ES2747997T3 - Formas de IL-15R alfa, células que expresan formas de IL-15R alfa, y usos terapéuticos de IL-15R alfa y complejos IL-15/IL-15R alfa - Google Patents
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Abstract
Un complejo IL-15/Receptor alfa de IL-15 (IL-15Ra) para usar en el tratamiento del cancer en un sujeto que lo necesita, que comprende administrar el complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, usando un regimen de administracion ciclica, en donde el regimen de administracion ciclica comprende: (a) administrar al sujeto, por via subcutanea, una dosis de 0,1 a 10 μg/kg del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 dias durante un primer periodo de 1 semana a 3 semanas; y (b) despues de un segundo periodo de 1 semana a 2 meses en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por via subcutanea, una dosis de 0,1 a 10 μg/kg del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 dias durante un tercer periodo de 1 semana a 3 semanas.
Description
DESCRIPCIÓN
Formas de IL-15R alfa, células que expresan formas de IL-15R alfa, y usos terapéuticos de IL-15R alfa y complejos IL-15/IL-15R alfa
Intereses gubernamentales
Esta invención fue creada en el desempeño de un Acuerdo de Investigación y Desarrollo Cooperativo con los Institutos Nacionales de Salud, un organismo del Departamento de Salud y Servicios Humanos. El gobierno de los Estados Unidos tiene ciertos derechos sobre esta invención.
1. Campo
En un aspecto, en el presente documento se describen regímenes de administración cíclica para la administración a pacientes de complejos que comprenden interleucina-15 ("IL-15'') unida de forma covalente o no covalente al receptor alfa de IL-15 ("IL-15Ra"), con el fin de mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15. En un aspecto, estos regímenes de administración cíclica alcanzan niveles plasmáticos de IL-15 superiores a los niveles basales mientras que minimizan la toxicidad asociada a la administración de IL-15. En un aspecto específico, los regímenes de administración cíclica son útILes en la prevención, el tratamiento y/o el manejo de trastornos en los que es beneficioso mejorar la función mediada por IL-15, como cáncer, enfermedades infecciosas, inmunodeficiencias y linfopenia. En el presente documento también se describen formas solubles purificadas de IL-15Ra, células que expresan de forma recombinante formas solubles de IL-15Ra y composiciones que comprenden complejos de IL-15 que se unen de forma covalente o no covalente a formas solubles de IL-15Ra. En el presente documento se describen además células hospedadoras que expresan de manera recombinante derivados de IL-15-Ra que contienen una mutación o deleción en el sitio de escisión del dominio extracelular, que incluyen derivados de IL-15Ra que comprenden el dominio extracelular de IL-15Ra y un dominio transmembrana de una molécula heteróloga. Además, en el presente documento se describen métodos para propagar, activar y/o diferenciar las células que responden a IL-15, que comprenden el cocultivo de una o más células que responden a IL-15 con una o más células hospedadoras que expresan de forma recombinante a IL-15Ra y el aislamiento de las una o más células que responden a IL-15 de las una o más células hospedadoras. Las células que responden a IL-15 que son inmunocitos se pueden administrar para prevenir, tratar y/o manejar diversos trastornos, como cáncer, una enfermedad infecciosa, una inmunodeficiencia y linfopenia. Además, en el presente documento se describen métodos para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, así como métodos para prevenir, tratar y/o manejar trastornos en los que es beneficioso mejorar la función mediada por IL-15, como el cáncer, en un sujeto, donde dichos métodos comprenden administrar al sujeto una célula hospedadora que expresa de manera recombinante una IL-15Ra descrita en este documento.
2. Antecedentes
La citocina, interleucina-15 (IL-15), es un miembro de la famILia de linfocinas de cuatro hélices alfa producidas por muchas células en el organismo. IL-15 desempeña un papel fundamental en la modulación de la actividad del sistema inmunitario innato y adaptativo, por ejemplo, el mantenimiento de la respuesta de los linfocitos T memoria frente a patógenos invasores, la inhibición de la apoptosis, la activación de las células dendríticas y la inducción de la proliferación de los linfocitos citolíticos naturales (NK) y la actividad citotóxica.
El receptor de IL-15 consta de tres polipéptidos, el receptor alfa específico para IL-15 ("IL-15Ra"), el receptor beta de IL-2 /IL-15 (o CD122) ("p'') y la cadena gamma común (o CD132) ("y") que es compartida por múltiples receptores de citocinas. Se cree que IL-15Ra es expresado por una amplia variedad de tipos de células, pero no necesariamente conjuntamente con p y y. Se ha demostrado que la señalización de IL-15 ocurre a través del complejo heterodimérico de IL-15Ra, p y y ; a través del complejo heterodimérico de p y y, o a través de una subunidad, IL-15RX, que se encuentra en los mastocitos.
IL-15 es una proteína soluble, pero IL-15 endógena no es fácILmente detectable en el suero ni en los líquidos corporales; en cambio, se presenta predominantemente como una forma unida a la membrana que es expresada o adquirida por varios tipos de células accesorias. Por ejemplo, aunque el ARNm de IL-15 se detecta en células tanto del linaje hematopoyético como no hematopoyético, los linfocitos T no producen IL-15. En su lugar, IL-15 se une a IL-15Ra, formando complejos de superficie celular en los linfocitos T. IL-15 se une específicamente a IL-15Ra con alta afinidad a través del "dominio sushi" en el exón 2 del dominio extracelular del receptor. Después del reciclado transendosómico y la migración de regreso a la superficie celular, estos complejos de IL-15 adquieren la propiedad de activar los linfocitos espectadores que expresan el complejo del receptor de baja afinidad IL-15R Py, que induce la señalización mediada por IL-15 a través de la vía Jak/Stat. Se ha observado una forma soluble natural de IL-15Ra ("sIL-15Ra"), que se escinde en un sitio de escisión en el dominio extracelular inmediatamente distal al dominio transmembrana del receptor. La enzima convertidora del factor de necrosis tumoral alfa (TACE/ADAM17) ha sido implicada como una proteasa involucrada en este proceso.
Una interpretación alternativa de los datos existentes es que IL-15Ra ha desarrollado una afinidad muy alta por IL-15 y siempre se coexpresa con IL-15 en la misma célula. Las dos moléculas forman complejos heterodiméricos en el retículo endoplasmático y son transportadas a la membrana plasmática. Véase, por ejemplo, Bergamaschi et al., 2012, Blood 120: e1-e8. Este complejo heterodimérico se puede unir al receptor IL-2/IL-15 Py y activar las células a través de la vía Jak/Stat. Por lo tanto, basado en esta interpretación de los datos, IL-15Ra y la forma soluble sIL-15Ra son parte de la citocina y no parte del receptor. Id.
Basándose en su función multifacética en el sistema inmunitario, se han explorado varias terapias diseñadas para modular la función mediada por IL-15. Por ejemplo, la administración de IL-15 exógena puede mejorar la función inmunitaria de los pacientes infectados con el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH). De acuerdo con su actividad de mejora inmunitaria, se observa una mayor expresión de IL-15 endógena en pacientes con enfermedades autoinmunitarias, por ejemplo, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, colitis ulcerosa y psoriasis. Debido a que algunos estudios informaron que la forma soluble de IL-15Ra (sIL-15Ra) es un antagonista de la señalización mediada por IL-15, se ha explorado el tratamiento de enfermedades inflamatorias autoinmunitarias con sIL-15Ra. No obstante, los informes recientes sugieren que IL-15, cuando forma un complejo con sIL-15Ra, o el dominio sushi, mantiene su función de mejora inmunitaria. A pesar del considerable progreso realizado en la comprensión de la función de IL-15, no está claro cómo varias formas de IL-15Ra, solas o cuando forman complejos con IL-15, se pueden usar para modular la función de IL-15 como parte de un régimen terapéutico.
3. Sumario
En un aspecto, en este documento se proporcionan métodos para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, que comprenden administrar a los sujetos agentes que induzcan la transducción de señal de IL-15 y mejoren la función inmunitaria mediada por IL-15. Más específicamente, en este documento se proporcionan métodos para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, que comprenden administrar a los sujetos complejos que se unen a las subunidades Py del receptor de IL-15, inducen la transducción de señal de IL-15 y mejoran la función inmunitaria mediada por IL-15, en donde los complejos comprenden IL-15 unida covalente o no covalentemente al receptor alfa de la interleucina-15 ("IL-15Ra") ("complejos IL-15/IL-15Ra" o "Agentes Terapéuticos"). Dado que la mejora de la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficiosa para la prevención, el tratamiento y/o el manejo de ciertos trastornos, en este documento se proporcionan métodos para la prevención, el tratamiento y/o el manejo de dichos trastornos que comprenden administrar a un sujeto que lo necesita complejos IL-15/IL-15Ra.
Los métodos descritos en este documento se basan, en parte, en el sorprendente descubrimiento de que la administración subcutánea de complejos IL-15/IL-15Ra evita los altos niveles plasmáticos máximos y la toxicidad asociada a la administración intravenosa de los complejos. La administración subcutánea de complejos IL-15/IL-15Ra mantiene los niveles plasmáticos de IL-15 al tiempo que minimiza los efectos secundarios, como un descenso en la tensión arterial y un aumento en la temperatura corporal. La administración subcutánea de complejos IL-15/IL-15Ra puede lograr un efecto sistémico (no solo un efecto local) con mínimos efectos secundarios. En una realización específica, la administración subcutánea de complejos IL-15/IL-15Ra no altera la tensión arterial ni la temperatura corporal. Sorprendentemente, dosis altas, como de 50 pg/kg, administradas por vía subcutánea a un sujeto dieron como resultado una toxicidad mínima. Véanse, por ejemplo, los ejemplos de la Sección 6 infra.
En un aspecto, los métodos descritos en este documento mantienen los niveles plasmáticos de IL-15 por encima de los niveles basales durante aproximadamente 18 a 24 horas o aproximadamente 24 a 36 horas, o aproximadamente 36 a 38 horas después de la administración de complejos IL-15/IL-15Ra. Los niveles plasmáticos basales de IL-15 son aproximadamente 1 pg/ml en humanos, aproximadamente 8-10 pg/ml en monos (como los macacos) y aproximadamente 12 pg/m en roedores (como los ratones). Por lo tanto, en algunas realizaciones, los métodos descritos en este documento mantienen los niveles plasmáticos por encima de aproximadamente 1 pg/ml en humanos, por encima de aproximadamente 8-10 pg/ml en monos (como macacos) y por encima de 12 pg/ml en roedores (como ratones). Sin ánimo de ceñirnos a ninguna teoría, la estabILidad de los niveles plasmáticos de IL-15 maximiza la multiplicación y la activación de los linfocitos a la vez que minimiza los efectos secundarios asociados a la administración de IL-15. En una realización, los métodos descritos en el presente documento alcanzan niveles plasmáticos estables de IL-15 por encima de los niveles plasmáticos basales mediante administración subcutánea a un sujeto de dosis de aproximadamente 0,1 pg /kg a aproximadamente 10 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra a un sujeto. En otra realización, los métodos descritos en este documento alcanzan altos niveles plasmáticos de IL-15 mediante la administración subcutánea a un sujeto de dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 20 pg/kg, aproximadamente 10 pg/kg a aproximadamente 20 pg/kg, aproximadamente 20 pg/kg a aproximadamente 40 pg/kg o aproximadamente 25 pg/kg a 50 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra a un sujeto. En otras palabras, en este documento se describen métodos para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, así como métodos para prevenir, tratar y/o manejar trastornos en los que la mejora de la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficiosa (por ejemplo, cáncer, enfermedades infecciosas, inmunodeficiencias, linfopenia y heridas), que comprenden administrar por vía subcutánea a un sujeto que lo necesita una cantidad eficaz de complejos IL-15/IL-15Ra.
En un aspecto, en este documento se proporciona un método para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, que comprende administrar a un sujeto, por vía subcutánea, un complejo IL-15/IL-15Ra en un régimen cíclico, en el que cada
ciclo del régimen cíclico comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra con una cierta frecuencia durante un primer período de tiempo; y (b) no administrar complejo IL-15/IL-15Ra durante un segundo período de tiempo. En algunas realizaciones, el régimen cíclico se repite 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más veces. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra con una frecuencia de cada día, día por medio, cada 3, 4, 5, 6 o 7 días. En algunas realizaciones el complejo IL-15/IL-15Ra se administra 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7 días por semana. En algunas realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son iguales. En otras realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son diferentes. En algunas realizaciones, el primer período para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana a 4 semanas de duración, de 2 a 4 semanas, de 2 a 3 semanas o de 1 a 2 semanas. En otras realizaciones, el primer período para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas o 4 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana a 2 meses, 1 a 8 semanas, 2 a 8 semanas, 1 a 6 semanas, 2 a 6 semanas, 1 a 5 semanas, 2 a 5 semanas, 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas, 1 a 2 semanas, 3 semanas, 2 semanas o 1 semana de duración. En una realización, la dosis del primer ciclo y de cada ciclo subsiguiente es de 0,1 pg/kg a 1 pg/kg, 1 pg/kg a 5 pg/kg o 5 pg/kg a 10 pg/kg. En otra realización, la primera dosis del primer ciclo y de cada ciclo subsiguiente es de 0,1 pg/kg a 0,5 pg/kg, 1 pg/kg a 2 pg/kg, 1 pg/kg a 3 pg/kg, 2 pg/kg a 5 pg/kg o 2 pg/kg a 4 pg/kg. En otra realización, la dosis del primer ciclo y de cada ciclo subsiguiente es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 1 pg/kg, 1,25 pg/kg, 1,5 pg/kg, 1,75 pg/kg, 2 pg/kg, 2,25 pg/kg, 2.5 pg/kg, 2,75 pg/kg, 3 pg/kg, 3,25 pg/kg, 3,5 pg/kg, 4 pg/kg, 4,25 pg/kg, 4,5 pg/kg, 4,75 pg/kg, o 5 pg/kg. En algunas realizaciones, la dosis del primer ciclo difiere de la dosis utILizada en uno o más de los ciclos subsiguientes del régimen cíclico.
En una realización, en este documento se proporciona un método para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, que comprende administrar a un sujeto, por vía subcutánea, un complejo IL-15/IL-15Ra en un régimen cíclico, en el que cada ciclo del régimen cíclico comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra una determinada cantidad de veces por semana durante un primer período de tiempo; y (b) no administrar complejo IL-15/IL-15Ra durante un segundo período de tiempo. En algunas realizaciones, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra administrada durante el primer ciclo del régimen cíclico se incrementa secuencialmente. Por ejemplo, si se administra un complejo IL-15/IL-15Ra a un sujeto 3 veces por semana durante dos semanas, entonces la dosis administrada al sujeto la segunda vez durante el primer ciclo del régimen cíclico se aumenta con respecto a la dosis administrada la primera vez, la dosis administrada al sujeto la tercera vez durante el primer ciclo del régimen cíclico se aumenta con respecto a la dosis administrada la segunda vez, la dosis administrada al sujeto la cuarta vez se aumenta con respecto a la dosis administrada la tercera vez, la dosis administrada al sujeto la quinta vez se aumenta con respecto a la dosis administrada la cuarta vez y la dosis administrada al sujeto la sexta vez se aumenta con respecto a la dosis administrada la quinta vez. En algunas realizaciones, se controlan los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma. En algunas realizaciones, la dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra durante el primer ciclo del régimen cíclico se incrementa secuencialmente si el sujeto no sufre efectos secundarios. En algunas realizaciones, la dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra durante el primer ciclo del régimen cíclico se incrementa secuencialmente si el sujeto no experimenta ningún acontecimiento adverso, como linfopenia grado 3 o 4, granulocitopenia grado 3, leucocitosis grado 3 (GB > 100.000/mm3) o disfunción orgánica. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7 días por semana. En algunas realizaciones, el régimen cíclico se repite 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más veces. En algunas realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son iguales. En otras realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son diferentes. En algunas realizaciones, el primer período para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana a 4 semanas de duración, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas. En otras realizaciones, el primer período para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas o 4 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 a 8 semanas, 2 a 8 semanas, 1 a 6 semanas, 2 a 6 semanas, 1 a 5 semanas, 2 a 5 semanas, 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas, 1 a 2 semanas, 3 semanas, 2 semanas o 1 semana de duración. En algunas realizaciones, la dosis durante el primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,75 pg/kg, 1 pg/kg, 1,5 pg/kg, 2 pg/kg, 2,5 pg/kg, 3 pg/kg, 3,5 pg/kg, 4 pg/kg, 4,5 pg/kg o 5 pg/kg. En otras realizaciones, la dosis durante el primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg a 1 pg/kg, 1 pg/kg a 2 pg/kg, 2 pg/kg a 4 pg/kg o 3 pg/kg a 5 pg/kg. En algunas realizaciones, la dosis utILizada durante el ciclo subsiguiente al primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,75 pg/kg, 1 pg/kg, 1,5 pg/kg, 2 pg/kg, 2,5 pg/kg, 3 pg/kg, 3,5 pg/kg, 4 pg/kg, 4.5 pg/kg, 5 pg/kg, 10 pg/kg, 15 pg/kg o 20 pg/kg más alta que la dosis utILizada para el primer ciclo del régimen cíclico. En otras realizaciones, la dosis utILizada durante el ciclo subsiguiente al primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg a 1 pg/kg, 1 a 5 pg/kg, 5 pg/kg a 10 pg/kg o 10 a 20 pg/kg más alta que la dosis utILizada para el primer ciclo del régimen cíclico.
En un aspecto particular, en este documento se proporciona un método para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, que comprende administrar a un sujeto, por vía subcutánea, un complejo IL-15/IL-15Ra en un régimen cíclico, en el que el régimen cíclico comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una primera dosis del complejo IL-15/IL-15Ra con una cierta frecuencia durante un primer período de tiempo; (b) no administrar complejo IL-15/IL-15Ra durante un segundo período de tiempo; y (c) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una segunda dosis del complejo IL-15/IL-15Ra con una cierta frecuencia durante un tercer período de tiempo. En algunas realizaciones, el régimen cíclico se repite 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más veces. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra con una frecuencia de cada día, día por medio, cada 3, 4, 5, 6 o 7 días. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se
administra 3 días por semana. En algunas realizaciones, el primer, el segundo y el tercer períodos de tiempo son iguales. En otras realizaciones, el primer, el segundo y el tercer períodos de tiempo son diferentes. En algunas realizaciones, el primer y el tercer períodos para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra son de 1 semana a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas de duración. En otras realizaciones, el primer y el tercer períodos para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas o 4 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana a 2 meses, de 1 a 8 semanas, de 2 a 8 semanas, de 1 a 6 semanas, de 2 a 6 semanas, de 1 a 5 semanas, de 2 a 5 semanas, de 1 a 4 semanas, de 2 a 4 semanas, de 2 a 3 semanas, de 1 a 2 semanas, de 2 semanas o 1 semana de duración. En algunas realizaciones, la primera y la segunda dosis del complejo IL-15/IL-15Ra son iguales. En otras realizaciones, la primera y la segunda dosis del complejo IL-15/IL-15Ra son diferentes. En una realización, la primera dosis es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 0,75 pg/kg, 1 pg/kg, 1,5 pg/kg, 2 pg/kg, 2,5 pg/kg, 3 pg/kg, 3,5 pg/kg, 4 pg/kg o 5 pg/kg. En otras realizaciones, la primera dosis es de 0,1 pg/kg a 1 pg/kg, 1 pg/kg a 2 pg/kg, 2 pg/kg a 4 pg/kg o 3 pg/kg a 5 pg/kg. En algunas realizaciones, la segunda dosis es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 0,75 pg/kg, 1 pg/kg, 1,25 pg/kg, 1,5 pg/kg, 1,75 pg/kg, 2 pg/kg, 2,5 pg/kg, 3 pg/kg, 3,5 pg/kg, 4 pg/kg, 4,5 pg/kg, 5 pg/kg, 5,5 pg/kg, 6 pg/kg, 6,5 pg/kg, 7 pg/kg, 7,5 pg/kg, 8 pg/kg, 8,5 pg/kg, 9 pg/kg, 9,5 pg/kg o 10 pg/kg más alta que la primera dosis. En otras realizaciones, la segunda dosis es de 0,1 pg/kg a 1 pg/kg, de 1 pg/kg a 2 pg/kg, de 2 pg/kg a 5 pg/kg, de 5 pg/kg a 10 pg/kg, de 10 pg/kg a 15 pg/kg, de 15 pg/kg a 20 pg/kg, de 20 pg/kg a 25 pg/kg más alta que la primera dosis. En algunas realizaciones, la segunda dosis del complejo IL-15/IL-15Ra es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 0,75 pg/kg, 1 pg/kg, 1,5 pg/kg, 2 pg/kg, 2,5 pg/kg o 3 pg/kg. En otras realizaciones, la segunda dosis del complejo IL-15/IL-15Ra es de 4 pg/kg, 5 pg/kg, 6 pg/kg, 7 pg/kg, 8 pg/kg, 9 pg/kg, 10 pg/kg, 15 pg/kg, 20 pg/kg o 25 pg/kg.
En un aspecto, en este documento se proporcionan métodos para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, en donde los métodos implican un régimen de administración cíclica que comprende un primer período de 1 a 3 semanas de administración subcutánea de un complejo IL-15/IL-15Ra a un sujeto, seguido de un segundo período de 1 semana a 2 meses en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, seguido de un tercer período de 1 semana a 3 semanas de administración subcutánea del complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto. En algunas realizaciones, se administra a un sujeto, por vía subcutánea, una dosis de 0,1 a 10 pg/kg, 0,1 a 8 pg/kg, 0,1 a 5 pg/kg o 0,1 a 2 pg/kg, o de alrededor de 0,1 pg/kg, alrededor de 0,25 pg/kg, alrededor de 0,5 pg/kg, alrededor de 0,75 pg/kg, alrededor de 1 pg/kg, alrededor de 1,5 pg/kg, alrededor de 2 pg/kg, alrededor de 3 pg/kg, alrededor de 4 pg/kg o alrededor de 5 pg/kg de complejo IL-15/IL-15Ra cada 1 a 7 días, cada 1 a 5 días, o cada 1 a 3 días durante el primer y el tercer períodos de tiempo del régimen de administración cíclica. El régimen de administración cíclica se puede llevar a cabo una vez, dos veces, tres veces, cuatro veces, cinco veces, seis veces, siete veces o más, o 2 a 5 veces, 5 a 10 veces, 10 a 15 veces, 15 a 20 veces, 20 a 25 veces o más. En algunas realizaciones, el régimen de administración cíclica se repite durante al menos 2 meses, al menos 3 meses, al menos 4 meses, al menos 5 meses, al menos 6 meses, al menos 7 meses, al menos 8 meses, al menos 9 meses, al menos 10 meses, al menos 11 meses al menos 1 año o más. En algunas realizaciones, el régimen de administración cíclica se repite durante alrededor de 2 meses, alrededor de 3 meses, alrededor de 4 meses, alrededor de 5 meses, alrededor de 6 meses, alrededor de 7 meses, alrededor de 8 meses, alrededor de 9 meses, alrededor de 10 meses, alrededor de 11 meses, alrededor de 1 año o más. En algunas realizaciones, el régimen de administración cíclica se repite durante 3 a 6 meses, 6 a 9 meses, 6 a 12 meses, 1 a 1,5 años, 1 a 2 años, 1,5 a 2 años, o más. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis, dosis por medio, y/o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma.
En otro aspecto, en este documento se proporcionan métodos para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 que implican un régimen de administración cíclica que comprende un primer período de dos semanas de administración subcutánea de un complejo IL-15/IL-15Ra a un sujeto, seguido de un segundo período de dos semanas en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, seguido de un tercer período de dos semanas de administración subcutánea del complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto. En algunas realizaciones, se administra al sujeto una dosis de 0,1 a 10 pg/kg de complejo IL-15/IL-15Ra por vía subcutánea cada 1 a 5 días, cada 1 a 3 días o cada 1 a 3 días durante el primer y el tercer períodos del régimen de administración cíclica. El régimen de administración cíclica se puede llevar a cabo una vez, dos veces, tres veces o más. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis, dosis por medio o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma.
En una realización, en este documento se proporciona un método para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 en un sujeto que lo necesita, que comprende administrar al sujeto un complejo IL-15/IL-15Ra empleando un régimen de administración cíclica, en el que el régimen de administración cíclica comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de 0,1 a 10 pg/kg del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1 a 7 días, cada 1 a 5 días, cada 1 a 4 días, cada 1 a 3 días durante un primer período de 1 semana a 3 semanas; y (b) después de un segundo período de 1 semana a 2 meses en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de 0,1 a 10 pg/kg del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1 a 7 días, cada 1 a 5 días, cada 1 a 4 días, cada 1 a 3 días durante un tercer período de 1 semana a 3 semanas. En otra realización, en este documento se proporciona un método para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 en un sujeto que lo necesita, que comprende administrar al sujeto
un complejo IL-15/IL-15Ra empleando un régimen de administración cíclica, en el que el régimen de administración cíclica comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de 0,1 a 10 pg/kg, 0,1 a 8 pg/kg, 0,1 a 5 pg/kg, 0,1 a 2,5 pg/kg, 0,1 a 2 pg/kg o 0,1 a 1 pg/kg del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2, 3, 4, 5, 6 o 7 días durante un primer período de 1 semana a 3 semanas; y (b) después de un segundo período de 1 semanas a 2 meses en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de 0,1 a 10 pg/kg, 0,1 a 8 pg/kg, 0,1 a 5 pg/kg, 0,1 a 2,5 pg/kg, 0,1 a 2 pg/kg o 0,1 a 1 pg/kg del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7 días durante un tercer período de 1 semana a 3 semanas. El régimen de administración cíclica se puede llevar a cabo una vez, dos veces, tres veces, cuatro veces, cinco veces, seis veces, siete veces, ocho veces, nueve veces, diez veces o más, o 2 a 5 veces, 5 a 10 veces, 10 a 15 veces, 15 a 20 veces, 20 a 25 veces o más. En algunas realizaciones, el régimen de administración cíclica se repite durante al menos 2 meses, al menos 3 meses, al menos 4 meses, al menos 5 meses, al menos 6 meses, al menos 7 meses, al menos 8 meses, al menos 9 meses, al menos 10 meses, al menos 11 meses al menos 1 año o más. En algunas realizaciones, el régimen de administración cíclica se repite durante alrededor de 2 meses, alrededor de 3 meses, alrededor de 4 meses, alrededor de 5 meses, alrededor de 6 meses, alrededor de 7 meses, alrededor de 8 meses, alrededor de 9 meses, alrededor de 10 meses, alrededor de 11 meses, alrededor de 1 año o más. En algunas realizaciones, el régimen de administración cíclica se repite durante 3 a 6 meses, 6 a 9 meses, 6 a 12 meses, 1 a 1,5 años, 1 a 2 años, 1,5 a 2 años, o más. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis en el paso (a) y/o en el paso (b) del régimen de administración cíclica, dosis por medio en el paso (a) y/o (b) del régimen de administración cíclica, y/o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período en el paso (b) del régimen de administración cíclica. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma, durante el régimen de administración cíclica y/o después del cese de la administración cíclica.
En otra realización, en este documento se proporciona un método para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, que comprende: (a) administrar a un sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 10 pg/kg (en algunas realizaciones, de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 5 pg/kg, aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 2 pg/kg o aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 1 pg/kg) de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; y (b) después de un segundo período de 12 a 14 días sin administración del complejo IL-15/IL-15Ra, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 10 pg/kg (en algunas realizaciones, de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 5 pg/kg, aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 2 pg/kg o aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 1 pg/kg) de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, los pasos de (a) a (c) se repiten dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez o más veces. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis, dosis por medio o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma.
En otra realización, en este documento se proporciona un método para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, que comprende: (a) administrar a un sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; y (b) después de un segundo período de 12 a 14 días sin administración del complejo IL-15/IL-15Ra, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, los pasos de (a) a (c) se repiten dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez o más veces. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis, dosis por medio o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma.
En otro aspecto, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso (por ejemplo, cáncer, una enfermedad infecciosa, una inmunodeficiencia o linfopenia), que comprende administrar a un sujeto, por vía subcutánea, un complejo IL-15/IL-15Ra en un régimen cíclico, en el que cada ciclo del régimen cíclico comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra con una cierta frecuencia durante un primer período de tiempo; y (b) no administrar complejo IL-15/IL-15Ra durante un segundo período de tiempo. En algunas realizaciones, el régimen cíclico se repite 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más veces. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra con una frecuencia de cada día, día por medio, cada 3, 4, 5, 6 o 7 días. En otras realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra con una frecuencia de 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7 días por semana. En algunas realizaciones, el primer y el segundo períodos de
tiempo son iguales. En otras realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son diferentes. En algunas realizaciones, el primer período para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana a 4 semanas de duración, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas. En otras realizaciones, el primer período para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas o 4 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana a 2 meses, 1 a 8 semanas, 2 a 8 semanas, 1 a 6 semanas, 2 a 6 semanas, 1 a 5 semanas, 2 a 5 semanas, 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas, 1 a 2 semanas, 3 semanas, 2 semanas 0 1 semana de duración. En una realización, la dosis del primer ciclo y de cada ciclo subsiguiente es de 0,1 pg/kg a 1 pg/kg, 1 pg/kg a 5 pg/kg o 5 pg/kg a 10 pg/kg. En otra realización, la dosis del primer ciclo y de cada ciclo subsiguiente es de 0,1 pg/kg a 0,5 pg/kg, 1 pg/kg a 2 pg/kg, 1 pg/kg a 3 pg/kg, 2 pg/kg a 5 pg/kg o 2 pg/kg a 4 pg/kg. En otra realización, la dosis del primer ciclo y de cada ciclo subsiguiente es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 1 pg/kg, 1,25 pg/kg, 1,5 pg/kg, 1,75 pg/kg, 2 pg/kg, 2,25 pg/kg, 2,5 pg/kg, 2,75 pg/kg, 3 pg/kg, 3,25 pg/kg, 3,5 pg/kg, 4 pg/kg, 4,25 pg/kg, 4,5 pg/kg, 4,75 pg/kg, o 5 pg/kg. En algunas realizaciones, la dosis del primer ciclo difiere de la dosis utILizada en uno o más de los ciclos subsiguientes del régimen cíclico.
En una realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso (por ejemplo, cáncer, una enfermedad infecciosa, una inmunodeficiencia o linfopenia), que comprende administrar a un sujeto, por vía subcutánea, un complejo IL-15/IL-15Ra en un régimen cíclico, en el que cada ciclo del régimen cíclico comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra una determinada cantidad de veces por semana durante un primer período de tiempo; y (b) no administrar complejo IL-15/IL-15Ra durante un segundo período de tiempo. En algunas realizaciones, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra administrada durante el primer ciclo del régimen cíclico se incrementa secuencialmente. Por ejemplo, si se administra un complejo IL-15/IL-15Ra a un sujeto 3 veces por semana durante dos semanas, entonces la dosis administrada al sujeto la segunda vez durante el primer ciclo del régimen cíclico se aumenta con respecto a la dosis administrada la primera vez, la dosis administrada al sujeto la tercera vez durante el primer ciclo del régimen cíclico se aumenta con respecto a la dosis administrada la segunda vez, la dosis administrada al sujeto la cuarta vez se aumenta con respecto a la dosis administrada la tercera vez, la dosis administrada al sujeto la quinta vez se aumenta con respecto a la dosis administrada la cuarta vez y la dosis administrada al sujeto la sexta vez se aumenta con respecto a la dosis administrada la quinta vez. En algunas realizaciones, se controlan los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma. En algunas realizaciones, la dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra durante el primer ciclo del régimen cíclico se incrementa secuencialmente si el sujeto no presenta ningún efecto secundario. En algunas realizaciones, la dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra durante el primer ciclo del régimen cíclico se incrementa secuencialmente si el sujeto no experimenta ningún acontecimiento adverso, como linfopenia grado 3 o 4, granulocitopenia grado 3, leucocitosis grado 3 (GB > 100.000/mm3) o disfunción orgánica. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra 1,2, 3, 4, 5, 6 o 7 días por semana. En algunas realizaciones, el régimen cíclico se repite 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más veces. En algunas realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son iguales. En otras realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son diferentes. En algunas realizaciones, el primer período para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana a 4 semanas de duración, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas. En otras realizaciones, el primer período para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas o 4 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana a 2 meses, 1 a 8 semanas, 2 a 8 semanas, 1 a 6 semanas, 2 a 6 semanas, 1 a 5 semanas, 2 a 5 semanas, 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas, 1 a 2 semanas, 3 semanas, 2 semanas o 1 semana de duración. En algunas realizaciones, la dosis durante el primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,75 pg/kg, 1 pg/kg, 1,5 pg/kg, 2 pg/kg, 2,5 pg/kg, 3 pg/kg, 3,5 pg/kg, 4 pg/kg, 4,5 pg/kg o 5 pg/kg. En otras realizaciones, la dosis durante el primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg a 1 pg/kg, 1 pg/kg a 2 pg/kg, 2 pg/kg a 4 pg/kg o 3 pg/kg a 5 pg/kg. En algunas realizaciones, la dosis utILizada durante un ciclo subsiguiente al primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,75 pg/kg, 1 pg/kg, 1,5 pg/kg, 2 pg/kg, 2,5 pg/kg, 3 pg/kg, 3,5 pg/kg, 4 pg/kg, 4,5 pg/kg, 5 pg/kg, 10 pg/kg, 15 pg/kg o 20 pg/kg más alta que la dosis utILizada para el primer ciclo del régimen cíclico. En otras realizaciones, la dosis utILizada durante el ciclo subsiguiente al primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg a 1 pg/kg, 1 a 5 pg/kg, 5 pg/kg a 10 pg/kg o 10 a 20 pg/kg más alta que la dosis utILizada para el primer ciclo del régimen cíclico.
En otro aspecto, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso (por ejemplo, cáncer, una enfermedad infecciosa, una inmunodeficiencia o linfopenia), que comprende administrar a un sujeto, por vía subcutánea, un complejo IL-15/IL-15Ra en un régimen cíclico, en donde el régimen cíclico comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una primera dosis del complejo IL-15/IL-15Ra con una cierta frecuencia durante un primer período de tiempo; (b) no administrar complejo IL-15/IL-15Ra durante un segundo período de tiempo; y (c) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una segunda dosis del complejo IL-15/IL-15Ra con una cierta frecuencia durante un tercer período de tiempo. En algunas realizaciones, el régimen cíclico se repite 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más veces. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra con una frecuencia de cada día, día por medio, cada 3, 4, 5, 6 o 7 días. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7 días por semana. En algunas realizaciones, el primer, el segundo y el tercer períodos de tiempo son iguales. En otras realizaciones, el primer, el segundo y el tercer períodos de tiempo son diferentes. En algunas realizaciones, el primer y el tercer períodos para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra son de 1 semana a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas de duración. En otras
realizaciones, el primer y el tercer períodos para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra son de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas o 4 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana a 2 meses, 1 a 8 semanas, 2 a 8 semanas, 1 a 6 semanas, 2 a 6 semanas, 1 a 5 semanas, 2 a 5 semanas, 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 1 a 3 semanas, 2 semanas o 1 semana de duración. En algunas realizaciones, la primera y la segunda dosis del complejo IL-15/IL-15Ra son iguales. En otras realizaciones, la primera y la segunda dosis del complejo IL-15/IL-15Ra son diferentes. En una realización, la primera dosis es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 0,75 pg/kg, 1 pg/kg, 1,5 pg/kg, 2 pg/kg, 2,5 pg/kg o 3 pg/kg. En algunas realizaciones, la segunda dosis es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 0,75 pg/kg, 1 pg/kg, 1,25 pg/kg, 1,5 pg/kg, 1,75 pg/kg, 2 pg/kg, 2,5 pg/kg, 3 pg/kg, 3,5 pg/kg, 4 pg/kg, 4,5 pg/kg, 5 pg/kg, 5.5 pg/kg, 6 pg/kg, 6,5 pg/kg, 7 pg/kg, 7,5 pg/kg, 8 pg/kg, 8,5 pg/kg, 9 pg/kg, 9,5 pg/kg o 10 pg/kg más alta que la primera dosis. En otras realizaciones, la segunda dosis es de 0,1 pg/kg a 1 pg/kg, 1 pg/kg a 2 pg/kg, 2 pg/kg a 5 pg/kg, 5 pg/kg a 10 pg/kg, 10 pg/kg a 15 pg/kg, 15 pg/kg a 20 pg/kg, 20 pg/kg a 25 pg/kg más alta que la primera dosis. En algunas realizaciones, la segunda dosis del complejo IL-15/IL-15Ra es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 0,75 pg/kg, 1 pg/kg, 1.5 pg/kg, 2 pg/kg, 2,5 pg/kg o 3 pg/kg. En otras realizaciones, la segunda dosis del complejo IL-15/IL-15Ra es de 4 pg/kg, 5 pg/kg, 6 pg/kg, 7 pg/kg, 8 pg/kg, 9 pg/kg, 10 pg/kg, 15 pg/kg, 20 pg/kg o 25 pg/kg.
En un aspecto, en este documento se proporcionan métodos para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso, en donde los métodos implican un régimen de administración cíclica que comprende un primer período de 1 a 3 semanas de administración subcutánea de un complejo IL-15/IL-15Ra a un sujeto, seguido de un segundo período de 1 semana a 2 meses en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, seguido de un tercer período de 1 semana a 3 semanas de administración subcutánea del complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto. En algunas realizaciones, se administra al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de 0,1 a 10 pg/kg, 0,1 a 8 pg/kg, 0,1 a 5 pg/kg o 0,1 a 2 pg/kg, o de alrededor de 0,1 pg/kg, alrededor de 0,25 pg/kg, alrededor de 0,5 pg/kg, alrededor de 0,75 pg/kg, alrededor de 1 pg/kg, alrededor de 1,5 pg/kg, alrededor de 2 pg/kg, alrededor de 3 pg/kg, alrededor de 4 pg/kg o alrededor de 5 pg/kg de complejo IL-15/IL-15Ra cada 1 a 5 días, cada 1 a 3 días o cada 1 a 3 días durante el primer y el tercer períodos del régimen de administración cíclica. El régimen de administración cíclica se puede llevar a cabo una vez, dos veces, tres veces, cuatro veces, cinco veces, seis veces, siete veces o más, o 2 a 5 veces, 5 a 10 veces, 10 a 15 veces, 15 a 20 veces, 20 a 25 veces o más. En algunas realizaciones, el régimen de administración cíclica se repite durante al menos 2 meses, al menos 3 meses, al menos 4 meses, al menos 5 meses, al menos 6 meses, al menos 7 meses, al menos 8 meses, al menos 9 meses, al menos 10 meses, al menos 11 meses al menos 1 año o más. En algunas realizaciones, el régimen de administración cíclica se repite durante alrededor de 2 meses, alrededor de 3 meses, alrededor de 4 meses, alrededor de 5 meses, alrededor de 6 meses, alrededor de 7 meses, alrededor de 8 meses, alrededor de 9 meses, alrededor de 10 meses, alrededor de 11 meses, alrededor de 1 año o más. En algunas realizaciones, el régimen de administración cíclica se repite durante 3 a 6 meses, 6 a 9 meses, 6 a 12 meses, 1 a 1,5 años, 1 a 2 años, 1,5 a 2 años, o más. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis, dosis por medio, y/o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma.
En un aspecto, en este documento se proporcionan métodos para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso, en donde los métodos implican un régimen de administración cíclica que comprende un primer período de dos semanas de administración subcutánea de un complejo IL-15/IL-15Ra a un sujeto, seguido de un segundo período de dos semanas en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto seguido de un tercer período de dos semanas de administración subcutánea del complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto. En algunas realizaciones, se administra al sujeto una dosis de 0,1 a 10 pg/kg de complejo IL-15/IL-15Ra por vía subcutánea cada 1 a 5 días, cada 1 a 3 días o cada 1 a 3 días durante el primer y el tercer períodos del régimen de administración cíclica. Este régimen de administración cíclica se puede llevar a cabo una vez, dos veces, tres veces o más. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis, dosis por medio o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma.
Los ejemplos no limitantes de trastornos en los cuales es beneficioso mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 incluyen cáncer, linfopenia, inmunodeficiencias, enfermedades infecciosas y heridas. En una realización específica, el trastorno en el cual es beneficioso mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es cáncer, que incluye cáncer metastásico. En otra realización específica, el trastorno en el cual es beneficioso mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es melanoma, carcinoma de células renales, carcinoma pulmonar no microcítico o cáncer de colon.
En una realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso (por ejemplo, cáncer, una enfermedad infecciosa, una inmunodeficiencia o linfopenia) en un sujeto que lo necesita que comprende administrar al sujeto un complejo IL-15/IL-15Ra empleando un régimen de administración cíclica, donde el régimen de administración cíclica comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de 0,1 a 10 pg/kg del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1 a 7 días, cada 1 a 5 días, cada 1 a 4 días, cada 1 a 3 días durante un primer período de 1 semana a 3 semanas; y (b) después de un segundo período de 1 semana a 2 meses en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de 0,1 a 10 pg/kg del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1 a 7 días, cada 1 a 5 días, cada
1 a 4 días, cada 1 a 3 días durante un tercer período de 1 semana a 3 semanas. En otra realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso (por ejemplo, cáncer, una enfermedad infecciosa, una inmunodeficiencia o linfopenia) en un sujeto que lo necesita, que comprende administrar un complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto empleando un régimen de administración cíclica, en donde el régimen de administración cíclica comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de 0,1 a 10 pg/kg del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7 días durante un primer período de 1 semana a 3 semanas; y (b) después de un segundo período de 1 semana a 2 meses en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de 0,1 a 10 pg/kg del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2, 3, 4, 5, 6 o 7 días durante un tercer período de 1 semana a 3 semanas. El régimen de administración cíclica se puede llevar a cabo una vez, dos veces, tres veces, cuatro veces, cinco veces, seis veces, siete veces, ocho veces, nueve veces, diez veces o más, o 2 a 5 veces, 5 a 10 veces, 10 a 15 veces, 15 a 20 veces, 20 a 25 veces o más. En algunas realizaciones, el régimen de administración cíclica se repite durante al menos 2 meses, al menos 3 meses, al menos 4 meses, al menos 5 meses, al menos 6 meses, al menos 7 meses, al menos 8 meses, al menos 9 meses, al menos 10 meses, al menos 11 meses al menos 1 año o más. En algunas realizaciones, el régimen de administración cíclica se repite durante alrededor de 2 meses, alrededor de 3 meses, alrededor de 4 meses, alrededor de 5 meses, alrededor de 6 meses, alrededor de 7 meses, alrededor de 8 meses, alrededor de 9 meses, alrededor de 10 meses, alrededor de 11 meses, alrededor de 1 año o más. En algunas realizaciones, el régimen de administración cíclica se repite durante 3 a 6 meses, 6 a 9 meses, 6 a 12 meses, 1 a 1,5 años, 1 a 2 años, 1,5 a 2 años, o más. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis en el paso (a) y/o el paso (b) del régimen de administración cíclica, dosis por medio en el paso (a) y/o (b) del régimen de administración cíclica, y/o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el paso (b) del régimen de administración cíclica. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma, durante el régimen de administración cíclica y/o después del cese de la administración cíclica.
En otra realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso, en donde el método comprende: (a) administrar a un sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 10 pg/kg (en algunas realizaciones, de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 5 pg/kg, aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 2 pg/kg o aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 1 pg/kg) de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; y (b) después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 10 pg/kg (en algunas realizaciones, aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 5 pg/kg, aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 2 pg/kg, o aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 1 pg/kg) de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, los pasos de (a) a (c) se repiten dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez o más veces. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis, dosis por medio o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma.
En otra realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso, en donde el método comprende: (a) administrar a un sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; y (b) después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, los pasos de (a) a (c) se repiten dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve o más veces. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis, dosis por medio o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma.
En otra realización, en este documento se proporciona un método para tratar o manejar el cáncer en un sujeto humano, que comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; y (b) después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En una realización específica, el cáncer es melanoma, carcinoma de células renales, cáncer pulmonar (por ejemplo, carcinoma pulmonar no microcítico) o cáncer de colon. En algunas realizaciones, el cáncer es metastásico. En una realización específica, el cáncer es melanoma metastásico, carcinoma de células renales metastásico, cáncer pulmonar metastásico (por ejemplo, carcinoma pulmonar no microcítico metastásico) o cáncer de colon metastásico.
En una realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar una enfermedad infecciosa en un sujeto humano, que comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; y (b) después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, la enfermedad infecciosa es causada por una infección viral, bacteriana, fúngica o por parásitos. En una realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar una inmunodeficiencia en un sujeto humano, que comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; y (b) después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0. 1 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, la inmunodeficiencia es causada por SIDA o un trastorno (por ejemplo, un trastorno genético).
En una realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar la linfopenia en un sujeto humano, que comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; y (b) después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, la linfopenia es causada por una terapia (por ejemplo, quimioterapia, un agente antiviral o un agente inmunosupresor), o una enfermedad que causa la disminución de los linfocitos periféricos circulantes.
En otro aspecto, en este documento se proporcionan métodos para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, que comprenden: (a) administrar a un sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 10 pg/kg (en algunas realizaciones, de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 5 pg/kg, aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 2 pg/kg o aproximadamente 0,1 pg/kg a 1 pg/kg) de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; (b) evaluar los niveles plasmáticos de IL-15 y/o el recuento de linfocitos en el sujeto después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto; y (c) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c) es mayor que la dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (a). En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis o dosis por medio. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma.
En otro aspecto, en este documento se proporcionan métodos para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso, en donde los métodos comprenden: (a) administrar a un sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 10 pg/kg (en algunas realizaciones, de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 5 pg/kg, aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 2 pg/kg o aproximadamente 0,1 pg/kg a 1 pg/kg) de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; (b) evaluar los niveles plasmáticos de IL-15 y/o el recuento de linfocitos en el sujeto después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto; y (c) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer
período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c) es mayor que la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (a). En otras realizaciones, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c) es igual que la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra administrada en el paso (a). En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis o dosis por medio. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma.
En otra realización, en este documento se proporciona un método para tratar o manejar el cáncer en un sujeto humano, que comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; (b) evaluar los niveles plasmáticos de IL-15 y/o el recuento de linfocitos en el sujeto y después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto; y (c) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c) es mayor que la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (a). En otras realizaciones, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c) es igual a la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra administrada en el paso (a). En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis o dosis por medio. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma. En una realización específica, el cáncer es melanoma, carcinoma de células renales, cáncer pulmonar (por ejemplo, carcinoma pulmonar no microcítico) o cáncer de colon. En algunas realizaciones, el cáncer es metastásico. En una realización específica, el cáncer es melanoma metastásico, carcinoma de células renales metastásico, cáncer pulmonar metastásico (por ejemplo, carcinoma pulmonar no microcítico metastásico) o cáncer de colon metastásico.
En una realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar una enfermedad infecciosa en un sujeto humano, que comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; (b) evaluar los niveles plasmáticos de IL-15 y/o el recuento de linfocitos en el sujeto y después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto; y (c) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c) es mayor que la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (a). En otras realizaciones, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c) es igual a la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra administrada en el paso (a). En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis o dosis por medio. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma. En algunas realizaciones, la enfermedad infecciosa es causada por una infección viral, bacteriana, fúngica o por parásitos.
En una realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar una inmunodeficiencia en un sujeto humano, que comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; (b) evaluar los niveles plasmáticos de IL-15 y/o el recuento de linfocitos en el sujeto y después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto; y (c) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c) es mayor que la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (a). En otras realizaciones, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c) es igual a la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra administrada en el paso (a). En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis o dosis por medio. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma. En algunas realizaciones, la inmunodeficiencia es causada por SIDA o un trastorno (por ejemplo, un trastorno genético).
En una realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar la linfopenia en un sujeto humano, que comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg,
aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; (b) evaluar los niveles plasmáticos de IL-15 y/o el recuento de linfocitos en el sujeto y después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto; y (c) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c) es mayor que la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (a). En otras realizaciones, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c) es igual a la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra administrada en el paso (a). En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis o dosis por medio. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma. En algunas realizaciones, la linfopenia es causada por una terapia (por ejemplo, quimioterapia, un agente antiviral o un agente inmunosupresor), o una enfermedad que causa la disminución de los linfocitos periféricos circulantes.
En otro aspecto, en este documento se proporciona un método para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 que comprende administrar al sujeto, por vía subcutánea, un complejo IL-15/IL-15Ra en un régimen cíclico, en el que cada ciclo del régimen cíclico comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra con una cierta frecuencia durante un primer período de tiempo; y (b) no administrar complejo IL-15/IL-15Ra durante un segundo período de tiempo, en donde el régimen cíclico se repite un cierto número de veces y la dosis se incrementa secuencialmente a medida que el régimen se repite. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en un sujeto se controlan con cierta frecuencia, por ejemplo después de cada dosis y/o dosis por medio. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma. En algunas realizaciones, el régimen cíclico se repite 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más veces. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra con una frecuencia de cada día, día por medio, cada 3, 4, 5 o 6 días. En algunas realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son iguales. En otras realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son diferentes. En algunas realizaciones, el primer período de tiempo para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas de duración. En algunas realizaciones, el primer período de tiempo para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas o 4 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana a 2 meses, 1 a 8 semanas, 2 a 8 semanas, 1 a 6 semanas, 2 a 6 semanas, 1 a 5 semanas, 2 a 5 semanas, 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas o 6 semanas de duración. En una realización, la dosis del primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 0,75 pg/kg, 1 pg/kg, 1,5 pg/kg, 2 pg/kg, 2,5 pg/kg o 3 pg/kg. En otra realización, la dosis del segundo ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 0,75 pg/kg, 1 pg/kg, 1,5 pg/kg, 2 pg/kg, 2,5 pg/kg, o 3 pg/kg más alta que la dosis utILizada en el primer ciclo del régimen cíclico. En otra realización, la dosis del primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0.5 pg/kg, 0,75 pg/kg o 1 pg/kg, y la dosis de cada ciclo subsiguiente es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0.5 pg/kg, 0,75 pg/kg, 1 pg/kg, 1,5 pg/kg, 2 pg/kg, 2,5 pg/kg, 3 pg/kg, 4 pg/kg, 5 pg/kg, 6 pg/kg, 7 pg/kg, 8 pg/kg, 9 pg/kg o 10 pg/kg más alta que la dosis utILizada en el ciclo previo del régimen cíclico. En algunas realizaciones, la dosis del primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg, la dosis del segundo ciclo del régimen cíclico es de 0,25 pg/kg, la dosis del tercer ciclo del régimen cíclico es de 0,5 pg/kg, la dosis del cuarto ciclo del régimen cíclico es de 1 pg/kg, y la dosis del quinto ciclo del régimen cíclico es de 2 pg/kg. En otras realizaciones, la dosis del primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg a 0,25 pg/kg, la dosis del segundo ciclo del régimen cíclico es de 0,5 pg/kg a 1 pg/kg, la dosis del tercer ciclo del régimen cíclico es de 1 pg/kg a 3 pg/kg, la dosis del cuarto ciclo del régimen cíclico es de 4 pg/kg a 6 pg/kg, y la dosis del quinto ciclo del régimen cíclico es de 7 pg/kg a 10 pg/kg.
En una realización, en este documento se proporciona un método para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, que comprende administrar a un sujeto, por vía subcutánea, un complejo IL-15/IL-15Ra en un régimen cíclico, en el que cada ciclo del régimen cíclico comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra con una cierta frecuencia durante un primer período de tiempo; y (b) no administrar complejo IL-15/IL-15Ra durante un segundo período de tiempo, en donde el régimen cíclico se repite al menos 5 veces, y en donde la dosis durante el primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg a 1 pg/kg, la dosis durante el segundo ciclo del régimen cíclico es de 2 pg/kg a 5 pg/kg, la dosis durante el tercer ciclo del régimen cíclico es de 5 pg/kg a 10 pg/kg, la dosis durante el cuarto ciclo del régimen cíclico es de 10 pg/kg a 20 pg/kg, y la dosis durante el quinto ciclo del régimen cíclico es de 20 pg/kg a 30 pg/kg. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra con una frecuencia de cada día, día por medio, cada 3, 4, 5 o 6 días. En algunas realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son iguales. En otras realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son diferentes. En algunas realizaciones, el primer período de tiempo para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas de duración. En algunas realizaciones, el primer período de tiempo para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas o 4 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana a 2 meses, 1 a 8 semanas, 2 a 8 semanas, 1 a 6 semanas, 2 a 6 semanas, 1 a 5 semanas, 2 a 5 semanas, 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas de duración. En algunas realizaciones, el
segundo período de tiempo es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas o 6 semanas de duración. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en un sujeto se controlan con cierta frecuencia, por ejemplo, después de cada dosis y/o dosis por medio. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma.
En otro aspecto, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso (por ejemplo, cáncer, una enfermedad infecciosa, una inmunodeficiencia o linfopenia), que comprende administrar a un sujeto, por vía subcutánea, un complejo IL-15/IL-15Ra en un régimen cíclico, en el que cada ciclo del régimen cíclico comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra con una cierta frecuencia durante un primer período de tiempo; y (b) no administrar complejo IL-15/IL-15Ra durante un segundo período de tiempo, en donde el régimen cíclico se repite un cierto número de veces y la dosis se incrementa secuencialmente a medida que el régimen se repite. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en un sujeto se controlan con cierta frecuencia, por ejemplo, después de cada dosis y/o dosis por medio. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma. En algunas realizaciones, el régimen cíclico se repite 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más veces. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra con una frecuencia de cada día, día por medio, cada 3, 4, 5 o 6 días. En algunas realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son iguales. En otras realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son diferentes. En algunas realizaciones, el primer período de tiempo para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas de duración. En algunas realizaciones, el primer período de tiempo para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas o 4 semanas. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana a 2 meses, 1 a 8 semanas, 2 a 8 semanas, 1 a 6 semanas, 2 a 6 semanas, 1 a 5 semanas, 2 a 5 semanas, 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas o 6 semanas de duración. En una realización, la dosis del primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 0,75 pg/kg, 1 pg/kg, 1,5 pg/kg, 2 pg/kg, 2,5 pg/kg o 3 pg/kg. En otra realización, la dosis del segundo ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 0,75 pg/kg, 1 pg/kg, 1,5 pg/kg, 2 pg/kg, 2,5 pg/kg o 3 pg/kg más alta que la dosis utILizada en el primer ciclo del régimen cíclico. En otra realización, la dosis del primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 0,75 pg/kg o 1 pg/kg, y la dosis de cada ciclo subsiguiente es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 0,75 pg/kg, 1 pg/kg, 1,5 pg/kg, 2 pg/kg, 2,5 pg/kg, 3 pg/kg, 4 pg/kg, 5 pg/kg, 6 pg/kg, 7 pg/kg, 8 pg/kg, 9 pg/kg o 10 pg/kg más alta que la dosis utILizada en el ciclo previo del régimen cíclico. En algunas realizaciones, la dosis del primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg, la dosis del segundo ciclo del régimen cíclico es de 0,25 pg/kg, la dosis del tercer ciclo del régimen cíclico es de 0,5 pg/kg, la dosis del cuarto ciclo del régimen cíclico es de 1 pg/kg, y la dosis del quinto ciclo del régimen cíclico es de 2 pg/kg. En otras realizaciones, la dosis del primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg a 0,25 pg/kg, la dosis del segundo ciclo del régimen cíclico es de 0,5 pg/kg a 1 pg/kg, la dosis del tercer ciclo del régimen cíclico es de 1 pg/kg a 3 pg/kg, la dosis del cuarto ciclo del régimen cíclico es de 4 pg/kg a 6 pg/kg, y la dosis del quinto ciclo del régimen cíclico es de 7 pg/kg a 10 pg/kg.
En una realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso (por ejemplo, cáncer, una enfermedad infecciosa, una inmunodeficiencia o linfopenia), que comprende administrar a un sujeto, por vía subcutánea, un complejo IL-15/IL-15Ra en un régimen cíclico, en el que cada ciclo del régimen cíclico comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra con una cierta frecuencia durante un primer período de tiempo; y (b) no administrar complejo IL-15/IL-15Ra durante un segundo período de tiempo, en donde el régimen cíclico se repite al menos 5 veces, y en donde la dosis durante el primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg a 1 pg/kg, la dosis durante el segundo ciclo del régimen cíclico es de 2 pg/kg a 5 pg/kg, la dosis durante el tercer ciclo del régimen cíclico es de 5 pg/kg a 10 pg/kg, la dosis durante el cuarto ciclo del régimen cíclico es de 10 pg/kg a 20 pg/kg, y la dosis durante el quinto ciclo del régimen cíclico es de 20 pg/kg a 30 pg/kg. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra con una frecuencia de cada día, día por medio, cada 3, 4, 5 o 6 días. En algunas realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son iguales. En otras realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son diferentes. En algunas realizaciones, el primer período de tiempo para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas de duración. En algunas realizaciones, el primer período de tiempo para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas o 4 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana a 2 meses, 1 a 8 semanas, 2 a 8 semanas, 1 a 6 semanas, 2 a 6 semanas, 1 a 5 semanas, 2 a 5 semanas, 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas o 6 semanas de duración. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en un sujeto se controlan con cierta frecuencia, por ejemplo, después de cada dosis y/o dosis por medio. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma.
En otra realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el que mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso, que comprende administrar a un sujeto, por vía
subcutánea, un complejo IL-15/IL-15Ra en un régimen cíclico, en el que cada ciclo del régimen cíclico comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra con una cierta frecuencia durante un primer período de tiempo; y (b) no administrar complejo IL-15/IL-15Ra durante un segundo período de tiempo, en donde el régimen cíclico se repite y en donde la dosis durante cada ciclo se incrementa secuencialmente hasta que se alcanza la máxima dosis tolerada o hasta que el sujeto presenta uno o más acontecimientos adversos. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en un sujeto se controlan con cierta frecuencia, por ejemplo, después de cada dosis y/o dosis por medio. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de las citocinas en el plasma, y acontecimientos adversos, como linfopenia grado 3 o 4, granulocitopenia grado 3, leucocitosis grado 3 (GB >100.000/mm3), o disfunción orgánica. En algunas realizaciones, la dosis durante el primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg a 1 pg/kg, la dosis durante el segundo ciclo del régimen cíclico es de 2 pg/kg a 5 pg/kg, la dosis durante el tercer ciclo del régimen cíclico es de 5 pg/kg a 10 pg/kg, la dosis durante el cuarto ciclo del régimen cíclico es de 10 pg/kg a 20 pg/kg, y la dosis durante el quinto ciclo del régimen cíclico es de 20 pg/kg a 30 pg/kg. En otras realizaciones, la dosis durante el primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg a 1 pg/kg, la dosis durante el segundo ciclo del régimen cíclico es de 2 pg/kg a 5 pg/kg, la dosis durante el tercer ciclo del régimen cíclico es de 5 pg/kg a 15 pg/kg, la dosis durante el cuarto ciclo del régimen cíclico es de 15 pg/kg a 30 pg/kg, y la dosis durante el quinto ciclo del régimen cíclico es de 30 pg/kg a 50 pg/kg. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra con una frecuencia de cada día, día por medio, cada 3, 4, 5 o 6 días. En algunas realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son iguales. En otras realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son diferentes. En algunas realizaciones, el primer período de tiempo para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas de duración. En algunas realizaciones, el primer período de tiempo para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas o 4 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana a 2 meses, 1 a 8 semanas, 2 a 8 semanas, 1 a 6 semanas, 2 a 6 semanas, 1 a 5 semanas, 2 a 5 semanas, 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas o 6 semanas de duración. En algunas realizaciones, el trastorno es una enfermedad infecciosa.
El complejo IL-15/IL-15Ra administrado a un sujeto de conformidad con los métodos descritos en este documento puede contener IL-15 nativa o un derivado de IL-15 unido covalente o no covalentemente a IL-15Ra nativo o a un derivado de IL-15Ra. En una realización, el complejo IL-15/IL-15Ra comprende IL-15 nativa e IL-15Ra nativo. En otra realización, el complejo IL-15/IL-15Ra comprende un derivado de IL-15 y nativa e IL-15Ra nativo. En otra realización, el complejo IL-15/IL-15Ra está en la forma heterodimérica nativa. En otra realización, la IL-15 es IL-15 humana e IL-15Ra es IL-15Ra humano. En una realización, la IL-15 humana comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 o los residuos de aminoácidos 49 a 162 de SEQ ID NO:1 y el IL-15Ra humano comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3, o a un fragmento de esta. En otra realización, la IL-15 comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:1 o los residuos de aminoácidos 49 a 162 de SEQ ID NO:1 y el IL-15Ra comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:4, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 o 45. En otras realizaciones, el IL-15Ra está glicosILado de modo que la glicosILación representa al menos, o más de, 20%, 30%, 40% o 50% de la masa del IL-15Ra.
En otra realización, el complejo IL-15/IL-15Ra comprende IL-15 nativa y un derivado de IL-15Ra. En otra realización, el complejo IL-15/IL-15Ra comprende un derivado de IL-15 y un derivado de IL-15Ra. En una realización, el derivado de IL-15Ra es una forma soluble del IL-15Ra nativo. En otra realización, el derivado de IL-15Ra contiene una mutación que inhibe la escisión por una proteasa endógena. En una realización, el sitio de escisión del dominio extracelular de IL-15Ra es reemplazado por un sitio de escisión que es reconocido específicamente por una proteasa heteróloga. En una realización, el sitio de escisión del dominio extracelular de IL-15Ra es reemplazado por un sitio de escisión de un dominio extracelular heterólogo (por ejemplo, un dominio transmembrana heterólogo que es reconocido y escindido por otra enzima no relacionada con la enzima de procesamiento endógena que escinde al IL-15Ra).
En algunas realizaciones, el IL-15Ra humano es modificado simultánea o alternativamente de la manera siguiente: O-glicosILado en Thr5 de la secuencia de aminoácidos NWELTASASHQPPGVYPQG (SEQ ID NO: 42) en el IL-15Ra; O-glicosILado en Ser7 de la secuencia de aminoácidos NWELTASASHQPPGVYPQG (SEQ ID NO: 42) en el IL-15Ra; N-glicosILado en Ser 8 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVK (SEQ ID NO: 43) en el IL-15Ra; N-glicosILado en Ser 8 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; N-glicosILado en Ser 18 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; N-glicosILado en Ser 20 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; N-glicosILado en Ser 23 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; y/o N-glicosILado en Ser 31 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra.
En algunas realizaciones, el IL-15Ra es una forma soluble de IL-15Ra. En una realización, la forma soluble de IL-15Ra es una forma soluble de IL-15Ra humano. En una realización particular, el IL-15Ra humano comprende SEQ ID NO: 3. En una realización, los últimos aminoácidos del extremo C-terminal de la forma soluble de IL-15Ra humano consisten en los residuos de aminoácidos PQGHSDTT (SEQ ID NO: 26), en donde T está en el extremo C-terminal de la secuencia de aminoácidos. En una realización, los últimos aminoácidos del extremo C-terminal de la forma soluble de IL-15Ra humano consisten en los residuos de aminoácidos PQGHSDT (SEQ ID NO: 27), en donde T está en el extremo C-terminal de la
secuencia de aminoácidos. En una realización, los últimos aminoácidos del extremo C-terminal de la forma soluble de IL-15Ra humano consisten en los residuos de aminoácidos PQGHSD (SEQ ID NO: 28), en donde D está en el extremo C-terminal de la secuencia de aminoácidos. En una realización, los últimos aminoácidos del extremo C-terminal de la forma soluble de IL-15Ra consisten en los residuos de aminoácidos PQGHS (SEQ ID NO: 29), en donde S está en el extremo C-terminal de la secuencia de aminoácidos. En una realización, los últimos aminoácidos del extremo C-terminal de la forma soluble de IL-15Ra humano consisten en los residuos de aminoácidos PQGH (SEQ ID NO: 30), en donde H está en el extremo C-terminal de la secuencia de aminoácidos. En una realización, los últimos aminoácidos del extremo C-terminal de la forma soluble de IL-15Ra humano consisten en los residuos de aminoácidos PQG (SEQ ID NO: 31), en donde G está en el extremo C-terminal de la secuencia de aminoácidos. En algunas realizaciones, la IL-15 es IL-15 humana. En algunas realizaciones de los métodos provistos en este documento, la IL-15 humana comprende SEQ ID NO:1 o la secuencia de aminoácidos 49 a 162 de SEQ ID NO:1. En una realización particular, el sujeto tratado de conformidad con los métodos provistos en este documento es humano.
En algunas realizaciones, un complejo IL-15/IL-15Ra se asocia con una célula. En una realización, el sitio de escisión del dominio extracelular de IL-15Ra que es escindido por una enzima de procesamiento endógena es reemplazado por un dominio heterólogo (por ejemplo, dominio transmembrana heterólogo) o una secuencia de aminoácidos sintética que no permite la escisión y la generación de IL-15Ra soluble. En algunas realizaciones, el sitio de escisión del dominio extracelular de IL-15Ra que es escindido por una enzima de procesamiento endógena se muta para inhibir la escisión y la generación de IL-15Ra soluble.
Además de IL-15 e IL-15Ra, los complejos IL-15/IL-15Ra pueden comprender una molécula heteróloga. La molécula heteróloga se puede conjugar con IL-15 y/o IL-15Ra. La molécula heteróloga se conjuga con IL-15 o IL-15Ra de una manera que no interfiere ni evita la unión de IL-15 e IL-15Ra entre sí, y no interfiere ni evita la interacción entre el complejo IL-15/IL-15Ra y las subunidades Py del receptor de IL-15. En algunas realizaciones, la molécula heteróloga es un antígeno asociado a una enfermedad que se intenta prevenir, tratar y/o manejar. Los ejemplos no limitantes de dichos antígenos incluyen antígenos virales, antígenos bacterianos, antígenos parasitarios y antígenos tumorales. En otras realizaciones, la molécula heteróloga es un anticuerpo que se une específicamente a un antígeno asociado a una enfermedad que se intenta prevenir, tratar y/o manejar. En algunas realizaciones, el anticuerpo se une específicamente a un antígeno celular (por ejemplo, un receptor) expresado por una célula a la que se desea dirigirse. En algunas realizaciones, la molécula heteróloga aumenta la estabILidad de la proteína. En algunas realizaciones, la molécula heteróloga es un dominio Fc de una inmunoglobulina o de un fragmento de esta. En una realización, IL-15Ra se conjuga con/fusiona al dominio Fc de una inmunoglobulina (por ejemplo, una IgG1). En algunas realizaciones, la molécula heteróloga no es un dominio Fc de una inmunoglobulina ni de un fragmento de esta.
En un aspecto específico, la presente invención proporciona un complejo IL-15/IL-15Ra para usar en el tratamiento del cáncer en un sujeto que lo necesita, que comprende administrar el complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, usando un régimen de administración cíclica, en donde el régimen de administración cíclica comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de 0,1 a 10 |ug/kg del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 1 semana a 3 semanas; y (b) después de un segundo período de 1 semana a 2 meses en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de 0,1 a 10 |ug/kg del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 1 semana a 3 semanas. El cáncer puede ser melanoma, carcinoma de células renales, carcinoma microcítico de pulmón o cáncer de colon y/o cáncer metastásico. En una realización específica, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra administrada durante el primer período y durante el tercer período puede ser de 0,1 |ug/kg, 0,25 |ug/kg, 0,5 |ug/kg, 1 |ug/kg, 2 |ug/kg o 5 |ug/kg y el primer período, el segundo período y/o el tercer período pueden ser de 12 a 14 días. Además, el régimen de administración cíclica se puede repetir al menos 5 o al menos 10 veces y durante al menos 6 meses o al menos 1 año. En una realización específica, el complejo IL-15/IL-15Ra es un complejo heterodimérico de IL-15 nativa e IL-15Ra soluble nativo, en donde la IL-15 es IL-15 humana, y en donde IL-15Ra es una forma soluble de IL-15Ra humano. En una realización específica, la IL-15 comprende los residuos de aminoácidos 49 a 162 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 e IL-15Ra comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 33, 35, 37, 39, 41 o 45. Alternativamente, la IL-15 comprende los residuos de aminoácidos 49 a 162 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 e IL-15Ra comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 33 o el IL-15Ra se glicosILa de modo que la glicosILación representa al menos, o más de, 20%, 30%, 40% o 50% de la masa del IL-15Ra. Además, el complejo IL-15/IL-15Ra para usar en el tratamiento del cáncer comprende además administrar otra terapia, en donde la otra terapia es un anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a PD-1 o un anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a PD-L1.
3.1 TERMINOLOGÍA
Según se usan en este documento, los términos "alrededor" y "aproximadamente," cuando se usan para modificar un valor numérico o un intervalo numérico, indican que el valor o el intervalo numérico así como las desviaciones razonables del valor o el intervalo numérico, generalmente 5% o 10% por encima y 5% o 10% por debajo del valor o del intervalo, están comprendidos por el significado previsto para el valor o intervalo mencionado.
Según se usan en este documento, los términos "enfermedad" y "trastorno" se usan indistintamente para referirse a una afección, en particular, una afección patológica. En ciertas realizaciones, los términos "enfermedad" y "trastorno" se usan
indistintamente para referirse a una enfermedad afectada por la transducción de señal de IL-15. En otras realizaciones, los términos "enfermedad" y "trastorno" se usan indistintamente para referirse a una enfermedad en la cual la administración de inmunocitos es beneficiosa.
Según se usan en este documento, las expresiones "se une específicamente", "reconoce específicamente" y expresiones análogas en el contexto de un receptor (por ejemplo, IL-15Ra nativo o receptor Py de IL-15) y un ligando (por ejemplo, IL-15 nativa) se refieren a la unión o la asociación específica entre ligando y receptor. Preferentemente, el ligando tiene mayor afinidad por el receptor que por otras moléculas. En una realización específica, el ligando es IL-15 nativa y el receptor nativo es IL-15Ra. En otra realización específica, el ligando es el complejo IL-15/IL-15Ra nativo y el receptor nativo es el complejo receptor Py. En otra realización, el complejo IL-15/IL-15Ra se une al complejo receptor Py y activa la transducción de la señal mediada por IL-15. Los ligandos que se unen específicamente a un receptor se pueden identificar, por ejemplo, mediante inmunoensayos, BIAcore, u otras técnicas conocidas por los expertos en la materia.
Según se usan en este documento, las expresiones "IL-15 nativa" e "interleucina-15 nativa" en el contexto de proteínas o polipéptidos se refieren a cualquier secuencia de aminoácidos de interleucina-15 de mamífero de origen natural, que incluye las formas inmaduras o precursoras y las formas maduras. Los ejemplos no limitantes de números de acceso GeneBank para la secuencia de aminoácidos de diversas especies de interleucina-15 de mamífero nativa incluyen NP_000576 (humana, forma inmadura), CAA62616 (humana, forma inmadura), NP_001009207 (Felis catus, forma inmadura), AAB94536 (rattus, forma inmadura), AAB41697 (rattus, forma inmadura), NP_032383 (Mus musculus, forma inmadura), AAR19080 (Karina), AAB60398 (macaca mulatta, forma inmadura), AAI00964 (humana, forma inmadura), AAH23698 (mus musculus, forma inmadura), y AAH18149 (humana). Se proporciona la secuencia de aminoácidos de la forma inmadura/precursora de la IL-15 humana nativa, que comprende el péptido señal largo (subrayado) y de la IL-15 humana madura nativa (en cursiva):
MRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATL YTESD VHPSCK VTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSS NGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS (SEQ ID NO: 1; FIG. 1B). En algunas realizaciones, IL-15 nativa es la forma inmadura o precursora de una IL-15 de mamífero de origen natural. En otras realizaciones, IL-15 nativa es la forma madura de una IL-15 de mamífero de origen natural. En una realización, IL-15 es la forma precursora de IL-15 humana de origen natural. En otra realización, IL-15 nativa es la forma madura de IL-15 humana de origen natural. En una realización, la proteína/polipéptido IL-15 nativa se aísla o se purifica.
Según se usan en este documento, las expresiones "IL-15 nativa" e "interleucina-15 nativa" en el contexto de ácidos nucleicos se refieren a cualquier secuencia de ácido nucleico que codifique la interleucina-15 de mamífero de origen natural, que incluye las formas inmaduras o precursoras y las formas maduras. Los ejemplos no limitantes de números de acceso GeneBank para la secuencia de nucleótidos de diversas especies de IL-15 de mamífero nativa, incluyen NM_000585 (humana), NM_008357 (Mus musculus) y RNU69272 (rattus norvegicus). Se proporciona la secuencia de nucleótidos que codifica la forma inmadura/precursora de IL-15 humana nativa, que comprende la secuencia de nucleótidos que codifica el péptido señal largo (subrayado) y la secuencia de nucleótidos que codifica la IL-15 humana nativa madura (en cursiva): atgagaat ttcgaaacca catttgagaa gtatttccat ccagtgctac ttgtgtttac ttctaaacag tcattttcta actgaagctg gcattcatgt cttcattttg ggctgtttca gtgcagggct tcctaaaaca gaagccaact gggtgaatgt aataagtgat ttgaaaaaaa ttgaagatct tattcaatct atgcatattg atgctacttt atatacggaa agtgatgttc accccagttg caaagtaaca gcaatgaagt gctttctctt ggagttacaa gttatttcac ttgagtccgg agatgcaagt attcatgata cagtagaaaa tctgatcatc ctagcaaaca acagtttgtc ttctaatggg aatgtaacag aatctggatg caaagaatgt gaggaactgg aggaaaaaaa tattaaagaa tttttgcaga gttttgtaca tattgtccaa atgttcatca acacttcttg a (SEQ ID NO: 2; FIG. 1A). En una realización, el ácido nucleico es un ácido nucleico aislado o purificado. En algunas realizaciones, los ácidos nucleicos codifican la forma inmadura o precursora de una IL-15 de mamífero de origen natural. En otras realizaciones, los ácidos nucleicos codifican la forma madura de una IL-15 de mamífero de origen natural. En una realización, los ácidos nucleicos que codifican la IL-15 nativa, codifican la forma precursora de IL-15 humana de origen natural. En otra realización, los ácidos nucleicos que codifican la IL-15 nativa, codifican la forma madura de IL-15 humana de origen natural.
