JPH10501815A

JPH10501815A - 抗原特異的ｔ細胞応答の阻害方法

Info

Publication number: JPH10501815A
Application number: JP8502351A
Authority: JP
Inventors: ブレイザー，ブルース・アール; バレラ，ダニエル・エイ
Original assignee: University of Minnesota
Current assignee: University of Minnesota
Priority date: 1994-06-07
Filing date: 1995-06-07
Publication date: 1998-02-17
Also published as: AU2701895A; CA2191733A1; EP0784482A2; WO1995034320A3; WO1995034320A2

Abstract

(57)【要約】Ｔ細胞における共刺激シグナルを阻害する剤の使用による、抗原特異的Ｔ細胞応答の阻害方法を開示する。好ましくは、Ｔ細胞における共刺激シグナルを阻害する第１の剤（例えば、ＣＴＬＡ４Ｉｇ融合蛋白）およびＴ細胞に対する抗原を提示している細胞へのＴ細胞の付着のごときＴ細胞の別の機能を阻害する第２の剤の両方を用いて抗原特異的Ｔ細胞応答を阻害する。例えば、抗原提示細胞へのＴ細胞の付着を阻害するためには、抗ＬＦＡ−１抗体をＣＴＬＡ４Ｉｇ融合蛋白と組み合わせて使用する。別法として、抗Ｂ７−１抗体または抗Ｂ７−２抗体のごとき、Ｔ細胞における共刺激シグナルを阻害する別の剤を、Ｔ細胞における増殖シグナルを阻害する第２の剤、例えば、抗ＩＬ−２受容体抗体とともに使用することができる。本発明方法は、対宿主移植片疾患の抑制および移植された組織または器官の対する拒絶反応の抑制に特に適する。

Description

【発明の詳細な説明】抗原特異的Ｔ細胞応答の阻害方法政府基金本明細書記載の研究は、米国公衆衛生事業基金ＲＯ１−ＣＡ３１６１８、ＲＯ１−ＣＡ３６７２５、ＰＯ１−ＣＡ２１７３７、ＲＯ１−ＡＩ３４４９５およびＰＯ１−ＡＩ３５２９６により一部援助された。それゆえ、米国政府は本発明において一定の権利を有しうる。発明の背景同種異系骨髄移植（ＢＭＴ）は、多くの血液学的悪性疾患および重篤な再生不良性貧血に対する有効な治療である（例えば、Thomas,E.D.(1983)J.Clin.Oncol. 1:517〜531;O'Reilly,R.J.et al.(1983)Blood62:942〜964；およびStorb,T.et a l.Semin.Hematol.2:27〜34参照）しかしながら、ドナー骨髄中のＴ細胞のレシピエント細胞に対する同種反応性は、対宿主移植片疾患（ＧＶＨＤ）と呼ばれる潜在的に致命的な状況を誘導する。ＧＶＨＤを最小化または除去するための試みにおいて採用された１の治療アプローチは、サイクロスポリンＡまたはメトトレキセートのごとき全身的な免疫抑制剤の移植レシピエントへの投与を包含する（例えば、Kapoor,N.et al.(1989)Bone Marrow Transp1ant.4:153参照）。しかしながら、かかる薬剤の使用は、腎臓のダメージおよび感染に対する感受性の増大を包含する悪い副作用を伴う。ＧＶＨＤを最小化または除去するためのもう１つのアプローチは、同種反応性Ｔ細胞を除去するための試みにおいて、ドナー骨髄からＴ細胞を枯渇させることであった（例えば、Martin,P.J.et al.(1987)Adv.Imm unol.40:379参照）。Ｔ細胞枯渇はＧＶＨＤの発症を減少させることが見いだされているが、この治療はまた骨髄定着の成功を減じる。さらに、血液学的悪性疾患を治療するために用いられるドナー骨髄からのＴ細胞枯渇は、ドナー細胞の抗白血病活性を低下させる（対白血病移植片応答、またはＧＶＬともいう）（例えば、Goldman,J.M.et al.(1988)Ann,Intern.Med,108:806〜814；Marmont,A.M.e t al.(1991)Blood78:2120〜2130参照）。かくして、骨髄移植片中の同種反応性Ｔ細胞はＧＶＨＤ誘導という有害な効果を有するが、移植片中の少なくともいくらかのＴ細胞の存在は、移植片の定着および抗白血病応答の両方に有益である。それゆえ、移植片中の他のＴ細胞の存在または機能を可能にしつつドナー骨髄中の同種反応性Ｔ細胞の応答を有効に阻害する治療は、骨髄定着効果を促進しつつＧＶＨＤの問題を取り扱うことにおいて大いに有利であろう。Ｔ細胞応答の誘導は２つのシグナルを必要とすることが示されている：第１のシグナルはＴ細胞表面上の抗原特異的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を介する刺激により生じるものであり、第２のシグナル（共刺激シグナルという）は１つまたはそれ以上の他のＴ細胞表面受容体の結合により生じるものである。共刺激シグナル（すなわち、シグナル２）不存在下でのＴＣＲ（すなわち、シグナル１）のみの使用は、Ｔ細胞の不応答または無感作を誘導する。細胞表面受容体ＣＤ２８を介する刺激によりＴ細胞において共刺激シグナルを発生させることができる（Hard ing,F.A.(1992)Nature356:607〜609）。ＣＤ２８に対するリガンドは、抗原提示細胞（ＡＰＣｓ）上において同定されている。ＣＤ２８リガンドは、Ｂ７−１（ＣＤ８０）およびＢ７−２（ＣＤ８６）のごときＢ７ファミリーの蛋白のメンバーを包含する（Freedman,A.S.et al.(1987)J.Immunol.137:3260〜3267;Freeman, G.J.et al.(1989)J,Immunol.143:2714〜2722;Freeman,G.J.et al.(1991)J.Exp.M ed.174:625〜631;Freeman,G.J.et al.(1993)Science262:909〜911;Azuma,M.et a l.(1993)Nature366:76〜79;Freeman,G.J.et al.(1993)J.Exp.Med.178:2185〜219 2）。さらに、Ｂ７ファミリーのメンバーは、別のＣＤ２８関連Ｔ細胞上表面受容体（ＣＴＬＡ４という）に結合することが示されている（Linsly,P.S.(1991)J .Exp.Med.174:561〜569;Freeman,G.J.et al.(1993)Science262:909〜911）。Ｔ細胞共刺激に関与する受容体およびリガンドの特徴づけは、Ｔ細胞における共刺激シグナルの遮断による抗原特異的Ｔ細胞非応答性の誘導に基づく治療アプローチにつながった。例えば、心臓同種移植片および膵臓島異種移植片の拒絶反応を抑制するために、Ｂ７−１およびＢ７−２の両方に結合するＣＴＬＡ４Ｉｇ融合蛋白が用いられている（例えば、Turka,L.A.et al.(1992)Proc.Natl.Acad.S ci.USA89,11102〜11105;Lin,H.et al.(1993)J.Exp.Med.178;1801〜1806;Lenscho w,D.J.et al.(1992)Science257:789〜792参照）。同様に、インビトロにおいてＴ細胞増殖およびＩＬ−２産生を阻害し、インビボにおいて抗原に対する初期免疫応答を阻害するために、Ｂ７−１および／またはＢ７−２と反応する抗体が用いられている（Hathcock,K.S.et al.(1993)Science262,905〜907;Azuma,M.et al .(1993)Nature366:76〜79;Powers,G.D.et al.(1994)Cell.Immunol.153,298〜311 ;Chen,C.et al.(1994)J.Immunol.152,2105〜2114）。しかしながら、移植レシピエントの全身的な免疫抑制の必要性を回避し、骨髄移植におけるＴ細胞枯渇の欠点を克服する、移植状況におけるＴ細胞応答を阻害する有効な方法は、やはり必要とされており、普及した治療則となるであろう。発明の概要本発明は、Ｔ細胞における共刺激シグナルを阻害する少なくとも１の剤を用いることによる、抗原に対するＴ細胞応答の阻害方法に関する。本発明は、少なくとも一部には、Ｔ細胞における共刺激シグナルの阻害剤をインビトロまたはインビボで用いて、骨髄および器官の移植のごとき臨床的状況、ならびに自己免疫疾患およびアレルギー応答における抗原に対する不適切なＴ細胞応答を阻害することができるという知見に基づく。好ましくは、Ｔ細胞における共刺激シグナルの阻害剤は、Ｔ細胞上の受容体（例えば、ＣＤ２８および／またはＣＴＬＡ４）とＴ細胞に対する抗原を提示している細胞上の共刺激分子（例えば、Ｂ７−１および／またはＢ７−２）との間の相互作用を阻害する剤である。かくして、共刺激シグナルの阻害剤は、例えば、受容体または共刺激分子に結合する抗体（またはそのフラグメント）、可溶性形態の受容体または共刺激分子、あるいはＴ細胞における共刺激シグナルを阻害するように設計されたペプチドフラグメントまたは他の小型分子であってよい。好ましい阻害剤は、可溶性ＣＴＬＡ４−免疫グロブリン融合蛋白（ＣＴＬＡ４Ｉｇ）または抗Ｂ７−１抗体もしくは抗Ｂ７−２抗体（または抗Ｂ７−１および抗Ｂ７−２抗体の両方）である。本発明方法によれば、抗原特異的Ｔ細胞における共シグナルの少なくとも１つの阻害剤にＴ細胞を接触させることにより、Ｔ細胞応答が阻害される。詳細には、骨髄移植レシピエントにおける対移植片疾患の抑制に使用するために、可溶性形態またはＣＴＬＡ４または抗Ｂ７−１もしくは抗Ｂ７−２抗体を用いてドナーの骨髄をインビトロで治療することができ、そのことにより、抗体をレシピエントに投与する前に、レシピエントの同種抗原を発現している細胞に対するドナーのＴ細胞応答を阻害することができる。本発明のもう１つの態様において、Ｔ細胞における共刺激シグナルの阻害剤（または第１の剤）が少なくとも１の第２の剤と組み合わせて用いられ、第２の剤は、第１の剤と組み合わされた場合、骨髄または器官の移植、ならびに自己免疫疾患およびアレルギー応答における抗原に対する不適切なＴ細胞応答を阻害するものである。１の具体例において、第２の剤は、Ｔ細胞に対する抗原を提示している細胞へのＴ細胞の付着を阻害する。例えば、第２の剤は、Ｔ細胞上の付着分子とＴ細胞の対する抗原を提示している細胞上の付着分子に対するリガンドとの間の相互作用を阻害するように作用する。阻害のための標的とするに適する付着分子およびリガンドは、ＬＦＡ−１、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、ＩＣＡＭ− ３、ＶＬＡ−４、ＶＣＡＭ−１、ＬＥＣＡＭ−１、ＥＬＣＡＭ−１、およびＣＤ４４を包含する。付着分子もしくは受容体に結合する抗体（またはそのフラグメント）、または可溶性形態の付着分子もしくは受容体を、本発明方法において第２の剤として用いることができる。本発明のもう１つの具体例にいおて、Ｔ細胞における共刺激シグナルの阻害剤を、Ｔ細胞における増殖シグナルの発生を阻害する第２の剤とともに使用して、そのことにより、抗原に対するＴ細胞の応答を阻害する。例えば、Ｔ細胞上の受容体とインターロイキン−２またはインターロイキン−４のごときＴ細胞増殖因子との間の相互作用を阻害する剤を、例えば、可溶性形態のＣＴＬＡ４とともに用いることができる。かくして、第２の剤は、Ｔ細胞上の受容体またはＴ細胞増殖因子のいずれかでに結合する抗体（またはそのフラグメント）であってよい。本発明方法に用いる好ましい第２の剤は抗インターロイキン−２受容体（ＩＬ− ２Ｒ）抗体（またはそのフラグメント）である。別法として、第２の剤は、Ｔ細胞における増殖シグナルを阻害するように細胞内で作用するものであってもよい。詳細には、上記剤は、レシピエントの同種抗原を発現している細胞に対するドナーＴ細胞の応答を阻害するためにドナーＴ細胞における共刺激シグナルの発生を阻害する第１の剤（例えば、ＣＴＬＡ４Ｉｇ）およびＴ細胞に対する抗原を提示している細胞へのドナーＴ細胞の付着を阻害する第２の剤（例えば抗ＬＦＡ− １抗体）が投与される骨髄移植レシピエントにおける対宿主移植片疾患の抑制に有用である。レシピエントへの第１および第２の剤の投与のほかに、ドナー細胞のレシピエント中への移植の前に、ドナー細胞（例えば、ドナーの骨髄）を、レシピエント細胞の存在下で第１および第２の剤にインビトロで接触させることができる。好ましくは、まず、第１および第２の剤と接触させる前に、なじませるための段階として、ドナーの細胞をレシピエントの細胞とともにインビトロで培養する。ドナー細胞をレシピエント細胞に対して馴化させること、次いで、レシピエント細胞の存在下で、馴化したドナー細胞をインビトロで第１および第２の試薬に曝露し、次いで、ドナー細胞をレシピエント細胞に投与し、インビボで第１および第２の剤でのレシピエントの処理を継続していくことを包含するこの規則は、骨髄移植レシピエントにおけるＧＶＨＤの抑制に特に有効であることがわかった。別法として、レシピエント細胞の存在下でインビトロでドナー細胞を第１および第２の剤と接触させ（好ましくは、レシピエント細胞の前培養の後に）、次いで、第１および第２の剤でのレシピエントのさらなるインビボ処理を行うことなくレシピエントに投与することができる。本発明方法は、移植レシピエントにおける他のタイプの移植片（例えば、心臓、腎臓、肝臓、肺、皮膚、膵臓島等のごとき器官または組織移植片）に対する拒絶反応を抑制することにも有用である。したがって、上記第１および第２の剤を器官または組織移植レシピエントに投与することができる。第１および第２の剤の投与のほかに、ドナー細胞（造血細胞のごとき）を、移植片の移植の前に馴化させるための段階としてレシピエントに投与することもできる。投与に適する医薬組成物も本発明の範囲内である。１の具体例において、組成物は、医薬上許容される単体中の一定量のヒト・ＣＴＬＡ４−免疫グロブリン融合蛋白または抗ヒトＢ７−１もしくはＢ７−２（または抗ヒト・Ｂ７−１およびＢ７−２抗体の両方）および一定量の抗ヒト・ＬＡＦ−１抗体からなる。もう１つの具体例において、組成物は、医薬上許容される単体中の一定量のヒト・ＣＴＬＡ４−免疫グロブリン融合蛋白または抗ヒト・Ｂ７−１もしくはＢ７−２抗体（または抗ヒト・Ｂ７−１およびＢ７−２抗体の両方）および一定量の抗ヒト・インターロイキン−２受容体抗体からなる。本発明のもう１つの態様は、共刺激分子（例えば、Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７ −３）または共刺激受容体（例えば、ＣＴＬＡ４、ＣＤ２８）に対する第１の結合特異性、および付着分子（例えば、ＬＡＦ−１、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、ＩＣＡＭ−３）または増殖因子受容体（例えば、ＩＬ−２Ｒ）に対する第２の結合特異性を有する新規二重特異的分子に関する。かかる分子を本明細書記載の方法において使用することができる。図面の簡単な説明図１は、インビトロおよびインビボ組み合わせ処理規則を用いて、リン酸緩衝化セイライン（ＰＢＳ）（対照）、ＣＴＬＡ４Ｉｇのみ、ＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＩＬ−２Ｒ、またはＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＬＦＡ−１、のいずれかで処理された骨髄移植（ＢＭＴ）レシピエントマウスの生存率パーセント値をグラフで表したものである。図２は、インビトロおよびインビボ組み合わせ処理規則を用いて、リン酸緩衝化セイライン（ＰＢＳ）（対照）、ＣＴＬＡ４Ｉｇのみ、ＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＩＬ−２Ｒ、またはＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＬＦＡ−１、のいずれかで処理されたＢＭＴレシピエントの平均体重グラム数をグラフで表したものである。図３は、インビトロおよびインビボ組み合わせ処理規則を用いて、リン酸緩衝化セイライン（ＰＢＳ）（対照）、ＣＴＬＡ４Ｉｇのみ、抗ＬＡＦ−１のみ、またはＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＬＡＦ−１、のいずれかで処理されたＢＭＴレシピエントマウスの生存率パーセント値をグラフで表したものである。図４は、インビトロおよびインビボ組み合わせ処理規則を用いて、リン酸緩衝化セイライン（ＰＢＳ）（対照）、ＣＴＬＡ４Ｉｇのみ、抗ＬＡＦ−１のみ、またはＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＬＡＦ−１、のいずれかで処理されたＢＭＴレシピエントの平均体重グラム数をグラフで表したものである。