ES2912916T3 - Recipiente para centrífuga y método de aislamiento de la SVF utilizando el mismo - Google Patents

Recipiente para centrífuga y método de aislamiento de la SVF utilizando el mismo Download PDF

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Bo Yung Yoo
Jun Hyuk Seo
Hyun Seung Ryu
Yong Su Kim
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Abstract

Un recipiente de centrífuga que comprende: una unidad de cuerpo (300) que es rotativa; una parte de cubierta (200) que cubre la unidad de cuerpo (300); y una parte de conexión (100) proporcionada en la parte de cubierta (200) y que comprende una pluralidad de tuberías de conexión (111) y (112) en comunicación de fluidos con el interior de la unidad de cuerpo (300), en donde la unidad de cuerpo (300) comprende una parte de alojamiento lateral (310) formada en una superficie lateral de la unidad de cuerpo (300) extendiéndose radialmente hacia fuera en todas las direcciones y sobresaliendo radialmente hacia fuera de la unidad de cuerpo (300), caracterizado porque el recipiente de centrifugación comprende un plato (150), dicho plato (150) es un cuerpo de revolución y tiene un extremo radial posicionado en la parte de alojamiento lateral (310), en donde una trayectoria de flujo lateral (152) en comunicación de fluidos con una tubería de conexión (112) de la pluralidad de tuberías de conexión (111, 112) se proporciona dentro del plato (150), en donde el plato (150) está configurado para no rotar cuando la unidad de cuerpo (300) rota, en donde un extremo de la otra tubería de conexión (111) de las tuberías de conexión (111) y (112) llega al cuerpo inferior (303) de la unidad de cuerpo (300), en donde la parte de conexión (100) comprende además una carcasa de tubería de conexión (115), la otra tubería de conexión (111) de la pluralidad de tuberías de conexión (111) y (112) llega al cuerpo inferior (303) de la unidad de cuerpo (300) a través de una trayectoria de flujo central (120), una parte de la trayectoria de flujo central (120) se proporciona dentro de la carcasa de la tubería de conexión (115), la tubería de conexión (112) está en comunicación de fluidos con la trayectoria de flujo lateral (152) a través de un espacio entre la carcasa de la tubería de conexión (115) y la trayectoria de flujo central (120), y una abertura de la trayectoria de flujo lateral (151) que conecta un espacio entre la carcasa de la tubería de conexión (115) y la trayectoria de flujo central (120) a la trayectoria de flujo lateral (152) se dispone en el centro del plato (150), en donde el exterior del recipiente de centrífuga y el interior de la parte de alojamiento lateral (310) están en comunicación de fluidos a través de la tubería de conexión (112) y la trayectoria de flujo lateral (152), en donde una sustancia alojada en la parte de alojamiento lateral (310) se descarga al exterior del recipiente de centrífuga a través de la tubería de conexión (112) y la trayectoria de flujo lateral (152), y una sustancia fuera del recipiente de centrífuga se introduce en la parte de alojamiento lateral (310), en donde el diámetro de una porción superior de la carcasa de la tubería de conexión (115) es menor que el diámetro de la porción inferior de la carcasa de la tubería de conexión (115), la trayectoria de flujo central (120) se inserta y se acopla con la porción superior de la carcasa de la tubería de conexión (115), y la abertura de la trayectoria de flujo lateral (151) se inserta y se acopla con la porción inferior de la carcasa de la tubería de conexión (115).

Description

DESCRIPCIÓN
Recipiente para centrífuga y método de aislamiento de la SVF utilizando el mismo
Campo técnico
La presente solicitud reivindica la prioridad de Solicitudes de patente coreanas Núm. 10-2016-0070331 y 10-2016­ 0129153 presentadas el 7 de junio de 2016 y el 6 de octubre de 2016 en la República de Corea.
La presente divulgación se refiere a un recipiente de centrífuga, un método de centrifugación que usa el mismo y a un método para aislar la fracción vascular estromal (SVF) usando el mismo.
Antecedentes de la técnica
La fracción vascular estromal (SVF) se puede separar del tejido adiposo para uso cosmético o terapéutico. Para separar la SVF del tejido adiposo, se introduce solución de lavado, enzima o similar según sea necesario, seguido de varias etapas de centrifugación utilizando una centrífuga.
Al aislar la SVF usando una centrífuga general, surgen los siguientes problemas.
Primero, la eficiencia de aislamiento de la SVF es baja en un recipiente de centrífuga que adopta la trayectoria de flujo lateral.
Esto se debe al hecho de que la trayectoria de flujo lateral no rota durante la rotación del recipiente de centrífuga. Para describir específicamente el proceso de aislamiento de la SVF, el líquido mezclado con grasa, enzima y solución salina fisiológica se centrifuga mediante la fuerza centrífuga de la centrífuga, de modo que la SVF y otras sustancias se separan en capas respectivas, formando así una estructura multicapa en una pared lateral. En este momento, el recipiente de centrífuga y las capas acumuladas en el lado del mismo continúan rotando durante la centrifugación, mientras que la trayectoria de flujo lateral conectada a la trayectoria de flujo central no rota (ver la Figura 9a). En vista de una pluralidad de capas separadas, la pluralidad de capas separadas son estacionarias, mientras que la trayectoria de flujo lateral rota (ver la Figura 10a). En consecuencia, se produce el llamado "efecto de agitación", en el que las capas de sustancias separadas se agitan por la trayectoria de flujo lateral, lo que hace que una porción de la SVF separada se vuelva a mezclar con las otras sustancias, lo que da como resultado una reducción de la eficiencia de separación de SVF.
En otras palabras, la trayectoria de flujo lateral es necesaria para separar la SVF del tejido adiposo mediante centrifugación y luego descargar el tejido adiposo restante al exterior, pero la trayectoria de flujo lateral también interfiere con el aislamiento de SVF.
En segundo lugar, la tasa de rendimiento de SVF es baja.
Como se describe en la Patente coreana Núm. 10-1316573 y la Publicación PCT Núm. WO2008-133874, está presente una manta que sobresale hacia fuera en la pared lateral o superficie inferior de un recipiente de centrífuga general, y la sustancia separada se acumula en la manta que sobresale. En estos ejemplos, la manta que sobresale hacia fuera de la pared lateral sobresale sólo de una parte de la pared lateral completa del recipiente de centrífuga. Sin embargo, dado que la sustancia separada por la rotación de la centrífuga se genera en todos los ángulos en la dirección radial, la sustancia generada en un ángulo donde la manta que sobresale no está colocada no converge bien con la manta que sobresale y, en consecuencia, la tasa de rendimiento es baja. También se conoce un dispositivo similar para la separación de la SVF de la Publicación PCT Núm. WO2011-052946.
