ES2925307T3 - Receptores de linfocitos T que reconocen MAGE-A3 restringida al MHC de clase II - Google Patents

Receptores de linfocitos T que reconocen MAGE-A3 restringida al MHC de clase II Download PDF

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Steven A Rosenberg
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Abstract

La invención proporciona un receptor de células T (TCR) aislado o purificado que tiene especificidad antigénica para MAGE-A3 restringido por MHC Clase II. La invención proporciona además polipéptidos y proteínas relacionados, así como ácidos nucleicos relacionados, vectores de expresión recombinantes, células huésped y poblaciones de células. Además, la invención proporciona anticuerpos, o una parte de unión a antígeno de los mismos, y composiciones farmacéuticas relacionadas con los TCR de la invención. La invención proporciona además métodos para detectar la presencia de cáncer en un huésped y métodos para tratar o prevenir el cáncer en un mamífero. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Receptores de linfocitos T que reconocen MAGE-A3 restringida al MHC de clase II
Referencia cruzada a la solicitud relacionada
La presente solicitud reivindica el beneficio de la Solicitud Provisional de EE.UU. N.° 61/701.056, presentada el 14 de septiembre de 2012.
Antecedentes de la invención
La terapia celular adoptiva (Adoptive Cell Therapy, ACT) implica la transferencia de linfocitos T reactivos en los pacientes, incluyendo la transferencia de los linfocitos T reactivos a tumores en los pacientes con cáncer. Una terapia celular adoptiva usando linfocitos T que se dirige a los epítopos de linfocitos T restringidos al antígeno leucocitario humano (HLA)-A*02 ha sido exitosa al causar la regresión de los tumores en algunos pacientes. Sin embargo, los pacientes que carecen de la expresión de HLA-A*02 no pueden ser tratados con linfocitos T que se dirigen a los epítopos de linfocitos T restringidos al HLA-A*02. Dicha limitación crea un obstáculo para la aplicación extendida de la terapia celular adoptiva. Por consiguiente, existe una necesidad de composiciones inmunológicas mejoradas y de métodos para tratar el cáncer. Cualquier referencia a métodos de tratamiento del cuerpo humano o animal mediante cirugía o terapia debe interpretarse como una referencia a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un método de tratamiento.
Breve sumario de la invención
La presente invención se refiere a una célula hospedadora que comprende un vector de expresión recombinante que comprende un ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un TCR para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer en un mamífero.
La presente invención se define por las reivindicaciones adjuntas. En particular, la presente invención proporciona: 1. Una célula hospedadora que comprende un vector de expresión recombinante que comprende un ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un TCR para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer en un mamífero, en donde el TCR comprende:
(a) las SEQ ID NO: 3-8 o
(b) una variante funcional de (a),
en donde el TCR de (a) y la variante funcional de (b) se unen de manera específica a MAGE A3 que se presenta por HLA-DPp1*04 y (ii) MAGE-A6,
en donde la variante funcional comprende:
(I) las SEQ ID NO: 3, 4, 6, 7, 8, y 29, en donde:
(1) Xaa en 4 es Ala, Xaa en 5 es Ser, Xaa en 6 es Gly y Xaa en 7 es Thr en la SEQ ID NO: 29;
(2) Xaa en 4 es Ser, Xaa en 5 es Ala, Xaa en 6 es Gly, y Xaa en 7 es Thr en la SEQ ID NO: 29;
(3) Xaa en 4 es Ser, Xaa en 5 es Ser,
Xaa en 6 es Gly, y Xaa en 7 es Ala en la SEQ ID NO: 29; o (4) Xaa en 4 es Val, Xaa en 5 es Ser, Xaa en 6 es Gly y Xaa en 7 es Thr en la SEQ ID NO: 29; o
(II) las SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 y 30 en donde:
(1) Xaa en 4 es Ala, Xaa en 5 es Thr, Xaa en 6 es Gly y Xaa en 7 es Pro en la SEQ ID NO: 30; o
(2) Xaa en 4 es Arg, Xaa en 5 es Ala, Xaa en 6 es Gly y Xaa en 7 es Pro en la SEQ ID NO: 30,
en donde el cáncer es cáncer linfocítico agudo; cáncer de huesos; cáncer de cerebro; cáncer del ano, canal anal o anorrectal; cáncer del ojo; cáncer del conducto biliar intrahepático; cáncer de las articulaciones; cáncer del cuello, de la vesícula biliar o la pleura; cáncer de la nariz, de la cavidad nasal o del oído medio; cáncer de la cavidad oral; cáncer de la vulva; cáncer de cuello uterino; cáncer mieloide crónico; cáncer de colon; cáncer esofágico; cáncer gástrico; tumor carcinoide gastrointestinal; glioma; cáncer de cabeza; carcinoma hepatocelular; cáncer de hipofaringe; cáncer de riñón; cáncer de laringe; leucemia; cáncer de hígado; linfoma; mesotelioma maligno; mieloma múltiple; cáncer de nasofaringe; cáncer de ovario; cáncer de cuello; cáncer pancreático; cáncer de peritoneo, omento y mesenterio, cáncer de faringe; cáncer de próstata; cáncer rectal; sarcoma; cáncer de intestino delgado; cáncer del tejido blando; cáncer de estómago; cáncer de testículo; cáncer de la tiroides o cáncer urotelial.
2. La célula hospedadora para el uso del punto 1, en donde la variante funcional comprende
(a) la SEQ ID NO: 29, en donde Xaa4 es Ala, Xaa5 es Ser, Xaa6 es Gly y Xaa7 es Thr, o
(b) la SEQ ID NO: 29, en donde Xaa4 es Ser, Xaa5 es Ala, Xaa6 es Gly y Xaa7 es Thr.
3. La célula hospedadora para el uso del punto 1 o 2, en donde el TCR o variante funcional comprende una región constante de murino.
4. La célula hospedadora para el uso de uno cualquiera de los puntos 1-3, en donde el TCR de variante funcional comprende una región constante de murino que comprende la s Eq ID NO: 25 y/o la SEQ ID NO: 26.
5. La célula hospedadora para el uso de uno cualquiera de los puntos 1-4, en donde el TCR de variante funcional comprende las secuencias de aminoácidos de:
(a) las SEQ ID NO: 9 y 10;
(b) las SEQ ID NO: 10 y 31, en donde:
(1) Xaa en 116 es Ala, Xaa en 117 es Ser, Xaa en 118 es Gly y Xaa en 119 es Thr en la SEQ ID NO: 31; (2) Xaa en 116 es Ser, Xaa en 117 es Ala, Xaa en 118 es Gly y Xaa en 119 es Thr en la SEQ ID NO: 31; (3) Xaa en 116 es Ser, Xaa en 117 es Ser, Xaa en 118 es Gly y Xaa en 119 es Ala en la SEQ ID NO: 31; o (4) Xaa en 116 es Val, Xaa en 117 es Ser, Xaa en 118 es Gly y Xaa en 119 es Thr en la SEQ ID NO: 3 (c) las SEQ ID NO: 9 y 31, en donde:
(1) Xaa en 115 es Ala, Xaa en 116 es Thr, Xaa en 117 es Gly y Xaa en 118 es Pro en la SEQ ID NO: 32; o (2) Xaa en 115 es Arg, Xaa en 116 es Ala, Xaa en 117 es Gly y Xaa en 118 es Pro en la SEQ ID NO: 32. 6. La célula hospedadora para el uso de uno cualquiera de los puntos 1-5, en donde la variante funcional comprende:
(a) la SEQ ID NO: 31, en donde Xaa116 es Ala, Xaa117 es Ser, Xaa118 es Gly y Xaa119 es Thr, o
(b) la SEQ ID NO: 31, en donde Xaa116 es Ser, Xaa117 es Ala, Xaa118 es Gly y Xaa119 es Thr.
7. La célula hospedadora para el uso de uno cualquiera de los puntos 1-6, en donde el TCR de variante funcional comprende las secuencias de aminoácidos de:
(a) las SEQ ID NO: 11 y 12;
(b) las SEQ ID NO: 27 y 28;
(c) las SEQ ID NO: 12 y 33, en donde:
(1) Xaa en 116 es Ala, Xaa en 117 es Ser, Xaa en 118 es Gly y Xaa en 119 es Thr en la SEQ ID NO: 33; (2) Xaa en 116 es Ser, Xaa en 117 es Ala, Xaa en 118 es Gly y Xaa en 119 es Thr en la SEQ ID NO: 33; (3) Xaa en 116 es Ser, Xaa en 117 es Ser, Xaa en 118 es Gly y Xaa en 119 es Ala en la SEQ ID NO: 33; o (4) Xaa en 116 es Val, Xaa en 117 es Ser, Xaa en 118 es Gly y Xaa en 119 es Thr en la SEQ ID NO: 3 (d) las SEQ ID NO: 11 y 34, en donde:
(1) Xaa en 115 es Ala, Xaa en 116 es Thr, Xaa en 117 es Gly y Xaa en 118 es Pro en la SEQ ID NO: 34; o (2) Xaa en 115 es Arg, Xaa en 116 es Ala, Xaa en 117 es Gly y Xaa en 118 es Pro en la SEQ ID NO: 34. 8. La célula hospedadora para el uso de uno cualquiera de los puntos 1-7, en donde la variante funcional comprende:
(a) la SEQ ID NO: 33, en donde Xaa116 es Ala, Xaa117 es Ser, Xaa118 es Gly y Xaa119 es Thr o (b) la SEQ ID nO: 33, en donde Xaa116 es Ser, Xaa117 es Ala, Xaa118 es Gly y Xaa119 es Thr.
9. La célula hospedadora para el uso de uno cualquiera de los puntos 1 a 8, en donde el ácido nucleico comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste en a) las SEQ ID NO: 37 y 38, b) las SEQ ID NO: 41 y 42, y c) las SEQ ID NO: 43 y 44.
10. La célula hospedadora para el uso de uno cualquiera de los puntos 1-9, en donde la célula es humana.
11. La célula hospedadora para el uso de uno cualquiera de los puntos 1-10, en donde el cáncer es positivo para una o ambas de MAGE-A3 y MAGE-A6.
12. La célula hospedadora para el uso de uno cualquiera de los puntos 1-11, en donde el cáncer es leucemia mieloide aguda, rabdomisarcoma alveolar, leucemia linfocítica crónica, carcinoma de colon, carcinoma hepatocelular, linfoma de Hodgkin, leiomiosarcoma uterino, linfoma de no Hodgkin, sarcoma osteogénico, carcinoma de células renales, carcinoma de células escamosas, sarcoma sinovial, cáncer del uréter o cáncer de la vejiga uninaria.
13. La célula hospedadora para el uso de uno cualquiera de los puntos 1-12, en donde el TCR comprende
(a) las SEQ ID NO: 3 y 8;
(b) las SEQ ID NO: 9-10;
(c) las SEQ ID NO: 11-12: o
(d) las SEQ ID NO: 27-28.
14. La célula hospedadora para el uso de acuerdo con uno cualquiera de los puntos 1-13, en donde la célula hospedadora está comprendida en una población de células.
15. La célula hospedadora para el uso de uno cualquiera de los puntos 1-13, en donde la célula hospedadora y un vehículo farmacéuticamente aceptable están comprendidos en una composición farmacéutica.
En el presente documento se divulga además un receptor de linfocitos T (T-cell receptor, TCR) purificado y porciones funcionales y variantes celulares del mismo, que tiene especificidad antigénica para MAGE-A3243-258 y MAGE-A6.
En el presente documento se divulga un TCR purificado o aislado comprendiendo (a) las SEQ ID NO: 3-8 o (b) las SEQ ID NO: 21-22, o una variante funcional de (a) o (b), en donde la variante funcional comprende (a) o (b) con al menos una sustitución del aminoácido en cualquiera de uno o más de (a) o cualquiera de uno o más de (b), y la variante funcional tiene la especificidad antigénica para MAGE-A3 en el contexto de HLA-DPp1*04.
En el presente documento se divulgan además polipéptidos y proteínas, así como ácidos nucleicos relacionados, vectores de expresión recombinantes, células hospedadoras y poblaciones de células. Además, se proporcionan anticuerpos o porciones de unión al antígeno de los mismos y composiciones farmacéuticas relacionadas con los TCR (incluyendo las porciones funcionales y las variantes funcionales de los mismos) divulgados en el presente documento.
En el presente documento se divulga la detección de la presencia del cáncer en un mamífero y el tratamiento o la prevención del cáncer en un mamífero. La detección de la presencia del cáncer en un mamífero comprende (i) poner en contacto una muestra que comprende células del cáncer con cualquiera de los TCR (incluyendo las porciones funcionales y las variantes funcionales del mismo), polipéptidos, proteínas, ácidos nucleicos, vectores de expresión recombinante, células hospedadoras, poblaciones de células hospedadoras o anticuerpos o porciones de unión al antígeno de los mismos, descritos en el presente documento, en consecuencia formando un complejo; y (ii) detectar el complejo, en donde la detección del complejo es indicativo de la presencia de cáncer en el mamífero.
En el presente documento se divulga el tratamiento o la prevención del cáncer en un mamífero que comprende administrar al mamífero cualquiera de los TCR (incluyendo las porciones funcionales y las variantes funcionales de los mismos), polipéptidos, o proteínas descritos en el presente documento, cualquier ácido nucleico o vector de expresión recombinante que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica cualquiera de los TCR (incluyendo las porciones funcionales y las variantes funcionales de los mismos), polipéptidos, proteínas descritos en el presente documento o cualquier célula hospedadora o población de células hospedadoras que comprenden un vector recombinante el cual codifica cualquiera de los TCR (incluyendo las porciones funcionales y las variantes funcionales de los mismos), polipéptidos o proteínas descritas en el presente documento, en una cantidad eficaz para tratar o prevenir el cáncer en el mamífero.
Las Figuras 1A y 1B son gráficos de barras que muestran la secreción de interferón (IFN)-gamma (pg/ml) por los linfocitos T CD4+ de los primeros (1A) y segundos (1B) donadores en respuesta al cocultivo con las células diana 293-CIITA no transfectadas (292-CIITA) o transfectadas con la proteína de longitud completa NY-ESO-1 (293-CIITA-NY-ESO-1), la proteína MAGE-A1 (293-CIITA-MAGE A1), la proteína MAGE-A3 (293-CIITA-MAGE-A3), la proteína MAGE-A6 (293-CIITA-MAGE-A6), o la proteína MAGE A12 (293-CIITA-MAGE-A12). Los linfocitos T fueron no transducidos (untransduced, UT) o transducidos con F5 (anti-MART-1) TCR, R12C9 TCR, o 6F9 TCR.
La Figura 2A es un gráfico de barras que muestra la secreción de IFN-gamma (pg/ml) por los linfocitos T de un donador humano que fueron transducidos o no transducidos con 6F9 TCR o F5 TCR en respuesta al cocultivo con las células 526-CIiTa que no fueron tratadas o fueron tratadas con anti-ARNip MAGE-A3 o anti-ARNip MART-1. La Figura 2B es un gráfico de barras que muestra la secreción de IFN-gamma (pg/ml) por los linfocitos T CD4+ de un donador humano que fueron transducidos o no transducidos con 6F9 TCR en respuesta a un cocultivo con células H1299-CIITA que fueron no tratadas o tratadas con anti-ARNip MAGE-A3 o anti-ARNip MART-1.
La Figura 3 es un gráfico de barras que muestra la secreción de IFN-gamma (pg/ml) por PBL transducido con 6F9 cultivado solo (solamente linfocitos T) o cocultivado con las células 3071, las células 3071-CIITA, las células 397, las células 397-CIITA, las células 2630, las células 2630-CIITA, las células 2984 o las células 2984-CIITA.
La Figura 4 es un gráfico de barras que muestra la secreción de IFN-gamma (pg/ml) por PBL CD4+ enriquecidos que se transdujo con 6F9 TCR o no se transdujo en el cultivo solo (solamente linfocitos T) o en respuesta al cocultivo con las células H1299-CIITA no tratadas, H1299-CIITA transfectadas con anti-HLA-DP o anti-ARNip HLA-DR, células no tratadas 526-CIITA o 526-CIITA transfectadas con anti-HLA-DP o anti-ARNip HLA-DR.
La Figura 5 es un gráfico de barras que muestra la secreción de IFN-gamma (pg/ml) por PBL que no se transdujo o que se transdujo con 6F9 TCR de tipo silvestre (ts) o uno de cada uno de los ocho TCR sustituidos: a1 (cadena alfa S116A), a2 (cadena alfa S117A), a3 (cadena alfa G118A), a4 (cadena alfa T119A), b1 (cadena beta R115A), b2 (cadena beta T116A), b3 (cadena beta G117A), o b4 (cadena beta P118A) en los cultivos solos (solamente linfocitos T; barras no sombreadas) o el cocultivo con 624-CIITA (barras de cuadros), 526-CIITA (barras rayadas a la derecha), 1359-CIITA (barras con líneas horizontales), H1299-CIITA (barras rayadas a la izquierda), o 1764-CIITA (barras con líneas verticales).
La Figura 6 es un gráfico de barras que muestra la secreción IFN-gamma (pg/ml) por PBL CD4+ enriquecido que no se transdujeron o se transdujeron con 6F9 TCR de tipo silvestre (ts) o uno de cada uno de los tres TCR sustituidos: a1 (cadena alfa S116A), a2 (cadena alfa S117A), o b2 (cadena beta T116A) en el cultivo solo (solamente linfocitos T; barras no sombreadas) o cocultivado con 624-CIITA (barras de cuadros), 526-CIITA (barras rayadas a la derecha), 1359-CIITA (barras con líneas horizontales), H1299-CIITA (barras rayadas a la izquierda), o 1764-CIITA (barras con líneas verticales).
La Figura 7 es un gráfica de barras que muestra la secreción de IFN-gamma (pg/ml) por PBL que se transdujo o no se transdujo con 6F9 TCR de tipo silvestre (ts) o uno de cada diez de los TCR sustituidos: a1 (cadena alfa S116A), a2 (cadena alfa S117A), a1-1 (cadena alfa S116L), a1-2 (cadena alfa S116I), a1-3 (cadena alfa S116V), a1-4 (cadena alfa S116M), a2-1 (cadena alfa S117L), a2-2 (cadena alfa S117I), a2-3 (cadena alfa S117V), o a2-4 (cadena alfa S117M) en el cultivo solo (solamente linfocitos T; barras no sombreadas) o cocultivado con 624-CIITA (barras rayadas a la derecha), 526-CIITA (barras con líneas verticales), 1359-CIITA (barras con líneas horizontales), H1299-CIITA (barras entrecruzadas a la izquierda), o 1764-CIITA (barras negras).
