ES2927568T3 - Composición cosmética que comprende un aceite esencial de siempreviva y un extracto de Origanum - Google Patents
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Abstract
La presente invención se refiere a una composición cosmética que contiene un aceite esencial de siempreviva y un extracto terpénico de al menos una planta del género Origanum, en particular Origanum majorana, y al uso cosmético de la misma en el cuidado de la piel, en particular para combatir los signos de la edad en la piel. y/o piel seca. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)
Description
DESCRIPCIÓN
Composición cosmética que comprende un aceite esencial de siempreviva y un extracto de Origanum
Objeto de la invención
La presente invención se refiere a una composición cosmética que engloba un aceite esencial de siempreviva y un extracto terpénico de al menos una planta del género Origanum, en particular de Origanum majorana, así como a su uso cosmético para el cuidado de la piel, en particular para combatir los signos cutáneos del envejecimiento y/o la sequedad de la piel.
Antecedentes de la invención
El envejecimiento de la piel está determinado por factores genéticos y ambientales. Suele distinguirse entre envejecimiento intrínseco o cronológico, que afecta a la piel como a otros órganos y corresponde a los cambios inevitables ligados a la edad, del envejecimiento extrínseco que está ligado a factores ambientales y en particular a cambios clínicos, histológicos y funcionales característicos de la piel ligados a la exposición crónica al sol y por lo tanto asentados en las áreas fotoexpuestas.
Estos dos procesos están íntimamente asociados y, en ambos casos, la producción de especies reactivas de oxígeno (ERO), que conducen al estrés oxidativo, es un factor determinante en el envejecimiento de la piel. Se define como un exceso de radicales libres presentes en el organismo como resultado de una producción excesiva por diversos mecanismos fisiológicos o fenómenos tóxicos exógenos (tales como el tabaco, la contaminación, la luz azul o la exposición a la radiación UV). Estas especies reactivas de oxígeno (ERO) y los radicales libres pueden generarse así por el metabolismo celular, tales como la respiración mitocondrial, o bien por la desintoxicación de xenobióticos o radiación solar.
En principio, esta producción fisiológica de radicales libres está controlada por los sistemas de defensa celular. Sin embargo, estos se ven afectados por diversos factores, tales como un déficit de antioxidantes o una disminución de la actividad de las enzimas antioxidantes o también por la sobreproducción de especies reactivas de oxígeno, lo que conduce así a un desequilibrio del equilibrio de defensas antioxidantes/prooxidantes y, por lo tanto, a un estado de estrés oxidativo. Está ampliamente aceptado que este estrés oxidativo juega un papel importante en el envejecimiento de la piel. Especialmente, la degradación de los lípidos y proteínas de la piel bajo el efecto del estrés oxidativo conlleva la flacidez de la piel, la formación de arrugas y manchas pigmentarias y una pérdida de elasticidad de la piel y de luminosidad de la tez. También se ha observado que el óxido nítrico producido en exceso durante un desequilibrio del equilibrio redox inhibía la síntesis de las proteínas necesarias para la cornificación de la epidermis y por lo tanto perturbaba la función de barrera.
Otros fenómenos conllevan una alteración de la función de barrera y, especialmente, la reducción de la capacidad de renovación y diferenciación de los queratinocitos ligada al envejecimiento. La alteración de la barrera epidérmica da como resultado la deshidratación de la epidermis y a su vez conlleva una mayor permeabilidad de la piel a los agentes oxidantes y contaminantes.
Se entiende por lo tanto el interés de disponer de medios que permitan reforzar la barrera cutánea y proteger la piel frente al estrés oxidativo.
La solicitante ya ha propuesto utilizar un aceite esencial de siempreviva, rico en compuestos terpénicos, como agente antienvejecimiento, por sus propiedades antirradicales e hidratantes (documento WO 03/018730), o para reforzar la función de barrera (documento WO 2012/153064).
Entre las otras plantas de la cuenca mediterránea descritas como eficaces contra el estrés oxidativo se pueden citar los polifenoles (documento EP 3069710) o ácido carnósico (documento US 9040066) procedentes de mejorana u Origanum majorana. Otros extractos de mejorana también son conocidos como principios activos antienvejecimiento. Así, la compañía BASF comercializa, bajo el nombre comercial Dermagenist®, un extracto acuoso de mejorana rico en terpenos, por sus propiedades inhibidoras de la metilación del ADN. Se sugiere así que este extracto podría ser útil para estimular la formación de fibras elásticas que se degradan con la edad y bajo el efecto de la exposición a la radiación UV (documento FR 2999926).
