ES2742410T3 - Cepa de Lactobacillus pentosus como probiótico - Google Patents
Cepa de Lactobacillus pentosus como probiótico Download PDFInfo
- Publication number
- ES2742410T3 ES2742410T3 ES14757862T ES14757862T ES2742410T3 ES 2742410 T3 ES2742410 T3 ES 2742410T3 ES 14757862 T ES14757862 T ES 14757862T ES 14757862 T ES14757862 T ES 14757862T ES 2742410 T3 ES2742410 T3 ES 2742410T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- strain
- composition
- vaginal
- lactobacillus
- treatment
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000186684 Lactobacillus pentosus Species 0.000 title claims abstract description 31
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 title description 54
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 title description 54
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 title description 37
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 73
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 40
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 39
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 claims description 35
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 32
- 208000037009 Vaginitis bacterial Diseases 0.000 claims description 26
- 208000004926 Bacterial Vaginosis Diseases 0.000 claims description 25
- 206010007134 Candida infections Diseases 0.000 claims description 24
- 201000007096 Vulvovaginal Candidiasis Diseases 0.000 claims description 24
- 201000003984 candidiasis Diseases 0.000 claims description 24
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims description 24
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 21
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 241000222126 [Candida] glabrata Species 0.000 claims description 12
- 208000032343 candida glabrata infection Diseases 0.000 claims description 12
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 12
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 claims description 12
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 claims description 11
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 8
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 claims description 6
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims description 5
- 229960000988 nystatin Drugs 0.000 claims description 4
- VQOXZBDYSJBXMA-NQTDYLQESA-N nystatin A1 Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/CC/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 VQOXZBDYSJBXMA-NQTDYLQESA-N 0.000 claims description 4
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 claims description 3
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 claims description 3
- 150000003852 triazoles Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 2
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 55
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 37
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 31
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 27
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 27
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 27
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 27
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 27
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 27
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 27
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 24
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 20
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 description 19
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 16
- 241000894007 species Species 0.000 description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 13
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 12
- 108010002069 Defensins Proteins 0.000 description 11
- 102000000541 Defensins Human genes 0.000 description 11
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 11
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 11
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 11
- 244000197813 Camelina sativa Species 0.000 description 10
- 230000036541 health Effects 0.000 description 10
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 10
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 10
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 9
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 description 8
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 description 8
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 8
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 8
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 8
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 8
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 7
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 6
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 6
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 6
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 6
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 6
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 6
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- 108010063045 Lactoferrin Proteins 0.000 description 5
- 102000010445 Lactoferrin Human genes 0.000 description 5
- 206010046914 Vaginal infection Diseases 0.000 description 5
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 5
- CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N l-phenylalanyl-l-lysyl-l-cysteinyl-l-arginyl-l-arginyl-l-tryptophyl-l-glutaminyl-l-tryptophyl-l-arginyl-l-methionyl-l-lysyl-l-lysyl-l-leucylglycyl-l-alanyl-l-prolyl-l-seryl-l-isoleucyl-l-threonyl-l-cysteinyl-l-valyl-l-arginyl-l-arginyl-l-alanyl-l-phenylal Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N 0.000 description 5
- 229940078795 lactoferrin Drugs 0.000 description 5
- 235000021242 lactoferrin Nutrition 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 5
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 5
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 4
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 4
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Natural products OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960002227 clindamycin Drugs 0.000 description 4
- KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N clindamycin Chemical compound CN1C[C@H](CCC)C[C@H]1C(=O)N[C@H]([C@H](C)Cl)[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](SC)O1 KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(tritiooxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO[3H])O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C)=C1 IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 3
- 210000003756 cervix mucus Anatomy 0.000 description 3
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 3
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 229960004884 fluconazole Drugs 0.000 description 3
- RFHAOTPXVQNOHP-UHFFFAOYSA-N fluconazole Chemical compound C1=NC=NN1CC(C=1C(=CC(F)=CC=1)F)(O)CN1C=NC=N1 RFHAOTPXVQNOHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 3
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 3
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 3
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 238000003906 pulsed field gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 3
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 3
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 3
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000019206 urinary tract infection Diseases 0.000 description 3
- 239000000003 vaginal tablet Substances 0.000 description 3
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 3
- PXRKCOCTEMYUEG-UHFFFAOYSA-N 5-aminoisoindole-1,3-dione Chemical compound NC1=CC=C2C(=O)NC(=O)C2=C1 PXRKCOCTEMYUEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 2
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000207201 Gardnerella vaginalis Species 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186840 Lactobacillus fermentum Species 0.000 description 2
- 241000186604 Lactobacillus reuteri Species 0.000 description 2
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 2
- 208000007027 Oral Candidiasis Diseases 0.000 description 2
- 208000012868 Overgrowth Diseases 0.000 description 2
- 208000029082 Pelvic Inflammatory Disease Diseases 0.000 description 2
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- UELITFHSCLAHKR-UHFFFAOYSA-N acibenzolar-S-methyl Chemical compound CSC(=O)C1=CC=CC2=C1SN=N2 UELITFHSCLAHKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 229960004543 anhydrous citric acid Drugs 0.000 description 2
- 229960004977 anhydrous lactose Drugs 0.000 description 2
- 230000001032 anti-candidal effect Effects 0.000 description 2
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 2
- 230000002368 bacteriocinic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 2
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N cycloheximide Chemical compound C1[C@@H](C)C[C@H](C)C(=O)[C@@H]1[C@H](O)CC1CC(=O)NC(=O)C1 YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 2
- 235000015203 fruit juice Nutrition 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 2
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 2
- 229940012969 lactobacillus fermentum Drugs 0.000 description 2
- 229940001882 lactobacillus reuteri Drugs 0.000 description 2
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 2
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 2
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 2
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 2
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 2
- 230000003232 mucoadhesive effect Effects 0.000 description 2
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 description 2
- 239000002417 nutraceutical Substances 0.000 description 2
- 235000021436 nutraceutical agent Nutrition 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 238000001853 pulsed-field electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000005000 reproductive tract Anatomy 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 206010046901 vaginal discharge Diseases 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- VHVPQPYKVGDNFY-DFMJLFEVSA-N 2-[(2r)-butan-2-yl]-4-[4-[4-[4-[[(2r,4s)-2-(2,4-dichlorophenyl)-2-(1,2,4-triazol-1-ylmethyl)-1,3-dioxolan-4-yl]methoxy]phenyl]piperazin-1-yl]phenyl]-1,2,4-triazol-3-one Chemical compound O=C1N([C@H](C)CC)N=CN1C1=CC=C(N2CCN(CC2)C=2C=CC(OC[C@@H]3O[C@](CN4N=CN=C4)(OC3)C=3C(=CC(Cl)=CC=3)Cl)=CC=2)C=C1 VHVPQPYKVGDNFY-DFMJLFEVSA-N 0.000 description 1
- 241000193818 Atopobium Species 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 235000011299 Brassica oleracea var botrytis Nutrition 0.000 description 1
- 235000017647 Brassica oleracea var italica Nutrition 0.000 description 1
- 240000003259 Brassica oleracea var. botrytis Species 0.000 description 1
- 206010007135 Candida nappy rash Diseases 0.000 description 1
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241001137251 Corvidae Species 0.000 description 1
- 238000001061 Dunnett's test Methods 0.000 description 1
- 208000004483 Dyspareunia Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108091029795 Intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 1
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 description 1
- 241000218492 Lactobacillus crispatus Species 0.000 description 1
- 241000224858 Lactobacillus gasseri DSM 14869 Species 0.000 description 1
- 241000224848 Lactobacillus rhamnosus DSM 14870 Species 0.000 description 1
- 241000917009 Lactobacillus rhamnosus GG Species 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BYBLEWFAAKGYCD-UHFFFAOYSA-N Miconazole Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1COC(C=1C(=CC(Cl)=CC=1)Cl)CN1C=NC=C1 BYBLEWFAAKGYCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000192041 Micrococcus Species 0.000 description 1
- BACYUWVYYTXETD-UHFFFAOYSA-N N-Lauroylsarcosine Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CC(O)=O BACYUWVYYTXETD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YJQPYGGHQPGBLI-UHFFFAOYSA-N Novobiocin Natural products O1C(C)(C)C(OC)C(OC(N)=O)C(O)C1OC1=CC=C(C(O)=C(NC(=O)C=2C=C(CC=C(C)C)C(O)=CC=2)C(=O)O2)C2=C1C YJQPYGGHQPGBLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- 206010036590 Premature baby Diseases 0.000 description 1
- 206010036595 Premature delivery Diseases 0.000 description 1
- 241001135215 Prevotella bivia Species 0.000 description 1
- 108010059712 Pronase Proteins 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 229920000294 Resistant starch Polymers 0.000 description 1
- 208000019802 Sexually transmitted disease Diseases 0.000 description 1
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 1
- 201000008100 Vaginitis Diseases 0.000 description 1
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 description 1
- 206010047786 Vulvovaginal discomfort Diseases 0.000 description 1
- 206010056530 Vulvovaginal pruritus Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001243 acetic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 208000002399 aphthous stomatitis Diseases 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015173 baked goods and baking mixes Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 235000015218 chewing gum Nutrition 0.000 description 1
- 229940112822 chewing gum Drugs 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 229960004022 clotrimazole Drugs 0.000 description 1
- VNFPBHJOKIVQEB-UHFFFAOYSA-N clotrimazole Chemical compound ClC1=CC=CC=C1C(N1C=NC=C1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 VNFPBHJOKIVQEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014156 coffee whiteners Nutrition 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 235000014510 cooky Nutrition 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 235000013325 dietary fiber Nutrition 0.000 description 1
- 235000021245 dietary protein Nutrition 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical compound CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 201000003511 ectopic pregnancy Diseases 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000007920 enema Substances 0.000 description 1
- 229940079360 enema for constipation Drugs 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 1
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000013020 final formulation Substances 0.000 description 1
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000001408 fungistatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 102000035122 glycosylated proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005608 glycosylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000010438 iron metabolism Effects 0.000 description 1
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000000622 irritating effect Effects 0.000 description 1
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 1
- 229960004130 itraconazole Drugs 0.000 description 1
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 235000021056 liquid food Nutrition 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- 235000013622 meat product Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229960000282 metronidazole Drugs 0.000 description 1
- VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N metronidazole Chemical compound CC1=NC=C([N+]([O-])=O)N1CCO VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940015194 metronidazole vaginal gel Drugs 0.000 description 1
- 229960002509 miconazole Drugs 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229960002950 novobiocin Drugs 0.000 description 1
- YJQPYGGHQPGBLI-KGSXXDOSSA-N novobiocin Chemical compound O1C(C)(C)[C@H](OC)[C@@H](OC(N)=O)[C@@H](O)[C@@H]1OC1=CC=C(C(O)=C(NC(=O)C=2C=C(CC=C(C)C)C(O)=CC=2)C(=O)O2)C2=C1C YJQPYGGHQPGBLI-KGSXXDOSSA-N 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 235000006180 nutrition needs Nutrition 0.000 description 1
- 229940127234 oral contraceptive Drugs 0.000 description 1
- 239000003539 oral contraceptive agent Substances 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 229940000673 orphan drug Drugs 0.000 description 1
- 239000002859 orphan drug Substances 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 1
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 pessaries Substances 0.000 description 1
- 235000015108 pies Nutrition 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 235000021395 porridge Nutrition 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000008476 powdered milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000310 rehydration solution Substances 0.000 description 1
- 235000021254 resistant starch Nutrition 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 description 1
- 235000013580 sausages Nutrition 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 239000002453 shampoo Substances 0.000 description 1
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000021055 solid food Nutrition 0.000 description 1
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000057 systemic toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 210000004876 tela submucosa Anatomy 0.000 description 1
- 229940098465 tincture Drugs 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 235000021404 traditional food Nutrition 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 239000006216 vaginal suppository Substances 0.000 description 1
- 206010046947 vaginismus Diseases 0.000 description 1
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009723 vascular congestion Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 208000010484 vulvovaginitis Diseases 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 230000005186 women's health Effects 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0034—Urogenital system, e.g. vagina, uterus, cervix, penis, scrotum, urethra, bladder; Personal lubricants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/36—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/02—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for disorders of the vagina
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
- A61Q17/005—Antimicrobial preparations
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/10—Washing or bathing preparations
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/01—Preparation of mutants without inserting foreign genetic material therein; Screening processes therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K2035/11—Medicinal preparations comprising living procariotic cells
- A61K2035/115—Probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
- A61K2800/92—Oral administration
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Birds (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
Abstract
Una composición que comprende la cepa de Lactobacillus pentosus depositada en la Colección Española de Cultivos Tipo bajo el número de acceso CECT 7504.
