ES2693382T3

ES2693382T3 - Cristal de derivado de azol benceno como inhibidor de xantina oxidasa

Info

Publication number: ES2693382T3
Application number: ES15827012.4T
Authority: ES
Inventors: Asahi Kawana; Yuki Miyazawa
Original assignee: Teijin Pharma Ltd
Current assignee: Teijin Pharma Ltd
Priority date: 2014-07-30
Filing date: 2015-07-29
Publication date: 2018-12-11
Anticipated expiration: 2035-07-29
Also published as: ZA201700491B; MY179339A; AR101363A1; JP6230713B2; AU2015297489B2; RU2017106058A; EP3176165A1; US20170210735A1; SA517380786B1; BR112017001659A2; TWI687418B; LT3176165T; IL250144B; EP3176165A4; IL250144A0; RU2017106058A3; HRP20181789T1; DK3176165T3; MX2017000513A; TR201818775T4

Abstract

Un cristal de ácido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazol-1-il)fenil]-4-metil-1,3-tiazol-5-carboxílico.

Description

DESCRIPCION

Cristal de derivado de azol benceno como inhibidor de xantina oxidasa Campo tecnico

La presente invencion se refiere a un cristal de un nuevo derivado de azol benceno util como un agente terapeutico o 5 un agente profilactico para enfermedades asociadas con la xantina oxidasa tal como gota, hiperuricemia, smdrome de lisis tumoral, calculos urinarios, hipertension, dislipidemia, diabetes, enfermedades cardiovasculares tales como arteriosclerosis o fallo cardiaco, enfermedades renales tales como nefropatia diabetica, enfermedades respiratorias tales como enfermedades pulmonares obstructivas cronicas, enfermedades intestinales inflamatorias o enfermedades autoinmunes.

10 Antecedentes de la tecnica

La xantina oxidasa es una enzima que cataliza la conversion de hipoxantina a xantina y seguidamente a acido urico en el metabolismo de los acidos nucleicos.

Un inhibidor de la xantina oxidasa inhibe la smtesis del acido urico para reducir un nivel de acido urico en la sangre con respecto a la accion de la xantina oxidasa. Es decir, un inhibidor de la xantina oxidasa es efectivo como un agente 15 terapeutico para la hiperuricemia y diversas enfermedades provocadas por la hiperuricemia. Por otro lado, hay artritis gotosa y tofos gotosos denominados gota como una condicion clmica provocada por un resultado de deposicion de cristales de urato despues de hiperuricemia prolongada. Ademas, la hiperuricemia se considera que es importante como un factor de las enfermedades por el estilo de vida asociadas con obesidad, hipertension, dislipidemia y diabetes o smdromes metabolicos, y recientemente, se ha aclarado que la hiperuricemia es un factor de riesgo de dano renal, 20 calculos urinarios y enfermedades cardiovasculares mediante encuestas epidemiologicas (The Guideline Revising Committee of Japanese Society of Gout and Nucleic Acid Metabolism, ed., Guideline for the management of hyperuricemia and gout, segunda edicion, Medical Review (2010)). Ademas, se espera que un inhibidor de xantina oxidasa sea util para el tratamiento de enfermedades asociadas con las especies de oxfgeno activo mediante la actividad inhibidora frente a la generacion de especies de oxfgeno activo, por ejemplo, para el tratamiento de 25 enfermedades cardiovasculares a traves de accion que mejora la funcion vascular (Circulation. 2006; 114: 2508-2516).

El alopurinol y el febuxostat se usan clmicamente como un agente terapeutico para la hiperuricemia, pero se ha presentado que el alopurinol tiene un efecto secundario tal como smdrome de Stevens-Johnson, necrolisis epidermica toxica, trastorno hepatico y disfuncion renal (Nippon Rinsho, 2003; 61, Supl. 1: 197-201).

Como un compuesto que tiene una actividad inhibidora de xantina oxidasa, por ejemplo, se presenta un derivado de 30 2-feniltiazol (PTL 1 a 3).

Por otro lado, en PTL 4 y 5, se presenta un derivado de acido ditiazol-carboxflico que tiene un anillo de benceno en el centro. Ademas, en PTL 6 y 7, se presenta un derivado de acido bifeniltiazol-carboxflico.

Lista de citas

Bibliograffa de patentes

35 [PTL 1] Publicacion internacional num. 92/09279

[PTL 2] Patente japonesa abierta a inspeccion publica num. 2002-105067 [PTL 3] Publicacion internacional num. 96/31211 [PTL 4] Publicacion internacional num. 2011/139886 [PTL 5] Publicacion internacional num. 2011/101867 40 [PTL 6] Publicacion internacional num. 2010/018458 [PTL 7] Publicacion internacional num. 2010/128163 Compendio de la invencion Problema tecnico

Un objeto de la presente invencion es proporcionar un cristal de un nuevo compuesto util como agente terapeutico o 45 agente profilactico para enfermedades asociadas con xantina oxidasa tal como gota, hiperuricemia, smdrome de lisis tumoral, calculos urinarios, hipertension, dislipidemia, diabetes, enfermedades cardiovasculares tales como arteriosclerosis o fallo cardiaco, enfermedades renales tales como nefropatfa diabetica, enfermedades respiratorias tales como enfermedades pulmonares obstructivas cronicas, enfermedades intestinales inflamatorias o enfermedades autoinmunes.

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Solucion al problema

Como resultado de estudios serios con el objeto anterior, los actuales inventores han encontrado que el acido 2-[4- (2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazol-1-il)fenil]-4-metil-1,3-tiazol-5-carbox^lico (en adelante, tambien denominado como un compuesto (I)) puede cristalizarse y existe como al menos un tipo de polimorfo cristalino.

Es decir, la presente invencion proporciona lo siguiente.

[1] Un cristal de acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazoM-il)fenil]-4-metil-1,3-tiazol-5-carboxflico;

[2] El cristal segun [1], en donde el cristal tiene una forma cristalina A;

[3] El cristal segun [2], en donde el cristal tiene picos caractensticos a angulos de difraccion de 20 = 7,2°, 11,3°, 15,9°,

17,9°, 20,8°, 22,3°, 23,1°, 23,8°, 24,3° y 28,6° en su espectro de difraccion de rayos X a traves de polvo;

[4] El cristal segun [2], en donde su espectro de difraccion de rayos X a traves de polvo tiene un patron mostrado en

la Fig. 1;

[5] El cristal segun [2], en donde su pico exotermico en termogravimetna/analisis termico diferencial es a 232°C;

[6] Una composicion farmaceutica que comprende el cristal segun cualquiera de [1] a [5] y un vehmulo farmaceuticamente aceptable;

[7] Un inhibidor de xantina oxidasa que comprende el cristal segun cualquiera de [1] a [5] como un ingrediente activo; y

[8] Un agente terapeutico o profilactico para usar en una o mas enfermedades seleccionadas del grupo que consiste en gota, hiperuricemia, smdrome de lisis tumoral, calculos urinarios, hipertension, dislipidemia, diabetes, enfermedades cardiovasculares, enfermedades renales, enfermedades respiratorias, enfermedades intestinales inflamatorias y enfermedades autoinmunes, que comprende el cristal segun cualquiera de [1] a [5] como un ingrediente activo.

