ES2902860T3 - Composiciones y métodos para el tratamiento de enfermedades oculares - Google Patents

Abstract

Composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y una proteína C activada (PCA) para su uso en la terapia del derrame de retina y la neovascularización coroidea (NVC).

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones y métodos para el tratamiento de enfermedades oculares

CAMPO TÉCNICO

[0001] La divulgación de la presente invención se refiere al tratamiento de enfermedades oculares, más concretamente, aunque no exclusivamente, al tratamiento o la prevención de enfermedades oculares asociadas con el derrame de retina y la neovascularización coroidea.

ANTECEDENTES

[0002] La neovascularización coroidea (NVC) es la creación de nuevos vasos sanguíneos en la capa coroidea del ojo, por debajo de la retina. La coroides es la zona entre la retina y la esclerótica (la parte blanca del ojo) que suministra oxígeno y nutrientes al ojo. La NVC se produce cuando empiezan a crecer nuevos vasos sanguíneos en la coroides y traspasan la membrana de Bruch, la barrera entre la coroides y la retina (el sustrato que sostiene la retina), hacia la retina y la alteran. Después de que los coriocapilares penetren inicialmente la membrana de Bruch (MBr), los vasos que invaden pueden retroceder o expandirse (inicio de la NVC). A continuación, durante la NVC temprana y tardía, la vasculatura de expansión se suele extender en uno de tres patrones distintos: en una capa entre la MBr y el epitelio pigmentario de la retina (NVC de tipo 1 o sub-EPR), en una capa entre el EPR (el revestimiento negro del ojo) y los fotorreceptores (NVC de tipo 2 o sub-retiniano) o en ambos lugares simultáneamente (NVC de tipo 3 o de patrón combinado) (véase la técnica anterior, figuras 1A-1C). El derrame de NVC en la retina, p. ej., sangrando y exudando, cuenta con algunos síntomas visuales agudos, siendo el más prominente la pérdida de visión.

[0003] La ubicación, el patrón de crecimiento y el tipo de NVC depende de la edad del paciente y la enfermedad subyacente con la que esté asociada. La NVC es la principal causa de pérdida de visión grave en varias enfermedades oculares tales como la degeneración macular asociada a la edad (DMAE), la miopatía y las estrías angioides.

[0004] Se distinguen la NVC clásica y la oculta, aunque pueden aparecer en formas combinadas. Las NVC ocultas proliferan bajo el EPR. Las NVC clásicas son menos frecuentes que las formas ocultas o mixtas. Pueden producirse en la degeneración macular asociada a la edad (DMAE) exudativa, pero también como secundaria a otras enfermedades coriorretinianas. El diagnóstico de una NVC clásica requiere una angiografía, donde se define como una hiperfluorescencia claramente visible y bien demarcada en la etapa temprana provocada por proliferaciones vasculares entre el EPR y la neurorretina, con un derrame creciente en la fase tardía de la angiografía. Los síntomas iniciales de la NVC clásica son la metamorfopsia, el deterioro de la agudeza visual y defectos en el campo visual central. Los signos oftalmoscópicos de la NVC son cambios subretinianos grisáceos-blancos junto con edema de retina, exudaciones duras y hemorragia subretiniana e intrarretiniana. Si la afección no se trata, a esto le seguirá normalmente el progreso con ampliación de la lesión y la posterior pérdida de fotorreceptores.

[0005] La mayoría de los estudios teorizan que la NVC se produce principalmente como resultado de efectos del factor de crecimiento u orificios en la MBr. No obstante, un exhaustivo estudio de simulación por ordenador (Shirinifard et al., 2012, PLoS Computational Biology, 8(5): 1-32), basado en simulaciones tridimensionales de un modelo de múltiples células de las máculas normales y patológicas, recapitulan los tres patrones de crecimiento de NVC (tipos 1 - 3), bajo la hipótesis de que la NVC se produce como resultado de combinaciones del deterioro de: (1) la adhesión de unión epitelial EPR-EPR; (2) la adhesión del complejo de membrana basada en EPR a la MBr (adhesión EPR-MBr); y (3) la adhesión del EPR a los segmentos externos de los fotorreceptores (adhesión EPR-POS). Algunos hallazgos clave del estudio fueron que, cuando una célula de punta endotelial penetra en la MBr, se pueden producir una o más de las siguientes situaciones:

(1) El EPR con uniones epiteliales normales, adhesión basal a la MBr y adhesión apical a POS resistiría la NVC. (2) Los pequeños orificios en la MBr no inician, por sí solos, la NVC.

(3) El EPR con uniones epiteliales normales y adhesión apical normal EPR-POS, pero con débil adhesión a la MBr (p. ej., debido a la acumulación de lípidos en la MBr), da como resultado una NVC sub-EPR temprana. La adhesión reducida entre las células retinianas pigmentadas y la membrana de Bruch es el tipo de NVC típica del envejecimiento.

(4) La adhesión normal del EPR a la MBr, pero una adhesión apical EPR-POS o adhesión epitelial EPR-EPR reducida (por ejemplo, debido a la inflamación) da como resultado una NVC subretiniana temprana. La adhesión reducida entre células retinianas pigmentadas cercanas es típica de la inflamación debido a la infección grave, y es un patrón de invasión observado en adultos jóvenes.

(5) La reducción simultánea de la unión epitelial EPR-EPR y la adhesión EPR-MBr da como resultado una NVC sub-EPR o subretiniana, que a menudo progresa a una NVC de patrón combinado. Estos hallazgos sugieren que:

[0006] Existen muchas causas para la NVC, la mayoría de las cuales son la aparición sincrónica o no sincrónica de una enfermedad o trastorno ocular, o un trastorno o enfermedad sistémica, como inflamación, o una enfermedad o trastorno autoinmune. Sin embargo, puesto que la adhesión es un mecanismo fundamental en el mantenimiento de la estructura de la retina, parece que los defectos en la adhesión dominan el inicio y el progreso de la NVC, seguida posteriormente por derrame de retina.

[0007] Los dos principales tratamientos actuales para la NVC son la destrucción de los vasos sanguíneos de invasión con fármacos, principalmente agentes antiangiogénicos, inyectados en los ojos (más habitualmente dañando también la retina y destruyendo asimismo vasos sanguíneos necesarios), o la oclusión láser de los vasos sanguíneos, que puede provocar cicatrices dañinas en la retina. Aun así, todavía no hay ningún tratamiento que aborde los problemas subyacentes que provocan que se invadan vasos sanguíneos, por lo que las recaídas son comunes, y muchos pacientes todavía pierden visión en uno o dos años.

[0008] El sistema de la proteína C proporciona una regulación de retroalimentación negativa de los sistemas de defensa del anfitrión, y pueden fomentar la regeneración equilibrada de componentes tisulares clave. Los actores moleculares fundamentales en el sistema de la proteína C incluyen la proteína C, la proteína S, la trombomodulina, el receptor de proteína C endotelial (EPCR), PARI y PAR3. La proteína C es un zimógeno, o precursor, de la proteína C activada (PCA) de la serina proteasa. La proteína C se sintetiza en el hígado como un polipéptido de cadena simple que experimenta un procesamiento considerable para dar lugar a una molécula bicatenaria que comprende cadenas pesadas (Mr = 40.000) y ligeras (Mr = 21.000) que se mantienen unidas mediante un enlace disulfuro. El intermedio bicatenario circulante se convierte en la forma biológicamente activa de la molécula, PCA, mediante la escisión mediada por trombina de un péptido de 12 residuos (también conocido como péptido de activación) del amino-terminal de la cadena pesada. La inactivación de la PCA circulante mediante inhibidores de serina proteasa de plasma es un importante mecanismo para el aclaramiento de la PCA.

[0009] La PCA farmacológica fomenta la curación y la homeostasis del tejido en casi todos los órganos del cuerpo. La PCA inicia la señalización celular que impulsa múltiples tipos diversos e independientes de actividades celulares, muchas de las cuales se denominan actividades citoprotectoras, que comprenden actividades antiapoptóticas y antiinflamatorias, y alteraciones favorables de la expresión génica. La PCA fomenta la estabilización de las barreras endotelial y epitelial para impedir derrames vasculares (Griffin et al., Blood, 2015, 125(19):2898-2907; Vetrano et al., 2011, PNAS, 108(49): 1983019835).

[0010] La descripción anterior se presenta como visión general de la técnica relacionada en este campo, y no debería interpretarse como una admisión de que cualquier información que contiene constituye una técnica anterior frente a la presente solicitud de patente.

SUMARIO

[0011] Cuando se produce la alteración de la homeostasis entre el epitelio pigmentario de la retina (EPR) y la membrana de Bruch, un círculo vicioso conduce a la neoangiogénesis coroidea, también conocida como neovascularización coroidea (NVC). Ahora se aprecia que esa adhesión celular es una de las claves para mantener los vasos sanguíneos fuera de la retina, y que una combinación de defectos en al menos uno de los tipos de adhesión, a saber, la adhesión de unión epitelial EPR-EPR; la adhesión del complejo de membrana a base de EPR a la membrana de Bruch; o la adhesión del EPR a los segmentos externos de los fotorreceptores, es suficiente para determinar la probabilidad, el patrón y la tasa de progreso de la NVC.

[0012] Los presentes inventores han abordado con éxito la necesidad, todavía no satisfecha, de disponer de terapias que restauren la adhesión normal en el ojo, proporcionando así medios para tratar la NVC e inhibir o prevenir el derrame neovascular coroideo perjudicial en la retina. Estas terapias comprenden el uso de PCA. Las formas de realización de la presente invención se definen en las reivindicaciones anexas.