図５は、インビトロ処理前にドナー細胞がレシピエント細胞に馴化されている、あるいは馴化されていない場合にインビトロおよびインビボ組み合わせ処理規則を用いて、リン酸緩衝化セイライン（ＰＢＳ）（対照）、またはＣＴＬＡ４Ｉｇ＋抗ＬＡＦ−１、のいずれかで処理されたＢＭＴレシピエントマウスの生存率パーセント値をグラフで表したものである。図６は、インビトロ処理前にドナー細胞がレシピエント細胞に馴化されている、あるいは馴化されていない場合のインビトロおよびインビボ組み合わせ処理規則を用いて、リン酸緩衝化セイライン（ＰＢＳ）（対照）、またはＣＴＬＡ４Ｉｇ＋抗ＬＡＦ−１、のいずれかで処理されたＢＭＴレシピエントマウスの平均体重グラム数をグラフで表したものである。図７は、インビトロおよびインビボ組み合わせ処理規則を用いてリン酸緩衝化セイライン（ＰＢＳ）（対照）、ＣＴＬＡ４Ｉｇのみ、ＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＩＬ−２Ｒ、またはＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＬＦＡ−１、のいずれかで処理された、あるいはインビトロでＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＩＬ−２Ｒで、インビボでＣＴＬＡ４Ｉｇのみ、のいずれかで処理されたＢＭＴレシピエントマウスの生存率パーセント値をグラフで表したものである。図８は、インビトロおよびインビボ組み合わせ処理規則を用いてリン酸緩衝化セイライン（ＰＢＳ）（対照）、ＣＴＬＡ４Ｉｇのみ、ＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＩＬ−２Ｒ、またはＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＬＦＡ−１のいずれかで処理された、あるいはインビトロでＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＩＬ−２Ｒで、インビボでＣＴＬＡ４Ｉｇのみ、のいずれかで処理されたＢＭＴレシピエントマウスの平均体重グラム数をグラフで表したものである。図９は、未処理ドナー細胞（対照）、あるいはインビトロでＣＴＬＡ４Ｉｇのみまたはパラホルムアルデヒドで固定されたレシピエント細胞で処理されたドナー細胞のいずれかを受容したＢＭＴレシピエントマウスの生存率パーセント値をグラフで表したものである。図１０は、ＰＢＳ（対照）、抗Ｂ７−１抗体、抗７−２抗体、抗Ｂ７−１および抗Ｂ７−２抗体、またはＣＴＬＡ４Ｉｇのいずれかで処理された同種反応性Ｔ細胞レシピエントマウスの生存率パーセント値をグラフで表したものである。図１１は、ＰＢＳ（対照）、抗ＩＦＮ−γ、抗ＩＬ−１２、または抗Ｂ７−１および抗Ｂ７−２抗体のいずれかで処理された同種反応性Ｔ細胞レシピエントマウスの生存率パーセント値をグラフで表したものである。図１２は、ＰＢＳ（対照）；抗Ｂ７−１および抗Ｂ７−２抗体、ｈＣＴＬＡ４Ｉｇ、ラパマイシン、ｍＩＬ−１０、ＩＬ−１２の組み合わせ；抗ＣＤ２および抗ＣＤ４８抗体の組み合わせ；または抗ｇｐ３９抗体のいずれかで処理された同種反応性Ｔ細胞レシピエントマウスの生存率パーセント値をグラフで表したものである。図１３は、抗ＩＣＡＭ−２抗体、抗ｇｐ３９または抗ＬＡＦ−１抗体で処理された場合、あるいはＢＭＴが、抗ＮＫ１.１抗体および補体（抗ＮＫ１.１＋補体）での処理により先ずＮＫ細胞を枯渇させられた場合のＢＭＴレシピエントマウスの生存率パーセント値をグラフで表したものである。発明の詳細な説明本発明は、Ｔ細胞における共刺激シグナルを阻害する少なくとも１つの剤の使用、あるいはＴ細胞に対する抗原を提示している細胞へのＴ細胞の付着を阻害するかまたはＴ細胞における増殖シグナルの発生を阻害する第２の剤と組み合わせて、インビトロおよび／またはインビボでの抗原特異的Ｔ細胞応答の阻害方法に関する。本明細書に用いる語句「Ｔ細胞応答を阻害する、またはＴ細胞応答の阻害」は、抗原へのＴ細胞の曝露によるＴ細胞増殖、リンホカイン分泌またはエフェクター機能（例えば、細胞毒性Ｔ細胞活性の誘導、またはＢ細胞による抗体産生）の誘導のごとき少なくとも１つのＴ細胞応答の減少または実質的な除去をいう。語句「Ｔ細胞応答を阻害する、またはＴ細胞応答の阻害」は、抗原に対するＴ細胞の応答の抑制、ならびに抗原に対するＴ細胞における無応答の誘導を包含し、さらに、本明細書においてはＴ細胞におけるアネルギーの誘導をいう。特定の抗原に対して無応答またはアネルギー性となったＴ細胞は、抗原に再曝露された場合、実質的に低下した、あるいは除去された応答（例えば、増殖および／またはリンホカイン産生）を示す。１の具体例において、同種抗原に対するドナーＴ細胞の応答が阻害されて、骨髄移植レシピエントにおける対宿主移植片疾患の軽減または実質的な除去が行われる。もう１つの具体例において、同種抗原に対するレシピエントＴ細胞の応答が阻害されて、ドナー移植片（例えば、移植された細胞、組織または器官）の拒絶反応が減少または実質的に除去される。本発明方法により抗原に対するＴ細胞応答を阻害するためには、Ｔ細胞を、Ｔ細胞における共刺激シグナルの少なくとも１つの阻害剤、あるいは別の剤との組み合わせに接触させる。「共刺激シグナルの阻害剤」または「共刺激シグナルの発生を阻害する剤」は、Ｔ細胞における第２のシグナルの形成または伝達を妨害、遮断または実質的に除去するものであり、ここにＴ細胞における第２のシグナルは、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介して伝達される第１の抗原特異的シグナルと一緒になって、Ｔ細胞による抗原特異的応答の誘導に必要なものである。典型的には、この第２のまたは共刺激シグナルは、Ｔ細胞に対する抗原を提示している細胞上（例えば、Ｂ細胞上、「プロフェッショナル」な抗原提示細胞上、または単球／マクロファージ、樹皮状細胞もしくはランゲルハンス細胞のごときＡＰＣ上、またはケラチノサイト、内皮細胞、星状細胞、線維芽細胞もしくはオリゴ樹皮状細胞のごときＴ細胞に対する抗原を提示しうる別の細胞タイプ上）のＢ７−１および／またはＢ７−２のごときリガンド（または関連分子、例えばＢ７−３）との相互作用により、ＣＤ２８および／またはＣＴＬＡ４のごときＴ細胞表面受容体（または関連分子）によって伝達される。共刺激分子のもう１つの例は熱安定性抗原（ＨＳＡ）である（Liu,Y.et al.(1992)Eur.J.Immunol.22,2855）。Ｔ細胞表現受容体（例えば、ＣＤ２８）を介してＴ細胞における共刺激シグナルの引き金を引くＢ７−１、Ｂ７−２またはＨＳＡのごときリガンドを、本明細書ではまとめて「共刺激分子」という。かかる共刺激分子が結合するＴ細胞表面受容体（例えば、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４）を、本明細書ではまとめて「共刺激受容体」という。したがって、本発明の１の具体例において、Ｔ細胞における共刺激シグナルの阻害剤は、Ｔ細胞上の受容体とＴ細胞に対する抗原を提示している細胞上の共刺激分子との間の相互作用を阻害する剤である。このタイプの剤は、本明細書において「共刺激遮断剤」ともいい、可溶性形態のＴ細胞上の受容体（または同様に特異的に結合するＴ細胞上の関連受容体）、可溶性形態の共刺激分子、または受容体もしくは共刺激分子のいずれかに結合する抗体（またはそのフラグメント）であってよい。好ましい共刺激阻害剤はＣＴＬＡ４−免疫グロブリン融合蛋白（ＣＴＬＡ４Ｉｇ）、Ｂ７−１およびＢ７−２の両方に結合する可溶性形態のＴ細胞上のＣＴＬＡ４受容体である。もう１つの具体例において、共刺激阻害剤は細胞内で作用して、ＣＤ２８および／またはＣＴＬＡ４に関連したシグナル伝達経路によるＴ細胞中の共刺激シグナルの発生または伝達を阻害する。抗原に対する不適切なＴ細胞応答を阻害するための共刺激シグナルの阻害剤の使用のほかに、別のＴ細胞機能を阻害する第２の剤を用いることができる。１の具体例において、第２の剤は、Ｔ細胞に対する抗原を提示している細胞へのＴ細胞の付着を阻害する。好ましくは、第２の剤は、Ｔ細胞上の付着分子とＴ細胞に対する抗原を提示している細胞（上記細胞タイプのごとき）上の付着分子に対するリガンドとの間の相互作用を阻害する。本明細書の用語「付着分子」とは、第１の機能または主要機能が、他の細胞との細胞の相互作用（例えば、Ｔ細胞とＡＰＣとの間の相互作用）の強さまたは貪欲さを増大させるものである細胞の表面上の分子をいう。したがって、「付着分子に対するリガンド」もまた付着分子と考えらえる（すなわち、第２の剤は、一方がＴ細胞上にあり他方がＴ細胞に対する抗原を提示している細胞上にある２つの付着分子間の相互作用を阻害しうる）。付着分子、またはそのリガンドがさらなる機能（例えば、シグナリング機能）を提供することもありうる。付着分子のファミリーの例はインテグリンおよびセレクチンを包含する。好ましい具体例において、Ｔ細胞応答の阻害に用いられる第２の剤は、インテグリンＬＦＡ−１とそのリガンドＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ− ２および／またはＩＣＡＭ−３との間の相互作用を阻害する。これとは別に、第２の剤は、ＣＤ４９ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅおよび／またはｆもしくは同等物（例えば、ＶＬＡ−１、ＶＬＡ−２、ＶＬΛ−３、ＶＬＡ−４、ＶＬＡ−５、ＶＬＡ−６）、ＣＤ２９（フィブロネクチン受容体；インテグリンベータ１鎖）、ＣＤ４３（ロイコシアリン）、ＣＤ４８（さらなるＬＦＡ−１リガンド）、ＶＣＡＭ−１（ＶＬＡ−４リガンド）、ＣＤ５２（ＣＡＭＰＡＴＨ）、ＣＤ５６（Ｎ−ＣＡＭ）、ＣＤ５９、ＣＤ６１（ＶＮＲのベータ鎖；インテグリンベータ３鎖）、ＣＤ６２Ｐ（Ｐ−セレクチン）、ＬＥＣＡＭ−１（Ｌ−セレクチンまたはＭｅｌ−１４）、ＥＬＡＭ−１（Ｅ−セレクチン）、ＣＤ４４（Ｐｇｐ−１ともいう）、ＣＤ１０３（ＨＭＬ−１；インテグリンａＥサブユニット）、ＣＤ１０４（インテグリンベータ４鎖）、Ｔｈｙ−１およびｇｐ３９のごとき他の付着分子の活性を妨害しうる（付着分子についての議論に関しては、Janeway,C.et al.(1993)Curr .Opin.Immunol.5:313〜323;Mobley,J.L.(1993)Semin.Immunol.5:227〜236;Patel ,D.D.et al.(1993)Semin.Immunol.5:283〜292;Rosen,S.D.et al.(1993)Semin.Im munol.5:237〜247;およびPicker,L.J．and Butcher,E.C.(1992)Ann.Rev.Immunol .10:561〜592参照）。本発明のもう１つの具体例において、Ｔ細胞における増殖シグナルの発生または伝達を阻害する第２の剤と一緒になった共刺激シグナル阻害剤の使用により、不適切なＴ細胞応答の阻害がなされる。「Ｔ細胞における増殖シグナルの発生を阻害する剤」は、Ｔ細胞増殖因子とＴ細胞上の増殖因子受容体との相互作用に関連した細胞内シグナルの形成または伝達を妨害する。したがって、１の具体例において、第２の剤はＴ細胞上の受容体とＴ細胞増殖因子との間の相互作用を阻害する。好ましくは、第２の剤はＴ細胞増殖因子インターロイキン−２（ＩＬ−２）とＴ細胞上のインターロイキン−２受容体（ＩＬ−２Ｒ）との間の相互作用を阻害する。これとは別に、他のＴ細胞増殖因子および／またはそれらの受容体の活性が阻害の標的となりうる。Ｔ細胞の刺激に関与する他のインターロイキンは、インターロイキン−１α、インターロイキン−１β、インターロイキン−１２、インターロイキン−１５およびインターロイキン−Ｔを包含する。さらに、インターフェロンα、βならびにγ、および腫瘍壊死因子αならびにβもＴ細胞刺激能を有する。したがって、これらのサイトカインまたはそれらの受容体を阻害の標的とすることができる。１の具体例において、第２の剤は、Ｔ細胞増殖因子またはＴ細胞上の増殖因子受容体のいずれかに結合する抗体（またはそのフラグメント）である。好ましい第２の剤は抗ＩＬ −２Ｒ抗体、またはそのフラグメントである。もう１つの具体例において、第２の剤は細胞内で作用してＴ細胞中の増殖シグナルの発生を阻害する。上記第２の剤に関して得られた結果をもとに、Ｔ細胞相互作用および／またはＴ細胞活性化に関与する他の表面分子を阻害する他の剤を共刺激阻害剤と組み合わせて用いてＴ細胞応答を阻害することができる。本発明のこれらおよび他の具体例を以下のサブセクションに詳細に説明する。Ｉ．Ｔ細胞応答を阻害するための剤Ａ．抗体本発明の１の具体例において、抗原特異的Ｔ細胞応答の阻害に使用する剤は抗体（またはそのフラグメント）であってよい。本発明方法における使用に適する抗体は当該分野において入手可能であるか（例えば、American Type Culture Co llection,Rockville,MDから入手でき、あるいは例えばBecton-DickinsonもしくはImmunotechから市販されている）、または抗体製造に関する標準的方法により製造できる。本明細書の用語「抗体」とは、免疫グロブリン分子および免疫学的に活性のある免疫グロブリンの一部分、すなわち、抗原に特異的に結合する（免疫反応する）抗原結合部位を含む分子である。構造的には、最も単純な天然に存在する抗体（例えば、ＩｇＧ）は、４本のポリペプチド鎖（ジスルフィド結合により内部結合された２本の重鎖（Ｈ）および２本の軽鎖（Ｌ））からなる。天然に存在する抗体のフラグメントによって抗体の抗原結合機能が発揮されうることが示されている。かくして、これらの抗原結合フラグメントも、用語「抗体」によって呼ばれるものとする。用語「抗体」に包含される結合フラグメントの例は、（i）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなるＦａｂフラグメント；（ii）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（iii）抗体のシングルアームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント；（iv）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ward et al.,(1989)Nature341:544〜546）；（v）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）；および（vi）ヒンジ領域においてジスルフィド架橋により結合した２つのＦａｂフラグメントからなる２価フラグメントであるＦ(ａｂ')₂フラグメントを包含する。抗体を慣用的方法を用いてフラグメント化してもよく、抗体全体に関して記載されたのと同様の方法でフラグメントの有用性についてスクリーニングする。さらに用語「抗体」は、抗原結合部分を有する二重特異的分子およびキメラ分子を包含するものとする。さらにそのうえ、Ｆｖフラグメントの２つのドメインが別個の遺伝子によってコードされていても、組み換え法により、それらを単一蛋白鎖（１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；Bird et al.(1988)Science242:423〜426；およびHuston et.el.(1988)P NAS85:5879〜5883）として製造することを可能にする合成リンカーを製造することができる。かかる１本鎖抗体も、用語「抗体」の範囲内である。本発明方法において標的とされる分子（例えば、共刺激分子、付着分子、増殖因子受容体等）に特異的な抗体を製造するために、適当な免疫原で動物を免疫する。用語「免疫原」は、本明細書においては、蛋白またはペプチドに対する抗体製造のための活性成分として蛋白またはペプチドを典型的に含有している組成物をいう。蛋白またはペプチドを単独で使用してもよく、あるいは担体と結合して抱合体として、またはペプチドポリマーとして使用してもよい。免疫原は、有効な免疫原量のペプチドまたは蛋白（所望により担体に結合した抱合体として）を含有すべきである。当該分野においてよく知られているように、１回分の有効量の免疫原は、とりわけ、接種される動物種、動物の体重および選択した免疫法による。典型的には、免疫原調製物は、１回の免疫量につき約１０マイクログラムないし約５００ミリグラム、好ましくは１回分あたり約５０マイクログラムないし約５０ミリグラムの濃度のペプチドを含有するであろう。免疫用調製物は、希釈剤の一部としてアジュバントを含有してもよい。完全フロイントのアジュバント（ＣＦＡ）、不完全フロイントのアジュバント（ＩＦＡ）およびアラムのごときアジュバントは当該分野においてよく知られており、いくつかのソースから市販されている。