CN110478307B - 祛黑眼圈组合物及其制备方法和含有该祛黑眼圈组合物的化妆品 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种祛黑眼圈组合物及其制备方法和含有该祛黑眼圈组合物的化妆品，所述祛黑眼圈组合物包括滨海剌芹干细胞提取物、极地雪藻提取物、红藻提取物以及枝管藻提取物。本发明的祛黑眼圈组合物，可以加快皮肤的新陈代谢，有效改善皮肤的自愈能力。本发明的组合物的组成能够产生协同增效的作用，可以最大程度改善黑眼圈问题。

Description

祛黑眼圈组合物及其制备方法和含有该祛黑眼圈组合物的化 妆品

技术领域

本发明涉及一种祛黑眼圈组合物及其制备方法和含有该祛黑眼圈组合物的化妆品，属于化妆品领域。

背景技术

黑眼圈位于双侧眶周，外观颜色较正常皮肤相对深，是一个广泛存在的皮肤问题，它会让人看起来满脸疲惫，比实际年龄更要衰老。产生黑眼圈的原因很多，除遗传、炎症、衰老等，熬夜、睡眠不足、压力大等也会造成眼部疲劳，会导致眼部周围血液循环不良，从而形成黑眼圈。从现代医学角度看，当人体过度疲劳时，自主神经失调，血管的血流循环不畅就会形成黑眼圈。

另外，黑眼圈形成还有一个重要原因是因为眼睑下方的肌肤非常薄，且密布着大量毛细血管，易发生色素沉着。眼周血管脆弱，导致血红蛋白渗漏。随着血红蛋白降解，血红素等有色产物会在真皮及表皮层累积。这些色素使皮肤看上去发紫，导致眼周黑眼圈的形成。

随着生活节奏的加快，生活压力的增加，黑眼圈困扰着越来越多的人群，因此研究安全有效的祛黑眼圈产品成为亟待解决的技术问题。

发明内容

发明要解决的问题

鉴于现有技术的不足，本发明首先提供了一种祛黑眼圈组合物。本发明的祛黑眼圈组合物的各组分可以产生协同作用，能有效改善黑眼圈问题。

本发明还提供了一种祛黑眼圈组合物的制备方法，其原料易于获取，制备成本较低，具有制备简单、经济的特点。

本发明还提供了一种化妆品，其含有本发明的祛黑眼圈组合物，该化妆品能够有效改善黑眼圈问题。

用于解决问题的方案

本发明提供一种祛黑眼圈组合物，其包括：滨海剌芹干细胞提取物、极地雪藻提取物、红藻提取物以及枝管藻提取物。

根据本发明的祛黑眼圈组合物，其中，以所述祛黑眼圈组合物的总质量为100％计，所述滨海剌芹干细胞提取物的加入量为0.5～20％，优选2～15％；所述极地雪藻提取物的加入量为10～50％，优选20～40％；所述红藻提取物的加入量为10～40％，优选15～35％；所述枝管藻提取物的加入量为5～45％，优选10～40％。

根据本发明的祛黑眼圈组合物，其中，所述红藻提取物包括罗布斯塔红藻提取物和/或水解红藻提取物；所述枝管藻提取物包括海星枝管藻提取物和/或奥氏海藻提取物。

根据本发明的祛黑眼圈组合物，其中，所述滨海剌芹干细胞提取物包括使用培养基进行培养的方法制备得到。

根据本发明的祛黑眼圈组合物，其中，所述滨海剌芹干细胞提取物的制备方法包括以下步骤：

步骤1)：将滨海剌芹根切片后置于基本培养基中，并添加蔗糖、琼脂和二氯苯氧乙酸进行培养，得到愈伤组织；

步骤2)：将所述愈伤组织置于基本培养基中，并添加蔗糖、二氯苯氧乙酸和激动素KT进行培养，得到悬浮细胞。

根据本发明的祛黑眼圈组合物，其中，所述步骤1)的基本培养基中，蔗糖的质量分数为1.5～4.5％，琼脂的加入量为7～8.5g/L，二氯苯氧乙酸的加入量为0.5～1.5mg/L；和/或

所述步骤2)的基本培养基中，蔗糖的质量分数为1.5～4.5％，二氯苯氧乙酸的加入量为0.2～1.2mg/L，激动素KT的加入量为0.01～0.5mg/L。

根据本发明的祛黑眼圈组合物，其中，所述基本培养基为MS培养基。

本发明还提供一种根据本发明的祛黑眼圈组合物的制备方法，其包括将所述祛黑眼圈组合物的各组分混合的步骤。

本发明还提供一种化妆品，其包括本发明所述的祛黑眼圈组合物，所述化妆品包括眼部精华、眼部乳液、眼部凝胶、眼膜或眼霜；优选地，所述祛黑眼圈组合物的加入量为2～18％，优选5～15％。

