CN102271711B - 每种维持移植物抗肿瘤效应的免疫重建促进剂或感染预防剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了用于抗肿瘤的同种异体造血干细胞移植疗法中的免疫重建促进剂或感染预防剂。促进剂或预防剂能够在移植后改善延迟的免疫重建或预防感染，同时维持同种异体造血干细胞移植的GVT效应。具体来说，在接受同种异体造血干细胞移植疗法和重建被延迟的患者中，可以通过在移植后的早期阶段给患者给药能够除去CD4+细胞的物质来促进免疫重建。以这样的方式，预计将在患者中早期完成感染管理并提高存活率。此外，能够降低与同种异体造血干细胞移植相关的并发症的风险，从而进一步使同种异体造血干细胞移植的应用更加广泛。

Description

每种维持移植物抗肿瘤效应的免疫重建促进剂或感染预防剂
技术领域
本发明涉及肿瘤的同种异体造血干细胞移植疗法中的免疫重建促进剂或感染预防剂。
背景技术
造血干细胞移植是一种治疗方式，其在恶性肿瘤被包含化疗和放疗的组合的移植前治疗方式破坏后，通过输送源自于供体或患者自身的造血干细胞来建立新的造血系统。其中，可以预期涉及源自于供体的造血干细胞移植的同种异体造血干细胞移植，对造血系统的各种肿瘤和其他治疗方法可能不能有效对抗的实体肿瘤具有抗肿瘤效应，即移植物抗肿瘤效应(在下文中也称为“GVT效应”)。然而，同时也存在着这些疗法可能伴有移植物抗宿主疾病(在下文中也称为“GVHD”)和由移植后免疫重建延迟所造成的感染的可能性。这些担忧限制了这种方法作为癌症免疫疗法的应用的扩展(非专利文献1和2)。
GVHD是一种以皮疹、黄疸和腹泻为特征的综合征，并被理解为由活化的供体T-细胞渗入到例如皮肤、肝脏和肠道中而引起。随着从1980年代早期开始快速发展的免疫抑制剂的出现，GVHD的预防和治疗结果显著改进。同时，作为GVHD死亡率降低的结果，与同种异体造血干细胞移植后的免疫缺陷相伴的致命感染作为影响这种移植的预后的主要因素而出现。然而，这种移植后延迟的免疫重建的致病机理和有效治疗还没有建立起来。目前的形势是，除了依赖于涉及给药免疫球蛋白制备物和抗生素的对症疗法之外，还没有可选方案。
本发明提出了使用能够贫化CD4阳性(在下文中也称为CD4+)细胞的物质(所述物质在下文中也称为“CD4+细胞贫化物质”)，以促进同种异体造血干细胞移植后的免疫重建或预防感染。这些物质在文献中还没有报道过。
非专利文献1：Shlomchik，W.D.，Nature Reviews Immunology，7(5)，340-352(2007)。
非专利文献2：Abrahamsen，I.W.和其他5位研究人员，Haematologica，90(1)，86-93(2005)。
发明内容
本发明的目的是提供用于肿瘤的同种异体造血干细胞移植疗法中的免疫重建促进剂或感染预防剂。
本发明人注意到GVHD严重性与延迟的免疫重建在临床过程中显示出强烈关联性，并且在GVHD发作时显现出骨髓抑制(血细胞减少症)，因此进行了广泛和反复研究。结果，他们发现：
(1)同种异体造血干细胞移植(在下文中有时被称为“骨髓GVHD”)后在骨髓组织中产生的扩散出血、结构破坏和造血障碍，抑制了骨髓中T和B淋巴细胞前体细胞的分化和增殖、延滞了细胞介导的免疫和淋巴细胞体液免疫的恢复；
(2)这些障碍由供体CD4+T淋巴细胞引起；
(3)这些障碍通过在这种移植后的早期阶段涉及CD4+T细胞的贫化、促进T和B淋巴细胞重建的治疗所改善；并且
(4)这些治疗不损害GVT效应。
基于这些发现，本发明人最终实现了本发明。
因此，本发明提供了下述方面。
[1]一种维持同种异体造血干细胞移植的移植物抗肿瘤效应的感染预防剂，所述感染预防剂包含能够贫化CD4阳性细胞的物质，并且在接受同种异体造血干细胞移植的当天或在移植后从第1日至约第60日的时间段内，每日一次至每约60日一次给药于接受所述移植的肿瘤患者。
[2]上述[1]的感染预防剂，其在移植后从第5日至约第14日的时间段内，每日一次至每10日一次给药。
[3]上述[1]或[2]的感染预防剂，其中能够贫化CD4阳性细胞的物质是CD4抗体或其改变的和/或修饰的形式。
[4]上述[3]的感染预防剂，其中CD4抗体是人源化抗人类CD4抗体或人类抗人类CD4抗体。
[5]上述[3]的感染预防剂，其中CD4抗体以每次1至30mg/kg的剂量给药。
[6]上述[1]的感染预防剂，其中肿瘤是造血系统肿瘤。
[7]上述[6]的感染预防剂，其中造血系统肿瘤是急性白血病、骨髓瘤或恶性淋巴瘤。
[8]上述[1]的感染预防剂，其中同种异体造血干细胞移植是骨髓移植、外周血干细胞移植或脐带血移植。
[9]上述[1]的感染预防剂，其中同种异体造血干细胞移植的供体是HLA匹配的亲属供体、HLA匹配的非亲属供体、HLA不匹配的亲属供体或HLA不匹配的非亲属供体。
[10]上述[1]的感染预防剂，其中同种异体造血干细胞移植是非清髓性移植或清髓性移植。
[11]上述[1]的感染预防剂，其中在同种异体造血干细胞移植中，移植前治疗包含抗癌药物给药、暴露于辐射或其组合。
[12]上述[1]的感染预防剂，其中感染是病原性病毒感染、病原性细菌感染、病原性真菌感染或病原性寄生虫感染。
[13]上述[1]的感染预防剂，其中感染的预防包含缓解由于骨髓中的移植物抗宿主反应而延迟的免疫重建。
[14]一种维持同种异体造血干细胞移植的移植物抗肿瘤效应的免疫重建促进剂，所述免疫重建促进剂包含能够贫化CD4阳性细胞的物质，并且在接受同种异体造血干细胞移植的当天或在移植后从第1日至约第60日的时间段内，每日一次至每约60日一次给药于接受所述移植的肿瘤患者。
本发明的药物能够在同种异体造血干细胞移植后促进免疫重建或防止感染，同时维持这种移植的GVT效应。
具体来说，在接受这种移植的肿瘤患者、特别是免疫重建被延迟的患者中，可以通过在移植后的早期阶段给药能够贫化CD4+细胞的物质来促进这种重建。作为结果，预计将在患者中早期完成感染管理并提高存活率。此外，降低了与同种异体造血干细胞移植相关的并发症的风险，使这种疗法的应用更加广泛。
附图简述
图1是骨髓GVHD的致病机制的示意图。