La Figura 8 es una gráfica de barras que muestran la secreción de IFN-gamma (pg/ml) por PBL que no se transduce (barras a cuadros) o se transduce con 6F9 TCR de tipo silvestre (ts) (barras con líneas horizontales) o 6F9mC TCR (SEQ ID NO: 27 y 28) (barras entrecruzadas a la izquierda) en el cultivo solo (solamente linfocitos T) o cocultivado con las células 624-CIITA, 1300-CIITA, 526-CIITA, 1359-CIITA, H1299-CIITA, 397-CIITA, 2630-CIITA, 2984-CIITA, 3071-CIITA, o 1764-CIITA.
Las Figuras 9A y 9B son gráficos de barras que muestran la secreción de IFN-gamma (pg/ml) por PBL CD4+ (9A) o CD8+ (9B) enriquecida que no se transdujo (barras a cuadros) o que se transdujo con 6F9 TCR de tipo silvestre (ts) (barra con líneas horizontales) o 6F9mC TCR (SEQ ID NO: 27 y 28) (barras entrecruzadas a la izquierda) en el cultivo solo (solamente linfocitos T) o cocultivo con células 624-CIITA, SK37-CIITA, 526-CIITA, 1359-CiITA, H1299-CIITA, 397-CIITA, 2630-CIITA, 2984-CIITA, 3071-CIITA, o 1764-CIITA.
La Figura 10A es un gráfico de barras que muestra la secreción de IFN-gamma (pf/ml) por PBL que no se transduce (UT, barras no sombreadas) o transducido con R12C9 TCR (barras grises) o 6F9 TCR (barras negras) en el cultivo solo (ninguno) o cocultivado con los transfectantes 293-CIITA que se transfectaron con la proteína NY-ESO-1 de longitud completa, proteína MAGE-A1, proteína MAGE-A3, proteína MAGE-A6, proteína Ma Ge-A12, o células 293-CIITA que se pulsaron con el péptido MAGE-A3243-258 o la proteína MAGE-A3.
La Figura 10B es una gráfica de barras mostrando la secreción de IFN-gamma (pf/ml) por PBL que no se transduce (barras negras, UT) o transducido con 6F9 TCR (barras grises) en el cultivo solo (solamente linfocitos T) o cocultivado con la línea celular H11299 (NSCLC) del cáncer de pulmón de células no pequeñas o la línea celular del melanoma 526 mel, 624 mel, o 1359 mel.
Descripción detallada de la invención
En el presente documento se divulga un receptor de linfocitos T (TCR) aislado o purificado y porciones funcionales y variantes funcionales del mismo que tienen especificidad para MAGE-A3, en donde el TCR reconoce el MAGE-A3 en el contexto de HLA-DPp1*04. El TCR aislado o purificado divulgado en el presente documento tiene también especificidad antigénica para MAGE-A3243-258 y MAGE-A6.
MAGE-A3 y MAGE-A6 son miembros de la familia MAGE-A de doce proteínas homólogas, también incluyendo MAGE-A1, MAGE-A2, MAGE-A4, MAGE-A5, MAGE-A7, MAGE-A8, MAGE-A9, MAGE-A10, MAGE-A11, y MAGE-A12. Las proteínas MAGE-A son antígenos del cáncer de testículos (CTA), los cuáles se expresan solamente en las células tumorales y en las células germinales del testículo y la placenta que no expresan MHC. Las proteínas MAGE-A se expresan en una variedad de cánceres en humanos incluyendo pero no limitados a, melanoma, cáncer de mama, leucemia, cáncer de tiroides, cáncer gástrico, cáncer pancreático, cáncer de hígado (por ejemplo, carcinoma hepatocelular), cáncer de pulmón (por ejemplo, carcinoma de pulmón no microcítico), cáncer de ovario, mieloma múltiple, cáncer de esófago, cáncer de riñón, cáncer en la cabeza (por ejemplo, carcinoma celular escamoso), cánceres de cuello (por ejemplo, carcinoma de células escamosas), cáncer de próstata, sarcoma de la célula sinovial y cáncer urotelial.
Los TCR (incluyendo las porciones funcionales y las variantes funcionales de los mismos) divulgados en el presente documento proporcionan muchas ventajas, incluyendo cuando se usan para la transferencia de células adoptivas. Por ejemplo, mediante la señalización de MAGE-A3 que se presenta en el contexto de HLA-DPp1*04, los TCR (incluyendo las porciones funcionales y las variantes funcionales de los mismos) hacen posible tratar a los pacientes que no son capaces de ser tratados usando los TCR que se dirigen a los antígenos MAGE que están presentes en el contexto de otras moléculas de HLA, por ejemplo, HlA-A*02, HLA-A*01, o HLA-C*07. HLA-DPp1*o4 es un alelo altamente prevalente que se expresa desde aproximadamente el 70 % a aproximadamente el 80 % de la población de pacientes con cáncer. Por consiguiente, los TCR (incluyendo las porciones funcionales y las variantes funcionales de los mismos) ventajosamente se expanden grandemente a la población de pacientes que pueden tratarse. Adicionalmente, sin apegarse a una teoría particular, se cree que porque MAGE-A3 y MAGE-A6 se expresan por las células de múltiples tipos de cáncer, los TCR (incluyendo las porciones funcionales y las variantes funcionales de los mismos) ventajosamente proporcionan la habilidad de destruir las células de múltiples tipos de cáncer y por consiguiente tratar o prevenir los múltiples tipos de cáncer. Adicionalmente, sin apegarse a una teoría particular, se cree que debido a que las proteínas MAGE-A son antígenos del cáncer testicular que se expresan solamente en las células tumorales y en células germinales de los testículos y la placenta que no expresan el MHC, los TCR (incluyendo las porciones funcionales y las variantes funcionales de los mismos) ventajosamente dirigen la destrucción de las células tumorales mientras minimizan o eliminan la destrucción de las células no cancerosas normales, por lo tanto reduciendo por ejemplo, mediante minimización o eliminación, la toxicidad.
La frase "especificidad antigénica" como se usa en el presente documento significa que el TCR puede unirse específicamente a y reconocer inmunológicamente la MAGE-A3 y/o MAGE-A6 con alta avidez. Por ejemplo, un TCR puede considerarse que tiene "especificidad antigénica" para MAGE-A3 y/o MAGE-A6 si los linfocitos T que expresan TCR secretan al menos 200 pg/ml o más (por ejemplo, 200 pg/ml o más, 300 pg/ml o más, 400 pg/ml o más, 500 pg/ml o más, 600 pg/ml o más, 700 pg/ml o más, 1000 pg/ml o más, 5.000 pg/ml o más, 7.000 pg/ml o más, 10.000 pg/ml o más, o 20.000 pg/ml o más) de IFN-y en el cocultivo con las células diana HLA-DPp1*04+ negativas de antígeno pulsadas con una baja concentración del péptido MAGE-A3 y/o MAGE-A6 (por ejemplo, aproximadamente 0,05 ng/ml a aproximadamente 5 ng/ml, 0,05 ng/ml, 0,1 ng/ml, 0,5 ng/ml, 1 ng/ml, o 5 ng/ml). Como alternativa o adicionalmente, un TCR puede considerarse que tiene "especificidad antigénica" para MAGE-A3 y/o MAGE-A6 si los linfocitos T que expresan el TCR secretan al menos dos veces tanto IFN-y como el nivel de fondo de IFN-y del PBL no transducido en el cocultivo con las células diana HLA- DPp1*04+ de antígeno negativo pulsadas con una baja concentración del péptido de MAGE-A3 y/o MAGE-A6. Los TCR (incluyendo las porciones funcionales y las variantes funcionales de los mismos) también pueden secretar el IFN-y en el cocultivo con las células diana HLA- DPp1*04+ de antígeno negativo pulsadas con concentraciones mayores de péptido MAGE-A3 y/o MAGE-A6.
En el presente documento se divulga un TCR (incluyendo porciones funcionales y variantes del mismo) con especificidad antigénica para cualquier proteína, polipéptido o péptido MAGE-A3. El TCR (incluyendo las porciones funcionales y variantes funcionales de los mismos) pueden tener especificidad antigénica para una proteína MAGE-A3 comprendiendo, consistiendo en o consistiendo esencialmente en la SEQ ID NO: 1. El TCR (incluyendo las porciones funcionales y variantes de los mismos) puede tener especificidad antigénica para un péptido MAGE-A3243-258 comprendiendo, consistiendo en o consistiendo esencialmente en KKLLTQHFVQENYLEY (SEQ ID NO: 2).
Los TCR (incluyendo las porciones funcionales y las variantes funcionales de los mismos) son capaces de reconocer el MAGE-A3 de una manera dependiente del antígeno del leucocito humano (HLA)-DPp1*04. "Dependiente de HLADPp1*04", tal como se usa en el presente documento, significa que los TCR generan una respuesta inmune en la unión a una proteína, polipéptido o péptido MAGE-A3, dentro del contexto de una molécula HLA-DPp1*04. Los TCR (incluyendo las porciones funcionales y las variantes funcionales de los mismos) son capaces de reconocer el MAGE-A3 que se presenta por una molécula HLA-DPp1*04 y puede unirse a la molécula HLA-DPp1*04 además del MAGE-A3. Las moléculas ejemplares de HLA-DPp1*04, en el contexto del cual los TCR (incluyendo las porciones funcionales y las variantes funcionales de los mismos) reconocen el MAGE-A3, incluye aquellas codificadas por los alelos HLA-DPpi*0401 y/o HLA-DPpi*0402.
En el presente documento se divulga además un TCR (incluyendo las porciones funcionales y las variantes de los mismos) con especificidad antigénica para cualquier proteína, polipéptido o péptido MAGE-A6. El TCR (incluyendo las porciones funcionales y las variantes funcionales de los mismos) pueden tener especificidad antigénica para una proteína MAGE-A6 comprendiendo, consistiendo en o consistiendo esencialmente en la SEQ ID NO: 45. Preferentemente, el TCR (incluyendo las porciones funcionales y las variantes funcionales del mismo) tiene especificidad antigénica para un péptido MAGE-A6243-258 comprendiendo, consistiendo en o consistiendo esencialmente en KKLLTQYFVQENYLEY (SEQ ID NO: 46).
En el presente documento se divulga además un TCR que comprende dos polipéptidos (es decir, cadenas de polipéptidos), tales como una cadena alfa (a) de un TCR, una cadena beta (p) de un TCR, una cadena gamma (y) de un TCR, una cadena delta (8) de un TCR, o una combinación de los mismos. Los polipéptidos del TCR de la invención pueden comprender cualquier secuencia de aminoácidos, con la condición de que el TCR tenga especificidad antigénica para MAGE-A3 en el contexto de HLA-DPp1*04.
El TCR puede comprender dos cadenas de polipéptidos, cada una de las cuales comprende una región variable que comprende una región determinante de complementariedad (CDR)1, una CDR2, y una CDR3 de un TCR. El tCr puede comprender una primera cadena de polipéptidos que comprende una CDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3 o 13 (CDR1 de la cadena a), una CDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4 o 14 (CDR2 de la cadena a), y una CDR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 5 o 15 (CDR3 de la cadena a), y una segunda cadena de polipéptidos que comprende una CDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 o 16 (CDR1 de la cadena p), una CDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 7 o 17 (CDR2 de la cadena p), y una CDR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 o 18 (CDR3 de la cadena p). En este sentido, el TCR puede comprender una cualquiera o más de las secuencias de aminoácidos del grupo que consiste en una cualquiera o más de las SEQ ID NO: 3-5, 6-8, 13-15, y 16-18. Preferentemente, el TCR comprende las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 3-8 o 13-18. Más preferentemente, el TCR comprende las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 3-8.
Como alternativa o adicionalmente, el TCR puede comprender una secuencia de aminoácidos de una región variable de un TCR que comprende las CDR establecidas anteriormente. En este sentido, el TCR puede comprender la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 9 o 19 (la región variable de una cadena a) o 10 o 20 (la región variable de una cadena p), ambas SEQ ID NO: 9 y 10 o ambas SEQ ID NO: 19 y 20. Preferentemente, el TCR comprende las secuencias de aminoácidos de ambas SEQ ID NO: 9 y 10.
Como alternativa o adicionalmente, el TCR puede comprender una cadena a de un TCR y una cadena p de un TCR. Cada una de las cadenas a y la cadena p del TCR puede comprender independientemente cualquier secuencia de aminoácidos. Preferentemente, la cadena a comprende la región variable de una cadena a como se estableció anteriormente. En este sentido, el TCR puede comprender la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 11 o 21. Una cadena a de este tipo se puede emparejar con cualquiera de la cadena p de un TCR. Preferentemente, la cadena p del TCR comprende la región variable de una cadena p como se estableció anteriormente. En este sentido, el TCR puede comprender la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 12 o 22. El TCR, por lo tanto, puede comprender la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 11, 12, 21, o 22, ambas SEQ ID nO: 11 y 12 o ambas SEQ ID NO: 21 y 22. Preferentemente, el TCR comprende las secuencias de aminoácidos de ambas SEQ ID NO: 11 y 12.
En el presente documento se divulgan además las variantes funcionales de los TCR descritos en el presente documento. La expresión "variante funcional" tal como se usa en el presente documento se refiere a un TCR, polipéptido o proteína que tiene identidad o similitud de secuencia significante o sustancial con un TCR, polipéptido o proteína originario, cuya variante funcional conserva la actividad biológica del TCR, polipéptido o proteína del cual es una variante. Las variantes funcionales abarcan, por ejemplo, aquellas variantes del TCR, polipéptido o proteína descrito en el presente documento (el TCR, polipéptido o proteína originario) que conserva la capacidad para unirse específicamente a un MAGE-A3 y/o MAGE-A6 para el cual el TCR originario tiene especificidad antigénica o al cual el polipéptido o proteína originaria se une específicamente de forma similar, de la misma forma o en mayor medida que el TCR, polipéptido o proteína originaria. En referencia al TCR, polipéptido o proteína originaria, la variante funcional puede, por ejemplo, ser al menos aproximadamente el 30 %, 50 %, 75 %, 80 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o más idéntica en la secuencia de aminoácidos para el TCR, polipéptido o proteína originaria.
La variante funcional puede, por ejemplo, comprender la secuencia de aminoácidos del TCR, polipéptido o proteína originaria con al menos una sustitución de aminoácido conservativa. Las sustituciones de aminoácidos conservativas son bien conocidas en la técnica e incluyen las sustituciones de aminoácidos en las cuales un aminoácido que tiene ciertas propiedades físicas y/o químicas se intercambia con otro aminoácido que tiene las mismas propiedades físicas o químicas. Por ejemplo, la sustitución de aminoácidos conservativa puede ser un aminoácido ácido sustituido por otro aminoácido ácido (por ejemplo, Asp o Glu), un aminoácido con cadena lateral no polar sustituido con otro aminoácido con una cadena lateral no polar (por ejemplo, Ala, Gly, Val, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Trp, Val, etc.), un aminoácido básico sustituido con otro aminoácido básico (Lys, Arg, etc.), un aminoácido con una cadena lateral polar sustituido con otro aminoácido con una cadena lateral polar (Asn, Cys, Gln, Ser, Thr, Tyr, etc.), etc.
Como alternativa o adicionalmente, las variantes funcionales pueden comprender la secuencia de aminoácidos del TCR, polipéptido o proteína originaria con al menos una sustitución de aminoácidos no conservativa. En este caso, es preferible para la sustitución de aminoácidos no conservativa no interferir con o inhibir la actividad biológica de la variante funcional. Preferentemente, la sustitución de aminoácidos no conservativa mejora la actividad biológica de la variante funcional, de manera que la actividad biológica de la variante funcional se incrementa en comparación con el TCR, polipéptido o proteína originaria.
En este sentido, la divulgación proporciona un TCR purificado o aislado que comprende (a) las SEQ ID NO: 3-8, (b) las SEQ ID NO: 21-22, o una variante funcional de (a) o (b), en donde la variante funcional comprende (a) o (b) con al menos una sustitución de aminoácidos en una cualquiera o más de (a) o una cualquiera o más de (b) y la variante funcional tiene especificidad antigénica para MAGE-A3 en el contexto de HLA-DPp1*04. Preferentemente, la sustitución del aminoácido se localiza en una región CDR3 de la cadena alfa o beta, preferentemente en la región CDR3 de la cadena alfa. La variante funcional (o porciones funcionales de la misma) puede proporcionar una mayor reactividad frente a MAGE-A3 en comparación con la secuencia de aminoácidos del TCR originario. En general, las secuencias de aminoácidos de la cadena a sustituida SEQ ID NO: 29, 31, y 33 corresponden con todo o las porciones de la SEQ ID NO: 11 no sustituida, natural (cadena a del TCR), con las SEQ iD NO: 29, 31, y 33 que tienen al menos una sustitución en comparación con la SEQ ID NO: 11. Preferentemente, uno o más Ser116, Ser117, Gly118, y Thr119 naturales se sustituye. Así mismo, las secuencias de aminoácidos de cadena p sustituida SEQ ID NO: 30, 32, y 34 corresponden con todo o las porciones de la SEQ ID NO: 12 no sustituida, natural (cadena p del TCR), con las SEQ ID NO: 30, 32, y 34 que tienen al menos una sustitución cuando se comparan con la SEQ ID NO: 12. Preferentemente, uno o más de Arg115, Thr116, Gly117 y Pro118 naturales se sustituye.
En particular, la divulgación proporciona una variante funcional de un TCR comprendiendo (i) la SEQ ID NO: 29, en donde Xaa4 es Ser, Ala, Leu, Ile, Val, o Met; Xaa5 es Ser, Ala, Leu, Ile, Val, o Met; Xaa6 es Gly, Ala, Leu, Ile, Val, o Met; y Xaa7 es Thr, Ala, Leu, Ile, Val, o Met y/o (ii) SEQ ID NO: 30, en donde Xaa4 es Arg, Ala, Leu, Ile, Val, o Met; Xaa5 es Thr, Ala, Leu, Ile, Val, o Met; Xaa6 es Gly, Ala, Leu, Ile, Val, o Met; y Xaa7 es Pro, Ala, Leu, Ile, Val, o Met. La SEQ ID NO: 29 generalmente corresponde a las posiciones 113-123 de la SEQ ID NO: 11 no sustituida, natural con la excepción de que en la SEQ ID NO: 29, uno o más de Ser4, Ser5, Gly6, y Thr7 se sustituye. Preferentemente, la variante funcional comprende (a) la SEQ ID NO: 29, en donde Xaa4 es Ala, Xaa5 es Ser, Xaa6 es Gly, y Xaa7 es Thr, o (b) la SEQ ID NO: 29, en donde Xaa4 es Ser, Xaa5 es Ala, Xaa6 es Gly, y Xaa7 es Thr. Aunque la SEQ ID NO: 29 puede comprender CDR3a SEQ ID NO: 5 de tipo silvestre, preferentemente, la SEQ ID NO: 29 no comprende la SEQ ID NO: 5. La SEQ ID NO: 30 generalmente se corresponde con las posiciones 112-126 de la SEQ ID NO: 12 no sustituida, natural con la excepción de que en la SEQ ID NO: 30, uno o más de Arg4, Thr5, Gly6, y Pro7 se sustituye. Aunque la SEQ ID NO: 30 puede comprender CDR3p SEQ ID NO: 8 de tipo silvestre, preferentemente, la SEQ ID NO: 30 no comprende la SEQ ID NO: 8.
