ES2635196T3 - Controles y kit para ensayos de actividad plaquetaria - Google Patents

Controles y kit para ensayos de actividad plaquetaria Download PDF

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Abstract

Kit para la preparación de controles para un procedimiento para la determinación de la función plaquetaria, y el kit contiene los siguientes componentes: a. Un primer liofilizado para la preparación de un primer control con función plaquetaria normal, en cuyo caso el liofilizado se compone de los siguientes componentes: -una sustancia reguladora de pH para mantener un valor de pH fisiológico, y -una sustancia auxiliar para la liofilización; y b. Un segundo liofilizado para la preparación de un segundo control con función plaquetaria anormalmente reducida, en cuyo caso el liofilizado se compone de los siguientes componentes: -una sustancia reguladora de pH para mantener un valor de pH fisiológico, y -una sustancia reguladora de pH para la liofilización, y - un inhibidor directo de la agregación plaquetaria del grupo de tirofiban, abxicimab, eptifibatid, ácido acetilsalicílico, MRS 2395, AR-C66096, cangrelor, ticagrelor, cilostazol, dipyridamol, prostaglandina E1, prostaciclina, iloprost, cicaprost, forscolina, 2-MeSAMP, C1330-7, MRS 2179, MRS 2279, MRS 2500, A2P5P, A3P5P y A3P5PS.

Description

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DESCRIPCION
Controles y kit para ensayos de actividad plaquetaria
La presente invencion se encuentra en el campo de diagnosticos de coagulacion y se refiere a un kit y a un procedimiento para la preparacion de controles para el uso en procedimientos de ensayo para determinar la funcion plaquetaria. Los procesos fisiologicos que por un lado garantizan la fluidez de la sangre en el sistema vascular y por otra parte aseguran que se impida las perdidas de sangre extravascular por medio de la formacion de coagulos de sangre, se agrupan bajo el termino hemostasis. En la regulacion de la hemostasis participan una cantidad de factores de protelna as! como tambien componentes celulares como, por ejemplo, los trombocitos (plaquetas sangulneas). En el caso de una lesion vascular, primero ocurre una fijacion de los trombocitos al colageno subendotelial. Esta adhesion ocurre por medio de la protelna adhesiva tal como el factor de von Willebrand (VWF). Durante el proceso de adhesion se activan los trombocitos y los mediadores y se liberan los mediadores de sus granulos, por lo cual se induce la agregacion de mas trombocitos as! como una intensificacion de la activacion. De esta manera se efectua una primera oclusion de la pared vascular (hemostasis primaria), que solo se estabiliza por medio de otras reacciones del sistema de coagulacion plasmatica (hemostasis secundaria). Las regulaciones fallidas de estos procesos pueden conducir a una trombofilia o a una diatesis hemorragica y pueden tener consecuencias letales dependiendo del grado de severidad.
En la diagnosis de coagulacion se conocen diferentes procedimientos y sistemas con cuya ayuda puede determinarse si la sangre de un paciente puede coagularse correctamente o si se presenta un defecto de coagulacion. En el caso de un defecto de coagulacion, con frecuencia se requiere obtener conocimientos mas precisos sobre las causas del defecto existente con el fin de poder seleccionar las medidas terapeuticas optimas. Una subfuncion importante del sistema de coagulacion que puede estudiarse de manera dirigida es la hemostasis primaria que depende esencialmente de la funcionalidad plaquetaria.
Un procedimiento conocido para investigar la funcion plaquetaria es la determinacion del tiempo de sangrado. Este es un ensayo global in vivo que detecta la hemostasis primaria. El tiempo de sangrado se determina infligiendo una pequena herida por corte o por pinchazo y midiendo el tiempo hasta que se detiene el sangrado. Este es un ensayo diflcil de estandarizar, que ofrece informacion gruesa, que ante todo se aplica en situaciones de emergencia con el fin de lograr una vision en conjunto de la hemostasis primaria. La ingesta de inhibidores de agregacion plaquetaria conduce a una prorroga del tiempo de sangrado. En la determinacion de tiempo de sangrado es desventajoso que en el caso de un tiempo normal de sangrado no pueda excluirse un defecto de funcion plaquetaria.
Los procedimientos in vitro permiten una deteccion esencialmente mas sensible de los defectos de funcion plaquetaria. En estos procedimientos habitualmente en una muestra de sangre entera o en una muestra de plasma rico en plaquetas (PRP) se induce la agregacion plaquetaria adicionando un activador y se mide la reaccion de agregacion. Los activadores usados conjuntamente, que se usan para la induccion de agregacion plaquetaria, son ADP (adenosin- 5'-difosfato), colageno, epinefrina (adrenalina), ristocetina y diferentes combinaciones de los mismos, as! como trombina, TRAP (protelna de activacion del receptor de trombina) o serotonina.
En el estado de la tecnica se conocen diversos procedimientos para investigar la funcion plaquetaria in vitro.