Sin embargo, persiste la necesidad de proporcionar una composición cosmética que permita combatir eficazmente los signos del envejecimiento de la piel y en particular reforzar la barrera cutánea y la respuesta de la piel al estrés oxidativo.
Sumario de la invención
El solicitante ha demostrado que la combinación de un extracto terpénico de Origanum con un aceite esencial de siempreviva activaba sinérgicamente la ruta de Nrf2 que se sabe que está ligada con la respuesta al estrés oxidativo. El factor de transcripción Nrf2 es, de hecho, un potente activador de la transcripción que juega un papel básico en la expresión inducible de numerosos genes citoprotectores en respuesta al estrés oxidativo y electrofílico. Los genes diana de Nrf2 están particularmente implicados en la síntesis de glutatión, la eliminación de especies reactivas de
oxígeno y las enzimas de desintoxicación celular. La solicitante también ha puesto en evidencia un aumento, también sinérgico, en la expresión de genes implicados en el proceso de diferenciación epidérmica mediante la combinación de un extracto terpénico de Origanum con un aceite esencial de siempreviva. A la solicitante le pareció así que la combinación anteriormente mencionada permitía formular una composición cosmética eficaz contra los signos del envejecimiento de la piel y/o la sequedad de la piel.
En este contexto, la invención tiene como objeto una composición cosmética que comprende un aceite esencial de siempreviva y un extracto terpénico de al menos una planta del género Origanum.
También tiene como objeto el uso de la composición anteriormente mencionada para combatir los signos del envejecimiento de la piel, especialmente la formación de arrugas, la flacidez de la piel y la pérdida de luminosidad de la tez, debidos en particular a la exposición a la luz azul, a la radiación UV, al tabaco y/o a la contaminación y/o para combatir la sequedad de la piel.
La invención también tiene como objeto un procedimiento cosmético para combatir los signos del envejecimiento de la piel, especialmente la formación de arrugas, la flacidez de la piel y la pérdida de luminosidad de la tez, debidos en particular a la exposición a la luz azul, a la radiación UV, al tabaco y/o a la contaminación, y/o para combatir la sequedad de la piel, que comprende la aplicación tópica sobre la piel de la composición anteriormente mencionada.
Descripción detallada
La presente invención emplea un aceite esencial de siempreviva. Entre las especies de siemprevivas susceptibles de ser utilizadas según la invención, se mencionarán todas las pertenecientes al género Helichrysum y, en particular Helichrysum italicum (o Helichrysum angustifolium D.C), que es la siempreviva de Italia, Helichrysum arenarium, quien es la siempreviva de las arenas, y Helichrysum stoechas o siempreviva común, sin que esta lista sea exhaustiva. Preferiblemente, se utiliza un aceite esencial de Helichrysum italicum, independientemente de la subespecie considerada.
Por "aceite esencial" se entiende en esta descripción el producto de la hidrodestilación o destilación por arrastre de vapor de los compuestos orgánicos volátiles presentes en cualquier parte de la siempreviva o de la planta entera, y más particularmente en sus partes aéreas como por ejemplo sus flores o sumidades floridas.
El aceite esencial de siempreviva representa ventajosamente de 0,001 a 5 % en peso y preferiblemente de 0,001 a 0,1 % en peso, con respecto al peso total de la composición según la invención.
Se asocia, en esta composición, con un extracto terpénico de al menos una planta del género Origanum, especialmente las especies Origanum vulgare y Origanum majorana. Preferiblemente, la planta del género Origanum pertenece a la especie Origanum majorana.
Se puede utilizar un extracto obtenido de toda o parte de la planta del género Origanum, especialmente la raíz, el tallo, la corteza, la flor, la semilla, el germen y/o la hoja y preferiblemente de las partes aéreas elegidas entre el tallo, las hojas y sus mezclas, más preferiblemente las hojas.
