ES2936482T3 - Agentes antiinfecciosos - Google Patents

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Neil Norcross
Chimed Jansen
Beatriz Baragana
Ian Gilbert
Laura Cleghorn
Susan Davis
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Abstract

La presente invención se relaciona con una nueva clase de inhibidores de compuestos de cromeno-2-carboxamida de fórmula general (I) en la que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 y X son como se definen en este documento, para su uso en medicina. , y su uso como agentes antiinfecciosos en particular, a las composiciones que los contienen, a los procesos para su preparación ya los intermedios usados en dichos procesos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Agentes antiinfecciosos
Sector técnico de la invención
La presente divulgación se refiere a un nuevo grupo de agentes antiinfecciosos, a su uso en medicina, a composiciones que los contienen, a procedimientos para su preparación y a productos intermedios usados en tales procedimientos. En particular, la presente divulgación proporciona compuestos de cromono-2-carboxamida para su uso en el tratamiento o la prevención de enfermedades infecciosas incluidas: malaria; criptosporidiosis; tuberculosis (TBC); esquistosomiasis, tripanosomiasis africana (TAH y/o TAA); enfermedad de Chagas; y/o leishmaniosis, y en el tratamiento o la prevención de infecciones bacterianas incluidas: infecciones bacterianas derivadas de Streptococcus pneumoniae y/o Enterococcus; o infecciones bacterianas derivadas de las especies bacterianas ESKAPE (Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumanii, Pseudomonas aeruginosa y/o especies de Enterobacter).
Antecedentes
Más de 350 millones de personas corren el riesgo de contraer enfermedades infecciosas tales como la malaria, la criptosporidiosis, la tuberculosis, la esquistosomiasis, la tripanosomiasis africana, la enfermedad de Chagas y la leishmaniosis. Las terapias existentes para tratar estas enfermedades infecciosas son cada vez más ineficaces debido al desarrollo de resistencias de los microbios que provocan estas afecciones a los fármacos usados tanto en la prevención como en el tratamiento de la enfermedad. También hay una falta de terapias eficaces en algunas manifestaciones de estas enfermedades.
Malaria
La malaria es una enfermedad devastadora con más de 214 millones de casos clínicos en 2015. Se estima que en 2015 se produjeron 438 000 muertes atribuidas a la malaria (OMS, Malaria Report 2015), la mayoría entre niños menores de cinco años en el África subsahariana. La malaria está causada por la infección de los glóbulos rojos por un parásito protozoario. Se sabe que cinco especies del protozoo Plasmodium causan infección en seres humanos: Plasmodium falciparum; Plasmodium vivax; Plasmodium ovale; Plasmodium malariae y Plasmodium knowlesi. La infiltración de protozoos de Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium ovale o Plasmodium malariae en el torrente sanguíneo se produce por una única fuente, la picadura de la hembra del mosquito Anopheles. Por lo tanto, existe una demanda de agentes que sean eficaces contra las infecciones por Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium ovale, Plasmodium malariae y Plasmodium knowlesi.
La forma más potencialmente mortal de la malaria se puede atribuir a células sanguíneas infectadas por el parásito Plasmodium falciparum, y puede causar insuficiencia renal o hepática, coma y muerte. Se estima que cada minuto muere un niño a causa de infecciones palúdicas por Falciparum, por lo tanto la necesidad de un tratamiento eficaz no podría ser mayor. Se necesitan agentes que sean: eficaces contra las infecciones por Plasmodium falciparum; eficaces contra las infecciones por Plasmodium falciparum y Plasmodium vivax; eficaces contra las infecciones por Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium malariae, Plasmodium ovale y Plasmodium knowlesi.
Las especies de Plasmodium requieren dos hospedadores, el ser humano y el mosquito, para completar su ciclo vital. En seres humanos la infección se inicia por la inoculación de esporozoitos en la saliva de un mosquito infectado. Una vez dentro del cuerpo, los esporozoitos migran al hígado y allí infectan a los hepatocitos, donde se diferencian, a través del estadio exoeritrocítico intracelular, al estadio de merozoito, que infecta a los glóbulos rojos para iniciar la replicación cíclica en el estadio sanguíneo asexual. El ciclo vital se completa con la diferenciación de una serie de merozoitos en los glóbulos rojos para dar gametocitos de estadio sexual, que son ingeridos por el mosquito, donde se desarrollan a través de una serie de estadios en el intestino medio para producir esporozoitos que migran a la glándula salival.
Muchos países han experimentado un resurgimiento de los casos de malaria causada por Plasmodium falciparum debido a la propagación de parásitos que son cada vez más resistentes tanto a la cloroquina, el fármaco más usado para la prevención y el tratamiento, como a tratamientos alternativos más recientes, tales como el artesunato. Véase Wellems et al, JID 2001; 184, Noedl et al, N Engl J Med 2008; 359:2619-2620, Tun et al, The Lancet. Infectious Diseases 2015; 15:415-21 y Takala-Harrison et al, JID 2015, 211:670-9. El desarrollo de nuevos tratamientos antipalúdicos con un modo de acción novedoso es de gran importancia, en particular dada la rápida propagación de la resistencia del parásito incluso en el caso de las terapias combinadas más recientes basadas en la artemisinina.
Por lo tanto, existe una necesidad de agentes antipalúdicos nuevos y eficaces con modos de acción novedosos. En particular, se necesitan nuevos agentes antipalúdicos que: sean eficaces contra los parásitos resistentes a los fármacos; sean eficaces contra las infecciones por Plasmodium falciparum resistentes a los fármacos tales como, por ejemplo, las infecciones por Plasmodium falciparum resistentes a la cloroquina; que sean activos contra el estadio hepático; que sean activos contra la forma de hipnozoíto; y/o que puedan usarse para el tratamiento con una dosis única; y/o que puedan usarse para el tratamiento profiláctico.
Criptosporidiosis
La criptosporidiosis es una enfermedad diarreica causada por la especie de parásito Cryptosporidium. Actualmente, hay 27 especies reconocidas de Cryptosporidium, incluidas 20 especies que infectan a los seres humanos, siendo C. parvum o C. hominis las responsables de la mayoría de las infecciones humanas, Int. J. For Parasitology 2015, 45, 367-373. La criptosporidiosis se identificó por primera vez como causa de infección humana en 1976, Gastroenterology, 1976, 70, 592-598. Un estudio más reciente que investigó la causa y el efecto de la diarrea en más de 22.000 niños menores de 5 años, reconoció a Cryptosporidium como la segunda causa más común tanto de diarrea como de morbilidad, después del rotavirus, The Lancet, 2013, 382, 9888, 209-222. La criptosporidiosis es una infección oportunista y los individuos con sistemas inmunitarios poco desarrollados, tales como los niños menores de 5 años, y los individuos inmunodeprimidos con coinfección por el VIH, tienen un mayor riesgo de infección y mortalidad. La malnutrición en la primera infancia también se asocia con la diarrea persistente y la infección por Cryptosporidium, Lancet Infect. Dis., 2015, 15, 85-94. La nitazoxanida es el único fármaco aprobado por la FDA para el tratamiento de la criptosporidisosis. Se ha establecido que la eficacia de la nitazoxanida es subóptima y no es un tratamiento eficaz para todos los pacientes infectados únicamente por Cryptosporidium, J. Infect. Dis., 2001, 184, 103-06 y Clin. Gastroenterol. Hepatol., 2006, 4, 320-24. La nitazoxanida también demostró ser ineficaz en ensayos clínicos con pacientes coinfectados por Cryptosporidium y VIH, que no estaban en tratamiento conjunto con terapia antirretrovírica contra el VIH, Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 1998, 92, 663-66 y BMC Infect. Dis. 2009, 9, 195. Por lo tanto, se necesitan nuevos agentes antiinfecciosos que sean eficaces contra el Cryptosporidium y, en particular, agentes que sean adecuados para su uso en el tratamiento o la prevención de: sujetos infectados únicamente por Cryptosporidium; sujetos inmunodeprimidos infectados por Cryptosporidium, tales como sujetos coinfectados por Cryptosporidium y VIH.
Leishmaniosis
La leishmaniosis está causada por varias especies de Leishmania transmitidas a los hospedadores (seres humanos y animales) por la picadura de flebótomos hembra infectados.
Existen tres formas principales de leishmaniosis humana, la visceral (la forma más grave de la enfermedad), la cutánea (la más común) y la mucocutánea (la más desfigurante).
La mayoría de las leishmaniosis pueden transmitirse de animales a seres humanos y los hospedadores reservorios incluyen muchas especies de mamíferos. Los perros son importantes reservorios de Leishmania infantum (L. infantum), que es una de las especies responsables de la leishmaniosis visceral. Los animales también pueden padecer formas viscerales, cutáneas y mucocutáneas de la enfermedad.
En 2012 se declararon aproximadamente 1,3 millones de nuevos casos de leishmaniosis y entre 20000 y 30000 muertes al año, Alvar et al, PLoS ONE, 2012, 7(5): e35671). En la actualidad, el tratamiento eficaz de la leishmaniosis se ve obstaculizado por la falta de eficacia, la escasa seguridad y la resistencia a los fármacos de los medicamentos actualmente disponibles, Seifert K., Open Med. Chem. J. 2011; 5:31-39.
Por ello, existe una necesidad médica real no satisfecha de nuevos fármacos orales y terapias combinadas para el tratamiento y la potencial eliminación de la leishmaniosis en determinadas áreas geográficas, y especialmente para el desarrollo de múltiples agentes orales nuevos para tales tratamientos. En particular, existe la necesidad de nuevos agentes antiinfecciosos que sean eficaces contra Leishmania, y en particular de agentes que sean adecuados para su uso en el tratamiento o la prevención de: Leishmania donovani, Leishmania infantum y/o L. chagasi, todas ellas causantes de leishmaniosis visceral; L. mexicana, L. amazonensis, L. venezuelensis, L. tropica, L. major, L. aethiopica, Leishmania viannia braziliensis, L. v. guyanensis, L. v. panamensis, L. v, peruviana que se asocian a otras formas de la enfermedad y en particular causan leishmaniosis cutánea; Leishmania v. braziliensis, L. v. guyanensis y L. v. panamensis que también pueden causar leishmaniosis mucocutánea.
Enfermedad de Chagas
La enfermedad de Chagas se debe al parásito protozoario Trypanosoma cruzi. La principal vía de transmisión a los seres humanos y a otros mamíferos son las heces infectadas de un insecto de tipo triatomino hematófago. Sin embargo, también puede transmitirse de la madre al feto y por transfusión sanguínea de sangre contaminada.
La enfermedad de Chagas es endémica en Centroamérica y Sudamérica, donde se estima que hay entre 7 y 8 millones de personas infectadas. La migración de poblaciones de países endémicos ha aumentado la distribución geográfica de la enfermedad de Chagas, con un número creciente de casos de enfermedad de Chagas en EE. UU., Canadá y en muchas partes de Europa. Aproximadamente se dan 13000 muertes cada año debido a la cardiopatía inducida por Chagas causada por la infección crónica chagásica.
Hasta la fecha, solo dos fármacos han demostrado su eficacia contra la enfermedad de Chagas: el benznidazol y el nifurtimox. Ambos medicamentos son más eficaces para curar la enfermedad cuando se administran poco después de la infección (fase aguda). Sin embargo, su eficacia disminuye cuando se administran en estadios posteriores de la enfermedad y sus efectos secundarios también reducen el cumplimiento terapéutico por parte de los pacientes. Por lo tanto, existe una necesidad urgente de tratamientos nuevos, más seguros y más eficaces para la enfermedad de Chagas y, especialmente, de nuevos agentes antiinfecciosos que sean eficaces contra la infección por Trypanosoma cruzi.
Tripanosomiasis africana humana (TAH)
La tripanosomiasis africana humana (TAH) o enfermedad del sueño africana está causada por el parásito protozoario Trypanosoma brucei. La transmiten las moscas infectadas del género Glossina, también llamadas moscas tsetsé, tsétsé o sesé, de madre a hijo durante el embarazo, así como a través de homoderivados.
Existen dos formas de la enfermedad dependiendo de la subespecie del parásito: Trypanosoma brucei gambiense (T. b. gambiense) y Trypanosoma brucei rhodesiense (T. b. rhodesiense). Trypanosoma brucei gambiense prevalece en África occidental y central y representa aproximadamente el 95 % de los casos declarados de tripanosomiasis y causa una infección crónica. Trypanosoma brucei rhodesiense se encuentra en África oriental y meridional y representa aproximadamente el 5 % de los casos declarados.
La enfermedad tiene dos estadios distintos. El estadio 1 se presenta con síntomas inespecíficos inclusive fiebre, erupción cutánea y fatiga. La TAH en estadio 1 no tratada da lugar a la enfermedad en estadio 2 o fase neurológica, en la que los parásitos invaden el sistema nervioso central causando síntomas neurológicos graves y, finalmente, la muerte.
Actualmente se usan cinco fármacos para el tratamiento de la tripanosomiasis africana. El estadio 1 de la enfermedad se trata con pentamidina intravenosa o intramuscular, para T. b. gambiense, o suramina intravenosa, para T. b. rhodesiense. El estadio 2 de la enfermedad se trata con melarsoprol intravenoso, o melarsoprol intravenoso en combinación con nifurtimox oral, o eflornitina intravenosa sola, o eflornitina en combinación con nifurtimox. Los cuatro fármacos, tanto si se usan individualmente como en estas terapias combinadas, tienen reacciones adversas graves. Por ello, se necesitan urgentemente tratamientos nuevos, más seguros y más eficaces para la TAH. En particular, se necesitan nuevos agentes antiinfecciosos más seguros y más eficaces que presenten eficacia contra las infecciones por Trypanosoma brucei gambiense (T. b. gambiense) y/o Trypanosoma brucei rhodesiense (T. b. rhodesiense).
Tripanosomiasis animal
La tripanosomiasis animal también se conoce como tripanosomiasis africana animal (TAA), y es una enfermedad de animales vertebrados no humanos. La tripanosomiasis africana humana (TAH) se conoce comúnmente como enfermedad del sueño. La tripanosomiasis animal está causada por varias especies y subespecies de parásitos del género Trypanosoma, tripanosomas que son patógenos para los animales, incluidas Trypanosoma congolense, Trypanosoma vivax, Trypanosoma brucei, Trypanosoma simiae, Trypanosoma godfreyi, Trypanosoma suis y Trypanosoma evansi. Se cree que probablemente existen otras especies o subespecies de tripanosomas no identificadas que son patógenas para los animales y también causan tripanosomiasis animal. La TAH está causada por Trypanosoma brucei gambiense y Trypanosoma brucei rhodesiense.
Los tripanosomas son parásitos protozoarios de la familia Trypanosomatidae y la mayoría de los tripanosomas son transmitidos por moscas del género Glossina, infectando los tripanosomas la sangre del animal. Por ello, un animal infectado puede actuar como reservorio de la enfermedad, con el potencial resultante de propagación adicional de la enfermedad en las áreas afectadas por la mosca del género Glossina. En África, la enfermedad es más común en las áreas afectadas por la mosca del género Glossina y se propaga por la picadura de una mosca infectada del género Glossina o de otras moscas infectadas. La tripanosomiasis animal puede infectar a muchos animales diferentes, incluido el ganado doméstico, tal como vacas, cabras, cerdos, ovejas y camellos. También se ha descubierto que animales salvajes, incluidos elefantes y leopardos, presentan tripanosomiasis. Diferentes parásitos afectan a diferentes grupos de organismos.
Los animales están principalmente en riesgo de contraer esta enfermedad allí donde existen tripanosomas y el vector de la mosca del género Glossina, y en África este "cinturón de la mosca tsetsé" se encuentra entre la latitud 15° N y 29° S, desde el borde meridional del desierto del Sáhara hasta Zimbabue, Angola y Mozambique.
Aunque la AAT se encuentra más comúnmente en la región del "cinturón de la mosca tsetsé" de África, ahora hay evidencia de que los tripanosomas pueden propagarse más allá de esta área y, por lo tanto, el potencial de propagación de la enfermedad con los riesgos asociados para los animales domésticos y salvajes se extiende más allá de África. Este riesgo de propagación de la enfermedad más allá del cinturón de la mosca tsetsé se asocia en particular con Trypanosoma vivax (T. vivax), que no parece necesitar de la mosca del género Glossina para su transmisión. Como indica Spickler en "African Animal Trypanosomiasis" http://www.cfsph.iastate.edu/Diseaseinfo/factsheets.php, T. vivax también se encuentra en América del Sur y Central y en el Caribe, con el riesgo potencial asociado de transmisión a los animales a través de vectores mecánicos en estas regiones.
Por lo tanto, sería deseable proporcionar un tratamiento para la tripanosomiasis animal que sea eficaz contra las formas de Trypanosoma vivax y/o Trypanosoma congolense de la enfermedad en particular.
Dado que también existe una forma de la enfermedad que infecta a los animales, también sería de gran valor desarrollar agentes antiinfecciosos eficaces contra la tripanosomiasis animal africana.
Esquistosomiasis
La esquistosomiasis es una enfermedad infecciosa desatendida y letal causada por gusanos trematodos parasitarios del género Schistosoma (principalmente Schistosoma haematobium, S. mansoni o S. japonicum). Según estimaciones de la OMS, al menos 218 millones de personas requirieron tratamiento preventivo contra la esquistosomiasis en 2015 (OMS, http://www.who.int/schistosomiasis/en/). La OMS estima que cada año se producen en el mundo aproximadamente 200.000 muertes por esquistosomiasis. Los efectos económicos y sanitarios de la esquistosomiasis son considerables debido a la discapacidad causada por la enfermedad. En los niños, la esquistosomiasis puede causar anemia, retraso del crecimiento y menor capacidad de aprendizaje. La esquistosomiasis también puede exacerbar los efectos de la malaria, la tuberculosis, el VIH y la hepatitis, véase Lancet, 2014; 383: 2253-64.
No hay vacuna disponible y, por lo tanto, el control de la esquistosomiasis se basa en el tratamiento a gran escala de las poblaciones en riesgo. El praziquantel (PZQ) es el único fármaco recomendado para la esquistosomiasis y la estrategia de control se ve facilitada por este único agente quimioterápico. Si surge resistencia al PZQ, el control sostenible de la esquistosomiasis correría un grave riesgo.
Aunque el PZQ es eficaz contra los gusanos esquistosomas adultos, tiene escasa actividad contra las larvas inmaduras de esquistosoma, Lancet, 2014; 383: 2253-64. En áreas de reinfección constante se requieren tratamientos repetidos con un intervalo de 3-6 semanas para destruir a las crías de gusanos resistentes y mejorar el tratamiento farmacológico. La resistencia al PZQ puede inducirse experimentalmente, Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 2002: 96, 465-69. La amenaza de una resistencia emergente al PZQ causada por la monoterapia masiva es una cuestión importante. Estos factores crean una necesidad médica no satisfecha.
Tuberculosis (TBC)
La tuberculosis (TBC) es una infección bacteriana causada por Mycobacterium tuberculosis y se transmite fácilmente de persona a persona cuando un sujeto con una infección activa de TBC expulsa gotitas que contienen la bacteria de la TBC de sus pulmones al toser o estornudar. La tuberculosis es la segunda causa de muerte debida a un agente infeccioso. Se ha informado de que en 2013 9 millones de personas desarrollaron TBC, lo que provocó 1,5 millones de muertes (OMS 2014). Las terapias de primera línea actualmente disponibles para el tratamiento de la TBC son anticuadas e inadecuadas, y normalmente consisten en seis meses de tratamiento con un cóctel de hasta 4 terapias con fármacos diferentes, cada uno de los cuales fue descubierto hace más de 50 años. Las limitaciones de la pauta posológica actual contribuyen a las altas tasas de incumplimiento, el aumento de la transmisión, la resistencia a los fármacos y, finalmente, la muerte. En 2013 se estimó que 500.000 personas desarrollaron una forma de tuberculosis multirresistente a los fármacos (MDR-TB por sus siglas en inglés). Esta forma resistente a los fármacos de la enfermedad, la MDR-TB, es insensible tanto a la isoniazida como a la rifampicina, que son las especies activas en las dos principales terapias farmacológicas para el tratamiento de la TBC. Además, Günther, G., Clin. Med. (Londres), 2014 Jun; 14(3): 279-852014, declaró que ahora hay un número creciente de personas infectadas con una forma de TBC derivada de bacterias muy resistentes (XDR-TB por sus siglas en inglés) que son resistentes a los componentes de las terapias tanto de primera como de segunda línea. Se acepta que, como consecuencia de estas cepas de bacterias resistentes emergentes, se necesitan urgentemente fármacos novedosos para abordar eficazmente la TBC, Koul, A., et al., Nature, 469, 483-490 (2011) y Wong, E. B., et al., Trends Microbiol. 2013 Sep; 21(9): 493-501), http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23764389. Por lo tanto, hay una necesidad de nuevos medicamentos que reduzcan la duración del tratamiento actual; sean eficaces contra la TBC, MDR, y/o XDR-TB; sean eficaces para su uso como terapia de fármaco único y sean eficaces para su uso en combinación con una o más terapias farmacológicas existentes.
Infecciones bacterianas
Es bien sabido que el aumento de la resistencia a los antibióticos es actualmente un problema importante en todo el mundo, OMS. Antimicrobial Resistance: Global Report on Surveillance, 2014. Las bacterias implicadas en enfermedades humanas incluyen bacterias gramnegativas, Neisseria gonorrhoeae, Klebsiella, Acinetobacter, Pseudomonas aeruginosa, E. coli. y Yersinia pestis, y bacterias grampositivas Streptococcus, Staphylococcus, Corynebacterium, Listeria (un cocobacilo), Bacillus y Clostridium.
Las bacterias gramnegativas causan infecciones que incluyen neumonía, infecciones del torrente sanguíneo, infecciones de heridas o del sitio quirúrgico y meningitis en entornos sanitarios. Las bacterias gramnegativas son resistentes a múltiples fármacos y son cada vez más resistentes a la mayoría de los antibióticos disponibles. Las bacterias grampositivas causan infecciones que incluyen el carbunco, la septicemia y la meningitis.
Ejemplos de bacterias que suponen una amenaza importante para la salud pública son Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (MRSA), Streptococcus pneumoniae resistente a la penicilina y Enterococcus resistente a la vancomicina. Además, también existe la amenaza de las infecciones bacterianas derivadas del llamado grupo ESKAPE de especies bacterianas, Enterococcus faecium, que también incluye Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumanii, Pseudomonas aeruginosa y especies de Enterobacter. Por lo tanto, existe una necesidad médica urgente no satisfecha de nuevos antibióticos y, en particular, de nuevos agentes antiinfecciosos para el tratamiento eficaz de infecciones bacterianas derivadas de: uno o más de Streptococcus pneumonia; y/o Enterococcus; o uno o más del grupo ESKAPE de especies bacterianas, Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumanii, Pseudomonas aeruginosa y/o Enterobacter. Concretamente, la Escherichia coli es una de las principales causas de infecciones bacterianas. Por lo tanto, sería especialmente deseable que estos nuevos antibióticos se dirigieran a una función celular vital del patógeno, fueran selectivos para la bacteria diana y dificultaran el desarrollo de resistencia por parte de la bacteria mediante mutaciones.
Lisil t-ARN sintetasa (LysRS o KRS1)
La síntesis de proteínas es un proceso complejo de varias etapas en el que intervienen muchas enzimas. Las aminoacil-ARNt sintetasas (aaRS) catalizan la unión de aminoácidos a sus ARN de transferencia afines, desempeñando un papel clave en la traducción de proteínas. La inhibición de las aaRS se ha utilizado con éxito contra las infecciones bacterianas con un inhibidor de las aaRS, la mupirocina, actualmente en uso clínico para el tratamiento tópico de las infecciones por Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (SARM). La mupirocina es un inhibidor de la isoleulcil-ARNt sintetasa (IleRS).
Recientemente, la cladosporina se identificó como un inhibidor de la lisil-ARNt sintetasa (LysRS). Según lo declarado por Scott et al., J. Antibiot. 1971 24, 747-755, la cladosporina es un metabolito secundario fúngico. La cladosporina es un inhibidor nanomolar de los estadios sanguíneo y hepático de Plasmodium. Ha demostrado selectividad por Plasmodium falciparum en comparación con las células humanas. Se ha demostrado que la cladosporina inhibe PfLysRS (CI50 = 61 nM) con una selectividad de más de 100 veces frente a HsLysRS, Hoepfner et al., Cell Host Microbe, 2012, 11(6):654-63. La cladosporina inhibe la lisil-ARNt sintetasa de Schistosoma mansoni (Sm) (Sm LysRS CI50 = 97 nM) con una selectividad de más de 60 veces frente a HsLysRS, Sharma et al., PLoS Negl. Trop. Dis 10(11); e0005084.
Sin embargo, la cladosporina es poco biodisponible, lo cual es un requisito clave para cualquier agente terapéutico activo, no solo para un potencial agente antipalúdico.
Recientemente, la esencialidad in vivo de LysRS micobacterianas ha sido demostrada por Ravishankar et al. PLOSone, 2016, 11(1):e0147188).
El documento JP2006/069906 se refiere a un compuesto de cromona que muestra excelentes efectos de control de enfermedades de plantas y a un agente de control de enfermedades de plantas. El compuesto de cromona está representado por la fórmula (1):
Figure imgf000007_0001
donde R1, R2 y R3 son iguales o diferentes, y son cada uno un átomo de hidrógeno o un grupo metilo;
R4 es un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C1-C3;
R5 es un grupo alquilo C1-C3, un grupo haloalquilo C1-C3, un grupo alquenilo C2-C3, un grupo haloalquenilo C2-C3, un grupo alcoxi C1-C3, un grupo haloalcoxi C1-C3, un grupo cicloalquilo C3-C6, un grupo cicloalcoxi C3-C6, un grupo amino, un grupo mono(alquil-C1-C3)amino, un grupo di(alquil-C1-C3)amino, un grupo ciano, un grupo nitro, un grupo hidroxi, un átomo de halógeno, un grupo NR7COR8, un grupo COR9, un grupo SR10, un grupo halopropeniloxi, un grupo etinilo, un grupo propargiloxi o un grupo cianometiloxi;
R6 es un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C1-C3, un grupo haloalquilo C1-C3, un grupo alcoxi C1-C3, un grupo haloalcoxi C1-C3, un grupo amino, un grupo ciano, un grupo nitro, un grupo hidroxi, un átomo de halógeno, un grupo NR11COR12, un grupo COR13, un grupo propargiloxi o un grupo cianometiloxi; R7, R8, R10, R11 y R12 son iguales o diferentes, y son cada uno un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C1-C3; y
R9 y R10 son iguales o diferentes, y son cada uno un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C1-C3, un grupo alcoxi C1-C3, un grupo amino, un grupo mono(alquil-C1-C3)amino y un grupo di(alquil-C1-C3)amino (reivindicación 1).
La presente invención proporciona un grupo novedoso de agentes antiinfecciosos que son compuestos de cromono-2-carboxamida e inhibidores de Plasmodium falciparum 3D7 que tienen potencial como tratamiento de enfermedades infecciosas y especialmente de malaria, criptosporidiosis, tuberculosis (TBC), esquistosomiasis, tripanosomiasis africana humana (TAH), tripanosomiasis africana animal (TAA), enfermedad de Chagas y leishmaniosis.
El grupo novedoso de compuestos de cromono-2-carboxamida según la presente invención tiene potencial para el tratamiento de infecciones por Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium ovale, Plasmodium malariae y Plasmodium knowlesi. En particular, el grupo novedoso de agentes antiinfecciosos según la presente invención tiene potencial para el tratamiento de: infecciones por Plasmodium falciparum; infecciones por Plasmodium falciparum y Plasmodium vivax; infecciones por Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium ovale, Plasmodium malariae y Plasmodium knowlesi; infecciones por Plasmodium falciparum resistentes a fármacos, tales como por ejemplo infecciones por Plasmodium falciparum resistentes a cloroquina; tiene actividad contra formas esquizontales en estadio hepático; actividad contra formas latentes en estadio hepático de P. vivax; tiene actividad contra la forma de hipnozoíto; y/o puede usarse para el tratamiento con una dosis única; y/o puede usarse para el tratamiento profiláctico.
El grupo novedoso de compuestos de cromono-2-carboxamida según la presente invención tienen potencial para el tratamiento de infecciones por Cryptosporidium. En particular, el grupo novedoso de agentes antiinfecciosos según la presente invención tiene potencial para el tratamiento de: sujetos infectados únicamente por Cryptosporidium; sujetos inmunodeprimidos infectados por Cryptosporidium tales como sujetos coinfectados por Cryptosporidium-VIH.
El grupo novedoso de compuestos de cromono-2-carboxamida según la presente invención tiene potencial para el tratamiento de nuevos agentes antiinfecciosos que son eficaces contra las infecciones por Leishmania. En particular, el grupo novedoso de agentes antiinfecciosos según la presente invención tiene potencial para el tratamiento de: infecciones por Leishmania infantum; sujetos infectados por: Leishmania donovani, Leishmania infantum y/o L. chagasi, que son todas causas de leishmaniosis visceral; L. mexicana, L. amazonensis, L. venezuelensis, L. tropica, L. major, L. aethiopica, Leishmania viannia braziliensis, L. v. guyanensis, L. v. panamensis, L. v, peruviana, que están asociadas a otras formas de la enfermedad y en particular causan leishmaniosis cutánea; y Leishmania v. braziliensis, L. v. guyanensis y L. v. panamensis que también pueden causar leishmaniosis mucocutánea.
El grupo novedoso de compuestos de cromono-2-carboxamida según la presente invención tiene potencial para el tratamiento de la enfermedad de Chagas. En particular, el grupo novedoso de agentes antiinfecciosos según la presente invención tiene potencial para el tratamiento de infecciones por Trypanosoma cruzi.
El grupo novedoso de compuestos de cromono-2-carboxamida según la presente invención tiene potencial para el tratamiento de la esquistosomiasis. En particular, el grupo novedoso de agentes antiinfecciosos según la presente invención tiene potencial para el tratamiento de: infecciones por Schistosoma haematobium, Schistosoma mansoni y Schistosoma japonicum.
El grupo novedoso de compuestos de cromono-2-carboxamida según la presente invención tiene potencial para el tratamiento de la tripanosomiasis africana humana (TAH). En particular, el grupo novedoso de agentes antiinfecciosos según la presente invención tiene potencial para el tratamiento de: infecciones por Trypanosoma brucei gambiense (T. b. gambiense) y/o Trypanosoma brucei rhodesiense (T. b. rhodesiense).
El grupo novedoso de compuestos de cromono-2-carboxamida según la presente invención tiene potencial para el tratamiento de la tuberculosis (TBC). En particular, el grupo novedoso de agentes antiinfecciosos según la presente invención tiene potencial para el tratamiento de la TBC mediante: la reducción de la duración del tratamiento requerido; la provisión de un tratamiento eficaz de infecciones por Mycobacterium tuberculosis; la provisión de un tratamiento eficaz de la TBC, MDR, y/o XDR-TB; es eficaz para su uso como terapia de fármaco único; es eficaz para su uso en combinación con una o más terapias farmacológicas existentes.
La presente invención proporciona un grupo novedoso de agentes antiinfecciosos que son compuestos de cromono-2-carboxamida que tienen potencial como nuevos antibióticos para su uso en el tratamiento o la prevención de infecciones por bacterias gramnegativas y/o grampositivas y en particular para su uso en el tratamiento eficaz de infecciones bacterianas derivadas de: uno o más de Streptococcus pneumoniae y/o Enterococcus; o uno o más del grupo ESKAPE de especies bacterianas, Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumanii, Pseudomonas aeruginosa y/o Enterobacter.
Las propiedades deseables de los compuestos de fórmula (I) según la presente invención incluyen: potencia contra Pf-KRS1; potencia contra Plasmodium falciparum 3D7; potencia contra Mtb; potencia contra Cryptosporidium parvum; potencia contra Leishmania donovani; Plasmodium falciparum 3D7; Plasmodium falciparum 3D7; Plasmodium falciparum 3D7; gusanos del género Schistosoma, tales como Schistosoma haematobium, Schistosoma mansoni, Schistosoma japonicum; baja toxicidad en células MRC-5 o HepG2; tanto potencia deseable contra Plasmodium falciparum (Pf) 3D7 como baja toxicidad en MRC-5 o HepG2; actividad deseable contra Plasmodium falciparum y Plasmodium vivax (Pv) frente a aislados clínicos; actividad deseable de bloqueo de la transmisión; potencial inhibidor de gametocitos; actividad frente a formas latentes en estadio hepático; buenas propiedades biofarmacéuticas tales como estabilidad física; buenos perfiles de solubilidad; estabilidad metabólica adecuada; propiedades ADME deseables (adsorción, distribución, metabolismo, excreción).
Sumario de la invención
La invención se define por las reivindicaciones adjuntas.
Según un primer aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula C-III:
Figure imgf000008_0001
donde n es 1 o 2;
donde X es un enlace;
donde Rx es un grupo ciclohexilo, ciclopentilo, ciclobutilo, tetrahidropiranilo o benzoxazol, pudiendo estar cada uno de dichos grupos Rx opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente de: OH, CH3 o F;
donde Rp es H o CH3 y donde cuando Rp es H, n es 1 o 2, y donde cuando Rp es CH3, n es 1;
donde R2 es H, OH, F, Cl, Br, -CH3, -CH2CH3, -OCH3 o -CN;
donde R3 es H, OH, F, Cl o -O(CH2)2NH2;
donde R4 es H, F, Br, OH, -OCH3, -C(O)NH2, -CH2OH, -C(O)OH, -NH2, - NHSO2CH3, -SO2NH2 o un grupo 1 H-tetrazol-5-ilo;
donde R5 y R6 se seleccionan cada uno independientemente entre H o CH3; con la condición de que cuando R2 = R3 = R4 = R5 = R6 = H, Rp no es H o Rx no es ciclohexilo; y donde uno de:
los compuestos es fluoro-8-hidroxi-W-((1-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
los compuestos es W-(ciclohexilmetil)-7-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
los compuestos es 8-fluoro-6-hidroxi-N-((1-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida; o
los compuestos es 6-hidroxi-N-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
o una sal, un hidrato, solvato, isómero óptico, geométrico o tautomérico, o polimorfo del mismo, veterinaria o farmacéuticamente aceptable.
Según otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula S-I:
Figure imgf000009_0001
donde R4 es un grupo -N(HSO2CH3;
donde R2 es H, OH, F, Cl, Br, -CH3, -CH2CH3, -OCH3 o -CN;
donde R3 es H, OH, F, Cl o -O(CH2)2NH2;
donde R5 y R6 se seleccionan cada uno independientemente entre H o CH3;
y donde R7 representa un grupo -X-Rx en el que X está representado por un grupo -(CH2)n-, en el que n es 1 o 2, o por un grupo -CH(CH3)-; y en el que Rx es un grupo ciclohexilo, ciclopentilo, ciclobutilo, tetrahidropiranilo o benzoxazol, en el que cada uno de dichos grupos Rx puede estar opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente entre: OH, CH3 o F;
o una sal, un hidrato, solvato, isómero óptico, geométrico o tautomérico, o polimorfo del mismo, veterinaria o farmacéuticamente aceptable.
Según otro aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula C-III o un compuesto de Fórmula S-I, como se ha definido anteriormente, o una sal, un solvato, hidrato, isómero óptico, geométrico o tautomérico, o polimorfo del mismo, farmacéuticamente aceptable, según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, junto con uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables, incluyendo opcionalmente la composición farmacéutica uno o más agentes terapéuticos adicionales.
Según otro aspecto, la presente invención proporciona compuestos de fórmula (I)
Figure imgf000009_0002
donde R1 es H u OH;
donde R2 es H, OH, CN, halógeno, un grupo alquilo -(C1-C3), un grupo alcoxi -O-(C1-C3), un grupo -C(O)(C1-C3), un grupo C(O)NR8R9, un grupo C(NH)NH metilciclohexilo,
donde dichos grupos alquilo -(C1-C3) (R2) o alcoxi -O-(C1-C3) (R2) pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de: OH; halógeno; o CN;
donde R3 es H, OH, CN, halógeno, un grupo alquilo -(C1-C3) en el que dicho grupo alquilo -(C1-C3) (R3) puede estar opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: OH; halógeno; o CN; donde R4 es H, OH, CN, halógeno, un grupo alquilo -(C1-C3), un grupo alcoxi -O-(C1-C3), un grupo -C(O)R10, -NR8R99, un grupo -SO2NR8R9, un grupo -N(R10)SO2R10 o un grupo heterocíclico ligado a C que contiene de uno a tres heteroátomos de O o N
donde dichos grupos alquilo -(C1-C3) (R4) pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: OH; halógeno; o CN,
donde dichos grupos alcoxi -O-(C1-C3) (R4) pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: NR11R12; o un grupo heterocíclico de 6 miembros ligado a C que opcionalmente puede estar sustituido independientemente por uno o más grupos halógeno, metilo, etilo u OH; donde R5 y R6 son cada uno independientemente H, o un grupo alquilo -(C1-C3);
donde R7 representa un grupo -X-R7,
donde X es un enlace o un grupo alquilo -(C1-C3), y está representado por un grupo -(CH2)n-, en el que n es 0, 1, 2 o 3, o un grupo -[(CH2)m-CH(CH3)]p-, en el que m y p son cada uno independientemente 0 o 1,
donde R7 es:
(i) un anillo de cicloalquilo de 4, 5, 6 o 7 miembros saturado o insaturado ligado a C, estando dicho anillo de cicloalquilo (R7) opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: OH; halógeno; o -(CH2)q-Y, en donde q es 0, 1 o 2 y en donde Y es H, NR13R14 o CO2R15;
(ii) un anillo heterocíclico de 4, 5 o 6 miembros saturado o insaturado ligado a C o N, que contiene uno o más heteroátomos seleccionados entre O, N o S, estando dicho anillo heterocíclico (R7) opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: un grupo alquilo -(C1-C3); un grupo alcoxi -O-(C1-C3); un anillo de cicloalquilo -(C3-C5); un grupo -C(O)R10; un grupo -SO2R16; y en el que dicho anillo heterocíclico (R7) opcionalmente sustituido está opcionalmente fusionado a un anillo saturado o insaturado de 5 o 6 miembros que contiene opcionalmente uno o dos átomos de O;
(iii) un grupo arilo o heteroarilo, estando dichos grupos arilo o heteroarilo opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: halógeno; un grupo -SO2NR17R18; un grupo -(CH2)q-Y en el que q es 0, 1 o 2 y en el que Y es H, NR13R14, o CO2R15; un grupo -C(O)R10; o un grupo -C(O)Nr 17R18; y en el que dichos grupos arilo o heteroarilo (R7) opcionalmente sustituidos están opcionalmente fusionados a un anillo heterocíclico saturado o insaturado de 5 o 6 miembros que contiene uno o dos átomos de O y/o N;
(iv) un grupo alquilo -(C1-C4) opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: halógeno;
(v) un grupo -SO2R16;
donde R8, R9, R10, R17 y R18 se seleccionan cada uno independientemente entre: H; o alquilo -(C1-C3);
donde R11 y R12 se seleccionan independientemente entre: H; o un grupo alquilo -(C1-C3), o donde junto con el átomo de -N del grupo -NR11R12-amina, los grupos N, R11 y/o R12 forman un grupo heterocíclico de anillo saturado o insaturado de 4, 5 o 6 miembros ligado a -N;
donde R13 y R14 se seleccionan independientemente entre H, CO2R19 y COR19 u opcionalmente R13, R14 y el nitrógeno del grupo -NR13R14 definen conjuntamente un anillo heterocíclico saturado o insaturado de 4, 5, 6 o 7 miembros, que está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: OH, halógeno o alquilo C1 a C6 de cadena lineal o ramificada;
donde R19 se selecciona entre alquilo C1 a C6 de cadena lineal o ramificada;
donde R15 se selecciona entre H y alquilo C1 a C6 de cadena lineal o ramificada;
donde R16 es H, un grupo alquilo -(C1-C3), o NH2; con la condición de que cuando R1 = R2 = R3 = R4 = R5 = R6 = H, R7 no es -(CH2)-ciclohexilo;
o una sal, un hidrato, solvato, isómero, profármaco o polimorfo del mismo, veterinaria o farmacéuticamente aceptable, para su uso en el tratamiento o la prevención de una o más enfermedades infecciosas, en donde opcionalmente la una o más enfermedades infecciosas se seleccionan independientemente de: malaria, criptosporidiosis, tuberculosis (TBC), tripanosomiasis africana humana (TAH), tripanosomiasis africana animal (TAA), enfermedad de Chagas, esquistosomiasis y/o leishmaniosis.
Según otro aspecto, la presente invención proporciona compuestos de fórmula (I) como se ha definido anteriormente, para su uso en el tratamiento o la prevención de una o más infecciones bacterianas, opcionalmente en donde los compuestos se usan en el tratamiento o la prevención de una o más infecciones por bacterias grampositivas y/o gramnegativas, en donde las infecciones bacterianas se seleccionan independientemente de: infecciones bacterianas derivadas de: uno o más de Streptococcus pneumoniae y/o Enterococcus; o uno o más del grupo ESKAPE de especies bacterianas, Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumanii, Pseudomonas aeruginosa y/o Enterobacter.
La presente invención proporciona además compuestos preferidos de fórmula I y C-III. También se desvelan en la presente memoria compuestos de fórmulas C-I, C-II, A-I, A-II, S-II y S-III como se define más adelante en este documento.
Descripción
Para evitar dudas, todas las definiciones proporcionadas en la presente memoria se aplican igualmente a las fórmulas generales (I), C-I, C-II, C-III, A-I, A-II, S-I, S-II y S-III como se ha detallado en la presente memoria. Por ello, la referencia a compuestos de fórmula (I) incluye compuestos de fórmulas.
Los términos científicos y técnicos usados en la presente memoria tienen los significados que se entienden comúnmente en la técnica, a menos que se definan específicamente de forma alternativa en la presente memoria.
Para evitar dudas, el término general cromona se usa para describir los compuestos de la invención y el término alternativo 4-oxo-cromeno puede usarse igualmente, ya que ambos términos se refieren a la misma estructura central de estos compuestos.
Cuando dos o más restos se describen como seleccionados "cada uno independientemente" de una lista de átomos o grupos, significa que los restos pueden ser iguales o diferentes. La identidad de cada resto es, por lo tanto, independiente de las identidades del uno o más restos.
En las definiciones anteriores, a menos que se indique otra cosa, los grupos alquilo que tienen dos o más átomos de carbono pueden estar insaturados o saturados y preferentemente están saturados; los grupos alquilo que tienen tres o más átomos de carbono pueden ser de cadena lineal o de cadena ramificada. Por ejemplo, un sustituyente alquilo C3 puede estar en forma de normal-propilo (n-propilo) o isopropilo (i-propilo). Para evitar dudas, cuando la estructura de cromona o un grupo R7 cíclico o heterocíclico está opcionalmente sustituido por un grupo alquilo, dicho(s) grupo(s) sustituyente(s) alquilo no puede(n) estar sustituido(s) adicionalmente por otros grupos alquilo (no sustituidos).
La expresión opcionalmente sustituido, tal como se usa en la presente memoria, indica que el grupo o grupos particulares pueden tener uno o más sustituyentes no hidrógeno. El número total de tales sustituyentes que pueden estar presentes es igual al número de átomos de H presentes en la forma no sustituida del grupo particular.
La expresión "farmacéuticamente aceptable", tal como se usa en la presente memoria, incluye una referencia a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas farmacéuticas que son, dentro del ámbito de un juicio médico fundado, adecuados para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos o animales sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, proporcional a una relación beneficio/riesgo razonable. Esta expresión incluye la aceptabilidad tanto para fines humanos como veterinarios.
Compuestos
La presente invención proporciona compuestos de fórmula (I):
Figure imgf000011_0001
donde R1 es H u OH;
donde R2 es H, OH, CN, halógeno, un grupo alquilo -(C1-C3), un grupo alcoxi -O-(C1-C3), un grupo -C(O)(C1-C3), un grupo C(O)NR8R9, un grupo C(NH)NH metilciclohexilo, donde dichos grupos alquilo -(C1-C3) (R2) o alcoxi -O-(C1-C3) (R2) pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de: OH; halógeno; o CN;
donde R3 es H, OH, CN, halógeno, un grupo alquilo -(C1-C3) en el que dicho grupo alquilo -(C1-C3) (R3) puede estar opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: OH; halógeno; o CN; donde R4 es H, OH, CN, halógeno, un grupo alquilo -(C1-C3), un grupo alcoxi -O-(C1-C3), un grupo -C(O)R10, -NR8R99, un grupo -SO2NR8R9, un grupo -N(R10)SO2R10 o un grupo heterocíclico ligado a C que contiene de uno a tres heteroátomos de O o N;
donde dichos grupos alquilo -(C1-C3) (R4) pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: OH; halógeno; o CN,
donde dichos grupos alcoxi -O-(C1-C3) (R4) pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: NR11R12; o un grupo heterocíclico de 6 miembros ligado a C que opcionalmente puede estar sustituido independientemente por uno o más grupos halógeno, metilo, etilo u OH; donde R5 y R6 son cada uno independientemente H, o un grupo alquilo -(C1-C3);
donde R7 representa un grupo -X-Rx
donde X es un enlace o un grupo alquilo -(C1-C3), y está representado por un grupo -(CH2)n-, en el que n es 0, 1, 2 o 3, o un grupo -[(CH2)m-CH(CH3)]p-, en el que m y p son cada uno independientemente 0 o 1,
donde R7 es:
(i) un anillo de cicloalquilo de 4, 5, 6 o 7 miembros saturado o insaturado ligado a C, estando dicho anillo de cicloalquilo (Rx) opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: OH; halógeno; o -(CH2)q-Y, en donde q es 0, 1 o 2 y en donde Y es H, NR13R14 o CO2R15;
(ii) un anillo heterocíclico de 4, 5 o 6 miembros saturado o insaturado ligado a C o N, que contiene uno o más heteroátomos seleccionados entre O, N o S, estando dicho anillo heterocíclico (Rx) opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: un grupo alquilo -(C1-C3); un grupo alcoxi -O-(C1-C3); un anillo de cicloalquilo -(C3-C5); un grupo -C(O)R10; un grupo -SO2R16; y en el que dicho anillo heterocíclico (Rx) opcionalmente sustituido está opcionalmente fusionado a un anillo saturado o insaturado de 5 o 6 miembros que contiene opcionalmente uno o dos átomos de O;
(iii) un grupo arilo o heteroarilo, estando dichos grupos arilo o heteroarilo opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: halógeno; un grupo -SO2NR17R18; un grupo -(CH2)q-Y en el que q es 0, 1 o 2 y en el que Y es H, NR13R14, o CO2R15; un grupo -C(O)R10; o un grupo -C(O)Nr 17R18; y en el que dichos grupos arilo o heteroarilo (Rx) opcionalmente sustituidos están opcionalmente fusionados a un anillo heterocíclico saturado o insaturado de 5 o 6 miembros que contiene uno o dos átomos de O y/o N;
(iv) un grupo alquilo -(C1-C4) opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: halógeno;
(v) un grupo -SO2R16;
donde R8, R9, R10, R17 y R18 se seleccionan cada uno independientemente entre: H; o alquilo -(C1-C3);
donde R11 y R12 se seleccionan independientemente entre: H; o un grupo alquilo -(C1-C3), o donde junto con el átomo de -N del grupo -NR11R12-amina, los grupos N, R11 y/o R12 forman un grupo heterocíclico de anillo saturado o insaturado de 4, 5 o 6 miembros ligado a -N;
donde R13 y R14 se seleccionan independientemente entre H, CO2R19 y COR19 u opcionalmente R13, R14 y el nitrógeno del grupo -NR13R14 definen conjuntamente un anillo heterocíclico saturado o insaturado de 4, 5, 6 o 7 miembros, que está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: OH, halógeno o alquilo C1 a C6 de cadena lineal o ramificada;
donde R19 se selecciona entre H y alquilo C1 a C6 de cadena lineal o ramificada;
donde R15 se selecciona entre H y alquilo C1 a C6 de cadena lineal o ramificada;
donde R16 es H, un grupo alquilo -(C1-C3), o NH2; con la condición de que cuando R1 = R2 = R3 = R4 = R5 = R6 = H, R7 no es -(CH2)-ciclohexilo;
o una sal, un hidrato, solvato, isómero, profármaco o polimorfo del mismo, veterinaria o farmacéuticamente aceptable, para su uso en el tratamiento o la prevención de una o más enfermedades infecciosas o para su uso en el tratamiento o la prevención de una o más infecciones bacterianas.