Efectos ventajosos de la invencion

La presente invencion proporciona cristales de un derivado de azol benceno, que son utiles como agentes terapeuticos o profilacticos para enfermedades asociadas con la xantina oxidasa tales como gota, hiperuricemia, smdrome de lisis tumoral, calculos urinarios, hipertension, dislipidemia, diabetes, enfermedades cardiovasculares tales como arteriosclerosis o fallo cardiaco, enfermedades renales tales como nefropatfa diabetica, enfermedades respiratorias tales como enfermedades pulmonares obstructivas cronicas, enfermedades intestinales inflamatorias o enfermedades autoinmunes. Estos cristales pueden usarse como un ingrediente farmaceutico activo para producir el agente farmaceutico.

Breve descripcion de los dibujos

[Fig. 1] La Fig. 1 es un espectro de difraccion de rayos X a traves de polvo de la forma cristalina A.

Descripcion de realizaciones

La “xantina oxidasa” se usa tanto en un amplio sentido que es una enzima para catalizar una reaccion de oxidacion de hipoxantina a xantina y ademas a acido urico como en un sentido limitado que es una xantina oxidorreductasa tipo oxidasa que es una de las enzimas que cataliza la misma reaccion. En la presente invencion, a menos que se especifique otra cosa, “xantina oxidasa” se denomina de forma colectiva a una enzima que cataliza una reaccion de oxidacion de hipoxantina a xantina y ademas a acido urico. En la xantina oxidorreductasa que es responsable de esta reaccion, estan presentes dos tipos de oxidorreductasa tipo oxidasa y oxidorreductasa tipo deshidrogenasa y ambos tipos estan incluidos en la xantina oxidasa de la presente invencion. A menos que se especifique otra cosa, “xantina oxidasa” tiene el mismo significado que se define anteriormente tambien en la “actividad inhibidora de la xantina oxidasa”, “inhibidor de la xantina oxidasa” y similares.

Los cristales de la presente invencion se caracterizan por los espectros de difraccion de rayos X a traves de polvo, y/o termogravimetna/analisis termico diferencial (TG/DTA) y similares. Los espectros de difraccion de rayos X (XRD) de polvos de estos cristales muestran patrones caractensticos, y cada cristal tiene valores 20 de angulo de difraccion espedficos. Ademas, cada uno de estos cristales tambien muestra su propio comportamiento termico caractenstico en la termogravimetna/analisis termico diferencial (TG/DTA).

La forma cristalina A de la presente invencion tiene picos caractensticos en angulos de difraccion de 20 = 7,2°, 11,3°, 15,9°, 17,9°, 20,8°, 22,3°, 23,1°, 23,8°, 24,3° y 28,6° en su espectro de difraccion de rayos X a traves de polvo. Ademas, la forma cristalina A de la presente invencion tiene un patron en su espectro de difraccion de rayos X a traves de polvo mostrado en la Fig. 1, y tiene un pico exotermico a 232°C en la termogravimetna/analisis termico diferencial (TG/DTA). La forma cristalina A es un cristal anhidro.

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Como se usa en esta memoria, “picos caractensticos” significa picos que se observan principalmente en el espectro de difraccion de rayos X a traves de polvo de cada polimorfo cristalino, ademas de picos unicos. Los cristales de la presente invencion identificados por los angulos de difraccion tambien incluyen picos distintos de los observados como los picos caractensticos descritos anteriormente.

La posicion y la intensidad relativa del angulo de difraccion 20 en el espectro de difraccion de rayos X a traves de polvo pueden variar ligeramente dependiendo de las condiciones de medida, y por lo tanto, incluso si 20 tiene una ligera diferencia, la identidad de una forma cristalina se reconocena haciendo referencia de forma apropiada al patron del espectro completo. Los cristales en el intervalo de dichos errores tambien estan incluidos en la presente invencion. Los errores en 20 pueden estar, por ejemplo, en el intervalo de ±0,5° o ±0,2°. En otras palabras, los cristales identificados por los angulos de difraccion anteriores tambien incluyen aquellos con angulos de difraccion dentro del intervalo de error de ±0,5° o ±0,2°.

En el analisis termogravimetrico/termico diferencial (TG/DTA), un “pico exotermico” y un “pico endotermico” se definen como la temperatura en el punto de partida de un pico y quieren decir la temperatura de partida exotermica y endotermica determinadas por extrapolacion. El “pico exotermico” y “pico endotermico” en el tG/DTA pueden variar un poco dependiendo de las condiciones de medida. Por ejemplo, el error se considera que esta en el intervalo de ±5°C o ±2°C. En otras palabras, los cristales identificados por los picos anteriores tambien incluyen aquellos con picos dentro del intervalo de error de ±5°C o ±2°C.

Ademas, tanto para el espectro de difraccion de rayos X a traves de polvo como para TG/DTA, la diferencia entre los valores medidos para un material de referencia de los cristales, por ejemplo, cada cristal obtenido por el metodo descrito en los presentes ejemplos y los valores numericos descritos en la presente solicitud pueden aceptarse como los errores de medida. Es decir, los cristales que tienen los mismos angulos de difraccion y picos exotermico y endotermico en el intervalo de los errores calculados por dichos metodos estan incluidos en los cristales de la presente invencion.

Una forma cristalina A de acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazoM-il)fenil]-4-metiM,3-tiazol-5- carboxflico puede sintetizarse, por ejemplo, segun el metodo de smtesis descrito a continuacion.

