ES2701453T3 - Procedimiento para el diagnóstico o el prediagnóstico de una ß-amiloidopatía - Google Patents

Procedimiento para el diagnóstico o el prediagnóstico de una ß-amiloidopatía Download PDF

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Abstract

Procedimiento para el diagnóstico o el prediagnóstico de la ß-amiloidopatía demencia de Alzheimer, que se produce con una deposición de proteína cerebral y una actividad reducida del transportador ABCC1 cerebral, o para el establecimiento del riesgo de un sujeto de padecer tal enfermedad, ingiriendo ya el sujeto sustancias que se transportan a través del transportador ABCC1 cerebral, consistente en las siguientes etapas: a) determinación de la cantidad de la sustancia ingerida en muestras de líquido corporal del sujeto en un momento determinado; b) repetición de la determinación de la etapa a) en al menos otro momento posterior; c) comparación de las cantidades establecidas en las etapas a) y b) con cantidades que se habían definido en momentos iguales como características de sujetos que en el momento de la toma de muestra no mostraban signos clínicos de la ß-amiloidopatía demencia de Alzheimer, estando seleccionadas las sustancias que se transportan a través del transportador ABCC1 cerebral de antibióticos, virostáticos/medicamentos antivíricos, antialérgicos/antihistamínicos, medicamentos cardiovasculares, antidepresivos, anti-hiperuricémicos, citostáticos, vitaminas/análogos de vitaminas, antiflogísticos, antiepilépticos, hormonas/derivados de hormonas, leucotrienos, muestras fluorescentes, metabolitos acoplados a GSH, a sulfato o a glucurónido de sustancias naturales (producidas endógenamente), toxinas o de medicamentos seleccionados del grupo compuesto por 2,4- dinitrofenil-SG, bimano-SG, N-etilmaleimida-SG, doxorrubicina-SG, tiotepa-SG, ciclofosfamida-SG, melfalan-SG, clorambucilo-SG, ácido etacrínico-SG, metolaclor-SG, atrazina-SG, sulforafan-SG, aflatoxina B1-epóxido-SG, 1- óxido de 4-nitroquinolina-SG, As(SG)3, etopósido-gluc, 4-(metilnitrosamino)-1-(3-piridil)-1-butanol (NNAL)-3ß-O20 gluc, SN-38-gluc, 4-metilumbeliferil-ß-d-gluc, sulfato de 6-hidroxi-5,7-dimetil-2-metilamino-4-(3-piridilmetil)- benzotiazol (E3040S)-gluc, leucotrieno C4, prostaglandina A2-SG, 15-desoxi-Δ12,14 prostaglandina J2-SG, hidroxinonenal-SG, 17ß-estradiol-17-ß-d-gluc, glucuronosilbilirrubina, bis-lucuronosilbilirrubina, hiodesoxicolato-6- α-gluc, sulfato de estrona-3, sulfato de deshidroepiandrosterona, sulfatolitocolato.

Description

DESCRIPCIÓN
Procedimiento para el diagnóstico o el prediagnóstico de una p-amiloidopatía
La acumulación de proteínas o fragmentos de proteínas (péptidos) en el cerebro es una característica significativa de enfermedades neurodegenerativas relacionadas con la edad. En la demencia de Alzheimer (Alzheimer disease, AD) y la p-amiloidangiopatía cerebral (CAA), la agregación de péptidos p-amiloides (Ap) desencadena la enfermedad, no conociéndose el mecanismo subyacente. La Ap-proteostasis, es decir, el equilibrio de producción y degradación/evacuación por transporte mediante receptores o proteasas, está alterada en la AD y en la CAA. Sin embargo, hasta ahora no se ha prestado demasiada atención a la retirada de los péptidos Ap por transportadores celulares (transportadores ABC). Cirrito y col. han podido mostrar que el transportador ABCB1 (Pgp) interviene en el transporte de Ap a través de la barrera hematoencefálica y que una ablación de Pgp en la barrera hematoencefálica en un modelo de ratón de la demencia de Alzheimer intensifica la deposición de Ap (Cirrito y col. J. Clin. Invest.
2005, 115(11), 3285-3290). En la enfermedad de Parkinson (Morbus Parkinson) se acumula la proteína a-sinucleína que regula, en otras cosas, la liberación de dopamina en la sustancia negra. En el caso de la a-sinucleinopatía de la enfermedad de Parkinson se sabe que los transportadores ABC desempeñan un papel decisivo para el transporte (Kortekaas y col., Ann Neurol 2005, 57, 176-179). En este caso existen varias subfamilias A-G, que pueden transportador distintos sustratos de forma recíproca (metabolitos, medicamentos, péptidos, proteínas, iones) y que incluso están en disposición de reemplazarse mutuamente en la función de transporte (por ejemplo ABCB1 y ABCC1, Tao y col. Cancer Chemotherapy and Pharmacology, 64, 5, 961-969).
Mediante distintos modelos de ratón modificados mediante ingeniería genética se ha podido mostrar que el transportador ABC (el elemento estructural común de los transportadores ABC es un casete de unión a ATP y un poro de transporte) ABCC1 es un importante transportador de proteínas/péptidos, en particular transportador de Ap, que tiene efectos funcionales extraordinarios en la acumulación de proteína cerebral. ABCC1 es también un importante transportador de a-sinucleína.
A continuación se representan las investigaciones con respecto a la actividad del transportador a modo de ejemplo con el transporte de Ap.