Description
DESCRIPCIÓN
Cepa de Lactobacillus pentosus como probiótico
La presente invención se refiere a los campos de la medicina, la microbiología y tecnología de los alimentos y, en particular, a una nueva cepa de Lactobacillus pentosus para ser utilizada como un probiótico en beneficio de la salud humana.
ESTADO DE LA TÉCNICA
Probióticos
El concepto de microorganismos probióticos nació de la hipótesis del Premio Nobel Elie Metchnikoff, quien sugirió que el consumo de bacterias capaces de producir la fermentación (Lactobacillus) tiene un efecto positivo en la microbiota del colon, la reducción de la presencia de toxinas bacterianas y otras actividades microbianas que tienen un impacto negativo en la salud humana.
"Los probióticos son microorganismos vivos que, después de su administración a los consumidores, aporta más beneficios que la nutrición natural básica". Hoy en día hay una gran cantidad de referencias acerca de la utilidad de los probióticos para el tratamiento de varios trastornos de la salud gastrointestinal, así como estudios que sugieren su utilidad para activar el sistema inmunitario y prevenir las alergias.
Las bacterias probióticas deben cumplir varios requisitos relacionados con la falta de toxicidad, la viabilidad, la adhesión y efectos beneficiosos. Las propiedades de cada una de las cepas bacterianas son únicas y no se pueden extrapolar a otras cepas de la misma especie (Araya, M., et al, Orientaciones para la Evaluación de los Probióticos en los alimentos -. Conjunto FAO / Grupo de Trabajo de la OMS, la FAO / OMS, Editor Organización 2002, la Agricultura y la Alimentación de las Naciones Unidas y la Organización Mundial de la Salud: Ontario, Canadá). Por lo tanto, es importante encontrar aquellas cepas que tienen un mejor rendimiento en todos los requisitos de probióticos.
Aunque el concepto de probióticos se asoció con la flora microbiana intestinal, estudios llevados a cabo ya en 1988 mostraron que este concepto también podría extenderse a la flora vaginal de las mujeres. Algunos grupos científicos han estado desarrollando esta idea desde hace algunos años, que culminó con la identificación de algunas cepas de Lactobacillus que son útiles para el tratamiento de las complicaciones de la salud vaginal (Anukam, K.C., et al., Estudio clínico comparando probiótico Lactobacillus GR-1 y RC-14 con metronidazol gel vaginal para tratar la vaginosis bacteriana sintomática. Microbes and Infection, 2006, Vol. 8 (12-13): páginas 2772-2776; Larsson, P.G., et al, Los lactobacilos humanos como la suplementación de clindamicina en pacientes con vaginosis bacteriana reduce la tasa de recurrencia; un estudio de 6 meses de duración, doble ciego, aleatorizado, controlado con placebo. BMC Women's Health, 2008. Vol. 8 N°1: página 3], lo que demuestra el concepto de probiótico para la salud vaginal.
Flora Vaginal Sana
La aparición de secreciones vaginales y la picazón son las causas más comunes de las visitas ginecológicas. Esto puede ser debido a reacciones alérgicas, al contacto con agentes irritantes (tela de fibra, jabón, spray, etc.) o en muchos casos debido a una infección.
La flora vaginal sana está compuesta principalmente por lactobacilos, que mantienen el pH ácido de la vagina (entre 3,9 y 4,3), impidiendo su colonización por otros microorganismos. Cuando esta flora natural se debilita, por ejemplo, por tratamientos con antibióticos sistémicos, la infección por especies patógenas se vuelve mucho más probable. Las complicaciones más frecuentes de la flora vaginal sana son candidiasis vulvovaginal y vaginosis bacteriana.
Candidiasis Vulvovaginal
Candida es una levadura altamente prevalente que se puede encontrar en pequeñas cantidades en la flora vaginal sin ningún síntoma de la enfermedad. Los síntomas aparecen cuando se perturba el equilibrio de la flora vaginal y la población de Candida aumenta en comparación con la cantidad de lactobacilos protectores. Los síntomas típicos de infección por Candida incluyen picazón y ardor vaginal, así como dispareunia y vaginismo. Aproximadamente, el 75% de los casos de la candidiasis vulvovaginal se deben a Candida albicans, y un 15% adicional de se deben a Candida glabrata (Richter, S.S., et al., Susceptibilidad antifúngica de Candida especies causantes de vulvovaginitis y epidemiología de los casos recurrentes. J. Clin. Microbiol., 2005. Vol. 43 N° 5: páginas 2155-2162). Se estima que el 75% de las mujeres experimentan al menos un episodio en el transcurso de su vida. Por otra parte, el 25% de los casos son recurrentes con cuatro o más episodios por año.
La infección ocurre a menudo después de un tratamiento con antibióticos prescrito con un objetivo terapéutico diferente. También es común en las mujeres que toman anticonceptivos orales que contienen estrógenos, en mujeres embarazadas y en mujeres con diabetes. Las infecciones por Candida se tratan con antimicóticos, tales como los fármacos de triazol (por ejemplo, fluconazol, clotrimazol, miconazol, itraconazol) o nistatina. Sin embargo, es de destacar que cepas de Candida glabrata tienden a mostrar una alta resistencia contra tales tratamientos, mientras que hasta el 20% de las cepas de Candida albicans aisladas en clínicas presenta resistencia al fluconazol,
uno de los tratamientos más típicos, haciendo hincapié en la importancia de encontrar nuevas herramientas terapéuticas para el tratamiento de la candidiasis vulvovaginal.
Además de su pH ácido, el fluido vaginal contiene varias proteínas antimicrobianas, tales como la lisozima, defensinas y lactoferrina. Durante la candidiasis vulvovaginal la concentración de estas sustancias aumenta más allá de los niveles normales en aproximadamente el 25% de las mujeres (Valore, E.V., et al., Deficiencia reversible de polipéptidos antimicrobianos en la vaginosis bacteriana. Infect. Immun., 2006. Vol. 74 N°10: páginas 5693-5702]. Esta respuesta es por lo general insuficiente para protegerse de levaduras tales como Candida, ya que el efecto de estas sustancias es más bacteriostático o bactericida que antimicótico. Sin embargo, ya que la flora vaginal sana está compuesta principalmente de bacterias del género Lactobacillus, este aumento anormal de proteínas antimicrobianas puede contribuir a retrasar aún más la recuperación de la flora sana de la vagina. Por otra parte, esto subraya la necesidad de considerar la resistencia a estos factores antimicrobianos en la búsqueda de lactobacilos adecuado para ser utilizados como probióticos.
Vaginosis Bacteriana
La vaginosis bacteriana es causada por un crecimiento excesivo de las especies bacterianas generalmente ausentes en la flora vaginal o que se encuentran en cantidades muy pequeñas. Las especies más comunes son Gardnerella vaginalis y Atopobium vaginale, pero un agente etiológico preciso no se ha encontrado hasta ahora. Aproximadamente, 1 de cada 5 mujeres desarrollará vaginosis bacteriana a lo largo de un intervalo de entre 6 y 12 meses. Aunque la vaginosis bacteriana puede causar descargas vaginales inusuales y olor a pescado, la mayoría de los casos son asintomáticos. Una característica típica de la vaginosis bacteriana es el aumento del pH por encima de aproximadamente 4,5, debido a la desaparición de los lactobacilos, lo que facilita aún más el crecimiento de otras especies bacterianas.
La vaginosis bacteriana se trata con antibióticos, como metronidazol y clindamicina. Sin embargo, la vaginosis bacteriana muestra una alta tasa de recurrencia, hasta un 35% durante el primer mes y hasta el 70% durante el primer año. También se ha observado que el tratamiento antibiótico de la vaginosis puede conducir a la candidiasis vulvovaginal con una infección secundaria, ya que los antibióticos, especialmente clindamicina, también afectan a lactobacilos.
Además, se ha demostrado que las mujeres que tienen vaginosis bacteriana tienden a tener bebés prematuros o bebés con bajo peso - menos de 2,5 kg -. A veces, la infección puede extenderse a las trompas de Falopio. Este tipo de infección se llama enfermedad inflamatoria pélvica (EIP) y puede causar infertilidad y daños a las trompas de Falopio, lo que aumenta el riesgo de embarazo ectópico. La vaginosis bacteriana también aumenta el riesgo de infecciones del tracto urinario y enfermedades de transmisión sexual.
Probióticos para el tratamiento de la candidiasis vulvovaginal y la vaginosis bacteriana
Actualmente existen varias cepas de probióticos comercializados para ayudar a controlar la candidiasis vulvovaginal, como Lactobacillus rhamnosus GR1, Lactobacillus fermentum RC14, Lactobacillus plantarum P17630 y Lactobacillus acidophilus NAS. Sin embargo, ninguno de ellos ha sido probado por su capacidad para resistir las elevadas concentraciones de factores antimicrobianos que se producen en aproximadamente 1 de cada 4 casos de infección. Además, sólo hay una solución probiótica (BION Flore Intime®, compuesto por cepas de Lactobacillus rhamnosus GR1 y Lactobacillus reuteri RC14) para el tratamiento de la candidiasis vulvovaginal cuyas declaraciones de eficacia están respaldadas por un ensayo clínico aleatorio controlado con placebo (Martínez, R.C.R., et al., el tratamiento mejorado de la candidiasis vulvovaginal con fluconazol más probiótico Lactobacillus rhamnosus GR-1 y Lactobacillus reuteri RC-14. Letters in Applied Microbiology, 2009. Vol. 48 N° 3: páginas 269-274].
Por otro lado, hay dos productos probióticos para el tratamiento de la vaginosis bacteriana cuyas declaraciones sobre la salud están respaldadas por estudios clínicos aleatorizados,controlados con placebo,: BION Flore Intime® -Lactobacillus rhamnosus GR1 y Lactobacillus fermentum RC14 - y EcoVag® - Lactobacillus gasseri DSM 14869 y Lactobacillus rhamnosus DSM 14870 -(Anukam, K.C., et al, 2006, supra; Larsson, P.G., et al, 2008, supra).
El estado de la técnica describe otras cepas como potenciales probióticos vaginales, tales como el documento EP1436380 B1, que describe la cepa de Lactobacillus pentosus NCIMB 41114 aislada a partir de un cultivo fecal obtenido de un individuo adulto sano y cultivada en presencia de tetraciclina. El documento describe que, debido a su capacidad de suprimir el crecimiento de especies de Candida y a que la cepa es resistente a tetraciclina y antibióticos relacionados, puede ser útil para combatir el crecimiento indeseable de Candida en cualquier región del cuerpo, en particular para el Síndrome del Intestino Irritable. Este documento no dice nada acerca de la actividad inhibitoria de la cepa contra la Candida glabrata, ni demuestra la capacidad de la cepa para adherirse al epitelio vaginal y sobrevivir en el ambiente vaginal o resistir frente a las sustancias antimicrobianas presentes en éste, tales como lisozima.
Okkers, D.J. et al. 1999 describe que la cepa de Lactobacillus pentosus TV35b, aislada a partir de las secreciones de fórnix posterior de la vagina de una paciente prenatal, producía un péptido de tipo bacteriocina (pentocina TV35b), que es inhibidora para Candida albicans, entre otras especies bacterianas. El documento no dice nada
acerca de la actividad inhibidora de las cepas contra Candida glabrata (Okkers, D.J. et al., Caracterización de pentocina TV35b, un péptido de tipo bacteriocina aislado de Lactobacillus pentosus con un efecto fungistático en Candida albicans, Journal of Applied Microbiology, 1999, Vol. 87, N° 5, páginas 726-734).
Por otro lado, el estado de la técnica describe cepas vaginales que no presentan actividad inhibidora contra Candida albicans. Por ejemplo, en Dimitonova et al. 2007, se evaluó la actividad inhibidora de 20 cepas de lactobacilos, aisladas a partir de muestras vaginales de mujeres búlgaras sanas. Ninguna de las 20 cepas inhibió el crecimiento de Candida albicans (Dimitonova, S.P. et al., Actividad antimicrobiana y propiedades protectoras de lactobacilos vaginales de mujeres búlgaras sanas, Anaerobe, 2007, Vol. 13, N° 5-6, páginas 178-184).
El estado de la técnica también enseña que la presencia de la actividad inhibidora contra Candida albicans no significa que la cepa bacteriana sea también antagonista frente a Candida glabrata. Por ejemplo, en Pascual L.M. et al., 2008, una cepa de Lactobacillus aislada de la vagina de mujeres no embarazadas, sanas, pre-menopáusicas, fue identificada como Lactobacillus rhamnosus L60. Lactobacillus rhamnosus L60 mostró un amplio espectro de actividad antimicrobiana contra patógenos urogenitales, y resistencia a antibióticos comúnmente prescritos para las infecciones causadas por estos patógenos. Esta cepa fue antagonista frente a 10 cepas de Candida albicans, pero no era antagonista frente a las 3 cepas de Candida glabrata sometidas a ensayo (Pascual, L.M. et al., Lactobacillus rhamnosus L60, un probiótico potencial aislado de la vagina humana, Journal of General and Applied Microbiology 2008, Vol. 54, N° 3, páginas 141-148).
