TWI669302B - 5-甲基-1,3,4-<img align="absmiddle" height="18px" width="27px" file="d10999.TIF" alt="其他非圖式 ed10999.png" img-content="tif" orientation="portrait" inline="yes" giffile="ed10999.png"></img>二唑-2-基化合物 - Google Patents

Abstract

本發明提供一種式I化合物：

Description

5-甲基-1,3,4-㗁二唑-2-基化合物

本發明係關於新穎5-甲基-1,3,4-㗁二唑-2-基化合物、關於包含該等化合物之醫藥組合物、關於使用該等化合物治療生理病症之方法且關於用於合成該等化合物之中間物及方法。

本發明屬於治療阿茲海默氏病(Alzheimer's disease)、進行性核上麻痹(PSP)及包括統稱為tau蛋白病之tau介導之神經退化(tau-mediated neurodegeneration)的其他疾病及病症的領域。

阿茲海默氏病為影響全世界數百萬患者之破壞性神經退化性病症。鑒於市場上當前批准之藥劑僅向患者提供短暫症狀性利益，在治療阿茲海默氏病中存在顯著未滿足之需求。

微管相關蛋白tau寡聚合成諸如配對螺旋絲(paired helical filament；PHF)及直絲或絞絲之絲狀結構引起神經原纖維纏結(NFT)及神經纖維網線(NT)，為阿茲海默氏病及其他tau蛋白病之定義性病理學特性中之一種。已發現患有阿茲海默氏病之個人大腦中的NFT數目與疾病之嚴重程度密切相關，此表明tau在神經元功能障礙及神經退化中具有關鍵作用(Nelson 等人,J Neuropathol Exp Neurol . ,71 (5), 362-381(2012))。已展示tau病理與PSP中之疾病持續時間相關；具有更多種侵襲性疾病病程的情況比具有更慢發展的情況具有更高的tau負擔。(Williams 等人,Brain ,130 , 1566-76 (2007))。

近期研究(Yuzwa 等人,Nat Chem Biol ,4 (8), 483-490 (2008))支持O - GlcNAc 酶(OGA)抑制劑限制tau過磷酸化且聚集至病理性tau中以用於治療阿茲海默氏病及相關tau介導之神經退化病症的治療潛能。特定言之，OGA抑制劑Thiamet-G與減緩JNPL3 tau小鼠模型中之運動神經元損耗(Yuzwa 等人,Nat Chem Biol , 8 , 393-399 (2012))且與減少Tg4510 tau小鼠模型中之tau病理及營養不良性神經突(Graham 等人,Neuropharmacology ,79 , 307-313 (2014))有關。因此，OGA抑制劑公認為減少tau之過磷酸化病理性形成之聚集的有效治療性途徑。

美國專利案第9,120,781號揭示具有OGA抑制活性且進一步揭示為有用於治療與OGA不足或過度表現及/或2-乙醯胺基-2-去氧-5ß-D-葡萄哌喃糖苷(O - GlcNAc )聚積或不足有關之疾病及病症的六氫苯并㗁唑及六氫苯并噻唑衍生物。另外，US2016/0031871揭示用於治療阿茲海默氏病之某些糖苷酶抑制劑。

需要作為大腦滲透劑之OGA抑制劑以提供對諸如阿茲海默氏病及PSP之tau介導之神經退化病症的治療。本發明提供作為OGA抑制劑之某些新穎化合物。

因此，本發明提供式I化合物：式I 或其醫藥學上可接受之鹽。

另外，本發明提供一種式Ia化合物：式Ia 或其醫藥學上可接受之鹽。

本發明亦提供一種治療需要此治療之患者之阿茲海默氏病的方法，其包含向該患者投與有效量的式I或Ia之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。

本發明進一步提供一種治療需要此治療之患者之輕度認知障礙向阿茲海默氏病之發展的方法，其包含向該患者投與有效量的式I或Ia之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。

本發明亦提供一種用於治療需要此治療之患者之進行性核上麻痹的方法，其包含向該患者投與有效量的式I或Ia之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。本發明亦提供一種用於治療患者之tau介導之神經退化病症的方法，其包含向需要此治療之患者投與有效量的式I或Ia之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。

此外，本發明提供一種式I或Ia之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於療法中，特定而言用於治療阿茲海默氏病或用於預防輕度認知障礙向阿茲海默氏病之發展。另外，本發明提供一種式I或Ia之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療進行性核上麻痹。本發明亦提供一種式I或Ia之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療tau介導之神經退化病症。

甚至此外，本發明提供一種式I或Ia之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療阿茲海默氏病或供預防輕度認知障礙向阿茲海默氏病之發展用的藥劑。另外，本發明提供式I或Ia之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療進行性核上麻痹用之藥劑。本發明亦提供式I或Ia之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療tau介導之神經退化病症用之藥劑。

本發明進一步提供一種醫藥組合物，其包含式I或Ia之化合物或其醫藥學上可接受之鹽以及一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。本發明進一步提供一種用於製備醫藥組合物之方法，其包含將式I或Ia之化合物或其醫藥學上可接受之鹽與一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑摻合。本發明亦涵蓋用於合成式I及Ia之化合物的新穎中間物及方法。舉例而言，本發明進一步提供以下式IIIa之中間化合物：其中Pg為適合保護基。適合保護基包括羧酸第三丁酯以及類似物。

本發明亦提供式IIa之中間化合物：。

輕度認知障礙基於臨床表現及展現輕度認知障礙之患者隨時間向阿茲海默氏癡呆症之進展經定義為與阿茲海默氏病有關之癡呆的潛在前驅階段。術語「預防輕度認知障礙向阿茲海默氏病之發展」包括抑制、減緩、遏止或逆轉患者的輕度認知障礙向阿茲海默氏病之發展。

如本文中所使用，術語「治療」或「以治療」包括抑制、減緩、遏止或逆轉現有症狀或病症之發展或嚴重程度。

如本文中所使用，術語「患者」係指人類。

如本文中所使用，術語「有效量」係指當向患者投與單一或多種劑量時，在診斷或治療下於患者中提供所要效果之本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的量或劑量。

有效量可容易地由熟習此項技術者藉由使用已知技術且藉由在類似情況下獲得的觀測結果來判定。在判定用於患者之有效量時，考慮多種因素，其包括但不限於：患者之物種；其體型、年齡及一般健康狀況；所涉及之特定疾病或病症；疾病或病症之涉及程度或嚴重程度；個體患者之反應；所投與之特定化合物；投與模式；所投與之製劑的生物可用性特徵；所選擇之劑量方案；伴隨藥療之用途；以及其他相關情況。