可溶性または膜結合いずれの蛋白もしくはペプチドフラグメントも免疫原としての使用に適する。天然ソースから単離されうる、あるいは当該分野で知られた方法により組み換え的に発現された精製形態の蛋白を免疫原として直接使用することができる。天然に存在する形態の蛋白を免疫に使用するかわりに、本発明で使用する抗体が生成の対象とされうる合成ペプチドを用いることができることを、当業者は理解するであろう。精製蛋白を、脂質または炭水化物のごとき非蛋白性物質で共有結合的または非共有結合的に修飾して免疫原性または溶解度を向上させることもできる。別法として、ウイルス粒子、複製するウイルス、または他の微生物に精製蛋白を結合または包含させて免疫原性を向上させることができる。抗体生成の対象とされる表面上の蛋白を発現する細胞全体で動物を免疫することも可能である（例えば、対象表面分子を発現するＴ細胞または抗原提示細胞を免疫原として用いることができる）。さらに別法として、対象蛋白またはペプチドをコードしている核酸（例えば、ＤＮＡ）を、いわゆる遺伝学的免疫のための免疫原として用いることも可能である。かくして、用語「免疫原」は、抗体生成の対象となる蛋白またはペプチドをコードしている核酸も包含するものとする（遺伝学的免疫についての記載に関しては例えば、Tang,D.C.et al.(1992)Nature3 56:152〜154;Eisenbraun,M.D.et al.(1993)DNA Cell Biol.12:791〜797;Wang,B. et al.(1993)DNA Cell Biol.12:799〜805参照）。一般的には、免疫原およびアジュバントの複数回の皮下（ｓｃ）または腹腔内（ｉｐ）注射によりポリクローナル抗体を動物内で生成させる。説明的な具体例として、典型的には、約１μｇないし１ｍｇの蛋白をフロイントの完全アジュバントと混合し、その溶液を複数部位に経皮的に注射することにより、蛋白、ペプチドまたは誘導体に対して動物を免疫する。１カ月後、フロイントの完全アジュバント（または他の適当なアジュバント）中のもとの免疫原量の１／５ないし１／１０を用いて、複数部位に皮下注射により動物に追加免疫する。７ないし１４日後、動物から採血し、特異的抗体力価について血清をアッセイする（例えば、ＥＬＩＳＡにより）。力価のプラトーに至るまで動物に追加免疫する。さらに、アラムのごとき凝集剤を用いて免疫応答を向上させることもできる。かかる哺乳動物により産生される抗体分子の集団を「ポリクローナル」という。なぜなら、集団が免疫原に対して異なる免疫特異性および親和性を有するからである。次いで、抗体分子を動物から集め（例えば、血液から）、蛋白Ａクロマトグラフィーのごときよく知られた方法により単離してＩｇＧフラクションを得る。抗体の特異性を向上させるために、固相固定化免疫原を用いる免疫アフィニテイークロマトグラフィーにより抗体を精製してもよい。免疫原が抗体分子と免疫反応して固相固定化免疫複合体を形成するに十分な時間、抗体を固相固定化免疫原と接触させる。標準的方法により結合抗体を複合体から分離する。本明細書の用語「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」はただ１種の抗原結合部位を有する抗体分子の集団をいう。かくして、典型的には、モノクローナル抗体組成物は、免疫反応する特定の蛋白に対する単一の結合部位を示す。培養における連続細胞系により抗体分子を製造する方法を用いてモノクローナル抗体を製造することができる。これらの方法は、元来Kohlerおよび Milstein(1975,Nature256:495〜497;Brown et al.(1981)J.Immunol127:539〜546 ;Brown et al.(1980)J.Biol.Chem255:4980〜4983;Yeh et.el.(1976)PNAS76:2927 〜2931;およびYeh et al.(1982)Int.J.Cancer29:269〜275も参照）により記載されたハイブリドーマ法およびより最近のヒト・Ｂ細胞ハイブリドーマ法(Kozbor et.el.(1983)Immunol Today4:72)、ＥＢＶ−ハイブリドーマ法（Cole et.el.(19 85),Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,Inc,pp.77〜96）、ならびにトリオーマ法には限られない。かくして、下記工程からなる方法によりモノクローナル抗体を製造することができる：（ａ）蛋白（またはそのペプチド）で動物を免疫する。典型的には、免疫学的にコンピテントな哺乳動物に免疫学的に有効量、すなわち、免疫応答を生じるに十分量の免疫原を投与することにより免疫を行う。好ましくは、哺乳動物はウサギ、ラットまたはマウスのごとき齧歯類である。次いで、哺乳動物が高アフィニティー抗体分子を生じるに十分な時間、哺乳動物を維持する。免疫原蛋白標品を用いて哺乳動物由来の血清をスクリーニングすることにより抗体産生を検出する。これらのスクリーニング法は当業者によく知られており、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）および／またはフローサイトメトリーである。（ｂ）次いで、所望抗体を分泌する各免疫哺乳動物から取った抗体産生細胞の懸濁液を調製する。十分時間後、動物（例えば、マウス）を屠殺し、体性の抗体産生リンパ球を得る。抗体産生細胞はリンパ節、脾臓および免疫動物の末梢血由来のものであってもよい。脾臓細胞が好ましく、当該分野においてよく知られた方法を用いて生理学的耐性培地中で機械的に個々の細胞に分離することができる。マウス・リンパ球は、以下に説明するマウス・ミエローマと高パーセンテージで融合する。ラット、ウサギおよびカエルの体細胞を用いることもできる。一般的にはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のごとき融合剤の存在下で、脾臓細胞をミエローマ細胞と融合させることにより、所望免疫グロブリンをコードしている脾臓細胞染色体を不死化させる。標準的方法によって、多種にわたるいずれのミエローマ細胞系を融合パートナーとして用いてもよく、例えば、Ｐ３−ＮＳ１／１−Ａｇ４−１、Ｐ３−ｘ６３−Ａｇ８.６５３またはＳｐ２／Ｏ−Ａｇ１４ミエローマ系であってもよい。これらのミエローマ系はAmerican Type Culture Collection(ATCC),Rockville,Mdから入手できる。次いで、所望ハイブリドーマを含む得られた細胞をＨＡＴ培地のごとき選択培地中で増殖させ、その中で、融合していない親ミエローマまたはリンパ球細胞は最終的に死滅する。ハイブリドーマ細胞のみが生き残り、限界希釈条件下で増殖して単離クローンを得ることができる。例えば、免疫に使用した抗原を用いるイムノアッセイ法によって、所望特異性の抗体の存在についてハイブリドーマ上清をスクリーニングする。次いで、限界希釈条件下で陽性クローンをサブクローン化し、産生されたモノクローナル抗体を単離することができる。モノクローナル抗体を単離精製して他の蛋白および混入物質をなくすのための種々の慣用的方法がある。モノクローナル抗体の精製に通常に用いられる方法は、硫酸アンモニウム沈殿、イオン交換クロマトグラフィー、およびアフィニティークロマトグラフィー（例えば、Monoclonal Hybridoma Antibodies:Techniques And Application s （Hurell(編)）中５１〜５２頁のZola et.el.の記載（CRC Press 1982）参照）。これらの方法により産生されたハイブリドーマを、当該分野において知られた方法を用いてインビボまたはインビトロで増殖させることができる。一般的には、例えば、研究室の培養容器中で個々の細胞系をインビトロで増殖させることができ、高濃度の単一特異性モノクローナル抗体を含有する培地を、デカンテーション、濾過または遠心分離により集めることができる。別法として、元々の融合のための体細胞およびミエローマを得るために用いたタイプの組織適合動物中にハイブリドーマ試料を注射することによりモノクローナル抗体の収量を向上させることができる。融合細胞ハイブリッドにより産生される特異的なモノクローナル抗体を分泌する腫瘍は注射された動物中で増殖する。腹水または血清のごときその動物の体液は高濃度のモノクローナル抗体を提供する。ヒト・ハイブリドーマまたはＥＢＶ−ハイブリドーマを用いる場合には、マウスのごとき動物中に注射された異種移植片に対する拒絶反応を避ける必要がある。免疫欠損マウスまたはヌードマウスを用いてもよく、あるいは先ず放射線照射されたヌードマウス中にハイブリドーマを固形皮下腫瘍として継代し、インビトロ培養し、プリスタンで馴化した放射線照射ヌードマウス中に腹腔内注射してもよく、該ヌードマウスは大量の特異的ヒト・モノクローナル抗体を分泌する腹水腫瘍を生じる。これらの組成物の製造に有用な培地および動物は当該分野においてよく知られており、かつ市販されており、合成培地、同血統繁殖マウス等を包含する。典型的な合成培地は、４.５ｍｇ／ｌのグルコース、２０ｍＭのグルタミンおよび２０％ウシ胎児血清を補足されたダルベッコの最小必須培地（ＤＭＥＭ；Dulbecco et.el.(1959)Virol.8:396））である。典型的な同血統繁殖マウス株はＢａｌｂ／ｃである。非ヒト対象において産生された抗体をヒトの治療に用いる場合、それらは、種々の程度で外来物であると認識され、免疫応答が患者において生じうる。この問題を最小化または除去するための、全身的な免疫抑制に好ましい１のアプローチは、キメラ抗体、すなわち、非ヒト動物の可変領域とヒトの不変領域を結合した抗体分子を得ることである。かかる抗体は上記モノクローナルおよびポリクローナル抗体の同等物であるが、ヒトに投与された場合にはより免疫原性が少なく、それゆえ、患者により耐えられるものである可能性がある。キメラマウス−ヒトモノクローナル抗体（すなわち、キメラ抗体）を、当該分野に知られた組み換えＤＮＡ法により製造することができる。例えば、ネズミ（または他の種）のモノクローナル抗体分子の不変領域をコードしている遺伝子をヒト・不変領域をコードしている遺伝子で置換する（Robinson et al.国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；Akira et.el.欧州特許出願第１８４１８７号;Taniguchi,M.,欧州特許出願第１７１４９６号；Morrison et al.欧州特許出願第１７３４９４号；Neuberger et al.ＰＣＴ出願ＷＯ８６／０１５３３；Cabi lly et.el.米国特許第４８１６５６７号；Cabilly et al.欧州特許出願第１２５０２３号；Better et al.(1988)Science240:1041〜1043;Liu et al.(1987)PNAS8 4:3439〜3443;Liu et al.(1987)J.Immunol.139:3521〜3526;Sum et al.(1987)PN AS84:214〜218;Nishimnura et al.(1987)Canc.Res.47:999〜1005;Wood et al.(1 985)Nature314:446〜449;およびShaw et al.(1988)J.Natl.Cencer Inst.80:1553 〜1559参照）。抗原の結合に関与しない可変領域の部分をヒト可変領域由来の同等部分で置き換えることによりキメラ抗体をさらに「ヒト化」させることができる。「ヒト化」キメラ抗体についての一般的なレビューは、Morrison,S.L.(1985)Science229: 1202〜1207およびOi et al.(1986)BioTechniques4:214により提供される。それらの方法は、少なくとも１つの重鎖または軽鎖由来の免疫グロブリン可変領域の全部または一部をコードしている核酸配列を単離し、操作し、次いで発現させることを包含する。かかる核酸のソースは当業者によく知られており、例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体産生ハイブリドーマから得ることができる。次いで、キメラ抗体またはそのフラグメントをコードしているｃＤＮＡを適当な発現ベクター中にクローン化することができる。適当な「ヒト化」抗体を、ＣＤＲまたはＣＥＡ置換によっても製造することができる（Winterに付与された米国特許第５２２５５３９号；Jones et al.(1986)Nature321:552〜525;Verhoeyan et al. (1988)Science239:1534;およびBeidler et al.(1988)J.Immunol.141:4053〜4060 参照）。マウスまたは他の種由来のｍＡｂ（モノクローナル抗体）をヒト化させる別法として、ヒト・蛋白の指向されたヒトｍＡｂを得ることができる。ヒト・蛋白またはペプチド免疫原で免疫できる、ヒト・抗体レパートリーを担持しているトランスジェニックマウスが創製されている。次いで、これらの免疫トランスジェニックマウス由来の脾臓細胞を用いて、ヒト・蛋白と特異的に反応するヒト・ｍＡｂを分泌するハイブリドーマを得ることができる（例えば、Wood et al.ＰＣＴ公開ＷＯ９１／００９０６、Kucherlapati et.el.ＰＣＴ公開ＷＯ９１／１０７４１；Lonberg et.el.ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０３９１８；Kay et.el.ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０３９１７；Lonberg,N.et al.(1994)Nature368:856〜859;Green,L.L .et al.(1994)Nature Genet.7:13〜21;Morrison,S.L.et al.(1994)Proc.Natl.Ac ad.Sci.USA81:6851〜6855;Bruggeman et al.(1993)Year Immunol.7:33〜40;Tuai llon et al.(1993)PNAS90:3720〜3724;Bruggeman et al.(1991)Eur.J.Immunol.2 1:1323〜1326参照）。組み換えＤＮＡテクノロジーの当業者によく知られた他の方法によってもモノクローナル抗体を製造することができる。特定の抗原特異性を有する抗体フラグメントを同定し単離するために「組み合わせ抗体ディスプレイ」法と呼ばれる別法が開発されており、これを用いてモノクローナル抗体を製造することができる（組み合わせ抗体ディスプレイの説明については、例えば、Sastry et al.(1989 )PNAS86:5278;Huse et.el.(1989)Science246:1275;およびOrlandi et al.(1989) PNAS86:3833参照）上記のように免疫原で動物を免疫した後、得られたｂ細胞プールの抗体レパートリーをクローン化する。一般的には、オリゴマープライマー混合物およびＰＣＲを用いることによる多種の集団からなる免疫グロブリン分子の可変領域のＤＮＡ配列を直接得るための方法が知られている。例えば、５’リーダー（シグナルペプチド）配列および／またはフレームワーク１（ＦＲ１）配列に対応する混合オリゴヌクレオチドプライマー、ならびに保存的な３’不変領域に対するプライマーを、多くのネズミ・抗体由来の重鎖および軽鎖可変領域のＰＣＲ増幅に使用することができる（Larrick et.el.(1991)Biotechniques11:15 2〜156）。同様の戦略を用いて、ヒト由来のヒト・重鎖および軽鎖可変領域を増幅することができる（Larrick et.el.(1991)Methods:Comparison to Methods in Enzymology2:106〜110）。例示的な具体例として、標準的なプロトコールを用いて、例えば、末梢血細胞、骨髄、または脾臓調製物の活性化Ｂ細胞からＲＮＡを単離する（例えば、米国特許第４６８３２０２号；Orlandi et al.PNAS(1989)86:3833〜3837;Sastry et al.PNAS(1989)86:5728〜5732;およびHuse et al.(1989)Science246:1275〜1281 参照）。重鎖およびκならびにλ軽鎖のそれぞれの不変領域に特異的なプライマー、ならびにシグナル配列に対応するプライマーを用いてｃＤＮＡ第１鎖を合成する。可変領域ＰＣＲプライマーを用いて、重鎖および軽鎖両方の可変領域を、単独または一緒に増幅し、ディスプレイパッケージを得るさらなる操作のために適当なベクター中に結合する。増幅プロトコールにおいて有用なオリゴヌクレオチドプライマーはユニークなものであってもよく、あるいは縮重位置にイノシンを含んでいてもよい。