ES2910303T3 - Compuesto mejorado para el tratamiento de insuficiencia cardiaca - Google Patents

Compuesto mejorado para el tratamiento de insuficiencia cardiaca Download PDF

Info

Publication number
ES2910303T3
ES2910303T3 ES18833849T ES18833849T ES2910303T3 ES 2910303 T3 ES2910303 T3 ES 2910303T3 ES 18833849 T ES18833849 T ES 18833849T ES 18833849 T ES18833849 T ES 18833849T ES 2910303 T3 ES2910303 T3 ES 2910303T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
treatment
cardiac
prevention
oligonucleotide
cdr132l
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES18833849T
Other languages
English (en)
Inventor
Thomas Thum
Sandor Batkai
Ariana Foinquinos
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Medizinische Hochschule Hannover
Original Assignee
Medizinische Hochschule Hannover
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Medizinische Hochschule Hannover filed Critical Medizinische Hochschule Hannover
Application granted granted Critical
Publication of ES2910303T3 publication Critical patent/ES2910303T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/712—Nucleic acids or oligonucleotides having modified sugars, i.e. other than ribose or 2'-deoxyribose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C12N2310/113—Antisense targeting other non-coding nucleic acids, e.g. antagomirs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
    • C12N2310/3231—Chemical structure of the sugar modified ring structure having an additional ring, e.g. LNA, ENA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/346—Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/31—Combination therapy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Un oligonucleótido que comprende una secuencia de fórmula II: **(Ver fórmula)** en la que A, T, G y C son componentes básicos de desoxirribonucleótido y en la que +G y +T son componentes básicos de nucleótido en puente.

Description

DESCRIPCIÓN
Compuesto mejorado para el tratamiento de insuficiencia cardiaca
La presente invención se refiere a un oligonucleótido que es un inhibidor eficaz del microARN miR-132, y a su uso en medicina, particularmente en la prevención o el tratamiento de trastornos cardiacos y/o trastornos fibróticos. La insuficiencia cardiaca es una de las principales causas patológicas de mortalidad en el mundo. El infarto de miocardio (IM) es la causa más importante de insuficiencia cardiaca, ya que el IM conduce a una remodelación progresiva posterior del corazón que da como resultado una insuficiencia cardiaca con mal pronóstico. Las opciones farmacológicas terapéuticas usadas actualmente para la insuficiencia cardiaca incluyen agentes que modulan la angiotensina, p-bloqueantes, diuréticos, antagonistas de la aldosterona, inhibidores de la neprilisina combinados con bloqueantes del receptor de la angiotensina II, vasodilatadores o agentes inotrópicos. Aunque varios estudios clínicos han demostrado disminuciones significativas en las tasas de mortalidad inducida por insuficiencia cardiaca para todos estos agentes, la tasa de mortalidad a los 5 años sigue siendo inaceptable en casi el 50 %. Por tanto, existe una gran necesidad de desarrollar enfoques terapéuticos novedosos y más eficientes para la insuficiencia cardiaca.
El crecimiento hipertrófico patológico de cardiomiocitos puede conducir al desarrollo de remodelación cardiaca, insuficiencia cardiaca y muerte súbita de origen cardiaco. El crecimiento hipertrófico de los cardiomiocitos es una respuesta al mayor esfuerzo de la pared cardiaca provocado por la sobrecarga de volumen y/o presión cardiaca. Inicialmente, la hipertrofia cardiaca es un mecanismo compensatorio que tiene como objetivo disminuir el esfuerzo de la pared y aumentar el gasto cardiaco. Sin embargo, la hipertrofia cardiaca prolongada avanza a disfunción contráctil, descompensación cardiaca y finalmente insuficiencia cardiaca (Hill y Olson, 2008; Barry y Townsend, 2010). La transición de la hipertrofia fisiológica a la patológica puede producirse dependiendo de muchos factores, incluyendo la pérdida de miocitos por apoptosis o necrosis, alteraciones en la autofagia, defectos en la respuesta contráctil, homeostasis del calcio desregulada, desensibilización de los receptores adrenérgicos o fibrosis cardiaca (Hill y Olson, 2008; Barry y Townsend, 2010). La señalización hipertrófica está mediada en gran medida por la ruta de señalización de la insulina (DeBosch y Muslin, 2008; Barry y Townsend, 2010). Tanto la insulina como el factor de crecimiento insulínico 1 (IGF-1) activan rutas prohipertróficas en los cardiomiocitos a través del receptor de IGF-1, que activa la fosfoinositina-3-cinasa (PI3K) (McMullen et al., 2004). La actividad de PI3K conduce a la activación de la serina/treonina cinasa Akt a través de su fosforilación, y la Akt activa fosforila factores de transcripción FoxO antihipertróficos que conducen a su desestabilización y prevención de la localización nuclear (Datta et al., 1999; Skurk et al., 2005; Ronnebaum y Patterson, 2010). Por el contrario, la acetilación de los factores FoxO por la sirtuina 1 (Sirt-1) conduce a su estabilización y translocación nuclear (Frescas et al., 2005). Los factores de transcripción FoxO estabilizados se localizan en el núcleo con el fin de regular la expresión de genes antihipertróficos. Las funciones antihipertróficas de las proteínas FoxO están mediadas en gran medida a través de la supresión de la ruta de señalización de la calcineurina prohipertrófica mediante la expresión de dianas génicas antihipertróficas de los factores FoxO, tales como la atrogina 1 (Ni et al., 2006; Ronnebaum y Patterson, 2010; Glas, 2010). Además, los factores de transcripción FoxO también inducen la apoptosis y regulan la autofagia en los cardiomiocitos (Ronnebaum y Patterson, 2010).
Se ha demostrado que los microARN tienen un papel clave en la remodelación cardiaca adversa. El documento WO 2013/034653 describe que miR-132 y/o miR-212 pueden inducir hipertrofia cardiaca y, por tanto, constituyen posibles dianas terapéuticas para el tratamiento de la insuficiencia cardiaca.
El documento WO 2016/042561 describe un método de tratamiento de un trastorno lipídico mediante la administración al sujeto de una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente polinucleotídico que es sustancialmente complementario a una secuencia de nucleótidos de un miR-132 humano.
Los presentes inventores han identificado un novedoso análogo de oligonucleótido que es un inhibidor eficaz de la expresión de miR-132 en cardiomiocitos. El análogo de oligonucleótido, denominado a continuación CDR132L, es un oligómero mixto (mixmer) que consiste en componentes básicos de ADN y LNA, que tiene uniones fosforotioato internucleosídicas. Carece de toxicidad significativa en una línea de células hepáticas humanas y en cardiomiocitos de rata neonatal aislados. Además, se demostró que CDR132L muestra efectos superiores en comparación con otros análogos de oligonucleótido que tienen la misma secuencia de nucleótidos pero una distribución diferente de componentes básicos de LNA.
