ES2894867T3

ES2894867T3 - Composiciones y procedimientos de tratamiento y prevención de infecciones por estafilococo áureo

Info

Publication number: ES2894867T3
Application number: ES15802959T
Authority: ES
Inventors: John Simard
Original assignee: XBIOTECH Inc; Xbiotech Inc
Current assignee: XBIOTECH Inc; Xbiotech Inc
Priority date: 2014-06-03
Filing date: 2015-06-03
Publication date: 2022-02-16
Anticipated expiration: 2035-06-03
Also published as: US20170015734A1; IL248959B; CN106456763B; EP3970747A3; EP3154584A4; CA2950840A1; KR20170007825A; AU2015271749A1; CN106456763A; MX2016015812A; US9783598B2; WO2015187779A1; US20190127449A1; KR20210047355A; US20220251175A1; PH12016502372A1; SG10201703965SA; JP6672221B2; EP3970747A2; PH12018501429A1

Abstract

Una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y un anticuerpo monoclonal purificado, en la que el anticuerpo monoclonal comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:11, en la que el anticuerpo monoclonal se une específicamente a la proteína A de Staphylococcus aureus (SpA) a través de su paratopo de la región Fab.

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones y procedimientos de tratamiento y prevención de infecciones por estafilococo áureo

Campo de la invención

La divulgación se refiere, en general, a procedimientos de tratamiento médico, inmunología y microbiología. Más particularmente, la divulgación se refiere a composiciones y procedimientos de tratamiento y prevención de infecciones por Staphylococcus aureus.

Antecedentes

El Staphylococcus aureus (SA) es una causa sustancial de enfermedad y muerte, tanto en seres humanos como en animales. La infección por estos cocos grampositivos suele provocar el desarrollo de un absceso superficial. Otros ^{casos de infección por}Sa ^{pueden ser mucho más graves. Por ejemplo, la intrusión del SA en los linfáticos y la sangre}puede provocar una infección sistémica que, a su vez, puede causar complicaciones como endocarditis, artritis, ^{osteomielitis, neumonía, shock séptico e incluso la muerte. La infección por}Sa ^{adquirida en el hospital es común y}particularmente problemática, siendo la causa más frecuente de infecciones del sitio quirúrgico y neumonía adquiridas en el hospital, y la segunda causa más frecuente de infecciones cardiovasculares y del torrente sanguíneo. La administración de antibióticos ha sido y sigue siendo el tratamiento estándar para las infecciones por SA. Desgraciadamente, el uso de antibióticos también ha alimentado el desarrollo de la resistencia a los antibióticos en SA. En particular, el SA resistente a la meticilina (MRSA) ha desarrollado la capacidad de resistir a los antibióticos betalactámicos, como la penicilina y las cefalosporinas. Y lo que es más alarmante, recientemente han aparecido SA resistentes a los antibióticos de último recurso, como la vancomicina y el linezolid. Además, se ha propuesto un enfoque alternativo a los antibióticos en el tratamiento de las infecciones estafilocócicas. El documento WO2013025834 divulga un panel de anticuerpos monoclonales generados por inmunización de ratones con SpAKKAA purificada, una variante no toxigénica de SpA, que carece de la capacidad de unirse específicamente a Fcy o al dominio Fab de los anticuerpos de la familia VH3. Se seleccionaron tres de estos anticuerpos con diferentes isotipos, a saber, 5A 10, 3F6 y 3011, para su posterior caracterización. Los experimentos de competencia de sitios de unión revelaron que los tres anticuerpos 5A 10, 3F6 y 3D11 también se unieron a la SpA de tipo salvaje. La unión de la IgG humana a la SpA fue bloqueada por los tres mAbs (5A10, 3F6 y 3D11) de una manera que superó la competencia de los mAbs de control de isotipo. Los tres anticuerpos seleccionados se unen a la SpA de tipo salvaje por su paratopo de la región Fab. En consonancia con esta unión mediada por el paratopo, los tres anticuerpos ejemplares protegieron a los ratones frente a la provocación con una cepa SA virulenta y desencadenaron la muerte opsonofagocítica de los estafilococos en la sangre humana y de ratón a través de una región Fc capaz de interactuar con un FcR cuando el anticuerpo se une a SpA a través de su paratopo de la región Fab. Sin embargo, sigue siendo necesario un nuevo enfoque para la prevención y el tratamiento de las infecciones por SA.

Sumario

Se descubrió que ciertos anticuerpos (Abs) que tienen paratopos de la región Fab que se unen específicamente a la proteína A (SpA) de SA son capaces de mediar la opsinización de las bacterias SA a pesar de la expresión de anticuerpos (Ab) que neutralizan la SpA. Las estrategias anteriores basadas en Ab para el tratamiento o la prevención de las infecciones por SA resultaron prometedoras en los ensayos preclínicos y en las primeras fases de los ensayos clínicos, pero no lograron alcanzar los objetivos en los ensayos de fase III. Tal vez para explicar estos resultados, las estrategias anteriores no abordaron la propiedad de neutralización de Ab de la SpA. La SpA es una proteína muy expresada en la pared celular que se une a la mayoría de las inmunoglobulinas (Igs) a través de sus regiones Fc (efectoras). La SpA se une a los anticuerpos humanos de las subclases IgG1, IgG2 e IgG4 a través de su región Fc con una KD de aproximadamente 1 x 10-9 M, y por lo tanto actúa como un anclaje de la región Fc que orienta la porción efectora de una inmunoglobulina (Ig) lejos de los efectores inmunitarios que interactúan con la Fc, como el complemento y los fagocitos portadores del receptor Fc (FcR). En consecuencia, la mayoría de los Abs específicos para antígenos SA están "secuestrados" de los efectores inmunitarios de esta manera. Además, dado que la SpA se expresa en gran medida en la pared celular de la SA (se estima que representa el 7% de la pared celular), media la formación de un escudo de Igs que cubre la pared celular. Este escudo obstaculiza estéricamente que los Abs específicos para los antígenos de la pared celular se unan a sus objetivos y medien en la optofagocitosis de las bacterias. La formación de un escudo de Ig no se apreciaba anteriormente como un factor de virulencia. Por lo tanto, el descubrimiento de que los Abs de unión a SA que tienen regiones Fab que se unen específicamente a SpA mientras permiten que sus regiones Fc sigan interactuando con los FcR en las células efectoras inmunitarias y/o activen el complemento mediante la unión de C1q a pesar de la capacidad de neutralización de Fc de SpA y la formación de un escudo de Ig fue un paso significativo sobre otros enfoques basados en Ab antiSA. Las versiones preferidas de dichos Abs son capaces de desplazar a las Igs ya unidas a SpA por sus regiones Fc.

Como ejemplos de lo anterior, se describen en el presente documento anticuerpos aislados o purificados (en particular, anticuerpos IgG3 humanos que tienen regiones Fc con baja o nula afinidad por SpA, como uno con el alotipo que tiene arginina en la posición del aminoácido 435 Stapleton et al., Nature Communications 2, número de artículo: 599, 2011) que tienen regiones Fab que pueden unirse específicamente a un epítopo diana de SpA en una bacteria SA, mientras que sus regiones Fc siguen siendo capaces de interactuar con un FcR (por ejemplo, recombinante soluble o nativo en células efectoras inmunitarias), a pesar de la propiedad de unión a Fc de SpA y del impedimento estérico del epítopo diana por parte de las Igs unidas a SpA a través de su región Fc. También se divulgan en el presente documento composiciones farmacéuticas que contienen al menos uno de estos anticuerpos y un portador farmacéuticamente aceptable (por ejemplo, un portador no natural farmacéuticamente aceptable). Además, se divulgan procedimientos para tratar a un sujeto que tiene una infección por SA o para reducir el riesgo de desarrollar una infección por SA en un sujeto, que incluyen la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de cualquiera de las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento o de cualquiera de los anticuerpos o fragmentos de unión a antígeno descritos en el presente documento a un sujeto que los necesita.

Como se utiliza en el presente documento, la palabra "un" o "una" delante de un sustantivo representa uno o varios de los sustantivos particulares. Por ejemplo, la frase "un anticuerpo" representa "uno o más anticuerpos"

Por el término "anticuerpo" o "Ab" se quiere significar cualquier inmunoglobulina (por ejemplo, anticuerpos humanos, de peces cartilaginosos o de camélidos) o conjugado de la misma, que se une específicamente a un antígeno (por ejemplo, un antígeno SpA como SEQ ID NO: 1 o un fragmento antigénico de SEQ ID NO: 1). Los expertos en la materia conocen una gran variedad de Abs. Los ejemplos no limitantes de Abs incluyen: Abs monoclonales (por ejemplo, incluyendo Abs de longitud completa), Abs policlonales, Abs multiespecíficos (por ejemplo, Abs biespecíficos), Abs de dominio variable dual, Abs de cadena única (por ejemplo, Abs de dominio único, Abs de camélidos y Abs de peces cartilaginosos), Abs quiméricos (por ejemplo, humanizados, como IgG3 humanizada) y Abs humanos (por ejemplo, Abs IgG3 humana). El término anticuerpo también incluye conjugados de Ab (por ejemplo, un Ab conjugado con una proteína estabilizadora, una etiqueta o un agente terapéutico (por ejemplo, cualquiera de los agentes terapéuticos descritos en el presente documento o conocidos en la técnica)).

Por el término "fragmento de unión a antígeno" se quiere significar cualquier porción de un Ab de longitud completa que contenga al menos un dominio variable (por ejemplo, un dominio variable de una inmunoglobulina de mamífero (por ejemplo, ser humano, ratón, rata, conejo o cabra) de cadena pesada o ligera), un dominio variable de unión a antígeno de camélido (VHH) o un dominio de nuevo receptor de antígeno de inmunoglobulina de pez cartilaginoso (Ig-NAR)) que sea capaz de unirse específicamente a un antígeno. Por ejemplo, un fragmento de unión a antígeno descrito en el presente documento puede incluir al menos parte de una región Fc de Ab que sea suficiente para mediar en la citotoxicidad mediada por células dependientes de anticuerpos (ADCC) y/o en la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) en un mamífero (por ejemplo, un ser humano) y/o se conjuga con un agente terapéutico (por ejemplo, cualquiera de los agentes terapéuticos descritos en el presente documento o conocidos en la técnica). Ejemplos no limitantes de fragmentos de Ab incluyen Fab, Fab', F(ab')2, fragmentos Fv, diabodies, anticuerpos lineales y Ab multiespecíficos formados a partir de fragmentos de Ab. Otros fragmentos de Ab que contienen al menos un dominio VHH de camélidos o al menos un dominio Ig-NAR de peces cartilaginosos incluyen minicuerpos, microanticuerpos, subnanoanticuerpos y nanoanticuerpos, y cualquiera de las otras formas de Abs descritas en La publicación de solicitud de patente US n° 2010/0092470. Un fragmento de unión a antígeno puede ser, por ejemplo, un fragmento de unión a antígeno de IgG1, IgG2, IgG3 IgG4, IgD, IgA, IgE o IgM humana o humanizada.