En la presente memoria se proporcionan además compuestos de fórmula C-I
Figure imgf000012_0001
Donde los compuestos de fórmula C-I son compuestos de fórmula I;
donde n es 0, 1, 2 o 3; donde X es un enlace, un enlace -O o un enlace -S; donde R1 a R6 y Rx son como se han definido según la fórmula (I) anteriormente en este documento; donde cuando Rp es CH3 n es 0 o 1; o una sal, un hidrato, solvato, isómero, profármaco o polimorfo del mismo, veterinaria o farmacéuticamente aceptable. Cuando R1 a R6 son todos H, (CHp)n-X-Rx no es -(CH2)-ciclohexilo.
La divulgación también incluye compuestos de fórmula C-II
Figure imgf000012_0002
donde los compuestos de fórmula C-II son compuestos de fórmula I donde R1, R5 y R6 son todos H;
donde n es 1; X es un enlace; Rp es H;
donde R2 es H, OH, F, Cl, Br, -CH3, -CH2CH3, -OCH3 o -CN;
donde R3 es H, F, o Cl;
donde R4 es H, F, OH, -CH2OH, -C(O)OH, -NH2, -NHSO2CH3 o un grupo 1H-tetrazol-5-ilo;
donde Rx es un grupo cicloalquilo saturado de 6 miembros ligado a C, que está opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados independientemente entre: OH o F;
o una sal, un hidrato, solvato, isómero, profármaco o polimorfo del mismo, veterinaria o farmacéuticamente aceptable. Cuando R2 a R4 son todos H, (CHp)n-X-Rx no es -(CH2)-ciclohexilo.
En la presente memoria se proporcionan además compuestos de fórmula C-III
Figure imgf000013_0001
donde los compuestos de fórmula C-III son compuestos de fórmula I donde R1 es H;
donde n es 1 o 2;
donde X es un enlace;
donde Rx es un grupo ciclohexilo, ciclopentilo, ciclobutilo, tetrahidropiranilo o benzoxazol, pudiendo estar cada uno de dichos grupos Rx opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente de: OH, CH3 o F;
donde Rp es H o CH3 y donde cuando Rp es H, n es 1 o 2, y donde cuando Rp es CH3, n es 1;
donde R1 (no mostrado) es H;
donde R2 es H, OH, F, Cl, Br, -CH3, -CH2CH3, -OCH3 o -CN;
donde R3 es H, OH, F, Cl o -O(CH2)2NH2;
donde R4 es H, F, Br, OH, -OCH3, -C(O)NH2, -CH2OH, -C(O)OH, -NH2, -NHSO2CH3, - SO2NH2 o un grupo 1 H-tetrazol-5-ilo;
donde R5 y R6 se seleccionan cada uno independientemente entre H o CH3;
o una sal, un hidrato, solvato, isómero, profármaco o polimorfo del mismo, veterinaria o farmacéuticamente aceptable. Cuando R2 a R6 son todos H, (CHp)n-X-Rx no es -(CH2)-ciclohexilo.
En la presente memoria se proporcionan además compuestos de fórmula A-I
Figure imgf000013_0002
donde los compuestos de fórmula A-I son compuestos de fórmula I donde R1, R3, R5 y R6 son todos H;
donde n, R2 y R4 son como se han definido según la fórmula I anterior, y donde Rx es como se ha definido según la fórmula (I) anterior, o una sal, un hidrato, solvato, isómero, profármaco o polimorfo del mismo, veterinaria o farmacéuticamente aceptable. Cuando R2 y R4 son H y n es 1, Rx no es ciclohexilo.
En la presente memoria se proporcionan además compuestos de fórmula A-II
Figure imgf000013_0003
donde los compuestos de fórmula A-II son compuestos de fórmula I donde R1, R2, R3, R5 y R6 son todos H; donde n, R2 y R4 son como se han definido según la fórmula I anterior, y donde Rx es como se ha definido según la fórmula (I) anterior, o una sal, un hidrato, solvato, isómero, profármaco o polimorfo del mismo, veterinaria o farmacéuticamente aceptable. Cuando R2 es H y n es 1, Rx no es ciclohexilo.
En la presente memoria se proporcionan además compuestos de fórmula S-I
Figure imgf000014_0001
donde los compuestos de fórmula S-I son compuestos de fórmula I donde R4 es un grupo -N(R10)SO2R10; donde R1, R2, R3, R5, R6, R7 y R10 se definen según la fórmula (I) anterior, o una sal, un hidrato, solvato, isómero, profármaco o polimorfo del mismo, veterinaria o farmacéuticamente aceptable.
En la presente memoria se proporcionan además compuestos de fórmula S-II
Figure imgf000014_0002
donde los compuestos de fórmula S-II son compuestos de fórmula I donde R1, R3, R5 y R6 son todos H y R4 es un grupo -N(R10)SO2R10;
donde R2, R7 y R10 son como se han definido según la fórmula (I) anterior, o una sal, un hidrato, solvato, isómero, profármaco o polimorfo del mismo, veterinaria o farmacéuticamente aceptable.
En la presente memoria se proporcionan además compuestos de fórmula S-III
Figure imgf000014_0003
donde los compuestos de fórmula S-III son compuestos de fórmula I donde R1, R3, R5 y R6 son todos H, R4 es un grupo -N(R10)SO2R10, y R7 es un grupo ciclohexilmetilo;
donde dicho grupo ciclohexilmetilo (R7) puede estar opcionalmente sustituido por uno o más grupos Ro seleccionados independientemente entre: OH, CH3 o F;
donde R2 y R10 se definen según la fórmula (I) anterior,
o una sal, un hidrato, solvato, isómero, profármaco o polimorfo del mismo, veterinaria o farmacéuticamente aceptable.
Compuestos particularmente preferidos según la presente invención son compuestos de fórmula (I)
donde R1 es H;
donde R2 es OH, Cl, F o CH3, preferentemente OH, Cl o F;
donde R3 es H, Cl o F, preferentemente H;
donde R5 es H o CH3, preferentemente H;
donde R6 es H o CH3, preferentemente H;
donde n es 1 o 2;
donde Rp es H o CH3, preferentemente H;
donde Rx es ciclohexilo opcionalmente sustituido en C-1 por OH o CH2OH OH y/o en C-4 con uno o más grupos F, o donde
Rx es un grupo ciclopentilo, tetrahidropiranilo, norbornanilo, espiro[3.3]heptanilo, dihidrobenzo[b][1,4]dioxinilo, o un grupo dihidrobenzo[b][1,3]dioxailo, donde dichos grupos están opcionalmente sustituidos en la posición C-1 por OH, o CH2CO2H y/o en C-4 con uno o más grupos F;
y donde R4 es H, OH, F, CH2OH, C(O)OH, NH2, NHSO2CH3, tetrazolilo,
o una sal, un hidrato, solvato, isómero, profármaco o polimorfo del mismo, veterinaria o farmacéuticamente aceptable.
Los sustituyentes de halógeno preferidos para su uso aquí son F, Cl y/o Br, más preferentemente F y Cl, más especialmente F.
Los compuestos individuales preferidos de fórmula (I) según la presente divulgación, y de fórmula C-I, se enumeran a continuación como compuestos individuales dentro del Grupo 1:
Ejemplo 6. N-(ciclohexilmetil)-6-hidroxi-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 8. N-(ciclohexilmetil)-8-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 9. 7-cloro-N-(ciclohexilmetil)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 10. N-(ciclohexilmetil)-6-metoxi-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 13. 6-hidroxi-W-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 27. W-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 28. W-(ciclohexilmetil)-6-metil-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 29. 6-Bromo-W-(ciclohexilmetil)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 30. 6-cloro-W-(ciclohexilmetil)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 31. W-(ciclohexilmetil)-6-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 40. 6-Fluoro-W-[[1-(hidroximetil)ciclohexil]metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 40A. 6-Fluoro-Ñ-((1-(2-hidroxietil)ciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 41.6-Fluoro-W-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 42. W-(ciclohexilmetil)-7-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 44. 6-Ciano-W-(ciclohexilmetil)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 45. W-(ciclohexilmetil)-6-etil-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 46. 6-etil-W-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 49. 6-cloro-Ñ-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 54. W-[(4,4-difluoro-1-hidroxi-ciclohexil)metil]-6-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 55. 6,8-difluoro-N-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 56. W-((4,4-difluoro-1-hidroxiciclohexil)metil)-6,8-difluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 57. W-[(4,4-difluoro-1-hidroxi-ciclohexil)metil]-6-hidroxi-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 70. W-(ciclohexilmetil)-6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 73. 6-cloro-8-hidroxi-N-((1-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 74. 6-fluoro-8-hidroxi-W-((1-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 76A. W-((4,4-difluoro-1-hidroxiciclohexil)metil)-6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 77. Fluoro-8-hidroxi-W-((1-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 78. W-(ciclohexilmetil)-7-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 82. W-(ciclohexilmetil)-8-(hidroximetil)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 84. W-(ciclohexilmetil)-8-(metilsulfonamido)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 86. W-(ciclohexilmetil)-4-oxo-8-(1H-tetrazol-5-il)-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 88. Ácido 2-((ciclohexilmetil)carbamoil)-4-oxo-4H-cromeno-8-carboxílico;
Ejemplo 21. W-[(4,4-difluorociclohexil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 23. W-(ciclopentilmetil)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 26. W-(2-ciclopentilmetil)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 32. 6-fluoro-4-oxo-W-(tetrahidropiran-2-ilmetil)cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 36. 6-fluoro-W-(norbornan-2-ilmetil)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 49A. (S)-W-(1-ciclohexiletil)-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 49B. (R)-N-(1-ciclohexiletil)-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 50. 4-oxo-W-(tetrahidropiran-2-ilmetil)cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 50A. 6-fluoro-4-oxo-W-(espiro[3.3]heptan-2-ilmetil)cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 57C. W-((2,3-dihidrobenzo[b][1,4]dioxin-6-il)metil)-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 57D. 6-Fluoro-W-(((1S,2S)-2-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 57E. 6-Fluoro-W-(((1S,2R)-2-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 57L. Ácido 2-(1-((6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamido)metil)ciclohexil)acético;
Ejemplo 23A. W-[(1-hidroxiciclopentil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 57C-1. Ñ-((2,3-dihidrobenzo[b][1,3]dioxa-5-il)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 86A. W-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-4-oxo-8-(1H-tetrazol-5-il)-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 83A. W-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-8-amino-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 84A. W-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-8-(metilsulfonamido)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 41A. 6-fluoro-W-[(1-hidroxi-4-fluoro-ciclohex-3-enil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
y sales ácidas, hidratos, solvatos, isómeros, profármacos o polimorfos de los mismos, veterinaria o farmacéuticamente aceptables.
Se proporciona en la presente memoria cualquiera de los compuestos individuales o grupos de compuestos indicados en el Grupo 1 y sales ácidas, hidratos, solvatos, isómeros, profármacos o polimorfos de los mismos farmacéutica y veterinariamente aceptables.
Los compuestos individuales altamente preferidos de fórmula (I), y de fórmula A-I, según la presente invención se enumeran más adelante en este documento como compuestos individuales dentro del Grupo 2:
Ejemplo 21. W-[(4,4-difluorociclohexil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 23. W-(ciclopentilmetil)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 26. W-(2-ciclopentilmetil)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 32. 6-fluoro-4-oxo-W-(tetrahidropiran-2-ilmetil)cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 36. 6-fluoro-W-(norbornan-2-ilmetil)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 49A. (S)-W-(1-ciclohexiletil)-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 49B. (R)-N-(l-ciclohexiletil)-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 50. 4-oxo-W-(tetrahidropiran-2-ilmetil)cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 50A. 6-fluoro-4-oxo-W-(espiro[3.3]heptan-2-ilmetil)cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 57C. W-((2,3-dihidrobenzo[b][1,4]dioxin-6-il)metil)-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 57D. 6-Fluoro-W-(((1S,2S)-2-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 57E. 6-Fluoro-W-(((1S,2R)-2-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 57L. Ácido 2-(1-((6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamido)metil)ciclohexil)acético;
Ejemplo 23A. W-[(1-hidroxiciclopentil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 57C-1. Ñ-((2,3-dihidrobenzo[b][1,3]dioxa-5-il)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 41A. 6-Fluoro-W-[(1-hidroxi-4-fluoro-ciclohex-3-enil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 78C. 8-fluoro-6-hidroxi-N-((1-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida
Ejemplo 97: 8-amino-6-fluoro-N-[(1-fluorociclohexil)metil]-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida
Ejemplo 96: 8-amino-6-fluoro-W-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida
Ejemplo 95: 8-amino-W-[(3,3-difluorociclopentil)metil]-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida
Ejemplo 94: 8-amino-N-[(4,4-difluorociclohexil)metil]-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida
Ejemplo 93: 8-amino-N-[(4,4-difluoro-1-hidroxi-ciclohexil)metil]-6-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxamida
Ejemplo 81: 8-fluoro-6-hidroxi-N-((1-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida
Ejemplo 76H: 6-fluoro-8-hidroxi-N-(2-metilbutil)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida
Ejemplo 76G: N-(3-ciclobutilpropil)-6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida
Ejemplo 76F: 6-fluoro-8-hidroxi-N-((1-hidroxiciclopentilo)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida
Ejemplo 76B: W-ciclohexil-6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-cromeno-2-carboxamida
Ejemplo 76C: W-(3,3-Difluorociclohexil)-6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida
Ejemplo 76D: 6-fluoro-8-hidroxi-N-((2-hidroxiespiro[3.3]heptan-2-il)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida Ejemplo 76E: N-(ciclobutilmetil)-6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida
y sales ácidas, hidratos, solvatos, isómeros, profármacos o polimorfos de los mismos, veterinaria o farmacéuticamente aceptables.
Se proporciona en la presente memoria cualquiera de los compuestos individuales o grupos de compuestos indicados en el Grupo 2 y sales ácidas, hidratos, solvatos, isómeros, profármacos o polimorfos de los mismos farmacéutica y veterinariamente aceptables.
Los compuestos individuales altamente preferidos de fórmula (I), y fórmula S-I, según la presente invención se enumeran más adelante en este documento como compuestos individuales dentro del Grupo 3:
Ejemplo 84A. W-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-8-(metilsulfonamido)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 84. W-(ciclohexilmetil)-8-(metilsulfonamido)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
Ejemplo 100: N-(ciclohexilmetil)-6-fluoro-8-(metanosulfonamido)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida
y sales ácidas, hidratos, solvatos, isómeros, profármacos o polimorfos de los mismos, veterinaria o farmacéuticamente aceptables.
En la presente memoria se proporciona cualquiera de los compuestos individuales o grupos de compuestos indicados en el Grupo 3 y sales ácidas, hidratos, solvatos, isómeros, profármacos o polimorfos de los mismos farmacéutica y veterinariamente aceptables.
En la presente memoria se proporciona además el compuesto del Ejemplo 54, W-[(4,4-difluoro-1-hidroxiciclohexil)metil]-6-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxamida; y sales ácidas, hidratos, solvatos, isómeros, profármacos o polimorfos del mismo farmacéutica y veterinariamente aceptables.
En la presente memoria se proporciona también el compuesto del Ejemplo 70, W-(ciclohexilmetil)-6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida; y sales ácidas, hidratos, solvatos, isómeros, profármacos o polimorfos del mismo farmacéutica y veterinariamente aceptables.
En la presente memoria se proporciona también el compuesto del Ejemplo 74, 6-fluoro-8-hidroxi-N-((1-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida; y sales ácidas, hidratos, solvatos, isómeros, profármacos o polimorfos del mismo farmacéutica y veterinariamente aceptables.
En la presente memoria se proporciona además el compuesto del Ejemplo 77, Fluoro-8-hidroxi-N-((1-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida; y sales ácidas, hidratos, solvatos, isómeros, profármacos o polimorfos del mismo farmacéutica y veterinariamente aceptables.
En la presente memoria se proporciona además el compuesto del Ejemplo 79, W-((4,4-difluorociclohexil)metil)-7-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-carboxamida; y sales ácidas, hidratos, solvatos, isómeros, profármacos o polimorfos del mismo farmacéutica y veterinariamente aceptables.
En la presente memoria se proporciona además el compuesto del Ejemplo 81, 8-fluoro-6-hidroxi-N-((1-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida; y sales ácidas, hidratos, solvatos, isómeros, profármacos o polimorfos del mismo farmacéutica y veterinariamente aceptables.
En la presente memoria se proporcionan además los compuestos individuales preferidos del Ejemplo 54, N-[(4,4-difluoro-1-hidroxi-ciclohexil)metil]-6-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxamida; del Ejemplo 77, Fluoro-8-hidroxi-Ñ-((1-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida; del Ejemplo 78: W-(ciclohexilmetil)-7-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida; del Ejemplo 74, 6-fluoro-8-hidroxi-W-((1-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida y sales ácidas, hidratos, solvatos, isómeros, profármacos o polimorfos del mismo farmacéutica y veterinariamente aceptables.
En la presente memoria se proporcionan además los compuestos individuales preferidos del Ejemplo 100: N-(ciclohexilmetil)-6-fluoro-8-(metanosulfonamido)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida; del Ejemplo 99: 8-amino-N-(ciclohexilmetil)-6-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxamida; del Ejemplo 97: 8-amino-6-fluoro-N-[(1-fluorociclohexil)metil]-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida; del Ejemplo 96: 8-amino-6-fluoro-W-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida; del Ejemplo 93: 8-amino-N-[(4,4-difluoro-1-hidroxiciclohexil)metil]-6-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxamida; del Ejemplo 92: 8-Amino-N-[(4,4-difluoro-1-hidroxi-ciclohexil)metil]-7-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxamida; del Ejemplo 8 l: 8-fluoro-6-hidroxi-N-((1-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida; del Ejemplo 73: 6-cloro-8-hidroxi-N-((1-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida; y sales ácidas, hidratos, solvatos, isómeros, profármacos o polimorfos del mismo farmacéutica y veterinariamente aceptables.
Las sales de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables de ciertos compuestos de fórmula (I) pueden prepararse fácilmente de manera convencional mezclando soluciones de un compuesto de fórmula (I) y el ácido deseado, según sea adecuado. Por ejemplo, una solución de la base libre se trata con el ácido apropiado, puro o en un disolvente adecuado, y la sal resultante se aísla por filtración o por evaporación a presión reducida del disolvente de reacción. Para una revisión de las sales adecuadas véase "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties Selection, and Use" de Stahl y Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Alemania, 2002). Las sales de adición de ácidos adecuadas para su uso en la presente memoria incluyen: fumarato, acetato, adipato, aspartato, benzoato, besilato, bicarbonato/carbonato, bisulfato/sulfato, borato, camsilato, citrato, ciclamato, edisilato, esilato, formiato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hexafluorofosfato, hibenzato, clorhidrato/cloruro, bromhidrato/bromuro, iodhidrato/ioduro, isetionato, lactato, malato, maleato, malonato, mesilato, metilsulfato, naftilato, 2-napsilato, nicotinato, nitrato, orotato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/fosfato de hidrógeno/fosfato de dihidrógeno, piroglutamato, sacarato, estearato, succinato, tanato, tartrato, tosilato y trifluoroacetato.
Los compuestos de la invención pueden existir en un continuo de estados sólidos que van desde totalmente amorfos a totalmente cristalinos. Los compuestos de la invención también pueden existir en formas solvatadas y no solvatadas. El término "solvato", tal como se usa en la presente memoria, describe un complejo molecular que comprende el compuesto de la invención y una o más moléculas de disolvente farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, etanol. El término "hidrato" se emplea cuando dicho disolvente es agua. También se incluyen en el alcance de la presente invención complejos multicomponente (distintos de sales y solvatos) en los que el fármaco y al menos otro componente están presentes en cantidades estequiométricas o no estequiométricas. Los complejos de este tipo incluyen los clatratos (complejos de inclusión fármaco-hospedador) y los cocristales. Para una revisión general de los complejos multicomponente véase J Pharm Sci, 64 (8), 1269-1288, de Haleblian (agosto 1975). Más adelante en este documento todas las referencias a compuestos de fórmula (I) incluyen referencias a sales, solvatos y complejos multicomponente.
Los compuestos de la invención incluyen compuestos de fórmula (I) como se han definido anteriormente, y polimorfos y hábitos cristalinos de los mismos.
Los isómeros de compuestos de fórmula (I) como se usan en la presente memoria incluyen isómeros ópticos, geométricos y tautoméricos. Los estereoisómeros tales como enantiómeros y diastereómeros, todos los isómeros geométricos y formas tautoméricas de los compuestos de fórmula (I), incluyendo compuestos que presentan más de un tipo de isomería, y mezclas de uno o más de los mismos están incluidos en la presente invención. También se incluyen las sales de adición de ácidos en las que el contraión es ópticamente activo, por ejemplo, d-lactato o /-lisina, o racémico, por ejemplo, d/-tartrato o d/-arginina. Los isómeros geométricos pueden separarse mediante técnicas convencionales bien conocidas por los expertos en la materia, por ejemplo, mediante cromatografía y cristalización fraccionada. Los estereoisómeros pueden separarse mediante técnicas convencionales conocidas por los expertos en la materia - véase, por ejemplo, "Stereochemistry of Organic Compounds" de E L Eliel (Wiley, Nueva York, 1994).
Como se ha indicado, los llamados "profármacos" de los presentes compuestos también están dentro del alcance de la invención. Por lo tanto, ciertos derivados de compuestos de fórmula (I), que pueden tener poca o ninguna actividad farmacológica por sí mismos, pueden, cuando se administran en o sobre el cuerpo, convertirse en compuestos de fórmula (I) que tengan la actividad deseada, por ejemplo, por escisión hidrolítica. Estos derivados se denominan "profármacos". Puede encontrarse más información sobre el uso de profármacos en Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14, ACS Symposium Series (T Higuchi y W Stella) y Bioreversible Carriers in Drug Design, Pergamon Press, 1987 (Ed. E B Roche, American Pharmaceutical Association). Los profármacos según la invención pueden producirse, por ejemplo, sustituyendo las funcionalidades apropiadas presentes en los compuestos de fórmula (I) por ciertos restos conocidos por los expertos en la materia como "pro-restos", tal como se describe, por ejemplo, en Design of Prodrugs de H Bundgaard (Elsevier, 1985). Por último, ciertos compuestos de fórmula (I) pueden actuar por sí mismos como profármacos de otros compuestos de fórmula (I).
También se incluyen en el alcance de la divulgación los metabolitos de compuestos de fórmula I, es decir, compuestos formados in vivo tras la administración del fármaco. Un ejemplo de metabolito según la invención es un derivado fenólico de un compuesto de fórmula I (-Ph -> -PhOH).
La presente divulgación incluye todos los compuestos de fórmula (I) marcados isotópicamente farmacéuticamente aceptables en los que uno o más átomos se sustituyen por átomos que tienen el mismo número atómico, pero una masa atómica o número másico diferente de la masa atómica o número másico habitual. Los compuestos de fórmula (I) marcados isotópicamente pueden prepararse generalmente mediante técnicas convencionales conocidas por los expertos en la materia o mediante procedimientos análogos a los descritos en los Ejemplos y Preparaciones adjuntos, usando un reactivo apropiado marcado isotópicamente en lugar del reactivo no marcado empleado anteriormente.
Preparación de compuestos
Los compuestos de fórmula general (I) y sus sales pueden prepararse mediante la metodología descrita más adelante en esta memoria, constituyendo aspectos adicionales de la presente invención. Los procedimientos generales, que pueden usarse para sintetizar los compuestos de fórmula general (I), se resumen en los Esquemas de reacción 1, 2, 3 y 4 y se ilustran en los Ejemplos.
ESQUEMA 1
Figure imgf000018_0001
En el Esquema 1, los reactivos adecuados para efectuar las transformaciones químicas a partir de un material de partida de 2-hidroxiacetofenona de fórmula general (II) en las etapas a a c para proporcionar compuestos de ácido cromónico intermedios de fórmula general (III) son los siguientes: a. EtONa, oxalato de dietilo, EtOH, 80 °C y después HCI 37 %, 90 °C; b. AcOH, HCI 37 %, 90 °C; bb. AcOH, HBr, 90 °C; c. LiOH, agua.
En el Esquema 1, los reactivos adecuados para efectuar las transformaciones químicas a partir de un compuesto de ácido cromónico intermedio de fórmula general (III) mediante una reacción de amidación para proporcionar, usando cualquiera de las etapas d, e, f, g, h o i, compuestos de cromona de fórmula general (I) que tengan el grupo "R7" deseado en el producto final, son los siguientes: d. PyBOP, DIPEA, DCM, R7NH2; e. C(O)Cb, DCM, una gota de DMF, R7NH2; f. COMU, DIPEA, ACN, R7NH2; g. CDMT, NMO, DCM, R7NH2; h. HBTU, EtaN, DMF, R7NH2; i. EDCI, EtaN, THF, R7NH2. Para evitar dudas, los nombres químicos de estos reactivos se proporcionan en la lista de abreviaturas más adelante en esta memoria.
El Esquema 1A ilustra el mismo procedimiento general que el Esquema 1, con la ilustración adicional de la cidización catalizada por ácido de un producto intermedio no aislado para proporcionar un producto intermedio de éster de cromona.
ESQUEMA 1A
Figure imgf000019_0001
AcOH, conc. HCI, 90UC o RSR'NH
AcOH, HBr, 90 C o (COCI)2,g3ladeDMF, DCM o
LiOH, agua
Figure imgf000019_0002
PyBOP, DI PEA, DCM o COMU, DIPEA, Acn o
Figure imgf000019_0003
CDMT. NMO. DCM 0
HBTU, Et3N, DMF o
HATU, DIPEA, DMFo
EDCI, Et3N, THF
En los procedimientos ilustrativos de los Esquemas 1 y 1A, las cromono-2-carboxamidas se sintetizaron por condensación de Claisen de 2-hidroxiacetofenonas con oxalato de dietilo seguida de reacción de ciclización catalizada por ácido para dar ésteres de cromona. [Lynch et al. J. Med. Chem. 2006, 49: 6569]. La hidrólisis de los ésteres se llevó a cabo tanto en condiciones ácidas como básicas. La amidación mediante la formación de cloruro ácido o usando diferentes reactivos estándares de acoplamiento de amidas incluyendo: hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitripirrolidinofosfonio (PyBOP), hexafluorofosfato de (1-ciano-2-etoxi-2-oxoetilidenaminooxi)dimetil-amino-morfolinocarbenio (COMU), 2-cloro-4,6-dimetoxi-1,3,5-triazina (CDMT), hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(1H-benzotriazol-1-il)uronio (HBTU), (hexafluorofosfato de 1-[bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinio 3-óxido) (HATU) y N-(3-Dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (EDCI) proporcionaron compuestos de cromono-2-carboxamida de fórmula (I). En la sección Experimental más adelante en este documento se proporcionan ejemplos de compuestos de fórmula general (I) preparados según los procedimientos de los Esquemas 1 y 1A.
Las fórmulas ilustradas en los Esquemas 1 y 1A se han simplificado para centrarse en las transformaciones químicas clave para proporcionar cromonas según la presente invención. Por ejemplo, el grupo general "R" en las fórmulas generales (II) y (III) se usa para indicar la presencia de cuatro grupos sustituyentes, R1 a R4, estos grupos corresponden a los grupos R1 a R4 en los compuestos de fórmula (I). Por ello, las definiciones de cada uno de estos cuatro grupos sustituyentes comúnmente denominados "R" en las fórmulas de los Esquemas 1 y 1A son las mismas que las definiciones de R1, R2, R3 y R4 proporcionadas anteriormente para la fórmula (I). Además, en las fórmulas generales (II) e (I) ilustradas en los Esquemas 1 y 1A, R5 es H. De nuevo, esta simplificación de las estructuras generales se ha usado únicamente con fines ilustrativos, y tanto en la fórmula general (II) como en la (I) de los Esquemas 1 y 1A, R5 puede ser cualquiera de los grupos sustituyentes de R5 indicados en la definición de la fórmula (I) anterior. En la fórmula (I) de los Esquemas 1 y 1A, R6 es H y de nuevo R6 puede ser cualquiera de los grupos sustituyentes R6 indicados en la definición de la fórmula (I) anterior.
Por lo tanto, con respecto a los compuestos (I), (II) y (III) del Esquema 1, las definiciones de R1 a R7 son las definidas anteriormente para los compuestos de fórmula (I) a menos que se indique lo contrario.
Por lo tanto, según otra forma de realización, la presente invención proporciona un procedimiento para la preparación de compuestos de cromono-2-carboxamida de fórmula general (I) que comprende la aminación de un producto intermedio de ácido cromónico de fórmula general (III) y, opcionalmente, en donde dicho procedimiento prevé adicionalmente la preparación del producto intermedio de ácido cromónico mediante hidrólisis de un producto intermedio de éster de cromona de fórmula general (II).
En un grupo preferente de compuestos de cromono-2-carboxamida según la presente invención en los que n es 0, 1, 2 o 3; en los que X es un enlace, un enlace -O o un enlace -S; en los que R1 a R6 y Rx son como se han definido según la fórmula (I) anterior; en los que cuando Rp es CH3 n es 0 o 1.
Por lo tanto, según otra forma de realización, la presente invención proporciona un procedimiento general para la preparación de compuestos de cromono-2-carboxamida en los que n es 0, 1, 2 o 3; en los que X es un enlace, un enlace -O o un enlace -S; en los que R1 a R6 y Rx son como se han definido según la fórmula (I) anterior; en el que cuando Rp es CH3 n es 0 o 1 de fórmula general (C-I) que comprende la aminación de un producto intermedio de ácido cromónico de fórmula general (III) y, opcionalmente, en el que dicho procedimiento prevé adicionalmente la preparación del producto intermedio ácido cromónico mediante hidrólisis de un producto intermedio de éster de cromona de fórmula general (II).
Como apreciará el químico experto, los reactivos y las condiciones empleados en las transformaciones en cualquiera de los esquemas del presente documento pueden usarse, modificarse y/o sustituirse por alternativas según sea necesario para proporcionar diversos compuestos alternativos de fórmula (I) mediante los procedimientos generales del presente documento.
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En el Esquema 2, los reactivos adecuados para efectuar las transformaciones químicas para la conversión de un compuesto de cromono-2-carboxamida de fórmula general (I) que tiene R4 = OH en un compuesto alternativo de fórmula general (I) que tiene R4 = -O(CH2)nNR11R12, a través de un compuesto intermedio protegido de fórmula general (IV) en el que R4 es un grupo oxiamino protegido, en las etapas a o b para proporcionar compuestos intermedios de fórmula general (IV) son como sigue: a. BocNHCH2CH2Br o 4-(2-cloroetil)piperazina-1-carboxilato de ferf-butilo, K2CO3, DMF, 100 °C, microondas (MW), 1 hora (h); b. 4-(bromometil)piperidina-1-carboxilato de ferf-butilo, K2CO3, DMF, 90 °C, 16 h.
En el Esquema 2, los reactivos adecuados para efectuar las transformaciones químicas para la conversión de los compuestos de oxiamina intermedios protegidos de fórmula general (IV) en otros compuestos intermedios de amina secundaria de fórmula general (V) en los que R4 es una forma de sal desprotegida del grupo R4 (de los compuestos protegidos N-BOC correspondientes de fórmula general (IV)) son los siguientes: c. HCI 4 M en dioxano.
En el Esquema 2, los reactivos adecuados para efectuar las transformaciones químicas para la conversión de los compuestos intermedios de amina-sal de fórmula general (V) en compuestos de fórmula general (I) en los que R4 es un grupo -O(CH2)nNR11R12, son los siguientes: d. formaldehído 37 %, ácido fórmico, reflujo, 1 h a 8 h.
Las fórmulas ilustradas en el Esquema 2 se han simplificado para centrarse en las transformaciones químicas clave para proporcionar cromonas 8-O-sustituidas según la presente invención. Por ejemplo, mientras que los compuestos intermedios de fórmulas (IV) y (V) y los compuestos finales de fórmula (I) como se ilustra en el Esquema 2 tienen todos R1 a R3 y R5 y R6 como grupos H, debe apreciarse que esta simplificación de las estructuras generales se ha usado solo con fines ilustrativos, y el procedimiento ilustrado en el Esquema 2 es aplicable para su uso a partir de un compuesto intermedio de las fórmulas (IV) donde R1 a R3 y R5 y R6 son como se han definido anteriormente y, en particular, como se han definido en relación con el Esquema 1. Ejemplos de compuestos de fórmula general (I) preparados según los procedimientos del Esquema 2 se proporcionan en la sección Experimental más adelante en este documento.
Por lo tanto, según otra forma de realización, la presente invención proporciona un procedimiento para la preparación de compuestos de fórmula general (I) mediante el procedimiento ilustrado en el Esquema 2.
El esquema 3 ilustra una ruta alternativa para la preparación de compuestos de cromono-2-carboxamida de fórmula general (I) a partir de fenol o grupos fenol sustituidos.
ESQUEMA 3
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En el Esquema 3, los reactivos adecuados para efectuar las transformaciones químicas a partir del material fenólico de partida en las etapas a para proporcionar una mezcla de compuestos éster intermedios de fórmulas generales (VIA) y (ViB) son los siguientes: a. but-2-indioato de dimetilo, Et3N, DCM, 25 °C, 1 h.
En el Esquema 3, los reactivos adecuados para efectuar las transformaciones químicas a partir de la mezcla de compuestos éster intermedios de las fórmulas generales (VIA) y (VIB) para proporcionar una mezcla de otros compuestos diácidos de olefina intermedios de las fórmulas generales (VIIA) y (VlIB) son los siguientes: b. NaOH o LiOH, THF/H2O, 40 °C, 3 h.
En el Esquema 3, los reactivos adecuados para efectuar las transformaciones químicas para convertir la mezcla de compuestos intermedios de diácido de olefina de las fórmulas generales (VIIA) y (VIIB) en compuestos intermedios de ácido cromono-2-carboxílico de las fórmulas generales (VIII) son los siguientes: c. H2SO4, cloruro de acetilo, 50 °C, 1 h.
En el Esquema 3, los reactivos adecuados para efectuar las transformaciones químicas para convertir los compuestos intermedios de ácido cromono-2-carboxílico de fórmulas generales (VIII) en compuestos de cromono-2-carboxamida de fórmula general (I) mediante reacción con un sustrato de amina adecuado para el grupo "R7" deseado en el producto final usando una de las etapas d o e son como sigue: d. HATU, DIPEA, R7NH2, 60 °C, 15 h; e. C(O)Cb, DCM, gota de DMF, R7NH2.
El esquema 3A ilustra el mismo procedimiento general que el Esquema 3, en el que los productos intermedios marcados como A y B se consolidan en una única estructura intermedia y también incluye reactivos adecuados para cada etapa de transformación.
ESQUEMA3A
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Usando los procedimientos ilustrados en los Esquemas 3 y 3A, se sintetizaron cromono-2-carboxamidas a partir de fenol o fenoles sustituidos comerciales. El tratamiento del fenol correspondiente con dicarboxilato de dimetilacetileno (DMAD, but-2-iendioato de dimetilo) seguido de hidrólisis de éster dio una mezcla de diácidos de olefina. Más adelante en este documento se proporcionan procedimientos de hidrólisis de éster adecuados y se describen en Lynch et al. J. Med. Chem. 2006, 49: 6569. El cierre del anillo se consiguió calentando esta mezcla con ácido sulfúrico y acetilcloruro para obtener ácidos cromono-2-carboxílicos. Las amidas se prepararon por reacción con cloruro de oxalilo seguido de la amina correspondiente o por activación ácida con HATU. En la sección Experimental más adelante en este documento se proporcionan ejemplos de compuestos de fórmula general (I) preparados según los procedimientos de los Esquemas 3 y 3A.
Para evitar dudas, las fórmulas ilustradas en los Esquemas 3 y 3A también se han simplificado para centrarse en las transformaciones químicas clave para proporcionar cromonas según la presente invención de la misma manera que se ha explicado anteriormente para los Esquemas 1, 1A y 2. Por ello, el grupo general "R" se usa para indicar los sustituyentes, R1 a R4 y como tal la definición de "R" en estas fórmulas y en la fórmula (I) como se muestra en los Esquemas 3 y 3A es coherente con las definiciones de R1 a R4 como se previó en la fórmula (I) en la presente memoria. Además, aunque el esquema ilustra compuestos en los que R5 y R6 son ambos H, se apreciará que los compuestos en los que R5 y/o R6 son cualquiera de los grupos sustituyentes R5 y/o R6 alternativos identificados en la fórmula (I) anterior pueden prepararse usando un reactivo alternativo en la primera etapa o usando una amina NHR6R7 adecuada en la etapa final.
Por lo tanto, según otra forma de realización, la presente invención proporciona un procedimiento para la preparación de compuestos de cromono-2-carboxamida de fórmula general (I) a partir de fenol o un fenol sustituido mediante el procedimiento ilustrado en el Esquema 3, o Esquema 3A, en el que dicho fenol sustituido tiene uno, dos, tres o cuatro grupos sustituyentes, y en el que dichos grupos sustituyentes son grupos R1P, R2P, R3P y R4P, en los que R1P, R2P, R3P y R4P corresponden a R1, R2, R3 y R4 tal como se han definido anteriormente, tanto con respecto a su funcionalidad como a sus posiciones en el anillo fenilo en relación con los compuestos finales de cromono-2-carboxamida de fórmula (I).
El Esquema 4 ilustra un enfoque sintético para la preparación de compuestos de fórmula general (I) que tienen R2 = F o Cl, R3 = F o Cl y R4 = OH, es decir, 8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamidas. En el Esquema 4, los compuestos intermedios de ácido de fórmula general (VIII) se convierten en primer lugar en sus ésteres correspondientes (etapa 1, transformación a), es decir los productos intermedios de fórmula general (IX) que tienen un sustituyente 8-metoxi, y después se convierten en los correspondientes productos intermedios de éster que contienen 8-hidroxi de fórmula general (X) (etapa 1, transformación b) antes de la reacción con la amina deseada que tiene un grupo R7 para proporcionar los compuestos finales 8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamidas de fórmula general (I) en la etapa final, transformación c.
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Los reactivos adecuados para llevar a cabo las transformaciones químicas a, b y c, en las etapas 1 a 3 del Esquema 4 se indican dentro del propio Esquema 4.
Para evitar dudas, las fórmulas ilustradas en el Esquema 4 también se han simplificado para centrarse en las transformaciones químicas clave para proporcionar cromonas según la presente invención de la misma manera que se ha explicado anteriormente para los Esquemas 1 a 3. Por ello, mientras que R1, R5 y R6 son todos H en las fórmulas ilustradas en el Esquema 4, se apreciará que los compuestos de fórmula general (I) que tienen sustituyentes alternativos distintos de H, para uno o más de estos grupos pueden prepararse mediante la selección de los materiales de partida y/o reactivos alternativos apropiados, como se ha indicado anteriormente para el Esquema 3. Se proporcionan ejemplos de compuestos de fórmula general (I) preparados según el procedimiento del Esquema 4 en la sección Experimental más adelante en este documento.
Por lo tanto, la presente invención proporciona un procedimiento para la preparación de compuestos de 8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida de fórmula general (I) donde R2 = F o Cl, R3 = F o Cl y R4 = OH que comprende la aminación del producto intermedio de éster de fórmula general (X) según el procedimiento ilustrado en el Esquema 4.
El Esquema 5 ilustra un enfoque sintético para la preparación de compuestos de 8-amino y 8-sulfonamino cromono-2-carboxamida de fórmula general (I) que tienen R4 = un grupo amino o sulfamino. En el Esquema 5, los compuestos intermedios de 6-bromo-8-nitro de fórmula general (XI) se convierten en primer lugar en sus aminas correspondientes (etapa 1, transformación a), es decir, compuestos de fórmula general (I) que tienen un sustituyente R4/8-amino, que posteriormente pueden convertirse en los compuestos R4/8-sulfonamino correspondientes de fórmula general (I) (etapa 2, transformación b).
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Los reactivos adecuados para llevar a cabo las transformaciones químicas a y b en las etapas 1 y 2 del Esquema 5 se indican en el propio Esquema 5.
Para evitar dudas, las fórmulas ilustradas en el Esquema 5 también se han simplificado para centrarse en las transformaciones químicas clave para proporcionar cromonas según la presente invención de la misma manera que se ha explicado anteriormente para los Esquemas 1 a 4. Por ello, mientras que R1, R3, R5 y R6 son todos H en las fórmulas ilustradas en el Esquema 5 se apreciará que los compuestos de fórmula general (I) que tienen sustituyentes alternativos distintos de H, tales como por ejemplo, donde R5 y/o R6 son grupos alquilo (C1-C3), y en particular CH3 pueden prepararse mediante la selección de los materiales de partida y/o reactivos alternativos apropiados. Se proporcionan ejemplos de compuestos de fórmula general (I) preparados según el procedimiento del Esquema 5 en la sección Experimental más adelante en este documento.
Por lo tanto, la presente invención proporciona un procedimiento para la preparación de compuestos 8-amino u 8-sulfonamino de cromono-2-carboxamidas de fórmula general (I) donde R4 = -NR8R9 o N(R10)SO2R10 que comprende la reducción del compuesto intermedio nitro de fórmula general (XI), o la reducción y posterior conversión a los compuestos sulfonamino de fórmula general (I) según el procedimiento ilustrado en el Esquema 5.
El Esquema 6 ilustra un enfoque sintético para la preparación de compuestos de 8-HET cromono-2-carboxamida de fórmula general (I) que tienen R4 = HET (tetrazol). En el Esquema 6, los compuestos intermedios 8-bromo-8 de fórmula general (XII) se convierten en primer lugar en sus correspondientes análogos ciano (etapa 1, transformación a), es decir, compuestos de fórmula general (I) que tienen un sustituyente R4/8-ciano, que posteriormente pueden convertirse en los correspondientes compuestos R4/8-HET de fórmula general (I) (etapa 2, transformación b).
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Los reactivos adecuados para llevar a cabo las transformaciones químicas a y b en las etapas 1 y 2 del Esquema 6 se indican en el propio Esquema 6.
Para evitar dudas, las fórmulas ilustradas en el Esquema 6 también se han simplificado para centrarse en las transformaciones químicas clave para proporcionar cromonas según la presente invención de la misma manera que se ha explicado anteriormente para los Esquemas 1 a 5. Por ello, mientras que R1, R2, R3, R5 y R6 son todos H en las fórmulas ilustradas en el Esquema 6, se apreciará que los compuestos de fórmula general (I) que tienen sustituyentes alternativos distintos de H (para uno o más de estos grupos) pueden prepararse mediante la selección de los materiales de partida y/o reactivos alternativos apropiados como se ha explicado anteriormente. Se proporcionan ejemplos de compuestos de fórmula general (I) preparados según el procedimiento del Esquema 6 en la sección Experimental más adelante.
Por lo tanto, la presente invención proporciona un procedimiento para la preparación de compuestos de 8-HET cromono-2-carboxamidas de fórmula general (I) donde R4 = HET (tetrazol) a partir del correspondiente compuesto ciano de fórmula general (I) según el procedimiento ilustrado en el Esquema 6.
El Esquema 7 ilustra un enfoque sintético para la interconversión de compuestos de cromono-2-carboxamida 8-sustituidos de fórmula general (I) en otros compuestos de cromono-2-carboxamida 8-sustituidos de fórmula general (I). En el Esquema 7, los 8-bromocompuestos de fórmula general (I) se convierten en primer lugar en sus correspondientes ésteres de metilo, (etapa 1, transformación a) es decir, compuestos de fórmula general (I) que tienen un sustituyente R4/8-alquilo-éster, que pueden convertirse a continuación en los correspondientes R4/8-carboxilatos (etapa 2, transformación b) y después en compuestos R4/8-carbamoilo de fórmula general (I) (etapa 3, transformación c).
ESQ U EM A7
Figure imgf000025_0001
Los reactivos adecuados para llevar a cabo las transformaciones químicas a, b, y c en las etapas 1,2, y 3 del Esquema 7 se indican dentro del propio Esquema 7.
Para evitar dudas, las fórmulas ilustradas en el Esquema 7 se han simplificado para centrarse en las transformaciones químicas clave para proporcionar cromonas según lo explicado anteriormente en la presente memoria, y se apreciará que los compuestos de fórmula general (I) que tienen grupos R5 y/o R6 alternativos con sustituyentes distintos de H pueden prepararse mediante la selección de los materiales de partida y/o reactivos alternativos apropiados como se explicó anteriormente en la presente memoria. Se proporcionan ejemplos de compuestos de fórmula general (I) preparados según el procedimiento del Esquema 7 en la sección Experimental más adelante en este documento.
Por lo tanto, la presente invención proporciona un procedimiento para la preparación de compuestos de cromono-2-carboxamidas 8-sustituidos de fórmula general (I) donde R4 = éster, ácido o carbamoilo según el procedimiento ilustrado en el Esquema 7.
El Esquema 8 ilustra un enfoque sintético para la preparación de compuestos de cromono-2-carboxamida 3-sustituidos de fórmula general (I). En el Esquema 8, los compuestos 3-sustituidos de fórmula general (I) se preparan mediante la reacción de un producto intermedio de ácido adecuado (que contiene el grupo sustituyente deseado en la posición 3 con respecto al compuesto final) de fórmula general (XIV) y un producto intermedio de amina adecuado de fórmula general (XV). El producto intermedio de ácido puede prepararse a partir de materiales de partida comerciales mediante la preparación de una cromona sustituida con éster (etapa 1, transformación a) que se convierte en la cromona sustituida con ácido correspondiente (etapa 2, transformación b), y después se combina con el producto intermedio de amina para proporcionar compuestos de cromono-2-carboxamida 3-sustituidos de fórmula general (I) (etapa 3, transformación c).
Figure imgf000025_0002
Los reactivos adecuados para llevar a cabo las transformaciones químicas a, b, y c en las etapas 1,2, y 3 del Esquema 8 se indican dentro del propio Esquema 8.
Para evitar dudas, las fórmulas ilustradas en el Esquema 8 se han simplificado para centrarse en las transformaciones químicas clave como se ha explicado anteriormente en la presente memoria, y se apreciará que los compuestos de fórmula general (I) que tienen sustituyentes alternativos distintos de H, para uno o más de los grupos R1 a R4 y R5 pueden prepararse mediante la selección de los materiales de partida y/o reactivos alternativos apropiados como se ha explicado anteriormente en la presente memoria. Se proporcionan ejemplos de compuestos de fórmula general (I) preparados según el procedimiento del Esquema 8 en la sección Experimental más adelante.