Para la determinación de la actividad de ABCC1 in vivo, en ratones transgénicos que expresan APP se eliminó mediante ingeniería genética en cada caso el transportador ABCB1, ABCG2 o ABCC1 (ratones knockout). A este respecto se ha encontrado que:
i) la cantidad de Ap en los ratones en los que faltaba el transportador ABCC1 había aumentado 12 veces, ii) la pérdida del transportador ABCB1 conduce solo a un aumento de factor 3 y
iii) la pérdida de ABCG2 no tiene un efecto de acumulación de Ap.
Las sustancias que influyen de forma adecuada en el transportador ABCC1 para poder tratar así enfermedades neurodegenerativas, en particular p-amiloidopatías o a-sinucleopatías, son 2-(R2-tio)-10-[3-(4-R1-piperazin-1-il)propil]-10H-fenotiazinas de acuerdo con la Fórmula general I,
Figure imgf000002_0001
en la que los restos
R1 y R2 son iguales o distintos y son en cada caso independientemente entre sí grupos alquilo C1-C6, que presentan independientemente entre sí dado el caso otro sustituyente seleccionado del grupo alquilo, arilo, acilo (preferentemente acetilo), amino, nitro, sulfonilo, hidroxilo, alcoxi, ariloxi, ariltio, alquiltio y átomo de halógeno, presentando los respectivos grupos alquilo dado el caso al menos otro átomo de halógeno y el resto
R3 se encuentra en una de las posiciones 6-9 del sistema de anillo de fenotiazina y es un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo, arilo, acilo (preferentemente acetilo), amino, nitro, sulfonilo, hidroxilo, alcoxi, ariloxi, ariltio o alquiltio o un átomo de halógeno, presentando los respectivos grupos alquilo dado el caso al menos otro átomo de halógeno, o es un grupo NR4R5 u OR6, siendo R4, R5 y R6 iguales o distintos y estando seleccionados en cada caso independientemente entre sí de hidrógeno y grupo alquilo C1-C3 y el resto
R7 se encuentra en una de las posiciones 1, 2 o 4 del sistema de anillo de fenotiazina y es un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo, arilo, acilo (preferentemente acetilo), amino, nitro, sulfonilo, hidroxilo, alcoxi, ariloxi, ariltio o alquiltio o un átomo de halógeno, presentando los respectivos grupos alquilo dado el caso al menos otro átomo de halógeno, o es un grupo NR8R9 u OR10, siendo R8 , R9 y R10 iguales o distintos y estando seleccionados en cada caso independientemente entre sí de hidrógeno y grupo alquilo C1-C3.
Tanto en las a-sinucleinopatías como en las p-amiloidopatías existe una necesidad de posibilidades de detectar o diagnosticar o prediagnosticar estas enfermedades.
Por tanto, el objetivo de la invención era facilitar un procedimiento con el que se pudiese diagnosticar o prediagnosticar la p-amiloidopatía demencia de Alzheimer. Este objetivo se resuelve con un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1. Se desprenden formas de realización preferentes de las reivindicaciones dependientes. En otras palabras, el objetivo se resuelve mediante un procedimiento para el diagnóstico o el prediagnóstico de la p-amiloidopatía demencia de Alzheimer o para el establecimiento del riesgo de un sujeto de enfermar por esta enfermedad, ingiriendo ya el sujeto sustancias que se transportan a través del transportador ABCC1 cerebral, consistente en las siguientes etapas:
a) determinación de la cantidad de la sustancia ingerida en muestras de líquido corporal del sujeto en un momento determinado,
b) repetición de la determinación de la etapa a) en al menos otro momento posterior;
c) comparación de las cantidades establecidas en las etapas a) y b) con cantidades que se habían definido en momentos iguales como características de sujetos que en el momento de la toma de muestra no mostraban signos clínicos de la p-amiloidopatía demencia de Alzheimer, estando seleccionadas las sustancias que se transportan a través del transportador ABCC1 cerebral de antibióticos, virostáticos/medicamentos antivíricos, antialérgicos/antihistamínicos, medicamentos cardiovasculares, antidepresivos, anti-hiperuricémicos, citostáticos, vitaminas/análogos de vitaminas, antiflogísticos, antiepilépticos, hormonas/derivados de hormonas, leucotrienos, muestras fluorescentes, metabolitos acoplados a GSH, sulfato o glucurónido de sustancias naturales (producidas endógenamente), toxinas o de medicamentos seleccionados del grupo compuesto por 2,4-dinitrofenil-SG, bimano-SG, N-etilmaleimida-SG, doxorrubicina-SG, tiotepa-SG, ciclofosfamida-SG, melfalan-SG, clorambucilo-SG, ácido etacrínico-SG, metolaclor-SG, atrazina-SG, sulforafan-SG, aflatoxina B1-epóxido-SG, 1-óxido de 4-nitroquinolina-SG, As(SG)3, etopósido-gluc, 4-(metilnitrosamino)-1-(3-piridil)-1-butanol (NNAL)-3p-O-gluc, SN-38-gluc, 4-metilumbeliferil-p-d-gluc, sulfato de 6-hidroxi-5,7-dimetil-2-metilamino-4-(3-piridilmetil)-benzotiazol (E3040S)-gluc, leucotrieno C4, prostaglandina A2-SG, 15-desoxi-A12,14 prostaglandina J2-SG, hidroxinonenal-SG, 17p-estradiol-17-p-d-gluc, glucuronosilbilirrubina, bis-lucuronosilbilirrubina, hiodesoxicolato-6-a-gluc, sulfato de estrona-3, sulfato de deshidroepiandrosterona, sulfatolitocolato.
