ES2865173T3

ES2865173T3 - Inhibición del canal iónico receptor del potencial transitorio A1

Info

Publication number: ES2865173T3
Application number: ES15722319T
Authority: ES
Inventors: Blaise Lippa; Qingyi Li; Iwona Wrona; Andrew Jackson; Christopher Liu; Guohua Liang; Matthew Baevsky; Richard Earl; Lisa Mcqueen; Jared Smit; Brett Cowans; Xinyuan Wu; Bertrand Chenard
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2014-04-23
Filing date: 2015-04-23
Publication date: 2021-10-15
Anticipated expiration: 2035-04-23
Also published as: HUE054066T2; US20170050966A1; CN106573934B; AU2015252007A1; TW201625618A; SI3134410T1; TWI676626B; LT3134410T; JP6557680B2; HRP20210613T1; AU2015252007B2; US20180230149A1; PT3134410T; RS61715B1; CY1124243T1; US10428072B2; EP3134410A1; WO2015164643A1; CA2945789C; EP3134410B1

Abstract

Un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo: **(Ver fórmula)** en la que: R1 es H, alquilo C1-C6, alquenilo C1-C6 o alquinilo C1-C6; R2 es H, alquilo C1-C6, alquenilo C1-C6 o alquinilo C1-C6 opcionalmente sustituido con uno o más grupos R5; R3 es H, alquilo C1-C6, alquenilo C1-C6 o alquinilo C1-C6; R4 es halo, hidroxi, alcoxi, tiol, alquiltio, amino, alquilamino, dialquilamino, ciano, nitro, amido, alquilamido, dialquilamido, tioílo, sulfonilo, ciclilo, heterociclilo, arilo o heteroarilo, opcionalmente sustituido en una o más posiciones con 1-4 grupos R6; R5 es independientemente H, halógeno, alquilo, aralquilo, alquenilo, alquinilo, hidroxi, amino, amido, fosfonato, carboxilo, éter, alquiltio, haloalquilo y ciano y R6 es independientemente H, halógeno, alquilo, aralquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, hidroxi, amino, nitro, sulfhidrilo, imino, amido, fosfato, fosfonato, fosfinato, carbonilo, carboxilo, sililo, éter, alquiltio, sulfonilo, cetona, aldehído, éster, heterociclo, un anillo aromático o heteroaromático, haloalquilo y ciano.

Description

DESCRIPCIÓN

Inhibición del canal iónico receptor del potencial transitorio A1

Campo técnico

La presente invención se refiere a compuestos de Fórmula (I), o a una sal, a una preparación farmacéutica o a una composición farmacéutica de los mismos, farmacéuticamente aceptables, y a compuestos y a composiciones para su uso en el tratamiento del dolor, de enfermedades inflamatorias, neuropatía, trastornos dermatológicos, afecciones pulmonares, y tos, así como en la inhibición del canal iónico receptor del potencial transitorio A1 (TRPA1, por las siglas del inglés Transient Receptor Potential A1).

Antecedentes

El receptor del potencial transitorio A1 (en el presente documento, "TRPA1"), es un canal catiónico no selectivo relacionado con la sensación de dolor en los seres humanos. El TRPA1 se encuentra en las neuronas sensoriales y funciona como un detector que ayuda a relacionar la detección de sustancias químicas nocivas, el daño tisular y la inflamación, con el dolor. Se cree que la activación del TRPA1 causa dolor al inducir la activación de las neuronas nociceptivas e impulsar la sensibilización central en la médula espinal. La estimulación del TRPA1 también puede aumentar la activación de las neuronas sensoriales, lo que conduce a la liberación de neuropéptidos proinflamatorios tales como NK-A, sustancia P y CGRP, que inducen vasodilatación y ayudan a reunir células inmunitarias. Una variedad de compuestos reactivos endógenos, producidos durante la inflamación, activan el TRPA1, entre ellos se incluyen, 4-hidroxinonenal, liberado durante la peroxidación de liposomas; prostaglandinas con un anillo de ciclopentano, sintetizadas por enzimas COX; peróxido de hidrógeno, producido por estrés oxidativo. La activación del TRPA1 también sensibiliza al TRPA1 al frío. Por otro lado, una mutación de ganancia de función en el TRPA1 causa síndrome de dolor episódico familiar; los pacientes que padecen esta afección tienen dolor episódico que puede desencadenarse por el frío. Por tanto, se considera que el TRPA1 desempeña un papel en el dolor relacionado con el daño nervioso, la alodinia al frío y el dolor inflamatorio.

Los compuestos que inhiben el canal iónico del TRPA1 pueden ser útiles, por ejemplo, en el tratamiento de afecciones mejoradas, eliminadas o prevenidas a través de la inhibición del canal iónico del TRPA1. Por ejemplo, las composiciones farmacéuticas que inhiben el TRPA1 pueden usarse para tratar el dolor. Se ha demostrado que la inhibición del TRPA1 (por ejemplo, por ablación genética y antagonismo químico) da como resultado una reducción del comportamiento del dolor en ratones y ratas. Los ratones con supresión génica (knockout) que carecen del TRPA1 funcional, tienen respuestas nociceptivas disminuidas a los activadores del TRPA1, entre los que se incluyen, AITC (siglas del inglés, allyl isothiocyanate, isotiocianato de alilo), formol, acroleína, 4-hidroxinonenal, y, además, tienen una hipersensibilidad térmica y mecánica muy reducida en respuesta al mediador inflamatorio, la bradicinina, (por ejemplo, Kwan, K. Y. y col. Neuron 2006, 50, 277-289; Bautista, D. M. y col. Cell 2006, 124, 1269-1282). En modelos de dolor animal, la regulación negativa de la expresión del TRPA1 por antisentidos específicos de genes previene y revierte la hiperalgesia por frío inducida por inflamación y lesión nerviosa (véase, por ejemplo, Obata, K. y col., J Clin Invest (2005) 115, 2393-2401; Jordt, S. E. y col., Nature (2004), 427, 260-265; Katsura, H. y col., Explor Neurol (2006), 200, 112-123). Los compuestos inhibidores del TRPA1 son eficaces en una variedad de modelos de dolor en roedores. Se ha demostrado que, después de inflamación inducida por adyuvante completo de Freund, los inhibidores del TRPA1 reducen la hipersensibilidad mecánica y la alodinia al frío sin alterar la sensación de frío normal en animales no sometidos previamente a experimentación (naive) y que también mejoran su función en el modelo de artrosis inducida con monoyodoacetato en la rata (véase, por ejemplo, Materazzi, S y col., Eur J Physiol (2012), 463(4):561-9; Wei H y col., Anesthesiology 2012, 117(1):137-48; Koivisto, A y col., Pharmacol Res (2012), 65(1):149-58). Los compuestos inhibidores del TRpA1 han demostrado un comportamiento al dolor reducido en roedores a los que se inyectó AITC (aceite de mostaza), formol, cinamaldehído, acroleína y otros activadores del TRPA1. Los compuestos inhibidores del TRPA1 también han demostrado ser eficaces en modelos de roedores del dolor posoperatorio, (véase, por ejemplo, Wei y col., Anesthesiology (2012), 117(1): 137-48); de la neuropatía periférica inducida por quimioterapia (véase, por ejemplo, Trevisan, y col., Cancer Res (2013) 73(10):3120-31) y de la neuropatía diabética dolorosa (véase, por ejemplo, Koivisto y col., Pharmacol Res (2011) 65:149-158). En el documento EP2170309 se desvelan compuestos y composiciones para tratar trastornos relacionados con el canal TRPA1. En el documento WO2009140517 se desvelan compuestos y composiciones para tratar lesiones causadas por la exposición a agresivos químicos. En el documento EP2742048 se desvelan compuestos y composiciones farmacéuticas para inhibir el canal iónico del TRPA1 y/o afecciones médicas, tales como dolor y asma, relacionadas con el TRPA1.

Sumario

La presente invención se define en las reivindicaciones adjuntas. Los compuestos descritos en el presente documento pueden ser útiles en el tratamiento de trastornos en los que la inhibición del canal iónico del TRPA1 es beneficiosa, por ejemplo, en el tratamiento del dolor. En algunas realizaciones, un compuesto descrito en el presente documento tiene propiedades preferibles sobre otros compuestos de la técnica que inhiben el TRPA1. Por ejemplo, en algunas realizaciones, un compuesto descrito en el presente documento inhibe el canal iónico del TRPA1 sin elevar los biomarcadores séricos de hepatotoxicidad. En algunas realizaciones, un compuesto, como se describe en el presente documento, por ejemplo, un compuesto de Fórmula (I), tiene una solubilidad acuosa deseable (incluidos los compuestos con solubilidad acuosa adecuados para composiciones farmacéuticas formuladas para administración intravenosa) en relación con otros compuestos de la técnica que inhiben el TRPA1.

En el presente documento se describe un compuesto de fórmula (I) y sales farmacéuticamente aceptables del mismo:

en la que cada una de las variables anteriores son como se describen en el presente documento, por ejemplo, en la descripción detallada a continuación.

También se describen en el presente documento composiciones farmacéuticas y preparaciones farmacéuticas purificadas que comprenden un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Los compuestos y composiciones descritos en el presente documento se pueden usar para tratar diversos trastornos en un sujeto. Por ejemplo, en el presente documento se describen compuestos y composiciones para su uso en procedimientos de tratamiento tales como un procedimiento para tratar un trastorno mediado por TRPA1 en un sujeto, comprendiendo el procedimiento administrar una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. También se describen en el presente documento compuestos y composiciones para su uso en procedimientos para tratar el dolor en un sujeto, comprendiendo el procedimiento administrar una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Los tipos de dolor a modo de ejemplo incluyen dolor neuropático, por ejemplo, neuropatía diabética dolorosa, neuropatía periférica inducida por quimioterapia, dolor en la zona lumbar, neuralgia del trigémino, neuralgia postherpética, ciática y síndrome del dolor regional complejo; dolor inflamatorio, por ejemplo, por artritis reumatoide, artrosis, trastorno temporomandibular; NDD o NPIQ; dolor visceral, por ejemplo, por pancreatitis, enfermedad inflamatoria del intestino, colitis, enfermedad de Crohn, endometriosis, dolor pélvico y angina; dolor seleccionado entre el grupo: dolor por cáncer, dolor por quemadura, dolor oral, dolor inducido por aplastamiento y lesión, dolor por incisión, dolor óseo, dolor por anemia de células falciformes, fibromialgia y dolor musculoesquelético o dolor por hiperalgesia o alodinia.

En algunas realizaciones los compuestos y las composiciones son para su uso en un procedimiento para tratar una enfermedad inflamatoria en un sujeto, comprendiendo el procedimiento administrar una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En algunas realizaciones los compuestos y composiciones son para su uso en un procedimiento para tratar neuropatía en un sujeto, comprendiendo el procedimiento administrar una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En algunas realizaciones, la neuropatía se debe a diabetes, lesión química, quimioterapia y o trauma.

En algunas realizaciones los compuestos y composiciones incluyen aquellas para su uso en un procedimiento para tratar un trastorno dermatológico en un sujeto, comprendiendo el procedimiento administrar una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Los trastornos dermatológicos a modo de ejemplos incluyen dermatitis atópica, picor agudo, psoriasis, urticaria, eccema, eccema dishidrótico, úlceras bucales y dermatitis del pañal.

En algunas realizaciones los compuestos y composiciones incluyen aquellos para su uso en un procedimiento para tratar una afección pulmonar en un sujeto, comprendiendo el procedimiento administrar una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Las afecciones pulmonares a modo de ejemplo incluyen enfermedades obstructivas tales como enfermedad pulmonar obstructiva crónica. Otras afecciones pulmonares a modo de ejemplo incluyen asma y tos.

Además, un compuesto como se describe en el presente documento, por ejemplo, un compuesto de fórmula (I), es útil en la fabricación de una composición farmacéutica formulada para administración oral. En algunas realizaciones, un compuesto descrito en el presente documento se puede formular en una composición para administración intravenosa. En unas realizaciones, se puede usar un compuesto o una composición descritos en el presente documento para tratar el dolor.

Un compuesto como se describe en el presente documento, por ejemplo, un compuesto de fórmula (I), puede incluir moléculas que tienen uno o más centros quirales. Por ejemplo, a menos que se indique otra cosa, una composición de fórmula (I) puede contener distintas cantidades de estereoisómeros de fórmula (Ia), (Ib), (IIa) y (IIb). En una realización, una composición que comprende un compuesto de fórmula (la) o (IIa) preferentemente contiene una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto que tiene la estereoquímica indicada en la fórmula (Ia) o (IIa) (por ejemplo, un exceso enantiomérico o un exceso diastereomérico de un isómero particular de fórmula (Ia) o (IIa) por encima del estereoisómero de fórmula (Ib) o (IIb) correspondiente). En una realización, una composición que comprende un compuesto de fórmula (I) contiene una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto que tienen la estereoquímica indicada en la fórmula (Ib) o (IIb) (por ejemplo, un exceso enantiomérico o un exceso diastereomérico de un isómero particular de fórmula (lb) o (IIb) por encima del estereoisómero de fórmula (Ia) correspondiente).

Además, los compuestos de fórmula (I) pueden incluir uno o más isótopos de los átomos presentes en la fórmula (I). Por ejemplo, los compuestos de fórmula (I) pueden incluir: aquellos en los que H (o hidrógeno) se reemplaza con cualquier forma isotópica de hidrógeno, incluyendo H, 2H o D (deuterio) y 3H (tritio); aquellos en los que C se reemplaza con cualquier forma isotópica de carbono, incluyendo 12C, 13C y 14C; aquellos en los que O se reemplaza con cualquier forma isotópica de oxígeno, incluyendo 16O, 17O y 18O; aquellos en los que N se reemplaza con cualquier forma isotópica de nitrógeno, incluyendo 13N, 14N y 15N; aquellos en los que P se reemplaza con cualquier forma isotópica de fósforo, incluyendo 31P y 32P; aquellos en los que S se reemplaza con cualquier forma isotópica de azufre, incluyendo 32S y 35S y aquellos en los que F se reemplaza con cualquier forma isotópica de flúor, incluyendo 19F y 18F. En una realización, los compuestos representados por la fórmula (I) comprenden isómeros de los átomos que contienen en su abundancia natural.

Breve descripción de los dibujos

La FIG. 1 es un espectro que representa el patrón de difracción de rayos X en muestras de polvo (DRXP) de una forma cristalina sólida del Compuesto 2 (Forma A) después del tratamiento en suspensión en etanol.

La FIG. 2 es un espectro que representa el patrón de difracción de rayos X en muestras de polvo de una forma cristalina sólida anhidra del Compuesto 2 (Forma B) después del tratamiento en suspensión en etanol al 97 %/agua al 3 % y secado al vacío (-80°°C durante un día).

La FIG. 3 es un gráfico que representa los resultados del análisis de calorimetría diferencial de barrido (CDB) en una forma cristalina sólida anhidra del Compuesto 2 (Forma B).

La FIG. 4 es un gráfico que representa los resultados del análisis termogravimétrico (ATG) en una forma cristalina sólida anhidra del Compuesto 2 (Forma B).

La FIG. 5 es un gráfico que representa los resultados del análisis de sorción dinámica de vapor (SDV) en una forma cristalina sólida anhidra del Compuesto 2 (Forma B).

La FIG. 6 es un espectro que representa los resultados superpuestos del análisis de DRXP de la forma cristalina sólida anhidra del Compuesto 2 (Forma B) antes (traza de color gris claro) y después (traza de color gris oscuro) de la microionización a un valor d90 inferior a 10 micrómetros.

La FIG. 7 es un gráfico que representa el efecto de diversas cantidades de dosificación del Compuesto 2 administradas por vía oral en el modelo de hiperalgesia por frío inducido por ACF en la rata.

La FIG. 8 es un gráfico que representa la duración de los comportamientos al dolor mediados por formol después de la administración por vía oral del Compuesto 2. Para evaluar la persistencia del beneficio proporcionado por el tratamiento, el compuesto 2 se administró 15 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas o 24 horas antes de la inyección de formol.

La FIG. 9 es un gráfico que representa un perfil ilustrativo de fenotipado de la reacción del CYP450 con el Compuesto 2, denominado también en el presente documento Ejemplo 2.

La FIG. 10 es un gráfico que representa la solubilidad de una formulación micronizada del Compuesto 2 en el intervalo de pH de 2,00 a 8,00.

La FIG. 11 es un gráfico que representa los niveles plasmáticos del Compuesto 2 (es decir, Ejemplo 2) en modelos de rata, perro o mono después de la administración de una dosis oral de 10 mg/kg.

La FIG. 12 es un gráfico que representa una comparación del perfil farmacocinético del Compuesto 2 (es decir, Ejemplo 2) en formulaciones en cápsulas y en suspensión en macacos alimentados y en ayunas.

La FIG. 13 es un gráfico que representa los efectos analgésicos observados después de dosis bajas del Compuesto 2 administrado por vía oral (es decir, Ejemplo 2) y un control (Compuesto A, es decir, Comparador A) en el modelo de ACF.

La FIG. 14 es un gráfico que representa la respuesta a la dosis observada después de la administración por vía oral del Compuesto 2 (es decir, Ejemplo 2) en el modelo de formol.

La FIG. 15 es un gráfico que representa la eficacia observada con dosis del Compuesto 1 administrado por vía intravenosa (es decir, Ejemplo 1) en el modelo de formol.

La FIG. 16 es un gráfico que representa el cambio de la resistencia pulmonar (respuesta asmática inmediata y tardía) en ovejas expuestas a alérgeno después de la administración del Compuesto 2.

La FIG. 17 es un gráfico que representa el efecto del Compuesto 2 (es decir, Ejemplo 2) sobre la medición de la hiperreactividad de las vías respiratorias en el modelo de oveja de asma alérgica.

La FIG. 18 es un gráfico que representa los biomarcadores séricos de hepatotoxicidad en perros beagle antes y después de recibir una dosis oral diaria del Compuesto 2 durante 5 días.

La FIG. 19 es un gráfico que representa el cambio de los biomarcadores séricos de hepatotoxicidad entre un control y el Compuesto 2 (administrado por vía oral) en perros beagle el Día 5 después de recibir una dosis oral diaria del Compuesto 2 durante 5 días.

La FIG. 20 es un gráfico que representa el cambio de los biomarcadores séricos de hepatotoxicidad en ratas Sprague-Dawley después de recibir una dosis oral diaria del Compuesto 2 durante 28 días.

La FIG.21 es un gráfico que representa el cambio de los biomarcadores séricos de hepatotoxicidad entre un control y el Compuesto 2 (administrado por vía oral) en ratas Sprague-Dawley el día 28 después de recibir una dosis oral diaria del Compuesto 2 durante 28 días.

La FIG. 22 es un gráfico que representa los biomarcadores séricos de hepatotoxicidad en macacos cangrejeros (Macaca fascicularis) después de recibir una dosis oral diaria del Compuesto 2 durante 28 días.

La FIG.23 es un gráfico que representa el cambio de los biomarcadores séricos de hepatotoxicidad entre un control y el Compuesto 2 (administrado por vía oral) en macacos cangrejeros el día 28 después de recibir una dosis oral diaria del Compuesto 2 durante 28 días.

Descripción detallada

Definiciones

Esta divulgación no se limita en su aplicación a los detalles de los procedimientos y composiciones descritas en el presente documento. Además, la fraseología y terminología usadas en el presente documento tienen el fin de describir y no deben verse como que limitan la invención según se define en las reivindicaciones adjuntas.

Como se usa en el presente documento, los artículos "un" y "una" se refieren a uno o a más de uno (por ejemplo, a al menos uno) del objeto gramatical del artículo.

"Alrededor de" y "aproximadamente" en general deben significar un grado aceptable de error de la cantidad medida dada la naturaleza o precisión de las medidas. Los grados de error a modo de ejemplo están dentro del 20 por ciento (%), normalmente, dentro del 10 % y más habitualmente, dentro del 5 % de un valor o un intervalo de valores dado.

Como se usa en el presente documento, una cantidad de un compuesto o una combinación, eficaz para tratar un trastorno (por ejemplo, un trastorno como se ha descrito en el presente documento), "cantidad terapéuticamente eficaz", "cantidad eficaz" o "curso eficaz" se refiere a una cantidad del compuesto o la combinación que es eficaz, tras administración de una dosis única o múltiples dosis a un sujeto, para tratar a un sujeto, o curar, aliviar, mitigar o mejorar a un sujeto con un trastorno (por ejemplo, un trastorno como se ha descrito en el presente documento) más allá de lo esperado en ausencia de dicho tratamiento.

La expresión "farmacéuticamente aceptable", como se usa en el presente documento, se refiere a un compuesto o vehículo (por ejemplo, excipiente) que se puede administrar a un sujeto, junto con un compuesto descrito en el presente documento (por ejemplo, un compuesto de fórmula (I)) y que no destruye la actividad farmacológica del mismo y no se tóxico cuando se administra en dosis suficientes para suministrar una cantidad terapéutica del compuesto.

Como se ha indicado anteriormente, ciertas realizaciones de los presentes compuestos pueden contener un grupo funcional básico, tal como amino o alquilamino y, por lo tanto, son capaces de formar sales farmacéuticamente aceptables con ácidos farmacéuticamente aceptables. La expresión "sales farmacéuticamente aceptables" en este sentido, se refiere a las sales de adición de ácidos orgánicos e inorgánicos, relativamente no tóxicas, de los compuestos desvelados en el presente documento. Estas sales se pueden preparar in situ durante el aislamiento final y la purificación de los compuestos de la invención o haciendo reaccionar por separado un compuesto purificado de la invención en su forma de base libre con un ácido orgánico o inorgánico adecuado y aislar la sal así formada. Las sales representativas incluyen las sales de bromhidrato, clorhidrato, sulfato, bisulfato, fosfato, nitrato, acetato, valerato, oleato, palmitato, estearato, laurato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartrato, naftilato, mesilato, glucoheptonato, lactobionato y laurilsulfonato. (Véase, por ejemplo, Berge y col. (1977) "Pharmaceutical Salts", J Pharm Sci 66:1-19.)

En otros casos, los compuestos desvelados en el presente documento pueden contener uno o más grupos funcionales ácidos y, por tanto, ser capaces de formar sales farmacéuticamente aceptables con bases farmacéuticamente aceptables. La expresión "sales farmacéuticamente aceptables" en estos casos se refiere a sales de adición de bases orgánicas e inorgánicas, relativamente no tóxicas, de los compuestos desvelados en el presente documento. Estas sales se pueden preparar del mismo modo in situ durante el aislamiento final y la purificación de los compuestos o haciendo reaccionar por separado el compuesto purificado en su forma de ácido libre con una base adecuada, tal como el hidróxido, carbonato o bicarbonato de un catión metálico farmacéuticamente aceptable, con amoniaco o con una amina orgánica primaria, secundaria o terciaria, farmacéuticamente aceptable. Las sales alcalinas o alcalinotérreas representativas incluyen las sales de litio, sodio, potasio, calcio, magnesio y aluminio. Las aminas orgánicas representativas útiles para la formación de sales de adición de base incluyen etilamina, dietilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina y piperazina.

La expresión "tratar" o "tratamiento", como se usa en el presente documento, se refiere a la aplicación o administración de un compuesto, solo o en combinación con, un agente adicional a un sujeto, por ejemplo, un sujeto que tiene un trastorno (por ejemplo, un trastorno como se ha descrito en el presente documento), un síntoma de un trastorno o una predisposición a un trastorno, con el fin de curar, sanar, aliviar, mitigar, alterar, remediar, subsanar, mejorar o afectar al trastorno.

Como se usa en el presente documento, el término "sujeto" pretende incluir seres humanos y animales no humanos. Los sujetos humanos a modo de ejemplo incluyen un sujeto humano que tiene un trastorno, por ejemplo, un trastorno descrito en el presente documento. La expresión "animales no humanos" de la invención incluye todos los vertebrados, por ejemplo, no mamíferos (tales como aves, anfibios, reptiles) y mamíferos, tales como primates no humanos, animales domesticados y/o útiles para la agricultura, por ejemplo, oveja, perro, gato, vaca, cerdo, etc.

Los términos "antagonista" e "inhibidor" se usan de manera intercambiable para referirse a un agente que disminuye o suprime una actividad biológica, tal como reprimir una actividad de un canal iónico, tal como TRPA1. Los inhibidores de TRPA1 incluyen inhibidores que tienen cualquier combinación de las propiedades estructurales y/o funcionales desveladas en el presente documento.

Una "cantidad eficaz" de, por ejemplo, un antagonista de TRPA1, con respecto a los procedimientos de inhibición o tratamiento en cuestión, se refiere a una cantidad del antagonista en una preparación que, cuando se aplica como parte de un régimen de dosificación deseado, proporciona un resultado clínico o funcional deseado. Sin limitarse a la teoría, una cantidad eficaz de un antagonista de TRPA1 para su uso en los procedimientos de la presente invención incluye una cantidad de un antagonista de TRPA1 eficaz para disminuir una o más de las funciones in vitro o in vivo de un canal de TRPA1. Las funciones a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, polarización de la membrana (por ejemplo, un antagonista puede prevenir la despolarización de una célula), flujo de iones, concentración de iones en una célula, corriente de salida y corriente de entrada. Los compuestos que antagonizan la función de TRPA1 incluyen compuestos que antagonizan una actividad funcional in vitro o in vivo de TRPA1. Cuando una actividad funcional particular se observa con facilidad solamente en un ensayo in vitro, la capacidad de un compuesto para inhibir una función de TRPA1 en ese ensayo in vitro sirve como un sustituto razonable de la actividad de ese compuesto. En determinadas realizaciones, una cantidad eficaz es una cantidad suficiente para inhibir una corriente mediada por TRPA1 y/o la cantidad suficientes para inhibir un flujo de iones mediado por TRPA1.

El término "hidrato", como se usa en el presente documento, se refiere a un compuesto formado por la unión de agua con el compuesto precursor. La expresión "que previene", cuando se usa en relación a un compuesto o composición para su uso en un procedimiento para prevenir una afección, tal como una recurrencia local (por ejemplo, dolor), una enfermedad tal como cáncer, un síndrome complejo tal como fallo cardíaco o cualquier otra afección médica, se conoce bien la técnica e incluye la administración de una composición que reduce la frecuencia de, o retrasa la aparición de, los síntomas de una afección médica en un sujeto con respecto a un sujeto que no recibe la composición. Por lo tanto, compuesto o composición para su uso en un procedimiento para prevenir cáncer incluye, por ejemplo, reducir el número de crecimientos cancerosos detectable en una población de pacientes que reciben una tratamiento profiláctico en relación con una población de control sin tratar y/o retrasar la aparición de crecimientos cancerosos detectables en una población tratada frente a una población de control sin tratar, por ejemplo, mediante una cantidad estadística y/o clínicamente significativa. Un compuesto o composición para su uso en un procedimiento para prevenir una infección incluye, por ejemplo, reducir el número de diagnósticos de la infección en una población tratada frente a una población de control sin tratar y/o retrasar la aparición de los síntomas de la infección en una población tratada frente a una población de control sin tratar. Un compuesto o composición para su uso en un procedimiento para prevenir el dolor incluye, por ejemplo, reducir la magnitud de o, como alternativa, retrasar, las sensaciones de dolor experimentadas por sujetos en una población tratada frente a una población de control sin tratar.

El término "profármaco" pretende incluir compuestos que, en condiciones fisiológicas, se convierten en los principios terapéuticamente activos de la presente invención. Un procedimiento común para elaborar un profármaco es incluir restos seleccionados que se hidrolizan en condiciones fisiológicas para liberar la molécula deseada. En otras realizaciones, el profármaco se convierte mediante actividad enzimática dentro del animal hospedador.

El término "solvato", como se usa en el presente documento, se refiere a un compuesto formado por solvatación (por ejemplo, un compuesto formado por la combinación de moléculas del disolvente con moléculas o iones del soluto).

Las expresiones "TRPA1", "proteína TRPA1" y "canal TRPA1" se usan de manera intercambiable a lo largo de la solicitud. Estas expresiones se refieren a un canal iónico (por ejemplo, un polipéptido) que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 5 del documento w O 2007/073505 o un polipéptido equivalente o un fragmento bioactivo funcional del mismo. En determinadas realizaciones, el término se refiere a un polipéptido que comprende, que consiste en o que consiste esencialmente en, la secuencia de aminoácidos expuesta en Se Q ID No : 1, SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 5. TRPA1 incluye polipéptidos que retienen una función de TRPA1 y comprende (i) toda o una porción de la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 o SEQ ID n O: 5; (ii) la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 5 con de 1 a aproximadamente 2, 3, 5, 7, 10, 15, 20, 30, 50, 75 o más sustituciones de aminoácidos conservadoras; (iii) una secuencia de aminoácidos que es al menos un 70 %, 75 %, 80 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % idéntica a la SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 5 y (iv) fragmentos funcionales de las mismas. Los polipéptidos de la invención incluyen también homólogos, por ejemplo, ortólogos y parálogos, de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 5.

El "exceso enantiomérico" o "% de exceso enantiomérico" de una composición se puede calcular usando la ecuación mostrada a continuación. En el ejemplo mostrado a continuación una composición contiene el 90 % de un enantiómero, por ejemplo, el enantiómero S y un 10 % del otro enantiómero, es decir, el enantiómero R.

ee = (90-10)/100 = 80%

Por lo tanto, una composición que contiene un 90% de un enantiómero y un 10 % del otro enantiómero se dice que tiene un exceso enantiomérico del 80 %.

El "exceso diastereomérico" o "% de exceso diastereomérico" de una composición se puede calcular usando la ecuación mostrada a continuación. En el ejemplo mostrado a continuación, una composición contiene un 90 % de un diastereómero y un 10 % de otro enantiómero.

de = (90-10)/100 = 80%

Por lo tanto, una composición que contiene un 90 % de un diastereómero y un 10 % del otro diastereómero se dice que tiene un exceso diastereomérico del 80 %.

Definiciones químicas

En diversos lugares de la presente memoria descriptiva, los sustituyentes de los compuestos de la invención se desvelan en grupos o en intervalos. Se pretende de manera específica que la invención incluya cada una y todas las subcombinaciones individuales de los miembros de dichos grupos e intervalos. Por ejemplo, la expresión "alquilo C1-6" pretende de manera específica desvelar de forma individual metilo, etilo, alquilo C3, alquilo C4, alquilo C5 y alquilo C6.

Para los compuestos de la invención en los que una variable aparece más de una vez, cada variable puede ser un resto diferente seleccionado entre el grupo de Markush que define la variable. Por ejemplo, cuando se describe una estructura que tiene dos grupos R que están presentes de manera simultánea en el mismo compuesto; los dos grupos R pueden representar restos diferentes seleccionados entre el grupo de Markush definido para R.

Se aprecia además que determinadas características de la invención, que, en aras de la claridad, se han descrito en el contexto de realizaciones separadas, se pueden proporcionar también en combinación en una realización individual. Por el contrario, varias características de la invención que, por brevedad, se han descrito en el contexto de una única realización, también se pueden proporcionar por separado o en cualquier subcombinación adecuada.

Como se usa en el presente documento, "alquilo", por sí mismo o como parte de otro sustituyente, significa, a menos que se indique otra cosa, una cadena lineal o ramificada y puede tener un número de átomos de carbono opcionalmente designado (es decir, C1-C6 significa de uno a seis carbonos). Los ejemplos de grupos hidrocarburo saturados incluyen, pero no se limitan a, grupos tales como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutilo, sec-butilo, n-pentilo, isopentilo, homólogos e isómeros de, por ejemplo, n-pentilo o n-hexilo.

Como se usa en el presente documento, "alquileno" se refiere a un alquilo divalente, por ejemplo, -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2CH2- y -CH2CH2CH2CH2CH2CH2-.

Como se usa en el presente documento, "alquenilo" puede ser una cadena de hidrocarburo lineal o ramificada, que contiene al menos un doble enlace y que tiene de dos a seis átomos de carbono (es decir alquenilo C2-C6). Los ejemplos de grupos alquenilo, incluyen, pero no se limitan a, grupos tales como etenilo (es decir, vinilo), prop-1-enilo (es decir, alilo), but-1-enilo, pent-1-enilo y penta-1,4-dienilo.

Como se usa en el presente documento, "alcoxi" puede ser un grupo alcoxi de cadena lineal o ramificada que tiene de uno a seis átomos de carbono (es decir, alcoxi C1-C6). Los ejemplos de grupos alcoxi, incluyen, pero no se limitan a, grupos tales como metoxi, etoxi, propiloxi, isopropiloxi, butiloxi, isobutiloxi, terc-butiloxi, pentiloxi o hexiloxi.

Como se usa en el presente documento, "alquinilo" puede ser una cadena de hidrocarburo lineal o ramificada, que contiene al menos un triple enlace, que tiene de dos a seis átomos de carbono (es decir alquilino C2-C6). Los ejemplos de grupos alquinilo, incluyen, pero no se limitan a, grupos tales como etinilo, propinilo, butinilo, pentinilo y hexinilo.

Como se usa en el presente documento, "amino" o "amina" se refiere a un grupo radical -NH2.

Como se usa en el presente documento, "arilo" se refiere a un resto de hidrocarburo aromático, poliinsaturado que puede ser un único anillo o múltiples anillos (por ejemplo, de 1 a 2 anillos) que están condensados juntos o unidos covalentemente, que tienen de seis a doce átomos de carbono (es decir, arilo C6-C12). Los ejemplos no limitantes de grupos arilo incluyen fenilo, 1-naftilo, 2-naftilo y 4-bifenilo.

