JP6557680B2 - 一過性受容体電位ａ１イオンチャネルの阻害 - Google Patents

一過性受容体電位ａ１イオンチャネルの阻害 Download PDF

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Description

優先権の主張
本出願は、２０１４年４月２３日に出願された米国仮特許出願第６１／９８３，２２３号および２０１４年５月１日に出願された米国仮特許出願第６１／９８７，２７２号の優先権を主張する。これらの米国仮特許出願は、それらの全体が、本明細書において参考として援用される。
技術分野
本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩、薬学的調製物もしくは薬学的組成物、ならびに、疼痛、炎症性疾患、ニューロパシー、皮膚科障害、肺の症状および咳を処置するため、および一過性受容体電位Ａ１イオンチャネル（ＴＲＰＡ１）を阻害するためのそれらの使用に関する。
背景
一過性受容体電位Ａ１（本明細書中において「ＴＲＰＡ１」）は、ヒトの痛覚に関係する非選択的陽イオンチャネルである。ＴＲＰＡ１は、感覚ニューロンに見られ、侵害性化学物質、組織損傷および炎症の検出を疼痛に結び付けるのを助ける検出器として機能する。ＴＲＰＡ１の活性化は、侵害受容ニューロンの発火および脊髄における中枢性感作の促進を誘導することによって、疼痛を引き起こすと考えられている。ＴＲＰＡ１の刺激は、感覚ニューロンの発火も増加させ、その結果、血管拡張を誘導し、免疫細胞のリクルートを助ける、炎症促進性神経ペプチド（例えば、ＮＫ−Ａ、サブスタンスＰおよびＣＧＲＰ）を放出させ得る。炎症中に産生される種々の内因性の反応性化合物が、ＴＲＰＡ１を活性化する。その内因性の反応性化合物としては、リポソームの過酸化中に放出される４−ヒドロキシノネナール；ＣＯＸ酵素によって合成されるシクロペンタンプロスタグランジン；酸化ストレスによって産生される過酸化水素が挙げられる。また、ＴＲＰＡ１の活性化は、ＴＲＰＡ１を寒冷に対して感作する。さらに、ＴＲＰＡ１における機能獲得変異は、家族性偶発性疼痛症候群を引き起こす；この症状に苦しんでいる患者は、寒冷によって引き起こされ得る偶発性疼痛を有する。したがって、ＴＲＰＡ１は、神経損傷、冷感異痛および炎症性疼痛に関係する疼痛に関与すると考えられる。
ＴＲＰＡ１イオンチャネルを阻害する化合物は、例えば、ＴＲＰＡ１イオンチャネルの阻害によって回復するか、排除されるかまたは予防される症状の処置において有用であり得る。例えば、ＴＲＰＡ１を阻害する薬学的組成物は、疼痛を処置するために使用することができる。ＴＲＰＡ１の阻害（例えば、遺伝子切除および化学的拮抗作用による阻害）は、マウスおよびラットにおいて疼痛行動を減少させると示された。機能的なＴＲＰＡ１を欠くノックアウトマウスでは、ＡＩＴＣ、ホルマリン、アクロレイン、４−ヒドロキシノネナールを含むＴＲＰＡ１活性化物質に対する侵害受容応答が低下しており、さらに、炎症性メディエーターであるブラジキニンに応答した熱過敏および機械的過敏が大幅に低下している（例えば、Ｋｗａｎ，Ｋ．Ｙ．ら、Ｎｅｕｒｏｎ ２００６，５０，２７７−２８９；Ｂａｕｔｉｓｔａ，Ｄ．Ｍ．ら、Ｃｅｌｌ ２００６，１２４，１２６９−１２８２）。動物疼痛モデルにおいて、遺伝子特異的アンチセンスによるＴＲＰＡ１発現のダウンレギュレーションは、炎症および神経損傷によって誘導される冷痛覚過敏を妨げ、逆転させた（例えば、Ｏｂａｔａ，Ｋ．ら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ（２００５）１１５，２３９３−２４０１；Ｊｏｒｄｔ，Ｓ．Ｅ．ら、Ｎａｔｕｒｅ（２００４），４２７，２６０−２６５；Ｋａｔｓｕｒａ，Ｈ．ら、Ｅｘｐｌｏｒ Ｎｅｕｒｏｌ（２００６），２００，１１２−１２３を参照のこと）。ＴＲＰＡ１阻害剤化合物は、種々のげっ歯類疼痛モデルにおいて有効である。ＴＲＰＡ１阻害剤は、未処置動物における正常な冷覚を変更することなく、フロイント完全アジュバントによって誘導される炎症後の機械的過敏症および冷感異痛を減少させると示され、また、ラットモノヨードアセテート変形性関節症モデルにおいて機能を改善するとも示された（例えば、Ｍａｔｅｒａｚｚｉ，Ｓら、Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ（２０１２），４６３（４）：５６１−９；Ｗｅｉ Ｈら、Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ ２０１２，１１７（１）：１３７−４８；Ｋｏｉｖｉｓｔｏ，Ａら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｓ（２０１２），６５（１）：１４９−５８を参照のこと）。ＴＲＰＡ１阻害剤化合物は、ＡＩＴＣ（カラシ油）、ホルマリン、シンナムアルデヒド、アクロレインおよび他のＴＲＰＡ１活性化物質を注射されたげっ歯類において疼痛行動の減少を示した。ＴＲＰＡ１阻害剤化合物は、術後痛（例えば、Ｗｅｉら、Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ（２０１２），１１７（１）：１３７−４８を参照のこと）；化学療法誘発性末梢神経障害（例えば、Ｔｒｅｖｉｓａｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ（２０１３）７３（１０）：３１２０−３１を参照のこと）および有痛性糖尿病性ニューロパシー（例えば、Ｋｏｉｖｉｓｔｏら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｓ（２０１１）６５：１４９−１５８を参照のこと）に対するげっ歯類モデルにおいても有効性を示した。
Ｋｗａｎ，Ｋ．Ｙ．ら、Ｎｅｕｒｏｎ ２００６，５０，２７７−２８９ Ｂａｕｔｉｓｔａ，Ｄ．Ｍ．ら、Ｃｅｌｌ ２００６，１２４，１２６９−１２８２ Ｏｂａｔａ，Ｋ．ら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ（２００５）１１５，２３９３−２４０１ Ｊｏｒｄｔ，Ｓ．Ｅ．ら、Ｎａｔｕｒｅ（２００４），４２７，２６０−２６５ Ｋａｔｓｕｒａ，Ｈ．ら、Ｅｘｐｌｏｒ Ｎｅｕｒｏｌ（２００６），２００，１１２−１２３ Ｍａｔｅｒａｚｚｉ，Ｓら、Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ（２０１２），４６３（４）：５６１−９ Ｗｅｉ Ｈら、Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ ２０１２，１１７（１）：１３７−４８ Ｋｏｉｖｉｓｔｏ，Ａら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｓ（２０１２），６５（１）：１４９−５８ Ｔｒｅｖｉｓａｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ（２０１３）７３（１０）：３１２０−３１
概要
本明細書中に記載される化合物は、ＴＲＰＡ１イオンチャネルの阻害が例えば疼痛の処置において有益である障害の処置において有用であり得る。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される化合物は、ＴＲＰＡ１を阻害する分野における他の化合物にまさる好ましい特性を有する。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される化合物は、肝毒性の血清バイオマーカーを増加させずにＴＲＰＡ１イオンチャネルを阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されるような化合物、例えば、式（Ｉ）の化合物は、ＴＲＰＡ１を阻害する分野における他の化合物と比べて望ましい水溶解度を有する（静脈内投与のために製剤化された薬学的組成物に適した水溶解度を有する化合物を含む）。
式（Ｉ）の化合物およびその薬学的に許容され得る塩
が本明細書中に記載され、式中、上記の変数の各々は、本明細書中、例えば、下記の詳細な説明に記載されるとおりである。
精製された薬学的調製物および式（Ｉ）の化合物またはその薬学的塩を含む薬学的組成物も本明細書中に記載される。
本明細書中に記載される化合物および組成物は、被験体における様々な障害を処置するために使用され得る。例えば、処置方法、例えば、被験体におけるＴＲＰＡ１媒介性障害を処置する方法が、本明細書中に記載され、その方法は、有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を投与する工程を含む。被験体における疼痛を処置する方法も本明細書中に記載され、その方法は、有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を投与する工程を含む。疼痛の例示的なタイプとしては、神経因性疼痛、例えば、有痛性糖尿病性ニューロパシー、化学療法誘発性末梢神経障害、腰痛、三叉神経痛、帯状疱疹後神経痛、坐骨神経痛および複合性局所性疼痛症候群；炎症性疼痛、例えば、関節リウマチ、変形性関節症、顎関節症（ｔｅｍｐｅｒｏｍａｎｄｉｂｕｌａｒ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）に由来する炎症性疼痛；ＰＤＮまたはＣＩＰＮ；内臓痛、例えば、膵炎、炎症性腸疾患、大腸炎、クローン病、子宮内膜症、骨盤痛およびアンギナに由来する内臓痛；以下の、癌性疼痛、火傷痛、口腔内痛、挫滅および損傷誘導性疼痛、切開痛、骨痛、鎌状赤血球症痛、線維筋痛症ならびに筋骨格痛の群から選択される疼痛；または痛覚過敏もしくは異痛症に由来する疼痛が挙げられる。
いくつかの実施形態において、上記方法には、被験体における炎症性疾患を処置するものが含まれ、その方法は、有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を投与する工程を含む。
いくつかの実施形態において、上記方法は、被験体におけるニューロパシーを処置する工程を含み、その方法は、有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を投与する工程を含む。いくつかの実施形態において、そのニューロパシーは、糖尿病、化学的損傷、化学療法およびまたは外傷に由来する。
いくつかの実施形態において、上記方法には、被験体における皮膚科障害（ｄｅｒｍａｔｏｇｏｌｏｇｉｃａｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）を処置するものが含まれ、その方法は、有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を投与する工程を含む。例示的な皮膚科障害としては、アトピー性皮膚炎、急性そう痒、乾癬、蕁麻疹、湿疹、異汗性湿疹、口腔内潰瘍およびおむつかぶれが挙げられる。
いくつかの実施形態において、上記方法には、被験体における肺の症状を処置するものが含まれ、その方法は、有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を投与する工程を含む。例示的な肺の症状としては、閉塞性疾患、例えば、慢性閉塞性肺疾患が挙げられる。さらなる例示的な肺の症状としては、喘息および咳が挙げられる。
さらに、本明細書中に記載されるような化合物、例えば、式（Ｉ）の化合物は、経口投与のために製剤化される薬学的組成物の製造において有用である。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される化合物は、静脈内投与のための組成物に製剤化され得る。実施形態において、本明細書中に記載される化合物または組成物は、疼痛を処置するために使用され得る。
本明細書中に記載されるような化合物、例えば、式（Ｉ）の化合物は、一つまたは複数のキラル中心を有する分子を含み得る。例えば、別段述べられない限り、式（Ｉ）の組成物は、様々な量の式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（ＩＩａ）および（ＩＩｂ）という立体異性体を含み得る。ある実施形態において、式（Ｉａ）または（ＩＩａ）の化合物を含む組成物は、好ましくは、治療有効量の、式（Ｉａ）または（ＩＩａ）に示される立体化学を有する化合物（例えば、式（Ｉｂ）または（ＩＩｂ）という対応する立体異性体に対してある鏡像体過剰率またはジアステレオ過剰率の特定の異性体の式（Ｉａ）または（ＩＩａ））を含む。ある実施形態において、式（Ｉ）の化合物を含む組成物は、治療有効量の、式（Ｉｂ）または（ＩＩｂ）に示される立体化学を有する化合物（例えば、式（Ｉａ）という対応する立体異性体に対してある鏡像体過剰率またはジアステレオ過剰率の特定の異性体の式（Ｉｂ）または（ＩＩｂ））を含む。
さらに、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ）に存在する原子の一つまたは複数の同位体を含み得る。例えば、式（Ｉ）の化合物には、Ｈ（または水素）が１Ｈ、２ＨまたはＤ（ジュウテリウム）および３Ｈ（トリチウム）を含む任意の同位体型の水素で置き換えられた化合物；Ｃが１２Ｃ、１３Ｃおよび１４Ｃを含む任意の同位体型の炭素で置き換えられた化合物；Ｏが１６Ｏ、１７Ｏおよび１８Ｏを含む任意の同位体型の酸素で置き換えられた化合物；Ｎが１３Ｎ、１４Ｎおよび１５Ｎを含む任意の同位体型の窒素で置き換えられた化合物；Ｐが３１Ｐおよび３２Ｐを含む任意の同位体型のリンで置き換えられた化合物；Ｓが３２Ｓおよび３５Ｓを含む任意の同位体型の硫黄で置き換えられた化合物；Ｆが１９Ｆおよび１８Ｆを含む任意の同位体型のフッ素で置き換えられた化合物などが含まれ得る。ある実施形態において、式（Ｉ）によって表される化合物は、その中の原子の異性核を天然に存在する存在量で含む。
図１は、エタノール中でのスラリー処理後の固体結晶形の化合物２（Ａ形）の粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）パターンを表しているスペクトルである。
図２は、９７％エタノール／３％水中でのスラリー処理および真空下での乾燥（−８０℃で１日間）の後の無水固体結晶形の化合物２（Ｂ形）の粉末Ｘ線回折パターンを表しているスペクトルである。
図３は、無水固体結晶形の化合物２（Ｂ形）に対する示差走査熱量測定（ＤＳＣ）解析の結果を表しているグラフである。
図４は、無水固体結晶形の化合物２（Ｂ形）に対する熱重量分析（ＴＧＡ）の結果を表しているグラフである。
図５は、無水固体結晶形の化合物２（Ｂ形）に対する動的蒸気収着（ＤＶＳ）解析の結果を表しているグラフである。
図６は、１０ミクロン未満のｄ９０値へのマイクロイオン化の前（薄灰色の線）および後（暗灰色の線）の無水固体結晶形の化合物２（Ｂ形）のＸＲＰＤ解析の結果を重ね合わせて表しているスペクトルである。
図７は、ラットのＣＦＡ誘発性冷痛覚過敏モデルにおける経口投与された化合物２の様々な投与量の作用を表しているグラフである。
図８は、化合物２の経口投与後のホルマリン媒介性疼痛行動の持続時間を表しているチャートである。ホルマリン注射の１５分前、３０分前、１時間前、２時間前、４時間前、６時間前または２４時間前に化合物２を投与することにより、処置によってもたらされる恩恵の持続性を評価した。
図９は、本明細書中で実施例２とも称される化合物２を用いてフェノタイピングしているＣＹＰ４５０反応の例示的なプロファイルを表しているチャートである。
図１０は、２．００〜８．００のｐＨ範囲にわたる化合物２の微粒子化された製剤の溶解度を表しているグラフである。
図１１は、ラット、イヌまたはサルモデルにおける、１０ｍｇ／ｋｇの経口量の投与後の化合物２（すなわち、実施例２）の血漿レベルを表しているグラフである。
図１２は、摂食サルおよび絶食サルにおける、カプセル製剤および懸濁製剤での化合物２（すなわち、実施例２）の薬物動態学的プロファイルの比較を表しているグラフである。
図１３は、ＣＦＡモデルにおいて、低用量の経口投与された化合物２（すなわち、実施例２）およびコントロール（化合物Ａ、すなわち、比較物質Ａ）に対して観察された鎮痛効果を表しているチャートである。
図１４は、ホルマリンモデルにおいて、化合物２（すなわち、実施例２）の経口投与に対して観察された用量反応を表しているチャートである。
図１５は、ホルマリンモデルにおいて、ある用量の静脈内投与された化合物１（すなわち、実施例１）で観察された有効性を表しているチャートである。
図１６は、化合物２の投与後にアレルゲンをチャレンジされたヒツジにおける、肺抵抗（早期および遅発の喘息反応）の変化を表しているグラフである。
図１７は、アレルギー性喘息のヒツジモデルにおける気道過敏の計測に対する化合物２（すなわち、実施例２）の効果を表しているチャートである。
図１８は、５日間にわたる化合物２の１日１回の経口投与の前後のビーグル犬における肝毒性の血清バイオマーカーを表しているチャートである。
図１９は、５日間にわたる化合物２の１日１回の経口投与の後の５日目のビーグル犬におけるコントロールと化合物２（経口投与）との間の肝毒性の血清バイオマーカーの変化を表しているチャートである。
図２０は、２８日間にわたる化合物２の１日１回の経口投与の後のｓｐｒａｇｕｅ−ｄａｗｌｅｙラットにおける肝毒性の血清バイオマーカーの変化を表しているチャートである。
図２１は、２８日間にわたる化合物２の１日１回の経口投与の後の２８日目のｓｐｒａｇｕｅ−ｄａｗｌｅｙラットにおけるコントロールと化合物２（経口投与）との間の肝毒性の血清バイオマーカーの変化を表しているチャートである。
図２２は、２８日間にわたる化合物２の１日１回の経口投与の後のカニクイザルにおける肝毒性の血清バイオマーカーを表しているチャートである。
図２３は、２８日間にわたる化合物２の１日１回の経口投与の後の２８日目のカニクイザルにおけるコントロールと化合物２（経口投与）との間の肝毒性の血清バイオマーカーの変化を表しているチャートである。
詳細な説明
定義
本開示は、その適用において、本明細書中に記載される方法および組成物の詳細に限定されない。また、本明細書中で使用される表現法および用語法は、説明目的であって、限定として見なされるべきでない。
本明細書中で使用されるとき、冠詞「ａ」および「ａｎ」は、一つまたは一つより多い（例えば、少なくとも一つの）、その冠詞の文法上の対象物のことを指す。
「約」および「およそ」は、計測された量に対して、その計測値の性質または精度を考慮に入れて、通常、許容され得る程度の誤差を意味するものとする。例示的な誤差の程度は、所与の値または値の範囲の２０パーセント（％）以内、代表的には、１０％以内、より代表的には５％以内である。
本明細書中で使用されるとき、障害（例えば、本明細書中に記載されるような障害）を処置するのに有効な化合物または組み合わせ物の量、「治療有効量」、「有効量」または「有効なコース」とは、被験体を処置する際、または障害（例えば、本明細書中に記載されるような障害）を有する被験体を治療する際、軽減する際、緩和する際もしくは改善する際の、被験体に対する単回投与または複数回投与において、そのような処置の非存在下において予測されるものを超えて有効な、化合物または組み合わせ物の量のことを指す。
用語「薬学的に許容され得る」は、本明細書中で使用されるとき、本明細書中に記載される化合物（例えば、式（Ｉ）の化合物）とともに被験体に投与され得るものであって、その薬理学的活性を損なわず、治療量の化合物を送達するのに十分な用量で投与されたとき無毒性である、化合物またはキャリア（例えば、賦形剤）のことを指す。
上で明示されたように、本化合物のある特定の実施形態は、塩基性官能基（例えば、アミノまたはアルキルアミノ）を含むことがあるので、薬学的に許容され得る酸と薬学的に許容され得る塩を形成することが可能である。用語「薬学的に許容され得る塩」は、この点において、本明細書中に開示される化合物の比較的無毒性の無機酸付加塩および有機酸付加塩のことを指す。これらの塩は、本発明の化合物の最終的な単離および精製においてインサイチュで調製され得るか、または遊離塩基の形態の精製された本発明の化合物を好適な有機酸もしくは無機酸と別々に反応させ、そのようにして形成された塩を単離することによって調製され得る。代表的な塩としては、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩（ｎａｐｔｈｙｌａｔｅ）、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩およびラウリルスルホン酸塩などが挙げられる（例えば、Ｂｅｒｇｅら（１９７７）“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ”，Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ６６：１−１９を参照のこと）。
他の場合において、本明細書中に開示される化合物は、一つまたはそれより多くの酸性官能基を含むことがあるので、薬学的に許容され得る塩基と薬学的に許容され得る塩を形成することが可能である。用語「薬学的に許容され得る塩」は、これらの場合において、本明細書中に開示される化合物の比較的無毒性の無機塩基付加塩および有機塩基付加塩のことを指す。これらの塩は、同様に、それらの化合物の最終的な単離および精製においてインサイチュで調製され得るか、または遊離酸の形態の精製された化合物を好適な塩基（例えば、薬学的に許容され得る金属カチオンの水酸化物、炭酸塩または炭酸水素塩）、アンモニアまたは薬学的に許容され得る有機第一級、第二級もしくは第三級アミンと別々に反応させることによって調製され得る。代表的なアルカリ塩またはアルカリ土類塩としては、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩およびアルミニウム塩などが挙げられる。塩基付加塩を形成するために有用な代表的な有機アミンとしては、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジンなどが挙げられる。
用語「処置する」または「処置」は、本明細書中で使用されるとき、被験体、例えば、障害（例えば、本明細書中に記載されるような障害）、障害の症候または障害の素因を有する被験体に、その障害を治療するか、治癒するか、軽減するか、緩和するか、変化させるか、矯正するか、回復させるか、改善するかまたはその障害に影響する目的で、ある化合物を単独でまたはさらなる作用物質との併用で適用することまたは投与することを指す。
本明細書中で使用されるとき、用語「被験体」は、ヒトおよび非ヒト動物を含むと意図されている。例示的なヒト被験体としては、障害、例えば、本明細書中に記載される障害を有するヒト被験体が挙げられる。本発明の「非ヒト動物」という用語には、すべての脊椎動物、例えば、非哺乳動物（例えば、ニワトリ、両生類、爬虫類）および哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、家畜化された動物および／または農業上有用な動物、例えば、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタなどが含まれる。
用語「アンタゴニスト」および「阻害剤」は、例えば、ＴＲＰＡ１などのイオンチャネルの活性を抑止するために生物学的活性を低下させるまたは抑制する作用物質のことを指すために交換可能に使用される。ＴＲＰＡ１阻害剤には、本明細書中に開示される構造特性および／または機能特性の任意の組み合わせを有する阻害剤が含まれる。
阻害または処置の主題の方法に関して、例えばＴＲＰＡ１アンタゴニストの「有効量」とは、所望の投与レジメンの一部として適用されたとき、所望の臨床的または機能的な結果をもたらす、調製物中のそのアンタゴニストの量のことを指す。理論に拘束されるものではないが、本発明の方法において使用するためのＴＲＰＡ１アンタゴニストの有効量には、ＴＲＰＡ１チャネルの一つまたはそれより多くのインビトロまたはインビボ機能を低下させるのに有効なＴＲＰＡ１アンタゴニストの量が含まれる。例示的な機能としては、膜分極（例えば、あるアンタゴニストは細胞の脱分極を妨げ得る）、イオン流入、細胞内のイオン濃度、外向き電流および内向き電流が挙げられるが、これらに限定されない。ＴＲＰＡ１機能に拮抗する化合物には、ＴＲＰＡ１のインビトロまたはインビボでの機能活性に拮抗する化合物が含まれる。特定の機能活性が、インビトロアッセイにおいてごく容易に観察可能であるとき、ある化合物がそのインビトロアッセイにおいてＴＲＰＡ１の機能を阻害する能力は、その化合物の活性に対する合理的な代用として役立つ。ある特定の実施形態において、有効量は、ＴＲＰＡ１媒介性の電流を阻害するのに十分な量および／またはＴＲＰＡ１媒介性のイオン流入を阻害するのに十分な量である。
用語「水和物」は、本明細書中で使用されるとき、水と親化合物との結合によって形成される化合物のことを指す。
用語「予防する」は、ある症状、例えば、局所再発（例えば、疼痛）、ある疾患、例えば、がん、症候群の複合体、例えば、心不全または他の任意の病状に関して使用されるとき、当該分野において十分理解されているものであり、その用語には、その組成物を投与されていない被験体と比べて、ある被験体における、ある病状の症候の発生頻度を減少させるか、またはある病状の症候の発生を遅延させる組成物の投与が含まれる。したがって、がんの予防には、例えば、統計的および／または臨床的に有意な量の、例えば、未処置のコントロール集団と比べたときの予防的処置を受けた患者集団における検出可能ながんの成長の数の減少、および／または未処置のコントロール集団と比べて処置された集団における検出可能ながんの成長の出現の遅延が含まれる。感染症の予防には、例えば、未処置のコントロール集団と比べて処置された集団におけるその感染症の診断数の減少、および／または未処置のコントロール集団と比べて処置された集団におけるその感染症の症候の発生の遅延が含まれる。疼痛の予防としては、例えば、未処置のコントロール集団と比べて処置された集団における被験体が経験した痛覚の大きさの減少あるいは痛覚の遅延が挙げられる。
用語「プロドラッグ」は、生理学的条件下において、本発明の治療的に活性な作用物質に変換される化合物を包含すると意図されている。プロドラッグを作製するための通常の方法は、所望の分子をもたらすために生理学的条件下において加水分解される選択された部分を含めることである。他の実施形態において、プロドラッグは、宿主動物における酵素活性によって変換される。
用語「溶媒和物」は、本明細書中で使用されるとき、溶媒和によって形成される化合物（例えば、溶媒分子と溶質の分子またはイオンとの組み合わせによって形成される化合物）のことを指す。
用語「ＴＲＰＡ１」、「ＴＲＰＡ１タンパク質」および「ＴＲＰＡ１チャネル」は、本願全体にわたって交換可能に使用される。これらの用語は、ＷＯ２００７／０７３５０５の配列番号１、配列番号３もしくは配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むイオンチャネル（例えば、ポリペプチド）、またはその等価なポリペプチドもしくは機能的な生理活性のフラグメントのことを指す。ある特定の実施形態において、その用語は、配列番号１、配列番号３または配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むか、そのアミノ酸配列からなるか、またはそのアミノ酸配列から本質的になるポリペプチドのことを指す。ＴＲＰＡ１には、ＴＲＰＡ１の機能を保持し、かつ（ｉ）配列番号１、配列番号３または配列番号５に示されるアミノ酸配列の全部または一部；（ｉｉ）１個〜約２、３、５、７、１０、１５、２０、３０、５０、７５個またはそれより多い保存的アミノ酸置換を含む、配列番号１、配列番号３または配列番号５に示されるアミノ酸配列；（ｉｉｉ）配列番号１、配列番号３または配列番号５と少なくとも７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列；および（ｉｖ）それらの機能的フラグメントを含む、ポリペプチドが含まれる。本発明のポリペプチドには、配列番号１、配列番号３または配列番号５のホモログ、例えば、オルソログおよびパラログも含まれる。
組成物の「鏡像体過剰率」または「％鏡像体過剰率」は、下記に示される方程式を用いて算出され得る。下記に示される例では、組成物は、９０％の一方のエナンチオマー、例えば、Ｓエナンチオマー、および１０％の他方のエナンチオマー、すなわち、Ｒエナンチオマーを含む。
ｅｅ＝（９０−１０）／１００＝８０％
したがって、９０％の一方のエナンチオマーおよび１０％の他方のエナンチオマーを含む組成物は、８０％の鏡像体過剰率を有するといわれる。
組成物の「ジアステレオ過剰率」または「％ジアステレオ過剰率」は、下記に示される方程式を用いて算出され得る。下記に示される例では、組成物は、９０％の一つのジアステレオマーおよび１０％の別のジアステレオマーを含む。
ｄｅ＝（９０−１０）／１００＝８０％
したがって、９０％の一つのジアステレオマーおよび１０％の他のジアステレオマーを含む組成物は、８０％のジアステレオ過剰率を有するといわれる。
化学的な定義
本明細書の様々な箇所において、本発明の化合物の置換基は、群または範囲として開示される。本発明は、そのような群および範囲のメンバーの各々およびそれらのメンバーのすべての個別の部分組み合わせを含むと明確に意図されている。例えば、用語「Ｃ１−６アルキル」は、メチル、エチル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキルおよびＣ６アルキルを個別に開示していると明確に意図されている。
変数が１回より多く出現する本発明の化合物の場合、各変数は、その変数を定義しているマーカッシュ群から選択される異なる部分であり得る。例えば、ある構造が、同じ化合物上に同時に存在する二つのＲ基を有すると記載される場合；その二つのＲ基は、Ｒについて定義されたマーカッシュ群から選択される異なる部分であり得る。
明確にするために別個の実施形態の文脈において記載される本発明のある特定の特徴は、単一の実施形態において組み合わせて提供され得ることがさらに認識される。逆に、簡潔にするために単一の実施形態の文脈において記載される本発明の様々な特徴は、別々にまたは任意の好適な部分組み合わせで提供され得る。
本明細書中で使用されるとき、「アルキル」は、別段述べられない限り、それ単独でまたは別の置換基の一部として、直鎖または分枝鎖を意味し、必要に応じて指定される数の炭素原子を有し得る（すなわち、Ｃ１−Ｃ６は、１〜６個の炭素を意味する）。飽和炭化水素基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、例えば、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルの同族体および異性体などのような基が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書中で使用されるとき、「アルキレン」とは、二価のアルキル、例えば、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−および−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−のことを指す。
本明細書中で使用されるとき、「アルケニル」は、少なくとも一つの二重結合を含み、２〜６個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖の炭化水素鎖（すなわち、Ｃ２−Ｃ６アルケニル）であり得る。アルケニル基の例としては、エテニル（すなわち、ビニル）、プロパ−１−エニル（すなわち、アリル）、ブタ−１−エニル、ペンタ−１−エニル、ペンタ−１，４−ジエニルなどのような基が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書中で使用されるとき、「アルコキシ」は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルコキシ基（すなわち、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり得る。アルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシ、プロピルオキシ、イソプロピルオキシ、ブチルオキシ、イソブチルオキシ、ｔｅｒｔ−ブチルオキシ、ペンチルオキシまたはヘキシルオキシなどのような基が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書中で使用されるとき、「アルキニル」は、少なくとも一つの三重結合を含み、２〜６個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖の炭化水素鎖（すなわち、Ｃ２−Ｃ６アルキニル）であり得る。アルキニル基の例としては、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニルなどのような基が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書中で使用されるとき、「アミノ」または「アミン」とは、ＮＨ２ラジカル基のことを指す。
本明細書中で使用されるとき、「アリール」とは、６〜１２個の炭素原子を有し、単一の環または共に縮合しているかもしくは共有結合的に連結された複数の環（例えば、１〜二つの環）であり得る、多価不飽和芳香族炭化水素部分（すなわち、Ｃ６−Ｃ１２アリール）のことを指す。アリール基の非限定的な例としては、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチルおよび４−ビフェニルが挙げられる。
本明細書中で使用されるとき、「シクロアルキル」とは、炭素および水素だけを含み、飽和または部分不飽和であり得る、単環式または多環式ラジカルのことを指す。シクロアルキル基には、３〜１０個の環原子を有する基（すなわち、Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキル）が含まれる。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロセプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロデシル、ノルボルニルなどのような基が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書中で使用されるとき、「ハロ」または「ハロゲン」は、別段述べられない限り、独立してまたは別の置換基の一部として、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子を意味する。用語「ハロゲン化物」は、それ単独で、または別の置換基の一部として、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素の原子のことを指す。
本明細書中で使用されるとき、「ハロアルキル」および「ハロアルコキシ」は、一つもしくはそれを超えるハロ基またはそれらの組み合わせで置換された、アルキルおよびアルコキシの構造を含み得る。例えば、用語「フルオロアルキル」および「フルオロアルコキシ」には、それぞれ、そのハロがフッ素である、ハロアルキルおよびハロアルコキシ基が含まれる。
本明細書中で使用されるとき、「ヘテロアルキル」は、炭素以外の原子、例えば、酸素、窒素、硫黄、リンまたはそれらの組み合わせから選択される一つまたは複数の骨格鎖原子を有する必要に応じて置換されるアルキルを含み得る。鎖の中の炭素の数を指す数値の範囲、例えば、Ｃ１−Ｃ６ヘテロアルキルが与えられることがあり、それは、この例では１〜６個の炭素原子を含む。例えば、−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３ラジカルは、「Ｃ３」ヘテロアルキルと称される。その分子の残りの部分に対する接続は、そのヘテロアルキル鎖の中のヘテロ原子または炭素のいずれかを介し得る。
本明細書中で使用されるとき、「ヘテロアリール」とは、窒素、酸素および硫黄から選択される一つまたは複数の環ヘテロ原子を含み、単環式または二環式の環系であり得る、５〜１４員の芳香族ラジカル（例えば、Ｃ２−Ｃ１３ヘテロアリール）のことを指す。自由原子価を有する原子から一つの水素原子を除去することによって、名称が「−イル（−ｙｌ）」で終わる一価のヘテロアリールラジカルから得られる二価のラジカルは、対応する一価のラジカルの名称に「−イデン（ｉｄｅｎｅ）」を付け加えることによって命名され、例えば、二つの接着点を有するピリジル（ｐｙｒｉｄｙｌ）基は、ピリジリデン（ｐｙｒｉｄｙｌｉｄｅｎｅ）である。Ｎ含有「複素環式芳香族」部分またはＮ含有「ヘテロアリール」部分とは、その環の骨格原子の少なくとも一つが窒素原子である芳香族基のことを指す。多環式ヘテロアリール基は、縮合していてもよいし、縮合していなくてもよい。ヘテロアリールラジカルにおけるヘテロ原子は、必要に応じて酸化される。一つまたは複数の窒素原子は、存在する場合、必要に応じて四級化される。ヘテロアリールは、その環の任意の原子を介して、その分子の残りの部分に付着される。ヘテロアリール基の例としては、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、フリル（フラニル）、キノリル、イソキノリル、チエニル、イミダゾリル、チアゾリル、インドリル、ピリル、オキサゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンズチアゾリル、イソオキサゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、インダゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、イソチアゾリル、ベンゾチエニル、プリニル、カルバゾリル、ベンズイミダゾリル、インドリニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書中で使用されるとき、「ヘテロシクリル」または「ヘテロシクロアルキル」は、２〜１２個の炭素原子、ならびに窒素、酸素および硫黄から選択される１〜６個のヘテロ原子を含む安定した３〜１８員の非芳香族の単環式、二環式または三環式の複素環ラジカルであり得る。ヘテロシクロアルキル基の例としては、ジオキソラニル、チエニル［１，３］ジチアニル、デカヒドロイソキノリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、イソチアゾリジニル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、オクタヒドロインドリル、オクタヒドロイソインドリル、２−オキソピペラジニル、２−オキソピペリジニル、２−オキソピロリジニル、オキサゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、４−ピペリドニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、キヌクリジニル、チアゾリジニル、テトラヒドロフリル、トリチアニル、テトラヒドロピラニル、チオモルホリニル、チアモルホリニル、１−オキソ−チオモルホリニル、１，１−ジオキソ−チオモルホリニルなどのような基が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書中で使用されるとき、「ヒドロキシ」または「ヒドロキシル」とは、−ＯＨのことを指す。
本明細書中で使用されるとき、「シアノ」とは、−ＣＮのことを指す。
本明細書中で使用されるとき、「ニトロ」とは、−ＮＯ２のことを指す。
本明細書中で使用されるとき、用語「置換される」は、有機化合物の許容できるすべての置換基を含むと企図される。ある広い態様において、許容できる置換基には、有機化合物の非環式および環式の分枝状および非分枝状の炭素環式および複素環式の芳香族および非芳香族の置換基（例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール（これらのいずれのそれ自体もさらに置換され得る））ならびにハロゲン、カルボニル（例えば、アルデヒド、ケトン、エステル、カルボキシルまたはホルミル）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、チオカルボキシレートまたはチオホルメート）、アミノ（例えば、−Ｎ（Ｒｂ）（Ｒｃ）（ここで、ＲｂおよびＲｃの各々は、独立してＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである））、シアノ、ニトロ、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｂ）（Ｒｃ）、−ＳＯＲｄおよびＳ（Ｏ）２Ｒｄ（ここで、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄの各々は、独立してＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである）が含まれる。例証的な置換基としては、例えば、上記の本明細書中に記載される置換基が挙げられる。許容できる置換基は、適切な有機化合物に対して、一つまたはそれを超え、同じであり得るか、または異なり得る。本発明の目的で、窒素などのヘテロ原子は、それらのヘテロ原子の原子価を満たす、本明細書中に記載される有機化合物の水素置換基および／または任意の許容できる置換基を有し得る。本発明は、いかなる方法によっても、有機化合物の許容できる置換基によって限定されないと意図されている。
「置換」または「〜で置換される」は、そのような置換が、置換された原子および置換基の許される原子価に一致したものであり、その置換によって、安定した化合物、例えば、転位、環化、脱離などによる変換を自発的に起こさない安定した化合物がもたらされるという暗黙の条件を含むと理解される。
省略形Ｍｅ、Ｅｔ、Ｐｈ、Ｔｆ、Ｎｆ、Ｔｓ、Ｍｓは、それぞれメチル、エチル、フェニル、トリフルオロメタンスルホニル、ノナフルオロブタンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニルおよびメタンスルホニルを表す。当該分野の通常の技量を有する有機化学者が利用する省略形のより包括的なリストは、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙの各巻の第１号に見られる；このリストは、通常、Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｌｉｓｔ ｏｆ Ａｂｂｒｅｖｉａｔｉｏｎｓと題された表に提示される。前記リストに含まれる省略形および当該分野の通常の技量を有する有機化学者が利用するすべての省略形が、参照により本明細書に援用される。
上に記載された化合物の企図される等価物には、別途それに対応するものであって、同じ一般的な特性（例えば、ＴＲＰＡ１活性を阻害する能力）を有する化合物が含まれ、ここで、その化合物の有効性に悪影響を及ぼさない、置換基の一つまたはそれより多くの単純な変更が行われている。一般に、本発明の化合物は、例えば下記に記載されるような一般的な反応スキームに図示される方法またはそれらの変法によって、容易に入手可能な出発物質、試薬および従来の合成手順を用いて、調製され得る。これらの反応において、本来公知であり本明細書中では言及されないバリアントを使用することも可能である。
本発明の目的で、化学元素は、元素周期表，ＣＡＳバージョン，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ，６７ｔｈ Ｅｄ．，１９８６−８７の表紙裏に従って特定される。また、本発明の目的で、用語「炭化水素」は、少なくとも一つの水素および一つの炭素原子を有する許容できるすべての化合物を含むと企図される。ある広い態様において、その許容できる炭化水素には、置換または非置換であり得る、非環式および環式の分枝状および非分枝状の炭素環式および複素環式の芳香族および非芳香族の有機化合物が含まれる。
化合物
ＴＲＰＡ１の阻害が有益である障害の処置において有用であり得る化合物が、本明細書中に記載される。そのような障害は、本明細書中に記載される。
上記化合物には、式（Ｉ）の化合物
が含まれ、式中、
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルケニルまたはＣ１−Ｃ６アルキニルであり；
Ｒ２は、一つまたは複数のＲ５基で必要に応じて置換される、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルケニルまたはＣ１−Ｃ６アルキニルであり；
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルケニルまたはＣ１−Ｃ６アルキニルであり；
Ｒ４は、一つまたは複数の位置において１〜４個のＲ６基で必要に応じて置換される、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、チオール、アルキルチオ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、アミド、アルキルアミド、ジアルキルアミド、チオイル、スルホニル、シクリル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ５は、独立して、Ｈ、ハロゲン、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシ、アミノ、アミド、ホスホネート、カルボキシル、エーテル、アルキルチオ、ハロアルキルおよびシアノであり；