Por el término "anticuerpo humano" se quiere significar un Ab que está codificado por un ácido nucleico (por ejemplo, locus de cadena pesada o ligera de inmunoglobulina humana reordenada) presente en el genoma de un humano. En algunas realizaciones, un Ab humano se produce en un cultivo celular de mamífero (por ejemplo, ser humano). En algunas realizaciones, un Ab humano se produce en una célula no humana (por ejemplo, una línea celular de ovario de hámster chino o una línea celular de ratón o hámster). En algunas realizaciones, un Ab humano se produce en una célula bacteriana o de levadura. Un Ab humano puede incluir un agente terapéutico conjugado (por ejemplo, cualquiera de los agentes terapéuticos descritos en el presente documento o conocidos en la técnica). Un Ab humano puede ser IgG1, IgG2, IgG4, IgD, IgA, IgE o IgM, y es preferentemente IgG3 humano. Por el término "verdadero anticuerpo humano" se quiere significar un Ab con regiones variables de cadena pesada y ligera que están presentes de forma natural en el suero de un ser humano.

Por el término "anticuerpo humanizado" se quiere significar un Ab que contiene principalmente secuencias de un Ab humano pero que también incluye secuencias mínimas derivadas de una Ig no humana (por ejemplo, de ratón, rata, conejo o cabra). En ejemplos no limitantes, los Ab humanizados son Ab humanos (Ab receptores) en los que los residuos de la región hipervariable del Ab receptor se sustituyen por residuos de la región hipervariable de un Ab de una especie no humana (Ab donante), por ejemplo, Ab de ratón, rata, conejo o cabra que tenga la especificidad, afinidad y capacidad deseadas. En algunas realizaciones, los residuos del marco Fv de la Ig humana se sustituyen por los correspondientes residuos no humanos. En algunas realizaciones, los Abs humanizados pueden contener residuos que no se encuentran en el Ab receptor o en el Ab donante. Estas modificaciones pueden realizarse para perfeccionar el rendimiento de Ab.

En algunos aspectos, el Ab humanizado contendrá sustancialmente la totalidad de al menos uno, y típicamente dos, dominios variables, en los que todos o sustancialmente todos los bucles hipervariables (regiones determinantes complementarias) corresponden a los de una inmunoglobulina no humana y todas o sustancialmente todas las regiones marco son las de una secuencia de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado también puede contener al menos una porción de una región constante de Ig (región Fc), típicamente, la de una Ig humana (por ejemplo, IgG3 humana). Los Abs humanizados pueden producirse mediante procedimientos de biología molecular bien conocidos en la técnica. En el presente documento se describen ejemplos no limitantes de procedimientos para generar Abs humanizados. Un anticuerpo humanizado puede incluir un agente terapéutico conjugado (por ejemplo, cualquiera de los agentes terapéuticos descritos en el presente documento o conocidos en la técnica).

Por el término "anticuerpo de cadena única" se quiere significar un polipéptido único que contiene al menos un dominio de unión variable (por ejemplo, un dominio variable de una Ig de cadena pesada o ligera de mamífero, un dominio de unión a antígeno variable (VHH) de camélido o un dominio de receptor de antígeno nuevo (Ig-NAR) de pez cartilaginoso (por ejemplo, tiburón) que es capaz de unirse específicamente a un antígeno. En el presente documento se describen ejemplos no limitantes de Abs de cadena única, y son conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, los anticuerpos descritos en Publicación de Patente US. n° 2010/0092470). Un anticuerpo de dominio único puede incluir un agente terapéutico conjugado (por ejemplo, cualquiera de los agentes terapéuticos descritos en el presente documento o conocidos en la técnica).

Un Ab o un fragmento de unión a antígeno del mismo "se une específicamente" o " específicamente unido a" a un antígeno particular, por ejemplo, SpA (como un epítopo que comprende SEQ ID NO: 1 o un fragmento antigénico de SEQ ID NO: 1), cuando se une a ese antígeno, pero reconoce y se une en menor medida (por ejemplo, no reconoce ni se une) a otras moléculas de una muestra. En algunas realizaciones, un Ab o un fragmento de unión a antígeno del mismo se une selectivamente a un epítopo con una afinidad (KD) igual o inferior a 1x 10-10 M (por ejemplo, inferior a 1 x 10-11 M o inferior a 1 x 10-12 M) en solución salina tamponada con fosfato (por ejemplo, según se determina por resonancia de plasmón superficial). La capacidad de un Ab o de un fragmento de unión a antígeno para unirse específicamente a un epítopo proteico puede determinarse utilizando cualquiera de los procedimientos conocidos en la técnica o los descritos en el presente documento.

Por el término "región determinante de la complementariedad" o "CDR" se quiere significar una región dentro de una Ig (Ig de cadena pesada o ligera) que forma parte de un sitio de unión al antígeno (paratopo) en un Ab o fragmento de unión al antígeno del mismo. Como se sabe en la técnica, una cadena pesada Ig contiene normalmente tres CDR: CDR1, CDR2 y CDR3, respectivamente, y una Ig de cadena ligera contiene normalmente tres CDR: CDR1, CDR2 y CDR3. En cualquier Ab o fragmento de unión a antígeno del mismo, las tres CDR de la Ig de cadena pesada y las tres CDR de la Ig de cadena ligera forman juntas un sitio de unión a antígeno en el Ab o fragmento de unión a antígeno del mismo. La base de datos Kabat es un sistema utilizado en la técnica para numerar las secuencias CDR presentes en una Ig de cadena ligera o una Ig de cadena pesada.

A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos utilizados en el presente documento tienen el mismo significado que comúnmente entiende una persona con conocimientos ordinarios en la técnica a la que pertenece la presente invención. En el presente documento se describen procedimientos y materiales para su uso en la presente invención; también pueden utilizarse otros procedimientos y materiales adecuados conocidos en la técnica. Los materiales, procedimientos y ejemplos son sólo ilustrativos y no pretenden ser limitativos. En caso de conflicto, prevalecerá la presente memoria, incluidas las definiciones.

Breve descripción de los dibujos

La figura 1 es un diagrama esquemático de la SpA que muestra los diferentes dominios y la ubicación de cada uno de los cinco péptidos antigénicos. La secuencia del péptido antigénico n° 5 se muestra (SEQ ID NO: 1).

La figura 2 es un conjunto de dos gráficos que muestran un histograma de la fluorescencia del aislado clínico de SA 00X (arriba) y de la cepa de SA ATCC #25923 (abajo) incubados con el Ab PA8-G3 biotinilado (línea clara) o el Ab anti-interleucina-1alfa biotinilado de control (MABpl) (línea oscura), y luego incubados con estreptavidina-APC.

La figura 3 es un conjunto de dos gráficos que muestran un histograma de la fluorescencia del aislado clínico 00X (arriba) y de la cepa ATCC #25923 (abajo) incubados con Ab PA8-G3 sin marcar (línea clara) o Ab MABpl sin marcar (línea oscura), seguidos de receptor Fcy recombinante biotinilado, y luego incubados con estreptavidina-APC.

La figura 4 es un gráfico de la intensidad fluorescente media de las células HL60 diferenciadas (utilizando la clasificación celular por fluorescencia) tras la coincubación con PA8-G3 Ab opsonizado con la cepa ATCC #25923 marcada con pH-rodo-verde o el aislado clínico 00X. Como control negativo se utilizaron muestras similares incubadas con un Ab MABpl de control, en lugar del Ab PA8-G3.

La figura 5 es un conjunto de dos gráficos que muestran la intensidad de fluorescencia del aislado clínico 00X (arriba) o del ATCC #25923 (abajo) preincubados con sueros humanos durante 15 minutos antes de la adición del Ab PA8-G3 biotinilado o del control negativo MABP1 Ab, y luego incubados con estreptavidina APC.

La figura 6 es un gráfico que muestra la intensidad fluorescente media de las células HL-60 diferenciadas o indiferenciadas tras la coincubación con SA marcado con pH-rodo-verde y uno de los siguientes Abs no marcados: PA7.2-G3, PA4-G3, PA8-G3, PA15-G3, PA21-G3, PA27-G3, PA32-G3, PA37-G3, o MABpl. Las muestras de MABpl Ab se utilizaron como control negativo.

La figura 7A-D son gráficos que muestran que la administración de mAb PA8 aumenta la supervivencia de los sujetos murinos infectados con S. aureus.

Las figuras 8 A-C son gráficos que muestran la sinergia entre PA8-G3 y vancomicina.

Descripción detallada

Se describen en el presente documento procedimientos y composiciones para tratar a un sujeto que tiene una infección por SA o para reducir el riesgo de desarrollar una infección por SA en un sujeto.

Anticuerpos y fragmentos de unión a antígeno de los mismos

En el presente documento se describen Abs purificados o aislados (por ejemplo, con una pureza de al menos el 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% en peso) (por ejemplo, preferentemente IgG3 humana, verdadera o humanizada) que se unen a SpA y son capaces de mediar en la opsinización de las bacterias SA a pesar de la expresión de SpA neutralizadora de anticuerpos (Ab). Preferentemente, dichos Abs se unen al péptido de la SEQ ID n O:1 con una afinidad de unión suficiente para desplazar a las inmunoglobulinas IgG humanas (por ejemplo, una o más de las IgG1, IgG2 e IgG4) unidas a SpA a través de su región Fc. Los Abs preferentes pueden unirse a SpA a través de sus paratopos de la región Fab con una KD de menos de 1 x 10-10 M (por ejemplo, menos de 1 x 10-11 M, menos de 1 x 10-12 M, menos de 0,5 x 10-12 M, o menos de 1 x 10-13 M) en condiciones fisiológicas (por ejemplo, solución salina tamponada con fosfato) (por ejemplo, según se determina utilizando resonancia de plasmón superficial o interferometría de biocapa utilizando SpA recombinante). Por ejemplo, se prefieren los Abs descritos en el presente documento que se unen a SpA a través de sus regiones Fab con una KD de entre 1 x 10-10 M y 0,5 x 10-12 M, entre 1 x 10-11 M y 0,5 x 10-12 M, entre 1 x 10-11 M y 0,2 x 10-12 M (por ejemplo, en condiciones fisiológicas, por ejemplo, solución salina con tampón de fosfato, por ejemplo, según las mediciones realizadas mediante resonancia de plasmón superficial utilizando SpA recombinante). Esos Abs o fragmentos de unión a antígeno descritos en el presente documento son preferiblemente capaces de desplazar a los Abs humanos (por ejemplo, uno o más de los IgG1, IgG2 e IgG4) unidos a SpA en la pared celular de una bacteria SA a través de sus regiones Fc. También se proporcionan en el presente documento mAbs purificados o aislados (por ejemplo, con una pureza de al menos el 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% en peso) (por ejemplo, preferentemente humanos verdaderos, humanos o IgG3 humanizados) que se unen específicamente a la proteína A de Staphylococcus aureus (SpA) con una KD de menos de 1 x 10-10 M a través de sus paratopos de la región Fab, en los que los mAbs son capaces de mediar en la opsinización de las bacterias de Staphylococcus aureus que expresan SpA en presencia de al menos 1 mg/ml (p. ej, al menos 1, 2, 3, 4, 5, 10, 25, 50 o 100 mg/ml, o la cantidad normalmente contenida en el suero humano) de inmunoglobulinas IgG que se unen a SpA a través de sus regiones Fc

