ES2659538T3 - Preparaciones de factor de transferencia y métodos asociados - Google Patents

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Abstract

Un suplemento nutricional, que comprende: un componente de fruta que incluye un zumo de una fruta que contiene oligoproantocianidina, conteniendo el zumo una oligoproantocianidina; un componente de factor de transferencia que incluye al menos factor de transferencia y lactoferrina.

Description

imagen1
imagen2
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imagen4
imagen5
(continuación)
Ratón
Pata (izquierda/derecha) Parte suave de la pata (no tratada) (micrómetros) Parte suave de la pata (final) (micrómetros) Parte suave de la pata (diferencia) (micrómetros)
3
Izquierda (control) 2057,40 2057,40 0,00
Derecha (prueba)
2032,00 2057,40 25,40
4
Izquierda (control) 2006,60 2032,00 25,40
Derecha (prueba)
2032,00 2057,40 25,40
5
Izquierda (control) 1955,80 2006,60 50,80
Derecha (prueba)
1930,40 1955,80 25,40
6
Izquierda (control) 1905,00 1930,40 25,40
Derecha (prueba)
1876,60 1955,80 76,20
En forma similar a los resultados de la primera fase, las partes suaves de la pata trasera izquierda de los ratones del grupo de control negativo exhibieron, en promedio, únicamente 12.70 micrómetros más de hinchazón
5 aproximadamente 24 horas después de la inyección de antígenos que las partes suaves de la pata trasera izquierda de los mismos ratones exhibida 24 horas después de la inyección de solución salina estéril. Ya que veinticuatro horas no es un período de tiempo suficiente para que un ratón tenga una respuesta inmune primaria (por ejemplo, transmitida por anticuerpo) al antígeno, estas diferencias significativas en hinchazón mostraron que los ratones no exhiben una respuesta inmune secundaria significativa al antígeno.
10 Ejemplo 3
En la primera fase del estudio, aproximadamente veinticuatro horas después de que los ratones se inyectaron con la solución de antígenos, las partes suaves de la pata trasera derecha de los seis ratones del segundo grupo de ratones (en donde los ratones habían sido inoculados previamente con una solución que incluye 16% de sólidos (p/v) de calostro en un pH de 4.0) se hincharon, en promedio, 50.80 micrómetros más que la hinchazón que se midió
15 en las partes suaves de la pata trasera izquierda de estos ratones. Estos resultados indican que hubo una mayor respuesta inmune secundaria, o hipersensibilidad tipo retardada en las partes suaves de las patas en donde el antígeno se inyectó, que en las partes suaves de las patas en las cuales no se inyectó antígeno, las cuales probablemente se hincharon debido a que fueron pinchadas por una aguja.
En la segunda fase del estudio, se obtuvieron resultados similares, tal como se establece en la siguiente tabla:
20 TABLA 3
Ratón
Pata (izquierda/derecha) Parte suave de la pata (no tratada) (micrómetros) Parte suave de la pata (final) (micrómetros) Parte suave de la pata (diferencia) (micrómetros)
1
Izquierda (control) 1955,80 2006,60 50,80
Derecha (prueba)
1981,20 2057,40 76,20
2
Izquierda (control) 1930,40 2006,60 76,20
Derecha (prueba)
1955,80 2108,20 152,40
3
Izquierda (control) 1955,80 2006,60 50,80
Derecha (prueba)
1981,20 2082,80 101,60
4
Izquierda (control) 2032,00 2057,40 25,40
Derecha (prueba)
2057,40 2108,20 50,80
5
Izquierda (control) 1930,40 2006,60 76,20
Derecha (prueba)
1955,80 2032,00 76,20
6
Izquierda (control) 2057,40 2108,20 50,80
Derecha (prueba)
2032,00 2159,00 127,00
En forma más específica, las partes suaves de la pata trasera derecha de seis ratones del segundo grupo se hincharon de modo que midieron, en promedio, 42.33 micrómetros más que la hinchazón que se midió en las partes suaves de la pata trasera izquierda de estos ratones antes y después de la inoculación de sus partes suaves de las
25 patas con la solución de antígeno. Los resultados similares entre la primera y segunda fases del estudio indican que, una vez que una solución líquida que incluye el factor de transferencia ha sido esterilizada, no existe cambio o hay muy poco cambio en la actividad del factor de transferencia después de un almacenamiento prolongado de la solución.
7
imagen6
(continuación)
Ratón
Pata (izquierda/derecha) Parte suave de la pata (no tratada) (micrómetros) Parte suave de la pata (final) (micrómetros) Parte suave de la pata (diferencia) (micrómetros)
Derecha (prueba)
1905,00 2032,00 127,00
5