[0013] En el presente documento se da a conocer un método para el tratamiento de una enfermedad, trastorno o afección ocular asociada al derrame de retina y a la NVC que comprende la administración a un sujeto que lo necesita de una cantidad efectiva de PCA.

[0014] En el presente documento se da a conocer una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y una proteína C activada (PCA) para su uso en la terapia de una enfermedad, trastorno o afección ocular asociada al derrame de retina y la neovascularización coroidea (NVC).

[0015] En el presente documento se da a conocer el uso de la proteína C activada (PCA) para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad, trastorno o afección ocular asociada al derrame de retina y la neovascularización coroidea.

[0016] Tal y como se da a conocer en el presente documento, la terapia es el tratamiento o prevención de una enfermedad, trastorno o afección ocular asociada al derrame de retina y NVC.

[0017] Tal y como se da a conocer en el presente documento, la enfermedad, trastorno o afección asociada al derrame de retina y a la NVC es una enfermedad, trastorno y afección provocada directamente por la NVC, acompañada por el desarrollo de NVC como etapa secundaria o complicación de esta, o acompañada por NVC como secuela sincrónica o asíncrona de esta.

[0018] Según algunas formas de realización, la enfermedad ocular se selecciona de entre la degeneración macular asociada a la edad (DMAE), la miopía patológica, el pseudoxantoma elástico con estrías angioides, la uveítis no infecciosa, la uveítis infecciosa, enfermedades inflamatorias del nervio óptico, como neuritis óptica, papiledema, neuropatía óptica isquémica anterior (NOIA), enfermedad de Behget y retinopatía; y

dicho trastorno ocular se selecciona de entre inflamación crónica, daño oxidativo, biogénesis de drusas, acumulación de lipofuscina, anomalías de la membrana de Bruch, cambios vasculares en el ojo que impiden la regulación de la presión y el flujo sanguíneos y crean condiciones de isquemia, envejecimiento fisiológico, factores genéticos y factores ambientales; y

dicha afección ocular es un incidente accidental y ocasional en el que la NVC y el derrame de retina se desarrollan tras una lesión traumática de la retina, y complicaciones durante un procedimiento médico oftálmico.

[0019] Según algunas formas de realización, la enfermedad ocular es DMAE.

[0020] Según algunas formas de realización, la PCA comprende una secuencia de tipo salvaje de PCA humana, una secuencia parcial funcional de PCA, un derivado de PCA o de una secuencia parcial funcional de esta, o una variante de PCA o de una secuencia parcial funcional de esta.

[0021] Según algunas formas de realización, la secuencia parcial funcional comprende hasta un 95 %, hasta un 90 %, hasta un 85 %, hasta un 80 %, hasta un 75 % de la secuencia de aminoácidos de la PCA de tipo salvaje, y mantiene la funcionalidad de la PCA de tipo salvaje o cercana a la de tipo salvaje.

[0022] Según algunas formas de realización, la secuencia de aminoácidos de dicha variante de PCA es al menos un 70 %, al menos un 80 %, al menos un 85 %, al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 98 % o un 100 % idéntica a la secuencia de aminoácidos de la PCA de tipo salvaje.

[0023] Según algunas formas de realización, la PCA y una composición farmacéutica que la comprende son para su uso en una terapia combinada con uno o más agentes activos seleccionados de entre agentes antiangiogénicos, antiinflamatorios, antibacterianos, inmunosupresores, anti-PDFG, antifúngicos y antivirales.

[0024] Según algunas formas de realización, el agente antiangiogénico es un agente anti-VEGF o un inhibidor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), y dicho agente inmunosupresor es un esteroide.

[0025] El Sumario introduce una selección de conceptos en una forma simplificada que se describen a continuación con más detalle en la Breve descripción de los dibujos y en la Descripción detallada.

[0026] A no ser que se definan de otro modo, todos los términos técnicos y/o científicos utilizados en el presente documento tienen el mismo significado que entiende habitualmente un experto en la materia a la que pertenece la invención. A pesar de que en la práctica o en la experimentación de formas de realización se pueden utilizar métodos y materiales similares o equivalentes a los que se describen en el presente documento, a continuación se describen ejemplos de métodos y/o materiales. En caso de conflicto, prevalecerá la memoria descriptiva de la patente, incluyendo las definiciones. Asimismo, los materiales, métodos y ejemplos son únicamente ilustrativos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

[0027] En el presente documento se describen algunas formas de realización, únicamente a modo de ejemplo, haciendo referencia a los dibujos adjuntos. En referencia específica ahora a los dibujos con más detalle, se subraya que los detalles particulares representados son a modo de ejemplo y con fines de discusión ilustrativa de las formas de realización. En este sentido, la descripción, tomada con los dibujos, pone de manifiesto a los expertos en la materia cómo pueden ponerse en práctica las formas de realización.

[0028] En los dibujos:

las figuras 1A-1C son esquemas de la técnica anterior de las barreras hematorretinianas (BRB) (1A), una estructura normal de la retina (1B), y una retina que presenta neovascularización coroidea en degeneración macular asociada a la edad (DMAE) (1C);

las figuras 2A-2D son imágenes de microscopio confocal de células del epitelio pigmentario de la retina (ARPE-19) teñidas con anticuerpo de conejo anti ZO-1 (brillante) y NucBlue® (tinción nuclear; zonas claras, circulares y redondas), tras el tratamiento con 0,0 pg/ml de PCA (control, 1A); 0,1 pg/ml de PCA (IB); 1 pg/ml de PCA (1C); o 10 pg/ml de PCA (ID);

la figura 3 es un gráfico que muestra la permeabilidad FITC-dextrano (como % de control) de células ARPE-19 tratadas con 0,0, 0,1 o 1 pg/ml de PCA (resultados medios de 4 experimentos);

la figura 4 es un gráfico que muestra la zona de vasos sanguíneos coroideos de la coroides plana tras la fotocoagulación láser de la retina y las inyecciones intravítreas de solución salina, bevacizumab (25 pg/animal) o PCA (1 pg/animal);

las figuras 5A-5B son gráficos que muestran el volumen de vasos sanguíneos (5A) y la profundidad (5B) de secciones aplanadas de EPR-coroides tras la fotocoagulación láser y las inyecciones intravítreas de solución salina o PCA (1 pg/animal); y

las figuras 6A-6C son imágenes apiladas en Z (1 pm) (6A-6B) y un gráfico (6C) de un ejemplo de retina completa aplanada tras la fotocoagulación láser y las inyecciones intravítreas de solución salina o PCA (1 pg/animal). Los vasos sanguíneos se muestran brillantes en las imágenes.

DESCRIPCIÓN DETALLADA

[0029] En el presente documento se da a conocer el uso de la proteína C activada (PCA) en la terapia de enfermedades oculares, más concretamente, aunque no exclusivamente, para el tratamiento de enfermedades oculares asociadas a neovascularización coroidea y derrame de retina.

[0030] La función óptima de la retina requiere un ambiente apropiado y estrictamente regulado. Esta regulación se determina mediante barreras celulares, creadas por proteínas de unión estrecha, que separan compartimentos funcionales, mantienen su homeostasis y controlan el transporte entre ellas. Las barreras hematorretinianas (BRB), particularmente la barrera externa compuesta por el epitelio pigmentario de la retina (EPR), y la barrera interna entre el endotelio microvascular de la retina, son estructuras muy dinámicas, capaces de responder rápidamente a los requisitos fisiológicos así a como a condiciones extrínsecas cambiantes.

[0031] La mayoría de las enfermedades de la retina implican derrame vascular y rotura de la BRB interna o externa. Existen dos tipos de neovascularización que se producen en la retina y provocan pérdida de visión: la neovascularización de la retina (NVR), en la que brotan nuevos vasos de los capilares retinianos e invaden las capas retinianas vítrea y neural, y la coroides a través de la membrana de Bruch, seguida de daño en las BRB, donde pueden derramar fluido o producir hemorragia bajo la retina (véase las figuras de la técnica anterior 1B y 1C). La NVC es la principal causa de pérdida de visión grave en varias enfermedades oculares distintas de la DMAE, por ejemplo, las estrías angioides y la miopía elevada.

[0032] Los dos principales tratamientos actuales para la NVC son la destrucción de los vasos sanguíneos de invasión con agentes anti-VEGF (factor de crecimiento endotelial vascular) (por ejemplo, Bevacizumab, Ranibizumab, Aflibercept), inyectados en los ojos (más habitualmente dañando también la retina y destruyendo asimismo vasos sanguíneos necesarios), o la coagulación láser de los vasos sanguíneos, que puede provocar cicatrices dañinas en la retina. Aun así, ninguno de los tratamientos aborda los problemas subyacentes que provocan que se invadan los vasos sanguíneos. Además, la mayoría de las veces, a la administración repetida con el tiempo le sigue una reducida respuesta terapéutica a los agentes anti-VEGF. Por lo tanto, las recaídas son comunes, y muchos pacientes siguen perdiendo visión en uno o dos años. Sigue siendo difícil lograr un tratamiento dirigido contra la causa de la enfermedad, ya que la etiología subyacente es muy compleja y difícil de conseguir.

[0033] La proteína C activada (PCA) es una serina proteasa plasmática con, entre otras, propiedades protectoras de la barrera endotelial y epitelial.

[0034] En busca de modalidades de tratamiento que cubrieran las necesidades todavía continuas de tratamiento de la NVC y prevención del derrame de retina, los presentes inventores han contemplado un efecto protector de barrera de la PCA en adhesiones deterioradas en uniones críticas del EPR en la retina, derivando así en una prevención o mejora del derrame de retina y la NVC.

[0035] Los presentes inventores han concebido modelos in vitro e in vivo para evaluar el efecto protector de la PCA en EPR y BRB, y pusieron en práctica con éxito un método novedoso de tratamiento de la NVC basado en la administración intravítrea de PCA.