Los Abs purificados o aislados proporcionados en el presente documento podrían unirse a un epítopo presente en el dominio extracelular (por ejemplo, presente en la región de repetición XR y en uno o más de los dominios de unión a IgG) de SpA. Ejemplos no limitantes de un antígeno que puede ser reconocido específicamente por cualquiera de los Abs (o fragmentos de unión a antígeno de los mismos) proporcionados en el presente documento incluyen: 6, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 aminoácidos contiguos de SEQ ID NO: 1 (por ejemplo, un fragmento que comienza en la posición de aminoácido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 o 14 de SEQ ID NO: 1); 6, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o 21 aminoácidos contiguos de SEQ ID NO: 82 (por ejemplo, un fragmento que comienza en la posición de aminoácido 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 de SEQ ID NO: 82); 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16 aminoácidos contiguos de SEQ ID NO: 83 (por ejemplo, un fragmento que comienza en la posición de aminoácido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 de SEQ ID NO: 83); 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o 21 aminoácidos contiguos de SEQ ID NO: 84 (por ejemplo, un fragmento que comienza en la posición de aminoácido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 de SEQ ID NO: 84); 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 aminoácidos contiguos de SEQ ID NO: 85 (por ejemplo, un fragmento que comienza en la posición de aminoácido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 o 14 de SEQ ID NO: 85); o 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, o 20 aminoácidos contiguos desde las posiciones de aminoácidos 1 a 20, 10 a 30, 20 a 40, 30 a 50, 40 a 60, 50 a 70, 60 a 80, 70 a 90, 80 a 100, 90 a 110, 100 a 120, 110 a 130, 120 a 140, 130 a 150, 140 a 160, 150 a 170, 160 a 180, 170 a 190, 180 a 200, 190 a 210, 200 a 220, 210 a 230, 220 a 240, 230 a 250, 240 a 260, 250 a 270, 260 a 280, 270 a 290, 280 a 300, 290 a 310, 300 a 320, 310 a 330, 320 a 340, 330 a 350, 340 a 360, 350 a 370, 360 a 380, 370 a 390, 380 a 400, 390 a 410, 400 a 420, 410 a 430, 420 a 440, o 430 o 450 de SEQ ID NO: 86. Los ejemplos de otros antígenos incluyen fragmentos similares de SpAs que tienen secuencias de aminoácidos que difieren de la SEQ ID NO:86.

Los procedimientos para determinar la capacidad de un Ab o un fragmento de unión a antígeno del mismo para unirse a una proteína diana (por ejemplo, SpA o una porción de la misma) pueden realizarse utilizando procedimientos conocidos en la técnica. Entre los ejemplos no limitantes de tales procedimientos se incluyen los ensayos de unión competitiva utilizando Abs que se sabe que se unen a la proteína diana (por ejemplo, SpA), ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas, BioCoRE®, columnas de afinidad, inmunoblotting o tecnología de array de proteínas. En algunas realizaciones, la actividad de unión del Ab o del fragmento de unión a antígeno del mismo se determina poniendo en contacto una bacteria SA con el Ab o el fragmento de unión a antígeno del mismo. En la sección de Ejemplos se describen procedimientos ejemplares para determinar la capacidad de un Ab o fragmento de unión a antígeno para desplazar a los Abs humanos (por ejemplo, uno o más de los IgG1, IgG2 e IgG4) unidos a SpA en la pared celular de una bacteria SA. Se conocen en la técnica otros procedimientos para determinar la capacidad de un Ab o fragmento de unión a antígeno para desplazar a los Abs humanos (por ejemplo, uno o más de los IgG1, IgG2 e IgG4) unidos a SpA en la pared celular de una bacteria SA.

Un Ab puede ser, por ejemplo, un mAb, un Ab multiespecífico (por ejemplo, un Ab biespecífico), un Ab quimérico (por ejemplo, un Ab humanizado, como un Ab IgG humanizado), un Ab humano o un fragmento de cualquiera de los anteriores. Por ejemplo, un Ab puede ser un Ab IgG3 monoclonal humano o humanizado. Un Ab también puede ser un Ab de una sola cadena (por ejemplo, un Ab de un solo dominio), como un Ab de una sola cadena de camélidos o peces cartilaginosos (por ejemplo, tiburón), o un Ab de una sola cadena que contenga al menos un dominio de unión a antígeno variable (VHH) de camélidos o al menos un dominio de receptor de antígeno nuevo (Ig-NAR) de peces cartilaginosos (por ejemplo, tiburón) (véase, por ejemplo, los Abs descritos en Publicación de Patente Us n° 2010/0092470). Un Ab puede ser una molécula entera de Ab o un multímero de Ab.

El término Ab también incluye conjugados de Ab (por ejemplo, un Ab conjugado con una proteína estabilizadora, una etiqueta o un agente terapéutico (por ejemplo, cualquiera de los agentes terapéuticos descritos en el presente documento o conocidos en la técnica)). Un Ab proporcionado en el presente documento puede, por ejemplo, incluir un dominio Fc o parte de un dominio Fc que sea suficiente para mediar la citotoxicidad mediada por células dependientes de Ab (ADCC) y/o la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) en un mamífero (por ejemplo, un humano), y/o se conjuga con un agente terapéutico (por ejemplo, cualquiera de los agentes terapéuticos descritos en el presente documento o conocidos en la técnica). Un Ab puede ser, por ejemplo, una IgG1, IgG2, IgG4, IgD, IgA, IgE o IgM humana o humanizada, y es preferiblemente una IgG3 humana o humanizada.

Un fragmento de unión a antígeno descrito en el presente documento puede, por ejemplo, incluir al menos parte de un dominio Fc que sea suficiente para mediar la citotoxicidad mediada por células dependientes de Ab (ADCC) y/o la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) en un mamífero (por ejemplo, un humano) y/o se conjuga con un agente terapéutico (por ejemplo, cualquiera de los agentes terapéuticos descritos en el presente documento o conocidos en la técnica). Ejemplos no limitantes de fragmentos de Ab incluyen Fab, Fab', F(ab')2, Fvs de cadena única (scFvs), fragmentos de Fv, fragmentos que contienen un dominio de cadena ligera variable o un dominio de cadena pesada variable, diabodies, Abs lineales y Abs multiespecíficos formados a partir de fragmentos de Ab. Otros fragmentos de Ab que contienen al menos un dominio v Hh de camélidos o al menos un dominio Ig-NAR de peces cartilaginosos incluyen minicuerpos, micro-Abs, subnano-Abs y nano-Abs, y cualquiera de las otras formas de Abs descritas en La publicación de solicitud de patente US n° 2010/0092470.

Los Abs o los fragmentos de unión a antígeno de los mismos pueden ser de cualquier tipo (por ejemplo, IgG humana o humanizada, IgE, IgM, IgD, IgA e IgY), clase (por ejemplo, IgGl humana o humanizada (por ejemplo, IgG1a o IgG1b), IgG2 (por ejemplo, IgG2a o IgG2b), IgG3 (por ejemplo, IgG3a o IgG3b), IgG4 (por ejemplo, IgG4a o IgG4b), IgA1, e IgA2 o subclase, aunque aquellas con una afinidad de unión Fc para SpA es baja (por ejemplo, que tengan una KD superior a 1 x 10'7 M, 1 x 10'6 M, 1 x 10'5 M, 1 x 10'4 M, o 1 x 10-3 M; o que tengan una KD superior a la de SpA por la región Fc de una IgG1 humana) en condiciones fisiológicas (por ejemplo, solución salina tamponada con fosfato) (por ejemplo, según se determine mediante resonancia de plasmón superficial utilizando SpA recombinante) son preferibles. Un fragmento de unión a antígeno puede ser, por ejemplo, un fragmento de unión a antígeno de IgG1 humana o humanizada (por ejemplo, IgG1a o IgG1b), IgG2 (por ejemplo, IgG2a o IgG2b), IgG4 (por ejemplo, IgG4a o IgG4b), IgD, IgA (por ejemplo, IgA1 o IgA2), IgE o IgM, y es preferentemente un fragmento de IgG3 humana o humanizada (por ejemplo, IgG3a o IgG3b). Pueden introducirse mutaciones de aminoácidos en la región constante de estas subclases de IgG. Las mutaciones de aminoácidos que pueden introducirse pueden ser, por ejemplo, las que mejoran la unión a los receptores Fc (como se describe en, por ejemplo, Proc. Natl. Acad. Sci. US 103(11):4005-4010, 2006 MAbs 1(6): 572-579, 2009; US 2010/0196362; US 2013/0108623; US 2014/0171623; US 2014/0093496 y US 2014/0093959), o mejorar o disminuir la unión a FcRn (como se describe en, por ejemplo, J. Biol. Chem. 276(9):6591-6604, 2001 Int Immunol. 18(12):1759-1769, 2006 y J. Biol. Chem. 281(33):23514-23524, 2006).