根据本发明的化妆品，其中，包括：保湿剂、螯合剂、增稠剂、乳化剂、润肤剂、防腐剂、香精中的一种或两种以上的组合；

优选地，以所述化妆品的总质量为100％计，所述保湿剂的加入量为0.01～20％；所述螯合剂的加入量为0.01～0.2％；所述增稠剂的加入量为0.01～1％；所述乳化剂的加入量为0.5～5％；所述润肤剂的加入量为0.5～25％；所述防腐剂的加入量为0.1～0.5％，所述香精的加入量为0.01～0.2％。

发明的效果

本发明的祛黑眼圈组合物，可以加快皮肤的新陈代谢，有效改善皮肤的自愈能力。本发明的组合物的各组分能够产生协同增效的作用，可以最大程度改善黑眼圈问题。

进一步地，本发明的祛黑眼圈组合物同时具有良好的抗氧化和抗炎效果，并能促进胶原蛋白的合成，减少皱纹，显著提升眼周外观效果。

进一步地，本发明的祛黑眼圈组合物的制备方法简单易行，适合大规模生产。

进一步地，本发明的含有祛黑眼圈组合物的化妆品能够有效改善黑眼圈问题。

附图说明

图1示出了实施例1-4及对比例1-10的血红素氧化酶-1基因表达相对于对照组的表达量。

具体实施方式

以下将详细说明本发明的各种示例性实施例、特征和方面。在这里专用的词“示例性”意为“用作例子、实施例或说明性”。这里作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。

另外，为了更好地说明本发明，在下文的具体实施方式中给出了众多的具体细节。本领域技术人员应当理解，没有某些具体细节，本发明同样可以实施。在另外一些实例中，对于本领域技术人员熟知的方法、手段、器材和步骤未作详细描述，以便于凸显本发明的主旨。

如无特殊声明，本发明所使用的单位均为国际标准单位，并且本发明中出现的数值，数值范围，均应当理解为包含了工业生产中所允许的误差。

本文中所使用的“水”包括去离子水、蒸馏水、双蒸水、纯净水、离子交换水等任何化妆品领域可行的水。

本文中所述的“室温”的含义可以是10～30℃。

本文中如有使用的“约”、“基本”、“大致”等表示，则其误差范围可以为5％。

第一实施方式

本发明的第一实施方式提供一种祛黑眼圈组合物，其包括：滨海剌芹干细胞提取物、极地雪藻提取物、红藻提取物以及枝管藻提取物。

本发明使用滨海剌芹干细胞提取物、极地雪藻提取物、红藻提取物以及枝管藻提取物的组合，可以有效改善黑眼圈问题。具体而言：

<滨海剌芹干细胞提取物>

植物干细胞是未分化的细胞，干细胞的活性成分具有完整的生物学功能，每个未分化的细胞含有植物的所有组分，是新细胞生长或替代特殊组织的来源。植物干细胞对提高皮肤的新陈代谢，改善微循环，收紧和恢复皮肤弹性具有重要的应用价值。本发明的发明人发现，滨海剌芹干细胞提取物来自其根部萃取的植物干细胞精华，可加快表皮的新陈代谢，有效改善皮肤的自愈能力。

滨海剌芹分布于英国和爱尔兰沿海岸，分布很广，具有比较大的主根，多剌和叶子和淡蓝色的花，富含黄酮类，氨基酸和糖，有很高的医用价值，被用来抗水肿，止痛及抵抗炎症老化，也可应用于化妆品中。

在本发明中，本发明的所述滨海剌芹干细胞提取物可以包括使用培养基进行培养的方法制备得到。当然，本发明的滨海剌芹干细胞提取物也可以通过市售购买得到。

作为优选，所述滨海剌芹干细胞提取物的制备方法包括以下步骤：

步骤1)：将滨海剌芹根切片后置于基本培养基中，并添加蔗糖、琼脂和二氯苯氧乙酸进行培养，得到愈伤组织；

步骤2)：将所述愈伤组织置于基本培养基中，并添加蔗糖、二氯苯氧乙酸和激动素KT进行培养，得到悬浮细胞。

其中，为了获得较为纯净的滨海剌芹干细胞提取物，步骤1)中的培养基和步骤2)中使用的基本培养基可以不是同一个基本培养基。

对于基本培养基的选择，本发明不作特别限定，可以是本领域常用的基本培养基。MS培养基中无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足滨海剌芹干细胞的营养和生理需要，因而适用范围比较广，并且滨海剌芹的愈伤组织可以快速繁殖。因此，本发明优选使用MS培养基作为基本培养基。