Ｒ６は、独立して、Ｈ、ハロゲン、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、ケトン、アルデヒド（ａｌｋｅｈｙｄｅ）、エステル、複素環、芳香環または芳香族複素環、ハロアルキルおよびシアノである。
いくつかの実施形態において、Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、例えば、−ＣＨ３である。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、Ｈである。
いくつかの実施形態において、Ｒ２は、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキル、例えば、−ＣＨ３、−ＣＤ３または−ＣＨＦ２である。
いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２の各々は、独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、例えば、−ＣＨ３である。いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２の各々は、独立して、−ＣＨ３であり、Ｒ３は、Ｈである。
いくつかの実施形態において、Ｒ３は、Ｈである。いくつかの実施形態において、Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、例えば、−ＣＨ３である。
いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２およびＲ３の各々は、独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、例えば、−ＣＨ３である。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉａ）の化合物
である。
いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２およびＲ３の各々は、独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、例えば、−ＣＨ３である。
いくつかの実施形態において、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｂ）の化合物
である。
いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２およびＲ３の各々は、独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、例えば、−ＣＨ３である。
いくつかの実施形態において、Ｒ４は、ヘテロシクリル、例えば、４〜８員環である。いくつかの実施形態において、そのヘテロシクリルは、窒素原子を介して連結される。いくつかの実施形態において、Ｒ４は、置換ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｒ４は、以下の群
から選択される。
いくつかの実施形態において、Ｒ４は、以下の群
から選択され、ｍは、１である。
いくつかの実施形態において、Ｒ４は、以下の群
から選択される。
いくつかの実施形態において、Ｒ４は、以下の群
から選択され、ｍは、１である。
いくつかの実施形態において、Ｒ４は、以下の群
から選択される。
いくつかの実施形態において、ｍは、０である。いくつかの実施形態において、ｍは、１である。
いくつかの実施形態において、Ｒ６は、アルキル、ハロアルキルまたはシアノ、例えば、アルキルまたはハロアルキル、例えば、−ＣＦ３である。
いくつかの実施形態において、Ｒ４は、以下の群
から選択される。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）の化合物
であり、式中、
ｎは、０〜４の整数であり；
ｍは、０〜４の整数から選択される。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩａ）の化合物
であり、式中、
ｎは、０〜４の整数であり；
ｍは、０〜４の整数から選択される。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｂ）の化合物
であり、式中、
ｎは、０〜４の整数であり；
ｍは、０〜４の整数から選択される。
いくつかの実施形態において、上記化合物は、以下の群
またはその薬学的に許容され得る塩から選択される。
いくつかの実施形態において、上記化合物は、以下の群
またはその薬学的に許容され得る塩から選択される。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、約１００℃に等しいかまたはそれより高い融点を有する。いくつかの実施形態において、前記式（Ｉ）の化合物は、約１２５℃、約１５０℃、約１７５℃もしくは約１８０℃に等しいかまたはそれより高い融点を有する。いくつかの実施形態において、前記式（Ｉ）の化合物は、約１８０℃〜約２０５℃の範囲内の融点を有する。いくつかの実施形態において、前記式（Ｉ）の化合物は、約１９０℃〜約２００℃の範囲内の融点を有する。いくつかの実施形態において、前記式（Ｉ）の化合物は、約１９０℃〜約１９６℃の範囲内の融点を有する。
いくつかの実施形態において、固体結晶形の式（Ｉ）の化合物は、好適な溶媒（例えば、エタノール、水またはそれらの組み合わせ）によるスラリー処理において生成される。いくつかの実施形態において、固体結晶形（例えば、無水固体結晶形）の式（Ｉ）の化合物は、好適な溶媒（例えば、エタノール、水またはそれらの組み合わせ）によるスラリー処理の後のさらなる処理（例えば、真空処理、例えば、１日間の−８０℃）において生成される。
いくつかの実施形態において、固体結晶形の式（Ｉ）の化合物（例えば、好適な溶媒、例えば、エタノール、水またはそれらの組み合わせによるスラリー処理、および必要に応じてその後のさらなる処理、例えば、真空処理、例えば、１日間の−８０℃において生成される）は、約１００℃に等しいかまたはそれより高い融点を有する。いくつかの実施形態において、前記固体結晶形の式（Ｉ）の化合物は、約１２５℃、約１５０℃、約１７５℃もしくは約１８０℃に等しいかまたはそれより高い融点を有する。いくつかの実施形態において、前記固体結晶形の式（Ｉ）の化合物は、約１８０℃〜約２０５℃の範囲内の融点を有する。いくつかの実施形態において、前記固体結晶形の式（Ｉ）の化合物は、約１９０℃〜約２００℃の範囲内の融点を有する。いくつかの実施形態において、前記固体結晶形の式（Ｉ）の化合物は、約１９０℃〜約１９６℃の範囲内の融点を有する。
いくつかの実施形態において、前記式（Ｉ）の化合物は、
またはその薬学的に許容され得る塩であり、これは、本明細書中で化合物２、実施例２または実施例２の化合物と称される。
いくつかの実施形態において、固体結晶形の化合物２（例えば、Ａ形）は、好適な溶媒（例えば、エタノール、水またはそれらの組み合わせ）によるスラリー処理において生成される。いくつかの実施形態において、前記固体結晶形の化合物２（例えば、Ａ形）は、２θに関して表現される特徴的なピークを、以下の角度：約７．６７°、約１２．５２°、約１３．４９°および約１９．３１°のうちの一つ以上に含む粉末Ｘ線回折パターンを有する。いくつかの実施形態において、前記固体結晶形の化合物２（例えば、Ａ形）は、図１に示されているような特徴的なピークを有する。
いくつかの実施形態において、固体結晶形の化合物２（例えば、無水固体結晶形の化合物２、例えば、Ｂ形）は、好適な溶媒（例えば、エタノール、水またはそれらの組み合わせ）によるスラリー処理の後のさらなる処理（例えば、真空処理、例えば、１日間の−８０℃）において生成される。いくつかの実施形態において、前記固体結晶形の化合物２（例えば、無水固体結晶形の化合物２、例えば、Ｂ形）は、２θに関して表現される特徴的なピークを、以下の角度：約９．７８°、約１２．９８°、約１９．２０°および約１９．６７°のうちの一つ以上に含む粉末Ｘ線回折パターンを有する。いくつかの実施形態において、前記固体結晶形の化合物２（例えば、無水固体結晶形の化合物２、例えば、Ｂ形）は、図２に示されているような特徴的なピークを有する。
いくつかの実施形態において、固体結晶形の化合物２（例えば、無水固体結晶形の化合物２、例えば、Ｂ形）は、約１００℃に等しいかまたはそれより高い融点を有する。いくつかの実施形態において、前記固体結晶形の化合物２（例えば、無水固体結晶形の化合物２、例えば、Ｂ形）は、約１２５℃、約１５０℃、約１７５℃もしくは約１８０℃に等しいかまたはそれより高い融点を有する。いくつかの実施形態において、前記固体結晶形の化合物２（例えば、無水固体結晶形の化合物２、例えば、Ｂ形）は、約１８０℃〜約２０５℃の範囲内の融点を有する。いくつかの実施形態において、前記固体結晶形の化合物２（例えば、無水固体結晶形の化合物２、例えば、Ｂ形）は、約１９０℃〜約２００℃の範囲内の融点を有する。いくつかの実施形態において、前記固体結晶形の化合物２（例えば、無水固体結晶形の化合物２、例えば、Ｂ形）は、約１９０℃〜約１９６℃の範囲内の融点を有する。いくつかの実施形態において、前記固体結晶形の化合物２（例えば、無水固体結晶形の化合物２、例えば、Ｂ形）は、図３に示されているような示差走査熱量測定トレースを有する。
いくつかの実施形態において、固体結晶形の化合物２（例えば、無水固体結晶形の化合物２、例えば、Ｂ形）は、好適な溶媒（例えば、エタノール、水またはそれらの組み合わせ）によるスラリー処理の後のさらなる処理（例えば、真空処理、例えば、１日間の−８０℃）において生成され、ここで、前記固体結晶形の化合物２（例えば、無水固体結晶形の化合物２、例えば、Ｂ形）は、約１５０℃に等しいかまたはそれより高い融点を有し、２θに関して表現される特徴的なピークを、以下の角度：約９．７８°、約１２．９８°、約１９．２０°および約１９．６７°のうちの一つ以上に含む粉末Ｘ線回折パターンを有する。いくつかの実施形態において、固体結晶形の化合物２（例えば、無水固体結晶形の化合物２、例えば、Ｂ形）は、好適な溶媒（例えば、エタノール、水またはそれらの組み合わせ）によるスラリー処理の後のさらなる処理（例えば、真空処理、例えば、１日間の−８０℃）において生成され、ここで、前記固体結晶形の化合物２（例えば、無水固体結晶形の化合物２、例えば、Ｂ形）は、１８５℃〜約２０５℃の範囲内の融点を有し、２θに関して表現される特徴的なピークを、以下の角度：約９．７８°、約１２．９８°、約１９．２０°および約１９．６７°のうちの一つ以上に含む粉末Ｘ線回折パターンを有する。
本発明のある特定の実施形態は、式（Ｉ）の化合物を含む精製された薬学的調製物を含む。いくつかの実施形態において、その薬学的調製物は、別のジアステレオマーに対して約５５％に等しいかまたはそれより高い（例えば、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約９９．５％）ジアステレオ過剰率の一つのジアステレオマーを含む。いくつかの実施形態において、その薬学的調製物は、別のジアステレオマーに対して約９５％に等しいかまたはそれより高いジアステレオ過剰率の一つのジアステレオマーを含む。いくつかの実施形態において、その薬学的調製物は、別のジアステレオマーに対して約９９％に等しいかまたはそれより高いジアステレオ過剰率の一つのジアステレオマーを含む。
いくつかの実施形態において、上記薬学的調製物は、約１０％に等しいかまたはそれより低い水分含有率（例えば、含水率）を含む。いくつかの実施形態において、上記薬学的組成物は、約９％、約８％、約７％、約６％、約５％、約４％、約３％、約２％、約１％、約０．５％、約０．１％、約０．０５％、約０．０１％もしくは約０．００１％に等しいかまたはそれより低い水分含有率（例えば、含水率）を含む。いくつかの実施形態において、上記薬学的調製物は、水分（例えば、水）を実質的に含まない。
いくつかの実施形態において、上記薬学的調製物は、式（Ｉ）の化合物を含み、ここで、その化合物は、
またはその薬学的に許容され得る塩であり、これは、本明細書中で化合物２、実施例２または実施例２の化合物と称される。
いくつかの実施形態において、上記薬学的調製物は、式（Ｉ）の化合物（ここで、その化合物は化合物２である）またはその薬学的に許容され得る塩を含み、その調製物は、約９９％に等しいかまたはそれより高いジアステレオ過剰率の化合物２を有する。いくつかの実施形態において、上記薬学的調製物は、式（Ｉ）の化合物（ここで、その化合物は化合物２である）またはその薬学的に許容され得る塩を含み、その調製物は、約０．１％に等しいかまたはそれより低い水分含有率（例えば、含水率）を有する。いくつかの実施形態において、上記薬学的調製物は、式（Ｉ）の化合物（ここで、その化合物は化合物２である）またはその薬学的に許容され得る塩を含み、その調製物は、約９９％に等しいかまたはそれより高いジアステレオ過剰率の化合物２および約０．１％に等しいかまたはそれより低い水分含有率（例えば、含水率）を有する。
いくつかの実施形態において、上記薬学的調製物は、２θに関して表現される特徴的なピークを以下の角度：約７．６７°、約１２．５２°、約１３．４９°および約１９．３１°のうちの一つまたは複数の角度に含む粉末Ｘ線回折パターンを有する固体結晶形の化合物２（例えば、Ａ形）を含み、その調製物は、約９９％に等しいかまたはそれより高いジアステレオ過剰率の化合物２および約０．１％に等しいかまたはそれより低い水分含有率（例えば、含水率）を有する。
いくつかの実施形態において、上記薬学的調製物は、１８５℃〜約２０５℃の範囲内の融点ならびに２θに関して表現される特徴的なピークを以下の角度：約９．７８°、約１２．９８°、約１９．２０°および約１９．６７°のうちの一つまたは複数の角度を含む粉末Ｘ線回折パターンを有する固体結晶形の化合物２（例えば、Ｂ形）を含み、その調製物は、約９９％に等しいかまたはそれより高いジアステレオ過剰率の化合物２および約０．１％に等しいかまたはそれより低い水分含有率（例えば、含水率）を有する。
式（Ｉ）の化合物には、本明細書中に記載される障害の処置、例えば、疼痛の処置につながるまたはそれらの処置をもたらす、経口投与または非経口（例えば、静脈内）投与に適した水溶解度を有する分子が含まれる。いくつかの実施形態において、その化合物は、経口投与に適した組成物に製剤化される。本明細書中に記載される式（Ｉ）の化合物のＴＲＰＡ１イオンチャネルを阻害する際の効力は、実施例３３の方法を用いて計測された。表１４は、例示的な化合物のＴＲＰＡ１阻害のインビトロにおける効力（実施例３３の方法によって計測されたもの）を開示している。
式（Ｉ）の好ましい化合物には、実施例３３の方法によって得られる、約１００ｎＭ未満（好ましくは、約７５ｎＭ未満、より好ましくは、約２５ｎＭ未満）のＩＣ５０値でＴＲＰＡ１イオンチャネルを阻害する化合物が含まれる。
式（Ｉ）の化合物は、ＴＲＰＡ１イオンチャネルを阻害し得る。いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、本明細書中に記載される障害（例えば、疼痛）を治療的に有効な様式で処置するために経口的または非経口的（例えば、静脈内）薬学的組成物の一部として投与され得る。
本明細書中に開示されるある特定の化合物は、特定の幾何異性体または立体異性体として存在し得る。本発明は、ｃｉｓ−およびｔｒａｎｓ−異性体、Ｒ−およびＳ−エナンチオマー、ジアステレオマー、（Ｄ）−異性体、（Ｌ）−異性体、それらのラセミ混合物ならびにそれらの他の混合物をはじめとしたそのようなすべての化合物が本発明の範囲内に入ると企図する。例えば、一つのキラル中心が、ある分子に存在する場合、本発明は、ラセミ混合物、鏡像異性的に濃縮された混合物および実質的に鏡像異性的またはジアステレオ異性的に純粋な化合物を含む。その組成物は、例えば、５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、９０％超、９５％超または９９％超の単一のエナンチオマーまたはジアステレオマーを含み得る。さらなる不斉炭素原子が、アルキル基などの置換基に存在し得る。そのような異性体のすべてならびにそれらの混合物が、本発明に含められると意図されている。
本明細書中に記載される化合物は、そのような化合物を構成している一つまたは複数の原子において、非天然の比率の同位体原子も含み得る。例えば、それらの化合物は、放射性同位体、例えば、トリチウム（３Ｈ）、ヨウ素−１２５（１２５Ｉ）または炭素−１４（１４Ｃ）で放射標識され得る。本明細書中に開示される化合物のすべての同位体バリエーションは、放射性であるか放射性でないか関係なく、本発明の範囲内に包含されると意図されている。例えば、重水素化化合物および１３Ｃを組み込んだ化合物は、本発明の範囲内に包含されると意図されている。
本明細書中に開示されるある特定の化合物は、非溶媒和の形態、ならびに水和された形態を含む溶媒和の形態で存在し得る。一般に、溶媒和の形態は、非溶媒和の形態と等価であり、本発明の範囲内に包含される。本明細書中に開示されるある特定の化合物は、複数の結晶形または非晶質型で存在し得る。一般に、すべての物理的形態が、本発明によって企図される用途に対して等価であり、本発明の範囲内に包含されると意図されている。
薬学的組成物
式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩などの本明細書中に記載される化合物を含む薬学的組成物は、本明細書中に記載される障害、例えば、被験体（例えば、ヒトおよび動物）におけるＴＲＰＡ１イオンチャネルの阻害に応答性である障害を処置するためまたは回復させるために使用され得る。
薬学的組成物中の式（Ｉ）の化合物の量および濃度、ならびに被験体に投与される薬学的組成物の量は、臨床的に妥当な因子、例えば、被験体の医学的に関連性のある特徴（例えば、年齢、体重、性別、他の病状など）、薬学的組成物における化合物の溶解度、化合物の効力および活性、ならびに薬学的組成物の投与様式に基づいて選択され得る。投与経路および投与レジメンに関するさらなる情報については、読者は、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｃｏｒｗｉｎ Ｈａｎｓｃｈ；Ｃｈａｉｒｍａｎ ｏｆ Ｅｄｉｔｏｒｉａｌ Ｂｏａｒｄ），Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ １９９０のＶｏｌｕｍｅ５のＣｈａｐｔｅｒ２５．３を参照する。
本明細書中に開示される化合物は、単独で投与されることが可能であるが、その化合物を薬学的製剤として投与することが好ましく、その薬学的製剤では、その化合物は、一つまたは複数の薬学的に許容され得る賦形剤またはキャリアと組み合される。本明細書中に開示される化合物は、ヒトまたは獣医学において使用するための任意の好都合な方法で投与するために製剤化され得る。ある特定の実施形態において、薬学的調製物中に含められる化合物は、それ自体で活性であり得るか、または例えば、生理学的環境において、活性な化合物に変換されることが可能なプロドラッグであり得る。
句「薬学的に許容され得る」は、過剰な毒性、刺激作用、アレルギー反応または他の問題もしくは合併症なしに人間および動物の組織と接触して使用するのに適したものであって、合理的なベネフィット／リスク比に見合っていて、適切な医学的判断の範囲内である、化合物、材料、組成物および／または剤形のことを指すために本明細書中で使用される。
薬学的に許容され得るキャリアの例としては、（１）糖、例えば、ラクトース、グルコースおよびスクロース；（２）デンプン、例えば、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプン；（３）セルロースおよびその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース；（４）トラガント末；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）賦形剤、例えば、カカオバターおよび坐剤ろう；（９）油、例えば、落花生油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油；（１０）グリコール、例えば、プロピレングリコール；（１１）ポリオール、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール；（１２）エステル、例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル；（１３）寒天；（１４）緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；（１５）アルギン酸；（１６）発熱物質非含有水；（１７）等張食塩水；（１８）リンガー溶液；（１９）エチルアルコール；（２０）リン酸緩衝液；（２１）シクロデキストリン、例えば、Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）；および（２２）薬学的製剤において使用される他の無毒性で適合性の物質が挙げられる。
薬学的に許容され得る酸化防止剤の例としては、（１）水溶性酸化防止剤、例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど；（２）油溶性酸化防止剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ−トコフェロールなど；および（３）金属キレート剤、例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などが挙げられる。
固形剤形（例えば、カプセル剤、錠剤、丸剤、糖衣錠、散剤、顆粒剤など）は、一つもしくはそれを超える薬学的に許容され得るキャリア、例えば、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウム、および／または以下のうちのいずれかを含み得る：（１）充填剤または増量剤、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよび／またはケイ酸；（２）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよび／またはアカシア；（３）湿潤剤、例えば、グリセロール；（４）崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のシリケートおよび炭酸ナトリウム；（５）溶解遅延剤、例えば、パラフィン；（６）吸収促進剤、例えば、四級アンモニウム化合物；（７）湿潤剤、例えば、セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロール；（８）吸収剤、例えば、カオリンおよびベントナイト粘土；（９）潤滑剤、例えば（ｓｕｃｈ ａ）、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよびそれらの混合物；および（１０）着色剤。
液体剤形には、薬学的に許容され得るエマルジョン、マイクロエマルジョン、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤が含まれ得る。液体剤形は、活性成分に加えて、当該分野において通常使用される不活性な希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物を含み得る。
懸濁剤は、活性な化合物に加えて、懸濁剤、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天およびトラガント、ならびにそれらの混合物を含み得る。
軟膏、ペースト、クリームおよびゲルは、活性な化合物に加えて、賦形剤、例えば、動物性および植物性脂肪、油、ろう、パラフィン、デンプン、トラガント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルクおよび酸化亜鉛またはそれらの混合物を含み得る。
散剤および噴霧剤は、活性な化合物に加えて、賦形剤、例えば、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウムおよびポリアミド粉末またはこれらの物質の混合物を含み得る。噴霧剤は、通例の噴射剤、例えば、クロロフルオロハイドロカーボンおよび揮発性非置換炭化水素、例えば、ブタンおよびプロパンをさらに含み得る。
製剤は、単位剤形で都合よく提供されることがあり、薬学分野で周知の任意の方法によって調製され得る。単回投与形態を作製するためにキャリア材料と組み合わされ得る活性成分の量は、処置される宿主、特定の投与様式に応じて変動し得る。単回投与形態を作製するためにキャリア材料と組み合わされ得る活性成分の量は、一般に、治療効果をもたらす化合物の量であり得る。通常、１００パーセントのうち、この量は、約１パーセント〜約９９パーセントの活性成分、好ましくは、約５パーセント〜約７０パーセント、最も好ましくは、約１０パーセント〜約３０パーセントの範囲であり得る。
本明細書中に開示される薬学的組成物の錠剤および他の固形剤形（例えば、糖衣錠、カプセル剤、丸剤および顆粒剤）は、必要に応じて刻み目がつけられ得るか、またはコーティングおよびシェル（例えば、腸溶コーティングおよび製薬分野において周知の他のコーティング）を用いて調製され得る。それらは、例えば、所望の放出プロファイルを提供する様々な比率のヒドロキシプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、リポソームおよび／またはミクロスフェアを用いて、その中の活性成分の持続放出または制御放出をもたらすようにも製剤化され得る。それらは、例えば、細菌保持フィルターで濾過することによって、または使用の直前に滅菌水もしくは他の何らかの滅菌された注射可能な媒質に溶解され得る滅菌された固体組成物の形態の滅菌剤を組み込むことによって、滅菌され得る。これらの組成物は、必要に応じて不透明化剤も含んでもよく、消化管のある特定の部分において、必要に応じて遅延様式で、活性成分だけを放出するかまたは活性成分を優先的に放出する組成物であってもよい。使用され得る包埋組成物の例としては、ポリマー物質およびろうが挙げられる。活性成分は、適切な場合には、一つまたは複数の上記賦形剤とともに、マイクロカプセルの形態でも存在し得る。
本発明の化合物の局所投与または経皮投与のための剤形としては、散剤、噴霧剤、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、液剤、パッチおよび吸入剤が挙げられる。活性な化合物は、薬学的に許容され得るキャリアおよび必要とされ得る任意の保存剤、緩衝剤または噴射剤と滅菌条件下で混合され得る。
本明細書中に開示される製剤は、デバイスを介して送達され得る。例示的なデバイスとしては、カテーテル、ワイヤー、ステントまたは他の腔内デバイスが挙げられるが、これらに限定されない。さらなる例示的な送達デバイスとしては、パッチ、包帯、マウスガードまたは咀嚼器も挙げられる。経皮パッチは、身体への本明細書中に開示される化合物の制御された送達をもたらすという追加の利点を有する。そのような剤形は、化合物を適切な媒質に溶解するかまたは分散することによって作製され得る。吸収促進剤は、皮膚を横断した化合物の流入を増加させるために使用され得る。そのような流入の速度は、律速膜を提供することまたは化合物をポリマーマトリックスもしくはゲルに分散することのいずれかによって制御され得る。
眼科用製剤、眼軟膏、滴剤、液剤などもまた、本発明の範囲内であると企図される。
いくつかの場合において、薬物の効果を延長するために、皮下注射または筋肉内注射からの薬物の吸収を遅延させることが望ましい。これは、水溶性に乏しい結晶性または非晶質の材料の液体懸濁液を使用することによって達成され得る。そして、その薬物の吸収速度は、結晶サイズおよび結晶形に依存し得る溶解速度に依存する。あるいは、非経口的に投与される薬物形態の遅延吸収は、その薬物を油性ビヒクルに溶解するかまたは懸濁することによって達成される。
注射可能なデポー型は、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生分解性ポリマーにおいて主題化合物のマイクロカプセルマトリックスを形成することによって作製され得る。薬物放出の速度は、薬物とポリマーとの比および使用される特定のポリマーの性質に応じて、制御され得る。他の生分解性ポリマーの例としては、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）が挙げられる。注射可能なデポー製剤は、薬物を体組織と適合性のリポソームまたはマイクロエマルジョンに捕捉することによっても調製される。
本明細書中に開示される化合物が、医薬品としてヒトおよび動物に投与されるとき、それらは、それ自体で、または例えば、０．１〜９９．５％（より好ましくは、０．５〜９０％）の活性成分を薬学的に許容され得るキャリアとともに含む薬学的組成物として、投与され得る。
上記製剤は、局所的に、経口的に、経皮的に、経直腸的に、経膣的に、非経口的に、鼻腔内に、肺内に、眼内に、静脈内に、筋肉内に、動脈内に、髄腔内に、嚢内に、眼窩内に、心臓内に、皮内に、腹腔内に、経気管的に、皮下に、表皮下に、関節内に、嚢下に、クモ膜下に、脊髄内に、胸骨内に、または吸入によって、投与され得る。
一つの具体的な実施形態は、ＴＲＰＡ１媒介性の電流を１マイクロモル濃度またはそれ未満のＩＣ５０で阻害する作用物質および経口的に許容され得る薬学的キャリアを含む、シロップ剤、エリキシル剤（ｅｌｉｘｅｒ）、懸濁剤、噴霧剤、舐剤、チュアブル舐剤、散剤およびチュアブル錠剤からなる群から選択される、水性の液体または口の中で溶ける固体の形態の、経口投与のための鎮咳性組成物である。そのような鎮咳性組成物は、抗ヒスタミン剤、５−リポキシゲナーゼ阻害剤、ロイコトリエン阻害剤、Ｈ３阻害剤、β−アドレナリン受容体アゴニスト、キサンチン誘導体、α−アドレナリン受容体アゴニスト、マスト細胞安定剤、去痰薬ならびにＮＫ１、ＮＫ２およびＮＫ３タキキニン受容体アンタゴニストからなる群から選択される、咳、アレルギーまたは喘息症候を処置するための一つまたは複数のさらなる作用物質を含み得る。
なおも別の実施形態は、ＴＲＰＡ１媒介性の電流を１マイクロモル濃度またはそれ未満のＩＣ５０で阻害する作用物質を含む、肺送達または経鼻送達のためのエアロゾル薬学的組成物を含む定量エアロゾルディスペンサーである。例えば、それは、定量吸入器、乾燥粉末吸入器またはエアジェット噴霧器であり得る。
投与量
本発明の薬学的組成物における活性成分の実際の投薬量レベルは、特定の患者、組成物および投与様式に対して、その患者にとって毒性でなく、所望の治療反応を達成するのに有効な活性成分の量が得られるように変動し得る。
選択される投与量レベルは、使用される本明細書中に開示される特定の化合物、またはそのエステル、塩もしくはアミドの活性、投与経路、投与時間、使用される特定の化合物の排泄速度、処置の期間、使用される特定の化合物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物および／または材料、処置される患者の年齢、性別、体重、症状、全般的な健康状態および以前の病歴、ならびに医学分野における周知の同様の因子をはじめとした種々の因子に依存し得る。
当該分野における通常の技能を有する医師または獣医師は、必要とされる薬学的組成物の有効量を容易に決定し、処方することができる。例えば、その医師または獣医師は、薬学的組成物において使用される本発明の化合物の用量を、所望の治療効果を達成するために必要とされるレベルよりも低いレベルで開始し、所望の効果が達成されるまでその投与量を徐々に増加させ得る。
通常、本発明の化合物の好適な１日量は、治療効果をもたらすのに有効な最も低い用量である、その化合物の量であり得る。そのような有効量は、一般に、上に記載された因子に依存し得る。通常、被験体に対する本明細書中に記載される化合物の静脈内、脳室内、鞘内および皮下の用量は、約０．０００１〜約１００ｍｇ／キログラム体重／日の範囲であり得る。例えば、その用量は、１〜５０、１〜２５または５〜１０ｍｇ／ｋｇであり得る。通常、被験体に対する本明細書中に記載される化合物の経口量は、約１〜約１，０００ｍｇ／日（例えば、約５〜約５００ｍｇ／日の範囲であり得る。
所望であれば、活性な化合物の有効な１日量は、その日のうちに適切な間隔で、必要に応じて単位剤形で、別々に投与される２、３、４、５、６またはそれを越える分割量で投与されてもよい。
処置方法
本明細書中に記載される化合物は、本明細書中に記載される障害を処置するためまたは予防するために使用され得る。例えば、ＴＲＰＡ１阻害活性を有する化合物が、ＴＲＰＡ１に関連する疾患または症状の症候を予防、処置または軽減するために本明細書中で提供される。式（Ｉ）の化合物または一つもしくはそれを超える式（Ｉ）の化合物を含む薬学的組成物は、本明細書中に記載される障害、症状または疾患、例えば、ＴＲＰＡ１の阻害によって処置可能なものを処置するために投与され得る。例えば、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を含む薬学的組成物は、周術期の鎮痛薬として、例えば、経度から中程度の急性術後痛の管理および中程度から重度の急性疼痛の管理においてオピオイド鎮痛薬の補助剤として、有用である。治療有効量の式（Ｉ）の化合物を含む薬学的組成物は、式（Ｉ）の化合物を含む薬学的組成物の１回またはそれを超える個別投与を含む臨床的に安全かつ有効な様式で、疼痛の処置のために患者に投与され得る。さらなる例示的な方法としては、末梢糖尿病性ニューロパシー（ＰＤＮ）および化学療法誘発性末梢神経障害（ＣＩＰＮ）の処置が挙げられる。例えば、治療的に有効な用量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を含む薬学的組成物は、被験体における疼痛を処置するために、１日またはそれを超える日数の処置期間にわたって１日あたり複数回（例えば、ＢＩＤ）、それを必要とする被験体に投与され得る（例えば、静脈内）。式（Ｉ）の化合物を含む薬学的組成物は、肺の症状、例えば、閉塞性疾患、例えば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息（例えば、寒冷誘発性喘息、運動誘発性喘息、アレルギー誘発性喘息および職業性喘息）および咳を処置するためまたは回復させるためにも使用され得る。
ＴＲＰＡ１受容体の媒介に関係する疾患の処置の当業者は、本明細書中以後に提示される試験の結果から式（Ｉ）の化合物の治療有効量を決定することができる。通常、本発明の化合物の好適な１日量は、治療効果をもたらすことができる最も低い用量である、化合物の量であり得る。そのような有効量は、一般に様々な因子に依存し得る。一般に、患者に対する本発明の化合物の経口、舌下、直腸、静脈内、局所的、経皮的、吸入および脳室内の用量は、約０．０００１〜約１００ｍｇ／キログラム体重／日の範囲であり得る。例えば、その用量は、１〜５０、１〜２５または５〜１０ｍｇ／ｋｇであり得る。例えば、治療的に有効な用量は、処置される患者の体重１ｋｇあたり、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇであり得ることが企図される。その日のうちに適切な間隔で２またはそれを超える分割用量で治療的に有効な用量を投与することが適切であることがある。前記分割用量は、単位剤形として、例えば、その各々が、単位剤形一つあたり約０．１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、より詳細には、約１〜約５００ｍｇの活性成分を含む単位剤形として、製剤化され得る。
正確な投与量および投与頻度は、当業者に周知であるように、使用される特定の式（Ｉ）の化合物、処置される特定の症状、処置される症状の重症度、特定の患者の年齢、体重および全般的な身体的症状、ならびにその患者が摂取している可能性がある他の薬物適用に依存する。さらに、前記「治療有効量」は、処置される患者の応答および／または本発明の化合物を処方している医師の評価に応じて、減少し得るかまたは増加し得る。ゆえに、本明細書中の上で述べた有効な１日量の範囲は、単なるガイドラインである。当該分野における通常の技能を有する医師または獣医師は、必要とされる薬学的組成物の有効量を容易に決定し、処方することができる。
本明細書中に記載される化合物または組成物での処置に適した例示的な障害を下記に提供する。
疼痛
ＴＲＰＡ１の調節において有用な式（Ｉ）の化合物は、哺乳動物、特に、ヒトにおける疼痛の処置および／または予防に適した鎮痛医薬品の製剤化において使用され得る。ＴＲＰＡ１の内因性の活性化物質は、組織損傷、炎症および代謝ストレスをはじめとした多くの病理学的な症状において産生される。本発明の化合物および薬学的組成物は、神経因性疼痛を含むＴＲＰＡ１の活性化に起因する疼痛を処置するために投与され得る。関連性のある神経因性疼痛の症状としては、有痛性糖尿病性ニューロパシー、化学療法誘発性末梢神経障害、腰痛、三叉神経痛、帯状疱疹後神経痛、坐骨神経痛および複合性局所性疼痛症候群が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書中に提供される組成物および方法は、炎症および炎症性疼痛の処置の処置に関連して使用され得る。そのような障害としては、関節リウマチ、変形性関節症、顎関節症が挙げられる。いくつかの実施形態において、本明細書中に提供される組成物および方法は、頭痛、例えば、片頭痛を処置するために使用され得る。
開示される化合物は、内臓痛および炎症の処置においても有用であり得る。関連性のある疾患としては、膵炎、炎症性腸疾患、大腸炎、クローン病、子宮内膜症、骨盤痛およびアンギナが挙げられる。
本明細書中に開示される化合物が使用され得るさらなる例示的な疼痛適応症としては、顎関節症、癌性疼痛（基礎疾患または処置のいずれかに起因するもの）、火傷痛、口腔内痛、癌の処置に起因する口腔内痛、挫滅および損傷誘発性疼痛、切開痛、骨痛、鎌状赤血球症痛、線維筋痛症ならびに筋骨格痛が挙げられる。ＴＲＰＡ１は、癌関連疼痛（例えば、Ｔｒｅｖｉｓａｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ（２０１３）７３（１０）：３１２０−３１３１を参照のこと）；術後痛（例えば、Ｗｅｉら、Ａｎａｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ（２０１２）１１７：１３７−１４８を参照のこと）；病理学的疼痛（例えば、Ｃｈｅｎら、Ｐａｉｎ（２０１１）１５２：２５４９−２５５６を参照のこと）；および化学的損傷に関連する疼痛（例えば、Ｍａｃｐｈｅｒｓｏｎら、Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ（２００７）２７（４２）：１１４１２−１１４１５を参照のこと）に関与すると示された。
痛覚過敏（例えば、機械的痛覚過敏（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｈｙｐｅｒａｌｅｇｓｉａ）、冷痛覚過敏（ｃｏｌｄ ｈｙｐｅｒａｌｅｇｓｉａ））または疼痛に対する高感度（例えば、急性、慢性）。多種化学物質過敏症は、呼吸器の症候および頭痛を含む多臓器の症候を伴う、化学物質への曝露に関係する障害である。
異痛症（例えば、皮膚異痛症、例えば、頭部、頭部外）は、正常には疼痛を誘発しない刺激、例えば、温度刺激または物理的刺激に起因する疼痛であり、通常の有痛性の刺激に対する極端な過度の反応のことを一般に指す痛覚過敏とは異なる。
片頭痛
ＴＲＰＡ１の調節において有用な式（Ｉ）の化合物は、哺乳動物、特に、ヒトにおける片頭痛の処置および／または予防に適した医薬品の製剤化において使用され得る。ＴＲＰＡ１活性化物質への曝露は、感受性集団において片頭痛の引き金を引くと示された。そのような活性化物質としては、ウンベルロン、ニトログリセリン、たばこの煙およびホルムアルデヒドが挙げられるが、これらに限定されない。したがって、本発明のＴＲＰＡ１アンタゴニストは、慢性と急性の両方の片頭痛の処置に対して著しい潜在的資質のある治療薬である。
炎症性疾患および炎症性障害
本明細書中に提供される組成物および方法はまた、炎症性疾患の処置に関連して使用され得る。これらの疾患としては、喘息、慢性閉塞性肺疾患、関節リウマチ、変形性関節症、炎症性腸疾患、糸球体腎炎、多発性硬化症などの神経炎症性疾患、および免疫系の障害が挙げられるが、これらに限定されない。ＴＲＰＡ１は、膵臓痛および膵臓の炎症に関与すると示された（例えば、Ｓｃｈｗａｒｔｚら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ（２０１１）１４０（４）：１２８３−１２９１を参照のこと）。
末梢神経障害、例えば、糖尿病性ニューロパシー（例えば、有痛性糖尿病性ニューロパシー）は、ニューロンの構成要素と炎症の構成要素の両方が関わる特定の症状である。機構的な理論に拘束されるものではないが、本発明のＴＲＰＡ１アンタゴニストは、糖尿病性ニューロパシーを含むがこれに限定されない末梢神経障害の処置において有用であり得る。末梢神経障害の処置（例えば、炎症の減少）における使用に加えて、主題の阻害剤は、末梢神経障害に関連する疼痛の減少においても有用であり得る。ＴＲＰＡ１は、ニューロパシーおよび神経因性疼痛に関与すると示された（例えば、Ｗｅｉら、Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ（２００９）１１１：１４７−５４；Ｋｏｉｖｉｓｔｏら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｓ（２０１１）６５：１４９−１５８を参照のこと）。
神経原性炎症は、ニューロンの過剰興奮性によって、炎症の引き金を引くペプチドが放出されたとき、生じることが多い。これらのペプチドには、サブスタンスＰおよびＣＧＲＰが含まれる。
ＴＲＰＡ１を阻止すると、ニューロンの活動が低下し得、ゆえに神経原性炎症が阻止され得る。例えば、気道における神経原性炎症は、喘息およびアレルギー性鼻炎の症候をもたらし得、また、硬膜における神経原性炎症は、片頭痛を媒介し得る。
膵炎
膵炎は、膵臓の炎症である。膵臓は、胃の後ろにあり、十二指腸に近接した大きな腺である。正常には、消化酵素は、小腸に到達するまで活性にならず、小腸において食物の消化を開始する。しかし、これらの酵素が、膵臓の内側で活性になる場合、膵臓自体の「消化」を開始する。ＴＲＰＡ１は、膵臓痛および膵臓の炎症に関与すると示された（例えば、Ｓｃｈｗａｒｔｚら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ（２０１１）１４０（４）：１２８３−１２９１を参照のこと）。
急性膵炎は、通常、以下に限らないが、胆石またはアルコール乱用が原因である。急性膵炎は、通常、数日間継続し得る上腹部の疼痛から始まる。その疼痛は、重度であることがあり、絶えず続くことがある。その疼痛は、腹部に孤立することもあるし、背部および他の領域に到達することもある。時折、一部の患者では、その疼痛は、突発性であり、激烈である。他の場合、または他の患者では、その疼痛は、食後に悪化する軽度の疼痛として始まる。急性膵炎を有する人は、重症に見えることが多く、非常に体調が悪いことが多い。他の症候としては、腹部の膨張および圧痛、悪心、嘔吐、発熱ならびに頻脈が挙げられ得る。急性膵炎の重度の症例は、脱水および低血圧を引き起こすことがあり、臓器不全、内出血または死亡にすら至ることがある。
急性膵炎の発作において、アミラーゼおよびリパーゼの血中濃度は、少なくとも３倍上昇することが多い。グルコース、カルシウム、マグネシウム、ナトリウム、カリウムおよび重炭酸塩の血中濃度も変化することがある。
現行の処置は、その発作の重症度に依存する。処置は、一般に、生命維持に必要な身体の機能を補助するように、疼痛を管理するように、および合併症を予防するようにデザインされる。通常数日間で回復する急性膵炎であっても、発作中の疼痛管理が必要になることが多い。本明細書中に開示される化合物は、急性膵炎に関連する疼痛を緩和するために使用され得る。
慢性膵炎は、膵臓に対する損傷が続く場合に発症し得る。消化酵素が膵臓および近くの組織を攻撃し、破壊すると、慢性膵炎が生じて、瘢痕および疼痛を引き起こす。慢性膵炎は、アルコール依存症、または膵管が封鎖されるか、損傷をうけるかもしくは狭くなることによって引き起こされ得る。さらに、遺伝的因子がこの疾患に影響するとみられ、ある特定の症例では、特定できる原因がない（いわゆる特発性膵炎）。
慢性膵炎を有するほとんどの人が、腹痛を有する。その疼痛は、飲食すると悪化することがあるか、背部にまで広がることがあるか、または絶えず続いて何もできない状態になることがある。他の症候としては、悪心、嘔吐、体重減少および脂肪便が挙げられる。
疼痛の緩和は、慢性膵炎の処置の第一段階である。いったんその疼痛が管理されると、高炭水化物および低脂肪の食事計画が導入される。損傷した膵臓からの酵素産生の減少を補うことを助けるために、膵酵素が使用され得る。時折、血糖を制御するために、インスリンまたは他の薬物が必要とされる。
疼痛は、通常、薬物治療を用いて管理されるが、疼痛を緩和するために手術が必要になることもある。手術は、拡大した膵管から排出するためまたはひどく損傷した膵臓の部分を１０除去するために必要であり得る。
疼痛は、慢性膵炎とともに現れることが多い。例えば、疼痛は、アルコール性慢性膵炎を有する患者のおよそ７５％、遅発性特発性慢性膵炎を有する患者の５０％および早発性特発性慢性膵炎を有する患者の１００％に存在する（ＤｉＭａｇｎｏ，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ（１９９９）１１６（５）：１２５２−１２５７）。
疼痛を有する少数の患者が、外科的または内視鏡的な処置が比較的容易である、容易に特定可能な病変を有する。他の患者では、疼痛は、種々の原因に起因すると考えられることが多く、その原因としては、膵臓内の圧力の上昇、虚血および線維症が挙げられる。しかしながら、理論に拘束されるものではないが、これらの現象は、その疼痛の根本原因でない可能性がある。むしろ、疼痛は、神経周膜への損傷およびその後の炎症のメディエーターおよび産物に対する神経の曝露によって誘導されるニューロンの感作の背景に起因し得る。