图2显示了BMT和GVHD组中的每种下列细胞的数量随时间的变化：总骨髓细胞(图2A)、总脾细胞(图2B)和总胸腺细胞(图2C)；以及BMT和GVHD组中骨髓中的每种下列细胞的数量随时间的变化：粒细胞(图2D)、单核细胞(图2G)、成红细胞(CD71+和Ter119+/-)(图2F和2I)以及脾CD4+和CD8+T细胞(图2E和2H)。
图3显示了BMT和GVHD组中每种类型的供体T细胞(图3A和3B)和供体骨髓来源细胞(图3C到3F)的数量随时间的变化(图3A、3B、3D和3E是脾脏结果，图3C和3F是胸腺结果)。
图4显示了BMT和GVHD组中骨髓中(图4A和4C)和胸腺(图4B和4D)中的B细胞数量随时间的变化。
图5显示了总骨髓细胞(图5A和5C)及其c-Kit(+)Sca-1(+)级份(图5B和5D)中参与血细胞分化的因子(CXCL12、Pax5、E2a、Ebf1、IFNγ、IL-7R、Irf1、GATA3)的mRNA表达。
图6显示了移植后第14天时BMT和GVHD组中肠道内的免疫组织染色图案(×200)和粪便IgA浓度(使用ELISA)。
图7显示了GVHD鼠类模型中移植后第21天时的骨髓切片的苏木精-曙红染色图像。
图8显示了BMT和GVHD组内骨髓中的SDF-1(CXCL12)表达。
图9显示了在源自带有突变体FasL的gld小鼠的脾T细胞与源自带有突变体Fas的lpr小鼠的骨髓细胞以各种组合(在图中，组合被标记为“骨髓细胞/脾细胞”[BM/SPL])使用的试验中，B细胞生产和体重随时间的变化。
图10显示了给药CD4抗体或CD8抗体对B细胞数量的影响。
图11显示了给药CD4抗体或CD8抗体对原初(TN)或效应(TE)CD4+T细胞数量的影响。
图12显示了移植后第100天时CD4抗体给药对血清免疫球蛋白浓度的影响。
图13显示了CD4抗体或CD8抗体给药对GVDH鼠类模型的存活百分数(图13A：同时灌输P815细胞时的GVT效应)、GVHD分值(图13B)和体重随间的变化(图13C)的影响。
实施本发明的最佳方式
下面将对本发明进行更充分的描述。
移植物抗宿主反应(有时缩写为“GVH反应”)在本文中是指当从供体移植的造血细胞由于细胞的免疫应答而攻击受体器官时引起的反应。GVH反应由供体的T细胞渗入例如皮肤、肝脏或肠道中而引起，其特征为引起皮疹、黄疸和/或腹泻作为主要症状。本发明是基于下述发现，即接受骨髓抑制的患者中延迟的免疫重建或降低的免疫功能由针对骨髓的GVH反应(在下文中称为“骨髓GVH反应”或“骨髓GVHD”)所引起。该机制显示在图1中。在同种异体造血干细胞移植后，输入的供体造血干细胞定植于血液骨髓微环境中存在的血液骨髓造血生境中并增殖，产生了各种白细胞亚类或前体细胞。血液骨髓GVHD的机理据认为是由于骨髓造血生境被供体T细胞损伤而引起的造血的间接抑制以及炎性因子例如IFN和TNF抑制血细胞增殖和分化而引起的造血的直接抑制。正如在实施例中所示，Fas-FasL途径在某种程度上参与经供体T细胞的骨髓GVHD；此外，供体T细胞中作为骨髓GVHD的主因的亚类是CD4+细胞。这种骨髓GVHD终止了受体中B细胞的产生和分化，并在同时也抑制了粒细胞性细胞和T细胞的产生，因此在免疫重建延迟和移植后感染机会的增加中发挥重要作用。
“移植物抗肿瘤效应”是指作为输入的供体来源的造血干细胞中存在的T细胞识别并攻击作为外来物质的患者的癌症或肿瘤细胞的结果，而可以观察到的癌症或肿瘤生长的抑制、萎缩和消除效应。因此，这是只有在涉及输入从具有不同HLA类型的供体收集的细胞的同种异体移植中才能观察到的效应。这种效应对于白血病来说，具体被称为移植物抗白血病效应(GVL效应)。类似地，对于淋巴瘤来说，这种效应被称为移植物抗淋巴瘤效应，对于多发性骨髓瘤来说，被称为移植物抗骨髓瘤效应。
在本发明的药物的使用中，接受了同种异体造血干细胞移植的肿瘤患者主要是指恶性肿瘤患者，其实例包括具有下列一种或多种恶性肿瘤的患者：造血系统肿瘤，大肠癌，肾癌(例如透明细胞癌)，黑素瘤(例如转移性恶性黑素瘤)，前列腺癌(例如激素耐受性前列腺腺癌)，乳腺癌，结肠癌，肺癌(例如非小细胞肺癌)，骨癌，胰腺癌，皮肤癌，头颈癌，皮肤或眼眶恶性黑素瘤，卵巢癌，直肠癌，肛门癌，胃癌，睾丸癌，子宫癌，输卵管癌，子宫内膜癌，宫颈癌，阴道癌，外阴癌，食管癌，小肠癌，内分泌系统癌症，甲状腺癌，甲状旁腺癌，肾上腺癌，软组织肉瘤，尿道癌，阴茎癌，儿科实体肿瘤，膀胱癌，肾脏或输尿管癌，肾盂癌，中枢神经系统(CNS)肿瘤，原发CNS淋巴瘤，肿瘤血管发生，脊椎肿瘤，脑干胶质瘤，垂体腺瘤，Kaposi肉瘤，表皮样癌，鳞状细胞癌以及环境诱导的癌症，包括石棉诱导的癌症。这里，优选使用本发明的药物的肿瘤患者是造血系统肿瘤患者。
造血系统肿瘤的实例是白血病和恶性淋巴瘤。白血病的实例包括淋巴细胞白血病(例如毛细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、幼淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病(例如B细胞慢性淋巴细胞白血病)、成人T细胞白血病(成人T细胞淋巴瘤、成人T细胞白血病骨髓渗入)、淋巴细胞白血病骨髓渗入)、骨髓瘤(例如浆细胞白血病、单生骨髓瘤、多发性骨髓瘤(例如Bence Jones多发性骨髓瘤、多发性骨髓瘤关节病、非分泌性多发性骨髓瘤、骨髓瘤肾、多发性骨髓瘤骨髓渗入)、骨髓增生异常综合征(例如RAEB、RAEB-t、顽固性贫血、RARS(原发性铁粒幼红细胞贫血)、髓性白血病(例如急性髓性白血病、急性髓性单核细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病、嗜碱性细胞白血病、嗜曙红细胞白血病、嗜中性细胞白血病、髓性单核细胞白血病、慢性髓性白血病(例如慢性髓性白血病中的恶性改变、慢性髓性白血病的慢性阶段、慢性髓性白血病的转变阶段、非典型慢性髓性白血病)、慢性髓性单核细胞白血病(例如青少年髓性单核细胞白血病)、髓性白血病骨髓渗入)、急性白血病、慢性白血病、单核细胞白血病(例如急性单核细胞白血病、慢性单核细胞白血病)、潜袭型白血病、Letterer-Siwe病、急性组织细胞增多症、急性肥大细胞瘤、急性成巨核细胞白血病、浆细胞瘤、骨髓纤维变性(例如急性骨髓纤维变性、原发性骨髓纤维变性、继发性骨髓纤维变性、特发性骨髓纤维变性)、骨髓增生性疾病、混合细胞白血病、脑膜白血病、类红细胞白血病、单克隆免疫球蛋白血症、低增生性白血病、继发性白血病、白血病性关节病、非典型白血病、肥大细胞白血病、肥大细胞肿瘤障碍和Crow-Fukase综合征。