Por lo tanto, la presente invención proporciona un procedimiento para la preparación de compuestos de cromono-2-carboxamidas 3-sustituidos de fórmula general (I) donde R4 = éster, ácido o carbamoilo según el procedimiento ilustrado en el Esquema 8.
El Esquema 9 ilustra un enfoque sintético para la preparación de compuestos de cromono-2-carboxamida 3,6-disustituidos de fórmula general (I). En el Esquema 9, los compuestos 3,6-di-sustituidos de fórmula general (I) se preparan mediante la reacción de un producto intermedio de ácido adecuado (que contiene el grupo sustituyente deseado en la posición 3 con respecto al compuesto final) de fórmula general (XVI) y un producto intermedio de amina adecuado de fórmula general (XV). El producto intermedio de ácido puede prepararse a partir de materiales de partida comerciales en 2 etapas como se indica en la etapa 1, transformación a, y en la etapa 2, transformación b. El producto intermedio de ácido se combina con el producto intermedio de amina para producir compuestos de cromono-2-carboxamida 3, 6-di-sustituidos de fórmula general (I) (etapa 3, transformación c).
ESQUEMA 9
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Los reactivos adecuados para llevar a cabo las transformaciones químicas a, b, y c en las etapas 1,2, y 3 del Esquema 9 se indican dentro del propio Esquema 9.
Para evitar dudas, las fórmulas ilustradas en el Esquema 9 se han simplificado para centrarse en las transformaciones químicas clave como se ha discutido anteriormente en la presente memoria, y se apreciará que los compuestos de fórmula general (I) que tienen sustituyentes alternativos distintos de H, para uno o más de los grupos R1, R3, R4 y R6, y/o sustituyentes distintos de F para los grupos R2, pueden prepararse mediante la selección de los materiales de partida y/o reactivos alternativos apropiados como se ha explicado anteriormente en la presente memoria. Se proporcionan ejemplos de compuestos de fórmula general (I) preparados según el procedimiento del Esquema 9 en la sección Experimental más adelante.
Por lo tanto, la presente invención proporciona un procedimiento para la preparación de compuestos de cromono-2-carboxamidas 3,6-di-sustituidos de fórmula general (I) donde R2 = halógeno y R5 = alquilo según el procedimiento ilustrado en el Esquema 9.
El Esquema 10 ilustra un enfoque sintético para la preparación de compuestos de fórmula general (I) con R2 = F o H, R3 = F o H y R4 = NH2, es decir, 8-amino-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamidas. En el Esquema 10, los compuestos de fórmula general (I) se preparan mediante la reacción de un producto intermedio de éster adecuado de fórmula general (XVIII) y una amina que tiene los grupos R6 y R7 deseados. El producto intermedio de éster puede prepararse a partir de materiales de partida comerciales en 3 etapas como se indica en la etapa 1, transformación a, y etapa 2, transformación b y c y etapa 3, transformación d. El producto intermedio de éster se combina con el producto intermedio de amina para proporcionar compuestos de 8-amino-4-oxo-cromeno-2-carboxamidas de fórmula general (I) (etapa 4, transformación e).
ESQUEMA 10
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Para evitar dudas, las fórmulas ilustradas en los Esquemas 10 también se han simplificado para centrarse en las transformaciones químicas clave como se ha explicado anteriormente en la presente memoria, y se apreciará que los compuestos de fórmula general (I) que tienen sustituyentes alternativos distintos de H, para uno o más de R1 y R5 se pueden preparar mediante una selección de los materiales de partida y/o reactivos apropiados como se ha explicado anteriormente en la presente memoria. Se proporcionan ejemplos de compuestos de fórmula general (I) preparados según el procedimiento del Esquema 10 en la sección Experimental más adelante.
Por lo tanto, la presente invención proporciona un procedimiento para la preparación de compuestos de 8-amino-4-oxo-cromeno-2-carboxamidas de fórmula general (I) que comprende la amidación del producto intermedio de éster de fórmula general (XVIII) según el procedimiento ilustrado en el esquema 10.
Los mecanismos de reacción generales descritos en la presente memoria para la preparación de materiales de partida novedosos usados en los procedimientos precedentes son convencionales y los reactivos y condiciones de reacción apropiados para su realización o preparación, así como los procedimientos para aislar los productos deseados, son bien conocidos por los expertos en la materia con referencia a los precedentes bibliográficos y a los Ejemplos y Preparaciones del presente documento.
Un experto en la materia también entenderá que los compuestos de la invención podrían prepararse por adaptación de los procedimientos descritos en la presente memoria y/o adaptación de procedimientos conocidos en la técnica, por ejemplo la técnica descrita en la presente memoria, o usando libros de texto convencionales tales como "Comprehensive Organic Transformations - A Guide to Functional Group Transformations", RC Larock, Wiley- VCH (1999 o ediciones posteriores), "March's Advanced Organic Chemistry - Reactions, Mechanisms and Structure", MB Smith, J. March, Wiley, (5a edición o posterior)) "Advanced Organic Chemistry, Part B, Reactions and Synthesis", FA Carey, RJ Sundberg, Kluwer Academic/Plenum Publications, (2001 o ediciones posteriores), "Organic Synthesis - The Disconnection Approach", S Warren (Wiley), (1982 o ediciones posteriores), "Designing Organic Syntheses" S Warren (Wiley) (1983 o ediciones posteriores), "Guidebook To Organic Synthesis" RK Mackie y DM Smith (Longman) (1982 o ediciones posteriores), etc., y sus referencias como guía.
También será evidente para un experto en la materia que puede ser necesario proteger y desproteger grupos funcionales sensibles durante la síntesis de un compuesto de la invención. Esto puede conseguirse por procedimientos convencionales, por ejemplo como se describe en "Protective Groups in Organic Synthesis" de Tw Greene y PGM Wuts, John Wiley & Sons Inc (1999), y referencias en el mismo.
Para cualquiera de las reacciones o los procedimientos descritos anteriormente pueden emplearse procedimientos convencionales de calentamiento y enfriamiento, por ejemplo baños de aceite de temperatura regulada o bloques calientes de temperatura regulada, y baños de hielo/sal o baños de hielo seco/acetona respectivamente. Pueden usarse procedimientos convencionales de aislamiento, por ejemplo extracción a partir de o en disolventes acuosos o no acuosos. Pueden emplearse procedimientos convencionales de secado de disolventes, soluciones o extractos orgánicos, tales como la agitación con sulfato de magnesio anhidro o sulfato de sodio anhidro, o el paso a través de una frita hidrófoba. Pueden usarse procedimientos convencionales de purificación, por ejemplo cristalización y cromatografía, por ejemplo cromatografía de sílice o cromatografía de fase inversa, según se requiera. La cristalización puede realizarse usando disolventes convencionales tales como acetato de etilo, metanol, etanol o butanol o mezclas acuosas de los mismos. Se apreciará que las temperaturas específicas de los tiempos de reacción pueden determinarse típicamente mediante técnicas de monitorización de la reacción, por ejemplo cromatografía en capa fina y EM-CL.
Procedimientos de uso
Se apreciará que las referencias a tratamiento tal como se usa en la presente memoria incluyen profilaxis así como tratamiento paliativo mediante el alivio de síntomas establecidos de una afección, es decir, prevención o control. "Tratar" o "tratamiento" de un estado, trastorno o afección incluye: (1) prevenir o retrasar la aparición de síntomas clínicos del estado, trastorno o afección que se desarrolla en un ser humano que puede estar afectado por el o predispuesto al estado, trastorno o afección pero que aún no experimenta o muestra síntomas clínicos o subclínicos del estado, trastorno o afección, (2) inhibir el estado, trastorno o afección, es decir, detener, reducir o retrasar el desarrollo de la enfermedad o una recaída de la misma (en caso de tratamiento de mantenimiento) o al menos un síntoma clínico o subclínico de la misma, o (3) aliviar o atenuar la enfermedad, es decir, provocar la regresión del estado, trastorno o afección o al menos uno de sus síntomas clínicos o subclínicos.
Los expertos en la materia apreciarán que las referencias a tratamiento en la presente memoria se refieren al tratamiento de afecciones establecidas. Sin embargo, los compuestos de fórmula general (I) y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos pueden, dependiendo de la afección, ser también útiles en la prevención (profilaxis) de ciertas enfermedades.
Tal como se usa en la presente memoria, a menos que se indique otra cosa, "tratar", "tratando" o "tratamiento" en referencia a una enfermedad significa: (1) mejorar la enfermedad o una o más de las manifestaciones biológicas de la enfermedad (2) interferir con (a) uno o más puntos de la cascada biológica que provoca o es responsable de la enfermedad o (b) una o más de las manifestaciones biológicas de la enfermedad, (3) aliviar uno o más de los síntomas o efectos asociados a la enfermedad, (4) ralentizar la progresión de la enfermedad o de una o más de las manifestaciones biológicas de la enfermedad y/o (5) disminuir la probabilidad de gravedad de una enfermedad o de las manifestaciones biológicas de la enfermedad.
Tal como se usa en la presente memoria, a menos que se indique otra cosa, "prevenir", "previniendo" o "prevención" significa la administración profiláctica de un fármaco para disminuir la probabilidad de aparición o retrasar la aparición de una enfermedad o su manifestación biológica. El experto apreciará que "prevención" no es un término absoluto. En medicina, se entiende que "prevención" se refiere a la administración profiláctica de un fármaco para disminuir sustancialmente la probabilidad o gravedad de un trastorno o manifestación biológica del mismo, o para retrasar la aparición de dicho trastorno o manifestación biológica del mismo.
Por lo tanto, en una forma de realización se proporciona el tratamiento o la prevención de una enfermedad. En otra forma de realización se proporciona el tratamiento de una enfermedad. En otra forma de realización se proporciona la prevención de una enfermedad.
Se proporciona por lo tanto como otro aspecto de la invención un compuesto de fórmula general (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en terapia. Se proporciona además un compuesto de fórmula general (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso como medicamento en terapia, terapia que es humana o veterinaria.
Se apreciará que cuando un compuesto de fórmula general (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se usa en terapia, se usa como un agente terapéutico activo.
Para evitar dudas, las referencias generales en la presente memoria a "tratamiento" incluyen referencias a tratamiento curativo, paliativo y profiláctico.
Uso humano y veterinario
Con respecto al uso de los compuestos de la invención en seres humanos se proporciona:
una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o una sal, un solvato, hidrato, isómero, profármaco o polimorfo del mismo, farmacéuticamente aceptable, junto con uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables;
un compuesto de fórmula (I), o una sal, un solvato, hidrato, isómero, profármaco o polimorfo del mismo, farmacéuticamente aceptable, o una composición farmacéutica que contenga cualquiera de los anteriores, para su uso como medicamento;
un compuesto de fórmula (I), o una sal, un solvato, hidrato, isómero, profármaco o polimorfo del mismo, farmacéuticamente aceptable, o una composición farmacéutica que contenga cualquiera de los anteriores, para su uso en el tratamiento profiláctico de una o más enfermedades infecciosas, y en particular para su uso en el tratamiento profiláctico de una o más enfermedades infecciosas seleccionadas independientemente de: malaria; enfermedad de Chagas; tripanosomiasis africana humana (TAH); tripanosomiasis animal africana; leishmaniosis; criptosporidiosis; esquistosomiasis;
un compuesto de fórmula (I), o una sal, un solvato, hidrato, isómero, profármaco o polimorfo del mismo, farmacéuticamente aceptable, o una composición farmacéutica que contenga cualquiera de los anteriores, para su uso en el tratamiento profiláctico de una o más infecciones por bacterias grampositivas y/o gramnegativas, en donde las infecciones bacterianas se seleccionan independientemente de: infecciones bacterianas derivadas de: uno o más de Streptococcus pneumoniae y/o Enterococcus; o uno o más del grupo ESKAPE de especies bacterianas, Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumanii, Pseudomonas aeruginosa y/o Enterobactep
un compuesto de fórmula (I), o una sal, un solvato, hidrato, isómero, profármaco o polimorfo del mismo, farmacéuticamente aceptable, o una composición farmacéutica que contenga cualquiera de los anteriores, para su uso en el tratamiento de una o más enfermedades infecciosas, y en particular para su uso en el tratamiento profiláctico de una o más enfermedades infecciosas seleccionadas independientemente de: malaria; enfermedad de Chagas; tripanosomiasis africana humana (TAH); tripanosomiasis animal africana (TAA); leishmaniosis; criptosporidiosis; un compuesto de fórmula (I), o una sal, un solvato, hidrato, isómero, profármaco o polimorfo del mismo, farmacéuticamente aceptable, o una composición farmacéutica que contenga cualquiera de los anteriores, para su uso en el tratamiento de una o más infecciones bacterianas, y en particular para su uso en el tratamiento profiláctico de una o más infecciones bacterianas seleccionadas independientemente de: tratamiento de una o más infecciones por bacterias grampositivas y/o gramnegativas, en donde las infecciones bacterianas se seleccionan independientemente de: infecciones bacterianas derivadas de: uno o más de Streptococcus pneumoniae y/o Enterococcus; o uno o más del grupo ESKAPE de especies bacterianas, Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumanii, Pseudomonas aeruginosa y/o Enterobacter;
uso del compuesto de fórmula (I), o una sal, un solvato, hidrato, isómero, profármaco o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de una formulación farmacéutica para el tratamiento de una o más enfermedades infecciosas, y en particular para su uso en el tratamiento profiláctico de una o más enfermedades infecciosas seleccionadas independientemente de:
malaria; enfermedad de Chagas; tripanosomiasis africana humana (TAH); tripanosomiasis animal africana (TAA); leishmaniosis; criptosporidiosis; esquistosomiasis;
uso del compuesto de fórmula (I), o una sal, un solvato, hidrato, isómero, profármaco o polimorfo del mismo, farmacéuticamente aceptable, para la preparación de una formulación farmacéutica para el tratamiento de una o más infecciones bacterianas, y en particular para su uso en el tratamiento profiláctico de una o más infecciones bacterianas seleccionadas independientemente de: tratamiento de una o más infecciones por bacterias grampositivas y/o gramnegativas, en donde las infecciones bacterianas se seleccionan independientemente de: infecciones bacterianas derivadas de: uno o más de Streptococcus pneumoniae y/o Enterococcus; o uno o más del grupo ESKAPE de especies bacterianas, Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumanii, Pseudomonas aeruginosa y/o Enterobacter;
un compuesto de fórmula (I), o una sal, un solvato, hidrato, isómero, profármaco o polimorfo del mismo, farmacéuticamente aceptable, o una composición farmacéutica que contenga cualquiera de los anteriores, para su uso en el tratamiento de una o más enfermedades o afecciones seleccionadas independientemente de: malaria resistente a fármacos; una infección tripanosómica; leishmaniosis visceral; leishmaniosis cutánea; criptosporidiosis; tripanosomiasis africana humana (TAH); tripanosomiasis animal africana; esquistosomiasis;
un compuesto de fórmula (I), o una sal, un solvato, hidrato, isómero, profármaco o polimorfo del mismo, farmacéuticamente aceptable, o una composición farmacéutica que contenga cualquiera de los anteriores, para su uso en el tratamiento de una o más infecciones bacterianas.
Con respecto al uso de los compuestos de la invención en animales se proporciona:
una composición veterinaria que comprende un compuesto de fórmula (I), o una sal, un solvato, hidrato, isómero, profármaco o polimorfo del mismo, farmacéuticamente aceptable, junto con uno o más vehículos, diluyentes o excipientes;
un compuesto de fórmula (I), o una sal, un solvato, hidrato, isómero, profármaco o polimorfo del mismo, farmacéuticamente aceptable, o una composición veterinaria que contenga cualquiera de los anteriores, para su uso como medicamento veterinario.
Para evitar dudas, cuando se hace referencia aquí al uso de los compuestos de fórmula (I), significa además el uso de los compuestos de cualquiera de las fórmulas seleccionadas independientemente de: (I), C-I, C-ll, C-lll, A-I, A-II, S­ I, S-ll o S-lll.
Tratamiento de la malaria
El tratamiento profiláctico de la malaria, tal como se define en la presente memoria, incluye el tratamiento de un sujeto con una cantidad profilácticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I), en donde dicha cantidad profilácticamente eficaz es una cantidad de compuesto que es eficaz para inhibir, disminuir la probabilidad de la enfermedad por parásitos de la malaria, o prevenir la infección palúdica o prevenir el retraso en la aparición de la enfermedad por parásitos de la malaria, cuando se administra antes de la infección, es decir, antes, durante y/o poco después del periodo de exposición a los parásitos de la malaria.
El tratamiento de la malaria, tal como se define en la presente memoria, incluye tratamiento de infecciones por Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium ovale, Plasmodium malariae y/o Plasmodium knowlesi; tratamiento de infecciones por Plasmodium falciparum; tratamiento de infecciones por Plasmodium falciparum y Plasmodium vivax; tratamiento de infecciones por Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium ovale, Plasmodium malariae y Plasmodium knowlesi; tratamiento de las formas latentes de la malaria vivax.
En la presente memoria se proporcionan compuestos de fórmula (I) que tienen una pCE50 para Pf 3D7 de 5 o más, preferentemente 5,5 o más, más preferentemente 6 o más, especialmente 6,5 o 7 o más.
En la presente memoria se proporcionan compuestos de fórmula (I) que tienen una pIC50 para Pf KRS1 de 6 o más, preferentemente 6,3 o más, más preferentemente 6,5 o más, especialmente 7 o más.
Tratamiento de la enfermedad de Chagas
Otro aspecto de la invención proporciona un procedimiento para la profilaxis o el tratamiento de la infección tripanosómica que comprende la administración de un compuesto de fórmula (I) a un sujeto que padece o puede estar expuesto a dicha infección por T. cruzi. Un aspecto relacionado de la invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I) en el tratamiento o la profilaxis de la infección tripanosómica. Otro aspecto relacionado proporciona el uso de los compuestos de fórmula (I) para el tratamiento o la profilaxis de la infección por T. cruzi.
Otro aspecto de la invención proporciona un procedimiento para el tratamiento de la infección tripanosómica que comprende la administración de un compuesto de fórmula (I) a un sujeto que padece o puede estar expuesto a dicha infección tripanosómica. Un aspecto relacionado de la invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula I en el tratamiento de la infección tripanosómica. Otro aspecto relacionado proporciona el uso de los compuestos de fórmula (I) para el tratamiento de la infección por T. cruzi. Otros aspectos relacionados proporcionan un compuesto de fórmula (I) para su uso en el tratamiento de la infección tripanosómica y un compuesto de fórmula (I) para su uso en el tratamiento de una infección por T. cruzi.
En algunas formas de realización de la invención, la infección tripanosómica es una infección por T. cruzi. Típicamente, el procedimiento o uso de la invención se refiere al tratamiento de una infección en curso en sujetos humanos.
Se cree que los agentes antiinfecciosos de fórmula (I) según la presente invención son adecuados para el tratamiento de aquellas enfermedades infecciosas en las que el patógeno está presente en órganos como el hígado, el bazo o el riñón, y en particular en músculos como el corazón.
En otro aspecto, la invención proporciona un kit que comprende una cantidad eficaz de uno o más compuestos de la fórmula del presente documento en forma farmacéutica unitaria, junto con instrucciones para administrar el compuesto a un sujeto que padece o es susceptible a infecciones tripanosómicas, tales como la enfermedad de Chagas.
[En la presente memoria se proporcionan compuestos de fórmula (I) que tienen una pCE50 para Cryptosporidium parvum de 5 o más, preferentemente 5,5 o más, más preferentemente 6 o más, especialmente 6,5 o 7 o más.
Tratamiento de la leishmaniosis
Se proporciona por lo tanto un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento o la prevención de la leishmaniosis, en particular la leishmaniosis visceral.
En una forma de realización de la invención se proporciona un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento o la prevención de la leishmaniosis cutánea. Se proporciona además el uso de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso como medicamento para el tratamiento o la prevención de la leishmaniosis, en particular la leishmaniosis visceral.
Se proporciona además un procedimiento de tratamiento o prevención de la leishmaniosis, en particular de la leishmaniosis visceral, procedimiento que comprende administrar a un sujeto humano que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra forma de realización de la invención se proporciona un procedimiento de tratamiento o prevención de la leishmaniosis cutánea, procedimiento que comprende administrar a un mamífero que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Según un aspecto preferido, los usos y/o procedimientos anteriores proporcionan compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos eficaces contra Leishmania, y en particular para agentes que son adecuados para su uso en el tratamiento o la prevención de Leishmania infantum.
Tratamiento de la esquistosomiasis
Se proporciona por lo tanto también un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento o la prevención de la esquistosomiasis.
Se proporciona además el uso de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso como medicamento para el tratamiento o la prevención de la esquistosomiasis.
Se proporciona además un procedimiento de tratamiento o prevención de la esquistosomiasis, procedimiento que comprende administrar a un sujeto humano que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Según un aspecto preferido, los usos y/o procedimientos anteriores proporcionan compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos que son eficaces contra gusanos del género Schistosoma, y en particular eficaces contra Schistosoma haematobium, Schistosoma mansoni y/o Schistosoma japonicum.
Tratamiento de la criptosporidiosis
Se proporciona por lo tanto un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento o la prevención de la criptosporidiosis.
Se proporciona además un procedimiento de tratamiento o prevención de la criptosporidiosis, procedimiento que comprende administrar a un sujeto humano que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra forma de realización de la invención se proporciona un procedimiento de tratamiento o prevención de la criptosporidiosis, que comprende administrar a un mamífero que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Según un aspecto preferido, los usos, y/o procedimientos anteriores proporcionan compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos eficaces contra Cryptosporidium, y en particular compuestos de fórmula (I) adecuados para su uso en el tratamiento o la prevención de; sujetos infectados únicamente por Cryptosporidium; sujetos inmunodeprimidos infectados por Cryptosporidium tales como sujetos coinfectados por Cryptosporidium-VIH.
Tratamiento de la tripanosomiasis africana humana (TAH)
También se proporciona un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento o la prevención de la TAH.
Se proporciona además un procedimiento de tratamiento o prevención de la TAH, procedimiento que comprende administrar a un sujeto humano que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra forma de realización de la invención se proporciona un procedimiento de tratamiento o prevención de TAH, procedimiento que comprende administrar a un mamífero que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Según un aspecto preferido, los usos y/o procedimientos anteriores proporcionan compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, eficaces contra infecciones por Trypanosoma brucei gambiense (T. b. gambiense) y/o Trypanosoma brucei rhodesiense (T. b. rhodesiense).
T ratamiento de la tuberculosis (TBC)
También se proporciona un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento o la prevención de la TBC.
Se proporciona además un procedimiento de tratamiento o prevención de la tuberculosis, procedimiento que comprende administrar a un sujeto humano que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra forma de realización de la invención se proporciona un procedimiento de tratamiento o prevención de la tuberculosis, procedimiento que comprende administrar a un mamífero que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Tratamiento de infecciones bacterianas
Se proporciona además un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento o la prevención de una infección bacteriana.
Se proporciona además un procedimiento de tratamiento o prevención de infecciones bacterianas, procedimiento que comprende administrar a un sujeto humano que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra forma de realización de la invención se proporciona un procedimiento de tratamiento o prevención de una o más infecciones bacterianas, procedimiento que comprende administrar a un mamífero que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Según un aspecto preferido, los usos y/o procedimientos anteriores proporcionan compuestos antibacterianos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, adecuados para su uso en el tratamiento o la prevención de, o que proporcionan un tratamiento eficaz de infecciones bacterianas derivadas de: Staphylococcus aureus; Streptococcus pneumoniae; Enterococcus; y/o Mycobacterium tuberculosis.
TERAPIA DE COMBINACIÓN
Los compuestos de la presente invención pueden administrarse en combinación con uno o más principios activos auxiliares para el tratamiento de la malaria. Los principios activos auxiliares adecuados para su uso en las combinaciones de la presente invención incluyen: artemisinina y sus derivados tales como, por ejemplo, artesunato; quinina y agentes relacionados; cloroquina; OZ439; NITD609; ferroquina; naptoquina; piperaquina; pirimetamina; proguanil; terapias basadas en sulfonamidas; mefloquina, incluido el clorhidrato de mefloquina; atovacuona; primaquina; halofantrina; doxiciclina; clindamicina; amodiaquina, comercializada como Camoquin o Flavoquine; y/o arteméter, incluida la combinación adicional con lumefantrina disponible en Novartis como componente de Riamet y Coartem, o con otro compuesto publicado actualmente en desarrollo.
La idoneidad de una combinación potencial de dos o más fármacos antipalúdicos puede evaluarse sobre la base de sus interacciones farmacológicas in vitro, en las que las interacciones de los dos fármacos antipalúdicos seleccionados se investigan in vitro utilizando ensayos normalizados de dosis-respuesta en un intervalo de concentraciones individualizadas. La selección de las condiciones y concentraciones adecuadas para llevar a cabo tales investigaciones sería competencia del experto.
Según otro aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende: un compuesto de fórmula (I) o una sal, un solvato, hidrato, isómero, profármaco o polimorfo del mismo, farmacéuticamente aceptable; uno o más agentes antipalúdicos adicionales; y uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.
Los ejemplos de combinaciones adecuadas en la presente memoria incluyen un compuesto de la presente invención y uno o más agentes terapéuticos adicionales seleccionados de: artesunato; mefloquina; OZ439, piperaquina y mezclas de los mismos.
Si se administra una combinación de principios activos, entonces la composición que comprende un compuesto de fórmula (I), como se ha detallado anteriormente, puede administrarse a un individuo antes, simultáneamente, por separado o secuencialmente con otros regímenes terapéuticos o coagentes útiles en el tratamiento de la malaria. Si se administra una combinación de principios activos, entonces los diferentes principios activos pueden formularse para la misma o diferente administración, por ejemplo un principio activo se puede formular para liberación inmediata y otro, para liberación sostenida. Si se administra una terapia combinada, los principios activos pueden estar formulados para las mismas o diferentes vías de administración, por ejemplo, en una terapia dual, un principio activo puede estar formulado para administración oral y otro para administración parenteral.
Administración y determinación de la dosis
Con el fin de seleccionar las formas farmacéuticas y vías de administración más apropiadas consideradas adecuadas para el tratamiento de la indicación deseada, los compuestos de fórmula (I) deben ser evaluados por sus propiedades biofarmacéuticas, tales como por ejemplo solubilidad, estabilidad de la solución (a través de un intervalo de pH), nivel de dosis probable y permeabilidad. Las pruebas biofarmacéuticas iniciales para su potencial como tratamiento antipalúdico han proporcionado resultados positivos.
Los compuestos de la invención destinados para su uso farmacéutico pueden administrarse como productos cristalinos o amorfos. Pueden obtenerse, por ejemplo, como gránulos sólidos, polvos o películas mediante procedimientos tales como precipitación, cristalización, liofilización, secado por pulverización o secado por evaporación. Puede usarse para este fin el secado por microondas o radiofrecuencia.
Pueden administrarse solos o en combinación con uno o más compuestos de la invención o en combinación con uno o más fármacos (o como cualquier combinación de los mismos). Generalmente, se administrarán como una formulación en asociación con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. El término "excipiente" se utiliza en la presente memoria para describir cualquier ingrediente distinto del compuesto o compuestos de la invención. La elección del excipiente dependerá en gran medida de factores tales como el modo particular de administración, el efecto del excipiente sobre la solubilidad y la estabilidad y la naturaleza de la forma farmacéutica. Los excipientes farmacéuticamente aceptables incluyen uno o más de: lubricantes, agentes aglutinantes, diluyentes, agentes tensioactivos, antioxidantes, colorantes, agentes aromatizantes, conservantes, potenciadores del sabor, conservantes, agentes estimulantes salivares, agentes refrigerantes, codisolventes (incluidos aceites), emolientes, agentes de carga, agentes antiespumantes, surfactantes y agentes enmascaradores del sabor.
Las composiciones farmacéuticas adecuadas para la administración de compuestos de la presente invención y los procedimientos para su preparación serán fácilmente evidentes para los expertos en la materia. Tales composiciones y procedimientos para su preparación pueden encontrarse, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, 19a Edición (Mack Publishing Company, 1995).
Las formulaciones adecuadas para la administración oral incluyen sólidos, semisólidos o líquidos tales como comprimidos; cápsulas blandas o duras; bolos; polvos; pastillas (incluidas las rellenas de líquido); masticables; multiy nanoparticulados; geles; soluciones sólidas; formas farmacéuticas de dispersión rápida; formas farmacéuticas de disolución rápida; formas farmacéuticas de disgregación rápida; películas; óvulos; aerosoles; parches bucales/mucoadhesivos; y formulaciones líquidas. Las formulaciones líquidas incluyen suspensiones, soluciones, elixires y jarabes. La administración oral puede implicar la deglución, para que el compuesto entre en el tracto gastrointestinal, y/o la administración bucal, lingual o sublingual, por la que el compuesto entra en el torrente sanguíneo directamente desde la boca. Las formulaciones líquidas pueden emplearse como carga en cápsulas blandas o duras y normalmente comprenden un vehículo, por ejemplo, agua, etanol, polietilenglicol, propilenglicol, metilcelulosa o un aceite adecuado, y uno o más agentes emulsionantes y/o agentes de suspensión. Las formulaciones líquidas también pueden prepararse por reconstitución de un sólido, por ejemplo, desde un sobre.
Las formulaciones para administración oral pueden ser de liberación inmediata y/o modificada. Las formulaciones de liberación modificada incluyen liberación retardada, sostenida, pulsátil, controlada, dirigida y programada. La formulación de comprimidos se trata en "Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Vol. 1", de H. Lieberman y L. Lachman, Marcel Dekker, N. Y., N.Y., 1980 (ISBN 0-8247-6918-X).
La presente invención proporciona una composición farmacéutica formulada para administración oral que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal, un solvato o hidrato del mismo, farmacéuticamente aceptable, según cualquier reivindicación anterior, junto con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. La presente invención proporciona además dicha composición farmacéutica formulada para administración oral como formulación en comprimidos de liberación inmediata o de liberación modificada.
Los compuestos de la invención también pueden administrarse por vía parenteral, o mediante inyección directamente en el torrente sanguíneo, en el músculo o en un órgano interno. Los medios adecuados para la administración parenteral incluyen intravenoso, intraarterial, intraperitoneal, intratecal, intraventricular, intrauretral, intraesternal, intracraneal, intramuscular, intrasinovial y subcutáneo. Los dispositivos adecuados para la administración parenteral incluyen inyectores de aguja (incluyendo microaguja), inyectores sin aguja y técnicas de infusión.
La presente invención proporciona una composición farmacéutica formulada para administración parenteral que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal, un solvato o hidrato del mismo, farmacéuticamente aceptable, según cualquier reivindicación anterior, junto con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. La presente invención proporciona además dicha composición farmacéutica formulada para administración parenteral como una formulación de liberación inmediata o como formulación en comprimidos de liberación modificada, adecuada para administración intramuscular o intravenosa.
Los compuestos de la invención también pueden administrarse por vía tópica, (intra)dérmica o transdérmica en la piel o las mucosas. Las formulaciones típicas para este fin incluyen geles, hidrogeles, lociones, soluciones, cremas, ungüentos, polvos de espolvoreo, apósitos, espumas, películas, parches cutáneos, obleas, implantes, esponjas, fibras, vendajes y microemulsiones. También pueden usarse liposomas.
Los compuestos de la invención pueden administrarse por vía rectal o vaginal, por ejemplo, en forma de supositorio, óvulo vaginal o enema. La manteca de cacao es una base tradicional para supositorios, pero pueden usarse varias alternativas según sea adecuado.
Las formulaciones farmacéuticas que contienen compuestos de la invención pueden formularse para ser de liberación inmediata y/o modificada. Las formulaciones de liberación modificada incluyen liberación retardada, sostenida, pulsátil, controlada, dirigida y programada.
POSOLOGÍA
Normalmente, un médico determinará la dosis real que será más adecuada para un sujeto individual. El nivel de dosis específico y la pauta de administración para cualquier individuo en particular pueden ser variados y dependerán de una diversidad de factores incluyendo la afección que se está tratando, la actividad del compuesto específico empleado, la estabilidad metabólica y la duración de la acción de ese compuesto, la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo, la alimentación, el modo y el tiempo de administración, la tasa de excreción, la combinación de fármacos, la gravedad de la afección en particular y el individuo sometido a terapia.
En general, sin embargo, una dosis adecuada estará en el intervalo de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal por día, en otra forma de realización, de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 5 mg/kg de peso corporal por día; en otra forma de realización, de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 0,5 mg/kg de peso corporal por día y en otra forma de realización, de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 0,1 mg/kg de peso corporal por día. En otras formas de realización, los intervalos pueden ser de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 750 mg/kg de peso corporal por día, en el intervalo de 0,5 a 60 mg/kg/día, y en el intervalo de 1 a 20 mg/kg/día.
La dosis deseada puede presentarse convenientemente en una dosis única o como dosis divididas administradas a intervalos apropiados, por ejemplo como una, dos, tres, cuatro o más dosis al día. Si los compuestos se administran transdérmicamente o en forma de liberación prolongada, los compuestos podrían administrarse una vez al día o menos.
El compuesto es convenientemente administrado en forma farmacéutica unitaria; por ejemplo conteniendo de 0,1 a 50 mg, convenientemente de 0,1 a 10 mg, lo más convenientemente de 0,1 a 5 mg de principio activo por forma farmacéutica unitaria. En otra forma de realización, el compuesto puede administrarse convenientemente en forma farmacéutica unitaria; por ejemplo, conteniendo de 10 a 1500 mg, de 20 a 1000 mg, o de 50 a 700 mg de principio activo por forma farmacéutica unitaria.
Estas posologías se basan en un sujeto humano medio con un peso de aproximadamente 65 kg a 70 kg. El médico podrá determinar fácilmente las dosis para sujetos cuyo peso esté fuera de este intervalo, tales como los lactantes y los ancianos.
La presente divulgación proporciona una composición farmacéutica formulada como un comprimido monodosis adecuado para administración oral que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal, un solvato o hidrato del mismo, farmacéuticamente aceptable, junto con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. La presente invención proporciona además dicha composición farmacéutica formulada para administración oral como formulación de comprimido monodosis de liberación inmediata o liberación modificada.
La presente divulgación proporciona además una composición farmacéutica formulada como comprimido monodosis formulado para administración oral como formulación de comprimido monodosis de liberación inmediata o liberación modificada que comprende de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 3000 mg, preferentemente de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 1500 mg, más preferentemente de aproximadamente 1 a aproximadamente 750 mg, de aproximadamente 1 a aproximadamente 750 mg, y especialmente de aproximadamente 5 a aproximadamente 250 mg de un compuesto de fórmula (I) o una sal, un solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.
Para el tratamiento antipalúdico, un tratamiento de dosis única es muy deseable para aumentar los niveles efectivos de tratamiento; aumentar las tasas de cumplimiento; así como para reducir los costes de tratamiento.
Para el tratamiento antiinfeccioso, de cualquiera de las afecciones infecciosas identificadas anteriormente, y en particular para el tratamiento antipalúdico, la presente divulgación proporciona además una composición farmacéutica formulada como un comprimido monodosis formulado para administración oral como formulación de comprimido monodosis de liberación inmediata o liberación modificada que comprende de 0,1 a 3000 mg, preferentemente de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 1500 mg, más preferentemente de aproximadamente 1 a aproximadamente 750 mg y especialmente de aproximadamente 5 a aproximadamente 250 mg de un compuesto de fórmula (I) o una sal, un solvato o hidrato del mismo, farmacéuticamente aceptable, junto con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.
Cuando deba administrarse una terapia de tratamiento único mediante una dosis grande, por ejemplo a un niño, la dosis podría proporcionarse mediante más de un comprimido, como 2 * 1500 mg, o 3 * 1000 mg, en lugar de un comprimido de dosis única de 3000 mg, donde los comprimidos pueden tomarse uno tras otro, o juntos según la idoneidad.
COADMINISTRACIÓN
En la medida en que pueda ser deseable administrar una combinación de compuestos activos, como se ha detallado anteriormente, por ejemplo, con el fin de tratar una enfermedad infecciosa o afección biológica particular, está dentro del alcance de la presente invención que dos o más composiciones farmacéuticas, al menos una de las cuales contenga un compuesto de fórmula general (I) como se ha definido anteriormente según la invención, puedan combinarse convenientemente en forma de un kit adecuado para la coadministración de las composiciones.
Por lo tanto, el kit de la invención comprende dos o más composiciones farmacéuticas separadas, al menos una de las cuales contiene un compuesto de fórmula (I) según la invención, y medios para mantener separadas dichas composiciones, tales como un recipiente, un frasco dividido o un paquete de aluminio dividido. Un ejemplo de este kit es el conocido paquete blíster usado para el envasado de comprimidos, cápsulas y similares.
Procedimientos de uso
Los expertos en la materia apreciarán que las referencias a tratamiento en la presente memoria se refieren al tratamiento de afecciones establecidas. Sin embargo, los compuestos de fórmula general (I) y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos pueden, dependiendo de la afección, ser también útiles en la prevención (profilaxis) de ciertas enfermedades.
Tal como se usa en la presente memoria, a menos que se indique otra cosa, "tratar", "tratando" o "tratamiento" en referencia a una enfermedad significa: (1) mejorar la enfermedad o una o más de las manifestaciones biológicas de la enfermedad (2) interferir con (a) uno o más puntos de la cascada biológica que provoca o es responsable de la enfermedad o (b) una o más de las manifestaciones biológicas de la enfermedad, (3) aliviar uno o más de los síntomas o efectos asociados a la enfermedad, (4) ralentizar la progresión de la enfermedad o de una o más de las manifestaciones biológicas de la enfermedad y/o (5) disminuir la probabilidad de gravedad de una enfermedad o de las manifestaciones biológicas de la enfermedad.
Tal como se usa en la presente memoria, a menos que se indique otra cosa, "prevenir", "previniendo" o "prevención" significa la administración profiláctica de un fármaco para disminuir la probabilidad de aparición o retrasar la aparición de una enfermedad o su manifestación biológica. El experto apreciará que "prevención" no es un término absoluto. En medicina, se entiende que "prevención" se refiere a la administración profiláctica de un fármaco para disminuir sustancialmente la probabilidad o gravedad de un trastorno o su manifestación biológica, o para retrasar la aparición de dicho trastorno o su manifestación biológica.
Por lo tanto, en una forma de realización que no forma parte de la invención, se proporciona el tratamiento o la prevención de una enfermedad. En otra forma de realización se proporciona el tratamiento de una enfermedad. En otra forma de realización se proporciona la prevención de una enfermedad.
Se proporciona por lo tanto como un aspecto adicional de la divulgación un compuesto de fórmula general (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en terapia. Se proporciona además un compuesto de fórmula general (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso como medicamento en terapia, terapia que es humana o veterinaria.
Se apreciará que cuando un compuesto de fórmula general (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se usa en terapia, se usa como un agente terapéutico activo.
Para evitar dudas, las referencias generales en la presente memoria a "tratamiento" incluyen referencias a tratamiento curativo, paliativo y profiláctico.
Malaria
Los compuestos de la presente invención son útiles en el tratamiento de la malaria. Los compuestos según la presente invención tienen potencial para el tratamiento de infecciones por Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium ovale, Plasmodium malariae y Plasmodium knowlesi. En particular, el grupo novedoso de compuestos de quinolona-4-carboxamida según la presente invención tiene potencial para el tratamiento de infecciones por Plasmodium falciparum; infecciones por Plasmodium falciparum y Plasmodium vivax; infecciones por Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium malariae, Plasmodium ovale y Plasmodium knowlesi.
En particular, el grupo novedoso de compuestos de cromona de fórmula general (I) según la presente invención tiene potencial para el tratamiento de la malaria atribuible a la infección por la forma de malaria potencialmente mortal atribuible a Plasmodium falciparum.
La malaria es causada por una infección de los glóbulos rojos por un pequeño organismo o parásito llamado protozoo. La infección por las cinco especies de protozoos de la malaria, Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium ovale, Plasmodium malariae y Plasmodium knowlesi se produce a través de la infiltración de protozoos en el torrente sanguíneo y se efectúa por una única fuente, la picadura de la hembra del mosquito Anopheles.
Las especies de Plasmodium necesitan dos hospedadores, el ser humano y el mosquito, para completar su ciclo vital. En seres humanos la infección se inicia por la inoculación de esporozoitos en la saliva de un mosquito infectado. Una vez dentro del cuerpo, los esporozoitos migran al hígado y allí infectan a los hepatocitos, donde se diferencian, a través del estadio exoeritrocítico intracelular, al estadio de merozoito, que infecta a los glóbulos rojos para iniciar la replicación cíclica en el estadio sanguíneo asexual. El ciclo vital se completa con la diferenciación de una serie de merozoitos en los glóbulos rojos para dar gametocitos de estadio sexual, que son ingeridos por el mosquito, donde se desarrollan a través de una serie de estadios en el intestino medio para producir esporozoitos que migran a la glándula salival. Según otro aspecto, la presente invención proporciona compuestos de cromona de fórmula general (I) para su uso como medicamentos antipalúdicos.
Se ha demostrado que los compuestos de la invención muestran tanto potencia funcional in vitro contra una cepa de Plasmodium palúdica como potencia deseable in vivo en un modelo murino de infección por Plasmodium.
Procedimiento de expresión y purificación de proteínas: para PPT111 His-MBP-TEV-Pf-KRS
El gen que codifica una forma truncada de la lisil-ARNt-sintetasa de Plasmodium falciparum (código Uniprot Q8IDJ8), residuos 80-583, se sometió a una optimización de codones y fue sintetizado por Genscript, con sitios de restricción Ndel y Xhol adicionales añadidos en los extremos del gen. Posteriormente, el gen fue digerido fuera del vector pUC57 proporcionado y ligado a un vector pET 15B modificado que codifica una etiqueta de la proteína de unión a la maltosa (MBP) marcada con Hexa-His N-terminal con un sitio de corte adicional del virus del grabado del tabaco (TEV) entre la proteína y la etiqueta para permitir una mayor expresión soluble, facilitar la captura por afinidad y el corte posterior durante la purificación. Todos los plásmidos se enviaron para la secuenciación para confirmar la identidad al departamento DNA Sequencing and Services (Universidad de Dundee).
La traducción del plásmido para PfKRS a partir de un vector pET15B modificado (Novagen) se proporciona más adelante en este documento. El gen fue sintetizado por Genscript (USA) y clonado usando enzimas FastDigest (Fermentas).
Etiqueta His - MGSSHHHHHHGSS (SEQ ID NO: 1)
Proteína de unión a la maltosa (necesaria para la estabilidad de KRS1)
MKIEEGKLVIWINGDKGYNGLAEVGKKFEKDTGIKVTVEHPDKLEEKFPQVAATGDGPDI IFWAHDRFGGYAQSGLLAEITPDKAFQDKLYPFTWDAVRYNGKLIAYPIAVEALSLIYNK DLLPNPPKTWEEIPALDKELKAKGKSALMFNLQEPYFTWPLIAADGGYAFKYENGKYDI KDVGVDNAGAKAGLTFLVDLIKNKHMNADTDYSIAEAAFNKGETAMTINGPWAWSNIDT SKVNYGVTVLPTFKGQPSKPFVGVLSAGINAASPNKELAKEFLENYLLTDEGLEAVNKD KPLGAVALKSYEEELAKDPRIAATMENAQKGEIMPNIPQMSAFWYAVRTAVINAASGRQ TVDEALKDAQTNSSSNNNNNNNNNNL (SEQ ID NO: 2)
Sitio de corte de TEV - GENLYFQGH (SEQ ID NO: 3)
Pf KRS1 -
MEVDPRLYFENRSKFIQDQKDKGINPYPHKFERTISIPEFIEKYKDLGNGEHLEDTILNITG RIMRVSASGQKLRFFDLVGDGEKIQVLANYSFHNHEKGNFAECYDKIRRGDIVGIVGFP GKSKKGELSIFPKETILLSACLHMLPMKYGLKDTEIRYRQRYLDLLINESSRHTFVTRTKII NFLRNFLNERGFFEVETPMMNLIAGGANARPFITHHNDLDLDLYLRIATELPLKMLIVGGI DKVYEIGKVFRNEGIDNTHNPEFTSCEFYWAYADYNDLIKWSEDFFSQLVYFILFGTYKIS YNKDGPENQPIEIDFTPPYPKVSIVEEIEKVTNTILEQPFDSNETIEKMINIIKEHKIELPNPP TAAKLLDQL4SHFIENKYNDKPFFIVEHPQIMSPLAKYHRTKPGLTERLEMFICGKEVLNA YTELNDPFKQKECFKLQQKDREKGDTEAAQLDSAFCTSLEYGLPPTGGLGLGIDRITMF LTNKNSIKDVILFPTMRPAN (SEQ ID NO: 4)
El plásmido se introdujo por transformación en células BL21 (DE3) (Stratagene) utilizando los procedimientos de choque térmico antes de sembrarlas en placas de agar LB complementadas con 50 ug^ml-1 de ampicilina y se incubaron durante una noche a 37 °C. Se tomaron raspados celulares y se usaron para inocular el medio de autoinducción (Studier, 2005) complementado con 50 ug^ml-1 de ampicilina. Los cultivos se cultivaron a 37 °C con agitación a 200 rpm durante cuatro horas antes de cultivarlos durante 18 horas durante una noche a 21 °C para permitir la expresión de la proteína.
Los cultivos se sedimentaron a 3.500 g, 4 °C durante 30 minutos antes de congelarlos a -20 °C hasta que se necesitaron. Las células se descongelaron y se resuspendieron en tampón A (TRIS 25 mM, NaCl 500 mM, imidazol 20 mM, pH 8,5) complementado con 10 ug_1 ml-1 de DNAse (Sigma) y tabletas inhibidoras de proteasa (Roche) antes de ser lisadas a 30 KPSI en un Sistema de Disrupción Celular de Constant (Constant Systems, RU). Los restos celulares se eliminaron mediante centrifugación a 37.500 g a 4 °C durante 30 minutos antes de filtrar el sobrenadante a 0,25 um. El sobrenadante se cargó en una columna HisTrap HP de 5 ml precargada (GE healthcare) equilibrada en tampón A. La purificación inicial se llevó a cabo en 20 volúmenes de columna con tampón B (TRIS 25 mM, NaCl 500 mM, imidazol 500 mM, pH 8,5) y los picos que contenían His-MBP-TEV-PfKRS se analizaron mediante SDS-PAGE. A continuación, la proteína se sometió a diálisis durante la noche con tampón C (TRIS 25 mM, NaCl 150 mM, pH 7,5) sola para los ensayos o en presencia de TEV para eliminar la etiqueta His-MBP para la cristalografía. A continuación, las muestras para cristalografía se sometieron a una nueva ronda de purificación IMAC para eliminar la etiqueta His-MBP y cualquier proteína no escindida. A continuación, ambas muestras se sometieron a filtración en gel utilizando una columna calibrada Superdex 200 26/60 (GE healthcare) equilibrada con tampón C. La Pf KRS escindida eluyó como dímero, mientras que la versión marcada eluyó como trímero. Las muestras se sometieron a análisis ESI-TOf en el Centro de Proteómica de la Universidad de Dundee para confirmar su identidad. Normalmente, las muestras finales tenían una pureza superior al 95% según el análisis por SDS-PAGE.