La eficacia de CDR132L se sometió a prueba en varios modelos animales. En un modelo de ratón transgénico de hipertrofia cardiaca, CDR132L condujo a una remodelación cardiaca inversa asociada con una expresión reducida de miR-132. En un modelo de ratón de insuficiencia cardiaca tras un IM, se halló que el tratamiento con CDR132L reduce la disfunción ventricular izquierda tras un IM y los parámetros independientes de la carga de la función contráctil sistólica. Además, la administración de CDR132L dio como resultado una mejora de la función cardiaca, y reduce la expresión de miR-132, la señalización de esfuerzo cardiaco y la hipertrofia tras un IM. En un modelo porcino de insuficiencia cardiaca tras un IM, se halló que el tratamiento con CDR132L evitaba la remodelación inadaptada y mejoraba la función ventricular izquierda. Además, CDR132L normaliza la expresión tisular de marcadores patológicos de insuficiencia cardiaca tales como PNB, PNA y proporciona un cambio en las isoformas de cambio pesado de miosina (razón MYH7/6).
En un estudio adicional, los presentes inventores han identificado efectos terapéuticos antifibróticos para el análogo de oligonucleótido CDR132L en un modelo de ratón in vivo de infarto de miocardio y modelos in vitro de fibrosis hepática y fibrosis pulmonar.
Por tanto, el oligonucleótido CDR132L es útil como agente activo en medicina, particularmente en la prevención o el tratamiento de trastornos cardiacos y/o trastornos fibróticos.
Por consiguiente, un primer aspecto de la presente invención proporciona un oligonucleótido, que comprende o que tiene la secuencia de fórmula II:
en la que A, T, G y C son componentes básicos de desoxirribonucleótido y
en la que G y T son componentes básicos de nucleótido en puente.
El análogo de oligonucleótido de fórmula II puede comprender al menos una unión internucleosídica modificada, por ejemplo, una unión internucleosídica que está estabilizada frente a la digestión con nucleasas, por ejemplo, una unión fosforotioato o fosforodiamidato. En realizaciones específicas, todas las uniones internucleosídicas son uniones modificadas, particularmente uniones fosforotioato.
En una realización más específica, la invención se refiere al oligonucleótido CDR132L tal como se describe en el presente documento.
El oligonucleótido CDR132L tiene una secuencia de fórmula III:
5’-dA*+T*dG*+G*dC*+T*dG*+T*dA*+G*dA*dC*dT*dG*+T*+T-3’
en la que dA es 2’desoxiadenosina, dG es 2’desoxiguanosina, dC es 2’desoxicitidina y T es timidina,
en la que T es un componente básico de LNA-T y G es un componente básico de LNA-G y en la que * es una unión fosforotioato.
Un aspecto adicional de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende, como agente activo, un análogo de oligonucleótido que comprende una secuencia de fórmula Ii o III y un portador farmacéuticamente aceptable.
Todavía un aspecto adicional de la presente invención se refiere al uso médico de un análogo de oligonucleótido que comprende una secuencia de fórmula II o III. En determinadas realizaciones, el uso médico se refiere a un uso para el tratamiento o la prevención de un trastorno asociado con, acompañado por y/o provocado por la expresión patológica de miR-132. En determinadas realizaciones, el uso médico se refiere al tratamiento o la prevención de trastornos cardiacos, particularmente trastornos asociados con hipertrofia cardiaca. En determinadas realizaciones, el uso médico se refiere al tratamiento de trastornos fibróticos, por ejemplo, trastornos asociados con, acompañados por y/o provocados por fibrosis patológica, particularmente trastornos fibróticos cardiacos, trastornos fibróticos pulmonares o trastornos fibróticos hepáticos.
El oligonucleótido de fórmula II o III puede consistir en componentes básicos de ADN de desoxirribonucleótido y componentes básicos de nucleótido en puente. Un “nucleótido en puente” se refiere a un ribonucleótido modificado en el que el resto ribosa comprende un puente de dos o tres átomos que conecta el átomo de carbono 2’ y el 4’. Por ejemplo, el puente puede comprender la estructura 2’-O-CH2-4’, 2’-O-CH2-CH2-4’, 2’-O-CH(CH3)-4’ o una estructura correspondiente en la que O se reemplaza por S o NH. En una realización particular, el al menos un componente básico de nucleótido en puente es un componente básico de ácido nucleico bloqueado (LNA) que tiene un puente 2’-O-CH2-4’.
El oligonucleótido de fórmula II o III tiene una longitud de al menos 16 componentes básicos, por ejemplo, una longitud de 16 a 20 componentes básicos. En una realización particular, el oligonucleótido de fórmula II o III tiene una longitud de 16 componentes básicos.
En algunas realizaciones, el oligonucleótido de fórmula II o III comprende de 5 a 10, por ejemplo, de 6 a 8, particularmente, 7 componentes básicos de nucleótido en puente, por ejemplo, componentes básicos de LNA.
En algunas realizaciones, el oligonucleótido de fórmula II o III es un oligonucleótido desnudo. En algunas realizaciones, el oligonucleótido puede conjugarse con al menos un resto heterólogo, por ejemplo, un resto que no contribuye a la unión del oligonucleótido a miR-132. El resto heterólogo puede ser un resto que mejora el direccionamiento y/o la captación celular, por ejemplo, un resto lipídico tal como colesterol o un ácido graso, un resto sacarídico o aminosacarídico tal como un resto que contiene N-galactosamina, un resto peptídico o polipeptídico o un resto nucleosídico o nucleotídico tal como un aptámero. Un resto heterólogo puede conjugarse con el extremo terminal 5' y/o 3' del análogo de oligonucleótido por medio de un enlace covalente o un espaciador.
El oligonucleótido de la presente invención es adecuado para su uso en medicina, incluyendo medicina humana y veterinaria. En determinadas realizaciones, el compuesto es útil en la prevención o el tratamiento de un trastorno asociado con, acompañado por y/o provocado por la expresión patológica, por ejemplo, sobreexpresión, de miR-132. Se halló que la administración del compuesto reduce significativamente la expresión in vitro e in vivo de miR-132. En algunas realizaciones, el compuesto puede administrarse a pacientes que muestran una sobreexpresión de miR-132 en comparación con sujetos sanos. En algunas realizaciones, el compuesto puede administrarse a pacientes que no muestran una sobreexpresión de miR-132 en comparación con sujetos sanos pero aun así necesitan una reducción del nivel de miR-132.
