ES2637151T3 - Tratamiento del linfoma de células T periféricas - Google Patents

Abstract

Un anticuerpo que se une a un polipéptido NKp46 y que agota las células tumorales que expresan NKp46, para su uso en el tratamiento o en la prevención de un linfoma de células T periféricas (LCTP) en un individuo.

Description

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El término "anticuerpo", como se utiliza en la presente memoria, se refiere a anticuerpos policlonales y monoclonales. Dependiendo del tipo de dominio constante en las cadenas pesadas, los anticuerpos se asignan a una de las cinco clases principales: IgA, IgD, IgE, IgG, e IgM. Varios de estos se dividen además en subclases o isotipos, tales como IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, y similares. Una unidad estructural a modo de ejemplo de inmunoglobulina (anticuerpo) comprende un tetrámero. Cada tetrámero está compuesto de dos pares idénticos de cadenas polipeptídicas, teniendo cada par una cadena "ligera" (aproximadamente 25 kDa) y una cadena "pesada" (aproximadamente 50-70 kDa). El extremo N-terminal de cada cadena define una región variable de aproximadamente 100 a 110 o más aminoácidos que son principalmente responsables del reconocimiento del antígeno. Las expresiones variable de la cadena ligera (VL) y variable de la cadena pesada (VP) se refieren a estas cadenas ligeras y pesadas, respectivamente. Los dominios constantes de la cadena pesada que corresponden a las diferentes clases de inmunoglobulinas se denominan "alfa", "delta", "épsilon", "gamma" y "mu", respectivamente. Las estructuras de las subunidades y las configuraciones tridimensionales de las diferentes clases de inmunoglobulinas son bien conocidas. IgG son las clases a modo de ejemplo de anticuerpos empleados en la presente memoria, ya que son los anticuerpos más comunes en la situación fisiológica y ya que se elaboran con más facilidad en un entorno del laboratorio. Opcionalmente, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal. Los ejemplos particulares de anticuerpos son anticuerpos humanizados, quiméricos, humanos, o adecuados para humanos. "Anticuerpos" también incluyen cualquier fragmento o derivado de cualquiera de los anticuerpos descritos en la presente memoria.

La expresión "se une específicamente a" significa que un anticuerpo puede unirse preferentemente en una prueba de unión competitiva al miembro de unión, p. ej., NKp46, como se evaluó utilizando formas recombinantes de las proteínas, epítopos en ellas o proteínas nativas presentes en la superficie de las células diana aisladas. Las pruebas de unión competitiva y otros métodos para determinar la unión específica se describen adicionalmente más adelante y son bien conocidas en la materia.

Cuando se dice que un anticuerpo "compite con" un anticuerpo monoclonal particular, significa que el anticuerpo compite con el anticuerpo monoclonal en una prueba de unión utilizando cualquiera de las moléculas NKp46 recombinantes o moléculas NKp46 expresadas en la superficie. Por ejemplo, si un anticuerpo de ensayo reduce la unión de Bab281, 9E2 o 195314 a un polipéptido NKp46 o célula que expresa NKp46 en una prueba de unión, se dice que el anticuerpo "compite" respectivamente con Bab281, 9E2 o 195314.

El término "afinidad", como se utiliza en la presente memoria, significa la fuerza de la unión de un anticuerpo a un epítopo. La afinidad de un anticuerpo está dada por la constante de disociación Kd, que se define como [Ab] x [Ag]/[Ab-Ag], en la que [Ab-Ag] es la concentración molar del complejo anticuerpo-antígeno, [Ab] es la concentración molar del anticuerpo no unido y [Ag] es la concentración molar del antígeno no unido. La constante de afinidad Ka se define por 1/Kd. Los métodos para determinar la afinidad de AMs se pueden hallar en Harlow, et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y., 1988), Coligan et al., eds., Current Protocols in Immunology, Greene Publishing Assoc. y Wiley Interscience, N.Y., (1992, 1993), y Muller, Meth. Enzymol. 92:589-601 (1983). Uno de los métodos convencionales bien conocidos en la materia para determinar la afinidad de los AMs es el uso de la detección por resonancia de plasmón superficial (RPS) (tal como mediante un análisis con un dispositivo analítico de RSO BIAcore™).