慢性膵炎を有する患者における有効な疼痛管理の重要性を考えると、有痛性の症候を処置するためのさらなる治療が重要かつ有用である。本明細書中に開示される化合物は、慢性膵炎に関連する疼痛を管理するために使用され得；それらは、慢性膵炎を有する患者を管理するために、単独でまたは治療的な処置の計画全体の一部として使用され得る。例えば、それらの化合物は、慢性膵炎を有する患者を管理するようにデザインされた治療レジメンの一部として、膵酵素および／またはインスリンとともに投与され得る。
癌の処置は、有痛性であるだけでなく、健康な組織にさえも有毒であり得る。いくつかの化学療法剤は、有痛性ニューロパシーを引き起こし得る。したがって、本明細書中に開示される化合物は、ニューロパシーを引き起こす癌の処置に関連する疼痛および／または炎症の処置に対して著しい潜在的資質のある治療薬であり得る。
プロスタグランジンの主な機能は、胃粘膜を保護することである。細胞増殖において重大な役割を果たす、ヒトの胃細胞における細胞内のカルシウムレベルの調節が、この機能に含められる。その結果として、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）によるプロスタグランジンの阻害は、胃細胞におけるカルシウム流入を阻害し得る（Ｋｏｋｏｓｋａら（１９９８）Ｓｕｒｇｅｒｙ（Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ）１２４（２）：４２９−４３７）。炎症を最も効果的に緩和するＮＳＡＩＤは、最も大きな胃腸損傷ももたらす（Ｃａｎａｄｉａｎ Ｆａｍｉｌｙ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ，５ Ｊａｎｕａｒｙ １９９８，ｐ．１０１）。したがって、特定の細胞型においてカルシウムチャネルを独立して調節する能力は、抗炎症治療のそのような副作用を軽減することを助け得る。さらにまたはあるいは、本明細書中に開示されるＴＲＰＡ１阻害性化合物の投与は、ＮＳＡＩＤと組み合わせて使用されてもよく、ゆえに、低投与量のＮＳＡＩＤを用いた疼痛緩和が促進される。
ＴＲＰＡ１は、慢性膵炎における継続中の侵害受容を媒介し得；膵炎における急性から慢性の炎症および痛覚過敏への変換に関わり得る。ＴＲＰＡ１は、例えば、鼻および口の粘膜ならびに呼吸器の裏打ちにおける、刺激作用および灼熱感も媒介し得る。
ニューロパシー
ＴＲＰＡ１の過活性は、有毒なカルシウム過負荷に至り得るので、ＴＲＰＡ１アンタゴニストは、糖尿病、化学的損傷、化学療法、スタチンなどの薬、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、ファブリー病、ビタミン欠乏症、シャルコー・マリー・トゥース病（Ｍａｒｉｅ−Ｃｈａｒｃｏｔ Ｔｏｏｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ）などの遺伝性多発ニューロパシー、および外傷に関連するニューロパシーの予防においても有用性を有する。筋萎縮性側索硬化症などの末梢神経変性疾患もまた、ＴＲＰＡ１アンタゴニストによる処置に適用できることがある。
肺疾患および咳
本明細書中に提供される組成物および方法は、肺疾患の処置にも関連して使用され得、その肺疾患としては、喘息（運動誘発性喘息、アトピー性喘息、アレルギー性喘息を含む）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気腫、嚢胞性線維症、気管支拡張症、細気管支炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、閉塞性細気管支炎（ポップコーン肺（ｐｏｐｃｏｒｎ ｗｏｒｋｅｒ ｌｕｎｇ））、ジアセチル、ホルムアルデヒドおよび他の刺激物質への曝露を含む化学物質への曝露に起因する疾患が挙げられるが、これらに限定されない。これらの症状には、結核、拘束性肺疾患（石綿沈着症、放射線線維症、過敏性肺臓炎、乳児呼吸窮迫症候群、特発性肺線維症、特発性間質性（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｉｎｔｅｒｓｔｉａｌ）肺炎、サルコイドーシス、好酸球性肺炎、リンパ管平滑筋肉腫症、肺ランゲルハンス細胞組織球増殖症および肺胞タンパク症を含む）；気道感染症（上気道感染症（例えば、感冒、静脈洞炎、扁桃炎、咽頭炎および喉頭炎）および下気道感染症（例えば、肺炎）を含む）；悪性（例えば、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、腺癌、扁平上皮癌、大細胞未分化癌腫、カルチノイド、中皮腫、肺の転移性がん、転移性生殖細胞がん、転移性腎細胞癌）であるか良性（例えば、肺過誤腫、先天性奇形、例えば、肺分画症および肺先天性嚢胞性腺腫様奇形（ＣＣＡＭ））であるかを問わず、呼吸器腫瘍；胸膜腔疾患（例えば、蓄膿および中皮腫）；ならびに肺血管疾患、例えば、肺塞栓、例えば、血栓塞栓症および空気塞栓症（医原性）、肺動脈高血圧症、肺水腫、肺出血、肺胞への血液漏出をもたらす肺の毛細血管に対する炎症および損傷も含まれる。処置され得る他の症状としては、呼吸機構に影響する障害（例えば、閉塞性睡眠時無呼吸、中枢性睡眠時無呼吸、ギラン・バレー（Ｇｕｉｌｌａｎ−Ｂａｒｒｅ）症候群および重症筋無力症）が挙げられる。
本化合物は、咳（痰の産生を伴うかまたは伴わない）、喘息に関連する咳、インフルエンザに関連する咳、咳血（ｃｏｕｇｈｉｎｇ ｂｌｏｏｄ）（喀血）、病因不明の咳、アレルギー誘発性咳および化学物質への曝露に起因する咳を処置するため、減少させるためまたは予防するためにも有用であり得る。
皮膚科障害
かゆみを引き起こすいくつかの作用物質は、ＴＲＰＡ１を直接活性化するか、またはＴＲＰＡ１の下流に結合する受容体の活性化を介して活性化する。本明細書中に提供される組成物および方法は、かゆみの処置に関連しても使用され得る。適応症としては、外来性の化学物質への曝露によって引き金が引かれる症状、例えば、接触皮膚炎、ウルシ皮膚炎、リンパ腫を含む癌に起因するかゆみ、クロロキンなどの薬剤によって引き起こされるかゆみ、反応性の薬物代謝産物に起因するかゆみまたは皮膚乾燥に起因するかゆみが挙げられるが、これらに限定されない。
さらなる例示的な適応症としては、アトピー性皮膚炎、乾癬、蕁麻疹、湿疹、異汗性湿疹、口腔内潰瘍、おむつかぶれが挙げられる。
かゆみ
かゆみ、すなわち急性そう痒は、例えば、環境中の有害物質に対する警告によって、重要な防御機能を発揮するが、例えば、数多くの皮膚障害、全身性障害および神経系障害を併発する消耗性の症状でもあり得る。かゆみのいくつかの形態は、それらが、例えば抗ヒスタミン剤による処置に感受性であるとき、ヒスタミンシグナル伝達によって媒介される。しかしながら、ほとんどの病態生理学的なかゆみの症状は、抗ヒスタミン剤処置に対して非感受性である。本発明の化合物および薬学的組成物は、かゆみを処置するために投与され得る。
アトピー性皮膚炎（ＡＤ）は、皮膚の慢性のかゆみおよび炎症性障害である。重度のＡＤを有する患者は、アトピーマーチとしても知られる、喘息およびアレルギー性鼻炎を発症し得る。発疹およびそう痒症は、アトピー性疾患に関連し得る。例えば、ＡＤおよび乾癬における、慢性のかゆみには；粗暴なひっかき行動などの病態生理学的特徴、例えば湿疹に由来する広範な上皮性過形成、腎不全、肝硬変、神経系障害、一部の癌が含まれる。
アレルギー性接触皮膚炎は、炎症および持続性のそう痒症に付随する一般的な皮膚疾患である。
本明細書中に開示されるような方法は、皮膚浮腫、ケラチノサイト過形成、神経成長、白血球浸潤および抗ヒスタミン剤抵抗性のひっかき行動を阻害し得る。本明細書中に開示されるような方法は、例えば、外来性の刺激物、例えば、ハプテン、オキサゾロン、ウルシオール（例えば、ツタウルシ由来）に対するアレルギー反応を阻害し得る。
疾患モデルおよび損傷モデル
ＴＲＰＡ１機能に拮抗する化合物は、前述の損傷、疾患、障害または症状のいずれかの予防および処置において有用であり得る。それらの有効性は、これらの化合物の活性のインビトロアッセイに加えて、一つまたは複数の動物モデルにおいて容易に試験され得る。疼痛を調べるための動物モデルが数多く存在する。様々なモデルが、損傷、疾患または他の症状に起因する疼痛を刺激するために様々な作用物質または手順を用いる（例えば、Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ−Ｍｕｎｒｏ（２００４）Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｓｃｉ（２００４）２５：２９９−３０５（例えば、表１、３または４）を参照のこと）。次いで、チャレンジされた動物の行動特性が観察され得る。それらの動物において疼痛を減少させ得る化合物または手順は、試験化合物または手順の非存在下のチャレンジされた動物の行動特性とそれらの存在下のチャレンジされた動物の行動特性とを比較して観察することによって、容易に試験され得る。
慢性疼痛を調べるために用いられる例示的な行動試験としては、自発痛、異痛症および痛覚過敏の試験が挙げられる。同書。自発痛を評価するために、姿勢、歩行、侵害防御機構の徴候（例えば、足を舐めること、過剰なグルーミング、過剰な探索行動、損傷した身体部分の防御および自傷）が観察され得る。誘発された疼痛を計測するために、熱への曝露後の行動反応が調べられ得る（例えば、熱傷モデル）。
疼痛の例示的な動物モデルとしては、Ｔｒｅｖｉｓａｎモデルに記載されているモデル、ならびにストレプトゾトシン誘発有痛性糖尿病性ニューロパシー、ボルテゾミブ（ｂｏｒｔｅｘｏｍｉｂ）誘発末梢神経障害およびオキサリプラチン誘発末梢神経障害を含むＫｏｉｖｉｓｔｏの参考文献；Ｃｈｕｎｇモデル、部分神経損傷（ｓｐａｒｅｄ ｎｅｒｖｅ ｉｎｊｕｒｙ）モデル、カラギナン（ｃａｒａｇｅｅｎａｎ）誘発痛覚過敏モデル、フロイント完全アジュバント誘発痛覚過敏モデル、熱傷モデル、ホルマリンモデルおよびＢｅｎｎｅｔｔモデルが挙げられるが、これらに限定されない。
Ｔｒｅｖｉｓａｎの参考文献では、化学療法誘発性末梢神経障害モデルは、ボルテゾミブまたはオキサリプラチンでの処置によるマウスにおけるＣＩＰＮ表現型の（ｉｆ）誘導を含む（Ｔｒｅｖｉｓａｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ（２０１３）７３：３１２０−３１３１）。ＴＲＰＡ１の阻害剤による動物の処置は、種々の侵害受容性試験のいずれか、例えば、フォンフレイヘア（Ｖｏｎ Ｆｒｅｙ ｈａｉｒ）試験、ホットプレート試験、寒冷刺激、化学的痛覚過敏またはロータロッド試験を用いて評価され得る。
Ｋｏｉｖｉｓｔｏの参考文献における末梢糖尿病性ニューロパシー（ＰＤＮ）のモデルは、ストレプトゾトシンを用いてラットにおいて真性糖尿病（ＤＭ）を誘導すること、およびＴＲＰＡ１アゴニストの足底内注射によって誘導される軸索反射を評価することを含む（Ｋｏｉｖｉｓｔｏら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｓ（２０１１）６５：１４９−１５８）。ＴＲＰＡ１を阻害する化合物による処置は、皮膚軸索反射のＤＭ誘発性減弱の低減について評価され得る。
神経因性疼痛のＣｈｕｎｇモデル（炎症なし）は、一つまたは複数の脊髄神経の結紮を含む（例えば、Ｃｈｕｎｇら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｍｅｄ（２００４）９９：３５−４５；Ｋｉｍ ａｎｄ Ｃｈｕｎｇ，Ｐａｉｎ（１９９２）５０：３５５−３６３を参照のこと）。脊髄神経の結紮は、熱痛覚過敏、冷感異痛および継続した疼痛をはじめとした種々の行動変化を動物にもたらす。結紮された動物に、ＴＲＰＡ１に拮抗する化合物を投与することにより、それらの化合物がこれらの結紮誘導性の行動変化を減少させるかをそれらの化合物の非存在下において観察されるものと比較して評価することができる。
カラギナン誘発痛覚過敏およびフロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）誘発痛覚過敏は、炎症性疼痛のモデルである（例えば、Ｗａｌｋｅｒら、Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ（２００３）３０４：５６−６２；ＭｃＧａｒａｕｇｈｔｙら、Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ（２００３）１４０：１３８１−１３８８；Ｈｏｎｏｒｅら、Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ（２００５）３１４：４１０−４２１を参照のこと）。カラギナンまたはＣＦＡをチャレンジされた動物に、ＴＲＰＡ１に拮抗する化合物を投与することにより、それらの化合物が寒冷過敏症、機械的過敏症または熱過敏症を減少させるかをそれらの化合物の非存在下において観察されるものと比較して評価することができる。さらに、ＴＲＰＡ１機能に拮抗する化合物が寒冷過敏症および／または機械的過敏症を減少させる能力もまた、これらのモデルにおいて評価され得る。代表的には、カラギナン誘発痛覚過敏モデルは、急性炎症性疼痛を模倣すると考えられており、ＣＦＡモデルは、慢性疼痛および慢性炎症性疼痛を模倣すると考えられている。
炎症性疼痛の例示的なモデルとしては、足底内ブラジキニン注射のラットモデルが挙げられる。簡潔には、動物のベースラインの熱感度を、ハーグリーブス装置において評価する。次いで、ＴＲＰＡ１遮断剤を全身投与する。続いて、ブラジキニンを足に注射し、痛覚過敏を発症させる。次いで、次の数時間にわたって複数の時点において、熱逃避潜時を計測する（Ｃｈｕａｎｇら、２００１；Ｖａｌｅら、２００４）。
炎症は、疼痛に対する重要な要因であることが多い。したがって、抗炎症薬として作用する化合物を特定することが有用である。神経活動を低下させる多くの化合物は、神経原性炎症も妨げる。炎症を直接計測するために、ラットの足の体積を、足容積測定装置を用いて評価し得る。ベースラインの測定値を得た後、カラギナンをその足に注射し得、ビヒクルまたは薬物で処置された動物における体積を数時間にわたってモニターし得る。足の腫脹を減少させる薬物は、抗炎症性であると考えられる。
片頭痛は、著しい疼痛および正常なタスクを完了できないことを伴う。片頭痛のモデルがいくつか存在し、それらのモデルには、ラット神経原性炎症モデル（例えば、Ｂｕｚｚｉら、Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ（１９９０）９９：２０２−２０６を参照のこと）およびＢｕｒｓｔｅｉｎモデル（例えば、Ｓｔｒａｓｓｍａｎら、Ｎａｔｕｒｅ（１９９６）３８４：５６０−５６４を参照のこと）が含まれる。
Ｂｅｎｎｅｔｔモデルは、慢性疼痛を再現するために長期の足の虚血を用いる（例えば、Ｘａｎｔｈｏｓら、Ｊ Ｐａｉｎ（２００４）５：Ｓ１を参照のこと）。これにより、術後痛を含む慢性疼痛、複合性局所性疼痛症候群および反射性交感神経性ジストロフィーに対する動物モデルが提供される。長期の虚血は、動物の行動変化を誘導し、その行動変化としては、機械的刺激に対する痛覚過敏、寒冷に対する感度、疼痛行動（例えば、足を振り動かすこと、舐めることおよび／またはかばうこと）および痛感過敏が挙げられる。チャレンジされた動物に、ＴＲＰＡ１に拮抗する化合物を投与することにより、それらの化合物が、これらの行動のいずれかまたはすべてを減少させるかをそれらの化合物の非存在下において観察されたときと比較して評価することができる。同様の実験が、術後痛を模倣するために使用され得る熱傷モデルまたはＵＶ熱傷モデルにおいて行われ得る。
神経因性疼痛のさらなるモデルとしては、脊髄損傷に基づく中枢性疼痛モデルが挙げられる。慢性疼痛は、脊髄損傷を誘導することによって、例えば、外科的に露出させた脊髄の領域におもりを落とすことによって（例えば、落錘モデル）、生じさせる。脊髄損傷はさらに、脊髄を挫滅するかもしくは圧迫することによって、神経毒を送達することによって、光化学物質を用いて、または脊髄を半側切除することによって、誘導され得る。
神経因性疼痛のさらなるモデルとしては、末梢神経損傷モデルが挙げられる。例示的なモデルとしては、神経腫モデル、Ｂｅｎｎｅｔｔモデル、Ｓｅｌｔｚｅｒモデル、Ｃｈｕｎｇモデル（Ｌ５またはＬ５／Ｌ６のいずれかにおける結紮）、坐骨神経凍結剥離術（ｓｃｉａｔｉｃ ｃｒｙｏｎｅｕｒｏｌｙｓｉｓ）モデル、下尾幹（ｉｎｆｅｒｉｏｒ ｃａｕｄａｌ ｔｒｕｎｋ）切除モデルおよび坐骨の炎症性神経炎モデルが挙げられるが、これらに限定されない。同書。
特定の疾患に関連する神経因性疼痛の例示的なモデルもまた利用可能である。糖尿病および帯状疱疹は、神経因性疼痛を伴うことが多い二つの疾患である。急性帯状疱疹エピソードの後でさえ、一部の患者は、帯状疱疹後神経痛に苦しみ続け、数年間続く持続痛を経験し続ける。帯状疱疹によって引き起こされる神経因性疼痛および／または帯状疱疹後神経痛は、帯状疱疹後神経痛モデル（ＰＨＮ）において調べられ得る。糖尿病性ニューロパシーは、糖尿病マウスモデル、ならびに化学的に誘導される糖尿病性ニューロパシーのモデルにおいて調べられ得る。
上で概要を述べたように、癌性疼痛は、任意のいくつかの原因を有することがあり、例えば、化学療法剤または腫瘍浸潤に関係する癌性疼痛を調べるための動物モデルが数多く存在する。トキシン関連癌性疼痛の例示的なモデルとしては、ビンクリスチン誘発末梢神経障害モデル、タキソール誘発末梢神経障害モデルおよびシスプラチン誘発末梢神経障害モデルが挙げられる。腫瘍浸潤によって引き起こされる癌性疼痛の例示的なモデルは、癌浸潤疼痛モデル（ＣＩＰ）である。同書。
原発性および転移性の骨癌は、甚だしい疼痛を伴う。骨癌疼痛のモデルがいくつか存在し、それらのモデルには、マウス大腿骨癌疼痛モデル（ＦＢＣ）、マウス踵骨癌疼痛モデル（ＣＢＣ）およびラット脛骨骨癌モデル（ＴＢＣ）が含まれる。同書。
疼痛のさらなるモデルは、ホルマリンモデルである。カラギナンモデルおよびＣＦＡモデルと同様に、ホルマリンモデルは、刺激物質を動物の皮内または腹腔内に注射することを含む。ホルムアルデヒドの３７パーセント溶液であるホルマリンの注射が、足の皮内注射に対して最もよく使用される作用物質である（ホルマリン試験）。０．５〜１５パーセントのホルマリン溶液（通常、約３．５％）を前足または後足の背側または足底の表面に注射することにより、注射後約６０分間にわたって強度が上昇して低下する二相性の有痛反応がもたらされる。代表的な反応としては、足を上げること、なめること、かじることまたは振り動かすことが挙げられる。これらの反応は、侵害受容性であると考えられる。その反応の初期段階（初期相としても知られる）は、３〜５分間続き、おそらく、侵害受容器の直接的な化学的刺激に起因する。この後に、動物が侵害受容を示唆する行動をほとんど示さない１０〜１５分間が続く。この反応の第２段階（後期相としても知られる）は、ホルマリン注射の約１５〜２０分後に始まり、２０〜４０分続き、はじめに侵害受容行動の数と頻度の両方が増加し、ピークに達し、次いで、減少する。これらの侵害受容行動の強度は、使用されたホルマリンの濃度に依存する。第２段階は、炎症現象が起きている感作の期間を含む。ホルマリン注射に対する二つの反応相は、ホルマリンモデルを、侵害受容性かつ急性炎症性の疼痛を調べるための適切なモデルにする。それは、いくつかの点において、神経因性疼痛もモデル化し得る。
ＴＲＰＡ１機能に拮抗する化合物は、慢性疼痛の前述のモデルのいずれかに加えて、急性疼痛の一つまたは複数のモデルにおいて試験され得る（例えば、Ｖａｌｅｎｚａｎｏら（２００５）Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ４８：６５８−６７２を参照のこと）。化合物が、慢性疼痛のモデルにおいて試験されるのか、急性疼痛のモデルにおいて試験されるのか、またはその両方において試験されるのかに関係なく、これらの研究は、通常、例えば、マウス、ラットまたはモルモットにおいて実施される（がこれらに限られない）。さらに、化合物は、疼痛のインビトロアッセイを提供する様々な細胞株においても試験され得る。
疼痛に対する処置を求めている多くの個体は、内臓痛に苦しんでいる。内臓痛の動物モデルとしては、炎症性子宮痛のラットモデル（例えば、Ｗｅｓｓｅｌｍａｎｎら、Ｐａｉｎ（１９９７）７３：３０９−３１７を参照のこと）、過敏性腸症候群を模倣するための消化管へのカラシ油の注射（例えば、Ｋｉｍｂａｌｌら（２００５）Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ Ｌｉｖｅｒ Ｐｈｙｓｉｏｌ，２８８（６）：Ｇ１２６６−７３を参照のこと）、過活動膀胱または膀胱炎を模倣するための膀胱へのカラシ油の注射（例えば、Ｒｉａｚｉｍａｎｄ（２００４），ＢＪＵ Ｉｎｔ ９４：１５８−１６３を参照のこと）が挙げられる。ＴＲＰＡ１化合物の有効性は、苦悶、胃腸の炎症または膀胱の興奮性の減少によって評価され得る。
咳を処置するためのＴＲＰＡ１アンタゴニストの有効性を試験するために、意識下モルモットの咳モデルを用いる実験が、容易に実施され得る（例えば、Ｔａｎａｋａ ａｎｄ Ｍａｒｕｙａｍａ（２００３）Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｓｃｉ ９３：４６５−４７０；ＭｃＬｅｏｄら（２００１）Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １３２：１１７５−１１７８を参照のこと）。簡潔には、モルモットは、マウスおよびラットなどの他のげっ歯類とは異なり、実際に咳をするので、モルモットは、咳に対する有用な動物モデルとして役立つ。さらに、モルモットの咳は、咳をしている動物の姿勢、挙動および外観に関して、ヒトの咳によく似ているとみられる。
咳を誘導するために、意識下のモルモットを、クエン酸またはカプサイシンなどの誘導物質に曝露する。咳の数を数えることによって、その動物の反応を計測する。咳抑制剤、例えば、ＴＲＰＡ１を阻害する化合物の有効性は、その作用物質を投与し、その作用物質が、クエン酸、カプサイシンまたは他の類似の咳誘導物質への曝露によって誘発される咳の数を減少させる能力を評価することによって、計測され得る。このように、咳の処置において使用するためのＴＲＰＡ１阻害剤は、容易に評価され、特定され得る。
さらなる咳モデルには、無意識のモルモットモデルも含まれ得る（例えば、Ｒｏｕｇｅｔら（２００４）Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １４１：１０７７−１０８３を参照のこと）。前述のモデルのいずれかが、咳をすることが可能な他の動物との使用に対して適合され得る。咳をすることが可能な例示的なさらなる動物としては、ネコおよびイヌが挙げられる。
本発明の化合物は、複数の喘息モデルにおいて試験され得る。一つの例は、マウスオバルブミン喘息モデルである（例えば、Ｃａｃｅｒｅｓ ＡＩら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．（２００９）１０６（２２）：９０９９−１０４を参照のこと）。このモデルでは、オバルブミンを２週間にわたって数回、腹膜腔内に注射する。第３週の間のいつかにおいて、動物を鼻腔内オバルブミンでチャレンジし、気道過敏、炎症および炎症性サイトカイン産生を計測し得る。化合物は、このモデルのチャレンジ期の間に投与する。Ｔｒｐａ１ノックアウトマウスは、Ｃａｃｅｒｅｓらによって報告されたような上記モデルに取って代わり得る。
喘息の大型動物モデルの例である、Ａｂｒａｈａｍ，Ｗ．Ｍ．らに記載されているような意識下のアレルギー性ヒツジモデルを用いて、抗原誘発性の後期喘息反応に対する化合物の効果を評価してもよい（Ａｂｒａｈａｍ ＷＭ．，Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ（２０００）１６２（２）：６０３−１１）。簡潔には、ベースラインの気道反応性を、喘息を誘導するためにＡｓｃａｒｉｓ ｓｕｕｍ抽出物を噴霧投与する前の意識下のヒツジにおけるプレチスモグラフによって計測する。ベースラインの記録を記録した後、動物へのＡｓｃａｒｉｓ ｓｕｕｍの噴霧投与によってチャレンジする。抗原感受性を、ベースラインからの肺気流抵抗の減少によって測定する。いったん動物が抗原感受性を示したら、試験化合物が投与され得、気道反応性の変化を評価するために、さらなる肺気流抵抗の記録が記録され得る。ウマおよびビーグル犬のモデルも時折用いられる。
さらなるモデルとしては、Ｒａｅｍｄｏｎｃｋら（Ｒａｅｍｄｏｎｃｋ Ｋら、Ｔｈｏｒａｘ（２０１２）Ｊａｎ；６７（１）：１９−２５）に記載されているような喘息のＢｒｏｗｎ ＮｏｒｗａｙラットモデルおよびＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスモデルが挙げられ得る。簡潔には、Ｂｒｏｗｎ ＮｏｒｗａｙラットおよびＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを感作し得、エアロゾル送達のオバルブミンでチャレンジし得る。全身プレチスモグラフを読むことによって計測される肺機能の低下によって、感受性が確認されたら、本発明の化合物が投与され得る。喘鳴を含む呼吸窮迫の視覚的徴候および可聴の徴候も存在することがある。
皮膚炎
皮膚疾患のマウスモデルが、現在、複数存在する。例えば、Ｌｉｕらは、オキサゾロンおよびウルシオールによって誘発される複数の接触皮膚炎（ｃｏｎｔａｃｔ ｄｅｒｍａｔｉｓ）モデルを報告した（例えば、Ｌｉｕ Ｂら、ＦＡＳＥＢ Ｊ．（２０１３）２７（９）：３５４９−６３を参照のこと）。簡潔には、Ｔｒｐａ１ノックアウトマウスに、オキサゾロンまたはウルシオールの局所投与を行うことにより、皮膚炎およびかゆみの反応を誘導する。耳のパンチを採取し、未処置の耳と比べて、チャレンジされた領域を計測することによって、表皮の厚さも計測され得る。インビボ処置化合物は、オキサゾロン（ｏｚａｚｏｌｏｎｅ）またはウルシオールによる処置の前または後に動物に化合物を投与することによって、測定され得る。ひっかき行動は、観察チャンバーの上に位置するビデオカメラによって記録される。処置群を把握していない観察者が、３０分間にわたって、動物がひっかき行動に費やす時間を記録する。
かゆみを誘発する乾燥皮膚の代替のマウスモデルは、Ｗｉｌｓｏｎらによって報告されたように（Ｗｉｌｓｏｎ ＳＲら、Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ（２０１３）３３（２２）：９２８３−９４）、それらのマウスへのアセトン、エーテルおよび水の投与を含む。このモデルでは、処置される領域を剃毛し、マウスの観察される領域、例えば、頬または尾側の背中にアセトンおよびエーテルの局所投与を１日２回行う。処置化合物のインビボ有効性は、アセトンおよびエーテルの投与の前または後にそれらの動物に化合物を投与することによって、測定され得る。ひっかき行動は、２０分間にわたってカメラによって記録され、処置群を把握していない観察者によって数量化される。
さらに、そう痒症は、かゆみを引き起こす作用物質の直接的な注射によって誘導され得る。これらの作用物質の例は、Ａｋａｙｉｍｏ ａｎｄ Ｃａｒｓｔｅｎｓ，２０１３に見られ得る。いくつかの例は、クロロキン（Ｗｉｌｓｏｎら、２０１１）、胆汁酸、ＴＳＬＰ（Ｗｉｌｓｏｎら、２０１３）およびＩＬ−３１（Ｃｅｖｉｋｂａｓら、２０１４）である。通常、規定の期間におけるひっかき行動の発作は、処置群を把握していない観察者（ｏｂｓｅｒｖｅｄ）によって記録される。
失禁のげっ歯類モデルが数多く存在する。これらには、神経損傷、尿道インピンジメント（ｕｒｅｔｈｒａｌ ｉｍｐｉｎｇｅｍｅｎｔ）および炎症によって誘導される失禁のモデルが含まれる。尿道インピンジメントのモデルとしては、ラット膀胱流出妨害モデル（例えば、Ｐａｎｄｉｔａ，ＲＫ，ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ ＫＥ．Ｊ Ｕｒｏｌ（１９９９）１６２：９４３−９４８を参照のこと）が挙げられる。炎症性モデルには、膀胱へのカラシ油の注射が含まれる。
失禁の処置におけるＴＲＰＡ１阻害剤化合物の有効性を試験するために、様々な濃度の化合物（例えば、低濃度、中濃度および高濃度）が、外科的な部分的な膀胱排出口閉塞（ＢＯＯ）の後のラットに投与され得る。様々な用量のＴＲＰＡ１阻害性化合物の有効性は、賦形剤のみが投与されたコントロール（シャムコントロール）と比較され得る。有効性はさらに、アトロピンなどのポジティブコントロールが投与されたラットと比較され得る。アトロピンは、ＢＯＯモデルにおける部分的な膀胱排出口閉塞の後の膀胱の過活動を減少させると予想される。ＢＯＯモデルにおいて化合物を試験するとき、化合物は、膀胱または尿道に直接投与され得る（例えば、カテーテルによって）か、または化合物は、全身投与され得る（例えば、経口的に、静脈内に（ｉｎｔｒａｖｅｎｅｏｕｓｌｙ）、腹腔内になど）ことに注意されたい。
膵臓（ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｃ）痛のラットモデルがいくつか報告されている（Ｌｕ，２００３，Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ ９８（３）：７３４−７４０；Ｗｉｎｓｔｏｎら（２００３）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｉｎ ４（６）：３２９−３３７）。Ｌｕらは、ラットにおいて二塩化ジブチルスズ（ｄｉｂｕｔｙｌｉｎ ｄｉｃｈｌｏｒｉｄｅ）の全身送達によって膵炎を誘導した。ラットは、７日間の間に、腹部のフォンフレイフィラメント刺激後の引っ込め（ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ）事象の増加および熱刺激後の引っ込め潜時の短縮を示した。これらの動物において誘導された疼痛状態は、脊髄における高レベルのサブスタンスＰも特徴とした（Ｌｕら、２００３）。このモデルにおいてＴＲＰＡ１阻害剤の有効性を試験するために、二塩化ジブチルスズの送達の後またはその送達と同時にＴＲＰＡ１阻害剤が投与され得る。コントロール動物には、キャリアまたは公知の鎮痛剤が投与され得る。疼痛の兆候が計測され得る。ＴＲＰＡ１阻害剤の有効性は、ＴＲＰＡ１阻害剤を投与された動物において観察された疼痛の兆候を、ＴＲＰＡ１阻害剤を投与されなかった動物の疼痛の兆候と比較することによって評価され得る。さらに、ＴＲＰＡ１阻害剤の有効性は、公知の疼痛医薬の有効性と比較され得る。
侵害受容行動を計測する手段としてのフォンフレイフィラメント試験の有効性は、Ｌ−アルギニンの全身投与によって膵炎を誘導することによっても示されたＬ−アルギニンの全身投与によって（Ｗｉｎｓｔｏｎら、２００３）。ＴＲＰＡ１阻害剤の有効性は、Ｌ−アルギニンの全身投与によって誘導される膵炎の後に同様に試験され得る。
Ｌｕらは、覚醒時の自由行動ラットにおける留置カニューレによる膵臓の急性侵害刺激を用いた膵臓痛に対する直接的な行動アッセイも報告した。これらのアッセイは、ブラジキニンの膵臓内注入に応答して、ケージを横断すること、立ち上がること、および後肢を伸長することを含んだ。Ｄ−ＡＰＶ（ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト）またはモルヒネのみの鞘内投与は、このモデルにおいて、内臓痛の行動を部分的に減少させた。両方の組み合わせが、疼痛行動をベースラインにまで減少させた。ＴＲＰＡ１阻害剤の有効性は、この系において同様に試験され得る。
前述の動物モデルのいずれもが、膵炎に関連する疼痛の処置におけるＴＲＰＡ１阻害剤の有効性を評価するために使用され得る。その有効性は、無処置コントロールまたはプラセボコントロールと比較され得る。さらにまたはあるいは、有効性は、一つまたは複数の公知の疼痛緩和医薬と比較して評価され得る。
一般的な手順
すべての反応を、不活性雰囲気下、通常、窒素下において行った。すべての非水性反応を、無水溶媒を用いて行った。すべての反応物を、マグネチックスターバーまたは吊り下げ式機械撹拌のいずれかを用いて撹拌した。すべての飽和抽出溶液を水性であると仮定する（例えば、飽和ＮＨ４Ｃｌ）。すべての乾燥剤が無水である。乾燥剤による有機溶液の乾燥は、その乾燥剤が濾過によってその有機溶液から除去されたこと意味する。クロマトグラフィーは、シリカゲルにおけるカラムクロマトグラフィーのことを指す。分取薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、シリカゲルプレート上で行った。反応混合物の濃縮は、減圧下での濃縮および回転蒸発器の使用を意味する。最終生成物の乾燥は、高真空条件下での乾燥を意味する。超音波処理は、超音波浴の使用を意味する。すべての１Ｈ−ＮＭＲデータを４００ＭＨｚにおいて得た。質量スペクトルは、陽イオンモードで得られ、別段示されない限り、プロトン化種ＭＨ＋として報告される。
省略形
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＩＣ Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ ４−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＥＤＣ １−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
ＥＡ 酢酸エチル
Ｅｔｈｅｒ ジエチルエーテル
ｈ 時間
ＨＯＡｃ 酢酸
ＨＯＡＴ １−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール
ＬＡＨ 水素化アルミニウムリチウム
ＭｅＯＨ メタノール
ｍｉｎ 分
ｎ−ＢｕＬｉ ｎ−ブチルリチウム
ＮＭＰ Ｎ−メチルピロリジノン
Ｐｄ／Ｃ 活性炭担持パラジウム、通常、１０％パラジウムの負荷量
ＰＥ 石油エーテル
ＲＴ 室温
ＴＢＡＩ ヨウ化テトラブチルアンモニウム
ＴＥＡ トリエチルアミン
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＬＣ 薄層クロマトグラフィー
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
合成中間体の調製
調製１ （２Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−３，４，５，６−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−７（２Ｈ）−イル）プロパン酸
工程１ （Ｒ）−メチル２−（メチルスルホニルオキシ）プロパノエート
ＤＣＭ（３００ｍＬ）中の、（Ｒ）−メチル２−ヒドロキシプロパノエート（３０ｇ，０．２８ｍｏｌ）およびＴＥＡ（８０ｍＬ，０．５６ｍｏｌ）の溶液を、０℃に冷却し、塩化メタンスルホニル（３３．６ｍＬ，０．４２ｍｏｌ）を０℃において１時間にわたって滴下した。その混合物を、１０〜２０℃において１．５時間撹拌した。得られた混合物を氷水（１００ｍＬ）でクエンチした。有機層を分離し、水（２×５０ｍＬ）およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮することにより、粗生成物（Ｒ）−メチル２−（メチルスルホニルオキシ）プロパノエート（５０ｇ，９５．２％）を赤煉瓦色の油状物として得て、それを精製せずに使用した。
工程２ （２Ｓ）−メチル２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−３，４，５，６−テトラ−ヒドロ−１Ｈ−プリン−７（２Ｈ）−イル）プロパノエート
１８℃のＤＭＦ（２．２Ｌ）中の、１，３−ジメチル−３，４，５，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン（１１２ｇ，０．６２ｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（１７１ｇ，１．２４ｍｏｌ，２ｅｑ）の懸濁液に、（Ｒ）−メチル２−（メチルスルホニルオキシ）プロパノエート（２２６ｇ，１．２４ｍｏｌ）を加えた。その混合物を１８℃において一晩撹拌し；次いで、それを飽和ＮＨ４Ｃｌ（２Ｌ）でクエンチした。得られた混合物をＤＣＭで抽出した（３×１Ｌ）。合わせた有機相を水（５×５００ｍＬ）およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣をＤＣＭに溶かし、６Ｎ ＨＣｌで抽出した（２×２００ｍＬ）。合わせた水相をＤＣＭで逆抽出した（２×５０ｍＬ）。合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮することにより、所望の生成物を薄茶色の油状物として得て（６５ｇ，３９．３％）、それをさらに精製せずに使用した。ＭＨ＋２６７。
工程３ （２Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−３，４，５，６−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−７（２Ｈ）−イル）プロパン酸
ジオキサン（４００ｍＬ）中の（２Ｓ）−メチル２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−３，４，５，６−テトラ−ヒドロ−１Ｈ−プリン−７（２Ｈ）−イル）プロパノエート（３９ｇ，１４５ｍｍｏｌ）の溶液に、６Ｎ ＨＣｌ（２００ｍＬ）を加えた。その混合物を３時間還流し、室温に冷却し、次いで、濃縮することにより、ジオキサンおよび水相の大部分を除去した。残渣を水（７０ｍＬ）においてトリチュレートし（ｔｒｉｔｕｒａｔｅｄ）、濾過した。固体を濾過により回収することにより、表題の生成物を得た（１７．３ｇ，ｅｅ：９９％＊）。濾液を濃縮乾固し、残渣を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（４０／１〜１５／１）で溶出するクロマトグラフィーによって精製することにより、さらなる生成物を得た（３．２ｇ，ｅｅ：９５％＊）。総収率は、５５．１％であった。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １３．２８ （ｓ， １Ｈ）， ８．２１ （ｓ， １Ｈ）， ５．４７ （ｑ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．４４ （ｓ， ３Ｈ）， ３．２１ （ｓ， ３Ｈ）， １．７６ （ｄ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ３Ｈ）． ＭＨ＋ ２５３．
＊キラルＨＰＬＣの詳細：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＡＤカラム，２５０＊４．６ｍｍ，１０ｕｍ。移動相：ヘキサン（０．１％ＴＦＡ）／ＩＰＡ（０．１％ＴＦＡ）７０／３０。
調製２ ５，５−ジメチルピロリジン−２−オン塩酸塩
工程１ メチル４−メチル−４−ニトロペンタノエート
ジオキサン（３ｍＬ）中の２−ニトロプロパン（５．０６ｇ，５６．８４ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｔｒｉｔｏｎ Ｂ（０．５５ｍＬ，４０％水溶液）を加えた。その反応物を７０℃に加温し、アクリル酸メチル（４．７８ｇ，５５．５８ｍｍｏｌ）を滴下した。滴下後、その反応物を１００℃において４時間加熱した。その反応物をＲＴに冷却し、１Ｎ ＨＣｌ（２ｍＬ）を加え、得られた混合物をＥＡと水とに分割した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮することにより、粗生成物（１０ｇ，１００％）を油状物として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ ３．６８ （ｓ， ３Ｈ）， ２．３５−２．３１ （ｍ， ２Ｈ）， ２．２７−２．２３ （ｍ， ２Ｈ）， １．６０ （ｓ， ６Ｈ）．
工程２ ５，５−ジメチルピロリジン−２−オン
ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中のＮｉＣｌ２六水和物（０．６７ｇ，２．８６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ４（０．３３ｇ，８．５７ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。その反応物を０．５時間にわたって超音波処理し；次いで、メチル４−メチル−４−ニトロペンタノエート（１．０ｇ，５．７７ｍｍｏｌ）を滴下した。さらなるＮａＢＨ４（０．６６ｇ，１７．１４ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。得られた混合物を室温において一晩撹拌した。その混合物をセライトで濾過し、濾液を４分の１の体積に濃縮した。残渣をＤＣＭと飽和ＮａＨＣＯ３とに分割した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮することにより、粗生成物（０．３５ｇ，５３．７％）を油状物として得た。ＭＨ＋１１４。
工程３ ５，５−ジメチルピロリジン−２−オン塩酸塩
ＴＨＦ（８ｍＬ）中のＬＡＨ（１２１ｍｇ，３．１８ｍｍｏｌ）の懸濁液に、５，５−ジメチルピロリジン−２−オン（０．３ｇ，２．６５ｍｍｏｌ）を加え、その反応物を６０℃において一晩加熱した。その反応物を０℃に冷却し、水（０．２ｍＬ）に続いて１５％ＮａＯＨ（０．２ｍＬ）で慎重にクエンチした。その混合物をセライトで濾過した。濾液に濃塩酸（Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ ａｃｉｄ）を加えた。この混合物を濃縮することにより、粗生成物（０．２ｇ，７５．５％）を白色固体として得て、それを精製せずに使用した。ＭＨ＋１００。
調製３ ２’−（２，２−ジメチルピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン
工程１ ５−ブロモ−２−（２，２−ジメチルピロリジン−１−イル）ピリミジン
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の、５−ブロモ−２−クロロピリミジン（２．３ｇ，１１．９ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（６．６ｇ，４７．６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＲＴのＤＭＦ（４ｍＬ）中の２，２−ジメチルピロリジン（２．２６ｇ，１６．７ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。得られた反応混合物を５０℃において２日間撹拌した。その反応物を、撹拌しながら氷水に注ぎ込んだ。沈殿物を回収することにより、粗５−ブロモ−２−（２，２−ジメチルピロリジン−１−イル）ピリミジン（２．３ｇ，７６．６％）を淡黄色固体として得て、それをいかなるさらなる精製も行わずに次の工程のために使用した。ＭＨ＋２５６。
工程２ ２−（２，２−ジメチルピロリジン−１−イル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリミジン
１，４−ジオキサン（３２０ｍＬ）中の、５−ブロモ−２−（２，２−ジメチルピロリジン−１−イル）ピリミジン（１７．６ｇ，６８．９ｍｍｏｌ）と、ビス（ピナコラト）ジボロン（２４．５ｇ，９６．５ｍｍｏｌ）と、ＫＯＡｃ（１３．５ｇ，０．１４ｍｏｌ）との混合物に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（２．４ｇ，３．４５ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を８０℃において２０時間撹拌した。その反応物をＲＴに冷却し、氷水に注ぎ込み、ＥＡで抽出した（４×２００ｍＬ）。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮することにより、黒っぽい残渣を得た。その残渣を、ＰＥ／ＥＡ（４０：１）で溶出するクロマトグラフィーによって精製することにより、２−（２，２−ジメチルピロリジン−１−イル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリミジン（２工程で１１．５ｇ，４９％）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ８．５８ （ｓ， ２Ｈ）， ３．６９ （ｍ， ２Ｈ）， １．９２ （ｍ， ４Ｈ）， １．５５ （ｓ， ６Ｈ）， １．３３ （ｓ， １２Ｈ）．
工程３ ２’−（２，２−ジメチルピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン
１，４−ジオキサン（１４０ｍＬ）中の２−（２，２−ジメチルピロリジン−１−イル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリミジン（９．５ｇ，３１ｍｍｏｌ）の混合物に、４−アミノ−２−クロロピリミジン（４．５ｇ，３４．５ｍｍｏｌ）および２Ｍ Ｋ２ＣＯ３（２０．４ｍＬ，４０．７ｍｍｏｌ）を加えた。その橙色の混合物からＮ２を用いて脱気し；次いで、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（３．６５ｇ，３．１ｍｍｏｌ）を加えた。その反応物を８０℃において一晩撹拌した。その反応物をＲＴに冷却し、水に注ぎ込み、ＥｔＯＡｃで抽出した（３×１５０ｍＬ）。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を、ＰＥ：ＥＡ（１：１）で溶出するクロマトグラフィーによって精製することにより、化合物２’−（２，２−ジメチルピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン（８．９６ｇ，＞１００％）を黄色固体として得た。ＭＨ＋２７１。
