受清髓调节的患者中发生持续植入时，含有<10⁴个CD8+T细胞/kg的半相合移植物不可能导致GVHD。由于设备通常实现CD8+T细胞的>2对数耗竭，试验中的CD8+T细胞耗竭PBC的开始剂量可能含有少于10⁴个CD8+T细胞/kg。然后，可能接受此剂量的患者未植入或经历GVHD，即使发生持续植入也如此。

实施例4-使用具有CliniMACS-CD8试剂的CliniMACS_系统的 CD8耗竭

在此试验中，在研究者赞助的IDE下，CD8+T细胞使用具有CliniMACS_CD8试剂的CliniMACS_系统(Miltenyi Biotec，Woburn，MA)来耗竭。我们执行三个验证操作，第一个使用白细胞分离产物，并且最后两个使用放血样本。来自最后一个耗竭的流式细胞术结果展示如下，证明占总细胞8.40％至0.03％的CD8+T细胞的极好耗竭，以及CD4+T细胞和CD16+或CD56+NK细胞的相应富集(图4)。表2展示所有三个产物满足具有占CD4+T细胞数目的<3.2％的CD8+T细胞数目的方案标准。如果产物#2和#3用于将106个CD4+T细胞/kg的剂量递送至具有70kg理想体重的接受者，其分别包含2.6x 103和7.7x 102个CD8+T细胞/kg IBW，完全低于植入或GVHD诱导的阈值的剂量。相比之下，有反应的五个患者尽管移植排斥，但仍接收含有中值为1.43x 10⁷个CD4+T细胞/kg(范围为0.84-3.14x 10⁷/kg)和1.86x 10⁷个CD8+T细胞/kg(范围为0.43-2.16x 10⁷/kg)的骨髓。因此，MDS患者能够排斥含有此许多T细胞的半相合细胞输注。

表2-CE8耗竭细胞产物验证结果

实施例5-预测疗法反应的相关实验室研究

鉴于免疫抑制疗法的潜在毒性，如抗胸腺细胞球蛋白，在患有MDS的患者中35，许多调查者努力识别与疗法反应相关的患者特征。预测疾病反应的这类特征包括低增生骨髓、通过光谱型分析得到的按照T细胞受体β链可变区CDR3尺寸划分的异常T细胞受体谱、具有阵发性夜间血红蛋白尿(PNH)特有表型的细胞的存在、HLADR15的表达、三性体8、低龄化和较短输注病史。此试验的主要目标是确定是否预测对于免疫抑制疗法的反应的特征也可预测对于Cy+CD8+T细胞耗竭半相合DLI的反应。进入此试验的患者在治疗前后检查T细胞受体光谱型。细胞遗传学和HLA分型常规地对于所有患者来执行。

最近研究已经发现供体自然杀伤细胞同种异体反应性在预防半相合干细胞移植之后的急性白血病复发中的作用36-38。最近，发现来自供体的同种异体反应性自然杀伤细胞可预防HLA相同干细胞移植之后的AML和MDS的复发39。这些结果强调需要使用分子和流式细胞方法来表征表达供体NK细胞上的杀伤免疫球蛋白样受体或KIR的谱系以便识别表达接受者细胞上的其HLA配体缺失的KIR的供体。这些研究在免疫遗传学实验室中回顾性地执行并且结果与对于疗法反应相关联。

实施例6-建议试验设计的理由

这是标准I/II期试验设计，其旨在在试验的I期部分中确定在环磷酰胺(Cy)之后输注的CD8+T细胞耗竭半相合外周血细胞(CD8-PBC)的最大耐受剂量(MTD)，然后在试验的II期部分中估计使用Cy加上MTD的CD8-PBC的治疗功效。高剂量Cy(>100mg/kg)广泛用作患有血液恶性肿瘤的患者的移植调节的一部分，并且它的安全性在此群体中详细记录，包括患有骨髓增生异常综合征的老年患者(年龄55-66)。因为其具有导致死亡的可能性，所以最严重的治疗风险是持续很久的发育不全和移植物抗宿主疾病，其均需要供体细胞的持续植入。原始细胞剂量，10⁵个CD4+T细胞/kg和<3.2x 10³个CD8+T细胞/kg的选择仅基于安全性考虑。具体来说，含有<104个CD8+T细胞/kg的移植物不导致严重GVHD，甚至在接受致死调节并且在移植之后没有药理学免疫抑制的患者之间也是如此。此外，来自标准骨髓移植物的CD8+T细胞的部分耗竭显著增加移植排斥的风险33，其为此试验中的所需治疗结果。出于这些原因，认为含有<104个CD8+T细胞/kg的DLI产物不可能导致严重不良事件。

最近公开使用没有CD8+T细胞耗竭的半相合DLI的经验。在I/II期试验中，41个患有复发/难治性恶性肿瘤的患者接受以100cGy全身辐照的非清除性调节，随后输注1x 10⁶至2x 108个半相合CD3+细胞/kg，其中29个患者接受最高剂量。目标反应在较高剂量水平下实现。值得注意的是，1x 10⁸个CD3+细胞/剂量是与反应相关联的最小剂量(25％反应率，或8个患者中有2个)，并且2x 10⁸个CD3+细胞/剂量(最高评估)与最大的反应率相关联(几乎50％，21个患者中有10个)。作为原则证明，所有反应在不存在持续供体嵌合体的情况下发生。在最高剂量群组中，观察到短暂供体嵌合体但是在大多数患者中在2周后消失，其中转化成完全供体嵌合体的两个患者中之一患上严重急性GVHD(类固醇反应性，随后患上致死败血症)。可能继发于细胞因子通量的被称为“单倍体免疫风暴”的急性临床综合征(特征为以下一个或更多个：发热、不适、LFT异常、皮疹和腹泻)通常在较高剂量水平下观察到并且剧烈地反应于类固醇。此研究证明此方法的生物活性和可管理的安全概况。在此研究中的为反应所需要的最小CD3+T细胞剂量(并非CD8+耗竭)是1x 10⁸个细胞/kg。

实施例7-患者选择

患者必须在病理上证实：骨髓增生异常综合征(MDS)，中间-2或更高的IPSS评分(参见附录A的IPSS评分系统)。患者必须失败或不合格或不耐受用5-阿扎胞苷治疗。