El hecho de que el sujeto ya ingiere al menos una sustancia que se transporta a través del transportador ABCC1 cerebral significa que esta sustancia no se tiene que administrar primero. Más bien, ya está presente en el cuerpo del sujeto, por ejemplo a causa de un tratamiento medicamentoso por otra enfermedad. Las muestras de líquido corporal del sujeto que se examinan son preferentemente muestras de plasma sanguíneo, suero sanguíneo y/o líquido cefalorraquídeo. Este análisis indirecto de la actividad de transportador del transportador ABCC1 se puede aprovechar para el diagnóstico/prediagnóstico de la demencia de Alzheimer. En el caso de sujetos que ya ingieren por otras vías sustancias que se pueden transportar por ABCC1, se puede examinar el perfil de la concentración de principio activo en líquidos corporales, preferentemente plasma sanguíneo, suero sanguíneo y/o líquido cefalorraquídeo. Una medición dependiente del tiempo muestra para sujetos, en los que existe una actividad reducida de transportador ABCC1 frente a los sujetos sanos, una curva de sustancia-concentración retardada o desplazada (concentración c registrada con respecto al tiempo t), es decir, el máximo de la curva aparece con un cambio en el tiempo.
Cuando se produce una curva desplazada con respecto al caso sano, es un indicio de una actividad modificada del transporte de ABCC1. Esto significa que entonces también se transportan peor sustancias tales como Ap y, por lo tanto, es un indicio de una enfermedad correspondiente.
Tanto los modelos de ratón como la influencia farmacológica del ABCC1 muestran que el mismo es un transportador transmembrana celular importante para la proteína Ap e implican que la barrera hematoencefálica y el plexo coroideo ocupan una posición clave para la eliminación de Ap del cerebro. Se ha podido mostrar que la activación farmacológica selectiva del transportador ABCC1 reduce significativamente la carga cerebral con Ap y se puede usar así terapéuticamente para el tratamiento de enfermedades con una proteostasis cerebral alterada. Además, se puede usar el análisis de la actividad de transportador del transportador ABCC1 tal como se ha descrito anteriormente para el diagnóstico/prediagnóstico indirecto o directo de una enfermedad correspondiente. El análisis directo sería posible a través de la administración de sustancias que son transportadas a través del transportador ABCC1 y su determinación. El análisis indirecto ya se ha explicado anteriormente.
Los cambios de mecanismos de exportación que están relacionados con transportadores ABC pueden influir sustancialmente en el perfil de agregación temporal de Ap y otras proteínas cerebrales. Por consiguiente, una influencia en la función del transportador ABCC1 repercute positivamente en el riesgo de enfermar por enfermedades neurodegenerativas, en particular por Alzheimer. “Tratamiento de enfermedades neurodegenerativas” comprende en este sentido la profilaxis al igual que el tratamiento de enfermedades ya existentes.
En primer lugar se examinó el papel de los transportadores ABC en la eliminación de Ap, de tal modo que se comprobó que ABCC1 está en disposición de transportar Ap. Para esto se usaron ensayos Transwell in vitro con células endoteliales (endothelial cell transwell assay, ECTA) de células endoteliales capilares cultivadas primarias de cerebros de ratón (preparación de cultivo celular): se usaron cultivos primarios de células endoteliales de capilares cerebrales de ratones deficientes en ABCB1, deficientes en ABCC1 (knock out) y de ratones de control (C57BI/6, FVB/N) para examinar la actividad de transportador específica de Ap. El transporte de Ap del compartimento abluminal (cerebro) al luminal (sangre) está alterado en los endotelios deficientes en ABCB1 y deficientes en ABCC1. La velocidad media de transporte de Ap durante las primeras seis horas después de la administración de péptidos Ap (Ap42) ascendió a 2,2 pg/min para las células de control. A diferencia de esto, las células deficientes en ABCC1 alcanzaron solo la mitad de la capacidad de transporte (1,0 pg/min). En las células deficientes en ABCB1, el transporte de Ap prácticamente era inexistente (0,3 pg/min). Otras investigaciones en endotelios capilares y células del plexo coroideo dieron como resultado que el transportador ABCB1 se expresa intensamente en endotelios de capilares cerebrales, mientras que la expresión de ABCC1 endotelial en capilares cerebrales es menor.
Entonces, mediante nuevos modelos de ratón generados para Alzheimer deficientes en transportador ABC se examinó la significancia relativa de miembros de la familia del transportador ABC in vivo. Los ratones modificados mediante ingeniería genética muestran en cada caso una deficiencia (knock out) en transportadores ABC específicos ABCG2, ABCB1 o ABCC1.
La inmunohistoquímica de Ap de cortes cerebrales mostró:
i) aumentos significativos en la cantidad cortical y en el tamaño de placas positivas a Ap en ratones deficientes en ABCC1 en comparación con ratones de control (véase la Fig. 1 y 2a-c).
ii) los ratones deficientes en ABCB1 mostraron un menor aumento de la cantidad y del tamaño de placas Ap que los ratones deficientes en ABCC1.
iii) entre los ratones de control y los ratones deficientes en ABCG2 no se pudo constatar ninguna diferencia significativa (Fig. 2a-c).
Para la determinación de la cantidad de Ap soluble en tampón (en su mayor parte monómeros y oligómeros de menor tamaño) y de Ap soluble en guanidina (en su mayor parte material fibrilar o agregado) se usaron ensayos de inmunoadsorción acoplados a enzimas (enzyme linked immunoabsorbent assays, ELISA) para Ap.
