ES2828961T3 - Agente terapéutico y/o profiláctico para leucemia/linfoma de células T del adulto - Google Patents

Abstract

7-Cloro-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil] -N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropirid-in-3-il) metil] -2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o 7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil] -N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il) metil] -2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de leucemia/linfoma de células T del adulto en un paciente que sufre de leucemia/linfoma de células T del adulto.

Description

DESCRIPCIÓN

Agente terapéutico y/o profiláctico para leucemia/linfoma de células T del adulto

Campo técnico

La presente invención se refiere a un agente para tratar y/o prevenir leucemia/linfoma de células T del adulto que contiene un compuesto que tiene una estructura química específica o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Antecedentes de la técnica

En la leucemia/linfoma de células T del adulto (ATL), es acumulada una pluralidad de anormalidades genéticas en las células T de sangre periférica infectadas con HTLV-1 durante un largo período de latencia de 50 a 60 años, que puede causar una transformación maligna. Se presume que hay 20 millones o más de personas infectadas (portadores) con el virus de la leucemia de células T humana del adulto tipo I (HTLV-1) en el mundo, y se presume que hay 1,08 millones o más de personas infectadas, y ATL se desarrolla en aproximadamente 1200 personas cada año en Japón (Bibliografía no patente 1). Se ha revelado, como resultado de un estudio de cohorte, que la ATL se desarrolla solo en portadores en los que una relación de las células infectadas con HTLV-1 en sangre periférica (carga de provirus, PVL) es del 4% o más (bibliografía no de patente 2). Este grupo de personas con alto riesgo de desarrollo represente el 25% de todos los portadores, y se espera que la reducción del número de células infectadas lleve a una reducción del riesgo de desarrollo de ATL. Sin embargo, hay una gran cantidad de puntos poco claros en los mecanismos moleculares de inmortalización y tumorigénesis de células causadas por HTLV-1 y de refractariedad, y no se ha encontrado un procedimiento eficaz para tratar la ATL ni un procedimiento para eliminar selectivamente las células infectadas. Debido a la aparición de un anticuerpo anti-CCR4, es decir, un fármaco diana molecular contra ATL, el resultado del tratamiento ha mejorado, pero el pronóstico sigue siendo el peor entre los linfomas malignos (bibliografía no de patente 3), y en términos de supervivencia media, el resultado del tratamiento de la quimioterapia para la ATL aguda es de 12,7 meses (bibliografía no de patente 4) y el resultado del tratamiento con el anticuerpo anti-CCR4 contra la recurrencia es de 13,7 meses (bibliografía no de patente 5). En consecuencia, es imperativo, sobre la base del esclarecimiento de la afección médica a nivel molecular, prevenir la infección por virus, prevenir el desarrollo de leucemia y desarrollar un nuevo procedimiento de tratamiento.

Ha sido revelado, como resultado de un análisis a gran escala de la expresión génica usando un gran número de muestras clínicas de ATL, que las células ATL son una población que tiene un patrón de expresión génica muy uniforme y anormal (bibliografía no de patente 6). Además, las células de ATL tienen una anormalidad del sistema de transducción de señales característica, que corresponde a una clave de supervivencia y crecimiento de las células tumorales, y se ha revelado que la anormalidad se deriva de la acumulación de anormalidades epigenéticas (bibliografía no de patente 7).

La familia polycomb controla negativamente la expresión génica a través del control de la cromatina mediante modificación de histonas. El potenciador de Zeste homólogo 1/2 (EZH1/2) corresponde al centro activo de complejo represor Polycomb 2 (PRC2) que trimetila la histona H3K27. EZH1 y EZH2 retienen un epigenoma en una célula mientras sus funciones son compensadas mutuamente. La inhibición de EZH2 lleva a la reducción del nivel de metilación de H3K27 en toda la célula, pero este efecto está restringido por el efecto compensador de EZH1. Cuando EZH1 y EZH2 son inhibidos simultáneamente, la metilación puede ser eliminada más eficazmente (bibliografía no de patente 8). Ha sido descubierto que la anormalidad en un componente PRC2 lleva al cáncer o anormalidad en la función de las células madre, y en particular, la acumulación de H3K27me3 metilado inducida por anormalidad génica o expresión aumentada de EZH2 está identificada en un gran número de cánceres, y se están llevando a cabo estudios serios principalmente para EZH2 como un nuevo fármaco diana molecular contra el cáncer (bibliografía no de patente 9 y 10).

La anormalidad de la familia polycomb que se produce en ATL fue aclarada mediante un análisis exhaustivo de la expresión génica (Bibliografía no de patente 6 y 11). En particular, la sobreexpresión de EZH2 es notoria y también se detecta un aumento del nivel de metilación de H3K27 en las células enteras. Además, se ha aclarado que la inhibición de miR-31 dependiente de EZH2 da como resultado la expresión de la quinasa inductora de NF-kB (NIK) para activar constitutivamente la vía de NF-KB y, por lo tanto, EZH2 se considera eficaz como un fármaco diana molecular contra ATL.

Listado de citas

Bibliografía no de patente

Bibliografía no de patente 1: Yamaguchi K., Watanabe T., Int J Hematol 2002; 76 Suppl 2: 240 Bibliografía no de patente 2: Iwanaga, M. et al., Blood 2010; 116(8): 1211-9

Bibliografía no de patente 3: Vose, Armitage, J. et al., J Clin Oncol 2008; 26(25): 4124-30

Bibliografía no de patente 4: Utsunomiya A. et al., J Clin Oncol 2007; 25(34): 5458-64

Bibliografía no de patente 5: Ishida, Joh, et al., J Clin Oncol 2012; 30(8): 837-42

Bibliografía no de patente 6: Yamagishi M. et al., Cancer Cell 2012; 21: 121

Bibliografía no de patente 7: Yamagishi M., Watanabe T., Front Microbiol 2012; 3: 334

Bibliografía no de patente 8: Shen, X. et al., Mol Cell 502008; 32 (4): 491-502

Bibliografía no de patente 9: Sparmann A., van Lohuizen M., Nat Rev Cancer 2006; 6: 846

Bibliografía no de patente 10: Lund, Adams, Copland., Leukemia 2014; 28(1): 44-9

Bibliografía no de patente 11: Sasaki D. et al., Haematologica 2011; 96: 712

Sumario de la invención

Problema técnico

La presente invención proporciona un agente para tratar y/o prevenir leucemia/linfoma de células T del adulto que contiene un compuesto que tiene una estructura química específica o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Solución al problema

Los inventores de la presente han aclarado que (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es marcadamente eficaz para tratar y prevenir la leucemia/linfoma de células T del adulto. La presente invención fue lograda sobre la base de este hallazgo.

De acuerdo con la presente invención, son proporcionadas invenciones de acuerdo con los siguientes apartados [1] a [8].

[1] 7-Cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o 7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropirid-in-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en el tratamiento de la leucemia/linfoma de células T del adulto en un paciente que sufre de leucemia/linfoma de células T del adulto.

[2] (2R)-7-Cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1.3- benzodioxol-5-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en el tratamiento de leucemia/linfoma de células T del adulto en un paciente que sufre de leucemia/linfoma de células T del adulto.

[3] p-toluenosulfonato de (2R)-7-Cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)cicloclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, para uso en el tratamiento de leucemia/linfoma de células T del adulto en un paciente que sufre de leucemia/linfoma de células T del adulto.

[4] (2R)-7-Bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en el tratamiento de leucemia/linfoma de células T del adulto en un paciente que sufre de leucemia/linfoma de células T del adulto.