实施例8-治疗计划

所有患者需要记录详细病史和身体检查和心脏、肝和肾功能的标准评估，如在部分10中指定。在方案登记之前不超过一个月内，所有患者经历骨髓穿刺和活检以进行形态、细胞发生(如果可适用)和流式细胞仪(如果可适用)评估，以及其它标准疾病评价(例如，胸膛、腹部、骨盆的CT)，如果可适用。

治疗前评估

环磷酰胺以静脉内输注形式在1-2hr内，(取决于体积)在第-2和-1天施用。环磷酰胺剂量是50毫克/公斤/天。剂量基于无论那一个更小的调节理想体重或实际体重来计算。体重和身高直接测量。身高的近似体重根据标准表或反映理想“值”的方程来计算。

环磷酰胺和预DLI方案

在环磷酰胺施用之前，指示患者增加液体过夜。在环磷酰胺之前，静脉内用3cc/kg/hr生理盐水开始水化作用2hr，然后在环磷酰胺前速率减少至2cc/kg/hr历时1hr并且在环磷酰胺后继续8hr。美司钠在环磷酰胺前30min以划分剂量静脉内给予并且在环磷酰胺后3、6和8hr给予。

美司钠剂量基于所给予的环磷酰胺剂量。美司钠的总每日剂量等于环磷酰胺的总每日剂量的80％。

预防性抗微生物疗法开始在第0天并且遵循制度实践。

抗真菌预防法施用如下：第0天开始，氟康唑400mg口服或静脉内每日一次，并且继续直到ANC>500历时连续3天(或在3天期间连续测量2次)。另一个适当预防性杀真菌剂可用于替代。卡氏肺囊虫性肺炎(PCP)预防开始于第0天并且应继续直到第60天。不耐受甲氧苄啶/磺胺甲恶唑(复方新诺明)的患者接受氨苯砜或喷他脒作为PCP预防。病毒预防由伐昔洛韦或阿昔洛韦组成，从第0天至第60天。在DLI之后，口服喹诺酮(例如莫西沙星或诺氟沙星)根据制度优选来施用直到ANC>500历时连续3天(或在3天期间连续测量2次)。

所有患者使用具有CD8试剂的系统来接受耗竭CD8+T细胞的半相合PBC的输注。剂量水平的编号是从最低到最高细胞剂量。第一患者群组(剂量水平1)接受Cy加上含有1x 105CD4+T细胞/kg接受者IBW的预定剂量的CD8+T细胞耗竭半相合PBC(CD8-PBC)。如果满足剂量扩大的标准，剂量水平2、2b、3或4的患者分别接受含有1x 10⁶、3x 106，1x 10⁷或5x 10⁷个CD4+T细胞/kg的预定剂量的CD8-PBC。

DLI剂量计算

计算递送预定剂量CD4+T细胞的最终(CD8耗竭)产物的体积的公式如下：预定体积(ml)＝预定CD4+T细胞剂量(细胞/kg)x接受者IBW*(kg)/CD4+T细胞浓度(细胞/毫升)*注意-如果实际重量<理想，使用实际重量。

然而，输注的CD8+T细胞的总数可不超过将要输注的CD4+T细胞的预定数目的3.2％(以上方程的分子)。如果耗竭产物中的CD4+/CD8+细胞的比率小于31.25(＝1/.032)，那么将要输注的产物的体积通过下式来确定：如果最终产物的CD4/CD8比率<31.25，那么：输注体积(ml)＝预定体积x(CD4/CD8比率)/31.25如果耗竭产物中的CD4+/CD8+细胞的比率等于或大于31.25，那么将要输注的产物的体积是预定体积(公式1)：如果最终产物的CD4/CD8比率>31.25，那么：输注体积(ml)＝预定体积

输注支持

血小板和压缩红细胞输注根据当前制度建议来给予。

实施例9-治疗持续时间

患者只适合于一次淋巴细胞输注。作出这样的限制是因为预期输注淋巴细胞的排斥诱导对于供体细胞或甚至其它近亲的记忆免疫力。患者外周血在第60天获得并且关于人抗小鼠抗体(HAMA)的存在和针对供体细胞的细胞毒性抗体来进行测试。

随访持续时间

在DLI之后，跟踪患者最少60天，然后直到死亡或疾病进展，无论那一个首先发生。由于不可接受的不良事件或出现治疗相关不良事件而从研究中去除的患者加以跟踪直到解决或不利事件稳定化。

DLI后监测：

保留于研究中的患者在DLI之后第14天、第28天和第60天和六个月抽取血液。通过这些血液抽取来获得具有手动差异的CBC。淋巴细胞子集包括表达CD4或CD8的细胞的百分比通过流式细胞术来分析。在60天之后，只要未记录疾病进展，患者进行每月完整血液计数连同白细胞差异，直到DLI之后6个月为止。

疾病评估。

除了以上指定的疾病评估以外，作为护理标准来执行的另外的疾病评估的结果出于研究目的来收集直到死亡或疾病进展，无论那一个首先发生。

实施例10-给药延迟/剂量改变

环磷酰胺剂量未改变。如果发生CD8+T细胞的过量含量，就改变DLI剂量。

不良事件：列表和报告要求

以下信息应对于患有急性GVHD的所有患者来收集：发病日期(定义为证实GVHD的第一活检的日期)发病时的GVHD评估表，每周进行评估直到GVHD消退为止，和第60天初步总体临床等级最大总体临床等级等级III-IV急性GVHD的发病日期，如果有的话60天之后的急性和慢性GVHD的发生和严重性在患者的六个月评估中加以捕获。

等级II-IV急性GVHD的所有实例作为不良事件加以捕获。等级III-IV GVHD作为严重不良事件来报告。

DLI诱导的发育不全定义为嗜中性白血球减少症(绝对嗜中性粒细胞计数<500/ml)，在第60天或后来具有供体嵌合体的任何证据。DLI诱导发育不全的所有病例作为严重不良事件来报告。

实施例11-药物信息

环磷酰胺

环磷酰胺可购得。环磷酰胺是主要通过交联DNA链来防止细胞分裂的烷化剂。环磷酰胺是细胞周期非特异性的。用于注射的环磷酰胺可以用100ml无菌水重构以便注射的2000mg小瓶形式来获得。重构产物的浓度是20mg/ml。计算剂量在250-500ml于水中的葡萄糖5％中进一步稀释。每个剂量在1-2hr内输注(取决于总体积)。