Por lo tanto, el hecho de que los lactobacilos descritos como potenciales para su uso como probiótico vaginal sean aislados de la vagina no significa que presenten actividad inhibidora frente a especies de Candida. Por otra parte, el hecho de que una cepa de Lactobacillus sea antagonista frente a Candida albicans no significa que también posean actividad frente a otras especies de Candida, tales como Candida glabrata. Por lo tanto, ser antagonista de las especies de Candida no es una característica inherente de lactobacilos.
El documento WO 2012/101500 A1 describe una composición efervescente en forma sólida para uso en aplicaciones vaginales para el tratamiento de infecciones vaginales. La composición efervescente comprende, entre la presencia de agentes patógenos en el entorno vaginal. La cepa se selecciona de una larga lista de las especies más comunes utilizadas como probióticos, del género Lactobacillus y Bifidobacterium. El documento no incluye un ensayo para evaluar las propiedades de las cepas. La invención está enfocada a la composición galénica diseñada para potenciar la supervivencia de los probióticos durante su fabricación y para mejorar la administración. Las cepas mencionadas en el documento están comercialmente disponibles y los patógenos mencionados son comunes en las patologías vagianles.
El documento JP 2008013502 A describe el uso de un producto obtenido mediante un proceso de fermentación de una planta crucifera, tal como, por ejemplo, brócoli, con bacterias del ácido láctico, tales como Lactobacillus pentosus, para tratar o prevenir infecciones por Candida, tales como la vaginitis. Se realizan ensayos con cepas depositadas de Candidad albicans. Este documento no dice nada acerca de la actividad inhibitoria del producto fermentado contra Candida glabrata.
Por otro lado, como se explicó anteriormente, las sustancias antibacterianas en el fluido vaginal se incrementan más allá de los niveles normales en aproximadamente el 25 % de las mujeres que experimentan una candidiasis vulvovaginal. Estas sustancias tienen un efecto inhibidor significativo sobre lactobacilos. Algunos lactobacilos se utilizan actualmente como probióticos vaginales, sin embargo, ninguno de ellos ha sido sometido a ensayo en cuanto a la capacidad de sobrevivir en las condiciones en que los factores antimicrobianos se incrementaron en el fluido vaginal. Por otra parte, ninguno de los probióticos vaginales actuales ha sido sometido a ensayo en cuanto a su actividad específica contra Candida glabrata. C.glabrata representa una fracción significativa de las infecciones por Candida y muestra una mayor resistencia a los tratamientos antimicóticos actuales, presentando así un mayor reto terapéutico.
SUMARIO DE LA INVENCIÓN
Los inventores proporcionan una nueva cepa de Lactobacillus pentosus adecuada como un probiótico para el tratamiento de infecciones vaginales, como resultado de extensos estudios de diferentes cepas de lactobacilos aislados a partir de seres humanos sanos. La cepa I1001 fue aislada de la flora vaginal de una mujer joven y sana que vivía en malas condiciones higiénicas. La cepa de Lactobacillus pentosus fue depositada el06 de marzo de 2009 en la Spanish Type Culture Collection (Colección Española de Cultivos Tipo, CECT, Edificio 3 CUE, Parc Científic Universitat de Valéncia, Catedrático Agustín Escardino, 9, 46980, Paterna, Valencia, España), por el depositante AB-Biotics, SA, situada en el Edificio Eureka, oficina P1M1.1, Campus UAB, Bellaterra-08193 (España). La cepa de L. pentosus recibió el número de acceso CECT 7504 después de que la Autoridad Internacional de Depósito declarara la cepa viable.
El depositante AB-Biotics, S.A. autoriza a la solicitante, GYNEA Laboratorios S.L., a referirse al mencionado material biológico depositado en la solicitud de patente europea con número de referencia del representante P2723EP00 o en cualquier solicitud de patente posterior derivada de ella o reivindicando prioridad de ella, y dio su consentimiento
incondicional e irrevocable de que el material depositado esté a disposición del público de conformidad con Artículo 33 EPC a partir de la fecha de presentación de la solicitud de patente antes mencionada.
La cepa CECT 7504 fue seleccionada entre las 100 cepas de lactobacilos aisladas debido a las siguientes propiedades distintivas:
• Alta supervivencia a los factores antimicrobianos que se encuentran en el fluido vaginal, especialmente lisozima. Como se explicó anteriormente, estos factores a menudo se incrementan en un subconjunto de pacientes con candidiasis (aproximadamente el 25% de los casos), y podría ser muy perjudicial para muchos probióticos. Como se indica en la sección de ejemplos, sólo una fracción de los lactobacilos de origen vaginal puede sobrevivir al aumento de las concentraciones de lisozima que se pueden encontrar en pacientes con candidiasis vulvovaginal, pero no en pacientes sanos (véase el EJEMPLO 3 que figura más abajo, donde 10 cepas de Lactobacillus son evaluadas). Esto significa que la resistencia a estas proteínas no es una característica inherente de lactobacilos. Por otra parte, se cree que ninguna técnica anterior describe probióticos vaginales con la capacidad de sobrevivir en las condiciones en las que la concentración de factores antimicrobianos naturales se incrementa en el fluido vaginal. Por lo tanto, los probióticos conocidos no serían eficaces para este subconjunto de pacientes. Sorprendentemente, la cepa CECT 7504 mostró una resistencia marcada a estas condiciones, por lo tanto, está especialmente indicada para este subconjunto de pacientes. En particular, la cepa CECT 7504 mostró una alta resistencia a la lisozima en concentraciones de hasta 16 mg/l (véase la FIG. 2). La lisozima es el factor antimicrobiano que se encuentra en la concentración más alta en el fluido vaginal, además de ácidos orgánicos, y el único cuya actividad está más dirigida contra organismos Gram-positivos, tales como Lactobacillus. Por otro lado, la cepa comercial de L. plantarum P17630 (ISADIN) mostró una marcada disminución de la viabilidad (90%) cuando se expone a concentraciones de lisozima superiores a 4 mg/l, tales como las que se pueden encontrar en algunos pacientes con candidiasis vulvovaginal.
• La capacidad de inhibir el crecimiento tanto de C. albicans como de C. glabrata, mostrando así un espectro de actividades más amplio para ayudar a controlar las infecciones por Candida, como la candidiasis vulvovaginal. Como se indica en la técnica de antecedentes y las secciones de ejemplos, algunos lactobacilos de origen vaginal muestran actividad antagonista significativa contra uno o dos aislados de Candida, pero solo una fracción pequeña muestra una actividad significativa frente a un panel de varios aislados de ambas especies de Candida albicans y Candida glabrata (véase el EJEMPLO 4). Por lo tanto, como se mencionó anteriormente, la capacidad de inhibir las cepas de Candida no es una característica inherente de lactobacilos. Sorprendentemente, la cepa CECT 7504 mostró una mayor actividad frente a las tres cepas de C. albicans sometidas a ensayo en comparación con la cepa probiótica comercial de Lactobacillus plantarum P17630, y también mostró una alta actividad contra una cepa de C. glabrata y alguna actividad contra una cepa diferente de C. glabrata, mientras que tanto L. plantarum P17630 como otras cepas de tipo salvaje mostraron baja actividad contra la primera cepa y ninguna actividad contra la última cepa de C. glabrata (TABLA 3).
• La capacidad de sobrevivir frente a altas concentraciones de agentes antimicóticos usados típicamente para tratar las infecciones por Candida, permitiendo de este modo que la cepa bacteriana de la presente invención sea co administrada con dichos agentes antimicóticos.
• Una mejora de la capacidad para acidificar el fluido vaginal en comparación con otros aislados y control comercial, mostrando así un alto potencial para ayudar a tratar la vaginosis bacteriana. La capacidad de acidificar el fluido vaginal es a menudo extrapolada a partir de la capacidad de acidificar los medios de cultivo de laboratorio típicos o leche. Sin embargo, la composición del fluido vaginal (baja concentración de nutrientes) es muy diferente de la composición de los medios de laboratorio o leche, que son ricos en nutrientes. En su lugar, la cepa de la invención ha sido sometida a ensayo en un medio que simula la composición real de fluido vaginal.
• La capacidad de adherirse fuertemente a las células epiteliales vaginales.
• Un buen crecimiento en medio industrial.
• Buena tolerabilidad cuando se sometió a ensayo en un modelo animal de irritación vaginal.
• Buena tolerancia y capacidad de colonización cuando se sometió a ensayo en voluntarios humanos.
En resumen, se cree que ninguna técnica anterior describe una cepa de Lactobacillus y, en particular, una cepa de Lactobacillus pentosus con las características antes mencionadas. La técnica describe otras cepas de Lactobacillus particularmente buenas para una de dichas características, pero lo que es digno de mención es que la cepa de Lactobacillus pentosus CECT 7504 cumple con todas esas cualidades juntas. Además, para cumplir las características clave mencionados anteriormente para el tratamiento de las infecciones vaginales, la cepa de la invención también presenta buenas características probióticas relacionados con la falta de toxicidad, la viabilidad, la adhesión y efectos beneficiosos. Los ejemplos que figuran más abajo proporcionan (a modo de ejemplo) protocolos para determinar cada una de las características probióticas y también se demostró que la cepa CECT 7504 tiene excelentes características probióticas.
Por lo tanto, en un primer aspecto, la presente invención proporciona una composición que comprende una cantidad eficaz de Lactobacillus pentosus CECT 7504. La expresión "cantidad eficaz" como se usa aquí, significa una cantidad de agente lo suficientemente alta como para presentar el beneficio deseado, pero lo suficientemente baja como para evitar efectos secundarios graves dentro del alcance del juicio médico.
Una amplia variedad de especies bacterianas del ácido láctico tiene un largo historial de uso seguro aparente. La Autoridad Europea de Seguridad Alimentaria ha desarrollado un sistema de concesión del estado de "Presunción Cualificada de Seguridad" (QPS) de las unidades taxonómicas con un largo historial probado de uso aparentemente seguro. La cepa CECT 7504 pertenece a una especie bacteriana que tiene un estatus QPS (Andreoletti, O., et al., El mantenimiento de la lista de microorganismos QPS añaden intencionadamente a los alimentos o piensos. Pregunta n °: EFSA-Q-2008-006, The EFSA Journal, 2008, Vol. 923: páginas 1-48)].
La aparición y propagación de la resistencia a los agentes antimicrobianos en las bacterias representan una amenaza para la salud humana y animal y presentan un importante coste económico y social. Cuando la resistencia a un agente antimicrobiano es inherente a una especie bacteriana, se conoce generalmente como 'resistencia intrínseca '(a veces llamada'resistencia natural'). Se presume que la resistencia intrínseca presenta un potencial mínimo de propagación horizontal, mientras que la resistencia adquirida mediada por los genes añadidos se considera que tiene un alto potencial de dispersión lateral. Los inventores de la presente invención han encontrado que la cepa que forma la composición de la invención no presenta resistencia significativa alguna a los antibióticos de importancia humana y / o veterinaria (ampicilina, gentamicina, estreptomicina, eritromicina, tetraciclina, clindamicina y cloranfenicol) según las directrices de la Autoridad Europea de Seguridad Alimentaria (Bories, G., et al., Actualización sobre los criterios utilizados en la evaluación de la resistencia bacteriana a los antibióticos de importancia humana o veterinaria. The EFSA Journal, 2008, Vol. 732: páginas 1-15), lo que evita el riesgo de una posible transferencia de la resistencia a los antibióticos a las especies patógenas.
En otro aspecto, la invención proporciona una composición que comprende una cantidad eficaz de la cepa de la invención, para su uso como un producto farmacéutico, un medicamento, un producto alimenticio, un suplemento dietético, un alimento médico, o un producto de higiene personal.
Como se dijo anteriormente, la cepa CECT 7504 muestra una actividad significativa frente a especies de Candida. Por lo tanto, en un tercer aspecto, la invención proporciona la composición como se ha definido anteriormente para su uso en la prevención y/o el tratamiento de la candidiasis. Este aspecto puede formularse alternativamente como el uso de una composición tal como se define en el primer aspecto de la invención para la fabricación de un producto farmacéutico, un medicamento, un producto alimenticio, un producto comestible, un suplemento dietético, un alimento médico o un producto de higiene personal para la prevención y/o el tratamiento de la candidiasis. Éste puede formularse alternativamente como un método para la prevención y/o el tratamiento de la candidiasis en un ser humano, que comprende administrar a dicho ser humano que lo necesite una cantidad eficaz de la composición tal como se define en el primer aspecto de la invención.