Como se usa en el presente documento, "cicloalquilo" se refiere a un radical monocíclico o policíclico que contiene solamente carbono e hidrógeno y puede estar saturado o parcialmente insaturado. Los grupos cicloalquilo incluyen grupos que tienen de 3 a 10 átomos en el anillo (es decir, cicloalquilo C3-C10). Los ejemplos de grupos cicloalquilo incluyen, pero no se limitan a, grupos tales como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclopentenilo, ciclohexilo, ciclohexenilo, cicloseptilo, ciclooctilo, ciclononilo, ciclodecilo o norbornilo.

Como se usa en el presente documento, "halo" o "halógeno", de forma independiente o como parte de otro sustituyente, significa, a menos que se indique otra cosa, un átomo de flúor, cloro, bromo o yodo. El término "haluro", por sí mismo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un átomo de flúor, cloro, bromo o yodo.

Como se usa en el presente documento, "haloalquilo" y "haloalcoxi" pueden incluir estructuras alquilo y alcoxi que están sustituidas con uno o más grupos halo o con combinaciones de los mismos. Por ejemplo, los términos "fluoroalquilo" y "fluoroalcoxi" incluyen grupos haloalquilo y haloalcoxi, respectivamente, en los que el halo es flúor.

Como se usa en el presente documento, "heteroalquilo" puede incluir un alquilo opcionalmente sustituido, que tiene uno o más átomos de la cadena esqueletal seleccionados entre un átomo distinto de carbono, por ejemplo, oxígeno, nitrógeno, azufre, fósforo o combinaciones de los mismos. Se puede dar un intervalo numérico, por ejemplo heteroalquilo C1-C6, que se refiere al número de carbonos en la cadena, que en este ejemplo incluye de 1 a 6 átomos de carbono. Por ejemplo, un radical -CH2OCH2CH3 se denomina como un heteroalquilo "C3". La conexión con el resto de la molécula puede ser a través de un heteroátomo o de un carbono en la cadena heteroalquilo.

Como se usa en el presente documento, "heteroarilo" se refiere a un radical aromático de 5 a 14 miembros (por ejemplo, heteroarilo C2-C13) que incluye uno o más heteroátomos en el anillo seleccionados entre nitrógeno, oxígeno y azufre y que puede ser un sistema de anillo monocíclico o bicíclico. Los radicales bivalentes derivados de radicales heteroarilo univalentes cuyos nombres terminan en "-ilo", mediante la eliminación de un átomo de hidrógeno del átomo con la valencia libre se nombran añadiendo "-ideno" al nombre del radical univalente correspondiente, por ejemplo, un grupo piridilo con dos puntos de unión es un piridilideno. Un resto "heteroaromático" o "heteroarilo" que contiene N se refiere a un grupo aromático en que al menos uno de los átomos esqueletales del anillo es un átomo de nitrógeno. El grupo heteroarilo policíclico puede estar condensado o no condensado. El heteroátomo o los heteroátomos en el radical arilo están opcionalmente oxidados. Uno o más átomos de nitrógeno, si están presentes, están opcionalmente cuaternizados. El heteroarilo está unido al resto de la molécula a través de cualquier átomo del anillo o los anillos. Los ejemplos de grupos heteroarilo incluyen, sin limitación, piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, piridazinilo, triazinilo, furilo (furanilo), quinolilo, isoquinolilo, tienilo, imidazolilo, tiazolilo, indolilo, pirrilo, oxazolilo, benzofurilo, benzotienilo, benzotiazolilo, isoxazolilo, pirazolilo, triazolilo, tetrazolilo, indazolilo, 1,2,4-tiadiazolilo, isotiazolilo, benzotienilo, purinilo, carbazolilo, benzoimidazolilo e indolinilo. Como se usa en el presente documento, "heterociclilo" o "heterocicloalquilo" puede ser un radical anillo heterociclo, mono, di, tri o tricíclico, no aromático, de 3 a 18 miembros, que comprende de dos a doce átomos de carbono y de uno a seis heteroátomos seleccionados entre nitrógeno, oxígeno y azufre. Los ejemplos de grupos heterocicloalquilo incluyen, pero no se limitan a, grupos tales como dioxolanilo, tienil[1,3]ditianilo, decahidroisoquinolilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, isotiazolidinilo, isoxazolidinilo, morfolinilo, octahidroindolilo, octahidroisoindolilo, 2-oxopiperazinilo, 2-oxopiperidinilo, 2-oxopirrolidinilo, oxazolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, 4-piperidonilo, azetidinilo, pirrolidinilo, pirazolidinilo, quinuclidinilo, tiazolidinilo, tetrahidrofurilo, tritianilo, tetrahidropiranilo, tiomorfolinilo, tiamorfolinilo, 1-oxo-tiomorfolinilo y 1,1-dioxo-tiomorfolinilo.

Como se usa en el presente documento, "hidroxi" o "hidroxilo" se refiere a -OH.

Como se usa en el presente documento, "ciano" se refiere a -CN.

Como se usa en el presente documento, "nitro" se refiere a -NO2.

Como se usa en el presente documento, se contempla que el término "sustituido" incluye todos los sustituyentes permisibles de los compuestos orgánicos. En un aspecto amplio, los sustituyentes permisibles incluyen sustituyentes acíclicos y cíclicos, ramificados y sin ramificar, carbocíclicos y heterocíclicos, aromáticos y no aromáticos, de los compuestos orgánicos (por ejemplo, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heteroarilo, cualquiera de los cuales puede a su vez estar sustituido adicionalmente), así como halógeno, carbonilo (por ejemplo, aldehído, cetona, éster, carboxilo o formilo), tiocarbonilo (por ejemplo, tioéster, tiocarboxilato o tioformiato), amino (por ejemplo, -N(Rb)(Rc), en los que cada Rb y Rc es independientemente H o alquilo C1-C6) ciano, nitro, -SO2N(Rb)(Rc), -SORd y S(O)2Rd, en los que cada Rb, Rc y Rd es independientemente H o alquilo C1-C6. Los sustituyentes ilustrativos incluyen, por ejemplo, los descritos anteriormente en el presente documento. Los sustituyentes permisibles pueden ser uno o más y los mismos o diferentes para los compuestos orgánicos apropiados. Para los fines de la presente invención, los heteroátomos tales como nitrógeno pueden tener sustituyentes de hidrógeno y/o sustituyentes permisibles de los compuestos orgánicos descritos en el presente documento que satisfacen las valencias de los heteroátomos. La presente invención no pretende estar limitada en modo alguno por los sustituyentes permisibles de los compuestos orgánicos.

Se entenderá que "sustitución" o "sustituido con" incluye la condición implícita de que dicha sustitución esté en concordancia con la valencia permitida del átomo sustituido y el sustituyente y que la sustitución dé como resultado un compuesto estable, por ejemplo, que no experimente transformación de forma espontánea tal como mediante redisposición, ciclación, eliminación, etc.

Las abreviaturas Me, Et, Ph, Tf, Nf, Ts, Ms representan metilo, etilo, fenilo, trifluorometanosulfonilo, nonafluorobutanosulfonilo, p-toluenosulfonilo y metanosulfonilo, respectivamente. Una lista más exhaustiva de las abreviaturas utilizadas por los químicos orgánicos con experiencia habitual en la técnica aparece en la primera edición de cada volumen del Journal of Organic Chemistry; esta lista se presenta habitualmente en una tabla titulada Standard List of Abbreviations

Los equivalentes contemplados de los compuestos descritos anteriormente incluyen compuestos que de otro modo les corresponden y que tienen las mismas propiedades generales de los mismos (por ejemplo, la capacidad para inhibir la actividad de TRPA1), en los que se hacen una o más variaciones sencillas de los sustituyentes que no afectan de manera adversa a la eficacia del compuesto. En general, los compuestos de la presente invención pueden prepararse por los procedimientos ilustrados en los esquemas de reacción generales como, por ejemplo, los descritos a continuación o por modificaciones de los mismos, usando materiales de partida, reactivos y procedimientos de síntesis convencionales fácilmente disponibles. En estas reacciones, también es posible usar variantes que son conocidas en sí mismas, pero que no se mencionan en el presente documento.

Para los fines de la presente invención, los elementos químicos se identifican de acuerdo con la Tabla Periódica de Elementos, versión CAS, Handbook of Chemistry and Physics, 67a Ed., 1986-87, cubierta interior. Además, para los fines de la presente invención, se contempla que el término "hidrocarburo" incluye todos los compuestos permisibles que tienen al menos un átomo de hidrógeno y uno de carbono. En un aspecto amplio, los hidrocarburos permisibles incluyen compuestos orgánicos acíclicos y cíclicos, ramificados y sin ramificar, carbocíclicos y heterocíclicos, aromáticos y no aromáticos, que pueden estar sustituidos o sin sustituir.

Compuestos

En el presente documento se describen compuestos, que pueden ser útiles en el tratamiento de un trastorno en el que la inhibición de TRPA1 es beneficiosa. Dichos trastornos se describen en el presente documento.

Los compuestos incluyen compuestos de fórmula (I)

Fórmula (I)

en la que:

R1 es H, alquilo C1-C6, alquenilo C1-C6 o alquinilo C1-C6;

R2 es H, alquilo C1-C6, alquenilo C1-C6 o alquinilo C1-C6 opcionalmente sustituido con uno o más grupos R5; R3 es H, alquilo C1-C6, alquenilo C1-C6 o alquinilo C1-C6;

R4 es halo, hidroxi, alcoxi, tiol, alquiltio, amino, alquilamino, dialquilamino, ciano, nitro, amido, alquilamido, dialquilamido, tioílo, sulfonilo, ciclilo, heterociclilo, arilo o heteroarilo, opcionalmente sustituido en una o más posiciones con 1-4 grupos R6;

R5 es independientemente H, halógeno, alquilo, aralquilo, alquenilo, alquinilo, hidroxi, amino, amido, fosfonato, carboxilo, éter, alquiltio, haloalquilo y ciano y

R6 es independientemente H, halógeno, alquilo, aralquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, hidroxi, amino, nitro, sulfhidrilo, imino, amido, fosfato, fosfonato, fosfinato, carbonilo, carboxilo, sililo, éter, alquiltio, sulfonilo, cetona, aldehído, éster, heterociclo, un anillo aromático o heteroaromático, haloalquilo y ciano.

En algunas realizaciones, R1 es alquilo C1-C6, por ejemplo, -CH3. En algunas realizaciones, R1 es H.

En algunas realizaciones, R2 es H o alquilo C1-C6, por ejemplo, -CH3, -CD3 o -CHF2.

En algunas realizaciones, cada R1 y R2 es independientemente alquilo C1-C6, por ejemplo, -CH3. En algunas realizaciones, cada R1 y R2 es independientemente -CH3 y R3 es H.

En algunas realizaciones, R3 es H. En algunas realizaciones, R3 es alquilo C1-C6, por ejemplo, -CH3.

En algunas realizaciones, cada uno de R1 y R2 y R3 es independientemente alquilo C1-C6, por ejemplo, -CH3.

En algunas realizaciones, el compuesto de fórmula (I) es el compuesto de fórmula (la):

Fórmula (la).

En algunas realizaciones, el compuesto de fórmula (I) de la reivindicación 1, es el compuesto de fórmula (Ib):

Fórmula (lb).

En algunas realizaciones, R4 es heterociclilo, por ejemplo, un anillo de 4 a 8 miembros. En algunas realizaciones, el heterociclilo está unido a través de un átomo de nitrógeno. En algunas realizaciones, R4 es heterociclilo sustituido. En algunas realizaciones, R4 se selecciona entre el grupo:

En algunas realizaciones, R4 se selecciona entre el grupo:

y m es 1.

En algunas realizaciones, R4 se selecciona entre el grupo:

y

En algunas realizaciones, R4 se selecciona entre el grupo:

y m es 1.

En algunas realizaciones, R4 se selecciona entre el grupo:

En algunas realizaciones, m es 0. En algunas realizaciones, m es 1.

En algunas realizaciones, R6 es alquilo, haloalquilo o ciano, por ejemplo, alquilo o haloalquilo, tal como -CF3. En algunas realizaciones, R4 se selecciona entre el grupo:

En algunas realizaciones, el compuesto de fórmula (I) es de fórmula (II):

en la que:

n es un número entero de 0 a 4 y

m se selecciona entre un número entero de 0 a 4.

En algunas realizaciones, el compuesto de fórmula (I) es de fórmula (IIa):

en la que:

n es un número entero de 0 a 4 y

m se selecciona entre un número entero de 0 a 4.

En algunas realizaciones, el compuesto de fórmula (I) es de fórmula (IIb):

en la que:

n es un número entero de 0 a 4 y

m se selecciona entre un número entero de 0 a 4.

En algunas realizaciones, el compuesto se selecciona entre el grupo siguiente y

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En algunas realizaciones, el compuesto se selecciona entre el grupo siguiente:

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En algunas realizaciones, un compuesto de fórmula (I) tiene un punto de fusión superior a o igual a aproximadamente 100 °C. En algunas realizaciones, dicho compuesto de fórmula (I) tiene un punto de fusión superior o igual a aproximadamente 125 °C, aproximadamente 150 °C, aproximadamente 175 °C o aproximadamente 180 °C. En algunas realizaciones, dicho compuesto de fórmula (I) tiene un punto de fusión en el intervalo de aproximadamente 180 °C a aproximadamente 205 °C. En algunas realizaciones, dicho compuesto de fórmula (I) tiene un punto de fusión en el intervalo de aproximadamente 190 °C a aproximadamente 200 °C. En algunas realizaciones, dicho compuesto de fórmula (I) tiene un punto de fusión en el intervalo de aproximadamente 190 °C a aproximadamente 196 °C.

En algunas realizaciones, se produce una forma cristalina sólida de un compuesto de fórmula (I) después de tratamiento de suspensión con un disolvente adecuado (por ejemplo, etanol, agua o una combinación de los mismos). En algunas realizaciones, se produce una forma cristalina sólida (por ejemplo, una forma cristalina sólida anhidra) de un compuesto de fórmula (I) después de tratamiento de suspensión con un disolvente adecuado (por ejemplo, etanol, agua o una combinación de los mismos) seguido de un tratamiento adicional (por ejemplo, tratamiento al vacío, por ejemplo, -80 °C durante un día).

En algunas realizaciones, una forma cristalina de un compuesto de fórmula (I) (por ejemplo, producido después de tratamiento de suspensión con un disolvente adecuado, por ejemplo, etanol, agua o una combinación de los mismos y, opcionalmente, seguido de un tratamiento adicional, por ejemplo, tratamiento al vacío, por ejemplo, -80 °C durante un día) tiene un punto de fusión superior a o igual a aproximadamente 100 °C. En algunas realizaciones, dicha forma cristalina sólida de un compuesto de fórmula (I) tiene un punto de fusión superior a o igual a aproximadamente 125 °C, aproximadamente 150 °C, aproximadamente 175 °C o aproximadamente 180 °C. En algunas realizaciones, dicha forma cristalina sólida de un compuesto de fórmula (I) tiene un punto de fusión en el intervalo de aproximadamente 180 °C a aproximadamente 205 °C. En algunas realizaciones, dicha forma cristalina sólida de un compuesto de fórmula (I) tiene un punto de fusión en el intervalo de aproximadamente 190 °C a aproximadamente 200 °C. En algunas realizaciones, dicha fórmula cristalina sólida de un compuesto de fórmula (I) tiene un punto de fusión en el intervalo de aproximadamente 190 °C a aproximadamente 196 °C.

En algunas realizaciones, el compuesto de fórmula (I) es:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, el cual se denomina como compuesto 2, ejemplo 2 o compuesto del ejemplo 2 en el presente documento.

En algunas realizaciones, una forma cristalina sólida del compuesto 2 (por ejemplo, la forma A) se produce después de tratamiento de suspensión con un disolvente adecuado (por ejemplo, etanol, agua o una combinación de los mismos). En algunas realizaciones, dicha forma cristalina sólida del compuesto 2 (por ejemplo, la forma A) tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende picos característicos, expresados en términos de 20, en uno o más de los ángulos siguientes: aproximadamente 7,67°, aproximadamente 12,52°, aproximadamente 13,49° y aproximadamente 19,31°. En algunas realizaciones, dicha forma cristalina sólida del compuesto 2 (por ejemplo, la forma A) tiene picos característicos como los mostrados en la Figura 1.

En algunas realizaciones, una forma cristalina sólida del compuesto 2 (por ejemplo, una forma cristalina sólida anhidra del compuesto 2, por ejemplo, la forma B) se produce después de tratamiento de suspensión con un disolvente adecuado (por ejemplo, etanol, agua o una combinación de los mismos) seguido de un tratamiento adicional (por ejemplo, tratamiento al vacío, por ejemplo, -80 °C durante un día). En algunas realizaciones, dicha forma cristalina sólida del compuesto 2 (por ejemplo, una forma cristalina sólida anhidra del compuesto 2, por ejemplo, la forma B) tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende picos característicos, expresados en términos de 20, en uno o más de los ángulos siguientes: aproximadamente 9,78°, aproximadamente 12,98°, aproximadamente 19,20° y aproximadamente 19,67°. En algunas realizaciones, dicha forma cristalina sólida del compuesto 2 (por ejemplo, una forma cristalina sólida anhidra del compuesto 2, por ejemplo, la forma B) tiene picos característicos como los mostrados en la Figura 2.

En algunas realizaciones, una forma cristalina sólida del compuesto 2 (por ejemplo, una forma cristalina sólida anhidra del compuesto 2, por ejemplo, la forma B) tiene un punto de fusión superior a o igual a aproximadamente 100 °C. En algunas realizaciones, dicha forma cristalina sólida del compuesto 2 (por ejemplo, una forma cristalina sólida anhidra del compuesto 2, por ejemplo, la forma B) tiene un punto de fusión superior a o igual a aproximadamente 125 °C, aproximadamente 150 °C, aproximadamente 175 °C o aproximadamente 180 °C. En algunas realizaciones, dicha forma cristalina sólida del compuesto 2 (por ejemplo, una forma cristalina sólida anhidra del compuesto 2, por ejemplo, la forma B) tiene un punto de fusión en el intervalo de aproximadamente 180 °C a aproximadamente 205 °C. En algunas realizaciones, dicha forma cristalina sólida del compuesto 2 (por ejemplo, una forma cristalina sólida anhidra del compuesto 2, por ejemplo, la forma B) tiene un punto de fusión en el intervalo de aproximadamente 190 °C a aproximadamente 200 °C. En algunas realizaciones, dicha forma cristalina sólida del compuesto 2 (por ejemplo, una forma cristalina sólida anhidra del compuesto 2, por ejemplo, la forma B) tiene un punto de fusión en el intervalo de aproximadamente 190 °C a aproximadamente 196 °C. En algunas realizaciones, dicha forma cristalina sólida del compuesto 2 (por ejemplo, una forma cristalina sólida anhidra del compuesto 2, por ejemplo, la forma B) tiene una traza de calorimetría diferencial de barrido como la mostrada en la Figura 3.

En algunas realizaciones, una forma cristalina sólida del compuesto 2 (por ejemplo, una forma cristalina sólida anhidra del compuesto 2, por ejemplo, la forma B) se produce después de tratamiento de suspensión con un disolvente adecuado (por ejemplo, etanol, agua o una combinación de los mismos) seguido de un tratamiento adicional (por ejemplo, tratamiento al vacío, por ejemplo, -80 °C durante un día) en el que dicha forma cristalina sólida del compuesto 2 (por ejemplo, una forma cristalina sólida anhidra del compuesto 2, por ejemplo, la forma B) tiene un punto de fusión superior a o igual a aproximadamente 150 °C y un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende picos característicos, expresados en términos de 20, en uno o más de los ángulos siguientes: aproximadamente 9,78°, aproximadamente 12,98°, aproximadamente 19,20° y aproximadamente 19,67°. En algunas realizaciones, una forma cristalina sólida del compuesto 2 (por ejemplo, una forma cristalina sólida anhidra del compuesto 2, por ejemplo, la forma B) se produce después de tratamiento de suspensión con un disolvente adecuado (por ejemplo, etanol, agua o una combinación de los mismos) seguido de un tratamiento adicional (por ejemplo, tratamiento al vacío, por ejemplo, -80 °C durante un día) en el que dicha forma cristalina sólida del compuesto 2 (por ejemplo, una forma cristalina sólida anhidra del compuesto 2, por ejemplo, la forma B) tiene un punto de fusión en el intervalo de 185 °C a aproximadamente 205 °C y un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende picos característicos, expresados en términos de 20, en uno o más de los ángulos siguientes: aproximadamente 9,78°, aproximadamente 12,98°, aproximadamente 19,20° y aproximadamente 19,67°.

Ciertas realizaciones de la presente invención comprenden una preparación farmacéutica purificada que comprende un compuesto de fórmula (I). En algunas realizaciones, la preparación farmacéutica comprende un exceso diastereomérica de más de o igual a aproximadamente el 55 % (por ejemplo, aproximadamente el 60 %, aproximadamente el 70 %, aproximadamente el 80 %, aproximadamente el 90 %, aproximadamente el 95 %, aproximadamente el 99 % o aproximadamente el 99,5 %) de un diastereómero sobre el otro diastereómero. En algunas realizaciones, la preparación farmacéutica comprende un exceso diastereomérica de más de o igual al 95 % de un diastereómero sobre el otro diastereómero. En algunas realizaciones, la preparación farmacéutica comprende un exceso diastereomérica de más de o igual al 99 % de un diastereómero sobre el otro diastereómero.

En algunas realizaciones, la preparación farmacéutica comprende menos de o igual a aproximadamente un contenido de humedad del 10 % (por ejemplo, contenido de agua). En algunas realizaciones, la composición farmacéutica menos de o igual a aproximadamente el 9 %, aproximadamente el 8 %, aproximadamente el 7 %, aproximadamente el 6 %, aproximadamente el 5 %, aproximadamente el 4 %, aproximadamente el 3 %, aproximadamente el 2 %, aproximadamente el 1%, aproximadamente el 0,5%, aproximadamente el 0,1%, aproximadamente el 0,05%, aproximadamente el 0,01 % o aproximadamente el 0,001 % de contenido de humedad (por ejemplo, contenido de agua). En algunas realizaciones, la preparación farmacéutica está sustancialmente libre de humedad (por ejemplo, agua).

En algunas realizaciones, la preparación farmacéutica comprende un compuesto de fórmula (I), en la que el compuesto es:

En algunas realizaciones, la preparación farmacéutica comprende un compuesto de fórmula (I), en la que el compuesto es el compuesto 2 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y la preparación tiene un exceso diastereomérico del compuesto 2 superior a o igual a aproximadamente el 99 %. En algunas realizaciones, la preparación farmacéutica comprende un compuesto de fórmula (I), en la que el compuesto es el compuesto 2 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y la preparación tiene un contenido de humedad (por ejemplo, contenido de agua) de menos de o igual a aproximadamente el 0,1 %. En algunas realizaciones, la preparación farmacéutica comprende un compuesto de fórmula (I), en la que el compuesto es el compuesto 2 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y la preparación tiene un exceso diastereomérico del compuesto 2 superior a o igual a aproximadamente el 99 % y un contenido de humedad (por ejemplo, contenido de agua) de menos de o igual a aproximadamente el 0,1 %.

En algunas realizaciones, la preparación farmacéutica comprende una forma cristalina sólida del compuesto 2 (por ejemplo, la forma A) que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende picos característicos, expresados en términos de 20, en uno o más de los ángulos siguientes: aproximadamente 7,67°, aproximadamente 12,52°, aproximadamente 13,49° y aproximadamente 19,31° y la preparación tiene un exceso diastereomérico del compuesto 2 superior a o igual a aproximadamente el 99 % y un contenido de humedad (por ejemplo, contenido de agua) de menos de o igual a aproximadamente el 0,1 %.

En algunas realizaciones, la preparación farmacéutica comprende una forma cristalina sólida del compuesto 2 (por ejemplo, la forma B) que tiene un punto de fusión en el intervalo de 185 °C a aproximadamente 205 °C y un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende picos característicos, expresados en términos de 20, en uno o más de los ángulos siguientes: aproximadamente 9,78°, aproximadamente 12,98°, aproximadamente 19,20° y aproximadamente 19,67° y la preparación tiene un exceso diastereomérico del compuesto 2 superior a o igual a aproximadamente el 99 % y un contenido de humedad (por ejemplo, contenido de agua) de menos de o igual a aproximadamente el 0,1 %.

Los compuestos de fórmula (I) incluyen moléculas que tienen una solubilidad en agua adecuada para administración oral o parenteral (por ejemplo, intravenosa) que conducen a o dan como resultado el tratamiento de un trastorno descrito en el presente documento, por ejemplo el tratamiento del dolor. En algunas realizaciones, el compuesto se formula en una composición adecuada para administración oral. La potencia para inhibir el canal iónico TRPA1 de los compuestos de fórmula (I) descritos en el presente documento se ha medido usando el procedimiento del ejemplo 33. La tabla 14 desvela la potencia de inhibición de TRPA1 in vitro de los compuestos a modo de ejemplo (medido por el procedimiento del ejemplo 33).

Los compuestos de fórmula (I) preferidos incluyen los compuestos que inhiben el canal iónico TRPA1 con un valor de CI 50 obtenido por el procedimiento del ejemplo 33 de menos de aproximadamente 100 nM (preferentemente, menos de aproximadamente 75 nM, más preferentemente menos de aproximadamente 25 nM).

Los compuestos de fórmula (I) pueden inhibir el canal iónico TRPA1. En algunas realizaciones, se puede administrar un compuesto de fórmula (I) como parte de una composición farmacéutica oral o parenteral (por ejemplo, intravenosa) para tratar un trastorno descrito en el presente documento (por ejemplo, dolor)de una manera terapéuticamente eficaz.

Ciertos compuestos desvelados en el presente documento pueden existir en formas geométricas o estereoisoméricas particulares. La presente invención contempla que todos estos compuestos, que incluyen isómeros cis y trans, enantiómeros R y S, diastereómeros, isómeros (D), isómeros (L), las mezclas racémicas de los mismos y otras mezclas de los mismos, entran dentro de la invención. Por ejemplo, si un centro quiral está presente en una molécula, la invención incluye las mezclas racémicas, las mezclas enantioméricamente enriquecidas y los compuestos enantiomérica o diastereoméricamente sustancialmente puros. La composición puede contener, por ejemplo, más del 50 %, más del 60 %, más del 70 %, más del 80 %, más del 90 %, más del 95 % o más del 99 % de un enantiómero o diastereómero individual. Pueden estar presentes más átomos de carbono asimétricos en un sustituyente tal como un grupo alquilo. Todos estos isómeros, así como las mezclas de los mismos, se pretende que estén incluidos en la presente invención.

Los compuestos descritos en el presente documento pueden contener también proporciones no naturales de isótopos atómicos en uno o más de los átomos que constituyen dichos compuestos. Por ejemplo, los compuestos se pueden radiomarcar con isótopos radiactivos, tales como, por ejemplo, tritio (3H), yodo-125 (125I) o carbono-14 (14C). Todas las variaciones isotópicas de los compuestos desvelados en el presente documento, sean o no radiactivos, se pretende que estén abarcadas dentro de la presente invención. Por ejemplo, se pretende que los compuestos deuterados y los compuestos que incorporan 13C estén abarcados dentro de la presente invención.

Ciertos compuestos desvelados en el presente documento pueden existir en formas no solvatadas así como en formas solvatadas, incluyendo formas hidratadas. En general, las formas solvatadas son equivalentes a las formas no solvatadas y están abarcadas dentro de la presente invención. Ciertos compuestos desvelados en el presente documento pueden existir en múltiples formas cristalinas o amorfas. En general, todas las formas físicas son equivalentes para los usos contemplados por la presente invención y se pretende que estén dentro de la presente invención.

Composiciones farmacéuticas

Las composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos descritos en el presente documento, tales como un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se pueden usar para tratar o mejorar un trastorno descrito en el presente documento, por ejemplo, un trastorno que responde a la inhibición del canal iónico TRPA1 en sujetos (por ejemplo, seres humanos y animales).

La cantidad y concentración de los compuestos de fórmula (I) en las composiciones farmacéuticas, así como la cantidad de la composición farmacéutica administradas a un sujeto, se puede seleccionar basándose en factores de relevancia clínica, tales como características médicas relevantes del sujeto (por ejemplo, edad, peso, género y otras condiciones médicas), la solubilidad de los compuestos en las composiciones farmacéuticas, la potencia y la actividad de los compuestos y la forma de administración de las composiciones farmacéuticas. Para más información sobre vías de administración y regímenes de dosificación se remite al lector al capítulo 25.3 del volumen 5 de Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990.

Aunque es posible que un compuesto desvelado en el presente documento se administre por sí solo, es preferible administrar el compuesto en forma de una formulación farmacéutica, en la que el compuesto se combina con uno o más excipientes o vehículos farmacéuticamente aceptables. Los compuestos desvelados en el presente documento se pueden formular para su administración por cualquier vía conveniente para su uso en un ser humano o en la medicina veterinaria. En determinadas realizaciones, el compuesto incluido en la preparación farmacéutica puede ser activo en sí mismo o puede ser un profármaco, por ejemplo, capaz de convertirse en un compuesto activo en un entorno fisiológico.

La expresión "farmacéuticamente aceptable" se emplea en el presente documento para referirse a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que son, dentro del ámbito del buen criterio médico, adecuados para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, acorde con una relación de beneficio/riesgo razonable.

Los ejemplos de vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen: (1) azúcares, tales como lactosa, glucosa y sacarosa; (2) almidones, tales como almidón de maíz y almidón de patata; (3) celulosa y sus derivados, tales como carboximetil celulosa sódica, etilcelulosa y acetato de celulosa; (4) tragacanto en polvo; (5) malta; (6) gelatina; (7) talco; (8) excipientes, tales como manteca de cacao y ceras para supositorios; (9) aceites, tales como aceite de cacahuete, aceite de semillas de algodón, aceite de cártamo, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soja; (10) glicoles, tales como propilenglicol; (11) polioles, tales como glicerin sorbitol, manitol y polietilenglicol; (12) ésteres, tales como oleato de etilo y laurato de etilo; (13) agar; (14) agentes tamponantes, tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; (15) ácido algínico; (16) agua libre de pirógenos; (17) solución salina isotónica; (18) solución de Ringer; (19) alcohol etílico; (20) soluciones de tampón fosfato; (21) ciclodextrinas tales como Captisol® y (22) otras sustancias compatibles no tóxicas empleadas en las formulaciones farmacéuticas.

Los ejemplos de antioxidantes farmacéuticamente aceptables incluyen: (1) antioxidantes solubles en agua, tales como ácido ascórbico, clorhidrato de cisteína, bisulfato sódico, metabisulfito sódico y/o sulfito sódico; (2) antioxidantes solubles en aceite, tales como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, galato de propilo y/o alfa-tocoferol y (3) agentes quelantes de metales, tales como el ácido cítrico, ácido etilendiamina tetraacético (EDTA), sorbitol, ácido tartárico y/o ácido fosfórico.

Las formas de dosificación sólidas (por ejemplo, cápsulas, comprimidos, píldoras, grageas, polvos y/o gránulos) pueden incluir uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, tales como citrato sódico o fosfato dicálcico y/o cualquiera de los siguientes: (1) cargas o extensores, tales como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y/o ácido silícico; (2) aglutinantes, tales como, por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa y/o goma arábiga; (3) humectantes, tales como glicerol; (4) agentes disgregantes, tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidón de patata o tapioca, ácido algínico, determinados silicatos y carbonato sódico; (5) agentes retardantes de la solución, tales como parafina; (6) aceleradores de la absorción, tales como compuestos de amonio cuaternario; (7) agentes humectantes, tales como, por ejemplo, alcohol cetílico y monoestearato de glicerol; (8) absorbentes, tales como caolín y arcilla de bentonita; (9) lubricantes, tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, lauril sulfato de sodio y mezclas de los mismos y (10) agentes colorantes.

Las formas de dosificación líquidas pueden incluir emulsiones, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Además del principio activo, las formas de dosificación líquidas pueden contener diluyentes inertes habitualmente usados en la técnica, tales como, por ejemplo, agua un otros disolventes, agentes solubilizantes y emulsionantes, tales como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, aceites (en particular, aceites de semilla de algodón, cacahuete, maíz, germen, oliva, ricino y sésamo), glicerol, alcohol tetrahidrofurílico, polietilenglicoles y ésteres de ácidos grasos de sorbitán y mezclas de los mismos.

Las suspensiones, además de los compuestos activos, pueden contener agentes de suspensión como, por ejemplo, alcoholes de isoestearilo etoxilados, polioxietilen sorbitol y ésteres de sorbitán, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar y tragacanto y mezclas de los mismos.

Las pomadas, pastas, cremas y geles pueden contener, además de un compuesto activo, excipientes, tales como grasas animales y vegetales, aceites, ceras, parafinas, almidón, tragacanto, derivados de celulosa, polietilenglicoles, siliconas, bentonitas, ácido silícico, talco y óxido de cinc o mezclas de los mismos.

Los polvos y pulverizaciones pueden contener, además de un compuesto activo, excipientes tales como lactosa, talco, ácido silícico, hidróxido de aluminio, silicatos de calcio y polvo de poliamida o mezclas de estas sustancias. Los pulverizadores pueden contener además propulsores habituales, tales como clorofluorohidrocarburos e hidrocarburos volátiles no sustituidos, tales como butano y propano.