环磷酰胺的临床毒性包括脱发、恶心和呕吐、头痛和眩晕、出血性膀胱炎、心脏中毒、免疫抑制、骨髓抑制、肺纤维化、增加肝酶和不适当抗利尿激素综合征(SIADH)。环磷酰胺由Oncology Pharmacy经销并且由Mead Johnson Pharmaceuticals生产。

美司钠(钠-2-巯基乙烷磺酸盐)

美司钠是用于预防由噁嗪磷(环磷酰胺和异环磷酰胺)诱导的出血性膀胱炎的预防剂。

它不具有内在细胞毒性并且没有对于化学疗法的拮抗效应。美司钠与丙烯醛，由噁嗪磷产生的尿毒素代谢物结合，以产生无毒硫醚并且通过与噁嗪磷的4-羟基代谢物组合来减缓丙烯醛形成速率。

美司钠可以含有100mg/ml溶液的200mg、400mg和1000mg小瓶形式来获得。每个剂量的美司钠在50ml生理盐水中进一步稀释以在15min内输注。美司钠剂量基于所给出的环磷酰胺剂量。美司钠的总每日剂量等于环磷酰胺的总每日剂量的80％。在用于尿保护的剂量下，美司钠实际上是无毒的。然而，可归因于美司钠的不良效应包括恶心和呕吐、腹泻、腹部疼痛、改变味觉、皮疹、风疹、头痛、关节或肢体疼痛、低血压和疲劳。

CBER IDE设备

供体使其血液经由外周全血收集(450ml至CPDA-1中)或白细胞分离程序来收集以在稳态条件(没有流动)下收集外周白细胞。每个白细胞分离收集在连续流动细胞分离器(COBE Spectra，Gambro)上使用淋巴细胞收集的制度标准操作程序来执行。给血方法，放血相比于白细胞分离，在给予之前30天内获得外周血绝对CD4+T细胞计数并且评估获得目标CD4+T细胞剂量所需要的血液体积来确定。因为外周血CD4+T细胞计数的正常范围是0.5-1.5x 10⁶/ml，可能简单放血对于剂量水平1-2是足够的，单采法可为水平2b所需要但是白细胞分离为剂量水平3和4所需要。

基于广泛的以前经验，4小时白细胞分离程序应足以获得5x 10⁷个CD4+T细胞/kg接受者IBW。目标收集超过适应耗竭过程期间的细胞损失的所需剂量至少30％。

产物在移植物工程改造实验室中经历CD8耗竭。遵循所有标准操作程序。对于有核细胞计数、CD3、CD4、CD8、CD16和CD56来分析产物。产物储存过夜并且CD8耗竭在选择系统(Miltenyi Biotec，Auburn，CA)上进行。在CD8耗竭之前，全血产物最初处理以制备血沉棕黄层浓缩物并且对于主要ABO不相容的供体/接受者对，血沉棕黄层浓缩物使用淋巴细胞分离介质来进一步处理以去除污染红细胞。然后，将经过处理的全血产物或单采产物浓缩并且重新悬浮于补充有0.5％人血清白蛋白的PBS/EDTA中。

添加缀合至葡聚糖铁超顺磁性颗粒的鼠科单克隆CD8抗体并且在室温下孵育30分钟。一个小瓶的抗体用于处理多达40x 10⁹个总白细胞和多达4x 10⁹个CD8+细胞。多余抗体通过洗涤1次来去除并且产物体积使用PBS/EDTA与白蛋白来调节至100ml。然后，使用无菌抛弃式导管集将它连接至CliniMACS选择系统。通过预设计算机程序来开始操作，所述计算机程序控制(i)抗体处理的细胞的流动，(ii)去除残留未结合细胞的洗涤，(iii)去除柱周围的磁场以释放选定细胞，和(iv)最终将CD8耗竭细胞收集于袋中。从最初产物浓缩结束起，整个过程耗费大约2-6小时。对于细胞计数、生存力、CD3、CD4、CD8、CD16和CD56含量来分析后续产物。CD4浓度用于计算患者剂量。将计算体积去除并且根据制度标准操作程序来制备以便输注。

相关/特别研究

表型免疫重构

在DLI之后的第14天、第28天、第60天和6个月，包括CD4+和CD8+T细胞的淋巴细胞子集的外周血浓度使用绝对淋巴细胞计数和流式细胞术来确定。

通过光谱型分析的宿主CD8+T细胞谱系变异性的分析。最近研究指示T细胞谱系的变异性可通过T细胞受体V_区域光谱型来评估，其评估表达给定V_基因的细胞的CDR3/变异性/连接区域(vβ--D—J--Cβ)。此区域赋予T细胞受体的特异性。免疫扫描或V_光谱型显著适用于评估治疗之后的抗肿瘤免疫响应和骨髓移植49之后的免疫重构。此外，免疫抑制疗法前后的MDS患者的光谱型分析显示以治疗响应来标准化的T细胞谱系的偏移。因此，我们假设患有MDS和可能CMML的患者在治疗之前具有偏移T细胞谱系，DLI最初诱导同种异体反应性T细胞群体，并且响应者最终获得如光谱型分析显示的正常T细胞谱系。预处理CD8+T细胞从患者外周血单核细胞(PBMC)获得。为了识别患者抗供体反应性T细胞，在细胞分选之前，来自患者的预处理PBMC与经过照射的供体PBMC一起培养七天。培养期允许克隆扩增患者抗供体T细胞。在第14天、第28天、第60天和六个月，还收集PBMC并且将CD8+T细胞纯化。

根据本公开，本领域技术人员应理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下可以在已公开并仍获得类似或相似结果的特定实施方案中做出许多改变。本发明的范围不受本文所述的具体实施方案限制，所述具体实施方案意欲作为本发明的个别方面的说明，并且功能上等同的方法和组分构成本发明的方面。因此，除了本文中示出和描述的那些修改之外，根据先前的描述，本发明的各种修改对于本领域技术人员来说将是显而易见的。因此，本发明仅受以下权利要求书限制。

Claims (129)