制限エンドヌクレアーゼ認識配列がプライマーに含まれていて、ベクター中の発現のための前以て決められた読み枠中への増幅されたフラグメントのクローニングを可能にするものであってもよい。免疫により得られた抗体レパートリーからクローン化されたＶ−遺伝子ライブラリーを、ディスプレイパッケージの集団、好ましくは糸状菌由来のディスプレイパッケージによって発現させて抗体ディスプレイライブラリーを形成することができる。理想的には、ディスプレイパッケージは、大多数の種々の抗体ディスプレイライブラリーのサンプリング、各アフィニティー分離ラウンド後の迅速なソーティング、および精製されたディスプレイパッケージからの抗体遺伝子の容易な単離を可能にする。ファージディスプレイライブラリーを得るための市販キット（例えば、PharmaciaのRecombinant Phage Antibody System、カタログ番号２７−９４００−０１；およびStratageneのSurfZapTMファージディスプレイキット、カタログ番号２４０６１２）のほかに、種々の抗体ディスプレイライブラリーを得る使用に特に適した方法および試薬の例は、例えば、Ladner et al.米国特許第５２２３４０９号；Kang et al.国際公開ＷＯ９２／１８６１９；Dower e t al.国際公開ＷＯ９１／１７２７１；Winter et al.国際公開ＷＯ９２／２０７９１；Markland et al.国際公開ＷＯ９２／１５６７９；Breitling et al.国際公開ＷＯ９３／０１２８８；McCafferty et al.国際公開ＷＯ９２／０１０４７；Garrard et al.国際公開ＷＯ９２／０９６９０；Ladner et al.国際公開ＷＯ９０／０２８０９；Fuchs et al．（１９９１）Bio/Technology2:1370〜1372;Ha y et al.(1992)Hum Antibod Hybridomas3:81〜85;Huse et al.(1989)Science246 :1275〜1281;Griffths et al.(1993)EMBO J12:725〜734;Hawkins et al.(1992)J Mol Biol226:889〜896;Clackson et al.(1991)Nature352:624〜628;Gram et al .(1992)PNAS89:3576〜3580;Garrard et al.(1991)Bio/Technology9:1373〜1377; Hoogenboom et al.(1991)Nuc Acid Res19:4133〜4137;およびBarbas et al.(199 1)PNAS88:7978〜7982おいて見いだされる。ディスプレイパッケージ（例えば、糸状菌ファージ）の表面上にディスプレイされたら、抗体ライブラリーを蛋白またはペプチドもしくはそのフラグメントでスクリーニングして、当該蛋白に特異性を有する抗体を発現するパッケージを同定し単離する。選択された抗体をコードしている核酸をディスプレイパッケージから（例えば、ファージゲノムから）回収し、標準的組み換えＤＮＡ法により他の発現ベクター中にサブクローン化することができる。ファージディスプレイライブラリースクリーニングのアプローチのもう１つの具体例において、重鎖および軽鎖のＶ領域ドメインを同じポリペプチド上に発現させ、フレキシブルリンカーにより結合して１本鎖Ｆｖフラグメントを形成し、次いで、ｓｃＦｖ遺伝子を所望発現ベクターまたはファージゲノム中にクローン化する。McCafferty et al.Nature(1990)348:552〜554において一般的に記載されているように、フレキシブルリンカー（Ｇｌｙ₄−Ｓｅｒ）により結合されている抗体の完全なＶ_HおよびＶ_Lドメインを用いて、抗原アフィニティーに基づいてディスプレイパッケージを分離可能にする１本鎖抗体を製造することができる。次いで、特定の抗原と反応する単離ｓｃＦｖ抗体を、本発明方法に用いるための医薬調製物中に処方することができる。Ｂ．可溶性蛋白および融合蛋白本発明のもう１つの具体例において、Ｔ細胞応答を阻害するための用いる剤は、可溶性形態のＴ細胞の表面上の分子（例えば、共刺激受容体、増殖因子受容体または付着分子）またはＴ細胞に対する抗原を提示する細胞の表面上の分子（例えば、共刺激分子または付着分子）である。この可溶性蛋白は、分子の表面形態とそのリガンドとの間の相互作用を阻害（および／または同様の結合特異性を有する関連表面分子とそのリガンドとの間の相互作用を阻害）する。例えば、可溶性形態のＣＴＬＡ４、Ｂ７−１および／またはＢ７−２を用いることができる。本明細書記載の方法における使用について好ましい第１の剤は、Ｂ７−１およびＢ７−２の両方に結合し、Ｂ７−１およびＢ７−２と、ＣＤ２８および／またはＣＴＬＡ４との相互作用を阻害しうる可溶性形態のＣＴＬＡ４分子（詳細には、ＣＴＬＡ４−免疫グロブリン融合蛋白）である。当該分野において知られた標準的な組み換えＤＮＡおよび蛋白発現法を用いて可溶性形態の表面結合蛋白を製造することができる。対象とする表面結合蛋白の細胞外ドメイン（またはその一部）をコードしているヌクレオチド配列からなる核酸（すなわち、トランスメンブランおよび細胞質ドメインのヌクレオチド配列を欠くもの）を単離し、原核細胞または真核細胞いずれかでの発現のための標準的な発現ベクター中にクローン化することができる。発現ベクターを適当な宿主細胞中（例えば、原核細胞での発現にはイー・コリ（E.coli）；真核細胞での発現には酵母または哺乳動物細胞、例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯもしくはＮＳＯ細胞）に導入し、細胞を培養して細胞中でのコードされている蛋白の発現を可能にする。次いで、集めた宿主細胞から、あるいは蛋白が細胞から分泌される場合には細胞が培養された培地から、標準的方法によって蛋白を精製する。表面結合蛋白の細胞外ドメイン（またはその一部）を、組み替え的に非融合蛋白として発現させることができ、より好ましくは、第２の蛋白またはポリペプチドとの融合蛋白として発現させる。本明細書の用語「融合蛋白」とは、第２の異種ポリペプチドに作動可能に結合した第１のポリペプチドからなる蛋白をいう。本発明方法における剤として用いられる好ましいタイプの融合蛋白は免疫グロブリン融合蛋白（例えば、ＣＴＬＡ４Ｉｇ）である。用語「免疫グロブリン融合蛋白」とは、第２の異種ポリペプチドが免疫グロブリン不変領域またはその一部である融合蛋白をいう。免疫グロブリン融合蛋白は当該分野において十分に説明されており(例えば、Caponらによる米国特許第５１１６９６４号；Capon,D.J.et a l.(1989)Nature337:525〜531；およびAruffo,A.et al.(1990)Cell61:1303〜1313 )、典型的には、少なくとも、免疫グロブリン重鎖の不変領域の機能的に活性なヒンジ領域、ＣＨ₂およびＣＨ₃ドメイン（例えば、ヒト・Ｃγ１）を包含する。Ｂ７−１−Ｉｇ融合蛋白およびＣＤ２８Ｉｇ融合蛋白の構築は、Linsley,P.S.et al.(1991)J.Exp.Med.173:721〜730に詳細に記載されている。ＣＴＬＡ４Ｉｇ融合蛋白の構築は、Linsley,P.S.et al.(1991)J.Exp.Med.174:561〜569およびGimm i,C.D.et al.(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6586に詳細に記載されている。Ｃ．二重特異的な剤本発明のもう１つの態様は、骨髄移植および器官移植のごとき臨床的状況、ならびに自己免疫疾患およびアレルギー応答における抗原に対する不適切なＴ細胞応答の阻害に使用する新規二重特異的な剤に関する。Ｔ細胞に対する抗原を提示している細胞へのＴ細胞の付着を阻害する、あるいはＴ細胞における増殖シグナルの発生を阻害するもう１つの剤とともにＴ細胞における共刺激シグナルを阻害する剤をインビトロまたはインビボで用いることができるという知見に部分的に基づいて、両方の剤の機能を有する新規二重特異的な剤または分子を設計し、製造することができる。したがって、共刺激分子または共刺激受容体に対する第１の結合特異性および付着分子に対する第２の結合特異性を有する二重特異的な剤は本発明の範囲内である。Ｂ７−１またはＢ７−２のごとき共刺激分子に対する第１の結合特異性は、抗Ｂ７−１抗体もしくはそのフラグメント、または抗Ｂ７ −２抗体もしくはそのフラグメントによって与えられうる。別法として、Ｂ７− １およびＢ７−２の両方に結合する単一抗体を用いることもできる。好ましくは、Ｂ７−１およびＢ７−２に対する第１の結合特異性は、Ｆｖフラグメント（すなわち、抗体全体のうちのＶ_HおよびＶ_L）によって与えられる。さらに、Ｂ７−１またはＢ７−２への結合特異性は、ＣＴＬＡ４Ｉｇ融合蛋白によっても与えられうる。もう１つの具体例において、第１の結合特異性は、ＣＤ２８またはＣＴＬＡ４のごとき共刺激受容体に対するものである。この具体例において、ＣＤ２８またはＣＴＬＡ４結合特異性は、抗ＣＤ２８抗体もしくはそのフラグメント（例えば、Ｆｖフラグメント）または抗ＣＴＬＡ４抗体もしくはそのフラグメント（例えば、Ｆｖフラグメント）によって与えられる。共刺激分子または共刺激受容体に対する結合特異性のほかに、本発明の二重特異的な剤は、ＬＡＦ−１（上記）のごとき付着分子またはインターロイキン−２受容体（ＩＬ−２Ｒ）もしくは他の増殖因子の受容体のごとき増殖因子の受容体に対する第２の結合特異性を有する。かくして、第２の結合特異性は、可溶性形態の付着分子／増殖因子受容体（例えば、ＬＦＡ−１Ｉｇ融合／ＩＬ−２Ｉｇ融合）、または付着分子／増殖因子受容体もしくは付着分子リガンドと特異的に反応する抗体、またはそのフラグメント（例えば、Ｆｖフラグメント）によって提供されうる。二重特異的抗体の製造方法のごとき標準的方法により、本発明の新規二重特異的な剤を製造することができる。例えば、２つの異なる特異性を有する２つのハイブリドーマの融合により、二重特異的抗体を製造することができる（例えば、 Milstein,C.and Cuello,A.C.(1983)Nature305:537〜540参照）。別法として、例えば、２つの抗体のヒンジシステイン残基の化学的架橋により（例えば、Shalab y,M.R.et al.(1992)J.Exp.Med.175:217〜225参照）またはダイマー化を促進するＣ末端ペプチドを含めることにより（例えば、Kostelny,S.A.et al.(1992)J.Imm unol.148:1547〜1533；およびPack,P.et al.(1992)Biochemistry31:1579〜1584 ）、組み換え二重特異的フラグメントを製造することができる。２つの結合した抗体Ｆｖフラグメント（すなわち、Ｖ_HおよびＶ_L領域）からなる二重特異的な剤を、Hollinger,P.et al.(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444〜6448に記載のごとく製造することができる。さらに、標準的な組み換えＤＮＡ法または化学的架橋法によって、免疫グロブリン融合蛋白のごとき融合蛋白（例えば、ＣＴＬＡ４Ｉｇ、Ｂ７−１−ＩｇまたはＢ７−２−Ｉｇ）を二重特異的な剤中に取り込むことができる。例えば、融合蛋白の免疫グロブリン不変領域を、第２の結合特異性を有する第２の分子（例えば、抗体またはそのフラグメント）に結合することができる。Ｄ．さらなる遮断剤抗体（またはそのフラグメント）、可溶性受容体またはリガンド（またはその一部）、もしくは二重特異的形態のこれらの分子のほかに、細胞表面分子間の相互作用を阻害する他の分子も、Ｔ細胞応答の阻害に使用することに関して本発明の範囲内である。例えば、受容体と共刺激分子との間の相互作用を阻害するペプチド、ペプチド模倣物、または他の形態の小型分子（薬剤のごとき）を用いてＴ細胞における共刺激シグナルを阻害することができる。同様に、Ｔ細胞に対する抗原を提示している細胞へのＴ細胞の付着を阻害、あるいはＴ細胞増殖因子とＴ細胞上のその受容体との間の相互作用を阻害するペプチド、ペプチド模倣物、または他の形態の小型分子（薬剤のごとき）を第２の剤として共刺激阻害剤とともに用いてＴ細胞応答を阻害することができる。Ｅ．細胞内の剤記載する方法の他の具体例において、細胞内で作用して特定のシグナル伝達経に関連した細胞内シグナルの精製を妨害する剤を用いてＴ細胞応答を阻害することができる。例えば、本明細書記載の共刺激阻害剤は、ＣＤ２８またはＣＴＬＡ４に関連したシグナル伝達経路を阻害するように細胞内で作用する剤でありうる。ＣＤ２８刺激はＴ細胞における蛋白のチロシンのホスホリレーションを引き起こすことが示されている（例えば、Vandenberghe,P.et al.(1992)J.Exp.Med.175 :951〜960;Lu,Y.et al.(1992)J.Immunol.149:24〜29）。したがって、ハービマイシンＡのごときチロシンキナーゼ阻害剤を第１の剤として使用してＣＤ２８関連シグナル伝達経路を阻害し、そのことにより、Ｔ細胞における共刺激シグナルの発生を阻害することができる。別法として、Ｔ細胞における蛋白チロシンホスファターゼ活性を刺激する剤を用いてＣＤ２８関連シグナル伝達経路を阻害して、そのことにより、蛋白チロシンホスホリレーションの正味の量を減少させることもできる。例えば、細胞チロシンホスファターゼＣＤ４５に指向された抗体を用いて、その表面にＣＤ４５を発現するＴ細胞におけるチロシンホスファターゼ活性を刺激することができる。ＣＤ２８ライゲーションに関連していると報告されている他の細胞内シグナルは、増大したホスホリパーゼＣ活性（例えば、Nunes,J. et al.(1993)Biochem.J.293:835〜842参照）および上昇した細胞内カルシウムレベル（例えば、Ledbetter,J.A.et al.(1990)Blood75:1531〜1539参照）を包含する。したがって、ホスホリパーゼＣ活性を阻害および／または細胞内カルシウムレベルの上昇を阻害する剤を用いて、Ｔ細胞における共刺激シグナルの発生を阻害することができる。さらに、あるいは別法として、Ｔ細胞における増殖シグナルの発生を阻害する第２の剤（共刺激阻害剤と組み合わせて用いられる）は細胞内で作用して、Ｔ細胞増殖因子（例えば、ＩＬ−２）とその受容体（例えば、ＩＬ−２Ｒ）との相互作用に関連した細胞内シグナルの形成を妨害することができる。インターロイキン−２は、Ｔ細胞におけるチロシンのホスホリレーションを誘導すると報告されている（例えば、Mills,G.et al.(1990)J.Biol.Chem.265:3561〜3567）。したがって、ハービマイシンＡのごときチロシンキナーゼ阻害剤を用いて、Ｔ細胞における増殖シグナルの発生を阻害することができる。さらに、サイクロスポリンＡのごときある種の免疫抑制剤は、少なくとも一部には、Ｔ細胞によるＩＬ−２産生を阻害することによって機能し、そのことにより、Ｔ細胞の正常なオートクリン増殖機構を妨害する。かくして、ＩＬ−２または他のＴ細胞増殖因子の産生または機能を阻害する薬剤は、Ｔ細胞における増殖シグナルの発生を阻害の有用でありうる。Ｆ．組成物Ｔ細胞応答を阻害するための本明細書記載の方法によって使用される第１および第２の剤を、対象へのインビボ投与に適した医薬組成物中に処方することができる。したがって、本発明のもう１つの態様は医薬組成物に関する。本発明の好ましい組成物は、Ｔ細胞応答の阻害に有効な量のＣＴＬＡ４Ｉｇ融合蛋白ならびに抗ＬＦＡ−１抗体、および医薬上許容される担体からなる。本発明のもう１つの好ましい組成物は、Ｔ細胞応答の阻害に有効な量のＣＴＬＡ４Ｉｇ融合蛋白ならびに抗ＩＬ−２Ｒ抗体、および医薬上許容される担体からなる。本発明の剤を、インビボでの薬剤投与に適した生物学的に矛盾しない形態にして対象に投与してＴ細胞応答を阻害する。「インビボでの薬剤投与に適した生物学的に矛盾しない形態」は、投与される蛋白の形態であって、リガンドの治療効果が毒性効果を上回っているものをいう。用語「対象」は、免疫応答が誘導されうる生物、例えば、哺乳動物を包含するものとする。対象の例は、ヒト、サル、イヌ、ネコ、マウス、ラット、およびそれらのトランスジェニック種を包含する。治療上有効量の本明細書記載の剤の投与は、所望結果を得るために必要な用量および期間における有効量と定義する。例えば、治療上有効量の抗ＬＦＡ−１抗体または抗ＩＬ−２Ｒ抗体と一緒になったＣＴＬＡ４Ｉｇ融合蛋白の治療上有効量を、個体の疾病状態、年齢、性別、ならびに体重のごとき因子、および融合蛋白および抗体の個体における所望応答誘導能によって変化させることができる。投与規則を調整して最適治療応答を得ることができる。