La divulgación también proporciona una variante funcional de un TCR que comprende (i) la SEQ ID NO: 31, en donde Xaa116 es Ser, Ala, Leu, Ile, Val, o Met; Xaa117 es Ser, Ala, Leu, Ile, Val, o Met; Xaa118 es Gly, Ala, Leu, Ile, Val, o Met; y Xaa119 es Thr, Ala, Leu, Ile, Val, o Met; y/o (ii) SEQ ID NO: 32, en donde Xaa115 es Arg, Ala, Leu, Ile, Val, o Met; Xaa116 es Thr, Ala, Leu, Ile, Val, o Met; Xaa117 es Gly, Ala, Leu, Ile, Val, o Met; y Xaa118 es Pro, Ala, Leu, Ile, Val, o Met. La SEQ ID NO: 31 generalmente corresponde a las posiciones 1-134 de la SEQ ID NO: 11 natural, no sustituida con la excepción que en la SEQ ID NO: 31, uno o más de uno o más de Ser116, Ser117, Gly118, y Thr119 se sustituye. Preferentemente, la variante funcional comprende (a) SEQ ID NO: 31, en donde Xaa116 es Ala, Xaa117 es Ser, Xaa118 es Gly, y Xaa119 es Thr, o (b) SeQ ID NO: 31, en donde Xaa116 es Ser, Xaa117 es Ala, Xaa118 es Gly, y Xaa119 es Thr. Aunque la SEQ ID NO: 31 puede comprender CDR3a SEQ ID NO: 5 de tipo silvestre, preferentemente, la SEQ ID NO: 31 no comprende la SEQ ID NO: 5. La SEQ ID NO: 32 generalmente se corresponde con las posiciones 1-137 de la SEQ ID NO: 12 natural, no sustituida con la excepción que en la SEQ ID NO: 32, uno o más de uno o más de Arg115, Thr116, Gly117, y Pro118 se sustituye. Aunque la SeQ ID NO: 32 puede comprender CDR3p SEQ ID NO: 8 de tipo silvestre, preferentemente, la SEQ ID NO: 32 no comprende la SEQ ID NO: 8.
También se proporciona por la divulgación una variante funcional de un TCR que comprende: (i) la SEQ ID NO: 33, en donde Xaa116 es Ser, Ala, Leu, Ile, Val, o Met; Xaa117 es Ser, Ala, Leu, Ile, Val, o Met; Xaa118 es Gly, Ala, Leu, Ile, Val, o Met; y Xaa119 es Thr, Ala, Leu, Ile, Val, o Met; y/o (ii) SEQ ID NO: 34, en donde Xaa115 es Arg, Ala, Leu, Ile, Val, o Met; Xaa116 es Thr, Ala, Leu, Ile, Val, o Met; Xaa117 es Gly, Ala, Leu, Ile, Val, o Met; y Xaa118 es Pro, Ala, Leu, Ile, Val, o Met. La SEQ ID NO: 33 generalmente se corresponde con las posiciones 1-275 de la SEQ ID NO: 11 natural, no sustituida con la excepción de que en la SEQ ID NO: 33, uno o más de uno o más de Ser116, Ser117, Gly118, y Thr119 se sustituye. Preferentemente, la variante funcional comprende (a) la SEQ ID NO: 33, en donde Xaa116 es Ala, Xaa117 es Ser, Xaa118 es Gly, y Xaa119 es Thr, o (b) la SEQ ID NO: 33, en donde Xaa116 es Ser, Xaa117 es Ala, Xaa118 es Gly, y Xaa119 es Thr. Aunque la SEQ ID NO: 33 puede comprender CDR3a SEQ ID NO: 5 de tipo silvestre, preferentemente, la SEQ ID NO: 33 no comprende la SEQ ID NO: 5. La SEQ ID NO: 34 generalmente se corresponde con las posiciones 1-313 de la SEQ ID NO: 12 natural, no sustituida con la excepción de que en la SEQ ID nO: 34, uno o más de uno o más de Arg115, Thr116, Gly117, y Pro118 se sustituye. Aunque la SeQ ID NO: 34 puede comprender CDR3p SEQ ID NO: 8 de tipo silvestre, preferentemente, la SEQ ID NO: 34 no comprende la SEQ ID NO: 8.
Como los TCR divulgados en el presente documento, las variantes funcionales descritas en el presente documento comprenden dos cadenas de polipéptidos, cada una de las cuales comprende una región variable comprendiendo una CDR1, una CDR2 y una CDR3 de un TCR. Preferentemente, la primera cadena de polipéptidos comprende una CDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3 (CDR1 de la cadena a), una CDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4 (CDR2 de la cadena a), y una CDR3 sustituida que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 29 (CDR3 sustituido de la cadena a) y la segunda cadena de polipéptidos comprende una CDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 (CDR1 de la cadena p), una CDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 7 (CDR2 de la cadena p), y una CDR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 (CDR3 de la cadena p). En el presente documento también se divulga que la primera cadena de polipéptidos comprende un CDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de la sEq ID NO: 3 (CDR1 de la cadena a), una CDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4 (CDR2 de la cadena a), y una CDR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 5 (CDR3 de la cadena a), y la segunda cadena de polipéptidos comprende una CDR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 (CDR1 de la cadena p), una CDR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 7 (CDR2 de la cadena p), y una c DR3 sustituida que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 30 (CDR3 sustituido de la cadena p). En este sentido, la variante funcional de la invención de un TCR de la invención puede comprender las secuencias de aminoácidos seleccionadas del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 3-5; las SEQ ID NO: 3-4 y 29; las SEQ ID NO: 6-8; y las SEQ ID NO: 6-7 y 30. Preferentemente la variante funcional de un TCR comprende las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 3-4, 29, y 6-8; las SEQ ID NO: 3-7 y 30; o las SEQ ID NO: 3-4, 29, 6-7, y 30. Más preferentemente, la variante funcional de un TCR comprende las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 3-4, 29, y 6-8.
Como alternativa o adicionalmente, la variante funcional de un TCR puede comprender una secuencia de aminoácidos sustituida de una región variable de un TCR que comprende las CDR establecidas anteriormente. En este sentido, el TCR puede comprender la secuencia de aminoácidos sustituida de la SEQ ID NO: 31 (la región variable sustituida de una cadena a), 10 (la región variable de una cadena p), ambas SEQ ID NO: 31 y 10, la secuencia de aminoácidos sustituida de la SEQ ID NO: 32 (la región variable sustituida de una cadena p), 9 (la región variable de una cadena a), ambas SEQ ID NO: 9 y 32, o ambas SEQ ID NO: 31 y 32. Preferentemente, la variante funcional de un TCR comprende las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 31 y 10 o las SEQ ID NO: 32 y 9. Más preferentemente, la variante de un TCR comprende las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 31 y 10.
Como alternativa o adicionalmente, la variante funcional de un TCR puede comprender una cadena a sustituida de un TCR y una cadena p de un TCR. Cada una de las cadenas a y p del TCR puede comprender independientemente cualquier secuencia de aminoácidos. Preferentemente, la cadena a sustituida comprende una región variable sustituida de una cadena a como se estableció anteriormente. En este sentido, la cadena a sustituida de un TCR puede comprender la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 33. Una cadena a sustituida de este tipo se puede emparejar con cualquier cadena p de un TCR. Preferentemente, la cadena p del TCR comprende la región variable de una cadena p como se estableció anteriormente. En este sentido, el tCr puede comprender la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 12 o la secuencia de aminoácidos sustituida SEQ ID NO: 34. Una cadena p sustituida de este tipo se puede emparejar con cualquier cadena a de un TCR. En este sentido, el TCR puede comprender la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 11 o 33. La variante funcional de un TCR, por lo tanto, puede comprender la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID NO: 11, 12, 33, 34, ambas SEQ ID NO: 33 y 34; ambas SEQ ID NO: 11 y 34; o ambas SEQ ID NO: 12 y 33. Preferentemente, la variante funcional de un Tc R comprende las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 11 y 34 o las SEQ ID NO: 12 y 33. Más preferentemente, la variante funcional de un TCR comprende las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 12 y 33.
El TCR (o la variante funcional del mismo) divulgado en el presente documento puede comprender una región constante humana. En este sentido, el TCR (o la variante funcional del mismo) puede comprender una región constante humana que comprende las SEQ ID NO: 23 o 35 (región constante humana de una cadena a), las SEQ ID NO: 24 o 36 (región constante humana de la cadena p), ambas SEQ ID NO: 23 y 24, o ambas SEQ ID NO: 35 y 36. Preferentemente, el TCR (o la variante funcional del mismo) comprende ambas SEQ ID NO: 23 y 24.
El TCR (o la variante funcional del mismo) divulgado en el presente documento puede comprender un TCR quimérico de ratón/humano (o la variante funcional del mismo). En este sentido, el TCR (o la variante funcional del mismo) puede comprender una región constante de ratón que comprende la SEQ ID NO: 25 (región constante de ratón de una cadena a). La SEQ ID NO: 26 (región constante de ratón de la cadena p), o ambas SEQ ID NO: 25 y 26. Preferentemente, el TCR (o la variante funcional del mismo) comprende ambas SEQ ID NO: 25 y 26.
El TCR quimérico de ratón/humano (o la variante funcional o la porción funcional del mismo) puede comprender cualquiera de las CDR establecidas anteriormente. En este sentido, el TCR quimérico de ratón/humano (o la variante funcional o la porción funcional del mismo) puede comprender la secuencia de aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 3-5; las SEQ ID NO: 13-15; las SEQ ID NO: 16-18; las SEQ ID NO: 3-4 y 29; las SeQ ID NO: 6-8; y las SEQ ID NO: 6-7 y 30. Preferentemente, el TCR quimérico de ratón/humano (o la variante funcional o la porción funcional del mismo) comprende las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 3-8; las SEQ ID NO: 13-18; las SEQ ID NO: 3-4, 29, y 6-8; las SEQ ID NO: 3-7 y 30; o las SEQ ID NO: 3-4, 29, 6-7, y 30. Más preferentemente, el TCR quimérico de ratón/humano (o la variante funcional o la porción funcional del mismo) comprende las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 3-4, 29, y 6-8 o las SEQ ID NO: 3-8.
Como alternativa o adicionalmente, el TCR quimérico de ratón/humano (o la variante funcional o porción funcional del mismo) puede comprender cualquiera de las regiones variables anteriormente establecidas. En este sentido, el TCR quimérico de ratón/humano (o la variante funcional o la porción funcional del mismo) puede comprender la secuencia de aminoácidos sustituidos de la SEQ ID NO: 31 (la región variable sustituida de una cadena a), la SEQ ID NO: 10 o 20 (la región variable de una cadena p), la secuencia de aminoácidos sustituida de la SEQ ID NO: 32 (la región variable sustituida de una cadena p), la SEQ ID NO: 9 o 19 (la región variable de una cadena a), ambas SEQ ID NO: 9 y 32, ambas SEQ ID NO: 31 y 32, ambas SEQ ID NO: 31 y 10, ambas SEQ ID NO: 9 y 10, o ambas SEQ ID NO: 19 y 20. Preferentemente, el tCr quimérico de ratón/humano (o la variante funcional o porción funcional del mismo) comprende las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 31 y 10, las SEQ ID NO: 9 y 10, o las SEQ ID NO: 32 y 9. Más preferentemente, la variante funcional o porción funcional de un TCR comprende las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 31 y 10, o las SEQ ID nO: 9 y 10.
Como alternativa o adicionalmente, el TCR quimérico de ratón/humano (o la variante funcional o porción funcional del mismo) puede comprender una cadena a de un TCR (o la variante funcional o porción funcional del mismo) y una cadena p de un TCR (o la variante funcional o porción funcional del mismo). Cada una de la cadena a y la cadena p del TCR quimérico de ratón/humano (o la variante funcional o porción funcional del mismo) puede comprender independientemente cualquier secuencia de aminoácidos. Preferentemente, la cadena a comprende la región variable de una cadena a tal como se estableció anteriormente. En este sentido, el TCR quimérico de ratón/humano (o la variante funcional o porción funcional del mismo) puede comprender la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 27. Un TCR quimérico de ratón/humano (o la variante funcional o porción funcional del mismo) de este tipo puede emparejarse con cualquier cadena p de un TCR (o la variante funcional o porción funcional del mismo). Preferentemente, la cadena p del TCR quimérico de ratón/humano (o la variante funcional o porción funcional del mismo) comprende la región variable de una cadena p como se estableció anteriormente. En este sentido, el TCR quimérico de ratón/humano (o la variante funcional o porción funcional del mismo) puede comprender la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 28. El TCR quimérico de ratón/humano (o la variante funcional o porción funcional del mismo), por lo tanto, puede comprender la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 27 o 28, o ambas SEQ ID NO: 27 y 28. Preferentemente, el TCR comprende las secuencias de aminoácidos las SEQ ID NO: 27 y 28.
En el presente documento se divulga también un polipéptido que comprende una porción funcional de cualquiera de los TCR o las variantes funcionales descritas en el presente documento. El término "polipéptido" tal como se usa en el presente documento incluye oligopéptidos y se refiere a una cadena simple de aminoácidos conectados por uno o más enlaces peptídicos.
Con respecto a los polipéptidos, la porción funcional puede ser cualquier porción que comprende los aminoácidos contiguos del TCR (o la variante funcional del mismo) del cual es una parte, con la condición de que la porción funcional específicamente se una a MAGE-A3 y/o a MAGE-A6. El término "porción funcional" cuando se usa en referencia a un TCR (o variante funcional del mismo) se refiere a cualquier parte del TCR (o la variante funcional del mismo) desvelada en el presente documento, cuya parte o fragmento conserva la actividad biológica del TCR (o la variante funcional del mismo) de cual es una parte (el TCR madre o la variante funcional madre del mismo). Las porciones funcionales abarcan, por ejemplo, aquellas partes de un TCR (o la variante funcional del mismo) que conservan la capacidad para unirse específicamente a MAGE-A3 (por ejemplo, en un HLA-DPp1*04-manera dependiente) o MAGE-A6, o detectar, tratar o prevenir el cáncer de un modo similar, del mismo modo o en mayor grado que el TCR originario (o la variante funcional del mismo). En referencia al TCR originario (o la variante funcional del mismo), la porción funcional puede comprender, por ejemplo, aproximadamente el 10 %, 25 %, 30 %, 50 %, 68 %, 80 %, 90 %, 95 %, o más, del TCR originario (o la variante funcional del mismo).
La porción funcional puede comprender aminoácidos adicionales en el extremo amino terminal o carboxilo terminal de la porción o en ambos extremos terminales, cuyos aminoácidos adicionales no se encuentran en la secuencia de aminoácidos del TCR originario o la variante funcional del mismo. De manera deseable, los aminoácidos adicionales no interfieren con la función biológica de la porción funcional, por ejemplo, que se une específicamente a MAGE-A3 y/o MAGE-A6; y/o que tiene la capacidad para detectar el cáncer, tratar o prevenir el cáncer, etc. De manera más deseable, los aminoácidos adicionales mejoran la actividad biológica, en comparación con la actividad biológica del TCR originario o la variante funcional del mismo.
El polipéptido puede comprender una porción funcional de cualquiera o ambas de las cadenas a y p de los TCR o la variante funcional del mismo divulgado en el presente documento, tal como una porción funcional que comprende una o más de CDR1, CDR2 y CDR3 de la(s) región(es) variable(s) de la cadena a y/o de la cadena p de un TCR o una variante funcional del mismo de la invención. En este sentido, el polipéptido puede comprender una porción funcional que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3 o 13 (CDR1 de la cadena a), 4 o 14 (CDR2 de la cadena a), 5, 15, o 29 (CDR3 de la cadena a), 6 o 16 (CDR1 de la cadena p), 7 o 17 (CDR2 de la cadena p), 8, 18, o 30 (CDR3 de la cadena p), o una combinación de los mismos. Preferentemente, el polipéptido comprende una porción funcional que comprende las SEQ ID NO: 3-5; 3-4 y 29; 6-8; 6-7 y 30; 13-15; 16-18; todo de las SEQ ID NO: 3-8; todo de las SEQ ID NO: 13-18; todo de las SEQ ID NO: 3-4, 29, y 6-8; todo de las SEQ ID NO: 3-7 y 30; o todo de las SEQ ID NO: 3-4, 29, 6-7, y 30. Más preferentemente, el polipéptido comprende una porción funcional que comprende las secuencias de aminoácidos de todas las SEQ ID NO: 3-8 o todo de las SEQ ID NO: 3­ 4, 29, y 6-8.
Como alternativa o adicionalmente, el polipéptido de la invención puede comprender, por ejemplo, la región variable del TCR o la variante funcional del mismo que comprende una combinación de las regiones CDR anteriormente establecidas. En este sentido, el polipéptido puede comprender la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 9, 19, o 31 (la región variable de una cadena a), SEQ ID NO: 10, 20, o 32 (la región variable de una cadena p), ambas SEQ ID No : 9 y 10, ambas SEQ ID NO: 19 y 20; ambas SEQ ID NO: 31 y 32; ambas SEQ ID NO: 9 y 32; o ambas SEQ ID NO: 10 y 31. Preferentemente, el polipéptido comprende las secuencias de aminoácidos de ambas SEQ ID NO: 9 y 10 o ambas SEQ ID NO: 10 y 31.