Metodología del ensayo bioquímico de la lisina-ARNt sintetasa (KRS1) de Plasmodium falciparum.
La lisina-ARNt-sintetasa (KRS1) es una enzima que cataliza la esterificación de L-Lisina al ácido ribonucleico de transferencia (ARNt) apropiado, para formar un aminoacil-ARNt. Una vez cargado el ARNt, un ribosoma transfiere el aminoácido desde el ARNt a un péptido en crecimiento, según el código genético.
Los sustratos de esta reacción son L-lisina y adenosín trifosfato (ATP), la reacción global es: aminoácido ARNt ATP ^ aminoacil-ARNt AMP PPi
En esta reacción global, AMP es monofosfato de adenosina y PPi es pirofosfato inorgánico. La progresión de la reacción en un ensayo bioquímico puede seguirse mediante el agotamiento de uno de los sustratos, en el caso de esta invención, el ATP. Esto se hizo usando el kit de ensayo patentado, Kinase Glo® Assay, que es una plataforma de ensayo de cinasa luminiscente adecuada para monitorizar actividades de cinasa usando hasta 10 pm de ATP comercializado por Promega Corporation de Madison, WI, EE. UU. El ensayo Kinase-Glo® se realizó en un único pocilio de una placa multipocillo añadiendo un volumen de reactivo Kinase-Glo® igual al volumen de una reacción de cinasa completada y midiendo la luminiscencia. La señal luminiscente resultante se correlaciona con la cantidad de ATP presente y se correlaciona inversamente con la cantidad de actividad cinasa. Por ello, al usar esta metodología de ensayo, la reducción de la señal luminiscente es relativa a la reducción de ATP a medida que progresa la reacción. Un compuesto que inhibe la acción de KRS no mostrará caída en la señal luminiscente de los controles de ensayo.
Se realizaron ensayos usando KRS de Plasmodium falciparum y de ser humano para evaluar cualquier selectividad de varios compuestos de prueba.
Los compuestos de prueba se solubilizaron en DMSO a una concentración máxima de 10 mM y se diluyeron en serie 1 en 3 para lograr un intervalo de concentraciones finales de ensayo de 50 pM a 2,5 nM en un volumen de reacción de 10 pl.
Se diluyó KRS a una concentración de trabajo de 75 nM en tampón de ensayo (HEPES 25 mM, KOH 25 mM, MgCl2.6 H2O 10 mM, KCI 50 mM), y se preparó la siguiente 'Mezcla Maestra' en tampón de ensayo: BSA 0,1 mg/ml , DTT 250 pM, espermina 200 pM, 0,05 % de NP-40, ATP 3 pM para Pf KRS1 (4 pM para Hs KRS1), ARNt de levadura 0,4 mg/ml, L-Lisina 60 pM, pirofosfatasa 0,5 U/ml.
Las placas se incubaron a temperatura ambiente durante 5 h para Pf KRS (2,5 h para HsKRS), luego el ensayo se detuvo por la adición de 10 pl del reactivo Kinase-Glo®. El ensayo se realizó en un solo pocillo de una placa multipocillo añadiendo un volumen de reactivo Kinase-Glo® comercializado por Corporación Promega de Madison, WI, e E. UU. Las placas se incubaron en la oscuridad durante 15 min más antes de leer la luminiscencia en un lector de placas BMG PHERAstar® FSX, que es un lector multimodo para su uso en el cribado de alto rendimiento disponible en BMG Labtech de Cary, NC, EE. UU. Los datos se analizaron calculando el porcentaje de inhibición en comparación con los controles máximo y mínimo del ensayo. Las curvas de concentración-efecto se ajustaron usando regresión no lineal con ActivityBase y los valores de CI50 se determinaron usando protocolos normalizados.
Cribado in vitro de Plasmodium falciparum
Se ha demostrado que los compuestos de fórmula general (I) según la presente invención tienen una actividad inhibidora deseable, expresada como CE50, contra la cepa 3D7 de Plasmodium falciparum, Pf (3D7). Los procedimientos experimentales y algunos resultados se proporcionan más adelante.
Cultivos de parásitos y metodología de ensayo de citotoxicidad para Plasmodium falciparum.
Los cultivos de la cepa de referencia de malaria ampliamente usada de Plasmodium falciparum 3D7 sensible a la cloroquinina se mantuvieron en una suspensión al 5% de glóbulos rojos humanos cultivados en medio RPMI 1640 complementado con un 0,5% de Albumax II (disponible en Gibco Life Technologies, San Diego, CA, n.° de ref. 11021­ 037), bicarbonato sódico 12 mM, hipoxantina 0,2 mM, (pH 7,3), y 20 mg/litro de gentamicina a 37 °C, en una atmósfera humificada al 1% de O2, al 3% de CO2 con un equilibrio gaseoso de nitrógeno.
La inhibición del crecimiento de los cultivos de Plasmodium falciparum se cuantificó en una curva dosis-respuesta de 10 puntos con una serie de dilución de 1 en 3 a partir de una concentración máxima de ensayo de 50 pM. Este ensayo de fluorescencia basado en placa de 384 pocillos utiliza la unión de SYBRgreen I (Thermo Fisher Scientific/Invitrogen n.° de ref. S7585) al ADN bicatenario, lo que aumenta en gran medida la señal fluorescente a 528 nm tras la excitación a 485 nm. Se usó mefloquina como control farmacológico para monitorizar la calidad del ensayo (Z' = 0,6 a 0,8, donde Z' es una medida de la discriminación entre los controles positivo y negativo en una placa de cribado). Las curvas de dosis-respuesta se determinaron a partir de un mínimo de 3 experimentos independientes. La bioactividad del compuesto se expresó como CE50, la concentración efectiva del compuesto que causa la muerte del 50 % de los parásitos. Los valores CE50 se determinaron a partir de un mínimo de 3 experimentos independientes.
Medición de la eficacia antipalúdica in vivo
Se ha llevado a cabo la medición in vivo de la eficacia potencial de los compuestos de fórmula (I) en un modelo palúdico. Estos experimentos in vivo se realizaron según el procedimiento publicado en Jimenez-Diaz, M. B. et al., Antimicrob. Agents Chemother. 53, 4533-4536, (2009). Los resultados de estos experimentos se proporcionan más adelante en los Resultados experimentales de esta memoria.
Estudios de Citotoxicidad
Los estudios de citotoxicidad in vitro pueden llevarse a cabo usando Hep G2 (carcinoma de hepatocito caucásico humano, HPACC n.° de ref. 85011430) usado como indicadores de toxicidad celular de mamíferos en general. La citotoxicidad in vitro de Hep G2 puede evaluarse utilizando el procedimiento de ensayo descrito en "Use of a humanderived liver cell line for the detection of cytoprotective, antigenotoxic and cogenotoxic agents", Volker MerschSundermann, Siegfried Knasmüller, Xin-jiang Wu, Firouz Darroudi, Fekadu Kassie. J.Tox 198 (2004) 329-340J cuyo contenido se incorpora en la presente memoria como referencia.
Los compuestos de fórmula (I) han demostrado selectividad celular en un modelo de Hep G2 usando la metodología proporcionada más adelante en este documento.
Procedimiento de expresión y purificación de proteínas: para PPT210 His-TEV-MtbKRS
El gen que codifica una forma truncada de la lisil-ARNt-sintetasa de Mycobacterium tuberculosis (código Uniprot l6YCJO) se sometió a una optimización de codones y fue sintetizado por Genscript, con sitios de restricción Ndel y Xhol adicionales añadidos en los extremos del gen. Posteriormente, el gen fue digerido fuera del vector pUC57 proporcionado y ligado a un vector pET15B modificado que codifica una etiqueta Hexa-His N-terminal con un sitio de corte adicional del virus del grabado del tabaco (TEV) entre la proteína y la etiqueta para permitir una mayor expresión soluble, facilitar la captura por afinidad y el corte posterior durante la purificación si fuera necesario. Todos los plásmidos se enviaron par la secuenciación para confirmar la identidad al departamento DNA Sequencing and Services (Universidad de Dundee).
La traducción del plásmido para MtbKRS 1 a partir de un vector pET15B modificado (Novagen) se proporciona más adelante en este documento. El gen fue sintetizado por Genscript (USA) y clonado usando enzimas FastDigest (Fermentas).
Etiqueta His - MGSSHHHHHHGSS (SEQ ID NO: 1)
Sitio de corte de TEV - GENLYFQGH (SEQ ID NO: 3)
MtbKRSI -
MSAADTAEDLPEQFRIRRDKRARLLAQGRDPYPVAVPRTHTLAEVRAAHPDLPIDTATE
DIVGVAGRVIFARNSGKLCFATLQDGDGTQLQVMISLDKVGQAALDAWKADVDLGDIVY VHGAVISSRRGELSVLADCWRIAAKSLRPLPVAHKEMSEESRVRQRYVDLIVRPEARAV
ARLRIAWRAIRTALQRRGFLEVETPVLQTLAGGAAARPFATHSNALDIDLYLRIAPELFL KRCIVGGFDKVFELNRVFRNEGADSTHSPEFSMLETYQTYGTYDDSAWTRELIQEVAD EAIGTRQLPLPDGSVYDIDGEWATIQMYPSLSVALGEEITPQTTVDRLRGIADSLGLEKD PAIHDNRGFGHGKLIEELWERTVGKSLSAPTFVKDFPVQTTPLTRQHRSIPGVTEKWDL
YLRGIELATGYSELSDPVVQRERFADQARAAAAGDDEAMVLDEDFLAALEYGMPPCTG TGMGIDRLLMSLTGLSIRETVLFPIVRPHSN* (SEQ ID NO: 5)
El plásmido se introdujo por transformación en células BL21 (DE3) (Stratagene) utilizando los procedimientos de choque térmico antes de sembrarlas en placas de agar LB complementadas con 50 ug_1mM de ampicilina y se incubaron durante una noche a 37 °C. Se tomaron raspados celulares y se usaron para inocular el medio de autoinducción (Studier, 2005) complementado con 50 ug_1mM de ampicilina. Los cultivos se cultivaron a 20 °C con agitación a 200 rpm durante cuarenta horas para permitir la expresión de la proteína.
Los cultivos se sedimentaron a 3.500 g, 4 °C durante 30 minutos antes de congelarlos a -20 °C hasta que se necesitaron. Las células se descongelaron y se resuspendieron en tampón A (HEPES 100 mM, NaCl 150 mM, imidazol 20 mM, pH 7,5) complementado con 10 ug_1 mM de DNAse (Sigma) y tabletas inhibidoras de proteasa (Pierce) antes de ser lisadas a 30 KPSI en un Sistema de Disrupción Celular de Constant (Constant Systems, RU). Los restos celulares se eliminaron mediante centrifugación a 40.000 g a 4 °C durante 30 minutos antes de filtrar el sobrenadante al prefiltro GFA. El sobrenadante se incubó con 5 ml de Ni Sepharose HP (GE healthcare) equilibrado en tampón A durante 1,5 horas. Se llevó a cabo una etapa inicial de lavado para eliminar las proteínas ricas en His en 4 volúmenes de columna con tampón B al 5% (HEPES 100 mM, NaCl 150 mM, imidazol 500 mM, 5% de glicerol pH 7,5). A continuación, la proteína se eluyó en 2 * 2 volúmenes de columna de tampón B. Las fracciones que contenían His-TEV-MtbKRS1 se analizaron por SDS-PAGE. La proteína se sometió a diálisis durante una noche con tampón C (HEPES 100 mM, NaCl 150 mM, 5 % de glicerol, pH 7,5). A continuación, las muestras se sometieron a filtración en gel utilizando una columna calibrada Superdex 20050/60 (GE healthcare) equilibrada con tampón C. Mtb KRS1 eluyó como dímero. Las muestras se sometieron a análisis ESI-TOF en el Centro de Proteómica de la Universidad de Dundee para confirmar su identidad. Normalmente, las muestras finales tenían una pureza superior al 80% según el análisis por SDS-PAGE.
Metodología de ensayo bioquímico de la lisina-ARNt-sintetasa (KRS1) de Mycobacterium tuberculosis.
La lisil-ARNt-sintetasa (o lisil-ARNt-ligasa) de Mycobacterium tuberculosis, para abreviar MtKRS, es una enzima dimérica multietápica que cataliza la reacción de L-lisina y ATP en la primera etapa y, en la segunda etapa, la transferencia de lisina al ARNt respectivo. En la primera etapa libera pirofosfato y en la segunda, AMP como productos secundarios. El producto principal es lisil-ARNt, que es un componente esencial para la síntesis de proteínas.
Reacción catalizada por MtKRS:
Etapa 1: Lisina ATP -> Lisil-AMP PPi
Etapa 2: Lisil-AMP ARNt -> Lisil-ARNt AMP
Principio de detección:
PPi -[pirofosfatasa]-> Pi Pi (reacción simultánea con MtKRS).
Pi BioMol Green -> complejo Pi-molibdato-Verde de Malaquita (adición final, detiene el ensayo).
Leer absorción a 650 nm.
La actividad enzimática de MtKRS se prueba en un ensayo de punto final basado en BioMol Green. Una enzima pirofosfatasa hace avanzar continuamente la primera etapa de la reacción hidrolizando el pirofosfato inorgánico liberado (PPi) creando fosfato libre (Pi). Esta clase de enzima es un impulsor natural de las enzimas liberadoras de pirofosfato en las células. En este ensayo, el fosfato inorgánico libre (Pi) se detecta finalmente mediante una reacción química usando Biomol Green (ENZO®).
BioMol Green consiste en colorante verde de malaquita, molibdato de amonio y un ácido fuerte (HCl). El fosfato libre forma un complejo con el molibdato y el verde de malaquita y aproximadamente 13 protones, que también se incorporan y eliminan de la solución. La mezcla de reacción cambia de color de naranja a verde - esto se detecta por un cambio en la absorbancia a 650 nm.
Este ensayo detecta la primera etapa de la reacción de MtKRS. Y no es necesario suministrar la mezcla de reacción con ARNt, lo que reduce sustancialmente los costes.
La mezcla final del ensayo contenía MtKRS 250 nM, Tris-HCl 30 mM pH 8, MgCte 40 mM, NaCl 140 mM, KCl 30 mM, 0,01 % de Brij-35, DTT 1 mM, ATP 3 |jM, L-lisina 12 j M, pirofosfatasa de levadura 0,5 U/ml (Sigma). La mezcla de ensayo se sembró en placas de 384 pocillos (Greiner 781101) con un volumen de reacción de 50 ul por pocillo. T ras 4 horas de incubación a temperatura ambiente se detuvo la reacción añadiendo una cantidad igual de 50 ul de BioMol Green (ENZO®). La mezcla de reacción detenida se incubó durante 20 minutos y la absorbancia se leyó a 650 nm en el lector de placas BMG PHERAstar® FSX, que es un lector multimodo para su uso en cribado de alto rendimiento disponible en BMG Labtech de Cary, NC, EE. UU.
Los compuestos de prueba se solubilizaron en DMSO a una concentración máxima de 10 mM y se diluyeron en serie 1 en 3 para lograr un intervalo de concentraciones finales de ensayo de 50 j M a 2,5 nM en un volumen de reacción de 10 jl.
En cada placa se incluyeron filas de controles de inhibición al 100% y al 0%. En lugar del compuesto se añadió DMSO. Los controles de inhibición al 100% carecían de L-lisina y los controles de inhibición al 0% eran la mezcla de ensayo normal.
Los datos se analizaron calculando el porcentaje de inhibición en comparación con los controles de ensayo máximo (100%) y mínimo (0%). Las curvas de concentración-efecto se ajustaron usando regresión no lineal con ActivityBase y los valores de CI50 se determinaron usando protocolos normalizados.
Se realizaron ensayos usando KRS micobacteriana y humana para evaluar cualquier selectividad de diversos compuestos de prueba.
Procedimiento de ensayo para la medición de la inhibición in vitro de M. tuberculosis H37Rv (Mtb. H37Rv)
Se llevó a cabo la medición in vitro de la concentración inhibitoria mínima (CIM) frente a Mtb mostrada por compuestos de fórmula (I). Estos experimentos se realizaron según el procedimiento publicado en Ballel et al. ChemMedChem, 2013, 8:313. Los detalles del procedimiento de ensayo se proporcionan más adelante y los resultados de estos experimentos se proporcionan en los Resultados experimentales.
Se llevó a cabo la medición de la concentración inhibitoria mínima (CIM) frente a M. tuberculosis (Mtb) H37Rv mostrada por compuestos de fórmula (I). En estos experimentos, la CIM de los compuestos de ensayo frente a M. tuberculosis H37Rv se realizó en placas de microtitulación de poliestireno de fondo plano de 96 pocillos. Se realizaron diez diluciones dobles de cada compuesto de ensayo (diluciones de fármaco) en DMSO puro a partir de 50 mM. Estas soluciones de fármaco (5 j l ) se añadieron a 95 j l de medio Middlebrook 7H9 (líneas A-H, filas 1-10 de la disposición de la placa). Se usó isoniazida (isonicotinil hidrazina, INHA) como control positivo; se prepararon ocho diluciones dobles de isoniazida empezando con 160 jg mM, y esta curva de control (5 jL ) se añadió a 95 jL de medio Middlebrook 7H9 (fila 11, líneas A-H). Se añadió DMSO puro (5 j l ) a la fila 12 (controles de crecimiento y blanco). El inóculo se normalizó a ~1*107 UFC mM y se diluyó 1:100 en caldo Middlebrook 7H9 (enriquecimiento Middlebrook ADC, un medio de cultivo deshidratado que favorece el crecimiento de especies micobacterianas, disponible en Becton-Dickinson, n.° de ref. 211887) para producir el inóculo final de la cepa H37Rv (ATCC25618) http://www.uniprot.org/proteomes/UP000001584. Este inóculo (100 j l) se añadió a toda la placa excepto a los pocillos G-12 y H-12 (controles en blanco). Todas las placas se colocaron en una caja sellada para evitar la desecación de los pocillos periféricos y se incubaron a 37 °C sin agitación durante seis días. Se preparó una solución colorante que contenía resazurina (diazoresorcinol) disolviendo un comprimido de resazurina (VWR International Ltd., Resazurin Tablets for Milk Testing, n.° de ref. 330884Y') en 30 ml de solución salina estéril tamponada con fosfato (PBS). De esta solución se añadieron 25 j l a cada pocillo. Se midió la fluorescencia (Spectramax M5, Molecular Devices; Aex 530 nm, /Aem 590 nm) después de 48 h para determinar el valor de CIM.
Procedimiento de ensayo para la medición de la inhibición in vitro de Crytosporidium.
Se llevó a cabo la medición in vitro de la CE50, la concentración efectiva de compuesto que causa la muerte del 50% de los parásitos frente a Cryptosporidium mostrada por compuestos de fórmula (I). Estos experimentos se realizaron según el procedimiento de Besssoff et al. Antimicrob. Agents Chemother. 2013, 57:1804-1814. Los resultados de estos experimentos se proporcionan más adelante en los Resultados experimentales de esta memoria.
Medición de la eficacia in vivo contra Cryptosporidium
Se ha llevado a cabo la medición in vivo de la eficacia potencial de los compuestos de fórmula (I) en dos modelos de Cryptosporidium.
Los experimentos in vivo con ratones IFN-y-knockout de criptosporidiosis se realizaron según el procedimiento publicado en Vinayak et al. Nature 2015, 523: 477-482.
La criptosporidiosis en el modelo murino NOD SCID gamma se ejecutó de la siguiente manera: Ratones NOD SCID gamma macho (NOD.Cg-Prkdcscid //2rgtm1Wjl/SzJ, Jackson Labs) se infectaron aproximadamente 2 semanas después del destete con 105 ooquistes de la cepa C. parvum Iowa por sonda oral. Se usaron cuatro ratones por grupo experimental. Se establece así una infección crónica y asintomática del intestino delgado, el ciego y el árbol biliar. La excreción fecal del parásito se controla mediante PCR cuantitativa para amplificar el ADN de C. parvum. Una semana después de la infección (que es el momento en el que la excreción se detecta de manera uniforme), se administran los compuestos por sonda oral. El tratamiento continuó durante cuatro días en total. La excreción fecal de ooquistes se indica el día 1 (7 días después de la infección inicial con una muestra tomada justo antes de la primera dosis de compuesto) y el día 5 (1 día después de la finalización de la última dosis).
Los resultados de estos experimentos se proporcionan más adelante en los Resultados experimentales de esta memoria.
Procedimiento de ensayo para la medición de la inhibición in vitro de Leishmania donovani.
Se llevó a cabo la medición in vitro de la CE50, la concentración efectiva del compuesto que causa la muerte del 50 % de los parásitos, frente a Leishmania donovani mostrada por compuestos de fórmula (I). Estos experimentos se ejecutaron según el procedimiento detallado en esta memoria y los resultados de estos experimentos se proporcionan en los Resultados experimentales más adelante.
El ensayo de Leishmania intramacrófago se realizó como se describe en de Rycker et al. (Antimicrob Agents Chemother. 2013 jul; 57(7):2913-22. doi: 10.1128/AAC.02398-12). En pocas palabras, se predispensó 1 j l de compuesto en placas intermedias estériles de 384 pocillos. Para el cribado de un solo punto se añadió anfotericina B a todos los pocillos de la columna 24 como control positivo (concentración final 2 jM ) y DMSO a la columna 23. Para determinar la potencia se crearon curvas de dilución de diez puntos, uno en tres, siendo la concentración más alta 50 jM , y en cada placa se incluyó una curva de control de anfotericina B. Los controles fueron los siguientes: columnas 11 y 12: DMSO, columnas 23 y 24: anfotericina B (concentración final 2 jM ). A las placas intermedias se añadieron 100 j l de medio THP-1 y las placas se agitaron durante >5 min para asegurar una mezcla completa. Las células THP-1 (8.000 por pocillo, 50 j l ) se sembraron en placas negras de fondo transparente de 384 pocillos (Corning) en presencia de PMA 10 nM. Tras 20 min a temperatura ambiente, las placas se incubaron a 37 °C con CO2 al 5% en un incubador humidificado durante 75 h. A continuación, las células se lavaron con 450 |jl de solución salina estéril tamponada con fosfato (PBS) complementada con CaCb 1 mM, MgCb 0,5 mM, 0,1 % (p/v) de albúmina sérica bovina (PBS-A) y se añadieron amastigotes a todos los pocillos a una multiplicidad de infección de 5 (40.000 amastigotes por pocillo). T ras 40 min a temperatura ambiente, las placas se devolvieron a la incubadora. Los amastigotes se incubaron en presencia de macrófagos durante 16 h. Los amastigotes extracelulares restantes se eliminaron posteriormente con un lavado de desbordamiento de 1 ml de PBS-A por pocillo (el tampón de lavado se aspira desde la parte superior del pocillo a medida que se dispensa) seguido de la adición de 25 j l de las prediluciones de compuestos utilizando una estación de pipeteo Matrix Hydra DT. La dilución final de cada compuesto fue de 200 veces. Las placas se incubaron durante 72 h y después se lavaron (250 j l de PBS-A) y se fijaron (4 % (v/v) de formaldehído-PBS, 30 min, temperatura ambiente). Tras la fijación, los pocillos se lavaron con 250 j l de PBS, se tiñeron (10 jg/m l de DAPI, 0,4 jg ml-1 de HCS Cellmask Deep Red en p Bs 0,1 % (v/v) de Triton X-100, 30 min, temperatura ambiente) y se lavaron con 250 j l de PBS. Por último, se añadió PBS 0,05% (v/v) de timerosal a los pocillos, se sellaron las placas y se tomaron imágenes en un microscopio de gran capacidad (GE IN Cell 1000 o Ge IN Cell 2000) usando un objetivo de 10 aumentos. El análisis de las imágenes se realizó con GE IN Cell Analyzer 1000 Workstation usando el módulo "Multi Target Analysis". Los ajustes para la segmentación fueron los siguientes: núcleos: área mínima: 142,384 jm 2, sensibilidad: 81, procedimiento: top-hat; células: área característica: 2500 jm 2, sensibilidad: 60, procedimiento: tophat multiescala; orgánulos (amastigotes): tamaño de gránulo 1 - 3, 3 escalas, sensibilidad: 90, detección en toda la célula. Para cada pocillo, se indicó el recuento de células THP-1 y el número medio de amastigotes por célula.
Procedimiento de ensayo para la medición de la inhibición in vitro de Trypanosoma cruzi.
Se llevó a cabo la medición in vitro de la CE50, la concentración efectiva de compuesto que causa la muerte del 50% de los parásitos frente Trypanosoma cruzi mostrada por compuestos de fórmula (I). Estos experimentos se realizaron según el procedimiento de Peña et al., Scientific Reports 5, número de artículo: 8771 (2015). Los resultados de estos experimentos se proporcionan más adelante en los Resultados experimentales de esta memoria.
Datos biológicos y Resultados experimentales
Para evitar dudas, cuando los datos de actividad se presentan como un valor pCI50 no es lo mismo que un valor de CI50. Tanto pCI50 como CI50 son términos de la técnica y el experto apreciará fácilmente que los compuestos que tienen un valor de CI50 de menos de aproximadamente 10 jM tendrán un valor de pCI50 correspondiente de más de aproximadamente 5.
En términos generales, un valor de CI50 de 1 jM equivale a un valor de pCI50 de 6, y un valor de CI50 de 100 nM equivale a un valor de pCI50 de 7.
1. datos in vitro
1-A. Datos de inhibición de Pf-KRS1
Los compuestos de fórmula (I) han demostrado actividad inhibidora de Pf-KRS. En la Tabla 1 se proporcionan los datos de la plC50 para Pf-KRS para algunos de los ejemplos de compuestos de la presente memoria de estas pruebas de ensayo de inhibición de la lisil-ARNt sintetasa de Plasmodium falciparum (Pf-KRS1).
TABLA 1
Figure imgf000042_0001
Figure imgf000043_0001
Figure imgf000044_0002
1-B. Datos de inhibición de Pf3D7
Los compuestos de fórmula (I) han demostrado actividad inhibidora frente a la cepa Pf 3D7 de Plasmodium falciparum. En la Tabla 2 se proporcionan los datos de la pEC50 de la Pf 3D7 para algunos de los ejemplos de compuestos de la presente memoria de estas pruebas de ensayo de inhibición de la actividad del Plasmodium falciparum.
TABLA 2
Figure imgf000044_0001
Figure imgf000045_0002
1-C. Datos de inhibición de Mtb KRS1
Los compuestos de fórmula (I) han demostrado actividad inhibidora frente a la Mtb KRS. En la Tabla 3 se proporcionan los datos de la plC50 para Mtb KRS para algunos de los ejemplos de compuestos de la presente memoria de estas pruebas de ensayo de inhibición de la lisil-ARNt sintetasa de Mycobacterium tuberculosis (Mtb KRS).
TABLA 3
Figure imgf000045_0001
Figure imgf000046_0003
1-D. Datos de inhibición de Mtb
Los compuestos de fórmula (I) han demostrado actividad inhibidora frente a Mtb. En la Tabla 4 se proporcionan los datos de la Mtb MIC para algunos de los ejemplos de compuestos de la presente memoria de estas pruebas de ensayo de inhibición de la actividad de la Mycobacterium tuberculosis.
Figure imgf000046_0001
1-E. Datos de Crytosporidium
Los compuestos de fórmula (I) han demostrado actividad inhibidora frente a Crytosporidium. En la Tabla 5 se proporcionan los datos de la pEC50 para Cryptosporidium parvum para algunos de los ejemplos de compuestos de la presente memoria de estas pruebas de ensayo de inhibición de la actividad del Crytosporidium.
TABLA 5
Figure imgf000046_0002
Figure imgf000047_0002
1-F. Datos de inhibición de Leishmania donovani
Los compuestos de fórmula (I) han demostrado actividad inhibidora frente a Leishmania donovani. En la Tabla 6 se proporcionan los datos para algunos de los ejemplos de compuestos de la presente memoria de estas pruebas de ensayo de inhibición in vitro de la actividad intramacrófaga del Leishmania donovani.
TABLA 6
Figure imgf000047_0001
1-G. Datos de inhibición de Trypanosoma cruzi
Los compuestos de fórmula (I) han demostrado actividad inhibidora frente a Trypanosoma cruzi. En la Tabla 7 se proporcionan los datos para algunos de los ejemplos de compuestos de la presente memoria de estas pruebas de ensayo de inhibición in vitro con toma de imágenes intracelulares de Trypanosoma cruzi.
TABLA 7
Figure imgf000047_0003
Figure imgf000048_0001
1-H. Citotoxicidad
Los compuestos de fórmula (I) han demostrado selectividad celular. En la Tabla 8 se proporcionan los datos de la pEC50 para Hep G2 para algunos de los ejemplos de compuestos de la presente memoria de estos ensayos de citotoxicidad in vitro de la Hep G2.
TABLA 8
Figure imgf000048_0002
Figure imgf000049_0004
2. datos in vivo
Los compuestos de fórmula (I) han demostrado eficacia en un modelo de ratón in vivo antipalúdico y anticriptosporisiosis in vivo. Los resultados de estas pruebas in vivo sobre la eficacia antipalúdica y anticriptosporisiosis se proporcionan y se explican más adelante. Las Tablas 8, 9 y 10 ilustran la bioactividad relativa de los compuestos de fórmula (I) frente al modelo de ratón SCID infectado por Plasmodium falciparum, el modelo INF-g-knockout infectado por Cryptosporidium parvum y el modelo de ratón gamma NOD SCID infectado por Cryptosporidium parvum, respectivamente.
TABLA 8
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TABLA 9
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TABLA 10
Figure imgf000049_0003
La invención se ilustra mediante los siguientes ejemplos no taxativos en los que se utilizan las siguientes abreviaturas y definiciones:
Abreviaturas
[0286]
8 cambio químico
d doblete
dd doble doblete
ACN acetonitrilo
DCM diclorometano
COMU (hexafluorofosfato de 1-ciano-2-etoxi-2-oxoetilidenaminooxi)dimetilamino-morfolino-carbenio
DMF dimetilformamida
CDMT 2-cloro-4,6-dimetoxi-1,3,5-triazina
DIPEA diisopropiletilamina (base de Hünig)
DMAP N,N-dimetil-4-aminopiridina
DMAD dimetilbut-2-inedioato
ES espectroscopia de masas con electronebulización de baja resolución
EDCI 3-(etiliminometilenamino)-N,N-dimetilpropan-1-amina
EtOAc acetato de etilo
Eq(s) equivalente(s)
h Bt U hexafluorofosfato de N,N,N', N'-tetrametil-O-(1H -benzotriazol-1-il)uronio
HPLC cromatografía de líquidos de alta eficacia
HRMS espectro de masas de alta resolución
CL-EM cromatografía de líquidos acoplada a la espectrometría de masa
M multiplete
Min minutos
m/z pico del espectro de masa
NMO N-metilmorfolina
RMN resonancia magnética nuclear
PyBOP hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxitripirrolidinofosfonio
Q cuartete
ta temperatura ambiente
S singulete
T triplete
TEA trietilamina
THF tetrahidrofurano
TLC cromatografía en capa fina
Equipo
Las reacciones utilizando irradiación por microondas se llevaron a cabo en un microondas Biotage Initiator. Las TLC de fase normal se llevaron a cabo en placas de sílice previamente recubiertas (Gel de sílice 60 F254, de laboratorios BDH) con visualización por luz UV (UV254/365 nm) y/o solución de ninhidrina. La cromatografía ultrarrápida se realizó utilizando Combiflash Companion Rf (comercializado por Teledyne ISCO) y columnas de gel de sílice precargadas compradas en Teledyne ISCO. Las separaciones por HPLC preparativa con espectrometría de masa se realizaron utilizando una HPLC Waters (bombas de gradiente binario 2545, bomba de conformación de HPLC 515, gestor de muestras 2767) conectada a una matriz de fotodiodos Waters 2998 y un detector de masa Waters 3100. Las separaciones por HPLC preparativa se realizaron con una HPLC Gilson (bombas 321, módulo de inyección 819, manipulador/inyector de líquido 215) conectada a un detector UV/VIS Gilson 155. En ambos instrumentos, las separaciones cromatográficas por HPLC se realizaron utilizando columnas Waters XBridge C18, 19 * 100 mm, tamaño de partícula de 5 um; utilizando amoníaco al 0,1% en agua (disolvente A) y acetonitrilo (disolvente B) como fase móvil. Los espectros de RMN 1H se registraron en un espectrómetro Bruker Avance DPX 500 (1H a 500,1 MHz, 13C a 125 MHz 19F a 470,5 MHz), o un Bruker Avance DPX 300 (1H a 300 MHz). Los desplazamientos químicos (8) se expresan en ppm registrados utilizando el disolvente residual como referencia interna en todos los casos. Los patrones de división de señales se describen como singlete (s), doblete (d), triplete (t), cuartete (q), multiplete (m), ancho (br) o una combinación de estos. Las constantes de acoplamiento (J) se indican al 0,5 Hz más cercano. Se registraron espectros de masas de electronebulización (ES) de baja resolución en un espectrómetro de masas Bruker MicroTof, ejecutado en modo positivo. El análisis por LC-MS y la separación cromatográfica se realizaron con un espectrómetro de masas Brucker MicrOTOf o una HPLC de la serie Agilent Technologies 1200 conectada a una LC/MS de cuatro polos de Agilent Technologies 6130, donde ambos instrumentos se conectaron a un detector de matriz de diodos Agilent. La columna utilizada fue una columna Waters XBridge (50 mm * 2,1 mm, tamaño de partícula de 3,5 pm) y los compuestos se eluyeron con un gradiente de 5 a 95% de acetonitrilo/agua 0,1% de amoníaco.
A menos que se indique lo contrario en la presente memoria, las reacciones no se optimizaron. Los disolventes y reactivos se compraron de proveedores comerciales y se utilizaron sin más purificación. Los disolventes secos se compraron en frascos sellados seguros almacenados sobre tamices moleculares.
Las preparaciones y los compuestos han sido nombrados usando la aplicación de nomenclatura ChemDraw Ultra 12.0 comercializada por CambridgeSoft Corporation.
Compuestos preparativos y compuestos ilustrativos para el proceso ilustrado en el Esquema 1.
Procedimiento General para los Esquemas 1 y 1A - ETAPA 1 transformación a:
Se añadió una solución de 2-hidroxifenil-etanona, o la correspondiente 2-hidroxifenil-etanona sustituida, (7,07 mmol) en oxalato de dietilo (3,8 mL, 4 eq., 28,3 mmol) al etóxido de sodio al 21% en etanol (15,6 mL, 6 eq., 42,5 mmol). La mezcla se agitó a 80 °C durante entre 1 h y 12 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se añadió ácido clorhídrico (HCl) al 37% (5 mL) y la mezcla de reacción se agitó a 90 °C durante 1 h. Luego se evaporó el disolvente y el residuo se absorbió con EtOAc y se lavó con agua. El análisis por LC-MS (ESI) se correspondió con el producto intermedio deseado y el residuo lavado se llevó directamente a la ETAPA 1, transformación b, bb o c según se deseara. Los siguientes compuestos preparativos (prep.) se prepararon según el procedimiento a, ilustrado en los Esquemas 1 y 1A:
Prep. 1: 8-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de etilo.
Figure imgf000051_0001
LC-MS (ESI), m/z 237 [M H]+.
Prep. 2: 6-metoxi-4-oxo-cromeno-2-carboxilato de etilo.
Figure imgf000051_0002
LC-MS (ESI), m/z 249 [M H]+.
Prep. 3: 6-ciano-4-oxo-cromeno-2-carboxilato de etilo.
Figure imgf000051_0003
LC-MS (ESI), m/z 244 [M H]+.
Prep. 4: 6-etoxi-4-oxo-cromeno-2-carboxilato de etilo.
Figure imgf000051_0004
LC-MS (ESI), m/z 263 [M H]+.
Prep. 5: 6-hidroxi-4-oxo-cromeno-2-carboxilato de etilo.
Figure imgf000052_0001
LC-MS (ESI), m/z 235 [M H]+.
Prep. 6: 5-metoxi-4-oxo-cromeno-2-carboxilato de etilo.
Figure imgf000052_0002
LC-MS (ESI), m/z 249 [M H]+.
Prep. 7: 7-hidroxi-4-oxo-cromeno-2-carboxilato de etilo.
Figure imgf000052_0003
[0299] El compuesto de la preparación 7 también está comercializado por Apollo, Scientific, Cheshire, Reino Unido y tiene el número CAS 23866-72-0.
Prep. 8: 6,8-difluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de etilo
Figure imgf000052_0004
Prep. 8A: 6-bromo-8-nitro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de etilo.
Figure imgf000052_0005
A una solución de 1-(5-bromo-2-hidroxifenil)etan-1-ona (1 g, 4,65 mmol) en CCU (6 mL) se le añadió HNO3 (0,52 mL). La mezcla se agitó a 70 °C durante 1 h y luego se enfrió hasta 25 °C y se recogió el precipitado. El precipitado se lavó con agua (20 mL) y luego éter de petróleo (10 mL) hasta obtener un sólido amarillo.
Prep. 8B: 8-bromo-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de etilo
Figure imgf000053_0001
Se siguió el procedimiento general a para obtener 6-bromo-8-nitro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de etilo. LC-MS (ESI), m/z 342, 344 [M H]+. RMN 1H (400 MHz, CDCla) 88,61-8,60 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,51-8,50 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,24 (s, 1H), 4,54-4,49 (q, J = 3,2 Hz, 2H), 1,49-1,46 (t, J = 3,2 Hz, 2H).
Procedimiento general para los Esquemas 1 y 1A - ETAPA 2 transformación b
Se agitó una solución de 4-oxo-cromeno-2-carboxilato, o un 4-oxo-cromeno-2-carboxilato sustituido correspondiente, (7,1 mmol) en ácido acético (15 mL) y ácido clorhídrico (HCl) al 37% (10 mL) a 90 °C durante 6 h. Después de ese tiempo el análisis por LC-MS (ESI) mostró una hidrólisis casi completa del material de carboxilato de partida. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se vertió en agua fría. El material precipitado resultante se filtró para proporcionar el ácido deseado como un sólido marrón con un rendimiento del 46%-91% en las dos etapas. El análisis por LC-MS (ESI) confirmó que el material se correspondía al producto deseado. El producto de reacción se llevó a la siguiente etapa sin más purificación.
Los siguientes compuestos preparativos (prep.) se prepararon según el procedimiento general para los Esquemas 1 y 1A - ETAPA 2, transformación b:
Prep. 9: ácido 8-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxílico.
Figure imgf000053_0002
LC-MS (ESI), m/z 209 [M H]+.
Prep. 10: ácido 7-hidroxi-4-oxo-cromeno-2-carboxílico.
Figure imgf000053_0003
LC-MS (ESI), m/z 207 [M H]+.
Prep. 11: ácido 6-metoxi-4-oxo-cromeno-2-carboxílico.
Figure imgf000053_0004
LC-MS (ESI), m/z 221 [M H]+.
P rep. 12: ác ido 6 -e to x i-4 -o xo -c ro m e n o -2 -ca rb o x ílico .
Figure imgf000054_0001
LC-MS (ESI), m/z 235 [M H]+.
Prep. 13: ácido 6-hidroxi-4-oxo-cromeno-
Figure imgf000054_0002
LC-MS (ESI), m/z 207 [M H]+.
Prep. 14: ácido 6,8-difluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxílico.
Figure imgf000054_0003
LC-MS (ESI), m/z 227 (M+H)+
Prep. 15: ácido 6-cloro-4-oxo-cromeno-2-carboxílico. El compuesto de preparación 15 también está comercializado por Fluorochem Limited, Hatfield, Reino Unido y tiene el número CAS 5006-45-1.
Prep. 16: ácido 6-etil-4-oxo-cromeno-2-carboxílico. El compuesto de preparación 16 también está comercializado por Fluorochem Limited, Hatfield, Reino Unido y tiene el número CAS 5527-91-3.
Prep. 17: ácido 4-oxocromeno-2-carboxílico. El compuesto de preparación 17 también está comercializado por Fluorochem Limited, Hatfield, Reino Unido y tiene el número CAS 4940-39-0.
Prep. 18: ácido 6-carbamoil-4-oxo-cromeno-2-carboxílico.
Figure imgf000054_0004
Se agitó una solución de 6-ciano-4-oxo-cromeno-2-carboxilato de etilo (783 mg, 3,22 mmol) en ácido acético (193 mg, 3,22 mmol) y ácido clorhídrico al 37% (117 mg, 3,22 mmol) a 50 °C durante 6 h. Después de ese tiempo el análisis por LC-MS (ESI) mostró una hidrólisis casi completa del material de carboxilato de partida. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se vertió en agua fría. El precipitado se filtró para proporcionar el ácido 6-carbamoil-4-oxo-cromeno-2-carboxílico deseado (500 mg, 2 mmol), con un rendimiento del 63% en las dos etapas. LC-MS (ESI), m/z 234 [M H]+.
Procedimiento general para los Esquemas 1 y 1A - ETAPA 2 transformación bb.
P ro ce d im ie n to bb pa ra la p re p a ra c ió n de ác ido 5 -h id ro x i-4 -o x o -c ro m e n o -2 -c a rb o x ílic o - P rep. 20.
Figure imgf000055_0001
Se agitó una mezcla de 5-metoxi-4-oxo-cromeno-2-carboxilato de etilo (200 mg, 0,81 mmol) en ácido acético (2,6 mL) y ácido hidrobrómico (HBr) al 48% (1,4 mL) a 95 °C durante 4 h. Después de dejar que la mezcla se enfriara a temperatura ambiente, se extrajo la fase acuosa con DCM, se secaron las fases orgánicas y se concentraron para proporcionar el ácido 5-hidroxi-4-oxo-cromeno-2-carboxílico deseado (113 mg, 0,55 mmol), con un rendimiento del 68%. Este producto ácido crudo se llevó a la siguiente etapa. El análisis por LC-MS (ESI) se correspondió con el producto ácido deseado. LC-MS (ESI), m/z 207 [M H]+.
Procedimiento general para los Esquemas 1 y 1A - ETAPA 2, transformación c.
Procedimiento c para la preparación de ácido 6-hidroxi-4-oxo-cromeno-2-carboxílico - Prep 21.
Figure imgf000055_0002
A una solución de 6-ciano-4-oxo-cromeno-2-carboxilato de etilo (243 mg, 1 mmol) en THF (7 mL), se le añadió una solución de hidróxido de litio (LiOH) (168 mg, 4 mmol) en agua (4 mL), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 min. El análisis por LC-MS (ESI) mostró la conversión completa del carboxilato de partida al ácido deseado. El disolvente (THF) se evaporó y la solución acuosa resultante se acidificó con HCl 2N. El precipitado se filtró para proporcionar ácido 6-ciano-4-oxo-cromeno-2-carboxílico (64 mg, 0,3 mmol) con un rendimiento del 27%. No se requirió purificación adicional del ácido, y el análisis por LC-MS (ESI) se correspondió con el producto deseado. LC-MS (ESI), m/z 216 [M H]+.
Procedimiento c para la preparación de ácido 6-bromo-8-nitro-4-oxo-cromeno-2-carboxílico - Prep. 21A:
Figure imgf000055_0003
A una solución de 6-bromo-8-nitro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de etilo (800 mg, 2,34 mmol) en MeOH (8 mL) y agua (2 mL) se le añadió NaOH (140 mg, 3,51 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 1 h. El disolvente se retiró y el residuo se acidificó mediante HCl 2N (10 mL). A continuación la mezcla se extrajo con acetato de etilo (20 mL). La capa orgánica se separó y se evaporó a presión reducida para proporcionar (650 mg, 88% de rendimiento) como un sólido amarillo. LC-MS (ESI), m/z 314, 316 [M H]+. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 88,78-8,77 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,43-8,42 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,07 (s, 1H).
Procedimiento general para los Esquemas 1 y 1A, ETAPA 3, aminación d para proporcionar compuestos ilustrativos de fórmula general (I) a partir de compuestos intermedios de fórmula general (III).
Procedimiento ilustrativo 1:
Se disolvió ácido 4-oxo-cromeno-2-carboxílico, o alternativamente un ácido 4-oxo-cromeno-2-carboxílico sustituido correspondiente, (2,7 mmol) en DMF (4 mL) y se añadió di-isopropil etilamina (DIPEA) (346 mg, 2,7 mmol). La mezcla de reacción se enfrió entonces a 0 °C con un baño de agua helada y luego se añadió una solución de PyBOP (1,4 g, 2,7 mmol) en DCM seco (4 mL). La mezcla resultante se agitó a 0 °C durante 20 minutos y luego se añadió la amina adecuada para proporcionar el producto deseado (2,7 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante entre 4 y 12 h. Después de la evaporación del disolvente, el material crudo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (utilizando la columna ultrarrápida de sílice desechable de fase normal Redisep® comercializada por Teledyne ISCO, Lincoln, Nebraska, EE. UU.), eluyendo con EtOAc en heptano. Las fracciones deseadas se concentraron hasta secarlas para proporcionar el producto deseado. El compuesto se purificó adicionalmente mediante re-precipitación de MeOH.
Para evitar dudas, en los siguientes Ejemplos en los que se utiliza la cromatografía en columna ultrarrápida y se utiliza (Redisep®) para describir el equipo, significa que se utilizó una columna ultrarrápida de sílice desechable de fase normal Redisep®, como la comercializada por Teledyne ISCO, Lincoln, Nebraska, EE. UU.
Los siguientes compuestos ilustrativos se prepararon según el procedimiento general para los Esquemas 1 y 1A, Etapa 3, transformación d:
Ejemplo 3: 23 N-r(4-clorofenil)metin-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000056_0001
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 40% en heptano, 63% de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 314 [M H]+. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 89,73 (t, J=6,0 Hz, 1H), 8,07 (dd, J=1,5, 8,0 Hz, 1H), 7,93 - 7,88 (m, 1H), 7,73 (d, J=8,3 Hz, 1H), 7,55 (dd, J=7,6, 7,6 Hz, 1H), 7,42 - 7,39 (m, 4H), 6,87 (s, 1H), 4,52 (d, J=6,1 Hz, 2H).
Ejemplo 4: N-(ciclohexilmetil)-7-hidroxi-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000056_0002
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 40% en heptano, 56% de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 302 [M H]+. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 89,04 (t, J=6,0 Hz, 1H), 7,89 (d, J=8,8 Hz, 1H), 7,02 - 6,94 (m, 2H), 6,70 (s, 1H), 3,18 - 3,12 (m, 2H), 1,73 - 1,68 (m, 4H), 1,57 (d, J=7,9 Hz, 2H), 1,18 (s, 4H), 0,95 (s, 2H).
Ejemplo 5: N-(ciclohexilmetil)-5-hidroxi-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000056_0003
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 30% en heptano, 81% de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 302 [M H]+. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 8 12,29 (s, 1H), 9,15 (t, J=5,8 Hz, 1H), 7,76 (dd, J=8,4, 8,4 Hz, 1H), 7,18 (d, J=8,3 Hz, 1H), 6,89 - 6,85 (m, 2H), 3,15 (dd, J=6,5, 6,5 Hz, 2H), 1,73 - 1,68 (m, 4H), 1,58 (dd, J=3,7, 7,3 Hz, 2H), 1,18 - 1,16 (m, 3H), 0,97 (d, J=11,7 Hz, 2H).
E je m p lo 6: N -(c ic lo h e x ilm e til) -6 -h id ro x i-4 -o xo -c ro m e n o -2 -ca rb o xa m id a .