En la agregometrla de transmision de luz, que tambien se denomina agregacion plaquetaria segun Born, se mide de manera fotometrica en un agregometro la capacidad de agregacion plaquetaria en plasma rico en plaquetas en presencia de sustancias que inducen la agregacion. Mediante la formacion del agregado se incrementa la translucidez de la muestra de PRP de modo que puede determinarse la medicion de translucidez, por ejemplo la velocidad de la formacion del agregado. Con ayuda de la agregometrla de transmision de luz tambien pueden registrarse efectos terapeuticos de los inhibidores de agregacion plaquetaria que se empleen como medicamentos. Una desventaja de la agregometrla de transmision de luz es que como material de muestra puede usarse exclusivamente plasma rico en plaquetas. Al plasma rico en plaquetas le hacen falta no solamente componentes importantes de la sangre como, por ejemplo, los globulos rojos y los globulos blancos, sino que requiere ademas una preparacion de la muestra que consume mucho tiempo y es propensa a errores.
El sistema VerifyNow® (Accumetrics) es un desarrollo ulterior de la agregometrla de transmision de luz que permite el estudio de la funcion plaquetaria en muestras de sangre entera. En este sistema, la reaccion de agregacion plaquetaria es amplificada adicionando micropartlculas recubiertas con fibrinogeno. Reactivos y kits para la realizacion de este procedimiento se describen en la publicacion WO 2005/007868 A2.
Otro principio de ensayo para determinar la funcion plaquetaria es el llamado sistema Platelet Function Analyzer System [Sistema analizador de funcion plaquetaria], abreviadamente sistema PFA (PFA-100®, PFA-200, Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH, Marburg, Alemania). Con ayuda del sistema PFA se mide la hemostasis primaria en muestras de sangre entera, en condiciones de flujo y, por lo tanto, en presencia de altas fuerzas cortantes.
Para simular las condiciones de flujo y las fuerzas cortantes tal como rigen en los vasos sangulneos arteriales mas pequenos, en una celda de medicion de PFA que se emplea en un instrumento de analisis de PFA, se genera una
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presion negativa de aproximadamente -40 mbares y la sangre entera citratada que se encuentra en un reservorio de muestras fluye por un capilar que tiene un diametro de aproximadamente 200 pm. El capilar desemboca en una camara de medicion que esta cerrada con un elemento de separacion, por ejemplo una membrana, que contiene una abertura central capilar a traves de la cual pasa la sangre debido a la presion negativa. En la mayorla de los casos, la membrana, al menos en el sector alrededor de la abertura, se desplaza con uno o varios activadores que inducen la agregacion plaquetaria, de modo que la sangre que fluye a lo largo se pone en contacto con las sustancias inductoras de agregacion en el sector de la abertura. A causa de la subpresion inducida y de la agregacion plaquetaria, en el sector de la abertura, se forma un tapon de trombocitos (trombo), el cual cierra la abertura de la membrana y detiene el flujo de sangre. En este sistema se mide el tiempo que se necesita hasta el cierre de la abertura de membrana. Este, as! llamado, tiempo de cierre se correlaciona con la funcionalidad plaquetaria. Habitualmente se usan celdas de medicion que estan equipadas con una membrana la cual esta recubierta con colageno (Col) y adicionalmente ya sea con ADP o con epinefrina (Epi). Otras celdas de medicion que son adecuadas para la determinacion de antitromboticos del grupo de los antagonistas de P2Y(12), como por ejemplo de clopidogrel, estan equipadas con una membrana que contiene ADP y prostaglandina E1 (EP-A1-1850134).
Otro principio de ensayo para la determinacion de la funcion plaquetaria es el sistema Multiplate® (Verum Diagnostica GmbH, Munich, Alemania). Con ayuda del sistema Multiplate en muestras de sangre entera se mide la hemostasis primaria con base en la agregometrla de impedencia. Para este proposito dos unidades de sensor que se componen de dos alambres de sensor dispuestos en paralelo y que se encuentran dispuestos en una celda de medicion especial, se sumergen en la muestra de sangre entera. Adicionando activadores plaquetarios tales como, por ejemplo, ADP, colageno o acido araquidonico, se induce la agregacion plaquetaria. Los trombocitos se adhieren a la superficie del alambre sensor, por lo cual se incrementa la resistencia electrica entre los alambres sensores. El incremento de la resistencia electrica medido se correlaciona con la funcion plaquetaria.
Hasta ahora no se ha logrado preparar un material de control o estandar que sea funcional y estable a largo plazo, que sea adecuado para el control o la estandarizacion de ensayos de funcion plaquetaria, que ensayan la funcion plaquetaria en sangre entera.
Las publicaciones US 4,338,564 y US 4,358,394 describen procedimientos para la preparacion de materiales hematologicos de control, que sean adecuados para el uso en la citometrla, porque en estas preparaciones se caracterizan principalmente la cantidad, la forma y el tamano de las celulas sangulneas. Sin embargo, estas preparaciones no son adecuadas para investigar la funcion plaquetaria porque las celulas se tratan con medios de fijacion y otras sustancias que modifican la membrana celular.
El objetivo fundamental de la presente invention fue proporcionar un material de control para ensayos de funcion plaquetaria en sangre entera.