En tercer lugar, es difícil eliminar la SVF viscosa de la pared lateral del recipiente.
La SVF tiene una viscosidad. Cuando la centrífuga separa la SVF, debido a la fuerza centrífuga, la SVF se adhiere a la pared lateral, no al fondo del recipiente de centrífuga. Se necesita una estructura especial para eliminar eficazmente la SVF adherida a la pared lateral.
Para resolver estos problemas, el solicitante de la presente ha propuesto un recipiente de centrífuga que sobresale radialmente en todos los ángulos en la Publicación de Patente Coreana Núm. 10-2016-0006076. Esto proporciona una trayectoria de flujo con una sección transversal constante para las sustancias en el mismo, y es posible eliminar la SVF precipitada en una trayectoria de flujo con una sección transversal determinada ejerciendo una corriente rápida en esta a través de la rotación y parada repetidas del recipiente.
En cuarto lugar, no es fácil usar, reemplazar y desechar repetidamente el recipiente.
El recipiente de centrífuga en el campo de la tecnología médica debe desecharse después de un uso. Por lo tanto, el intercambio frecuente del recipiente es esencial y, por lo tanto, es preferible que el montaje y desmontaje del recipiente sea fácil, la producción sea simple y el precio unitario sea bajo. El aspecto complejo del recipiente puede dificultar la instalación y la extracción y provocar fugas entre las partes ensambladas. Y, por supuesto, se requiere que la centrífuga mantenga una hermeticidad excelente cuando se consideran las características de la centrífuga. Se conocen otros tipos de centrífugas en el campo de la separación de componentes sanguíneos, como la descrita en el documento de patente de Estados Unidos US 5,976,388.
(Documento de patente 1) KR10-2016-0006076 A1
(Documento de patente 2) KR10-1316573 B1
(Documento de Patente 3) WO2008-133874
(Documento de patente 4): WO2011-052946
(Documento de patente 5): US 5,976,388
Divulgación
Problema Técnico
La presente divulgación está diseñada para resolver los problemas de la técnica relacionada.
Específicamente, la presente divulgación propone un recipiente de centrífuga, que es capaz de centrifugación a través de su rotación, eliminando una determinada parte durante la centrifugación y realizando un proceso de introducción de una sustancia extraña sin reducir la eficiencia de aislamiento de la SVF. En particular, la presente divulgación pretende proponer un recipiente de centrífuga del que se elimina sustancialmente el efecto de agitación. Además, la presente divulgación pretende proporcionar un recipiente de centrífuga que puede aumentar la tasa de rendimiento de SVF finalmente obtenida.
Además, la presente divulgación pretende proporcionar un recipiente de centrífuga, que se retira fácilmente después de un uso y se vuelve a montar, y que tiene una hermeticidad excelente, baja dificultad de fabricación y bajo coste de fabricación.
Solución Técnica
De acuerdo con la invención, se proporciona un recipiente de centrífuga, que incluye una unidad de cuerpo 300 que es rotativa, una parte de cubierta 200 que cubre la unidad de cuerpo 300 y una parte de conexión 100 provista en la parte de cubierta 200 y que comprende una pluralidad de tuberías de conexión 111 y 112 en comunicación de fluidos con el interior de la unidad de cuerpo 300, en la que la unidad de cuerpo 300 incluye una parte de alojamiento lateral 310 formada en una superficie lateral de la unidad de cuerpo 300 extendiendo al menos una parte de la misma radialmente hacia fuera, y un plato 150 que tiene un extremo radial colocado en la parte de alojamiento lateral 310.
Además, la parte de alojamiento lateral 310 se extiende radialmente en todas las direcciones.
El plato 150 es un cuerpo de revolución tal que el efecto de agitación no ocurre incluso cuando el plato 150 no rota durante la rotación de la unidad de cuerpo 300.
Se proporciona una trayectoria de flujo lateral 152 en comunicación de fluidos con una tubería de conexión 112 de la pluralidad de tuberías de conexión 111 y 112 que se proporciona dentro del plato 150.
Un extremo de la otra tubería de conexión 111 de las tuberías de conexión 111 y 112 alcanza el cuerpo inferior 303 de la unidad de cuerpo 300.
La parte de conexión 100 incluye además una carcasa de tubería de conexión 115, la otra tubería de conexión 111 de la pluralidad de tuberías de conexión 111 y 112 llega al cuerpo inferior 303 de la unidad de cuerpo 300 a través de una trayectoria de flujo central 120, una parte de la trayectoria de flujo central 120 se proporciona dentro de la carcasa de la tubería de conexión 115, la tubería de conexión 112 está en comunicación de fluidos con la trayectoria de flujo lateral 152 a través de un espacio entre la carcasa de la tubería de conexión 115 y la trayectoria de flujo central 120, y una abertura de la trayectoria de flujo lateral 151 que conecta un espacio entre la carcasa de la tubería de conexión 115 y la trayectoria de flujo central 120 a la trayectoria de flujo lateral 152 se dispone en el centro del plato 150.
El exterior del recipiente de centrífuga y el interior de la parte de alojamiento lateral 310 están en comunicación de fluidos a través de la tubería de conexión 112 y la trayectoria de flujo lateral 152.
Una sustancia alojada en la parte de alojamiento lateral 310 se descarga al exterior del recipiente de centrífuga a través de la tubería de conexión 112 y la trayectoria de flujo lateral 152 y una sustancia fuera del recipiente de centrífuga se introduce en la parte de alojamiento lateral 310.
El diámetro de una porción superior de la carcasa de la tubería de conexión 115 es menor que un diámetro de la porción inferior de la carcasa de la tubería de conexión 115, la trayectoria de flujo central 120 se inserta y se acopla con la porción superior de la carcasa de la tubería de conexión 115, y la abertura de la trayectoria de flujo lateral 151 se inserta y se acopla con la porción inferior de la carcasa de la tubería de conexión 115.
También es preferible que la parte de alojamiento lateral 310 se extienda radialmente hacia fuera de una porción superior, una porción intermedia o una porción inferior de la unidad de cuerpo 300.