Dos tipos de cadenas H se asocian heterológicamente para producir un Ab biespecífico. La tecnología de los pomos en los agujeros (como se describe, por ejemplo, en J. Immunol. Methods 248(1-2):7-15, 2001y J. Biol. Chem. 285(27): 20850-20859, 2010), la tecnología de repulsión electrostática (como se describe, por ejemplo, en el documento WO 06/106905), la tecnología SEEDbody (descrita, por ejemplo, en Protein Eng. Des. Sel. 23(4):195-202, 2010), y que pueden utilizarse para la asociación heteróloga de dos tipos de cadenas H a través de un dominio CH3. Cualquiera de los anticuerpos descritos en el presente documento puede ser aquellos con una cadena de azúcar modificada o deficiente. Entre los ejemplos de anticuerpos que tienen cadenas de azúcar modificadas se encuentran los anticuerpos modificados por glicosilación (como se describe en, por ejemplo,el documento WO 99/54342), anticuerpos con cadenas de azúcar defucosiladas (como se describe en, por ejemplo en los documentos WO 00/61739, WO 02/31140, WO 06/067847y WO 06/067913), y anticuerpos que tienen una cadena de azúcar con GlcNAc bisecante (como se describe, por ejemplo, en el documento WO 02/79255). Ejemplos conocidos de procedimientos para producir anticuerpos IgG deficientes en la cadena de azúcar incluyen el procedimiento de introducir una mutación a la asparagina en la posición de numeración 297 de la UE en la cadena pesada (J. Clin. Pharmacol. 50(5): 494-506, 2010), y el procedimiento de producción de IgG utilizando E. coli (J. Immunol. Methods 263(1-2):133-147, 2002y J. Biol. Chem. 285(27):20850-20859, 2010). Además, la heterogeneidad que acompaña a la supresión de la lisina C-terminal en la IgG, y la heterogeneidad que acompaña a la alteración de los enlaces de disulfuro en la región de bisagra de la IgG2 puede disminuirse introduciendo supresiones/sustituciones de aminoácidos (como se describe en, por ejemplo, el documento WO 09/041613). Cualquiera de los Abs o fragmentos de unión a antígeno descritos en el presente documento incluye al menos uno (por ejemplo, uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis) aminoácidos (por ejemplo, un aminoácido añadido, insertado o sustituido, por ejemplo, no dentro de un CDR) que no están presentes en un Ab humano correspondiente. Cualquiera de los Abs o fragmentos de unión a antígeno descritos en el presente documento también puede tener al menos un aminoácido suprimido (por ejemplo, en comparación con un Ab humano correspondiente), por ejemplo, una supresión del extremo N o C de una cadena ligera o pesada, o una supresión de un aminoácido de un dominio constante (por ejemplo, el dominio Fc).

Se puede usar SpA, o fragmento del mismo (por ejemplo, al menos 7, 8, 9 o 10 aminoácidos continuos de SEQ ID NO: 1 (por ejemplo, a partir de la posición del aminoácido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 o 13 de SEQ ID NO: 1), o toda la SEQ ID NO: 1) como inmunógeno para generar Abs mediante técnicas estándar de preparación de Ab policlonales y monoclonales. Los fragmentos de Ab pueden generarse a partir de Abs monoclonales utilizando procedimientos bien conocidos en la técnica.

Un inmunógeno se utiliza típicamente para preparar Abs inmunizando a un sujeto adecuado (por ejemplo, conejo, cabra, ratón u otro mamífero). Una preparación inmunogénica adecuada puede contener, por ejemplo, un polipéptido expresado recombinantemente o sintetizado químicamente. El preparado puede incluir además un adyuvante, como el adyuvante completo o incompleto de Freund, o un agente inmunoestimulante similar.

Como alternativa a la preparación de hibridomas monoclonales secretores de Ab, se puede identificar y aislar un Ab monoclonal dirigido contra un polipéptido mediante el cribado de una biblioteca combinatoria de inmunoglobulinas recombinantes (por ejemplo, una biblioteca de visualización de fagos de Ab) con el polipéptido de interés. Los equipos para generar y cribado de bibliotecas de visualización de fagos están disponibles en el mercado (por ejemplo, el sistema de anticuerpos de fagos recombinantes de Pharmacia, número de catálogo 27-9400-01; y el equipo de visualización de fagos SurfZAP* de Stratagene, número de catálogo 240612). Además, se pueden encontrar ejemplos de procedimientos y reactivos especialmente aptos para su uso en la generación y el cribado de una biblioteca de visualización Ab en, por ejemplo, Pat. US n° 5.223.409, los documentos w O 92/18619; WO 91/17271; WO 92/2079; WO 92/15679; WO 93/01288; WO 92/01047; WO 92/09690; WO 90/02809, Fuchs et al., Bio/Technology 9:1370-1372, 1991 Hay et al., Hum. Antibod. Hibridomas 3:81-85, 1992; Huse et al., Science 246:1275-1281, 1989; Griffiths et al., EMBO J. 12:725-734, 1993.

Procedimientos adicionales para aislar y secuenciar un Ab humano (por ejemplo, IgG3 humana) que se une específicamente a un epítopo SpA (por ejemplo, un epítopo localizado o definido dentro del polipéptido de SEQ ID NO: 1) se describen en la sección de Ejemplos. Se describen otros procedimientos generales para hacer Abs y fragmentos de unión a antígeno en Publicación de solicitud de patente US n° 2011/0059085.

En algunas realizaciones, los Abs o fragmentos de unión a antígeno proporcionados en el presente documento son Abs humanos o humanizados (por ejemplo, Abs IgG3 humanos o humanizados). En algunas realizaciones, un Ab humanizado es un Ab humano que ha sido diseñado para contener al menos una región determinante complementaria (CDR) presente en un Ab no humano (por ejemplo, un Ab de rata, ratón, conejo o cabra). En algunas realizaciones, un Ab humanizado o un fragmento del mismo puede contener las tres CDR de una cadena ligera de un Ab humano o no humano que se une específicamente a un epítopo SpA (por ejemplo, un epítopo localizado o definido dentro del polipéptido de SEQ ID NO: 1). En algunas realizaciones, el Ab humanizado o fragmento del mismo puede contener las tres CDR de una cadena pesada de un Ab humano o no humano que se une específicamente a un epítopo de SpA (por ejemplo, un epítopo localizado o definido dentro del polipéptido de SEQ ID NO: 1). En algunas realizaciones, el Ab humanizado o su fragmento puede contener las tres CDR de una cadena pesada y las tres CDR de una cadena ligera de un Ab monoclonal humano o no humano que se une específicamente a un epítopo de SpA (por ejemplo, un epítopo localizado o definido dentro del polipéptido de SEQ ID NO: 1).

Se divulgan también formas multiméricas de Abs. Por ejemplo, los Abs de la invención pueden adoptar la forma de dímeros de Ab, trímeros o multímeros de orden superior de moléculas de inmunoglobulina monoméricas. Los dímeros de moléculas enteras de inmunoglobulina o de fragmentos de F(ab')2 son tetravalentes, mientras que los dímeros de fragmentos Fab o de moléculas scFv son bivalentes. Los monómeros individuales dentro de un multímero Ab pueden ser idénticos o diferentes, es decir, pueden ser multímeros Ab heteroméricos u homoméricos. Por ejemplo, los Abs individuales dentro de un multímero pueden tener las mismas o diferentes especificidades de unión.

La multimerización de los Abs puede lograrse mediante la agregación natural de los Abs o mediante técnicas de enlace químico o recombinante conocidas en la técnica. Por ejemplo, un cierto porcentaje de preparaciones de Ab purificadas (por ejemplo, moléculas de IgG1 purificadas) forman espontáneamente agregados de proteínas que contienen homodímeros de Ab y otros multímeros de Ab de orden superior. Alternativamente, los homodímeros de Ab pueden formarse mediante técnicas de enlace químico conocidas en la técnica. Por ejemplo, los agentes reticulantes heterobifuncionales, que incluyen, pero no se limitan a, SMCC (succinimidil 4-(maleimidometil)ciclohexano-1-carboxilato) y SATA (N-succinimidil S-acetiltio-acetato) (disponibles, por ejemplo, en Pierce Biotechnology, Inc. (Rockford, IL)) pueden utilizarse para formar multímeros Ab. Un protocolo ejemplar para la formación de homodímeros de Ab se da en Ghetie et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. US 94: 7509-7514, 1997). Los homodímeros Ab pueden convertirse en homodímeros Fab'2 mediante la digestión con pepsina. Otra forma de formar homodímeros de Ab es mediante el uso del péptido T15 autofílico descrito en Zhao et al. (J. Immunol. 25:396-404, 2002).

Alternativamente, se puede hacer que los Abs se multimericen mediante técnicas de ADN recombinante. Las IgM y las IgA forman naturalmente multímeros de Ab mediante la interacción con el polipéptido de la cadena J madura. Las moléculas no IgA o no IgM, como las moléculas IgG, pueden ser diseñadas para contener el dominio de interacción de la cadena J de IgA o IgM, confiriendo así la capacidad de formar multímeros de orden superior en las moléculas no IgA o no IgM (véase, por ejemplo, Chintalacharuvu et al., Clin. Inmunol. 101:21-31,2001 y Frigerio et al., Plant Physiol.

123:1483-1494, 2000). Los dímeros de IgA se secretan de forma natural en el lumen de los órganos revestidos de mucosa. Esta secreción está mediada por la interacción de la cadena J con el receptor polimérico de la IgA (pIgR) en las células epiteliales. Si no se desea la secreción de una forma IgA de un Ab (o de un Ab diseñado para contener un dominio de interacción con la cadena J), puede reducirse en gran medida expresando la molécula de Ab en asociación con una cadena J mutante que no interactúa bien con el pIgR (Johansen et al., J. Immunol., 167:5185-192, 2001). Los dímeros de ScFv también pueden formarse mediante técnicas recombinantes conocidas en la técnica; un ejemplo de la construcción de dímeros de scFv se da en Goel et al. (Cancer Res. 60:6964-71,2000). Los multímeros de Ab pueden purificarse utilizando cualquier procedimiento adecuado conocido en la técnica, incluyendo, pero sin limitación, la cromatografía de exclusión por tamaño.