例えば、数回分に分けた用量を毎日投与してもよく、あるいは治療状況に応じて用量を減少させてもよい。活性な剤（例えば、抗体および／または融合蛋白）を、注射（皮下注射、静脈注射等）、経口投与、吸入、経皮適用、または直腸投与のごとき便利な方法で投与することができる。投与経路によっては、化合物を不活性化させうる酵素、酸および他の自然条件から化合物を防御するための材料で活性化合物を被覆してもよい。非経口的投与以外によって剤を投与するためには、その不活性化を防止するための材料で剤を被覆する必要があり、あるいは該材料とともに剤を共投与する必要がある。適当な担体または希釈剤とともに剤を個体に投与してもよく、あるいは酵素阻害剤とともに共投与してもよく、あるいはリポソームのごとき適当な担体に入れて投与してもよい。医薬上許容される希釈剤は、セイラインおよび水性緩衝液を包含する。酵素阻害剤は、膵トリプシンインヒビター、ジイソプロピルフルオロホスフェート（ＤＥＰ）およびトラシロールを包含する。リポソームは、水中油中水エマルジョン（water-in-oil-in-water emulsion）ならびに慣用的なリポソーム（Strejan et al.(1984)J.Neuroimmunol.7:27）を包含する。グリセロール、液体ポリエチレングリコール、ならびにそれらの混合物中、および油中に分散物を調製することもできる。通常の貯蔵および使用条件下では、微生物の増殖を防止するために、これらの調製物は保存料を含有していてもよい。注射用途に適する医薬組成物は、滅菌水溶液（水溶性）または分散物および即座に滅菌注射可能溶液もしくは分散物を調製するための滅菌粉末を包含する。すべての場合において、組成物を滅菌しなければならず、シリンジから排出できる程度の流体でなくてはならない。組成物は、製造および保存の条件下で安定でなければならず、細菌および真菌のごとき微生物のコンタミネーション作用に対抗して保存されなければならない。担体は、例えば、水、等張緩衝化セイライン溶液エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール等）、およびそれらの適当な混合物を含有する溶媒または分散媒であってよい。例えば、レシチンのごときコーティングを用いることにより、分散物の場合には必要な粒子サイズ維持することにより、そして界面活性剤を用いることにより、適当な流動性を維持することができる。種々の抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール等により、微生物の作用の防止を行うことができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖類、マンニトール、ソルビトールのごとき多価アルコール、塩化ナトリウムを組成物に含有させることが好ましいであろう。吸収を遅延させる剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物中に含有させることにより、注射可能組成物の吸収の延長を引き起こすことができる。必要に応じて上記の１の成分またはその組み合わせを伴った所望量の溶媒中に活性ある剤を含有させ、次いで、滅菌濾過することによって滅菌注射可能溶液を調製することができる。一般的には、基本分散媒および必要とされる上記他の成分を含有する滅菌担体中に活性化合物を含有させることにより分散物を調製する。滅菌注射可能溶液を調製するための滅菌粉末の場合には、好ましい調製方法は真空乾燥および凍結乾燥であり、それらは、さらなる所望成分を伴った活性成分（例えば、抗体）の粉末を、その前以て滅菌濾過しておいた溶液から調製するものである。上記のように活性化合物が適当に保護される場合には、例えば、不活性希釈剤または同化可能かつ摂食可能な担体とともに化合物を経口投与してもよい。本明細書に用いる「医薬上許容される担体」は、いずれかおよびすべての溶媒、分散媒、コーティング剤、抗細菌剤ならびに抗真菌剤、等張剤および吸収延長剤等を包含する。医薬上活性のある物質についてのかかる媒体および剤の使用は当該分野においてよく知られている。慣用的な媒体または剤が活性化合物に適合しない場合を除き、治療組成物におけるその使用が企図される。補助的な活性化合物を組成物中に含有させることもできる。分量の投与および均一化を容易にするために１回分の剤型として非経口組成物を処方することが特に有利である。本明細書に用いる「１回分の剤型」は、治療すべき哺乳動物対象への１回毎の適用に適した物理的に別々になった単位をいい、各単位は、必要な医薬担体と一緒になった、所望治療効果を生じるように計算された前以て決定された量の活性化合物を含有する。本発明の１回分の剤型に関する詳細は、（ａ）活性化合物の独特の特徴および達成すべき個々の治療効果、および（ｂ）個体における感受性の治療のためのかかる活性化合物の調合の分野における固有の制限により決定され、それらに直接的に左右される。II ．本発明の利用本発明方法を用いて、Ｔ細胞を共刺激阻害剤、所望により本明細書記載の第２の剤と接触させることにより、Ｔ細胞応答をインビトロまたはインビボにおいて阻害することができる。したがって、本明細書の用語「接触させ」は、Ｔ細胞を第１および第２の剤とともにインキュベーション（培養）し、第１および第２の剤を対象に投与することを包含するものとする。本発明方法は、以下のサブセクションにさらに詳述するような所望でないＴ細胞応答を阻害することが望ましい治療状況において有用である。さらに、実施例に示すように、本発明方法は、治療中止後に持続するＴ細胞における抗原無応答性を誘導する（すなわち、第１および第２の剤の投与の中止後、抗原無応答性はインビボで持続する）。かくして、本発明方法はＴ細胞アネルギーの誘導に有用であり、そのことにより、付随する有害な副作用を有する長期にわたる全身的な免疫抑制を必要とせずに、種々の臨床的状況におけるＴ細胞の長期阻害のための手段を提供する。Ａ．骨髄移植−ＧＶＨＤの阻害本発明方法は、同種異系骨髄移植により生じる対宿主移植片疾患の抑制に特に有用である。骨髄移植片中の成熟ドナーＴ細胞の存在は移植片の定着および白血病対移植片応答の両方に対して有益であることがすでに観察されている。しかしながら、移植片中の成熟ドナーＴ細胞の存在はＧＶＨＤを誘導する。実施例に示すように、共刺激阻害剤（例えば、ＣＴＬＡ４Ｉｇのごとき共刺激遮断剤）の使用により、あるいは共刺激阻害剤と、さらにドナーＴ細胞機能を阻害する第２の剤との同時使用により、同種異系ドナーＴ細胞の応答を阻害することが可能である。かくして、これらの治療は、成熟Ｔ細胞が移植されたドナー細胞中に存在することを許可し、かくして、ＧＶＨＤを回避し、骨髄移植の移植片定着を促進する。そのうえ、同種抗原に対するＴ細胞の無応答性が誘導され、そのことにより、骨髄移植レシピエントに対する連続的治療の必要なく、長期にわたるＴ細胞応答の阻害が行われる。骨髄移植状況において阻害されるＴ細胞は、移植前にインビトロで利用可能なドナーＴ細胞であるので、インビトロ、インビボ、または最も好ましくはインビトロ／インビボ組み合わせ処理規則（実施例参照）において同種反応性ドナーＴ細胞応答を阻害することができる。したがって、１の具体例において、インビトロにおいてドナーＴ細胞の集団を（移植前に）、１）レシピエントの同種抗原を発現している細胞の第２の集団（レシピエントの同種抗原、例えば、主要もしくは副組織適合性抗原を共有している別のソース由来のレシピエント細胞または細胞）、および２）ドナーＴ細胞における共刺激シグナルを阻害する剤、と接触させることにより骨髄移植レシピエントにおける対宿主移植片疾患を抑制する。もう１つの具体例において、ドナーＴ細胞を、上記１）および２）、ならびに３）レシピエントの同種抗原を発現している細胞に対するドナーＴ細胞の付着を阻害するか、あるいはドナーＴ細胞における増殖シグナルの発生を阻害する第２の剤と接触させる。１の具体例において、共刺激シグナルを阻害する剤（すなわち、第１の剤）はＣＴＬＡ４Ｉｇ融合蛋白である。もう１つの具体例において、第１の剤は抗Ｂ７−１または抗Ｂ７−２抗体（またはそれらのフラグメント）であるか、あるいは抗Ｂ７−１および抗Ｂ７−２抗体の両方（またはＢ７−２およびＢ７−２の両方に結合する単一抗体）である。１の具体例において、第２の剤は抗ＬＦＡ−１抗体または抗ＩＬ−２Ｒ抗体のいずれかである。レシピエントの同種抗原を発現する細胞の第２の集団は、典型的には、それらが増殖できない、および／または代謝的に活性でないように処理され、例えば、細胞は放射線照射され、および／またはパラホルムアルデヒド処理される。本発明方法において、阻害剤と接触したドナー細胞の集団は成熟ドナーＴ細胞を含んでいる。したがって、本発明方法において使用されるドナー細胞の集団は、例えば、Ｔ細胞が枯渇していない、レシピエント中に移植されるべき骨髄細胞自体であってよい。別法として、あるいはさらに、成熟ドナーＴ細胞のソースはドナー末梢血細胞、脾臓細胞または他の適当なドナーＴ細胞のソースであってよい。非骨髄Ｔ細胞（例えば、末梢血Ｔ細胞または脾臓細胞）を、阻害剤と接触される成熟Ｔ細胞のソースとして用いる場合、引き続いて行う骨髄移植の移植片は骨髄細胞および非骨髄細胞の混合物である（すなわち、骨髄細胞は、同種反応性が阻害されている成熟ドナーＴ細胞と一緒になっている）。ならされたＴ細胞は、馴化されていないＴ細胞よりも阻害剤による阻害を受けやすい（実施例の実験例３参照）。したがって、好ましい具体例において、インビトロ処理規則は、阻害剤をインビトロ培養物に添加する前に、阻害剤の不存在下においてインビトロでレシピエント細胞とともにドナー細胞を培養することを包含する。例えば、典型的な混合リンパ球反応（ＭＬＲ）においてレシピエント同種抗原を発現している細胞の第２の集団とともにドナー細胞（ドナーＴ細胞を含む）を培養する。同種反応性Ｔ細胞の誘導に適する時間、例えば１ないし３日細胞を培養する。この工程は、レシピエント同種抗原に対してドナー同種反応性Ｔ細胞を馴化させることに役立つ。この馴化工程後、レシピエント中への細胞移植前に、阻害剤を数時間にわたり培養物に添加することができる。レシピエント同種抗原を発現している細胞および阻害剤とともにドナー細胞をインビトロ培養した後（好ましくは、ドナー細胞をレシピエント同種抗原に対してならした後）、ドナー細胞をレシピエントに投与する（インビトロ培養に使用するドナー細胞が骨髄細胞を含まない場合、例えば、末梢血細胞または脾臓細胞を成熟ドナーＴ細胞のソースとして使用する場合には、Ｔ細胞枯渇骨髄細胞をレシピエントに投与することもできる）。もう１つの具体例において、インビトロ処理およびドナー細胞のレシピエントへの投与の後、さらにレシピエントを阻害剤でインビボ処理する。すなわち、共刺激阻害剤を、単独で、あるいは付着遮断剤または増殖遮断剤のごとき第２の剤とともに、レシピエントに投与することができる。別法として、第２の剤を単独でレシピエントに投与することもできる。もう１つの具体例においては、レシピエントを阻害剤で処理するだけである（すなわち、レシピエントに剤を投与することによる）。この具体例において、ドナーおよびレシピエント細胞のインビトロ培養、および１またはそれ以上の阻害剤でのその処理が省略される。Ｂ．組織および器官の移植本発明方法を、組織または器官（例えば、膵臓島、皮膚、心臓、肝臓、肺、腎臓等）中に存在するような同種異系細胞の移植のごとき他の移植状況にも適用でき、レシピエントによる同種異系細胞の拒絶反応を抑制することができる。移植レシピエントにおける同種異系細胞の拒絶反応を阻害するためには、２つの剤の組み合わせをレシピエントに投与する：１）レシピエントＴ細胞において共刺激シグナルを阻害する第１の剤、および２）レシピエントＴ細胞に対する抗原を提示する細胞に対するレシピエントＴ細胞の付着を阻害するか、あるいはレシピエントＴ細胞における増殖シグナルを阻害する第２の剤である。例えば、第１の剤はＣＴＬＡ４Ｉｇ融合蛋白、抗Ｂ７−１抗体または抗Ｂ７−２抗体（またはＢ７ −１およびＢ７−２の両方に結合する抗体）であってよい。第２の剤は、例えば、抗ＬＦＡ−１抗体または抗ＩＬ−２Ｒ抗体のいずれかであってよい。上で議論したように、馴化された同種反応性細胞は、馴化されていないＴ細胞よりも、第１および第２の剤の組み合わせによる阻害を受けやすいので、移植レシピエントにおける移植片に対する拒絶反応の抑制方法は、ドナー同種抗原に対してレシピエントＴ細胞を馴化させるために、組織または器官移植片の移植に先立ってレシピエントにドナー細胞（例えば、ドナー造血細胞）を投与することを包含する前処理工程を包含しうる。この前処理の後、組織または器官移植片を移植し、第１および第２の阻害剤をレシピエントに投与する。さらに、あるいは別法として、レシピエントによる同種異系細胞に対する拒絶反応を抑制する方法は、レシピエント中への移植の前に、エクスビボにおける本明細書記載の阻害剤での移植片の前処理を包含しうる。例えば、抗体、融合蛋白または他の阻害剤を、同種異系細胞または組織とともにインキュベーション、あるいは器官中に灌流することができる(例えば、阻害剤を器官中に導入することができ、インプットならびにアウトプット容器を付けて、器官内で剤が標的分子に結合するようにでき、次いで、器官をレシピエント中に移植することができる )。移植後、レシピエントをインビボで阻害剤でさらに処理する（例えば、レシピエントに剤を投与することにより）。Ｃ．自己免疫性本発明方法によるＴ細胞応答の阻害は自己免疫疾患の治療について治療的に有用でありうる。多くの自己免疫疾患は、自己組織に対して反応性があり（すなわち、自己抗原に対して反応性があり）疾患の病理に関与するサイトカインおよび自己抗体の産生を促進する、Ｔ細胞の不適切な活性化の結果である。かくして、自己反応性Ｔ細胞の活性化を防止することは疾病の徴候を減少または除去しうる。自己免疫疾患に苦しむ対象への、上記したＴ細胞応答を阻害する第２の剤と組み合わせての共刺激阻害剤の投与を用いて疾病のプロセスに関与しうる自己抗体またはＴ細胞由来のサイトカインの産生を防止することができる。自己免疫疾患を治療するためには、第１の剤（例えば、ＣＴＬＡ４Ｉｇ）および第２の剤（例えば、抗ＬＦＡ−１ｍＡｂまたは抗ＩＬ−２ＲｍＡｂ）を治療が必要な対象に同時投与する。別法として、知られた自己抗原に関する自己免疫疾患については、自己抗原を第１および第２の剤とともに対象に同時投与することができる。この方法は、種々の自己免疫疾患および糖尿病、関節炎（リューマチ性関節炎、若年性リューマチ性関節炎、骨関節炎、乾癬性関節炎を包含）、多発性硬化症、重症の筋無力症、全身性紅斑性狼瘡、自己免疫性甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性発する乾性角結膜炎を包含）、円形脱毛症、節足動物にかまれた反応によるアレルギー応答、Crohn病、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、大腸潰瘍、喘息、アレルギー性喘息、皮膚の紅斑性狼瘡、強皮症、膣炎、直腸肛門炎、薬剤による発疹、らいの逆転反応、らい性結節性紅斑、自己免疫性ぶどう膜炎、アレルギー性脳髄膜炎、急性壊死性出血性脳疾患、病的な両側の進行性感覚神経聴力損失、再生不良性貧血、純粋な赤血球貧血、病的な血小板減少症、多発性軟骨炎、Wegener肉芽腫、慢性激症肝炎、Stevens-Johnson症候群、病的なスプルー、扁平苔癬、Crohn病、Graves眼病、サルコイドーシス、初期の胆硬変、後ぶどう膜炎、および間質肺線維症を包含する自己免疫諸相を有する疾患に治療に有用でありうる。Ｄ．アレルギーアトピー性アレルギーにおけるＩｇＥ抗体応答はＴ細胞に非常に依存しており、かくして、アレルゲン特異的Ｔ細胞による応答を阻害することは、アレルギーおよびアレルギー性反応の治療において治療的に有用でありうる。例えば、アレルゲンに曝露されたアレルギー対象に共刺激阻害剤および本明細書記載の第２の剤の組み合わせを投与して、アレルゲン特異的Ｔ細胞による応答を阻害し、そのことにより対象におけるアレルギー応答を低調にすることができる。アレルギー反応は、本質的には全身的であってもよく、局所的であってもよいが、アレルゲン侵入経路および肥満細胞もしくは好塩基球上のＩｇＥの沈着パターンによる。かくして、第１および第２の剤の適切な投与により局所的または全身的にアレルゲン特異的Ｔ細胞応答を阻害することが必要となりうる。例えば、１の具体例において、第１の剤（例えば、ＣＴＬＡ４Ｉｇ）、第２の剤（例えば、抗ＬＦＡ−１ｍＡｂまたは抗ＩＬ−２ＲｍＡｂ）およびアレルゲンを、アレルギー対象に同時皮下投与する。限定的であってはならない以下の実施例によって、さらに本発明を説明する。本願全体において引用されたすべての文献、特許および公開された特許出願を参照により本明細書に記載されているものとみなす。実施例実施例においては、移植細胞対宿主病についての動物モデルを使用して、ＧＶＨＤの抑制によって評価されるＴ細胞応答に対する種々の薬剤の能力を試験した。