El objetivo se logra proporcionando un kit capaz de almacenarse el cual permita al usuario de un ensayo de funcion plaquetaria preparar controles estandarizados de una manera sencilla.
La invencion se refiere, por lo tanto, a un kit de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 3 para preparar controles para un procedimiento para determinar la funcion plaquetaria, en el cual el kit contiene al menos un primer liofilizado para la preparacion de un primer control con funcion plaquetaria normal y un segundo liofilizado para la preparacion de un segundo control con funcion plaquetaria anormalmente reducida.
Para la preparacion de controles, cada liofilizado se disuelve en sangre entera que presenta una funcion plaquetaria normal.
Cada liofilizado de un kit segun la invencion se compone al menos de una sustancia reguladora de pH para mantener un valor de pH fisiologico y una sustancia auxiliar para la liofilizacion.
El valor de pH fisiologico de la sangre se encuentra habitualmente entre aproximadamente 7,35 y 7.45. Las sustancias reguladoras de pH preferidas para mantener un valor de pH fisiologico son HEPES (acido 2-(4-(2-hidroxietil)-1- piperazinil)-etanosulfonico), PBS (solution de cloruro de sodio con pH regulado mediante fosfato), OVB (regulador de pH veronal de Owren), MES (acido 2-(N-morfolino) etansulfonico), PIPES (acido piperazina-N,N'-bis(2-etanosulfonico), TAPS (acido N-tris(hidroximetil)metil-3-aminopropanosulfonico), CHES (acido 2-(ciclohexilamino)etanosulfonico), CAPS (acido N-ciclohexil-3-aminopropanosulfonico), Tris (tris(hidroximetil)-aminometano) o MOPS (acido 3-(N- morfolino)propanosulfonico).
Sustancias auxiliares preferidas para la liofilizacion son sustancias del grupo de los disacaridos, que entre otros comprenden sacarosa, lactosa, trehalosa y maltosa y del grupo de los alcoholes, preferiblemente polietilenglicol, manitol y sorbitol. Estas sustancias tienen efecto crioprotector y lioprotector, es decir que protegen otros componentes de la preparacion durante el congelamiento y la liofilizacion.
El liofilizado para la preparacion de un control con funcion plaquetaria normal se encuentra libre de sustancias que influyan en la funcion plaquetaria.
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Un liofilizado para la preparacion de un control con funcion plaquetaria anormalmente reducida contiene adicionalmente al menos un inhibidor directo de la agregacion plaquetaria del grupo de tirofiban, abxicimab, eptifibatid, acido acetilsalicilico, MRS 2395, AR-C66096, cangrelor, ticagrelor, cilostazol, dipyridamol, prostaglandina E1 (PGE1), prostaciclina, iloprost, cicaprost, forscolina, 2-MeSAMP (2-metiltioadenosin-5'-monofosfato), C1330-7 (N1-(6-etoxi-3,3- benzotiazol-2-il-2-(7-etoxi-4-hidroxi-2,2-dioxo-2H-2-6benzo[4,5][1,3]tiazolo[2,3-c][1,2,4]tiadiazin-3-il)-2-oxo-1- etansulfonamida), MRS 2179 (sal diamonio de 2'-desoxi-N6-metiladenosin-3',5'-difosfato), MRS 2279 ((N)- metanocarba-N6-metil-2-cloro-2'-desoxiadenosin-3',5'-bisfosfato), MRS 2500 (2-yodo-N6-metil-(N)-metanocarba-2'- desoxiadenosin-3',5'-bisfosfato), A2P5P (adenosin-2',5'-bisfosfato), A3P5P (adenosin-3',5'-bisfosfato) y A3P5PS (adenosin-3'-fosfat,5'-fosfosulfato). Por un inhibidor directo de la agregacion plaquetaria se entiende una sustancia que tiene un efecto directo en la funcion plaquetaria como, por ejemplo, mediante bloqueo de los receptores ADP plaquetarios, inhibicion plaquetaria de la ciclooxigenasa (COX) o bloqueo de los receptores plaquetarios GP-IIb/IIIa. Los inhibidores directos de la agregacion plaquetaria deben distinguirse de los llamados anticoagulantes que despliegan su efecto inhibiendo factores plasmaticos de coagulacion, tales como trombina o el factor Xa y pueden tener de esta manera indirectamente una influencia en la funcion plaquetaria. En contraposicion a los anticoagulantes, los inhibidores directos de la agregacion plaquetaria no producen, por ejemplo, una prorroga del tiempo de coagulacion en un ensayo de coagulacion en plasma.
Un liofilizado para la preparacion de un control con una funcion plaquetaria anormalmente reducida contiene al menos un inhibidor directo de la agregacion plaquetaria en una cantidad tal que un control pueda ser capaz de prepararse, que preferiblemente presente una funcion plaquetaria de aproximadamente 50% a aproximadamente 80%, de modo particularmente preferido de aproximadamente 70% de la funcion plaquetaria normal.