Como alternativa o adicionalmente, el polipéptido puede comprender la longitud completa de una cadena a o p de uno de los TCR o la variante funcional del mismo descrito en el presente documento. En este sentido, el polipéptido puede comprender una secuencia de aminoácidos de las SeQ ID NO: 11, 12, 21, 22, 27, 28, 33, o 34. Como alternativa, el polipéptido divulgado en el presente documento puede comprender las cadenas a y p de los TCR o las variantes funcionales de los mismos descritos en el presente documento. Por ejemplo, el polipéptido puede comprender las secuencias de aminoácidos de ambas SEQ ID NO: 11 y 12, ambas SEQ ID NO: 21 y 22, ambas SEQ ID NO: 33 y 34, ambas SEQ ID NO: 11 y 34, ambas SEQ ID NO: 12 y 33, o ambas SEQ ID NO: 27 y 28. Preferentemente, el polipéptido comprende las secuencias de aminoácidos de ambas SEQ ID NO: 11 y 12, ambas SEQ ID NO: 33 y 12, o ambas SEQ ID NO: 27 y 28.
La divulgación se refiere además a una proteína que comprende al menos uno de los polipéptidos descritos en el presente documento. Por "proteína" se entiende una molécula que comprende una o más cadenas de polipéptidos. La proteína desvelada en el presente documento puede comprender una primera cadena de polipéptidos que comprende las secuencias de aminoácidos de las sEq ID NO: 3-5, las SEQ iD NO: 13-15, o las SEQ ID NO: 3-4 y 29 y una segunda cadena de polipéptidos que comprende la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID NO: 6-8, las SeQ ID NO: 16-18, o las SEQ ID NO: 6-7 y 30. Como alternativa o adicionalmente, la proteína desvelada en el presente documento puede comprender una primera cadena de polipéptidos que comprende la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID NO: 9, 19, o 31 y una segunda cadena de polipéptidos que comprende la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID NO: 10, 20, o 32. La proteína desvelada en el presente documento puede, por ejemplo, comprender una primera cadena de polipéptidos que comprende la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID NO: 11, 21, 27, o 33 y una segunda cadena de polipéptidos que comprende la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID NO: 12, 22, 28, o 34. En este caso, la proteína desvelada en el presente documento puede ser un TCR. Como alternativa, si, por ejemplo, la proteína comprende una sola cadena de polipéptidos que comprende las SEQ ID NO: 11, 21, 27, o 33 y las SEQ iD NO: 12, 22, 28, o 34, o si la primera y/o segunda cadena(s) de polipéptidos de la proteína además comprende(n) otras secuencias de aminoácidos, por ejemplo, una secuencia de aminoácidos que codifica una inmunoglobulina o una porción de la misma, entonces la proteína puede ser una proteína de fusión. En este sentido, la divulgación también proporciona una proteína de fusión que comprende al menos un polipéptido descrito en el presente documento junto con al menos otro polipéptido. El otro polipéptido puede existir como un polipéptido separado de la proteína de fusión o puede existir como un polipéptido, el cual se expresa en marco (en tándem) con uno de los polipéptidos descritos en el presente documento. El otro polipéptido puede codificar cualquier molécula proteínica o peptídica o una porción del mismo, que incluye, pero sin limitación una inmunoglobulina, CD3, CD4, CD8, una molécula del MHC, una molécula CD1, por ejemplo, CD1a, CD1b, CD1c, CD1d, etc.
La proteína de fusión puede comprender una o más copias del polipéptido divulgado en el presente documento y/o una o más copias del otro polipéptido. Por ejemplo, la proteína de fusión puede comprender 1, 2, 3, 4, 5, o más, copias del polipéptido divulgado en el presente documento y/o del otro polipéptido. Los métodos adecuados para hacer las proteínas de fusión se conocen en la técnica e incluyen, por ejemplo, los métodos recombinantes. Ver, por ejemplo, Choi et al., Mol. Biotechnol. 31: 193-202 (2005).
Los TCR (y las porciones funcionales y las variantes funcionales de los mismos), polipéptidos, y proteínas pueden expresarse como una sola proteína que comprende un péptido enlazador que une la cadena a y la cadena p. En este sentido, los TCR (y las variantes funcionales y las porciones funcionales del mismo), polipéptidos y proteínas que comprenden las s Eq ID NO: 11, 21, 27, o 33 y las SEQ ID NO: 12, 22, 28, o 34 además pueden comprender un péptido enlazador. El péptido enlazador puede facilitar la expresión de un TCR recombinante (incluyendo las porciones funcionales y variantes funcionales de los mismos), polipéptido y/o proteína en una célula hospedadora. Tras la expresión de la construcción que incluye el péptido enlazador por una célula hospedadora, el péptido enlazador puede escindirse, dando como resultado las cadenas a y p separadas.
La proteína desvelada en el presente documento puede ser un anticuerpo recombinante que comprende al menos uno de los polipéptidos descritos en el presente documento. Tal como se usa en el presente documento, "anticuerpo recombinante" se refiere a una proteína recombinante (por ejemplo, diseñada genéticamente) que comprende al menos uno de los polipéptidos divulgados en el presente documento y una cadena de polipéptidos de un anticuerpo o una porción del mismo. El polipéptido de un anticuerpo o la porción del mismo puede ser una cadena pesada, una cadena ligera, una región constante o variable de una cadena ligera o pesada, un fragmento variable de cadena sencilla (scFv), o un fragmento de un anticuerpo Fc, Fab, o F(ab)2', etc. La cadena del polipéptido de un anticuerpo o porción del mismo puede existir como un polipéptido separado del anticuerpo recombinante. Como alternativa, la cadena de polipéptido de un anticuerpo o porción del mismo puede existir como un polipéptido, que se expresa en marco (en tándem) con el polipéptido divulgado en el presente documento. El polipéptido de un anticuerpo o porción del mismo puede ser un polipéptido de cualquier anticuerpo o cualquier fragmento del anticuerpo, incluyendo cualquiera de los anticuerpos y fragmentos de los anticuerpos descritos en el presente documento.
El TCR (o la variante funcional del mismo), polipéptido o proteína puede consistir esencialmente en la secuencia o secuencias de aminoácidos específicos descritos en el presente documento, de manera que los otros componentes del TCR (o variante funcional del mismo), polipéptido, o proteína, por ejemplo, los otros aminoácidos, no cambian materialmente la actividad biológica del t Cr (o la variante funcional del mismo), polipéptido o proteína. En este sentido, el TCR (o la variante funcional del mismo), polipéptido o proteína, puede por ejemplo, consistir esencialmente en la secuencia de aminoácidos de las s Eq ID nO: 11, 12, 21, 22, 27, 28, 33, y 34, ambas SEQ ID NO: 11 y 12, ambas SEQ ID NO: 21 y 22, ambas SEQ ID NO: 27 y 28, ambas SEQ ID NO: 33 y 34, ambas SEQ ID NO: 11 y 34, o ambas SEQ ID NO: 12 y 33. También, por ejemplo, los TCR (incluyendo las variantes funcionales de los mismos), polipéptidos o proteínas pueden consistir esencialmente en las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 9, 10, 19, 20, 31, 32, ambas SEQ ID NO: 9 y 10, ambas SEQ ID NO: 19 y 20, ambas SEQ ID NO: 31 y 32, ambas SEQ ID NO: 9 y 32, ambas SEQ ID NO: 10 y 31. Asimismo, los TCR (incluyendo las variantes funcionales de los mismos), polipéptidos o proteínas pueden consistir esencialmente de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3 o 13 (CDR1 de la cadena a), SEQ ID NO: 4 o 14 (CDR2 de la cadena a), SEQ ID NO: 5, 15, o 29 (CDR3 de la cadena a), SEQ ID NO: 6 o 16 (CDR1 de la cadena p), SEQ ID NO: 7 o 17 (CDR2 de la cadena p), SEQ ID NO: 8, 18, o 30 (CDR3 de la cadena p), o cualquier combinación de los mismos, por ejemplo las SEQ ID NO: 3-5; 6-8; 3-8; 13-15; 16-18; 13-18; 3-4 y 29; 6-7 y 30; 3-4, 29, y 6-8; 3-7 y 30; o 3-4, 29, 6-7, y 30.
Los TCR, polipéptidos y proteínas de la invención (incluyendo las variantes funcionales de los mismos) pueden ser de cualquier longitud, es decir, pueden comprender cualquier número de aminoácidos, siempre y cuando los TCR, polipéptidos o proteínas (o variantes funcionales de los mismos) conserven su actividad biológica, es decir, la capacidad para unirse específicamente a MAGE-A3 y/o MAGE-A6, para detectar el cáncer en un mamífero, o tratar o prevenir el cáncer en un mamífero, etc. Por ejemplo, el polipéptido puede estar en el intervalo de 50 a aproximadamente 5000 aminoácidos de longitud, tal como 50, 70, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 o más aminoácidos de longitud. En este sentido, los polipéptidos divulgados en el presente documento también incluyen oligopéptidos.
Los TCR, los polipéptidos y las proteínas divulgados en el presente documento (incluyendo las variantes funcionales de los mismos) de la invención pueden comprender los aminoácidos sintéticos en lugar de uno o más aminoácidos naturales. Dichos aminoácidos sintéticos se conocen en la técnica e incluyen, por ejemplo ácido aminociclohexano carboxílico, norleucina, ácido a-amino n-decanoico, homoserina, S-acetilaminometil-cisteína, trans-3- y trans-4-hidroxiprolina, 4-aminofenilalanina, 4- nitrofenilalanina, 4-clorofenilalanina, 4-carboxifenilalanina, p-fenilserina p-hidroxifenilalanina, fenilglicina, a-naftilalanina, ciclohexilalanina, ciclohexilglicina, ácido indolin-2-carboxílico, ácido 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina-3-carboxílico, ácido aminomalónico, monoamida del ácido aminomalónico, N'-bencil-N'-metil-lisina, N',N'-dibencil-lisina, 6-hidroxilisina, ornitina, ácido a-aminociclopentano carboxílico, ácido a-aminociclohexano carboxílico, ácido a-aminocicloheptano carboxílico, ácido a-(2-amino-2-norbornano)-carboxílico, ácido a j -diaminobutírico, ácido a,p-diaminopropiónico, homofenilalanina y a-terc-butilglicina.
Los TCR, los polipéptidos y las proteínas divulgados en el presente documento (incluyendo las variantes funcionales de los mismos) pueden ser glicosilados, amidados, carboxilados, fosforilados, esterificados, N-acetilados, ciclizados, por ejemplo, mediante un puente de disulfuro o convertidos en una sal de adición de ácido y/u opcionalmente dimerizados o polimerizados o conjugados.
El TCR, el polipéptido y/o proteína divulgados en el presente documento (incluyendo las variantes funcionales de los mismos) puede obtenerse por los métodos conocidos en la técnica. Los métodos apropiados de síntesis de novo de los polipéptidos y las proteínas se describen en las referencias, tales como Chan et al., Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis, Oxford University Press, Oxford, Reino Unido, 2005; Peptide and Protein Drug Analysis, ed. Reid, R., Marcel Dekker, Inc., 2000; Epitope Mapping, ed. Westwood et al., Oxford University Press, Oxford, Reino Unido, 2000; y la Patente de EE.UU. N°. 5.449.752. También los polipéptidos y proteínas pueden producirse recombinantemente usando los ácidos nucleicos descritos en el presente documento usando los métodos recombinantes convencionales. Véase, por ejemplo, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3ra ed., Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY 2001; y Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates y John Wiley & Sons, NY, 1994. Además, algunos de los TCR, polipéptidos y proteínas divulgados en el presente documento (incluyendo las variantes funcionales de los mismos) pueden aislarse y/o purificarse de una fuente, tal como una planta, una bacteria, un insecto, un mamífero, por ejemplo, una rata, un ser humano, etc. Los métodos de aislamiento y purificación son bien conocidos en la técnica. Como alternativa, los TCR, los polipéptidos y/o proteínas descritos en el presente documento (incluyendo las variantes funcionales de los mismos) pueden sintetizarse comercialmente por las empresas tales como Synpep (Dublín, CA), Peptide Technologies Corp. (Gaithersburg, MD), y Multiple Peptide Systems (San Diego, CA). En este sentido, los TCR (incluyendo las variantes funcionales de los mismos), polipéptidos y proteínas pueden sintetizarse, recombinarse, aislarse y/o purificarse.
En el ámbito de la invención están incluidas células hospedadoras y poblaciones de células hospedadoras. Se divulgan además conjugados, por ejemplo, bioconjugados, que comprenden cualquiera de los TCR, polipéptidos o proteínas (incluyendo cualquiera de las variantes funcionales de los mismos), ácidos nucleicos, vectores de expresión recombinante o anticuerpos o porciones de unión al antígeno de los mismos. Los conjugados, así como los métodos de síntesis de los conjugados en general, se conocen en la técnica (Véase, por ejemplo, Hudecz, F., Methods Mol. Biol. 298: 209-223 (2005) y Kirin et al., Inorg Chem. 44(15): 5405-5415 (2005)).
Por "ácido nucleico" tal como se usa en el presente documento se incluye "polinucleótido", "oligonucleótido" y "molécula de ácido nucleico" y generalmente se refiere a un polímero de ADN o ARN, el cual puede ser monocatenario o bicatenario, sintetizada u obtenida (por ejemplo, aislado y/o purificado) de fuentes naturales, que puede contener nucleótidos naturales, no naturales o alterados, y que puede contener un enlace entre nucleótidos natural, no natural o alterado, tal como un enlace de fosforoamidato o un enlace defosforotioato, en lugar de fosfodiéster encontrado entre los nucleótidos de un oligonucleótido no modificado. Generalmente se prefiere que el ácido nucleico no comprenda ninguna inserción, deleción, inversión y/o sustitución. Sin embargo, puede ser apropiado en algunos ejemplos, como se trata en el presente documento, para el ácido nucleico comprender una o más inserciones, deleciones, inversiones y/o sustituciones.
Preferentemente, los ácidos nucleicos divulgados en el presente documento son recombinantes. Tal como se usa en el presente documento, el término "recombinante" se refiere a (i) moléculas que se construyen fuera de las células vivas mediante la unión natural o sintética de los segmentos de ácidos nucleicos a las moléculas del ácido nucleico que pueden replicarse en una célula viva o (ii) moléculas que son resultado de la replicación de aquellas descritas anteriormente en (i). Para los fines del presente documento, la replicación puede ser replicación in vitro o replicación in vivo.
Los ácidos nucleicos pueden construirse basándose en la síntesis química y/o en reacciones de unión enzimática usando los procedimientos conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Sambrook et al., citado anteriormente, y Ausubel et al., citado anteriormente. Por ejemplo, un ácido nucleico puede sintetizarse químicamente usando nucleótidos de origen natural o nucleótidos modificados de distintas formas diseñados para incrementar la estabilidad biológica de las moléculas o para incrementar la estabilidad física del dúplex formado en la hibridación (por ejemplo, derivados de fosforotioato y nucleótidos sustituidos con acridina). Los ejemplos de nucleótidos modificados que pueden usarse para generar los ácidos nucleicos incluyen pero no se limitan a 5-fluorouracilo, 5-bromouracilo, 5-chlorouracilo, 5-iodouracilo, hipoxantina, xantina, 4-acetilcitosina, 5-(carboxihidroximetil) uracilo, 5-carboximetilaminometil-2-tiouridina, 5-carboximetilaminometiluracil, dihidrouracilo, beta-D-galactosilqueosina, inosina, N6-isopenteniladenina, 1-metilguanina, 1-metilinosina, 2,2-dimetilguanina, 2-metiladenina, 2-metilguanina, 3-metilcitosina, 5-metilcitosina, adenina N6-substituida, 7-metilguanina, 5-metilaminometiluracilo, 5-metoxiaminometil-2-tiouracilo, beta-D-mannosilqueosina, 5'-metoxicarboximetiluracilo, 5-metoxiuracilo, 2-metiltio-N6-isopenteniladenina, ácido uracil-5-oxiacético (v), wibutoxosina, pseudouracilo, queosina, 2-tiocitosina, 5-metil-2-tiouracilo, 2-tiouracilo, 4-tiouracilo, 5-metiluracilo, metiléster del ácido uracil-5-oxiacético, 3-(3-amino-3-N-2-carboxipropil) uracilo, y 2,6-diaminopurina. Alternativamente, uno o más de los ácidos nucleicos divulgados en el presente documento pueden comprarse en empresas tales como Macromolecular Resources (Fort Collins, CO) y Synthegen (Houston, TX).
El ácido nucleico puede comprender cualquier secuencia de nucleótidos que codifica cualquiera de los TCR, polipéptidos, proteínas o variantes funcionales de los mismos descritos en el presente documento. Por ejemplo, el ácido nucleico puede comprender, consistir en o consistir esencialmente en cualquiera de uno o más de la secuencia de nucleótidos las SEQ ID NO: 37-44.
La divulgación también proporciona un ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que es complementaria a la secuencia de nucleótidos de cualquiera de los ácidos nucleicos descritos en el presente documento o una secuencia de nucleótidos que hibrida bajo condiciones rigurosas con la secuencia de nucleótidos de cualquiera de los ácidos nucleicos descritos en el presente documento.
La secuencia de nucleótidos que híbrida en condiciones rigurosas preferentemente híbrida en condiciones muy severas. Por "condiciones muy rigurosas" se entiende que la secuencia de nucleótidos específicamente hibrida con una secuencia diana (la secuencia de nucleótidos de cualquiera de los ácidos nucleicos descritos en el presente documento) en una cantidad que es detectablemente mayor que la hibridación no específica. Las condiciones muy rigurosas incluyen condiciones que distinguirían un polinucleótido con una secuencia complementaria exacta o una que contiene solamente un poco de desajustes dispersos de una secuencia aleatoria que pasa por tener pocas regiones pequeñas (por ejemplo, de 3-10 bases) que coinciden con la secuencia de nucleótidos. Dichas pequeñas regiones de complementariedad son más accesibles de fusionarse que un complemento de longitud completa de 14­ 17 o más bases y la hibridación de alta rigurosidad los hace más fácilmente distinguibles. Las condiciones de relativamente alta rigurosidad incluirán, por ejemplo, condiciones de baja salinidad y/o alta temperatura, tal como se proporcionan por aproximadamente 0,02-0,1 M de NaCl o el equivalente, en temperaturas de aproximadamente 50­ 70 °C. Dichas condiciones de alta rigurosidad toleran pocos desajustes, si los hay, entre la secuencia de nucleótidos y la cadena de molde o diana y son particularmente adecuadas para detectar la expresión de cualquiera de los TCR (incluyendo las porciones funcionales y variantes funcionales de los mismos). Generalmente se aprecia que las condiciones pueden volverse más rigurosas por la adición de elevadas cantidades de formamida.