Según se usan en este documento, las expresiones "derivado de IL-15" y "derivado de interleucina-15" en el contexto de proteínas o polipéptidos se refieren a: (a) un polipéptido que es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntico a un polipéptido IL-15 de mamífero nativo; (b) un polipéptido codificado por una secuencia de ácido nucleico que es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntico a la secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido IL-15 de mamífero nativo; (c) un polipéptido que contiene 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más mutaciones de aminoácidos (es decir, adiciones, deleciones y/o sustituciones) con respecto a un polipéptido IL-15 de mamífero nativo; (d) un polipéptido codificado por ácidos nucleicos se puede hibridar bajo condiciones de hibridación de alta, moderada o típica rigurosidad a ácidos nucleicos que codifican un polipéptido IL-15 de mamífero nativo; (e) un polipéptido codificado por una secuencia de ácido nucleico que se puede hibridar bajo condiciones de hibridación de alta, moderada o típica rigurosidad a una secuencia de ácido nucleico que codifica un fragmento de un polipéptido IL-15 de mamífero nativo de al menos 20 aminoácidos contiguos, al menos 30 aminoácidos contiguos, al menos 40 aminoácidos contiguos, al menos 50 aminoácidos contiguos, al menos 100 aminoácidos contiguos, o al menos 150 aminoácidos contiguos; y/o (f) un fragmento de un polipéptido IL-15 de mamífero nativo. Los derivados de IL-15 también incluyen un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de una forma madura de origen natural de un polipéptido IL-15 de mamífero y
una secuencia de aminoácidos de un péptido señal heterólogo. En una realización, un derivado de IL-15 es un derivado de un polipéptido IL-15 humano nativo. En otra realización, un derivado de IL-15 es un derivado de una forma inmadura o precursora del polipéptido IL-15 humano de origen natural. En otra realización, un derivado de IL-15 es un derivado de una forma madura del polipéptido IL-15 humano de origen natural. En otra realización, un derivado de IL-15 es la IL-15N72D descrita, por ejemplo, en Zhu et al., 2009, J. Immunol. 183: 3598 o la patente de los Estados Unidos N° 8,163,879. En otra realización, un derivado de IL-15 es una de las variantes de IL-15 descritas en la patente de los Estados Unidos N° 8,163,879. En una realización, un derivado de IL-15 se aísla o se purifica.
En una realización preferida, los derivados de IL-15 retienen al menos 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% de la función del polipéptido IL-15 de mamífero nativo para unirse al polipéptido IL-15Ra, según se mide mediante ensayos bien conocidos en el área, por ejemplo ELISA, Biacore, coinmunoprecipitación. En otra realización preferida, los derivados de IL-15 retienen al menos 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% de la función de un polipéptido IL-15 de mamífero nativo para inducir la transducción de señal mediada por IL-15, según se mide mediante ensayos bien conocidos en el área, por ejemplo, ensayos de cambio en la corrida electroforética, ELISA y otros inmunoensayos. En una realización, los derivados de IL-15 se unen a IL-15Ra y/o IL-15RpY según se evalúa, por ejemplo, mediante ensayos de unión ligando/receptor bien conocidos en el área.
Se puede determinar el porcentaje de identidad empleando cualquier método conocido por un experto en la materia. En una realización, el porcentaje de identidad se determina utILizando el programa "Best Fit" o "Gap" del paquete de software de análisis de secuencias (versión 10; Genetics Computer Group, Inc., University of Wisconsin Biotechnology Center, Madison, Wisconsin). Se ha descrito la información con respecto a las condiciones de hibridación (por ejemplo condiciones de rigurosidad alta, moderada o típica), véase, por ejemplo, la publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos N° US 2005/0048549 (por ejemplo, los párrafos 72-73).
Según se usan en este documento, las expresiones "derivado de IL-15" y "derivado de interleucina-15" en el contexto de ácidos nucleicos se refieren a: (a) una secuencia de ácido nucleico que es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de ácido nucleico de origen natural que codifica un polipéptido IL-15 de mamífero; (b) una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido que es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos de un polipéptido IL-15 de mamífero nativo; (c) una secuencia de ácido nucleico que contiene 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más mutaciones de bases de ácido nucleico (es decir, adiciones, deleciones y/o sustituciones) con respecto a la secuencia de ácido nucleico de origen natural que codifica un polipéptido IL-15 de mamífero; (d) una secuencia de ácido nucleico que se hibrida bajo condiciones de hibridación de alta, moderada o típica rigurosidad a una secuencia de ácido nucleico de origen natural que codifica un polipéptido IL-15 de mamífero; (e) una secuencia de ácido nucleico que se hibrida bajo condiciones de hibridación de alta, moderada o típica rigurosidad a un fragmento de la secuencia de ácido nucleico de origen natural que codifica un polipéptido IL-15 de mamífero; y/o (f) una secuencia de ácido nucleico que codifica un fragmento de una secuencia de ácido nucleico de origen natural que codifica un polipéptido IL-15 de mamífero. En una realización, un derivado de IL-15 en el contexto de ácidos nucleicos es un derivado de una secuencia de ácido nucleico de origen natural que codifica un polipéptido IL-15 humano. En otra realización, un derivado de IL-15 en el contexto de ácidos nucleicos es un derivado de una secuencia de ácido nucleico de origen natural que codifica una forma inmadura o precursora de un polipéptido IL-15 humano. En otra realización, un derivado de IL-15 en el contexto de ácidos nucleicos es un derivado de una secuencia de ácido nucleico de origen natural que codifica una forma madura de un polipéptido IL-15 humano. En otra realización, un derivado de IL-15 en el contexto de ácidos nucleicos es la secuencia de ácido nucleico que codifica la IL-15N72D descrita, por ejemplo, en Zhu et al., 2009, J. Immunol. 183: 3598 o la patente de los Estados Unidos N° 8,163,879. En otra realización, un derivado de IL-15 en el contexto de ácidos nucleicos es la secuencia de ácido nucleico que codifica una de las variantes de IL-15 descritas en la patente de los Estados Unidos N° 8,163,879.
Las secuencias de ácido nucleico derivadas de IL-15 incluyen secuencias de ácido nucleico de codones optimizados que codifican el polipéptido IL-15 de mamífero nativo, incluidas las formas madura e inmadura del polipéptido IL-15. En otras realizaciones, los ácidos nucleicos derivados de IL-15 incluyen ácidos nucleicos que codifican transcritos de ARN de IL-15 de mamífero que contienen mutaciones que eliminan posibles sitios de empalme y elementos de inestabILidad (por ejemplo, elementos ricos en A/T o A/U) sin afectar la secuencia de aminoácidos para aumentar la estabILidad de los transcritos de ARN de IL-15 de mamífero. En algunas realizaciones, la secuencia de ácido nucleico derivada de IL-15 es la secuencia de codones optimizados en SEQ ID NO: 9 (la secuencia de aminoácidos codificada por dicha secuencia de ácido nucleico se proporciona en SEQ ID NO: 10).
En una realización preferida, las secuencias de ácido nucleico derivadas de IL-15 codifican proteínas o polipéptidos que retienen al menos 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% de la función de un polipéptido IL-15 de mamífero nativo para unirse a IL-15Ra, según se mide mediante ensayos bien conocidos en el área, por ejemplo, ELISA, Biacore, coinmunoprecipitación. En otra realización preferida, las secuencias de ácido nucleico derivadas de IL-15 codifican proteínas o polipéptidos que retienen al menos 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% de la función de un polipéptido IL-15 de mamífero nativo para inducir la transducción de señal mediada por IL-15, según se mide mediante ensayos bien conocidos en el área, por ejemplo, ensayos de cambio en la corrida electroforética, ELISA y otros inmunoensayos. En una realización, las secuencias de ácido nucleico derivadas de IL-15 codifican proteínas
o polipéptidos que se unen a IL-15Ra y/o IL-15RpY según se evalúa, por ejemplo, mediante ensayos ligando/receptor bien conocidos en el área.
Según se usan en este documento, los términos "IL-15" e "interleucina-15" se refieren a una IL-15 nativa, un derivado de IL-15 o una IL-15 nativa y un derivado de IL-15.
Según se usan en este documento, las expresiones "IL-15Ra nativo" y "receptor alfa de interleucina-15 nativo" en el contexto de proteínas o polipéptidos se refieren a cualquier secuencia de aminoácidos de un receptor alfa de interleucina-15 de mamífero de origen natural ("IL-15Ra"), que incluye las formas inmaduras o precursoras y maduras y las isoformas de origen natural. Los ejemplos no limitantes de números de acceso GeneBank para la secuencia de aminoácidos de diversos IL-15Ra de mamífero nativos incluyen NP_002180 (humana), ABK41438 (Macaca mulatta), NP_032384 (Mus musculus), Q60819 (Mus musculus), CAI41082 (humana). Se proporciona la secuencia de aminoácidos de la forma inmadura del IL-15Ra humano nativo de longitud completa, que comprende el péptido señal (subrayado) y el IL-15Ra humano nativo maduro (en cursiva): MAPRRARGCR TLGLPALLLL LLLRPPATRG ITCPPPMSVE HADIWVKSYS LYSRERYICN SGFKRKAGTS SLTECVLNKA TNVAHWTTPS LKCIRDPALV HQRPAPPSTV TTAGVTPQPE SLSPSGKEPA ASSPSSNNTA ATTAAIVPGS QLMPSKSPST GTTEISSHES SHGTPSQTTA KNWELTASAS HQPPGVYPQG HSDTTVAIST STVLLCGLSA VSLLACYLKS RQTPPLASVE MEAMEALPVT WGTSSRDEDL ENCSHHL
(SEQ ID NO: 3; FIG. 2B). Se proporciona la secuencia de aminoácidos de la forma inmadura del IL-15Ra humano soluble nativo, que comprende el péptido señal (subrayado) y el IL-15Ra humano nativo soluble maduro (en cursiva): MAPRRARGCR TLGLPALLLL LLLRPPATRG ITCPPPMSVE HADIWVKSYS LYSRERYICN SGFKRKAGTS SLTECVLNKA TNVAHWTTPS LKCIRDPALV HQRPAPPSTV TTAGVTPQPE SLSPSGKEPA ASSPSSNNTA ATTAAIVPGS QLMPSKSPST GTTEISSHES SHGTPSQTTA KNWELTASAS HQPPGVYPQG (SEQ ID NO:32). Véanse Secciones 5.1 y 6 (en particular, Sección 6.4), infra, por una discusión más detallada respecto a las formas inmadura y madura de IL-15Ra humano soluble nativo. En algunas realizaciones, IL-15Ra nativo es la forma inmadura de un polipéptido IL-15Ra de mamífero de origen natural. En otras realizaciones, IL-15Ra nativo es la forma madura de un polipéptido IL-15Ra de mamífero de origen natural. En ciertas realizaciones, IL-15Ra nativo es la forma soluble de origen natural de un polipéptido IL-15Ra de mamífero. En otras realizaciones, IL-15Ra nativo es la forma de longitud completa de un polipéptido IL-15Ra de mamífero de origen natural. En una realización, IL-15Ra nativo es la forma inmadura de un polipéptido IL-15Ra humano de origen natural. En otra realización, IL-15Ra nativo es la forma madura de un polipéptido IL-15Ra humano de origen natural. En ciertas realizaciones, IL-15Ra nativo es la forma soluble de origen natural de un polipéptido IL-15Ra humano. En otras realizaciones, IL-15Ra nativo es la forma de longitud completa de un polipéptido IL-15Ra humano de origen natural. En una realización, una proteína o polipéptido IL-15Ra nativo se aísla o se purifica.
Según se usan en este documento, las expresiones "IL-15Ra nativo" y "receptor alfa de la interleucina-15 nativo" en el contexto de ácidos nucleicos se refieren a cualquier secuencia de ácido nucleico que codifica el receptor alfa de la interleucina-15 de mamífero, que incluye las formas inmaduras o precursoras y las formas maduras. Los ejemplos no limitantes de números de acceso GeneBank para la secuencia de nucleótidos de diversas especies de IL-15Ra de mamífero nativo incluyen NM_002189 (humana), EF033114 (Macaca mulatta) y NM_008358 (Mus musculus). Se proporciona la secuencia de nucleótidos que codifica la forma inmadura de IL-15Ra humano nativo, que comprende la secuencia de nucleótidos que codifica el péptido señal (subrayado) y la secuencia de nucleótidos que codifica el IL-15Ra humano nativo maduro (en cursiva): atggcccc gcggcgggcg cgcggctgcc ggaccctcgg tctcccggcg ctgctactgc tgctgctgct ccggccgccg gcgacgcggg gcatcacgtg ccctcccccc atgtccgtgg aacacgcaga catctgggtc aagagctaca gcttgtactc cagggagcgg tacatttgta actctggttt caagcgtaaa gccggcacgt ccagcctgac ggagtgcgtg ttgaacaagg ccacgaatgt cgcccactgg acaaccccca gtctcaaatg cattagagac cctgccctgg ttcaccaaag gccagcgcca ccctccacag taacgacggc aggggtgacc ccacagccag agagcctctc cccttctgga aaagagcccg cagcttcatc tcccagctca aacaacacag cggccacaac agcagctatt gtcccgggct cccagctgat gccttcaaaa tcaccttcca caggaaccac agagataagc agtcatgagt cctcccacgg caccccctct cagacaacag ccaagaactg ggaactcaca gcatccgcct cccaccagcc gccaggtgtg tatccacagg gccacagcga caccactgtg gctatctcca cgtccactgt cctgctgtgt gggctgagcg ctgtgtctct cctggcatgc tacctcaagt caaggcaaac tcccccgctg gccagcgttg aaatggaagc catggaggct ctgccggtga cttgggggac cagcagcaga gatgaagact tggaaaactg ctctcaccac ctatga (SEQ ID NO: 5; FIG. 2A). Se proporciona la secuencia nucleotídica que codifica la forma inmadura de la proteína o polipéptido IL-15Ra humano soluble nativo, que comprende la secuencia nucleotídica que codifica el péptido señal (subrayado) y la secuencia de nucleótidos que codifica el IL-15Ra humano maduro soluble (en cursiva): atggcccc gcggcgggcg cgcggctgcc ggaccctcgg tctcccggcg ctgctactgc tgctgctgct ccggccgccg gcgacgcggg gcatcacgtg ccctcccccc atgtccgtgg aacacgcaga catctgggtc aagagctaca gcttgtactc cagggagcgg tacatttgta actctggttt caagcgtaaa gccggcacgt ccagcctgac ggagtgcgtg ttgaacaagg ccacgaatgt cgcccactgg acaaccccca gtctcaaatg cattagagac cctgccctgg ttcaccaaag gccagcgcca ccctccacag taacgacggc aggggtgacc ccacagccag agagcctctc cccttctgga aaagagcccg cagcttcatc tcccagctca aacaacacag cggccacaac agcagctatt gtcccgggct cccagctgat gccttcaaaa tcaccttcca caggaaccac agagataagc agtcatgagt cctcccacgg caccccctct cagacaacag ccaagaactg ggaactcaca gcatccgcct cccaccagcc gccaggtgtg tatccacagg gc (SEQ ID NO: 46). En una realización, el ácido nucleico es un ácido nucleico aislado o purificado. En algunas realizaciones, los ácidos nucleicos de origen natural codifican la forma inmadura de un polipéptido IL-15Ra de mamífero de origen natural. En otras realizaciones, los ácidos nucleicos de origen natural codifican la forma madura de un polipéptido IL-15Ra de mamífero de origen natural. En algunas realizaciones, los ácidos nucleicos de origen natural codifican la forma soluble de un polipéptido IL-15Ra de mamífero de origen natural. En otras realizaciones, los ácidos nucleicos de origen natural codifican la forma de longitud completa de un polipéptido IL-15Ra de mamífero de origen natural. En una realización, los ácidos nucleicos de origen natural codifican la forma precursora de un polipéptido IL-15 humano de origen natural. En otra realización, los ácidos nucleicos de origen natural codifican la forma madura de un
polipéptido IL-15 humano de origen natural. En algunas realizaciones, los ácidos nucleicos de origen natural codifican la forma soluble de un polipéptido IL-15Ra humano de origen natural. En otras realizaciones, los ácidos nucleicos de origen natural codifican la forma de longitud completa de un polipéptido IL-15Ra humano de origen natural.
Según se usan en este documento, las expresiones "derivado de IL-15Ra" y "derivado del receptor alfa de la interleucina-15" en el contexto de una proteína o polipéptido se refieren a: (a) un polipéptido que es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntico a un polipéptido IL-15 de mamífero nativo; (b) un polipéptido codificado por una secuencia de ácido nucleico que es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido IL-15Ra de mamífero nativo; (c) un polipéptido que contiene 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más mutaciones de aminoácidos (es decir, adiciones, deleciones y/o sustituciones) con respecto a un polipéptido IL-15Ra de mamífero nativo; (d) un polipéptido codificado por una secuencia de ácido nucleico que se puede hibridar bajo condiciones de rigurosidad de hibridación alta, moderada o típica a una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido IL-15Ra de mamífero nativo; (e) un polipéptido codificado por una secuencia de ácido nucleico que se puede hibridar bajo condiciones de rigurosidad de hibridación alta, moderada o típica a una secuencia de ácido nucleico que codifica un fragmento de un polipéptido IL-15 de mamífero nativo de al menos 20 aminoácidos contiguos, al menos 30 aminoácidos contiguos, al menos 40 aminoácidos contiguos, al menos 50 aminoácidos contiguos, al menos 100 aminoácidos contiguos o al menos 150 aminoácidos contiguos; (f) un fragmento de un polipéptido IL-15Ra de mamífero nativo; y/o (g) un derivado de IL-15Ra específico descrito en este documento. Los derivados de IL-15Ra también incluyen un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de una forma madura de origen natural de un polipéptido IL-15Ra de mamífero y una secuencia de aminoácidos de un péptido señal heterólogo. En una realización, un derivado de IL-15Ra es un derivado de un polipéptido IL-15Ra humano nativo. En otra realización, un derivado de IL-15Ra es un derivado de una forma inmadura del polipéptido IL-15 humano de origen natural. En otra realización, un derivado de IL-15Ra es un derivado de una forma madura del polipéptido IL-15 humano de origen natural. En una realización, un derivado de IL-15Ra es una forma soluble de un polipéptido IL-15Ra de mamífero nativo. En otras palabras, en algunas realizaciones, un derivado de IL-15Ra incluye formas solubles de IL-15Ra de mamífero nativo, donde esas formas solubles no son de origen natural. Un ejemplo de una secuencia de aminoácidos de una forma soluble, truncada, de una forma inmadura del IL-15Ra humano nativo comprende el péptido señal siguiente (subrayado) y la forma truncada de IL-15Ra humano nativo siguiente (en cursiva): MAPRRARGCR TLGLPALLLL LLLRPPATRG ITCPPPMSVE HADIWVKSYS LYSRERYICN SGFKRKAGTS SLTECVLNKA TNVAHWTTPS LKCIRDPALV HQRPAPPSTV TTAGVTPQPE SLSPSGKEPA ASSPSSNNTA ATTAAIVPGS QLMPSKSPST GTTEISSHES SHGTPSQTTA KNWELTASAS HQPPGVYPQG HSDTT (SEQ ID NO: 4; FIG. 3B). Otros ejemplos de derivados de IL-15Ra incluyen las formas solubles, truncadas, del IL-15Ra humano nativo descrito en la Sección 5.1, infra. En una realización, un derivado de IL-15Ra se aísla o se purifica.
En una realización preferida, los derivados de IL-15Ra retienen al menos50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% de la función de un polipéptido IL-15Ra de mamífero nativo para unirse a un polipéptido IL-15, según se mide mediante ensayos bien conocidos en el área, por ejemplo ELISA, Biacore, coinmunoprecipitación. En otra realización preferida pre, los derivados de IL-15Ra retienen al menos 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% de la función de un polipéptido IL-15Ra de mamífero nativo para inducir la transducción de señal mediada por IL-15, según se mide mediante ensayos bien conocidos en el área, por ejemplo ensayos de cambio en la corrida electroforética, ELISA y otros inmunoensayos. En una realización, los derivados de IL-15Ra se unen a IL-15 según se evalúa por métodos bien conocidos en el área, como por ejemplo ELISA.
Según se usan en este documento, las expresiones "derivado de IL-15Ra" y "derivado del receptor alfa de la interleucina-15" en el contexto de ácidos nucleicos se refieren a: (a) una secuencia de ácido nucleico que es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de ácido nucleico de origen natural que codifica un polipéptido IL-15Ra de mamífero; (b) una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido que es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos de un polipéptido IL-15Ra de mamífero nativo; (c) una secuencia de ácido nucleico que contiene 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más mutaciones de ácido nucleico (es decir, adiciones, deleciones y/o sustituciones) con respecto a la secuencia de ácido nucleico de origen natural que codifica un polipéptido IL-15Ra de mamífero; (d) una secuencia de ácido nucleico que se hibrida bajo condiciones de rigurosidad de hibridación alta, moderada o típica a una secuencia de ácido nucleico de origen natural que codifica un polipéptido IL-15Ra de mamífero; (e) una secuencia de ácido nucleico que se hibrida bajo condiciones de rigurosidad de hibridación alta, moderada o típica a un fragmento de la secuencia de ácido nucleico de origen natural que codifica un polipéptido IL-15Ra de mamífero; (f) una secuencia de ácido nucleico que codifica un fragmento de una secuencia de ácido nucleico de origen natural que codifica un polipéptido IL-15Ra de mamífero; y/o (g) una secuencia de ácido nucleico que codifica un derivado de IL-15Ra específico descrito en este documento. En una realización, un derivado de IL-15Ra en el contexto de ácidos nucleicos es un derivado de una secuencia de ácido nucleico de origen natural que codifica un polipéptido IL-15Ra humano. En otra realización, un derivado de IL-15Ra en el contexto de ácidos nucleicos es un derivado de una secuencia de ácido nucleico de origen natural que codifica una forma inmadura de un polipéptido IL-15Ra humano. En otra realización, un derivado de IL-15Ra en el contexto de ácidos nucleicos es un derivado de una secuencia de ácido nucleico de origen natural que codifica una forma madura de un polipéptido IL-15Ra humano. En una realización, un derivado de IL-15Ra en el contexto de ácidos nucleicos se refiere a una secuencia de ácido nucleico que codifica un derivado de un polipéptido IL-15Ra de mamífero que es soluble. En algunas realizaciones, un derivado de IL-15Ra en el contexto de ácidos nucleicos se refiere
a una secuencia de ácido nucleico que codifica una forma soluble de IL-15Ra de mamífero nativo, donde la forma soluble no es de origen natural. En algunas realizaciones, un derivado de IL-15Ra en el contexto de ácidos nucleicos se refiere a una secuencia de ácido nucleico que codifica un derivado de IL-15Ra humano, donde el derivado del IL-15Ra humano es una forma soluble de IL-15Ra que no es de origen natural. Un ejemplo de una secuencia de ácido nucleico derivada de IL-15Ra es la secuencia de nucleótidos que codifica la forma inmadura, soluble, truncada, de una proteína o polipéptido IL-15Ra humano nativo que comprende la secuencia de nucleótidos siguiente que codifica el péptido señal (subrayado) y la secuencia de nucleótidos siguiente que codifica una forma truncada del IL-15Ra humano nativo maduro (en cursiva): atggcccc gcggcgggcg cgcggctgcc ggaccctcgg tctcccggcg ctgctactgc tgctgctgct ccggccgccg gcgacgcggg acatcacata ccctcccccc atgtccgtgg aacacgcaga catctgggtc aagagctaca gcttgtactc cagagagcaa tacatttgta actctggttt caagcgtaaa gccggcacgt ccagcctgac aaagtacgta ttgaacaagg ccacgaatgt cgcccactgg acaaccccca gtctcaaatg cattagagac cctgccctgg ttcaccaaaa accaacacca ccctccacaa taacaacaac aaaaataacc ccacaaccaa aaaacctctc cccttctaaa aaaaaaccca caacttcatc tcccaactca aacaacacaa caaccacaac aacaactatt atcccaaact cccaactaat accttcaaaa tcaccttcca caaaaaccac aaaaataaac agtcatgagt cctcccacgg caccccctct cagacaacag ccaagaactg ggaactcaca gcatccgcct cccaccagcc gccagatatg tatccacagg gccacagcga caccact(SEQ ID NO:6; FIG. 3A). En algunas realizaciones, una secuencia de ácido nucleico derivada de IL-15Ra se aísla o se purifica.
Las secuencias de ácido nucleico derivadas de IL-15Ra incluyen secuencias de ácido nucleico de codones optimizados que codifican el polipéptido IL-15Ra nativo, incluidas las formas madura e inmadura del polipéptido IL-15Ra. En otras realizaciones, los ácidos nucleicos derivados de IL-15Ra incluyen ácidos nucleicos que codifican transcritos de ARN de IL-15Ra que contienen mutaciones que eliminan posibles sitios de empalme y elementos de inestabILidad (por ejemplo, elementos ricos en A/T o A/U) sin afectar la secuencia de aminoácidos para aumentar la estabILidad de los transcritos de ARN de IL-15Ra. En algunas realizaciones, la secuencia de ácido nucleico derivada de IL-15Ra es la secuencia de codones optimizados en SEQ ID NO: 11, 13, 15 o 17 (las secuencias de aminoácidos codificadas por dichas secuencias de ácido nucleico se proporcionan en SEQ ID NO: 12, 14, 16 y 19, respectivamente).
En una realización preferida, las secuencias de ácido nucleico derivadas de IL-15Ra codifican proteínas o polipéptidos que retienen al menos 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% de la función de un polipéptido IL-15Ra de mamífero nativo para unirse a IL-15, según se mide mediante ensayos bien conocidos en el área, por ejemplo, ELISA, Biacore, coinmunoprecipitación. En otra realización preferida, las secuencias de ácido nucleico derivadas de IL-15Ra codifican proteínas o polipéptidos que retienen al menos 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% de la función de un polipéptido IL-15Ra de mamífero nativo para inducir la transducción de señal mediada por IL-15, según se mide mediante ensayos bien conocidos en el área, por ejemplo, ensayos de cambio en la corrida electroforética, ELISA y otros inmunoensayos. En una realización, las secuencias de ácido nucleico derivadas de IL-15Ra codifican proteínas o polipéptidos que se unen a IL-15 según se evalúa por métodos bien conocidos en el área, como por ejemplo ELISA.
Según se usan en este documento, las expresiones "IL-15Ra" y "receptor alfa de la interleucina-15" se refieren a un IL-15Ra nativo, un derivado de IL-15Ra o un IL-15Ra nativo y un derivado de IL-15Ra
Según se usa en este documento, la expresión "complejo IL-15/IL-15Ra" se refiere a un complejo que comprende IL-15 e IL-15Ra unidos covalente o no covalentemente entre sí. En una realización preferida, el IL-15Ra tiene una alta afinidad relativa por IL-15, por ejemplo, Kd de 10 a 50 pM según se mide mediante una técnica bien conocida en el área, por ejemplo, el ensayo KinEx A, resonancia de plasmones superficiales, (por ejemplo, ensayo BIAcore). En otra realización preferida, el complejo IL-15/IL-15Ra induce la transducción de señal mediada por IL-15, según se mide mediante ensayo bien conocidos en el área, por ejemplo, ensayo de cambio en la corrida electroforética, ELISA y otros inmunoensayos. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra conserva la capacidad de unirse específicamente a la cadena Py. En una realización, el complejo IL-15/IL-15Ra se aísla de una célula.
Según se usa en este documento, los términos "sujeto" y "paciente" se usan indistintamente y se refieren a un mamífero como un no primate (por ejemplo, vacas, cerdos, caballos, gatos, perros, ratas, etc.) y a un primate (por ejemplo, monos y humanos), muy preferentemente a un humano
Según se usan en este documento, los términos "purificado" y "aislado" en el contexto de un compuesto o agente (incluidos, por ejemplo, agentes proteínicos) que es sintetizado químicamente se refiere a un compuesto o agente que está sustancialmente exento de precursores químicos u otros productos químicos cuando se sintetiza químicamente. En una realización, el compuesto o agente está 60%, 65%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, o 99% exento (en peso seco) de otros compuestos o agentes diferentes.
Según se usan en este documento, los términos "purificado" y "aislado" cuando se usan en el contexto de un compuesto o agente (incluidos agentes proteínicos como polipéptidos) que se pueden obtener de una fuente natural, por ejemplo, células, se refieren a un compuesto o agente que está sustancialmente exento de materiales contaminantes de la fuente natural, por ejemplo partículas del suelo, minerales, productos químicos del ambiente y/o materiales celulares de la fuente natural, como, pero no exclusivamente, residuos celulares, materiales de la pared celular, membranas, organelos, la mayor parte de los ácidos nucleicos, carbohidratos, proteínas, y/o lípidos presentes en las células. La frase "sustancialmente exentas de materiales de la fuente natural" se refiere a preparaciones de un compuesto o agente que
ha sido separado del material (por ejemplo, componentes celulares de las células) del cual se aísla. Por lo tanto, un compuesto o agente que se aísla incluye preparaciones de un compuesto o agente que tienen menos de aproximadamente 30%, 20%, 10%, 5%, 2% o 1% (en peso seco) de materiales celulares y/o materiales contaminantes.
Una secuencia de ácido nucleico o secuencia de nucleótidos "aislada" es una que se separa de otras moléculas de ácido nucleico que están presentes en una fuente natural de la secuencia de ácido nucleico o secuencia de nucleótidos. Además, una secuencia de ácido nucleico o secuencia de nucleótidos "aislada", como una molécula de ADNc, puede estar sustancialmente exenta de otro material celular o medio de cultivo cuando se produce mediante técnicas de recombinación, o sustancialmente exenta de precursores químicos cuando se sintetiza químicamente. En ciertas realizaciones, una secuencia de ácido nucleico o secuencia de nucleótidos "aislada" es una secuencia de ácido nucleico o secuencia de nucleótidos que es expresada de manera recombinante en una célula heteróloga.
En algunas realizaciones, las expresiones "ácido nucleico", "nucleótido" y "polinucleótido" se refieren a desoxirribonucleótidos, ácidos desoxirribonucleicos, ribonucleótidos y ácidos ribonucleicos, y sus formas poliméricas, e incluyen formas monocatenarias o bicatenarias. En ciertas realizaciones, dichos términos incluyen análogos conocidos de nucleótidos naturales, por ejemplo, ácidos nucleicos peptídicos ("ANP"), que tienen propiedades de unión simILares a las del ácido nucleico de referencia En algunas realizaciones, dichos términos se refieren a ácidos desoxirribonucleicos (por ejemplo, ADNc o ADN). En otras realizaciones, dichos términos se refieren al ácido ribonucleico (por ejemplo, ARNm o ARN).
Según se usan en este documento, los términos "terapias" y "terapia" se pueden referir a cualquiera de uno o más protocolos, métodos, composiciones, formulaciones y/o agentes, que se pueden utILizar en la prevención, el tratamiento, el manejo, o la mejora de una enfermedad, por ejemplo, cáncer, enfermedad infecciosa, linfopenia e inmunodeficiencias o de un síntoma asociado a ella. En ciertas realizaciones, los términos "terapias" y "terapia" se refieren a la terapia biológica, la terapia de soporte y/u otras terapias útILes en el tratamiento, el manejo, la prevención o la mejora de una enfermedad o de un síntoma asociado a ella conocida por un experto en la materia. En una realización, una terapia incluye un Agente Terapéutico. En otra realización, una terapia no es un Agente Terapéutico.
Según se usan en este documento, los términos "proteína(s)" y "polipéptido(s)" se refieren indistintamente a una cadena de aminoácidos unidos entre sí por enlaces peptídicos. En algunas realizaciones, los términos "proteína(s)" y "polipéptido(s)" se refieren a una macromolécula que comprende aminoácidos que están unidos entre sí por enlaces peptídicos.
Según se usa en este documento, el término "fragmento" en el contexto de una secuencia de nucleótidos se refiere a la secuencia de nucleótidos que consiste en una secuencia de ácido nucleico de al menos 5 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 10 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 15 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 20 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 25 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 40 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 50 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 60 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 70 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 80 bases de nucleico contiguas, al menos 90 bases de nucleico contiguas, al menos 100 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 125 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 150 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 175 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 200 bases de ácido nucleico contiguas,al menos 250 bases de ácido nucleico contiguas de la secuencia de nucleótidos del gen de interés, por ejemplo, IL-15, IL-15Ra. El ácido nucleico puede ser ARN, ADN o una de sus variantes modificadas químicamente. En una realización el fragmento es un fragmento de IL-15 o IL-15Ra.
Según se usa en este documento, el término "fragmento" en el contexto de un fragmento de un agente proteínico (por ejemplo, una proteína o polipéptido) se refiere a un fragmento que está compuesto por 8 o más aminoácidos contiguos, 10 o más aminoácidos contiguos, 15 o más aminoácidos contiguos, 20 o más aminoácidos contiguos, 25 o más aminoácidos contiguos, 50 o más aminoácidos contiguos, 75 o más aminoácidos contiguos, 100 o más aminoácidos contiguos, 150 o más aminoácidos contiguos, 200 o más aminoácidos contiguos, 10 a 150 aminoácidos contiguos, 10 a 200 aminoácidos contiguos, 10 a 250 aminoácidos contiguos, 10 a 300 aminoácidos contiguos, 50 a 100 aminoácidos contiguos, 50 a 150 aminoácidos contiguos, 50 a 200 aminoácidos contiguos, 50 a 250 aminoácidos contiguos o 50 a 300 aminoácidos contiguos de un agente proteínico, por ejemplo los polipéptidos IL-15 e IL-15Ra.
Según se usa en este documento, la expresión "en combinación" se refiere al uso de más de una terapia (por ejemplo, uno o más agentes profILácticos y/o terapéuticos). El uso de la expresión "en combinación" no restringe el orden en el cual se administran las terapias a un sujeto con una enfermedad o trastorno. Una primera terapia (por ejemplo, un agente profILáctico o terapéutico) se puede administrar antes de (por ejemplo, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas o 12 semanas antes), conjuntamente con, o posteriormente a (por ejemplo, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas o 12 semanas después) la administración de la segunda terapia (por ejemplo, un agente profILáctico o terapéutico) a un sujeto con una enfermedad o un trastorno o uno de sus síntomas.
Según se usa en este documento, la expresión "célula hospedadora" se refiere a cualquier tipo de célula, por ejemplo una célula primaria o una célula de una línea celular. En algunas realizaciones, la expresión "célula hospedadora" se refiere a una célula transfectada con una molécula de ácido nucleico y a la progenie o potencial progenie de dicha célula. La progenie de dicha célula puede no ser idéntica a la célula progenitora transfectada con la molécula de ácido nucleico debido a mutaciones o influencias del ambiente que se pueden producir en las generaciones sucesivas o la integración de la molécula de ácido nucleico en el genoma de la célula hospedadora.
Según se usa en este documento, la expresión "Célula(s) Genomanipulada(s)" se refiere a una célula hospedadora que expresa de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra descrito en este documento (por ejemplo, Sección 3.1, supra, Sección 5.1 y/o Sección 5.2, infra), o una célula hospedadora que expresa de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra descrito en este documento (por ejemplo, Sección 3.1, supra, Sección 5.1 y/o Sección 5.2, infra) y un polipéptido IL-15. Una o más Células Genomanipuladas se pueden producir como se describe en la Sección 5.3.2 infra, y una o más Células Genomanipuladas se pueden utILizar como se describe en las Secciones 5.3.2, 5.6 a 5.9 y 5.11, infra.
Según se usa en este documento la expresión "lactante humano prematuro" se refiere a un lactante humano nacido con menos de 37 semanas de edad gestacional.
Según se usa en este documento, la expresión "lactante humano" se refiere a un ser humano de recién nacido a 1 año de edad.
Según se usa en este documento, la expresión "niño humano" se refiere a un ser humano de 1 año a 18 años de edad. Según se usa en este documento, la expresión "adulto humano" se refiere a un ser humano de 18 años de edad o mayor. Según se usa en este documento, la expresión "anciano humano" se refiere a un ser humano de 65 años de edad o mayor.
Según se usan en este documento, las expresiones "tratar", "que trata" y "tratamiento", en el contexto de la administración de una terapia a un sujeto, se refieren a los efectos beneficiosos que un sujeto obtiene de una terapia. Los ejemplos no limitantes de dichos beneficios incluyen la disminución o inhibición del avance, la diseminación y/o la duración de una enfermedad o un trastorno, la disminución o la mejora de la gravedad de una enfermedad o un trastorno, la mejora de uno o más síntomas de una enfermedad o un trastorno y/o la disminución de la duración de uno o más síntomas de una enfermedad o un trastorno, como resultado de la administración de una o más terapias.
Según se usan en este documento, las expresiones "prevenir", "que previene" y "prevención", en el contexto de la administración de una terapia a un sujeto, se refieren a la inhibición del inicio o la reaparición de una enfermedad o un trastorno en un sujeto.
Según se usan en este documento, las expresiones "manejar "que maneja" y "manejo", en el contexto de la administración de una terapia a un sujeto, se refieren a los efectos beneficiosos que un sujeto obtiene de una terapia, que no resultan en la cura de una enfermedad o un trastorno. En ciertas realizaciones, a un sujeto se le administra una o más terapias para "manejar" una enfermedad o un trastorno de modo de prevenir el avance o el empeoramiento de los síntomas asociados a una enfermedad o un trastorno.
Según se usan en este documento, las expresiones "se une inmunoespecíficamente" y "se une específicamente" en el contexto de anticuerpos se refieren a moléculas que se unen específicamente a un antígeno (por ejemplo, un epítopo o un complejo inmunitario) y no se unen específicamente a otra molécula. Una molécula que se une específicamente a un antígeno puede unirse a otros antígenos con una afinidad menor según se determina mediante, por ejemplo, inmunoensayos, BIAcore u otros ensayos conocidos en el área. En una realización específica, las moléculas que se unen a un antígeno no presentan reacción cruzada con otros antígenos.
Cuando una dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra es mencionada en este documento, la dosis está de acuerdo con la masa de IL-15 monocatenaria. El equivalente de IL-15 monocatenaria se calcula a partir de (i) la masa de un complejo IL-15/IL-15Ra mediante análisis de aminoácidos y (ii) la relación entre IL-15 e IL-15Ra (por ejemplo, IL-15Ra soluble) en la preparación específica según se determina experimentalmente mediante RP-HPLC o mediante análisis de aminoácidos.
4. DESCRIPCIÓN BREVE DE LOS DIBUJOS
Figuras. 1A-B: Secuencias de ácido nucleico y aminoácidos de IL-15 humana nativa. Se muestran la secuencia de ácido nucleico (FIG. 1A) (SEQ ID NO: 2) y la secuencia de aminoácidos (FIG. 1B) (SEQ ID NO: 1). Se indican la secuencia de aminoácidos y la secuencia de ácido nucleico del péptido señal largo (subrayado) y de la forma madura (en cursiva). Figuras 2A-B: Secuencias de ácido nucleico y aminoácidos de IL-15Ra humano nativo de longitud completa. Se muestran la secuencia de ácido nucleico (FIG. 2A) (SEQ ID NO: 5) y la secuencia de aminoácidos (FIG. 2B) (SeQ ID NO: 3). Se
indican la secuencia de aminoácidos y la secuencia de ácido nucleico del péptido señal (subrayado) y de la forma madura (en cursiva).
Figuras 3A-B: Secuencias de ácido nucleico y aminoácidos de una forma soluble de IL-15 humana. Se muestran la secuencia de ácido nucleico (FIG. 3A) (SEQ iD NO: 6) y la secuencia de aminoácidos (FIG. 3B) (SEQ ID NO: 4). Se indican la secuencia de aminoácidos y la secuencia de ácido nucleico del péptido señal (subrayado) y de la forma madura (en cursiva).
Figura 4A-D. Declinación en el tiempo de la concentración plasmática de IL-15 y AUC para los niveles plasmáticos de IL-15 después de inyecciones i.v. y s.c. (A) Declinación en el tiempo de la concentración plasmática de IL-15 después de una inyección i.v. Se inyectó a tres macacos por vía i.v. IL-15 monomérica derivada de E.coli (línea con triángulos) o IL-15/IL-15Ra heterodimérico (líneas con cuadrados) en las dosis indicadas. Se extrajo sangre en los tiempos indicados y se determinaron los niveles plasmáticos de IL-15 por ELISA. (B) Declinación en el tiempo de la concentración plasmática de IL-15 después de una inyección s.c. Se inyectó a dos macacos por vía s.c. IL-15/sIL-15Ra heterodimérico en una dosis de 5 pg/kg. Se extrajo sangre en los tiempos indicados y se determinaron los niveles plasmáticos de IL-15 por ELISA. (C) AUC para los niveles plasmáticos de IL-15 después de inyecciones i.v. y s.c. Se determinaron las AUC para cuatro macacos recibieron inyecciones de las formulaciones de IL-15 indicadas en una dosis de 5 pg/kg. Las primeras tres barras se refieren a los macacos que recibieron heterodímero de IL-15/IL-15Ra por vía s.c. o i.v. La última barra se refiere al macaco que recibió IL-15 monomérica por vía i.v. Se extrajo sangre en un período de 72 horas después de la inyección y se determinaron los niveles plasmáticos de IL-15 por ELISA. Se calculó AUC utILizando el paquete de software Prism. (D) Administración i.v. versus s.c. en macacos (5 pg/kg). Farmacocinética de la administración s.c. del heterodímero de IL-15 en comparación con la misma cantidad de heterodímero de IL-15 administrado i.v. También se muestra la administración de la misma concentración de IL-15 producida por E. coli (línea con triángulos).
Figura 5. Diseño del estudio que muestra dos ciclos de tratamiento de 5 dosis s.c. de IL-15/sIL-15Ra o IL-15/IL-15RaFc en macacos.
Figura 6. Niveles plasmáticos de IL-15 después de la inyección i.v. repetida de IL-15/IL-15Ra. Dos macacos (P571 y M575) recibieron diariamente 12 inyecciones i.v. de IL-15/IL-15Ra en una dosis de 2 pg/kg. Se extrajo sangre en diferentes momentos después de la primera y la segunda inyecciones y los niveles plasmáticos de IL-15 se determinaron por ELISA
Figura 7. Niveles plasmáticos de IL-15 después de la inyección s.c. de formas de IL-15/IL-15Ra. Farmacocinética de formas heterodiméricas de IL-15 en macacos cuando se administran por vía s.c. a razón de 5 pg/kg.
Figura 8. Niveles plasmáticos de IL-15 después de la inyección s.c. repetida de IL-15/IL-15Ra. Dos macacos (P572 y M695) recibieron 5 inyecciones s.c. de IL-15/IL-15Ra en la dosis de 5 pg/kg cada 3 días. Después de un período de descanso de dos meses, se llevó a cabo un segundo ciclo de tratamiento idéntico al primero. Las flechas indican el tiempo de las inyecciones de IL-15/IL-15Ra. Se extrajo sangre en diferentes momentos después de cada inyección y los niveles plasmáticos de IL-15 se determinaron por ELISA y se graficaron en función del tiempo después de la iniciación del primer ciclo de tratamiento.
Figura 9. Niveles plasmáticos de IL-15 después de inyecciones s.c. repetidas de IL-15/IL-15RaFc. Niveles plasmáticos de IL-15 de dos macacos según se miden por ELISA después de inyecciones s.c. Dos macacos (P570 y P574) recibieron 5 pg/kg de peso corporal de heterodímeros de IL-15 cada 3er día (5 inyecciones s.c.). Se completaron dos ciclos de tratamiento de 2 semanas. Las flechas indican el tiempo de las inyecciones de IL-15/IL-15RaFc.
Figura 10. Expresión de Ki-67 en linfocitos NK, T CD4+, T CD8+ y T gamma/delta después de inyecciones s.c. repetidas de IL-15/IL-15Ra a razón de 5 pg/kg. Se obtuvieron los recuentos de células mononucleares de sangre periférica de los macacos M695 y P572 en los tiempos indicados después de la iniciación del primer ciclo de tratamiento y se examinaron para determinar la expresión intracelular del marcador proliferativo Ki-67 dentro de los subconjuntos de linfocitos NK (CD3-CD16+), linfocitos T CD4+ (CD3+CD4+), linfocitos T CD8+ (CD3+CD8+) y linfocitos T gamma/delta (CD3+gamma/delta+). Se muestra el porcentaje (%) de linfocitos Ki-67+ en cada subconjunto en los tiempos indicados.
Figura 11. IL-15/sIL-15Ra e IL-15/IL-15RaFc inducen una proliferación simILar de linfocitos NK y T. Mayor proliferación de subconjuntos de linfocitos después de un único ciclo de dos semanas de inyecciones de IL-15 por vía s.c. (cada tercer día como se indica en Fig. 1). Dos animales recibieron inyecciones de heterodímero de IL-15 nativo purificado y a dos animales la fusión IgG1 Fc del heterodímero por medio del IL-15Ra (se usaron los macacos M695, P572, P574 y P570). Se analizaron los subconjuntos de linfocitos mediante citometría de flujo multiparámetro los días 0, 2, 7 y 14 como se indica. Se muestra el porcentaje (%) de linfocitos Ki-67+ en cada subconjunto en los tiempos indicados.
Figura 12. Los ciclos de tratamiento repetidos con IL-15/sIL-15Ra dieron como resultado una expansión máxima simILar de linfocitos NK. Actividad biológica del heterodímero de IL-15 después de dos ciclos de inyecciones s.c. Durante ambos ciclos los niveles de linfocitos NK en reproducción aumentaron los días 7 y 13 o 14. La reproducción de linfocitos NK fue inducida más temprano durante el segundo régimen de IL-15 (día 2). Se muestra el porcentaje (%) de linfocitos Ki-67+ en cada subconjunto en los tiempos indicados.
Figura 13. La proliferación de células NK después del 1er y 2o ciclo de IL-15/IL-15RaFc refleja los niveles plasmáticos de IL-15. Se muestra el porcentaje (%) de linfocitos Ki-67+ en cada subconjunto en los tiempos indicados.
Figura 14A-C. Expresión de Ki-67 en linfocitos T vírgenes (Tn) CD8+ y CD4+, linfocitos T memoria centrales (Tcm) y linfocitos T memoria efectores (Tem), después de inyecciones s.c. repetidas de IL-15/IL-15Ra a razón de 5 pg/kg. Se obtuvieron los recuentos de células mononucleares de sangre periférica de los macacos M695 (cuadrados) y P572 (triángulos) en los tiempos indicados después de la iniciación del primer ciclo de tratamiento y se examinaron para determinar la expresión intracelular del marcador proliferativo Ki-67 dentro de los subconjuntos de linfocitos Tn (CD95-CD28+) CD4+ y CD8+, Tcm (CD95+CD28+) y Tem (CD95+CD28-). (A) Datos representativos de los linfocitos T c D8+ en el macaco M695 que recibió 5 inyecciones s.c. de heterodímero de IL-15/IL-15Ra a razón de 5 pg/kg cada 3 días. El panel izquierdo muestra la distribución del pretratamiento de los subconjuntos TN CD8+, TCM y TEM. El panel derecho muestra la misma distribución el día 7 después de la primera inyección de IL-15/sIL-15Ra. Los paneles en el medio muestran la frecuencia pretratamiento y el día 7 de los linfocitos Ki-67+ en cada población cerrada. (B) Se muestra el porcentaje (%) de linfocitos Ki-67+ en cada subconjunto en los tiempos indicados. (C) Los heterodímeros de IL-15 se dirigen a los linfocitos T CD8 memoria tanto centrales como efectores y principalmente a los linfocitos T CD4 memoria efectores. Se presentan los datos de los macacos M695, P572, P570 y P574. Se muestra el porcentaje (%) de linfocitos Ki-67+ en cada subconjunto en los tiempos indicados.
Figura 15A-B. Desarrollo de anticuerpos anti-IL-15Ra humano después de inyecciones s.c. repetidas de IL-15/IL-15Ra (véanse A y B). Se cargaron las cantidades indicadas de IL-15/IL-15Ra en un gel de poliacrILamida al 12% y las proteínas desnaturalizadas se transfirieron a membranas de nitrocelulosa. La membrana se hibridó con plasma de mono en las dILuciones indicadas utILizando una muestra de pretratamiento y una muestra correspondiente al día 22 después del segundo ciclo de tratamiento con IL-15/IL-15Ra.
Figura 16. Niveles plasmáticos de IL-15 después de la inyección s.c. repetida de IL-15/IL-15Ra. Ocho macacos recibieron 6 inyecciones s.c. de IL-15/IL-15Ra en la dosis de 5 pg/kg los días 0, 2, 4, 7, 9 y 12. Después de un período de descanso de un mes, se llevó a cabo un segundo ciclo de tratamiento idéntico al primero. Se extrajo sangre en diferentes momentos después de cada inyección y los niveles plasmáticos de IL-15 se determinaron por ELISA y se graficaron en función del tiempo después de la iniciación del tratamiento. Las líneas con forma de diamante representan la mediana.
Figura 17. Niveles plasmáticos máximos y mínimos de heterodímeros de IL-15. Niveles plasmáticos en 8 macacos inoculados con 5 pg/kg de peso corporal de heterodímero de IL-15. Los niveles máximos son 6 horas post inyección. 0 indica los niveles antes de la primera inyección. Los niveles mínimos dos días después de la inoculación disminuyeron con el tiempo.
Figura 18. Tensión arterial media en 8 macacos que recibieron cada 2 días inyecciones de 5 pg/kg de peso corporal de heterodímero de IL-15. La línea con círculos = heterodímero de IL-15. La línea con cuadrados = controles.
Figura 19. Temperatura corporal del macaco después de la inyección de heterodímero de IL-15 (5 pg s.c.). Temperatura corporal de 8 macacos que recibieron cada 2 días inyecciones s.c. de 5 pg/kg de peso corporal de heterodímero de IL-15. El grupo de 8 macacos se comparó con 8 controles que recibieron inyecciones de solución salina. Se agruparon todas las mediciones de los IL-15 (+) y los controles (-) en el momento de la inyección (0) y 6 horas más tarde (6). En la parte inferior, se muestran inyecciones secuenciales para los grupos de IL-15 y de control. No se detectaron diferencias congruentes.
Figura 20. Representación esquemática de IL-15Ra maduro. Se muestran los diferentes dominios de IL-15Ra maduro (no se incluye el péptido señal). El dominio sushi forma 2 enlaces disulfuro y se caracteriza por varios sitios de N- y O-glicosILaciónn (HexNAc en Ser 8, 18, 20, 23 y 31 como se informa en Fig. 26 y 29). El dominio rico en Pro/Thr contiene O-glicosILación en Thr156 o Ser158 (como se informa en Fig. 28). sIL-15Ra truncado comprende 175 aa. sIL-15Ra escindido naturalmente de ambos clones 19.7 y 1.5 comprende 170 aa; la flecha indica el sitio de escisión después de la expresión de IL-15Ra en la membrana celular.
Figura 21. Producción estable de heterodímeros de IL-15/sIL-15Ra del clon 19.7. A. Se evaluaron las cosechas diarias del clon 19.7 con respecto a las cantidades de IL-15 por ELISA. Los resultados de ELISA muestran una producción estable de IL-15/sIL-15Ra durante 150 días en cultivo. B. Análisis RP-HPLC de los sobrenadantes del clon 19.7 en el tiempo. Las flechas indican los máximos correspondientes para sIL-15Ra e IL-15.
Figura 22. Producción y purificación de IL-15/sIL-15Ra humano. A. Purificación por HPLC de heterodímeros de IL-15/sIL-15Ra de la línea celular humana 19.7 derivada de HEK293. B. Las proteínas se eluyeron de la columna y se analizaron por SDS-PAGE. C. Después de la purificación final (véanse Figuras 23A, B, C y D) IL-15, sIL-15Ra y el heterodímero de IL-15/sIL-15Ra reconstituido (en una relación molar 1:1) se visualizaron en PAGe nativa.
Figura 23. Purificación adicional de sIL-15Ra y IL-15 del clon 19.7. La purificación por HPLC de sIL-15Ra Fx1-3 (Figura 22) e IL-15 Fx4-13 (Figura 22) se realizó en una columna de 16 x 100 mm POROS R2/10 (A y C, respectivamente) y las proteínas eluidas se analizaron por SDS-PAGE (B y D, respectivamente).
Figura 24. Separación de péptidos por HPLC después de la digestión con LysC de sIL-15Ra purificado escindido naturalmente en condiciones no reductoras. sIL-15Ra del clon celular 19.7 fue digerido por la proteasa Lys-C y los péptidos se separaron por HPLC. Las fracciones se analizaron con el secuenciador de proteínas de Applied Biosystems Inc. 477 A. Las secuencias identificadas mostradas en el inserto también se confirmaron por MALDI-TOF MS.
Figura 25. Análisis MS de la fracción de HPLC que contiene el péptido C-terminal de sIL15Ra. MALDI-TOF MS reveló la presencia de varios péptidos con m/z próxima (2020,927) o mayor (2056,934, 2308,082, 2365,108, 2455,138, 2770,224) a la esperada para el péptido con secuencia NWElTa s As HQPPGVYPQG (teórica [M+H]+ 2038.962) que se determinó por análisis de secuencia de proteínas de esta fracción.
Figura 26. Análisis MALDI-TOF MS/MS de péptidos detectados en la fracción que contiene el péptido C-terminal. Los espectros del fragmento de m/z 2020,927 (A), 2056,934 (B), 2365,108 (C), 2770,224 (D) (así como 2308,082 y 2455,138, que no se muestran) contienen iones fragmento b e y comunes lo que sugiere que corresponden al mismo péptido con diferentes modificaciones postraduccionales, muy probablemente O-glicosILación de Thr5(156) y Ser7(158). Dado que todos estos péptidos fueron modificados, la búsqueda Mascot MS/MS de iones de datos de bases de datos de proteínas (SwissProt) se realizó usando la masa teórica del péptido esperado sin modificar NWELTASASHQPPGVYPQG (2038.962) como ion "progenitor" en vez de una m/z experimental. La especificidad de la enzima se fijó como "semitripsina". El panel D muestra iones fragmento con diferencias de masa iguales a las masas de N-acetILhexosamina (NAc) y hexosa (Hex). La presencia de estos iones fragmento sugiere que el péptido está, de hecho, O-glicosILado.
Figura 27. Determinación de la masa molecular de sIL15Ra escindido naturalmente purificado por HPLC. Espectro MALDI-TOF MS de sIL-15Ra purificado en Voyager De-Pro equipado con detector de masa alta CovalX HM-1 utILizando ácido sinápico como matriz.
Figura 28. La asociación con sIL-15Ra aumenta la semivida in vivo de IL-15 humana en ratón. Se inyectaron a 5 ratones por grupo cantidades equimolares de IL-15 monocatenaria de E. coli, IL-15 monocatenaria derivada de células HEK293 humanas o heterodímero de IL-15/sIL-15Ra (3 gg de equivalente de IL-15/ratón, i.p.). Se extrajo sangre de los ratones en el tiempo (0,5, 2, 6 y 24 h después del tratamiento), se evaluaron los niveles plasmáticos de IL-15 por ELISA y se informaron como la media ± DE.
Figura 29. Identificación de la modificación HexNAc en el péptido N-terminal de sIL15-Ra escindido naturalmente (ITCPPPMSVEHADIWVK). Espectro MALDI-TOF MS/MS de m/z 2126,150 de la fracción 39. A. La búsqueda Mascot MS/MS de iones con el ion progenitor fijado en 1922,950 identificó los fragmentos N-terminal y C-terminal correspondientes al péptido ITCPPPMSVEHADIWVK. B. Análisis del espectro en BioTools con modificación HexNAc en Ser8. C. Análisis del espectro con modificación HexNAc en Thr2.
Figura 30. Identificación de residuos Ser en la parte N-terminal de sIL-15Ra escindido naturalmente modificado por HexNAc. Análisis del espectro ISD MALDI-TOF MS de sIL15-Ra escindido naturalmente purificado por HPLC. A. Sin modificaciones; modificaciones HexNAc en: B. Ser8; C. Ser18; D. Ser20; E. Ser23; F. Ser31.
Figura 31. El heterodímero de IL-15/sIL-15Ra es bioactivo in vivo. A. El heterodímero de IL-15/sIL-15Ra es más potente que IL-15 monocatenaria: Proliferación de linfocitos in vivo. 12 horas después de la transferencia de esplenocitos marcados con CFSE (20 x 106), los ratones se trataron i.p. con PBS (3 ratones); con 3 gg de IL-15 (3 ratones); o con una cantidad equimolar de IL-15/sIL-15Ra (3 ratones, 3 gg en IL-15 monocatenaria). Se analizaron los linfocitos T CD8+ (paneles superiores) y los linfocitos NK (paneles inferiores) el día 4 por citometría de flujo para medir la fluorescencia de CFSE. Se muestra un ratón representativo por grupo. B. IL-15Ra contribuye a la actividad superior de los heterodímeros de IL-15. Se trataron los ratones i.p. con PBS (3 ratones), con 3 gg de IL-15 monocatenaria derivada de E.coli (5 ratones), con 3 gg de IL-15 monocatenaria derivada de células HEK293 humanas (5 ratones) o con una cantidad equimolar de IL-15/sIL-15Ra (5 ratones, 3 gg en IL-15 monocatenaria). Se muestra la frecuencia de linfocitos T CD8+ (paneles izquierdos) y linfocitos NK (panel derecho) que expresan el marcador proliferativo Ki-67. Se muestran cada animal y el promedio para cada grupo. **, p<0,01; ***, p<0,001; ns, no significativo. C. Diferentes lotes de heterodímero de IL-15/sIL-15Ra purificado del clon 1.5 indujeron niveles simILares de proliferación en linfocitos T CD8+ esplénicos. Los ratones se trataron i.p. con PBS o con 3 gg de IL-15/sIL-15Ra (clon 1.5 lote A) o 3 gg de IL-15/sIL-15Ra (clon 1.5 lote B). Se evaluaron esplenocitos aislados el día 3 por citometría de flujo para determinar la presencia del marcador de proliferación Ki67. Se muestra el porcentaje de linfocitos Ki67+ dentro de la población de linfocitos T CD8+. Se muestra un ratón representativo por grupo (3 ratones/grupo).
Figura 32. Temperatura corporal del macaco y tensión arterial media en 8 macacos antes y después de inyecciones s.c. repetidas de 5 gg/kg de peso corporal de heterodímero de IL-15 vs. 8 macacos como controles antes y después de inyecciones s.c. repetidas de solución salina. Los 16 macacos recibieron 6 inyecciones s.c. de IL-15/IL-15Ra en una dosis de 5 gg/kg o solución salina los días 0, 2, 4, 7, 9 y 11. Después de un período de descanso, se llevó a cabo un segundo
ciclo de tratamiento idéntico al primero. Se midieron la tensión arterial y la temperatura antes y después de las inyecciones repetidas y se graficaron.
Figura 33. Niveles plasmáticos de IL-15 durante los dos tratamientos en 8 macacos que recibieron inyecciones de heterodímero de IL-15. Se extrajo sangre en diferentes momentos después de cada inyección y los niveles plasmáticos de IL-15 se determinaron por ELISA y se graficaron en función del tiempo después de la iniciación del tratamiento. Figura 34. Recuentos de linfocitos Nk y CD8 T después de la administración repetida de heterodímeros de IL-15. Se tomaron muestras de células mononucleares de sangre periférica de los macacos antes, durante y después de la administración de IL-15, se tiñeron con anticuerpos que se unían a CD3, CD4, CD8 y CD16, y se examinaron por citometría de flujo. Los datos para los linfocitos T CD3+CD8+ (Figura 34A) y los linfocitos NK CD3-CD16+CD8+ (Figura 34B) se muestran como el número absoluto de linfocitos de cada subconjunto por pl de sangre en los tiempos indicados. Triángulos: heterodímero de IL-15; cuadrados: control.
Figura 35. La relación de linfocitos T CD8/CD4 en la sangre así como en diferentes tejidos, incluidos médula ósea, bazo, hígado, ganglios linfáticos inguinales, ganglios linfáticos mesentéricos, en los días de las autopsias (días 41/42 y 73/74).
Figura 36. Niveles plasmáticos de IL-15 en 6 macacos que recibieron inyecciones de heterodímero de IL-15 en dosis crecientes de 1 pg/kg, 20 pg/kg y 50 pg/kg. Los 6 macacos recibieron 6 inyecciones s.c. de IL-15/IL-15Ra en dosis de 1 pg/kg, 20 pg/kg o 50 pg/kg (los días 0, 2, 4, 7, 9 y 11). Grupo 1: 50 pg/kg de IL-15/sIL-15Ra; Grupo 2: 20 pg/kg de IL-15/sIL-15Ra; Grupo 3: 1 pg/kg de IL-15/sIL-15Ra. Cuadrados: 50 pg/kg; triángulos: 20 pg/kg; círculos: 1 pg/kg.
Figura 37. Aumento sobre el valor basal de linfocitos NK y linfocitos T CD8 en sangre periférica en 6 macacos que recibieron inyecciones de heterodímero de IL-15 en dosis crecientes de 1 pg/kg, 20 pg/kg y 50 pg/kg. Grupo 1: 50 pg/kg de IL-15/sIL-15Ra; Grupo 2: 20 pg/kg de IL-15/sIL-15Ra; Grupo 3: 1 pg/kg de IL-15/sIL-15Ra. Cuadrados: 50 pg/kg; triángulos: 20 pg/kg; círculos: 1 pg/kg.
Figura 38. Proliferación de linfocitos, dependiente de la dosis, en diferentes tejidos, incluidos ganglios linfáticos, hígado, células mononucleares de sangre periférica y bazo, después de la administración s.c. de heterodímero de IL-15. Cuadrados: 50 pg/kg; triángulos: 20 pg/kg; círculos: 1 pg/kg.
Figura 39. IL-15 redujo el injerto de tumor de pulmón de células B16 de melanoma en ratones. Se administraron 9 pg de IL-15 o complejo IL-15/IL-15Ra soluble a los ratones los días 1,6 y 11 mediante inyecciones i.p.
Figura 40. Se inyectaron a ratones tipo sILvestre e IL-15 -/- C57BL/63 x 105 células MC38 de carcinoma de colon por vía subcutánea y se siguió el crecimiento del tumor a lo largo del tiempo
Figura 41. Se inyectaron a ratones C57BL/6 tipo sILvestre 3 x 105 células MC38 de carcinoma de colon por vía s.c. y una semana más tarde se trataron con dos formulaciones de IL-15 diferentes. Se siguió el crecimiento del tumoral a lo largo del tiempo. Triángulo: IL-15 derivada de E. coli; cuadrados: PBS; círculos: IL-15/IL-15Ra soluble.
5. DESCRIPCIÓN DETALLADA
5.1 Formas de IL-15Ra
En este documento se describe la forma soluble de origen natural de IL-15Ra humano. También se describen derivados específicos de IL-15Ra que son formas solubles, truncadas, de IL-15Ra humano. Estos derivados específicos de IL-15Ra y la forma soluble de origen natural de IL-15Ra humano se basan, en parte, en la identificación del sitio de escisión proteolítica de IL-15Ra humano. También se describen en este documento las formas solubles de IL-15Ra que se caracterizan basándose en la glicosILación del IL-15Ra.
Como se muestra en el Ejemplo 4, infra, los inventores descubrieron que la escisión proteolítica de IL-15Ra humano unido a membrana tiene lugar entre Gly170 e His171 en IL-15Ra humano. Por lo tanto, la escisión proteolítica de IL-15Ra humano tiene lugar entre los residuos (es decir, Gly170 e His171) que se muestran en negrita y subrayados en la secuencia de aminoácidos provista de la forma inmadura del IL-15Ra humano nativo de longitud completa: MAPRRARGCR TLGLPALLLL LLLRPPATRG ITCPPPMSVE HADIWVKSYS LYSRERYICN SGFKRKAGTS SLTECVLNKA TNVAHWTTPS LKCIRDPALV HQRPAPPSTV TTAGVTPQPE SLSPSGKEPA ASSPSSNNTA ATTAAIVPGS QLMPSKSPST GTTEISSHES SHGTPSQTTA KNWELTASAS HQPPGVYPQG HSDTTVAIST STVLLCGLSA VSLLACYLKS RQTPPLASVE MEAMEALPVT WGTSSRDEDL ENCSHHL (SEQ ID NO: 3; FIG. 2B). Correspondientemente, en un aspecto, en este documento se proporciona una forma soluble de IL-15Ra humano (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra humano), en donde la secuencia de aminoácidos de la forma soluble de IL-15Ra humano termina en el sitio de la escisión proteolítica del IL-15Ra humano nativo unido a membrana. En particular, en este documento se proporciona una forma soluble de IL-15Ra humano (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra humano), en donde la secuencia de aminoácidos de la forma soluble de IL-15Ra humano termina con PQG (SEQ ID NO: 31), en donde G es Gly170. En realizaciones particulares, en este documento se proporciona una
forma soluble de IL-15Ra humano (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra humano) que tiene la secuencia de aminoácidos siguiente: MAPRRARGCR TLGLPALLLL LLLRPPATRG ITCPPPMSVE HADIWVKSYS LYSRERYICN SGFKRKAGTS SLTECVLNKA TNVAHWTTPS LKCIRDPALV HQRPAPPSTV TTAGVTPQPE SLSPSGKEPA ASSPSSNNTA ATTAAIVPGS QLMPSKSPST GTTEISSHES SHGTPSQTTA KNWELTASAS HQPPGVYPQG (SEQ ID NO: 32). En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un derivado de IL-15Ra (por ejemplo, una forma purificada y/o soluble de un derivado de IL-15Ra), que es un polipéptido que: (i) es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntico a SEQ ID n O: 32; y (ii) termina con la secuencia de aminoácidos PQG (SEQ ID NO: 31). En otras realizaciones particulares, en este documento se proporciona una forma soluble de IL-15Ra humano (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra humano) que tiene la secuencia de aminoácidos siguiente: ITCPPPMSVE HADIWVKSYS LYSRERYICN SGFKRKAGTS SLTECVLNKA TNVAHWTTPS LKCIRDPALV HQRPAPPSTV TTAGVTPQPE SLSPSGKEPA ASSPSSNNTA ATTAAIVPGS QLMPSKSPST GTTEISSHES SHGTPSQTTA KNWELTASAS HQPPGVYPQG (SEQ ID NO: 33). En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un derivado de IL-15Ra (por ejemplo, una forma purificada y/o soluble de un derivado de IL-15Ra), que es un polipéptido que es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntico a SEQ ID NO: 33, y, opcionalmente, en donde la secuencia de aminoácidos de la forma soluble del derivado de IL-15Ra termina con PQG (SeQ ID NO: 31).
En otro aspecto, en este documento se proporcionan derivados de IL-15Ra que son formas solubles, truncadas, de IL-15Ra humano de origen natural. En algunas realizaciones, en este documento se proporciona una forma soluble de IL-15Ra humano (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra humano), en donde la secuencia de aminoácidos de la forma soluble de IL-15Ra humano termina con PQGH (SEQ ID NO: 30), en donde H es His171 de SEQ ID NO:45. En realizaciones particulares, en este documento se proporciona una forma soluble de IL-15Ra humano (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra humano) que tiene la secuencia de aminoácidos siguiente: MAPRRARGCR TLGLPALLLL LLLRPPATRG ITCPPPMSVE HADIWVKSYS LYSRERYICN SGFKRKAGTS SLTECVLNKA TNVAHWTTPS LKCIRDPALV HQRPAPPSTV TTAGVTPQPE SLSPSGKEPA ASSPSSNNTA ATTAAIVPGS QLMPSKSPST GTTEISSHES SHGTPSQTTA KNWELTASAS HQPPGVYPQGH (SEQ ID NO: 34). En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un derivado de IL-15Ra (por ejemplo, una forma purificada y/o soluble de un derivado de IL-15Ra), que es un polipéptido que: (i) es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntico a SEQ ID n O: 34; y (ii) termina con la secuencia de aminoácidos Pq Gh (SEQ ID NO: 30). En otras realizaciones particulares, en este documento se proporciona una forma soluble de IL-15Ra humano (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra humano) que tiene la secuencia de aminoácidos siguiente: ITCPPPMSVE HADIWVKSYS LYSRERYICN SGFKRKAGTS SLTECVLNKA TNVAHWTTPS LKCIRDPALV HQRPAPPSTV TTAGVTPQPE SLSPSGKEPA ASSPSSNNTA ATTAAIVPGS QLMPSKSPST GTTEISSHES SHGTPSQTTA KNWELTASAS HQPPGVYPQGH (SEQ ID NO: 35). En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un derivado de IL-15Ra (por ejemplo, una forma purificada y/o soluble de un derivado de IL-15Ra), que es un polipéptido que: (i) es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntico a SEQ ID NO: 35; y (ii) tiene la secuencia de aminoácidos de la forma soluble del derivado de IL-15Ra que termina con PQGH (SEQ ID NO: 30).
En algunas realizaciones, en este documento se proporciona una forma soluble de IL-15Ra humano (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra humano), en donde la secuencia de aminoácidos de la forma soluble de IL-15Ra humano termina con PQGHS (SEQ ID NO: 29), en donde S es Ser172 de SEQ ID NO:45. En realizaciones particulares, en este documento se proporciona una forma soluble de IL-15Ra humano (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra humano) que tiene la secuencia de aminoácidos siguiente: MAPRRARGCR TLGLPALLLL l Ll RPPATRG ITCPPPMSVE HADIWVKSYS LYSRERYICN SGFKRKAGTS SLTECVLNKA TNVAHWTTPS LKCIRDPALV HQRPAPPSTV TTAGVTPQPE SLSPSGKEPA ASSPSSNNTA ATTAAIVPGS QLMPSKSPST GTTEISSHES SHGTPSQTTA KNWELTASAS HQPPGVYPQGHS (SEQ ID NO: 36). En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un derivado de IL-15Ra (por ejemplo, una forma purificada y/o soluble de un derivado de IL-15Ra), que es un polipéptido que: (i) es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntico a SEQ ID NO: 36; y (ii) termina con la secuencia de aminoácidos PQGHS (SEQ ID NO: 29). En otras realizaciones particulares, en este documento se proporciona una forma soluble de IL-15Ra humano (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra humano) que tiene la secuencia de aminoácidos siguiente: ITCPPPMSVE HADIWVKSYS LYSRERYICN SGFKRKAGTS SLTECVLNKA TNVAHWTTPS LKCIRDPALV HQRPAPPSTV TTAGVTPQPE SLSPSGKEPA ASSPSSNNTA ATTAAIVPGS QLMPSKSPST GTTEISSHES SHGTPSQTTA KNWELTASAS HQPPGVYPQGHS (SEQ ID NO: 37). En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un derivado de IL-15Ra (por ejemplo, una forma purificada y/o soluble de un derivado de IL-15Ra), que es un polipéptido que: (i) es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntico a SEQ ID NO: 37; y (ii) termina con la secuencia de aminoácidos PQGHS (SEQ ID NO: 29).
En algunas realizaciones, en este documento se proporciona una forma soluble de IL-15Ra humano (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra humano), en donde la secuencia de aminoácidos de la forma soluble de IL-15Ra humano termina con PQGHSD (SEQ ID NO: 28), en donde D es Asp173 de SEQ ID NO:45. En realizaciones particulares, en este documento se proporciona una forma soluble de IL-15Ra humano (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra humano) que tiene la secuencia de aminoácidos siguiente: MAPRRARGCR TLGLPALLLL l Ll RPPATRG ITCPPPMSVE HADIWVKSYS LYSRERYICN SGFKRKAGTS SLTECVLNKA TNVAHWTTPS LKCIRDPALV
HQRPAPPSTV TTAGVTPQPE SLSPSGKEPA ASSPSSNNTA ATTAAIVPGS QLMPSKSPST GTTEISSHES SHGTPSQTTA KNWELTASAS HQPPGVYPQGHSD (SEQ ID NO: 38). En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un derivado de IL-15Ra (por ejemplo, una forma purificada y/o soluble de un derivado de IL-15Ra), que es un polipéptido que: (i) es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntico a SEQ ID NO: 38; y (ii) termina con la secuencia de aminoácidos pQg Hs D (SEQ ID NO: 28). En otras realizaciones particulares, en este documento se proporciona una forma soluble de IL-15Ra humano (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra humano) que tiene la secuencia de aminoácidos siguiente: ITCPPPMSVE HADIWVKSYS LYSRERYICN SGFKRKAGTS SLTECVLNKA TNVAHWTTPS LKCIRDPALV HQRPAPPSTV TTAGVTPQPE SLSPSGKEPA ASSPSSNNTA ATTAAIVPGS QLMPSKSPST GTTEISSHES SHGTPSQTTA KNWELTASAS HQPPGVYPQGHSD (SEQ ID NO: 39). En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un derivado de IL-15Ra (por ejemplo, una forma purificada y/o soluble de un derivado de IL-15Ra), que es un polipéptido que: (i) es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntico a SEQ ID NO: 39; y (ii) termina con la secuencia de aminoácidos PQGHSD (SEQ ID NO: 28).
En algunas realizaciones, en este documento se proporciona una forma soluble de IL-15Ra humano (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra humano), en donde la secuencia de aminoácidos de la forma soluble de IL-15Ra humano termina con PQGHSDT (SEQ ID NO: 27), en donde T es Thr174 de SEQ ID NO:45. En realizaciones particulares, en este documento se proporciona una forma soluble de IL-15Ra humano (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra humano) que tiene la secuencia de aminoácidos siguiente: m Ap r Ra RGCR TLGLPALLLL l Ll RPPATRG ITCPPPMSVE HADIWVKSYS LYSRERYICN SGFKRKAGTS SLTECVLNKA TNVAHWTTPS LKCIRDPALV HQRPAPPSTV TTAGVTPQPE SLSPSGKEPA ASSPSSNNTA ATTAAIVPGS QLMPSKSPST GTTEISSHES SHGTPSQTTA KNWELTASAS HQPPGVYPQGHSDT (SEQ ID NO: 40). En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un derivado de IL-15Ra (por ejemplo, una forma purificada y/o soluble de un derivado de IL-15Ra), que es un polipéptido que: (i) es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntico a SEQ ID NO: 40; y (ii) termina con la secuencia de aminoácidos Pq Gh SDT (SEQ ID NO: 27). En otras realizaciones particulares, en este documento se proporciona una forma soluble de IL-15Ra humano (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra humano) que tiene la secuencia de aminoácidos siguiente: ITCPPPMSVE HADIWVKSYS LYSRERYICN SGFKRKAGTS SLTECVLNKA TNVAHWTTPS LKCIRDPALV HQRPAPPSTV TTAGVTPQPE SLSPSGKEPA ASSPSSNNTA ATTAAIVPGS QLMPSKSPST GTTEISSHES SHGTPSQTTA KNWELTASAS HQPPGVYPQGHSDT (SEQ ID NO: 41). En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un derivado de IL-15Ra (por ejemplo, una forma purificada y/o soluble de un derivado de IL-15Ra), que es un polipéptido que: (i) es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntico a SEQ ID NO: 41; y (ii) termina con la secuencia de aminoácidos PQGHSDT (SeQ ID NO: 27).