[5] 7-Cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o 7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en la prevención de la aparición de leucemia/linfoma de células T del adulto en un individuo portador del virus tipo I de leucemia de células T humanas del adulto (HTLV-1).

[6] (2R)-7-Cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1.3- benzodioxol-5-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en la prevención de la aparición de la leucemia/linfoma de células T del adulto en un individuo portador del virus tipo I de la leucemia de células T humanas del adulto (HTLV-1).

[7] p-toluenosulfonato de (2R)-7-Cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)cicloclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2 dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, para uso en la prevención de la aparición de leucemia/linfoma de células T del adulto en un individuo portador del virus tipo I de leucemia de células T humanas del adulto (HTLV-1).

[8] (2R)-7-Bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en la prevención de la aparición de leucemia/linfoma de células T del adulto en un individuo portador del virus tipo I de leucemia de células T humanas del adulto (HTLV-1).

Breve descripción de los dibujos

[Figura 1] Las Figuras 1A y 1 B ilustran el crecimiento de la línea celular TL-Om1 derivada de células tumorales de pacientes con ATL que han sido tratados con un compuesto del Ejemplo 1 a lo largo del tiempo (Figura 1A) y de forma dependiente de la dosis (Figura 1 B). El crecimiento está representado de manera tal que el crecimiento celular de un grupo tratado con DMSO sea del 100%.

[Figura 2] Las Figuras 2A y 2B ilustran el crecimiento de la línea celular TL-Om1 derivada de células tumorales de pacientes con ATL que se han tratado con un compuesto del Ejemplo 1 a lo largo del tiempo (Figura 2A) y de forma dependiente de la dosis (Figura 2 B). El crecimiento está representado de manera tal que el crecimiento celular de un grupo tratado con Dm So sea del 100%.

[Figura 3] La Figura 3 ilustra un efecto del compuesto para el uso de la presente invención sobre el crecimiento de células mononucleares de sangre periférica aisladas de pacientes con ATL (26 casos).

[Figura 4] La Figura 4 ilustra un efecto del compuesto para el uso de la presente invención sobre una relación de células infectadas (PVL) en células mononucleares de sangre periférica aisladas de muestras del portador de HTLV-1.

Descripción de la realización

En la presente memoria, el término "leucemia/linfoma de células T del adulto" (en adelante en la presente memoria, a menudo simplemente denominado "ATL") se refiere a leucemia/linfoma causada por infección con el virus tipo 1 de la leucemia de células T humanas (HTLV-1). A menudo, la ATL también es denominada "leucemia de células T del adulto” o "linfoma de células T del adulto".

En la presente memoria, el término "portador de HTLV-1 "significa un individuo (un animal de sangre caliente, particularmente un ser humano) infectado con el virus HTLV-1. Si un individuo tiene un anticuerpo contra e1HTLV-1, el individuo puede ser considerado un portador de HTLV-1.

En la presente memoria, el término "prevenir' y sus derivados significan que es reducida la tasa de inicio de ATL en un portador de HTLV-1 antes de la aparición de la ATL. El término significa que la aparición de ATL se previene con preferencia en 60% o más, y más preferentemente 80% o más de sujetos que pertenecen a un grupo portador HTLV-1.

En la presente memoria, el término "tratar" y sus derivados significan remisión, alivio y/o retraso del empeoramiento de los síntomas clínicos de ATL en un paciente que ha desarrollado ATL.

Un médico puede diagnosticar ATL sobre la base de los síntomas clínicos de un individuo. Además, la ATL es una enfermedad causada por el crecimiento monoclonal de células T en las que e1HTLV-1 se ha incorporado al genoma como un provirus y, por lo tanto, la ATL se puede diagnosticar mediante la detección, por un procedimiento de transferencia Southern o similar, que el provirus se HTLV-1 incorpora de forma monoclonal en un ADN de células de ATL contenidas en una muestra obtenida de un individuo.

Como procedimiento de prueba para diagnosticar que un individuo es portador de HTLV-1, son conocidos un ensayo de aglutinación de partículas (ensayo PA), un ensayo de quimioluminiscencia, un ensayo de anticuerpos fluorescentes indirectos que usan una célula infectada por virus como antígeno y un procedimiento de transferencia Western, y cualquiera de estos se puede emplear de manera apropiada. En el procedimiento de transferencia Western, si un anticuerpo contra la proteína de la envoltura del virus (gp46) es positivo y uno o más anticuerpos contra tres proteínas centrales (p19, p24 y p53) son positivos en una muestra obtenida de un individuo, puede ser diagnosticado que el individuo es un portador de HTLV-1. Alternativamente, se puede diagnosticar de forma subsidiaria mediante una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para amplificar el genoma del provirus HTLV-1, si el individuo es o no un portador.

De acuerdo con la presente invención, cualquiera de los siguientes compuestos y sales farmacéuticamente aceptables del mismo puede ser usado para prevenir y/o tratar la ATL.

(2R)-7-Cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[Fórmula 1]

(2R)-7-Bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[Fórmula 2]

El compuesto para uso de la presente invención puede estar opcionalmente en forma de una sal farmacéuticamente aceptable. Una sal farmacéuticamente aceptable se refiere a una sal que no tiene una toxicidad notable pero que puede ser usada como producto farmacéutico. El compuesto para uso de la presente invención tiene un grupo básico y, por tanto, puede ser convertido en una sal mediante una reacción con un ácido.

Los ejemplos de la sal para un grupo básico incluyen sales de ácidos inorgánicos tal como sales de hidroácidos halogenados que incluyen fluorhidrato, clorhidrato, bromhidrato e yodhidrato, nitrato, perclorato, sulfato y fosfato; sales de ácidos orgánicos tal como sulfonatos de alquilo C1-C6 que incluyen metanosulfonato, trifluorometanosulfonato y etanosulfonato, aril sulfonatos que incluyen bencenosulfonato y p-toluenosulfonato, acetato, malato, fumarato, succinato, citrato, ascorbato, tartrato, oxalato, adipato y maleato; y sales de aminoácidos tal como sal de glicina, sal de lisina, sal de arginina, sal de ornitina, glutamato y aspartato.

La sal farmacéuticamente aceptable del compuesto para uso de la presente invención puede ser convertida en un hidrato mediante la incorporación de una molécula de agua en algunos casos si la sal se deja en el aire o se reprecipita, y dicho hidrato es incluido en la sal para uso de la presente invención.

La sal farmacéuticamente aceptable del compuesto para uso de la presente invención puede ser convertida en un solvato por absorción de alguna clase de disolvente en algunos casos si la sal se deja en el solvente o se reprecipita, y tal solvato está incluido en la sal para uso de la presente invención.

Además, la presente invención también abarca un compuesto convertido, a través de una reacción con una enzima, ácido gástrico o similar en condiciones fisiológicas en un cuerpo vivo, en un compuesto del Ejemplo 1 o un compuesto del Ejemplo 2 correspondiente a un ingrediente activo de una composición farmacéutica para uso de la presente invención, a saber, un compuesto convertido en el compuesto del Ejemplo 1 o el compuesto del Ejemplo 2 mediante oxidación enzimática, reducción, hidrolisis o similares, o un "compuesto profármaco farmacéuticamente aceptable" convertido en el compuesto del Ejemplo 1 o el compuesto del Ejemplo 2 por hidrólisis o similar provocada por ácido gástrico o similar.

El compuesto para uso de la presente invención o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede ser aislado y purificado mediante cualquiera de los procedimientos conocidos, tal como extracción, precipitación, destilación, cromatografía, separación por precipitación y reprecipitación.