El extracto puede obtenerse por cualquier procedimiento adecuado para la extracción de una fracción mayoritaria en peso de compuestos terpénicos y especialmente por extracción con la ayuda de un disolvente polar prótico que comprende, preferiblemente constituido por, al menos un disolvente elegido entre el agua, un monoalcohol (tal como etanol o isopropanol), un glicol (tal como propilenglicol o butilenglicol), un poliol (tal como xilitol) y sus mezclas. La extracción se puede realizar en frío (maceración) o en caliente, preferiblemente a una temperatura de 4 a 20 °C. La cantidad de planta empleada puede representar de 1 a 10 % en peso, con respecto al peso de disolvente o disolventes. A la etapa de extracción le sigue generalmente una etapa de separación de la materia sólida y del sobrenadante, por ejemplo por centrifugación, de recuperación del sobrenadante, especialmente por filtración, y eventualmente de destilación. El extracto obtenido se puede secar opcionalmente por atomización y/o liofilización. Las etapas de desodorización y/o decoloración del extracto pueden realizarse después de la extracción, en cualquier estadio del procedimiento descrito anteriormente.
Tal extracto de Origanum majorana está disponible especialmente de la compañía BASF bajo el nombre comercial Dermagenist®.
El extracto de Origanum representa ventajosamente de 0,001 a 5 % en peso y preferiblemente de 0,01 a 0,4 % en peso, con respecto al peso total de la composición según la invención.
Como se desprende de los ejemplos siguientes, se ha demostrado que la combinación de extractos vegetales según la invención permite activar sinérgicamente la expresión de genes implicados en la defensa de la piel frente a fenómenos de oxidación y de genes implicados en la regulación de la diferenciación epidérmica.
Por “sinergia”, se entiende en el marco de esta descripción que el efecto obtenido utilizando la combinación de extractos según la invención es significativamente mayor que el efecto obtenido utilizando uno cualquiera de los dos extractos.
La combinación anteriormente mencionada se incluye en una composición cosmética que generalmente engloba un
medio fisiológicamente aceptable, en particular un medio cosméticamente aceptable, es decir, que no genera hormigueo o enrojecimiento incompatible con el uso cosmético. Este medio engloba preferiblemente una fase acuosa (que contiene por ejemplo el extracto de Origanum) y una fase grasa (que contiene generalmente aceite esencial de siempreviva). Se prefiere que la composición esté en forma de emulsión de aceite en agua o de agua en aceite o de dispersión de aceite en agua.
La fase acuosa engloba agua y eventualmente al menos un constituyente elegido entre los polioles y los gelificantes acuosos. El agua representa ventajosamente del 40 al 80 %, por ejemplo, del 60 al 70 % del peso total de la composición. El poliol puede elegirse especialmente entre la glicerina, el propilenglicol, el butilenglicol, el pentilenglicol y sus mezclas y puede representar del 5 al 30 %, preferiblemente del 15 al 25 % del peso total de la composición.
Por “gelificante acuoso”, se entiende un compuesto polimérico capaz de inmovilizar moléculas de agua al hidratarse y de aumentar así la viscosidad de la fase acuosa. Tal gelificante puede elegirse entre: polisacáridos, tales como: celulosa y sus derivados, almidones modificados, carragenano, agar agar, goma xantana y gomas vegetales tales como goma guar o de algarroba; polímeros sintéticos y especialmente homopolímeros de acrilato de sodio eventualmente reticulados, así como copolímeros acrílicos, en particular copolímeros de acrilato de sodio y/o (met)acrilato de alquilo y/o (met)acrilato de hidroxialquilo y/o (met)acrilato de (polietoxi)alquilo, eventualmente con al menos otro monómero, ventajosamente ácido 2-acrilamido-2-metilpropanosulfónico (AMPS), estando eventualmente reticulados estos copolímeros; y sus mezclas.
