ES2723883T3 - Inhibidores de glicosidasa - Google Patents

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Abstract

Un medicamento que comprende un compuesto de fórmula (I)**Fórmula** en la que X1 designa S u O; X2, W designan independientemente entre sí N o CR6; R1, R3, R4 designan independientemente entre sí Y; R3, R4 designan conjuntamente también -(CY2)p-; R2 designa COY, Y, Alq, Cic, (CY2)nAr, COAlq, CO(CY2)nAr, CONY2, CONYAlq, COOY, COOAlq, COO(CY2)nAr, SO2Y, SO2Alq, SO2(CY2)nAr, CY2OY o CY2NY2; R1, R2 designan conjuntamente también -(CY2)p-CONY2-(CY2)p-; R5 designa (CY2)qAr, OAr, Cic, Y o NY2; R6 designa Y, OY, Hal o CN; L designa -CY2-, -CO- o -SO2-; Y designa H o A; A designa alquilo acíclico no ramificado o ramificado que tiene 1-10 átomos de C, en que 1-7 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal; Alq designa alquenilo no ramificado o ramificado que tiene 2-10 átomos de C, en que 1-4 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal; Cic designa cicloalquilo que tiene 3-7 átomos de C, en que 1-4 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal; Ar designa un carbociclo monocíclico o bicíclico insaturado o aromático que tiene 3-12 átomos de C, que puede estar sustituido con al menos un sustituyente seleccionado del grupo de Hal, A, (CY2)n- OY, (CY2)n-NY2, COOY, SO2Y y CN, o que puede estar fusionado con un heterociclo monocíclico saturado, insaturado o aromático que tiene 1-5 átomos de C y 1-4 átomos de N, O y/o S; Hal designa F, Cl, Br o I; y m, n, p, q designan independientemente entre sí 0, 1, 2 o 3; y/o una sal fisiológicamente aceptable de los mismos; con la condición de que se excluya el éster metílico del ácido (5-piperidin-1-ilmetiltiazol-2-il)carbámico.

Description

DESCRIPCIÓN
Inhibidores de glicosidasa
La presente invención se refiere a un medicamento que comprende un compuesto de fórmula (I)
Figure imgf000002_0001
en la que X1, X2, W, R1 a R5, L y m tienen el significado según las reivindicaciones, y/o sales farmacéuticamente aceptables del mismo. Los compuestos de fórmula (I) pueden usarse como inhibidores de glicosidasa. Son también objetos de la invención composiciones farmacéuticas que comprenden como ingrediente activo un medicamento que comprende los compuestos de fórmula (I), y el medicamento que comprende los compuestos de fórmula (I), para uso en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer.
Un amplio intervalo de proteínas celulares, tanto nucleares como citoplasmáticas, se modifican postraduccionalmente mediante la adición del monosacárido 2-acetamido-2-desoxi-p-D-glucopiranósido (p-N-acetilglucosamina) que se enlaza a través de un grupo de enlace O-glicosídico. Esta modificación se hace referencia generalmente como N-acetilglucosamina O-ligada u O-GlcNAc. La enzima responsable de ligar postraduccionalmente p-N-acetilglucosamina (GlcNAc) con residuos de serina y treonina específicos de numerosas proteínas nucleocitoplásmicas es la O-GlcNAc transferasa (OGTasa). Una segunda enzima, conocida como O-GlcNAcasa, retira esta modificación postraduccional liberando las proteínas, haciendo de la modificación de O-GlcNAc un ciclo dinámico que ocurre varias veces durante el tiempo de vida de una proteína.
Las proteínas modificadas con O-GlcNAc regulan un amplio intervalo de funciones celulares vitales incluyendo, por ejemplo, transcripción, degradación proteosómica y señalización celular. La O-GlcNAc se encuentra también en muchas proteínas estructurales. Por ejemplo, se ha encontrado en una serie de proteínas citoesqueléticas, incluyendo proteínas de neurofilamentos, sinapsinas, la proteína de ensamblado de clatrina específica de sinapsina AP-3 y anquirina-G. Se ha encontrado que la modificación de O-GlcNAc es abundante en el cerebro. Se ha encontrado también en proteínas claramente implicadas en la etiología de varias enfermedades, incluyendo enfermedad de Alzheimer (EA) y cáncer.
Por ejemplo, está bien establecido que la EA y una serie de tauopatías relacionadas, incluyendo síndrome de Down, enfermedad de Pick, enfermedad de Niemann-Pick de tipo C y esclerosis lateral amiotrófica (ELA) se caracterizan, en parte, por el desarrollo de ovillos neurofibrilares (ONF). Estos ONF son agregados de filamentos helicoidales pareados (FHP) y están compuestos por una forma anormal de la proteína citoesquelética “tau”. Normalmente, tau estabiliza una red celular clave de microtúbulos que es esencial para distribuir proteínas y nutrientes en las neuronas. En pacientes de EA, sin embargo, tau se vuelve hiperfosforilada, perturbando su actividad normal, formando ONF y en última instancia agregando para formar ONF. Se encuentran seis isoformas de tau en el cerebro humano. En pacientes de EA, las seis isoformas de tau se encuentran en ONF, y todas están notablemente hiperfosforiladas. La tau en tejido cerebral sano porta solo 2 o 3 grupos fosfato, mientras que aquellas encontradas en los cerebros de paciente de EA portan, de media, 8 grupos fosfato. Un paralelismo claro entre los niveles de ONF en los cerebros de pacientes de EA y la gravedad de la demencia apoya fuertemente el papel clave de la disfunción de tau en EA. Las causas precisas de esta hiperfosforilación de tau permanecen esquivas. Por consiguiente, se ha dedicado un esfuerzo considerable hacia a) dilucidar la base fisiológica molecular de la hiperfosforilación de tau y b) identificar estrategias que podrían limitar la hiperfosforilación de tau con la esperanza de que estas podrían detener, o incluso revertir, la progresión de la enfermedad de Alzheimer. Varios elementos de prueba sugieren que la regulación positiva de una serie de cinasas puede estar implicada en la hiperfosforilación de tau, aunque muy recientemente se ha adelantado una base alternativa para esta hiperfosforilación.
En particular, ha surgido recientemente que los niveles de fosfato de tau están regulados por los niveles de O-GlcNAc en tau. La presencia de O-GlcNAc en tau ha estimulado estudios que correlacionan los niveles de O-GlcNAc con los niveles de fosforilación de tau. El reciente interés en este campo proviene de la observación de que se ha encontrado que la modificación de O-GlcNAc ocurre en muchas proteínas en residuos aminoacídicos que son también conocidos por estar fosforilados. Consistentemente con esta observación, se ha encontrado que los aumentos en los niveles de fosforilación dan como resultado niveles de O-GlcNAc disminuidos y, a la inversa, los niveles aumentados de O-GlcNAc se correlacionan con niveles de fosforilación disminuidos. Esta relación recíproca entre O-GlcNAc y fosforilación se ha denominado la “hipótesis de ying-yang”, y ha ganado apoyo bioquímico por el reciente descubrimiento de que la enzima OGTasa forma un complejo funcional con fosfatasas para retirar los grupos fosfato de proteínas. Como la fosforilación, la O-GlcNAc es una modificación dinámica que puede retirarse y reinstaurarse varias veces durante la vida útil de una proteína. Indicativamente, el gen que codifica la O-GlcNAcasa se ha cartografiado en un locus cromosómico que está ligado a EA. La tau hiperfosforilada en cerebros de EA humanos tiene niveles notablemente menores de O-GlcNAc que los encontrados en cerebros humanos sanos. Muy recientemente, se ha mostrado que los niveles de O-GlcNAc de proteína tau soluble de cerebros humanos afectados con EA son notablemente menores que los de cerebro sano. Además, se ha sugerido que los FHP de cerebro enfermo carecen completamente de cualquier modificación de O-GlcNAc en absoluto. La base molecular de esta hipoglicosilación de tau no es conocida, aunque puede provenir de la actividad aumentada de cinasas y/o de la disfunción de una de las enzimas implicadas en el procesamiento de O-GlcNAc. Apoyando esta última opinión, tanto en células neuronales PC-12 como en secciones de tejido cerebral de ratones, se usó un inhibidor de N-acetilglucosaminidasa no selectivo para aumentar los niveles de O-GlcNAc de tau, tras de lo cual se observó que disminuían los niveles de fosforilación. La implicación de estos resultados colectivos es que al mantener los niveles de O-GlcNAc sanos en pacientes de EA, tal como inhibiendo la acción de O-GlcNAcasa (OGA), debería poderse bloquear la hiperfosforilación de tau y todos los efectos asociados a la hiperfosforilación de tau, incluyendo la formación de o Nf y los efectos posteriores. Sin embargo, debido a que el funcionamiento apropiado de las p-hexosaminidasas lisosómicas es crítico, cualquier intervención terapéutica potencial para el tratamiento de EA que bloquee la acción de O-GlcNAcasa tendría que evitar la inhibición concomitante de ambas hexosaminidasas lisosómicas A y B.
Consistentemente con las propiedades conocidas de la ruta biosintética de hexosamina, las propiedades enzimáticas de O-GlcNAc transferasa (oGTasa), y la relación recíproca entre O-GlcNAc y fosforilación, se ha mostrado que la disponibilidad de glucosa disminuida en el cerebro conduce a la hiperfosforilación de tau. El deterioro gradual del transporte y metabolismo de glucosa conduce a O-GlcNAc disminuida e hiperfosforilación de tau (y otras proteínas). Por consiguiente, la inhibición de O-GlcNAcasa debería compensar el deterioro relacionado con la edad del metabolismo de glucosa en los cerebros de individuos sanos así como pacientes que padecen EA o enfermedades neurodegenerativas relacionadas.
Estos resultados sugieren que un fallo en los mecanismos reguladores de los niveles de O-GlcNAc de tau puede ser vitalmente importante en la formación de ONF y la neurodegeneración asociada. Un buen apoyo al bloqueo de la hiperfosforilación de tau como intervención terapéuticamente útil viene de estudios que muestran que cuando se tratan ratones transgénicos que albergan tau humana con inhibidores de cinasa, no desarrollan los defectos motores típicos y, en otro caso, muestran un nivel disminuido de tau insoluble. Estos estudios proporcionan un claro nexo entre la reducción de los niveles de fosforilación de tau y el alivio de los síntomas de comportamiento de tipo EA en un modelo de múrido de esta enfermedad.
Hay también un gran cuerpo de evidencias que indican que los niveles aumentados de modificación de proteína O-GlcNAc proporcionan protección contra los efectos patogénicos del estrés en tejido cardiaco, incluyendo estrés causado por isquemia, hemorragia, choque hipervolémico y paradoja del calcio. Por ejemplo, la activación de la ruta biosintética de hexosamina (HBP) mediante la administración de glucosamina se ha demostrado que ejerce un efecto protector en modelos animales de isquemia/reperfusión, hemorragia por traumatismo, choque hipervolémico y paradoja del calcio. Además, una fuerte evidencia indica que estos efectos cardioprotectores están mediados por niveles elevados de modificación de proteína O-GlcNAc- Hay también evidencias de que la modificación de O-GlcNAc desempeña un papel en una variedad de enfermedades neurodegenerativas, incluyendo enfermedad de Parkinson y enfermedad de Huntington.
Los seres humanos tienen tres genes que codifican enzimas que escinden residuos de p-N-acetilglucosamina terminales de glicoconjugados. El primero de estos codifica la enzima O-glicoproteina-2-acetamido-2-desoxi-p-D-glucopiranosidasa (O-GlcNAcasa). La O-GlcNAcasa es el miembro de la familia 84 de las glicósido hidrolasas. La O-GlcNAcasa actúa hidrolizando O-GlcNAc de los residuos de serina y treonina de proteínas modificadas postraduccionalmente. Consistentemente con la presencia de O-GlcNAc en muchas proteínas intracelulares, la enzima O-GlcNAcasa parece tener un papel en la etiología de varias enfermedades incluyendo diabetes de tipo II, EA y cáncer. Aunque la O-GlcNAcasa se aisló probablemente antes, transcurrieron aproximadamente 20 años ante de que su papel bioquímico en la acción para escindir O-GlcNAc de residuos de serina y treonina de proteínas fuera entendido. Más recientemente, se ha clonado O-GlcNAcasa, se ha caracterizado parcialmente y se ha sugerido que tiene actividad adicional como histona acetiltransferasa.
Sin embargo, un reto importante en el desarrollo de inhibidores para bloquear la función de glicosidasas de mamífero, incluyendo O-GlcNAcasa, es el gran número de enzimas funcionalmente relacionadas presentes en los tejidos de eucariotas superiores. Por consiguiente, el uso de inhibidores no selectivos en el estudio del papel fisiológico en células y organismos de una enzima particular es complicado debido a que surgen fenotipos complejos de la inhibición concomitante de tales enzimas relacionadas funcionalmente. En el caso de p-N-acetilglucosaminidasas, los compuestos existentes que actúan bloqueando la función de O-GlcNAcasa son no específicos y actúan potentemente inhibiendo las p-hexosaminidasas lisosómicas.
El documento US 2009/0163545 describe compuestos alteradores de la vida útil, tales como éster metílico de ácido (5-piperidin-1-ilmetiltiazol-2-il)carbámico. El documento WO 2010/108115 describe genéricamente derivados de amida heterocíclicos como inhibidores de cinasa Janus alostéricos. El documento WO 2010/101949 describe la preparación de quinolinas 8-sustituidas como moduladores de sirtuina. La N-[5-(4-fenilpiperidin-1-ilmetil)tiazol-2-il]acetamida está comercialmente disponible con fines no definidos. Se divulgan inhibidores de OGA de bajo peso molecular en la solicitud internacional WO 2008/025170. Existe la necesidad de moléculas de bajo peso molecular que inhiban selectivamente OGA.
La invención tenía el objeto de encontrar compuestos novedosos que tuvieran propiedades valiosas, en particular aquellas que pueden usarse para la preparación de medicamentos.
Se ha encontrado sorprendentemente que los compuestos descritos en la presente memoria y las sales de los mismos tienen propiedades farmacológicas muy valiosas. En particular, actúan como inhibidores de glicosidasa. La invención se refiere a compuestos de fórmula (I) como medicamento
Figure imgf000004_0001
en la que
X1 designa S u O;
X2, W designan independientemente entre sí N o CR6;
R1, R3, R4 designan independientemente entre sí Y;
R3, R4 designan conjuntamente también -(CY2)p-;
R2 designa COY, Y, Alq, Cic, (CY2)nAr, COAlq, CO(CY2)nAr, CONY2 , CONYAlq, COOY,
COO(CY2)nAr, SO2Y, SO2Alq, SO2(CY2)nAr, CY2OY o CY2NY2 ;
R1, R2 designan conjuntamente también -(CY2)p-CONY2-(CY2)p-;
R5 designa (CY2)qAr, OAr, Cic, Y o NY2 ;
R6 designa Y, OY, Hal o CN;
L designa -CY2-, -CO- o -SO2-;
Y designa H o A;
A designa alquilo acíclico no ramificado o ramificado que tiene 1-10 átomos de C, en que 1 -7 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal;
Alq designa alquenilo no ramificado o ramificado que tiene 2-10 átomos de C, en que 1-4 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal;
Cic designa cicloalquilo que tiene 3-7 átomos de C, en que 1-4 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal;
Ar designa un carbociclo monocíclico o bicíclico insaturado o aromático que tiene 3-12 átomos de C, que puede estar sustituido con al menos un sustituyente seleccionado del grupo de Hal, A, (CY2)n-Oy , (CY2V N Y 2 , COOY, SO2Y y CN, o que puede estar fusionado con un heterociclo monocíclico saturado, insaturado o aromático que tiene 1-5 átomos de C y 1-4 átomos de N, O y/o S;
Hal designa F, Cl, Br o I; y
m, n, p, q designan independientemente entre sí 0, 1, 2 o 3;
y/o una sal fisiológicamente aceptable de los mismos;
con la condición de que se excluya el éster metílico del ácido (5-piperidin-1-ilmetiltiazol-2-il)carbámico.
Particularmente, los compuestos de fórmula (I) se proporcionan como medicamento
Figure imgf000005_0001
en la que
X1 designa S u O;
X2, W designan independientemente entre sí N o CR6;
R1, R3, R4 designan independientemente entre sí Y;
R3, R4 designan conjuntamente también -(CY2)p-;
R2 designa COY, Y, Alq, Cic, (CY2)nAr, COAlq, CO(CY2)nAr, CONY2 , CONYAlq, COOY, COOAlq, COO(CY2)nAr, SO2Y, SO2Alq, SO2(CY2)nAr, CY2OY o CY2NY2 ;
R5 designa (CY2)qAr, Cic, Y o NY2;
R6 designa Y, OY, Hal o CN;
L designa -CY2-, -CO- o -SO2-;
Y designa H o A;
A designa alquilo acíclico no ramificado o ramificado que tiene 1-10 átomos de C, en que 1-7 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal;
Alq designa alquenilo no ramificado o ramificado que tiene 2-10 átomos de C, en que 1-4 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal;
Cic designa cicloalquilo que tiene 3-7 átomos de C, en que 1-4 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal;
Ar designa un carbociclo monocíclico o bicíclico insaturado o aromático que tiene 3-12 átomos de C, que puede estar sustituido con al menos un sustituyente seleccionado del grupo de Hal, A, (CY2)n-OY, (CY2V N Y 2 , COOY, SO2Y y CN;
Hal designa F, Cl, Br o I; y
m, n, p, q designan independientemente entre sí 0, 1, 2 o 3;
y/o una sal fisiológicamente aceptable de los mismos;
con la condición de que se excluya el éster metílico del ácido (5-piperidin-1-ilmetiltiazol-2-il)carbámico.
El compuesto se define para incluir derivados, solvatos, tautómeros, enantiómeros, racematos e esteroisómeros del mismo farmacéuticamente utilizables, incluyendo mezclas de los mismos en todas las relaciones.
El término “derivados farmacéuticamente utilizables” pretende significar, por ejemplo, las sales de los compuestos descritos en la presente memoria. El término “solvatos” de los compuestos pretende significar aducciones de moléculas de disolvente inerte a los compuestos, que se forman debido a su fuerza atractiva mutua. Los solvatos son, por ejemplo, monohidratos o dihidratos o alcóxidos. Los solvatos o sales de los compuestos descritos en la presente memoria están también comprendidos.
Los compuestos descritos en la presente memoria pueden estar presentes en forma de sus isómeros de doble enlace o isómeros E o Z puros, o en forma de mezclas de estos isómeros de doble enlace. Cuando sea posible, los compuestos descritos en la presente memoria pueden estar en forma de tautómeros tales como tautómeros ceto-enol. Todos los esteroisómeros de los compuestos descritos en la presente memoria están contemplados, tanto en mezcla como en forma pura o sustancialmente pura. Los compuestos descritos en la presente memoria pueden tener centros asimétricos en cualquiera de los átomos de carbono. En consecuencia, pueden existir en forma de sus racematos, en forma de enantiómeros y/o diastereómeros puros o en forma de mezclas de estos enantiómeros y/o diastereómeros. Las mezclas pueden tener cualquier relación de mezclado deseada de los estereoisómeros. Por tanto, por ejemplo, los compuestos descritos en la presente memoria que tienen uno o más centros de quiralidad y que aparecen como racematos o como mezclas diastereoisoméricas pueden fraccionarse mediante métodos conocidos por sí mismos en sus isómeros ópticos puros, concretamente, enantiómeros o diastereómeros. La separación de los compuestos descritos en la presente memoria puede tener lugar por separación en columna en fase quiral o no quiral o mediante recristalización a partir de un disolvente ópticamente activo opcional o con el uso de un ácido o base ópticamente activo o mediante derivatización con un reactivo ópticamente activo tal como, por ejemplo, un alcohol ópticamente activo, y posterior eliminación del radical.
Pueden usarse mezclas de los compuestos descritos en la presente memoria, por ejemplo, mezclas de dos diastereómeros, por ejemplo, a relación 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:10, 1:100 o 1:1000. Estas son con particular preferencia mezclas de compuestos estereoisoméricos.
La nomenclatura como se usa en la presente memoria para definir compuestos está en general basada en las normas de la organización IUPAC para compuestos químicos y especialmente compuestos orgánicos. Los términos indicados para explicación de los compuestos anteriores siempre, a menos que se indique otra cosa en la descripción o en las reivindicaciones, tienen los siguientes significados:
El término “no sustituido” significa que el correspondiente radical, grupo o resto no tiene sustituyentes. El término “sustituido” significa que el correspondiente radical, grupo o resto tiene uno o más sustituyentes. Cuando un radical tiene una pluralidad de sustituyentes, y se especifica una selección de diversos sustituyentes, los sustituyentes se seleccionan independientemente entre sí y no necesitan ser idénticos. Aunque un radical tenga una pluralidad de sustituyentes designados específicos (p. ej. Y2), la expresión de cada sustituyente puede diferir entre sí (p. ej., metilo y etilo). Se entenderá por consiguiente que una sustitución múltiple con cualquier radical descrito en la presente memoria puede implicar radicales idénticos o diferentes. Por ello, si aparecen radicales individuales varias veces en un compuesto, los radicales adoptan los significados indicados, independientemente entre sí.
Los términos “alquilo” o “A ” hacen referencia a radicales hidrocarbonados saturados acíclicos que pueden ser ramificados o de cadena lineal y tienen preferiblemente 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 átomos de carbono, concretamente alcanilos C1-C10. Son ejemplos de radicales alquilo adecuados metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, 1,1-, 1,2- o 2,2-dimetilpropilo, 1 -etilpropilo, 1 -etil-1 -metilpropilo, 1 -etil-2-metilpropilo, 1,1,2- o 1,2,2-trimetilpropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, ferc-butilo, 1-, 2- o 3-metilbutilo, 1,1-, 1,2-, 1,3-,2,2-, 2,3- o 3,3-dimetilbutilo, 1- o 2-etilbutilo, n-pentilo, isopentilo, neo-pentilo, ferc-pentilo, 1-, 2- o 3-metilpentilo, n-hexilo, 2-hexilo, isohexilo, n-heptilo, n-octilo, n-nonilo, ndecilo, n-undecilo, n-dodecilo, n-tetradecilo, n-hexadecilo, n-octadecilo, n-icosanilo, n-docosanilo.
En la invención, A designa alquilo acíclico no ramificado o ramificado que tiene 1-10 átomos de C, en que 1-7 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal. Una realización preferida de A designa alquilo acíclico no ramificado o ramificado que tiene 1-6 átomos de C, en que 1-4 átomos pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal. En una realización más preferida de la invención, A designa alquilo acíclico no ramificado o ramificado que tiene 1-4 átomos de C, en que 1-3 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal, particularmente por F y/o Cl. Lo más preferido es que A designe alquilo acíclico no ramificado o ramificado que tiene 1-6 átomos de C. Es altamente preferido alquilo C1-4. Es un radical alquilo C1-4, por ejemplo, un metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, ferc-butilo, sec-butilo, ferc-butilo, fluorometilo, difluorometilo, trifluorometilo, pentafluoroetilo, 1,1,1 -trifluoroetilo o bromometilo, especialmente metilo, etilo, propilo o trifluorometilo. Se entenderá que la denominación respectiva de A es independiente entre sí en cualquier radical de los compuestos descritos en la presente memoria.
Los términos “alquenilo” o “Alq” hacen referencia a alquenilo no ramificado o ramificado que tiene 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 átomos de C, concretamente alquenilos C2-C10. Los alquenilos tienen al menos un doble enlace C-C. Son ejemplos de alquenilos adecuados alilo, vinilo, propenilo, -CH2CH=CH2 , -CH=CH-CH3, -C(=CH2)CH3), 1-, 2- o 3-butenilo, isobutenilo, 2-metil-1- o -2-butenilo, 3-metil-1-butenilo, 1,3-butadienilo, 2-metil-1,3-butadienilo, 2,3-dimetil-1,3-butadienilo, 1-, 2-, 3- o 4-pentenilo y hexenilo.
En la invención, Alq designa alquenilo no ramificado o ramificado que tiene 2-10 átomos de C, en que 1-4 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal. Una realización preferida de Alq designa alquenilo no ramificado o ramificado que tiene 2-6 átomos de C, en que 1-3 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal, particularmente por F y/o Cl. En una realización más preferida de la invención, Alq designa alquenilo no ramificado o ramificado que tiene 2-6 átomos de C. En la realización más preferida de la invención, Alq designa alquenilo no ramificado o ramificado que tiene 2-4 átomos de C, de forma altamente preferible vinilo.
Los términos “cicloalquilo” o “Cic” hacen referencia a grupos/radicales hidrocarbonados cíclicos no aromáticos saturados y parcialmente insaturados que tienen 1-3 a anillos, que contienen 3 a 20, preferiblemente 3 a 12, más preferiblemente 3 a 9 átomos de carbono. El radical cicloalquilo puede ser también parte de un sistema bicíclico o policíclico donde, por ejemplo, el radical cicloalquilo está fusionado con un radical arilo, heteroarilo o heterociclilo como se definen en la presente memoria por cualquier miembro o miembros de anillo posibles y deseados. La unión a los compuestos de fórmula general (I) puede efectuarse mediante cualquier miembro de anillo posible del radical cicloalquilo. Son ejemplos de radicales cicloalquilo adecuados ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, ciclodecilo, ciclohexenilo, ciclopentenilo y ciclooctadienilo.
En la invención, Cic designa cicloalquilo que tiene 3-7 átomos de C, en que 1-4 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal. Se prefiere cicloalquilo C3-C7. Es más preferido cicloalquilo C4-C7. El más preferido es cicloalquilo C5-C7, concretamente ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo, es altamente preferible ciclohexilo. Se entenderá que la denominación respectiva de Cic es independiente entre sí en cualquier radical de los compuestos descritos en la presente memoria.
El término “arilo” o “carboarilo” hace referencia a sistemas hidrocarbonados aromáticos monocíclicos o policíclicos que tienen 3 a 14, preferiblemente 3-12, más preferiblemente 4 a 12, lo más preferiblemente 5 a 10, con alta preferencia 6 a 8 átomos de carbono, que pueden estar opcionalmente sustituidos. El término “arilo” incluye también sistemas en que el ciclo aromático es parte de un sistema bicíclico o policíclico saturado, parcialmente insaturado y/o aromático, tal como cuando el ciclo aromático se fusiona con un grupo arilo, cicloalquilo, heteroarilo o heterociclilo como se definen en la presente memoria mediante cualquier miembro de anillo deseado y posible del radical arilo. La unión de los compuestos de fórmula general (I) puede efectuarse mediante cualquier miembro de anillo posible del radical alquilo. Son ejemplos de radicales arilo adecuados fenilo, bifenilo, naftilo, 1 -naftilo, 2-naftilo y antracenilo, pero igualmente indanilo, indenilo o 1,2,3,4-tetrahidronaftilo. Son carboarilos preferidos fenilo, naftilo y bifenilo opcionalmente sustituidos, más preferiblemente carboarilo monocíclico opcionalmente sustituido que tiene 6-8 átomos de C, lo más preferiblemente fenilo opcionalmente sustituido.
Se define también un carbociclo, incluyendo pero sin limitación carboarilo, como “Ar”. Son ejemplos de radicales Ar adecuados fenilo, o-, m- o p-tolilo, o-, m- o p-etilfenilo, o-, m- o p-propilfenilo, o-, m- o p-isopropilfenilo, o-, m- o p-fercbutilfenilo, o-, m- o p-hidroxifenilo, o-, m- o p-metoxifenilo, o-, m- o p-etoxifenilo, o-, m- o p-fluorofenilo, o-, m- o pbromofenilo, o-, m- o p-clorofenilo, o-, m- o p-sulfonamidofenilo, o-, m- o p-(N-metil-sulfonamido)fenilo, o-, m- o p-(N,N-dimetilsulfonamido)fenilo, o-, m- o p-(N-etil-N-metilsulfonamido)fenilo, o-, m- o p-(N,N-dietilsulfonamido)fenilo, particularmente 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- o 3,5-difluorofenilo, 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- o 3,5-diclorofenilo, 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- o 3,5-dibromofenilo, 2,3,4-, 2,3,5-, 2,3,6-, 2,4,6- o 3,4,5-triclorofenilo, 2,4,6-trimetoxifenilo, 2-hidroxi-3,5-diclorofenilo, p-yodofenilo, 4-fluoro-3-clorofenilo, 2-fluoro-4-bromofenilo, 2,5-difluoro-4-bromofenilo, 3-bromo-6-metoxifenilo, 3-cloro-6-metoxifenilo o 2,5-dimetil-4-clorofenilo.
Ar designa preferiblemente un carbociclo monocíclico o bicíclico insaturado o aromático que tiene 3-12 átomos de C, que puede estar sustituido con al menos un sustituyente seleccionado del grupo de Hal, A, (CY2VOY, (CY2)n-NYY, COOY, SO2Y y CN. En una realización más preferida de la invención, Ar designa un carbociclo monocíclico o bicíclico insaturado o aromático que tiene 4-12 átomos de C, que pueden estar sustituidos con al menos un sustituyente seleccionado del grupo de Hal, A, OY, COOY y CN. Lo más preferible es que Ar designe un carbociclo monocíclico o bicíclico aromático que tiene 5-10 átomos de C, que puede estar monosustituido o disustituido con al menos un sustituyente seleccionado del grupo de Hal, A, OY, COOH y CN. En una realización altamente preferida de la invención. Ar designa un carbociclo monocíclico aromático que tiene 6-8 átomos, que puede estar monosustituido con Hal, A u OY. Se prefiere particularmente que Ar designe fenilo que puede estar para- o meta-sustituido con A u OY. Se entenderá que la respectiva denominación de Ar es independiente entre sí en cualquier radical de los compuestos descritos en la presente memoria.
En la invención, Ar puede estar fusionado con un heterociclo monocíclico saturado, insaturado o aromático que tiene 1-5 átomos de C y 1-4 átomos de N, O y/o S. Más preferiblemente, Ar puede estar fusionado con un heterociclo monocíclico saturado o aromático que tiene 2-4 átomos de C y 1-3 átomos de O y/o N. Lo más preferiblemente, Ar puede estar fusionado con un heterociclo monocíclico saturado o aromático que tiene 3-4 átomos de C y 2 átomos de O N.
El término “heterociclo” o “heterociclilo” hace referencia a un sistema monocíclico de 3-9 átomos de anillo, preferiblemente 3-7 átomos de anillo, más preferiblemente 3-6 átomos de anillo, que comprende átomos de carbono y 1,2, 3, 4 o 5 heteroátomos que son idénticos o diferentes, en particular nitrógeno, oxígeno y/o azufre. El sistema cíclico puede ser saturado o monoinsaturado o poliinsaturado, preferiblemente insaturado, más preferiblemente un heteroarilo. En el caso de un sistema cíclico que consiste en al menos dos anillos, los anillos pueden ser fusionados o espiro o conectados de otro modo. Tales radicales heterociclilos pueden estar ligados mediante cualquier miembro de anillo. El término “heterociclilo” incluye también sistemas en que el heterociclo es parte de un sistema saturado, parcialmente insaturado y/o aromático bicíclico o policíclico, tal como cuando el heterociclo está fusionado con un grupo arilo, cicloalquilo, heteroarilo o heterociclilo como se definen en la presente memoria mediante cualquier miembro de anillo deseado y posible del radical heterociclilo. La unión de los compuestos de fórmula general (I) puede efectuarse mediante cualquier miembro de anillo posible del radical heterociclilo. Son ejemplos de radicales heterociclilo adecuados pirrolidinilo, tiapirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, oxapiperazinilo, oxapiperidinilo, oxadiazolilo, tetrahidrofurilo, imidazolidinilo, tiazolidinilo, tetrahidropiranilo, morfolinilo, tetrahidrotiofenilo, dihidropiranilo.
El término “heteroarilo” hace referencia a un radical hidrocarbonado aromático monocíclico de 3-9, preferiblemente 4, 5 o 6 miembros que comprende al menos 1, cuando sea apropiado también 2, 3, 4 o 5 heteroátomos, preferiblemente nitrógeno, oxígeno y/o azufre, donde los heteroátomos son idénticos o diferentes. El número de heteroátomos es preferiblemente de 1 o 2, más preferiblemente 2. El término “heteroarilo” incluye también sistemas en que el ciclo aromático es parte de un sistema bicíclico saturado, parcialmente insaturado y/o aromático, tal como cuando el ciclo aromático está fusionado con un grupo arilo, cicloalquilo, heteroarilo o heterociclilo como se definen en la presente memoria mediante cualquier miembro de anillo deseado y posible del radical heteroarilo. La unión a los compuestos de fórmula general (I) puede efectuarse mediante cualquier miembro de anillo posible del radical heteroarilo. Son ejemplos de heteroarilo adecuados pirrolilo, tienilo, furilo, imidazolilo, tiazilo, isotiazilo, oxazilo, oxadiazilo, isoxazilo, pirazilo, piridilo, pirimidilo, piridazinilo, pirazilo, indolilo, quinolilo, isoquinolinilo, imidazolilo, triazolilo, triazinilo, tetrazilo, ftalazinilo, indazolilo, indolizinilo, quinoxalinilo, quinazolinilo, pteridinilo, carbazolilo, fenazinilo, fenoxazinilo, fenotiazinilo y acridinilo.
El término “halógeno”, “átomo de halógeno”, “sustituyente halógeno” o “Hal” hace referencia a uno o, cuando sea apropiado, una pluralidad de átomos de flúor (F, fluoro), bromo (Br, bromo), cloro (CI, cloro) o yodo (I, yodo). Las denominaciones “dihalógeno”, “trihalógeno” y “perhalógeno” hacen referencia respectivamente a dos, tres y cuatro sustituyentes, en que cada sustituyente puede seleccionarse independientemente del grupo consistente en flúor, cloro, bromo y yodo. Halógeno significa preferiblemente un átomo de flúor, cloro o bromo. Flúor y cloro son más preferidos, particularmente cuando los halógenos están sustituidos en un grupo alquilo (halogenoalquilo) o alcoxi (p. ej. CF3 y CF3O). Se entenderá que la denominación respectiva de Hal es independiente entre sí en cualquier radical de los compuestos descritos en la presente memoria.
En la presente invención, X1 designa S u O, preferiblemente S.
En la presente invención, X2 designa CR6 o N, preferiblemente CR6, más preferiblemente CY, lo más preferiblemente CH.
En la presente invención, W designa N o CR6, preferiblemente N o CY, más preferiblemente N o CH, lo más preferiblemente N.
Es una realización preferida de la presente invención que X2 designe CY y/o W designe N o CH.
En la presente invención, R1 designa H o A, preferiblemente H.
En la presente invención, R2 designa COY, Y, Alq, Cic, (CY2)nAr, COAlq, CO(CY2)nAr, CONY2, CONYAlq, COOY, COOAlq, COO(CY2)nAr, SO2Y, SO2Alq, SO2(CY2)nAr, CY2OY o CY2NY2; preferiblemente COY, Y, Cic, (CY2)nAr, COAlq, CO(CY2)nAr, CONY2, COOY, COO(CY2)nAr, SO2Y, CY2OY o CY2NY2 ; más preferiblemente COY, Y, Cic, (CY2)nAr, COAlq, COAr, CONYY, COOY, COO(CY2)nAr o SO2Y; lo más preferiblemente COY, COAlq, CONY2 o COOY; con alta preferencia COA, COAlq, CONHA o COOA; con particularmente alta preferencia COY; y con muy particularmente alta preferencia COA.
Se excluye en otro aspecto preferido que R1 y R2 designen H al mismo tiempo.
En la presente invención, R3 designa H o A, más preferiblemente y A.
En la presente invención, R4 designa H o A, más preferiblemente H.
En la presente invención, R3 y R4 designan conjuntamente también -(CY2V , preferiblemente -(CH2V , y más preferiblemente -(CH2)2-.
Preferiblemente, R5 designa (CY2)qAr, Cic, Y o NY2 ; más preferiblemente (CY2)qAr, Cic, H o A; lo más preferiblemente (CH2)qAr, Cic o A; con alta preferencia (CH2)qAr o Cic; con particularmente alta preferencia (CH2)qAr; y con muy particularmente alta preferencia Ar.
En la presente invención, R6 designa Y, OY, Hal o CN; preferiblemente H, A, OY o Hal; más preferiblemente H, A, OH o Hal; lo más preferiblemente H, OH o Hal; y con alta preferencia H.
En la presente invención, L designa -CY2-, -CO- o -SO2-; preferiblemente CY2 ; más preferiblemente CHY; y lo más preferiblemente CH2.
Es otra realización preferida de la presente invención que W designe N; R2 designe COY, COAlq, CONY2 o COOY; y/o L designe CY2. Es una realización más preferida de la presente invención que W designe N; R2 designe COY y L designe CHY.