Figure imgf000057_0001
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 55% en heptano. El compuesto se purificó adicionalmente mediante re-precipitación de MeOH para proporcionar la cromeno-2-carboxamida deseada con un rendimiento del 31%. LC-MS (ESI), m/z 302 [M H]+. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 8 10,13 (s, 1H), 9,04 (t, J=5,9 Hz, 1H), 7,63 - 7,61 (m, 1H), 7,34 - 7,30 (m, 2H), 6,74 (s, 1H), 3,15 (dd, J=6,5, 6,5 Hz, 2H), 1,75 - 1,68 (m, 4H), 1,65 - 1,55 (m, 2H), 1,22 - 1,14 (m, 3H), 0,98 - 0,90 (m, 2H).
Ejemplo 7: N-benzil-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000057_0002
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 40% en heptano, 15% de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 280 [M H]+. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 89,71 (t, J=5,9 Hz, 1H), 8,07 (dd, J=1,6, 7,9 Hz, 1H), 7,93 - 7,88 (m, 1H), 7,74 (d, J=8,3 Hz, 1H), 7,55 (dd, J=7,7, 7,7 Hz, 1H), 7,37 - 7,36 (m, 5H), 6,87 (s, 1H), 4,53 (d, J=6,1 Hz, 2H).
Ejemplo 8: N-(ciclohexilmetil)-8-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000057_0003
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 30% en heptano, 27% de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 304 [M H]+. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 88,92 (s, 1H), 7,88 - 7,83 (m, 2H), 7,55 - 7,50 (m, 1H), 6,90 (s, 1H), 3,15 (dd, J=6,5, 6,5 Hz, 2H), 1,69 (s, 4H), 1,21 (d, J=16,9 Hz, 4H), 0,95 (s, 3H).
Ejemplo 9: 7-cloro-N-(ciclohexilmetil)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000057_0004
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 25% en heptano, 56% de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 320 [M H]+. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 89,04 (s, 1H), 8,05 (d, J=8,6 Hz, 1H), 7,87 (d, J=1,8 Hz, 1H), 7,60 (dd, J=1,9, 8,6 Hz, 1H), 6,83 (s, 1H), 3,16 (dd, J=6,5, 6,5 Hz, 2H), 2,51 (s, 5H), 1,71 (s, 6H).
E je m p lo 10: N -(c ic lo h e x ilm e til) -6 -m e to x i-4 -o xo -c ro m e n o -2 -ca rb o xa m id a .
Figure imgf000058_0001
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 25% en heptano, 23% de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 316 [M H]+. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 69,08 (t, J=6,0 Hz, 1H), 7,71 (d, J=9,2 Hz, 1H), 7,50 (dd, J=3,1, 9,2 Hz, 1H), 7,42 (d, J=3,1 Hz, 1H), 6,80 (s, 1H), 3,88 (s, 3H), 3,15 (dd, J=6,6, 6,6 Hz, 2H), 1,70 - 1,68 (m, 4H), 1,59 (t, J=3,6 Hz, 2H), 1,19 - 1,16 (m, 3H), 0,94 (d, J=10,5 Hz, 2H).
Ejemplo 11: 8-bromo-N-(ciclohexilmetil)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000058_0002
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 25% en heptano, 55% de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 365 [M H]+. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 68,55 (t, J=5,7 Hz, 1H), 8,19 (d, J=7,7 Hz, 1H), 8,04 (d, J=7,9 Hz, 1H), 7,47 (dd, J=7,8, 7,8 Hz, 1H), 6,89 (s, 1H), 3,17 (dd, J=6,4, 6,4 Hz, 2H), 1,75 -1,69 (m, 4H), 1,62 - 1,55 (m, 2H), 1,26 - 1,13 (m, 3H), 1,01 - 0,92 (m, 2H).
Ejemplo 12: N-(ciclohexilmetil)-8-hidroxi-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000058_0003
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 45% en heptano, 11% de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 302 [M H]+. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 610,32 - 10,29 (m, 1H), 9,15 (s, 1H), 7,48 (dd, J=1,7, 7,6 Hz, 1H), 7,38 - 7,30 (m, 2H), 6,83 (s, 1H), 3,20 (dd, J=6,6, 6,6 Hz, 2H), 1,77 - 1,68 (m, 3H), 1,64 -1,57 (m, 2H), 1,25 - 1,15 (m, 4H), 1,00 - 0,93 (m, 2H).
Ejemplo 13: 6-hidroxi-N-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000058_0004
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc a entre el 65% y el 80% en heptano y luego se purificó adicionalmente mediante HPLC preparativa, procedimiento ácido, ACN al 5%-95% en agua, 24% de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 318 [M H]+. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 610,14 (s, 1H), 8,67 (t, J=6,1 Hz, 1H), 7,67 - 7,63 (m, 1H), 7,34 - 7,30 (m, 2H), 6,78 (s, 1H), 4,41 (s, 1H), 3,29 (d, J=6,2 Hz, 2H), 1,58 - 1,44 (m, 6H), 1,42 - 1,35 (m, 4H).
Ejemplo 14: N-[(4-clorofenil)metil]-7-hidroxi-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
[0350 ]
Figure imgf000059_0001
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 40% en heptano, 56% de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 330 [M H]+. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 89,66 (t, J=5,9 Hz, 1H), 7,89 (d, J=8,6 Hz, 1H), 7,43 - 7,36 (m, 4H), 7,00 - 6,94 (m, 2H), 6,74 (s, 1H), 4,50 (d, J=6,1 Hz, 2H).
Ejemplo 15: N-[(4-clorofenil)metil]-5-hidroxi-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000059_0002
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 40% en heptano, 53% de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 330 [M H]+. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 8 12,27 (s, 1H), 9,75 (d, J=5,9 Hz, 1H), 7,76 (dd, J=8,3, 8,3 Hz, 1H), 7,44 - 7,37 (m, 4H), 7,16 (d, J=8,3 Hz, 1H), 6,90 - 6,87 (m, 2H), 4,51 (d, J=6,1 Hz, 2H).
Ejemplo 16: 7-hidroxi-N-isobutil-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000059_0003
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 65% en heptano y luego se purificó adicionalmente mediante HPLC preparativa, procedimiento ácido, ACN al 5%-95% en agua, 17% de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 262 [M H]+. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 8 11,05 - 11,05 (m, 1H), 9,06 (t, J=5,8 Hz, 1H), 7,88 (d, J=8,7 Hz, 1H), 7,01 - 6,93 (m, 2H), 6,70 (s, 1H), 3,12 (dd, J=6,6, 6,6 Hz, 2H), 1,92 - 1,85 (m, 1H), 0,91 (d, J=6,7 Hz, 6H).
Ejemplo 17: N-isobutil-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000059_0004
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 40% en heptano, 23% de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 246 [M H]+. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 89,14 - 9,11 (m, 1H), 8,06 (dd, J=1,7, 8,0 Hz, 1H), 7,93 - 7,88 (m, 1H), 7,76 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,55 (dd, J=7,6, 7,6 Hz, 1H), 6,83 (s, 1H), 3,14 (dd, J=6,6, 6,6 Hz, 2H), 1,93 - 1,86 (m, 1H), 0,92 (d, J=6,7 Hz, 6H).
E je m p lo 18: N -[(3 -ca rb a m o ilfe n il)m e til]-4 -o xo -c ro m e n o -2 -ca rb o xa m id a .
Figure imgf000060_0001
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con MeOH al 2% en DCM y luego se purificó adicionalmente mediante re-precipitación de DCM, 14% de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 323 [M H]+. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 89,74 (s, 1H), 8,07 (dd, J=1,5, 7,9 Hz, 1H), 7,93 - 7,86 (m, 3H), 7,80 - 7,73 (m, 2H), 7,57 - 7,50 (m, 2H), 7,46 - 7,41 (m, 2H), 6,88 (s, 1H), 4,57 (d, J=6,1 Hz, 2H).
Ejemplo 19: W-ciclohexil-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000060_0002
El producto se purificó mediante HPLC preparativa (Gilson) usando el procedimiento al 5%-50% y NH3 al 0,1% en agua y acetonitrilo como eluyentes, 44% de rendimiento. RMN 1H (500 MHz, CDCb) 88,24 (dd, J=1,4, 8,0 Hz, 1H), 7,78 - 7,74 (m, 1H), 7,56 (d, J=7,9 Hz, 1H), 7,50 - 7,46 (m, 1H), 7,19 (s, 1H), 6,75 (d, J=7,6 Hz, 1H), 4,05 - 3,96 (m, 1H), 2,10 - 2,03 (m, 1H), 1,86 - 1,79 (m, 2H), 1,73 - 1,66 (m, 2H), 1,51 - 1,23 (m, 5H). LC-MS (ESI), m/z 272 (M+H)+.
Ejemplo 20: 4-oxo-W-(tetrahidropiran-4-ilmetil)cromeno-2-carboxamida
Figure imgf000060_0003
El producto se purificó mediante HPLC preparativa (Gilson) usando el procedimiento al 5%-50% y HCO2H al 0,1% en agua y acetonitrilo como eluyentes. Luego, el producto se purificó adicionalmente usando cromatografía autopreparativa de espectometría de masas (MDA, por sus siglas en inglés, Waters) usando el procedimiento al 5%-40% y HCO2H al 0,1% en agua y acetonitrilo como eluyentes. Se obtuvo un producto purificado con un rendimiento del 3%. RMN 1H (500 MHz, CDCb) 88,26 (dd, J=1,7, 7,9 Hz, 1H), 7,80 - 7,75 (m, 1H), 7,56 - 7,48 (m, 2H), 7,21 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 4,04 (dd, J=3,6, 10,9 Hz, 2H), 3,46 - 3,40 (m, 4H), 2,01 - 1,93 (m, 1H), 1,72 (dd, J=1,8, 13,0 Hz, 2H), 1,49 - 1,39 (m, 2H). LC-MS (ESI), m/z 288 (M+H)+.
Ejemplo 21: N-[(4,4-difluorociclohexil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000060_0004
El producto se purificó mediante HPLC preparativa (Gilson) usando el procedimiento al 5%-50% y NH3 al 0,1% en agua y acetonitrilo como eluyentes. Se obtuvo un producto purificado con un rendimiento del 17%. RMN 1H (500 MHz, CDCla) 88,25 (dd, J=1,4, 7,9 Hz, 1H), 7,79 - 7,76 (m, 1H), 7,56 - 7,48 (m, 2H), 7,20 (s, 1H), 7,04 (d, J=10,7 Hz, 1H), 3,45 (dd, J=6 ,6 , 6,6 Hz, 2H), 2,20 - 1,69 (m, 7H), 1,47 - 1,37 (m, 2H). LC-MS (ESI), m/z 322 (M+H)+.
Ejemplo 22: W-[(4-metilciclohexil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000061_0001
El producto se purificó mediante HPLC preparativa (Gilson) usando el procedimiento al 5%-50% y NH3 al 0,1% en agua y acetonitrilo como eluyentes. Se obtuvo un producto purificado con un rendimiento del 45%. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 69,10 (dd, J=5,7, 5,7 Hz, 1H), 8,06 (dd, J=1,7, 7,9 Hz, 1H), 7,92-7,88 (m, 1H), 7,75 (d, J=7,8 Hz, 1H), 7,56 -7,53 (m, 1H), 6,83 (d, J=1,7 Hz, 1H), 3,16 (dd, J=6,5, 6,5 Hz, 2H), 1,82 - 1,65 (m, 3H), 1,55 - 1,40 (m, 3H), 1,33 - 1,24 (m, 1H), 1,03- 0,89 (m, 3 H), 0,86 (d, J=6,7 Hz, 3H). LC-MS (ESI), m/z 300 (M+H)+.
Ejemplo 23: W-(ciclopentilmetil)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000061_0002
El producto se purificó mediante HPLC preparativa (Gilson) usando el procedimiento al 5%-50% y NH3 al 0,1% en agua y acetonitrilo como eluyentes. Se obtuvo un producto purificado con un rendimiento del 34%. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 69,14 (t, J=5,7 Hz, 1H), 8,06 (dd, J=1,4, 8,0 Hz, 1H), 7,92 - 7,88 (m, 1H), 7,76 (d, J=7,8 Hz, 1H), 7,57 - 7,53 (m, 1H), 6,83 (s, 1H), 3,24 (dd, J=6,0, 7,3 Hz, 2H), 2,24 - 2,14 (m, 1H), 1,74 - 1,48 (m, 6H), 1,32 - 1,23 (m, 2H). LC-MS (ESI), m/z 272 (M+H)+.
El análogo de 1-hidroxi, W-[(1-hidroxiciclopentil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida, Ejemplo 23A, se preparó con los materiales de partida apropiados usando química análoga.
Ejemplo 24: 4-oxo-W-(tetrahidrofuran-2-ilmetil)cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000061_0003
El producto se purificó mediante HPLC preparativa (Gilson) usando el procedimiento al 5%-50% y NH3 al 0,1% en agua y acetonitrilo como eluyentes. Se obtuvo un producto purificado con un rendimiento del 7%. RMN 1H (500 MHz, CDCl3) 68,24 (dd, J=1,4, 7,9 Hz, 1H), 7,78 - 7,74 (m, 1H), 7,56 (d, J=7,9 Hz, 1H), 7,50 - 7,46 (m, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,19 (s, 1H), 4,12 (ddd, J=3,1, 7,3, 14,6 Hz, 1H), 3,98 - 3,93 (m, 1H), 3,87 - 3,82 (m, 2H), 3,41 - 3,35 (m, 1H), 2,13 -2,06 (m, 1H), 2,01 - 1,96 (m, 2H), 1,64 (ddd, J=7,6, 12,3, 15,8 Hz, 1H). LC-MS (ESI), m/z 274 (M+H)+.
Ejemplo 25: W-cicloheptil-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000062_0001
El producto se purificó mediante HPLC preparativa (Gilson) usando el procedimiento al 5%-50% y NH3 al 0,1% en agua y acetonitrilo como eluyentes. Se obtuvo un producto purificado con un rendimiento del 9%. RMN 1H (400 MHz, CDCb) 88,25 (dd, J=1,5, 8,0 Hz, 1H), 7,79 - 7,74 (m, 1H), 7,57 - 7,46 (m, 2H), 7,19 (s, 1H), 6,78 (d, J=7,1 Hz, 1H), 4,22 - 4,14 (m, 1H), 2,12 - 2,06 (m, 2H), 1,75 - 1,58 (m, 10H). LC-MS (ESI), m/z 286 (M+H)+.
Ejemplo 26: W-(2-ciclopentiletil)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000062_0002
El producto se purificó mediante HPLC preparativa (Gilson) usando el procedimiento al 5%-95% y NH3 al 0,1% en agua y acetonitrilo como eluyentes. Se obtuvo un producto purificado con un rendimiento del 13%. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) 88,25 (dd, J=1,5, 8,0 Hz, 1H), 7,78 - 7,74 (m, 1H), 7,55 - 7,46 (m, 2H), 7,28 (s, 1H), 7,19 (s, 1H), 6,90 - 6,90 (m, 1H), 3,57 - 3,51 (m, 2H), 1,92 - 1,84 (m, 4H), 1,75 - 1,55 (m, 5H), 1,25 - 1,15 (m, 2H). LC-MS (ESI), m/z 286 (M+H)+.
Ejemplo 27: W-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000062_0003
El producto se purificó mediante cromatografía en columna usando un cartucho de sílice de 12 g (Redisep®) y heptano (A) y acetato de etilo (B) como disolventes. Se utilizó el siguiente gradiente de purificación: 3 minutos de retención A, 18 minutos de subida al 100% B, 3 minutos de retención al 100% B. Se obtuvo un producto purificado con un rendimiento del 45%. RMN 1H (500 MHz, CDCb) 88,18 (dd, J=1,7, 7,9 Hz, 1H), 7,73 - 7,69 (m, 1H), 7,52 (d, J=7,9 Hz, 1H), 7,45 - 7,41 (m, 2H), 3,54 (d, J=6,1 Hz, 2H), 2,37 (s, 1H), 1,67 - 1,52 (m, 9H), 1,42 - 1,34 (m, 1H). LC-MS (ESI), m/z 302 (M+H)+.
Ejemplo 28: W-(ciclohexilmetil)-6-metil-4-oxo-cromeno-2-carboxamida
Figure imgf000062_0004
El producto se purificó mediante cromatografía en columna usando un cartucho de sílice de 12 g (Redisep®) y heptano (A) y acetato de etilo (B) como disolventes. Se utilizó el siguiente gradiente de purificación: 3 minutos de retención A, 18 minutos de subida al 70% B, 3 minutos de retención al 70% B. Se obtuvo un producto purificado con un rendimiento del 32%. RMN 1H (400 MHz, CDCb) 87,89 (d, J=1,2 Hz, 1H), 7,45 (dd, J=1,9, 8,6 Hz, 1H), 7,35 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,15 - 7,10 (m, 1H), 7,06 (s, 1H), 3,28 - 3,23 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 1,73 - 1,53 (m, 5H), 1,23 - 1,06 (m, 4H), 0,99 - 0,78 (m, 2H). LC-MS (ESI), m/z 300 (M+H)+.
E je m p lo 29: 6 -b rom o -W -(c ¡do he x ¡lm e t¡l)-4 -o xo -c ro m eno -2 -ca rboxa m ¡da
Figure imgf000063_0001
El producto se purificó mediante cromatografía en columna usando un cartucho de sílice de 12 g (Redisep®) y heptano (A) y acetato de etilo (B) como disolventes. Se utilizó el siguiente gradiente de purificación: 3 minutos de retención A, 18 minutos de subida al 100% B, 3 minutos de retención al 100% B. Se obtuvo un producto purificado con un rendimiento del 29%. RMN 1H (500 MHz, CDCb) 88,37 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,84 (dd, J=2,4, 9,0 Hz, 1H), 7,46 (d, J=8,9 Hz, 1H), 7,20 (s, 1H), 6,90 (s, 1H), 3,37 (dd, J=6,6, 6,6 Hz, 2H), 1,83 - 1,64 (m, 6H), 1,32 - 1,20 (m, 3H), 1,10 - 1,00 (m, 2H). LC-MS (ESI), m/z 363 y 366 (M+H)+.
Ejemplo 30: 6-doro-W-(ddohex¡lmet¡l)-4-oxo-cromeno-2-carboxam¡da.
Figure imgf000063_0002
El producto se purificó mediante cromatografía en columna usando un cartucho de sílice de 12 g (Redisep®) y heptano (A) y acetato de etilo (B) como disolventes. Se utilizó el siguiente gradiente de purificación: 3 minutos de retención A, 18 minutos de subida al 100% B, 3 minutos de retención al 100% B. Se obtuvo un producto purificado con un rendimiento del 31%. RMN 1H (500 MHz, CDCla) 88,22 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,71 (dd, J=2,7, 8,9 Hz, 1H), 7,53 (d, J=9,0 Hz, 1H), 7,20 (s, 1H), 6,89 (s, 1H), 3,37 (dd, J=6,6, 6,6 Hz, 2H), 1,84 - 1,64 (m, 6H), 1,33 - 1,20 (m, 3H), 1,10 - 1,01 (m, 2H).
Ejemplo 31: ^-(ddohexilmetN^-fluoro^-oxo-cromeno^-carboxamida.
Figure imgf000063_0003
El producto se purificó mediante cromatografía en columna usando un cartucho de sílice de 12 g (Redisep®) y heptano (A) y acetato de etilo (B) como disolventes. El producto se precipitó de una mezcla de metanol y DMSO. Se obtuvo un producto purificado con un rendimiento del 10%. RMN 1H (500 MHz, CDCb) 87,87 (dd, J=3,1, 8,1 Hz, 1H), 7,56 (dd, J=4,1, 9,2 Hz, 1H), 7,47 (ddd, J=3,1, 7,4, 9,2 Hz, 1H), 7,17 (s, 1H), 6,88 (s, 1H), 3,36 (dd, J=6,6, 6,6 Hz, 2H), 1,84 -1,75 (m, 3H), 1,74 - 1,62 (m, 2H), 1,56 (s, 1H), 1,33 - 1,18 (m, 3H), 1,08 - 0,99 (m, 2H). LC-MS (ESI), m/z 304 (M+H)+.
Ejemplo 32: 6-fluoro-4-oxo-W-(tetrah¡drop¡ran-2-¡lmet¡l)cromeno-2-carboxam¡da.
Figure imgf000063_0004
El producto se purificó mediante cromatografía en columna usando un cartucho de sílice de 12 g (Redisep®) y heptano (A) y acetato de etilo (B) como disolventes. Se utilizó el siguiente gradiente de purificación: 3 minutos de retención A, 18 minutos de subida al 100% B, 3 minutos de retención al 100% B. Se obtuvo un producto purificado con un rendimiento del 21%. RMN 1H (500 MHz, CDCla) 87,81 (dd, J=3,1, 8,1 Hz, 1H), 7,56 - 7,52 (m, 1H), 7,43 (ddd, J=3,1, 7,5, 9,2 Hz, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,12 (s, 1H), 4,02 - 3,97 (m, 1H), 3,75 (ddd, J=3,1, 7,2, 13,9 Hz, 1H), 3,52 - 3,42 (m, 2H), 3,22 (ddd, J=4,4, 8,4, 13,9 Hz, 1H), 1,88 - 1,82 (m, 1H), 1,64 - 1,48 (m, 4H), 1,36 - 1,20 (m, 1H). LC-MS (ESI), m/z 306 (M+H)+.
Ejemplo 33: 6-fluoro-4-oxo-W-(tetrahidropiran-3-ilmetil)cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000064_0001
El producto se purificó mediante cromatografía en columna usando un cartucho de sílice de 12 g (Redisep®) y heptano (A) y acetato de etilo (B) como disolventes. Se utilizó el siguiente gradiente de purificación: 3 minutos de retención A, 18 minutos de subida al 100% B, 3 minutos de retención al 100% B. Se obtuvo un producto purificado con un rendimiento del 70%. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 89,15 (dd, J=5,8, 5,8 Hz, 1H), 7,84 - 7,73 (m, 3H), 6,84 (s, 1H), 3,81 - 3,69 (m, 2H), 3,36 (dd, J=2,7, 10,6 Hz, 1H), 3,23 - 3,13 (m, 3H), 1,88 - 1,76 (m, 2H), 1,61 (ddd, J=3,9, 7,5, 17,2 Hz, 1H), 1,51 - 1,42 (m, 1H), 1,32 - 1,17 (m, 1H). LC-MS (ESI), m/z 306 (M+H)+.
Ejemplo 34: 6-fluoro-4-oxo-W-[(2-oxo-3-piperidil)metil]cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000064_0002
El producto se purificó mediante HPLC preparativa (Gilson) usando el procedimiento al 5%-40% y NH3 al 0,1% en agua y acetonitrilo como eluyentes. Se obtuvo un producto purificado con un rendimiento del 39%. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 89,19 - 9,16 (m, 1H), 7,83 - 7,80 (m, 2H), 7,79 - 7,74 (m, 1H), 7,56 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 3,71 - 3,66 (m, 1H), 3,44 (ddd, J=7,2, 9,0, 13,2 Hz, 1H), 3,16 - 3,11 (m, 2H), 2,50 - 2,45 (m, 1H), 1,92 - 1,86 (m, 1H), 1,82 - 1,76 (m, 1H), 1,64 - 1,58 (m, 1H), 1,54 - 1,46 (m, 1H). LC-MS (ESI), m/z 319 (M+H)+.
Ejemplo 35: 6-fluoro-4-oxo-W-(4,4,4-trifluorobutil)cromeno-2-carboxamida
Figure imgf000064_0003
El producto se purificó mediante cromatografía en columna usando un cartucho de sílice de 12 g (Redisep®) y heptano (A) y acetato de etilo (B) como disolventes. Se utilizó el siguiente gradiente de purificación: 3 minutos de retención A, 18 minutos de subida al 100% B, 3 minutos de retención al 100% B. Se obtuvo un producto purificado con un rendimiento del 33%. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 8 9,21 (t, J=5,7 Hz, 1H), 7,83 - 7,80 (m, 2H), 7,76 - 7,73 (m, 1H), 6,85 (s, 1H), 3,43 - 3,31 (m, 2H), 2,41 - 2,30 (m, 2H), 1,83 - 1,76 (m, 2H). LC-MS (ESI), m/z 318 (M+H)+.
Ejemplo 36: 6-fluoro-W-(norbornan-2-ilmetil)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
El producto se purificó mediante cromatografía en columna usando un cartucho de sílice de 12 g (Redisep®) y heptano (A) y acetato de etilo (B) como disolventes. Se utilizó el siguiente gradiente de purificación: 3 minutos de retención A, 18 minutos de subida al 100% B, 3 minutos de retención al 100% B. Se obtuvo un producto purificado con un rendimiento del 54%. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 89,18 (dd, J=5,8, 5,8 Hz, 1H), 7,86 - 7,73 (m, 3H), 6,84 (s, 1H), 3,19 - 3,03 (m, 2H), 2,23 - 2,17 (m, 2H), 2,11 (d, J=3,2 Hz, 1H), 1,79 - 1,59 (m, 1H), 1,53 - 1,45 (m, 2H), 1,39 - 1,26 (m, 2H), 1,15 - 1,08 (m, 3H). LC-MS (ESI), m/z 316 (M+H)+.
Ejemplo 37: W-[1-[[(6-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carbonil)amino]-metil]ciclohexil]carbamato de ferf-butilo.
Figure imgf000065_0001
El producto se purificó mediante cromatografía en columna usando un cartucho de sílice de 12 g (Redisep®) y heptano (A) y acetato de etilo (B) como disolventes. Se utilizó el siguiente gradiente de purificación: 3 minutos de retención A, 18 minutos de subida al 100% B, 3 minutos de retención al 100% B. Se obtuvo un producto purificado con un rendimiento del 71%. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 88,96 - 8,92 (m, 1H), 7,84 - 7,81 (m, 2H), 7,77 - 7,74 (m, 1H), 6,87 (s, 1H), 6,49 - 6,46 (m, 1H), 3,47 (d, J=6,1 Hz, 2H), 2,10 (d, J=12,2 Hz, 2H), 1,41 (s, 13H), 1,32 - 1,18 (m, 4H). LC-MS (ESI), m/z 319 (M+H-t-BuCO)+.
Ejemplo 38: clorhidrato de W-[(1-aminociclohexil)metil]-6-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000065_0002
Se disolvió W-[1-[[(6-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carbonil)amino]metil]ciclohexil]carbamato de tert-butilo (277 mg, 0,63 mmol) en una solución 4 M de cloruro de hidrógeno en dioxano (3,14 mL, 12,58 mmol) a temperatura ambiente para dar una solución transparente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h y se formó un precipitado blanco. Los disolventes se retiraron a presión reducida. El residuo resultante se suspendió en acetonitrilo (20 mL) y el disolvente se retiró a presión reducida para obtener clorhidrato de W-[(1-aminociclohexil)metil]-6-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxamida (230 mg, 98 % de rendimiento) como un sólido blancuzco. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 8 9,53 (dd, J=6,2, 6,2 Hz, 1H), 8,14 (s, 3H), 8,00 (dd, J=4,3, 9,2 Hz, 1H), 7,86 - 7,80 (m, 1H), 7,76 (dd, J=3,2, 8,2 Hz, 1H), 6,94 (s, 1H), 3,63 - 3,57 (m, 2H), 1,73 (dd, J=5,3, 11,4 Hz, 2H), 1,66 - 1,56 (m, 4H), 1,53 - 1,48 (m, 3H), 1,35 -1,28 (m, 1H). LC-MS (ESI), m/z 319 (M+H)+.
Ejemplo 39: clorhidrato de W-[(1-aminociclohexil)metil]-6-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000065_0003
A una solución de clorhidrato de W-[(1-aminociclohexil)metil]-6-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxamida (72 mg, 0,19 mmol) y diisopropiletilamina (50 mg, 0,39 mmol) en DCM (5 mL), se le añadió cloruro de acetilo (0,03 mL, 0,42 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se inactivó con una solución acuosa saturada de NaHCO3 y se extrajo con DCM. La fase orgánica se separó y se secó sobre MgSO4. El disolvente se retiró a presión reducida. Los productos se purificaron mediante HPLC preparativa (Gilson) usando el procedimiento al 5% 50% y NH3 al 0,1% en agua y acetonitrilo como eluyentes. Las fracciones que contenían el producto se evaporaron (Genevac) y se agruparon para obtener la W-[(1-acetamidociclohexil)metil]-6-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxamida deseada (25 mg, 34% de rendimiento) como un sólido blanco. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 89,27 - 9,24 (m, 1H), 7,86 - 7,74 (m, 3H), 7,35 (s, 1H), 6,87 (s, 1H), 3,56 (d, J=6,0 Hz, 2H), 2,09 (d, J=13,4 Hz, 2H), 1,89 (s, 3H), 1,53 - 1,28 (m, 7H), 1,23 - 1,19 (m, 1H). LC-MS (ESI), m/z 361 (M+H)+.
Ejemplo 40: 6-fluoro-W-[[1-(hidroximetil)ciclohexil]metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000066_0001
El producto se purificó mediante cromatografía en columna usando un cartucho de sílice de 12 g (Redisep®) y heptano (A) y acetato de etilo (B) como disolventes. Se utilizó el siguiente gradiente de purificación: 3 minutos de retención A, 18 minutos de subida al 100% B, 3 minutos de retención al 100% B. Se obtuvo un producto purificado con un rendimiento del 56%. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 88,86 (t, J=6,1 Hz, 1H), 7,83 - 7,80 (m, 2H), 7,79 - 7,74 (m, 1H), 6,85 (s, 1H), 4,70 (t, J=5,7 Hz, 1H), 3,34 - 3,32 (m, 2H), 1,48 - 1,28 (m, 12H). LC-MS (ESI), m/z 334 (M+H)+.
Ejemplo 40A: 6-fluoro-W-((1-(2-(hidroxietil)ciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000066_0002
El producto se purificó mediante HPLC preparativa (columna: YMC-Actus ODS-AQ 150*305u; fase móvil: [agua (TFA al 0,1%)-ACN]; B%:35%-65%, 11 min), 50% de rendimiento. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 89,14 (s, 1H), 7,84-7,73 (m, 3H), 6,84 (s, 1H), 4,99 (s, 1H), 3,58-3,58 (m, 2H), 3,31-3,29 (m, 2H), 1,53-1,31 (m, 12H). LC-MS (ESI), m/z 348 (M+H)+
Ejemplo 41: 6-fluoro-W-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000066_0003
El producto se purificó mediante cromatografía en columna usando un cartucho de sílice de 12 g (columna ultrarrápida de sílice desechable de fase normal Redisep® comercializada por Teledyne ISCO, Lincoln, Nebraska, EE. UU.) usando heptano (disolvente A) y acetato de etilo (disolvente B) como disolventes. Se utilizó el siguiente gradiente de purificación: 3 minutos de retención A, 11 minutos de subida al 50% B, 10 minutos de retención al 50% B. Las muestras que contenían el producto se agruparon para obtener el producto crudo como un sólido amarillo (260 mg). El producto se purificó adicionalmente mediante HPLC preparativa (Gilson) usando el procedimiento al 5%-50% y usando ácido fórmico al 0,1% en agua y acetonitrilo como eluyentes. 21% de rendimiento. RMN 1H (500 MHz, CDCl3) 87,83 (dd, J=3,1, 7,9 Hz, 1H), 7,60 - 7,56 (m, 1H), 7,46 (ddd, J=3,1, 7,5, 9,2 Hz, 1H), 7,37 (t, J=5,5 Hz, 1H), 7,16 (s, 1H), 3,54 (d, J=6,1 Hz, 2H), 2,22 - 2,15 (m, 1H), 1,66 - 1,53 (m, 9H), 1,41 - 1,34 (m, 1H). LC-MS (ESI), 320 (M+H)+.
El análogo de 4-fluoro-ciclohex-3-enil, el análogo de 1-hidroxi, 6-fluoro-W-[(1-hidroxi-4-fluoro-ciclohex-3-enil)metil]-4-oxo-chromeno-2-carboxamida, Ejemplo 41A, se preparó con los materiales de partida apropiados usando química análoga.
Ejemplo 42: W-(ciclohexilmetil)-7-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000067_0001
El producto se purificó mediante HPLC preparativa (Gilson) usando el procedimiento al 5%-50% y NH3 al 0,1% en agua y acetonitrilo como eluyentes. Se obtuvo el producto purificado con un rendimiento del 42%. RMN 1H (500 MHz, CDCb) 88,27 (dd, J=6,3, 8,9 Hz, 1H), 7,29 - 7,19 (m, 2H), 7,18 (s, 1H), 6,91 (s, 1H), 3,37 (dd, J=6,6, 6,6 Hz, 2H), 1,85 - 1,63 (m, 6H), 1,34 - 1,20 (m, 3H), 1,10 - 1,00 (m, 2H). LC-MS (ESI), m/z 304(M+H)+.
Ejemplo 43: N2-(ciclohexilmetil)-4-oxo-cromeno-2,6-dicarboxamida.
Figure imgf000067_0002
Se suspendió ácido 6-carbamoil-4-oxo-cromeno-2-carboxílico (208 mg, 0,8920 mmol) en MeCN (2 mL) y se añadió diisopropiletilamina (115 mg, 0,9 mmol). La mezcla de reacción se enfrió entonces a 0 °C con un baño de agua helada y se añadió una solución de PyBOP (464 mg, 0,9 mmol) en DCM seco (2 mL). La mezcla se agitó a 0 °C durante 30 minutos, luego se añadió ciclohexilmetanamina (101 mg, 0,9 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. Después de la evaporación del disolvente, el material crudo se absorbió en metanol y el precipitado blanco se filtró para proporcionar el producto deseado, N2-(ciclohexilmetil)-4-oxo-cromeno-2,6-dicarboxamida (140 mg, 0,4 mmol), con un rendimiento del 45%. LC-MS (ESI), m/z 329 [M H]+. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 89,13 (dd, J=5,8, 5,8 Hz, 1H), 8,58 (s, 1H), 8,35 - 8,30 (m, 2H), 7,80 (d, J=8,8 Hz, 1H), 7,56 (s, 1H), 6,86 (s, 1H), 3,17 (dd, J=6,5, 6,5 Hz, 2H), 1,74 - 1,64 (m, 6H), 1,22 - 1,14 (m, 3H), 0,96 (dd, J=11,6, 11,6 Hz, 2H).
Procedimiento general para los Esquemas 1 y 1A, ETAPA 3, aminación e para proporcionar compuestos ilustrativos de fórmula general (I) a partir de compuestos intermedios de fórmula general (IIl).
Se suspendió ácido 4-oxo-cromeno-2-carboxílico, o alternativamente un ácido 4-oxo-cromeno-2-carboxílico sustituido correspondiente (0,62 mmol) en DCM seco (2 mL) y se añadió cloruro de oxalilo en DCM (99 mg, 1,2 eq., 0,78 mmol) y una gota de DMF. Después de 10 min se añadió a la mezcla de reacción una solución de la amina seleccionada que tenía la funcionalidad -R7 deseada (1,1 eq., 0,68 mmol) y Et3N (94 mg, 1,5 eq., 0,93 mmol) en DCM (1 mL) y la reacción se agitó con N2 a temperatura ambiente durante 2 h. Después de ese tiempo, la mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo con DCM para proporcionar un material crudo que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida usando EtOAc en heptano como eluyente, usando la columna Redisep® con las condiciones de disolvente apropiadas especificadas para cada ejemplo. Las fracciones deseadas se concentraron hasta secarlas para dar el producto deseado.
Los siguientes compuestos ilustrativos de fórmula (I) se prepararon según el procedimiento general anterior e:
Ejemplo 43A: 6-ciano-N-(ciclohexilmetil)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000067_0003
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 45% en heptano, para proporcionar la cromeno-2-carboxamida con un 24% de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 311 [M H]+. r Mn 1H (500 MHz, DMSO) 89,14 (t, J=5,9 Hz, 1H), 8,47 (d, J=1,8 Hz, 1H), 8,29 (dd, J=2,1, 8,7 Hz, 1H), 7,91 (d, J=8,9 Hz, 1H), 6,90 (s, 1H), 3,17 (dd, J=6,6, 6,6 Hz, 2H), 1,74 - 1,67 (m, 4H), 1,64 - 1,56 (m, 2H), 1,25 - 1,14 (m, 3H), 0,99 - 0,91 (m, 2H).
E je m p lo 44: N -(c id o h e x ilm e til) -6 -e til-4 -o x o -c ro m e n o -2 -c a rb o x a m id a .
Figure imgf000068_0001
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 30% en heptano, para proporcionar la cromeno-2-carboxamida con un 57% de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 314 [M H]+. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 89,08 (t, J=5,7 Hz, 1H), 7,86 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,77 (dd, J=2,1, 8,7 Hz, 1H), 7,68 (d, J=8,7 Hz, 1H), 6,80 (s, 1H), 3,16 (dd, J=6,5, 6,5 Hz, 2H), 2,76 (q, J=7,6 Hz, 2H), 1,74 - 1,68 (m, 3H), 1,64 - 1,56 (m, 2H), 1,26 -1,22 (m, 7H), 0,98 - 0,90 (m, 2H).
Ejemplo 45: 6-etil-N-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000068_0002
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 50% en heptano, para proporcionar la cromeno-2-carboxamida con un 44% de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 330 [M H]+. r Mn 1H (500 MHz, DMSO) 88,70 (t, J=5,6 Hz, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,79 - 7,70 (m, 2H), 6,85 (s, 1H), 4,41 (s, 1H), 3,33 - 3,29 (m, 2H), 2,77 (q, J=7,6 Hz, 2H), 1,57 (dd, J=11,2, 11,2 Hz, 2H), 1,49 - 1,34 (m, 8H), 1,24 (t, J=7,6 Hz, 3H).
Ejemplo 46: N-(ciclohexilmetil)-6-etoxi-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000068_0003
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 35% en heptano, para proporcionar la cromeno-2-carboxamida con un 54% de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 330 [M H]+. r Mn 1H (500 MHz, DMSO) 89,07 (t, J=5,6 Hz, 1H), 7,70 (d, J=9,2 Hz, 1H), 7,49 (dd, J=3,1, 9,2 Hz, 1H), 7,40 (d, J=3,1 Hz, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,15 (q, J=6,9 Hz, 2H), 3,16 (dd, J=6,5, 6,5 Hz, 2H), 1,75 - 1,68 (m, 4H), 1,64 - 1,56 (m, 2H), 1,38 (t, J=6,9 Hz, 3H), 1,25 - 1,14 (m, 3H), 0,98 - 0,91 (m, 2H).
Ejemplo 47: 6-etoxi-N-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000068_0004
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 50% en heptano, para proporcionar la cromeno-2-carboxamida con un 41% de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 346 [M H]+. r Mn 1H (500 MHz, DMSO) 88,70 (t, J=5,7 Hz, 1H), 7,74 (d, J=9,2 Hz, 1H), 7,48 (dd, J=3,1, 9,2 Hz, 1H), 7,40 (d, J=3,1 Hz, 1H), 6,83 (s, 1H), 4,40 (s, 1H), 4,15 (q, J=7,0 Hz, 2H), 3,30 (d, J=6,4 Hz, 2H), 1,60 - 1,53 (m, 2H), 1,48 - 1,42 (m, 5H), 1,40 - 1,35 (m, 5H), 1,23 - 1,20 (m, 1H).
E je m p lo 48: 6 -d o ro -N -[(1 -h id ro x ic id o h e x il)m e til]-4 -o x o -c ro m e n o -2 -c a rb o x a m id a .
Figure imgf000069_0001
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 50% en heptano, para proporcionar la cromeno-2-carboxamida con un 35% de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 336 [M H]+. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 88,78 - 8,75 (m, 1H), 8,01 - 7,93 (m, 2H), 7,85 (d, J=9,0 Hz, 1H), 6,89 (s, 1H), 4,40 (s, 1H), 3,30 (s, 2H), 1,60 - 1,53 (m, 2H), 1,50 - 1,34 (m, 7H), 1,25 - 1,20 (m, 1H).
Ejemplo 49: N-(ciclohexilmetil)-4-oxo-6-(trifluorometoxi)-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000069_0002
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 30% en heptano, para proporcionar la cromeno-2-carboxamida con un 53% de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 370 [M H]+. r Mn 1H (500 MHz, DMSO) 89,14 (t, J=5,1 Hz, 1H), 7,94 - 7,89 (m, 3H), 6,87 (s, 1H), 3,17 (dd, J=6,5, 6,5 Hz, 2H), 1,72 (t, J=13,4 Hz, 4H), 1,64 (s, 2H), 1,25 - 1,18 (m, 3H), 0,99 - 0,92 (m, 2H).
Ejemplo 49A: (S)-W-(1-ciclohexiletil)-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000069_0003
El producto se purificó en primer lugar mediante TLC preparativa (DCM/MeOH 10/1), y luego mediante cromatografía en columna ultrarrápida (ácido fórmico/H2O/ACN al 0,1%), 20 % de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 318 [M H]+. RMN 1H (500 MHz, CDCla) 87,85-7,83 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,59-7,47 (m, 2H), 7,15 (s, 1H), 6,74-6,72 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,08-4,06 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 1,79-1,70 (m, 5H), 1,67 (m, 1H), 1,25-1,24 (m, 1H), 1,17-1,06 (m, 7H).
Ejemplo 49B: (R)-W-(1-ciclohexiletil)-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000069_0004
El producto se purificó en primer lugar mediante TLC preparativa (DCM/MeOH 10/1), y luego mediante cromatografía en columna ultrarrápida (ácido fórmico/H2O/ACN al 0,1%), 20 % de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 318 [M H]+. RMN 1H (500 MHz, CDCla) 87,87-7,84(m, 1H), 7,58-7,55 (d, t = 4,6 Hz, 1H), 7,47-7,46 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,16 (s, 1H), 6,63­ 6,60 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 4,10-4,04 (m, 1H), 1,77 (m, 4H), 1,57 (m, 1H), 1,27-1,26 (m, 1H), 1,17-1,05 (m, 8H).
Procedimiento para los Esquemas 1 y 1A, ETAPA 3, aminación f para proporcionar compuestos ilustrativos de fórmula general (I).
E je m p lo 50: 4 -o xo -W -(te tra h id rop ¡ran -2 -¡lm e t¡l)c ro m en o-2 -ca rbo xam ¡da .
Figure imgf000070_0001
A una solución de ácido 4-oxo-cromeno-2-carboxíl¡co (120 mg, 0,6 mmol) en acetonitrilo (5 mL) se añadió tetrah¡drop¡ran-2-¡lmetanam¡na (80 mg, 0,7 mmol) y COMU (324 mg, 0,8 mmol). Después de agitar durante 15 minutos a temperatura ambiente, se añadió di-isopropiletilamina (0,22 mL, 1,3 mmol) por goteo y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. La reacción se dividió entonces entre DCM y agua y se pasó a través de un separador de fases. El producto se purificó mediante HPLC preparativa (Gilson) usando el procedimiento al 5%-50% con NH3 al 0,1% en agua y acetonitrilo como eluyentes. Las fracciones que contenían el producto se agruparon para obtener4-oxo-W-(tetrah¡dropiran-2-¡lmet¡l)cromeno-2-carboxam¡da (20 mg, 10% de rendimiento) como un sólido blancuzco. RMN 1H (500 MHz, CDCb) 88,25 (dd, J=1,7, 7,9 Hz, 1H), 7,79 - 7,74 (m, 1H), 7,57 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,48 (dd, J=7,6, 7,6 Hz, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,20 (s, 1H), 4,08 - 4,04 (m, 1H), 3,82 (ddd, J=2,9, 7,3, 13,9 Hz, 1H), 3,57 - 3,48 (m, 2H), 3,30 - 3,24 (m, 1H), 1,94 - 1,88 (m, 1H), 1,71 - 1,53 (m, 4H), 1,43 - 1,33 (m, 1H). LC-MS (ESI), m/z 288 (M+H)+.
Procedimiento general para los Esquemas 1 y 1A, ETAPA 3, aminación g para proporcionar compuestos ilustrativos de fórmula general (I) a partir de compuestos intermedios de fórmula general (IIl).
A una solución de ácido 4-oxo-cromeno-2-carboxíl¡co o el correspondiente ácido 4-oxo-cromeno-2-carboxíl¡co sustituido (0,48 mmol) en DCM (10 mL) se le añadió 2-cloro-4,6-d¡metox¡-1,3,5-tr¡az¡na (CDMT) (101 mg, 0,58 mmol) seguido de W-metilmorfolina (NMO), (0,211 mL, 1,92 mmol) y la mezcla resultante se agitó durante 30 minutos. La amina deseada, para proporcionar el compuesto final deseado de fórmula (I), (1,2 eq., 0,58 mmol) se añadió después en una porción y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se lavó entonces con una solución acuosa saturada de NaHCO3 (5 mL). La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO4 y se evaporó hasta secarla a presión reducida. El residuo se aplicó a una columna de SPE que contenía sorbente de intercambio catiónico Isolute® SCX, comercializado por Biotage Ab , Uppsala, Suecia, (2 g) y el producto crudo se eluyó con MeOH. El filtrado de metanol se concentró a presión reducida y el producto se purificó mediante HPLC preparativa (Gilson).
Los siguientes compuestos ilustrativos se prepararon según el procedimiento general para la transformación g:
Ejemplo 50A: 6-fluoro-4-oxo-W-(esp¡ro[3.3]heptan-2-ilmet¡l)cromeno-2-carboxam¡da.
Figure imgf000070_0002
El producto se purificó mediante HPLC preparativa (Gilson) con un procedimiento al 5%-95% usando HCO2H al 0,1% en agua y acetonitrilo como eluyentes. Se proporcionó el producto deseado con un rendimiento del 41%. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 89,11 (dd, J=5,6, 5,6 Hz, 1H), 7,83 - 7,72 (m, 3H), 6,83 (s, 1H), 3,30 (d, J=6,9 Hz, 2H), 2,44 - 2,34 (m, 1H), 2,09 - 2,03 (m, 2H), 1,98 - 1,89 (m, 4H), 1,79 - 1,70 (m, 4H). LC-MS (ESI), m/z 316 (M+H)+.
Ejemplo 51: W-[(3,3-d¡fluoroc¡clobutil)met¡l]-6-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxam¡da.
Figure imgf000070_0003
El producto se purificó mediante HPLC preparativa (Gilson) con un procedimiento al 5%-50% usando NH3 al 0,1% en agua y acetonitrilo como eluyentes. Se proporcionó el producto deseado con un rendimiento del 30%. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 89,28 (t, J=5,8 Hz, 1H), 7,83 - 7,80 (m, 2H), 7,74 (d, J=7,8 Hz, 1H), 6,85 (s, 1H), 3,45 (dd, J=6,2, 6,2 Hz, 2H), 2,72 - 2,62 (m, 2H), 2,51 - 2,39 (m, 3H). LC-MS (ESI), m/z 312 (M+H)+.
Ejemplo 52: 6-fluoro-W-[(3-fluoroc¡dobut¡l)met¡l]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000071_0001
El producto se purificó mediante HPLC preparativa (Gilson) con un procedimiento al 5%-95% usando NH3 al 0,1% en agua y acetonitrilo como eluyentes. Se proporcionó el producto deseado con un rendimiento del 31%. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 89,20 (t, J=5,6 Hz, 1H), 7,83 - 7,71 (m, 3H), 6,84 (s, 1H), 5,27 - 5,10 (m, 1H), 3,37 - 3,31 (m, 3H), 2,28 - 2,19 (m, 4H). LC-MS (ESI), m/z 294 (M+H)+.