El compuesto para uso de la presente invención puede contener, en uno o más átomos que constituyen el compuesto, un isótopo en una relación no natural. Los ejemplos del isótopo incluyen hidrógeno pesado (2H), tritio (3H), yodo-125 (125I) y carbono-14 (14C). Además, el compuesto se puede radiomarcar con un isótopo radiactivo tal como tritio (3H), yodo-125 (125I) o carbono-14 (14C). El compuesto radiomarcado es útil como un agente terapéutico o profiláctico, un reactivo de investigación tal como un reactivo de ensayo y un agente de diagnóstico tal como un agente de diagnóstico por imágenes in vivo. Se observa que todas las variantes isotópicas del compuesto para uso de la presente invención están incluidas en el alcance de la presente invención sin importar si son radiactivas o no. El compuesto para uso de la presente invención o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede ser usado junto con otro agente antitumoral. Los ejemplos del agente antitumoral incluyen un agente alquilante, un antimetabolito, un antibiótico antitumoral, un extracto vegetal antineoplásico, un BRM (modificador de la respuesta biológica), una hormona, una vitamina, un anticuerpo antitumoral, un fármaco dirigido a moléculas y otros agentes antitumorales.

Más específicamente, los ejemplos del agente alquilante incluyen un agente alquilante tal como mostaza nitrogenada, N-óxido de mostaza nitrogenada o clorambucilo, un agente alquilante a base de aziridina tal como carbocuona o tiotepa, un agente alquilante a base de epóxido como di-bromomanitol o di-bromo-dulcitol, un agente alquilante a base de nitrosourea tal como carmustina, lomustina, semustina, clorhidrato de nimustina, estreptozocina, clorozotocina, o ranimustina y busulfano, tosilato de improsulfano y dacarbazina.

Los ejemplos de varios antimetabolitos incluyen un antimetabolito de purina tal como 6-mercaptopurina, 6-tiouanina o tioinosina, un antimetabolito de pirimidina tal como fluorouracilo, tegafur, tegafur-uracilo, carmofur, doxifluridina, broxuridina, citarabina o enocitabina, y un metabolito del ácido fólico tal como metotrexato o trimetrexato.

Los ejemplos del antibiótico antitumoral incluyen un agente antitumoral antibiótico a base de antraciclina, tal como mitomicina C, bleomicina, peplomicina, daunorrubicina, aclarbicina, doxorrubicina, pirarrubicina, THP-adriamicina, 4'-epidoxorrubicina, o epirrubicina y crominicina A3, y actinomicina D.

Los ejemplos del extracto vegetal antineoplásico incluyen alcaloides de la vinca tal como vindesina, vincristina y vinblastina, taxanos tal como paclitaxel y docetaxel y epipodofilotoxinas tal como etopósido y tenipósido.

Los ejemplos de BRM incluyen un factor de necrosis tumoral e indometacina.

Los ejemplos de la hormona incluyen hidrocortisona, dexametasona, metilprednisolona, prednisolona, prasterona, betametasona, triamcinolona, oximetolona, nandrolona, metenolona, fosfestrol, etinilestradiol, clormadinona y medroxiprogesterona.

Los ejemplos de la vitamina incluyen vitamina C y vitamina A.

Los ejemplos del anticuerpo antitumoral y el fármaco dirigido molecular incluyen trastuzumab, rituximab, cetuximab, nimotuzumab, denosumab, bevacizumab, infliximab, mesilato de imatinib, gefitinib, erlotinib, sunitinib, lapatinib y sorafenib.

Los ejemplos de los otros agentes antitumorales incluyen cisplatino, carboplatino, oxaliplatino, tamoxifeno, camptotecina, ifosfamida, ciclofosfamida, melfalán, L-asparaginasa, aceglatona, esquizofilano, picibanilo, procarbazina, pipobromano, neocarzinosatatina, hidroxiurea, ubenimex, y krestina.

El compuesto para uso de la presente invención o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo se puede administrar de diversas formas. Los ejemplos de las formas de dosis incluyen la administración oral en forma de un comprimido, una cápsula, un gránulo, una emulsión, un comprimido, un polvo y un jarabe (una solución), y administración parenteral en forma de inyección (administración intravenosa, intramuscular, subcutánea o intraperitoneal), una infusión por goteo y un supositorio (administración rectal). Estas diversas preparaciones pueden ser formuladas mediante un procedimiento ordinario usando un agente principal junto con un agente auxiliar habitualmente usado en el campo de la formulación farmacéutica, tal como un excipiente, un aglutinante, un agente desintegrante, un lubricante, un corrector, un agente solubilizante, una suspensión y un agente de revestimiento. Cuando el compuesto de la sal es usado en forma de un comprimido, un portador para uso puede ser, por ejemplo, un excipiente tal como lactosa, azúcar blanco, cloruro de sodio, glucosa, urea, almidón, carbonato de calcio, caolín, celulosa cristalina, o ácido silícico; un aglutinante tal como agua, etanol, propanol, jarabe simple, una solución de glucosa, una solución de almidón, una solución de gelatina, carboximetil celulosa, goma laca, metil celulosa, fosfato de potasio o polivinil pirrolidona; un agente desintegrante tal como almidón seco, alginato de sodio, un polvo de agar, un polvo de laminaran, hidrógeno carbonato de sodio, carbonato de calcio, un éster de ácido graso de polioxietilensorbitano, lauril sulfato de sodio, estearato de monoglicérido, almidón, o lactosa; un inhibidor de la desintegración tal como azúcar blanco, estearina, manteca de cacao o un aceite hidrogenado; un promotor de la absorción tal como una sal de amonio cuaternario, o lauril sulfato de sodio; un agente humectante tal como glicerina o almidón; un adsorbente tal como almidón, lactosa, caolín, benonita, o ácido silícico coloidal; o un lubricante tal como talco purificado, sal de estearato, un polvo de ácido bórico, o polietilenglicol. Además, el comprimido se puede proporcionar con un revestimiento habitual si es necesario, y puede estar en forma de, por ejemplo, un comprimido revestido de azúcar, un comprimido revestido de gelatina, un comprimido con revestimiento entérico, un comprimido revestido con película, o comprimido de dos capas o comprimido de varias capas.

Cuando el compuesto de la sal es usado en forma de comprimido, un portador para uso puede ser un excipiente tal como glucosa, lactosa, manteca de cacao, almidón, un aceite vegetal hidrogenado, caolín, talco o; un aglutinante tal como goma arábiga en polvo, tragacanto en polvo, gelatina o etanol; o un agente desintegrador tal como laminaran, o agar.

Cuando el compuesto de la sal es usado en forma de supositorio, cualquiera de los portadores conocidos en este campo técnico puede ser usado ampliamente, y los ejemplos incluyen polietilenglicol, manteca de cacao, alcoholes superiores, ésteres de alcoholes, gelatina y glicéridos semisintéticos.

Cuando es usado en forma de inyección, el compuesto o la sal pueden ser usados como una solución, una emulsión o una suspensión. La solución, la emulsión o la suspensión son esterilizadas preferentemente y son isotónicas a la sangre. Un disolvente usado para preparar la solución, la emulsión o la suspensión no está especialmente limitado a condición de que el disolvente pueda ser usado como diluyente para uso médico, y los ejemplos incluyen agua, etanol, propilenglicol, alcohol isoestearílico etoxilado alcohol isoestearílico polioxilado y un éster de ácido graso de polioxietilen sorbitano. En este caso, la preparación puede contener sal común, glucosa o glicerina en una cantidad suficiente para preparar una solución isotónica, y puede contener un agente solubilizante habitual, tampón, agente calmante o similares.