La composición de la invención es particularmente útil para el tratamiento profiláctico de individuos susceptibles a la candidiasis y también para el tratamiento terapéutico de individuos infectados con microorganismos del género Candida. En particular, la composición de la invención se puede administrar a bebés, niños y enfermos de SIDA para prevenir o tratar las aftas (candidiasis oral) o la dermatitis del pañal por Candida. Además, los pacientes con SIDA se beneficiarían de la composición descrita en este documento como que se reduciría la probabilidad de adquirir una infección por Candida, y si se adquiere, experimentarían menos translocación de Candida cuando se ingiere por vía oral. La composición también es útil para prevenir infecciones que ponen en peligro el feto en mujeres embarazadas, parto prematuro e infección del tracto urinario.
Dada la actividad anti-Candida de la cepa CECT 7504, junto con su capacidad de adherirse a las células epiteliales y para soportar los factores antimicrobianos que se encuentran en el fluido vaginal, en una realización particular, la composición de la invención es especialmente útil en la prevención y / o el tratamiento de la candidiasis vaginal. En una realización más particular, la candidiasis es causada por Candida glabrata. Como se explicó arriba, la cepa de la invención es especialmente útil en la prevención y/o el tratamiento de la candidiasis vaginal con una respuesta inflamatoria alta.
La expresión “alta respuesta inflamatoria” en esta descripción se entiende como el incrermento observado duante la candidiasis vulvovaginal en las concentraciones de proteínas antimicrobianas contenidas en el fluido vaginal, tales como lisozima, defensinas y lactoferrina (Valore, E.V., et al.supra). Lisozima es una de las sustancias antibacterianas en una concentración elevada en el fluido vaginal. Su concentración varía entre 1 y 4 mg/l en mujeres sanas y mujeres afectadas por la vaginosis bacteriana, pero puede alcanzar 16 mg/l o más en mujeres que padecen candidiasis vulvovaginal. Por lo tanto, la definición de “alta respuesta inflamatoria” de acuerdo con esta descripción puede basarse en los nivles de lisozima. Es difícil establecer los niveles de lisozima a partir de los cuales se pueda considerar que exista “una alta respuesta inflamatoria”, debido a que la técnica no los describe. En esta descripción, se puede considerar que “una alta respuesta inflamatoria” está presente cuando las concentraciones de lisozima son iguales a o mayores que 4 mg/ml.
Las infecciones por Candida también pueden ocurrir en otros epitelios fuera del tracto vaginal, tales como el epitelio intestinal o el epitelio de la cavidad oral. Por lo tanto, la actividad anti-Candida de la cepa CECT 7504 y su capacidad de adherirse al epitelio puede ser útil para el tratamiento y/o la prevención de infecciones por Candida en el intestino o la cavidad oral. Por lo tanto, en otro aspecto, la invención proporciona la composición como se definió anteriormente para su uso en la prevención o el tratamiento de la candidiasis oral y/o la candidiasis intestinal. Este aspecto puede formularse alternativamente como el uso de una composición tal como se define en el primer aspecto de la invención para la fabricación de un producto farmacéutico, un medicamento, un producto alimenticio, un producto comestible, un suplemento dietético, un alimento médico, o un producto de higiene personal para la prevención y/o tratamiento de la candidiasis oral y/o intestinal. Esto puede formularse alternativamente como un método para la prevención y/o el tratamiento de la candidiasis oral y/o intestinal en un ser humano, que comprende administrar a dicho ser humano en necesidad del mismo una cantidad eficaz de la composición tal como se define en el primer aspecto de la invención.
Por último, como se dijo anteriormente, la cepa CECT 7504 muestra una alta capacidad de acidificar el medio vaginal. Por lo tanto, en otro aspecto, la invención proporciona la composición como se define en el primer aspecto de la invención para su uso en la prevención y/o el tratamiento de la vaginosis bacteriana. Este aspecto puede formularse alternativamente como el uso de una composición tal como se define en el primer aspecto de la invención para la fabricación de un producto farmacéutico, un medicamento, un producto alimenticio, un producto comestible, un suplemento alimenticio, un alimento médico o un producto de higiene personal para la prevención y/o el tratamiento de la vaginosis bacteriana. Esto puede formularse alternativamente como un método para la prevención y/o el tratamiento de la vaginosis bacteriana en un ser humano, que comprende administrar a dicho ser humano que lo necesite una cantidad eficaz de la composición tal como se define en el primer aspecto de la invención.
La composición de la invención puede prepararse en cualquier forma adecuada que no afecte negativamente a la viabilidad de la cepa que forma la composición de la invención. La selección de los excipientes y los métodos más apropiados para la formulación en vista del propósito particular de la composición está dentro del alcance de las personas ordinarias expertas en la técnica de la tecnología farmacéutica. La composición se puede administrar por vía oral, vaginal o rectal, o el uso de diferentes formas de administración al mismo tiempo (por ejemplo, por vía oral y por vía vaginal).
En este sentido, la composición de la invención está en forma sólida o líquida y puede estar, entre otras cosas, en forma de polvos, comprimidos o pastillas, comprimidos para chupar, preparaciones de película, soluciones, aerosoles, gránulos, píldoras, suspensiones, emulsiones, cápsulas, comprimidos y cápsulas enterocubiertos, jarabes, líquidos, elixires, dulces, goma de mascar, supositorios, micro-enemas, tabletas vaginales, cápsulas de gelatina vaginales, cremas, geles, pomadas, lociones, tampones, servilletas, almohadillas, tiras de fusión, preservativos, pesarios, aerosoles, tintura o extractos fluidos.
La composición de acuerdo con la invención se puede formular en una forma en la que la cepa de la invención sea el único agente activo o esté mezclada con uno o más de otros agentes activos y / o se mezcla con excipientes farmacéuticamente aceptables o aditivos o ingredientes adecuados en el caso de un producto alimenticio o un producto comestible. En una forma de realización particular de la invención, la composición contiene adicionalmente uno o más agentes activos adicionales. Preferiblemente, el agente o agentes activos adicionales son otras bacterias probióticas que no son antagónicas a la cepa que forma la composición de la invención. Debido a la capacidad de la cepa de la invención de sobrevivir a altas concentraciones de agentes antimicóticos usados típicamente para tratar las infecciones por Candida, en una realización particular, la composición de la invención se puede administrar en combinación con fármacos antimicóticos de triazol o nistatina en la prevención y / o el tratamiento de la candidiasis. Su compatibilidad se ha demostrado en los ejemplos que figuran más adelante. Dependiendo de la formulación, la cepa se puede añadir como bacterias purificadas, como un cultivo bacteriano, como parte de un cultivo bacteriano, como un cultivo bacteriano que ha sido post-tratado, y solo o junto con portadores o ingredientes adecuados. También pueden añadirse prebióticos.
La expresión "producto farmacéutico" se entiende en su sentido amplio en esta descripción, incluyendo cualquier composición que comprende un ingrediente activo - en este caso, la cepa de la invención preferiblemente en forma de composición, junto con excipientes farmacéuticamente aceptables. La expresión "producto farmacéutico" no se limita a medicamentos. La expresión "farmacéuticamente aceptable" tal como se usa en este documento se refiere a compuestos, materiales, composiciones y / o formas de dosificación que son, dentro del alcance del criterio médico, apropiados para su uso en contacto con los tejidos de un sujeto (por ejemplo, humano) sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica, u otro problema o complicación, acorde con una relación beneficio / riesgo razonable. Cada portador, excipiente, etc. también debe ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la formulación. Portadores, excipientes, etc. adecuados se pueden encontrar en textos farmacéuticos estándar.
El producto farmacéutico puede adoptar diferentes formas o nombres dependiendo de la ruta de aprobación del producto y también en función del país. Por ejemplo, un medicamento es un producto farmacéutico en particular. Un alimento médico es otro producto farmacéutico en particular. Las expresiones "alimento médico" o "alimentos para fines médicos especiales" se utilizan en algunos países para referirse a un alimento especialmente formulado y destinados al tratamiento dietético de una enfermedad que tiene necesidades nutricionales distintivas que no pueden
ser satisfechas solo por una dieta normal. Se definen en normativas tales como la Food and DrugAdministration's 1988 Orphan Drug Act Amendments en los Estados Unidos, y la Directiva de la Comisión 1999/21/CE en Europa. Los alimentos médicos son distintos de la categoría más amplia de complementos alimenticios y de alimentos tradicionales que guardan una declaración de propiedades saludables. Por lo tanto, en una realización particular, la composición de la invención es un alimento médico.
A menudo, las composiciones bacterianas probióticas, tales como la descrita en este documento, se consideran como suplementos alimenticios. Un suplemento alimenticio, también conocido como complemento dietético o complemento nutricional se considera otro producto farmacéutico en particular. Esta es una preparación destinada a complementar la dieta y proporcionar nutrientes o ingredientes beneficiosos que generalmente no se ingieren en la dieta normal o no puede ser consumidos en cantidades suficientes. Sobre todo, los suplementos alimenticios son considerados como productos alimenticios, pero a veces se definen como fármacos, productos naturales para la salud o productos nutracéuticos. En el sentido de la presente invención, los suplementos dietéticos incluyen también nutracéuticos. Los suplementos dietéticos se venden generalmente "over the counter (de venta libre), es decir, sin receta médica. Si el suplemento alimenticio adopta la forma de una píldora o una cápsula, comprende excipientes que son el mismo que el utilizado en medicamentos. Un suplemento alimenticio, sin embargo, también puede adoptar la forma de un producto alimenticio que está reforzado con algunos nutrientes (por ejemplo, una barrita o yogur).
Por lo tanto, en una realización particular, la composición de la invención es un suplemento alimenticio.
Si la composición de acuerdo con la invención es un suplemento alimenticio, éste se puede administrar como tal, se puede mezclar con un líquido bebible adecuado, tal como agua, yogur, leche o zumo de fruta, o se puede mezclar con alimentos sólidos o líquidos. En este contexto, el suplemento alimenticio puede estar en forma de comprimidos o pastillas, píldoras, cápsulas, gránulos, polvos, suspensiones, sobres, dulces, barras, jarabes y formas de administración correspondientes, generalmente en forma de una dosis unitaria. Preferiblemente, el suplemento alimenticio que comprende la composición de la invención se administra en forma de comprimidos, pastillas, cápsulas o polvos, fabricado en procesos convencionales de preparación de suplementos dietéticos.
La cepa de la invención puede ser también incluida en una variedad de productos alimenticios o productos comestibles, tales como productos lácteos (un yogur, un queso, una leche fermentada, una leche en polvo, un producto fermentado a base de leche, un helado, un producto a base de cereal fermentado, un polvo a base de leche), pan, barras, coberturas, galletas y cereales, una bebida o un aliño. La expresión "producto comestible" se usa aquí en su sentido más amplio, incluyendo cualquier tipo de producto, en cualquier forma de presentación, que puede ser ingerida por un animal, es decir, un producto que es organolépticamente aceptable. La expresión “producto alimenticio” se entiende como un producto comestible que también proporciona un soporte nutricional para el cuerpo. Ejemplos de otros productos alimenticios son productos de carne (por ejemplo, salchichas o carne para untar), coberturas de chocolate, rellenos y glaseados, chocolate, productos de confitería, productos horneados (tartas, pasteles), salsas y sopas, zumos de frutas y blanqueadores de café. Productos alimenticios particularmente interesantes son los suplementos dietéticos y las fórmulas infantiles. El producto alimenticio comprende preferentemente un material de soporte tal como gachas de avena, alimentos fermentados de ácido láctico, almidón resistente, fibras dietéticas, hidratos de carbono, proteínas y proteínas glicosiladas. En una forma de realización particular, la cepa de la invención está encapsulada o recubierta.
Por lo tanto, en una realización particular, la composición de la invención es un producto alimenticio.
Algunas de las formas antes mencionadas se consideran dispositivos médicos en algunos países, por ejemplo, cápsulas vaginales, un tampón u otros tipos de aplicadores. Por lo tanto, en una realización particular, la composición de la invención es un dispositivo médico.
En otra realización particular, la composición de la invención es un producto de higiene personal, que puede ser vendido "over the counter" en un supermercado o en una farmacia. Ejemplos de producto de higiene personal son tampones, compresas, toallas sanitarias, pañales, jabones, champús, geles, pomadas, cremas, aerosoles y lociones.
En particular, la composición de la invención está en forma de tabletas intravaginales mucoadhesivas desintegrables que se aplican por vía intravaginal utilizando un dispositivo aplicador. Los comprimidos de 700 mg comprenden particularmente hidroxipropilmetilcelulosa, lactosa anhidra y ácido cítrico y 100 mg (1-2x109 ufc) de la cepa CECT 7504 (véase el EJEMPLO 8).
Por lo tanto, ha de entenderse que la composición de la invención es útil en el tratamiento de la candidiasis y vaginosis bacteriana, independientemente de la forma de la composición, es decir, independientemente de ser un producto farmacéutico, un medicamento, un producto alimenticio, un producto comestible, un suplemento alimenticio, un alimento médico, o un producto de higiene personal.