En el contexto de la presente memoria, un "determinante" designa un sitio de interacción o de unión en un polipéptido.

El término "epítopo" se refiere a un determinante antigénico, y es el área o región en un antígeno al que se une un anticuerpo. Un epítopo de proteína puede comprender residuos de aminoácidos implicados directamente en la unión, así como residuos de aminoácidos que están bloqueados eficazmente por el anticuerpo o péptido específico de unión al antígeno, es decir, residuos de aminoácidos en la "impronta" del anticuerpo. Es la forma más simple o área estructural más pequeña en un complejo molécula antígeno que puede combinarse con p. ej., un anticuerpo o un receptor. Los epítopos pueden ser lineales o conformacionales/estructurales. La expresión "epítopo lineal" se define como un epítopo compuesto de residuos de aminoácidos que son contiguos en la secuencia lineal de aminoácidos (estructura primaria). La expresión "epítopo conformacional o estructural" se define como un epítopo compuesto de residuos de aminoácidos que no son todos contiguos y de este modo representan partes separadas de la secuencia lineal de aminoácidos que se aproximan entre sí mediante el plegado de la molécula (estructuras secundaria, terciaria y/o cuaternaria). Un epítopo conformacional es dependiente de la estructura 3-dimensional. El término "conformacional" se suele utilizar por lo tanto de forma intercambiable con "estructural".

La expresión "fragmento inmunogénico" se refiere a cualquier fragmento polipeptídico o peptídico que es capaz de provocar una respuesta inmunitaria, tal como (i) la generación de anticuerpos que se unen a dicho fragmento y/o la unión de cualquier forma de la molécula que comprende dicho fragmento, incluyendo el receptor unido a la membrana y mutantes derivados de los mismos, o (ii) la estimulación de una respuesta de células T que implica células T que reaccionan con el complejo bi-molecular que comprende cualquier molécula de CMH y un péptido derivado de dicho fragmento. Alternativamente, un fragmento inmunogénico se refiere también a cualquier construcción capaz de provocar una respuesta inmunitaria como se ha definido previamente, tal como un fragmento peptídico conjugado a una proteína portadora mediante el acoplamiento covalente, una construcción polipeptídica recombinante quimérica que comprende dicho fragmento peptídico en su secuencia de aminoácidos, e incluye

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específicamente las células transfectadas con un ADNc cuya secuencia comprende una porción que codifica dicho fragmento.

El término "que depleciona", "deplecionar" o "depleción", con respecto a las células que expresan NKp46, significa un proceso, método, o compuesto que puede destruir, eliminar, lisar o inducir dicha destrucción, eliminación o lisis, a fin de afectar negativamente el número de células que expresan NKp46 presentes en una muestra o en un sujeto.

Las expresiones "inmunoconjugado", "anticuerpo conjugado", "conjugado de anticuerpo y fármaco", y "CAD" se utilizan indistintamente y se refieren a un anticuerpo que está conjugado a otro resto (p. ej., cualquier resto que no contiene anticuerpo, un agente terapéutico o una etiqueta).

El término "agente" se utiliza en la presente memoria para denotar un compuesto químico, una mezcla de compuestos químicos, una macromolécula biológica, o un extracto hecho de materiales biológicos. La expresión "agente terapéutico" se refiere a un agente que tiene actividad biológica.