[0036] Como se muestra en la sección de Ejemplos que se incluye más adelante, en un modelo in vitro de células humanas del epitelio pigmentario de la retina (ARPE-19), la PCA indujo la translocación de la proteína de unión estrecha Zonula Occludens 1 (ZO-1) a la membrana celular de ARPE19 y redujo la permeabilidad al EPR del dextrano marcado en comparación con las células no tratadas (véanse los Ejemplos 1 y 2 del presente documento). En un modelo in vivo concebido por los presentes inventores, la NVC se indujo mediante fotocoagulación indirecta con láser de diodo en ratones macho C57BL/6J. La inyección intravítrea de PCA (1 pg/animal) inmediatamente después de la lesión redujo drásticamente el área de NVC (Ejemplo 3 del presente documento) así como el volumen y la profundidad de la NVC, como muestra el análisis tridimensional de PCA (1 pg/animal) inmediatamente después de la lesión redujo drásticamente el área de NVC (Ejemplo 3 del presente documento) así como el volumen y la profundidad de la NVC, como muestra el análisis tridimensional (véase el Ejemplo 4 del presente documento). El efecto de la PCA fue comparable al efecto del bevacizumab, el tratamiento de preferencia actual para la NVC.

[0037] Además, los presentes inventores han cuantificado la formación de vasos sanguíneos tras la lesión con láser en ratones, y han demostrado satisfactoriamente que la PCA redujo de manera significativa el desarrollo y la penetración de vasos sanguíneos desde la coroides hacia la retina (véase el Ejemplo 5 en el presente documento).

[0038] En el presente documento se da a conocer un método para la prevención o el tratamiento de enfermedades, trastornos y afecciones oculares asociadas al derrame de retina y a la neovascularización coroidea, comprendiendo el método la administración de una cantidad efectiva de proteína C activada (PCA) a un paciente que lo necesita.

[0039] El término «proteína C activada», tal y como se utiliza en el presente documento, debe interpretarse de manera amplia para abarcar varias formas de PCA conocidas en la técnica y aquellas que todavía están por descubrir. Ejemplos no limitativos incluyen: la secuencia de tipo salvaje de la PCA humana; una variante polimórfica de la PCA humana; un homólogo interespecie de la PCA humana; una secuencia parcial funcional de la PCA humana de tipo salvaje o su variante polimórfica u homólogo interespecie; un derivado de la PCA humana de tipo salvaje o de su variante polimórfica, homólogo interespecie o secuencia parcial funcional; y una variante (mutante) de la PCA humana de tipo salvaje o de su variante polimórfica, homólogo interespecie o secuencia parcial funcional. El término «administración de PCA», tal y como se utiliza en el presente documento, hace referencia a la administración de una o más de estas formas de PCA, ya sea combinadas en una única forma de dosificación o administradas de manera consecutiva en una o más formas de dosificación separadas, comprendiendo cada una una o más formas de PCA según lo descrito en el presente documento.

[0040] El término «asociado/a(s) a neovascularización coroidea», tal y como se utiliza en el presente documento, se refiere a una enfermedad, trastorno o afección provocada directamente por la NVC, o a una enfermedad, trastorno o afección acompañada de desarrollo de NVC, por ejemplo, como etapa secundaria o complicación de esta y, opcionalmente, un empeoramiento, agravamiento o progreso debido al proceso de NVC. Las enfermedades, trastornos o afecciones acompañadas de NVC como secuela sincrónica o asíncrona de estas, a saber, la NVC producida por una aparición anterior de tales enfermedades o trastornos, por ejemplo, enfermedades infecciosas o no infecciosas, son también enfermedades, trastornos o afecciones asociadas a la NVC según lo definido en el presente documento.

[0041] Las enfermedades oculares asociadas con NVC que pueden tratarse mediante el método descrito en el presente documento incluyen, aunque sin carácter limitativo, la degeneración macular asociada a la edad (DMAE), la miopía patológica y el pseudoxantoma elástico con estrías angioides.

[0042] La NVC y el derrame de sangre en la retina pueden producirse como resultado de una gran variedad de enfermedades inflamatorias o no inflamatorias de la coroides y la retina, tales como, sin carácter limitativo, neuritis óptica y otras enfermedades inflamatorias del nervio óptico, como papiledema, neuropatía óptica isquémica anterior (NOlA), oclusión de los vasos sanguíneos, enfermedad de Behget y complicaciones de la diabetes, como retinopatía.

[0043] La NVC puede ser la secuela tanto de uveítis infecciosa como de uveítis no infecciosa. En las enfermedades infecciosas, la toxoplasmosis (provocada por el parásito Toxoplasma gondii y responsable de la retinocoroiditis toxoplásmica), Toxocara canis, tuberculosis y retinopatías virales, pueden presentar NVC como secuela sincrónica o asíncrona. La uveítis no infecciosa asociada con NVC incluye, aunque sin carácter limitativo, coroidopatía punctata interna (CPI), coroiditis multifocal (CMF), epiteliopatía pigmentaria placoide multifocal posterior aguda (EPPMPA), coroiditis serpiginosa (CS), síndrome de presunta histoplasmosis ocular (SPHO) y el síndrome de Vogt-Koyanagi-Harada (VKH).

[0044] Por ejemplo, la NVC está asociada habitualmente a la CMF, que se halla en entre un 32 y un 46 % de los pacientes, y el SPHO, la principal causa de deterioro visual es la aparición de NVC en la mácula, que da como resultado la exudación y la posterior formación de cicatrices.

[0045] Las bacterias también pueden afectar a los ojos, y la NVC puede (aunque en raras ocasiones) ser una de las secuelas más graves. La colonización de la retina puede producirse mediante la metástasis de la coroides durante la endocarditis, infección de la válvula aórtica, absceso renal y óseo, y abuso de drogas intravenosas. La membrana neovascular coroidea crece normalmente cerca de un granuloma coroideo activo o quiescente. La NVC clásica es generalmente la que se produce típicamente en la endocarditis bacteriana, que crece cerca de la lesión coriorretiniana principal, o en la zona circundante de una vieja cicatriz atrófica.

[0046] Los virus también se han asociado con la NVC, predominantemente como complicación tardía (Neri et al., 2009, Middle East Afr J Ophthalmol., 16(4): 245-251); por ejemplo, el virus del Nilo Occidental puede provocar una capilaropatía isquémica extensiva en la mácula que puede desarrollarse en una neovascularización coroidea cerca de una cicatriz coriorretiniana.

[0047] La NVC puede ser una secuela tardía de hongos tales como Candida albicans, Cryptococcus neoformans y Aspergillus fumigatus, que se han descrito como patógenos potenciales para el ojo.

[0048] Los trastornos oculares asociados a la NVC que pueden beneficiarse del tratamiento con PCA de acuerdo con las formas de realización del método descrito en el presente documento incluyen, aunque sin carácter limitativo, el daño oxidativo, biogénesis de drusas, acumulación de lipofuscina, anomalías de la membrana de Bruch, cambios vasculares en el ojo que impidan la regulación de la presión y el flujo sanguíneos, limitando así el intercambio de nutrientes y la eliminación de los residuos metabólicos y creando condiciones de isquemia, envejecimiento fisiológico, factores genéticos (mutaciones en la ruta del complemento) y factores ambientales (por ejemplo, tabaquismo, radiación, carencia de vitaminas, etc.). Por ejemplo, la NVC puede ser secundaria, originándose a partir de una vieja cicatriz coriorretiniana.

[0049] Las «afecciones asociadas a la NVC», según lo definido en el presente documento, se refieren a incidentes accidentales, ocasionales y puntuales en los que se desarrolla NVC como resultado, por ejemplo, de una lesión traumática de la retina, complicaciones durante un procedimiento médico oftálmico, como cirugía, tratamiento láser o comprobación rutinaria, etc.

[0050] Los términos «terapia», «tratamiento», «tratando», «tratar», tal y como se utilizan en el presente documento, son intercambiables y se refieren a: (a) prevenir que aparezca una enfermedad, trastorno o afección en un humano que puede estar predispuesto a la enfermedad, trastorno y/o afección, pero que aún no haya sido diagnosticado de esta; (b) inhibir la enfermedad, trastorno o afección, es decir, deteniendo su desarrollo; (c) aliviar, paliar o mejorar la enfermedad, trastorno o afección, es decir, provocando la regresión de la enfermedad, trastorno y/o afección; y (d) curar la enfermedad, trastorno o afección. Dicho de otro modo, los términos «terapia», «tratar», «tratamiento» y «tratando» se extienden a la profilaxis, a saber, «prevenir», «prevención» y «previniendo», así como al tratamiento en sí de afecciones establecidas. Por consiguiente, el uso de los términos «prevenir», «prevención» y «previniendo» se referirían a una administración del agente activo a una persona que en el pasado haya sufrido las afecciones anteriormente mencionadas, tales como, por ejemplo, derrame de retina o NVC, pero que no esté sufriendo las afecciones en el momento de la administración de la composición.

[0051] Así, los términos «tratamiento», «terapia» y similares incluyen, aunque sin carácter limitativo, cambios en el estado del receptor. Los cambios pueden ser subjetivos u objetivos, y pueden referirse a características, como síntomas o signos de la enfermedad, trastorno o afección que se está tratando. Por ejemplo, si el paciente advierte mejoría en la agudeza visual, defectos reducidos del campo visual central o reducción del dolor, entonces se habrá producido un tratamiento exitoso. Del mismo modo, si el médico advierte cambios objetivos, por ejemplo, mediante angiografía de fluoresceína (AF), angiografía con verde de indocianina (ICGA) o tomografía de coherencia óptica (TCO), entonces el tratamiento será también exitoso. Alternativamente, el médico puede observar una reducción del tamaño de las lesiones u otras anomalías tras examinar al paciente (por ejemplo, cambios subretinianos grisáceos-blancos junto con edema de retina, exudaciones duras y hemorragia subretiniana e intrarretiniana). Esto también representaría una mejora o un tratamiento exitoso. El término también incluye la prevención del deterioro del estado de un receptor. El beneficio terapéutico incluye cualquier número de factores subjetivos u objetivos que indican una respuesta de la afección que se está tratando, según lo descrito en el presente documento.