En la invención, Y designa H o A. Se entenderá que la denominación respectiva de Y es independiente entre sí en cualquier radical de los compuestos descritos en la presente memoria.
En la presente invención, el índice m designa 0, 1,2 o 3; preferiblemente 0, 1 o 2; más preferiblemente 1 o 2 y lo más preferiblemente 1.
En la presente invención, el índice n designa 0, 1, 2 o 3; preferiblemente 0, 1 o 2; más preferiblemente 0 o 1; y lo más preferiblemente 0. Se entenderá que la denominación respectiva del índice n es independiente entre sí en cualquier radical de los compuestos descritos en la presente memoria.
En la presente invención, el índice p designa 0, 1, 2 o 3; preferiblemente 1, 2 o 3; más preferiblemente 1 o 2 y lo más preferiblemente 2.
En la presente invención, el índice q designa 0, 1, 2 o 3; preferiblemente 0, 1 o 2; más preferiblemente 0 o 1 y lo más preferiblemente 0.
Es una realización de la presente invención que los índices m y p designen independientemente entre sí 1 o 2, y/o los índices n y q designen independientemente entre sí 0 o 1.
Por consiguiente, la materia en cuestión de la invención se refiere a compuestos de fórmula (I) como medicamento, en que al menos uno de los radicales anteriormente mencionados tiene cualquier significado, particularmente realizado en cualquier realización preferida, como se describe anteriormente. Los radicales que no se especifican explícitamente en el contexto de ninguna realización de fórmula (I), subfórmulas de la misma u otros radicales de la misma, se considerará que representan cualquier denominación respectiva según la fórmula (I) como se divulga a continuación para resolver el problema de la invención. Esto significa que los radicales anteriormente mencionados pueden adoptar todos los significados designados como cada uno de los descritos en el curso anterior o siguiente de la presente memoria descriptiva, independientemente del contexto en que se encuentren, incluyendo, pero sin limitación, cualquier realización preferida. Se entenderá particularmente que puede combinarse cualquier realización de cierto radical con cualquier realización de uno o más de otros radicales.
En otra realización más preferida de la presente invención, se proporcionan compuestos de subfórmula (IA) como medicamento
Figure imgf000009_0001
en la que
X1 designa S u O;
X2 designa CR6 o N;
R2 designa COY, COAlq, CONY2 o COOY;
R3, R4 designan independientemente entre sí Y;
R3, R4 designan conjuntamente también -(CY2)p-;
R5 designa (CY2)qAr, Cic o Y;
R6 designa Y, OY o Hal;
Y designa H o A;
A designa alquilo acíclico no ramificado o ramificado que tiene 1-10 átomos de C, en que 1-7 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal;
Alq designa alquenilo no ramificado o ramificado que tiene 2-6 átomos de C, en que 1-3 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal;
Cic designa cicloalquilo que tiene 3-7 átomos de C, en que 1-4 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal;
Ar designa un carbociclilo monocíclico o bicíclico insaturado o aromático que tiene 4-12 átomos de C, que puede estar sustituido con al menos un sustituyente seleccionado del grupo de Hal, A, OY, COOY y CN;
Hal designa F, CI, Br o I;
m, q designan independientemente entre sí 0, 1 o 2; y
p designa 1, 2 o 3;
y/o una sal fisiológicamente aceptable de los mismos;
con la condición de que se excluya éster metílico del ácido (5-piperidin-1-ilmetiltiazol-2-il)carbámico.
En otra realización más preferida de la presente invención, se proporcionan compuestos de subfórmula (IB) como medicamento
Figure imgf000010_0001
en la que
X2 designa CY o N;
R3, R4 designan independientemente entre si Y;
R3, R4 designan conjuntamente también -(CH2)p-;
R5 designa (CH2)qAr, Cic o A;
Y designa H o A;
A designa alquilo acíclico no ramificado o ramificado que tiene 1-6 átomos de C, en que 1-4 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal;
Cic designa cicloalquilo que tiene 4-7 átomos de C;
Ar designa un carbociclo monocíclico o bicíclico aromático que tiene 5-10 átomos de C, que puede estar monosustituido o disustituido con al menos un sustituyente seleccionado del grupo de Hal, A, OY, COOH y CN;
Hal designa F, CI, Br o I;
m designa 0, 1 o 2;
p designa 1 o 2; y
q designa 0 o 1;
y/o una sal fisiológicamente aceptable de los mismos.
En otra realización altamente preferida de la presente invención, se proporcionan compuestos de subfórmula (IC) como medicamento
Figure imgf000010_0002
en la que
R3 designa A;
R4 designa H;
R3, R4 designan también -(CH2)p
R5 designa (CH2)qAr, Cic o A;
Y designa H o A;
A designa alquilo acíclico no ramificado o ramificado que tiene 1-4 átomos de C, en que 1-3 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal;
Cic designa cicloalquilo que tiene 5-7 átomos de C;
Ar designa un carbociclo monocíclico aromático que tiene 6-8 átomos de C, que pueden estar monosustituidos con Hal, A u OY;
Hal designa F, CI, Br o I;
m, p designan independientemente entre sí 1 o 2; y
q designa 0 o 1;
y/o una sal fisiológicamente aceptable de los mismos.
En otro aspecto de las fórmulas (I) o (IA) a (IC), se excluye que R3 y R5 designen A al mismo tiempo.
En aún otra realización altamente preferida de la presente invención, se proporcionan compuestos de subfórmula (ID) como medicamento
Figure imgf000011_0001
en la que
X1 designa S u O;
R1 designa H o A;
R2 designa COA, COAlq, CONHA o COOA;
A designa alquilo acíclico no ramificado o ramificado que tiene 1-6 átomos de C; y
Alq designa alquenilo ramificado o no ramificado que tiene 2-6 átomos de C;
y/o una sal fisiológicamente aceptable de los mismos.
Las enseñanzas anteriores de la presente memoria descriptiva referentes a los compuestos de fórmula (I), incluyendo cualquier definición de radical y realización preferida de los mismos, son válidas y aplicables sin restricciones a los compuestos según las subfórmulas (IA) a (ID) y sus sales, si es oportuno.
Son realizaciones de preferencia particularmente alta aquellos compuestos de fórmula (I) y subfórmula (IA) a (ID) enumerados en la Tabla 1 y/o sales fisiológicamente aceptables de los mismos.
Tabla 1: Compuestos de fórmulas (I) y subfórmulas (IA) a (ID). Ensayo de inhibición enzimática de OGA: EJEMPLO 12. Ensayo de O-GlcNacilación celular: EJEMPLO 13.
N° Estructura Inhibición Células Ruta enzimática de B35 sintética hOGA (CI50) (CE50, general ICC)
>10 pM
10 pM
+ 1<10pM
+ 1<10
++ 0,2<1 pM pM
+++ <0,2 pM ++
0,2<1 pM
Figure imgf000012_0001
5 Esquema
5 N° Estructura Inhibición Células Ruta enzimática de B35 sintética hOGA (CI50) (CE50, general ICC)
> 10 |jM
10 j M
+ 1<10j M
+ 1<10 ++ 0,2<1 j M j M
+++ <0,2 j M ++
0,2<1 j M +++
<0,2 j M
N° Estructura Inhibición Células Ruta enzimática de B35 sintética hOGA (CI50) (CE50, general ICC)
>10 pM
10 pM
+ 1<10pM
+ 1<10
++ 0,2<1 pM pM
+++ <0,2 pM ++
0,2<1 pM
Figure imgf000014_0001
13 + Esquema
Figure imgf000014_0005
14 Esquema
Figure imgf000014_0002
3
15 Esquema
Figure imgf000014_0003
2
16 Esquema
Figure imgf000014_0004
3
17 Esquema
6 N° Estructura Inhibición Células Ruta enzimática de B35 sintética hOGA (CI50) (CE50, general ICC)
>10 pM
10 pM
+ 1<10pM
+ 1<10
++ 0,2<1 pM pM
+++ <0,2 pM ++
0,2<1 pM
+++
<0,2 pM
18 Esquema
Figure imgf000015_0001
6
19 ++ + Esquema
Figure imgf000015_0002
2
20 ++ + Esquema
Figure imgf000015_0003
2
21 +++ + Esquema
Figure imgf000015_0004
2
22 ++ + Esquema
Figure imgf000015_0005
2
23 Esquema
2 N° Estructura Inhibición Células Ruta enzimática de B35 sintética hOGA (CI50) (CE50, general ICC)
>10 pM
10 pM
+ 1<10pM
+ 1<10 ++ 0,2<1 pM pM
+++ <0,2 pM ++
0,2<1 pM +++
<0,2 pM
N° Estructura Inhibición Células Ruta enzimática de B35 sintética hOGA (CI50) (CE50, general ICC)
> 10 |jM
10 j M
+ 1<10j M
+ 1<10 ++ 0,2<1 j M j M
+++ <0,2 j M ++
0,2<1 j M +++
<0,2 j M
N° Estructura Inhibición Células Ruta enzimática de B35 sintética hOGA (CI50) (CE50, general ICC)
>10 pM
10 pM
+ 1<10pM
+ 1<10 ++ 0,2<1 pM pM
+++ <0,2 pM ++
0,2<1 pM +++
<0,2 pM
N° Estructura Inhibición Células Ruta enzimática de B35 sintética hOGA (CI50) (CE50, general ICC)
> 10 |jM
10 j M
+ 1<10j M
+ 1<10 ++ 0,2<1 j M j M
+++ <0,2 j M ++
0,2<1 j M N° Estructura Inhibición Células Ruta enzimática de B35 sintética hOGA (CI50) (CE50, general ICC)
> 10 |jM
10 j M
+ 1<10j M
+ 1<10
++ 0,2<1 j M j M
+++ <0,2 j M ++
0,2<1 j M
+++
<0,2 j M
Figure imgf000020_0001
50 +++ Esquema
10 N° Estructura Inhibición Células Ruta enzimática de B35 sintética hOGA (CI50) (CE50, general ICC)
> 10 |jM
10 j M
+ 1<10j M
+ 1<10
++ 0,2<1 j M j M
+++ <0,2 j M ++
0,2<1 j M
+++
<0,2 j M
51 +++ Esquema
Figure imgf000021_0001
10
52 +++ Esquema
Figure imgf000021_0002
10
53 +++ Esquema
Figure imgf000021_0003
10
54 +++ Esquema
Figure imgf000021_0004
10
55 +++ Esquema
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9
56 +++ Esquema
10 N° Estructura Inhibición Células Ruta enzimática de B35 sintética hOGA (CI50) (CE50, general ICC)
>10 pM
10 pM
+ 1<10pM
+ 1<10
++ 0,2<1 pM pM
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0,2<1 pM
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58 + Esquema
Figure imgf000022_0001
11
59 + Esquema
Figure imgf000022_0002
9
61 ++ Esquema
Figure imgf000022_0003
9
62 +++ Esquema
Figure imgf000022_0004
9
63 +++ Esquema
Figure imgf000022_0005
10
64 +++ Esquema
10 N° Estructura Inhibición Células Ruta enzimática de B35 sintética hOGA (CI50) (CE50, general ICC)
> 10 |jM
10 j M
+ 1<10j M
+ 1<10
++ 0,2<1 j M j M
+++ <0,2 j M ++
0,2<1 j M
+++
<0,2 j M
+++ Esquema
Figure imgf000023_0001
10
Los compuestos según la fórmula (I) y los materiales de partida para su preparación, respectivamente, se producen mediante métodos en sí conocidos, como se describen en la bibliografía, concretamente en condiciones de reacción que son conocidas y adecuadas para dichas reacciones. También puede hacerse uso de variantes que son en sí conocidas, pero no se mencionan con mayor detalle en la presente memoria. Si se desea, los materiales de partida pueden formarse también in situ dejándolos en estado no aislado en la mezcla de reacción bruta, pero convirtiéndolos inmediatamente después en el compuesto descrito en la presente memoria. Por otro lado, es posible llevar a cabo la reacción por etapas.
Las reacciones se realizan preferiblemente en condiciones básicas. Las bases adecuadas son óxidos metálicos, p. ej. óxido de aluminio, hidróxido de metal alcalino (hidróxido de potasio, hidróxido de sodio e hidróxido de litio, entre otros), hidróxido de metal alcalinotérreo (hidróxido de bario e hidróxido de calcio, entre otros), alcoholatos de metal alcalino (etanolato de potasio y propanolato de sodio, entre otros), carbonatos de metal alcalino (p. ej., bicarbonato de sodio) y varias bases orgánicas (p. ej., N,N-diisopropiletilamina, piperidina o dietanolamina, entre otros).
La reacción se lleva a cabo generalmente en un disolvente inerte. Son disolventes inertes adecuados, por ejemplo, hidrocarburos tales como hexano, éter de petróleo, benceno, tolueno o xileno; hidrocarburos clorados tales como tricloroetileno, 1,2-dicloroetano, tetracloruro de carbono, cloroformo o diclorometano; alcoholes tales como metanol, etanol, isopropanol, n-propanol, n-butanol o ferc-butanol; éteres tales como dietiléter, diisopropiléter, tetrahidrofurano (THF) o dioxano; glicoléteres tales como etilenglicolmonometil- o -monoetiléter, etilenglicoldimetiléter (diglima); cetonas tales como acetona o butanona; amidas tales como acetamida, dimetilacetamida o dimetilformamida (DMF); nitrilos tales como acetonitrilo; sulfóxidos tales como dimetilsulfóxido (DMSO); disulfuro de carbono; ácidos carboxílicos tales como ácido fórmico, ácido acético o ácido trifluoroacético (TFA); compuestos nitrados tales como nitrometano o nitrobenceno; ésteres tales como acetato de etilo o mezclas de dichos disolventes. Se da particular preferencia a TFA, DMF, diclorometano, THF, H2O, metanol, ferc-butanol, ferc-amilalcohol, trietilamina o dioxano.
Dependiendo de las condiciones usadas, el tiempo de reacción es entre unos pocos minutos y 14 días, la temperatura de reacción es entre aproximadamente -80 °C y 140 °C, normalmente entre -50 °C y 120 °C, preferiblemente entre -20 °C y 100 °C.
La presente invención se refiere también a un proceso para fabricar compuestos de fórmula (I) que comprende las etapas de:
(a) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (II)
en la que R7 designa Hal, H or OH; y
X1, W, R1, R2y L tienen el significado definido anteriormente,
con un compuesto de fórmula (III)
Figure imgf000024_0001
en la que X2, R3, R4, R5 y m tienen el significado definido anteriormente,
facilitando el compuesto de fórmula (I)
Figure imgf000024_0002
en la que X1, X2, W, R1 a R5, L y m tienen el significado definido anteriormente;
y opcionalmente
(b) convertir el compuesto de fórmula (I), en la que R2 es H, en otro compuesto de fórmula (I), en la que R2 tiene un significado distinto de H como se define anteriormente;
(c) convertir una base o ácido del compuesto de fórmula (I) en una sal fisiológicamente aceptable del mismo; y/o
(d) personalizar manifiestamente el compuesto de fórmula (I) o sal fisiológicamente aceptable como medicamento. Las siguientes reacciones, incluyendo sin limitación esquemas, condiciones y compuestos, se prefieren particularmente. Los radicales tienen el significado definido anteriormente.
Esquema 1: Secuencia general para acoplamiento modular que implica una etapa de sustitución nucleófila
Figure imgf000024_0003
Esquema 3: Secuencia general para síntesis modular que implica química de acoplamiento catalizada por paladio (procedimiento B)
Figure imgf000025_0001
Esquema 5: Rutas generales para la síntesis de heteroarilamidas y heteroarilaminas
Figure imgf000026_0001
Esquema 6: Rutas generales para la síntesis de análogos que contienen grupos funcionales (p. ej., cetonas, alcoholes y aminas primarias)
Esquema 7: Rutas generales para la síntesis de análogos que contienen grupos funcionales (p. ej., ureas, carbamatos y sulfonamidas)
Esquema 10: Secuencia general para síntesis modular que implica la reacción de Wittig
Figure imgf000029_0001
en la que
X1, X2, W, R1, R3a R5, Lym tienen el significado definido anteriormente, con la condición de que se excluya 5-pirrolidin-1 -ilmetiltiazol-2-ilamina. Pueden usarse preferiblemente como intermedios para la preparación de otros compuestos de fórmula (I) descritos en la presente memoria.
Es un aspecto preferido de los compuestos intermedios de fórmula (IE) que W designe N o CH y X1 tenga el significado definido anteriormente. Independientemente de la actividad inhibidora de glucosidasa, se dan los intermedios particularmente preferidos en los ejemplos siguientes, que pueden usarse para la preparación de otros compuestos según los esquemas 5 a 7.
Son intermedios más preferidos los compuestos de subfórmula (IE1)
Figure imgf000030_0001
en la que W designa N o CH; y X1 y R1 tienen el significado definido anteriormente.
Se proporciona también un proceso para fabricar compuestos de subfórmula (IF), que comprende las etapas de: (a) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (IV)
Figure imgf000030_0002
en la que W y X1 tienen el significado definido anteriormente
con un compuesto de fórmulas (V), (VI), (VII) o (VIII)
Figure imgf000030_0003
R2’ designa Y, Alq, Cic o (CY2)nAr;
R2’’ designa R2’’’ o R2’’’’;
R2’’’ designa Y, Alc o (CY2)nAr;
R2’’’’ designa OY, OAlc u O(CY2)nAr; e
Y, Alc, Cic, Ar, Hal y n tienen el significado definido anteriormente,
facilitando el compuesto de subfórmula (IF)
Figure imgf000031_0001
R1 designa H;
R2 designa Y, Alq, Cic, (CY2)nAr, COY, COAlc, CO(CY2)nAr, CONHY, CONHAlc,
CONH(CY2)nAr, COOY, COOAlc, COO(CY2)nAr, SO2Y, SO2Alq o SO2(CY2)nAr; y
W y Xi tienen el significado definido anteriormente;
y opcionalmente
(b) hacer reaccionar el compuesto de subfórmula (IF) obtenido en la etapa (a) con un haluro de alquilo facilitando otro compuesto de fórmula (IF) en la que R1 tiene un significado distinto de H como se define anteriormente;
y/o
(c) convertir una base o ácido del compuesto de subfórmula (IF) en una sal fisiológicamente aceptable del mismo.
Los compuestos de fórmula (I) y subfórmulas del mismo son accesibles mediante las rutas anteriores. Los materiales de partida, incluyendo los compuestos de fórmulas (II) a (VIII), son habitualmente conocidos por el especialista, o pueden prepararse fácilmente mediante métodos conocidos. Por consiguiente, puede purificarse cualquier compuesto de fórmulas (II) a (VIII), proporcionado como producto intermedio y usado como material de partida para la preparación de compuestos de fórmula (I).
Los compuestos de fórmula (I) pueden modificarse, como hidrogenarse o reducirse con metal, para retirar el cloro, o someterse a una reacción de sustitución y/o transformarse con un ácido o base en una sal, preferiblemente con un ácido fuerte. Están disponibles numerosos artículos y métodos y son útiles para el especialista en la materia con respecto a química orgánica, estrategias y tácticas químicas, rutas sintéticas, protección de intermedios, procedimiento de escisión y purificación, aislamiento y caracterización. Las modificaciones químicas generales son conocidas por el especialista en la materia. La halogenación de arilos o la sustitución de hidroxilo por halógenos de ácidos, alcoholes, fenoles y sus estructuras tautoméricas pueden llevarse a cabo preferiblemente mediante el uso de POCl3 o SOCI2, PCI5 , sO 2Cl2. En algunos casos, es también útil cloruro de oxalilo. Las temperaturas pueden variar de 0 °C a reflujo, dependiendo de la tarea de halogenar una estructura de piridona o una ácido carboxílico o ácido sulfónico. El tiempo se ajustará también de minutos a varias horas o incluso una noche. De forma similar, la alquilación, formación de éter, formación de éster y formación de amida son conocidas por el especialista en la materia. La arilación con ácidos arilborónicos puede realizarse en presencia de un catalizador de Pd, ligando y base apropiados, preferiblemente una sal carbonato, fosfato o borato de sodio, potasio o cesio. Pueden usarse también bases orgánicas como Et3N, DIPEA o el más básico DBU. Los disolventes pueden variar también de tolueno, dioxano, THF, diglima, monoglima, alcoholes, DMF, DMA, NMP o acetonitrilo, en algunos casos incluso agua y otros. Los catalizadores usados comúnmente como precursores de tipo Pd(PPh3)4, Pd(OAc)2 o PdCI2 de catalizadores de PdO han progresado a más complejos con ligandos más eficaces. En arilaciones C-C, en lugar de ácidos y ésteres borónicos, pueden ser útiles sales de ariltrifluoroborato de potasio (acoplamiento de Suzuki-Miyaura), organosilanos (acoplamiento de Hiyama), reactivos de Grignard (Kumada), compuestos organocíncicos (acoplamiento de Negishi) y estannanos (acoplamiento de Stille). Esta experiencia puede transferirse a las N- y O-arilaciones. Están disponible numerosos artículos y métodos y son útiles para el especialista en la materia con respecto a la N-arilación, incluso de anilinas deficientes en electrones, y con cloruros de arilo y anilinas así como para O-arilación usando catálisis de Cu y Pd.
En la etapa final de los procesos anteriores, se proporciona opcionalmente una sal de los compuestos, preferiblemente aquellos de fórmula (I). Dichos compuestos descritos en la presente memoria pueden usarse en su forma no salina final. Por otro lado, la presente invención engloba también el uso de estos compuestos en forma de sus sales farmacéuticamente aceptables, que pueden derivarse de diversos ácidos y bases orgánicos e inorgánicos mediante procedimientos conocidos en la materia. Las formas de sal farmacéuticamente aceptables de los compuestos descritos en la presente memoria se preparan en su mayor parte mediante métodos convencionales. Si el compuesto descrito en la presente memoria contiene un grupo carboxilo, puede formarse una de sus sales adecuadas mediante la reacción del compuesto con una base adecuada dando la correspondiente sal de adición de base. Tales bases son, por ejemplo, hidróxidos de metal alcalino, incluyendo hidróxido de potasio, hidróxido de sodio e hidróxido de litio; hidróxidos de metal alcalinotérreo tales como hidróxido de bario e hidróxido de calcio; alcóxidos de metal alcalino, por ejemplo etóxido de potasio y propóxido de sodio y diversas bases orgánicas tales como piperidina, dietanolamina y N-metilglutamina. Las sales de aluminio de los compuestos descritos en la presente memoria se incluyen igualmente.
En el caso de ciertos compuestos descritos en la presente memoria, pueden formarse sales de adición de ácido tratando estos compuestos con ácidos orgánicos e inorgánicos farmacéuticamente aceptables, por ejemplo haluros de hidrógeno tales como cloruro de hidrógeno, bromuro de hidrógeno o yoduro de hidrógeno, otros ácidos minerales y las correspondientes sales de los mismos tales como sulfato, nitrato o fosfato y similares, y sulfonatos de alquilo y monoarilo tales como etanosulfonato, toluenosulfonato y bencenosulfonato, y otros ácidos orgánicos y las correspondientes sales de los mismos, tales como acetato, trifluoroacetato, tartrato, maleato, succinato, citrato, benzoato, salicilato, ascorbato y similares. Por consiguiente, la sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables de los compuestos descritos en la presente memoria incluyen las siguientes: acetato, adipato, alginato, arginato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato (besilato), bisulfato, bisulfito, bromuro, butirato, canforato, canfosulfonato, caprilato, cloruro, clorobenzoato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dihidrogenofosfato, dinitrobenzoato, dodecilsulfato, etanosulfonato, fumarato, galacterato (de ácido múcico), galacturonato, glucoheptanoato, gluconato, glutamato, glicerofosfato, hemisuccinato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, hipurato, hidrocloruro, hidrobromuro, hidroyoduro, 2-hidroxietanosulfonato, yoduro, isetionato, isobutirato, lactato, lactobionato, malato, maleato, malonato, mandelato, metafosfato, metanosulfonato, metilbenzoato, monohidrogenofosfato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, nitrato, oxalato, oleato, palmoato, pectinato, persulfato, fenilacetato, 3-fenilpropionato, fosfato, fosfonato y ftalato, pero esto no representa una restricción.
Con respecto a lo afirmado anteriormente, puede verse que las expresiones “sal farmacéuticamente aceptable” y “sal fisiológicamente aceptable”, que se usan intercambiablemente en la presente memoria, en la presente relación pretenden significar un ingrediente activo que comprende un compuesto descrito en la presente memoria en forma de una de sus sales, en particular si esta forma salina confiere propiedades farmacocinéticas mejorada al ingrediente activo en comparación con la forma libre del ingrediente activo o cualquier otra forma de sal del ingrediente activo usada anteriormente. La forma de sal farmacéuticamente aceptable del ingrediente activo puede proporcionar también este ingrediente activo por primera vez con una propiedad farmacocinética deseada que no tenía antes y puede incluso tener una influencia positiva sobre la farmacodinámica de este ingrediente activo con respecto a su eficacia terapéutica en el cuerpo
Se pretende también que un compuesto de fórmula (I) incluya formas marcadas isotópicamente del mismo. Una forma marcada isotópicamente de un compuesto de fórmula (I) es idéntica a este compuesto aparte del hecho de que uno o más átomos del compuesto se han reemplazado por un átomo o átomos que tienen una masa atómica o número másico que difiere de la masa atómica o número másico del átomo que aparece habitualmente de forma natural. Los ejemplos de isótopos que están fácilmente disponibles comercialmente y que pueden incorporarse a un compuesto de fórmula (I) mediante métodos bien conocidos incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, por ejemplo 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 31P, 32P, 35S , 18F y 36CI, marcado isotópicamente de fórmula (I) puede usarse en una serie de modos beneficiosos. Por ejemplo, un compuesto marcado isotópicamente de fórmula (I) en que se ha incorporado, por ejemplo, un radioisótopo tal como 3H o 14C, es adecuado para ensayos de distribución en tejido de medicamento y/o sustrato. Estos radioisótopos, concretamente tritio (3H) y carbono 14 (14C) se prefieren particularmente debido a su preparación sencilla y excelente detectabilidad.
La incorporación de isótopos más pesados, por ejemplo, deuterio (2H), a un compuesto de fórmula (I) tiene ventajas terapéuticas debido a la mayor estabilidad metabólica de este compuesto marcado isotópicamente. Una mayor estabilidad metabólica se traduce directamente en una semivida in vivo aumentada o menores dosificaciones, lo que en la mayoría de circunstancias representaría un aspecto preferido de la divulgación. Un compuesto marcado isotópicamente de fórmula (I) puede prepararse habitualmente llevando a cabo los procedimientos divulgados en los esquemas de síntesis y la descripción relacionada, en la parte de ejemplos y en la parte de preparación del presente texto, reemplazando un reactante no marcado isotópicamente por un reactante marcado isotópicamente fácilmente disponible.
El deuterio (2H) puede incorporarse también a un compuesto de fórmula (I) con fines de manipular el metabolismo oxidativo del compuesto mediante el efecto isotópico cinético primario. El efecto isotópico cinético primario es un cambio en la velocidad de una reacción química que es el resultado del intercambio de núcleos isotópicos, que a su vez está causado por el cambio en las energías de estado fundamental necesarias para la formación de enlace covalente después de este intercambio isotópico. El intercambio de un isótopo más pesado da habitualmente como resultado la reducción de la energía de estado fundamental para un enlace químico y por tanto causa la reducción de la velocidad de rotura de enlace limitante de velocidad. Si ocurre rotura de enlace en o cerca de una región de punto de silla a lo largo de la coordenada de una reacción multiproducto, las relaciones de distribución de producto pueden alterarse sustancialmente. Como explicación: si se une deuterio a un átomo de carbono en una posición no intercambiable, son típicas diferencias de velocidad de kM/kD= 2-7. Si esta diferencia de velocidad se aplica exitosamente a un compuesto de fórmula (I) que es susceptible de oxidación, el perfil de este compuesto in vivo puede modificarse drásticamente y dar como resultado propiedades farmacocinéticas mejoradas.
Cuando se descubren y desarrollan agentes terapéuticos, el especialista en la materia intenta optimizar los parámetros farmacocinéticos mientras que se retienen las propiedades in vitro deseables. Es razonable suponer que muchos compuestos con malos perfiles farmacocinéticos son susceptibles de metabolismo oxidativo. Los ensayos microsómicos hepáticos in vitro actualmente disponibles proporcionan información valiosa sobre el curso del metabolismo oxidativo de este tipo, lo que a su vez permite el diseño racional de compuestos deuterados de fórmula (I) con estabilidad mejorada mediante resistencia a dicho metabolismo oxidativo. Se obtienen así mejoras significativas en los perfiles farmacocinéticos de compuestos de fórmula (I) y pueden expresarse cuantitativamente en términos de aumentos de la semivida in vivo (t/2), la concentración al efecto terapéutico máximo (Cmáx), el área bajo la curva de dosis-respuesta (AUC) y F; y en términos de aclaramiento, dosis y costes materiales reducidos.
A continuación, se pretende ilustrar lo anterior: se prepara un compuesto de fórmula (I), que tiene múltiples sitios potenciales de ataque por el metabolismo oxidativo, por ejemplo, átomos de hidrógeno bencílicos y átomos de hidrógeno unidos a un átomo de nitrógeno, en forma de una serie de análogos en que se reemplazan diversas combinaciones de átomos de hidrógeno por átomos de deuterio de modo que algunos, la mayoría o todos estos átomos de hidrógeno se han reemplazado por átomos de deuterio. Las determinaciones de la semivida posibilitan una determinación favorable y exacta de la extensión en que ha mejorado la mejora de resistencia al metabolismo oxidativo. De este modo, se determina que la semivida del compuesto original puede extenderse hasta un 100 % como resultado del intercambio de deuterio-hidrógeno de este tipo.
El intercambio de deuterio-hidrógeno en un compuesto de fórmula (I) puede usarse también para conseguir una modificación favorable del espectro de metabolito del compuesto de partida para disminuir o eliminar los metabolitos tóxicos indeseados. Por ejemplo, si surge un metabolito tóxico mediante escisión oxidativa del enlace carbonohidrógeno (C-H), puede suponerse razonablemente que el análogo deuterado disminuirá o eliminará en gran medida la producción del metabolito indeseado, incluso si la oxidación particular no es una etapa determinante de la velocidad.
Los compuestos según la fórmula (I) y/o sales fisiológicamente aceptables de los mismos pueden usarse para inhibir una glicosidasa. El término “ inhibición” designa cualquier reducción de la actividad glicosidasa que esté basada en la acción de los compuestos específicos descritos en la presente memoria, que son capaces de interaccionar con la glicosidasa diana de tal manera que se haga posible el reconocimiento, unión y bloqueo. Se entenderá que los compuestos descritos en la presente memoria finalmente interaccionan con la diana y despliegan el efecto. Los compuestos se caracterizan por una afinidad apreciable tal por al menos una glicósido hidrolasa que asegure una unión fiable y preferiblemente un bloqueo completo de la actividad glicosidasa. Más preferiblemente, las sustancias son monoespecíficas para garantizar un reconocimiento exclusivo y dirigido a la diana glicosidasa individual elegida. El término “reconocimiento”, sin estar limitado a ello, se refiere a cualquier tipo de interacción entre los compuestos específicos y la diana, particularmente unión o asociación covalente o no covalente, tal como un enlace covalente, interacciones hidrófobas/hidrófilas, fuerzas de van der Waals, pares iónicos, enlaces de hidrógeno, interacciones ligando-receptor y similares. Tal asociación puede englobar también la presencia de otras moléculas tales como péptidos, proteínas o secuencias nucleotídicas. La presente interacción receptor/ligando se caracteriza preferiblemente por una alta afinidad, alta selectividad y reactividad cruzada mínima o incluso nula con otras moléculas diana para excluir impactos insanos y dañinos en el sujeto tratado.
Preferiblemente, la glicosidasa comprende glicósido hidrolasas, más preferiblemente la familia 84 de glicósido hidrolasas, lo más preferiblemente O-glicoproteína-2-acetamido-2-desoxi-p-D-glucopiranosidasa (OGA), con alta preferencia una O-GlcNAcasa de mamífero. Se prefiere particularmente que los compuestos de fórmula (I) descritos en la presente memoria se unan selectivamente a una O-GlcNAcasa, p. ej. inhibiendo selectivamente así la escisión de 2-acetamido-2-desoxi-p-D-glucopiranósido (O-GlcNAc) mientras que no inhiben sustancialmente una phexosaminidasa lisosómica.
Los compuestos descritos en la presente memoria exhiben preferiblemente una actividad biológica ventajosa, que se demuestra fácilmente en ensayos de actividad enzimática como se describen en la presente memoria o son conocidos de la técnica anterior. En tales ensayos in vitro, los compuestos exhiben y causan preferiblemente un efecto inhibidor. La CI50 es la concentración de un compuesto que produce un 50 % de la inhibición máxima para ese compuesto. La diana glicosidasa está especialmente semiinhibida por los compuestos descritos en la presente memoria si la concentración de los compuestos asciende a menos de 100 pM, preferiblemente menos de 10 pM, más preferiblemente menos de 1 pM, lo más preferiblemente menos de 0,2 pM.
La actividad biológica ventajosa de los compuestos descritos en la presente memoria puede demostrarse también en ensayos basados en cultivos celulares, p. ej. ensayos como se describen en el documento WO 2008/025170. Cuando se ensayan compuestos descritos en la presente memoria en un ensayo celular, se mide un aumento de la O-GlcNAcilación (debido a la inhibición de OGA). La CE50 es la concentración eficaz de un compuesto que produce un 50 % de la respuesta máxima posible para ese compuesto. Los compuestos descritos en la presente memoria exhiben valores de CI50 en el intervalo de 0,1 pM a 100 pM. Se prefiere que los compuestos descritos en la presente memoria tengan una actividad, expresada por una CE50 estándar de menos de 100 pM, más preferiblemente menos de 10 pM, lo más preferiblemente menos de 1 pM, con alta preferencia menos de 0,2 pM.
Otro objeto de la presente invención se refiere a un método para inhibir una glicosidasa, en el que un sistema capaz de expresar la glicosidasa, particularmente que expresa dicha glicosidasa, se pone en contacto con al menos un compuesto de fórmula (I) descrito en la presente memoria y/o sales fisiológicamente aceptables del mismo, en condiciones in vitro tales que se inhiba dicha glicosidasa. Preferiblemente, se pone en contacto la glicosidasa con un compuesto que inhibe selectivamente O-GlcNAcasa y más preferiblemente que tiene una CI50 de menos de 0,2 pM.
Se prefiere también realizar el método in vitro y que el método no se practique en el cuerpo humano. Se prefiere un sistema celular en el alcance del método. El sistema celular se define por ser cualquier sujeto a condición de que el sujeto comprenda células. Célula hace referencia a cualquier tipo de células primarias o células genomanipuladas, tanto en estado aislado, en cultivo, como estirpe celular, ensambladas en un tejido, órganos o mamíferos de laboratorio intactos, a condición de que sean capaces de expresar la glicosidasa. Se entenderá también que la célula expresa la glicosidasa como precondición inherente para poner en práctica los métodos de inhibición. Aunque se prefiere particularmente que las células sean capaces de expresar o expresen la glicosidasa, no se excluirá que puedan usarse células deficientes en glicosidasa y se añada glicosidasa artificialmente al sistema celular. El ensayo de la invención puede incluso realizarse completamente in vitro de tal modo que se renuncie a células, pero se ponga en contacto una glicosidasa con al menos un compuesto de fórmula (I) descrito en la presente memoria y/o sales fisiológicamente aceptables del mismo. Por ello, se proporciona una cantidad de glicosidasa aislada en forma bruta o purificada con este fin. Las enseñanzas anteriores de la presente memoria descriptiva referentes a los compuestos de fórmula (I), incluyendo cualquier realización preferida de los mismos, son válidas y aplicables sin restricciones a los compuestos según la fórmula (I) y sus sales cuando se usan en el método para inhibir la glicosidasa.
Como se discute en la presente memoria, las rutas de señalización de glicosidasa son relevantes para diversas enfermedades, preferiblemente enfermedades neurodegenerativas y cáncer. Por consiguiente, los compuestos descritos en la presente memoria son útiles en la profilaxis y/o el tratamiento de enfermedades que dependen de dichas rutas de señalización mediante interacción con una o más de ellas. Por lo tanto, los compuestos descritos en la presente memoria son inhibidores de las rutas de señalización descritas en la presente memoria, preferiblemente de la señalización mediada por OGA.