进一步，所述步骤1)的基本培养基中，蔗糖的质量分数为1.5～4.5％，琼脂的加入量为7～8.5g/L，二氯苯氧乙酸的加入量为0.5～1.5mg/L。当蔗糖、琼脂和二氯苯氧乙酸的含量在本发明的范围内时，可以获得更多的愈伤组织。

所述步骤1)中，为了提高滨海剌芹干细胞提取物的培养效果，进行愈伤组织培养的温度为20～30℃，培养的时间为15～35天。

进一步，所述步骤2)的基本培养基中，蔗糖的质量分数为1.5～4.5％，二氯苯氧乙酸的加入量为0.2～1.2mg/L，激动素KT的加入量为0.01～0.5mg/L，当蔗糖、二氯苯氧乙酸和激动素KT进行培养的含量在本发明的范围内时，可以获得更多的悬浮细胞。

所述步骤2)中，为了提高滨海剌芹干细胞提取物的培养效果，进行悬浮细胞培养的温度为20～30℃，培养的时间为15～35天。作为优选，所述步骤2)中，进行悬浮细胞培养优选使用摇床震荡培养，所述摇床的转速可以为60～110rpm/min。

在本发明中，滨海剌芹根优选使用切除根冠的滨海剌芹根尖。即：取切除根冠的滨海剌芹根尖作为外植体。具体地，将切除根冠的滨海剌芹根尖洗净消毒后切片，所述切片一般是在无菌条件下进行的，作为优选，切片的厚度为0.8～1.2mm。

进一步，在得到悬浮细胞后，优选对该悬浮细胞进行后处理，得到滨海剌芹干细胞提取物。具体地，所述后处理步骤可以包括过滤、冷冻、浓缩、干燥等至少一个步骤。本发明对过滤、冷冻、浓缩、干燥等不作特别限定，能实现本发明的功能即可。作为优选，所述浓缩为减压浓缩，所述干燥为真空冷冻干燥。

在本发明中，以所述祛黑眼圈组合物的总质量为100％计，所述滨海剌芹干细胞提取物的加入量为0.5～20％，优选2～15％；例如：1％、3％、5％、8％、10％、12％、14％、16％、18％等。当所述滨海剌芹干细胞提取物的加入量为0.5～20％时，所得到的祛黑眼圈组合物能够显著刺激角质形成细胞血红素氧化酶-1基因的表达，并且能够有效祛除黑眼圈。

<极地雪藻提取物>

极地雪藻(Chlamydomonasnivalis)是一种淡水的单细胞绿藻，在分类学上属于绿藻门(Chlorophyta)、绿藻纲(Chlorophyceae)、团藻目(Volvocales)。

雪藻是一种单细胞的藻类生物，能够在接近0℃的环境下仍然保持活跃的生命力。极地雪藻的最适生长温度在10℃以下，在营养丰富和低光强下保持绿色并快速生长。本发明的发明人发现，极地雪藻可以保护并活化皮肤细胞，强化皮肤屏障，令肌肤平滑、水润。

本发明的极地雪藻提取物可以是市售购买得到，也可以是通过制备方法制备得到。举例而言，极地雪藻提取物购自广州领宇贸易有限公司，但是本领域技术人员应当知晓，在购买时，并不限于仅此一家生产厂商。

进一步地，对于极地雪藻提取物的制备方法，可以采用醇提的方式进行提取，具体的，所述醇可以是乙醇、丙醇、丁醇、丁二醇等常用的醇。

具体地，所述极地雪藻提取物的制备方法包括以下步骤：将极地雪藻细粉置于反应器中，加入醇的水溶液，浸泡后，进行回流提取，将提取液进行过滤即得极地雪藻提取物。

以所述祛黑眼圈组合物的总质量为100％计，所述极地雪藻提取物的加入量为10～50％，优选20～40％；例如：15％、18％、22％、25％、28％、30％、32％、35％、45％等；当所述极地雪藻提取物的加入量为10～50％时，所得到的祛黑眼圈组合物能够显著刺激角质形成细胞血红素氧化酶-1基因的表达，并且能够有效祛除黑眼圈。

<红藻提取物>

红藻绝大部分海生，见于热带和亚热带海岸附近，常附著于其他植物。叶状体有丝状、分枝状、羽状或片状。细胞间连以纤细的原生质丝。除叶绿素外，尚含藻红素和藻蓝素，故常呈红色或蓝色。