Ejemplo 53: 6-fluoro-W-[(1-metox¡ddol^ex¡l)met¡l]-4-oxo-cromeno-2-carboxam¡da.
Figure imgf000071_0002
El producto se purificó mediante HPLC preparativa (Gilson) con un procedimiento al 5%-60% usando NH3 al 0,1% en agua y acetonitrilo como eluyentes. Se proporcionó el producto deseado con un rendimiento del 48%. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 88,70 (t, J=6,0 Hz, 1H), 7,89 (dd, J=4,3, 9,2 Hz, 1H), 7,82 - 7,71 (m, 2H), 6,85 (s, 1H), 3,40 - 3,34 (m, 2H), 3,17 (s, 3H), 1,70 (d, J=13,1 Hz, 2H), 1,54 - 1,41 (m, 4H), 1,35 - 1,18 (m, 4H). LC-MS (ESI), 334 (M+H)+.
Ejemplo 54: W-[(4,4-d¡fluoro-1-h¡drox¡-c¡dohex¡l)met¡l]-6-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxam¡da.
Figure imgf000071_0003
El producto se purificó mediante HPLC preparativa con un procedimiento al 5%-50%. Se proporcionó el producto deseado con un rendimiento del 37%. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 88,99 (t, J=6,2 Hz, 1H), 7,89 - 7,73 (m, 3H), 6,88 (s, 1H), 4,80 (s, 1H), 3,37 (d, J=6,4 Hz, 2H), 2,10 - 1,86 (m, 4H), 1,68 - 1,53 (m, 4H). LC-MS (ESI), m/z 356 (M+H)+. Ejemplo 55: 6,8-d¡fluoro-W-[(1-h¡drox¡c¡dohex¡l)met¡l]-4-oxo-cromeno-2-carboxam¡da.
Figure imgf000071_0004
El producto se purificó mediante HPLC preparativa con un procedimiento al 5%-50% y HCO2H al 0,1% en agua y acetonitrilo como eluyentes. Se proporcionó el producto deseado con un rendimiento del 25%. RMN 1H (500 MHz, CDCl3) 88,43 (dd, J=5,9, 5,9 Hz, 1H), 8,04 - 7,98 (m, 1H), 7,59 (d, J=7,9 Hz, 1H), 6,94 (s, 1H), 4,45 (s, 1H), 3,30 (d, J=6,3 Hz, 2H), 1,61 - 1,51 (m, 2H), 1,47-1,32 (m, 8H), 1,27 - 1,17 (m, 1H). LC-MS (ESI), m/z 338 (M+H)+.
E je m p lo 56: N -[(4 ,4 -d iflu o ro -1 -h id ro x ic id o h e x il)m e til]-6 ,8 -d iflu o ro -4 -o x o -4 H -c ro m e n o -2 -c a rb o x a m id a .
Figure imgf000072_0001
El producto se purificó mediante HPLC preparativa con un procedimiento al 5%-50% y HCO2H al 0,1% en agua y acetonitrilo como eluyentes. 23% de rendimiento. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 88,70 (t, J=6,0 Hz, 1H), 8,04 - 7,98 (m, 1H), 7,60 - 7,57 (m, 1H), 6,95 (s, 1H), 4,81 (s, 1H), 3,37 - 3,32 (m, 2H), 2,10 - 1,85 (m, 4H), 1,68 - 1,51 (m, 4H). LC-MS (ESI), m/z 374 (M+H)+.
Procedimiento para los Esquemas 1 y 1A, ETAPA 3, aminación h para proporcionar compuestos ilustrativos de fórmula general (I).
Ejemplo 57: W-[(4,4-difluoro-1-hidroxi-ciclohexil)metil]-6-hidroxi-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000072_0002
A una solución de ácido 6-hidroxi-4-oxo-cromeno-2-carboxílico (100 mg, 0,5 mmol) en DMF (5 mL) se le añadió HBTU (202 mg, 0,5 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h para proporcionar una solución ácida activada. A una solución separada de clorhidrato de 1-(aminometil)-4,4-difluoro-ciclohexanol, comprada en ChemBridge Corporation, San Diego, EE. UU., (117 mg, 0,6 mmol) en DMF (1 mL) se le añadió Et3N (0,081 mL, 0,6 mmol) y se mezcló a temperatura ambiente. Esta solución de amina se añadió a la solución ácida activada a temperatura ambiente y la mezcla de reacción se agitó durante la noche. El disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo resultante se absorbió en DCM (20 mL) y luego se lavó con una solución acuosa saturada de NaHCO3 (5 mL). La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO4 y se evaporó hasta secarla a presión reducida. El producto crudo se purificó mediante HPLC preparativa (Gilson) eluyendo con NH3 al 0,1% en agua y un procedimiento al 5%-50%. Las fracciones que contenían el producto se agruparon. El producto se purificó adicionalmente mediante HPLC preparativa (Gilson) eluyendo con HCO2H al 0,1% en agua y acetonitrilo y un procedimiento al 5%-50%. Las fracciones que contenían el producto se agruparon para obtener W-[(4,4-difluoro-1-hidroxiciclohexil)metil]-6-hidroxi-4-oxo-cromeno-2-carboxamida (27mg, 15% de rendimiento) como un sólido blanco. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 810,17 (s, 1H), 8,92 (t, J=6,3 Hz, 1H), 7,65 (d, J=9,3 Hz, 1H), 7,34 - 7,31 (m, 2H), 6,79 (s, 1H), 4,80 (s, 1H), 3,37 - 3,34 (m, 2H), 2,10 - 1,88 (m, 4H), 1,67 - 1,52 (m, 4H). LC-MS (ESI), m/z 354 (M+H)+.
Procedimiento para los Esquemas 1 y 1A - ETAPA 3, aminación i
A una solución de ácido cromen-4-oxo-cromeno-2-carboxílico o el correspondiente ácido 4-oxo-cromeno-2-carboxílico sustituido (1 eq) en DMF (5 mL), se le añadió ciclohexilmetanamina o la amina correspondiente (1,2 eq), HATU (1,5 eq) y DIPEA (3 eq). La mezcla de reacción se agitó durante 16 h a temperatura ambiente y luego se diluyó con agua (20 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2 * 20 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida. Los productos se purificaron mediante cromatografía en columna.
Los siguientes compuestos se prepararon según la ETAPA 3, transformación i:
Ejemplo 57A: 6-bromo-W-(ciclohexilmetil)-8-nitro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000072_0003
El producto se purificó mediante cromatografía en columna (éter de petróleo/acetato de etilo 5/1 a 3/1). 50% de rendimiento. RMN 1H (400 MHz, CDCla) 88,68-8,66 (m, 2H), 7,28 (s, 1H), 7,24 (m, 1H), 3,4-3,37 (m, 2H), 1,85-1,71 (m, 6H), 1,33-1,04 (m, 5H). LC-MS (ESI), m/z 408, 410 (M+H)+.
Ejemplo 57B: 6-fluoro-4-oxo-W-((2-oxopiperidin-4-il)metil)-4H-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000073_0001
El producto se purificó mediante cromatografía en columna mediante HPLC preparativa (TFA) y luego mediante HPLC preparativa (Base), 5% de rendimiento. RMN 1H (300 MHz, d6-MeOD) 87,84-7,79 (m,2H), 7,72-7,68 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,01 (s, 1H), 3,45-3,36 (m, 3H), 3,32-3,24 (m, 1H), 2,46-2,45 (m, 1H), 2,15-2,12 (m, 1H), 2,10-1,97(m, 1H), 1,57-1,55(m, 1H), 1,51 (m, 1H). LC-MS (ESI), m/z 319 (M+H)+.
Ejemplo 57C: W-[(2,3-dihidrobenzo[b][1,4]dioxin-6-il)metil]-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000073_0002
La mezcla de reacción se vertió en agua (50 mL) y se filtró, 29,29% de rendimiento. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 88,20 (s, 1H), 7,69-7,76 (m, 2H), 7,58-7,68 (d, 1H), 6,91 (s, 1H), 6,86 (s, 1H), 6,80-6,82 (m, 2H), 4,44-4,46 (d, 2H), 4,22 (s, 4H). LC-MS (ESI), m/z 356 (M+H)+.
El compuesto del Ejemplo 57C-1, W-((2,3-dihidrobenzo[b][1,3]dioxin-5-il)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida se preparó a partir de los materiales de partida apropiados usando química análoga.
Ejemplo 57D: 6-fluoro-W-(((1S,2S)-2-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-chromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000073_0003
El producto se purificó mediante HPLC preparativa (Instrumento: GX-E; Columna: Phenomenex Synergi C18250*21,2 mm, tamaño de partícula: 4 pm; Fase móvil: acetonitrilo al 25%-55% en H2O (con adición de NH3.H2O al 0,1%, v/v) para proporcionar 6-fluoro-W-(((1S,2S)-2-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida(80 mg, 27% de rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, MeOD) 87,82-7,79 (m, 2H), 7,68-7,65 (m, 1H), 7,01 (s, 1H), 3,95 (d,J= 3,6Hz, 1H), 3,56-3,51 (m, 1H), 3,38-3,33 (m, 1H), 1,84-1,82 (m, 2H), 1,73-1,68 (m, 2H), 1,53-1,49 (m, 4H),1,47-1,35 (m, 1H). LC-MS (ESI), m/z 320 (M+H)+.
Ejemplo 57E: 6-fluoro-W-(((1S,2R)-2-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-chromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000073_0004
El producto se purificó mediante HPLC preparativa (TFA) [Instrumento: GX-E; Columna: Phenomenex Synergi C18 250*21,2 mm, tamaño de partícula: 4 |jm; Fase móvil: acetonitrilo al 25%-55% en H2O (con adición de TFA al 0,05%, v/v)] para proporcionar 6-fluoro-W-(((1S,2R)-2-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida (70 mg, 24% de rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 89,07(s, 1H), 7,82 (d,J= 5,2Hz, 2H),7,76-7,74(m, 1H), 6,84 (s, 1H), 4,80 (d, J= 4,8Hz, 1H), 3,59-3,54 (m, 1H), 3,28-3,26 (m, 2H), 2,68 (s, 2H), 2,34 (s, 2H), 1,86-1,57 (m, 2H),1,25-0,95 (m, 3H). LC-MS (ESI), m/z 320 (M+H)+.
Ejemplo 57F: (S)-W-(1-ciclohexil-2-hidroxietil)-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000074_0001
El producto se purificó mediante HPLC preparativa (Procedimiento TFA), 25% de rendimiento. RMN 1H (400 MHz, CDCla) 87,88-7,86 (dd, J1 = 2,8 Hz ,J2 = 8,0 Hz, 1H), 7,61-7,59 (t, J = 4,6 Hz , 1H), 7,58-7,48 (m, 1H), 7,48 (s, 1H), 7,18 (s, 1H), 4,03-4,01 (m, 1H), 3,94-3,83 (m, 2H), 1,84-1,79(m, 6H),1,29-1,12 (m, 5H). LC-MS (ESI), m/z 334 (M+H)+.
Ejemplo 57G: (R)-W-(1-ciclohexil-2-hidroxietil)-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida
Figure imgf000074_0002
El producto se purificó mediante HPLC preparativa (Procedimiento TFA), 19% de rendimiento. RMN 1H (400 MHz, CDCla) 87,88-7,86 (dd, J1 = 2,8 Hz ,J2 = 7,6 Hz, 1H),7,60-7,58 (t, J = 4,2 Hz, 1H), 7,49 (m, 1H), 7,48 (s, 1H), 7,18 (s, 1H), 4,02-4,00 (m, 1H), 3,94-3,83 (m, 2H), 1,84-1,81 (m, 6H), 1,29-1,12 (m, 5H). LC-MS (ESI), m/z 334 (M+H)+.
Ejemplo 57H: W-(ciclohexilmetil)-6-fluoro-N-metil-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000075_0001
El producto se purificó mediante HPLC preparativa (Procedimiento TFA), 25% de rendimiento. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 87,88-7,86 (t, J = 4,2 Hz, 1H), 7,54-7,45(m, 2H), 6,52-6,48 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,42-3,40 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 3,22-3,20 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 3,10-3,09 (d, J = 2 Hz, 3H), 1,81-1,72 (m, 6H), 1,27-1,22 (m, 4H), 0,81-0,79 (m, 1H). LC-MS (ESI), m/z 318 (M+H)+.
Ejemplo 57 I: W-(2-etilbutil)-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000075_0002
El producto se purificó mediante HPLC preparativa (Procedimiento TFA), 49% de rendimiento. RMN 1H (400 MHz, CDCla) 87,80-7,79 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 7,48-7,42 (m, 1H), 7,39-7,38 (m, 1H), 7,09(s, 1H), 6,73(s, 1H), 3,39-3,36 (t , J = 6,2 Hz, 2H), 1,35-1,34 (m, 1H), 1,33-1,32 (m, 4H), 0,90-0,87 (m, 6H). LC-MS (ESI), m/z 292 (M+H)+.
Ejemplo 57 J: 6-fluoro-W-2-metilbutil)-4-oxo-4H-chromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000075_0003
El producto se purificó mediante HPLC preparativa (Procedimiento TFA), 49% de rendimiento. RMN 1H (400 MHz, CDCla) 87,90-7,87 (dd, J1 = 3,2 Hz ,J2 = 8,0 Hz, 1H), 7,56-7,55 (d, J = 4 Hz, 1H), 7,51-7,48 (m, 1H), 7,18 (s, 1H), 6,89 (s, 1H), 3,48-3,43 (m, 1H), 3,37-3,32 (m, 1H), 1,76-1,74 (m, 1H),1,50-1,48 (m, 1H), 1,31-1,27 (m, 1H), 1,02-0,96 (m, 6H). LC-MS (ESI), m/z 278 (M+H)+.
Ejemplo 57K: Etil 2-(1-((6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamido)metil)ciclohexil)acetato.
Figure imgf000075_0004
A una solución de ácido 2-(1-(aminometil)ciclohexil)acético (200 mg, 1,17 mmol) en EtOH (4 mL) se le añadió SOCb (278 mg, 2,34 mmol, 0,169 mL) por goteo a 25 °C, la mezcla de reacción se agitó a 80 °C durante 3 h. El disolvente se retiró a presión reducida y la amina resultante se utilizó sin más purificación en la etapa de amidación siguiendo el procedimiento general i. El producto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (DCM/MeOH 50:1 a 20:1), 69% de rendimiento. LC-MS (ESI), m/z 390 (M+H)+.
Ejemplo 57L: Ácido 2-(1-((6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamido)metil)ciclohexil)acético
Figure imgf000076_0001
Una mezcla de 2-(1-((6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamido)metil)cidohexil)acetato de etilo (120 mg, 0,38 mmol), concentrado, HCl (0,377 mL) y AcOH (0,53 mL) se agitó a 80 °C durante 30 min. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El producto se purificó mediante HPLC preparativa (procedimiento ácido) para obtener ácido 2-(1-((6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamido)metil)ciclohexil)acético (50 mg, 0,135 mmol, 44% de rendimiento) hasta obtener un sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 812,20 (s, 1H), 8,88 (s, 1H), 7,86-7,80 (m, 2H), 7,76-7,74 (t, J = 4,2 Hz, 1H), 6,85 (s, 1H), 3,45-3,44 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 2,33 (s, 2H), 1,49-1,36 (m, 10H). LC-MS (ESI), m/z 362 (M+H)+.
Compuestos preparativos y compuestos ilustrativos para el proceso ilustrado en el Esquema 2.
Procedimiento general para el Esquema 2 - ETAPA 1, transformación a para proporcionar compuestos intermedios ilustrativos de fórmula general (IV):
Ejemplo 58: Compuesto intermedio
A una suspensión de N-(ciclohexilmetil)-8-hidroxi-4-oxo-cromeno-2-carboxamida (48 mg, 0,16 mmol) en DMF (2 mL), se añadió carbonato de potasio (51 mg, 0,37 mmol) y después de 20 minutos se añadió N-(2-bromoetil)carbamato de ferf-butilo o, alternativamente, 4-(bromometil)piperidino-1-carboxilato de ferf-butilo (1,2 eq.) y la reacción se agitó con N2, a 90 °C durante la noche. Después de ese tiempo, el análisis por LC-MS (ESI) confirmó la presencia de algún material de partida residual en la mezcla de reacción. Se añadieron 10 mg de carbonato de potasio y un equivalente adicional de N-(2-bromoetil)carbamato de ferf-butilo o 4-(bromometil)piperidino-1-carboxilato de tert- butilo (según corresponda) y la mezcla se agitó durante otras 4 h a 90 °C. La mezcla de reacción luego se filtró y se evaporó para proporcionar material intermedio crudo que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con una cantidad adecuada de EtOAc en heptano para cada ejemplo (como se detalla en los procedimientos generales anteriores) para proporcionar el compuesto intermedio deseado.
Los siguientes compuestos intermedios ilustrativos adicionales de fórmula general (IV) se prepararon según el procedimiento general para la transformación a en la ETAPA 1 del Esquema 2:
Ejemplo 59: Compuesto intermedio, (2-((2-((ciclohexilmetil)carbamoil)-4-oxo-4H-cromen-8-il)oxi)etil)carbamato de ferfbutilo.
Figure imgf000076_0002
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 45% en heptano, para proporcionar el compuesto intermedio protegido t-BOC con un 56% de rendimiento como un sólido amarillento. LC-MS (ESI) condición básica, m/z 445 [M H]+.
Ejemplo 59: Compuesto intermedio, 4-[[2-(ciclohexilmetilcarbamoil)-4-oxo-cromen-8-il]oximetil]piperidino-1-carboxilato de ferf-butilo.
Figure imgf000077_0001
El compuesto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 45% en heptano, para proporcionar el compuesto protegido t-BOC con un 82% de rendimiento como un sólido blanco. LC-MS (ESI) condición básica, m/z 499 [M H]+.
Procedimiento general para el Esquema 2 - ETAPA 1, transformación b para proporcionar compuestos intermedios ilustrativos de fórmula general (IV):
Ejemplo 60: Compuesto intermedio, 4[2-[2-(ciclohexilmetilcarbamoil)-4-oxo-cromen-8-il]oxietil]piperazino-1-carboxilato de tert-butilo.
Figure imgf000077_0002
A una solución de N-(ciclohexilmetil)-8-hidroxi-4-oxo-cromeno-2-carboxamida (45 mg, 0,15 mmol) en DMF (2 mL), se añadió carbonato de potasio (48 mg, 0,34 mmol) y después de 20 minutos se añadió también 4-(2-cloroetil)piperazino-1-carboxilato de tert-butilo (58 mg, 0,22 mmol) y la reacción se agitó en un reactor de microondas a 100 °C durante 1 h. Después de ese tiempo, el análisis por LC-Ms (ESI) confirmó la conversión completa del material de partida en el producto intermedio deseado. La mezcla de reacción se filtró entonces y se evaporó para dar el material intermedio crudo que después se purificó adicionalmente usando cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con MeOH al 0%-10% en DCM para dar 4-[2-[2-(ciclohexilmetilcarbamoil)-4-oxo-cromen-8-il]oxietil]piperazino-1-carboxilato de tert-butilo (23 mg, 0,04 mmol), con un rendimiento del 28% y como un sólido blanco. El análisis por LC-MS (ESI) del producto así purificado se correspondió con el producto deseado y el material se llevó directamente a la siguiente etapa, conversión a compuesto intermedio de fórmula general (V) sin más análisis. LC-MS (ESI) m/z 514 [M H]+.
Procedimiento general para el Esquema 2 - ETAPA 2, transformación c para proporcionar compuestos intermedios ilustrativos de fórmula general (V):
Se agitó una solución del material de partida sustituido en 8 protegido Boc deseado, por ejemplo, N-(ciclohexilmetil)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida (0,0810 mmol) en HCl 4 M en dioxano (0,5 mL) con N2 durante 1 h. Después de ese tiempo se formó un precipitado y el análisis por LC-MS (ESI) mostró un pico que correspondía al derivado desprotegido deseado. El disolvente se evaporó hasta secarse para proporcionar el producto intermedio desprotegido como un sólido blanco.
Los siguientes compuestos intermedios ilustrativos se prepararon según el procedimiento general para el Esquema 2, ETAPA 2, transformación c:
E je m p lo 61: co m p u e s to in te rm ed io . c lo rh id ra to de 8 -(2 -a m in o e to x i)-N -(c id o h e x ilm e til) -4 -o x o -c ro m e n o -2 -c a rb o x a m id a .
Figure imgf000078_0001
Se obtuvo el compuesto intermedio con un rendimiento del 95%. LC-MS (ESI) m/z 345 [M H]+. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 88,76 - 8,75 (m, 1H), 8,19 - 8,16 (m, 3H), 7,66 (d, J=7,9 Hz, 1H), 7,60 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,48 (dd, J=8,0, 8,0 Hz, 1H), 6,88 (s, 1H), 4,40 (t, J=5,0 Hz, 2H), 3,19 (dd, J=6,5, 6,5 Hz, 2H), 2,52 - 2,50 (m, 2H), 1,73 - 1,70 (m, 4H), 1,63 (d, J=13,6 Hz, 2H), 1,23 - 1,17 (m, 3H), 0,99 - 0,94 (m, 2H).
Ejemplo 61: compuesto intermedio, clorhidrato de N-(ciclohexilmetil)-4-oxo-8-(4-piperidilmetoxi)cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000078_0002
Se obtuvo el compuesto intermedio con un rendimiento del 83%. LC-MS (ESI) m/z 399 [M H]+. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 88,57 (m, 2H), 7,61 - 7,54 (m, 2H), 7,45 (dd, J=8,0, 8,0 Hz, 1H), 6,84 (s, 1H), 4,10 (d, J=6,7 Hz, 2H), 3,58 (s, 1H), 3,16 (m, 2H), 2,93 (m, 2H), 2,23 - 2,17 (m, 1H), 2,05 - 2,01 (m, 2H), 1,73 - 1,68 (m, 4H), 1,65 - 1,63 (m, 1H), 1,58 - 1,48 (m, 3H), 1,23 - 1,14 (m, 3H), 0,99 - 0,91 (m, 2H).
Ejemplo 62: compuesto intermedio, diclorhidrato de N-(ciclohexilmetil)-4-oxo-8-(2-piperazin-1-iletoxi)cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000078_0003
Se obtuvo el compuesto intermedio con un rendimiento del 83%. LC-MS (ESI) m/z 414 [M H]+. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 87,64 (d, J=7,8 Hz, 1H), 7,58 (d, J=7,5 Hz, 1H), 7,48 (dd, J=8,0, 8,0 Hz, 1H), 6,93 (s, 1H), 4,58 - 4,58 (m, 2H), 3,65 (s, 6H), 3,57 (s, 3H), 3,17 (dd, J=6,5, 6,5 Hz, 2H), 1,73 - 1,69 (m, 4H), 1,64 - 1,59 (m, 2H), 1,24 - 1,14 (m, 4H), 0,98 - 0,93 (m, 2H).
Procedimiento general para el Esquema 2 - ETAPA 3, transformación d para proporcionar compuestos sustituidos en 8-0 ilustrativos de fórmula general (I):
A una solución que contenía un compuesto intermedio de fórmula general (V) como se ha indicado en el Procedimiento general C anterior, (0,07 mmol) en ácido fórmico (0,1 mL), se le añadió un exceso de formaldehído al 37% en agua (0,03 mL) y la mezcla de reacción se agitó por reflujo durante entre 1h y 8h. Después de la evaporación del disolvente, el material crudo se purificó mediante HPLC preparativa (procedimiento ácido, ACN al 5%-95% en agua) para proporcionar el producto deseado como un sólido.
Los siguientes compuestos ilustrativos adicionales se prepararon según el procedimiento general para el Esquema 2, Etapa 2, transformación d:
Ejemplo 63: N-(ciclohexilmetil)-8-[2-(dimetilamino)etoxil-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000079_0001
Se obtuvo el compuesto con un 35% de rendimiento. 88,45 (t, J=5,6 Hz, 1H), 7,60 - 7,52 (m, 2H), 7,44 (dd, J=8,0, 8,0 Hz, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,27 (t, J=5,6 Hz, 2H), 3,16 (t, J=6,4 Hz, 2H), 2,75 (dd, J=5,7, 5,7 Hz, 2H), 2,27 (s, 6H), 1,75 -1,65 (m, 5H), 1,58 - 1,52 (m, 1H), 1,23 - 1,15 (m, 3H), 1,00 - 0,92 (m, 2H). LC-MS (ESI) m/z 373 [M H]+. RMN 1H (500 MHz, DMSO).
Ejemplo 64: clorhidrato de N-(ciclohexilmetil)-8-[(1-metil-4-piperidil)metoxil-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000079_0002
Se obtuvo el producto con un rendimiento del 46%. LC-MS (ESI) m/z 413 [M H]+. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 88,46 (t, J=5,0 Hz, 1H), 7,59 - 7,51 (m, 2H), 7,44 (dd, J=7,9, 7,9 Hz, 1H), 6,81 (s, 1H), 4,06 (d, J=6,1 Hz, 2H), 3,16 (dd, J=6,4, 6,4 Hz, 2H), 2,99 - 2,99 (m, 2H), 2,52 - 2,50 (m, 3H), 2,38 - 2,35 (m, 2H), 1,93 - 1,86 (m, 3H), 1,76 - 1,63 (m, 5H), 1,57 - 1,53 (m, 1H), 1,45 - 1,42 (m, 2H), 1,24 - 1,14 (m, 3H), 1,00 - 0,92 (m, 2H).
Ejemplo 65: diclorhidrato de N-(ciclohexilmetil)-8-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoxi]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000079_0003
Se obtuvo el producto con un rendimiento del 87%. LC-MS (ESI) m/z 428 [M H]+. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 87,64 (d, J=7,8 Hz, 1H), 7,58 (d, J=7,2 Hz, 1H), 7,48 (dd, J=7,9, 7,9 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 5,77 (s, 1H), 4,68 (s, 2H), 3,51 3,49 (m, 6H), 3,24 - 3,17 (m, 2H), 2,82 (s, 3H), 2,74 (dd, J=5,4, 5,4 Hz, 1H), 1,73 - 1,69 (m, 4H), 1,63 (s, 4H), 1,24 -1,15 (m, 5H), 0,99 - 0,94 (m, 2H).
Compuestos preparativos y compuestos ilustrativos para el proceso ilustrado en los Esquemas 3 y 3A.
Procedimiento general para la síntesis de diésteres de olefina
A una mezcla de fenol (1 eq) y Et3N (2 eq) en DCM, se le añadió DMAD (1,1 eq). La mezcla se agitó a 25 °C durante 2 h. La mezcla se diluyó con agua (200 mL) y se extrajo con DCM (2 * 200 mL), las capas orgánicas se separaron, se secaron sobre Na2SO4 y se filtraron. El disolvente se concentró a presión reducida. El producto se purificó mediante cromatografía en columna.
Procedimiento general para la hidrólisis de diésteres de olefina
Una mezcla del maleato y fumarato 1/1 correspondiente (1eq) se disolvió en THF/agua 1/1 y se añadió NaOH (6 eq). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se acidificó con HCl concentrado y se filtró. El sólido se recogió y se secó para dar los productos deseados.
Procedimiento general para la preparación de ácidos 2-cromono-carboxílicos
Se agitó una mezcla de ácido maleico y ácido fumárico (1 eq) correspondiente en H2SO4 (4 eq) y cloruro de acetilo (10 mL) a 25 °C durante la noche. La mezcla de reacción se vertió en agua helada (50 mL). El precipitado se filtró y se secó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna.
Prep. 19: 2-(2-metoxifenoxi)maleato de dimetilo y 2-(2-metoxifenoxi)fumarato de dimetilo
Figure imgf000080_0001
Preparado siguiendo el procedimiento general para la síntesis de diésteres de olefina. El producto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato 10/1 a 2/1). RMN 1H (400 MHz, CDCb) 87,32-7,20 (m, 1H), 7,15-6,83 (m, 12H), 6,48 (s, 2H), 5,03 (s, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,87 (m, 8H), 3,75 (s, 5H), 3,71-3,67 (m, 8H). A una mezcla de 2-metoxifenol (20 g, 161 mmol) y Et3N (24 g, 242 mmol) en DCM (200 mL), se le añadió but-2-inodioato de dimetilo (25 g, 177 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 25 °C durante 30 minutos. La mezcla se diluyó con agua (200 mL) y se extrajo con DCM (2 * 200 mL), las capas orgánicas se separaron, se secaron sobre Na2SO4 y se filtraron. El disolvente se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato 10/1 a 2/1) para obtener una mezcla de 2-(2-metoxifenoxi)maleato de dimetilo y 2-(2-metoxifenoxi)fumarato de dimetilo (24 g) como un aceite incoloro. RMN 1H (400 MHz, CDCb) 87,32-7,20 (m, 1H), 7,15-6,83 (m, 12H), 6,48 (s, 2H), 5,03 (s, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,87 (m, 8H), 3,75 (s, 5H), 3,71-3,67 (m, 8H).
Prep. 20: ácido 2-(2-metoxifenoxi)maleico y ácido 2-(2-metoxifenoxi)fumárico.
Figure imgf000080_0002
Preparado siguiendo el procedimiento general para la síntesis de diácidos de olefina. Se agitó una mezcla de 2-(2-metoxifenoxi)maleato de dimetilo y 2-(2-metoxifenoxi)fumarato de dimetilo (24 g) y NaOH (18 g, 450 mmol) en H2O (150 mL) y THF (100 mL) a 100 °C durante 3 h. La mezcla de reacción se acidificó con HCl concentrado. (50 mL) y se filtró. El sólido se recogió y se secó para proporcionar una mezcla de ácido 2-(2-metoxifenoxi)maleico y ácido 2-(2-metoxifenoxi)fumárico (10 g, 52% de rendimiento) como un sólido blanco.
Prep. 21: ácido 8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico
Figure imgf000081_0001
Preparado siguiendo el procedimiento general para la síntesis de ácidos 2-cromono-carboxílicos. Se agitó una mezcla de ácido 2-(2-metoxifenoxi)maleico y ácido 2-(2-metoxifenoxi)fumárico (10 g, 42 mmol) en H2SO4 (20 mL) y cloruro de acetilo (200 mL) a 25 °C durante 16 h. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna [TFA/H2O 1/1000, 60% (H2O:MeCN)] para obtener ácido 8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico (1,00 g, 10% de rendimiento) como un sólido rosa. r Mn 1H (400 MHz, Metanol-d4) 87,58-7,55 (m, 1H), 7,51-7,44 (m, 2H), 6,90 (s, 1H), 3,97 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 221 (M+H)+.
Ejemplo 66: W-(ciclohexilmetil)-8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida
Figure imgf000081_0002
Preparado siguiendo el procedimiento general e para la síntesis de 2-cromono-carboxamidas. Se agitó una mezcla de ácido 8-metoxi-4-oxo-4 H-cromeno-2-carboxílico (500 mg, 2,27 mmol) y dicloruro de oxalilo (865 mg, 6,81 mmol) en DCM (1 mL) a 0 °C durante 2 h. La mezcla se añadió a una solución de ciclohexilmetanamina (308 mg, 2,72 mmol) y Et3N (345 mg, 3,41 mmol) en DCM (5 mL) a 0 °C y la mezcla de reacción resultante se agitó a 15 °C durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua (5 mL) y se extrajo con DCM (3 * 5 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo 10/1 a 1/1) para obtener W-(ciclohexilmetil)-8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida (268 mg, 35% de rendimiento) como un sólido amarillo claro. RMN 1H (400 MHz, Metanol-d4) 87,70­ 7,64 (m, 1H), 7,49-7,43 (m, 2H), 6,97 (s, 1H), 4,06 (s, 3H), 3,29-3,27 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 1,82-1,62 (m, 6H), 1,36-1,21 (m, 3H), 1,07-0,96 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 317 (M+H)+.
Ejemplo 67: W-(ciclohexilmetil)-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000081_0003
A una solución de N-(c¡clohex¡lmet¡l)-8-metox¡-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxam¡da (200 mg, 0,63 mmol) en DCM (1 mL) se le añadió borontribromuro (BBr3) (636 mg, 2,54 mmol) a -78 °C. La mezcla de reacción se agitó a -78 °C durante 2 h. La mezcla de reacción se inactivó con MeOH (1 mL) y se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con MeOH (1 mL) y se agitó durante 10 min, luego la mezcla se filtró y el sólido se recogió y se secó para dar N-(ciclohex¡lmet¡l)-8-hidrox¡-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxam¡da(79 mg, 40% de rendimiento) como un sólido blancuzco. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 8 10,28 (s, 1H), 9,15-9,12 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 7,48-7,36 (m, 1H), 7,35-7,30 (m, 2H), 6,81 (s, 1H), 3,20-3,17 (m, 2H), 1,75-1,60 (m, 6H), 1,22-1,13 (m, 2H), 0,97-0,94 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z 302 (M+H)+.
Prep. 24: 2-(2-(trifluorometil)fenoxi)fumarato de dimetilo y 2-(2-(trifluorometil)fenoxi)maleato de dimetilo (1:1)
Figure imgf000082_0001
Preparado siguiendo el procedimiento general para la síntesis de diésteres de olefina. A una solución de 2­ (trifluorometil)fenol (5 g, 31 mmol) y Et3N (4,7 g, 46 mmol) en DCM (50 mL), se le añadió but-2-inodioato de dimetilo (4,4 g, 31 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 1 h. El disolvente se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato 7/1) para obtener una mezcla 1/1 de 2-(2-(trifluorometil)fenoxi)fumarato de dimetilo y 2-(2-(trifluorometil)fenoxi)maleato de dimetilo (7 g) como un aceite amarillo claro.
Prep. 25: ácido 2-(2-(trifluorometil)fenox¡)fumár¡co y ácido 2-(2-(trifluorometil)fenox¡)male¡co (1:1)
Figure imgf000082_0002
Preparado siguiendo el procedimiento general para la síntesis de ácidos 2-cromono-carboxílicos. A una solución de una mezcla 1/1 de 2-(2-(trifluorometil)fenoxi)fumarato de dimetilo y 2-(2-(trifluorometil)fenoxi)maleato de dimetilo (7 g) en THF (35 mL) y H2O (35 mL) se le añadió LiOH (3,86 g, 92,00 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 25 °C durante 3 horas. La reacción se concentró a presión reducida y luego el residuo se acidificó con HCl 4N hasta pH ~2-3. El precipitado se filtró y se secó al vacío para obtener ácido 2-(2-(trifluorometil)fenox¡)fumár¡co y ácido 2-(2-(trifluorometil)fenox¡)male¡co (1:1) (6,2 g, 98% de rendimiento) como un sólido blanco.
Prep. 26: ácido 4-oxo-8-(trifluorometil)-4H-cromeno-2-carboxíl¡co.
Figure imgf000082_0003
Preparado siguiendo el procedimiento general para la síntesis de ácidos 2-cromono-carboxílicos. A una solución de ácido 2-(2-(trifluorometil)fenox¡)fumár¡co y ácido 2-(2-(trifluorometil)fenox¡)male¡co (1:1) (6,2 g) en cloruro de acetilo (120 mL) se le añadió H2SO4 (7,2 g, 73 mmol ). La mezcla se agitó a 50 °C durante 1 h. El disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se vertió en agua helada (50 mL). El precipitado se filtró y se secó a presión reducida. El sólido se purificó mediante HPLC preparativa en condiciones ácidas para proporcionar ácido 4-oxo-8-(trifluoromet¡l)-4H-cromeno-2-carboxílico (1,3 g, 45 % de rendimiento) como un sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 88,34-8,32 (m, 1H), 8,27-8,25 (m, 1H), 7,71-7,67 (m, 1H), 7,01 (s, 1H). LCMS (ESI) m/z 259 (M+H)+.
Ejemplo 68: W-(c¡clohex¡lmet¡l)-4-oxo-8-(tr¡fluoromet¡l)-4H-cromeno-2-carboxam¡da.
Figure imgf000083_0001
Preparado s¡gu¡endo el proced¡m¡ento general e para la síntes¡s de 2-cromono-carboxam¡das. A una soluc¡ón de ác¡do 4-oxo-8-(tr¡fluoromet¡l)cromeno-2-carboxíl¡co (100 mg, 0,39 mmol) en DCM (1 mL) se le añad¡ó por goteo C(O)Cl2 (98 mg, 0,77 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a 20 °C durante 30 m¡nutos. La reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da y el res¡duo se d¡luyó con DCM (1 mL). La soluc¡ón se añad¡ó a una soluc¡ón de c¡clohex¡lmetanam¡na (57 mg, 0,50 mmol) y Et3N (78 mg, 0,77 mmol) en DCM (1 mL). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a 20 °C durante otras 2,5 h. Luego, la mezcla se d¡luyó entonces con agua (10 mL) y, poster¡ormente, se extrajo con DCM (3 * 5 mL). Las capas orgán¡cas se comb¡naron y se concentraron a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có med¡ante TLC preparat¡va (DCM/MeOH 5/1) para obtener W-(c¡clohex¡lmet¡l)-4-oxo-8-(tr¡fluoromet¡l)cromeno-2-carboxam¡da (71 mg, 50% de rend¡m¡ento) como un sól¡do blanco. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 88,53-8,52 (m, 1H), 8,34-8,32 (m, 1H), 8,27-8,25 (m, 1H) 7,71-7,68 (m, 1H), 7,00 (s, 1H), 3,17-3,14 (m, 2H), 1,73-1,56 (m, 6H), 1,22-1,15 (m, 3H), 0,96-0,93 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 354 (M+H)+.
Prep. 28: 2-(4-fluoro-2-metox¡fenox¡)fumarato de d¡met¡lo y 2-(4-fluoro-2-metox¡fenox¡)maleato de d¡met¡lo (1:1)
Figure imgf000083_0002
Preparado s¡gu¡endo el proced¡m¡ento general para la síntes¡s de d¡ésteres de olef¡na.
A la soluc¡ón de 4-fluoro-2-metox¡fenol (5 g, 35 mmol, 4 mL) y but-2-¡nod¡oato de d¡met¡lo (5 g, 35 mmol) en DCM (50 mL) se le añad¡ó Et3N (3,56 g, 35 mmol, 4,88 mL). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a 25 °C durante 2 h y luego se concentró a pres¡ón reduc¡da para obtener una mezcla 1/1 de 2-(4-fluoro-2-metox¡fenox¡)fumarato de d¡met¡lo y 2-(4-fluoro-2-metox¡fenox¡)maleato de d¡met¡lo (5,5 g, 55% de rend¡m¡ento) como un ace¡te rojo. Los productos crudos se ut¡l¡zaron para la s¡gu¡ente etapa s¡n más pur¡f¡cac¡ón.
Prep. 29: ác¡do 2-(4-fluoro-2-metox¡fenox¡)fumár¡co y ác¡do 2-(4-fluoro-2-metox¡fenox¡)male¡co (1:1).
Figure imgf000083_0003
Preparado s¡gu¡endo el proced¡m¡ento general para la síntes¡s de ác¡dos 2-cromono-carboxíl¡cos. A la soluc¡ón de 2-(4-fluoro-2-metox¡fenox¡)fumarato de d¡met¡lo y 2-(4-fluoro-2-metox¡fenox¡)maleato de d¡met¡lo (5,5 g, 19 mmol) en MeOH (90 mL), se le añad¡ó una soluc¡ón de NaOH (3,1 g, 77 mmol) en H2O (30 mL). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a 25 °C durante 5 h. La mezcla de reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da para el¡m¡nar el MeOH y luego se lavó con acetato de et¡lo (2 * 200 mL). La capa acuosa se ac¡d¡f¡có con HCl 4N a pH ~2-3 y luego se extrajo con acetato de et¡lo (2 * 100 mL). Las capas orgán¡cas comb¡nadas se lavaron con salmuera (50 mL) y se secaron con Na2SO4. El d¡solvente se ret¡ró a pres¡ón reduc¡da para obtener una mezcla de ác¡do 2-(4-fluoro-2-metox¡fenox¡)fumár¡co y ác¡do 2-(4-fluoro-2-metox¡fenox¡)male¡co (1:1) (1.50 g, 30% de rend¡m¡ento) como un sól¡do amar¡llo claro.
Prep. 30: ácido 6-fluoro-8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico
Figure imgf000084_0001
A una solución de ácido 2-(4-fluoro-2-metoxifenoxi)fumárico y ácido 2-(4-fluoro-2-metoxifenoxi)maleico (1:1) (2 g, 7,8 mmol) en cloruro de acetilo (50 mL) se le añadió H2SO4 (4,6 g, 47 mmol, 2,5 mL) por goteo. La mezcla de reacción se agitó a 50 °C durante 2 h y luego se vertió lentamente en agua (100 mL). El precipitado se filtró y se secó a presión reducida para proporcionar ácido 6-fluoro-8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico (800 mg, 43% de rendimiento) como un sólido blancuzco. RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 87,35-7,29 (m, 2H), 7,07 (s, 1H), 4,06 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 352 (M+H)+.
Ejemplo 69: W-(ciclohexilmetil)-6-fluoro-8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000084_0002
Preparado siguiendo el Procedimiento general i.
A una solución de ácido 6-fluoro-8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico (400 mg, 1,68 mmol) en DMF (5 mL) se añadieron ciclohexilmetanamina (285 mg, 2,52 mmol, 327 pL), HATU (1,28 g, 3,36 mmol) y DIPEA (868 mg, 6,72 mmol, 1,17 mL). La mezcla de reacción se agitó a 60 °C durante 15 h y luego se diluyó con H2O (20 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2 * 20 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (SiO2, éter de petróleo/EtOAc 20/1 a 3:1) para obtener W-(ciclohexilmetil)-6-fluoro-8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida (140 mg, 25% de rendimiento) como un aceite amarillo. LCMS (ESI) m/z 334 (M+H)+.
Ejemplo 70: W-(ciclohexilmetil)-6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000084_0003
A una solución de W-(ciclohexilmetil)-6-fluoro-8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida (100 mg, 0,3 mmol) en DCM (3 mL) se le añadió BBr3 (225 mg, 0,9 mmol, 87 pL) a -78 °C y se agitó durante 2 h. La mezcla se dejó calentar hasta 25 °C y se agitó durante 13 h. La mezcla de reacción se inactivó mediante la adición de EtOH (10 mL) a 25 °C y luego se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa en condiciones ácidas para proporcionar W-(ciclohexilmetil)-6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida (32 mg, 33% de rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 8 10,93-10,92 (m, 1H), 9,15-9,12 (m, 1H), 7,24-7,20 (m, 1H), 7,17-7,14 (m, 1H), 6,84 (s, 1H), 3,21-3,18 (m, 2H), 1,75-1,61 (m, 6 H), 1,24-0,94 (m, 5H). LCMS (ESI) m/z 320 (M+H)+.
Prep. 33: 2-(4-cloro-2-metoxifenoxi)fumarato de dimetilo y 2-(4-cloro-2-metoxifenoxi)maleato de dimetilo (1:1).
Figure imgf000085_0001
Preparado siguiendo el procedimiento general para la síntesis de diésteres de olefina.
Se disolvió una solución de 4-cloro-2-metoxifenol (1 g, 6,3 mmol, 770 pL) y Et3N (640 mg, 6,31 mmol, 875 pL) en DCM (20 mL), luego se añadió but-2-inedioato de dimetilo (900 mg, 6,31 mmol). La mezcla se agitó a 20 °C durante 2 horas y luego se vertió en agua (200 mL). La fase acuosa se extrajo con DCM (3 * 100 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (2 * 200 mL), se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío para obtener 2-(4-cloro-2-metoxifenoxi)fumarato de dimetilo y 2-(4-cloro-2-metoxifenoxi)maleato de dimetilo (1:1) (2 g) como un aceite amarillo. LCMS (ESI) m/z 301 (M+H)+.
Prep. 34: compuesto de ácido 2-(4-cloro-2-metoxifenoxi)fumárico con ácido 2-(4-cloro-2-metoxifenoxi)maleico (1:1).
Figure imgf000085_0002
Preparado siguiendo el procedimiento general para la síntesis de ácidos 2-cromono-carboxílicos.
Se disolvió una mezcla de 2-(4-cloro-2-metoxifenoxi)fumarato de dimetilo y 2-(4-cloro-2-metoxifenoxi)maleato de dimetilo (1:1) (2,00 g) en MeOH (15 mL) y H2O (5 mL), luego se añadió NaOH (533 mg, 13 mmol). La mezcla se agitó a 20 °C durante 12 horas y luego la mezcla se vertió en agua (300 mL). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 * 300 mL). La capa acuosa se acidificó con HCl 4N a pH ~2-3 y luego se extrajo con acetato de etilo (2 * 100 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (NaCl) (2 * 500 mL), se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío para obtener una mezcla de compuesto de ácido 2-(4-cloro-2-metoxifenoxi)fumárico con ácido 2-(4-cloro-2-metoxifenoxi)maleico (1:1) (2 g) como un sólido blanco.
Prep. 35: ácido 6-cloro-8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico.
Figure imgf000085_0003
Preparado siguiendo el procedimiento general para la síntesis de ácidos 2-cromono-carboxílicos. Se disolvió una mezcla de compuesto de ácido 2-(4-cloro-2-metoxifenoxi)fumárico con ácido 2-(4-cloro-2-metoxifenoxi)maleico (1:1) (2 g, bruto) en cloruro de acetilo (20 mL), se añadió H2SO4 (1,44 g, 15 mmol, 0,78 mL). La mezcla se agitó a 50 °C durante 2 h y luego se vertió en agua helada (200 mL). El precipitado se filtró para proporcionar ácido 6-cloro-8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico (0,5 g, 31% de rendimiento) como un sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, CDCb) 87,61 (d,J=2,4Hz 1H), 7,45 (d,J= 2,0Hz 1H), 7,07 (s, 1H), 4,05 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 255 (M+H)+.
Prep. 35A: 2-(3-fluoro-4-metoxifenoxi)fumarato de dimetilo y 2-(3-fluoro-4-metoxifenoxi)maleato de dimetilo (1:1).
Figure imgf000086_0001
Preparado siguiendo el procedimiento general para la síntesis de diésteres de olefina. Los productos se purificaron mediante cromatografía en columna (éter de petróleo/acetato de etilo 7/1), 29% de rendimiento.
Prep. 35B: ácido 2-(3-fluoro-4-metoxifenoxi)fumárico y ácido 2-(3-fluoro-4-metoxifenoxi)maleico (1:1).
Figure imgf000086_0002
Preparado siguiendo el procedimiento general para la síntesis de ácidos 2-cromono-carboxílicos, 81% de rendimiento. Prep. 35C: ácido 7-fluoro-6-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico.
Figure imgf000086_0003
Preparado siguiendo el procedimiento general para la síntesis de ácidos 2-cromono-carboxílicos, 98% de rendimiento. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 87,86-7,83 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 7,60-7,57 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,91 (s, 1H), 3,96 (s, 3H). Ejemplo 71: W-(ciclohexilmetil)-7-fluoro-6-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000086_0004
Preparado siguiendo el procedimiento general i para la síntesis de 2-cromono-carboxamidas. El producto se purificó mediante HPLC preparativa, 9% de rendimiento. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 89,04-9,01 (m, 1H), 7,67-7,65 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 7,60-7,57 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 6,80 (s, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,16-3,12 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,73-1,57 (m, 6H), 1,21-1,16 (m, 3H), 0,98-0,92 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 334 (M+H)+.