恶性淋巴瘤的实例包括B细胞淋巴瘤、弥散性淋巴瘤(例如弥散性混合淋巴瘤、弥散性小细胞淋巴瘤、弥散性小核裂细胞淋巴瘤、弥散性大细胞淋巴瘤、弥散性未分化淋巴瘤、成淋巴细胞淋巴瘤、成免疫细胞淋巴结肿大、网状细胞肉瘤)、霍奇金氏病(例如淋巴细胞贫化霍奇金氏病、淋巴细胞为主型霍奇金氏病、结节硬化型霍奇金氏病、混合细胞霍奇金氏病)、淋巴瘤、胃的恶性淋巴瘤、眼眶恶性淋巴瘤、颈部恶性淋巴瘤、甲状腺恶性淋巴瘤、骨骼恶性淋巴瘤、十二指肠恶性淋巴瘤、恶性纵隔淋巴瘤、小肠恶性淋巴瘤、大肠恶性淋巴瘤、脑恶性淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤(例如T区淋巴瘤、Sézary综合征、Lennert淋巴瘤、蕈样肉芽肿)、恶性扁桃腺淋巴瘤、脾脏恶性淋巴瘤、滤泡细胞淋巴瘤(例如中尺寸细胞型滤泡细胞淋巴瘤、混合细胞型滤泡细胞淋巴瘤、大细胞型滤泡细胞淋巴瘤)、MALT淋巴瘤、心脏恶性淋巴瘤、结肠恶性淋巴瘤、直肠恶性淋巴瘤、恶性淋巴瘤骨髓渗入、恶性免疫增生性疾病(例如α-H链疾病、γ-H链疾病、原发性巨球蛋白血症、免疫增生性小肠疾病)和鼻咽恶性淋巴瘤。这里，优选使用本发明的药物的造血系统肿瘤是急性白血病。
在本发明的药物的使用中，“同种异体造血干细胞移植”在本文中是指通过输入来自HLA类型一致或相似的亲属供体或非亲属供体的造血干细胞来重建造血的方法。为了收集或获取造血干细胞，需要首先筛选亲属的HLA类型，或在骨髓库(例如日本骨髓捐献计划(JapanMarrow Donor Program))或脐带血库(例如日本脐带血库网络(JapaneseCord Blood Bank Network))中搜索具有与患者一致或相似的HLA类型的供体。预计同种异体造血干细胞移植可以具有GVT效应，但是存在发生GVHD的风险。因此，本发明的药物有效。另一种类型的造血干细胞移植是自体造血干细胞移植，其是通过输入个体自身的造血干细胞来重建造血的方法。然而，在这种情况下对本发明的药物的需求低，因为不担心发生GVHD，并且也几乎没有GVT效应。
造血干细胞移植根据移植中使用的细胞类型分成三类：骨髓移植、外周血干细胞移植和脐带血移植，本发明的药物可以应用于每种类型。骨髓移植是通过移植骨髓液来移植造血干细胞的方法。可以通过将供体置于全身麻醉下，并通过在骨盆背面左侧和右侧的三至五个位置处使用骨髓针收集每个体重约15至20mL液体，来获得骨髓液。外周血干细胞移植是移植外周血干细胞的方法，所述外周血干细胞已通过给药G-CSF而从骨髓大量流入血液中。可以通过皮下注射约10μg/kg/日G-CSF共4至6日，并使用血组分收集系统收集注射后第4至6日的细胞，来获得外周血干细胞。细胞收集的定时，可以通过测量CD34抗原阳性的细胞数量来设定，所述CD34抗原是血液中存在的造血干细胞标志物。脐带血移植是移植存在于脐带血中的造血干细胞的方法。与患者匹配的脐带血可以利用HLA类型测试从脐带血库中搜索。在脐带血移植中，尽管与其他类型的移植相比可以从脐带血收集的干细胞数量有限，但不容易产生GVHD。结果，即使6个HLA类型中的两个不相容，移植也是可能的。每种上述的移植方法和收集、制备或筛选骨髓、外周血干细胞或脐带血的方法，可以根据《造血干细胞移植和诊断手册》第一版(Manual of hematopoietic stem celltransplantation and diagnosis)(由Nihon Igakukan出版)或《造血细胞移植手册》(Manual of hematopoietic cell transplantation)第三修订版(由Nihon Igakukan出版)来实施。
用于同种异体造血干细胞移植的供体可以根据HLA(人类白细胞抗原)类型来选择。由于从每个双亲遗传三个HLA类型(HLA-A、-B和-DR)，因此原则上在同种异体造血干细胞移植中应该考虑的HLA类型的数量是6个。因为HLA类型不相容能够引起移植后严重的GVHD，因此需要HLA类型匹配。然而，一定程度的不相容性可能具有引起加强的GVT效应的相反效应。因此，优选根据肿瘤类型、患者的年龄和健康状况以及待移植的造血干细胞类型来选择适合的供体。供体的选择原则上根据下面的分类来进行。
(1)HLA匹配的亲属供体。因为HLA类型是遗传的，在兄弟姐妹中存在1/4的相容概率。因此，GVHD和输血相关并发症的频率一般较低。在同种异体造血细胞移植中，需要首先从亲属中寻找相容供体。
(2)HLA匹配的非亲属供体。在没有找到对于所有HLA类型来说HLA匹配的亲属的情况下，可以从骨髓库中搜索HLA匹配的人(HLA匹配的非亲属供体)。
(3)HLA不匹配的亲属供体。由于从6个HLA类型中的5个匹配的亲属供体进行的同种异体造血干细胞移植的成功率与从HLA匹配的非亲属供体进行的移植的成功率相当，因此在即使没有发现所有HLA类型都匹配的亲属的情况下，也可以选择具有部分不匹配的亲属供体。
(4)HLA不匹配的非亲属供体。在不能从HLA匹配的个体或HLA不匹配的亲属中找到适合供体的情况下，可以选择HLA不匹配的非亲属作为供体。但是，在这样的情况下，存在GVHD的高风险。
此外，在供体的选择中，优选也根据例如呼吸功能、循环功能、肝功能、各种疾病的治疗史以及感染和过敏的存在或不存在来做出判断。对于更详细的选择标准，可以参考《造血干细胞移植和诊断手册》(Manual of hematopoietic stem cell transplantation and diagnosis)第一版(由Nihon Igakukan出版)或《造血细胞移植手册》(Manual ofhematopoietic cell transplantation)第三修订版(由Nihon Igakukan出版)。