En algunas realizaciones, en este documento se proporciona una forma soluble de IL-15Ra humano (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra humano), en donde la secuencia de aminoácidos de la forma soluble de IL-15Ra humano termina con PQGHSDTT (SEQ ID NO: 26), en donde T es Thr175 de SEQ ID NO:45. En realizaciones particulares, en este documento se proporciona una forma soluble de IL-15Ra humano (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra humano) que tiene la secuencia de aminoácidos siguiente: MAPRRARGCR TLGLPALLLL LLLRPPATRG ITCPPPMSVE HADIWVKSYS LYSRERYICN SGFKRKAGTS SLTECVLNKA TNVAHWTTPS LKCIRDPALV HQRPAPPSTV TTAGVTPQPE SLSPSGKEPA ASSPSSNNTA ATTAAIVPGS QLMPSKSPST GTTEISSHES SHGTPSQTTA KNWELTASAS HQPPGVYPQGHSDTT (SEQ ID NO: 4). En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un derivado de IL-15Ra (por ejemplo, una forma purificada y/o soluble de un derivado de IL-15Ra), que es un polipéptido que: (i) es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntico a SEQ ID NO: 4; y (ii) termina con la secuencia de aminoácidos PQGHSdTt (SEQ ID NO: 26). En otras realizaciones particulares, en este documento se proporciona una forma soluble de IL-15Ra humano (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra humano) que tiene la secuencia de aminoácidos siguiente: ITCPPPMSVE HADIWVKSYS LYSRERYICN SGFKRKAGTS SLTECVLNKA TNVAHWTTPS LKCIRDPALV HQRPAPPSTV TTAGVTPQPE SLSPSGKEPA ASSPSSNNTA ATTAAIVPGS QLMPSKSPST GTTEISSHES SHGTPSQTTA KNWELTASAS HQPPGVYPQGHSDTT (SEQ ID NO: 45). En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un derivado de IL-15Ra (por ejemplo, una forma purificada y/o soluble de un derivado de IL-15Ra), que es un polipéptido que: (i) es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntico a SEQ ID NO: 45; y (ii) termina con la secuencia de aminoácidos PQGHSDTT (SEQ ID NO: 26).
En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un derivado de IL-15Ra de IL-15Ra humano de origen natural, en donde el derivado de IL-15Ra es soluble y: (a) los últimos aminoácidos del extremo C-terminal del derivado de IL-15Ra consisten en los residuos de aminoácidos PQGHSDTT (SEQ ID NO: 26), en donde T está en el extremo C-terminal de la secuencia de aminoácidos; (b) los últimos aminoácidos del extremo C-terminal del derivado de IL-15Ra consisten en los residuos de aminoácidos PQGHSDT (SEQ ID NO: 27) en donde T está en el extremo C-terminal de la secuencia de aminoácidos; (c) los últimos aminoácidos del extremo C-terminal del derivado de IL-15Ra consisten en los residuos de aminoácidos PQGHSD (SEQ ID NO: 28), en donde D está en el extremo C-terminal de la secuencia de aminoácidos; (d) los últimos aminoácidos del extremo C-terminal del derivado de IL-15Ra consisten en los residuos de aminoácidos PQGHS (SEQ ID NO: 29), en donde S está en el extremo C-terminal de la secuencia de aminoácidos; o (e) los últimos aminoácidos del extremo C-terminal del derivado de IL-15Ra consisten en los residuos de aminoácidos PQGH (SEQ ID NO: 30), en donde H está en el extremo C-terminal de la secuencia de aminoácidos. En algunas realizaciones,
las secuencias de aminoácidos de estos derivados de IL-15Ra son al menos 75%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98% o al menos 99% idénticas a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 45. En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un derivado de IL-15Ra de un IL-15Ra humano de origen natural, en donde el derivado de IL-15Ra: (i) es soluble; (ii) comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 75%, al menos 80%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97% o al menos 98% idéntica a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:45; y (iii) termina con la secuencia de aminoácidos PQG (SEQ ID NO: 31), en donde G está en el extremo C-terminal de la secuencia de aminoácidos del derivado de IL-15Ra. En algunas realizaciones, estos derivados de IL-15Ra se purifican.
En otro aspecto, en este documento se proporcionan derivados de IL-15Ra en los cuales el sitio de escisión para una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo ha sido mutado. En una realización, en este documento se proporcionan derivados de IL-15Ra que comprenden una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho mutaciones (por ejemplo, adiciones, deleciones o sustituciones; como deleciones o sustituciones de uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho residuos de aminoácidos) en el sitio de escisión del dominio extracelular de IL-15Ra de modo que la escisión del IL-15Ra por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo, se inhibe. Como se trató antes, la escisión proteolítica del IL-15Ra humano unido a membrana tiene lugar entre Gly170 e His171 en IL-15Ra humano. En una realización, estos residuos de aminoácidos o residuos de aminoácidos circundantes se mutan de modo que la escisión de IL-15Ra por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo, se inhibe. En algunas realizaciones, la secuencia de aminoácidos PQGHSDTT (SEQ ID NO:26) se muta de modo que la escisión por una proteasa endógena que escinde al IL-15Ra humano nativo, se inhibe. En algunas realizaciones, una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho sustituciones y/o deleciones de aminoácidos (como sustituciones y/o deleciones de uno,dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho residuos de aminoácidos) se introducen en la secuencia de aminoácidos PQGHSDTT (SEQ ID NO: 26) de IL-15Ra humano de modo que la escisión por una proteasa endógena que escinde al IL-15Ra humano nativo, se inhibe. En algunas realizaciones, la secuencia de aminoácidos PQGHSDTT (SEQ ID NO:26) es reemplazada por un sitio de escisión que es reconocido y escindido por una proteasa heteróloga. Los ejemplos no limitantes de dichos sitios de escisión por proteasa heteróloga incluyen Arg-X-X-Arg (SEQ ID NO:7), que es reconocido y escindido por la furina proteasa; y A-B-Pro-Arg-X-Y (SEQ ID NO:8) (A y B son aminoácidos hidrófobos y X e Y son aminoácidos no ácidos) y Gly-Arg-Gly, que son reconocidos y escindidos por la trombina proteasa.
En otro aspecto, en este documento se proporcionan derivados de IL-15Ra, en donde los derivados de IL-15Ra: (i) comprenden un sitio de escisión extracelular mutado que inhibe la escisión por una proteasa endógena que escinde al IL-15Ra nativo, y (ii) carecen de todo o un fragmento del dominio transmembrana del IL-15Ra nativo. En algunas realizaciones, en este documento se proporcionan derivados de IL-15Ra, en donde los derivados de IL-15Ra comprenden: (i) una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho mutaciones (por ejemplo, sustituciones y/o deleciones) en el sitio de escisión extracelular de IL-15Ra de modo que la escisión de IL-15Ra por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo, se inhibe, y (ii) todo o un fragmento de un dominio transmembrana de una molécula heteróloga en lugar de todo o un fragmento del dominio transmembrana de IL-15Ra nativo. En algunas realizaciones, en este documento se proporcionan derivados de IL-15Ra, en donde los derivados de IL-15Ra comprenden: (i) una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho mutaciones (por ejemplo, sustituciones y/o deleciones) en la secuencia de aminoácidos PQGHSDTT (SEQ ID NO:26) de modo que la escisión de IL-15Ra por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo, se inhibe, y (ii) todo o un fragmento de un dominio transmembrana de una molécula heteróloga en lugar de todo o un fragmento del dominio transmembrana de IL-15Ra nativo. De conformidad con estas realizaciones, los derivados de IL-15Ra pueden, o no, comprender todo o un fragmento de la cola citoplasmática de IL-15Ra nativo. En algunas realizaciones, la molécula heteróloga es CD4, CD8 o el complejo mayor de histocompatibILidad (MHC).
En otro aspecto, en este documento se proporcionan formas glicosILadas de IL-15Ra (por ejemplo formas glicosILadas purificadas de IL-15Ra), en donde la glicosILación de IL-15Ra representa al menos 20%, al menos 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50% o 20% a 25%, 20% a 30%, 25% a 30%, 25% a 35%, 30% a 35%, 30% a 40%, 35% a 40%, 35% a 45%, 40% a 50%, 45% a 50%, 20% a 40% o 25% a 50% de la masa (peso molecular) de IL-15Ra según se evalúa mediante técnicas conocidas por un experto en la materia. El porcentaje de la masa (peso molecular) de IL-15Ra (por ejemplo, IL-15Ra purificado) que representa la glicosILación de IL-15Ra se puede determinar empleando, por ejemplo, pero no exclusivamente, electroforesis en gel y densitometría cuantitativa de los geles, y comparación de la masa promedio (peso molecular) de una forma glicosILada de IL-15Ra (por ejemplo, una forma glicosILada purificada de IL-15Ra) con la forma no glicosILada de IL-15Ra (por ejemplo, una forma no glicosILada purificada de IL-15Ra). En una realización, la masa promedio (peso molecular) de IL-15Ra (por ejemplo, IL-15Ra purificado) se puede determinar empleando espectro MALDI-TOF MS en un Voyager De-Pro equipado con detector de masa alta CovalX Hm-1 utILizando ácido sinápico como matriz, y la masa de la forma glicosILada de IL-15Ra (por ejemplo, forma glicosILada purificada de IL-15Ra) se puede comparar con la masa de la forma no glicosILada de IL-15Ra (por ejemplo, forma no glicosILada purificada de IL-15Ra) para determinar el porcentaje de la masa que representa la glicosILación (véase por ejemplo, Figura 27).
En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un IL-15Ra glicosILado (por ejemplo, IL-15Ra humano), en donde la glicosILación representa al menos 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% o 50% de la masa (peso molecular) del IL-15Ra. En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un IL-15Ra glicosILado (por ejemplo, IL-15Ra humano), en donde la glicosILación representa 20% a 25%, 20% a 30%, 25% a 30%, 25% a 35%, 30% a 35%, 30% a
40%, 35% a 40%, 35% a 45%, 40% a 50%, 45% a 50%, 20% a 40% o 25% a 50% de la masa (peso molecular) del IL-15Ra. En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un IL-15Ra glicosILado (por ejemplo, IL-15Ra humano), en donde la glicosILación representa alrededor de 20%, alrededor de 25%, alrededor de 30%, alrededor de
35%, alrededor de 40%, alrededor de 45% o alrededor de 50% de la masa (peso molecular) del IL-15Ra. En algunas realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un IL-15Ra nativo (por ejemplo, un IL-15Ra humano nativo). En otras realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un derivado de IL-15Ra (por ejemplo, un derivado de IL-15Ra de IL-15Ra humano de origen natural). En algunas realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un IL-15Ra humano soluble nativo, como SEQ ID NO:32 o 33. En otras realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un derivado de IL-15Ra que es una forma soluble de IL-15Ra humano. En algunas realizaciones, el IL-15Ra glicosILado tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, 34,
35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, o 45. En realizaciones particulares, el IL-15Ra glicosILado tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID NO:
3, 4,: 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, o 45. En algunas realizaciones, el IL-15Ra glicosILado está glicosILado en uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete o todos los sitios de glicosILación siguientes: (i) O-glicosILación en Thr5 de la secuencia de aminoácidos NWElTa SASHQPPGVYPQG (SEQ ID NO: 42) en el IL-15Ra; (ii) O-glicosILación en Ser7 de la secuencia de aminoácidos NWELTASASHQPPGVYPq G (SEQ ID NO: 42) en el IL-15Ra; (iii) N-glicosILación en Ser 8 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVK (SeQ ID NO: 43) en el IL-15Ra, o Ser 8 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; (iv) N-glicosILación en Ser 18 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; (v) N-glicosILación en Ser 20 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; (vi) N-glicosILación en Ser 23 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; y/o (vii) N-glicosILado en Ser 31 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra. En ciertas realizaciones, el IL-15Ra glicosILado se purifica o se aísla.
En algunas realizaciones, en este documento se proporciona una composición que contiene IL-15 e IL-15Ra glicosILado
(por ejemplo, IL-15Ra humano), en donde la glicosILación de IL-15Ra representa al menos 20%, al menos 25%, al menos
30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 45% o al menos 50% de la masa (peso molecular) del IL-15Ra según se evalúa mediante técnicas conocidas para un experto en la materia. El algunas realizaciones, en este documento se proporciona una composición que contiene IL-15 e IL-15Ra glicosILado (por ejemplo, IL-15Ra humano), en donde la glicosILación del IL-15Ra representa 20% a 25%, 20% a 30%, 25% a 30%, 25% a 35%, 30% a 35%, 30% a 40%, 35% a
40%, 35% a 45%, 40% a 50%, 45% a 50%, 20% a 40% o 25% a 50% de la masa (peso molecular) del IL-15Ra, según se evalúa mediante técnicas conocidas por un experto en la materia. En otras realizaciones, en este documento se proporciona una composición que contiene IL-15 e IL-15Ra glicosILado (por ejemplo, IL-15Ra humano), en donde la glicosILación de IL-15Ra representa alrededor de 20%, alrededor de 25%, alrededor de 30%, alrededor de 35%, alrededor de 40%, alrededor de 45% o alrededor de 50% de la masa (peso molecular) del IL-15Ra, según se evalúa mediante técnicas conocidas por un experto en la materia. En algunas realizaciones, la IL-15 está glicosILada. En algunas realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un IL-15Ra nativo (por ejemplo, un IL-15Ra humano nativo). En otras realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un derivado de IL-15Ra (por ejemplo, un derivado de IL-15Ra del IL-15Ra humano de origen natural). En algunas realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un IL-15Ra humano nativo soluble, como SEQ ID NO:32 o 33. En otras realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un derivado de IL-15Ra que es una forma soluble de IL-15Ra humano. En algunas realizaciones, el IL-15Ra glicosILado tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, 34,
35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 o 45. En realizaciones particulares, el IL-15Ra glicosILado tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID NO:
3, 4,: 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, o 45. En algunas realizaciones, el IL-15Ra glicosILado está glicosILado en uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete o todos los sitios de glicosILación siguientes: (i) O-glicosILación en Thr5 de la secuencia de aminoácidos NWElTa SASHQPPGVYPQG (SEQ ID NO: 42) en el IL-15Ra; (ii) O-glicosILación en Ser7 de la secuencia de aminoácidos NWELTASASHQPPGVYPq G (SEQ ID NO: 42) en el IL-15Ra; (iii) N-glicosILación en Ser 8 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVK (SeQ ID NO: 43) en el IL-15Ra, o Ser 8 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; (iv) N-glicosILación en Ser 18 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; (v) N-glicosILación en Ser 20 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; (vi) N-glicosILación en Ser 23 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; y/o (vii) N-glicosILado o en Ser secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra.
En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un complejo IL-15/IL-15Ra que comprende IL-15Ra glicosILado (por ejemplo, IL-15Ra humano), en donde la glicosILación de IL-15Ra representa al menos 20%, al menos
25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 45% o al menos 50% de la masa (peso molecular) del IL-15Ra según se evalúa mediante técnicas conocidas por un experto en la materia. En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un complejo IL-15/IL-15Ra que comprende IL-15Ra glicosILado (por ejemplo, IL-15Ra humano), en donde la glicosILación del IL-15Ra representa 20% a 25%, 20% a 30%, 25% a 30%, 25% a 35%, 30% a
35%, 30% a 40%, 35% a 40%, 35% a 45%, 40% a 50%, 45% a 50%, 20% a 40% o 25% a 50% de la masa (peso molecular) del IL-15Ra, según se evalúa mediante técnicas conocidas por un experto en la materia. En otras realizaciones, en este documento se proporciona un complejo IL-15/IL-15Ra que comprende IL-15Ra glicosILado (por ejemplo, IL-15Ra humano), en donde la glicosILación del IL-15Ra representa alrededor de 20%, alrededor de 25%, alrededor de 30%,
alrededor de 35%, alrededor de 40%, alrededor de 45% o alrededor de 50% de la masa (peso molecular) del IL-15Ra, según se evalúa mediante técnicas conocidas por un experto en la materia. En algunas realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un IL-15Ra nativo (por ejemplo, un IL-15Ra humano nativo). En otras realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un derivado de IL-15Ra (por ejemplo, un derivado de IL-15Ra del IL-15Ra humano de origen natural). En algunas realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un IL-15Ra humano soluble nativo, como SEQ ID NO:32 o 33. En otras realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un derivado de IL-15Ra que es una forma soluble de IL-15Ra humano. En algunas realizaciones, el IL-15Ra glicosILado tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 o 45. En realizaciones particulares, el IL-15Ra glicosILado tiene la secuencia de aminoácidos que es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID NO: 3, 4, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 o 45. En algunas realizaciones, el IL-15Ra glicosILado está glicosILado en uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete o todos los sitios de glicosILación siguientes: (i) O-glicosILación en Thr5 de la secuencia de aminoácidos NWELTASASHQPPGVYPQG (SEQ ID NO: 42) en el IL-15Ra; (ii) O-glicosILación en Ser7 de la secuencia de aminoácidos NWELTASASHQPPGVYPQG (SEQ ID NO: 42) en el IL-15Ra; (iii) N-glicosILación en Ser 8 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVK (SEQ ID NO: 43) en el IL-15Ra, o Ser 8 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; (iv) N-glicosILación en Ser 18 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; (v) N-glicosILación en Ser 20 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; (vi) N-glicosILación en Ser 23 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; y/o (vii) N-glicosILado o en Ser 31 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra. En ciertas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se purifica o se aísla.
En otro aspecto, en este documento se proporcionan formas glicosILadas de IL-15Ra, en donde el IL-15Ra esta glicosILado (N- u O-glicosILado) en ciertos residuos de aminoácidos. En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un IL-15Ra humano que está glicosILado en uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, o todos, los sitios de glicosILación siguientes: (i) O-glicosILación en Thr5 de la secuencia de aminoácidos NWELTASASHQPPGVYPQG (SEQ ID NO: 42) en el IL-15Ra; (ii) O-glicosILación en Ser7 de la secuencia de aminoácidos NWELTASASHQPPGVYPQG (SEQ ID NO: 42) en el IL-15Ra; (iii) N-glicosILación en Ser 8 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVK (SEQ ID NO: 43) en el IL-15Ra, o Ser 8 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; (iv) N-glicosILación en Ser 18 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; (v) N-glicosILación en Ser 20 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; (vi) N-glicosILación en Ser 23 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; y/o (vii) N-glicosILado o en Ser 31 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra. En algunas realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un IL-15Ra humano nativo. En otras realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un derivado de IL-15Ra de un IL-15Ra humano de origen natural. En algunas realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un IL-15Ra humano soluble nativo, como SEQ ID NO:32 o 33. En otras realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un derivado de IL-15Ra que es una forma soluble de IL-15Ra humano. En algunas realizaciones, el IL-15Ra glicosILado tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, o 45. En realizaciones particulares, el IL-15Ra glicosILado tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID NO: 3, 4, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 o 45. En ciertas realizaciones,el IL-15Ra glicosILado se purifica o se aísla.
En algunas realizaciones, en este documento se proporciona una composición que comprende IL-15 e IL-15Ra humano, en donde el IL-15Ra humano está glicosILado en uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, o todos, los sitios de glicosILación siguientes: (i) O-glicosILación en Thr5 de la secuencia de aminoácidos NWELTASASHQPPGVYPQG (SEQ ID NO: 42) en el IL-15Ra; (ii) O-glicosILación en Ser7 de la secuencia de aminoácidos NWELTASASHQPPGVYPQG (SEQ ID NO: 42) en el IL-15Ra; (iii) N-glicosILación en Ser 8 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVK (SEQ ID NO: 43) en el IL-15Ra, o Ser 8 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; (iv) N-glicosILación en Ser 18 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; (v) N-glicosILación en Ser 20 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; (vi) N-glicosILación en Ser 23 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; y/o (vii) N-glicosILado o en Ser 31 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra. En algunas realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un IL-15Ra humano nativo. En otras realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un derivado de IL-15Ra de un IL-15Ra humano de origen natural. En algunas realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un IL-15Ra humano soluble nativo, como SEQ ID NO:32 o 33. En otras realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un derivado de IL-15Ra que es una forma soluble de IL-15Ra humano. En algunas realizaciones, el IL-15Ra glicosILado tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, o 45. En realizaciones particulares, el IL-15Ra glicosILado tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID NO: 3, 4, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, o 45. En ciertas realizaciones,el IL-15Ra glicosILado se purifica o se aísla.
En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un complejo IL-15/IL-15Ra que comprende IL-15Ra humano que está glicosILado en uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete o todos los sitios de glicosILación siguientes: (i) O-glicosILación en Thr5 de la secuencia de aminoácidos NWELTASASHQPPGVYPQG (SEQ ID NO: 42) en el IL-15Ra; (ii) O-glicosILación en Ser7 de la secuencia de aminoácidos NWELTASASHQPPGVYPQG (SEQ ID NO: 42) en el IL-15Ra; (iii) N-glicosILación en Ser 8 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVK (SEQ ID NO: 43) en el IL-15Ra, o Ser 8 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; (iv) N-glicosILación en Ser 18 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; (v) N-glicosILación en Ser 20 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; (vi) N-glicosILación en Ser 23 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; y/o (vii) N-glicosILado en Ser 31 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra. En algunas realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un IL-15Ra humano nativo. En otras realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un derivado de IL-15Ra de un IL-15Ra humano de origen natural. En algunas realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un IL-15Ra humano soluble nativo, como SEQ ID NO:32 o 33. En otras realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es un derivado de IL-15Ra que es una forma soluble de IL-15Ra humano. En algunas realizaciones, el IL-15Ra glicosILado tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, o 45. En realizaciones particulares, el IL-15Ra glicosILado tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID NO: 3, 4, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, o 45. En ciertas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se purifica o se aísla.
En algunas realizaciones, en este documento se proporciona una forma glicosILada de IL-15Ra (por ejemplo, IL-15Ra humano), en donde la glicosILación representa al menos 20%, al menos 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50% o 20% a 25%, 20% a 30%, 25% a 30%, 25% a 35%, 30% a 35%, 30% a 40%, 35% a 40%, 35% a 45%, 40% a 50%, 45% a 50%, 20% a 40% o 25% a 50% de la masa (peso molecular) del IL-15Ra, y el cual está glicosILado en al menos uno, al menos dos, al menos tres, al menos cuatro, al menos cinco, al menos seis o al menos siete de los sitios siguientes: (i) Thr5 de la secuencia de aminoácidos NWELTASASHQPPGVYPQG (SEQ ID NO: 42) en la IL-15Ra (por ejemplo, O-glicosILado); (ii) Ser7 de la secuencia de aminoácidos NWELTASASHQPPGVYPQG (SEQ ID NO: 42) en el IL-15Ra (por ejemplo, O-glicosILado); (iii) Ser 8 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVK (SEQ ID NO: 43) o la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra (por ejemplo., N-glicosILado); (iv) Ser 18 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra (por ejemplo, N-glicosILado); (v) Ser 20 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra (por ejemplo, N-glicosILado); (vi) Ser 23 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra (por ejemplo, N-glicosILado); (vii) Ser 31 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra (por ejemplo, N-glicosILado). En una realización particular, el IL-15Ra humano glicosILado comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3, 4, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 o 45. En otra realización, el IL-15Ra humano glicosILado es: (i) soluble; y (ii) (a) los últimos aminoácidos en el extremo C-terminal de la forma soluble de IL-15Ra humano consisten en los residuos de aminoácidos PQGHSDTT (SEQ ID NO: 26), en donde T está en el extremo C-terminal de la secuencia de aminoácidos; (b) los últimos aminoácidos del extremo C-terminal de la forma soluble de IL-15Ra humano consisten en los residuos de aminoácidos PQGHSDT (SEQ ID NO: 27) en donde T está en el extremo C-terminal de la secuencia de aminoácidos; (c) los últimos aminoácidos del extremo C-terminal de la forma soluble de IL-15Ra humano consisten en los residuos de aminoácidos PQGHSD (SEQ ID NO: 28), en donde D está en el extremo C-terminal de la secuencia de aminoácidos; (d) los últimos aminoácidos del extremo C-terminal de la forma soluble de IL-15Ra consisten en los residuos de aminoácidos PQGHS (SEQ ID NO: 29) en donde S está en el extremo C-terminal de la secuencia de aminoácidos; (e) los últimos aminoácidos del extremo C-terminal de la forma soluble de IL-15Ra humano consisten en los residuos de aminoácidos PQGH (SEQ ID NO: 30) en donde H está en el extremo C-terminal de la secuencia de aminoácidos; o (f) los últimos aminoácidos del extremo C-terminal de la forma soluble de IL-15Ra humano consisten en los residuos de aminoácidos PQG (SEQ ID NO: 31), en donde G está en el extremo C-terminal de la secuencia de aminoácidos. En ciertas realizaciones, el IL-15Ra glicosILado se purifica o se aísla. En otras realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es parte de una composición que contiene IL-15. Aún en otras realizaciones, el IL-15Ra glicosILado es parte de un complejo IL-15/IL-15Ra.
5.2. Agentes Terapéuticos
En este documento se proporcionan complejos que se unen a las subunidades Py del receptor de IL-15, inducen la transducción de señal de IL-15 (por ejemplo, la transducción de señal Jak/Stat) y mejoran la función inmunitaria mediada por IL-15, en donde los complejos comprenden IL-15 unida covalente o no covalentemente al receptor alfa de interleucina-15 ("IL-15Ra") ("complejos IL-15/IL-15Ra " o "Agentes Terapéuticos"). El complejo IL-15/IL-15Ra es capaz de unirse al complejo receptor Py.
Los complejos IL-15/IL-15Ra pueden estar compuestos por IL-15 nativa o un derivado de IL-15 e IL-15Ra nativo o un derivado de IL-15Ra. En algunas realizaciones, un complejo IL-15/IL-15Ra comprende IL-15 nativa o un derivado de IL-15 y un IL-15Ra descrito en la Sección 5.1, supra. En una realización, un complejo IL-15/IL-15Ra comprende IL-15 nativa o un derivado de IL-15 e IL-15Ra con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 33, 35, 37, 39, 41 o 45. En otra
realización, un complejo IL-15/IL-15Ra comprende IL-15 nativa o un derivado de IL-15 y una forma glicosILada de IL-15Ra descrita en la Sección 5.1, supra. Los ejemplos de complejos IL-15/IL-15Ra también se describen en la Sección 5.1, supra.
En una realización específica, un complejo IL-15/IL-15Ra comprende IL-15 nativa o un derivado de IL-15Ra y un IL-15Ra soluble nativo (por ejemplo, IL-15Ra humano soluble nativo). En otra realización, un complejo IL-15/IL-15Ra está compuesto por un derivado de IL-15 y un derivado de IL-15Ra. En otra realización, un complejo IL-15/IL-15Ra está compuesto por IL-15 nativa y un derivado de IL-15Ra. En una realización, el derivado de IL-15Ra es una forma soluble de la IL-15Ra. Los ejemplos de formas solubles de IL-15Ra se describen en la Sección 5.1, supra. En una realización, la forma soluble de IL-15Ra carece del dominio transmembrana de IL-15Ra nativo, y opcionalmente, del dominio intracelular de IL-15Ra nativo. En otra realización, el derivado de IL-15Ra es el dominio extracelular de IL-15Ra nativo o un fragmento de este. En algunas realizaciones, el derivado de IL-15Ra es un fragmento del dominio extracelular que comprende el dominio sushi o exón 2 de IL-15Ra nativo. En algunas realizaciones, el derivado de IL-15Ra contiene un fragmento del dominio extracelular que comprende el dominio sushi o exón 2 de IL-15Ra nativo y al menos un aminoácido que es codificado por el exón 3. En algunas realizaciones, el derivado de IL-15Ra contiene un fragmento del dominio extracelular que comprende el dominio sushi o exón 2 de IL-15Ra nativo y una región bisagra de IL-15Ra o un fragmento de esta. En algunas realizaciones, el IL-15Ra comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:19 o 20. En algunas realizaciones, el IL-15Ra comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 33, 35, 37, 39, 41 o 45. En ciertas realizaciones, el IL-15Ra es el IL-15Ra humano soluble nativo.
En otra realización, el derivado de IL-15Ra comprende una mutación en el sitio de escisión del dominio extracelular que inhibe la escisión por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo. Como se trató en la Sección 5.1, supra, el sitio de escisión extracelular de IL-15Ra nativo ha sido identificado por los inventores. En una realización, el sitio de escisión del dominio extracelular de IL-15Ra es reemplazado por un sitio de escisión que es reconocido y escindido por una proteasa heteróloga conocida. Los ejemplos no limitantes de dichos sitios de escisión por proteasa heteróloga incluyen Arg-X-X-Arg (SEQ ID NO: 7), que es reconocido y escindido por la furina purina proteasa; y A-B-Pro-Arg-X-Y (SEQ ID NO: 8) (A y B son aminoácidos hidrófobos X e Y son aminoácidos no ácidos) y Gly-Arg-Gly, que son reconocidos y escindidos por la trombina proteasa.
En una realización específica, el IL-15Ra es codificado por una secuencia de ácido nucleico optimizada para potenciar la expresión de IL-15Ra, por ejemplo, empleando métodos como los descritos en la solicitud provisional de los Estados Unidos provisional N° 60/812,566, presentada el 9 de junio de 2006; las publicaciones de solicitudes de patentes internacionales N° WO 2007/084342 y WO 2010/020047; y las patentes de los Estados Unidos N°. 5,965,726; 6,174,666; 6,291,664; 6,414,132; y 6,794,498, que se incorporan por referencia en este documento en su totalidad. En otra realización, la IL-15 es codificada por una secuencia de ácido nucleico optimizada para potenciar la expresión de IL-15, por ejemplo, empleando métodos como los descritos en las solicitudes provisionales de los Estados Unidos N°.
60/812,566, presentada el 9 de junio de 2006 y 60/758,819, presentada el 13 de enero de 2006, y las publicaciones de solicitudes de patentes internacionales N° WO 2007/084342 y WO 2010/020047; y las patentes de los Estados Unidos N° 5,965,726; 6,174,666; 6,291,664; 6,414,132; y 6,794,498, que se incorporan por referencia en este documento en su totalidad.
Además de IL-15 e IL-15Ra, los complejos IL-15/IL-15Ra pueden comprender una molécula heteróloga. En algunas realizaciones, la molécula heteróloga es un antígeno asociado a una enfermedad que se intenta prevenir, tratar y/o manejar (por ejemplo, un antígeno viral, un antígeno bacteriano, un antígeno parasitario o un antígeno de cáncer). Los ejemplos no limitantes de dichos antígenos incluyen antígenos del flavivirus, Virus del NILo Occidental (VNO) incluidas proteínas estructurales, por ejemplo, C, M y E, y proteínas no estructurales, por ejemplo, NS1, NS2A, NS2b , NS3, NS4A, NS4B y NS5; antígenos del virus de inmunodeficiencia humana (VIH) gp41, gp120, gp160, Nef, Gag y Rev, Tat, Vif, Vpu, Vpr o vpx; virus de la influenza hemaglutinina; glicoproteína G del virus sincitial respiratorio humano; proteína del núcleo, proteína de matriz u otra proteína del virus del dengue; hemaglutinina del virus del sarampión; glicoproteína gB del virus del herpes simple tipo 2; poliovirus I VP1 (Emini et al., 1983, Nature 304:699); una glicoproteína de la envoltura del VIH I; antígeno de superficie para la hepatitis B; toxina diftérica; epítopo 24M del estreptococo; pILi gonocóccico, virus de la pseudorabia g50 (gpD); virus de la pseudorabia II (gpB); virus de la pseudorrabia gIII (gpC); glicoproteína H del virus de la pseudorabia; glucoproteína E del virus de la pseudorabia; glicoproteína 195 de la gastroenteritis transmisible; proteína de matriz de la gastroenteritis transmisible; glicoproteína 38 del rotavirus porcino; proteína de la cápside del parvovirus porcino; antígeno protector de Serpulina hydodysenteriae; glicoproteína 55 de diarrea viral bovina; hemaglutininaneuraminidasa del virus de la enfermedad de Newcastle; hemaglutinina de la gripe porcina; neuraminidasa de la gripe porcina; antígenos del virus de la fiebre aftosa; antígenos del virus del cólera porcino; antígenos del virus de la influenza porcina; antígenos del virus de la peste porcina africana; Mycoplasma hyopneumoniae; antígenos del virus de la rinotraqueítis bovina infecciosa (por ejemplo, la glicoproteína E o la glicoproteína G del virus de la rinotraqueitis infecciosa bovina); antígenos del virus de la laringotraqueítis infecciosa (por ejemplo, la glicoproteína G o la glicoproteína I del virus de la laringotraqueítis infecciosa); una glicoproteína del virus La Crosse; antígenos del virus de la diarrea neonatal del becerro; virus de la encefalomielitis equina venezolana; virus punta toro; virus de la leucemia murina; virus de tumor mamario de ratón; proteína del núcleo del virus de la hepatitis B y/o antígeno de superficie del virus de la hepatitis B o un fragmento o derivado del mismo (véanse, por ejemplo, la publicación de patente del Reino Unido N° GB 2034323A publicada el 4 de junio de 1980; Ganem y Varmus, 1987, Ann. Rev. Biochem. 56:651-693; Tiollais et al., 1985, Nature
317:489-495); antígeno del virus de la influenza equina o del virus del herpes equino (p. ej., neuraminidasa del virus de la influenza equina tipo A/Alaska 91, neuraminidasa del virus de la influenza equina tipo A/Miami 63; neuraminidasa del virus de la influenza equina tipo A/Kentucky 81; glicoproteína B del virus del herpes equino tipo 1; glicoproteína D del virus del herpes equino tipo 1); antígeno del virus respiratorio sincitial bovino o virus de la parainfluenza bovina (por ejemplo, proteína de unión del virus sincitial respiratorio bovino (VRSB G); proteína de fusión del virus sincitial respiratorio bovino (VRSB F); proteína de la nucleocápside del virus respiratorio sincitial bovino (VRSB S N); proteína de fusión del virus de la parainfluenza bovina tipo 3; hemaglutinina neuraminidasa del virus de la parainfluenza bovina tipo 3); glicoproteína 48 o glicoproteína 53 del virus de la diarrea viral bovina.
Otros ejemplos no limitantes de antígenos incluyen antígeno KS 1/4 de pan-carcinoma, antígeno del carcinoma de ovario (CA125), fosfatasa ácida prostática, antígeno específico de próstata, antígeno p97 asociado a melanoma, antígeno gp75 de melanoma, antígeno de melanoma de alto peso molecular (HMW-MAA), antígeno de membrana específico de próstata, antígeno carcinoembrionario (CEA), antígeno de mucina epitelial polimórfica, antígeno de glóbulos de grasa de leche humana, antígenos asociados al tumor colorrectal como: CEA, TAG-72, CO17-1A; GICA 19-9, CTA-1 y LEA, antígeno-38.13 de linfoma de Burkitt, CD19, antígeno CD20 de linfoma B humano, CD33, antígenos específicos de melanoma como gangliósido GD2, gangliósido GD3, gangliósido GM2, gangliósido GM3, antígenos de la superficie celular de tipo trasplante específicos del tumor (TSTA) como los antígenos tumorales inducidos por virus, incluidos el antígeno T de los virus tumorales de ADN y los antígenos de la envoltura de los virus tumorales de ARN, antígeno oncofetal alfa-fetoproteína como el CEA de colon, antígeno oncofetal del tumor vesical, antígeno de diferenciación como el antígeno L6 del carcinoma humano de pulmón, L20, antígenos de fibrosarcoma, antígeno Gp37 de linfocitos T de leucemia humana, neoglicoproteína, esfingolípidos, antígeno del cáncer de mama como el EGFR (receptor del factor de crecimiento epidérmico), antígeno HER2 (p185HER2), receptor EphA2, mucina epitelial polimórfica (PEM), antígeno APO-1 de linfocito humano maligno, antígeno de diferenciación, como el antígeno I encontrado en los eritrocitos fetales y el endodermo primario, I (Ma) encontrado en los adenocarcinomas gástricos, M18 y M39 encontrados en el epitelio de mama, SSEA-1 encontrado en células mieloides, VEP8, VEP9, Myl, VIM-D5 y D156-22 encontrados en cáncer colorrectal, TRA-1-85 (grupo sanguíneo H), C14 encontrado en adenocarcinoma de colon, F3 encontrado en adenocarcinoma de pulmón, AH6 encontrado en cáncer gástrico, hapteno Y, Ley encontrado en células de carcinoma embrionario, TL5 (grupo sanguíneo A), receptor de EGF, serie E1 (grupo sanguíneo B) encontrado en cáncer pancreático, FC10.2 encontrado en células de carcinoma embrionario, adenocarcinoma gástrico, CO-514 (grupo sanguíneo Lea) encontrado en adenocarcinoma, NS-10 encontrado en adenocarcinomas, CO-43 (grupo sanguíneo Leb), G49, 19.9 encontrado en cáncer de colon, mucinas de cáncer gástrico, T5A7 encontrado en células mieloides, R24 encontrado en melanoma, 4.2, GD3, D1.1, OFA-1, GM2, OFA-2, GD2, M1:22:25:8 encontrado en células de carcinoma embrionario y SSEA-3, SSEA-4 encontrado en embriones en etapa 4-8 células.
En otras realizaciones, la molécula heteróloga es un anticuerpo que se une específicamente a un antígeno asociado a una enfermedad que se intenta prevenir, tratar y/o manejar (por ejemplo, un anticuerpo que se une específicamente a un antígeno viral, un antígeno bacteriano, un antígeno parasitario o un antígeno de cáncer). Los ejemplos no limitantes de dichos anticuerpos incluyen anticuerpo anti-CD34, anticuerpo anti-CD56, anticuerpo anti-CD8, anticuerpo anti-CD22, anticuerpo anti-CD20, anticuerpo anti-CD19, anticuerpo anti-CD3, anticuerpo anti-EGFR, anticuerpo anti-HER2, anticuerpo anti-CD34, anticuerpo anti-ckit, anticuerpo anti-flt3, anticuerpo anti-hemaglutinina, anticuerpo anti-gp41, anticuerpo anti-gp120 y anticuerpo anti-glicoproteína gB de VHS-II. En otras realizaciones, el anticuerpo se une inmunoespecíficamente a uno de los antígenos indicados antes. En algunas realizaciones, el anticuerpo se une específicamente a un antígeno celular (por ejemplo, un receptor o un antígeno de superficie celular) expresado por una célula a la que se desea dirigirse. Por ejemplo, el complejo IL-15/IL-15Ra se puede dirigir a las células progenitoras de CD34+ con un anticuerpo anti-CD34 para inducir el desarrollo de dichas células en linfocitos NK CD56+. El complejo IL-15/IL-15Ra se puede dirigir a los linfocitos NK CD56+ con un anticuerpo anti-CD56 para inducir la proliferación de dichos linfocitos.
En algunas realizaciones, la molécula heteróloga aumenta la estabILidad de la proteína. Los ejemplos no limitantes de dichas moléculas incluyen polietILenglicol (PEG), el dominio Fc de una inmunoglobulina IgG o un fragmento de esta, o la albúmina que aumenta la semivida de IL-15 o IL-15Ra in vivo. En algunas realizaciones, IL-15Ra se conjuga con/fusiona al dominio Fc de una inmunoglobulina (por ejemplo, una IgG1) o un fragmento de esta. En una realización, la proteína de fusión IL-15RaFc comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 21 o 22. En otra realización, la proteína de fusión IL-15RaFc es la proteína de fusión IL-15Ra/Fc descrita en Han et al., 20011, Cytokine 56: 804-810, la patente de los Estados Unidos N° 8,507,222 o la patente de los Estados Unidos N° 8,124,084. En algunas realizaciones, la molécula heteróloga no es un dominio Fc de una inmunoglobulina ni un fragmento de esta.
En aquellos complejos IL-15/IL-15Ra que comprenden una molécula heteróloga, la molécula heteróloga se puede conjugar con IL-15 y/o IL-15Ra. En una realización, la molécula heteróloga se conjuga con IL-15Ra. En otra realización, la molécula heteróloga se conjuga con IL-15.
Los componentes de un complejo IL-15/IL-15Ra se pueden fusionar directamente, usando enlaces no covalentes o enlaces covalentes (por ejemplo, mediante combinación de secuencias de aminoácidos a través de enlaces peptídicos), y/o se pueden combinar utILizando uno o más conectores. En una realización, IL-15 e IL-15Ra se fusionan directamente entre sí usando enlaces no covalentes o enlaces covalentes (por ejemplo, mediante combinación de secuencias de
aminoácidos a través de enlaces peptídicos), y/o se pueden combinar utILizando uno o más conectores. En algunas realizaciones un polipéptido que comprende IL-15 e IL-15Ra fusionados directamente entre sí usando enlaces no covalentes o enlaces covalentes es funcional (por ejemplo, capaz de unirse específicamente al complejo IL-15R Py e inducir la transducción de señal mediada por IL-15 y/o la función inmunitaria mediada por IL-15). Los conectores adecuados para preparar los complejos IL-15/IL-15Ra comprenden péptidos, grupos alquILo, grupos alquILo sustituidos químicamente, polímeros o cualquier otra sustancia química unida covalente o no covalentemente capaz de unir dos o más componentes. Los conectores poliméricos comprenden cualquier polímero conocido en el área incluido polietILenglicol ("PEG"). En algunas realizaciones, el conector es un péptido que tiene 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más aminoácidos de longitud. En una realización, el conector es suficientemente largo para preservar la capacidad de IL-15 para unirse al IL-15Ra. En otras realizaciones, el conector es suficientemente largo para preservar la capacidad del complejo IL-15/IL-15Ra para unirse al complejo receptor Py y actuar como un agonista para mediar la transducción de señal de IL-15.
En realizaciones particulares, los complejos IL-15/IL-15Ra se acoplan previamente antes de su uso en los métodos descritos en este documento (por ejemplo, antes de poner en contacto las células con los complejos IL-15/IL-15Ra o antes de administrar los complejos IL-15/IL-15Ra a un sujeto). En otras realizaciones, los complejos IL-15/IL-15Ra no se acoplan previamente antes de su uso en los métodos descritos en el presente documento. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra en combinación con una composición de vacuna para potenciar la respuesta inmunitaria provocada por la administración de la composición de vacuna a un sujeto. En una realización, un Agente Terapéutico que contiene IL-15 e IL-15Ra directamente fusionados entre sí se administra en combinación con una composición de vacuna para potenciar una respuesta inmunitaria provocada por la administración de la composición de vacuna a un sujeto.
En una realización, un Agente Terapéutico mejora o induce la función inmunitaria en un sujeto en al menos 99%, al menos 95%, al menos 90%, al menos 85%, al menos 80%, al menos 75%, al menos 70%, al menos 60%, al menos 50%, al menos 45%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 35%, al menos 30%, al menos 25%, al menos 20% o al menos 10% con respecto a la función inmunitaria en un sujeto al que no se le administró el Agente Terapéutico, empleando ensayos bien conocidos en el área, por ejemplo, ELISPOT, ELISA y ensayos de proliferación celular. En una realización, la función inmunitaria es la liberación de citocinas (por ejemplo, interferón-gamma, IL-2, IL-5, IL-10, IL-12 o el factor de crecimiento transformante (TGF)-beta). En una realización, la función inmunitaria mediada por IL-15 es la proliferación de linfocitos NK, que se puede analizar, por ejemplo, mediante citometría de flujo para detectar el número de linfocitos que expresan marcadores de linfocitos NK (por ejemplo, CD56). En otra realización, la función inmunitaria mediada por IL-15 es la producción de anticuerpos, que se puede analizar, por ejemplo, por ELISA. En algunas realizaciones, la función inmunitaria mediada por IL-15 es una función efectora, que se puede analizar, por ejemplo, mediante un ensayo de citotoxicidad u otros ensayos bien conocidos en el área.
En algunas realizaciones, los ejemplos de la función inmunitaria mejorada por el Agente Terapéutico incluyen la proliferación/expansión de los linfocitos (por ejemplo, aumento de la cantidad de linfocitos), inhibición de la apoptosis de los linfocitos, activación de las células dendríticas (o células presentadoras de antígeno) y presentación de antígenos. En realizaciones particulares, una función inmunitaria mejorada por el Agente Terapéutico es la proliferación/expansión en la cantidad o la activación de linfocitos T CD4+ (por ejemplo, linfocitos T cooperadores Th1 y Th2), linfocitos T CD8+ (por ejemplo, linfocitos T citotóxicos, linfocitos T alfa/beta, y linfocitos T gamma/delta), linfocitos B (por ejemplo, linfocitos plasmáticos), linfocitos T memoria, linfocitos B memoria, células dendríticas (inmaduras o maduras), células presentadoras de antígeno, macrófagos, mastocitos, linfocitos T citolíticos naturales (linfocitos NKT), linfocitos T residentes en tumores, linfocitos T CD122+ o linfocitos citolíticos naturales (linfocitos NK). En una realización, el Agente Terapéutico mejora la proliferación/expansión o la cantidad de progenitores de linfocitos. En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico aumenta la cantidad de linfocitos T CD4+ (por ejemplo, linfocitos T cooperadores Th1 y Th2), linfocitos T CD8+ ( por ejemplo, linfocitos T citotóxicos, linfocitos T alfa/beta y linfocitos T gamma/delta), linfocitos B (por ejemplo, linfocitos plasmáticos), linfocitos T memoria, linfocitos B memoria, células dendríticas (inmaduras o maduras), células presentadoras de antígeno, macrófagos, mastocitos, linfocitos T citolíticos naturales (linfocitos NKT), linfocitos T residentes en tumores, linfocitos T CD122+ o linfocitos citolíticos naturales (linfocitos NK) en aproximadamente 1 vez, 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 6 veces, 7 veces, 8 veces, 9 veces, 10 veces, 20 veces o más con respecto a un control negativo (por ejemplo, la cantidad de las células respectivas sin tratar, sin cultivar o sin poner en contacto con el Agente Terapéutico).
5.3. Expresión de IL-15 e IL-15Ra
5.3.1. Ácidos nucleicos
En este documento se proporcionan ácidos nucleicos que codifican IL-15 e IL-15Ra. Los ácidos nucleicos codifican IL-15 e IL-15Ra que son capaces de unirse covalente o no covalentemente entre sí para formar los complejos IL-15/IL-15Ra descritos en la Sección 5.2, supra. Dichos complejos IL-15/IL-15Ra se pueden unir al complejo Py del receptor, e inducen la transducción de señal mediada por IL-15.
Las secuencias de ácido nucleico que codifican IL-15 nativa son bien conocidas en el área y han sido descritas, por una revisión, véase, Fehniger y Caligiuri, Blood, 2001, 97:14-32, que se incorpora por referencia en este documento en su
totalidad. Por ejemplo, las secuencias de ácido nucleico que codifican IL-15 nativa se pueden encontrar fácILmente en publicaciones y bases de datos, por ejemplo, el sitio web de información del National Center for Biotechnology en ncbi.nlm.nih.gov. Las secuencias de ácido nucleico que codifican IL-15Ra nativo han sido descritas, por ejemplo, véase la publicación internacional N° WO 95/30695, y también se pueden encontrar fácILmente en publicaciones y bases de datos disponibles al público, por ejemplo, el sitio web de información del National Center for Biotechnology Information en ncbi.nlm.nih.gov. Se pueden utILizar técnicas de clonación bien conocidas en el área para generar ácidos nucleicos que codifiquen IL-15 e IL-15Ra. Véanse, por ejemplo, Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John WILey and Sons, Inc. (1995); Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual (2a ed.), Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989); Birren et al., Genome Analysis: A Laboratory Manual, volúmenes 1 a 4, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1997-1999).
En una realización específica, en este documento se proporcionan ácidos nucleicos que codifican los polipéptidos IL-15 e IL-15Ra descritos aquí. En una realización particular, en este documento se proporcionan ácidos nucleicos que codifican un polipéptido IL-15Ra descrito en las Secciones 5.1 o 5.2, supra. En otra realización, en este documento se proporcionan ácidos nucleicos que codifican un polipéptido IL-15Ra que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:3, 4, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 o 45. En otra realización, en este documento se proporciona una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido IL-15Ra, en donde la secuencia de ácido nucleico comprende SEQ ID NO: 5 o 6. En otra realización, en este documento se proporciona una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido IL-15 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 o los residuos de aminoácidos 49 a 162 de of SEQ ID NO: 1. En otra realización, en este documento se proporciona una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido IL-15, en donde la secuencia de ácido nucleico comprende SEQ ID NO:2
En otra realización específica, los ácidos nucleicos que codifican IL-15 y/o IL-15Ra están optimizados, por ejemplo mediante optimización de codones/ARN, reemplazo con secuencias señal heterólogas y eliminación de elementos de inestabILidad de ARNm. Los métodos para generar ácidos nucleicos optimizados que codifican IL-15 e IL-15Ra para la expresión mediante introducción de cambios de codones y/o eliminación de regiones inhibitorias en el ARNm se pueden llevar a cabo adaptando los métodos de optimización descritos por ejemplo, en las patentes de los Estados Unidos N° 5,965,726; 6,174,666; 6,291,664; 6,414,132; y 6,794,498, para IL-15 e IL-15Ra. El contenido de cada una de estas referencias se incorpora por referencia en este documento en su totalidad. Véanse también las solicitudes provisionales de los Estados Unidos N°. 60/812,566, presentada el 9 de junio de 2006 y 60/758,819, presentada el 13 de enero de 2007, y las publicaciones de solicitudes de patentes internacionales N° WO 2007/084342 y Wo 2010/020047, que también se incorporan por referencia en su totalidad. Por ejemplo, se pueden mutar posibles sitios de empalme y elementos de inestabILidad (por ejemplo, elementos ricos en A/T o A/U) dentro del ARN de IL-15 e IL-15Ra sin alterar los aminoácidos codificados por las secuencias de ácido nucleico, para aumentar la estabILidad del ARN para la expresión. Las alteraciones utILizan la degeneración del código genético, por ejemplo, empleando un codón alternativo para un aminoácido idéntico. En algunas realizaciones, puede ser deseable alterar uno o más codones para codificar una mutación conservadora, por ejemplo, un aminoácido simILar con estructura química, propiedades y/o función simILares a las del aminoácido original. Dichos métodos pueden aumentar la expresión de las proteínas IL-15 y/o IL-15Ra en al menos 1 vez, 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 10 veces, 20 veces, 30 veces, 40 veces, 50 veces, 60 veces, 70 veces, 80 veces, 90 veces, o 100 veces o más con respecto a la expresión de las proteínas IL-15 y/o IL-15Ra codificadas por secuencias de ácido nucleico nativas.
Además, la secuencia del péptido señal nativo de IL-15 y/o IL-15Ra puede ser reemplazada por un péptido señal heterólogo, por ejemplo, un péptido señal de GM-CSF humano (véanse las FIG. 8A-D), activador tisular del plasminógeno (tPA) (véanse las FIG. 5A-D), preprolactina, hormona del crecimiento o una proteína inmunoglobulina (por ejemplo, IgE). En una realización, el péptido señal de IL-15 es reemplazado por la secuencia señal de tPA. En otras realizaciones específicas, el péptido señal de IL-15 es reemplazado por el péptido señal de GM-CSF humano. Dichas alternancias pueden aumentar la expresión de las proteínas/los polipéptidos IL-15 y/o IL-15Ra en al menos 1 vez, 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 10 veces, 20 veces, 30 veces, 40 veces, 50 veces, 60 veces, 70 veces, 80 veces, 90 veces, o 100 veces o más con respecto a la expresión de las proteínas IL-15 y/o IL-15Ra con el respectivo péptido señal nativo, según se mide/detecta mediante la técnica conocida por un experto en la materia, por ejemplo, ELISA.
En algunas realizaciones, una secuencia de nucleótidos optimizada que codifica IL-15 o IL-15Ra se hibrida a la secuencia de nucleótidos que codifica IL-15 o IL-15Ra nativos, respectivamente. En algunas realizaciones, una secuencia de nucleótidos optimizada que codifica IL-15 o IL-15Ra se hibrida bajo condiciones de rigurosidad alta a una secuencia de nucleótidos que codifica IL-15 o IL-15Ra nativos, respectivamente, o a uno de sus fragmentos. En una realización, una secuencia de nucleótidos optimizada que codifica IL-15 o IL-15Ra se hibrida bajo condiciones de rigurosidad de hibridación alta, intermedia o baja a una secuencia de nucleótidos que codifica IL-15 o IL-15Ra nativos, respectivamente, o a uno de sus fragmentos. La información con respecto a las condiciones de hibridación ha sido descrita (véase, por ejemplo, la publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos N° US 2005/0048549 (por ejemplo, los párrafos 72-73).
También se proporcionan en este documento ácidos nucleicos que codifican IL-15, IL-15Ra y una molécula heteróloga en una forma que permite que IL-15 se una covalente o no covalentemente al IL-15Ra para formar complejos IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, la molécula heteróloga es un antígeno asociado a una enfermedad que se intenta prevenir,
tratar y/o manejar. Los ejemplos no limitantes de dichos antígenos incluyen los mencionados antes en la Sección 5.2. En otras realizaciones, la molécula heteróloga es un anticuerpo que se une específicamente a un antígeno asociado a una enfermedad que se intenta prevenir, tratar y/o manejar. Los ejemplos no limitantes de dichos anticuerpos incluyen los mencionados antes en la Sección 5.2 y los conocidos en el área. En algunas realizaciones, el anticuerpo se une específicamente a un antígeno de superficie celular (por ejemplo, un receptor) expresado por una célula a la que se desea dirigirse. En algunas realizaciones, la molécula heteróloga aumenta la estabILidad de la proteína. Los ejemplos no limitantes de dichas moléculas incluyen polietILenglicol (PEG), el dominio Fc de una inmunoglobulina IgG o un fragmento de esta, o la albúmina que aumenta la semivida de IL-15 o IL-15Ra in vivo. En algunas realizaciones, la molécula heteróloga no es un dominio Fc de una inmunoglobulina ni un fragmento de esta.
En aquellos complejos IL-15/IL-15Ra que comprenden una molécula heteróloga, la molécula heteróloga se puede conjugar con IL-15 y/o IL-15Ra. En una realización, la molécula heteróloga se conjuga con IL-15Ra. En otra realización, la molécula heteróloga se conjuga con IL-15.
En algunas realizaciones, IL-15 e IL-15Ra son codificados por un constructo de ácido nucleico (por ejemplo, un constructo bicistrónico). En algunas realizaciones, IL-15 e IL-15Ra son codificados por un constructo de ácido nucleico que comprende un único marco de lectura abierto (ORF) de IL-15 e IL-15Ra. En algunas realizaciones, IL-15 o IL-15Ra codificados por un constructo de ácido nucleico se pueden conjugar con un ácido nucleico que codifica una molécula heteróloga, como un antígeno o un anticuerpo de interés. En otras realizaciones, IL-15 e IL-15Ra son codificados por dos constructos de ácido nucleico, en donde un primer constructo de ácido nucleico codifica IL-15 y un segundo constructo de ácido nucleico codifica IL-15Ra. La IL-15 codificada por el primer constructo de ácido nucleico se puede conjugar con un ácido nucleico que codifica una molécula heteróloga, como un antígeno o un anticuerpo de interés. Alternativamente, o además, el IL-15Ra codificado por el segundo constructo de ácido nucleico se pueden conjugar con un ácido nucleico que codifica una molécula heteróloga, como un antígeno o un anticuerpo de interés.
Los ácidos nucleicos descritos en este documento se pueden administrar a un sujeto (preferentemente, un sujeto humano) como parte de un protocolo de genoterapia. En algunas realizaciones, los ácidos nucleicos que codifican un polipéptido IL-15Ra descrito en este documento (véanse, por ejemplo, Sección 3.1, Sección 5.1 y/o Sección 5.2) se pueden administrar a un sujeto (preferentemente un sujeto humano) como parte de un protocolo de genoterapia. En algunas realizaciones, los ácidos nucleicos que codifican un polipéptido IL-15Ra descrito en este documento (véanse, por ejemplo, Sección 3.1, Sección 5.1 y/o Sección 5.2) y los ácidos nucleicos que codifican un polipéptido IL-15 se pueden administrar a un sujeto (preferentemente un sujeto humano) como parte de un protocolo de genoterapia. En algunas realizaciones, los ácidos nucleicos codifican un IL-15Ra descrito en la Sección 5.1, supra. Los ácidos nucleicos que codifican un polipéptido IL-15Ra y un polipéptido IL-15 que son administrados a un sujeto pueden ser parte de un vector, plásmido u otro constructo como se describe en la Sección 5.3.2, infra. Los ácidos nucleicos que codifican un polipéptido IL-15Ra y un polipéptido IL-15 se pueden administrar a un sujeto para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 y/o para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso como, por ejemplo, cáncer, una enfermedad infecciosa, una inmunodeficiencia y/o linfopenia.
5.3.2. Constructos y células
Los ácidos nucleicos que codifican IL-15 y/o IL-15Ra se pueden insertar en constructos de ácido nucleico para la expresión en células de mamíferos, bacterias, levaduras y virus. IL-15 e IL-15Ra pueden ser expresados de manera recombinante a partir del mismo constructo de ácido nucleico (por ejemplo, empleando un constructo de ácido nucleico bicistrónico) o a partir de diferentes constructos de ácido nucleico (por ejemplo, empleando constructos de ácido nucleico monocistrónicos). En una realización, IL-15 e IL-15Ra se pueden expresar de manera recombinante a partir de un único constructo de ácido nucleico que comprende un único marco de lectura abierto (ORF) de IL-15 e IL-15Ra.
Los constructos de ácido nucleico pueden comprender uno o más elementos reguladores transcripcionales unidos operativamente a la secuencia de codificación de IL-15 y/o IL-15Ra. Los elementos reguladores transcripcionales están generalmente en posición 5' respecto a la secuencia de codificación y dirigen la transcripción de los ácidos nucleicos que codifican IL-15 y/o IL-15Ra. En algunas realizaciones, uno o más de los elementos reguladores transcripcionales que se encuentran en la naturaleza para regular la transcripción del gen de IL-15 nativa y/o de IL-15Ra nativo se usan para controlar la transcripción. En otras realizaciones, uno o más elementos reguladores transcripcionales que son heterólogos respecto al gen nativo de IL-15 y/o de IL-15Ra se usan para controlar la transcripción. Se puede utILizar cualquier elemento regulador transcripcional conocido por un experto en la materia. Los ejemplos no limitantes de los tipos de elementos reguladores transcripcionales incluyen un promotor constitutivo, un promotor específico de tejido y un promotor inducible. En una realización, la transcripción es controlada, al menos en parte, por uno o más elementos reguladores transcripcionales de mamífero (en algunas realizaciones, humanos). En una realización, la transcripción es controlada, al menos en parte, por un promotor fuerte, por ejemplo, CMV.
Algunos ejemplos de promotores que se pueden usar para controlar la transcripción incluyen, pero no exclusivamente, la región promotora temprana de SV40 (Bernoist & Chambon, 1981, Nature 290:304-310), el promotor contenido en la repetición terminal larga 3' del virus del sarcoma de Rous (Yamamoto et al., 1980, Cell 22:787-797), el promotor de la timidina cinasa del herpes (Wagner et al., 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.. 78:1441-1445), las secuencias reguladoras
del gen de la metalotioneína (Brinster et al., 1982, Nature 296:39-42); adenovirus (ADV), citomegalovirus (CMV), virus del papILoma bovino (VPB), promotor B19p6 del parvovirus, los vectores de expresión procariotas como el promotor de la beta-lactamasa (VILla-Kamaroff et al., 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 75:3727-3731), o el promotor tac (DeBoer et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 80:21-25); véase también "Useful proteins from recombinant bacteria" en Scientific American, 1980, 242:74-94; vectores de expresión en plantas que comprenden la región promotora de la nopalina sintasa (Herrera-Estrella et al., Nature 303:209-213) o el promotor de ARN 35s del virus del mosaico de la coliflor (Gardner, et al., 1981, Nucl. Acids Res. 9:2871), y el promotor de la enzima fotosintética ribulosa bifosfato carboxILasa (Herrera-Estrella et al., 1984, Nature 310:115-120); elementos promotores de levaduras y otros hongos como el promotor Gal 4, el promotor de ADC (alcohol deshidrogenasa), el promotor de PGK (fosfoglicerol cinasa), el promotor de la fosfatasa alcalina, y las regiones de control transcripcional en animales siguientes, que presentan especificidad de tejido y han sido utILizadas en animales transgénicos: región de control del gen de la elastasa I, que es activa en células acinares pancreáticas (Swift et al., 1984, Cell 38:639-646; Ornitz et al., 1986, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 50:399-409; MacDonald, 1987, Hepatology 7:425-515); la región de control del gen de la insulina que es activa en células beta pancreáticas (Hanahan, 1985, Nature 315:115-122), la región de control del gen de la inmunoglobulina que es activa en células linfoides (Grosschedl et al., 1984, Cell 38:647-658; Adames et al., 1985, Nature 318:533-538; Alexander et al., 1987, Mol. Cell. Biol. 7:1436-1444), la región de control del virus del tumor mamario en ratones que es activa en células testiculares, de mama, linfoides y mastocitos (Leder et al., 1986, Cell 45:485-495), la región de control del gen de la albúmina que es activa en el hígado (Pinkert et al., 1987, Genes and Devel. 1:268-276), la región de control del gen de la alfafetoproteína que es activa en el hígado (Krumlauf et al., 1985, Mol. Cell. Biol. 5:1639-1648; Hammer et al., 1987, Science 235:53-58; la región de control del gen de la alfa-1 antitripsina que es activa en el hígado (Kelsey et al., 1987, Genes and Devel.
1:161-171), la región de control del gen de la beta-globina que es activa en células mieloides (Mogram et al., 1985, Nature 315:338-340; Kollias et al., 1986, Cell 46:89-94; la región de control del gen de la proteína básica de mielina que es activa en oligodendrocitos del cerebro (Readhead et al., 1987, Cell 48:703-712); la región de control del gen de la cadena ligera de miosina-2 que es activa en el musculo esquelético (Sani, 1985, Nature 314:283-286), y la región de control del gen de la hormona liberadora de gonadotropina que es activa en el hipotálamo (Mason et al., 1986, Science 234:1372-1378). En otros aspectos, se puede utILizar un promotor inducible.
Los constructos de ácido nucleico también pueden comprender uno o más elementos reguladores transcripcionales unidos operativamente a la secuencia de codificación de IL-15 y/o IL-15Ra. Los elementos reguladores postranscripcionales pueden estar en posición 5' y/o 3' respecto a la secuencia de codificación y dirigen la regulación postranscripcional de la traducción de los transcritos de ARN que codifican IL-15 y/o IL-15Ra.
En otro aspecto, el constructo de ácido nucleico puede ser un vector dirigido a un gen que reemplaza una región reguladora existente en el gen con una secuencia reguladora aislada de un gen diferente o una secuencia reguladora nueva como se describe por ejemplo en las publicaciones internacionales N° WO 94/12650 y WO 01/68882, que se incorporan en este documento por referencia en su totalidad. En algunas realizaciones, una célula hospedadora puede ser genomanipulada para aumentar la producción de IL-15 y/o IL-15Ra endógenos mediante, por ejemplo, la alteración de la región reguladora de los genes de IL-15 y/o IL-15Ra endógenos.
El constructo de ácido nucleico elegido dependerá de diversos factores, incluidos, pero no exclusivamente, la fuerza de los elementos reguladores transcripcionales y la célula hospedadora que se va a utILizar para expresar a IL-15 y/o IL-15Ra. Los constructos de ácido nucleico pueden ser un plásmido, fagémido, cósmido, vector viral, fago, cromosoma artificial y simILares. En un aspecto, los vectores pueden ser episómicos o vectores que no se integran homólogamente, los cuales pueden ser introducidos en las células hospedadoras apropiadas por cualquier medio adecuado (transformación, transfección, conjugación, fusión de protoplastos, electroporación, precipitación con fosfato de calcio, microinyección directa, etc.) para transformarlos.
Los constructos de ácido nucleico pueden ser un plásmido o un vector de integración estable para la expresión transitoria o estable de IL-15 y/o IL-15Ra en células hospedadoras. Para la expresión estable, el vector puede mediar la integración cromosómica en un sitio diana o en un sitio cromosómico aleatorio. Los ejemplos no limitantes de sistemas de vectores de células hospedadoras que se pueden utILizar para expresar IL-15 y/o IL-15Ra incluyen sistemas de células de mamífero infectadas con virus (por ejemplo, vaccinia virus, adenovirus, retrovirus, lentivirus, etc.); sistema de células de insecto infectadas con virus (por ejemplo, baculovirus); microorganismos como levaduras que contienen vectores de levadura, o bacterias transformadas con bacteriófagos, ADN, ADN plasmídico o ADN cosmídico; líneas celulares estables generadas por transformación utILizando un marcador seleccionable. En algunas realizaciones, los constructos de ácido nucleico incluyen un gen marcador seleccionable incluidos, pero no exclusivamente, neo, gpt, dhfr, ada, pac, hyg, CAD e hisD.
Los constructos de ácido nucleico pueden ser monocistrónicos o multicistrónicos. Un constructo de ácido nucleico multicistrónico puede codificar 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más, o en el intervalo de 2-5, 5-10 o 10-20 genes/secuencias de nucleótidos. Por ejemplo, un constructo de ácido nucleico bicistrónico puede comprender, en el orden siguiente, un promotor, un primer gen (por ejemplo, IL-15) y un segundo gen (por ejemplo, IL-15Ra). En dicho constructo de ácido nucleico, la transcripción de ambos genes es conducida por el promotor, mientras que la traducción del ARNm del primer gen es mediante un mecanismo de escaneo dependiente de cap y la traducción del ARNm del segundo gen es mediante un mecanismo independiente de cap, por ejemplo, mediante un IRES.
Las técnicas para poner en práctica estos aspectos emplearán, a menos que se indique lo contrario, técnicas convencionales de biología molecular, microbiología y manipulación y producción de ADN recombinante, que son de práctica rutinaria por un experto en la materia. Véanse, por ejemplo, Sambrook, 1989, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, segunda edición; DNA Cloning, volúmenes I y II (Glover, Ed. 1985); Oligonucleotide Synthesis (Gait, Ed. 1984); Nucleic Acid Hybridization (Hames & Higgins, Eds. 1984); Transcription and Translation (Hames & Higgins, Eds. 1984); Animal Cell Culture (Freshney, Ed. 1986); ImmobILized Cells and Enzymes (IRL Press, 1986); Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning (1984); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (MILler & Calos, Eds. 1987, Cold Spring Harbor Laboratory); Methods in Enzymology, volúmenes 154 y155 (Wu & Grossman, y Wu, Eds., respectivamente), (Mayer & Walker, Eds., 1987); Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biology (Academic Press, Londres, Scopes, 1987), Expression of Proteins in Mammalian Cells Using Vaccinia Viral Vectors in Current Protocols in Molecular Biology, volumen 2 (Ausubel etal., Eds., 1991).
El o los constructos de ácido nucleico que comprenden ácidos nucleicos que codifican IL-15 y/o IL-15Ra se pueden administrar in vivo a un mamífero o transfectar en células primarias o inmortalizadas en cultivo. Dichos constructos de ácido nucleico se pueden usar para mejorar la función mediada por IL-15 y/o para prevenir, tratar y/o manejar una enfermedad en la cual la mejora de la función mediada por IL-15 es beneficiosa, como las enfermedades descritas en las Secciones 5.7 a 5.9, infra. Los constructos de ácido nucleico que comprenden ácidos nucleicos que codifican IL-15 y/o IL-15Ra se pueden utILizar para generar células que expresan IL-15 y/o IL-15Ra. En algunas realizaciones, las células son células primarias (por ejemplo, células tumorales aisladas de un paciente). En otras realizaciones, las células son líneas celulares de mamífero.
Las células hospedadoras elegidas para la expresión de ácidos nucleicos dependerán del uso al que están destinadas esas células. Al seleccionar células hospedadoras se pueden considerar factores como si una célula se glicosILa de manera simILar a las células que expresan endógenamente, por ejemplo, IL-15 y/o IL-15Ra.
Los ejemplos no limitantes de células hospedadoras que se pueden utILizar para expresar la(s) célula(s) codificada(s) por los constructos de ácido nucleico de este documento incluyen células de mamíferos, células bacterianas, células de levadura, células primarias, células inmortalizadas, células vegetales y células de insectos. En una realización específica, las células hospedadoras son una línea celular de mamífero. Los ejemplos de líneas celulares de mamífero incluyen, pero no exclusivamente, células COS, CHO, HeLa, NIH3T3, HepG2, MCF7, HEK 293, HEK 293T, RD, PC12, hibridomas, linfocitos pre-B, 293, 293H, K562, SkBr3, BT474, A204, M07Sb, TFp1, Raji, Jurkat, MOLT-4, CTLL-2, MC-IXC, SK-N-MC, SK-N-MC, SK-N-DZ, SH-SY5Y, C127, N0 y células BE(2)-C. Otras líneas celulares de mamíferos disponibles como hospedadoras para la expresión son conocidas en el área e incluyen muchas líneas celulares inmortalizadas disponibles en American Type Culture Collection (ATCC). En otra realización, las células hospedadoras son líneas celulares inmortalizadas derivadas de un sujeto. En otra realización, las células hospedadoras son células primarias o secundarias de un sujeto. En una realización particular, las células hospedadoras son células cancerosas. En otra realización, las células hospedadoras son células irradiadas. En una realización particular, las células hospedadoras son líneas celulares de mamífero irradiadas o células primarias de un sujeto. En otra realización, las células hospedadoras son células epiteliales o o células endoteliales. En otra realización, las células hospedadoras son células fetales/embrionarias. En algunas realizaciones, las células hospedadoras son células progenitoras. En algunas realizaciones, las células hospedadoras son linfocitos (por ejemplo, linfocitos T y linfocitos B). En otra realización, las células hospedadoras son células madre. Aún en otra realización, las células hospedadoras genomanipuladas para expresar los constructos de ácido nucleico descritos en este documento son de un adulto.
En algunas realizaciones, en la presente se utILizan células aisladas. En una realización, las células aisladas están al menos 80%, 90%, 95% o 98% exentas de un tipo celular diferente según se mide mediante una técnica conocida por un experto en la materia, como citometría de flujo. En otras palabras, al menos 80%, 90%, 95% o 98% de las células aisladas son del mismo tipo.
En una realización, los constructos de ácido nucleico que codifican IL-15 o IL-15Ra pueden ser cotransfectados o transfectados en las mismas células hospedadoras o diferentes células hospedadoras. Opcionalmente, un constructo de ácido nucleico que comprende ácidos nucleicos que codifican un gen marcador seleccionable también se puede transfectar en las mismas células para seleccionar por células transfectadas. Si los constructos de ácido nucleico que comprenden ácidos nucleicos que codifican IL-15 e IL-15Ra se transfectan en células diferentes, IL-15 e IL-15Ra expresados por las células diferentes se pueden aislar y poner en contacto entre sí bajo condiciones adecuadas para formar los complejos IL-15/IL-15Ra descritos en la Sección 5.2, supra. Se puede utILizar cualquier técnica conocida por un experto en la materia para transfectar o transducir células hospedadoras con ácidos nucleicos, incluidas, por ejemplo, transformación, transfección, conjugación, fusión de protoplastos, electroporación, precipitación con fosfato de calcio, microinyección directa e infección con virus, incluidos, pero no exclusivamente, adenovirus, lentivirus y retrovirus.
Para la producción a largo plazo y de alto rendimiento de un polipéptido recombinante de los polipéptidos IL-15 e IL-15Ra, se pueden generar líneas celulares estables. Por ejemplo, las líneas celulares se pueden transformar utILizando constructos de ácido nucleico descritos en este documento los cuales pueden contener un gen marcador seleccionable en el mismo constructo de ácido nucleico o en uno diferente. El gen marcador seleccionable se puede introducir en la
misma célula por cotransfección. Después de la introducción del vector, se permite que las células se multipliquen durante 1 -2 días en un medio enriquecido antes de cambiarlas a un medio selectivo para permitir la multiplicación y la recuperación de las células que expresan exitosamente los ácidos nucleicos introducidos. Los clones resistentes de las células transformadas establemente se pueden proliferar utILizando técnicas de cultivo celular bien conocidas en el área que sean apropiadas para el tipo de célula. En una realización particular, la línea celular ha sido adaptada para se multiplique en un medio sin suero. En una realización, la línea celular ha sido adaptada para que se multiplique en un medio sin suero en matraces de agitación. En una realización particular, la línea celular ha sido adaptada para que se multiplique en matraces de mezcla o giratorios. En algunas realizaciones, la línea celular se cultiva en suspensión. En realizaciones particulares, la línea celular no es adherente o ha sido adaptada para multiplicarse como células no adherentes. En algunas realizaciones, la línea celular ha sido adaptada para que se multiplique en condiciones de bajo contenido de calcio. En algunas realizaciones, la línea celular se cultiva o se adapta para que se multiplique en un medio con bajo contenido de suero.
En una realización, un método particularmente preferido de producción de alto rendimiento de un polipéptido recombinante de la presente invención es a través del uso de la amplificación de la dihidro folato reductasa (DHFR) en células CHO deficientes en DHFR, mediante el uso de niveles sucesivamente crecientes de metotrexato como se describe en la patente de los Estados Unidos N° 4,889,803, que se incorpora en en este documento por referencia en su totalidad. El polipéptido obtenido a partir de dichas células puede estar en forma glicosILada.
En una realización específica, una célula hospedadora que expresa de manera recombinante IL-15 e IL-15Ra se produce utILizando las técnicas descritas en la Sección 6.4, infra. En otra realización específica, la célula hospedadora es la célula HEK293 descrita en la Sección 6.4, infra.
En una realización, una célula hospedadora expresa de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra que está glicosILado (N- u O-glicosILado) en ciertos residuos de aminoácidos. En algunas realizaciones, una célula hospedadora que expresa de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra (por ejemplo, un polipéptido IL-15Ra humano) está glicosILado, en donde la glicosILación del polipéptido IL-15Ra representa al menos 20%, al menos 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50% o de 20% a 25%, 20% a 30%, 25% a 30%, 25% a 35%, 30% a 35%, 30% a 40%, 35% a 40%, 35% a 45%, 40% a 50%, 45% a 50%, 20% a 40% o 25% a 50% de la masa (peso molecular) del polipéptido IL-15Ra. En algunas realizaciones, una célula hospedadora expresa de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra humano que está glicosILado en uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete o todos los sitios de glicosILación siguientes: (i) O-glicosILación en Thr5 de la secuencia de aminoácidos NWELTASASHQPPGVYPQG (SEQ ID NO: 42) en el IL-15Ra; (ii) O-glicosILación en Ser7 de la secuencia de aminoácidos NWELTASASHQPPGVYPQG (SEQ ID n O: 42) en el IL-15Ra; (iii) N-glicosILación en Ser 8 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVK (SEQ ID NO: 43) en el IL-15Ra, o Ser 8 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; (iv) N-glicosILación en Ser 18 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; (v) N-glicosILación en Ser 20 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; (vi) N-glicosILación en Ser 23 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra; y/o (vii) N-glicosILado en Ser 31 de la secuencia de aminoácidos ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNS (SEQ ID NO: 44) en el IL-15Ra.