本發明之化合物在約0.1至約15 mg/kg體重之範圍內的每日劑量下有效。在一些情況下，低於前述範圍之下限值的劑量可完全足夠，同時在其他情況下，在可接受副作用之情況下仍可採用較大劑量，且因此上文劑量範圍並不意欲以任何方式限制本發明之範疇。

本發明之化合物較佳調配為以任何使得化合物具有生物可用性之途徑投與的醫藥組合物，該途徑包括口服及經皮途徑。最佳地，該等組合物用於經口投與。此等醫藥組合物及其製備方法在此項技術中已熟知(參見例如，Remington: The Science and Practice of Pharmacy, L.V. Allen, 編者, 第22版, Pharmaceutical Press, 2012)。

式I及Ia之化合物或其醫藥學上可接受之鹽特別適用於本發明之治療方法，但較佳為某些組態。以下段落描述該等較佳組態。應瞭解此等偏好可適用於治療方法及本發明化合物。

本發明之化合物包括：式Ia式Ib式Ic式Id， 及其醫藥學上可接受之鹽。

其中哌啶環上之甲基及氧取代基呈順式或反式組態的式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽包括於本發明之範疇內，且較佳為順式組態。舉例而言，一般熟習此項技術者將瞭解，位置2處之甲基相對於位置4處之氧呈順式組態，如下文流程A中所展示：流程 A 式Ia式Ic

另外，一般熟習此項技術者應瞭解，位置2處之甲基相對於位置4處之氧呈反式組態，如下文流程B中所示：流程 B 式Ib式Id

更佳為其中哌啶環之位置2處之對掌性中心呈S-組態的化合物。儘管本發明涵蓋所有獨立對映異構體及非對映異構體，以及該等化合物之對映異構體之混合物，包括外消旋體，但尤佳為具有如下所列舉之絕對組態的化合物： N-[4-氟-5-[[(2S,4S)-2-甲基-4-[(5-甲基-1,3,4-㗁二唑-2-基)甲氧基]-1-哌啶基]甲基]噻唑-2-基]乙醯胺及其醫藥學上可接受之鹽，其中更佳為游離鹼N-[4-氟-5-[[(2S,4S)-2-甲基-4-[(5-甲基-1,3,4-㗁二唑-2-基)甲氧基]-1-哌啶基]甲基]噻唑-2-基]乙醯胺。

尤佳為N-[4-氟-5-[[(2S,4S)-2-甲基-4-[(5-甲基-1,3,4-㗁二唑-2-基)甲氧基]-1-哌啶基]甲基]噻唑-2-基]乙醯胺之結晶形式。更佳為特徵在於在繞射角2θ為13.5°之X射線粉末繞射光譜中之峰值以及選自由以下組成之群的一或多個峰值：5.8°、13.0°、14.3°、17.5°、20.4°、21.4°及22.2° (其中繞射角公差為0.2度)的N-[4-氟-5-[[(2S,4S)-2-甲基-4-[(5-甲基-1,3,4-㗁二唑-2-基)甲氧基]-1-哌啶基]甲基]噻唑-2-基]乙醯胺之結晶形式。

個別異構體、對映異構體或非對映異構體可由一般熟習此項技術者在合成本發明之化合物中之任何適宜點處藉由諸如選擇性結晶技術或對掌性層析之方法來分離或分解(參見例如 J. Jacques, 等人, 「Enantiomers , Racemates , and Resolutions 」, John Wiley and Sons, Inc., 1981, 及E.L. Eliel及S.H. Wilen,「Stereochemistry of Organic Compounds 」, Wiley-Interscience, 1994)。

可例如藉由在此項技術中熟知之標準條件下使本發明之化合物的適當游離鹼與適當的醫藥學上可接受之酸在適合溶劑中反應來形成本發明之化合物之醫藥學上可接受之鹽。此等鹽之形成為此項技術中所熟知及瞭解。參見例如，Gould, P.L., 「Salt selection for basic drugs」,International Journal of Pharmaceutics ,33 : 201-217 (1986)； Bastin, R.J., 等人, 「Salt Selection and Optimization Procedures for Pharmaceutical New Chemical Entities」,Organic Process Research and Development ,4 : 427-435 (2000)；及 Berge, S.M., 等人, 「Pharmaceutical Salts」,Journal of Pharmaceutical Sciences ,66 : 1-19, (1977)。

可藉由一般熟習此項技術者已知的各種程序來製備本發明之化合物或其鹽，其中一些在以下流程、製備方案及實例中加以說明。一般熟習此項技術者認識到，所描述之各途徑中之特定合成步驟可以不同方式組合或與不同流程之步驟結合以製備本發明之化合物或其鹽。以下流程中各步驟之產物可利用此項技術中熟知之常規方法回收，包括萃取、蒸發、沈澱、層析、過濾、濕磨及結晶。在以下流程中，除非另外指示，否則所有取代基均如先前所定義。試劑及起始材料為一般熟習此項技術者容易獲得的。在不限制本發明之範疇的情況下，提供以下流程、製備方案及實例以進一步說明本發明。另外，一般熟習此項技術者瞭解到，式Ia、Ib、Ic及Id之化合物可藉由使用可由熟習此項技術者製備之具有對應立體化學組態之起始材料來製備。舉例而言，以下流程利用具有與式Ia最終對應之組態的起始材料。

一般而言，式Ia化合物可由式IIa化合物製備(流程1)。更特定言之，在諸如三乙醯氧基硼氫化鈉之適合還原劑之存在下於適合溶劑中用N-(4-氟-5-甲醯基噻唑-2-基)乙醯胺還原性地烷基化式IIa化合物，以得到式Ia化合物。適合溶劑包括乙酸乙酯。可藉由化學技術中已知之方法以及以下製備方案及實例中所提供之方法來製備N-(4-氟-5-甲醯基噻唑-2-基)乙醯胺。

式IIa化合物可由其中Pg為適合胺保護基之式IIIa化合物製備。更特定言之，使其中Pg為羧酸第三丁酯(t-BOC)的式IIIa化合物在諸如二㗁烷或二氯甲烷之溶劑中與諸如氫氯酸或三氟乙酸之酸反應，以得到式IIa化合物。應瞭解，式IIa化合物可分離為游離鹼或對應於所利用之酸試劑的酸加成鹽。適合胺保護基在化學技術中已知且包括t-BOC及Cbz以及論述於T. W. Green, P. G. M. Wuts, 「Protective Groups in Organic Synthesis」 Wiley-Interscience, New York, 1999中之彼等者。