Cualquiera de los Abs o fragmentos de unión a antígeno descritos en el presente documento puede conjugarse con una molécula estabilizadora (por ejemplo, una molécula que aumenta la vida media del Ab o fragmento de unión a antígeno del mismo en un felino o en solución). Ejemplos no limitantes de moléculas estabilizadoras incluyen: un polímero (por ejemplo, un polietilenglicol) o una proteína (por ejemplo, albúmina sérica, como la albúmina sérica felina). Cualquiera de los Abs o fragmentos de unión a antígeno descritos en el presente documento puede conjugarse con un rótulo (por ejemplo, un fluoróforo, un radioisótopo o una molécula luminiscente) o un agente terapéutico (por ejemplo, un agente citotóxico o un radioisótopo). Se describen procedimientos ejemplares para fijar una etiqueta o un agente terapéutico a un Ab en la solicitud de patente US n° 2013/0224228. Ejemplos no limitantes de agentes citotóxicos incluyen agentes conocidos por inducir la muerte celular del microbio (por ejemplo, una bacteria grampositiva, como el Staphylococcus aureus). Entre los ejemplos no limitantes de agentes citotóxicos que pueden conjugarse con cualquiera de los Abs o fragmentos de unión a antígenos proporcionados en el presente documento se incluyen: linezolid, eritromicina, mupirocina, ertapenem, doripenem, imipenem, cilastatina, meropenem, cefadroxil, cefazolina, cefalotina, cefalexina, ceflacor, cefamandole, cefoxitin, cefprozil, cefuroxime, cefixime, cefdinir, cefditoren, cefoperazone, cefotaxime, cefpodoxime, ceftazidime, ceftibuten, ceftizoxime, ceftriaxone, ceftaroline fosamil, ceftobiprole, teicoplanin, vancomycin, televancin, clindamycin, lincomycin, daptomycin, amoxicillin, ampicilina, azlocilina, carbenicilina, cloxacilina, dicloxacilina, flucloxacilina, mezlocilina, meticilina, nafcilina, oxacilina, penicilina G, penicilina V, piperacilina, penicilina G, temocilina, ticarcilina, bacitracina, colistina, polimixina B, ciprofloxacina, enoxacina, gatifloxacina, gemifloxacina, levofloxacina, lomefloxacina, moxifloxacina, ácido nalidíxico, norfloxacina, ofloxacina, trovafloxacina, grepafloxacina, esparfloxacina, temafloxacina, mafenida, sulfacetamida, sulfadiazina, sulfadimetoxina de plata, sufametozol, sulfametoxazol, sulfanilamida, sulfasalazina, sulfisoxazol, trimetoprimasulfametoxazol, sulfonamidocrisoidina, demeclociclina, doxiciclina, minociclina, oxitetraciclina y tetraciclina.

Por ejemplo, un Ab (por ejemplo, un IgG3 monoclonal humano o humanizado) o un fragmento de unión a antígeno del mismo (por ejemplo, un fragmento de un IgG3 monoclonal humano o humanizado) proporcionado en el presente documento que se une específicamente a SpA puede incluir:

(i) una cadena pesada que comprende una CDR1, una CDR2 y una CDR3 de las SEQ ID NO: 2, 3 y 4, respectivamente, y/o una cadena ligera que comprende una CDR1, una CDR2 y una CDR3 de las SEQ ID NO: 7, 8 y 9, respectivamente;

(ii) una cadena pesada que comprende una CDR1, una CDR2 y una CDR3 de las SEQ ID NO: 12, 13 y 14, respectivamente, y/o una cadena ligera que comprende una CDR1, una CDR2 y una CDR3 de las SEQ ID NO: 17, 18 y 19, respectivamente;

(iii) una cadena pesada que comprende una CDR1, una CDR2 y una CDR3 de las SEQ ID NO: 22, 23 y 24, respectivamente, y/o una cadena ligera que comprende una CDR1, una CDR2 y una CDR3 de las SEQ ID NO: 27, 28 y 29, respectivamente;

(iv) una cadena pesada que comprende una CDR1, una CDR2 y una CDR3 de las SEQ ID NO: 32, 33 y 34, respectivamente, y/o una cadena ligera que comprende una CDR1, una CDR2 y una CDR3 de las SEQ ID NO: 37, 38 y 39, respectivamente;

(v) una cadena pesada que comprende una CDR1, una CDR2 y una CDR3 de las SEQ ID NO: 42, 43 y 44, respectivamente, y/o una cadena ligera que comprende una CDR1, una CDR2 y una CDR3 de las SEQ ID NO: 47, 48 y 49, respectivamente;

(vi) una cadena pesada que comprende una CDR1, una CDR2 y una CDR3 de las SEQ ID NO: 52, 53 y 54, respectivamente, y/o una cadena ligera que comprende una CDR1, una CDR2 y una CDR3 de las SEQ ID NO: 57, 58 y 59, respectivamente;

(vii) una cadena pesada que comprende una CDR1, una CDR2 y una CDR3 de las SEQ ID NO: 62, 63 y 64, respectivamente, y/o una cadena ligera que comprende una CDR1, una CDR2 y una CDR3 de las SEQ ID NO: 67, 68 y 69, respectivamente; o

(viii) una cadena pesada que comprende una CDR1, una CDR2 y una CDR3 de las SEQ ID NO: 72, 73 y 74, respectivamente, y/o una cadena ligera que comprende una CDR1, una CDR2 y una CDR3 de las SEQ ID NO: 77, 78 y 79, respectivamente.

En algunos ejemplos, cualquiera de los Abs proporcionados en el presente documento tiene: una cadena pesada de Ab que incluye SEQ ID NO: 6 y/o una cadena ligera que incluye el SEQ ID NO: 11; una cadena pesada de Ab que incluye el SEQ ID NO: 16 y/o una cadena ligera que incluye el SEQ ID NO: 21; una cadena pesada de Ab que incluye el SEQ ID NO: 26 y/o una cadena ligera que incluye el SEQ ID NO: 31; una cadena pesada de Ab que incluye el SEQ ID NO: 36 y/o una cadena ligera que incluye el SEQ ID NO: 41; una cadena pesada de Ab que incluye el s Eq ID NO: 46 y/o una cadena ligera que incluye el s Eq ID NO: 51; una cadena pesada de Ab que incluye el SEQ ID NO: 56 y/o una cadena ligera que incluye el SEQ ID NO: 61; una cadena pesada de Ab que incluye el SEQ ID NO: 66 y/o una cadena ligera que incluye el SEQ ID NO: 71; o una cadena pesada de Ab que incluya el SEQ ID NO: 76 y/o una cadena ligera que incluye el SEQ ID NO: 81.

En ejemplos adicionales, cualquiera de los Abs (por ejemplo, una IgG3 humana o humanizada) o fragmentos de unión a antígeno (por ejemplo, un fragmento de unión a antígeno de una IgG3 humana o humanizada) proporcionados en el presente documento puede unirse a SpA con una KD de menos de 1 x 10-10 M (por ejemplo, menos de 1 x 10-11 M o menos de 1 x 10-12 M) y/o ser capaz de desplazar Abs humanos (por ejemplo, una o más de las IgG1, IgG2 e IgG4) unidas a SpA, donde el antígeno o el fragmento de unión a antígeno tiene un conjunto de seis CDR que no tiene más de una, dos, tres, cuatro, cinco o seis sustituciones totales de aminoácidos (por ejemplo, sustituciones conservadoras de aminoácidos) en el conjunto (el conjunto completo) de seis CDR seleccionadas del grupo que consiste en:

(i) SEQ ID NOs: 2, 3, 4, 7, 8 y 9;

(ii) SEQ ID NOs: 12, 13, 14, 17, 18 y 19;

(iii) SEQ ID NOs: 22, 23, 24, 27, 28 y 29;

(iv) SEQ ID NOs: 32, 33, 34, 37, 38 y 39;

(v) SEQ ID NOs: 42, 43, 44, 47, 48 y 49;

(vi) SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 57, 58 y 59;

(vii) SEQ ID NOs: 62, 63, 64, 67, 68 y 69; o

(viii) SEQ ID NOs: 72, 73, 74, 77, 78 y 79.

Por ejemplo, un Ab (por ejemplo, una IgG3 humana o humanizada) o un fragmento de unión a antígeno (por ejemplo, un fragmento de unión a antígeno de una IgG3 humana o humanizada) divulgado en el presente documento puede incluir un conjunto de seis CDR que no tiene más de una, dos, tres o cuatro sustituciones totales de aminoácidos en el conjunto (el conjunto completo) de seis CDR de SEQ ID NOs: 2, 3, 4, 7, 8 y 9. Por ejemplo, un Ab (por ejemplo, una IgG3 humana o humanizada) o un fragmento de unión a antígeno (por ejemplo, un fragmento de unión a antígeno de una IgG3 humana o humanizada) divulgado en el presente documento puede comprender o consistir en:

(i) un conjunto de seis CDR de SEQ ID NOs: 2, 3, 4, 7, 8 y 9;

(ii) un conjunto de seis CDR de SEQ ID NOs: 12, 13, 14, 17, 18 y 19;

(iii) un conjunto de seis CDR de SEQ ID NOs: 22, 23, 24, 27, 28 y 29;

(iv) un conjunto de seis CDR de SEQ ID NOs: 32, 33, 34, 37, 38 y 39;

(v) un conjunto de seis CDR de SEQ ID NOs: 42, 43, 44, 47, 48 y 49;

(vi) un conjunto de seis CDR de SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 57, 58 y 59;

(vii) un conjunto de seis CDR de SEQ ID NOs: 62, 63, 64, 67, 68 y 69; o

(viii) un conjunto de seis CDR de SEQ ID NOs: 72, 73, 74, 77, 78 y 79.

En ejemplos adicionales, un Ab (por ejemplo, una IgG3 monoclonal humana o humanizada) o un fragmento de unión a antígeno (por ejemplo, un fragmento de unión a antígeno de una IgG3 humana o humanizada) proporcionado en el presente documento que se une específicamente a SpA incluye un dominio variable seleccionado del grupo de: (i) un dominio variable que comprende o consiste en SEQ ID NO: 5; ii) un dominio variable que comprenda o consista en SEQ ID NO: 10; iii) un dominio variable que comprenda o consista en SEQ ID NO: 15; iv) un dominio variable que comprenda o consista en SEQ ID NO: 20; v) un dominio variable que comprenda o esté formado por SEQ ID NO: 25; vi) un dominio variable que comprenda o esté formado por SEQ ID NO: 30; vii) un dominio variable que comprenda o esté formado por SEQ ID NO: 35; viii) un dominio variable que comprenda o esté formado por SEQ ID NO: 40; ix) un dominio variable que comprenda o esté formado por SEQ ID NO: 45; x) un dominio variable que comprenda o esté formado por SEQ ID NO: 50; xi) un dominio variable que comprenda o esté formado por SEQ ID NO: 55; xii) un dominio variable que comprenda o esté formado por SEQ ID NO: 60; (xiii) un dominio variable que comprenda o esté formado por SEQ ID NO: 65; xiv) un dominio variable que comprenda o esté formado por s Eq ID NO: 70; xv) un dominio variable que comprenda o esté formado por SEQ ID NO: 75; o (xvi) un dominio variable que comprenda o esté formado por SEQ ID NO: 80. Por ejemplo, un Ab (por ejemplo, una IgG3 monoclonal humana o humanizada) o un fragmento de unión a antígeno (por ejemplo, un fragmento de unión a antígeno de una IgG3 humana o humanizada) puede incluir (i) un dominio variable que comprenda o consista en SEQ ID NO: 5 y/o un dominio variable que comprenda o consista en SEQ ID NO: 10; (ii) un dominio variable que comprende o consiste en SEQ ID NO:15 y/o un dominio variable que comprende o consiste en SEQ ID NO: 20; iii) un dominio variable que comprenda o consista en SEQ ID NO: 25 y/o un dominio variable que comprenda o consista en SEQ ID NO: 30; iv) un dominio variable que comprenda o consista en SEQ ID NO: 35 y/o un dominio variable que comprenda o consista en SEQ ID NO: 40; v) un dominio variable que comprenda o esté formado por SEQ ID NO: 45 y/o un dominio variable que comprenda o consista en SEQ ID NO: 50; vi) un dominio variable que comprenda o esté formado por SEQ ID NO: 55 y/o un dominio variable que comprenda o consista en SEQ ID NO: 60; vii) un dominio variable que comprenda o esté formado por SEQ ID NO: 65 y/o un dominio variable que comprenda o consista en SEQ ID NO: 70; o un dominio variable que comprenda o consista en SEQ ID NO: 75 y/o un dominio variable que comprenda o consista en SEQ ID NO: 80.