对于本发明的药物的使用来说，同种异体造血干细胞移植还包括移植前准备。这里，“移植前准备”是指在移植前进行的治疗，其包括抗癌药物给药、辐射或其组合，以及在需要时给药免疫抑制剂以消除癌细胞或降低患者的免疫力，以便于供体造血干细胞的移植。这样的移植前准备可以在造血干细胞移植前7至10日进行。
可以使用在利用本发明的药物的移植前治疗中的抗癌药物实例包括烷基化药剂(例如环磷酰胺、白消安、马法兰、羟基脲、盐酸尼莫司汀、卡莫司汀、洛莫司汀、雷莫司汀、硝胺、异环磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、塞替哌、卡巴醌、白消安、达卡巴嗪、替莫唑胺、盐酸甲基苄肼、盐酸氮芥N-氧化物)、抗代谢物(例如依诺他滨、卡培他滨、卡莫氟、克拉屈滨、吉西他滨、阿糖胞苷、阿糖胞苷十八烷基磷酸盐、甲氨蝶呤、巯基嘌呤、氟达拉滨、氟尿嘧啶、替加氟、替加氟-尿嘧啶、替加氟-吉美拉西-氧嗪酸钾、去氧氟尿苷、奈拉滨、羟基脲、培美曲塞、喷司他丁、巯基嘌呤)、抗癌抗体(例如盐酸柔红霉素、盐酸多柔比星、吡柔比星、米托蒽醌、盐酸伊达比星、博来霉素、放线菌素D、阿柔比星、氨柔比星、表柔比星、净司他丁斯酯、培洛霉素、丝裂霉素C、米托蒽醌)、生物碱(例如长春新碱、长春地辛、依托泊苷、伊立替康、依托泊苷、索布佐生、多西他赛、拓扑替康、紫杉醇、长春瑞滨、长春碱)、分子标志物(例如替伊莫单抗、伊马替尼、厄洛替尼、吉非替尼、吉妥单抗、舒尼替尼、西妥昔单抗、索拉非尼、他米巴罗汀、曲妥珠单抗、维甲酸、帕尼单抗、贝伐单抗、硼替佐米、利妥昔单抗)以及含铂药物(例如奥沙利铂、卡铂、顺铂、奈达铂)。抗癌药物给药方案可以按照本技术领域公知的方法来进行。
可以使用在利用本发明的药物的移植前治疗中的辐射可以按照本技术领域中公知的方案来进行。例如，优选情况下的辐射，对于急性白血病、恶性淋巴瘤和某些实体癌来说通过全身辐射来进行，对于常规实体癌来说通过局部辐射来进行。所需剂量将随着多种因素而变，例如辐射方法(单剂或分步暴露)、肿瘤类型和肿瘤对辐射的敏感度。例如，在全身辐射中，10至12Gy被视为标准剂量。另一方面，为了减少辐射对器官的损伤，最近经常使用的是分步辐射。例如，辐射可能需要每日进行1到2次暴露，每次暴露的剂量水平约为1.8至2Gy，共进行约4至7日的时间。分步辐射可以是等量分级的暴露或不等量分级的暴露，并可以根据患者的负荷、副作用和治疗效果进行适合的修改。辐射疗法可以与抗癌药物疗法平行进行。
在使用本发明的药物时，抗癌药物的类型和剂量或辐射剂量，可以根据肿瘤或造血干细胞的类型或根据患者的年龄或健康状况进行选择。本发明的药物可以使用在包含使用常规的强有力的移植前治疗方案的“具有清髓性移植前治疗方案的同种异体造血干细胞移植(清髓性移植)”中，或通过减弱移植前治疗方案的强度能够降低毒性的“具有非清髓性移植前治疗方案的同种异体造血干细胞移植(非清髓性移植)”中(参见《造血干细胞移植和诊断手册》(Manual of hematopoieticstem cell transplantation and diagnosis)第一版(由Nihon Igakukan出版)或《造血细胞移植手册》第三修订版(Manual of hematopoietic celltransplantation)(由Nihon Igakukan出版))。
此外，可以任选给药免疫抑制剂(例如环孢素、他克莫司)以保持不发生急性GVHD。
在本发明中，“CD4+w细胞贫化物质”是指例如消除供体来源的CD4+细胞的物质或抑制供体来源的CD4+细胞的增殖或功能的物质。其实例包括具有补体依赖性细胞毒性(在下文中缩写为“CDC”)和/或抗体依赖性细胞毒性(在下文中缩写为“ADC”)的CD4抗体，或已经添加有细胞毒素或细胞毒性药物的这些CD4抗体。
这里，“CD4+细胞”是指在细胞表面上表达CD4的免疫细胞。其实例包括CD4+T细胞、CD4+树突状细胞、CD4+巨噬细胞和CD4+NKT细胞。CD4+T细胞对本发明中骨髓GVHD的发生的贡献特别大。
这里，CD4抗体可以是任何与人类CD4结合，并通过破坏CD4+细胞或抑制它们的增殖或功能而从患者的血液或各种组织中减少或消除这些细胞的抗体。然而，人源化抗人类CD4抗体和人类抗人类CD4抗体是优选的。
这里，“人源化抗人类CD4抗体”是指通过将源自于另一种哺乳动物例如小鼠的抗人类CD4抗体的互补决定区(也称为“CDR”)嫁接到人类抗体的构架(也称为“FR”)序列上而获得的抗体。这种抗体可以根据在例如美国专利No.4,816,567、5,225,539、5,530,101、5,585,089和6,180,370中描述的方法来制造。源自于其他哺乳动物的抗人类CD4抗体可以通过例如杂交瘤技术(Kohler，G.等，Nature，256(5517)，495-497(1975))来生产。抗体可变区中FR上的氨基酸可以被取代，以便人源化抗人类CD4抗体的CDR形成适合的抗原结合位点(Sato，K.等，Cancer Research，53，851-856(1993))。
“人类抗人类CD4抗体”是其中CDR和FR等的全部结构源自于人类的抗人类CD4抗体。这样的抗体可以使用HuMAb小鼠(注册商标)(参见例如美国专利No.5,545,806、5,569,825、5,625,126和5,633,425)、KM小鼠(注册商标)(参见WO 02/43478)、Xeno小鼠(注册商标)(参见美国专利No.5,939,598、6,075,181、6,114,598、6,150,584和6,162,963)、TC小鼠(注册商标)(参见Tomizuka等Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97(2)，722-727(2000))或人类免疫细胞重建的SCID小鼠(参见美国专利No.5,476,996和5,698,767)来生产。人类抗人类CD4抗体也可以通过噬菌体展示方法对人类免疫球蛋白基因文库进行筛选来制备(参见美国专利No.5,223,409、5,403,484和5,571,698)。