この系においては、Ｃ５７ＢＬ／６（Ｂ６）（Ｈ−２^k）ドナー細胞をＢ１０. ＢＲ／ＳgＳnＪ（Ｂ１０.ＢＲ）（Ｈ−２^b）レシピエントマウスに移植する。すなわち、この系は組織適合性遺伝子座において完全にミスマッチのドナーとレシピエントとを使用する。この動物モデルにおける治療効率により、関係のないドナーおよびマッチした同胞ドナーＢＭＴの両方における、ヒトでの効率を予測することができる。この系は、従来、ラパマイシン（Blazar,B.R.et al.（１９９３）J.Immunol.,151:5726-5741；Blazar,B.R.et al.(1993)Ann.N.Y.Acad.Sci.,6 85 :73-85）、リシン・イムノトキシン類（Vallera,D.A.et al.(1991)Blood,77:1 82-194）、放射性標識抗Ｌy−１（Vallera,D.A.et al.(1991)Cancer Research,5 1:1891-1897）および抗ＣＤ３（Blazar,B.R.et al.(1993)J.Immunol.,150:265-2 77；Blazar,B.R.et al.(1994)J.Immunol.,152:3665-3674）での治療のような他のＧＶＨＤ抑制のための治療の評価に使用されていた。この系では、ドナー細胞は、成熟Ｔリンパ球源として、Ｔ細胞枯渇骨髄および脾細胞の混合物を含む。Ｔ細胞応答を抑制するために使用する薬剤は、ＣＴＬＡ４Ｉg融合蛋白、抗ＬＦＡ−１抗体および抗ＩＬ−２受容体抗体の単独または組み合わせであった。異なった療法も試験した。いくつかのレシピエント動物は、インビボにおいてのみ、種々の薬剤で処置し、骨髄移植前日から開始した。他のレシピエント動物については、インビトロ／インビボ処置の組み合わせを使用した。この療法では、移植前に、ドナー脾細胞を照射レシピエント細胞と共に種々の阻害剤（例えば、抗体および／または融合蛋白）の存在下、または非存在下でインビトロでインキュベーションした。いくつかの実験では、ドナー脾細胞を、まず、いずれの阻害剤も非存在下で混合リンパ球反応（ＭＬＲ）中で照射レシピエント細胞と共に培養し（同種反応性ドナーＴ細胞を感作）、ついで、該ドナー細胞の移植数時間前にＭＬＲ培養に種々の阻害剤を添加した。ついで、該種々の阻害剤のインビボ投与により、レシピエント動物の処置を続けた。さらに、他の療法においては、ドナー脾細胞を、ＣＴＬＡ４Ｉgの存在下、照射レシピエント細胞と共に、またはパラホルムアルデヒド固定レシピエント細胞のみと共に培養し、ついで、さらなるレシピエントのインビボ処置なしに移植した。移植細胞対宿主病の重篤度は、ＢＭＴ後の経日におけるレシピエントマウスの生存時間およびＢＭＴ後のレシピエントマウスの平均体重（ＧＶＨＤの副作用としての体重減少）を含む種々の分析によって測定した。実施例においては、以下の方法を使用した。試験動物Ｂ１０.ＢＲ／ＳｇＳｎＪ（Ｈ−２^k）レシピエントマウスをJackson Laborato ry（Bar Harbor,ME）から購入した。Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ−２^b）ドナーマウスを National Institute of Health（Bethesda,MD）から購入した。ドナーおよびレシピエントはメスであった。ＢＭＴ時においてメスのドナーは４〜６週齢であり、メスのレシピエントは８〜１０週齢であった。骨髄移植ここに用いた移植プロトコールは詳細に記載されたものである（Blazer,B.R. et al.(1990)Blood75:798）。Philips RT250 Orthovoltage Therapy Unit（Phil ips Medical Systems,Germany）から、２２５ｋＶ、１７ｍＡで、最終吸収線量０.４１グレイ／分で０.３５ｍｍＣｕを通して、Ｂ１０.ＢＲレシピエントに８ .０グレイ（Ｇｙ）の全身照射（ＴＢＩ）を行った。大腿骨および脛骨から骨髄を流出させることによりドナーの骨髄（ＢＮ）をＲＰＭＩ１６４０中に集めた。Ｔ細胞を枯渇させてあり、ＧＶＨＤ発生Ｔリンパ球のソースとしての脾臓細胞と混合された抗Ｔｈｙ１.２抗体（ｍＡｂ）（ハイブリドーマ３０−Ｈ−１２、ラットＩｇＧ２ｂ、Cambridge,MAのDr.David Sachsから提供された）＋すでに説明されているＣ’（Blazer,B.R.et al.(1990)Blood75:798;Blazer,B.R.(1991)Bloo d78:3093;Blazer,B.R.et al.(1991)J.Immunol.147:1492）を伴っている、Ｃ５７ＢＬ／６ドナー由来の２５ｘ１０⁶個のＢＭ細胞を、レシピエント（実験あたり１グループあたり８匹）に与えた。細切れにした脾臓をワイヤーメッシュに通し、それらをＲＰＭＩ１６４０中に集めることにより脾臓細胞の単一細胞懸濁液を得た。脾臓細胞をＢＭとともに１０⁸個／ｍｌの濃度に懸濁して、骨髄−脾臓細胞集団（ＢＭＳ）を作成した。ＢＮＳのうち０.５ｍｌ（２５ｘ１０⁶個の脾臓細胞（全細胞数５０ｘ１０⁶個）を含む）を、尾の静脈から各レシピエントマウスに注入した。すべての実験におけるＧＶＨＤ防止に関する陽性対照として、１の実験群に、Ｔ細胞が除去され、抗Ｔｈｙ−１.２＋Ｃ’を伴っっている脾臓細胞を与えた。この処理は、すべての検出可能な本質的なキラー細胞機能（Blazer,B .R.et al.(1988)Transplantation45:876）および少なくとも９５％の細胞溶解性Ｔリンパ球前駆体（Blazer,B.R.et al.(1990)Blood75:798）を除去するためにすでに行われているものである。ｈＣＴＬＡ４−Ｉｇ蛋白の調製ｈ（ヒト）ＣＴＬＡ４−Ｉｇ（Gimmi,C.D.et al.(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.U SA90:6586に記載されたようにして構築）を、チャイニーズハムスター卵巣細胞由来の固定化蛋白Ａ上清と反応させることにより精製した（該細胞は、ヒト・ゲノムＩｇＧ１遺伝子由来のＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３ドメインに結合したｈＣＴＬＡ４の細胞外部分を含む発現ベクターを電気穿孔により導入された）。精製ｈＣＴＬＡ４−Ｉｇは全体としてダイマー形態からなっていた。抗ＬＦＡ−１ｍＡｂの調製抗ＬＦＡ−１アルファ鎖ｍＡｂ（抗ＣＤ１１α）（ハイブリドーマＦＤ４４１ .８、ラット・ＩｇＧ２ｂ、親切にも、Dr.Frank Fitch,University of Chicago, Chicago,ILから提供された；Sarmiento,M.et al.(1982)Immunol.Rev.68:135に記載）を実験に用いた。プリスタン馴化マウス由来の腹水を硫酸アンモニウム（５０％）沈殿により濃縮し、０.１Ｍリン酸カリウム（ｐＨ７.５）に対して透析した（Blazer,B.R.et al.(1991)Blood78:3093〜3012に記載のごとく）。抗ＩＬ−２ＲｍＡｂの調製抗ＩＬ−２ＲｍＡｂ（ハイブリドーマＰＣ６１５.３、ラットＩｇＧ１、Ameri can Type Culture Collection,Rockville,MDから得た）を実験に用いた。プリスタン馴化マウス由来の腹水を硫酸アンモニウム（５０％）沈殿により濃縮し、０ .１Ｍリン酸カリウム（ｐＨ７.５）に対して透析した（Blazer,B.R.et al.(1991 )Blood78:3093〜3012に記載のごとく）。剤のインビボ投与インビボ投与のために、ＰＢＳ、ｈＣＴＬＡ４−Ｉｇ（−１、０日目に２５０ μｇ／回、次いで、ＢＭＴ後２８日目まで週３回１００μｇ／回を投与）、および／または抗ＬＦＡ−１ｍＡｂ（−１日目から始めて、次いで、ＢＭＴ後２９日目まで２週間に２回３００μｇ／回）もしくは抗ＩＬ−２ＲｍＡｂ（−１日目から＋５日目までは２５０μｇ／回、次いで、＋６ないし＋１０日目までは１００ μｇ、次いで、ＢＭＴ後２９日目までは１週間に３回１００μｇ）をマウスに腹腔内（ｉｐ）注射した。剤を伴う脾臓細胞のインビトロインキュベーション宿主同種抗原に応答するドナーＧＶＨＤ発生脾臓細胞の能力を低下させるために、ドナーの抗宿主特異的応答性低下の発生に有利な条件下でドナー脾臓細胞が宿主脾臓同種抗原に曝露されるインビトロ培養系を確立した。最初の実験において、ドナーＣ５７ＢＬ／６脾臓細胞を８ｘ１０⁶個／ｍｌの濃度として、Dulbecc oの最小必須培地（ＤＭＥＭ）、１０％ウシ胎児血清（商品名Hyclone）、２−メルカプトエタノール（ｘ１０−Ｍ^-1）、および補足アミノ酸ならびに抗生物質中に懸濁した。上記培地、血清、および補足物質中に懸濁されている、照射を受けた（３０〜３３Ｇｙ）宿主脾臓細胞を疑似処理するか、またはｈＣＴＬＡ４−Ｉｇ（５０μｇ／ｍｌ）および／または種々のｍＡｂ（１５０μｇ／ｍｌ）とともに４℃で３０分インキュベーションした。この短いインキュベーションの終了時において懸濁物を洗浄しなかったが、最終濃度８ｘ１０⁶個／ｍｌまで希釈し、次いで、ドナー脾臓細胞と混合した。２２５ｃｍ²のフラスコ中全部で１５０ｍｌの中に、ドナーおよび宿主の脾臓細胞をそれぞれ９.６ｘ１０⁹個になるまで添加し、示されたように２.５ないし４日間３７℃、１０％ＣＯ₂下に置いた。他の実験においては、インビトロ処理プロトコールを変更してドナー抗宿主馴化細胞を標的とした。上記インビトロ培養系を改変して、先ず、照射を受けた宿主同種抗原に対してドナー脾臓細胞を３日間馴化した。インキュベーション期間終了時に、バルク培養物を洗浄し、濃度５０ｘ１０⁶個／ｍｌとして再懸濁し、５０ｘ１０⁶個／ｍｌの抗Ｔｈｙ−１.２＋Ｃ'処理されたＢＭと混合してＢＭＳ調製物を作成した。ｈＣＴＬＡ４−Ｉｇ（最終濃度５０μｇ／ｍｌ）および／または抗ＬＦＡ−１ｍＡｂ（最終濃度１５０μｇ／ｍｌ）もしくはＰＢＳをＢＭＳ調製物に３７℃で３時間添加してＢ７リガンドを飽和させた。さらに手を加えることなくＢＭＳ調製物を注入した。各レシピエントに、尾の静脈から、２５ｘ１０⁶個のＢＭ細胞および２５ｘ１０⁶個の脾臓細胞を含有する０.５ｍｌを与えた。示したようにレシピエント群にはＰＢＳ,ｈＣＴＬＡ４−Ｉｇ、および／または抗ＬＦＡ−１をインビボで与え、用量およびスケジュールは上で詳述したものおよび下のセクションの結果に示したものとした。いくつかの実験においては、Ｔ細胞の共刺激を減少させるための別のアプローチをｈＣＴＬＡ４Ｉｇインキュベーションと対比した。スティミュレーター（st imulator）を照射するのではなく、Ｂ１０.ＢＲスティミュレーター脾臓細胞（２０ｘ１０⁶個／ｍｌ）をパラホルムアルデヒド（０.１５％）とともに４℃で６０分インキュベーションした。次いで、スティミュレーター細胞を洗浄し、再懸濁して８ｘ１０⁶個／ｍｌとし、馴化工程として、８ｘ１０⁶個／ｍｌのリスポンダー（responder）細胞（Ｂ６脾臓細胞）と２.５または４日間混合した。次いで、リスポンダー細胞をドナーＢＭ細胞と混合してＢＭＳ調製物を作成し、上記のごとくレシピエント動物にＢＭＳ調製物を投与した。代表的な実験において、インビトロインキュベーションされたバルク細胞集団の一部をフローサイトメトリー（ＦＣＭ）および／または慣用的手順による三重水素化チミジン取り込みによる増殖の評価のために取った。すべての実験において、２.５〜４日の期間の最後に、バルク集団を培地で３回洗浄し、再懸濁し、次いで、抗Ｔｈｙ１.２＋Ｃ'処理ＢＭに対して１：１の割合で添加した。統計学的分析 Studentのｔ試験により連続データの群比較を行った。カイ−スクエア（chi-a quare）のMantel-Peto-Coxサマリー（summary）（Mantel,N.(1966)Cancer Chemo ther.Rep.50:163）を用いるライフテーブル（lifetable）法により生存データを分析した。確率（ｐ）値＜０.０５を有意とみなした。実験例１この実験において、ｈＣＴＬＡ４Ｉｇを単独または抗ＬＦＡ−１もしくは抗ＩＬ−２Ｒとともに用いることのＧＶＨＤ阻害効果を、インビトロ／インビボ組み合わせ処理規則（方法論において上記）において評価した。下記処理条件を用いた：インビトロ処理ｈＣＴＬＡ４−Ｉｇドナー脾臓細胞および照射されたレシピエント細胞の３日ＭＬＲの終わりに、５０μｇ／ｍｌを単独または抗ＬＦＡ−１もしくは抗ＩＬ −２Ｒ（各１５０μｇ／ｍｌ）とともに３７℃で３時間添加。インビボ処理ｈＣＴＬＡ４Ｉｇ単独または抗ＬＦＡ−１もしくは抗ＩＬ−２Ｒとともに、 −１日目および０日目に２５０μｇ、次いで、２８日目まで毎週３回１００μｇ抗ＩＬ−２Ｒ −１日目から＋５日目までは２５０μｇ、次いで、６〜１０日目は１００μｇ、次いで、２８日目までは毎週３回１００μｇ抗ＬＦＡ−１ −１日目から＋２９日目まで毎週３００μｇ結果を図１に示す。図１は、生存マウスの割合をＢＭＴ後の日数の関数として示す。図２は、マウスの平均体重グラム数をＢＭＴ後の日数の関数として示す。対照（ＰＢＳ処理）動物の生存率が５０％に至る時間はＢＭＴ後わずか約２５日であったが、ＣＴＬＡ４Ｉｇ処理マウスの５０％はＢＭＴ後約６０日まで生存した。ＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＬＦＡ−１、またはＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＩＬ− ２Ｒのいずれかで処理されたマウスの５０％以上がＢＭＴ後１００日を超えて生存した。すべてのインビボ処理をＢＭＴ後２９日目までに中止したので、結果は、インビトロおよびインビボでの、単独または抗ＬＦＡ−１もしくは抗ＩＬ−２Ｒを伴ったＣＴＬＡ４Ｉｇ処理は、同種抗原に対するＴ細胞無応答性またはアネルギーと矛盾しないＴ細胞応答に対する長期阻害を誘導しうることを示すものである。実験例２この実験において、以下の処理規則を評価した：ＣＴＬＡ４Ｉｇのみ、インビトロおよびインビボ抗ＬＦＡ−１のみ、インビトロおよびインビボＣＴＬＡ４Ｉｇ＋抗ＬＦＡ−１、インビボのみＣＴＬＡ４Ｉｇ＋抗ＬＦＡ−１、インビトロおよびインビボ処理条件は実験例１記載のものと同じであった。結果を図３（生存率）および図４（平均体重グラム数）に示す。ＣＴＬＡ４Ｉｇまたは抗ＬＦＡ−１処理は単独で（インビトロおよびインビボで）、動物の生存率が５０％に至る時間をＰＢＳ処理対照動物と比較して延長した。ＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＬＦＡ−１の同時投与（インビボのみ）は、対照処理動物と比較してずっと生存率を増加させた。インビトロおよびインビボ双方で、ＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＬＦＡ−１混合処理した動物は、対照と比較して最大のＢＭＴ後の生存率を示した。実施例３この実験において、インビトロ／インビボ組み合わせ処理規則を、抗ＬＦＡ− １と今後されたＣＴＬＡ４Ｉｇとともに使用した。最終的な３時間の培養のために、ＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＬＦＡ−１の添加前にドナー脾臓細胞を照射されたレシピエント細胞とともにＭＬＲ中で３日間培養した（「馴化細胞」）。別法として、ＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＬＦＡ−１の連続的存在下でドナー脾臓細胞を照射されたレシピエント細胞とともに培養した（「非馴化」）。ＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＬＦＡ−１でのレシピエントマウスの処理を、移植後インビボで継続した。処理条件は実験例１に記載したのと同じであった。結果を図５（生存率）および図６（平均体重グラム数）にグラフで示す。インビトロでＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＬＦＡ−１とともに培養された非馴化脾臓細胞のレシピエントは、対照（ＰＢＳ）処理マウスと比較してＢＭＴ後の長期の生存を示した。インビトロでＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＬＦＡ−１とともに培養する前に、ドナー脾臓細胞をレシピエント細胞とともに前培養（すなわち馴化）すると、対照処理動物と比較してずっと長いＢＭＴ後の生存が得られた。結果は、処理前にレシピエントの同種抗原に対してドナーＴ細胞を馴化させることは、ＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＬＦＡ −１のＧＶＨＤ阻害効果にとっては必須でないが、処理規則に馴化工程を入れることにより、剤の阻害効果を高めることができるということを示す。