[0052] En algunas formas de realización, el método de tratamiento o prevención de enfermedades, trastornos o afecciones oculares puede incluir la administración a un sujeto que lo necesita de una cantidad efectiva de PCA desde aproximadamente 10 pg/ml hasta aproximadamente 250 pg/ml, desde aproximadamente 10 pg/ml hasta aproximadamente 150 pg/ml, desde aproximadamente 10 pg/ml hasta aproximadamente 100 pg/ml, desde aproximadamente 20 pg/ml hasta aproximadamente 100 pg/ml, desde aproximadamente 30 pg/ml hasta aproximadamente 90 pg/ml, desde aproximadamente 30 pg/ml hasta aproximadamente 80 pg/ml, desde aproximadamente 40 pg/ml hasta aproximadamente 70 pg/ml, por ejemplo, aproximadamente 60 pg/ml, por dosis, incluyendo cualquier subintervalo y cualquier valor intermedio entre estos.

[0053] Se da a conocer el uso de la PCA en el tratamiento de enfermedades, trastornos o afecciones oculares asociadas con la NVC que se ve afectado por administración intravítrea, por ejemplo, inyección intravítrea.

[0054] Opcionalmente, a pesar de que se tiene en cuenta que los fluidos en la retina (humor vítreo) diluyen la PCA administrada en cualquiera de las cantidades efectivas descritas en el presente documento en un factor de 20-50, se prepara una porción de aproximadamente 0,02 ml a aproximadamente 0,1 ml, de aprox. 0,03 ml a aprox. 0,07 ml, de aprox. 0,04 ml a aprox. 0,06 ml, preferiblemente de aproximadamente 0,05 ml, incluyendo cualquier subintervalo y cualquier valor intermedio entre estos, de PCA diluida en una solución de irrigación intraocular a cualquiera de los intervalos de concentración efectivos anteriormente descritos. Opcionalmente, se prepara cada porción, por ejemplo, en jeringas de insulina y, opcionalmente, se almacenan, por ejemplo, a -70 °C justo hasta antes de su uso. Opcionalmente, inmediatamente después de la inyección, se administran gotas oftálmicas, por ejemplo, de levofloxacina al 0,3 %.

[0055] Una cantidad efectiva de PCA según lo descrito en el presente documento se aplica tópicamente en los ojos.

[0056] El método de tratamiento de la NVC y el derrame vascular en la retina según lo descrito en el presente documento se puede beneficiar, por ejemplo, proporcionar un efecto sinérgico, cuando se combina con otras modalidades de tratamiento, particularmente modalidades de tratamiento dirigidas al motivo principal o al desencadenante del desarrollo de NVC.

[0057] Teniendo en cuenta que la inflamación subclínica crónica y la inflamación clínica de la retina y la coroides pueden ser la base de la patogénesis de la NVC y derivar así en el derrame en la retina, en algunas formas de realización, que presentan una terapia combinada, la estrategia de tratamiento para la NVC secundaria a inflamaciones no infecciosas estaría dirigida a controlar el proceso inflamatorio. En consecuencia, junto con la PCA, pueden indicarse medicaciones sistémicas, por ejemplo, corticosteroides como la dexametasona (p. ej., Ozurdex) y derivados de esta, con o sin agentes inmunosupresores. Asimismo, o alternativamente, se indican terapias dirigidas directamente al proceso neovascular, como cualquiera de los agentes anti-VEGF intravítreos, particularmente cuando la terapia antiinflamatoria muestra una respuesta insuficiente. Por ejemplo, en las formas de realización en las que la NVC está asociada con retinocoroiditis recurrente, puede proporcionarse a un paciente la asociación clásica de antibióticos antitoxoplasmáticos con corticosteroides, opcionalmente, junto con la terapia anti-VEGF. La terapia combinada que comprende terapia antiinflamatoria y anti-VEGF dirigida directamente al proceso neovascular se recomienda en casos graves. Ejemplos no limitativos de agentes anti-VEGF que pueden utilizarse en una modalidad de tratamiento combinado incluyen el bevacizumab, ranibizumab y aflibercept.

[0058] Sin limitarse a ninguna teoría, se cree que la PCA interactúa con receptores celulares como el receptor activado por proteasa (PAR) 1, PAR3, el receptor endotelial de la proteína C (REPC) y otros, e induce la transducción de señales que deriva en una estabilización y protección de las barreras. Por otro lado, los agentes anti-VEGF se unen al VEGF e inhiben su capacidad de unirse y activar los receptores de VEGF. En vista de estos distintos modos de acción, el tratamiento combinado que presenta la coadministración de uno o más agentes anti-VEGF y PCA puede tener efectos sinérgicos en el tratamiento o prevención de la NVC. En algunas formas de realización, el uso de PCA como único agente activo en el tratamiento de enfermedades, trastornos y afecciones oculares asociadas con la NVC se aplica a pacientes resistentes a anti-VEGF.

[0059] En algunos ejemplos de formas de realización, cuando la NVC es secundaria a un trastorno autoinflamatorio, la PCA puede administrarse a un paciente más duro con agentes inmunosupresores, por ejemplo, una asociación de esteroides, ciclosporina A y, en algunos casos, azatioprina. Los esteroides pueden ser esteroides perioculares o sistémicos.

[0060] En algunos ejemplos de formas de realización, en la neovascularización conoidea idiopática (NVCI), donde la NVC es el único hallazgo fiable en la retina y no son detectables otras anomalías, el tratamiento de PCA puede combinarse con medicaciones antiinflamatorias.

[0061] Puesto que el proceso inflamatorio no es solo loco-regional y parece que todo el sistema inmunitario está implicado, siempre debería considerarse el uso de esteroides sistémicos. La seguridad y la eficacia de la inmunosupresión para el control de nuevos vasos coroideos resultan conocidas. La elección del inmunosupresor debería establecerse en función de las características del propio fármaco. Por ejemplo, el micofenolato de mofetilo (MMF) puede ser la elección de fármaco para el control a largo plazo de la NVC inflamatoria, ya que ha demostrado ser efectivo en la mejora de la arteriolopatía y la reducción de la cantidad de mediadores solubles implicados en la fisiopatología de la NVC.

[0062] El factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) desempeña un papel importante en la cascada de angiogénesis que se activa en las enfermedades vasculares retinocoroideas (Ali Sadiq et al., 2015, http://dx.doi.org/10.1016/Lsiopt.2015.05.005). Una posible explicación para la implicación del PDGF en el proceso de la NVC incluye la entrada de plaquetas y monocitos en el humor vítreo y el espacio subretiniano tras la lesión en la barrera hematorretiniana, con la posterior agregación de plaquetas y descarga de PDGF. Interleucinas como IL-1 y TGF-p, liberadas de macrófagos activados, pueden derivar en una síntesis posterior de PDGF.

[0063] En algunas formas de realización de terapia combinada de acuerdo con la presente invención, la PCA puede coadministrarse con agentes anti-PDGF que bloquean los efectos del PDGF en el proceso de angiogénesis en la retina. Ejemplos no limitativos de agentes anti-PDGF incluyen antagonistas de PDGF, tales como la proteína de repetición de anquirina diseñada (DARPin) que se une selectivamente y antagoniza el PDGF-BB en la NVC subretiniana, opcionalmente coadministrada con una proteína similar que antagoniza el VEGF-A (proteína anti-VEGF). Otro ejemplo de antagonista de PDGF de alta afinidad es E10030, que se une al PDGF y bloquea su unión a PDGFR-p. Este antagonista tiene una mayor efectividad cuando se coadministra con un agente anti-VEGF, como ranibizumab.

[0064] En algunas formas de realización de la terapia combinada, la PCA se proporciona a un paciente junto con uno o más tratamientos seleccionados de entre terapias antiangiogénicas, antiinflamatorias, antibacterianas, inmunosupresoras, anti-PDGF, antifúngicas y antivirales. En algunas formas de realización, el fármaco o agente activo coadministrado se administra junto con PCA en una única forma de dosificación, opcionalmente mediante inyección intravítrea. Asimismo, o alternativamente, el fármaco o agente activo coadministrado se administra en una o más formas de dosificación separadas, ya sea antes, simultáneamente o después de la administración de PCA. En algunas formas de realización, el agente activo coadministrado se administra sistémicamente. Alternativamente, o además, el agente activo coadministrado se administra localmente, opcionalmente mediante inyección intravítrea.

[0065] El método de tratamiento descrito en el presente documento presenta una pauta de administración de PCA dictada por varias consideraciones, tales como el estado de la retina, el progreso de la curación, la tolerancia del paciente, etc. Por ejemplo, puede aplicarse una única dosis una vez al mes o una vez a la semana durante un máximo de 6 a 8 semanas, donde el espacio entre sucesivas administraciones y la necesidad de continuar la administración de PCA se determina en función del estado de la retina tratada, el progreso de la curación y los efectos secundarios evaluados.

Composiciones farmacéuticas

[0066] En el presente documento se da a conocer una composición farmacéutica que comprende, como agente activo, PCA, un fragmento funcional de PCA, un derivado de PCA, un homólogo de PCA o una combinación de los mismos, para su uso en el tratamiento de enfermedades y trastornos oculares.