La divulgación también proporciona un ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente el 70 % o más, por ejemplo, aproximadamente el 80 %, aproximadamente el 90 %, aproximadamente el 91 %, aproximadamente el 92 %, aproximadamente el 93 %, aproximadamente el 94 %, aproximadamente el 95 %, aproximadamente el 96 %, aproximadamente el 97 %, aproximadamente el 98 %, o aproximadamente el 99 % idénticas a cualquiera de los ácidos nucleicos descritos en el presente documento.
Los ácidos nucleicos divulgados en el presente documento pueden incorporarse en un vector de expresión recombinante. En este sentido, se proporcionan vectores de expresión recombinantes que comprenden cualquiera de los ácidos nucleicos divulgados en el presente documento. Para los fines del presente documento, el término "vector de expresión recombinante" significa una construcción de polinucleótidos u oligonucleótidos genéticamente modificados que permite la expresión de un ARNm, una proteína, un polipéptido o un péptido por una célula hospedadora, cuando la construcción comprende una secuencia de nucleótidos que codifica el ARNm, la proteína, el polipéptido o el péptido y el vector se pone en contacto con la célula en condiciones suficientes para que se exprese el ARNm, la proteína, el polipéptido o el péptido dentro de la célula. Los vectores divulgados en el presente documento no son completamente de origen natural. Sin embargo, las partes de los vectores pueden ser de origen natural. Los vectores de expresión recombinante pueden comprender cualquier tipo de nucleótidos, incluyendo, pero sin limitación ADN y ARN, los cuales pueden ser monocatenarios o bicatenarios, sintetizados u obtenidos en parte de las fuentes naturales y las cuales pueden contener nucleótidos alterados o no naturales o naturales. Los vectores de expresión recombinante pueden comprender enlaces entre nucleótidos de origen natural o no natural, o ambos tipos de enlaces. Preferentemente, los nucleótidos o los enlaces entre nucleótidos naturales o no naturales no pueden impedir la transcripción o la replicación del vector.
El vector de expresión recombinante divulgado en el presente documento puede ser cualquier vector de expresión recombinante adecuado y se puede usar para transformar o transfectar cualquier célula hospedadora adecuada. Los vectores adecuados incluyen aquellos diseñados para la propagación y expansión o para la expresión o ambos, tales como plásmidos y virus. El vector puede seleccionarse del grupo que consiste en las series pUC (Fermentas Life Sciences), las series pBluescript (Stratagene, LaJolla, CA), las series pET (Novagen, Madison, WI), las series pGEX (Pharmacia Biotech, Uppsala, Suecia), y las series pEX (Clontech, Palo Alto, CA). Los vectores bacteriófagos, tales como AGT10, AGT11, AZaplI (Stratagene), AEMBL4, y ANM1149, también pueden usarse. Los ejemplos de los vectores de expresión en plantas incluyen pBl01, pBI101.2, pBI101.3, pBI121 y pBIN19 (Clontech). Los ejemplos de vectores de expresión en animales incluyen pEUK-Cl, pMAM y pMAMneo (Clontech). De preferencia, el vector de expresión recombinante es un vector vírico, por ejemplo, un vector retrovírico.
Los vectores de expresión recombinante divulgados en el presente documento pueden prepararse usando las técnicas de ADN recombinante convencionales descritas en, por ejemplo, Sambrook et al., citado anteriormente, y Ausubel et al., citado anteriormente. Las construcciones de los vectores de expresión, que son circulares o lineales, pueden prepararse para que contengan un sistema de replicación funcional en una célula hospedadora procariótica o eucariótica. Los sistemas de replicación pueden derivarse, por ejemplo, de ColEl, plásmido 2 p, A, SV40, virus del papiloma bovino y similares.
De manera deseable, el vector de expresión recombinante comprende secuencias reguladoras, tales como codones de transcripción e inicio y de terminación de la transcripción y de la traducción, que son específicos para el tipo de célula hospedadora (por ejemplo, bacterias, hongos, plantas o animales) en la cual el vector se introduce, como sea apropiado y se tiene en cuenta si el vector es de ADN o de ARN.
El vector de expresión recombinante puede incluir uno o más genes marcadores, los cuales permiten la selección de células hospedadoras transfectadas o transformadas. Los genes marcadores incluyen resistencia biocida, por ejemplo, resistencia a los antibióticos, a los metales pesados, etc. complementación en una célula hospedadora auxótrofa para proporcionar protótrofos y similares. Los genes marcadores adecuados para los vectores de expresión incluyen, por ejemplo, genes de resistencia a la neomicina/G418, genes de resistencia a la higromicina, genes de resistencia al histidinol, genes de resistencia a la tetraciclina y genes de resistencia a la ampicilina.
El vector de expresión recombinante puede comprender un promotor natural o no natural operablemente unido a la secuencia de nucleótidos que codifica el TCR, polipéptido o proteína (incluyendo las variantes funcionales del mismo), o la secuencia de nucleótidos que es complementaria a o la cual hibrida con la secuencia de nucleótidos que codifica el TCR, polipéptido o proteína (incluyendo las variantes funcionales del mismo). La selección de promotores, por ejemplo, fuertes, débiles, inducibles, específico de tejido y específico de desarrollo, está dentro de la experiencia del experto. De manera similar, la combinación de una secuencia de nucleótidos con un promotor también está dentro de la experiencia del experto. El promotor puede ser un promotor no vírico, o un promotor vírico, por ejemplo, un promotor de citomegalovirus (CMV), un promotor del SV40, un promotor del RSV y un promotor encontrado en la repetición terminal larga del virus de las células madre de murino.
Los vectores de expresión recombinante pueden diseñarse para expresión transitoria, para expresión estable o para ambas. También, los vectores de expresión recombinante pueden estar hecho para la expresión constitutiva o para la expresión inducible. Además, los vectores de expresión recombinante pueden estar hechos para que incluyan un gen suicida.
Como se usa en el presente documento, la expresión "gen suicida" se refiere a un gen que provoca que la célula que expresa el gen suicida muera. El gen suicida puede ser un gen que confiere sensibilidad a un agente, por ejemplo, un fármaco, en la célula en la cual el gen se expresa y causa que la célula muera cuando la célula se pone en contacto con o se expone al agente. Los genes suicidas son bien conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, Suicide Gene Therapy: Methods and Reviews, Springer, Caroline J. (Centro Británico de Búsqueda del Cáncer para los Terapistas en el Instituto de Búsqueda del Cáncer, Sutton, Surrey, Reino Unido), Humana Press, 2004) e incluye, por ejemplo, el gen de la timidina cinasa (TK) del virus del herpes simple (HSV), citosina daminasa, fosforilasa de nucleósido purina y nitrorreductasa.
La divulgación proporciona además una célula hospedadora que comprende cualquiera de los vectores de expresión recombinante descritos en el presente documento. Tal como se usa en el presente documento, la expresión "célula hospedadora" se refiere a cualquier tipo de célula que puede contener el vector de expresión recombinante. La célula hospedadora puede ser una célula eucariota, por ejemplo, de plantas, animales, hongos, o algas o puede ser una célula procariótica, por ejemplo, bacterias o protozoos. La célula hospedadora puede ser una célula cultivada o una célula primaria, es decir, aislada directamente de un organismo, por ejemplo, un ser humano. La célula hospedadora puede ser una célula adherente o una célula suspendida, es decir, una célula que crece en suspensión. Las células hospedadoras adecuadas se conocen en la técnica e incluyen, por ejemplo, células DH5a de E. coli., células de ovarios de hámster chino, células VERO de monos, células c Os , células HEK293 y similares. Para propósitos de amplificación o replicación del vector de expresión recombinante, la célula hospedadora preferentemente es una célula procariótica, por ejemplo, una célula DH5a . Para propósitos de producir un TCR recombinante, polipéptido o proteína, la célula hospedadora preferentemente es una célula de mamífero. Más preferentemente, la célula hospedadora es una célula de humano. Aunque la célula hospedadora puede ser de cualquier tipo celular, puede originarse de cualquier tipo de tejido, y puede ser de cualquier estado de desarrollo, la célula hospedadora preferida es un linfocito de sangre periférica (PBL) o una célula mononuclear de sangre periférica (PBMC). Más preferentemente, la célula hospedadora es un linfocito T.
Para los fines del presente documento, el linfocito T puede ser cualquier linfocito T, tal como un linfocito T cultivado, por ejemplo, un linfocito T primario, o un linfocito T de una línea de linfocitos T cultivada, por ejemplo, Jurkat, SupTI, etc., o un linfocito T obtenido de un mamífero. Si se obtiene de un mamífero, el linfocito T puede obtenerse de numerosas fuentes, incluyendo, pero sin limitación, sangre, médula ósea, ganglios linfáticos, timo o de otros tejidos o fluidos. Los linfocitos T también pueden enriquecerse o purificarse. Preferentemente, el linfocito T es un linfocito T humano. Más preferentemente, el linfocito T es un linfocito T aislado de un humano. El linfocito T puede ser cualquier tipo de linfocito T y puede ser de cualquier estado de desarrollo, incluyendo pero sin limitación los linfocitos T doblemente positivos CD4+/CD8+, linfocitos T CD4+ colaboradores, por ejemplo linfocitos Thi y Th2, linfocitos T CD4+, linfocitos T CD8+ (por ejemplo, linfocitos T citotóxicos), linfocitos infiltrantes de tumor (TIL), linfocitos T de memoria (por ejemplo, linfocitos T de la memoria central y linfocitos T de la memoria efectora), linfocitos T sin exposición previa y similares.
La invención también proporciona una población de células que comprende al menos una célula hospedadora descrita en el presente documento. La población de células puede ser una población heterogénea que comprende la célula hospedadora que comprende cualquiera de los vectores de expresión recombinantes descritos, además de al menos una de las otras células, por ejemplo, una célula hospedadora (por ejemplo, un linfocito T), la cual no comprende ninguno de los vectores de expresión recombinante o una célula diferente al linfocito T, por ejemplo, un linfocito B, un macrófago, un neutrófilo, un eritrocito, un hepatocito, una célula endotelial, una célula epitelial, una célula muscular, una célula del cerebro, etc. Como alternativa, la población de células puede ser una población sustancialmente homogénea, en la cual, la población comprende principalmente células hospedadoras (es decir, que consiste esencialmente en) que comprenden el vector de expresión recombinante. La población también puede ser una población clonal de células, en la cual todas las células de la población son clones de una sola célula hospedadora que comprende un vector de expresión recombinante, de manera que todas las células de la población comprenden el vector de expresión recombinante. En una realización de la invención, la población de las células es una población clonal que comprende las células hospedadoras que comprenden un vector de expresión recombinante tal como se describe en el presente documento.
La divulgación se refiere además a un anticuerpo, o a una porción de unión al antígeno del mismo, el cual específicamente se une a una porción funcional de cualquiera de los TCR (o variante funcional del mismo) descritos en el presente documento. Preferentemente, la porción funcional se une de manera específica al antígeno del cáncer, por ejemplo, la porción funcional que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 3 o 13 (CDR1 de la cadena a), 4 o 14 (CDR2 de la cadena a), 5, l5, o 29 (CDR3 de la cadena a), 6 o 16 (CDR1 de la cadena p), 7 o 17 (CDR2 de la cadena p), 8, 18, o 30 (Cd R3 de la cadena p), SEQ ID NO: 9, 19, o 31 (región variable de la cadena a), SEQ ID NO: 10, 20, o 32 (región variable de la cadena p), o una combinación de las mismas, por ejemplo, 3-5; 6­ 8; 3-8; 13-15; 16-18; 13-18; 3-4 y 29; 6-7 y 30; 3-4, 29, y 6-8; o 3-7 y 30; 3-4, 29, 6-7, y 30. Más preferentemente, la porción funcional comprende las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 3-8 o las SEQ ID NO: 3-4, 29, y 6-8. Preferentemente, el anticuerpo, o la porción de unión al antígeno del mismo, se une a un epítopo que está formado por todas las 6 CDR (CDR1-3 de la cadena alfa y CDR1-3 de la cadena beta). El anticuerpo puede ser de cualquier tipo de inmunoglobulina que se conoce en la técnica. Por ejemplo, el anticuerpo puede ser de cualquier isotipo, por ejemplo, IgA, IgD, IgE, IgG, IgM, etc. El anticuerpo puede ser monoclonal o policlonal. El anticuerpo puede ser un anticuerpo de origen natural, por ejemplo, un anticuerpo aislado y/o purificado de un mamífero, por ejemplo, ratón, conejo, cabra, caballo, gallina, hámster, humano, etc. Como alternativa, el anticuerpo puede ser un anticuerpo genéticamente manipulado, por ejemplo, un anticuerpo humanizado o un anticuerpo quimérico. El anticuerpo puede estar en una forma monomérica o polimérica. También, el anticuerpo puede tener cualquier nivel de afinidad o avidez para la porción funcional del TCR (o la variante funcional del mismo). De manera deseable, el anticuerpo es específico para la porción funcional del TCR (o las variantes funcionales del mismo), de manera que exista una reacción cruzada mínima con otros péptidos o proteínas.
Los métodos de analizar la capacidad de unirse de los anticuerpos a cualquier porción funcional o variante funcional del TCR se conocen en la técnica e incluyen cualquier prueba de unión anticuerpo-antígeno, tal como, por ejemplo, radioinmunoanálisis (RIA), ELISA, análisis por transferencia de Western, inmunoprecipitación y ensayos de inhibición competitiva (véase, por ejemplo, Janeway et al., citado a continuación, y la Publicación de Solicitud de Patente de EE.UU. N.° 2002/0197266 A1).
Los métodos adecuados para generar anticuerpos se conocen en la técnica. Por ejemplo, los métodos de hibridoma convencionales se describen en, por ejemplo, Kohler y Milstein, Eur. J. Immunol., 5, 511-519 (1976), Harlow y Lane (eds.), Antibodies: A Laboratory Manual, CSH Press (1988), y C.A. Janeway et al. (eds.), Immunobiology, 5a Ed., Garland Publishing, Nueva York, NY (2001)). Como alternativa, otros métodos tales como los métodos de EBV-hibridoma (Haskard y Archer, J. Immunol. Methods, 74(2), 361-67 (1984), y Roder et al., Methods Enzymol., 121, 140-67 (1986)), y los sistemas de expresión del vector bacteriófago (véase, por ejemplo, Huse et al., Science, 246, 1275-81 (1989)) son conocidos en la técnica. Además, los métodos para producir anticuerpos en los animales no humanos se describen en, por ejemplo, las Patentes de EE.UU. 5.545.806, 5.569.825, y 5.714.352, y la Publicación de Solicitud de Patente de EE.UU. N.° 2002/0197266 A1.
Además, la presentación en fagos puede usarse para generar el anticuerpo divulgado en el presente documento. En este sentido, las bibliotecas fago que codifican los dominios variables (V) de unión al antígeno de los anticuerpos pueden generarse usando técnicas convencionales de biología molecular y técnicas de ADN recombinante (véase, por ejemplo, Sambrook et al. (eds.), Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3ra Edición, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Nueva York (2001)). El fago que codifica una región variable con la especificidad deseada se selecciona para la unión específica al antígeno deseado y se reconstituye un anticuerpo parcial o completo que comprende el dominio variable seleccionado. Las secuencias de ácido nucleico que codifican el anticuerpo reconstituido se introducen en una línea celular apropiada, tal como una célula de mieloma para la producción de hibridoma, de manera que los anticuerpos que tienen las características de los anticuerpos monoclonales se secretan por la célula (véase, por ejemplo, Janeway et al., citado anteriormente, Huse et al., citado anteriormente, y la Patente de EE.UU. 6.265.150).
Los anticuerpos pueden producirse por los ratones transgénicos que son transgénicos para los genes específicos de inmunoglobulina de cadena ligera o de cadena pesada. Dichos métodos se conocen en la técnica y se describen en, por ejemplo, las Patentes de EE.UU. 5.545.806 y 5.569.825, y Janeway et al., citado anteriormente.
Los métodos para generar los anticuerpos humanizados son bien conocidos en la técnica y se describen en detalle en, por ejemplo, Janeway et al., citado anteriormente, las Patentes de EE.UU. 5.225.539, 5.585.089 y 5.693.761, la Patente Europea N°. 0239400 B1, y la Patente de Reino Unido N.° 2188638. Los anticuerpos humanizados también se generan usando la tecnología de rechapado del anticuerpo descrita en, por ejemplo, la Patente de EE.UU.
5.639.641 y Pedersen et al., J. Mol. Biol., 235, 959-973 (1994).
La divulgación también proporciona las porciones de unión al antígeno de cualquiera de los anticuerpos descritos en el presente documento. La porción de unión al antígeno puede ser cualquier porción que tiene al menos un sitio de unión al antígeno, tal como Fab, F(ab')2, dsFv, sFv, diacuerpos, y triacuerpos.
Un fragmento del anticuerpo del fragmento de la región variable de cadena simple (sFv), que consiste en un fragmento Fab truncado que comprende el dominio variable (V) de un anticuerpo de cadena pesada unido a un dominio V de una cadena ligera de anticuerpo a través de un péptido sintético, puede generarse usando técnicas habituales de tecnología de ADN recombinante (véase, por ejemplo, Janeway et al., citado anteriormente). De manera similar, los fragmentos de la región de variable estabilizados con disulfuro (dsFv) pueden prepararse mediante la tecnología del ADN recombinante (véase, por ejemplo, Reiter et al., Protein Engineering, 7, 697-704 (1994)). Los fragmentos de anticuerpo divulgados en el presente documento, sin embargo, no se limitan a estos tipos ejemplares de fragmentos de anticuerpos.
También, el anticuerpo, o la porción de unión al antígeno del mismo, puede modificarse para que comprenda un marcador detectable, tal como, por ejemplo, un radioisótopo, un fluoróforo (por ejemplo, isotiocianato de fluoresceína (FITC), ficoeritrina (PE)), una enzima (por ejemplo, fosfatasa alcalina, peroxidasa de rábano picante) y partículas de elementos (por ejemplo, partículas de oro).
Las células hospedadoras de la invención (incluyendo las poblaciones de las mismas) y los TCR, polipéptidos, proteínas (incluyendo las variantes funcionales de los mismos), ácidos nucleicos, vectores de expresión recombinante y anticuerpos (incluyendo las porciones de unión al antígeno de los mismos) divulgados en el presente documento, pueden aislarse y/o purificarse. El término "aislado", tal como se usa en la presente, significa que ha sido extraído de su ambiente natural. El término "purificado", tal como se usa en el presente documento significa que se ha incrementado en pureza, en donde "pureza" es un término relativo y no necesariamente se interpreta como pureza absoluta. Por ejemplo, la pureza puede ser al menos aproximadamente el 50 %, puede ser mayor que el 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, o puede ser el 100 %.