Un kit preferido contiene varios liofilizados diferentes para la preparacion de controles con funcion plaquetaria anormalmente reducida. Estos liofilizados diferentes pueden contener ellos mismos un inhibidor directo de la agregacion plaquetaria aunque en cantidad diferente. Como alternativa, los liofilizados pueden contener inhibidores directos de la agregacion plaquetaria que son diferentes.
Un kit de ensayo particularmente preferido contiene liofilizados que contienen adicionalmente plasma normal humano. Esto tiene la ventaja de que se compensan deficiencias cualesquiera de los componentes de plasma en la muestra de sangre entera, en la cual el liofilizado se disuelve al preparar el material de control. Concentraciones mas bajas de componentes determinados de plasma, como por ejemplo concentraciones bajas del factor de von Willebrand (VWF), pueden influir la determinacion de la actividad plaquetaria. Introduciendo estos componentes en forma de plasma normal humana, se garantiza una concentration minima de todos los componentes plasmaticos, de modo que se logra una estabilizacion de la funcion plaquetaria control y, por lo tanto, una estandarizacion mejorada de los resultados del ensayo. Un liofilizado de un kit de ensayo de acuerdo con la invention contiene plasma normal humana, preferiblemente en una cantidad tal que pueda prepararse un control que contiene despues de disolverse en sangre entera aproximadamente 2% a aproximadamente 20% en volumen de plasma normal humana.
Otro kit particularmente preferido contiene liofilizados que adicionalmente contienen factor humano de von Willebrand (VWF), aislado. Este tiene la ventaja de que se compensan deficiencias cualesquiera del VWF en la muestra de sangre entera, en la cual se disuelve el liofilizado durante la preparacion del material de control. Esto provoca una estabilizacion de la funcion plaquetaria en un control y, por lo tanto, una estandarizacion mejorada de los resultados del ensayo. Un liofilizado de un kit ensayo de acuerdo con la invencion contienen factor de von Willebrand, preferiblemente factor humano de von Willebrand, aislado, preferiblemente en una cantidad tal que pueda prepararse un control que contienen despues de disolverse en sangre entera aproximadamente 0,1 a aproximadamente l0 IU/mL de VWF, de modo particularmente preferido 0,1 a aproximadamente 1,0 IU/mL de VWF, de modo muy particularmente preferido 0,1 a aproximadamente 0,5 IU/mL de VWF.
El termino "liofilizado" comprende productos finales de la liofilizacion.
Para la preparacion de los liofilizados de un kit de acuerdo con la invencion habitualmente se preparan primero soluciones acuosas que contienen las sustancias deseadas en las concentraciones deseadas. Las soluciones se exponen en los recipientes, preferiblemente en viales de vidrio, en forma de alicuotas y a continuation se liofilizan. Los residuos en forma de polvo, anhidros, se cierran luego de modo hermetico al aire y pueden almacenarse durante varios meses, dado el caso incluso anos.
Un kit de ensayo segun la invencion contiene preferiblemente varios recipientes, de manera mas preferida varios viales de vidrio o de plastico los cuales contienen los diferentes liofilizados de forma cerrada, hermeticos al aire.
Otro objeto de la presente invencion es un procedimiento para la preparacion de controles para un procedimiento para la determinacion de la funcion plaquetaria. La preparacion de los controles se efectua de tal manera que se usa un kit de acuerdo con la invencion el cual contiene diferentes liofilizados. Los diferentes liofilizados se disuelven en sangre entera con funcion plaquetaria normal. De manera mas preferida, la sangre entera es una muestra de sangre entera fresca de un donante sano. La sangre entera es anticoagulada preferiblemente con una sustancia del grupo de citrato, hirudina, PPACK (D-fenilalanil-L-prolil-L-arginina clorometil cetona), BAPA (bencilsulfonil-D-Arg-Pro-4- amidinobenzilamida) y heparina.
La preparacion de los controles disolviendo los liofilizados en sangre entera se efectua preferiblemente solo en el aplicador de un procedimiento para determinar la funcion plaquetaria.
Ejemplos
Los siguientes ejemplos de realization sirven para ilustrar la invention y no deben entenderse como una limitation.
5 Ejemplo 1: Preparacion de un kit de ensayo de acuerdo con la invencion y preparacion de controles para un procedimiento para la determination de la funcion plaquetaria
Fue preparado un kit de ensayo para la preparacion de controles que son adecuados, entre otros, para el uso en ensayos de funcion plaquetaria de acuerdo con el principio de ensayo del llamado Platelet Function Analyzer Systems (PFA-100®, PFA-200, Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH, Marburg, Alemania).
10 Con ayuda del sistema PFA se mide la hemostasis primaria en muestras de sangre entera, en condiciones de flujo y, por lo tanto, en presencia de fuerzas cortantes altas. Como medida para la funcion plaquetaria, se mide en este sistema el tiempo que se necesita hasta el cierre de una abertura de membrana en una celda de medicion especial (tiempo de cierre). Las celdas de medicion, que estan equipadas con diferentes tipos de membrana, permiten la determinacion de diferentes funciones plaquetarias. Fueron usadas celdas de medicion que estaban equipadas con una membrana 15 la cual estaba recubierta con colageno (Col) y con ADP (Col/ADP), o la cual estaba recubierta con colageno (Col) y con epinefrina (Epi) (Col/Epi), o que estaba recubierta con ADP y prostaglandina E1 (INNOVANCE® PFA P2Y).