Las formulaciones pueden presentarse de manera conveniente en forma de dosificación unitaria y pueden prepararse mediante cualquier procedimiento bien conocido en la técnica farmacéutica. La cantidad de principio activo que se puede combinar con un material de vehículo para producir una forma de dosificación unitaria variará dependiendo del hospedador que se está tratando, el modo de administración particular. La cantidad de principio activo que se puede combinar con un material de vehículo para producir una forma de dosificación unitaria generalmente será la cantidad del compuesto que produce un efecto terapéutico. Generalmente, del cien por cien, esta cantidad variará de aproximadamente el 1 por ciento a aproximadamente el noventa y nueve por ciento del principio activo, preferentemente de aproximadamente el 5 por ciento a aproximadamente el 70 por ciento, más preferentemente de aproximadamente el 10 por ciento a aproximadamente el 30 por ciento.

Los comprimidos y otras formas de dosificación sólidas de las composiciones farmacéuticas desveladas en el presente documento, tales como grageas, cápsulas, píldoras y gránulos, opcionalmente se pueden ranurar o preparar con recubrimientos y cubiertas, tales como recubrimientos entéricos y otros recubrimientos bien conocidos en la técnica de la formulación farmacéutica. También se podrían formular de manera que proporcionen una liberación controlada del principio activo que se está usando, por ejemplo, hidroxipropilmetil celulosa en proporciones variables para proporcionar el perfil de liberación deseado, otras matrices de polímero, liposomas y/o microesferas. Se pueden esterilizar mediante, por ejemplo, filtración a través de un filtro que retiene las bacterias o incorporando agentes esterilizantes en forma de composiciones sólidas estériles que se pueden disolver en agua estéril o algún otro medio inyectable estéril inmediatamente antes de su uso. Opcionalmente, estas composiciones también pueden contener agentes opacificantes y pueden ser de una composición tal que liberan el o los principios activos solo, o preferentemente, en una porción determinada del tracto gastrointestinal, opcionalmente, de forma retardada. Los ejemplos de composiciones de inclusión que se pueden usar incluyen sustancias poliméricas y ceras. El principio activo también puede estar en forma microencapsulada, si es adecuado, con uno o más de los excipientes descritos anteriormente.

Las formas de dosificación para la administración tópica o transdérmica de un compuesto de la presente invención incluyen polvos, pulverizaciones, pomadas, pastas, cremas, lociones, geles, soluciones, parches e inhaladores. El compuesto activo se puede mezclar en condiciones estériles con un vehículo farmacéuticamente aceptable y con cualquier conservante, tampón o propulsor que se pueda necesitar.

Las formulaciones desveladas en el presente documento se pueden suministrar mediante un dispositivo. Los dispositivos a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, un catéter, alambre, stent otro dispositivo intraluminal. Otros dispositivos de administración a modo de ejemplo incluyen también un parche, vendaje, protector bucal o aparato dental. Los parches transdérmicos tienen la ventaja añadida de proporcionar un suministro controlado de un compuesto desvelado en el presente documento al cuerpo. Dichas formas de dosificación se pueden elaborar disolviendo o dispersando el compuesto en el medio apropiado. También se pueden usar potenciadores de la absorción para aumentar el flujo del compuesto a través de la piel. La velocidad de dicho flujo puede controlarse ya sea proporcionando una membrana de control de la velocidad o dispersando el compuesto en una matriz polimérica o gel.

Las formulaciones oftálmicas, ungüentos oftálmicos, gotas y soluciones, se contempla que están también dentro de la invención.

En algunos casos, para prolongar el efecto de un fármaco, es deseable ralentizar la absorción del fármaco mediante inyección subcutánea o intramuscular. Esto se puede conseguir mediante el uso de una suspensión líquida de material cristalino o amorfo que tiene una pobre solubilidad en agua. La velocidad de absorción del fármaco entonces depende de su velocidad de disolución, que, a su vez, puede depender del tamaño del cristal y la forma cristalina. Como alternativa, la absorción retardada de una forma de administración por vía parenteral se consigue disolviendo o suspendiendo el fármaco en un vehículo oleoso.

Las formas de depósitos inyectables se elaboran formando matrices microencapsuladas de los compuestos objeto en polímeros biodegradables tales como polilactida-poliglicólido. Dependiendo de la relación de fármaco a polímero y la naturaleza del polímero particular empleado, se puede controlar la velocidad de liberación del fármaco. Los ejemplos de otros polímeros biodegradables incluyen poli(ortoésteres) y poli(anhídridos). Las formulaciones de depósito inyectables se preparan también atrapando el fármaco en liposomas o microemulsiones que con compatibles con el tejido corporal.

Cuando los compuestos desvelados en el presente documento se administran en forma de productos farmacéuticos, a seres humanos y animales, se pueden dar per se o en forma de una composición farmacéutica que contiene, por ejemplo, del 0,1 al 99,5 % (más preferentemente, del 0,5 al 90 %) de principio activo junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Las formulaciones se pueden administrar por vía tópica, oral, transdérmica, rectal, vaginal, parenteral, intranasal, intrapulmonar, intraocular, intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardíaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutánea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoidea, intraespinal, intraesternal o por inhalación.

Una realización específica es una composición antitusiva para administración peroral que comprende un agente que inhibe una corriente mediada por TRPA1 con un CI50 de 1 micromolar o menos y un vehículo farmacéuticamente aceptable por vía oral, en forma de un líquido de base acuosa o un sólido que se disuelve en la boca, seleccionado entre el grupo que consiste en jarabe, elixir, suspensión, pulverización, pastilla para chupar, pastilla masticable, polvo y comprimido masticable. Dichas composiciones antitusivas pueden incluir uno o más agentes adicionales para tratar los síntomas de tos, alergia o asma, seleccionados entre el grupo que consiste en: antihistamínicos, inhibidores de 5-lipoxigenasa, inhibidores de leucotrieno, inhibidores de H3, agonistas del receptor p-adrenérgico, derivados de xantina, agonistas del receptor a-adrenérgico, estabilizadores de mastocitos, espectorantes y antagonistas del receptor de taquiquinina NK1, Nk 2 y NK3.

Otra realización más es un dispensador en aerosol de dosis medida que contiene una composición farmacéutica en aerosol para administración pulmonar o nasal que comprende un agente que inhibe una corriente mediada por TRPA1 con una CI50 de 1 micromolar o menos. Por ejemplo, puede ser un inhalador de dosis medida, un inhalador de polvo seco o un nebulizador de chorro de aire.

Dosificaciones

Los niveles de dosificación reales de los principios activos en las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden variar para obtener una cantidad de principio activo que es eficaz para conseguir la respuesta terapéutica deseada para un paciente particular, composición y modo de administración, sin ser tóxicos para el paciente.

El nivel de dosificación seleccionado dependerá de una diversidad de factores que incluyen la actividad del compuesto particular desvelado en el presente documento empleado o el éster, la sal o la amida del mismo, la vía de administración, el momento de administración, la velocidad de excreción del compuesto particular que se está empleando, la duración del tratamiento, otros fármacos, compuestos y/o materiales usados en combinación con el compuestos particular empleado, la edad, sexo, peso, condición, salud general e historial médico anterior del paciente que se está tratando y factores similares bien conocidos en las técnicas médicas.

Un médico o veterinario que tiene la habilidad habitual en la técnica puede determinar y prescribir con facilidad la cantidad eficaz de la composición farmacéutica requerida. Por ejemplo, el médico o veterinario podría comenzar con dosis de los compuestos de la invención empleados en la composición farmacéutica a niveles inferiores al requerido para conseguir el efecto terapéutico deseado y gradualmente aumentar la unidad de dosificación hasta conseguir el efecto deseado.

En general, una dosis diaria adecuada de un compuesto de la invención será la cantidad del compuesto que es la menor dosis eficaz para producir un efecto terapéutico. Dicha dosis eficaz generalmente dependerá de los factores descritos anteriormente. Generalmente, las dosis intravenosa, intracerebroventricular, intratecal y subcutánea de los compuestos descritos en el presente documento para un sujeto variarán de aproximadamente 0,0001 a aproximadamente 100 mg por kilogramo de peso corporal al día. Por ejemplo, la dosis puede ser de 1-50, 1-25 o 5-10mg/kg. Generalmente, las dosis orales de los compuestos descritos en el presente documento para un sujeto variarán de aproximadamente 1 a aproximadamente 1.000 mg/día (por ejemplo, de aproximadamente 5 a aproximadamente 500 mg/día.

Si se desea, la dosis diaria eficaz del compuesto activo se puede administrar en forma de dos, tres, cuatro, cinco, seis o más subdosis administradas por separado a intervalos apropiados a lo largo del día, opcionalmente, en formas de dosificación unitarias.

Procedimientos de tratamiento

Los compuestos descritos en el presente documento se pueden usar para tratar o prevenir un trastorno descrito en el presente documento. Por ejemplo, en el presente documento se proporcionan compuestos con actividad inhibidora de TRPA1 para la prevención, tratamiento o mejora de los síntomas de una enfermedad o afección asociada con TRPA1. Los compuestos de fórmula (I) o las composiciones farmacéuticas que contienen uno o más compuestos de fórmula (I), se pueden administrar para tratar trastornos, afecciones o enfermedades descritas en el presente documento tales como las que se pueden tratar mediante la inhibición de TRPA1. Por ejemplo, las composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos de fórmula (I) o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, son útiles como analgésico perioperatorio, por ejemplo en el tratamiento del dolor agudo medio a moderado postoperatorio y el tratamiento del dolor agudo moderado a grave, como complemento de los analgésicos opioides. Las composiciones farmacéuticas que comprenden una dosis terapéuticamente eficaz de los compuestos de fórmula (I), se pueden administrar a un paciente para el tratamiento del dolor de una manera clínicamente segura y eficaz, que incluye una o más administraciones separadas de las composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de fórmula (I). Otros procedimientos a modo de ejemplo incluyen el tratamiento de la neuropatía diabética periférica (NDP) y la neuropatía periférica inducida por quimioterapia (NPIQ). Por ejemplo, una composición farmacéutica que comprende una dosis terapéuticamente eficaz de los compuestos de fórmula (I) o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos se puede administrar (por ejemplo, por vía intravenosa) a un sujeto que lo necesita múltiples veces al día (por ejemplo, DVD) durante una duración de tratamiento de uno o más días, para tratar el dolor en un sujeto. Las composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de fórmula (I) se pueden usar también para tratar o mejorar afecciones pulmonares, tales como enfermedades obstructivas, por ejemplo, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), asma (por ejemplo, asma inducida por frío, asma inducida por ejercicio, asma inducida por alergia y asma ocupacional) y tos.

Los expertos en el tratamiento de enfermedades relacionadas con la mediación del receptor de TRPA1 podrán determinar la cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) a partir de los resultados presentados a continuación en el presente documento. En general, una dosis diaria adecuada de un compuesto de la invención será aquella cantidad del compuesto que es la menor dosis capaz de producir un efecto terapéutico. Dicha dosis eficaz generalmente dependerá de diversos factores. Generalmente, las dosis oral, sublingual, rectal, intravenosa, tópica, transdérmica, inhalada e intracerebroventricular de los compuestos de la presente invención para un paciente variarán de aproximadamente 0,0001 a aproximadamente 100 mg por kilogramo de peso corporal al día. Por ejemplo, la dosis puede ser de 1-50, 1-25 o 5-10 mg/kg. Se contempla, por ejemplo, que una dosis terapéuticamente eficaz será de aproximadamente 0,001 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg por kg de peso corporal, más preferentemente de aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 10 mg/kg por kg de peso corporal del paciente a tratar. Puede ser apropiado administrar la dosis terapéuticamente eficaz en forma de dos o más subdosis a intervalos apropiados a lo largo del día. Dichas subdosis se pueden formular en formas de dosificación unitarias, por ejemplo conteniendo cada una de aproximadamente 0,1 mg a aproximadamente 1000 mg, más particularmente de aproximadamente 1 a aproximadamente 500 mg del principio activo por forma de dosificación unitaria.

La dosis exacta y la frecuencia de administración dependen del compuesto de fórmula (I) particular usado, la afección particular que se está tratando, la gravedad de la afección que se esté tratando, la edad, el peso y el estado físico general del paciente particular, así como otra medicación que el paciente pueda tomar, como saben bien los expertos en la técnica. Además, dicha "cantidad terapéuticamente eficaz" se puede reducir o aumentar dependiendo de la respuesta del paciente tratado y/o dependiendo de la evaluación del médico que prescribe los compuestos de la presente invención. Los intervalos de cantidad diaria eficaz mencionados anteriormente en el presente documento son, por lo tanto, solamente pautas. Un médico o veterinario que tiene la habilidad habitual en la técnica puede determinar y prescribir con facilidad la cantidad eficaz de la composición farmacéutica requerida.

Los trastornos a modo de ejemplo adecuados para tratar con un compuesto o composición descrita en el presente documento se proporcionan a continuación.

Dolor

Los compuestos de fórmula (I) que son útiles en la modulación de TRPA1 se pueden usar en la formulación de productos farmacéuticos analgésicos adecuados para el tratamiento y/o profilaxis del dolor en mamíferos, en especial en seres humanos. Los activadores endógenos de TRPA1 se producen durante muchas afecciones patológicas que incluyen lesión tisular, inflamación y estrés metabólico. Los compuestos y composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden administrar para tratar dolor resultante de la activación de TRPA1, incluyendo dolor neuropático. Las afecciones de dolor neuropático relevantes incluyen, pero no se limitan a, neuropatía diabética dolorosa, neuropatía periférica inducida por quimioterapia, dolor en la zona lumbar, neuralgia del trigémino, neuralgia postherpética, ciática y síndrome del dolor regional complejo.

Las composiciones y procedimientos proporcionados en el presente documento se pueden usar en relación con tratamiento de en el tratamiento de la inflamación y el dolor inflamatorio. Dichos trastornos incluyen artritis reumatoide, artrosis, trastorno temperomandibular. En algunas realizaciones, las composiciones y procedimientos proporcionados en el presente documento se pueden usar para tratar el dolor de cabeza, por ejemplo, jaqueca.

Los compuestos desvelados también son útiles en el tratamiento del dolor visceral y la inflamación. Las enfermedades relevantes incluyen pancreatitis, enfermedad inflamatoria del intestino, colitis, enfermedad de Crohn, endometriosis, dolor pélvico y angina.

Otras indicaciones para el dolor a modo de ejemplo para las que se pueden usar los compuestos desvelados en el presente documento incluyen trastorno temporomandibular, dolor por cáncer (resultante tanto de la enfermedad subyacente como de los tratamientos), dolor por quemadura, dolor oral, dolor oral debido a tratamiento del cáncer, dolor inducido por aplastamiento y lesión, dolor por incisión, dolor óseo, dolor por anemia de células falciformes, fibro mialgia y dolor musculoesquelético. TRPA1 ha demostrado desempeñar un papel en el dolor relacionado con el cáncer (véase, por ejemplo, Trevisan y col., Cancer Res (2013) 73(10):3120-3131); dolor postoperatorio (véase, por ejemplo, Wei y col., Anasthesiology (2012) 117:137-148); dolor patológico (véase, por ejemplo, Chen y col., Pain (2011) 152:2549-2556) y dolor relacionado con lesión química (véase, por ejemplo, Macpherson y col., J Neurosci (2007) 27(42):11412-11415).

Hiperalgesia (por ejemplo, hiperalgesia mecánica, hiperalgesia por frío) o sensibilidad aumentada al dolor (por ejemplo, agudo, crónico). La sensibilidad química múltiple es un trastorno relacionado con la exposición química con síntomas multiorgánicos que incluyen síntomas respiratorios y dolor de cabeza.

La alodinia (por ejemplo, alodinia cutánea, por ejemplo, cefálica, extracefálica) es un dolor debido a un estímulo que normalmente no provoca dolor, por ejemplo, estímulos de temperatura o físicos y difiere de la hiperalgesia, la cual generalmente se refiere a una reacción extrema, exagerada, a un estímulo que normalmente es doloroso.

Migraña

Los compuestos de fórmula (I) que son útiles en la modulación de TRPA1 se pueden usar en la formulación de productos farmacéuticos adecuados para el tratamiento y/o la profilaxis de la migraña en mamíferos, en especial en seres humanos. Se ha demostrado que la exposición a los activadores de TRPA1 desencadena la migraña en las poblaciones susceptibles. Dichos activadores incluyen, pero no se limitan a, umbelulona, nitroglicerina, humo de cigarrillos y formaldehído. Por consiguiente, los antagonistas de TRPA1 de la invención representan una posibilidad terapéutica significativa para el tratamiento de la migraña, tanto crónica como aguda.

Enfermedades y trastornos inflamatorios

Las composiciones y procedimientos proporcionados en el presente documento se pueden usar también en relación con el tratamiento de enfermedades inflamatorias. Estas enfermedades incluyen, pero no se limitan a, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide, artrosis, enfermedad inflamatoria del intestino, glomerulonefritis, enfermedades neuroinflamatorias tales como esclerosis múltiple y trastornos del sistema inmunitario. TRPA1 ha demostrado desempeñar un papel en el dolor pancreático y la inflamación (véase, por ejemplo, Schwartz y col., Gastroenterology (2011) 140(4):1283-1291).

Neuropatía periférica, por ejemplo neuropatía diabética (por ejemplo, neuropatía diabética dolorosa), es una afección particular que implica tanto un componente neuronal como uno inflamatorio. Sin estar atado por una teoría mecanicista, los agonistas de TRPA1 de la invención pueden ser útiles para tratar las neuropatías periféricas que incluyen, pero no se limitan a, neuropatía diabética. Además de su uso en el tratamiento de las neuropatías periféricas (por ejemplo, inflamación reducida), los inhibidores objeto pueden ser útiles también para reducir el dolor asociado con la neuropatía periférica. TRPA1 ha demostrado desempeñar un papel en la neuropatía y el dolor neuropático véase, por ejemplo, Wei y col., Anesthesiology (2009) 111:147-54; Koivisto y col., Pharmacol Res (2011) 65:149-158).

La inflamación neurogénica a menudo ocurre cuando la hiperexcitabilidad neuronal conduce a la liberación de péptidos que desencadenan la inflamación. Estos péptidos incluyen la sustancia P y CGRP. El bloqueo de TRPA1 podría reducir la actividad neuronal y, por lo tanto, podría bloquear la inflamación neurogénica. Por ejemplo, la inflamación neurogénica en el tracto respiratorio, puede dar como resultado síntomas de rinitis y asma alérgica y la inflamación neurogénica en la duramadre también puede mediar en el dolor de migraña.

Pancreatitis

La pancreatitis es una inflamación del páncreas. El páncreas es una glándula grande detrás del estómago y cerca del duodeno. Normalmente, las enzimas digestivas no se activan hasta que alcanzan el intestino delgado, en el que comienzan a digerir los alimentos. Pero si estas enzimas se activan dentro del páncreas, estas comienzan a "digerir" el propio páncreas. TRPA1 ha demostrado desempeñar un papel en el dolor pancreático y la inflamación (véase, por ejemplo, Schwartz y col., Gastroenterology (2011) 140(4):1283-1291.).

La pancreatitis aguda habitualmente, aunque no exclusivamente, está provocada por cálculos biliares o por abuso de alcohol. La pancreatitis aguda habitualmente comienza con dolor en la parte superior del abdomen que puede durar varios días. El dolor puede ser grave y se puede hacer constante. El dolor se puede aislar en el abdomen o puede alcanzar la espalda y otras áreas. En ocasiones y para algunos pacientes, el dolor es repentino e intenso. Otras veces o para otros pacientes, el dolor comienza como un dolor leve que empeora después de comer. Alguien con pancreatitis aguda a menudo parece y se siente muy enfermo. Otros síntomas pueden incluir abdomen hinchado y sensible, náuseas, vómitos, fiebre y pulso rápido. Los casos graves de pancreatitis aguda pueden causar deshidratación y presión sanguínea baja e incluso pueden conducir a fallo orgánico, hemorragia interna o muerte.

Durante los ataques de pancreatitis aguda, los niveles sanguíneos de amilasa y lipasa a menudo están aumentados en al menos 3 veces. También puede haber cambios en los niveles sanguíneos de glucosa, calcio, magnesio, sodio, potasio y bicarbonato.

El tratamiento actual depende de la gravedad del ataque. El tratamiento, en general, se diseña para mantener las funciones corporales vitales, gestionar el dolor y evitar complicaciones. Aunque habitualmente la pancreatitis aguda se resuelve en unos días, a menudo se requiere gestión del dolor durante un ataque. Los compuestos desvelados en el presente documento se pueden usar para mitigar el dolor asociado con la pancreatitis aguda.

Se puede desarrollar pancreatitis crónica si continúa la lesión en el páncreas. La pancreatitis crónica tiene lugar cuando las enzimas digestivas atacan y destruyen el páncreas y los tejidos cercanos, causando cicatrización y dolor. La pancreatitis crónica puede estar causada por alcoholismo o por conductos pancreáticos bloqueados, dañados o estrechados. Además, los factores hereditarios parecen influir en la enfermedad y, en ciertos casos, no hay causa identificable (la denominada pancreatitis idiopática).

La mayoría de la gente con pancreatitis crónica tiene dolor abdominal. El dolor puede empeorar cuando se come o se bebe, irradiarse a la espalda o hacerse constante e incapacitante. Otros síntomas incluyen náuseas, vómitos, pérdida de peso y heces grasas.

Aliviar el dolor es la primera etapa para tratar la pancreatitis crónica. Una vez se ha gestionado el dolor, se pone en marcha un plan dietético alto en carbohidratos y bajo en grasas. Se pueden usar enzimas pancreáticas para ayudar a compensar la disminución de la producción de enzimas del páncreas lesionado. En ocasiones se necesitan insulina u otros fármacos para controlar la glucosa en sangre.

Aunque el dolor se gestiona habitualmente usando terapia farmacológica, puede ser necesaria la cirugía para aliviar el dolor. La cirugía puede ser necesaria para drenar un conducto pancreático agrandado o incluso para eliminar una porción de un páncreas gravemente lesionado.

Con frecuencia el dolor está presente con la pancreatitis crónica. Por ejemplo, el dolor está presente para aproximadamente el 75 % de los pacientes con pancreatitis crónica alcohólica, el 50 % de los pacientes con pancreatitis crónica idiopática de inicio tardío y el 100 % de los pacientes con pancreatitis crónica idiopática de inicio temprano (DiMagno, Gastroenterology (1999) 116(5):1252-1257).

Una minoría de los pacientes con dolor tienen lesiones fácilmente identificables que son relativamente fáciles de tratar por vía quirúrgica o endoscópica. En otros pacientes, a menudo se piensa que el dolor es el resultado de una diversidad de causas, que incluyen presión intrapancreática elevada, isquemia y fibrosis. Sin limitarse a la teoría, sin embargo, estos fenómenos probablemente no son la causa subyacente del dolor. Más bien, el dolor puede ser el resultado de un trasfondo de sensibilización neuronal inducido por daño al perineuro y posterior exposición de los nervios a mediadores y productos de inflamación.

Dada la importancia de la gestión eficaz del dolor en pacientes con pancreatitis crónica, otras terapias para tratar los síntomas dolorosos son importantes y útiles. Los compuestos desvelados en el presente documento se pueden usar para gestionar el dolor asociado con la pancreatitis crónica; se pueden usar solos o como parte de un plan de tratamiento terapéutico general para gestionar pacientes con pancreatitis crónica. Por ejemplo, los compuestos se pueden administrar con enzimas pancreáticas y/o insulina como parte de un régimen terapéutico diseñado para gestionar pacientes con pancreatitis crónica.

Los tratamientos para el cáncer son no solamente dolorosos, sino que incluso pueden ser tóxicos para el tejido sano. Algunos agentes quimioterapéuticos pueden causar neuropatía dolorosa. Por consiguiente, los compuestos desvelados en el presente documento podrían representar una posibilidad terapéutica significativa para el tratamiento del dolor y/ la inflamación asociados con los tratamientos para el cáncer que causan neuropatía.

Una función principal de las prostaglandinas es proteger la mucosa gástrica. En esta función se incluye la modulación del nivel de calcio intracelular en las células gástricas humanas, que desempeña un papel crítico en la proliferación celular. En consecuencia, la inhibición de las prostaglandinas mediante fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINEs) puede inhibir la entrada de calcio en las células gástricas (Kokoska y col. (1998) Surgery (St Louis) 124(2):429-437). Los AINEs que alivian la inflamación de la manera más eficaz también producen el mayor daño gastrointestinal (Canadian Family Physician, 5 de enero de 1998, pág. 101). Por lo tanto, la habilidad para modular de manera independiente los canales de calcio en los tipos de células específicos puede ayudar a mejorar dicho efecto secundario de la terapia antiinflamatoria. Además, o como alternativa, la administración de los compuestos inhibidores de TRPA1 desvelados en el presente documento se puede usar en combinación con los AINEs, promoviendo de este modo el alivio del dolor usando dosis reducidas de AINEs.

TRPA1 puede mediar la nocicepción en curso en la pancreatitis crónica y puede estar implicado en la transformación de la inflamación y la hiperalgesia aguda en crónica en la pancreatitis. TRPA1 también puede mediar en la irritación y el ardor en la, por ejemplo, mucosa nasal y oral y el revestimiento respiratorio.

Neuropatía

Debido a que la sobreactividad de TRPA1 puede conducir a una sobrecarga tóxica de calcio, los antagonistas de TRPA1 también tienen utilidad en la prevención de neuropatía asociada con diabetes, lesión química, quimioterapia, medicinas tales como estatinas, VIH/SIDA, enfermedad de Fabry, deficiencia de vitaminas, polineuropatía hereditaria tal como enfermedad de Marie-Charcot Tooth y trauma. Las enfermedades neurodegenerativas periféricas tales como esclerosis lateral amiotrófica también pueden ser susceptibles de tratamiento con un antagonista de TRPA1.

Enfermedad pulmonar y tos

Las composiciones y procedimientos proporcionados en el presente documento se pueden usar también en relación con el tratamiento de las enfermedades pulmonares, que incluyen, pero no se limitan a, asma (incluyendo asma inducido por ejercicio, asma atópica, asma alérgica), Enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), enfisema, fibrosis quística, bronquiectasia, bronquiolitis, aspergilosis broncopulmonar alérgica, bronquiolitis obliterante (pulmón de trabajador de palomitas de maíz), enfermedades debidas a exposición química, que incluyen exposiciones a diacetilo, formaldehído y otros irritantes. Estas afecciones también incluyen tuberculosis, enfermedad pulmonar restrictiva, que incluye asbestosis, fibrosis por radiación, neumonitis por hipersensibilidad, síndrome de dificultad respiratoria infantil, fibrosis pulmonar idiopática, sarcoidosis por neumonía intersticial idiopática, neumonía eosinofílica, linfangioleiomiomatosis, histiocitosis pulmonar de células de Langerhan y proteinosis alveolar pulmonar; infecciones del tracto respiratorio, que incluyen infecciones del tracto respiratorio superior (por ejemplo, resfriado común, sinusitis, tonsillitis, faringitis y laringitis) e infecciones del tracto respiratorio inferior (por ejemplo, neumonía); tumores respiratorios, ya sean malignos (por ejemplo, cáncer de pulmón microcítico, cáncer de pulmón no microcítico, adenocarcinoma, carcinoma escamocelular, carcinoma indiferenciado macrocítico, carcinoide, mesotelioma, cáncer metastásico del pulmón, cáncer metastásico de células germinales, carcinoma metastásico de células renales) o benignos (por ejemplo, hamartoma pulmonar, malformaciones congénitas tales como secuestro pulmonar y malformación adenomatoídea quística (MAQ)); enfermedades de la cavidad pleural (por ejemplo, enfisema y mesotelioma) y enfermedades vasculares pulmonares, por ejemplo, embolia pulmonar tal como tromboembolia y embolia gaseosa (iatrogénica), hipertensión arterial pulmonar, edema pulmonar, hemorragia pulmonar, inflamación y daño a los capilares en el pulmón que da como resultado filtración de sangre en los alveolos. Otras afecciones que se pueden tratar incluyen trastornos que afectan a los mecanismos respiratorios (por ejemplo, apnea obstructiva del sueño, apnea central del sueño, síndrome de Guillan-Barre y miastenia gravis).

Los presentes compuestos también pueden ser útiles para tratar, reducir o prevenir la tos (con o sin la producción de esputos), tos asociada con asma, tos asociada con gripe, espectoración de sangre (hemoptisis), tos de etiología desconocida, tos inducida por alergia y tos debida a exposiciones químicas.

Trastornos dermatológicos

Una diversidad de agentes que causan picor activan TRPA1 directamente o mediante la activación de receptores que se acoplan a TRPA1 corriente abajo. Las composiciones y procedimientos proporcionados en el presente documento se pueden usar también en relación con el tratamiento del picor. Las indicaciones incluyen, pero no se limitan a, afecciones desencadenadas por exposición a químicos exógenos tales como dermatitis de contacto, hiedra venenosa, picor debido a cáncer, que incluye linfomas, picor causado por medicamentos tales como cloroquina, picor debido a metabolitos reactivos de fármacos o picor debido a piel seca.

Otras indicaciones a modo de ejemplo incluyen dermatitis atópica, psoriasis, urticaria, eccema, eccema dishidrótico, úlceras bucales, dermatitis del pañal.

Picor

El picor o prurito agudo, aunque proporciona una importante función protectora, por ejemplo, advirtiendo contra los agentes perniciosos del medio ambiente, también puede ser una afección debilitante que, por ejemplo, acompaña numerosos trastornos cutáneos, sistémicos y del sistema nervioso. Algunas formas de picor están mediadas por la señalización de histamina, ya que son susceptibles de tratamiento con, por ejemplo, antihistaminas. Sin embargo, la mayoría de las afecciones patofisiológicas de picor son insensibles al tratamiento con antihistaminas. Los compuestos y las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden administrar para tratar el picor.

La dermatitis atópica (DA) es un picor crónico y un trastorno inflamatorio de la piel. Los pacientes con DA grave pueden desarrollar asma y rinitis alérgica, también conocida como marcha atópica. La erupción cutánea y el prurito se pueden asociar con enfermedad atópica. El picor crónico, por ejemplo, en la DA y la psoriasis; incluye rasgos característicos patofisiológicos tales como fuerte rascado, hiperplasia epidérmica extensiva por, por ejemplo, eccema, insuficiencia renal, cirrosis, trastornos del sistema nervioso, algunos cánceres.

La dermatitis alérgica de contacto es una enfermedad común de la piel asociada con inflamación y prurito persistente.

Los procedimientos desvelados en el presente documento pueden inhibir el edema cutáneo, la hiperplasia de queratinocitos, el crecimiento nervioso, inflamación de leucocitos y el comportamiento de rascado resistente a antihistamina. Los procedimientos desvelados en el presente documento pueden inhibir la respuesta alérgica a, por ejemplo, estimulantes exógenos, por ejemplo, haptenos, oxazolona, urushiol (por ejemplo, de hiedra venenosa).

Modelos de enfermedades y lesiones

Los compuestos que antagonizan la función del TRPA1 pueden ser útiles en la profilaxis y el tratamiento de cualquiera de las lesiones enfermedades, trastornos o afecciones anteriores. Además de ensayos de la actividad in vitro de estos compuestos, su eficacia se puede probar fácilmente en uno o más modelos animales. Existen numerosos modelos animales para estudiar el dolor. Los distintos modelos utilizan varios agentes o procedimientos para simular el dolor resultante de lesiones, enfermedades u otras afecciones (véase, por ejemplo, Blackburn-Munro (2004) Trends in Pharmacol Sci (2004) 25:299-305 (por ejemplo, las Tablas 1, 3 o 4). A continuación, se pueden observar las características de comportamiento de los animales expuestos. Los compuestos o procedimientos que pueden reducir el dolor en los animales pueden probarse fácilmente observando las características de comportamiento de los animales expuestos en presencia del compuesto o compuestos de ensayo o procedimiento de ensayo frente a la ausencia de estos.

Como pruebas de comportamiento ilustrativas que se utilizan para estudiar el dolor crónico se incluyen pruebas de dolor espontáneo, alodinia e hiperalgesia. Id. Para evaluar el dolor espontáneo, puede observarse la postura, la marcha, los signos nociceptivos (por ejemplo, lamido de patas, acicalamiento excesivo, comportamiento exploratorio excesivo, vigilancia de la parte del cuerpo lesionada y automutilación). Para medir el dolor evocado, se pueden examinar las respuestas de comportamiento después de la exposición al calor (por ejemplo, modelo de lesión térmica).

Como ejemplos de modelos animales de dolor se incluyen, pero sin limitación, los modelos descritos en el modelo de Trevisan y las referencias de Koivisto, incluida la neuropatía diabética dolorosa inducida por estreptozotocina, la neuropatía periférica inducida por bortexomib y la neuropatía periférica inducida por oxaliplatino; el modelo de Chung, el modelo de lesión de nervio compartido, el modelo de hiperalgesia inducida por carragenano, el modelo de hiperalgesia inducida por adyuvante completo de Freund, el modelo de lesión térmica, el modelo de dolor inducido por formol y el modelo de Bennett.