このデータは、阻害（例えば、アネルギー誘導）に対して、馴化Ｔ細胞が非馴化Ｔ細胞よりも感受性であることと矛盾しない。実験例４この実験において、以下の処理規則を評価した：ＣＴＬＡ４Ｉｇのみ、インビトロおよびインビボＣＴＬＡ４Ｉｇ＋抗ＩＬ−２Ｒ、インビトロ、次いで、ＣＴＬＡ４Ｉｇのみ、インビボＣＴＬＡ４Ｉｇ＋抗ＩＬ−２Ｒ、インビトロおよびインビボＣＴＬＡ４Ｉｇ＋抗ＬＦＡ−１、インビトロおよびインビボ処理条件は実験例１記載のものと同じであった。結果を図７（生存率）および図８（平均体重グラム数）に示す。ＣＴＬＡ４Ｉｇのみ（インビトロおよびインビボ）の使用は、対照（ＰＢＳ）処理動物と比較してレシピエントの生存率が５０％に至る時間を延長した（それぞれ、約６０日、約４２日）。ＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＬＦＡ−１、またはＣＴＬＡ４Ｉｇおよび抗ＩＬ−２Ｒという混合使用は、さらに動物の生存率を増大させた（いずれの処理でも生存率５０％に至るには１００日以上）。さらに、ＧＶＨＤの阻害は長期にわたり、インビボ処理を中止した後も持続し、同種抗原に対するＴ細胞の無応答性またはアネルギーと矛盾しなかった。実験例５この実験において、ＣＴＬＡ４Ｉｇのみによるインビトロアネルギー誘導を試験した。照射されたＢ１０.ＢＲスティミュレーターとともにＢ６脾臓細胞（８ｘ１０⁶個）を（１：１の割合で）、ｈＣＴＬＡ４Ｉｇ（５０μｇ／ｍｌ）の存在下でインキュベーションした。ドナー脾臓細胞の第３の群を、未照射の、パラホルムアルデヒド固定（０.１５％）された宿主脾臓細胞とともにインキュベーションした。パラホルムアルデヒド固定は、宿主ＡＰＣｓ上の共刺激分子の放出および／または誘導ならびに表面発現を防止する。三重水素化チミジンで一晩パルシングする前に脾臓細胞を３また４日間維持した。Δｃｐｍ（ｃｐｍ（実験値）−ｃｐｍ（自己由来の応答））を、平均値ｘ１０^-3で表す。回収率％は、記載された日数において残存しているリスポンダー数をインプット細胞数で割って１００をかけたものである。３日間培養物は処理群において高い％の回収率および対照に対して低い％のドナーの抗宿主増殖応答を有するので、３日間培養物は４日間培養物よりも好ましい。データは、対照群と比較すると処理群は宿主に対する増殖応答が低下しているので（回収率％の相違を対照群に対して修正した後であっても）、リスポンダー細胞は低応答性の状態に誘導されたことを示す。処理群における抗宿主応答は４日目において増加し、ドナーの抗応答細胞の出現頻度が低下し、対照と比較すると増殖に長い時間を要することが示される。この阻害の程度がインビボでのＧＶＨＤ防御に十分であるかどうかを決定するために、３群の３日間ＭＬＲ培養物をセットアップした。３日目の終わりに、細胞を十分に洗浄し、再懸濁し、次いで、２５ｘ１０⁶個のＴ細胞枯渇骨髄細胞とともにＢ１０.ＢＲレシピエント（ｎ＝８マウス／群）中に再注入した。ドナー細胞の一部をプレーティングし、三重水素化チミジンで１８時間パルスした。Ｂ６の自己由来応答については平均ｃｐｍ±平均値の１標準偏差（ＳＥＭ）ｘ１０^-3 ＝０.９±０.１であった。自己由来のｃｐｍを全ｃｐｍから差し引いて対照応答に対する％を得た。レシピエントマウスに関する保険統計学的生存のプロットを図９に示す。結果は、ドナーの抗宿主応答はＣＴＬＡ４Ｉｇおよびパラホルムアルデヒド固定群について再現性があることを示す。同数の１００％生存細胞を注入したにもかかわらず、照射された宿主ＡＣＰｓに添加されたＣＴＬＡ４Ｉｇまたはパラホルムアルデヒド固定ＡＣＰｓのいずれのレシピエントも、対照のインキュベーションされた群と比較すると高い保険統計学的生存率を有していた（それぞれｐ＝０.０５６、０.０５７）。培養脾臓細胞数が非常に多かったため（この株の組み合わせについては５ｘ１０⁶個の新鮮脾臓細胞がＬＤ₉₅である）、ドナーの抗宿主応答性に対する６９〜８３％の阻害に関連したＧＶＨＤ防御効果は最小化された。しかしながら、結果は、Ｔ細胞枯渇をしない場合のインビトロでのドナー細胞機能の操作によりＧＶＨＤが減少しうることを明確に示す。インビボで剤が投与されず、対照インキュベーション群と比較すると処理群においてはＴ細胞基盤が変化せず、同数の生存細胞が得られたことを強調するのは重要である。ＧＶＨＤ防御効果はすべて、ＢＭＴ前のドナーＴ細胞の機能的変化の結果であった。実験例６この実験において、インビトロで同種異系細胞とともに培養されたＢ６脾臓細胞について表現型および機能の研究を行った。表現型の分析インビトロでのＣ５７ＢＬ／６抗Ｂ１０.ＢＲ系においていずれの細胞が優先的に増殖するのか、およびどのような活性抗原が誘導されるのかを決定するために、１°混合リンパ球反応（ＭＬＲ）細胞を洗浄し、集め、次いで、表現型に分類した。陽性細胞の％を示す。馴化されたリスポンダーは活性化Ｔ細胞の割合を増加させ、活性化抗原ＩＬ− ２Ｒα鎖、Ｂ７−１、およびＣＤ６９を発現するＣＤ３ｅ⁺細胞のパーセンテージの増加によりそのことが示された。また、Ｂ細胞が活性化され、Ｂ７−１およびＩＬ−２Ｒを発現した（Ｂ７−１およびＩＬ−２Ｒを発現するＢ２２０⁺細胞のパーセンテージに増加により示される）。ＣＤ４⁺Ｔ細胞はＣＤ４５ＲＢ（ＩＬ−２分泌Ｔｈ「メモリー」細胞上に見いだされる）の発現を誘導された。ＧＶＨＤにかかっているマウスにおけるインビボでのＣＤ４⁺Ｔ細胞に対する同種活性化ＣＤ８⁺の不釣り合いな増加とは対照的に、ＣＤ４⁺およびＣＤ８⁺Ｔ細胞の割合は変化しなかった。機能の分析機能の研究において、Ｂ６の抗ｂｍ１２特異的低応答性の誘導を、１次（１° ）および２次（２°）ＭＬＲ培養において評価した。最適化された１°ＭＬＲ培養条件を決定して以下のものを包含するようにした：１）スティミュレーター細胞のＴ細胞枯渇（そのことによりバックグラウンド応答が減少する）；２）バルク培養においてセットアップされる１：１、１：２、および１：３のリスポンダー：スティミュレーター比（８ｘ１０⁶個のＢ６リスポンダー／ｍｌ＋８〜２４ｘ１０⁶個の照射されたｂｍ１２スティミュレーター／ｍｌ）［三重水素化チミジン取り込みアッセイにおけるΔｃｐｍ測定により測定した場合、これらの条件は、おおまかに同等な増殖応答を生じる。培養期間の終わりに一部を取り、９６ウェルプレート上に１ｘ１０⁵または３ｘ１０⁵個を撒き、一晩パルシングし、次いで、集めることによりアッセイを行った。増殖応答は培養５日目にピークとなり（撒かれた３ｘ１０⁵個の細胞については２８.３〜３７.２ｘ１０³の平均ｃｐｍ範囲であり、撒かれた１ｘ１０⁵個の細胞については１０.９〜２２.５ｘ１０³の平均ｃｐｍ範囲）、６日目および７日目に低下する］；３）７日目の限界希釈アッセイ（ＬＤＡ）における増殖中のＢ６の抗ｂｍ１２細胞の前駆体出現頻度範囲１：１０７２〜１：３６９６。２°ＭＬＲ培養の貢献を最適化するために、Ｂ６の抗ｂｍ１２を用いていくつかのバルクＭＬＲ培養実験を行った。１：１のリスポンダー：スティミュレーター比（８ｘ１０⁶個／ｍｌを各２２５ｃｍ²フラスコに添加）を用いて、１°ＭＬＲの日数を変化させ（４〜６日）、１°培養後、Ficoll-Hypaque密度勾配遠心分離を行って残存スティミュレーターおよび生存していない細胞を除去し、同種反応性集団（幼若細胞）について豊富化した。さらに、１°ＭＬＲ培養と２°ＭＬＲ培養との間の残りの日数を変化させた（１〜３日）これらの操作は高い自己由来の応答を低下させなかった。処理された１°ＭＬＲ培養細胞におけるアネルギー誘導の測定として、Ｂ６の抗ｂｍ１２増殖Ｔ細胞出現頻度についての限界希釈アッセイ（ＬＤＡ）分析を行った。１°および２°ＭＬＲについて２群を比較した。これらの群は、１°ＭＬＲ培養開始時点で添加されたｈＣＴＬＡ４Ｉｇ（５０μｇ／ｍｌ）の存在または不存在についてのみ異なっていた。リスポンダー（Ｂ６脾臓細胞）およびＴ細胞枯渇スティミュレーター（Ｂ１０.ＢＲ脾臓細胞）（リスポンダー：スティミュレーター比１：１；２２５ｃｍ²フラスコ中それぞれ５ｘ１０⁶個／ｍｌ）のバルク培養を、上記方法論のセクションに記載した条件に従って確立した。４日間のインキュベーション後、細胞の一部を各フラスコから取り、９６ウェルプレート上に撒き、次いで、三重水素化チミジンで一晩パルスして増殖を測定した（１°ＭＬＲ培養結果）。残りの細胞を５日間培養し、Ficoll-Hypaque勾配上に乗せ、２回洗浄し、次いで、カウントして１°ＭＬＲ培養細胞処理後の正味の収率を決定した。次いで、これらの細胞を２日間休止させた。２日間（最適休止期間と決定された）の休止後、細胞を洗浄し、照射されたｂｍ１２スティミュレーター（５ｘ１０⁵個／ウェル）または照射された第３のスティミュレーター（Ｂ１０.ＢＲ：Ｈ−２^k）（５ｘ１０⁵個／ウェル）の集団とともに限界希釈（３倍希釈で５ｘ１０⁴〜１.５ｘ１０²個）において撒いた。ウェルに１０ユニット／ｍｌのｒｈ（組み換えヒト）ＩＬ−２（Hoffman-LaRoche）を補足した。インキュベーション７日後、三重水素化トリチウムで細胞をパルスして増殖を測定した（２°ＭＬＲ培養結果）。１°ＭＬＲおよび２°ＭＬＲの結果（ＬＤＡ分析）を下に示す：この実験から、Ｂ６の抗ｂｍ１２同種応答はｈＣＴＬＡ４−Ｉｇにより媒介される阻害に対して非常に感受性があると結論することができる。ＬＤＡを用いると、再度バルク培養を確立するよりもより容易に２次ＭＬＲ応答を定量することができる。もとのスティミュレーターおよび第３のスティミュレーター集団に対する２°ＭＬＲ応答によって確認されるように、無処理脾臓細胞における高度な同種抗原特異的無応答性が達成された。これらの結果は、インビトロでのＣＴＬＡ４Ｉｇ処理により新鮮脾臓細胞において同種抗原特異的低応答性を得ることができるという証拠を提供する。実験例７この実験において、ＧＶＨＤ標的器官の表現型の分析を行って、激しいＧＶＨＤを有する完全に同種異系ＢＭＳのＢＭＴレシピエントにおける組織炎症応答の動力学およびタイプを評価した。Ｔ細胞を枯渇され脾臓細胞を補足されたＣ５ＢＬ／６骨髄細胞に対するレシピエントであって（骨髄細胞、脾臓細胞はそれぞれ２５ｘ１０⁶個）致命的に照射を受けたＢ１０.ＢＲレシピエントから、脾臓およびＧＶＨＤ標的器官（肝臓、結腸、肺、および皮膚）の試料を得た。ＢＭＴ＋２日後から毎日試料を得て、ＣＤ３ｅ、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｍａｃ−１、ＭＨＣクラスＩＩ、Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＩＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−２に対して指向された抗体を用いるイムノペルオキシダーゼ（アビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼ）染色に供した。ＢＭＴ５日後に取られた組織から得た肺および結腸の染色凍結切片について要約する。肺および結腸における主要な最初の細胞流入は５日目にピークに達し、肝臓においては９日目にピークに達した。対照は、Ｔ細胞またはＢ７抗原に関して陽性なまばらな細胞のみを結腸中に含んでいた。各表面抗原を発現している細胞の相対的割合に従って、結果の要約を下に示す：高い、中程度、低いまたは無し（−）。ＴＣＤＢＭＳのレシピエントは、ＣＤ３ｅ、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｂ７−１、またはＢ７−２を発現する検出可能な細胞を実質的に有しておらず、少数のＭａｃ−１⁺およびＭＨＣクラスII⁺細胞を有している。これらの研究から、ＢＭＴ後の初期段階においては、ＣＤ８⁺Ｔ細胞が肺および結腸に存在する優勢な炎症細胞であると結論することができる。また、ＢＭＴ５日後までに結腸および肝臓においてＢ７−２が高レベルにまで誘導される。この時点で、肺においてＢ７−２もアップレギュレート（upregulate）されるが、優勢Ｂ７抗原はＢ７−１である。Ｂ７分子に対するアップレギュレーションは、Ｔ細胞活性化および増殖に関する共刺激リガンドとして役立ちうる。肺における高密度のＭＨＣクラスII抗原の同時発現（おそらく肺胞マクロファージ上に）は、活性化／増殖プロセスをさらに増幅しうる。ＧＶＨＤにかかっているマウスの脾臓において、結腸におけるのと同様にＩＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−２はアップレギュレートされる。実験例８この実験において、ＧＶＨＤの発生に及ぼす抗Ｂ７−１および／または抗Ｂ７ −２抗体の効果を分析した。この実験のために、Ｂ６Ｌｙ５.２マウスのリンパ節から得た１０⁵個のＣＤ４⁺ Ｔ細胞を、照射を受けた（６００Ｃｓ）ｂｍ１２レシピエントマウスに注射した（０日目）。移植されたマウスを、さらに処理せずにおくか（ＰＢＳ）、またはインビボにおいて以下の規則のいずれかに従って処理した： −１日目および０日目にｈＣＴＬＡ４Ｉｇ２５０μｇ、次いで、１週間に３回１００μｇ； −１日目および０日目に抗Ｂ７−１抗体２５０μｇ、次いで、１週間に３回１００μｇ； −１日目および０日目に抗Ｂ７−２抗体２５０μｇ、次いで、１週間に３回１００μｇ；および −１日目および０日目に抗Ｂ７−１および抗Ｂ７−２抗体混合２５０μｇ、次いで、１週間に３回１００μｇ抗Ｂ７−１および抗Ｂ７−２モノクローナル抗体は、例えば、Freedman,A.S.e t al.(1987)J.Immunol.139,3260（抗Ｂ７−１）、Chen,C.et al.(1994)L.Immuno l.152,2105およびHathcock,K.S.et al.(1993)Science262,905（抗Ｂ７−２）に記載されている。異なる規則による処理を受けたマウスの生存率％を図１０に示す。結果は、抗Ｂ７−１または抗Ｂ７−２抗体のいずれかのみの投与はマウスの生存を延長したことを示す。そのうえ、抗Ｂ７−１および抗Ｂ７−２抗体を両方一緒に移植レシピエントマウスに投与すると、マウスはＧＶＨＤから完全に防御された（すなわち、動物の１００％生存が観察された）。かくして、抗Ｂ７−１または抗Ｂ７−２抗体のいずれかのみの投与はＧＶＨＤの発生を有意に減少させ、おそらく、両抗体の混合投与はＧＶＨＤからの長期の防御につながるであろう。実験例９この実験において、ＧＶＨＤの発生に対する抗ＩＬ−１２または抗ＩＦＮ−γ 抗体処理の効果を調べた。この例において、Ｂ６Ｌｙ５.２マウスのリンパ節から得た１０⁵個のＣＤ４⁺ Ｔ細胞を、照射を受けた（６００Ｃｓ）ｂｍ１２レシピエントマウスに注射した（０日目）。移植されたマウスを、さらに処理せずにおくか（ＰＢＳ）、またはインビボにおいて以下の規則のいずれかに従って処理した： −１日目から２１日目まで１週間に２回抗ＩＬ−１２（Ｃ１５.１およびＣ１７.１５）３００μｇ； −１日目から２１日目まで1週間に２回抗ＩＦＮ−γ（Ｒ４−６Ａ２）３００ μｇ；および −１日目および０日目に抗Ｂ７−１（ＩＧ１０.Ｆ９）および抗Ｂ７−２（ＧＬ−１）２５０μｇ、次いで、２１日目まで１週間に３回１００μｇ。移植され、上記プロトコールに従って処理されたマウスの生存率％を図１１に示す。結果は、抗ＩＮＦ−γ抗体を与えられたマウスの１００％が、同種反応性ＣＤ４⁺Ｔ細胞の注射後少なくとも２６日目まで生存したことを示す。抗Ｂ７− １および抗Ｂ７−２抗体のマウスへの混合投与も、マウスの１００％生存を達成した（実験例８の結果を確認するものである）。抗ＩＬ−１２抗体の投与は、先の２例よりもいくぶん有効でなかったが、マウスの約２５％についてＧＶＨＤに対する防御がやはり生じた。実験例１０以下の実験において、抗ＣＤ４８抗体との抗ＣＤ−２抗体の混合投与、または抗ｇｐ３９抗体の投与効果を試験した。Ｂ６Ｌｙ５.２マウスのリンパ節から得た１０⁶個のＣＤ４⁺Ｔ細胞を、照射を受けた（６００Ｃｓ）ｂｍ１２レシピエントマウスに注射した（０日目）。移植されたマウスを、さらに処理せずにおくか（ＰＢＳ）、またはインビボにおいて以下の規則のいずれかに従って処理した： −１日目から始めて１週間に２回抗ＣＤ-２および抗ＣＤ４８抗体３００μｇ; −１日目から５日目まで抗−ｇｐ３９抗体２００μｇ、次いで、１週間に２回２００μｇ； −１日目および０日目に抗Ｂ７−１および抗Ｂ７−２抗体２５０μｇ、次いで、１週間に３回１００μｇ； −１日目および０日目にｈＣＴＬＡ４Ｉｇ２５０μｇ、次いで、１週間に３回１００μｇ； −１日目から１３日目まで、次いで、１週間に３回ラパマイシン１.５ｍｇ／ｋｇ −１日目および０日目にｍＩＬ１０３０μｇ；０日目にＩＬ−１２１μｇ；および０日目に、次いで、１週間に３回ＩＬ−１２１μｇ抗ｇｐ−３９抗体は、例えば、ＰＣＴ特許出願ＷＯ９５／０６６６６に記載されている。マウスの生存率％を図１２に示す。抗ＣＤ２および抗ＣＤ４８抗体の混合物は、マウスをＧＶＨＤから有意に保護した（例えば、同種反応性Ｔ細胞の注射後少なくとも７０日目において７５％のマウスが生存していた）。