Debio prepararse un control que proporcionaba una funcion plaquetaria normal con todos los tres tipos de celdas de medicion (control normal, nivel l). Ademas, debio producirse un control que proporcionaba una funcion plaquetaria anormalmente reducida con todos los tres tipos de celdas de medicion (control anormal, nivel 2). Ademas, debio 20 prepararse un control que proporcionara una funcion plaquetaria anormalmente reducida solamente con celdas de medicion de Col/Epi, aunque una funcion plaquetaria con los otros dos tipos de celdas de medicion (control anormal Col/Epi, nivel 2). Ademas, debio producirse un control que proporcionara una funcion plaquetaria anormalmente reducida solamente con celdas de medicion INNOVANCE®, aunque una funcion plaquetaria normal con los otros dos tipos de celda de medicion (control anormal P2Y, nivel 2).
25 Las funciones plaquetarias deseadas de los diferentes controles se recopilan en la Tab. 1.
Tabla 1: Funciones plaquetarias de los diferentes controles
Celda de medicion PFA
Control normal (Nivel 1) Control anormal (Nivel 2) Control anormal Col/EPI (Nivel 2) Control anorma P2Y (Nivel 2)
Col/EPI
Normal Abnormal Anormal Normal
Col/ADP
Normal Anormal Normal Normal
INNOVANCE PFA P2Y
Normal Anormal Normal Anormal
En la Tab. 2 se encuentran listadas las sustancias que han sido usadas para la preparacion de los liofilizados. Primero han sido preparadas soluciones madre en las concentraciones indicadas en agua destilada.
30 Tabla 2: Soluciones madre de las sustancias usadas
Sustancia
Concentracion de la solucion madre
HEPES
238 g/mol
D-Manitol
182 g/mol
Acido acetilsalicilico (ASS)
2,5 g/L
Tirofiban clorhidrato
10 mg/mL
Prostaglandina E1
5 mg/mL
AR-C 66096
10 mM
Para cada control han sido dosificadas con pipeta cantidades definidas de las soluciones madre de las sustancias deseadas en viales de vidrio (GW 5). La cantidad de la solution madre que va a dosificarse con pipeta ha sido calculada de tal manera que se encontraba presente una concentration final deseado de las sustancias en el control terminado.
35 Los controles debieron prepararse adicionando un volumen respectivamente de 2 mL de sangre entera. Las concentraciones finales de las sustancias en los diferentes controles terminados se recopilan en la Tab. 3.
Las mezclas llquidas en los viales de vidrio GW 5 fueron liofilizadas a continuation en una planta de liofilizacion de acuerdo con el siguiente programa: cuatro horas congeladas a -40°C con 40 % de vaclo, despues secado d urante 8 horas a +20°C.
Tabla 3: Concentration final de las sustancias en 2 mL de sangre entera
Control normal (Nivel 1) Control anormal (Nivel 2) Control anormal Col/EPI (Nivel 2) Control anormal P2Y (Nivel 2)
Inhibidor plaquetario
- 0,1 pg/mL Tirofiban 10 nM PGE1 + 50 pM ASS 200 nM AR- C66096
Regulador de pH
5 mM HEPES 5 mM HEPES 5 mM HEPES 5 mM HEPES
Sustancias auxiliares
0,001 % Manitol 0,001 % Manitol 0,001 % Manitol 0,001 % Manitol
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Los liofilizados de los controles descritos en la Tab. 3 fueron disueltos respectivamente en 2 mL de sangre entera citratada de un donante sano por aproximadamente 10 minutos a temperatura ambiente.
Ejemplo 2: Uso de controles preparados de acuerdo con la invention en un procedimiento para la determination de la funcion plaquetaria en el sistema PFA
10 La funcion plaquetaria de los controles preparados de acuerdo con el ejemplo 1 fue medida con todas las tres celdas de medicion PFA o con celdas de medicion individuales en determinacion doble en un analizador de PFA. En paralelo fueron medidas las mismas muestras de sangre entera en estado nativo (es decir, sin adicion de liofilizados) las cuales han sido usadas para disolver los liofilizados.
Para los tres tipos diferentes de celda de medicion hablan sido determinados previamente los valores llmite (cut-offs) 15 para el tiempo de cierre (en segundos), los cuales permitieron la diferenciacion entre una funcion plaquetaria normal y una anormalmente reducida. Las muestras con una funcion plaquetaria anormalmente reducida presentan un tiempo de cierre prolongado que se encuentra por encima del cut-off. Los cut-offs para los diferentes tipos de celdas de medicion se recopilan en la Tab. 4.