También es preferible que la unidad de cuerpo 300 incluya un cuerpo superior 301, un cuerpo intermedio 302 y un cuerpo inferior 303, un diámetro del cuerpo superior 301 aumenta gradualmente en dirección hacia arriba, y la parte de alojamiento lateral 310 es una parte radialmente exterior del cuerpo superior 301 con un diámetro aumentado. También es preferible que el diámetro del cuerpo inferior 303 disminuya gradualmente en dirección hacia abajo, que una pluralidad de miembros agitadores 360 estén colocados en una superficie interna del cuerpo inferior 303, y es preferible que la pluralidad de miembros agitadores 360 estén dispuestos para formar una pluralidad de filas orientadas hacia un centro de eje de rotación de la unidad de cuerpo 300.
En otro aspecto de la presente divulgación, se proporciona un método de centrifugación que usa el recipiente de centrífuga descrito anteriormente, que incluye los pasos de separar una sustancia dentro del recipiente de centrífuga a medida que la unidad de cuerpo 300 rota mediante una rotación del recipiente de centrífuga, que es acumulado en la parte de alojamiento lateral 310, durante el cual el plato 150 no rota cuando la unidad de cuerpo 300 rota, evitando así un efecto de agitación de la sustancia que se separa y acumula en la parte de alojamiento lateral 310.
En otro aspecto de la presente divulgación, se proporciona un método de aislamiento de SVF que usa el método de centrifugación como se describió anteriormente, que puede incluir pasos de (a) introducir tejido adiposo en la unidad de cuerpo 300 a través de una primera tubería de conexión 111 de la pluralidad de tuberías de conexión 111 y 112, (b) suministrar la solución de lavado a través de la primera tubería de conexión 111 y centrifugar mediante el método de centrifugación para separar el tejido adiposo en un tejido adiposo lavado y un contaminante, (c) eliminar los contaminantes de la unidad de cuerpo 300 a través de la primera tubería de conexión 111, (d) suministrar una enzima a través de la primera tubería de conexión 111, agitar y centrifugar mediante el método de centrifugación descrito anteriormente para separar el tejido adiposo lavado en un tejido adiposo digerido y una solución acuosa primaria, (e) eliminar el tejido adiposo digerido de la unidad de cuerpo 300 a través de la segunda tubería de conexión 112 de la pluralidad de tuberías de conexión 111 y 112, (f) separar una solución acuosa primaria en SVF y una solución acuosa secundaria suministrando una solución de lavado a través de la primera tubería de conexión 111 y centrifugando mediante el método de separación centrífuga, en donde la SVF se adhiere a la parte de alojamiento lateral 310, (g) eliminar la solución acuosa secundaria desde la unidad de cuerpo 300 a través de la segunda tubería de conexión 112, (h) precipitar la SVF adherida a la parte de alojamiento lateral 310 por inercia al cuerpo inferior 303 suministrando una pequeña cantidad de solución de lavado a través de la primera tubería de conexión 111 y luego repetir la rotación y detener el recipiente de centrífuga, y (i) extraer la SVF del cuerpo inferior 303 a través de la primera tubería de conexión 111.
Efectos ventajosos
La presente divulgación proporciona los siguientes efectos. La presente divulgación propone un recipiente de centrífuga que tiene un plato que incluye una trayectoria de flujo lateral.
Con esta configuración, la presente divulgación tiene la ventaja de que la estructura multicapa provista en la pared lateral del recipiente de centrífuga no se agita durante la centrifugación y, por lo tanto, el efecto de agitación se elimina sustancialmente mientras que algunos de los componentes precipitados en la pared lateral pueden ser descargados selectivamente.
Además, dado que la SVF separada se acumula en la parte de alojamiento lateral posicionada radialmente en todas las direcciones, se proporciona una alta tasa de rendimiento de SVF.
Además, la presencia de una mordaza de enganche o similar permite un montaje y desmontaje convenientes, y también se proporciona facilidad de fabricación y excelente hermeticidad, y bajo coste de fabricación.
Además, como resultado de la prueba de verificación, se confirmó que la tasa de rendimiento y la estabilidad usando el recipiente de centrífuga de acuerdo con la presente descripción eran superiores a las de los aparatos convencionales, como se muestra en las Figuras 13 a 15
Breve descripción de los dibujos
Los dibujos adjuntos ilustran una realización preferida de la presente divulgación y, junto con la divulgación anterior, sirven para proporcionar una mayor comprensión de las características técnicas de la presente divulgación y, por lo tanto, la presente divulgación no se considera limitada al dibujo.
La Figura 1 es una vista en perspectiva de un recipiente de centrífuga según la presente divulgación.
La Figura 2 es una vista en perspectiva despiezada de un recipiente de centrífuga según la presente divulgación.
La Figura 3 es una vista en sección transversal de un recipiente de centrífuga tomada a lo largo de la línea A-A' de la Figura 1 de acuerdo con la presente divulgación.
La Figura 4 es una vista en perspectiva de una parte de conexión 100 de un recipiente de centrífuga según la presente divulgación.
La Figura 5 es una vista en perspectiva de una parte de una parte de conexión 100 del recipiente de centrífuga según la presente descripción.
La Figura 6 es una vista en perspectiva de la sección transversal de una parte de una parte de conexión 100 de un recipiente de centrífuga según la presente divulgación.
Las Figuras 7 y 8 son vistas en perspectiva de un recipiente de centrífuga de otra realización de la presente divulgación.
Las Figuras 9 y 10 son vistas conceptuales para explicar las características para eliminar el efecto de agitación de un recipiente de centrífuga según la presente divulgación.
La Figura 11 es un diagrama de flujo para explicar un método de aislamiento de SVF utilizando un recipiente de centrífuga de acuerdo con la presente divulgación.
La Figura 12 es una vista esquemática para explicar un método de aislamiento de SVF utilizando un recipiente de centrífuga de acuerdo con la presente divulgación.
Las Figuras 13 a 15 son los resultados de una prueba de verificación de comparación entre el aislamiento de SVF usando un recipiente de centrífuga de acuerdo con la presente divulgación y el aislamiento de SVF usando instrumentos convencionales.
Mejor modo
A continuación, se describirá un recipiente de centrífuga según la presente divulgación con referencia a los dibujos.