Ejemplo 72: W-(ciclohexilmetil)-7-fluoro-6-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000087_0001
A una solución de W-(ciclohexilmetil)-7-fluoro-6-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida(200 mg, 0,6 mmol) en DCM (2 mL) se le añadió BBr3 (751 mg, 3 mmol) a - 78 °C. Luego, la mezcla se agitó a 25 °C durante 30 min. La mezcla se inactivó con MeOH y se concentró a presión reducida. El producto se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar W-(ciclohexilmetil)-7-fluoro-6-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida (44 mg, 23% de rendimiento) como un sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 89,01-8,98 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 7,59-7,57 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 7,51­ 7,49 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 6,74 (s, 1H), 3,16-3,12 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 1,72-1,68 (m, 6H), 1,21-1,18 (m, 3H), 0,95-0,92 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 320 (M+H)+
Compuestos preparativos y compuestos ilustrativos para el proceso ilustrado en el Esquema 4.
Prep. 36: 6-cloro-8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de metilo.
Figure imgf000087_0002
Se disolvió ácido 6-cloro-8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico (0,5 g, 2 mmol) en MeOH (10 mL) y se añadió SOCI2 (0,47 g, 4,0 mmol, 0,285 mL) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a 65 °C durante 1 hora y luego se filtró para proporcionar 6-cloro-8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de metilo (300 mg) como un sólido marrón oscuro. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 87,67 (d,J=2,4Hz 1H), 7,58 (d,J=2,4Hz 1H),7,05 (s, 1H), 4,08 (s, 3H), 4,00 (s, 3H).
Prep. 37: 6-cloro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de metilo.
Figure imgf000087_0003
Se disolvió 6-cloro-8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de metilo (300 mg, 1,12 mmol) en DCM (10 mL) y se añadió BBr3 (1,68 g, 6,70 mmol, 0,65 mL) a -78 °C en nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó a 25 °C durante 12 horas y luego se vertió en agua helada (50 mL). La fase acuosa se extrajo con DCM (3 x 50 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (2 * 100 mL), se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío para proporcionar 6-cloro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de metilo (200,00 mg, crudo) como un sólido amarillo. LCMS (ESI) m/z 255 (M+H)+.
Ejemplo 73: 6-doro-8-hidroxi-N-((1-hidroxicidohexil)metil)-4-oxo-4H cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000088_0001
Se disolvieron 6-doro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxNato de metilo (100 mg, 0,39 mmol) y 1-(aminometil)cidohexanol (76 mg, 0,59 mmol) en THF (2 mL), se añadieron 4-dimetilaminopiridina (DMAP) (5 mg, 0,04 mmol) y Et3N (120 mg, 1.18 mmol, 0,16 mL). La mezcla se agitó a 20 °C durante 30 minutos. La mezcla se vertió en agua (50 mL) y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 * 30 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (2 * 100 mL), se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El producto se purificó mediante HPLC preparativa (condiciones ácidas) [Instrumento: GX-E; Columna: Phenomenex Synergi C18 250*21,2 mm, tamaño de partícula: 4 pm; Fase móvil: acetonitrilo al 25%-55% en H2O (con adición de TFA al 0,05%, v/v)] para proporcionar 6-cloro-8-hidroxi-N-((1-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida (60 mg, 43% de rendimiento) como un sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 8 11,19 (s, 1H), 8,96 (t, J=6,0Hz, 1H), 7,41 (d, J=2,4Hz,1H), 7,35 (d, J=2,4Hz, 1H),6,88 (s, 1H), 4,47 (s, 1H), 3,34 (s, 2H), 1,68-1,20 (m, 10H). LCMS (ESI) m/z 352 (M+H)+.
Prep. 39: 6-fluoro-8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de metilo.
Figure imgf000088_0002
Se agitó una solución de ácido 6-fluoro-8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico (600 mg, 2,52 mmol) en HCl/MeOH (6 mL) a 75 °C durante 5 h. La mezcla de reacción se concentró para obtener 6-fluoro-8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de metilo (350 mg, 55% de rendimiento) como un sólido blancuzco.
Prep. 40A: 6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de metilo.
Figure imgf000088_0003
A una solución del compuesto 6-fluoro-8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato (180 mg, 0,71 mmol) en DCM (5 mL) se le añadió BBr3 (1,07 g, 4,28 mmol, 412 pL) por goteo a -78 °C. La mezcla de reacción se dejó calentar a 25 °C y se agitó durante 2 h. La reacción se diluyó con DCM (20 mL) y se inactivó con una solución acuosa saturada de NaHCO3 (20 mL) a 5 °C. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera (10 mL) y se secó sobre Na2SO4. Los disolventes se retiraron a presión reducida y el residuo se purificó mediante TLC preparativa (éter de petróleo/acetato de etilo 1/2) para proporcionar 6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de metilo (100 mg, 59% de rendimiento) como un sólido amarillo.
Prep. 40B: ácido 6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico.
Figure imgf000089_0001
A una mezcla de 6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato (1,5 g, 6,30 mmol, 1 eq) en MeOH (20 mL) se le añadió K2CO3 (1,74 g, 12,60 mmol, 2 eq) a 20 °C y se agitó a 20 °C durante 15 h. La mezcla se filtró, el filtrado se ajustó a pH=2 con HCl 4N (10 mL), luego se filtró para recoger la torta de filtro. La torta de filtro se trituró con MeOH, luego se filtró para proporcionar ácido 6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico (1 g, 4.5 mmol, 71% de rendimiento) como un sólido amarillo claro. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 57,11-7,04 (m, 2H), 6,67 (s, 1H).
Ejemplo 74: 6-fluoro-8-hidroxi-W-((1-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000089_0002
A una solución de 6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de metilo (15 mg, 0,63 mmol), DMAP (1,5 mg, 0,01 mmol) y Et3N (25 mg, 0,25 mmol, 35 pL) en THF (0,5 mL) se le añadió 1-(aminometil)ciclohexanol (24 mg, 0,19 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 1 h y luego los disolventes se retiraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa (columna: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; fase móvil: [agua (0,225%FA)-ACN]; B%: 25% -55%, 10 min) para obtener 6-fluoro-8-hidroxi-W-((1-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida (10 mg, 47 % de rendimiento) como un sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, d Ms O) 89,13-9,12 (m, 1H), 7,17-7,08 (m, 2H), 6,85(s, 1H), 4,49 (s, 1H), 3,32-3,30 (m, 2H), 1,56-1,15 (m, 10H). LCMS (ESI) m/z 336 (M+H)+.
Ejemplo 75: W-((4,4-difluorociclohexil)metil)-6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000089_0003
A una solución de 6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato (60 mg, 0,25 mmol), DMAP (6 mg, 0,05 mol) y Et3N (102 mg, 1,01 mmol, 139,68 pL) en THF ( 0,5 mL) se le añadió (4,4-difluorociclohexil)metanamina (94 mg, 0,62 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 1 h y luego los disolventes se retiraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa (columna: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; fase móvil: [agua (0,225%FA)-ACN]; B%: 35% -65%, 10 min) para obtener W-((4,4-difluorociclohexil)metil)-6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida (18 mg, 19% de rendimiento) como un sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 89,42-9,41 (m, 1H), 7,14-7,05 (m, 2H), 6,82 (m, 1H), 3,25-3,23 (m, 2H), 2,10-2,08 (m, 2H), 1,79-1,71 (m, 5H), 1,22-1,15 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 356 (M+H)+.
Ejemplo 76A: W-((4,4-d¡fluoro-1-h¡drox¡c¡clohex¡l)met¡l)-6-fluoro-8-h¡drox¡-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxam¡da.
Figure imgf000090_0001
A una soluc¡ón de 6-fluoro-8-h¡drox¡-4-oxo-4H-cromeno-2-carbox¡lato (80 mg, 0,35 mmol), DMAP (8 mg, 0,07 mmol) y Et3N (136 mg, 1,34 mmol, 186 pL) en THF (0,5 mL) se le añad¡ó 1-(am¡nomet¡l)-4,4-d¡fluoro-c¡clohexanol (139 mg, 0,84 mmol). La mezcla se ag¡tó a 25 °C durante 16 h y luego los d¡solventes se ret¡raron a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có med¡ante HPLC preparat¡va (columna: Welch Ult¡mate AQ-C18 150*30mm*5um; fase móv¡l:
[agua(0,1%TFA)-ACN];B%: 30%-60%, 13 m¡n) para obtener W-((4,4-d¡fluoro-1-h¡drox¡c¡clohex¡l)met¡l)-6-fluoro-8-h¡drox¡-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxam¡da (13 mg, 10% de rend¡m¡ento) como un sól¡do blanco. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 89,14-9,11 (m, 1H), 7,24-7,21 (m, 1H), 7,18-7,15 (m, 1H), 6,88 (s, 1H), 4,86 (s, 1H), 3,40-3,38 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 2,15-1,83 (m, 4H), 1,66-1,58 (m, 4H). LCMS (ESI) m/z 372 (M+H)+.
Ejemplo 76B: W-c¡clohex¡l-6-fluoro-8-h¡drox¡-4-oxo-cromeno-2-carboxam¡da
Figure imgf000090_0002
A una suspens¡ón de ác¡do 6-fluoro-8-h¡drox¡-4-oxo-cromeno-2-carboxíl¡co (50 mg, 0,22 mmol) en THF anh¡dro (0,5 mL) se le añad¡ó EDCI (51,3 mg, 0,27 mmol) y se ag¡tó durante 1 hora a temperatura amb¡ente. Luego se añad¡eron c¡clohexanam¡na (33,2 mg, 0,33 mmol) y tr¡met¡lam¡na (27 mg, 0,27 mmol) y la reacc¡ón se dejó a temperatura amb¡ente durante 36 h. La reacc¡ón se d¡luyó con una soluc¡ón 6:3:1 de DMSO:MeOH:AGUA y se pur¡f¡có med¡ante HPLC preparat¡va (Waters) ut¡l¡zando el proced¡m¡ento al 5%-95% y ác¡do fórm¡co al 0,1% en agua y aceton¡tr¡lo como eluyentes. Las fracc¡ones que contenían el producto se evaporaron (Genevac) y se agruparon para obtener la N-c¡clohex¡l-6-fluoro-8-h¡drox¡-4-oxo-cromeno-2-carboxam¡da deseada (10 mg, 13%) como un sól¡do blanco. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 811,03 (brs, 1H), 8,87 (d, J=8 Hz, 1H), 7,21 (dd, J=3, 9,9 Hz, 1H), 7,15 (dd, J=3, 8,3 Hz, 1H), 6,84 (s, 1H), 3,8 (m, 1H), 1,84 (m, 4H), 1,65 (m, 1H), 1,35 (m, 4H), 1,16 (m, 1H). LC-MS (ESI), m/z 306 [M H]+.
Ejemplo 76C: W-(3,3-d¡fluoroc¡clohex¡l)-6-fluoro-8-h¡drox¡-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxam¡da.
Figure imgf000090_0003
S¡gu¡endo el proced¡m¡ento para la preparac¡ón del ejemplo 76C. El compuesto se pur¡f¡có med¡ante HPLC preparativa (cond¡c¡ones ác¡das), 21% de rend¡m¡ento. RMN 1H (400 MHz, MeOD) d 7,25 (dd, J = 3,0, 8,2 Hz, 1H), 7,11 (dd, J = 3,0, 9,6 Hz, 1H), 7,03 (s, 1H), 4,23 - 4,16 (m, 1H), 2,48 - 2,38 (m, 1H), 2,15 - 2,02 (m, 2H), 1,97 - 1,90 (m, 2H), 1,89 -1,77 (m, 1H), 1,75-1,60 (m, 2H), 1,57-1,46 (m, 1H). LC-MS (ESI), m/z 342 [M H]+.
Prep. 40C: 2-trimetilsililoxispiro[3.3]heptano-2-carbonitrilo
Figure imgf000091_0001
A una solución de yoduro de zinc (3 mg, 0,01 mmol) en DCM anhidro (1,8 mL) que se enfrió en un baño de hielo, se le añadieron espiro[3,3]heptan-2-ona (100 mg,0,90 mmol) y trimetilsililformonitrilo (90 mg,0,91 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. La reacción se inactivó con una solución acuosa al 10% de carbonato de sodio y el producto se extrajo con DCM y se pasó a través de una frita hidrófoba y los volátiles se eliminaron al vacío. Se obtuvo 2-trimetilsililoxiespiro[3.3]heptano-2-carbonitrilo (180 mg, 90%) como un aceite de naranja. RMN 1H (400 MHz, CDCla) 2,51 (m, 2H), 2,07 (m, 2H), 1,99 (m, 2H), 1,78 (m, 2H), 1,65 (m, 2H).
Prep. 40D: clorhidrato de 2-(aminometil)espiro[3.3]heptan-2-ol
Figure imgf000091_0002
Se diluyó LiAlH4 (1M en THF) (49 mg, 1,29 mmol) con éter anhidro (6,15 mL) y se enfrió en un baño de hielo antes de la adición gota a gota de 2-trimetilsililoxiespiro[3.3]heptano-2-carbonitrilo (180 mg, 0,86 mmol) en éter (6,15 mL). Después de la adición completa, la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante 2 h. La reacción luego se enfrió en un baño de hielo y se añadió hielo hasta que no se observó efervescencia. Se añadieron aproximadamente 2 ml de NaOH 1M y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante aproximadamente 10 minutos antes de filtrarse a través de un cartucho de celita. Se añadieron 1,5 ml de HCl 4 M en dioxano y se eliminaron los volátiles al vacío. El residuo se trituró con éter para proporcionar clorhidrato de 2-(aminometil)espiro[3.3]heptan-2-ol (72 mg, 45%) como un sólido blancuzco. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 7,08 (br s, 3H), 5,60 (br s, 1H), 2,74 (m, 2H), 2,4 (m, 1H), 1,97 (m, 6H), 1,77 (m, 2H).
Ejemplo 76D: 6-fluoro-8-hidroxi-N-((2-hidroxiespiro[3.3]heptan-2-il)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida
Figure imgf000091_0003
A una suspensión de ácido 6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-cromeno-2-carboxílico (80 mg, 0,36 mmol) en THF anhidro (5 mL) se le añadió EDCI (82 mg, 0,43 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadió clorhidrato de 2-(aminometil)espiro[3.3]heptan-2-ol (73 mg, 0,41 mmol) seguido de trietilamina (74 mg, 0,74 mmol) y la reacción se dejó a temperatura ambiente durante 16 h. Se añadieron DCM y NaHCO3 saturado y los orgánicos se aislaron usando una frita hidrófoba. Los volátiles se eliminaron y el residuo se purificó mediante HPLC preparativa usando el procedimiento al 5%-95% y ácido fórmico al 0,1% en agua y acetonitrilo como eluyentes. Las fracciones que contenían el producto se evaporaron y se agruparon para obtener la 6-fluoro-8-hidroxi-N-((2-hidroxispiro[3.3]heptan-2-il)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida deseada (12,8 mg, 10% de rendimiento) como un sólido blanco. r Mn 1H (400 MHz, DMSO) 11,19 (s, 1H), 9,10 (t, J=6 Hz, 1H), 7,21 (dd, J=3, 9,9 Hz, 1H), 7,16 (dd, J=3, 8,4 Hz, 1H), 6,89 (s, 1H), 5,26 (s, 1H), 3,40 (d, J=6,2 Hz, 2H), 2,19 (m, 2H), 2,07 (m, 2H), 1,94 (m, 4H), 1,77 (m, 2H). LC-MS (ESI), m/z 348 [M H]+.
Ejemplo 76E: N-(ciclobutilmetil)-6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida
Figure imgf000091_0004
A una suspensión de ácido 6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-cromeno-2-carboxílico (100 mg, 0,45 mmol) en THF anhidro (5 mL) se le añadió EDCI (103 mg, 0,54 mmol). Después de 1 hora, se añadieron ciclobutilmetanoamina (38 mg, 0,45 mmol) y Et3N (54 mg, 0,54 mmol) y la reacción se dejó durante la noche a temperatura ambiente. El producto se dividió entre DCM (10 mL) y NaHCO3 (5 mL) y la fase orgánica se concentró a presión reducida. El producto se purificó mediante HPLC preparativa. Las fracciones que contenían el producto se evaporaron y se agruparon para obtener la N-(ciclobutilmetil)-6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida deseada (16 mg, 12% de rendimiento) como un sólido blanco. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 810,96 - 10,96 (m, 1H), 9,13 (dd, J=5,8, 5,8 Hz, 1H), 7,22 - 7,12 (m, 2H), 6,84 (s, 1H), 3,41-3,38 (m, 2H), 2,60-2,59 (m, 1H), 2,07 - 1,99 (m, 2H), 1,87 - 1,82 (m, 2H), 1,78 - 1,71 (m, 2H). LC-MS (ESI), m/z 292 [M H]+.
Ejemplo 76F: 6-fluoro-8-hidroxi-N-((1-hidroxiciclopentil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida
Figure imgf000092_0001
A una suspensión de ácido 6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-cromeno-2-carboxílico (100 mg, 0,45 mmol) en THF anhidro (5 mL) se le añadió EDCI (103 mg, 0,54 mmol). Después de 1 hora, se añadieron 1-(aminometil)ciclopentanol (52 mg, 0,45 mmol) y Et3N (54 mg, 0,54 mmol) y la reacción se dejó durante la noche a temperatura ambiente. El producto se dividió entre DCM (10 mL) y NaHCO3 (5 mL) y la fase orgánica se concentró a presión reducida. El producto se purificó mediante HPLC preparativa. Las fracciones que contenían el producto se evaporaron y se agruparon para obtener la 6-fluoro-8-hidroxi-N-((1-hidroxiciclopentil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida deseada (20 mg, 13% de rendimiento) como un sólido blanco. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 89,09 (t, J=6,3 Hz, 1H), 7,22 - 7,12 (m, 2H), 6,87 (s, 1H), 4,63 (s, 1H), 3,44 (d, J=6,3 Hz, 2H), 1,74 - 1,69 (m, 2H), 1,61 - 1,53 (m, 6H). LC-MS (ESI), m/z 322 [M H]+.
Ejemplo 76G: N-(3-ciclobutilpropil)-6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida
Figure imgf000092_0002
A una suspensión de ácido 6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-cromeno-2-carboxílico (100 mg, 0,5 mmol) en THF anhidro (3 mL) se le añadió EDCI (103 mg, 0,5 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente hasta dar una solución transparente. Después de 1 hora, se añadió clorhidrato de 3-ciclobutilpropan-1-amina (134 mg, 0,9 mmol) en DCM y Et3N (59 mg, 0,6 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 18 h. El disolvente se retiró al vacío y el residuo se purificó mediante HPLC preparativa. Las fracciones que contenían el producto se evaporaron y se agruparon para obtener la N-(3-ciclobutilpropil)-6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida deseada (19 mg, 12% de rendimiento) como un sólido blanco. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 89,13 (t, J=5,5 Hz, 1H), 7,23 - 7,13 (m, 2H), 6,83 (s, 1H), 3,29 (d, J=6,9 Hz, 1H), 2,52-2,50 (m, 2H), 2,34-2,24 (m, 1H), 2,06-1,97 (m, 2H), 1,86-1,74 (m, 2H), 1,62-1.74 (m, 2H). LC-MS (ESI), m/z 320 [M H]+.
Ejemplo 76H: 6-fluoro-8-hidroxi-N-(2-metilbutil)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida
Figure imgf000092_0003
A una suspensión de ácido 6-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-cromeno-2-carboxílico (100 mg, 0,45 mmol) en THF anhidro (1,1 mL) se le añadió EDCI (103 mg, 0,5 mmol) y se agitó a temperatura ambiente. Después de 1 hora, se añadieron 2­ metilbutan-1-amina (39 mg, 0,45 mmol) y Et3N (54 mg,0,5 mmol) y se dejaron durante la noche a temperatura ambiente. El producto se purificó mediante HPLC preparativa. Las fracciones que contenían el producto se evaporaron y se agruparon para obtener la 6-fluoro-8-hidroxi-N-(2-metilbutil)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida deseada (23 mg, 16% de rendimiento) como un sólido amarillo claro. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 8 10,90 (s, 1H), 9,12 (dd, J=5,9, 5,9 Hz, 1H), 7,24 - 7,14 (m, 2H), 6,84 (s, 1H), 3,27 (dd, J=6,5, 13,1 Hz, 1H), 3,20 - 3,12 (m, 1H), 1,68 (dd, J=6,7, 12,6 Hz, 1H), 1,47 - 1,39 (m, 1H), 1,21 - 1,10 (m, 1H), 0,93 - 0,88 (m, 6H). LC-MS (ESI), m/z 294 [M H]+.
Prep. 40A: 2-(3-fluoro-2-metoxifenoxi)fumarato de dimetilo y 2-(3-fluoro-2-metoxifenoxi)maleato de dimetilo (1:1).
Figure imgf000093_0001
Se partió con el 3-fluoro-2-metoxifenol (Combi-Blocks, OT-0938) preparado siguiendo el procedimiento general para la síntesis de diésteres de olefina. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (éter de petróleo/acetato de etilo 7/1), 69% de rendimiento. LCMS (ESI) m/z 285 (M+H)+.
Prep. 40B: ácido 2-(3-fluoro-2-metoxifenoxi)fumárico y ácido 2-(3-fluoro-2-metoxifenoxi)maleico (1:1).
Figure imgf000093_0002
Preparado siguiendo el procedimiento general para la síntesis de ácidos 2-cromono-carboxílicos. El producto crudo de reacción se vertió en HCl 1 N (50 mL). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 * 50 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (2 * 100 mL), se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío.
Prep. 40C: ácido 7-fluoro-8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico.
Figure imgf000093_0003
Preparado siguiendo el procedimiento general para la síntesis de ácidos 2-cromono-carboxílicos, 67% de rendimiento. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 87,81-7,75 (m, 1H), 7,48 (t, J= 9,8Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 4,08 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 239 (M+H)+
Prep. 40D: 7-fluoro-8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de metilo.
Figure imgf000093_0004
Se disolvió ácido 7-fluoro-8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico (500 mg, 2,1 mmol) en MeOH (5 mL), se añadió SOCI2 (499 mg, 4,20 mmol, 0,304 mL). La mezcla se agitó a 65 °C durante 2 horas. La mezcla se filtró para proporcionar 7-fluoro-8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de metilo (400 mg, 75% de rendimiento) como un sólido blancuzco. LCMS (ESI) m/z 253 (M+H)+.
Prep. 40B: 7-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de metilo.
Figure imgf000094_0001
Se disolvió 7-fluoro-8-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de metilo (500 mg, 2 mmol) en DCM (5 mL), se añadió BBr3 (1,5 g, 6,0 mmol, 0,57 mL) a -78 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 16 horas. La mezcla se vertió en agua (50 mL). La fase acuosa se extrajo con DCM (2 * 50 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (3 * 200 mL), se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío para proporcionar 7-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de metilo (200 mg, 42% de rendimiento) como un sólido amarillo. LCMS (ESI) m/z 239 (M+H)+.
Ejemplo 77: fluoro-8-hidroxi-N-((1-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000094_0002
Se disolvieron 7-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de metilo (100 mg, 0,42 mmol) y 1-(aminometil)ciclohexanol (55 mg, 0,42 mmol) en THF (2 mL), se añadieron Et3N (127 mg, 1,26 mmol, 0,174 mL) y DMAP (5 mg, 0,042 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 1 hora. La mezcla se vertió en agua (30 mL). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 * 30 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (2 * 50 mL), se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El producto crudo se purificó mediante HPLC preparativa (TFA) [Instrumento: GX-E; Columna: Phenomenex Synergi C18250*21,2 mm, tamaño de partícula: 4 pm; Fase móvil: acetonitrilo al 25%-55% en 0,05% TFA en agua] para proporcionar 7-fluoro-8-hidroxi-W-((1-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida (7 mg, 5% de rendimiento) como un sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, MeOD) 87,68­ 7,64 (m, 1H), 7,32 (t, J=9,8Hz, 1H), 7,03 (s, 1H), 3,49 (s, 2H), 1,71-1,53 (m, 10H). LCMS (ESI) m/z 336 (M+H)+.
Ejemplo 78: N-(ciclohexilmetil)-7-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000094_0003
Se disolvieron 7-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de metilo (100 mg, 0,42 mmol) y ciclohexilmetanamina (48 mg, 0,42 mmol, 0,055 mL) en THF (2 mL), se añadieron Et3N (127 mg, 1,26 mmol, 0,174 mL) y DMAP (5 mg, 0,042 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 1 hora. La mezcla se vertió en agua (30 mL). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 * 30 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (2 * 50 mL), se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El producto crudo se purificó mediante HPLC preparativa (TFA) [Instrumento: GX-E; Columna: Phenomenex Synergi C18250x21,2 mm, tamaño de partícula: 4 |jm; Fase móvil: acetonitrilo al 25%-55% en 0,05% TFA en agua] para proporcionar N-(ciclohexilmetil)-7-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida(42 mg, 31% de rendimiento) como un sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, MeOD) 8 7,67-7,64 (m, 1H), 7,32 (t, J=9,6Hz, 1H), 7,01 (s, 1H), 3,33 (s, 2H), 1,85-1,70 (m, 6H), 1,34-1,26 (m, 3H), 1,06-1,01 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 320 (M+H)+.
Ejemplo 79: N-((4,4-difluorociclohexil)metil)-7-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida
Figure imgf000095_0001
Se disolvieron 7-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de metilo (300 mg, 1,26 mmol, 1 eq.) y (4,4-difluorociclohexil)metanamina (280 mg, 1,50 mmol, 1,2 eq., HCl) en THF (2 mL), TEA (510 mg, 5 mmol, 700 uL, 4 eq.) y se añadió DMAP (16 mg, 126 umol, 0,1 eq.). La mezcla se agitó a 25 °C durante 1 hora. La mezcla se vertió en agua (100 mL). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (100 mL * 3). La fase orgánica combinada se lavó con HCl 1N (100 mL) y salmuera (100 mL * 2), se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. Los productos se lavaron con MeCN (20 mL) para proporcionar N-((4,4-difluorociclohexil)metil)-7-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida (78 mg, 219 umol, 17% de rendimiento, 99% de pureza) como un sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 89,31-9,28 (t, J=6,0Hz, 1H), 7,59-7,55 (m,1H), 7,48-7,44 (m,1H), 6,88 (s,1H), 3,35-3,32 (m,2H), 2,10-2,05 (m,2H), 1,90-1,79 (m,5H), 1,32-1,24 (m,2H). LCMS (ESI) m/z 356.0 (M+H)+.
Ejemplo 80: N-((4,4-difluoro-1-hidroxiciclohexil)metil)-7-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida
Figure imgf000095_0002
Se disolvieron 7-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de metilo (300 mg, 1,26 mmol, 1 eq.) y (4,4-difluoro-1-hidroxiciclohexil)metanamina (254 mg, 1,26 mmol, 1 eq., HCl) en THF (5 mL), TEA (383 mg, 3,8 mmol, 525 uL, 3 eq.) y se añadió DMAP (16 mg, 126 umol, 0,1 eq.). La mezcla se agitó a 25 °C durante 1 hora. La mezcla se vertió en agua (30 mL). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (30 mL * 3). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (50 mL * 2), se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. Los productos se lavaron con MeCN (50 mL) para proporcionar N-((4,4-difluoro-1-hidroxiciclohexil)metil)-7-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida (59 mg, 159 umol, 13% de rendimiento, 99% de pureza) como un sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 811,06 (s,1H), 9,26-9,23 (t, J = 6,0Hz, 1H), 7,59-7,55 (m,1H), 7,49-7,44 (m, 1H), 6,91 (s, 1H), 4,92 (s, 1H), 3,46 (d, J = 6,4Hz, 2H), 2,13-1,96 (m, 4H), 1,75-1,64 (m,4H). LCMS (ESI) m/z 372,1 (M+H)+.
Prep. 41A: 2-(2-fluoro-4-metoxifenoxi)maleato de dimetilo y 2-(2-fluoro-4-metoxifenoxi)fumarato de dimetilo (1:1).
Figure imgf000095_0003
Preparado siguiendo el procedimiento general para la síntesis de diésteres de olefina. Los productos se purificaron y se utilizaron en la siguiente etapa sin más purificación.
Prep. 41B: ácido 2-(2-fluoro-4-metoxifenoxi)maleico y ácido 2-(2-fluoro-4-metoxifenoxi)fumárico (1:1).
Figure imgf000096_0001
Preparado siguiendo el procedimiento general para la síntesis de ácidos 2-cromono-carboxílicos, 78% de rendimiento. Prep. 41C: ácido 8-fluoro-6-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico.
Figure imgf000096_0002
Preparado siguiendo el procedimiento general para la síntesis de ácidos 2-cromono-carboxílicos, 79% de rendimiento. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 87,44 (s, 1H), 6,93 (s, 1H), 6,90-6,90 (m, 2H), 6,88-6,83 (m, 2H), 6,26 (s, 1H), 4,94 (s, 1H), 3,79-3,78 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z 239.0 (M+1)+.
Prep. 42A: 8-fluoro-6-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de metilo
Figure imgf000096_0003
A una solución de ácido 8-fluoro-6-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxíl¡co (2,20 g, 9,24 mmol, 1,00 eq.) en MeOH (170,00 mL) se le añadió SOCl2 (3,08 g, 25,86 mmol, 1,88 mL, 2,80 eq.) por goteo. La mezcla se agitó a 65 °C durante 1 h. La TLC (PE:EA=3:1; Rf=0,51) mostró que había aparecido un nuevo punto importante. La mezcla se filtró y la torta de filtro se recogió dando 8-fluoro-6-metox¡-4-oxo-4H-cromeno-2-carbox¡lato de metilo (2,00 g, 6,39 mmol, 69,16% de rendimiento, 80,58% de pureza) como un sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 87,61-7,57 (dd, J1 = 2,8 Hz, J2 = 6,0 Hz, 1H), 7,26 (s, 1H), 6,97 (s, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,88 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 253.1 (M+1)+.
Prep. 42B: 8-fluoro-6-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de metilo
Figure imgf000097_0001
A una solución de 8-fluoro-6-metoxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carbox¡lato de metilo (2,00 g, 7,93 mmol, 1,00 eq) en DCM (10,00 mL) se le añadió BBr3 (5,96 g, 23,79 mmol, 2,29 mL, 3,00 eq) por goteo a -78 °C, la mezcla se agitó a 25 °C durante 16 h. La TLC (PE:EA = 2:1; Rf = 0,24) mostró que apareció un punto importante. La mezcla se vertió en agua (50 mL). La fase acuosa se extrajo con DCM(50 mL*2). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (200 mL*3), se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. Se obtuvo 8-fluoro-6-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de metilo (1.20 g, 4,96 mmol, 62,60% de rendimiento, 98,53% de pureza) como un sólido amarillo. LCMS (ESI) m/z 238.9 (M+1)+.
Prep. 42C: ácido 8-fluoro-6-h¡drox¡-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxíl¡co
Figure imgf000097_0002
Preparado siguiendo el procedimiento general para la síntesis de ácidos 2-cromono-carboxílicos, 67 % de rendimiento. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 87,81-7,75 (m, 1H), 7,48 (t, J= 9,8Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 4,08 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 239 (M+H)+
Ejemplo 81: 8-fluoro-6-h¡drox¡-N-((1-h¡drox¡c¡clohex¡l)met¡l)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxam¡da
Figure imgf000097_0003
Se disolvieron 8-fluoro-6-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de metilo (200,00 mg, 839,74 umol, 1,00 eq) y 1-(aminometil)ciclohexanol (108 mg, 839 umol, 1,00 eq) en THF (2,00 mL), se añadió TEA (254 mg, 2,52 mmol, 349 uL, 3,00 eq) y DmAP (10 mg, 83 umol, 0,10 eq). La mezcla se agitó a 25 °C durante 12 horas. La LCMS mostró que se encontró la MS deseada. La mezcla se neutralizó por HCl (2M, 3 mL) a pH = 5-6 y se extrajo con EA (3 mL*3). La capa orgánica se concentró. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa (columna: Agela ASB 150*25mm*5um; fase móvil: [agua (0,1 %TFA)-ACN]; B%: 18%-48%, 11 min). Se obtuvo 8-fluoro-6-h¡drox¡-N-((1-h¡drox¡c¡clohex¡l)met¡l)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida (41,00 mg, 122 umol, 15% de rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 810,53 (s, 1H), 8,39-8,36 (t, J1 = 5,6 Hz, J2 = 6,0 Hz, 1H), 7,30-7,27 (m, 1H), 7,14 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 4,46 (s, 1H), 3,30-3,28 (m, 2H), 1,55-1,32(m, 10H). LCMS (ESI) m/z 336.1 (M+1)+.
Prep. 43: 8-metil-4-oxo-4-cromeno-2-carboxilato de etilo.
Figure imgf000098_0001
] Se preparó una mezcla de hidrato de hidroxilitio (3151 mg, 75,09 mmol) en DCM (50 mL) a temperatura ambiente y se añadió but-2-inedioato de dimetilo (2,31 mL, 2668 mg, 18,77 mmol) seguido de o-cresol (2-metilfenol) (2,0 mL, 2030 mg, 18,77 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Luego, la mezcla se lavó con agua (2 x 20 mL), se filtró a través de un separador de fases y el filtrado crudo se concentró a presión reducida para proporcionar un aceite verde. Se disolvió el aceite en THF (25 mL) y se añadió hidrato de hidroxilitio (3151 mg, 75,09 mmol) en agua (25 mL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. La mezcla se concentró a presión reducida, luego se disolvió en agua (20 mL), se añadió HCl acuoso 6 M y la solución se ajustó a pH 1-2 y luego la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. El precipitado resultante se filtró, se lavó con agua (2 x 50 mL) y se secó al vacío. El precipitado crudo se suspendió luego en ácido sulfúrico concentrado (30 mL) y se calentó a 80 °C durante 18 h y se enfrió hasta la temperatura ambiente. La mezcla se enfrió hasta 0 °C y se añadió agua (40 mL) a la mezcla (se formó precipitado marrón claro) y se agitó durante 30 minutos, luego se dejó calentar hasta la temperatura ambiente y se agitó durante otros 30 minutos. A continuación, el precipitado se filtró a través de una columna fritada y el sólido crudo se volvió a suspender en agua (60 mL) y se agitó durante 2 horas, luego se filtró, se lavó la torta de filtro con agua (2 x 20 mL) y se secó el precipitado al vacío. El sólido se suspendió en acetonitrilo y se concentró a presión reducida para proporcionar ácido 8-metil-4-oxo-cromeno-2-carboxílico (1318 mg, 32 %) como un sólido de color tostado. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 87,90 (d, J=7,8 Hz, 1H), 7,75 (d, J=7,0 Hz, 1H), 7,44 (t, J=7,6 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 2,52 - 2,50 (m, 3H) (protón OH no observado); LCMS m/z 202 (M-H)-.
Prep. 44: 8-metil-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de etilo.
Figure imgf000098_0002
Se preparó una mezcla de ácido 8-metil-4-oxo-cromeno-2-carboxílico (1087 mg, 5,32 mmol) y ácido sulfúrico (1 mL, 1840 mg, 18,76 mmol) a temperatura ambiente y se calentó a 80 °C durante 30 minutos. Luego, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se añadió etanol (15 mL, 11835 mg, 256,89 mmol) y la mezcla se calentó a 80 °C durante 16 h. A continuación, la mezcla se concentró a presión reducida para eliminar el etanol y luego se diluyó con DCM (30 mL), se lavó con agua (10 mL), se filtró a través de un separador de fases y se purificaron los orgánicos mediante el uso de una resina de intercambio aniónico fuerte (SAX) en una columna adecuada para la captura de compuestos ácidos. En pocas palabras, los orgánicos se diluyeron con DCM (10 mL), se filtraron a través de una columna de intercambio aniónico fuerte SAX (Isolute) y se lavaron con DCM (50 mL). El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar el producto deseado 8-metil-4-oxo-cromeno-2-carboxilato de etilo (1136 mg, 87 % de rendimiento) como un sólido blancuzco. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 87,89 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,75 (d, J=7,2 Hz, 1H), 7,44 (t, J=7,6, Hz, 1H), 6,94 (s, 1H), 4,41 (q, J=7,1 Hz, 2H), 2,50 - 2,49 (m, 3H), 1,36 (t, J=7,1 Hz, 3H); LCMS m/z 233 (M+H)+.
Prep. 45: 8-(bromometil)-4-oxo-4-cromeno-2-carboxilato de etilo.
Figure imgf000098_0003
Se preparó una mezcla de 1-bromopirrolidin-2,5-diona (1711 mg, 9,62 mmol) y clorobenceno (60 mL) a temperatura ambiente y se añadió bencenocarboperoxoato de benzoilo (21 mg, 0,09 mmol) y 8-metil-4-oxo-cromeno-2-carboxilato de etilo (2030 mg, 8,74 mmol) y la mezcla se calentó de 140 °C a 145 °C durante 20 h. La mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente, se filtró a través de una masa de celita, la masa se lavó posteriormente con una mezcla de acetato de etilo/heptano 1:1 y el filtrado se concentró a presión reducida. La mezcla cruda se suspendió en acetato de etilo, se cargó en la columna directamente y se purificó por cromatografía en columna para proporcionar el producto deseado 8-(bromometil)-4-oxo-cromeno-2-carboxilato de etilo (1582 mg, 55 % de rendimiento) como un sólido incoloro. RMN 1H (400 MHz, CDCb) 88,17 (dd, J=1,7, 8,0 Hz, 1H), 7,80 (dd, J=1,7, 7,4 Hz, 1H), 7,43 (t, J=7,7 Hz, 1H), 7,14 (s, 1H), 4,79 (s, 2H), 4,48 (q, J=7,2 Hz, 2H), 1,45 (t, J=7,2 Hz, 3H); LCMS m/z 312 (M+H)+.
Prep. 46: 8-(hidroximetil)-4-oxo-4-cromeno-2-carboxilato de etilo.
Figure imgf000099_0001
Se preparó una mezcla de 8-(bromometil)-4-oxo-cromeno-2-carboxilato de etilo (325 mg, 1,05 mmol) en acetona (2 mL) a temperatura ambiente y se añadió agua (8 mL) y la mezcla se calentó a 100 °C durante 0,5 h en un tubo de vidrio tapado. El análisis por LCMS confirmó la presencia tanto del producto deseado como del material de partida. La mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente y se diluyó con d Cm (10 mL) y se filtró a través de un separador de fases. En una inspección adicional por LCMS y TLC, aún quedaban niveles significativos de material de partida. Entonces, la mezcla se volvió a disolver en una cantidad adicional de acetona (3 mL) y posteriormente se añadió agua (12 mL) y la mezcla se calentó en un matraz de fondo redondo (RBF) a 100 °C. Nota: La disolución completa ocurrió después de aumentar la dilución de la concentración original, en la proporción de 20% de acetona/80% de agua. Después de 45 minutos, la cantidad relativa de producto con respecto al material de partida había aumentado de 1:1 a >2:1. La mezcla se calentó durante otros 75 minutos y el análisis de la reacción confirmó la presencia del producto deseado solo y sin material de partida. La mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente, se diluyó con DCM (10 mL) y se filtró a través de un separador de fases. La fase orgánica se separó y se concentró a presión reducida y se purificó mediante cromatografía en columna (solubilizada en DCM y cargada directamente en la columna, eluyente: acetato de etilo/heptano al 10%-50%) para proporcionar 8-(hidroximetil)-4-oxo-cromeno-2-carboxilato de etilo (216 mg, 79 %) como un sólido incoloro. RMN 1H (500 MHz, CDCla) 88,14 (dd, J=1,7, 7,9 Hz, 1H), 7,84 - 7,82 (m, 1H), 7,45 (t, J=7,6, 1H), 7,13 (s, 1H), 5,05 (d, J=6,4 Hz, 2H), 4,47 (q, J=7,1 Hz, 2H), 2,32 (t, J=6,4 Hz, 1H), 1,44 (t, J=7,1 Hz, 3H); LCMS m/z 249 (M+H)+.
Ejemplo 82: W-(ciclohexilmetil)-8-(hidroximetil)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000099_0002
Se disolvió una mezcla de 8-(hidroximetil)-4-oxo-cromeno-2-carboxilato de etilo (215 mg, 0,87 mmol) en THF (5 mL) y se añadió hidrato de hidroxilitio (91 mg, 2,2 mmol) en agua (3 mL) por goteo durante 1 minuto y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla mostró la presencia del carboxilato de partida mediante LCMS y la mezcla se concentró a presión reducida hasta secarla. Luego, la mezcla se acidificó con solución acuosa de HCl 6 M a pH 1, a continuación se diluyó con DCM y, posteriormente, se concentró a presión reducida hasta secarla. Después se añadió la mezcla suspendida en DMF (8 mL) y HBTU (361 mg, 0,95 mmol) y la mezcla resultante se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. Entonces se añadió ciclohexilmetanamina (0,169 mL, 147 mg, 1,30 mmol) y la mezcla se agitó durante otras 3 h a temperatura ambiente y el progreso de la reacción se monitorizó mediante LCMS. La mezcla de reacción se diluyó luego con acetato de etilo (30 mL), los orgánicos se separaron y se lavaron con 5% de LiCI ac. (3 x 10 mL), salmuera (NaCl) (10 mL), y después se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró a presión reducida. Luego, el producto crudo se purificó mediante columna SCX (para eliminar el exceso de ciclohexilmetanamina), y se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna (10%-50% de acetato de etilo/heptano) para proporcionar el producto deseado W-(ciclohexilmetil)-8-(hidroximetil)-4-oxo-cromeno-2-carboxamida (106 mg,0,32 mmol), 37 % de rendimiento como un sólido incoloro. RMN 1H (500 MHz, CDCb) 88,17 (dd, J=1,7, 7,9 Hz, 1H), 7,74 (dd, J=1,6, 7,2 Hz, 1H), 7,43 (t, J=7,6 Hz, 1H), 7,13 (s, 1H), 7,06 (brs, 1H), 5,02 (d, J=6,1 Hz, 2H), 3,35 (t, J=6,5 Hz, 2H), 1,94 (t, J=6,1 Hz, 1H), 1,83 - 1,74 (m, 4H), 1,73 - 1,57 (m, 2H), 1,32 - 1,16 (m, 3H), 1,09 - 0,99 (m, 2H); LCMS m/z 316 (M+H)+.
Compuestos preparativos y compuestos ilustrativos para el proceso ilustrado en el Esquema 5.
Ejemplo 83: 8-amino-N-(ciclohexilmetil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000100_0001
A una solución de 6-bromo-W-(ciclohexilmetil)-8-nitro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida (100 mg, 0,24 mmol) y DIPEA (63 mg, 0,49 mmol, 85 pL) en acetato de etilo (2 mL), se le añadió Pd/C (20 mg). Luego, la reacción se agitó a 25 °C durante 5 h con hidrógeno. La mezcla se filtró y el filtrado se lavó con agua (2 mL). Luego, la capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se evaporó a presión reducida para proporcionar el compuesto deseado, 8-amino-N-(ciclohexilmetil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida (80 mg) como un sólido amarillo. LCMS (ESI) m/z 301 (M+H)+.
El análogo de 1-hidroxi, N-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-8-amino-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida, Ejemplo 83A, se preparó con los materiales de partida apropiados usando química análoga.
Ejemplo 84: W-(ciclohexilmetil)-8-(metilsulfonamido)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000100_0002
A una solución de 8-amino-W-(ciclohexilmetil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida (80 mg, 0,26 mmol) y DIPEA (69 mg, 0,53 mmol, 0,93 mL) en DCM (1 mL) se le añadió cloruro de metanosulfonilo (46 mg, 0,40 mmol, 0,03 mL). La mezcla de reacción se agitó a 25 °C durante 1 h y luego se lavó con agua (2 mL). La capa orgánica se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC preparativa (condiciones ácidas) para proporcionar W-(ciclohexilmetil)-8-(metilsulfonamido)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida (10 mg, 9% de rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, CDCla) 88,07-8,05 (m, 1H), 7,74-7,72 (m, 1H), 7,62 (brs, 1H), 7,42-7,38 (m, 1H), 7,08 (s, 1H), 3,27-3,24 (m, 2H), 1,73-1,55 (m ,6H), 1,16-1,14 (m, 3H), 0,96-0,93 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 379 (M+H)+.
El análogo 1-hidroxi, W-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-8-(metilsulfonamido)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida, Ejemplo 84A, se preparó a partir de los materiales de partida apropiados usando química análoga.
Compuestos preparativos y compuestos ilustrativos para el proceso ilustrado en el Esquema 6.
Ejemplo 85: 8-ciano-N-(ciclohexilmetil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000101_0001
A una solución de 8-bromo-W-(c¡dohex¡lmet¡l)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxam¡da (80 mg, 0,22 mmol) en NMP (0,5 mL) se le añadió CuCN (59 mg, 0,65 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 160 °C durante 2 h con irradiación de microondas. La reacción se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa (condiciones ácidas) para proporcionar 8-c¡ano-N-(c¡clol^ex¡lmet¡l)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxam¡da (5 mg, 7% de rendimiento) como un sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, CDCla) 88,49-8,46 (m, 1H), 8,08-8,06 (m, 1H), 7,62-7,58 (m, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,05 (s, 1H), 3,41-3,38 (m, 2H), 1,85-1,73 (m, 6H), 1,32-1,06 (m, 5H). LCMS (ESI) m/z311 (M+H)+.
Ejemplo 86: N-(c¡clol^ex¡lmet¡l)-4-oxo-8-(1H-tetrazol-5-¡l)-4H-cromeno-2-carboxam¡da.
Figure imgf000101_0002
Se agitó una mezcla de 8-c¡ano-N-(c¡clol^ex¡lmet¡l)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxam¡da (45 mg, 0,14 mmol), ZnBr2 (33 mg, 0,14 mmol, 0,007 mL) y N aN (28 mg, 0,434 mmol, 0,015 mL) en i-PrOH (0,8 mL) y H2O (0,4 mL) a 120 °C durante 12 horas. La mezcla de reacción se diluyó con H2O (200 mL) y se filtró. El sólido se lavó con H2O (10 mL), acetato de etilo (20 mL) y MeOH (30 mL). El producto se purificó mediante HPLC preparativa (condición TFA) para obtener N-(c¡clohex¡lmet¡l)-4-oxo-8-(1H-tetrazol-5-¡l)-4H-cromeno-2-carboxam¡da (23 mg, 43% de rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 88,78-8,75 (m, 1H), 8,48-8,46 (m, 1H), 8,24-8,22 (d, 1H), 7,75-7,71 (m, 1H), 6,87 (s, 1H), 3,24-3,22 (m, 2H), 1,81-1,65 (m, 6H), 1,26-1,17 (m, 3H), 1,03-1,01 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 354 (M+H)+.
El análogo 1-hidroxi, N-[(1-h¡drox¡c¡clohex¡l)met¡l]-4-oxo-8-(1H-tetrazol-5-¡l)-4H-cromeno-2-carboxam¡da, Ejemplo 86A, se preparó a partir de los materiales de partida apropiados usando química análoga.
Compuestos preparativos y compuestos ilustrativos para el proceso ilustrado en el Esquema 7.
Ejemplo 87: 2-((c¡clohex¡lmet¡l)carbamo¡l)-4-oxo-4H-cromeno-8-carbox¡lato de metilo.