El término “prevención” en el contexto de la presente invención se refiere a la administración del compuesto a un paciente que se sabe que tiene un mayor riesgo de desarrollar un determinado trastorno. El término “tratamiento” en el contexto de la presente invención se refiere a la administración del compuesto a un paciente que ya ha desarrollado signos y/o síntomas de un determinado trastorno. El término “paciente” se refiere a un sujeto que necesita la administración del compuesto de la invención en el campo de medicina humana o veterinaria. En realizaciones específicas, el paciente es un paciente humano.
En determinadas realizaciones, el compuesto de la presente invención es útil en la prevención o el tratamiento de trastornos cardiacos, particularmente de trastornos asociados con hipertrofia cardiaca. Por ejemplo, el compuesto es útil en la prevención o el tratamiento de disfunción contráctil, descompensación cardiaca, insuficiencia cardiaca o para la prevención o el tratamiento de remodelación cardiaca después de un infarto de miocardio, miocarditis, valvulopatías tales como estenosis de la válvula aórtica o insuficiencia de la válvula mitral, trastornos cardiacos genéticos con hipertrofia cardiaca, por ejemplo, miocardiopatía hipertrófica obstructiva y no obstructiva o enfermedad de Fabry.
El compuesto es útil para la administración a pacientes seleccionados de
(i) pacientes que tienen un mayor riesgo de desarrollar insuficiencia cardiaca,
(ii) pacientes que padecen insuficiencia cardiaca (congestiva), por ejemplo, pacientes que tienen un mayor riesgo de avance de una insuficiencia cardiaca,
(iii) pacientes tras un infarto de miocardio, y/o
(iv) pacientes con cardiopatías congénitas asociadas con hipertrofia cardiaca, tales como estenosis de venas pulmonares, comunicación interauricular o interventricular.
En determinadas realizaciones, el compuesto de la presente invención es útil en la prevención o el tratamiento de trastornos fibróticos, particularmente trastornos asociados con, acompañados por y/o provocados por fibrosis patológica.
La fibrosis patológica es la formación de un exceso de tejido conjuntivo fibroso en un órgano o tejido, particularmente asociado con, acompañado por y/o provocado por un estado patológico. La fibrosis patológica puede producirse en muchos órganos y tejidos diferentes dentro del cuerpo, normalmente como resultado de inflamación o daño.
En una realización determinada, la fibrosis es una fibrosis cardiaca, por ejemplo, un estado que implica fibrosis patológica en el corazón. Los tipos de fibrosis cardiaca a modo de ejemplo incluyen fibrosis auricular, fibrosis endomiocárdica o fibrosis que resulta de un infarto de miocardio previo.
En una realización adicional, la fibrosis es una fibrosis pulmonar, por ejemplo, un estado que implica fibrosis patológica en el pulmón. Los tipos de fibrosis pulmonar a modo de ejemplo incluyen trastornos fibróticos provocados por factores laborales o ambientales, por ejemplo, por exposición a toxinas y contaminantes tales como polvo de sílice, fibras de amianto, polvo de metal, polvo de carbón, polvo de cereales, excrementos de aves y animales. Otros tipos de trastornos fibróticos pulmonares están provocados por radioterapia y/o tratamiento con medicamentos tales como fármacos quimioterápicos, fármacos cardiacos, antibióticos o fármacos antiinflamatorios. Todavía otros tipos de trastornos fibróticos pulmonares están provocados por trastornos que incluyen fibrosis pulmonar idiopática, dermatitis, polimiositis, enfermedad mixta del tejido conjuntivo, una enfermedad autoinmunitaria tal como artritis reumatoide, esclerodermia, síndrome de Sjogren o lupus eritematoso sistémico, sarcoidosis, neumonía, una infección viral o enfermedad por reflujo gastroesofágico (ERGE).
En una realización adicional, la fibrosis puede ser fibrosis hepática, por ejemplo, un estado que implica fibrosis patológica en el hígado. Los tipos de fibrosis hepática a modo de ejemplo están provocados por una infección viral, por ejemplo, por el virus de la hepatitis B y/o C, trastornos metabólicos hereditarios, hepatitis autoinmunitaria, colestasis, sobrecarga de hierro, esteatosis hepática no alcohólica, incluyendo hígado graso no alcohólico (NAFL) y esteatohepatitis no alcohólica (NASH), y hepatopatía alcohólica.
En aún más realizaciones, la fibrosis también puede ser una fibrosis vascular, por ejemplo, rigidez arterial, una fibrosis cutánea, por ejemplo, formación de queloides o fibrosis sistémica nefrogénica, una artrofibrosis, algunas formas de capsulitis adhesiva, fibrosis de partes blandas tal como fibrosis mediastínica o fibrosis retroperitoneal, o fibrosis de la médula ósea tal como mielofibrosis.
En determinadas realizaciones, la invención abarca la determinación de la cantidad y/o actividad de determinados parámetros fisiológicos en el sujeto que va a tratarse antes, durante y/o después de la administración del compuesto de la invención. Este procedimiento de diagnóstico concomitante puede proporcionar ayuda para el uso médico tal como se describió anteriormente. Por ejemplo, el procedimiento de diagnóstico puede proporcionar ayuda en la evaluación de riesgos, estratificación de pacientes, monitorización de la evolución del tratamiento y/o control posterior al tratamiento.
En determinadas realizaciones, la invención abarca la determinación de la cantidad y/o actividad de miR-132 en el sujeto que va a tratarse antes, durante y/o después de la administración de los compuestos de la invención. En realizaciones adicionales, la invención abarca la determinación de la cantidad y/o actividad de marcadores cardiacos tales como PNB, PNA o isoformas de cambio pesado de miosina, por ejemplo, la razón MYH7/6, y/o los niveles de FoxO3 y/o SERCA2. En aún más realizaciones, la invención abarca la determinación de la cantidad y/o actividad de marcadores fibróticos tales como colágeno, por ejemplo, depósito de colágeno y/o expresión de genes marcadores fibróticos tales como colágeno 1A1, colágeno 1A2, colágeno 3A1 y/o una metalopeptidasa de matriz tal como metalopeptidasa de matriz 2.