En concordancia con los resultados morfológicos de la inmunohistoquímica, los ratones deficientes en ABCC1 mostraron un aumento significativo en Ap agregado en comparación con los ratones de control en todos los momentos de la medición. La carga cerebral con Ap era la más intensa a una edad de 25 semanas. En este momento, los valores de Ap (Ap42) eran 12 veces mayores que en el caso de los ratones de control. El Ap soluble en tampón aumentó también con la edad, pero después de 25 semanas, el momento de la máxima carga de placas, los valores del Ap soluble disminuyeron mucho en el grupo deficiente en ABCC1.
Se llevaron a cabo otras investigaciones que proporcionaron pruebas adicionales de la relación entre la evacuación por transporte, dado el caso ausente, por ABCC1 y la agregación de Ap.
Las cinéticas de transporte de transportadores ABC dependen entre otras cosas de características específicas de proteínas/péptidos, tales como la carga específica. La variante tipo holandesa de la proteína precursora de amiloide (mutante holandesa, APPdt), que introduce una carga negativa adicional cerca de la interfaz de la a-secretasa de la APP y conduce así a una grave amiloidangiopatía cerebral (CAA), influye en la eliminación del Apdt a través de la barrera hematoencefálica. Los análisis de transferencia Western de capilares cerebrales y plexo coroideo (CP) de ratones de control mostraron una fuerte expresión de ABCB1 en endotelios capilares cerebrales (BC) y de ABCC1 en el CP (Fig. 3d). Ya que los transportadores ABC desempeñan un papel importante en la eliminación del Ap, se supuso que los ratones transgénicos APPdt deficientes en transportador ABC (en la barrera hematoencefálica y en la barrera sangre-plexo coroideo) presentan una acumulación intensificada de Apdt en los vasos meníngeos. El grado de la CAA en los ratones APPdt deficientes en ABC se cuantificó a la edad de 24 meses. En concordancia con la suposición, al menos el 51 % de los vasos estaban muy alterados (>75 % de la pared vascular cargada con Ap) en los animales deficientes en ABCC1 con respecto al 23 % en los controles (Fig. 3c).
Basándose en estos resultados se examinó hasta qué punto se podía reducir/ver influido el contenido en Ap soluble en el cerebro por la activación mediada por principio activo de transportadores ABC. Se trataron ratones con deposiciones de amiloide durante 30 días con la tietilperazina antiemética (Torecan®, 2-(etiltio)-10-[3-(4-metilpiperazin-1-il)propil]-10H-fenotiazina). Dos veces al día se administraron 3 mg/kg peso corporal por vía intramuscular. El tratamiento profiláctico comenzó ya antes de que los ratones formaran placas seniles. Las mediciones ELISA de los animales tratados mostraron una reducción de la cantidad de Ap de al menos el 31 % en los ratones tratados en comparación con animales tratados con vehículo (vehículo = agua) (Fig. 3e). Los resultados están reproducidos gráficamente en la Fig. 3.
La capacidad de retirar Ap resultó ser un factor clave en la regulación de la acumulación intracerebral de Ap.
Resultó ser un activador particularmente eficaz del transportador ABCC1 la tietilperazina (Torecan®). Otros derivados partiendo del mismo armazón de base mostraron asimismo buenos resultados en la activación del transportador ABCC1. Los correspondientes derivados están representados en la fórmula general I
Figure imgf000005_0001
en la que los restos
R1 y R2 son iguales o distintos y son en cada caso independientemente entre sí grupos alquilo C1-C6 , que presentan independientemente entre sí dado el caso otro sustituyente seleccionado del grupo alquilo, arilo, acilo (preferentemente acetilo), amino, nitro, sulfonilo, hidroxilo, alcoxi, ariloxi, ariltio, alquiltio y átomo de halógeno, presentando los respectivos grupos alquilo dado el caso al menos otro átomo de halógeno y el resto
R3 se encuentra en una de las posiciones 6-9 del sistema de anillo de fenotiazina, preferentemente en la posición 6, 7 u 8, y es un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo, arilo, acilo (preferentemente acetilo), amino, nitro, sulfonilo, hidroxilo, alcoxi, ariloxi, ariltio o alquiltio o un átomo de halógeno, presentando los respectivos grupos alquilo dado el caso al menos otro átomo de halógeno, o es un grupo NR4R5 u OR6 , siendo R4 , R5 y R6 iguales o distintos y estando seleccionados en cada caso independientemente entre sí de hidrógeno y grupo alquilo C1-C3 y el resto
R7 se encuentra en una de las posiciones 1, 2 o 4 del sistema de anillo de fenotiazina, preferentemente en la posición 2 o 4, y es un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo, arilo, acilo (preferentemente acetilo), amino, nitro, sulfonilo, hidroxilo, alcoxi, ariloxi, ariltio o alquiltio o un átomo de halógeno, presentando los respectivos grupos alquilo dado el caso al menos otro átomo de halógeno, o es un grupo NR8R9 u OR10, siendo R8, R9 y R10 iguales o distintos y estando seleccionados en cada caso independientemente entre sí de hidrógeno y grupo alquilo C1-C3.