Smtesis del Compuesto (A-2)

imagen1

(en donde Y1 e Y2 representan un grupo saliente). Los ejemplos de un grupo saliente representado por Y1 e Y2 incluyen un atomo de halogeno, un grupo metanosulfoniloxi, un grupo p-toluensulfoniloxi, un grupo trifluorometanosulfoniloxi y similares. La reaccion es un metodo para sintetizar un compuesto (A-2) mediante la reaccion de alcohol de neopentilo con un grupo saliente Y2 en un compuesto (A-1) en presencia de una base. Ejemplos de la base a usar incluyen una sal inorganica tal como hidruro sodico, hidroxido sodico, hidroxido de potasio, hidroxido de litio, carbonato sodico, carbonato de potasio, carbonato de cesio; un alcoxido metalico tal como etoxido sodico, metoxido sodico y t-butoxido de potasio; y una amina organica tal como trietilamina, piridina, 4-aminopiridina, N-etil-N,N-diisopropilamina (DIPEA) y 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-7-undeceno (DBU). La reaccion se realiza haciendo reaccionar una base en una cantidad equivalente o ligeramente excesiva respecto al compuesto (A-1) y alcohol de neopentilo en una cantidad equivalente o excesiva respecto al compuesto (A-1) en un disolvente inactivo para la reaccion en el intervalo entre 0°C y 140°C, seguido por la adicion del compuesto (A-1) a la mezcla permitiendo a la reaccion continuar generalmente de 0,5 a 16 horas. La reaccion se realiza preferiblemente bajo una atmosfera de gas inerte tal como nitrogeno. Aqrn, el disolvente incluye, aunque no esta particularmente limitado a, por ejemplo, hidrocarburos aromaticos tales como benceno, tolueno y xileno; eteres tales como dietileter, tetrahidrofurano (THF), 1,4-dioxano, 1,2-dimetoxietano y 1,2-dietoxietano; hidrocarburos halogenados tales como diclorometano, 1,2-dicloroetano y cloroformo; N,N-dimetilformamida (DMF); N- metilpirrolidona; dimetilsulfoxido (DMSO); agua; o un disolvente mezclado de los mismos.

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S^ntesis del compuesto (A-4)

(en donde R representa un grupo alquilo que tiene 1 a 6 atomos de carbono). El metodo de smtesis es un metodo para sintetizar un compuesto (A-4) acoplando compuestos (A-2) y (A-3) juntos. Los ejemplos de un grupo saliente representado por Y1 incluyen un atomo de halogeno, un grupo metanosulfoniloxi, un grupo p-toluensulfoniloxi y un grupo trifluorometanosulfoniloxi. La reaccion se realiza haciendo reaccionar los compuestos (A-2) y (A-3) usando una cantidad equivalente o excesiva de un compuesto respecto al otro en un disolvente inactivo para la reaccion en presencia de una base y un catalizador de metal de transicion, anadiendo un ligando, un acido carboxflico y una sal de cobre monovalente o divalente cuando sea necesario, en el intervalo entre la temperatura ambiente y una temperatura de reflujo generalmente durante 0,5 horas a 2 dfas. La reaccion se realiza preferiblemente en una atmosfera de gas inerte tal como nitrogeno. Aqm, el disolvente incluye, aunque no esta particularmente limitado a, por ejemplo, hidrocarburos aromaticos tal como benceno, tolueno y xileno; eteres tales como dietileter, tetrahidrofurano (THF), 1,4-dioxano, 1,2-dimetoxietano y 1,2-dietoxietano; hidrocarburos halogenados tales como diclorometano, 1,2- dicloroetano y cloroformo; alcoholes tales como metanol, etanol, 2-propanol y butanol; N,N-dimetilformamida (DMF); N-metilpirrolidona; dimetilsulfoxido (DMSO); agua; y un disolvente mezclado de los mismos. Ejemplos de la base incluyen hidruro de litio, hidruro sodico, hidruro de potasio, hidroxido sodico, hidroxido de potasio, carbonato sodico, carbonato de potasio, carbonato de cesio, fluoruro de potasio, fluoruro de cesio, fosfato de tripotasio, acetato sodico y acetato de potasio, una sal metalica de un alcoxido que tiene 1 a 6 atomos de carbono (sal de litio, sal sodica, sal de potasio y sal de magnesio); una sal metalica de un anion alquilo que tiene de 1 a 6 atomos de carbono (sal de litio, sal sodica, sal de potasio y sal de magnesio); sal (fluoruro, cloruro y bromuro) de tetra (alquilo que tiene 1 a 4 atomos de carbono) amonio; diisopropiletilamina; tributilamina; N-metilmorfolina; diazabicicloundeceno; diazabiciclooctano; e imidazol. Los ejemplos del catalizador de metal de transicion incluyen cobre, paladio, cobalto, hierro, rodio, rutenio e iridio. Los ejemplos del ligando incluyen tri(t-butil)fosfina, tri(ciclohexil)fosfina, t-butildiciclohexilfosfina, di(t- butil)ciclohexilfosfina y di(t-butil)metilfosfina. Los ejemplos de la sal de cobre monovalente o divalente incluyen cloruro de cobre (I), bromuro de cobre (I), yoduro de cobre (I), acetato de cobre (I), fluoruro de cobre (II), cloruro de cobre (II), bromuro de cobre (II), yoduro de cobre (II), acetato de cobre (II) un hidrato de los mismos y una mezcla de los mismos. Ejemplos del acido carboxflico incluyen acido formico, acido acetico, acido propionico, acido n-butmco, acido isobutmco, acido pentanoico, acido isopentanoico, acido pivalico y acido trifluoroacetico.

Smtesis del compuesto (A-5)

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(en donde R representa un grupo alquilo que tiene 1 a 6 atomos de carbono). El metodo de smtesis es un metodo para sintetizar un compuesto (A-5) mediante la reduccion de un grupo nitro del compuesto (A-4). La reaccion se realiza haciendo reaccionar el compuesto (A-4) en una atmosfera de gas hidrogeno en un disolvente inactivo para la reaccion en presencia de un catalizador de metal de transicion en el intervalo entre la temperatura ambiente y una temperatura de reflujo generalmente durante 0,5 horas a 2 dfas. Aqm, el disolvente incluye, aunque no esta particularmente limitado a, por ejemplo, hidrocarburos aromaticos tales como benceno, tolueno y xileno; eteres tales como dietileter, tetrahidrofurano (THF), 1,4-dioxano, 1,2-dimetoxietano y 1,2-dietoxietano; hidrocarburos halogenados tales como diclorometano, 1,2-dicloroetano y cloroformo; alcoholes tales como metanol, etanol, 2-propanol y butanol; N,N- dimetilformamida (DMF); N-metilpirrolidona; dimetilsulfoxido (DMSO); acetato de etilo; y un disolvente mezclado de los mismos. Los ejemplos preferidos del catalizador de metal de transicion incluyen paladio-carbono, hidroxido de paladio, negro de paladio, platino-carbono, mquel Raney y similares.