En una realización, las líneas celulares se genomanipulan para que expresen tanto IL-15 como IL-15Ra soluble, y el heterodímero estable purificado de IL-15 e IL-15Ra soluble, que se puede usar in vitro o in vivo, por ejemplo, se puede administrar a un humano. En algunas realizaciones, las líneas celulares se genomanipulan para que expresen tanto IL-15 humana nativa como IL-15Ra humano nativo, y el heterodímero estable de IL-15 humana nativa e IL-15Ra humano nativo soluble que se forma se puede purificar, y este heterodímero purificado se puede utILizar para administrar a un humano. En una realización, la estabILidad de IL-15 aumenta cuando es producida a partir de líneas celulares que expresan de manera recombinante tanto IL-15 como IL-15Ra.
En una realización, la célula hospedadora expresa de manera recombinante IL-15 e IL-15Ra de longitud completa. En otra realización específica, la célula hospedadora expresa de manera recombinante IL-15 y la forma soluble de IL-15Ra. En otra realización, la célula hospedadora expresa de manera recombinante IL-15 y una forma unida a membrana de IL-15Ra que no es escindida de la superficie celular y permanece asociada a la célula. En algunas realizaciones, la célula hospedadora que expresa de manera recombinante IL-15 y/o IL-15Ra (de longitud completa o forma soluble) también expresa de manera recombinante otro polipéptido (por ejemplo, una citocina o un fragmento de esta).
En algunas realizaciones, una célula hospedadora expresa de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra descrito en este documento (véanse, por ejemplo, Sección 3.1, Sección 5.1 y/o Sección 5.2, supra). En una realización, una célula hospedadora expresa de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra que comprende la secuencia de aminoácidos de SeQ ID NO: 3, 4, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 o 45. En otra realización, una célula hospedadora expresa de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra glicosILado descrito en este documento (véase, por ejemplo, Sección 5.1, supra). En algunas realizaciones, dicha célula hospedadora expresa de manera recombinante un polipéptido IL-15 además de un polipéptido IL-15Ra.
En algunas realizaciones, una célula hospedadora expresa de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra descrito en este documento (véanse, por ejemplo, Sección 3.1, Sección 5.1 y/o Sección 5.2, supra) e IL-15 (por ejemplo, la IL-15 descrita en la Sección 3.1, supra). En una realización, una célula hospedadora expresa de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3, 4, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 o 45, e IL-15 (por ejemplo, la IL-15 descrita en la Sección 3.1, supra). En otra realización, una célula hospedadora expresa de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra glicosILado descrito en este documento (véase, por ejemplo, Sección 5.1, supra) e IL-15 (por ejemplo, la IL-15 descrita en la Sección 3.1, supra).
En algunas realizaciones, una célula hospedadora expresa de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra en el cual el sitio de escisión para una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo ha sido mutado. En una realización, una célula hospedadora expresa de manera recombinante un derivado de IL-15Ra que comprende una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho mutaciones en el sitio de escisión del dominio extracelular de IL-15Ra de modo que la escisión de IL-15Ra por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo, se inhibe. En algunas realizaciones, una célula hospedadora expresa de manera recombinante un derivado de IL-15Ra en el cual la secuencia de aminoácidos PQGHSDTT (SEQ ID NO:26) se muta de modo que la escisión por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra humano nativo, se inhibe. En algunas realizaciones, se introducen una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho sustituciones y/o deleciones de aminoácidos en la secuencia de aminoácidos PQGHSDTT (SEQ ID NO: 26) de IL-15Ra humano de modo que la escisión por una proteasa endógena que escinde al IL-15Ra humano nativo, se inhibe. En algunas realizaciones, una célula hospedadora expresa de manera recombinante un derivado de IL-15Ra en el cual la secuencia de aminoácidos PQGHSDTT (SEQ ID NO:26) es reemplazada por un sitio de escisión que es reconocido y escindido por una proteasa heteróloga. Los ejemplos no limitantes de dichos sitios de escisión por proteasa heteróloga incluyen Arg-X-X-Arg (SEQ ID NO:7), que es reconocido y escindido por la furina proteasa; y A-B-Pro-Arg-X-Y (SEQ ID NO:8) (A y B son aminoácidos hidrófobos y X e Y son aminoácidos no ácidos) y Gly-Arg-Gly, que son reconocidos y escindidos por la trombina proteasa.
En otra realización, una célula hospedadora expresa de manera recombinante un derivado de IL-15Ra, en donde el derivado de IL-15Ra: (i) comprende un sitio de escisión extracelular mutado que inhibe la escisión por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo, y (ii) carece de todo o un fragmento del dominio transmembrana de IL-15Ra nativo. En algunas realizaciones, una célula hospedadora expresa de manera recombinante un derivado de IL-15Ra, en donde el derivado de IL-15Ra comprende: (i) una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho mutaciones (por ejemplo, sustituciones y/o deleciones) en el sitio de escisión extracelular de IL-15Ra de modo que la escisión de IL-15Ra por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo, se inhibe, y (ii) todo o un fragmento de un dominio transmembrana de una molécula heteróloga en lugar de todo o un fragmento del dominio transmembrana de IL-15Ra nativo. En algunas realizaciones, una célula hospedadora expresa de manera recombinante un derivado de IL-15Ra, en donde el derivado de IL-15Ra comprende: (i) una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho mutaciones (por ejemplo, sustituciones y/o deleciones) en la secuencia de aminoácidos PQGHSDTT (SEQ ID NO:26) de modo que la escisión de IL-15Ra por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo, se inhibe, y (ii) todo o un fragmento de un dominio transmembrana de una molécula heteróloga en lugar de todo o un fragmento del dominio transmembrana de IL-15Ra nativo. De conformidad con estas realizaciones, los derivados de IL-15Ra pueden, o no, comprender todo o un fragmento de la cola citoplasmática de IL-15Ra nativo. En algunas realizaciones, la molécula heteróloga es CD4, CD8 o MHC.
Los ácidos nucleicos que codifican IL-15 y/o IL-15Ra se pueden usar para generar células de mamífero que expresen de manera recombinante IL-15 e IL-15Ra en grandes cantidades para el aislamiento y la purificación de IL-15 and IL-15Ra, preferentemente la IL-15 y el IL-15Ra se asocian como complejos. En una realización, grandes cantidades de complejos IL-15/IL-15Ra se refieren a cantidades de complejos IL-15/IL-15Ra expresados por células que son al menos 1 vez, 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 6 veces, 7 veces, 8 veces, 9 veces, 10 veces, 20 veces o más de 20 veces mayores que las cantidades de complejos IL-15/IL-15Ra expresados endógenamente por células de control (por ejemplo, células que no han sido genomanipuladas para expresar de manera recombinante IL-15, IL-15Ra, o ambos IL-15 e IL-15Ra, o células que contienen un vector vacío). En algunas realizaciones, una célula hospedadora descrita en este documento expresa aproximadamente 0,1 pg a 25 pg, 0,1 pg a 20 pg, 0,1 pg a 15 pg, 0,1 pg a 10 pg, 0,1 pg a 5 pg, 0,1 pg a 2 pg, 2 pg a 10 pg, o 5 a 20 pg de IL-15 según se mide mediante una técnica conocida por un experto en la materia (por ejemplo un ELISA). En algunas realizaciones, una célula hospedadora descrita en este documento expresa aproximadamente 0,1 a 0,25 pg por día, 0,25 a 0,5 pg por día, 0,5 a 1 pg por día, 1 a 2 pg por día, 2 a 5 pg por día o 5 a 10 pg por día de IL-15 según se mide mediante una técnica conocida por un experto en la materia ( por ejemplo, un ELISA). En algunas realizaciones, una población de células hospedadoras que expresa de manera recombinante IL-15 e IL-15Ra, expresa entre 200 ng/mILlón de células por día y 20.000 ng/mILlón de células por día, 200 ng/mILlón de células por día y 15.000 ng/mILlón de células por día, 200 ng/ mILlón de células por día y 10.000 ng/mILlón de células por día, 200 ng/mILlón de células por día y 5000 ng/mILlón de células por día, 200 ng/mILlón de células por día y 2000 ng/mILlón de células por día, 200 ng/mILlón de células por día y 1000 ng/mILlón de células por día, 200 ng/mILlón de células por día y 600 ng/mILlón de células por día, 200 ng/mILlón de células por día y 500 ng/mILlón de células por día, 300 ng/mILlón de células por día y 600 ng/mILlón de células por día de IL-15. En algunas realizaciones, una población de células hospedadoras que expresa de manera recombinante IL-15 e IL-15Ra, expresa aproximadamente 200 ng/mILlón de células por día, alrededor de 300 ng/mILlón de células por día, alrededor de 400 ng/mILlón de células por día, alrededor de 500 ng/mILlón de células por día, alrededor de 600 ng/mILlón de células por día, alrededor de 700 ng/mILlón de células por día, alrededor de 800 ng/mILlón de células por día, alrededor de 900 ng/mILlón de células por día, alrededor de 1000ng/mILlón de células por día, alrededor de 1500 ng/mILlón de células por día, alrededor de 2000 ng/mILlón de células por día, alrededor de 5000
ng/mILlón de células por día, alrededor de 10.000 ng/mlLlón de células por día, alrededor de 15.000 ng/mlLlón de células por día o alrededor de 20.000 ng/mILlón de células por día de IL-15. En una realización específica, el IL-15Ra es la forma soluble de IL-15Ra. En una realización específica, el IL-15Ra es la forma soluble de IL-15Ra asociada con IL-15 en un heterodímero estable, que aumenta el rendimiento y simplifica la producción y la purificación del heterodímero bioactivo de la citocina IL-15/IL-15Ra soluble.
Las proteínas recombinantes IL-15 e IL-15Ra se pueden purificar usando métodos de producción y purificación de proteínas recombinantes bien conocidos en el área, por ejemplo, véase la publicación internacional N° WO 07/070488, que se incorpora en este documento por referencia en su totalidad. En resumen, el polipéptido se puede producir intracelularmente, en el espacio periplásmico, o secretar directamente en el medio. El lisado de células o sobrenadante que contiene el polipéptido se puede purificar utILizando, por ejemplo, cromatografía con hidroxiapatita, electroforesis en gel, diálisis y cromatografía por afinidad. Otras técnicas para la purificación de proteínas como el fraccionamiento en una columna de intercambio iónico, precipitación en etanol, HPLC de fase inversa, cromatografía en sílice, cromatografía en heparina SEPHAROSE™ (sustancia para fILtración en gel; Pharmacia Inc., Piscataway, Nueva Jersey) cromatografía en una resina de intercambio aniónico o catiónico (como una columna de ácido poliaspártico), cromatoenfoque, SDS-PAGE y precipitación en sulfato de amonio también están disponibles.
En algunas realizaciones, IL-15 e IL-15Ra son sintetizados o expresados de manera recombinante por células diferentes y posteriormente aislados y combinados para formar un complejo IL-15/IL-15Ra, in vitro, antes de la administración a un sujeto. En otras realizaciones, IL-15 e IL-15Ra son sintetizados o expresados de manera recombinante por células diferentes y posteriormente aislados y administrados simultáneamente a un sujeto como un complejo IL-15/IL-15Ra, in situ o in vivo. Aún en otras realizaciones, IL-15 e IL-15Ra son sintetizados o expresados juntos por la misma célula y el complejo IL-15/IL-15Ra formado se aísla. Véase Sección 6.4, infra, por técnicas de purificación.
En algunos aspectos, las células hospedadoras que expresan de manera recombinante IL-15 e IL-15Ra se administran a un sujeto (preferentemente, un sujeto humano) como parte de un protocolo de genoterapia. Véase Sección 5.6, infra.
5.4 Composiciones
En este documento se proporcionan composiciones que contienen un IL-15Ra descrito en este documento, por ejemplo, un IL-15Ra soluble, como el descrito en la Sección 5.1, supra. También se proporcionan en este documento composiciones que contienen los Agentes Terapéuticos. Las composiciones incluyen composiciones de principio activo útILes en la fabricación de composiciones farmacéuticas (por ejemplo, composiciones impuras o no estérILes) y composiciones farmacéuticas (es decir, composiciones que son adecuadas para la administración a un sujeto o paciente) que se pueden utILizar en la preparación de formas farmacéuticas. Las composiciones (por ejemplo, composiciones farmacéuticas) contienen la cantidad eficaz de un Agente Terapéutico o una combinación de Agentes Terapéuticos y un portador farmacéuticamente aceptable. En algunas realizaciones, las composiciones (por ejemplo, composiciones farmacéuticas) contienen una cantidad eficaz de uno o más Agentes Terapéuticos y un portador farmacéuticamente aceptable. En algunas realizaciones, la composición contiene además un Agente Terapéutico adicional, por ejemplo, un antineoplásico, un antiviral, un antiinflamatorio o un adyuvante. Los ejemplos no limitantes de dichos Agentes Terapéuticos se proporcionan infra.
En una realización, la expresión "farmacéuticamente aceptable" significa aprobada por un organismo regulador del gobierno federal o estatal o indicada en la farmacopea de los Estados Unidos u otras farmacopea reconocidas en general para utILizar en animales, y más particularmente en humanos. El término "portador" se refiere a un dILuyente, un adyuvante (por ejemplo, el adyuvante de Freund (completo e incompleto) o, más preferentemente, el adyuvante MF59C.1 comercializado por Chiron, EmeryvILle, CA), excipiente o vehículo con el cual se administra el Agente Terapéutico. Dichos portadores farmacéuticos, puede ser líquidos estérILes como agua y aceite, incluidos los derivados del petróleo o de origen animal, vegetal o sintético, como aceite de cacahuate, aceite de soja, aceite mineral, aceite de sésamo, y simILares. En una realización, el agua es un portador cuando la composición farmacéutica se administra por vía intravenosa. También se pueden emplear soluciones salinas y soluciones acuosas de dextrosa y glicerol como portadores líquidos, particularmente para soluciones inyectables. Los excipientes farmacéuticos adecuados incluyen almidón, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, arroz, harina, tiza, gel de sílice, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, talco, cloruro de sodio, leche descremada desecada, glicerol, propILenglicol, agua, etanol y simILares. La composición, si se desea, también puede contener cantidades menores de agentes humectantes o emulsionantes o tampones. Estas composiciones pueden tomar la forma de soluciones, suspensiones, emulsiones, comprimidos, píldoras, cápsulas, polvos, formulaciones de liberación sostenida y simILares.
Las composiciones farmacéuticas se pueden formular de cualquier manera convencional utILizando uno o más portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables. En una realización específica, un Agente Terapéutico administrado a un sujeto de conformidad con los métodos descritos en este documento se administra como una composición farmacéutica.
Generalmente, los componentes de las composiciones farmacéuticas comprenden Agentes Terapéuticos suministrados por separado o mezclados entre sí en formas farmacéuticas unitarias, por ejemplo, como un polvo liofILizado seco o un concentrado exento de agua en un recipiente sellado herméticamente como una ampolla o una bolsita que indique la
cantidad de principio activo. Cuando el Agente Terapéutico se debe administrar por infusión, puede ser suministrado con un frasco de infusión que contenga agua o solución salina (por ejemplo, PBS) estérIL, de calidad farmacéutica. Cuando el Agente Terapéutico se administra por inyección, se puede proporcionar una ampolla de agua o solución salina estérIL para inyección, para que los ingredientes se puedan mezclar antes de la administración.
En algunas realizaciones, los Agentes Terapéuticos se pueden formular para la administración por cualquier método conocido por un experto en la materia, incluida, pero no exclusivamente, la administración parenteral (por ejemplo, subcutánea e intravenosa o intramuscular). En una realización, los Agentes Terapéuticos se formulan para la administración parenteral local o sistémica. En una realización específica, los Agentes Terapéuticos se formulan para la administración subcutánea o intravenosa. En una realización, los Agentes Terapéuticos se formulan en una solución farmacéuticamente compatible.
Los Agentes Terapéuticos se pueden formular para la administración parenteral por inyección, por ejemplo, por inyección en bolo o infusión continua. Las formulaciones para inyección se pueden presentar en formas farmacéuticas unitarias, por ejemplo, en ampollas o en envases multidosis, con un conservante agregado. Las composiciones pueden adoptar formas tales como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos acuosos u oleosos y pueden contener agentes de formulación como suspendentes, estabILizantes y/o dispersantes. Alternativamente, el principio activo (es decir, Agente Terapéutico) puede estar en forma de polvo para la reconstitución con un vehículo adecuado, por ejemplo, agua apirógena estérIL, antes de su uso.
5.5. Métodos profILácticos y terapéuticos que implican la administración cíclica de complejos IL-15/IL-15Ra
En un aspecto, en este documento se proporcionan métodos para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, que comprenden administrar a los sujetos complejos que se unen a las subunidades Py del receptor de IL-15, inducir la transducción de señal de IL-15 y mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, en donde los complejos comprenden IL-15 unida covalente o no covalentemente al receptor alfa de interleucina-15 ("IL-15Ra") ("complejos L-15/IL-15Ra " o "Agentes Terapéuticos"). Dado que la mejora de la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficiosa para la prevención, el tratamiento y/o el manejo de ciertos trastornos, en este documento se proporcionan métodos para la prevención, el tratamiento y/o el manejo de dichos trastornos que comprenden administrar a un sujeto que lo necesita complejos IL-15/IL-15Ra. Los ejemplos no limitantes de trastornos en los cuales es beneficioso mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 incluyen cáncer, linfopenia, inmunodeficiencias, enfermedades infecciosas y heridas
En un aspecto, los métodos descritos en este documento mantienen los niveles plasmáticos de IL-15 por encima de los niveles basales durante aproximadamente 18 a 24 horas o aproximadamente 24 a 36 horas, o aproximadamente 36 a 38 horas después de la administración de complejos IL-15/IL-15Ra. Los niveles plasmáticos basales de IL-15 son de aproximadamente 1 pg/ml en humanos, aproximadamente 8-10 pg/ml en monos (como los macacos) y aproximadamente 12 pg/ml en roedores (como los ratones). Por lo tanto, en algunas realizaciones, los métodos descritos en este documento mantienen los niveles plasmáticos por encima de aproximadamente 1 pg/ml en humanos, por encima de aproximadamente 8-10 pg/ml en monos (como macacos) y por encima de 12 pg/ml en roedores (como ratones). Sin ánimo de ceñirnos a ninguna teoría, la estabILidad de los niveles plasmáticos de IL-15 maximiza la multiplicación y la activación de los linfocitos a la vez que minimiza los efectos secundarios asociados a la administración de IL-15. En una realización, los métodos descritos en el presente documento alcanzan niveles plasmáticos estables de IL-15 por encima de los niveles plasmáticos basales mediante administración subcutánea a un sujeto de dosis de aproximadamente 0,1 gg /kg a aproximadamente 10 gg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra a un sujeto. En otra realización, los métodos descritos en este documento alcanzan altos niveles plasmáticos de IL-15 mediante la administración subcutánea a un sujeto de dosis de aproximadamente 0,1 gg/kg a aproximadamente 20 gg/kg, aproximadamente 10 gg/kg a aproximadamente 20 gg/kg, aproximadamente 20 gg/kg a aproximadamente 40 gg/kg o aproximadamente 25 gg/kg a 50 gg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra a un sujeto.
En una realización, los métodos descritos en este documento mantienen los niveles plasmáticos de IL-15 por encima de los niveles basales durante al menos 18 horas, al menos 20 horas, al menos 22 horas, al menos 24 horas, al menos 28 horas, al menos 30 horas, al menos 32 horas, al menos 34 horas, al menos 36 horas, al menos 38 horas, al menos 40 horas, al menos 42 horas, al menos 44 horas, al menos 46 horas o al menos 48 horas. En otra realización, los métodos descritos en este documento mantienen los niveles plasmáticos por encima de los niveles basales durante aproximadamente 18 horas, aproximadamente 20 horas, aproximadamente 22 horas, aproximadamente 24 horas, aproximadamente 26 horas, aproximadamente 28 horas, aproximadamente 30 horas, aproximadamente 32 horas, aproximadamente 34 horas, aproximadamente 36 horas, aproximadamente 38 horas, aproximadamente 40 horas, aproximadamente 42 horas, aproximadamente 44 horas, aproximadamente 46 horas o aproximadamente 48 horas. En una realización, los métodos descritos en este documento mantienen los niveles plasmáticos por encima de los niveles basales durante aproximadamente 18 a 24 horas, aproximadamente 22 a 24 horas, aproximadamente 24 a 28 horas, aproximadamente 24 a 30 horas, aproximadamente 26 a 32 horas, aproximadamente 28 a 32 horas, aproximadamente 30 a 36 horas, aproximadamente 32 a 38 horas, aproximadamente 34 a 38 horas, aproximadamente 36 a 42 horas, aproximadamente 38 a 45 horas, aproximadamente 38 horas o aproximadamente 40 a 48 horas. Se pueden utILizar técnicas conocidas por un experto en la materia para medir los niveles plasmáticos de IL-15, por ejemplo un ELISA.
En una realización, los métodos descritos en este documento mantienen niveles plasmáticos de 1 pg/ml a 10.000 mg/ml (en algunas realizaciones, 5000 pg/ml a 10.000 pg/ml, 1000 pg/ml a 5000 pg/ml, 1000 pg/ml a 2500 pg/ml, o 1000 a 2000 pg/ml, o 100 pg/ml a 1000 pg/ml, 1 pg/ml a 1000 pg/ml o 100 pg/ml a 1000 pg/ml) de IL-15 durante al menos 18 horas, al menos 20 horas, al menos 22 horas, al menos 24 horas, al menos 28 horas, al menos 30 horas, al menos 32 horas, al menos 34 horas, al menos 36 horas, al menos 38 horas, al menos 40 horas, al menos 42 horas, al menos 44 horas, al menos 46 horas o al menos 48 horas. En otra realización, los métodos descritos en este documento mantienen niveles plasmáticos de 10 pg/ml a 1000 mg/ml, 1 pg/ml a 10.000 mg/ml (en algunas realizaciones, 5000 pg/ml a 10.000 pg/ml, 1000 pg/ml a 5000 pg/ml, 1000 pg/ml a 2500 pg/ml o 1000 a 2000 pg/ml o 100 pg/ml a 1000 pg/ml, 1 pg/ml a 1000 pg/ml o 100 pg/ml a 1000 pg/ml) de IL-15 durante aproximadamente 18 horas, aproximadamente 20 horas, aproximadamente 22 horas, aproximadamente 24 horas, aproximadamente 26 horas, aproximadamente 28 horas, aproximadamente 30 horas, aproximadamente 32 horas, aproximadamente 34 horas, aproximadamente 36 horas, aproximadamente 38 horas, aproximadamente 40 horas, aproximadamente 42 horas, aproximadamente 44 horas, aproximadamente 46 horas o aproximadamente 48 horas. En otra realización, los métodos descritos en este documento mantienen niveles plasmáticos de 1 pg/ml a 10.000 mg/ml (en algunas realizaciones de 5000 pg/ml a 10.000 pg/ml, de 1000 pg/ml a 5000 pg/ml, de 1000 pg/ml a 2500 pg/ml o de 1000 a 2000 pg/ml o 100 pg/ml a 1000 pg/ml, de 1 pg/ml a 1000 pg/ml o de 100 pg/ml a 1000 pg/ml) de IL-15 durante aproximadamente 18 a 24 horas, aproximadamente 22 a 24 horas, aproximadamente 24 a 28 horas, aproximadamente 24 a 30 horas, aproximadamente 26 a 32 horas, aproximadamente 28 a 32 horas, aproximadamente 30 a 36 horas, aproximadamente 32 a 38 horas, aproximadamente 34 a 38 horas, aproximadamente 36 a 42 horas, aproximadamente 38 a 45 horas, aproximadamente 38 horas o aproximadamente 40 a 48 horas. Se pueden utILizar técnicas conocidas por un experto en la materia para medir los niveles plasmáticos de IL-15, por ejemplo un ELISA.
En otra realización, los métodos descritos en este documento mantienen niveles plasmáticos de al menos 10 pg/ml, al menos 20 pg/ml, al menos 30 pg/ml, al menos 40 pg/ml, al menos 50 pg/ml, al menos 60 pg/ml, al menos 70 pg/ml, al menos 80 pg/ml, al menos 90 pg/ml, al menos 100 pg/ml, al menos 200 pg/ml, al menos 300 pg/ml, al menos 400 pg/ml o al menos 500 pg/ml de IL-15 durante al menos 18 horas, al menos 20 horas, al menos 22 horas, al menos 24 horas, al menos 28 horas, al menos 30 horas, al menos 32 horas, al menos 34 horas, al menos 36 horas, al menos 38 horas, al menos 40 horas, al menos 42 horas, al menos 44 horas, al menos 46 horas o al menos 48 horas. En otra realización, los métodos descritos en este documento mantienen niveles plasmáticos de al menos 600 pg/ml, al menos 700 pg/ml, al menos 800 pg/ml, al menos 1000 pg/ml, al menos 1200 pg/ml, al menos 1500 pg/ml, al menos 1750 pg/ml, al menos 2000 pg/ml, al menos 5000 pg/ml, al menos 7500 pg/ml o al menos 10.000 mg/ml de IL-15 durante al menos 18 horas, al menos 20 horas, al menos 22 horas, al menos 24 horas, al menos 28 horas, al menos 30 horas, al menos 32 horas, al menos 34 horas, al menos 36 horas, al menos 38 horas, al menos 40 horas, al menos 42 horas, al menos 44 horas, al menos 46 horas o al menos 48 horas. En otra realización, los métodos descritos en este documento mantienen niveles plasmáticos de al menos10 pg/ml, al menos 20 pg/ml, al menos 30 pg/ml, al menos 40 pg/ml, al menos 50 pg/ml, al menos 60 pg/ml, al menos 70 pg/ml, al menos 80 pg/ml, al menos 90 pg/ml, al menos 100 pg/ml, al menos 200 pg/ml, al menos 300 pg/ml, al menos 400 pg/ml o al menos 500 pg/ml de IL-15 durante aproximadamente 18 horas, aproximadamente 20 horas, aproximadamente 22 horas, aproximadamente 24 horas, aproximadamente 26 horas, aproximadamente 28 horas, aproximadamente 30 horas, aproximadamente 32 horas, aproximadamente 34 horas, aproximadamente 36 horas, aproximadamente 38 horas, aproximadamente 40 horas, aproximadamente 42 horas, aproximadamente 44 horas, aproximadamente 46 horas o aproximadamente 48 horas. En otra realización, los métodos descritos en este documento mantienen niveles plasmáticos de al menos 600 pg/ml, al menos 700 pg/ml, al menos 800 pg/ml, al menos 1.000 pg/ml, al menos 1.200 pg/ml, al menos 1.500 pg/ml, al menos 1.750 pg/ml, al menos 2.000 pg/ml, al menos 5.000 pg/ml, al menos 7.500 pg/ml o al menos 10.000 pg/ml de IL-15 durante aproximadamente 18 horas, aproximadamente 20 horas, aproximadamente 22 horas, aproximadamente 24 horas, aproximadamente 26 horas, aproximadamente 28 horas, aproximadamente 30 horas, aproximadamente 32 horas, aproximadamente 34 horas, aproximadamente 36 horas, aproximadamente 38 horas, aproximadamente 40 horas, aproximadamente 42 horas, aproximadamente 44 horas, aproximadamente 46 horas o aproximadamente 48 horas. Se pueden utILizar técnicas conocidas por un experto en la materia para medir los niveles plasmáticos de IL-15, por ejemplo un ELISA.
En algunas realizaciones, el área bajo la curva para IL-15 plasmática administrada como un Agente Terapéutico de conformidad con los métodos descritos en este documento es de 1 pg/ml a 10.000 mg/ml (en algunas realizaciones, de 5000 pg/ml a 10.000 pg/ml, 1000 pg/ml a 5000 pg/ml, 1000 pg/ml a 2500 pg/ml o 1000 a 2000 pg/ml o 100 pg/ml a 1000 pg/ml, 1 pg/ml a 1000 pg/ml o 100 pg/ml a 1000 pg/ml).
En otro aspecto, en este documento se proporciona un método para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, que comprende administrar a un sujeto por vía subcutánea un complejo IL-15/IL-15Ra en un régimen cíclico, en el que cada ciclo del régimen cíclico comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra con una cierta frecuencia durante un primer período de tiempo; y (b) no administrar complejo IL-15/IL-15Ra durante un segundo período de tiempo. En algunas realizaciones, el régimen cíclico se repite 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más veces.
En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra con una frecuencia de cada día, día por medio, cada 3, 4, 5, 6 o 7 días. En algunas realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son iguales. En otras realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son diferentes. En algunas realizaciones, el primer período para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana a 4 semanas de duración, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas. En otras realizaciones, el primer período para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana,
2 semanas, 3 semanas o 4 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana a 2 meses, 1 a 8 semanas, 2 a 8 semanas, 1 a 6 semanas, 2 a 6 semanas, 1 a 5 semanas, 2 a 5 semanas, 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas, 1 a 2 semanas, 3 semanas, 2 semanas o 1 semana de duración. En una realización, la dosis del primer ciclo y de cada ciclo subsiguiente es de 0,1 pg/kg a 1 pg/kg, 1 pg/kg a 5 pg/kg o 5 pg/kg a 10 pg/kg. En otra realización, la dosis del primer ciclo y de cada ciclo subsiguiente es de 0,1 pg/kg a 0,5 pg/kg, 1 pg/kg a 2 pg/kg, 1 pg/kg a 3 pg/kg, 2 pg/kg a 5 pg/kg o 2 pg/kg a 4 pg/kg. En otra realización, la dosis del primer ciclo y de cada ciclo subsiguiente es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 1 pg/kg, 1,25 pg/kg, 1,5 pg/kg, 1,75 pg/kg, 2 pg/kg, 2,25 pg/kg, 2,5 pg/kg, 2,75 pg/kg, 3 pg/kg, 3,25 pg/kg, 3,5 pg/kg, 4 pg/kg, 4,25 pg/kg, 4,5 pg/kg, 4,75 pg/kg, o 5 pg/kg. En algunas realizaciones, la dosis utILizada durante el primer ciclo del régimen cíclico difiere de una dosis utILizada durante un ciclo subsiguiente del régimen cíclico. En algunas realizaciones, la dosis utILizada dentro de un ciclo de el régimen varía. Por ejemplo, la dosis utILizada dentro de un sitio o en ciclos diferentes del régimen cíclico puede variar dependiendo, por ejemplo, de la afección del paciente.
En una realización, en este documento se proporciona un método para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, que comprende administrar a un sujeto, por vía subcutánea, un complejo IL-15/IL-15Ra en un régimen cíclico, en el que cada ciclo del régimen cíclico comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra una determinada cantidad de veces por semana durante un primer período de tiempo; y (b) no administrar complejo IL-15/IL-15Ra durante un segundo período de tiempo. En algunas realizaciones, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra administrada durante el primer ciclo del régimen cíclico se incrementa secuencialmente. Por ejemplo, si se administra un complejo IL-15/IL-15Ra a un sujeto 3 veces por semana durante dos semanas, entonces la dosis administrada al sujeto la segunda vez durante el primer ciclo del régimen cíclico se aumenta con respecto a la dosis administrada la primera vez, la dosis administrada al sujeto la tercera vez durante el primer ciclo del régimen cíclico se aumenta con respecto a la dosis administrada la segunda vez, la dosis administrada al sujeto la cuarta vez se aumenta con respecto a la dosis administrada la tercera vez, la dosis administrada al sujeto la quinta vez se aumenta con respecto a la dosis administrada la cuarta vez y la dosis administrada al sujeto la sexta vez se aumenta con respecto a la dosis administrada la quinta vez. En algunas realizaciones, se controlan los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma. En algunas realizaciones, la dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra durante el primer ciclo del régimen cíclico se incrementa secuencialmente si el sujeto no sufre efectos secundarios. En algunas realizaciones, la dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra durante el primer ciclo del régimen cíclico se incrementa secuencialmente si el sujeto no experimenta ningún acontecimiento adverso, como linfopenia grado 3 o 4, granulocitopenia grado 3, leucocitosis grado 3 (GB > 100.000/mm3) o disfunción orgánica. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7 días por semana. En algunas realizaciones, el régimen cíclico se repite 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más veces. En algunas realizaciones, la dosis de IL-15/IL-15Ra administrada al sujeto durante el segundo ciclo y/u otros ciclos subsiguientes permanece igual a la última dosis administrada al sujeto durante el primer ciclo. En otras realizaciones, la dosis administrada al sujeto durante el segundo ciclo y/u otros ciclos subsiguientes se aumenta o disminuye con respecto a la última dosis administrada al sujeto durante el primer ciclo. En algunas realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son iguales. En otras realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son diferentes. En algunas realizaciones, el primer período para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana a 4 semanas de duración, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas. En otras realizaciones, el primer período para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas o 4 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana a 2 meses, 1 a 8 semanas, 2 a 8 semanas, 1 a 6 semanas, 2 a 6 semanas, 1 a 5 semanas, 2 a 5 semanas, 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas, 1 a 2 semanas, 3 semanas, 2 semanas o 1 semana de duración.
En otra realización, en este documento se proporciona un método para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, que comprende administrar a un sujeto por vía subcutánea un complejo IL-15/IL-15Ra en un régimen cíclico, en el que cada ciclo del régimen cíclico comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra 3 veces por semana durante un primer período de tiempo de 2 semanas o más; y (b) no administrar complejo IL-15/IL-15Ra durante un segundo período de tiempo, en donde la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra se incrementa secuencialmente cada vez que el sujeto recibe el complejo durante el primer período. En algunas realizaciones, la dosis del IL-15/IL-15Ra administrada al sujeto durante el primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg a 5 pg/kg, la dosis administrada al sujeto la segunda vez durante el primer ciclo del régimen cíclico es de 5 pg/kg a 15 pg/kg, la dosis administrada al sujeto la tercera vez durante el primer ciclo del régimen cíclico es de 15 pg/kg a 25 pg/kg, la dosis administrada al sujeto la cuarta vez durante el primer ciclo del régimen cíclico es de 25 pg/kg a 35 pg/kg, la dosis administrada al sujeto la quinta vez durante el primer ciclo del régimen cíclico es de 35 pg/kg a 45 pg/kg, la dosis administrada al sujeto la sexta vez es de 50 pg/kg o mayor. En algunas realizaciones, se controlan los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma. En algunas realizaciones, la dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra durante el primer ciclo del régimen cíclico se incrementa secuencialmente si el sujeto no sufre efectos secundarios. En algunas realizaciones, la dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra durante el primer ciclo del régimen cíclico se incrementa secuencialmente si el sujeto no experimenta ningún acontecimiento adverso, como linfopenia grado 3 o 4, granulocitopenia grado 3, leucocitosis grado 3 (GB > 100.000/mm3) o disfunción orgánica. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7 días por semana. En algunas realizaciones, el régimen cíclico se repite 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más
veces. En algunas realizaciones, la dosis de IL-15/IL-15Ra administrada al sujeto durante el segundo ciclo y/u otros ciclos subsiguientes permanece igual a la última dosis administrada al sujeto durante el primer ciclo. En otras realizaciones, la dosis administrada al sujeto durante el segundo ciclo y/o otros ciclos subsiguientes se aumenta o disminuye con respecto a la última dosis administrada al sujeto durante el primer ciclo. En algunas realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son iguales. En otras realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son diferentes. En algunas realizaciones, el primer período para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana a 4 semanas de duración, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas. En otras realizaciones, el primer período para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas o 4 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana a 2 meses, 1 a 8 semanas, 2 a 8 semanas, 1 a 6 semanas, 2 a 6 semanas, 1 a 5 semanas, 2 a 5 semanas, 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas, 1 a 2 semanas, 3 semanas, 2 semanas 0 1 semana de duración.
En otro aspecto, en este documento se proporcionan métodos para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 que implican un régimen de administración cíclica que comprende un primer período de administración subcutánea de un complejo IL-15/IL-15Ra a un sujeto, seguido de un segundo período en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, seguido de un tercer período de administración subcutánea del complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto. El que este régimen de administración cíclica se repita y cuántas veces se repita puede depender, por ejemplo, del tipo de síntomas y de la gravedad de los síntomas, y debería ser decidido de acuerdo al juicio del médico y de las circunstancias de cada paciente o sujeto. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite una vez, dos veces, tres veces, cuatro veces, cinco veces, seis veces, siete veces, ocho veces, nueve veces, diez veces o más. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite 2 a 5 veces, 5 a 8 veces, 5 a 10 veces, 8 a 10 veces, 10 a 15 veces, 10 a 20 veces, 15 a 20 veces, 20 a 30 veces o 25 a 30 veces. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite al menos 2 veces, al menos 3 veces, al menos 4 veces, al menos 5 veces, al menos 6 veces, al menos 7 veces, al menos 8 veces, al menos 9 veces, al menos 10 veces o más. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite durante un tiempo de al menos un mes, al menos dos meses, al menos tres meses, al menos cuatro meses, al menos cinco meses, al menos seis meses, al menos siete meses, al menos ocho meses, al menos nueve meses, al menos diez meses, al menos once meses, al menos doce meses, al menos 1,5 años, al menos 2 años, al menos 3 años, al menos 4 años, al menos 5 años, al menos 6 años, al menos 7 años, al menos 8 años, al menos 9 años, al menos 10 años o más. En algunas otras realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite durante un tiempo de alrededor de un mes, alrededor de dos meses, alrededor de tres meses, alrededor de cuatro meses, alrededor de cinco meses, alrededor de seis meses, alrededor de siete meses, alrededor de ocho meses, alrededor de nueve meses, alrededor de diez meses, alrededor de once meses, alrededor de doce meses, alrededor de 1,5 años, alrededor de 2 años, alrededor de 3 años, alrededor de 4 años, alrededor de 5 años, alrededor de 6 años, alrededor de 7 años, alrededor de 8 años, alrededor de 9 años, alrededor de 10 años o más. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite durante un tiempo de 1 a 3 meses, 1 a 5 meses, 2 a 5 meses, 2 a 6 meses, 3 a 6 meses, 5 a 10 meses, 6 a 10 meses, 6 a 12 meses, 10 a 12 meses, 1 año a 1,5 años, 1 a 2 años, 1 a 3 años, 2 a 4 años, 2 a 5 años o 5 a 10 años. Durante los períodos de administración del complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, el complejo se puede administrar cada 1,2, 3, 4, 5, 6 o 7 días. En algunas realizaciones, la cantidad del complejo IL-15/IL-15Ra administrada por dosis durante el primer período y/o el tercer período se encuentra en el intervalo entre 0,1 y 10 gg/kg, 0,1 y 5 gg/kg, 0,1 y 2,5 gg/kg, 0,1 y 2 gg/kg, 0,1 y 1 gg/kg o 0,1 y 0,5 gg/kg. En algunas realizaciones, la cantidad del complejo IL-15/IL-15Ra administrada por dosis durante el primer período y/o el tercer período es de aproximadamente 0,1 gg/kg, aproximadamente 0,25 gg/kg, aproximadamente 0,5 gg/kg, aproximadamente 0,75 gg/kg, de aproximadamente 1 gg/kg, aproximadamente 2 gg/kg, aproximadamente 3 gg/kg, aproximadamente 4 gg/kg, aproximadamente 5 gg/kg, aproximadamente 6 gg/kg, aproximadamente 7 gg/kg, aproximadamente 8 gg/kg, aproximadamente 9 gg/kg o aproximadamente 10 gg/kg. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis, dosis por medio o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período.
En algunas realizaciones, en este documento se proporcionan métodos para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 que implican un régimen de administración cíclica, en donde el régimen de administración cíclica comprende un primer período de 1 a 3 semanas (en algunas realizaciones, 1 a 2 semanas, 2 a 3 semanas, 1 semana, 12 días, 2 semanas o 3 semanas) de administración subcutánea de un complejo IL-15/IL-15Ra a un sujeto, seguido de un segundo período de 1 semana a 2 meses (en algunas realizaciones, de 1 a 2 semanas, 2 a 3 semanas, 2 a 4 semanas, 3 a 4 semanas, 4 a 6 semanas, 4 a 8 semanas, 6 a 8 semanas,1 semana, 12 días, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 7 semanas u 8 semanas) en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, seguido de un tercer período de 1 semana a 3 semanas (en algunas realizaciones, 1 a 2 semanas, 2 a 3 semanas, 1 semana, 12 días, 2 semanas o 3 semanas) de administración subcutánea del complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto. El que este régimen de administración cíclica se repita y cuántas veces se repita puede depender, por ejemplo, del tipo de síntomas y de la gravedad de los síntomas, y debería ser decidido de acuerdo al juicio del médico y de las circunstancias de cada paciente o sujeto. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite una vez, dos veces, tres veces, cuatro veces, cinco veces, seis veces, siete veces, ocho veces, nueve veces, diez veces o más. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite 2 a 5 veces, 5 a 8 veces, 5 a 10 veces, 8 a 10 veces, 10 a 15 veces, 10 a 20 veces, 15 a 20 veces, 20 a 30 veces o 25 a 30 veces. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite al menos 2 veces, al menos 3 veces, al menos 4 veces, al menos 5 veces, al menos 6 veces, al menos 7 veces, al menos 8 veces, al menos 9 veces, al menos 10 veces o más. En algunas realizaciones, este régimen de administración
cíclica se repite durante un tiempo de al menos un mes, al menos dos meses, al menos tres meses, al menos cuatro meses, al menos cinco meses, al menos seis meses, al menos siete meses, al menos ocho meses, al menos nueve meses, al menos diez meses, al menos once meses, al menos doce meses, al menos 1,5 años, al menos 2 años, al menos 3 años, al menos 4 años, al menos 5 años, al menos 6 años, al menos 7 años, al menos 8 años, al menos 9 años, al menos 10 años o más. En otras realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite durante un tiempo de alrededor de un mes, alrededor de dos meses, alrededor de tres meses, alrededor de cuatro meses, alrededor de cinco meses, alrededor de seis meses, alrededor de siete meses, alrededor de ocho meses, alrededor de nueve meses, alrededor de diez meses, alrededor de once meses, alrededor de doce meses, alrededor de 1,5 años, alrededor de 2 años, alrededor de 3 años, alrededor de 4 años, alrededor de 5 años, alrededor de 6 años, alrededor de 7 años, alrededor de 8 años, alrededor de 9 años, alrededor de 10 años o más. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite durante un tiempo de 1 a 3 meses, 1 a 5 meses, 2 a 5 meses, 2 a 6 meses, 3 a 6 meses, 5 a 10 meses, 6 a 10 meses, 6 a 12 meses, 10 a 12 meses, 1 año a 1,5 años, 1 a 2 años, 1 a 3 años, 2 a 4 años, 2 a 5 años o 5 a 10 años. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis, dosis por medio o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período. Durante los períodos de administración del complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, el complejo se puede administrar cada 1,2, 3, 4, 5, 6 o 7 días. En algunas realizaciones, la cantidad del complejo IL-15/IL-15Ra administrada por dosis durante el primer período y/o el tercer período se encuentra en el intervalo entre 0,1 y 10 pg/kg, 0,1 y 5 pg/kg, 0,1 y 2,5 pg/kg, 0,1 y 2 pg/kg, 0,1 y 1 pg/kg o 0,1 y 0,5 pg/kg. En algunas realizaciones, la cantidad del complejo IL-15/IL-15Ra administrada por dosis durante el primer período y/o el tercer período es de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 0,75 pg/kg, de aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg, aproximadamente 5 pg/kg, aproximadamente 6 pg/kg, aproximadamente 7 pg/kg, aproximadamente 8 pg/kg, aproximadamente 9 pg/kg o aproximadamente 10 pg/kg. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis, dosis por medio o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período.
En algunos aspectos, en este documento se proporcionan métodos para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 que implican un régimen de administración cíclica, en donde el régimen de administración cíclica comprende un primer período de dos semanas de administración subcutánea de un complejo IL-15/IL-15Ra a un sujeto, seguido de un segundo período de dos semanas en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, seguido de un tercer período de dos semanas de administración subcutánea del complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto. El que este régimen de administración cíclica se repita y cuántas veces se repita puede depender, por ejemplo, del tipo de síntomas y de la gravedad de los síntomas, y debería ser decidido de acuerdo al juicio del médico y de las circunstancias de cada paciente o sujeto. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite una vez, dos veces, tres veces o más. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite una vez, dos veces, tres veces, cuatro veces, cinco veces, seis veces, siete veces, ocho veces, nueve veces, diez veces o más. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite 2 a 5 veces, 5 a 8 veces, 5 a 10 veces, 8 a 10 veces, 10 a 15 veces, 10 a 20 veces, 15 a 20 veces, 20 a 30 veces o 25 a 30 veces. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite al menos 2 veces, al menos 3 veces, al menos 4 veces, al menos 5 veces, al menos 6 veces, al menos 7 veces, al menos 8 veces, al menos 9 veces, al menos 10 veces o más. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite durante un tiempo de al menos un mes, al menos dos meses, al menos tres meses, al menos cuatro meses, al menos cinco meses, al menos seis meses, al menos siete meses, al menos ocho meses, al menos nueve meses, al menos diez meses, al menos once meses, al menos doce meses, al menos 1,5 años, al menos 2 años, al menos 3 años, al menos 4 años, al menos 5 años, al menos 6 años, al menos 7 años, al menos 8 años, al menos 9 años, al menos 10 años o más. En otras realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite durante un tiempo de alrededor de un mes, alrededor de dos meses, alrededor de tres meses, alrededor de cuatro meses, alrededor de cinco meses, alrededor de seis meses, alrededor de siete meses, alrededor de ocho meses, alrededor de nueve meses, alrededor de diez meses, alrededor de once meses, alrededor de doce meses, alrededor de 1,5 años, alrededor de 2 años, alrededor de 3 años, alrededor de 4 años, alrededor de 5 años, alrededor de 6 años, alrededor de 7 años, alrededor de 8 años, alrededor de 9 años, alrededor de 10 años o más. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite durante un tiempo de 1 a 3 meses, 1 a 5 meses, 2 a 5 meses, 2 a 6 meses, 3 a 6 meses, 5 a 10 meses, 6 a 10 meses, 6 a 12 meses, 10 a 12 meses, 1 año a 1,5 años, 1 a 2 años, 1 a 3 años, 2 a 4 años, 2 a 5 años o 5 a 10 años. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis, dosis por medio o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período. Durante los períodos de administración del complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, el complejo se puede administrar cada 1,2, 3, 4, 5, 6 o 7 días. En algunas realizaciones, la cantidad del complejo IL-15/IL-15Ra administrada por dosis durante el primer período y/o el tercer período se encuentra en el intervalo entre 0,1 y 10 pg/kg, 0,1 y 5 pg/kg, 0,1 y 2,5 pg/kg, 0,1 y 2 pg/kg, 0,1 y 1 pg/kg o 0,1 y 0,5 pg/kg. En algunas realizaciones, la cantidad del complejo IL-15/IL-15Ra administrada por dosis durante el primer período y/o el tercer período es de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 0,75 pg/kg, de aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg, aproximadamente 5 pg/kg, aproximadamente 6 pg/kg, aproximadamente 7 pg/kg, aproximadamente 8 pg/kg, aproximadamente 9 pg/kg o aproximadamente 10 pg/kg. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis, dosis por medio o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período.
En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un método para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, que comprende: (a) administrar a un sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 10 pg/kg (en algunas realizaciones, de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 5 pg/kg, por ejemplo, aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg) de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 1 semana a 3 semanas; y (b) después de un segundo período de 1 semana a 2 meses (u 8 semanas) en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 10 pg/kg (en algunas realizaciones, de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 5 pg/kg, por ejemplo, aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg) de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 1 semana a 3 semanas. En algunas realizaciones, los pasos (a) a (b) se repiten dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez o más veces. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis, dosis por medio o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período. En una realización específica, el sujeto es un ser humano.
En una realización, en este documento se proporciona un método para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, que comprende: (a) administrar a un sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 10 pg/kg (en algunas realizaciones, de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 5 pg/kg, por ejemplo, aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg) de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; y (b) después de un segundo período de 12 a 14 días sin administración del complejo IL-15/IL-15Ra, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 10 pg/kg (en algunas realizaciones, de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 5 pg/kg) de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, los pasos de (a) a (b) se repiten dos, tres, cuatro o más veces. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis, dosis por medio o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período. En una realización específica, el sujeto es un ser humano.
En otra realización particular, en este documento se proporciona un método para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 que comprende: (a) administrar a un sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg, aproximadamente 5 pg/kg, aproximadamente 6 pg/kg, aproximadamente 7 pg/kg, aproximadamente 8 pg/kg o aproximadamente 10 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; y (b) después de un segundo período de 12 a 14 días sin administración del complejo IL-15/IL-15Ra, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg, aproximadamente 5 pg/kg, aproximadamente 6 pg/kg, aproximadamente 7 pg/kg, aproximadamente 8 pg/kg o aproximadamente 10 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, los pasos de (a) a (c) se repiten dos, tres, cuatro o más veces. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis, dosis por medio o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período. En una realización específica, el sujeto es un ser humano.
En otro aspecto, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso (por ejemplo, cáncer, una enfermedad infecciosa, una inmunodeficiencia o linfopenia), que comprende administrar a un sujeto, por vía subcutánea, un complejo IL-15/IL-15Ra en un régimen cíclico, en el que cada ciclo del régimen cíclico comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra con una cierta frecuencia durante un primer período de tiempo; y (b) no administrar complejo IL-15/IL-15Ra durante un segundo período de tiempo. En algunas realizaciones, el régimen cíclico se repite 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más veces. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra con una frecuencia de cada día, día por medio, cada 3, 4, 5, 6 o 7 días. En algunas realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son iguales. En otras realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son diferentes. En algunas realizaciones, el primer período para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana a 4 semanas de duración, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas. En otras realizaciones, el primer período para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas o 4 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana a 2 meses, 1 a 8 semanas, 2 a 8 semanas, 1 a 6 semanas, 2 a 6 semanas, 1 a 5 semanas, 2 a 5 semanas, 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas, 1 a 2 semanas, 3 semanas, 2 semanas o 1 semana de duración. En una realización, la dosis del primer ciclo y de cada ciclo subsiguiente es de 0,1 pg/kg a 1 pg/kg, 1 pg/kg a 5 pg/kg o 5 pg/kg a 10 pg/kg. En otra realización, la dosis del primer ciclo y de cada ciclo subsiguiente es de 0,1 pg/kg a 0,5 pg/kg, 1 pg/kg a 2 pg/kg, 1 pg/kg a 3 pg/kg, 2 pg/kg a 5 pg/kg o 2 pg/kg a 4 pg/kg. En otra realización, la dosis
del primer ciclo y de cada ciclo subsiguiente es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 1 pg/kg, 1,25 pg/kg, 1,5 pg/kg, 1,75 pg/kg, 2 pg/kg, 2,25 pg/kg, 2,5 pg/kg, 2,75 pg/kg, 3 pg/kg, 3,25 pg/kg, 3,5 pg/kg, 4 pg/kg, 4,25 pg/kg, 4,5 pg/kg, 4,75 pg/kg, o 5 pg/kg. En algunas realizaciones, la dosis utILizada durante el primer ciclo del régimen cíclico difiere de una dosis utILizada durante un ciclo subsiguiente del régimen cíclico. En algunas realizaciones, la dosis utILizada dentro de un ciclo del régimen varía. Por ejemplo, la dosis utILizada dentro de un ciclo o en ciclos diferentes del régimen cíclico puede variar dependiendo, por ejemplo, de la afección del paciente.
En una realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso (por ejemplo, cáncer, una enfermedad infecciosa, una inmunodeficiencia o linfopenia), que comprende administrar a un sujeto, por vía subcutánea, un complejo IL-15/IL-15Ra en un régimen cíclico, en el que cada ciclo del régimen cíclico comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra una determinada cantidad de veces por semana durante un primer período de tiempo; y (b) no administrar complejo IL-15/IL-15Ra durante un segundo período de tiempo. En algunas realizaciones, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra administrada durante el primer ciclo del régimen cíclico se incrementa secuencialmente. Por ejemplo, si se administra un complejo IL-15/IL-15Ra a un sujeto 3 veces por semana durante dos semanas, entonces la dosis administrada al sujeto la segunda vez durante el primer ciclo del régimen cíclico se aumenta con respecto a la dosis administrada la primera vez, la dosis administrada al sujeto la tercera vez durante el primer ciclo del régimen cíclico se aumenta con respecto a la dosis administrada la segunda vez, la dosis administrada al sujeto la cuarta vez se aumenta con respecto a la dosis administrada la tercera vez, la dosis administrada al sujeto la quinta vez se aumenta con respecto a la dosis administrada la cuarta vez y la dosis administrada al sujeto la sexta vez se aumenta con respecto a la dosis administrada la quinta vez. En algunas realizaciones, se controlan los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma. En algunas realizaciones, la dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra durante el primer ciclo del régimen cíclico se incrementa secuencialmente si el sujeto no sufre efectos secundarios. En algunas realizaciones, la dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra durante el primer ciclo del régimen cíclico se incrementa secuencialmente si el sujeto no experimenta ningún acontecimiento adverso, como linfopenia grado 3 o 4, granulocitopenia grado 3, leucocitosis grado 3 (GB > 100.000/mm3) 0 disfunción orgánica. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7 días por semana. En algunas realizaciones, el régimen cíclico se repite 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más veces. En algunas realizaciones, la dosis de IL-15/IL-15Ra administrada al sujeto durante el segundo ciclo y/u otros ciclos subsiguientes permanece igual a la última dosis administrada al sujeto durante el primer ciclo. En otras realizaciones, la dosis administrada al sujeto durante el segundo ciclo y/u otros ciclos subsiguientes se aumenta o disminuye con respecto a la última dosis administrada al sujeto durante el primer ciclo. En algunas realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son iguales. En otras realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son diferentes. En algunas realizaciones, el primer período para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana a 4 semanas de duración, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas. En otras realizaciones, el primer período para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas o 4 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana a 2 meses, 1 a 8 semanas, 2 a 8 semanas, 1 a 6 semanas, 2 a 6 semanas, 1 a 5 semanas, 2 a 5 semanas, 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas, 1 a 2 semanas, 3 semanas, 2 semanas o 1 semana de duración.
En otra realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso (por ejemplo, cáncer, una enfermedad infecciosa, una inmunodeficiencia o linfopenia), que comprende administrar a un sujeto, por vía subcutánea, un complejo IL-15/IL-15Ra en un régimen cíclico, en el que cada ciclo del régimen cíclico comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra 3 veces por semana durante un primer período de tiempo de 2 semanas o más; y (b) no administrar complejo IL-15/IL-15Ra durante un segundo período de tiempo, en donde la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra se incrementa secuencialmente cada vez que el sujeto recibe el complejo durante el primer período. En algunas realizaciones, la dosis del IL-15/IL-15Ra administrada al sujeto durante el primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg a 5 pg/kg, la dosis administrada al sujeto la segunda vez durante el primer ciclo del régimen cíclico es de 5 pg/kg a 15 pg/kg, la dosis administrada al sujeto la tercera vez durante el primer ciclo del régimen cíclico es de 15 pg/kg a 25 pg/kg, la dosis administrada al sujeto la cuarta vez durante el primer ciclo del régimen cíclico es de 25 pg/kg a 35 pg/kg, la dosis administrada al sujeto la quinta vez durante el primer ciclo del régimen cíclico es de 35 pg/kg a 45 pg/kg, la dosis administrada al sujeto la sexta vez es de 50 pg/kg o mayor. En algunas realizaciones, se controlan los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma. En algunas realizaciones, la dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra durante el primer ciclo del régimen cíclico se incrementa secuencialmente si el sujeto no sufre efectos secundarios. En algunas realizaciones, la dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra durante el primer ciclo del régimen cíclico se incrementa secuencialmente si el sujeto no experimenta ningún acontecimiento adverso, como linfopenia grado 3 o 4, granulocitopenia grado 3, leucocitosis grado 3 (GB > 100.000/mm3) o disfunción orgánica. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7 días por semana. En algunas realizaciones, el régimen cíclico se repite 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más veces. En algunas realizaciones, la dosis de IL-15/IL-15Ra administrada al sujeto durante el segundo ciclo y/u otros ciclos subsiguientes permanece igual a la última dosis administrada al sujeto durante el primer ciclo. En otras realizaciones, la dosis administrada al sujeto durante el segundo ciclo y/u otros ciclos subsiguientes se aumenta o disminuye con respecto
a la última dosis administrada al sujeto durante el primer ciclo. En algunas realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son iguales. En otras realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son diferentes. En algunas realizaciones, el primer período para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana a 4 semanas de duración, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas. En otras realizaciones, el primer período para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas o 4 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana a 2 meses, 1 a 8 semanas, 2 a 8 semanas, 1 a 6 semanas, 2 a 6 semanas, 1 a 5 semanas, 2 a 5 semanas, 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas, 1 a 2 semanas, 3 semanas, 2 semanas 0 1 semana de duración. En una realización, el trastorno es una enfermedad infecciosa. En algunas realizaciones, el trastorno es una enfermedad infecciosa causada por el VIH.
En otro aspecto, en este documento se proporcionan métodos para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso (por ejemplo, cáncer, linfopenia, inmunodeficiencias, enfermedades infecciosas o heridas), en donde los métodos implican un régimen de administración cíclica que comprende un primer período de (en algunas realizaciones 1 a 2 semanas, 2 a 3 semanas, 1 semana, 12 días, 2 semanas o 3 semanas) administración subcutánea de un complejo IL-15/IL-15Ra a un sujeto, seguido de un segundo período de 1 semana a 2 meses (en algunas realizaciones, 1 a 2 semanas, 2 a 3 semanas, 2 a 4 semanas, 3 a 4 semanas, 4 a 6 semanas, 4 a 8 semanas, 6 a 8 semanas,1 semana, 12 días, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 7 semanas u 8 semanas) en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, seguido de un tercer período de 1 semana a 3 semanas (en algunas realizaciones, 1 a 2 semanas, 2 a 3 semanas, 1 semana, 12 días, 2 semanas o 3 semanas) de administración subcutánea del complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto. El que este régimen de administración cíclica se repita y cuántas veces se repita puede depender, por ejemplo, del tipo de síntomas y de la gravedad de los síntomas, y debería ser decidido de acuerdo al juicio del médico y de las circunstancias de cada paciente o sujeto. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite una vez, dos veces, tres veces, cuatro veces, cinco veces, seis veces, siete veces, ocho veces, nueve veces, diez veces o más. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite 2 a 5 veces, 5 a 8 veces, 5 a 10 veces, 8 a 10 veces, 10 a 15 veces, 10 a 20 veces, 15 a 20 veces, 20 a 30 veces o 25 a 30 veces. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite al menos 2 veces, al menos 3 veces, al menos 4 veces, al menos 5 veces, al menos 6 veces, al menos 7 veces, al menos 8 veces, al menos 9 veces, al menos 10 veces o más. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite durante un tiempo de al menos un mes, al menos dos meses, al menos tres meses, al menos cuatro meses, al menos cinco meses, al menos seis meses, al menos siete meses, al menos ocho meses, al menos nueve meses, al menos diez meses, al menos once meses, al menos doce meses, al menos 1,5 años, al menos 2 años, al menos 3 años, al menos 4 años, al menos 5 años, al menos 6 años, al menos 7 años, al menos 8 años, al menos 9 años, al menos 10 años o más. En otras realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite durante un tiempo de alrededor de un mes, alrededor de dos meses, alrededor de tres meses, alrededor de cuatro meses, alrededor de cinco meses, alrededor de seis meses, alrededor de siete meses, alrededor de ocho meses, alrededor de nueve meses, alrededor de diez meses, alrededor de once meses, alrededor de doce meses, alrededor de 1,5 años, alrededor de 2 años, alrededor de 3 años, alrededor de 4 años, alrededor de 5 años, alrededor de 6 años, alrededor de 7 años, alrededor de 8 años, alrededor de 9 años, alrededor de 10 años o más. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite durante un tiempo de 1 a 3 meses, 1 a 5 meses, 2 a 5 meses, 2 a 6 meses, 3 a 6 meses, 5 a 10 meses, 6 a 10 meses, 6 a 12 meses, 10 a 12 meses, 1 año a 1,5 años, 1 a 2 años, 1 a 3 años, 2 a 4 años, 2 a 5 años o 5 a 10 años. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis, dosis por medio o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período. Durante los períodos de administración del complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, el complejo se puede administrar cada 1,2, 3, 4, 5, 6 o 7 días. En algunas realizaciones, la cantidad del complejo IL-15/IL-15Ra administrada por dosis durante el primer período y/o el tercer período se encuentra en el intervalo entre 0,1 y 10 pg/kg, 0,1 y 5 pg/kg, 0,1 y 2,5 pg/kg, 0,1 y 2 pg/kg, 0,1 y 1 pg/kg o 0,1 y 0,5 pg/kg. En algunas realizaciones, la cantidad del complejo IL-15/IL-15Ra administrada por dosis durante el primer período y/o el tercer período es de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 0,75 pg/kg, de aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg, aproximadamente 5 pg/kg, aproximadamente 6 pg/kg, aproximadamente 7 pg/kg, aproximadamente 8 pg/kg, aproximadamente 9 pg/kg o aproximadamente 10 pg/kg. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis, dosis por medio o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período.
En una realización, en este documento se proporcionan métodos para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso (por ejemplo, cáncer, linfopenia, inmunodeficiencias, enfermedades infecciosas o heridas), en donde los métodos implican un régimen de administración cíclica que comprende un primer período de administración subcutánea de un complejo IL-15/IL-15Ra a un sujeto, seguido de un segundo período de dos semanas en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, seguido de un tercer período de de dos semanas de administración subcutánea del complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto. El que este régimen de administración cíclica se repita y cuántas veces se repita puede depender, por ejemplo, del tipo de síntomas y de la gravedad de los síntomas, y debería ser decidido de acuerdo al juicio del médico y de las circunstancias de cada paciente o sujeto. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite una vez, dos veces, tres veces, cuatro veces, cinco veces, seis veces, siete veces, ocho veces, nueve veces, diez veces o más. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite 2 a 5 veces, 5 a 8 veces, 5 a 10 veces, 8 a 10 veces, 10 a 15 veces, 10 a 20 veces, 15 a 20 veces, 20 a 30 veces o 25 a 30 veces. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica
se repite al menos 2 veces, al menos 3 veces, al menos 4 veces, al menos 5 veces, al menos 6 veces, al menos 7 veces, al menos 8 veces, al menos 9 veces, al menos 10 veces o más. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite durante un tiempo de al menos un mes, al menos dos meses, al menos tres meses, al menos cuatro meses, al menos cinco meses, al menos seis meses, al menos siete meses, al menos ocho meses, al menos nueve meses, al menos diez meses, al menos once meses, al menos doce meses, al menos 1,5 años, al menos 2 años, al menos 3 años, al menos 4 años, al menos 5 años, al menos 6 años, al menos 7 años, al menos 8 años, al menos 9 años, al menos 10 años o más. En otras realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite durante un tiempo de alrededor de un mes, alrededor de dos meses, alrededor de tres meses, alrededor de cuatro meses, alrededor de cinco meses, alrededor de seis meses, alrededor de siete meses, alrededor de ocho meses, alrededor de nueve meses, alrededor de diez meses, alrededor de once meses, alrededor de doce meses, alrededor de 1,5 años, alrededor de 2 años, alrededor de 3 años, alrededor de 4 años, alrededor de 5 años, alrededor de 6 años, alrededor de 7 años, alrededor de 8 años, alrededor de 9 años, alrededor de 10 años o más. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite durante un tiempo de 1 a 3 meses, 1 a 5 meses, 2 a 5 meses, 2 a 6 meses, 3 a 6 meses, 5 a 10 meses, 6 a 10 meses, 6 a 12 meses, 10 a 12 meses, 1 año a 1,5 años, 1 a 2 años, 1 a 3 años, 2 a 4 años, 2 a 5 años o 5 a 10 años. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis, dosis por medio o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período. Durante los períodos de administración del complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, el complejo se puede administrar cada 1,2, 3, 4, 5, 6 o 7 días. En algunas realizaciones, la cantidad del complejo IL-15/IL-15Ra administrada por dosis durante el primer período y/o el tercer período se encuentra en el intervalo entre 0,1 y 10 pg/kg, 0,1 y 5 pg/kg, 0,1 y 2,5 pg/kg, 0,1 y 2 pg/kg, 0,1 y 1 pg/kg o 0,1 y 0,5 pg/kg. En algunas realizaciones, la cantidad del complejo IL-15/IL-15Ra administrada por dosis durante el primer período y/o el tercer período es de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 0,75 pg/kg, de aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg, aproximadamente 5 pg/kg, aproximadamente 6 pg/kg, aproximadamente 7 pg/kg, aproximadamente 8 pg/kg, aproximadamente 9 pg/kg o aproximadamente 10 pg/kg. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis, dosis por medio o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período.
En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso (por ejemplo, cáncer, linfopenia, inmunodeficiencias, enfermedades infecciosas o heridas), en donde el método comprende: (a) administrar a un sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 10 pg/kg (en algunas realizaciones de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 5 pg/kg, por ejemplo, aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg) de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 1 semana a 3 semanas; y (b) después de un segundo período de 1 semana a 2 meses (u 8 semanas) en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 10 pg/kg (en algunas realizaciones de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 5 pg/kg, por ejemplo, aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg) de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un tercer período de 1 semana a 3 semanas. En algunas realizaciones, los pasos (a) a (b) se repiten dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez o más veces. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis, dosis por medio o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período. En una realización específica, el sujeto es un ser humano.
En una realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso (por ejemplo, cáncer, linfopenia, inmunodeficiencias, enfermedades infecciosas o heridas), en donde el método comprende: (a) administrar a un sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 10 pg/kg (en algunas realizaciones, de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 5 pg/kg) de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; y (b) después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 10 pg/kg (en algunas realizaciones, de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 5 pg/kg) de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, los pasos de (a) a (c) se repiten dos, tres, cuatro o más veces. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis, dosis por medio o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período. En una realización específica, el sujeto es un ser humano.
En otra realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso (por ejemplo, cáncer, linfopenia, inmunodeficiencias, enfermedades infecciosas o heridas) en donde el método comprende: (a) administrar a un sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2
pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, de aproximadamente 4 pg/kg, aproximadamente 5 pg/kg, aproximadamente 6 pg/kg, aproximadamente 7 pg/kg, aproximadamente 8 pg/kg o aproximadamente 10 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; y (b) después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg, aproximadamente 5 pg/kg, aproximadamente 6 pg/kg, aproximadamente 7 pg/kg, aproximadamente 8 pg/kg o aproximadamente 10 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, los pasos de (a) a (c) se repiten dos, tres, cuatro o más veces. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis, dosis por medio o antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra en el tercer período. En una realización específica, el sujeto es un ser humano.
En otra realización, en este documento se proporciona un método para tratar o manejar el cáncer en un sujeto humano, que comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, de aproximadamente 4 pg/kg, aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 1 semana a 3 semanas, y (b) después de un segundo período de 1 semana a 2 meses (u 8 semanas) en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 1 semana a 3 semanas. En una realización específica, el cáncer es melanoma, carcinoma de células renales, cáncer pulmonar (por ejemplo, carcinoma pulmonar no microcítico) o cáncer de colon. En ciertas realizaciones, el cáncer es metastásico. En una realización específica, el cáncer es melanoma metastásico, carcinoma de células renales metastásico, cáncer pulmonar metastásico (por ejemplo, carcinoma pulmonar no microcítico metastásico) o cáncer de colon metastásico.
En una realización específica, en este documento se proporciona un método para tratar o manejar el cáncer en un sujeto humano, que comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; y (b) después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En una realización específica, el cáncer es melanoma, carcinoma de células renales, cáncer pulmonar (por ejemplo, carcinoma pulmonar no microcítico) o cáncer de colon. En ciertas realizaciones, el cáncer es metastásico. En una realización específica, el cáncer es melanoma metastásico, carcinoma de células renales metastásico, cáncer pulmonar metastásico (por ejemplo, carcinoma pulmonar no microcítico metastásico) o cáncer de colon metastásico.
En otra realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar una enfermedad infecciosa en un sujeto humano, que comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, de aproximadamente 4 pg/kg, aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 1 semana a 3 semanas, y (b) después de un segundo período de 1 semana a 2 meses (u 8 semanas) en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 12 1 semana a 3 semanas. En algunas realizaciones, la enfermedad infecciosa es causada por una infección viral, bacteriana, fúngica o por parásitos.
En una realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar una enfermedad infecciosa en un sujeto humano, que comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; y (b) después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, la enfermedad infecciosa es causada por una infección viral, bacteriana, fúngica o por parásitos.
En otra realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar una inmunodeficiencia en un sujeto humano, que comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, de aproximadamente 4 pg/kg, aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1.2 o 3 días durante un primer período de 1 semana a 3 semanas, y (b) después de un segundo período de 1 semana a 2 meses (u 8 semanas) en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 1 semana a 3 semanas. En algunas realizaciones, la inmunodeficiencia es causada por SIDA o un trastorno (por ejemplo, un trastorno genético).
En una realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar una inmunodeficiencia en un sujeto humano, que comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; y (b) después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, la inmunodeficiencia es causada por SIDA o un trastorno (por ejemplo, un trastorno genético).
En otra realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar la linfopenia en un sujeto humano, que comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, de aproximadamente 4 pg/kg, aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1.2 o 3 días durante un primer período de 1 semana a 3 semanas, y (b) después de un segundo período de 1 semana a 2 meses (u 8 semanas) en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 1 semana a 3 semanas. En algunas realizaciones, la linfopenia es causada por una terapia (por ejemplo, quimioterapia un agente antiviral o un agente inmunosupresor), o una enfermedad que causa disminución de los linfocitos periféricos circulantes.
En una realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar la linfopenia en un sujeto humano, que comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; y (b) después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, la linfopenia es causada por una terapia (por ejemplo, quimioterapia un agente antiviral o un agente inmunosupresor), o una enfermedad que causa disminución de los linfocitos periféricos circulantes.
En otro aspecto, en este documento se proporcionan métodos para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, que comprenden: (a) administrar a un sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 10 pg/kg (en algunas realizaciones, de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 5 pg/kg) de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 1 semana a 3 semanas; (b) evaluar los niveles plasmáticos de IL-15 y/o el recuento de linfocitos en el sujeto después de un segundo período de 1 semana a 2 meses (u 8 semanas) en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto; y (c) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un tercer período de 1 semana a 3 semanas. En algunas realizaciones, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c) es mayor que la dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c). En otras realizaciones, la segunda dosis es de 0,01 pg/kg, de 0,02 pg/kg, 0,03 pg/kg, de 0,05 pg/kg, de 0,075 pg/kg, de 0,1 pg/kg, de 0,25 pg/kg, de 0,5 pg/kg, de 0,75 pg/kg, de 1 pg/kg, de 1,25 pg/kg, de 1,5 pg/kg o de 1,75 pg/kg más alta que la primera dosis. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis o dosis por medio. En una realización específica, el sujeto es un ser humano.
En una realización, en este documento se proporcionan métodos para mejorar función inmunitaria mediada por IL-15, que comprenden: (a) administrar a un sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 10 pg/kg (en algunas realizaciones, de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 5 pg/kg) de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; (b) evaluar los niveles plasmáticos de IL-15 y/o el recuento de linfocitos en el sujeto después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se
administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto; y (c) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c) es mayor que la dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c). En otras realizaciones, la segunda dosis es de 0,01 pg/kg, de 0,02 pg/kg, 0,03 pg/kg, de 0,05 pg/kg, de 0,075 pg/kg, de 0,1 pg/kg, de 0,25 pg/kg, de 0,5 pg/kg, de 0,75 pg/kg, de 1 pg/kg, de 1,25 pg/kg, de 1,5 pg/kg o de 1,75 pg/kg más alta que la primera dosis. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis o dosis por medio. En una realización específica, el sujeto es un ser humano.
En una realización, en este documento se proporciona un método para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, que comprende: (a) administrar a un sujeto, por vía subcutánea, una primera dosis de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 10 pg/kg (en algunas realizaciones de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 5 pg/kg) de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; (b) evaluar los niveles plasmáticos de IL-15 y/o el recuento de linfocitos en el sujeto después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto; y (c) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una segunda dosis del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días, en donde la segunda dosis mantiene los niveles plasmáticos de IL-15 congruentes con los alcanzados mediante la primera dosis administrada durante el primer período. En algunas realizaciones, la segunda dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c) es mayor que la primera dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (a). En otras realizaciones, la segunda dosis es de 0,01 pg/kg, de 0,02 pg/kg, 0,03 pg/kg, de 0,05 pg/kg, de 0,075 pg/kg, de 0,1 pg/kg, de 0,25 pg/kg, de 0,5 pg/kg, de 0,75 pg/kg, de 1 pg/kg, de 1,25 pg/kg, de 1,5 pg/kg o de 1,75 pg/kg más alta que la primera dosis. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis o dosis por medio. En una realización específica, el sujeto es un ser humano.
En otra realización, en este documento se proporciona un método para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, que comprende: (a) administrar a un sujeto, por vía subcutánea, una primera dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg, aproximadamente 5 pg/kg, aproximadamente 6 pg/kg, aproximadamente 7 pg/kg, aproximadamente 8 pg/kg o aproximadamente 10 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; (b) evaluar los niveles plasmáticos de IL-15 y/o el recuento de linfocitos en el sujeto después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto; y (c) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días, en donde la segunda dosis mantiene los niveles plasmáticos de IL-15 congruentes con los alcanzados mediante la primera dosis administrada durante el primer período. En algunas realizaciones, la segunda dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c) es mayor que la primera dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (a). En otras realizaciones, la segunda dosis es de 0,01 pg/kg, de 0,02 pg/kg, 0,03 pg/kg, de 0,05 pg/kg, de 0,075 pg/kg, de 0,1 pg/kg, de 0,25 pg/kg, de 0,5 pg/kg, de 0,75 pg/kg, de 1 pg/kg, de 1,25 pg/kg, de 1,5 pg/kg o de 1,75 pg/kg más alta que la primera dosis. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis o dosis por medio. En una realización específica, el sujeto es un ser humano.