Las células hospedadoras de la invención (incluyendo las poblaciones de las mismas) y los TCR los ácidos nucleicos, los vectores de expresión recombinantes, y los anticuerpos (incluyendo las porciones de unión al antígeno de los mismos) divulgados en el presente documento, todos de los cuales son referidos colectivamente como "materiales de TCR", en lo sucesivo en el presente documento, pueden formularse en una composición, tal como una composición farmacéutica. En este sentido, la invención se refiere a una composición farmacéutica comprendiendo cualquiera de los TCR, polipéptidos, proteínas, porciones funcionales, variantes funcionales, ácidos nucleicos, vectores de expresión, células hospedadoras (incluyendo las poblaciones de las mismas), y anticuerpos (incluyendo las porciones de unión al antígeno de los mismos), y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Las composiciones que contienen cualquiera de los materiales de TCR pueden comprender más de un material de TCR de la invención, por ejemplo, un polipéptido, y un ácido nucleico, o dos o más TCR diferentes (incluyendo las porciones funcionales y las variantes funcionales de los mismos). Como alternativa, la composición farmacéutica puede comprender un material TCR en combinación con otros agentes o fármacos farmacéuticamente activos, tales como agentes quimioterapéuticos, por ejemplo, asparaginasa, busulfan, carboplatin, cisplatina, daunorubicin, doxorubicin, fluorouracilo, gemcitabina, hidroxiurea, metotrexato, paclitaxel, rituximab, vinblastina, vincristina, etc. Preferentemente, el vehículo es un vehículo farmacéuticamente aceptable. Con respecto a las composiciones farmacéuticas, el vehículo puede ser cualquiera de aquellos convencionalmente usados para el material de TCR particular consideración. Dichos vehículos farmacéuticamente aceptables son bien conocidos por los expertos en la materia y están fácilmente disponibles para el público. Se prefiere que el vehículo farmacéuticamente aceptable sea uno, el cual no tenga efectos colaterales en deterioro o toxicidad bajo las condiciones de uso.
La selección del vehículo se determinará en parte por el material de TCR particular, así como por el método particular usado para administrar el material de TCR. Por consiguiente, existe una variedad de formulaciones adecuadas de la composición farmacéutica de la invención. Las formulaciones adecuadas pueden incluir cualquiera de aquellas para la administración oral, en aerosol, parenteral, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal o intraperitoneal. Se puede usar más de una vía para administrar los materiales de TCR y en ciertos ejemplos, una vía particular puede proporcionar una respuesta más eficaz y más inmediata que la otra vía.
Preferentemente, el material de TCR se administra mediante inyección, por ejemplo, por vía intravenosa. Cuando el material de TCR de la invención es una célula hospedadora que expresa el TCR de la invención (o la variante funcional del mismo); el vehículo farmacéuticamente aceptable para las células para la inyección puede incluir cualquier vehículo isotónico, tal como por ejemplo, solución salina normal (aproximadamente 0,90 % en p/v de NaCl en agua, aproximadamente 300 mOsm/l de NaCl en agua o aproximadamente 9,0 g NaCl por litro de agua), solución de electrolitos NORMOSOL R (Abbott, Chicago, IL), PLASMA-LYTE A (Baxter, Deerfield, IL), aproximadamente el 5 % de dextrosa en agua o lactato Ringer. En una realización, el vehículo farmacéuticamente aceptable se suplementa con albúmina de suero humano.
La composición farmacéutica además puede comprender TCR restringidos al MHC de Clase I o polipéptidos, proteínas, ácidos nucleicos, o vectores de expresión recombinante que codifican los TCR restringidos al MHC de Clase I o las células hospedadoras o las poblaciones de las células que expresan los TCR restringidos al MHC de Clase I. Sin apegarse a una teoría particular, se cree que los linfocitos T CD8+ restringidos al MHC de Clase I aumentan la reactividad de los linfocitos T CD4+ restringidos al MHC de clase II y mejoran la capacidad de los linfocitos T CD4+ restringidos al MHC de clase II para tratar o prevenir el cáncer.
Para los fines de la invención, la cantidad o dosis (por ejemplo, números de células cuando el material de TCR de la invención es una o más células) del material de TCR de la invención administrado deberá ser suficiente para efectuar, por ejemplo, una respuesta terapéutica o profiláctica en un sujeto o animal en un periodo de tiempo razonable. Por ejemplo, la dosis del material de TCR de la invención debe ser suficiente para unirse a un antígeno de cáncer, o detectar, tratar o prevenir el cáncer en un período de aproximadamente 2 horas o más, por ejemplo, 12 a 24 o más horas, a partir del momento de la administración. En ciertas realizaciones, el período de tiempo podría ser incluso mayor. La dosis se determinará por la eficacia del material de TCR particular de la invención y la afección del animal (por ejemplo, humano), así como el peso corporal del animal (por ejemplo, humano) a tratar.
En la técnica se conocen muchos análisis para determinar una dosis de administración. Para los fines de la invención, un análisis que comprende comparar el grado en el que las células diana lisan o se secreta IFN-y por los linfocitos T que expresan el TCR (o la variante funcional o porción funcional del mismo), polipéptido, o proteína en la administración de una dosis dada de dichos linfocitos T para un mamífero entre un conjunto de mamíferos de los cuales a cada uno se le proporciona una dosis diferente de linfocitos T, podría usarse para determinar una dosis inicial que se va a administrar a un mamífero. El grado en que las células diana lisan o se secreta IFN-y en la administración de una cierta dosis puede analizarse por los métodos conocidos en la técnica.
La dosis del material de TCR también puede determinarse por la existencia, naturaleza y el grado de cualquier efecto colateral adverso que puede acompañar a la administración de un material de TCR particular de la invención. Típicamente, el médico tratante decidirá la dosis del material de TCR con el cual tratará a cada paciente individual, tomando en consideración una variedad de factores, tales como edad, el peso corporal, la salud en general, la dieta, el sexo, el material de TCR que se va a administrar, la vía de administración, y la gravedad de la afección que se está tratando. En una realización en la que el material de TCR es una población de células, el número de células administradas por infusión puede variar, por ejemplo, desde aproximadamente 1 x 106 a aproximadamente 1 x 1011 células o más.
Un experto en la técnica rápidamente apreciará que los materiales de TCR divulgados en el presente documento pueden modificarse de muchas formas, de manera que la eficacia profiláctica o terapéutica de los materiales de TCR se incremente a través de la modificación. Por ejemplo, los materiales de TCR pueden conjugarse ya sea directamente o indirectamente a través de un puente o una porción de señalización. La práctica de conjugar compuestos, por ejemplo, los materiales de TCR con las porciones de señalización se conoce en la técnica. Véase, por ejemplo, J. Drug Targeting 3: 111 (1995) y la Patente de EE.UU. 5.087.616. La expresión "porción de señalización" tal como se usa en el presente documento, se refiere a cualquier molécula o agente que reconoce y se une de manera específica a un receptor de superficie celular, de manera que la porción de señalización dirige la administración de los materiales de TCR a una población de células en las cuales el receptor se expresa en su superficie. Las porciones de señalización incluyen, pero sin limitación, anticuerpos, o fragmentos de los mismos, péptidos, hormonas, factores de crecimiento, citocinas y cualquier otro ligando natural o no natural, el cual se une a los receptores de superficie celular (por ejemplo, Receptor del Factor de Crecimiento Epitelial (EGFR), receptor de linfocito T (TCR), receptor de linfocito B (BCR), CD28, Receptor del Factor de Crecimiento derivado de las Plaquetas (DGF), receptor de acetilcolina nicotínica (nAChR), etc.). El término "puente" tal y como se usa en el presente documento, se refiere a cualquier agente o molécula que une a los materiales de TCR con la porción de señalización. Un experto en la técnica reconocerá que los sitios en los materiales de TCR, que no son necesarios para la función de los materiales de TCR de la invención, son sitios ideales para unirse a un puente y/o porción de señalización, con la condición de que el puente y/o porción de señalización, una vez unido a los materiales de TCR de la invención, no interfiera con la función de los materiales de TCR de la invención, por ejemplo, la capacidad para unirse a MAGE-A3 o MAGE-A6, o para detectar, tratar o prevenir el cáncer.
Se contempla que las composiciones farmacéuticas, los TCR (incluyendo las variantes funcionales de los mismos), los polipéptidos, proteínas, ácidos nucleicos, vectores de expresión recombinante, las células hospedadoras, o las poblaciones de células pueden usarse en tratar o prevenir el cáncer. Sin apegarse a una teoría particular, los TCR (y las variantes funcionales de los mismos) se cree que se unen específicamente a MAGE-A3 y/o MAGE-A6, de manera que el TCR (o el polipéptido relacionado o la proteína y las variantes funcionales de los mismos) cuando se expresa por una célula es capaz de mediar una respuesta inmune en contra de una célula diana que expresa MAGE-A3 o MAGE-A6. En este sentido, la invención se refiere a tratar o prevenir el cáncer en un mamífero, que comprende la administración a un mamífero de cualquiera de las composiciones farmacéuticas, TCR (y variantes funcionales de los mismos), polipéptidos, o proteínas descritas en la presente, cualquier ácido nucleico o vector de expresión recombinante que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica cualquiera de los TCR (y las variantes funcionales de los mismos), polipéptidos, proteínas descritos en la presente o cualquier célula hospedadora o población de células que comprenden un vector recombinante que codifica cualquiera de los TCR (y las variantes funcionales de los mismos), polipéptidos, o proteínas descritas en el presente documento, en una cantidad eficaz para tratar o prevenir el cáncer en el mamífero.
Tratar o prevenir el cáncer además puede comprender la coadministración de los TCR restringidos al MHC de Clase I o polipéptidos, proteínas, ácidos nucleicos, o vectores de expresión recombinante que codifican los TCR restringidos al MHC de clase I o las células hospedadoras o poblaciones de las células que expresan los TCR restringidos al MHC de clase I en el mamífero.
El término "tratar" o "prevenir" así como las palabras procedentes de las mismas, tal como se usan en el presente documento, no necesariamente implican el 100 % o del tratamiento o la prevención completa. Además, existen varios grados de tratamiento o prevención de los cuales un experto en la técnica reconocerá que tienen un posible beneficio o efecto terapéutico. En este sentido, en el presente documento de divulga cualquier cantidad de cualquier nivel de tratamiento o prevención del cáncer en un mamífero. Además, el tratamiento o prevención divulgado en el presente documento puede incluir el tratamiento o prevención de una o más afecciones o síntomas de la enfermedad, es decir, el cáncer que está siendo tratado o prevenido. También, para los fines del presente documento, "prevención" puede abarcar el retraso del inicio de la enfermedad, o un síntoma o afección de la misma. También se proporciona un método para detectar la presencia del cáncer en un mamífero. El método comprende (i) poner en contacto una muestra que comprende células del cáncer con cualquier TCR (y variantes funcionales de los mismos), polipéptidos, proteínas, ácidos nucleicos, vectores de expresión recombinante, células hospedadoras, poblaciones de células, o anticuerpos o porciones de unión al antígeno de los mismos, descritos en el presente documento, formando así un complejo y detectando el complejo, en donde la detección del complejo es indicativa de la presencia de cáncer en el mamífero.
Con respecto al método para detectar el cáncer en un mamífero, la muestra de las células del cáncer puede ser una muestra que comprende las células completas, lisados de las mismos o una fracción de los lisados de la célula completa, por ejemplo, una fracción citoplásmica o nuclear, una fracción de proteína completa o una fracción de ácido nucleico.
Para los fines del método de detección, el contacto puede llevarse a cabo in vitro o in vivo con respecto al mamífero. Preferentemente, el contacto es in vitro.
También, la detección del complejo puede ocurrir a través de cualquier número de formas conocidas en la técnica. Por ejemplo, los TCR (y las variantes funcionales de los mismos), polipéptidos, proteínas, ácidos nucleicos, vectores de expresión recombinantes, células huéspedes, poblaciones de las células, o anticuerpos o porciones de unión al antígeno de los mismos, descritos en la presente, pueden etiquetarse con una etiqueta detectable tal como, por ejemplo, un radioisótopo, un fluoróforo (por ejemplo, isotiocianato de fluoresceína (FITC), ficoeritrina (PE)), una enzima (por ejemplo, fosfatasa alcalina, peroxidasa de rábano picante), y partículas elementales (por ejemplo, partículas de oro).
Para los fines de los métodos, en donde se administran las células hospedadoras o las poblaciones de células, las células pueden ser células que son alogénicas o autólogas para un mamífero.
Con respecto a los métodos de la invención, el cáncer puede ser cualquier cáncer, incluyendo cualquiera de los sarcomas (por ejemplo, sarcoma sinovial, sarcoma osteogénico, leiomiosarcoma uterino, y rabdomiosarcoma alveolar), linfomas (por ejemplo, linfoma de Hodgkin y linfoma de no Hodgkin), carcinoma hepatocelular, glioma, cánceres de la cabeza (por ejemplo, carcinoma de células escamosas), cánceres del cuello (por ejemplo, carcinoma de células escamosas), cáncer linfocítico agudo, leucemias (por ejemplo, leucemia mieloide aguda y leucemia linfocítica crónica), cáncer de huesos, cáncer de cerebro, cáncer del ano, del canal anal o anorrectal, cáncer del ojo, cáncer del conducto biliar intrahepático, cáncer de las articulaciones, cáncer del cuello, de la vejiga, o pleura, cáncer de la nariz, de la cavidad nasal o del oído medio, cáncer de la cavidad oral, cáncer de la vulva, cáncer mieloide crónico, cánceres del colon (por ejemplo, carcinoma del colon), cáncer esofágico, cáncer de cuello uterino, cáncer gástrico, tumor carcinoide gastrointestinal, cáncer de hipofaringe, cáncer de laringe, cáncer del hígado (por ejemplo, carcinoma hepatocelular), mesotelioma maligno, mieloma múltiple, cáncer de la nasofaringe, cáncer de ovario, cáncer pancreático, peritoneo, omento y cáncer del mesenterio, cáncer de faringe, cáncer de próstata, cáncer rectal, cánceres del riñón (por ejemplo, carcinoma celular renal), cáncer del intestino delgado, cáncer del tejido blando, cáncer de estómago, cáncer testicular, cáncer de la tiroides y cánceres uroteliales (por ejemplo, cáncer de la uretra y cáncer de la vejiga urinaria). Preferentemente, el cáncer es cáncer de próstata, sarcoma celular sinovial, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de esófago o cáncer de ovario.
El mamífero referido en los métodos de la invención puede ser cualquier mamífero. Tal y como se usa en el presente documento, el término "mamífero" se refiere a cualquier mamífero, incluyendo, pero sin limitación, mamíferos del orden Rodentia, tales como ratones y hámsteres y mamíferos del orden Logomorfa, tales como conejos. Se prefiere que los mamíferos sean del orden Carnívoro, incluyendo Felinos (gatos) y Caninos (perros). Es más preferido que los mamíferos sean del orden Artiodáctilo, incluyendo Bovinos (vacas) y Cerdos (puercos) o del orden Perisodáctilo, incluyendo Equinos (caballos). Es más preferido que los mamíferos sean del orden Primates, Ceboides o Simoides (monos) o del orden Antropoide (humanos y simios). Un mamífero especialmente preferido es el humano.
Los siguientes ejemplos además ilustran la invención, pero, por supuesto, no deben interpretarse como limitantes en ninguna manera de su alcance.
EJEMPLO 1A
Este ejemplo demuestra el aislamiento de los TCR de los clones de linfocitos T
El clon efector anti-MAGE-A3243-258 CD4+ R12C9 y el clon anti-MAGE-A3243-258 Treg 6F9 se cultivó con el péptido de los linfocitos B de EBV pulsados con (MAGE-A3243-258). Se midió la secreción de citocina, el porcentaje de las células indicadoras suprimidas, el porcentaje de las células FOXP3+ Treg y el porcentaje de las secuencias FOXP3 no metiladas. Las secuencias del intrón 1 FOXP3 no metiladas se consideraron como un marcador para un fenotipo Treg estable. Los resultados para los clones 6F9 y R12C9 se muestran en las Tablas 1A y 1B.
TABLA 1A
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TABLA 1B
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Los clones de Treg pueden inhibir la proliferación de las células indicadoras después de la estimulación por un péptido apropiado. Como se muestra en la Tabla 1A, el clon 6F9 es un clon de Treg.
Se clonó un TCR que comprende las SEQ ID NO: 21 y 22 del clon efector anti-MAGE-A3243-258 CD4+ R12C9 ("R12C9 TCR"). Se clonó un TCR que comprende las SEQ ID NO: 11 y 12 del clon anti-MAGE-A3243-258 Treg 6F9 ("TCR 6F9").
EJEMPLO 1B
Este ejemplo demuestra la eficiencia de la transducción del PMC transducido con una secuencia de nucleótidos que codifica el 6F9 TCR o R12C9 TCR del Ejemplo 1.
Los transcritos que codifican la cadena beta y alfa de los TCR de R12C9 y 6F9 se unieron con las secuencias que codifican el péptido de autoescisión P2A y se clonaron en un vector retrovírico MSGV1. Los PBMC de tres pacientes se estimularon con OKT3, se transdujeron con suplementos retrovíricos transitorios en el día dos, y se enriquecieron para los linfocitos T CD4+ en el día siete. Los niveles de la expresión TCR se evaluaron por el marcado de las células transducidas con anti-Vp22 o Vp6.7, el cual detectó el 6F9 o R12C9 TCR, respectivamente. El análisis de PBMC del paciente 1 indicó que entre 25 y 35% de las células T se transdujeron con los TCR individuales y los niveles de transducción similar se obtuvieron con el PBMC de los pacientes 2 y 3.
EJEMPLO 2
Este ejemplo demuestra que los linfocitos T transducidos con las secuencias de nucleótidos que codifican los TCR anti-MAGE-A3243-258 del Ejemplo 1 reconocen el transactivador 293 del complejo principal de histocompatibilidad de clase II (CIITA) de los transfectantes de MAGE-A3 y las dianas de los péptidos pulsados. Este Ejemplo también demuestra que el TCR 6F9 reconoce los transfectantes 293-CIITA de Ma Ge-A3 y MAGE-A6.