Tabla 4: Cut-offs de los tres tipos de celdas de medicion de PFA
Col/EPI Col/ADP INNOVANCE PFA P2Y
Cut-off
165 s 119 s 106 s
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Control normal (nivel 1) (HEPES + Mannitol)
El control normal (nivel 1) que habla sido preparado disolviendo HEPES liofilizado y manitol en sangre entera, presenta tiempos de cierre ligeramente prorrogados pero normales frente a las muestras nativas de sangre entera. En la Tab. 5 se muestran los tiempos medios de cierre de las muestras nativas de sangre entera en comparacion con los tiempos 25 medios de cierre de un control normal (nivel 1) en los diferentes tipos de celda de medicion (pruebas de sangre entera en forma de allcuotas en total de 14 donantes sanos).
Tabla 5: Tiempos medios de cierre del control normal (nivel 1)
Celda de medicion
Cut-off Sangre entera nativa Control normal (Nivel 1)
Col/Epi
165 s 99 s 112 s
Col/ADP
119 s 85 s 90 s
INNOVANCE PFA P2Y
106 s 64 s 74 s
Control anormal (nivel 2) (HEPES + manitol + tirofiban)
30 Puesto que tirofiban bloquea el receptor activado de GPIIb/IIIa de los trombocitos, esto impide la agregacion plaquetaria independientemente del tipo de activation o del tipo de celda de medicion. Las primeras investigaciones fueron realizadas, por lo tanto, solamente con la celda de medicion Col/ADP activada de la manera mas fuerte. El control anormal (nivel 2) que habla sido preparado disolviendo HEPES liofilizado, manitol y tirofiban en sangre entera, presenta tiempos medios de cierre anormales, ostensiblemente prorrogados frente a las muestras nativas de sangre
35 entera y frente a los controles normales (nivel 1), por encima del cut-off, con el tipo de celda de medicion Col/ADP. En la tabla 6 se muestran los tiempos medios de cierre de muestras nativas de sangre entera y de controles normales (nivel 1) en comparacion con los tiempos medios de cierre de un control anormal (nivel 2) en celdas de medicion de Col/ADP (muestras de sangre entera en forma de allcuotas en total de 14 donantes sanos).
5
10
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20
25
Tabla 6: Tiempo medio de cierre de Col/ADP del control anormal (nivel 2)
Celda de medicion
Cut-off Sangre entera nativa Control normal (Nivel 1) Control anormal (Nivel 2)
Col/ADP
119 s 87 s 93 s 287 s
Control anormal Col/EPI (Nivel 2) (HEPES + manitol + acido acetilsalicllico + prostaglandina E1)
El control Col/Epi (nivel 2) anormal, especlfico de Col/Epi, el cual habla sido preparado disolviendo HEPES liofilizado, manitol, acido acetilsalicllico y PGE1 en sangre entera, presenta con el tipo de celda de medicion Col/Epi, frente a las muestras nativas de sangre entera y frente a los controles normales (nivel 1) tiempos de cierre anormales, ostensiblemente prorrogados por encima del cut-off. En la Tab. 7 se muestran los tiempos medios de cierre de muestras nativas de sangre entera y de controles normales (Nivel 1) en comparacion con los tiempos medios de cierre de un control anormal Col/Epi (nivel 2) en celdas de medicion de Col/Epi (muestras de sangre entera en forma de allcuotas en total de 10 donantes sanos).
Tabla 7: Tiempo medio de cierre Col/Epi del control anormal Col/Epi (nivel 2)
Celda de medicion
Cut-off Sangre entera nativa Control normal (Nivel 1) Control anormal Col/Epi (Nivel 2)
Col/Epi
165 s 106 s 117 s 279 s
Control anormal P2Y (nivel 2) (HEPES + manitol + AR-C66096)
El control anormal especlfico P2Y de INNOVANCE PFA (nivel 2), que habla sido preparado disolviendo HEPES liofilizado, manitol y AR-C66096 en sangre entera, presenta con el tipo de celda de medicion INNOVANCE PFA P2Y frente a las muestras nativas de sangre entera y frente a los controles normales (nivel 1) tiempos de cierre ostensiblemente prorrogados, anormales, por encima del cut-off (vease la Fig. 4). En la Tab. 8 se muestran los tiempos medios de cierre de muestras nativas de sangre entera y de controles normales (nivel 1) en comparacion con los tiempos medios de cierre de un control anormal P2Y (nivel 2) en celdas de medicion P2Y de INNOVANCE PFA (muestras de sangre entera en forma de allcuotas en total de 4 donantes sanos).
Tabla 8: Tiempo medio de cierre P2Y de INNOVANCE del control anormal P2Y (nivel 2)
Celda de medicion
Cut-off Sangre entera nativa Control normal (Nivel 1) Control anormal P2Y (Nivel 2)
INNOVANCE PFA P2Y
106 s 79 s 79 s 300 s
En la Tab. 9 se muestran los tiempos medios de cierre de muestras nativas de sangre entera y, por lo tanto, de controles normales y anormales preparados de acuerdo con la invention en los tres tipos diferentes de celdas de medicion de PFA (muestras de sangre entera en forma de allcuotas en total de 4 donantes sanos). Los controles preparados de acuerdo con la invencion presentan las actividades plaquetarias deseadas (comparese con Tab. 1).