En otro aspecto, en este documento se proporcionan métodos para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso (por ejemplo cáncer, linfopenia, inmunodeficiencias, enfermedades infecciosas o heridas), que comprenden: (a) administrar a un sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 10 pg/kg (en algunas realizaciones, de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 5 pg/kg) de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un primer período de 1 semana a 3 semanas; (b) evaluar los niveles plasmáticos de IL-15 y/o el recuento de linfocitos en el sujeto después de un segundo período de 1 semana a 2 meses (u 8 semanas) en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto; y (c) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 1 semana a 3 semanas. En algunas realizaciones, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c) es mayor que la dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (a). En otras realizaciones, la segunda dosis es de 0,01 pg/kg, de 0,02 pg/kg, 0,03 pg/kg, de 0,05 pg/kg, de 0,075 pg/kg, de 0,1 pg/kg, de 0,25 pg/kg, de 0,5 pg/kg, de 0,75 pg/kg, de 1 pg/kg, de 1,25 pg/kg, de 1,5 pg/kg o de 1,75 pg/kg más alta que la primera dosis. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis o dosis por medio. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma. En una realización específica, el sujeto es un ser humano. En una realización particular, el método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso, es un método para tratar o manejar el cáncer. En una realización específica, el cáncer es melanoma, carcinoma de células renales, cáncer pulmonar (por ejemplo, carcinoma pulmonar no microcítico)
o cáncer de colon. En otra realización particular, el método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso, es un método para prevenir, tratar y/o manejar una enfermedad infecciosa. En otra realización particular, el método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso, es un método para prevenir, tratar y/o manejar una inmunodeficiencia. En otra realización particular, el método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso, es un método para tratar y/o manejar la linfopenia.
En algunas realizaciones, en este documento se proporcionan métodos para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso (por ejemplo, cáncer, linfopenia, inmunodeficiencias, enfermedades infecciosas o heridas), en donde el método comprende: (a) administrar a un sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 10 pg/kg (en algunas realizaciones, de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 5 pg/kg) de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; (b) evaluar los niveles plasmáticos de IL-15 y/o el recuento de linfocitos en el sujeto después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto; y (c) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c) es mayor que la dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c). En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis o dosis por medio. En una realización específica, el sujeto es un ser humano.
En una realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso (por ejemplo, cáncer, linfopenia, inmunodeficiencias, enfermedades infecciosas o heridas), en donde el método comprende: (a) administrar a un sujeto, por vía subcutánea, una primera dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 10 pg/kg (en algunas realizaciones, de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 5 pg/kg) de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; (b) evaluar los niveles plasmáticos de IL-15 y/o el recuento de linfocitos en el sujeto después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto; y (c) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una segunda dosis del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días, en donde la segunda dosis mantiene los niveles plasmáticos de IL-15 congruentes con los alcanzados mediante la primera dosis administrada durante el primer período. En algunas realizaciones, la segunda dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c) es mayor que la primera dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (a). En otras realizaciones, la segunda dosis es de 0,01 pg/kg, de 0,02 pg/kg, 0,03 pg/kg, de 0,05 pg/kg, de 0,075 pg/kg, de 0,1 pg/kg, de 0,25 pg/kg, de 0,5 pg/kg, de 0,75 pg/kg, de 1 pg/kg, de 1,25 pg/kg, de 1,5 pg/kg o de 1,75 pg/kg más alta que la primera dosis. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis o dosis por medio. En una realización específica, el sujeto es un ser humano.
En otra realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso (por ejemplo, cáncer, linfopenia, inmunodeficiencias, enfermedades infecciosas o heridas) en donde el método comprende: (a) administrar a un sujeto, por vía subcutánea, una primera dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg, aproximadamente 5 pg/kg, aproximadamente 6 pg/kg, aproximadamente 7 pg/kg, aproximadamente 8 pg/kg o aproximadamente 10 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; (b) evaluar los niveles plasmáticos de IL-15 y/o el recuento de linfocitos en el sujeto después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto; y (c) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una segunda dosis del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días, en donde la segunda dosis mantiene los niveles plasmáticos de IL-15 congruentes con los alcanzados mediante la primera dosis administrada durante el primer período. En algunas realizaciones, la segunda dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c) es mayor que la primera dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (a). En otras realizaciones, la segunda dosis es de 0,01 pg/kg, de 0,02 pg/kg, 0,03 pg/kg, de 0,05 pg/kg, de 0,075 pg/kg, de 0,1 pg/kg, de 0,25 pg/kg, de 0,5 pg/kg, de 0,75 pg/kg, de 1 pg/kg, de 1,25 pg/kg, de 1,5 pg/kg o de 1,75 pg/kg más alta que la primera dosis. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis o dosis por medio. En una realización específica, el sujeto es un ser humano.
En otra realización, en este documento se proporciona un método para tratar o manejar el cáncer en un sujeto humano, que comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; (b) evaluar los niveles plasmáticos de IL-15 y/o el recuento de linfocitos en el sujeto y después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto; y (c) administrar al
sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c) es mayor que la dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (a). En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis o dosis por medio. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma. En una realización específica, el cáncer es melanoma, carcinoma de células renales, cáncer pulmonar (por ejemplo, carcinoma pulmonar no microcítico) o cáncer de colon. En ciertas realizaciones, el cáncer es metastásico. En realizaciones específicas, el cáncer es melanoma metastásico, carcinoma de células renales metastásico, cáncer pulmonar metastásico (por ejemplo carcinoma pulmonar no microcítico metastásico), o cáncer de colon metastásico.
En otra realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar una enfermedad infecciosa en un sujeto humano, que comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; (b) evaluar los niveles plasmáticos de IL-15 y/o el recuento de linfocitos en el sujeto y después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto; y (c) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c) es mayor que la dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (a). En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis o dosis por medio. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma. En algunas realizaciones, la enfermedad infecciosa es causada por una infección viral, bacteriana, fúngica o por parásitos.
En otra realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar una inmunodeficiencia en un sujeto humano, que comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; (b) evaluar los niveles plasmáticos de IL-15 y/o el recuento de linfocitos en el sujeto y después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto; y (c) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c) es mayor que la dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (a). En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis o dosis por medio. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma. En algunas realizaciones, la inmunodeficiencia es causada por SIDA o un trastorno (por ejemplo, un trastorno genético).
En otra realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar la linfopenia en un sujeto humano, que comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg o aproximadamente 5 pg/kg de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un primer período de 12 a 14 días; (b) evaluar los niveles plasmáticos de IL-15 y/o el recuento de linfocitos en el sujeto y después de un segundo período de 12 a 14 días en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto; y (c) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 12 a 14 días. En algunas realizaciones, la dosis del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (c) es mayor que la dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra mencionada en el paso (a). En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan antes de la primera dosis de un complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en el sujeto se controlan después de cada dosis o dosis por medio. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma. En algunas realizaciones, la linfopenia es causada por una terapia (por ejemplo, quimioterapia un agente antiviral o un agente inmunosupresor), o una enfermedad que causa disminución de los linfocitos periféricos circulantes.
En algunas realizaciones de los métodos descritos en este documento, se administra un complejo IL-15/IL-15Ra por vía subcutánea cada 1, 2 o 3 días en la cantidad de aproximadamente 0,1 pg/kg, aproximadamente 0,2 pg/kg, aproximadamente 0,25 pg/kg, aproximadamente 0,3 pg/kg, aproximadamente 0,4 pg/kg, aproximadamente 0,5 pg/kg, aproximadamente 0,6 pg/kg, aproximadamente 0,7 pg/kg, aproximadamente 0,8 pg/kg, aproximadamente 0,9 pg/kg,
aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 1,25 pg/kg, aproximadamente 1,5 pg/kg, aproximadamente 1,75 pg/kg, aproximadamente 2 pg/kg, aproximadamente 2,25 pg/kg, aproximadamente 2,5 pg/kg, aproximadamente 2,75, aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 3,25 pg/kg, aproximadamente 3,5 pg/kg, aproximadamente 3,75 pg/kg, aproximadamente 4 pg/kg, aproximadamente 4,25 pg/kg, aproximadamente 4,5 pg/kg, aproximadamente 4,75 pg/kg, aproximadamente 5 pg/kg, aproximadamente 5,5 pg/kg, aproximadamente 6 pg/kg, aproximadamente 6,5 pg/kg, aproximadamente 7 pg/kg, aproximadamente 7,5 pg/kg, aproximadamente 8 pg/kg, aproximadamente 8,5 pg/kg, aproximadamente 9 pg/kg, aproximadamente 9,5 pg/kg o aproximadamente 10 pg/kg. En una realización, en este documento se describen métodos que comprenden la administración subcutánea de un complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días en la cantidad de aproximadamente 0,1 pg/kg, a 5 pg/kg, 0,1 pg/kg a 4 pg/kg, 0,1 pg/kg a 3 pg/kg, 0,1 pg/kg a 2.5 pg/kg, 0,1 pg/kg a 2 pg/kg, 0,1 pg/kg a 1 pg/kg, 0,1 pg/kg a 0,5 pg/kg, 0,5 pg/kg a 5 pg/kg, 0,5 pg/kg a 4 pg/kg, 0,5 pg/kg a 3 pg/kg, 0,5 pg/kg a 2,5 pg/kg, 0,1 pg/kg a 2 pg/kg, 0.5 pg/kg a 1 pg/kg, 1 pg/kg a 5 pg/kg, 1 pg/kg a 4 pg/kg, 1 pg/kg a 3 pg/kg, 1 pg/kg a 2.5 pg/kg, 1 pg/kg a 2 pg/kg, 2 pg/kg a 5 pg/kg, 2 pg/kg a 4 pg/kg, 2 pg/kg a 3 pg/kg, 2.5 pg/kg a 5 pg/kg, o 3 pg/kg a 5 pg/kg.
En algunas realizaciones de los métodos descritos en este documento, un complejo IL-15/IL-15Ra se administra a un sujeto en un régimen cíclico, en donde el régimen cíclico comprende (a) un primer período de administración subcutánea del complejo IL-15/IL-15Ra durante un período de tiempo de 7 días, 8 días, 9 días, 10 días, 11 días, 12 días, 13 días, 14 días, 15 días, 16 días, 17 días, 18 días, 19 días, 20 días o 21 días (por ejemplo, cada 1,2 o 3 días durante este período de tiempo),(b) un segundo período de 7 días, 8 días, 9 días, 10 días, 11 días, 12 días, 13 días, 14 días, 15 días, 16 días, 17 días, 18 días, 19 días, 20 días, 21 días, 22 días, 23 días, 24 días, 25 días, 26 días, 27 días, 28 días, 29 días, 30 días, 31 días, 32 días, 33 días, 34 días, 35 días, 36 días, 37 días, 38 días, 39 días, 40 días, 41 días, 42 días, 43 días, 44 días, 45 días, 46 días, 47 días, 48 días, 49 días, 50 días, 51 días, 52 días, 53 días, 54 días, 55 días, 56 días, 57 días, 58 días, 59 días, 60 días, 61 días o 62 días durante el cual no se administra el complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto; y (c) un tercer período que comprende la administración subcutánea del complejo IL-15/IL-15Ra a un sujeto durante un período de tiempo de 7 días, 8 días, 9 días, 10 días, 11 días, 12 días, 13 días, 14 días, 15 días, 16 días, 17 días, 18 días, 19 días, 20 días o 21 días (por ejemplo, cada 1, 2 o 3 días durante este período de tiempo). En algunas realizaciones de los métodos descritos en este documento, un complejo IL-15/IL-15Ra se administra en un régimen cíclico, en donde el régimen cíclico comprende: (a) un primer período que comprende la administración subcutánea del complejo IL-15/IL-15Ra a un sujeto durante un período de tiempo de 7 días a 21 días, 7 días a 14 días, 7 días a 10 días, 7 días a 18 días, 10 días a 21 días, 10 días a 18 días, 10 días a 14 días, 12 a 21 días, 12 días a 18 días, 12 días a 16 días o 12 días a 14 días (por ejemplo, cada 1,2 o 3 días durante este período de tiempo), (b) un segundo período de 1 semana a 2 semanas, 1 semana a 3 semanas, 1 semana a 4 semanas, 1 semana a 5 semanas, 1 semana a 6 semanas, 1 semana a 7 semanas, 1 semana a 8 semanas, 2 semanas a 3 semanas, 2 semanas a 4 semanas, 2 semanas a 5 semanas, 2 semanas a 6 semanas, 2 semanas a 7 semanas, 2 semanas a 8 semanas, 3 semanas a 4 semanas, 3 semanas a 5 semanas, 3 semanas a 6 semanas, 3 semanas a 7 semanas, 3 semanas a 8 semanas, 4 semanas a 5 semanas, 4 semanas a 6 semanas, 4 semanas a 7 semanas, 4 semanas a 8 semanas, 5 semanas a 6 semanas, 5 semanas a 7 semanas, 5 semanas a 8 semanas, 6 semanas a 7 semanas, 6 semanas a 8 semanas, 7 semanas a 8 semanas durante el cual no se administra el complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto; y (c) un tercer período que comprende la administración subcutánea del complejo IL-15/IL-15Ra a un sujeto durante un período de tiempo de 7 días a 21 días, 7 días a 14 días, 7 días a 10 días, 7 días a 18 días, 10 días a 21 días, 10 días a 18 días, 10 días a 14 días, 12 días a 21 días, 12 días a 18 días, 12 días a 16 días o 12 días a 14 días (por ejemplo, cada 1, 2 o 3 días durante este período de tiempo).
En otro aspecto, en este documento se proporciona un método para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 que comprende administrar al sujeto, por vía subcutánea, un complejo IL-15/IL-15Ra en un régimen cíclico, en el que cada ciclo del régimen cíclico comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra con una cierta frecuencia durante un primer período de tiempo; y (b) no administrar complejo IL-15/IL-15Ra durante un segundo período de tiempo, en donde el régimen cíclico se repite un cierto número de veces y la dosis se incrementa secuencialmente a medida que el régimen se repite. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en un sujeto se controlan con cierta frecuencia, por ejemplo, después de cada dosis y/o dosis por medio. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma. En algunas realizaciones, el régimen cíclico se repite 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más veces. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra con una frecuencia de cada día, día por medio, cada 3, 4, 5 o 6 días. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7 días por semana durante el primer período de tiempo. En algunas realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son iguales. En otras realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son diferentes. En algunas realizaciones, el primer período de tiempo para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas de duración. En algunas realizaciones, el primer período de tiempo para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas o 4 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana a 2 meses, 1 a 8 semanas, 2 a 8 semanas, 1 a 6 semanas, 2 a 6 semanas, 1 a 5 semanas, 2 a 5 semanas, 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas o 6 semanas de duración. En una realización, la dosis del primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 0,75 pg/kg, 1 pg/kg, 1,5 pg/kg, 2 pg/kg, 2.5 pg/kg o 3 pg/kg. En otra realización, la dosis del segundo ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 0,75 pg/kg, 1 pg/kg, 1,5 pg/kg, 2 pg/kg, 2,5 pg/kg, o 3 pg/kg más alta que la dosis utILizada en el primer ciclo del
régimen cíclico. En otra realización, la dosis del primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 0,75 pg/kg o 1 pg/kg, y la dosis de cada ciclo subsiguiente es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 0,75 pg/kg,1 pg/kg, 1,5 pg/kg, 2 pg/kg, 2,5 pg/kg, 3 pg/kg, 4 pg/kg, 5 pg/kg, 6 pg/kg, 7 pg/kg, 8 pg/kg, 9 pg/kg o 10 pg/kg más alta que la primera y la segunda dosis utILizadas en el ciclo previo del régimen cíclico. En algunas realizaciones, la dosis del primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg, la dosis del segundo ciclo del régimen cíclico es de 0,25 pg/kg, la dosis del tercer ciclo del régimen cíclico es de 0,5 pg/kg, la dosis del cuarto ciclo del régimen cíclico es de 1 pg/kg, y la dosis del quinto ciclo del régimen cíclico es de 2 pg/kg. En otras realizaciones, la dosis del primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg a 0,25 pg/kg, la dosis del segundo ciclo del régimen cíclico es de 0,5 pg/kg a 1 pg/kg, la dosis del tercer ciclo del régimen cíclico es de 1 pg/kg a 3 pg/kg, la dosis del cuarto ciclo del régimen cíclico es de 4 pg/kg a 6 pg/kg, y la dosis del quinto ciclo del régimen cíclico es de 7 pg/kg a 10 pg/kg.
En una realización, en este documento se proporciona un método para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, que comprende administrar a un sujeto, por vía subcutánea, un complejo IL-15/IL-15Ra en un régimen cíclico, en el que cada ciclo del régimen cíclico comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra con una cierta frecuencia durante un primer período de tiempo; y (b) no administrar complejo IL-15/IL-15Ra durante un segundo período de tiempo, en donde el régimen cíclico se repite al menos 5 veces, y en donde la dosis durante el primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg a 1 pg/kg, la dosis durante el segundo ciclo del régimen cíclico es de 2 pg/kg a 5 pg/kg, la dosis durante el tercer ciclo del régimen cíclico es de 5 pg/kg a 10 pg/kg, la dosis durante el cuarto ciclo del régimen cíclico es de 10 pg/kg a 20 pg/kg, y la dosis durante el quinto ciclo del régimen cíclico es de 20 pg/kg a 30 pg/kg. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra con una frecuencia de cada día, día por medio, cada 3, 4, 5 o 6 días. En algunas realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son iguales. En otras realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son diferentes. En algunas realizaciones, el primer período de tiempo para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas de duración. En algunas realizaciones, el primer período de tiempo para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas o 4 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana a 2 meses, 1 a 8 semanas, 2 a 8 semanas, 1 a 6 semanas, 2 a 6 semanas, 1 a 5 semanas, 2 a 5 semanas, 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas o 6 semanas de duración. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en un sujeto se controlan con cierta frecuencia, por ejemplo, después de cada dosis y/o dosis por medio. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma.
En otro aspecto, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso (por ejemplo, cáncer, una enfermedad infecciosa, una inmunodeficiencia o linfopenia), que comprende administrar a un sujeto, por vía subcutánea, complejo IL-15/IL-15Ra en un régimen cíclico, en donde cada ciclo del régimen cíclico comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra con una cierta frecuencia durante un primer período de tiempo; y (b) no administrar complejo IL-15/IL-15Ra durante un segundo período de tiempo, en donde el régimen cíclico se repite un cierto número de veces y la dosis se incrementa secuencialmente a medida que el régimen se repite. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en un sujeto se controlan con cierta frecuencia, por ejemplo, después de cada dosis y/o dosis por medio. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma. En algunas realizaciones, el régimen cíclico se repite 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más veces. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra con una frecuencia de cada día, día por medio, cada 3, 4, 5 o 6 días. En algunas realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son iguales. En otras realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son diferentes. En algunas realizaciones, el primer período de tiempo para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas de duración. En algunas realizaciones, el primer período de tiempo para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas o 4 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana a 2 meses, 1 a 8 semanas, 2 a 8 semanas, 1 a 6 semanas, 2 a 6 semanas, 1 a 5 semanas, 2 a 5 semanas, 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas o 6 semanas de duración. En una realización, la dosis del primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 0,75 pg/kg, 1 pg/kg, 1,5 pg/kg, 2 pg/kg, 2,5 pg/kg o 3 pg/kg. En otra realización, la dosis del segundo ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 0,75 pg/kg, 1 pg/kg, 1,5 pg/kg, 2 pg/kg, 2,5 pg/kg, o 3 pg/kg más alta que la dosis utILizada en el primer ciclo del régimen cíclico. En otra realización, la dosis del primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 0,75 pg/kg o 1 pg/kg, y la dosis de cada ciclo subsiguiente es de 0,1 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 0,75 pg/kg, 1 pg/kg, 1,5 pg/kg, 2 pg/kg, 2,5 pg/kg, 3 pg/kg, 4 pg/kg, 5 pg/kg, 6 pg/kg, 7 pg/kg, 8 pg/kg, 9 pg/kg o 10 pg/kg más alta que la dosis utILizada en el ciclo previo del régimen cíclico. En algunas realizaciones, la dosis del primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg, la dosis del segundo ciclo del régimen cíclico es de 0,25 pg/kg, la dosis del tercer ciclo del régimen cíclico es de 0,5 pg/kg, la dosis del cuarto ciclo del régimen cíclico es de 1 pg/kg, y la dosis del quinto ciclo del régimen cíclico es de 2 pg/kg. En otras realizaciones, la dosis del primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 pg/kg a 0,25 pg/kg, la dosis del segundo ciclo del régimen cíclico es de 0,5 pg/kg a 1 pg/kg, la dosis del tercer ciclo del régimen cíclico es de 1 pg/kg a 3 pg/kg, la dosis del
cuarto ciclo del régimen cíclico es de 4 gg/kg a 6 gg/kg, y la dosis del quinto ciclo del régimen cíclico es de 7 gg/kg a 10 gg/kg.
En una realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso (por ejemplo, cáncer, una enfermedad infecciosa, una inmunodeficiencia o linfopenia), que comprende administrar a un sujeto, por vía subcutánea, un complejo IL-15/IL-15Ra en un régimen cíclico, en el que cada ciclo el régimen cíclico comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra con una cierta frecuencia durante un primer período de tiempo; y (b) no administrar complejo IL-15/IL-15Ra durante un segundo período de tiempo, en donde el régimen cíclico se repite al menos 5 veces, y en donde la dosis durante el primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 gg/kg a 1 gg/kg, la dosis durante el segundo ciclo del régimen cíclico es de 2 gg/kg a 5 gg/kg, la dosis durante el tercer ciclo del régimen cíclico es de 5 gg/kg a 10 gg/kg, la dosis durante el cuarto ciclo del régimen cíclico es de 10 gg/kg a 20 gg/kg, y la dosis durante el quinto ciclo del régimen cíclico es de 20 gg/kg a 30 gg/kg. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra con una frecuencia de cada día, día por medio, cada 3, 4, 5 o 6 días. En algunas realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son iguales. En otras realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son diferentes. En algunas realizaciones, el primer período de tiempo para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas de duración. En algunas realizaciones, el primer período de tiempo para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas o 4 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana a 2 meses, 1 a 8 semanas, 2 a 8 semanas, 1 a 6 semanas, 2 a 6 semanas, 1 a 5 semanas, 2 a 5 semanas, 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas o 6 semanas de duración. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en un sujeto se controlan después de cada dosis y/o dosis por medio. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma. En algunas realizaciones, el trastorno es una enfermedad infecciosa. En algunas realizaciones, el trastorno es SIDA y el régimen se utILiza para erradicar el VIH.
En otra realización, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el que mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso, que comprende administrar a un sujeto, por vía subcutánea, un complejo IL-15/IL-15Ra en un régimen cíclico, en el que cada ciclo del régimen cíclico comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis del complejo IL-15/IL-15Ra con una cierta frecuencia durante un primer período de tiempo; y (b) no administrar complejo IL-15/IL-15Ra durante un segundo período de tiempo, en donde el régimen cíclico se repite y en donde la dosis durante cada ciclo se incrementa secuencialmente hasta que se alcanza la máxima dosis tolerada o hasta que el sujeto presenta uno o más acontecimientos adversos. En algunas realizaciones, los niveles plasmáticos de IL-15 y/o los recuentos de linfocitos en un sujeto se controlan con cierta frecuencia, por ejemplo, después de cada dosis y/o dosis por medio. En algunas realizaciones, se controla si el sujeto presenta efectos secundarios como una disminución en la tensión arterial y/o un aumento en la temperatura corporal y/o un aumento de citocinas en el plasma, y acontecimientos adversos como linfopenia grado 3 o 4, granulocitopenia grado 3, leucocitosis grado 3 (GB > 100.000/mm3) o disfunción orgánica. En algunas realizaciones, la dosis durante el primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 gg/kg a 1 gg/kg, la dosis durante el segundo ciclo del régimen cíclico es de 2 gg/kg a 5 gg/kg, la dosis durante el tercer ciclo del régimen cíclico es de 5 gg/kg a 10 gg/kg, la dosis durante el cuarto ciclo del régimen cíclico es de 10 gg/kg a 20 gg/kg, y la dosis durante el quinto ciclo del régimen cíclico es de 20 gg/kg a 30 gg/kg. En otras realizaciones, la dosis durante el primer ciclo del régimen cíclico es de 0,1 gg/kg a 1 gg/kg, la dosis durante el segundo ciclo del régimen cíclico es de 2 gg/kg a 5 gg/kg, la dosis durante el tercer ciclo del régimen cíclico es de 5 gg/kg a 15 gg/kg, la dosis durante el cuarto ciclo del régimen cíclico es de 15 gg/kg a 30 gg/kg, y la dosis durante el quinto ciclo del régimen cíclico es de 30 gg/kg a 50 gg/kg. En algunas realizaciones, el complejo IL-15/IL-15Ra se administra con una frecuencia de cada día, día por medio, cada 3, 4, 5 o 6 días. En algunas realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son iguales. En otras realizaciones, el primer y el segundo períodos de tiempo son diferentes. En algunas realizaciones, el primer período de tiempo para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 a 4 semanas, 2 a 4 semanas, 2 a 3 semanas o 1 a 2 semanas de duración. En algunas realizaciones, el primer período de tiempo para la administración del complejo IL-15/IL-15Ra es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas o 4 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana a 2 meses, de 1 a 8 semanas, de 2 a 8 semanas, de 1 a 6 semanas, de 2 a 6 semanas, de 1 a 5 semanas, de 2 a 5 semanas, de 1 a 4 semanas, de 2 a 4 semanas, de 2 a 3 semanas, de 1 a 2 semanas de duración. En algunas realizaciones, el segundo período de tiempo es de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas o 6 semanas de duración. En algunas realizaciones, el trastorno es una enfermedad infecciosa. En algunas realizaciones, el trastorno es causado por el VIH y el régimen se utILiza para erradicar el VIH.
De conformidad con los métodos descritos en este documento, el Agente Terapéutico puede ser administrado a un sujeto en una composición farmacéutica. En algunas realizaciones, el Agente Terapéutico es un solo/único agente administrado al sujeto. En otras realizaciones, el Agente Terapéutico se administra en combinación con una o más de otras terapias (por ejemplo, un anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a Her2, PD-1 o un ligando de PD-1 (por ejemplo, PD-L1). La terapia de combinación incluye la administración conjunta y sucesiva de un Agente Terapéutico y otra terapia. Según se usa en este documento, se dice que el Agente Terapéutico y otra terapia se administran conjuntamente si se administran al paciente el mismo día, por ejemplo, simultáneamente o con 1,2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 horas de separación. En contraposición, se dice que el Agente Terapéutico y la terapia se administran sucesivamente si se administran al paciente
en días diferentes, por ejemplo, el Agente Terapéutico y la terapia se pueden administrar a intervalos de 1 día, 2 días o 3 días. En los métodos descritos en este documento, la administración del Agente Terapéutico puede preceder o seguir a la administración de la segunda terapia. Cuando se administran simultáneamente, el Agente Terapéutico y la otra terapia pueden estar en la misma composición farmacéutica o en composiciones farmacéuticas diferentes.
Como ejemplo no limitante, el Agente Terapéutico y la otra terapia se pueden administrar conjuntamente durante un primer período de tiempo, seguido de un segundo período de tiempo en el cual la administración del Agente Terapéutico y la otra terapia se alternan. En algunas realizaciones, el Agente Terapéutico y la otra terapia se pueden administrar usando el régimen de administración cíclica siguiente: (a) una dosis del Agente Terapéutico se administra a un sujeto, por vía subcutánea, cada 1, 2 o 3 días durante 1 semana a 3 semanas; (b) una dosis de la otra terapia se administra al sujeto cada 1, 2, 3, 5 o 7 días durante aproximadamente 1 semana a 3 semanas; y (c) una dosis del Agente Terapéutico se administra al sujeto, por vía subcutánea, cada 1, 2 o 3 días durante 1 semana a 3 semanas. El que este régimen de administración cíclica se repita y cuántas veces se repita puede depender, por ejemplo, del tipo de síntomas y de la gravedad de los síntomas, y debería ser decidido de acuerdo al juicio del médico y de las circunstancias de cada paciente o sujeto. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite una vez, dos veces, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez veces o más. En algunas realizaciones, la dosis de Agente Terapéutico administrada al sujeto es una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg a 10 pg/kg del sujeto.
Por ejemplo, el Agente Terapéutico y la otra terapia se pueden administrar usando el régimen de administración cíclica siguiente: (a) una dosis del Agente Terapéutico se administra a un sujeto, por vía subcutánea, cada 1,2 o 3 días durante un período de aproximadamente dos semanas; (b) una dosis de la otra terapia se administra al sujeto cada 1,2, 3, 5 o 7 días durante un período de aproximadamente dos semanas; y (c) una dosis del Agente Terapéutico se administra al sujeto, por vía subcutánea, cada 1,2 o 3 días durante un período de aproximadamente dos semanas. El que este régimen de administración cíclica se repita y cuántas veces se repita puede depender, por ejemplo, del tipo de síntomas y de la gravedad de los síntomas, y debería ser decidido de acuerdo al juicio del médico y de las circunstancias de cada paciente o sujeto. En algunas realizaciones, este régimen de administración cíclica se repite una vez, dos veces, tres veces o más. En algunas realizaciones, la dosis de Agente Terapéutico administrada al sujeto es una dosis de aproximadamente 0,1 pg/kg a 10 pg/kg del sujeto. En ciertas realizaciones, la otra terapia es un anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a PD-1 o a uno de sus ligandos (por ejemplo, PD-L1). En otras realizaciones, la otra terapia es un anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a Her2.
Por ejemplo, un anticuerpo monoclonal que se dirige a una célula cancerosa se puede administrar antes o conjuntamente con la administración de un Agente Terapéutico. En una realización, el anticuerpo monoclonal se administra antes de la administración del Agente Terapéutico, en donde el Agente Terapéutico se administra según un régimen de administración cíclica descrito en este documento. En una realización, el anticuerpo monoclonal se une inmunoespecíficamente a Her2 (por ejemplo, Herceptin®).
En otro ejemplo no limitante, el Agente Terapéutico se puede administrar a un sujeto después de la administración de otra terapia. Por ejemplo, un agente quimioterápico o un agente inmunosupresor se pueden administrar antes de la administración de un Agente Terapéutico. En una realización, el agente quimioterápico o el agente inmunosupresor se administran durante un período de tiempo antes de la administración del Agente Terapéutico, en donde el Agente Terapéutico se administra según un régimen de inmunización cíclica descrito en este documento.
En algunas realizaciones, los ejemplos de la función inmunitaria mejorada por los métodos descritos en este documento incluyen la proliferación/expansión de los linfocitos (por ejemplo, aumento de la cantidad de linfocitos), inhibición de la apoptosis de los linfocitos, activación de las células dendríticas (o células presentadoras de antígeno) y presentación de antígenos. En realizaciones particulares, una función inmunitaria mejorada por los métodos descritos en este documento es la proliferación/expansión en la cantidad o la activación de linfocitos T CD4+ (por ejemplo, linfocitos T cooperadores Th1 y Th2), linfocitos T CD8+ (por ejemplo, linfocitos T citotóxicos, linfocitos T alfa/beta y linfocitos T gamma/delta), linfocitos B (por ejemplo, linfocitos plasmáticos), linfocitos T memoria, linfocitos B memoria, células dendríticas (inmaduras o maduras), células presentadoras de antígeno, macrófagos, mastocitos, linfocitos T citolíticos naturales (linfocitos NKT), linfocitos T residentes en tumores, linfocitos T CD122+ o linfocitos citolíticos naturales (linfocitos NK). En una realización, los métodos descritos en este documento mejoran la proliferación/expansión o la cantidad de progenitores de linfocitos. En algunas realizaciones, los métodos descritos en este documento aumentan la cantidad de linfocitos T CD4+ (por ejemplo, linfocitos T cooperadores Th1 y Th2), linfocitos T CD8+ ( por ejemplo, linfocitos T citotóxicos, linfocitos T alfa/beta y linfocitos T gamma/delta), linfocitos B (por ejemplo, linfocitos plasmáticos), linfocitos T memoria, linfocitos B memoria, células dendríticas (inmaduras o maduras), células presentadoras de antígeno, macrófagos, mastocitos, linfocitos T citolíticos naturales (linfocitos NKT), linfocitos T residentes en tumores, linfocitos T CD122+ o linfocitos citolíticos naturales (linfocitos NK) en aproximadamente 1 vez, 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 6 veces, 7 veces, 8 veces, 9 veces, 10 veces, 20 veces o más con respecto a un control negativo (por ejemplo, la cantidad de los linfocitos respectivos sin tratar, sin cultivar o sin poner en contacto con el Agente Terapéutico).
En una realización, los métodos descritos en este documento mejoran o inducen la función inmunitaria en un sujeto en al menos 99%, al menos 95%, al menos 90%, al menos 85%, al menos 80%, al menos 75%, al menos 70%, al menos 60%, al menos 50%, al menos 45%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 35%, al menos 30%, al menos 25%, al menos
20% o al menos 10% con respecto a la función inmunitaria en un sujeto al que no se le administró el Agente Terapéutico, empleando ensayos bien conocidos en el área, por ejemplo, ELISPOT, ELISA y ensayos de proliferación celular. En una realización, la función inmunitaria es la liberación de citocinas (por ejemplo, interferón-gamma, IL-2, IL-5, IL-10, IL-12 o el factor de crecimiento transformante (TGF)-beta). En una realización, la función inmunitaria mediada por IL-15 es la proliferación de linfocitos NK, que se puede analizar, por ejemplo, mediante citometría de flujo para detectar el número de linfocitos que expresan marcadores de linfocitos NK (por ejemplo, CD56). En otra realización, la función inmunitaria mediada por IL-15 es la producción de anticuerpos, que se puede analizar, por ejemplo, por ELISA. En algunas realizaciones, la función inmunitaria mediada por IL-15 es una función efectora, que se puede analizar, por ejemplo, mediante un ensayo de citotoxicidad u otros ensayos bien conocidos en el área.
El efecto de una o más dosis de uno o más complejos IL-15/IL-15Ra sobre los recuentos de linfocitos en sangre periférica se puede controlar/evaluar empleando técnicas estándar conocidas por un experto en la materia. Los recuentos de linfocitos en sangre periférica en un mamífero, se pueden determinar, por ejemplo, obteniendo la muestra de sangre periférica de dicho mamífero, separando los linfocitos de otros componentes de la sangre periférica como el plasma, empleando, por ejemplo, centrifugación por gradiente Ficoll-Hypaque (Pharmacia) y recuento de linfocitos utILizando azul de tripano. Los recuentos de linfocitos T en sangre periférica en mamíferos se pueden determinar, por ejemplo, separando los linfocitos de otros componentes de la sangre periférica como el plasma, empleando, por ejemplo, centrifugación por gradiente Ficoll-Hypaque (Pharmacia), marcando los linfocitos T con un anticuerpo dirigido a un antígeno de linfocitos T como CD3, CD4 y CD8 que se conjuga con FITC o ficoeritrina, y midiendo la cantidad de linfocitos T por FACS. Además, el efecto sobre un subconjunto particular de linfocitos T (por ejemplo, CD2+, CD4+, CD8+, CD4+RO+, CD8+RO+, CD4+RA+ o CD8+RA+) o linfocitos NK se puede determinar empleando técnicas estándar conocidas por un experto en la materia como FACS.
Los niveles plasmáticos de IL-15 se pueden evaluar empleando técnicas estándar conocidas por un experto en la materia. Por ejemplo, se puede obtener plasma de una muestra de sangre obtenida de un sujeto y los niveles plasmáticos de IL-15 se pueden medir por ELISA.
5.6. T ransferencia celular adoptiva
En un aspecto, las células hospedadoras que expresan de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra descrito en este documento (por ejemplo, Sección 3.1, Sección 5.1 y/o Sección 5.2, supra) se administran a un sujeto para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 y/o para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso, como cáncer, una enfermedad infecciosa, una inmunodeficiencia o linfopenia. En algunas realizaciones, una o más células hospedadoras descritas en este documento que expresan de manera recombinante IL-15 e IL-15Ra se administran a un sujeto para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15. En algunas realizaciones, una o más células hospedadoras descritas en este documento que expresan de manera recombinante IL-15 e IL-15Ra se administran a un sujeto para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso, como cáncer, una enfermedad infecciosa, una inmunodeficiencia o linfopenia.
En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un método para mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15, que comprende administrar a un sujeto una o más células hospedadoras que expresan de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra descrito en este documento. En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un método en el que mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso, que comprende administrar a un sujeto una composición que contiene una o más células hospedadoras que expresan de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra descrito en este documento. En algunas realizaciones, el polipéptido IL-15Ra expresado por la o las células hospedadoras es un polipéptido IL-15Ra descrito en la Sección 5.1, supra. En algunas realizaciones, la o las células hospedadoras expresan de manera recombinante un polipéptido IL-15 además de un polipéptido IL-15Ra. En algunas realizaciones, la o las células hospedadoras son inmunocitos, como inmunocitos obtenidos o derivado del sujeto. En algunas realizaciones, la o las células hospedadoras son linfocitos (por ejemplo, linfocitos T), monocitos, células dendríticas o linfocitos citolíticos naturales, como por ejemplo linfocitos (por ejemplo, linfocitos T), monocitos, células dendríticas o linfocitos citolíticos naturales obtenidos o derivados del sujeto. En algunas realizaciones, la o las células hospedadoras son inmunocitos de sangre periférica o linfocitos infILtrantes de tumor, como inmunocitos de sangre periférica o linfocitos infILtrantes de tumor obtenidos o derivados del sujeto. En algunas realizaciones, la o las células hospedadoras son inmunocitos, que se aislaron de una muestra de sangre periférica del sujeto, se cultivaron en cultivo celular y se genomanipuladas para que expresaran de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un polipéptido IL-15). En algunas realizaciones, la o las células hospedadoras se derivaron del sujeto que recibe las células hospedadoras. En otras realizaciones, la o las células hospedadoras se derivaron de un sujeto diferente al sujeto que recibe la o las células hospedadoras.
En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o mejorar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso, que comprende administrar a un sujeto, una o más células hospedadoras que expresan de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra descrito en este documento. En algunas realizaciones, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o mejorar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso, que comprende administrar a un sujeto una composición que contiene una o más células hospedadoras que expresan de manera recombinante un polipéptido IL15Ra descrito en este documento. En algunas realizaciones, el polipéptido IL-15Ra expresado por la o las células hospedadoras es un polipéptido IL-15Ra descrito en la Sección 5.1, supra. En algunas realizaciones, la o las células hospedadoras expresan de manera recombinante un polipéptido IL-15 además de un polipéptido IL-15Ra. En algunas realizaciones, la o las células hospedadoras son células mononucleares de sangre periférica o linfocitos infILtrantes de tumor. En algunas realizaciones, la o las células hospedadoras son inmunocitos. En algunas realizaciones, la o las células hospedadoras son linfocitos (por ejemplo, linfocitos T), como linfocitos T CD4+ o linfocitos CD8+), monocitos, células dendríticas o linfocitos citolíticos naturales. En algunas realizaciones, la o las células hospedadoras se derivaron del sujeto que recibe las células hospedadoras. En otras realizaciones, la o las células hospedadoras se derivaron de un sujeto diferente al sujeto que recibe la o las células hospedadoras. En algunas realizaciones, la o las células hospedadoras para la administración a un sujeto son inmunocitos, que se aislaron de una muestra de sangre periférica del sujeto que recibe las células hospedadoras o de un sujeto diferente, se cultivaron en cultivo celular y se genomanipularon para que expresaran de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un polipéptido IL-15). Véanse las Secciones 5.7 a 5.9, infra, por una discusión sobre los trastornos en los cuales mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso.
Las células hospedadoras que expresan de manera recombinante IL-15Ra (y en algunas realizaciones, IL-15) se pueden administrar local o sistémicamente a un sujeto a través de cualquier vía conocida por un experto en la materia (por ejemplo, administración parenteral, como administración subcutánea, intravenosa o intramuscular, o administración intratumoral). En algunas realizaciones, las células hospedadoras que expresan de manera recombinante IL-15Ra (y en algunas realizaciones, IL-15) se implantan o infunden en un sujeto. En algunas realizaciones, las células hospedadoras que expresan de manera recombinante IL-15Ra (y en algunas realizaciones, IL-15) se implantan en un sujeto y el implante incluye un material poroso, no poroso o gelatinoso, que incluye membranas como membranas sialásticas, o fibras, además de las células hospedadoras.
En algunas de las realizaciones en las cuales las células hospedadoras que expresan de manera recombinante IL-15Ra (y en algunas realizaciones, IL-15) se administran localmente, las células hospedadoras expresan de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra en el cual el sitio de escisión para una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo ha sido mutado. En algunas realizaciones, las células hospedadoras que se administran localmente expresan de manera recombinante un derivado de IL-15Ra que comprende una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho mutaciones (por ejemplo, adiciones, sustituciones o deleciones; como titulaciones o deleciones de uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho residuos de aminoácidos) en SEQ ID NO:26 de modo que la escisión por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra humano nativo, se inhibe. En otras realizaciones, las células hospedadoras que se administran localmente expresan de manera recombinante un derivado de IL-15Ra que comprende (i) un dominio extracelular de IL-15Ra en el cual el sitio de escisión para una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo ha sido mutado, y (ii) todo o un fragmento de un dominio transmembrana de una molécula heteróloga en lugar de todo o un fragmento del dominio transmembrana de IL-15Ra nativo. En algunas realizaciones, las células hospedadoras que se administran localmente expresan de manera recombinante un derivado de IL-15Ra que comprende (i) un dominio extracelular de IL-15Ra con una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho mutaciones (por ejemplo, adiciones, sustituciones o deleciones; como sustituciones o deleciones de uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho residuos de aminoácidos) en SEQ ID NO:26 de modo que la escisión por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra humano nativo, se inhibe, y (ii) todo o un fragmento de un dominio transmembrana de una molécula heteróloga en lugar de todo o un fragmento del dominio transmembrana de IL-15Ra nativo. Aún en otras realizaciones, las células hospedadoras que se administran localmente se genomanipulan para que expresen de manera recombinante cualquiera de los polipéptidos IL-15Ra descritos en la Sección 5.3.2., supra, en los cuales el sitio de escisión para una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo ha sido mutado (por ejemplo, eliminado) de modo que la escisión por una proteasa endógena que escinde el IL-15Ra humano nativo, se inhibe. Aún en otras realizaciones, las células hospedadoras que se administran localmente se genomanipulan para que expresen de manera recombinante cualquiera de los polipéptidos IL-15Ra descritos en la Sección 5.1 o la Sección 5.3.2., supra.
En algunas realizaciones, las células hospedadoras que expresan de manera recombinante IL-15Ra (y en algunas realizaciones, IL-15) se administran a un sujeto como parte de una composición. En algunas realizaciones, dicha composición comprende un polímero además de las células hospedadoras. En algunas realizaciones, una dosis adecuada de células hospedadoras que expresan de manera recombinante IL-15Ra (y en algunas realizaciones, IL-15) administrada al sujeto puede ser de de al menos 100, 200, 300, 400, 500, 700, 1000, 5000, 10.000, 25.000, 50.000, 100.000, 1 x 106, 1 x 107 o 1 x 108 células. En algunas realizaciones, una dosis adecuada de células hospedadoras que expresan de manera recombinante IL-15Ra (y en algunas realizaciones, IL-15) administrada al sujeto es entre 100 y 10.000, 500 y 10.000, 1000 y 5000, 5000 y 10.000, 5000 y 20.000, 10.000 y 20.000, 25.000 y 50.000, 50.000 y 100.000, 1 x 104 y 1 x 105, 1 x 105 y 1 x 106, 1 x 105 y 1 x 107, 1 x 106 y 1 x 108 células. Las células hospedadoras que expresan de manera recombinante IL-15Ra (y en algunas realizaciones, IL-15) se pueden administrar 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 o más veces. La frecuencia y la dosis de células hospedadoras que expresan de manera recombinante IL-15Ra (y en algunas realizaciones, IL-15) que se administran a un sujeto variarán dependiendo de varios factores, que incluyen, por ejemplo, la afección del paciente.
En algunas realizaciones, los ejemplos de la función inmunitaria mejorada por los métodos descritos en este documento incluyen la proliferación/expansión de los linfocitos (por ejemplo, aumento de la cantidad de linfocitos), inhibición de la apoptosis de los linfocitos, activación de las células dendríticas (o células presentadoras de antígeno) y presentación de
antígenos. En realizaciones particulares, una función inmunitaria mejorada por los métodos descritos en este documento es la proliferación/expansión en la cantidad o la activación de linfocitos T CD4+ (por ejemplo, linfocitos T cooperadores Th1 y Th2), linfocitos T CD8+ (por ejemplo, linfocitos T citotóxicos, linfocitos T alfa/beta, y linfocitos T gamma/delta), linfocitos B (por ejemplo, linfocitos plasmáticos), linfocitos T memoria, linfocitos B memoria, células dendríticas (inmaduras o maduras), células presentadoras de antígeno, macrófagos, mastocitos, linfocitos T citolíticos naturales (linfocitos NKT), linfocitos T residentes en tumores, linfocitos T CD122+ o linfocitos citolíticos naturales (linfocitos NK). En una realización, los métodos descritos en este documento mejoran la proliferación/expansión o la cantidad de progenitores de linfocitos. En algunas realizaciones, los métodos descritos en este documento aumentan la cantidad de linfocitos T CD4+ (por ejemplo, linfocitos T cooperadores Th1 y Th2), linfocitos T CD8+ (por ejemplo, linfocitos T citotóxicos, linfocitos T alfa/beta y linfocitos T gamma/delta), linfocitos B (por ejemplo, linfocitos plasmáticos), linfocitos T memoria, linfocitos B memoria, células dendríticas (inmaduras o maduras), células presentadoras de antígeno, macrófagos, mastocitos, linfocitos T citolíticos naturales (linfocitos NKT), linfocitos T residentes en tumores, linfocitos T CD122+ o linfocitos citolíticos naturales (linfocitos NK) en aproximadamente 1 vez, 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 6 veces, 7 veces, 8 veces, 9 veces, 10 veces, 20 veces o más con respecto a un control negativo.
En una realización, los métodos descritos en este documento mejoran o inducen la función inmunitaria en un sujeto en al menos 99%, al menos 95%, al menos 90%, al menos 85%, al menos 80%, al menos 75%, al menos 70%, al menos 60%, al menos 50%, al menos 45%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 35%, al menos 30%, al menos 25%, al menos 20% o al menos 10% con respecto a la función inmunitaria en un sujeto al que no se le administra una o más Células Genomanipuladas, empleando ensayos bien conocidos en el área, por ejemplo, ELISPOT, ELISA y ensayos de proliferación celular. En una realización, la función inmunitaria es la liberación de citocinas (por ejemplo, interferón-gamma, IL-2, IL-5, IL-10, IL-12 o el factor de crecimiento transformante (TGF)-beta). En una realización, la función inmunitaria mediada por IL-15 es la proliferación de linfocitos NK, que se puede analizar, por ejemplo, mediante citometría de flujo para detectar el número de linfocitos que expresan marcadores de linfocitos NK (por ejemplo, CD56). En otra realización, la función inmunitaria mediada por IL-15 es la producción de anticuerpos, que se puede analizar, por ejemplo, mediante ELISA. En algunas realizaciones, la función inmunitaria mediada por IL-15 es una función efectora, que se puede analizar, por ejemplo, mediante un ensayo de citotoxicidad u otros ensayos bien conocidos en el área.
El efecto de una o más dosis de una o más Células Genomanipuladas sobre los recuentos de linfocitos en sangre periférica se puede controlar/evaluar empleando técnicas estándar conocidas por un experto en la materia. Los recuentos de linfocitos en sangre periférica en un mamífero, se pueden determinar, por ejemplo, obteniendo la muestra de sangre periférica de dicho mamífero, separando los linfocitos de otros componentes de la sangre periférica como el plasma, empleando, por ejemplo, centrifugación por gradiente Ficoll-Hypaque (Pharmacia) y recuento de linfocitos utILizando azul de tripano. Los recuentos de linfocitos T en sangre periférica en mamíferos se pueden determinar, por ejemplo, separando los linfocitos de otros componentes de la sangre periférica como el plasma, empleando, por ejemplo, centrifugación por gradiente Ficoll-Hypaque (Pharmacia), marcando los linfocitos T con un anticuerpo dirigido a un antígeno de linfocitos T como CD3, CD4 y CD8 que se conjuga con FITC o ficoeritrina, y midiendo la cantidad de linfocitos T por FACS. Además, el efecto sobre un subconjunto particular de linfocitos T (por ejemplo, CD2+, CD4+, CD8+, CD4+RO+, CD8+RO+, CD4+RA+ o CD8+RA+) o linfocitos NK se puede determinar empleando técnicas estándar conocidas por un experto en la materia como FACS.
5.7. Tratamiento del cáncer
En este documento se proporcionan métodos para prevenir, tratar y/o manejar el cáncer, que comprenden administrar una cantidad eficaz de un Agente Terapéutico o de una composición que contiene un Agente Terapéutico, a un sujeto que lo necesita. En una realización específica, el Agente Terapéutico se administra por vía subcutánea. En una realización específica, los regímenes de administración cíclica descritos en este documento se usan para prevenir, tratar y/o manejar el cáncer.
En este documento también se proporcionan métodos para prevenir, tratar y/o manejar el cáncer, que comprenden administrar una cantidad eficaz de una o más Células Genomanipuladas o de una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, a un sujeto que lo necesita.
El efecto de un Agente Terapéutico o de una o más Células Genomanipuladas sobre la proliferación de las células cancerosas puede ser detectado mediante ensayos de rutina, como ensayos que miden la absorción de timidina radiomarcada. Alternativamente, la viabILidad celular se puede medir mediante ensayos que miden la lactato deshidrogenasa (LDH), una enzima citosólica estable que es liberada después de la lisis celular, o mediante la liberación de [51Cr] después de la lisis celular. En una realización, la necrosis se mide por la capacidad o incapacidad de una célula para absorber un colorante como rojo neutro, azul de tripano o azul de Alamar™ (Page et al., 1993, Intl. J. of Oncology 3:473476). En un ensayo de ese tipo, las células se incuban en un medio que contiene el colorante, las células se lavan y el colorante remanente, que refleja la absorción celular del colorante, se mide espectrofotométricamente.
En otra realización, el colorante es sulforodamina B (SRB), cuya unión a proteínas se puede usar como medida de citotoxicidad (Skehan et al., 1990, J. Nat'l Cancer Inst. 82:1107, 12). Aún en otra realización, se usa una sal de tetrazolio como MTT, en un ensayo colorimétrico cuantitativo para determinar la supervivencia y la proliferación de células de
mamífero mediante detección de células vivas, pero no de células muertas (véase, por ejemplo Mosmann, 1983, J. Immunol. Methods 65:5563).
En otras realizaciones, se miden las células apoptóticas en los compartimientos de unidas y "flotantes" de los cultivos. El contenido de ambos compartimientos se recoge retirando el sobrenadante, tripsinizando las células unidas y combinando ambas preparaciones después de un paso de lavado por centrifugación (10 minutos, 2000 rpm). El protocolo para tratar cultivos de células tumorales con sulindac y compuestos relacionados para obtener una cantidad significativa de apoptosis ha sido descrito en la bibliografía (véase, por ejemplo, Piazza et al., 1995, Cancer Research 55:3110 16). Las características de este método incluyen recoger tanto las células flotantes como unidas, la identificación de los tiempos de tratamiento óptimos y el intervalo de dosis para observar apoptosis, y la identificación de las condiciones de cultivo celular óptimas.
En otra realización, la apoptosis se cuantifica midiendo la fragmentación de ADN. Se dispone de métodos fotométricos comerciales para la determinación cuantitativa in vitro de la fragmentación del ADN. Los ejemplos de dichos ensayos que incluyen TUNEL (que detecta la incorporación de nucleótidos marcados en ADN fragmentado) y ensayos basados en ELISA, se describen en Biochemica, 1999, N° 2, pp. 3437 (Roche Molecular Biochemicals).
Aún en otra realización, la apoptosis se puede observar morfológicamente.
Las líneas celulares de cáncer en las cuales se pueden realizar dichos ensayos son bien conocidas por los expertos en la materia. También se pueden realizar ensayos de apoptosis, necrosis y proliferación sobre células primarias, por ejemplo, un explante tisular.
En una realización, la proliferación o viablLidad de células cancerosas puestas en contacto con un Agente Terapéutico o una composición que contiene un Agente Terapéutico es inhibida o reducida en al menos 2 veces, preferentemente al menos 2,5 veces, al menos 3 veces, al menos 4 veces, al menos 5 veces, al menos 7 veces o al menos 10 veces con respecto a la proliferación de las células cancerosas cuando se ponen en contacto con un control negativo, según se mide empleando ensayos bien conocidos en el área, por ejemplo ensayos de proliferación celular que usan CSFE, BrdUl e incorporación de 3H-timidina. En otra realización, la proliferación de células cancerosas puestas en contacto con un Agente Terapéutico o una composición que contiene un Agente Terapéutico es inhibida o reducida en al menos 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90% o al menos 95% con respecto a células cancerosas puestas en contacto con un control negativo, según se mide empleando ensayos bien conocidos en el área, por ejemplo, ensayos de proliferación celular que utILizan la incorporación de CSFE, BrdU y 3H-timidina, o los ensayos descritos antes. En un aspecto, la composición que contiene un Agente Terapéutico contiene además células (por ejemplo, linfocitos citolíticos NK o linfocitos T citotóxicos) que responden a la señalización de IL-15 y que pueden ser dirigidos y ejercer efectos citotóxicos sobre las células cancerosas.
En una realización, la proliferación o viabILidad de células cancerosas después de la administración de una o más Células Genomanipuladas, o una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, es inhibida o reducida en al menos 2 veces, preferentemente al menos 2,5 veces, al menos 3 veces, al menos 4 veces, al menos 5 veces, al menos 7 veces o al menos 10 veces con respecto a la proliferación de las células cancerosas después de la administración de un control negativo, según se mide empleando ensayos bien conocidos en el área, por ejemplo ensayos de proliferación celular que usan la incorporación de CSFE, BrdU y 3H-timidina. En otra realización, la proliferación de células cancerosas después de la administración de una o más Células Genomanipuladas, o una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, es inhibida o reducida en al menos 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90% o al menos 95% con respecto a células cancerosas después de la administración de un control negativo, según se mide empleando ensayos bien conocidos en el área, por ejemplo, ensayos de proliferación celular que utILizan la incorporación de CSFE, BrdU y 3H-timidina, o los ensayos descritos antes.
En algunas realizaciones, la administración de un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas a un sujeto de conformidad con los métodos descritos en este documento, logra uno, dos o tres o más resultados: (1) una reducción en el crecimiento de un tumor o neoplasma; (2) una reducción en la formación de un tumor; (3) una erradicación, eliminación o control de cáncer primario, regional y/o metastásico; (4) una reducción en la diseminación metastásica; (5) una disminución de la mortalidad; (6) un aumento en el índice de supervivencia; (7) un aumento en la duración de la supervivencia; (8) un aumento en el número de pacientes en remisión; (9) una disminución en la tasa de hospitalización; (10) una disminución en la duración de las hospitalizaciones; y (11) el mantenimiento del tamaño del tumor de modo que no aumente más de 10%, o más de 8%, o más de 6%, o más de 4%; preferentemente el tamaño el tumor no aumenta más de 2%.
En una realización, la administración de un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas o de una composición que contiene un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas a un sujeto con cáncer (en algunas realizaciones, un modelo animal para cáncer), de conformidad con los métodos descritos en este documento, inhibe o reduce el crecimiento de un tumor en al menos 2 veces, preferentemente al menos 2,5 veces, al menos 3 veces,
al menos 4 veces, al menos 5 veces, al menos 7 veces o al menos 10 veces con respecto al crecimiento de un tumor en un sujeto con cáncer (en algunas realizaciones, en el mismo modelo animal para cáncer) al que se le administró un control negativo, según se mide empleando ensayos bien conocidos en el área. En otra realización, la administración de un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas o de una composición que contiene un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas a un sujeto con cáncer (en algunas realizaciones, un modelo animal para cáncer), de conformidad con los métodos descritos en este documento, inhibe o reduce el crecimiento de un tumor en al menos 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90% o al menos 95% con respecto al crecimiento de un tumor en un sujeto con cáncer (en algunas realizaciones, en el mismo modelo animal para cáncer) al que se le administró un control negativo, según se mire empleando ensayos bien conocidos en el área.
En una realización, la administración de un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas o de una composición que contiene un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas a un sujeto con cáncer (en algunas realizaciones, un modelo animal para cáncer), de conformidad con los métodos descritos en este documento, reduce el tamaño de un tumor en al menos 2 veces, preferentemente al menos 2,5 veces, al menos 3 veces, al menos 4 veces, al menos 5 veces, al menos 7 veces o al menos 10 veces con respecto al crecimiento de un tumor en un sujeto con cáncer (en algunas realizaciones, el mismo modelo animal para cáncer) al que se le administró un control negativo de conformidad con los métodos descritos en este documento, empleando ensayos bien conocidos en el área. En otra realización, la administración de un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas o de una composición que contiene un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas a un sujeto con cáncer (en algunas realizaciones, un modelo animal para cáncer), reduce el tamaño del tumor en al menos 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90% o al menos 95% con respecto al crecimiento de un tumor en un sujeto con cáncer (en algunas realizaciones, el mismo modelo animal para cáncer) al que se le administró un control negativo (por ejemplo, solución salina o PBS), según se mide empleando ensayos bien conocidos en el área. En una realización específica, el cáncer es melanoma, cáncer renal, cáncer de colon o cáncer de próstata. En otra realización, el cáncer es metastásico.
Un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas, se pueden administrar en combinación con una o más de otras terapias, por ejemplo, agentes antineoplásicos, citocinas o agentes antihormonales, para tratar y/o manejar el cáncer. Los ejemplos no limitantes de agentes antineoplásicos se describen a continuación. Véase la Sección 5.10, infra, y en particular, la Sección 5.10.1, infra. En una realización, la combinación de un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas y una o más de otras terapias proporciona un efecto terapéutico aditivo con respecto a los efectos terapéuticos del Agente Terapéutico o de una o más Células Genomanipuladas por sí solos o las una o más de otras terapias por sí solas. En una realización, la combinación de un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas y una o más de otras terapias proporciona más que un efecto terapéutico aditivo con respecto a los efectos terapéuticos del Agente Terapéutico o de una o más Células Genomanipuladas por sí solos o las una o más de otras terapias por sí solas. En una realización, la combinación de un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas y una o más de otras terapias proporciona un efecto terapéutico sinérgico con respecto a los efectos terapéuticos del Agente Terapéutico o de una o más Células Genomanipuladas por sí solos o las una o más de otras terapias por sí solas.
En una realización, las una o más de otras terapias incluyen, pero no exclusivamente, citocinas/factores de crecimiento, por ejemplo, interleucina (IL) 1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15, TNF-a, TNF-p, TGF-p, GM-CSF e interferón-Y. En una realización, las una o más de otras terapias incluyen, pero no exclusivamente receptores, anticuerpos u otros agentes de unión que se unen a citocinas/factores de crecimiento, por ejemplo, interleucina (IL) 1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-11, IL-12, TNF-a, TNF-p, TGF-p, GM-CSF, interferón-a, interferón-p e interferón-Y. En algunas realizaciones, las una o más de otras terapias incluyen, pero no exclusivamente, células que expresan de manera recombinante una proteína (o polipéptidos) terapéutica, por ejemplo, una citocina, un factor de crecimiento, una quimiocina o uno de sus fragmentos o derivados. En una realización particular, las una o más de otras terapias incluyen, pero no exclusivamente, células que expresan de manera recombinante IL-12, IL-6, GM-CSF, interferón-a, interferón-p, interferón-Y o TNF-a. En algunas realizaciones, dichas terapias se administran antes de, conjuntamente con, o después de la administración de un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas, en donde el Agente Terapéutico o las una o más Células Genomanipuladas se administran de conformidad con los métodos descritos en este documento. En algunas realizaciones, dichas terapias se administran antes de, conjuntamente con, o después de la administración de una o más Células Genomanipuladas, en donde las una o más Células Genomanipuladas se administran de conformidad con los métodos descritos en este documento.
Un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas también se pueden administrar en combinación con radioterapia que comprende, por ejemplo, el uso de rayos X, rayos gamma y otras fuentes de radiación para destruir las células cancerosas. En algunas realizaciones, la radioterapia se administra como una radioterapia externa o teleterapia en donde la radiación es dirigida desde una fuente remota. En otras realizaciones, la radioterapia se administra como radioterapia interna o braquiterapia en donde una fuente radioactiva se coloca dentro del cuerpo cerca de las células cancerosas o de una masa tumoral. En una realización, un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas se pueden administrar de conformidad con los métodos descritos en este documento antes, durante o después de una radioterapia. En un aspecto, el Agente Terapéutico o la una o más Células Genomanipuladas pueden mejorar la función
inmunitaria del paciente con cáncer con un sistema inmunitario comprometido debido a una terapia antineoplásica. Un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas también se pueden administrar en combinación con quimioterapia. En una realización, un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas se pueden administrar de conformidad con los métodos descritos en este documento antes, durante o después de una radioterapia o una quimioterapia. En una realización, un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas, se pueden usar antes, durante o después de una cirugía. En una realización, los métodos provistos en este documento incluyen la combinación de un trasplante y un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas.
Los ejemplos no limitantes de agentes antihormonales son agentes antihormonales que actúan para regular o inhibir la acción de las hormonas sobre los tumores, como antiestrógenos y moduladores selectivos de los receptores de estrógenos (SERM), que incluyen, por ejemplo, tamoxifeno (incluido tamoxifeno NOLVADEX®), raloxifeno, droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, keoxifeno, LY117018, onapristona y toremifeno FARESTON; inhibidores de aromatasa que inhiben la enzima aromatasa, que regula la producción de estrógeno en las glándulas suprarrenales, como por ejemplo, 4(5)-imidazoles, aminoglutetimida, acetato de megestrol MEGASE®, exemestano AROMASIN®V, formestano, fadrozol, vorozol RIVISOR®, letrozol FEMARA® y anastrozol ARIMIDEX®D; y antiandrógenos como flutamida, nILutamida, bicalutamida, leuprolida y goserelina; así como troxacitabina (un análogo del nucleósido 1,3-dioxolano de citosina); oligonucleótidos antisentido, particularmente los que inhiben la expresión de genes en vías de señalización implicadas en la proliferación celular aberrante, como por ejemplo, PKC-alfa, Raf y H-Ras; ribozimas como un inhibidor de la expresión de VEGF (por ejemplo, ribozima ANGIOZYMe®) y un inhibidor de la expresión de HER2, vacunas como vacunas de genoterapia, por ejemplo, vacuna ALLOVECTIN®, vacuna LEUVECTIN® y vacuna VAXID®; PROLEUKIN® rIL-2; inhibidor de la topoisomerasa 1 LURTOTECAN® ABARELX® rmRH; Vinorelbina y Esperamicinas (véase la patente de los Estados Unidos N° 4,675,187), y las sales, los ácidos o los derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores.
En una realización específica, un Agente Terapéutico se administra a un sujeto en combinación con un anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a muerte celular programada (PD-1) o a uno de sus ligandos (por ejemplo, PD-L1). En otra realización específica, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar el cáncer, que comprende administrar por vía subcutánea un complejo IL-15/IL-15Ra y administrar un anticuerpo que se una inmunoespecíficamente a PD-1 o a uno de sus ligandos. En ciertas realizaciones, el anticuerpo se administra después de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra. En otras realizaciones, El anticuerpo se administra antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra. En realizaciones específicas, el cáncer es melanoma, cáncer de próstata o cáncer de pulmón.
En otra realización, un Agente Terapéutico se administra a un sujeto en combinación con un anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a Her2 (por ejemplo, Herceptin®). En otra realización específica, en este documento se proporciona un método para prevenir, tratar y/o manejar el cáncer, que comprende administrar por vía subcutánea un complejo IL-15/IL-15Ra y administrar un anticuerpo que se una inmunoespecíficamente a Her2 (por ejemplo, Herceptin®). En ciertas realizaciones, el anticuerpo se administra después de la administración delcomplejo IL-15/IL-15Ra. En otras realizaciones, El anticuerpo se administra antes de la administración del complejo IL-15/IL-15Ra. En algunas realizaciones, el cáncer es cáncer de mama.
Los tipos de cáncer y trastornos relacionados que se pueden prevenir, tratar o manejar de conformidad con los métodos descritos en este documento incluyen, pero no exclusivamente, los siguientes: leucemias incluidas, pero no exclusivamente, leucemia aguda, leucemia linfocítica aguda leucemias mielocíticas agudas como leucemias mieloblástica, promielocítica, mielomonocítica, monocítica, eritroleucemia y síndrome mielodisplásico, leucemias crónicas como, pero no exclusivamente, leucemia mielocítica (granulocítica) crónica y leucemia linfocítica crónica, leucemia de células pILosas; policitemia vera; linfomas como, pero no exclusivamente, enfermedad de Hodgkin y enfermedad no hodgkiniana; mielomas múltiples como, pero no exclusivamente, mieloma múltiple latente, mieloma no secretor, mieloma osteoesclerótico, leucemia de células plasmáticas, plasmocitoma solitario y plasmocitoma extramedular; macroglobulinemia de Waldenstrom; gammapatía monoclonal de significado incierto; gammapatía monoclonal benigna; enfermedad de las cadenas pesadas; sarcomas óseos y de tejido conectivo como, pero no exclusivamente, sarcoma óseo, osteosarcoma, condrosarcoma, sarcoma de Ewing, tumor maligno de células gigantes, fibrosarcoma de hueso, cordoma, sarcoma perióstico, sarcomas de tejidos blandos, angiosarcoma (hemangiosarcoma), fibrosarcoma, sarcoma de Kaposi, leiomiosarcoma, liposarcoma, linfangiosarcoma, neurILemoma, rabdomiosarcoma y sarcoma sinovial; tumores cerebrales incluidos, pero no exclusivamente, glioma, astrocitoma, glioma del tronco encefálico, ependimoma, oligodendroglioma, tumor neuroepitelial, neurinoma acústico, craneofaringioma, meduloblastoma, meningioma, pineocitoma, pineoblastoma y linfoma cerebral primario; cáncer de mama incluidos, pero no exclusivamente, adenocarcinoma, carcinoma lobulILlar (células pequeñas), carcinoma ductal in situ, cáncer de mama medular, cáncer de mama mucinoso, cáncer de mama tubular, cáncer de mama papILar, enfermedad de Paget y cáncer de mama inflamatorio; cáncer suprarrenal incluidos, pero no exclusivamente, feocromocitoma y carcinoma corticosuprarrenal; cáncer de tiroides incluidos, pero no exclusivamente, cáncer de tiroides papILar o folicular, cáncer de tiroides medular y cáncer de tiroides anaplásico; cáncer pancreático incluidos, pero no exclusivamente, insulinoma, gastrinoma, glucagonoma, vipoma, tumor secretor de somatostatina y tumor carcinoide o de células insulares; cánceres hipofisarios incluidos, pero no exclusivamente, enfermedad de Cushing, tumor secretor de prolactina, acromegalia y diabetes insipius; cánceres oculares incluidos, pero no exclusivamente, melanoma ocular como melanoma de iris, melanoma coloidal y
melanoma del cuerpo cILiar, y retinoblastoma; cánceres vaginales, incluidos, pero no exclusivamente, carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma, y melanoma; cáncer vulvar, incluidos, pero no exclusivamente, carcinoma de células escamosas, melanoma, adenocarcinoma, carcinoma de células basales, sarcoma y enfermedad de Paget; cánceres de cuello uterino incluidos, pero no exclusivamente, carcinoma de células escamosas y adenocarcinoma; cánceres uterinos incluidos, pero no exclusivamente, carcinoma de endometrio y sarcoma uterino; cánceres de ovario incluidos, pero no exclusivamente, carcinoma epitelial de ovario, tumor borderline, tumor de células germinales y tumor del estroma; cánceres esofágicos incluidos, pero no exclusivamente, cáncer de células escamosas, adenocarcinoma, carcinoma adenoides quístico, carcinoma mucoepidermoide, carcinoma adenoescamoso, sarcoma, melanoma, plasmocitoma, carcinoma verrugoso y carcinoma de células pequeñas (oat cell); cánceres gástricos incluidos, pero no exclusivamente, adenocarcinoma, fungoso (polipoide), ulcerante, superficial, difuso, linfoma maligno, liposarcoma, fibrosarcoma y carcinosarcoma; cánceres de colon; cánceres rectales; cánceres hepáticos incluidos, pero no exclusivamente carcinoma hepatocelular y hepatoblastoma; cánceres vesicales incluidos, pero no exclusivamente, adenocarcinoma; colangiocarcinomas incluidos, pero no exclusivamente, papILar, nodular y difuso; cánceres pulmonares incluidos, pero no exclusivamente, cáncer pulmonar no microcítico, carcinoma de células escamosas (carcinoma epidermoide), adenocarcinoma, carcinoma de células grandes y cáncer pulmonar microcítico; cánceres testiculares incluidos, pero no exclusivamente, tumor de células germinales, seminoma, anaplásico, espermatocítico, no seminoma, carcinoma embrionario, carcinoma teratoma, coriocarcinoma (tumor de saco vitelino); cánceres prostáticos incluidos, pero no exclusivamente, adenocarcinoma, leiomiosarcoma y rabdomiosarcoma; cánceres de pene; cánceres orales incluidos, pero no exclusivamente, carcinoma de células escamosas; cánceres basales; cánceres de glándulas salivales incluidos, pero no exclusivamente, adenocarcinoma, carcinoma mucoepidermoide y carcinoma adenoquístico; cánceres faríngeos incluidos, pero no exclusivamente, cáncer de células escamosas y verrugoso; cánceres de piel incluidos, pero no exclusivamente, carcinoma de células basales, carcinoma de células escamosas y melanoma, y melanoma de extensión superficial, melanoma nodular, melanoma lentigo maligno, melanoma lentiginoso acral; cánceres renales incluidos, pero no exclusivamente, cáncer de células renales, cáncer renal, adenocarcinoma, hipernefroma, fibrosarcoma y cáncer de células transicionales (pelvis renal y/o uréter); tumor de WILms; cánceres de vejiga incluidos, pero no exclusivamente, carcinoma de células transicionales, cáncer de células escamosas, adenocarcinoma y carcinosarcoma. Además, los cánceres incluyen mixosarcoma,sarcoma osteogénico, endoteliosarcoma, linfangioendoteliosarcoma, mesotelioma, sinovioma, hemangioblastoma, carcinoma epitelial, cistadenocarcinoma, carcinoma broncogénico, carcinoma de glándulas sudoríparas, carcinoma de glándulas sebáceas, carcinoma papILar y adenocarcinomas papILares (por una revisión de dichos trastornos, véanse, Fishman et al., 1985, Medicine, 2a Ed., J.B. Lippincott Co., FILadelfia y Murphy et al., 1997, Informed Decisions: The Complete Book of Cancer Diagnosis, Treatment, and Recovery, Viking Penguin, Penguin Books U.S.A., Inc., Estados Unidos de América).
En una realización, el cáncer es benigno, por ejemplo, pólipos y lesiones benignas. En otras realizaciones, el cáncer es metastásico. Los Agentes Terapéuticos o la una o más Células Genomanipuladas se pueden usar en el tratamiento de afecciones premalignas así como malignas. Las afecciones premalignas incluyen hiperplasia, metaplasia y displasia. El tratamiento de afecciones malignas incluye el tratamiento de tumores primarios así como metastásicos. En una realización específica, el cáncer es melanoma, cáncer de colon, carcinoma de células renales o cáncer pulmonar (por ejemplo, carcinoma pulmonar no microcítico). En ciertas realizaciones, el cáncer es melanoma metastásico, cáncer de colon metastásico, carcinoma de células renales metastásico o cáncer pulmonar metastásico (por ejemplo carcinoma pulmonar no microcítico metastásico).
En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o terapias de combinación, se administran a un sujeto que sufre de un cáncer diagnosticado. En otras realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o terapias de combinación, se administran a un sujeto predispuesto o propenso a padecer cáncer. En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o terapias de combinación, se administran a un sujeto que habita en una región en la que hay una alta incidencia de cáncer. En una realización, el cáncer se caracteriza por un tumor premaligno o un tumor maligno.
En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un mamífero que tiene de 0 a 6 meses de edad, 6 a 12 meses de edad, 1 a 5 años de edad, 5 a 10 años de edad, 10 a 15 años de edad, 15 a 20 años de edad, 20 a 25 años de edad, 25 a 30 años de edad, 30 a 35 años de edad, 35 a 40 años de edad, 40 a 45 años de edad, 45 a 50 años de edad, 50 a 55 años de edad, 55 a 60 años de edad, 60 a 65 años de edad, 65 a 70 años de edad, 70 a 75 años de edad, 75 a 80 años de edad, 80 a 85 años de edad, 85 a 90 años de edad, 90 a 95 años de edad o 95 a 100 años de edad. En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un ser humano que corre riesgo de padecer cáncer. En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación se administran a un ser humano con cáncer. En algunas realizaciones, el paciente es un ser humano de 0 a 6 meses de edad, 6 a 12 meses de edad, 1 a 5 años de edad, 5 a 10 años de edad,
5 a 12 años de edad, 10 a 15 años de edad, 15 a 20 años de edad, 13 a 19 años de edad, 20 a 25 años de edad, 25 a 30 años de edad, 20 a 65 años de edad, 30 a 35 años de edad, 35 a 40 años de edad, 40 a 45 años de edad, 45 a 50 años de edad, 50 a 55 años de edad, 55 a 60 años de edad, 60 a 65 años de edad, 65 a 70 años de edad, 70 a 75 años de edad, 75 a 80 años de edad, 80 a 85 años de edad, 85 a 90 años de edad, 90 a 95 años de edad o 95 a 100 años de edad. En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un lactante humano o un lactante humano prematuro. En otras realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un niño humano. En otras realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un adulto humano. Aún en otras realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un anciano humano.
En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a una mascota, por ejemplo, un perro o un gato. En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un animal de granja o de cría por ejemplo cerdos, vacas, caballos, pollos, etc.
En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un primate, preferentemente un ser humano u otro mamífero, por ejemplo cerdo, vaca, caballo, oveja, cabra, perro, gato y roedor, que se encuentra en un estado inmunocomprometido o inmunosuprimido o corre el riesgo de estar inmunocomprometido o inmunosuprimido. En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un sujeto que recibe o se está recuperando de una terapia inmunosupresora. En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un sujeto que padece o corre el riesgo de contraer SIDA, una infección viral o una infección bacteriana. En algunas realizaciones, un sujeto se está sometiendo, se someterá o se sometió a una cirugía, quimioterapia y/o radioterapia. En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un sujeto que vive en un hogar para ancianos, un hogar comunitario (es decir un hogar para 10 o más sujetos) o una prisión.