Las expresiones "agente tóxico", "resto tóxico" y "agente citotóxico" abarcan cualquier compuesto que puede ralentizar, detener o revertir la proliferación de células, disminuir su actividad de cualquier manera detectable o destruirlas directa o indirectamente. Preferentemente, los agentes citotóxicos causan principalmente la muerte celular interfiriendo directamente con el funcionamiento de la célula, e incluyen, entre otros, agentes alquilantes, inhibidores del factor de necrosis tumoral, intercalantes de ADN, inhibidores de microtúbulos, inhibidores de la quinasa, inhibidores de proteasoma e inhibidores de la topoisomerasa. Una "carga útil tóxica", como se utiliza en la presente memoria, se refiere a una cantidad suficiente de agente citotóxico que, cuando se administra a una célula, da como resultado la muerte celular. La administración de una carga útil tóxica puede lograse mediante la administración de una cantidad suficiente de inmunoconjugado que comprende un fragmento de unión al anticuerpo

o al antígeno y un agente citotóxico. La administración de una carga útil tóxica también puede lograrse mediante la administración de una cantidad suficiente de un inmunoconjugado que comprende un agente citotóxico, en el que el inmunoconjugado comprende un fragmento de unión al anticuerpo o al antígeno secundario del mismo que reconoce y une un fragmento de unión al anticuerpo (anti-NKp46) o al antígeno.

La expresión "adecuado para un ser humano", con respecto a un anticuerpo, se refiere a cualquier anticuerpo, anticuerpo derivatizado, o fragmento de anticuerpo que puede utilizarse de forma segura en seres humanos, p. ej., para los métodos terapéuticos descritos en la presente memoria. Los anticuerpos adecuados para seres humanos incluyen todos los tipos de anticuerpos humanizados, quiméricos o completamente humanos, o cualquier anticuerpo en el que al menos una porción de los anticuerpos se deriva de los seres humanos o modifica a fin de evitar la respuesta inmunitaria que se provocó generalmente cuando se utilizan anticuerpos no humanos nativos.

Para los fines de la presente memoria, un anticuerpo "humanizado" o "humano" se refiere a un anticuerpo en el que la región marco constante y variable de una o más inmunoglobulinas humanas se fusiona con la región de unión, p. ej., la RDC de una inmunoglobulina animal. Dichos anticuerpos están diseñados para mantener la especificidad de unión del anticuerpo no humano del que se derivan las regiones de unión, pero evitando una reacción inmunitaria contra el anticuerpo no humano. Dichos anticuerpos pueden obtenerse de ratones transgénicos u otros animales que se han "modificado por ingeniería genética" para producir anticuerpos humanos específicos en respuesta a una estimulación antigénica (véase, p. ej., Green et al. (1994) Nature Genet 7:13; Lonberg et al. (1994) Nature 368:856; Taylor et al. (1994) Int Immun 6:579. Un anticuerpo completamente humano puede construirse también por métodos de transfección genética o cromosómica, así como por tecnología de expresión en fagos, todos los cuales se conocen en la materia (véase, p. ej., McCafferty et al. (1990) Nature 348:552-553). Los anticuerpos humanos también pueden generarse por células B activadas in vitro (véase, p. ej., las patentes de Estados Unidos n.º

5.567.610 y 5.229.275.

Un "anticuerpo quimérico" es una molécula de anticuerpo en la que se altera, reemplaza o intercambia (a) la región constante, o una porción de la misma, de forma que el sitio de unión al antígeno (región variable) se vincula a una región constante de una clase diferente o alterada, función efectora y/o especies, o una molécula completamente diferente que confiere nuevas propiedades al anticuerpo quimérico, p. ej., una enzima, toxina, hormona, factor de crecimiento, fármaco, etc.; o (b) la región variable, o una porción de la misma, se altera, reemplaza o intercambia con una región variable que tiene una especificidad de antígeno diferente o alterada.

Las expresiones "dominio Fc", "porción Fc" y "región Fc" se refieren a un fragmento C-terminal de una cadena pesada de anticuerpo, p. ej., aproximadamente del aminoácido (aa) 230 a aproximadamente al aa 450 de la cadena pesada γ (gamma) humana o su secuencia homóloga en otros tipos de cadenas pesadas de anticuerpos (p. ej., α, δ, ε y μ para anticuerpos humanos), o un alotipo de origen natural de los mismos. A menos que se especifique lo contrario, la numeración de Kabat del aminoácido comúnmente aceptado para las inmunoglobulinas se utiliza a lo largo de la presente divulgación (véase Kabat et al. (1991) Sequences of Protein of Immunological Interest, 5ª ed., Servicio de Salud Pública de los Estados Unidos, Instituto Nacional de Salud, Bethesda, MD).