En la referencia de Trevisan, el modelo de neuropatía periférica inducida por quimioterapia, implica la inducción de un fenotipo CIPN (por sus siglas en inglés chemotherapy-induced peripheral neuropathy, neuropatía periférica inducida por quimioterapia) en ratones, mediante tratamiento con bortexomib u oxaliplatino (Trevisan y col., Cancer Res (2013) 73:3120-3131). El tratamiento de un animal con un inhibidor del TRPA1 se puede evaluar utilizando cualquiera de una variedad de pruebas nociceptivas, tal como la prueba de filamento de Von Frey, la prueba de la placa caliente, la prueba de simulación de frío, de hiperalgesia química o la del cilindro giratorio.

El modelo de neuropatía diabética periférica (NDP) en la referencia de Koivisto, implica la inducción de la diabetes mellitus (DM) en ratas con estreptozotocina y la evaluación del reflejo axónico inducido por la inyección intraplantar de un agonista del TRPA1 (Koivisto y col., Pharmacol Res (2011) 65:149-158). El tratamiento con un compuesto que inhibe TRPA1 puede evaluarse para la reducción de la atenuación del reflejo axónico cutáneo inducido por DM.

El modelo de Chung de dolor neuropático (sin inflamación) implica la ligadura de uno o más nervios raquídeos (véase, por ejemplo, Chung y col., Methods Mol Med (2004) 99: 35-45; Kim y Chung, Pain (1992) 50, 355-363). La ligadura de los nervios raquídeos produce una variedad de cambios de comportamiento en los animales, incluida la hiperalgesia térmica, la alodinia al frio y el dolor continuo. Los compuestos que antagonizan el TRPA1 pueden administrarse a animales con ligadura para evaluar si disminuyen estos cambios de comportamiento inducidos por la ligadura, en comparación con lo observado en ausencia del compuesto.

La hiperalgesia inducida por carragenano y la hiperalgesia inducida por adyuvante completo de Freund (ACF), son modelos de dolor inflamatorio (véase, por ejemplo, Walker y col., J Pharmacol Exp Ther (2003) 304:56-62; McGaraughty y col. Br J Pharmacol (2003) 140:1381-1388; Honore y col. J Pharmacol Exp Ther (2005) 314:410-421). Los compuestos que antagonizan el TRPA1 pueden administrarse a animales expuestos a carragenano o a ACF para evaluar si disminuyen la hipersensibilidad al frío, mecánica o térmica, en comparación con lo observado en ausencia del compuesto. Además, en estos modelos también se puede evaluar la capacidad de los compuestos que antagonizan la función del TRPA1 para disminuir la hipersensibilidad mecánica y/o al frío. Normalmente, se cree que el modelo de hiperalgesia inducida por carragenano imita el dolor inflamatorio agudo y se cree que el modelo de ACF imita el dolor crónico y el dolor inflamatorio crónico.

Como ejemplos de modelos de dolor inflamatorio se incluyen el modelo de rata de inyección intraplantar de bradicinina. En resumen, la sensibilidad térmica de referencia de los animales se evalúa en un equipo de Hargreave. Después, por vía sistémica, se administran bloqueadores de TRPA1. Posteriormente, se inyecta bradicinina en la pata y se permite que se desarrolle una hiperalgesia. Después, durante las próximas horas, se mide la latencia de escape térmico en múltiples puntos temporales (Chuang y col., 2001; Vale y col., 2004).

La inflamación suele ser un factor importante que contribuye al dolor. Por ello, es útil para identificar compuestos que actúan como antiinflamatorios. Muchos compuestos que reducen la actividad neuronal también previenen la inflamación neurogénica. Para medir directamente la inflamación, el volumen de una pata de la rata se puede evaluar utilizando un pletismómetro. Una vez tomada la medición de referencia, se puede inyectar carragenano en la pata y controlar el volumen durante horas en los animales que han sido tratados con el vehículo o el fármaco. Los fármacos que reducen la hinchazón de la pata se consideran antiinflamatorios.

Las migrañas se asocian a un dolor significativo y a la incapacidad de realizar tareas normales. Existen varios modelos de migraña, incluido el modelo de inflamación neurogénica de rata (véase, por ejemplo, Buzzi y col Br J Pharmacol (1990) 99:202-206) y el modelo de Burstein (véase, por ejemplo, Strassman y col., Nature (1996) 384: 560-564).

El modelo de Bennett utiliza la isquemia prolongada de la pata para reflejar el dolor crónico (véase, por ejemplo, Xanthos y col. J Pain (2004) 5: S1). Esto proporciona un modelo animal para el dolor crónico, incluido el dolor posoperatorio, el síndrome de dolor regional complejo y la distrofia simpático refleja. La isquemia prolongada induce cambios de comportamiento en los animales, incluida la hiperalgesia a los estímulos mecánicos, la sensibilidad al frío, los comportamientos de dolor (por ejemplo., sacudir las patas, lamerlas y/o favorecerlas), e hiperpatía. Los compuestos que antagonizan el TRPA1 pueden administrarse a animales expuestos para evaluar si disminuyen alguno o todos estos comportamientos en comparación con los observado en ausencia del compuesto. Se pueden realizar experimentos similares en un modelo de lesión térmica o de quemaduras por rayos UV que se puede utilizar para imitar el dolor postoperatorio.

Los modelos adicionales de dolor neuropático incluyen modelos de dolor central basados en la lesión de la médula espinal. El dolor crónico se genera induciendo una lesión de la médula espinal, por ejemplo, dejando caer un peso sobre una zona de la médula espinal expuesta quirúrgicamente (por ejemplo, modelo de caída de peso). La lesión de la médula espinal también se puede inducir aplastando o comprimiendo la médula espinal, suministrando neurotoxina, utilizando productos fotoquímicos o hemiseccionando la médula espinal.

Los modelos adicionales de dolor neuropático incluyen modelos de lesión de nervios periféricos. Como ejemplos de modelos se incluyen, pero sin limitación, el modelo de neuroma, el modelo de Bennett, el modelo de Seltzer, el modelo de Chung (ligadura en L5 o L5/L6), el modelo de crioneurolisis del nervio ciático, el modelo de resección del tronco caudal inferior y el modelo de neuritis inflamatoria del nervio ciático.

Id.

También se dispone de ejemplos de modelos de dolor neuropático asociado a enfermedades particulares. La diabetes y el herpes zóster son dos enfermedades que a menudo vienen acompañadas de dolor neuropático. Incluso después de episodios agudos de herpes zóster, algunos pacientes continúan padeciendo neuralgia posherpética y sienten un dolor persistente que dura años. El dolor neuropático causado por el herpes zóster y/o la neuralgia posherpética se puede estudiar en el modelo de neuralgia posherpética (NPH). La neuropatía diabética se puede estudiar en modelos de ratón diabético, así como en modelos de neuropatía diabética inducida químicamente.

Como se ha indicado anteriormente, el dolor por cáncer puede tener diversas causas, y existen numerosos modelos animales para examinar el dolor por cáncer relacionado con, por ejemplo, productos quimioterápicos o infiltración tumoral. Como ejemplos de modelos de dolor por cáncer relacionado con toxinas, se incluyen el modelo de neuropatía periférica inducida por vincristina, el modelo de neuropatía periférica inducida por taxol y el modelo de neuropatía periférica inducida por cisplatino. Un modelo ilustrativo de dolor por cáncer causado por infiltración tumoral es el modelo de dolor por invasión del cáncer (CIP, siglas del inglés cáncer invasión pain). Id.

Los cánceres de hueso primarios y metastásicos se asocian a un inmenso dolor. Existen varios modelos de dolor por cáncer de hueso, incluido el modelo de dolor por cáncer de hueso de fémur (CHF) de ratón, el modelo de dolor por cáncer de hueso calcáneo (CHC) de ratón y el modelo de cáncer de hueso de tibia (CHT) de rata. Id.

Otro modelo de dolor es el modelo de formol. Al igual que en los modelos de carragenano y de ACF, el modelo de formol implica la inyección de un irritante por vía intradérmica o intraperitoneal en un animal. La inyección de formol, una solución al 37 por ciento de formaldehído, es el agente más utilizado habitualmente para la inyección intradérmica en la pata (prueba de formol). La inyección de una solución de formol del 0,5 al 15 por ciento (normalmente de aproximadamente el 3,5 %) en la superficie dorsal o plantar de la pata delantera o trasera produce una respuesta dolorosa bifásica de intensidad creciente y decreciente durante aproximadamente 60 minutos después de la inyección. Las respuestas típicas incluyen levantar la pata, lamerla, mordisquearla o sacudirla. Estas respuestas se consideran nociceptivas. La fase inicial de la respuesta (también conocida como fase inmediata), que dura entre 3 y 5 minutos, probablemente se deba a la estimulación química directa de los nociceptores. A esto le sigue un intervalo de 10 a 15 minutos durante el cual los animales muestran un comportamiento de nocicepción poco sugerente. La segunda fase de esta respuesta (también conocida como fase tardía) comienza aproximadamente al cabo de 15 a 20 minutos después de la inyección de formol y dura entre 20 y 40 minutos, aumentando inicialmente con el número y la frecuencia de los comportamientos nociceptivos, alcanzando un pico, y después disminuyendo. Las intensidades de estos comportamientos nociceptivos dependen de la concentración de formol utilizada. La segunda fase implica un período de sensibilización durante el cual se producen fenómenos inflamatorios. Las dos fases de reactividad a la inyección de formol hacen que el modelo de formol sea un modelo apropiado para estudiar el dolor inflamatorio agudo y nociceptivo. También puede modelar, en algunos aspectos, el dolor neuropático.

Además de cualquiera de los modelos anteriores de dolor crónico, los compuestos que antagonizan la función del TRPA1 se pueden probar en uno o más modelos de dolor agudo (véase, por ejemplo, Valenzano y col. (2005) Neuropharmacology 48:658-672). Independientemente de si los compuestos se prueban en modelos de dolor crónico, dolor agudo, o ambos, estos estudios normalmente se realizan (aunque no exclusivamente), por ejemplo, en ratones, ratas o cobayas. Adicionalmente, los compuestos se pueden probar en varias líneas celulares que proporcionan ensayos in vitro del dolor.

Muchas personas que buscan tratamiento para el dolor padecen dolor visceral. Los modelos animales de dolor visceral incluyen el modelo de rata de dolor uterino inflamatorio (véase, por ejemplo, Wesselmanny col., Pain (1997) 73:309-317), la inyección de aceite de mostaza en el tubo gastrointestinal para imitar el síndrome del intestino irritable (véase, por ejemplo, Kimball y col., (2005) Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol, 288(6):G1266-73), la inyección de aceite de mostaza en la vejiga para imitar hiperactividad o cistitis vesical (véase, por ejemplo, Riazimand (2004), BJU Int 94:158-163). La eficacia de un compuesto TRPA1 se puede evaluar a través de una disminución del retorcimiento (de dolor), inflamación gastrointestinal o excitabilidad vesical.

Para probar la eficacia de los antagonistas de TRPA1 en el tratamiento de la tos, pueden realizarse fácilmente experimentos utilizando el modelo de tos en cobayas conscientes (véase, por ejemplo, Tanaka y Maruyama (2003) J Pharmacol Sci 93:465-470; McLeod y col. (2001) Br J Pharmacol 132: 1175-1178). En resumen, las cobayas sirven como un modelo animal útil para la tos porque, a diferencia de otros roedores, como los ratones y las ratas, las cobayas realmente tosen. Por otro lado, la tos de las cobayas parece imitar la tos humana en cuanto a la postura, comportamiento y aspecto del animal que tose.

Para inducir la tos, cobayas conscientes se exponen a un agente inductor, tal como ácido cítrico o capsaicina. La respuesta del animal se mide contando el número de toses. La eficacia de un agente supresor de la tos, por ejemplo, un compuesto que inhibe el TRPA1, se puede medir administrando el agente y evaluando la capacidad del mismo para disminuir el número de toses provocadas por la exposición al ácido cítrico, a la capsaicina o a otro agente similar inductor de la tos. De esta manera, pueden evaluarse e identificarse fácilmente inhibidores del TRPA1 para su uso en el tratamiento de la tos.

Otros modelos de tos también pueden incluir el modelo de tos en cobayas no conscientes (véase, por ejemplo, Rouget y col. (2004) Br J Pharmacol 141: 1077-1083). Cualquiera de los modelos anteriores puede adaptarse para su uso en otros animales que pueden toser. Como ejemplos de otros animales que pueden toser se incluyen los gatos y los perros.

Los compuestos de la invención se pueden probar en múltiples modelos de asma. Un ejemplo es el modelo murino de asma inducido por ovoalbúmina (véase, por ejemplo, Caceres Al y col., Proc Natl Acad Sci U S A. (2009) 106(22):9099-104). En este modelo, durante 2 semanas se inyecta varias veces ovoalbúmina en la cavidad intraperitoneal. En algún momento de la tercera semana, los animales se exponen a ovoalbúmina intranasal y se mide la hiperreactividad de las vías respiratorias, la inflamación y la producción de citocinas inflamatorias. Los compuestos se administran durante la fase de exposición del modelo. Según indican Caceres y col., en los modelos anteriores, pueden sustituirse ratones con Trpa1 desactivado.

Un ejemplo de un modelo de asma en animales de gran tamaño es el modelo de asma alérgica en ovejas conscientes descrito en Abraham, W.M. y col., que puede utilizarse para evaluar los efectos de los compuestos sobre la respuesta de la fase tardía del asma inducida por antígenos (Abraham WM., Am J Respir Crit Care Med (2000) 162(2):603-11). En resumen, antes de la administración nebulizada de extracto de Ascaris suum para inducir el asma, la reactividad de referencia de las vías respiratorias se mide con un pletismógrafo en ovejas conscientes. Una vez obtenidas las lecturas de referencia, los animales se exponen a una dosis nebulizada de Ascaris suum. La sensibilidad al antígeno se determina a través de la disminución de la resistencia al flujo pulmonar con respecto al valor de referencia. Una vez que los animales demuestran sensibilidad al antígeno, los compuestos de ensayo pueden administrarse y obtenerse lecturas de resistencia al flujo pulmonar adicionales para evaluar los cambios de reactividad de las vías respiratorias. Algunas veces también se utilizan modelos en el caballo y el perro beagle.

Otros modelos pueden incluir el modelo de rata marrón noruega y el modelo de asma de ratón C57BL/6J como se describe en Raemdonck y col., (Raemdonck K y col., Thorax (2012) enero;67(1):19-25). En resumen, las ratas marrón noruegas y los ratones C57BL/6J pueden sensibilizarse con ovoalbúmina y exponerse a ésta suministrada en aerosol. Una vez confirmada la sensibilidad mediante la disminución de la función pulmonar medida a través de las lecturas del pletismógrafo de cuerpo entero, pueden administrarse los compuestos de la invención. También puede haber signos visuales y auditivos de dificultad respiratoria, incluyendo respiración sibilante.

Dermatitis

Actualmente existen múltiples modelos de ratón de enfermedades dermatológicas. Por ejemplo, Liu y col., describen múltiples modelos de dermatitis por contacto inducida por oxazolona y urushiol (véase, por ejemplo, Liu B y col., FASEB J. (2013) 27(9):3549-63). En resumen, ratones con Trpa1 desactivado, reciben administraciones tópicas de oxazolona o urushiol para inducir respuestas de dermatitis y comezón. El grosor de la epidermis también puede medirse realizando pinchazos en las orejas y midiendo las zonas expuestas en comparación con las orejas no tratadas. Los compuestos de tratamiento se pueden determinar in vivo administrando los compuestos a los animales antes o después de los tratamientos con oxazolona o urushiol. Los comportamientos de rascado se registran con cámaras de vídeo colocadas sobre las cámaras de observación. Los observadores, que desconocen los grupos de tratamiento, registran el tiempo que los animales pasan rascándose en el transcurso de treinta minutos.

Un modelo alternativo de piel seca en ratón que provoca comezón implica la administración de acetona, éter y agua al ratón, según indican Wilson y col. (Wilson SR y col., J Neurosci (2013) 33(22):9283-94). En este modelo, la zona a tratar se rasura y los ratones reciben administración tópica de acetona y éter dos veces al día en la zona a observar, por ejemplo, en los carrillos o en la parte inferior del lomo. La eficacia in vivo de los compuestos de tratamiento se puede determinar administrando los compuestos a los animales antes o después de la administración de la acetona y éter. El comportamiento de rascado se registra con una cámara durante un período de 20 minutos y los observadores, que desconocen los grupos de tratamiento, lo cuantifican.

Además, el prurito puede inducirse mediante inyección directa de un agente que causa comezón. Se pueden encontrar ejemplos de estos agentes en Akayimo y Carstens, 2013. Algunos ejemplos son: cloroquina (Wilson y col., 2011), ácidos biliares, TSLP (Wilson y col., 2013) e IL-31 (Cevikbas y col., 2014). Por lo general, un observador que desconoce el grupo de tratamiento, registra los episodios de rascado.

Existen numerosos modelos de incontinencia en roedores. Estos incluyen modelos de incontinencia inducida por daño nervioso, pinzamiento e inflamación uretral. Los modelos de pinzamiento uretral incluyen el modelo de obstrucción infravesical en ratas (véase, por ejemplo, Pandita, RK y Andersson KE. J Urol (1999) 162: 943-948). Los modelos inflamatorios incluyen la inyección de aceite de mostaza en la vejiga.

Para probar la eficacia de un compuesto inhibidor del TRPA1 en el tratamiento de la incontinencia, después de una obstrucción infravesical (OIV) quirúrgica parcial, a las ratas se las puede administrar diversas concentraciones de compuesto (por ejemplo, una concentración baja, media y alta). La eficacia de las diversas dosis del compuesto inhibidor del TRPA1, se puede comparar con la de los controles a los que se administran solo excipientes (control simulado). La eficacia se puede comparar además con la de las ratas a las que se administra un control positivo, tal como atropina. Se espera que en el modelo de OIV, la atropina disminuya la hiperactividad vesical después de la obstrucción infravesical quirúrgica parcial. Debe tenerse en cuenta que al probar los compuestos en el modelo de OIV, éstos pueden administrarse directamente en la vejiga o uretra (por ejemplo, a través de un catéter) o pueden administrar por vía sistémica (por ejemplo, por vía oral, intravenosa, intraperitoneal, etc.).

Recientemente se han descrito varios modelos de dolor pancreático en la rata (Lu, 2003, Anesthesiology 98(3):734-740; Winston y col., (2003) Journal of Pain 4(6): 329-337). Lu y col., indujeron pancreatitis mediante el suministro sistémico de dicloruro de dibutilina en ratas. Las ratas mostraron un aumento de los acontecimientos de retirada después de la estimulación del abdomen con filamentos de von Frey y una disminución de la latencia de retirada después de estimulación térmica durante un período de 7 días. El estado de dolor inducido en estos animales también se caracterizó por un aumento de los niveles de sustancia P en la médula espinal (Lu, y col., 2003). Para probar la eficacia de un inhibidor del TRPA1 en este modelo, se puede administrar un inhibidor del TRPA1 después de suministrar dicloruro de dibutilina o de manera simultánea cuando se suministra dicho compuesto. A los animales de control se les puede administrar un transportador o un analgésico conocido. Se pueden medir indicios de dolor. La eficacia de un inhibidor del TRPA1 se puede evaluar comparando los indicios de dolor observados en animales que reciben un inhibidor del TRPA1 con los de los animales que no recibieron un inhibidor del TRPA1. Adicionalmente, la eficacia de un inhibidor del TRPA1 se puede comparar con la de los medicamentos analgésicos conocidos.

La eficacia de la prueba de filamentos de von Frey como medio para medir el comportamiento nociceptivo, también se demostró induciendo pancreatitis mediante la administración sistémica de L-arginina (Winston y col, 2003). La eficacia de un inhibidor del TRPA1 se puede probar de manera similar después de una pancreatitis inducida mediante la administración sistémica de L-arginina.

Lu y col. también describieron ensayos de comportamiento directos del dolor pancreático utilizando estimulación nociva aguda del páncreas a través de una cánula ductal permanente en ratas despiertas y que se movían libremente. Estos ensayos incluían el cruce de jaulas, la cría y la extensión de las extremidades traseras en respuesta a la infusión de bradicinina intrapancreática. La administración intratecal de D-APV (un antagonista del receptor NMDA) o morfina sola, redujo parcialmente los comportamientos de dolor visceral en este modelo. Las combinaciones de ambos redujeron los comportamientos de dolor al valor de referencia. La eficacia de un inhibidor del TRPA1 se puede probar de manera similar en este sistema.

Cualquiera de los modelos animales anteriores puede usarse para evaluar la eficacia de un inhibidor del TRPA1 en el tratamiento del dolor asociado a la pancreatitis. La eficacia se puede comparar con la de un control que no recibe tratamiento o que recibe placebo. Además, o como alternativa, la eficacia se puede evaluar en comparación con la de uno o más medicamentos analgésicos conocidos.

Ejemplos

Procedimientos generales

Todas las reacciones se llevaron a cabo en atmósfera inerte, generalmente nitrógeno. Todas las reacciones no acuosas se llevaron a cabo usando disolventes anhidros. Todas las reacciones se agitaron con una barra de agitación magnética o con agitación mecánica superior. Se supone que todas las soluciones de extracción saturadas son acuosas (por ejemplo, NH4O saturado). Todos los agentes de secado son anhidro. Las soluciones orgánicas de secado con un agente de secado implican que el agente de secado se eliminó de la solución orgánica por filtración. Cromatografía se refiere a cromatografía en columna sobre gel de sílice. La cromatografía de capa fina (CCF) preparativa se lleva a cabo sobre placas de gel de sílice. La concentración de las mezclas de reacción implica concentración a presión reducida y el uso de un instrumento de evaporación rotatoria. El secado de los productos finales implica secado en condiciones de alto vacío. La sonicación implica el uso de un baño ultrasónico. Todos los dato s de RMN 1H se obtuvieron a 400 MHz. Los espectros de masas se obtuvieron en modo de ion positivo y se indican como las especies protonadas MH+ a menos que se indique otra cosa.

Abreviaturas

DCM diclorometano

DIC N,N'-diisopropilcarbodiimida

DIPEA N,N'-diisopropiletilamina

DMAP 4-dimetilaminopiridina

DMF N,N-dimetilformamida

EDC 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida

EA acetato de etilo

éter éter dietílico

h horas

HOAc ácido acético

HOAT 1-hidroxi-7-azabenzotriazol

LAH hidruro de litio y aluminio

MeOH metanol

min minutos

n-BuLi n-butillitio

NMP N-metilpirrolidinona

Pd/C paladio sobre carbono activado, generalmente 10 % de carga de paladio

PE éter de petróleo

TA temperatura ambiente

TBAI yoduro de tetrabutilamonio

TEA trietilamina

TFA ácido trifluoroacético

CCF cromatografía de capa fina

THF tetrahidrofurano

Preparación de intermedios sintéticos

Preparación 1 ácido (2S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-3,4,5,6-tetrahidro-1H-purin-7(2H)-il)propanoico

Una solución de 2-hidroxipropanoato de (R)-metilo (30 g, 0,28 mol) y TEA (80 ml, 0,56 mol) en DCM (300 ml) se enfrió a 0 °C y se añadió cloruro de metanosulfonilo (33,6 ml, 0,42 mol) gota a gota a 0 °C durante 1 h. La mezcla se agitó a 10-20 °C durante 1,5 h. La mezcla resultante se inactivó con hielo-agua (100 ml). La capa orgánica se separó, se lavó con agua (2 x 50 ml) y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró para proporcionar el producto 2-(metilsulfoniloxi)propanoato de (R)-metilo en bruto (50 g, 95,2 %) en forma de un aceite de color rojo ladrillo que se usó sin purificación.

Etapa 22-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-3,4,5,6-tetra-hidro-1H-purin-7(2H)-il)propanoato de (2S)-metilo

A una suspensión de 1,3-dimetil-3,4,5,7-tetrahidro-1H-purin-2,6-diona (112 g, 0,62 mol) y K2CO3 (171 g, 1,24 mol, 2 equiv.) en DMF (2,2 l) a 18 °C se le añadió 2-(metilsulfoniloxi)propanoato de (R)-metilo (226 g, 1,24 mol). La mezcla se agitó a 18 °C durante una noche; después se inactivó con NH4Cl saturado (2 l). La mezcla resultante se extrajo con DCM (3 x 1 l). La fase orgánica combinada se lavó con agua (5 x 500 ml) y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se recogió en DCM y se extrajo con HCl 6 N (2 x 200 ml). La fase acuosa combinada se extrajo de nuevo con DCM (2 x 50 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar el producto deseado en forma de un aceite de color pardo claro (65 g, 39,3 %) que se usó sin más purificación. MH+ 267.

Etapa 3 ácido (2S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-3,4,5,6-tetrahidro-1H-purin-7(2H)-il)propanoico

A una solución de 2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-3,4,5,6-tetra-hidro-1H-purin-7(2H)-il)propanoato de (2S)-metilo (39 g, 145 mmol) en dioxano (400 ml) se le añadió HCl 6 N (200 ml). La mezcla se calentó a reflujo durante 3 h, se enfrió a temperatura ambiente y después se concentró para eliminar el dioxano y la mayoría de la fase acuosa. El residuo se trituró en agua (70 ml) y se filtró. El sólido se recogió por filtración para dar el producto del título (17,3 g, ee: 99 %*). El filtrado se concentró a sequedad y el residuo se purificó por cromatografía eluyendo con DCM/MeOH (40/1 a 15/1) para dar un producto adicional (3,2 g, ee: 95 %*). El rendimiento total fue del 55,1 %. RMN 1H (DMSO-cfó) 813,28 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 5,47 (c, J = 7,4 Hz, 1H), 3,44 (s, 3H), 3,21 (s, 3H), 1,76 (d, J = 7,4 Hz, 3H). MH+253.

* Detalles de la ClAR quiral: Columna Chiralcel AD, 250*4,6 mm, 10 um. Fase móvil: hexano (TFA al 0,1 %)/IPA (TFA al 0,1 %) 70/30.

Preparación 2 clorhidrato de 5,5-dimetilpirrolidin-2-ona

Etapa 14-metil-4-nitropentanoato de metilo

A una solución de 2-nitropropano (5,06 g, 56,84 mmol) en dioxano (3 ml) se le añadió Triton B (0,55 ml, acuoso al 40 %). La reacción se calentó a 70 °C y se añadió acrilato de metilo (4,78 g, 55,58 mmol) gota a gota. Después de la adición, la reacción se calentó a 100 °C durante 4 h. La reacción se enfrió a TA, se añadió HCl 1 N (2 ml), la mezcla resultante se repartió entre EA y agua. La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró para proporcionar el producto en bruto (10 g, 100 %) en forma de un aceite. RMN 1H (CDCh) 83,68 (s, 3H), 2,35-2,31 (m, 2H), 2,27-2,23 (m, 2H), 1,60 (s, 6H).

Etapa 25,5-dimetilpirrolidin-2-ona

A una solución de NiCh hexahidrato (0,67 g, 2,86 mmol) en MeOH (30 ml) se le añadió NaBH4 (0,33 g, 8,57 mmol) en porciones. La reacción se sonicó durante 0,5 h; después se añadió 4-metil-4-nitropentanoato de metilo (1,0 g, 5,77 mmol) gota a gota. Se añadió más NaBH4 (0,66 g, 17,14 mmol) en porciones. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se filtró a través de Celite y el filtrado se concentró hasta un cuarto de volumen. El residuo se repartió entre DCM y NaHCO3 saturado. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró para proporcionar el producto en bruto (0,35 g, 53,7 %) en forma de un aceite. MH+ 114.

Etapa 3 clorhidrato de 5,5-dimetilpirrolidin-2-ona

A una suspensión de LAH (121 mg, 3,18 mmol) en THF (8 ml) se le añadió 5,5-dimetilpirrolidin-2-ona (0,3 g, 2,65 mmol) y la reacción se calentó a 60 °C durante una noche. La reacción se enfrió a 0 °C y se inactivó cuidadosamente con agua (0,2 ml) seguido de NaOH al 15 % (0,2 ml). La mezcla se filtró a través de celite. Se añadió ácido clorhídrico concentrado al filtrado. Esta mezcla se concentró para proporcionar el producto en bruto (0,2 g, 75,5 %) en forma de un sólido de color blanco, que se usó sin purificación. MH+100.

Preparación 32'-(2,2-dimetilpirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina

Etapa 15-bromo-2-(2,2-dimetMpirroNdm-1-M)pmmidma

A una solución de 5-bromo-2-cloropirimidina (2,3 g, 11,9 mmol) y K2CO3 (6,6 g, 47,6 mmol) en DMF (20 ml) se le añadió una solución de 2,2-dimetilpirrolidina (2,26 g, 16,7 mmol) en DMF (4 ml) a TA. La mezcla de reacción resultante se agitó a 50 °C durante dos días. La reacción se vertió en agua enfriada con hielo con agitación. El precipitado se recogió para dar 5-bromo-2-(2,2-dimetilpirrolidin-1-il)pirimidina en bruto (2,3 g, 76,6 %) en forma de un sólido de color amarillo claro, que se usó en la etapa siguiente sin más purificación. MH+ 256.

Etapa 22-(2,2-dimetilpirrolidin-1-il)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)pirimidina

A una mezcla de 5-bromo-2-(2,2-dimetilpirrolidin-1-il)pirimidina (17,6 g, 68,9 mmol), bis(pinacolato)diboro (24,5 g, 96,5 mmol) y KOAc (13,5 g, 0,14 mol) en 1,4-dioxano (320 ml) se le añadió Pd(PPh3)2Ch (2,4 g, 3,45 mmol). La mezcla se agitó a 80 °C durante 20 h. La reacción se enfrió a TA, se vertió en agua con hielo y se extrajo con EA (4 x 200 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se concentró para dar un residuo oscuro.

El residuo se purificó por cromatografía eluyendo con EP/AE (40:1) para dar 2-(2,2-dimetilpirrolidin-1-M)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)pirimidina (11,5 g, 49 % en dos etapas) en forma de un sólido de color amarillo. RMN 1H (DMSO-de) 58,58 (s, 2H), 3,69 (m, 2H), 1,92 (m, 4H), 1,55 (s, 6H), 1,33 (s, 12H).

Etapa 32'-(2,2-dimetilpirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina

A una mezcla de 2-(2,2-dimetilpirrolidin-1-il)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)pirimidina (9,5 g, 31 mmol) en 1,4-dioxano (140 ml) se le añadió 4-amino-2-cloropirimidina (4,5 g, 34,5 mmol) y K2CO32 M (20,4 ml, 40,7 mmol). La mezcla de color naranja se desgasificó con N2; después se añadió Pd(PPh3)4 (3,65 g, 3,1 mmol). La reacción se agitó a 80 °C durante una noche. La reacción se enfrió a TA, se vertió en agua y se extrajo con EtOAc (3 x 150 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía eluyendo con PE:EA (1:1) para proporcionar el compuesto 2'-(2,2-dimetilpirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina (8,96 g, >100 %) en forma de un sólido de color amarillo. MH+ 271.

Preparación 4 (S)-2-(2-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)pirimidin-5-il)pirimidin-4-amina

Una mezcla de clorhidrato de (S)-2-(trifluorometil)pirrolidina (40 g, 0,23 mol), K2CO3 (94,6 g, 0,68 mol) y 5-bromo-2-cloropirimidina (48 g, 0,25 mol) en d Mf (200 ml) se agitó a 100 °C durante 24 h, después se añadió N1,N2-dimetiletan-1,2-diamina (4 ml) y la reacción se agitó durante otras 2 h para consumir el exceso de 5-bromo-2-cloropirimidina. La reacción se interrumpió con agua (400 ml) y se extrajo con EA (3 x 500 ml). La fase orgánica combinada se lavó con LiCl acuoso al 10 %, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía eluyendo con PE:EA (50:1) para proporcionar (S)-5-bromo-2-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)pirimidina (50 g, 74%) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (DMSO-de) 58,54 (s, 2H), 4,90-4,94 (m, 2H), 3,56-3,58 (m, 2H), 2,02-2,16 (m, 4H). MH+ 296.

Etapa 2 ácido (S)-2-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)pirimidin-5-ilborónico

Una solución de (S)-5-bromo-2-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)pirimidina (50 g, 0,17 mol) y borato de triisopropilo (44,4 g, 0,23 mol) en THF (400 ml) se enfrió a -78 °C y se añadió n-BuLi (105 ml, 2,4 M en hexano) gota a gota. La reacción se agitó 2 h a -78 °C. La reacción se interrumpió con agua (150 ml) y se dejó calentar a TA. La reacción se concentró para dejar la fase acuosa. La fase acuosa se extrajo con éter (2 x 50 ml) para eliminar las impurezas (producto en la capa acuosa). El pH se ajustó a 5 con HCl 6 N y después se extrajo con EA (3 x 100 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 y se concentró para proporcionar ácido (S)-2-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il) pirimidin-5-ilborónico (45 g, rendimiento cuantitativo) en forma de un sólido de color blanquecino. MH+ 262.

Etapa 3 (S)-2-(2-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)pirimidin-5-il)pirimidin-4-amina

A una mezcla de ácido (S)-2-(2-(trifluorometM)pirrolidin-1-il)pirimidin-5-ilborónico (9,5 g, 36,4 mmol), 2-cloropirimidin-4-amina (4,3 g, 33,1 mmol) y Na2CO3 (7,0 g, 66,2 mmol) en dioxano (105 ml) y agua (35 ml) se e añadió Pd(PPh3)4 (3,8 mg, 3,31 mmol). La mezcla se desgasificó con nitrógeno y después se agitó a 110 °C durante 3 h. La reacción se enfrió y se filtró a través de Celite. El filtrado se repartió con eA (300 ml) y agua (150 ml). La fase orgánica se lavó con salmuera (100 ml), se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía eluyendo con DCM/MeOH (100:1 a 80:1 a 70:1) para dar (S)-2-(2-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1 -il)pirimidin-5-il)pirimidin-4-amina (8 g, 78 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (CDCh) 89,16 (s, 2H), 8,13-8,14 (d, J = 10 Hz, 1H), 6,97 (s, 2H), 6,34-6,35 (d, J = 6 Hz, 1H), 5,09-5,13 (m, 1H), 3,67-3,72 (m, 2H), 2,06-2,21 (m, 4H). MH+ 311.