Tabla 9: Tiempos medios de cierre de los cuatro controles diferentes en los tres tipos de celdas de medicion
diferentes
Celda de medicion PFA
Sangre entera nativa Control normal (Nivel 1) Control anormal (Nivel 2) Control anormal Col/EPI (Nivel 2) Control anormal P2Y (Nivel 2)
Col/EPI Cut-off: 165 s
119 s 133 s (normal) 300 s (anormal) 282 s (anormal) 152 s (normal)
Col/ADP Cut-off: 119 s
100 s 108 s (normal) 300 s (anormal) 109 s (normal) 116 s (normal)
INNOVANCE PFA P2Y Cut-off: 106 s
79 s 79 s (normal) 300 s (anormal) 90 s (normal) 300 s (anormal)

Claims (11)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    REIVINDICACIONES
    1. Kit para la preparacion de controles para un procedimiento para la determinacion de la funcion plaquetaria, y el kit contiene los siguientes componentes:
    a. Un primer liofilizado para la preparacion de un primer control con funcion plaquetaria normal, en cuyo caso el liofilizado se compone de los siguientes componentes:
    -una sustancia reguladora de pH para mantener un valor de pH fisiologico, y
    -una sustancia auxiliar para la liofilizacion; y
    b. Un segundo liofilizado para la preparacion de un segundo control con funcion plaquetaria anormalmente reducida, en cuyo caso el liofilizado se compone de los siguientes componentes:
    -una sustancia reguladora de pH para mantener un valor de pH fisiologico, y
    -una sustancia reguladora de pH para la liofilizacion, y
    - un inhibidor directo de la agregacion plaquetaria del grupo de tirofiban, abxicimab, eptifibatid, acido acetilsalicllico, MRS 2395, AR-C66096, cangrelor, ticagrelor, cilostazol, dipyridamol, prostaglandina E1, prostaciclina, iloprost, cicaprost, forscolina, 2-MeSAMP, C1330-7, MRS 2179, MRS 2279, MRS 2500, A2P5P, A3P5P y A3P5PS.
  2. 2. Kit para la preparacion de controles para un procedimiento para la determinacion de la funcion plaquetaria, y el kit contiene los siguientes componentes:
    a. un primer liofilizado para la preparacion de un primer control con funcion plaquetaria normal, en cuyo caso el liofilizado se compone de los siguientes componentes:
    - una sustancia reguladora de pH para mantener un valor de pH fisiologico, y
    - una sustancia auxiliar para la liofilizacion, y
    - plasma normal humana; y
    b. un segundo liofilizado para la preparacion de un segundo control con funcion plaquetaria anormalmente reducida, en cuyo caso el liofilizado se compone de los siguientes componentes:
    - una sustancia reguladora de pH para mantener un valor de pH fisiologico, y
    - una sustancia auxiliar para la liofilizacion, y
    - un inhibidor directo de la agregacion plaquetaria del grupo de tirofiban, abxicimab, eptifibatid, acido acetilsalicllico, MRS 2395, AR-C66096, cangrelor, ticagrelor, cilostazol, dipyridamol, prostaglandina E1, prostaciclina, iloprost, cicaprost, forscolina, 2-MeSAMP, C1330-7, MRS 2179, MRS 2279, MRS 2500, A2P5P, A3P5P y A3P5PS y
    - plasma normal humana.
  3. 3. Kit para la preparacion de controles para un procedimiento para la determinacion de la funcion plaquetaria, y el kit contiene los siguientes componentes:
    a. un primer liofilizado para la preparacion de un primer control con funcion plaquetaria normal, en cuyo caso el liofilizado se compone de los siguientes componentes:
    - una sustancia reguladora de pH para mantener un valor de pH fisiologico, y
    - una sustancia auxiliar para la liofilizacion, y -factor humano de von Willebrand; y
    b. un segundo liofilizado para la preparacion de un segundo control con funcion plaquetaria anormalmente reducida, en cuyo caso el liofilizado se compone de los siguientes componentes:
    - una sustancia reguladora de pH para mantener un valor de pH fisiologico, y
    - una sustancia auxiliar para la liofilizacion, y
    5
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    20
    25
    - un inhibidor directo de la agregacion plaquetaria del grupo de tirofiban, abxicimab, eptifibatid, acido acetilsalicllico, MRS 2395, AR-C66096, cangrelor, ticagrelor, cilostazol, dipyridamol, prostaglandina E1, prostaciclina, iloprost, cicaprost, forscolina, 2-MeSAMP, C1330-7, MRS 2179, MRS 2279, MRS 2500, A2P5P, A3P5P y A3P5PS y
    -factor humano de von Willebrand.
  4. 4. Kit de acuerdo con una de las reivindicaciones anteriores, en el cual la sustancia reguladora de pH para mantener un valor de pH fisiologico se selecciona del grupo de HEPES, PBS, OVB, MES, PIPES, TAPS, cHeS, CAPS, Tris y MOPS.