Por su parte, la fase grasa puede comprender uno o más aceites volátiles y/o no volátiles. Son ejemplos de aceites volátiles los alcanos ramificados, tales como el isododecano y los alcanos C10-C13 lineales. Como aceites no volátiles, se pueden mencionar especialmente:
- ésteres de ácidos y de monoalcohol elegidos entre: mono- y poliésteres de ácidos C2-C10 lineales saturados (preferiblemente C6-C10) y de monoalcoholes C10-C18 lineales saturados (preferiblemente C10-C14), mono- y poliésteres de ácidos C10-C20 lineales saturados y monoalcoholes C3-C20 ramificados o insaturados (preferiblemente C3-C10); mono- y poliésteres de ácidos C5-C20 ramificados o insaturados y de monoalcoholes C5-C20 ramificados o insaturados; mono- y poliésteres de ácidos C5-C20 ramificados o insaturados y de monoalcoholes C2-C4 lineales;
- triglicéridos de ácidos grasos C6-C12, tales como triglicéridos de ácido caprílico y cáprico y triheptanoína;
- ácidos grasos C10-C20 ramificados y/o insaturados (tales como los ácidos linoleico, láurico y mirístico);
- alcoholes grasos C10-C20 ramificados y/o insaturados (tales como octildodecanol y oleilalcohol);
- hidrocarburos tales como el escualano (C30), especialmente el escualano vegetal extraído del aceite de oliva y el hemiescualano (C15);
- carbonatos de dialquilo, tales como carbonato de dicaprililo y carbonato de dietilhexilo;
- éteres de dialquilo tales como éter de dicaprililo; y
- sus mezclas.
También se pueden mencionar los aceites vegetales que contienen uno o más de los constituyentes anteriormente mencionados.
Como ésteres de ácidos y de monoalcoholes, se pueden mencionar especialmente los monoésteres tales como la mezcla de caprato y caprilato de coco, macadamiato de etilo, éster etílico de manteca de karité, isoestearato de isoestearilo, isononanoato de isononilo, isononanoato de etilhexilo, neopentanoato de hexilo, neopentanoato de etilhexilo , neopentanoato de isoestearilo, neopentanoato de isodecilo, miristato de isopropilo, miristato de octildodecilo, palmitato de isopropilo, palmitato de etilhexilo, laurato de hexilo, laurato de isoamilo, nonanoato de cetoestearilo, capilato de propilheptilo y sus mezclas. Otros ésteres que pueden utilizarse son los diésteres de ácidos y de monoalcoholes tales como adipato de diisopropilo, adipato de dietilhexilo, sebacato de diisopropilo y sebacato de diisoamilo.
Son ejemplos de aceites vegetales especialmente los aceites de germen de trigo, girasol, argán, hibisco, cilantro, semilla de uva, sésamo, maíz, albaricoque, ricino, karité, aguacate, oliva, soja, almendra dulce, palma, colza, algodón, avellana, macadamia, yoyoba, alfalfa, amapola, calabaza potimarrón, sésamo, calabaza, grosella negra, onagra, lavanda, borraja, mijo, cebada, quinoa, centeno, cártamo, nuez de la India, pasiflora, rosa moscatel, Echium, camelina o camelia.
La fase grasa también puede comprender al menos un estructurante de fase grasa. Por "estructurante de fase grasa", se entiende un compuesto capaz de espesar los aceites contenidos en la composición, elegidos especialmente entre las ceras, los gelificantes de la fase grasa y las sustancias grasas pastosas, así como sus mezclas.
Según una realización preferida, esta composición engloba también al menos un principio activo antienvejecimiento,
en particular un principio activo adecuado para prevenir y/o tratar las arrugas, la flacidez y/o la formación de manchas pigmentarias, que puede elegirse especialmente entre agentes antirradicales, agentes que estimulan la diferenciación y/o la proliferación de queratinocitos y/o fibroblastos; agentes para estimular la síntesis de glicosaminoglicanos y/o colágeno y/o fibrillas de anclaje dermoepidérmicas y/o fibras elásticas; agentes que previenen la degradación de colágeno y/o glicosaminoglicanos y/o fibrillas de anclaje dermoepidérmicas y/o fibras elásticas; agentes antiglicación; agentes despigmentantes y/o inhibidores de la melanogénesis; y sus mezclas.