流程 1 其中Pg為適合胺保護基之式IIIa化合物可由式IVa化合物製備(流程2)。更特定言之，在諸如第三丁醇鈉之鹼之存在下使其中Pg為羧酸第三丁酯之式IVa化合物與2-(氯甲基)-5-甲基-1,3,4-㗁二唑反應，以得到式IIIa化合物。反應宜在諸如乙腈或二甲基甲醯胺之溶劑中進行。

可藉由在氫化或酶促條件下還原式Va化合物來製備其中Pg為羧酸第三丁酯的式IVa化合物。更特定言之，使式Va化合物與諸如三(第二丁基)硼氫化鋰之氫化還原劑在諸如四氫呋喃之溶劑中反應，以得到其中Pg為羧酸第三丁酯的式IVa化合物。替代地，使式Va化合物與諸如酮還原酶之酶促還原劑在諸如DMSO之溶劑中反應，以得到其中Pg為羧酸第三丁酯的式IV化合物。可藉由化學技術中已知之方法來製備其中Pg為適合胺保護基的式Va化合物，該等方法包括描述於WO 2004/094380 A1中之彼等方法。

流程 2 在展示於流程3中之一連串步驟中，可替代地由式VIa化合物來製備其中Pg為適合胺保護基的式IIIa化合物。更特定言之，在諸如二異丙基乙胺之鹼之存在下使其中Pg為羧酸第三丁酯的式VIa化合物與對甲苯磺醯氯反應，以得到式IIIa化合物。反應宜在諸如乙腈之溶劑中進行。可藉由在1,1'-羰基二咪唑之存在下使式VIIa化合物與乙醯肼反應來製備其中Pg為羧酸第三丁酯的式VIa化合物。反應宜在諸如四氫呋喃之溶劑中進行。可藉由首先使式IVa化合物與2-氯-1-嗎啉基-乙酮及諸如第三丁醇鈉之鹼在諸如乙腈之溶劑中反應來製備其中Pg為羧酸第三丁酯的式VIIa化合物。接著在諸如2-丙醇之溶劑中用諸如氫氧化鈉水溶液之鹼水溶液水解式IVa化合物之所得嗎啉基加成物，以得到其中Pg為羧酸第三丁酯的式VIIa化合物。

流程 3

製備 1 合成N-(4-氟-5-甲醯基-噻唑-2-基)胺基甲酸第三丁酯。在室溫下，將氟化銫(227 g，1480 mmol)添加至N-(4-氯-5-甲醯基-噻唑-2-基)胺基甲酸第三丁酯(38.8 g，148 mmol；用於製備N-(4-氯-5-甲醯基-噻唑-2-基)胺基甲酸第三丁酯，參見例如N. Masuda, 等人,Bioorg Med Chem ,12 , 6171-6182 (2004))於DMSO (776 mL)中之溶液中。在具有133℃之內部溫度的145℃加熱器中攪拌反應混合物48小時，隨後在冰-水浴中冷卻混合物。向混合物中添加飽和碳酸氫鈉水溶液(500 mL)、鹽水(500 mL)及乙酸乙酯(500 mL)。在室溫下攪拌混合物10分鐘，隨後經由矽藻土過濾，用乙酸乙酯(500 mL)洗滌。將濾過物轉移至分液漏斗且分離各層，接著用乙酸乙酯(1 L)萃取水層。用鹽水(1 L)洗滌經合併有機物，接著用乙酸乙酯(300 mL)萃取鹽水層。使經合併有機物經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮，以得到殘餘物。使殘餘物通過矽膠墊(330 g)，用含5%乙酸乙酯之二氯甲烷(1.5 L)溶離，且濃縮濾過物，以得到殘餘物(24.2 g，66%產率，基於藉由¹ H NMR量測之56%純度假定100%純度或37%產率)。

將殘餘物(32.7 g合併批料，133 mmol)溶解於異丙醇(303 mL)中，過濾且接著藉由SFC (超臨界流體層析法)，使用IC管柱(纖維素多醣衍生物：參(3,5-二氯苯基胺基甲酸酯)，30 × 250 mm，5u)且以180 毫升/分鐘注入3 mL 10% IPA(無添加劑)來純化。濃縮含產物溶離份，以得到標題化合物(16.1 g，49%)。MS m/z 247.0 (M+H)。

製備 2 合成N-(4-氟-5-甲醯基-噻唑-2-基)乙醯胺。在夾套容器中，在室溫下將溴化鋅(91.9 g，408 mmol)一次性添加至N-(4-氟-5-甲醯基-噻唑-2-基)胺基甲酸第三丁酯(33.5 g，136 mmol)及二氯甲烷(503 mL)之混合物中。在37℃之內部溫度下攪拌反應混合物隔夜，接著將夾套溫度設定成-10℃且歷經15分鐘逐滴添加四氫呋喃(111 mL)，保持內部溫度低於6℃。接著將夾套溫度設定成-30℃且歷經5分鐘逐滴添加吡啶(110 mL，1360 mmol)，保持內部溫度低於5℃。將夾套溫度設定成0℃且歷經5分鐘逐滴添加乙酸酐(116 mL，1220 mmol)。在37℃之內部溫度下攪拌反應混合物隔夜，接著冷卻至室溫且通過矽藻土短墊，用四氫呋喃(500 mL)溶離。將濾過物轉移至燒瓶中且濃縮混合物，以得到由甲苯(50 mL)濃縮之殘餘物。向殘餘物中添加單水合檸檬酸(57.2 g，272 mmol)於水(400 mL)及2-甲基四氫呋喃(400 mL)中之溶液，且在40℃下攪拌混合物5分鐘，接著通過矽藻土短墊，用2-甲基四氫呋喃(100 mL)溶離。將濾過物轉移至分液漏斗且分離各層。用2-甲基四氫呋喃(2×250 mL)萃取水層且用水(500 mL)稀釋經合併有機物。歷經5分鐘向混合物中分批添加固體碳酸氫鈉且攪拌直至停止氣體逸出。將混合物轉移至分液漏斗且分離各層，接著用2-甲基四氫呋喃(200 mL及100 mL)萃取水層。使經合併有機物經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮，以得到用2-甲基四氫呋喃(100 mL)稀釋之殘餘物，且使混合物通過矽膠短墊(250 g)，用2-甲基四氫呋喃(2.5 L)溶離。濃縮濾過物，以得到懸浮於二氯甲烷與庚烷的1:1混合物(202 mL)中之殘餘物。在室溫下攪拌混合物30分鐘且接著過濾。在真空下在40℃下乾燥經過濾之固體2小時，以得到標題化合物(18.0 g，70%)。MS m/z 189.0 (M+H)。

