ES2645970T3

ES2645970T3 - Inhibidores de agrecanasa

Info

Publication number: ES2645970T3
Application number: ES13785745.4T
Authority: ES
Inventors: Timothy Barrett Durham; Jothirajah MARIMUTHU; Michael Robert Wiley
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2012-10-26
Filing date: 2013-10-18
Publication date: 2017-12-11
Anticipated expiration: 2033-10-18
Also published as: TW201427955A; AR092971A1; US20150218107A1; EA201590621A1; US9206139B2; KR20150058480A; CA2886526C; MX2015005297A; WO2014066151A1; PT2912021T; AU2013334989B2; EP2912021B1; BR112015009032B1; TWI620738B; EP2912021A1; BR112015009032A2; JP2015535248A; KR101689983B1; DK2912021T3; CA2886526A1

Abstract

Un compuesto que tiene la fórmula:**Fórmula** en la que R1 se selecciona entre metilo, etilo, propilo, dimetilo y ciclopropilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

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DESCRIPCIÓN

Inhibidores de agrecanasa

El tejido conectivo es un componente necesario de todos los mamíferos. Proporciona rigidez, diferenciación, uniones y, en algunos casos, elasticidad. Los componentes del tejido conectivo incluyen, por ejemplo, colágeno, elastina, proteoglicanos, fibronectina y laminina. Estos productos bioquímicos constituyen (o son componentes de) estructuras, tales como la piel, el hueso, los dientes, el tendón, el cartílago, la membrana basal, los vasos sanguíneos, la córnea y el humor vítreo. La artritis es una forma de trastorno de las articulaciones que implica la inflamación del tejido conectivo de una o más articulaciones. Independientemente del tipo de artritis, los síntomas comunes de todos los trastornos artríticos incluyen niveles diversos de dolor, hinchazón, rigidez de las articulaciones y, algunas veces, un dolor constante alrededor de la articulación o articulaciones.

Se estima que la mitad de los pacientes humanos de 65 años y mayores, casi todos los pacientes de 75 años y mayores, tienen osteoartritis. Existen muchos tratamientos para la osteoartritis (OA), que varían del Tylenol a los opiáceos (para tratar el dolor por OA) y la cirugía de reemplazo de la articulación total extrema. Actualmente no existe ningún tratamiento aprobado que haya demostrado afectar a la progresión de la OA.

La artritis es mucho más común en perros que en otros animales domésticos. La artritis es una enfermedad terrible, ya que causa el dolor de los animales y restringe la movilidad. Cualquier perro puede padecer artritis, aunque los perros de edad más avanzada y las razas más grandes pueden ser más susceptibles. Los perros activos, como los perros de trabajo o caza, también pueden estar en mayor riesgo debido a sus niveles de actividad mayores.

La caracterización bioquímica del cartílago en la articulación artrítica muestra una pérdida significativa de dos componentes clave de la matriz, el colágeno, en particular el colágeno de tipo II, y el agrecano. La degradación del agrecano es uno de los primeros cambios observados en la erosión del cartílago, en particular en la osteoartritis (OA). Los estudios han indicado que el agrecano es catabolizado por dos proteasas de matriz extracelular identificadas como agrecanasas. Dos proteasas agrecanasa, ADAMTS-4 (una desintegrina y metaloproteasa con motivos de trombospondina (en inglés a disintegrin and metalloprotease with thrombospondin motifs), agrecanasa 1) y ADAMTS-5 (agrecanasa 2), se han identificado como particularmente eficaces el catabolismo del agrecano. Existe una necesidad de proporcionar un tratamiento más eficaz de la artritis y, en particular, un tratamiento de la OA.

La degradación o erosión de las articulaciones se produce en diversas enfermedades, incluyendo la artritis reumatoide, la artritis psoriásica, la osteoartrosis, la artritis hipertrófica y la osteoartritis. Adicionalmente, la inflamación aguda de las articulaciones puede ir acompañada de la destrucción del cartílago. Son ejemplos de enfermedades que implican la inflamación aguda de las articulaciones son la artritis por yersinia, la artritis pro pirofosfato, la artritis gotosa y la artritis séptica. Además, otro factor que puede conducir a la destrucción o la degeneración del cartílago es el tratamiento con cortisona.

El documento WO 02/096426 desvela una serie de derivados de hidantoína que se dice que son útiles como inhibidores de metaloproteinasas de la matriz (MMP), de la enzima convertidora de TNF-α (TACE), la agrecanasa o una combinación de las mismas. Los derivados se desvelan como útiles en el tratamiento de trastornos inflamatorios, incluyendo la osteoartritis.