1. Descripción del recipiente de centrífuga
El recipiente de centrífuga según la presente divulgación está montado en una centrífuga. La centrífuga generalmente incluye un miembro de potencia que proporciona potencia para la rotación, una pluralidad de bolsas conectadas al recipiente de centrífuga para alojar las sustancias que se van a separar y los aditivos, y las sustancias separadas o los contaminantes en el mismo, una unidad de control para controlar la operación, un dispositivo de visualización para dar salida al estado de operación, etc. El recipiente de centrífuga de acuerdo con la presente divulgación se puede aplicar a cualquier tipo de centrífuga y, por lo tanto, la centrífuga no se describirá redundantemente en este documento.
A continuación, se describirá en detalle un recipiente de centrífuga según la presente descripción con referencia a las Figuras 1 a 6.
1.1. Pieza de conexión 100
El recipiente de centrífuga según la presente divulgación incluye una parte de conexión 100, una parte de cubierta 200 y una unidad de cuerpo 300.
Una primera tubería de conexión 111, una segunda tubería de conexión 112, una carcasa del miembro de sellado 113, una carcasa de la tubería de conexión 115 y una mordaza de enganche 119 están colocados en una porción superior de la parte de conexión 100. Aunque la parte de conexión 100 se muestra en el dibujo incluyendo dos tuberías de conexión 111 y 112, también se pueden proporcionar dos o más tuberías de conexión.
La pluralidad de tuberías de conexión 111 y 112 previstas en la parte de conexión 100 están conectados a las bolsas de la centrífuga mediante tubos separados o similares. Con esta configuración, el usuario puede introducir el analito o el aditivo en el recipiente de centrífuga, o eliminar la sustancia separada o los contaminantes del recipiente de centrífuga.
Una pluralidad de tuberías de conexión 111 y 112 están en comunicación de fluidos con un espacio dentro de la unidad de cuerpo 300, y la configuración de la trayectoria de flujo se describirá específicamente a continuación. La carcasa del miembro de sellado 113 tiene un miembro de sellado 130 colocado en el mismo para proteger el miembro de sellado 130 desde el exterior. El miembro de sellado 130 puede incluir un primer miembro de sellado 131, un segundo miembro de sellado 132 y un tercer miembro de sellado 133 (ver Figura 2), y puede estar fabricado de un miembro elástico, un miembro de cerámica y un miembro magnético, respectivamente, para aumentar la hermeticidad.
La carcasa de la tubería de conexión 115 incluye una trayectoria de flujo a través de la cual una pluralidad de tuberías de conexión 111 y 112 están en comunicación de fluidos con un espacio dentro de la unidad de cuerpo 300, y también protege la trayectoria de flujo desde el exterior.
La carcasa de la tubería de conexión 115 está configurado de manera que una porción superior y una porción inferior están escalonadas, y la primera tubería de conexión 111 está conectada a la porción superior y la segunda tubería de conexión 112 está conectada a la porción inferior. Cuando las porciones superior e inferior están escalonadas, esto significa que los diámetros internos superior e inferior de la carcasa de la tubería de conexión 115 están configurados de manera diferente entre sí, lo que permite que la trayectoria de flujo central 120 se inserte fácilmente en la porción superior y también permite una porción sobresaliente del plato superior 150 que tiene la abertura de la trayectoria de flujo lateral 151 posicionada en ella para insertarse en la porción inferior y, por lo tanto, permite un fácil montaje, mientras mantiene la hermeticidad (ver Figura 3).
La mordaza de enganche 119 se refiere a una porción en la que la centrífuga se engancha cuando el recipiente de centrífuga está montado en la centrífuga, y sirve para ayudar a que el recipiente de centrífuga se coloque en posición en la centrífuga. Cuando el recipiente de centrífuga está montado para su uso, el usuario puede montar fácilmente la centrífuga enganchándola a la mordaza de enganche 119, y también puede separar fácilmente la centrífuga liberando la mordaza de enganche 119.
La porción inferior de la parte de conexión 100 se inserta en el espacio dentro de la unidad de cuerpo 300 y está sellada desde el exterior por la parte de cubierta 200 y el miembro de sellado 130. Un plato circular 150 se coloca debajo de la parte de conexión 100. Un extremo radial del plato 150 se coloca en la parte de alojamiento lateral 310. En el dibujo, el plato 150 se muestra con un plano circular, es decir, el propio plato 150 tiene una forma cilíndrica plana, pero se puede usar cualquier cuerpo de revolución. Esto se describirá en detalle a continuación.
Se proporciona una trayectoria de flujo lateral 152 dentro del plato 150 para proporcionar una comunicación de fluidos a través de la segunda tubería de conexión 112.
Una de las ventajas del plato 150 según la presente divulgación es que la trayectoria de flujo lateral 152 proporcionada en el plato 150 se puede conectar directamente a la parte de alojamiento lateral 310. En consecuencia, se obtienen otras ventajas tales como que es posible descargar algunas de las sustancias precipitadas secuencialmente en la parte de alojamiento lateral 310 por el proceso de centrifugado a través de la segunda tubería de conexión 112, y en el proceso de descarga y el proceso de centrifugado, el plato 150 como un cuerpo de revolución no provoca un efecto de agitación en la solución recogida en la parte de alojamiento lateral 310, de modo que la capa de precipitado más exterior que no está en contacto con el puerto de descarga no se agita. Esto se analizará en detalle a continuación con referencia a las Figuras 9 y 10.
1.2. Parte de cubierta 200
La parte de cubierta 200 se refiere a una porción que se asienta en la porción superior de la unidad de cuerpo 300. Se coloca una abertura 210 en el centro superior de la parte de cubierta 200. La abertura 210 está configurada de tal manera que la protuberancia del plato superior 150 que tiene la trayectoria de flujo lateral posicionada en ella se inserta y acopla con la abertura 210, y la trayectoria de flujo central 120 pasa a través de la abertura 210.
Una parte de asiento del miembro de sellado 230 se coloca radialmente hacia fuera de la abertura 210, y el miembro de sellado 130 se asienta sobre ella.
Una parte de conexión del cuerpo 240 que sobresale hacia arriba se coloca radialmente hacia fuera de la parte de cubierta 200. Se proporciona una ranura en una porción inferior de la parte de conexión del cuerpo 240 y se inserta en ella una parte de conexión de la cubierta 340 de la unidad del cuerpo 300, de modo que se aumenta la durabilidad del recipiente de centrífuga y se evita la separación de la parte de cubierta 200 durante la rotación. 1.3. Unidad de cuerpo 300
La unidad de cuerpo 300 se puede dividir en un cuerpo superior 301, un cuerpo intermedio 302 y un cuerpo inferior 303 (véase la Figura 3).