1.一种制造同种异体淋巴细胞组合物的方法，其包括：

提供来自相对于接受者为同种异体的人供体的外周血细胞组合物，所述外周血细胞组合物包括CD4+T细胞、CD8+T细胞和自然杀伤细胞，其中(i)在所述供体抗所述接受者的方向中，所述供体包括相对于所述接受者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因错配，并且所述HLA II类等位基因错配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，并且(ii)所述接受者不具有对所述供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体；并且

通过使所述外周血细胞组合物中的CD8+T细胞的数目减少至少一个数量级来从所述外周血细胞组合物制造所述同种异体淋巴细胞组合物，其中(a)所述同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与所述外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，并且(b)所述同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于所述外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，其限制条件是所述同种异体淋巴细胞组合物的所述CD4+T细胞未离体活化。

2.如权利要求1所述的方法，其中如果所述供体和接受者是ABO血型不相容的并且所述外周血细胞组合物包括一定数目的红细胞，那么制造所述同种异体淋巴细胞组合物还包括减少所述红细胞数目。

3.如权利要求2所述的方法，其中红细胞的数目包括小于或等于约50ml压积。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与所述外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约20％。

5.如权利要求1所述的方法，其进一步限制条件为从所述供体获得的CD4+T细胞未有意地扩增或有意地离体分化。

6.如权利要求1所述的方法，其中减少所述外周血细胞组合物中的所述CD8+T细胞包括使用与磁性颗粒相关联的抗CD8+抗体或抗CD8+抗体加上补体。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述外周血细胞组合物是全血产物或单采产物。

8.如权利要求1所述的方法，其中在所述供体抗所述接受者方向上的所述HLA II类等位基因错配是在HLA-DRB1处的错配。

9.如权利要求1所述的方法，其中所述提供还包括针对一个或多个选择特征进行筛选并且对于选自由所述接受者、所述供体和一种或多种潜在同种异体供体组成的组的受试者来执行所述筛选。

10.如权利要求9所述的方法，其中针对感染物抗原的血清反应性来筛选选择特征。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述感染物抗原选自由以下组成的组：人免疫缺陷病毒(HIV)抗原、肝炎病毒抗原和巨细胞病毒抗原。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述感染物抗原是巨细胞病毒抗原，对所述接受者和所述供体加以筛选，并且在所述接受者或所述供体中没有所述巨细胞病毒抗原的血清反应性。

13.如权利要求9所述的方法，其中针对一种以上HLA II类等位基因来筛选选择特征。

14.如权利要求13所述的方法，其中基于最大化在所述一种以上HLA II类等位基因处、在所述潜在同种异体供体抗所述接受者方向上、所述潜在同种异体供体与所述接受者之间的错配来选择潜在同种异体供体，并且将所述潜在同种异体供体选为所述供体。

15.如权利要求9所述的方法，其中针对一个或多个HLA I类等位基因来筛选选择特征。

16.如权利要求15所述的方法，其中基于最小化所述一种以上HLA I类等位基因处、所述潜在同种异体供体与所述接受者之间的错配来选择潜在同种异体供体，并且将所述潜在同种异体供体选为所述供体。

17.一种通过如权利要求1所述的方法获得的用于施用至人接受者的同种异体淋巴细胞组合物。

18.一种同种异体人淋巴细胞组合物，其包括：

来自供体的外周血细胞组合物的CD4+T细胞和自然杀伤细胞，其中(i)在所述供体抗所述接受者的方向中，所述供体包括相对于所述接受者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因错配，并且所述HLA II类等位基因错配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，(ii)所述接受者不具有对所述供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体，(iii)所述同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与所述外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，(iv)基于以公斤(kg)为单位的所述接受者理想体重的供体CD4+T细胞的数目在约1X10⁵个CD4+T细胞/kg与约1X10⁹个CD4+T细胞/kg之间，(v)所述同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于所述外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，并且(vi)所述同种异体淋巴细胞组合物具有比所述外周血细胞组合物少至少一个数量级的CD8+T细胞；

其限制条件是所述同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。

19.如权利要求18所述的淋巴细胞组合物，其中所述外周血细胞组合物包括一定数目的红细胞并且红细胞的数目包括小于或等于约50ml压积。

20.如权利要求18所述的淋巴细胞组合物，其进一步限制条件为从所述供体获得的CD4+T细胞未有意地扩增或有意地离体分化。

21.如权利要求18所述的淋巴细胞组合物，其中所述外周血细胞组合物是全血产物或单采产物。

22.如权利要求18所述的淋巴细胞组合物，其中所述HLA II类等位基因错配是选自由以下组成的组的两个或更多个HLA II类等位基因的错配：HLA-DRB1、HLA-DPB1和HLA-DQB1。

23.如权利要求18所述的淋巴细胞组合物，其中在所述供体抗所述接受者方向上的所述HLA II类等位基因错配是在HLA-DRB1处的错配。

24.一种治疗人受试者的疾病或病状的方法，其包括：

向所述受试者施用淋巴细胞减少性非致淋巴细胞衰竭的疗法以诱导所述受试者的短暂淋巴细胞减少；并且

随后向所述受试者施用从人同种异体供体的外周血细胞组合物获得的第一同种异体淋巴细胞组合物，所述第一同种异体淋巴细胞组合物包括来自所述供体的外周血细胞组合物的一定数目的CD4+T细胞和一定数目的自然杀伤细胞，其中(i)在所述供体抗所述受试者的方向中，所述供体包括相对于所述受试者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因错配，并且所述HLA II类等位基因错配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，(ii)所述受试者不具有对所述供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体，(iii)所述第一同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与所述外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，(iv)基于以公斤(kg)为单位的所述受试者理想体重的供体CD4+T细胞的数目在约1X10⁵个CD4+T细胞/kg与约1X10⁹个CD4+T细胞/kg之间，(v)所述第一同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于所述外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，并且(vi)所述第一同种异体淋巴细胞组合物具有比所述外周血细胞组合物少至少一个数量级的CD8+T细胞，其限制条件是所述第一同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。

25.如权利要求24所述的方法，其中所述淋巴细胞减少性非致淋巴细胞衰竭的疗法包括用选自由以下组成的组的一种或多种细胞减少性试剂来治疗所述受试者：烷化剂、烷基磺酸盐、亚硝基脲、三氮烯、抗代谢物、嘧啶类似物、嘌呤类似物、长春花生物碱、表鬼臼毒素、抗生素、二溴甘露醇、脱氧精胍菌素、二甲基马利兰和塞替派。