本发明中的CD4抗体也包括抗体片段例如上述抗体的Fab、F(ab)’2和ScFv，以及低分子抗体例如Sc(Fv)2和双抗体(diabodies)。
CD4抗体的同种型包括IgG(IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)、IgA(IgA1和IgA2)、IgM、IgD和IgE。IgG是优选的，更加优选的是其中ADCC或CDC更强的IgG1或IgG3。
此外，本发明中的CD4抗体的潜在免疫原性，可以通过改变FR内的至少一个残基或至少一个CDR内的至少一个残基并移除T-细胞表位来降低(参见美国专利申请No.20030153043)。
此外，通过改变或修改本发明的CD4抗体的可变区或恒定区，有可能改变抗原结合活性、稳定性、生物半衰期、补体结合活性、CDC、Fc受体结合活性和/或ADCC。
本发明中的CD4抗体的抗原相容性，可以通过经氨基酸取代消除可变区FR上的糖基化位点来增加(参见美国专利No.5,714,350和6,350,861)。此外，通过改变CH1铰链区中半胱氨酸残基的数量，能够促进重链和轻链的组装或能够增加抗体稳定性(美国专利No.5,677,425)。此外，通过在美国专利No.6,277,375或5,869,046和美国专利No.6,121,022中提到的氨基酸取代或通过使用本技术领域已知的方法进行PEG转化，能够延长生物半衰期。
此外，对于本发明中的CD4抗体来说，通过Fc区中的氨基酸取代能够改变效应子功能(参见美国专利No.5,624,821和5,648,260)，通过美国专利No.6,194,551中描述的方法能够增强CDC，通过WO94/29351中描述的方法能够增强补体结合活性。
此外，本发明中的CD4抗体对ADCC和/或Fcγ受体的亲和性可以通过WO 00/42072中描述的方法来增强。类似地，通过使用美国专利出版物No.20040110704、欧洲专利No.1,176,195、WO 03/035835或WO 99/54342中描述的方法或细胞改变糖基化或减少岩藻糖残基，能够增加抗体的ADCC。
这里，本发明中的CD4抗体的优选实例包括MTRX-1011A、TRX-1(参见WO 2002/102853)、Ibalizumab(参见WO 92/09305)、BT-061、huB-F5和Zanolimumab(参见WO 97/13852)、4162W94、Clenoliximab或Keliximab(参见WO 93/02108)、AD-519或PRO-542(参见WO92/13947)和Cedelizumab(参见WO 96/36359)。
为了增加CD4+细胞贫化能力，本发明中的CD4抗体可以任选结合细胞毒性分子例如细胞毒素或细胞毒性药物。细胞毒素的说明性实例包括紫杉醇、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、吐根碱、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、长春新碱、长春碱、秋水仙碱、阿霉素、道诺霉素、二羟基蒽醌、米托蒽醌、光神霉素、放线菌素D、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔、嘌呤霉素、度卡霉素、加里刹霉素、美登素、auristatin及其衍生物。更优选的实例包括度卡霉素、加里刹霉素、美登素、auristatin及其衍生物。同时，细胞毒性药物的说明性实例包括抗代谢物(例如甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、6-巯基鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶达卡巴嗪)、烷基化试剂(例如二氯甲基二乙氨、硫代二十碳五烯酸苯丁酸氮芥、马法兰、卡莫司汀(BSNU)、洛莫司汀(CCNU)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲佐菌素、丝裂霉素C、顺式二氨二氯合铂(II))、蒽环类抗生素(例如道诺霉素和阿霉素)、抗生素(例如更生霉素、博来霉素、米拉霉素、蒽霉素(AMC))以及抗有丝分裂剂(例如长春新碱、长春碱)。细胞毒素或细胞毒性药物与CD4抗体的结合可以通过本技术领域已知的方法实施。
本发明的药物可用于防止移植后感染，例如病原性病毒感染、病原性细菌感染、病原性真菌感染和病原性寄生虫感染。这里，病原性病毒的说明性实例包括HIV、肝炎病毒(例如HCV、HBV、HAV)、疱疹病毒(例如VZV、HSV-1、HAV-6、HSV-II、CMV、Epstein-Barr病毒)、腺病毒、流感病毒、黄病毒、艾柯病毒、鼻病毒、柯萨奇病毒、冠状病毒、呼吸道合胞病毒、腮腺炎病毒、轮状病毒、麻疹病毒、风疹病毒、细小病毒、痘苗病毒、成人T细胞白血病病毒(HTLV)、登革热病毒、乳头瘤病毒、接触传染软疣病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病病毒、JC病毒、虫媒病毒和脑炎病毒。病原性细菌的说明性实例包括衣原体、立克次氏体细菌、分枝杆菌、肺炎球菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌、淋球菌、大肠埃希氏杆菌(Escherichiacoli)、肠球菌、conococcus、克雷伯氏菌、变形杆菌、沙雷氏菌、假单胞菌、军团菌、白喉杆菌、沙门氏菌，以及造成霍乱、破伤风、肉毒中毒、炭疽、鼠疫、钩端螺旋体病和莱姆病的细菌。