替代合成 N -( 4 - 氟 - 5 - 甲醯基 - 噻唑 - 2 - 基 ) 乙醯胺。 在惰性氛圍下，溶解氟化四甲基銨四水合物(100 kg，605 mol)，隨後溶解異丙醇(453-459 kg)，且在＜70℃溫度下在減壓下濃縮至體積(150-180 L)。添加異丙醇(453-459 kg)且在減壓下濃縮至150-180 L。重複直至混合物具有＜0.2%之KF。

添加二甲基甲醯胺(546-552 kg)，加熱至90℃，且在減壓下濃縮至150 L。回添加二甲基甲醯胺(453-459 kg)且在減壓下濃縮至150 L。重複直至混合物具有＜60 ppm之殘餘異丙醇限值。添加N-(4-氯-5-甲醯噻唑-2-基)乙醯胺(15 kg，73.3 mol)及二甲基甲醯胺(149 kg)，並加熱至100℃持續2-4小時。將溫度調節至20-25℃，隨後添加2-甲基四氫呋喃(248 kg)。添加25% wt氯化銨水溶液(458 kg)且攪拌30分鐘。分離各層且用額外的2-甲基四氫呋喃(248 kg)洗滌水層。分離各層且用25% wt氯化銨水溶液(2×458 kg)洗滌經合併有機層並攪拌30分鐘。

添加乙酸乙酯(180 kg)且將反應混合物加熱至回流1小時，以獲得澄清溶液。在減壓下在＜55℃下將混合物濃縮至約30 L之體積。添加乙酸乙酯(54 kg)且在減壓下在＜55℃下將混合物濃縮至約30 L之體積。在20-25℃下，在氮氣下，攪拌混合物2小時。藉由過濾收集固體且在真空下在55-65℃下乾燥10-12小時，以獲得標題化合物(4.5 kg，82.5%純度)。

製備 3 合成(2S,4S)-4-羥基-2-甲基-哌啶-1-羧酸第三丁酯。向燒瓶中添加(2S)-2-甲基-4-側氧基-哌啶-1-羧酸第三丁酯(50 g，234.44 mmol)及四氫呋喃(500 mL)。在氮氣氛圍下將混合物冷卻至-65℃且歷經45分鐘逐滴添加三(第二丁基)硼氫化鋰(304.77 mL，304.77 mmol；1 M於四氫呋喃中)，保持內部溫度低於-60℃。在室溫下攪拌反應混合物1小時，接著冷卻至-30℃。向反應混合物中添加水(25.34 mL)與四氫呋喃(100.16 mL)的混合物，保持內部溫度低於-20℃。歷經1小時逐滴添加過氧化氫水(118.88 mL，1.17 mol，30 wt/wt%)於水中之(126.70 mL)水溶液，保持內部溫度低於10℃。向混合物中添加氯化氫水溶液(46.89 mL，234.44 mmol，5 M)及甲基第三丁基醚(1.00 L)，且將混合物升溫至室溫。分離各層且在室溫下用偏亞硫酸氫鈉222.84 g，1.17 mol)於水(500 mL)中之溶液攪拌有機相10分鐘。分離各層且使有機相經硫酸鎂乾燥且濃縮。藉由急驟層析法(0-50%甲基第三丁基醚/異己烷，矽膠)來純化殘餘物，且組合並濃縮含產物溶離份，以得到標題化合物(40.4 g，78%)。ES/MS (m/e) 238 (M+Na)。

替代合成(2S,4S)-4-羥基-2-甲基-哌啶-1-羧酸第三丁酯。在20℃下向含有去離子水(460 L)及磷酸二氫鉀(6.5 kg，0.41當量)的搪玻璃反應器中裝填DMSO (27.4 kg，1.0體積)及D-(+)-葡萄糖單水合物(28.9 kg，1.25當量)。將內部溫度調節至30℃且藉由添加氫氧化鈉水溶液(8%，15 L，0.28當量)將反應物之pH調節至6.9。使反應器裝填有(2S)-2-甲基-4-側氧基-哌啶-1-羧酸第三丁酯(24.9 kg，1.0當量(99.1% ee))，且在30℃下攪動混合物15 min。將酮還原酶(KRED-130，250 g，1% w/w)、葡萄糖去氫酶(GDH-101，250 g，1% w/w)及NADP鈉鹽(63 g，0.25% w/w)經由開放口直接裝填至反應混合物中。將混合物保持在30℃溫度且經由添加8% NaHCO₃ 水溶液保持在pH 7.0 ± 0.2下。在攪拌16.5 h之後(99.5%轉化率)，向反應中裝填Celite™ (12.5 kg，50 w/w%)及甲苯(125 L，5體積)。在30℃下攪拌30 min之後，經由串聯式GAF過濾器(4罩)歷經1 h之時段將混合物轉移至另一個2000 L反應器中。使混合物靜置30 min且不攪拌，分離各層，且用甲苯(2 × 125 L)反萃取水層。過濾(串聯式GAF過濾器)經合併有機層，且在25℃下用氯化鈉水溶液(25%，125 L，5體積)洗滌甲苯混合物。使所得甲苯溶液共沸乾燥(部分真空，內部溫度＜60℃)成0.10 w/w%水且冷卻至20℃。在正氮氣壓力下經由濾筒過濾器使混合物濾出反應器至潔淨圓筒中。接著將反應混合物自圓筒轉移至500 L搪玻璃容器中且在真空(＜60℃)下濃縮至56 L (2.25 vol)之目標殘餘體積。在40℃下裝填正庚烷(169 kg，10體積)，且使混合物接種有25 g (2S,4S)-4-羥基-2-甲基-哌啶-1-羧酸第三丁酯。用額外的正庚烷(25 L，1 vol)稀釋所得濃稠漿液且歷經4小時冷卻至16℃。經由離心分離產物，用正庚烷(每轉25 L；必要4次旋轉)洗滌，在30℃下在盤式乾燥器中乾燥11 h之後產生20.3 kg (81%；＞99.9% ee)。ES/MS (m/e) 238 (M+Na)。