Además, la formulación descrita anteriormente puede contener, si es necesario, un colorante, un conservante, un perfume, un agente saborizante, un edulcorante o similares, y puede contener además otro producto farmacéutico. Una cantidad del compuesto contenido como ingrediente activo en la formulación no está especialmente limitada, pero se selecciona apropiadamente de una amplia variedad y es normalmente 0,5 a 70% en peso, y preferentemente 1 a 30% en peso en la composición entera.

La cantidad de uso varía de acuerdo con el síntoma, la edad y similares de un paciente (un animal de sangre caliente, particularmente un ser humano), y en el caso de la administración oral, preferentemente se administra a un adulto una vez a través de seis veces al día, de acuerdo con el síntoma, con el límite superior por día establecido en 2000 mg (preferentemente 100 mg) y el límite inferior establecido en 0,1 mg (preferentemente 1 mg y más preferentemente 10 mg).

La presente invención proporciona el uso en un procedimiento para tratar ATL en un paciente que sufre de ATL, que incluye administrar el compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo al paciente. La presente invención también proporciona el uso en un procedimiento para prevenir la aparición de a Tl en un individuo portador de HTLV-1, que incluye la administración del compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo al sujeto. La presente invención proporciona una composición farmacéutica para uso en el tratamiento de ATL en un paciente que sufre de ATL, que contiene el compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo. La presente invención también proporciona una composición farmacéutica para su uso en la prevención de la aparición de ATL en un individuo portador de HTLV-1, que contiene el compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo. La composición farmacéutica para uso de la presente invención puede contener un excipiente farmacéuticamente aceptable además del compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

La presente invención proporciona el compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso en el tratamiento de ATL en un paciente que sufre de ATL. La presente invención también proporciona el compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso en la prevención de la aparición de ATL en un individuo portador de HTLV-1. La presente invención proporciona el uso del compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo en la producción de una composición farmacéutica para uso en el tratamiento de ATL en un paciente que sufre de ATL. La presente invención también proporciona el uso del compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso en la producción de una composición farmacéutica para uso en la prevención de la aparición de la ATL en un individuo portador de HTLV-1.

De acuerdo con los Ejemplos de prueba 1 a 3 descritos a continuación, el compuesto para uso de la presente invención o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede reducir el crecimiento de leucemia/linfoma de células T del adulto, puede reducir una tasa de supervivencia de leucemia/linfoma de células T del adulto, y/o puede destruir leucemia/linfoma de células T del adulto. Por consiguiente, la presente invención proporciona una composición o una composición farmacéutica para uso para reducir el crecimiento de leucemia/linfoma de células T del adulto, para reducir una tasa de supervivencia de leucemia/linfoma de células T del adulto, y/o para destruir leucemia/linfoma de células T del adulto, que contiene el compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Ejemplos

Ejemplo de referencia 1

5-cloro-3,4-dihidoxi-2-metilbenzoato de metilo

3,4-dihidroxi-2-metilbenzoato de metilo (12,1 g, 66,2 mmol) fue disuelto en acetato de etilo (265 ml), fue añadido al mismo N-clorosuccinimida (13,3 g, 99,2 mmol), el producto resultante fue agitado a temperatura ambiente durante 1 hora, y fue añadido p-anisol (7,15 g, 66,2 mmol) al producto resultante, seguido por agitación otros 15 minutos. La solución de reacción así obtenida fue lavada con agua y una solución salina saturada, y el producto resultante fue secado con sulfato de magnesio y concentrado bajo presión reducida. El residuo así obtenido fue lavado con diclorometano para obtener un compuesto del título (8,03 g, 37,1 mmol, 56% de rendimiento).

1H-RMN (400MHz, DMSO-d6) ó: 2,34 (3H, s), 3,76 (3H, s), 7,36 (1 H, s), 9,11 (1 H, br s), 9,96 (1 H, br s). MS (ES I) m/z: 215 (M-H)-.

Ejemplo de referencia 2

N-(trans-4-etinilciclohexil)carbamato de terc-butilo

[Fórm ula 4]

A una solución de metanol (30 ml) de N-(trans-4-formilciclohexil)carbamato de terc-butilo (0,856 g, 3,77 mmol), fueron añadidos carbonato de potasio (1,04 g, 7,54 mmol) y 1-diazo-1-dimetoxifosforil-propan-2-ona (0,565 ml, 3,77 mmol), y el producto resultante fue agitado a temperatura ambiente durante 16 horas. A la solución de reacción así obtenida, fue añadida agua, el producto resultante fue extraído con acetato de etilo, la capa orgánica resultante fue lavada con una solución salina saturada y después secada con sulfato de sodio anhidro. El disolvente fue destilado bajo presión reducida, y el residuo resultante fue purificado por cromatografía en gel de sílice (hexano: acetato de etilo = 100:0 a 85:15) para obtener un compuesto del título (0,678 g, 3,04 mmol, 81 % de rendimiento).1

1H-RMN (400MHz, CDCla) ó: 1,04-1,17 (2H, m), 1,42-1,55 (2H, m), 1,44 (9H, s), 1,94-2,05 (4H, m), 2,04 (1 H, d, J = 2,5 Hz), 2,16-2,25 (1 H, m), 3,34-3,50 (1 H, m), 4,29-4,43 (1H, br s).

Ejemplo de referencia 3

5-bromo-3,4-dihidroxi-2-metil benzoato de metilo

3,4-dihidroxi-2-metilbenzoato de metilo (43,1 g, 237 mmol) fue disuelto en ácido acético (250 ml) y diclorometano (250 ml), fue añadida una solución de diclorometano (20 ml) de bromo (37,8 g, 237 mmol) de una manera gota a gota durante 15 minutos mientras era enfriada con hielo, y el producto resultante fue agitado a la misma temperatura durante 4 horas. Posteriormente, también fue añadido bromuro (3,78 g, 23,7 mmol) al producto resultante, la mezcla resultante fue agitada durante 1,5 horas mientras era enfriada con hielo, y fue añadida agua helada a la solución de reacción resultante seguido por la extracción con acetato de etilo. La capa orgánica resultante fue lavada con una solución acuosa de sulfito de sodio y una solución salina saturada, y concentrado bajo presión reducida. El residuo así obtenido fue lavado con diclorometano para obtener un compuesto del título (50,4 g, 193 mmol, 82% de rendimiento).

1H-RMN (400MHz, CDCla) 6: 2,47 (3H, s), 3,87 (3H, s), 5,61 (1H, br s), 5,83 (1H, br s), 7,67 (1H, s). MS (ES I) m/z: 259, 261 (M-H)-.