La presente invención proporciona compuestos que pueden ser útiles para el tratamiento de la artritis y, en particular, de la osteoartritis, así como para la inhibición de la erosión del cartílago. Los compuestos de la presente invención presentan potencia hacia ADAMTS 4 y/o ADAMTS 5.

La presente invención proporciona compuestos que tienen la fórmula:

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en la que R1 se selecciona entre metilo, etilo, propilo, dimetilo y ciclopropilo, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Como puede verse en la Fórmula I, los compuestos de las invenciones tienen dos centros quirales, o un centro quiral cuando R1 es dimetilo:

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Etapa 4: Síntesis de (2R)-N-[[(4R)-4-ciclopropil-2,5-dioxo-imidazolidin-4-il]metil]-2-[[4(trifluorometil)fenil]metil]butanamida (Ejemplo 2)

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A un MFR de 3 bocas (2 l) se le añadieron diclorometano (996 ml), dimetilformamida (200 ml), ácido (2R)-2-[[4

5 (trifluorometil)fenil]metil]butanoico (53 g, 215 mmoles) y hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'tetrametiluronio (215 mmoles; 81,84 g) a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno. A la mezcla se le añadió N,N-dimetil-etanamina (1,08 moles; 116,80 ml) en una porción. La mezcla se agitó durante 30 min. A la solución resultante se le añadió (5R)-5-(aminometil)-5-ciclopropil-imidazolidina-2,4-diona (237 mmoles; 49 g) en una porción. La solución resultante se agitó durante 2,5 h. Después se detuvo la agitación y la mezcla se dejó reposar

10 abierta al aire durante 16 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (200 ml) y se lavó con HCl 2 M (ac.) (200 ml, 2 veces), NaHCO3 al 5 % (ac.) (200 ml, 2 veces) y salmuera (500 ml). La fase orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a un aceite. El aceite se diluyó con CH2Cl2 (250 ml) provocando que precipitase un sólido de color blanco. El sólido se recogió por filtración y se lavó con éter de petróleo (100 ml, 2 veces) para proporcionar el compuesto del título (55 g; EM: [M+H]+ = 398 m/z).

15 Ejemplo 3

(2S)-2-ciclopropil-N-[[(4R)-4-ciclopropil-2,5-dioxo-imidazolidin-4-il]metil]-3-[4-(trifluorometil)fenil]propanamida

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La síntesis como se ha descrito esencialmente en el Ejemplo 2 puede usarse para fabricar el compuesto anterior, mediante el uso de cloruro de 2-ciclopropilacetilo en lugar de cloruro de butanoílo.

20 Ejemplo 4 (2S)-N-[[(4R)-4-ciclopropil-2,5-dioxo-imidazolidin-4-il]metil]-3-metil-2-[[4-(trifluorometil)fenil]metil]butanamida

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La síntesis como se ha descrito esencialmente en el Ejemplo 2 puede usarse para fabricar el compuesto anterior, mediante el uso de cloruro de 3-metilbutanoílo en lugar de cloruro de butanoílo.

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mediante la adición del sustrato a una concentración final de 20 µM. La concentración final de DMSO en el ensayo era del 1,0 %. La placa se incubó durante 2-4 horas a temperatura ambiente y la escisión del sustrato se determinó a temperatura ambiente con un lector de placas de fluorescencia (filtro de excitación de 320 y filtro de emisión de 436) en un LJL Analyst® o un Envision® Wallac.

Los datos se analizaron mediante el uso de programas de software ActivityBase® v. 5.3 usando una ecuación 205 de modelo de ajuste de 4 parámetros a partir de la cual se generaron CI50 relativas. La señal máxima se calculó a partir de pocillos sin tratar mediante el inhibidor, pero que tenían enzima, sustrato y DMSO al 1,0 %. La señal mínima se calculó a partir de pocillos que tenían solamente tampón (sin enzima), sustrato y DMSO al 1,0 %.

Ensayo de fluorescencia in vitro de otra actividad MMP

Se usó esencialmente el mismo procedimiento para los ensayos de MMP restantes que para el ensayo de MMP-2, anteriormente, o como se conoce en la técnica. Por ejemplo, para la MMP-14, la fuente de enzima es el dominio catalítico de MMP-14 (MT1-MMP) producido por la activación de una proforma soluble recombinante de la enzima purificada a partir del periplasma. Consiste en restos de aminoácidos Tyr89 a Gly265 de MT1-MMP humana madura (Calbiochem® número de catálogo 475935). La concentración final de cada pocillo era de 0,5 nM en lugar de 0,2 nM como en el ensayo de MMP-2. Los datos de los compuestos representativos de la invención se proporcionan a continuación en la Tabla 3.