調製４ （Ｓ）−２−（２−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリミジン−５−イル）ピリミジン−４−アミン
工程１ （Ｓ）−５−ブロモ−２−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリミジン
ＤＭＦ（２００ｍＬ）中の、（Ｓ）−２−（トリフルオロメチル）ピロリジン塩酸塩（４０ｇ，０．２３ｍｏｌ）と、Ｋ２ＣＯ３（９４．６ｇ，０．６８ｍｏｌ）と、５−ブロモ−２−クロロピリミジン（４８ｇ，０．２５ｍｏｌ）との混合物を、１００℃において２４時間撹拌し、次いで、Ｎ１，Ｎ２−ジメチルエタン−１，２−ジアミン（４ｍＬ）を加え、その反応物をさらに２時間撹拌することにより、過剰な５−ブロモ−２−クロロピリミジンを消費した。その反応物を水（４００ｍＬ）でクエンチし、ＥＡで抽出した（３×５００ｍＬ）。合わせた有機相を１０％ＬｉＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を、ＰＥ：ＥＡ（５０：１）で溶出するクロマトグラフィーによって精製することにより、（Ｓ）−５−ブロモ−２−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリミジン（５０ｇ，７４％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ８．５４ （ｓ， ２Ｈ）， ４．９０−４．９４ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５６−３．５８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０２−２．１６ （ｍ， ４Ｈ）． ＭＨ＋ ２９６．
工程２ （Ｓ）−２−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリミジン−５−イルボロン酸
ＴＨＦ（４００ｍＬ）中の、（Ｓ）−５−ブロモ−２−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリミジン（５０ｇ，０．１７ｍｏｌ）およびホウ酸トリイソプロピル（４４．４ｇ，０．２３ｍｏｌ）の溶液を−７８℃に冷却し、ｎ−ＢｕＬｉ（１０５ｍＬ，ヘキサン中２．４Ｍ）を滴下した。その反応物を−７８℃において２時間撹拌した。その反応物を水（１５０ｍＬ）でクエンチし、ＲＴに加温した。その反応物を濃縮することにより、水相を残した。その水相をエーテルで抽出することにより（２×５０ｍＬ）、不純物を除去した（水層中に生成物）。６Ｎ ＨＣｌを用いてｐＨを５に調整し、次いで、それをＥＡで抽出した（３×１００ｍＬ）。合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮することにより、（Ｓ）−２−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリミジン−５−イルボロン酸（４５ｇ，定量的収量）をオフホワイトの固体として得た。ＭＨ＋２６２。
工程３ （Ｓ）−２−（２−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリミジン−５−イル）ピリミジン−４−アミン
ジオキサン（１０５ｍＬ）および水（３５ｍＬ）中の、（Ｓ）−２−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリミジン−５−イルボロン酸（９．５ｇ，３６．４ｍｍｏｌ）と、２−クロロピリミジン−４−アミン（４．３ｇ，３３．１ｍｍｏｌ）と、Ｎａ２ＣＯ３（７．０ｇ，６６．２ｍｍｏｌ）との混合物に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（３．８ｍｇ，３．３１ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を、窒素を用いて脱気し、次いで、１１０℃において３時間撹拌した。その反応物を冷却し、セライトで濾過した。濾液をＥＡ（３００ｍＬ）および水（１５０ｍＬ）で分離した。有機相をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１００：１〜８０：１〜７０：１）で溶出するクロマトグラフィーによって精製することにより、（Ｓ）−２−（２−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリミジン−５−イル）ピリミジン−４−アミン（８ｇ，７８％）を白色固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ ９．１６ （ｓ， ２Ｈ）， ８．１３−８．１４ （ｄ， Ｊ ＝ １０ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．９７ （ｓ， ２Ｈ）， ６．３４−６．３５ （ｄ， Ｊ ＝ ６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．０９−５．１３ （ｍ， １Ｈ）， ３．６７−３．７２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０６−２．２１ （ｍ， ４Ｈ）． ＭＨ＋ ３１１．
調製５ （Ｒ）−２−（２−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリミジン−５−イル）ピリミジン−４−アミン
表題の化合物を、調製４の方法を用いて調製した。ＭＨ＋３１１
調製６ （２Ｓ）−２−（１−メチル−２，６−ジオキソ−３，４，５，６−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−７（２Ｈ）−イル）プロパン酸
工程１ （２Ｓ）−メチル２−（１−メチル−２，６−ジオキソ−３，４，５，６−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−７（２Ｈ）−イル）プロパノエート
５０℃のＤＭＦ（１５０ｍＬ）中の、１−メチル−３，４，５，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン（６．９０４ｇ，４１．５ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（５．７３４ｇ，４１．５ｍｍｏｌ）の懸濁液に、（Ｒ）−メチル２−（メチルスルホニルオキシ）プロパノエート（５．８１８ｇ，３２．０ｍｍｏｌ）を加えた。その反応物を５０℃において一晩撹拌し、次いで、飽和ＮＨ４Ｃｌ（２Ｌ）でクエンチした。得られた混合物をＥＡで抽出した（３×２００ｍＬ）。合わせた有機相を水（５×５００ｍＬ）およびブラインで洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（０〜３％ＭｅＯＨ：ＤＣＭ）によって精製することにより、表題の生成物を白色固体として得た（１．６４９ｇ，２０％）。ＭＨ＋２５３。
工程２ （２Ｓ）−２−（１−メチル−２，６−ジオキソ−３，４，５，６−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−７（２Ｈ）−イル）プロパン酸
ジオキサン（３ｍＬ）中の（２Ｓ）−メチル２−（１−メチル−２，６−ジオキソ−３，４，５，６−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−７（２Ｈ）−イル）プロパノエート（９６．９ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ）の混合物に、６Ｎ ＨＣｌ（２ｍＬ）を加えた。その反応物を３時間還流し、室温に冷却し、濃縮することにより、白色固体の生成物を得た（９２ｍｇ，１００％）；ＭＨ＋２３９。
調製７ （Ｓ）−２−（３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパン酸
工程１ （Ｓ）−メチル２−（３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパノエート
ＲＴのＤＭＦ（２ｍｌ）中の（２Ｓ）−メチル２−（１−メチル−２，６−ジオキソ−３，４，５，６−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−７（２Ｈ）−イル）プロパノエート（６００ｍｇ，２．３８ｍｍｏｌ）の溶液に、ナトリウム２−クロロ−２，２−ジフルオロアセテート（５０８ｍｇ，３．３３ｍｍｏｌ）に続いてＣｓ２ＣＯ３（２２９ｍｇ ３．８１ｍｍｏｌ）を加えた。その反応物を６０℃で１２時間加熱した。その反応物をＲＴに冷却し、冷水で希釈し、ＥＡで２回抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を、ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０〜３％）で溶出するクロマトグラフィーによって精製することにより、（Ｓ）−メチル２−（３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパノエート（１６４ｍｇ，２３％）を無色の油状物として得た。ＭＨ＋３０３。
工程２ （Ｓ）−２−（３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパン酸
ジオキサン（１ｍＬ）中の（Ｓ）−メチル２−（３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパノエート（６４ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）の混合物に、６Ｎ ＨＣｌ（１ｍＬ）を加えた。その反応物を３時間還流し、ＲＴに冷却し、次いで、濃縮した。沈殿物を回収することにより、白色固体の生成物を得た（６１ｍｇ，１００％）。ＭＨ＋２８９。
調製８ ２’−（３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン
工程１ ５−ブロモ−２−（３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）ピリミジン
密封チューブに、５−ブロモ−２−クロロピリミジン（４５０ｍｇ，２．３ｍｍｏｌ）、３，３−ジフルオロアゼチジン塩酸塩（２７５．１ｍｇ，２．１ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（５８９．３ｍｇ，４．３ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（３ｍＬ）を投入した。そのチューブを密封し、１３０℃において２時間撹拌した。その反応物をＲＴに冷却し、水（４ｍＬ）に注ぎ込んだ。固体を濾過により回収し、乾燥することにより、５−ブロモ−２−（３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）ピリミジン（３００ｍｇ，５１．４％）を白色固体として得た。ＭＨ＋２５０。
工程２ （２−（３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）ピリミジン−５−イル）ボロン酸
ＴＨＦ（６ｍＬ）中の、５−ブロモ−２−（３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）ピリミジン（３００ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）およびホウ酸トリイソプロピル（０．４ｍＬ，１．８ｍｍｏｌ）の溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（０．６ｍＬ，ヘキサン中２．４Ｍ，１．５ｍｍｏｌ）を−７８℃において滴下した。その混合物を−７８℃において２時間撹拌した。その反応物を水でクエンチし、ＲＴに加温した。溶媒を濃縮し、残留水層をエーテルで抽出した（２×１０ｍＬ）。水層を、１Ｎ ＨＣｌを用いてｐＨ６に調整し、ＥＡで抽出した（３×１０ｍＬ）。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮することにより、生成物（１７０ｍｇ，６５．６％）を白色固体として得た。ＭＨ＋２１６。
工程３ ２’−（３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン
１，４−ジオキサン（５ｍＬ）および水（１ｍＬ）中の、（２−（３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）ピリミジン−５−イル）ボロン酸（１７０．０ｍｇ，０．８ｍｍｏｌ）と、４−アミノ−２−クロロピリミジン（１０２．４ｍｇ，０．８ｍｍｏｌ）と、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（５６．２ｍｇ，０．０８ｍｍｏｌ）とＮａ２ＣＯ３（１６７．５ｍｇ，１．６ｍｍｏｌ）との混合物を、窒素を用いて脱気し、９０℃において一晩撹拌した。得られた混合物をＲＴに冷却し、ＥＡに注ぎ込んだ。有機相を分離し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣をエーテルに溶解した。不溶性残渣を濾過によって除去し、濾液を濃縮することにより、２’−（３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン（１３０ｍｇ，６２．３％）を白色固体として得た。ＭＨ＋２６５。
調製９ ２−クロロ−Ｎ−（２’−（３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）アセトアミド
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の２’−（３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン（６０ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）の溶液に、２−クロロアセチルクロリド（０．０３ｍＬ，０．３４ｍｍｏｌ）を０℃において滴下した。その反応物をＲＴで２時間撹拌し、次いで、それをＥＡに注ぎ込んだ。この有機相を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮することにより、２−クロロ−Ｎ−（２’−（３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）アセトアミド（５０ｍｇ，６４．７％）を黄色固体として得た。ＭＨ＋３４１。
調製１０ （２−（４，４−ジフルオロピペリジン−１−イル）ピリミジン−５−イル）ボロン酸
工程１ ５−ブロモ−２−（４，４−ジフルオロピペリジン−１−イル）ピリミジン
密封チューブに、５−ブロモ−２−クロロピリミジン（６３３．３ｍｇ，３．３ｍｍｏｌ）、４，４−ジフルオロピペリジン塩酸塩（４７２．８ｍｇ，３．０ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（８２９．３ｍｇ，６．０ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（４ｍＬ）を投入した。そのチューブを密封し、１３０℃において２時間撹拌し；次いで、それをＲＴに冷却し、水（５ｍＬ）に注ぎ込んだ。固体の沈殿物を回収し、乾燥することにより、５−ブロモ−２−（４，４−ジフルオロピペリジン−１−イル）ピリミジン（６４０ｍｇ，７７％）を白色固体として得た。ＭＨ＋２７８。
工程２ （２−（４，４−ジフルオロピペリジン−１−イル）ピリミジン−５−イル）ボロン酸
ＴＨＦ（８ｍＬ）中の、５−ブロモ−２−（４，４−ジフルオロピペリジン−１−イル）ピリミジン（６４０ｍｇ，２．３ｍｍｏｌ）およびホウ酸トリイソプロピル（０．８ｍＬ，３．５ｍｍｏｌ）の溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（２ｍＬ，ヘキサン中２．４Ｍ，１．５ｍｍｏｌ）を−７８℃において滴下した。その混合物を−７８℃において２時間撹拌した。この反応物を水でクエンチし、ＲＴに加温した。その反応物を濃縮し、残留水性混合物をエーテルで抽出した（２×１０ｍＬ）。水相を、１Ｎ ＨＣｌを用いてｐＨ６に調整し、ＥＡで抽出した（３×１０ｍＬ）。合わせた有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮することにより、（２−（４，４−ジフルオロピペリジン−１−イル）ピリミジン−５−イル）ボロン酸（４２０ｍｇ，７４．８％）を白色固体として得た。ＭＨ＋２４４。
調製１１ ２−クロロ−Ｎ−（２−クロロピリミジン−４−イル）アセトアミド
４−アミノ−２−クロロピリミジン（２．０ｇ，１５．４ｍｍｏｌ）とＤＭＦ（２５ｍＬ）との混合物に、２−クロロアセチルクロリド（０．０３ｍＬ，０．３４ｍｍｏｌ）を０℃において滴下した。その反応物をＲＴにおいて一晩撹拌し、次いで、それをＥＡに注ぎ込んだ。有機相を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭを用いてトリチュレートし、固体を回収することにより、２−クロロ−Ｎ−（２−クロロピリミジン−４−イル）アセトアミド（１．３ｇ，２０．５％）を黄色固体として得た。ＭＨ＋２０６。
調製１２ Ｎ−（２−クロロピリミジン−４−イル）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）アセトアミド
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の、２−クロロ−Ｎ−（２−クロロピリミジン−４−イル）アセトアミド（１．１ｇ，５．４ｍｍｏｌ）と、１，３−ジメチル−１Ｈ−プリン−２，６（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン（９６６．３ｍｇ，５．４ｍｍｏｌ）と、Ｋ２ＣＯ３（１．１ｇ，８．１ｍｍｏｌ）と、ＴＢＡＩ（１９８．２ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）との混合物を、９０℃において１０分間撹拌した。その反応物をＲＴに冷却し、次いで、ＥＡで希釈した。得られた混合物を水、飽和ＮＨ４Ｃｌおよびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣をＤＣＭから再結晶することにより、Ｎ−（２−クロロピリミジン−４−イル）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−アセトアミド（１．３ｇ，６９．４％）を白色固体として得た。ＭＨ＋３５０。
調製１３ ３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン塩酸塩
工程１ ３−ベンジル−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，４−ジオン
ＡｃＯＨ（３０ｍＬ）中の３−オキサビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，４−ジオン（２．３ｇ，２０．５ｍｍｏｌ）の混合物に、ＤＭＡＰ（１５０ｍｇ）およびベンジルアミン（２．２ｍＬ，２０．５ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を１００℃において４０時間撹拌し；次いで、ＲＴに冷却した。その反応物を濃縮し、残渣をＥＡに溶解した。有機相を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を、ＰＥ：ＥＡ（８：１〜５：１）で溶出するクロマトグラフィーによって精製することにより、３−ベンジル−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，４−ジオン（３．７ｇ，８９．６％）を白色固体として得た。ＭＨ＋２０２。
工程２ ３−ベンジル−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン
ＴＨＦ（３０ｍＬ）中の３−ベンジル−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，４−ジオン（２．０ｇ，１０．０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＬＡＨ（１．５ｇ，４０．０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を、４時間加熱還流し、次いで、それを０℃に冷却した。その冷たい反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌで慎重にクエンチし、次いで、濾過した。濾液を濃縮することにより、表題の化合物（１．５ｇ，８６．７％）を透明の油状物として得た。ＭＨ＋１７４。
工程３ ３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン塩酸塩
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中の、３−ベンジル−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン（１．３ｇ，７．５ｍｍｏｌ）と、１０％Ｐｄ／Ｃ（１３０ｍｇ）と、濃ＨＣｌ（０．６３ｍＬ，７．５ｍｍｏｌ）との混合物を、水素雰囲気（バルーン）下のＲＴにおいて１８時間撹拌した。その反応物をセライトで濾過し、濾液を濃縮することにより、表題の化合物（８５０ｍｇ，９５％）を白色固体として得た。ＭＨ＋８４
調製１４ ２’−（３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン
工程１ ３−（５−ブロモピリミジン−２−イル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン
密封チューブに、５−ブロモ−２−クロロピリミジン（６７１．７ｍｇ，３．５ｍｍｏｌ）、３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン塩酸塩（４１６．７ｍｇ，３．５ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（９６７．５ｍｇ，７．０ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（４ｍＬ）を投入した。そのチューブを密封し、１３０℃において２時間撹拌した。その反応物をＲＴに冷却し、冷水（４ｍＬ）に注ぎ込んだ。形成した固体を回収し、乾燥することにより、３−（５−ブロモピリミジン−２−イル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン（４８０ｍｇ，５７．４％）を白色固体として得た。ＭＨ＋２４０。
工程２ （２−（３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−イル）ピリミジン−５−イル）ボロン酸
ＴＨＦ（６ｍＬ）中の、３−（５−ブロモピリミジン−２−イル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン（４８０ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）およびホウ酸トリイソプロピル（０．７ｍＬ，３．０ｍｍｏｌ）の溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（１．１ｍＬ，ヘキサン中２．４Ｍ，２．６ｍｍｏｌ）を−７８℃において滴下した。その反応物を−７８℃において２時間撹拌し、次いで、それを水でクエンチし、ＲＴに加温した。その反応物を濃縮し、水性残渣をエーテルで抽出した（２×２０ｍＬ）。水層を分離し、１Ｎ ＨＣｌを用いてｐＨ６に調整し、ＥＡで抽出した（３×２０ｍＬ）。合わせた有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮することにより、表題の生成物（２００ｍｇ，４８．５％）を白色固体として得た。ＭＨ＋２０６。
工程３ ２’−（３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン
１，４−ジオキサン（５ｍＬ）および水（１ｍＬ）中の、（２−（３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−イル）ピリミジン−５−イル）ボロン酸（１５０．０ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）と、２−クロロピリミジン−４−アミン（２３７．９ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）と、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（８６．０ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）と、Ｎａ２ＣＯ３（２４５．９ｍｇ，２．３ｍｍｏｌ）との混合物を、窒素を用いて脱気し、８０℃において一晩撹拌した。その反応物をＲＴに冷却し、ＥＡに注ぎ込んだ。有機相を分離し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣をエーテルに溶解した。不溶性残渣を濾過により除去し、濾液を濃縮することにより、２’−（３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン（１００ｍｇ，３３．８％）を白色固体として得た。ＭＨ＋２５５。
調製１５ Ｎ−（２’−（３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）−２−クロロアセトアミド
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の２’−（３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン（４０ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）の溶液に、２−クロロアセチルクロリド（０．０２ｍＬ，０．３ｍｍｏｌ）を０℃において滴下した。その反応物をＲＴにおいて２時間撹拌し、次いで、ＥＡに注ぎ込んだ。有機層を水およびブラインで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮することにより、Ｎ−（２’−（３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）−２−クロロアセトアミド（５０ｍｇ，９６．２％）を黄色固体として得た。ＭＨ＋３２９。
調製１６ ２’−（３−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン
工程１ ５−ブロモ−２−（３−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリミジン（ｐｙｒａｍｉｄｉｎｅ）
密封チューブに、５−ブロモ−２−クロロピリミジン（４４１．４ｍｇ，２．３ｍｍｏｌ）、３−（トリフルオロメチル）ピロリジン塩酸塩（４０２．６ｍｇ，２．１ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（６３５．８ｍｇ，４．６ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（３ｍＬ）を投入した。そのチューブを密封し、１３０℃において２時間撹拌し；次いで、それを水（４ｍＬ）に注ぎ込んだ。固体を回収し、乾燥することにより、５−ブロモ−２−（３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）ピリミジン（５００ｍｇ，７３．７％）を白色固体として得た。ＭＨ＋２９６。
工程２ （２−（３−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリミジン−５−イル）ボロン酸
ＴＨＦ（６ｍＬ）中の、５−ブロモ−２−（３−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリミジン（５００ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）およびホウ酸トリイソプロピル（０．６ｍＬ，２．５ｍｍｏｌ）の溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（０．９ｍＬ，ヘキサン中２．４Ｍ，２．２ｍｍｏｌ）を−７８℃において滴下した。その混合物を−７８℃において２時間撹拌し、次いで、水でクエンチし、ＲＴに加温した。その反応物を濃縮し、水性残渣をエーテルで抽出した（２×２０ｍＬ）。水層を１Ｎ ＨＣｌを用いてｐＨ６に調整し、ＥＡで抽出した（３×２０ｍＬ）。合わせた有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮することにより、表題の生成物（３２０ｍｇ，７２．３％）を白色固体として得た。ＭＨ＋２６０。
工程３ ２’−（３−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン
１，４−ジオキサン（５ｍＬ）および水（１ｍＬ）中の、（２−（３−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリミジン−５−イル）ボロン酸（３２０．０ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）と、２−クロロピリミジン−４−アミン（１５８．１ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）と、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（８６．０ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）と、Ｎａ２ＣＯ３（２６０．０ｍｇ，２．５ｍｍｏｌ）との混合物を、窒素を用いて脱気し、９０℃において一晩撹拌した。その反応物をＲＴに冷却し、ＥＡに注ぎ込んだ。有機相を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣をエーテルに溶解した。不溶性残渣を濾過により除去し、濾液を濃縮することにより、２’−（３−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン（２００ｍｇ，５２．６％）を白色固体として得た。ＭＨ＋３１１。
調製１７ ２−クロロ−Ｎ−（２’−（３−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）アセトアミド
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の２’−（３−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン（９３ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）の溶液に、２−クロロアセチルクロリド（０．０４ｍＬ，０．４５ｍｍｏｌ）を０℃において滴下した。その反応物をＲＴにおいて２時間撹拌し、次いで、ＥＡに注ぎ込んだ。有機相を水およびブラインで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮することにより、２−クロロ−Ｎ−（２’−（３−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）アセトアミド（１００ｍｇ，８６．４％）を黄色固体として得た。ＭＨ＋３８７。
調製１８ ２−（２−（３−（トリフルオロメチル）アゼチジン−１−イル）ピリミジン−５−イル）ピリミジン−４−アミン
工程１ ２−（３−（トリフルオロメチル）アゼチジン−１−イル）ピリミジン−５−イルボロン酸
ＴＨＦ（５ｍＬ）中の、５−ブロモ−２−（３−（トリフルオロメチル）アゼチジン−１−イル）ピリミジン（５５０ｍｇ，１．９５ｍｍｏｌ）およびホウ酸トリイソプロピル（３８３ｍｇ，２．７４ｍｍｏｌ）の溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（１．１ｍＬ，ヘキサン中２．４Ｍ）を−７８℃において滴下した。その反応物を−７８℃において２時間撹拌した。その反応物を水（５ｍＬ）でクエンチし、ＲＴに加温した。その反応物を濃縮し、水性残渣をエーテルで抽出した（２×２ｍＬ）。水層を、１Ｎ ＨＣｌを用いてｐＨ５に調整し、ＥＡで抽出した（３×５ｍＬ）。合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮することにより、２−（３−（トリフルオロメチル）アゼチジン−１−イル）ピリミジン−５−イルボロン酸（４５０ｍｇ，９３．７％）をオフホワイトの固体として得た。ＭＨ＋２４８。
工程２ ２−（２−（３−（トリフルオロメチル）アゼチジン−１−イル）ピリミジン−５−イル）ピリミジン−４−アミン
ジオキサン（１０ｍＬ）中の、２−（３−（トリフルオロメチル）アゼチジン−１−イル）ピリミジン−５−イルボロン酸（４５０ｍｇ，１．８２ｍｍｏｌ）と、２−クロロピリミジン−４−アミン（２１３ｍｇ，１．６５ｍｍｏｌ）と、飽和Ｎａ２ＣＯ３（２．５ｍＬ）との混合物に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（５８ｍｇ，０．０８ｍｍｏｌ）を加え、窒素を用いて３回脱気した。その反応物を９０℃において一晩撹拌した。その反応物をＲＴに冷却し、セライトで濾過した。濾液をＥＡで抽出した（２×４ｍＬ）。合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を、ＰＥ：アセトン（３：１）で溶出するクロマトグラフィーによって精製することにより、２−（２−（３−（トリフルオロメチル）アゼチジン−１−イル）ピリミジン−５−イル）ピリミジン−４−アミン（３５０ｍｇ，７１．４％）を白色固体として得た。ＭＨ＋２９７。
調製１９ ２−クロロ−Ｎ−（２−（２−（３−（トリフルオロメチル）アゼチジン−１−イル）ピリミジン−５−イル）ピリミジン−４−イル）アセトアミド
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の２−（２−（３−（トリフルオロメチル）アゼチジン−１−イル）ピリミジン−５−イル）ピリミジン−４−アミン（１００ｍｇ，０．３４ｍｍｏｌ）の溶液に、２−クロロアセチルクロリド（０．０４５ｍＬ，０．５１ｍｍｏｌ）を０℃において滴下した。その混合物を室温において２時間撹拌し、次いで、ＥＡに注ぎ込んだ。有機相を水およびブラインで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮することにより、２−クロロ−Ｎ−（２’−（３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）アセトアミド（７０ｍｇ，５６％）を黄色油状物として得た。ＭＨ＋３７３．１。
調製２０ ２’−（４，４−ジフルオロピペリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−アミン
（２−（４，４−ジフルオロピペリジン−１−イル）ピリミジン−５−イル）ボロン酸（１４２ｍｇ，０．５８ｍｍｏｌ）と、２−クロロピリミジン−４−アミン（６８．５ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ）と、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（３７．３ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ）と、Ｋ２ＣＯ３（１４６．８ｍｇ，１．０６ｍｍｏｌ）と、１，４−ジオキサン（３ｍＬ）と、水（０．５ｍＬ）との混合物を、窒素を用いて脱気し、９０℃において２時間撹拌した。得られた混合物をＲＴに冷却し、ＥＡに注ぎ込んだ。有機層を分離し、水およびブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（５０：１）で溶出するカラムクロマトグラフィーで精製することにより、２’−（４，４−ジフルオロピペリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン（１５ｍｇ，１０％）を白色固体として得た。ＭＨ＋２９３。
調製２１ （Ｓ）−２’−（２−メチルピペリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−アミン
工程１ （Ｓ）−５−ブロモ−２−（２−メチルピペリジン−１−イル）ピリミジン
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の５−ブロモ−２−クロロピリミジン（１．４１ｇ，７．３５ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−２−メチルピペリジン（８００ｍｇ，８．０８ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（１．５２ｇ，１１．０３ｍｍｏｌ）を加えた。その反応物をＲＴにおいて一晩撹拌した。その反応物を氷水に注ぎ込み、ＥＡで抽出した（３×２０ｍＬ）。合わせた有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を、ＰＥ：ＥＡ（８０：１）で溶出するクロマトグラフィーによって精製することにより、表題の生成物（１．０７ｇ，５６．９％）を白色固体として得た。ＭＨ＋２４０。
工程２ （Ｓ）−２−（２−メチルピペリジン−１−イル）ピリミジン−５−イルボロン酸
ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の、（Ｓ）−５−ブロモ−２−（２−メチルピペリジン−１−イル）ピリミジン（１．０７ｇ，４．２ｍｍｏｌ）およびホウ酸トリイソプロピル（１．１ｇ，５．８７ｍｍｏｌ）の溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（５．２５ｍＬ，ヘキサン中１．６Ｍ，８．４ｍｍｏｌ）を−７０℃において滴下した。その反応物を−７０℃において３時間撹拌し、次いで、水でクエンチした。その反応物を濃縮し、水性残渣をエーテルで抽出した（２×２０ｍＬ）。水相を１Ｎ ＨＣｌを用いてｐＨ６に調整し、ＥＡで抽出した（３×２０ｍＬ）。合わせた有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮することにより、表題の生成物（９００ｍｇ，９６％）を白色固体として得て、それを精製せずにそのまま使用した。ＭＨ＋２２２。
工程３ （Ｓ）−２’−（２−メチルピペリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−アミン
１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）および水（２．５ｍＬ）中の、（Ｓ）−２−（２−メチルピペリジン−１−イル）ピリミジン−５−イルボロン酸（７５２ｍｇ，３．４ｍｍｏｌ）と、４−アミノ−２−クロロピリミジン（４００ｍｇ，３．０９ｍｍｏｌ）と、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（２１６．０ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）と、Ｎａ２ＣＯ３（６５５ｍｇ，６．１８ｍｍｏｌ）との混合物を、窒素を用いて脱気し、８０℃において２時間撹拌した。その反応物をＲＴに冷却し、ＥＡ（２０ｍＬ）と水（１５ｍＬ）とに分割した。有機相を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣をエーテルに溶解した。不溶性残渣を濾過により除去し、濾液を濃縮することにより、（Ｓ）−２’−（２−メチルピペリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−アミン（６８２ｍｇ，８１．８％）を白色固体として得た。ＭＨ＋２７１。
調製２２ （Ｓ）−２−クロロ−Ｎ−（２’−（２−メチルピペリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−イル）アセトアミド
ＤＭＦ（８ｍＬ）中の（Ｓ）−２’−（２−メチルピペリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−アミン（４００ｍｇ，１．４８ｍｍｏｌ）の溶液に、２−クロロアセチルクロリド（０．１７ｍＬ，２．２４ｍｍｏｌ）を０℃において滴下した。その反応物をＲＴにおいて一晩撹拌し、次いで、氷水に注ぎ込み、ＥＡで抽出した（３×２０ｍＬ）。合わせた有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮することにより、所望の生成物（５１０ｍｇ，９９％）を黄色のシロップ状物として得た。ＭＨ＋３４７。
調製２３ ２−クロロ−Ｎ−（２’−（２，２−ジメチルピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）アセトアミド（ＬＪ−２６２−６４）
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の２’−（２，２−ジメチルピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン（４００ｍｇ，１．４８ｍｍｏｌ）の溶液に、２−クロロアセチルクロリド（２５１ｍｇ，２．２２ｍｍｏｌ）を０℃において滴下した。ＲＴにおいて一晩撹拌した後、その反応混合物をＥＡと水とに分割した。有機相を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮することにより、２−クロロ−Ｎ−（２’−（２，２−ジメチルピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）アセトアミド（５００ｍｇ，９７．４％）を黄色固体として得た。ＭＨ＋３４７。
調製２４ （Ｓ）−２’−（２−メチルピロリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−アミン
工程１ （Ｓ）−２−（２−メチルピロリジン−１−イル）ピリミジン−５−イルボロン酸
ＴＨＦ（７０ｍＬ）中の、（Ｓ）−５−ブロモ−２−（２−メチルピロリジン−１−イル）ピリミジン（７ｇ，３０．８ｍｍｏｌ，ＷＯ２０１３／０２３１０２に記載されている方法を用いて調製したもの）およびホウ酸トリイソプロピル（８．１２ｇ，４３．２ｍｍｏｌ）の溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（２８．９ｍＬ，ヘキサン中１．６Ｍ，４６．３ｍｍｏｌ）を−７０℃において滴下した。その反応物を−７０℃において３時間撹拌し；次いで、それを水でクエンチした。その反応物を濃縮し、水性残渣をエーテルで抽出した（２×２０ｍＬ）。水層を１Ｎ ＨＣｌを用いてｐＨ６に調整し、ＥＡで抽出した（３×２０ｍＬ）。合わせた有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮することにより、表題の生成物（４．８ｇ，７５．３％）を白色固体として得た。ＭＨ＋２０８。
工程２ （Ｓ）−２’−（２−メチルピロリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−アミン
１，４−ジオキサン（４０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）中の、（Ｓ）−２−（２−メチルピロリジン−１−イル）ピリミジン−５−イルボロン酸（２．５３ｇ，１２．２３ｍｍｏｌ）と、４−アミノ−２−クロロピリミジン（１．４４ｇ，１１．１２ｍｍｏｌ）と、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（４３２．０ｍｇ，０．６ｍｍｏｌ）と、Ｎａ２ＣＯ３（２．３５ｇ，２２．２４ｍｍｏｌ）との混合物を、窒素を用いて脱気し、８０℃において２時間撹拌した。その反応物をＲＴに冷却し、ＥＡに注ぎ込んだ。有機相を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣をエーテルに溶かした。不溶性残渣を濾過により除去し、濾液を濃縮することにより、（Ｓ）−２’−（２−メチルピロリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−アミン（１．５ｇ，５４％）を白色固体として得た。ＭＨ＋２５７。
調製２５ （Ｓ）−２−クロロ−Ｎ−（２’−（２−メチルピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）アセトアミド