Los compuestos descritos en la presente memoria pueden usarse in vitro o in vivo. La susceptibilidad de una célula particular al tratamiento con los compuestos descritos en la presente memoria puede determinarse particularmente mediante pruebas in vitro, tanto en el curso de investigación como de aplicación clínica. Típicamente, se combina un cultivo de células con un compuesto descrito en la presente memoria a diversas concentraciones durante un periodo de tiempo que es suficiente para permitir que los agentes activos modulen la actividad glicosidasa, habitualmente entre aproximadamente una hora y una semana. El tratamiento in vitro puede llevarse a cabo usando células cultivadas de cualquier muestra o estirpe celular.
El hospedador o paciente puede pertenecer a cualquier especie de mamífero, por ejemplo, una especie de primate, particularmente seres humanos; roedores incluyendo ratones, ratas y hámsteres; conejos, caballos, vacas, perros, gatos, etc. Los modelos animales son de interés para investigaciones experimentales, proporcionando un modelo para el tratamiento de enfermedades humanas.
Para la identificación de una ruta de transducción de señal y para la detección de interacciones entre diversas rutas de transducción de señal, diversos científicos han desarrollado modelos o sistemas de modelización adecuados, por ejemplo, modelos de cultivo celular y modelos de animales transgénicos. Para la determinación de ciertos pasos de la cascada de transducción de señal, pueden utilizarse compuestos interactivos para modular la señal. Los compuestos descritos en la presente memoria pueden usarse también como reactivos para ensayar las rutas de transducción de señal dependientes de OGA en animales y/o modelos de cultivo celular o en las enfermedades clínicas mencionadas en esta solicitud.
El uso según los párrafos anteriores de la memoria descriptiva puede realizarse en modelos in vitro o in vivo. La inhibición puede monitorizarse mediante las técnicas descritas a lo largo de la presente memoria descriptiva. El uso in vitro se aplica preferiblemente a muestras de seres humanos que padecen enfermedades neurodegenerativas y cáncer. El ensayo de varios compuestos específicos y/o derivados de los mismos hace posible la selección de aquel ingrediente activo que sea más adecuado para el tratamiento del sujeto humano. La velocidad de dosificación in vivo del derivado elegido se preajusta ventajosamente a la susceptibilidad a glicosidasa y/o gravedad de la enfermedad del sujeto respectivo con respecto a los datos in vitro. Por lo tanto, la eficacia terapéutica se potencia notablemente. Además, la enseñanza posterior de la presente memoria descriptiva referente al uso de los compuestos según la fórmula (I) y sus derivados para la producción de un medicamento para el tratamiento profiláctico o terapéutico y/o monitorización se considera válida y aplicable sin restricciones al uso del compuesto para la inhibición de la actividad glicosidasa, preferiblemente la actividad OGA, si es oportuno.
La invención se refiere a un medicamento que comprende al menos un compuesto descrito en la presente memoria y/o sales farmacéuticamente aceptables del mismo. Un “medicamento” es cualquier agente en el campo de la medicina que comprende uno o más compuestos de fórmula (I) o preparaciones del mismo (p. ej., una composición farmacéutica o formulación farmacéutica) y puede usarse en profilaxis, terapia, seguimiento o cuidados posteriores de pacientes que padecen enfermedades que están asociadas a la actividad OGA, de tal modo que pueda establecerse una modificación patogénica de su condición global o de la condición de regiones particulares del organismo al menos temporalmente.
En consecuencia, la invención se refiere también a una composición farmacéutica que comprende como ingrediente activo el medicamento según la invención junto con coadyuvantes y/o excipientes farmacéuticamente tolerables.
“Coadyuvante” designa cada sustancia que posibilita, intensifica o modifica una respuesta específica contra el ingrediente activo de la invención si se administra simultánea, contemporánea o secuencialmente. Son coadyuvantes conocidos para soluciones de inyección, por ejemplo, composiciones de aluminio tales como hidróxido de aluminio o fosfato de aluminio, saponinas tales como QS21, dipéptido de muramilo o tripéptido de muramilo, proteínas tales como gamma-interferón o TNF, M59, escualeno o polioles.
Además, el ingrediente activo puede administrarse solo o en combinación con otros tratamientos. Puede conseguirse un efecto sinérgico usando más de un compuesto en la composición farmacéutica, concretamente el compuesto de fórmula (I) se combina con al menos otro agente como ingrediente activo, que es otro compuesto de fórmula (I) o un compuesto de armazón estructural diferente. Los ingredientes activos pueden usarse simultánea o secuencialmente. Los presentes compuestos son adecuados para combinación con agentes conocidos por los especialistas en la materia (p. ej., documento WO 2008/025170) y son útiles con los compuestos descritos en la presente memoria.
Un conjunto (kit) consiste en paquetes separados de una cantidad eficaz de un compuesto descrito en la presente memoria y/o sales, derivados, solvatos y estereoisómeros del mismo farmacéuticamente aceptables, incluyendo mezclas de los mismos en todas las relaciones, y una cantidad eficaz de un medicamento ingrediente activo adicional. El conjunto comprende envases adecuados, tales como cajas, botellas, bolsas o ampollas individuales. El conjunto puede comprender, por ejemplo, ampollas separadas que contienen cada una cantidad eficaz de un compuesto descrito en la presente memoria y/o sales, derivados, solvatos y estereoisómeros del mismo farmacéuticamente aceptables, incluyendo mezclas de los mismos en todas las relaciones, y una cantidad eficaz de un medicamento ingrediente activo adicional en forma disuelta o liofilizada.
Las formulaciones farmacéuticas pueden adaptarse para administración mediante cualquier método adecuado deseado, por ejemplo, mediante métodos orales (incluyendo bucales o sublinguales), rectales, nasales, tópicos (incluyendo bucales, sublinguales o transdérmicos), vaginales o parenterales (incluyendo subcutáneos, intramusculares, intravenosos o intradérmicos). Tales formulaciones pueden prepararse usando procesos conocidos en la técnica farmacéutica, p. ej., combinando el ingrediente activo con el excipiente o excipientes o coadyuvante o coadyuvantes.
La composición farmacéutica de la invención se produce de modo conocido usando portadores sólidos o líquidos comunes, diluyentes y/o aditivos y coadyuvantes habituales para la ingeniería farmacéutica, y con una dosificación apropiada. La cantidad de material excipiente que se combina con el ingrediente activo para producir una única forma de dosificación varía dependiendo del hospedador tratado y del modo de administración particular. Los excipientes adecuados incluyen sustancias orgánicas o inorgánicas que son adecuadas para las diferentes vías de administración, tales como aplicación entérica (p. ej. oral), parenteral o tópica, y que no reaccionan con los compuestos de fórmula (I) o sales de los mismos. Son ejemplos de excipientes adecuados agua, aceites vegetales, alcoholes bencílicos, alquilenglicoles, polietilenglicoles, triacetato de glicerol, gelatina, carbohidratos, p. ej. lactosa o almidón, estearato de magnesio, talco y gelatina de petróleo.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para administración oral pueden administrarse como unidades separadas tales como, por ejemplo, cápsulas o comprimidos; polvos o gránulos; soluciones o suspensiones en líquidos acuosos o no acuosos; espumas comestibles o alimentos espumados o emulsiones líquidas de aceite en agua o emulsiones líquidas de agua en aceite.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para administración parenteral incluyen soluciones de inyección estériles acuosas y no acuosas que comprenden antioxidantes, tampones, bacteriostáticos y solutos, mediante los cuales la formulación se vuelve isotónica con la sangre del recipiente para tratar; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden comprender medios de suspensión y espesantes. Las formulaciones pueden administrarse en envases monodosis o multidosis, por ejemplo, ampollas y viales sellados, y almacenarse en estado desecado por congelación (liofilizado), de modo que solo es necesaria la adición de un líquido portador estéril, por ejemplo, agua con fines de inyección, inmediatamente antes del uso. Las soluciones y suspensiones de inyección preparadas de acuerdo con la receta pueden prepararse a partir de polvos, gránulos y comprimidos estériles.
Ni que decir tiene que, además de los constituyentes particularmente mencionados anteriormente, las formulaciones pueden comprender también otros agentes habituales en la técnica con respecto al tipo particular de formulación; por tanto, por ejemplo, las formulaciones que son adecuadas para administración oral pueden comprender aromas.
Preferiblemente, la composición farmacéutica se adapta para administración oral. Las preparaciones pueden esterilizarse y/o pueden comprender auxiliares tales como proteínas portadoras (p. ej., seroalbúmina), lubricantes, conservantes, estabilizantes, cargas, agentes quelantes, antioxidantes, disolventes, agentes ligantes, agentes de suspensión, agentes humectantes, emulsionantes, sales (para influir en la presión osmótica), sustancias tampón, colorantes, aromatizantes y una o más sustancias activas adicionales, por ejemplo, una o más vitaminas. Los aditivos son bien conocidos en la técnica y se usan en una variedad de formulaciones.
Preferiblemente, una composición farmacéutica comprende como ingrediente activo una cantidad eficaz de al menos un compuesto de fórmula (I) descrito en la presente memoria y/o sales fisiológicamente aceptables del mismo junto con coadyuvantes farmacéuticamente tolerables para administración oral, opcionalmente en combinación con al menos otro ingrediente farmacéutico activo. Las enseñanzas anteriores de la presente memoria descriptiva referentes a la vía de administración y el producto de combinación, respectivamente, son válidas y aplicables sin restricciones a la combinación de ambos rasgos, si es oportuno.
Los términos “cantidad eficaz” o “dosis eficaz” o “dosis” se usan intercambiablemente en la presente memoria y designan una cantidad de compuesto farmacéutico que tiene un efecto profiláctico o terapéutico relevante sobre una enfermedad o condición patológica, concretamente que causa en un tejido, sistema, animal o ser humano una respuesta biológica o médica buscada o deseada, por ejemplo, por un investigador o médico. Un “efecto profiláctico” reduce la probabilidad de desarrollar una enfermedad o incluso previene el inicio de una enfermedad. Un “efecto terapéuticamente relevante” alivia en cierta medida uno o más síntomas de una enfermedad o devuelve a la normalidad parcial o completamente uno o más parámetros fisiológicos o bioquímicos asociados a o causantes de la enfermedad o afección patológica. Además, la expresión “cantidad terapéuticamente eficaz” designa una cantidad que, en comparación con un correspondiente sujeto que no ha recibido esta cantidad, tiene la siguiente consecuencia: tratamiento mejorado, curación, prevención o eliminación de una enfermedad, síndrome, afección, dolencia, trastorno o efecto secundario o también la reducción del avance de un enfermedad, dolencia o trastorno. La expresión “cantidad terapéuticamente eficaz” engloba también las cantidades que son eficaces para aumentar la función fisiológica normal.
El intervalo de dosis o dosificación respectivo para administración de la composición farmacéutica según la invención es suficientemente alto para conseguir el efecto profiláctico o terapéutico deseado de reducir los síntomas de las enfermedades anteriormente citadas. Se entenderá que el nivel, frecuencia y periodo de administración de dosis específico a cualquier ser humano particular dependerán de una variedad de factores, incluyendo la actividad del compuesto específico empleado, la edad, peso corporal, estado de salud general, género, dieta, momento y vía de administración, velocidad de excreción, combinación farmacológica y gravedad de la enfermedad particular en la que se aplica la terapia específica. Usando medios y métodos bien conocidos, puede determinarse la dosis exacta por un especialista en la materia mediante experimentación rutinaria. Las enseñanzas anteriores de la presente memoria descriptiva son válidas y aplicables sin restricciones a la composición farmacéutica que comprende los compuestos de fórmula (I), si es oportuno.
Las formulaciones farmacéuticas pueden administrarse en forma de unidades de dosificación que comprenden una cantidad predeterminada de ingrediente activo por unidad de dosificación. La concentración del ingrediente profiláctica o terapéuticamente activo en la formulación puede variar de aproximadamente 0,1 a 100 % en peso. Preferiblemente, el compuesto de fórmula (I), o las sales farmacéuticamente aceptables del mismo, se administran en dosis de aproximadamente 0,5 a 1000 mg, más preferiblemente entre 1 y 700 mg, lo más preferiblemente 5 y 100 mg por unidad de dosis. Generalmente, tal intervalo de dosis es apropiado para incorporación diaria total. En otros términos, la dosis diaria está preferiblemente entre aproximadamente 0,02 y 100 mg/kg de peso corporal. La dosis específica para cada paciente depende, sin embargo, de una amplia variedad de factores como ya se ha descrito en la presente memoria descriptiva (p. ej., dependiendo de la afección, tratada, del método de administración y la edad, peso y condición del paciente). Las formulaciones de unidad de dosificación preferidas son aquellas que comprenden una dosis diaria o dosis parcial, como se indica anteriormente, o una correspondiente fracción de la misma de un ingrediente activo. Además, las formulaciones farmacéuticas de este tipo pueden prepararse usando un proceso que es generalmente conocido en la técnica farmacéutica.
Aunque la cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto descrito en la presente memoria tiene que determinarse en última instancia por el doctor o veterinario tratante considerando una serie de factores (p. ej., la edad y peso del animal, la afección precisa que requiera tratamiento, la gravedad de la afección, la naturaleza de la formulación y el método de administración), una cantidad eficaz de un compuesto descrito en la presente memoria para uso en el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas, por ejemplo enfermedad de Alzheimer, está generalmente en el intervalo de 0,1 a 100 mg/kg de peso corporal del receptor (mamífero) al día y, particularmente, típicamente en el intervalo de 1 a 10 mg/kg de peso corporal al día. Por tanto, la cantidad real al día para un mamífero adulto que pese 70 kg está habitualmente entre 70 y 700 mg, donde esta cantidad puede administrarse como una dosis única al día o habitualmente en una serie de dosis parciales (tales como, por ejemplo, dos, tres, cuatro, cinco o seis) al día, de modo que la dosis diaria total sea la misma. Puede determinarse una cantidad eficaz de una sal o solvato o de un derivado fisiológicamente funcional del mismo como la fracción de la cantidad eficaz del compuesto descrito en la presente memoria. Puede suponerse que son adecuadas dosis similares para el tratamiento de otras afecciones mencionadas anteriormente.
La composición farmacéutica de la invención puede emplearse como medicamento en medicina humana y veterinaria. Los compuestos de fórmula (I) y/o sales fisiológicas de los mismos son adecuados para uso en el tratamiento profiláctico o terapéutico y/o la monitorización de enfermedades que están causadas, mediadas y/o propagadas por la actividad OGA. Se prefiere particularmente que las enfermedades sean enfermedades neurodegenerativas y cáncer, más preferiblemente enfermedades neurodegenerativas, lo más preferiblemente tauopatías, con alta preferencia enfermedad de Alzheimer.
La enfermedad o afección neurodegenerativa se selecciona más preferiblemente del grupo de enfermedad de Alzheimer, esclerosis lateral amiotrófica (ELA), degeneración corticobasal (DCB), demencia frontotemporal con parkinsonismo ligado al cromosoma 17 (DFTP-17), enfermedad de Niemann-Pick (de tipo C), complejo de parkinsonismo-demencia de Guam, enfermedad de Pick (EPi), parálisis supranuclear progresiva (PSP) y enfermedad de Parkinson. La más preferida es enfermedad de Alzheimer.
Los compuestos según la fórmula (I) y/o sales fisiológicamente aceptables de los mismos pueden usarse para el tratamiento profiláctico o terapéutico y/o la monitorización de enfermedades que están causadas, mediadas o propagadas por la actividad o Ga . Además, los compuestos según la fórmula (I) y/o sales fisiológicamente aceptables de los mismos pueden usarse para la producción de un medicamento para el tratamiento profiláctico o terapéutico y/o la monitorización de enfermedades que están causadas, mediadas y/o propagadas por la actividad OGA. Los compuestos de fórmula (I) y/o una sal fisiológicamente aceptable de los mismos pueden emplearse además como intermedios para la preparación de medicamentos ingredientes activos adicionales. El medicamento se prepara preferiblemente de manera no química, p. ej. combinando el ingrediente activo con al menos un portador o excipiente sólido, líquido y/o semilíquido, y opcionalmente junto con uno o más de otras sustancias activas en forma de dosificación apropiada.
Se proporcionan compuestos de fórmula (I) descrita en la presente memoria y/o sales fisiológicamente aceptables de los mismos para uso en el tratamiento profiláctico o terapéutico y/o la monitorización de enfermedades que están causadas, mediadas y/o propagadas por la actividad OGA. Otro objeto de la invención se refiere a un medicamento según la invención para uso en el tratamiento profiláctico o terapéutico y/o la monitorización de enfermedades neurodegenerativas y cáncer. La enseñanza anterior de la presente memoria descriptiva referente a los compuestos de fórmula (I), incluyendo cualquier realización preferida de los mismos, es válida y aplicable sin restricciones al medicamento que comprende compuestos según la fórmula (I) y sus sales para uso en el tratamiento profiláctico o terapéutico y/o la monitorización de enfermedades neurodegenerativas y cáncer.
Los compuestos de fórmula (I) descritos en la presente memoria pueden administrarse antes o después del inicio de una enfermedad una o varias veces actuando como terapia. Los compuestos anteriormente mencionados y productos médicos de uso descritos en la presente memoria se usan particularmente para el tratamiento terapéutico. Un efecto terapéuticamente relevante alivia en cierta medida uno o más síntomas de un trastorno, o devuelve a la normalidad, parcial o completamente, uno o más parámetros fisiológicos o bioquímicos asociados a o causantes de una enfermedad o afección patológica. La monitorización se considera una clase de tratamiento a condición de que los compuestos se administren a distintos intervalos, p. ej. para reforzar la respuesta y erradicar los patógenos y/o síntomas de la enfermedad completamente. Pueden aplicarse el compuesto idéntico o diferentes compuestos. El medicamento puede usarse también para reducir la probabilidad de desarrollar un trastorno o incluso prevenir la iniciación de trastornos asociados a la actividad OGA por adelantado o para tratar los síntomas emergentes y continuos. Los trastornos referidos por la invención son preferiblemente enfermedades neurodegenerativas, diabetes, cáncer y estrés.
El tratamiento profiláctico es aconsejable si el sujeto posee alguna precondición para las afecciones fisiológicas o patológicas anteriormente mencionadas, tales como una disposición familiar, un defecto genético o una enfermedad pasada anteriormente.
Es otro objeto preferido de la invención proporcionar un medicamento según la invención para uso en el tratamiento de una tauopatía. El uso preferido es una administración oral.
Dentro del alcance de la presente invención, se proporcionan por primera vez medicamentos que comprenden los compuestos de fórmula (I). Los compuestos de bajo peso molecular descritos en la presente memoria son inhibidores de glicosidasa fuertes y selectivos con permeabilidad pasiva mejorada. Se ha mostrado que los compuestos de fórmula (I) son competitivos con PUGNAc, un inhibidor de OGA conocido que se une al bolsillo de sustrato. El sustrato endógeno es una proteína O-GlcNAcilada. La O-GlcNAcilación de proteínas nucleares y citoplasmáticas es una de las modificaciones postraduccionales más comunes en animales y plantas. La ciclación de O-GlcNAc modula una serie de procesos celulares y hay evidencias crecientes de que la desregulación de la O-GlcNAcilación desempeña un papel en la etiología de varias enfermedades, incluyendo enfermedad de Alzheimer. La O-GlcNAc transferasa (OGT) y la O-GlcNAcasa (OGA) son las dos enzimas que regulan la ciclación de O-GlcNAc. Los datos emergentes sugieren que los inhibidores que bloquean OGA pueden ayudar a mantener niveles de O-GlcNAc saludables en pacientes de enfermedad de Alzheimer e inhibir así la formación de ovillos neurofibrilares. Por ello, puede aplicarse ventajosamente el uso de los compuestos de fórmula (I) en la regulación, modulación y/o inhibición de la cascada de señales de la glicosidasa como herramienta de investigación, para diagnóstico y/o en el tratamiento de cualquier trastorno que sea sensible a la señalización e inhibición de OGA.
Los inhibidores de bajo peso molecular pueden aplicarse ellos mismos y/o en combinación con medidas físicas para el diagnóstico de la eficacia de tratamiento. Los medicamentos y composiciones farmacéuticas que contienen dichos compuestos y el uso de dichos compuestos para tratar afecciones mediadas por glicosidasa es un enfoque novedoso prometedor para un amplio espectro de terapias causantes de una mejora directa e inmediata en el estado de salud, tanto en hombre como en animal. El impacto es de especial beneficio para combatir eficazmente la enfermedad de Alzheimer, sola o en combinación con otros tratamientos neurodegenerativos.
Debido a la actividad inhibidora sorprendentemente apreciable sobre OGA, junto con la permeabilidad pasiva, los compuestos descritos en la presente memoria pueden administrarse ventajosamente a menores dosis en comparación con otros inhibidores menos potentes o selectivos de la técnica anterior, mientras que siguen consiguiendo efectos biológicos deseados equivalentes o incluso superiores. Además, tal reducción de dosis conduce ventajosamente a menos o incluso ningún efecto adverso medicinal.
Los compuestos de fórmula (I), sus sales, isómeros, tautómeros, formas enantioméricas, diastereómeros, racematos y/o derivados se caracterizan por una alta especificidad y estabilidad, bajos costes de fabricación y un manejo conveniente. Estos rasgos forman la base de una acción reproducible, en la que está incluida la falta de reactividad cruzada, y de una interacción fiable y segura con la estructura diana.
Ha de entenderse que esta invención no está limitada a los compuestos, composiciones farmacéuticas, usos y métodos particulares descritos en la presente memoria, ya que tales cuestiones pueden, por supuesto, variar. Ha de entenderse también que la terminología usada en la presente memoria es con fines de describir realizaciones particulares solo y no pretende limitar el alcance de la presente invención, que se define solo por las reivindicaciones adjuntas. Como se usa en la presente memoria, incluyendo las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares de palabras tales como “un”, “una” y “el/la” incluyen sus correspondientes referentes plurales a menos que el contexto dicte claramente otra cosa. Por tanto, p.ej., la referencia a “un compuesto” incluye un único o varios diferentes compuestos, y la referencia a “un método” incluye la referencia a etapas y métodos equivalentes conocidos por un especialista en la materia, y así. A menos que se definan de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en la presente memoria tienen el mismo significado que se entiende comúnmente por un especialista en la materia a la que pertenece esta invención.
Las técnicas que son esenciales según la invención se describen con detalle en la memoria descriptiva. Otras técnicas que no se describen con detalle corresponden a métodos estándares conocidos que son bien conocidos por un especialista en la materia, o las técnicas se describen con más detalle en las referencias, solicitudes de patente o bibliografía estándar citadas. Aunque pueden usarse en la práctica o ensayo de la presente invención métodos y materiales similares o equivalentes a los descritos en la presente memoria, se describen a continuación ejemplos adecuados. Los siguientes ejemplos se proporcionan a modo de ilustración y no a modo de limitación. Dentro de los ejemplos, se usan reactivos y tampones estándares que están libres de actividades contaminantes (siempre que sea práctico). Los ejemplos han de considerarse particularmente de tal modo que no estén limitados a las combinaciones demostradas explícitamente de rasgos, sino que los rasgos ejemplificados pueden combinarse sin restricciones de nuevo a condición que resuelvan el problema técnico de la invención. De forma similar, pueden combinarse los rasgos de cualquier reivindicación con los rasgos de una o más de las otras reivindicaciones.
Lista de abreviaturas
Ac acetilo
ACN acetonitrilo
AcOH ácido acético
ac. acuoso
a ancho
BOC ferc-butiloxicarbonilo
BMS complejo de borano-sulfuro de dimetilo
BSA seroalbúmina bovina
Bu butilo
cat. catalítico
8 desplazamiento químico
d doblete o deuterado
D deuterio
DCM diclorometano
dd doblete de dobletes
DIAD azodicarboxilato de diisopropilo
OlEA N,N-dietilamina
DIPEA N,N-diisopropiletilamina
DMA dimetilacetamida
DMAP 4-dimetilaminopiridina
DMF N,N-dimetilformamida
DMSO dimetilsulfóxido
dppf 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno
eq. equivalentes
Et etilo
EtOAc acetato de etilo
EtOH etanol
1H protón
h hora
HPLC cromatografía líquida de alta presión/resolución
CI50 concentración inhibidora semimáxima
LAH hidruro de litio y aluminio
LC cromatografía líquida
LC/MS cromatografía líquida acoplada con espectrometría de masas LiHMDS hexametildisilazida de litio
m multiplete
M ión molecular o mol/litro
Máx Lambda máx
min minuto
m /z relación de masa a carga
MHz megahercios
Me metilo
min minutos
MeOH metanol
MS espectrometría/espectro de masas
N Normal (unidad de concentración)
NMO N-óxido de 4-metilmorfolina
NMP N -metil-2-pirrolidona
RMN resonancia magnética nuclear
n°. número
Pet. petróleo
O/N una noche
PBS solución salina tamponada con fosfato
PG grupo protector
Ph fenilo
ppm partes por millón
kPa kilopascales
c cuartete
Fr factor de retención
TA/ta temperatura ambiente
Tr/TR tiempo de retención
s singlete
t triplete
T erc lte rc terciario
TEA trietilamina
TFA ácido trifluoroacético
THF tetrahidrofurano
TLC cromatografía en capa fina
T3P anhídrido cíclico del ácido 1-propanofosfónico
UV ultravioleta
Resonancia magnética nuclear: Se registró la RMN-1H en un espectrómetro Bruker de 400 MHz, usando la señal residual de disolvente deuterado como referencia interna. Los desplazamientos químicos (8) se reseñan en ppm respecto al tetrametilsilano. Los datos de RMN-1H se reseñan como sigue: desplazamiento químico (multiplicidad, constantes de acoplamiento y número de hidrógenos). La multiplicidad se abrevia como sigue: s (singlete), d (doblete), t (triplete), c (cuartete), m (multiplete), a (ancho).
Programa de LC analítica general
Figure imgf000040_0001
Método A de LC/MS: Este método seguía el programa de LC analítica general, donde la fase móvil A era TFA al 0,1 % en H2O y a fase móvil B era TFA al 0,1 % en ACN. El caudal era de 2,0 ml/min. La columna era XBridge C8 (50 x 4.6 mm, 3,5 pm). Se usó el detector de MS en modo positivo.
Método B de LC/MS: Este método seguía el programa de LC analítica general, donde la fase móvil A era NH4HCO3 10 mM en H2O y la fase móvil B era ACN. El caudal era de 0,8 ml/min. La columna era XBridge C8 (150 x 4,6 mm, 3,5 pm). Se usó el detector de MS en modo negativo.
Método C de LC/MS: Este método seguía el programa de LC analítica general, donde la fase móvil A era TFA al 0,1 % en H2O y a fase móvil B era TFA al 0,1 % en ACN. El caudal era de 2,0 ml/min. La columna era XBridge C8 (50 x 4.6 mm, 3,5 pm). Se usó el detector de MS en modo positivo.
Método D de LC/MS: Este método seguía el programa de LC analítica general, donde la fase móvil A era NH4HCO3 10 mM en H2O y la fase móvil B era ACN. El caudal era de 1,0 ml/min. La columna era XBridge C8 (150 x 4,6 mm, 3,5 pm). Se usó el detector de MS en modo positivo.
Método A de HPLC: Este método seguía el programa de LC analítica general, donde la fase móvil A era TFA al 0,1 % en H2O y a fase móvil B era TFA al 0,1 % en ACN. El caudal era de 2,0 ml/min. La columna era XBridge C8 (50 x 4,6 mm, 3,5 pm). Se usó un detector de UV.
Método B de HPLC: Este método seguía el programa de LC analítica general, donde la fase móvil A era NH4HCO310 mM en H2O y la fase móvil B era ACN. El caudal era de 0,8 ml/min. La columna era XBridge C8 (150 x 4,6 mm, 3,5 pm). Se usó un detector de UV.
Método C de HPLC: Este método seguía el programa de LC analítica general, donde la fase móvil A era TFA al 0,1 % en H2O y a fase móvil B era TFA al 0,1 % en ACN. El caudal era de 2,0 ml/min. La columna era XBridge C8 (50 x 4,6 mm, 3,5 |jm). Se usó un detector de UV.
Método D de HPLC: Este método seguía el programa de LC analítica general, donde la fase móvil A era NH4HCO310 mM en H2O y la fase móvil B era ACN. El caudal era de 1,0 ml/min. La columna era XBridge C8 (150 x 4,6 mm, 3,5 jm ). Se usó un detector de UV.
Método A de HPLC quiral: Este método seguía el programa de LC analítica general, donde la fase móvil quiral A era DEA al 0,1 % en n-hexano:IPA 60:40. El caudal era de 1,0 ml/min. La columna era CHIRALPAK AD-H (250 x 4,6 mm, 5 jm ). Se usó un detector de UV.
Método B de MD Auto-Prep: Este método seguía el programa de LC analítica general, donde la fase móvil era TFA al 0,1 % en H2O, B-MeOH o ACN. Columna: Symmetry C8 (300 x 19 mm, 7 jm ). Se usaron detectores de PDA y UV. Métodos de HLC preparativa general: Se realizó la HPLC preparativa usando una columna preparativa Symmetry C8 (19 x 300 mm, 7 jm ) o una columna Sunfire C8 (19 x 250 mm, 5 jm ). La fase móvil A era acetato de amonio 10 mM en agua o TFA al 0,1 % en agua. La fase móvil B era metanol o acetonitrilo.
Para compuestos polares:
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Para compuestos no polares:
Figure imgf000041_0002
Método C de HPLC preparativa: Este método seguía el programa de LC analítica general, donde la fase móvil A era TFA al 0,1 % en H2O y la fase móvil B era MeOH o ACN. Columna: Sunfire C8 (19 x 250 mm, 5 jm ) o Sunfire C18 (30 x 250 mm, 10 jm ). Se usó un detector de UV.
Método B de HPLC preparativa: Este método seguía el programa de LC analítica general, donde la fase móvil A era NH4HCO3 10 mM en H2O y la fase móvil B era MeOH o ACN. Columna: Sunfire C8 (19 x 250 mm, 5 jm ) o Sunfire C18 (30 x 250 mm, 10 jm ) o Sunfire C18 (30 x 250 mm, 10 jm ). Se usó un detector de UV.
EJEMPLO 1: Preparación de 5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-amina (intermedio)
Figure imgf000042_0001
Etapa 1: Se añadió gota a gota LiAIH4 (15 ml, 0,0309 mol, solución 2,0 M en THF) a una solución agitada de 2 -((te rc -butoxicarbonil)amino)tiazol-5-carboxilato de etilo (5 g, 0,0183 mol) en THF seco (80 ml) a 0 °C bajo N2. Se agitó entonces la mezcla de reacción a TA durante 1 hora. Después de terminar la reacción, se enfrió la mezcla de reacción a -10 °C a 0 °C. Se inactivó la reacción mediante la adición gota a gota de NaOH al 10 % (5 ml). Después de 10 min, se filtró la mezcla a través de una almohadilla de Celite y se concentró el filtrado a presión reducida, procurando (5-(hidroximetil)tiazol-2-il)carbamato de terc-butilo (6 g) bruto en forma de un sólido amarillo pálido. Se usó el producto bruto en la siguiente reacción sin purificación. lC/m S: (Método A) 231,0 (M+H). RMN-1H (DMSO-d6, 400 MHz): 66,78 (s, 1H), 4,38 (s, 2H), 1,38 (s, 9H).
Etapa 2: Se añadió gota a gota cloruro de tionilo (6,3 ml, 0,103 mol) a una solución de (5-(hidroximetil)tiazol-2-il)carbamato de terc-butilo (6 g, 0,026 mol) en DCM (60 ml) a 0 °C bajo N2. Se agitó entonces la mezcla de reacción a 0 °C durante 2 h. Se monitorizó la mezcla de reacción por TLC. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida procurando (5-(clorometil)tiazol-2-il)carbamato de terc-butilo (7 g) bruto en forma de un líquido marrón. Se usó el producto bruto en la siguiente reacción sin purificación.
Etapa 3: Se añadió una solución de (5-(clorometil)tiazol-2-il)carbamato de terc-butilo (7 g, 0,028 mol) en DCM (70 ml) a una mezcla de 4-fenilpiperidina (4,5 g, 0,028 mol) y Et3N (12 ml, 0,0704 mol) en DCM (50 ml). Se agitó la mezcla de reacción a TA durante 30 m in. Después de terminar la reacción, se diluyó la mezcla de reacción con DCM (200 ml) y se lavó primero con agua y entonces con salmuera. Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio y se concentró a presión reducida. Se recristalizó el producto bruto con acetonitrilo y se secó entonces a vacío, procurando (5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)carbamato de terc-butilo ((3,8 g) en forma de un sólido blanco. LC/MS: (Método A) 374,3 (M+H). RMN-1H (DMSO-d6, 400 MHz) 611,09 (s a, 1H), 7,28-7,21 (m, 4H), 7,18-7,14 (m, 2H), 3,61 (s, 2H), 2,94­ 2,91 (m, 2H), 2,50-2,42 (m, 1H), 2,06-2,0 (m, 2H), 1,73-1,67 (m, 4H), 1,45 (s, 9H).
Etapa 4: Se añadió HCl en dioxano (200 ml) a una solución de (5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)carbamato de terc-butilo (3,8 g) en dioxano seco (60 ml). Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 12 h. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida procurando la sal clorhidrato de 5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-amina en forma de un sólido blanco. Rendimiento: (2,9 g, 92 %). RMN-1H (DMSO-d6, 400 MHz) 69,46 (s a, 2H), 7,50-7,45 (d, J =19,2 Hz, 1H), 7,34-7,30 (t, J= 15 Hz, 2H), 7,23-7,20 (m, 3H), 4,39 (s, 2H), 3,55-3,45 (m, 2H), 3,04-2,99 (m, 2H), 2,83-2,77 (m, 1H), 2,12-2,06 (m, 2H), 2,03-1,94 (m, 2H).
EJEMPLO 1-3: Preparación de N-(5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)propionamida
Se añadieron cloruro de propionilo (29 mg, 1 eq.) y Et3N (96 mg, 3 eq.) a una solución agitada de hidrocloruro de 5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-amina (100 mg, 1 eq.) en diclorometano (5 ml) a 0° C. Se dejó agitar la mezcla de reacción a TA durante 2 h. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida, se añadió agua y se extrajo el producto con diclorometano. Se separó la fase orgánica, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida. Se sometió el residuo a HPLC procurando la sal trifluoroacetato de N-(5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)propionamida en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 35 % (41 mg). LC/MS: (Método A) 330,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 3,03 min, 98,9 %, (Máx), 96,9% (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 6 11,9 (s, 1H), 7,29-7,14 (m, 6H), 3,6 (s, 2H), 3,1 (t, J= 4,0 Hz, 1H), 2,9 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 2,43-2,37 (m, 2H), 2,06-2,01 (m, 2H), 1,78-1,56 (m, 4H), 1,25-1,02 (m, 3H).
EJEMPLO 1-7: Preparación de 2-metil-5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol
Etapa 1: Se añadió gota a gota LiAlH4 (1,1 eq., solución 2,0 M en THF) a una solución agitada de 2-metiltiazol-5-carboxilato de etilo (1 eq) en THF seco (5 ml) a 0 °C) bajo N2. Se agitó la mezcla de reacción a TA durante 1 h. Se monitorizó la progresión de la reacción por TLC. Después de terminar la reacción, se enfrió la mezcla de reacción a -10 °C a 0 °C y se inactivó entonces mediante la adición gota a gota de solución acuosa de NaOH al 10 % (5 ml). Después de 10 min de agitación, se filtró la mezcla a través de una almohadilla de Celite y se concentró el filtrado a presión reducida, procurando (2-metiltiazol-5-il)metanol (6 g) en forma de un sólido amarillo pálido. Se usó el producto bruto en la siguiente etapa sin purificación. Lc /m S: (Método A) 130,0 (M+H). RMN-1H (DMSO-d6, 400 MHz): 67,4 (s, 1H), 5,5 (s, 1H), 4,6 (d, J= 4,0 Hz, 2H), 2,6 (s, 3H).
Etapa 2: Se añadió gota a gota cloruro de tionilo (3 eq.) a una solución de (2-metiltiazol-5-il)metanol (1 eq) en DCM (10 ml) a 0 °C bajo N2. Se agitó la mezcla de reacción a 0 °C durante 2 h. Se monitorizó la progresión de la reacción por TLC. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción bajo presión reducida procurando 5-(clorometil)-2-metiltiazol en forma de un líquido marrón.