Son ejemplos de tales principios activos antienvejecimiento especialmente: ácido ascórbico, sus sales, sus éteres y sus ésteres, especialmente el glucósido de ascorbilo; adenosina; ribosa; extractos de miel; proteínas y glicoproteínas, extraídas especialmente de almendras dulces; proteínas vegetales hidrolizadas, especialmente procedentes de arroz, semillas de hibisco o lupino; polipéptidos y pseudodipéptidos, tales como clorhidrato de carcinina, palmitoilpentapéptido-4 (Pal-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser) y palmitoiltripéptido-38 comercializados especialmente por SEDERMA con los nombres comerciales Matrixyl® 3000 y Matrixyl® Synthe'6, respectivamente, el palmitoiltripéptido-8 comercializado por la compañía LUCAS MEYER bajo la referencia comercial Nutrazen®, el pentapéptido-18 comercializado por la compañía LIPOTEC con el nombre comercial Leuphasyl® Solution, el sh-decapéptido-9 comercializado por la compañía SANDREAM con el nombre comercial Neoendorphin® y palmitoilhexapéptido-52 comercializado por la compañía INFINITEC bajo la referencia comercial X50 Myocept® Powder; silanos tales como manuronato de metilsilanol; arabinoxilanos, extraídos en particular de la harina de centeno y galactoarabinanos, procedentes especialmente del alerce; ácido hialurónico y sus sales; polifenoles, extraídos en particular de mimosa; alfa-hidroxiácidos, incluidos los extraídos del limón; extractos (generalmente acuosos) de plantas tales como trébol de agua, pensamiento silvestre, cola de caballo, Mafane (Acmella olerácea), cardo borriquero (Onopordum acanthium), milenrama (Achillea millefolium, contenida especialmente en el producto Neurobiox® de la compañía BASF), embelia (Embelia concinna, tal como comercializa la compañía SEPPIC), higo chumbo (Opuntia ficus indica, comercializado especialmente por MIBELLE AG BIOCHEMISTRY con el nombre comercial AquaCacteen®), salvia (Salvia officinalis, vendida especialmente por PROVITAL GROUP), Vitex negundo (comercializado especialmente por LABORATOIRES EXPANSCIENCE bajo la referencia comercial Neurovity®), castaña, papaya, argán, avena, girasol, margarita, peonía o eneldo; extractos acuosos de algas y especialmente de coralina, jania roja, Ungaria pinnatifada, Alaria esculenta o Nannochlorosis oculata; aceites esenciales, especialmente de mirto; gluconatos de cinc y/o cobre; y sus mezclas.
Como variante o adicionalmente, la composición utilizada según la invención puede comprender al menos un agente tensor. Puede tratarse de un polímero tensor, capaz de tensar la piel por acción mecánica y así reducir la aparición de arrugas y líneas finas, en particular un polisacárido, especialmente un extracto de algas o plancton marino o una goma vegetal. También puede tratarse de un agente tensor de acción biológica del tipo “similar al botox”, por ejemplo un extracto de Acmella oleracea comercializado con el nombre de Gatuline® Expression por la compañía GATTEFOSSE; un extracto de semilla de hibisco comercializado con el nombre Myoxinol® LS9736 por la compañía BASF BCS o también un péptido de tipo acetilhexapéptido-8 comercializado con el nombre Argireline® por la compañía Lipotec.
La composición según la invención también puede contener diversos constituyentes que pueden estar dispersos en la fase grasa y/o en la fase acuosa de la emulsión, siempre que sean compatibles con la aplicación tópica sobre la piel.
Puede englobar así al menos un emulsionante de aceite en agua o de agua en aceite, generalmente no iónico, tal como ésteres de polioxietileno, ésteres de sorbitán eventualmente polietoxilados, ésteres de ácidos grasos y glicerol eventualmente polietoxilados, éteres de alcoholes grasos y azúcares tales como alquilglucósidos, y sus mezclas. Los emulsionantes pueden representar del 2 al 10 % y preferiblemente del 4 al 6 % del peso total de la composición. Sin embargo, se prefiere que la composición según la invención esté desprovista de emulsionante.
La composición según la invención también puede comprender una o varias cargas pulverulentas, que se presentan ventajosamente en forma de micropartículas porosas o huecas, preferentemente porosas. Estas micropartículas son en principio sustancialmente esféricas. Estas cargas pueden elegirse especialmente entre:
- cargas orgánicas tales como: polvos de polisacáridos y en particular almidón nativo, almidón modificado o celulosa;
polvos de polímeros acrílicos tales como poli(metacrilato de metilo), de poliamidas o de poliolefinas; polvos de algas secas como Corallina officinalis;
- cargas inorgánicas tales como sílice, arcillas, perlita y talco;
- y sus mezclas.