在本发明中，所选用的红藻可以是罗布斯塔红藻提取物和/或水解红藻提取物，作为优选，本发明使用罗布斯塔红藻提取物，可以取得更优异的效果。

具体地，从罗布斯塔红藻中萃取得到的纯天然产物，可有效促进血管的微循环，去除水肿。本发明的发明人发现，罗布斯塔红藻提取物能有效清除自由基，具有抗氧化的功效，能够延缓肌肤衰老，减少皮肤细纹，令肌肤水嫩细滑。

本发明的罗布斯塔红藻提取物可以是市售购买得到，也可以是通过制备方法制备得到。举例而言，罗布斯塔红藻提取物购自广州际洲贸易有限公司，但是本领域技术人员应当知晓，在购买时，并不限于仅此一家生产厂商。

进一步地，对于罗布斯塔红藻提取物的制备方法，可以采用醇提的方式进行提取，具体的，所述醇可以是乙醇、丙醇、丁醇、丁二醇等常用的醇。

具体地，将罗布斯塔红藻细粉置于反应器中，加入醇的水溶液，浸泡后，进行回流提取，将提取液进行过滤即得罗布斯塔红藻提取物。

以所述祛黑眼圈组合物的总质量为100％计，所述红藻提取物的加入量为10～40％，优选15～35％，例如：12％、18％、20％、22％、25％、28％、30％、32％、38％等；当所述红藻提取物的加入量为10～40％时，所得到的祛黑眼圈组合物能够显著刺激角质形成细胞血红素氧化酶-1基因的表达，并且能够有效祛除黑眼圈。

<枝管藻提取物>

枝管藻中富含褐藻硫酸多糖等生物活性物质。具有提高机体抗氧化能力和提高免疫力的功效。另外，枝管藻提取物对脯氨酰内肽酶有抑制，对调节血管紧张素、神经紧张素有益，本发明的发明人发现，枝管藻提取物具有舒缓的作用，结合它的抗氧化性，可用于皮肤调养；其对透明质酸酶有抑制作用，可有效抑制透明质酸的分解，因而有皮肤保湿作用。

在本发明中，所述枝管藻提取物可以包括海星枝管藻提取物和/或奥氏海藻提取物。

本发明的枝管藻提取物可以是市售购买得到，也可以是通过制备方法制备得到。举例而言，本发明的海星枝管藻提取物购自广州澳萃贸易有限公司，但是本领域技术人员应当知晓，在购买时，并不限于仅此一家生产厂商。

进一步地，对于枝管藻提取物的制备方法，可以采用醇提的方式进行提取，具体的，所述醇可以是乙醇、丙醇、丁醇、丁二醇等常用的醇。

将枝管藻细粉置于反应器中，加入醇的水溶液，浸泡后，进行回流提取，将提取液进行过滤即得枝管藻提取物。具体地，在本发明中，海星枝管藻提取物、奥氏海藻提取物均可以采用该方法制备得到。

以所述祛黑眼圈组合物的总质量为100％计，所述枝管藻提取物的加入量为5～45％，优选10～40％，例如：8％、12％、18％、20％、22％、25％、28％、30％、32％、38％等。当所述红藻提取物的加入量为5～45％时，所得到的祛黑眼圈组合物能够显著刺激角质形成细胞血红素氧化酶-1基因的表达，并且能够有效祛除黑眼圈。

所述滨海剌芹干细胞提取物、极地雪藻提取物、红藻提取物以及枝管藻提取物的重量比为1:2～10:1～8:1～12，优选为1:2.5～8:1～6:2～9。当滨海剌芹干细胞提取物、极地雪藻提取物、红藻提取物以及枝管藻提取物的重量比在1:2～10:1～8:1～12的范围内时，能够取得更加优异的去黑眼圈效果。

本发明的祛黑眼圈组合物，可以加快皮肤的新陈代谢，有效改善皮肤的自愈能力。本发明的组合物的组成能够产生协同增效的作用，可以最大程度改善黑眼圈问题。本发明的祛黑眼圈组合物同时具有良好的抗氧化和抗炎效果，并能促进胶原蛋白的合成，减少皱纹，显著提升眼周外观效果。

第二实施方式

本发明的第二实施方式提供了一种第一实施方式的祛黑眼圈组合物的制备方法，其包括将所述祛黑眼圈组合物的各组分混合的步骤。

本发明对混合的时间、温度等条件不作特定限定，只要能够将所述祛黑眼圈组合物充分混合均匀即可，优选采用搅拌的方式进行混合，一般是在室温下混合。

第三实施方式

本发明的第三实施方式提供了一种化妆品，其包括本发明第一实施方式所述的祛黑眼圈组合物，所述化妆品包括眼部精华、眼部乳液、眼部凝胶、眼膜或眼霜；优选地，以所述化妆品的总质量为100％计，所述祛黑眼圈组合物的加入量为2～18％，优选5～15％。当去黑眼圈组合物的加入量在2～18％时，可以有效改善黑眼圈的情况。