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Smtesis del compuesto (A-6): un alquilester de acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazol-1-il)fenil]-4-metil- 1,3-tiazol-5-carbox^lico

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(en donde R y R1 representan independientemente un grupo alquilo que tiene 1 a 6 atomos de carbono). El metodo de smtesis es un metodo para sintetizar un anillo de tetrazol haciendo reaccionar el compuesto (A-5) con un ortoformiato y un compuesto azida. La reaccion se realiza haciendo reaccionar el compuesto (A-5), un ortoformiato y un compuesto azida que usa una cantidad equivalente o excesiva de uno de los compuestos en un disolvente inactivo para la reaccion en presencia de un acido en el intervalo entre la temperatura ambiente y una temperatura de reflujo generalmente durante 0,5 horas a 2 dfas. La reaccion se realiza preferiblemente en una atmosfera de gas inerte tal como nitrogeno. Ejemplos del ortoformiato incluyen ortoformiato de trimetilo y ortoformiato de trietilo. Ademas, los ejemplos del compuesto de azida incluyen azida sodica y trimetilsililazida. Ejemplos del acido a usar incluyen un acido organico tal como acido formico y acido acetico, un acido inorganico tal como acido clortndrico y acido sulfurico, y un acido de Lewis tal como triflato de indio, triflato de iterbio, triflato de zinc y tricloroindio. El disolvente a usar para estas reacciones incluye, aunque no esta particularmente limitado a, por ejemplo, benceno, tolueno, diclorometano, dicloroetano, cloroformo, tetracloruro de carbono, dietileter, tetrahidrofurano (THF), 1,4-dioxano, 1,2-dimetoxietano, 1,2-dietoxietano, N,N-dimetilformamida (DMF), N-metilpirrolidona, dimetilsulfoxido (DMSO) y un disolvente mezclado de los mismos, y un acido tal como acido acetico puede usarse tambien como un disolvente.

Smtesis de una forma cristalina A del compuesto (I): acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazol-1-il)fenil]-4- metil-1,3-tiazol-5-carboxflico

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(en donde, R representa un grupo alquilo que tiene 1 a 6 atomos de carbono). Una forma cristalina A del compuesto

(I) puede producirse por un metodo que comprende una etapa de suspension de un compuesto (A-7) en un disolvente e hidrolisis de la suspension anadiendo una disolucion acuosa de una base y una etapa de neutralizacion del producto de reaccion. Ademas, el metodo puede comprender ademas una etapa de adicion de agua al producto neutralizado y una etapa posterior de agitacion de la disolucion de reaccion. El disolvente usado para suspender el compuesto (A-7) incluye, por ejemplo, hidrocarburos aromaticos tal como benceno, tolueno y xileno; eteres tales como dietileter, tetrahidrofurano (THF), 1,4-dioxano, 1,2-dimetoxietano y 1,2-dietoxietano; hidrocarburos halogenados tales como diclorometano, 1,2-dicloroetano y cloroformo; alcoholes tales como metanol, etanol, 2-propanol y butanol; N,N- dimetilformamida (DMF); N-metilpirrolidona; dimetilsulfoxido (DMSO); agua; y un disolvente mezclado de los mismos. El disolvente preferiblemente es un eter, un alcohol, agua o un disolvente mezclado de los mismos.

En el compuesto (A-7), R preferiblemente es un grupo alquilo que tiene 1 a 6 atomos de carbono y mas preferiblemente un grupo etilo. Aqm, un grupo alquilo se denomina como un grupo hidrocarburo saturado alifatico lineal o ramificado. Los ejemplos espedficos de un grupo alquilo que tiene 1 a 6 atomos de carbono incluyen un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo propilo, un grupo isopropilo, un grupo butilo, un grupo isobutilo, un grupo terc-butilo, un grupo pentilo, un grupo isopentilo y un grupo hexilo.

La reaccion de hidrolisis del compuesto (A-7) al compuesto (I) continua suspendiendo el compuesto (A-7) en el disolvente (por ejemplo, en una cantidad de 15 veces la cantidad del compuesto (A-7)) y despues haciendo reaccionar el compuesto (A-7) con una base en una cantidad equivalente o ligeramente excesiva respecto al compuesto (A-7). Ejemplos de bases preferidas incluyen hidroxido sodico, hidruro de potasio e hidroxido de litio. La reaccion continua en el intervalo entre 0°C y 100°C aunque se realiza preferiblemente en el intervalo entre 20°C y 30°C. Despues de la reaccion de hidrolisis, el producto de reaccion se neutraliza haciendo reaccionar la base usada con un acido en una cantidad equivalente o ligeramente excesiva respecto a la base usada. Un ejemplo de un acido preferido incluye acido

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Posteriormente, se anade agua (por ejemplo, en una cantidad de 5 veces la cantidad del compuesto (A-7)) al producto de reaccion neutralizado y la mezcla se agita durante una hora, y despues el precipitado se filtra y se seca para obtener cristales. Aunque la cantidad del disolvente, la cantidad de agua anadida, las condiciones de agitacion y el tiempo hasta la separacion por filtrado no estan particularmente limitadas, como estas condiciones pueden tener una influencia en el rendimiento de los cristales, la pureza qmmica, el diametro de las partfculas y la distribucion de tamano de partfculas, estas condiciones se combinan preferiblemente y se ajustan segun el proposito. Para la filtracion, puede usarse un metodo habitual, por ejemplo, filtracion natural, filtracion por presion, filtracion al vado o separacion centnfuga. Para el secado, puede usarse un metodo habitual, por ejemplo, secado natural, secado al vado, secado por calentamiento y secado por calentamiento al vado. El compuesto intermedio de la reaccion puede purificarse por un metodo habitual tal como re-cristalizacion, re-precipitacion y diversos metodos de cromatograffa, si fuera necesario, durante el proceso de smtesis.

Aunque los cristales de la presente invencion pueden identificarse por un espectro de difraccion de rayos X a traves de polvo o analisis termogravimetrico/termico diferencial (TG/DTA) caractenstico, cuando otras formas cristalinas estan presentes, no se hace referencia a la velocidad de incorporacion de los mismos. Cuando solo se obtiene una forma espedfica de cristal, al menos la incorporacion de las demas formas cristalinas puede aceptarse en un grado que no puede detectarse por estos metodos de medida. Ademas, cuando una forma espedfica de cristal se usa como un ingrediente farmaceutico activo para un agente farmaceutico, no significa que la inclusion de las demas formas de cristales sea inaceptable.

Los cristales de la presente invencion pueden usarse como un ingrediente activo farmaceutico. Ademas, cuando las demas formas cristalinas estan presentes, puede usarse no solo una forma de los cristales sino tambien una mezcla de dos o mas formas de cristales. En la presente invencion, la capacidad de manejo durante la produccion, capacidad de reproduccion, estabilidad y estabilidad en el almacenaje se hacen de forma ventajosa obteniendo cristales de acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazoM-il)fenil]-4-metil-1,3-tiazol-5-carboxflico en comparacion con aquellos que no son cristalinos.

Una composicion farmaceutica puede obtenerse usando los cristales de la presente invencion y un vedculo farmaceuticamente aceptable.