Ejemplo 1

(2R)-7-Cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida

(Etapa 1-1)

2-[trans-4-(terc-butoxicarbonilamino)ciclohexil]-7-cloro-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxilato de metilo

A una solución de tolueno (50 ml) del 5-cloro-3,4-dihidroxi-2-metilbenzoato de metilo (1,00 g, 4,62 mmol) sintetizado en el Ejemplo de referencia 1 y el N-(trans-4-etinilciclohexil)carbamato de terc-butilo (1,55 g, 6,93 mmol) sintetizado en el Ejemplo de referencia 2, fueron añadidos dodecacarbonil trirrutenio (0) (0,0738 g, 0,115 mmol) y 5-(di-tercbutilfosfino)-1',3',5'-trifenil-1'H-[1,4']bipirazol (0,175 g, 0,346 mmol), y la mezcla resultante fue agitada bajo una atmósfera de nitrógeno a 120 °C durante 1 hora. Después de completar la reacción, el disolvente fue destilado bajo presión reducida, y el residuo así obtenido fue purificado mediante cromatografía en columna de gel de sílice (hexano: acetato de etilo = 100:0 a 80:20) para obtener un compuesto del título (1,00 g, 2,28 mmol, 49% de rendimiento). 1H-RMN (400MHz, CDCla) 6: 1,02-1,16 (2H, m), 1,24-1,40 (2H, m), 1,44 (9H, s), 1,62 (3H, s), 1,78-1,88 (1 H, m), 1,91-2,00 (2H, m), 2,04-2,12 (2H, m), 2,38 (3H, s), 3,33-3,46 (1 H, m), 3,85 (3H, s), 4,37 (1 H, br s), 7,53 (1H, s).

(Etapa 1-2)

(2R)-2-[trans-4-(terc-butoxicarbonilamino)ciclohexil]-7-cloro-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxilato de metilo A partir de 2-[trans-4-(terc-butoxicarbonilamino)ciclohexil]-7-cloro-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxilato de metilo sintetizado en la etapa 1-1, cada enantiómero fue separado en las siguientes condiciones:

Columna: Daicel Corporation, CHIRALCEL OZ-H 4,6 mm ID x 250 mm L

Disolvente de elución: n-hexano: etanol = 98:2

Caudal: 1,00 ml/min

Temperatura: 25 °C

Primer pico: 10,7 min ([(a]ü20 = -18,3 (C = 0,92, cloroformo))

Segundo pico: 11,7 min ([a]D20 = 18,3 (C = 0,96, cloroformo))

En las siguientes etapas, fue usado el segundo pico aislado mediante el uso de una columna quiral para la separación.

(Etapa 1-3)

Ácido (2R)-2-[trans-4-(terc-Butoxicarbonilamino)ciclohexil]-7-cloro-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxílico

Al (2R)-2-[trans-4-(terc-butoxicarbonilamino)ciclohexil]-7-cloro-2,4-dimetil-1,3-benzodixol-5-carboxilato de metilo (el segundo pico, 0,234 g, 0,532 mmol) separado en la etapa 1-2, fueron añadidos tetrahidrofurano (3 ml) y metanol (1,5 ml), y una solución acuosa de hidróxido de sodio 1 M (1,33 ml, 1,33 mmol) también fue añadidaal producto resultante, seguido por agitación a temperatura ambiente durante 16 horas. Después de completar la reacción, también fue añadido ácido clorhídrico 1 M (1,33 ml, 1,33 mmol) para la neutralización, y también fue añadido diclorometano para extracción. La capa orgánica así obtenida fue concentrada bajo presión reducida para obtener un compuesto del título (0,227 g, 0,532 mmol, 100% de rendimiento).

(Etapa 1-4)

N-[trans-4-[(2R)-7-cloro-5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metilcarbamoil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-2-il] ciclohexil]carbamato de terc-butilo

A una solución de dimetilformamida (5 ml) del ácido (2R)-2-[trans-4-(terc-butoxicarbonilamino)ciclohexil]-7-cloro-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxílico (0,227 g, 0,532 mmol) sintetizado en la etapa 1-3, fueron añadidos clorhidrato de 3-(aminometil)-4,6-dimetil-1,2-dihidropiridin-2-ona (0,116 g, 0,586 mmol), clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (0,122 g, 0,639 mmol), 1-hidroxi-7-azabenzotriazol (0,0869 g, 0,639 mmol), y N,N-diisopropiletilamina (0,223 ml, 1,28 mmol), y el producto resultante fue agitado bajo una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Después de completar la reacción, una solución acuosa saturada de hidrógeno carbonato de sodio fue añadida a la solución de reacción, y el producto resultante fue extraído con acetato de etilo. La capa orgánica resultante fue secada con sulfato de sodio anhidro, y el disolvente fue destilado bajo presión reducida. El residuo así obtenido fue disuelto en cloroformo, y purificado por cromatografía en columna de gel de sílice (cloroformo: metanol = 100:0 a 95:5) para obtener un compuesto del título (0,298 g, 0,532 mmol, 100% de rendimiento).

1H-RMN (400MHz, CDCla) 6: 1,01-1,16 (2H, m), 1,23-1,38 (2H, m), 1,44 (9H, s), 1,59 (3H, s), 1,76-1,84 (1H, m), 1,88-1,95 (2H, m), 2,02-2,11 (2H, m), 2,22 (3H, s), 2,25 (3H, s), 2,37 (3H, s), 3,30-3,46 (1 H, m), 4,35-4,41 (1H, m), 4,49 (2H, d, J = 6,1 Hz), 5,96 (1 H, s), 6,87 (1 H, s), 7,23 (1 H, t, J = 6,1 Hz). MS (APCI) m/z: 560 (M+H)+.

(Etapa 1-5)

(2R)-2-(trans-4-Aminociclohexil)-7-cloro-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida

N-[trans-4-[(2R)-7-cloro-5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metilcarbamoil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-2-il]ciclohexil]carbamato de terc-butilo (0,298 g, 0,532 mmol) sintetizado en la etapa 1-4 fue disuelto en metanol (1,3 ml), y fue añadida una solución de ácido clorhídrico 4 M-1,4-dioxano (1,33 ml, 5,32 mmol) seguido por agitación a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de completar la reacción, fue añadida una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio para neutralización, y usado 20% de metanol-cloroformo para la extracción. La capa orgánica resultante fue lavada con una solución salina saturada, secada con sulfato de sodio, y después concentrada bajo presión reducida para obtener un compuesto del título (0,241 g, 0,524 mmol, 98% de rendimiento). MS (APCI) m/z: 460 (M+H)+.

(Etapa 1-6)

(2R)-7-Cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida

(2R)-2-(trans-4-aminociclohexil)-7-cloro-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida (17,0 g, 36,9 mmol) sintetizada en la etapa 1-5 fue disuelta en metanol (200 ml), fue añadida una solución acuosa de formaldehído 37% (6,29 g, 77,5 mmol), el producto resultante fue agitado a temperatura ambiente durante 10 minutos, y fue añadido triacetoxiborohidruro de sodio (34,2 g, 129 mmol), seguido por agitación a temperatura ambiente durante 16 horas. Después de completar la reacción, el producto resultante fue neutralizado con una solución acuosa de hidróxido de sodio 1 M, y fue usado 20% metanol-cloroformo para extracción. La capa orgánica resultante fue lavada con una solución salina saturada, secada con sulfato de sodio, y concentrada bajo presión reducida, y el residuo así obtenido fue purificado por cromatografía en columna de gel de sílice básica (acetato de etilo: metanol = 100:0 a 96:4) para obtener un compuesto del título (15,3 g, 31,4 mmol, 85% de rendimiento).

1H-RMN (400MHz, DMSO-d6) ó: 1,08-1,21 (4H, m), 1,59 (3H, s), 1,77-1,90 (5H, m), 2,03-2,09 (1 H, m), 2,11 (6H, 15 s), 2,13 (6H, s), 2,16 (3H, s), 4,21 (2H, d, J = 4,9 Hz), 5,85 (1H, s), 6,84 (1 H, s), 8,13 (1 H, t, J = 4,9 Hz), 11,48 (1 H, s).

MS (APCI) m/z: 488 (M+H)+.