La determinación de los parámetros anteriores puede llevarse a cabo en muestras de líquidos corporales tales como sangre, plasma o suero o en muestras de tejido según métodos conocidos a nivel de ácido nucleico y/o proteína, y puede proporcionar información de diagnóstico útil, por ejemplo, sobre la evolución y/o el éxito del tratamiento. El compuesto de la invención puede administrarse como una composición farmacéutica que comprende un portador farmacológicamente aceptable. La administración puede llevarse a cabo mediante métodos conocidos, en los que el compuesto se introduce en la célula o el órgano diana deseado del sujeto que va a tratarse.
El compuesto puede administrarse como tal o como un conjugado con un resto heterólogo tal como se describió anteriormente.
Para aplicaciones farmacéuticas, la composición puede estar en forma de disolución, por ejemplo, una disolución inyectable, emulsión, inhalación, suspensión, o similar.
La composición puede administrarse de cualquier manera adecuada, por ejemplo, por vía parenteral, en particular mediante inyección tal como inyección subcutánea, intramuscular, intravenosa o intraarterial, o mediante infusión, por ingestión oral o por inhalación y/o por aplicación dérmica. El portador puede ser cualquier portador farmacéutico adecuado. Preferiblemente, se usa un portador que es capaz de aumentar la eficacia de las moléculas de oligonucleótido para entrar en las células diana. Los ejemplos adecuados de tales portadores son liposomas, por ejemplo, liposomas catiónicos, o exosomas prediseñados.
El compuesto se administra en una dosificación farmacéuticamente eficaz dependiendo de la vía de administración y el tipo o la gravedad de la enfermedad.
El compuesto puede administrarse como monoterapia o en combinación con un medicamento diferente adicional, particularmente un medicamento adecuado para la prevención o el tratamiento de trastornos cardiacos o trastornos fibróticos tal como se describió anteriormente.
Ejemplos de medicamentos adicionales adecuados para la prevención o el tratamiento de trastornos cardiacos son agentes que modulan la angiotensina, p-bloqueantes, diuréticos, antagonistas de la aldosterona, vasodilatadores, agentes inotrópicos, estatinas o inhibidores de neprilisina, o combinaciones de los mismos, por ejemplo, una combinación de un inhibidor de neprilisina, por ejemplo, sacubitrilo, con un bloqueante del receptor de la angiotensina II, por ejemplo, valsartán.
Ejemplos de medicamentos adicionales adecuados para la prevención del tratamiento de trastornos fibróticos son medicamentos para la prevención o el tratamiento de fibrosis cardiaca tales como inhibidores de la ECA, por ejemplo, lisinopril, bloqueantes del receptore de angiotensina II, por ejemplo, candesartán, losartán u olmesartán, antagonistas de la aldosterona, por ejemplo, inhibidores de espironolactona y/o TGF p, por ejemplo, pirfenidona o tranilast, medicamentos para la prevención o el tratamiento de fibrosis pulmonar tales como agentes antifibróticos, por ejemplo, nintedanib o pirfenidona, agentes antiinflamatorios, por ejemplo, corticosteroides, azatioprina, ciclofosfamida y micofenolato de mofetilo, agentes antirreflujo, por ejemplo, inhibidores de la bomba de proteínas o bloqueantes de H2 , y/o agentes antitusígenos y medicamentos para la prevención y/o el tratamiento de fibrosis hepática tales como inhibidores de la ECA, por ejemplo, benazepril, lisinopril o ramipril, agentes antivirales o agonistas de PPAR a.
Aún más, la invención se refiere al uso de un compuesto de la invención tal como se describió anteriormente en el presente documento para la fabricación de un medicamento para la prevención o el tratamiento de un trastorno cardiaco.
Aún más, la invención se refiere al uso de un compuesto de la invención tal como se describió anteriormente en el presente documento para la fabricación de un medicamento para la prevención o el tratamiento de un trastorno fibrótico.
Además, la presente invención se describirá con más detalle mediante las siguientes figuras y ejemplos.
Ejemplo 1 - Silenciamiento de la expresión de miR-132 en cardiomiocitos
Se llevó a cabo un ensayo in vitro cuantitativo para determinar la actividad inhibidora de miARN de numerosos compuestos análogos de estructura derivados de una biblioteca anti-miR-132. Se cuantificó el silenciamiento de la expresión de miARN mediante ensayos TaqMan® y PCR en tiempo real cuantitativa.
Se realizó el estudio en cardiomiocitos de rata aislados después de la estimulación hipertrófica mediante tratamiento con fenilefrina/isoproterenol en concentraciones de 10 ^M. Se incubaron las células durante 48 horas en medio de cultivo celular convencional. Se administraron los compuestos de prueba individualmente en una concentración de 100 nM. Los ensayos se llevaron a cabo por triplicado.
El compuesto CDR132L, un oligómero mixto (mixmer) de LNA-ADN que tiene una estructura principal de fosforotioato, se identificó como el compuesto más potente de la biblioteca de análogos de estructura anti-miR-132. La estructura de CDR132L es la siguiente:
en la que dA es 2’desoxiadenosina, dG es 2’desoxiguanosina, dC es 2’desoxicitidina y T es timidina,
en la que T es un componente básico de LNA-T y G es un componente básico de LNA-G y en la que * es una unión fosforotioato.
Ejemplo 2 - Perfil toxicológico
2.1 Objetivo del estudio: obtener el perfil de toxicidad de CDR132L
2.2 Esquema del estudio:
Se llevó a cabo un ensayo de citotoxicidad in vitro en células hepáticas humanas (HepG2) y cardiomiocitos neonatales aislados (NRCM). Se usó un ensayo MTT colorimétrico comercial para evaluar la citotoxicidad. Después de la adición de los compuestos individuales, se incubaron las células en medio DMEM durante 48 horas. Se comparó el efecto de CDR132L (rojo) con un oligonucleótido de LNA reorganizado al azar, usado como control (azul), en un intervalo de dosis de 0,01-100 ^M. El intervalo de dosis terapéutica está marcado en gris.
2.3 Resultados: no se halló toxicidad significativa de CDR132L en células HepG2 y NRCM a lo largo del intervalo de dosis terapéutica (remítase a las figuras 1A y 1B).
Ejemplo 3 - Remodelación inversa ventricular izquierda del corazón debilitado mediante la administración de CDR132L en modelo de ratón transgénico
3.1 Objetivo del estudio: someter a prueba la eficacia de CDR132L para revertir la insuficiencia cardiaca en un modelo de ratón de insuficiencia cardiaca.
3.2 Esquema del estudio:
Modelo de hipertrofia cardiaca: ratones transgénicos (TG) con sobreexpresión cardiaca de miR-132 (Ucar et al.
2012).