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（Ｓ）−２’−（２−メチルピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン（２５６ｍｇ，１ｍｍｏｌ）の溶液に、２−クロロアセチルクロリド（１７０ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ）を０℃において滴下した。ＲＴにおいて一晩撹拌した後、その反応混合物をＥＡと水とに分割した。有機層を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮することにより、（Ｓ）−２−クロロ−Ｎ−（２’−（２−メチルピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）アセトアミド（２８０ｍｇ，８４．１％）を黄色固体として得た。ＭＨ＋３３３。
調製２６ ２−クロロ−Ｎ−（２’−（（Ｓ）−２−メチルピロリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−イル）プロパンアミド
ＤＭＦ（１５ｍＬ）中の（Ｓ）−２’−（２−メチルピロリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−アミン（８００ｍｇ，３．１２ｍｍｏｌ）の溶液に、２−クロロプロパノイルクロリド（０．３３ｍＬ，３．４３ｍｍｏｌ）を０℃において滴下した。その反応物をＲＴにおいて一晩撹拌した。その反応物を氷水に注ぎ込み、ＥＡで抽出した（３×２０ｍＬ）。合わせた有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗生成物を、ＰＥ：ＥＡ（５：１）で溶出するクロマトグラフィーによって精製することにより、２−クロロ−Ｎ−（２’−（（Ｓ）−２−メチルピロリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−イル）プロパンアミド（６００ｍｇ，５６％）を粘稠性の油状物として得た。ＭＨ＋３４７。
調製２７ ２−（３−メチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）酢酸
３−メチル−１Ｈ−プリン−２，６（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン（１５ｇ，９０ｍｍｏｌ）と、Ｋ２ＣＯ３（１３．７３ｇ，９９ｍｍｏｌ）と、ＤＭＦ（４５１ｍＬ）と、２−クロロ酢酸エチル（９．６２ｍＬ，９０ｍｍｏｌ）との混合物を、９０℃において０．５時間加熱した。その反応物をＲＴに冷却し、水（４５０ｍＬ）を加えた。その撹拌溶液に、水（１００ｍＬ）におけるＬｉＯＨ（４．３２ｇ，１８１ｍｍｏｌ）を加えた。その反応物をＲＴにおいて１時間撹拌した。その反応物を、６Ｎ ＨＣｌを用いてｐＨ４に調整した。形成した沈殿物を回収し、乾燥することにより、２−（３−メチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）酢酸（１８，６７０ｇ，９２％）を白色粉末として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １３．５１ （ｓ， １ Ｈ）， ８．０１ （ｓ， １ Ｈ）， ５．０３ （ｓ， ２ Ｈ）， ３．３６ （ｓ， ３ Ｈ）．
調製２８ ２−（１−メチル−３−メチル−ｄ３−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）酢酸
工程１ ｔｅｒｔ−ブチル２−（１−メチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）アセテート
ＤＭＦ（２００ｍＬ）中の、１−メチルキサンチン（９．０４９ｇ，５４．４ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（８．２５８ｇ，５９．８ｍｍｏｌ）の溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル２−ブロモアセテート（８．０３ｍＬ，５４．４ｍｍｏｌ）を滴下した。その反応物を９０℃において１時間撹拌し、室温に冷却した。その混合物を水に注ぎ込み、ＨＣｌ（６Ｎ，ａｑ．）を用いてｐＨ４に酸性化した。次いで、その混合物をＥＡで抽出した（２００ｍＬ×３）。合わせた有機層を水（２００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空中で濃縮した。粗生成物を、ＭａＯＨ：ＤＣＭ（２：１００）で溶出するクロマトグラフィーによって精製することにより、ｔｅｒｔ−ブチル２−（１−メチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）アセテート（６．５３９ｇ，４３％）を黄色固体として得た。ＭＨ＋２８１。
工程２ ｔｅｒｔ−ブチル２−（１−メチル−３−メチル−ｄ３−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）アセテート
ＲＴのＤＭＦ（２０．６６ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（１−メチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）アセテート（１．１５８ｇ，４．１３ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（０．８５７ｇ，６．２０ｍｍｏｌ）およびヨードメタン−Ｄ３（０．３３４ｍＬ，５．３７ｍｍｏｌ）を加えた。その反応物を６５℃において２時間加熱した。さらなるヨードメタン−Ｄ３（０．２当量）を加え、加熱を１時間続けた。その反応物をＲＴに冷却し、水で希釈し、ＥＡで３回抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（０〜１００％ＥＡ：ヘキサン）によって精製することにより、ｔｅｒｔ−ブチル２−（１−メチル−３−メチル−ｄ３−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）アセテートを得た（１．３５ｇ，不純）。ＭＨ＋２９８。その不純生成物をさらに精製せずに使用した。
工程３ ２−（１−メチル−３−メチル−ｄ３−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）酢酸
ＤＣＭ（２７．２ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（１−メチル−３−メチル−ｄ３−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）アセテート（１．３５ｇ，４．５４ｍｍｏｌ）の溶液をＴＦＡ（１８．１６ｍＬ）で処理した。その反応物をＲＴにおいて２時間撹拌した。その反応物を濃縮することにより、油状物を得て、それを精製せずに使用した。ＭＨ＋２４２。
調製２９ ２’−（６，６−ジフルオロ−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン
工程１ ３−（５−ブロモピリミジン−２−イル）−６，６−ジフルオロ−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン
密封チューブに、５−ブロモ−２−クロロピリミジン（７４８．５ｍｇ，３．９ｍｍｏｌ）、６，６−ジフルオロ−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン塩酸塩（６０４．６ｍｇ，３．９ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（１．１ｇ，７．８ｍｍｏｌ）およびＮＭＰ（３ｍＬ）を投入した。その混合物を１３０℃において３時間撹拌し；次いで、それをＲＴに冷却し、水（４ｍＬ）に注ぎ込んだ。固体を濾過により回収し、真空下で乾燥することにより、３−（５−ブロモピリミジン−２−イル）−６，６−ジフルオロ−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン（１．０ｇ，９３．２％収率）を白色固体として得た。ＭＨ＋２７６。
工程２ （２−（６，６−ジフルオロ−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−イル）ピリミジン−５−イル）ボロン酸
ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の、３−（５−ブロモピリミジン−２−イル）−６，６−ジフルオロ−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン（１．１ｇ，４．１ｍｍｏｌ）および（ｉ−ＰｒＯ）３Ｂ（１．４ｍＬ，６．２ｍｍｏｌ）の溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（３．９ｍＬ，ヘキサン中１．６Ｍ，６．２ｍｍｏｌ）を−７８℃において滴下した。その反応物を−７８℃において２時間撹拌し；次いで、それを水でクエンチし、ＲＴに加温した。溶媒を減圧下で除去し、水層をエーテルで洗浄した（２×５０ｍＬ）。次いで、水層を、１Ｎ ＨＣｌを用いてｐＨ６に調整し、ＥＡで抽出した（３×５０ｍＬ）。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮することにより、２−（６，６−ジフルオロ−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−イル）ピリミジン−５−イル）ボロン酸（７００ｍｇ，７２．６％収率）を白色固体として得た。
工程３ ２’−（６，６−ジフルオロ−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン
１，４−ジオキサン（５ｍＬ）および水（１ｍＬ）中の、（２−（６，６−ジフルオロ−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−イル）ピリミジン−５−イル）ボロン酸（２４１．０ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）と、２−クロロピリミジン−４−アミン（１２９．０ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）と、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（５７．８ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ）と、Ｋ２ＣＯ３（２７６．４ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）との混合物を脱気し、Ｎ２で３回パージした。その反応物を、撹拌しながら３時間、９０℃において加熱した。得られた混合物をＲＴに冷却し、ＥＡに注ぎ込んだ。有機相を分離し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（５０：１）で溶出するクロマトグラフィーで精製することにより、２’−（６，６−ジフルオロ−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン（２１０ｍｇ，７２．３％収率）を白色固体として得た。ＭＨ＋２９１。
調製３０ （２Ｒ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−３，４，５，６−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−７（２Ｈ）−イル）プロパン酸
工程１ （Ｓ）−メチル２−（メチルスルホニルオキシ）プロパノエート
ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の、（Ｓ）−メチル２−ヒドロキシプロパノエート（１２．３７９ｇ，１１９ｍｏｌ）およびＴＥＡ（１７．４ｍＬ，１２５ｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却し、塩化メタンスルホニル（１２．４ｍＬ，１２５ｍｏｌ）を０℃において１時間にわたって滴下した。その混合物を２０℃において１．５時間撹拌した。得られた混合物を氷水（１００ｍＬ）でクエンチした。有機層を分離し、水（２×５０ｍＬ）およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮することにより、粗生成物（Ｓ）−メチル２−（メチルスルホニルオキシ）プロパノエート（２０．９４０ｇ，９７％）を茶色油状物として得て、それを精製せずに使用した。
工程２ （Ｒ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパン酸
ＲＴのＤＭＦ（５００ｍＬ）中の、１，３−ジメチル−３，４，５，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン（４．５８８ｇ，２５．５ｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（７．０３８ｇ，５１ｍｏｌ，２ｅｑ）の懸濁液に、（ｓ）−メチル２−（メチルスルホニルオキシ）プロパノエート（６．９５３ｇ，３８．２ｍｏｌ）を加えた。その混合物をＲＴにおいて一晩撹拌し、次いで、飽和ＮＨ４Ｃｌでクエンチした。得られた混合物をＤＣＭで抽出した（３×３００ｍＬ）。合わせた有機相を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。茶色油状残渣（８．６３３ｇ）をジオキサン（１０ｍＬ）に溶解した。その溶液に、６Ｎ ＨＣｌ（ａｑ．１０ｍＬ）を加えた。その混合物を２時間還流し、ＲＴに冷却し、次いで、濃縮することにより、ジオキサンおよび水相の大部分を除去した。残渣を、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（０〜１０％）で溶出するクロマトグラフィーで精製することにより、（Ｒ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパン酸（６．０１５ｇ，９３．６％収率）を白色固体として得た。
式（Ｉ）の化合物の合成
実施例１ （Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（２，２−ジメチルピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）プロパンアミド
ＤＣＭ（７２ｍＬ）中の、２’−（２，２−ジメチルピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン（４．２ｇ，１５．５ｍｍｏｌ）と、（Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパン酸（３．５６ｇ，１４．１ｍｍｏｌ）との混合物に、ＨＯＡＴ（１．９２ｇ，１４．１ｍｍｏｌ）をＲＴにおいて加えた。その反応物を０℃に冷却し、ピリジン（２．２３ｇ，２８．２ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（２．６７ｇ，２１．２ｍｍｏｌ）を加えた。その反応物を２５〜２８℃に加温し、一晩撹拌した。その反応混合物を０．５Ｎ ＨＣｌでクエンチした。その混合物をｎ−ヘキサンに滴下し、形成した沈殿物を回収し、ＭｅＯＨで洗浄することにより、（Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（２，２−ジメチルピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）プロパンアミド（３ｇ，１９％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ ９．７８ （ｓ， １Ｈ）， ９．１４ （ｓ， ２Ｈ）， ８．５４ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９１ （ｓ， １Ｈ）， ７．７６ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．８３ （ｑ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ １Ｈ）， ３．７７ （ｍ， ２Ｈ）， ３．６３ （ｓ， ３Ｈ）， ３．５０ （ｓ， ３Ｈ）， １．９６ （ｍ， ７Ｈ）， １．６０ （ｓ， ６Ｈ）． ）．
実施例２ （Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（（Ｓ）−２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）プロパンアミド（化合物２）
ＤＣＭ（４８ｍＬ）中の、（Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパン酸（２．４４ｇ，９．６７ｍｍｏｌ）と、（Ｓ）−２’−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−アミン（３．３ｇ，１０．６ｍｍｏｌ）との混合物に、ＨＯＡＴ（１．３ｇ，９．６７ｍｍｏｌ）をＲＴにおいて加えた。その混合物を０℃に冷却した。ピリジン（１．５ｇ，１９．３ｍｍｏｌ）を３０分間にわたって滴下した後、ＤＩＣ（１．８ｇ，１４．５ｍｍｏｌ）を滴下した。その反応物を３５℃において１６時間撹拌し；次いで、それをＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈した。その混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ（５０ｍＬ，０℃に予冷したもの）およびブラインで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を、まずＥＡ：ＰＥ（３：２）で溶出し、次いで、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（３０：１）で溶出するクロマトグラフィーによって精製し、次いで、ＥｔＯＨを用いて再結晶することにより、表題の化合物（４．５ｇ，７８％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．４６ （ｓ， １Ｈ）， ９．２２ （ｓ， ２Ｈ）， ８．６６ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３１ （ｓ， １Ｈ）， ７．８１ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．８２ （ｑ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ １Ｈ）， ５．１２ （ｔ， １Ｈ）， ３．７０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４７ （ｓ， ３Ｈ）， ３．１６ （ｓ， ３Ｈ）， ２．１０ （ｍ， ４Ｈ）， １．８８ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）． ＭＨ＋ ５４５． ジアステレオ過剰率（ｄｅ）：９９％＊．
＊キラルＨＰＬＣ法の条件：カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＩＢ，１５０＊４．６ｍｍ，５μｍ；移動相：Ａ：ヘキサン（ＨＰＬＣグレード）；Ｂ：ＥｔＯＨ（ＨＰＬＣグレード）；流速：０．８ｍＬ／分；勾配：２５分間の３０％Ｂ。結果：所望のジアステレオ異性体（Ｓ）の保持時間は、１４．１６分であり、他方の異性体（Ｒ）は、９．６６分である。
実施例３ （Ｒ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（（Ｓ）−２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）プロパンアミド
ＥｔＯＨ中の実施例２からの再結晶後の母液を濃縮した。残渣をキラル分取ＨＰＬＣ精製にかけることにより、（Ｒ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（（Ｓ）−２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）プロパンアミドを白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．４８ （ｓ， １Ｈ）， ９．２５ （ｓ， ２Ｈ）， ８．６９ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３３ （ｓ， １Ｈ）， ７．８３ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．８１ （ｑ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ １Ｈ）， ５．１３ （ｔ， １Ｈ）， ３．７１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．６９ （ｓ， ３Ｈ）， ３．１７ （ｓ， ３Ｈ）， ２．１４ （ｍ， ４Ｈ）， １．８８ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）． ＭＨ＋ ５４５． ｄｅ： ９９％．＊
＊キラルＨＰＬＣ法の条件：カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＩＢ、１５０＊４．６ｍｍ，５μｍ；移動相：Ａ：ヘキサン（ＨＰＬＣグレード）；Ｂ：ＥｔＯＨ（ＨＰＬＣグレード）；流速：０．８ｍＬ／分；勾配：２５分間の３０％Ｂ。
実施例４ （Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（（Ｒ）−２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）プロパンアミド
表題化合物を、実施例２の方法を用いて調製することにより、白色固体を得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．４６ （ｓ， １Ｈ）， ９．２５ （ｓ， ２Ｈ）， ８．７０ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３３ （ｓ， １Ｈ）， ７．８３ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．８１ （ｑ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ １Ｈ）， ５．１４ （ｔ， １Ｈ）， ３．６７ （ｍ， ２Ｈ）， ３．３２ （ｓ， ３Ｈ）， ３．１４ （ｓ， ３Ｈ）， ２．１０ （ｍ， ４Ｈ）， １．８６ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）． ＭＨ＋ ５４５． ｄｅ ９８％＊
＊キラルＨＰＬＣ法の条件：カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＩＢ、１５０＊４．６ｍｍ，５μｍ；移動相：Ａ：ヘキサン（ＨＰＬＣグレード）；Ｂ：ＥｔＯＨ（ＨＰＬＣグレード）；流速：０．８ｍＬ／分；勾配：２５分間の３０％Ｂ。
実施例５ （Ｓ）−２−（１−メチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（（Ｓ）−２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）プロパンアミド
ＤＣＭ（２ｍＬ）中の、（２Ｓ）−２−（１−メチル−２，６−ジオキソ−３，４，５，６−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−７（２Ｈ）−イル）プロパン酸（９０．４ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ）と、（Ｓ）−２’−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−アミン（１１９ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ）との混合物に、ＨＯＡＴ（１０４ｍｇ，０．７６ｍｍｏｌ）をＲＴにおいて加えた。その反応物を０℃に冷却した。ピリジン（９１ｍｇ，１．１５ｍｍｏｌ）を滴下した後、ＤＩＣ（９７ｍｇ，０．７７ｍｍｏｌ）を滴下した。その反応物を２０℃において１６時間撹拌し；次いで、それをＤＣＭ（１０ｍＬ）で希釈した。その混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌおよびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（３０：１）で溶出するクロマトグラフィーによって精製することにより、表題の生成物（８３ｇ，４１％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．９４ （ｓ， １Ｈ）， １１．４４ （ｓ， １Ｈ）， ９．２５ （ｓ， ２Ｈ）， ８．７１ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２３ （ｓ， １Ｈ）， ７．８４ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．７８ （ｑ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ １Ｈ）， ５．１４ （ｔ， １Ｈ）， ３．７１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．１２ （ｓ， ３Ｈ）， ２．２０ （ｍ， ４Ｈ）， １．８４ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）． ＭＨ＋ ５３１．
実施例６ （Ｓ）−２−（３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（（Ｓ）−２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）プロパンアミド
ＤＣＭ（１ｍＬ）中の、（Ｓ）−２−（３−（ジフルオロメチル）−１−メチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパン酸（６１ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）と、（Ｓ）−２’−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−アミン（３１０ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）との混合物に、ＨＯＡＴ（５７ｍｇ，０．４２ｍｍｏｌ）をＲＴにおいて加えた。その混合物を０℃に冷却した。ピリジン（５０ｍｇ，０．６３ｍｍｏｌ）を滴下した後、ＤＩＣ（５３ｍｇ，０．４２ｍｍｏｌ）を滴下した。その反応物を２０℃において１６時間撹拌し、次いで、ＤＣＭ（１０ｍＬ）で希釈した。その混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌおよびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣をＤＣＭ：ＭｅＯＨ（３０：１）で溶出するクロマトグラフィーによって精製することにより、生成物（４５．６ｍｇ，３７％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．４９ （ｓ， １Ｈ）， ９．２５ （ｓ， ２Ｈ）， ８．７０ （ｓ， １Ｈ）， ８．３９ （ｓ， １Ｈ）， ７．８６ （ｔ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ５．８２ （ｑ， Ｊ ＝ ８ Ｈｚ １Ｈ）， ５．１４ （ｔ， １Ｈ）， ３．７４ （ｍ， ２Ｈ）， ３．１６ （ｓ， ３Ｈ）， ２．２２ （ｍ， ４Ｈ）， １．８７ （ｄ， Ｊ ＝ ８ Ｈｚ， ３Ｈ）． ＭＨ＋ ５８１．
実施例７ Ｎ−（２’−（３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）アセトアミド
ＤＭＦ（３ｍＬ）中の、２−クロロ−Ｎ−（２’−（３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）アセトアミド（５０．０ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）と、Ｋ２ＣＯ３（４１．５ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）と、１，３−ジメチル−１Ｈ−プリン−２，６（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン（２６．５ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）と、ＴＢＡＩ（５．６ｍｇ，０．０１ｍｍｏｌ）との混合物を、９０℃において一晩撹拌した。その反応物をＲＴに冷却し、ＥＡで希釈した。有機相を水、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝３０：１）によって精製することにより、Ｎ−（２’−（３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）アセトアミド（４．０ｍｇ，５．６％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．４８ （ｓ， １Ｈ）， ９．２６ （ｓ， ２Ｈ）， ８．７３ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０８ （ｓ， １Ｈ）， ７．８３ （ｓ， １Ｈ）， ５．３６ （ｓ， ２Ｈ）， ４．６０ （ｔ， Ｊ ＝ １２．２ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．４６ （ｓ， ３Ｈ）， ３．１９ （ｓ， ３Ｈ）． ＭＨ＋ ４８５．１．
実施例８ Ｎ−（２’−（４，４−ジフルオロピペリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）アセトアミド
１，４−ジオキサン（３ｍＬ）および水（０．５ｍＬ）中の、Ｎ−（２−クロロピリミジン−４−イル）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）アセトアミド（８７．３ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）と、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２８．９ｍｇ，０．０３ｍｍｏｌ）と、（２−（４，４−ジフルオロピペリジン−１−イル）ピリミジン−５−イル）ボロン酸（６６．９ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）と、ＮａＨＣＯ３（２１．０ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）との混合物を、窒素を用いて脱気し、９０℃において一晩撹拌した。その反応物をＲＴに冷却し、ＥＡで希釈した。有機相を分離し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝３０：１）によって精製することにより、Ｎ−（２’−（４，４−ジフルオロピペリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）アセトアミド（８．０ｍｇ，６．２％）を白色固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．４４ （ｓ， １Ｈ）， ９．２３ （ｓ， ２Ｈ）， ８．７１ （ｄ， Ｊ ＝ ５．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０８ （ｓ， １Ｈ）， ７．８１ （ｓ， １Ｈ）， ５．３６ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０５ − ３．９７ （ｍ， ４Ｈ）， ３．４６ （ｓ， ３Ｈ）， ３．１９ （ｓ， ３Ｈ）， ２．０６ （ｄｄ， Ｊ ＝ １２．５， ６．６ Ｈｚ， ４Ｈ）． ＭＨ＋ ５１３．１．
実施例９ （Ｓ）−Ｎ−（２’−（３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−イル）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパンアミド
ＤＣＭ（３ｍＬ）中の、（Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパン酸（５７ｍｇ，０．２３ｍｍｏｌ）と、２’−（３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−アミン（５０ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）との混合物に、ＨＯＡＴ（３１ｍｇ，０．２３ｍｍｏｌ）をＲＴにおいて加えた。その反応物を０℃に冷却し、次いで、ピリジン（３０ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した後、ＤＩＣ（３６ｇ，０．２９ｍｍｏｌ）を滴下した。その反応物をＲＴに加温し、次いで、３０℃に加温し、１８時間撹拌した。その反応物を水で抽出した後、飽和ＮＨ４Ｃｌで抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝３０：１）によって精製することにより、（Ｓ）−Ｎ−（２’−（３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−イル）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパンアミド（１０ｍｇ，９％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．５１ （ｓ， １Ｈ）， ９．２６ （ｓ， ２Ｈ）， ８７２ （ｄ， １Ｈ），． ８．３５ （ｓ， １Ｈ）， ７．８６ （ｄ， １Ｈ）， ５．８１ （ｑ， １Ｈ）， ４．６０ （ｔ， ４Ｈ）， ３．４７ （ｓ， ３Ｈ）， ３．１７（ｓ， ３Ｈ）， １．８１（ｄ， ３Ｈ）． ＭＨ＋ ４９９．
実施例１０ Ｎ−（２’−（３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）アセトアミド
ＤＭＦ（３ｍＬ）中の、Ｎ−（２’−（３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）−２−クロロアセトアミド（５０．０ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）と、Ｋ２ＣＯ３（４４．３ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）と、１，３−ジメチル−１Ｈ−プリン−２，６（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン（２８．０ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）と、ＴＢＡＩ（５．９ｍｇ，０．０２ｍｍｏｌ）との混合物を、９０℃において一晩撹拌した。その反応物をＲＴに冷却し、ＥＡで希釈した。有機相を水、飽和ＮＨ４Ｃｌおよびブラインで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２５：１）によって精製することにより、Ｎ−（２’−（３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）アセトアミド（２．０ｍｇ，２．９％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．４１ （ｓ， １Ｈ）， ９．１７ （ｓ， ２Ｈ）， ８．６８ （ｄ， Ｊ ＝ ５．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０８ （ｓ， １Ｈ）， ７．７６ （ｓ， １Ｈ）， ５．３６ （ｓ， ２Ｈ）， ３．８７ （ｄ， Ｊ ＝ １１．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．５９ （ｓ， ２Ｈ）， ３．５１ （ｓ， ３Ｈ）， ３．１９ （ｓ， ３Ｈ）， ０．８２ （ｍ， ３Ｈ）， ０．１８ （ｓ， １Ｈ）． ＭＨ＋ ４７５．
実施例１１ ２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（３−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）
ＤＭＦ（３ｍＬ）中の、２−クロロ−Ｎ−（２’−（３−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）アセトアミド（１００．０ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ）と、Ｋ２ＣＯ３（５３．７ｍｇ，０．３９ｍｍｏｌ）と、１，３−ジメチル−１Ｈ−プリン−２，６（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン（４６．６ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ）と、ＴＢＡＩ（９．７ｍｇ，０．０３ｍｍｏｌ）との混合物を、９０℃において一晩撹拌した。その反応物をＲＴに冷却し、ＥＡで希釈した。有機相を水、飽和ＮＨ４Ｃｌおよびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝３０：１）によって精製することにより、２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（３−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’ビピリミジン］−４−イル）アセトアミド（４．０ｍｇ，２．９％）を白色固体として得た。１ＨＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．４２ （ｓ， １Ｈ）， ９．２２ （ｓ， ２Ｈ）， ８．７０ （ｄ， Ｊ ＝ ５．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０８ （ｓ， １Ｈ）， ７．７９ （ｓ， １Ｈ）， ５．３６ （ｓ， ２Ｈ）， ３．９１ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．７， ８．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７７ （ｓ， １Ｈ）， ３．７２ − ３．６１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４６ （ｓ， ３Ｈ）， ３．１９ （ｓ， ３Ｈ）， ２．３５ − ２．２９ （ｍ， １Ｈ）， ２．１４ （ｄｄ， Ｊ ＝ １２．９， ７．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．００ （ｄ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， １Ｈ）． ＭＨ＋ ５３１．
実施例１２ Ｎ−（２’−（３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）アセトアミド
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の、２−クロロ−Ｎ−（２−（２−（３−（トリフルオロメチル）アゼチジン−１−イル）ピリミジン−５−イル）ピリミジン−４−イル）アセトアミド（７０ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）と、Ｋ２ＣＯ３（５１．９ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ）と、１，３−ジメチル−１Ｈ−プリン−２，６（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン（３４．２ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）と、ＴＢＡＩ（１１．２ｍｇ，０．０１９ｍｍｏｌ）との混合物を、５０℃において２時間撹拌した。その反応物をＲＴに冷却し、ＥＡで希釈した。有機相を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。ＭｅＯＨを用いてトリチュレートした粗生成物を濾過し、乾燥することにより、表題の生成物２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−１，２，３，６−テトラヒドロプリン−７−イル）−Ｎ−（２−（２−（３−（トリフルオロメチル）アゼチジン−１−イル）ピリミジン−５−イル）ピリミジン−４−イル）アセトアミド（７．０ｍｇ，５．６％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ９．２２ （ｓ， ２Ｈ）， ８．７１ （ｄ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０８ （ｓ， １Ｈ）， ７．８１ （ｄ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８３ （ｓ， １Ｈ）， ５．３６ （ｓ， ２Ｈ）， ４．３９−４．４４ （ｍ， ２Ｈ）， ４．１２ − ４．１７ （ｍ， ２Ｈ）， ３．７６ − ３．７８ （ｍ， １Ｈ）， ３．４５ （ｓ， ３Ｈ）， ３．２１ （ｓ， ３Ｈ）． ＭＨ＋ ５１７．
実施例１３ （Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（３−（トリフルオロメチル）アゼチジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−イル）プロパンアミド
ＤＣＭ（３ｍＬ）中の、（Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパン酸（８５ｍｇ，０．３４ｍｍｏｌ）と、２’−（３−（トリフルオロメチル）アゼチジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−アミン（１００ｍｇ，０．３４ｍｍｏｌ）との混合物に、ＨＯＡＴ（４６ｍｇ，０．３４ｍｍｏｌ）をＲＴにおいて加えた。その反応物を０℃に冷却した。続けて、ピリジン（５４ｍｇ，０．６８ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（６４ｍｇ，０．５１ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した。その反応物を３０℃に加温し、１８時間撹拌した。その反応物を水（５ｍＬ）および飽和ＮＨ４Ｃｌ（５ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を、ＰＥ：ＥＡ（１：１）で溶出するクロマトグラフィーによって精製することにより、（Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（３−（トリフルオロメチル）アゼチジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−イル）プロパンアミド（６０ｍｇ，３３．３％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６，） δ １１．４９ （ｓ， １Ｈ）， ９．２２ （ｓ， ２Ｈ）， ８．７０ （ｄ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３４ （ｓ， １Ｈ）， ７．８４ （ｄ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．８１ （ｑ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ １Ｈ）， ４．４２ （ｔ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．１３−４．１７ （ｍ， ２Ｈ）， ３．７５−３．７８ （ｍ， １Ｈ）， ３．４５ （ｓ， ３Ｈ）， ３．１８（ｓ， ３Ｈ）， １．８７（ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ ， ３Ｈ）， ＭＨ＋ ５３１．
実施例１４ （Ｓ）−Ｎ−（２’−（４，４−ジフルオロピペリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−イル）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパンアミド
ＤＣＭ（３ｍＬ）中の、（Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパン酸（５０ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）および２’−（４，４−ジフルオロピペリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−アミン（５８ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＡＴ（２７ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）をＲＴにおいて加えた。その反応物を０℃に冷却した。続けて、ピリジン（３２ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ）、次いで、ＤＩＣ（３８ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した。その反応物を１８時間、３０℃に加温した。その反応物を水（５ｍＬ）および飽和ＮＨ４Ｃｌ（５ｍＬ）で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を、ＰＥ：ＥｔＯＡｃ（１：１）で溶出する分取ＴＬＣによって精製することにより、（Ｓ）−Ｎ−（２’−（４，４−ジフルオロピペリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−イル）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパンアミド（１５ｍｇ，１４．３％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６，） δ ９．２２ （ｓ， ２Ｈ）， ８．７０ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３４ （ｓ， １Ｈ）， ７．８３ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．８１ （ｑ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ １Ｈ）， ４．０２ （ｔ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．５４ （ｓ， ３Ｈ）， ３．２１ （ｓ， ３Ｈ）， ２．０１−２．１０ （ｍ， ４Ｈ）， １．８７（ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ ， ３Ｈ）． ＭＨ＋ ５２７．２．
実施例１５ （２Ｓ）−Ｎ−（２’−（３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−イル）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパンアミド
表題化合物を、実施例１４の方法に従って２０．７％の収率で白色固体として調製した。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．４２ （ｓ， １Ｈ）， ９．１６ （ｓ， ２Ｈ）， ８．６６ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３３ （ｓ， １Ｈ）， ７．７９ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．８１ （ｑ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ １Ｈ）， ３．８６ （ｄ， Ｊ ＝ １１．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．５７ （ｄ， Ｊ ＝ １１．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．４１ （ｓ， ３Ｈ）， ３．１７ （ｓ， ３Ｈ）， １．８６ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．７０ （ｔ， Ｊ ＝ ３．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ０．７５−０．８０ （ｍ， １Ｈ）， ０．１５−０．１８ （ｍ， １Ｈ）． ＭＨ＋ ４８９．
実施例１６ （２Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（３−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−イル）プロパンアミド
表題化合物を、実施例１４の方法に従って３９．１％の収率で白色固体として調製した。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．４６ （ｓ， １Ｈ）， ９．２２ （ｓ， ２Ｈ）， ８．６９ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３４ （ｓ， １Ｈ）， ７．８１ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．８２ （ｑ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８８−３．９４ （ｍ， １Ｈ）， ３．６９−３．７８ （ｍ， １Ｈ）， ３．６２−３．６７ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５０ （ｓ， ３Ｈ）， ３．４３−３．４９ （ｍ， １Ｈ）， ３．２０ （ｓ， ３Ｈ）， ２．３０−２．３５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．１２−２．１７（ｍ， １Ｈ）， １．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）． ＭＨ＋ ５４５．２．
実施例１７ （Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（２−メチルピペリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−イル）アセトアミド
ＤＭＦ（８ｍＬ）中の１，３−ジメチル−１Ｈ−プリン−２，６（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン（２０８ｍｇ，１．１６ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（３２０ｍｇ，２．３２ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−クロロ−Ｎ−（２’−（２−メチルピペリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−イル）アセトアミド（４００ｍｇ，１．１６ｍｍｏｌ）を加えた。その反応物をＲＴにおいて１時間撹拌し；次いで、氷水に注ぎ込んだ。固体沈殿物を回収し、ＭｅＯＨを用いてトリチュレートすることにより、（Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（２−メチルピペリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−イル）アセトアミド（２２０ｍｇ，４５．５％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．３８ （ｓ， １Ｈ）， ９．１７ （ｓ， ２Ｈ）， ８．６８ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０７ （ｓ， １Ｈ）， ７．７５ （ｓ， １Ｈ）， ５．３６ （ｓ， ２Ｈ）， ５．１２−５．１４ （ｍ， １Ｈ）， ４．６７−４．７１ （ｍ， １Ｈ）， ３．４５ （ｓ， ３Ｈ）， ３．１９ （ｓ， ３Ｈ）， ３．００ （ｔ， Ｊ ＝ １２ Ｈｚ， １Ｈ）， １．５７−１．７５ （ｍ， ５Ｈ）， １．２２−１．４０ （ｍ， １Ｈ）， １．１９ （ｄ， Ｊ ＝ ８ Ｈｚ， ３Ｈ）． ＭＨ＋ ４９１．
実施例１８ ２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（２，２−ジメチルピロリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−イル）アセトアミド
表題化合物を、実施例１７の方法を用いて４３．１％の収率で白色固体として調製した。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ ９．５９ （ｓ， １Ｈ）， ９．１９ （ｓ， ２Ｈ）， ８．６０ （ｄ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７７ （ｓ， ２Ｈ）， ５．１８ （ｓ， ２Ｈ）， ３．７７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．６４ （ｓ， ３Ｈ）， ３．４７ （ｓ， ３Ｈ）， １．９４−１．９８ （ｍ， ４Ｈ）， １．６０４ （ｓ， ６Ｈ）． ＭＨ＋ ４９１．
実施例１９ （Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（２−メチルピロリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−イル）アセトアミド
表題化合物を、実施例１７の方法を用いて４６．７％の収率で白色固体として調製した。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．３８ （ｓ， １Ｈ）， ９．１８ （ｓ， ２Ｈ）， ８．６８ （ｄ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０９ （ｓ， １Ｈ）， ７．７８ （ｓ， １Ｈ）， ５．３７ （ｓ， ２Ｈ）， ４．３２ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．５４−３．６８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４７ （ｓ， ３Ｈ）， ３．２０ （ｓ， ３Ｈ）， １．７１−２．１１ （ｍ， ４Ｈ）， １．２４ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）． ＭＨ＋ ４７７．
実施例２０ ２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（（Ｓ）−２−メチルピロリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−イル）プロパンアミド
ＤＭＦ（８ｍＬ）中の１，３−ジメチル−１Ｈ−プリン−２，６（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン（３１２ｍｇ，１．７３ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（４７７ｍｇ，３．４６ｍｍｏｌ）、２−クロロ−Ｎ−（２’−（（Ｓ）−２−メチルピロリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−イル）プロパンアミド（６００ｍｇ，１．７３ｍｍｏｌ）を加えた。その反応物をＲＴにおいて１時間撹拌し；次いで、氷水に注ぎ込んだ。固体沈殿物を回収し、ＭｅＯＨで洗浄することにより、２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（（Ｓ）−２−メチルピロリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−イル）プロパンアミド（１３０ｍｇ，１６％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．４３ （ｓ， １Ｈ）， ９．１８ （ｓ， ２Ｈ）， ８．６７ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３４ （ｓ， １Ｈ）， ７．７８ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．８２ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３１ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．５３−３．６８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４６ （ｓ， ３Ｈ）， ３．１９ （ｓ， ３Ｈ）， １．７１−２．１９ （ｍ， ７Ｈ）， １．２３ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）． ＭＨ＋ ４９１．
実施例２１ （Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（（Ｓ）−２−メチルピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）プロパンアミド
実施例２０からのジアステレオ異性生成物混合物を、キラルカラム＊を用いる超臨界流体クロマトグラフィーによって分離することにより、（Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（（Ｓ）−２−メチルピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）プロパンアミドを無色の液体として得た（保持時間６．０分）。ＭＨ＋４９１。
＊キラルＨＰＬＣ分離条件 Ｃｈｉｒａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｗｅｓｔ Ｃｈｅｓｔｅｒ，ＰＡ）製の２．１×２５．０ｃｍ ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＩＣ、５０％の超臨界二酸化炭素および５０％のＤＣＭ：ヘキサン：イソプロパノールの２：１：１混合物を用いる、８０ｍＬ／分の流速。
実施例２２ （Ｒ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（（Ｓ）−２−メチルピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）プロパンアミド
実施例２０からのジアステレオ異性生成物混合物を、キラルカラム＊を用いる超臨界流体クロマトグラフィーによって分離することにより、（Ｒ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（（Ｓ）−２−メチルピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）プロパンアミドを無色の液体として得た（保持時間４．８分）。ＭＨ＋４９１。
＊キラルＨＰＬＣ分離条件 Ｃｈｉｒａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｗｅｓｔ Ｃｈｅｓｔｅｒ，ＰＡ）製の２．１×２５．０ｃｍ ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＩＣ、５０％の超臨界二酸化炭素および５０％のＤＣＭ：ヘキサン：イソプロパノールの２：１：１混合物を用いる、８０ｍＬ／分の流速。
実施例２３ ２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（（Ｓ）−２−メチルピペリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−イル）プロパンアミド
表題の生成物を、調製２６および実施例２０の方法を用いて２８．３％の収率で白色固体として調製した。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ ９．７３ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ９．１７ （ｓ， ２Ｈ）， ８．５６ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８６ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ） ７．７９ （ｄ， Ｊ ＝ ４ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．７６ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．７６ （ｄ， Ｊ ＝ １２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．６０ （ｓ， ３Ｈ）， ３．４７ （ｓ， ３Ｈ）， ３．０２ （ｔ， Ｊ ＝ １２ Ｈｚ， １Ｈ）， １．９０ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．４８−１．７８ （ｍ， ６Ｈ）， １．２３ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）． ＭＨ＋ ５０５．
実施例２４ （Ｓ）−２−（３−メチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（２−メチルピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）アセトアミド
（Ｓ）−２’−（２−メチルピロリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−アミン（２４９ｍｇ，０．９７１ｍｍｏｌ）、２−（３−メチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）酢酸（４３６ｍｇ，１．９４３ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（７４５ｍｇ，３．８９ｍｍｏｌ）をピリジン（２．４３ｍＬ）に加えた。その反応物をＲＴにおいて２日間撹拌した。その反応物を濃縮し、残渣をクロマトグラフィーによって精製することにより、（Ｓ）−２−（３−メチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（２−メチルピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）アセトアミド（５０ｍｇ，１１％）を無色の液体として得た。ＭＨ＋４６３。
実施例２５ Ｎ−｛２−［２−（（２Ｓ）−２−メチルピロリジニル）ピリミジン−５−イル］ピリミジン−４−イル｝−２−（１−メチル−３−メチル−ｄ３−２，６−ジオキソ（１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル））アセトアミド
２−（１−メチル−３−メチル−ｄ３−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）酢酸（０．２００ｇ，０．８２９ｍｍｏｌ）と、（Ｓ）−２’−（２−メチルピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン（０．２１３ｇ，０．８２９ｍｍｏｌ）と、ＥＤＣ（０．３１８ｇ，１．６５８ｍｍｏｌ）との混合物を、ＲＴにおいてピリジン（４．１５ｍＬ）に溶解した。その反応物を一晩撹拌し、次いで、水で希釈した。その反応物をＥＡで３回抽出した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣をクロマトグラフィーによって精製することにより、Ｎ−｛２−［２−（（２Ｓ）−２−メチルピロリジニル）ピリミジン−５−イル］ピリミジン−４−イル｝−２−（１−メチル−３−メチル−ｄ３−２，６−ジオキソ（１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル））アセトアミド（６６．１ｍｇ １７％）を無色の液体として得た。ＭＨ＋４８０。
実施例２６ （（２Ｓ）−Ｎ−（２−（２−（３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−イル）ピリミジン（ｐｙｒａｍｉｄｉｎ）−５−イル）チアゾール−４−イル）−２−（３−メチル−２，６−ジオキソ−１−（２−オキソブチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパンアミド
表題化合物を、実施例１４の方法を用いて８％の収率で白色固体として調製した。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯｄ６） δ １１．４７ （ｓ， １Ｈ）， ９．２０ （ｓ， ２Ｈ）， ８．６９ （ｄ， Ｊ ＝ ５．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３５ （ｓ， １Ｈ）， ７．８２（ｄ， Ｊ ＝ ５．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．８３ （ｓ， １Ｈ）， ４．０１ （ｄ， Ｊ ＝ １２．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．８７ （ｄ， Ｊ ＝ １１．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．４６ （ｓ， ３Ｈ）， ３．１８（ｓ， ３Ｈ）， ２．７１ （ｄ， Ｊ ＝ １１．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．８７ （ｄ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， ３Ｈ）． ＭＨ＋ ５２５．
実施例２７ （Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）アセトアミド
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の、２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）アセチルクロリド（２５０ｍｇ，０．９７ｍｍｏｌ）と、（Ｓ）−２’−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン（３３２ｍｇ，１．０７ｍｍｏｌ）との混合物に、０℃においてＤＩＰＥＡ（０．５０９ｍＬ，２．９２ｍｍｏｌ）を加えた。その反応物をＲＴにおいて１８時間撹拌し、次いで、２４時間還流した。その混合物をＲＴに冷却し、水（７５ｍＬ）で希釈し、ＥＡで抽出した（５０ｍＬ×３）。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（１００％ＥＡで溶出する）によって精製することにより、表題化合物（１７ｍｇ，３．３％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ ９．６ （ｂｒｄ ｓ， １Ｈ）， ９．２６ （ｓ， ２Ｈ）， ８．６１ （ｄ， Ｊ ＝ ４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９６−７．８ （ｍ， １Ｈ）， ７．７５ （ｓ， １Ｈ）， ５．２２−５．０６ （ｍ， ３Ｈ）， ５．１２ （ｔ， １Ｈ）， ３．８９−３．７５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．６２ （ｓ， ３Ｈ）， ３．４６ （ｓ， ３Ｈ）， ２．３５−２．２２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．１８−２．０４ （ｍ， ２Ｈ）． ＭＨ＋ ５３１．
実施例２８ （Ｒ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（（Ｒ）−２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）プロパンアミド
表題化合物を、実施例２の方法を用いて調製することにより、表題化合物を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．４６ （ｓ， １Ｈ）， ９．２２ （ｓ， ２Ｈ）， ８．６６ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３１ （ｓ， １Ｈ）， ７．８１ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．８２ （ｑ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ １Ｈ）， ５．１２ （ｔ， １Ｈ）， ３．７０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４７ （ｓ， ３Ｈ）， ３．１６ （ｓ， ３Ｈ）， ２．１０ （ｍ， ４Ｈ）， １．８８ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）． ＭＨ＋ ５４５
実施例２９ （Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（（Ｓ）−２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−イル）プロパンアミドのプロセススケールの合成
工程１ （Ｒ）−メチル２−（（（トリフルオロメチル）スルホニル）オキシ）プロパノエート
窒素雰囲気下の５０Ｌの反応容器に、塩化メチレン（３０Ｌ）を投入し、撹拌した。（Ｒ）−乳酸メチル（１．４４ｋｇ，１３．８３ｍｏｌ）を加えた後、２，６−ルチジン（１．５６ｋｇ，１４．５６ｍｏｌ）を加えた。その撹拌混合物を、ドライアイス／アセトン浴を用いて−５〜５℃に冷却した。蠕動ポンプを用いて、内部温度を−５〜５℃に維持しつつ、その反応容器にトリフルオロメタンスルホン酸無水物（３．９ｋｇ，１３．８３ｍｏｌ）を慎重に投入した。この添加には、１時間超が必要であった。添加が完了した後、温度を０〜５℃に維持しつつ、その反応物をさらに１時間撹拌した。その反応物を脱イオン水（１０Ｌ）で慎重にクエンチし、激しい撹拌を１分間続けた。撹拌を停止し、相を分離させた。反応容器をアセトン（２×１０Ｌ）、次いで、塩化メチレン（２×１０Ｌ）で連続的に浄化しつつ、生成物を含む下（塩化メチレン）層を保持容器に移した。中間体のトリフレートを精製せずにそのまま使用した。
工程２ メチル（Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパノエート
Ｒ−メチル２−（（（トリフルオロメチル）スルホニル）−オキシ）プロパノエートの塩化メチレン生成物溶液を、清浄になった５０Ｌの反応容器に戻し、混合物を窒素雰囲気下に置いた。その混合物を撹拌しながら、ドライアイス／アセトン浴を用いて０〜５℃に冷却した。冷却中に、テオフィリン（２．０ｋｇ，１１．１ｍｏｌ）をその反応容器に投入した。内部温度を１０℃未満に維持しつつ、その反応容器に、１，１，３，３−テトラメチルグアニジン（１．３４ｋｇ，１１．６６ｍｏｌ）を、蠕動ポンプを介してゆっくり加えた。添加が完了した後、反応温度を０〜１０℃で維持しつつ、その反応物を少なくとも１時間撹拌した。３０分後に採取されたアリコートをＨＰＬＣによって試験し、その反応が完了したことを確かめた。その反応容器に氷冷０．２Ｎ ＨＣｌ（１０Ｌ）を加えることにより、反応をクエンチした。その混合物を１〜２分間激しく撹拌した。撹拌を停止し、相を分離させた。下の塩化メチレン生成物層を保持容器に移した。上の水層を取り出し、廃棄した。下の塩化メチレン層をその反応容器に戻し、それを１〜２分間激しく撹拌しながら、５％ＮａＨＣＯ３水溶液（１０Ｌ）で抽出した。撹拌を停止し、相を分離させた。下の生成物層を保持容器に移した。上の水層を取り出し、廃棄した。下の塩化メチレン層を反応容器に戻し加えた。脱イオン水（１０Ｌ）をその反応容器に加えた。その混合物を１分間激しく撹拌した。撹拌を停止し、相を分離させた。下の生成物層を保持容器に移した。上の水層を取り出し、廃棄した。塩化メチレン生成物を含む溶液をロータリーエバポレーターに移し、その塩化メチレンの大部分が蒸留されるまで、真空下で濃縮したところ（浴温度３０〜４０℃）、粗メチル（Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパノエートが黒っぽい粘稠性のシロップ状物として残った。サンプルのＨＰＬＣ解析によって、生成物およびその純度を確かめた。
工程３ （Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパン酸
メチル（Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパノエート（７．１６ｋｇ，工程１および２の二つのバッチからの粗シロップ状物）をロータリーエバポレーターのバルブ（ｂｕｌｂ）に移した。真空を適用し、塩化メチレンがそれ以上蒸留されなくなるまで、そのバルブを３０〜４０℃の浴温度で回転させた。別個に、３Ｎ ＨＣｌ水溶液（３２Ｌ，４．５当量，４ｋｇのテオフィリンに基づく）を調製した。ロータリーエバポレーターのバルブからの残渣を５０Ｌの反応容器に移した。そのバルブを少量の３Ｎ ＨＣｌですすぐことにより、すべての粗エステルを取り出してその反応容器に移し、残りの３Ｎ ＨＣｌをその反応容器に投入した。その反応混合物を７０〜７５℃において少なくとも１６時間加熱した。１６時間後の反応物の状態を、少量のアリコートのＨＰＬＣ解析によって確認し、エステルの量が酸生成物に対して１０％未満であったら、完了したと見なした。その混合物を、少なくとも１６時間、撹拌しながら室温に冷却した。生成物をブフナー漏斗上に回収し、固体を氷冷脱イオン水で洗浄した（２×２Ｌ）。混合物が自由流動性の固体になるまで、固体を真空漏斗上で一晩乾燥した（２．９５Ｋｇ）。粗生成物は、ＨＰＬＣ解析によると９３．８％純粋であった。
粗（Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパン酸の一部（１ｋｇ）を２２Ｌの反応容器に投入した。その反応容器に脱イオン水（９Ｌ，９体積）を加え、撹拌を開始した。そのスラリーを９５℃に加熱し、すべての固体が溶解するまでその温度で保持した。その高温の混合物に、２５０ｍＬの脱イオン水中の４０ｇ（４重量％）のＮｏｒｉｔｅ（登録商標）活性炭のスラリーを加え、撹拌を９０〜９５℃において１時間続けた。その高温の混合物を、２２Ｌの容器からガラスマイクロファイバーフィルターを備えた濾過用漏斗を通して清浄な５０Ｌの反応容器に慎重に移した。このプロセスを、１ｋｇの上記粗酸を用いてさらに２回繰り返し、毎回、同じ５０Ｌの反応容器に濾過した。その反応容器を、撹拌しながら３０℃未満に冷却した。固体を濾過し、生成物を氷冷脱イオン水で洗浄した（２×２Ｌ）。生成物を、その濾過用漏斗上で少なくとも１２時間乾燥し、次いで、それを真空オーブンに移し、一定重量になるまで乾燥することにより、（Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパン酸を得た（２．２５ｋｇ）。精製された生成物は、ＨＰＬＣによると９９．３１％純粋であり、キラルＨＰＬＣによると１００％の鏡像異性体純度を有した。テオフィリン出発物質に基づくと、純粋な（Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパン酸の全収率は、４２．４％であった。
工程４ （Ｓ）−５−ブロモ−２−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリミジン
機械的撹拌、還流冷却器、窒素入口、熱電対および外付けマントルヒーターが備え付けられた反応容器に、（Ｓ）−２−トリフルオロメチルピロリジン（１５９８ｇ，１１．４９ｍｏｌ）、５−ブロモ−２−クロロピリミジン（２０００ｇ，１０．３４ｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（９Ｌ）を投入した。その撹拌混合物を５０℃に加温した。その混合物が、溶液になったら、ジイソプロピルエチルアミン（１６３３ｇ，１２．６４ｍｏｌ）を加え、その反応温度を１２０℃に上げた。ＨＰＬＣによるとその反応が完了するまで、その反応物を２４〜４８時間撹拌した。その反応物を７０℃以上に冷却し、内容物を、水（９０Ｌ）を含む第２の撹拌容器に移した。この混合物を撹拌し、２０℃に冷却し、次いで、さらに５〜１０℃に冷却し、この温度において２時間保持した。固体生成物を濾過により回収し、冷水で洗浄した（３×５Ｌ）。生成物を５０℃の真空下で一定重量になるまで乾燥することにより、（Ｓ）−５−ブロモ−２−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリミジン（２８９８ｇ，９４．６％）を、ＨＰＬＣによると約９９％純粋な薄茶色固体として得た。
工程５ （Ｓ）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−２−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリミジン
機械的撹拌、還流冷却器、窒素入口、熱電対および外付けマントルヒーターが備え付けられた反応容器に、ジオキサン（８Ｌ）を投入し、静かな撹拌を開始した。その反応物に、（Ｓ）−５−ブロモ−２−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリミジン（１６００ｇ，５．４０ｍｏｌ）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ（１，３，２−ジオキサボロラン）（２０５８ｇ，８．１１ｍｏｌ）および酢酸カリウム（１０５９ｇ，１０．８１ｍｏｌ）を投入した。さらなるジオキサン（１７Ｌ）を加え、その混合物に窒素ガスを通した。その反応物にビス−（トリフェニルホスフィン）パラジウムクロリド触媒（１１３．７ｇ，０．１６１ｍｏｌ）を加えた。その混合物に窒素をなおも通しながら、その反応物を加熱した。反応温度が５０℃に達したら、混合物に窒素を通さなかった。しかしながら、窒素雰囲気を維持し、冷却器を通じて排出した。反応温度を９５〜１００℃に上げて、約１６〜２４時間後にＨＰＬＣ解析がその反応が完了したことを示すまで、この温度で維持した。その反応物を６０℃以上に冷却し、３８体積の水を含む反応容器に蠕動ポンプを介して移した。移送ラインを０．２５〜１．５０体積のジオキサンですすいだ。生成物の結晶化を促進するために適切であるとき、その反応容器にさらなる水を加えた。その混合物を１０±５℃に冷却し、少なくとも１時間保持した。生成物をブフナー漏斗に回収し、冷水で洗浄し（３×２体積）、一定重量が達成されるまで、５０〜６０℃の真空下で乾燥した。（Ｓ）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−２−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリミジンを薄茶色固体，１９６４ｇとして得た。この固体は、１２．７％の水を含み、ＨＰＬＣによって測定したとき、およそ９６％の純度であった。収率は、１７１５ｇ，９１．４％であると推定された。その材料は、残留水の除去なしで、さらなる反応に適していた。
工程６ （Ｓ）−２’−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン
工程５からの湿った（Ｓ）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−２−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリミジン（１９６４ｇ）を含水率についてアッセイし、化学量論をしかるべく調整した（１７１５ｇ，５．０ｍｏｌ）。マントルヒーター、熱電対コントローラー、窒素入口、メカニカルスターラーおよび還流冷却器が備え付けられた反応容器にジオキサン（１６Ｌ）を加えた。化合物（Ｓ）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−２−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリミジン（１７１５ｇ，５．０ｍｏｌに補正された）、４−アミノ−２−クロロピリミジン（６４８ｇ，５ｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（９６２ｇ，９．０８ｍｏｌ）をその反応容器に加えた。さらなるジオキサン（８Ｌ）を加える。その溶液に窒素ガスを約３０〜６０分間通して、冷却器から排出させた。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（２３０ｇ ０．２ｍｏｌ）を加え、ジオキサン（１Ｌ）を用いて残留触媒を反応容器にすすぎ入れた。加熱を開始し、混合物が約５０℃に達するまで、窒素バブリングを続けた。この時点において、窒素チューブを溶液の表面より上に引き上げたが、窒素窒素（ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｔｈｅ ｎｉｔｒｏｇｅｎ）雰囲気を維持して、冷却器から排出させた。温度を８５〜９０℃に上げ、ＨＰＬＣによって測定したとき、その反応が完了するまで（１〜４時間）、維持した。その反応物を６０ｎ℃以上に冷却し、温度を維持しつつ、水（１８Ｌ）を加えた。その反応混合物を、高温の状態でＧＦ−Ｂガラス繊維紙で濾過してフィルターボトルに入れた。濾液を温かいまま反応容器に移し、必要に応じて１：１ジオキサン／水（０．５〜３Ｌ）ですすぎ、反応容器のジャケット温度を４５℃に設定した。次いで、その反応容器に水（３６Ｌ）を移し、加えている間、温度を維持した。その混合物を５±５℃にゆっくり冷却し、結晶化を最大にするために必要なとき、その反応容器にさらなる水を加えた。温度を少なくとも２時間、５±５℃で維持し、その後、生成物をブフナー漏斗に回収し、冷水で洗浄した（３×３．５Ｌ）。一定重量が達成されるまで、生成物を５０〜６０℃の真空下で乾燥することにより、（Ｓ）−２’−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン（１０７３ｇ，７０％）をオフホワイトの固体として得た。
この粗生成物の一部（７５４ｇ，２．４３ｍｏｌ）を３Ｎ ＨＣｌ（１５Ｌ）でスラリー化し、濾過することにより、不純物を除去した。その酸性溶液をＭＴＢＥ（４Ｌ））およびヘプタン（４Ｌ）で抽出した。これらの有機抽出物を廃棄して処分した。その酸性溶液を、５０％水酸化ナトリウムを用いてｐＨ９〜１０に塩基性化した。その混合物を冷却し、沈殿物を濾過により回収した。固体を冷水で洗浄し、真空下で乾燥することにより、オフホワイトの固体，６９５ｇ，９２％回収率を得た。この材料中の残留パラジウムは、７８２ｐｐｍであった。この生成物を５０％アセトニトリル水溶液（８Ｌ）から再結晶した。その混合物を冷却し、生成物を濾過により回収し、冷溶媒ですすぎ、真空下で乾燥することにより、４０１．７ｇ（最初の７５４ｇの５３％）のオフホワイトの固体を得て、それは、この時点で１８１ｐｐｍの残留パラジウムを含んでいた。このオフホワイトの固体をＴＨＦに溶解し、パラジウムスカベンジャーＳｉｌｉＣｙｃｌｅ（登録商標）ＳｉｌｉａＭｅｔＳ（登録商標）Ｔｈｉｏｌ樹脂（２５ｇ）で処理した。溶媒を除去することにより、（Ｓ）−２’−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミンを白色固体として得て（３９０ｇ，９７％回収率）、それは、ＨＰＬＣによると９７％超純粋であり、１０ｐｐｍ未満の残留パラジウムを含んでいた。
工程７ （Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（（Ｓ）−２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−イル）プロパンアミド
撹拌機、窒素入口および冷却器を備えた１００Ｌの反応容器に、ジクロロメタン（２０Ｌ）、（Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）プロパン酸（１．０ｋｇ，３．９６ｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１４．５ｍＬ，０．２ｍｏｌ）を加えた。さらなるジクロロメタン（１０Ｌ）を加え、撹拌混合物を１０〜１５℃に冷却した。温度を２５℃未満に維持しつつ、塩化オキサリル（１．５１ｋｇ，１１．９ｍｏｌ）をゆっくり加えた。その反応物を２５℃において３０〜６０分間撹拌した。窒素をブリードしながら真空下のその反応物から溶媒を蒸留し、必要に応じて反応容器のジャケット温度を３５℃に上げた。さらなるジクロロメタン（２０Ｌ）を加え、その反応物から溶媒を再度蒸留した。ジクロロメタンの添加および蒸留を繰り返した。テトラヒドロフラン（１０Ｌ）を加え、これにより、白色からベージュのスラリーが得られた。その反応物に、（Ｓ）−２’−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン（１．０７ｋｇ，３．４５ｍｏｌ）を加え、その添加容器をテトラヒドロフラン（１．５Ｌ）ですすいで反応混合物に入れた。その反応物を≦０℃に冷却し、２，６−ルチジン（０．９６４Ｌ，８．２８ｍｏｌ）を加え、反応温度を５℃未満に維持した。ＨＰＬＣによってその反応が完了したと考えられるまで、その反応物を約０℃において撹拌した（約２％の（Ｓ）−２’−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミンが残っていた）。約１４時間後、反応温度を１５℃未満に維持しつつ、その反応物を０．２Ｎ ＨＣｌ（４０Ｌ）および水（２０Ｌ）で慎重にクエンチした。固体生成物を回収し、脱イオン水で２回洗浄した。固体を、一定重量になるまで、５０〜６０℃の真空下で乾燥することにより、１，４７３ｇ（７８％）の（Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（（Ｓ）−２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−イル）プロパンアミドを得た。この生成物材料を、同様の反応からの１，４３５ｇの生成物と合わせ、２％エタノール水溶液（８６．８Ｌ）から再結晶することにより、２，２５０ｇの精製された（Ｓ）−２−（１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７（６Ｈ）−イル）−Ｎ−（２’−（（Ｓ）−２−（トリフルオロ−メチル）ピロリジン−１−イル）−２，５’−ビピリミジン−４−イル）プロパンアミドをオフホワイトの固体として得た。
実施例３０ （Ｓ）−５−ブロモ−２−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリミジンからの（Ｓ）−２’−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミンのテレスコーピング合成
ジオキサン（１７．２５Ｌ）が投入された反応容器に、（Ｓ）−５−ブロモ−２−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリミジン（１５００ｇ，５．０６６ｍｏｌ）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ（１，３，２−ジオキサボロラン）（１９３７ｇ，７．６２８ｍｏｌ）および酢酸カリウム（９９８ｇ，１０．１７ｍｏｌ）を加える。さらなるジオキサン（６．２５Ｌ）を加え、３０〜６０分間静かに撹拌しながら、その混合物に窒素ガスを通した。ビス−（トリフェニルホスフィン）パラジウムクロリド触媒（１０７ｇ，０．１５２ｍｏｌ）を、ジオキサンですすぎながら（０．５Ｌ）加え、その反応物を５０℃に加熱した。この時点において、その混合物に窒素を通さなかったが、窒素雰囲気を維持し、冷却器から排出させた。反応温度をさらに９５〜１００℃に上げ、ＨＰＬＣ解析によって示されるとき、その反応が完了するまで（約２４時間）、この温度を維持した。
次いで、その反応物を６０℃に冷却し、４−アミノ−２−クロロピリミジン（６２３ｇ，４．８１ｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（９７５ｇ，９．２ｍｏｌ）および水（７．５Ｌ）を加えた。その溶液に窒素ガスを約３０〜６０分間通し、冷却器から排出させた。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１２９ｇ ０．１１ｍｏｌ）を加え、残留触媒をジオキサン（０．５Ｌ）ですすいで反応容器に入れた。加熱を再開し、混合物が約５０℃に達するまで、窒素バブリングを続けた。この時点において、窒素チューブを溶液の表面より上に引き上げたが、窒素雰囲気を維持して、冷却器から排出させた。温度を８５〜９０℃に上げ、ＨＰＬＣによって測定したとき、その反応が完了するまで（１〜２４時間）、維持した。６０℃以上に冷却した後、その温度を維持しつつ、水（１５Ｌ）を加え、その反応混合物をＧＦ−Ｂガラス繊維紙で濾過してフィルターボトルに入れた。濾液を温かいまま反応容器に移し、必要に応じて１：１ジオキサン／水（０．５〜３Ｌ）ですすぎ、反応容器のジャケット温度を４５℃に設定した。水（４２Ｌ）を反応容器に加え、その混合物を５±５℃にゆっくり冷却した。結晶化を最大にするために必要なとき、その反応容器にさらなる水を加え、温度を少なくとも２時間、５±５℃で保持した。次いで、生成物をブフナー漏斗に回収し、冷水で洗浄し（３×３．５Ｌ）、次いで、一定重量が達成されるまで、５０〜６０℃の真空下で乾燥することにより、（Ｓ）−２’−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミン（１２６６ｇ，７０％）をオフホワイトの固体として得た。この生成物を、実施例２９（工程７）に記載されたように精製することにより、（Ｓ）−２’−（２−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）−［２，５’−ビピリミジン］−４−アミンを、記載された純度と同様の純度で得た。