La expresión "citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos" o "CCDA" es un término bien entendido en la materia, y se refiere a una reacción mediada por células en la que las células citotóxicas no específicas que

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9E2 o 195314:de ensayo entre aproximadamente 1:10 y aproximadamente 1:100 es un anticuerpo que se une sustancialmente al mismo epítopo o determinante como Bab281, 9E2 o 195314. Preferentemente, dicho anticuerpo de ensayo reducirá la unión de Bab281, 9E2 o 195314 al antígeno de NKp46 en al menos aproximadamente 90 %

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ej., aproximadamente 95 %).

La competencia también puede evaluarse mediante, por ejemplo, una prueba de citometría de flujo. En un ensayo de este tipo, las células que llevan un polipéptido NKp46 dado pueden incubarse primero con Bab281, 9E2 o 195314, por ejemplo, y luego con el anticuerpo de ensayo etiquetado con un fluorocromo o biotina. Se dice que el anticuerpo compite con Bab281, 9E2 o 195314 si la unión obtenida tras la preincubación con una cantidad de saturación de Bab281, 9E2 o 195314 es de aproximadamente 80 %, preferentemente aproximadamente 50 %, aproximadamente 40 % o menos (p. ej., aproximadamente 30 %, 20 % o 10 %) de la unión (medida por medio de fluorescencia) obtenida por el anticuerpo sin pre-incubación con Bab281, 9E2 o 195314. Alternativamente, se dice que un anticuerpo compite con Bab281, 9E2 o 195314 si la unión obtenida con un anticuerpo Bab281, 9E2 o 195314 etiquetado (por un fluorocromo o biotina) en células preincubadas con una cantidad de saturación de anticuerpo de ensayo es de aproximadamente 80 %, preferentemente aproximadamente 50 %, aproximadamente 40 %, o menos

(p.

ej., aproximadamente 30 %, 20 % o 10 %) de la unión obtenida sin preincubación con el anticuerpo de ensayo.

Una prueba de competición simple en la que un anticuerpo de ensayo es pre-adsorbido y aplicado a la concentración de saturación a una superficie sobre la que se inmoviliza un antígeno NKp46 puede emplearse también. La superficie en la prueba de competición simple es preferentemente un chip BIACORE (u otros medios adecuados para el análisis de resonancia de plasmón superficial). El anticuerpo de control (p. ej., Bab281, 9E2 o 195314) se pone entonces en contacto con la superficie a una concentración de saturación de NKp46 y se mide el NKp46 y la unión de superficie del anticuerpo de control. Esta unión del anticuerpo de control se compara con la unión del anticuerpo de control a la superficie que contiene NKp46 en ausencia de anticuerpo de ensayo. En una prueba de ensayo, una reducción significativa en la unión de la superficie que contiene NKp46 por el anticuerpo de control en presencia de un anticuerpo de ensayo indica que el anticuerpo de ensayo reconoce sustancialmente el mismo epítopo que el anticuerpo de control de manera tal que el anticuerpo de ensayo "reacciona de forma cruzada" con el anticuerpo de control. Cualquier anticuerpo de ensayo que reduce la unión del anticuerpo de control (como Bab281, 9E2 o 195314) a un antígeno de NKp46 en al menos aproximadamente 30 % o más, preferentemente aproximadamente 40 %, puede considerarse como un anticuerpo que se une sustancialmente al mismo epítopo o determinante como un control (p. ej., Bab281, 9E2 o 195314). Preferentemente, dicho anticuerpo de ensayo reducirá la unión del anticuerpo de control (p. ej., Bab281, 9E2 o 195314) al antígeno de NKp46 en al menos aproximadamente 50 % (p. ej., al menos aproximadamente 60 %, al menos aproximadamente 70 %, o más). Se apreciará que el orden de los anticuerpos de control y ensayo se pueda invertir: es decir, el anticuerpo de control se pueda unir en primer lugar a la superficie y el anticuerpo de ensayo se ponga en contacto con la superficie a partir de entonces en una prueba de competición. Preferentemente, el anticuerpo que tiene mayor afinidad para el antígeno de NKp46 se une a la superficie en primer lugar, ya que se esperará que la disminución en la unión apreciada por el segundo anticuerpo (suponiendo que los anticuerpos reaccionan de forma cruzada) tenga una mayor magnitud. Ejemplos adicionales de tales ensayos se proporcionan en p. ej., Saunal (1995) J. Immunol. Methods 183: 33-41.