Tratamiento: 20 mg/kg i.p. semanales de CDR132L o placebo (remítase a la figura 2A)
Grupos: compañero de camada silvestre (WT)+placebo, WT+CDR132L, TG+placebo, TG+CDR132L. n=6/grupo. Se detectaron los niveles de expresión de miR-132 a través de qPCR. Prueba estadística: prueba de la t para datos independientes (figura 2B).
**p<0,01, n=6/grupo.
3.3 Resultados:
Imágenes de ecocardiografía representativas del corazón (figura 3A).
CDR132L revierte la hipertrofia tal como se mide por la masa cardiaca y el volumen telediastólico (LVEDV) (figura 3B).
CDR132L mejora la función contráctil regional en la mayoría de los segmentos del ventrículo izquierdo (AB, segmento basal de cara anterior; AM, cara anterior media; AA, vértice de la cara anterior; PA vértice de la cara posterior; PM, cara posterior media y PB, segmento basal de la cara posterior) (figura 3C).
Ejemplo 4 - Administración de CDR132L en un modelo de ratón de insuficiencia cardiaca tras un IM
4.1 Objetivo del estudio: someter a prueba la eficacia de CDR132L en un modelo de ratón de insuficiencia cardiaca tras un IM
4.2 Esquema del estudio
Modelo de ratón de infarto de miocardio (IM): ligadura permanente de la arteria coronaria (LAD) en ratones C57BL/6N (Kolk et al., 2009).
Grupos: IM o simulación, tratados con CDR132L o placebo
Tratamiento: 20 mg/kg i.p., el día 7 y el 14 tras un IM
Criterio de valoración: función del VI el día 28 tras un IM. n=6-7/grupo (figura 4).
4.3 Resultados:
El tratamiento con CDR132L mejora la disfunción ventricular izquierda tras un IM (figura 5A). También se mejoraron los parámetros independientes de la carga de la función contráctil sistólica (figura 5B) (*p<0,05).
El tratamiento con CDR132L también mejora la tasa de deformación longitudinal (LSR) y, por tanto, revierte la disfunción contráctil tras un IM en segmentos cardiacos individuales en el área remota del corazón (*p<0,05) (figura 6).
El tratamiento con CDR123L silencia eficazmente la expresión de miR-132 en tejidos cardiacos, en, por ejemplo, el área remota (sin infarto) y la zona periinfarto (figura 7A).
A nivel histológico, CDR132L reduce el tamaño de los cardiomiocitos en el área remota del corazón tras un IM (figura 7B).
A nivel tisular, CDR132L reduce la expresión de la señal de esfuerzo cardiaco en PNA en el corazón tras un IM (figura 7C).
Ejemplo 5 - Prueba de CDR132L en un modelo porcino de insuficiencia cardiaca tras un IM
5.1 Objetivo del estudio: probar la eficacia in vivo de CDR132L en un modelo clínicamente relevante de infarto de miocardio posterior.
5.2 Configuración del estudio:
• Modelo porcino de infarto de miocardio provocado por isquemia de 90 min (oclusión de LAD) y posterior reperfusión.
• Grupos: placebo o CDR132L, n=6 por grupo.
• Tratamiento: dos veces, el día 3 y el día 28 tras un IM, 0,3 mg/kg por vía intracoronaria y 0,5 mg/kg por vía intravenosa, respectivamente (figura 8).
• Criterio de valoración: 8 semanas tras un IM. Medidas de resultados primarias: FE y remodelación del VI.
5.3 Resultados:
• El tratamiento con CDR132L evita la remodelación inadaptada y mejora la función, tal como se determina por la medición del volumen telediastólico, el volumen telesistólico, la fracción de expulsión y la función ventricular izquierda (figuras 9A-D).
• El tratamiento con CDR132L mejora la contractilidad segmentaria en los segmentos correspondientes al miocardio superviviente/remoto; IRM cardiaca en el criterio de valoración: n=6/grupo, área roja: p<0,05 (figura 9E).
• El tratamiento con CDR132L evita la remodelación inadaptada y mejora la viabilidad del VI en el área apical tal como se determina por NOGA, mapeo electroanatómico en el criterio de valoración: n=6/grupo, placebo frente a CDR132L: p<0,05 (figura 10).
• CDR132L normaliza la expresión tisular de marcadores patológicos de insuficiencia cardiaca en PNA y PNB y proporciona un cambio en las isotermas de cambio pesado de miosina, es decir, la razón MYH7/6 (figura 11).
• A nivel histológico, el tratamiento con CDR132L reduce eficazmente la hipertrofia de los cardiomiocitos en imágenes de microfotografía representativas de áreas remotas del VI del área del VI (tinción con WGA/DAPI 20x) (figura 12A) y representación gráfica (figura 12B), n=6/grupo, placebo frente a CDR132L: p<0,05.
Ejemplo 6 - Perfil PD/unión a la diana de CDR132L en cerdos
6.1 Configuración del estudio:
• Tratamiento: 1x, día 0, 0,5 mg/kg o 5 mg/kg mediante perfusión por vía intracoronaria, n=3 cerdos/grupo, placebo frente a CDR132L: p<0,05.
• Ensayo de miARN tisular por qPCR en el criterio de valoración (24 horas tras el tratamiento).
6.2 Resultados:
• Una dosis única de tratamiento con CDR132L silencia los niveles cardiacos de miR-132 de manera dependiente de la dosis (figura 13).
Ejemplo 7 - Perfil toxicológico de órganos
7.1 Configuración del estudio:
• Tratamiento: dos veces, el día 3 y el día 28 tras un IM, 0,3 mg/kg por vía intracoronaria y 0,5 mg/kg por vía intravenosa, respectivamente.
• Extracción de muestras de sangre en serie, criterio de valoración: 72 h tras el tratamiento, n=6 cerdos/grupo, placebo frente a CDR132L: p<0,05.
7.2 Resultados:
• El tratamiento con CDR132L in vivo no provoca ninguna toxicidad en los órganos de los cerdos (figura 14). Ejemplo 8 - Niveles cardiacos de ARNm de FoxO3 y SERCA2 en un modelo de ratón de insuficiencia cardiaca Se midieron los niveles cardiacos de ARNm de FoxO3 y Serca2 en ratones de control y miR-132 TG tratados mediante inyección intraperitoneal o bien de oligonucleótidos reorganizados al azar de control o bien de CDR132L, semanalmente, 4 veces. Todos los valores representan la media ± EEM. *P < 0,05 (figuras 15A y 15B) Ejemplo 9 - Comparación de diferentes oligonucleótidos
El propósito de este estudio fue evaluar el efecto terapéutico del novedoso inhibidor de miR-132-3p CDR132L según la invención presente con dos oligonucleótidos comparativos. Los dos oligonucleótidos comparativos muestran la misma secuencia de oligonucleótidos y una estructura principal de fosforotioato que CDR132L, pero difieren en la distribución de los componentes básicos de LNA dentro de la molécula. CDR2u1 alberga dos componentes básicos de LNA en el extremo 5' y 3' mientras que para CDR301 cada nucleótido porta un componente básico de LNA. Para someter a prueba la eficacia, se administraron los diferentes oligonucleótidos a cardiomiocitos de rata neonatal (NRCM). Se monitorizaron los efectos de este tratamiento mediante PCR en tiempo real cuantitativa (qRT-PCR) siguiendo alteraciones en la expresión de miR-132-3p y su gen diana conocido FoxO3 (caja de cabeza de tenedor “Forkhead boX’ O3).