  5. 5. Kit de acuerdo con una de las reivindicaciones anteriores, en el cual la sustancia auxiliar para la liofilizacion es un disacarido, preferiblemente un disacarido del grupo de sacarosa, lactosa, trehalosa y maltosa.
  6. 6. Kit de acuerdo con una de las reivindicaciones anteriores, en el cual la sustancia auxiliar para la liofilizacion es un alcohol, preferiblemente un alcohol del grupo de polietilenglicol, manitol y sorbitol.
  7. 7. Kit de acuerdo con una de las reivindicaciones anteriores, en el cual el segundo liofilizado contiene un inhibidor directo de la agregacion plaquetaria en una cantidad de modo que pueda prepararse un control que presenta una funcion plaquetaria de entre aproximadamente 50 % y aproximadamente 80 %, de preferencia aproximadamente de 70 % de la funcion plaquetaria normal.
  8. 8. Kit de acuerdo con una de las reivindicaciones anteriores, y el kit contiene ademas al menos otro liofilizado para la preparacion de al menos otro control con funcion plaquetaria anormalmente reducida, en el cual el al menos otro liofilizado contiene el mismo inhibidor directo de la agregacion plaquetaria que el segundo liofilizado, aunque en una cantidad diferente y el al menos otro liofilizado contiene otro inhibidor directo de la agregacion plaquetaria diferentes del del segundo liofilizado.
  9. 9. Procedimiento para la preparacion de controles para un procedimiento para la determination de la funcion plaquetaria, caracterizado porque se usa un kit de acuerdo con una de las reivindicaciones precedentes y en cuyo caso cada uno de los liofilizados contenidos en el kit se disuelve en sangre entera con funcion plaquetaria normal.
  10. 10. Procedimiento de acuerdo con la revindication 9, en el cual la sangre entera con funcion plaquetaria normal es una muestra de sangre entera de un donante sano.
  11. 11. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 9 o 10, en el cual la sangre entera es anticoagulada con citrato, hirudina, PPACK, BAPA o heparina.
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6012455B2 (ja) * 2012-12-21 2016-10-25 シーメンス ヘルスケア ダイアグノスティクス プロダクツ ゲゼルシヤフト ミツト ベシユレンクテル ハフツング 血小板機能を測定するシステムにおいて測定結果を標準化する方法
CN105652022B (zh) * 2015-12-31 2017-10-10 浙江盛域医疗技术有限公司 血栓弹力图仪质控品及其制备方法
JP6941061B2 (ja) * 2016-02-17 2021-09-29 ソニーグループ株式会社 血小板凝集能解析装置、血小板凝集能解析システム、血小板凝集能解析用プログラム及び血小板凝集能の解析方法
JP7110360B2 (ja) 2017-10-09 2022-08-01 テルモ ビーシーティー バイオテクノロジーズ，エルエルシー 凍結乾燥方法
JP7230429B2 (ja) 2018-10-25 2023-03-01 ソニーグループ株式会社 血小板凝集能解析装置、血小板凝集能解析方法及び血小板凝集能解析システム
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Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4358394A (en) 1979-05-07 1982-11-09 Coulter Electronics, Inc. Process for preparing whole blood reference controls having long term stability
US4338564A (en) 1979-06-11 1982-07-06 R & D Systems, Inc. Hematology control composition and methods for its use
DE19634313A1 (de) * 1996-08-24 1998-02-26 Behringwerke Ag Methode zur Stabilisierung von Plättchen
KR100512671B1 (ko) * 1996-11-27 2005-09-07 아벤티스 파마슈티칼스 인크. 항 Ｘａ 활성을 지닌 화합물 및 혈소판 응집 길항제 화합물을포함하는 약제학적 조성물
US20070243632A1 (en) * 2003-07-08 2007-10-18 Coller Barry S Methods for measuring platelet reactivity of patients that have received drug eluting stents
US7790362B2 (en) * 2003-07-08 2010-09-07 Accumetrics, Inc. Controlled platelet activation to monitor therapy of ADP antagonists
DE10360628A1 (de) * 2003-12-19 2005-07-21 Dade Behring Marburg Gmbh Kontrollplasma für Thrombinaktivitätstests
WO2006020773A2 (en) * 2004-08-12 2006-02-23 Adlyfe, Inc. Methods for preparing freeze-dried platelets, compositions comprising freeze-dried platelets, and methods of use
US7811558B2 (en) * 2004-08-12 2010-10-12 Cellphire, Inc. Use of stabilized platelets as hemostatic agent
ES2668551T3 (es) * 2005-09-26 2018-05-18 Lifecell Corporation Composición seca de plaquetas
DE102006020385A1 (de) 2006-04-28 2007-10-31 Dade Behring Marburg Gmbh Verfahren und Vorrichtung zur Bestimmung der Thrombozytenfunktion unter Flussbedingungen
DE102006020386A1 (de) * 2006-04-28 2007-10-31 Dade Behring Marburg Gmbh Verfahren zur Bestimmung der Thrombozytenfunktion unter Flussbedingungen

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