Estos derivados correspondientemente son muy adecuados para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas, en particular de p-amiloidopatías o a-sinucleinopatías, comprendiendo el tratamiento tal como se ha mencionado anteriormente tanto la profilaxis como el tratamiento de enfermedades ya existentes. El átomo de halógeno/los átomos de halógeno están seleccionados preferentemente de flúor y cloro. Los grupos acilo (-(C=O)-R) de los restos R1, 237 son preferentemente grupos acetilo (-C(=O)CH3). Preferentemente, los restos R1 y R2 son iguales o distintos y en cada caso independientemente entre sí un grupo alquilo C1-C6 o un grupo alquilo C1-C6 (preferentemente alquilo C1), sustituido con un grupo acetilo, así como los restos R3 y R7 hidrógeno o un grupo acetilo. En una forma de realización preferente, los restos R1 y R2 son iguales o distintos y en cada caso independientemente entre sí son un grupo alquilo C1-C3. Además es preferente que los restos R3 y R7 sean hidrógeno. Es particularmente preferente que el resto R1 sea un grupo metilo, el resto R2, un grupo etilo y los restos R3 y R7, hidrógeno (tietilperazina, Torecan®). En el caso del uso para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas ha resultado ventajoso añadir a las 2-(R2-tio)-10-[3-(4-R1-piperazin-1-il)propil]-10H-fenotiazinas otros principios activos, preferentemente 1-benzhidrilpiperazinas, con la máxima preferencia 1-benzhidril-4-cianamilpiperazina (cinarizina).
Se pueden diagnosticar distintas enfermedades neurodegenerativas mediante el análisis indirecto que se ha descrito anteriormente, refiriéndose la presente invención al diagnóstico de la demencia de Alzheimer (AD). La presente invención concibe, pero no comprende, el caso de que la enfermedad neurodegenerativa sea una a-sinucleinopatía, en particular enfermedad de Parkinson (PD). Ambas enfermedades, es decir, la p-amiloidopatía y las asinucleinopatías, están caracterizadas por deposiciones de proteínas cerebrales que se pueden diagnosticar mediante la actividad del transportador ABCC1.
A continuación se mencionan otras enfermedades que se pueden diagnosticar asimismo mediante la actividad del transportador ABCC1. Así, otra enfermedad que se puede diagnosticar, sin embargo, no comprendida por la presente invención, es la demencia por cuerpos de Lewy (LBD). Esta está caracterizada asimismo por una agregación de proteína cerebral, es decir, es una a-sinucleinopatía como el Parkinson.
Otra enfermedad neurodegenerativa que se puede diagnosticar, sin embargo, no comprendida por la presente invención, es la enfermedad de Huntington (HD). Otra enfermedad neurodegenerativa que se puede diagnosticar, sin embargo, no comprendida por la presente invención, es una enfermedad priónica, en particular la enfermedad de Creutzfeld-Jacob (CJD) o el Insomnio Familiar Fatal (FFI). Otra enfermedad neurodegenerativa que se puede diagnosticar, sin embargo, no comprendida por la presente invención, es una tauopatía, en particular degeneración corticobasal (CBD), síndrome de Steel-Richardson-Olszewski (PSP), progessive supranuclear palsy-oftalmoparesia supranuclear progresiva) o enfermedad de Pick (PiD). Otra enfermedad neurodegenerativa que se puede diagnosticar, sin embargo, no comprendida por la presente invención, es una degeneración frontotemporal (FTLD), en particular degeneración positiva a ubiquitina, degeneración positiva a TDP43 o degeneraciones negativas para ubiquitina y TDP43. Otra enfermedad neurodegenerativa que se puede diagnosticar, sin embargo, no comprendida por la presente invención, es la esclerosis lateral amiotrófica (ELA). Otra enfermedad neurodegenerativa que se puede diagnosticar, sin embargo, no comprendida por la presente invención, es una ataxia espinocerebral (SCA) o para-paresia espástica (SPG). Otra enfermedad neurodegenerativa/neuroinmunológica que se puede diagnosticar, sin embargo, no comprendida por la presente invención, es esclerosis múltiple (EM) o un síndrome relacionado con EM, en particular ADEm o síndrome de Devic.
Descripción de las figuras
Muestran
la Fig. 1a, que la densidad cortical de placas neuríticas en ratones deficientes en ABCC1 (ABCCIko) está aumentada ~75 %;
la Fig. 1b, c, que el tamaño medio de placa está aumentado (+34 %) a causa de la mayor cantidad de placas (+63 %) con un tamaño de más de 700 pm2 y una menor frecuencia de placas de menor tamaño (­ 24 %). Barras de error, error típico (n>3);
la Fig. 1d, que la tinción de IHC en ratones deficientes en ABCG2 (ABCG2ko), deficientes en ABCB1 (ABCBIko), deficientes en ABCC1 (ABCCIko) y en ratones de control muestra una mayor densidad superficial en Ap en animales deficientes en ABCC1. Están representadas placas típicas del mismo tamaño en el recorte, las barras de cambio de escala representan 500 pm (visión general) y 50 pm (recorte) (*p<0,05);
la Fig. 2a, que la densidad de placas en la corteza (cobertura) y el tamaño en ratones knockout de transportador ABC específico está aumentada. En particular, los ratones deficientes en ABCC1 (ABCCIko) muestran una mayor carga con amiloide Ap (barras gris claro, en cada caso en el exterior a la derecha en los grupos individuales), s = semana en la abscisa;
la Fig. 2b, que el tamaño total de placa en ratones deficientes en ABCC1 (ABCCIko) y deficientes en ABCB1
(ABCBIko) está aumentado a la edad de 25 meses, s = semana en la abscisa;
la Fig. 2c, que el aumento total en el tamaño de placa está asociado a la presencia de menos placas de menor tamaño y más placas de mayor tamaño (>700 pm2), mientras que la cantidad de placas de tamaño medio queda en el mismo valor, barras de error, error típico (n>5), *p<0,05;
la Fig. 3, que la deficiencia de ABCC1 favorece la acumulación de Ap y Apdt y que la activación de ABCC1 (por la administración de Torecan) disminuye los valores de Ap; en donde
la Fig. 3a muestra que a la edad de 25 semanas la deficiencia en ABCC1 conduce a un aumento marcado (~12 veces) en Ap insoluble; y
la Fig. 3b muestra que la cantidad de Ap42 soluble en tampón está reducida a una edad de 25 semanas notablemente en comparación con 22 semanas (-56 %). Esto se basa probablemente en la deposición en depósitos insolubles. A la misma edad, la superficie cubierta por deposiciones de Ap, que se mide en la inmunohistoquímica, está aumentada un 83 % (barras de error, error típico n>5, p<0,05);
la Fig. 3c muestra que el 53 % de los vasos sanguíneos está muy alterado por CAA (>75 % de los vasos sanguíneos presentan Ap). Esto se refiere a ratones deficientes en ABCC1 (ABCCIko) en comparación con el 23 % en los controles (n=3);
la Fig. 3d muestra que la expresión de ABCC1 se puede ver predominantemente en el plexo coroideo (CP), mientras que ABCB1 se expresa sobre todo en los capilares del cerebro (BP);
la Fig. 3e muestra que la activación de ABCC1 por tietilperazina (Torecan) disminuye los valores de Ap en ratones (-28 %), barras de error, error típico (n=4, *p<0,05).