Un preparado que contiene los cristales de la presente invencion se prepara usando aditivos normalmente usados para la formulacion. Ejemplos de los aditivos para un preparado solido incluyen un excipiente tal como lactosa, sacarosa, glucosa, almidon de mafz, almidon de patata blanco, celulosa cristalina, acido silfcico anhidro ligero, silicato de aluminio sintetico, aluminometasilicato de magnesio y fosfato de hidrogeno y calcio; un aglutinante tal como celulosa cristalina, carboximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, carboximetilcelulosa sodica y polivinilpirrolidona; un agente disgregante tal como almidon, carboximetilcelulosa sodica, carboximetilcelulosa de calcio, croscarmelosa sodica y almidon de carboximetilo sodico; un lubricante tal como talco y acido estearico; un agente de recubrimiento tal como hidroximetilpropilcelulosa, ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa y etilcelulosa; y un agente colorante, los aditivos para un preparado semisolido incluyen una base tal como vaselina blanca, y los aditivos para un preparado lfquido incluyen un disolvente tal como etanol; un agente solubilizante tal como etanol; un conservante tal como para-hidroxibenzoato; un agente de tonicidad tal como glucosa; un agente tamponante tal como acido dtrico; un antioxidante tal como acido L-ascorbico; un agente quelante tal como EDTA; y un agente de suspension y un agente emulgente tal como polisorbato 80.

Los cristales de la presente invencion pueden usarse en cualquier forma de dosificacion tal como un preparado solido, un preparado semisolido y un preparado lfquido, y usarse en un preparado para cualquier forma de administracion tal como un preparado oral y un preparado parenteral (tal como un preparado en inyeccion, un preparado percutaneo, un preparado oftalmico, un preparado en supositorio, un preparado trans-nasal y un preparado para inhalacion).

Una composicion farmaceutica que contiene los cristales de la presente invencion como un ingrediente activo puede usarse como un inhibidor de xantina oxidasa o un agente terapeutico y un agente profilactico para enfermedades asociadas con la xantina oxidasa tal como gota, hiperuricemia, smdrome de lisis tumoral, calculos urinarios, hipertension, dislipidemia, diabetes, enfermedades cardiovasculares tales como esclerosis arterial y fallo cardiaco, enfermedades renales tal como nefropatfa diabetica, enfermedades respiratorias tales como enfermedad pulmonar obstructiva cronica, enfermedades intestinales inflamatorias o enfermedades autoinmunes. Aqrn, el termino “profilactico” significa evitar la incidencia o comienzo de las enfermedades en un individuo que no esta afectado por enfermedades o no ha desarrollado aun enfermedades y el termino “terapeutico” significa tratar, suprimir o remediar enfermedades o smtomas en un individuo que ya ha sido afectado por enfermedades o ha desarrollado enfermedades.

Ejemplos

Metodo de medida

La difraccion de rayos X a traves de polvo de los cristales de la presente invencion se midio en las siguientes condiciones.

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45

50

Aparato: D8 DISCOVER con GADDS CS fabricado por Bruker AXS

Fuente de radiacion: Cu Ka, longitud de onda: 1,541838 (10'10m), 40 kV-40 mA, monocromador de grafito de superficie plana incidente, diametro del colimador 300 pm, detector PSPC bi-dimensional, barrido de 3 a 40°

El analisis termogravimetrico/termico diferencial (TG/DTA) de los cristales de la presente invencion se midio en las siguientes condiciones.

Aparato: TG8120 fabricado por Rigaku

Velocidad de elevacion de temperatura: 10°C/min, atmosfera: nitrogeno, recipiente de muestra: aluminio, Referencia: alumina, Muestreo: 1,0 seg., intervalo de temperatura de medida: 25 a 300°C.

Con respecto a los compuestos para los que se midio el espectro 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6 o CDCh), se muestran el desplazamiento qrnmico (8: ppm) y la constante de acoplamiento (J: Hz).

Aparato: JMTC-400/54/SS fabricado por JEOL

Las abreviaturas representan lo siguiente: s= singlete, d= duplete, t= triplete, q= cuadruplete; brs= singlete ancho, m= multiplete

Ejemplo de referencia 1

Produccion de 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazol-1-il)fenil]-4-metil-1,3-tiazol-5-carboxilato de etilo

(1) Una mezcla preparada suspendiendo 1,06 g de alcohol de neopentilo en 40,0 mL de tolueno se enfrio a 0°C en una atmosfera de nitrogeno, y se anadieron 1,35 g de t-butoxisodio y la mezcla resultante se agito a 0°C durante 30 minutos. Posteriormente, despues de anadir 2,20 g de 4-bromo-1-fluoro-2-nitrobenceno a la mezcla anterior a 0°C, la disolucion de la mezcla de reaccion resultante se calento a temperatura ambiente y se agito a temperatura ambiente durante 2 horas. Despues de la adicion de agua a la disolucion de mezcla de reaccion, se realizo la extraccion usando acetato de etilo. La fase organica se lavo con una solucion salina, seguido por secado y concentracion a presion reducida para obtener 3,12 g de 4-bromo-1-(2,2-dimetilpropoxi)-2-nitrobenceno.

(2) Se preparo una suspension anadiendo 3,04 g de bicarbonato de potasio, 63 mg de cloruro de paladio (II) y 297 mg de bromuro de cobre (I) a 4,18 g de 4-bromo-1-(2,2-dimetilpropoxi)-2-nitrobenceno, y suspendiendo la mezcla en 45 mL de tolueno. Posteriormente, una disolucion de mezcla de reaccion preparada anadiendo 2,97 g de 4-metil-1,3- tiazol-5-carboxilato de etilo, 133 pL de acido isobutrnco y 333 pL de di-t-butilciclohexilfosfina a la suspension se calento a 120°C durante 14 horas en una atmosfera de nitrogeno. La disolucion de mezcla de reaccion se filtro con celite para eliminar la materia insoluble, se anadio agua al filtrado, y se realizo la extraccion usando acetato de etilo. La fase organica se lavo con una solucion salina y despues se sometio a secado y concentracion a presion reducida, seguido por purificacion mediante un metodo convencional para obtener 5,13 g de 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-nitrofenil]-4-metil- 1,3-tiazol-5-carboxilato de etilo.

1H-RMN (400 MHz, CDCls) 8: 1,08 (9H, s), 1,39 (3H, t, J = 6,8 Hz), 2,77 (3H, s), 3,79 (2H, s), 4,36 (2H, q, J = 6,8 Hz), 7,12 (1H, d, J = 8,8 Hz), 8,10 (1H, dd, J = 2,0, 8,8 Hz), 8,45 (1H, d, J = 2,0 Hz)

(3) Una disolucion de mezcla de reaccion se preparo suspendiendo 5,13 g de 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-nitrofenil]-4- metil-1,3-tiazol-5-carboxilato de etilo en 50 mL de etanol, y anadiendo 500 mg de paladio/carbono (10% en peso) a la suspension, y la mezcla de reaccion se agito a 50°C durante 20 horas en una atmosfera de hidrogeno. La disolucion de mezcla de reaccion se filtro y el filtrado se concentro a presion reducida para obtener 4,66 g de 2-[3-amino-4-(2,2- dimetilpropoxi)fenil]-4-metil-1,3-tiazol-5-carboxilato de etilo.