La determinación de si un anticuerpo se une en una región de epítopo puede llevarse a cabo de manera conocida por el experto en la materia. Como un ejemplo de tales métodos de mapeo/caracterización, una región de epítopo para un anticuerpo anti-NKp46 puede determinarse por una "impronta" de epítopo utilizando modificación química de las aminas/carboxilos expuestos en la proteína NKp46. Un ejemplo específico de dicha técnica de impronta es el uso de HXMS (intercambio de hidrógeno-deuterio detectado por espectrometría de masas) en el que un intercambio de hidrógeno/deuterio de la unión del receptor y proteína de ligando, protones de amida, y se produce de nuevo el intercambio, en el que los grupos amida del esqueleto que participan en la unión a proteínas están protegidos de nuevo por el intercambio y, por lo tanto, permanecerán deuterados. Las regiones relevantes pueden identificarse en este punto por proteolisis péptica, separación de cromatografía de líquidos de alto rendimiento con microboro rápido, y/o espectrometría de masas de ionización por electrospray. Véase, p. ej., Ehring H, Analytical Biochemistry, Vol. 267 (2) págs. 252-259 (1999) Engen, J. R. y Smith, D. L. (2001) Anal. Chem. 73, 256A-265A. Otro ejemplo de una técnica de identificación de epítopo adecuado es el mapeo de epítopos por resonancia magnética nuclear (RMN), en el que se compara normalmente la posición de las señales en espectros de RMN bidimensionales del antígeno libre y el antígeno complejado con el péptido de unión al antígeno, tal como un anticuerpo. El antígeno normalmente es selectivamente isotópicamente etiquetado con 15N de manera que solo las señales correspondientes al antígeno y no se aprecian señales del péptido de unión al antígeno en el espectro de RMN. Las señales de antígeno procedentes de aminoácidos implicados en la interacción con el péptido de unión al antígeno cambiarán normalmente de posición en el espectro del complejo en comparación con el espectro del antígeno libre, y los aminoácidos implicados en la unión pueden ser identificados de esa manera. Véase, p. ej., Ernst Schering Res Found Workshop. 2004; (44): 149-67; Huang et al. Journal of Molecular Biology, Vol. 281 (1) págs. 61-67 (1998); y Saito y Patterson, Methods. junio de1996; 9 (3): 516-24.

El mapeo/caracterización de epítopos también puede realizarse utilizando métodos de espectrometría de masas. Véase, p. ej., Downard, J Mass Spectrom. abril de 2000; 35 (4): 493-503 y Kiselar y Downard, Anal Chem. 1 de mayo de 1999; 71 (9): 1792-801. Las técnicas de digestión con proteasa también pueden resultar útiles en el