进一步，本发明的化妆品包括：保湿剂、螯合剂、增稠剂、乳化剂、润肤剂、防腐剂、香精中的一种或两种以上的组合。本发明的化妆品的配方组成温和，可以使本发明的祛黑眼圈组合物的功效得到充分发挥。具体而言：

以所述化妆品的总质量为100％计，所述保湿剂的加入量为0.01～20％，能够起到保湿作用。为了使保湿剂的功效能够进一步发挥，本发明的保湿剂的加入量可以是1～18％，可以是3～16％，可以是5～14％，可以是6～12％，例如：2％、3％、6％、8％、10％、12％、15％、17％、19％等等。

在本发明中，所述保湿剂包括丙二醇、丁二醇、泛醇、芦芭油、双丙甘醇、甘油、甘油聚丙烯酸酯、透明质酸钠、海藻糖中的一种或两种以上的组合。

优选地，本发明的保湿剂包含透明质酸钠、甘油、丁二醇以及芦芭油中的一种或两种以上的组合。具体地，以所述化妆品的总质量为100％计，所述透明质酸钠的加入量为0.01～0.1％，所述甘油的加入量为2～8％，所述丁二醇的加入量为1～5％，所述芦芭油的加入量为0.1～2％。

以所述化妆品的总质量为100％计，所述增稠剂的加入量为0.01～1％。通过添加增稠剂，可以使本发明的化妆品的稠度合适。

在本发明中，所述增稠剂包括卡波姆、黄原胶、丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、聚二甲基硅氧烷/乙烯基聚二甲基硅氧烷交联聚合物、山嵛醇、聚丙烯酰胺、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物中的一种或两种以上的组合。

优选地，本发明的增稠剂包括卡波姆和/或丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物。具体地，以所述化妆品的总质量为100％计，所述卡波姆的加入量为0.01～0.3％，所述丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物的加入量为0.01～0.5％。

以所述化妆品的总质量为100％计，所述乳化剂的加入量为0.5～5％，例如：可以是1～5％，可以是2～4.5％等。当乳化剂的含量为0.5～5％时，能够起到优异的乳化作用，且乳化体系稳定，产品的稳定性优异。

在本发明中，所述乳化剂包括鲸蜡硬脂基葡糖苷、PEG-100硬脂酸酯、甘油硬脂酸酯、PEG-10油菜籽甾醇、月桂醇聚醚-7、聚甘油-3甲基葡糖二硬脂酸酯、PEG/PPG-10/1聚二甲基硅氧烷、聚甘油-3二异硬脂酸酯、硬脂醇聚醚-20、鲸蜡醇聚醚-20、聚山梨醇酯-60等中的一种或两种以上的组合中的一种或两种以上的组合。

优选地，所述乳化剂包括鲸蜡硬脂基葡糖苷和/或甘油硬脂酸酯。具体地，以所述化妆品的总质量为100％计，鲸蜡硬脂基葡糖苷的加入量为0.5～3％，甘油硬脂酸酯的加入量为0.5～2％。

以所述化妆品的总质量为100％计，所述润肤剂的加入量为0.5～25％，例如所述润肤剂的加入量可以是1％、5％、10％、12％、15％、18％、20％、12％、24％等。通过在化妆品中添加润肤剂，可以减少皮肤表面水分的蒸发，防止皮肤干裂。另外，通过添加润肤剂，可以在皮肤表面形成疏水性薄膜，防止外部有害物质的侵入，不会减少皮肤表面水分的蒸发，且化妆品不油腻，使用感优异。

在本发明中，所述润肤剂包括鲸蜡硬脂醇、肉豆蔻酸异丙酯、鲸蜡醇乙基己酸酯、聚二甲基硅氧烷、环五聚二甲基硅氧烷、辛酸/癸酸甘油三酯、油醇芥酸酯、氢化聚异丁烯、牛油果树果脂、棕榈酸乙基己酯、氢化聚癸烯、环己硅氧烷、C20-24烷基聚二甲基硅氧烷、C13-14异链烷烃、C12-15醇苯甲酸酯、氢化大豆油、乳木果油、植物甾醇类、油橄榄油不皂化物中的一种或两种以上的组合。