[0067] La composición farmacéutica descrita en el presente documento es para su uso en el tratamiento de enfermedades y trastornos oculares que están asociados, o provocados, por NVC, como, por ejemplo, aunque sin carácter limitativo, degeneración macular asociada a la edad (DMAE), estrías angioides y miopía elevada.

[0068] Las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento pueden comprender, además del agente activo PCA, un vehículo farmacéuticamente aceptable y excipientes y comprender, además, opcionalmente, componentes químicos que, por ejemplo, facilitan la liberación sostenida del agente activo en el ojo tratado.

[0069] En consecuencia, en cualquiera de los métodos y usos descritos en el presente documento, la PCA de tipo salvaje o cualquiera de sus secuencias funcionales parciales (fragmentos), derivados y homólogos descritos en el presente documento pueden proporcionarse a un individuo por sí solo o como parte de una composición farmacéutica donde está mezclado con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

[0070] Tal y como se utiliza en el presente documento, una «composición farmacéutica» se refiere a una preparación de uno o más de PCA, un fragmento funcional, un derivado o un homólogo de esta descrito en el presente documento (como ingrediente activo), o sales fisiológicamente aceptables o profármacos de estas, con otros componentes químicos que incluyen, aunque sin carácter limitativo, vehículos fisiológicamente adecuados, excipientes, lubricantes, agentes tampón, agentes antibacterianos, agentes de carga (p. ej., manitol), antioxidantes (p. ej., ácido ascórbico o bisulfito de sodio), agentes antiinflamatorios, agentes antivirales, agentes quimioterapéuticos, antihistamínicos, etc. El propósito de una composición farmacéutica es facilitar la administración de un compuesto a un sujeto. El término «ingrediente activo» se refiere a un compuesto que es responsable de un efecto biológico.

[0071] Tal y como se utiliza en el presente documento, el término «fisiológicamente aceptable» hace referencia a que ha sido aprobado por una agencia reguladora del gobierno federal o estatal o listado en la Farmacopea de Estados Unidos u otra farmacopea reconocida generalmente para su uso en animales, y más concretamente en humanos. En el presente documento, la expresión «vehículo fisiológicamente adecuado» se refiere a un vehículo aprobado o a un diluyente que no provoca irritación significativa en un organismo y no anula la actividad biológica y las propiedades de un posible agente activo.

[0072] En el presente documento, el término «excipiente» se refiere a una sustancia inerte que se añade a una composición farmacéutica para facilitar más los procesos y la administración de los ingredientes activos. Ejemplos de excipientes incluyen, sin carácter limitativo, carbonato de calcio, fosfato de calcio, varios azúcares y tipos de almidón, derivados de celulosa, gelatina, aceites vegetales y polietilenglicoles.

[0073] Pueden encontrarse técnicas para la formulación y la administración de fármacos en el documento "Remington's Pharmaceutical Sciences" Mack Publishing Co., Easton, Pensilvania, Estados Unidos, última edición, que se incorpora en el presente documento mediante referencia.

[0074] Las composiciones farmacéuticas para su uso de acuerdo con la presente invención pueden formularse de manera convencional utilizando uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables que comprenden excipientes y adyuvantes, que facilitan el procesamiento de los compuestos en preparaciones que pueden utilizarse farmacéuticamente. La formulación adecuada depende de la vía de administración elegida. La dosificación puede variar dependiendo de la forma de dosificación empleada y la vía de administración utilizada. La formulación exacta, vía de administración y dosificación pueden ser seleccionadas por el médico individual en virtud de la condición del paciente.

[0075] La composición farmacéutica puede estar formulada para su administración en una o más vías locales, dependiendo de la zona que se vaya a tratar.

[0076] En alguna forma de realización, la composición farmacéutica está formulada en una forma adecuada para la administración intravítrea. En algunas formas de realización, la composición farmacéutica está formulada en una forma adecuada para la aplicación tópica en la zona aplicada.

[0077] De acuerdo con una forma de realización, la composición farmacéutica descrita anteriormente se envasa en un material de envasado y se identifica de forma impresa, en el material de envasado o sobre este, para su uso en el tratamiento de una afección médica asociada a la NVC.

Proteína C activada (PCA)

[0078] La proteína C puede purificarse a partir de concentrados de factores de coagulación o a partir de plasma mediante métodos conocidos, y a continuación activarse in vitro para obtener la forma activada PCA; sin embargo, dichos procesos son complejos y costosos, en parte debido a la disponibilidad limitada del material de partida y a la baja concentración de proteína C en el plasma. Asimismo, el uso terapéutico de productos derivados de sangre humana conlleva el riesgo de transmisión de enfermedades. Por lo tanto, en algunas de cualquiera de las formas de realización del uso de PCA en aplicaciones terapéuticas de acuerdo con la presente invención, la PCA utilizada es una PCA de tipo salvaje recombinante humana disponible en el mercado, secuencias parciales funcionales de esta, derivados de esta y variantes (mutantes) de esta obtenidos mediante técnicas conocidas de ingeniería genética, tales como técnicas de ADN recombinante.

[0079] En algunas formas de realización, la PCA recombinante humana de tipo salvaje y de longitud completa se aplica para el tratamiento de enfermedades, trastornos o afecciones oculares asociadas a la n Vc . Alternativamente, o además, se aplica una variante polimórfica o un homólogo interespecie de la PCA humana.

[0080] En algunas formas de realización, se aplica un fragmento funcional de PCA humana de tipo salvaje en la terapia de enfermedades, trastornos o afecciones oculares asociadas a la NVC. Según lo definido en el presente documento, un «fragmento funcional de PCA» es una secuencia parcial de la secuencia de proteína de tipo salvaje o de una variante polimórfica o de un homólogo interespecie de esta. El fragmento funcional puede comprender hasta un 95 %, hasta un 90 %, hasta un 85 %, hasta un 80 %, hasta un 75 % o incluso menos de la secuencia de aminoácidos de la PCA de tipo salvaje, y mantiene la funcionalidad de la PCA de tipo salvaje o cercana a la de tipo salvaje.

[0081] En algunas formas de realización, se aplica un derivado de la PCA de tipo salvaje o de una secuencia parcial funcional de esta para fines terapéuticos de acuerdo con la presente invención. Tal y como se utiliza en el presente documento, un «derivado de PCA» abarca la PCA de tipo salvaje, una variante polimórfica y un homólogo interespecie de esta, o cualquier secuencia parcial funcional de esta, en la que la secuencia de aminoácidos ha sido modificada tras la síntesis proteica, presentando sustancialmente la misma actividad biológica que la PCA de tipo salvaje. La expresión «que presenta(n) sustancialmente la misma actividad biológica», tal y como se utiliza en el presente documento, se refiere a derivados de PCA que presentan aproximadamente un 60 % de identidad, aproximadamente un 65 % de identidad, aproximadamente un 70 % de identidad, aproximadamente un 75 % de identidad, aproximadamente un 80 % de identidad, aproximadamente un 85 % de identidad, aproximadamente un 90 % de identidad, aproximadamente un 95 % de identidad, o un 100 % de identidad de actividad biológica con la proteína C activada humana de tipo salvaje.

[0082] La modificación de la PCA o una secuencia parcial funcional de esta después de la síntesis comprende modificaciones químicas o físicas, o ambas, de uno o más aminoácidos. La PCA o una secuencia parcial funcional de esta que haya sido sometida a una modificación química o física se denomina en el presente documento un «derivado químico» y un «derivado físico», respectivamente. Por ejemplo, un derivado de la secuencia de aminoácidos de la PCA puede ser idéntico a la secuencia de tipo salvaje, pero contiene una modificación de conformación posterior a la síntesis (es decir, una derivatización física).

[0083] Se dan a conocer y se describen con más profundidad ejemplos de derivados de PCA útiles para el objetivo de la presente invención, por ejemplo, en la patente estadounidense n.° 5,516,650.

[0084] En algunas formas de realización, se aplica una variante de la PCA de tipo salvaje o de una secuencia parcial funcional de esta para fines terapéuticos de acuerdo con la presente invención. Según se utiliza en el presente documento, los términos «una variante de PCA» y «una mutante de PCA» son intercambiables y abarcan la PCA de tipo salvaje, una variante polimórfica y un homólogo interespecie de esta, o cualquier secuencia parcial funcional de esta, en la que uno o más de los aminoácidos codificados naturalmente se han sustituido o eliminado mediante modificación post-traducción. Una «variante de PCA» o un «mutante de PCA» incluye, además, la secuencia de aminoácidos codificada naturalmente que contiene uno o más aminoácidos adicionales. La modificación de sustitución post-traducción comprende el reemplazo de uno o más aminoácidos codificados naturalmente de la PCA con uno o más aminoácidos seleccionados de entre aminoácidos naturales y no naturales. La modificación de adición post-traducción comprende la adición de uno o más aminoácidos seleccionados de entre aminoácidos naturales y no naturales en la secuencia de aminoácidos codificada naturalmente. La modificación que da como resultado la sustitución, adición o deleción de uno o más aminoácidos también se denomina en el presente documento «derivatización biológica».

[0085] El término «aminoácido natural», tal y como se utiliza en el presente documento y en la técnica, hace referencia a cualquiera de los 20 aminoácidos comunes codificados naturalmente (a saber, alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, ácido glutámico, cisteína, fenilalanina, glicina, glutamina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, prolina, serina, tirosina, treonina, triptófano y valina), así como a pirrolisina y selenocisteína. El término «aminoácidos no naturales», tal y como se utiliza en el presente documento, incluye, aunque sin carácter limitativo, análogos de aminoácidos que funcionan de manera sustancialmente similar a los aminoácidos que se producen naturalmente. Los análogos de aminoácidos se refieren a compuestos que presentan la misma estructura química básica que un aminoácido que se produce naturalmente, a saber, un carbono a que está unido a un hidrógeno, un grupo carboxilo, un grupo amino y un grupo R. Dichos análogos pueden tener grupos R modificados o pueden presentar esqueletos peptídicos modificados, al mismo tiempo que siguen conservando la misma estructura química básica que un aminoácido de origen natural. Ejemplos no limitativos de análogos de aminoácidos incluyen la homoserina, norleucina, metionina sulfóxido y metionina metilsulfonio.