26.如权利要求25所述的方法，其中所述淋巴细胞减少性非致淋巴细胞衰竭的疗法包括用烷化剂治疗所述受试者并且所述烷化剂是环磷酰胺。

27.如权利要求24所述的方法，其中在将所述第一同种异体淋巴细胞组合物施用至所述受试者之后，所述方法还包括将抗肿瘤单克隆抗体或抗肿瘤单克隆抗体/药物缀合物施用至所述受试者。

28.如权利要求27所述的方法，其中所述方法还包括施用所述抗肿瘤单克隆抗体并且所述抗肿瘤单克隆抗体选自由以下组成的组：利妥昔单抗、西妥昔单抗、曲妥珠单抗和培妥珠单抗。

29.如权利要求27所述的方法，其中所述方法还包括施用所述抗肿瘤单克隆抗体/药物缀合物并且所述抗肿瘤单克隆抗体/药物缀合物选自由以下组成的组：布妥昔单抗维多汀、吉妥珠单抗奥佐米星、曲妥珠单抗艾美坦辛、伊妥珠单抗奥佐米星、格雷帕珠单抗维多汀、罗佛珠单抗莫登素、坎妥珠单抗莫登素和米拉珠单抗-多柔比星。

30.如权利要求24所述的方法，其中在将所述第一同种异体淋巴细胞组合物施用至所述受试者之后，所述方法还包括将化学治疗剂施用至所述受试者。

31.如权利要求30所述的方法，其中所述化学治疗剂选自由以下组成的组：达沙替尼、尼罗替尼、帕纳替尼、伊马替尼、拉帕替尼和维莫德吉。

32.如权利要求24所述的方法，其中在将所述第一同种异体淋巴细胞组合物施用至所述受试者之后，所述方法还包括将单克隆抗体/CD4+T细胞表位缀合物施用至所述受试者。

33.如权利要求24所述的方法，其中在将所述第一同种异体淋巴细胞组合物施用至所述受试者之后，所述方法还包括

向所述受试者施用连续淋巴细胞减少性非致淋巴细胞衰竭的疗法以诱导所述受试者的短暂淋巴细胞减少；并且

随后向所述受试者施用从另外人同种异体供体的另外外周血细胞组合物获得的连续同种异体淋巴细胞组合物，所述连续同种异体淋巴细胞组合物包括来自所述另外供体的另外外周血细胞组合物的一定数目的CD4+T细胞和一定数目的自然杀伤细胞，其中(i)在所述另外供体抗所述受试者的方向中，所述另外供体包括相对于所述受试者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因错配，并且所述HLA II类等位基因错配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，(ii)所述受试者不具有对所述另外供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体，(iii)所述连续同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与所述另外外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，(iv)基于以公斤(kg)为单位的所述受试者理想体重的另外供体CD4+T细胞的数目在约1X10⁵个CD4+T细胞/kg与约1X10⁹个CD4+T细胞/kg之间，(v)所述连续同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于所述另外外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，并且(vi)所述连续同种异体淋巴细胞组合物具有比所述另外外周血细胞组合物少至少一个数量级的CD8+T细胞。

34.如权利要求33所述的方法，其限制条件是所述连续同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。

35.如权利要求24所述的方法，其中在将所述第一同种异体淋巴细胞组合物施用至所述受试者之后，所述方法还包括施用阻断T细胞中的负信号转导的试剂。

36.如权利要求35所述的方法，其中所述阻断T细胞中的负信号转导的试剂选自由以下组成的组：抗PD-1抗体、伊匹木单抗、抗PD-L2抗体和PD-1融合蛋白质。

37.如权利要求24所述的方法，其中所述疾病或病状选自由以下组成的组：癌症、自身免疫病症、器官移植、同种异体移植物排斥和病毒感染。

38.如权利要求37所述的方法，其中所述疾病或病状是癌症并且所述癌症是骨髓增生异常综合征。

39.一种制造用于施用至人接受者的同种异体淋巴细胞组合物的方法，其包括：

提供来自相对于所述接受者为同种异体的人供体的外周血细胞组合物，所述外周血细胞组合物包括一定数目的CD4+T细胞、一定数目的CD8+T细胞和一定数目的自然杀伤细胞，其中(i)所述供体具有相对于存在于所述接受者体内的抗原的CD4+T细胞免疫力，(ii)所述供体包括相对于所述接受者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因匹配并且所述HLA II类等位基因匹配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，并且(iii)所述接受者不具有对所述供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体；并且

通过使所述外周血细胞组合物中的CD8+T细胞的数目减少至少一个数量级来从所述外周血细胞组合物制造所述同种异体淋巴细胞组合物，其中(a)所述同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与所述外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，并且(b)所述同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于所述外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，其限制条件是所述同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。

40.如权利要求39所述的方法，其中所述HLA II类等位基因匹配包括HLA-DRB1处的匹配。

41.如权利要求39所述的方法，其中所述HLA II类等位基因匹配包括HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1处的匹配。

42.如权利要求39所述的方法，其中如果所述供体和接受者是ABO血型不相容的并且所述外周血细胞组合物包括一定数目的红细胞，那么制造所述同种异体淋巴细胞组合物还包括减少所述红细胞数目。

43.如权利要求42所述的方法，其中所述红细胞的数目包括小于或等于约50ml压积。

44.如权利要求39所述的方法，其中存在于所述接受者中的抗原选自由以下组成的组：赘生性抗原、赘生性独特型、病毒抗原、细菌抗原、真菌抗原、寄生虫抗原和非人类动物抗原。

45.如权利要求44所述的方法，其中所述抗原是赘生性抗原并且所述赘生性抗原是肿瘤抗原。

46.如权利要求39所述的方法，其中所述提供还包括针对一个或多个选择特征进行筛选并且对于选自由所述接受者、所述供体和一种或多种潜在同种异体供体组成的组的受试者来执行所述筛选。

47.如权利要求46所述的方法，其中针对感染物的血清反应性来筛选选择特征。

48.如权利要求47所述的方法，其中所述感染物抗原选自由以下组成的组：人免疫缺陷病毒(HIV)抗原、肝炎病毒抗原和巨细胞病毒抗原。

49.如权利要求48所述的方法，其中所述感染物抗原是巨细胞病毒抗原，对所述接受者和所述供体加以筛选，并且在所述接受者或所述供体中没有所述巨细胞病毒抗原的血清反应性。