Algunas realizaciones de cualquiera de los Abs (por ejemplo, IgG3 monoclonal humana o humanizada) o fragmentos de unión a antígeno (por ejemplo, un fragmento de unión a antígeno de una IgG3 humana o humanizada) descritos en el presente documento tienen una o más (por ejemplo, una, dos, tres o cuatro) de las siguientes actividades: se unen específicamente a SpA en una cepa de MRSA; se unen específicamente a un epítopo definido por SEQ ID NO: 1; se unen a SpA con una Kd de menos de 1 x 10-10 M (por ejemplo, menos de 1 x 10-11 M o menos de 1 x 10-12); y desplazan a los Abs humanos unidos a SpA en la pared celular de una bacteria Staphylococcus aureus (por ejemplo, una bacteria MRSA).

Composiciones farmacéuticas

Se proporcionan en este apartado composiciones farmacéuticas que contienen al menos un portador farmacéuticamente aceptable (por ejemplo, un portador no natural farmacéuticamente aceptable) y al menos uno (por ejemplo, dos, tres o cuatro) de cualquiera de los Abs o fragmentos de unión a antígeno proporcionados en el presente docummento. Los ejemplos no limitantes de portadores farmacéuticamente aceptables incluyen agua esterilizada, solución salina fisiológica, estabilizadores, excipientes, antioxidantes (por ejemplo, ácido ascórbico), tampones (por ejemplo, fosfato, citrato, histidina y otros ácidos orgánicos), antisépticos, surfactantes (por ejemplo, PEG y Tween), agentes quelantes (por ejemplo, EDTA o EGTA) y aglutinantes. Otros ejemplos de portadores farmacéuticamente aceptables incluyen polipéptidos de bajo peso molecular, proteínas (por ejemplo, albúmina de suero y gelatina), aminoácidos (por ejemplo, glicina, glutamina, asparagina, ácido glutámico, ácido asparágico, metionina, arginina y lisina), azúcares y carbohidratos (por ejemplo, polisacáridos y monosacáridos) y alcoholes de azúcar (por ejemplo, manitol y sorbitol). Al preparar una solución acuosa inyectable, pueden utilizarse soluciones salinas fisiológicas e isotónicas con glucosa y otros adyuvantes como D-sorbitol, D-manosa, D-manitol y cloruro de sodio, y si es necesario, en combinación con solubilizantes adecuados, como alcohol (p. ej, etanol), polialcoholes (por ejemplo, propilenglicol y PEG) y tensioactivos no iónicos (por ejemplo, polisorbato 80, polisorbato 20, poloxámero 188 y HCO-50). Al mezclar la hialuronidasa en la formulación, se puede administrar un mayor volumen de líquido por vía subcutánea (véase, por ejemplo, Expert. Opin. Drug. Deliv. 4(4): 427-440, 2007).

Los Abs y los fragmentos de unión a antígenos proporcionados en el presente documento pueden, por ejemplo, encapsularse en microcápsulas (por ejemplo, las realizadas de hidroximetilcelulosa, gelatina y poli(metilmetacrilato)), o incorporarse como componentes de sistemas coloidales de administración de fármacos (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsión, nanopartículas y nanocápsulas) (véase, por ejemplo, "Remington's Pharmaceutical Science 16th edition", Oslo Ed. (1980)). Los procedimientos para preparar las composiciones farmacéuticas como agentes farmacéuticos de liberación controlada también son bien conocidos, y dichos procedimientos pueden aplicarse a los Abs y a los fragmentos de unión a antígenos de la presente invención (véase, por ejemplo, Langer et al., J. Biomed. Mater. Res. 15: 267-277; 1981 Langer, Chemtech. 12: 98-105, 1982; Patente US n° 3.773.919; Publicación de solicitud de patente europea n° EP 58.481; Sidman y otros, Biopolymers 22: 547-556, 1983; y EP 133.988).

Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en el presente documento pueden formularse para su administración intravenosa, intaarterial, intradérmica, subcutánea, intramuscular, intraperitoneal u oral.

La dosis de una composición farmacéutica de la presente invención puede determinarse adecuadamente teniendo en cuenta la forma de dosificación, el procedimiento de administración, la edad y el peso corporal del paciente, los síntomas del paciente, la gravedad de la infección por SA o el nivel de riesgo de infección por SA. Generalmente, la dosis diaria para un adulto puede ser, por ejemplo, entre 0,1 mg y 10.000 mg de una sola vez o en varias porciones. La dosis puede ser, por ejemplo, de 0,2 a 10.000 mg/día (por ejemplo, de 1 a 10 g/día, de 2 a 8 g/día, de 1 a 5 g/día, de 0,5 a 2,5 g/día, de 0,5 a 500 mg/día, de 1 a 300 mg/día, de 3 a 100 mg/día o de 5 a 50 mg/día). Estas dosis pueden variar, dependiendo del peso corporal del paciente y de su edad, así como del procedimiento de administración; sin embargo, la selección de la dosis adecuada está al alcance de los expertos en la materia. Del mismo modo, el período de dosificación puede determinarse adecuadamente en función del progreso terapéutico.

Cualquiera de las composiciones farmacéuticas proporcionadas en el presente documento puede incluir además uno o más agentes antimicrobianos adicionales. Ejemplos no limitantes de tales agentes antimicrobianos incluyen: linezolid, eritromicina, mupirocina, ertapenem, doripenem, imipenem, cilastatina, meropenem, cefadroxil, cefazolina, cefalotina, cefalexina, ceflacor, cefamandole, cefoxitin, cefprozil, cefuroxime, cefixime, cefdinir, cefditoren, cefoperazone, cefotaxime, cefpodoxime, ceftazidime, ceftibuten, ceftizoxime, ceftriaxone, ceftaroline fosamil, ceftobiprole, teicoplanin, vancomycin, televancin, clindamycin, lincomycin, daptomycin, amoxicillin, ampicilina, azlocilina, carbenicilina, cloxacilina, dicloxacilina, flucloxacilina, mezlocilina, meticilina, nafcilina, oxacilina, penicilina G, penicilina V, piperacilina, penicilina G, temocilina, ticarcilina, bacitracina, colistina, polimixina B, ciprofloxacina, enoxacina, gatifloxacina, gemifloxacina, levofloxacina, lomefloxacina, moxifloxacina, ácido nalidíxico, norfloxacina, ofloxacina, trovafloxacina, grepafloxacina, esparfloxacina, temafloxacina, mafenida, sulfacetamida, sulfadiazina, sulfadimetoxina de plata, sufametozol, sulfametoxazol, sulfanilamida, sulfasalazina, sulfisoxazol, trimetoprimasulfametoxazol, sulfonamidocrisoidina, demeclociclina, doxiciclina, minociclina, oxitetraciclina y tetraciclina.

Procedimientos para tratar a un sujeto que tiene una infección por S. aureus o para reducir el riesgo de desarrollar una infección por S. aureus en un sujeto

También se divulgan procedimientos para tratar a un sujeto que tiene una infección por SA (por ejemplo, infección por ^{MRSA, bacteriemia por SA, infección cutánea por SA, mastitis por SA, celulitis o foliculitis por}Sa, ^{o infecciones de}heridas por SA, abscesos, osteomielitis, endocarditis, neumonía, shock séptico, intoxicación alimentaria o síndrome de shock tóxico) que incluyen administrar a un sujeto (por ejemplo, un ser humano u otro mamífero como un bovino, un ovino, un canino, un felino, un equino, un hircino, un leporino, un porcino o un aviario) que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos una de las composiciones farmacéuticas proporcionadas en el presente documento o de al menos uno de los Abs o fragmentos de unión a antígeno proporcionados en el presente documento. En algunos ejemplos, al sujeto se le ha diagnosticado o identificado una infección por SA (por ejemplo, una infección por MRSA). Algunas realizaciones incluyen además (antes de la etapa de administración) una etapa de diagnóstico, identificación o selección del sujeto que tiene o está afectado por una infección por SA (por ejemplo, una infección por MRSA o VRSA). En algunos ejemplos, la infección por SA es una infección nosocomial. En algunos ejemplos, el sujeto ha sido tratado previamente con un tratamiento antibacteriano y el tratamiento anterior no tuvo éxito.

También se divulgan procedimientos para reducir el riesgo de un sujeto de desarrollar una infección por SA (por ejemplo, una infección por MRSA) que incluyen la administración al sujeto de una cantidad eficaz de al menos una de las composiciones farmacéuticas proporcionadas en el presente documento o de al menos uno de los Abs o fragmentos de unión a antígeno proporcionados en el presente documento. En algunos aspectos, la infección por SA es una infección nosocomial. Algunos aspectos incluyen además, antes de la administración, la selección o la identificación de un sujeto que tiene un mayor riesgo de desarrollar una infección por SA (por ejemplo, una infección por MRSA). Por ejemplo, el sujeto puede ser un profesional sanitario (por ejemplo, un médico, una enfermera, un técnico de laboratorio o un asistente médico) (por ejemplo, un profesional sanitario en contacto físico con un sujeto que tiene una infección por SA (por ejemplo, una infección por MRSA)). Un sujeto en estos procedimientos también puede ser un sujeto admitido en un hospital o en un tratamiento hospitalario (por ejemplo, una residencia de ancianos) que contiene (ha admitido) al menos otro sujeto que tiene una infección por SA (por ejemplo, una infección por MRSA). El sujeto puede ser un paciente hospitalizado, como uno de la unidad de cuidados intensivos, un paciente inmunocomprometido y un paciente que se ha sometido o se someterá a un procedimiento quirúrgico (por ejemplo, cirugía cardíaca).