Figure imgf000101_0003
A una solución de Pd(dppf)Cl2 (52 mg, 0,71 mmol) y 1,1-ferrocenediN-bis (difenilfosfina) (DPPF) (79 mg, 0,14 mmol) en tolueno (2 mL) se le añadieron 8-bromo- N^ciclohexilmetil^-oxo^H-cromeno^-carboxamida (520 mg, 1,43 mmol), Et3N (144 mg, 1,43 mmol, 0,197 mL) y MeOH (7 mL). La mezcla de reacción se agitó a 75 °C en gas monóxido de carbono (CO) (45Psi/310264Pa) durante 16 horas. Luego se concentró la mezcla y se extrajo con acetato de etilo (2 x 20 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (2 x 20 mL) y se secaron con Na2SO4. El disolvente se concentró para proporcionar 2-((ciclohexilmetil)carbamoil)-4-oxo-4H-cromeno-8-carboxilato de metilo (300 mg, 54% de rendimiento) como un sólido blancuzco. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 88,34-8,31 (m, 3H), 7,66-7,62 (m, 1H), 6,86 (s, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,24-3,20 (m, 2H), 1,78-1,57 (m, 6H), 1,25-0,99 (m, 5H). LCMS (ESI) m/z 334 (M+H)+.
Ejemplo 88: ácido 2-((ciclohexilmetil)carbamoil)-4-oxo-4H-cromeno-8-carboxílico.
Figure imgf000102_0001
Una mezcla de 2-((ciclohexilmetil)carbamoil)-4-oxo-4H-cromeno-8-carboxilato de metilo (280 mg, 0,81 mmol) y HCl (12 M, 1,40 mL) en AcOH (50 j L) se agitó a 80 °C durante 1 hora. La mezcla de reacción se inactivó con acetonitrilo (20 mL) y se concentró para proporcionar el producto crudo (90 mg, 33% de rendimiento) como un sólido blancuzco. La purificación adicional mediante HPLC preparativa (condición ácida) de 30 mg de producto crudo proporcionó 11 mg de ácido 2-((ciclohexilmetil)carbamoil)-4-oxo-4H-cromeno-8-carboxílico purificado. Rm N 1H (400 MHz, CDCb) 88,37­ 8,35 (m, 1H), 8,28-8,26 (m, 1H), 8,11-8,09 (m, 1H), 7,64-7,60 (m, 1H), 6,84 (m, 1H), 1,78-1,62 (m, 6H), 1,24-0,98 (m, 4H). LCMS (ESI) m/z 330 (M+H)+.
Ejemplo 89: W2-(ciclohexilmetil)-4-oxo-4H-cromeno-2,8-dicarboxamida.
Figure imgf000102_0002
Se agitó una mezcla de ácido 2-(ciclohexilmetilcarbamoil)-4-oxo-cromeno-8-carboxílico (60 mg, 0,18 mmol), clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDCI) (Sigma-Aldrich) (52 mg, 0,27 mmol), HOBt (37 mg, 0,27 mmol), DIPEA (118 mg, 0,91 mmol, 0,15 mL), NH4Cl (97 mg, 1,82 mmol, 0,063 mL) en DMF (1 mL) a 25 °C durante 16 h. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se recogió. El disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC preparativa (condiciones ácidas) para proporcionar W2-(ciclohexilmetil)-4-oxo-4H-cromeno-2,8-dicarboxamida (12 mg, 19 % de rendimiento) como un sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, CDCb) 88,17-8,11 (m, 2H), 7,61-7,57 (m, 1H), 6,89 (s, 1H), 3,17-3,15 (m, 2H), 1,73-1,54 (m, 6H), 1,21-0,93 (m, 5H). LCMS (ESI) m/z 329 (M+H)+.
Compuestos preparativos y compuestos ilustrativos para el proceso ilustrado en el Esquema 8.
Prep. 47: 3-metil-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de etilo.
Figure imgf000102_0003
Se agitó una mezcla de 1-(2-hidroxifenil)propan-1-ona (1 g, 6,7 mmol) y 2-cloro-2-oxoacetato de etilo (1,1 g, 8,0 mmol) en piridina (10 mL) a 60 °C durante 2 h, luego se calentó a 120 °C durante 13 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua (30 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 25 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etilo 50/1 a 15/1) para obtener 3-metil-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de etilo (600 mg, 39% de rendimiento) como un sólido blanco.
Prep. 48: ácido 3-metil-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico.
Figure imgf000103_0001
A una solución de 3-metil-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de etilo (300 mg, 1,3 mmol) en EtOH (5 mL) y H2O (5 mL) se le añadió KOH (145 mg, 2,6 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 15 horas. Se concentró la mezcla de reacción a presión reducida y se ajustó el pH a pH=2-3 con HCl (2N), se filtró el precipitado para obtener ácido 3-metil-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico (100 mg, 38% de rendimiento) como un sólido blanco.
Ejemplo 90: N-(ciclohexilmetil)-3-metil-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000103_0002
A una solución de ácido 3-metil-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico (50 mg, 0,24 mmol) en DMF (1 mL) se le añadió HATU (140 mg, 0,37 mmol) y ciclohexilmetanamina (42 mg, 0,367 mmol, 0,047 mL), DlpEA (63 mg, 0,489 mmol, 0,085 mL). La mezcla se agitó a 25 °C durante 15 horas. La mezcla de reacción se diluyó con H2O (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2 * 5 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida. El producto se purificó mediante HPLC preparativa (condiciones ácidas) para obtener N-(ciclohexilmetil)-3-metil-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida (23 mg, 32% de rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, MeOD) 88,18-8,15 (m, 1H), 7,83-7,81 (m, 1H), 7,67-7,66 (m, 1H), 7,53-7,51 (m, 1H), 3,28-3,26 (m, 2H), 2,26 (s, 3H), 1,86-1,74 (m, 6H), 1,35-1,04 (m, 5H). LCMS (ESI) m/z 300 (M+H)+.
Compuestos preparativos y compuestos ilustrativos para el proceso ilustrado en el Esquema 9.
Prep. 49: 4-fluorofenilpropionato.
Figure imgf000103_0003
A una solución de 4-fluorofenol (2 g, 18 mmol) y Et3N (2,2 g, 21,41 mmol) en DCM (20 mL) se le añadió cloruro de propanoilo (1,82 g, 19,62 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a 25 °C durante 16 h. La mezcla se lavó con agua (50 mL). La capa orgánica se separó y se evaporó a presión reducida. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (éter de petróleo/acetato de etilo 30/1 a 10/1) para proporcionar propionato de 4-fluorofenilo (2 g, 67% de rendimiento) como un aceite incoloro. RMN 1H (400 MHz, CDCb) 87,08-7,06 (m, 3H), 2,64-2,58 (q, J= 7,6 Hz, 2H), 1,31-1,27 (d, J= 7,6 Hz, 3H).
Prep. 50: 1-(5-fluoro-2-hidroxifenil)propan-1-ona.
Figure imgf000104_0001
A una solución de propionato de 4-fluorofenilo (499 mg, 2,97 mmol) en clorobenceno (5 mL) se añadió AICI3 (594 mg, 4,46 mmol) y se agitó a 100 °C durante 5 h. La mezcla de reacción se enfrió a 25 °C y luego se vertió en agua (20 mL). La mezcla se extrajo con éter metil-tert-butílico (2 x 10 mL). La capa orgánica se separó y los disolventes se evaporaron a presión reducida. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (éter de petróleo/acetato de etilo 30/1) para proporcionar 1-(5-fluoro-2-hidroxifenil)propan-1-ona (400 mg, 80% de rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, CDCla) 87,46-7,43 (m, 1H), 7,23-7,20 (m, 1H), 6,99-6,96 (m, 1H), 3,05-3,00 (q, J= 7,2 Hz, 2H), 1,29-1,25 (d, J= 7,2 Hz, 3H).
Prep. 51: acido 6-fluoro-3-metil-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico.
Figure imgf000104_0002
A una solución de 1-(5-fluoro-2-hidroxifenil)propan-1-ona (400 mg, 2,38 mmol) en piridina (4 mL) se le añadió 2-cloro-2-oxo-acetato de etilo (357 mg, 2,62 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 100 °C durante 16 h. Los disolventes se retiraron a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC preparativa (condición de HCl) para proporcionar ácido 6-fluoro-3-metil-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico (70 mg, 13% de rendimiento) como un sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 87,78-7,24 (m, 3H), 2,23 (s, 3H).
Ejemplo 91: W-(ciclohexilmetil)-6-fluoro-3-metil-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
Figure imgf000104_0003
El compuesto del Ejemplo 91 se preparó siguiendo el procedimiento general e como se ha indicado anteriormente en el Esquema 1, para la síntesis de 2-cromono-carboxamidas. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (éter de petróleo/acetato de etilo 5/1), 45% de rendimiento. RMN 1H (400 MHz, MeOD) 87,80-7,77 (m, 1H), 7,40-7,36 (m, 2H), 6,72 (s, 1H), 3,27-3,24 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 1,98-1,62 (m, 6H), 1,23-1,14 (m, 3H), 0,97-0,94 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 318 (M+H)+.
Compuestos preparativos y compuestos ilustrativos para el proceso ilustrado en el Esquema 10.
Prep. 52: 1-(4-fluoro-2-hidroxi-3-nitro-fenil)etanona
Figure imgf000104_0004
Se preparó una mezcla de 1-(4-fluoro-2-hidroxifenil)etanona (2332 mg, 15,13 mmol) en una solución preparada previamente de ácido sulfúrico conc.: agua (8:2) (10 mL) a temperatura ambiente y se enfrió a 0 °C. Luego se añadió ácido nítrico (1634 mg, 18,16 mmol) (70%) por goteo durante 1 min, la mezcla se agitó durante 30 minutos a 0 °C y luego se vertió en agua helada (aproximadamente 200 mL), la mezcla se extrajo con acetato de etilo (2 x 200 mL) y los orgánicos se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron a presión reducida. La mezcla se purificó luego mediante cromatografía en columna (0-50% de acetato de etilo/heptano) para proporcionar 1-(4-fluoro-2-hidroxi-3-nitro-fenil)etanona (850 mg, 4.10 mmol), 27 % de rendimiento como un sólido amarillo pálido. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) 813,29 (d, J=1,4 Hz, 1H), 7,92 (dd, J=5,8, 9,0 Hz, 1H), 6,81 (dd, J=8,9, 8,9 Hz, 1H), 2,67 (s, 3H); LCMS m/z 200 (M+H)+
Prep. 53: 7-fluoro-8-nitro-4-oxo-cromeno-2-carboxilato
Figure imgf000105_0001
Se preparó una mezcla de 1-(4-fluoro-2-hidroxi-3-nitro-fenil)etanona (850 mg, 4.3 mmol) en etanol (25 mL) a temperatura ambiente y se añadió oxalato de dietilo (1559 mg, 10,67 mmol) (aproximadamente 1,5 mL) seguido de la adición por goteo (durante 5 minutos) de etóxido de sodio (6076 mg, 89.29 mmol) (solución al 21% en etanol) (7 mL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla luego se acidificó con HCl conc. (hasta aproximadamente pH 1) y la mezcla se calentó a 80 °C durante 4 h. La LCMS mostró una mezcla 2:1 de éster deseado a ácido. La mezcla se concentró a presión reducida hasta secarla, se diluyó con tolueno (15 mL) y se concentró hasta secarla para eliminar las trazas de agua. Luego se suspendió la mezcla en etanol (20 mL) y se añadió ácido sulfúrico conc. (5 mL) y se calentó la mezcla a 80 °C durante 20 h. La mezcla se concentró a presión reducida, se diluyó con DCM (50 mL) y se lavó con agua (2 x 20 mL), salmuera (20 mL), se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró a presión reducida. A continuación, la mezcla se purificó mediante columna de PE-AX (para eliminar las trazas de ácido), se diluyó con DCM, se cargó y se eluyó con DCM. La mezcla se purificó luego mediante cromatografía en columna (DCM puro) para proporcionar el compuesto deseado 7-fluoro-8-nitro-4-oxo-cromeno-2-carboxilato de etilo (480 mg, 1.54 mmol), 36 % de rendimiento como un sólido amarillo pálido. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) 88,38 (dd, J=5,7, 9,1 Hz, 1H), 7,37 (dd, J=8,9, 8,9 Hz, 1H), 7,18 (s, 1H), 4,46 (q, J=7,1 Hz, 2H), 1,43 (t, J=7,2 Hz, 3H); LCMS m/z 282 (M+H)+
Prep. 54: 8-amino-7-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxilato
Figure imgf000105_0002
Se preparó una mezcla de 7-fluoro-8-nitro-4-oxo-cromeno-2-carboxilato de etilo (480 mg, 1,71 mmol) en etanol (12 mL) a temperatura ambiente y se añadió cloruro de amonio (457 mg, 8,53 mmol) en agua (6 mL) seguido de hierro (286 mg, 5,12 mmol) y la mezcla se calentó a 80 °C durante 4 h. La TLC no mostró presencia de material de partida y la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se filtró a través de una masa de celita, la masa se lavó con etanol (30 mL) y el filtrado se concentró a presión reducida. Luego, la mezcla se disolvió en acetato de etilo (40 mL) y los orgánicos se lavaron con agua (20 mL), salmuera (20 mL), se secaron en sulfato de magnesio y se concentraron a presión reducida. La mezcla se purificó mediante cromatografía en columna en DCM puro para proporcionar el compuesto deseado 8-amino-7-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxilato de etilo (184 mg, 0,70 mmol), 41 % de rendimiento como un sólido incoloro. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) 87,53 (dd, J=6,0, 8,9 Hz, 1H), 7,13 (dd, J=8,9, 10,1 Hz, 1H), 7,07 (s, 1H), 4,47 (q, J=7,2 Hz, 2H), 4,25 (s, 2H), 1,44 (t, J=7,2 Hz, 3H); LCMS m/z 252 (M+H)+
E je m p lo 92: 8 -a m in o -N -[(4 ,4 -d iflu o ro -1 -h id ro x i-c id o h e x il)m e til]-7 -flu o ro -4 -o x o -c ro m e n o -2 -c a rb o x a m id a
Figure imgf000106_0001
Se preparó una mezcla de clorhidrato de W-1-(am¡nomet¡l)-4,4-difluoro-c¡dohexanol (241 mg, 1,19 mmol) en piridina (6 mL) a temperatura ambiente y se añadió trietilamina (0,15 mL, 109 mg, 1,08 mmol) y la mezcla se agitó durante 1 h. Se agitó una mezcla de 8-amino-7-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxilato de etilo (84 mg, 0,33 mmol) en piridina (2 mL) y DMAP (45 mg, 0,34 mmol) a temperatura ambiente durante 1 h. La solución previamente preparada de amina en piridina se añadió entonces a la mezcla de DMAP y cromona y la mezcla se agitó durante 96 h a temperatura ambiente y se monitorizó mediante LCMS para confirmar la presencia del producto deseado. Luego, la mezcla se concentró a presión reducida, se disolvió en DCM (15 mL) y se purificó mediante columna de extracción de fase sólida PEAX-SCX columna de captura (ácido /base) SPE, se eluyó con DCM y luego metanol para obtener el producto deseado 8-am¡no-N-[(4,4-d¡fluoro-1-h¡drox¡c¡dohex¡l)met¡l]-7-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxam¡da (67 mg, 0,17 mmol), 51 % de rendimiento como un sólido amarillo pálido. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 89,26 (t, J=6,4 Hz, 1H), 7,29 - 7,18 (m, 2H), 6,82 (s, 1H), 6,22 (s, 2H), 4,79 (s, 1H), 3,36 (d, J=6,6 Hz, 2H), 2,11 - 1,84 (m, 4H), 1,67 - 1,56 (m, 4H); LCMS m/z 371 (M+H)+
Prep. 55: 1-(5-fluoro-2-h¡drox¡-3-n¡tro-fen¡l)-etanona
Figure imgf000106_0002
A una solución agitada de 1-(5-fluoro-2-hidroxifenil)-etanona (10 g, 13 mmol) en ácido acético (80 ml), conc. Se añadió HNO3 (4,9 ml, 110 mmol) por goteo a 0 °C y se dejó agitar a temperatura ambiente durante 16 h. Después de completar el material de partida mediante TLC, la masa de reacción se vertió en agua helada y el precipitado sólido se filtró. El material sólido se lavó con agua helada, se formó un sistema azeotrópico con tolueno y se secó a presión reducida para obtener 1-(5-fluoro-2-h¡drox¡-3-n¡tro-fen¡l)-etanona (11,5 g, 89%) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6 ): 8 12,56 (brs, 1H), 8,24 (dd, J= 3,2, 8,0 Hz, 1H), 8,18 (dd, J= 3,24, 8,56 Hz, 1H), 2,70 (s, 3H). LCMS m/z 198 (M-H)+
Prep. 56: 6-fluoro-8-nitro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de etilo
Figure imgf000106_0003
A una solución agitada de 1-(5-fluoro-2-h¡drox¡-3-n¡tro-fen¡l)-etanona (5,0 g, 25 mmol) en DMF (120 ml) se añadió oxalato de dietilo (8,82 ml, 63 mmol) y se enfrió a 0 °C. Se añadió por goteo 1 M de sol de t-BuOK en THF (100 ml, 100,43 mmol) a 0 °C y se mantuvo durante 2 horas. Luego se ajustó el pH a 5-6 con HCl diluido y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para obtener el producto crudo. El material crudo se disolvió en etanol (120 ml) y se le añadió HCl conc. (8 ml). La mezcla de reacción se sometió a reflujo durante 16 h. La mezcla de reacción se concentró y el residuo (que contenía alguna cantidad de DMF) se tomó en acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con solución saturada de bicarbonato de sodio, agua y salmuera enfriada. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El material crudo se purificó mediante cromatografía en columna combinada ultrarrápida y se eluyó con acetato de etilo-hexano al 9% para obtener 6-fluoro-8-nitro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de etilo (3,8 g, 54%). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 88,65-8,63 (m, 1H), 8,17-8,15 (m, 1H), 7,09 (s, 1H), 4,41 (q, J= 6,96 Hz, 2H), 1,35 (t, J= 6,92 Hz, 3H). LCMS m/z 282 (M+H)+
Prep. 57: 8-amino-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de etilo
Figure imgf000107_0001
A una solución agitada de 6-fluoro-8-nitro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de etilo (3,8 g, 13,51 mmol) en etanol (15 ml) se le añadió una solución de NH4CI (3,61 g, 66 mmol) en agua (15 ml) seguida de la adición de polvo de hierro (2,26 g, 41 mmol). La mezcla de reacción se calentó hasta reflujo a 90 °C durante 1,5 h. Después de la conversión completa del material de partida (comprobado por TLC), el hierro se filtró y el filtrado se concentró. El residuo se dividió entre agua y acetato de etilo. La capa de acetato de etilo se lavó con agua y salmuera. Se secó con Na2SO4, se filtró y se concentró. El compuesto crudo se trituró con mezcla de éter-pentano para obtener 8-amino-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de etilo (2,5 g, 74%) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 86,90-6,87 (m, 2H), 6,79 (dd, J= 2,92, 8,44 Hz, 1H), 5,95 (s, 2H), 4,39 (q, J= 7,08 Hz, 2H), 1,36 (t, J= 7,04 Hz, 3H). LCMS m/z 252 (M+H)+
Prep. 58: acido 8-amino-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico
Figure imgf000107_0002
A una solución agitada de 8-amino-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxilato de etilo (3,0 g, 12 mmol) en metanol (10 ml) se añadió K2CO3 (4,95 g, 36 mmol) y se dejó agitar a temperatura ambiente durante 16 h. El residuo se concentró y el material crudo se vertió en agua helada. Se ajustó el pH a entre ~6 y 7 con HCI dil. y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera. Se secó con Na2SO4, se filtró y se concentró. El material crudo se trituró con éter dietílico para obtener ácido 8-amino-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico (2,05 g, 77%) como un sólido marrón. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 86,88-6,85 (m, 2H), 6,80-6,77 (m, 1H), 5,99 (brs, 2H). LCMS m/z 224 (M+H)+
Ejemplo 93: 8-amino-N-[(4,4-difluoro-1-hidroxi-ciclohexil)metil]-6-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxamida
Figure imgf000107_0003
Se preparó una mezcla de clorhidrato de N1-(aminometil)-4,4-difluoro-cidohexanol (241 mg, 1,19 mmol) en piridina (8 mL) a temperatura ambiente y se añadió trietilamina (0,56 mL, 409 mg, 4,04 mmol) y la mezcla se agitó durante 1 h. Se agitó una mezcla de 8-amino-7-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxilato de etilo (507 mg, 2,02mmol) en piridina (2 mL) y DMAP (272 mg, 2,22 mmol) a temperatura ambiente durante 1 h. La solución previamente preparada de amina en piridina se añadió entonces a la mezcla de DMAP y cromona y la mezcla se agitó durante 96 h a temperatura ambiente y se monitorizó mediante LCMS para confirmar la presencia del producto deseado. Luego, la mezcla se concentró a presión reducida, se disolvió en DCM (15 mL) y se purificó mediante columna de extracción de fase sólida. La mezcla se purificó a través de una columna SCX con una columna (de captura de compuestos básicos) SPE, eluida con DCM 20% metanol/DCM, y luego metanol para obtener el producto crudo deseado. El producto se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna para proporcionar 8-amino-N-[(4,4-difluoro-1-hidroxi-ciclohexil)metil]-6-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxamida (346 mg, 0,93 mmol), 46 % de rendimiento como un sólido amarillo pálido. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 89,18 (t, J=6,4 Hz, 1H), 6,85 - 6,75 (m, 3H), 6,59 (s, 2H), 4,79 (s, 1H), 3,37 (d, J=6,5 Hz, 2H), 2,08 -1,91 (m, 4H), 1,64 - 1,53 (m, 4H); LCMS m/z 371 (M+H)+
Ejemplo 94: 8-amino-N-[(4,4-difluorociclohexil)metil]-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida
Figure imgf000108_0001
A una solución agitada de ácido 8-amino-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico (0,15 g, 0,7 mmol) y (4,4-difluorociclohexil)metilamina (0,11 g, 0,7 mmol) en DMF (2 ml) se le añadió T3P (50% en acetato de etilo, 1,3 ml, 2 mmol) y DIPEA (0,6 ml, 3,4 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se calentó a 80 °C durante 16 h. La mezcla de reacción se vertió en agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El material crudo se purificó mediante cromatografía en columna seguida de HPLC preparativa (tampón de bicarbonato de amonio) para obtener 8-amino-N-[(4,4-difluorociclohexil)metil]-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida (88 mg, 37%) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 89,22 (brs, 1H), 6,82-6,74 (m, 3H), 6,55 (brs, 2H), 3,24-3,22 (m, 2H), 2,01-1,99 (m, 2H), 1,83-1,75 (m, 5H), 1,25-1,20 (m, 2H). LCMS m/z 355 (M+H)+
Ejemplo 95: 8-amino-W-[(3,3-difluorociclopentil)metil]-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida
Figure imgf000108_0002
A una solución agitada de ácido 8-amino-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico (0,1 g, 0,45 mmol) en DMF (3 mL) en un matraz se añadieron EdC.HCl (0,3 g, 1,6 mmol) y HOBT (0,22 g, 1,6 mmol) y se agitó durante 30 min. Después de 30 min, se añadió Et3N (0,32 ml, 2,2 mmol), (3,3-difluorociclopentil)metilamina (0,07 g, 0,54 mmol) y se dejó agitar a temperatura ambiente durante 48 h. La mezcla de reacción se vertió en agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con solución saturada de NaHCO3, agua y salmuera. Se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró. El material crudo se purificó mediante TLC preparativa (eluyente-5% metanol en diclorometano) para obtener 8-amino-W-[(3,3-difluorociclopentil)metil]-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida (7 mg, 5 %) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 89,21 (t, 1H, J = 5,8 Hz), 6,83-6,74 (m, 2H), 6,81 (s, 1H), 6,53 (s, 2H), 3,36-3,29 (m, 2H), 2,50-2,40 (m, 1H), 2,26-2,00 (m, 3H), 1,92-1,82 (m, 2H), 1,58-1,49 (m, 1H). LCMS m/z 341) (M+H)+
Ejemplo 96: 8-amino-6-fluoro-N-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida
Figure imgf000109_0001
A una solución agitada de éster etílico del ácido 8-amino-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico (100 mg, 0,4 mmol) en DCM (0,5 mL) se le añadió piridina (1 mL) y DMAP (47 mg, 0,4 mmol). A continuación, se añadió por goteo una solución de 1-aminometil-ciclohexanol (103 mg, 0,8 mmol) en DCM (0,5 mL) en la mezcla de reacción a temperatura ambiente. La mezcla resultante se dejó agitar a temperatura ambiente durante 16 h en atmósfera de argón. Luego se concentró a presión reducida, el residuo se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró. El material crudo se purificó mediante HPLC preparativa (tampón de bicarbonato de amonio) para proporcionar 8-amino-6-fluoro-W-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida (25 mg, 19%) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 89,05 (t, 1H, J= 6,2 Hz), 6,83-6,74 (m, 2H), 6,82 (s, 1H), 6,58 (s, 2H), 4,35 (s, 1H), 3,31-3,28 (m, 2H), 1,56-1,31 (m, 9H), 1,23-1,16 (m, 1H). LCMS m/z 335 (M+H)+
Ejemplo 97: 8-amino-6-fluoro-N-[(1-fluorociclohexil)metil]-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida
Figure imgf000109_0002
A una solución agitada de ácido 8-amino-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico (0,13 g, 0,6 mmol) y (1-fluorociclohexil)metanamina (0,115 g, 0,9 mmol) en DMF (1 ml) se le añadió T3P (50% en acetato de etilo, 1,2 ml, 1,749 mmol) y piridina (0,193 ml, 2,3 mmol). La masa de reacción se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se vertió en agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con solución saturada de NaHCO3, solución de HCl 1N, agua y salmuera. Se secó con Na2SO4, se filtró y se concentró. El material crudo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida combinada seguida de trituración con éter dietílico y n-pentano para proporcionar 8-amino-6-fluoro-N-[(1-fluorociclohexil)metil]-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida (0,12 g, 61%) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 89,32 (t, J= 6,0 Hz, 1H), 6,83-6,74 (m, 3H), 6,61 (brs, 2H), 3,53 (dd, J= 6,0, 21 Hz, 2H), 1,76-1,72 (m, 2H), 1,55-1,47 (m, 7H), 1,25-1,22 (m, 1H). LCMS m/z 337 (M+H)+
Ejemplo 98: 8-amino-6-fluoro-N-[(4-hidroxiciclohexil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida
Figure imgf000109_0003
Se preparó una mezcla de N-[(4-oxociclohexil)metil]carbamato de ferf-butilo (316 mg, 1,39 mmol) en metanol (10 mL) a temperatura ambiente y se agitó en nitrógeno. Luego se añadió borohidruro de sodio (59 mg, 1,53 mmol) en una porción y la mezcla se agitó durante 45 minutos. La TLC (teñida en KMnO4) no mostró material de partida y la mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en DCM (20 mL), se lavó con agua (5 mL), los orgánicos estaban turbios, por lo que se añadió salmuera (1 mL) y los orgánicos se filtraron a través de un separador de fases. Los orgánicos se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron a presión reducida. Se disolvió el aceite intermedio crudo (aminociclohexanol protegido con Boc) en DCM (10 mL), se añadió TFA (1 mL) a la mezcla y se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. La TLC no mostró presencia de material de partida y la mezcla se concentró a presión reducida. Luego, la mezcla se diluyó con metanol (5 mL) y se basificó con amoníaco/metanol 7 M (hasta aproximadamente pH 10) y la mezcla se concentró a presión reducida. Alcohol amino puro no aislado y utilizado en la etapa de amidación como una mezcla de amina con sal de amonio y utilizado sin más purificación.
Se preparó una mezcla de 8-amino-6-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxilato de etilo (130 mg, 0,52 mmol) en THF (6 mL) a temperatura ambiente y se añadió monohidrato de hidróxido de litio (23 mg, 0,55 mmol) en agua (2 mL) en una porción y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La LCMS (modo neg) mostró una masa de 222 (M-H+) solamente y la mezcla se concentró hasta secarla a presión reducida. Luego se disolvió el intermedio de carboxilato crudo en DMF (6 mL), se añadió HBTU y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de aminoalcohol/sal preparada previamente se suspendió en DMF (3 mL), se añadió en una porción y la mezcla se agitó durante 20 h a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con acetato de etilo (40 mL) y se lavó con LiCI ac. al 5%. (2 x 10 mL), salmuera (10 mL), los productos orgánicos se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron a presión reducida. A continuación, la mezcla cruda se disolvió en metanol (20 mL) y se filtró a través de una columna de captura de ácido (SAX) y el filtrado se concentró a presión reducida. Luego, la mezcla se purificó mediante HPLC autopreparativa de espectrometría de masas para proporcionar el compuesto deseado 8-amino-6-fluoro-N-[(4-hidroxiciclohexil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida (4 mg, 0,01 mmol), 2% de rendimiento como un sólido blancuzco. RMN 1H (400 MHz, MeOD) 87,01 (s, 1H), 6,93 (dd, J=3,0, 8,8 Hz, 1H), 6,87 (dd, J=3,0, 10,3 Hz, 1H), 3,56 - 3,49 (m, 1H), 3,30 (d, J=6,8 Hz, 2H), 2,02 - 1,96 (m, 2H), 1,90 - 1,83 (m, 2H), 1,70 - 1,61 (m, 1H), 1,33 - 1,22 (m, 2H), 1,16 - 1,05 (m, 2H) (no se observó amida NH, anilina NH2 ni OH); LCMS m/z 335 (M+H)+
Ejemplo 99: 8-amino-N-(ciclohexilmetil)-6-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxamida
Figure imgf000110_0001
A una solución de ácido 8-amino-6-fluoro-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxílico (3,80 g, 15,13 mmol, 1,00 eq) en MeCN (40 mL) se añadió 3-metilpiridina (4,23 g, 45,39 mmol, 4,41 mL, 3,00 eq), MsCI (1,91 g, 16,64 mmol, 1,29 mL, 1,10 eq) y ciclohexilmetanamina (1,88 g, 16,64 mmol, 2,17 mL, 1,10 eq) a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 1 hora. La mezcla se vertió en agua (200 mL). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (200 mL * 2). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (300 mL * 2), se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa (columna: Phenomenex luna C18 250*50mm*10 um; fase móvil: [agua (0,1%TFA)-ACN]; B%: 35Ac N%-60ACN%, 29MIN; 60%min). La fracción se concentró al vacío para proporcionar 8-amino-N-(ciclohexilmetil)-6-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxamida (1,25 g, 3,91 mmol, 26% de rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 89,16-9,13 (m, 1H), 6,83-6,74 (m, 3H), 6,56 (s, 2H), 3,19-3,16 (t, J= 6,4 Hz, 1H), 1,73- 1,21-1,13 (m, 3H), 0,98-0,93 (m, 2H). LCMS m/z 335 (M+H)+.
Ejemplo 100: N-(ciclohexilmetil)-6-fluoro-8-(metanosulfonamido)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida
Figure imgf000110_0002
A una solución de 8-amino-N-(ciclohexilmetil)-6-fluoro-4-oxo-cromeno-2-carboxamida (50 mg, 0,1571 mmol) en DCM (1 mL) DMF (0,5 mL), se añadió DIPEA (41 mg, 0,3 mmol) seguido de cloruro de metanosulfonilo (18 mg, 0,2 mmol) y la mezcla de reacción se agitó en nigrógeno a temperatura ambiente durante la noche. Después de ese tiempo, solo se detectaron trazas de producto mediante LCMS (procedimiento básico), por lo que se añadió un equivalente más de DIPEA (41 mg, 0,3 mmol) y cloruro de metanosulfonilo (18 mg, 0,2 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante la noche y luego la mezcla de reacción se calentó a 50 °C y se agitó durante otras 4 h. La mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, entonces se lavó la fase orgánica con solución saturada deNH4Cl, se secó y se

Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Compuesto que se encuentra dentro del alcance de fórmula C-III
Figure imgf000119_0001
donde n es 1 o 2;
donde X es un enlace;
donde Rx es un grupo ciclohexilo, ciclopentilo, ciclobutilo, tetrahidropiranilo o benzoxazol, pudiendo estar cada uno de dichos grupos Rx opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente de: OH, CH3 o F;
donde Rp es H o CH3 y donde cuando Rp es H, n es 1 o 2, y donde cuando Rp es CH3, n es 1;
donde R2 es H, OH, F, Cl, Br, -CH3, -CH2CH3, -OCH3 o -CN;
donde R3 es H, OH, F, Cl o -O(CH2)2NH2;
donde R4 es H, F, Br, OH, -OCH3, -C(O)NH2, -CH2OH, -C(O)OH, -NH2, - NHSO2CH3, -SO2NH2 o un grupo 1 H-tetrazol-5-ilo;
donde R5 y R6 se seleccionan cada uno independientemente entre H o CH3; con la condición de que cuando R2 = R3 = R4 = R5 = R6 = H, Rp no es H o Rx no es ciclohexilo; y donde el compuesto que se encuentra en la fórmula C-III es uno de los siguientes cuatro compuestos
el compuesto es fluoro-8-hidroxi-W-((1-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
el compuesto es W-(ciclohexilmetil)-7-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida;
el compuesto es 8-fluoro-6-hidroxi-N-((1-hidroxiciclohexil)metil)-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida; o
el compuesto es 6-hidroxi-N-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida;
o una sal, un hidrato, solvato, isómero óptico, geométrico o tautomérico, o polimorfo del mismo, veterinaria o farmacéuticamente aceptable.
2. Compuesto de fórmula S-I
Figure imgf000119_0002
donde R2 es H, OH, F, Cl, Br, -CH3, -CH2CH3, -OCH3 o -CN;
donde R3 es H, OH, F, Cl o -O(CH2)2NH2;
donde R5 y R6 se seleccionan cada uno independientemente entre H o CH3;
y donde R7 representa un grupo -X-Rx donde X está representada por un grupo -(CH2)ndonde n es 1 o 2 o un grupo -CH(CH3)-; y donde Rx es un grupo ciclohexilo, ciclopentilo, ciclobutilo, tetrahidropiranilo o benzoxazol, pudiendo estar cada uno de dichos grupos Rx opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente de: OH, CH3, o F; o una sal, un hidrato, solvato, isómero óptico, geométrico o tautomérico, o polimorfo del mismo, veterinaria o farmacéuticamente aceptable.
3. Compuesto según cualquier reivindicación anterior que tiene una pCE50 para Pf 3D7 de 5 o más, preferentemente 5,5 o más, más preferentemente 6 o más, especialmente 6,5 o 7 o más.
4. Compuesto según cualquier reivindicación anterior que tiene una pCE50 para Pf KRS1 de 6 o más, preferentemente 6,3 o más, más preferentemente 6,5 o más, especialmente 7 o más.
5. Compuesto según cualquier reivindicación anterior que tiene una pCEso para Crytosporidium parvum de 5 o más, preferentemente 5,5 o más, más preferentemente 6 o más, especialmente 6,5 o 7 o más.
6. Composición farmacéutica que comprende un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una sal, un solvato, hidrato, isómero óptico, geométrico o tautomérico, o polimorfo del mismo, farmacéuticamente aceptable según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, junto con uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables, incluyendo opcionalmente la composición farmacéutica uno o más agentes terapéuticos adicionales.
7. Compuesto de fórmula I
Figure imgf000120_0001
donde R1 es H u OH;
donde R2 es H, OH, CN, halógeno, un grupo alquilo -(C1-C3), un grupo alcoxi -O-(C1-C3), un grupo -C(O)(C1-C3), un grupo C(O)NR8R9, un grupo metilciclohexilo C(NH)NH,
donde dichos grupos alquilo -(C1-C3) (R2) o alcoxi -O-(C1-C3) (R2) pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: OH; halógeno; o CN;
donde R3 es H, OH, CN, halógeno, un grupo alquilo -(C1-C3) en donde dicho grupo alquilo -(C1-C3) (R3) puede estar opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: OH; halógeno; o CN;
donde R4 es H, OH, CN, halógeno, un grupo alquilo -(C1-C3), un grupo alcoxi -O-(C1-C3), un grupo -C(O)R10, -NR8R9, un grupo -SO2NR8R9, un grupo -N(R10)SO2R10 o un grupo heterocíclico ligado a C que contiene de uno a tres heteroátomos de O o N;
donde dichos grupos alquilo -(C1-C3) (R4) pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: OH; halógeno; o CN,
donde dichos grupos alcoxi -O-(C1-C3) (R4) pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: NR11R12; o un grupo heterocíclico de 6 miembros ligado a C que opcionalmente puede estar sustituido independientemente por uno o más grupos halógeno, metilo, etilo u OH;
donde R5 y R6 son cada uno independientemente H, o un grupo alquilo -(C1-C3);
donde R7 representa un grupo -X-Rx,
donde X es un enlace o un grupo alquilo -(C1-C3), y está representada por un grupo -(CH2)n, donde n es 0, 1, 2 o 3, o un grupo -[(CH2)m-CH(CH3)]p-, donde m y p son cada uno independientemente 0 o 1,
donde Rx es:
(i) un anillo de cicloalquilo de 4, 5, 6 o 7 miembros saturado o insaturado ligado a C, estando dicho anillo de cicloalquilo
(Rx) opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: OH; halógeno; o -(CH2)q-Y, donde q es 0, 1 o 2 y donde Y es H, NR13R14 o CO2R15
(ii) un anillo heterocíclico de 4, 5 o 6 miembros saturado o insaturado ligado a C o N, que contiene uno o más heteroátomos seleccionados entre O, N o S, estando dicho anillo heterocíclico (Rx) opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: un grupo alquilo -(C1-C3); un grupo alcoxi -O-(C1-C3); un anillo de cicloalquilo -(C3-C5); un grupo -C(O)R10; un grupo -SO2R16; y donde dicho anillo heterocíclico
(Rx) opcionalmente sustituido está opcionalmente fusionado a un anillo saturado o insaturado de 5 o 6 miembros que contiene opcionalmente uno o dos átomos de O;
(iii) un grupo arilo o heteroarilo, estando dichos grupos arilo o heteroarilo opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: halógeno; un grupo -SO2NR17R18; un grupo -(CH2)q-Y donde q es 0, 1 o 2 y donde Y es H, NR13R14, o CO2R15; un grupo -C(O)R10; o un grupo -C(O)NR17R18; y donde dichos grupos arilo o heteroarilo (Rx) opcionalmente sustituidos están opcionalmente fusionados a un anillo heterocíclico saturado o insaturado de 5 o 6 miembros que contiene uno o dos átomos de O y/o N;
(iv) un grupo alquilo -(C1-C4) opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: halógeno;
(v) un grupo -SO2R16;
donde R8, R9, R10, R17 y R18 se seleccionan cada uno independientemente entre: H; o alquilo -(C1-C3);
donde R13 y R14 se seleccionan independientemente entre H, CO2R19 y COR19 u opcionalmente R13, R14 y el nitrógeno del grupo -NR13R14 definen conjuntamente un anillo heterocíclico saturado o insaturado de 4, 5, 6 o 7 miembros, que está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: OH, halógeno o alquilo C1 a C6 de cadena lineal o ramificada;
donde R19 se selecciona entre alquilo C1 a C6 de cadena lineal o ramificada;
donde R15 se selecciona entre H y alquilo C1 a C6 de cadena lineal o ramificada;
donde R11 y R12 se seleccionan independientemente entre: H; o un grupo alquilo -(C1-C3), o donde junto con el átomo de -N del grupo -NR11R12-amina, los grupos N, R11 y/o R12 forman un grupo heterocíclico de anillo saturado o insaturado de 4, 5 o 6 miembros ligado a -N;
donde R16 es H, un grupo alquilo -(C1-C3), o NH2; con la condición de que cuando
Figure imgf000120_0002
R2 = R3 = R4 no es -(CH2)-ciclohexilo;
o una sal, un hidrato, solvato, isómero óptico, geométrico o tautomérico, o polimorfo del mismo, veterinaria o farmacéuticamente aceptable;
para su uso en el tratamiento o la prevención de una o más enfermedades infecciosas.
8. Composición farmacéutica que comprende un compuesto según la reivindicación 7, o una sal, un solvato, hidrato, isómero óptico, geométrico o tautomérico, o polimorfo del mismo, farmacéuticamente aceptable según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, junto con uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables, incluyendo opcionalmente la composición farmacéutica uno o más agentes terapéuticos adicionales para su uso en el tratamiento o la prevención de una o más enfermedades infecciosas.
9. Compuesto de fórmula I según la reivindicación 7 para su uso según la reivindicación 7 o una composición farmacéutica según la reivindicación 8 para su uso en el tratamiento o la prevención de una o más enfermedades infecciosas, siendo el compuesto 6-hidroxi-N-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-4-oxo-cromeno-2-carboxamida.
10. Compuesto de fórmula I según la reivindicación 7 para su uso según la reivindicación 7 o una composición farmacéutica según la reivindicación 8 para su uso en el tratamiento o la prevención de una o más enfermedades infecciosas, siendo el compuesto fluoro-8-hidroxi-W-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
11. Compuesto de fórmula I según la reivindicación 7 para su uso según la reivindicación 7 o una composición farmacéutica según la reivindicación 8 para su uso en el tratamiento o la prevención de una o más enfermedades infecciosas, siendo el compuesto W-(ciclohexilmetil)-7-fluoro-8-hidroxi-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
12. Compuesto de fórmula I según la reivindicación 7 para su uso según la reivindicación 7 o una composición farmacéutica según la reivindicación 8 para su uso en el tratamiento o la prevención de una o más enfermedades infecciosas, siendo el compuesto 8-fluoro-6-hidroxi-W-[(1-hidroxiciclohexil)metil]-4-oxo-4H-cromeno-2-carboxamida.
13. Compuesto de fórmula I según cualquiera de las reivindicaciones 7, 9, 10, 11 o 12 o una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12 para su uso en el tratamiento o la prevención de una o más enfermedades infecciosas donde las enfermedades infecciosas están seleccionadas independientemente entre: malaria, criptosporidiosis, tuberculosis (TBC), tripanosomiasis africana humana (TAH), tripanosomiasis africana animal (TAA), enfermedad de Chagas, esquistosomiasis y/o leishmaniosis.
14. Compuesto de fórmula I
Figure imgf000121_0001
donde R1 es H u OH;
donde R2 es H, OH, CN, halógeno, un grupo alquilo -(C1-C3), un grupo alcoxi -O-(C1-C3), un grupo -C(O)(C1-C3), un grupo C(O)NR8R9, un grupo metilciclohexilo C(NH)NH,
donde dichos grupos alquilo -(C1-C3) (R2) o alcoxi -O-(C1-C3) (R2) pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: OH; halógeno; o CN;
donde R3 es H, OH, CN, halógeno, un grupo alquilo -(C1-C3) en donde dicho grupo alquilo -(C1-C3) (R3) puede estar opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: OH; halógeno; o CN; donde R4 es H, OH, CN, halógeno, un grupo alquilo -(C1-C3), un grupo alcoxi -O-(C1-C3), un grupo -C(O)R10, -NR8R9, un grupo -SO2NR8R9, un grupo -N(R10)SO2R10 o un grupo heterocíclico ligado a C que contiene de uno a tres heteroátomos de O o N
donde dichos grupos alquilo -(C1-C3) (R4) pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: OH; halógeno; o CN,
donde dichos grupos alcoxi -O-(C1-C3) (R4) pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: NR11R12; o un grupo heterocíclico de 6 miembros ligado a C que opcionalmente puede estar sustituido independientemente por uno o más grupos halógeno, metilo, etilo u OH; donde R5 y R6 son cada uno independientemente H, o un grupo alquilo -(C1-C3);
donde R7 representa un grupo -X-Rx,
donde X es un enlace o un grupo alquilo -(C1-C3), o está representada por un grupo -(CH2)n, donde n es 0, 1, 2 o 3, o un grupo -[(CH2)m-CH(CH3)]p-, donde m y p son cada uno independientemente 0 o 1,
donde Rx es:
(i) un anillo de cicloalquilo de 4, 5, 6 o 7 miembros saturado o insaturado ligado a C, estando dicho anillo de cicloalquilo (Rx) opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: OH; halógeno; o -(CH2)q-Y, donde q es 0, 1 o 2 y donde Y es H, NR13R14 o CO2R15
(ii) un anillo heterocíclico de 4, 5 o 6 miembros saturado o insaturado ligado a C o N, que contiene uno o más heteroátomos seleccionados entre O, N o S, estando dicho anillo heterocíclico (Rx) opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: un grupo alquilo -(C1-C3); un grupo alcoxi -O-(C1-C3); un anillo de cicloalquilo -(C3-C5); un grupo -C(O)R10; un grupo -SO2R16; y donde dicho anillo heterocíclico (Rx) opcionalmente sustituido está opcionalmente fusionado a un anillo saturado o insaturado de 5 o 6 miembros que contiene opcionalmente uno o dos átomos de O;
(iii) un grupo arilo o heteroarilo, estando dichos grupos arilo o heteroarilo opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: halógeno; un grupo -SO2NR17R18; un grupo -(CH2)q-Y donde q es 0, 1 o 2 y donde Y es H, NR13R14, o CO2R15; un grupo -C(O)R10; o un grupo -C(O)NR17R18; y donde dichos grupos arilo o heteroarilo (Rx) opcionalmente sustituidos están opcionalmente fusionados a un anillo heterocíclico saturado o insaturado de 5 o 6 miembros que contiene uno o dos átomos de O y/o N;
(iv) un grupo alquilo -(C1-C4) opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: halógeno;
(v) un grupo -SO2R16;
donde R8, R9, R10, R17 y R18 se seleccionan cada uno independientemente entre: H; o alquilo -(C1-C3);
donde R13 y R14 se seleccionan independientemente entre H, CO2R19 y COR19 u opcionalmente R13, R14 y el nitrógeno del grupo -NR13R14 definen conjuntamente un anillo heterocíclico saturado o insaturado de 4, 5, 6 o 7 miembros, que está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: OH, halógeno o alquilo C1 a C6 de cadena lineal o ramificada;
donde R19 se selecciona entre alquilo C1 a C6 de cadena lineal o ramificada;
donde R15 se selecciona entre H y alquilo C1 a C6 de cadena lineal o ramificada;
donde R11 y R12 se seleccionan independientemente entre: H; o un grupo alquilo -(C1-C3), o donde junto con el átomo de -N del grupo -NR11R12-amina, los grupos N, R11 y/o R12 forman un grupo heterocíclico de anillo saturado o insaturado de 4, 5 o 6 miembros ligado a -N;
donde R16 es H, un grupo alquilo -(C1-C3), o NH2; con la condición de que cuando R1 = R2 = R3 = R4 = R5 = R6 = H, R7 no es -(CH2)-ciclohexilo;
o una sal, un hidrato, solvato, isómero óptico, geométrico o tautomérico, o polimorfo del mismo, veterinaria o farmacéuticamente aceptable; o
una composición farmacéutica según la reivindicación 6 para su uso en el tratamiento o la prevención de una o más infecciones bacterianas.
15. Compuesto de fórmula I según la reivindicación 14, o composición farmacéutica según la reivindicación 6 para su uso en el tratamiento o prevención de una o más infecciones por bacterias grampositivas y/o gramnegativas, en donde las infecciones bacterianas se seleccionan independientemente de: infecciones bacterianas derivadas de: uno o más de Streptococcus pneumoniae y/o Enterococcus; o uno o más del grupo ESKAPE de especies bacterianas, Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumanii, Pseudomonas aeruginosa y/o Enterobacter.
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