Rotación específica [a]D20 = 1,0 (C = 1,0, cloroformo)

Ejemplo 2

(2R)-7-Bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida

(Etapa 2-1)

7-bromo-2-[trans-4-(terc-butoxicarbonilamino)ciclohexil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxilato de metilo Una reacción similar al de la etapa 1-1 fue realizada mediante el uso de 5-bromo-3,4-dihidroxi-2-metilbenzoato de metilo (23,5 g, 90,0 mmol) sintetizado en el Ejemplo de referencia 3, el N-(trans-4-etinilciclohexil)carbamato de terc-butilo (22,1 g, 99,0 mmol) sintetizado en el Ejemplo de referencia 2, dodecacarbonil trirrutenio(0)(1,44 g, 2,25 mmol) y 5-(di-terc-butilfosfino)-1',3',5'-trifenil-1'H-[1,4']bipirazol (3,42 g, 6,75 mmol) para obtener un compuesto del título (38,9 g, 80,3 mmol, 89% de rendimiento). 1H-RMN (400MHz, CDCla) ó: 1,04-1,15 (2H, m), 1,25-1,38 (2H, m), 1,44 (9H, s), 1,63 (3H, s), 1,79-1,87 (1H, m), 1,91-1,99 (2H, m), 2,04-2,12 (2H, m), 2,38 (3H, s), 3,31-3,46 (1H, m), 3,84 (3H, s), 4,37 (1H, br s), 7,67 (1H, s).

(Etapa 2-2)

(2R)7-bromo-2-[trans-4-(terc-butoxicarbonilamino)ciclohexil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxilatode de metilo A partir de 7-bromo-2-[trans-4-(terc-butoxicarbonilamino)ciclohexil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxilato de metilo sintetizado en la etapa 2-1, cada enantiómero fue separado en las siguientes condiciones:

Columna: Daicel Corporation, CHIRALCEL OZ-H 4,6 mm ID x 250 mm L

Disolvente de elución: n-hexano: etanol = 98:2

Caudal: 1,00 ml/min

Temperatura: 25 °C

Primer pico: 11,2 min (rotación específica [a]D20 = -6,5 (C = 1,0, cloroformo))

Segundo pico: 12,3 min (rotación específica [a]D20 =

6,3 (C = 1,0, cloroformo))

En las siguientes etapas, fue usado el segundo pico aislado mediante el uso de una columna quiral para la separación.

(Etapa 2-3)

Ácido (2R)-7-Bromo-2-[trans-4-(terc-butoxicarbonilamino)ciclohexil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxílico Una reacción similar a la de la etapa 1-3 fue realizada mediante el uso del (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(tercbutoxicarbonilamino)ciclohexil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxilato de metilo (el segundo pico, 0,956 g, 1,97 mmol) separado en la etapa 2-2, tetrahidrofurano (6 ml), metanol (3 ml), y una solución acuosa de hidróxido de sodio 1 M (2,96 ml, 2,96 mmol) para obtener un compuesto del título (0,903 g, 1,92 mmol, 97% de rendimiento).

(Etapa 2-4)

N-[trans-4-[(2R)-7-bromo-5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metilcarbamoil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-2-il]ciclohexil]carbamato de terc-butilo

Una reacción similar a la de la etapa 1-4 fue realizada mediante el uso del ácido (2R)-7-bromo-[trans-4-(terc-butoxicarbonilamino)ciclohexil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxílico (0,903 g, 1,92 mmol) sintetizado en la etapa 2-3, dimetilformamida (20 ml), clorhidrato de 3-(aminometil)-4,6-dimetil-1,2-dihidropiridin-2-ona(0,399 g, 2,11 mmol), clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (0,442 g, 2,30 mmol), 1-hidroxi-7-azabenzotriazol (0,314 g, 2,30 mmol), y N,N-diisopropiletilamina (0,803 ml, 4,61 mmol) para obtener un compuesto del título (0,801 g, 1,32 mmol, 69% de rendimiento). 1H-RMN (400MHz, CDCla) 6: 1,03-1,15 (2H, m),

(1 H, m), 4,49 (2H, d, J = 6,0 Hz), 5,95 (1 H, s), 7,00 (1 H, s), 7,18 (1 H, t, J = 6,0 Hz). MS (APCI) m/z: 604, 606 (M+H)+.

(Etapa 2-5)

(2R)-2-(trans-4-Aminociclohexil)-7-bromo-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida

Una reacción similar a la de la etapa 1-5 fue realizada mediante el uso del N-[trans-4-[(2R)-7-boromo-5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metilcarbamoil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-2-il]ciclohexil]carbamato de terc-Butilo (0,801, g, 1,32 mmol) sintetizado en la etapa 2-4, metanol (1,5 ml), y un una solución 4 M de ácido clorhídrico-1,4-dioxano (1,67 ml, 6,62 mmol) para obtener un compuesto del título (0,668 g, 1,32 mmol, 100% de rendimiento).

1H-RMN (400MHz, DMSO-d6) 6: 0,93-1,05 (2H, m), 1,08-1,23 (2H, m), 1,59 (3H, s), 1,73-1,85 (5H, m), 2,10 (3H, s), 2,11 (3H, s), 2,16 (3H, s), 2,39-2,49 (1 H, m), 4,21 (2H, d, J = 4,9 Hz), 5,85 (1 H, s), 6,94 (1 H, s), 8,14 (1 H, t, J = 4,9 Hz).

MS (ESI) m/z: 504, 506 (M+H)+.

(Etapa 2-6)

(2R)-7-Bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida

Una reacción similar a la de la etapa 1-6 fue realizada mediante el uso del (2R)-2-(trans-4-aminociclohexil)-7-bromo-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida (21,1 g, 41,7 mmol) sintetizada en la etapa 2-5, metanol (250 ml), una solución acuosa de formaldehído 37% (7,12 g, 87,8 mmol), y triacetoxiborohidruro de sodio (38,8 g, 146 mmol) para obtener un compuesto del título (15,1 g, 28,4 mmol, 68% de rendimiento).

1H-RMN (400MHz, DMSO-da) 5: 1,08-1,20 (4H, m), 1,59 (3H, s), 1,75-1,90 (5H, m), 2,02-2,12 (1 H, m), 2,09 (3H, s), 2,11 (3H, s), 2,13 (6H, s), 2,16 (3H, s), 4,21 (2H, d, J = 4,9 Hz), 5,85 (1 H, s), 6,93 (1 H, s), 8,12 (1 H, t, J = 4,9 Hz), 11,47 (1H, s).

MS (APCI) m/z: 532, 534 (M+H)+.

Rotación específica [a]D20 = -7,2 (C = 1,0, cloroformo)

Ejemplo 3

7-Bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)cidohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida

(Etapa 3-1)

Ácido 7-Bromo-2-[trans-4-(terc-butoxicarbonilamino)ciclohexil]-2,4-dimetil-1,3-benzodixol-5-carboxílico

Una reacción similar a la de la etapa 1-3 fue realizada mediante el uso del 7-bromo-2-[trans-4-(tercbutoxicarbonilamino)ciclohexil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxilato de metilo (23,5 g, 48,5 mmol) sintetizado en la etapa 2-1, tetrahidrofurano (120 ml), metanol (60 ml), y una solución acuosa de hidróxido de sodio 1 M (72,8 ml, 72,8 mmol) para obtener un compuesto del título (22,8 g, 48,5 mmol, 100% de rendimiento).