Las cepas de la invención se producen mediante el cultivo de las bacterias en un medio adecuado y bajo condiciones adecuadas. Las cepas se pueden cultivar solo para formar un cultivo puro, o como un cultivo mixto junto con otros microorganismos, o mediante el cultivo de bacterias de diferentes tipos por separado y luego combinándolas en las proporciones deseadas. Después del cultivo, la suspensión celular se recupera y se utiliza
como tal o se trata de la manera deseada, por ejemplo, mediante la concentración o la liofilización para ser empleada posteriormente en la preparación de productos farmacéuticos o comestibles. A veces, la preparación probiótica se somete a un proceso de inmovilización o de encapsulación con el fin de mejorar la vida útil. Varias técnicas para la inmovilización o la encapsulación de bacterias son conocidas en la técnica.
Es evidente que mediante el uso de la cepa depositada como material de partida, el experto en la materia puede de manera rutinaria, por mutagénesis convencional o técnicas de re-aislamiento, obtener más mutantes o derivados de los mismos que conservan o mejoran las características y ventajas de la cepa que forma la composición de la invención que se describen en la presente memoria. En una forma de realización del primer aspecto de la invención, el mutante se obtiene mediante el uso de tecnología de ADN recombinante. En otra forma de realización del primer aspecto de la invención, el mutante se obtiene por mutagénesis aleatoria. En una tercera forma de realización del primer aspecto de la invención, la variante es una variante que se produce de manera natural. Por lo tanto, otro aspecto de la invención se refiere a un método para obtener un mutante de la cepa de Lactobacillus pentosus depositada en la Colección Española de Cultivos Tipo con el número de acceso CECT 7504, que comprende el uso de la cepa depositada como material de partida y la aplicación de mutagénesis, en el que el mutante obtenido conserva o mejora las actividades antimicóticas y / o antibacterianas y/o la capacidad de colonizar el tracto vaginal de la cepa originaria depositada.
La cantidad eficaz de unidades formadoras de colonias (ufc) para la cepa en la composición será determinada por el experto en la técnica y dependerá de la formulación final. Por ejemplo, cuando se administra por vía oral, la cepa de la invención está presente en la composición en una cantidad que da una dosis diaria eficaz de 107 a 1012 ufc, de acuerdo con la legislación vigente, preferiblemente de 109 a 1011ufc y, cuando se administra por vía vaginal o por vía rectal, en una cantidad que da una dosis diaria eficaz de 103 a 1012ufc, preferiblemente de 105 a 1010ufc. La expresión "unidad formadora de colonias" ("ufc") se define como el número de células bacterianas reveladas por recuentos microbiológicos en placas de agar. Los suplementos dietéticos contienen por lo general cepas probióticas en una cantidad comprendida entre 107 y 1012ufc / g. En una realización particular, la composición de la invención es un suplemento alimenticio que comprende entre 109-1011ufc / g.
El uso general de la cepa CECT 7504 es en forma de células viables. Sin embargo, también podría extenderse a células no viables tales como cultivos muertos o lisados celulares (obtenidos, por ejemplo, por la exposición a pH alterado, tratamiento con ultrasonidos, radiación, temperatura o presión, entre otros medios para matar o lisar bacterias) o composiciones que contienen factores beneficiosos producidos por la cepa CECT 7504.
A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretende excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Objetos adicionales, ventajas y características de la invención serán evidentes para los expertos en la técnica tras el examen de la descripción o pueden aprenderse mediante la puesta en práctica de la invención. Además, la presente invención cubre todas las posibles combinaciones de realizaciones particulares y preferidas descritas en este documento.
Los siguientes ejemplos y dibujos se proporcionan en este documento para fines ilustrativos, y sin pretender que sean limitativos de la presente invención.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
FIG. 1. Patrones de electroforesis de campo pulsante de ADN genómico restringido con Sma-I ySfi-I de (de derecha a izquierda): Lactobacillus pentosus CECT 7504 (I1001), Lactobacillus plantarum P17630 y marcador molecular de ADN (M).
La FIG. 2 muestra el crecimiento de cepas de Lactobacillus en un fluido vaginal simulado suplementado con lisozima (concentración final 0, 4 y 16 mg/l). “Lys” significa “lisozima”. I1001 es la cepa CECT 7504 y P17630 es la cepa control de L. plantarum P17630.
La FIG. 3 muestra cómo la cepa L. pentosus CECT 7504 (I1001) presenta un crecimiento equiparable al probiótico bien conocido L. rhamnosus GG en un medio de cultivo que simula un medio industrial. “t” representa “tiempo” y ufc/ml son el número de células viables.
La FIG. 4 muestra la cantidad de ADN de las especies L. pentosus y L. plantarum encontrados en el fluido vaginal de mujeres voluntarias participantes en el estudio después de la administración del producto. Los datos se expresan como medias y error estándar de la media (SEM). El tiempo se indica en horas tras la administración; las copias de ADN por ml de fluido vaginal están en una escala logarítmica. Los círculos en blanco corresponden a datos de voluntarios que toman el producto durante 5 días consecutivos, y los círculos negros corresponden a datos de voluntarios que toman el producto durante 3 días consecutivos.
EJEMPLOS
Tal como se usa en este documento, I1001 corresponde a Lactobacillus pentosus CECT 7504.
EJEMPLO 1. Aislamiento del microorganismo
La cepa CECT 7504 fue aislada de torundas vaginales de mujeres jóvenes y sanas de entre 14-21 años de edad que viven en malas condiciones higiénicas. Las muestras se disolvieron en tampón PBS a pH 7,4, y se sembraron alícuotas en diferentes medios para la incubación en diferentes condiciones. El tiempo de incubación dependió de la tasa de crecimiento de la cepa y funciona normalmente a partir de 24 h hasta 3 días. El aislamiento de cepas individuales se realizó con los mismos medios de selección, a continuación, se realizaron tinciones Gram y ensayos de los exámenes microscópicos para su caracterización inicial.
La cepa se cultivó inicialmente en medio MRS complementado con 100 pg/l de novobiocina (Sigma), 5 pg/ml de nistatina 5 pg/ml de cicloheximida (Sigma), 1 mg/l de ampicilina, 10 pg/ml de vancomicina y se incubaron a 30 °C en condiciones anaerobias y pH 6,4. La tinción Gram mostró una clara tinción Gram-positiva, así como morfología de bacilos no formadores de esporas.
EJEMPLO 2. Caracterización taxonómica de la cepa
Las bacterias se recogieron, lavaron y resuspendieron en tampón de pre-lisis (480 ml de EDTA 50 mM, pH 8,0; 120 ml de lisozima 10 mg/ml) a 37 °C durante 60 min. Se extrajo el ADN utilizando el kit de purificación de ADN genómico Wizard (Promega). Después de la centrifugación de las bacterias pre-tratadas a 14000 g durante 2 min para eliminar el sobrenadante, se siguió el protocolo de Promega. Brevemente, las bacterias se resuspendieron en solución de lisis de núcleos y se incubaron a 80 °C durante 5 min y después se enfriaron a temperatura ambiente. Los lisados celulares se incubaron en solución de RNasa a 37 °C durante 60 min y las proteínas se precipitaron mediante la adición de la solución de precipitación de proteínas y agitación a alta velocidad. Las muestras se enfriaron y se centrifugaron a 15000 g durante 3 min. Los sobrenadantes que contenían el ADN se transfirieron a tubos limpios de microcentrífuga de 1,5 ml y se mezclaron con 600 ml de isopropanol por inversión. El ADN se recogió por centrifugación a 15000 g durante 2 min y se vertió cuidadosamente el sobrenadante. Las muestras de ADN se lavaron con 600 ml de etanol al 70% invirtiendo suavemente el tubo varias veces. El etanol se separó por aspiración, después de la centrifugación a 15000 g durante 2 min. Por último, el sedimento de ADN se resuspendió en 100 ml de una solución de rehidratación mediante incubación a 65 °C durante 1 h. Las muestras fueron almacenadas a 2-8 °C.
2.1. Identificación de géneros y especies
El ARNr 16S fue amplificado por PCT utilizando los cebadores universales Eub27f y Eub1492r, que producen un fragmento de la secuencia prácticamente completa del gen 16S (más de 1.400 nucleótidos) (TABLA 1). Después, el ADN se lavó utilizando el kit 10 Quiaquick (Quiagene).
TABLA1. Cebadores usados para la amplificación y secuenciación del gen 16S
Se realiza ron cuatro reacci ones de secue nciaci ón conse cutiva s para cada muest
un analizador genético 3130 (Applied Biosystems), utilizando el kit BigDye v.3.1 y los cebadores que se muestran en la TABLA 1. La recogida de datos y los cromatogramas fueron construidos usando el software de Análisis de Secuencia de ADN v.5.2 (Applied Biosystems) y se examinó mediante análisis visual con Chromas (Technelysium Pty Ltd.) y BioEdit (Ibis Biosciences). s Eq ID NO: 7 es la secuencia del gen 16S de la cepa CECT 7504.
La identificación de género se realizó mediante la herramienta Ribosomal Database Project (RDP) (Wang, Q., et al., Clasificador bayesiano Naive para una rápida asignación de secuencias de ARNr en la nueva taxonomía bacteriana. Appl. Environ. Microbiol., 2007, Vol. 73 (16): páginas 5261-5267]. La identificación de especies se realizó por comparación de la secuencia obtenida con secuencias de 16S de las cepas tipo, en el Ribosomal Database Project (Cole, J.R., et al, The Ribosomal Database Project (RDP-II) introduce myRDP y los datos públicos de calidad controlada Nucl. Acids Res., 2007, Vol. 35 (suppl_1). páginas. D169-172). El emparejamiento más cercano para la cepa de Lactobacillus pentosus JCM 1558 (100% puntuación de similitud máxima), que es la cepa tipo de la especie Lactobacillus pentosus. La secuencia 16S de la cepa CECT 7504 también se alineó con la base de datos de secuencias NCBI usando BLAST, dando como resultado un emparejamiento muy próximo con la cepa de Lactobacillus plantarum KLDS1.0676. Debido al hecho de que las bases de datos de secuencias son dinámicas al incorporar continuamente nuevas secuencias genéticas, la cepa CECT 7504 se puede clasificar como Lactobacillus pentosus o Lactobacillus plantarum. Es sabido que las especies Lactobacillus plantarum y pentosus están estrechamente relacionadas, siendo así intercambiables en la práctica.
2.2. Genotipado de la cepa
La caracterización se realizó por digestión genómica y electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE). La cepa CECT 7504 se sometió a un protocolo previamente descrito (Rodas, A.M., et al, Estudio polifásico de cepas de Lactobacillus de vino: Implicaciones taxonómicas. Int J Syst Evol Microbiol, 2005. Vol. 55 (1): páginas 197-207) con modificaciones menores. Las cepas se cultivaron en placas de agar MRS y se incubaron a 37 °C 5% de CO2 durante 18 h. Las células se recogieron y se lavaron 3 veces en 8 ml de PET (Tris 10 mM, pH 7,6, NaCl 1 M) y después se centrifugaron a 6000 rpm durante 10 min. Los sedimentos se resuspendieron en 700 ml de tampón de lisis (Tris 6 mM, NaCl 1 M, EDTA 0,1 M, SLS al 0,5%, ácido desoxicólico al 0,2%; 1 mg/ml de lisozima; 40 U/ml de mutanolisina; 20 mg/ml de RNasa). Un volumen igual de 1,6% de agarosa de bajo punto de fusión (FMC BioProducts, Rockland, ME, EE.UU.) se añadió a las células resuspendidas y se dejó que solidificara a 4 °C durante 1 h. Los insertos se transfirieron a 2 ml de tampón de lisis II (EDTA 0,5 M pH 9,2, 1% de N-lauril sarcosina y 1 mg / ml de pronasa) y se incubaron a 50 °C durante 48 h. Los insertos se lavaron entonces a temperatura ambiente con tampón TE (Tris 10 mM, EDTA 1 mM pH 8,0). La digestión total del ADN se realizó separadamente con enzimas de restricción Sma-I y Sfi-I (Roche Diagnostics). La cepa probiótica comercial de L. plantarum P17630 se utilizó como control.
Una electroforesis en gel de campo pulsado se realizó utilizando un aparato CHEF DRIII (BioRad Laboratories). Los insertos se cargaron en un gel de agarosa al 1% (agarosa SeaKem ME, FMC BioProducts, ME, EE.UU.). La TABLA 2 describe las condiciones de electroforesis para cada enzima. Los marcadores de peso molecular de ADN fueron el marcador de escalera lambda PFG y el marcador de bajo intervalo PFG (New England Biolabs). Después de la electroforesis, los geles se tiñeron con bromuro de etidio y UV utilizando el Sistema GelDoc (BioRad). Los resultados se representan en la FIG. 1.