製備 4 合成2-[[(2S,4S)-1-第三丁氧基羰基-2-甲基-4-哌啶基]氧基]乙酸。在室溫下將2-氯-1-嗎啉基-乙酮(59.4 g，363 mmol)添加至(2S,4S)-4-羥基-2-甲基-哌啶-1-羧酸第三丁酯(52.1 g，242 mmol)於乙腈(521 mL)中之溶液中。在冰-水浴中攪拌反應混合物且歷經10分鐘逐份添加第三丁醇鈉(48.0 g，484 mmol)，保持內部溫度低於15℃。在室溫下攪拌反應混合物2小時，接著在冰-水浴冷卻之情況下歷經5分鐘將其添加至含有飽和氯化銨水溶液(250 mL)及水(250 mL)之另一個燒瓶中，在添加期間保持內部溫度低於15℃。將混合物升溫至室溫且用甲基第三丁基醚(2 × 500 mL)萃取，接著用鹽水(300 mL)洗滌經合併有機物。經合併有機物接著經硫酸鈉乾燥，經過濾且濃縮，以得到殘餘物，該殘餘物在室溫下與2-丙醇(414 mL)及2 M氫氧化鈉水溶液(303 mL，605 mmol)組合。在具有內部溫度為45℃之47℃加熱器中攪拌反應混合物隔夜。將反應混合物冷卻至室溫且濃縮以移除2-丙醇，接著用水(50 mL)稀釋混合物。用甲基第三丁基醚(250 mL)萃取混合物，接著在冰-水浴中冷卻水層並用乙酸(55.6 mL，968 mmol)酸化。含水混合物用乙酸乙酯(4 × 250 mL)萃取，接著合併有機物經硫酸鈉乾燥，經過濾且濃縮以得到殘餘物，該殘餘物自甲苯(3 × 100 mL)濃縮，以得到標題化合物(79.8 g)。MS m/z 272.0 (M−H)。

製備 5 合成(2S,4S)-4-[2-(2-乙醯肼基)-2-側氧基-乙氧基]-2-甲基-哌啶-1-羧酸第三丁酯。將四氫呋喃(798 mL)添加至含有2-[[(2S,4S)-1-第三丁氧基羰基-2-甲基-4-哌啶基]氧基]乙酸(79.8 g，224 mmol，76.6質量%)之燒瓶中且在冰-水浴中攪拌混合物，其中內部溫度為5℃。向混合物中一次性添加1,1'-羰基二咪唑(43.5 g，268 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物2小時。添加另外一部分1,1'-羰基二咪唑(7.25 g，44.7 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物30分鐘。將反應混合物浸沒在冰-水浴中且一次性添加乙醯肼(21.5 g，291 mmol)，接著在室溫下攪拌反應混合物隔夜。在冰-水浴中攪拌反應混合物且歷經2分鐘添加飽和碳酸氫鈉水溶液(500 mL)，保持內部溫度低於15℃。混合物用水(300 mL)稀釋且接著經濃縮以移除四氫呋喃。用2-甲基四氫呋喃(4 × 500 mL)萃取含水混合物。經合併有機物經硫酸鈉乾燥，經過濾且濃縮，以得到與乙酸乙酯(200 mL)及庚烷(200 mL)組合之殘餘物。在室溫下攪拌混合物30分鐘，接著用庚烷(200 mL)稀釋且在室溫下劇烈攪拌混合物額外30分鐘，接著過濾。在真空下在40℃下乾燥經過濾固體2小時，以得到第一批標題化合物(71.5 g)。再過濾濾過物且在氮氣流下在室溫下乾燥經過濾固體15分鐘，以得到第二批標題化合物(1.98 g)。大部分第一批產物(71.1 g，216 mmol，未知純度)及第二批產物(1.97 g，5.98 mmol，未知純度)與第三丁基甲基醚(731 mL)組合且在內部溫度40℃下在45℃加熱器中攪拌混合物30分鐘，接著在攪拌下歷經1小時冷卻至室溫且過濾混合物。在真空下在室溫下在氮氣流下乾燥經過濾固體30分鐘，以得到標題化合物(53.7 g)。MS m/z 352.0 (M+Na)。

製備 6 合成(2S,4S)-2-甲基-4-[(5-甲基-1,3,4-㗁二唑-2-基)甲氧基]哌啶-1-羧酸第三丁酯。在氮氣下在室溫下向(2S,4S)-4-羥基-2-甲基-哌啶-1-羧酸第三丁酯(0.5 g，2 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)中之溶液中逐份添加第三丁醇鈉(0.92 g，9.28 mmol)。在室溫下攪拌所得反應混合物40 min。將反應混合物冷卻至0℃且添加2-(氯甲基)-5-甲基-1,3,4-㗁二唑(0.416 g，3.14 mmol)。在室溫下攪拌所得溶液隔夜。在真空中濃縮反應混合物且用水稀釋殘餘物。用3份乙酸乙酯萃取混合物。經合併有機萃取物經硫酸鎂乾燥，經過濾且在減壓下濃縮，以得到原油。

將殘餘物溶解於二甲亞碸(至2 ml之總體積)中，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10微米 30 × 100 mm C-18) (CH₃ CN及具有10 mM碳酸氫銨之水，用氫氧化銨調節至pH 9，15%至100% CH₃ CN，在50 ml/min下歷經7 min) (1次注射) (204 nm)純化，以得到標題化合物(0.028 g，0.089 mmol，4%)。MS m/z 312.0 (M+H)。

替代 合成 (2S,4S)-2- 甲基 -4-[(5- 甲基 -1,3,4- 㗁二唑 -2- 基 ) 甲氧基 ] 哌啶 -1- 羧酸第三丁酯。 向燒瓶中添加(2S,4S)-4-[2-(2-乙醯肼基)-2-側氧基-乙氧基]-2-甲基-哌啶-1-羧酸第三丁酯(53.7 g，163 mmol)及乙腈(537 mL)且在室溫下攪拌漿液。向混合物中一次性添加N,N-二異丙基乙胺(114 mL，652 mmol)且歷經5分鐘分三份添加對甲苯磺醯氯(77.7 g，408 mmol)，用水浴冷卻。在室溫下攪拌反應混合物隔夜，接著在冰-水浴中冷卻且歷經10分鐘逐滴添加N',N'-二甲基乙烷-1,2-二胺(21.8 g，245 mmol)，保持內部溫度低於15℃。在室溫下攪拌反應混合物30分鐘，接著在室溫下用飽和檸檬酸水溶液(50 mL)、乙酸乙酯(500 mL)及水(450 mL)稀釋。分離各層且用飽和檸檬酸水溶液(50 mL)及水(450 mL)之混合物洗滌有機層。用飽和碳酸氫鈉水溶液(500 mL)洗滌有機層且接著用乙酸乙酯(500 mL)萃取水層。經合併有機物經硫酸鈉乾燥，經過濾且濃縮，以得到殘餘物，該殘餘物穿過矽膠短墊(400 g)，用含25%乙酸乙酯之庚烷(2 × 500 mL溶離份)溶離且接著用乙酸乙酯(5×500 mL溶離份)溶離。濃縮含產物溶離份，以得到標題化合物(53.3 g)。MS m/z 312.2 (M+H)。