La parte de alojamiento lateral 310 se coloca radialmente hacia fuera del cuerpo superior 301. La parte de alojamiento lateral 310 se refiere a una porción que sobresale al menos radialmente hacia fuera de la unidad de cuerpo 300. Durante una operación de la centrífuga, las sustancias separadas en el recipiente de centrífuga comienzan a acumularse naturalmente en la parte de alojamiento lateral 310 por la fuerza centrífuga. Cuando se completa la rotación de la centrífuga, las sustancias de baja viscosidad descenderán por gravedad y fluirán a una parte de alojamiento inferior 330 del cuerpo inferior 303, mientras que las sustancias de alta viscosidad (por ejemplo, SVF) permanecerán en la parte de alojamiento lateral 310.
Preferiblemente, la pared de la parte de alojamiento lateral 310 sobresale radialmente y hacia fuera y estén perfectamente conectados a la pared de la unidad de cuerpo 300. Es decir, es preferible que el cuerpo superior 301 y el cuerpo intermedio 302 estén perfectamente conectados. En este caso, las sustancias separadas en el cuerpo intermedio 302 o en el cuerpo inferior 303 se pueden suministrar naturalmente a la parte de alojamiento lateral 310 del cuerpo superior 301. Mientras que el diámetro del cuerpo intermedio 302 se muestra constante en la Figura 3, el diámetro puede ser diferente siempre que el cuerpo intermedio 302 esté conectado perfectamente al cuerpo superior 301.
Además, la parte de alojamiento lateral 310 se extiende radialmente hacia fuera en todas las direcciones (es decir, a 360 grados). Cuando solo se extiende una parte del lóbulo, esta tomará la forma del lóbulo convencional donde la SVF se aloja en cierta medida. Sin embargo, cuando el lóbulo se extiende radialmente hacia fuera en todas las direcciones, la SVF se puede alojar independientemente de las direcciones en las que la SVF se separe mediante centrifugación y, como resultado, se puede esperar una tasa de rendimiento superior.
La parte de alojamiento inferior 330 se coloca en un extremo del cuerpo inferior 303 y la trayectoria de flujo central 120 está conectada al interior de la parte de alojamiento inferior 330. Con esta configuración, las sustancias acumuladas en la parte de alojamiento inferior 330 pueden descargarse al exterior del recipiente de centrífuga (véanse las Figuras 12c y 12j).
Una pluralidad de miembros agitadores 360 están colocados en una superficie interior del cuerpo inferior 303, es decir, en una superficie inferior del cuerpo inferior 303. Es preferible que la pluralidad de miembros agitadores 360 estén dispuestos para formar una pluralidad de filas hacia el centro del eje de rotación de la unidad de cuerpo 300. La Figura 2 ilustra cinco miembros agitadores 360 en cada una de las tres filas, pero el número y la disposición pueden variar.
Mientras tanto, en la realización ilustrada, la parte de alojamiento lateral 310 que se extiende radialmente hacia fuera está colocada en el cuerpo superior 301, pero también es posible otra realización en la que la parte de alojamiento lateral está situada en el cuerpo intermedio o en el cuerpo inferior. En el caso anterior, el plato también debe colocarse en el cuerpo intermedio o cuerpo inferior donde se coloca la parte de alojamiento lateral.
1.4. Trayectoria de flujo
La trayectoria de flujo del recipiente de centrífuga de acuerdo con la presente divulgación se describirá con referencia adicional a las Figuras 3. Como se usa aquí, "canal de flujo" se refiere a una trayectoria de comunicación de fluidos entre el exterior del recipiente de centrífuga y el interior de la unidad de cuerpo 300.
La presente divulgación adopta dos canales independientes.
La primera trayectoria de flujo incluye la primera tubería de conexión 111 y la trayectoria de flujo central 120, y el extremo de la misma se coloca en la parte de alojamiento inferior 330. La segunda trayectoria de flujo incluye la segunda tubería de conexión 112, una región radialmente exterior de la carcasa de la tubería de conexión 115 (es decir, una región exterior de la trayectoria de flujo central 120), una abertura de la trayectoria de flujo lateral 151 y una trayectoria de flujo lateral 152. Un extremo de la segunda trayectoria de flujo se coloca en la parte de alojamiento lateral 310. En este ejemplo, la abertura de la trayectoria de flujo lateral 151 tiene una forma doblada a 90 grados para conectar la segunda tubería de conexión 112 y la trayectoria de flujo lateral 152 (véanse las Figuras 5 y 6).
La primera trayectoria de flujo y la segunda trayectoria de flujo son independientes entre sí. En particular, cuando se ve desde el interior de la carcasa de la tubería de conexión 115, la trayectoria de flujo central 120 se coloca lo más cerca posible del centro, constituyendo así la primera trayectoria de flujo, y la segunda trayectoria de flujo se forma en el exterior de la pared de la trayectoria de flujo central 120 que sirve como límite. En consecuencia, las dos trayectorias de flujo son independientes entre sí.
2. Descripción del método de montaje del recipiente de centrífuga
El recipiente de centrífuga de acuerdo con la presente divulgación es ventajoso porque el recipiente está diseñado para ensamblarse fácilmente mientras tiene una hermeticidad excelente, proporcionando así una baja dificultad de fabricación y un bajo coste de fabricación.
El método de montaje se describirá con referencia a la Figura 2.
La porción superior de la parte de conexión 100, que incluye la pluralidad de tuberías de conexión 111 y 112, la carcasa de la tubería de conexión 115, la mordaza de enganche 119 y la carcasa del miembro de sellado 113, está moldeada integralmente.
El primer miembro de sellado 131, el segundo miembro de sellado 132 y el tercer miembro de sellado 133 se moldean por separado debido a las diferentes sustancias de los mismos, y luego se inserta una superficie superior del segundo miembro de sellado 132 en una superficie inferior del primer miembro de sellado 131 y una superficie superior del tercer miembro de sellado 133 se inserta en una superficie inferior del segundo miembro de sellado 132 para formar un miembro de sellado integrado 130.
La superficie superior del miembro de sellado 130 (es decir, la superficie superior del primer miembro de sellado 131) se inserta en la superficie interior de la carcasa del miembro de sellado 113 y la superficie inferior del miembro de sellado 130 (es decir, la superficie inferior del tercer miembro de sellado 133) se asienta en la parte de asiento del miembro de sellado 230 de la parte de cubierta 200. En este ejemplo, la superficie superior del miembro de sellado 130 tiene el tamaño y la forma para adaptarse a la superficie interior de la carcasa del miembro de sellado 113, y la superficie inferior del miembro de sellado 130 tiene el tamaño y la forma para adaptarse a la parte de asiento del miembro de sellado 230, de manera que se mantenga el sellado.