TABLA2. Condiciones de electroforesis para este estudio
Como se muestra en la FIG. 1, los patrones de restricción de Sfi-I ySma-I de electroforesis de campo pulsante fueron diferentes para la cepa de la invención L. pentosus CECT 7504 (I1001) y una cepa control comercial perteneciente a la especie estrechamente relacionada L. plantarum (P17630). La PFGE permite distinguir entre cepas de la misma especie, y por lo tanto puede ser utilizada para identificar únicamente una determinada cepa bacteriana dentro de las especies bacterianas (Rodas, A.M., et al., 2005 supra).
EJEMPLO 3. Resistencia al fluido vaginal
El fluido vaginal contiene una gran variedad de factores antimicrobianos que actúan por diferentes mecanismos, tales como pH ácido, lisozima, lactoferrina y defensinas. Por lo tanto, demostrar que una cepa bacteriana es capaz de sobrevivir en un ambiente ácido (Dho, G., et al., Características microbianas de Lactobacillus plantarum P17630 contenida en supositorios vaginales. GIMMOC, 2003. Vol. VII (2): páginas 102-8) no es garantía suficiente de que esta cepa será capaz de sobrevivir en el entorno vaginal, ya que contiene otros factores antimicrobianos además de pH ácido.
Fluido Vaginal (Sintético)
Se utilizó un simulador de fluido vaginal (Owen, D.H. et al., Un simulador de fluido vaginal. Contraception, 1999. Vol.
59 N° 2: páginas 91-5], al que se añadieron proteínas y péptidos antibacterianos: 3,5 g/l de NaCl, 1,4 g/l de KOH, 0,22 g/l de Ca(OH)2, 0,02 g/l de BSA, 2 g/l de ácido láctico, 1 g/l de ácido acético, 0,16 g/l de glicerol, 0,4 g/l de urea y 5 g/l de glucosa. El pH se ajustó posteriormente a 4,2 con ácido láctico.
Proteínas Antibacterianas
La lisozima es una de las sustancias antibacterianas en una mayor concentración en el fluido vaginal. Su concentración varía entre 1 y 4 mg/l en mujeres sanas o mujeres afectadas por vaginosis bacteriana, pero puede llegar a 16 mg/l o más en mujeres que padecen candidiasis vulvovaginal (Valore, E.V., et al., 2006, supra]. La lisozima tiene un amplio espectro de actividad antibacteriana, pero es especialmente activa contra bacterias, tales como lactobacilos. Por lo tanto, es de gran importancia para asegurar la selección de una cepa capaz de sobrevivir a altas concentraciones de lisozima con el fin de obtener un probiótico que puede beneficiar a todas las mujeres con candidiasis vulvovaginal.
Péptidos Antibacterianos
La actividad de defensinas p-2 y p-3 contra Lactobacillus ha sido bien documentada. Sin embargo, la defensina p-2 se encuentra en una concentración 30 veces menor que la defensina p-3 (Ghosh, S.K., et al, cuantificación de defensinas beta-2 y -3 en los fluidos corporales: Aplicación de Estudios de la inmunidad innata. Clin Chem., 2007. Vol. 53 N°4: páginas 757-765]. La concentración de defensina p-3 en el fluido vaginal puede estar entre 1 y 5 mg/l.
Por el contrario, otras proteínas antimicrobianas, tales como lactoferrina, tienen poca actividad frente a Lactobacillus, por ejemplo, la actividad antibacteriana de la lactoferrina se basa principalmente en la interrupción del metabolismo de hierro bacteriano y los lactobacilos no requieren hierro para crecer (Archibald, F., Manganeso: su adquisición por parte y en función de las bacterias del ácido láctico. Critical Rev. Microbiol., 1986. Vol. 13 N°1: páginas 63-109].
Las cepas de lactobacilos se cultivaron durante la noche en caldo MRS. Las células se recogieron por centrifugación y se resuspendieron en PBS a razón de 107 ufc / ml. Se inocularon 20 pl de la suspensión celular en 200 pl de fluido vaginal simulado complementado con lisozima (0, 4 y 16 mg/l de concentración final) o 4 mg/l de lisozima más defensina p-3 (0, 2 y 4 mg/l de concentración final). Las placas de microtitulación se incubaron durante 3 h a 37 °C y el número de células viables que quedan en cada pocillo se contó mediante dilución en serie y siembra en agar MRS. Todos los experimentos se realizaron por triplicado.
De 10 cepas de lactobacilos aisladas, la cepa CECT 7504 fue una de las cinco cepas que muestran resistencia tanto a la lisozima y como a la defensina p-3. La cepa CECT 7504 mostró una alta resistencia a concentraciones de lisozima de hasta 16 mg/l (véase la FIG. 2). Por otro lado, la cepa control L. plantarum P17630 (ISADIN) mostró una marcada disminución de la viabilidad (90%) cuando se expone a concentraciones de lisozima por encima de 4 mg/l, tales como las que se pueden encontrar en una fracción significativa de pacientes con candidiasis vulvovaginal.
Es de destacar, que tanto la cepa CECT 7504 como la cepa de L. plantarum P17630 eran resistentes a concentraciones de defensina p-3 de 2 mg/l y 4 mg/l, ya sea solo o en combinación con 4 mg/l de lisozima, lo que indica que ambas están preparadas a sobrevivir en el entorno de una vagina sana.
EJEMPLO 4. Propiedades anti-microbianas
4.1. Actividad contra C. albicans y C. glabrata
La actividad frente a C. albicans y C. glabrata fue sometida a ensayo usando el método de capa de agar. Brevemente, las cepas de lactobacilos se cultivaron durante la noche en agar MRS (Scharlab) y se colocaron con un asa estéril para bacterias como dos líneas rectas cruzadas. Las placas se incubaron durante 24 h a 37 °C y posteriormente se recubrieron con 6 ml de medio líquido YM (Scharlab) inoculado con 20 pl de un cultivo durante la noche de Candida en caldo YM. Las placas se dejaron enfriar y se incubaron de nuevo durante 14 h y la zona de inhibición se midió en tres puntos diferentes. Las cepas de lactobacilos fueron inicialmente sometidas a ensayo contra una cepa de C. albicans (CECT 1392). Las cepas que mostraban una actividad significativa fueron posteriormente sometidas a ensayo frente a cuatro cepas más de Candida: C. albicans CECT 1472 y 1002 y C. glabrata CECT 1448 y CECT 1900. Todos los experimentos se realizaron por triplicado.
De 46 cepas de lactobacilos aisladas a partir de muestras vaginales, 35 mostraron una actividad significativa frente a C. albicans CECT 1392. Sin embargo, sólo 8 cepas de lactobacilos muestran una actividad significativa contra las tres cepas de C. albicans. Además, sólo 3 cepas de lactobacilos muestran una actividad significativa, tanto frente a cepas de C. albicans comno de C. glabrata. Una muestra de los resultados se muestra en la TABLA 3.
TABLA3
La cepa CECT 7504 mostró una mayor actividad frente a las tres cepas de C. albicans en comparación con la cepa probiótica comercial Lactobacillus plantarum P17630. La mayor parte de los lactobacilos de tipo salvaje sometidos a ensayo mostraron actividad contra dos cepas como máximo. Además, la cepa CECT 7504 mostró una alta actividad contra una cepa de C. glabrata y alguna actividad contra una segunda cepa, mientras que tanto L. plantarum P17630 como otras cepas de tipo salvaje mostraron baja actividad contra la primera cepa y ninguna actividad contra la segunda cepa (TABLA 3).
4.2. Acidificación del entorno vaginal
Es ampliamente aceptado que una de las funciones fundamentales de la flora vaginal sana es la acidificación del fluido vaginal para prevenir el crecimiento excesivo de especies bacterianas no deseables, es decir, la vaginosis bacteriana, principalmente a través de la producción de los ácidos láctico y acético. Por lo tanto, una alta producción de ácido láctico es un rasgo deseable para una cepa probiótica para la gestión de la vaginosis bacteriana.
La capacidad de acidificar el fluido vaginal se extrapola a menudo a partir de la capacidad de las cepas de acidificar medios de cultivo de laboratorio típicos o leche. Sin embargo, la composición del fluido vaginal (baja concentración de nutrientes) es bastante diferente de la composición de los medios de cultivo de laboratorio o de la leche, que son ricos en nutrientes. Por lo tanto, suponiendo que una cepa tenga una buena capacidad para sobrevivir, crecer y acidificar el fluido vaginal debido a su capacidad de sobrevivir, crecer y acidificar un medio con una composición diferente es por lo menos arriesgada.
Con el fin de detectar el potencial para acidificar el fluido vaginal, se utilizó una simulación del fluido vaginal modificado (Owen, D.H. et al., 1999, supra] complementado con 4 mg/l de lisozima (la concentración más alta observada en la vaginosis bacteriana (Valore, E.V., et al, 2006, supra]): 3,5 g/l de NaCl, 1,4 g/l de KOH, 0,22 g/l de Ca(OH)2, 0,02 g/l de BSA, 2 g/l de ácido láctico, 1 g/l de ácido acético, 0,16 g/l de glicerol y 0,4 g/l de urea. El pH se ajustó a 5,5 usando NaOH 1N y la glucosa se añadió a 20 g/l para ser capaz de detectar una gota en el pH causado por la fermentación.
Las cepas de lactobacilos se cultivaron durante la noche en caldo MRS y se inocularon 50 pL en 3 ml de fluido vaginal simulado modificado. Se midió el pH después de la incubación durante la noche a 37 °C. Todos los experimentos se realizaron por triplicado.
La cepa CECT 7504 mostró la mayor capacidad de acidificar el fluido vaginal entre las cepas de lactobacilos sometidas a ensayo, que fue significativamente mayor que la capacidad mostrada por la cepa control P17630 (TABLA 4). La capacidad de acidificación de la cepa CecT 7504 también fue la mejor entre los materiales aislados con la actividad más alta frente a Candida.
TABLA 4
EJEMLO 5. Adhesión a las células del epitelio vaginal
Cepas de lactobacilos marcadas con timidina tritiada se incubaron con cultivos confluentes de células HeLa, una línea celular obtenida a partir del epitelio del cuello uterino vaginal usada previamente para evaluar la adherencia de lactobacilos al epitelio vaginal ([Atassi, F., et al., Cepas de Lactobacillus aisladas de la microbiota vaginal de mujeres sanas inhiben Prevotella bivia y Gardnerella vaginalis en cocultivo y cultivo celular. FEMS Immunology & Medical Microbiology, 2006. Vol. 48 N°3: páginas 424-432; Mastromarino, P., et al, Caracterización y selección de cepas de Lactobacillus vaginales para la preparación de comprimidos vaginales. Journal of Applied Microbiology, 2002. Vol. 93 N°5: páginas 884-893]. Esta metodología permite contar todas las células de lactobacilos adheridas en lugar de la toma de muestras parciales de las células epiteliales y la realización de recuentos visuales de lactobacilos adheridos por microscopía, lo que resulta en recuentos más fiables.
Nuestra experiencia demuestra que la preincubación en medios ácidos (tales como el fluido vaginal) podría alterar la adherencia de las bacterias, principalmente debido a la expresión de proteínas HSP en la membrana. Por otra parte, es importante tener en cuenta que los presentes estudios se han realizado sobre una monocapa confluente de células epiteliales para simular las condiciones reales del epitelio, no en las células epiteliales individuales en solución como se informó para otros probióticos (Culici, M., et al, Adherencia de Lactobacillus plantarum P17630 a las células epiteliales vaginales y su influencia en la adhesión de Candida albicans. GIMMOC, 2004. Vol. 8 N°1: páginas 34-41].
Células HeLa se cultivaron hasta 95-100% de confluencia en placas de 24 pocillos. Las cepas de lactobacilos se cultivaron durante la noche en 10 ml de medio MRS con timidina tritiada (10 pCi). Luego, las células bacterianas fueron recuperadas por centrifugación y se resuspendieron a razón de 5x108 ufc/ml en fluido vaginal simulado con
pH ajustado a 5 usando ácido láctico durante 15 min a 37 °C. Partes alícuotas de 0,5 ml se diluyeron en PBS para obtener suspensiones de 2x107 ufc/ml y 2.5x106 ufc/ml, que son más o menos equivalentes a las bacterias a la proporción de células HeLa de 200:1 y 25:1.
Se añadieron 0,5 ml de las suspensiones bacterianas a los pocillos que contenían cultivos confluentes de células HeLa y se co-incubaron durante 45 min a 37 °C. A continuación, los pocillos se lavaron dos veces con PBS para eliminar las bacterias poco adheridas. Finalmente, se rasparon los pocillos y el contenido se colocó en viales de centelleo para cuantificar la cantidad de timidina tritiada. Además, partes alícuotas de las suspensiones bacterianas inoculadas en las placas de 24 pocillos se colocaron en viales de centelleo para calcular la relación entre la radiactividad y las células bacterianas para cada cepa. Todos los experimentos se realizaron por duplicado.