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ejemplo, uno o ambos de los residuos de histidina en las posiciones de aminoácidos 310 y 435 pueden sustituirse, por ejemplo con lisina, alanina, glicina, valina, leucina, isoleucina, prolina, metionina, triptófano, fenilalanina, serina o treonina (véase, p.ej., la publicación PCT n.º WO 2007/080277), de manera que las regiones constantes sustituidas proporcionan la disminución de la unión a FcγRIIB inhibidor sin disminuir la unión a FcγRIIIA activador. En algunas realizaciones, tales modificaciones aumentan la afinidad de la región Fc variante para FcγRIIIA y/o FcγRIIA y también potencian la afinidad de la región Fc variante para FcγyRIIB en relación con el anticuerpo parental. En otras realizaciones, dichas una o más modificaciones de aminoácidos aumentan la afinidad de la región Fc variante para FcγRIIIA y/o FcγRIIA pero no alteran la afinidad de las regiones Fc variantes para FcγRIIB en relación a la región Fc del anticuerpo parental. En otra realización, dichas uno o más modificaciones de aminoácidos potencian la afinidad de la región Fc variante para FcγRIIIA y FcγRIIA pero reducen la afinidad para FcγRIIB con relación al anticuerpo parental. El aumento de la afinidad y/o avidez resulta en la actividad de unión detectable a FcγR o relacionada con FcyR en células que expresan bajos niveles de FcγR cuando la actividad de unión de la molécula parental (sin la región Fc modificada) no puede detectarse en las células.

Las afinidades y las propiedades de unión de los anticuerpos anti-NKp46 para un FcγR pueden determinarse utilizando ensayos in vitro (pruebas basadas en bioquímica o inmunología) conocidos en la materia para la determinación del anticuerpo-antígeno o interacciones Fc-FcγR, es decir, la unión específica de un antígeno a un anticuerpo o la unión específica de una región Fc a un FcγR, respectivamente, incluyendo, entre otros, una prueba ELISA, prueba de resonancia de plasmón superficial, pruebas de inmunoprecipitación.

En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-NKp46 que comprenden una región Fc variante comprenden al menos una modificación de aminoácidos (por ejemplo, que poseen 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o más modificaciones de aminoácidos) en el dominio CH3 de la región Fc. En otras realizaciones, los anticuerpos anti-NKp46 que comprenden una región Fc variante comprenden al menos una modificación de aminoácidos (por ejemplo, que poseen 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o más modificaciones de aminoácidos) en el dominio CH2 de la región Fc, que se define como una extensión de los aminoácidos 231-341. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-NKp46 comprenden al menos dos modificaciones de aminoácidos (por ejemplo, que poseen 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o más modificaciones de aminoácidos), en el que al menos una de tales modificaciones se encuentra en la región CH3 y al menos una de dicha modificación se encuentra en la región CH2. Además se abarca una modificación de aminoácidos en la región bisagra. En una realización particular, se abarca una modificación de aminoácidos en el dominio CH1 de la región Fc, que se define como una extensión en los aminoácidos 216-230.

Se puede realizar cualquier combinación de modificaciones de Fc, por ejemplo cualquier combinación de diferentes modificaciones se desvela en la patentes de Estados Unidos n.º US, 7.632.497; 7.521.542; 7.425.619; 7.416.727; 7.371.826; 7.355.008; 7.335.742; 7.332.581; 7.183.387; 7.122.637; 6.821.505 y 6.737.056; en las publicaciones PCT n.º WO2011/109400; WO 2008/105886; WO 2008/002933; WO 2007/021841; WO 2007/106707; WO 06/088494; WO 05/115452; WO 05/110474; WO 04/1032269; WO 00/42072; WO 06/088494; WO 07/024249; WO 05/047327; WO 04/099249 y WO 04/063351; y en Presta, L.G. et al. (2002) Biochem. Soc. Trans. 30(4):487-490; Shields, R.L. et al. (2002) J. Biol. Chem. 26; 277(30):26733-26740 y Shields, R.L. et al. (2001) J. Biol. Chem. 276(9):6591-6604).

Los anticuerpos anti-NKp46 pueden comprender una región Fc variante, en la que la región Fc variante comprende al menos una modificación de aminoácidos (por ejemplo, que poseen 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o más modificaciones de aminoácidos) relativo a una región Fc de tipo nativo, de manera que la molécula tiene una función efectora potenciada con respecto a una molécula que comprende una región Fc de tipo natural, opcionalmente en la que la región Fc variante comprende una sustitución en una cualquiera o más de las posiciones 221, 239, 243, 247, 255, 256, 258, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 300, 301, 303, 305, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 316, 320, 322, 326, 329, 330, 332, 331, 332, 333, 334, 335, 337, 338, 339, 340, 359, 360, 370, 373, 376, 378, 392, 396, 399, 402, 404, 416, 419, 421, 430, 434, 435, 437, 438 y/o 439.