Como carga inorgánica, se prefiere utilizar sílice.
Estas cargas pueden representar del 1 al 5 % en peso, con respecto al peso total de la composición.
La composición según la invención también puede comprender aditivos elegidos especialmente entre los fotoprotectores orgánicos y/o inorgánicos, activos frente a la luz azul y/o UVA y/o UVB; polímeros filmógenos a base de polisacáridos, capaces de formar una película protectora anticontaminación, tales como los productos comercializados por SOLABIA con los nombres comerciales Pollustop® y Solashield® ; agentes descamantes tales
como a- y p-hidroxiácidos; partículas exfoliantes; perfumes; agentes antioxidantes; agentes secuestrantes; ajustadores de pH; conservantes; pigmentos; tintes; y sus mezclas.
Esta composición puede presentarse en cualquier forma adecuada para la aplicación tópica sobre la piel y especialmente en forma de leche, crema, loción, gel, pasta o película. Generalmente se trata de una composición sin aclarado y en particular una composición de cuidado, una composición de maquillaje, tal como una base de maquillaje, o una composición de protección solar.
La composición según la invención se puede aplicar sobre al menos una zona del cuerpo de una persona que presente signos de envejecimiento de la piel (por ejemplo, de al menos 30 años, o incluso de al menos 40 años, y más particularmente en la cara, el cuello y/o el escote Como variante, se puede aplicar en todo el cuerpo, especialmente en el busto, los brazos, las piernas y el vientre para combatir la sequedad de la piel.
Esta composición se puede aplicar una o varias veces al día, por ejemplo, por la mañana y/o por la noche, sobre las zonas a tratar.
Como variante, la composición según la invención puede ser una composición con aclarado utilizada para el cuidado de la piel, en particular del rostro y eventualmente del cuerpo. En este caso, se puede utilizar, por ejemplo, como mascarilla o como pasta exfoliante.
Ejemplos
La invención se entenderá mejor a la luz de los siguientes ejemplos, que se dan únicamente a modo de ilustración y no pretenden limitar el alcance de la invención, definida por las reivindicaciones adjuntas.
Ejemplo 1: Prueba ex vivo en explante de piel humana
Se realizó un análisis transcriptómico para demostrar el efecto de la combinación de plantas según la invención sobre la expresión de ciertos genes de la piel.
El transcriptoma es el conjunto de ARN mensajeros procedentes de la expresión de parte del genoma en un tejido o tipo celular dado. La caracterización y cuantificación del transcriptoma permite identificar los genes regulados en condiciones particulares, determinar los mecanismos de regulación de estos genes y definir las redes de expresión o las ruta de activación de estos genes. Una de las técnicas utilizadas para medir simultáneamente el nivel de expresión de un gran número de ARN mensajeros diferentes es la del chip de ADN. Los chips de ADN permiten medir y visualizar muy rápidamente las diferencias de expresión a escala de un genoma completo.
1) Material y métodos
Preparación de la muestra
Se pusieron un extracto acuoso de hojas de mejorana (Origanum majorana), un aceite esencial de siempreviva (Helichrysum italicum) obtenido por hidrodestilación, o la combinación de los dos extractos, en presencia de explantes de piel supervivientes. El aceite esencial de siempreviva se disolvió al 10 % en dimetilsulfóxido (DMSO) antes de aplicarlo al medio de cultivo. El extracto de mejorana se diluyó directamente en el medio de cultivo.
Se incubaron independientemente 4 explantes de piel de abdominoplastia de una paciente de 34 años en presencia de extracto de mejorana, aceite esencial de siempreviva o su combinación durante 24 horas en un "medio de cultivo de piel" de la compañía Biopredic a 37 °C a 5 % de CO2 en una atmósfera húmeda (98 %) en la interfase aire-líquido. Se incubaron 4 explantes de piel no tratados o tratados con disolvente DMSO al 1 % en las mismas condiciones. La Tabla 1 a continuación resume las concentraciones aplicadas para cada composición.