病原性真菌的说明性实例包括假丝酵母(Candida)(例如白色假丝酵母(albicans)、克鲁斯氏假丝酵母(krusei)、光滑假丝酵母(glabrata)、热带假丝酵母(tropicalis))、新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)、曲霉(Aspergillus)(例如烟曲霉(fumigatus)、黑曲霉(niger))、毛霉目(Mucorales)(例如毛霉属(Mucor)、犁头霉(Absidia)、根霉(Rhizopus))、申克孢子丝菌(Sporothrix schenckii)、皮炎芽生菌(Blastomyces dermatitidis)、巴西芽生菌(Paracoccidioidesbrasiliensis)、粗球孢子菌(Coccidioides immitis)和荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)。病原性寄生虫的说明性实例包括溶组织内阿米巴(Entamoeba hisolytica)、结肠小袋纤毛虫(Balantidium coli)、福勒氏耐格里阿米巴(Naegleria fowleri)、棘阿米巴属物种(Acanthamoeba spp.)、兰氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)、隐孢子虫属物种(Cryptosporidium spp.)、卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)、间日疟原虫(Plasmodium vivax)、果氏巴贝虫(Babesia microti)、布氏锥虫(Trypanosoma brucei)、克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)、杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)和巴西钩口线虫(Ancylostoma braziliense)。
在本发明中，作为活性成分的CD4+细胞贫化物质可以通过肠胃外途径例如静脉内、肌肉内、皮内、腹膜内、皮下或脊柱，作为与可药用载体一起制备的组合物的注射液或灌输液给药。
CD4+细胞贫化物质的剂量典型为例如约0.1至约100mg/kg，优选为约0.1至约50mg/kg，更优选为约1至约30mg/kg。
本发明药物的给药时间是同种异体造血干细胞移植的当天或移植后1至约60日，优选为移植后1至约30日，更优选为移植后第5至14日，更优选为移植后第5至7日。在观察到伴有慢性GVHD的骨髓抑制的情况下，即使在移植后60日以上，仍可进行进一步给药。
本发明的药物可以每日一次到每约60日一次之间的任何频率给药，尽管给药优选为每日一次，更优选为每3日一次，更优选为每10日一次。
包含本发明的CD4+细胞贫化物质的注射液或灌输液，可以作为溶液、悬液或乳液使用。溶液可以使用例如注射用蒸馏水、生理盐水、葡萄糖溶液和等渗溶液(例如氯化钠、氯化钾、甘油、甘露糖醇、山梨糖醇、硼酸、硼酸钠、丙二醇溶液)。此外，注射液也可以包括例如稳定剂、增溶剂、悬浮剂、乳化剂、安抚剂、缓冲剂、防腐剂、抗菌剂和pH调节剂。可以使用的稳定剂的实例包括白蛋白、球蛋白、明胶、甘露糖醇、葡萄糖、葡聚糖、乙二醇、丙二醇、亚硫酸二乙酯、抗坏血酸、酸式亚硫酸钠、硫代硫酸钠、乙二胺四乙酸钠、柠檬酸钠和二丁基羟基甲苯。可以使用的增溶剂的实例包括醇类(例如乙醇)、多元醇(例如丙二醇、聚乙二醇))和非离子型表面活性剂(例如聚山梨酸酯80(注册商标)、HCO-50)。可以使用的悬浮剂的实例包括甘油单硬脂酸酯、单硬脂酸铝、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟甲基纤维素和月桂基硫酸钠。可以使用的乳化剂的实例包括阿拉伯树胶、藻酸钠和黄蓍树胶。可以使用的安抚剂的实例包括苯甲醇、氯丁醇和山梨糖醇。可以使用的缓冲剂的实例包括磷酸缓冲剂、乙酸缓冲剂、硼酸缓冲剂、碳酸缓冲剂、柠檬酸缓冲剂、Tris缓冲剂、谷氨酸缓冲剂和ε-氨基己酸缓冲剂。可以使用的防腐剂的实例包括对氧苯甲酸甲酯、对氧苯甲酸乙酯、对氧苯甲酸丙酯、对氧苯甲酸丁酯、氯丁醇、苯甲醇、苯扎氯铵、脱氢乙酸钠、乙二胺四乙酸钠、硼酸和硼酸钠。可以使用的抗菌剂的实例包括苯扎氯铵、对氧苯甲酸和氯丁醇。可以使用的pH调节剂的实例包括盐酸、氢氧化钠、磷酸和乙酸。
可以通过在最后步骤灭菌或通过包含消毒操作例如用滤器过滤等的灭菌，然后装入无菌容器，来生产注射液或灌注液。注射液可以通过冷冻保存，或可以在首先通过冷冻干燥除去水后保存。在后一种情况下，在使用时，向保存的注射物添加注射用蒸馏水等以便将其重新溶解备用。
所有在本说明书中明确引用的专利和参考文献的全部内容，在此作为本说明书的一部分引为参考。
实施例
下面通过实施例对本发明进行详细描述，尽管本发明不限于这些实施例。
实施例1：同种异体造血干细胞移植后GVHD的动物模型的产生
在造血干细胞移植前一天，对受体小鼠(6周龄雌性C57BL/6×DBA2F1(BDF1，H2d/b))进行致死性辐射(11Gy)，将剂量分成两次相隔3小时使用。一些辐射过的小鼠接受源自于C57BL/6(B6，H2b)的T细胞贫化的骨髓细胞(5×106个细胞)和脾脏T-细胞(5×106个细胞，对CD11b、B220、Ter119和NK1.1进行阴性富集)两者。这些小鼠在下文中被称为GVHD组。其他辐射过的小鼠只接受源自于C57BL/6(B6，H2b)的T细胞贫化的骨髓细胞(5×106个细胞)。后者在下文中被称为BMT组。
实施例2：移植后源自于供体造血干细胞的骨髓造血的流式细胞术分析
从实施例1制备的每组小鼠中的每只动物收获骨髓、脾脏和胸腺，并通过流式细胞术分析从移植后第7至第28天源自于供体造血干细胞的骨髓造血随时间的变化。流式细胞术通过本技术领域的普通专业人员已知的方法来进行。
图2(A)到(I)显示了在BMT和GVHD组中的每种下列细胞的数量随时间的变化：总骨髓细胞、总脾细胞和总胸腺细胞；以及BMT和GVHD组中骨髓中的每种下列细胞的数量随时间的变化：粒细胞、单核细胞、成红细胞(CD71+和Ter119+/-)以及脾CD4+和CD8+T细胞。观察到了GVHD组中骨髓、脾脏和胸腺细胞总数的降低，BMT组中脾脏CD4+T细胞的恢复以及GVHD组中成红细胞的减少。
实施例3：同种异体造血干细胞移植后GVHD动物模型的产生(2)