A continuación, la porción inferior de la parte de conexión 100 que incluye la trayectoria de flujo central 120 y el plato 150 se inserta y acopla con el montaje de la porción superior de la parte de conexión 100, el miembro de sellado 130 y la parte de cubierta 200 desde abajo. Específicamente, la trayectoria de flujo central 120 se inserta en la porción superior de la carcasa de la tubería de conexión 115, y la porción sobresaliente del plato superior 150 donde se coloca la abertura de la trayectoria de flujo lateral 151 se inserta en la porción inferior de la carcasa de la tubería de conexión 115 (ver Figura 3).
A continuación, la unidad de cuerpo 300 se monta en la parte de cubierta 200. Es decir, la parte de conexión de la cubierta 340 de la unidad de cuerpo 300 se inserta en una porción inferior de la parte de conexión del cuerpo 240 de la parte de cubierta 200 y se fija en su posición. Además, se puede proporcionar una unión o fusión separada para la inserción y la fijación.
3. Descripción de otras realizaciones
Como se muestra en las Figuras 1 a 6, el recipiente de centrífuga de acuerdo con la realización de la presente divulgación descrita anteriormente tiene la parte de alojamiento lateral 310 colocada en la porción superior del cuerpo principal 301.
Como se muestra en la Figura 7, un recipiente de centrífuga de acuerdo con otra realización de la presente descripción tiene la parte de alojamiento lateral 310 colocada en la porción intermedia del cuerpo principal 302. Como se muestra en la Figura 8, un recipiente de centrífuga según otra realización más de la presente divulgación tiene la parte de alojamiento lateral 310 colocada en la porción inferior del cuerpo principal 303.
En las tres realizaciones mostradas en las Figuras 1, 7 y 8, la parte de alojamiento lateral 310 tiene al menos una parte que se extiende radialmente hacia fuera, o preferiblemente, la parte de alojamiento lateral 310 se extiende radialmente hacia fuera en todas las direcciones. Además, en las tres realizaciones, un extremo del plato 150 se coloca en la parte de alojamiento lateral 310.
4. Eliminación sustancial del efecto de agitación
La característica de un recipiente de centrífuga de eliminar el efecto de agitación según la presente divulgación se describirá a continuación con referencia a las Figuras 9 y 10. Las Figuras 9 y 10a ilustran el efecto de agitación mostrado en la técnica relacionada (o en particular, en la Publicación de patente coreana Núm. 10-2016-0006076), y la Figura 10b ilustra un ejemplo de la presente descripción.
En un recipiente de centrífuga según la presente divulgación, la sustancia a separar en la parte de cubierta 200, la unidad de cuerpo 300 y la unidad de cuerpo 300 rotan a medida que se hace funcionar la centrífuga. En esta situación, los componentes incluidos en la pieza de conexión 100 no rotan. Es decir, la trayectoria de flujo central 120, el plato 150 y la trayectoria de flujo lateral 152 dentro del plato 150 incluida en la parte de conexión 100 no rotan. Esto se debe a que la parte de conexión 100 está conectada a una bolsa de alojamiento de sustancias o similar de la centrífuga que suministra la sustancia a través de un tubo (no mostrado) o similar.
Este es también el caso de la técnica relacionada en la que no se proporciona el plato 150 y, en consecuencia, como se muestra en la Figura 9a, la unidad de cuerpo 300 y la sustancia a separar incluida en ella rotan, pero la trayectoria de flujo lateral 152 no rota cuando se hace funcionar la centrífuga. Cuando el proceso continúa hasta cierto punto, las sustancias a separar se separan en la SVF o similares para formar una estructura de múltiples capas, y las sustancias en la estructura de múltiples capas se rotan, pero la trayectoria de flujo lateral 152 no se rota.
Como se muestra en la Figura 10a, en una observación relativa de esto desde la perspectiva de las múltiples capas separadas, significa que solo la trayectoria de flujo lateral 152 rota, mientras que las múltiples capas están en un estado estacionario. En consecuencia, la trayectoria de flujo lateral 152 agita y perturba las múltiples capas a medida que se sumerge y retira repetidamente de las múltiples capas separadas. Esto hace que algunas de las sustancias separadas, incluida la SVF, se vuelvan a mezclar, lo que reduce la eficacia del aislamiento.
Sin embargo, en la realización de la presente divulgación provista del plato circular 150, se proporcionan diferentes aspectos.
Como se muestra en la Figura 10b, en una observación relativa desde el lado de las múltiples capas separadas, solo el plato 150 rota, mientras que las múltiples capas están en un estado estacionario. Sin embargo, solo el plato 150 rota debido a su forma circular, en la misma posición tridimensional. Es decir, el plato no se sumerge ni se retira de nuevo. En consecuencia, las capas múltiples no se agitan ni se perturban, y se elimina sustancialmente el efecto de agitación en el que las sustancias separadas, incluida la SVF, se vuelven a mezclar.
Mientras tanto, el plato 150 para evitar el efecto de agitación no tiene que ser necesariamente circular, y se puede usar cualquier forma siempre que tenga la forma de un cuerpo de revolución. Como se usa aquí, el "cuerpo de revolución" significa una figura que siempre tiene una forma constante en la sección transversal que incluye el eje de rotación.
Por ejemplo, mientras que el plato 150 es circular en la Figura 10b, la sección transversal desde el lado de las múltiples capas es constante como un cuadrado.
El plato 150 puede ser un cuerpo de revolución que tenga una sección transversal triangular en lugar de una forma rectangular. En este caso, el propio plato 150 puede tener una forma cónica plana, y todavía no se produce el efecto de agitación, lo cual es preferible.
El plato 150 puede ser un cuerpo de revolución de sección en forma de paralelepípedo. En este caso, el propio plato 150 tendrá forma de paraguas y, de nuevo, no se produce el efecto de agitación, lo que es preferible.
5. Descripción del método de aislamiento de SVF utilizando un recipiente de centrífuga
A continuación se describirá un método de aislamiento de SVF usando un recipiente de centrífuga de acuerdo con la presente divulgación con referencia a las Figuras 11 y 12.
Las Figuras 12a a 12j muestran los respectivos pasos descritos con referencia a la Figura 11, en la que se añaden los números de referencia correspondientes (S100 a S800) en la parte inferior de cada dibujo.