Los anticuerpos anti-NKp46 pueden comprender una región Fc variante, en la que la región Fc variante comprende al menos una modificación de aminoácidos (por ejemplo, que poseen 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o más modificaciones de aminoácidos) relativo a una región Fc de tipo natural, de manera que la molécula tiene una función efectora potenciada con respecto a una molécula que comprende una región Fc de tipo natural, opcionalmente en la que la región Fc variante comprende una sustitución en una cualquiera o más de las posiciones 329, 298, 330, 332, 333 y/o 334 (p. ej., sustituciones S239D, S298A, A330L, I332E, E333A y/o K334A). En un ejemplo, los residuos en las posiciones de aminoácidos S239 y I332 pueden sustituirse, por ejemplo con otro aminoácido, opcionalmente en la que la modificación S239 es una sustitución S239D y la modificación I332 es una sustitución I332E; tales regiones constantes sustituidas proporcionan una mayor unión a FcγRIIIA activador.

En una realización, los anticuerpos que tienen regiones Fc variantes o de tipo natural pueden haber alterado los patrones de glicosilación que aumentan la capacidad de unión de los anticuerpos al receptor Fc. Tales modificaciones de carbohidratos se puede lograr mediante, por ejemplo, la expresión del anticuerpo en una célula huésped con la maquinaria de glicosilación alterada. Las células con la maquinaria de glicosilación alterada se han descrito en la materia y se pueden utilizar como células huésped en las que se expresan anticuerpos recombinantes para producir de este modo un anticuerpo con la glicosilación alterada. Véase, por ejemplo, Shields, R.L. et al.

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de la Salud. WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues, 4ª ed. Lyon, Francia: IARC Press, 2008). Véase también, p. ej., Foss et al. (2011) Blood 117:6756-6767.

En un aspecto ejemplar, se desvela un método de reducción de la progresión de LCTP en un huésped mamífero, (p. ej., un paciente humano) que tiene un nivel detectable de células cancerígenas que comprende administrar un anticuerpo anti-NKp46, una composición de anticuerpo anti-NKp46, o una composición relacionada (p. ej., un ácido nucleico que codifica un anticuerpo anti-NKp46), en una cantidad suficiente para reducir de forma detectable la progresión de las neoplasias hematológicas en el huésped.

En un aspecto a modo de ejemplo, se desvela un método de tratamiento de LCTP en un individuo que tiene un pronóstico de la enfermedad precario y/o que ha recaído, es resistente o no responde a la terapia con un primer agente terapéutico.

La enfermedad o diagnóstico y progresión del cáncer pueden definirse por criterios convencionales para el tipo particular de enfermedad. LCTP (por ejemplo LCTP-NE) se basa normalmente en el examen de sangre periférica o de biopsia tisular para las características histológicas suplementadas por inmunohistoquímica detallada, citometría de flujo, citogenética y genética molecular. El examen puede incluir, por ejemplo, el recuento sanguíneo completo, ensayos diferenciales de la función renal y hepática, lactato deshidrogenasa (LDH), beta2 microglobulina, albúmina, calcio en suero, ácido úrico, biopsia de médula ósea, radiografía de tórax y tomografía computarizada (TC) del tórax, abdomen y pelvis. La progresión se determina opcionalmente mediante la evaluación de la expansión clonal selectiva de células iniciadas. Los métodos para detectar tipos de cáncer y la progresión del cáncer se pueden lograr mediante cualquier técnica adecuada, varios ejemplos de los cuales son conocidos en la materia. Los ejemplos de técnicas adecuadas incluyen PCR y RT-PCR (p. ej., de genes asociados a células cancerígenas o "marcadores"), biopsia, técnicas de formación de imágenes, estudio del cariotipo y otros análisis cromosómicos, técnicas de detección por inmunoensayo/inmunocitoquímica, pruebas histológicas y/o histopatológicas, estudios de cinética celular y análisis del ciclo celular, citometría de flujo, y técnicas de exploración física (p. ej., para los síntomas físicos).