製備 7 合成5-甲基-5-[[(2S,4S)-2-甲基-4-哌啶基]氧基甲基]-1,3,4-㗁二唑2,2,2-三氟乙酸。在氮氣下向(2S,4S)-2-甲基-4-[(5-甲基-1,3,4-㗁二唑-2-基)甲氧基]哌啶-1-羧酸第三丁酯(0.0275 g，0.0883 mmol)於二氯甲烷(3 mL)中之溶液中添加三氟乙酸(0.035 mL，0.45 mmol)。在室溫下攪拌混合物隔夜。在減壓下濃縮混合物，得到標題化合物(0.04 g，84%)。MS m/z 212.0 (M+H)。

製備 8 合成2-甲基-5-[[(2S,4S)-2-甲基-4-哌啶基]氧基甲基]-1,3,4-㗁二唑。在室溫下向燒瓶中添加(2S,4S)-2-甲基-4-[(5-甲基-1,3,4-㗁二唑-2-基)甲氧基]哌啶-1-羧酸第三丁酯(52.9 g，170 mmol)及二氯甲烷(265 mL)。在5℃內部溫度下在冰-水浴中攪拌反應混合物且歷經5分鐘逐滴添加三氟乙酸(3500 mmol，265 mL)，保持內部溫度低於10℃。在室溫下攪拌反應混合物15分鐘，接著濃縮以得到殘餘物，用水(300 mL)及甲基第三丁基醚(300 mL)稀釋該殘餘物。分離各層且在冰-水浴中攪拌水層並用50%氫氧化鈉水溶液(20 mL)鹼化，在添加期間保持內部溫度低於10℃。用二氯甲烷(4×300 mL)萃取混合物且經合併有機物經硫酸鈉乾燥，經過濾且濃縮，以得到標題化合物(30.5 g)。MS m/z 212.2 (M+H)。

實例 1 合成N-[4-氟-5-[[(2S,4S)-2-甲基-4-[(5-甲基-1,3,4-㗁二唑-2-基)甲氧基]-1-哌啶基]甲基]噻唑-2-基]乙醯胺。在氮氣下向2-甲基-5-[[(2S,4S)-2-甲基-4-哌啶基]氧基甲基]-1,3,4-㗁二唑2,2,2-三氟乙酸(0.16 g，0.7 mmol)於乙酸乙酯(1 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(0.021 mL，0.12 mmol)並攪拌溶液5分鐘。添加N-(4-氟-5-甲醯基-噻唑-2-基)乙醯胺(0.04 g，0.122 mmol)並攪拌5分鐘，添加三乙醯氧基硼氫化鈉(0.055 g，0.25 mmol)且將反應混合物升溫至40℃並攪拌隔夜。在減壓下濃縮混合物，以得到棕色固體。

將殘餘物溶解於二甲亞碸(至1 ml之總體積)中，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10微米 30 × 100 mm C-18) (CH₃ CN及具有10 mM碳酸氫銨之水，用氫氧化銨調節至pH 9，15%至100% CH₃ CN，在100 ml/min下歷經12 min) (1次注射) (271/204 nm)純化，以得到標題化合物(0.007 g，14%)。MS m/z 384.2 (M+H).

替代合成結晶 N -[ 4 - 氟 - 5 -[[( 2S , 4S )- 2 - 甲基 - 4 -[( 5 - 甲基 - 1 , 3 , 4 - 㗁二唑 - 2 - 基 ) 甲氧基 ]- 1 - 哌啶基 ] 甲基 ] 噻唑 - 2 - 基 ] 乙醯胺。 在室溫下將三乙醯氧基硼氫化鈉(59.1 g，279 mmol)添加至2-甲基-5-[[(2S,4S)-2-甲基-4-哌啶基]氧基甲基]-1,3,4-㗁二唑(23.3 g，93.0 mmol)、乙酸乙酯(438 mL)及N,N-二異丙基乙胺(32.4 mL，186 mmol)之混合物中。在31℃加熱器中攪拌反應混合物15分鐘，其中內部溫度為30℃，接著歷經5分鐘逐份添加N-(4-氟-5-甲醯基-噻唑-2-基)乙醯胺(17.5 g，93.0 mmol)。在31℃加熱器中攪拌反應混合物隔夜，其中內部溫度為30℃，接著在冰-水浴中冷卻至內部溫度為5℃。歷經15分鐘向混合物中添加2 M鹽酸水溶液(140 mL)，保持內部溫度低於10℃。在室溫下攪拌混合物15分鐘，接著用水(50 mL)及乙酸乙酯(20 mL)稀釋且分離各層。用2M鹽酸水溶液(35 mL)於水(100 mL)中之混合物萃取有機層。在冰-水浴中攪拌經合併水層且歷經10分鐘逐滴添加50%氫氧化鈉水溶液(19.5 mL)，保持內部溫度低於10℃。混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)稀釋，且接著用2-甲基四氫呋喃(3×200 mL)萃取。經合併有機物經硫酸鈉乾燥，經過濾且濃縮，以得到殘餘物，該殘餘物藉由急驟層析法純化，用含0-15% 2-丙醇之二氯甲烷溶離。濃縮含產物溶離份以得到殘餘物，該殘餘物自庚烷(100 mL)濃縮。濃縮材料與含40%乙酸乙酯之庚烷(457 mL)組合且在50℃加熱器中攪拌混合物1小時，接著冷卻至室溫且過濾。在真空下在40℃下乾燥經過濾固體1小時，以得到第一批產物(22.9 g)。濃縮濾過物以得到殘餘物，該殘餘物與含40%乙酸乙酯之庚烷(50 mL)組合且在50℃加熱器中攪拌混合物30分鐘，接著冷卻至室溫且過濾。經過濾固體與含50%乙酸乙酯之庚烷(33 mL)組合且在50℃加熱器中攪拌混合物1小時，接著冷卻至室溫且過濾。在真空下在40℃下乾燥經過濾固體1小時，以得到第二批產物(2.50 g)。