Etapa 3: Se añadió una solución de 5-(clorometil)-2-metiltiazol (400 mg, 1 eq.) en DCM (5 ml) a una mezcla de 4-fenilpiperidina (480 mg, 1,1 eq.) y DIPEA (1,2 eq.) en DCM (2,5 ml). Se agitó la mezcla de reacción a TA durante 1 h. Después de terminar la reacción, se diluyó la mezcla de reacción con diclorometano y se lavó entonces consecutivamente con agua y salmuera. Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio y se concentró a presión reducida. Se sometió el residuo a HPLC preparativa procurando 2-metil-5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol en forma de un sólido gomoso amarillo pálido. Rendimiento: 16 % (140 mg). LC/MS: (Método A) 273,0 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,71 min, 97,8 %, (Máx), 99,4 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 88,1 (s, 1H), 7,5 (s, 1H), 7,29-7,14 (m, 5H), 3,7 (s, 2H), 2,94-2,91 (m, 2H), 2,5 (s, 3H), 2,09-2,04 (m, 2H), 1,73-1,70 (m, 2H), 1,66-1,57 (m, 2H).
EJEMPLO 1-8: Preparación de 2-etil-5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol
Figure imgf000043_0001
Etapa 1: Se añadió tributil(vinil)estaño (1,1 eq) a una solución de éster etílico del ácido 2-bromotiazol-5-carboxílico (1 eq.) en 1,4-dioxano (5 ml), seguido de PdCl2(PPh3)2 (10 % en moles). Se calentó la mezcla de reacción a 100 °C durante 14 h. Después de terminar la reacción, se filtró la mezcla de reacción a través de una almohadilla de Celite y se concentró el filtrado a presión reducida. Se sometió el residuo a cromatografía ultrarrápida procurando 2-viniltiazol-5-carboxilato de etilo en forma de un sólido gomoso amarillo pálido. Rendimiento: 65 %. LC/MS: (Método A) 184,3 (M+H).
Etapa 2: Se añadió Pd/C al 10 % a una solución de 2-viniltiazol-5-carboxilato de etilo (1 eq.) en metanol:acetato de etilo (5 ml, 1:1). Se trató entonces la mezcla de reacción con hidrógeno (96,5 kPa) a TA durante 1 h. Después de terminar la reacción, se filtró la mezcla de reacción a través de una almohadilla de Celite y se concentró el filtrado a presión reducida. Se sometió el residuo a cromatografía ultrarrápida procurando 2-etiltiazol-5-carboxilato de etilo en forma de un líquido gomoso amarillo pálido. Rendimiento: 60 %. LC/MS: (Método A) 186,0 (M+H).
Etapa 3: Se añadió gota a gota LiAIH4 (1,1 eq., solución 2,0 M en THF) a una solución agitada de 2-etiltiazol-5-carboxilato de etilo (1 eq.) en THF seco (5 ml) a 0 °C bajo N2. Se agitó entonces la mezcla de reacción a TA durante 1 h. Después de terminar la reacción (monitorizada por TLC), se enfrió la mezcla de reacción a -10 °C-0 °C. Se inactivó la reacción mediante la adición gota a gota de NaOH al 10 % (5 ml). Después de 10 min, se filtró la mezcla a través de una almohadilla de Celite y se concentró el filtrado a presión reducida, procurando (2-etiltiazol-5-il)metanol (6 g) en forma de un sólido amarillo pálido. Se añadió gota a gota cloruro de tionilo (3 eq.) al producto bruto (1 eq.) en DCM (5 ml) a 0 °C bajo N2. Se agitó entonces la mezcla de reacción a 0 °C durante 2 h. Después de terminar la reacción, monitorizada por TLC, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida, procurando 5-(clorometil)-2-etiltiazol en forma de un líquido marrón. Se usó el producto bruto en la siguiente reacción sin purificación. Rendimiento: 40 %. LC/MS: (Método A) 148,0 (M+H).
Etapa 4: Se añadió una solución de 5-(clorometil)-2-etiltiazol (300 mg, 1 eq.) en DCM (5 ml) a una mezcla de 4-fenilpiperidina (328 mg, 1,1 eq.) y DIPEA (526 mg, 2 eq.) en DCM (5 ml). Se agitó la mezcla de reacción a TA durante 1 h. Después de terminar la reacción, se diluyó la mezcla de reacción con DCM y se lavó entonces consecutivamente con agua y salmuera. Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio y se concentró a presión reducida. Se sometió el residuo a HPLC preparativa procurando 2-etil-5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol en forma de un sólido gomoso amarillo pálido. Rendimiento: 27 % (145 mg). LC/MS: (Método A) 287,0 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 3,02 min, 99,8 %, (Máx), 99,5 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,5 (s, 1H), 7,29-7,14 (m, 5H), 3,7 (s, 1H), 2,95-2,80 (m, 4H), 2,50-2,43 (m, 1H), 2,08-2,02 (m, 2H), 1,73-1,59 (m, 4H), 1,3 (t, J= 8,0 Hz, 3H).
EJEMPLO 2: Esquema 2 (Procedimiento A)
Etapa 1: Se añadió gota a gota CHaCOCl (1,2 eq.) a una solución agitada de 2-formil-5-aminotiazol (1 eq.) en piridina seca a 0 °C durante 10 min. Después de la adición, se dejó agitar la reacción a TA durante 12 h. Después de terminar la reacción, se evaporó la mezcla de reacción a presión reducida y se añadió H2O consiguiendo un precipitado que se filtró y secó al aire procurando el producto.
Etapa 2. Se añadieron CH3COOH catalítico, amina sustituida (1,1 eq.), montmorillonita K-10 y Na(OAc)3BH (1 eq.) a una solución agitada de N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida (1 eq.) en THF/metanol (1:1) a TA. Se calentó entonces la mezcla de reacción a 90 °C durante 12 h. Después de terminar la reacción, se filtró la mezcla de reacción a través de un lecho de Celite y se concentró el filtrado procurando el producto bruto, que se purificó por cromatografía en columna procurando el producto deseado.
EJEMPLO 2-15: Preparación de N-[5-(4-metilpiperidin-1-ilmetil)tiazol-2-il]acetamida
Siguiendo el procedimiento A, se usaron N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida (0,1 g, 0,58 mmol) y 4-metilpiperidina (172 mg, 1,76 mmol) procurando N-[5-(4-metilpiperidin-1-ilmetil)tiazol-2-il]acetamida. La purificación del producto por HPLC preparativa procuró la sal trifluoroacetato de N-[5-(4-metilpiperidin-1-ilmetil)tiazol-2-il]acetamida en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 20 % (46 mg). LC/MS: (Método A) 254,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 1,72 min, 99,8 %, (Máx), 99,4 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 812,30 (s, 1H), 9,50 (s, 1H), 7,58 (d, J= 5,8 Hz, 1H), 4,58-4,47 (m, 2H), 3,48-3,35 (m, 2H), 2,90-2,82 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), 1,81-1,78 (m, 2H), 1,56-1,55 (m, 1H), 1,36-1,32 (m, 2H), 0,97­ 0,94 (m, 3H).
EJEMPLO 2-19: Preparación de N-[5-(4-fenilpiperazin-1-ilmetil)tiazol-2-il]acetamida
Siguiendo el procedimiento A, se usaron N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida (0,1 g, 0,58 mmol) y 4-fenilpiperazina (234 mg, 1,76 mmol) procurando N-[5-(4-fenilpiperazin-1-ilmetil)tiazol-2-il]acetamida en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 7 % (10 mg). LC/MS: (Método A) 317,3 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,41 min, 98,5 %, (Máx), 97,4 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 811,96 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,20-7,16 (m, 2H), 6,90 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 6,76­ 6,73 (m, 1H), 3,66 (s, 2H), 3,10 (d, J= 8,0 Hz, 4H), 2,50-2,48 (m, 4H), 2,10 (s, 3H).
EJEMPLO 2-20: Preparación de N-{5-[(3-fenilpropilamino)metil]tiazol-2-il}acetamida
Siguiendo el procedimiento A, se usaron N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida (0,1 g, 0,58 mmol) y 3-fenilpropilamina (234 mg, 1,76 mmol) procurando N-{5-[(3-fenilpropilamino)metil]tiazol-2-il}acetamida. La purificación del producto por HPLC preparativa dio la sal trifluoroacetato de N-{5-[(3-fenilpropilamino)metil]tiazol-2-il}acetamida en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 13 % (16 mg). LC/MS: (Método A) 290,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,41 min, 98,2 %, (Máx), 94,8 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 812,22 (s, 1H), 8,78 (s, 2H), 7,51 (s, 1H), 7,31-7,18 (m, 5H), 4,35 (s, 2H), 2,89-2,86 (m, 2H), 2,65-2,61 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), 1,90-1,86 (m, 2H).
EJEMPLO 2-21: Preparación de N-(5-{[metil-(3-fenilpropil)amino]metil}tiazol-2-il)acetamida
Siguiendo el procedimiento A, se usaron N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida (0,1 g, 0,58 mmol) y metil-(3-fenilpropil)amina (261 mg, 1,76 mmol) procurando N-(5-{[metil-(3-fenilpropil)amino]metil}tiazol-2-il)acetamida. La purificación del producto por HPLC preparativa procuró la sal trifluoroacetato de N-(5-{[metil-(3-fenilpropil)amino]metil}tiazol-2-il)acetamida en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 13 % (29 mg). lC/MS: (Método A) 304,3 (M+h ). HPLC: (Método A) TR: 2,62 min, 99,2 %, (Máx), 97,4 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 811,94 (s, 1H), 7,26-7,12 (m, 6H), 3,60-3,58 (m, 2H), 2,58-2,48 (m, 2H), 2,32-2,28 (m, 2H), 2,13-2,10 (m, 6H), 1,73-1,70 (m, 2H).
EJEMPLO 2-22: Preparación de N-[5-(3-fenilazetidin-1-ilmetil)tiazol-2-il]acetamida
Siguiendo el procedimiento A, se usaron N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida (0,1 g, 0,58 mmol) y 3-fenilazetidina (231 mg, 1,76 mmol), procurando N-[5-(3-fenilazetidin-1-ilmetil)tiazol-2-il]acetamida en forma de un sólido amarillo pálido. Rendimiento: 31 % (48 mg). LC/MS: (Método A) 288,0 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,26 min, 97,7 %, (Máx), 98,9 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6) 811,74 (s, 1H), 7,35-7,23 (m, 6H), 3,83-3,76 (m, 5H), 3,26-3,23 (m, 2H), 2,32 (s, 3H).
EJEMPLO 2-23: Preparación de N-[5-(4-ciano-4-fenilpiperidin-1-ilmetil)tiazol-2-il]acetamida
Siguiendo el procedimiento A, se usaron N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida (0,1 g, 0,58 mmol) y 4-fenilpiperidin-4-carbonitrilo (323 mg, 1,76 mmol) procurando N-[5-(4-ciano-4-fenilpiperidin-1-ilmetil)tiazol-2-il]acetamida en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 27 % (48 mg). LC/MS: (Método A) 341,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,66 min, 99,6%, (Máx), 99,8 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 811,98 (s, 1H), 7,54-7,51 (m, 2H), 7,44-7,40 (m, 2H), 7,37-7,30 (m, 2H), 3,73 (s, 2H), 2,98 (d, J= 12,0 Hz, 2H), 2,36-2,30 (m, 2H), 2,12-2,10 (m, 5H), 2,09-2,02 (m, 2H).
EJEMPLO 2-24: Preparación de N-[5-(4-hidroxi-4-fenilpiperidin-1-ilmetil)tiazol-2-il]acetamida
Siguiendo el procedimiento A, se usaron N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida (0,1 g, 0,58 mmol) y 4-fenilpiperidin-6-ol (307 mg, 1,76 mmol) procurando N-[5-(4-hidroxi-4-fenilpiperidin-1-ilmetil)tiazol-2-il]acetamida en forma de un sólido marrón pálido. Rendimiento: 31 % (16 mg). LC/MS: (Método A) 332,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,11 min, 96,2%, (Máx), 96,6 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 811,95 (s, 1H), 7,47 (d, J= 7,4 Hz, 2H), 7,31-7,17 (m, 3H), 4,77 (s, 1H), 3,66 (s, 2H), 2,66-2,62 (m, 2H), 2,49-2,40 (m, 2H), 2,10 (s, 3H), 1,92-1,87 (m, 2H), 1,58-1,55 (m, 2H).
EJEMPLO 2-25: Preparación de N-(5-piperidin-1-ilmetiltiazol-2-il)acetamida
Siguiendo el procedimiento A, se usaron N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida (0,1 g, 0,58 mmol) y piperidina (370 mg, 1,76 mmol) procurando N-(5-piperidin-1-ilmetiltiazol-2-il)acetamida en forma de un sólido marrón pálido. Rendimiento: 14 % (18 mg). LC/MS: (Método A) 240,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,31 min, 97,7 %, (Máx), 98,6 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 8 11,94 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 3,57-3,52 (m, 2H), 2,32-2,31 (m, 4H), 2,11 (s, 3H), 1,90-1,36 (m, 6H).
EJEMPLO 2-26: Preparación de N-[5-(4-isopropilpiperidin-1-ilmetil)tiazol-2-il]acetamida
Siguiendo el procedimiento A, se usaron N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida (0,1 g, 0,58 mmol) y 4-isopropilpiperidina (220 mg, 1,76 mmol) procurando N-[5-(4-isopropilpiperidin-1-ilmetil)tiazol-2-il]acetamida en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 23 % (33 mg). LC/MS: (Método A) 282,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,57 min, 98,8 %, (Máx), 96,6 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 811,93 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 3,56 (s, 2H), 2,85-2,83 (m, 2H), 2,09 (s, 3H), 1,87-1,81 (m, 2H), 1,58-1,55 (m, 2H), 1,40-1,33 (m, 1H), 1,24-1,23 (m, 2H), 0,96-0,85 (m, 7H).
EJEMPLO 2-27: Preparación de N-(5-((4-ciclohexilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Siguiendo el procedimiento A, se usaron N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida (0,1 g, 0,58 mmol) y 4-ciclohexilpiperidina (290 mg, 1,76 mmol) procurando N-(5-((4-ciclohexilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida. Se sometió el producto a HPLC preparativa procurando la sal trifluoroacetato de N-(5-((4-ciclohexilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-ilo) en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 10 % (19 mg). LC/MS: (Método A) 322,3 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 3,34 min, 98,2 %, (Máx), 95,2 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 812,30 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), 7,60-7,55 (m, 1H), 4,47 (d, J= 4,0 Hz, 2H), 3,40-3,37 (m, 2H), 2,88-2,50 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), 1,84-1,81 (m, 2H), 1,74-1,61 (m, 6H), 1,39-1,32 (m, 8H), 0,98-0,96 (m, 2H).
EJEMPLO 2-28: Preparación de N-(5-((4-bencilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Siguiendo el procedimiento A, se usaron N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida (0,1 g, 0,58 mmol) y 4-bencilpiperidina (304 mg, 1,76 mmol) procurando N-(5-((4-bencilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 18 % (31 mg). LC/MS: (Método A) 330,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 3,00 min, 98,9 %, (Máx), 98,1 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 811,92 (s, 1H), 7,26-7,12 (m, 6H), 3,55 (s, 2H), 2,79-2,76 (m, 2H), 1,97 (s, 3H), 1,86-1,81 (m, 2H), 1,52-1,42 (m, 3H), 1,32-1,22 (m, 2H).
EJEMPLO 2-29: Preparación de N-(5-((3-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Siguiendo el procedimiento A, se usaron N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida (0,1 g, 0,58 mmol) y 3-fenilpiperidina (280 mg, 1,76 mmol) procurando N-(5-((3-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida en forma de un sólido marrón. Rendimiento: 13 % (22 mg). LC/MS: (Método A) 316,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,68 min, 99,3 %, (Máx), 98,2% (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 811,94 (s, 1H), 7,28-7,17 (m, 6H), 3,64 (s, 2H), 2,85-2,83 (m, 2H), 2,74-2,71 (m, 1H), 2,09 (s, 3H), 2,00-1,95 (m, 2H), 1,77-1,68 (m, 2H), 1,54-1,42 (m, 2H).
EJEMPLO 2-34: Preparación de N-(5-((4-(dimetilamino)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Siguiendo el procedimiento A, se sintetizó N-(5-((4-(dimetilamino)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida a partir de N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida (0,1 g, 0,58 mmol) y N,N-dimetilpiperidin-4-amina (222 mg, 1,76 mmol) en forma de un sólido gomoso blanco. Rendimiento: 15 % (20 mg, sólido gomoso blanco). LC/MS: (Método A) 283,3 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 3,20 min, 98,4 %, (Máx), 97,9 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 11,96 (s, 1H), 7,24 (s, 1H), 3,61 (s, 2H), 2,89 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 2,31 (s, 3H), 2,10-1,81 (m, 4H), 1,47-1,42 (m, 2H), 0,56-0,10 (m, 6H).
EJEMPLO 2-41: Preparación de N-[5-(4-fluoro-4-fenilpiperidin-1-ilmetil)tiazol-2-il]acetamida
Siguiendo el procedimiento A, se usaron N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida (0,1 g, 0,58 mmol) y 4-fluoro-4-fenilpiperidina (311 mg, 1,76 mmol) procurando N-[5-(4-fluoro-4-fenil-5-piperidin-1-ilmetil)tiazol-2-il]acetamida en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 25% (10 mg). LC/MS: (Método A) 334,0 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,80 min, 99,8 %, (Máx), 99,6 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 811,97 (s, 1H), 7,43-7,29 (m, 6H), 3,70 (s, 2H), 2,79 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 2,35-2,30 (m, 2H), 2,10-2,09 (m, 5H), 1,87-1,86 (m, 2H).
EJEMPLO 3: Esquema 3 (Procedimiento B)
Etapa 1: Se añadieron ácido borónico sustituido (1,2 eq.), Cs2CO3 (1,5 eq) y finalmente PdCh(dppf)2 (6 % en moles) a una solución agitada de éster ferc-butílico del ácido 4-trifluorometanosulfoniloxi-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (1 eq.) en dioxano desgasificado seco. Se calentó la mezcla de reacción a 100 °C durante 14 h. Después de terminar la reacción, se filtró la mezcla de reacción a través de un lecho de Celite, se evaporó el filtrado a presión reducida y se purificó por cromatografía en columna procurando el producto.
Etapas 2 y 3: Se añadió dioxano/HCl (2 ml) a una solución agitada de éster ferc-butílico del ácido fenil-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico 4-sustituido (1 eq.) en dioxano a 0 °C y se dejó agitar a TA durante 4 h. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción procurando el producto, que se usó como tal para la siguiente etapa sin purificación adicional. Se disolvió la mezcla de reacción bruta (1 eq.) en THF:MeOH (1:1), se añadieron CH3COOH catalítico, fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridina 4-sustituida bruta (1,1 eq.), montmorillonita K-10 (1 eq.) y Na(OAc)3BH (1,2 eq.) y se calentó a 90 °C durante 12 h. Después de terminar la reacción, se filtró la mezcla de reacción a través de un lecho de Celite y se concentró el filtrado procurando el producto bruto.
Etapa 4: Se disolvió el producto de la etapa 3 del procedimiento B en metano (10 ml) y se sometió a hidrogenación usando Pd/C al 10 % y H2 (96,5 kPa) durante 4 h a 12 h. Después de terminar la reacción, se filtró la mezcla de reacción a través de un lecho de Celite, se evaporó el filtrado y se concentró. Se purificó el producto bruto tanto por cromatografía en columna como HPLC preparativa procurando el producto.
EJEMPLO 3a: Preparación de 4-(2-fluorofenil)-5,6-dihidropiridin-1(2H)carboxilato de ferc-butilo (intermedio)
Figure imgf000046_0004
Se preparó 4-(2-fluorofenil)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-carboxilato de ferc-butilo usando ácido 2-fluorofenilborónico (300 mg, 1 mmol) y éster ferc-butílico del ácido 4-trifluorometanosulfoniloxi-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (704 mg, 1,1 mmol) en forma de un sólido gomoso marrón (369 mg, 62 %) siguiendo el procedimiento B etapa 1. LC/MS: (Método A) 278,2 (M+H).
EJEMPLO 3b: Preparación de éster ferc-butílico del ácido 4-(4-fluorofenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (intermedio)
Figure imgf000046_0001
Se preparó éster ferc-butílico del ácido (4-(4-fluorofenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1 -carboxílico usando ácido 4-fluorofenilborónico (300 mg, 1 mmol) y éster ferc-butílico del ácido 4-trifluorometanosulfoniloxi-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (704 mg, 1,1 mmol) en forma de un sólido marrón (405 mg, 68 %) siguiendo el procedimiento B etapa 1. LC/MS: (Método A) 278,2 (M+H).
EJEMPLO 3c: Preparación de éster ferc-butílico del ácido 4-p-tolil-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (intermedio)
Figure imgf000046_0002
Se preparó éster ferc-butílico del ácido 4-p-tolil-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico usando ácido 4-metilfenilborónico (400 mg, 1 mmol) y éster ferc-butílico del ácido 4-trifluorometanosulfoniloxi-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (1 g, 1,1 mmol) en forma de un líquido gomoso (312 mg, 52 %) siguiendo el procedimiento B etapa 1. LC/MS: (Método A) 274,2 (M+H).
EJEMPLO 3d: Preparación de 4-(m-tolil)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-carboxilato de ferc-butilo (intermedio)
Figure imgf000046_0003
Se preparó éster ferc-butílico del ácido 4-m-tolil-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico usando ácido 3-metilfenilborónico (400 mg, 1 mmol) y éster ferc-butílico del ácido 4-trifluorometanosulfoniloxi-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (1 g, 1,1 mmol) en forma de un sólido amarillo gomoso (606 mg, 74 %) siguiendo el procedimiento B etapa 1. LC/MS: (Método A) 274,2 (M+H).
EJEMPLO 3e: Preparación de éster ferc-butílico del ácido 4-o-tolil-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxíMco (intermedio)
Figure imgf000047_0003
Se preparó éster ferc-butílico del ácido 4-o-tolil-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico usando ácido 2-metilfenilborónico (300 mg, 1 mmol) y éster ferc-butílico del ácido 4-trifluorometanosulfoniloxi-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (800 mg, 1,1 mmol) en forma de un líquido amarillo pálido (363 mg, 60 %) siguiendo el procedimiento B etapa 1. LC/MS: (Método A) 274,2 (M+H).
EJEMPLO 3f: Preparación de éster ferc-butílico del ácido 4-(4-metoxifenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (intermedio)
Figure imgf000047_0001
Se preparó éster ferc-butílico del ácido (4-(4-metoxifenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico usando ácido 4-metoxifenilborónico (400 mg, 1 mmol) y éster ferc-butílico del ácido 4-trifluorometanosulfoniloxi-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (871 mg, 1,1 mmol) en forma de un líquido incoloro (410 mg, 54 %) siguiendo el procedimiento B etapa 1. LC/MS: (Método A) 290,2 (M+H).
EJEMPLO 3g: Preparación de éster ferc-butílico del ácido 4-(3-metoxifenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (intermedio)
Figure imgf000047_0002
Se preparó éster ferc-butílico del ácido (4-(3-metoxifenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxilico usando ácido 3-metoxifenilborónico (400 mg, 1 mmol) y éster ferc-butílico del ácido 4-trifluorometanosulfoniloxi-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (871 mg, 1,1 mmol) en forma un líquido amarillo (319 mg, 42 %) siguiendo el procedimiento B etapa 1. LC/MS: (Método A) 290,2 (M+H).
EJEMPLO 3h: Preparación de éster ferc-butílico del ácido 4-(2-metoxifenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (intermedio)
Figure imgf000047_0004
Se preparó éster ferc-butílico del ácido (4-(2-metoxifenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico usando ácido 2-metoxifenilborónico (400 mg, 1 mmol) y éster ferc-butílico del ácido 4-trifluorometanosulfoniloxi-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (871 mg, 1,1 mmol) en forma de un líquido amarillo pálido (547 mg, 72 %) siguiendo el procedimiento B etapa 1. LC/MS: (Método A) 290,2 (M+H).
EJEMPLO 3i: Preparación de éster ferc-butílico del ácido 4-(2-cianofenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (intermedio)
Figure imgf000048_0003
Se preparó éster ferc-butílico del ácido (4-(2-cianofenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico usando ácido 2-cianofenilborónico (400 mg, 1 mmol) y éster ferc-butílico del ácido 4-trifluorometanosulfoniloxi-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (990 mg, 1,1 mmol) en forma de un sólido blanco (448 mg, 58 %) siguiendo el procedimiento B etapa 1. LC/MS: (Método A) 285,2 (M+H).
EJEMPLO 3j: Preparación de éster ferc-butílico del ácido 4-(4-cianofenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (intermedio)
Figure imgf000048_0002
Se preparó éster ferc-butílico del ácido (4-(4-cianofenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico usando ácido 4-cianofenilborónico (400 mg, 1 mmol) y éster ferc-butílico del ácido 4-trifluorometanosulfoniloxi-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (990 mg, 1,1 mmol) en forma de un líquido incoloro (770 mg, 62 %) siguiendo el procedimiento B etapa 1. LC/MS: (Método A) 285,1 (M+H).
EJEMPLO 3k: Preparación de éster ferc-butílico del ácido 4-(2-etoxicarbonilfenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (intermedio)
Figure imgf000048_0004
Se preparó éster ferc-butílico del ácido 4-(2-etoxicarbonilfenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico usando ácido 2-etoxicarbonilfenilborónico (300 mg, 1 mmol) y éster ferc-butílico del ácido 4-trifluorometanosulfoniloxi-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (682 mg, 1,1 mmol) en forma de un líquido incoloro pálido (328 mg, 64 %) siguiendo el procedimiento B etapa 1. LC/MS: (Método A) 332,1 (M+H).
EJEMPLO 3l: Preparación de éster ferc-butílico del ácido 4-(4-etoxicarbonilfenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (intermedio)
Figure imgf000048_0001
Se preparó éster ferc-butílico del ácido 4-(4-etoxicarbonilfenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxilico usando ácido 4-etoxicarbonilfenilborónico (400 mg, 1 mmol) y éster terc-butílico del ácido 4-trifluorometanosulfoniloxi-3,6-dihidro-2Hpiridin-1 -carboxíMco (682 mg, 1,1 mmol) en forma de un líquido incoloro (465 mg, 68 %) siguiendo el procedimiento B etapa 1. LC/MS: (Método A) 332,1 (M+H).
EJEMPLO 3m: Preparación de éster ferc-butílico del ácido 4-(2-hidroxifenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (intermedio)
Figure imgf000049_0003
Se preparó éster ferc-butílico del ácido (4-(2-hidroxifenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1 -carboxílico usando ácido 2-hidroxifenilborónico (300 mg, 1 mmol) y éster ferc-butílico del ácido 4-trifluorometanosulfoniloxi-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (798 mg, 1,1 mmol) en forma de un líquido incoloro (420 mg, 72 %) siguiendo el procedimiento B etapa 1. LC/MS: (Método A) 276,2 (M+H).
EJEMPLO 3n: Preparación de éster ferc-butílico del ácido 4-(4-hidroxifenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (intermedio)
Figure imgf000049_0001
Se preparó éster ferc-butílico del ácido 4-(4-hidroxifenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1 -carboxílico usando ácido 4-hidroxifenilborónico (300 mg, 1 mmol) y éster ferc-butílico del ácido 4-trifluorometanosulfoniloxi-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (800 mg, 1,1 mmol) en forma de un líquido incoloro (380 mg, 65 %) siguiendo el procedimiento B etapa 1. LC/MS: (Método A) 276,2 (M+H).
EJEMPLO 3o: Preparación de éster ferc-butílico del ácido 4-(3-hidroxifenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (intermedio)
Figure imgf000049_0002
Se preparó éster ferc-butílico del ácido 4-(3-hidroxifenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1 -carboxílico usando ácido 3-hidroxifenilborónico (300 mg, 1 mmol) y éster ferc-butílico del ácido 4-trifluorometanosulfoniloxi-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxilico (790 mg, 1,1 mmol) en forma de un líquido incoloro (420 mg, 72 %) siguiendo el procedimiento B etapa 1. LC/MS: (Método A) 276,2 (M+H).
EJEMPLO 3-14: Preparación de N-(5-((4-(p-tolil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Siguiendo el procedimiento B, se sintetizó N-(5-((4-(p-tolil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida a partir de éster fercbutílico del ácido 4-p-tolil-3,6-dihidro-2H-piridin-1 -carboxílico y N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 26 % (34 mg). LC/MS: (Método A) 330,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 3,20 min, 98,7 %, (Máx), 96,6 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 11,94 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,11-7,05 (m, 4H), 3,63 (s, 2H), 2,92 (d, J = 12,0 Hz, 2H), 2,49-2,48 (m, 1H), 2,23 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,02-1,97 (m, 2H), 1,67-1,58 (m, 4H).
EJEMPLO 3-16: Preparación de N-(5-((4-(4-metoxifenil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Siguiendo el procedimiento B, se sintetizó N-(5-((4-(4-metoxifenil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida a partir de éster ferc-butílico del ácido 4-(4-metoxifenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico y N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida. La purificación por HPLC preparativa procuró la sal trifluoroacetato del compuesto del título en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 25 % (67 mg). LC/MS: (Método A) 346,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,83 min, 97,1 %, (Máx), 95,7 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 512,32 (s, 1H), 9,51 (s, 1H), 7,65-7,60 (m, 1H), 7,13-7,10 (m, 2H), 6,91-6,86 (m, 2H), 4,56 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,53-3,52 (m, 2H), 3,03-2,97 (m, 2H), 2,75-2,72 (m, 1H), 2,15 (s, 3H), 1,99-1,95 (m, 2H), 1,78-1,72 (m, 2H).
EJEMPLO 3-30: Preparación de N-(5-((4-(2-fluorofenil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Siguiendo el procedimiento B, se sintetizó N-(5-((4-(2-fluorofenil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida a partir de 4-(2-fluorofenil)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-carboxilato de tere-butilo y N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida en forma de un sólido amarillo pálido. Rendimiento: 5 % (3 mg). LC/MS: (Método A) 334,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,80 min, 97,4 %, (Máx), 97,4% (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 5 11,95 (s, 1H), 7,36-7,32 (m, 1H), 7,26-7,20 (m, 2H), 7,15­ 7,09 (m, 2H), 3,64 (s, 2H), 2,96-2,88 (m, 2H), 2,77-2,72 (m, 1H), 2,09-1,98 (m, 5H), 1,84-1,75 (m, 4H).
EJEMPLO 3-31: Preparación de N-(5-((4-(m-tolil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Siguiendo el procedimiento B, se sintetizó N-(5-((4-(m-tolil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida a partir de 4-(mtolil)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-carboxilato de tere-butilo y N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 17 % (32 mg). LC/MS: (Método A) 330,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 3,07 min, 98,7 %, (Máx), 98,9 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 511,95 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,13 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,04-6,98 (m, 3H), 3,63 (s, 2H), 2,94-2,91 (m, 2H), 2,49-2,48 (m, 1H), 2,2 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,02-2,01 (m, 2H), 1,78-1,64 (m, 4H).
EJEMPLO 3-32: Preparación de N-(5-((4-(3-metoxifenil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Siguiendo el procedimiento B, se sintetizó N-(5-((4-(3-metoxifenil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida a partir de éster tere-butílico del ácido 4-(3-metoxifenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico y N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 14 % (29 mg). LC/MS: (Método A) 346,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,73 min, 98,9 %, (Máx), 98,6 % (254 nm).
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 511,95 (s, 1H), 7,25-7,15 (m, 2H), 6,81-6,71 (m, 2H), 3,71 (s, 3H), 3,63 (s, 2H), 2,94­ 2,91 (m, 2H), 2,49-2,43 (m, 1H), 2,10 (s, 3H), 2,05-1,97 (m, 2H), 1,72-1,65 (m, 4H).
EJEMPLO 3-33: Preparación de N-(5-((4-(2-metoxifenil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Siguiendo el procedimiento B, se sintetizó N-(5-((4-(2-metoxifenil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida a partir de éster tere-butílico del ácido 4-(2-metoxifenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico y N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 30 % (62 mg). LC/MS: (Método A) 346,0 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,89 min, 97,9 %, (Máx), 97,6 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 511,95 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,18-7,12 (m, 2H), 6,93-6,85 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,63 (s, 2H), 2,93-2,80 (m, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,03-1,97 (m, 2H), 1,67-1,54 (m, 4H).
EJEMPLO 3-35: Preparación de N-(5-((4-(2-cianofenil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Siguiendo el procedimiento B, se sintetizó N-(5-((4-(2-cianofenil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida a partir de éster tere-butílico del ácido 4-(2-cianofenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico y N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida en forma de un sólido amarillo pálido. Rendimiento: 29 % (54 mg). LC/MS: (Método A) 341,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,45 min, 93,8%, (Máx), 95,3% (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 511,97 (s, 1H), 7,76 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,67-7,63 (m, 1H), 7,55 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,41 (d, J= 4,0 Hz, 1H), 7,27-7,26 (m, 1H), 3,68 (s, 2H), 2,99-2,97 (m, 2H), 2,81 (s, 1H), 2,10-2,08 (m, 5H), 1,74-1,72 (m, 4H).
EJEMPLO 3-36: Preparación de N-(5-((4-(4-cianofenil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Siguiendo el procedimiento B, se sintetizó N-(5-((4-(4-cianofenil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida a partir de éster tere-butílico del ácido 4-(4-cianofenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico y N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 2 % (3 mg). Lc /MS: (Método A) 341,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,59 min, 94,6 %, (Máx), 89,0 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 5 11,95 (s, 1H), 7,73 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 7,46 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 7,26 (s, 1H), 3,65 (s, 2H), 2,95-2,88 (m, 2H), 2,58 (s, 1H), 2,10-2,02 (m, 5H), 1,74-1,62 (m, 4H).
EJEMPLO 3-37: Preparación de N-(5-((4-(2-hidroxifenil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Siguiendo el procedimiento B, se sintetizó N-(5-((4-(2-hidroxifenil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida a partir de éster tere-butílico del ácido 4-(2-hidroxifenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico y N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida. La purificación por HPLC preparativa procuró la sal trifluoroacetato del compuesto del título en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 7 % (19 mg). LC/MS: (Método A) 332,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,28 min, 98,9 %, (Máx), 98,6 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 512,29 (s, 1H), 9,56-9,51 (m, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,05-7,01 (m, 2H), 6,82-6,74 (m, 2H), 4,54 (m, 2H), 3,49-3,47 (m, 2H), 3,09-3,00 (m, 3H), 2,15 (s, 3H), 1,96-1,85 (m, 4H).
EJEMPLO 3-38: Preparación de N-(5-((4-(4-hidroxifenil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Siguiendo el procedimiento B, se sintetizó N-(5-((4-(4-hidroxifenil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida a partir de éster ferc-butílico del ácido 4-(4-hidroxifenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico y N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 6 % (5 mg). LC/m S: (Método A) 332,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 1,90 min, 96,5 %, (Máx), 97,9 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 811,95 (s, 1H), 9,14 (s, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,01 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 6,65 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 3,62 (s, 2H), 2,92-2,89 (m, 2H), 2,32-2,31 (m, 1H), 2,10 (s, 3H), 2,03-1,98 (m, 2H), 1,68-1,53 (m, 4H).
EJEMPLO 3-39: Preparación de N-(5-((4-(3-hidroxifenil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Siguiendo el procedimiento B, se sintetizó N-(5-((4-(3-hidroxifenil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida a partir de éster ferc-butílico del ácido 4-(3-hidroxifenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico y N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida. La purificación por HPLC preparativa procuró la sal trifluoroacetato de N-(5-((4-(3-hidroxifenil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 9 % (24 mg). lC/Ms : (Método A) 332,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,11 min, 98,9 %, (Máx), 98,8% (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 812,32 (s, 1H), 9,55-9,37 (m, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,12-7,08 (m, 1H), 6,62-6,58 (m, 3H), 4,55 (d, J = 4,2 Hz, 2H), 3,50-3,47 (m, 2H), 3,03-2,97 (m, 2H), 2,72­ 2,66 (m, 1H), 2,16 (s, 3H), 1,98-1,82 (m, 2H), 1,79-1,74 (m, 2H).
EJEMPLO 3-42: Preparación de N-(5-((4-(4-fluorofenil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Siguiendo el procedimiento B, se sintetizó N-(5-((4-(4-fluorofenil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida a partir de éster ferc-butílico del ácido 4-(4-fluorofenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1 -carboxílico y N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida en forma de un sólido marrón pálido. Rendimiento: 35 % (41 mg). LC/MS: (Método A) 334,0 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,98 min, 98,2 %, (Máx), 96,6 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 11,95 (s, 1H), 7,29-7,26 (m, 3H), 7,10-7,06 (m, 2H), 3,64 (s, 2H), 2,94-2,91 (m, 2H), 2,49-2,48 (m, 1H), 2,10 (s, 3H), 2,05-2,00 (m, 2H), 1,72-163 (m, 4H).