En cualquiera de los procedimientos en el presente documento descritos, el sujeto puede ser un hombre o una mujer. Por ejemplo, el sujeto puede ser un bebé, un niño pequeño, un adolescente o un adulto (por ejemplo de al menos 18 años, de al menos 20 años, de al menos 25 años, de al menos 30 años, de al menos 35 años, de al menos 40 años, de al menos 45 años, de al menos 50 años, de al menos 55 años, de al menos 60 años, de al menos 65 años, de al menos 70 años, de al menos 75 años, de al menos 80 años, de al menos 85 años, de al menos 90 años, de al menos 95 años, o de al menos 100 años). En algunos ejemplos, el sujeto tiene un sistema inmunitario suprimido o debilitado (por ejemplo, el sistema inmunitario humoral o celular).

En algunos ejemplos, la al menos una composición farmacéutica proporcionada en el presente documento o el al menos un Ab o fragmento de unión a antígeno proporcionado en el presente documento se administra por vía intravenosa, intaarterial, intradérmica, subcutánea, intramuscular, intraperitoneal u oral. Por ejemplo, en los procedimientos para reducir el riesgo de desarrollar una infección por SA, se administra al sujeto al menos una de las composiciones farmacéuticas proporcionadas en el presente documento o al menos uno de los Abs o fragmentos de unión a antígeno proporcionados en el presente documento antes o poco después de entrar en contacto físico con un sujeto identificado, diagnosticado, que tiene o se sospecha que tiene una infección por SA (por ejemplo, una infección por MRSA).

En cualquiera de los procedimientos descritos en el presente documento, se administra al sujeto al menos una (por ejemplo, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve o diez) dosis de cualquiera de las composiciones farmacéuticas proporcionadas en el presente documento o al menos una (por ejemplo, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve o diez) dosis de cualquiera de los Abs o fragmentos de unión a antígeno proporcionados en el presente documento. A un sujeto se le pueden administrar dos o más dosis de cualquiera de las composiciones farmacéuticas o al menos dos dosis de cualquiera de los Abs o fragmentos de unión a antígeno proporcionados en el presente documento con una frecuencia de al menos una dosis cada mes (por ejemplo, al menos dos dosis cada mes, al menos tres dosis cada mes, al menos cuatro dosis cada mes, al menos una dosis a la semana, al menos dos dosis a la semana, al menos tres dosis a la semana, al menos cuatro dosis a la semana, al menos cinco dosis a la semana, al menos una dosis al día, al menos dos dosis al día, o al menos tres dosis al día).

Algunos aspectos incluyen además la coadministración a un sujeto y Ab descritos en el presente documento y uno o más agentes antimicrobianos adicionales. Ejemplos no limitantes de tales agentes antimicrobianos incluyen: linezolid, eritromicina, mupirocina, ertapenem, doripenem, imipenem, cilastatina, meropenem, cefadroxil, cefazolina, cefalotina, cefalexina, ceflacor, cefamandole, cefoxitin, cefprozil, cefuroxime, cefixime, cefdinir, cefditoren, cefoperazone, cefotaxime, cefpodoxime, ceftazidime, ceftibuten, ceftizoxime, ceftriaxone, ceftaroline fosamil, ceftobiprole, teicoplanin, vancomycin, televancin, clindamycin, lincomycin, daptomycin, amoxicillin, ampicilina, azlocilina, carbenicilina, cloxacilina, dicloxacilina, flucloxacilina, mezlocilina, meticilina, nafcilina, oxacilina, penicilina G, penicilina V, piperacilina, penicilina G, temocilina, ticarcilina, bacitracina, colistina, polimixina B, ciprofloxacina, enoxacina, gatifloxacina, gemifloxacina, levofloxacina, lomefloxacina, moxifloxacina, ácido nalidíxico, norfloxacina, ofloxacina, trovafloxacina, grepafloxacina, esparfloxacina, temafloxacina, mafenida, sulfacetamida, sulfadiazina, sulfadimetoxina de plata, sulfadimetoxina, sufametizol, sulfametoxazol, sulfanilamida, sulfasalazina, sulfisoxazol, trimetoprimasulfametoxazol, sulfonamidocrisoidina, demeclociclina, doxiciclina, minociclina, oxitetraciclina y tetraciclina. Ejemplos adicionales de agentes terapéuticos que pueden incluirse en cualquiera de las composiciones farmacéuticas proporcionadas en el presente documento son uno o más Abs descritos en la publicación de solicitud de patente US n° 2011/0059085.

Equipos

También se divulgan en el presente documento equipos que contienen al menos uno (por ejemplo, dos, tres, cuatro o cinco) de cualquiera de los Abs o fragmentos de unión a antígeno proporcionados en el presente documento. En algunos ejemplos, los equipos pueden contener una SpA recombinante o un péptido que comprende o consiste en SEQ ID NO: 1 o un fragmento antigénico de SEQ ID NO: 1 (por ejemplo, al menos 7 aminoácidos continuos de SEQ ID NO: 1 (por ejemplo, a partir de la posición de los aminoácidos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 o 13 de SEQ ID NO: 1)). En algunos ejemplos, el al menos un Ab o fragmento de unión a antígeno está unido a un sustrato sólido (por ejemplo, un pozo, un chip, una película, una perla o una resina de cromatografía). Dichos equipos pueden incluir envases comerciales y/o información impresa sobre los Abs y sus procedimientos de uso.

Ejemplos

Ejemplo 1. Generación de Abs humanos que se unen específicamente a la SpA y desplazan a las inmunoglobulinas humanas IgG unidas a la SpA a través de su región Fc

Los Abs IgG3 humanos que se unen a un epítopo de SpA se generaron como se describe a continuación. Se utilizaron cinco péptidos sintetizados que cubren las secuencias de unión a la IgG y de repetición Xr en la SpA para detectar los Abs antipéptidos en la sangre de 311 voluntarios adultos sanos. Los cinco péptidos sintetizados de SpA utilizados para el cribado tenían las secuencias indicadas como SEQ ID NOs: 82, 83, 84, 85 y 1 (péptidos 1, 2, 3, 4 y 5, respectivamente). Alrededor del 4% de los sujetos sanos presentaban niveles de Abs antipéptido (anti-SpA) superiores a 10 veces sobre el fondo (en adelante denominados "donantes positivos"), según se determinó mediante un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA). Se obtuvo plasma de estos donantes positivos y se utilizó para aislar verdaderos Abs humanos que se unen específicamente a un péptido que cubre las secuencias de unión a IgG y de repetición Xr de SpA utilizando los procedimientos descritos en Publicación de la solicitud de patente US n° 2013/0018173. En resumen, los Abs de interés se aislaron mediante cromatografía de afinidad de antígenos y se secuenciaron de novo mediante espectrometría de masas. Paralelamente, los Abs fueron isotipados utilizando un equipo de isotipado humano.

Se identificó que uno de los Abs aislados pertenece a la subfamilia VH3 y tiene una cadena pesada IgG2 y una cadena ligera VK1. Las células B se aislaron de la sangre del donante utilizando un equipo obtenido de STEMCELL Technologies, Inc. Su ARN se extrajo utilizando un protocolo de extracción de Trizol, y el ADNc se generó utilizando SuperScript III. Se utilizaron cebadores específicos del líder para amplificar las correspondientes cadenas pesadas y ligeras del Ab y se generó una biblioteca de ScFv "dirigida". La biblioteca fue analizada contra el antígeno SpA de tipo salvaje durante 7 rondas. Los clones se examinaron mediante ELISA directo y en sándwich con SpA de tipo salvaje. Los clones seleccionados se secuenciaron y las cadenas pesadas y ligeras se clonaron en vectores con una región constante (Fc) de IgG3 (que carece del sitio de reconocimiento de SpA en las regiones Fab). Los vectores se transfectaron en líneas celulares CHO y se eligieron los clones de mayor producción. Los Abs purificados se sometieron a pruebas de actividad anti-SpA. Los clones se ampliaron para su producción a gran escala, y los Abs producidos se purificaron y utilizaron para otros análisis. A continuación se describen ejemplos de ocho de estos Abs:

PA8-G3 Ab

Dominio variable de la cadena pesada de SEQ ID NO: 5.

Las CDRs 1, 2 y 3 de la cadena pesada de los SEQ ID NOs: 2, 3 y 4, respectivamente.

Cadena pesada de SEQ ID NO: 6.

Dominio variable de la cadena ligera de SEQ ID NO: 10.

Las CDRs 1, 2 y 3 de la cadena ligera de SEQ ID NO: 7, 8 y 9, respectivamente.

Cadena ligera de SEQ ID NO: 11.

PA4-G3 Ab

Dominio variable de la cadena pesada de SEQ ID NO: 15.

Las CDRs 1,2 y 3 de la cadena pesada de los SEQ ID NOs: 12, 13 y 14, respectivamente.

Cadena pesada de SEQ ID NO: 16.

Dominio variable de la cadena ligera de SEQ ID NO: 20.

Las CDRs 1,2 y 3 de la cadena ligera de SEQ ID NOs: 17, 18 y 19, respectivamente.

Cadena ligera de SEQ ID NO: 21.

PA7.2-G3 Ab

Dominio variable de la cadena pesada de SEQ ID NO: 25.

Las CDRs 1, 2 y 3 de la cadena pesada de los SEQ ID NOs: 22, 23 y 24, respectivamente.

Cadena pesada de SEQ ID NO: 26.

Dominio variable de la cadena ligera de SEQ ID NO: 30.

Las CDRs 1,2 y 3 de la cadena ligera de SEQ ID NOs: 27, 28 y 29, respectivamente.

Cadena ligera de SEQ ID NO: 31.

PA15-G3 Ab

Dominio variable de la cadena pesada de SEQ ID NO: 35.

Las CDRs 1,2 y 3 de la cadena pesada de los SEQ ID NOs: 32, 33 y 34, respectivamente.

Cadena pesada de SEQ ID NO: 36.

Dominio variable de la cadena ligera de SEQ ID NO: 40.

Las CDRs 1,2 y 3 de la cadena ligera de SEQ ID NOs: 37, 38 y 39, respectivamente.

Cadena ligera de SEQ ID NO: 41.

PA21-G3 Ab

Dominio variable de la cadena pesada de SEQ ID NO: 45.

Las CDRs 1, 2 y 3 de la cadena pesada de los SEQ ID NOs: 42, 43 y 44, respectivamente.

Cadena pesada de SEQ ID NO: 46.

Dominio variable de la cadena ligera de SEQ ID NO: 50.

Las CDRs 1,2 y 3 de la cadena ligera de SEQ ID NOs: 47, 48 y 49, respectivamente.

Cadena ligera de SEQ ID NO: 51.

PA27-G3 Ab

Dominio variable de la cadena pesada de SEQ ID NO: 55.

Las CDRs 1,2 y 3 de la cadena pesada de los SEQ ID NOs: 52, 53 y 54, respectivamente.

Cadena pesada de SEQ ID NO: 56.

Dominio variable de la cadena ligera de SEQ ID NO: 60.