(4) Una disolucion de mezcla de reaccion preparada suspendiendo 2,58 g de 2-[3-amino-4-(2,2-dimetilpropoxi)fenil]- 4-metil-1,3-tiazol-5-carboxilato de etilo en 30 mL de acido acetico y anadiendo 962 mg de azida sodica y 2,19 g de ortoformiato de trietilo se calento a 70°C durante 2 horas en una atmosfera de nitrogeno. Despues de enfriar la mezcla de reaccion a temperatura ambiente, se anadieron 20 mL de agua, seguido por purificacion mediante un metodo convencional para obtener 2,78 g de 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazol-1-il)fenil]-4-metil-1,3-tiazol-5- carboxilato de etilo.

1H-RMN (400 MHz, CDCla) 8: 1,00 (9H, s), 1,39 (3H, t, J = 6,8 Hz), 2,78 (3H, s), 3,80 (2H, s), 4,36 (2H, q, J = 6,8 Hz), 7,18 (1H, d, J = 8,8 Hz), 8,08 (1H, dd, J = 2,4, 8,8 Hz), 8,42 (1H, d, J = 2,4 Hz), 9,19 (1H, s)

Ejemplo 1

Produccion de una forma cristalina A de acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazol-1-il)fenil]-4-metil-1,3- tiazol-5-carboxflico

Una disolucion de mezcla de reaccion preparada disolviendo 2,58 g de 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazol- 1-il)fenil]-4-metil-1,3-tiazol-5-carboxilato de etilo en 30,0 L de una disolucion mixta de tetrahidrofurano/metanol = 1/1

seguido por la adicion de 6,50 mL de disolucion acuosa de hidroxido sodico 2 M se agito en el intervalo entre 20°C y 30°C durante 3 horas. Mientras se agitaba en el intervalo entre 20°C y 30°C, se anadieron lentamente 6,50 mL de acido clorhndrico 2 M a la disolucion de mezcla de reaccion y ademas se anadieron lentamente 17,0 mL de agua. La disolucion de mezcla de reaccion se agito en el intervalo entre 20°C y 30°C durante una hora y se obtuvieron cristales 5 por filtracion. Los cristales resultantes se lavaron con 7,0 mL de una disolucion mixta de metanol/agua = 1/1 y 7,0 mL de agua. Los cristales se secaron al vacfo a 50°C para dar 2,25 g de cristales de acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H- 1,2,3,4-tetrazol-1-il)fenil]-4-metiM,3-tiazol-5-carboxflico. La XRD de los cristales resultantes se muestra en la Fig. 1. Se observaron picos a angulos de difraccion de 20 = 7,2°, 11,3°, 15,9°, 17,9°, 20,8°, 22,3°, 23,1°, 23,8°, 24,3° y 28,6°. Ademas, se observo un pico exotermico en la termogravimetna/analisis termico diferencial (TG/DTA) a 232°C.

10 1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 8: 0,83 (9H, s), 2,66 (3H, s), 3,83 (2H, s), 7,47 (1H, d, J = 8,8 Hz), 8,18 (1H, dd, J = 2,4,

8,8 Hz), 8,27 (1H, d, J = 2,0 Hz), 9,78 (1H, s), 13,40 (1H, s)

Ejemplo de referencia 2

Produccion de acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazol-1-il)fenil]-4-metil-1,3-tiazol-5-carboxflico

Una disolucion de mezcla de reaccion preparada disolviendo 307 mg de 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4- 15 tetrazol-1-il)fenil]-4-metil-1,3-tiazol-5-carboxilato de etilo en 8,0 mL de una disolucion mixta de tetrahidrofurano/metanol = 1/1 seguido por la adicion de 1,0 mL de disolucion acuosa de hidroxido sodico 2 M se agito a temperatura ambiente durante 3 horas. Despues de anadir 1,0 mL de acido clorhndrico 2 M a la disolucion de mezcla de reaccion, se anadieron 6,0 mL de agua, seguido de purificacion mediante un metodo convencional para obtener 244 mg de acido 2-[4-(2,2- dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazol-1-il)fenil]-4-metil-1,3-tiazol-5-carboxflico.

20 1H-RMN (DMSO-d6) 8: 0,83 (9H, s), 2,66 (3H, s), 3,83 (2H, s), 7,47 (1H, d, J = 8,8 Hz), 8,18 (1H, dd, J = 2,4, 8,8 Hz),

8,27 (1H, d, J = 2,0 Hz), 9,78 (1H, s), 13,40 (1H, s)

Ejemplo de referencia 3

Medida de la actividad inhibidora de la xantina oxidasa

(1) Preparacion del compuesto de ensayo

25 Despues de disolver acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazol-1-il)fenil]-4-metil-1,3-tiazol-5-carboxMco en DMSO (producido por Sigma Corporation) de manera que la concentracion es 20 mM, la disolucion se uso ajustando la concentracion a un valor deseado para el proposito durante el uso.

(2) Metodo de medida

La evaluacion de la actividad inhibidora de la xantina oxidasa del acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazol- 30 1-il)fenil]-4-metil-1,3-tiazol-5-carboxflico se realizo por el metodo descrito en la referencia (Method Enzymatic Analysis, 1, 521-522, 1974) con modificacion parcial. Esta evaluacion se realizo midiendo la actividad de la xantina oxidorreductasa tipo oxidasa. Concretamente, una disolucion de xantina (fabricada por Sigma Co.) se preparo a 10 mM usando una disolucion de hidroxido sodico 20 mM y despues se mezclo con tampon fosfato 100 mM para ajustar a 30 |jM. Se anadieron 75 jL de la disolucion a cada pocillo de la placa de 96 pocillos. El compuesto de ensayo diluido 35 con DMSO a 100 veces de una concentracion final se anadio a cada pocillo a 1,5 jL por pocillo. Despues de mezclar la placa, se midio la absorbancia a 290 nm mediante un lector de microplacas SPECTRA MAX Plus 384 (fabricado por Molecular Devices, LLC). Posteriormente, se preparo la xantina oxidorreductasa tipo oxidasa (a partir de suero de leche, fabricada por Calbiochem Novabiochem Corp.) a 30,6 mU/mL usando una disolucion de tampon fosfato 100 mM y se anadio a cada pocillo a 73,5 jL por pocillo. Inmediatamente despues de la mezcla, el cambio de absorbancia 40 a 290 nm se midio durante 5 minutos. La actividad enzimatica de la disolucion DMSO sin compuesto de ensayo se uso como control al 100%, y se calculo la velocidad de inhibicion del compuesto de ensayo. Se calculo la concentracion inhibidora al cincuenta por ciento del compuesto de ensayo en la actividad de la xantina oxidorreductasa tipo oxidasa ajustando a la curva de respuesta a la dosis.

El acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazol-1-il)fenil]-4-metil-1,3-tiazol-5-carboxflico mostro una actividad 45 inhibidora de la xantina oxidasa de 1,0 nM < CI50 < 5,0 nM.

Ejemplo de referencia 4

Efecto hipouricemico (ratas normales)

El efecto hipouricemico se confirmo para el acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazol-1-il)fenil]-4-metil-1,3- tiazol-5-carboxflico. Un compuesto de ensayo suspendido en una disolucion de metilcelulosa al 0,5% se administro a 50 la fuerza a ratas macho Sprague-Dawley de 8 a 9 semanas de edad (Japan Charles River Co.) por administracion gastrica oral usando una aguja de alimentacion. Despues de recogerse la sangre desde la vena de la cola a las 2 horas despues de la administracion, se separo el plasma. El nivel de acido urico en la muestra de sangre se midio por el metodo de la uricasa usando un espectrometro de absorcion ademas de un kit de determinacion de acido urico (UA F Wako tipo L: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.). El porcentaje de efecto hipouricemico se determino mediante la

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30

35

siguiente expresion:

Porcentaje de efecto hipouricemico (%) = (Nivel de acido urico del animal de control - Nivel de acido urico del animal administrado con compuesto de ensayo) x 100 / Nivel de acido urico del animal de control

El acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazoM-il)feml]-4-metiM,3-tiazol-5-carboxflico mostro un efecto hipouricemico del 50% o mas en ambas dosis de 10 mg/kg y 1 mg/kg.

A partir de los resultados anteriores, se mostro que el acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazol-1-il)fenil]- 4-metil-1,3-tiazol-5-carboxflico tiene un potente efecto hipouricemico.

Ejemplo 5

Efecto hipouricemico prolongado (ratas normales)

Se administro acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazoM-il)fenil]-4-metiM,3-tiazol-5-carboxflico a ratas macho Sprague-Dawley de la misma manera que en el Ejemplo de referencia 4. Despues de recogerse la sangre de la vena de la cola 24 horas despues de la administracion, se separo el plasma. El nivel de acido urico en la sangre se midio por un metodo de la uricasa que usa un espectrometro de absorcion y un kit de determinacion de acido urico (UA F de Wako tipo L: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.). El porcentaje del efecto hipouricemico se determino por la siguiente expresion:

Porcentaje de efecto hipouricemico (%) = (Nivel de acido urico del animal de control - Nivel de acido urico del animal administrado con compuesto de ensayo) x 100 ! Nivel de acido urico del animal de control

El acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazoM-il)fenil]-4-metiM,3-tiazol-5-carboxflico mostro un efecto hipouricemico del 50% o mas en una dosis de 10 mg/kg y 40% o mas en una dosis de 3 mg/kg a las 24 horas despues de la administracion.

A partir de los resultados anteriores, se mostro que el acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazol-1-il)fenil]- 4-metil-1,3-tiazol-5-carboxflico tiene un efecto hipouricemico prolongado durante un largo periodo de tiempo.

Ejemplo de referencia 6

Efecto hipouricemico (perros Beagle hiperuricemicos)

El efecto hipouricemico del acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazol-1-il)fenil]-4-metil-1,3-tiazol-5- carboxflico en un perro Beagle hiperuricemico inducido por acido oxonico se confirmo. Un compuesto de ensayo suspendido en una disolucion de metilcelulosa al 0,5% se administro a un perro Beagle (Kitayama labes) mediante administracion gastrica oral. Se administro oxonato de potasio (50 mg/kg) de forma subcutanea antes y 4 horas despues de la administracion del compuesto. Despues de recogerse la sangre de la vena cefalica a las 8 horas despues de la administracion, se separo el plasma. El nivel de acido urico en la muestra de plasma se midio por el metodo LC-MS/MS y el porcentaje de efecto hipouricemico se determino mediante la siguiente expresion:

El acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazoM-il)fenil]-4-metiM,3-tiazol-5-carboxflico mostro un efecto hipouricemico del 80% o mas en una dosis de 10 mg/kg a las 8 horas despues de la administracion.

A partir de los resultados anteriores, se mostro que los compuestos de la presente invencion tienen un potente efecto hipouricemico en el perro Beagle.

Ejemplo de referencia 7

Efecto inhibidor prolongado de la xantina oxidasa en el tejido y el plasma.

Para la “xantina oxidasa” en la presente invencion, en lo que se refiere a este ejemplo, se distinguen las actividades que catalizan la reaccion oxidativa que se producen mediante la xantina oxidorreductasa tipo oxidasa solamente y mediante la xantina oxidorreductasa tanto tipo oxidasa como tipo deshidrogenasa. La primera es la “actividad de XO” y la ultima es la “actividad de XOR”. En la “actividad de XO en el tejido”, “actividad de Xo en plasma”, “inhibicion de la 5 actividad de XOR en el tejido”, “inhibicion de la actividad de XOR en el tejido” y similares, la “actividad de XO” y la “actividad de XOR” tienen el mismo significado que se define anteriormente. El tejido incluye hngado, rinon y vasos. Ademas, el porcentaje de inhibicion de la actividad de XO y el de la inhibicion de la actividad de XO en la misma muestra se ensena que son similares, segun los resultados posteriores.

El efecto inhibidor de la actividad de XO en el tejido, la actividad de XOR en el tejido y la actividad de XO en plasma 10 se confirmo para el acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazoM-il)fenil]-4-metiM,3-tiazl-5-carboxflico. Un compuesto de ensayo suspendido en una disolucion de metilcelulosa al 0,5% se administro de forma forzada a ratas macho Sprague-Dawley de 7 a 9 semanas de edad (Japan Charles River Co.) mediante administracion gastrica oral usando una aguja de alimentacion. La sangre se recogio de la vena abdominal y se recogio tejido a las 24 o 27 horas despues de la administracion. La muestra de plasma se preparo por centrifugado.