La cepa CECT 7504 muestra mayor adherencia a las células epiteliales vaginales que la cepa control P17630 como se muestra en la tabla a continuación (TABLA 5):
TABLA 5
EJEMPLO 6. Crecimiento en medio industrial
Se inoculó un inóculo de 0,5% de un cultivo durante la noche de cada cepa a ensayar en 100 ml de Medio Comestible General (Saarela, M., et al., Ácido de fase estacionaria y tratamientos de calor para la mejora de la viabilidad de las bifidobacterias y lactobacilos probióticos. Journal of Applied Microbiology, 2004. Vol. 96 N° 6: páginas. 1205-1214] pre-calentado a 37 °C, que fue utilizado como un sustituto de los medios industriales. Este medio está compuesto por 20 g/l de glucosa, 30 g/l de peptona de soja, 7 g/l de extracto de levadura, 1 g/l de MgSCM x 7 H2O en tampón fosfato potásico 0,01 M (pH 6,3). Las cepas se incubaron a 37 °C y se extrajeron partes alícuotas de 100 pL en diferentes momentos (0, 3, 6 y 23 horas) con el fin de cuantificar el número de células viables mediante recuento en placa. La cepa Lactobacillus rhamnosus GG (Valio Ltd), un probiótico bien conocido, se utilizó como control.
La cepa de L. pentosus CECT 7504 (I1001) muestra un crecimiento comparable a la del bien conocido probiótico L. rhamnosus g G en medio simulando medios industriales, alcanzando concentraciones de 109 ufc/ml después de un cultivo durante la noche a partir de un inóculo de 106 ufc/ml.
EJEMPLO 7. Tolerancia Vaginal en Conejos tras Administración Repetida
La tolerabilidad en la mucosa vaginal se determinó después de la administración de la cepa CECT 7504 a dos concentraciones diferentes (20 y 100 mg/ml, a 5x107 ufc/mg) en comparación con un grupo de control (solo vehículo), siguiendo la directriz ISC 10993-10:2002. Conejos hembra New Zealand White de 9-11 semanas de edad, de peso de 2,1 a 2,5 kg, fueron asignados al azar en tres grupos de 6 conejos cada uno y se mantuvieron en jaulas individuales a 17-20 °C y 50-70% de humedad relativa, y fueron alimentados con dieta estándar Teklad 2030C para conejo y agua del grifo ad libitum. Cada conejo se administró a la dosis de 1 ml/día una vez al día durante 7 días consecutivos por vía tópica en la vagina del conejo. Como vehículo se utilizó carboximetil celulosa de sodio al 1% en agua destilada como vehículo. El pH de las formulaciones fue de 7,6 para el vehículo solo, de 5,8 para la dosis de 20 mg/ml y de 5,6 para la dosis de 100 mg/ml.
La mortalidad se verificó dos veces al día y los signos clínicos una vez al día. El peso corporal se verificó dos veces durante la aclimatación, inmediatamente antes de la primera y la cuarta administración, y antes del sacrificio. Todos los animales se sacrificaron 24 horas después de la última administración por inyección intravenosa de pentobarbital sódico administrado en la vena de la oreja a una dosis de 60 mg/kg de peso corporal y un volumen de 1 ml/kg, y se realizó la autopsia. El aparato genital de cada animal fue examinado con especial énfasis en la superficie vaginal.
Después de separar la grasa y los tejidos adyacentes, los ovarios, la vagina y el útero de cada animal fueron fijados en tampón formalina al 10% neutra. Secciones de las zonas distal, medial y proximal de la vagina fueron embebidas, cortadas a un espesor nominal de 4 micrómetros, y teñidas con hematoxilina y eosina, y se examinaron microscópicamente, graduando las alteraciones observadas de acuerdo con la siguiente escala de evaluación (TABLA 6):
TABLA 6
La evaluación de las propiedades irritantes del producto de ensayo y la tolerabilidad se realiza basándose en las puntuaciones medias obtenidas. Se añaden los grados de evaluación microscópica de todos los animales en el grupo de ensayo y la suma se divide por el número de observaciones para obtener una media del grupo de ensayo, el valor medio de la irritación (MVI). La puntuación máxima es 16. Esto se repite para el grupo de control. La media del grupo de control se resta de la media del grupo de ensayo para obtener el índice de irritación, y se clasifican de acuerdo con la siguiente escala (TABLA 7):
TABLA 7
Signos clínicos
No se observaron ni mortalidad ni signos clínicos de toxicidad sistémica durante el período de estudio, y todos los animales sobrevivieron a la autopsia prevista. No se observaron diferencias notables en el peso corporal o la ganancia de peso corporal en el Grupo 2 (20 mg/ml de dosis). La pérdida de peso corporal se registró en dos
hembras del Grupo 3 (100 mg/ml de dosis). Sin embargo, las diferencias no fueron estadísticamente significativas (prueba de Dunnett) con respecto al grupo de control.
Hallazgos Macroscópicos y Microscópicos
Se observó un aumento de la incidencia de la coloración rojiza de la mucosa vaginal en comparación con el grupo de Control después de 7 días de la administración tópica de la cepa CECT 7504 a las concentraciones de 20 mg/ml y 100 mg/ml (5x107 ufc/mg). Se observó inflamación en la submucosa vaginal, así como aumento de la incidencia y / o gravedad de la congestión vascular y la infiltración de leucocitos debido a una respuesta inmune. Sin embargo, la respuesta fue dependiente de la dosis, y las alteraciones eran de gravedad mínima a 20 mg/kg y ligera a 100 mg/kg. En general, el valor de irritación media (VIM) obtenido en el Grupo 2 fue de 0,83, lo que indica que no hay respuesta irritativa a la concentración de 20 mg/ml. El valor de irritación media (VIM) obtenido en el Grupo 3 fue de 2,33, lo que indica una irritación mínima en la concentración de 100 mg/ml. Debe tenerse en cuenta que la microflora del tracto genital en la mucosa de conejo es muy escasa, conteniendo básicamente Staphylococus, Micrococcus y Pseudomonas (Jacques, M., et al., La microflora normal del tracto genital de la hembra de conejo. Can J Vet Res., 1986. Vol. 50: páginas 272-4]. Así, a diferencia de la flora vaginal en humanos, casi no hay lactobacilos y, por lo tanto, se observó una reacción inmune a un cuerpo extraño después de la administración de Lactobacillus pentosus CECT 7504.
EJEMPLO 8. Colonización Vaginal y Tolerabilidad en Voluntarios Femeninos después de la Administración Repetida
Un ensayo clínico de diseño abierto se llevó a cabo en 10 voluntarias con edades entre 18-40 años, con el fin de determinar la capacidad de la cepa CECT 7504 para colonizar el epitelio vaginal (como punto final primario) y para evaluar la tolerabilidad del producto (como punto final secundario). La administración se ensayó durante 3 y 5 días para evaluar si la duración de la exposición al probiótico influyó en su capacidad para colonizar el epitelio vaginal. Los criterios de inclusión fueron tener menstruaciones regulares y la voluntad de abstenerse de actividad sexual durante los días de la administración del producto y en la noche antes del día de muestreo. Fueron excluidas las mujeres que usan productos intravaginales, que tiene una infección vaginal o que toman antibióticos a partir de 15 días antes del inicio del estudio, así como mujeres con inmunosupresión, lactantes o embarazadas. El protocolo fue revisado y aprobado por el comité ético del Hospital Vall d'Hebron (Barcelona), y se llevó a cabo de conformidad con la Declaración de Helsinki y las directrices de Buena Práctica Clínica.
Se prepararon comprimidos intravaginales mucoadhesivos desintegrables de 700 mg hechas de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), lactosa anhidra y ácido cítrico, y que contenían 100 mg (1-2x109 ufc) de la cepa CECT 7504, con una fuerza de compresión de 60 N. Las voluntarias (21-36 años de edad, mediana de 29 años) fueron asignadas al azar para recibir ya sea comprimidos durante 3 días consecutivos (5 mujeres) o 5 días consecutivos (5 mujeres). Los comprimidos se aplicaron por vía vaginal por las voluntarias antes de ir a dormir, utilizando un dispositivo aplicador. Se utilizaron torundas estériles para recoger muestras de fluido vaginal justo antes de la primera administración y en los días 1, 3 y 8 después de la última administración. Las muestras se almacenaron a 4 °C hasta su análisis. Para evaluar la tolerabilidad, los voluntarios registraron los síntomas vaginales al día durante 3 semanas a partir del primer día de la administración de los comprimidos vaginales.
Se extrajo el ADN de las muestras usando el sistema automatizado EasyMAG (Biomerieux) y las muestras se ensayaron para determinar la presencia de la cepa CECT 7504 utilizando una PCR cuantitativa específica para las especies L. pentosus y L. plantarum. La amplificación fijó como objetivo una región de 144 pares de bases dentro de la región intergénica de ARNr 16S-23S. La sondafue 5'-marcada con FAM y 3'-marcada con NFQ-MGB (Applied Biosystems). La amplificación se llevó a cabo utilizando TaqMan Master Mix (Applied Biosystems) siguiendo las instrucciones del fabricante. El calentamiento consistió en 2 minutos a 50 °C y 10 minutos a 95 °C.
La desnaturalización se realizó a 95 °C durante 15 sseguido de hibridación y extensión a 60 °C durante 60 s, durante 45 ciclos. Las secuencias de los cebadores y la sonda se indican a continuación (TABLA 8).
TABLA 8
Se encontró que el probiótico era bien tolerado. Se informó de flujo vaginal leve por parte de algunas voluntarias, pero en otros estudios se ha demostrado que es atribuible a la introducción del producto en la vagina y no a la cepa
probiótica, como también se observa este efecto en voluntarios que recibieron el producto placebo (Stapleton A.E et al, Ensayo aleatorizado, controlado con placebo de fase 2 de un probiótico Lactobacillus Crispatus intravaginal para la Prevención de la infección del tracto urinario recurrente, Clinical Infectious Diseases, 2011, Vol. 52 N°10: páginas1212-17). No se encontróel ADN de cepas de L. pentosus o de L. plantarum en cantidades detectables en la línea base en las voluntarias. Sin embargo, se encontraron un promedio de 106 copias de ADN por ml de fluido vaginal en la mañana después de la última administración del probiótico (FIG. 4). Dos días más tarde, el probiótico fue aún detectable independientemente del grupo. En 2 de 5 pacientes en el grupo que recibió el comprimido durante 5 días consecutivos, el probiótico todavía era detectable 8 días después de la última administración, pero no en los que recibieron el producto durante 3 días.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Araya, M., et al., Guidelines for the Evaluation of Probiotics in Food - Joint FAO/WHO Working Group, FAO/WHO, Editor 2002, Food and Agriculture Organization of the United Nations and World Health Organization: Ontario, Canadá.
Anukam, K.C., et al., Clinical study comparing probiotic Lactobacillus GR-1 and RC-14 with metronidazole vaginal gel to treat symptomatic bacterial vaginosis. Microbes and Infection, 2006 Vol. 8 N°12-13: páginas 2772-2776.
Larsson, P.G., et al., Human lactobacilli as supplementation of clindamycin to patients with bacterial vaginosis reduce the recurrence rate; a 6-month, double-blind, randomized, placebo-controlled study. BMC Women's Health, 2008, Vol. 8 N°1: página 3.
Richter, S.S., et al., Antifungal Susceptibilities of Candida Species Causing Vulvovaginitis and Epidemiology of Recurrent Cases. J. Clin. Microbiol., 2005, Vol. 43 N°5: páginas 2155-2162
Valore, E.V., et al., Reversible Deficiency of Antimicrobial Polypeptides in Bacterial Vaginosis. Infect. Immun., 2006, Vol. 74 N°10: páginas 5693-5702.
Martinez, R.C.R., et al., Improved treatment of vulvovaginal candidiasis with fluconazole plus probiotic Lactobacillus rhamnosus GR-1 and Lactobacillus reuteri RC-14. Letters in Applied Microbiology, 2009, Vol. 48 N°3: páginas 269 274.
Okkers, D. J.et al., Characterization of pentocin TV35b, a bacteriocin-like peptide isolated from Lactobacillus pentosus with a fungistatic effect on Candida albicans, Journal of Applied Microbiology, 1999, Vol. 87, N° 5, páginas 726-734.
Dimitonova, S.P. et al., Antimicrobial activity and protective properties of vaginal lactobacilli from healthy Bulgarian women, Anaerobe 2007, Vol. 13, N° 5-6, páginas 178-184.
Pascual, L.M. et al., Lactobacillus rhamnosus L60, a potential probiotic isolated from the human vagina, Journal of General and Applied Microbiology 2008, Vol. 54, N° 3, páginas 141-148.