En la figura 16 se muestran el diseño experimental y los resultados: (A) Descripción general de la configuración experimental. Se sembraron cardiomiocitos de rata neonatal el día 0 y se trataron con los oligonucleótidos CDR132L, CDR2u1 o CDR301 (100 nM cada uno) el día 1. En el criterio de valoración, se recogieron las células para el análisis de la expresión génica. (B) Niveles de expresión de miR-132-3p después del tratamiento con CDR132L, CDR2u1 o CDR301. (C) Niveles de expresión del gen diana Forkhead box O3 (FoxO3) de miR-132-3p después del tratamiento con CDR132L, CDR2u1 o CDR301. Los datos son la media DE. Se determinaron los valores de P de oligonucleótidos frente a placebo mediante la prueba de la t de Student bilateral.
El tratamiento de NRCM con CDR132L y CDR301 condujo a una reducción significativa de los niveles de miR-132-3p en un 96 %, mientras que CDR2u1 redujo la expresión de miARN en un 30 % (figuras 16A-B). Además, el tratamiento con CDR132L condujo a una depresión significativa del gen diana FoxO3 de miR-132-3p, que no se logró con CDR2u1 ni con CDR301 (figura 16C).
En resumen, los datos demuestran un efecto inhibidor superior de CDR132L en comparación con CDR2u1 y CDR301 indicado por niveles de expresión significativamente reducidos de miR-132-3p y una represión significativa de su gen diana FoxO3.
Ejemplo 10 - Efectos de CDR132L sobre la fibrosis cardiaca
El propósito de este estudio fue evaluar los efectos terapéuticos antifibróticos de CDR132L en un modelo in vivo de fibrosis.
Para la prueba in vivo de la actividad antifibrótica, se usó el modelo de ratón de infarto de miocardio (IM) por ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior izquierda (LAD) en ratones C57BL/6N. Se aplicó el tratamiento con CDR132L el día 7 y 14 con placebo (análogo de oligonucleótido reorganizado al azar de CDR132L, 20 mg/kg) y CDR132L (20 mg/kg). Los grupos incluyeron el grupo operado de control (ratones operados de manera simulada) y ratones con ligadura de LAD (IM, infarto de miocardio), que recibieron o bien placebo o bien CDR132L: simulación+placebo, simulación+CDR132L, IM+placebo, IM+CDr 132l . n=6-7/grupo. En la figura 17 se describe el diseño experimental.
En la figura 18 se muestra la evaluación del efecto antifibrótico de CDR132L in vivo en insuficiencia cardiaca tras un IM. La fibrosis (que se muestra como el % de depósito de colágeno detectado por tinción con pricosirio (PSR) y expresión del gen de la cadena alfa 1 de colágeno tipo III (Col3a1) en relación con p-actina) se atenuó después del IM mediante el tratamiento con CDR132L. Los grupos incluyeron el grupo de operación de control (ratones operados de manera simulada) y ratones con ligadura de LAD (IM), que recibieron o bien placebo (columna negra) o bien CDR132L (columna blanca): simulación+placebo, simulación+CDR132L, IM+placebo, IM+c Dr 132L. Se realizó una prueba estadística (prueba de la t para datos independientes) entre ratones con IM tratados con placebo o CDR132L. **p<0,01, n=6-7/grupo.
Según los resultados histológicos, la fibrosis se atenuó después del tratamiento con CDR132L (figura 18A). Esto se confirmó a nivel molecular, con expresión génica reducida para marcadores de fibrosis como la cadena alfa 1 de colágeno tipo III (Col3a1) (figura 18B).
Ejemplo 11 - Efectos de CDR132L sobre la fibrosis pulmonar y hepática
Se sometió a prueba el efecto antifibrótico de CDR132L en modelos in vitro de fibrosis pulmonar y hepática. Para ello, se estimularon fibroblastos primarios humanos derivados de hígado (fibroblastos hepáticos primarios humanos, HPLF, PeloBiotech) y pulmón (fibroblastos pulmonares primarios humanos normales, NHLF, Lonza) con agentes profibróticos y se trataron con CDR132L. Se monitorizaron los efectos terapéuticos de CDRL132L siguiendo los procesos clave dentro de la ruta fibrótica, incluyendo la tasa de proliferación y las alteraciones en la expresión de los genes marcadores fibróticos en el criterio de valoración. Además, se evaluó la expresión de miR-132-3p para demostrar que el tratamiento con CDR132L es eficaz.
Para determinar la proliferación celular, se usó un kit de ELISA (ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas) de proliferación celular (proporcionado por Roche). Este ensayo colorimétrico permite cuantificar la proliferación celular en función de la medición de BrdU (bromodesoxiuridina) incorporada en el ADN recién sintetizado de las células en proliferación. Se ha detectado y cuantificado la cantidad de BrdU incorporada. Los valores de absorbancia se correlacionan directamente con la cantidad de síntesis de ADN y, por tanto, con el número de células en proliferación en los microcultivos respectivos. Se ha evaluado la expresión génica mediante PCR en tiempo real cuantitativa (qRT-PCR), midiendo los niveles de expresión de miR-132-3p y marcadores fibróticos, incluyendo colágeno 1a 1 (COL1A1), colágeno 1A2 (COL1A2) y metalopeptidasa de matriz 2 (MMP2).