抗ｇｐ−３９抗体も、マウスの生存を延長した（例えば、注射後少なくとも７０日目においてやはり６２％のマウスが生存していた）。先に観察されたように、ＣＴＬＡ４Ｉｇマウスは、ＧＶＨＤに対する防御において強力な効果を有していなかった。実験例１１この実験において、ＧＶＨＤを防止することにおける付着分子ＩＣＡＭ−２に対する抗体の効果を分析した。この実験において、ＢＲマウス由来の脾臓細胞を補足したＴ細胞枯渇骨髄を、上記のごとく、照射した（９００ＴＢＩ）Ｂ６マウスに注射した。移植マウスを処理せずにおくか、または下記規則のうちの１つに従って処理した： −１日目から２８日目まで１週間に２回抗ＩＣＡＭ−２抗体３００μｇ； −１日目から２８日目まで１週間に２回抗ＬＦＡ−１抗体３００μｇ；および −１日目から５日目まで、次いで、１週間に２回抗ｇｐ３９２００μｇもう１つの実験において、先ず、ドナー細胞をＮＫ細胞（ＮＫ１.１）と反応する抗体で処理し、さらに補体で処理してドナー細胞からＮＫ細胞を除去した。得られたマウスの生存率を図１３に示す。上記のごとく、抗ＬＦＡ−１または抗ｇｐ３９いずれかでの処理は生存を延長した。これらの処理ほど効果的ではないが、抗ＩＣＡＭ−２抗体も延長された生存を示し、抗ＩＣＡＭ−２処理がＧＶＨＤの発生を抑制しうることが示された。実験例１２この実験は、混合リンパ球反応におけるＴ細胞応答に対する抗ＩＬ−４抗体の効果を示す。ＩＬ−４産生が、少なくとも一部には、Ｂ６のＣＤ４⁺Ｔ細胞における抗ｂｍ１２応答を説明しうるかどうかを調べるために、飽和濃度（５０μｇ／ｍｌ）の精製抗ＩＬ４ｍＡｂ（１１Ｂ１１）の不存在下または存在下でＭＬＲ培養をセットアップした。上記のごとく、Ｔ細胞枯渇された５ｘ１０⁵個のｂｍ１２の脾臓のスティミュレーターを伴った１ｘ１０⁵個のＢ６のＣＤ４⁺リンパ節細胞（ウェルあたり）を用いてＭＬＲを行った。同種応答の防止における剤の効果を決定するために、いくつかのＭＬＲにさらなる剤を添加した。剤の量は≧飽和量［インタクトなｍＡｂについては１５０μｇ／ｍｌ、他の剤については５０μｇ／ｍＬＨＳＡについて２０μｇ／ｍｌであることを除く］であった。４、５または７日後に３系のウェルをパルスした。５日目はピーク増殖応答の日であり、それゆえ、説明例に用いる。結果を下に示す：結果は、ＩＬ４蛋白は、ｂｍ１２の同種抗原に応答するＢ６のＣＤ４⁺Ｔ細胞における約５０％の増殖応答の説明となる。かくして、ＩＬ−４の効果を遮断することは有意に同種応答を減少させ、抗ＩＬ−４抗体は単独または他の剤と組み合わされてＧＶＨＤ抑制に有用である可能性があることが示される。均等物当業者は、通常の実験以上のものを用いなくても、本明細書記載の特別な具体例に対する多くの均等物を認識するであろうし、また、確かめることができるであろう。かかる均等物は、以下の請求の範囲に包含されると考えられる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ１２Ｎ 15/09 9358−4ＢＣ１２Ｐ 21/08 // Ｃ１２Ｐ 21/08 9282−4ＢＣ１２Ｎ 15/00 Ａ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＪＰ

Claims

【特許請求の範囲】１．抗原に対するＴ細胞による応答を阻害する方法であって、Ｔ細胞を、ａ）Ｔ細胞における共刺激シグナルを阻害する第１の剤；およびｂ）Ｔ細胞に対する抗原を提示している細胞へのＴ細胞の付着を阻害する第２の剤と接触させることからなり、そのことにより第１および第２の剤は、抗原に対するＴ細胞による応答を阻害するものである方法。２．第１の剤が、Ｔ細胞上の受容体と、Ｔ細胞に対する抗原を提示している細胞上の共刺激分子との間の相互作用を阻害する請求項１の方法。３．Ｔ細胞上の受容体がＣＤ２８である請求項２の方法。４．Ｔ細胞上の受容体がＣＴＬＡ４である請求項２の方法。５．共刺激分子がＢ７−１またはＢ７−２である請求項２の方法。６．第１の剤が可溶性形態のＣＴＬＡ４である請求項２の方法。７．可溶性形態のＣＴＬＡ４がヒト・ＣＴＬＡ４−免疫グロブリン融合蛋白である請求項６の方法。８．第１の剤が抗Ｂ７−１抗体もしくはそのフラグメント、抗Ｂ７−２抗体もしくはそのフラグメント、または抗Ｂ７−１抗体および抗Ｂ７−２抗体の両方もしくはそれらのフラグメントである請求項２の方法。９．抗Ｂ７−１抗体が抗ヒト・Ｂ７−１モノクローナル抗体であり、抗Ｂ７− ２抗体が抗ヒト・Ｂ７−２モノクローナル抗体である請求項８の方法。１０．第１の剤が、Ｔ細胞における共刺激シグナルの発生を阻害するように細胞内で作用する請求項１の方法。１１．第２の剤が、Ｔ細胞上の付着分子と、Ｔ細胞に対する抗原を提示している細胞上の付着分子に対するリガンドとの間の相互作用を阻害する請求項１の方法。１２．付着分子が、ＬＦＡ−１、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、ＩＣＡＭ−３、ＣＤ４９、ＶＬＡ−１、ＶＬＡ−２、ＶＬＡ−３、ＶＬＡ−４、ＶＬＡ−５、ＶＬＡ−６、ＣＤ２９、ＣＤ４３、ＣＤ４８、ＶＣＡＭ−１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ５９、ＣＤ６１、ＣＤ６２Ｐ、ＬＥＣＡＭ−１、ＥＬＡＭ−１、ＣＤ４４、ＣＤ１０３、ＣＤ１０４およびＴｈｙ−１からなる群より選択される請求項１１の方法。１３．第２の剤が、Ｔ細胞上の付着分子、またはＴ細胞に対する抗原を提示している細胞上の付着分子に対するリガンドのいずれかに結合する抗体もしくはそのフラグメントである請求項１１の方法。１４．第２の剤が抗ＬＦＡ−１抗体もしくはそのフラグメントである請求項１３の方法。１５．抗ＬＦＡ−１抗体が抗ヒト・ＬＦＡ−１モノクローナル抗体もしくはそのフラグメントである請求項１４の方法。１６．第２の剤が、抗−ｇｐ３９、抗ＩＣＡＭ−１、抗ＩＣＡＭ−２、および抗ＣＤ４８と一緒になった抗ＣＤ２からなる群より選択される抗体である請求項１３の方法。１７．骨髄移植レシピエントにおける対宿主移植片疾患の抑制方法であって、ドナーＴ細胞からなる第１の細胞集団をインビトロにおいてａ）レシピエント同種抗原を発現する第２の細胞集団；ｂ）ドナーＴ細胞における共刺激シグナルを阻害する第１の剤；およびｃ）レシピエント同種抗原を発現する細胞へのドナーＴ細胞の付着を阻害する第２の剤と接触させることからなり、そのことにより第１および第２の剤は、レシピエントの同種抗原を発現する細胞に対するドナーのＴ細胞による応答を阻害して、骨髄移植レシピエントへの第１の細胞集団の投与によりレシピエントにおける対宿主移植片疾患が阻害される方法。１８．第１の細胞集団が骨髄細胞、末梢血細胞および脾臓細胞からなる群より選択される請求項１７の方法。１９．第１の剤が可溶性形態のＣＴＬＡ４である請求項１７の方法。２０．可溶性形態のＣＴＬＡ４がヒト・ＣＴＬＡ４−免疫グロブリン融合蛋白である請求項１９の方法。２１．第１の剤が抗Ｂ７−１抗体もしくはそのフラグメント、抗Ｂ７−２抗体もしくはそのフラグメント、または抗Ｂ７−１抗体および抗Ｂ７−２抗体の両方もしくはそれらのフラグメントである請求項１７の方法。２２．抗Ｂ７−１抗体が抗ヒト・Ｂ７−１モノクローナル抗体であり、抗Ｂ７ −２抗体が抗ヒト・Ｂ７−２モノクローナル抗体である請求項２１の方法。２３．第２の剤が抗ＬＦＡ−１抗体またはそのフラグメントである請求項１７の方法。２４．抗ＬＦＡ−１抗体が抗ヒト・ＬＦＡ−１モノクローナル抗体またはそのフラグメントである請求項２３の方法。２５．さらに、第１の細胞集団を第１ならびに第２の剤とインビトロで接触させる前に、第１ならびに第２の剤の不存在下インビトロで第１の細胞集団を第２の細胞集団と接触させることからなる請求項１７の方法。２６．さらに、第１の細胞集団をレシピエントに投与することからなる請求項１７の方法。２７．さらに、第１の剤をレシピエントに投与すること、第２の剤をレシピエントに投与すること、あるいは第１ならびに第２の剤両方をレシピエントに投与することからなる請求項１７の方法。２８．ドナー骨髄およびドナーＴ細胞を移植されるレシピエントにおける対宿主移植片疾患を抑制する方法であって、ａ）ドナーＴ細胞における共刺激シグナルを阻害する第１の剤；およびｂ）Ｔ細胞に対する抗原を提示している細胞へのドナーＴ細胞の付着を阻害する第２の剤をレシピエントに投与することからなる方法。２９．第１の剤がヒト・ＣＴＬＡ４−免疫グロブリン融合蛋白である請求項２８の方法。３０．第１の剤が抗Ｂ７−１抗体もしくはそのフラグメント、抗Ｂ７−２抗体もしくはそのフラグメント、または抗Ｂ７−１抗体および抗Ｂ７−２抗体の両方もしくはそれらのフラグメントである請求項２８の方法。３１．抗Ｂ７−１抗体が抗ヒト・Ｂ７−１モノクローナル抗体であり、抗Ｂ７ −２抗体が抗ヒト・Ｂ７−２モノクローナル抗体である請求項３０の方法。３２．第２の剤が抗ヒト・ＬＦＡ−１モノクローナル抗体またはそのフラグメントである請求項２８の方法。３３．第２の剤が、抗ｇｐ３９、抗ＩＣＡＭ−１、抗ＩＣＡＭ−２、および抗４８と一緒になった抗ＣＤ２からなる群より選択される抗体である請求項２８の方法。３４．さらに、ドナー骨髄およびドナーＴ細胞をレシピエントに投与することからなる請求項２８の方法。３５．ドナー同種異系細胞のレシピエントによるドナー同種異系細胞に対する拒絶反応を抑制する方法であって、ａ）レシピエントＴ細胞における共刺激シグナルの発生を阻害する第１の剤；およびｂ）Ｔ細胞に対する抗原を提示している細胞へのレシピエントＴ細胞の付着を阻害する第２の剤をレシピエントに投与することからなる方法。３６．第１の剤が可溶性形態のＣＴＬＡ４である請求項３５の方法。３７．可溶性形態のＣＴＬＡ４がヒト・ＣＴＬＡ４−免疫グロブリン融合蛋白である請求項３６の方法。３８．第１の剤が抗Ｂ７−１抗体もしくはそのフラグメント、抗Ｂ７−２抗体もしくはそのフラグメント、または抗Ｂ７−１抗体および抗Ｂ７−２抗体の両方もしくはそれらのフラグメントである請求項３５の方法。３９．抗Ｂ７−１抗体が抗ヒト・Ｂ７−１モノクローナル抗体であり、抗Ｂ７ −２抗体が抗ヒト・Ｂ７−２モノクローナル抗体である請求項３８の方法。４０．第２の剤が抗ＬＦＡ−１抗体またはそのフラグメントである請求項３５の方法。４１．抗ＬＦＡ−１抗体が抗ヒト・ＬＦＡ−１モノクローナル抗体またはそのフラグメントである請求項４０の方法。４２．第２の剤が、抗ｇｐ３９、抗ＩＣＡＭ−１、抗ＩＣＡＭ−２、および抗４８と一緒になった抗ＣＤ２からなる群より選択される抗体である請求項３５の方法。４３．さらに、同種異系細胞をレシピエントに投与することからなる請求項３５の方法。４４．さらに、ドナー同種異系細胞の移植の前に、ドナー造血細胞をレシピエントに前投与して、そのことによりドナー同種抗原に対してレシピエントＴ細胞を馴化させることからなる請求項３５の方法。４５．ドナー同種異系細胞が組織または器官からなる請求項３５の方法。４６．組織または器官が肝臓、腎臓、心臓、肺、膵臓島、腸、結腸、または皮膚である請求項４５の方法。４７．さらに、第１ならびに第２の剤をレシピエントに投与する前に、ドナー同種異系細胞を第１ならびに第２の剤とインビトロで接触させることからなる請求項３５の方法。４８．抗原に対するＴ細胞による応答を阻害する方法であって、ａ）Ｔ細胞における共刺激シグナルを阻害する第１の剤；およびｂ）Ｔ細胞における増殖シグナルを阻害する第２の剤にＴ細胞を接触させることからなり、そのことにより第１ならびに第２の剤がＴ細胞による抗原に対する応答を阻害するものである方法。４９．第１の剤が、Ｔ細胞上の受容体と、Ｔ細胞に対する抗原を提示している細胞上の共刺激分子との間の相互作用を阻害する請求項４８の方法。５０．Ｔ細胞上の受容体がＣＤ２８である請求項４９の方法。５１．Ｔ細胞上の受容体がＣＴＬＡ４である請求項４９の方法。５２．共刺激分子がＢ７−１またはＢ７−２である請求項４９の方法。５３．第１の剤が可溶性形態のＣＴＬＡ４である請求項４９の方法。５４．可溶性形態のＣＴＬＡ４がヒト・ＣＴＬＡ４−免疫グロブリン融合蛋白である請求項５３の方法。５５．第１の剤が抗Ｂ７−１抗体もしくはそのフラグメント、抗Ｂ７−２抗体もしくはそのフラグメント、または抗Ｂ７−１抗体および抗Ｂ７−２抗体の両方もしくはそれらのフラグメントである請求項４９の方法。５６．抗Ｂ７−１抗体が抗ヒト・Ｂ７−１モノクローナル抗体であり、抗Ｂ７ −２抗体が抗ヒト・Ｂ７−２モノクローナル抗体である請求項３８の方法。５７．第１の剤が、Ｔ細胞における共刺激シグナルの発生を阻害するように細胞内で作用する請求項４９の方法。５８．第２の剤が、Ｔ細胞上の受容体とＴ細胞増殖因子との間の相互作用を阻害する請求項４９の方法。５９．Ｔ細胞増殖因子が、インターロイキン−１α、インターロイキン−１β 、インターロイキン−２、インターロイキン−４、インターロイキン−６、インターロイキン−７、インターロイキン−９、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、インターロイキン−１５、インターロイキン−Ｔ、およびインターフェロン−ガンマからなる群より選択される請求項５８の方法。６０．第２の剤が、Ｔ細胞上の受容体またはＴ細胞増殖因子のいずれかに結合する抗体である請求項５８の方法。６１．第２の剤が抗インターロイキン−２受容体抗体またはそのフラグメントである請求項６０の方法。６２．第２の剤が、Ｔ細胞における増殖シグナルの発生を阻害するように細胞内で作用する請求項４９の方法。６３．骨髄移植レシピエントにおける対宿主移植片疾患を抑制する方法であって、ドナーＴ細胞からなる第１の細胞集団をインビトロにおいてａ）レシピエント同種抗原を発現する第２の細胞集団；ｂ）ドナーＴ細胞における共刺激シグナルを阻害する第１の剤；およびｃ）ドナーＴ細胞における増殖シグナルを阻害する第２の剤と接触させることからなり、そのことにより、第１ならびに第２の剤がレシピエントの同種抗原を発現している細胞に対するドナーＴ細胞による応答を阻害して、第１の細胞集団の骨髄移植レシピエントへの投与によりレシピエントにおける対宿主移植片疾患が抑制される方法。６４．第１の細胞集団が、骨髄細胞、末梢血細胞および脾臓細胞からなる群より選択される請求項６３の方法。６５．第１の剤がヒト・ＣＴＬＡ４−免疫グロブリン融合蛋白である請求項６３の方法。６６．第１の剤が抗Ｂ７−１抗体もしくはそのフラグメント、抗Ｂ７−２抗体もしくはそのフラグメント、または抗Ｂ７−１抗体および抗Ｂ７−２抗体の両方もしくはそれらのフラグメントである請求項６３の方法。６７．抗Ｂ７−１抗体が抗ヒト・Ｂ７−１モノクローナル抗体であり、抗Ｂ７ −２抗体が抗ヒト・Ｂ７−２モノクローナル抗体である請求項６６の方法。６８．第２の剤が抗インターロイキン−２受容体抗体またはそのフラグメントである請求項６３の方法。６９．さらに、第１の細胞集団をインビトロで第１ならびに第２の剤と接触させる前に、第１ならびに第２の剤の不存在下インビトロにおいて第１の細胞集団を第２の細胞集団と接触させることからなる請求項６３の方法。７０．さらに、第１の細胞集団をレシピエントに投与することからなる請求項６４の方法。７１．さらに、第１の剤をレシピエントに投与すること、第２の剤をレシピエントに投与すること、あるいは第１および第２の剤両方をレシピエントに投与することからなる請求項６３の方法。７２．医薬上許容される担体中の一定量のヒト・ＣＴＬＡ４−免疫グロブリン融合蛋白および一定量の抗ヒト・ＬＦＡ−１抗体からなる、投与に適する医薬組成物。７３．医薬上許容される担体中のａ）抗ヒト・Ｂ７−１モノクローナル抗体もしくはそのフラグメント、抗ヒト・Ｂ７−２モクローナル抗体もしくはそのフラグメント、または抗ヒト・Ｂ７− １モノクローナル抗体および抗ヒト・Ｂ７−２モノクローナル抗体もしくはそれらのフラグメントからなる群より選択される一定量の第１の剤；およびｂ）一定量の抗ヒト・ＬＦＡ−１抗体からなる、投与に適する医薬組成物。７４．医薬上許容される担体中の一定量のヒト・ＣＴＬＡ４−免疫グロブリン融合蛋白および一定量の抗ヒト・インターロイキン−２受容体抗体からなる、投与に適した医薬組成物。７５．医薬上許容される担体中のａ）抗ヒト・Ｂ７−１モノクローナル抗体もしくはそのフラグメント、抗ヒト・Ｂ７−２モクローナル抗体もしくはそのフラグメント、または抗ヒト・Ｂ７− １モノクローナル抗体および抗ヒト・Ｂ７−２モノクローナル抗体もしくはそれらのフラグメントからなる群より選択される一定量の第１の剤；およびｂ）一定量の抗ヒト・インターロイキン−２受容体抗体からなる、投与に適する医薬組成物。７６．ドナー骨髄およびドナーＴ細胞を移植されたレシピエントにおける対宿主移植片疾患を抑制する方法であって、ドナーＴ細胞における共刺激シグナルを阻害する少なくとも１つの剤をレシピエントに投与することからなる方法。７７．少なくとも１つの剤が抗Ｂ７−１および抗Ｂ７−２抗体の混合物である請求項７６の方法。