Izquierda (control) 2032,00 2082,80 50,80
Derecha (prueba)
2057,40 2184,40 127,00
6
Izquierda (control) 1955,80 1955,80 0,00
Derecha (prueba)
2006,60 2057,40 50,80
Ya que los resultados son comparables (es decir, no son significativamente mayores) con los obtenidos con las soluciones esterilizadas con calor (ver resultados de los ejemplos 3 y 4) podrá apreciarse que la esterilización con 5 calor de una solución que incluye factor de transferencia no disminuye o reduce en forma significativa la actividad del factor de transferencia.
Ejemplo 6
Esta conclusión fue verificada a través de los datos de otro ensayo en la parte blanda de las patas de ratones, en donde se inocularon seis ratones BALB/c, en la parte de atrás del cuello, con 0.5 ml de una solución que incluye 10 16% de sólidos (p/v) de una fracción de calostro secada con rocío que había sido reconstituida en agua destilada, desionizada. Aproximadamente 24 horas más tarde, los ratones fueron anestesiados con isoflurano, posteriormente las partes suaves de las patas en su pata trasera se midió e inoculó en la forma descrita anteriormente (es decir, la parte blanda de la parte izquierda con solución salina estéril, parte blanda derecha con solución de antígeno). Después de aproximadamente otras 24 horas, las partes suaves de las patas se midieron nuevamente. Las partes 15 suaves de las patas derechas de estos ratones se hincharon, en promedio, aproximadamente 42.33 micrómetros más que las partes suaves de la pata trasera izquierda de estos ratones. Este valor es comparable (es decir no es significativamente diferente) con las diferencias observadas anteriormente con respecto al segundo, tercero y cuarto grupos de ratones tanto en la primera como segunda fase del estudio descrito en los ejemplos del 2 al 5 y 7, soportando en forma adicional la conclusión de que la esterilización con calor de una solución que incluye factor de
20 transferencia, tal como las soluciones que fueron probadas en el segundo y tercer grupo de ratones (ejemplos 3 y 4) no tienen un efecto adverso significativo en la actividad del factor de transferencia.
Ejemplo 7
El hecho de que el factor de transferencia con el cual los ratones fueron inoculados fueran responsables de la respuesta inmune secundaria incrementada, está soportada por los resultados del quinto grupo o grupo de control 25 positivo, de ratones durante la segunda fase del estudio, tal como se establece en la segunda tabla:
TABLA 6
Ratón
Pata (izquierda/derecha) Parte suave de la pata (no tratada) (micrómetros) Parte suave de la pata (final) (micrómetros) Parte suave de la pata (diferencia) (micrómetros )
1
Izquierda (control) 1981,20 2006,60 25,40
Derecha (prueba)
2006,60 2082,80 76,20
2
Izquierda (control) 1828,80 1854,20 25,40
Derecha (prueba)
1879,60 2082,80 203,20
3
Izquierda (control) 1905,00 1930,40 25,40
Derecha (prueba)
1981,20 2082,80 101,60
4
Izquierda (control) 2006,60 2057,40 50,80
Derecha (prueba)
2032,00 2184,40 152,40
5
Izquierda (control) 2032,00 2057,40 25,40
Derecha (prueba)
2057,40 2184,40 127,00
6
Izquierda (control) 2108,20 2108,20 0,00
Derecha (prueba)
2082,80 2184,40 101,60
Estos resultados, los cuales muestran en promedio, 101.60 micrómetros más de hinchazón en las partes suaves de las patas que fueron inoculadas con solución de antígenos con respecto a las que fueron inoculadas con solución 30 salina estéril, son similares a la diferencia de 124.88 micrómetros observados en los ratones del grupo de control positivo durante la primera fase del estudio de la parte blanda de la pata de ratones. La mayor hinchazón en las partes suaves de las patas inoculadas son solución de antígeno de los ratones del grupo de control positivo indica una mayo respuesta inmune secundaria que la inducida en forma artificial a través de la administración de factor de
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transferencia, ya que los ratones del grupo de control positivo tuvieron un periodo de tiempo suficiente (es decir, dos semanas) para generar su propio factor de transferencia, y por lo tanto, para generar su propia respuesta inmune secundaria al antígeno.
Una vez que se ha fabricado una preparación comestible de la presente invención, puede introducirse en un contenedor limpio o estéril para el transporte y almacenamiento subsecuentes.
Ejemplo 8