Preparación 5 (R)-2-(2-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)pirimidin-5-il)pirimidin-4-amina

El compuesto del título se preparó usando el procedimiento de preparación 4. MH+ 311

Preparación 6 ácido (2S)-2-(1-metil-2,6-dioxo-3,4,5,6-tetrahidro-1H-purin-7(2H)-il)propanoico

Etapa 12-(1-metil-2,6-dioxo-3,4,5,6-tetrahidro-1H-purin-7(2H)-il)propanoato de (2S)-metilo

A una suspensión de 1-metil-3,4,5,7-tetrahidro-1H-purin-2,6-diona (6,904 g, 41,5 mmol) y K2CO3 (5,734 g, 41,5 mmol) en DMF (150 ml) a 50 °C se le añadió 2-(metilsulfoniloxi)propanoato de (R)-metilo (5,818 g, 32,0 mmol). La reacción se agitó a 50 °C durante una noche, después se inactivó con NH4Cl saturado (2 l). La mezcla resultante se extrajo con EA (3 x 200 ml). La fase orgánica combinada se lavó con agua (5 x 500 ml) y salmuera. La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía (0-3 % de MeOH:DCM) para dar el producto del título en forma de un sólido de color blanco (1,649 g, 20 %). MH+ 253.

Etapa 2 ácido (2S)-2-(1-metil-2,6-dioxo-3,4,5,6-tetrahidro-1H-purin-7(2H)-il)propanoico

A una mezcla de 2-(1-metil-2,6-dioxo-3,4,5,6-tetrahidro-1H-purin-7(2H)-il)propanoato de (2S)-metilo (96,9 mg, 0,38 mmol) en dioxano (3 ml) se le añadió HCl 6 N (2 ml). La reacción se calentó a reflujo durante 3 h, se enfrió a temperatura ambiente y se concentró para dar el producto sólido de color blanco (92 mg, 100 %); MH+ 239.

Preparación 7 ácido (S)-2-(3-(difluorometil)-1-metil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanoico

Etapa 12-(3-(difluorometil)-1-metil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanoato de (S)-metilo:

A una solución de 2-(1-metil-2,6-dioxo-3,4,5,6-tetrahidro-1H-purin-7(2H)-il)propanoato de (2S)-metilo (600 mg, 2,38 mmol) en DMF (2 ml) a TA se le añadió 2-cloro-2,2-difluoroacetato de sodio (508 mg, 3,33 mmol) seguido de Cs2COa (229 mg 3,81 mmol). La reacción se calentó a 60 °C durante 12 h. La reacción se enfrió a TA, se diluyó con agua fría y se extrajo con EA dos veces. La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4 y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía eluyendo con MeOH:DCM (0-3 %) para dar 2-(3-(difluorometil)-1-metil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanoato de (S)-metilo (164 mg, 23% ) en forma de un aceite incoloro. MH+ 303.

Etapa 2 ácido (S)-2-(3-(difluorometil)-1-metil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanoico

A una mezcla de 2-(3-(difluorometil)-1-metil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanoato de (S)-metilo (64 mg, 0,21 mmol) en dioxano (1 ml) se le añadió HCl 6 N (1 ml). La reacción se calentó a reflujo durante 3 h, se enfrió a TA y después se concentró. El precipitado se recogió para dar el producto sólido de color blanco (61 mg, 100 %). MH+ 289.

Preparación 82'-(3,3-difluoroazetidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina

Etapa 15-bromo-2-(3,3-difluoroazetidin-1-il)pirimidina

Se cargó un tubo cerrado herméticamente con 5-bromo-2-doropirimidina (450 mg, 2,3 mmol), clorhidrato de 3,3-difluoroazetidina (275,1 mg, 2,1 mmol), K2CO3 (589,3 mg, 4,3 mmol) y DMF (3 ml). El tubo se cerró herméticamente y se agitó a 130 °C durante 2 h. La reacción se enfrió a TA y se vertió en agua (4 ml). El sólido se recogió por filtración y se secó para dar 5-bromo-2-(3,3-difluoroazetidin-1-il)pirimidina (300 mg, 51,4%) en forma de un sólido de color blanco. MH+ 250.

Etapa 2 ácido (2-(3,3-difluoroazetidin-1-il)pirimidin-5-il)borónico

A una solución de 5-bromo-2-(3,3-difluoroazetidin-1-il)pirimidina (300 mg, 1,2 mmol) y borato de triisopropilo (0,4 ml, 1,8 mmol) en THF (6 ml) se le añadió n-BuLi (0,6 ml, 2,4 M en hexano, 1,5 mmol) gota a gota a -78 °C. La mezcla se agitó a -78 °C durante 2 h. La reacción se interrumpió con agua y se calentó a TA. El disolvente se concentró y la capa acuosa residual se extrajo con éter (2 x 10 ml). La capa acuosa se ajustó a pH 6 con HCl 1 N y se extrajo con EA (3 x 10 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar el producto (170 mg, 65,6%) en forma de un sólido de color blanco. MH+ 216.

Etapa 32'-(3,3-difluoroazetidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina

Una mezcla de ácido (2-(3,3-difluoroazetidin-1-il)pirimidin-5-il)boronico (170,0 mg, 0,8 mmol), 4-amino-2-cloropirimidina (102,4 mg, 0,8 mmol), Pd(PPh3)2Ch (56,2 mg, 0,08 mmol) y Na2CO3 (167,5 mg, 1,6 mmol) en 1,4-dioxano (5 ml) y agua (1 ml) se desgasificó con nitrógeno y se agitó a 90 °C durante una noche. La mezcla resultante se enfrió a TA y se vertió en EA. La fase orgánica se separó, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se disolvió en éter. Un residuo insoluble se eliminó por filtración y el filtrado se concentró para dar 2'-(3,3-difluoroazetidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina (130 mg, 62,3 %) en forma de un sólido de color blanco. MH+ 265.

Preparación 92-cloro-N-(2'-(3,3-difluoroazetidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)acetamida

A una solución de 2'-(3,3-difluoroazetidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina (60 mg, 0,2 mmol) en DMF (2 ml) se le añadió gota a gota cloruro de 2-cloroacetilo (0,03 ml, 0,34 mmol) a 0 °C. La reacción se agitó a TA durante 2 h y después se vertió en EA. Esta fase orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar 2-cloro-N-(2'-(3,3-difluoroazetidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)acetamida (50 mg, 64,7 %) en forma de un sólido de color amarillo. MH+341.

Preparación 10 ácido (2-(4,4-difluoropiperidin-1-il)pirimidin-5-il)borónico

Se cargó un tubo cerrado herméticamente con 5-bromo-2-doropirimidina (633,3 mg, 3,3 mmol), clorhidrato de 4,4-difluoropiperidina (472,8 mg, 3,0 mmol), K2CO3 (829,3 mg, 6,0 mmol) y DMF (4 ml). El tubo se cerró herméticamente y se agitó a 130 °C durante 2 h; después se enfrió a TA y se vertió en agua (5 ml). El precipitado sólido se recogió y se secó para dar 5-bromo-2-(4,4-difluoropiperidin-1-il)pirimidina (640 mg, 77 %) en forma de un sólido de color blanco. MH+ 278.

Etapa 2 ácido (2-(4,4-difluoropiperidin-1-il)pirimidin-5-il)borónico

A una solución de 5-bromo-2-(4,4-difluoropiperidin-1-il)pirimidina (640 mg, 2,3 mmol) y borato de triisopropilo (0,8 ml, 3,5 mmol) en THF (8 ml) se le añadió n-BuLi (2 ml, 2,4 M en hexano, 1,5 mmol) gota a gota a -78 °C. La mezcla se agitó a -78 °C durante 2 h. Esta reacción se inactivó con agua y se dejó calentar a TA. La reacción se concentró y la mezcla acuosa residual se extrajo con éter (2 x 10 ml). La fase acuosa se ajustó a pH 6 con HCl 1 N y se extrajo con EA (3 x 10 ml). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar ácido (2-(4,4-difluoropiperidin-1-il)pirimidin-5-il)borónico (420 mg, 74,8 %) en forma de un sólido de color blanco. MH+ 244.

Preparación 112-cloro-N-(2-cloropirimidin-4-il)acetamida

A una mezcla de 4-amino-2-cloropirimidina (2,0 g, 15,4 mmol) y DMF (25 ml) se le añadió gota a gota cloruro de 2-cloroacetilo (0,03 ml, 0,34 mmol) a 0 °C. La reacción se agitó a TA durante una noche y después se vertió en EA. La fase orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se trituró con DCM y los sólidos se recogieron para dar 2-cloro-N-(2-cloropirimidin-4-il)acetamida (1,3 g, 20,5 %) en forma de un sólido de color amarillo. MH+ 206.

Preparación 12 N-(2-cloropirimidin-4-il)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)acetamida

Una mezcla de 2-cloro-N-(2-cloropirimidin-4-il)acetamida (1,1 g, 5,4 mmol), 1,3-dimetil-1H-purin-2,6(3H,7H)-diona (966,3 mg, 5,4 mmol), K2CO3(1,1 g, 8,1 mmol) y TBAI (198,2 mg, 0,5 mmol) en DMF (20 ml) se agitó a 90 °C durante 10 min. La reacción se enfrió a TA y después se diluyó con EA. La mezcla resultante se lavó con agua, NH4Cl saturado y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se recristalizó en DCM para dar N-(2-cloropirimidin-4-il)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-acetamida (1,3 g, 69,4 %) en forma de un sólido de color blanco. MH+ 350.

Preparación 133-clorhidrato de azabiciclo[3.1.0]hexano

Etapa 13-bencil-3-azabiCiclo[3.1.0]hexan-2,4-diona

A una mezcla de 3-oxabiciclo[3.1.0]hexan-2,4-diona (2,3 g, 20,5 mmol) en AcOH (30 ml) se le añadió DMAP (150 mg) y bencilamina (2,2 ml, 20,5 mmol). La mezcla se agitó a 100 °C durante 40 h; después se enfrió a TA. La reacción se concentró y el residuo se disolvió en EA. La fase orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía eluyendo con PE:EA (8:1 a 5:1) para proporcionar 3-bencil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-2,4-diona (3,7 g, 89,6 %) en forma de un sólido de color blanco. MH+ 202.

Etapa 23-bencil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano

A una solución de 3-bencil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-2,4-diona (2,0 g, 10,0 mmol) en THF (30 ml) se le añadió LAH (1,5 g, 40,0 mmol). La mezcla resultante se calentó a reflujo 4 h y después se enfrió a 0 °C. La mezcla de reacción fría se inactivó cuidadosamente con NH4Cl saturado y después se filtró. El filtrado se concentró para proporcionar el compuesto del título (1,5 g, 86,7 %) en forma de un aceite transparente. MH+174.

Etapa 3 clorhidrato de 3-azabiciclo[3.1.0]hexano

Pd/C, H2, HCI conc.

^MeOH <0 ^NHHCI

Una mezcla de 3-bencil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano (1,3 g, 7,5 mmol), Pd al 10%/C (130 mg) y HCl conc. (0,63 ml, 7,5 mmol) en MeOH (20 ml) se agitó a t A en atmósfera de hidrógeno (globo) durante 18 h. La reacción se filtró a través de Celite y el filtrado se concentró para dar el compuesto del título (850 mg, 95 %) en forma de un sólido de color blanco. MH+ 84

Preparación 142'-(3-azabiciclo[3.1.0]hexan-3-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina

Etapa 13-(5-bromopirimidm-2-M)-3-azabicido[3.1.0]hexano

Se cargó un tubo cerrado herméticamente con 5-bromo-2-doropirimidina (671,7 mg, 3,5 mmol), clorhidrato de 3 azabiciclo[3.1.0]hexano (416,7 mg, 3,5 mmol), K2CO3 (967,5 mg, 7,0 mmol) y DMF (4 ml). El tubo se cerró herméticamente y se agitó a 130 °C durante 2 h. La reacción se enfrió a TA y se vertió en agua fría (4 ml). El sólido que se formó se recogió y se secó para dar 3-(5-bromopirimidin-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano (480 mg, 57,4 %) en forma de un sólido de color blanco. Mh 240.

Etapa 2 ácido (2-(3-azabiciclo[3.1.0]hexan-3-il)pirimidin-5-il)borónico

A una solución de 3-(5-bromopirimidin-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano (480 mg, 2,0 mmol) y borato de triisopropilo (0,7 ml, 3,0 mmol) en THF (6 ml) se le añadió n-BuLi (1,1 ml, 2,4 M en hexano, 2,6 mmol) gota a gota a -78 °C. La reacción se agitó a -78 °C durante 2 h y después se inactivó con agua y se calentó a TA. La reacción se concentró y el residuo acuoso se extrajo con éter (2 x 20 ml). La capa acuosa se separó, se ajustó a pH 6 con HCl 1 N y se extrajo con EA (3 x 20 ml). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar el producto del título (200 mg, 48,5 %) en forma de un sólido de color blanco. MH+ 206.

Etapa 32'-(3-azabiciclo[3.1.0]hexan-3-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina

Una mezcla de ácido (2-(3-azabiciclo[3.1.0]hexan-3-il)pirimidin-5-il)borónico (150,0 mg, 1,2 mmol), 2-cloropirimidin-4-amina (237,9 mg, 1,2 mmol), Pd(PPh3)2Ch (86,0 mg, 0,1 mmol) y Na2CO3 (245,9 mg, 2,3 mmol) en 1,4-dioxano (5 ml) y agua (1 ml) se desgasificó con nitrógeno y se agitó a 80 °C durante una noche. La reacción se enfrió a TA y se vertió en EA. La fase orgánica se separó, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se disolvió en éter. Un residuo insoluble se eliminó por filtración y el filtrado se concentró para dar 2'-(3-azabiciclo[3.1.0]hexan-3-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina (100 mg, 33,8%) en forma de un sólido de color blanco. MH+ 255.

Preparación 15 N-(2'-(3-azabiciclo[3.1.0]hexan-3-MH2,5'-bipirimidm]-4-M)-2-doroacetamida

A una solución de 2'-(3-azabicido[3.1.0]hexan-3-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina (40 mg, 0,2 mmol) en DMF (2 ml) se le añadió gota a gota cloruro de 2-cloroacetilo (0,02 ml, 0,3 mmol) a 0 °C. La reacción se agitó a TA durante 2 h, después se vertió en EA. La capa orgánica se extrajo con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar N-(2'-(3-azabiciclo[3.1.0]hexan-3-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)-2-cloroacetamida (50 mg, 96,2%) en forma de un sólido de color amarillo. MH+ 329.

Preparación 162'-(3-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina

Etapa 15-bromo-2-(3-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)piramidina

Se cargó un tubo cerrado herméticamente con 5-bromo-2-cloropirimidina (441,4 mg, 2,3 mmol), clorhidrato de 3-(trifluorometil)pirrolidina (402,6 mg, 2,1 mmol), K2CO3 (635,8 mg, 4,6 mmol) y DMF (3 ml). El tubo se cerró herméticamente y se agitó a 130 °C durante 2 h; después se vertió en agua (4 ml). El sólido se recogió y se secó para dar 5-bromo-2-(3,3-difluoroazetidin-1-il)pirimidina (500 mg, 73,7 %) en forma de un sólido de color blanco. MH+ 296.

Etapa 2 ácido (2-(3-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)pirimidin-5-il)borónico

A una solución de 5-bromo-2-(3-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)piramidina (500 mg, 1,7 mmol) y borato de triisopropilo (0,6 ml, 2,5 mmol) en THF (6 ml) se le añadió gota a gota n-BuLi (0,9 ml, 2,4 M en hexano, 2,2 mmol) a -78 °C. La mezcla se agitó a -78 °C durante 2 h, después se inactivó con agua y se dejó calentar a TA. La reacción se concentró y el residuo acuoso se extrajo con éter (2 x 20 ml). La capa acuosa se ajustó a pH 6 con HCl 1 N y se extrajo con EA (3 x 20 ml). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar el producto del título (320 mg, 72,3 %) en forma de un sólido de color blanco. MH+ 260.

Etapa 32'-(3-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina

Una mezcla de ácido (2-(3-(trifluorometil)pirrolidin-1 -il)pirimidin-5-il)borónico (320,0 mg, 1,2 mmol), 2-doropirimidin-4-amina (158,1 mg, 1,2 mmol), Pd(PPh3)2Ch (86,0 mg, 0,1 mmol) y Na2CO3 (260,0 mg, 2,5 mmol) en 1,4-dioxano (5 ml) y agua (1 ml) se desgasificó con nitrógeno y se agitó a 90 °C durante una noche. La reacción se enfrió a TA y se vertió en EA. La fase orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se disolvió en éter. Un residuo insoluble se eliminó por filtración y el filtrado se concentró para dar 2'-(3-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina (200 mg, 52,6 %) en forma de un sólido de color blanco. MH+ 311.

Preparación 172-cloro-N-(2'-(3-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)acetamida

A una solución de 2'-(3-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina (93 mg, 0,3 mmol) en DMF (2 ml) se le añadió gota a gota cloruro de 2-cloroacetilo (0,04 ml, 0,45 mmol) a 0 °C. La reacción se agitó a TA durante 2 h, después se vertió en EA. La fase orgánica se extrajo con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar 2-cloro-N-(2'-(3-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)acetamida (100 mg, 86,4%) en forma de un sólido de color amarillo. MH+ 387.

Preparación 182-(2-(3-(trifluorometil)azetidin-1-il)pirimidin-5-il)pirimidin-4-amina

Etapa 1 ácido 2-(3-(trifluorometil)azetidin-1-il)pirimidin-5-ilborónico

A una solución de 5-bromo-2-(3-(trifluorometil)azetidin-1-il)pirimidina (550 mg, 1,95 mmol) y borato de triisopropilo (383 mg, 2,74 mmol) en THF (5 ml) se le añadió gota a gota n-BuLi (1,1 ml, 2,4 M en hexano) a -78 °C. La reacción se agitó a -78 °C durante 2 h. La reacción se interrumpió con agua (5 ml) y se dejó calentar a TA. La reacción se concentró y el residuo acuoso se extrajo con éter (2 x 2 ml). Se ajustó el pH de la capa acuosa a 5 con HCl 1 N y se 2xtrajo con EA (3 x 5 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 y se concentró para proporcionar ácido -(3-(trifluorometil)azetidin-1-il)pirimidin-5-ilborónico (450 mg, 93,7 %) en forma de un sólido de color blanquecino. MH+ 248.

Etapa 22-(2-(3-(trifluorometil)azetidin-1-il)pirimidin-5-il)pirimidin-4-amina

A una mezcla de ácido 2-(3-(trifluorometil)azetidin-1 -M)pirimidin-5-ilborónico (450 mg, 1,82 mmol), 2-cloropirimidin-4-amina (213 mg, 1,65 mmol) y Na2CO3 saturado (2,5 ml) en dioxano (10 ml) se le añadió Pd(PPh3)2Ch (58 mg, 0,08 mmol) y se desgasificó tres veces con nitrógeno. La reacción se agitó a 90 °C durante una noche. La reacción se enfrió a TA y se filtró a través de Celite. El filtrado se extrajo con EA (2 x 4 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía eluyendo con PE:acetona (3:1) para proporcionar 2-(2-(3-(trifluorometil)azetidin-1 -il)pirimidin-5-il)pirimidin-4-amina (350 mg, 71,4 %) en forma de un sólido de color blanco. MH+ 297.

Preparación 192-cloro-N-(2-(2-(3-(trifluorometil)azetidin-1-il)pirimidin-5-il)pirimidin-4-il)acetamida

A una solución de 2-(2-(3-(trifluorometil)azetidin-1-il)pirimidin-5-il)pirimidin-4-amina (100 mg, 0,34 mmol) en DMF (2 ml) se le añadió gota a gota cloruro de 2-cloroacetilo (0,045 ml, 0,51 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h, después se vertió en EA. La fase orgánica se extrajo con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar 2-cloro-N-(2'-(3,3-difluoroazetidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)acetamida (70 mg, 56 %) en forma de un aceite de color amarillo. MH+ 373,1.

Preparación 202'-(4,4-difluoropiperidin-1 -il)-2,5'-bipirimidin-4-amina

Una mezcla de ácido (2-(4,4-difluoropiperidin-1-il)pirimidin-5-il)borónico (142 mg, 0,58 mmol), 2-cloropirimidin-4-amina (68,5 mg, 0,53 mmol), Pd(PPh3)2Ch (37,3 mg, 0,05 mmol), K2CO3 (146,8 mg, 1,06 mmol), 1,4-dioxano (3 ml) y agua (0,5 ml) se desgasificó con nitrógeno y se agitó a 90 °C durante 2 h. La mezcla resultante se enfrió a TA y se vertió en EA. La capa orgánica se separó, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró. El residuo se purificó con cromatografía en columna eluyendo con DCM/MeOH (50:1) para dar 2'-(4,4-difluoropiperidin-1 -il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina (15 mg, 10 %) en forma de un sólido de color blanco. MH+ 293.

Preparación 21 (S)-2'-(2-metilpiperidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-amina

A una solución de 5-bromo-2-cloropirimidina (1,41 g, 7,35 mmol) en DMF (20 ml) se le añadió (S)-2-metilpiperidina (800 mg, 8,08 mmol) y K2CO3 (1,52 g, 11,03 mmol). La reacción se agitó a TA durante una noche. La reacción se vertió en agua enfriada con hielo y se extrajo con EA (3 x 20 ml). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía eluyendo con PE:EA (80:1) para proporcionar el producto del título (1,07 g, 56,9 %) en forma de un sólido de color blanco. MH+ 240.

Etapa 2 ácido (S)-2-(2-metilpiperidin-1-il)pirimidin-5-ilborónico

A una solución de (S)-5-bromo-2-(2-metilpiperidin-1-il)pirimidina (1,07 g, 4,2 mmol) y borato de triisopropilo (1,1 g, 5,87 mmol) en THF (20 ml) se le añadió n-BuLi (5,25 ml, 1,6 M en hexano, 8,4 mmol) gota a gota a -70 °C. La reacción se agitó a -70 °C durante 3 h, después se inactivó con agua. La reacción se concentró y el residuo acuoso se extrajo con éter (2 x 20 ml). La fase acuosa se ajustó a pH 6 con HCl 1 N y se extrajo con EA (3 x 20 ml). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar el producto del título (900 mg, 96 %) en forma de un sólido de color blanco, que se usó directamente sin purificación. MH+ 222.

Etapa 3 (S)-2'-(2-metilpiperidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-amina

Una mezcla de ácido (S)-2-(2-metilpiperidin-1 -il)pirimidin-5-ilborónico (752 mg, 3,4 mmol), 4-amino-2-cloropirimidina (400 mg, 3,09 mmol), Pd(PPh3)2Ch (216,0 mg, 0,3 mmol) y Na2CO3 (655 mg, 6,18 mmol) en 1,4-dioxano (10 ml) y agua (2,5 ml) se desgasificó con nitrógeno y se agitó a 80 °C durante 2 h. La reacción se enfrió a TA y se repartió entre EA (20 ml) y agua (15 ml). La fase orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se disolvió en éter. Un residuo insoluble se eliminó por filtración y el filtrado se concentró para dar (S)-2'-(2-metilpiperidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-amina (682 mg, 81,8 %) en forma de un sólido de color blanco. MH+ 271.

Preparación 22 (S)-2-cloro-N-(2'-(2-metilpiperidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-il)acetamida

A una solución de (S)-2'-(2-metilpiperidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-amina (400 mg, 1,48 mmol) en DMF (8 ml) se le añadió cloruro de 2-cloroacetilo (0,17 ml, 2,24 mmol) gota a gota a 0 °C. La reacción se agitó a TA durante una noche, después se vertió en agua con hielo y se extrajo con EA (3 x 20 ml). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró para proporcionar el producto deseado (510 mg, 99 %) en forma de un jarabe amarillo. MH+ 347.

Preparación 232-cloro-N-(2'-(2,2-dimetilpirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)acetamida (LJ-262-64)

A una solución de 2'-(2,2-dimetilpirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina (400 mg, 1,48 mmol) en DMF (5 ml) se le añadió gota a gota cloruro de 2-cloroacetilo (251 mg, 2,22 mmol) a 0 °C. Después de agitar a TA durante una noche, la mezcla de reacción se repartió entre EA y agua. La fase orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar 2-cloro-N-(2'-(2,2-dimetilpirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)acetamida (500 mg, 97,4 %) en forma de un sólido de color amarillo. MH+ 347.

Preparación 24 (S)-2'-(2-metilpirrolidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-amina

Etapa 1 acido (S)-2-(2-metilpirrolidin-1-il)pirimidin-5-ilborónico

A una solución de (S)-5-bromo-2-(2-metilpirrolidin-1-il)pirimidina (7 g, 30,8 mmol, preparada usando el procedimiento descrito en el documento WO2013/023102) y borato de triisopropilo (8,12 g, 43,2 mmol) en THF (70 ml) se le añadió n-BuLi (28,9 ml, 1,6 M en hexano, 46,3 mmol) gota a gota a -70 °C. La reacción se agitó a -70 °C durante 3 h; después se inactivó con agua. La reacción se concentró y el residuo acuoso se extrajo con éter (2 x 20 ml). La capa acuosa se ajustó a pH 6 con HCl 1 N y se extrajo con EA (3 x 20 ml). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar el producto del título (4,8 g, 75,3 %) en forma de un sólido de color blanco. MH+ 208.

Etapa 2 (S)-2'-(2-metilpirrolidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-amina

Una mezcla de ácido (S)-2-(2-metilpirrolidin-1-il)pirimidin-5-ilborónico (2,53 g, 12,23 mmol), 4-amino-2-cloropirimidina (1,44 g, 11,12 mmol), Pd(PPh3)2Ch (432,0 mg, 0,6 mmol) y Na2CO3 (2,35 g, 22,24 mmol) en 1,4-dioxano (40 ml) y agua (10 ml) se desgasificó con nitrógeno y se agitó a 80 °C durante 2 h. La reacción se enfrió a TA y se vertió en EA. La fase orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se recogió en éter. Un residuo insoluble se eliminó por filtración y el filtrado se concentró para dar (S)-2'-(2-metilpirrolidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-amina (1,5 g, 54 %) en forma de un sólido de color blanco. MH+ 257.

Preparación 25 (S)-2-cloro-N-(2'-(2-metilpirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)acetamida

A una solución de (S)-2'-(2-metilpirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina (256 mg, 1 mmol) en DMF (5 ml) se le añadió gota a gota cloruro de 2-cloroacetilo (170 mg, 1,5 mmol) a 0 °C. Después de agitar a TA durante una noche, la mezcla de reacción se repartió entre EA y agua. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar (S)-2-cloro-N-(2'-(2-metilpirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)acetamida (280 mg, 84,1 %) en forma de un sólido de color amarillo. MH+ 333.

Preparación 262-cloro-N-(2'-((S)-2-metilpirrolidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-il)propanamida

A una solución de (S)-2'-(2-metilpirrolidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-amina (800 mg, 3,12 mmol) en DMF (15 ml) se le añadió cloruro de 2-cloropropanoílo (0,33 ml, 3,43 mmol) gota a gota a 0 °C. La reacción se agitó a TA durante una noche. La reacción se vertió en agua enfriada con hielo y se extrajo con EA (3 x 20 ml). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El producto en bruto se purificó por cromatografía eluyendo con PE:EA (5:1) para dar 2-cloro-N-(2'-((S)-2-metilpirrolidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-il)propanamida (600 mg, 56 %) en forma de un aceite viscoso. MH+ 347.

Preparación 27 ácido 2-(3-metil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)acético

Una mezcla de 3-metil-1H-purin-2,6(3H,7H)-diona (15 g, 90 mmol), K2CO3 (13,73 g, 99 mmol), DMF (451 ml) y 2-cloroacetato de etilo (9,62 ml, 90 mmol) se calentó a 90 °C durante 0,5 h. La reacción se enfrió a TA y se añadió agua (450 ml). A la solución en agitación se le añadió LiOH (4,32 g, 181 mmol) en agua (100 ml). La reacción se agitó a TA durante 1 h. La reacción se ajustó a pH 4 con HCl 6 N. El precipitado que se formó se recogió y se secó para producir ácido 2-(3-metil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)acético (18.670 g, 92 %) en forma de un polvo de color blanco. RMN 1H (DMSO-cfe) 513,51 (s, 1 H), 8,01 (s, 1H), 5,03 (s, 2H), 3,36 (s, 3H).

Preparación 28 ácido 2-(1-metil-3-metil-d3-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)acético

A una solución de 1-metilxantina (9,049 g, 54,4 mmol) y carbonato potásico (8,258 g, 59,8 mmol) en DMF (200 ml), se le añadió 2-bromoacetato de tere-butilo (8,03 ml, 54,4 mmol) gota a gota. La reacción se agitó a 90 °C durante 1 h y se enfrió a temperatura ambiente. La mezcla se vertió en agua y se acidificó con HCl (6 N, ac.) a pH 4. La mezcla se extrajo después con EA (200 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (200 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron al vacío. El producto en bruto se purificó por cromatografía eluyendo con MaOH:DCM (2:100) para dar 2-(1-metil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)acetato de tere-butilo (6,539 g, 43 %) en forma de un sólido de color amarillo. MH+ 281.

Etapa 22-(1-metil-3-metil-d3-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)acetato de tere-butilo

A una solución de 2-(1-metil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)acetato de ferc-butilo (1,158 g, 4,13 mmol) en DMF (20,66 ml) a TA se le añadió K2CO3 (0,857 g, 6,20 mmol) y yodometano-D3 (0,334 ml, 5,37 mmol). La reacción se calentó a 65 °C durante 2 h. Se añadió más yodometano-D3 (0,2 equiv.) y el calentamiento continuó 1 h más. La reacción se enfrió a TA, se diluyó con agua y se extrajo tres veces con EA. La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4 y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía (0-100 % de EA:hexano) para proporcionar 2-(1-metil-3-metil-d3-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)acetato de ferc-butilo (1,35 g, impuro). MH+ 298. El producto impuro se usó sin más purificación.

Etapa 3 ácido 2-(1-metil-3-metil-d3-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)acético

Una solución de 2-(1-metil-3-metil-d3-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)acetato de ferc-butilo (1,35 g, 4,54 mmol) en DCM (27,2 ml) se trató con TFA (18,16 ml). La reacción se agitó a TA durante 2 h. La reacción se concentró hasta un aceite que se usó sin purificación. MH+ 242.

Preparación 292'-(6,6-difluoro-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-3-M)-[2,5'-bipirimidm]-4-amma

Etapa 13-(5-bromopirimidin-2-il)-6,6-difluoro-3-azabiciclo[3.1.0]hexano

Se cargó un tubo cerrado herméticamente con 5-bromo-2-cloropirimidina (748,5 mg, 3,9 mmol), clorhidrato de 6,6-difluoro-3-azabiciclo[3.1.0]hexano (604,6 mg, 3,9 mmol), K2CO3 (1,1 g, 7,8 mmol) y NMP (3 ml). La mezcla se agitó a 130 °C durante 3 h; después se enfrió a TA y se vertió en agua (4 ml). El sólido se recogió por filtración y se secó al vacío para dar 3-(5-bromopirimidin-2-il)-6,6-difluoro-3-azabiciclo[3.1.0]hexano (1,0 g, 93,2 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco. MH+ 276.

Etapa 2 ácido (2-(6,6-difluoro-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-3-il)pirimidin-5-il)borónico

A una solución de 3-(5-bromopirimidin-2-il)-6,6-difluoro-3-azabiciclo[3.1.0]hexano (1,1 g, 4,1 mmol) e (;-PrO)3B (1,4 ml, 6,2 mmol) en THF (20 ml) se le añadió n-BuLi (3,9 ml, 1,6 M en hexano, 6,2 mmol) gota a gota a -78 °C. La reacción se agitó a -78 °C durante 2 h; después se inactivó con agua y se calentó a TA. El disolvente se eliminó a presión reducida y la capa acuosa se lavó con éter (2 x 50 ml). La capa acuosa se ajustó después a pH 6 con HCl 1 N y se extrajo con EA (3 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para dar ácido 2-(6,6-difluoro-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-3-il)pirimidin-5-il)borónico (700 mg, 72,6% de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.

Etapa 32'-(6,6-difluoro-3-azabicido[3.1.0]hexan-3-M)-[2,5'-bipirimidm]-4-amma

Una mezcla de ácido (2-(6,6-difluoro-3-azabicido[3.1.0]hexan-3-il)pirimidin-5-il)borónico (241,0 mg, 1,0mmol), 2-doropirimidin-4-amina (129,0 mg, 1,0 mmol), Pd(PPh3)4 (57,8 mg, 0,05 mmol) y K2CO3 (276,4 mg, 2,0 mmol) en 1,4-dioxano (5 ml) y agua (1 ml) se desgasificó y se purgó con N2tres veces. La reacción se calentó a 90 °C con agitación durante 3 h. La mezcla resultante se enfrió a TA y se vertió en EA. La fase orgánica se separó, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó con cromatografía eluyendo con DCM:MeOH (50:1) para proporcionar 2'-(6,6-difluoro-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-3-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina (210 mg, 72,3% de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco. MH+ 291.