Las CDRs 1,2 y 3 de la cadena ligera de SEQ ID NOs: 57, 58 y 59, respectivamente.

Cadena ligera de SEQ ID NO: 61.

PA32-G3 Ab

Dominio variable de la cadena pesada de SEQ ID NO: 65.

Las CDRs 1,2 y 3 de la cadena pesada de los SEQ ID NOs: 62, 63 y 64, respectivamente.

Cadena pesada de SEQ ID NO: 66.

Dominio variable de la cadena ligera de SEQ ID NO: 70.

Las CDRs 1, 2 y 3 de la cadena ligera de SEQ ID NO: 67, 68 y 69, respectivamente.

Cadena ligera de SEQ ID NO: 71.

PA37-G3 Ab

Dominio variable de la cadena pesada de SEQ ID NO: 75.

Las CDRs 1,2 y 3 de la cadena pesada de los SEQ ID NOs: 72, 73 y 74, respectivamente.

Cadena pesada de SEQ ID NO: 76.

Dominio variable de la cadena ligera de SEQ ID NO: 80.

Las CDRs 1, 2 y 3 de la cadena ligera de SEQ ID NOs: 77, 78 y 79, respectivamente.

Cadena ligera de SEQ ID NO: 81.

Se realizó un conjunto de experimentos para determinar si el Ab PA8-G3 sería capaz de unirse a SpA en la pared celular de SA. En estos experimentos, las manchas de SA ATCC #25923 o el aislado clínico 00X se incubaron con (i) PA8-G3 biotinilado, y luego estreptavidina-APC para cuantificar fluorescentemente la cantidad de PA8-G3 unido a la superficie de SA (Figura 2) o (ii) PA8-G3 Ab. purificado sin marcar, seguido del receptor Fcy recombinante biotinilado, y luego estreptavidina-APC para cuantificar por fluorescencia la cantidad de PA8-G3 unida a la superficie del SA que llevaría a la fagocitosis (es decire., tener regiones Fc libres disponibles para unir el receptor Fcy recombinante 1) (Figura 3). En estos experimentos se utilizó un Ab anti-interleucina-la (MABpl) como control negativo. Los datos de la Figura 2 muestran que PA8-G3 se une a SpA en la pared celular de SA y los datos de la Figura 3 indican que el Ab PA8-G3 unido tenía sus regiones Fc disponibles para interactuar con FcR, lo que sugiere que el Ab sería capaz de mediar en la opsinofagocitosis de SA en sujetos humanos (a diferencia de tener sus regiones Fc unidas a SpA y no poder enganchar FcRs y, por tanto, mediar en la opsinofagocitosis de la bacteria).

Se realizó otra serie de experimentos para comprobar si la unión del PA8-G3 Ab a la superficie de SA sería reconocida por los receptores Fc y de los fagocitos. En estos experimentos, se incubaron dos cepas diferentes de S. aureus marcadas con pH-rodo-verde (aislado clínico 00X o ATCC #25923) con Ab PA8-G3 sin marcar o con un Ab de control (MABpl), y luego se incubaron con células HL-60 diferenciadas. La fluorescencia resultante de las células HL-60 se determinó mediante la clasificación celular asistida por fluorescencia (FACS). Los datos muestran que el PA8-G3 se une a la pared celular de ambas cepas SA y media la fagocitosis a través de los receptores Fcy de la superficie de las células HL-60 (Figura 4). El éxito de la fagocitosis por parte de las células HL-60 diferenciadas de S. aureus unido a PA8-G3 también quedó patente en los experimentos de microscopía de fluorescencia.

Se utilizó la resonancia de plasmón de superficie para determinar la cinética de unión de PA8-G3 a SpA. En estos experimentos, el Ab PA8-G3 se inmovilizó utilizando un sensor de captura antihumano y un SpA comercial de tipo salvaje. Estos datos muestran que la PA8-G3 tiene una KD de 5,38 pM. Esta afinidad es aproximadamente 1.000 veces mayor que la afinidad nanomolar de las IgG1, IgG2 e IgG4 del suero humano con la SpA.

Se realizó un conjunto adicional de experimentos para determinar si el Ab PA8-G3 sería capaz de competir con éxito por la unión a SpA con la IgG humana unida a SpA a través de su receptor Fc. En estos experimentos, dos cepas diferentes de S. aureus se preincubaron con suero humano (que contiene una alta concentración de Igs que se unen a SpA a través de sus regiones Fc) durante 15 minutos antes de la incubación con el Ab PA8-G3 biotinilado o el Ab MABp1-IgG3 biotinilado (control negativo de isotipo), y luego se trató con APC de estreptavidina, y después se determinó la fluorescencia por citometría de flujo. Los datos muestran que el Ab PA8-G3 fue capaz de unirse a SpA teniendo los Abs IgG humanos unidos a SpA por su dominio Fc (Figura 5).

En otra serie de experimentos, se demostró que el anticuerpo PA8-G3 compite con la unión de MABpl-IgG1 (que se une a SpA a través de su región Fc) en las perlas recubiertas de SpA. La preincubación de las perlas SpA con PA8-G3 redujo la unión de MABpl-IgGl añadida posteriormente en un 80,3%. Por el contrario, con las perlas de SpA preincubadas con MABpl-IgGl, el PA8-G3 añadido posteriormente se unió a más del 30% de las superficies de las perlas de SpA en 15 minutos, mientras que el MABp1-IgG3 añadido posteriormente (control negativo con el isotipo correspondiente que tiene el Fab de MABpl y un Fc de IgG3 humana) no se unió significativamente a las perlas de SpA preincubadas con MABpl-IgGl.

Se realizó un conjunto adicional de experimentos para probar la capacidad de los Abs anti-SpA adicionales para promover la fagocitosis de SA por las células HL-60 diferenciadas. En estos experimentos, las células HL-60 diferenciadas se coincubaron con S. aureus marcado con pH-rodo-verde y uno de los siguientes Abs: PA7.2-G3, PA4-G3, PA8-G3, PA15-G3, PA21-G3, PA27-G3, PA32-G3, PA37-G3, o MABpl. El MABpl se utilizó como control negativo en estos experimentos. Los datos muestran que todos los Abs anti-SpA probados fueron capaces de promover la opsinización y fagocitosis de S. aureus por parte de las células HL-60 diferenciadas (Figura 6).

Se realizaron experimentos adicionales de interferometría de biocapa (utilizando un instrumento ForteBio Octet Red 96) para determinar la KD de siete Abs anti-SpA adicionales (realizados utilizando antígeno 20 nM). Los datos resultantes mostraron que la PA7.2-G3 tiene una KD inferior a 1 x 10'12 M, la PA4-G3 tiene una KD de 5,38 x 10'12 M, la PA15-G3 tiene una Kd inferior a 1 x 10'12 M , la PA21-G3 tiene una KD inferior a 1 x 10'12 M, la PA27-G3 tiene una KD inferior a 1 x 10'12 M, la PA32-G3 tiene una KD inferior a 1 x 10'12 M y la PA37-G3 tiene una KD inferior a 1 x 10'12 M.

En resumen, los datos muestran que los Abs en el presente documento proporcionados pueden unirse con muy alta afinidad a la SpA en la pared celular de la SA, promover la fagocitosis por parte de las células inmunitarias, y son capaces de hacerlo en presencia de IgGs humanas unidas a la SpA por su dominio Fc.

Ejemplo 2. Estudio de supervivencia in vivo del anticuerpo monoclonal PA8 en un modelo de bacteriemia/sepsis en ratones.

Se examinó la supervivencia de los ratones frente a la bacteriemia por S. aureus utilizando dosis profilácticas de PA8 (el anticuerpo monoclonal denominado PA8-G3 descrito en el Ejemplo 1).

Los ratones Balb/C hembra (de 6 a 8 semanas de edad) se adquirieron en el Laboratorio Charles River, NIH, Maryland. A su llegada, los ratones fueron examinados, alojados en grupo (10/jaula) en jaulas con lecho absorbente. Todos los ratones se sometieron a las normas de cría exigidas en la Guía del NIH para el cuidado y uso de los animales de laboratorio.

La eficacia protectora de la PA8 se investigó en el modelo de sepsis SA inducido por inyecciones intravenosas (i.v.) de 2 *107 UFC de la cepa MRSA NR-46223. Los ratones fueron tratados por vía intravenosa con PA8 a dosis específicas (5mg o 10mg) 3h antes de la infección por MRSA o dos dosis de 5mg cada una en el día 0 y 3. Los ratones de control fueron tratados únicamente con el tampón de formulación. Los ratones fueron seguidos durante 10 días (dos veces al día), momento en el que todos los ratones restantes fueron sacrificados.

Tres horas después de la administración i.v. de PA8/tampón de formulación (0,1ml), los ratones fueron ensayados con una única inyección intravenosa (IV) de la cepa de S. aureus NR-46223 (2x107 UFC en 0,1ml). Un grupo de ratones recibió dos dosis de 5 mg cada una el día 0 y el día 3. Se detectaron diferencias significativas en los tiempos de supervivencia relativa entre los grupos de tratamiento. Con referencia a la Fig. 7A-D, la administración pasiva de una dosis única de 5mg (A) o 10mg (B), o de dos dosis de 5mg en el día 0 y en el día 3 (C), de mAb PA8 (por vía intravenosa) aumenta la supervivencia de los ratones BALB/c significativamente más que el tratamiento con tampón de formulación en forma dependiente de la dosis (10 ratones por grupo) con sepsis por Staphylococcus aureus (inducida por la inyección intravenosa de 2 *107 unidades formadoras de colonias de S. aureus resistente a la meticilina, cepa NR-46223). La sección (D) muestra la supervivencia utilizando todos los diferentes tratamientos en un solo gráfico. Sobrevivieron el cincuenta por ciento (5/10) de los ratones que recibieron 5 mg de Mab PA8 (p=0,016), el sesenta por ciento de los que recibieron dos dosis de 5 mg cada una (p=0,09), y el setenta por ciento (7/10) de los que recibieron 10 mg de mAb PA8 (p=0,003), en comparación con el 10% (1/10) de los ratones que recibieron el tampón de formulación (1/10) que sobrevivieron al desafío bacteriano con S. aureus NR-46223. El análisis estadístico de los datos de los animales se realizó mediante un análisis de supervivencia de Kaplan-Meier con una prueba de Mantel-Cox (logrank). Estos resultados indican claramente que la PA8 proporciona un nivel significativo de protección contra la infección letal con la cepa MRSA de S. aureus .

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y un anticuerpo monoclonal purificado, en la que el anticuerpo monoclonal comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:11, en la que el anticuerpo monoclonal se une específicamente a la proteína A de Staphylococcus aureus (SpA) a través de su paratopo de la región Fab.