EJEMPLO 3-43: Preparación de N-(5-((4-(o-tolil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Siguiendo el procedimiento B, se sintetizó N-(5-((4-(o-tolil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida a partir de éster fercbutílico del ácido 4-o-tolil-3,6-dihidro-2H-piridin-1 -carboxílico y N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida. La purificación por HPLC preparativa procuró la sal trifluoroacetato del compuesto del título en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 40 % (76 mg). LC/MS: (Método A) 330,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 3,01 min, 99,4 %, (Máx), 98,8 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 811,96 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,26-7,03 (m, 5H), 3,66 (s, 2H), 2,96-2,93 (m, 2H), 2,67­ 2,61 (m, 1H), 2,26 (s, 3H), 2,11-2,06 (m, 5H), 1,65-1,62 (m, 4H).
EJEMPLO 3-44: Preparación de ácido 2-(1-((2-acetamidotiazol-5-il)metil)piperidin-4-il)benzoico
Siguiendo el procedimiento B, se sintetizó 2-(1-((2-acetamidotiazol-5-il)metil)piperidin-4-il)benzoato de etilo a partir de N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida y éster ferc-butílico del ácido 4-(2-etoxicarbonilfenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico. Se añadió LOH.H2O (1 eq.) a una solución agitada de 2-(1-((2-acetamidotiazol-5-il)metil)piperidin-4-il)benzoato de etilo (1 eq.) en THF/MeOH/H2O (1:1:1) (3 ml). Se agitó la mezcla de reacción a TA durante 3 h. Después de terminar la reacción, se neutralizó la mezcla de reacción con ácido cítrico y se extrajo entonces con DCM. Se secó la capa orgánica sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó el producto bruto por HPLC preparativa procurando la sal hidrocloruro del ácido 2-(1-((2-acetamidotiazol-5-il)metil)piperidin-4-il)benzoico en forma de un sólido marrón pálido. Rendimiento: 10 % (9 mg). lC/MS: (Método A) 360,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,35 min, 99,0 %, (Máx), 98,6 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 813,05 (s, 1H), 12,32 (s, 1H), 9,63 (s, 1H), 7,76­ 7,70 (m, 1H), 7,60-7,53 (m, 1H), 7,35-7,31 (m, 3H), 4,56 (s, 2H), 3,60-3,49 (m, 3H), 3,11-3,05 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), 2,00-1,86 (m, 4H).
EJEMPLO 3-45: Preparación de ácido 4-(1-((2-acetamidotiazol-5-il)metil)piperidin-4-il)benzoico
Siguiendo el procedimiento B, se sintetizó 4-(1-((2-acetamidotiazol-5-il)metil)piperidin-4-il)benzoato de etilo a partir de éster ferc-butílico del ácido 4-(4-etoxicarbonilfenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico y N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida. Se añadió LOH.H2O (1 eq.) a una solución agitada de 4-(1-((2-acetamidotiazol-5-il)metil)piperidin-4-il)benzoato de etilo (1 eq.) en THF/MeOH/H2O (1:1:1) (3 ml) y se dejó agitar la mezcla de reacción a TA durante 3 h. Después de terminar la reacción, se neutralizó la mezcla de reacción con ácido cítrico y se extrajo con DCM. Se secó la capa orgánica sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó el producto bruto por HPLC preparativa procurando la sal hidrocloruro del ácido 4-(1-((2-acetamidotiazol-5-il)metil)piperidin-4-il)benzoico en forma de un sólido marrón. Rendimiento: 26 % (37 mg). LC/MS: (Método A) 360,2 (M+H). Hp LC: (Método A) TR: 1,96 min, 99,0 %, (Máx), 97,8 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 812,89 (s, 1H), 12,31 (s, 1H), 10,54 (s, 1H), 7,90 (d, J= 8,2 Hz, 2H), 7,65 (s, 1H), 7,34 (d, J= 8,3 Hz, 2H), 4,53 (s, 1H), 3,49-3,47 (m, 2H), 3,01-2,88 (m, 3H), 2,88 (s, 3H), 1,99-1,96 (m, 4H).
EJEMPLO 4-12: Preparación de N-ciclopropil-5-((4-fenilpiperidin-1 -il)metil)tiazol-2amina
Figure imgf000052_0001
Etapa 1: Se añadió ciclopropilamina (1 eq., 17,5 mmol) a una solución agitada enfriada con hielo de isotiocianato de benzoílo (1 eq., 17,5 mmol) en cloroformo seco (20 ml). Se dejó agitar la mezcla de reacción a TA durante 45 min. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida. Se usó el residuo, 1-benzoil-3-ciclopropiltiourea bruta, en la siguiente reacción sin purificación. Se añadió NaOH (4 N, 1 eq.) a una solución agitada enfriada con hielo de 1-benzoil-3-ciclopropiltiourea (1 eq., 17,2 mmol) en metanol (35 ml). Se dejó agitar la mezcla de reacción a 60 °C durante 1,5 h. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida y se añadió agua con hielo. Se recogió el sólido por filtración procurando 1-ciclopropiltiourea en forma de un sólido blanco, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. Rendimiento: 74 % (1,16 g). RMN-1H: (400 MHz, CD3OD): 82,47 (s a, 1H), 0,81-0,76 (m, 2H), 0,60-0,58 (m, 2H).
Etapa 2: Se añadió DMF-DMA (1,5 eq., 14,9 mmol) a una solución agitada de 1-ciclopropiltiourea (1 eq, 9,2 mmol) en etanol (25 ml). Se calentó entonces la mezcla de reacción a 90 °C con agitación durante 3 h. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida y se trituró el residuo obtenido con acetato de etilo procurando 1-ciclopropil-3-[1-dimetilaminometiliden]tiourea en forma de un sólido blanco, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. Rendimiento: 78 % (1,61 g). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 88,6 (s, 1H), 3,21-3,16 (m, 1H), 3,1 (s, 3H), 3,0 (s, 3H), 0,68-0,63 (m, 2H), 0,58-0,56 (m, 2H).
Etapa 3: Se añadió cloroacetato de etilo (1,1 eq.) a una solución agitada de 1 -ciclopropil-3-[1-dimetilaminometiliden]tiourea (1 eq.) en CH3CN (15 ml). Se dejó agitar la mezcla de reacción a 90 °C durante 14 h. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida. Se trituró el residuo con NaHCO3 acuoso saturado. Se recogió el sólido por filtración procurando éster etílico del ácido 2-ciclopropilaminotiazol-5-carboxílico en forma de un sólido marrón, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. Rendimiento: 55 % (0,85 g). LC/MS: (Método A) 2130 (M+H).
Etapa 4: Se añadió NaOH (2 N, 1,1 eq.) a una solución agitada de éster etílico del ácido 2-ciclopropilaminotiazol-5-carboxílico (1 g, 1 eq.) en etanol (15 ml) a 0 °C. Se dejó agitar entonces la mezcla de reacción a TA durante 14 h. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida y se neutralizó mediante la adición de HCl acuoso (1 N). Se recogió el sólido por filtración procurando ácido 2-(ciclopropilamino)tiazol-5-carboxílico en forma de un sólido blanco que se usó en la siguiente etapa sin purificación. Rendimiento: 98 % (0,85 g). LC/MS: (Método B) 183,0 (M-H).
Etapa 5: Se añadieron Et3N (870 mg, 1,1 eq.), 4-fenilpiperidina (760 mg, 1,1 eq.) y T3P (2,76 g, 2 eq.) a una solución agitada de ácido 2-(ciclopropilamino)tiazol-5-carboxílico (800 mg, 1 eq.) en DCM (15 ml) a 0 °C. Se dejó agitar la mezcla de reacción a TA durante 4 h. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida. Se sometió el residuo a cromatografía ultrarrápida procurando (2-(ciclopropilamino)tiazol-5-il)-(4-fenilpiperidin-1-il)metanona en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 45 % (0,64 g). LC/Ms : (Método A) 328,0 (M-H).
Etapa 6: Se añadió complejo de borano-sulfuro de metilo en THF (2 M, 0,75 ml, 2 eq.) a una solución agitada de (2-(ciclopropilamino)tiazol-5-il)-(4-fenilpiperidin-1-il)metanona (100 mg, 1 eq.) en THF (15 ml) a 0 °C. Se dejó agitar la mezcla de reacción a 60 °C durante 4 h, se trató con metanol (5 ml) y se calentó entonces a 60 °C durante otra hora. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida. Se sometió el residuo a cromatografía ultrarrápida procurando N-ciclopropil-5-((4-fenilpiperidin-1 -il)metil)tiazol-2-amina en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 28 % (34,4 mg). LC/MS: (Método B) 314,3 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,49 min, 98,1 %, (Máx), 98,6 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,30-7,16 (m, 5H), 6,87-7,05 (m, 1H), 3,70-3,68 (m, 2H), 3,11-3,09 (m, 4H), 2,30-2,25 (m, 2H), 1,84-1,80 (m, 2H), 1,68-1,64 (m, 2H), 0,71-0,65 (m, 2H), 0,50-0,46 (m, 2H).
EJEMPLO 5a: Preparación de N-metil-5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-amina (intermedio)
Figure imgf000053_0001
Posteriormente al ejemplo 1 etapa 3, se añadió LÍAIH4 (solución 2,0 M en THF, 0,8 ml, 1,5 eq) a una solución agitada de (5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)carbamato de ferc-butilo (200 mg, 1 eq.) en THF (10 ml) a 0 °C. Se calentó entonces la mezcla de reacción a 65 °C durante 90 min. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida, se añadió agua y se extrajo el producto con DCM. Se separó la fase orgánica, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida. Se sometió el residuo a cromatografía ultrarrápida procurando metil-5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-amina en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 80 % ( 1 2 0 mg).
LC/MS: (Método B) 288,3 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,23 min, 99,9 %, (Máx), 99,6 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 8 7,31-7,21 (m, 4H), 7,18-7,14 (m, 1H), 6 , 8 (s, 1H), 3,5 (s, 2H), 2,9 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 2,76-2,75 (m, 3H), 2,45-2,42 (m, 1H), 2,02-1,96 (m, 2H), 1,73-1,70 (m, 2H), 1,64-1,57 (m, 2H).
EJEMPLO 5b: Preparación de N-etil-5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)oxazol-2-amina (intermedio)
Figure imgf000053_0002
Etapa 1: Se añadieron BOC-anhídrido (418 mg, 1,2 eq.), DIPEA (0,6 ml, 3 eq.) y finalmente DMAP (78 mg, 0,5 eq.) a una solución de 2-aminoxazol-5-carboxilato de etilo (200 mg, 1 eq.) en DMF seca (20 ml). Se deja agitar la mezcla de reacción a TA durante una noche. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida y se añadió agua. Se extrajo el producto con DCM. Se concentró la fase orgánica a presión reducida y se sometió el residuo a cromatografía ultrarrápida procurando 2-((ferc-butoxicarbonil)amino)oxazol-5-carboxilato de etilo en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 79 % (1,3 g). LC/MS: (Método A) 257,0 (M+H). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 11,3 (s, 1H), 7,8 (s, 1H), 4,29-4,27 (m, 2H), 1,5 (s, 9H), 1,3 (t, J= 8,0 Hz, 3H).
Etapa 2: Se añadió LiOH (165 mg, 2 eq.) a una solución de 2-((ferc-butoxicarbonil)amino)oxazol-5-carboxilato de etilo (500 mg, 1 eq) en THF/MeOH/H2O (3:1:1, 15 ml) y se dejó agitar la mezcla de reacción a TA durante 4 h. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida y se añadió agua. Se neutralizó la mezcla mediante la adición de HCl acuoso (1 N). Se recogió el sólido blanquecino por filtración y se secó procurando ácido 2-((ferc-butoxicarbonil)amino)oxazol-5-carboxílico, que se usó en la siguiente etapa sin purificación. Rendimiento: 76 % (880 mg). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 11,2 (s, 1H), 7,7 (s, 1H), 1,5 (s, 9H).
Etapa 3: Se añadieron Et3N (0,6 ml, 3 eq.) y 4-fenilpiperidina (248 mg, 1,54 mmol, 1,1 eq.) a una solución de ácido 2-((ferc-butoxicarbonil)amino)oxazol-5-carboxílico (320 mg, 1 eq.) en DCM (15 ml) a 0 °C. Después de 15 min de enfriamiento a 0 °C, se trató la mezcla de reacción con T3P (900 mg, 2 eq.). Se dejó agitar la mezcla de reacción a TA durante 14 h. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida y se añadió agua. Se extrajo el producto con DCM. Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida. Se sometió el residuo a cromatografía ultrarrápida procurando (5-(4-fenilpiperidin-1-carbonil)oxazol-2-il)carbamato de ferc-butilo en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 82 % (430 mg). LC/MS: (Método B) 372.0 (M+H). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 11,0 (s, 1H), 7,5 (s, 1H), 7,31-7,18 (m, 5H), 4,4 (d, J= 12,0 Hz, 2H), 3,01-2,83 (m, 2H), 1,84-1,81 (m, 2H), 1,60-1,58 (m, 2H), 1,4 (s, 9H).
Etapa 4: Se añadió LAH en THF (1 M, 1,6 ml, 1,5 eq) a una solución de (5-(4-fenilpiperidin-1-carbonil)oxazol-2-il)carbamato de ferc-butilo (400 mg, 1 eq.) en THF seco (15 ml) a 0 °C. Se dejó agitar entonces la mezcla de reacción a TA durante 30 min. Después de terminar la reacción, se inactivó la mezcla de reacción mediante la adición de NaOH acuoso (1 N) y se extrajo con diclorometano. Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida. Se sometió el residuo a cromatografía ultrarrápida procurando (5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)oxazol-2-il)carbamato de ferc-butilo en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 40 % (150 mg). LC/MS: (Método B) 358.0 (M+H). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 10,4 (s, 1H), 7,28-7,16 (m, 5H), 6,9 (s, 1H), 3,5 (s, 2H), 2,92-2,89 (m, 2H), 2,45-2,43 (m, 1H), 2,08-2,03 (m, 2H), 1,73-1,60 (m, 4H), 1,6 (s, 9H).
Etapa 5: Se añadieron NaH (20 mg, 1,5 eq.) y yoduro de etilo (0,02 ml, 1,5 eq.) a una solución de (5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)oxazol-2-il)carbamato de ferc-butilo (50 mg, 1 eq) en DMF seca (5 ml) a 0 °C. Se dejó agitar la mezcla de reacción a TA durante 2 h. Después de terminar la reacción, se inactivó la reacción mediante la adición de agua enfriada con hielo y se extrajo el producto con DCM. Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida. Se sometió el residuo a cromatografía ultrarrápida procurando etil-(5-((4-fenilpiperidin 1-il)metil)oxazol-2-il)carbamato de ferc-butilo en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 56 % (30 mg). LC/MS: (Método B) 386,2 (M+H).
Etapa 6: Se añadió dioxano/HCl (1 ml) a una solución de etil-(5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)oxazol-2-il)carbamato de ferc-butilo (30 mg, 1 eq.) en 1,4-dioxano seco (1 ml) a 0 °C. Se dejó agitar entonces la mezcla de reacción a TA durante 12 h. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida procurando la sal hidrocloruro de N-etil-5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)oxazol-2-amina en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 80 % (18,3 mg). LC/MS: (Método A) 286,3 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 5,41 min, 99,6 %, (Máx), 99,1 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 810,9 (s, 1H), 8,6 (s, 1H), 7,35-7,30 (m, 2H), 7,26-7,20 (m, 3H), 4,5 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 3,50-3,47 (m, 2H), 3,30-3,27 (m, 2H), 3,08-3,01 (m, 2H), 2,81-2,75 (m, 1H), 2,01-2,05 (m, 4H), 1,2 (t, J= 4,0 Hz, 3H).
EJEMPLO 5-1: Preparación de N-(5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Posteriormente al ejemplo 1, se añadió piridina (2,86 ml, 0,0355 mmol) a una solución de hidrocloruro de 5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-amina (2,2 g, 0,007 mol) en DCM (30 ml) a 0 °C, seguido de cloruro de acetilo (0,8 ml, 0,0113 mol) gota a gota durante 5 min. Se agitó la mezcla de reacción a TA durante 1 h. Se monitorizó la progresión de la reacción por TLC. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida y se neutralizó con NaHCO3 al 10 % en agua. Se extrajo el producto con acetato de etilo (200 ml). Se lavó la fase orgánica consecutivamente con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró a presión reducida. Se sometió el residuo a cromatografía ultrarrápida (sílice de malla 60-120) usando éter de petróleo/acetato de etilo como eluyente procurando N-(5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida (1,2 g, 53,8 %) en forma de un sólido amarillo pálido. TLC (éter de petróleo/acetato de etilo, 5:5, Fr= 0,2). LC/MS: (Método A) 316 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,7 min, 97 %. RMN-1H (DMSO-d6, 400 MHz) 8 11,94 (s a, 1H), 7,28-7,21 (m, 5H), 7,18-7,14 (m, 1H), 3,64 (s, 2H), 2,94-2,91 (m, 2H), 2,49-2,42 (m, 4H), 2,10-1,97 (m, 2H), 1,73-1,70 (m, 4H).
EJEMPLO 5-4: Preparación de N-[5-(4-fenilpiperidin-1-ilmetil)-tiazol-2-il]acrilamida
Posteriormente al ejemplo 1, se añadieron cloruro de acrolilo (29 mg, 1 eq.) y Et3N (96 mg, 3 eq.) a una solución agitada de hidrocloruro de 5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-amina (100 mg, 1 eq.) en diclorometano (5 ml) a -20 °C. Se agitó la mezcla de reacción a -20 °C durante 1 h. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida, se añadió agua y se extrajo el producto con DCM. Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida. Se sometió el residuo a HPLC preparativa procurando la sal trifluoroacetato de N-[5-(4-fenilpiperidin-1-ilmetil)tiazol-2-il]acrilamida en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 14 % (16 mg). LC/MS: (Método A) 328,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,96 min, 96,2%, (Máx), 92,5 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 812,6 (s, 1H), 9,5 (s, 1H), 7,7 (s, 1H), 7,67-7,20 (m, 5H), 6,57-6,50 (m, 1H), 6,44-6,39 (m, 1H), 5,9 (dd, J =4,0, 8,0 Hz, 1H), 4,6 (dd, J= 8,0 Hz, 2H), 3,5 (dd, J= 12,0 Hz, 2H), 3,07-3,01 (m, 2H), 2,82-2,76 (m, 1H), 2,01-2,15 (m, 2H), 1,85-1,92 (m, 2H).
EJEMPLO 5-5: Preparación de N-etil-5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-amina
Etapa 1: Posteriormente al ejemplo 1, etapa 3, se añadió NaH (80 mg, 1,5 eq) a una solución agitada de (5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)carbamato de ferc-butilo (200 mg, 1 eq.) en DMF (5 ml). Se trató entonces la mezcla de reacción con yoduro de etilo (0,08 ml, 1,5 eq.) a 65 °C durante 90 min. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida, se añadió agua y se extrajo el producto con DCM. Se separó la fase orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida. Se sometió el residuo a cromatografía ultrarrápida procurando etil-(5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)carbamato de ferc-butilo en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 45 % (100 mg). LC/MS: (Método A) 402,2 (M+H).
Etapa 2: Se añadió HCl en dioxano (5 ml) a una solución agitada de etil-(5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)carbamato de ferc-butilo (50 mg) en dioxano seco (2 ml) y se agitó la mezcla de reacción a TA durante 12 h. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida procurando N-etil-5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-amina en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 22 % (7,3 mg). LC/MS: (Método B) 302,2 (M+H). HPLC: (Método B) TR: 5,89 min, 99,5 %, (Máx), 99,1 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,4 (t, J= 12.0 Hz, 1H), 7,28-7,16 (m, 5H), 6,8 (s, 1H), 3,5 (s, 2H), 3,32-3,14 (m, 2H), 2,9 (t, J= 12,0 Hz, 2H), 2,46-2,45 (m, 1H), 2.0 (t, J= 4,0 Hz, 2H), 1,7 (t, J= 12,0 Hz, 2H), 1,63-1,57 (m, 2H), 1,1 (t, J= 12,0 Hz, 3H).
EJEMPLO 5-6: Preparación de 5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)-N-propiltiazol-2-amina
Se preparó 5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)-N-propiltiazol-2-amina de manera similar a la descrita para N-etil-5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-amina (Ejemplo 5-5), partiendo de (5-((4-fenilpiperidin-1 -il)metil)tiazol-2-il)carbamato de ferc-butilo y 1-yodopropano. Rendimiento: 14 % (8 mg, sólido blanquecino). Lc /MS: (Método B) 316,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,59 min, 99,6 %, (Máx), 99,2 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,4 (d, J= 4,0 Hz, 1H), 7,28-7,14 (m, 5H), 6,8 (s, 1H), 3,5 (s, 2H), 3,13-3,08 (m, 2H), 2,9 (t, J= 12,0 Hz, 2H), 2,45-2,42 (m, 2H), 2,01-1,96 (m, 2H), 1,73-1,70 (m, 2H), 1,64-1,48 (m, 4H), 0,9 (t, J= 12,0 Hz, 3H).
EJEMPLO 5-9: Preparación de N-metil-N-(5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Posteriormente al Ejemplo 5a, se añadieron cloruro de acetilo (0,05 ml, 6 eq.) y DMAP (catalítico) a una solución agitada de N-metil-5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-amina (50 mg, 1 eq.) en piridina (3 ml) a 0 °C. Se dejó agitar entonces la mezcla de reacción a TA durante 12 h. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida, se añadió agua y se extrajo el producto con DCM. Se secó la fase orgánica sobre Na2SO4 , se filtró y se concentró a presión reducida. Se sometió el residuo a HPLC preparativa procurando la sal trifluoroacetato de N-metil-N-(5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 13% (10 mg). LC/MS: (Método A) 330,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,91 min, 98,9 %, (Máx), 95,0 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 87,32-7,21 (m, 4H), 7,17-7,14 (m, 1H), 3,7 (s, 2H), 3,6 (s, 3H), 2,9 (d, J= 12,0 Hz, 2H), 2,49­ 2,45 (m, 1H), 2,4 (s, 3H), 2,06-2,01 (m, 2H), 1,73-1,60 (m, 4H).
EJEMPLOS 5-10: Preparación de 1-metil-3-(5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)urea
Posteriormente al Ejemplo 1, se añadieron Et3N (261 mg, 2,0 eq) y fosgeno (0,35 eq.) a una solución agitada de hidrocloruro de 5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-amina (400 mg, 1 eq.) en THF seco (5 ml) a 0 °C. Se dejó entonces agitar la mezcla de reacción a TA durante 30 min. Se enfrió la mezcla de reacción de nuevo a 0 °C y se trató entonces con CH3NH2 en THF (2 M, 1,2 eq.). Se dejó agitar la mezcla de reacción a TA durante 2 h. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida. Se añadió agua y se extrajo el producto con DCM. Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida. Se sometió el residuo a HPLC preparativa procurando la sal trifluoroacetato de 1-metil-3-(5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)urea en forma de un sólido amarillo pálido. Rendimiento: 5 % (16 mg). LC/MS: (Método A) 331,0 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,87 min, 95,2 %, (Máx), 95,6 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 88,2 (s, 1H), 7,28-7,22 (m, 4H), 7,18-7,14 (m, 1H), 7,1 (s, 1H), 6,4 (d, J= 4,0 Hz, 1H), 3,6 (s, 2H), 2,94-2,91 (m, 2H), 2,67-2,66 (m, 3H), 2,46-2,43 (m, 1H), 2,05-2,02 (m, 2H), 1,73-1,57 (m, 4H).
EJEMPLO 5-13: Preparación de N-[5-(4-fenilpiperidin-1-ilmetil)oxazol-2-il]acetamida
Etapa 1: Posteriormente al Ejemplo 5b, etapa 4, se añadieron DMAP (12 mg, 0,5 eq.) y cloruro de acetilo (0,02 ml, 1,5 eq.) a una solución de (5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)oxazol-2-il)carbamato de ferc-butilo (80 mg, 1 eq.) en DCM seco (10 ml) a 0 °C. Se dejó agitar la mezcla de reacción a TA durante 12 h. Después de terminar la reacción, se inactivó la reacción mediante la adición de agua enfriada con hielo y se extrajo con DCM. Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida. Se sometió el residuo a cromatografía ultrarrápida procurando acetil-(5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)oxazol-2-il)carbamato de ferc-butilo en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 48% (80 mg). LC/MS: (Método A) 400,2 (M+H).
Etapa 2: Se añadió dioxano/HCl (1 ml) a una solución de acetil-(5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)oxazol-2-il)carbamato de ferc-butilo (1 eq) en 1,4-dioxano seco (5 ml) a 0 °C. Se dejó agitar entonces la mezcla de reacción a TA durante 2 h. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida. Se sometió el residuo a HPLC preparativa procurando la sal trifluoroacetato de N-(5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)oxazol-2-il)acetamida en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 19 % (12,2 mg). LC/Ms : (Método A) 300,3 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,36 min, 97,5%, (Máx), 98,7% (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 811,1 (s, 1H), 7,28-7,14 (m, 5H), 6,9 (s, 1H), 3,5 (s, 2H), 2,9 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 2,41-2,40 (m, 1H), 2,09-1,99 (m, 5H), 1,73-1,57 (m, 4H).
EJEMPLO 6-17: Preparación de 1-[5-(4-fenil-piperidin-1-ilmetil)tiazol-2-il]propan-2-ona
Posteriormente al Ejemplo 1-7, se añadió n-BuLi (1,6 M en hexano, 0,5 ml, 0,807 mmol) a una solución agitada de 2-metil-5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol (200 mg, 0,73 mmol) en THF seco a -78 °C. Se agitó entonces la mezcla de reacción durante 15 min. Se añadió entonces EtOAc (0,12 ml, 1,7 eq.) y se dejó agitar a -78 °C durante 3 h. Después de terminar la reacción, se inactivó la mezcla de reacción con NH4Cl acuoso saturado, se extrajo con DCM (10 ml), se secó y se evaporó a presión reducida. Se purificó el producto bruto por cromatografía en columna procurando un sólido amarillo pálido. Rendimiento: 35 % (75 mg). LC/MS: (Método A) 315,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,66 min, 93,7 %, (Máx), 90,7 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,54 (s, 1H), 7,28-7,14 (m, 5H), 4,21 (s, 2H), 3,70 (s, 2H), 2,94-2,91 (m, 2H), 2,46-2,45 (m, 1H), 2,19 (s, 3H), 2,08-2,03 (m, 2H), 1,73-1,65 (m, 4H).
EJEMPLO 6-18: Preparación de 1-[5-(4-fenilpiperidin-1-ilmetil)tiazol-2-il]butan-2-ona
Posteriormente al Ejemplo 1-7, se añadió N-BuLi (1,6 M en hexano, 0,5 ml, 0,807 mmol) a una solución agitada de 2-metil-5-((4-fenilpiperidin-1-il)metil)tiazol (150 mg, 0,5 mmol) en THF seco a -78 °C y se agitó durante 15 min. Se añadió entonces propionato de metilo (0,12 ml, 1,1 mmol) y se dejó agitar la mezcla de reacción a -78 °C durante 3 h. Después de terminar la reacción, se inactivó la reacción mediante la adición de NH4Cl acuoso saturado, se extrajo con DCM (10 ml), se secó y se evaporó a presión reducida. Se purificó el producto bruto por cromatografía en columna procurando un sólido amarillo pálido. Rendimiento: 44 % (57 mg). LC/MS: (Método A) 329,0 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,96 min, 98,7 %, (Máx), 97,7 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,54 (s, 1H), 7,28-7,16 (m, 5H), 4,19 (s, 2H), 3,70 (s, 2H), 2,94-2,91 (m, 2H), 2,59-2,43 (m, 3H), 2,08-2,02 (m, 2H), 1,73-1,65 (m, 4H), 1,84 (t, J = 4,0 Hz, 3H).
EJEMPLO 7-2: Preparación de éster metílico del ácido [5-(4-fenilpiperidin-1-ilmetil)tiazol-2-il]carbámico
Se preparó éster metílico del ácido [5-(4-fenilpiperidin-1-ilmetil)tiazol-2-il]carbámico de manera similar a la descrita en el Ejemplo 5-1, sumado a las particularidades del Esquema 7.
EJEMPLO 7-11: Preparación de N-[5-(4-fenilpiperidin-1-ilmetil)tiazol-2-il]metanosulfonamida
Se añadieron cloruro de metanosulfonilo (10 mg, 1,1 eq.) y DMAP (catalítico) a una solución agitada de hidrocloruro de 5-((4-fenilpiperidin-1 -il)metil)tiazol-2-amina (20 mg, 1 eq.) en piridina (2 ml) a 0 °C. Se dejó agitar entonces la mezcla de reacción a Ta durante 3 h. Después de terminar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a presión reducida y se añadió agua. Se extrajo el producto con DCM. Se secó la fase orgánica secada sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida. Se sometió el residuo a cromatografía ultrarrápida procurando N-[5-(4-fenilpiperidin-1-ilmetil)tiazol-2-il]metanosulfonamida en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 80 % (19,4 mg). LC/MS: (Método A) 352,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,55 min, 94,2%, (Máx), 92,0% (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 812,2 (s, 1H), 7,29-7,14 (m, 6H), 3,5 (s, 2H), 2,96-2,87 (m, 5H), 2,09-2,04 (m, 2H), 1,75-1,62 (m, 4H).
EJEMPLO 8: Preparación de N-(5-(1-(4-fenilpiperidin-1-il)etil)tiazol-2-il)acetamida (compuesto n° 40)
Etapa 1: Se añadió MeMgBr (11,7 ml, 11,7 mmol) a una solución agitada de N-(5-formiltiazol-2-il)acetamida (1 g, 0,58 mmol) en THF seco (20 ml) a -78 °C. Se dejo agitar la mezcla de reacción a TA durante 5 h. Después de terminar la reacción, se inactivó la reacción mediante la adición de una solución acuosa saturada de NH4Cl y se extrajo entonces la mezcla con DCM. Se separó la capa orgánica y se secó sobre Na2SO4 , se filtró y se concentró a presión reducida procurando el producto bruto, N-[5-(1-hidroxietil)tiazol-2-il]acetamida, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. RMN-1H: (400 MHz, DMSO-da): 811,90 (s, 1H), 7,20 (s, 1H), 5,47 (d, J= 6,2 Hz, 1H), 4,92-4,86 (m, 1H), 2,10 (s, 3H), 1,40 (d, J= 4,5 Hz, 3H).
Etapa 2: Se añadieron PPh3 (0,52 g, 1,20 mmol) y DIAD (0,4 ml, 2,01 mmol) a una solución agitada de N-[5-(1-hidroxietil)tiazol-2-il]acetamida (0,27 g, 1,34 mmol) en THF seco (10 ml). Se dejó agitar la mezcla de reacción a TA durante 12 h. Después de terminar la reacción, se inactivó la mezcla de reacción mediante la adición de una solución de H2O y se extrajo con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó sobre Na2SO4 , se filtró y se concentró a presión reducida. Se sometió el residuo a cromatografía en columna procurando N-(5-(1-(4-fenilpiperidin-1-il)etil)tiazol-2-il)acetamida en forma de un líquido gomoso incoloro. Rendimiento: 54 % (22 mg). LC/MS: (Método A) 330,2 (M+H). HPLC: (Método A) TR: 2,83 min, 98,5 %, (Máx), 98,8 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 11,91 (s, 1H), 7,29-7,14 (m, 6H), 3,97-3,92 (m, 1H), 2,96-2,81 (m, 2H), 2,50-2,49 (m, 1H), 2,20-2,10 (m, 5H), 1,76-1,60 (m, 4H), 1,32­ 1,29 (m, 3H).
EJEMPLO 9: Esquema 9 (Procedimiento C) - Procedimiento general para la adición de amina a intermedios de 5-(clorometil)tiazol-2-ilo
Se añadieron intermedio de (5-(clorometil)tiazol-2-ilo) (1 a 2 eq.) y TEA o DIPEA (2 a 4 eq.) a una solución agitada de amina (0,5 a 1,2 eq.) en acetonitrilo seco (5 a 10 ml) a ta. Se calentó la solución resultante a 80 °C durante 6 h. Se concentró la mezcla de reacción a vacío y se diluyó el residuo resultante con DCM (20 a 50 ml). Se lavó la capa de DCM con solución de salmuera (5 a 10 ml), agua (5 a 10 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía en columna, por cristalización o precipitación procurando el producto bruto.
EJEMPLO 9a: Preparación de N-(5-(clorometil)tiazol-2-il)acetamida (intermedio)
Figure imgf000056_0001
Etapa 1: Se añadió anhídrido acético (8,89 g, 87,20 mmol) a una solución agitada de 2-aminotiazol-5-carboxilato de etilo (10,0 g, 58,1 mmol), piridina (9,47 ml, 116,27 mmol) y DMAP (200 mg, 1,6 mmol) en DCM (100 ml) a 0 °C y se calentó a reflujo durante 2 h. Se concentró la mezcla de reacción a presión reducida se añadió HCl (1,5 N en agua, 50 ml). Se agitó la mezcla durante 10 min. Se filtró el precipitado resultante y se lavó con agua (250 ml) y hexano (50 ml) dando 2-acetamidotiazol-5-carboxilato de etilo en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 98 % (12,1 g). LC/MS: (Método C) 215,0 (M+H), TR: 2,77 min, 97,11 % (Máx). RMN-1H (300 MHz, DMSO-d6): 88,10 (s, 1H), 4,24 (c, J= 6,2, 2H), 2,17 (s, 3H), 1,26 (t, J= 6,2 Hz, 3H).
Etapa 2: Se añadió lentamente trietilborohidruro de litio (36,0 ml, 37,3 mmol, solución 1 M en THF) a una solución agitada de 2-acetamidotiazol-5-carboxilato de etilo (4,0 g 18,6 mmol) en tolueno seco (110 ml) a 0 °C. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 2 h. Se monitorizó la terminación de la reacción por TLC. Se inactivó la mezcla de reacción con MeOH (2,0 ml). Se añadió agua (20 ml) y se agitó la solución durante 10 min. Se separaron dos capas y se lavó la capa acuosa con hexano (3 x 25 ml). Se acidificó la capa acuosa con AcOH (4 ml). Se recuperó el precipitado resultante por filtración y se lavó con agua (10 ml) y hexano (20 ml), dando N-(5-(hidroximetil)tiazol-2-il)acetamida en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 84 % (2,7 g). LCMS: (Método C) 173,0 (M+H), TR: 2,02 min, 99,89 % (Max). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 811,86 (s, 1H), 7,23 (s a, 1H), 5,32 (s, 1H), 4,54 (s, 2H), 2,09 (s, 3H).
Etapa 3: Se añadió lentamente cloruro de tionilo (12,9 ml, 174,4 mmol) a una solución agitada de N-(5-(hidroximetil)tiazol-2-il)acetamida (10,0 g, 58,1 mmol) en DCM seco (27 ml) a 0 °C y se calentó a reflujo durante 3 h.
Se concentró la mezcla de reacción a presión reducida. Se codestiló el residuo resultante con DCM (2 x 50 ml) y Et2O (50 ml) dando A/-(5-(cloromet¡l)tiazol-2-¡l)acetam¡da en forma de un sólido amarillo pálido. Rendimiento: 92 % (10,2 g). LCMS: (Método C) 187,0 (M+H), TR: 1,77 min, 90,36 % (Máx) (se preparó una muestra analítica en MeOH, facilitando la formación del aducto de metoxi visto en MS). RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 812,18 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 5,02 (s, 2H), 2,14 (s, 3H).
EJEMPLO 9-46: Preparación de N-(5-((4-(4-clorobenzil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Se sintetizó N-(5-((4-(4-clorobencil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida siguiendo el procedimiento C, usando N-(5-(clorometil)tiazol-2-il)acetamida (139 mg, 0,73 mmol), hidrocloruro de 4-[(4-clorofenil)piperidina (150 mg, 0,61 mmol, HDH Pharma), DIPEA (315 mg, 2,44 mmol) y ACN (10 ml). Se purificó el producto bruto por HpLC prep (Método C) dando el compuesto esperado en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 9 % (20 mg). LC/MS: (Método C) 364,0 (M+H). HPLC: (Método C) TR: 3,40 min, 95,9% (Máx), 97,1 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 811,93 (s, 1H), 7,31 (d, J= 8,4 Hz, 2H), 7,19 (t, J= 8,4 Hz, 2H), 7,1 (s, 1H), 3,57 (s, 2H), 2,81-2,78 (m, 2H), 2,58-2,51 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1,88-1,83 (m, 2H), 1,51-1,45 (m, 3H), 1,24-1,15 (m, 2H).