Tabla 3

Ejemplo: CI50 de MMP1 (uM) CI50 de MMP2 (uM) CI50 de MMP3 (uM) CI50 de MMP7 (uM) CI50 de MMP8 (uM) CI50 de MMP9 (uM) CI50 de MMP12 (uM) CI50 de MMP13 (uM) CI50 de MMP14 (uM)

1: No sometido a ensayo 1,75 2,845 >100 0,0179 12 0,009 1,110 3,89

2: 0,897 0,704 15,342 >100 <0,00510 0,439 0,026 4,189 7,99

3: 39,2 35 99,710 >100 0,804 >100 0,268 46,952 50,2

4: 56,8 >100 >100 >100 5,22 >100 3,365 >100 >100

5: 4,55 4,652 13,165 >100 0,054 7,59 0,071 4,808 14,870

Modelo de PD por inyección de MIA en ratas

Puede emplearse el ensayo como se describe en Swearingen y col., Osteoarthritis and Cartilage 18 (2010) 11591166. Se preparó MIA (Sigma, nº de catálogo I2512, sal de sodio) recién hecho el día de uso a 3 mg en 50 ul de solución salina estéril al 0,9 %. Se anestesiaron ratas Lewis macho de 7-8 semanas de edad y se les inyectó con MIA por vía intraarticular en la rodilla derecha (para inducir la actividad endógena de la agrecanasa y la liberación de fragmentos de agrecano en el fluido sinovial) y solución salina en la rodilla izquierda (contralateral) el día 0. Se dosificaron por vía oral inhibidor de agrecanasa (3, 10 o 30 mg/kg) o vehículo [hidroxietilcelulosa al 1 % (HEC); Tween 80 al 25 %; antiespumante al 0,05 %], dos veces al día a partir del día 3. Se administró una sola dosis de compuesto el día 7, los animales se sacrificaron 4 h más tarde y las articulaciones de la rodilla se lavaron con 200 ul de solución salina. Se sometió a ensayo el lavado sinovial para determinar los fragmentos de agrecano escindidos por agrecanasa usando el ELISA sándwich NITEGE. La cantidad de fragmentos de agrecano presentes en el lavado sinovial se determinó basándose en una curva patrón generada con agrecano de rata digerido con agrecanasa. El análisis estadístico se realizó usando el ensayo de Dunnett. Ensayo ELISA Sándwich: Para el ELISA NITEGE, el anticuerpo monoclonal a-NITEGE se inmovilizó sobre placas de ELISA de unión elevada de color blanco (Nunc) durante la noche a 4 ºC. Después del bloqueo, se añadieron muestras de lavado de fluido sinovial de rata a la placa y se capturaron fragmentos con una secuencia NITEGE C-terminal. Los fragmentos capturados se detectaron usando el anticuerpo monoclonal a-HABR conjugado con HRP. La señal de ELISA se midió usando el sustrato de sensibilidad máxima Supersignal ELISA Femto (Pierce) y se leyó en un luminómetro Victor. La cantidad de fragmentos de agrecano presente en la muestra se determinó basándose en una curva patrón generada con agrecano de condrosarcoma de rata digerido con agrecanasa (solución madre 850 mg/ml diluida en tampón de dilución de anticuerpo). Los datos se presentan en la Tabla 4.

Tabla 4

Solución salina: ETM de solución salina MIA ETM de MIA % de inhibición Valor P

Vehículo: 4,00 0,62 27,02 4,29

Ejemplo 1 10 MPK: 15,87 0,92 41,3 0,0052

Ejemplo 1 30 MPK: 14,00 1,57 48,2 0,0011

Ejemplo 1 100 MPK: 8.06 1.29 70.2 <0,0001

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Estudio del biomarcador plasmático ARGN en perros con osteoartritis

El objetivo de este estudio es determinar la respuesta del biomarcador plasmático ARGN en perros osteoartríticos (OA) a un compuesto de la invención a través de un intervalo de dosis después de la administración oral diaria durante 21 días. Se admitieron dieciséis (16) perros de laboratorio adultos de raza Beagle ≥ 8 años de edad con signos radiológicos de OA en la articulación o articulaciones de la cadera y 4 perros Beagle de control emparejados por edad.