包括第一批和第二批產物之批次組合(29.3 g，76.4 mmol)在室溫下與乙酸乙酯(117 mL)及庚烷(117 mL)組合。在51℃加熱器中在50℃內部溫度下攪拌混合物30分鐘，接著冷卻至室溫且過濾。在40℃下在真空下乾燥經過濾固體隔夜，以得到呈結晶固體形式之標題化合物(26.7 g)。MS m/z 384.0 (M+H), [α]_D ²⁰ = +39 ° (C=0.2, 甲醇)。

結晶 N -[ 4 - 氟 - 5 -[[( 2S , 4S )- 2 - 甲基 - 4 -[( 5 - 甲基 - 1 , 3 , 4 - 㗁二唑 - 2 - 基 ) 甲氧基 ]- 1 - 哌啶基 ] 甲基 ] 噻唑 - 2 - 基 ] 乙醯胺之 X 射線粉末繞射 ( XRPD ) 。 在60℃下將結晶N-[4-氟-5-[[(2S,4S)-2-甲基-4-[(5-甲基-1,3,4-㗁二唑-2-基)甲氧基]-1-哌啶基]甲基]噻唑-2-基]乙醯胺(218 mg)溶解於1.25 mL甲醇中5分鐘。在攪拌下將溶液冷卻至環境溫度20分鐘。藉由真空過濾分離所得固體。最終固體產物為163 mg或75%產率。

在配備有CuKa源(λ = 1.54060 Å)及Vantec偵測器且在35 kV及50 mA下操作之Bruker D4 Endeavor X射線粉末繞射儀上獲得結晶固體之XRD圖。在4°與40° 2θ之間掃描樣品，其中步長為0.0087° 2θ且掃描速率為0.5秒/步，且發散度為0.6 mm，固定抗散射為5.28 mm，且偵測器狹縫為9.5 mm。將乾燥粉末裝填於石英樣品固持器中且使用玻璃載片獲得光滑表面。結晶學技術中已熟知，對於任何既定結晶形式，由於由諸如晶體形態及習性之因素所產生之較佳定向，繞射峰之相對強度可能變化。在存在較佳定向之影響的情況下，峰強度改變，但多晶型物之特徵峰位置不變。參見例如官方2015年5月1日之The U. S. Pharmacopeia 38 - National Formulary 35第＜941＞章 Characterization of crystalline and partially crystalline solids by X-ray powder diffraction (XRPD)。此外，結晶學技術中亦熟知，對於任何既定結晶形態，角峰位置可略微變化。舉例而言，峰值位置可能由於分析樣品時之溫度或濕度變化、樣品置換或內標存在或不存在而發生偏移。在本發明之情況下，± 0.2 2θ之峰位置變化將考慮此等潛在變化而不妨礙明確鑑別指定結晶形式。結晶形式之確認可基於區別峰值(以°2θ為單位)、通常為更主要之峰值之任何獨特組合來進行。在環境溫度及相對濕度下所收集之結晶形式繞射圖基於8.85及26.77度2θ處之NIST 675標準峰值來調節。

因此，結晶N-[4-氟-5-[[(2S,4S)-2-甲基-4-[(5-甲基-1,3,4-㗁二唑-2-基)甲氧基]-1-哌啶基]甲基]噻唑-2-基]乙醯胺藉由XRD圖使用CuKa輻射表徵為具有如下表1中所描述之繞射峰(2θ值)。更特定言之，圖案較佳含有13.5°處之峰值以及選自由以下組成之群的一或多個峰值：5.8°、13.0°、14.3°、17.5°、20.4°、21.4°及22.2°，其中繞射角公差為0.2度。 表1：結晶N-[4-氟-5-[[(2S,4S)-2-甲基-4-[(5-甲基-1,3,4-㗁二唑-2-基)甲氧基]-1-哌啶基]甲基]噻唑-2-基]乙醯胺之X射線粉末繞射峰值。

活體外人類 OGA 酶分析 產生 OGA 蛋白 將編碼全長人類O-GlcNAc-β-N- 乙醯葡萄糖胺苷酶 (NM_012215)之核苷酸序列插入至具有N端聚組胺酸(HIS)標記之pFastBac1 (Invitrogen)載體中。桿狀病毒產生根據Bac-to-Bac桿狀病毒表現系統(Invitrogen)方案來進行。使用每公升培養物10 mLP1 病毒使Sf9細胞以1.5 × 10⁶ 個細胞/毫升經受感染且在28℃下培育48小時。短暫離心細胞，用PBS沖洗且在-80℃下儲存離心塊。

如下純化上文OGA蛋白(His-OGA)：在4℃下將4 L細胞溶解於含有50 mM pH為8.0的Tris、300 mM NaCl、10%甘油、10 mM咪唑、1 mM二硫蘇糖醇(DTT)、0.1% Triton^TM X-100、4片蛋白酶抑制劑(完全不含EDTA，Roche)之200 mL緩衝液中45 min。接著在4℃下使此細胞溶解產物以16500 rpm自旋40 min，且在4℃下使上澄液與6 mL Ni-NTA樹脂(鎳-氮基三乙酸)一起培育2小時。

接著將樹脂裝填至管柱上且用50 mM pH為8.0之Tris、300 mM NaCl、10%甘油、10 mM咪唑、0.1% Triton^TM X-100、1 mM DTT洗滌，隨後用50 mM pH為8.0之Tris、150 mM NaCl、10 mM咪唑、10%甘油、1 mM DTT洗滌。用50 mM pH為8.0之Tris、150 mM NaCl、300 mM咪唑、10%甘油、1 mM DTT溶離蛋白。將混合的含His-OGA之溶離份濃縮至6 ml且負載至Superdex75 (16/60)上。用50 mM pH為8.0之Tris、150 mM NaCl、10%甘油、2 mM DTT溶離蛋白。混合含His-OGA之溶離份且用BCA (布萊德福比色分析(Bradford Colorimetric Assay))量測蛋白濃度。

OGA 酶分析 OGA酶催化自核質蛋白移除O-GlcNAc 。為量測此活性，使用螢光素二-N-乙醯基-β-N-乙醯基-D-葡萄胺糖苷(FD - GlcNAc , Kim, Eun Ju; Kang, Dae Ook; Love, Dona C.; Hanover, John A. Carbohydrate Research (2006), 341(8), 971-982)作為受質，最終濃度為10 μM (在96孔分析格式中)或6.7 μM (在384孔分析格式中)。此螢光受質在由OGA裂解後具有螢光，從而可藉由在535 nm處偵測(在485 nm處激發)之螢光增加來量測酶活性。

製備分析緩衝液，以得到最終濃度為含50 mM H₂ NaPO₃ -HNa₂ PO₃ 、0.01%牛血清白蛋白及0.01% Triton^TM X-100之水，pH為7。最終酶濃度為3 nM (在96孔分析格式中)或3.24 nM (在384孔分析格式中)。兩種分析格式均產生基本上等效的結果。