EJEMPLO 9-48: Preparación de N-(5-((4-(4-fluorobencil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Se sintetizó el compuesto del título siguiendo el procedimiento general C, usando N-(5-(clorometil)tiazol-2-il)acetamida (300 mg, 1,57 mmol), 4-[(4-fluorofenil)metilpiperidina (152 mg, 0,786 mmol, ISDI Inc. Chemicals), TEA (636 mg, 6,29 mmol) y ACN (4,5 ml). Se purificó el producto bruto por cromatografía ultrarrápida dando el compuesto del título en forma de un sólido amarillo. Rendimiento: 15 % (84 mg). LC/MS: (Método C) 348,0 (M+H), HPLC: (Método C) TR: 3,07 min, 97,6% (Máx), 95,6% (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 811,93 (s, 1H), 7,21-7,16 (m, 3H), 7,01-7,05 (m, 2H), 3,56 (s, 2H), 2,81-2,78 (m, 2H), 2,50-2,47 (m, 2H), 2,10 (s, 3H), 1,88-1,82 (m, 2H), 1,52-1,44 (m, 3H), 1,19-1,15 (m, 2H).
EJEMPLO 9-55: Preparación de N-(5-((4-(4-metoxibencil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Se sintetizó el compuesto del título siguiendo el procedimiento general C, usando N-(5-(clorometil)tiazol-2-il)acetamida (240 mg, 1,24 mmol), hidrocloruro de 4-(4-metoxibencil)piperidina (300 mg, 1,24 mmol, Gencore Biopharma), DIPEA (518 mg, 3,73 mmol) y ACN (10 ml). Se purificó el producto bruto por cromatografía ultrarrápida dando el compuesto del título en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 5 % (22 mg). LC/MS: (Método C) 360,2 (M+H), HPLC: (Método C) TR: 2,93 min, 97,6% (Máx), 96,5% (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 811,92 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,05 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 6,82 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 3,71 (s, 3H), 3,56 (s, 2H), 2,81-2,78 (m, 2H), 2,42 (d, J= 7,2 Hz, 2H), 2.11 (s, 3H), 1,88-1,82 (m, 2H), 1,52-1,40 (m, 3H), 1,15-1,13 (m, 2H).
EJEMPLO 9b: Preparación de 4-(5-(clorometil)tiazol-2-il)piperazin-2-ona (intermedio)
Figure imgf000057_0001
Etapa 1: Se añadió gota a gota nitrito de sodio (4,80 g, 69,68 mmol) disuelto en agua (50 ml) a una solución agitada de 2-aminotiazol-5-carboxilato de etilo (10,0 g, 46,45 mmol, Combi block) en HBr al 48 % (75 ml) a 0 °C y se agitó la mezcla de reacción a 0 °C durante 15 min. Se añadió entonces gota a gota bromuro de cobre (I) (6,66 g, 46,45 mmol) en HBr al 48 % (75 ml) a 0 °C y se agitó la mezcla de reacción resultante a ta durante 4 h. Se diluyó la mezcla de reacción con DCM (200 ml) y se lavó con agua (50 ml), salmuera (50 ml), se secó sobre Na2SO4 y se concentró a presión reducida. Se purificó el producto bruto resultante por cromatografía ultrarrápida (CHCh al 100 %) dando 2-bromotiazol-5-carboxilato de etilo en forma de un líquido amarillo. Rendimiento: 50 % (5,5 g). LCMS: (Método A) 235,9 (M+H), TR: 3,85 min, 98,6 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 88,16 (s, 1H), 4,38 (c, J= 7,1 Hz, 2H), 1,39 (t, J= 7,1 Hz, 3H).
Etapa 2: Se añadieron 2-oxapiperazina (0,318 g, 3,17 mmol) y trietilamina (0,642 g, 6,3 mmol) a una solución agitada de 2-bromotiazol-5-carboxilato de etilo (0,75 g, 3,17 mmol) en DMF seca (6 ml) a ta y se agitó la mezcla de reacción a 90 °C durante una noche. Se concentró la mezcla de reacción y se disolvió el producto bruto resultante en MeOH al 5 %-DCM. Se lavó la capa orgánica con agua, salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró, procurando 2-(3-oxopiperazin-1-il)tiazol-5-carboxilato de etilo en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 75 % (0,61 g). LCMS: (Método A) 256,0 (M+H), TR: 2,38 min, 99,4 % (Máx). RMN-1H (300 MHz, DMSO-d6): 88,26 (s, 1H), 7,88 (s, 1H), 4,24-4,17 (m, 2H), 4,00 (s, 2H), 3,70-3,67 (m, 2H), 3,35-3,30 (m, 2H), 1,23 (t, J= 7,0 Hz, 3H).
Etapa 3: Se añadió lentamente trietilborohidruro de litio (3,9 ml, 3,91 mmol, solución 1 M en THF) a una solución agitada de 2-(3-oxopiperazin-1-il)tiazol-5-carboxilato de etilo (0,5 g, 1,95 mmol) en THF seco (10 ml) a 0 °C. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 2 h. Se monitorizó la terminación de la reacción por TLC. Se enfrió la mezcla de reacción a 0 °C, se inactivó usando metanol (10 ml) y se concentró a presión reducida. Se purificó el producto bruto resultante por cromatografía ultrarrápida dando 4-(5-(hidroximetil)tiazol-2-il)piperazin-2-ona en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 50% (210 mg). LCMS: (Método A) 214,0 (M+H), TR: 0,39 min, 92,9% (Máx). RMN-1H (300 MHz, DMSO-da): 8 8,13 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 5,26-5,22 (m, 1H), 4,42 (d, J= 5,6 Hz, 2H), 3,87 (s, 2H), 3,58-3,54 (m, 2H).
Etapa 4: Se añadió lentamente cloruro de tionilo (0,12 ml, 1,68 mmol) a una solución agitada de 4-(5-(hidroximetil)tiazol-2-il)piperazin-2-ona (180 g, 0,84 mmol) en DCM seco (1,8 ml) a 0 °C y se calentó a reflujo durante 3 h. Se concentró la mezcla de reacción a presión reducida. Se codestiló el residuo resultante con DCM (2 x 10 ml) dando 4-(5-(clorometil)tiazol-2-il)piperazin-2-ona en forma de una goma amarilla y se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. Rendimiento: 92 % (0,18 g). LCMS: (Método A) 228,0 (M+H, aducto de MeOH), TR: 0,85 min, 84,7 % (Máx).
EJEMPLO 9-59: Preparación de 4-(5-((4-(1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)etil)piperazin-1-il)metil)tiazol-2-il)piperazin-2-ona
Se sintetizó el compuesto del título siguiendo el procedimiento general C, con 4-(5-(clorometil)tiazol-2-il)piperazin-2-ona (0,18 g, 1,17 mmol), hidrocloruro de 1-(1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)etil)piperazina (0,139 g, 0,62 mmol), TEA (0,235 g, 2,33 mmol) y ACN (3,6 ml). Se purificó el producto bruto por cromatografía ultrarrápida obteniendo el compuesto del título en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 24 % (87,49 mg). LC/MS: (Método C) 430,0 (M+H), HPLC: (Método C) TR: 1,86 min, 97,1 % (Máx), 98,2 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, CD3OD): 8 7,06 (s, 1H), 6,92 (s, 1H), 6,83 (s, 2H), 5,97 (s, 2H), 4,06 (s, 2H), 3,71-3,68 (m, 5H), 3,48-3,46 (m, 3H), 2,85-2,52 (m, 7H), 1,50 (s, 3H).
EJEMPLO 9-61: Preparación de N-(5-((4-fenoxipiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Se sintetizó el compuesto del título siguiendo el procedimiento general C, usando N-(5-(clorometil)tiazol-2-il)acetamida (500 mg, 2,9 mmol), 4-fenoxipiperidina (250 mg, 1,45 mmol, Gencore Biopharma), TEA (1,17 g, 11,62 mmol) y ACN ( 8 ml). Se purificó el producto bruto por cromatografía en columna dando el compuesto del título en forma de un sólido amarillo. Rendimiento: 5 % (43 mg). LC/MS: (Método A) 332,0 (M+H), HPLC: (Método A) TR: 2,77 min, 96,8 % (Máx), 95,1 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 11,95 (s, 1H), 7,27-7,23 (m, 3H), 6,93-6,87 (m, 3H), 4,38-4,35 (m, 1H), 3,64 (s, 2H), 2,69-2,66 (m, 2H), 2,31-2,23 (m, 2H), 2,10 (s, 3H), 1,93-1,90 (m, 2H), 1,63 (m, 2H).
EJEMPLO 9-62: Preparación de N-(5-((4-fenetilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Se sintetizó el compuesto del título siguiendo el procedimiento general C, usando N-(5-(clorometil)tiazol-2-il)acetamida (500 mg, 2,9 mmol), 4-fenetilpiperidina (270 mg, 1,45 mmol, Fchemicals), TEA (1,17 g, 11,62 mmol) y ACN ( 8 ml). Se purificó el producto bruto por titulación dando el compuesto del título en forma de un sólido marrón. Rendimiento: 12 % (12 mg). LC/MS: (Método C) 344,2 (M+H), HPLC: (Método C) TR: 3,45 min, 98,9 % (Máx), 96,7 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 11,92 (s, 1H), 7,27-7,21 (m, 3H), 7,18-7,12 (m, 3H), 3,57 (s, 2H), 2,80 (d, J= 10,8 Hz, 2H), 2,56-2,51 (m, 2H), 2,10 (s, 3H), 1,89-1,84 (m, 2H), 1,66 (d, J= 9,6 Hz, 2H), 1,50-1,45 (m, 2H), 1,18-1,12 (m, 3H).
EJEMPLO 10b: Preparación de hidrocloruro de 4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-ilmetil)piperidina (intermedio)
Figure imgf000058_0001
Etapa 1: Se añadió trifenilfosfina (1,2 g, 4,65 mmol) a una solución agitada de 5-(bromometil)benzo[d][1,3]dioxol (1 g, 4,65 mmol) en tolueno (10 ml). Se calentó a reflujo la mezcla de reacción durante 2 h. Se monitorizó la terminación de la reacción por TLC. Se concentró entonces la mezcla de reacción a vacío y se trituró con dietiléter. Se filtró el sólido obtenido, se lavó con dietiléter, se secó y se llevó a la siguiente etapa sin purificación adicional. Se aisló (benzo[d][1,3]dioxol-5-ilmetil)bromotrifenilfosfano en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 82 % (1,8 g). LCMS: (Método C) 397,0 (M-Br), TR: 4,21 min, 97,2 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 7,94-7,90 (m, 3H), 7,79-7,74 (m, 6 H), 7,70-7,64 (m, 6 H), 6,81-6,79 (m, 1H), 6,47-6,44 (m, 2H), 5,98 (s, 2H), 5,07-5,03 (m, 2H).
Etapa 2: Se añadió ferc-butóxido de potasio (423 mg, 3,77 mmol) a una solución agitada de (benzo[d][1,3]dioxol-5-ilmetil)bromotrifenilfosfano (1,0 g, 4,65 mmol) en THF (10 ml) a 0 °C. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 2 h. Se añadió 1-Boc-piperidin-4-ona (375 mg, 1,88 mmol) en THF (10 ml) a 0 °C. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 2 h. Se monitorizó la terminación de la reacción por TLC. Se concentró entonces la mezcla de reacción a vacío y se disolvió la mezcla bruta en acetato de etilo, se lavó con agua, se secó sobre sulfato de sodio y se evaporó. Se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida consiguiendo 4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-ilmetilen)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo en forma de un sólido marrón pálido. Rendimiento: 58 %. LCMS: (Método C) 2 6 2 , 0 (M-t-Bu+H), TR: 5,58 min, 95,9 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 6 , 8 8 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 6,79 (s, 1H), 6,69 (dd, J= 1,2, 8,0 Hz, 1H), 6,28 (s, 1H), 6,00 (s, 2H), 3,39 (t, J= 5,8 Hz, 2H), 3,33-3,31 (m, 2H), 2,37 (t, J= 5,6 Hz, 2H), 2,24 (t, J= 5,5 Hz, 2H), 1,41 (s, 9H).
Etapa 3: Se añadió Pd/C al 10 % (100 mg) a una solución agitada de 4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-ilmetilen)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (350 mg, 1,10 mmol) en metanol (10 ml). Se agitó la mezcla de reacción a presión de hidrógeno (2 kg/cm2) a ta durante 2 h. Se filtró entonces a través de Celite, se concentró a vacío y se llevó la mezcla bruta a la siguiente etapa sin purificación adicional. Se aisló 4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-ilmetil)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 80 % (280 mg). Lc MS: (Método C) 264,0 (M-t-Bu+H), TR: 5,61 min, 95,7% (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 86,80-6,74 (m, 2H), 6,60-6,57 (m, 1H), 5,94 (s, 2H), 3,90-3,86 (m, 2H), 2,71-2,49 (m, 2H), 2,41-2,38 (m, 3H), 1,52-1,48 (m, 2H), 1,36 (s, 9H), 0,98-0,94 (m, 2H).
Etapa 4: Se disolvió 4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-ilmetil)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (280 mg, 319,4 mmol) en solución de HCl en dioxano (1 ml, 4 M). Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 1 h. Después de terminar la reacción, se concentró a presión reducida procurando la sal hidrocloruro de 4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-ilmetil)piperidina en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 99 % (220 mg). RMN-1H (400 MHz, DMsO-d6): 86,82-6,76 (m, 2H), 6,63­ 6,58 (m, 1H), 5,97 (s, 2H), 3,94-3,89 (m, 2H), 2,73-2,51 (m, 2H), 2,41-2,38 (m, 3H), 1,52-1,48 (m, 2H), 0,98-0,94 (m, 2H).
EJEMPLO 10-47: Preparación de N-(5-((4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-ilmetil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Se sintetizó el compuesto del título siguiendo el procedimiento general C, usando N-(5-(clorometil)tiazol-2-il)acetamida (149 mg, 0,78 mmol), hidrocloruro de 4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-ilmetil)piperidina (220 mg, 0,78 mmol), DIPEA (302 mg, 2,34 mmol) y DMF (10 ml). Se purificó el producto bruto por cromatografía ultrarrápida dando el compuesto del título en forma de un sólido marrón pálido. Rendimiento: 7 % (20 mg). LCMS: (Método C) 374,0 (M+H). HPLC: (Método C) TR: 2,91 min, 95,9 % (Máx), 97,1 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 811,93 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 6,79 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 6,74 (s, 1H), 6,59 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 5,95 (s, 2H), 3,56 (s, 2H), 2,81-2,78 (m, 2H), 2,41-2,40 (m, 2H), 2,11 (s, 3H), 1,85-1,77 (m, 2H), 1,53-1,41 (m, 3H), 1,18-1,10 (m, 2H).
EJEMPLO 10d: Preparación de hidrocloruro de 4-(4-(trifluorometil)bencil)piperidina (intermedio)
Figure imgf000059_0001
Etapa 1: Se añadió fosfito de trietilo (3,7 ml, 22,0 mmol) a 1-(bromometil)-4-(trifluorometil)benceno (4,0 g, 16,7 mmol) a ta y se calentó a reflujo la mezcla a 150 °C durante una noche. Se enfrió la mezcla de reacción y se evaporó a vacío. Se llevó el producto bruto a la siguiente etapa sin purificación adicional. Se aisló bromuro de trietoxi-(4-(trifluorometil)bencil)fosfonio en forma de un líquido incoloro. Rendimiento: 91 % (6,1 g). LCMS: (Método C) 297,0 (M+H), TR: 4,35 min, 96,92 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,66 (d, J= 12,0 Hz, 2H), 7,48 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 3,97-3,94 (m, 6H), 2,49-2,48 (m, 2H), 1,23-1,21 (m, 9H).
Etapa 2: Se añadieron 15-corona-5-éter (0,27 g, 1,2 mmol) en THF seco (35 ml) y NaH (al 60 %, 0,59 g, 14,4 mmol) a una solución agitada de bromuro de trietoxi-(4-(trifluorometil)bencil)fosfonio (6,1 g, 15,0 mmol) a 0 °C y se agitó durante 1 h. Se añadió entonces 1-Boc-piperidin-4-ona (2,5 g, 12,6 mmol) en THF (25 ml) a la misma temperatura y se agitó la mezcla a ta durante una noche. Se inactivó la mezcla de reacción con agua con hielo y se extrajo con EtOAc (120 ml). Se lavó la capa orgánica con NaHCO3 al 10 % (20 ml), agua (20 ml), salmuera (15 ml), se secó sobre Na2SO4 y se concentró. Se purificó el producto bruto por cromatografía en columna de gel de sílice consiguiendo 4-(4-(trifluorometil)benciliden)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 84 % (4,3 g). LCMS: (Método C) 242,0 (M+H), TR: 6,24 min, 98,79 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,66 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 7,42 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 6,43 (s, 1H), 3,43-3,39 (m, 2H), 3,35-3,31 (m, 2H), 2,40-2,36 (m, 2H), 2,31-2,28 (m, 2H), 1,22 (s, 9H).
Etapa 3: Se añadió Pd/C (0,380 g, 10 %) a una solución agitada de 4-(4-(trifluorometil)benciliden)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (3,8 g, 11,1 mmol) en MeOH seco (100 ml) bajo nitrógeno. Se agitó la mezcla de reacción bajo presión de hidrógeno (2 kg/cm2) a ta durante 2 h. Se filtró entonces la mezcla de reacción a través de Celite y se concentró dando 4-(4-(trifluorometil)bencil)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 84 % (3,2 g). LCMS: (Método C) 244,0 (M+H), TR: 6,25 min, 99,66 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,61 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 7,38 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 4,09-4,05 (m, 1H), 3,89-3,86 (m, 2H), 3,20-3,14 (m, 2H), 2,59­ 2,57 (m, 4H), 1,51-1,47 (m, 2H), 1,36 (s, 9H).
Etapa 4: Se añadió una solución de HCl en dioxano (30 ml, 4 M) a una solución agitada de 4-(4-(trifluorometil)bencil)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (3,2 g, 9,3 mmol) en 1,4-dioxano (6 ml) a ta y se agitó durante 2 h. Se concentró la mezcla de reacción. Se lavó el producto bruto resultante con dietiléter y se usó como tal sin purificación adicional en la síntesis del Ejemplo 10-49. Se aisló hidrocloruro de 4-(4-(trifluorometil)bencil)piperidina en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 85 % (2 g). LCMS: (Método C) 244,0 (M+H), r T. 3,41 min, 99,20% (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,64 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 7,41 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 3,36 (m, 2H), 2,77-2,73 (m, 3H), 2,61 (d, J= 12,0 Hz, 2H), 1,84-1,81 (m, 1H), 1,68-1,63 (m, 2H), 1,39-1,35 (m, 2H).
EJEMPLO 10-49: Preparación de N-(5-((4-(4-(trifluorometil)bencil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Se sintetizó el compuesto del título siguiendo el procedimiento general C, usando N-(5-(clorometil)tiazol-2-il)acetamida (490 mg, 2,57 mmol), hidrocloruro de 4-(4-(trifluorometil)bencil)piperidina (600 mg, 2,15 mmol), DIPEA (867 mg, 6,89 mmol) y ACN (10 ml). Se purificó el producto bruto por cromatografía ultrarrápida dando el compuesto del título en forma de un sólido marrón. Rendimiento: 1 % (8 mg). LC/MS: (Método C) 398,0 (M+H), HPLC: (Método C) TR: 3,71 min, 97,6 % (Máx), 96,9 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 811,93 (s, 1H), 7,62 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 7,39 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 7,21 (s, 1H), 3,57 (s, 2H), 2,81-2,78 (m, 2H), 2,59 (d, J= 6,4 Hz, 2H), 2,11 (s, 3H), 1,88-1,83 (m, 2H), 1,52-1,49 (m, 3H), 1,23-1,18 (m, 2H).
EJEMPLO 10e: Preparación de hidrocloruro de 4-(3-fluorobencil)piperidina (intermedio)
Figure imgf000060_0001
Etapa 1: Se añadió fosfito de trietilo (2,7 ml, 15,3 mmol) a 1-(bromometil)-3-fluorobenceno (2,3 g, 11,6 mmol) a ta y se calentó a reflujo la mezcla a 150 °C durante una noche. Se enfrió la mezcla de reacción a ta y se evaporó a vacío. Se llevó el producto bruto a la siguiente etapa sin purificación adicional. Se aisló bromuro de trietoxi-(3-fluorobencil)fosfonio en forma de un líquido incoloro. Rendimiento: 76 % (3,2 g). LCMS: (Método C) 247,0 (M-Et-Br+H), TR: 3,67 min, 97,58 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,35-7,34 (m, 1H), 7,10-7,09 (m, 3H), 3,96-3,95 (m, 6H), 3,31-3,24 (m, 2H), 1,23-1,20 (m, 9H).
Etapa 2: Se añadió NaH (al 60 %, 0,33 g, 8,1 mmol) a una solución agitada de bromuro de trietoxi-(3-fluorobencil)fosfonio (3,2 g, 9,03 mmol) y 15-corona-5-éter (0,16 g, 0,7 mmol) en THF seco (25 ml) a 0 °C y se agitó durante 1 h. Se añadió entonces una solución de 1-Boc-piperidin-4-ona (1,5 g, 7,71 mmol) en THF (15 ml) y se agitó la mezcla a ta durante una noche. Se inactivó la mezcla de reacción con agua con hielo y se extrajo con acetato de etilo (100 ml). Se lavó la capa orgánica con NaHCO3 al 10 % (20 ml), agua y salmuera. Se secó la capa orgánica sobre Na2SO4 y se concentró. Se purificó el producto bruto por cromatografía en columna de gel de sílice dando 4-(3-fluorobenciliden)piperidin-1-carboxilato de tere-butilo en forma de un líquido incoloro. Rendimiento: 55 % (1,5 g). LCMS: (Método C) 192,2 (M-Boc+H), TR: 5,79 min, 98,67 % (Max). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,38-7,36 (m, 1H), 7,07-7,02 (m, 3H), 6,3 (s, 1H), 3,42-3,40 (m, 2H), 3,34 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 2,40-2,39 (s, 3H), 2,40-2,39 (s, 3H), 2,40-2,37 (s, 2H), 2,30-2,27 (s, 2H), 1,41 (s, 9H).
Etapa 3: Se añadió Pd/C (0,150 g, 10 %) a una solución agitada de 4-(3-fluorobenciliden)piperidin-1-carboxilato de tere-butilo (1,5 g, 11,1 mmol) en MeOH seco (75 ml) bajo nitrógeno. Se agitó la mezcla de reacción bajo presión de hidrógeno (2 kg/m2) a ta durante 2 h. Se filtró a través de Celite y se concentró procurando 4-(3-fluorobencil)piperidin-1-carboxilato de tere-butilo en forma de un líquido incoloro. Rendimiento: 73 % (1,1 g). LCMS: (Método C) 194,2 (M-Boc+H), TR: 5,82 min, 98,76 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,33-7,25 (m, 1H), 7,01-6,96 (m, 3H), 3,90­ 3,58 (m, 2H), 2,61-2,51 (m, 4H), 1,76-1,65 (m, 3H), 1,30 (s, 9H), 0,90-0,81 (m, 2H).
Etapa 4: Se añadió una solución de HCl en dioxano (10 ml, 4 M) a una solución agitada de 4-(3-fluorobencil)piperidin-1-carboxilato de tere-butilo (1,1 g, 3,7 mmol) en 1,4-dioxano (6 ml) a ta y se agitó la mezcla durante 2 h. Se concentró. Se lavó el producto bruto con dietiléter (5 ml) y se usó como tal sin purificación adicional para la síntesis del Ejemplo 10-50. Se aisló hidrocloruro de 4-(3-fluorobencil)piperidina en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 90 % (0,9 g). LCMS: (Método C) 194,0 (M+H), TR: 2,77 min, 90 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,35-7,28 (m, 1H), 7,04-6,98 (m, 3H), 3,21-3,16 (m, 2H), 2,79-2,71 (m, 2H), 2,51 (d, J= 9,4 Hz, 2H), 1,81-1,75 (m, 1H), 1,68-1,63 (m, 2H), 1,30-1,25 (m, 2H).
EJEMPLO 10-50: Preparación de N-(5-((4-(3-fluorobencil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Se sintetizó el compuesto del título siguiendo el procedimiento general C, usando N-(5-(clorometil)tiazol-2-il)acetamida (300 mg, 1,57 mmol), hidrocloruro de 4-(3-fluorobencil)piperidina (350 mg, 1,53 mmol), DIPEA (740 mg, 4,6 mmol) y ACN (10 ml). Se purificó el producto bruto por cromatografía ultrarrápida dando el compuesto del título en forma de un sólido marrón. Rendimiento: 13 % (67 mg). LC/MS: (Método C) 348,2 (M+H), HPLC: (Método C) TR: 3,09 min, 98,5 % (Máx), 96,1 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 811,93 (s, 1H), 7,33-7,27 (m, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,01-6,97 (m, 3H), 3,57 (s, 2H), 2,81-2,78 (m, 2H), 2,51-2,50 (m, 2H), 2,11 (s, 3H), 1,89-1,84 (m, 2H),1,52-1,49 (m, 3H), 1,21-1,13 (m, 2H).
EJEMPLO 10f: Preparación de hidrocloruro de 4-bencil-2-metilpiperidina (intermedio)
Figure imgf000060_0002
Etapa 1: Se añadió tere-butóxido de potasio (2,0 g, 17,8 mmol) a una solución agitada de bromuro de benciltrifenilfosfonio (8,1 g, 18,7 mmol) en THF seco (20 ml) a ta. Se agitó la mezcla resultante durante 1 h. Se añadió entonces 2-metil-4-oxopiperidin-1-carboxilato de tere-butilo (2,0 g, 9,3 mmol) a la misma temperatura y se agitó la mezcla de reacción durante 3 h. Se evaporaron los disolventes. Se añadió agua (20 ml) al producto bruto resultante y se extrajo con DCM (80 ml). Se secó la capa orgánica sobre Na2SO4 y se concentró. Se purificó el producto bruto por cromatografía en columna de gel de sílice (EtOAc al 5 % en hexano) consiguiendo 4-benciMden-2-metilpiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo en forma de un líquido gomoso incoloro. Rendimiento: 59 % (1,4 g). LCMS: (Método C) 232 (M-t-Bu+H), TR: 6,05 min, 95,8 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 87,36-7,31 (m, 2H), 7,31-7,19 (m, 3H), 6,50­ 6,35 (m, 1H), 4,36-4,32 (m, 1H), 3,95-3,82 (m, 1H), 2,93 (d, J= 11,8 Hz, 1H), 2,73-2,69 (m, 1H), 2,50-2,14 (m, 3H), 1.35 (s, 9H),1,01 (d, J= 8,0 Hz, 3H).
Etapa 2: Se añadió Pd/C (200 mg, 10 %, Aldrich) a una solución agitada de 4-benciliden-2-metilpiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (1,4 g, 4,87 mmol) en MeOH seco (10 ml) bajo nitrógeno. Se agitó la mezcla de reacción bajo presión de hidrógeno (2 kg/cm2) a ta durante 2 h. Se concentró la mezcla de reacción y se secó a vacío procurando 4-bencil-2-metilpiperidin-1-carboxilato de terc-butilo en forma de un líquido marrón. Rendimiento: 80 % (1,2 g). LCMS: (Método C) 234 (M-t-Bu+H), TR: 6,07 min, 96,68 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,26-7,24 (m, 2H), 7,27-7,23 (d, 3H), 3,68-3,51 (m, 1H), 3,51-3,49 (d, 1H), 3,33-3,11 (m, 1H), 2,58-2,55 (m, 1H), 2,47-2,44 (m, 1H), 1,76-1,55 (m, 4H), 1.35 (s, 9H), 1,12 (s, 3H), 0,98-1,01 (m, 1H).
Etapa 3: Se añadió una solución de HCl en dioxano (20 ml, 4 M) a una solución agitada de 4-bencil-2-metilpiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (1,2 g, 4,15 mmol) en 1,4-dioxano (10 ml) a ta y se agitó durante 2 h. Se concentró la mezcla de reacción. Se lavó el producto bruto con dietiléter (5 ml) y se usó como tal para la siguiente etapa sin purificación adicional para la síntesis del EJEMPLO 10-51. Se aisló hidrocloruro de 4-bencil-2-metilpiperidina en forma de un sólido azul pálido. Rendimiento: 98 % (0,85 g). LCMS: (Método C) 190,02 (M+H), TR: 2,79 min, 95,04 % (Máx).
EJEMPLO 10-51: Preparación de N-(5-((4-bencil-2-metilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Se sintetizó el compuesto del título siguiendo el procedimiento general C, usando N-(5-(clorometil)tiazol-2-il)acetamida (300 mg, 1,57 mmol), hidrocloruro de 4-bencil-2-metilpiperidina (350 mg, 1,56 mmol), DIPEA (740 mg, 4,6 mmol) y ACN (10 ml). Se purificó el producto bruto por cromatografía en columna dando el compuesto del título en forma de un sólido marrón. Rendimiento: 7 % (32 mg). LC/MS: (Método C) 344,2 (M H), HPLC: (Método C) TR: 3,11 min, 98,9 % (Máx), 97,2% (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 811,93 (s, 1H), 7,28-7,22 (m, 3H), 7,18-7,13 (m, 3H), 3,95 (d, J= 14,8 Hz, 1H), 3,55 (d, J= 14,0 Hz, 1H), 2,77-2,74 (m, 1H), 2,50-2,44 (m, 2H), 2,11 (s a, 5H), 1,97-1,91 (m, 1H), 1,49-1,39 (m, 3H), 1,08-1,06 (m, 4H).
EJEMPLO 10g: Preparación de hidrocloruro de 4-bencil-3-fluoropiperidina (intermedio)
Figure imgf000061_0001
Etapa 1: Se añadió trietilamina (33,5 ml, 0,24 mol) a una solución agitada de 1-Boc-piperidin-4-ona (20,0 g, 0,10 mol, Spectrochem) en DMF seca (50 ml), seguido de cloruro de trimetilsililo (15,2 g, 0,12 mol, Chempure), se selló herméticamente la masa de reacción y se calentó a 80 °C durante 20 h. Se evaporó la masa de reacción, se disolvió en acetato de etilo, se lavó con agua, se secó sobre sulfato de sodio y se evaporó. Se llevó el producto bruto a la siguiente etapa sin purificación adicional. Se aisló 4-((ferc-butilsilil)oxi)-3,6-dihidropiridin-1(2H)-carboxilato de fercbutilo en forma de un líquido marrón. Rendimiento: 92 % (25,0 g). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 83,98-3,95 (m, 1H), 3,72 (t, J= 8,16 Hz, 2H), 2,96-2,89 (m, 1H), 1,51-1,47 (m, 2H), 1,47 (s, 9H), 0,16 (s, 9H).
Etapa 2: Se añadió ditetrafluoroborato de 1-(clorometil)-4-fluoro-1,4-diazoniabiciclo[2.2.2]octano (Select fluor) (35,8 g, 0,101 mol) a una solución agitada de 4-((ferc-butilsilil)oxi)-3,6-dihidropiridin-1(2H)carboxilato de ferc-butilo (25,0 g, 0,09 mol) en acetonitrilo seco (200 ml). Se agitó la masa de reacción a ta durante 1 h. Se diluyó la masa de reacción con acetato de etilo, se lavó con agua, se secó sobre sulfato de sodio y se evaporó. Se purificó el producto bruto por cromatografía en columna ultrarrápida de gel de sílice consiguiendo 3-fluoro-4-oxopiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 73 % (8,1 g). LCMS: (Método c ) 118,2 (M-Boc+H), TR: 2,53 min, 96,5 % (ELSD). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 84,92-4,89 (m, 1H), 4,76-4,73 (m, 1H), 4,21-4,17 (m, 1H), 3,30-3,20 (m, 2H), 2,60-2,45 (m, 2H), 1,47 (s, 9H).
Etapa 3: Se añadió ferc-butóxido de potasio (2,0 g, 9,21 mmol) a una solución agitada de bromuro de benciltrifenilfosfonio (10,0 g, 18,3 mmol) en THF seco (20 ml) a ta durante 1 h. Se añadió entonces 3-fluoro-4-oxopiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (1,8 g, 18,3 mmol) a la misma temperatura y se agitó la mezcla de reacción durante 3 h. Se concentró la mezcla de reacción. Se añadió agua a la mezcla bruta resultante y se extrajo con DCM (80 ml). Se secó la capa orgánica sobre Na2SO4 y se concentró. Se purificó el producto bruto por cromatografía en columna de gel de sílice (EtOAc al 5 % en hexano) consiguiendo 4-benciliden-3-fluoropiperidin-1-carboxilato de fercbutilo en forma de un sólido amarillo. Rendimiento: 57 % (1,6 g). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,39-7,32 (m, 2H), 7,30-7,24 (m, 3H), 6,68 (s, 1H), 5,36 (d, J= 46 Hz, 1H), 4,43-4,07 (m, 2H), 3,11-2,60 (m, 4H), 1,50 (s, 9H).
Etapa 4: Se añadió Pd/C (200 mg, 10 % Aldrich) a una solución agitada de 4-benciliden-3-fluoropiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (1,6 g, 5,4 mmol) en MeOH seco (10 ml) bajo nitrógeno. Se agitó la mezcla de reacción bajo presión de hidrógeno (2 kg/cm2) a ta durante 2 h. Se filtró la mezcla de reacción y se concentró. Se purificó la mezcla bruta resultante por cromatografía en columna ultrarrápida (EtOAc al 2 a 5 % en éter de petróleo) dando dos isómeros. Rendimiento total: 33 %. Primer isómero en eluir: 14 % (0,55 g, líquido incoloro). RMN-1H (400 Mhz , DMSO-d6) 87,31­ 7,28 (m, 2H), 7,23-7,14 (m, 3H), 4,08 (d, J= 13,2 Hz, 1H), 2,68-2,61 (m, 2H), 2,55 (d, J= 6,9 Hz, 2H), 1,68-1,57 (m, 3H), 1,46 (s, 9H), 1,27-1,15 (m, 2H). Segundo isómero en eluir: 19 % (0,29 g, líquido incoloro). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6) isómero 2: 87,32-7,29 (m, 2H), 7,23-7,13 (m, 3H), 4,45 (d, J= 46,8 Hz, 1H), 2,90-2,80 (m, 2H), 2,65-2,63 (m, 2H), 2,54-2,50 (m, 2H), 1,37 (s, 9H), 1,37-1,36 (m, 2H). Se usó en la siguiente etapa el segundo isómero en eluir.
Etapa 5: Se añadió una solución de HCl en dioxano (10 ml, 4 M) a una solución agitada de 4-bencil-3-fluoropiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (segundo isómero en eluir) (0,29 g, 1,5 mmol) en 1,4-dioxano (10 ml) a ta y se agitó durante 2 h. Se concentró la mezcla de reacción. Se lavó el producto bruto resultante con dietiléter (5 ml) y se usó como tal, isómero único, en la síntesis del Ejemplo 10-52. Se aisló hidrocloruro de 4-bencil-3-fluoropiperidina en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 98 % (0,18 g). LCMS: (Método C) 194,2 (M+H), TR: 2,5-2,6 min, 95,3 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 89,42 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,33-7,14 (m, 5H), 4,77-4,61 (s, 1H), 3,54-3,28 (m, 4H), 3,17-2,99 (m, 5H), 2,56-2,42 (m, 2H), 1,57-1,15 (m, 2H).
EJEMPLO 10-52: Preparación de N-(5-((4-bencil-3-fluoropiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Se sintetizó el compuesto del título siguiendo el procedimiento general C, usando N-(5-(clorometil)tiazol-2-il)acetamida (190 mg, 0,98 mmol), hidrocloruro de 4-bencil-3-fluoropiperidina en forma de isómero único (150 mg, 0,65 mmol), DIPEA (125 mg, 1,98 mmol) y ACN (10 ml). Se purificó el producto bruto por cromatografía en columna ultrarrápida seguido de MD Autoprep (Método B) dando el compuesto del título en forma de un sólido marrón en forma de un isómero único. Rendimiento: 2 % (15 mg). LCMS: (Método C) 348,0 (M+H) HPLC: (Método C) TR: 2,89 min, 99,4 % (Máx), 98,2% (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 811,95 (s, 1H), 7,31-7,27 (m, 2H), 7,24 (s, 1H), 7,20-7,19 (m, 3H), 4,46 (d, J= 47,6 Hz, 1H), 3,63 (s, 2H), 3,06-3,03 (m, 1H), 2,81 (d, J= 10,8 Hz, 1H), 2,70-2,65 (m, 1H), 2,56-2,46 (m, 2H), 2,11 (s, 3H), 1,99-1,93 (m, 1H), 1,56-1,23 (m, 3H).