El tejido adiposo se suministra a la unidad de cuerpo 300 a través de la primera tubería de conexión 111 (S100). A continuación, se suministra solución de lavado a la unidad de cuerpo 300 a través de la primera tubería de conexión 111, y luego se hace funcionar la centrífuga, rotando y agitando durante un tiempo predeterminado (S200). Una vez completada la rotación y la agitación, el tejido adiposo lavado y los contaminantes, incluida la sangre o similares, se separan en capas superior e inferior, respectivamente. La capa inferior de los contaminantes separados se descarga al exterior a través de la trayectoria de flujo central 120 cuyo extremo se posiciona en la parte de alojamiento inferior 330, y se retira (S300).
A continuación, se suministra una enzima como, por ejemplo, la colagenasa, y la centrífuga se hace rotar y agitar durante un tiempo predeterminado (S400). Al finalizar la rotación y la agitación, el tejido adiposo y la solución acuosa primaria digerida por la enzima se separan radialmente hacia dentro y hacia fuera, respectivamente. Los tejidos adiposos digeridos que se separan radialmente hacia dentro se descargan al exterior a través de la trayectoria de flujo lateral 152 cuyo extremo se posiciona en la parte de alojamiento lateral 310, y se retiran (S500).
Luego, la solución de lavado se suministra adicionalmente a la solución acuosa primaria restante, después de lo cual se realiza la rotación y agitación durante un tiempo predeterminado (S600). Así, la solución acuosa secundaria y la SVF se separan radialmente hacia dentro y hacia fuera, respectivamente. La solución acuosa secundaria que se separa radialmente hacia dentro se descarga al exterior a través de la trayectoria de flujo lateral 152 cuyo extremo se coloca en la parte de alojamiento lateral 310 y se retira (S700).
En consecuencia, solo la SVF permanece en la parte de alojamiento lateral 310, y se mantiene posicionada en la parte de alojamiento lateral 310 debido a la viscosidad de la SVF, es decir, la SVF no desciende hacia abajo incluso con su propio peso. En consecuencia, después de suministrar una pequeña cantidad de solución de lavado a través de la primera tubería de conexión 111, el recipiente de centrífuga repite la rotación y la parada. Debido a que la fuerza centrífuga de la rotación hace que la solución de lavado se distribuya ampliamente en la parte de alojamiento lateral 310, por la rotación y parada repetidas, la SVF se precipita en el cuerpo inferior 303 por la inercia impartida a la solución de lavado. A continuación, la SVF precipitada en el cuerpo inferior 303 es extraída y recogida a través de la primera tubería de conexión 111 (S800).
6. Prueba de verificación
Se realizaron pruebas para verificar el rendimiento del recipiente de centrífuga de acuerdo con la presente divulgación.
La grasa que se aspiró del abdomen y el muslo de 10 adultos masculinos y femeninos de entre 20 y 40 años de edad se introdujo en un recipiente de centrífuga de acuerdo con la presente divulgación y luego se separó la SVF de acuerdo con el método descrito con referencia a las Figuras 11 y 12. Las pruebas se realizaron con el primer grupo introducido con 50 ml y el segundo grupo introducido con 100 ml. Como enzima, se diluyeron 50 mg de colagenasa en 50 ml de solución de Hartmann, en comparación con 50 ml de grasa.
El número de células obtenidas por 1g de grasa introducida (Células/g), la viabilidad celular (%), y la actividad colagenasa (PZU/ml), es decir, la cantidad residual de colagenasa se calculó con base en el producto final obtenido según el método descrito en las Figuras 11 y 12. El recuento de células para calcular el número de células obtenidas y la viabilidad se realizó utilizando un contador de células automatizado.
Entre los instrumentos convencionales disponibles actualmente en el mercado, se seleccionaron Multi Station©, Cha-Station©, Lipokit©, y Celution©. El número de células obtenidas por 1 g de grasa introducida (Células/g), la viabilidad celular (%), y la actividad colagenasa (PZU/ml) de cada uno de los instrumentos ya son bien conocidos, y en consecuencia, la información correspondiente se comparó con los resultados según la presente divulgación.
(1) Número de células obtenidas
Como se muestra en la Figura 13, se observó que cuando se usó el recipiente de centrífuga de acuerdo con la presente divulgación, se obtuvieron de 2 a 50 veces o más células en comparación con los resultados obtenidos con Multi Station©, Cha-Station©, y Lipokit©. Sin embargo, el número de células obtenidas fue similar a los resultados obtenidos con Celution©.
(2) Viabilidad celular
Como se muestra en la Figura 14, la viabilidad del recipiente de centrífuga de acuerdo con la presente divulgación fue excelente en comparación con los resultados obtenidos con Lipokit© y Celution©. Sin embargo, la viabilidad celular del recipiente de centrífuga de acuerdo con la presente divulgación fue similar o algo inferior en comparación con los resultados obtenidos con Multi Station© y Cha-Station©.
Luego se comparó el número de células obtenidas con los siguientes resultados.
En comparación con la presente divulgación, Multi Station© de la técnica relacionada exhibió la mitad del número de células obtenidas o menos, pero la viabilidad celular fue algo mayor. En comparación con la presente divulgación, Lipokit© y Celution© exhibieron un número similar de células obtenidas, pero una viabilidad celular más baja. Es decir, la técnica relacionada mostraba una baja viabilidad cuando se obtenía una gran cantidad de células, y el número de células obtenidas era bajo cuando la viabilidad era alta.
Por lo tanto, se confirmó que la presente divulgación tiene una excelente viabilidad celular así como el número de células obtenidas y, por lo tanto, tiene una tasa de rendimiento final excelente en comparación con la técnica relacionada.
(3) Residuo de enzima
Como resultado de la actividad colagenasa como se muestra en la Figura 15, cuando se usó el recipiente de centrífuga de acuerdo con la presente divulgación, la cantidad de residuos de colagenasa fue de aproximadamente el 20 % o menos del valor promedio en Multi Station©, Cha-Station©, Lipokit© y Celution©, por lo que se confirmó que es más estable.
Será evidente para los expertos en la técnica que se pueden realizar diversas modificaciones y variaciones en la presente divulgación sin alejarse del alcance de la presente divulgación tal como se define en las siguientes reivindicaciones y sus equivalentes. Por lo tanto, el alcance de la protección de la presente descripción está determinado por las reivindicaciones.