La figura 19 se refiere al modelo in vitro de fibrosis hepática: (A) Descripción general de la configuración experimental. Se sembraron fibroblastos hepáticos primarios humanos (proporcionados por PeloBiotech) el día 0 y se trataron con estímulo fibrótico (10 ng/ml de TGF-p en medio de crecimiento normal (medio de fibroblastos completo complementado con FBS al 10 %)) y CDR132L (100 nM) el día 1. En el criterio de valoración, se han evaluado la proliferación celular y la expresión génica de marcadores fibróticos. (B) Niveles de expresión de miR-132-3p después del tratamiento con CDR132L. (C) Proliferación evaluada mediante la monitorización de la incorporación de BrdU (bromodesoxiuridina) durante la síntesis de ADN. El reactivo BrdU se ha añadido al medio 20 h antes del criterio de valoración. (D) Niveles de expresión de genes marcadores fibróticos (colágeno 1A1 (COL1A1), colágeno 1A2 (COL1A2) y metalopeptidasa de matriz 2 (MMP2)). En (B) y (D), la línea discontinua indica el nivel de expresión de las células de control no estimuladas. Los datos son la media DE. Se determinaron los valores de P de CDR132L frente al control mediante la prueba de la t de Student bilateral.
La estimulación de los HPLF con el factor de crecimiento transformante beta (TGF-p) (figura 19A) condujo a una ligera inducción de miR-132-3p que se redujo significativamente mediante el tratamiento con CDR132L (figura 19B). Además, este compuesto redujo la proliferación de fibroblastos (figura 19C) y la expresión de genes fibróticos, incluyendo COL1A1, COL1A2 y MMP2 (figura 19D).

Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Un oligonucleótido que comprende una secuencia de fórmula II:
Figure imgf000015_0001
en la que A, T, G y C son componentes básicos de desoxirribonucleótido y
en la que G y T son componentes básicos de nucleótido en puente.
2. El oligonucleótido según la reivindicación 1, en el que G y T son componentes básicos de nucleótido bloqueado (LNA) que tienen un puente 2’-O-CH2-4’.
3. El oligonucleótido según la reivindicación 1 o 2, que tiene una longitud de 16 componentes básicos.
4. El oligonucleótido según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, que comprende al menos una unión internucleosídica modificada, particularmente al menos una unión internucleosídica fosforotioato o fosforodiamidato, en el que particularmente todas las uniones internucleosídicas son uniones fosforotioato.
5. El oligonucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, que comprende la secuencia de fórmula III:
en la que dA es 2’desoxiadenosina, dG es 2’desoxiguanosina, dC es 2’desoxicitidina y T es timidina, en la que T es un componente básico de nucleótido bloqueado (LNA)-T y G es un componente básico de nucleótido bloqueado (LNA)-G y en la que * es una unión fosforotioato.
6. El oligonucleótido según cualquiera de las reivindicaciones 1-5, conjugado con un resto heterólogo.
7. Una composición farmacéutica que comprende un oligonucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 1-6 y un portador farmacéuticamente aceptable.
8. El oligonucleótido según cualquiera de las reivindicaciones 1-6 o la composición farmacéutica según la reivindicación 7, para su uso en medicina, en particular para su uso en medicina humana.
9. El oligonucleótido según cualquiera de las reivindicaciones 1-6 o la composición farmacéutica según la reivindicación 7, para su uso en la prevención o el tratamiento de un trastorno asociado con, acompañado por y/o provocado por la expresión patológica de miR-132.
10. El oligonucleótido según cualquiera de las reivindicaciones 1-6 o la composición farmacéutica según la reivindicación 7, para su uso en la prevención o el tratamiento de trastornos cardiacos, particularmente trastornos asociados con hipertrofia cardiaca, particularmente para su uso en la prevención o el tratamiento de disfunción contráctil, descompensación cardiaca o insuficiencia cardiaca.
11. El oligonucleótido según cualquiera de las reivindicaciones 1-6 o la composición farmacéutica según la reivindicación 7, para su uso en la prevención o tratamiento de trastornos cardiacos, en el que el compuesto se administra a pacientes seleccionados de:
(i) pacientes que tienen un mayor riesgo de desarrollar insuficiencia cardiaca,
(ii) pacientes que padecen insuficiencia cardiaca (congestiva), por ejemplo, pacientes que tienen un mayor riesgo de avance de una insuficiencia cardiaca;
(iii) pacientes tras un infarto de miocardio, y/o
(iv) pacientes con cardiopatías congénitas asociadas con hipertrofia cardiaca, tales como estenosis de venas pulmonares, comunicación interauricular o interventricular.
12. El oligonucleótido según cualquiera de las reivindicaciones 1-6 o la composición farmacéutica según la reivindicación 7, para su uso en el tratamiento o la prevención de trastornos cardiacos como monoterapia o en combinación con un medicamento adicional, particularmente seleccionado de agentes que modulan la angiotensina, p-bloqueantes, diuréticos, antagonistas de la aldosterona, vasodilatadores, agentes inotrópicos, o combinaciones de los mismos.
13. El oligonucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 1-6 o la composición farmacéutica según la reivindicación 7, para su uso en el tratamiento o la prevención de trastornos fibróticos, particularmente para su uso en la prevención o el tratamiento de trastornos fibróticos cardiacos, más particularmente fibrosis auricular, fibrosis endomiocárdica o fibrosis que resulta de un infarto de miocardio previo, trastornos fibróticos pulmonares, más particularmente fibrosis pulmonar provocada por factores laborales o ambientales, fibrosis pulmonar provocada por radioterapia y/o tratamiento con medicamentos o fibrosis pulmonar idiopática, o trastornos fibróticos hepáticos, más particularmente hepatopatía alcohólica o esteatosis hepática no alcohólica (NAFLD).
14. El oligonucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 1-6 o la composición farmacéutica según la reivindicación 7, para su uso en la prevención o el tratamiento de trastornos fibróticos como monoterapia o en combinación con un medicamento adicional.
15. El oligonucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 1-6 o la composición farmacéutica según la reivindicación 7, para su uso en el tratamiento o la prevención de trastornos según una cualquiera de las reivindicaciones 8-14, que abarca una etapa de determinar la cantidad y/o actividad de (i) miR-132 de (ii) al menos un marcador cardiaco y/o (iii) al menos un marcador fibrótico en el paciente que va a tratarse antes, durante y/o después de la administración del oligonucleótido o la composición farmacéutica.