EJEMPLO 10h: Preparación de hidrocloruro de 4-bencil-3-metilpiperidina (intermedio)
Figure imgf000062_0001
Etapa 1: Se añadió ferc-butóxido de potasio (2,0 g, 17,8 mmol) a una solución agitada de bromuro de benciltrifenilfosfonio en THF seco (20 ml) a ta y se agitó la mezcla resultante durante 1 h. Se añadió entonces 3-metil-4-oxopiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (2,0 g, 9,3 mmol) a ta y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 3 h. Se concentró la mezcla de reacción. Se añadió a la mezcla bruta resultante agua (20 ml) y se extrajo con DCM (80 ml). Se secó la capa orgánica sobre Na2SO4 y se concentró. Se purificó el residuo resultante por cromatografía en columna de gel de sílice consiguiendo 4-benciliden-3-metilpiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo en forma de un líquido amarillo pálido. Rendimiento: 63 % (1,7 g). LCMS: (Método C) 232,0 (M-t-Bu+H), TR: 6,03 min, 95,27 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,34-7,29 (m, 2H), 7,21-7,17 (m, 3H), 6,32 (s, 1H), 3,37-3,31 (m, 2H), 2,38-2,25 (m, 5H), 1,45 (s, 9H), 1,08 (d, J= 9,2 Hz, 3H).
Etapa 2: Se añadió Pd/C (0,180 g, 10 %) a una solución agitada de 4-benciliden-3-metilpiperidin-1-carboxilato de fercbutilo (1,7 g, 5,9 mmol) en MeOH seco (10 ml). Se agitó la mezcla de reacción bajo presión de hidrógeno (2 kg/cm2) a ta durante 2 h. Se filtró la mezcla de reacción y se concentró. Se usó el producto bruto resultante como tal en la siguiente etapa. Se aisló 4-bencil-3-metilpiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo en forma de un sólido marrón. Rendimiento: 82 % (1,4 g). LCMS: (Método C) 234,0 (M-t-Bu+H), TR: 6,01 min, 60,01 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,28-7,23 (m, 2H), 7,18-7,12 (m, 3H), 2,97-2,93 (m, 2H), 2,48-2,47 (m, 2H), 1,88-1,83 (m, 2H), 1,40 (s, 3H), 1,34-1,32 (m, 4H), 0,9 (d, J= 9,2 Hz, 3H).
Etapa 3: Se añadió una solución de HCl en dioxano (20 ml, 4 M) a una solución agitada de 4-bencil-3-metilpiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (1,4 g, 4,8 mmol) en 1,4-dioxano (80 ml) a ta y se agitó durante 2 h. Se concentró la mezcla de reacción. Se lavó el producto bruto resultante con dietiléter (5 ml) y se usó como tal en la síntesis del Ejemplo 10­ 53 sin purificación adicional. Se aisló hidrocloruro de 4-bencil-3-metilpiperidina en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 98% (0,85 g). LCMS: (Método C) 234,0 (M+H), TR: 2,85 min, 63,36% (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,30-7,27 (m, 2H), 7,25-7,14 (m, 3H), 3,02-2,82 (m, 4H), 2,56-2,54 (m, 2H), 1,89-1,88 (m, 2H), 1,60-1,40 (m, 3H), 0,9 (d, J= 9,2 Hz, 3H).
EJEMPLO 10-53: Preparación de N-(5-((4-bencil-3-metilpiperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Se sintetizó el compuesto del título siguiendo el procedimiento general C, usando N-(5-(clorometil)tiazol-2-il)acetamida (400 mg, 2,1 mmol), hidrocloruro de 4-bencil-3-metilpiperidina (300 mg, 1,3 mmol), DlPEA (740 mg, 4,6 mmol) y ACN (20 ml). Se purificó el producto bruto por cromatografía ultrarrápida dando el compuesto del título en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 5 % (21 mg). LC/MS: (Método D) 344,0 (M+H), HPLC: (Método C) TR: 3,27 min, 98,7 % (Máx), 98,6 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 812,92 (s, 1H), 7,28-7,24 (m, 2H), 7,21 (s, 1H), 7,18-7,16 (m, 3H), 3,58 (d, J= 13,6 Hz, 1H), 3,48 (d, J= 14,4 Hz, 1H), 2,76-2,73 (m, 1H), 2,46-2,43 (m, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,04-2,02 (m, 1H), 1,94-1,90 (m, 1H), 1,68 (s a, 2H), 1,42-1,37 (m, 1H), 1,31-1,28 (m, 1H), 0,95-0,94 (d, J= 4,0 Hz, 3H).
EJEMPLO 10i: Preparación de hidrocloruro de 4-(4-metilbencil)piperidina (intermedio)
Figure imgf000063_0001
Etapa 1: Se añadió fosfito de trietilo (2,3 ml, 13,4 mmol) a 4-(bromometil)benzonitrilo (2,0 g, 10,2 mmol) a ta y se calentó a reflujo a 150 °C durante una noche. Se enfrió la mezcla de reacción y se evaporó a vacío. Se llevó el producto bruto a la siguiente etapa sin purificación adicional. Rendimiento: 84 % (3,1 g, líquido incoloro). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,77 (d, J= 10,68 Hz, 2H), 7,46 (d, J= 10,68 Hz, 2H), 3,99-3,88 (m, 6H), 3,40 (s, 2H), 1,24-1,02 (m, 9H).
Etapa 2: Se añadieron 15-corona-5-éter (0,15 g, 0,68 mmol) en THF seco (25 ml) y NaH (al 60 %, 0,31 g, 7,7 mmol) a una solución agitada de bromuro de (4-cianobencil)trietoxifosfonio (3,1 g, 8,56 mmol) a 0 °C y se agitó durante 1 h. Se añadió entonces 1-Boc-piperidin-4-ona (1,43 g, 7,1 mmol) en THF (15 ml) y se agitó a ta durante una noche. Se inactivó la mezcla de reacción con agua con hielo y se extrajo con acetato de etilo (80 ml). Se lavó la capa orgánica con NaHCO3 al 10 % (10 ml), agua (10 ml) y salmuera (10 ml). Se secó la capa orgánica sobre Na2SO4 y se concentró. Se purificó el producto bruto por cromatografía en columna de gel de sílice consiguiendo 4-(4-cianobenciliden)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 56 % (4,3 g, sólido blanco). LCMS: (Método C) 199.2 (M-Boc+H), TR: 5,39 min, 98,42 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,77 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 7,39 (d, J= 12.0 Hz, 2H), 6,42 (s, 1H), 3,38-3,35 (m, 4H), 2,34-2,32 (m, 4H), 1,40 (s, 9H).
Etapa 3: Se añadió Pd/C (0,15 g, 10 %) a una solución agitada de 4-(4-cianobenciliden)piperidin-1-carboxilato de fercbutilo (1,4 g, 4,69 mmol) en MeOH/THF seco (60 ml, 1:1) bajo nitrógeno. Se agitó la mezcla de reacción bajo presión de hidrógeno (2 kg/cm2) a ta durante 1 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite y se concentró procurando 4-(4-metilbencil)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 78 % (1,1 g). LCMS: (Método C) 190,2 (M-Boc+H), TR: 6,11 min, 75,33 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,35-7,30 (m, 1H), 7,04-7,03 (m, 3H), 3,86 (d, J= 12,0 Hz, 2H), 2,59 (m,2H), 2,49-2,48 (m, 3H), 2,23 (s, 3H), 1,59-1,56 (m, 3H), 1,367 (s, 9H).
Etapa 4: Se añadió una solución de HCl en dioxano (10 ml, 4 M) a una solución agitada de 4-(4-metilbencil)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (1,1 g, 3,6 mmol) en 1,4-dioxano (6 ml) a ta y se agitó durante 2 h. Se concentró la mezcla de reacción. Se lavó la mezcla bruta con dietiléter (10 ml) procurando 4-(4-metilbencil)piperidina en forma de un sólido blanquecino. Se usó como tal en la síntesis del Ejemplo 10-54. Rendimiento: 88 % (0,75 g). LCMS: (Método C) 190,2 (M+H), TR: 3,00 min, 86,43 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 88,56 (s, 1H), 7,06-7,04 (m, 4H), 3,20-3,16 (m, 3H), 2,76-2,72 (m, 3H), 2,24 (s, 3H), 1,72-1,63 (m, 4H), 1,35-1,32 (m, 2H).
EJEMPLO 10-54: Preparación de N-(5-((4-(4-metilbencil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Se sintetizó el compuesto del título siguiendo el procedimiento general C, usando N-(5-(clorometil)tiazol-2-il)acetamida (290 mg, 1,53 mmol), hidrocloruro de 4-(4-metilbencil)piperidina (300 mg, 1,27 mmol), DIPEA (518 mg, 3,82 mmol) y ACN (10 ml). Se purificó el producto bruto por cromatografía ultrarrápida dando el compuesto del título en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 3 % (14 mg). LC/MS: (Método C) 344,2 (M+H), h PlC: (Método C) TR: 3,33 min, 97.1 % (Máx), 95,7 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 811,92 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,06 (d, J= 7,6 Hz, 2H), 7.02 (d, J= 7,6 Hz, 2H), 3,56 (s, 2H), 2,80-2,78 (m, 2H), 2,44 (d, J= 6,4 Hz, 2H), 2,25 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,87-1,82 (m, 2H), 1,52-1,42 (m, 3H), 1,19-1,11 (m, 2H).
EJEMPLO 10k: Hidrocloruro de 4-(naftalen-2-ilmetil)piperidina (intermedio)
Figure imgf000063_0002
Etapa 1: Se añadió trifenilfosfina (2,66 g, 101 mmol, Spectrochem) a una solución agitada de 2-bromometilnaftaleno (2,5 g, 11,3 mol, Spectrochem) en tolueno seco (25 ml) a ta y se calentó a reflujo durante 16 h. Se enfrió la mezcla de reacción a ta y se evaporó a vacío. Se lavó el producto bruto con dietiléter y se secó a vacío. Se aisló el producto bruto en forma de un sólido blanco. Se llevó a la siguiente etapa sin purificación adicional. Rendimiento: 70 % (5 g). LCMS: (Método C) 403,2 (M-Br), TR: 4,66 min, 99,07 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,91-7,89 (m, 4H), 7,88-7,75 (m, 13H), 7,73-7,68 (m, 4H), 7,07-7,05 (m, 1H), 5,37-5,34 (m, 2H).
Etapa 2: Se añadió ferc-butóxido de potasio (1,0 g, 10,0 mmol) a una solución agitada de bromuro de naftiltrifenilfosfonio (4,8 g, 10,0 mmol) en THF seco (10 ml) a ta y se agitó la mezcla durante 1 h. Se añadió entonces 1-boc-piperidin-4-ona (1,0 g, 5,02 mmol, GLR scientific) y se agitó la mezcla de reacción durante 3 h. Se concentró. Se añadió agua (20 ml) y se extrajo con DCM (50 ml). Se secó la capa orgánica sobre Na2SO4 y se concentró. Se purificó el producto bruto por cromatografía en columna de gel de sílice (EtOAc al 3 % en hexano) consiguiendo 4-(naftalen-2-ilmetilen)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 56 % (0,91 g). LCMS: (Método C) 268 (M-t-Bu+H), TR: 6,18 min, 95,39 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 87,84 (t, J= 7,8 Hz, 3H), 7,72 (s, 1H), 7,50-7,39 (m, 2H), 7,38-7,35 (m, 1H), 6,51 (m, 1H), 3,45-3,31 (m, 4H), 2,34-2,25 (m, 4H), 1,40 (s, 9H).
Etapa 3: Se añadió Pd/C (0,09 g, 10 %, Aldrich) a una solución agitada de 4-(naftalen-2-ilmetilen)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (0,91 g, 2,8 mmol) en MeOH seco (10 ml) bajo nitrógeno. Se agitó la mezcla de reacción bajo presión de hidrógeno (2 kg/cm2) a ta durante 2 h. Se concentró la mezcla de reacción y se secó a vacío. Se aisló el producto bruto en forma de un sólido blanco. Se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. Rendimiento: 55 % (0,55 g). LCMS: (Método C) 270,0 (M-t-Bu+H), TR: 6,22 min, 95,4 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,87-7,82 (m, 2H), 7,67 (s, 1H), 7,50-7,43 (m, 2H), 7,43-7,37 (m, 1H), 3,91 (s, 2H), 2,67-2,51-1,57 (m, 3H), 1,58-1,55 (m, 2H), 1,38 (s, 9H), 1,11-1,03 (m, 2H).
Etapa 4: Se añadió una solución de HCl en dioxano (20 ml, 4 M) a una solución agitada de 4-(naftalen-2-ilmetil)piperidin-1 -carboxilato de ferc-butilo (0,55 g, 1,6 mmol) en 1,4-dioxano (10 ml) a ta y se agitó la mezcla durante 2 h. Se concentró. Se lavo el producto bruto con dietiléter (5 ml) y se aisló en forma de un sólido blanquecino. Se usó hidrocloruro de 4-(naftalen-2-ilmetil)piperidina bruto en la síntesis del EJEMPLO 10-56 sin purificación adicional. Rendimiento: 90 % (0,5 g). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 88,74 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 7,83 (d, J= 9,0 Hz, 3H), 7,45 (s, 1H), 7,35 (d, J= 11,2 Hz, 1H), 7,02-6,82 (m, 1H), 3,22-3,18 (m, 3H), 2,83-2,67 (m, 4H), 1,86 (s, 1H), 1,73-1,68 (m, 2H),1,42-1,25 (m, 2H).
EJEMPLO 10-56: Preparación de N-(5-((4-(naftalen-2-ilmetil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Se sintetizó el compuesto del título siguiendo el procedimiento general C, usando N-(5-(clorometil)tiazol-2-il)acetamida (180 mg, 0,95 mmol), hidrocloruro de 4-(naftalen-2-ilmetil)piperidina (250 mg, 0,95 mmol), DIPeA (365 mg, 2,8 mmol) y DMF (10 ml). Se purificó el producto bruto por MD autoprep (Método B) dando el compuesto del título en forma de un sólido marrón. Rendimiento: 5 % (12 mg). LC/MS: (Método C) 380,2 (M+H), HPLC: (Método C) TR: 3,64 min, 97,9 % (Máx), 98,5 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 811,90 (s, 1H), 7,86-7,81 (m, 3H), 7,65 (s, 1H), 7,48-7,41 (m, 2H), 7,34 (dd, J= 2,8, 8,4 Hz, 1H), 7,21 (s, 1H), 3,57 (s, 2H), 2,82-2,79 (m, 2H), 2,67-2,66 (m, 2H), 2,11(s, 3H), 1,90-1,84 (m, 2H), 1,57-1,55 (m, 3H), 1,28-1,22 (m, 2H).
EJEMPLO 10l: Preparación de hidrocloruro de 6-(piperidin-4-ilmetil)quinoxalina (intermedio)
Figure imgf000064_0001
Etapa 1: Se añadió gota a gota n-BuLi (12,0 ml, 30,15 mmol) a una solución agitada de bromuro de metiltrifenilfosfonio (14,3 g, 40,02 mmol) en THF seco (40 ml) bajo nitrógeno a -78 °C y se agitó la mezcla durante 1 h a la misma temperatura. Se añadió entonces 1-Boc-piperidin-4-ona (4,0 g, 20,1 mmol) en THF (20 ml) y se agitó la mezcla a ta durante 1 h. Se enfrió la mezcla de reacción a 0 °C y se inactivó con NH4CI sat. Se extrajo el producto con acetato de etilo (100 ml). Se lavó la capa orgánica con salmuera (50 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró. Se purificó el producto bruto resultante por cromatografía en columna procurando 4-metilenpiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo en forma de un líquido incoloro. Rendimiento: 67 % (2,6 g). LCMS: (Método C) 98,2 (M-Boc+H), TR: 4,83 min, 93,41 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 84,73 (s, 2H), 3,30 (t, J= 12,0 Hz, 4H), 2,08 (t, J= 12,0 Hz, 4H), 1,38 (s, 9H).
Etapa 2: Se añadió 9-BBN (6,1 ml, 3,04 mmol) a una muestra desgasificada de 4-metilenpiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (0,6 g, 3,04 mmol) en THF seco (10 ml). Se calentó a reflujo la mezcla resultante durante 1 h. Después de enfriar a ta, se añadieron 6-bromoquinoxalina (0,55 g, 2,78 mmol), Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2 (0,15 g, 0,18 mmol), Dm F (10 ml), agua (1 ml) y K2CO3 (0,6 g, 4,5 mmol) a ta. Se calentó la mezcla resultante a 60 °C durante 3 h. Se enfrió la mezcla de reacción a ta y se diluyó con agua (20 ml). Se ajustó el pH a 11 con NaOH acuoso al 10 % y se extrajo la mezcla con acetato de etilo. Se secó la capa orgánica sobre Na2SO4 anhidro y se concentró consiguiendo el producto bruto en forma de un líquido incoloro. Se usó 4-(quinoxalin-6-ilmetil)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo en la siguiente etapa sin purificación adicional. Rendimiento: 24 % (0,23 g). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 88,89-8,86 (m, 2H), 8,04­ 8,01 (m, 3H), 2,73-2,67 (m, 2H), 2,25 (m, 9H), 1,13 (s, 9H).
Etapa 3: Se añadió una solución de HCl en dioxano (10 ml, 4 M) a una solución agitada de 4-(quinoxalin-6-ilmetil)piperidin-1 -carboxilato de ferc-butilo (0,3 g, 0,7 mmol) en 1,4-dioxano (5 ml) a ta y se agitó la mezcla resultante durante 2 h. Se concentró la mezcla de reacción. Se lavó el producto bruto resultante con dietiléter (5 ml) procurando hidrocloruro de 6-(piperidin-4-ilmetil)quinoxalina en forma de un sólido gris. Se usó en la síntesis del Ejemplo 10-63 sin purificación adicional. Rendimiento: 77 % (0,2 g). LCMS: (Método C) 228,2 (M+H), TR: 1 min, 96,98 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 88,90 (d, J= 12,0 Hz, 2H), 8,02-7,90 (m, 3H), 3,24-3,20 (m, 2H), 2,82-2,80 (m, 4H), 2,25 (m, 4H).
EJEMPLO 10-63: Preparación de N-(5-((4-(quinoxaMn-6-ilmetil)piperidin-1 il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Se sintetizó el compuesto del título siguiendo el procedimiento general C, usando hidrocloruro de 6-(piperidin-4-ilmetil)quinoxalina (0,1 g, 0,38 mmol) (10 ml), DIPEA (0,3 ml, 1,14 mmol), N-(5-(clorometil)tiazol-2-il)acetamida (0,11 g, 0,57 mmol) en acetonitrilo seco. Se purificó el producto bruto por cromatografía en columna ultrarrápida procurando el compuesto del título en forma de un sólido marrón. Rendimiento: 16,8 % (75 mg). LCMS: (Método C) 3 8 2 , 2 (M+H). HPLC: (Método C) TR: 2,21 min, 99,69 % (Máx), 99,01 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 11,98 (s, 1H), 8,02 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 7,88 (s, 1H), 7,72 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,23 (s, 1H), 3,58 (s a, 2H), 2,79 (d, J= 5,6 Hz, 3H), 2,12 (s, 3H), 2,09 (s, 1H), 1,99-1,88 (m, 2H), 1,58 (m, 3H), 1,26-1,23 (m, 2H).
EJEMPLO 10m: Preparación de hidrocloruro de 4-(3,5-difluorobencil)piperidina (intermedio)
Figure imgf000065_0001
Etapa 1: Se añadió fosfito de trietilo (3,4 ml, 19,1 mmol) a bromuro de 3,5-difluorobencilo (3 g, 14,4 mmol) a ta y se calentó a reflujo a 150 °C durante una noche. Se enfrió la mezcla de reacción y se evaporó a vacío. Se aisló el producto bruto en forma de un líquido incoloro y se llevó a la siguiente etapa sin purificación adicional. Rendimiento: 95 % (5,2 g). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,14-7,07 (m, 1H), 7,00-6,98 (m, 2H), 4,03-3,90 (m, 6H), 3,34-3,14 (m, 2H), 1,26­ 1,22 (m, 9H).
Etapa 2: Se añadieron 15-corona-5-éter (0,24 ml, 1,1 mmol) en THF seco (35 ml) y NaH (60 %, 0,5 g, 12,5 mmol) a una solución agitada de bromuro de (3,5-difluorobencil)trietoxifosfonio (5,2 g, 13,9 mmol) a 0 °C y se agitó durante 1 h. Se añadió entonces 1-Boc-piperidin-4-ona (2,3 g, 11,7 mmol) en THF (25 ml) y se agitó a ta durante una noche. Se inactivó la mezcla de reacción con agua con hielo, se extrajo con acetato de etilo (100 ml) y se lavó con NaHCO3 al 10 %, agua y salmuera. Se secó la capa orgánica sobre Na2SO4 y se concentró. Se purificó el producto bruto por cromatografía en columna de gel de sílice consiguiendo 4-(3,5-difluorobenciliden)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo en forma de un líquido incoloro. Rendimiento: 57 % (2 g). LCMS: (Método C) 254,0 (M-t-Bu+H), TR: 5,65 min, 99,6 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,11-7,06 (m, 1H), 6,94 (d, J= 6,8 Hz, 1H), 6,35 (s, 1H), 3,42-3,32 (m, 4H), 2,40 (t, J= 3,4 Hz, 2H), 2,39 (t, J= 5,6 Hz, 2H), 1,41 (s, 9H).
Etapa 3: Se añadió Pd/C (0,20 g, 10 %) a una solución agitada de 4-(3,5-difluorobenciliden)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (2 g, 6,4 mmol) en MeOH seco (80 ml) bajo nitrógeno. Se agitó la mezcla de reacción bajo presión de hidrógeno (2 kg/cm2) a ta durante 2 h. Se filtró entonces a través de Celite, se concentró y se usó para la siguiente etapa. Rendimiento: 95 % (0,9 g, sólido blanco). LCMS: (Método C) 256,0 (M-t-Bu+H), TR: 5,60 min, 99,73 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,04-6,98 (m, 1H), 6,94-6,91 (m, 2H), 3,89 (d, J= 10,6 Hz, 2H), 2,65 (t, J= 1,8 Hz, 2H), 2,50 (d, J= 5,3 Hz, 2H), 1,72-1,65 (m, 1H), 1,51-1,47 (m, 2H), 1,36 (s, 9H), 1,05-0,95 (m, 2H).
Etapa 4: Se añadió una solución de HCl en dioxano (20 ml, 4 M) a una solución agitada de 4-(3,5-difluorobencil)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (1,9 g, 6,1 mmol) en 1,4-dioxano (6 ml) a ta y se agitó durante 2 h. Se concentró la mezcla de reacción. Se lavó el producto bruto resultante con dietiléter (5 ml) procurando hidrocloruro de 4-(3,5-difluorobencil)piperidina en forma de un sólido blanquecino. Se usó en la síntesis del EJEMPLO 10-64 sin purificación adicional. Rendimiento: 93 % (1,4 g). LCMS: (Método C) 212,0 (M+H), TR: 2,84 min, 99,69 % (Máx).
EJEMPLO 10-64: Preparación de N-(5-((4-(3,5-difluorobencil)piperidin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Se sintetizó el compuesto del título siguiendo el procedimiento general C, usando N-(5-(clorometil)tiazol-2-il)acetamida (0,35 g, 1,82 mmol), hidrocloruro de 4-(3,5-difluorobencil)piperidina (0,3 g, 1,21 mmol) y DIPEA (0,7 ml, 3,6 mmol) en ACN seco (20 ml). Se purificó el producto bruto por cromatografía en columna ultrarrápida procurando el compuesto del título en forma de un sólido marrón. Rendimiento: 16,8 % (75 mg). LCMS: (Método C) 366,0 (M+H). HPLC: (Método C) TR: 3,27 min, 98,9 % (Máx), 96,7 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 11,93 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,03­ 6,98 (m, 1H), 6,91 (d, J= 6,4 Hz, 2H), 3,57 (s, 2H), 2,81-2,78 (m, 2H), 2,53 (s, 2H), 2,11 (s, 3H), 1,89-1,84 (m, 2H), 1,51-1,48 (m, 3H), 1,23-1,13 (m, 2H).
EJEMPLO 10n: Preparación de hidrocloruro de 4-(naftalen-1-ilmetil)piperidina (intermedio)
Figure imgf000065_0002
Etapa 1: Se añadió trifenilfosfina (2,1 g, 8,02 mmol, Spectrochem) a una solución agitada de 1-bromometilnaftaleno (1,97 g, 8,9 mol, Combiblocks) en tolueno seco (25 ml) a ta y se calentó a reflujo durante 16 h. Se enfrió entonces la mezcla de reacción a ta y se evaporó a vacío. Se lavó el producto bruto resultante con dietiléter y se usó como tal la siguiente etapa sin purificación adicional. Rendimiento: 87 % (3,5 g, sólido blanco). LCMS: (Método A) 403,2 (M-Br), TR: 4,43 min, 97,5 % (Máx).
Etapa 2: Se añadió ferc-butóxido de potasio (0,813 g, 7,24 mmol) a una solución agitada de bromuro de (naftalen-1-ilmetil)trifenilfosfonio (3,5 g, 7,24 mmol) en THF seco (10 ml) a ta y se agitó durante 1 h. Se añadió entonces 1-Bocpiperidin-4-ona (0,722 g, 3,62 mmol, GLR scientific) a la misma temperatura y se agitó durante otras 3 h. Se inactivó la mezcla de reacción con agua (20 ml) y se extrajo con DCM (50 ml). Se secó la capa orgánica sobre Na2SO4 y se concentró. Se purificó el producto bruto resultante por cromatografía en columna de gel de sílice (EtOAc al 3 % en hexano) consiguiendo 4-(naftalen-1-ilmetilen)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 34 % (0,4 g). LCMS: (Método A) 268,1 (M-t-Bu+H), TR: 5,85 min, 45,9 % (Máx).
Etapa 3: Se añadió Pd/C (0,04 g, 10 %, Aldrich) a una solución agitada de 4-(naftalen-1-ilmetilen)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (0,4 g, 1,23 mmol) en MeOH seco (20 ml) bajo nitrógeno. Se agitó la mezcla de reacción bajo presión de hidrógeno (2 kg/cm2) a ta durante 2 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite y se concentró a vacío. Se llevó el producto bruto resultante como tal a la siguiente etapa sin purificación adicional. Rendimiento: 87 % (0,35 g, líquido incoloro). LCMS: (Método A) 270,0 (M-t-Bu+H), TR: 5,78 min, 58,0 % (Máx).
Etapa 4: Se añadió HCl-dioxano (10 ml, 4 M) a una solución agitada de 4-(naftalen-1-ilmetil)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (0,35 g, 1,07 mmol) en 1,4-dioxano (10 ml) a ta y se agitó durante 2 h. Se concentró la mezcla de reacción a vacío. Se codestiló el producto bruto resultante con dietiléter (5 ml) y se usó para la siguiente etapa. Rendimiento: 89 % (0,25 g, sólido blanco). LCMS: (Método A) 226,2 (M+H), TR: 3,22 min, 88,8 % (Máx).
EJEMPLO 10-65: Preparación de N-(2-((4-(naftalen-1-ilmetil)piperidin-1-il)metil)tiazol-5-il)acetamida
Se sintetizó el compuesto del título siguiendo el procedimiento general C, usando N-(5-(clorometil)tiazol-2-il)acetamida (79 mg, 0,42 mmol), hidrocloruro de 4-(naftalen-1-ilmetil)piperidina (110 mg, 0,42 mmol), DIPEA (0,163 mg, 1,26 mmol) y ACN (5 ml). Se purificó el producto bruto por MD-Auto prep, Método B, en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 2,1 % (5,7 mg). LCMS: (Método A) 380,0 (M+H), TR: 3,62 min, 98,8 % (Máx), 98,3 (220 nm). HPLC: (Método A) TR: 3,58 min, 99,22 % (Máx), 99,18 % (220 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6: 812,6 (s, 1H), 7,92-7,86 (m, 2H), 7,74 (d, J= 3,6 Hz, 2H), 7,53-749 (m, 2H), 7,40 (t, J= 7,2 Hz,1H), 4,33 (s, 2H), 3,51-3,46 (m, 2H), 3,10-3,03 (m, 1H), 2,70-2,56 (m, 2H), 2,34-2,32 (m, 2H), 2,19-2,16 (m, 2H), 1,89-1,85 (m, 2H), 1,59-1,50 (m, 2H), 1,26-1,20 (m, 2H).
EJEMPLO 11 a: Preparación de hidrocloruro de 1-(1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)etil)piperazina (intermedio)
Figure imgf000066_0001
Etapa 1: Se añadió lentamente NaBH4 (2,7 g, 71,3 mmol, Loba chemie) a una solución agitada de 3,4-metilendioxiacetofenona (10,0 g, 6091 mmol, Alfa aesar) en MeOH seco (200 ml) a 0 °C. Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 1 h. Se concentró entonces la mezcla de reacción a vacío y se diluyó con DCM. Se lavó la capa de DCM con agua, salmuera y se secó sobre Na2SO4 anhidro. Se retiró el disolvente a presión reducida y se usó el alcohol bruto resultante como tal en la siguiente etapa. Rendimiento: 99 % (10,0 g, líquido incoloro). LCMS: (Método D) 149,0 (M-H2O+H), TR: 2,513 min, 98,6 % (Máx), 97,7 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, CDCla): 86,89 (s, 1H), 6,89-6,75 (m, 2H), 5,95 (s, 2H), 4,81 (t, J= 8,0 Hz, 1H), 1,46 (d, J= 8,0 Hz, 3H).
Etapa 2: Se añadió lentamente cloruro de tionilo (23,4 g, 180,72 mmol) a una solución agitada de 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)etan-1-ol (10,0, 60,2 mmol) en Dc M seco (27 ml) a 0 °C y se calentó a reflujo la mezcla resultante durante 3 h. Se concentró entonces a presión reducida. Se codestiló el residuo resultante con DCM, dando 5-(1-cloroetil)benzo[d][1,3]dioxol en forma de un líquido marrón. Rendimiento: 72 % (6,3 g). LCMS: (Método D) 149,0 (M-HCI+H), TR: 3,705 min, 80,15 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 87,06 (d, J= 4,0 Hz, 1H), 6,93 (d, J= 8,0 Hz. 1H), 6,86 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 6,01 (s, 2H), 2,49 (c, J= 8,9 Hz, 1H), 1,74 (d, J= 8,9 Hz, 3H).
Etapa 3: Se añadieron 5-(1-cloroetil)benzo[d][1,3]dioxol (6,39 g, 34,7 mmol) y DIPEA (13,45 g, 104,0 mmol) a una solución agitada de 1-Boc-piperazina (6,5 g, 34,0 mmol) en ACN seco (100 ml) a ta y se calentó a 80 °C durante una noche. Se concentró la mezcla de reacción a vacío y se diluyó el residuo resultante con EtOAc. Se lavó la capa orgánica con agua, solución de salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a vacío. Se purificó el producto bruto por cromatografía en columna de gel de sílice procurando 4-(1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)etil)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo en forma de un líquido gomoso incoloro. Rendimiento: 20 % (2,0 g). LCMS: (Método C) 335,2 (M+H), TR: 3,10 min, 93,15 % (Máx), 96,06 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 86,85-6,82 (m, 2H), 6,74­ 6,71 (m, 1H), 5,98 (d, J= 1,6 Hz, 2H), 3,37-3,36 (m, 1H), 3,27 (m, 4H), 2,28-2,21 (m, 4H), 1,37 (s, 9H), 1,25 (d, J= 6,8 Hz, 3H).
Etapa 4: Se añadió una solución de HCl en dioxano (20 ml, 4 M) a una solución agitada de 4-(1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)etil)piperazin-1 -carboxilato de ferc-butilo (2,0 g, 5,9 mmol) en dioxano seco (10 ml) y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 2 h. Se concentró la mezcla de reacción a vacío y se purificó el producto bruto por recristalización con dietiléter, procurando hidrocloruro de 1-(1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)etil)piperazina en forma de un sólido blanquecino. Rendimiento: 82 % (1,2 g). LCMS: (Método D) 235,0 (M+H), TR: 4,2 min, 98,56 % (Máx), 97,3 % (220 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 812,09 (m, 1H), 9,43 (m, 1H), 9,20 (m, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,07-7,02 (m, 2H), 6,08 (s, 2H), 4,55 (m, 1H), 3,82 (m, 1H), 3,50-3,39 (m, 3H), 3,17-2,96 (m, 2H), 1,68 (s, 3H).
EJEMPLO 11-58: Preparación de N-(5-((4-(1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)etil)piperazin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Se sintetizó el compuesto del título siguiendo el procedimiento general C, usando N-(5-(clorometil)tiazol-2-il)acetamida (0,28 g, 1,48 mmol), hidrocloruro de 1-(1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)etil)piperazina (0,4 g, 1,48 mmol), DIp Ea (0,57 g, 4,44 mmol) y ACN (5 ml). Se purificó el producto bruto por cromatografía en columna ultrarrápida dando el compuesto del título en forma de un sólido marrón. Rendimiento: 2 % (3,71 mg). LC/MS: (Método C) 389,0 (M+H), HPLC: (Método C) TR: 2,09 min, 92,6 % (Máx), 91,1 % (254 nm). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 11,94 (s, 1H), 6,83-6,81 (m, 3H), 6,71 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 5,98 (s, 2H), 3,58 (s, 2H), 3,35-34 (m, 1H), 2,33-2,32 (m, 7H), 2,10 (s, 3H), 1,23 (d, J= 2,8 Hz, 3H).
EJEMPLOS 11-57 y 11-60: Preparación de (S)-N-(5-((4-(1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)etil)piperazin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida y (R)-N-(5-((4-(1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)etil)piperazin-1-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
Figure imgf000067_0001
Se separaron dos enantiómeros del Ejemplo 58 por HPLC quiral (columna Chiralcell OJ-H (250 x 4,6 mm, 5 pm); eluida con DEA al 0,1 % en hexano:IPA 90:10; caudal 1,0 ml/min). Se concentró el primer compuesto en eluir dando el Ejemplo 60 en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 3 % (16 mg). LC/MS: (Método C) 389,0 (M+H), HPLC: (Método C) TR: 2,12 min, 98,9 % (Máx), 99,2 % (254 nm). Pureza quiral por HPLC: (Método C) TR: 16,97 min, 100,0 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 811,95 (s, 1H), 7,23 (s, 1H), 6,83 (s, 1H), (d, J= 8,4 Hz, 1H), 6,71 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 5,97 (d, J= 1,2 Hz, 2H), 3,57 (s, 2H), 3,31-3,28 (m, 1H), 2,33-2,32 (m, 8H), 2,10 (s, 3H), 1,22 (d, J= 8,0 Hz, 3H).
Se concentró el segundo compuesto en eluir dando el Ejemplo 57 en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 2 % (13 mg). LC/MS: (Método C) 389,0 (M+H). HPLC: (Método C) TR: 2,12 min, 99,7 % (Máx), 99,7 % (254 nm). Pureza por HPLC quiral: (Método C) TR: 29,60 min, 100,0 % (Máx). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 811,91 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 6,81 (s, 1H), (d, J= 8,4 Hz, 1H), 6,70 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 5,96 (d, J= 1,2 Hz, 2H), 3,56 (s, 2H), 3,30-3,29 (m, 1H), 2,32­ 2,31 (m, 8H), 2,09 (s, 3H), 1,22 (d, J= 8,0 Hz, 3H).
La inhibición enzimática de hOGA (CI50) de ambos compuestos del título estaba entre 1 y 10 pM ("++").
EJEMPLO 12: Ensayo de inhibición de la enzima O-GlcNAcasa humana
Se pipetearon con un instrumento de manejo de líquidos TTP LabTech Mosquito 100 nl de la concentración apropiada de una solución de inhibidor en 100 % de DMSO (para el cálculo de una curva de dosis-respuesta) en cada pocillo de una placa de 384 pocillos (Aurora Biotechnologies, pieza n° 30311). Se añadieron los siguientes componentes de reacción a un volumen final de 10 pl en tampón de Mcllvaine (pH 6,5): hOGA marcada con His 20 nM y mono-beta-O-(2-desoxi-2-N-acetil)glucopiranósido de fluoresceína 10 pM (FL-GlcNAc; Marker Gene Technologies Inc, pieza n° M1485). Se incubó la placa durante 60 min a temperatura ambiente y se terminó entonces la reacción mediante la adición de 10 pl de tampón de terminación (glicina 200 mM, pH 10,75). Se leyó la placa en una plataforma Envision en formato fluorescente usando el espejo superior con 485 nm amortiguador como configuración del filtro de excitación y 520 nm como configuración del filtro de emisión. Se representó la cantidad de fluorescencia medida frente a la concentración de inhibidor para producir una curva de dosis-respuesta sigmoidea, a partir de la cual se calculó el valor de CI50.