Los linfocitos CD4+ de sangre periférica enriquecidos (PBL) de dos donadores humanos no se transdujeron (UT) o se transdujeron con TCR F5 (anti-MART-1), TCR R12C9, o TCR 6F9. Las células se cultivaron con células diana 293-CIITA-transfectadas con el péptido MAGE-A3243-258 (SEQ ID NO: 2) pulsado. Las células 293-CIITA son células 293 transducidas con CIITA, que es un gen humano que codifica la proteína transactivadora del complejo principal de histocompatibilidad de clase II. Los resultados obtenidos con las células transducidas con TCR 6F9 y R12C9 se muestran en la Tabla 2 y la Figura 10A. El PBL transducido por TCR R12C9 o TCR 6F9 reconoce las células diana MAGE-A3243 -258 HLA-DP*0401+ con el péptido pulsado. La titulación del péptido MAGE-A3243-258 indicó que los linfocitos T CD4+ transducidos con los t Cr 6F9 o R12C9 TCR de liberaron niveles comparables de IFN-y en respuesta a las dianas pulsadas con un mínimo de entre 0,001 y 0,01 mg/ml del péptido MAGE-A3:243-258. Los experimentos se repitieron usando el PBL de un tercer donante humano y se obtuvieron resultados similares.
TABLA 2 ____________________________________________________________________________
I Donante 1 I
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Las células diana 293-CIITA se transfectaron con las construcciones de ADN (vector pCADN3) que codifican la proteína MAGE-A3 o la proteína MAGE-A6 de longitud completa, la cual difiere en solamente una sola posición (249), o la proteína de longitud completa MAGE-A1 o la proteína MAGE-A12. El PBL no transducido y transducido se cocultivó con las células 293-CIITA transfectadas y se midió la secreción del interferón gamma (IFN). Los resultados se muestran en las Figuras 1A, 1B, y 10A.
Como se muestra en las Figuras 1A, 1B, y 10A, aunque los linfocitos T transducidos con TCR R12C9 y TCR 6F9 reconocieron las dianas con péptido pulsado, los p Bl transducidos con el TCR 6F9 fueron las más altamente reactivas para cada uno de los transfectantes MAGE-A3 y MAGE-A6293-CIITA. Los linfocitos T CD4+ transducidos con el 6f9, pero no el TCR R12C9 reconocieron las células HLA DP*0401 293-CIITA transfectadas con los genes que codifican MAGE-A3 o MAGE-A6, pero no MAGE-A1 o A12. La comparación de las secuencias de aminoácidos de las regiones correspondientes de los miembros de la familia MAGE indicaron que el MAGE-A3 y MAGE-A6 solamente difieren en una posición (resto 249), mientras los otros miembros de la familia MAGE difieren de MAGE-A3 en dos (MAGE-A12243-258 (SEQ ID NO: 70)) o tres posiciones (MAGE-A1243-258 (SEQ ID NO: 71)). Además, los linfocitos T CD4+ transducidos con el TCR 6F9, pero no el TCR R12C9 reconocieron la línea celular del melanoma MAGE-A3+/HLA-DP*0401 1359 mel-CIITA pero fallaron en reconocer la línea celular del melanoma MAGE-A3+/HLA-DP*0401 624 mel-CIITA. Los linfocitos T CD4+ con el TCR R12C9 fallaron en reconocer alguna de las líneas celulares del melanoma probado. Las células transducidas con el TCR DMF5 MART-1 reactivo fallaron en reconocer las células 293-CIITA transfectadas o las células diana pulsadas MAGE-A3:243-258, pero reconocieron la línea celular HLA-A*0201+ y MART-1+ 624 mel-CIITA. Los experimentos se repitieron usando PBL de un tercer donante humano y se obtuvieron resultados similares. Dado que el TCR 6F9 se obtuvo de un clon de Treg, el cual está involucrado en la supresión de la actividad inmune, la reactividad del TCR 6F9 fue sorprendente e inesperada. Estos resultados indicaron que mientras los linfocitos T CD4+ transducidos con el 6F9 o R12C9 reconocieron las células diana de péptido pulsado, solamente las células transfectadas con el TCR 6F9 reconocieron las células diana transfectadas así como las células tumorales MAGE-A3+ y HLA-DP*04+.
EJEMPLO 3
Este ejemplo demuestra que los PBL 6F9 transducidos muestran alta reactividad para la proteína de longitud completa MAGE-A3 procesada y presentada por las células HLA-DP4+ B.
Los PBL de los dos donantes humanos no se transdujeron o se transdujeron con una secuencia de nucleótidos que codifica el TCR 6F9. Las células se cocultivaron con las células HLA-DP4+ B que tuvieron la proteína de longitud completa procesada y presentada MAGE-A3 (SEQ ID NO: 1). Los resultados se muestran en la Tabla 3 y la Figura 10A. Como se muestra en la Tabla 3 y la Figura 10A, los PBL 6F9 transducidos fueron altamente reactivos para la proteína de longitud completa MAGE-A3 procesada y presentada por las células HLA-DP4+ B.
TABLA 3
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EJEMPLO 4
Este ejemplo demuestra que los PBL con TCR 6F9 transducido son reactivos para las líneas tumorales con la presentación endógena de clase II de la proteína MAGE-A3.
El PBL de dos donantes humanos no fue transducido o fue transducido con una secuencia de nucleótidos que codifican al TCR 6F9 o TCR F5. Las células se cultivaron solas (solamente linfocitos T) o se cocultivaron con las células 624-CIITA, las células 526-CIITA o las células H1299-CIITA (líneas celulares tumorales con CIITA). Los resultados se muestran en la Tabla 4. Como se muestra en la Tabla 4, los PBL con TCR 6F9 transducido fueron reactivos para las líneas tumorales con la presentación de la clase II endógena de la proteína MAGE-A3.
TABLA 4
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Ejemplo 5
Este ejemplo demuestra que el TCR 6F9 es específico de MAGE-A3.
El PBL de un donante humano fue enriquecido en CD4+ y el número de células se expandió rápidamente en el día 27. Las células no se transdujeron o se transdujeron con el TCR F5 o el TCR 6F9 y se cocultivaron con las células 526-CIITA o las células H1299-CIITA solas o con ARNip de anti-MAGE-A3 o ARNip de anti-MART-1. Se midió la secreción de IFN-gamma. Los resultados se muestran en las Figuras 2Ay 2B.
Como se muestra en las Figuras 2A y 2, el ARNip de anti-MAGE-A3 redujo la actividad de las células transducidas con TCR 6F9. Por consiguiente, el análisis de inactivación de ARNip confirmó que el TCR 6F9 es específico de MAGE-A3.
EJEMPLO 6
Este ejemplo demuestra que el TCR 6F9 reconoce al MAGE-A3 en una manera restringida a HLA-DP.
Las líneas tumorales 624, 526, 1359, H1299, 1300, 1764, 3071, 397, 2630, y 2984 se transdujeron con CIITA (624-CIITA, 526-CIITA, 1359-CIITA, H1299-CIITA, 1300-CIITA, 1764-CIITA, 3071-CIITA, 397-CIITA, 2630-CIITA, y 2984-CIITA) y la expresión HLA-DP se midió mediante citometría de flujo. La expresión de DP4 y MAGE-A3 se muestra en la Tabla 5A.
TABLA 5A
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El PBL con 6F9 transducido se cultivó solo (solamente linfocitos T) o se cocultivó con células 3071, células 3071-CIITA, células 397, células 397-CIITA, células 2630, células 2630-CIITA, células 2984 y células 2984-CIITA. Se midió la secreción de IFN-gamma. Los resultados se muestran en la Figura 3. Como se muestra en la Figura 3, el PBL con 6F9 transducido fue reactivo con las líneas celulares tumorales que expresan CIITA.
El TCR 6F9 además se evalúo mediante la determinación de la reactividad de los linfocitos T CD4+ y CD8+ separados de los PBMC de dos pacientes frente a las líneas celulares tumorales incluyendo 624-CIITA, 526-CIITA, 1359-CIITA, H1299-CIITA, SK37-CIITA, 1764-CIITA, 3071-CIITA, 397-CIITA, 2630-CIITA, y 2984-CIITA. Cinco líneas celulares del melanoma que expresaron MAGE-A3 y HLA-DP*0401 (2630-CIITA, 397-CIITA, 2984-CIITA, 526-CIITA, y 1359-CIITA), así como la línea celular del carcinoma de pulmón de células no pequeñas H1299 NSCLC-CIITA fueron reconocidas por los linfocitos T CD4+ y T CD8+ transducidos, aunque los linfocitos T CD4+ secretaron mayores cantidades de citocina en respuesta a las dianas tumorales que los linfocitos T CD8+ transducidos.
Las células H1299-CIITA y 526-CIITA se transfectaron con ARNip anti-HLA-DP o anti-HLA-DR para inactivar la expresión de HLA-DP o HLA-DR. Las células 3071-CIITA y 526-CIITA se transfectaron con ARNip anti-HLA-DQ para inactivar la expresión de HLA-DQ. La inactivación HLA-DP, HLA-DR, o HLA-DQ se confirmó por citometría de flujo. El PBL de un donante humano se enriqueció en CD4+ y el número de células se expandió rápidamente en el día 30. Las células se transdujeron con el TCR 6F9 o no se transdujeron. Las células se cultivaron solas (solamente linfocitos T) o se cocultivaron con las células H1299-CIITA no tratadas, las H1299-CIITA se transfectaron con ARNip anti-HLA-DP o anti-HLA-DR, las células 526-CIITA no tratadas, o 526-CIITA transfectadas con ARNip anti-HLA-DP o anti-HLA-DR. Se midió la secreción de IFN-gamma. Los resultados se muestran en la Figura 4. Como se muestra en la Figura 4, el ARNip anti-HLA-DP redujo la actividad de las células transducidas con TCR 6F9.
Los estudios adicionales empleando anticuerpos confirmaron que el TCR 6F9 reconoce el MAGE-A3 en de manera restringida a HLA-clase II. El PBL transducido con TCR 6F9 se cocultivó con las células establecidas en la Tabla 5B y se bloqueó con los anticuerpos establecidos en la Tabla 5B. El IFN-gamma se midió y los resultados se establecen en la Tabla 5B.
TABLA 5B
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Como se muestra en la Tabla 5B, los estudios de bloqueo de anticuerpos mostraron que el TCR 6F9 reconoce el MAGE-A3 de manera restringida al HLA Clase II, pero no de manera restringida al HLA-DR o de manera restringida al HLA de clase I.
EJEMPLO 7
Este ejemplo demuestra que una sustitución de alanina en la posición 116 o 117 de la cadena alfa del TCR 6F9 incrementa la reactividad del TCR 6F9.
Se prepararon ocho TCR diferentes sustituidos, cada uno teniendo solo la sustitución de alanina en una diferente ubicación en la región CDR3 del TCR 6F9, tal como se establece en la Tabla 6.
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El PBL de un donante humano no fue transducido o fue transducido con TCR 6F9 de tipo silvestre (ts) o uno de cada uno de los ocho TCR sustituidos en la Tabla 6. Las células se cultivaron solas (solamente linfocitos T) o se cocultivaron con 624-CIITA, 526-CIITA, 1359-CIITA, H1299-CIITA, o 1764-CIITA. Se midió la secreción de IFN-gamma. Los resultados se establecieron en la Figura 5. Como se muestra en la Figura 5, los TCR a1 y a2 sustituidos demostraron reactividad incrementada en comparación con el TCR 6F9 de ts.
Un experimento separado con PBL enriquecido en CD4+ transducido también confirmó la mayor reactividad de los TCR a1 y a2 sustituidos (Figura 6). Como se muestra en la Figura 6, los TCR a1 y a2 sustituidos mostraron un incremento aproximadamente de 2 veces en la actividad antitumoral en comparación con el TCR 6F9 de ts. Los TCR a1 y a2 sustituidos también mostraron mejor enlace al tetrámero (SEQ ID NO: 2) en comparación con el TCR 6F9 de ts, tal como se mide por citometría de flujo.
EJEMPLO 8
Este ejemplo demuestra la reactividad de los TCR 6F9 sustituidos.
Se prepararon ocho de los TCR diferentes sustituidos, cada uno teniendo la sustitución del aminoácido en una diferente ubicación en la región CDR3 de la cadena alfa del TCR 6F9, tal como se establece en la Tabla 7.
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 El PBL de un donante humano no fue transducido o fue transducido con TCR 6F9 de tipo silvestre (ts) de cada uno de los ocho TCR sustituidos. Las células se cultivaron solas (solamente linfocitos T) o se cocultivaron con 624-CIITA, 526-CIITA, 1359-CIITA, H1299-CIITA, o 1764-CIITA. Se midió la secreción de IFN-gamma. Los resultados se establecen en la Figura 7. Como se muestra en la Figura 7, los TCR a1, a2 y a1-3 sustituidos demostraron reactividad frente a las líneas celulares tumorales CIITA.
EJEMPLO 9
Este ejemplo demuestra que la sustitución de la región constante natural del TCR 6F9 con una región constante de murino incrementa la reactividad del TCR 6F9.
Se preparó un TCR se preparó que comprende las regiones variables de las cadenas a y p TCR 6F9 de ts y una región constante de murino (TCR 6F9mC) (SEQ ID NO: 27 y 28).
El TCR 6F9mC demostró mejor tetrámero MAGE-A3 y tinción de Vp en comparación con el TCR 6F9 de ts, tal como se midió mediante citometría de flujo. Sin apegarse a una teoría en particular, se cree que el TCR 6F9mC TCR proporciona un apareamiento mejorado de las cadenas de TCR a y p.
El PBL de un donador humano no fue transducido o fue transducido con TCR 6F9 de ts o TCR 6F9mC y se cultivó solo (solamente linfocitos T) o se cocultivó con células 624-CIITA, 1300-CIITA, 526-CIITA, 1359-CIiTa , H1299-CIITA, 397-CIITA, 2630-CIITA, 2984-CIITA, 3071-CIITA, o 1764-CIITA. Se midió la secreción de IFN-gamma. Los resultados se muestran en la Figura 8. Como se muestra en la Figura 8, las células transducidas con 6F9mC mostraron un incremento de 2-5 veces en una actividad antitumoral en comparación con las células transducidas con TCR 6F9 de ts.
Las células no transducidas, las células transducidas con TCR 6F9 o las células transducidas con 6F9mC TCR se enriquecieron para CD8 o CD4 y se cultivaron solas (solamente linfocitos T) o se cocultivaron con células 624-CIITA, SK37-CIITA, 526-CIITA, 1359-CIITA, H1299-CIITA, 397-CIITA, 2630-CIITA, 2984-CIITA, 3071-CIITA, o 1764-CIITA. Se midió la secreción de interferón-gamma. Los resultados se muestran en las Figuras 9A y 9B. Como se muestra en las Figuras 9A y 9B, las células transducidas con 6F9mC y enriquecidas en CD8 y CD4 mantuvieron mayor actividad antitumoral en comparación con las células transducidas con TCR 6F9 para varias líneas celulares, indicando una alta afinidad para el TCR 6F9mC independiente de los correceptores. Los experimentos se repitieron usando PBL de un segundo donante humano y se obtuvieron resultados similares. Las comparaciones de las respuestas de los linfocitos T CD4+ transducidas con TCR 6F9 de tipo silvestre (ts) con aquellas células transducidas con el TCR 6F9mc indicaron que las regiones constantes de murino dieron como resultado una mejora de dos a cinco veces en la respuesta de los linfocitos T transducidos frente a las siete dianas de MAGE-A3+ y HLA-DP*0401+ que se evaluaron. Además, la respuesta de los linfocitos T CD8+ transducidos con el 6F9m se mejoró por entre dos y diez veces por encima de aquellas observadas en las células transducidas con el TCR 6F9 de ts. Las respuestas de los linfocitos T CD8+ transducidos con el 6F9mc fueron generalmente inferiores que los linfocitos T CD4+ transducidos con este TCR, aunque se observaron respuestas de citocina similares en las respuestas a algunas dianas tumorales.
EJEMPLO 10
Este ejemplo demuestra que, en la estimulación tumoral, las células transducidas con TCR 6F9mC producen altos niveles de IFN-gamma y TNF-alfa y muestran un fenotipo altamente activado (tal como se mide por la expresión elevada de 4-1BB, CD25, y CD69).
Las células CD4 o CD8 fueron enriquecidas y transducidas con TCR 6F9mC. Las células transducidas se cocultivaron con las líneas tumorales 624-CIITA, 2630-CIITA, 2984-CIITA, o Whitington-CIITA durante 6 horas y entonces se tiñeron para IFN-gamma intracelular, interleuquina (IL)-2, o factor de necrosis tumoral (TNF)-a. Las células transducidas con TCR 6F9mC TCR mostraron producción de IF-gamma intracelular específica en la estimulación tumoral. Las células transducidas con TCR 6F9mC mostraron producción de IL-2 detectable y producción de TNF-a alta específica en la estimulación tumoral en la fracción enriquecida con CD4.
Las células fueron enriquecidas en CD4 y transducidas con TCR 6F9mC. Las células transducidas se cocultivaron con las líneas tumorales 624-CIITA, 2630-CIITA, 2984-CIITA, o Whitington-CIITA durante la noche y posteriormente se tiñeron para 4-1BB, CD25, y CD69. Durante la estimulación tumoral durante la noche, la mayoría de las células transducidas con TCR 6F9mC expresaron altos niveles de 4-1BB (indicativas de activación específica de antígeno), CD25, y CD69.
EJEMPLO 11
Este ejemplo demuestra que el TCR 6F9 media el reconocimiento de la célula tumoral.
El PBL fue no transducido o fue transducido con el TCR 6F9 de tipo silvestre y cultivado solo o cocultivado con la línea celular de cáncer de pulmón no microcítico (NSCLC) H11299 o la línea celular del melanoma 526 mel, 624 mel, o 1359 mel. La expresión de MAGE-A3 y DP*04 se muestra en la Tabla 8.
TABLA 8
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Se midió la expresión de IFN-gamma. Los resultados se muestran en la Figura 10B. Como se muestra en la Figura 10B, el TCR 6F9 media el reconocimiento de la célula tumoral.
EJEMPLO 12
Este ejemplo demuestra que el TCR 6F9 y el 6F9mc poseen un alto grado de especificidad para el péptido MAGE-A3:248-258.
Para evaluar la fina especificidad del reconocimiento del antígeno mediado por las células transducidas con el TCR 6F9 y 6F9mc, las células diana HLA-DP*0401 se pulsaron con el truncamiento del péptido MAGE-A3:243-258 o los péptidos relacionados de los miembros de la familia MAGE. Los linfocitos T CD4+ aislados de PBMC de dos pacientes (PBMC-1 o PBMC-2) por la selección negativa se transdujeron con el TCR 6F9, el TCR 6F9mc, o no fueron transducidos y 10 días después de la estimulación con OKT3 se analizó su respuesta a las células 293-CIITA que se pulsaron con 10 mg/ml de los péptidos indicados en la Tabla 9.