En otro estudio, se llevaron a cabo ensayos en las partes suaves de la pata de ratones para determinar la efectividad del factor de transferencia en muestras tratadas con calor de una solución líquida que incluye factor de transferencia que ha sido almacenado durante un año. En total, se prepararon cuatro muestras, teniendo dos de ellas un pH de aproximadamente 4 y teniendo dos de ellas un pH de aproximadamente 7. Todas las muestras han sido esterilizadas en forma instantánea a una temperatura de aproximadamente 120ºC, durante aproximadamente 2 segundos hasta aproximadamente 4 segundos. Las muestras se almacenaron en forma subsecuente durante un año en donde cada una de las muestras con un pH = 4 y pH = 7 siendo almacenadas a temperatura ambiente (la cual varía de aproximadamente 18ºC hasta aproximadamente 25ºC) y en donde cada una de las muestras tiene un pH = 4 y pH = 7 habiendo siendo refrigeradas (a temperaturas de aproximadamente 4ºC). Después de año, las muestras fueron liofilizadas. Antes de las pruebas, las muestras liofilizadas se reconstituyeron hasta concentraciones deseadas, posteriormente se administraron en la forma descrita anteriormente.
En la primera muestra, la cual incluye un líquido que tiene un pH de aproximadamente 4 se almacenó a temperatura ambiente, la hinchazón de la parte blanda de la pata fue en promedio de 50.80 micrómetros más que las partes suaves de las patas que han sido inyectadas con antígeno versus las partes suaves de las patas que han sido inyectadas meramente con solución salina. Estos resultados se repitieron en una segunda (líquido con un pH de aproximadamente 7 que fue almacenado a temperatura ambiente), tercera (líquido de un pH de aproximadamente 4 que ha sido refrigerado) y cuarta (líquido de un pH de aproximadamente 7 que fue refrigerado) muestras, en las cuales las partes suaves de las partes traseras de las patas habían sido inyectadas con antígeno, se hincharon, en promedio respectivamente 59.27, 67.73, y 63.50 micrómetros más que las partes suaves de las patas traseras que habían sido inyectadas meramente con solución salina.
Además, se prepararon controles positivos y negativos tal como se describió anteriormente. En el control positivo, la diferencia promedio es la hinchazón entre las partes suaves de las patas inyectadas con antígenos y las partes suaves de las patas inyectadas con solución salina fue de 114.30 micrómetros. En el control negativo, la diferencia promedio en hinchazón entre las partes suaves de las patas inyectadas con antígenos y las partes suaves de las patas inyectadas con solución salina fue únicamente de 38.10 micrómetros.
Tomados en conjunto, estos datos indican que la hinchazón incrementada fue debido a la presencia del factor de transferencia en ratones en las áreas (partes suaves de las patas traseras) en las cuales se introdujo el antígeno. En forma adicional, estos datos indican que el factor de transferencia perdió poco o nada de su efectividad después del tratamiento con calor y almacenamiento prolongado. La actividad del factor de transferencia en muestras refrigeradas parece haber sido ligeramente mayor que la actividad del factor de transferencia en las muestras a temperatura ambiente.
Además, a partir de lo anterior parece que el pH en el factor de transferencia se mantiene (aproximadamente 4 o aproximadamente 7) no tiene efecto o tiene poco efecto en su viabilidad a largo plazo.
Aunque la descripción anterior contiene muchas especificidades, esto no se construye como una limitación del alcance de la presente invención, sino meramente como un suministro de ilustraciones de algunas de las modalidades actualmente preferidas. En forma similar, se pueden considerar otras modalidades de la presente invención las cuales no se apartan del espíritu o alcance de la misma. Las características procedentes de diferentes modalidades pueden emplear en combinación. El alcance de la presente invención, por consiguiente, se indica y se limita únicamente a través de las reivindicaciones adjuntas y sus equivalentes legales, en lugar de por la descripción anterior. Todas las adiciones, eliminaciones y modificaciones a la presente invención aquí descritas, y que están dentro de los significados y alcances de las reivindicaciones están contenidas en la misma.
10

Claims (1)

  1. imagen1
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US67722605P 2005-05-02 2005-05-02
US677226P 2005-05-02
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