Andreoletti, O., et al., The maintenance of the list of QPS microorganisms intentionally added to food or feed. Pregunta n° : EFSA-Q-2008-006. The EFSA Journal, 2008, Vol. 923: páginas 1-48.
Bories, G., et al., Update on the criteria used in the assessment of bacterial resistance to antibiotics of human or veterinary importance. The EFSA Journal, 2008, Vol. 732: páginas 1-15.
Wang, Q., et al., Naive Bayesian Classifier for Rapid Assignment of rRNA Sequences into the New Bacterial Taxonomy. Appl. Environ. Microbiol., 2007, Vol. 73 N°16: páginas 5261-5267.
Cole, J.R., et al., The Ribosomal Database Project (RDP-II): introducing myRDP space and quality controlled public data. Nucl. Acids Res., 2007, Vol. 35 (supl_1): páginas D169-172.
Rodas, A.M., et al., Polyphasic study of wine Lactobacillus strains: taxonomic implications. Int J Syst Evol Microbiol, 2005, Vol. 55 N°1: páginas 197-207.
Dho, G., et al., Microbial characteristics of Lactobacillus plantarum P17630 contained in vaginal suppositories. GIMMOC, 2003, Vol. VII N°2: páginas 102-108.
Owen, D.H. et al., A vaginal fluid simulant. Contraception., 1999, Vol. 59 N°2: páginas 91-95.
Ghosh, S.K., et al., Quantification of Human beta-Defensin-2 and -3 in Body Fluids: Application for Studies of Innate Immunity. Clin Chem, 2007, Vol. 53N° 4: páginas 757-765.
Archibald, F., Manganese: its acquisition by and function in the lactic acid bacteria. Crit Rev Microbiol., 1986, Vol. 13 N°1: páginas 63-109.
Claims (15)
1. Una composición que comprende la cepa de Lactobacillus pentosus depositada en la Colección Española de Cultivos Tipo bajo el número de acceso CECT 7504.
2. La composición como se define en la reivindicación 1, para su uso en la prevención y/o el tratamiento de la candidiasis.
3. La composición para uso de acuerdo con la reivindicación 2, para su uso en la prevención y/o el tratamiento de la candidiasis vaginal.
4. La composición para uso de acuerdo con la reivindicación 3, para su uso en la prevención y/o el tratamiento de la candidiasis vaginal causada por Candida glabrata.
5. La composición para uso de acuerdo con la reivindicación 3, para su uso en la prevención y/o el tratamiento de la candidiasis vaginal con una respuesta inflamatoria elevada.
6. La composición para uso de acuerdo con la reivindicación 2, para su uso en la prevención y/o el tratamiento de la candidiasis en combinación con fármacos antimicóticos de triazol o nistatina.
7. La composición para uso de acuerdo con la reivindicación 2, para su uso en la prevención y/o el tratamiento de la candidiasis oral o intestinal.
8. La composición como se define en la reivindicación 1, para su uso en la prevención y/o el tratamiento de la vaginosis bacteriana.
9. La composición como se define en la reivindicación 1, para su uso como un medicamento.
13. La composición según la reivindicación 1, que es un producto de higiene personal.
14. Una cepa de Lactobacillus pentosus depositada en la Colección Española de Cultivos Tipo bajo el número de acceso CECT 7504.
15. Un método para obtener un mutante de la cepa de Lactobacillus pentosus depositada en la Colección Española de Cultivos Tipo bajo el número de acceso CECT 7504, que comprende utilizar la cepa depositada como material de partida y aplicar mutagénesis, donde el mutante obtenido mantiene o potencia las actividades antimicóticas y/o antibacterianas y/o la capacidad de colonizar el tracto vaginal de la cepa originaria depositada.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP13382326 | 2013-08-12 | ||
PCT/EP2014/067177 WO2015022297A1 (en) | 2013-08-12 | 2014-08-11 | Strain of lactobacillus pentosus as probiotic |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2742410T3 true ES2742410T3 (es) | 2020-02-14 |
Family
ID=49029045
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES14757862T Active ES2742410T3 (es) | 2013-08-12 | 2014-08-11 | Cepa de Lactobacillus pentosus como probiótico |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10149872B2 (es) |
EP (1) | EP3035943B1 (es) |
JP (1) | JP6587614B2 (es) |
KR (1) | KR102146146B1 (es) |
CN (1) | CN105555284B (es) |
AU (1) | AU2014307938B2 (es) |
BR (1) | BR112016002888B1 (es) |
CA (1) | CA2920819C (es) |
EA (1) | EA030595B1 (es) |
ES (1) | ES2742410T3 (es) |
MX (1) | MX368473B (es) |
MY (1) | MY171618A (es) |
PE (1) | PE20160191A1 (es) |
PH (1) | PH12016500304A1 (es) |
PL (1) | PL3035943T3 (es) |
PT (1) | PT3035943T (es) |
TW (1) | TWI643626B (es) |
WO (1) | WO2015022297A1 (es) |
ZA (1) | ZA201601119B (es) |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3347367A4 (en) * | 2015-09-09 | 2019-05-15 | Ubiome, Inc. | METHOD AND SYSTEM FOR DIAGNOSIS AND THERAPY DERIVED FROM MICROBIOMA FOR BACTERIAL VAGINOSIS |
BE1023643B1 (nl) | 2016-03-21 | 2017-06-01 | Yun NV | Vaginale preparaten voor het onderhouden en / of herstellen van een gezonde vrouwelijke microbiota |
BE1024425B9 (nl) * | 2016-06-21 | 2018-03-26 | Yun NV | Dermatologische preparaten voor het onderhouden en/of herstellen van een gezonde huidmicrobiota |
CN106520600A (zh) * | 2016-10-25 | 2017-03-22 | 天益健康科学研究院(镇江)有限公司 | 一种低pH条件下抑菌复合微生物制剂 |
WO2018129043A1 (en) * | 2017-01-03 | 2018-07-12 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for predicting risk of preterm birth |
US11138746B2 (en) | 2017-07-03 | 2021-10-05 | Ricoh Company, Ltd. | Diagnostic support system and diagnostic support method |
PL233261B1 (pl) * | 2017-08-21 | 2019-09-30 | Politechnika Lodzka | Szczep bakterii mlekowych Lactobacillus pentosus |
CN109662259B (zh) * | 2017-10-16 | 2022-07-29 | 江苏省农业科学院 | 一种富益生菌冻干毛豆粒产品及其制备方法 |
CN109864270B (zh) * | 2017-12-01 | 2022-07-29 | 江苏省农业科学院 | 一种富益生菌冻干胡萝卜丁产品及其制备方法 |
JP2020075921A (ja) * | 2018-11-02 | 2020-05-21 | ロート製薬株式会社 | 膣用固形医薬組成物 |
FR3089788B1 (fr) * | 2018-12-17 | 2020-12-18 | Lesaffre & Cie | Souche de levure Saccharomyces cerevisiae pour le traitement et/ou la prévention de candidoses oropharyngées |
IT201900000801A1 (it) * | 2019-01-18 | 2020-07-18 | Proge Farm Srl | Composizione comprendente batteri probiotici non vitali e suo uso in terapia |
KR102244492B1 (ko) * | 2020-10-21 | 2021-04-26 | 대한민국(관리부서:국립수산과학원) | 신규 락토바실러스 속 균주 및 그의 용도 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002113041A (ja) * | 2000-10-11 | 2002-04-16 | Uni Charm Corp | 皮膚常在菌をコントロールする吸収性物品 |
GB0124580D0 (en) * | 2001-10-12 | 2001-12-05 | Univ Reading | New composition |
AU2003220603A1 (en) | 2002-03-28 | 2003-10-13 | Transact Technologies Incorporated | Methods and apparatus for creating customized messages for printing on a transaction slip |
SE528382C2 (sv) * | 2004-10-05 | 2006-10-31 | Probi Ab | Probiotiska lactobacillusstammar för förbättrad vaginal hälsa |
JP5199551B2 (ja) * | 2006-07-06 | 2013-05-15 | サンスター株式会社 | カンジダ菌感染に基づく疾患の予防又は改善剤 |
IT1397566B1 (it) * | 2009-05-27 | 2013-01-16 | Probiotical Spa | Lactobacillus pentosus produttore di batteriocine, composizioni alimentari e farmaceutiche contenenti lo stesso e relativo uso |
IT1403661B1 (it) * | 2011-01-28 | 2013-10-31 | Probiotical Spa | Composizione effervescente in forma solida per uso in applicazioni vaginali per il trattamento di infezioni vaginali. |
-
2014
- 2014-08-08 TW TW103127325A patent/TWI643626B/zh active
- 2014-08-11 WO PCT/EP2014/067177 patent/WO2015022297A1/en active Application Filing
- 2014-08-11 EA EA201690218A patent/EA030595B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2014-08-11 KR KR1020167006568A patent/KR102146146B1/ko active IP Right Grant
- 2014-08-11 JP JP2016533902A patent/JP6587614B2/ja active Active
- 2014-08-11 MY MYPI2016700464A patent/MY171618A/en unknown
- 2014-08-11 PE PE2016000240A patent/PE20160191A1/es unknown
- 2014-08-11 ES ES14757862T patent/ES2742410T3/es active Active
- 2014-08-11 MX MX2016001764A patent/MX368473B/es active IP Right Grant
- 2014-08-11 PT PT14757862T patent/PT3035943T/pt unknown
- 2014-08-11 EP EP14757862.9A patent/EP3035943B1/en active Active
- 2014-08-11 CN CN201480050874.6A patent/CN105555284B/zh active Active
- 2014-08-11 AU AU2014307938A patent/AU2014307938B2/en active Active
- 2014-08-11 BR BR112016002888-0A patent/BR112016002888B1/pt active IP Right Grant
- 2014-08-11 PL PL14757862T patent/PL3035943T3/pl unknown
- 2014-08-11 CA CA2920819A patent/CA2920819C/en active Active
- 2014-08-11 US US14/911,730 patent/US10149872B2/en active Active
-
2016
- 2016-02-12 PH PH12016500304A patent/PH12016500304A1/en unknown
- 2016-02-18 ZA ZA2016/01119A patent/ZA201601119B/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20160193260A1 (en) | 2016-07-07 |
BR112016002888A2 (pt) | 2017-11-21 |
PT3035943T (pt) | 2019-09-04 |
JP2016533744A (ja) | 2016-11-04 |
CN105555284A (zh) | 2016-05-04 |
PH12016500304A1 (en) | 2016-05-02 |
EA030595B1 (ru) | 2018-08-31 |
JP6587614B2 (ja) | 2019-10-09 |
AU2014307938B2 (en) | 2017-08-31 |
AU2014307938A1 (en) | 2016-03-10 |
CA2920819A1 (en) | 2015-02-19 |
TWI643626B (zh) | 2018-12-11 |
KR102146146B1 (ko) | 2020-08-20 |
WO2015022297A1 (en) | 2015-02-19 |
MX368473B (es) | 2019-10-04 |
CA2920819C (en) | 2020-03-24 |
EP3035943A1 (en) | 2016-06-29 |
MY171618A (en) | 2019-10-21 |
BR112016002888B1 (pt) | 2021-12-14 |
CN105555284B (zh) | 2019-11-05 |
EP3035943B1 (en) | 2019-05-15 |
EA201690218A1 (ru) | 2016-07-29 |
KR20160046834A (ko) | 2016-04-29 |
US10149872B2 (en) | 2018-12-11 |
TW201534313A (zh) | 2015-09-16 |
PE20160191A1 (es) | 2016-04-15 |
MX2016001764A (es) | 2016-07-26 |
PL3035943T3 (pl) | 2019-10-31 |
ZA201601119B (en) | 2017-04-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2742410T3 (es) | Cepa de Lactobacillus pentosus como probiótico | |
ES2435065T3 (es) | Cepas de lactobacilos probióticos para mejorar la salud vaginal | |
US8668906B2 (en) | Lactobacillus plantarum strains as hypocholesterolemic agents | |
KR101840239B1 (ko) | 장 염증의 치료에 사용하기 위한 프로바이오틱 조성물 | |
JP7546829B2 (ja) | 泌尿生殖器の酵母感染症および細菌感染症の治療に適したプロバイオティクスなラクトバチルス・クリスパタス株 | |
ES2553177T3 (es) | Cepas de Lactobacillus plantarum como probióticos con efecto inmunomodulador especifico | |
EP3261723B1 (en) | Probiotic lactobacillus plantarum strains for urinary tract infections | |
Deshpande et al. | Probiotic Bacteriotherapy and Its Oral Health Perspective | |
Pascual et al. | Prevention strategy of urogenital infections by using Lactobacilli with probiotic properties | |
CA3239840A1 (en) | Bacillus clausii strain, compositions thereof, and methods of use |