50.如权利要求46所述的方法，其中选择特征是针对一种以上HLA II类等位基因来筛选一种或多种潜在同种异体供体。

51.如权利要求50所述的方法，其中潜在同种异体供体基于最小化所述一种以上HLA II类等位基因处、所述潜在同种异体供体与所述接受者之间的错配来选自所述一种或多种潜在同种异体供体，并且将所述潜在同种异体供体选为所述供体。

52.如权利要求46所述的方法，其中选择特征是针对一种或多种HLA I类等位基因来筛选一种或多种潜在同种异体供体。

53.如权利要求52所述的方法，其中潜在同种异体供体基于最小化所述一种或多种HLA I类等位基因处、所述潜在同种异体供体与所述接受者之间的错配来选自所述一个或多个潜在同种异体供体，并且将所述潜在同种异体供体选为所述供体。

54.如权利要求39所述的方法，其中所述供体针对存在于所述接受者中的所述抗原进行了免疫接种。

55.如权利要求39所述的方法，其中所述供体具有针对存在于所述接受者中的所述抗原的预先存在的CD4+T细胞免疫力。

56.如权利要求39所述的方法，其中所述供体对其具有免疫力的存在于所述接受者中的所述抗原是病毒抗原并且所述病毒抗原选自由以下组成的组：人乳头状瘤病毒抗原、爱泼斯坦巴尔病毒抗原、卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)抗原、甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原和丙型肝炎病毒抗原。

57.如权利要求56所述的方法，其中所述病毒抗原是人乳头状瘤病毒抗原并且所述人乳头状瘤病毒抗原是E6或E7抗原性肽。

58.如权利要求39所述的方法，其中所述同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与所述外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约20％。

59.如权利要求39所述的方法，其进一步限制条件为从所述供体获得的CD4+T细胞未有意地扩增或有意地离体分化。

60.如权利要求39所述的方法，其中减少所述外周血细胞组合物中的所述CD8+T细胞包括使用与磁性颗粒相关联的抗CD8+抗体或抗CD8+抗体加上补体。

61.如权利要求39所述的方法，其中所述外周血细胞组合物是全血产物或单采产物。

62.如权利要求39所述的方法，其中存在于所述接受者中的所述抗原由于将包含所述抗原的纳米颗粒引入所述接受者中而存在于所述接受者体内，其中在引入所述纳米颗粒之前，所述抗原不存在于所述接受者体内。

63.一种通过如权利要求39所述的方法获得的用于施用至人接受者的同种异体淋巴细胞组合物。

64.一种用于施用至人接受者的从人同种异体供体的外周血细胞组合物获得的同种异体淋巴细胞组合物，所述同种异体淋巴细胞组合物包括：

来自所述供体的外周血细胞组合物的一定数目的CD4+T细胞和一定数目的自然杀伤细胞，其中(i)所述供体具有相对于存在于所述接受者体内的抗原的CD4+T细胞免疫力，(ii)所述供体包括相对于所述接受者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因匹配并且所述HLA II类等位基因匹配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，(iii)所述接受者不具有对所述供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体，(iv)所述同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与所述外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，(v)基于以公斤(kg)为单位的所述接受者理想体重的供体CD4+T细胞的数目在约1X10⁵个CD4+T细胞/kg与约1X10⁹个CD4+T细胞/kg之间，(vi)所述同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于所述外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，并且(vii)所述同种异体淋巴细胞组合物具有比所述外周血细胞组合物少至少一个数量级的CD8+T细胞；

其限制条件是同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。

65.如权利要求64所述的淋巴细胞组合物，其中存在于所述接受者中的抗原选自由以下组成的组：赘生性抗原、赘生性独特型、病毒抗原、细菌抗原、真菌抗原和寄生虫抗原。

66.如权利要求64所述的淋巴细胞组合物，其中所述抗原是赘生性抗原并且所述赘生性抗原是肿瘤抗原。

67.如权利要求64所述的淋巴细胞组合物，其中所述供体对其具有免疫力的存在于所述接受者中的所述抗原是病毒抗原并且所述病毒抗原选自由以下组成的组：人乳头状瘤病毒抗原、爱泼斯坦巴尔病毒抗原、卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)抗原、甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原和丙型肝炎病毒抗原。

68.如权利要求67所述的淋巴细胞组合物，其中所述病毒抗原是人乳头状瘤病毒抗原并且所述人乳头状瘤病毒抗原是E6或E7抗原性肽。

69.如权利要求64所述的淋巴细胞组合物，其中如果所述供体和接受者是ABO血型不相容的并且所述外周血细胞组合物包括一定数目的红细胞，那么制造所述同种异体淋巴细胞组合物还包括减少所述红细胞数目。

70.如权利要求69所述的淋巴细胞组合物，其中所述红细胞的数目包括小于或等于约50ml压积。

71.如权利要求64所述的淋巴细胞组合物，其中所述HLA II类等位基因匹配包括HLA-DRB1处的匹配。

72.如权利要求64所述的淋巴细胞组合物，其中所述HLA II类等位基因匹配包括HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1处的匹配。

73.如权利要求64所述的淋巴细胞组合物，其中所述同种异体淋巴细胞组合物没有对于巨细胞病毒抗原的免疫反应性。

74.如权利要求64所述的淋巴细胞组合物，其中所述同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与所述外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约20％。

75.如权利要求64所述的淋巴细胞组合物，其进一步限制条件为从所述供体获得的CD4+T细胞未有意地扩增或有意地离体分化。

76.如权利要求64所述的淋巴细胞组合物，其中所述外周血细胞组合物是全血产物或单采产物。

77.一种用于施用至人接受者的从人同种异体供体的外周血细胞组合物获得的同种异体淋巴细胞组合物，所述同种异体淋巴细胞组合物包括：

来自所述供体的外周血细胞组合物的一定数目的CD4+T细胞和一定数目的自然杀伤细胞，其中(i)所述供体具有相对于存在于所述接受者体内的抗原的CD4+T细胞免疫力，(ii)所述供体包括相对于所述接受者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因匹配并且所述HLA II类等位基因匹配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，(iii)所述接受者不具有对所述供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体，(iv)所述同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与所述外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，(v)基于以公斤(kg)为单位的所述接受者理想体重的供体CD4+T细胞的数目在约1X10⁵个CD4+T细胞/kg与约1X10⁹个CD4+T细胞/kg之间，(vi)所述同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于所述外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，并且(vii)所述同种异体淋巴细胞组合物具有比所述外周血细胞组合物少至少一个数量级的CD8+T细胞；