[0086] El término «aminoácido no natural» incluye, además, aminoácidos codificados naturalmente (incluyendo, aunque sin carácter limitativo, los 20 aminoácidos comunes, pirrolisina y selenocisteína), así como análogos de aminoácidos que hayan sido sometidos a modificaciones químicas. Ejemplos no limitativos de aminoácidos modificados químicamente incluyen N-acetilglucosaminil-L-serina, N-acetilglucosaminil-L-treonina y O-fosfotirosina.

[0087] La modificación post-traducción de la proteína PCA puede incluir un «grupo de modificación del amino-terminal», a saber, la adhesión de una molécula al grupo amino-terminal de la proteína. Únicamente a modo de ejemplo, los grupos de modificación del terminal incluyen polietilenglicol o seroalbúmina. Los grupos de modificación del terminal pueden utilizarse para modificar características terapéuticas de la PCA, incluyendo, aunque sin carácter limitativo, el incremento de la semivida sérica de la PCA.

[0088] Las sustituciones, deleciones o adiciones individuales a la secuencia de la proteína que alteran, añaden o eliminan un único aminoácido natural o un pequeño porcentaje de aminoácidos naturales en la secuencia de PCA codificada se consideran en el presente documento una modificación conservadora. En una «variante modificada de manera conservadora» de la PCA, la alteración da como resultado la deleción de un aminoácido, la adición de un aminoácido, o la sustitución de un aminoácido natural con un aminoácido químicamente similar (análogo).

[0089] En algunas formas de realización, el derivado de PCA comprende una sustitución, adición o deleción o cualquier combinación de estas, de aminoácidos, que proporcionan una o más de las siguientes características a la proteína: mayor afinidad para un receptor, mayor estabilidad, solubilidad acuosa modificada (p. ej., incrementada), mayor solubilidad en una célula huésped, resistencia modulada a la proteasa, semivida sérica modulada, inmunogenicidad modulada y/o expresión modulada relativa a la PCA de tipo salvaje. La actividad biológica modulada, según se utiliza en el presente documento, se refiere a un incremento o reducción de la reactividad, y alteración de la selectividad, p. ej., aumentando o disminuyendo la selectividad al sustrato de la PCA y cualquier parte funcional de esta.

[0090] Habitualmente, las modificaciones efectuadas presentan efectos beneficiosos en la PCA, tales como la mejora de su estabilidad y/o de su actividad biológica. Asimismo, se sabe que la PCA está asociada con la apoptosis en ciertos sistemas celulares. El alivio o la prevención del daño celular asociado al menos parcialmente con la apoptosis, especialmente en sujetos con riesgo de sufrir o que sufren dicho daño celular, puede verse afectado por el uso de mutantes de PCA, por ejemplo, aunque sin carácter limitativo, variantes de PCA recombinante que tengan una actividad anticoagulante notablemente reducida, pero conserven una actividad antiapoptótica (citoprotectora) cercana a la normal, de manera que la proporción entre actividad antiapoptótica y actividad anticoagulante sea mayor en las variantes que en la proteína C activada de tipo salvaje o endógena. Tres ejemplos de dichas mutantes de PCA recombinante que se dan a conocer en las patentes estadounidenses n.° 9,192,657 y 7,489,305 son KKK191-193AAA-PCA (mutación de lisinas 191, 192 y 193 a alaninas en un bucle expuesto a la superficie que contiene Lys191-193; también conocidas como "3K3A-PCA"), RR229/230AA-PCA (mutación de argininas 229 y 230 a alaninas) y RR229/230AA más KKK191-193AAA-PCA (combinación de mutaciones de argininas 229 y 230 a alaninas y lisinas 191, 192 y 193 a alaninas (también conocidas en la técnica como "5A-PCA")). Debido a su reducida actividad anticoagulante, estos ejemplos de variantes de PCA proporcionan un riesgo de sangrado significativamente reducido (las variantes 5A-PCA y 3K3A-PCA presentan < 10 % de actividad anticoagulante residual). Se ha informado de que 3K3A-PCA proporciona neuroprotección y una ventana terapéutica ampliada, (Griffin et al., 2015, Blood, 125:2898-2907). Otras mutantes de PCA que pueden utilizarse de acuerdo con algunas formas de realización incluyen PCA-2Cys, K193E-PCA y E149A-PCA, dadas a conocer en Griffin et al. (véase arriba), y variantes de PCA que incluyen la sustitución del residuo 158 (Asp) con un residuo de aminoácido no ácido, como Ala, Ser, Thr o Gly, o una sustitución del residuo 154 (His) con un residuo de aminoácido como Lys, Arg o Leu.

[0091] Una PCA de tipo salvaje modificada puede presentar una derivatización química, derivatización física, una derivatización biológica o cualquier combinación de estas. En algunas formas de realización, dichas derivatizaciones son regioselectivas. En algunas formas de realización, dichas derivatizaciones son regioespecíficas.

[0092] La secuencia del derivado químico, físico o biológico de PCA puede ser al menos un 70 %, al menos un 80 %, al menos un 85 %, al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 98 %, o incluso un 100 % idéntica a la secuencia de PCA de tipo salvaje o cualquiera de las secuencias parciales funcionales de esta.

[0093] En algunas formas de realización, la actividad biológica de cualquiera de los derivados de PCA mejora en aproximadamente un 5 %, en aproximadamente un 10 %, en aproximadamente un 15 %, en aproximadamente un 20 %, en aproximadamente un 30 %, en aproximadamente un 50 %, en aproximadamente un 60 %, en aproximadamente un 70 %, en aproximadamente un 80 %, en aproximadamente un 85 %, en aproximadamente un 90 %, en aproximadamente un 95 %, en aproximadamente un 100 %, en aproximadamente un 110 % o más, incluyendo cualquier valor intermedio entre estos, en comparación con la actividad biológica de cualquier PCA de tipo salvaje o secuencia parcial funcional de esta.

[0094] El término «modificado/a(s) o no modificado/a(s)» se refiere a que la secuencia de aminoácidos natural que se describe está modificada opcionalmente, es decir, la secuencia de aminoácidos natural de PCA objeto de debate puede estar modificada o no modificada.

[0095] Las formas de realización descritas en el presente documento contemplan el uso de derivados de PCA disponibles en el mercado.

[0096] Es de esperar que, durante la vida de una patente que madure a partir de la presente solicitud, se desarrollen muchos derivados químicos, físicos y biológicos relevantes de PCA o de secuencias parciales funcionales de esta, y el alcance del término «proteína C activada, secuencia parcial funcional de esta, derivado de esta o variante de esta» pretende incluir a priori la totalidad de dichas nuevas tecnologías.

[0097] Los términos «comprende», «comprendiendo», «incluye»», «incluyendo», «presentando» y sus conjugaciones significan «incluyendo, pero sin limitarse a».

[0098] El término «que consiste en» implica «que incluye y limitado a».

[0099] Tal y como se utiliza en el presente documento, la forma singular» un», «una», «el» y «la» incluyen referencias al plural a no ser que el contexto indique claramente lo contrario. Por ejemplo, el término «un compuesto» o «al menos un compuesto» puede incluir una pluralidad de compuestos, incluyendo mezclas de estos.

[0100] Tal y como se utiliza en el presente documento, el término «método» se refiere a modos, medios, técnicas y procesos para conseguir una tarea determinada, incluyendo, aunque sin carácter limitativo, aquellos modos, medios, técnicas y procesos, ya sean conocidos o desarrollados fácilmente a partir de modos, medios, técnicas y procesos conocidos por profesionales de las artes químicas, farmacológicas, biológicas, bioquímicas y médicas.

[0101] Tal y como se utiliza en el presente documento, el término «tratando» incluye la anulación, sustancialmente la inhibición, ralentización o inversión del progreso de una afección, mejorando sustancialmente los síntomas clínicos o estéticos de una afección o previniendo sustancialmente la aparición de síntomas clínicos o estéticos de una afección.

[0102] Siempre que se indique en el presente documento un intervalo numérico, este pretende incluir cualquier número citado (fraccionario o entero) dentro del intervalo indicado. Las expresiones «oscilando/oscila entre» un primer número indicado y un segundo número indicado y «oscilando/oscila desde» un primer número indicado «hasta» un segundo número indicado se utilizan en el presente documento de manera indistinta y pretenden incluir el primer y el segundo número indicado y todos los números fraccionarios y enteros entre estos.

[0103] Varias formas de realización y aspectos según lo delimitado anteriormente y según lo reivindicado en la sección de reivindicaciones que se muestra más adelante encuentran soporte experimental en los siguientes ejemplos.

EJEMPLOS

[0104] Se hace referencia ahora a los siguientes ejemplos, los cuales, junto con las descripciones anteriores, ilustran algunas formas de realización de manera no limitativa.