EJEMPLO 13: Ensayo de O-GlcNAcilación celular
Se sembraron células de neuroblastoma de rata B35 (ATCC; CRL-2754) en placas tratadas con poli-D-lisina de 96 pocillos (BD Falcon; 354640) a una densidad de 10.000 células por pocillo en un volumen total de 90 pl de medio completo. Se trataron las células el día siguiente con una concentración apropiada de solución de inhibidor durante 16 h a 37 °C en 5 % de CO2. Se fijaron las células en 100 pl de paraformaldehído al 4 % durante 15 min a temperatura ambiente, seguido de tres lavados con tampón PBS. Se permeabilizaron entonces las células con Triton X-100 al 0,1 % durante 60 min a temperatura ambiente. Después de tres lavados con PBS, se bloquearon las células con suero de cabra al 10 % que contenía 1 % de BSA en tampón PBS durante 2 horas a temperatura ambiente. Se incubaron entonces las células con un anticuerpo monoclonal de conejo específico de tau O-GlcNAcilada en la serina 400 (Epitomics) a una dilución 1:1000 durante un anoche a 4 °C. Se retiró por lavado el anticuerpo primario y se incubaron las células con un anticuerpo secundario conjugado con AlexaFluor488 de cabra anti-conejo (Molecular Probes; A11034), y se añadió tinte nuclear Hoechst 33342 a una concentración de 1 |jg/ml. Se leyeron las células en un lector de placas Acumen Explorer eX3. Para calcular la CE50, se representó la intensidad de pico total frente a la concentración de inhibidor para producir una curva de dosis-respuesta sigmoidea.
EJEMPLO 14: Preparaciones farmacéuticas
(A) Viales de inyección: Se ajustó una solución de 100 g de un ingrediente activo según la invención y 5 g de hidrogenofosfato de disodio en 3 l de agua bidestilada a pH 6,5 usando ácido clorhídrico 2 N, se esterilizó por filtración, se transfirió a viales de inyección, se liofilizó y se selló en condiciones estériles. Cada vial de inyección contenía 5 mg de ingrediente activo.
(B) Supositorios: Se fundió una mezcla de 20 g de ingrediente activo según la invención con 100 g de lecitina de soja y 1400 g de manteca de cacao, se vertió en moldes y se dejó enfriar. Cada supositorio contenía 20 mg de ingrediente activo.
(C) Solución: Se preparó una solución a partir de 1 g de ingrediente activo según la invención, 9,38 g de NaH2PO4'2H2O, 28,48 g de Na2HPO4-12H2O y 0,1 g de cloruro de benzalconio en 940 mg de agua bidestilada. Se ajustó el pH a 6,8, se completó la solución hasta 1 l y se esterilizó por irradiación. Esta solución podría usarse en forma de gotas oculares.
(D) Pomada: Se mezclaron 500 mg de ingrediente activo según la invención con 99,5 g de vaselina en condiciones asépticas.
(E) Comprimidos: Se comprimió una mezcla de 1 kg de ingrediente activo según la invención, 4 kg de lactosa, 1,2 kg de almidón de patata, 0,2 kg de talco y 0,1 kg de estearato de magnesio dando comprimidos de manera convencional, de tal modo que cada comprimido contenía 10 mg de ingrediente activo.
(F) Comprimidos recubiertos. Se comprimieron comprimidos análogamente al Ejemplo E y se recubrieron posteriormente de manera convencional con un recubrimiento de sacarosa, almidón de patata, talco, tragacanto y tinte.
(G) Cápsulas: Se introdujeron 2 kg de ingrediente activo según la invención en cápsulas de gelatina dura de manera convencional de tal forma que cada cápsula contenía 20 mg de ingrediente activo.
(H) Ampollas: Se esterilizó por filtración una solución de 1 kg de ingrediente activo según la invención en 60 l de agua bidestilada, se transfirió a ampollas, se liofilizó en condiciones estériles y se selló en condiciones estériles. Cada ampolla contenía 10 mg de ingrediente activo.
(I) Pulverización de inhalación: Se disolvieron 14 g de ingrediente activo según la invención en 10 l de solución isotónica de NaCl, y se transfirió la solución a envases de pulverización comercialmente disponibles con un mecanismo de bomba. La solución podía pulverizarse en la boca o la nariz. Un chorro de pulverización (aproximadamente 0,1 ml) correspondía a una dosis de aproximadamente 0,14 mg.
EJEMPLO 15: La O-GlcNAcilación aumentada reduce la tau patológica sin afectar su fosforilación normal en un modelo de tauopatía de ratón.
FIGURAS
Figura 1: Efectos de ThiametG agudo o subcrónico sobre la O-GlcNAcilación y fosforilación en ratones Tg4510. A, los niveles de O-GlcNAcilación total aumentaron en el hemiprosencéfalo de ratón 4 h después de la administración única de ThiametG o 4 h después de 14 tratamientos repetidos diariamente con ThiametG. B, la tau inmunoprecipitada (anticuerpo HT7) estaba fuertemente O-GlcNAcilada en S400 en animales tratados durante 14 días en comparación con controles de vehículo. C, los niveles de O-GlcNAcilación de proteína tau estaban ligeramente aumentados en el hemiprosencéfalo de ratón 4 h después del tratamiento único de ThiametG (%) y significativamente aumentados 4 h después del último de los 14 tratamientos diarios con ThiametG. D, la fosforilación de tau disminuía en los epítopos S202/205, S262 y S396 4 h después de la administración única de ThiametG, pero volvía a los niveles normales después de 14 tratamientos diarios con ThiametG. La fosforilación de tau en S356 se redujo significativamente después de una administración única y repetida (14 días) de ThiametG (ANOVA unifactorial, *p <0,05). Los datos de transferencia Western (N= 13-15/grupo) se expresan como media ± eem del porcentaje de controles tratados con vehículo. ANOVA unifactorial, *p< 0,05 en comparación con el control.
Figura 2: Efectos del tratamiento crónico de ThiametG sobre la O-GlcNAcilación de tau y la tau patológica en ratones Tg4510. A, los niveles de O-GlcNAcilación de tau permanecen elevados en hemiprosencéfalo de ratón después de 4 meses de administración de ThiametG. B, la tau patológica hiperfosforilada (64 kDa) se reduce drásticamente en los epítopos pS202/205, pS400, pS356 y pS262 después de 4 meses de administración de ThiametG. C, expresión localizada de O-GlcNAc-tau (anticuerpo Otau(S400); panel superior) y AT8 (panel medio) que reconoce que la tau agregada hiperfosforilada se detectó en la región CA1 del hipocampo en ratones Tg4510. Se realizó inmunotinción dual para demostrar la no colocalización de O-GIcNAc-tau con tau patológica (panel inferior, imagen de 63x). D, el estado de fosforilación de tau de la especie de tau de 50-60 kDa no cambiaba después de 4 meses de administración repetida de ThiametG. Los datos de transferencia Western (N= 13-15/grupo) se expresan como media ± eem del porcentaje de controles tratados con vehículo. ANOVA unifactorial, *p <0,05 en comparación con control.
Figura 3: Efectos del tratamiento crónico de ThiametG sobre neuronas distróficas de tau y ovillos en el hipocampo. A, las neuronas positivas de AT8 se reducen significativamente en la región CA1 y CA3 del hipocampo después de 4 meses de administración de ThiametG. B, las fibras agirófilas (medidas por tinción de Bielschowsky) se reducen significativamente en la región CA1 del hipocampo, pero no en la región CA3, después de 4 meses de administración de ThiametG. La cuantificación por IHC y Bielschowsky (N= 13-15/grupo) se expresa como media ± eem del porcentaje de controles tratados con vehículo.
MATERIALES Y MÉTODOS
Animales: Se generaron ratones Tg(tauP301L)4510 como se describe anteriormente (Santacruz e t a l., 2005, Science 309: 476-481). Se criaron los animales y se albergaron en el McLaughlin Research Institute (Great Falls, Montana). Todos los experimentos se aprobaron por el MRI Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC). Se evaluaron los efectos agudos (tratamiento de 1 día) y subcrónicos (tratamiento de 14 días) de ThiametG en ratones Tg4510 machos y hembras de 3 meses de edad. Se evaluaron los efectos crónicos (4 meses) de ThiametG en ratones Tg4510 machos y hembras a partir de 2 meses de edad. Se disolvió ThiametG en agua y se administró por vía oral a una concentración de 500 mg/kg/día.
Anticuerpo específico de O-GlcNAc-tau (Otau(S400)): Para generar un anticuerpo monoclonal de conejo específico de tau O-GlcNAcilada en la serina 400, se inmunizaron conejos con un péptido (cVYKSPVV-(O-GlcNAc)S-GDTSPRH) correspondiente a los aminoácidos 393 a 407 en tau humana 2N4R. Se aislaron linfocitos de conejos con antisueros de alta titulación y se generaron hibridomas. Se purificaron los anticuerpos de IgG a partir del sobrenadante de subclones de hibridoma positivos. Se confirmó la especificidad del anticuerpo en transferencias Western con muestras de tau O-GlcNAcilada recombinante y lisados de células HEK293 que coexpresan OGT y 2N4R-tau humana (datos no mostrados).
Inmunoprecipitación de tau: Para inmunoprecipitar proteína tau de lisados de cerebro, se usó un kit de inmunoprecipitación Crosslink (Pierce 26147). Se reticuló la resina A/G con 10 pg de anticuerpo de tau HT7 (Thermo Scientific MN1000) o Ig de ratón de control (Santa Cruz Biotech sc-2025) mediante el protocolo del fabricante. Se incubaron 250 pg de lisados de cerebro preparados como se describe anteriormente con el anticuerpo de tau acoplado con resina durante una noche a 4 °C. Se eluyeron las muestras con 50 pI de tampón de elución de bajo pH y se centrifugaron inmediatamente en tubos de recogida que contenían 5 pI de Tris 1 M, pH 9,5. Se sometió la tau inmunoprecipitada a transferencia Western como se describe a continuación.
Transferencia Western: Para examinar los cambios en la O-GlcNAcilación y fosforilación, se sacrificaron los animales 4 h después de la inyección en los estudios agudos y subcrónicos y 24 h después de la última inyección en el estudio crónico. Se diseccionaron rápidamente los hemiprosencéfalos y se congelaron en hielo seco. Se homogeneizaron muestras de tejido en tampón Phosphosafe (EMO Chemicals), seguido de centrifugación a baja velocidad (15.000 g) para retirar los desechos celulares. Se ensayó el sobrenadante resultante (sobrenadante de baja velocidad, Lss) para determinar las concentraciones de proteína por el método de Lowry. Se determinaron la O-GlcNAcilación y fosforilación en muestras de proteína de 20 pg sometidas a PAGE-SDS al 4-15 % (geles de Tris-HCI, Bio-Rad), seguido de transferencia a membranas de nitrocelulosa (Invitrogen, IBlot system). Se bloquearon las membranas en tampón de bloqueo Licor a temperatura ambiente durante 1 h y se incubaron en anticuerpo primario durante una noche a 4 °C. Se detectó la O-GlcNAcilación de proteína total usando el anticuerpo RL2 (1:500, ThermoScientific), se detectó la O-GlcNAcilación de tau usando el anticuerpo Otau(S400) (1:500) y se detectó la fosforilación de tau usando AT8 (1:500, ThermoScientific), pS396, pS262, pS356 (1:500, Abeam) y pS400 (1:5000, GenScript). Los anticuerpos de GAPDH (1:1000, Abcam) o tau total (1:50.000 ThermoScientific) servían como controles de carga internos. Se incubaron las membranas con anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforo específicos de especie (1:10.000; Licor) durante 1 h a temperatura ambiente y se detectaron usando Licor Odyssey.
Fraccionamiento de tau: Para analizar la tau de 50-60 kDa frente a la tau de 64 kDa, se centrifugó la fracción Lss que contiene ambas especies de tau de 50-60 kDa y 64 kDa a alta velocidad (110.000 g durante 15 min). Se retiró la fracción sobrenadante (fracción S1) que contenía las proteínas tau de 50-60 kDa y se ensayó para determinar las concentraciones de proteína. Para analizar los cambios en tau de 50-60 kDa y 64 kDa, se sometieron las fracciones Lss y S1 a PAGE-SDS al 10 % (geles de Tris-HCI, Bio-Rad) seguido de transferencia como se describe anteriormente. La tau de 64 kDa aparecía como una banda compacta con una masa aparente de ~64 kDa en lisado de cerebro completo (fracción Lss), pero estaba ausente en el sobrenadante (fracción S1) después de centrifugación a alta velocidad, que separa la tau de 50-60 kDa de la de 64 kDa (Figura 2B). La tau de 50-60 kDa aparece como varias bandas con una masa aparente que oscila de ~50-60 kDa.
Inmunohistoquímica: Para examinar la patología de ovillos, se diseccionó un hemicerebro, se fijó por inmersión en formalina tamponada neutra al 10 % durante 24-48 h y se embebió posteriormente en bloques de parafina. Se montaron secciones coronarias en serie de 10 micrómetros en portaobjetos Superfrost Plus y se tiñeron usando el kit Bond Intense R. Para detectar las neuronas distróficas AT8 , se pretrataron los portaobjetos montados con soluciones de recuperación de antígeno durante 10 min seguido de lavados con tampón de lavado BOND. Se inactivaron posteriormente las secciones con peróxido de hidrógeno en el kit Bond Intense R, se bloquearon con tampón de bloqueo M.O.M. (kits de inmunodetección M.O.M, Vector Laboratories) y se incubaron entonces con anticuerpo primario pS202/205 (1:500; ThermoScientific). Se incubaron entonces las secciones secuencialmente con anticuerpo secundario biotinilado de asno anti-ratón (1:200; Jackson Immunoresearch), estreptavidina-HRP y 3,3'-diaminobenzidina (ambas con el kit BOND Intense R). Para detectar los ovillos agirófilos, se desparafinizaron secciones, se rehidrataron con agua destilada y se trataron con formaldehído (al 4 %) durante una noche a 37 °C. Se lavaron las secciones con agua del grifo, se incubaron en una solución de nitrato de plata al 20 % durante 15 min en la oscuridad, se lavaron, se incubaron con solución de plata amoniacal durante 10 min en la oscuridad, se lavaron con agua con amoniaco y se trataron con revelador. Se lavaron posteriormente las secciones con agua con amoniaco, agua destilada y tiosulfato de sodio, se deshidrataron y montaron.
Inmunofluorescencia: Para examinar la colocalización entre tau O-GlcNAcilada y AT8 , se bloquearon secciones con suero de cabra normal al 5 % (Jackson Immunoresearch) durante 1 h, seguido de incubación secuencial con Otau(S400); (1:100, 1 h) yAT 8 (1:500, 1 h). Después de lavar, se incubaron las secciones con anticuerpos secundarios conjugado con FITC de cabra anti-conejo y conjugado con rojo Texas de cabra anti-ratón (Invitrogen) en PBS durante 1 h. Después de lavar, se pusieron cubreobjetos sobre los portaobjetos con reactivo antidesvanecimiento Prolong Gold (Invitrogen).
Análisis estadístico: Se analizaron los cambios de O-GlcNAcilación y fosforilación de proteína por ANOVA unifactorial, seguido de comparaciones post hoc de Dunnets o por la prueba de t para aquellos estudios con solo dos grupos de tratamiento. Se analizó la inmunohistoquímica por la prueba de t.
RESULTADOS
(i) La inhibición aguda y subcrónica de OGA aumenta la O-GlcNAcilación de tau y reduce transitoriamente la fosforilación de tau.
Para investigar los efectos de la O-GlcNAcilación aumentada sobre la fosforilación de tau, se eligió el modelo de ratón Tg4510 porque se parece mucho a la tautopatía humana y representa un modelo importante para el estudio de enfermedades neurodegenerativas relacionadas con tau. Los ratones Tg4510 recibieron una inyección única o repetida del inhibidor de OGA ThiametG o vehículo. ThiametG es un potente inhibidor de OGA con una CI50 de ~5 nM. La OGA cataliza la retirada de los residuos de O-GlcNAc de proteínas y por tanto la inhibición de OGA da como resultado un aumento relativo de la modificación O-GlcNAc en proteínas. Se observó un aumento significativo de la O-GlcNAcilación de proteína total en el SNC después de una única inyección de ThiametG (F(2,43)= 20,98; p< 0,01 en comparación con tratado con vehículo; Figura 1A) o 14 días de administración (F(2,43)= 12,57; p< 0,01). El aumento de la O-GlcNAcilación de proteína total después de 14 días de ThiametG era significativamente mayor que después de una única inyección (p< 0,05).
Para investigar específicamente los efectos del tratamiento de ThiametG sobre la O-GlcNAcilación de tau, se generó un anticuerpo monoclonal de conejo específico de O-GlcNAcilación de tau en la serina 400 (Otau(8400)). S400 puede modificarse por O-GlcNAcilación (Yuzawa et al., 2010, Amino Acids 40: 857-868) y está localizado entre S396 y S404, que son sitios de fosforilación conocidos por estar implicados en la patología de tau. Para confirmar que Otau(S400) reconocía de hecho la tau O-GlcNAcilada, se inmunoprecipitó tau con un anticuerpo panespecífico de tau (HT7) de cerebros de ratones Tg4510 que se habían tratado subcrónicamente con ThiametG y sondeado con anticuerpo Otau(S400). El anticuerpo Otau(S400) reconocía fuertemente la tau inmunoprecipitada en animales tratados con ThiametG, pero solo en una extensión mucho menor en los animales tratados con vehículo (Figura 1B). De forma interesante, se detectó tau O-GlcNAcilada en las bandas de menor peso molecular de tau, indicando que solo un subconjunto de tau estaba O-GlcNAcilado. Se detectó solo un pequeño aumento de O-GlcNAcilación de tau después de una única inyección de ThiametG. Sin embargo, la inyección repetida de ThiametG produjo un aumento de 9 veces de la O-GlcNAcilación de tau (F(2,42)= 22,04; p< 0,05 en comparación con tratado con vehículo; Figura 1G). Esto confirma que tau es un sustrato de O-GlcNAcilación y que la inhibición de OGA aumenta enérgicamente O-GlcNAc en tau en la serina 400 en un modelo de patología de tau de ratón.
Una única inyección de ThiametG reducía la fosforilación de tau en los epítopos S202/205 (F(2,43)= 43,49; p< 0,05), S262 (F(2,43)= 27,36; p< 0,05), S356 (F(2,43)= 33,31; p< 0,05 y S396 (f(2,43)= 22,48; p< 0,05; Figura 1D). El tratamiento agudo con ThiametG no alteraba la fosforilación de tau en S400 sugiriendo que la O-GlcNAcilación no regula la fosforilación de tau en este epítopo. De forma interesante, el tratamiento repetido con ThiametG no producía una mayor reducción de la fosforilación de tau en los epítopos investigados. En el caso de S202/205, S2 6 2 y S396, la fosforilación volvía hasta niveles basales después de 14 días de ThiametG, mientras que la fosforilación en S356 se reducía aún significativamente (F(2,43)= 26,72; p< 0,05), pero mostraba una tendencia hacia fosforilación aumentada.
(ii) La inhibición crónica de OGA reduce la patología de tau
Para examinar los efectos crónicos de ThiametG sobre la patología de tau, los animales Tg4510 recibieron 4 meses de tratamiento con ThiametG empezando a los 2 meses de edad. Se seleccionaron los ratones intencionadamente a esta edad para empezar el paradigma de tratamiento antes de cualquier signo de acumulación de tau patológica y neurodegeneración. 24 horas después de la última inyección, se recogió tejido cerebral para análisis de proteína tau mediante transferencia Western así como análisis histológico de ovillos. Los niveles de O-GlcNAcilación de proteína total después de 4 meses de ThiametG eran similares (185 %) al producido después del tratamiento de 14 días (datos no mostrados). Además, la O-GlcNAcilación de tau permanecía elevada 9 veces después de 4 meses de dosificación, comparable al nivel de O-GlcNAcilación de tau después de 14 días de tratamiento de ThiametG, indicando que la O-GlcNAcilación de tau alcanzaba un estado estacionario ya después de 2 semanas de inhibición de OGA (T27= 18,95; p< 0,0001; Figura 2A). Notablemente, aparecía O-GlcNAcilación en tau en las bandas de masa molecular menor y estaba ausente de la banda de 64 kDa que representa tau patológica, sugiriendo que solo se O-GlcNAcila tau no patológica. Para corroborar que la tau patológica no está O-GlcNAcilada, se realizaron experimentos de inmunofluorescencia de marcaje dual en secciones de cerebro de ratones Tg4510 tratados con ThiametG con el anticuerpo Otau(S400) (Figura 2C, panel superior) y el anticuerpo AT8 (Figura 2C, panel medio), que reconoce tau agregada hiperfosforilada. Las neuronas individuales en la región CA1 del hipocampo mostraban una fuerte inmunorreactividad de AT8 en soma y neuritas (Figura 2B, panel medio), mientras que la inmunorreactividad de O-GlcNAc-tau estaba localizada principalmente en cuerpos celulares neuronales (Figura 2C, panel superior). No se observó colocalización de O-GlcNAc-tau con tau patológica (Figura 2C, panel inferior), lo que está de acuerdo con el análisis bioquímico de que las especies patológicas de tau no están O-GlcNAciladas en cerebros de Tg4510.
Se identificó bioquímicamente tau patológica hiperfosforilada por centrifugación diferencial de homogeneizado de cerebro de ratones Tg4510 y detección con anticuerpos específicos de fosfo-tau. La tau patológica aparecía como una banda de masa molecular alta compacta a alrededor de 64 kDa en homogeneizado de cerebro entero (fracción de centrifugación de baja velocidad; Lss), pero estaba ausente en el sobrenadante después de centrifugación a alta velocidad (fracción S1), que separa la tau normal de la patológica (Figura 2B). La fracción S1 contenía especies de tau con una masa molecular aparente que oscila de ~50-60 kDa. El tratamiento crónico con ThiametG disminuía significativamente la tau de 64 kDa detectada con anticuerpos específicos de fosforilación dirigidos a S202/205 (T27 = 2984; p< 0,01), S400 (T27= 2,769; p<0,01), S356 (T27= 2,132; p<0,05)y S262 (T27= 3,030; p< 0,01; Figura 2B) de tau, indicando que un aumento mantenido de O-GlcNAcilación de tau previene la acumulación de tau patológica.
No hubo cambios en el estado de fosforilación de la especie de tau de 50-60 kDa (Figura 20) en diversos epítopos implicados en la agregación de tau, a saber, S202/205, S356 y S262. Esto sugiere que un aumento mantenido de O-GlcNAcilación no regula la fosforilación de la especie de tau de 50-60 kDa y por tanto puede prevenir la acumulación de tau patológica independientemente del nivel de fosforilación. Esto contrasta con la reducción de la fosforilación de tau observada después de una única inyección de ThiametG y es inconsistente con la noción en la técnica de que la fosforilación de tau está regulada directamente por O-GlcNAcilación mediante ocupación de sitio competitiva o adyacente.
Para confirmar el efecto de la inhibición de OGA sobre la agregación de tau, se valoró histológicamente la patología de tau en secciones de cerebro de ratones Tg5410 tratados con ThiametG. Consistentemente con los análisis bioquímicos, el tratamiento crónico con ThiametG reducía significativamente las neuronas distróficas positivas de pS202/205 (AT8) en la región CA1 (T26= 3,053, p< 0,01) y CA3 (T25= 3,046, p< 0,01) del hipocampo (Figura 3). Además, para demostrar que las neuronas inmunorreactivas de AT8 reflejan de hecho neuronas portadoras de ovillos, se realizó la tinción de Bielschowsky en secciones de cerebro de animales tratados con ThiametG y vehículo. Consistentemente con la inmunohistoquímica de AT8, se encontró una reducción significativa de la patología de ovillos en la región CA1 del hipocampo (T(25)= 2,309; p< 0,05; Figura 3B). Sin embargo, no se observó diferencia en la carga de ovillos en la región CA3 del hipocampo. Esto puede ser debido a diferencias en la sensibilidad para los agregados de tau tempranos entre las metodologías.
Tomados en conjunto, los resultados sugieren que aumentar los niveles de O-GlcNAc en tau atenúa la formación de especies patológicas de tau en el modelo de ratón Tg4510.
DISCUSIÓN
Se ha mostrado que el tratamiento farmacológico crónico del modelo de tau de ratón Tg4510 con un inhibidor potente y selectivo de OGA, ThiametG, da como resultado una reducción significativa de la patología de tau medida bioquímica y patológicamente. Se observó una reducción altamente significativa de tau de 64 kDa patológica en homogeneizados cerebrales de animales tratados con ThiametG. Esta especie de tau representa un conjunto distinto soluble a baja velocidad, pero sedimentable a alta velocidad, de tau agregada, consistente lo más probablemente en dímeros y oligómeros de tau. Estos agregados de tau tempranos preceden a la formación de ONF y se correlacionan mejor con la disfunción y degeneración neuronal que los de tau insolubles en sarcosilo u ONF en cerebro de ratón Tg4510. De forma similar, en ciertas áreas de la enfermedad de Alzheimer (EA), la pérdida neuronal cerebral y patología de ONF son topográficamente distintas, con el número de neuronas degeneradas mucho mayor que el de neuronas portadoras de ONF, implicando que es improbable que sean los ONF el agente neurotóxico primario durante la progresión de la enfermedad. Además, se encuentra una tau anormal estructuralmente similar a la especie de tau de 64 kDa patológica en ratones Tg4510 en tauopatías humanas, haciendo a estos intermedios de tau agregados una diana potencial para el tratamiento terapéutico. Con este estudio, se demostró claramente que la especie de 64 kDa patológica de tau puede reducirse mediante la inhibición a largo plazo de OGA, haciendo de OGA una diana molecular atractiva para el descubrimiento de fármacos. Esta observación está también en gran concordancia como los hallazgos inmunohistológicos que mostraban significativamente menos neuronas inmunorreactivas con el anticuerpo AT8, un marcador de agregados de tau patológicas, en animales tratados con ThiametG.
De forma importante, se encontró una O-GlcNAcilación notablemente más fuerte de tau en respuesta a la inhibición crónica de OGA, que puede dar cuenta del efecto más pronunciado sobre tau patológica. La diferencia en la O-GlcNAcilación de tau puede explicarse mediante el uso del modelo de tau de ratón Tg4510 en este estudio, que expresa trangénicamente tau a un nivel superior que el modelo de ratón JNPL3. Adicionalmente, el anticuerpo de O-GlcNAc-tau específico de sitio puede tener mayor afinidad por tau O-GlcNAcilada en S400 que el anticuerpo 3925. Notablemente, en este estudio se encontró modificación de O-GlcNAc en S400 solo en la tau que migraba a menor masa molecular en geles de poliacrilamida y estaba ausente de neuronas inmunopositivas de AT8, sugiriendo que solo la tau no patológica estaba O-GlcNAcilada. Esto concuerda con la noción de que la O-GlcNAcilación mantiene a tau en un estado que la vuelve menos propensa a agregación. De forma consistente, se encontró que la tau no patológica inmunopurificada de cerebros de pacientes de EA estaba más O-GlcNAcilada que la tau patológica hiperfosforilada.
La inhibición crónica de OGA disminuía la abundancia de agregados de tau patológica en el cerebro de ratón Tg4510 sin afectar a los niveles de fosforilación de tau no patológica. Esto sugiere que la O-GlcNAcilación puede no regular directamente la fosforilación de tau, pero atenúa la agregación de tau mediante un mecanismo independiente de la fosforilación. Aunque no puede excluirse completamente que otros mecanismos dependientes de O-GlcNAc sean responsables del efecto sobre la agregación de tau, es probable que la O-GlcNAcilación de tau rebaje directamente su tendencia a la oligomerización, como se ha demostrado in vitro con formas truncadas de tau modificada con O-GlcNAc. En este contexto, es importante señalar que la O-GlcNAcilación en S400 parece desempeñar un papel predominante en la inhibición de la oligomerización de tau, lo que es consistente con el aumento de 9 veces altamente significativo de la O-GlcNAcilación de tau en S400 y la reducción simultánea de la agregación de tau en respuesta a la inhibición crónica de OGA como se observa en este estudio. Este efecto protector de la O-GlcNAcilación sobre la agregación de proteína no es particular de tau, ya que las versiones O-GlcNAciladas de péptidos TAB1 y alfasinucleína tenían menos tendencia a oligomerización en comparación con sus contrapartidas no modificadas. Como la O-GlcNAcilación previene la agregación de diferentes tipos de proteínas amiloidogénicas, la inhibición de OGA puede proporcionar una estrategia terapéutica para una multitud de enfermedades causadas por la agregación aberrante de proteínas aparte de EA.
En resumen, estos datos demuestran por primera vez que un aumento crónico de la O-GlcNAcilación de tau protege frente a la formación de agregados de tau hiperfosforilados, que están estrechamente ligados con la neurotoxicidad observada en EA y otras tauopatías. Este estudio apoya fuertemente a OGA como diana molecular para terapia modificadora de enfermedad para atenuar la progresión de la patología de tau en EA y otras tauopatías.

Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Un medicamento que comprende un compuesto de fórmula (I)
Figure imgf000073_0001
en la que
X1 designa S u O;
X2, W designan independientemente entre sí N o CR6;
R1, R3, R4 designan independientemente entre sí Y;
R3, R4 designan conjuntamente también -(CY2)p-;
R2 designa COY, Y, Alq, Cic, (CY2)nAr, COAlq, CO(CY2)nAr, CONY2 , CONYAlq, COOY, COOAlq,
COO(CY2)nAr, SO2Y, SO2Alq, SO2(CY2)nAr, CY2OY o CY2NY2 ;
R1, R2 designan conjuntamente también -(CY2)p-CONY2-(CY2)p-;
R5 designa (CY2)qAr, OAr, Cic, Y o NY2 ;
R6 designa Y, OY, Hal o CN;
L designa -CY2-, -CO- o -SO2-;
Y designa H o A;
A designa alquilo acíclico no ramificado o ramificado que tiene 1-10 átomos de C, en que 1-7 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal;
Alq designa alquenilo no ramificado o ramificado que tiene 2-10 átomos de C, en que 1-4 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal;
Cic designa cicloalquilo que tiene 3-7 átomos de C, en que 1-4 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal;
Ar designa un carbociclo monocíclico o bicíclico insaturado o aromático que tiene 3-12 átomos de C, que puede estar sustituido con al menos un sustituyente seleccionado del grupo de Hal, A, (CY2)n-Oy , (CY2V N Y 2 , COOY, SO2Y y CN, o que puede estar fusionado con un heterociclo monocíclico saturado, insaturado o aromático que tiene 1-5 átomos de C y 1-4 átomos de N, O y/o S;
Hal designa F, Cl, Br o I; y
m, n, p, q designan independientemente entre sí 0, 1, 2 o 3;
y/o una sal fisiológicamente aceptable de los mismos;
con la condición de que se excluya el éster metílico del ácido (5-piperidin-1-ilmetiltiazol-2-il)carbámico.
2. El medicamento según la reivindicación 1, en el que
X1 designa S.
3. El medicamento según la reivindicación 1 o 2, en el que
X2 designa CY; y/o
W designa N o CH.
4. El medicamento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que
W designa N;
R2 designa COY, COAlq, CONY2 o COOY; y/o
L designa CY2.
5. El medicamento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que
m, p designan independientemente entre sí 1 o 2, y/o
n, q designan independientemente entre sí 0 o 1.
6. El medicamento según la reivindicación 1, que comprende un compuesto de subfórmula (IA)
Figure imgf000074_0001
en la que
X1 designa S u O;
X2 designa CR6 o N;
R2 designa COY, COAlq, CONY2 o COOY;
R3, R4 designan independientemente entre sí Y;
R3, R4 designan conjuntamente también -(CY2)p-;
R5 designa (CY2)qAr, Cic o Y;
R6 designa Y, OY o Hal;
Y designa H o A;
A designa alquilo acíclico no ramificado o ramificado que tiene 1-10 átomos de C, en que 1-7 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal;
Alq designa alquenilo no ramificado o ramificado que tiene 2-6 átomos de C, en que 1-3 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal;
Cic designa cicloalquilo que tiene 3-7 átomos de C, en que 1-4 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal;
Ar designa un carbociclilo monocíclico o bicíclico insaturado o aromático que tiene 4-12 átomos de C, que puede estar sustituido con al menos un sustituyente seleccionado del grupo de Hal, A, OY, COOY y CN;
Hal designa F, CI, Br o I;
m, q designan independientemente entre sí 0, 1 o 2; y
p designa 1,2 o 3;
y/o una sal fisiológicamente aceptable de los mismos;
con la condición de que se excluya que R3 y R5 designen A.
7. El medicamento según la reivindicación 6, que comprende un compuesto de subfórmula (IB)
Figure imgf000075_0001
en la que
X2 designa CY o N;
R3, R4 designan independientemente entre si Y;
R3, R4 designan conjuntamente también -(CH2)p-;
R5 designa (CH2)qAr, Cic o A;
Y designa H o A;
A designa alquilo acíclico no ramificado o ramificado que tiene 1-6 átomos de C, en que 1-4 átomos de H pueden estar reemplazados independientemente entre sí por Hal;
Cic designa cicloalquilo que tiene 4-7 átomos de C;
Ar designa un carbociclo monocíclico o bicíclico aromático que tiene 5-10 átomos de C, que puede estar monosustituido o disustituido con al menos un sustituyente seleccionado del grupo de Hal, A, OY, COOH y CN;
Hal designa F, CI, Br o I;
m designa 0, 1 o 2;
p designa 1 o 2; y
q designa 0 o 1;
y/o una sal fisiológicamente aceptable de los mismos.
8. El medicamento según la reivindicación 1, que comprende un compuesto seleccionado del grupo de:
Figure imgf000076_0001
Figure imgf000077_0001
Figure imgf000078_0001
Figure imgf000079_0001
Figure imgf000080_0001
Figure imgf000081_0001
Figure imgf000082_0001
Figure imgf000083_0001
y/o una sal fisiológicamente aceptable de los mismos.
9. Un proceso para la fabricación del medicamento según la reivindicación 1 que comprende las etapas de: (a) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (II)
Figure imgf000084_0001
en la que R7 designa Hal, H or OH; y
X1, W, R1, R2 y L tienen el significado definido anteriormente en la reivindicación 1,
con un compuesto de fórmula (III)
Figure imgf000084_0002
en la que X2, R3, R4, R5 y m tienen el significado definido anteriormente en la reivindicación 1,
procurando el compuesto de fórmula (I)
Figure imgf000084_0003
en la que X1, X2, W, R1 a R5, L y m tienen el significado definido anteriormente en la reivindicación 1;
y opcionalmente
(b) convertir el compuesto de fórmula (I), en la que R2 es H, en otro compuesto de fórmula (I), en la que R2 tiene un significado distinto de H como se define en la reivindicación 1;
(c) convertir una base o ácido del compuesto de fórmula (I) en una sal fisiológicamente aceptable del mismo; y/o
(d) personalizar manifiestamente el compuesto de fórmula (I) o sal fisiológicamente aceptable como medicamento.
10. Un compuesto intermedio de subfórmula (IE)
Figure imgf000084_0004
en la que X1, X2, W, R1, R3 a R5, L y m tienen el significado como se define en la reivindicación 1;
a condición de que se excluya 5-pirrolidin-1 -ilmetiltiazol-2-ilamina.
11. Una composición farmacéutica que comprende como ingrediente activo el medicamento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 junto con coadyuvantes y/o excipientes farmacéuticamente tolerables, opcionalmente en combinación con uno o más de otros ingredientes activos.
12. Un medicamento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para uso en el tratamiento profiláctico o terapéutico y/o la monitorización de una afección seleccionada del grupo de enfermedades neurodegenerativas y cáncer.
13. El medicamento para uso según la reivindicación 12, en el que la afección se selecciona del grupo de enfermedad de Alzheimer, esclerosis lateral amiotrófica (ELA), degeneración corticobasal (DCB), demencia frontotemporal con parkinsonismo ligada al cromosoma 17 (FTDP-17), enfermedad de Niemann-Pick (tipo C), complejo de parkinsonismo-demencia de Guam, enfermedad de Pick (EPi), parálisis supranuclear progresiva (PSP) y enfermedad de Parkinson, preferiblemente enfermedad de Alzheimer.
14. El medicamento para uso según la reivindicación 12, en el que la afección es una tauopatía.
15. Un método para inhibir una glicosidasa, en el que se pone en contacto un sistema que expresa la glicosidasa con un compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y/o una sal fisiológicamente aceptable del mismo en condiciones in vitro de tal modo que se inhiba la glicosidasa.
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