其限制条件是同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。

78.如权利要求77所述的淋巴细胞组合物，其中所述抗原选自由以下组成的组：赘生性抗原、病毒抗原、细菌抗原、真菌抗原、寄生虫抗原和非人类动物抗原。

79.如权利要求78所述的淋巴细胞组合物，其中所述抗原是非人类动物抗原并且所述非人类动物抗原是匙孔血蓝蛋白抗原。

80.如权利要求78所述的淋巴细胞组合物，其中所述抗原是病毒抗原并且所述病毒抗原选自由以下组成的组：人乳头状瘤病毒抗原、爱泼斯坦巴尔病毒抗原、卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)抗原、甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原、丙型肝炎病毒抗原和流感抗原。

81.如权利要求80所述的淋巴细胞组合物，其中所述病毒抗原是人乳头状瘤病毒抗原并且所述人乳头状瘤病毒抗原是E6或E7抗原性肽。

82.如权利要求80所述的淋巴细胞组合物，其中所述病毒抗原是流感抗原并且所述流感抗原是血凝素抗原或神经氨酸酶抗原。

83.如权利要求77所述的淋巴细胞组合物，其中如果所述供体和接受者是ABO血型不相容的并且所述外周血细胞组合物包括一定数目的红细胞，那么制造所述同种异体淋巴细胞组合物还包括减少所述红细胞数目。

84.如权利要求83所述的淋巴细胞组合物，其中所述红细胞的数目包括小于或等于约50ml压积。

85.如权利要求77所述的淋巴细胞组合物，其中所述HLA II类等位基因匹配包括HLA-DRB1处的匹配。

86.如权利要求77所述的淋巴细胞组合物，其中所述HLA II类等位基因匹配包括HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1处的匹配。

87.如权利要求77所述的淋巴细胞组合物，其中所述同种异体淋巴细胞组合物没有对于巨细胞病毒抗原的免疫反应性。

88.如权利要求77所述的淋巴细胞组合物，其中所述同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与所述外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约20％。

89.如权利要求77所述的淋巴细胞组合物，其进一步限制条件为从所述供体获得的CD4+T细胞未有意地扩增或有意地离体分化。

90.如权利要求77所述的淋巴细胞组合物，其中所述外周血细胞组合物是全血产物或单采产物。

91.一种用于治疗受试者的疾病或病状的试剂盒，所述试剂盒包括：

如权利要求77所述的淋巴细胞组合物，其中受试者是人接受者；并且

纳米颗粒组合物，其包括包含不存在于所述人接受者体内的抗原的纳米颗粒。

92.如权利要求91所述的试剂盒，其中所述纳米颗粒还包括细胞因子。

93.如权利要求92所述的试剂盒，其中所述细胞因子是白介素或干扰素。

94.如权利要求93所述的试剂盒，其中所述细胞因子是白介素并且选自由以下组成的组：IL-2、IL-7、IL-12和IL-15。

95.如权利要求93所述的试剂盒，其中所述细胞因子是干扰素并且选自由以下组成的组：干扰素γ、干扰素β、干扰素α、干扰素、τ、干扰素Ω和复合干扰素。

96.如权利要求91所述的试剂盒，其中所述纳米颗粒还包括选自由以下组成的组的化合物：趋化因子、成像剂、光天线分子、热天线分子和Toll样受体配体。

97.如权利要求91所述的试剂盒，其中所述纳米颗粒还包括将所述纳米颗粒靶向输送至肿瘤细胞或抗原呈递细胞的试剂。

98.一种治疗人受试者的疾病或病状的方法，其包括：

向所述受试者施用从人同种异体供体的外周血细胞组合物获得的同种异体淋巴细胞组合物，

所述同种异体淋巴细胞组合物包括来自所述供体的外周血细胞组合物的一定数目的CD4+T细胞和一定数目的自然杀伤细胞，其中(i)所述供体具有相对于存在于所述受试者体内的抗原的CD4+T细胞免疫力，(ii)所述供体包括相对于所述受试者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因匹配并且所述HLA II类等位基因匹配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，(iii)所述受试者不具有对所述供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体，(iv)所述同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与所述外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，(v)基于以公斤(kg)为单位的所述受试者理想体重的供体CD4+T细胞的数目在约1X10⁵个CD4+T细胞/kg与约1X10⁹个CD4+T细胞/kg之间，(vi)所述同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于所述外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，并且(vii)所述同种异体淋巴细胞组合物具有比所述外周血细胞组合物少至少一个数量级的CD8+T细胞；

其限制条件是同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。

99.如权利要求98所述的方法，其中在向所述受试者施用所述同种异体淋巴细胞组合物之前，所述方法还包括向所述受试者施用淋巴细胞减少性非致淋巴细胞衰竭的疗法以诱导所述受试者的短暂淋巴细胞减少

100.如权利要求98所述的方法，其中在向所述受试者施用所述同种异体淋巴细胞组合物之前，所述方法还包括施用耗竭或抑制髓源性抑制细胞的疗法。

101.如权利要求100所述的方法，其中所述耗竭或抑制髓源性抑制细胞的疗法包括施用选自由以下组成的组的药物：达沙替尼、5-氟尿嘧啶、泰索帝、氯膦酸盐和吉西他滨。

102.如权利要求98所述的方法，其中在向所述受试者施用所述同种异体淋巴细胞组合物之前，所述方法还包括施用耗竭或抑制肿瘤相关巨噬细胞的疗法。

103.如权利要求98所述的方法，其中在向所述受试者施用所述同种异体淋巴细胞组合物之前，所述方法还包括施用耗竭调控性T细胞的疗法。

104.如权利要求103所述的方法，其中耗竭调控性T细胞的疗法可包括施用选自由以下组成的组的药物：环磷酰胺、地尼白介素融合毒素和达利珠单抗。

105.如权利要求98所述的方法，其中在向所述受试者施用所述同种异体淋巴细胞组合物之后，所述方法还包括施用药物以诱导同种异体反应性T细胞的选择性耗竭。

106.如权利要求98所述的方法，其中所述抗原选自由以下组成的组：赘生性抗原、病毒抗原、细菌抗原、真菌抗原和寄生虫抗原。

107.如权利要求106所述的方法，其中所述抗原是病毒抗原并且所述病毒抗原选自由以下组成的组：人乳头状瘤病毒抗原、爱泼斯坦巴尔病毒抗原、卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)抗原、甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原和丙型肝炎病毒抗原。