Ejemplos
Animales
Se adquirieron ratones transgénicos APP (APP, APPdt) en The Jackson Laboratory (Bar Harbor, EE.UU.) y la Universidad de Tübingen (Tübingen, Alemania). Los ratones deficientes en NEP se obtuvieron de Riken Brain Research Institute (Saitama, Japón). Se obtuvieron ratones deficientes en ABCG2, ABCB1 y ABCC1 en Taconic-Farms (Dinamarca). Todas las líneas de ratón transgénicas y knockout se cruzaron durante al menos 9 generaciones en el fondo genético FVB. Los ratones se mantuvieron con ciclo de luz/oscuridad 12 h/12 h a 23 °C con libre acceso a alimento y agua.
Procedimientos
Preparación tisular
Para la preparación tisular se sacrificaron los ratones mediante dislocación cervical y se realizó una perfusión transcardiaca con PBS (solución salina fisiológica tamponada con fosfato). Se retiró el cerebro y un hemisferio se almacenó en paraformaldehído al 4 % tamponado para la inclusión en parafina e inmunohistoquímica. El otro hemisferio se criogenizó en nitrógeno líquido y se almacenó a -80 °C para análisis bioquímicos.
ELISA
Se usaron kits de ELISA (TH40HS, TK42HS) de The Genetics Company (TGC, Schlieren, Suiza) para la cuantificación de Ap. Se homogeneizaron los hemisferios cerebrales mediante el uso de PreCellys24 (12 s, 6.500 rpm). Después de la adición de tampón carbonato (pH 8,0) se mezclaron los homogeneizados mediante el uso de PreCellys (5 s, 5.000 rpm) y se centrifugaron durante 90 min a 4 °C y 24.000 g para separar especies de Ap solubles de insolubles. El sobrenadante remanente (fracción soluble en tampón) se mezcló con clorhidrato de guanidina 8 M en una relación de 1:1,6. Para la extracción de las especies de Ap agregadas se disolvió el sedimento en 8 volúmenes de clorhidrato de guanidina 5 M, se agitó a temperatura ambiente durante 3 h y se centrifugó a 24.000 g durante 20 min a 40 °C. El sobrenadante remanente representaba la fracción soluble en guanidina (GuaHCl). Se midieron tres veces los contenidos proteicos de todas las muestras, usándose un espectofotómetro Nanodrop 1000 (ThermoFisher Scientific, Wilmington, EE.UU.). Los ELISA se llevaron a cabo según las instrucciones del fabricante mediante el uso de diluciones adecuadas.
Transferencias Western
Para las transferencias Western se prepararon homogeneizados tisulares. Las concentraciones totales de proteínas de los extractos se determinaron mediante el uso de un ensayo de BCA (Pierce, parte de Thermo Fisher Scientific, Rockford, EE.UU.). Después de la electroforesis de 10 pg de proteína total por carril se transfirieron las proteínas a membranas de PVDF. Después del bloqueo en leche en polvo al 5 % en tampón TBST (Tris 50 mM pH 7,4, NaCl 150 mM, 0,1 % Tween20) durante 1 h a temperatura ambiente, las transferencias se examinaron con respecto a ABCB1 (1:500, D-11, Santa Cruz), ABCC1 (1:200, Alexis Bio) o p-actina (1:20.000, Sigma) durante una noche a 4 °C. Como anticuerpos de detección se usaron anti-ratón-HRP, anti-rata-HRP o anti-conejo-HRP. Para la visualización se usó un kit de detección Amersham ECL Plus y una cámara RoperCoolSnap HQ2.
Inmunohistoquímica (IHC)
Se incluyeron en parafina cerebros fijados en formalina y se cortaron en secciones de 4 pm de espesor. Después de la eliminación de la parafina se siguieron tratando las secciones con un Autostainer Bond-Max™ (Menarini/Leica, Alemania). La inmunotinción se inició después del bloqueo de peroxidasa endógena (5 min) y recuperación de epítopo (epitope retrieval) durante 5 min con el 95 % de ácido fórmico (para anticuerpo 6F3D, Dako, Alemania) y 70 % de ácido fórmico (para anticuerpos 4G8, Millipore, Alemania). Se incubaron anticuerpos primarios de forma rutinaria a temperatura ambiente durante 30 min con las siguientes diluciones: 6F3D (1:100), 4G8 (1:500). Se detectaron anticuerpos primarios con el kit de detección BondMax™ Bond Polymer Refine y según el protocolo convencional DAB R30. Los cortes se digitalizaron por completo con una resolución de 230 nm mediante el uso de un escáner MiraxDesk/MiraxMidi y a continuación se analizaron automáticamente mediante el uso del paquete de software AxioVision (Zeiss, Alemania).