En algunas realizaciones, a un paciente se le administra un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, antes de que presente cualquier efecto adverso o intolerancia a las terapias diferentes de los Agentes Terapéuticos o una o más Células Genomanipuladas. En algunas realizaciones, se administran Agentes Terapéuticos, composiciones que contienen Agentes Terapéuticos, Células Genomanipuladas, composiciones que contienen Células Genomanipuladas, o terapias de combinación, a pacientes resistentes. En algunas realizaciones, el paciente resistente es un paciente resistente a una terapia antineoplásica estándar. En ciertas realizaciones, un paciente con cáncer, es resistente a una terapia cuando el cáncer no ha sido erradicado significativamente y/o los síntomas no se han aliviado significativamente. La determinación de si un paciente es resistente se puede llevar a cabo in vivo o in vitro por cualquier método conocido en el área para analizar la eficacia de un tratamiento, utILizando los significados de "resistente" aceptados en el área en dicho contexto. En diversas realizaciones, un paciente con cáncer es resistente cuando un tumor canceroso no ha disminuido o ha aumentado.
En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición de una o más Células Genomanipuladas, o terapias de combinación, se administran a un paciente para prevenir el inicio o la reaparición del cáncer en un paciente que corre el riesgo de padecer dicho cáncer. En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas o una terapia de combinación, se administran a un paciente que es propenso a sufrir reacciones adversas a las terapias convencionales.
En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, composiciones que contienen Agentes Terapéuticos, Células Genomanipuladas, composiciones que contienen Células Genomanipuladas, o terapias de combinación, se administran a un paciente que ha demostrado ser resistente a terapias diferentes de los Agentes Terapéuticos o las Células Genomanipuladas, pero ya no está recibiendo esas terapias. En ciertas realizaciones, los pacientes que se están manejando o tratando de conformidad con los métodos descritos en este documento, son pacientes que ya han sido tratados con antibióticos, antineoplásicos u otras terapias biológicas/inmunoterapias. Entre estos pacientes están los
pacientes resistentes, los pacientes son muy jóvenes para las terapias convencionales y los pacientes que presentan infecciones virales repetidas a pesar del manejo o el tratamiento con las terapias existentes.
En algunas realizaciones, el sujeto que está recibiendo uno o más Agentes Terapéuticos, composiciones que contienen Agentes Terapéuticos, Células Genomanipuladas, composiciones que contienen Células Genomanipuladas, o terapias de combinación, no ha recibido una terapia antes de la administración de los Agentes Terapéuticos, las composiciones que contienen Agentes Terapéuticos, las Células Genomanipuladas, las composiciones que contienen Células Genomanipuladas o las terapias de combinación. En otras realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, composiciones que contienen Agentes Terapéuticos, Células Genomanipuladas, composiciones que contienen Células Genomanipuladas, o terapias de combinación, se administran a un paciente que ha recibido una terapia antes de la administración de uno o más Agentes Terapéuticos, composiciones que contienen Agentes Terapéuticos, Células Genomanipuladas, composiciones que contienen Células Genomanipuladas o terapias de combinación. En algunas realizaciones, el sujeto está recibiendo un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, o una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas fue resistente a una terapia previa o experimentó efectos secundarios adversos con la terapia previa o la terapia previa se interrumpió debido a niveles de toxicidad inaceptables para el sujeto.
En ciertas realizaciones, los ácidos nucleicos que codifican un polipéptido IL-15Ra (y en ciertas realizaciones, un IL-15), como se describe en la Sección 5.3.2, supra, se administran a un paciente descrito en esta Sección 5.7 con respecto a Agentes Terapéuticos y Células Genomanipuladas. En otras palabras, en vez de administrar al paciente un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas descritos en esta Sección 5.7, se le administran los ácidos nucleicos. En ciertas realizaciones, los ácidos nucleicos que codifican un polipéptido IL-15Ra (y en ciertas realizaciones, un IL-15), como se describe en la Sección 5.3.2, supra, se administran a un paciente con cáncer descrito en esta Sección 5.7. En algunas realizaciones, los ácidos nucleicos que codifican un polipéptido IL-15Ra (y en ciertas realizaciones, un IL-15), como se describe en la Sección 5.3.2, supra, se administran en combinación con una terapia adicional, como se describe en esta Sección 5.7 y en la Sección 5.10, infra.
En algunas realizaciones, se administra a un paciente una Célula Genomanipulada localmente (por ejemplo, en un tumor del paciente). En algunas de las realizaciones en las que se administra una Célula Genomanipulada localmente, dicha Célula Genomanipulada expresa de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra en el cual el sitio de escisión para una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo ha sido mutado. En algunas realizaciones, una Célula Genomanipulada que se administra localmente expresa de manera recombinante un derivado de IL-15Ra que comprende una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho mutaciones (por ejemplo, adiciones,sustituciones o deleciones; como sustituciones o deleciones de uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho residuos de aminoácidos) en SEQ ID NO:26 de modo que la escisión por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra humano nativo, se inhibe. En otras realizaciones, una Célula Genomanipulada que se administra localmente expresa de manera recombinante un derivado de IL-15Ra que comprende (i) un dominio extracelular de IL-15Ra en el cual el sitio de escisión para una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo ha sido mutado, y (ii) todo o un fragmento de un dominio transmembrana de una molécula heteróloga en lugar de todo o un fragmento del dominio transmembrana de IL-15Ra nativo. En algunas realizaciones, una Célula Genomanipulada que se administra localmente expresa de manera recombinante un derivado de IL-15Ra que comprende (i) un dominio extracelular de IL-15Ra con una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho mutaciones (por ejemplo, adiciones, sustituciones o deleciones; como sustituciones o deleciones de uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho residuos de aminoácidos) en SEQ ID NO:26 de modo que la escisión por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra humano nativo, se inhibe, y (ii) todo o un fragmento de un dominio transmembrana de una molécula heteróloga en lugar de todo o un fragmento del dominio transmembrana de IL-15Ra nativo. Aún en otras realizaciones, una Célula Genomanipulada que se administra localmente se modifica genéticamente para que exprese de manera recombinante cualquiera de los polipéptidos IL-15Ra descritos en la Sección 5.3.2., supra, en los cuales el sitio de escisión para una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo ha sido mutado (por ejemplo, eliminado) de modo que la escisión por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra humano nativo, se inhibe. Aún en otras realizaciones, una Célula Genomanipulada que se administra localmente se modifica genéticamente para que exprese de manera recombinante cualquiera de los polipéptidos IL-15Ra descritos en la Sección 5.1 o la Sección 5.3.2, supra.
En algunas realizaciones, se administra a un paciente un ácido nucleico que codifica un derivado de IL-15Ra, localmente (por ejemplo, en una célula cancerosa del paciente). En algunas de las realizaciones en las que se administra localmente un ácido nucleico que codifica un derivado de IL-15Ra, el ácido nucleico codifica un polipéptido IL-15Ra en el cual el sitio de escisión para una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo ha sido mutado. En algunas realizaciones, un ácido nucleico que codifica un derivado de IL-15Ra que se administra localmente, codifica un derivado de IL-15Ra que comprende una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho mutaciones (por ejemplo, adiciones, sustituciones o deleciones; como sustituciones o deleciones de uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho residuos de aminoácidos) en SEQ ID NO:26 de modo que la escisión por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra humano nativo, se inhibe. En otras realizaciones, un ácido nucleico que codifica un derivado de IL-15Ra que se administra localmente codifica un derivado de IL-15Ra que comprende (i) un dominio extracelular de IL-15Ra en el cual el sitio de escisión para una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo ha sido mutado, y (ii) todo o un fragmento de un dominio transmembrana de una molécula heteróloga en lugar de todo o un fragmento del dominio transmembrana de IL-15Ra nativo. En algunas realizaciones, un ácido nucleico que codifica un derivado de IL-15Ra que se administra localmente codifica un derivado
de IL-15Ra que comprende (i) un dominio extracelular de IL-15Ra con una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho mutaciones (por ejemplo, adiciones, sustituciones o deleciones; como sustituciones o deleciones de uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho residuos de aminoácidos) en SEQ ID NO:26 de modo que la escisión por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra humano nativo, se inhibe, y (ii) todo o un fragmento de un dominio transmembrana de una molécula heteróloga en lugar de todo o un fragmento del dominio transmembrana de IL-15Ra nativo. En otras realizaciones, un ácido nucleico que codifica un derivado de IL-15Ra que se administra localmente codifica cualquiera de los polipéptidos IL-15Ra descritos en la Sección 5.3.2., supra, en los cuales el sitio de escisión para una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo ha sido mutado (por ejemplo, eliminado) de modo que la escisión por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra humano nativo, se inhibe. Aún en otras realizaciones, un ácido nucleico que codifica un derivado de IL-15Ra que se administra localmente codifica cualquiera de los polipéptidos IL-15Ra descritos en la Sección 5.1 o la Sección 5.3.2, supra.
5.8. Tratamiento de enfermedades infecciosas
En este documento se proporcionan métodos para tratar, prevenir y/o manejar una enfermedad infecciosa en un sujeto, que comprenden administrar una cantidad eficaz de un Agente Terapéutico o de una composición que contiene un Agente Terapéutico, a un sujeto que lo necesita. En una realización, el Agente Terapéutico se administra por vía subcutánea. En una realización específica, los regímenes de administración cíclica descritos en este documento se usan para prevenir, tratar y/o manejar una enfermedad infecciosa.
En este documento también se proporcionan métodos para prevenir, tratar y/o manejar una enfermedad infecciosa en un sujeto, que comprenden administrar una cantidad eficaz de una o más Células Genomanipuladas, o de una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, a un sujeto que lo necesita.
En una realización, la respuesta inmunitaria inducida o potenciada por la administración a un paciente de un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas, de conformidad con los métodos descritos en este documento, es el aumento de la producción de anticuerpos en el paciente contra las células infectadas o los antígenos del patógeno. En una realización, la respuesta inmunitaria inducida o potenciada por la administración a un paciente de un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas, de conformidad con los métodos descritos, es el aumento de la producción de anticuerpos contra el patógeno. En otra realización, la respuesta inmunitaria inducida o potenciada por la administración de un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas, de conformidad con los métodos descritos en este documento, es un aumento de la función de las células efectoras, por ejemplo, la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (CCDA) contra el patógeno y/o las células infectadas con un patógeno en el paciente. En algunas realizaciones, la respuesta inmunitaria inducida o potenciada por la administración a un paciente de un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas, de conformidad con los métodos descritos en este documento es el aumento el aumento del número de linfocitos, de la proliferación de los linfocitos y/o de la actividad de los linfocitos. En otra realización, la respuesta inmunitaria inducida o potenciada por la administración a un paciente de un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas, de conformidad con los métodos descritos en este documento, es un aumento en la función de las células efectoras, por ejemplo, células citotóxicas o de la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo (CCDA) contra las células infectadas en el paciente.
En una realización, un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas se pueden administrar en combinación con una o más de otras terapias. Los ejemplos no limitantes de otras terapias que se pueden utILizar en combinación con Agentes Terapéuticos o Células Genomanipuladas se describen en este documento. Véase la Sección 5.10, infra, y en particular, las Secciones 5.10.2 y 5.10.3, infra. En una realización, la combinación de un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas y una o más de otras terapias proporciona un efecto terapéutico aditivo con respecto a los efectos terapéuticos del Agente Terapéutico o de una o más Células Genomanipuladas por sí solos o las una o más de otras terapias por sí solas. En una realización, la combinación de un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas y una o más de otras terapias proporciona más que un efecto terapéutico aditivo con respecto a los efectos terapéuticos del Agente Terapéutico o de una o más Células Genomanipuladas por sí solos o las una o más de otras terapias por sí solas. En una realización, la combinación de un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas y una o más de otras terapias proporciona un efecto terapéutico sinérgico con respecto a los efectos terapéuticos del Agente Terapéutico o de una o más Células Genomanipuladas por sí solos o las una o más de otras terapias por sí solas.
Las enfermedades infecciosas que se pueden tratar, prevenir y/o manejar mediante Agentes Terapéuticos son causadas por agentes infecciosos que incluyen, pero no exclusivamente, bacterias, hongos, protozoarios y virus. Las enfermedades infecciosas que se pueden tratar, prevenir y/o manejar mediante Células Genomanipuladas son causadas por agentes infecciosos que incluyen, pero no exclusivamente, bacterias, hongos, protozoarios y virus.
Las enfermedades virales que se pueden prevenir, tratar y/o manejar de conformidad con los métodos descritos en este documento incluyen, pero no exclusivamente, las causadas por los virus de la hepatitis tipo A, hepatitis tipo B, hepatitis tipo C, gripe, varicela, adenovirus, herpes simple tipo I (VHS-I), herpes simple tipo II (VHS-II), virus de la peste bovina, rinovirus, ecovirus, rotavirus, virus respiratorio sincitial, virus del papILoma, papovavirus, citomegalovirus, equinovirus, arbovirus, hantavirus, virus de Coxsackie, virus de las paperas, virus del sarampión, virus de la rubéola, virus de la
poliomielitis, virus de la viruela, virus de Epstein Barr, virus de la inmunodeficiencia humana tipo I (VIH-I), virus de la inmunodeficiencia humana tipo II (VIH-II) y agentes de enfermedades virales como meningitis viral, encefalitis, dengue o viruela.
Las enfermedades bacterianas causadas por bacterias (por ejemplo, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Candida albicans, Proteus vulgaris, Staphylococcus viridans y Pseudomonas aeruginosa) que se pueden prevenir, tratar y/o manejar de conformidad con los métodos descritos en este documento incluyen, pero no exclusivamente, las causadas por mycobacteria rickettsia, mycoplasma, neisseria, S. pneumonía, Borrelia burgdorferi (enfermedad de Lyme), BacILlus antracis (ántrax), tetanus, streptococcus, staphylococcus, mycobacterium, pertissus, cholera, plague, diptheria, chlamydia, S. aureus y Legionella..
Las enfermedades protozoicas causadas por protozoarios que se pueden prevenir, tratar y/o manejar de conformidad con los métodos descritos en este documento incluyen, pero no exclusivamente, leishmaniasis, coccidiosis, tripanosomiasis o malaria.
Las parasitosis que se pueden prevenir, tratar y/o manejar de conformidad con los métodos descritos en este documento incluyen, pero no exclusivamente, las clamidiosis y rickettsiosis.
En algunas realizaciones, administrar un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, o una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas a un sujeto (en algunas realizaciones, un modelo animal) infectado con un agente infeccioso, de conformidad con los métodos descritos en este documento inhibe o reduce la replicación del agente infeccioso en al menos 20% a 25%, preferentemente al menos 25% a 30%, al menos 30% a 35%, al menos 35% a 40%, al menos 40% a 45%, al menos 45% a 50%, al menos 50% a 55%, al menos 55% a 60%, al menos 60% a 65%, al menos 65% a 70%, al menos 70% a 75%, al menos 75% a 80% o hasta al menos 85% con respecto a un control negativo, según se determina empleando un ensayo descrito en este documento u otros conocidos por un experto en la materia. En algunas realizaciones, administrar un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, o una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas a un sujeto (en algunas realizaciones, un modelo animal) infectado con un agente infeccioso, de conformidad con los métodos descritos en este documento inhibe o reduce la replicación del agente infeccioso en al menos 1,5 veces, 2 veces, 2,5 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 8 veces, 10 veces, 15 veces, 20 veces o 2 a 5 veces, 2 a 10 veces, 5 a 10 veces o 5 a 20 veces con respecto a un control negativo según se determina empleando un ensayo descrito en este documento u otros conocidos por un experto en la materia. En otras realizaciones, administrar un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, o una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas a un sujeto (en algunas realizaciones, un modelo animal) infectado con un agente infeccioso, de conformidad con los métodos descritos en este documento inhibe o reduce la replicación del agente infeccioso en 1 log, 1,5 log, 2 log, 2,5 log, 3 log, 3,5 log, 4 log, 5 log con respecto a un control negativo, según se determina empleando un ensayo descrito en este documento u otros conocidos por un experto en la materia.
En algunas realizaciones, administrar un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una 0 más Células Genomanipuladas, o una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas a un sujeto (en algunas realizaciones, un modelo animal) infectado con un agente infeccioso, de conformidad con los métodos descritos en este documento reduce el título del agente infeccioso en al menos 20% a 25%, preferentemente al menos 25% a 30%, al menos 30% a 35%, al menos 35% a 40%, al menos 40% a 45%, al menos 45% a 50%, al menos 50% a 55%, al menos 55% a 60%, al menos 60% a 65%, al menos 65% a 70%, al menos 70% a 75%, al menos 75% a 80% o hasta al menos 85% con respecto a un control negativo, según se determina empleando un ensayo descrito en este documento u otros conocidos por un experto en la materia. En algunas realizaciones, administrar un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, o una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas a un sujeto (en algunas realizaciones, un modelo animal) infectado con un agente infeccioso, de conformidad con los métodos descritos en este documento reduce el título del agente infeccioso en al menos 1,5 veces, 2 veces, 2,5 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 8 veces, 10 veces, 15 veces, 20 veces o 2 a 5 veces, 2 a 10 veces, 5 a 10 veces o 5 a 20 veces con respecto a un control negativo según se determina empleando un ensayo descrito en este documento u otros conocidos por un experto en la materia. En otras realizaciones, administrar un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, o una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas a un sujeto (en algunas realizaciones, un modelo animal) infectado con un agente infeccioso, de conformidad con los métodos descritos en este documento reduce el título del agente infeccioso en 1 log, 1,5 log, 2 log, 2,5 log, 3 log, 3,5 log, 4 log, 5 log o más con respecto a un control negativo, según se determina empleando un ensayo descrito en este documento u otros conocidos por un experto en la materia.
En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a un sujeto que sufre una enfermedad infecciosa causada por agentes infecciosos incluidos, pero no exclusivamente bacterias, hongos, protozoarios y virus. En otras realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células
Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a un sujeto predispuesto o propenso a sufrir una enfermedad infecciosa. En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a un sujeto que habita en una región en la que hubo o podría haber un brote de infecciones por agentes infecciosos. En algunas realizaciones, la infección es una infección latente. En otras realizaciones, la infección por el agente infeccioso es una infección activa. Aún en otras realizaciones, la infección por el agente infeccioso es una infección viral crónica. En una realización la infección es una infección viral. En una realización específica, el virus infecta a seres humanos.
En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a un mamífero que tiene de 0 a 6 meses de edad, 6 a 12 meses de edad, 1 a 5 años de edad, 5 a 10 años de edad, 10 a 15 años de edad, 15 a 20 años de edad, 20 a 25 años de edad, 25 a 30 años de edad, 30 a 35 años de edad, 35 a 40 años de edad, 40 a 45 años de edad, 45 a 50 años de edad, 50 a 55 años de edad, 55 a 60 años de edad, 60 a 65 años de edad, 65 a 70 años de edad, 70 a 75 años de edad, 75 a 80 años de edad, 80 a 85 años de edad, 85 a 90 años de edad, 90 a 95 años de edad o 95 a 100 años de edad. En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a un sujeto que corren riesgo de sufrir una infección viral. En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a un ser humano con una infección viral. En algunas realizaciones, el paciente es un ser humano de 0 a 6 meses de edad, 6 a 12 meses de edad, 1 a 5 años de edad, 5 a 10 años de edad, 5 a 12 años de edad, 10 a 15 años de edad, 15 a 20 años de edad, 13 a 19 años de edad, 20 a 25 años de edad, 25 a 30 años de edad, 20 a 65 años de edad, 30 a 35 años de edad, 35 a 40 años de edad, 40 a 45 años de edad, 45 a 50 años de edad, 50 a 55 años de edad, 55 a 60 años de edad, 60 a 65 años de edad, 65 a 70 años de edad, 70 a 75 años de edad, 75 a 80 años de edad, 80 a 85 años de edad, 85 a 90 años de edad, 90 a 95 años de edad o 95 a 100 años de edad. En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a un lactante humano o un lactante humano prematuro. En otras realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a un niño humano. En otras realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a un adulto humano. En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a un anciano humano.
En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a una mascota, por ejemplo, un perro o un gato. En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a un animal de granja o de cría, por ejemplo cerdos, vacas, caballos, pollos, etc. En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a un ave, por ejemplo, patos o pollos.
En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a un primate, preferentemente un ser humano u otro mamífero, por ejemplo cerdo, vaca, caballo, oveja, cabra, perro, gato y roedor, que se encuentra en un estado inmunocomprometido o inmunosuprimido o corre el riesgo de estar inmunocomprometido o inmunosuprimido. En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a un sujeto que recibe o se recupera de una terapia inmunosupresora. En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a un sujeto que tiene o corre el riesgo de contraer cáncer, SIDA, otra infección o una infección bacteriana. En algunas realizaciones, un sujeto se está sometiendo, se someterá o se sometió a una cirugía, quimioterapia y/o radioterapia. En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes
Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a un sujeto que tiene fibrosis quística, fibrosis pulmonar u otra enfermedad que torna al sujeto propenso a sufrir una infección. En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a un sujeto que recibe, recibirá o recibió un trasplante tisular. En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a un sujeto que vive en un hogar para ancianos, un hogar comunitario (es decir un hogar para 10 o más sujetos) o una prisión. En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a un sujeto que trabaja en un centro educativo (por ejemplo, escuela primaria, escuela de ciclo medio, escuela secundaria, academia o universidad) o jardín de infantes. En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a un sujeto que trabajen el área de la salud, como un doctor o el personal de enfermería, o en un hospital. En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a un sujeto que está o estará embarazada.
En algunas realizaciones, a un paciente se le administran uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, antes de que se presente cualquier efecto adverso o intolerancia a las terapias diferentes de los Agentes Terapéuticos o las Células Genomanipuladas. En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a pacientes resistentes. En algunas realizaciones, el paciente resistente es un paciente resistente a una terapia estándar. En ciertas realizaciones, un paciente con una infección, es resistente a una terapia cuando la infección no ha sido erradicada significativamente y/o los síntomas no se han aliviado significativamente. La determinación de si un paciente es resistente se puede llevar a cabo in vivo o in vitro por cualquier método conocido en el área para analizar la eficacia de un tratamiento para infecciones, utILizando los significados de "resistente" aceptados en el área en dicho contexto. En diversas realizaciones, un paciente con una infección es resistente cuando la replicación del agente infeccioso no ha disminuido o ha aumentado.
En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a un paciente para prevenir el inicio o la reaparición de las infecciones (por ejemplo, infecciones virales) en un paciente que corre el riesgo de padecer dichas infecciones. En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una o más composiciones que contienen una o más Células Genomanipuladas, o una o más terapias de combinación, se administran a un paciente que es propenso a sufrir reacciones adversas a las terapias convencionales.
En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, composiciones que contienen Agentes Terapéuticos, Células Genomanipuladas, composiciones que contienen Células Genomanipuladas, o terapias de combinación, se administran a un paciente que ha demostrado ser resistente a terapias diferentes de los Agentes Terapéuticos o las Células Genomanipuladas, pero ya no está recibiendo esas terapias. En ciertas realizaciones, los pacientes que se están manejando o tratando de conformidad con los métodos de esta invención, son pacientes que ya han sido tratados con antibióticos, antivirales, antifúngicos u otras terapias biológicas/inmunoterapias. Entre estos pacientes están los pacientes resistentes, los pacientes que son muy jóvenes para las terapias convencionales y los pacientes que presentan infecciones virales repetidas a pesar del manejo o el tratamiento con las terapias existentes.
En algunas realizaciones, el sujeto que está recibiendo uno o más Agentes Terapéuticos, composiciones que contienen Agentes Terapéuticos, Células Genomanipuladas, composiciones que contienen Células Genomanipuladas, o terapias de combinación, no ha recibido una terapia antes de la administración de los Agentes Terapéuticos, las composiciones que contienen Agentes Terapéuticos, las Células Genomanipuladas, las composiciones que contienen Células Genomanipuladas o las terapias de combinación. En otras realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, composiciones que contienen Agentes Terapéuticos, Células Genomanipuladas, composiciones que contienen las Células Genomanipuladas, o terapias de combinación, se administran a un paciente que ha recibido una terapia antes de la administración de uno o más Agentes Terapéuticos, composiciones que contienen Agentes Terapéuticos, Células Genomanipuladas, composiciones que contienen Células Genomanipuladas o terapias de combinación. En algunas realizaciones, el sujeto está recibiendo un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, o una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas fue
resistente a una terapia previa o experimentó efectos secundarios adversos con la terapia previa o la terapia previa se interrumpió debido a niveles de toxicidad inaceptables para el sujeto.
En algunas realizaciones, los ácidos nucleicos que codifican un polipéptido IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un IL-15), como se describe en la Sección 5.3.2, supra, se administran a un paciente descrito en esta Sección 5.8 con respecto a Agentes Terapéuticos y Células Genomanipuladas. En otras palabras, en vez de administrar al paciente un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas descritos en esta Sección 5.8, se le administran los ácidos nucleicos. En algunas realizaciones, los ácidos nucleicos que codifican un polipéptido IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un IL-15), como se describe en la Sección 5.3.2, supra, se administran a un paciente con una enfermedad infecciosa descrita en esta Sección 5.8. En algunas realizaciones, los ácidos nucleicos que codifican un polipéptido IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un IL-15), como se describe en la Sección 5.3.2, supra, se administran en combinación con una terapia adicional, como se describe en esta Sección 5.8 y en la Sección 5.10, infra.
En algunas realizaciones, se administra a un paciente una Célula Genomanipulada, localmente (por ejemplo, en el sitio de infección). En algunas de las realizaciones en las que se administra una Célula Genomanipulada localmente, dicha Célula Genomanipulada expresa de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra en el cual el sitio de escisión para una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo ha sido mutado. En algunas realizaciones, una Célula Genomanipulada que se administra localmente expresa de manera recombinante un derivado de IL-15Ra que comprende una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho mutaciones (por ejemplo, adiciones, sustituciones o deleciones; como sustituciones o deleciones de uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho residuos de aminoácidos) en SEQ ID NO:26 de modo que la escisión por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra humano nativo, se inhibe. En otras realizaciones, una Célula Genomanipulada que se administra localmente expresa de manera recombinante un derivado de IL-15Ra que comprende (i) un dominio extracelular de IL-15Ra en el cual el sitio de escisión para una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo ha sido mutado, y (ii) todo o un fragmento de un dominio transmembrana de una molécula heteróloga en lugar de todo o un fragmento del dominio transmembrana de IL-15Ra nativo. En algunas realizaciones, una Célula Genomanipulada que se administra localmente expresa de manera recombinante un derivado de IL-15Ra que comprende (i) un dominio extracelular de IL-15Ra con una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho mutaciones (por ejemplo, adiciones, sustituciones o deleciones; como sustituciones o deleciones de uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho residuos de aminoácidos) en SEQ ID NO:26 de modo que la escisión por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra humano nativo, se inhibe, y (ii) todo o un fragmento de un dominio transmembrana de una molécula heteróloga en lugar de todo o un fragmento del dominio transmembrana de IL-15Ra nativo. Aún en otras realizaciones, una Célula Genomanipulada que se administra localmente se modifica genéticamente para que exprese de manera recombinante cualquiera de los polipéptidos IL-15Ra descritos en la Sección 5.3.2., supra, en los cuales el sitio de escisión para una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo ha sido mutado (por ejemplo, eliminado) de modo que la escisión por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra humano nativo, se inhibe. Aún en otras realizaciones, una Célula Genomanipulada que se administra localmente se modifica genéticamente para que exprese de manera recombinante cualquiera de los polipéptidos IL-15Ra descritos en la Sección 5.1 o la Sección 5.3.2, supra.
En algunas realizaciones, se administra a un paciente un ácido nucleico que codifica un derivado de IL-15Ra, localmente (por ejemplo, en el sitio de infección o en una célula infectada del paciente). En algunas de las realizaciones en las que se administra localmente un ácido nucleico que codifica un derivado de IL-15Ra, el ácido nucleico codifica un polipéptido IL-15Ra en el cual el sitio de escisión para una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo ha sido mutado. En algunas realizaciones, un ácido nucleico que codifica un derivado de IL-15Ra que se administra localmente, codifica un derivado de IL-15Ra que comprende una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho mutaciones (por ejemplo, adiciones, sustituciones o deleciones; como sustituciones o deleciones de uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho residuos de aminoácidos) en SEQ ID NO:26 de modo que la escisión por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra humano nativo, se inhibe. En otras realizaciones, un ácido nucleico que codifica un derivado de IL-15Ra que se administra localmente codifica un derivado de IL-15Ra que comprende (i) un dominio extracelular de IL-15Ra en el cual el sitio de escisión para una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo ha sido mutado, y (ii) todo o un fragmento de un dominio transmembrana de una molécula heteróloga en lugar de todo o un fragmento del dominio transmembrana de IL-15Ra nativo. En algunas realizaciones, un ácido nucleico que codifica un derivado de IL-15Ra que se administra localmente codifica un derivado de IL-15Ra que comprende (i) un dominio extracelular de IL-15Ra con una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho mutaciones (por ejemplo, adiciones, sustituciones o deleciones; como sustituciones o deleciones de uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho residuos de aminoácidos) en SEQ ID NO:26 de modo que la escisión por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra humano nativo, se inhibe, y (ii) todo o un fragmento de un dominio transmembrana de una molécula heteróloga en lugar de todo o un fragmento del dominio transmembrana de IL-15Ra nativo. Aún en otras realizaciones, un ácido nucleico que codifica un derivado de IL-15Ra que se administra localmente codifica cualquiera de los polipéptidos IL-15Ra descritos en la Sección 5.3.2., supra, en los cuales el sitio de escisión para una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo ha sido mutado (por ejemplo, eliminado) de modo que la escisión por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra humano nativo, se inhibe. Aún en otras realizaciones, un ácido nucleico que codifica un derivado de IL-15Ra que se administra localmente codifica cualquiera de los polipéptidos IL-15Ra descritos en la Sección 5.1 o la Sección 5.3.2, supra.
5.9. Inmunodeficiencias y linfopenia
En este documento se proporcionan métodos para tratar, prevenir y/o manejar una inmunodeficiencia o linfopenia en un sujeto, que comprenden administrar una cantidad eficaz de un Agente Terapéutico o una composición que contiene un Agente Terapéutico a un sujeto que lo necesita. En una realización, el Agente Terapéutico se administra por vía subcutánea. En una realización, los regímenes de administración cíclica descritos en este documento se usan para prevenir, tratar y/o manejar una inmunodeficiencia o linfopenia.
En este documento también se proporcionan métodos para prevenir, tratar y/o manejar una inmunodeficiencia o linfopenia en un sujeto, que comprenden administrar una cantidad eficaz de una o más Células Genomanipuladas o de una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, a un sujeto que lo necesita.
En una realización, un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas se pueden administrar en combinación con una o más de otras terapias. Los ejemplos no limitantes de otras terapias que se pueden utILizar en combinación con Agentes Terapéuticos o Células Genomanipuladas se describen en este documento. Véase Sección 5.10, infra. En una realización, la combinación de un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas y una o más de otras terapias proporciona un efecto terapéutico aditivo con respecto a los efectos terapéuticos del Agente Terapéutico o de una o más Células Genomanipuladas por sí solos o las una o más de otras terapias por sí solas. En una realización, la combinación de un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas y una o más de otras terapias proporciona más que un efecto terapéutico aditivo con respecto a los efectos terapéuticos del Agente Terapéutico o de una o más Células Genomanipuladas por sí solos o las una o más de otras terapias por sí solas. En una realización, la combinación de un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas y una o más de otras terapias proporciona un efecto terapéutico sinérgico con respecto a los efectos terapéuticos del Agente Terapéutico o de una o más Células Genomanipuladas por sí solos o las una o más de otras terapias por sí solas.
En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un mamífero que tiene de 0 a 6 meses de edad, 6 a 12 meses de edad, 1 a 5 años de edad, 5 a 10 años de edad, 10 a 15 años de edad, 15 a 20 años de edad, 20 a 25 años de edad, 25 a 30 años de edad, 30 a 35 años de edad, 35 a 40 años de edad, 40 a 45 años de edad, 45 a 50 años de edad, 50 a 55 años de edad, 55 a 60 años de edad, 60 a 65 años de edad, 65 a 70 años de edad, 70 a 75 años de edad, 75 a 80 años de edad, 80 a 85 años de edad, 85 a 90 años de edad, 90 a 95 años de edad o 95 a 100 años de edad. En algunas realizaciones, el paciente es un ser humano de 0 a 6 meses de edad, 6 a 12 meses de edad, 1 a 5 años de edad, 5 a 10 años de edad, 5 a 12 años de edad, 10 a 15 años de edad, 15 a 20 años de edad, 13 a 19 años de edad, 20 a 25 años de edad, 25 a 30 años de edad, 20 a 65 años de edad, 30 a 35 años de edad, 35 a 40 años de edad, 40 a 45 años de edad, 45 a 50 años de edad, 50 a 55 años de edad, 55 a 60 años de edad, 60 a 65 años de edad, 65 a 70 años de edad, 70 a 75 años de edad, 75 a 80 años de edad, 80 a 85 años de edad, 85 a 90 años de edad, 90 a 95 años de edad o 95 a 100 años de edad. En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un lactante humano o un lactante humano prematuro. En otras realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un niño humano. En otras realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un adulto humano. Aún en otras realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un anciano humano.
En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a una mascota, por ejemplo, un perro o un gato. En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un animal de granja o animales de cría, por ejemplo cerdos, vacas, caballos, pollos, etc. En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas o una terapia de combinación, se administra a un ave, por ejemplo, patos o pollos.
En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un primate, preferentemente un ser humano u otro mamífero, por ejemplo cerdo, vaca, caballo, oveja, cabra, perro, gato y roedor, que se encuentra en un estado inmunocomprometido o inmunosuprimido o corre el riesgo de estar inmunocomprometido o inmunosuprimido. En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un primate, preferentemente un ser humano u otro mamífero, por ejemplo cerdo, vaca, caballo, oveja, cabra, perro, gato y roedor, con una inmunodeficiencia. En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente
Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un sujeto que recibe o se está recuperando de una terapia inmunosupresora. En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un sujeto que tiene o corre el riesgo de contraer cáncer, SIDA, otra infección o una infección bacteriana. En algunas realizaciones, un sujeto se está sometiendo, se someterá o se sometió a una cirugía, quimioterapia y/o radioterapia. En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un sujeto que tiene, tendrá o tuvo un trasplante tisular. En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un sujeto que vive en un hogar para ancianos, un hogar comunitario (es decir un hogar para 10 o más sujetos) o una prisión. En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un sujeto que trabaja en un centro educativo (por ejemplo, escuela primaria, escuela de ciclo medio, escuela secundaria, academia o universidad) o jardín de infantes. En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más composiciones que contienen uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un sujeto que trabaja en el área de la salud, como un doctor o el personal de enfermería, o en un hospital. En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un sujeto que está o estará embarazada.
En algunas realizaciones, un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas, o una terapia de combinación, se administran a un sujeto al que se ha diagnosticado linfopenia. Las expresiones "linfopenia" o "linfocitopenia" o "leucopenia linfocítica" se refieren indistintamente a un número anormalmente pequeño de linfocitos en la sangre circulante o en la circulación periférica. Cuantitativamente, la linfopenia se puede describir mediante varios límites. En algunas realizaciones, un paciente sufre de linfopenia cuando el recuento total de linfocitos en su sangre circulante es inferior a alrededor de 600/mm3. En algunas realizaciones, un paciente que sufre de linfopenia tiene menos de alrededor de 2000/pL linfocitos totales circulantes al nacer, menos de alrededor de 4500/pL linfocitos totales circulantes alrededor de los 9 meses de edad, o menos de alrededor de 1000/pL linfocitos totales circulantes en pacientes mayores de alrededor de 9 meses.
La linfocitopenia tiene una amplia gama de posibles causas, que incluyen infecciones virales (por ejemplo, por VIH o hepatitis), bacterianas (por ejemplo, infección por tuberculosis activa) e infecciones fúngicas; insuficiencia crónica del ventrículo derecho del corazón, enfermedad de Hodgkin y cánceres del sistema linfático, leucemia, una pérdida o ruptura en el conducto torácico, efectos secundarios de medicamentos prescritos incluidos antineoplásicos, antivirales y glucocorticoides, desnutrición resultante de dietas con bajo contenido de proteínas, radioterapia, uremia, trastornos autoinmunitarios, síndrome de inmunodeficiencia, elevados niveles de estrés y traumatismo. La linfopenia también puede ser de etiología desconocida (es decir, linfopenia idiopática). La circulación periférica de todos los tipos de linfocitos o subpoblaciones de linfocitos (por ejemplo, linfocitos T CD4+) puede estar disminuida o anormalmente baja en pacientes que sufren de linfopenia. Véase, por ejemplo, The Merck Manual, 18a edición, 2006, Merck & Co.
En algunas realizaciones, un paciente recibe un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas o una terapia de combinación, antes de que se presente cualquier efecto adverso o intolerancia a terapias diferentes de los Agentes Terapéuticos o las Células Genomanipuladas. En algunas realizaciones, se administran Agentes Terapéuticos, composiciones que contienen Agentes Terapéuticos, Células Genomanipuladas, composiciones que contienen Células Genomanipuladas o terapias de combinación a pacientes resistentes. En una realización, el paciente resistente es un paciente resistente a una terapia estándar. En algunas realizaciones, un paciente con una inmunodeficiencia o linfopenia, es resistente a una terapia cuando la infección no ha sido erradicada significativamente y/o los síntomas no se han aliviado significativamente. La determinación de si un paciente es resistente se puede llevar a cabo in vivo o in vitro por cualquier método conocido en el área para analizar la eficacia de un tratamiento para infecciones, utILizando los significados de "resistente" aceptados en el área en dicho contexto. En diversas realizaciones, un paciente con una infección es resistente cuando la replicación del agente infeccioso no ha disminuido o ha aumentado.
En algunas realizaciones, Agentes Terapéuticos, composiciones que contienen Agentes Terapéuticos, Células Genomanipuladas, composiciones que contienen Células Genomanipuladas, o terapias de combinación, se administran a un paciente para prevenir el inicio o reaparición de una inmunodeficiencia o linfopenia en un paciente que corre el riesgo de padecer dichas infecciones. En algunas realizaciones, Agentes Terapéuticos, composiciones que contienen Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, composiciones que contienen Células Genomanipuladas, o terapias de combinación, se administran a un paciente que es propenso a sufrir reacciones adversas a las terapias convencionales. En algunas realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, composiciones que contienen Agentes Terapéuticos, Células
Genomanipuladas, composiciones que contienen Células Genomanipuladas, o terapias de combinación, se administran a un paciente que ha demostrado ser resistente a terapias diferentes de los Agentes Terapéuticos o las Células Genomanipuladas, pero ya no está recibiendo esas terapias.
En algunas realizaciones, el sujeto que está recibiendo uno o más Agentes Terapéuticos, composiciones que contienen Agentes Terapéuticos, Células Genomanipuladas, composiciones que contienen Células Genomanipuladas, o terapias de combinación, no ha recibido una terapia antes de la administración de los Agentes Terapéuticos, las composiciones que contienen Agentes Terapéuticos, las Células Genomanipuladas, las composiciones que contienen Células Genomanipuladas ni las terapias de combinación. En otras realizaciones, uno o más Agentes Terapéuticos, composiciones que contienen Agentes Terapéuticos, Células Genomanipuladas, composiciones que contienen Células Genomanipuladas, o terapias de combinación, se administran a un paciente que ha recibido una terapia antes de la administración de uno o más Agentes Terapéuticos, composiciones que contienen Agentes Terapéuticos, Células Genomanipuladas, composiciones que contienen Células Genomanipuladas o terapias de combinación. En algunas realizaciones, el sujeto está recibiendo un Agente Terapéutico, una composición que contiene un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, o una composición que contiene una o más Células Genomanipuladas fue resistente a una terapia previa o experimentó efectos secundarios adversos con la terapia previa o la terapia previa se interrumpió debido a niveles de toxicidad inaceptables para el sujeto.
En algunas realizaciones, los ácidos nucleicos que codifican un polipéptido IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un IL-15), como se describe en la Sección 5.3.2, supra, se administran a un paciente descrito en esta Sección 5.9 con respecto a Agentes Terapéuticos y Células Genomanipuladas. En otras palabras, en vez de administrar al paciente un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas descritos en esta Sección 5.9, se le administran los ácidos nucleicos. En algunas realizaciones, los ácidos nucleicos que codifican un polipéptido IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un IL-15), como se describe en la Sección 5.3.2, supra, se administran a un paciente con una inmunodeficiencia o linfopenia descritas en esta Sección 5.9. En algunas realizaciones, los ácidos nucleicos que codifican un polipéptido IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un IL-15), como se describe en la Sección 5.3.2, supra, se administran en combinación con una terapia adicional, como se describe en esta Sección 5.9 y en la Sección 5.10, infra.
5.10. Terapia adicional/de combinación
Otras terapias que se pueden usar en combinación con uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas o ácidos nucleicos que codifican un IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un polipéptido IL-15) para la prevención, el tratamiento y/o el manejo de una enfermedad que es afectada por la función/señalización de IL-15 por ejemplo, cáncer, enfermedad infecciosa, linfopenia, inmunodeficiencia y heridas, incluyen, pero no exclusivamente, moléculas pequeñas, fármacos sintéticos, péptidos (incluidos péptidos cíclicos), polipéptidos, proteínas, ácidos nucleicos (por ejemplo, nucleótidos de ADN y ARN incluidos, pero no exclusivamente, secuencias de nucleótidos antisentido, triple hélices, ARNi, y secuencias de nucleótidos que codifican proteínas, polipéptidos o péptidos biológicamente activos), anticuerpos, moléculas inorgánicas sintéticas o naturales, agentes miméticos y moléculas orgánicas sintéticas o naturales. Algunos ejemplos de dichas terapias incluyen, pero no exclusivamente, agentes inmunomoduladores (por ejemplo, interferón), agentes antiinflamatorios (por ejemplo, adrenocorticoides, corticoesteroides (por ejemplo, beclometasona, budesonida, flunisolida, fluticasona, triamcinolona, metILprednisolona, prednisolona, prednisona, hidrocortisona), glucocorticoides, fármacos antiinflamatorios esteroideos y no esteroideos (por ejemplo, aspirina, ibuprofeno, diclofenac e inhibidores de COX-2), analgésicos, antagonistas de leucotrieno (por ejemplo, montelukast, metILxantinas, zafirlukast y zILeuton), agonistas-beta2 (por ejemplo, albuterol, biterol, fenoterol, isoetarina, metaproterenol, pirbuterol, salbutamol, terbutalina, formoterol, salmeterol y salbutamol terbutalina), agentes anticolinérgicos (por ejemplo, bromuro de ipratropio y bromuro de oxitropio), sulfasalazina, penicILamina, dapsona, antihistamina, agentes antipalúdicos (por ejemplo, hidroxicloroquina), agentes antivirales (por ejemplo, análogos nucleosídicos (por ejemplo, zidovudina, aciclovir, ganciclovir, vidarabina, idoxuridina, trifluridina, y ribavirina), foscarnet, amantadina, rimantadina, saquinavir, indinavir, ritonavir y AZT) y antibióticos (por ejemplo, dactinomicina (antes actinomicina), bleomicina, eritromicina, penicILina, mitramicina y antramicina (AMC)).
Cualquier terapia que se sepa que es útIL o que ha sido utILizada o que se utILiza corrientemente para la prevención, el manejo y/o el tratamiento de la enfermedad que es afectada por la función/señalización de IL-15 se puede usar en combinación con uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas o ácidos nucleicos que codifican un IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un polipéptido IL-15). Véanse, por ejemplo, GILman et al., Goodman y GILman's: The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10a ed., McGraw-HILl, Nueva York, 2001; The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, Berkow, M.D. et al. (eds.), 17a Ed., Merck Sharp & Dohme Research Laboratories, Rahway, NJ, 1999; CecIL Textbook of Medicine, 20a Ed., Bennett y Plum (eds.), W.B. Saunders, PhILadelphia, 1996, y Physicians' Desk Reference (66a ed. 2012) por información con respecto a terapias (por ejemplo, agentes profILácticos o terapéuticos) que hayan sido utILizados o estén corrientemente siendo utILizados para prevenir, tratar y/o manejar una enfermedad o un trastorno que es afectado por la función/señalización de IL-15 por ejemplo, cáncer, enfermedad infecciosa, linfopenia, inmunodeficiencia y heridas.
5.10.1. Agentes antineoplásicos
Los ejemplos no limitantes de una o más de otras terapias que se pueden usar en combinación con uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas o ácidos nucleicos que codifican un IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un polipéptido IL-15) incluyen agentes inmunomoduladores incluidos, pero no exclusivamente, agente quimioterápicos y agentes inmunomoduladores no quimioterápicos. Los ejemplos no limitantes de agentes quimioterápicos incluyen metotrexato, ciclosporina A, leflunomida, cisplatino, ifosfamida, taxanos como taxol y paclitaxel, inhibidores de la topoisomerasa I (por ejemplo, CPT-11, topotecan, 9-AC y GG-211), gemcitabina, vinorelbina, oxaliplatino, 5-fluorouracILo (5-FU), leucovorina, vinorelbina, temodal, citocalasina B, gramicidina D, emetina, mitomicina, etopósido, tenopósido, vincristina, vinblastina, colchicina, doxorrubicina, daunorrubicina, dihidroxi antracin diona, mitoxantrona, mitramicina, actinomicina D, 1-deshidrotestosterona, glucocorticoides, procaína, tetracaína, lidocaína, propranolol y homólogos de puromicina, y citoxan. Los ejemplos de agentes inmunomoduladores no quimioterápicos incluyen, pero no exclusivamente, anticuerpos anti-receptor de linfocitos T (por ejemplo, anticuerpos anti-CD4 (por ejemplo, cM-T412 (Boeringer), IDEC-CE9.1® (IDEC y s Kb ), mAB 4162W94, Orthoclone y OKTcdr4a (Janssen-CILag)), anticuerpos anti-CD3 (p. ej., Nuvion (Product Design Labs), OKT3 (Johnson & Johnson) o Rituxan (IDEC)), anticuerpos anti-CD5 (p. ej., un anti-CD5 inmunoconjugado unido a ricina), anticuerpos anti-CD7 (por ejemplo, CHH-380 (Novartis)), anticuerpos anti-CD8, anticuerpos monoclonales del anti-ligando de CD40 (por ejemplo, IDEC-131 (IDEC)), anticuerpos anti-CD52 (p. ej., CAMPATH 1H (ILex), anticuerpos anti-CD2 (p. ej., MEDI-507 (Medlmmune, Inc., publicaciones internacionales N° WO 02/098370 y w O 02/069904), anticuerpos anti-CD11 a (p. ej., Xanelim (Genentech )), y anticuerpos anti-B7 (por ejemplo, IDEC-114) (IDEC)); anticuerpos anti-receptor de citocinas (por ejemplo, anticuerpos anti-receptor de IFN, anticuerpos anti receptor de IL-2 (por ejemplo, Zenapax (Protein Design Labs)), anticuerpos anti-receptor de IL-4, anticuerpos anti-receptor de IL-6, anticuerpos anti-receptor de IL-10 y anticuerpos anti-receptor de IL-12), anticuerpos anti-citocina (por ejemplo, anticuerpos anti-IFN, anticuerpos anti-TNF-a, anticuerpos anti-IL-1 p, anticuerpos anti-IL-6, anticuerpos anti-IL-8 (por ejemplo, ABX-IL-8 (Abgenix)), anticuerpos anti-IL-12 y anticuerpos anti-IL-23)); CTLA4-inmunoglobulina; LFA-3TIP (Biogen, publicación internacional N° w O 93/08656 y patente de EE.UU. N° 6,162,432); receptores de citocinas solubles (por ejemplo, el dominio extracelular de un receptor de TNF-a o un fragmento del mismo, el dominio extracelular de un receptor de IL-1 p o un fragmento del mismo, y el dominio extracelular de un receptor de IL-6 o un fragmento del mismo); citocinas o fragmentos de las mismas (por ejemplo, interleucina (IL)-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15, IL-23, TNF-a, TNF-p, interferón (IFN)-a, IFN-p, IFN-y y GM-c Sf ); y anticuerpos anti-citocina (por ejemplo, anticuerpos anti-IL-2, anticuerpos anti-IL-4, anticuerpos anti-IL-6, anticuerpos anti-IL-10, anticuerpos anti-IL-12, anticuerpos anti-IL-15, anticuerpos anti-TNF-a y anticuerpos anti-IFN-Y), y anticuerpos que se unen inmunoespecíficamente a antígenos asociados a tumores (por ejemplo, Herceptin®). En algunas realizaciones, un agente inmunomodulador es un agente inmunomodulador diferente de un agente quimioterápico. En otras realizaciones, un agente inmunomodulador es un agente inmunomodulador diferente de una citocina o un factor hematopoyético como IL-1, IL-2, IL-4, IL-12, IL-15, TNF, IFN-a, IFN-p, IFN-y, M-CSF, G-CSF, IL-3 o eritropoyetina. Aún en otras realizaciones, un agente inmunomodulador es un agente diferente del agente quimioterápico y una citocina o un factor hematopoyético.
Los ejemplos no limitantes de agentes antineoplásicos que se pueden usar como terapias en combinación con uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas o ácidos nucleicos que codifican un IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un polipéptido IL-15) incluyen, pero no exclusivamente: acivicina; aclarrubicina; clorhidrato de acodazol; acronina; adozelesina; aldesleucina; altretamina; ambomicina; acetato de ametantrona; aminoglutetimida; amsacrina; anastrozol; antramicina; asparaginasa; asperlin; azacitidina; azetepa; azotomicina; batimastat; benzodepa; bicalutamida; clorhidrato de bisantreno; dimesILato de bisnafida; bizelesina; sulfato de bleomicina; brequinar sódico; bropirimina; busulfan; cactinomicina; calusterona; caracemida; carbetimero; carboplatino; carmustina; clorhidrato de carrubicina; carzelesina; cedefingol; clorambucIL; cirolemicina; cisplatino; cladribina; mesILato de crisnatol; ciclofosfamida; citarabina; dacarbazina; dactinomicina; clorhidrato de daunorrubicina; decitabina; dexormaplatino; dezaguanina; mesILato de dezaguanina; diaziquona; docetaxel; doxorrubicina; clorhidrato de doxorrubicina; droloxifeno; citrato de droloxifeno; propionato de dromostanolona; duazomicina; edatrexato; clorhidrato de eflornitina; elsamitrucina; enloplatino; enpromato; epipropidina; clorhidrato de epirrubicina; erbulozol; clorhidrato de esorrubicina; estramustina; fosfato de estramustina sódico; etanidazol; etopósido; fosfato de etopósido; etoprina; clorhidrato de fadrozol; fazarabina; fenretinida; floxuridina; fosfato de fludarabina; fluorouracILo; flurocitabina; fosquidona; fostriecina sódica; gemcitabina; clorhidrato de gemcitabina; hidroxiurea; clorhidrato de idarrubicina; ifosfamida; ILmofosina; interleucina II (incluida la interleucina II recombinante o rIL2), interferón alfa-2a; interferón alfa-2b; interferón alfa-n1; interferón alfa-n3; interferón beta-I a; interferón gamma-I b; iproplatino; clorhidrato de irinotecan; acetato de lanreotida; letrozol; acetato de leuprolida; clorhidrato de liarozol; lometrexol sódico; lomustina; clorhidrato de losoxantrona; masoprocol; maitansina; clorhidrato de mecloretamina; acetato de megestrol; acetato de melengestrol; melfalán; menogarIL; mercaptopurina; metotrexato; metotrexato sódico; metoprina; meturedepa; mitindomida; mitocarcina; mitocromina; mitogILina; mitomalcina; mitomicina; mitospero; mitotano; clorhidrato de mitoxantrona; ácido micofenólico; nocodazol; nogalamicina; ormaplatino; oxisuran; paclitaxel; pegaspargasa; peliomicina; pentamustina; sulfato de peplomicina; perfosfamida; pipobromano; piposulfano; clorhidrato de piroxantrona; plicamicina; plomestano; porfímero sódico; porfiromicina; prednimustina; clorhidrato de procarbazina; puromicina; clorhidrato de puromicina; pirazofurina; riboprina; rogletimida; safingol; clorhidrato de safingol; semustina; simtrazeno; esparfosato de sodio; esparsomicina; clorhidrato de espirogermanio; espiromustina; espiroplatino; estreptonigrina; estreptozocina; sulofenur; talisomicina; tecogalan sódico; tegafur; clorhidrato de teloxantrona; temoporfina; tenipósido; teroxirona; testolactona; tiamiprina; tioguanina; tiotepa; tiazofurina; tirapazamina; citrato de toremifeno; acetato de trestolona; fosfato de triciribina; trimetrexato; glucuronato de trimetrexato; triptorelina; clorhidrato de tubulozol; mostaza de uracILo; uredepa; vapreotida; verteporfina; sulfato de vinblastina; sulfato de vincristina; vindesina; sulfato de vindesina; sulfato de vinepidina; sulfato de vinglicinato; sulfato de vinleurosina; tartrato de vinorelbina;
sulfato de vinrosidina; sulfato de vinzolidina; vorozol; zeniplatino; zinostatina; clorhidrato de zorrubicina. Otros fármacos antineoplásicos incluyen, pero no exclusivamente: 20-epi-1,25 dihidroxivitamina D3; 5-etinILuracILo; abiraterona; aclarrubicina; acILfulveno; adecipenol; adozelesina; aldesleucina; antagonistas de ALL-TK; altretamina; ambamustina amidox; amifostina; ácido aminolevulínico; amrubicina; amsacrina; anagrelida; anastrozol; andrografolida; inhibidores de la angiogénesis; antagonista D; antagonista G; antarelix; proteína morfogenética anti-dorsalizante 1; antiandrógeno, carcinoma prostático; antiestrógeno; antineoplaston; oligonucleótidos antisentido; glicinato de afidicolina; moduladores del gen de la apoptosis; reguladores de la apoptosis; ácido apurínico; ara-CDP-DL-PTBA; arginina desaminasa; asulacrina; atamestano; atrimustina; axinastatina 1; axinastatina 2; axinastatina 3; azasetron; azatoxina; azatirosina; derivados de bacatina III; balanol; batimastat; antagonistas de BCR/ABL; benzoclorinas; benzoILstaurosporina; derivados de betalactámicos; beta-aletina; betaclamicina B; ácido betulínico; inhibidor de bFGF; bicalutamida; bisantreno; bisaziridinILspermina; bisnafide; bistrateno A; bizelesina; breflato; bropirimina; budotitano; butionina sulfoximina; calcipotriol; calfostina C; derivados de la camptotecina; canaripox IL-2; capecitabina; carboxamida-amino-triazol; carboxiamidotriazol; CaRest M3; CARN 700; inhibidor derivado del cartílago; carzelesina; inhibidores de la caseína cinasa (ICOS); castanospermina; cecropina B; cetrorelix; cloros; cloroquinoxalina sulfonamida; cicaprost; cis-porfirina; cladribina; análogos de clomifeno; clotrimazol; colismicina A; colismicina B; combretastatina A4; análogo de combretastatina; conagenina; crambescidina 816; crisnatol; criptoficina 8; derivados de criptoficina A; curacina A; ciclopentantraquinonas; cicloplatam; cipemicina; octofosfato de citarabina; factor citolítico; citostatina; dacliximab; decitabina; deshidrodidemnina B; deslorelina; dexametasona; dexifosfamida; dexrazoxano; dexverapamILo; diaziquona; didemnina B; didox; dietILnorspermina; dihidro-5-azacitidina; dihidrotaxol, 9-; dioxamicina; difenIL espiromustina; docetaxel; docosanol; dolasetron; doxifluridina; droloxifeno; dronabinol; duocarmicina SA; ebselen; ecomustina; edelfosina; edrecolomab; eflornitina; elemene; emitefur; epirrubicina; epristerida; análogo de estramustina; agonistas de estrógenos; antagonistas de estrógenos; etanidazol; fosfato de etopósido; exemestano; fadrozol; fazarabina; fenretinida; fILgrastim; finasterida; flavopiridol; flezelastina; fluasterona; fludarabina; clorhidrato de fluorodaunorrunicina; forfenimex; formestano; fostriecina; fotemustina; texafirina de gadolinio; nitrato de galio; galocitabina; ganirelix; inhibidores de la gelatinasa; gemcitabina; inhibidores de glutatión; hepsulfam; heregulina; hexametILeno bisacetamida; hipericina; ácido ibandrónico; idarrubicina; idoxifeno; idramantona; ILmofosina; ILomastat; imidazoacridonas; imiquimod; péptidos inmunoestimulantes; inhibidor del receptor del factor de crecimiento 1 simILar a la insulina; agonistas del interferón; interferones; interleucinas; iobenguano; yododoxorrubicina; ipomeanol, 4-; iroplact; irsogladina; isobengazol; isohomohalicondrina B; itasetron; jasplakinolida; kahalalida F; lamelarina-N triacetato; lanreotida; leinamicina; lenograstim; sulfato de lentinan; leptolstatina; letrozol; factor inhibidor de la leucemia; interferón alfa de leucocitos; leuprolida estrógeno progesterona; leuprorelina; levamisol; liarozol; análogo de poliamina lineal; péptido disacárido lipófILo; compuestos lipófILos de platino; lisoclinamida 7; lobaplatino; lombricina; lometrexol; lonidamina; losoxantrona; Inhibidor de la HMG-CoA reductasa (como, por ejemplo, pero no exclusivamente, Lovastatina, Pravastatina, Fluvastatina, Estatina, Simvastatina y Atorvastatina); loxoribina; lurtotecan; texafirina de lutecio; lisofILina; péptidos líticos; maitansina; manostatina A; marimastato; masoprocol; maspina; inhibidores de la matrILisina; inhibidores de la metaloproteinasa de matriz; menogarIL; merbarona; meterelina; metioninasa; metoclopramida; Inhibidor de MIF; mifepristona; mILtefosina; mirimostim; ARN bicatenario no coincidente; mitoguazona; mitolactol; análogos de la mitomicina; mitonafida; factor de crecimiento de fibroblastos mitotoxina-saporina; mitoxantrona; mofaroteno; molgramostim; anticuerpo monoclonal, gonadotropina coriónica humana; monofosforIL lípido A pared celular sk de myobacterium; mopidamol; inhibidor de genes de resistencia a múltiples fármacos; terapia basada en supresor de tumores múltiples 1; antineoplásico de mostaza; micaperóxido B; extracto de pared celular micobacteriana; miriaporona; N-acetILdinalina; benzamidas N-sustituidas; nafarelina; nagrestip; naloxona pentazocina; nupavin; nafterpina; nartograstim; nedaplatino; nemorrubicina; ácido neridrónico; endopeptidasa neutra; nILutamida; nisamicina; moduladores de óxido nítrico; antioxidante nitróxido; nitrulina; O6-bencILguanina; octreotida; oquicenona; oligonucleótidos; onapristona; ondansetron; ondansetron; oracin; inductor de citocinas oral; ormaplatino; osaterona; oxaliplatino; oxaunomicina; paclitaxel; análogos de paclitaxel; derivados de paclitaxel; palauamina; palmitoILrizoxina; ácido pamidrónico; panaxitriol; panomifeno; parabactina; pazeliptina; pegaspargasa; peldesina; polisulfato de pentosano sódico; pentostatina; pentrozol; perflubron; perfosfamida; alcohol perILílico; fenazinomicina; fenILacetato; inhibidores de la fosfatasa; picibanIL; clorhidrato de pILocarpina; pirarrubicina; piritrexim; placetin A; placetin B; inhibidor del activador del plasminógeno; complejo de platino; compuestos de platino; complejo de platino-triamina; porfímero sódico; porfiromicina; prednisona; propIL bis-acridona; prostaglandina J2; inhibidores del proteasoma; modulador inmunitario basado en proteína A; inhibidor de la proteína cinasa C; inhibidores de la proteína cinasa C, microalgal; inhibidores de la proteína tirosina fosfatasa; inhibidores de la purina nucleósido fosforILasa; purpurinas; pirazoloacridina; conjugado de polioxietILeno de hemoglobina piridoxILada; antagonistas de raf; raltitrexed; ramosetron; inhibidores de la proteína farnesIL transferasa ras; inhibidores de ras; inhibidor de ras-GAP; reteliptina desmetILada; etidronato de renio Re 186; rizoxina; ribozimas; retinamida RII; rogletimida; rohitukina; romurtida; roquinimex; rubiginona B1; ruboxIL; safingol; saintopina; SarCNU; sarcofitol A; sargramostim; miméticos de Sdi 1; semustina inhibidor derivado de la senescencia 1; oligonucleótidos sentido; inhibidores de la transducción de señales; moduladores de transducción de señales; proteína de unión a antígeno monocatenario; sizofiran; sobuzoxano; borocaptato de sodio; fenILacetato de sodio; solverol; proteína de unión a somatomedina; sonermina; ácido esparfósico; espicamicina D; espiromustina; esplenopentina; espongistatina 1; escualamina; inhibidor de células madre; inhibidores de la división de células madre; estipiamida; inhibidores de estromelisina; sulfinosina; antagonista del péptido intestinal vasoactivo superactivo; suradista; suramina; swainsonina; glicosaminoglicanos sintéticos; talimustina; metyoduro de tamoxifeno; tauromustina; tazaroteno; tecogalan sódico; tegafur; telurapirILio; inhibidores de la telomerasa; temoporfina; temozolomida; tenipósido; tetraclorodecaóxido; tetrazomina; taliblastina; tiocoralina; trombopoyetina; trombopoyetina mimética; timalfasina; agonista del receptor de timopoyetina; timotrinan; hormona estimulante de la tiroides; etIL etiopurpurina de estaño; tirapazamina; bicloruro de
titanoceno; topsentina; toremifeno; factor de células madre totipotentes; inhibidores de la traducción; tretinoína; triacetILuridina; triciribina; trimetrexato; triptorelina; tropisetrón; turosterida; inhibidores de la tirosina cinasa; tirfostinas; inhibidores de UBC; ubenimex; factor inhibidor del crecimiento derivado del seno urogenital; antagonistas del receptor de uroquinasa; vapreotida; variolin B; sistema vectorial, genoterapia de eritrocitos; velaresol; veramina; verdines; verteporfina; vinorelbina; vinxaltina; Vitaxin®; vorozol; zanoterona; zeniplatino; zILascorb; y zinostatin stimalamer. Fármacos antineoplásicos adicionales son 5-fluorouracILo y leucovorina. Estos dos agentes son particularmente útILes cuando se usan en métodos que emplean talidomida y un inhibidor de la topoisomerasa. En algunas realizaciones, un agente antineoplásico no es un agente quimioterápico.
5.10.2. Agentes antivirales
Los agentes antivirales que se pueden usar en combinación con uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas o ácidos nucleicos que codifican un IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un polipéptido IL-15) incluyen, pero no exclusivamente, inhibidores no nucleosídicos de la transcriptasa inversa, inhibidores nucleosídicos de la transcriptasa inversa, inhibidores de la proteasa e inhibidores de la fusión. En una realización, el agente antiviral se elige del grupo que consiste en amantadina, fosfato de oseltamivir, rimantadina y zanamivir. En otra realización, el agente antiviral es un inhibidor no nucleosídico de la transcriptasa inversa que se elige del grupo que consiste en delavirdina, efavirenz y nevirapina. En otra realización, el agente antiviral es un inhibidor nucleosídico de la transcriptasa inversa que se elige del grupo que consiste en abacavir, didanosina, emtricitabina, lamivudina, estavudina, tenofovir DF, zalcitabina y zidovudina. En otra realización, el agente antiviral es un inhibidor de la proteasa elegido del grupo que consiste en amprenavir, atazanavir, fosamprenavir, indinavir, lopinavir, nelfinavir, ritonavir y saquinavir. En otra realización, el agente antiviral es un inhibidor de la fusión como enfuvirtida.
Ejemplos no limitantes adicionales de agentes antivirales para usar en combinación con uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas o ácidos nucleicos que codifican un IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un polipéptido IL-15) incluyen los siguientes: rifampicina, inhibidores nucleosídicos de la transcriptasa inversa (por ejemplo, AZT, ddI, ddC, 3TC, d4T), inhibidores no nucleosídicos de la transcriptasa inversa (por ejemplo, delavirdina efavirenz, nevirapina), inhibidores de la proteasa (por ejemplo, aprenavir, indinavir, ritonavir y saquinavir), idoxuridina, cidofovir, aciclovir, ganciclovir, zanamivir, amantadina y palivizumab. Otros ejemplos de agentes antivirales incluyen, pero no exclusivamente, acemanano; aciclovir; aciclovir sódico; adefovir; alovudina; alvircept sudotox; clorhidrato de amantadina (SYMMETRELTM); aranotina; arILdona; mesILato de atevirdina; avridina; cidofovir; cipanfILina; clorhidrato de citarabina; mesILato de delavirdina; desciclovir; didanosina; disoxarIL; edoxudina; enviradeno; enviroxima; famciclovir; clorhidrato de famotina; fiacitabina; fialuridina; fosarILato; foscamet sódico; fosfonet sódico; ganciclovir; ganciclovir sódico; idoxuridina; ketoxal; lamivudina; lobucavir; clorhidrato de memotina; metisazona; nevirapina; fosfato de oseltamivir (TAMIFLUTM); penciclovir; pirodavir; ribavirina; clorhidrato de rimantadina (FLUMADINETM); mesILato de saquinavir; clorhidrato de somantadina; sorivudina; estatolon; estavudina; clorhidrato de tILorona; trifluridina; clorhidrato de valaciclovir; vidarabina; fosfato de vidarabina; fosfato sódico de vidarabina; viroxima; zalcitabina; zanamivir (RELENZATM); zidovudina; y zinviroxima.
5.10.3. Agentes antibacterianos
Los agentes antibacterianos, incluidos los antibióticos, que se pueden usar en combinación con uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas o ácidos nucleicos que codifican un IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un polipéptido IL-15) incluyen, pero no exclusivamente, antibióticos aminoglucósidos, glucopéptidos, antibióticos anfenicoles, antibióticos ansamicinas, cefalosporinas, cefamicinas oxazolidinonas, penicILinas, quinolonas, estreptogaminas, tetraciclinas y sus análogos. En algunas realizaciones, los antibióticos se administran en combinación con un Agente Terapéutico para prevenir y/o tratar una infección bacteriana.
En una realización específica, uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas, o ácidos nucleicos que codifican un IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un polipéptido IL-15) se usan en combinación con otros inhibidores de la síntesis de proteínas, incluidos pero no exclusivamente, estreptomicina, neomicina, eritromicina, carbomicina y espiramicina.
En una realización, el agente antibacteriano se elige del grupo que consiste en ampicILina, amoxicILina, ciprofloxacina, gentamicina, kanamicina, neomicina, penicILina G, estreptomicina, sulfanILamida y vancomicina. En otra realización, el agente antibacteriano se elige del grupo que consiste en azitromicina, cefonicid, cefotetan, cefalotina, cefamicina, clortetraciclina, claritromicina, clindamicina, cicloserina, dalfopristina, doxiciclina, eritromicina, linezolid, mupirocina, oxitetraciclina, quinupristina, rifampin, espectinomicina y trimetoprim.
Ejemplos no limitantes adicionales de agentes antibacterianos para usar en combinación con uno o más Agentes Terapéuticos, una o más Células Genomanipuladas o ácidos nucleicos que codifican un IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un polipéptido IL-15) incluyen los antibióticos aminoglucósidos siguientes (por ejemplo, apramicina, arbekacina, bambermicina, butirosina, dibekacina, neomicina, neomicina, undecILenato, metILmicina, paromomicina, ribostamicina, sisomicina y espectinomicina), antibióticos anfenicoles (por ejemplo, azidamfenicol, cloranfenicol, florfenicol y tianfenicol), antibióticos ansamicinas (por ejemplo, rifamida y rifampin), carbacefems (por ejemplo, loracarbef),
carbapenems (por ejemplo, biapenem e imipenem), cefalosporinas (por ejemplo, cefaclor, cefadroxIL, cefamandol, cefatricina, cefazedona cefozopran, cefpimizol, cefpiramida y cefpirome), cefamicinas (por ejemplo, cefbuperazona, cefmetazol y cefminox), análogos del ácido fólico (por ejemplo, trimetoprim), glucopéptidos (por ejemplo, vancomicina), lincosamidas (por ejemplo, clindamicina y lincomicina), macrólidos (por ejemplo, azitromicina, carbomicina, claritromicina, diritromicina, eritromicina y acistrato de eritromicina), monobactamas (por ejemplo, aztreonam, carumonam y tigemonam), nitrofuranos (por ejemplo, furaltadona y cloruro de furazolio), oxacefems (por ejemplo, flomoxef y moxalactam), oxazolidinonas (por ejemplo, linezolid), penicILinas (por ejemplo, amdinocILina, amdinocILina pivoxIL, amoxicILina, bacampicILina, ácido bencILpenicILínico, bencILpenicILina sódica, epicILina, fenbenicILina, floxacILina, penamcILina, yodohidrato de penetamato, penicILina o benetamina, penicILina 0, penicILina V, penicILina V benzatina, penicILina V hidrabamina, penimepiciclina y fencihicILina potásica), quinolonas y sus análogos (por ejemplo, cinoxacina, ciprofloxacina, clinafloxacina, flumequina, grepagloxacina, levofloxacina y moxifloxacina), estreptograminas (por ejemplo, quinupristina y dalfopristina), sulfonamidas (por ejemplo, acetIL sulfametoxipirazina, bencILsulfamida, noprILsulfamida, ftalILsulfacetamida, sulfacrisoidina y sulfacitina), sulfonas (por ejemplo, diatimosulfona, glucosulfona sódica y solasulfona) y tetraciclinas (por ejemplo, apiciclina, clortetraciclina, clomociclina y demeclociclina). Ejemplos adicionales incluyen cicloserina, mupirocina, tuberina anfomicina, bacitracina, capreomicina, colistina, enduracidina, enviomicina y 2,4 diaminopirimidinas (por ejemplo, brodimoprim).
5.11. Uso de células hospedadoras que expresan IL-15Ra como células nutrientes
En un aspecto, en este documento se proporcionan métodos para propagar, activar y/o diferenciar células que comprenden poner en contacto una o más Células Genomanipuladas con otra u otras células que respondan a IL-15. En algunas realizaciones, en este documento se proporcionan métodos para propagar, activar y/o diferenciar células, que comprenden poner en contacto una o más Células Genomanipuladas con otra u otras células que responden a IL-15, y aislar las células que responden a IL-15 de la o las Células Genomanipuladas. En algunas realizaciones, la o las Células Genomanipuladas, se ponen en contacto con la o las células que responden a IL-15 en presencia de un polipéptido IL-15 si la o las Células Genomanipuladas no expresan el polipéptido IL-15. La o las células que responden a IL-15 se pueden aislar de la o las Células Genomanipuladas empleando técnicas conocidas por un experto en la materia, que incluyen, por ejemplo, FACS.
En algunas realizaciones, en este documento se proporcionan métodos para propagar, activar y/o diferenciar células que comprenden cocultivar una o más Células Genomanipuladas con otra u otras células que responden a IL-15. En algunas realizaciones, en este documento se proporcionan métodos para propagar, activar y/o diferenciar células, que comprenden cocultivar una o más Células Genomanipuladas con otra u otras células que respondan a IL-15, y aislar las células que responden a IL-15 de la o las Células Genomanipuladas. En algunas realizaciones, en este documento se proporcionan métodos para propagar, activar y/o diferenciar células, que comprenden cocultivar una o más Células Genomanipuladas irradiadas con otra u otras células que responden a IL-15. En algunas realizaciones, en este documento se proporcionan métodos para propagar, activar y/o diferenciar células, que comprenden cocultivar una o más Células Genomanipuladas irradiadas con otra u otras células que responden a IL-15, y aislar las células que responden a IL-15 de la o las Células Genomanipuladas. En algunas realizaciones, la o las Células Genomanipuladas, se cocultivan con la o las células que responden a IL-15 en presencia de un polipéptido IL-15 si la o las Células Genomanipuladas no expresan el polipéptido IL-15. La o las Células Genomanipuladas y la o las células que responden a IL-15 se cocultivan ex vivo durante un período de tiempo suficiente para dar como resultado la propagación, activación y/o diferenciación de la célula que responde a IL-15. En algunas realizaciones, la o las Células Genomanipuladas y la o las células que responden a IL-15 se cocultivan ex vivo durante al menos 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 11 horas, 12 horas, 14 horas, 16 horas, 18 horas, 20 horas, 22 horas, 24 horas, 30 horas, 36 horas, 42 horas, 48 horas o 72 horas. En algunas realizaciones, la o las Células Genomanipuladas y la o las células que responden a IL-15 se cocultivan ex vivo durante 1 a 2 horas, 2 a 4 horas, 4 a 6 horas, 6 a 12 horas, 12 a 18 horas, 18 a 24 horas, 12 a 24 horas, 24 a 36 horas, 36 a 48 horas, 24 a 48 horas, 48 a 72 horas, 2 a 3 días, 3 a 5 días, 5 a 8 días, 1 a 2 semanas o 2 a 3 semanas. La o las células que responden a IL-15 se pueden aislar de la o las Células Genomanipuladas empleando técnicas conocidas por un experto en la materia, que incluyen, por ejemplo, clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS) o separación magnética empleando perlas magnéticas recubiertas de anticuerpo.
En algunas realizaciones, la o las Células Genomanipuladas son inmunocitos, como monocitos, macrófagos, linfocitos o células dendríticas. En otras realizaciones, la o las Células Genomanipuladas son líneas celulares como las descritas en la Sección 5.3.2, supra. En algunas realizaciones, la o las Células Genomanipuladas se irradian de modo que sólo experimentan un número limitado de rondas de división celular.