Preparación 30 ácido (2R)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-3,4,5,6-tetrahidro-1H-purin-7(2H)-il)propanoico

Etapa 12-(metilsulfoniloxi)propanoato de (S)-metilo

Una solución de 2-hidroxipropanoato de (S)-metilo (12,379 g, 119 mol) y TEA (17,4 ml, 125 mol) en DCM (100 ml) se enfrió a 0 °C y se añadió cloruro de metanosulfonilo (12,4 ml, 125 mol) gota a gota a 0 °C durante 1 h. La mezcla se agitó a 20 °C durante 1,5 h. La mezcla resultante se inactivó con agua con hielo (100 ml). La capa orgánica se separó, se lavó con agua (2 x 50 ml) y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró para proporcionar el producto en bruto 2-(metilsulfoniloxi)propanoato de (S)-metilo (20,940 g, 97 %) en forma de un aceite de color pardo que se usó sin purificación.

Etapa 2 ácido (R)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanoico

A una suspensión de 1,3-dimetil-3,4,5,7-tetrahidro-1H-purin-2,6-diona (4,588 g, 25,5 mol) y K2CO3 (7,038 g, 51 mol, 2 equiv.) en DMF (500 ml) a TA se le añadió 2-(metilsulfoniloxi)propanoato de (s)-metilo (6,953 g, 38,2 mol). La mezcla se agitó a TA durante una noche, después se inactivó con NH4Cl saturado. La mezcla resultante se extrajo con DCM (3 x 300 ml). La fase orgánica combinada se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo aceitoso de color pardo (8,633 g) se disolvió en dioxano (10 ml). A la solución se le añadió HCl 6 N (ac. 10 ml). La mezcla se calentó a reflujo durante 2 h, se enfrió a TA y después se concentró para eliminar el dioxano y la mayoría de la fase acuosa. El residuo se purificó con cromatografía eluyendo con MeOH/DCM (0-10%) para proporcionar ácido (R)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanoico (6,015 g, 93,6 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.

Síntesis de compuestos de fórmula (I)

Ejemplo 1 (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-(2,2-dimetilpirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)propanamida

A una mezcla de 2'-(2,2-dimetilpirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina (4,2 g, 15,5 mmol) y acido (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanoico (3,56 g, 14,1 mmol) en DCM (72 ml) se le añadió HOAT (1,92 g, 14,1 mmol) a TA. La reacción se enfrió a 0 °C y se añadieron piridina (2,23 g, 28,2 mmol) y DIC (2,67 g, 21,2 mmol). La reacción se calentó a 25 -28 °C y se agitó durante una noche. La mezcla de reacción se inactivó con HCl 0,5 N. La mezcla se añadió gota a gota a n-hexano y el precipitado que se formó se recogió y se lavó con MeOH para dar (S)-2-(1,3-dimetM-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-(2,2-dimetMpirrolidin-1 -il)-[2,5’-bipirimidin]-4-il)propanamida (3 g, 19 %). RMN 1H (CDCla) 89,78 (s, 1H), 9,14 (s, 2H), 8,54 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,76 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,83 (c, J = 7.2 Hz, 1H), 3,77 (m, 2H), 3,63 (s, 3H), 3,50 (s, 3H), 1,96 (m, 7H), 1,60 (s, 6H)).

Ejemplo 2 (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-((S)-2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)propanamida (Compuesto 2)

A una mezcla de acido (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanoico (2,44 g, 9,67 mmol) y (S)-2'-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-amina (3,3 g, 10,6 mmol) en Dc M (48 ml) se le añadió HOAT (1,3 g, 9,67 mmol) a TA. La mezcla se enfrió a 0 °C. Se añadió piridina (1,5 g, 19,3 mmol) gota a gota durante 30 min seguido de la adición gota a gota de DIC (1,8 g, 14,5 mmol). La reacción se agitó a 35 °C durante 16 h; después se diluyó con DCM (100 ml). La mezcla se extrajo con NH4Cl saturado (50 ml, preenfriado a 0 °C) y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía eluyendo primero con eA:PE (3:2) y después DCM:MeOH (30:1) y después se recristalizó con EtOH para dar el compuesto del título (4,5 g, 78 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (DMSO-de) 8 11,46 (s, 1H), 9,22 (s, 2H), 8,66 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,81 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,82 (c, J = 7.2 Hz, 1H), 5,12 (t, 1H), 3,70 (m, 2H), 3,47 (s, 3H), 3,16 (s, 3H), 2,10 (m, 4H), 1,88 (d, J = 7,2 Hz, 3h ). MH+ 545. exceso diastereomérico (de): 99 %*.

*Condición de procedimiento CLAR quiral: Columna: CHIRALPAK IB, 150*4,6 mm, 5 pm; Fase móvil: A: Hexano (calidad CLAR); B: EtOH (calidad ClAr ); Caudal: 0,8 ml/min; Gradiente: 30 % de B durante 25 min. Resultados: El tiempo de retención del diastereómero deseado (S) es 14,16 min, el del otro isómero (R) es 9,66 min.

Ejemplo 3 (R)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-((S)-2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)propanamida

Las aguas madre después de la recristalización del ejemplo 2 en EtOH se concentraron. El residuo se sometió a purificación por CLAR preparativa quiral para dar (R)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-((S)-2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)propanamida en forma de un sólido de color blanco. RMN *H (DMSO-de) 8 11,48 (s, 1H), 9,25 (s, 2H), 8,69 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,33 (s, 1H), 7,83 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,81 (c, J = 7.2 Hz, 1H), 5,13 (t, 1H), 3,71 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 3,17 (s, 3H), 2,14 (m, 4H), 1,88 (d, J = 7,2 Hz, 3H). MH+ 545. de: 99 %.*

*Condición de procedimiento CLAR quiral: Columna: CHIRALPAK IB, 150*4,6 mm, 5 pm; Fase móvil: A: Hexano (calidad CLAR); B: EtOH (calidad CLAR); Caudal: 0,8 ml/min; Gradiente: 30 % de B durante 25 min.

Ejemplo 4 (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-((R)-2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)propanamida

El compuesto del título se preparó usando el procedimiento del ejemplo 2 para producir un sólido de color blanco. RMN 1H (DMSO-de) 611,46 (s, 1H), 9,25 (s, 2H), 8,70 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,33 (s, 1H), 7,83 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,81 (c, J = 7.2 Hz, 1H), 5,14 (t, 1H), 3,67 (m, 2H), 3,32 (s, 3H), 3,14 (s, 3H), 2,10 (m, 4H), 1,86 (d, J = 7,2 Hz, 3H). MH+ 545. de 98 %*

Ejemplo 5 (S)-2-(1-metil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-((S)-2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)propanamida

A una mezcla de ácido (2S)-2-(1-metil-2,6-dioxo-3,4,5,6-tetrahidro-1H-purin-7(2H)-il)propanoico (90,4 mg, 0,38 mmol) y (S)-2'-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-amina (119 mg, 0,38 mmol) en Dc M (2 ml) se le añadió HOAT (104 mg, 0,76 mmol) a Ta . La reacción se enfrió a 0 °C. Se añadió piridina (91 mg, 1,15 mmol) gota a gota seguido de la adición gota a gota de DIC (97 mg, 0,77 mmol). La reacción se agitó a 20 °C durante 16 h; después se diluyó con DCM (10 ml). La mezcla se lavó con NH4Cl saturado y salmuera, se secó sobre Na2SO4y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía eluyendo con DCM:MeOH (30:1) para dar el producto del título (83 g, 41 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (DMSO-de) 6 11,94 (s, 1H), 11,44 (s, 1H), 9,25 (s, 2H), 8,71 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,84 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,78 (c, J = 7.2 Hz, 1H), 5,14 (t, 1H), 3,71 (m, 2H), 3,12 (s, 3H), 2,20 (m, 4H), 1,84 (d, J = 7,2 Hz, 3H). MH+ 531.

Ejemplo 6 (S)-2-(3-(difluorometil)-1-metil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-((S)-2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)propanamida

A una mezcla de ácido (S)-2-(3-(difluorometil)-1-metil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanoico (61 mg, 0,21 mmol) y (S)-2'-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-amina (310 mg, 0,21 mmol) en Dc M (1 ml) se le añadió HOAT (57 mg, 0,42 mmol) a Ta . La mezcla se enfrió a 0 °C. Se añadió piridina (50 mg, 0,63 mmol) gota a gota seguido de la adición gota a gota de DIC (53 mg, 0,42 mmol). La reacción se agitó a 20 °C durante 16 h, después se diluyó con DCM (10 ml). La mezcla se lavó con NH4Cl saturado y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía eluyendo con DCM:MeOH (30:1) para dar el producto (45,6 mg, 37 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (DMSO-de) 611,49 (s, 1H), 9,25 (s, 2H), 8,70 (s, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,86 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 5,82 (c, J = 8 Hz, 1H), 5,14 (t, 1H), 3,74 (m, 2H), 3,16 (s, 3H), 2,22 (m, 4H), 1,87 (d, J = 8 Hz, 3H). MH+ 581.

Ejemplo 7 N-(2'-(3,3-difluoroazetidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin 7(6H)-il)acetamida

Una mezcla de 2-doro-N-(2'-(3,3-difluoroazetidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)acetamida (50,0 mg, 0.1 mmol), K2CO3 (41,5 mg, 0,3 mmol), 1,3-dimetil-1H-purin-2,6(3H,7H)-diona (26,5 mg, 0,1 mmol) y TBAI (5,6 mg, 0,01 mmol) en DMF (3 ml) se agitó a 90 °C durante una noche. La reacción se enfrió a TA y se diluyó con EA. La fase orgánica se lavó con agua, solución saturada de NH4Cl y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó por CCF preparativa (DCM/MeOH = 30:1) para dar N-(2'-(3,3-difluoroazetidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)acetamida (4,0 mg, 5,6 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (DMSO-cfó) 5 11,48 (s, 1H), 9,26 (s, 2H), 8,73 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 5,36 (s, 2H), 4,60 (t, J = 12,2 Hz, 4H), 3,46 (s, 3H), 3,19 (s, 3H). MH+ 485,1.

Ejemplo 8 N-(2'-(4,4-difluoropiperidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)acetamida

Una mezcla de N-(2-cloropirimidin-4-il)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)acetamida (87,3 mg, 0,3 mmol), Pd(PPh3)4 (28,9 mg, 0,03 mmol), ácido (2-(4,4-difluoropiperidin-1-il)pirimidin-5-il)borónico (66,9 mg, 0,3 mmol) y NaHCO3 (21,0 mg, 0,3 mmol) en 1,4-dioxano (3 ml) y agua (0,5 ml) se desgasificó con nitrógeno y se agitó a 90 °C durante una noche. La reacción se enfrió a TA y se diluyó con EA. La fase orgánica se separó, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó por CCF preparativa (DCM/MeOH = 30:1) para dar N-(2'-(4,4-difluoropiperidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)acetamida (8,0 mg, 6,2%) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (DMSO-cfó) 8 11,44 (s, 1H), 9,23 (s, 2H), 8,71 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,81 (s, 1H), 5,36 (s, 2H), 4,05-3,97 (m, 4H), 3,46 (s, 3H), 3,19 (s, 3H), 2,06 (dd, J = 12,5, 6,6 Hz, 4H). MH+ 513,1.

Ejemplo 9 (S)-N-(2'-(3,3-difluoroazetidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-il)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanamida

A una mezcla de ácido (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanoico (57 mg, 0,23 mmol) y 2'-(3,3-difluoroazetidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-amina (50 mg, 0,19 mmol) en DCM (3 ml) se le añadió HOAT (31 mg, 0,23 mmol) a TA. La reacción se enfrió a 0 °C, después se añadió piridina (30 mg, 0,38 mmol) lentamente gota a gota, seguido de la adición gota a gota de DIC (36 g, 0,29 mmol). La reacción se dejó calentar a TA y después se calentó a 30 °C y se agitó 18 h. La reacción se extrajo con agua seguido de NH4Cl saturado. La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó por CLAR preparativa (DCM/MeOH = 30:1) para dar (S)-N-(2'-(3,3-difluoroazetidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-il)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanamida (10 mg, 9 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (DMSO-de) 811,51 (s, 1H), 9,26 (s, 2H), 872 (d, 1H), 8,35 (s, 1H), 7,86 (d, 1H), 5,81 (c, 1H), 4,60 (t, 4H), 3,47 (s, 3H), 3,17 (s, 3H), 1,81 (d, 3H). MH+ 499.

Ejemplo 10 N-(2'-(3-azabiciclo[3.1.0]hexan-3-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)acetamida

Una mezcla de N-(2'-(3-azabicido[3.1.0]hexan-3-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)-2-doroacetamida (50,0 mg, 0,16 mmol), K2CO3 (44,3 mg, 0,32 mmol), 1,3-dimetil-1H-purin-2,6(3H,7H)-diona (28,0 mg, 0,16 mmol) y TBAI (5,9 mg, 0,02 mmol) en DMF (3 ml) se agitó a 90 °C durante una noche. La reacción se enfrió a TA y se diluyó con EA. La fase orgánica se extrajo con agua, NH4Cl saturado y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó por CCF preparativa (DCM/MeOH = 25:1) para dar N-(2-(3-azabiciclo[3.1.0]hexan-3-ilH2,5-bipirimidin]-4-il)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)acetamida (2,0 mg, 2,9 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (DMSO-de) 511,41 (s, 1H), 9,17 (s, 2H), 8,68 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,76 (s, 1H), 5,36 (s, 2H), 3,87 (d, J = 11,5 Hz, 2H), 3,59 (s, 2H), 3,51 (s, 3H), 3,19 (s, 3H), 0,82 (m, 3H), 0,18 (s, 1H). MH+ 475.

Ejemplo 11 2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-(3-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)

Una mezcla de 2-cloro-N-(2'-(3-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)acetamida (100,0 mg, 0,26 mmol), K2CO3 (53,7 mg, 0,39 mmol), 1,3-dimetil-1H-purin-2,6(3H,7H)-diona (46,6 mg, 0,26 mmol) y t Ba I (9,7 mg, 0,03 mmol) en DMF (3 ml) se agitó a 90 °C durante una noche. La reacción se enfrió a TA y se diluyó con EA. La fase orgánica se lavó con agua, NH4O saturado y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó por CCF preparativa (DCM/MeOH = 30:1) para dar 2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2-(3-(trifluorometil)pirrolidin-1 -il)-[2,5' bipirimidin]-4-il)acetamida (4,0 mg, 2,9 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (DMSO-de) 811,42 (s, 1H), 9,22 (s, 2H), 8,70 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,79 (s, 1H), 5,36 (s, 2H), 3,91 (dd, J = 11,7, 8,1 Hz, 1H), 3,77 (s, 1H), 3,72-3,61 (m, 2H), 3,46 (s, 3H), 3,19 (s, 3H), 2,35-2,29 (m, 1H), 2,14 (dd, J = 12,9, 7,3 Hz, 1H), 2,00 (d, J = 7,9 Hz, 1H). MH+ 531.

Ejemplo 12 N-(2'-(3,3-difluoroazetidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)acetamida

Una mezcla de 2-cloro-N-(2-(2-(3-(trifluorometil)azetidin-1-il)pirimidin-5-il)pirimidin-4-il)acetamida (70 mg, 0,19 mmol), K2CO3 (51,9 mg, 0,38 mmol), 1,3-dimetil-1H-purin-2,6(3H,7H)-diona (34,2 mg, 0,19 mmol) y TBAI (11,2 mg, 0,019 mmol) en DMF (2 ml) se agitó a 50 °C durante 2 h. La reacción se enfrió a TA y se diluyó con EA. La fase orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El producto en bruto que se trituró con MeOH, se filtró y se secó para dar el producto del título 2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)-N-(2-(2-(3(trifluorometil)azetidin-1-il)pirimidin-5-il)pirimidin-4-il)acetamida (7,0 mg, 5,6 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (DMSO-de) 89,22 (s, 2H), 8,71 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,81 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 7,83 (s, 1H), 5,36 (s, 2H), 4,39-4,44 (m, 2H), 4,12-4,17 (m, 2H), 3,76-3,78 (m, 1H), 3,45 (s, 3H), 3,21 (s, 3H). MH+ 517.

Ejemplo 13 (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-(3-(trifluorometil)azetidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-il)propanamida

A una mezcla de ácido (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanoico (85 mg, 0,34 mmol) y 2'-(3-(trifluorometil)azetidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-amina (100 mg, 0,34 mmol) en DCM (3 ml) se le añadió HOAT (46 mg, 0,34 mmol) a TA. La reacción se enfrió a 0 °C. Se añadieron de manera secuencial piridina (54 mg, 0,68 mmol) y DIC (64 mg, 0,51 mmol) lentamente gota a gota. La reacción se calentó a 30 °C y se agitó 18 h. La reacción se lavó con agua (5 ml) y NH4Cl (5 ml) saturado. La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía eluyendo con PE:EA (1:1) para proporcionar (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-(3-(trifluorometil)azetidin-1 -il)-2,5'-bipirimidin-4-il)propanamida (60 mg, 33,3%) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (DMSO-de) 8 11,49 (s, 1H), 9,22 (s, 2H), 8,70 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 8,34 (s, 1H), 7,84 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,81 (c, J = 8.0 Hz, 1H), 4,42 (t, J = 8,8 Hz, 2H), 4,13-4,17 (m, 2H), 3,75-3,78 (m, 1H), 3,45 (s, 3H), 3,18 (s, 3H), 1,87 (d, J = 8,8 Hz, 3H), MH+ 531.

Ejemplo 14 (S)-N-(2'-(4,4-difluoropiperidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-il)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanamida

A una solución de ácido (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il) propanoico (50 mg, 0,2 mmol) y 2'-(4,4-difluoropiperidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-amina (58 mg, 0,2 mmol) en DCM (3 ml) se le añadió HOAT (27 mg, 0,2 mmol) a TA. La reacción se enfrió a 0 °C. Se añadieron de manera secuencial piridina (32 mg, 0,4 mmol) y después DIC (38 mg, 0,3 mmol) lentamente gota a gota. La reacción se calentó a 30 °C durante 18 h. La reacción se extrajo con agua (5 ml) y NH4Cl saturado (5 ml). La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó por CCF preparativa eluyendo con PE:EtOAc (1:1) para proporcionar (S)-N-(2'-(4,4-difluoropiperidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-il)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanamida (15 mg, 14,3%) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (DMSO-de) 89,22 (s, 2H), 8,70 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,34 (s, 1H), 7,83 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,81 (c, J = 6.8 Hz, 1H), 4,02 (t, J = 5,6 Hz, 4H), 3,54 (s, 3H), 3,21 (s, 3H), 2,01-2,10 (m, 4H), 1,87 (d, J = 6,8 Hz, 3H). MH+ 527,2.

Ejemplo 15 (2S)-N-(2'-(3-azabiciclo[3.1.0]hexan-3-il)-2,5'-bipirimidin-4-il)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanamida

El compuesto del título se preparó siguiendo el procedimiento del ejemplo 14 con un 20,7 % de rendimiento en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (DMSO-de) 811,42 (s, 1H), 9,16 (s, 2H), 8,66 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,33 (s, 1H), 7,79 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,81 (c, J = 7.2 Hz, 1H), 3,86 (d, J = 11,2 Hz, 2H), 3,57 (d, J = 11,6 Hz, 2H), 3,41 (s, 3H), 3,17 (s, 3H), 1,86 (d, J = 7,6 Hz, 3H), 1,70 (t, J = 3,6 Hz, 2H), 0,75-0,80 (m, 1H), 0,15-0,18 (m, 1H). MH+ 489.

Ejemplo 16 (2S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-(3-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-il)propanamida

El compuesto del título se preparó siguiendo el procedimiento del ejemplo 14 con un 39,1 % de rendimiento en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (DMSO-de) 611,46 (s, 1H), 9,22 (s, 2H), 8,69 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,34 (s, 1H), 7,81 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,82 (c, J = 7,2 Hz, 1H), 3,88-3,94 (m, 1H), 3,69-3,78 (m, 1H), 3,62-3,67 (m, 2H), 3,50 (s, 3H), 3,43-3,49 (m, 1H), 3,20 (s, 3H), 2,30-2,35 (m, 2H), 2,12-2,17 (m, 1H), 1,87 (t, J = 7,2 Hz, 3H). MH+ 545,2.

Ejemplo 17 (S)-2-(1,3-dimetN-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purm-7(6H)-M)-N-(2'-(2-metNpiperidm-1-M)-2,5'-bipirimidin-4-il)acetamida

A una solución de 1,3-dimetil-1H-purin-2,6(3H,7H)-diona (208 mg, 1,16 mmol) en DMF (8 ml) se le añadió K2CO3 (320 mg, 2,32 mmol) y (S)-2-cloro-N-(2'-(2-metilpiperidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-il)acetamida (400 mg, 1,16 mmol). La reacción se agitó a t A durante 1 h; después se vertió en agua con hielo. El precipitado sólido se recogió y se trituró con MeOH para proporcionar (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-(2-metilpiperidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-il)acetamida (220 mg, 45,5 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN *H (DMSO-cfó) 511,38 (s, 1H), 9,17 (s, 2H), 8,68 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,75 (s, 1H), 5,36 (s, 2H), 5,12-5,14 (m, 1H), 4,67-4,71 (m, 1H), 3,45 (s, 3H), 3,19 (s, 3H), 3,00 (t, J = 12 Hz, 1H), 1,57-1,75 (m, 5H), 1,22-1,40 (m, 1H), 1,19 (d, J = 8 Hz, 3H). MH+ 491.

Ejemplo 18 2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-(2,2-dimetilpirrolidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-il)acetamida

El compuesto del título se preparó usando el procedimiento del ejemplo 17 con un 43,1 % de rendimiento en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (CDCla) 59,59 (s, 1H), 9,19 (s, 2H), 8,60 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,77 (s, 2H), 5,18 (s, 2H), 3,77 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,64 (s, 3H), 3,47 (s, 3H), 1,94-1,98 (m, 4H), 1,604 (s, 6H). MH+ 491.

Ejemplo 19 (S)-2-(1,3-dimetN-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purm-7(6H)-N)-N-(2'-(2-metMpirroNdm-1-M)-2,5'-bipirimidin-4-il)acetamida

El compuesto del título se preparó usando el procedimiento del ejemplo 17 con un 46,7 % de rendimiento en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (DMSO-de) 511,38 (s, 1H), 9,18 (s, 2H), 8,68 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 5,37 (s, 2H), 4,32 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 3,54-3,68 (m, 2H), 3,47 (s, 3H), 3,20 (s, 3H), 1,71-2,11 (m, 4H), 1,24 (d, J = 6,4 Hz, 3H). MH+ 477.

Ejemplo 20 2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-((S)-2-metilpirrolidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-il)propanamida

A una solución de 1,3-dimetil-1H-purin-2,6(3H,7H)-diona (312 mg, 1,73 mmol) en DMF (8 ml) se le añadió K2CO3 (477 mg, 3,46 mmol), 2-cloro-N-(2'-((S)-2-metilpirrolidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-il)propanamida (600 mg, 1,73 mmol). La reacción se agitó a TA durante 1 h; después se vertió en agua enfriada con hielo. El precipitado sólido se recogió y se lavó con MeOH para proporcionar 2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-((S)-2-metilpirrolidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-il)propanamida (130 mg, 16 %) en forma de un sólido de color blanco. r Mn 1H (DMSO-cfe) 511,43 (s, 1H), 9,18 (s, 2H), 8,67 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,34 (s, 1H), 7,78 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,82 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,31 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 3,53-3,68 (m, 2H), 3,46 (s, 3H), 3,19 (s, 3H), 1,71-2,19 (m, 7H), 1,23 (d, J = 6,4 Hz, 3H). MH+ 491.

Ejemplo 21 (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-((S)-2-metilpirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)propanamida

La mezcla diastereomérica de producto del ejemplo 20 se separó por cromatografía de fluidos supercríticos con una columna quiral * para obtener (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-((S)-2-metilpirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)propanamida en forma de un líquido incoloro (tiempo de retención 6,0 min). MH+ 491.

* Las condiciones de separación por CLAR quiral 2,1 x 25,0 cm ChiralPak IC de Chiral Technologies (West Chester, PA), con 50 % de dióxido de carbono supercrítico y 50 % de una mezcla 2:1:1 de DCM:hexano:isopropanol a un caudal de 80 ml/min.

Ejemplo 22 (R)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-((S)-2-metilpirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)propanamida

La mezcla diastereomérica de producto del ejemplo 20 se separó por cromatografía de fluidos supercríticos con una columna quiral* para obtener (R)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-((S)-2-metilpirrolidin-1 -il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)propanamida en forma de un líquido incoloro (tiempo de retención 4,8 min). MH+ 491.

Ejemplo 23 2-(1,3-dimetN-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purm-7(6H)-M)-N-(2'-((S)-2-metMpipendm-1-M)-2,5'-bipirimidin-4-il)propanamida

El producto del título se preparó usando los procedimientos de la preparación 26 y el ejemplo 20 con un 28,3 % de rendimiento en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (CDCh) 59,73 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 9,17 (s, 2H), 8,56 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 7,86 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,79 (d, J = 4 Hz, 1H), 5,76 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 4,76 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,47 (s, 3H), 3,02 (t, J = 12 Hz, 1H), 1,90 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 1,48-1,78 (m, 6H), 1,23 (d, J = 6,4 Hz, 3H). MH+ 505.

Ejemplo 24 (S)-2-(3-metil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-(2-metilpirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)acetamida

(S)-2'-(2-metilpirrolidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-amina (249 mg, 0,971 mmol), acido 2-(3-metil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)acético (436 mg, 1,943 mmol) y EDC (745 mg, 3,89 mmol) se añadieron a piridina (2,43 ml). La reacción se agitó 2 días a TA. La reacción se concentró y el residuo se purificó por cromatografía para proporcionar (S)-2-(3-metil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-(2-metilpirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)acetamida (50 mg, 11 %) en forma de un líquido incoloro. MH+ 463.

Ejemplo 25 N-{2-[2-((2S)-2-metilpirrolidinil)pirimidin-5-il]pirimidin-4-il}-2-(1-metil-3-metil-d3-2,6-dioxo(1,3,7-trihidropurin-7-il))acetamida

Una mezcla de ácido 2-(1-metil-3-metil-d3-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)acético (0,200 g, 0,829 mmol), (S)-2'-(2-metilpirrolidin-1 -il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina (0,213 g, 0,829 mmol) y EDC (0,318 g, 1,658 mmol) se disolvió en piridina (4,15 ml) a TA. La reacción se agitó durante una noche y después se diluyó con agua. La reacción se extrajo tres veces con EA. La fase orgánica se secó sobre MgSO4 y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía para proporcionar N-{2-[2-((2S)-2-metilpirrolidinil)pirimidin-5-il]pirimidin-4-il}-2-(1-metil-3-metild3-2,6-dioxo(1,3,7-trihidropurin-7-il))acetamida (66,1 mg 17 %) en forma de un líquido incoloro. MH+ 480.

Ejemplo 26 ((2S)-N-(2-(2-(3-azabicido[3.1.0]hexan-3-N)piramidm-5-N)tiazol-4-N)-2-(3-metN-2,6-dioxo-1-(2-oxobutil)-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanamida

El compuesto del título se preparó usando el procedimiento del ejemplo 14 con un 8 % de rendimiento en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (DMSOda) 811,47 (s, 1H), 9,20 (s, 2H), 8,69 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 8,35 (s, 1H), 7,82 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 5,83 (s, 1H), 4,01 (d, J = 12,0 Hz, 2H), 3,87 (d, J = 11,0 Hz, 2H), 3,46 (s, 3H), 3,18 (s, 3H), 2,71 (d, J = 11,5 Hz, 2H), 1,87 (d, J = 6,6 Hz, 3H). MH+ 525.

Ejemplo 27 (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)acetamida

A una mezcla de cloruro de 2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)acetilo (250 mg, 0,97 mmol) y (S)-2'-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina (332 mg, 1,07 mmol) en THF (10 ml) se le añadió DiPeA (0,509 ml, 2,92 mmol) a 0 °C. La reacción se agitó a TA durante 18 h, después se sometió a reflujo durante 24 h. La mezcla se enfrió a TA, se diluyó con agua (75 ml) y se extrajo con EA (50 ml X 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4 y se concentraron. El residuo se purificó por CCF preparativa (eluyendo con EA al 100 %) para dar el compuesto del título (17 mg, 3,3 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (CDCh) 89,6 (s a, 1H), 9,26 (s, 2H), 8,61 (d, J = 4 Hz, 1H), 7,96-7,8 (m, 1H), 7,75 (s, 1H), 5,22-5,06 (m, 3H), 5,12 (t, 1H), 3,89-3,75 (m, 2H), 3,62 (s, 3H), 3,46 (s, 3H), 2,35-2,22 (m, 2H), 2,18-2,04 (m, 2H). MH+ 531.

Ejemplo 28 (R)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-((R)-2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-il)propanamida

El compuesto del titulo se preparó usando el procedimiento del ejemplo 2 para producir el compuesto del titulo en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (DMSO-de) 811,46 (s, 1H), 9,22 (s, 2H), 8,66 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,81 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,82 (c, J = 7.2 Hz, 1H), 5,12 (t, 1H), 3,70 (m, 2H), 3,47 (s, 3H), 3,16 (s, 3H), 2,10 (m, 4H), 1,88 (d, J = 7,2 Hz, 3H). MH+ 545

Ejemplo 29 Proceso de síntesis a escala de (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purm-7(6H)-N)-N-(2'-((S)-2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidinil-4-il)propanamida

Etapa 12-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)propanoato de (R)-metilo

Un reactor de 50 l en atmósfera de nitrógeno se cargó con cloruro de metileno (30 l) y se agitó. Se añadió acetato de (R)-metilo (1,44 kg, 13,83 mol), seguido de 2,6-lutidina (1,56 kg, 14,56 mol). La mezcla en agitación se enfrió a de -5 a 5 °C usando un baño de hielo seco/acetona. El reactor se cargó cuidadosamente con trifluorometano sulfónico anhídrido (3,9 kg, 13,83 mol) usando una bomba peristáltica mientras se mantenía la temperatura interna entre -5 y 5 °C. Esta adición requirió más de 1 h. Después de que se completara la adición, la reacción se agitó 1 h más mientras se mantenía la temperatura entre 0 y 5 °C. La reacción se inactivó cuidadosamente con agua desionizada (10 l) y la agitación vigorosa continuó 1 min más. Se detuvo la agitación y se dejaron separar las fases. La capa del fondo (cloruro de metileno) que contenía el producto, se transfirió a un recipiente de almacenamiento mientras el reactor se limpiaba sucesivamente con acetona (2 x 10 l) y después cloruro de metileno (2 x 10 l). El triflato intermedio se usó directamente sin purificación.

Etapa 2 (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanoato de metilo

La solución del producto de cloruro de metileno de 2-(((trifluorometil)sulfonil)-oxi)propanoato de R-metilo se cargó de nuevo en el reactor de 50 l limpio y la mezcla se puso en atmósfera de nitrógeno. La mezcla se enfrió con agitación a de 0 a 5 °C con un baño de hielo seco/acetona. Durante el enfriamiento se cargó teofilina (2,0 kg, 11,1 mol) en el reactor. Se añadió 1,1,3,3-tetrametilguanidina (1,34 kg, 11,66 mol) lentamente al reactor mediante una bomba peristáltica mientras se mantenía la temperatura interna por debajo de 10 °C. Después de que se completara la adición, la reacción se agitó durante al menos 1 h mientras se mantenía la temperatura de reacción a de 0 a 10 °C. Una alícuota recogida 30 min después se ensayó por CLAR y se confirmó que la reacción se había completado. Se añadió HCl 0,2 N enfriado en hielo (10 l) al reactor para inactivar la reacción. La mezcla se agitó vigorosamente durante 1-2 min. La agitación se detuvo y se dejó que las fases se separaran. La capa del producto de cloruro de metileno del fondo se transfirió a un recipiente de almacenamiento. La capa acuosa superior se eliminó y se descartó. La capa de cloruro de metileno del fondo se añadió de nuevo al reactor y se extrajo con NaHCO3 acuoso al 5 % (10 l) con agitación vigorosa durante 1-2 min. La agitación se detuvo y se dejó que las fases se separaran. La capa de producto del fondo se transfirió a un recipiente de almacenamiento. La capa acuosa superior se eliminó y se descartó. La capa de cloruro de metileno del fondo de volvió a añadir al reactor. Se añadió agua desionizada (10 l) al reactor. La mezcla se agitó vigorosamente durante 1 min. Se detuvo la agitación y se dejó que las fases se separaran. La capa de producto del fondo se transfirió a un recipiente de almacenamiento. La capa acuosa superior se eliminó y se descartó. La solución que contenía el producto de cloruro de metileno se transfirió a un evaporador rotatorio y se concentró al vacío (temperatura de baño 30-40 °C) hasta que la mayoría del cloruro de metileno se destiló dejando (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanoato de metilo en bruto en forma de un jarabe viscoso oscuro. El análisis por CLAR de una muestra confirmó el producto y su pureza.