Valoración del grado de gravedad de la CAA
Se tiñeron cortes cerebrales de ratones APPdt con anticuerpo 4G8. Se examinaron al menos dos secciones no sucesivas con respecto a CAA de los vasos meníngeos con enmascaramiento. Todos los vasos meníngeos se recortaron manualmente y se categorizó del siguiente modo el grado de gravedad de la CAA:
Categoría I: no alterado
Categoría II: <25 % de la periferia teñida positivamente
Categoría III: <50 % de la periferia teñida positivamente
Categoría IV: <75 % de la periferia teñida positivamente
Categoría V: <100 % de la periferia teñida positivamente
Se calculó la cantidad media de vasos para cada categoría con respecto al número total de los vasos hallados. Ensayo de Transwell de células endoteliales (ECTA)
Se prepararon células endoteliales de capilares cerebrales de ratón como se describe en Coisne y col. (Coisne, C. y col. Mouse syngenic in vitro blood-brain barrier model: a new tool to examine inflammatory events in zerebral endothelium. Laboratory Investigation; 85, 734-746 (2005)). Al menos diez ratones de 3-4 semanas de edad se decapitaron y se retiraron los cerebros. Después de la disección del tronco encefálico, de la sustancia blanca y de la meninge se homogeneizó el tejido en dos volúmenes de tampón de lavado B (WBB) (Hanks buffered salt solution (HBBS), HEPES 10 mM, 0,1 % de BSA) mediante el uso de un homogeneizador de vidrio de 15 ml (Wheaton Industries, Millville, NJ; EE.UU.). Se añadió un volumen de 30% de solución de dextrano al homogeneizado. Se centrifugó dos veces a 3.000 g y 4 °C. El sedimento que contenía los vasos se resuspendió en WBB y los vasos grandes se rompieron manualmente mediante un brusco pipeteado de la solución. Se empleó filtración al vacío a través de membranas de 60 pm (SEFAR, Suiza) para separar los vasos grandes de los capilares. Después del tratamiento combinado con colagenasa/dispasa (HBSS, HEPES 10 mM, TCLK 0,15|jg/ml, ADNasa-I Í0|jg/ml, colagenasa/dispasa 1 mg/ml (Roche) se consiguió una suspensión de una sola célula mediante pipeteado brusco adicional de la solución. Las células endoteliales se introdujeron en insertos de Transwell revestidos con Matrigel (poros de 0,4 pm, Greiner Bio-One, Alemania) con una densidad de 120.000 células por inserto y se dejaron crecer en un cultivo glial de respaldo.
Se usó amarillo azufre para la determinación del flujo paracelular durante los ensayos. El medio de cultivo del compartimento abluminal se reemplazó con una solución que contenía 10 ng de Ap42 (concentración final 1,6 nM). A continuación se tomaron muestras del compartimento luminal después de 2 h, 6 h o 24 h y se determinó el contenido de Ap con ELISA (TK42-highsense, TGC, Suiza). Se determinó la velocidad de transporte como se describe en Coisne y col. (Coisne, C. y col. Mouse syngenic in vitro blood-brain barrier model: a new tool to examine inflammatory events in cerebral endothelium. Laboratory Investigation; 85, 734-746 (2005)).
Estadísticas de ELISA
Se aplicó el ensayo de bondad de ajuste de Lilliefors (alfa = 0,05) a los datos de ELISA y a los datos de ELISA con transformación logarítmica para diferenciar entre el aumento de datos de muestras de distribución normal y el aumento de datos de muestras con distribución normal logarítmica. A pesar del reducido tamaño de muestra para los dos conjuntos de datos se rechazó la hipótesis nula (H0) para 5 de 44 muestras. Concordando con la observación del desplazamiento sobre todo positivo (skew) y datos de muestras estrictamente positivos se desechó la suposición de datos de distribución normal. Se calcularon valores medios e intervalos de confianza con la suposición de una distribución normal logarítmica subyacente. Se aplicó el ensayo de Wilcoxon para datos independientes para comparar los datos de ELISA de las distintas cepas de ratón para cada momento.