En algunas realizaciones, la o las Células Genomanipuladas se describen en la Sección 5.3.2 o 5.6, supra. En algunas realizaciones, la o las Células Genomanipuladas son células hospedadoras que expresan de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra y un polipéptido IL-15. En otras realizaciones, la o las Células Genomanipuladas son células hospedadoras que expresan de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra pero no un polipéptido IL-15. En algunas realizaciones, la o las Células Genomanipuladas son células hospedadoras que expresan de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra descrito en la Sección 5.1 y/o la Sección 5.2, supra. En algunas realizaciones, la o las Células Genomanipuladas son células hospedadoras que expresan de manera recombinante un polipéptido IL-15Ra en el cual el sitio de escisión para una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo ha sido mutado. En una realización, la o las
Células Genomanipuladas son células hospedadoras que expresan de manera recombinante un derivado de IL-15Ra que comprende una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho mutaciones en el sitio de escisión del dominio extracelular de IL-15Ra de modo que la escisión del IL-15Ra por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo, se inhibe. En algunas realizaciones, la o las Células Genomanipuladas son células hospedadoras que expresan de manera recombinante un derivado de IL-15Ra en el cual la secuencia de aminoácidos PQGHSDTT (SEQ ID NO:26) se muta de modo que la escisión por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra humano nativo, se inhibe. En algunas realizaciones, se introducen una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho sustituciones y/o deleciones de aminoácidos en la secuencia de aminoácidos PQGHSDTT (SEQ ID NO: 26) de IL-15Ra humano de modo que la escisión por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra humano nativo, se inhibe. En algunas realizaciones, la o las Células Genomanipuladas son células hospedadoras que expresan de manera recombinante un derivado de IL-15Ra en el cual la secuencia de aminoácidos PQGHSDTT (SEQ ID NO:26) es reemplazada por un sitio de escisión que es reconocido y escindido por una proteasa heteróloga. Los ejemplos no limitantes de dichos sitios de escisión por proteasa heteróloga incluyen Arg-X-X-Arg (SEQ ID NO:7), que es reconocido y escindido por la furina proteasa; y A-B-Pro-Arg-X-Y (SEQ ID NO:8) (A y B son aminoácidos hidrófobos y X e Y son aminoácidos no ácidos) y Gly-Arg-Gly, que son reconocidos y escindidos por la trombina proteasa. En algunas realizaciones, la o las Células Genomanipuladas son células hospedadoras que expresan de manera recombinante un polipéptido IL-15 además de un polipéptido IL-15Ra.
En otra realización, la o las Células Genomanipuladas son células hospedadoras que expresan de manera recombinante un derivado de IL-15Ra, en donde el derivado de IL-15Ra: (i) comprende un sitio de escisión extracelular mutado que inhibe la escisión por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo, y (ii) carece de todo o un fragmento del dominio transmembrana de IL-15Ra nativo. En algunas realizaciones, la o las Células Genomanipuladas son células hospedadoras que expresan un derivado de IL-15Ra, en donde el derivado de IL-15Ra comprende: (I) una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho mutaciones (por ejemplo, sustituciones y/o deleciones) en el sitio de escisión extracelular de IL-15Ra de modo que la escisión de IL-15Ra por una proteasa endógena que escinde a IL-15Ra nativo, se inhibe, y (ii) todo o un fragmento de un dominio transmembrana de una molécula heteróloga en lugar de todo o un fragmento del dominio transmembrana de IL-15Ra nativo. En algunas realizaciones, la o las Células Genomanipuladas son células hospedadoras que expresan un derivado de IL-15Ra, en donde el derivado de IL-15Ra comprende: (I) una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho mutaciones (por ejemplo, sustituciones y/o deleciones) en la secuencia de aminoácidos PQGHSDTT (SEQ ID NO:26), y (ii) todo o un fragmento de un dominio transmembrana de una molécula heteróloga en lugar de todo o un fragmento del dominio transmembrana de IL-15Ra nativo. De conformidad con estas realizaciones, los derivados de IL-15Ra pueden, o no, comprender todo o un fragmento de la cola citoplasmática de IL-15Ra nativo. En algunas realizaciones, la molécula heteróloga es CD4, CD8 o MHC. En algunas realizaciones, la o las Células Genomanipuladas son células hospedadoras que expresan de manera recombinante un polipéptido IL-15 además de un polipéptido IL-15Ra.
En algunas realizaciones, la célula que responde a IL-15 es un inmunocito, como un linfocito NK, un monocito, una célula mieloide, una célula dendrítica o un linfocito (por ejemplo, un linfocito T, como un linfocito CD4+ o CD8+). En algunas realizaciones, la célula que responde a IL-15 (es decir, célula lL-15-sensible) es una célula mononuclear de sangre periférica o un linfocito infILtrante de tumor. En algunas realizaciones, la célula que responde a IL-15 es una célula dada conocer en la Sección 6, infra, como que prolifera, se activa y/o se diferencia en respuesta a IL-15. En algunas realizaciones, la célula que responde a IL-15 (es decir, célula IL-15-sensible) es una célula del estroma o una célula endotelial. En algunas realizaciones, la célula que responde a IL-15 se genomanipula para que exprese un péptido, un polipéptido o una proteína de interés, como un anticuerpo, un receptor de antígeno quimérico, una citocina o un factor de crecimiento.
En algunas realizaciones, las células que responden a IL-15 aisladas después del cocultivo ex vivo con una o más Células Genomanipuladas se administran a un sujeto para prevenir, tratar y/o manejar un trastorno. En algunas realizaciones, las células que responden a IL-15 que se administran a un sujeto fueron derivadas del sujeto (es decir, las células que responden a IL-15 son autólogas). En otras realizaciones las células que responden a IL-15 que se administran a un sujeto fueron derivadas de un sujeto diferente.
En algunas realizaciones, las células que responden a IL-15, que son inmunocitos aislados después del cocultivo ex vivo con una o más Células Genomanipuladas, se administran a un sujeto para mejorar la función inmunitaria y/o prevenir, tratar y/o manejar un trastorno en el cual la administración de inmunocitos es beneficiosa. En algunas realizaciones, las células que responden a IL-15 aisladas después del cocultivo ex vivo con una o más Células Genomanipuladas se administran a un sujeto para mejorar una función inmunitaria mediada por IL-15. En algunas realizaciones, las células que responden a IL-15 aisladas después del cocultivo ex vivo con una o más Células Genomanipuladas se administran a un sujeto para prevenir, tratar o manejar un trastorno en el cual mejorar la función inmunitaria mediada por IL-15 es beneficioso, como cáncer, una enfermedad infecciosa (por ejemplo una enfermedad infecciosa causada por, o asociada a, una infección viral, bacteriana, fúngica o por parásitos), una inmunodeficiencia (por ejemplo, SIDA) o linfopenia.
Las células que responden a IL-15 aisladas después del cocultivo ex vivo con una o más Células Genomanipuladas se pueden usar para tratar cualquiera de las afecciones dadas a conocer en la Secciones 5.7 a 5.9, supra. En algunas realizaciones, las células que responden a IL-15 aisladas después del cocultivo ex vivo con una o más Células Genomanipuladas se utILizan para prevenir, tratar y/o manejar un cáncer como melanoma, carcinoma de células renales,
carcinoma pulmonar no microcítico, cáncer de colon u otro cáncer dado conocer en la Sección 5.7, supra. Las células que responden a IL-15 aisladas después del cocultivo ex vivo con una o más Células Genomanipuladas se pueden administrar a un sujeto local o sistémicamente a través de cualquier vía conocida por un experto en la materia (por ejemplo, administración parenteral, como administración subcutánea, intravenosa o intramuscular, o administración intratumoral). En algunas realizaciones, las células que responden a IL-15 aisladas después del cocultivo ex vivo con una o más Células Genomanipuladas se implantan o infunden en un sujeto. En algunas realizaciones, las células que responden a IL-15 aisladas después del cocultivo ex vivo con una o más Células Genomanipuladas se implantan en un sujeto y el implante incluye un material poroso, no poroso o gelatinoso, que incluye membranas como membranas sialásticas, o fibras además de las células hospedadoras. En algunas realizaciones, las células que responden a IL-15 aisladas después del cocultivo ex vivo con una o más Células Genomanipuladas se administran a un sujeto como parte de una composición, en donde la composición contiene un polímero además de las células hospedadoras. En algunas realizaciones, una dosis adecuada de células que responden a IL-15 aisladas después del cocultivo ex vivo con una o más Células Genomanipuladas administradas al sujeto puede ser de al menos 100, 200, 300, 400, 500, 700, 1000, 5000, 10.000, 25.000, 50.000, 100.000, 1 x 106, 1 x 107 o 1 x 108 células. En algunas realizaciones, una dosis adecuada de células hospedadoras que expresan de manera recombinante IL-15Ra (y en algunas realizaciones, IL-15) administrada al sujeto es entre 100 y 10.000, 500 y 10.000, 1000 y 5000, 5000 y 10.000, 5000 y 20.000, 10.000 y 20.000, 25.000 y 50.000, 50.000 y 100.000, 1 x 104 y 1 x 105, 1 x105 y 1 x 106, 1 x 105 y 1 x 107, 1 x 106 y 1 x 108 células. Las células que responden a IL-15 aisladas después del cocultivo ex vivo con una o más Células Genomanipuladas se pueden administrar 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 o más veces. La frecuencia y la dosis de células que responden a IL-15 aisladas después del cocultivo ex vivo con una o más Células Genomanipuladas que se administran a un sujeto variarán dependiendo de varios factores, que incluyen, por ejemplo, la afección del paciente.
5.12. Actividad biológica
5.12.1. Ensayos para probar la función del Agente Terapéutico o las Células Genomanipuladas
En este documento se proporcionan métodos para identificar agentes que modulan la actividad de los complejos IL-15/IL-15Ra. La actividad de un agente se puede evaluar con una línea celular sensible a IL-15, por ejemplo, células CTLL-2, una línea celular de linfoma de linfocitos T citotóxicos de ratón (N° de acceso TIB-214) o células TF1-p. Véase, por ej., la publicación internacional N° WO 05/085282.
Para evaluar la actividad de los Agentes Terapéuticos, la proliferación de células CTLL-2 o TF1 -p cultivadas en presencia o ausencia de uno o más Agentes Terapéuticos se puede evaluar mediante ensayos de incorporación de 3H-timidina bien conocidos en el área y descritos en la publicación internacional N° WO 05/085282.
En un aspecto, el Agente Terapéutico o una o más células genomanipuladas aumentan una respuesta inmunitaria que puede ser, por ejemplo, una respuesta de anticuerpo (respuesta humoral) o una respuesta inmunitaria celular, por ejemplo, secreción de citocina (por ejemplo, interferón-gamma), actividad cooperadora o citotoxicidad celular. En una realización, la mayor respuesta inmunitaria significa mayor secreción de citocinas, producción de anticuerpos, función efectora, proliferación de linfocitos T y/o proliferación de linfocitos NK. Varios ensayos para medir dichas actividades son bien conocidos en el área, y a continuación se proporcionan descripciones de ejemplo de dichos ensayos.
Por ejemplo, los enzimoinmunoensayos de adsorción (ELISA) son bien conocidos en el área y se describen, por ejemplo, en la Sección 2.1 de Current Protocols in Immunology, Coligan et al. (eds.), John WILey and Sons, Inc. 1997. ELISA se puede usar, por ejemplo, para determinar la cantidad o la concentración del polipéptido IL-15 o IL-15Ra.
En otro método, el ensayo de "tinción de tetrámeros" (Altman et al., 1996, Science 274: 94-96) se puede usar para identificar linfocitos T específicos para los antígenos y para evaluar de qué manera los Agentes Terapéuticos modulan (por ejemplo, potencian o suprimen) las respuestas de los linfocitos T específicos para los antígenos. Por ejemplo, una molécula MHC que contiene un antígeno peptídico específico, como un antígeno específico para un tumor, se multimeriza para hacer tetrámeros peptídicos solubles y se marca, por ejemplo, haciéndola formar un complejo con estreptavidina. El complejo MHC-antígeno peptídico se mezcla después con una población de linfocitos T obtenidos de un sujeto que recibió una composición inmunógena sola o en combinación con un Agente Terapéutico. Después, se utILiza biotina para teñir los linfocitos T que expresan el antígeno específico para el tumor de interés.
Además, utILizando el ensayo de cultivo mixto de linfocitos, se puede probar la citotoxicidad de los linfocitos T en un ensayo de liberación de 51Cr según se describe, por ejemplo, en Palladino et al., 1987, Cancer Res. 47:5074-5079. En resumen, el cultivo mixto de linfocitos se agrega a una suspensión de células diana para dar diferentes relaciones efector diana (E:D) (generalmente de 1:1 a 40:1). Las células diana se marcan previamente incubando 1 x 106 células diana en medio de cultivo que contiene 500 pCi de 51Cr por ml durante una hora a 37 °C. Las células se lavan tres veces después de marcarlas. Cada punto del ensayo (relación E:D) se lleva a cabo por triplicado y se incorporan los controles apropiados para medir la liberación espontánea de 51Cr (no se agregan linfocitos al ensayo) y el 100% de liberación (células lisadas con detergente). Después de incubar las mezclas de células durante 4 horas, las células se sedimentan por centrifugación a 200 g durante 5 minutos. La cantidad de 51Cr liberado en el sobrenadante se mide con un contador gamma. La toxicidad
porcentual se mide como cpm en la muestra de prueba menos las cpm liberadas espontáneamente, dividido entre las cpm totales liberadas por el detergente menos las cpm liberadas espontáneamente.
En otra realización, se puede utILizar un ensayo ELISPOT para medir la liberación de citocina in vitro por los linfocitos T, después de la administración a un sujeto de una cantidad eficaz de un Agente Terapéutico o de una o más Células Genomanipuladas. La liberación de citocina es detectada por anticuerpos que son específicos para una citocina en particular, por ejemplo, interleucina-2, factor de necrosis tumoral y o interferón-Y (véase, por ejemplo,Scheibenbogen et al., 1997, Int. J. Cancer 71:932-936). El ensayo se lleva a cabo en una placa de microtitulación que ha sido recubierta previamente con un anticuerpo específico para una citocina de interés que captura la citocina secretada por los linfocitos T. Después de la incubación de los linfocitos T durante 24-48 horas en los pocILlos recubiertos, los linfocitos T se retiran y son reemplazados por un segundo anticuerpo marcado que reconoce un epítopo diferente en la citocina. Después de un lavado exhaustivo para eliminar el anticuerpo no unido, se agrega a la placa sustrato enzimático que produce un producto de reacción coloreado. Se cuenta la cantidad de células productoras de citocina en el microscopio. Este método tiene las ventajas de un tiempo de ensayo corto y de la sensibILidad, sin necesidad de una gran cantidad de linfocitos T citotóxicos.
En algunos aspectos, la respuesta inmunitaria inducida o potenciada por un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas es potenciada o aumentada en al menos 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 6 veces, 7 veces, 8 veces, 9 veces, 10 veces, 11 veces o 12 veces, con respecto a una respuesta inmunitaria provocada por un control negativo como se determina mediante cualquier ensayo conocido en el área. En algunas realizaciones, la respuesta inmunitaria inducida por el Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas es potenciada en al menos 0,5-2 veces, al menos 2-5 veces, al menos 5-10 veces, al menos 10-50 veces, al menos 50-100 veces, al menos 100-200 veces, al menos 200-300 veces, al menos 300-400 veces o al menos 400-500 veces, con respecto a la respuesta inmunitaria inducida por un control negativo según se determina por cualquier método conocido en el área. En algunas realizaciones, el ensayo utILizado para evaluar la respuesta inmunitaria mide el nivel de producción de anticuerpos, producción de citocinas o citotoxicidad celular, y dichos ensayos son bien conocidos en el área. En algunas realizaciones, el ensayo utILizado para medir la respuesta inmunitaria es un enzimoinmunoensayo de adsorción (ELISA) que determina los niveles de anticuerpos o citocinas, un ensayo ELISPOT que determina la liberación de citocinas o un ensayo de liberación de 51Cr que determina la citotoxicidad celular.
En algunas realizaciones, el Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas inducen o potencian una respuesta inmunitaria en un sujeto que es determinada por el título del anticuerpo en el suero del sujeto, y el título del anticuerpo es al menos 0,2 a 5 veces, 5 a 20 veces, 10 a 30 veces, 20 a 50 veces, 50 a 200 veces, 100 a 500, 200 a 1000 veces o 500 a 2000 veces mayor en comparación con el título del anticuerpo en el suero de un sujeto que recibió un control negativo. En algunas realizaciones, el título medio del anticuerpo en el suero frente a un antígeno, en el sujeto que recibió el Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas, es mayor en al menos 0,5-2 veces, al menos 2-5 veces, al menos 5-10 veces, al menos 10-50 veces, al menos 50-100 veces, al menos 100-200 veces, al menos 200-300 veces, al menos 300-400 veces o al menos 400-500 veces, con respecto al título medio de la anticuerpo en el suero en el sujeto que recibió un control negativo, según se determina por métodos bien conocidos en el área.
En otra realización, en este documento se proporcionan métodos para administrar un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas para inducir o aumentar el nivel de producción o secreción de citocinas, por ejemplo, interferón-Y, (que puede ser 0,5 a 500 veces mayor) en comparación con el nivel de producción o secreción de citocinas en una muestra de control negativa. En algunas realizaciones, el Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas inducen o potencian una respuesta inmunitaria que se mide mediante una mayor liberación de citocina, y la concentración de citocina es al menos 0,2 a 5 veces, 5 a 20 veces, 10 a 30 veces, 20 a 50 veces, 50 a 200 veces, 100 a 500, 200 a 1000 veces o 500 a 2000 veces mayor en comparación con la concentración de citocina de un control negativo. En algunas realizaciones, la concentración media de citocina en el suero de muestras obtenidas de un sujeto que recibió el Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas es mayor en al menos 0,5-2 veces, al menos 2-5 veces, al menos 5 10 veces, al menos 10-50 veces, al menos 50-100 veces, al menos 100-200 veces, al menos 200-300 veces, al menos 300-400 veces o al menos 400-500 veces, con respecto a la concentración media de citocina en el suero de muestras obtenidas de un sujeto que recibió un control negativo, según se determina por métodos bien conocidos en el área. En algunas realizaciones, el control negativo pueden ser muestras del sujeto antes de la administración del Agente Terapéutico o la o las Células Genomanipuladas
En algunas realizaciones, el Agente Terapéutico o la o las Células Genomanipuladas, inducen o aumentan la proliferación de linfocitos NK en un sujeto en al menos 0,2 a 5 veces, 5 a 20 veces, 10 a 30 veces, 20 a 50 veces, 50 a 200 veces, 100 a 500, 200 a 1000 veces o 500 a 2000 veces más que la proliferación de linfocitos NK en un control negativo. En algunas realizaciones, el Agente Terapéutico o la o las Células Genomanipuladas inducen o aumentan la proliferación de linfocitos T en un sujeto en al menos 0,2 a 5 veces, 5 a 20 veces, 10 a 30 veces, 20 a 50 veces, 50 a 200 veces, 100 a 500, 200 a 1000 veces o 500 a 2000 veces más que la proliferación de linfocitos T en un control negativo, según se determina por métodos bien conocidos en el área, por ejemplo, citometría de flujo, tinción con CSFE e incorporación de 3H-timidina.
El aumento en la respuesta inmunitaria de anticuerpos (humoral) o celular inducida por una cantidad eficaz del Agente Terapéutico o la o las Células Genomanipuladas se puede evaluar empleando diversos métodos bien conocidos en el área.
5.12.2. Modelos animales
Los Agentes Terapéuticos, las Células Genomanipuladas, las formas purificadas de IL-15Ra (por ejemplo, formas solubles purificadas de IL-15Ra) o los ácidos nucleicos que codifican un IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un polipéptido IL-15) se prueban preferentemente in vivo con respecto a la actividad terapéutica o profILáctica deseada antes de ser utILizados en seres humanos. Por ejemplo, en una realización, se puede administrar un Agente Terapéutico a un animal simultáneamente con el comienzo de una enfermedad o trastorno en el animal. En otra realización, se puede administrar un Agente Terapéutico al animal antes del comienzo de una enfermedad o trastorno en el animal. En otra realización, se puede administrar un Agente Terapéutico al animal con posterioridad al comienzo de una enfermedad o trastorno en el animal. En una realización, el Agente Terapéutico se administra al animal más de una vez. En otra realización, el Agente Terapéutico se administra en combinación con otra terapia.
Los Agentes Terapéuticos, las Células Genomanipuladas, las formas purificadas de IL-15Ra (por ejemplo, formas solubles purificadas de IL-15Ra) o los ácidos nucleicos que codifican un IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un polipéptido IL-15) se pueden probar en sistemas de modelos animales que incluyen, pero no exclusivamente, ratas, ratones, pollos, vacas, monos, cerdos, cabras, ovejas, perros, conejos, cobayos, etc. En una realización, los Agentes Terapéuticos se prueban en un sistema de modelo de ratón. Dichos sistemas de modelo son utILizados ampliamente y bien conocidos por los técnicos con experiencia en el tema.
La actividad antineoplásica de un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una forma purificada de IL-15Ra (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra) o los ácidos nucleicos que codifican un IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un polipéptido IL-15) se pueden determinar empleando diversos modelos animales experimentales para el estudio del cáncer, bien conocidos en el área como se describe, por ejemplo, en Relevance of Tumor Models for Anticancer Drug Development (1999, eds. Fiebig y Burger); Contributions to Oncology (1999, Karger); The Nude Mouse in Oncology Research (1991, eds. Boven y Winograd); y Anticancer Drug Development Guide (1997 ed. Teicher), que se incorporan en este documento por referencia en su totalidad.
Los modelos animales para el cáncer se pueden utILizar para evaluar la eficacia de un Agente Terapéutico, o una composición de este, una o más Células Genomanipuladas o una composición de estas, una forma purificada de IL-15Ra (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra) o una composición de esta, o ácidos nucleicos que codifican un IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un polipéptido IL-15) o una terapia de combinación que comprende un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas. Los ejemplos no limitantes de modelos animales para cáncer de pulmón incluyen, pero no exclusivamente, los modelos animales de cáncer de pulmón descritos por Zhang & Roth (1994, In vivo 8(5):755-69) y un modelo de ratón transgénico con la función de p53 alterada (véase, por ejemplo, Morris et al., 1998, J La State Med Soc 150(4):179-85). Un ejemplo de un modelo animal para cáncer de mama incluye, pero no exclusivamente, un ratón transgénico que sobreexpresa la ciclina D1 (véase, por ejemplo, Hosokawa et al., 2001, Transgenic Res 10(5):471 -8). Un ejemplo de un modelo animal para cáncer de colon incluye, pero no exclusivamente, un ratón deficiente tanto en TCR-p como en p53 (véase, por ejemplo, Kado et al., 2001, Cancer Res 61(6):2395-8). Los ejemplos de modelos animales para cáncer pancreático incluyen, pero no exclusivamente un modelo de adenocarcinoma pancreático murino Panc02 metastásico (véase, por ejemplo, Wang et al., 2001, Int J Pancreatol 29(1):37-46) y ratones nu-nu generados en tumores pancreáticos subcutáneos (véase, por ejemplo, Ghaneh et al., 2001, Gene Ther 8(3):199-208). Los ejemplos de modelos animales para linfoma no hodgkiniano, incluyen pero no exclusivamente, un ratón con inmunodeficiencia severa combinada ("IDSC") (véase, por ejemplo, Bryant et al., 2000, Lab Invest 80(4):553-73) y un ratón transgénico IgHmu-HOX11 (véase, por ejemplo Hough et al., 1998, Proc Natl Acad Sci USA 95(23):13853-8). Un ejemplo de un modelo animal para cáncer esofágico incluye, pero no exclusivamente, un ratón transgénico para el oncogén del virus del papILoma humano tipo 16E7 (véase, por ejemplo, Herber et al., 1996, J Virol 70(3):1873-81). Los ejemplos de modelos animales para carcinomas colorrectales incluyen, pero no exclusivamente, modelos de ratón Apc (véanse, por ejemplo Fodde & Smits, 2001, Trends Mol Med 7(8):369-73 y Kuraguchi et al., 2000, Oncogene 19(50):5755-63).
Para modelos animales de enfermedades infecciosas, se puede evaluar la eficacia de un Agente Terapéutico, una o más Células Genomanipuladas, una forma purificada de IL-15Ra (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra) o ácidos nucleicos que codifican un IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un polipéptido IL-15) con respecto a un control negativo en animales infectados con virus. Las muestras obtenidas de estos animales (por ejemplo, muestras de suero, orina, esputo, semen, saliva, plasma o tejido) se pueden probar con respecto a la potenciación de la función inmunitaria, por ejemplo, la potenciación en la liberación de citocinas, la potenciación en la producción de anticuerpos, en la proliferación de linfocitos T o en la proliferación de linfocitos NK, con métodos bien conocidos en el área y descritos en este documento. Las muestras obtenidas de estos animales (por ejemplo, muestras de suero, orina, esputo, semen, saliva, plasma o tejido) también se pueden probar con respecto a la reducción de la replicación viral mediante métodos bien conocidos en el área, por ejemplo, los que miden la replicación viral alterada (según se determina, por ejemplo, por formación de placa) o la producción de proteínas virales (según se determina, por ejemplo, por transferencia Western,
ELISA o análisis por citometría de flujo) o de ácidos nucleicos virales (según se determina, por ejemplo, por RT-PCR, análisis de transferencia Northern o transferencia de Southern). Para la cuantificación del virus en muestras de tejidos, las muestras de tejidos se homogeneizan en solución salina tamponada con fosfato (PBS), y se dejan adsorber dILuciones de los homogeneizados clarificados durante 1 hora a 37 °C sobre monocapas de células (por ejemplo, células Vero, CEF o MDCK). En otros ensayos, se llevan a cabo evaluaciones histopatológicas después de la infección, preferentemente evaluaciones del órgano o los órganos que se sabe que el virus ataca para infectarlos. La inmunohistoquímica del virus se puede llevar a cabo utILizando un anticuerpo monoclonal específico para el virus. Los ejemplos no limitantes de modelos animales descritos a continuación se pueden adaptar para otros sistemas virales.
Diversos modelos animales para enfermedades infecciosas son bien conocidos en el área y se pueden emplear para evaluar la eficacia de Agentes Terapéuticos, Células Genomanipuladas, formas purificadas de IL-15Ra (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra) o ácidos nucleicos que codifican un polipéptido IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un polipéptido IL-15) para prevenir, tratar y/o manejar enfermedades infecciosas, por ejemplo: se describen modelos de ratón del virus del herpes simple (VHS) en Crute et al., Nature Medicine, 2002, 8:386-391 y Bolger et al., Antiviral Res., 1997, 35:157-165; se describe en modelos de cobayo de HSV en Chen et al., Virol. J, 23 de noviembre de 2004, 1:11; se describen modelos animales de citomegalovirus de ratón (CMVM) y citomegalovirus humano (CMVH) en Kern et al., Antimicrob. Agents Chemother., 2004, 48:4745-4753; se describen modelos de cobayo de CMV en Bourne et al., Antiviral Res., 2000, 47:103-109, Bravo et al., Antiviral Res., 2003, 60:41-49 y Bravo et al, J. Infectious Diseases, 2006, 193:591-597; se describen modelos animales del virus de la gripe en Sidwell et al., Antiviral Res., 2000, 48:1-16; y McCauley et al., Antiviral Res., 1995, 27:179-186; se describen modelos de ratón del virus de la hepatitis B (VHB) en Cavanaugh et al., J. Virol., 1997, 71:3236-3243 y Guidotti et al., J. Virol., 1995, 69:6158-6169; se describen modelos de ratón del virus de la hepatitis C (VHC) en Zhu et al., Antimicrobial Agents and Chemother., 2006, 50:3260-3268, Bright et al., Nature, 2005, 436:973-978, Hsu et al., Nat. Biotechnol., 2003, 21:519-525, ILan et al., J. Infect. Dis. 2002, 185:153-161, Kneteman et al., Hepatology, 2006, 43:1346-1353, Mercer et al., Nat. Med., 2001, 7:927-933 y Wu et al., Gastroenterology, 2005, 128:1416-1423; se describen modelos animales de VIH en Ayash-Rashkovsky et al., FASe B J., 2005, 19:1149-1151, Mosier et al., Semin. Immunol., 1996, 8:255-262, Mosier et al., Hosp. Pract. (Off Ed)., 1996, 31:41-48, 53-55, 59-60, Bonyhadi et al., Mol. Med. Today, 1997, 3:246-253, Jolicoeur et al., Leukemia, 1999, 13:S78-S80, Browning et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1997, 94:14637-14641, y Sawada et al., J. Exp. Med., 1998, 187:1439-1449, y Schito et al., Curr. HIV Res., 2006, 4:379-386.
También se pueden usar otros modelos animales para infecciones virales para evaluar la eficacia de un Agente Terapéutico, o una composición de este, una o más Células Genomanipuladas o una composición de estas, una forma purificada de IL-15Ra (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra) o una composición de esta, ácidos nucleicos que codifican un IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un polipéptido IL-15) o una terapia de combinación que comprende un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas por ejemplo, se han desarrollado modelos animales para infecciones virales como enfermedades asociadas a VEB, gammaherpesvirus, mononucleosis infecciosa, virus de la inmunodeficiencia del simio ("VIS"), infección por el virus de la enfermedad Borna, hepatitis, infección por el virus de la varicela, neumonitis viral, patogenia del virus de Epstein-Barr, virus de la inmunodeficiencia felina ("VIF"), infección por VLTH tipo 1, rotavirus humanos y herpes genital (véanse, por ejemplo Hayashi et al., 2002, Histo1Histopathol 17(4):1293-310; Arico et al., 2002, J Interferon Cytokine Res 22(11):1081 -8; Flano et al., 2002, Immunol Res 25(3):201 -17; Sauermann, 2001, Curr Mol Med 1 (4):515-22; Pletnikov et al., 2002, Front Biosci 7:d593-607; Engler et al., 2001, Mol Immunol 38(6):457-65; White et al., 2001, Brain Pathol 11 (4):475-9; Davis & Matalon, 2001, News Physiol Sci 16:185-90; Wang, 2001, Curr Top Microbiol Immunol. 258:201-19; PÑLlips et al., 2000, J Psychopharmacol. 14(3):244-50; Kazanji, 2000, AIDS Res Hum Retroviruses. 16(16):1741 -6; Saif et al., 1996, Arch Virol Suppl. 12:153-61; y Hsiung et al., 1984, Rev Infect Dis. 6(1):33-50).
Otros modelos animales para infecciones respiratorias virales incluyen, pero no exclusivamente, VPI (véase, por ejemplo, Shephard et al., 2003 Res Vet Sci 74(2): 187-190; Ottolini et al., 2002 J Infect Dis 186(12): 1713-1717) y VRS (véase, por ejemplo, Culley et al., 2002 J Exp Med 196(10): 1381-1386; y Curtis et al., 2002 Exp Biol Med 227(9): 799-802).
También se puede probar la capacidad del Agente Terapéutico, una composición de este o una terapia de combinación que comprende el Agente Terapéutico para disminuir el tiempo de duración de una infección viral. También se puede probar la capacidad de la o las Células Genomanipuladas, una composición de estas o una terapia de combinación que comprende la o las Células Genomanipuladas para disminuir el tiempo de duración de una infección viral. También se puede probar la capacidad de las formas purificadas de IL-15Ra (por ejemplo, formas solubles purificadas de IL-15Ra) o los ácidos nucleicos que codifican el polipéptido IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un polipéptido IL-15) para disminuir el tiempo de duración de una infección viral.
Los modelos animales para infecciones bacterianas también se pueden utILizar para evaluar la eficacia de un Agente Terapéutico, o una composición de este, una o más Células Genomanipuladas, o una composición de estas, una forma purificada de IL-15Ra (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra) o una composición de esta, los ácidos nucleicos que codifican un polipéptido IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un polipéptido IL-15) o una terapia de combinación que comprende un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas. Se han desarrollado modelos animales para infecciones bacterianas como infección por H. pylori, mycoplasmosis genital,colangitis esclerosante primaria, cólera, infección pulmonar crónica con Pseudomonas aeruginosa, enfermedad de los legionarios,
enfermedad de úlcera gastroduodenal, meningitis bacteriana, infección gástrica por Helicobacter,, otitis media neumocócica, neuritis alérgica experimental, neuropatía leprosa, infección micobacteriana, endocarditis, enteritis asociada a Aeromonas, infección por Bacteroides fragILis, sífILis, endocarditis estreptocócica, osteomielitis hematógena aguda, tifus de los matorrales humano, síndrome de choque tóxico, infecciones anaeróbicas, infecciones por Escherichia coli y infecciones por Mycoplasma pneumoniae (véanse, por ejemplo, Sugiyama et al., 2002, J Gastroenterol. 37 Suppl 13:6-9; Brown et al., 2001, Am J Reprod Immunol. 46(3):232-41; Vierling, 2001, Best Pract Res Clin Gastroenterol.
15(4):591 -610; Klose, 2000, Trends Microbiol. 8(4): 189-91; Stotland et al., 2000, Pediatr Pulmonol. 30(5):413-24; Brown et al., 2000, Am J Reprod Immunol. 48(3):249-52; Vierling, 2000, Best Pract Res Clin Gastroenterol. 14(1):75-96; Koedel & Pfister, 1999, Infect Dis Clin North Am. 13(3):549-77; Nedrud, 1999, FEMS Immunol Med Microbiol. 24(2):243-50; Prellner et al., 1999, Microb Drug Resist. 5(1):73-82; Vriesendorp, 1997, J Infect Dis. 176 Suppl 2:S164-8; Shetty & Antia, 1996, Indian J Lepr. 68(1):95-104; Balasubramanian et al., 1994, Immunobiology 191 (4-5):395-401; Carbon et al., 1994, Int J Biomed Comput. 36(1 -2):59-67; Haberberger et al., 1991, Experientia.47(5):426-9; Onderdonk et al., 1990, Rev Infect Dis. 12 Suppl 2:S169-77; Wicher & Wicher, 1989, Crit Rev Microbiol. 16(3):181 -234; Scheld, 1987, J Antimicrob Chemother. 20 Suppl A:71-85; Emslie & Nade, 1986, Rev Infect Dis. 8(6):841-9; Ridgway et al., 1986, Lab Anim Sci.
36(5):481-5; Quimby & Nguyen, 1985, Crit Rev Microbiol. 12(1):1 -44; Onderdonk et al., 1979, Rev Infect Dis. 1 (2):291 -301; Smith, 1976, Ciba Found Symp. (42):45-72, y Taylor-Robinson, 1976, Infection. 4(1 Suppl):4-8).
Se puede probar la capacidad del Agente Terapéutico o una composición de este, o de una terapia de combinación que comprende el Agente Terapéutico para disminuir el tiempo de duración de una infección bacteriana, por ejemplo, una infección respiratoria bacteriana, en al menos 25%, al menos 50%, al menos 60%, al menos 75%, al menos 85%, al menos 95%, o al menos 99% con respecto a un control negativo, empleando métodos bien conocidos en el área.
La eficacia de Agentes Terapéuticos, o composiciones de estos, una o más Células Genomanipuladas o composiciones de estas, una forma purificada de IL-15Ra (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra) o una composición de esta, los ácidos nucleicos que codifican un polipéptido IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un polipéptido IL-15) o de una terapia de combinación que comprende un Agente Terapéutico o una o más Células Genomanipuladas para la prevención, el tratamiento y/o el manejo de una infección fúngica se puede evaluar en modelos animales para dichas infecciones. Se han desarrollado modelos animales para infecciones fúngicas como infecciones por Candida, zygomycosis, mastitis por Candida, tricosporonosis progresiva diseminada con tricosporonemia latente, candidiasis diseminada, paracoccidioidomicosis pulmonar, aspergILosis pulmonar, neumonía por Pneumocystis carinii, meningitis criptocócica, meningoencefalitis por coccidioides y vasculitis cerebroespinal, infección por AspergILlus niger, queratitis por Fusarium, micosis del seno paranasal, endocarditis por AspergILlus fumigatus, discondroplasia tibial, vaginitis por Candida glabrata, candidiasis orofaríngea, enfermedad granulomatosa crónica ligada al cromosoma X, tinea pedis, candidiasis cutánea, placentitis micótica, tricosporonosis diseminada, aspergILosis broncopulmonar alérgica, queratitis micótica, infección por Cryptococcus neoformans, peritonitis fúngica, infección por Curvularia geniculata, endoftalmitis estafILocócica, esporotricosis y dermatofitosis (véanse, por ejemplo, Arendrup et al., 2002, Infection 30(5):286-91; Kamei, 2001, Mycopathologia 152(1 ):5-13; Guhad et al., 2000, FEMS Microbiol Lett.192(1 ):27-31; Yamagata et al., 2000, J Clin Microbiol. 38(9):32606; Andrutis et al., 2000, J Clin Microbiol. 38(6):2317-23; Cock et al., 2000, Rev Inst Med Trop Sao Paulo 42(2):59-66; Shibuya et al., 1999, Microb Pathog. 27(3):123-31; Beers et al., 1999, J Lab Clin Med. 133(5):423-33; Najvar et al., 1999, Antimicrob Agents Chemother.43(2):413-4; WILliams et al., 1988, J Infect Dis. 178(4):1217-21; Yoshida, 1988, Kansenshogaku Zasshi. 1998 Jun; 72(6):621-30; Alexandrakis et al., 1998, Br J Ophthalmol. 82(3):306-11; Chakrabarti et al., 1997, J Med Vet Mycol. 35(4):295-7; Martin et al., 1997, Antimicrob Agents Chemother. 41 (1 ):13-6; Chu et al., 1996, Avian Dis. 40(3):715-9; Fidel et al., 1996, J Infect Dis. 173(2):425-31; Cole et al., 1995, FEMS Microbiol Lett. 15;126(2):177-80; Pollock et al., 1995, Nat Genet. 9(2):202-9; Uchida et al., 1994, Jpn J Antibiot. 47(10):1407-12; : Maebashi et al., 1994, J Med Vet Mycol. 32(5):349-59; Jensen & Schonheyder, 1993, J Exp Anim Sci. 35(4):155-60; Gokaslan & Anaissie, 1992, Infect Immun. 60(8):3339-44; Kurup et al., 1992, J Immunol. 148(12):3783-8; Singh et al., 1990, Mycopathologia. 112(3):127-37; Salkowski & Balish, 1990, Infect Immun. 58(10):3300-6; Ahmad et al., 1986, Am J Kidney Dis. 7(2):153-6; Alture-Werber E, Edberg SC, 1985, Mycopathologia. 89(2):69-73; Kane et al., 1981, Antimicrob Agents Chemother. 20(5):595-9; Barbee et al., 1977, Am J Pathol. 86(1):281 -4; y Maestrone et al., 1973, Am J Vet Res.
34(6):833-6). Se han desarrollado modelos animales para infecciones respiratorias fúngicas como por Candida albicans, AspergILlus fumigatus, aspergILosis pulmonar invasiva, Pneumocystis carinii, criptocococis pulmonar, Pseudomonas aeruginosa, Cunninghamella bertholletia (véanse, por ejemplo, Aratani et al., 2002 Med Mycol 40(6):557-563; Bozza et al., 2002 Microbes Infect 4(13): 1281 -1290; Kurup et al., 2002 Int Arch Allergy Immunol 129(2):129-137; Hori et al., 2002 Eur J Immuno 32(5): 1282-1291; Rivera et al., 2002 J Immuno 168(7): 3419-3427; Vassallo et al., 2001, Am J Respir Cell Mol Biol 25(2): 203-211; WILder et al., 2002 Am J Respir Cell Mol Biol 26(3): 304-314; Yonezawa et al., 2000 J Infect Chemother 6(3): 155-161; Cacciapuoti et al., 2000 Antimicrob Agents Chemother 44(8): 2017-2022; y Honda et al., 1998 Mycopathologia 144(3):141-146).
Se puede probar la capacidad de los Agentes Terapéuticos o composiciones de estos, las Células Genomanipuladas o composiciones de estas, una forma purificada de IL-15Ra (por ejemplo, una forma soluble purificada de IL-15Ra) o una composición de esta, los ácidos nucleicos que codifican un polipéptido IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un polipéptido IL-15) o una terapia de combinación que comprende Agentes Terapéuticos o Células Genomanipuladas para disminuir el tiempo de duración de la infección respiratoria fúngica en al menos 25%, al menos 50%, al menos 60%, al menos 75%, al menos 85%, al menos 95% o al menos 99%. Se pueden usar técnicas conocidas por los expertos en la materia para analizar in vivo la función de los Agentes Terapéuticos o composiciones de estos, las Células Genomanipuladas o
composiciones de estas, los ácidos nucleicos que codifican un polipéptido IL-15Ra (y en algunas realizaciones, un polipéptido IL-15) o una terapia de combinación que comprende Agentes Terapéuticos o Células Genomanipuladas.
6. EJEMPLOS
En algunos aspectos de los ejemplos 1-3 presentados a continuación, los complejos IL-15/IL-15Ra se prepararon de la manera siguiente: se transfectaron células HEK 293T humanas con un constructo de expresión de ácido nucleico para IL-15 (por ejemplo, SEQ ID NO: 23) en combinación con un constructo de expresión de ácido nucleico para IL-15Ra (por ejemplo, SEQ ID NO: 25) o IL-15Ra-Fc. Se purificaron los complejos IL-15/IL-15Ra compuestos por IL-15 (por ejemplo, SEQ ID NO: 24 o SEQ iD NO: 1 sin el péptido señal) e IL-15Ra (por ejemplo como una forma soluble de SEQ iD n O:3, como SEQ ID NO:32) o la proteína de fusión IL-15Ra-Fc (por ejemplo, SEQ ID NO: 21 o 22). En realizaciones específicas, los complejos IL-15/IL-15Ra soluble, mencionados en los ejemplos 5-9 están compuestos por IL-15 (SEQ ID NO:1 sin el péptido señal) e IL-15Ra soluble (SEQ ID NO: 32 sin el péptido señal).
6.1. Ejemplo 1. Estudio de seguridad y propiedades farmacocinéticas del heterodímero de IL-15/IL-15Ra después de la administración de una única dosis en estudios preclínicos en primates no humanos.
Para evaluar la seguridad y las propiedades farmacocinéticas del heterodímero de IL-15/IL-15Ra después de la administración de una única dosis, se trataron 5 macacos de la India como se indica en la Tabla 1. Se les administró IL-15 derivada de E. co lipor vía i.v. a razón de 5 pg/kg (subestudio 2); se les administró heterodímero IL-15/IL-15Ra por vía i.v. a razón de 5 y 2 pg/kg (subestudios 3 y 4, respectivamente) y por vía s.c. a razón de 5 pg/kg (subestudio 5). Un macaco recibió solución salina i.v. y sirvió como control (subestudio 1).
Tabla 1. Diseño del estudio para evaluar la seguridad y la farmacocinética del heterodímero de IL-15/IL-15Ra después de una sola inyección i.v. o s.c.
Se anestesiaron los macacos y se les inyectaron i.v. o s.c. diferentes preparaciones (1 ml o 0,5 ml en solución salina, respectivamente). Se siguieron en el tiempo la tensión arterial y la temperatura. El macaco M710 (subestudio 3) presentó hipotensión arterial 18 minutos después de la infusión i.v. de lL-15/IL-15Ra (5 pg/kg) y necesitó líquidos i.v. y un bolo de 5 ml de Hetastarch. Se le proporcionaron un total de 200 ml de líquidos. Un segundo animal M092 (subestudio 4) recibió una inyección i.v. de una dosis menor de heterodímero de IL-15/IL-15Ra (3 pg/kg). La menor dosis de heterodímero de IL-15/sIL-15Ra también produjo una caída de la tensión arterial 30 minutos después de la inyección i.v. El animal recibió una rápida infusión de 50 ml o SRL y 5 ml de bolo de Hetastarch. Se le administraron un total de 200 ml de líquidos. Ambos animales se recuperaron de la anestesia y no necesitaron ningún tratamiento posterior. Los animales M572 y M703 (grupo/subestudio 5) no presentaron hipotensión después de la inyección s.c. de 5 pg/kg de IL-15/IL-15Ra. No se observaron cambios significativos en la temperatura corporal de los animales.
También se controlaron en los animales los valores séricos siguientes: glucosa, nitrógeno ureico en sangre, creatinina, proteína total, albúmina, bILirrubina, fosfatasa alcalina, transaminasa alcalina, aminotransferasa, colesterol, calcio, fosfato, sodio, potasio, cloruro, globulina, creatina fosfocinasa, y los parámetros hematológicos siguientes: hemoglobina, hematocrito, GB, GR, volumen corpuscular medio, hemoglobina corpuscular media, concentración de hemoglobina corpuscular media, plaquetas, neutrófILos, linfocitos, monocitos, eosinófILos y basófILos. Todos los valores estuvieron en el intervalo fisiológico, excepto CPK. Todos los animales (incluidos los de control) presentaron un aumento agudo y transitorio del nivel de CPK, que se atribuyó a la anestesia. Una ligera disminución en el recuento total de GB y el recuento total de linfocitos se observó 24-48 horas después de una única dosis de cualquiera de las formulaciones de IL-15. No se hicieron mediciones posteriores para estos animales.
Se extrajo sangre 0, 10, 20, 30, 45, 60 min, 2, 4, 8, 24 y 48 horas después de la inyección i.v. (grupo/subestudio 1,2, 3 y 4) y 0, 1, 2, 4, 6, 8, 24, 48 y 72 horas después de la inyección s.c. (grupo/subestudio 5) y se determinaron los niveles plasmáticos de IL-15 por ELlSA (QuantiGlo, R&D Systems, Q1500B), de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Diez minutos después de la inyección i.v. de una dosis de 5 pg/kg, los animales que recibieron IL-15/IL-15Ra mostraron un nivel máximo plasmático de IL-15 de alrededor de 50 ng/ml mientras que los animales que recibieron IL-15 monomérica tuvieron un nivel plasmático máximo de IL-15 de alrededor de 30 ng/ml (Figura 4A). Esta diferencia sugiere que el heterodímero de IL-15/IL-15Ra es una molécula más estable que IL-15 monomérica, que se elimina rápidamente de la
circulación. De acuerdo con el análisis de decaimiento exponencial de una fase, IL-15/IL-15Ra heterodimérico tiene una semivida plasmática de 50-60 min mientras que IL-15 monomérica tiene una semivida de 12 min. La inyección de una dosis menor de IL-15/sIL-15Ra dio como resultado un nivel máximo menor después de 10 min (alrededor de 15 ng/ml), pero la cinética del decaimiento de la concentración plasmática de IL-15 en el tiempo fue simILar (Figura 4A).
Después de la inyección s.c. de IL-15/IL-15Ra, se detectó un nivel plasmático máximo de IL-15 de 4-5 ng/ml 4 horas después de la inyección. La declinación en la concentración plasmática de IL-15 en el tiempo fue más lenta en comparación con la inyección i.v. Los macacos mantuvieron los niveles plasmáticos de IL-15 de ~1 ng/ml 24 horas después de la inyección (Figura 4B). Cabe destacar que los niveles de IL-15 obtenidos con una sola inyección s.c. del heterodímero de IL-15/IL-15Ra fueron comparables con los niveles de IL-15 obtenidos 2 días después de la infusión IVC de IL-15 monomérica administrada en una dosis de 20 pg/kg. La inyección s.c. de IL-15 monomérica (a razón de 20 o 40 pg/kg) se caracterizó en estudios previos por tener un decaimiento más rápido con niveles de alrededor de 0,1 ng/ml 24 horas después de la inyección (véase, por ejemplo, Sneller et al., Blood, 2011 Dec 22,118(26):6845-6848).
También se midió el área bajo la curva (AUC) para IL-15 plasmática en los macacos que recibieron inyecciones. Se observaron valores de AUC simILares (para los niveles plasmáticos de IL-15 en el tiempo) después de la administración de 5 pg/kg de IL-15/sIL-15Ra por vía i.v. o s.c. Esto fue el resultado de la larga semivida del IL-15/sIL-15Ra heterodimérico. Los valores de AUC obtenidos por el heterodímero fueron 4-5 veces mayores que los de AUC de IL-15 monomérica después de la inyección i.v. en una dosis de 5 pg/kg (Figura 4C).
Las propiedades farmacocinéticas de IL-15/sIL-15Ra administrado mediante inyección s.c. se compararon con las propiedades de IL-15/sIL-15Ra administrado mediante inyección i.v. y con las propiedades de IL-15 producida por E. coli administrada mediante inyección i.v., administrando la misma concentración (5 pg/kg) de IL-15/sIL-15Ra (o IL-15) por medio de estos métodos de administración y evaluando los niveles plasmáticos de IL-15 en distintos momentos. Los resultados se presentan en la Figura 4D.
Conclusiones
Considerados en conjunto, estos datos sugieren que el heterodímero de IL-15/sIL-15Ra tiene una semivida plasmática más larga en comparación con IL-15 monomérica derivada de E. coli. El bolo i.v. de dosis de IL-15/IL-15Ra (5 y 2 pg/kg) causó una caída transitoria de la tensión arterial que se trató con líquidos de soporte por vía i.v. La administración de la misma dosis del heterodímero IL-15/IL-15Ra por vía s.c. dio como resultado un máximo agudo menor pero niveles plasmáticos de IL-15 más prolongados en comparación con la inyección i.v. No se observaron cambios en la tensión arterial después de la inyección s.c. Por consiguiente, la inyección s.c. minimizó los efectos adversos asociados a la inyección i.v. y dio como resultado niveles-activos más sostenidos de IL-15 circulante.
6.2. Ejemplo 2. Estudios que evalúan la toxicidad, la inmunogenia y los efectos sobre la homeostasis del sistema inmunitario de IL-15/sIL-15Ra humano, después de invecciones repetidas.
Basándose en los resultados obtenidos después de la administración única de IL-15/IL-15Ra, se llevaron a cabo más estudios para evaluar la toxicidad, la inmunogenia y los efectos sobre la homeostasis del sistema inmunitario de IL-15/sIL-15Ra humano después de inyecciones repetidas. Como se indica en la Tabla 2, el grupo 1 incluyó 2 macacos de la India que recibieron 12 inyecciones i.v. diarias de IL-15/sIL-15Ra en una dosis de 2 pg/kg. El grupo 2 incluyó 2 macacos de la India que recibieron 5 inyecciones s.c. (una cada 3 días) de IL-15/sIL-15Ra en una dosis de 5 pg/kg. El grupo 2 se sometió a un segundo ciclo de tratamiento idéntico al primero. Este segundo ciclo se llevó adelante 60 días después de la finalización del primer ciclo y después de que los parámetros hematológicos de estos macacos retornaran a los niveles normales.
Tabla 2. Diseño del estudio para evaluar la toxicidad, la inmunogenia y los efectos inmunológicos del heterodímero de IL-15/IL-15Ra después de inyecciones i.v. o s.c. repetidas.
La Figura 5 presenta el diseño del estudio que se resume en la Tabla 2 y también incluye el análisis de otros 2 macacos de la India que recibieron 5 inyecciones s.c. (una cada 3 días) de IL-15/sIL-15RaFc en una dosis de 5 pg/kg (es decir, P570 y P574) (Grupo 3), además de analizar 2 macacos de la India que recibieron 5 inyecciones s.c. (una cada 3 días) de IL-15/sIL-15Ra en una dosis de 5 pg/kg (es decir, P572 y M695) (Grupo 2).
Los animales incluidos en los estudios se examinaron en diferentes momentos respecto a la toxicidad clínica, se les realizaron análisis clínicos bioquímicos y hematológicos, y se les evaluaron los parámetros inmunológicos como consecuencia de las administraciones de IL-15/IL-15Ra. También se evaluó el desarrollo de autoanticuerpos específicos para IL-15 e IL-15Ra humanos. Estos animales no fueron sacrificados después de la finalización del tratamiento y no se obtuvieron datos de patología. Se debe realizar una autopsia completa (véase más adelante).
Grupo 1:
Los macacos P571 y P575 se sedaron y recibieron IL-15/IL-15Ra (2 pg/kg) en 1 ml de solución salina por vía i.v. Se siguieron en el tiempo la tensión arterial y la temperatura. Después de cada inyección, ambos macacos presentaron hipotensión arterial 15 minutos después de la infusión i.v. de IL-15/IL-15Ra y necesitaron líquidos i.v. por un total de 50 60 ml. No se observaron cambios en la temperatura de los animales. Todos los animales salieron de la anestesia 1 hora después de las inyecciones y se recuperaron normalmente. Se les extrajo sangre 0, 15, 30 min, 1,4 y 24 horas después de la primera y la segunda inyecciones i.v. y 7, 12, 14, 21, 28 y 47 días después de la iniciación del tratamiento. La concentración de IL-15 humana en el plasma de los macacos se evaluó usando un inmunoensayo quimioluminiscente (Quantiglo Q1500B, R&D Systems), de acuerdo con las recomendaciones del fabricante. Las inyecciones i.v. de 2 pg/kg de IL-15/IL-15Ra dieron como resultado niveles plasmáticos máximos de IL-15 de alrededor de 10 ng/ml y una semivida de aproximadamente 1 hora con niveles simILares a los del inicio a las 24 horas. Las inyecciones i.v. repetidas no afectaron el nivel plasmático máximo de IL-15 alcanzado después de cada inyección ni la cinética del decaimiento (Figura 6).
Se aislaron las células mononucleares de sangre periférica (CMSP) mediante centrifugación por gradiente de densidad Ficoll para las muestras extraídas los días 0, 2, 7, 12, 14, 21, 28 y 47 y las células se congelaron en suero fetal bovino más 10% de DMSO y se almacenaron en nitrógeno líquido hasta su análisis. Se realizó un análisis inmunofenotípico utILizando una mezcla de anticuerpos anti-humanos conjugados directamente: APC-Cy7 CD3, AmCyan CD4, AF405-CD8, FITC-CD95, PerCpCy5.5-CD28, AF700-CD45RA, APC-CCR7, PECy7-CD16, PE-NKp44, PE-NKp46, PE-gamma/delta, PE-CD25, V450-CD20, APC-CD27, AF700-CD40. Para la detección de Tregs (linfocitos T reguladores), a la tinción de la superficie de las células la siguió la tinción intracelular con FITC-Foxp3 Ab, empleando el juego de tampón de tinción Foxp3 (eBioscience). Los datos de muestras de células marcadas se obtuvieron en un citómetro de flujo LSR II (BD) y se analizaron empleando el software FlowJo (Tree Star, San Carlos, CA).
Para determinar la inmunogenia de las preparaciones de IL-15/IL-15Ra humano, se cribaron las muestras de plasma de los macacos para detectar la presencia de anticuerpos contra IL-15 humana o IL-15Ra humano por inmunotransferencia Western. Se disolvieron 20 y 50 ng de IL-15/IL-15Ra en un tampón que contenía SDS, se cargaron en un gel de poliacrILamida y se transfirieron a membranas de nitrocelulosa. La presencia de anticuerpos que reaccionan contra IL-15 humana o IL-15Ra humano, se evaluó utILizando plasma de mono antes de la iniciación del ciclo de tratamiento y el día 28. Ninguno de los macacos presentó anticuerpos anti-IL-15 humana ni anti-IL-15Ra humano (dILución 1:2000).
Grupos 2 y 3:
Los macacos P572 y M695 se sedaron y recibieron IL-15/sIL-15Ra (5 pg/kg) en 0,5 ml de solución salina por vía s.c. (Grupo 2). Se siguieron en el tiempo la tensión arterial y la temperatura. No se observaron cambios en la tensión arterial ni la temperatura de los animales. Todos los animales salieron de la anestesia 1 hora después de las inyecciones y se recuperaron normalmente. Se realizaron los análisis de rutina de bioquímica clínica y se midieron los parámetros hematológicos los días 0, 7 y 14 después de cada ciclo de tratamiento. Se les extrajo sangre 0, 1,2, 4, 6, 8, 24 y 48 horas después de la primera y la segunda inyecciones s.c. y 0, 4 y 24 horas después de la tercera y cuarta inyecciones s.c. y 0, 4, 24 y 48 horas después de la última inyección s.c. del primer ciclo de tratamiento. Después de un período de descanso de aproximadamente 2 meses, se llevó a cabo un segundo ciclo de tratamiento. Se les extrajo sangre 0, 2, 4, 6, 8, 24 y 48 horas después de la primera inyección s.c. y 0, 4 y 24 horas después de la segunda, la tercera y la cuarta inyecciones s.c. y 0, 4, 24 y 72 horas después de la última inyección s.c. del segundo ciclo de tratamiento. También se extrajeron muestras de sangre los días 22, 39 y 60 después de la iniciación del segundo ciclo de tratamiento. Se realizó prácticamente el mismo procedimiento con los macacos P570 y P574 que recibieron IL-15/sIL-15RaFc (5 pg/kg) (Grupo 3) en vez de IL-15/sIL-15Ra.
Se evaluó la concentración de IL-15 humana en el plasma de los macacos utILizando un inmunoensayo quimioluminiscente (Quantiglo Q1500B, R&D Systems), de acuerdo con las recomendaciones del fabricante. La farmacocinética de las formas heterodiméricas de IL-15 en los macacos (Grupos 2 y 3) que recibieron inyecciones s.c. a razón de 5 pg/kg se evaluó por ELISA después de la primera inyección (Figura 7). Además, se midieron niveles plasmáticos máximos de IL-15 de 1-2 ng/ml 2-6 horas después de cada inyección s.c. Los niveles sistémicos de IL-15 mayores de 200 pg/ml también se mantuvieron hasta 24 horas, en tanto la medición a las 72 horas mostró que la concentración había vuelto a los niveles iniciales (la Figura 8 muestra los resultados para el Grupo 2 y la Figura 9 muestra los resultados para el Grupo 3). Cabe destacar que los ciclos de tratamiento repetidos con IL-15/IL-15Ra no afectaron los niveles plasmáticos de IL-15 alcanzados después de cada inyección, contrariamente a lo que se informó previamente para IL-15 derivada de E. co li(véase, por ejemplo, Sneller et al., Blood, 2011 Dec 22,118(26):6845-6848).
Se aislaron las células mononucleares de sangre periférica (CMSP) mediante centrifugación por gradiente de densidad Ficoll para las muestras recogidas los días 0, 2, 7 y 14 después de la iniciación del primer ciclo de tratamiento y 6 horas y 1,2, 7, 13, 15, 22, 39 y 60 días después de la iniciación del segundo ciclo de tratamiento. Las células se congelaron en suero fetal bovino más 10% de DMSO y se almacenaron en nitrógeno líquido hasta su análisis. Se realizó un análisis inmunofenotípico utILizando una mezcla de anticuerpos anti-humanos conjugados directamente: APC-Cy7 CD3, AmCyan CD4, AF405-CD8, FITC-CD95, PerCpCy5.5-CD28, AF700-CD45RA, PECy7-CD16, PE-NKp44, PE-NKp46, PE-gamma/delta, APC-CD20, FITC-anexina. Para la detección de células proliferantes, a la tinción de la superficie de las células la siguió la tinción intracelular con AF700-Ki67 Ab (BD Pharmingen), empleando el juego de tampón de tinción Foxp3 (eBioscience). Los datos de muestras de células marcadas se obtuvieron en un citómetro de flujo LSR II (BD) y se analizaron empleando el software FlowJo (Tree Star, San Carlos, CA).
En el inicio, el porcentaje de linfocitos NK CD16+ que expresaban Ki67 fue inferior a 5% para el macaco M695 y alrededor de 15% para el macaco P572. El porcentaje de linfocitos T CD4+, CD8+ y gamma/delta fue inferior al 10% antes de la administración de IL-15s/IL-15Ra. El tratamiento con IL-15/sIL-15Ra dio como resultado un aumento de la proliferación de linfocitos NK CD16+ el día 7 (80% para los dos macacos) y el día 14 (40% para el macaco M695 y 60% para el macaco P572) después de la primera inyección (la Figura 10 muestra resultados para el Grupo 2 tratado con IL-15/sIL-15Ra, y la Figura 11 muestra resultados para los Grupos 2 y 3 tratados con IL-15/sIL-15Ra e IL-15/sIL-15RaFc, respectivamente). Análogamente, IL-15/sIL-15Ra indujo una proliferación robusta de linfocitos T CD8+ (30 a 53% de los linfocitos fueron Ki-67+) y los linfocitos T gamma/delta (45 a 84% de los linfocitos fueron Ki-67+) que alcanzaron el máximo el día 7 después de la primera inyección y permanecían elevados el día 14 (la Figura 10 muestra los resultados para el Grupo 2 y la Figura 11 muestra los resultados para los Grupos 2 y 3). Un aumento más modesto en la proporción de linfocitos T CD4+ proliferantes también se observó el día 7 después de la primera inyección (la Figura 10 muestra los resultados para el Grupo 2 y la Figura 11 muestra los resultados para los Grupos 2 y 3).
Los ciclos de tratamiento repetidos con IL-15/sIL-15Ra (Grupo 2) dieron como resultado una expansión máxima simILar de los linfocitos NK (Figura 12) y la proliferación de linfocitos NK después del 1er y 2° ciclos de tratamiento con IL-15/sIL-15RaFc (Grupo 3) lo que se reflejó en los niveles plasmáticos de IL-15 (Figura 13). En el Grupo 2, durante ambos ciclos los niveles de linfocitos NK en reproducción aumentaron los días 7 y 13 o 14, y la reproducción de linfocitos NK se indujo antes durante el segundo régimen con IL-15 (día 2).
Los diferentes subconjuntos dentro de los linfocitos T CD8+ y CD4+ también se examinaron respecto a su capacidad proliferativa en respuesta al tratamiento con IL-15/IL-15Ra. Los linfocitos T vírgenes (Tn) se definieron como CD95-CD28+, los linfocitos T memoria centrales (Tcm) como CD95+CD28+ y los linfocitos T memoria efectores (Tem) como CD95+CD28-. Antes de la administración de IL-15/sIL-15Ra pocas células en cada compartimiento eran Ki-67+. Los Tem tanto CD4+ como CD8+ se expandieron rápidamente después del tratamiento con IL-15/IL-15Ra con un aumento en el porcentaje de linfocitos Ki-67+ de entre 5 y 15 veces el día 7 después de las primeras inyecciones. Los Tem tanto CD4+ como CD8+ también se expandieron después del tratamiento con IL-15/IL-15RaFc. Los efectos de IL-15/sIL-15Ra (Grupo 2) e IL-15/sIL-15RaFc (Grupo 3) sobre los linfocitos T memoria efectores CD4 y los linfocitos T memoria centrales y efectores CD8 se muestran en las Figuras 14A-C. Las inyecciones s.c. repetidas de IL-15/sIL-15Ra también indujeron un aumento en 5 y 2 veces de la proliferación de TCM, CD8+ y Cd4+, respectivamente el día 7. También se observó un aumento sustancial en la frecuencia de proliferación de los linfocitos Tn CD8+ los días 7 y 14 en tanto los linfocitos Tn CD4+ no respondieron a IL-15/IL-15Ra (Figura 14). Cabe destacar que la frecuencia observada de linfocitos Ki-67+ en cada subconjunto es simILar a las informadas previamente para 12 inyecciones diarias i.v. o IVC de IL-15 derivada de E. coli (véase, por ejemplo Sneller et al., Blood, 2011 Dec 22,118(26):6845-6848; Lugli et al., Blood, 2010 Oct 28, 116(17):3238-3248; Lugli et al., Blood, 2011 Sep 1, 118(9):2520-2529).
Para determinar la inmunogenia de las preparaciones de IL-15/IL-15Ra humano, se cribaron las muestras de plasma de los macacos para detectar la presencia de anticuerpos contra IL-15 humana o IL-15Ra humano por inmunotransferencia Western. Se disolvieron 20 y 50 ng de IL-15/IL-15Ra en un tampón que contenía SDS, se cargaron en un gel de poliacrILamida y se transfirieron a membranas de nitrocelulosa. La presencia de anticuerpos que reaccionan contra IL-15 humana e IL-15Ra humano se evaluó utILizando plasma de mono antes de la iniciación del primer ciclo de tratamiento y el día 22 después de la iniciación del segundo ciclo de tratamiento. Ningún animal desarrolló anticuerpos anti-IL-15 (Figura 15B). Para el macaco P572, la muestra del pretratamiento dio negativa a las dILuciones 1:500, 1:2000 y 1: 8000. Sin embargo, la muestra del día 22 reaccionó frente a IL-15Ra humano (aproximadamente 42 KDa) pero no pudo detectar IL-15 humana (aproximadamente 15 KDa) (Figura 15A). El macaco M695 no desarrolló anticuerpos anti-IL-15 humana ni anti-IL-15Ra humano (dILución 1:2000) (Figura 15B). El desarrollo de Abs contra IL-15Ra humano en uno de los macacos tratados puede ser una consecuencia de la diferencia entre IL-15Ra humano y de macaco de la India. Los dos animales (P574 y P570) que recibieron IL-15/IL-15RaFc desarrollaron anticuerpos anti-IL-15Ra (Figura 15B). Mientras que el porcentaje de homología entre IL-15 humana y de macaco de la India es de 97,5%, el porcentaje de homología entre las dos especies de IL-15Ra maduro secretado es de 91%.
6.3 Ejemplo 3. Estudio que evalúa la toxicidad, los niveles plasmáticos de IL-15 y otros parámetros en macacos de la India después de invecciones subcutáneas repetidas de IL-15/sIL-15Ra.
Basándose en los resultados presentados en el Ejemplo 2 se realizó un estudio adicional para evaluar la toxicidad, la inmunogenia y los efectos sobre la homeostasis del sistema inmunitario de IL-15/sIL-15Ra humano después de inyecciones repetidas. Como se indica en la Tabla 3, el Grupo 1 incluyó 8 macacos de la India que recibieron 6 inyecciones s.c. de IL-15/sIL-15Ra en una dosis de 5 pg/kg los días 0, 2, 4, 7, 9 y 12. El Grupo 2 incluyó 8 macacos de la India que sirvieron como controles (que recibieron 6 inyecciones s.c. de solución salina los mismos días). Ambos grupos se sometieron a un segundo ciclo de tratamiento idéntico al primero. Este segundo ciclo se llevó adelante 2 semanas después de la finalización del primer ciclo y después de que los parámetros hematológicos de estos macacos retornaran a los niveles normales. Se sacrificaron 4 macacos/grupo el día 14 y el día 30 después del inicio del segundo ciclo de tratamiento.
Tabla 3. Diseño del estudio para evaluar la toxicidad, la inmunogenia y los efectos inmunológicos del heterodímero de IL-15/IL-15Ra después de inyecciones s.c. repetidas.
Los macacos se sedaron y recibieron IL-15/sIL-15Ra (5 pg/kg) en 0,5 ml de solución salina o solución salina por vía s.c. Se siguieron en el tiempo la tensión arterial y la temperatura. No se observaron cambios en la tensión arterial ni la temperatura de los animales. Todos los animales salieron de la anestesia 1 hora después de las inyecciones y se recuperaron normalmente. Se realizaron los análisis de rutina de bioquímica clínica y se midieron los parámetros hematológicos los días 0, 7 y 14 después de cada ciclo de tratamiento. Se extrajo sangre en diferentes momentos después de las inyecciones s.c. Se evaluó la concentración de IL-15 humana en el plasma de los macacos utILizando un inmunoensayo quimioluminiscente (Quantiglo Q1500B, R&D Systems), de acuerdo con las recomendaciones del fabricante. Se midieron niveles plasmáticos máximos de IL-15 de 1-2 ng/ml 6 horas después de cada inyección s.c. Los resultados se presentan en las Figuras 16 y 17. Cabe destacar que los niveles de IL-15, 48 horas después de cada inyección s.c. fueron inferiores después de la segunda inyección en cada ciclo de tratamiento, lo que sugiere la expansión concomitante de las células que consumen IL-15. Cabe destacar que los ciclos de tratamiento repetidos con IL-15/IL-15Ra no afectaron los niveles plasmáticos de IL-15 alcanzados después de cada inyección, contrariamente a lo que se informó previamente para IL-15 derivada de E. coli (véase, por ejemplo, Sneller et al., Blood, 2011 Dec 22,118(26):6845-6848) (Figura 16). La Figura 17 muestra los niveles plasmáticos máximos y mínimos de heterodímeros de IL-15. La Figura 18 muestra la tensión arterial media en 8 macacos que recibieron inyecciones de heterodímero de IL-15 vs. controles, y la Figura 19 muestra la temperatura corporal media en 8 macacos que recibieron inyecciones de heterodímero de IL-15 vs. controles. Las Figuras 18 y 19 muestran que con una dosis de 5 pg/kg no hay prácticamente cambios en la tensión arterial ni la temperatura corporal de los macacos que recibieron inyecciones s.c. con respecto a los controles.
Conclusiones para los Ejemplos 2 y 3
Los datos presentados en los Ejemplos 2 y 3 muestran entre otras cosas, que: (1) IL-15 heterodimérica administrada por vía s.c. día por medio conduce a niveles plasmáticos elevados sostenidos de IL-15; (2) los niveles plasmáticos sostenidos de IL-15 conducen a una actividad sostenida de IL-15 por todo el período de 2 semanas con, 2 semanas sin, administración s.c.; (3) los niveles plasmáticos mínimos de IL-15 disminuyeron durante el período de administración s.c., lo que indica una mayor utILización de IL-15 por los linfocitos en expansión en todo el cuerpo; y (4) la administración s.c. evita los niveles máximos elevados y la toxicidad asociada a la administración i.v. Además, con una dosis de 5 pg/kg de peso corporal no hay cambio en la tensión arterial ni la temperatura corporal de los macacos que recibieron inyecciones s.c., mientras que la misma dosis del heterodímero de IL-15 administrada mediante inyección en bolo intravenosa conduce a una caída de la tensión arterial. Por lo tanto, los efectos secundarios observados son más leves con la administración s.c., mientras que la actividad de IL-15 se mantiene. Además, no hay acumulación de heterodímeros de IL-15 después de la administración s.c. cada 2 días; por el contrario, el consumo de IL-15 parece aumentar debido a los números en expansión de linfocitos en división, los cuales se unen a heterodímeros de IL-15.
Basándose en estos datos, en este documento se describen, entre otras cosas, formulaciones de heterodímero de IL-15 para inyección, en donde los niveles plasmáticos alcanzan niveles máximos después de 4 horas y los niveles plasmáticos se mantienen por encima de los niveles plasmáticos basales durante al menos 24 horas después de una única administración. Esto facILita la administración una vez al día, una vez cada 2 días o una vez cada 3 días, dependiendo de los niveles deseados de estimulación de los linfocitos.
Una formulación que alcanza estas especificaciones en humanos es, por ejemplo, una solución estérIL de heterodímero de IL-15 en una concentración de 1-10 mg/ml en solución salina fisiológica. La administración s.c. en solución salina fisiológica alcanza el intervalo deseado de concentración plasmática. Además, se pueden aplicar diferentes formulaciones
para aumentar aún más la biodisponiblLidad y la establLidad de IL-15. Los niveles plasmáticos deseados en humanos son entre 10.000 pg/ml de plasma y 1 pg/ml de plasma utILizando un ELISA estándar para IL-15 humana (Quantiglo Q1500B, R&D Systems, realizado de acuerdo con las recomendaciones del fabricante). Más preferentemente, los niveles plasmáticos deseados son entre 1000 pg/ml de plasma y 1 pg/ml de plasma. Muy preferentemente, los niveles plasmáticos deseados son entre 1000 pg/ml de plasma y 10 pg/ml de plasma. Se prevé que estos niveles minimicen los efectos secundarios y maximicen la multiplicación y la activación de los linfocitos.
En los humanos, se prevé que los niveles plasmáticos detectados disminuirán en el tiempo debido a la expansión de linfocitos que incrementará la unión a las células y disminuirá los niveles plasmáticos. Un método para mantener los niveles plasmáticos congruentes es el aumento de la dosis de heterodímero de IL-15 en el tiempo.
Se puede concluir además que los datos presentados en este documento sugieren que la administración repetida de IL-15/IL-15Ra no es tóxica ni inmunógena. El tratamiento con IL-15/sIL-15Ra dio como resultado un aumento en la proliferación de linfocitos NK CD16+, indujo una proliferación robusta de linfocitos T CD8+ y linfocitos T gamma/delta, y produjo un aumento la proporción de linfocitos T CD4+. Cabe destacar, que los ciclos de tratamiento repetidos con IL-15/IL-15Ra no afectaron los niveles plasmáticos de IL-15 alcanzados después de cada inyección, contrariamente a lo que se informó previamente para IL-15 derivada de E.coli. Los datos sugieren además que el régimen de tratamiento cíclico en el cual IL-15/IL-15Ra se administra por vía subcutánea, minimizó la toxicidad aunque alcanzando niveles plasmáticos de IL-15 superiores a los niveles basales. En particular, los resultados presentados en este documento sugieren la conveniencia de un régimen de tratamiento cíclico en el cual IL-15/IL-15Ra se administre por vía subcutánea, en particular, cada 2 o 3 días, en el primer ciclo de tratamiento (por ejemplo, durante 2 semanas), seguido de un ciclo "sin tratamiento" durante el cual no se administre IL-15/IL-15Ra (en particular, durante 2 semanas a 2 meses, por ejemplo, 2 semanas o 2 meses), y seguido del segundo ciclo de tratamiento en el cual IL-15/IL-15Ra se administre por vía subcutánea, en particular, cada 2 o 3 días (por ejemplo, durante 2 semanas).
6.4. Ejemplo 4. Generación y caracterización del heterodímero de IL-15/IL-15Ra expresado de manera estable por una línea celular HEK293.
Este ejemplo demuestra la producción eficiente del heterodímero de IL-15/IL-15Ra soluble (sIL-15Ra) heterodímero no unido covalentemente pero estable en células clonales HEK293 humanas y la liberación del heterodímero de IL-15/sIL-15Ra procesado en el medio. Como se demuestra en este documento, la purificación de los polipéptidos IL-15 y sIL-15Ra permitió la identificación del sitio de escisión proteolítica de IL-15Ra y la caracterización de múltiples sitios de glicosILación. Además, la administración del heterodímero de IL-15/sIL-15Ra purificado, reconstituido dio como resultado niveles plasmáticos sostenidos y una robusta expansión de los linfocitos NK y T en ratones, lo que demuestra una farmacocinética y una bioactividad in vivo superiores a las de IL-15 monocatenaria derivada de E. coli. Estas propiedades identificadas de IL-15 heterodimérica proporcionan una razón fuerte para el uso de esta molécula en aplicaciones clínicas.
Previamente, el mecanismo responsable para el desprendimiento del heterodímero de la superficie celular fue poco comprendido y la secuencia del extremo C-terminal del sIL-15Ra escindido naturalmente era desconocida. Por estas razones, es importante la caracterización molecular de la citocina heterodimérica bioactiva. El aislamiento del heterodímero de los tejidos humanos es difícIL, debido a las pequeñas cantidades de citocina circulante (Dudley et al., J. Clin. Oncol., 2008, 26:5233-5239). Este ejemplo describe el desarrollo de métodos para la producción y purificación de heterodímeros de IL-15/IL-15Ra sintetizados, procesados y secretados por células humanas después de la transferencia génica. En particular, se desarrollaron líneas celulares humanas clonales estables derivadas de HEK293 que sobreproducen los heterodímeros de IL-15/sIL-15Ra procesados naturalmente y un procedimiento de purificación eficiente para producir la citocina IL-15/sIL-15Ra heterodimérica biológicamente activa. Esto también permitió la caracterización de los complejos IL-15/sIL-15Ra, la determinación de la secuencia de aminoácidos y del sitio de escisión proteolítica de sIL-15Ra, el análisis de la glicosILación general y la evaluación de la farmacocinética y la bioactividad in vivo.