本発明の化合物の特徴付け
本発明の化合物は、本明細書中ではそれらのそれぞれの実施例の番号によって言及される。例えば、実施例１に記載された方法によって生成された化合物は、「実施例１の化合物」、「実施例１」または「化合物１」と称され得る。三つすべての名称が、本明細書中で交換可能に使用され得る。
実施例３１ 式（Ｉ）の化合物のスラリー処理から得られる固体結晶形の特徴付け
本発明のある特定の化合物は、溶媒または溶媒の組み合わせ（例えば、水、エタノールまたはそれらの組み合わせ）の中でのスラリー処理後に溶媒和結晶形を生成した。例えば、化合物２は、室温においてエタノール、または最大３％の水を含むエタノール水溶液混合物においてスラリー化したとき、本明細書中でＡ形と称される溶媒和物結晶形を生成した。そのスラリーから得られた固体結晶性生成物を、粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）を用いてインデックスすることにより、単位格子を定義した（図１）。ＸＰＲＤピーク実測値を下記の表１に列挙する。
表１ エタノールスラリーから得られた固体結晶形の化合物２（Ａ形）の粉末Ｘ線回折ピーク実測値
スラリー処理から得られた式（Ｉ）の化合物の結晶を乾燥すると、別の多形を生成することができた。例えば、９７％エタノール／３％水におけるスラリー処理から得られた化合物２の結晶の真空処理（−８０℃で１日間）によって、本明細書中でＢ形と称される、安定した無水固体結晶形が生成された。この得られた結晶形を、ＸＲＰＤ、偏光顕微鏡法、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、熱重量分析（ＴＧＡ）および動的蒸気収着（ＤＶＳ）ならびにＤＶＳ後のＸＲＰＤをはじめとした種々の方法を用いて特徴づけた。
図２は、化合物２の無水固体結晶形のサンプルのＸＲＰＤパターンを示しており、ピークの実測値を下記の表２に列挙する。このサンプルのインデックスの成功は、それが単一の結晶相から構成されていることを示唆する。この固体結晶形を周囲条件において３ヶ月間貯蔵した後、そのサンプルを再度ＸＲＰＤ解析に供した。得られたＸＲＰＤパターンは、図２に示されている元のインデックスされたパターンと合致した。
表２ エタノールスラリー由来の無水固体結晶形の化合物２（Ｂ形）の粉末Ｘ線回折ピークの実測値
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）および熱重量分析（ＴＧＡ）も無水固体結晶形の化合物２（Ｂ形）に対して行った；得られたデータを図３および図４に示す。ＤＳＣは、４８．５℃にピーク最大値を有する小さい広範な吸熱を示し、これは、しばしば揮発事象を示す；しかしながら、ＴＧＡには、対応する重量減少事象が存在しない。４８．５℃における広範な吸熱は、貯蔵中のサンプル中に吸収された水が存在することを示唆する可能性があり、これは、水分収着（ＤＶＳ）データと一致する。ＤＳＣは、１８５．４℃に開始すると算出される広範な吸熱も示し、その吸熱は、おそらく融解事象に対応し、０．１％の重量という小幅なＴＧＡ重量減少と一致することから、そのサンプルが、少量の未同定の揮発性成分を含み得ることが示唆される。
無水固体結晶形の化合物２（Ｂ形）の動的蒸気収着（ＤＶＳ）解析も行った。得られた等温線プロットは、図５に示されており、５％相対湿度（ＲＨ）の平衡状態において０．２％の重量減少の後、無視できるヒステリシスを伴う２．７％の重量の可逆的な吸着／脱着を示す。この挙動に基づくと、Ｂ形は、可変性の水和物であるとみられ、その水和物中の含水量は、周囲の相対湿度に依存する。まとめると、ＸＲＰＤ、ＤＳＣ、ＴＧＡおよびＤＶＳデータはすべて、Ｂ形が、乾燥すると無水になる、結晶性の可変性の水和物材料であることと一致する。
エタノールまたはエタノール水溶液混合物から得られた化合物２の結晶は、長く細い針状晶を形成する。そのような結晶性材料のＸＲＰＤパターンは、優先配向の現象によって複雑になることが多く、それは、主に２次元で整列する結晶に起因する。したがって、再結晶されたサンプルから得られる式（Ｉ）の化合物、例えば、化合物２のＸＲＰＤパターンは、上に記載されたスラリー実験から得られるものと異なって見える。粒径を減少させると、優先配向アーチファクトの規模が減少し得ることが知られている。図６は、エタノールから再結晶され、乾燥された固体結晶形の化合物２（Ｂ形）の、１０ミクロン未満のｄ９０値に微粒子化する前（薄灰色の線）および後（暗灰色の線）のＸＲＰＤパターンの例を示している。
実施例３２ 式（Ｉ）の化合物の動力学的溶解度の計測
参照により本明細書中に援用されるＫｅｒｎｓ，Ｅ．Ｈ．，Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ（２００１）９０：１８３８−１８５８において概要が述べられ、下記に記載される手順を用いて、式（Ｉ）の化合物の溶解度を試験した。式（Ｉ）の化合物に対する溶解度についてのデータは、この方法によって得られ、表３に含められた。以下のカラム寸法：４．６×３０ｍｍ，３．５μｍを有するＸｂｒｉｄｇｅ Ｓｈｉｅｌｄ ＲＰ１８カラムを用いるＨＰＬＣによって、クロマトグラフィーデータを得た。移動相は、０．１％（ｖ／ｖ）で加えられたトリフルオロ酢酸（ＭＰＣ）を含む脱イオン水（ＭＰＡ）およびＨＰＬＣグレードのアセトニトリル（ＭＰＢ）からなった。移動相の流速は、２．５ｍＬ／分であり、カラムおよびサンプリングの操作は、外界温度で行われた。ＵＶ検出は、２８０ｎｍに設定した。溶解度の測定のために使用されたすべてのサンプルに対して、使用された移動相の勾配は、表４に示されているとおりである。
表３ 選択された式（Ｉ）の化合物に対する例示的な溶解度：
式（Ｉ）の化合物の解析用のサンプルは、式（Ｉ）の化合物の原液を緩衝液に入れることによって、％ｖ／ｖ＝１／１９（すなわち、１９０μＬの緩衝液に１０μＬの原液）で調製された。三つの緩衝液系を調製した：５％デキストロース水溶液中の５０ｍＭ酢酸ナトリウムから調製されたｐＨ４．０、１：１の比の滅菌された注射用水と５％デキストロース水溶液における７５ｍＭリン酸ナトリウムから調製されたｐＨ７．４、および１：２の比の滅菌された注射用水と５％デキストロース水溶液における５０ｍＭ炭酸水素ナトリウムから調製されたｐＨ９．０。それらのサンプルを、３００ｒｐｍのマイクロプレート振盪機上で外界温度において２４時間インキュベートした。インキュベーションの後、それらのサンプルを、外界温度において５分間１３ｋ ｒｐｍで遠心した。得られた上清（ｓｕｐｅｒｎａｎｔａｎｔ）をＨＰＬＣ解析のために抽出した。
表４ 溶解度測定のために使用された移動相の勾配
例えば、本発明の化合物は、許容され得るレベルの薬物が治療標的に到達するのを可能にし得る。
化合物２の微粒子化された製剤の溶解度を、ＭｃＩｌｖａｉｎクエン酸−リン酸緩衝液レシピ（０．２Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４および０．１Ｍクエン酸）をｐＨ２．２から８．６４まで用いてさらに評価した。サンプルを３０時間撹拌し、サンプリングし、遠心し、ＵＰＬＣによって解析した。最も高い溶解度は、ｐＨ８．６および３．１において見られたが、ｐＨの効果は、０．２〜１．３ｍｇ／ｍｌの範囲であり狭かった。結果を図１０に示す。
絶食時模擬腸液（ｆａｓｔｅｄ−ｓｔａｔｅ ｓｉｍｕｌａｔｅｄ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｆｌｕｉｄ）（ＦａＳＳＩＦ）アッセイにおいても溶解度を測定した。簡潔には、化合物２をＦａＳＳＩＦ媒質（胆汁酸塩、ＮａＯＨ（０．４２０ｇ）、ＮａＨ２ＰＯ４（３．４３８ｇ）、ＮａＣｌ（６．１８６ｇ）、２５℃においてｐＨを６．５にし、１Ｌの体積にした）に加え、３０時間撹拌し、サンプリングし、遠心し、ＵＰＬＣによって解析した。このＦａＳＳＩＦモデルにおける溶解度は、１．１９ｍｇ／ｍｌであると測定された。
溶解度を、模擬胃腸液（ＳＧＦ）（２５℃においてＨＣｌ ０．１Ｎ）においてさらに評価した。簡潔には、化合物を３０時間撹拌し、サンプリングし、遠心し、ＵＰＬＣによって解析した。ＳＧＦにおける溶解度は、１．０５ｍｇ／ｍｌであると見出された。これらの研究の結果は、化合物２の溶解度が、媒質のｐＨに有意に依存しないが、胆汁酸塩の存在に基づいて、溶解度がいくらか上昇し得ることを示唆する。
通常のリンガー液における溶解度についても、本発明の化合物を試験した。簡潔には、化合物の標準的な範囲の体積の１０ｍＭ ＤＭＳＯ原液を通常のリンガー液（１４５ｍＭ ＮａＣｌ、４．５ｍＭ ＫＣｌ、２ｍＭ ＣａＣｌ２、１ｍＭ ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭグルコース；室温においてｐＨ７．４）に溶解することによって、化合物の溶解度を測定した。室温における４０分間のボルテックスおよびインキュベーションの後、溶液を濾過し、アセトニトリルでクエンチし、液体クロマトグラフィーによって解析した。検量線と比較することによって、溶解限度を測定した。溶解限度は、３１．３μＭ超と測定された。溶解度は、試験された最後の二つの希釈度の間に観察された増加が、２倍超である場合、「超」として報告される。表５は、試験された化合物に対して得られた値を示している。
表５ 通常のリンガー液における式（Ｉ）の化合物の溶解度
ヒト、ラット、イヌおよびカニクイザルの血漿タンパク質への化合物２の結合を、平衡透析アプローチを用いて試験した。この方法では、遊離化合物を、タンパク質が結合した化合物から半透膜の透析によって分離する。１μＭの濃度において、化合物２は、ヒト血漿タンパク質に対して９８．５％の結合、ラット血漿タンパク質に対して９５．３％の結合、イヌ血漿タンパク質に対して９４．５％の結合およびカニクイザル血漿タンパク質に対して９８．０％の結合を示した（表６）。
１μＭの濃度においてタンパク質の結合を試験した。ヒト、カニクイザル、イヌおよびラットのプールされたＫ２ＥＤＴＡ血漿を解凍し、４℃、２０００×ｇにおいて１０分間遠心することにより、微粒子を除去し；上清の上部における任意の脂質を吸引によって除去した。その血漿を、使用する前に１０分間、３７℃に加温した。試験化合物を、ポリプロピレンプレート内の２ｍｌの血漿に入れて、１μＭという最終濃度にした。加えられた血漿の三つ組の４００μｌアリコートを、Ｔｈｅｒｍｏ ＲＥＤ透析ユニットに移し、６００μｌのＰＢＳ緩衝液に対して透析した。そのＲＥＤデバイスを、Ｂｏｅｋｅｌ Ｊｉｔｔｅｒｂｕｇ １３００００を用いて静かに振盪しながら３７℃においてインキュベートし；また、プレートを光から保護した。６時間の透析の後、三つ組の５０μｌアリコートをＲＥＤプレートから取り出し、必要に応じて、ＰＢＳ緩衝液またはブランク血漿のいずれかとマトリックスを合致させ、内標準を含む４体積のＡＣＮでクエンチした。次いで、抽出されたサンプルを４℃、２０００×ｇにおいて５分間遠心した。上清（５０μｌ）を取り出し、１００μｌの水で希釈した後、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳバイオ分析を行った。
表６ 化合物２およびワルファリンと血漿タンパク質との結合の比較
アルブミンおよび血漿の存在下のＩＣ５０阻止の変化も調べた。薬物の薬理学的効果は、未結合の血漿レベルと相関すると仮定され、これは、「遊離薬物仮説」として公知である。この研究の目的は、生理的に妥当な濃度のアルブミンおよび血漿の存在下の化合物２によるヒトＴＲＰＡ１（ｈＴＲＰＡ１）の阻止に対するＩＣ５０の変化を推定することであった（表７を参照のこと）。技術的な問題に起因して、ヒト型のＴＲＰＡ１を用いて、すべての種におけるタンパク質の結合を評価した。ｄｅｌ Ｃａｍｉｎｏ，Ｄ．ら、Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ７４（２０１０）３０：１５１６５に記載されているようなホールセルパッチクランプ法を用いて、ヒト血漿（ｈＰｌａｓｍａ）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ラット血漿（ｒＰｌａｓｍａ）、ラット血清アルブミン（ＲＳＡ）、イヌ血漿およびヒツジ血清アルブミン（ｓｈｅｅｐＳＡ）をはじめとした様々な種由来の１％（ｗ／ｖ）血清アルブミンまたは２５％（ｖ／ｖ）血漿の存在下において、カラシ油中の活性成分であるアリルイソチオシアネート（ＡＩＴＣ）による活性化時のｈＴＲＰＡ１を通過する電流を計測した。化合物２を、ＤＭＳＯ中の１０ｍＭ原液からＤＭＳＯ中の１０および１００μＭにさらに希釈し、次いで、リンガー液に、表７および表８において言及される濃度に希釈した。
その後の化合物２の投入は、ｈＴＲＰＡ１の用量依存的および可逆的な遮断をもたらした。２５％（ｖ／ｖ）ヒト血漿（ｈＰｌａｓｍａ）の存在下において、ｈＴＲＰＡ１電流は、９５±２ｎＭのＩＣ５０で阻止され、これは、血清の非存在下のＩＣ５０よりも１４倍高い（表８を参照のこと）。ラット血漿（ｒＰｌａｓｍａ）およびラット血清アルブミン（ＲＳＡ）の存在下のｈＴＲＰＡ１において行われた実験は、化合物２によってそれぞれ６８±８ｎＭおよび９５±９ｎＭの阻止の効力がもたらされたことから、ヒト血漿で観察されたものと同様の程度のタンパク質結合が示唆される。化合物２による阻止に対するＩＣ５０は、イヌ血漿の存在下においていくらか高かった（２２１±５４ｎＭ）。１％（ｗ／ｖ）ヒツジ血清アルブミン（ＳｈｅｅｐＳＡ）の存在下において、ｈＴＲＰＡ１電流は、７０±１０ｎＭのＩＣ５０で阻止された。化合物２による阻止と洗浄における逆転の両方が、２〜３分以内に完了した。これらの実験は、より多くの遊離薬物が標的と相互作用するのに利用可能であるので、化合物２が、以前に特定された化合物よりも低い血漿レベルにおいて薬理学的効果を発揮し得ることを示唆している。
ＩＣ５０のシフトが血漿の存在下において観察されることに基づくと、化合物２が、試験された四つの種の血漿タンパク質に対して９０〜９７％の範囲で有意な結合を示すと結論づけられ得る。これは、同様の効力の過去の化合物にまさる改善に相当する。
表７ アルブミンおよび血漿における化合物２ ｈＴＲＰＡ１ ＩＣ５０測定
表８ 様々な哺乳動物起源のｈＴＲＰＡ１に対する化合物２のＩＣ５０の測定
代謝安定性
式（Ｉ）の化合物の代謝安定性を、標準的な肝ミクロソームアッセイによって測定した。簡潔には、ＤＭＳＯに溶解した試験される化合物をヒト、イヌまたはラットの肝ミクロソームに加えることによって、代謝安定性を試験した。１μＭの試験化合物という開始濃度でアッセイを行った。３７℃においてニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸オキシダーゼ（ＮＡＤＰＨ）再生成分を加えることによって、その反応を惹起し、その時点において、直ちにアリコートを氷冷アセトニトリル／メタノール／水溶液中でクエンチした。反応混合物を、振盪機上において３７℃でインキュベートし、さらなるアリコートを７、１５、３０および６０分後に採取した。クエンチおよび遠心分離の後、サンプルをＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳにおいて解析した。結果を下記の表９、表１０および表１１に示す。
表９ ヒト肝ミクロソームにおける化合物の半減期および肝クリアランス
表１０ イヌ肝ミクロソームにおける化合物の半減期および肝クリアランス
表１１ ラット肝ミクロソームにおける化合物の半減期および肝クリアランス
バイオアベイラビリティ
ラットにおける初期バイオアベイラビリティ研究を、本発明の化合物の溶液を用いて行った。化合物を、適切な賦形剤における溶液として経口投与によって送達した。製剤の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：４％ＤＭＳＯ、１０％Ｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ−１５および８６％水または４％ＤＭＳＯ、５％Ｔｗｅｅｎ、２５％Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ。目標濃度は、代表的には、１ｍｇ／ｍＬであり、経口胃管栄養法によって非絶食ラットに投与した。絶対的バイオアベイラビリティは、非静脈内の用量補正された曲線下面積（ＡＵＣ）を静脈内の用量補正されたＡＵＣで除算した値である。経口経路（ＰＯ）によって投与された薬物に対するＦを算出するための式を以下に示す。
％Ｆ＝ＡＵＣ ＰＯ×用量ＩＶ／ＡＵＣ ＩＶ×用量ＰＯ
試験された化合物に対するラットのそれぞれのバイオアベイラビリティを表１２に示す。
表１２ 非絶食ラットにおける化合物のバイオアベイラビリティ
さらなる研究を、微粒子化された化合物２を用いてラット、イヌ（ビーグル）およびカニクイザルにおいて行った。動物に、１ｍｇ／ｍＬという目標濃度で注射用水中の０．５％メチルセルロースにおける懸濁液として製剤化された、１０ｍｇ／ｋｇの経口量の化合物を投与し、ラットまたは絶食イヌにおいては経口胃管栄養法によって、および絶食カニクイザルにおいては経口送達によって、１０ｍＬ／ｋｇの用量体積を投与した。これらの研究におけるラットに対する％Ｆは、８５％であり、イヌに対しては３６％であり、サルに対しては１９％であった。図１１は、これらの種に対する薬物動態学的プロファイルを示している。
化合物２のバイオアベイラビリティを特徴づけるために、いくつかのインビボ研究を行った。化合物２の
Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおいて、１０ｍｇ／ｋｇ〜１０００ｍｇ／ｋｇの単回の経口量の化合物２を一連の実験において比較した。これらの研究において使用された化合物２は、エタノールから再結晶され、微粒子化された。曲線下面積（ＡＵＣ）および最大血漿濃度（Ｃｍａｘ）に基づく曝露量は、用量とともに１０００ｍｇ／ｋｇまで増加した。
三つの研究をイヌ（ビーグル）において行った。一つの研究では、３匹の絶食イヌに、１０ｍｇ／ｋｇの微粒子化された化合物２の懸濁液を胃管栄養法によって投与した。血液サンプルを、投与前ならびに投与の０．２５、０．５０、１、２、４、６、８、１２および２４時間後にこれらのイヌから回収した。血液サンプルを解析して、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって化合物２の血漿レベルを測定した。その後の研究では、１０、１００、３００、６００または１０００ｍｇ／ｋｇの用量レベルで絶食イヌに投与された、微粒子化された化合物２（エタノールから再結晶されたもの）の懸濁液の単回の経口投与後に薬物動態学的（ＰＫ）パラメータを測定した。血液サンプルを、投与前ならびに投与の０．５、１、２、４、８、１２、２４および４８時間後に採取し、解析して、化合物２の血漿レベルを測定した。ＡＵＣおよびＣｍａｘに基づく曝露量は、用量とともに６００ｍｇ／ｋｇまで増加した。
化合物２の懸濁製剤のＰＫプロファイルおよびバイオアベイラビリティを測定するために、三つの研究を絶食カニクイザルにおいて行った。３頭のサルに、１０ｍｇ／ｋｇの微粒子化された化合物２を含む懸濁液を経口胃管栄養法によって投与した。投与前ならびに投与の０．２５、０．５０、１、２、４、６、１２および２４時間後に、サルから採血した。化合物２の血漿レベルをＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって測定した。より高レベルの化合物２を経口懸濁液として絶食サルに投与したときのＰＫプロファイルを評価するために、さらなる研究を行った。投与前および投与の２４時間後まで、血液サンプルを回収した。３００ｍｇ／ｋｇの化合物２を投与されたサルからは、さらに４８時間後の血液サンプルを回収した。化合物２の血漿レベルをＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって測定した。ＡＵＣおよびＣｍａｘに基づく曝露量は、用量とともに１０００ｍｇ／ｋｇまで増加した。
化合物２のカプセル製剤および懸濁製剤のＰＫパラメータを比較するために、別の研究を行った。すべてのサルに、２５０ｍｇの化合物２を投与した。二つの群にカプセル製剤を投与した：一つの群は絶食であり、もう一つの群は、自由に摂食可能であった。懸濁製剤を投与する動物には、経鼻胃管を用いて投与し、絶食させた。図１２に見られ、下記の表１３に要約されるように、カプセル製剤は、懸濁剤よりも高いバイオアベイラビリティに関連するとみられたが、数字上の差は小さかった。カプセル製剤のＰＫプロファイルを、絶食サルと摂食サルの両方において比較したとき、化合物２のカプセルのバイオアベイラビリティは、絶食サルにおいて数値的に高かった。
表１３ 化合物２：カプセル製剤および懸濁製剤のＰＫパラメータの比較
実施例３３ ＴＲＰＡ１イオンチャネルの阻害を計測するための方法
参照により本明細書中に援用されるｄｅｌ Ｃａｍｉｎｏら、Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ（２０１０）３０（４５）：１５１６５−１５１７４に概要が述べられ、下記に要約されている手順を用いて、表１４に示されているデータ表に提供されているヒトＴＲＰＡ１のインビトロ阻害を計測することによって示されたように、式（Ｉ）の化合物は、ＴＲＰＡ１チャネルを阻害する。ＴＲＰＡ１の阻害に対するデータは、この方法によって、示されている式（Ｉ）の化合物に対して得られ、関連性のあるデータが下記の表１４に含められている。すべての電流が、ＥＰＣ−９およびＥＰＣ−１０増幅器ならびにＰａｔｃｈｍａｓｔｅｒソフトウェア（ＨＥＫＡ）を用いて、ホールセル配置で記録された。パッチピペットは、１．５〜３Ｍの抵抗を有し、直列抵抗の最大７５％が補償された。標準的なピペット溶液は、１４０ｍＭ ＣｓＡｓｐ、１０ｍＭ ＥＧＴＡ、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２．２７ｍＭ、２０ ＭｇＣｌ２、１．９１ｍＭ ＣａＣｌ２および最大０．３ｍＭ Ｎａ２ＧＴＰからなり、ｐＨは、ＣｓＯＨで７．２に調整された。さらに、１４５ｍＭ ＣｓＣｌ、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ ＥＧＴＡおよび最大０．３ｍＭ Ｎａ２ＧＴＰおよび１ｍＭ ＭｇＣｌ２を含む溶液（ＣｓＯＨでｐＨ７．２に調整）が使用され得る。標準的な浴溶液は、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭグルコース、４．５ｍＭ ＫＣｌ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、３ｍＭ ＭｇＣｌ２を含み、ｐＨは、ＮａＯＨで７．４に調整した。いくつかの場合では、ＥＧＴＡの代わりに２ｍＭ ＣａＣｌ２を加え、ＭｇＣｌ２の濃度を１ｍＭに低下させた。
−６０ｍＶにおいて連続的に記録するか、または電圧ランプを４秒ごとに０ｍＶの保持電位から適用することによって、データを収集した。連続的な記録は、４００Ｈｚにおいて行い、提示のために１０Ｈｚにおいてオフラインでデジタル的にフィルタリングした。電圧ランプを４００ｍｓにわたって−１００ｍＶから１００ｍＶまで適用し、データを１０ｋＨｚにおいて収集し、３０２．９ｋＨｚにおいてフィルタリングした。内向き電流および外向き電流を、それぞれ−８０ｍＶおよび８０ｍＶにおけるランプから解析した。液体接合部電位補正は用いなかった。
重力送りの連続的な局所灌流システムを用いて、溶液を切り替えた。迅速な温度変化を達成するために、二つの温度制御システムおよび灌流システムを同時に使用した。２２℃に等しいかまたはそれより高い温度の場合、Ｗａｒｎｅｒ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓのバイポーラ温度コントローラー（ＴＣ−３４４Ｂ）およびインラインヒーター（ＳＨＭ−８）を使用した。２２℃未満の温度の場合、Ｗａｒｎｅｒ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓの温度コントローラー（ＣＬ−１００）および熱冷却モジュール（ＴＣＭ−１）を使用した。サーミスター（Ｗａｒｎｅｒ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，ＴＡ−２９）を用いて温度を確認し、記録された細胞における温度は、記録された温度の＋／−２℃以内であると推定された。
表１４は、上に記載されたインビトロアッセイから得られたデータを示している。ホールセルパッチ配置におけるヒトＴＲＰＡ１（「ｈＴＲＰＡ１」）に対する式（Ｉ）の化合物のアンタゴニスト作用を、上に記載されたインビトロアッセイプロトコルを用いて評価した。
表１４ ヒトＴＲＰＡ１に対する式（Ｉ）の化合物のアンタゴニスト作用
実施例３４ 寒冷過敏症に対する効果
本発明の実施形態は、炎症性疼痛の処置において効果的であり得る。化合物２を、ＣＦＡ誘発性疼痛試験法によって試験した。化合物２を、経口投与（ＰＯ）のために、４％ＤＭＳＯ、１０％Ｓｏｌｕｔｏｌ、８６％ＤＷＩ，ｐＨ５．９中の透明の溶液として製剤化した。
簡潔には、０．１ｍＬのフロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）を右後足に投与することによって、後足を低温に対して感作する（異痛症（ａｌｌｏｄｙｎｉｃ））。３日後、ＣＦＡを注射された足を動物が持ち上げるのに要した時間を、注射されていない正常な左後足と比べて、記録する。動物を低温プレート（１℃）の表面上に置き、その動物が、ひるむかまたは足をプレートから持ち上げることによって不快感を示した瞬間に操作者は試験を停止する（足引っ込め潜時、すなわちＰＷＬ）。組織損傷を回避するために、最大カットオフ時間は、５分とする。異痛症である動物（最初の三つの疼痛行動に対する平均ＰＷＬは、ＣＦＡを注射された後足に対しては＜１５０秒：正常な足とＣＦＡを注射された足との間に約≧５０％の差）をこの研究に含め、続いて、処置群にランダム化する。翌日、盲検条件下においてそれらの動物に投薬する。１〜２時間の前処置時間の後、投与後のＰＷＬの記録を再度取る。薬物処置動物におけるＰＷＬを、ビヒクルを投与された動物と比較することによって、薬物処置の有効性を評価する。
図７および表１５に示されているように、化合物２は、０．３〜１０ｍｇ／ｋｇの経口量の投与後、寒冷過敏症を弱めた。正の比較物質ＴＲＰＡ１アンタゴニストである化合物Ａもまた、足底内注射によって送達された１５０ｍｇ／ｋｇという高用量において、寒冷過敏症を低減した。重要なことには、経口的に送達されたビヒクル（４％ＤＭＳＯ、１０％Ｓｏｌｕｔｏｌ、８６％ＤＷＩ）は、投与前のベースラインの測定値と比べて、足引っ込め潜時に対して影響を及ぼさなかった。
表１５ 様々な経口投与量の化合物２による寒冷過敏症の減弱
表１６は、化合物２および化合物Ａの平均血漿レベルを要約している。化合物２の用量にほぼ比例した曝露量が、試験された用量範囲全体にわたって観察された。化合物２の血漿結合の減少は、化合物Ａと比べて、被験体に対する化合物２のバイオアベイラビリティの改善を示唆している。
表１６ 化合物２および化合物Ａの血漿レベル
ビヒクル群と処置群との間に行動の差は無かった（表１７を参照のこと）。しかしながら、正の比較物質である化合物Ａで処置された５／１０匹の動物において嗜眠／動作緩慢が顕著であったことから、化合物２は、有意な鎮静作用を誘導しないことが実証された。
表１７ 化合物２の投与時の動物の行動の検査
開示された方法を用いて、化合物４も試験した。化合物４を、０．５％メチルセルロース中の懸濁液として製剤化し、表１８に示される用量で投与した。
表１８ 様々な経口投与量の化合物４による寒冷過敏症の減弱
さらなる研究において、本発明の化合物を、低用量において炎症性疼痛の処置に対する有効性について試験した。上に開示された方法を用いて、化合物２を０．１〜１ｍｇ／ｋｇ ＰＯの範囲で投与した。正の比較物質ＴＲＰＡ１アンタゴニストである化合物Ａも、１５０ｍｇ／ｋｇ ＩＰの用量で試験した。化合物２を、１０ｍｌ／ｋｇの投与体積での経口投与（ＰＯ）のための、４％ＤＭＳＯ、１０％Ｓｏｌｕｔｏｌ、８６％ＤＷＩ，ｐＨ５．９中の透明の溶液として製剤化した。経口薬物送達は、２０ゲージの１．５インチ経口胃管栄養針および５ｃｃ注射器を用いて達成された。試験の２時間前に、摂食ラットに、０．０３、０．１、０．３もしくは１ｍｇ／ｋｇの化合物２またはビヒクルの単回の経口胃管栄養を投与した。
表１９および図１３に見られるように、化合物２は、０．１、０．３および１ｍｇ／ｋｇ ＰＯで投与されたとき、足引っ込め潜時を計測することによってアッセイされたとき、ＣＦＡ誘発性の寒冷過敏症の有意な逆転を示した。０．０３ｍｇ／ｋｇの用量レベルは、統計学的に有意な効果を発揮しなかった。正の比較物質であるプロトタイプのＴＲＰＡ１アンタゴニスト化合物Ａもまた、１５０ｍｇ／ｋｇ ＩＰで投与されたとき、寒冷過敏症の有意な逆転を示した。
表１９ 化合物２によるＣＦＡ誘発性寒冷過敏症の逆転
要約すると、これらの研究は、本発明の化合物が、経口投与後に、炎症性疼痛の処置において効果的であるという潜在性を有することを示唆している。
実施例３５ ホルマリンモデル
化合物２を、Ｄｕｂｕｉｓｓｏｎら、Ｐａｉｎ（１９７７）Ｄｅｃ；４（２）：１６１−７４が報告したホルマリン誘発疼痛試験において試験した。Ｄｕｂｕｉｓｓｏｎらは、ラットおよびネコにおいて疼痛および痛覚消失を評価するための方法を報告した。簡潔には、希ホルマリン（５０μＬの３％ホルマリン）を、ラットの後足の足底表面に注射する。その動物を、直ちに観察領域（標準的なＰｌｅｘｉｇｌａｓｓラットケージ）に戻し、その時点において、その動物が二つの異なる相において疼痛行動（ひるむ、注射された足／脚を舐める、噛む）を示すのに費やした時間を、訓練された観察者が記録する。初期相（Ｉ相：０〜５分）は、ホルマリンおよび機能的ＴＲＰＡ１による求心性線維の直接的な活性化に依存する有意な構成要素を有すると考えられる（ＭｃＮａｍａｒａら、２００７）。特定の研究において疼痛行動を数えるのに関与する個体は、処置群を把握していない。
研究者は、ラットのホルマリンモデルにおいて、疼痛行動に対する１、３および１０ｍｇ／ｋｇでの化合物２の経口投与を研究した。化合物２を、４％ＤＭＳＯ、１０％Ｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ１５、８６％ＷＦＩ中の溶液として調製した。ビヒクル（４％ＤＭＳＯ、１０％Ｓｏｌｕｔｏｌ、８６％ＷＦＩ）、または１、３もしくは１０ｍｇ／ｋｇの化合物２を、足底内ホルマリンの１時間前に動物に経口投与した。図１４は、最初の２分（左）において観察された疼痛行動の持続時間または研究時間全体；５分にわたる疼痛行動の持続時間（右）を示している。（１群あたりｎ＝８）（＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１：片側Ｔ検定）
化合物２の経口投与は、表２０および図１４に見られるように、３および１０ｍｇ／ｋｇにおけるホルマリンモデルの１相において侵害受容応答を有意に減少させた。ビヒクルで処置された動物と比べて、１ｍｇ／ｋｇの化合物２で処置された動物は、足底内ホルマリン投与後の０〜２分において疼痛行動の持続時間を約１４％減少させたが、この減少は、統計学的に有意ではなかった。３および１０ｍｇ／ｋｇ ＰＯの用量において、化合物２は、ビヒクルで処置された動物と比べて、ホルマリン誘発疼痛行動を、０〜２分において、それぞれ約７２％および約８９％有意に減少させた。
疼痛行動の持続時間の同様の減少が、化合物２を用いたとき、ホルマリン投与後の０〜５分において観察された。１ｍｇ／ｋｇ ＰＯにおいて、化合物２は、疼痛行動を約１４％減少させたが、ビヒクルで処置された動物と比べて統計的有意性に達しなかった。化合物２は、３および１０ｍｇ／ｋｇ ＰＯにおいて、ホルマリン誘発疼痛行動の持続時間をそれぞれ約４６％および約６０％有意に減少させた。
表２０ ホルマリンモデルを用いたとき、経口投与された化合物２の用量反応
疼痛行動の持続時間の減少は、化合物１を用いたときも、ホルマリン投与後の０〜５分において観察された。ラットの静脈内に送達された１ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇでは、化合物１は、表２１および図１５に示されているようにホルマリン誘発疼痛行動の持続時間を減少させた。
表２１ ホルマリンモデルを用いたときの静脈内に投与された化合物１の用量反応
疼痛行動の持続時間の減少は、化合物４を用いたときも、ホルマリン投与後の０〜５分において観察された。ホルマリンアッセイについて上に記載された方法を用いて、化合物４を、４％ＤＭＳＯ；５％Ｔｗｅｅｎ−８０；２０％Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ；および７１％ＷＦＩ中の溶液として製剤化し、ラットに経口胃管栄養法によって投与した。化合物４は、表２２に示されているように、ホルマリン誘発疼痛行動の持続時間を減少させた。
表２２ ホルマリンモデルを用いたときの経口投与された化合物４の用量反応
ホルマリンアッセイについて上に記載された方法を用いて、化合物４を、０．５％メチルセルロース中の懸濁液として製剤化し、ラットに経口胃管栄養法によって投与した。化合物４は、表２３に示されているように、ホルマリン誘発疼痛行動の持続時間を減少させた。
表２３ ホルマリンモデルを用いたときの経口投与された化合物４の用量反応
応答の持続性も調べた。化合物２を、４％ＤＭＳＯ、１０％Ｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ１５および８６％ＷＦＩ中の溶液として調製した。１０ｍｇ／ｋｇの経口量の化合物２またはビヒクル（ＰＯ）でラットを処置した。図８は、ホルマリン注射の前の３０分〜６時間の１０ｍｇ／ｋｇ ＰＯの化合物２の経口投与製剤による前処置が、ホルマリン媒介性疼痛行動の持続時間を有意に減少させたことを示している。
ビヒクルで処置された動物と比べて、１０ｍｇ／ｋｇ ＰＯにおける経口での化合物２の１５分間〜６時間の前処置は、ホルマリン注射の０〜２分後のホルマリン誘発疼痛行動の持続時間を約３０〜８７％減少させ、疼痛行動の減少の最大値は、表２４に示されているように、２時間の前処置群において観察された。
表２４ ホルマリンモデルを用いたときの化合物２の経口投与における疼痛反応の持続時間
化合物２を、Ａｂｒａｈａｍ，Ｗ．Ｍ Ｐｕｌｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ（２００８）２１：７４３−７５４に開示されている方法に従って、アレルギー性気管支収縮および気道過敏のヒツジモデルにおいても試験した。Ａｓｃａｒｉｓ ｓｕｕｍをチャレンジされたアレルギーヒツジは、肺抵抗（ＲＬ）の実質的な二相性の増加を示す。最初の４時間は、初期喘息反応（ＥＡＲ）と考えられ；次の４時間（４〜８時間目）は、後期喘息反応（ＬＡＲ）であると考えられる。気道反応性（ＡＨＲ）を評価するために、緩衝液後の値（ｐｏｓｔ−ｂｕｆｆｅｒ ｖａｌｕｅ）に対して肺抵抗を４００％増加させる累積カルバコール用量（ＰＣ４００）（呼吸単位（ｂｒｅａｔｈ ｕｎｉｔｓ）を単位とする）を用量反応曲線から算出した。１呼吸単位は、１％ｗ／ｖカルバコール溶液の１呼吸と定義された。チャレンジ前のＰＣ４００を、投薬開始の１〜３日前に得た。
化合物２を、６ｍｇ／ｍｌの濃度において０．５％メチルセルロースに懸濁された微粒子化粉末として製剤化し、３０ｍｇ／ｋｇという用量で４日間にわたって１日１回、毎日ほぼ同じ時間に経口投与した。ヒツジに、３０ｍｇ／ｋｇの化合物２を４日間にわたって毎日、経口投与した。化合物２の最後の投与の２時間後に、ヒツジをアレルゲン（Ａｓｃａｒｉｓ）チャレンジに供した。各ヒツジを腹臥位で拘束し、頭を固定化した後、鼻腔からの局所麻酔を行った。バルーンカテーテルを、一方の鼻孔を通って下部食道に進めた。各ヒツジに、カフ付き気管内チューブを他方の鼻孔を通して挿管した。気管圧および胸腔内圧を、それぞれその気管内チューブおよびバルーンカテーテルを用いて測定した。経肺圧、すなわち、気管圧と胸腔内圧との差を、差圧変換カテーテルシステムを用いて計測した。気管内チューブの遠位末端を呼吸気流計に接続することによって、ＲＬを測定した。５〜１０呼吸のデータをコンピュータに収集し、それを用いてＲＬを算出した。化合物２による処置を開始する前にＡｓｃａｒｉｓでチャレンジされた同じヒツジからのデータを用いて、ベースライン値を確立した。コントロール試験および薬物試験に対する症状のモニタリングは、同一であった。
チャレンジの当日であり、化合物２の最後の投与の２時間後に、Ａｓｃａｒｉｓ ｓｕｕｍのエアロゾル（８２，０００タンパク質窒素単位／ｍＬ）を、噴霧器を用いて生成し、Ｈａｒｖａｒｄレスピレーターを用いてヒツジに送達した。チャレンジの１時間前、Ａｓｃａｒｉｓチャレンジの直後およびその後８時間にわたって１時間ごとに、ＲＬを測定した。チャレンジから４時間後までは、ＥＡＲであると考えられ、４〜８時間後は、ＬＡＲであると考えられる。
ＡＨＲに対して悪影響を及ぼすコリン作動性アゴニストであるエアロゾル化されたカルバコールもヒツジにチャレンジした。ＲＬを４００％増加させたカルバコール濃度（ＰＣ４００）（呼吸単位を単位とする）の測定を、化合物２投与なしのＡｓｃａｒｉｓチャレンジの２４時間後（ヒストリカルベースライン）または化合物２の最後の投与の２４時間後に行った。
図１６は、ベースライン（コントロール）レベルおよび化合物２（３０ｍｇ／ｋｇ）による処置後のヒツジにおける抗原によって誘発された応答を示している。化合物２は、ピーク初期気道反応に影響しなかった。しかしながら、化合物２は、後期気道反応を劇的に減弱した（８５％保護）。コントロール試験では、平均後期気道反応は、１２６±４．７％であったのに対して、処置試験では、平均ＬＡＲは、わずか１９±２．３％（Ｐ＝０．００２）であった。
図１７は、肺抵抗の４００％増加を誘導するカルバコールの濃度に相当する気道過敏の測定値であるＰＣ４００に対する化合物２（３０ｍｇ／ｋｇ）の作用をさらに示している。
要約すると、化合物２による処置は、気道過敏を、Ａｓｃａｒｉｓ ｓｕｕｍをチャレンジされていないヒツジにおいて観察されたレベルと同様のレベルにまで低下させた。
実施例３６ 薬学的プロファイル
本発明の化合物は、有意な薬物／薬物相互作用を有しない可能性があり、このことは、その投与が複数の薬剤を摂取している患者にとって好ましくする。
化合物２がヒトＣＹＰ４５０酵素を阻害する能力を評価した。化合物１および化合物２を、標準的なＰ４５０Ｃｙｐ阻害発光アッセイにおいて試験した。結果を下記の表２５に示す。
表２５ 化合物１および２によるＣＹＰ４５０酵素の阻害
化合物２は、試験された七つのアイソザイムに対して１０μＭにおいて最大３７％というヒトＣＹＰ４５０酵素の最大の阻止を達成した；これらの値は、算出されたＩＣ５０値が、＞１０μＭであり得ることを示唆している（表２６）。
化合物２をフェノタイピングするＣＹＰ４５０反応を、選択的ＣＹＰ４５０阻害剤の存在下および非存在下において試験物質をヒト肝ミクロソームとともにインキュベートすることによって行った。代謝半減期は、ケトコナゾールを除くいずれのＣＹＰ４５０阻害剤によっても有意に影響されなかったことから、化合物２のインビトロ代謝が主にＣＹＰ３Ａ４アイソザイムを必要とすることが示唆される（図９）。
表２６ 化合物２および適切な参照化合物による１０μＭにおけるＣＹＰ４５０阻害
＊１μＭアッセイ濃度
実施例３７ イヌにおける肝毒性安全性プロファイル
ビヒクル（脱イオン水における０．５％メチルセルロース［４００ｃｐｓ］）中の化合物２を、雄および雌の非ナイーブビーグル犬の三つの群に、５日間連続して１日１回、胃管栄養法によって経口投与した。各群に、一つの用量レベルを投与した。用量レベルは、各群に対して３００、６００および１０００ｍｇ／ｋｇであった。同時のコントロール群には、類似のレジメンでビヒクルを投与した。用量体積は、すべての群に対して１０ｍｌ／ｋｇであった。肝毒性または胆管損傷を表す、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ａｌａｎｉｎｅ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒｅａｓｅ）［ＡＬＴ］、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ［ＡＳＴ］、アルカリホスファターゼ（ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｓｔａｓｅ）［ＡＬＰ］およびガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ［ＧＧＴ］の血清バイオマーカーを介して、肝毒性（Ｈｅｐａｔｏｘｉｃｉｔｙ）を計測した。表２７は、示された各用量レベルのイヌにおける化合物２が、３００ｍｇ／ｋｇの用量以下まで血清バイオマーカーを上昇させなかったことを示している。
表２７ ビーグル犬における化合物２の肝毒性安全性プロファイル
図１８は、化合物２が、正常範囲を超えて血清バイオマーカーレベルを有意に上昇させないことをさらに実証している。図１９は、化合物２が、ビヒクルに対する％差異によって示されるとき、ベースライン測定値を超えて血清バイオマーカーレベルを有意に上昇させなかったことを実証している。
実施例３８ ラットにおける肝毒性安全性プロファイル
ビヒクル（０．５％メチルセルロース［４００ｃｐｓ］）中の化合物２を、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからのｓｐｒａｇｕｅ−ｄａｗｌｅｙラットの三つの群に、最低２８日間連続して１日１回、胃管栄養法によって経口投与した。各群に一つの投与量レベルを投与した。投与量レベルは、各群に対して３０、１００および３００ｍｇ／ｋｇ／日であった。同時のコントロール群には、類似のレジメンでビヒクルを投与した。用量体積は、すべての群に対して１０ｍｌ／ｋｇであった。肝毒性または胆管損傷を表す、アラニンアミノトランスフェラーゼ［ＡＬＴ］、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ［ＡＳＴ］、アルカリホスファターゼ［ＡＬＰ］およびガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ［ＧＧＴ］の血清バイオマーカーを介して、肝毒性を計測した。表２８は、示された各用量レベルのラットにおける化合物２が、３００ｍｇ／ｋｇの用量以下まで血清バイオマーカーを上昇させなかったことを示している。
表２８ ラットにおける化合物２の肝毒性安全性プロファイル
図２０は、化合物２が、正常範囲を超えてレベルを有意に上昇させないことをさらに実証している。図２１は、化合物２が、ビヒクルに対する％差異によって示されるとき、ベースライン測定値を超えてレベルを有意に上昇させなかったことを実証している。
実施例３９ サルにおける肝毒性安全性プロファイル
ビヒクル（０．５％メチルセルロース，４００ｃｐｓ）中の化合物２を、カニクイザルの四つの群に、２８または２９日間連続して１日１回、経鼻胃管挿管によって投与した。各群に、一つの用量レベルを投与した。投与量レベルは、１群あたり１０、３０、１００および３００ｍｇ／ｋｇ／日であった。同時のコントロール群には、類似のレジメンでビヒクルを投与した。用量体積は、すべての群に対して１０ｍｌ／ｋｇであった。肝毒性または胆管損傷を表す、アラニンアミノトランスフェラーゼ［ＡＬＴ］、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ［ＡＳＴ］、アルカリホスファターゼ［ＡＬＰ］およびガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ［ＧＧＴ］の血清バイオマーカーを介して、肝毒性を計測した。表２９は、示された各用量レベルのサルにおける化合物２が、３００ｍｇ／ｋｇの用量以下まで血清バイオマーカーを上昇させなかったことを示している。
表２９ カニクイザルにおける化合物２の肝毒性安全性プロファイル
図２２は、化合物２が、正常範囲を超えてレベルを有意に上昇させないことをさらに実証している。図２３は、化合物２が、ビヒクルに対する％差異によって示されるとき、ベースライン測定値を超えてレベルを有意に上昇させなかったことを実証している。
均等物
本明細書に引用された特許、特許出願および刊行物の各々およびすべての開示は、それらの全体が参照により本明細書中に援用される。本発明は、具体的な態様に照らして開示されてきたが、本発明の他の態様およびバリエーションが、本発明の真の精神および範囲から逸脱することなく他の当業者によって工夫され得ることは明らかである。添付の請求項は、そのような態様および等価なバリエーションのすべてを含むと解釈されるように意図されている。
参照により本明細書中に援用されると言われるいずれの特許、刊行物または他の開示材料も、全部または一部において、援用される材料が、既存の定義、陳述または本開示に示される他の開示材料と矛盾しない程度にだけ、本明細書中に援用される。したがって、必要な限り、本明細書中に明示的に示されるような本開示は、参照により本明細書中に援用されるいずれの矛盾する材料にも取って代わる。
本発明は、その好ましい実施形態に照らして特に示され、説明されてきたが、添付の請求項によって包含される本発明の範囲から逸脱することなく、それらの実施形態の中において形態および詳細の様々な変更が行われ得ることが当業者によって理解されるだろう。