优选地，所述润肤剂包括氢化聚异丁烯、鲸蜡醇乙基己酸酯、辛酸/癸酸甘油三酯、聚二甲基硅氧烷、乳木果油和鲸蜡硬脂醇中的一种或两种以上的组合。具体地，以所述化妆品的总质量为100％计，氢化聚异丁烯的加入量为1～6％，鲸蜡醇乙基己酸酯的加入量为1～5％，辛酸/癸酸甘油三酯的加入量为0.5～4％，聚二甲基硅氧烷的加入量为1～6％，乳果木油的加入量为0.1～2％，鲸蜡硬脂醇的加入量为0.5～3％。

本发明的化妆品中还可以包含有螯合剂，以所述化妆品的总质量为100％计，所述螯合剂的加入量为0.01～0.2％。所述螯合剂可以是EDTA-2Na和/或EDTA-4Na等。

另外，本发明的化妆品中还包含有防腐剂和香精。以所述化妆品的总质量为100％计，所述防腐剂的加入量为0.1～0.5％；所述香精的加入量为0.01～0.2％。所述防腐剂可以包括苯氧乙醇、羟苯甲酯、羟苯丙酯、苯甲酸及其盐中的一种或两种以上的组合。

第四实施方式

本发明的第四实施方式提供了一种本发明的第三实施方式的化妆品的制备方法，包括将所述化妆品的各组分混合的步骤。

具体而言，所述化妆品的制备方法包括以下步骤：

(1)将保湿剂、增稠剂、螯合剂和水投入到水相锅中，搅拌均匀，加热搅拌至80～85℃，保温5～20min；

(2)将乳化剂、润肤剂投入到油相锅，加热搅拌至80～85℃，搅拌均匀；

(3)将水相锅中的物料抽入乳化锅中，将油相锅中的物料抽入乳化锅中，搅拌均匀，然后将乳化锅内抽真空，均质搅拌5～30min；

(4)然后开冷却水降温至40～45℃，加入防腐剂、香精以及祛黑眼圈组合物，搅拌均匀，检验合格后出料，制备完成。

实施例

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例中，极地雪藻提取物购自广州领宇贸易有限公司；

罗布斯塔红藻提取物购自广州际洲贸易有限公司；

海星枝管藻提取物购自广州澳萃贸易有限公司。

所述滨海剌芹干细胞提取物的制备方法为：

(1)外植体的选取和消毒处理：取切除根冠的滨海剌芹根尖作为外植体，清洗干净后进行消毒；

(2)外植体切片：将步骤(1)中得到的滨海剌芹根尖在无菌条件下切成1mm的薄片；

(3)愈伤组织培养：将步骤(2)中的切片放入基本培养基，再加入质量分数为3％的蔗糖、8g/L琼脂和1mg/L二氯苯氧乙酸(2,4-D)在25℃的温度下进行培养25天；

(4)细胞悬浮培养：将步骤(3)中的愈伤组织加入到基本培养基中，再加入质量分数为3％的蔗糖、0.5mg/L二氯苯氧乙酸(2,4-D)和0.1mg/L激动素KT，摇床以90rpm/min的转速在25℃的温度下振荡培养25天，得悬浮细胞；

(5)将步骤(4)中的悬浮细胞过滤后，收集滤液，减压浓缩，真空冷冻干燥即得滨海剌芹干细胞提取物。

实施例1

取滨海剌芹干细胞提取物12重量份、极地雪藻提取物35重量份、罗布斯塔红藻提取物25重量份、海星枝管藻提取物28重量份，其中，滨海剌芹干细胞提取物、极地雪藻提取物、罗布斯塔红藻提取物、海星枝管藻提取物的重量比为1:35/12:25/12:7/3，将上述各组分混合搅拌均匀后，得到祛黑眼圈组合物。

实施例2

取滨海剌芹干细胞提取物10重量份、极地雪藻提取物33重量份、罗布斯塔红藻提取物27重量份、海星枝管藻提取物30重量份，其中，滨海剌芹干细胞提取物、极地雪藻提取物、罗布斯塔红藻提取物、海星枝管藻提取物的重量比为1:3.3:2.7:3，将上述各组分混合搅拌均匀后，得到祛黑眼圈组合物。

实施例3

取滨海剌芹干细胞提取物8重量份、极地雪藻提取物37重量份、罗布斯塔红藻提取物22重量份、海星枝管藻提取物33重量份，其中，滨海剌芹干细胞提取物、极地雪藻提取物、罗布斯塔红藻提取物、海星枝管藻提取物的重量比为1:4.625:2.75:4.125，将上述各组分混合搅拌均匀后，得到祛黑眼圈组合物。

实施例4

取滨海剌芹干细胞提取物5重量份、极地雪藻提取物30重量份、罗布斯塔红藻提取物27重量份、海星枝管藻提取物38重量份，其中，滨海剌芹干细胞提取物、极地雪藻提取物、罗布斯塔红藻提取物、海星枝管藻提取物的重量比为1:6:5.4:7.6，将上述各组分混合搅拌均匀后，得到祛黑眼圈组合物。