Claims (5)

REIVINDICACIONES
1. Un recipiente de centrífuga que comprende:
una unidad de cuerpo (300) que es rotativa;
una parte de cubierta (200) que cubre la unidad de cuerpo (300); y
una parte de conexión (100) proporcionada en la parte de cubierta (200) y que comprende una pluralidad de tuberías de conexión (111) y (112) en comunicación de fluidos con el interior de la unidad de cuerpo (300),
en donde la unidad de cuerpo (300) comprende
una parte de alojamiento lateral (310) formada en una superficie lateral de la unidad de cuerpo (300) extendiéndose radialmente hacia fuera en todas las direcciones y sobresaliendo radialmente hacia fuera de la unidad de cuerpo (300),
caracterizado porque
el recipiente de centrifugación comprende un plato (150), dicho plato (150) es un cuerpo de revolución y tiene un extremo radial posicionado en la parte de alojamiento lateral (310),
en donde una trayectoria de flujo lateral (152) en comunicación de fluidos con una tubería de conexión (112) de la pluralidad de tuberías de conexión (111, 112) se proporciona dentro del plato (150), en donde el plato (150) está configurado para no rotar cuando la unidad de cuerpo (300) rota, en donde un extremo de la otra tubería de conexión (111) de las tuberías de conexión (111) y (112) llega al cuerpo inferior (303) de la unidad de cuerpo (300),
en donde la parte de conexión (100) comprende además una carcasa de tubería de conexión (115), la otra tubería de conexión (111) de la pluralidad de tuberías de conexión (111) y (112) llega al cuerpo inferior (303) de la unidad de cuerpo (300) a través de una trayectoria de flujo central (120), una parte de la trayectoria de flujo central (120) se proporciona dentro de la carcasa de la tubería de conexión (115),
la tubería de conexión (112) está en comunicación de fluidos con la trayectoria de flujo lateral (152) a través de un espacio entre la carcasa de la tubería de conexión (115) y la trayectoria de flujo central (120), y
una abertura de la trayectoria de flujo lateral (151) que conecta un espacio entre la carcasa de la tubería de conexión (115) y la trayectoria de flujo central (120) a la trayectoria de flujo lateral (152) se dispone en el centro del plato (150),
en donde el exterior del recipiente de centrífuga y el interior de la parte de alojamiento lateral (310) están en comunicación de fluidos a través de la tubería de conexión (112) y la trayectoria de flujo lateral (152),
en donde una sustancia alojada en la parte de alojamiento lateral (310) se descarga al exterior del recipiente de centrífuga a través de la tubería de conexión (112) y la trayectoria de flujo lateral (152), y una sustancia fuera del recipiente de centrífuga se introduce en la parte de alojamiento lateral (310), en donde el diámetro de una porción superior de la carcasa de la tubería de conexión (115) es menor que el diámetro de la porción inferior de la carcasa de la tubería de conexión (115),
la trayectoria de flujo central (120) se inserta y se acopla con la porción superior de la carcasa de la tubería de conexión (115), y
la abertura de la trayectoria de flujo lateral (151) se inserta y se acopla con la porción inferior de la carcasa de la tubería de conexión (115).
2. El recipiente de centrífuga según la reivindicación 1, en donde la parte de alojamiento lateral (310) se extiende radialmente hacia fuera de una porción superior, una porción intermedia o una porción inferior de la unidad de cuerpo (300).
3. El recipiente de centrífuga según la reivindicación 2, en donde la unidad de cuerpo (300) comprende un cuerpo superior (301), un cuerpo intermedio (302) y un cuerpo inferior (303),
un diámetro del cuerpo superior (301) aumenta gradualmente en dirección ascendente, y la parte de alojamiento lateral (310) es una parte radialmente exterior del cuerpo superior (301) con un diámetro aumentado.
4. El recipiente de centrífuga según la reivindicación 3, en donde el diámetro del cuerpo inferior (303) disminuye gradualmente en dirección descendente,
una pluralidad de miembros agitadores (360) están colocados en una superficie interior del cuerpo inferior (303), y
la pluralidad de miembros agitadores (360) se disponen para formar una pluralidad de filas orientadas hacia un centro de eje de rotación de la unidad de cuerpo (300).
5. Un método de centrifugación que usa el recipiente de centrífuga de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende los pasos de:
separar una sustancia dentro del recipiente de centrífuga a medida que la unidad de cuerpo (300) rota mediante una rotación del recipiente de centrífuga, que se acumula en la parte de alojamiento lateral (310), durante la cual el plato (150) no rota cuando la unidad de cuerpo (300) rota, evitando así un efecto de agitación de la sustancia que se separa y acumula en la parte de alojamiento lateral (310).
Un método de aislamiento de la fracción vascular estromal (SVF) que utiliza el método de centrifugación según la reivindicación 5, que comprende las etapas de:
(a) introducir tejido adiposo en la unidad de cuerpo (300) a través de una primera tubería de conexión (111) de la pluralidad de tuberías de conexión (111) y (112);
(b) suministrar la solución de lavado a través de la primera tubería de conexión (111) y centrifugar por el método de centrifugación para separar el tejido adiposo en tejido adiposo lavado y un contaminante; (c) eliminar los contaminantes de la unidad de cuerpo (300) a través de la primera tubería de conexión (111);
(d) suministrar una enzima a través de la primera tubería de conexión (111) y centrifugar por el método de centrifugación para separar el tejido adiposo lavado en tejido adiposo digerido y una solución acuosa primaria;
(e) retirar el tejido adiposo digerido de la unidad de cuerpo (300) a través de la segunda tubería de conexión (112) de la pluralidad de tuberías de conexión (111) y (112);
(f) separar una solución acuosa primaria en la SVF y una solución acuosa secundaria suministrando una solución de lavado a través de la primera tubería de conexión (111), agitando y centrifugando mediante el método de separación centrífuga, en el que la SVF se adhiere a la parte de alojamiento lateral (310);
(g) retirar la solución acuosa secundaria de la unidad de cuerpo (300) a través de la segunda tubería de conexión (112);
(h) precipitar la SVF adherida a la parte de alojamiento lateral (310) por inercia al cuerpo inferior (303) suministrando una pequeña cantidad de solución de lavado a través de la primera tubería de conexión (111) y luego repetir la rotación y detención del recipiente de centrífuga; y
(i) extraer la sVf precipitada en el cuerpo inferior (303) a través de la primera tubería de conexión (111).
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