Tabla 1
Extracción de ARN totales
Después de la incubación, los explantes de piel se molieron en el tampón recomendado por el fabricante del kit de extracción de ARN RNeasy mini kit (Qiagen, Hilden, Alemania), luego se extrajeron los ARN totales utilizando este mismo kit. Los ARN totales se cuantificaron y luego se verificó su calidad mediante el dispositivo de electroforesis
Biüanalyzer 2100 con su kit de análisis RNA 6000 Nano LabChip Kit (Agilent Technologies, Santa Clara, EE. UU.).
Medición de la expresión génica en un chip de oligonucleótidos y adquisición de datos:
Se utilizaron chips de oligonucleótidos de 60 unidades en cubreobjetos de vidrio de 1 "x3", (SurePrint G3 Human Gene Expression 8x60K v2 Microarray - G4851B, Agilent Technologies, Santa Clara, EE. UU.) para el análisis de la expresión génica.
La documentación y el protocolo experimental completo están disponibles en el sitio web de Agilent Technologies.
Brevemente, se realiza la transcripción inversa y la amplificación de los ARN totales a ADNc y luego a ARNc y su marcaje con cianina 3 con la ayuda del kit Low input Quick Amp Labeling Kit (Agilent Technologies). La purificación de los ARNc se efectuó con la ayuda del kit RNeasy mini kit (Qiagen, Hilden, Alemania) y la hibridación con el kit Microarray hybridization chamber kit (Agilent Technologies, Santa Clara, EE. UU.). Luego, los chips se escanearon utilizando el escáner SureScan (Agilent Technologies, Santa Clara, EE. UU.) y el software de control Scan (Agilent Technologies, Santa Clara, EE. UU.). Luego, las imágenes escaneadas se extrajeron y normalizaron con el software Feature Extraction (Agilent Technologies, Santa Clara, EE. UU.).
El análisis estadístico de los datos se realizó con el software Genespring GX 13 (Agilent Technologies, Santa Clara, EE. UU.).
A continuación, se utilizó el software ingenuity Pathways Analysis (ingenuity® Pathway Analysis (IPA), ingenuity Systems, Redwood City, CA, EE. UU. - http://www.ingenuity.com) para analizar y predecir el estado de activación de las rutas biológicas moduladas por el extracto de mejorana, el aceite esencial de siempreviva o su combinación.
Para cada condición de tratamiento, se realizaron a cabo 4 experimentos de marcaje independientes (es decir, 4 chips de oligonucleótidos por condición, correspondientes a los 4 explantes de piel tratados de forma independiente para cada condición) para aumentar la reproducibilidad de los datos.
Los genes expresados por los explantes de piel tratados se consideraron inducidos o inhibidos si su nivel de expresión diferencial era superior a un factor de 2 en comparación con los de los explantes de control. Los explantes no tratados sirvieron como controles para la condición tratada con extracto de mejorana y los explantes tratados con el disolvente DMSO al 1 % sirvieron como controles para la condición tratada con aceite esencial de siempreviva o la combinación de extracto de mejorana y aceite esencial de siempreviva. Se aplicó una prueba de Student moderada corregida por la tasa de falsos positivos con el procedimiento de Benjamini & Hochberg usando el software GeneSpring para calcular la diferencia estadística en la expresión génica entre los explantes no tratados o tratados con disolvente DMSO y los explantes tratados con los principios activos o su combinación. Los genes con un valor de p inferior o igual a 0,05 se consideraron expresados diferencialmente.
Estos genes fueron luego analizados por el software ingenuity Pathways Analysis. Este software permite un análisis funcional de los genes regulados en las diferentes condiciones de tratamiento, un análisis de las rutas de señalización en las que estos genes forman parte y el análisis de los reguladores anteriores de estas rutas. El software calculó una puntuación Z (variable centrada reducida) en relación con los genes significativamente regulados. Una puntuación Z >2 o <-2 indica dentro de un intervalo de confianza del 99 % que las rutas biológicas inducidas o reprimidas no son solo por casualidad, sino muy específicamente.
2) Resultados
2a) Defensas antioxidantes: activación de la ruta de Nrf2
La siguiente tabla presenta la diferencia en la expresión de los genes que están implicados en la ruta de Nrf2 de defensa antioxidante tras el tratamiento de explantes de piel con extracto de mejorana, aceite esencial de siempreviva y su combinación.