Claims (42)

  1. 式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩であって、

    式中、
    Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１-Ｃ６アルキル、Ｃ１-Ｃ６アルケニルまたはＣ１-Ｃ６アルキニルであり；
    Ｒ２は、一つまたは複数のＲ５基で必要に応じて置換される、Ｈ、Ｃ１-Ｃ６アルキル、Ｃ１-Ｃ６アルケニルまたはＣ１-Ｃ６アルキニルであり；
    Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１-Ｃ６アルキル、Ｃ１-Ｃ６アルケニルまたはＣ１-Ｃ６アルキニルであり；
    Ｒ４は、一つまたは複数の位置において１〜４個のＲ６基で必要に応じて置換される、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、チオール、アルキルチオ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、アミド、アルキルアミド、ジアルキルアミド、チオイル、スルホニル、シクリル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールであり；
    Ｒ５は、独立して、Ｈ、ハロゲン、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシ、アミノ、アミド、ホスホネート、カルボキシル、エーテル、アルキルチオ、ハロアルキルおよびシアノであり；
    Ｒ６は、独立して、Ｈ、ハロゲン、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、ケトン、アルデヒド、エステル、複素環、芳香環または芳香族複素環、ハロアルキルおよびシアノである、
    式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
  2. Ｒ１が、Ｃ１-Ｃ６アルキルである、請求項１に記載の化合物。
  3. Ｒ１が、-ＣＨ３である、請求項１または２に記載の化合物。
  4. Ｒ１が、Ｈである、請求項１に記載の化合物。
  5. Ｒ２が、Ｈである、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。
  6. Ｒ２が、Ｃ１-Ｃ６アルキルである、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。
  7. Ｒ２が、-ＣＨ３、-ＣＤ３または-ＣＨＦ２である、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。
  8. Ｒ１およびＲ２の各々が、独立してＣ１-Ｃ６アルキルである、請求項１に記載の化合物。
  9. Ｒ１およびＲ２の各々が、独立して-ＣＨ３である、請求項８に記載の化合物。
  10. Ｒ１およびＲ２の各々が、独立して-ＣＨ３であり、Ｒ３が、Ｈである、請求項８に記載の化合物。
  11. Ｒ３が、Ｈである、請求項１〜９のいずれかに記載の化合物。
  12. Ｒ３が、Ｃ１-Ｃ６アルキルである、請求項１〜９のいずれかに記載の化合物。
  13. Ｒ３が、-ＣＨ３である、請求項１２に記載の化合物。
  14. Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の各々が、独立してＣ１-Ｃ６アルキルである、請求項１に記載の化合物。
  15. Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の各々が、独立して-ＣＨ３である、請求項１４に記載の化合物。
  16. 前記化合物が、式（Ｉａ）の化合物

    である、請求項１〜１５のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物。
  17. 前記化合物が、式（Ｉｂ）の化合物

    である、請求項１〜１５のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物。
  18. Ｒ４が、ヘテロシクリルである、請求項１〜１７のいずれかに記載の化合物。
  19. 前記ヘテロシクリルが、４〜８員環である、請求項１８に記載の化合物。
  20. 前記ヘテロシクリルが、窒素原子を介して連結される、請求項１８または１９に記載の化合物。
  21. Ｒ４が、置換ヘテロシクリルである、請求項１〜１７のいずれかに記載の化合物。
  22. Ｒ４が、以下の群

    から選択される、請求項１〜１７のいずれかに記載の化合物。
  23. Ｒ４が、以下の群

    から選択され、ｍが、１である、請求項１〜２２のいずれかに記載の化合物。
  24. Ｒ４が、以下の群

    から選択される、請求項１〜２３のいずれかに記載の化合物。
  25. Ｒ４が、以下の群

    から選択され、ｍが、１である、請求項１〜２２のいずれかに記載の化合物。
  26. Ｒ４が、以下の群

    から選択される、請求項１〜２２および２５のいずれかに記載の化合物。
  27. ｍが、１である、請求項２２に記載の化合物。
  28. ｍが、０である、請求項２２に記載の化合物。
  29. Ｒ６が、アルキル、ハロアルキルまたはシアノである、請求項１〜２７のいずれかに記載の化合物。
  30. Ｒ６が、アルキルまたはハロアルキルである、請求項２９に記載の化合物。
  31. Ｒ６が、-ＣＦ３である、請求項３０に記載の化合物。
  32. Ｒ４が、以下の群

    から選択される、請求項１〜１７のいずれかに記載の化合物。
  33. 前記式（Ｉ）の化合物が、式（ＩＩ）の化合物

    であり、式中、
    ｎは、０〜４の整数であり；
    ｍは、０〜４の整数から選択される、
    請求項１〜１７のいずれかに記載の化合物。
  34. 前記式（Ｉ）の化合物が、式（ＩＩａ）の化合物

    であり、式中、
    ｎは、０〜４の整数であり；
    ｍは、０〜４の整数から選択される、
    請求項１〜１７のいずれかに記載の化合物。
  35. 前記式（Ｉ）の化合物が、式（ＩＩｂ）の化合物

    であり、式中、
    ｎは、０〜４の整数であり；
    ｍは、０〜４の整数から選択される、
    請求項１〜１７のいずれかに記載の化合物。
  36. 前記化合物が、以下の群

    またはその薬学的に許容され得る塩から選択される、請求項１に記載の化合物。
  37. 前記化合物が、

    またはその薬学的に許容され得る塩である、請求項１のいずれかに記載の化合物。
  38. 前記化合物の固体結晶形が、２θに関して表現される特徴的なピークを約７．６７°、約１２．５２°、約１３．４９°および約１９．３１°に含む粉末Ｘ線回折パターンを有する、請求項３７に記載の化合物。
  39. 前記化合物の固体結晶形が、２θに関して表現される特徴的なピークを約９．７８°、約１２．９８°、約１９．２０°および約１９．６７°に含む粉末Ｘ線回折パターンを有する、請求項３７に記載の化合物。
  40. 前記化合物の固体結晶形が、約１５０℃に等しいかまたはそれより高い融点を有する、請求項１に記載の化合物。
  41. 前記化合物の固体結晶形が、約１８０℃〜約２０５℃の範囲内の融点を有する、請求項１に記載の化合物。
  42. 前記化合物の固体結晶形が、約１９０℃〜約２００℃の範囲内の融点を有する、請求項１に記載の化合物。
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