使用十點濃度反應曲線將待測試之化合物稀釋於純二甲亞碸(DMSO)中。反應混合物中之最大化合物濃度為30 µM。在藉由添加受質開始反應之前，將在適當濃度下之化合物與OGA酶一起預培育30分鐘。在室溫下使反應進行60分鐘。接著，在不停止反應的情況下，讀取螢光。藉由繪製標準化資料與化合物之對數且使用四參數邏輯方程式擬合資料來計算IC₅₀ 值。

實例1之化合物基本上如上文所描述來測試且展現IC₅₀ 為2.13 nM ± 0.89 (n=5)。此資料證實實例1之化合物抑制活體外OGA酶活性。

用於量測對 OGA 酶活性之抑制的全細胞分析 細胞接種： 利用此項技術中已知之標準條件，生成經修飾用於誘導性表現P301S-1N4R形式的微管相關蛋白tau之TRex-293細胞且保持在生長培養基中，該生長培養基由DMEM高葡萄糖(Sigma# D5796)組成，補充有10%不含四環素之胎牛血清(FBS，Sigma F2442)、20 mM HEPES、5 μg/mL殺稻瘟菌素(Life Technologies# A11139-03)及200 μg/mL吉歐黴素(Life Technologies# R250-01)。對於實驗，將細胞以每孔10,000-14,000個細胞接種在塗佈有聚-D-離胺酸之Corning Biocoat (356663) 384孔盤中的生長培養基中，且在37℃/5% CO₂ 下在細胞培育箱中培育20-24 h。在不誘導Tau表現的情況下進行實驗。

化合物處理： 使用十點濃度反應曲線使待測試之化合物在純DMSO中連續稀釋1/3且在生長培養基中進一步稀釋。接種之後20-24 h，在生長培養基中用測試化合物處理細胞；最大化合物濃度為15 µM (0.15% DMSO)。最大抑制由15 μM Thiamet G之重複量測結果來界定且最小抑制由0.15% DMSO處理之重複量測結果來界定。使細胞返回至在37°C/5% CO₂ 下之培育箱中維持20-24小時。在各盤內一式兩份測試化合物。

免疫染色 ： 在化合物治療20-24小時之後，自分析盤移除培養基且將含25 μL之3.7%甲醛溶液(Sigma # F1635)之DPBS(Sigma # D8537；杜貝克磷酸鹽緩衝鹽水(Dulbecco's phosphate buffered saline))添加至各孔中並培育30分鐘。接著用DPBS洗滌細胞一次，且接著用0.1% Triton^TM X-100 (Sigma# T9284)滲透。30分鐘之後，用DPBS洗滌細胞兩次且接著將阻斷溶液(1% BSA/DPBS/0.1% Triton^TM X-100)添加至各孔中並培育60分鐘。移除阻斷溶液且將0.40-0.33 μg/mLO-GlcNAc 蛋白抗體(RL2純系，Thermo，MA1072)於阻斷溶液中之溶液添加至細胞中且使其在2-8℃下靜置隔夜。次日，用DPBS洗滌細胞兩次且將含二級抗體(2 ug/mL Alexa Fluor 488山羊抗小鼠IgG (Life Technologies# A11001))之DPBS添加至各孔中且使其在室溫下靜置90分鐘。移除二級抗體，用DPBS洗滌細胞兩次且將濃度分別為1 ug/mL及50 ug/mL之DAPI (Sigma # D9564；4',6-二甲脒基-2-苯吲哚，二乳酸鹽)及RNase (Sigma，R6513)於DPBS中之溶液添加至各孔中。密封盤，培育一個小時且在Acumen eX3 hci (TTP Labtech)上分析。除了初級抗體以外，所有上文所描述之培育及洗滌步驟均在室溫下進行。

分析及結果： 在使用488 nm及405 nm激發雷射及兩個發射濾波器FL2 (500-530 nm)及FL1 (420-490 nm)之Acumen eX3儀器上分析各盤。FL2濾波器為與O-GlcNAc 蛋白抗體(RL2純系)相對應之信號且FL1濾波器為與細胞核(DAPI)相對應之信號。總FL2/總FL1 (各孔之總螢光而無對象或種群選擇)比率用於資料分析。使資料標準化成如由15 µM Thiamet G處理標記之最大抑制及由0.15% DMSO處理達成之最小抑制。用非線性曲線擬合應用(4-參數對數等式)擬合資料且計算並報導IC₅₀ 值。

實例1之化合物基本上如上文所描述來測試且展現IC₅₀ 為22.6 nM ± 7.3 (n=3)。此資料證實實例1之化合物抑制細胞分析中之OGA酶活性。

Claims (16)

1. 一種下式之化合物：或其醫藥學上可接受之鹽。
2. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中位置2處之甲基相對於哌啶環上之位置4處之氧呈順式組態：
3. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中位置2處之甲基相對於哌啶環上之位置4處之氧呈反式組態：
4. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物為N-[4-氟-5-[[(2S,4S)-2-甲基-4-[(5-甲基-1,3,4-二唑-2-基)甲氧基]-1-哌啶基]甲基]噻唑-2-基]乙醯胺。
5. 如請求項4之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其為N-[4-氟-5-[[(2S,4S)-2-甲基-4-[(5-甲基-1,3,4-二唑-2-基)甲氧基]-1-哌啶基]甲基]噻唑-2-基]乙醯胺。
6. 如請求項5之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物為結晶體。
7. 如請求項6之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中在繞射角2θ為13.5°之X射線粉末繞射光譜中之峰值與選自由以下組成之群的一或多個峰值組合：5.8°、13.0°、14.3°、17.5°、20.4°、21.4°及22.2°，其中繞射角公差為0.2度。
8. 如請求項1至7中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於療法中。
9. 如請求項1至7中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療阿茲海默氏病(Alzheimer's disease)。
10. 如請求項1至7中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療輕度認知障礙向阿茲海默症之發展。
11. 如請求項1至7中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療進行性核上麻痹。
12. 一種如請求項1至7中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療阿茲海默氏病用之藥劑。
13. 一種如請求項1至7中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供預防輕度認知障礙向阿茲海默氏病之發展用的藥劑。
14. 一種如請求項1至7中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療進行性核上麻痹用之藥劑。
15. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至7中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽以及一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
16. 一種用於製備醫藥組合物之方法，其包含將如請求項1至7中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽與一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑摻合。