La puntuación Z de la ruta de defensa antioxidante de NRF-2 en respuesta al tratamiento de explantes de piel con extracto de mejorana, aceite esencial de siempreviva y su combinación se calculó mediante el software utilizado y se indica en la Tabla 2 a continuación.
Tabla 2
De esta tabla, se desprende que el extracto de mejorana, utilizado solo, tiende a inhibir la ruta de NRF-2, a diferencia del aceite esencial de siempreviva. Sin embargo, estos efectos no son significativos. Por otro lado, parece que la combinación de los dos extractos da como resultado una marcada activación de la ruta de NRF-2, lo que demuestra el efecto sinérgico de estos dos extractos.
2b) Diferenciación epidérmica: Aumento de la función de barrera
La Tabla 3 a continuación muestra la diferencia en la expresión de los genes que están implicados en la diferenciación epidérmica tras el tratamiento de explantes de piel con extracto de mejorana, aceite esencial de siempreviva y su combinación.
Esta tabla muestra que ciertos genes implicados en la diferenciación de queratinocitos están regulados positivamente y otros que inhiben la diferenciación de queratinocitos están regulados negativamente. Además, los genes de factores de crecimiento (HGF, epirregulina) también están regulados positivamente, lo que permite el mantenimiento de la reserva de queratinocitos en proliferación. Todos estos genes permitirán un refuerzo de la barrera epidérmica.
3) Conclusión
Este ejemplo demuestra por análisis transcriptómico ex vivo por chips de ADN que la composición de la invención permite estimular los genes implicados especialmente en la renovación de la epidermis y la gestión del estrés oxidativo, permitiendo así combatir el envejecimiento de la piel debido en particular a las agresiones externas que generan un estrés oxidativo, y fortaleciendo la función de barrera de la piel.
Ejemplo 2: Composición cosmética
La siguiente composición se prepara de manera convencional para los expertos en la materia, mezclando los siguientes ingredientes en las proporciones ponderales indicadas.
Aceite esencial de siempreviva 0,01-0,1 %
Extracto de hoja de mejorana 0,2-0,8 %
Adenosina 0,05 %
Aceites 5-15 %
Gelificantes oleosos 1 -5 %
Gelificantes acuosos 1 -3 %
Polioles 20-25 %
Secuestrante cs
Antioxidantes cs
Aroma cs
Conservantes cs
Agua csp 100 %
Claims (8)
1. Composición cosmética que comprende un aceite esencial de siempreviva y un extracto terpénioo de al menos una planta del género Origanum.
2. Composición según la reivindicación 1, caracterizada porque la siempreviva se elige entre las especies Helichrysum italicum, Helichrysum arenarium y Helichrysum stoechas, preferiblemente Helichrysum italicum.
3. Composición según la reivindicación 1 o 2, caracterizada porque el aceite esencial de siempreviva se obtiene de las partes aéreas de la planta, en particular de sus flores o sumidades floridas.
4. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada porque la planta del género Origanum pertenece a la especie Origanum majorana.
5. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque el extracto de Origanum se obtiene a partir de las partes aéreas de la planta escogidas entre el tallo, las hojas y sus mezclas, más preferiblemente las hojas.
6. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada porque el extracto de Origanum se obtiene por extracción con la ayuda de un disolvente polar prótico que comprende, preferiblemente constituido por, al menos un disolvente elegido entre agua, un monoalcohol tal como etanol o isopropanol, un glicol tal como propilenglicol o butilenglicol, un poliol tal como xilitol y sus mezclas.
7. Uso de la composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para combatir los signos del envejecimiento de la piel, especialmente la formación de arrugas, la flacidez de la piel y la pérdida de luminosidad de la tez, debidos en particular a la exposición a la radiación UV y/o a la luz azul, al tabaquismo y/o a la contaminación y/o para combatir la sequedad de la piel.
8. Procedimiento cosmético para combatir los signos del envejecimiento de la piel, especialmente la formación de arrugas, la flacidez de la piel y la pérdida de luminosidad de la tez, debidos en particular a la exposición a la radiación UV y/o a la luz azul, al tabaquismo y/o a la contaminación, y/o para combatir la sequedad de la piel, que comprende la aplicación tópica sobre la piel de la composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.
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