El análisis de la respuesta para los péptidos MAGE-A3 truncados de dos cultivos de CD4+ PBMC transducidos indicó que el péptido 11-mero QHFVQEnYlEY (SEQ ID NO: 54) correspondiente a los aminoácidos 248-258 de la proteína MAGE-A3 representó el péptido mínimo que provocó una respuesta comparable a la generada por el péptido MAGE-A3 :243-258 (Tabla 9). El péptido MAGE-A3:243-258 se pronosticó usando un algoritmo de predicción de epítopo para poseer una alta afinidad para HLA-DP*0401, y, además, el reconocimiento de los péptidos MAGE-A3 truncados pareció correlacionarse con el reconocimiento del linfocito T (Tabla 9). Se observó reconocimiento significativo para el péptido MAGE-A6:248-258 que contuvo una sola sustitución de histidina por tirosina en la posición 249, pero se observó reactividad mínima en contra de los miembros adicionales de la familia MAGE de los productos génicos que poseen entre dos y cinco diferencias del péptido MAGE-A3:248-258. Una búsqueda BLAST de la base de datos del NCBI reveló que la mayoría del péptido estrechamente relacionado se derivó de la proteína necdina. Este péptido, que posee cinco diferencias con el péptido MAGE-A3:248-258, tampoco fue reconocido por los linfocitos T transducidos con el TCR 6F9 o 6F9mc. Estos hallazgos indican que el TCR 6F9 posee un alto grado de especificidad para el péptido MAGE-A3:248-258 y sugiere que los linfocitos T transducidos con este TCR poseen poca o ninguna reactividad cruzada con los péptidos derivados de las proteínas de humano adicionales.
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Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Célula hospedadora que comprende un vector de expresión recombinante que comprende un ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un TCR para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer en un mamífero, en donde el TCR comprende:
(a) las SEQ ID NO: 3-8 o
(b) una variante funcional de (a),
en donde el TCR de (a) y la variante funcional de (b) se unen específicamente a (i) MAGE-A3 que está presentada por HLA-DPp1*04 y (ii) MAGE-A6,
en donde la variante funcional comprende:
(I) las SEQ ID NO: 3, 4, 6, 7, 8 y 29, en donde:
(1) Xaa en 4 es Ala, Xaa en 5 es Ser, Xaa en 6 es Gly y Xaa en 7 es Thr en la SEQ ID NO: 29;
(2) Xaa en 4 es Ser, Xaa en 5 es Ala, Xaa en 6 es Gly y Xaa en 7 es Thr en la SEQ ID NO: 29;
(3) Xaa en 4 es Ser, Xaa en 5 es Ser, Xaa en 6 es Gly y Xaa en 7 es Ala en la SEQ ID NO: 29; o
(4) Xaa en 4 es Val, Xaa en 5 es Ser, Xaa en 6 es Gly y Xaa en 7 es Thr en la SEQ ID NO: 29; o
(II) las SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 y 30 en donde:
(1) Xaa en 4 es Ala, Xaa en 5 es Thr, Xaa en 6 es Gly y Xaa en 7 es Pro en la SEQ ID NO: 30; o
(2) Xaa en 4 es Arg, Xaa en 5 es Ala, Xaa en 6 es Gly y Xaa en 7 es Pro en la SEQ ID NO: 30,
en donde el cáncer es cáncer linfocítico agudo; cáncer de huesos; cáncer de cerebro; cáncer del ano, canal anal o anorrectal; cáncer del ojo; cáncer del conducto biliar intrahepático; cáncer de las articulaciones; cáncer del cuello, de vesícula biliar o pleura; cáncer de la nariz, de la cavidad nasal o del oído medio; cáncer de la cavidad oral; cáncer de la vulva; cáncer de cuello uterino; cáncer mieloide crónico; cáncer de colon; cáncer esofágico; cáncer gástrico; tumor carcinoide gastrointestinal; glioma; cáncer de cabeza; carcinoma hepatocelular; cáncer de hipofaringe; cáncer de riñón; cáncer de laringe; leucemia; cáncer de hígado; linfoma; mesotelioma maligno; mieloma múltiple; cáncer de nasofaringe; cáncer de ovario; cáncer de cuello; cáncer pancreático; cáncer de peritoneo, omento y mesenterio, cáncer de faringe; cáncer de próstata; cáncer rectal; sarcoma; cáncer de intestino delgado; cáncer del tejido blando; cáncer de estómago; cáncer de testículo; cáncer de la tiroides o cáncer urotelial.
2. La célula hospedadora para el uso de la reivindicación 1, en donde la variante funcional comprende (a) la SEQ ID
NO: 29, en donde Xaa4 es Ala, Xaa5 es Ser, Xaa6 es Gly y Xaa7 es Thr, o (b) la SEQ ID NO: 29, en donde Xaa4 es
Ser, Xaa5 es Ala, Xaa6 es Gly y Xaa7 es Thr.
3. La célula hospedadora para el uso de la reivindicación 1 o 2, en donde el TCR o la variante funcional comprende una región constante de murino.
4. La célula hospedadora para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde el TCR o la variante funcional comprende una región constante de murino que comprende la SEQ ID NO: 25 y/o la SEQ ID NO: 26.
5. La célula hospedadora para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde el TCR o la variante funcional comprende las secuencias de aminoácidos de:
(a) las SEQ ID NO: 9 y 10;
(b) las SEQ ID NO: 10 y 31, en donde:
(1 ) Xaa en 116 es Ala, Xaa en 117 es Ser, Xaa en 118 Gly y Xaa en 119 es Thr en la SEQ ID NO: 3 (2) Xaa en 116 es Ser, Xaa en 117 es Ala, Xaa en 118 Gly y Xaa en 119 es Thr en la SEQ ID NO: 3 (3) Xaa en 116 es Ser, Xaa en 117 es Ser, Xaa en 118 Gly y Xaa en 119 es Ala en la SEQ ID NO: 3 (4) Xaa en 116 es Val, Xaa en 117 es Ser, Xaa en 118
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Gly y Xaa en 119 es Thr en la SEQ ID NO: 3 (c) las SEQ ID NO: 9 y 32, en donde:
(1 ) Xaa en 115 es Ala, Xaa en 116 es Thr, Xaa en 117 es Gly y Xaa en 118 es Pro en la SEQ ID NO: 3 (2) Xaa en 115 es Arg, Xaa en 116 es Ala, Xaa en 117
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es Gly y Xaa en 118 es Pro en la SEQ ID NO: 3
6. La célula hospedadora para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde la variante funcional comprende:
(a) la SEQ ID NO: 31, en donde Xaa116 es Ala, Xaa117 es Ser, Xaa118 es Gly y Xaa119 es Thr, o
(b) la SEQ ID NO: 31, en donde Xaa116 es Ser, Xaa117 es Ala, Xaa118 es Gly y Xaa119 es Thr.
7. La célula hospedadora para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde el TCR o la variante funcional comprende las secuencias de aminoácidos de:
(a) las SEQ ID NO: 11 y 12;
(b) las SEQ ID NO: 27 y 28;
(c) las SEQ ID NO: 12 y 33, en donde:
(1) Xaa en 116 es Ala, Xaa en 117 es Ser, Xaa en 118 es Gly y Xaa en 119 es Thr en la SEQ ID NO: 33;
(2) Xaa en 116 es Ser, Xaa en 117 es Ala, Xaa en 118 es Gly y Xaa en 119 es Thr en la SEQ ID NO: 33;
(3) Xaa en 116 es Ser, Xaa en 117 es Ser, Xaa en 118 es Gly y Xaa en 119 es Ala en la SEQ ID NO: 33;
(4) Xaa en 116 es Val, Xaa en 117 es Ser, Xaa en 118 es Gly y Xaa en 119 es Thr en la SEQ ID NO: 33;
(d) las SEQ ID NO: 11 y 34, en donde:
(1 ) Xaa en 115 es Ala, Xaa en 116 es Thr, Xaa en 117 es Gly y Xaa en 118 es Pro en la SEQ ID NO: 34; o (2) Xaa en 115 es Arg, Xaa en 116 es Ala, Xaa en 117 es Gly y Xaa en 118 es Pro en la SEQ ID NO: 34.
8. La célula hospedadora para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en donde la variante funcional comprende:
(a) la SEQ ID NO: 33, en donde Xaa116 es Ala, Xaa117 es Ser, Xaa118 es Gly y Xaa119 es Thr, o
(b) la SEQ ID NO: 33, en donde Xaa116 es Ser, Xaa117 es Ala, Xaa118 es Gly y Xaa119 es Thr.
9. La célula hospedadora para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde el ácido nucleico comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste en a) las SEQ ID NO: 37 y 38, b) las SEQ ID NO: 41 y 42, y c) las SEQ ID NO: 43 y 44.
10. La célula hospedadora para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en donde la célula es humana.
11. La célula hospedadora para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en donde el cáncer es positivo para una o ambas de MAGE-A3 and MAGE-A6.
12. La célula hospedadora para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en donde el cáncer es leucemia mieloide aguda, rabdomiosarcoma alveolar, leucemia linfocítica crónica, carcinoma de colon, carcinoma hepatocelular, linfoma de Hodgkin, leiomiosarcoma uterino, linfoma no Hodgkin, sarcoma osteogénico, carcinoma de células renales, carcinoma de células escamosas, sarcoma sinovial, cáncer de uréter o cáncer de vejiga urinaria.
13. La célula hospedadora para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en donde el TCR comprende: (a) las SEQ ID NO: 3-8;
(b) las SEQ ID NO: 9-10;
(c) las SEQ ID NO: 11-12; o
(d) las SEQ ID NO: 27-28.
14. La célula hospedadora para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en donde la célula hospedadora está comprendida en una población de células.
15. La célula hospedadora para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en donde la célula hospedadora y un vehículo farmacéuticamente aceptable están comprendidos en una composición farmacéutica.
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Families Citing this family (44)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX367279B (es) * 2012-09-14 2019-08-13 Us Health Receptores de la celula t que reconocen mhc de mage-a3 de calse ii-restringida.
WO2014100615A1 (en) 2012-12-20 2014-06-26 Purdue Research Foundation Chimeric antigen receptor-expressing t cells as anti-cancer therapeutics
JP6599450B2 (ja) 2014-10-02 2019-10-30 アメリカ合衆国 がん特異的突然変異に対し抗原特異性を有するｔ細胞を単離する方法
CA2963362A1 (en) * 2014-10-02 2016-04-07 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Methods of isolating t cell receptors having antigenic specificity for a cancer-specific mutation
GB201505305D0 (en) * 2015-03-27 2015-05-13 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel Peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against various tumors
RS64397B1 (sr) * 2015-03-27 2023-08-31 Immatics Biotechnologies Gmbh Novi peptidi i kombinacija peptida za upotrebu u imunoterapiji protiv raznih tumora (seq id 25 - mrax5-003)
GB201515321D0 (en) * 2015-08-28 2015-10-14 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides, combination of peptides and scaffolds for use in immunotherapeutic treatment of various cancers
WO2017070042A1 (en) 2015-10-20 2017-04-27 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Methods of producing t cell populations using akt inhibitors
WO2017139199A1 (en) 2016-02-10 2017-08-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Inducible arginase
EP3416668A4 (en) * 2016-02-18 2020-02-19 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF MELANOMA
GB201604458D0 (en) 2016-03-16 2016-04-27 Immatics Biotechnologies Gmbh Peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against cancers
RS63727B1 (sr) 2016-03-16 2022-12-30 Immatics Biotechnologies Gmbh Transficirane t ćelije i t-ćelijski receptori za upotrebu u imunoterapiji protiv malignih tumora
GB201604494D0 (en) * 2016-03-16 2016-04-27 Immatics Biotechnologies Gmbh Transfected T-Cells and T-Cell receptors for use in immunotherapy against cancers
CN106749620B (zh) * 2016-03-29 2020-09-25 广东香雪精准医疗技术有限公司 识别mage-a1抗原短肽的t细胞受体
US12144850B2 (en) 2016-04-08 2024-11-19 Purdue Research Foundation Methods and compositions for car T cell therapy
US10188749B2 (en) 2016-04-14 2019-01-29 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions and methods to program therapeutic cells using targeted nucleic acid nanocarriers
WO2018097951A1 (en) 2016-11-22 2018-05-31 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-mage-a3/a6 antibodies
DE102016123859B3 (de) * 2016-12-08 2018-03-01 Immatics Biotechnologies Gmbh Neue T-Zellrezeptoren und deren Verwendung in Immuntherapie
CN108250289B (zh) * 2016-12-28 2021-10-08 香雪生命科学技术（广东）有限公司 源自于mage b6的肿瘤抗原短肽
CN110121336A (zh) 2017-01-05 2019-08-13 弗莱德哈钦森癌症研究中心 改善疫苗功效的系统和方法
CA3051481A1 (en) 2017-02-07 2018-08-16 Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) Phospholipid ether (ple) car t cell tumor targeting (ctct) agents
ES3010559T3 (en) 2017-02-28 2025-04-03 Endocyte Inc Compositions and methods for car t cell therapy
EP4269595A3 (en) * 2017-10-05 2023-12-06 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Methods for selectively expanding cells expressing a tcr with a murine constant region
WO2019075055A1 (en) 2017-10-11 2019-04-18 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services METHODS FOR PRODUCING T-CELL POPULATIONS USING P38 MAPK INHIBITORS
CN109776671B (zh) * 2017-11-14 2022-05-27 杭州康万达医药科技有限公司 分离的t细胞受体、其修饰的细胞、编码核酸、表达载体、制备方法、药物组合物和应用
CN109837248A (zh) * 2017-11-25 2019-06-04 深圳宾德生物技术有限公司 一种tcr敲除的靶向mage-a3的t细胞受体基因修饰t细胞及其制备方法和应用
CN109836490A (zh) * 2017-11-25 2019-06-04 深圳宾德生物技术有限公司 一种靶向mage-a3的t细胞受体、t细胞受体基因修饰t细胞及其制备方法和应用
JP7549303B2 (ja) 2018-01-22 2024-09-11 エンドサイト・インコーポレイテッド Ｃａｒ ｔ細胞の使用方法
CN111936518A (zh) 2018-02-06 2020-11-13 西雅图儿童医院（Dba西雅图儿童研究所） 对fl-ple标记的肿瘤表现出最佳的t细胞功能的荧光素特异性car
CN118374524A (zh) 2018-02-09 2024-07-23 美国卫生和人力服务部 拴系白细胞介素-15和白细胞介素-21
CN112105382A (zh) 2018-02-23 2020-12-18 恩多塞特公司 用于car t细胞疗法的顺序方法
CN112236447B (zh) * 2018-04-19 2023-10-20 得克萨斯州大学系统董事会 具有mage-b2特异性的t细胞受体及其用途
CN118726256A (zh) 2018-04-24 2024-10-01 美国卫生和人力服务部 使用羟基柠檬酸和/或其盐产生t细胞群体的方法
EP3714941A1 (en) 2019-03-27 2020-09-30 Medigene Immunotherapies GmbH Mage-a4 tcrs
JP2022541181A (ja) * 2019-07-15 2022-09-22 ネオジン セラピューティクス ビー．ブイ． Ｔｃｒ遺伝子の単離方法
DE102019121007A1 (de) 2019-08-02 2021-02-04 Immatics Biotechnologies Gmbh Antigenbindende Proteine, die spezifisch an MAGE-A binden
JP2020143057A (ja) * 2020-04-01 2020-09-10 アメリカ合衆国 がん特異的突然変異に対し抗原特異性を有するｔ細胞受容体を単離する方法
EP4211228B1 (en) 2020-09-08 2025-11-05 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services T cell phenotypes associated with response to adoptive cell therapy
WO2022104035A2 (en) 2020-11-13 2022-05-19 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Enhanced antigen reactivity of immune cells expressing a mutant non-signaling cd3 zeta chain
WO2023130040A2 (en) 2021-12-31 2023-07-06 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services T cell therapy with vaccination as a combination immunotherapy against cancer
CN116813744B (zh) * 2023-02-23 2024-02-23 暨南大学 一种识别mage-a3抗原短肽的t细胞受体及其应用
WO2025137640A1 (en) 2023-12-22 2025-06-26 Gilead Sciences, Inc. Azaspiro wrn inhibitors
WO2025160480A1 (en) 2024-01-26 2025-07-31 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Enhanced tumor reactivity of t cells lacking sit1, lax1, or trat1
WO2025250587A1 (en) 2024-05-29 2025-12-04 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Drug-regulatable, inducible cytokine expression

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
IN165717B (es) 1986-08-07 1989-12-23 Battelle Memorial Institute
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
AU8507191A (en) 1990-08-29 1992-03-30 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
JP3266311B2 (ja) 1991-05-02 2002-03-18 生化学工業株式会社 新規ポリペプチドおよびこれを用いる抗ｈｉｖ剤
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US6265150B1 (en) 1995-06-07 2001-07-24 Becton Dickinson & Company Phage antibodies
US5714352A (en) 1996-03-20 1998-02-03 Xenotech Incorporated Directed switch-mediated DNA recombination
EP1257289A1 (en) 2000-02-08 2002-11-20 The Penn State Research Foundation Immunotherapy using interleukin 13 receptor subunit alpha 2
EP2598528A1 (en) * 2010-07-28 2013-06-05 Immunocore Ltd. T cell receptors
BR112013006718B1 (pt) * 2010-09-20 2021-12-07 Tron - Translationale Onkologie An Der Universitätsmedizin Der Johannes Gutenberguniversität Mainz Gemeinnutzige Gmbh Receptor de células t com especificidade para ny-eso-1, composição farmacêutica compreendendo o mesmo e uso do mesmo
WO2012054825A1 (en) * 2010-10-22 2012-04-26 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-mage-a3 t cell receptors and related materials and methods of use
CN102251033B (zh) * 2011-07-05 2013-03-20 北京大学人民医院 基于mage-a3基因辅助诊断多发性骨髓瘤患者的定量检测试剂盒
PT2755997T (pt) 2011-09-15 2018-10-30 Us Health Recetores de célula t que reconhecem mage restrito a hlaa1 ou hla-cw7
US9413985B2 (en) * 2012-09-12 2016-08-09 Lattice Semiconductor Corporation Combining video and audio streams utilizing pixel repetition bandwidth
MX367279B (es) * 2012-09-14 2019-08-13 Us Health Receptores de la celula t que reconocen mhc de mage-a3 de calse ii-restringida.

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Publication number Publication date
LT2895509T (lt) 2020-03-25
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