对比例1-10

表1为对比例1-10中不同组合物各组分的重量份，按照实施例1-4的方法，制备得到相应的祛黑眼圈组合物。

表1

功效测试1：血红素氧化酶-1基因表达

血红素等有色产物在真皮及表皮层的累积会使皮肤看上去发紫，导致眼周黑眼圈的形成，所以清除游离血红素有助于减退黑眼圈，而血红素加氧酶-1(HO-1)的增加可以催化血红素的降解，从而达到祛黑眼圈的效果。血红素加氧酶-1基因表达增加越大，祛黑眼圈效果越明显。

将角质形成细胞接种在6孔细胞培养板中，培养基为角质细胞生长介质，含有0.2％牛垂体激素，5μg/mL牛胰岛素，0.18μg/mL可的松，5μg/ml牛转铁蛋白和0.2ng/mL表皮生长因子，在37℃，5％CO₂条件下培养两天。实验分为对照组和实验组，将对照组中的培养基替换为新鲜培养基(与角质形成细胞的培养基相同)，将实验组中的培养基替换为含有质量分数为8％的实施例1-4和对比例1-10的祛黑眼圈组合物的新鲜培养基(与角质形成细胞的培养基相同，其中添加祛黑眼圈组合物)，继续培养24小时。

然后用PBS溶液清洗，提取细胞中的总RNA，并以此为模板，利用逆转录酶反转录成cDNA，再以cDNA为模板进行聚合酶链式扩增，使用HO-1基因的特定探针检测HO-1的基因表达。实验数据处理：计算实验组HO-1mRNA相对于对照组的表达量，数值越大，表明HO-1基因表达越多，其中，对照组的表达量通过仪器归1处理，即对照组的表达量为1，计算结果如图1所示。

从实施例1-4可以看出，使用实施例1-4的祛黑眼圈组合物显著刺激了角质形成细胞血红素氧化酶-1基因的表达。

从对比例1-4中可以看出，单一组成的滨海剌芹干细胞提取物、极地雪藻提取物、罗布斯塔红藻提取物、海星枝管藻提取物对HO-1的基因表达促进较低。

对比实施例1和对比例5可知，不添加滨海剌芹干细胞提取物同样会降低HO-1的基因表达。

对比实施例1和对比例6-10，滨海剌芹干细胞提取物、极地雪藻提取物、罗布斯塔红藻提取物、海星枝管藻提取物的含量在本发明所述范围内时，所得到的祛黑眼圈组合物促进角质形成细胞血红素氧化酶-1基因表达效果更佳。

因此，滨海剌芹干细胞提取物、极地雪藻提取物、罗布斯塔红藻提取物、海星枝管藻提取物的组合更有利于血红素氧化酶-1基因表达，即祛黑眼圈的效果更好。

应用实施例1-4

根据下表2中应用实施例1-4的各组分的含量(重量份)，其中，所述祛黑眼圈组合物为对应实施例1-4制备得到的祛黑眼圈组合物(即：应用实施例1中应用的是实施例1的祛黑眼圈组合物，依次类推)，按照下述步骤制备得到应用实施例1-4的眼霜。

具体地，眼霜的制备步骤如下：

1)将A相投入到水相锅中，搅拌均匀，加热搅拌至80℃，保温10min；

2)将B相投入到油相锅，加热搅拌至80℃，搅拌均匀；

3)将水相锅中的物料抽入乳化锅中。将油相锅中的物料抽入乳化锅中，搅拌均匀，然后将乳化锅内抽真空，均质搅拌15min；

4)然后开冷却水降温至40℃，加入C相，搅拌均匀，检验合格后出料，制备完成。

表2

应用对比例1-10

根据下表3中各组分的含量(重量份)，其中，所述祛黑眼圈组合物对应为对比例1-10制备得到的祛黑眼圈组合物(即：应用对比例1中应用的是对比例1的祛黑眼圈组合物，依次类推)，按照与应用实施例1-4相同的方法制备得到眼霜。

表3

功效测试2：眼部皮肤色差值测试

根据皮肤色差值L*的大小来判定皮肤颜色的深浅，L*值越大，表明皮肤颜色越浅，即祛黑眼圈效果越好。

选取眼部有明显黑眼圈的人，年龄：25-55岁，分为15组，每组25人，其中一组受试者使用不含本发明祛黑眼圈组合物的眼霜，为对照组。另外14组受试者分别涂抹应用实施例1-4和应用对比例1-10的眼霜，每天早晚各涂抹一次，持续使用28天。使用DZCP-10-01面部成像仪进行VISIA-CR拍照，并测试记录第0天、第28天眼周的皮肤色差值L*，取每组平均值，测试结果如表4所示。