108.如权利要求107所述的方法，其中所述病毒抗原是人乳头状瘤病毒抗原并且所述人乳头状瘤病毒抗原是E6或E7抗原性肽。

109.如权利要求107所述的方法，其中所述病毒抗原是人乳头状瘤病毒抗原并且所述疾病或病状是癌症并且所述癌症选自由以下组成的组：宫颈癌、外阴癌、阴道癌、阴茎癌、肛门癌和口咽癌。

110.一种治疗人受试者的疾病或病状的方法，其包括：

向肿瘤中注入纳米颗粒组合物，其中所述纳米颗粒组合物包括包含不存在于所述受试者体内的抗原的纳米颗粒，由此将所述抗原引入所述受试者体内；

向所述受试者施用从人同种异体供体的外周血细胞组合物获得的同种异体淋巴细胞组合物，所述同种异体淋巴细胞组合物包括来自所述供体的外周血细胞组合物的一定数目的CD4+T细胞和一定数目的自然杀伤细胞，其中(i)所述供体具有相对于所述抗原的CD4+T细胞免疫力，(ii)所述供体包括相对于所述受试者的至少一个人白细胞抗原(HLA)II类等位基因匹配并且所述HLA II类等位基因匹配是在选自由以下组成的组的基因处：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，(iii)所述受试者不具有对所述供体的人白细胞抗原有反应性的可检测抗体，(iv)所述同种异体淋巴细胞组合物中的CD4+T细胞的数目与所述外周血细胞组合物中的CD4+T细胞的数目的差异小于约50％，(v)基于以公斤(kg)为单位的所述受试者理想体重的供体CD4+T细胞的数目在约1X10⁵个CD4+T细胞/kg与约1X10⁹个CD4+T细胞/kg之间，(vi)所述同种异体淋巴细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目小于或等于所述外周血细胞组合物中的自然杀伤细胞的数目，并且(vii)所述同种异体淋巴细胞组合物具有比所述外周血细胞组合物少至少一个数量级的CD8+T细胞；

其限制条件是同种异体淋巴细胞组合物的CD4+T细胞未离体活化。

111.如权利要求110所述的方法，其中在向所述受试者施用所述同种异体淋巴细胞组合物之前，所述方法还包括向所述受试者施用淋巴细胞减少性非致淋巴细胞衰竭的疗法以诱导所述受试者的短暂淋巴细胞减少。

112.如权利要求110所述的方法，其中在向所述受试者施用所述同种异体淋巴细胞组合物之前，所述方法还包括施用耗竭或抑制髓源性抑制细胞的疗法。

113.如权利要求112所述的方法，其中所述耗竭或抑制髓源性抑制细胞的疗法包括施用选自由以下组成的组的药物：达沙替尼、5-氟尿嘧啶、泰索帝、氯膦酸盐和吉西他滨。

114.如权利要求110所述的方法，其中在向所述受试者施用所述同种异体淋巴细胞组合物之前，所述方法还包括施用耗竭或抑制肿瘤相关巨噬细胞的疗法。

115.如权利要求110所述的方法，其中在向所述受试者施用所述同种异体淋巴细胞组合物之前，所述方法还包括施用耗竭调控性T细胞的疗法。

116.如权利要求115所述的方法，其中耗竭调控性T细胞的疗法可包括施用选自由以下组成的组的药物：环磷酰胺、地尼白介素融合毒素和达利珠单抗。

117.如权利要求110所述的方法，其中在向所述受试者施用所述同种异体淋巴细胞组合物之后，所述方法还包括施用药物以诱导同种异体反应性T细胞的选择性耗竭。

118.如权利要求110所述的方法，其中所述抗原选自由以下组成的组：赘生性抗原、病毒抗原、细菌抗原、真菌抗原、寄生虫抗原和非人类动物抗原。

119.如权利要求118所述的方法，其中所述抗原是非人类动物抗原并且所述非人类动物抗原是匙孔血蓝蛋白抗原。

120.如权利要求118所述的方法，其中所述抗原是病毒抗原并且所述病毒抗原选自由以下组成的组：人乳头状瘤病毒抗原、爱泼斯坦巴尔病毒抗原、卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)抗原、甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原和丙型肝炎病毒抗原。

121.如权利要求120所述的方法，其中所述病毒抗原是流感抗原并且所述流感抗原是血凝素抗原或神经氨酸酶抗原。

122.如权利要求110所述的方法，其中所述纳米颗粒还包括细胞因子。

123.如权利要求122所述的方法，其中所述细胞因子是白介素或干扰素。

124.如权利要求123所述的方法，其中所述细胞因子是白介素并且选自由以下组成的组：IL-2、IL-7、IL-12和IL-15。

125.如权利要求123所述的方法，其中所述细胞因子是干扰素并且选自由以下组成的组：干扰素γ、干扰素β、干扰素α、干扰素、τ、干扰素Ω和复合干扰素。

126.如权利要求110所述的方法，其中所述纳米颗粒还包括选自由以下组成的组的化合物：趋化因子、成像剂、光天线分子、热天线分子和Toll样受体配体。

127.如权利要求110所述的方法，其中所述纳米颗粒还包括将所述纳米颗粒靶向输送至肿瘤细胞或抗原呈递细胞的试剂。

128.如权利要求110所述的方法，其中在从所述供体获得所述外周血细胞组合物之前，所述供体针对所述抗原进行了免疫接种。

129.如权利要求110所述的方法，其中所述疾病或病状选自由以下组成的组：肺癌肿瘤、乳腺癌肿瘤、前列腺癌肿瘤、脑癌肿瘤和皮肤癌肿瘤。