在造血干细胞移植前一天，对CD45.2+受体小鼠(6周龄雌性C57BL/6×DBA2F1(BDF1，H2d/b))进行致死性辐射(11Gy)，将剂量分成两次相隔3小时使用。一些辐射过的小鼠接受源自于CD45.1+CD45.2+同类系小鼠的T细胞贫化的骨髓细胞(5×106个细胞)和源自于CD45.1+同类系小鼠的脾脏T-细胞(5×106个细胞，对CD11b、B220、Ter119和NK1.1进行阴性富集)两者。这些小鼠在下文中被称为GVHD组。其他辐射过的小鼠只接受源自于CD45.1+CD45.2+同类系小鼠的T细胞贫化的骨髓细胞(5×106个细胞)。后者在下文中被称为BMT组。
实施例4：移植后源自于供体造血干细胞的骨髓造血的流式细胞术分析(2)
从实施例3制备的每组小鼠中的每只动物收获骨髓、脾脏和胸腺，并通过流式细胞术分析从移植后第7至第28天源自于供体造血干细胞的骨髓造血随时间的变化。流式细胞术通过本技术领域的普通专业人员已知的方法来进行。
图3(A)到(F)显示了在BMT和GVHD组中每种类型的供体T细胞和供体骨髓来源细胞的数量随时间的变化。在GVHD组中与BMT组相比，由供体骨髓来源的T细胞引起的恢复延迟。此外，尽管GVHD组中供体骨髓来源的T细胞被抑制，但它们逐渐产生。
图4(A)到(D)显示了BMT和GVHD组中骨髓和胸腺中的B细胞数量随时间的变化。在GVHD组中，始终存在B细胞分化和生产的过度损伤。
因此，在GVHD组中，观察到了髓细胞和成红细胞的降低，特别是由于淋巴祖细胞恢复的延迟引起的系统性T细胞和B细胞恢复的延迟。这些结果表明发生了GVHD引起的免疫抑制。
实施例5：通过实时RT-PCR分析血细胞分化
为了确定骨髓GVHD损伤血细胞分化的哪个阶段，从实施例1中产生的GVHD鼠类模型收获骨髓，通过本技术领域的普通专业人员已知的方法制备总RNA，并通过实时RT-PCR分析参与血细胞分化的因子(CXCL12、Pax5、E2a、Ebf1、IFN-γ、IL-7R、Irf1、GATA3)的mRNA表达。实时RT-PCR通过本技术领域的普通专业人员已知的方法来进行。
图5(A)到(D)显示了通过总骨髓细胞及其c-Kit(+)Sca-1(+)级份的浓缩和分析而获得的结果。在GVHD组中，对B细胞分化和增殖来说必需的转录因子Pax5、E2a和Ebf1的表达明显极度降低。也观察到了淋巴细胞前体分化所需的IL-7R的降低。这些结果表明，由于GVHD发生，B细胞的生产和分化从非常早的阶段开始受到特异性或连续的损害。
实施例6：肠道的免疫组织染色和粪便IgA的ELISA分析
为了理解GVHD对肠道免疫的影响，收集实施例1中制备的GVHD鼠类模型的肠道和粪便，并进行肠道的免疫组织染色和粪便IgA的ELISA测量。免疫组织染色和ELISA分析通过本技术领域的普通专业人员已知的方法来进行。
图6(A)和(B)分别显示了在BMT和GVHD组中移植后第14天时肠道的免疫组织染色图样(×200)和粪便IgA浓度。在GVHD组中与BMT组相比，IgA生产被显著抑制(在免疫组织染色图样中用箭头指示的明亮区域的消失)。粪便IgA的ELISA测量也是同样。这些结果显示，在GVHD中IgA生产受损。
实施例7：GVHD发作时的骨髓病理分析
为实施例1中产生的GVHD鼠类模型制备了移植后第21天的骨髓切片，并进行了苏木精-曙红染色。苏木精-曙红染色通过本技术领域的普通专业人员已知的方法进行。
如图7中所示，在GVHD组中观察到了有核细胞数量(图上由黑色阴影表示的细胞的数量)和红细胞的斑点簇(箭头)数量的明显降低。这些是与GVHD相关的特征性骨髓发现。尽管没有显示，但在GVHD组中，在移植后第28天，骨髓中的出血和血凝块显著，表明正常结构的严重破坏。
同时，尽管没有显示，但在GVHD组中在移植后第21天观察到的细胞结构和出血图片的显著降低，在给药CD4抗体的组中得到改善。具体来说，观察到了有核骨髓数量的恢复以及红细胞斑点簇的减少。应该指出，在上述GVHD鼠类模型中，在每个第4和第6日腹膜内给药一次200μg CD4抗体(GK1.5，Medical & Biological Laboratories)。
实施例8：分析骨髓组织中的GVHD作用位点
为了鉴定骨髓组织中的GVHD作用位点，从实施例1中产生的GVHD鼠类模型收获骨髓，通过本技术领域的普通专业人员已知的方法制备总RNA，并通过实时RT-PCR测量SDF-1(CSCL12)随时间的表达。SDF-1是一种与造血相关的分子，其在造血干细胞和处于各种分化阶段的血细胞前体细胞的增殖和分化位点处与骨髓基质的相互作用过程中是必需的。实时RT-PCR通过本技术领域的普通专业人员已知的方法来进行。
如图8(A)到(D)所示，在GVHD组中表达显著降低。该结果表明，骨髓基质是GVHD的靶。这也得到了GVHD组与BMT组之间B细胞上的SDF-1受体CXCR4的表达没有显著差异的支持，而且得到下述事实的进一步巩固，即甚至在使用源自于含突变Fas的lpr小鼠的骨髓细胞的移植实验中，在GVHD组中也不能恢复B细胞生产。相反，在提供CD4抗体的组中，SDF-1表达的降低随着时间的过去显示出增加的趋势(图8C和8D)。
实施例9：诱导骨髓GVHD的效应分子的鉴定
在造血干细胞移植前一天，对受体小鼠(6周龄雌性C57BL/6×DBA2F1(BDF1，H2d/b))进行致死性辐射(11Gy)，将剂量分成两次相隔3小时使用。辐射过的小鼠作为移植的骨髓接受源自于C57BL/6(B6，H2b)的T细胞贫化的骨髓细胞(5×106个细胞)或源自于含有突变的Fas的lpr小鼠的T细胞贫化的骨髓细胞(5×106个细胞)。在将要诱导GVHD的情况下，小鼠接受正常的野生型(也称为WT)B6脾脏T细胞(5×106个细胞，对CD11b、B220、Ter119和NK1.1进行阴性富集)或各种组合的源自带有突变体FasL的gld小鼠的脾脏T细胞(5×106个细胞，对CD11b、B220、Ter119和NK1.1进行阴性富集)(也称为GVHD组)。含有突变体FasL的gld小鼠和含有突变体Fas的lpr小鼠从Japan SLC，Inc获得。