1H-RMN (CDCla) 5: 1,04-1,16 (2H, m), 1,25-1,38 (2H, m), 1,44 (9H, s), 1,64 (3H, s), 1,80-1,90 (1H, m), 1,92-2,00 (2H, m), 2,06-2,16 (2H, m), 2,41 (3H, s), 3,35-3,48 (1H, m), 4,40 (1H, br s), 7,80 (1 H, s).

MS (ESI) m/z: 468, 470 (M-H)-.

(Etapa 3-2)

N-[trans-4-[(7-bromo-5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1H-piridin-3-il)metilcarbamoil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-2-il]ciclohexil]carbamato de terc-butilo

Una reacción similar a la de la etapa 1-4 fue realizada mediante el uso del ácido 7-bromo-2-[trans-4-(terc-butoxicarbonilamino)ciclohexil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxílico(22,8 g, 48,5 mmol) sintetizado en la etapa 3-2, dimetilformamida (300 ml), clorhidrato de 3-(aminometil)-4,6-dimetil-1,2-dihidropiridin-2-ona (10,1 g, 53,4 mmol), clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (11,2 g, 58,2 mmol), 1-hidroxi-7-azabenzotriazol (7,92 g, 58,2 mmol), y N,N-diisopropiletilamina (20,3 ml, 146 mmol) para obtener un compuesto del título (26,8 g, 44,3 mmol, 91 % de rendimiento).1

1H-RMN (400MHz, CDCla) 5: 1,02-1,15(2H, m), 1,23-1,40 (2H, m), 1,43 (9H, s), 1,59 (3H, s), 1,75-1,84 (1 H, m), 1,89-1,97 (2H, m), 2,02-2,10 (2H, m), 2,21 (3H, s), 2,26 (3H, s), 2,37 (3H, s), 3,34-3,45 (1 H, m), 4,39 (1 H,d, J = 8,4 Hz), 4,49 (2H, d, J = 5,5 Hz), 5,96 (1 H, s), 7,00 (1 H, s), 7,21 (1 H, t, J = 5,5 Hz).

MS (ESI) m/z: 604, 606 (M+H)+.

Etapa (3-3)

(2R)-2-(trans-4-Aminociclohexil)-7-bromo-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3 benzodioxol-5-carboxamida

Una reacción similar a la de la etapa 1-5 fue realizada mediante el uso del N-[trans-4-[7-bromo-5-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil-carbamoil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-2-il]ciclohexil]carbamato de terc-butilo (6,04 g, 9,99 mmol) sintetizado en la etapa 3-2, metanol (10 ml), y una solución 4 M de ácido clorhídrico-1,4-dioxano (12,5 ml, 50,0 mmol) para obtener un compuesto del título (4,20 g, 8,30 mmol, 83% de rendimiento).

1H-RMN (400MHz, DMSO-d6) ó: 0,93-1,05 (2H, m), 1,08-1,23 (2H, m), 1,59 (3H, s), 1,73-1,85 (5H, m), 2,10 (3H, s), 2.11 (3H, s), 2,16 (3H, s), 2,39-2,49 (1 H, m), 4,21 (2H, d, J = 4,9 Hz), 5,85 (1 H, s), 6,94 (1 H, s), 8,14 (1 H, t, J = 4,9 Hz).

MS (ESI) m/z: 504, 506 (M+H)+.

(Etapa 3-4)

7-Bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida

Una reacción similar a la de la etapa 1-6 fue realizada mediante el uso de la 2-(trans-4-aminociclohexil)-7-bromo-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida (21,0 g, 41,6 mmol) sintetizado en la etapa 3-3, diclorometano (500 ml), una solución acuosa de formaldehído 37% (8,45 g, 104 mmol), y triacetoxiborohidruro de sodio (55,2 g, 208 mmol) para obtener un compuesto del título (20,0 g, 37,6 mmol, 90% de rendimiento).

1H-RMN (400MHz, DMSO-d6) ó: 1,08-1,23 (4H, m), 1,59 (3H, s), 1,75-1,90 (5H, m), 2,02-2,09 (1 H, m), 2,10 (3H, s), 2.11 (3H, s), 2,13 (6H, s), 2,16 (3H, s), 4,21 (2H, d, J = 4,9 Hz), 5,85 (1 H, s), 6,94 (1 H, s), 8,14 (1 H, t, J = 4,9 Hz), 11,48 (1 H, s).

MS (APCI) m/z: 532, 534 (M+H)+.

Ejemplo 4

p-toluenosulfonato de (2R)-7-Cloro-2-[trans-4-(di metilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida

A la (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida (0,202 g, 0,414 mmol) sintetizada en el Ejemplo 1, fueron añadidos acetona (7,97 ml) y una solución acuosa de ácido p-toluensulfónico 4,00 mol/L (0,103 ml, 0,414 mmol) a temperatura ambiente. Posteriormente, la solución resultante fue agitado a 40 °C durante aproximadamente 20 horas, seguido por agitación a temperatura ambiente durante aproximadamente 0,5 horas, y después fue filtrado el precipitado. Posteriormente, el sólido fue secado durante la noche a temperatura ambiente para obtener un compuesto del título (0,256 g, 99% de rendimiento).

1H-RMN (DMSO-d6) ó: 1,15-1,32 (2H, m), 1,36-1,50 (2H, m), 1,62 (3H, s), 1,88-2,06 (5H, m), 2,11 (3H, s), 2,12 (3H, s), 2,17 (3H, s), 2,29 (3H, s), 2,70 (3H, s), 2,71 (3H, s), 3,10-3,22 (1 H, m), 4,22 (2H, d, J = 5,0 Hz), 5,86 (1 H, s), 6,87 (1 H, s), 7,11 (2H, d, J = 8,2 Hz), 7,48 (2H, d, J = 8,2 Hz), 8,14 (1 H, t, J = 5,0 Hz), 9,31 (1 H, br s), 11,48 (1 H, s).

Análisis elemental calculado para C26H34ClN3O4C7HsO3S: C, 60,03; H, 6,41; N, 6,36; Cl, 5,37; S, 4,86. Experimental: C, 58,81; H, 6,48; N, 6,21; Cl, 5,32; S, 4,85.

Ejemplo de prueba 1

Efecto de inhibición de crecimiento contra TL-Om1

El Dr. Kazuo Sugamura, Chief Executive, Local Incorporated Administrative Agency Miyagi Prefectura1Hospital Organization, proporcionó una línea celular TL-Om1 derivada de una célula tumoral de un paciente con ATL. La línea celular TL-Om1 fue suspendida en un medio (medio RPMI 1640 (Invitrogen) suplementado con suero bovino fetal 10% (FBS, Invitrogen)), y sembrada en una placa de 12 pocillos a una densidad de 1 x 105 células/1 ml/pocillo. Inmediatamente después de la siembra, fue añadida una serie de diluciones del compuesto del Ejemplo 1 o del Ejemplo 3 preparado usando DMSO, y el producto resultante fue cultivado en condiciones de 37 °C y CO25%. Las células fueron recogidas cada dos o tres días y cultivadas por pasajes mediante la transferencia de 300 pL del medio de cultivo a una placa de 12 pocillos conteniendo 1 ml de medio fresco. Además, fue añadida nuevamente la serie de diluciones del compuesto del Ejemplo 1 o del Ejemplo 3 para realizar el cultivo de forma continua. En los días 3, 5, 7, 10, 12 y 14 después de comenzar el cultivo, las células fueron recogidas del medio de cultivo para obtener una densidad celular y, por lo tanto, fue examinada la influencia del compuesto del Ejemplo 1 o Ejemplo 3 en el crecimiento celular. El número de células en cada uno de estos días fue obtenido por WST-8 (Dojindo Laboratories). Las células cultivadas fueron sembradas en una placa de 96 pocillos mediante 100 pL, fue añadido WST-8 a cada pocilio hasta una concentración final del 10% y la placa resultante fue incubada a 37 °C durante 2 horas. La absorbancia fue medida a 450 nm de cada muestra usando un lector de placas (iMark Microplate Reader, Biorad). Fue obtenida una curva de calibración entre el número de células y la absorbancia, y fue calculado el número de células sobre la base de la absorbancia obtenida en una prueba real. Fue calculado el número de células en cada pasaje y fue calculada la tasa de crecimiento celular de cada grupo tratado con compuesto asumiendo que el crecimiento celular de un grupo tratado con DMSO fue del 100%. Los resultados son ilustrados en las Figuras 1 y 2. Ejemplo de prueba 2