ES18833849T 2017-12-15 2018-12-14 Compuesto mejorado para el tratamiento de insuficiencia cardiaca Active ES2910303T3 (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762599050P 2017-12-15 2017-12-15
EP17207738 2017-12-15
PCT/EP2018/085008 WO2019115788A1 (en) 2017-12-15 2018-12-14 Improved compound for treatment of heart failure

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2910303T3 true ES2910303T3 (es) 2022-05-12

Family

ID=65023844

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES18833849T Active ES2910303T3 (es) 2017-12-15 2018-12-14 Compuesto mejorado para el tratamiento de insuficiencia cardiaca

Country Status (19)

Country Link
US (2) US11208651B2 (es)
EP (1) EP3724336B1 (es)
JP (1) JP7253834B2 (es)
CN (1) CN111630168B (es)
AU (1) AU2018383013A1 (es)
BR (1) BR112020009532A2 (es)
CA (1) CA3084111A1 (es)
CL (1) CL2020001578A1 (es)
DK (1) DK3724336T3 (es)
ES (1) ES2910303T3 (es)
HU (1) HUE058867T2 (es)
IL (1) IL275273B1 (es)
MX (1) MX2020006198A (es)
PH (1) PH12020550589A1 (es)
PL (1) PL3724336T3 (es)
RS (1) RS63078B1 (es)
SI (1) SI3724336T1 (es)
WO (1) WO2019115788A1 (es)
ZA (1) ZA202002529B (es)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2022535997A (ja) * 2019-06-14 2022-08-10 カーディオール ファーマシューティカルズ ゲーエムベーハー ヒト対象者における心不全の治療

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CO5271699A1 (es) 2000-01-24 2003-04-30 Pfizer Prod Inc Procedimiento para el tratamiento de cardiomiopatia utilizando inhibidores de la glucogeno fosforilasa
WO2006027776A1 (en) * 2004-09-07 2006-03-16 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Agents, compositions and methods for treating pathologies in which regulating an ache-associated biological pathway is beneficial
US20070065840A1 (en) * 2005-03-23 2007-03-22 Irena Naguibneva Novel oligonucleotide compositions and probe sequences useful for detection and analysis of microRNAS and their target mRNAS
DK2002003T3 (en) * 2005-05-27 2016-03-21 Ospedale San Raffaele Srl Gene vector comprising miRNA
US8748101B2 (en) * 2008-11-10 2014-06-10 Battelle Memorial Institute Methods, compositions, and devices utilizing MicroRNA to determine physiological conditions
WO2010105096A2 (en) * 2009-03-11 2010-09-16 University Of Massachusetts Modulation of human cytomegalovirus replication by micro-rna 132 (mir132), micro-rna 145 (mir145) and micro-rna 212 (mir212)
US20120107825A1 (en) * 2010-11-01 2012-05-03 Winger Edward E Methods and compositions for assessing patients with reproductive failure using immune cell-derived microrna
EP2474617A1 (en) * 2011-01-11 2012-07-11 InteRNA Technologies BV Mir for treating neo-angiogenesis
HUE036269T2 (hu) * 2011-09-06 2018-06-28 Max Planck Gesellschaft A MIRNA-212/132 nukleinsav család alkalmazása terápiás célanyagként
CN103361428B (zh) * 2013-06-21 2016-06-22 徐州医学院 miRNA-132化合物在制备慢性疼痛诊断标志物及治疗药物中的应用
EP3230453B1 (en) * 2014-09-21 2020-05-20 Yissum Research and Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. Downregulating mir-132 for the treatment of lipid related disorders
JP2022535997A (ja) * 2019-06-14 2022-08-10 カーディオール ファーマシューティカルズ ゲーエムベーハー ヒト対象者における心不全の治療
JP2023538496A (ja) * 2020-07-23 2023-09-08 ヨハン ヴォルフガング ゲーテ－ウニヴェルズィテート フランクフルト 心不全治療のためのｍｉＲＮＡのコンビナトリアル阻害
CN112043721B (zh) * 2020-09-04 2022-01-28 南通大学 miR-132-5p在制备神经再生药物或材料中的应用
CN115068632A (zh) * 2022-06-22 2022-09-20 华中科技大学同济医学院附属同济医院 Ago2在制备治疗心衰的药物方面的用途及其蛋白、基因、转化体、药物与制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
PL3724336T3 (pl) 2022-08-08
RU2020122587A (ru) 2022-01-10
ZA202002529B (en) 2021-08-25
RU2020122587A3 (es) 2022-01-10
RS63078B1 (sr) 2022-04-29
KR20200104294A (ko) 2020-09-03
AU2018383013A1 (en) 2020-06-11
HUE058867T2 (hu) 2022-09-28
CA3084111A1 (en) 2019-06-20
SI3724336T1 (sl) 2022-05-31
WO2019115788A1 (en) 2019-06-20
CL2020001578A1 (es) 2020-11-06
US20210180054A1 (en) 2021-06-17
US11208651B2 (en) 2021-12-28
EP3724336B1 (en) 2022-02-09
MX2020006198A (es) 2020-11-24
DK3724336T3 (da) 2022-03-21
EP3724336A1 (en) 2020-10-21
IL275273B1 (en) 2024-05-01
CN111630168B (zh) 2023-09-22
PH12020550589A1 (en) 2021-04-26
BR112020009532A2 (pt) 2020-11-03
US20220162597A1 (en) 2022-05-26
JP2021506268A (ja) 2021-02-22
CN111630168A (zh) 2020-09-04
IL275273A (en) 2020-07-30
JP7253834B2 (ja) 2023-04-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2018201241B2 (en) Multi-target modulation for treating fibrosis and inflammatory conditions
US10307401B2 (en) Compositions and methods for treatment of prostate cancer
Domínguez-Rodríguez et al. Urocortin-2 prevents dysregulation of Ca2+ homeostasis and improves early cardiac remodeling after ischemia and reperfusion
ES2893294T3 (es) Inhibidores de oligonucleótidos antisentido (ASO) del transportador de monocarboxilato4 (MCT4) para su uso como agentes terapéuticos en el tratamiento de cáncer
ES2910303T3 (es) Compuesto mejorado para el tratamiento de insuficiencia cardiaca
RU2794975C2 (ru) Усовершенствованное соединение для лечения сердечной недостаточности
JP2022535997A (ja) ヒト対象者における心不全の治療
KR102677043B1 (ko) 심부전 치료를 위한 개선된 화합물
JP2017178943A (ja) 血管新生阻害薬
WO2016058061A1 (en) microRNA SIGNATURES FOR CARDIAC DISORDERS
KR20230022812A (ko) 비천연 핵산 리간드를 유효성분으로 포함하는 삼중음성 유방암의 치료를 위한 약학적 조성물
WO2019146621A1 (ja) ペリオスチンの発現量増加またはスプライシングバリアントの変化を伴う疾患の治療用医薬組成物
Javan et al. Aberrant signaling pathways: hallmark of cancer cells and target for nanotherapeutics
WO2022263880A1 (en) Epo variants and modulators
US20090054328A1 (en) Reagents and Methods for Modulating Gene Expression Related to Hypertension
WO2011150897A2 (es) Método para la terapia del cáncer