Etapa 3 ácido (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanoico

(S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanoato de metilo (7,16 kg, jarabe en bruto en dos lotes de las etapas 1 y 2) se transfirió a una bombilla de evaporador rotatorio. Se aplicó vacío y la bombilla se rotó con una temperatura de baño de 30-40 °C hasta que no se destiló más cloruro de metileno. Por separado, se preparó una solución de HCl acuoso 3 N (32 l, 4,5 equiv, basándose en 4 kg de teofilina). El residuo de la bombilla del evaporador rotatorio se transfirió a un reactor de 50 l. La bombilla se aclaró con porciones pequeñas de HCl 3 N para eliminar todo el éster en bruto y se transfirió al reactor y el HCl 3 N restante se cargó al reactor. La mezcla de reacción se calentó a 70-75 °C durante al menos 16 h. El estado de la reacción a las 16 h se comprobó por análisis por CLAR de una alícuota pequeña y se consideró completa cuando la cantidad de éster fue menor del 10 % en comparación con el producto ácido. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente con agitación durante al menos 16 h. El producto se recogió en un embudo de Buchner y los sólidos se lavaron con agua desionizada enfriada con hielo (2 x 2 l). Los sólidos se secaron en el embudo de vacío durante una noche hasta que la mezcla se convirtió en un sólido de flujo libre (2,95 Kg). El producto en bruto fue 93,8 % puro según análisis por CLAR.

Una porción del ácido (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H-il)propanoico en bruto (1 kg) se cargó en un reactor de 22 l. Se añadió agua desionizada (9 l, 9 volúmenes) al reactor y se comenzó a agitar. La suspensión se calentó a 95 °C y se mantuvo a esa temperatura hasta que se disolvieron todos los sólidos. Una suspensión de 40 g (4 % en peso) de carbón activado Norite® en 250 ml de agua desionizada se añadió a la mezcla caliente y la agitación continuó a 90-95 °C durante 1 h. La mezcla caliente se transfirió cuidadosamente del recipiente de 22 l a través de un embudo de filtro que contiene un filtro de microfibra de vidrio a un reactor de 50 l limpio. Este procedimiento se repitió dos veces más con 1 kg del ácido en bruto, filtrando cada vez en el mismo reactor de 50 l. El reactor se dejó enfriar a menos de 30 °C con agitación. Los sólidos se filtraron y el producto se lavó con agua desionizada enfriada con hielo (2 x 2 l). El producto se secó al menos 12 h en el embudo de filtro, después se transfirió a un horno de vacío y se secó hasta un peso constante para proporcionar ácido (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanoico (2,25 kg). El producto purificado era un 99,31 % puro según CLAR y tenía una pureza enantiomérica del 100 % según CLAR quiral. El rendimiento total del ácido (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanoico puro, basándose en el material de partida de teofilina fue del 42,4 %.

Etapa 4 (S)-5-bromo-2-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)pirimidina

A un recipiente de reacción equipado con un agitador mecánico, condensador de reflujo, entrada de nitrógeno, termopar y una manta térmica externa se cargó con (S)-2-trifluorometilpirrolidina (1598 g, 11,49 mol), 5-bromo-2-cloropirimidina (2000 g, 10,34 mol) y N,N-dimetilacetamida (9 l). La mezcla en agitación se calentó a 50 °C. Cuando la mezcla se convirtió en una solución, se añadió diisopropiletilamina (1633 g, 12,64 mol) y la temperatura de reacción se aumentó hasta 120 °C. La reacción se agita durante 24-48 h hasta que se completa la reacción según CLAR. La reacción se enfría a no menos de 70 °C y los contenidos se transfieren a un segundo recipiente de agitación que contiene agua (90 l). Esta mezcla se agitó y se dejó enfriar a 20 °C, después se enfrió más hasta de 5 a 10 °C y se mantuvo a esta temperatura durante 2 h. El producto sólido se recogió por filtración y se lavó con agua fría (3 x 5 l) El producto se secó al vacío a 50 °C hasta peso constante para proporcionar (S)-5-bromo-2-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)pirimidina (2898 g, 94,6 %) en forma de un sólido de color pardo claro que era ~99 % puro según CLAR.

Etapa 5 (S)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-2-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)pirimidina

Un recipiente de reacción equipado con agitador mecánico, condensador de reflujo, entrada de nitrógeno, termopar y una manta térmica externa se cargó con dioxano (8 l) y se inició una agitación suave. La reacción se cargó con (S)-5-bromo-2-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)pirimidina (1600 g, 5,40 mol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (2058 g, 8,11 mol) y acetato potásico (1059 g, 10,81 mol). Se añadió más dioxano (17 l) y se burbujeó gas nitrógeno a través de la mezcla. Se añadió catalizador de cloruro de bis-(trifenilfosfina)paladio (113,7 g, 0,161 mol) a la reacción. La reacción se calentó con nitrógeno todavía burbujeando a través de la mezcla. Cuando la temperatura de reacción alcanzó los 50 °C, no se burbujeó más nitrógeno a través de la mezcla. Sin embargo, se mantuvo una atmósfera de nitrógeno, ventilando a través del condensador. La temperatura de reacción se elevó de 95 a 100 °C y se mantuvo a esta temperatura hasta que el análisis por CLAR indicó que la reacción se había completado, después de aproximadamente 16-24 h. La reacción se enfrió a no menos de 60 °C y se transfirió mediante bomba peristáltica a un reactor que contenía 38 volúmenes de agua. La línea de transferencia se aclaró con de 0,25 a 1,50 vol de dioxano. Se añadió más agua al reactor cuando fue apropiado para facilitar la cristalización del producto. La mezcla se enfrió a 10 ± 5 °C y se mantuvo durante al menos 1 hora. El producto se recogió en un embudo de Buchner, se lavó con agua fría (3 X 2 volúmenes) y se secó al vacío a 50-60 °C hasta que se consiguió un peso constante. Se obtuvo (S)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-2-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)pirimidina en forma de un sólido de color pardo claro, 1964 g. Este sólido contenía un 12,7 % de agua y era aproximadamente un 96 % puro según se determinó por CLAR. Se estimó que el rendimiento fue de 1715 g, 91,4 %. El material era adecuado para reaccionar más sin eliminar el agua residual.

Etapa 6 (S)-2'-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina

El (S)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-2-(2-(trifluorometil)pirroMdin-1-il)pirimidina (1964 g) de la etapa 5 se ensayó para el contenido de agua y la estequiometría se ajustó en consecuencia (1715 g, 5,0 mol). Se añadió dioxano (16 l) a un recipiente de reacción equipado con una manta térmica, controlador para termopar, entrada de nitrógeno, agitador mecánico y condensador de reflujo. Los compuestos de (S)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-N)-2-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)pirimidina (corregidos a 1715 g, 5,0 mol), 4-amino-2-cloropirimidina (648 g, 5 mol) y carbonato sódico (962 g, 9,08 mol) se cargaron en el recipiente de reacción. Se añadió más dioxano (8 l). Se burbujeó gas nitrógeno a través de la solución durante aproximadamente 30-60 min, ventilando a través del condensador. Se añadió tetrakis(trifenilfosfina)paladio (230 g 0,2 mol) y el catalizador residual se aclaró en el recipiente de reacción con dioxano (1 l). Se comenzó el calentamiento y el burbujeo de nitrógeno continuó hasta que la mezcla alcanzó aproximadamente 50 °C. En este momento se retrajo el tubo de nitrógeno por encima de la superficie de la solución, pero se mantuvo la atmósfera de nitrógeno, ventilando a través del condensador. La temperatura se elevó hasta 85 90 °C y se mantuvo hasta que se completó la reacción (1-4 h) según se determinó por CLAR. La reacción se enfrió a no menos de 60n °C y se añadió agua (18 l) mientras se mantenía la temperatura. La mezcla de reacción se filtró en caliente a través de un papel de fibra de vidrio GF-B en una botella de filtro. El filtrado se transfirió mientras estaba templado a un reactor, aclarando con 1:1 de dioxano/agua (0,5 a 3 l) si fuera necesario, con la temperatura de la camisa del reactor ajustada a 45 °C. Después se añadió agua (36 l) al reactor y la temperatura se mantuvo durante la adición. La mezcla se enfrió lentamente a 5 ± 5 °C y se añadió más agua al reactor según se necesitó para maximizar la cristalización. La temperatura se mantuvo a 5 ± 5 °C durante al menos 2 horas, tras lo cual el producto se recogió en un embudo de Buchner y se lavó con agua fría (3 X 3,5 l). El producto se secó al vacío a 50-60 °C hasta que se consiguió un peso constante para dar (S)-2'-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1 -il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina (1073 g, 70%) en forma de un sólido blanquecino.

Una porción de este producto en bruto (754 g, 2,43 mol) se suspendió con HCl 3 N (15 l) y se filtró para eliminar las impurezas. La solución ácida se extrajo con MTBE (4 l)) y heptano (4 l). Estos extractos orgánicos se desecharon. La solución ácida se basificó con hidróxido sódico al 50 % a pH 9-10. La mezcla se enfrió y el precipitado se recogió por filtración. El sólido se lavó con agua fría y se secó al vacío para producir un sólido de color blanquecino, 695 g, 92 % de recuperación. El paladio residual en este material fue de 782 ppm. Este producto se recristalizó en acetonitrilo acuoso al 50 % (8 l). La mezcla se enfrió y el producto se recogió por filtración, se aclaró con disolvente frío y se secó al vacío para dar 401,7 g (53 % de los 754 g iniciales) del sólido blanquecino, ahora con 181 ppm de paladio residual. Este sólido blanquecino se disolvió en THF y se trató con resina depuradora de paladio SiliCicle® SiliaMetS® Tiol (25 g). El disolvente se eliminó para dar (S)-2'-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina en forma de un sólido de color blanco (390 g, 97 % de recuperación) que era más del 97 % pura según CLAR y con menos de 10 ppm de paladio residual.

Etapa 7 (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-((S)-2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-il)propanamida

A un reactor de 100 l con agitador, entrada de nitrógeno y condensador se le añadió diclorometano (20 l), ácido (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)propanoico (1,0 kg, 3,96 mol) y N,N-dimetilformamida (14,5 ml, 0,2 mol). Se añadió más diclorometano (10 l) y la mezcla en agitación se enfrió a 10-15 °C. Se añadió cloruro de oxalilo (1,51 kg, 11,9 mol) lentamente mientras se mantenía la temperatura por debajo de 25 °C. La reacción se agitó 30 60 min a 25 °C. El disolvente se destiló de la reacción al vacío y con una purga de nitrógeno y la temperatura de la camisa del reactor se elevó a 35 °C según fue necesario. Se añadió más diclorometano (20 l) y el disolvente se destiló otra vez de la reacción. Se repitieron la adición y la destilación del diclorometano. Se añadió tetrahidrofurano (10 l) y esto proporcionó una suspensión de color blanco a beis. A la reacción se le añadió (S)-2-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina (1,07 kg, 3,45 mol) y el recipiente de adición se aclaró con tetrahidrofurano (1,5 l) en la mezcla de reacción. La reacción se enfrió a < 0 °C y se añadió 2,6-lutidina (0,964 l, 8,28 mol), manteniendo la temperatura de reacción por debajo de 5 °C. La reacción se agitó a aproximadamente 0 °C hasta que se consideró completa según CLAR (aproximadamente un 2% de (S)-2'-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina restante). Después de aproximadamente 14 h, la reacción se inactivó cuidadosamente con HCl 0,2 N (40 l) y agua (20 I ) mientras la temperatura de reacción se mantenía por debajo de 15 °C. El producto sólido se recogió y se lavó con agua desionizada dos veces. Los sólidos se secaron hasta peso constante al vacío a 50-60 °C para proporcionar 1.473 g (78 %) de (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-((S)-2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-il)propanamida. Este material de producto se combinó con 1.435 g de producto de una reacción similar y se recristalizó en etanol acuoso al 2% (86,8 l) para producir 2.250 g de (S)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)-N-(2'-((S)-2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-2,5'-bipirimidin-4-il)propanamida purificada en forma de un sólido de color blanquecino.

Ejemplo 30 Síntesis telescópica de (S)-2'-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina a partir de (S)-5-bromo-2-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)pirimidina

A un recipiente de reacción cargado con dioxano (17,25 l) se le añadió (S)-5-bromo-2-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)pirimidina (1500 g, 5,066 mol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (1937 g, 7,628 mol) y acetato potásico (998 g, 10,17 mol). Se añadió más dioxano (6,25 l) y se burbujeó gas nitrógeno a través de la mezcla con agitación suave durante de 30 a 60 min. Se añadió catalizador de cloruro de bis-(trifenilfosfina)paladio (107 g, 0,152 mol) con un aclarado de dioxano (0,5 l) y la reacción se calentó a 50 °C. En este punto, no se burbujeó más nitrógeno a través de la mezcla, aunque se mantuvo una atmósfera de nitrógeno, ventilando a través del condensador. La temperatura de reacción se elevó más, a de 95 a 100 °C y se mantuvo a esta temperatura hasta que la reacción se completó como se indicó por análisis CLAR (aproximadamente 24 h).

Después, la reacción se enfrió a 60 °C y se añadieron 4-amino-2-cloropirimidina (623 g, 4,81 mol), carbonato sódico (975 g, 9,2 mol) y agua (7,5 l). Se burbujeó gas nitrógeno a través de la solución durante aproximadamente 30-60 min, ventilando a través del condensador. Se añadió tetrakis(trifenilfosfina)paladio (129 g 0,11 mol) y el catalizador residual se aclaró en el recipiente de reacción con dioxano (0,5 l). Se reinició el calentamiento y el burbujeo con nitrógeno continuó hasta que la mezcla alcanzó aproximadamente 50 °C. En este momento se retrajo el tubo de nitrógeno por encima de la superficie de la solución, pero la atmósfera de nitrógeno se mantuvo, ventilando a través del condensador. La temperatura se elevó a 85-90 °C y se mantuvo hasta que la reacción se completó (1-24 h) según se determinó por CLAR. Después de enfriar a no menos de 60 °C, se añadió agua (15 l) mientras se mantenía la temperatura y la mezcla de reacción se filtró a través de un papel de fibra de vidrio GF-B en una botella de filtro. El filtrado se transfirió mientras estaba templado a un reactor, aclarando con 1:1 de dioxano/agua (0,5 a 3 l) si fuera necesario, con la temperatura de la camisa del reactor ajustada a 45 °C. Se añadió agua (42 l) al reactor y la mezcla se enfrió lentamente a 5 ± 5 °C. Se añadió más agua al reactor según fue necesario para maximizar la cristalización y la temperatura de mantuvo a 5 ± 5 °C durante al menos 2 horas. El producto se recogió después en un embudo de Buchner, se lavó con agua fría (3 x 3,5 l), después se secó al vacío a 50-60 °C hasta que se consiguió un peso constante para dar (S)-2'-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina (1266 g, 70%) en forma de un sólido de color blanquecino. Este producto se purificó como se describe en el ejemplo 29 (Etapa 7) para producir (S)-2'-(2-(trifluorometil)pirrolidin-1-il)-[2,5'-bipirimidin]-4-amina con una pureza similar a la descrita.

Caracterización de los compuestos de la invención

Los compuestos de la invención se denominan en el presente documento por su número de ejemplo respectivo. Por ejemplo el compuesto producido por el procedimiento descrito en el ejemplo 1 se puede denominar "Compuesto del ejemplo 1", "Ejemplo 1" o "Compuesto 1". Cualquiera de los tres nombres se puede usar en el presente documento de manera intercambiable.

Ejemplo 31 Caracterización de las formas cristalinas sólidas obtenidas a partir de tratamiento de suspensión de los compuestos de fórmula (I)

Ciertos compuestos de la invención produjeron formas cristalinas solvatadas después del tratamiento de suspensión en un disolvente o una combinación de disolventes (por ejemplo, agua, etanol o una combinación de los mismos). Por ejemplo, El compuesto 2 produjo una forma cristalina solvatada cuando se suspensión en etanol o en mezclas de etanol acuosas que contenían hasta un 3 % de agua a temperatura ambiente, denominada en el presente documento forma A. El producto cristalino sólido obtenido a partir de la suspensión se indexó usando difracción de rayos X en polvo (DRXP) para definir la unidad celular (F ig u re 1). Los picos de DRXP observados se enumeran a continuación en la T a b la 1.

T a b la 1 P ico s d e d ifra c c ió n d e rayo s X en p o lvo o b s e rv a d o s d e u na fo rm a c r is ta lin a d e l c o m p u e s to 2 (F o rm a A n i r ir n n i n n n l

continuación

El secado de los cristales del compuesto de fórmula (I) obtenido del tratamiento de suspensión fue capaz de producir polimorfos alternativos. Por ejemplo, el tratamiento al vacío (-80 °C durante un día) de los cristales del compuesto 2 obtenido del tratamiento de suspensión en etanol al 97 %/agua al 3 % produce una forma cristalina sólida anhidra, estable, denominada en el presente documento como forma B. Esta forma cristalina resultante se caracterizó usando una diversidad de procedimientos, que incluyen DRXP, microscopía de luz polarizada, calorimetría diferencial de barrido (CDB), análisis termogravimétrico (ATG) y sorción dinámica de vapor (SDV) con post-SDV DRXP.

La fig u ra 2 muestra el patrón de DRXP de una muestra de la forma cristalina sólida anhidra del compuesto 2 y los picos observados se enumeran a continuación en la T a b la 2. La indexación exitosa de esta muestra indica que está compuesta de una sola fase cristalina. Después de almacenar esta forma cristalina sólida en condiciones ambiente durante tres meses, la muestra se sometió otra vez a análisis por DRXP. El patrón de DRXP resultante coincide con el patrón indexado original mostrado en la F ig u ra 2.

T a b la 2 P ico s d e d ifra c c ió n d e rayo s X en p o lvo o b s e rv a d o s d e u na fo rm a c r is ta lin a s ó lid a a n h id ra del m 2 F rm B r ir n n i n n n l

continuación

También se llevaron a cabo calorimetría diferencial de barrido (CDB) y análisis termogravimétrico (ATG) en la forma cristalina sólida anhidra del compuesto 2 (Forma B); los datos resultantes se muestran en la F ig u ra 3 y la F ig u ra 4.

La CDB muestra una endotermia amplia secundaria con un pico máximo a 48,5 °C que a menos es indicativo de un evento de volatilización; aunque no existe un evento de pérdida de peso correspondiente en el ATG. La endotermia amplia a 48,5 °C puede indicar la presencia de agua absorbida en la muestra durante el almacenamiento que es consistente con los datos de sorción de humedad (SDV). La CDB también muestra una endotermia amplia con un inicio calculado de 185,4 °C que probablemente corresponde a un evento de fusión y coincide con un ATG secundario de pérdida de peso del 0,1 % en peso que incida que la muestra puede contener una pequeña cantidad de un componente volátil no identificado.

También se realizaron análisis de sorción dinámica de vapor (SDV) de la forma cristalina sólida anhidra del compuesto 2 (Forma B). La gráfica isoterma resultante se representa en la Figura 5, y muestra una pérdida de peso del 0,2 % en equilibrio a una humedad relativa del 5 % (HR), seguido de una adsorción/desorción reversible del 2,7 % en peso con histéresis inapreciable. Basándose en este comportamiento, la Forma B parece ser un hidrato variable, en el que el contenido en agua dependerá de la humedad ambiental relativa. Tomados en conjunto, los datos de la DRXP, la CDB, el ATG y la SDV son todos consistentes con la forma B siendo un material hidrato variable, cristalino, que se convierte en anhidro después de secado.

Los cristales del compuesto 2 obtenidos a partir de etanol o mezclas acuosas de etanol forman largas agujas delgadas. Los patrones de DRXP de dichos materiales cristalinos a menudo se complican por el fenómeno de la orientación preferida, que resulta de la alineación predominante de los cristales en dos dimensiones. Por lo tanto los patrones de DRXP de los compuestos de fórmula (I), por ejemplo, el compuesto 2, obtenidos de las muestras recristalizadas se ven diferentes de los obtenidos de los experimentos de suspensión descritos anteriormente. Se sabe que la reducción del tamaño de partícula puede reducir la magnitud de los artefactos de orientación preferida. La Figura 6 ilustra ejemplos de patrones de DRXP de la forma cristalina sólida del compuesto 2 (Forma B) recristalizados a partir de etanol y secados, antes (línea de color gris claro ) y después de micronización (línea de color gris oscuro) a un valor dg0 de menos de 10 micrómetros.

Ejemplo 32 Medición de las solubilidades cinéticas de los compuestos de fórmula (I)

Las solubilidades de los compuestos de fórmula (I) se ensayaron usando el procedimiento analizado en Kerns, E.H., J Pharm Sci (2001) 90:1838-1858, incorporado en el presente documento por referencia y descrito a continuación. Mediante este procedimiento se obtuvieron datos para la solubilidad para los compuestos de fórmula (I) y se incluyeron en la Tabla 3. Los datos cromatográficos se realizaron mediante CLAr usando una columna Xbridge Shield RP18 con las dimensiones de columna siguientes: 4,6 x 30 mm, 3,5 pm. La fase móvil consintió en agua desionizada (MPA) con ácido trifluoroacético añadido al 0,1 % (v/v) (MPC) y acetonitrilo calidad CLAR (MPB). El caudal de la fase móvil fue de 2,5 ml/min con la columna y el muestreo funcionando a temperatura ambiente. la detección UV se ajustó a 280 nm.

Para todas las muestras usadas para la determinación de la solubilidad, el gradiente de la fase móvil usado es como se muestra en la Tabla 4.

Las muestras para el análisis de los compuestos de fórmula (I) se prepararon a un % en v/v = 1/19 (es decir, 10 pl de solución madre en 190 pl de tampón) añadiendo soluciones madre de los compuestos de fórmula (I) en soluciones tamponadas. Se prepararon tres sistemas de solución tamponada: pH 4,0 preparada a partir de acetato sódico 50 mM en una solución de dextrosa al 5 % en agua, pH 7,4 preparada a partir de fosfato sódico 75 mM en una relación 1:1 de agua esterilizada para inyección a una solución de dextrosa al 5 % en agua y pH 9,0 preparada a partir de bicarbonato sódico 50 mM en una relación 1:2 de agua esterilizada para inyección a una solución de dextrosa al 5 % en agua. Las muestras se incubaron en un agitador de microplaca a 300 rpm durante 24 horas a temperatura ambiente. Después de la incubación, las muestras se centrifugaron durante cinco minutos a 13k rpm a temperatura ambiente. El sobrenadante resultante se extrajo para análisis CLAR.

Tabla 4 ubilidad

continuación

Por ejemplo, los compuestos de la invención pueden permitir niveles aceptables de fármaco para alcanzar dianas terapéuticas.

La solubilidad de una formulación micronizada del compuesto 2 se evaluó además usando recetas de tampones citratofosfato de McIlvain (Na2HPO40,2 M y ácido cítrico 0,1 M) de pH 2,2 a 8,64. Las muestras se agitaron durante 30 horas y se muestrearon, centrifugaron y analizaron por CLUR. La mayor solubilidad se vio a pH 8,6 y 3,1 mientras que el efecto del pH fue estrecho, variando de 0,2 a 1,3 mg/ml. Los resultados se muestran en la Figura 10.

La solubilidad se determinó también en un ensayo de fluido intestinal simulado en estado de ayuno (FaSSIF). En resumen, el compuesto 2 se añadió al medio FaSSIF (sales biliares, NaOH (0,420 g), NaH2PO4 (3,438 g), NaCl (6,186 g), pH a 6,5, a 25 °C y reducido a 1 l de volumen) se agitó durante 30 horas y se muestreó, se centrifugó y se analizó por CLUR. Se determinó que la solubilidad en el modelo FaSSIF que era de 1,19 mg/ml.

La solubilidad se ensayó además en fluido gastrointestinal simulado (SGF) (HCl 0,1 N a 25 °C). En resumen, el compuesto se agitó durante 30 horas y se muestreó, se centrifugó y se analizó por CLUR. Se encontró que la solubilidad en SGF era de 1,05 mg/ml. Los resultados de estos estudios indican que la solubilidad del compuesto 2 no es significativamente dependiente del pH del medio, pero puede tener algo aumento de solubilidad basándose en la presencia de sales biliares.

Los compuestos de la invención se ensayaron también para solubilidad en solución de Ringer Normal. En resumen, la solubilidad del compuesto de determinó disolviendo un intervalo estándar de volúmenes de solución madre de DMSO 10 mM DMSO de los compuestos en solución de Ringer Normal (NaCl 145 mM, KCl 4,5 mM, CaCh 2 mM, MgCl2 1 mM, HEPES 10 mM, 10 mM glucosa; pH 7,4 a temperatura ambiente). Después de agitación e incubación durante 40 minutos a temperatura ambiente, las soluciones se filtraron, se inactivaron con acetonitrilo y se analizaron por cromatografía líquida. Se determinaron los límites de solubilidad por comparación con una curva estándar. Se determinó que el límite de solubilidad era mayor que 31,3 pM. La solubilidad se indica como "mayor que" si el incremento observado entre las 2 últimas diluciones ensayadas es mayor de 2 veces. La Tabla 5 muestra los valores obtenidos para los compuestos ensayados.

Tabla 5 Solubilidad de los com uestos de^ fórmula I en solución de Rin er Normal

La unión del Compuesto 2 con proteínas plasmáticas de ser humano, rata, perro y mono cangrejero (Macaca fascicularis), se probó utilizando una estrategia de diálisis de equilibrio. Con este procedimiento, el compuesto libre se separa del compuesto unido a proteínas mediante diálisis a través de una membrana semipermeable. A una concentración de 1 pM, el Compuesto 2 demostró una unión del 98,5 % con las proteínas plasmáticas de ser humano, del 95,3 % con las de rata, del 94,5 % con las de perro y del 98,0 % con las de mono cangrejero (Tabla 6).

La unión a proteínas se probó a una concentración de 1 pM. Se descongeló un conjunto de plasma K2EDTA de ser humano, de mono cangrejero, de perro y de rata y para eliminar las partículas se centrifugó a 2000 x g durante 10 minutos a 4°°C; también se eliminó por aspiración cualquier lípido existente en la parte superior del sobrenadante. El plasma se calentó a 37°°C durante 10 minutos antes de su uso. Los compuestos de prueba se añadieron a 2 ml de plasma en una placa de polipropileno a una concentración final de 1 pM. A las unidades de diálisis Thermo RED se transfirieron partes alícuotas por triplicado de 400 pl de plasma enriquecido y se dializaron frente a 600 pl de tampón PBS. Los dispositivos RED se incubaron a 37°°C con agitación suave utilizando un agitador Boekel Jitterbug 130000; las placas también se protegieron de la luz. Después de 6 horas de diálisis, se retiraron partes alícuotas por triplicado de 50 pl de la placa r Ed , se emparejaron con la matriz con tampón PBS o con plasma en blanco, según corresponda, y se enfriaron con 4 volúmenes de ACN que contenía un patrón interno. A continuación, las muestras extraídas se centrifugaron a 2000 x g durante 5 minutos a 4 °C. El sobrenadante (50 pl) se retiró y se diluyó con 100 pl de agua antes del bioanálisis mediante LC/MS/MS (Liquid Chromatography/Mass spectrometry/Mass spectrometry, cromatografía líquida con espectrometría de masas en tándem).

Ta as

También se estudió el cambio de CI50 para el bloqueo en presencia de albúmina y plasma. Se supone que el efecto farmacológico de un fármaco se correlaciona con niveles de plasma no unido, lo que se conoce como la "hipótesis del fármaco libre". El objetivo de este estudio fue estimar el cambio de CI50 para el bloqueo del TRPA1 humano (hTRPA1) con el Compuesto 2 en presencia de concentraciones fisiológicamente relevantes de albúmina y plasma (véase la Tabla 7). Debido a cuestiones técnicas, para evaluar la unión con proteínas en todas las especies, se utilizó la forma humana del TRPA1. Para medir la corriente a través del hTRPA1 después de la activación con isotiocianato de alilo (AITC), el principio activo del aceite de mostaza, se empleó la técnica de pinzamiento zonal de células enteras descrita en del Camino, D. y col. J Neurosci 74 (2010) 30:15165, en presencia de seroalbúmina al 1 % (p/v) o de plasma al 25 % (v/v) de diversas especies, incluido plasma humano (Plasmah), seroalbúmina humana (SAH), plasma de rata (Plasmar), seroalbúmina de rata (SAR), plasma de perro y seroalbúmina de oveja (SAoveja). El compuesto 2 se subdiluyó a partir de una reserva de 10 mM en DMSO a 10 y 100 pM en DMSO, y después se diluyó en solución Ringer a las concentraciones indicadas en las Tablas 7 y 8.

La posterior introducción del Compuesto 2 dio como resultado un bloqueo reversible y dependiente de la dosis del hTRPA1. En presencia de plasma humano (Plasmah) al 25 % (v/v), las corrientes del hTRPA1 se bloquearon con una CI 50 de 95 ± 2 nM, que es 14 veces mayor que la CI50 en ausencia de suero (véase la Tabla 8). Los experimentos realizados con hTRPA1 en presencia de plasma de rata (Plasmar) y seroalbúmina de rata (SAR) produjeron una fuerza de bloqueo con el Compuesto 2 de 68 ± 8 nM y de 95 ± 9 nM, respectivamente, lo que indica un grado de unión a proteínas similar al observado con el plasma humano. La CI50 para el bloqueo con el Compuesto 2 fue algo mayor en presencia de plasma de perro (221 ± 54 nM). En presencia de seroalbúmina de oveja (SAoveja) al 1 % (p/v), las corrientes del hTRPA1 se bloquearon con una CI50 de 70 ± 10 nM. Tanto el bloqueo con el Compuesto 2 como la reversión después de la eliminación con lavado se completaron en 2-3 minutos. Estos experimentos indican que el Compuesto 2 ejercerá efectos farmacológicos a niveles plasmáticos más bajos que los de los compuestos previamente identificados, porque hay más fármaco libre disponible para interactuar con la diana.

Basándose en el cambio de la CI50 observado en presencia de plasma, se puede llegar a la conclusión de que el Compuesto 2 presenta una unión significativa a las proteínas plasmáticas en las cuatro especies probadas en el intervalo del 90-97 %. Esto representa una mejora con respecto a compuestos anteriores de fuerza similar.

Tabla 7 Determinación de CI del Com uesto 2^ sobre hTRPA1 en albúmina lasma

Tabla 8 Determinación de CI del Com uesto 2 sobre hTRPA1 de diversas fuentes de mamífero

Estabilidad metabólica

La estabilidad metabólica de los compuestos de Fórmula (I) se determinó mediante ensayos estándar en microsomas hepáticos. En resumen, la estabilidad metabólica se probó añadiendo a microsomas hepáticos de ser humano, de perro o de rata, el compuesto a probar disuelto en DMSO. Los ensayos se realizaron con una concentración inicial de 1 |jM de compuesto de prueba. La reacción comenzó con la adición de componentes de regeneración de nicotinamida adenina dinucleótido fosfato (NADPH) oxidasa a 37°°C, momento en el que una parte alícuota se desactivó inmediatamente en una solución de acetonitrilo/metanol/agua enfriada con hielo. La mezcla de reacción se incubó a 37 °C en un agitador y se tomaron partes alícuotas adicionales a los 7, 15, 30 y 60 minutos. Después de la desactivación y de la centrifugación, las muestras se analizaron mediante HPLC/Ms /MS (cromatografía liquidaespectrometría de masas en tándem). En las Tablas 9, 10 y 11, mostradas a continuación, se ofrecen los resultados.

continuación

^

Tabla 11 Semivida aclaramiento he ático de los com uestos en microsomas he áticos de rata

Biodisponibilidad

Se realizaron estudios preliminares de biodisponibilidad en ratas con soluciones de los compuestos de la invención. Los compuestos se suministraron mediante administración por vía oral como una solución en un excipiente apropiado. Como ejemplos de formulaciones se incluyen, pero sin limitación: DMSO al 4 %, Soluto1HS-15 al 10 % y agua al 86 % o DMSO al 4 %, Tween al 5 %, Cremophor EL al 25 %. Normalmente, las concentraciones diana fueron de 1 mg/ml y se administraron mediante sonda oral a ratas que no habían ayunado. La biodisponibilidad absoluta es el área bajo la curva (ABC) de la dosis corregida no intravenosa dividida entre el ABC de la dosis corregida intravenosa. La fórmula para calcular el valor de F de un fármaco administrado por vía oral (VO) se indica a continuación:

% de F = ABC VO X Dosis IV/ABC IV X Dosis VO

En la Tabla 12 se muestra la biodisponibilidad respectiva en ratas de los compuestos probados.

Tabla 12 Biodis onibilidad de los com uestos en ratas ue no han ayunado

Se realizaron estudios adicionales con el Compuesto 2 micronizado en ratas, perros (beagle) y macacos cangrejeros. Los animales recibieron una dosis oral de 10 mg/kg de compuesto formulado como una suspensión en metilcelulosa al 0,5 % en agua para inyección a una concentración diana de 1 mg/ml, y se les administró un volumen de dosis de 10 ml/kg mediante sonda oral en ratas o perros en ayunas y mediante suministro oral en macacos cangrejeros en ayunas. El % de F para las ratas en estos estudios fue del 85 %, del 36 % para los perros y del 19 % para los macacos. La Figura 11 representa el perfil farmacocinético de estas especies.