En una realización, el diagnóstico o la evaluación de LCTP (p. ej. LCTP-NE) comprende el análisis cromosómico. Los casos de LCTP-NE suelen mostrar una morfología heterogénea y variable, con pérdidas de haber sido notificadas en 3T, 6q, 9p, 10q, 12q y/o 5q, y ganancias cromosómicas recurrentes, incluso en 8q, 9p y/o 19q. Un estudio CGH en LCTP-NE muestra aumentos frecuentes de 7q22-31, 1q, 3p, 5p y 8q24qter y pérdidas de 6q22-24 y 10p13pter y casos con cariotipos complejos con un pronóstico precario de la enfermedad.

En una realización, el diagnóstico o la evaluación de LCTP comprende el análisis de biomarcadores. En una realización, un paciente que tiene un pronóstico precario de la enfermedad se identifica por análisis de biomarcadores en el que la presencia o ausencia (p. ej., nivel de) un ácido nucleico o proteína se detecta en una muestra biológica procedente del paciente (p. ej., en las células tumorales de un paciente). Un intervalo de biomarcadores es conocido en LCTP, incluyendo, p. ej., p53, Ki-67, Bcl-2, Bcl-XL, CD26, EBV, MDR, CCND2, CCR4, NK-Kb, CCR3, CXCR3, PRDM1, y ALK-1.

En una realización, el diagnóstico o la evaluación de LCTP comprende detectar receptores de quimioquinas CXCR3 y/o CCR4 (p. ej., la detección de presencia o ausencia de ácido nucleico o proteínas CXCR3 y/o CCR4, niveles de ácido nucleico o proteínas CXCR3 y/o CCR4). CXCR3 y CCR4 se han encontrado respectivamente en el 63 % y 34 % de LCTP-NE (Percy et al. Int. Class Diseases for Oncol. (ICD-O-3) 3ª ed. Ginebra, Suiza: World Health Organization (2000)). En una realización, una determinación de que un paciente tiene un LCTP (p. ej., células de LCTP) que es positivo para CXCR3 y negativo para CCR4 indica que el paciente tiene un pronóstico precario de la enfermedad.

En una realización, el linfoma de células T de tipo enteropatía se diagnostica y/o trata con una composición de anticuerpo anti-NKp46. El linfoma de células T asociado a enteropatía (LTAE) se considera una complicación de la enfermedad celíaca (EC), véase, p. ej. Di Sabatino et al. (2012) Blood 119:2458-2468. Este tumor se deriva de la transformación neoplásica de linfocitos T intraepiteliales aberrantes emergentes en los pacientes celiacos que no responden a una dieta sin gluten. La adherencia deficiente a una dieta sin gluten, la homocigosis HLA-DQ2 y el diagnóstico tardío de EC se reconocen como factores de riesgo para la evolución maligna de EC. La EC refractaria (ECR) progresa a menudo a LTAE. El diagnóstico o la evaluación de LTAE puede comprender así la detección de un marcador de LTAE, o de EC o ECR que es susceptible de progresar a LTAE, o la identificación de un paciente que tiene LTAE, o EC o ECR susceptible de progresar a LTAE. En una realización, el linfoma de células T de tipo enteropatía se trata con (mediante la administración) una composición de anticuerpo anti-NKp46, en combinación con un segundo agente terapéutico utilizado en el tratamiento de LTAE, p. ej., una quimioterapia, p. ej., CHOP que comprende ciclofosfamida, doxorrubicina, vincristina, prednisona, u otros regímenes de agentes quimioterapéuticos múltiples.

La administración de anticuerpos anti-NKp46 a un sujeto (ya sea por administración directa o expresión de un ácido nucleico en el mismo, tal como a partir de un vector de transferencia de genes virales de la viruela que comprende la secuencia o secuencias de ácido nucleico que codifica el anticuerpo anti-NKp46 y la práctica de los otros métodos

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