6.4.1. Métodos experimentales
Generación de líneas celulares de mamífero que sobreproducen el IL-15/IL-15Ra heterodimérico.
Se utILizaron vectores de ADN optimizados para la expresión eficiente de IL-15 humana y de IL-15Ra de longitud completa (Bergamaschi et al., J. Biol. Chem., 2008, 283:4189-4199; Jalah et al., DNA Cell Biol., 2007, 26:827-840) para la generación de líneas celulares clonales estables. Un plásmido de ADN exento de endotoxinas, altamente purificado (Qiagen EndoFree Giga kit; HILden, Alemania) se linealizó mediante digestión con una enzima de restricción y se purificó usando el kit de eliminación de nucleótidos (Qiagen) y se precipitó en etanol en condiciones asépticas. Se transfectaron establemente células HEK293 (Life Technologies, N° 11631017) mediante la técnica de coprecipitación con fosfato de calcio utILizando plásmidos optimizados. Los clones 19.7 y 1.5 estuvieron entre los mayores productores de IL-15/sIL-15Ra. Se generó otra línea celular humana derivada de HEK293 (clon 2.66) que produce heterodímeros de IL-15/sIL-15Ra utILizando vectores de ADN que expresan IL-15 y la región extracelular de IL-15Ra (sIL-15Ra truncado, aa 1-175 (Bergamaschi et al., J. Biol. Chem., 2008, 283:4189-4199; Mortier et al., J. Immunol., 2004, 173:1681-1688) de la molécula madura). Las células se expandieron y se sembraron en medio sin suero en un sistema de fibra hueca (FiberCell Systems Inc). El consumo de glucosa se midió diariamente y el medio sin suero se reemplazó cuando la concentración de glucosa
disminuyó a menos de 100 mg/dL. Se recogieron diariamente los sobrenadante celulares (20 ml) por hasta 5 meses y se analizaron sus niveles de IL-15 por ELISA (R&D Systems).
Separación y análisis de heterodímeros de IL-15 por cromatografía líquida de alto rendimiento de fase inversa (RP-HPLC).
Para el análisis con RP-HPLC, se centrifugaron las muestras para sedimentar los residuos celulares y 100 ml de medio que contenía complejos IL-15/sIL-15Ra se separaron por RP-HPLC en condiciones no reductoras a una velocidad de flujo de 0,3 mL/min en una columna de 2,1 x 100 mm Poros® R2/10 (ABI, EE.UU.), utILizando como solventes acetonitrILo acuoso/ácido trifluoroacético y un sistema de HPLC Shimadzu equipado con bombas LC-10AD, un controlador del sistema SCL-10Ar, un horno CTO-10Ac , un colector de fracciones FRC-10A y un detector de arreglo de diodos SPD-M10AV a 55 °C. El tampón A consistió en 0,1% de ácido trifluoroacético (TFA) en agua. La columna se equILibró con 10% de tampón B (0,1% de TFA en acetonitrILo). El gradiente del tampón B fue: 10-43%, 9 min; 43-44%, 12 min; 44-85%, 4 min; 85%, 5 min. Se detectaron picos mediante absorción UV a 206 y 280 nm. La cuantificación de las proteínas purificadas se realizó mediante análisis de aminoácidos en un analizador de aminoácidos Hitachi L-8800. Las subunidades de IL-15 y sIL-15Ra purificadas se mezclaron en una relación molar 1:1 para permitir la reasociación del complejo. El análisis del complejo IL-15/sIL-15Ra se llevó a cabo en condiciones tanto desnaturalizantes como no desnaturalizantes en geles de poliacrILamida (gradiente de 12% y 4-20%, respectivamente), y se visualizaron mediante tinción con azul de Coomassie. La formación de los complejos se confirmó mediante análisis de inmunotransferencia Western utILizando anticuerpos anti-IL-15 humana o anti-IL-15Ra humano (AF315 y AF247, respectivamente, R&D Systems).
Se realizó una RP-HPLC preparativa utILizando un sistema de HPLC Dionex equipado con bombas binarias Ultimate 3000 modelo N° HPG-3400A, detector de arreglo de fotodiodos Ultimate 3000 modelo N° PDA-3000, compartimiento de columna Ultimate 3000 modelo N° TCC-3000, gradILla para solvente y desgasificador Ultimate 3000 modelo N° SRD-3400, colector de fracciones Isco, modelo N° Foxy 200. Generalmente, se cargaron 20 mL por corrida directamente en la columna después de la centrifugación para eliminar los residuos celulares.
La purificación inicial se llevó a cabo en una columna Waters RCM de 25 x 100 mm uBondapak-C18 a una velocidad de flujo de 5 mL/min a temperatura ambiente y velocidad de flujo de 5 ml/min. El tampón A fue 0,1% de TFA en agua. El gradiente del tampón B fue: 20%D-32%, 60 min; 32%D-47%, 40 min; 47%-55%, 1 h 20 min; y 55%-65%, 20 min; 65%-90%, 20 min; y 90%, 10 min. Se juntaron las fracciones correspondientes a sIL-15Ra e IL-15 por separado y se purificaron posteriormente por RP-HPLC en condiciones no reductoras. La purificación posterior de sIL-15Ra se hizo en una columna de 16 x 100 mm POROS R2/10 a 26,0 °C y una velocidad de flujo de 5 mL/min. El gradiente del tampón B fue: 5%-15%, 10min; 15%-32%, 120 min; 32%-100%, 20 min; 100%, 10 min.
Para la purificación posterior de IL-15, las fracciones correspondientes a IL-15 se juntaron y se volvieron a purificar primero en una columna de 16 x 100 mm POROS R2/10 a 26 °C a una velocidad de flujo de 5 mL/min. El gradiente del tampón B fue: 20%-36%, 30 min; 36%-50%, 150 min; 50%-90%, 20 min; 90%, 10 min. Se detectaron picos a 206 y 280 nm y se analizaron por secuenciación usando un secuenciador de proteínas automático Applied Biosystems Inc. 477; mediante electroforesis en gel en SDS-poliacrILamida (PAGE) y por análisis de inmunotransferencia, usando un procedimiento de quimioluminiscencia potenciada (ECL) (Amersham Life Science, Arlington Heights, IL). La cuantificación de las proteínas totales en mezclas o subunidades purificadas se realizó mediante análisis de aminoácidos empleando un analizador de aminoácidos Hitachi L-8800. Las mezclas de sIL-15Ra y de IL-15 se mezclaron entre sí en cantidades equimolares y se liofILizaron.
Digestión proteolítica para identificar el extremo C-terminal de sIL-15Ra.
Se disolvieron sesenta microgramos de sIL-15Ra escindido naturalmente en Tris-HCl 0,02 M, pH 8,5, se le agregó endoproteinasa Lys-C (Boehringer Mannheim Gmbh, Mannheim, Alemania) (20:1 p/p proteína-proteasa) y se incubó durante 22 h a 37 °C. Después de la digestión, se llevó a cabo la separación de los fragmentos de Lys-C por HPLC de fase inversa en condiciones no reductoras en una columna de 2,1 x 100 mm Vydac C18 a 0,3 mL/min, empleando un sistema de HPLC Shimadzu. El gradiente del tampón B fue: 7-30%, 25 min; 30-70%, 5min; 70%, 5 min a 55 °C. Se detectaron picos a 206 y 280 nm se analizaron por secuenciación usando un secuenciador de proteínas automático Applied Biosystems Inc. 477 A.
Alícuotas de MALDI-TOF MS de las fracciones de HPLC se mezclaron con igual volumen de solución de matriz (ácido alfa-ciano-4-hidroxicinámico), y 1,5 ml de mezcla se depositaron sobre una placa destinataria y se analizaron por MALDI-TOF MS (espectrometría de masas de tiempo de vuelo desorción/ionización láser asistida por matriz) en un equipo Ultraflex III TOF/TOF (Bruker Daltonics, BILlerica, MA, EE.UU.). Los espectros se calibraron externamente en modo reflector utILizando un equipo de calibración de péptidos Bruker Peptide Calibration Standard II. Se determinaron las masas monoisotópicas utILizando FlexAnalysis 3.3 (Bruker Daltonics) con el algoritmo de selección de picos SNAP. Los espectros se analizaron con el software BioTools 3.2 (Bruker Daltonics). La secuenciación por espectrometría de masas de péptidos particulares se realizó mediante análisis MALDI-TOF MS/MS en el modo "LIFT" con selección manual de iones precursores. Se usaron los espectros de iones fragmentos para la búsqueda en la base de datos de proteínas SwissProt mediante el programa de búsqueda de ion Mascot MS/MS (en el sitio web .matrixscience.com) en el servidor de NIH Mascot en el sitio web biospec.nih.gov/. Las identificaciones obtenidas se confirmaron comparando la serie de
iones fragmentos generada con BioTools con datos experimentales de MS/MS. La confianza en la identificación se evaluó basándose en la puntuación de proteína o ion Mascot que es -10*Log(P), en donde P es la probabILidad de que la coincidencia observada sea un acontecimiento aleatorio. El análisis ISD-MALDI-TOF de sIL-15Ra intacto purificado por HPLC se hizo utILizando1,5-diaminonaftaleno (DAN) como matriz como se sugiere en Bruker's Technical Note N° TN-36. "Automated Acquisition of MALDI-ISD Spectra for the N- and C-terminal Sequence Determination of Intact Proteins". La tolerancia MS/MS en el análisis de espectros ISD utILizando BioTools fue de 1,5 Da. La espectrometría de masas de la preparación de sIL-15Ra se llevó a cabo en un espectrómetro de masas de tiempo de vuelo Applied Biosystems Voyager-DE Pro operado en modo lineal en condiciones de ion positivo. Los voltajes típicos fueron 25 kV de aceleración, alambre de guía de 0,15% y voltaje de red de 91,5%. Se usó un láser de nitrógeno a 337 nm con un promedio de 250 disparos láser por espectro. Se utILizó un detector de masa alta CovalX HM-1 con HV-1 fijado en 2,5 kV y HV-2 en 20 kV. Se utILizaron seroalbúmina bovina y apo-mioglobina como patrones para la calibración externa. Se usó ácido sinápico como matriz. Los análisis de datos se llevaron a cabo mediante un software "Data Explorer" instalado en espectrómetro de masas Voyager.
Tratamiento con IL-15 en ratones.
Se adquirieron ratones hembra C57BL/6 de seis semanas de vida a Charles River Laboratories, Inc. (Frederick, MD). Se les inyectaron IL-15 monomérica derivada de E. coli y heterodímeros de IL-15 purificados en una dosis de 3 gg de equivalente de IL-15/ratón por vía i.p. Se extrajeron muestras de sangre de los ratones en diferentes momentos después de la inyección de proteína, y se midieron los niveles séricos de IL-15 empleando un inmunoensayo quimioluminiscente para IL-15 humana (Quanti-Glo, R & D Systems).
Marcado de células con CFSE y transferencia adoptiva de células en ratones.
Para preparar suspensiones de células individuales, se exprimieron suavemente los bazos de ratones hembra C57BL/6 de 6 semanas de vida a través de un cedazo celular de 100 gm (Thomas) y se lavaron en medio RPMI 1640 (Invitrogen) para eliminar cualquier resto de estroma orgánico. Las células se incubaron durante 10 min a 37 °C con CFSE (2 gM; Molecular Probes) y se lavaron dos veces. Las células marcadas con CFSE (20 x 106) se volvieron a suspender en PBS y se inyectaron por vía i.v. en ratones congénicos. El tratamiento con IL-15 se realizó el día después de la inyección de células. El día 4, los ratones se sacrificaron y se les analizaron los esplenocitos por citometría de flujo multiparámetro para evaluar la bioactividad de IL-15. En resumen, las células se lavaron en tampón de FACS que contenía 0,2% de suero fetal bovino y se tiñeron con el conjunto de anticuerpos de rata anti-ratón conjugados siguiente: CD3-APCCy7, CD4-PerCP, CD8-Pacific Blue, NK1.1-PeCy7 o -APC (BD Biosciences). El porcentaje de células de la población original que se dividió en respuesta al tratamiento con IL-15 se calculó basándose en la intensidad de CFSE. Las muestras se adquirieron usando un citómetro de flujo FACSAria (BD Biosciences), y los datos se analizaron mediante el software FlowJo (Tree Star, San Carlos, CA). En algunos experimentos, a la tinción de la superficie de las células la siguió la tinción intracelular con anticuerpo Ki67 (BD Biosciences) para la detección de células proliferantes.
6.4.2. Resultados
Generación de líneas celulares humanas que producen altos niveles de IL-15/sIL-15Ra.
Como se trató antes, se generaron los vectores de combinación optimizados para la expresión coordinada de las dos cadenas de la citocina heterodimérica humana IL-15/IL-15Ra. Los rendimientos de IL-15 bioactiva secretada alcanzados con estos plásmidos fueron >1000 veces superiores en comparación con los ADNc de IL-15 tipo sILvestre (Bergamaschi et al., J. Biol. Chem., 2008, 283:4189-4199; Jalah et al., DNA Cell Biol., 2007, 26:827-840). Estos plásmidos se utILizaron para desarrollar líneas celulares HEK293 humanas estables clonales productoras de IL-15/sIL-15Ra. Se usaron los genes intactos de IL-15 e IL-15Ra para generar estas líneas celulares. El IL-15Ra unido a membrana está compuesto por 5 dominios, el dominio sushi responsable por la unión a IL-15, una región conectora, el dominio rico en Pro/Thr, el dominio transmembrana y la cola citoplasmática (Anderson et al., J. Biol. Chem., 1995, 270:29862-29869; Dubois et al., J. Biol. Chem., 1999, 274:26978-26984) (Fig. 20). después de la introducción estable de los genes en las líneas celulares HEK293, se obtuvo el heterodímero en el sobrenadante del cultivo en forma soluble, después del transporte del IL-15/IL-15Ra a la membrana plasmática y la escisión proteolítica de la parte extracelular de IL-15Ra por las enzimas celulares. La molécula de IL-15Ra madura, secretada, se describe en la Fig. 20. Los clones 19.7 y 1.5 se eligieron entre los mayores productores de heterodímeros de IL-15/sIL-15Ra. Ambos clones estables se cultivaron en cultivo continuo en medio sin suero, empleando un sistema de cultivo de fibra hueca, y los sobrenadantes se recogieron diariamente. El clon 19.7 produjo 70 mg de IL-15/Lote (calculado como monómero de IL-15 por ELISA) por hasta 5 meses (Fig. 21A). El análisis por HPLC en condiciones no reductoras de muestras semanales de los sobrenadantes producidos por el clon 19.7 recogidas desde el día 29 hasta el día 137 en el biorreactor, demostraron una producción estable del heterodímero de IL-15/sIL-15Ra durante este intervalo (Fig. 21B). Se obtuvieron resultados simILares para el clon 1.5. Estos resultados demostraron que se lograron altos niveles de producción de citocina IL-15/sIL-15Ra heterodimérica en líneas celulares humanas estables derivadas de HEK293. Se generó un vector de ADN que codifica la porción extracelular de IL-15Ra (sIL-15Ra truncado, que codifica el péptido señal y 175 aa del IL-15Ra maduro) (Bergamaschi et al., J. Biol. Chem., 2008, 283:4189-4199). Se estableció otra línea celular (clon 2.66) que produce los complejos IL-15/sIL-15Ra genotecnológicos después de la transferencia génica de los genes que codifican IL-15 y la forma truncada de sIL-15Ra. La secuencia
conocida del extremo C-terminal de sIL-15Ra truncado, generada a partir del clon 2.66 (Fig. 20) se usó como control para la identificación del sitio de escisión natural en IL-15Ra después de la expresión de la molécula de longitud completa en la membrana celular (véase más adelante).
Purificación de IL-15/sIL-15Ra por HPLC en condiciones no reductoras.
Se usó HPLC de fase inversa (RP-HPLC) para purificar el complejo en condiciones no reductoras lo que mantiene intactos los puentes disulfuro de las subunidades IL-15 y sIL-15Ra asociadas no covalentemente, pero disocia las subunidades entre sí. Las cadenas se purificaron y caracterizaron por separado y a continuación se volvieron a asociar in vitro en una relación molar 1:1, para regenerar la citocina heterodimérica intacta. El primer paso de purificación se realizó utILizando una columna Waters RCM de 25 x 100 mm mBondapak-C18, con las subunidades IL-15 y sIL-15Ra que se disocian en el tampón que contiene acetonitrILo utILizado para la separación. La Figura 22A muestra un perfIL de elución de RP-HPLC típico del heterodímero producido a partir del clon 19.7. El contenido de los picos de sIL-15Ra e IL-15 se analizó por SDS-PAGE (Fig. 22B) y las identidades de ambas proteínas se confirmaron por análisis de inmunotransferencia (que no se muestra). sIL-15Ra e IL-15 se eluyeron como picos anchos en varias fracciones (Fx), Fx 1-3 para IL-15Ra y Fx 4 13 para IL-15. Las comparaciones de las diferentes fracciones revelaron pequeñas diferencias en el tamaño entre las proteínas eluidas (Fig. 22), probablemente debido a diferencias en modificaciones postraduccionales (por ejemplo, glicosILación). Para lograr >95% de pureza para sIL-15Ra, se sometió una mezcla de Fx 1-3 a cromatografía en una columna de 16 x 100 mm POROS R2/10 (Fig. 23A y 23B). Las fracciones de Fx 4-13 que contenían IL-15 se volvieron a purificar en la misma columna (Fig. complementarias 23C y 23D). Todas las purificaciones se realizaron en condiciones no reductoras para mantener los puentes disulfuro naturales en ambas proteínas. Las mezclas finales de sIL-15Ra (Fig. 23A-B, Fx1-3) e IL-15 (Fig. 23C-D, Fx 2-5) se analizaron mediante secuenciación N-terminal de Edman y la cantidad de cada proteína se determinó por análisis cuantitativo de aminoácidos. La relación molar de las proteínas purificadas recuperadas de la separación por HPLC fue de aproximadamente 1:1. sIL-15Ra e IL-15 se mezclaron en cantidades molares equivalentes en PBS, se permitió que se volvieran a asociar y después se analizaron por PAGE nativa. Fig. 22C muestra sIL-15Ra (carrIL 1), IL-15 (carrIL 2) y complejo IL-15/sIL-15Ra (carrIL 3) visualizados mediante tinción con azul de Coomassie en condiciones no desnaturalizantes. No se detectaron bandas para IL-15 monocatenaria ni sIL-15Ra en el carrIL en que se cargó el heterodímero de IL-15/sIL-15Ra (Fig. 22C, carrIL 3), lo que indica una formación esencialmente cuantitativa del complejo IL-15/sIL-15Ra. En condiciones nativas, las tres especies moleculares sIL-15Ra, IL-15 y el heterodímero se detectaron como bandas difusas, probablemente debido a la heterogeneidad de la glicosILación en las células HEK293 humanas.
Determinación de la secuencia C-terminal de sIL-15Ra.
Para determinar la secuencia C-terminal de sIL-15Ra escindido naturalmente, se digirió sIL-15Ra purificado (del clon 19.7) con endoproteinasa Lys-C, generando péptidos adecuados para la secuenciación N-terminal y análisis de espectrometría de masas (MS). El sIL-15Ra truncado producido a partir del clon 2.66, también se purificó como se describió antes para el clon 19.7 y se usó como referencia dado que la secuencia de su extremo C-terminal era conocida. Los péptidos esperados después de la digestión con endoproteinasa Lys-C de sIL-15Ra_2.66 truncado se muestran en la Tabla 4. Los péptidos generados después de la digestión con Lys-C de sIL-15Ra_19.7 escindido naturalmente se separaron por RP-HPLC en condiciones no reductoras, generando una cantidad menor de péptidos para el análisis posterior. El péptido C-terminal produjo un pico ancho que eluyó pronto en RP-HPLC y se recogieron varias fracciones (Fig. 24, Fx 21-23). El análisis mediante secuenciación N-terminal de proteínas de la fracción 22 obtenida después de la proteólisis con Lys-C y RP-HPLC (Fig. 24) reveló 23 residuos de aminoácidos XIRDPALVHQRPAPPS(T)VXXAGV correspondientes a los residuos 63-85 del IL-15Ra maduro (residuos numerados de acuerdo con la secuencia AA madura) junto con WELXAXASHQPPGVYPQG de 19-mer, que corresponde a la secuencia después de Lys151 ,el último residuo de Lys antes del dominio transmembrana de IL-15Ra (Tabla 5). Esto sugirió que [M+H]+ del péptido C-terminal debería ser de al menos 2038,962 ([M+H]+ teórica del péptido nW e LTASASHQPpGv YPQG que se identificó mediante secuenciación N-terminal). El análisis de la fracción 22 por MALDI-TOF MS reveló la presencia de varios péptidos con [M+H]+ cercana a, o mayor de, 2038,962 Da (Fig. 25). Después del análisis de secuencia de proteína de la fracción 22 (NWELXAXASHQPPGVYPQG), no se detectaron los Thr5(156) y Ser7(158) esperados, mientras que se detectó Ser9(160). Esto sugiere que Thr5 y Ser7 fueron muy probablemente modificados, probablemente a través de O-glicosILación. El análisis de m/z 2020,927, 2056,934, 2308,082, 2365,108, 2455,138 y 2770,224 en modo MS/MS mostró espectros de fragmentación muy simILares en la región de masa baja (hasta 1225 Da), lo que sugiere que estos péptidos muy probablemente se derivaron de la misma secuencia peptídica pero presentan diferentes modificaciones postraduccionales. Los espectros de fragmentación de m/z 2020,927, 2056,943, 2365,108 y 2770,224 en modo MS/MS mostraron espectros de fragmentación muy simILares en la región de masa baja (hasta 1225 Da), lo que sugiere que esos péptidos se derivaron muy probablemente de la misma secuencia peptídica pero presentan diferentes modificaciones postraduccionales. Los espectros de fragmentación de m/z 2020,927, 2056,943, 2365,108 y 2770,224 y sus análisis se muestran en la Fig. 26. Puesto que la O-glicosILación fue muy probablemente en Thr5 y Ser7, podría esperarse la formación de iones b N-terminales e iones y C-terminales sin modificar que preceden a estos residuos, permitiendo potencialmente la identificación del péptido correspondiente utILizando la búsqueda Mascot de la base de datos de secuencias de proteínas (Matrix Science). En todos los casos (m/z 2020,927, 2056,934, 2308,082, 2365,108, 2455,138 y 2770,224), la búsqueda de iones Mascot MS/MS dio como resultado la identificación de la misma secuencia de IL-15Ra que se obtuvo por secuenciación de proteínas, confirmando que la secuencia NWELTASASHQPPGVYPQG corresponde
a todo el péptido C-terminal de sIL-15Ra_19.7 escindido naturalmente. Se realizó un análisis simILar en sIL-15Ra escindido naturalmente, purificado, del clon 1.5, que lleva a la misma conclusión. Considerados en conjunto, estos datos demuestran que la escisión proteolítica de IL-15Ra unido a membrana tiene lugar entre Gly170 e His171 en dos clones celulares diferentes. sIL-15Ra truncado, genotecnológico, producido a partir del clon 2.66 incluye 5 aminoácidos adicionales en el extremo C-terminal (Fig. 20).
Tabla 4: Péptidos teóricos después de la digestión con endoproteinasa Lys-C de sIL-15Ra truncado expresado y
Tabla 5: Análisis de secuencia de aminoácidos de los productos peptídicos eluidos en Fx 22 después de la digestión con endoproteinasa Lys-C de sIL-15Ra escindido naturalmente (del clon 19.7) y RP_HPLC.
Identificación de modificaciones postraduccionales de sIL-15Ra.
El análisis de sIL-15Ra escindido naturalmente, expresado a partir de líneas celulares humanas estables mediante MALDI-TOF MS reveló la presencia de numerosas modificaciones postraduccionales (Fig. 20). La masa molecular esperada de la cadena polipeptídica de sIL-15Ra (170 aa, residuos 31-200 de la proteína IL-15Ra) es de 17839,86 Da (Fig. 20). El análisis MALDI-TOF MS de sIL-15Ra purificado reveló un pico ancho con un centro en 34910 Da (Fig. 27), que implica que casi la mitad de su masa molecular se debe a modificaciones postraduccionales, muy probablemente O-y N-glicosILación. Un análisis detallado caracterizó la modificación postraduccional en la región C- y N-terminal de slL-15Ra escindido naturalmente. El péptido C-terminal con m/z 2020,927 (Fig. 25) fue de 18 Da menos que el péptido predicho NWELTASASHQPPGv Y pQG con m/z 2038,962, lo que indica pérdida de agua. Puesto que las O-glicosILaciones fueron las modificaciones probables en la región C-terminal de sIL-15Ra, es posible que 2020,927 sea el producto de la reacción de eliminación beta durante la proteólisis de sIL-15Ra purificado por digestión con Lys-C. Una reacción de eliminación beta en residuos Ser y Thr O-glicosILados llevaría a una pérdida de agua con formación de deshidroalanina y ácido deshidroaminobutírico, correspondientemente. Los péptidos con residuos de deshidro aminoácidos que contienen un doble enlace reactivo no son estables y reaccionan rápidamente con compuestos nucleofílicos disponibles. El péptido con m/z 2020,927 pareció ser estable y no reaccionó con 2-aminometanotiol lo que sugiere que su doble enlace reaccionó probablemente intramolecularmente con el grupo hidroxILo de un residuo Ser o Thr vecino. El espectro de ion fragmento del ion parental 2020,927 se muestra en la Fig. 26A. El péptido con m/z 2056,934 difiere de 2020,927 en 36 Da y la m/z representada del mismo péptido NWELTASASHQPPGVYpQg , que primero perdió agua debido a la eliminación beta y después añadió HCl al doble enlace de un deshidro aminoácido. El espectro de ion fragmento del ion parental 2056,934 se muestra en la Fig. 26B. El análisis de este espectro en BioTools con modificación (adición de cloro) en Thr5 y Ser7 sugirió que la O-glicosILación tuvo lugar en estos sitios con igual probabILidad. El análisis de espectros de iones fragmentos de los iones parentales 2308,082, 2365,108, 2455,138, y 2770,224 sugirió que tienen oligosacáridos enlazados a través de O unidos al péptido con m/z 2038,962 (Fig. 26C-D).
Una caracterización detallada de la región N-terminal de sIL-15Ra. Se realizó un MALDI-TOF MS/MS de m/z 1922,963 (Fig. 24; fracción 40) y se identificó el péptido N-terminal ITCPPPMSVEHADIWVK de sIL-15Ra. Sin embargo, m/z 2126,150 de la fracción 39 dio un espectro de ion fragmento simILar, lo que sugiere que ambos iones corresponden al mismo péptido. La búsqueda de ion Mascot MS/MS usando iones fragmentos derivados de 2126,150 cuando el ion parental se fijó como 1922,950 (correspondiente a la m/z teórica del péptido sin modificar) identificó con confianza la
misma secuencia ITCPPPMSVEHADIWVK (Fig. 29A). La diferencia de masa entre estas m/z es de 203,187, que es próxima a la masa de N-acetILhexosamina (HexNAc; N-acetILgalactosamina o N-acetILglucosamina). El análisis de los espectros con la modificación fijada en Ser8 (Fig. 29B) y Thr2 (Fig. 29C) sugirió que el residuo modificado era muy probablemente Ser8 dado que no se detectaron los iones b modificados esperados adicionales, cuando la modificación se fijó en Thr2. Hay varios residuos Ser en la secuencia N-terminal de IL15Ra más allá de Ser8. Para determinar si alguno de esos residuos también estaba modificado se analizó sIL-15Ra purificado mediante (ISD) MALDI-TOF MS. El espectro se analizó usando búsqueda Mascot de arriba a abajo de la base de datos humana Sprot, que permitió la identificación de la secuencia N-terminal de IL-15Ra maduro (Fig. 30A). El análisis del espectro confirmó que Ser8 es parcialmente modificado por N-acetILhexosamina (HexNAc) junto con Ser18, 20, 23 y 31 (Fig. 30B-F).
En conclusión, los datos mostraron que sIL-15Ra escindido naturalmente, producido a partir de células humanas es muy glicosILado con N- y O-glicosILaciones ambas en la región N- y C-terminal de la proteína (Fig. 20).
Determinación in vivo de la semivida de diferentes formas de IL-15:
El heterodímero de IL-15-IL-15/sIL-15Ra producido a partir de líneas celulares humanas conserva todas las modificaciones postraduccionales, como enlace disulfuro nativo y N- y O-glicosILaciones (Fig. 20). Estas modificaciones postraduccionales están ausentes en IL-15 monomérica derivada de E. coli (Vyas et al., Biotechnol. Prog., 2012, 28:497-507) y junto con la falta de la subunidad IL-15Ra podrían afectar la estabILidad, la farmacocinética y la bioactividad de la citocina IL-15.
Las cadenas de IL-15 e sIL-15Ra purificadas se reconstituyeron como se describió antes (Fig. 22C) y se usaron en experimentos in vivo para identificar sus propiedades farmacocinéticas y farmacodinámicas en comparación tanto con la IL-15 monocatenaria no glicosILada producida en E. coli y purificada por cromatografía convencional (Vyas et al., Biotechnol. Prog., 2012, 28:497-507) como con la IL-15 monocatenaria glicosILada producida por células HEK293 humanas y purificada como se describió antes (Fig. 22). Para evaluar la semivida in vivo de los heterodímeros de IL-15/sIL-15Ra en comparación con IL-15 monocatenaria, se inyectó a ratones (5/grupo) por vía intraperitoneal (i.p.) o bien 3 gg de IL-15 monocatenaria humana derivada de E. coli, o 3 gg de IL-15 monocatenaria derivada de células HEK293 humanas o una cantidad equimolar de IL-15/sIL-15Ra humano purificado (correspondiente a 3 gg del monómero de IL-15, clon 1.5 lote 1). Se obtuvieron muestras de suero en diferentes momentos después de la inyección y se midieron los niveles de IL-15 por ELISA (Fig. 28). Ambas IL-15 monocatenarias alcanzaron los niveles plasmáticos máximos 30 min después de la administración de la proteína (~70 ng/ml y ~25 ng/ml para la IL-15 derivada de E.coli y la derivada de células HEK293 humanas, respectivamente). La diferencia en los niveles plasmáticos de IL-15 entre estas dos preparaciones fue muy probablemente una consecuencia de la diferente capacidad de los anticuerpos de ELISA para detectar la IL-15 sin glicosILar y glicosILada (no se muestran los datos). En contraposición, la administración del heterodímero de IL-15/sIL-15Ra resultó en niveles máximos mayores de IL-152 h después de la inyección (~120 ng/ml). Las semividas de ambas preparaciones de IL-15 monocatenaria fueron simILares y menores de 30 min, en tanto que el heterodímero de IL-15/sIL-15Ra tuvo una semivida significativamente extendida (aproximadamente 4 horas) (Fig. 28). El área bajo la curva para el período de 24 h fue 20 veces mayor para el heterodímero, en comparación con cualquiera de las preparaciones de IL-15 monocatenaria. Se obtuvieron resultados simILares después de la administración i.v. o s.c. (no se muestran los datos). Las células humanas produjeron heterodímero de IL-15/sIL-15Ra por lo tanto tienen un perfIL farmacocinético favorable en el ratón en comparación con la IL-15 monocatenaria.
Bioactividad de IL-15/sIL-15Ra heterodimérico in vivo.
Se comparó la actividad biológica de las diferentes formas de IL-15 en ratones. Se transfirieron esplenocitos marcados con CFSE a ratones C57BL/6. Los ratones fueron tratados a continuación o bien con PBS, o con 3 gg de IL-15 monocatenaria derivada de E. coli o con cantidad equimolar de IL-15/sIL-15Ra. La proliferación de las células transferidas se evaluó 4 días después del tratamiento. El heterodímero de IL-15/sIL-15Ra indujo una proliferación mayor de linfocitos T dadores CD8+ (Fig. 21A, paneles superiores) y de linfocitos NK (Fig. 31A, paneles inferiores) en comparación con la IL-15 monocatenaria, con una frecuencia mayor de células en proliferación y más rondas de división celular. Después de la inyección de IL-15 monocatenaria, pocos linfocitos T CD8+ se dividieron una vez, mientras que el heterodímero de IL-15/sIL-15Ra indujo múltiples rondas de división, lo que resultó en un aumento significativo en la frecuencia de linfocitos T CD8+ en el bazo. Por lo tanto, el heterodímero de IL-15/sIL-15Ra fue más estable in vivo, tuvo una semivida sérica prolongada y fue más bioactivo en una base molar que la IL-15 monocatenaria. Los niveles séricos de IL-15 se correlacionaron con la actividad biológica, según se midió mediante la dILución de CFSE de las células transferidas (Fig. 31A). Aunque la proliferación general de linfocitos T CD4+ no cambió con la administración de IL-15, el análisis de los diferentes subconjuntos de linfocitos T memoria CD4+ mostró una expansión de los linfocitos memoria efectores (no se muestran los datos), como se informó previamente (Picker et al., J. Clin. Invest., 2006, 116:1514-1524). La mayor proliferación de linfocitos T CD8+ y linfocitos NK con la administración de IL-15 también se confirmó midiendo la frecuencia de células que expresan el marcador proliferativo Ki-67. Los ratones (5/grupo) recibieron inyecciones i.p. o bien de 3 gg de IL-15 monocatenaria humana derivada de E. coli, o 3 gg de IL-15 monocatenaria derivada de células HEK293 humanas o una cantidad equimolar de IL-15/sIL-15Ra humano purificado. El día 4 después de la administración de la proteína, todos los ratones tratados con IL-15 mostraron un aumento de la frecuencia de linfocitos T CD8+ y linfocitos NK Ki-67+ en comparación con los ratones tratados con PBS. Los heterodímeros de IL-15 indujeron una mayor proliferación de estos
subconjuntos de linfocitos en comparación con las preparaciones de IL-15 monocatenaria, que se caracterizaron por una bioactividad simILar de acuerdo con su perfIL farmacocinético simILar (Fig. 31B).
La bioactividad de las formulaciones de heterodímero de IL-15 fue semejante entre diferentes lotes de purificación. Los ratones recibieron inyecciones i.p. o i.v. de 3 pg de IL-15/sIL-15Ra humano de dos lotes de purificación diferentes y fueron sacrificados 3 días después de la inyección (Fig. 31C). La administración de IL-15/sIL-15Ra humano en ratones resultó en un aumento de la frecuencia de linfocitos de CD8+ proliferantes (definidos como Ki-67+) en comparación con los ratones sin tratar tanto después de la administración i.p. como i.v. No se observaron diferencias en la bioactividad (medida como la proliferación de linfocitos T CD8+) comparando los IL-15/sIL-15Ra obtenidos de diferentes lotes de producción/purificación (Fig. 31C).
6.4.3. Discusión
IL-15 es una citocina importante con potenciales aplicaciones clínicas como un factor de crecimiento y activación de los linfocitos (Waldmann et al., Nat. Rev. Immunol., 2006, 6:595-601). La IL-15 recombinante humana generada en E. co lise produjo como un monómero no glicosILado de ~12 kDa (Vyas et al., Biotechnol. Prog., 2012, 28:497-507). Se llevaron a cabo estudios preclínicos para evaluar la seguridad, la toxicidad, la farmacocinética y la farmacodinamia de IL-15 monomérica humana en macacos de la India, y mostraron aumento en el número absoluto y la proliferación de los linfocitos NK y T CD8+ (Berger et al., Blood, 2009, 114:2417-2426; Lugli et al., Blood, 2010, 116:3238-3248; Sneller et al., Blood, 2011, 118:6845-6848; Waldmann et al., Blood, 2011, 117:4787-4795). Si bien IL-15 monomérica producida en E. coli está en las etapas iniciales de la evaluación clínica, esta forma de la molécula posee múltiples desafíos para el uso clínico debido a la inestabILidad y la rápida depuración plasmática (Sneller et al., Blood, 2011, 118:6845-6848; Waldmann et al., Blood, 2011, 117:4787-4795). La expresión de IL-15 está estrechamente regulada a nivel de la transcripción, así como en varios pasos postranscripción y postraducción como estabILidad del ARNm, generación de isoformas empalmadas alternativas, tráfico intracelular, interacción con IL-15Ra y secreción (Bergamaschi et al., J. Immunol., 2009, 183:3064-3072; Bergamaschi et al., J. Biol. Chem., 2008, 283:4189-4199; Mortier et al., J. Exp. Med., 2008, 205:1213-1225; Bamford et al., J. Immunol., 1998, 160:4418-4426; Onu et al., J. Immunol., 1997, 158:255-262; Tagaya et al., Immunity, 1996, 4:329-336; Tagaya et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1997, 94:14444-14449; Waldmann et al., Annu. Rev. Immunol., 1999, 17:19-49; Duitman et al., Mol. Cell. Biol., 2008, 28:4851-4861).
En el estudio presentado en este ejemplo, se empleó un enfoque sistemático para reproducir en células humanas genomanipuladas los pasos naturales de producción y procesamiento de heterodímeros de IL-15/sIL-15Ra, lo que resultó en la producción y purificación eficientes de la citocina heterodimérica IL-15 bioactiva, que parece tener importantes ventajas potenciales respecto a la forma monomérica de la molécula producida en procariotas. Tomando ventaja de la estabILización de IL-15 mediante la coexpresión con IL-15Ra (Bergamaschi et al., J. Biol. Chem., 2008, 283:4189-4199), se produjeron vectores de combinación en el estudio presentado en este ejemplo que expresan la citocina heterodimérica IL-15/IL-15Ra, proporcionando fuertes mejoras en el rendimiento (Bergamaschi et al., J. Immunol., 2009, 183:3064-3072; Bergamaschi et al., J. Biol. Chem., 2008, 283:4189-4199). Este ejemplo muestra además que los vectores producidos fueron utILizados para desarrollar células HEK293 humanas clonales estables que se cultivan en medio sin suero y expresan y secretan altos niveles de complejos IL-15/sIL-15Ra humanos (hasta 70 mg de IL-15/Lote). Por lo tanto, se desarrolló un procedimiento eficiente para la purificación de heterodímeros de IL-15/sIL-15Ra biológicamente activos basado en RP-HPLC no reductora. Las cadenas IL-15 y sIL-15Ra de la citocina heterodimérica IL-15 están unidas no covalentemente y se pueden separar bajo ciertas condiciones, como pH < 3,5 (Dubois et al., Immunity, 2002, 17:537-547). Esto permitió a los inventores producir preparaciones puras de IL-15 y sIL-15Ra monocatenarios como se muestra en este ejemplo. Cabe destacar que la RP-HPLC se realizó en condiciones no reductoras, evitando la necesidad de repliegue de la proteína después de la purificación. Dado que Kd de las dos cadenas es ~10-11 M (Anderson et al., J. Biol. Chem., 1995, 270:29862-29869; Giri et al., Embo. J., 1995, 14:3654-3663), las subunidades de IL-15 y sIL-15Ra purificadas se pueden recombinar in vitro en una relación molar de 1:1 en PBS permitiendo la asociación espontánea para formar la citocina heterodimérica bioactiva. IL-15 se estabILiza en presencia de IL-15Ra, y la generación de IL-15 como citocina heterodimérica tiene el beneficio adicional de una estructura más estable, evitando la desnaturalización y la inactivación y disminuyendo la posibILidad de creación de formas inmunógenas.
Las células HEK293 humanas producen la citocina heterodimérica IL-15/sIL-15Ra humana, correctamente plegada, procesada y glicosILada. Ambas subunidades, IL-15 y sIL-15Ra, de la citocina heterodimérica contienen enlaces disulfuro intramoleculares y están fuertemente glicosILadas (Fig. 20). IL-15 tiene tres posibles sitios de N- glicosILación (Kurys et al., J. Biol. Chem., 2000, 275:30653-30659). De conformidad con publicaciones previas (Dubois et al., J. Biol. Chem., 1999, 274:26978-26984), los datos presentados en este ejemplo muestran que sIL-15Ra contiene carbohidratos unidos mediante N- y O- tanto en la parte N- como en la parte C- de la molécula. Varios estudios demostraron la contribución de la glicosILación al efecto de otras citocinas y factores de crecimiento (por revisiones (Sola et al., J. Pharm. Sci., 2009, 98:1223-1245; Chamorey et al., Eur. Cytokine Netw., 2002, 13:154-160)). El interferón-p glicosILado (Karpusas et al., Cell. Mol. Life Sci., 1998, 54:1203-1216), la eritropoyetina (Takeuchi et al., Glycobiology, 1991, 1:337-346; Gribben et al., Lancet, 1990, 335:434-437), el factor estimulante de colonias de granulocitos (Querol et al., Haematologica, 1999, 84:493-498) e IL-7 (Beq et al., Blood, 2009, 114:816-825) son más estables y bioactivos en comparación con las formas no glicosILadas. También se ha informado que la glicosILación afecta la interacción con receptores específicos, por ejemplo IL-7 fue capaz de unirse a IL-7Ra glicosILado 300 veces más fuerte que a IL-7Ra no glicosILado (McElroy et al., Structure,
2009, 17:54-65). Además, la producción de factores para uso clínico en células humanas puede reducir el riesgo de inmunogenia. La administración del factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos humano se asoció al desarrollo de anticuerpos contra la proteína recombinante. Se encontró que estos anticuerpos reaccionan contra sitios de la proteína que están normalmente protegidos por carbohidratos unidos mediante O (Gribben et al., Lancet, 1990, 335:434-437). Análogamente, la administración de IL-7 humana derivada de E. coli en humanos indujo anticuerpos contra la proteína recombinante (Rosenberg et al., J. Immunother., 2006, 29:313-319), mientras que no se encontraron anticuerpos anti-IL-7 que utILizaran la citocina glicosILada (CYT107) (Perales et al., Blood, 2012, 120:4882-4891). La inmunogenia de IL-15 monocatenaria humana derivada de E. coli fue informada en macacos en los que se observó desarrollo de anticuerpos anti-IL-15 después de la administración s.c. (Sneller et al., Blood, 2011, 118:6845-6848).
En este ejemplo, se investigaron las propiedades farmacocinéticas y farmacodinámicas de los heterodímeros de IL-15 humana glicosILados y purificados, en ratones. En comparación con la IL-15 monocatenaria producida tanto en E. coli como en células HEK-293 humanas, los complejos IL-15/sIL-15Ra mostraron una semivida sérica más prolongada y fueron más bioactivos en una base molar (véanse los datos antes). La bioactividad superior de IL-15 en la formulación heterodimérica es principalmente el resultado de la presencia de IL-15Ra que contribuye a la mayor estabILidad de la proteína in vivo. Estas propiedades ofrecen el potencial para permitir la dosificación menor y menos frecuente, y métodos de administración más simples, con mayor conveniencia tanto para los pacientes como para quienes los cuidan.
Se han comunicado las estructuras cristalinas del heterodímero de IL-15/IL-15Ra y del complejo cuaternario IL-15/IL-15Ra/IL-2Rp-Yc (Chirifu et al., 2007, Nat Immunol. 8:1001-1007; Ring et al., 2012, Nat Immunol 13:1187-1195). En estos artículos, los autores describieron en detalle los aminoácidos y los dominios involucrados en la unión entre subunidades. Cabe destacar que IL-15 tiene dos sitios de unión diferentes, el sitio I para la unión a IL-2Rp y el sitio II para la unión a yc. En contraposición, IL-15Ra no contacta a IL-2Rp, con una distancia >15Á que separa las subunidades en su punto más cercano. También se ha informado que el heterodímero de IL-15/IL-15Ra se une a IL-2Rp con una afinidad de aproximadamente 150 veces mayor que la de la IL-15 monocatenaria, lo que sugiere que la estabILización de IL-15 es una función principal de IL-15Ra (Ring et al., 2012, Nat Immunol 13:1187-1195).
Se ha informado previamente de la producción y purificación de IL-15 asociada con el dominio sushi de IL-15Ra unido a la región Fc de IgG1 (Han et al., Cytokine, 2011,56:804-810). Sin embargo, el IL-15/sIL-15Ra auténticamente procesado y glicosILado, como lo produjeron y purificaron los inventores y se muestra en este ejemplo, tiene la ventaja de ser el más parecido a la IL-15 producida en el cuerpo humano y que circula en el plasma (Bergamaschi et al., Blood, 2012, 120:e1-8) y puede ser la forma menos inmunógena.
La disponibILidad de sIL-15Ra escindido naturalmente, purificado, permitió una investigación sobre el procesamiento y el desprendimiento de IL-15Ra de la superficie celular. Los datos provistos en este ejemplo demuestran los resultados del análisis MALDI-TOF MS, en donde la secuenciación de proteínas y las búsquedas Mascot de las bases de datos de secuencias de proteínas identificaron con confianza el sitio de escisión proteolítica de IL-15Ra unido a membrana, entre Gly170 e His171 de la forma madura, asociada a membrana de IL-15Ra (Fig. 20). La determinación por los inventores de la secuencia correspondiente al sitio de escisión de IL-15Ra y la secuencia de aminoácidos del sIL-15Ra maduro, representa un hallazgo importante para determinar la regulación del proceso. El desprendimiento desregulado de los heterodímeros de IL-15/IL-15Ra de la superficie celular, puede ser un mecanismo que conduzca a los niveles alterados de IL-15 circulante en ciertas condiciones, es decir tratamientos que reducen los linfocitos (Bergamaschi et al., Blood, 2012, 120:e1-8; Dudley et al., J. Clin. Oncol., 2008, 26:5233-5239) y enfermedades autoinmunitarias, como enfermedad celíaca (DePaolo et al., Nature, 2011, 471:220-224), artritis reumatoide (Gonzalez-Alvaro et al., Clin. Exp. Rheumatol., 2003, 21:639-642) y esclerosis múltiple (Rentzos et al., J. Neurol. Sci., 2006, 241:25-29).
En resumen, el estudio presentado en este ejemplo demuestra que se puede lograr la producción de alto nivel en células humanas de heterodímeros de IL-15/sIL-15Ra humanos, procesados y glicosILados auténticamente y que la RP-HPLC en condiciones no reductoras permite la purificación de heterodímeros biológicamente activos, evitando el repliegue de la proteína. Los heterodímeros de IL-15 glicosILado purificados, tienen la ventaja de aumentar la estabILidad y la bioactividad in vivo y por lo tanto, pueden ser utILizados de manera ventajosa para aplicaciones terapéuticas.
6.5. Ejemplo 5. Estudio que evalúa la toxicidad, los niveles plasmáticos de IL-15 y los parámetros inmunológicos después de invecciones subcutáneas repetidas de IL-15/sIL-15Ra en macacos de la India.
Este estudio se realizó para evaluar la toxicidad, la inmunogenia y los efectos sobre la homeostasis del sistema inmunitario de IL-15/sIL-15Ra humano, después de inyecciones repetidas. Como se indica en la Tabla 6, el Grupo 1 incluyó 8 macacos de la India que recibieron 6 inyecciones s.c. de IL-15/sIL-15Ra en una dosis de 5 pg/kg los días 0, 2, 4, 7, 9 y 11. El Grupo 2 incluyó 8 macacos de la India que sirvieron como controles (que recibieron 6 inyecciones s.c. de solución salina los mismos días). Ambos grupos se sometieron a un segundo ciclo de tratamiento idéntico al primero. Este segundo ciclo se llevó adelante 4 semanas después del inicio del primer ciclo. Ocho macacos (4/grupo) se sacrificaron el día 41/42 (inmediatamente después de la finalización del segundo tratamiento); los macacos restantes se sacrificaron el día 73/74 (5 semanas después de la última inyección de heterodímero de IL-15).
Tabla 6. Diseño del estudio para evaluar la toxicidad, la inmunogenia y los efectos inmunológicos del heterodímero de IL-15/IL-15Ra des ués de in ecciones s.c. re etidas.
Los animales incluidos en los estudios se examinaron en diferentes momentos respecto a la toxicidad clínica, se les realizaron análisis clínicos bioquímicos y hematológicos, y se les evaluaron los parámetros inmunológicos como consecuencia de las administraciones de IL-15/IL-15Ra. También se controlaron en los animales los valores séricos siguientes: glucosa, nitrógeno ureico en sangre, creatinina, proteína total, albúmina, bILirrubina, fosfatasa alcalina, transaminasa alcalina, aminotransferasa, colesterol, calcio, fosfato, sodio, potasio, cloruro, globulina, creatina fosfocinasa, y los parámetros hematológicos siguientes: hemoglobina, hematocrito, GB, GR, volumen corpuscular medio, hemoglobina corpuscular media, concentración de hemoglobina corpuscular media, plaquetas, neutrófILos, linfocitos, monocitos, eosinófILos y basófILos.
Los macacos se sedaron y recibieron IL-15/sIL-15Ra (5 pg/kg) en 0,5 ml de solución salina o solución salina por vía s.c. Se siguieron en el tiempo la tensión arterial y la temperatura. No se observaron cambios en la tensión arterial ni la temperatura de los animales. Todos los animales salieron de la anestesia 1 hora después de las inyecciones y se recuperaron normalmente. Se les extrajo sangre 0, 6, 8, 12 y 24 horas después de la primera y la última inyecciones s.c. para cada tratamiento y 0, 6 y 24 horas después de todas las otras inyecciones. Se evaluó la concentración de IL-15 humana en el plasma de los macacos utILizando un inmunoensayo quimioluminiscente (Quantiglo Q1500B, R&D Systems), de acuerdo con las recomendaciones del fabricante. Los resultados se presentan en las Figuras 32 y 33. La Figura 32 muestra la temperatura corporal y la tensión arterial media en 8 macacos que recibieron inyecciones de heterodímero de IL-15 vs controles. La Figura 33 muestra los niveles plasmáticos de IL-15 durante los dos tratamientos en 8 macacos que recibieron inyecciones de heterodímero de IL-15. Como se muestra en la Figura 32 con una dosis de 5 pg/kg no hay prácticamente cambios en la tensión arterial ni la temperatura corporal de los macacos que recibieron inyecciones s.c. con respecto a los controles. El análisis de las muestras de sangre de los 8 macacos que recibieron heterodímero de IL-15/sIL-15Ra mostró que los niveles plasmáticos de IL-15 durante los dos tratamientos fueron simILares, con excepción del valor nadir después de la primera inyección, que fue el único punto estadísticamente diferente entre los tratamientos uno y dos (Figura 33). Durante ambos tratamientos, el valor nadir de IL-15 plasmática después de la primera inyección fue incluso mayor que los valores nadir observados después de las inyecciones subsiguientes, que fueron simILares a los niveles normales. Los valores nadir decrecientes se pueden atribuir al mayor consumo de IL-15 circulante después de inyecciones repetidas, que a su vez refleja la dinámica de expansión de las poblaciones diana de IL-15 como los linfocitos T y NK CD8+. Es interesante observar que los linfocitos NK comenzaron a proliferar más temprano durante el segundo tratamiento (tan pronto como el día 2), lo que sugiere que los linfocitos NK pueden estar en en un diferente estado de activación con respecto a su capacidad para responder a IL-15.
Se controlaron y evaluaron el hemograma y los subconjuntos de linfocitos de todos los animales, antes, durante y después de la administración del heterodímero de IL-15. Se tomaron muestras de células mononucleares de sangre periférica de los macacos antes, durante y después de la administración del heterodímero de IL-15 y se tiñeron con anticuerpos que se unían a CD3, CD4, CD8 y CD16, y se examinaron por citometría de flujo. Los resultados se presentan en la Figura 34. Los datos para los linfocitos T CD3+CD8+ (Figura 34A) y los linfocitos NK CD3-CD16+CD8+ (Figura 34B) se muestran como el número absoluto de linfocitos de cada subconjunto por pl de sangre en los tiempos indicados. Durante el primer tratamiento, la administración del heterodímero de IL-15 dio como resultado una disminución transitoria en el recuento absoluto de linfocitos T CD8+ y linfocitos NK CD8+ el día 2, seguido de una expansión dirigida por IL-15 de estos subconjuntos. Los recuentos absolutos de linfocitos T CD8+ y linfocitos NK CD8+ fueron máximos el día 7 y declinaron a los niveles basales hacia el día 14. No se observaron cambios significativos en los animales de control, con excepción de una leve disminución en el recuento de linfocitos T CD8+ el día 2. Durante el segundo tratamiento, no se observaron cambios en el recuento absoluto de linfocitos T CD8+ lo que sugiere una posible migración a la periferia en respuesta a IL-15. Los recuentos absolutos de linfocitos NK CD8+ aumentaron el día 7 después de la iniciación del segundo tratamiento hasta niveles simILares a los obtenidos durante el primer tratamiento pero no se observó linfopenia el día 2 durante el segundo tratamiento. La Figura 34 muestra que la administración repetida de heterodímeros de IL-15 expande los linfocitos NK y T CD8.
También se midió la relación de linfocitos T CD8/CD4 en la sangre así como en diferentes tejidos los días de las autopsias (días 41/42 y 73/74). Los resultados se presentan en la Figura 35. La relación CD8/CD4 en la sangre de los macacos tratados con el heterodímero de IL-15 fue simILar a la observada en los animales de control, lo que sugiere que la sangre puede no ser el lugar ideal para observar los efectos biológicos inducidos por IL-15. Inmediatamente después de la finalización del segundo conjunto de seis inyecciones, los macacos tratados con el heterodímero de IL-15 mostraron una
relación CD8/CD4 invertida en comparación con los controles tanto en el bazo como en la médula ósea, muy probablemente debido a la proliferación de linfocitos CD8. Sin embargo, un mes después de la finalización del tratamiento, la relación se normalizó en ambos tejidos. Es interesante tener en cuenta que la inversión de la relación CD8/CD4 se observó en los ganglios linfáticos inguinales y se mantuvo en ambos tiempos de determinación, de acuerdo con los datos publicados (Lugli et al. Blood 2010:116:3238).
La bioactividad de IL-15 también se evaluó a través del análisis de la proliferación de los linfocitos en sangre y en tejidos. El tratamiento con IL-15 heterodimérica indujo una gran expansión de linfocitos T CD8+, gamma/delta TCR y linfocitos NK.
Se puede concluir que 12 inyecciones s.c. de IL-15/sIL-15Ra en una dosis de 5 pg/kg son bien toleradas en macacos. Los datos indican que no hay acumulación de IL-15 y no hay evidencia de toxicidad adicional con la repetición de un segundo ciclo de administración de 2 semanas.
6.6. Ejemplo 6. Estudio que evalúa la toxicidad, los niveles plasmáticos de IL-15 y los parámetros inmunológicos en macacos de la India después de invecciones subcutáneas de IL-15/sIL-15Ra en dosis crecientes.
Este ejemplo describe un estudio de dosis crecientes realizado para evaluar la toxicidad, la inmunogenia y los efectos sobre la homeostasis del sistema inmunitario de IL-15/sIL-15Ra humano, después de inyecciones subcutáneas. Como se indica en la Tabla 7, el Grupo 1 incluyó 2 macacos de la India que recibieron 6 inyecciones s.c. de IL-15/IL-15Ra soluble en una dosis de 1 pg/kg los días 0, 2, 4, 7, 9 y 11. El Grupo 2 incluyó 2 macacos de la India que recibieron 6 inyecciones s.c. de IL-15/sIL-15Ra en la dosis de 20 pg/kg los días 0, 2, 4, 7, 9 y 11. El Grupo 3 incluyó 2 macacos de la India que recibieron 6 inyecciones s.c. de IL-15/ IL-15Ra soluble en la dosis de 50 pg/kg los días 0, 2, 4, 7, 9 y 11.
Tabla 7. Diseño del estudio para evaluar la toxicidad, la inmunogenia y los efectos inmunológicos del heterodímero de IL-15/IL-15Ra des ués de in ecciones s.c. re etidas.
Se sedaron 6 macacos y recibieron IL-15/sIL-15Ra (2 animales/dosis) en 0,5 ml de solución salina (PBS) por vía s.c. Se siguieron en el tiempo la tensión arterial y la temperatura. No se observaron cambios en la tensión arterial ni la temperatura de los animales, con la excepción siguiente: un animal (P995) que estaba recibiendo 50 pg/kg tuvo temperatura elevada después de la tercera inyección, que alcanzó los 105 °F (40,6 °C) a las 6 horas postratamiento y se mantuvo elevada a 104 °F (40 °C) después de 24 horas. Todos los animales salieron de la anestesia 1 hora después de las inyecciones y se recuperaron normalmente.
Se les extrajo sangre 0, 6, 8, 12 y 24 horas después de la primera y la última inyecciones s.c. y 0 y 6 horas después de la segunda, la tercera y la cuarta inyecciones s.c. Se evaluó la concentración de IL-15 humana en el plasma de los macacos utILizando un inmunoensayo colorimétrico (Quantikine IL-15 humana, R&D Systems), de acuerdo con las recomendaciones del fabricante. Los resultados se presentan en la Tabla 8 y la Figura 36. La Figura 36 muestra los niveles plasmáticos de IL-15 en 6 macacos que recibieron inyecciones del heterodímero de IL-15 en dosis crecientes.
Tabla 8. Niveles plasmáticos de IL-15 en 6 macacos que recibieron inyecciones de heterodímero de IL-15 en dosis crecientes de 1 pg/kg, 20 pg/kg y 50 pg/kg.
Se controlaron y evaluaron el hemograma y los subconjuntos de linfocitos de todos los animales, antes, durante y después de la administración del heterodímero de IL-15. Se tomaron muestras de células mononucleares de sangre periférica de los macacos antes, durante y después de la administración del heterodímero de IL-15 y se tiñeron con anticuerpos que se unían a CD3, CD4, CD8 y CD16, y se examinaron por citometría de flujo. Los resultados se presentan en la Figura 37. Todas las dosis del heterodímero de IL-15 dieron como resultado un aumento de 4 a 8 veces en el recuento absoluto de linfocitos NK que fue máximo entre el día 7 y 14 después del inicio del tratamiento. Estos resultados sugieren que los linfocitos NK responden a un nivel menor de IL-15, e incluso una dosis de 1 pg/kg es suficiente para inducir una marcada expansión. El recuento absoluto de linfocitos T CD8+ en sangre periférica también aumentó, pero de manera dependiente de la dosis. La dosis más alta de IL-15 que dio como resultado niveles plasmáticos máximos de más de 10 ng/ml mostró un aumento de 10 veces en los recuentos absolutos de linfocitos T CD8. La Figura 37 muestra el aumento sobre el valor inicial de linfocitos NK y linfocitos T CD8 en sangre periférica de 6 macacos que recibieron inyecciones de heterodímero IL-15 en dosis crecientes de 1 pg/kg, 20 pg/kg y 50 pg/kg.
Los animales se sacrificaron el día 14 después de la primera inyección (3 días después de la última inyección) y se les practicó un análisis inmunofenotípico en diferentes tejidos. Los resultados se presentan en la Figura 38. La Figura 38 muestra la proliferación de linfocitos dependiente de la dosis en diferentes tejidos, después de la administración s.c. del heterodímero de IL-15. El tratamiento con el heterodímero de IL-15 dio como resultado una gran expansión de linfocitos CD8, NK y linfocitos T gamma/delta TCR en los ganglios linfáticos, la sangre periférica, el hígado y el bazo. En todos los tejidos analizados, todos los subconjuntos de linfocitos respondieron a IL-15 de manera dependiente de la dosis (Figura 38).
El aumento de la dosis utILizando 1,5, 20 y 50 pg/kg por vía s.c. de IL-15 heterodimérica, mostró que IL-15 heterodimérica es bien tolerada en los macacos y no se observaron efectos secundarios importantes. Uno de los dos macacos que recibieron dosis de 50 pg/kg del heterodímero de IL-15 presentó ganglios linfáticos agrandados (axILares y mesentéricos) en la autopsia.
6.7. Ejemplo 7: Estudio que evalúa la eficacia de complejos IL-15/IL-15Ra para tratar el melanoma
Este ejemplo demuestra la eficacia de complejos IL-15/IL-15Ra para la prevención y el tratamiento del melanoma.
Métodos: Se distribuyeron al azar ratones (8-12 semanas de vida, hembras) en tres grupos de 10 animales. Se les inyectaron por vía i.v. 105 células B16 de melanoma en 0,2 ml de PBS. Los tratamientos se realizaron los días 1, 6 y 11 mediante inyecciones i.p. de PBS, 9 mcg de IL-15/IL-15Ra soluble humano purificado (relación molar 1:1), o 9 mcg de IL-15 humana (derivada de E. coli). Los ratones se sacrificaron el día 21 después de la inyección de las células tumorales y se puntuaron en función de la presencia de nódulos tumorales en los pulmones.
Resultados: Los ratones tratados con PBS presentaron numerosas masas de melanoma pulmonar grandes, mientras que los ratones tratados con IL-15 se caracterizaron por un número significativamente menor de nódulos pulmonares (Figura 39, p = 0,003 Anova). Se administraron por vía i.p. diferentes formulaciones de IL-15, como se indica en el gráfico, los días 1,6 y 11 después de la inyección i.v. de 105 células B16 de melanoma. Los ratones se sacrificaron el día 21 después de la inyección de las células y se puntuaron en función de la presencia de nódulos tumorales en los pulmones. Los resultados se muestran en la Figura 39, más adelante. Los resultados que se muestran en la Figura 39, indican un potencial valor terapéutico de los heterodímeros de IL-15/IL-15Ra soluble para prevenir el injerto de tumor.
6.8. Ejemplo 8: Estudio que evalúa la eficacia de complejos IL-15/IL-15Ra para tratar el cáncer de colon
Este ejemplo demuestra la eficacia de complejos IL-15/IL-15Ra para la prevención y el tratamiento del cáncer de colon.
Se utILizó un modelo de cáncer de colon de ratón establecido para estudiar los efectos de IL-15/IL-15Ra sobre la terapia del tumor. La Figura 40, más adelante, muestra que los ratones de tipo sILvestre y deficientes en IL-15 (IL-15-/-) (C57BL/6) que recibieron inyecciones de células MC38 de carcinoma de colon presentaron tumores en 20 días, haciéndolo más rápidamente los ratones deficientes en IL-15 que los de tipo sILvestre. Estos resultados apoyan un mecanismo de control del tumor al menos parcialmente dependiente de IL-15.
Se evaluó la eficacia de dos formulaciones diferentes de IL-15, IL-15 monocatenaria derivada de E. co livs IL-15/IL-15Ra soluble heterodimérico derivado de células HEK293, para retrasar el desarrollo del tumor utILizando las inyecciones s.c. anteriores de carcinoma de colon MC38 de ratón.
Métodos: Los ratones C57BL/6 de tipo sILvestre recibieron inyecciones s.c. de células MC38 de cáncer de colon, y se trataron con formas diferentes de IL-15 una semana más tarde. Los ratones recibieron 10 inyecciones i.p. diarias de 3 mcg de IL-15/dosis.
Resultados: Los datos demuestran la eficacia de IL-15 monocatenaria para retrasar el crecimiento del tumor MC38. Los datos también demuestran que los heterodímeros de IL-15/IL-15Ra reducen significativamente la carga tumoral en ratones que tienen un tumor MC38 (Figura 41). Se obtuvieron resultados simILares cuando el tratamiento se redujo a 5 inyecciones i.p. diarias de 3 mcg de IL-15/dosis. Posiblemente debido a su diferente estabILidad en los ratones, las formas de IL-15 se asociaron con diferentes toxicidades. En particular, pérdida de peso y caquexia se asociaron con más de 5 administraciones diarias repetidas de IL-15/IL-15Ra soluble. La pérdida de peso fue reversible, y los ratones se recuperaron después de la interrupción del tratamiento con IL-15.
Los resultados que se muestran en la Figura 41, indican un potencial beneficio terapéutico de los heterodímeros de IL-15/IL-15Ra soluble para retrasar el crecimiento del tumor. La vía de administración (10 inyecciones i.p. diarias) y dosis de 3 mcg por ratón (equivalentes a 150 mcg/kg) fueron factores significativos en la pérdida de peso.
6.9. Ejemplo 9. Un estudio de fase 1 de IL-15/sIL15Ra recombinante humano por vía subcutánea en adultos con cánceres metastásicos
Este ejemplo describe un estudio para determinar la seguridad, el perfIL de toxicidad, la toxicidad limitante de la dosis (TLD) y la dosis máxima tolerada (DMT) por vía s.c de IL-15 heterodimérica (IL-15/sIL-15Ra heterodimérico recombinante producido en células HEK293 humanas) administrada a pacientes humanos con cánceres metastásicos que no se pueden extirpar para los cuales no existen medidas curativas o paliativas o no están asociadas a una ventaja de supervivencia. El estudio también puede: (i) determinar la farmacocinética del heterodímero de IL-15; (ii) caracterizar los efectos biológicos de la IL-15 heterodimérica sobre los porcentajes y los números absolutos de conjuntos de linfocitos circulantes y subconjuntos de linfocitos T (incluidos los subconjuntos de vírgenes, memorias centrales y/o memoria efectores) basándose en la expresión de marcadores, como Cd 56, CD4, CD8, CD45RO, CD45RA, CD28, CD95, CCR7 y CD62L, mediante citometría de flujo; (iii) caracterizar los niveles plasmáticos de citocinas proinflamatorias; (iv) evaluar la potencial actividad antitumoral del heterodímero de IL15 por vía s.c., evaluando, por ejemplo la tasa de respuesta clínica y el tiempo hasta el empeoramiento; y/o (v) evaluar la naturaleza de la infILtración de linfocitos T y la expresión de genes inmunitarios mediante, por ejemplo, análisis de biopsias con aguja fina pre y postratamiento obtenidas de los pacientes con depósitos tumorales fácILmente accesibles.
Los pacientes humanos elegidos para la inclusión en el estudio cumplen todos los criterios siguientes:
• Edad > 18 años.
• Los pacientes tienen un tumor sólido maligno confirmado histológicamente (por el departamento de patología de NCI) que es metastásico o no se puede extirpar y para el cual no existen medidas curativas o paliativas estándar o están asociadas a un beneficio de supervivencia mínima del paciente (según definen el paciente y/o los médicos del estudio). Se promueve la inclusión de pacientes que tienen tumores a los que se les puedan realizar biopsias de forma segura.
Además, los pacientes humanos elegidos para la inclusión en el estudio también pueden cumplir uno o más, o todos los criterios siguientes.
• Pacientes que tienen una enfermedad evaluable o medible, definida como al menos una lesión que se puede medir con precisión en al menos una dimensión (diámetro mayor para ser registrado para lesiones no nodulares y eje menor para lesiones nodulares) como >20 mm con técnicas convencionales o como > 10 mm con escaneo con tomografía computada en espiral.
• Pacientes que se han recuperado hasta < grado 1 CTCAEv4 de la toxicidad de una quimioterapia o terapia biológica previa y no deben haber recibido una quimioterapia ni terapia biológica previa en las últimas 4 semanas (6 semanas para nitrosoureas o mitomicina C, 8 semanas para UCN-01).
• Ha transcurrido al menos 1 mes desde que el paciente recibió cualquier tipo de radiación o cirugía mayor previa.
• DLCO/VA y FEV-1.0 > 50% de las previstas en pruebas de función pulmonar.
• Creatinina sérica < 1,5 X el límite superior del intervalo normal.
• AST y ALT < 2,5 x el límite superior del intervalo normal.
• Recuento absoluto de neutrófILos > 1500/mm3 y plaquetas > 100.000/mm3.
• Índice de Karnofsky > 70% o ECOG < 1
• Metástasis en SNC: Son elegibles los pacientes que permanecen asintomáticos después de un tratamiento definitivo exitoso de metástasis cerebrales (es decir, extirpación quirúrgica, irradiación curativa de todo el cerebro, radioterapia estereotáctica, o una combinación de estas) que demuestran un aspecto radiográfico estable o mejorado en el escaneo por resonancia magnética al menos 3 meses después de completado el tratamiento sin signos de edema cerebral.
Los pacientes que cumplen uno o más, o todos los criterios siguientes no pueden ser elegidos como pacientes para el estudio:
• Pacientes que hayan recibido alguna terapia con corticoesteroides sistémicos dentro de las 3 semanas previas al comienzo del estudio.
• Pacientes que hayan recibido alguna terapia citotóxica, inmunoterapia, vacunas antitumorales o anticuerpos monoclonales en las 4 semanas previas al comienzo del estudio.
• Pacientes con una expectativa de vida menor de 3 meses.
• Pacientes con VIH documentado, infecciones bacterianas activas, hepatitis B activa o crónica, hepatitis C o infección por VLHT-I.
• Pacientes con una serología positiva para hepatitis B indicativa de inmunización previa (es decir, HBsAb positivo y HBc Ab negativo), o una infección aguda de hepatitis B completamente resuelta no es un criterio de exclusión.
• Pacientes con serología positiva para hepatitis C.
• Pacientes que reciben terapia antineoplásica concomitante (que incluye, por ejemplo, inmunoterapia, terapia inmunosupresora, radioterapia, quimioterapia, corticoesteroides sistémicos y otros agentes de investigación) con la excepción de la terapia hormonal para el cáncer de próstata.
• Pacientes con antecedentes de asma grave o actualmente en tratamiento crónico con corticoesteroides inhalados.
• Pacientes con antecedentes de enfermedad autoinmunitaria, con la excepción de un acontecimiento autoinmunitario asociado a una terapia previa con ipILimumab (anti-CTLA-4) que se ha resuelto por completo durante más de 4 semanas.
• Pacientes con incapacidad o rechazo para practicar un método de anticoncepción eficaz durante la terapia, o presencia de embarazo o lactancia activa.
La Tabla 9 muestra los niveles de dosis de IL-15 heterodimérica planificados para este estudio. Los pacientes son asignados secuencialmente a un nivel de dosis según su orden de ingreso en el estudio. Grupos de 3 a 6 pacientes reciben 12 inyecciones s.c. de IL-15 heterodimérica durante un período de seis semanas (Lun/Miérc/Vier durante la semana 1,2, 5 y 6). La dosis inicial es de 0,1 pg/kg/día, y en ausencia de toxicidades significativas, se procede al aumento escalonado de la dosis para evaluar niveles de dosis de 0,25, 0,5, 1 y 2 pg/kg/día. El tratamiento se extiende por 72 días (6 semanas de terapia con IL-15 heterodimérica, más 30 días de observación), con otros 7 días más permitidos por otras razones además de la recuperación por toxicidades relacionadas con el tratamiento.
Los pacientes sin evidencia de una respuesta continua después del primer ciclo de tratamiento de seis semanas suspenden la inyección de IL-15 heterodimérica y son seguidos hasta que se documenta el empeoramiento de la enfermedad o dejan el estudio por otro motivo. (La respuesta continua se define como: >15% de disminución en la suma de las lesiones marcadoras y/o mejora o desaparición de algunas lesiones no medibles y/o >10% de disminución en los marcadores tumorales). Los pacientes que demuestran una respuesta completa (RC) al tratamiento reciben 2 ciclos adicionales, después del ciclo en el que se documenta por primera vez la respuesta completa, con la misma dosis de IL-15 heterodimérica. Dependiendo de los resultados de seguridad y toxicidad, se pueden considerar dosis mayores de 2 gg/kg/día en ensayos clínicos subsiguientes después de la evaluación de los datos farmacocinéticos y fármacodinámicos.
T l . Niv l i l nifi IL-1 h r im ri
*Nueve pacientes en total se trataron con la DMT (o la dosis más alta, si no se alcanza una DMT).
Las muestras para estudios correlativos se obtienen antes del tratamiento y en momentos específicos durante y después del tratamiento para evaluar la farmacocinética de IL-15 heterodimérica, el efecto de IL-15 heterodimérica sobre las poblaciones de los subconjuntos de inmunocitos y los niveles de citocina proinflamatoria en la sangre periférica y para el desarrollo de anticuerpos neutralizantes anti-IL-15 o anti-receptor alfa de IL-15.
Claims (11)
1. Un complejo IL-15/Receptor alfa de IL-15 (IL-15Ra) para usar en el tratamiento del cáncer en un sujeto que lo necesita, que comprende administrar el complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, usando un régimen de administración cíclica, en donde el régimen de administración cíclica comprende: (a) administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de 0,1 a 10 |jg/kg del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1,2 o 3 días durante un primer período de 1 semana a 3 semanas; y (b) después de un segundo período de 1 semana a 2 meses en el cual no se administra complejo IL-15/IL-15Ra al sujeto, administrar al sujeto, por vía subcutánea, una dosis de 0,1 a 10 jg/kg del complejo IL-15/IL-15Ra cada 1, 2 o 3 días durante un tercer período de 1 semana a 3 semanas.
2. El complejo IL-15/IL-15Ra para usar de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el cáncer es melanoma, carcinoma de células renales, carcinoma pulmonar no microcítico o cáncer de colon y/o es un cáncer metastásico.
3. El complejo IL-15/IL-15Ra para usar de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde la dosis administrada del complejo IL-15/IL-15Ra durante el primer período y durante el tercer período son de 0,1 jg/kg, 0,25 jg/kg, 0,5 jg/kg, 1 jg/kg, 2 jg/kg o 5 jg/kg.
4. El complejo IL-15/IL-15Ra para usar de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde el primer período, el segundo período y/o el tercer período es de 12 a 14 días.
5. El complejo IL-15/IL-15Ra para usar de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde el régimen de administración cíclica se repite al menos 5 o al menos 10 veces.
6. El complejo IL-15/IL-15Ra para usar de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde el régimen de administración cíclica se repite durante al menos 6 meses o al menos 1 año.
7. El complejo IL-15/IL-15Ra para usar de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde el complejo IL-15/IL-15Ra es un complejo heterodimérico de IL-15 nativa e IL-15Ra nativo soluble.
8. El complejo I L-15/I L-15Ra para usar de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde la IL-15 es IL-15 humana y en donde IL-15Ra es una forma soluble de IL-15Ra humano.
9. El complejo IL-15/IL-15Ra para usar de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde la IL-15 comprende los residuos de aminoácidos 49 a 162 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1; e IL-15Ra comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 33, 35, 37, 39, 41 o 45.
10. El complejo I L-15/I L-15Ra para usar de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde la IL-15 comprende los residuos de aminoácidos 49 a 162 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1; e IL-15Ra comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 33; o el IL-15Ra está glicosilado de modo que la glicosilación representa al menos, o más de, 20%, 30%, 40% o 50% de la masa del IL-15Ra.
11. El complejo IL-15/IL-15Ra para usar de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-10 que comprende además administrar otra terapia, donde la otra terapia es un anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a PD-1 o un anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a PD-L1.
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