表4

从表4中可以看出，应用实施例1-4为使用了含有本发明祛黑眼圈组合物的眼霜，应用实施例1-4可有效增加皮肤的色差值，即祛黑眼圈效果越好。

对比应用实施例1-4和应用对比例1-4，可以看出单一组成的滨海剌芹干细胞提取物、极地雪藻提取物、罗布斯塔红藻提取物、海星枝管藻提取物对皮肤色差值的增加量明显减少。

对比应用实施例1和应用对比例5可知，不添加滨海剌芹干细胞提取物同样会降低皮肤色差值的增加量。

对比应用实施例1和应用对比例6-10，滨海剌芹干细胞提取物、极地雪藻提取物、罗布斯塔红藻提取物、海星枝管藻提取物的含量在本发明所述范围内时，含有本发明的祛黑眼圈组合物的眼霜更有利于增加皮肤的色差值，即祛黑眼圈效果更好。

本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (12)

1.一种祛黑眼圈组合物，其特征在于，包括：滨海剌芹干细胞提取物、极地雪藻提取物、红藻提取物以及枝管藻提取物；以所述祛黑眼圈组合物的总质量为100％计，所述滨海剌芹干细胞提取物的加入量为0.5～20％；所述极地雪藻提取物的加入量为10～50％；所述红藻提取物的加入量为10～40％；所述枝管藻提取物的加入量为5～45％；

所述红藻提取物为罗布斯塔红藻提取物，所述枝管藻提取物为海星枝管藻提取物。

2.根据权利要求1所述的祛黑眼圈组合物，其特征在于，以所述祛黑眼圈组合物的总质量为100％计，所述滨海剌芹干细胞提取物的加入量为2～15％；所述极地雪藻提取物的加入量为20～40％；所述红藻提取物的加入量为15～35％；所述枝管藻提取物的加入量为10～40％。

3.根据权利要求1或2所述的祛黑眼圈组合物，其特征在于，所述滨海剌芹干细胞提取物包括使用培养基进行培养的方法制备得到。

4.根据权利要求3所述的祛黑眼圈组合物，其特征在于，所述滨海剌芹干细胞提取物的制备方法包括以下步骤：

步骤1)：将滨海剌芹根切片后置于基本培养基中，并添加蔗糖、琼脂和二氯苯氧乙酸进行培养，得到愈伤组织；

步骤2)：将所述愈伤组织置于基本培养基中，并添加蔗糖、二氯苯氧乙酸和激动素KT进行培养，得到悬浮细胞。

5.根据权利要求4所述的祛黑眼圈组合物，其特征在于，所述步骤1)的基本培养基中，蔗糖的质量分数为1.5～4.5％，琼脂的加入量为7～8.5g/L，二氯苯氧乙酸的加入量为0.5～1.5mg/L；和/或

所述步骤2)的基本培养基中，蔗糖的质量分数为1.5～4.5％，二氯苯氧乙酸的加入量为0.2～1.2mg/L，激动素KT的加入量为0.01～0.5mg/L。

6.根据权利要求4或5所述的祛黑眼圈组合物，其特征在于，所述基本培养基为MS培养基。

7.一种根据权利要求1-6任一项所述的祛黑眼圈组合物的制备方法，其特征在于，包括将所述祛黑眼圈组合物的各组分混合的步骤。

8.一种化妆品，其特征在于，包括权利要求1-6任一项所述的祛黑眼圈组合物，所述化妆品包括眼部精华、眼部乳液、眼部凝胶、眼膜或眼霜。

9.根据权利要求8所述的化妆品，其特征在于，以所述化妆品的总质量为100％计，所述祛黑眼圈组合物的加入量为2～18％。

10.根据权利要求8所述的化妆品，其特征在于，以所述化妆品的总质量为100％计，所述祛黑眼圈组合物的加入量为5～15％。

11.根据权利要求8-10任一项所述的化妆品，其特征在于，包括：保湿剂、螯合剂、增稠剂、乳化剂、润肤剂、防腐剂、香精中的一种或两种以上的组合。

12.根据权利要求11所述的化妆品，其特征在于，以所述化妆品的总质量为100％计，所述保湿剂的加入量为0.01～20％；所述螯合剂的加入量为0.01～0.2％；所述增稠剂的加入量为0.01～1％；所述乳化剂的加入量为0.5～5％；所述润肤剂的加入量为0.5～25％；所述防腐剂的加入量为0.1～0.5％，所述香精的加入量为0.01～0.2％。

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