Se recogieron muestras de sangre para las concentraciones plasmáticas de ARGN basales de todos los perros los días 30, 28 y 26 antes de comenzar la administración de la dosis. Los 16 perros con OA se aleatorizaron en bloque por sus concentraciones plasmáticas de ARGN basales promedio a 1 de 4 grupos de tratamiento: placebo, 0,1, 1 y 10 mg/kg del compuesto del Ejemplo 2. Los 4 perros de control emparejados por edad sin OA se asignaron todos al grupo de tratamiento con placebo. Comenzando en el día 0, los perros recibieron la administración por sonda oral una vez al día del compuesto Ejemplo 2 en una solución/suspensión durante 3 semanas en función de su grupo de tratamiento asignado. Las muestras de sangre para la determinación de la concentración del ARGN plasmático y del compuesto del Ejemplo 2 se recogieron antes de la primera administración de la dosis y 3 veces por semana durante 4 semanas adicionales (día 28). Se recogieron muestras de sangre adicionales para la determinación de la concentración del ARGN plasmático y del compuesto del Ejemplo 2 antes de y 1, 2, 6, 12 y 24 horas después de la última administración de la dosis (Día 20). Las concentraciones plasmáticas de ARGN se determinaron por inmunoensayo usando un protocolo de ELISA sándwich y la concentración plasmática del compuesto Ejemplo 2 se determinó usando un procedimiento CL-EM/EM. Se calcularon estadísticas resumidas de las concentraciones del ARGN plasmático y del compuesto del Ejemplo 2 y se realizó un análisis farmacocinético no compartimental de las concentraciones del compuesto del Ejemplo 2.

Las concentraciones plasmáticas de ARGN se inhibieron de manera sensible a la dosificación con inhibiciones medias el Día 21 del 33,8 %, 70,7 % y 80,3 % después de la dosificación diaria con 0,1, 1 y 10 mg/kg del compuesto del Ejemplo 2, respectivamente. La inhibición del ARGN en perros normales y perros con OA tratados con placebo fue comparativamente baja, variando del -1,30 % al 13,4 %. Las concentraciones ARGN no fueron sustancialmente diferentes entre perros normales y perros con OA tratados con placebo. Las concentraciones plasmáticas del compuesto del Ejemplo 2 aumentaron con la dosis de manera subproporcional y se alcanzaron rápidamente concentraciones en el estado estacionario. Es evidente que el aumento de las dosificaciones y la exposición sistémica del compuesto del Ejemplo 2 dio como resultado el aumento de la inhibición de concentraciones plasmáticas de ARGN. Por tanto, el compuesto del Ejemplo 2 inhibió su agrecanasa diana en perros con OA de origen natural tras la administración oral una vez al día.

La invención se describe mediante las siguientes cláusulas.

1. Un compuesto que tiene la fórmula:

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en la que R1 se selecciona entre metilo, etilo, propilo, dimetilo y ciclopropilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. El compuesto de acuerdo con la cláusula 1 que tiene la fórmula:

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o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

10. El compuesto de acuerdo con la cláusula 9 que tiene la fórmula:

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o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

11. El compuesto de acuerdo con la cláusula 1 que tiene la fórmula:

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o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

12. El compuesto de acuerdo con la cláusula 11 que tiene la fórmula:

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o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

13. El compuesto de acuerdo con la cláusula 1 que tiene la fórmula:

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27. Un compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las cláusulas 22 a 26, en el que el compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se ha de administrar en un comprimido, cápsula, solución o suspensión.

28. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las cláusulas 1 a 14, o una sal farmacéuticamente 5 aceptable del mismo, para su uso en la inhibición de la erosión del cartílago.

29.: Un compuesto para su uso de acuerdo con la cláusula 28, en el que el compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se ha de administrar con al menos un agente activo adicional.

30.: Un compuesto para su uso de acuerdo con la cláusula 28 o 29, en el que el compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se ha de administrar a un ser humano.

10 31. Un compuesto para su uso de acuerdo con la cláusula 28 o 29, en el que el compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se ha de administrar a un perro.

32.: Un compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las cláusulas 28 a 31, en el que el compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se ha de administrar por vía oral.

33.: Un compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las cláusulas 28 a 32, en el que el compuesto, o

15 una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se ha de administrar en un comprimido, cápsula, solución o suspensión.

34.: El uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las cláusulas 1 a 14, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento.

35.: El uso de la cláusula 34, en el que dicho medicamento es para el tratamiento de la artritis.

20 36. El uso de la cláusula 34 o 35, en el que dicho medicamento es para la inhibición de la erosión del cartílago.

37.: El uso de cualquiera de las cláusulas 34 a 36, en el que dicho medicamento está adaptado para la administración oral.

38.: El uso de cualquiera de las cláusulas 34 a 37, en el que dicho medicamento está en forma de un comprimido, cápsula, solución o suspensión.

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Claims

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