Efecto de inhibición de crecimiento en muestras derivadas de pacientes con ATL

Como sangre periférica derivada de pacientes con ATL, fueron usadas las muestras diagnosticadas como ATL de acuerdo con los criterios de la clasificación de la OMS y la clasificación de Shimoyama (Yamaguchi K., Watanabe T. (2002)) en instalaciones registradas en el Joint Study on Predisposing Factors of ATL Development (JSPFAD). A partir de la sangre entera de pacientes con ATL de 26 casos (incluidos 19 casos para el compuesto del Ejemplo 1; y 7 casos para el compuesto del Ejemplo 3), fueron obtenidas células monoculares de sangre periférica (PBMC) conteniendo células tumorales por centrifugación usando Ficoll (GE Healthcare). Las PBMC fueron suspendidas en un medio (medio PRMI 1640 suplementado con 10% plasma del paciente) y sembradas en una placa de 48 pocillos a una densidad de 3 x 105 células/300 pL/pocillo (ATL Núm. 1 a 5) o 2 x 105 células/300 pL/pocillo (ATL Núm. 6 a 26). Además, para retener el cultivo a largo plazo de células ATL que expresan IL-2R (CD25), fue añadido IL-2 (R & C Systems, Inc.) hasta una concentración final de 10 ng/ml. Después de sembrar las células, fue añadido a las mismas una serie de diluciones de cada compuesto preparado usando DMSO, y el producto resultante fue cultivado en condiciones de 37 °C y CO25% durante 7 días. Las células así cultivadas fueron sembradas en una placa de 96 pocillos por 100 pL, fue añadido WST-8 a cada pocillo hasta una concentración final del 10%, la placa resultante fue incubada a 37 ° C durante 4 horas y la absorbancia fue medida a 450 nm como un índice de la densidad celular en la solución del medio. Los resultados son ilustrados en la Figura 3. Como resultado, ha sido revelado que el compuesto puede ser usado para tratar ATL.

Ejemplo de prueba 3

Efecto de reducción de PVL en muestras derivadas de portadores

A partir de la sangre entera de 9 casos diagnosticados como portadores de HTLV-1 mediante una prueba de anticuerpos en instalaciones registradas en JSPFAD, fueron obtenidas PBMC conteniendo células infectadas con HTLV-1 mediante centrifugación usando Ficoll. Las PBMC fueron suspendidas en un medio (medio RPMI 1640 suplementado con FBS 10%) y sembradas en una placa de 48 pocillos a una densidad de 5 x 105 células/250 pL/ pocillo. A continuación, fue añadido DMSO o el compuesto del Ejemplo 1 o del Ejemplo 3 en una concentración final de 100 nM, y el producto resultante fue cultivado en condiciones de 37 °C y CO25%durante 10 a 12 días. Fueron recogidas las células cultivadas y fue extraído el ADN genómico de las mismas usando el kit de QIAmp ADN Blood Mini (QIAGEN). Como relación de células infectadas en una población celular así cultivada, fue medido el número de copias de HTLV-1 usando un sistema de PCR en tiempo real (7500 Real Time PCR System, Applied Biosystems, Inc.). Como control interno, fue medido simultáneamente el número de genes de RNasa P para calcular la relación de células infectadas (PVL). Los cebadores y una sonda usados en PCR en tiempo real tienen las siguientes secuencias:

[Fórmula 9]

Cebador directo pX2-S

5'-CGGATACCCAGTCTACGTGTT-3'

Cebador inverso pX2-AS

5'-CAGTAGGGCGTGACGATGTA-3'

Sonda pX2 marcada con FAM

5'-CTGTGTACAAGGCGACTGGTGCC-3'

Un cebador y una sonda para los genes de RNasa P fueron adquiridos de Applied Biosystems, Inc.

Asumiendo que la PVL del grupo tratado con DMSO fue de 100%, fue calculado el cambio relativo de PVL e ilustrado en la Figura 4. En los grupos tratados con el compuesto de la presente, la PVL fue reducida notablemente en comparación con el grupo tratado con DMSO. Como resultado, ha sido revelado que el compuesto reduce la tasa de incidencia de ATL en un portador de HTLV-1.

Ha sido revelado, como resultado del Ejemplo de prueba 1, que un compuesto inhibidor de EZH1/2 redujo significativamente y en forma dependiente de la dosis el crecimiento celular de las células TL-Om1. Además, el compuesto redujo significativamente la supervivencia celular de las células tumorales derivadas de pacientes con ATL. Además, fue confirmado que la relación de células infectadas con HTLV-1 presentes en la sangre periférica del portador fue reducida notablemente. Esto sugiere que el compuesto induce la muerte celular de las células infectadas con HTLV-1.

Claims (8)

REIVINDICACIONES

1. 7-Cloro-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil] -N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropirid-in-3-il) metil] -2,4-dimetil-1.3- benzodioxol-5-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o 7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil] -N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il) metil] -2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de leucemia/linfoma de células T del adulto en un paciente que sufre de leucemia/linfoma de células T del adulto.

2. (2R)-7-Cloro-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil]-N- [(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropirid-in-3-il) metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de leucemia/linfoma de células T del adulto en un paciente que sufre de leucemia/linfoma de células T del adulto.

3. p-toluenosulfonato de (2R)-7-Cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, para su uso en el tratamiento de leucemia/linfoma de células T del adulto en un paciente que sufre de leucemia/linfoma de células T del adulto.

4. (2R)-7-Bromo-2-[trans-4- (dimetilamino)ciclohexil ]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropirid-in-3-il )metil] -2,4­ dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de leucemia/linfoma de células T del adulto en un paciente que sufre de leucemia/linfoma de células T del adulto.

5. 7-Cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N -[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropirid-in-3-il) metil] -2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o 7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil]-N- [(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropirid-in-3-il)metil ]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en la prevención de la aparición de leucemia/linfoma de células T del adulto, en un individuo, de un portador del virus tipo I de leucemia de células T humanas del adulto (HTLV-1).

6. (2R)-7-Cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropirid-in-3-il)metil] -2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en la prevención de la aparición de leucemia/linfoma de células T del adulto, en un individuo, de un portador del virus tipo I de leucemia de células T humanas del adulto (HTLV-1).

7. p-toluenosulfonato(2R)-7-Cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil] -N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropirid-in-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, para su uso en la prevención de la aparición de leucemia/linfoma de células T del adulto, en un individuo, de un portador del virus tipo I de leucemia de células T humanas del adulto (HTLV-1).

8. (2R)-7-Bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil] -N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1.3- benzodioxol-5-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en la prevención de la aparición de leucemia/linfoma de células T del adulto, en un individuo, de un portador del virus tipo I de leucemia de células T humanas del adulto (HTLV-1).