Claims (2)

REIVINDICACIONES
1. Procedimiento para el diagnóstico o el prediagnóstico de la p-amiloidopatía demencia de Alzheimer, que se produce con una deposición de proteína cerebral y una actividad reducida del transportador ABCC1 cerebral, o para el establecimiento del riesgo de un sujeto de padecer tal enfermedad, ingiriendo ya el sujeto sustancias que se transportan a través del transportador ABCC1 cerebral, consistente en las siguientes etapas:
a) determinación de la cantidad de la sustancia ingerida en muestras de líquido corporal del sujeto en un momento determinado;
b) repetición de la determinación de la etapa a) en al menos otro momento posterior;
c) comparación de las cantidades establecidas en las etapas a) y b) con cantidades que se habían definido en momentos iguales como características de sujetos que en el momento de la toma de muestra no mostraban signos clínicos de la p-amiloidopatía demencia de Alzheimer, estando seleccionadas las sustancias que se transportan a través del transportador ABCC1 cerebral de antibióticos, virostáticos/medicamentos antivíricos, antialérgicos/antihistamínicos, medicamentos cardiovasculares, antidepresivos, anti-hiperuricémicos, citostáticos, vitaminas/análogos de vitaminas, antiflogísticos, antiepilépticos, hormonas/derivados de hormonas, leucotrienos, muestras fluorescentes, metabolitos acoplados a GSH, a sulfato o a glucurónido de sustancias naturales (producidas endógenamente), toxinas o de medicamentos seleccionados del grupo compuesto por 2,4-dinitrofenil-SG, bimano-SG, N-etilmaleimida-SG, doxorrubicina-SG, tiotepa-SG, ciclofosfamida-SG, melfalan-SG, clorambucilo-SG, ácido etacrínico-SG, metolaclor-SG, atrazina-SG, sulforafan-SG, aflatoxina BI-epóxido-SG, 1-óxido de 4-nitroquinolina-SG, As(SG)3, etopósido-gluc, 4-(metilnitrosamino)-1-(3-piridil)-1-butanol (NNAL)-3p-O-gluc, SN-38-gluc, 4-metilumbeliferil-p-d-gluc, sulfato de 6-hidroxi-5,7-dimetil-2-metilamino-4-(3-piridilmetil)-benzotiazol (E3040S)-gluc, leucotrieno C4, prostaglandina A2-SG, 15-desoxi-A12,14 prostaglandina J2-SG, hidroxinonenal-SG, 17p-estradiol-17-p-d-gluc, glucuronosilbilirrubina, bis-lucuronosilbilirrubina, hiodesoxicolato-6-a-gluc, sulfato de estrona-3, sulfato de deshidroepiandrosterona, sulfatolitocolato.
2. Procedimiento para el diagnóstico o el prediagnóstico de la p-amiloidopatía demencia de Alzheimer o para el establecimiento de un riesgo de un sujeto de padecer tal enfermedad de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque las muestras de líquido corporal del sujeto son muestras de plasma sanguíneo, suero sanguíneo y/o líquido cefalorraquídeo.
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN118510519A (zh) * 2022-01-04 2024-08-16 免疫基因股份公司 用于在治疗或预防阿尔茨海默痴呆中使用的特定剂量的吩噻嗪化合物
WO2024083822A1 (en) * 2022-10-18 2024-04-25 Immungenetics Ag Identifying a subject suffering from alzheimer's dementia or being at risk of developing alzheimer's dementia

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH365379A (de) * 1956-04-18 1962-11-15 Sandoz Ag Verfahren zur Herstellung von neuen, in 3-Stellung mit einer einwertigen Schwefelfunktion substituierten Phenothiazinen
BE568701A (es) * 1957-06-18
US3621097A (en) * 1970-03-30 1971-11-16 Jan Marcel Didier Aron Samuel Method and compositions for treatment of mental illness
US4471116A (en) * 1982-07-28 1984-09-11 Hoffmann-La Roche Inc. Substituted (10H-phenothiazin-10-L)-propyl-1-piperazines
US6566368B2 (en) * 1994-04-22 2003-05-20 Pentech Pharmaceuticals, Inc. Apomorphine-containing dosage form for ameliorating male erectile dysfunction
EP0778773A1 (en) * 1994-08-08 1997-06-18 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Methods for treating and/or preventing alzheimer's disease using phenothiazines and/or thioxanthenes
DE4430091A1 (de) * 1994-08-25 1996-02-29 Bayer Ag Verwendung von N-substituierten Phenothiazinen
DE60307049T2 (de) * 2003-04-25 2007-02-08 Neuro3D Verwendung von Piperazin- Phenothiazin- Derivaten zur Herstellung eines Arzneimittels mit neuroprotektiven und/oder neurotropischen Wirkungen auf das ZNS und/oder PNS
DE102005014142B4 (de) * 2005-03-23 2006-11-09 Hennig Arzneimittel Gmbh & Co. Kg Pelletförmige Retardzubereitung gegen Schwindel
WO2007062862A2 (en) * 2005-12-02 2007-06-07 Ludwig Maximilians Universität München Use of calmodulin inhibitors for the treatment of neurodegenerative disorders
LT2457905T (lt) * 2006-07-11 2016-11-10 Wista Laboratories Ltd. Diaminofenotiazino junginių sintezės ir (arba) gryninimo metodai
AU2007317817B2 (en) * 2006-11-10 2012-09-20 Cara Therapeutics, Inc. Synthetic peptide amides
GB0701970D0 (en) * 2007-02-01 2007-03-14 Wilson Stuart Treatment of protein aggregation diseases
TW200848063A (en) * 2007-04-23 2008-12-16 Combinatorx Inc Methods and compositions for the treatment of neurodegenerative disorders
JP5721230B2 (ja) * 2008-04-29 2015-05-20 ファーネクストＰｈａｒｎｅｘｔ 血管新生の調節を通したアルツハイマー病および関連障害の処置のための新たな治療アプローチ
EP3560496A1 (en) * 2008-04-29 2019-10-30 Pharnext Combination compositions for treating alzheimer disease and related disorders with zonisamide and acamprosate
MX2010011880A (es) * 2008-04-29 2011-05-25 Pharnext Nuevos enfoques terapeuticos para tratar la enfermedad del alzheimer y trastornos relacionados mediante una modulacion de la respuesta de estres celular.
US9399032B2 (en) * 2009-05-14 2016-07-26 The General Hospital Corporation Methods and compositions for treating degenerative and ischemic disorders

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Publication number Publication date
WO2012031941A2 (de) 2012-03-15
DK2693216T3 (en) 2019-01-14
DE102010062810A1 (de) 2012-03-08
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