Materiales y métodos

Cultivo celular

[0105] Las células humanas del epitelio pigmentario de la retina (EPR) (línea celular ARPE-19) se adquirieron de ATCC™ (Manassas, Virginia, Estados Unidos) y se cultivaron en condiciones estándar de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Medios de cultivo: DMEM/F-12 (HAM) 1:1 (Biological Industries, Israel cat # 01-170-1A) complementado con suero bovino fetal al 10 % (Biological Industries, Israel cat # 04-121-1A), glutamina 1 mM (Biological Industries, Israel cat # 03-022-1B), 100 |j/ml de penicilina, 0,1 mg/ml de estreptomicina y 12,5 |j/ml de nistatina (Biological Industries, Israel cat # 03-032-1B). Los experimentos se realizaron utilizando los pasos 10 - 3o. Para el ensayo de inmunofluorescencia, las células se sembraron en una concentración de 1,3 x 104 células/cm2 y se cultivaron durante un mínimo de 30 días, donde los medios se cambiaron cada 2-3 días. Las células se lavaron con medio de inanición (suero carente de medio de crecimiento completo de células) y se trataron con 0,1, 1,0 o 10,0 jg/m l de proteína C activada (PCA) en medio de inanición durante 10 minutos. Tras 10 minutos, el medio se sustituyó por medio de crecimiento completo y las células se incubaron hasta un máximo de 4 horas.

Proteína C activada (PCA) humana

[0106] La PCA humana recombinante de tipo salvaje se adquirió de Haematologic Technologies Inc., EE. UU. (cat # HCAPC-0080).

Ensayo de permeabilidad in vitro

[0107] Las células de EPR se sembraron a una concentración de 6,7 x 103 células/cm2 sobre un inserto Transwell® de tereftalato de polietileno (PET) de 1 jm (Corning®, Massachusetts, EE. UU.). Las células se cultivaron durante 30 días hasta la confluencia en 600 j l de medio en la cámara inferior y 100 j l en la cámara superior. El medio se cambió cada 2­ 3 días. A continuación, las células se lavaron con medio de inanición (medio basal que contiene 1 mM de glutamina, 100 j/m l de penicilina, 0,1 mg/ml de estreptomicina y 12,5 jn/m l de nistatina), y se incubaron con medio de inanición que contenía 10,0, 1,0, 0,1 o 0,0 jg/m l de PCA. Tras 10 minutos de incubación con PCA, el medio de la cámara superior se sustituyó por isotiocianato de fluoresceína (FITC) Dextrano 70 kD, 1000 jg/m l (Sigma, Israel, cat # FD-70) durante un máximo de 6 horas. El medio de la cámara inferior se sustituyó por medio basal. Se tomaron muestras del medio de la parte inferior del inserto. La fluorescencia FITC, que representa el flujo a través de la capa celular, se detectó utilizando un lector de microplacas multidetección (Synergy™ HT, BioTek) a una excitación de 485 nm. Las muestras del medio se devolvieron a la cámara inferior para su incubación adicional.

[0108] Para el cálculo de la concentración de FITC-dextrano, se comparó la fluorescencia con una curva de calibración.

Inmunotinción de Zonula occludens-1 (ZO-1) in vitro

[0109] Las células se cultivaron en el Sistema de Portaobjetos de Cámara de Plástico Permanox™ con portaobjetos de 4 pocillos (Thermo Scientific, EE. UU. cat # 177437) durante 30 días. Las células se lavaron con medio de inanición, se incubaron con medio de inanición que contenía 1,0, 0,1 o 0,0 jg/m l de PCA durante un máximo de 4 horas, y a continuación se fijaron en paraformaldehído al 4 % en tampón fosfato salino (PBS) y, por último, se permeabilizaron con un 0,2 % del surfactante no iónico Triton™ X-100 en PBS durante 10 minutos. Antes de la aplicación de antígenos, se realizó la recuperación de antígenos utilizando 10 mM de ácido cítrico con pH 6,0 durante 10 minutos a 95 °C. La demostración del antígeno se mejoró significativamente mediante el pretratamiento con los reactivos de recuperación del antígeno que rompen los enlaces cruzados de las proteínas formados mediante la fijación de paraformaldehído y se descubrieron así sitios antigénicos ocultos. Las muestras se incubaron con anticuerpo de conejo anti ZO-1 (Invitrogen, cat # 40-2300, 1:100), durante la noche a 4 °C en una cámara humidificada, y posteriormente se incubaron con el anticuerpo secundario de burro anti-conejo Alexa Fluor® 568 (Invitrogen, cat # A10042, 1:100) durante 1 hora a temperatura ambiente, y 5 min de incubación con el reactivo NucBlue® Fixed Cell ReadyProbe® (Molecular Probes™, EE. UU.; cat # R37606) diluido en PBS. Se captaron digitalmente imágenes de portaobjetos representativos utilizando ajustes convencionales del microscopio y la cámara. Para imágenes confocales tridimensionales (3D), se captaron imágenes de células apiladas en Z de 0,5 jm de distancia (Leica TCS SP8). La representación tridimensional de las imágenes se consiguió utilizando el módulo de software científico Imaris x 647.1.1 (Oxford Instruments, Reino Unido).

Modelos animales láser in vivo

[0110] La fotocoagulación láser coroidea es un método aceptado y utilizado comúnmente para la inducción de la neovascularización coroidea (NVC). Se obtuvieron ratones C57BL/6J macho pigmentados y de ocho semanas de vida (Harlan Laboratories Ltd., Jerusalén, Israel) y se manejaron de acuerdo con las recomendaciones del Comité Institucional para el Cuidado y Uso de Animales del hospital. Los animales se anestesiaron con una inyección intraperitoneal (IP) de 100 mg/kg de ketamina y 10 mg/kg de xilacina, y las pupilas se dilataron con la administración tópica de gotas oftálmicas con tropicamida al 0,8 %. Las aplicaciones láser se aplicaron utilizando un oftalmoscopio de láser de diodo indirecto (Sistema SLx de IRIS Medical™ Oculight®, Iridex, Mountain View, California, EE. UU.) con el haz de tratamiento ajustado a 810 nm. Los rayos de luz se enfocaron sobre la superficie de la retina mediante lentes de condensación de 90 dioptrías (D) (Volk® Optical, Mentor, Ohio, EE. UU.). La NVC se indujo utilizando una potencia láser de 350 mW por 100 mseg en los ojos derechos en las posiciones de reloj 3, 6 y 9 del polo posterior, a una distancia de 1 - 2 diámetros de disco óptico (DD) rodeando el nervio óptico. La formación de burbujas blancas fue confirmada por el operario. Tras la aplicación láser, se inyectó de manera intravítrea PCA bajo un microscopio operativo. Se colocó de manera intravítrea una jeringa (calibre 33; Hamilton®) en el espacio retrolateral del ojo y se inyectó al menos uno de los siguientes: 1 j l (por ratón) de PCA (1 jg / jl) ; solución salina (como control); y bevacizumab (Avastin®) (25 jg /l j l ) (Genentech, Inc., South San Francisco, California, EE. UU., y Roche, Basilea, Suiza); se realizaron cantidades fijas en el día 5 tras la aplicación láser.

Perfusión de dextrano y aplanamiento de la coroides/retina

[0111] Se anestesiaron cinco ratones tras la aplicación láser, según se ha descrito arriba. Para la perfusión de dextrano, se inyectaron 0,1 ml de conjugado de isotiocianato de fluoresceína dextrano (FITC-dextrano; MW 500 k, Sigma Aldrich, Rehovot, Israel) diluidos en solución salina a una concentración de 25 mg/ml en el ventrículo izquierdo de los corazones de los ratones anestesiados. Los ojos se enuclearon, se lavaron en PBS y se fijaron en formalina al 4 % durante 2 - 3 horas. Las retinas neuronales se pelaron. Se utilizaron entre tres y cuatro incisiones radiales para aplanar el complejo EPR-coroides-esclerótica o la retina neuronal sobre portaobjetos de vidrio. Los portaobjetos se cubrieron con el reactivo antifade ProLong®™ Gold de medio de montaje (Invitrogen, EE. UU.), o se tiñeron además con anticuerpos, como se describe abajo.

Inmunotinción de coroides/retina plana

[0112] Para teñir además la retina/coroides aplanada con anticuerpos, los portaobjetos obtenidos según lo descrito anteriormente se lavaron con PBS y se incubaron en una solución al 0,5 % de PBS-Triton™ X100 a 4 °C durante la noche. A continuación, los portaobjetos se bloquearon durante 1 hora en suero de burro normal (NDS) al 5 % y se incubaron con CD31 de rata anti-ratón (eBioscience®, San Diego, California, EE. UU., cat # 14-0311) 1:100 a 4 °C durante la noche. A continuación, los portaobjetos se lavaron con PBS y se incubaron a 4 °C durante la noche con Alexa Fluor® 568 de cabra anti-rata 1:100 (Invitrogen), y posteriormente se incubaron durante 15 minutos con 10 pg/ml del tinte de ácido nucleico dihidrocloruro de 4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) en PBS (Sigma, cat # 9542), y se cubrieron con reactivo antifade ProLong®™ Gold de medio de montaje.

[0113] Se captaron imágenes de la coroides plana utilizando un microscopio de fluorescencia. Las coroides planas también se captaron con microscopio de luz para eliminar zonas transparentes a la luz, presumiblemente zonas lesionadas durante las preparaciones de montaje plano.

[0114] El área de la NVC se cuantificó con el software Image-J (NIH, Bethesda, Maryland, EE. UU.). Se delimitó el área de las lesiones. El análisis de la varianza se utilizó para el análisis estadístico utilizando una prueba ANOVA de un factor.

[0115] Las imágenes de las proyecciones tridimensionales se captaron utilizando un microscopio confocal Leica TCS SP8. Se captaron en condiciones estándar imágenes apiladas en Z a una distancia de un micrómetro (1 pm) de la coroides/retina aplanada. El volumen y la profundidad de la tinción se midió utilizando el software Imaris.