15 La actividad de XO en el tejido, la actividad de XOR en el tejido y la actividad de XO en plasma se midieron mediante el ensayo basado en pterina que utiliza la reaccion en que la pterina se oxida por cada tipo de xantina oxidorreductasa para producir isoxantopterina fluorescente. En resumen, los tejidos congelados se homogeneizaron con tampon fosfato de potasio, pH 7,4, que contema acido etilendiaminotetraacetico (EDTA) 1 mM e inhibidores de proteasa para preparar la concentracion de tejido como sigue (hngado: 25 mg/mL, rinon: 25 mg/mL, vasos: 30 mg/mL). Despues los 20 homogeneizados se centrifugaron a 12.000 rpm durante 15 min a 4°C. Cuando se midio la actividad de XO, el

sobrenadante del tejido y el plasma se co-incubaron respectivamente con disolucion de pterina 50 |jM a 37°C. Cuando se midio la actividad de xOr, el sobrenadante del homogeneizado del tejido se co-incubo con pterina 50 jM y disolucion de azul de metileno 50 jM a 37°C. Como un control, tambien se incubo xantina oxidorreductasa tipo oxidasa (a partir de suero de leche, fabricado por Calbiochem Novabiochem Corp.) con disolucion de pterina de la misma 25 manera. La actividad de XO y la actividad de XOR de las muestras se determinaron a partir de la intensidad de

fluorescencia que se normalizaron mediante el valor de intensidad del control y la concentracion de protema.

El porcentaje de inhibicion de la actividad de XO y de inhibicion de la actividad de XOR se determino mediante la siguiente expresion:

Porcentaje de inhibicion de actividad deXO o XOR (%) = (actividad de XO o XOR del animal de control - actividad de XO o XOR del animal administrado con compuesto de ensayo) x 100 / actividad de XO o XOR del animal de control.

30 Las actividades de XO en el hngado y el rinon y la actividad de XO en plasma 27 horas despues de la administracion se muestran en la tabla posterior.

Tabla 1

Actividad inhibidora de XO del tejido y el plasma (en la administracion): diseccion aproximadamente 27 horas despues de la

% de inhibicion (frente a vehnculo)

Dosis (mg/kg): 1 10

Hfgado: >80% >80%

Rinon: >60% >70%

Plasma: >25% >40%

El acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazol-1-il)fenil]-4-metiM,3-tiazol-5-carboxflico inhibio el 80% o mas 35 de la actividad de XO 27 horas despues de la administracion del farmaco en comparacion con el animal de control en la dosis de 10 mg/kg en el tngado.

El presente compuesto inhibio el 70% o mas de la actividad de XO 27 horas despues de la administracion del farmaco en comparacion con el animal de control a la dosis de 10 mg/kg en el rinon.

El presente compuesto inhibio el 40% o mas de la actividad de XO 27 horas despues de la administracion del farmaco 40 en comparacion con el animal de control a la dosis de 10 mg/kg en plasma.

El presente compuesto inhibio el 80% o mas de la actividad de XOR 27 horas despues de la administracion del farmaco en comparacion con el animal de control a la dosis de 1 mg/kg en el hngado.

El presente compuesto inhibio el 60% o mas de la actividad de XOR 27 horas despues de la administracion del farmaco

en comparacion con el animal de control a la dosis de 1 mg/kg en el rinon.

El presente compuesto inhibio el 25% o mas de la actividad de XO 27 horas despues de la administracion del farmaco en comparacion con el animal de control a la dosis de 1 mg/kg en plasma.

Ademas, la actividad inhibidora de XOR en los vasos a las 24 horas despues de la administracion se muestra en la 5 siguiente tabla.

Tabla 2

Actividad inhibidora de XOR del tejido (en la diseccion 24 horas despues de la administracion)

% de inhibicion (frente a vehnculo)

Dosis (mg/kg): 1 10

Hfgado: >80% >80%

Vasos: >30% >50%

El acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazoM-il)fenil]-4-metiM,3-tiazol-5-carboxflico inhibio el 80% o mas de la actividad de XOR 24 horas despues de la administracion del farmaco en comparacion con el animal de control a 10 la dosis de 10 mg/kg en el hngado.

El presente compuesto inhibio el 50% o mas de la actividad de XOR 24 horas despues de la administracion del farmaco en comparacion con el animal de control a la dosis de 10 mg/kg en los vasos.

Ademas, el presente compuesto inhibio el 80% o mas de la actividad de XOR 24 horas despues de la administracion del farmaco en comparacion con el animal de control a la dosis de 1 mg/kg en el tngado.

15 El presente compuesto inhibio el 30% o mas de la actividad de XOR 24 horas despues de la administracion del farmaco en comparacion con el animal de control a la dosis de 1 mg/kg en los vasos.

A partir de los resultados anteriores, se mostro que el compuesto de la presente invencion tiene un prolongado efecto inhibidor de la actividad de XO o la actividad de XOR.

Aplicabilidad industrial

20 Los cristales de acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazol-1-il)fenil]-4-metil-1,3-tiazol-5-carboxflico de la presente invencion se usan como un agente farmaceutico. Ademas, estos cristales pueden usarse como un ingrediente farmaceutico activo para producir un agente farmaceutico.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un cristal de acido 2-[4-(2,2-dimetilpropoxi)-3-(1H-1,2,3,4-tetrazoM-il)fenil]-4-metiM,3-tiazol-5-carbox^lico.
2. El cristal segun la reivindicacion 1, en donde el cristal tiene una forma cristalina A.
3. El cristal segun la reivindicacion 2, en donde el cristal tiene picos caractensticos a angulos de difraccion de 20 =

5 7,2°, 11,3°, 15,9°, 17,9°, 20,8°, 22,3°, 23,1°, 23,8°, 24,3° y 28,6° en su espectro de difraccion de rayos X a traves de

polvo.
4. El cristal segun la reivindicacion 2, en donde su espectro de difraccion de rayos X a traves de polvo tiene un patron mostrado en la Fig. 1.
5. El cristal segun la reivindicacion 2, en donde su pico exotermico en termogravimetna/analisis termico diferencial 10 esta a 232°C.
6. Una composicion farmaceutica que comprende el cristal segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y un vehuculo farmaceuticamente aceptable.
7. Un cristal segun cualquiera de las reivindicaciones 1-5, o una composicion farmaceutica segun la reivindicacion 6, para usar en terapia o profilaxis.

15 8. Un cristal segun cualquiera de las reivindicaciones 1-5, o una composicion farmaceutica segun la reivindicacion 6

para usar en el tratamiento o prevencion de una enfermedad asociada con la xantina oxidasa.
9. Un cristal o composicion farmaceutica para usar como en la reivindicacion 8, en donde la enfermedad asociada con la xantina oxidasa se selecciona del grupo que consiste en gota, hiperuricemia, smdrome de lisis tumoral, calculos urinarios, hipertension, dislipidemia, diabetes, enfermedades cardiovasculares, enfermedades renales, enfermedades 20 respiratorias, enfermedades intestinales inflamatorias y enfermedades autoinmunes.