在图9中，(WT/-)、(lpr/-)、(WT/WT)、(lpr/WT)和(WT/gld)表示移植时的骨髓细胞与脾脏细胞的组合(骨髓/脾脏)。
从相应小鼠组中的每只动物收获骨髓，并通过流式细胞术分析移植后第7日至第28日红细胞分化随时间的变化。流式细胞术通过本技术领域的普通专业人员已知的方法来进行。
正如在图9(A)到(C)中所示，在WT/gld组中观察到了B细胞的部分恢复。该结果显示，供体T细胞的FasL在骨髓GVHD的发作中发挥的作用有限。此外，因为在使用源自于含有Fas的lpr小鼠的骨髓细胞作为被移植的骨髓细胞的lpr/WT组中没有观察到B细胞的恢复，因此存在着FasL的靶是基质细胞而不是红细胞的可能性。此外，即使输入不表达Fas的骨髓时造血也不恢复这一事实，表明骨髓细胞不是被供体T细胞的Fas-FasL途径直接损害，而是作为直接干扰骨髓细胞并对骨髓细胞的分化“场所”发挥必需作用的造血微环境的骨髓基质细胞受到损伤这一可能性。
实施例10：诱导骨髓GVHD的T细胞亚类的鉴定
将实施例7中提到的CD4抗体(200μg)或CD8抗体(53-6.7，Medical and Biological Laboratories)，在移植后每个第4和第6日一次腹膜内给药于实施例1中产生的GVHD鼠类模型，并使用GVHD的改进作为指标，鉴定作为原因的T细胞亚类。
如图10中所示，可以观察到由于给药CD4抗体导致的B细胞的显著恢复，表明CD4是主要效应子。另一方面，没有观察到给药CD8抗体所引起的效应。通过流式细胞术进行的胸腺T细胞分化分析，证实了如图11(A)到(D)所示，通过给药CD4抗体促进了胸腺中原初T细胞的恢复。此外，如图12中所示，在给药CD4抗体时，在移植后第100天观察到了各种类型的免疫球蛋白的恢复。
实施例11：CD4抗体对骨髓GVHD和GVT效应的作用
为了证实给药CD4抗体对GVHD和GVT效应的作用，在骨髓移植前2小时用1×104个P815细胞(源自DBA2小鼠的肥大细胞肿瘤(ATCC：TIB-64))对实施例1中产生的GVHD鼠类模型进行静脉内注射，然后在移植后每个第4和第6日向该模型给药一次200μg抗CD4抗体。对小鼠存活率、GVHD分值和体重的变化进行分析。
如图13A到13C所示，在CD4抗体组中，GVHD被抑制而不损失GVT效应(13B)，并且100％的存活率维持到移植后几乎40天(13A)。在BMT组中，由于肿瘤细胞转移到肝脏和脊髓而引起的肿瘤死亡，在移植后第15到第20天出现。
实施例12：清髓性移植中的CD4抗体疗法
在各种形式的化疗(在各种类型的急性或慢性白血病的情况下，单次给药适量环磷酰胺；在恶性淋巴瘤的情况下，治疗包括适量马法兰、环磷酰胺、拉司太特和地塞米松的任何组合)之后，在移植前1至3日进行12Gy(分步暴露，每日4Gy，共3日)的全身辐射(TBI)，然后进行造血干细胞移植。优选情况下，从移植后第5日至第7日，每日给药一次CD4抗体，总共三次。
实施例13：在非清髓性移植中的CD4抗体疗法
在化疗(氟达拉滨和白消安的组合)之后，在移植前1到2日作为分步暴露进行TBI(2至4Gy)，然后进行造血干细胞移植。接下来，优选在移植后第5到第7日每日一次给药CD4抗体，总共三次。
工业实用性
本发明是有用的，因为它能阻止与同种异体造血干细胞移植相伴的并发症、特别是感染的风险。

Claims (12)

1.CD4抗体或其保持CD4抗体的效果的改变的和/或修饰的形式在制备用于已接受同种异体造血干细胞移植的肿瘤患者的感染预防剂中的应用，所述同种异体造血干细胞移植选自骨髓移植、外周血干细胞移植和脐带血移植，所述感染预防剂维持同种异体造血干细胞移植的移植物抗肿瘤效应。
2.权利要求1的应用，其中CD4抗体是人源化抗人类CD4抗体或人类抗人类CD4抗体。
3.权利要求1的应用，其中肿瘤是造血系统肿瘤。
4.权利要求3的应用，其中造血系统肿瘤是急性白血病、骨髓瘤或恶性淋巴瘤。
5.权利要求1的应用，其中同种异体造血干细胞移植的供体是HLA匹配的亲属供体、HLA匹配的非亲属供体、HLA不匹配的亲属供体或HLA不匹配的非亲属供体。
6.权利要求1的应用，其中同种异体造血干细胞移植是非清髓性移植或清髓性移植。
7.权利要求1的应用，其中在同种异体造血干细胞移植中，移植前治疗包含抗癌药物给药、暴露于辐射或其组合。
8.权利要求1的应用，其中感染是病原性病毒感染、病原性细菌感染、病原性真菌感染或病原性寄生虫感染。
9.权利要求1的应用，其中感染的预防包含改善由于骨髓中的移植物抗宿主反应而延迟的免疫重建。
10.CD4抗体或其保持CD4抗体的效果的改变的和/或修饰的形式在制备用于已接受同种异体造血干细胞移植的肿瘤患者的免疫重建促进剂中的应用，所述同种异体造血干细胞移植选自骨髓移植、外周血干细胞移植和脐带血移植，所述免疫重建促进剂维持同种异体造血干细胞移植的移植物抗肿瘤效应。
11.权利要求1的应用，其中保持CD4抗体的效果的改变的和/或修饰的形式选自CD4抗体的Fab片段，CD4抗体的F(ab)’2片段，CD4抗体的ScFv片段，Sc(Fv)2和双抗体，以及已经添加有细胞毒素或细胞毒性药物的CD4抗体。
12.权利要求11的应用，其中保持CD4抗体的效果的改变的和/或修饰的形式选自CD4抗体的Fab片段，CD4抗体的F(ab)’2片段，CD4抗体的ScFv片段，Sc(Fv)2和双抗体，以及已经添加有细胞毒素或细胞毒性药物的CD4抗体。
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Prevention of lethal graft-vs.-host disease by a single low dose injection of anti-T cell monoclonal antibody to the allograft recipients;Andre C. Knulst et al;《Eur.J.Immunol.》;19911231;第21卷;第104页第2.2栏，第105页第3.5栏，图3 *

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