Para caracterizar la biodisponibilidad del Compuesto 2 se realizaron diversos estudios in vivo. En ratas Sprague-Dawley, se comparó una sola dosis oral de 10 mg/kg a 1000 mg/kg del Compuesto 2 en una serie de experimentos. El Compuesto 2 usado en estos estudios se recristalizó en etanol y se micronizó. Las exposiciones basadas en el área bajo la curva (ABC) y en la concentración plasmática máxima (Cmáx), aumentaron con dosis de hasta 1000 mg/kg.

Se realizaron tres estudios en perros (beagle). En un estudio, a tres perros en ayunas se les administraron, mediante sonda, 10 mg/kg de una suspensión del Compuesto 2 micronizado. Se recogieron muestras de sangre de estos perros antes de la dosificación y a las 0,25, 0,50, 1,2, 4, 6, 8, 12 y 24 horas después de la administración. Para determinar los niveles plasmáticos del Compuesto 2, se analizaron muestras de sangre mediante LC/MS/MS. En estudios posteriores, los parámetros farmacocinéticos (FC) se determinaron después de una sola dosis oral de suspensiones del Compuesto 2 micronizado (recristalizado en etanol) administrada a perros en ayunas a niveles de dosis de 10, 100, 300, 600 o 1000 mg/kg. Se tomaron muestras de sangre antes de la dosificación y a las 0,5, 1, 2, 4, 8, 12, 24 y 48 horas después de la dosificación y se analizaron para determinar los niveles plasmáticos del Compuesto 2. Las exposiciones basadas en el ABC y en la Cmáx, aumentaron con dosis de hasta 600 mg/kg.

Para determinar el perfil FC y la biodisponibilidad de una formulación en suspensión del Compuesto 2, se realizaron tres estudios en macacos cangrejeros en ayunas. A tres macacos se les administró, mediante sonda oral, una suspensión que contenía 10 mg/kg del Compuesto 2 micronizado. Se extrajo sangre de los macacos antes de la dosificación y a las 0,25, 0,50, 1, 2, 4, 6, 12 y 24 horas después de la dosificación. Los niveles plasmáticos del Compuesto 2 se determinaron mediante LC/MS/MS. Para evaluar el perfil FC a niveles de dosis más altos del Compuesto 2 administrados a macacos en ayunas como una suspensión oral, se realizaron estudios adicionales. Se recogieron muestras de sangre antes de la dosificación y hasta 24 horas después de la dosificación. Se recogió una muestra de sangre adicional de 48 horas de los macacos que recibieron dosis de 300 mg/kg del Compuesto 2. Los niveles plasmáticos del Compuesto 2 se determinaron mediante LC/MS/MS. Las exposiciones basadas en el ABC y en la Cmáx, aumentaron con dosis de hasta 1000 mg/kg.

Para comparar los parámetros FC de las formulaciones en cápsulas y en suspensión del Compuesto 2, se realizó otro estudio. Todos los macacos recibieron dosis de 250 mg del Compuesto 2. Se dosificaron dos grupos con la formulación en cápsulas: uno en ayunas y otro con comida a libre demanda. Los animales que recibieron la formulación en suspensión se dosificaron utilizando una sonda nasogástrica y se mantuvieron en ayunas. Como se observa en la Figura 12 y se resume en la Tabla 13 más adelante, la formulación en cápsulas parecía estar asociada a una mayor biodisponibilidad en comparación con la formulación en suspensión, aunque la diferencia numérica fue pequeña. Cuando se comparó el perfil FC de la formulación en cápsulas en macacos tanto alimentados como en ayunas, la biodisponibilidad del Compuesto 2 en cápsulas fue numéricamente mayor en macacos en ayunas.

Tabla ensión

Ejemplo 33 Procedimiento para medir la inhibición del canal iónico del TRPA1

Los compuestos de Fórmula (I) inhiben el canal del TRPA1, como se muestra al medir la inhibición in vitro del TRPA1 humano, que se proporciona en las tablas de datos mostradas en la Tabla 14, utilizando el procedimiento descrito en del Camino y col., J Neurosci (2010) 30(45): 15165-15174, que se resume a continuación. Los datos de inhibición del TRPA1 se obtuvieron mediante este procedimiento para los compuestos de Fórmula (I) indicados, incluidos los datos relevantes de la Tabla 14 más adelante. Todas las corrientes se registraron en configuración de célula entera utilizando amplificadores EPC-9 y EPC-10 y el programa informático Patchmaster (HEKA). Las pipetas de pinzamiento zonal tenían una resistencia de 1,5-3 M y se compensó hasta el 75 % de la resistencia en serie. La solución de pipeta estándar consistía en CsAsp 140 mM, EGTA 10 mM, HEPES 10 mM, 20 MgCh 2,27 mM, CaCh 1,91 mM, y Na2GTP hasta 0,3 mM, con un pH ajustado a 7,2 con CsOH. Además, puede utilizarse una solución que contiene CsCl 145 mM, HEPES 10 mM, EGt A 10 mM y hasta Na2GTP 0,3 mM y MgCh 1 mM (con un pH ajustado a 7,2 con CsOH). La solución de baño estándar contenía NaCl 150 mM, HEPES 10 mM, glucosa 10 mM, KCl 4,5 mM, EGTA 1 mM, MgCh 3 mM, con un pH ajustado a 7,4 con NaOH.

En algunos casos, en lugar de EGTA, se añadió CaCh 2 mM y la concentración de MgCh se redujo a 1 mM.

Los datos se recogieron mediante registros continuos a -60 mV o aplicando rampas de tensión desde un potencial de retención de 0 mV cada 4 s. Se recogieron registros continuos a 400 Hz y se filtraron digitalmente fuera de línea a 10 Hz para su presentación. Se aplicaron rampas de tensión de -100 mV a 100 mV en el transcurso de 400 ms, y los datos se recogieron a 10 kHz y se filtraron a 302,9 kHz. Se analizaron las corrientes de entrada y salida de las rampas a -80 y 80 mV, respectivamente. No se utilizó la corrección del potencial de unión de líquidos.

Las soluciones se cambiaron utilizando un sistema de perfusión focal continua alimentado por gravedad. Para conseguir cambios rápidos de temperatura, se emplearon simultáneamente dos sistemas de control de temperatura y perfusión. Para temperaturas superiores o iguales a 22°°C, se utilizó un controlador de temperatura bipolar de Warner Instruments (TC-344B) y un calentador en línea (SHM-8). Para temperaturas inferiores a 22°°C se utilizó un controlador de temperatura de Warner Instruments (CL-100) y un módulo de enfriamiento térmico (TCM-1). Las temperaturas se confirmaron utilizando un termistor (Warner Instruments, TA-29) y se estimó que las temperaturas en la célula registrada estaban dentro de /- 2°°C de las indicadas.

La Tabla 14 muestra datos obtenidos del ensayo in vitro descrito anteriormente. Los efectos antagonistas de los compuestos de Fórmula (I) contra el TRPA1 humano ("hTRPA1") en una configuración de pinzamiento zonal de células enteras, se evaluaron utilizando el protocolo de ensayo in vitro descrito anteriormente.

^ istas de los Com uestos de Fórmute (I) contra el TRPA1 humano

Ejemplo 34 Efecto sobre la hipersensibilidad al frío

Las realizaciones de la invención pueden ser eficaces en el tratamiento del dolor inflamatorio. El Compuesto 2 se probó mediante el procedimiento de prueba de dolor inducido por ACF. Para su administración por vía oral (VO), el Compuesto 2 se formuló como una solución transparente en DMSO al 4 %, Solutol al 10 %, API al 86 % a un pH de 5,9.

En resumen, la pata trasera se sensibiliza al frío (efecto alodínico), administrando 0,1 ml de adyuvante completo de Freund (ACF) en la pata trasera derecha. Tres días después, el tiempo que tarda el animal en levantar su pata inyectada con ACF, se registra en comparación con el de su pata trasera izquierda normal no inyectada. Los animales se colocan en la superficie de la placa fría (1 °C) y el operario detiene la prueba en el instante en que el animal muestra malestar al retroceder o levantar su pata de la placa (latencia de retirada de la pata, o LRP). Para evitar daños en los tejidos, el tiempo límite máximo es de 5 minutos. Los animales que son alodínicos (promedio de LRP en los tres primeros comportamientos de dolor <150 segundos para la pata trasera inyectada con ACF: ~ >50 % de diferencia entre la pata normal y la inyectada con ACF) se incluyen en el estudio y posteriormente se asignan al azar entre los grupos de tratamiento. Al día siguiente, los animales reciben dosis en condiciones de ocultamiento. Después de un tiempo de tratamiento previo de 1-2 horas, se vuelven a tomar las lecturas de LRP posteriores a la dosis. La eficacia del tratamiento con el fármaco se evalúa comparando la LRP de los animales que se tratan con el fármaco con la de los animales que reciben el vehículo.

Como se muestra en la Figura 7 y en la Tabla 15, el compuesto 2 atenuó la hipersensibilidad al frío después de dosis orales de 0,3 a 10mg/kg. El Compuesto A antagonista del TRPA1, comparador positivo, también redujo la hipersensibilidad al frío a una dosis más alta de 150 mg/kg suministrada mediante inyección intraplantar. Lo que es más importante, el vehículo suministrado por vía oral (DMSO al 4 %, Solutol al 10 %, API al 86 %) no tuvo ningún efecto sobre la latencia de retirada de la pata, en comparación con las mediciones de referencia previas a la administración.

Tabla 15 Atenuación de la hi ersensibilidad al frío con el Com uesto 2 a diversas dosificaciones orales

La Tabla 16 resume el promedio de los niveles plasmáticos del Compuesto 2 y del Compuesto A. En todo el intervalo de dosis probado se observaron exposiciones aproximadamente proporcionales a la dosis del Compuesto 2. La disminución de la unión plasmática del Compuesto 2 indica una mejor biodisponibilidad del Compuesto 2 para los sujetos respecto al Compuesto A.

T l 1 Niv l l m i l m 2 l m A

No hubo diferencias en cuanto al comportamiento entre los grupos que recibieron vehículo y los grupos de tratamiento (véase la Tabla 17). Sin embargo, se observó letargo/movimiento lento en 5 animales de 10 (5/10) tratados con el comparador positivo, el Compuesto A, demostrando que el Compuesto 2 no induce un efecto sedante significativo.

Tabla 17 Examen del com ortamiento animal des ués de la administración del Com uesto 2

El compuesto 4 también se probó utilizando los procedimientos desvelados. El compuesto 4 se formuló como una suspensión en metilcelulosa al 0,5 % y se administró a las dosis indicadas en la Tabla 18.

Tabla 18 Atenuación de la hi ersensibilidad al frío con el Com uesto 4 a diversas dosificaciones orales

En un estudio posterior, se probó la eficacia de los compuestos de la invención a dosis bajas para el tratamiento del dolor inflamatorio. Utilizando los procedimientos desvelados anteriormente, el compuesto 2 se dosificó a intervalos de 0,1 a 1 mg/kg VO. El Compuesto A antagonista del TRPA1, comparador positivo, también se probó a una dosis de 150 mg/kg IP. El Compuesto 2 se formuló como una solución transparente en DMSO al 4 %, Solutol al 10 %, API al 86 %, pH 5,9, para administración por vía oral (VO) a un volumen de dosis de 10 ml/kg. El suministro oral del fármaco se realizó utilizando una aguja de sonda oral de calibre 20 de 11/2" y una jeringa de 5 cc. Las ratas alimentadas recibieron una sola sonda oral del Compuesto 2 a 0,03, 0,1, 0,3 o 1 mg/kg o Vehículo, 2 horas antes de la prueba

Como se observa en la Tabla 19 y en la Figura 13, cuando el Compuesto 2 se dosifica a 0,1, 0,3 y 1 mg/kg VO, mostró una reversión significativa de la hipersensibilidad al frío inducida por ACF, como se ensayó midiendo la latencia de retirada de la pata. Los niveles de dosis de 0,03 mg/kg no ejercieron ningún efecto estadísticamente significativo. El comparador positivo, el Compuesto A antagonista prototípico del TRPA1, también mostró una reversión significativa de la hipersensibilidad al frío cuando se dosificó a 150 mg/kg IP.

Tabla^ sto 2

En resumen, estos estudios sugieren que los compuestos de la invención tienen el potencial de ser eficaces en el tratamiento del dolor inflamatorio después de la administración por vía oral.

Ejemplo 35 Modelo de formol

El compuesto 2 se probó en la prueba de dolor inducida por formol indicada por Dubuisson y col., Pain (1977) Dec; 4(2):161-74. Dubuisson y col describen un procedimiento para evaluar el dolor y la analgesia en ratas y gatos. En resumen, en la superficie plantar de la pata trasera de una rata, se inyecta formol diluido (50 pl de formol al 3 %). El animal se devuelve inmediatamente a un campo de observación (jaula de rata estándar de plexiglás), momento en el que un observador capacitado registra el tiempo que el animal pasa mostrando comportamientos de dolor (retroceso, lamido, mordisqueo de la pata/pierna inyectada) en dos fases distintas. La fase inicial (Fase I: 0-5 min) se cree que tiene un componente significativo que depende de la activación directa de las fibras aferentes por el formol y el TRPA1 funcional (McNamara y col., 2007). La persona responsable de contar los comportamientos de dolor en un estudio en particular no conoce los grupos de tratamiento.

Los investigadores estudiaron la administración por vía oral del Compuesto 2 a 1, 3 y 10 mg/kg sobre los comportamientos de dolor en el modelo de formol en la rata. El compuesto 2 se preparó como soluciones en DMSO al 4%, Solutol HS15 al 10%, API al 86%. Los animales recibieron por vía oral dosis de Vehículo (DMSO al 4%, Solutol al 10 %, API al 86 %), o de Compuesto 2 a 1, 3 o 10 mg/kg una hora antes de inyectar formol intraplantar. La Figura 14 muestra la duración de los comportamientos de dolor observados en los dos primeros minutos (izquierda) o la duración de los comportamientos de dolor durante todo el período de estudio; cinco minutos (Derecha). (n=8 por grupo) (* = p < 0,05, ** = p < 0,01, *** p <0,001: prueba de la T de 1 cola)

Como se observa en Tabla 20 y en la Figura 14, la administración por vía oral del Compuesto 2 redujo significativamente las respuestas nociceptivas en la Fase 1 del modelo de formol a 3 y 10 mg/kg. En comparación con los animales tratados con vehículo, los animales tratados con el Compuesto 2 a 1 mg/kg dieron como resultado una disminución de ~ 14 % en la duración de los comportamientos de dolor de 0 a 2 minutos después de la inyección de formol intraplantar, aunque esta reducción no fue estadísticamente significativa. A dosis de 3 y 10 mg/kg VO, el Compuesto 2 produjo una disminución significativa del -72 % y -89 % de los comportamientos de dolor inducidos por formol de 0 a 2 minutos, respectivamente, en comparación con los animales tratados con vehículo.

También se observó una reducción similar en la duración de los comportamientos de dolor con el Compuesto 2 de 0 a 5 minutos después de la administración de formol. A una administración por VO de 1 mg/kg, el compuesto 2 redujo los comportamientos de dolor en un -14 %, pero no alcanzó significación estadística en comparación con los animales tratados con vehículo. A una administración por VO de 3 y 10 mg/kg, el compuesto 2 redujo significativamente la duración de los comportamientos de dolor inducidos por formol en un -46 % y -60 %, respectivamente.

Tabla ^ formol

También se observó una reducción de la duración de los comportamientos de dolor con el Compuesto 1 de 0 a 5 minutos después de la administración de formol. A 1 mg/kg y 3 mg/kg suministrados por vía intravenosa a ratas, el Compuesto 1 redujo la duración de los comportamientos de dolor inducidos por formol como se muestra en la Tabla 21 y en la Figura 15.

Tabla 21 Respuesta a la dosis del Compuesto 1 administrado por vía intravenosa utilizando el modelo de formol

También se observó una reducción de la duración de los comportamientos de dolor con el Compuesto 4 de 0 a 5 minutos después de la administración de formol. Utilizando los procedimientos descritos anteriormente para el ensayo de formol, el Compuesto 4 se formuló como una solución en DMSO al 4 %; Tween-80 al 5 %; Cremophor EL al 20 %; y API (agua para inyección) al 71 % y se administró por sonda oral a ratas. Como se muestra en la Tabla 22, el Compuesto 4 redujo la duración de los comportamientos de dolor inducidos por formol.

Tabla 22 R l i l m 4 mini r r ví r l iliz n l m l ^ formol

Utilizando los procedimientos descritos anteriormente para el ensayo de formol, el Compuesto 4 se formuló como una suspensión en metilcelulosa al 0,5% y se administró por sonda oral a ratas. Como se muestra en la Tabla 23, el Compuesto 4 redujo la duración de los comportamientos de dolor inducidos por formol.

Tabla 2 R l i l m 4 mini r r ví r l iliz n l m l ^ formol

También se estudió la persistencia de la respuesta. El Compuesto 2 se preparó como una solución en DMSO al 4 %, Solutol HS15 al 10 % y API al 86 %. Las ratas se trataron con 10 mg/kg de dosis orales del Compuesto 2 o con el vehículo (VO). La Figura 8 muestra que el tratamiento previo con la formulación de dosis oral del Compuesto 2 a 10 mg/kg VO de 30 minutos a 6 horas antes de la inyección de formol, disminuyó significativamente la duración de los comportamientos de dolor mediados por formol.

En comparación con los animales tratados con vehículo, el tratamiento previo de 15 minutos a 6 horas con el Compuesto 2 por vía oral VO a 10 mg/kg produjo una disminución de ~30-87 % en la duración de los comportamientos de dolor inducidos con formol de 0 a 2 minutos después de la inyección de formol, observándose la máxima disminución del comportamiento de dolor en el grupo de tratamiento previo de 2 horas como se muestra en la Tabla 24.

Tabla 24 Duración de la respuesta de dolor después de la administración por vía oral del Compuesto 2 utilizando el modelo de formol

El compuesto 2 también se probó en el modelo de oveja de broncoconstricción alérgica e hiperreactividad de las vías respiratorias de acuerdo con los procedimientos desvelados en Abraham, W.M Pulm Pharmacol Ther (2008) 21:743-754. Ovejas alérgicas expuestas a Ascaris suum muestran una aumento bifásico y sustancial de la resistencia pulmonar (RL). Las cuatro primeras horas se considera que son la respuesta asmática inmediata (RAI); las cuatro horas siguientes (4 a 8 horas) se considera que son la respuesta asmática tardía (RAT). Para evaluar la reactividad de las vías respiratorias (RVR), se calculó la dosis acumulada de carbacol en unidades de respiración que aumentaba la resistencia pulmonar en un 400 % sobre el valor posterior al tampón (PC 400) a partir de la curva de respuesta a la dosis. Una unidad de respiración se definió como una respiración de una solución de carbacol al 1 % p/v. Se obtuvo un PC 400 previo a la exposición de 1 a 3 días antes del inicio de la dosificación.

El compuesto 2 se formuló como un polvo micronizado suspendido en metilcelulosa al 0,5 % a una concentración de 6 mg/ml y se administró por vía oral a una dosis de 30 mg/kg una vez al día durante 4 días, aproximadamente a la misma hora todos los días. Durante cuatro días, las ovejas recibieron 30 mg/kg de Compuesto 2 por vía oral al día. Dos horas después de la dosis final del Compuesto 2, las ovejas se sometieron a una exposición a alérgenos (Ascaris). Cada oveja se sujetó en decúbito prono y su cabeza se inmovilizó antes de la anestesia por vía tópica de las fosas nasales. A través de una narina, se hizo avanzar un catéter con globo hasta la parte inferior del esófago. Cada oveja se intubó con un tubo endotraqueal con manguito a través de la otra narina. Las presiones traqueal y pleural se determinaron utilizando el tubo endotraqueal y el catéter con globo, respectivamente. La presión transpulmonar, es decir, la diferencia entre las presiones traqueal y pleural, se midió utilizando un sistema de catéter con transductor de presión diferencial. La Rl se determinó conectando el extremo distal del tubo endotraqueal a un neumotacógrafo. En un ordenador, se recogieron datos de cinco a diez respiraciones y se utilizaron para calcular la Rl. Para establecer los valores de referencia, se utilizaron los datos de las mismas ovejas expuestas a Ascaris antes del inicio del tratamiento con el Compuesto 2. Las condiciones de monitorización de los experimentos con control y con fármaco fueron idénticas.

El día de la exposición y dos horas después de la dosis final del Compuesto 2, se generó un aerosol de Ascaris suum (82.000 unidades de nitrógeno proteico/ml) utilizando un nebulizador y se suministró a las ovejas utilizando un respirador Harvard. La Rl se determinó una hora antes de la exposición, inmediatamente después de la exposición a Ascaris y, a partir de entonces, cada hora durante ocho horas. La exposición en 4 horas se considera que es RAI, mientras que la de 4 a 8 horas se considera que es RAT.

Las ovejas también se expusieron a carbacol en aerosol, un agonista colinérgico que tiene un impacto negativo sobre la RVR. Las determinaciones de la concentración de carbacol en unidades de respiración que aumentaron la RL un 400 % (PC400), se realizaron 24 horas después de la exposición a Ascaris sin dosificación del Compuesto 2 (referencia histórica) o 24 horas después de la administración de la dosis final del Compuesto 2.

La Figura 16 muestra las respuestas inducidas por antígeno en ovejas a niveles de referencia (control) y después del tratamiento con el Compuesto 2 (30 mg/kg). El Compuesto 2 no afectó a las respuestas inmediatas máximas de las vías respiratorias. Sin embargo, atenuó drásticamente las respuestas tardías de las vías respiratorias (protección del 85 %). En el experimento con control, el promedio de respuestas tardías de las vías respiratorias fue de 126 ± 4,7 %, mientras que en el experimento de tratamiento el promedio de la RAT fue solo de 19 ± 2,3 % (P=0,002).

La Figura 17 muestra además el efecto del Compuesto 2 (30 mg/kg) sobre PC400, una medición de hiperreactividad de las vías respiratorias que representa la concentración de carbacol que induce un aumento del 400 % en la resistencia pulmonar.

En resumen, el tratamiento con el Compuesto 2 redujo la hiperreactividad de las vías respiratorias a niveles similares a los observados en ovejas que no se expusieron a Ascaris suum.

Ejemplo 36 Perfil farmacéutico

Los compuestos de la invención pueden no tener interacciones farmacológicas significativas, lo que hace preferible su administración en pacientes que toman varios medicamentos.

Se evaluó la capacidad del Compuesto 2 para inhibir las enzimas humanas del CYP450 (citocromo P450). Los Compuestos 1 y 2 se probaron en un ensayo luminiscente de inhibición estándar del CYP450. Los resultados se muestran a continuación en la Tabla 25.

Tabla 25 Inhibición de enzimas del CYP450 con los Com uestos 1 2

El compuesto 2 consiguió un bloqueo máximo de las enzimas humanas del CYP450 de hasta un 37 % a 10 pM en las siete isoenzimas probadas; estos valores indican que los valores calculados de CI50 serían >10 pM (Tabla 26).

El fenotipado de la reacción del CYP450 del Compuesto 2, se realizó incubando el artículo de ensayo con microsomas hepáticos humanos en presencia y en ausencia de inhibidores selectivos del CYP450. A excepción del ketoconazol, las semividas metabólicas no se vieron significativamente afectadas por ninguno de los inhibidores del CYP450, lo que indica que en el metabolismo in vitro del Compuesto 2 intervienen principalmente las isoenzimas del CYP3A4.

(Figura 9).

T l 2 Inhi i i n l YP4 1 M n l^ m 2 n m r f r n i r i s

continuación

E je m p lo 37 P erfil d e s e g u rid a d d e h e p a to to x ic id a d en perros

El Compuesto 2 en vehículo (metilcelulosa al 0,5 % [400 cps] en agua desionizada) se administró por vía oral una vez al día durante cinco días consecutivos mediante una sonda a 3 grupos de perros beagle macho y hembra no sometidos previamente a experimentación. Cada grupo recibió un nivel de dosis. Los niveles de dosis fueron de 300, 600 y 1000 mg/kg para cada grupo. Un grupo de control concordante recibió el vehículo en un régimen comparable. El volumen de la dosis fue de 10 ml/kg en todos los grupos. La hepatoxicidad se midió a través de los biomarcadores séricos de alanina aminotransferasa [ALT], aspartato aminotransferasa (AST), fosfastasa alcalina [ALP] y gamma glutamil transferasa [GGT], que representan hepatotoxicidad o lesión de las vías biliares. La T a b la 27 muestra que, en los perros, el Compuesto 2 a cada nivel de dosis indicado, no elevó los biomarcadores séricos hasta una dosis de 300 mg/kg inclusive.

La F ig u ra 18 demuestra además que el Compuesto 2 no eleva significativamente los niveles de los biomarcadores séricos por encima de los intervalos normales. La F ig u ra 19 demuestra que el Compuesto 2 no elevó significativamente los niveles de los biomarcadores séricos por encima de las mediciones de referencia, como lo demuestra el % de diferencia con respecto al vehículo.

E je m p lo 38 P erfil d e s e g u rid a d d e h e p a to to x ic id a d en ra tas

El compuesto 2 en el vehículo (metilcelulosa al 0,5 % [400 cps]) se administró por vía oral mediante sonda una vez al día durante un mínimo de 28 días consecutivos a 3 grupos de ratas Sprague-Dawley de los laboratorios Charles River. Cada grupo recibió un nivel de dosificación. En cada grupo, los niveles de dosificación fueron de 30, 100 y 300 mg/kg/día. Los grupos de control concordantes recibieron el vehículo en un régimen comparable. El volumen de la dosis fue de 10 ml/kg en todos los grupos. La hepatoxicidad se midió a través de los biomarcadores séricos de alanina aminotransferasa [ALT], aspartato aminotransferasa (AST), fosfastasa alcalina [ALP] y gamma glutamil transferasa [GGT], que representan hepatotoxicidad o lesión de las vías biliares. La T a b la 28 muestra que el Compuesto 2 en las ratas, en cada nivel de dosis indicado, no elevó los biomarcadores séricos hasta una dosis de 300 mg/kg inclusive.

T l 2 P rfil ri h x i i l m 2 n r

continuación

La Figura 20 demuestra además que el Compuesto 2 no eleva significativamente los niveles por encima de los intervalos normales. La Figura 21 demuestra que el Compuesto 2 no elevó significativamente los niveles por encima de las mediciones de referencia, como lo demuestra el % de diferencia con respecto al vehículo.

Ejemplo 39 Perfil de seguridad de hepatotoxicidad en macacos

El Compuesto 2 en el vehículo (metilcelulosa al 0,5 %, 400 cps) se administró mediante intubación nasogástrica una vez al día durante 28 o 29 días consecutivos a 4 grupos de macacos cangrejeros. Cada grupo recibió un nivel de dosis. Los niveles de dosificación fueron de 10, 30, 100 y 300 mg/kg/día por grupo. Un grupo de control concordante recibió el vehículo en un régimen comparable. En todos los grupos, el volumen de dosificación fue de 10ml/kg. La hepatoxicidad se midió a través de los biomarcadores séricos de alanina aminotransferasa [ALT], aspartato aminotransferasa (AST), fosfastasa alcalina [ALP] y gamma glutamil transferasa [GGT], que representan hepatotoxicidad o lesión de las vías biliares. La Tabla 29 muestra que, en los macacos, el Compuesto 2 a cada nivel de dosis indicado, no elevó los biomarcadores séricos hasta una dosis de 300 mg/kg inclusive.

Tabla 29 Perfil de se uridad de he atotoxicidad del Com uesto 2 en macacos can reeros

La Figura 22 demuestra además que el Compuesto 2 no eleva significativamente los niveles por encima de los intervalos normales. La Figura 23 demuestra que el Compuesto 2 no elevó significativamente los niveles por encima de las mediciones de referencia, como lo demuestra el % de diferencia con respecto al vehículo.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

en la que:

R1 es H, alquilo C1-C6, alquenilo C1-C6 o alquinilo C1-C6;

R6 es independientemente H, halógeno, alquilo, aralquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, hidroxi, amino, nitro, sulfhidrilo, imino, amido, fosfato, fosfonato, fosfinato, carbonilo, carboxilo, sililo, éter, alquiltio, sulfonilo, cetona, aldehido, éster, heterociclo, un anillo aromático o heteroaromático, haloalquilo y ciano.

2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación anterior, en el que R1 es alquilo C1-C6, opcionalmente -CH3; o en el que R1 es H y/o en el que R2 es alquilo C1-C6; opcionalmente

en el que R2 es -CH3, -CD3 o -CHF2, o en el que R2 es H;

y/o en el que cada uno de R1 y R2 es independientemente alquilo C1-C6; opcionalmente en el que cada uno de R1 y R2 es independientemente -CH3;

y/o en el que cada uno de R1 y R2 es independientemente -CH3 y R3 es H;

y/o en el que R3 es H; o

en el que R3 es alquilo C1-C6; o

en el que R3 es -CH3

y/o; en el que cada uno de R1, R2 y R3 es independientemente alquilo C1-C6; opcionalmente en el que cada uno de R1, R2 y R3 es independientemente -CH3.

3. El compuesto de fórmula (I) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el compuesto es de fórmula (Ia):

o en el que el compuesto de fórmula (I) es de fórmula (Ib):

Fórmula (Ib).

4. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que R4 es heterociclilo;

y/o en el que el heterociclilo es un anillo de 4 a 8 miembros;

y/o en el que el heterociclilo está unido a través de un átomo de nitrógeno;

y/o en el que R4 es heterociclilo sustituido;

y/o en el que R4 se selecciona entre el grupo:

y/o en el que R4 se selecciona entre el grupo:

y m es 1; y/o en el que R4 se selecciona entre el grupo:

y/o en el que R4 se selecciona entre el grupo:

y

y m es 1; y/o en el que R4 se selecciona entre el grupo:

opcionalmente en las que m es 1 o 0;

y/o en las que R6 es alquilo, haloalquilo o ciano;

y/o en las que R6 es alquilo o haloalquilo; opcionalmente en el que R6 es -CF3; y/o en el que R4 se selecciona entre el grupo:

5. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el compuesto de fórmula (I) es de fórmula (II):

en la que:

n es un número entero de 0 a 4; y

m se selecciona entre un número entero de 0 a 4;

opcionalmente en el que el compuesto de fórmula (I) es de fórmula (IIa):

en la que:

n es un número entero de 0 a 4; y

m se selecciona entre un número entero de 0 a 4;

o en el que el compuesto de fórmula (I) es de fórmula (IIb):

Fórmula (IIb)

en la que:

n es un número entero de 0 a 4; y

m se selecciona entre un número entero de 0 a 4.

6. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el compuesto se selecciona entre el grupo siguiente:

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

7. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el compuesto es:

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

8. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

en la que:

R1 es H, alquilo C1-C6, alquenilo C1-C6 o alquinilo C1-C6;

R5 es independientemente H, halógeno, alquilo, aralquilo, alquenilo, alquinilo, hidroxi, amino, amido, fosfonato, carboxilo, éter, alquiltio, haloalquilo y ciano; y

9. La composición de acuerdo con la reivindicación 8, en la que el compuesto es:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo;

y/o en el que la preparación comprende un exceso diastereomérico de más de o igual a 99;

y/o en el que la preparación tiene un contenido de humedad de menos de o igual a un 0,1 %.

10. Una composición para su uso en el tratamiento de un trastorno mediado por TRPA1 en un sujeto, comprendiendo la composición una cantidad eficaz de un compuesto de cualquier reivindicación anterior.

11. Una composición para su uso en el tratamiento del dolor en un sujeto, comprendiendo la composición una cantidad eficaz de un compuesto de cualquier reivindicación anterior;

opcionalmente en el que el dolor es dolor neuropático;

o en el que el dolor es dolor inflamatorio;

o en el que el dolor es NDP o NPIQ;

o en el que el dolor es dolor visceral;

o en el que el dolor se selecciona entre el grupo: dolor por cáncer, dolor por quemadura, dolor oral, dolor inducido por aplastamiento y lesión, dolor por incisión, dolor óseo, dolor por anemia de células falciformes, fibromialgia y dolor musculoesquelético o en el que el dolor es por hiperalgesia o alodinia.

12. Una composición para su uso en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un sujeto, comprendiendo la composición una cantidad eficaz de un compuesto de cualquier reivindicación anterior.

13. Una composición para su uso en el tratamiento de neuropatía en un sujeto, comprendiendo la composición una cantidad eficaz de un compuesto de cualquier reivindicación anterior;

opcionalmente en el que la neuropatía es por diabetes, lesión química, quimioterapia y o trauma.

14. Una composición para su uso en el tratamiento de un trastorno dermatológico en un sujeto, comprendiendo la composición una cantidad eficaz de un compuesto de cualquier reivindicación anterior; opcionalmente en el que el trastorno dermatológico se selecciona entre dermatitis atópica, picor agudo, psoriasis, urticaria, eccema, eccema dishidrótico, úlceras bucales y dermatitis del pañal.

15. Una composición para su uso en el tratamiento de una enfermedad pulmonar en un sujeto, comprendiendo la composición una cantidad eficaz de un compuesto de cualquier reivindicación anterior; opcionalmente en el que la enfermedad pulmonar es una enfermedad obstructiva; o en el que la enfermedad pulmonar es enfermedad pulmonar obstructiva crónica o asma.

16. Una composición para su uso en el tratamiento de tos en un sujeto, comprendiendo la composición una cantidad eficaz de un compuesto de cualquier reivindicación anterior;

opcionalmente en el que la tos es tos inducida por alergia.