EJEMPLO 1

Efectos de la PCA en la localización celular de la proteína de unión estrecha zonula occludens 1 (ZO-1)

[0116] Los complejos de unión intercelular incluyen proteínas de unión estrecha, tales como la ocludina o las claudinas. Estas proteínas se unen a la fosfoproteína citoplasmática zona occludens (ZO)-1, que se une al citoesqueleto y proporciona así estabilidad de unión. La alteración de ZO-1 puede conducir a la ruptura de uniones estrechas y a un incremento de la permeabilidad vascular (endotelial) o epitelial. En vista de la implicación de ZO-1 en la unión del complejo de unión estrecha al citoesqueleto y en el mantenimiento de la integridad de la barrera del EPR, se analizó el efecto de la exposición a PCA en la localización celular de ZO-1. La localización celular de ZO-1 se estudió utilizando la tinción de inmunofluorescencia con anticuerpo anti-ZOl según lo descrito anteriormente en Materiales y métodos.

[0117] Las imágenes de microscopio confocal de las células de EPR teñidas con el anticuerpo de conejo anti ZO-1 (líneas brillantes) y con el reactivo NucBlue® Fixed Cell ReadyProbe® (tinción nuclear) con o sin PCA (0-10 pg/ml) se muestran en las figuras 2A-2D. Se observa claramente que 1 pg/ml de PCA indujo la sobrerregulación, la translocación y la acumulación de proteína ZO-1 en la membrana celular ARPE19. Estos resultados sugieren que la acumulación de ZO-1 en la membrana periférica de las células epiteliales puede inhibir la permeabilidad patológica y la angiogénesis a través de la barrera física formada por la estructura de unión estrecha.

EJEMPLO 2

Efectos de la PCA en la permeabilidad de las células EPR in vitro

[0118] Para abordar la cuestión de si la translocación de ZO-1 está acompañada por una reducción de la permeabilidad del EPR, se evaluó la permeabilidad celular basándose en la monitorización espectrofotométrica del transporte de dextrano marcado a través de una capa celular en ausencia o presencia de PCA. Se evaluó la permeabilidad in vitro de las células ARPE-19 conforme al protocolo descrito anteriormente en Material y métodos.

[0119] Los resultados de 4 experimentos repetidos se resumen en la figura 3. Como se muestra, la exposición de las células EPR a 1 pg/ml de PCA redujo drásticamente la fuga de FITC-dextrano a través de la monocapa EPR, lo que implica claramente que la PCA estabilizó la barrera EPR.

EJEMPLO 3

Cuantificación del área de la NVC tras la fotocoagulación láser

[0120] La neovascularización coroidea (NVC) se indujo mediante fotocoagulación láser de diodo indirecto en ratones C57BL/6J macho, tal y como se ha descrito anteriormente en Materiales y métodos. Inmediatamente después de la lesión, se inyectó de manera intravítrea a los ratones 1 pl de PCA en 1 pg/animal o 1 pl de bevacizumab en 25 pg/animal. El área de la NVC de coroides plana se determinó utilizando tinción de inmunofluorescencia del anticuerpo anti CD31, tal y como se describe en Materiales y métodos. El grupo de diferenciación 31 (CD31, también conocida como molécula de adhesión celular endotelial plaquetaria (PECAM-1)) es una proteína que constituye una gran porción de las uniones intercelulares de las células endoteliales. En inmunohistoquímica, CD31 se utiliza principalmente para demostrar la presencia de células endoteliales que son los «componentes básicos» de la NVC. El área de la NVC se evaluó mediante el software de procesamiento de fotografías imageJ en el día 5 tras la lesión con láser.

[0121] Como se muestra en la figura 4, el tratamiento con PCA redujo drásticamente el área de la NVC. El efecto de la PCA fue comparable al efecto del bevacizumab, el tratamiento de preferencia actual para la NVC.

EJEMPLO 4

Efecto del tratamiento con PCA en el volumen y la profundidad de la NVC (análisis tridimensional)

[0122] La neovascularización coroidea se indujo mediante fotocoagulación láser de diodo indirecto en ratones C57BL/6J macho, tal como se ha descrito anteriormente en Materiales y métodos. Inmediatamente después de la lesión, se inyectó de manera intravítrea a los ratones 1 pl de PCA a 1 pg/animal o bien 1 pl de solución salina. Cinco días después de las aplicaciones láser, se anestesió a los ratones, y se inyectaron 0,15 ml de conjugado de isotiocianato de fluoresceínadextrano (FITC-dextrano) diluidos en solución salina hasta una concentración de 25 mg/ml en el ventrículo izquierdo del corazón de cada rata. Los ojos se enuclearon. La coroides-EPR y la retina se separaron, se aplanaron sobre portaobjetos y se montaron según lo descrito en Materiales y métodos. Se adquirieron imágenes utilizando un microscopio confocal. La cuantificación de la NVC se llevó a cabo en imágenes 3D reconstruidas utilizando un software de análisis de imágenes 3D.

[0123] Las figuras 5A y 5B muestran la cuantificación del volumen de NVC (5A) y la profundidad de la NVC (5B) en las secciones coroides-EPR. Queda claramente demostrado que el tratamiento con PCA redujo drásticamente el volumen y la profundidad de la NVC.

EJEMPLO 5

Efecto de la PCA en la penetración de vasos sanguíneos recién formados desde la coroides hacia la retina (análisis tridimensional)

[0124] Se indujo neovascularización coroidea en ratones C57BL/6J macho. Inmediatamente después de la lesión, se inyectó de manera intravítrea a los ratones 1 pl de PCA a 1 pg/animal o bien 1 pl de solución salina, y se realizó la perfusión de dextrano y el aplanamiento de la retina según lo descrito anteriormente en Materiales y métodos. Se captaron en condiciones estándar imágenes apiladas en Z a una distancia de un micrómetro (1 pm) de las reinas aplanadas. En las figuras 6A-6C se presenta un resumen de las mediciones de sección Z de la retina completa 5 días después de la fotocoagulación y tras la perfusión con dextrano.

[0125] Las imágenes representativas de la retina completa que se muestran en las figuras 6A-6B demuestran la apetencia de los vasos sanguíneos en la sección más profunda de la retina inducida por láser, y su inhibición por PCA.

[0126] La cuantificación de las mediciones del área de los vasos sanguíneos en la sección retiniana se muestra en la figura 6C. Como se muestra claramente, la PCA redujo significativamente la penetración de los vasos sanguíneos en la retina.

[0127] A pesar de que la invención se ha descrito junto con formas de realización específicas de la misma, es evidente que muchas alternativas, modificaciones y variaciones serán evidentes para los expertos en la materia. En consecuencia, todas las alternativas y modificaciones.

[0128] La cuantificación de las mediciones del área de los vasos sanguíneos en la sección retiniana se muestra en la figura 6C. Como se muestra claramente, la PCA redujo significativamente la penetración de los vasos sanguíneos en la retina.

[0129] A pesar de que la invención se ha descrito junto con formas de realización específicas de la misma, es evidente que muchas alternativas, modificaciones y variaciones resultarán evidentes para los expertos en la materia. Además, la enumeración o identificación de cualquier referencia en la presente solicitud deberá interpretarse como una admisión de que dicha referencia está disponible como técnica anterior a la presente invención.

Claims (9)

REIVINDICACIONES

1. Composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y una proteína C activada (PCA) para su uso en la terapia del derrame de retina y la neovascularización coroidea (NVC).

2. Composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 1, donde la terapia es el tratamiento o prevención del derrame de retina y la neovascularización coroidea.

3. Composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 1 o 2, donde la terapia del derrame de retina y la NVC se da en una enfermedad, trastorno y afección ocular provocada directamente por la NVC, que presenta el desarrollo de NVC como etapa secundaria o complicación de esta, o que presenta la NVC como secuela sincrónica o asíncrona de esta.

4. Composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 3, donde

la enfermedad ocular se selecciona de entre degeneración macular asociada a la edad (DMAE), miopía patológica, pseudoxantoma elástico con estrías angioides, uveítis no infecciosa, como el síndrome de Vogt-Koyanagi-Harada (VKH), uveítis infecciosa, enfermedades inflamatorias del nervio óptico, como neuritis óptica, papiledema, neuropatía óptica isquémica anterior (NOIA), enfermedad de Behget y retinopatía;

el trastorno ocular se selecciona de entre inflamación crónica, daño oxidativo, biogénesis de drusas, acumulación de lipofuscina, anomalías de la membrana de Bruch, cambios vasculares en el ojo que impiden la regulación de la presión y el flujo sanguíneos y crean condiciones de isquemia, envejecimiento fisiológico, factores genéticos y factores ambientales; y

la afección ocular es un incidente accidental y ocasional en el que la neovascularización coroidea y el derrame de retina se desarrollan tras una lesión traumática de la retina, y complicaciones durante un procedimiento médico oftálmico.

5. Composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 4, donde la enfermedad ocular es DMAE.

6. Composición farmacéutica para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde la proteína C activada comprende una secuencia de tipo salvaje de la PCA humana, o una secuencia parcial funcional de PCA.

7. Composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 6, donde la secuencia parcial funcional de PCA comprende hasta un 95 %, hasta un 90 %, hasta un 85 %, hasta un 80 %, o hasta un 75 % de la secuencia de aminoácidos de la PCA de tipo salvaje, y mantiene la funcionalidad de la PCA de tipo salvaje o cercana a la de tipo salvaje.

8. Composición farmacéutica según la reivindicación 1 o 2 para su uso en una terapia combinada con uno o más agentes activos seleccionados de entre agentes antiangiogénicos, antiinflamatorios, antibacterianos, inmunosupresores, anti-PDFG, antifúngicos y antivirales.

9. Composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 8, donde el agente antiangiogénico es un agente anti-VEGF o un inhibidor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), y el agente inmunosupresor es un esteroide.