ES2639445T3 - Composición para su utilización como plasma de control anormal de la coagulación en ensayos in vitro - Google Patents

Composición para su utilización como plasma de control anormal de la coagulación en ensayos in vitro Download PDF

Info

Publication number
ES2639445T3
ES2639445T3 ES15382091.5T ES15382091T ES2639445T3 ES 2639445 T3 ES2639445 T3 ES 2639445T3 ES 15382091 T ES15382091 T ES 15382091T ES 2639445 T3 ES2639445 T3 ES 2639445T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
plasma
composition
coagulation
abnormal
hemostasis
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES15382091.5T
Other languages
English (en)
Inventor
José Segui Borrell
Daniel Martorell Pena
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Grifols SA
Original Assignee
Grifols SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Grifols SA filed Critical Grifols SA
Application granted granted Critical
Publication of ES2639445T3 publication Critical patent/ES2639445T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/96—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood or serum control standard
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C65/00—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C65/21—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups containing ether groups, groups, groups, or groups
    • C07C65/28—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups containing ether groups, groups, groups, or groups having unsaturation outside the aromatic rings
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2496/00—Reference solutions for assays of biological material
    • G01N2496/05—Reference solutions for assays of biological material containing blood cells or plasma
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
    • Y10T436/106664—Blood serum or blood plasma standard or control

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Composición para su utilización como plasma de control anormal de la coagulación en ensayos in vitro, comprendiendo dicha composición: plasma humano, solución tamponada isotónica al plasma normal y ácido ferúlico, caracterizada por que dicho plasma humano se ha obtenido mediante métodos conocidos de extracción de plasma humano y por que dicha solución isotónica tamponada tiene un pH entre 6,5 y 8,5, en la que la concentración de plasma humano está en el intervalo de 15% (v/v) a 75% (v/v), la cantidad de dicha solución isotónica tamponada está en el intervalo de 40% (v/v) a 70% (v/v); y en la que la cantidad de ácido ferúlico está en el intervalo de 0,01% (p/v) a 1% (p/v).

Description

5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
DESCRIPCION
Composicion para su utilizacion como plasma de control anormal de la coagulacion en ensayos in vitro
La presente invencion se refiere al sector del analisis clinico de la sangre y, mas en particular, se refiere a una composicion que comprende plasma humano, solucion isotonica tamponada y acido ferulico para utilizar en el control anormal de la coagulacion en ensayos de hemostasia, coagulacion y fibrinolisis. Ademas, la presente invencion se refiere a la utilizacion de acido ferulico en la preparacion de un control anormal de plasma en ensayos de hemostasia.
La hemostasia es el conjunto de mecanismos a traves de los cuales los animales con un sistema vascular evitan desangrarse tras una herida. El mecanismo de la hemostasia tiene distintas funciones importantes: (a) mantener la sangre en estado fluido cuando circula dentro del sistema vascular, (b) detener la hemorragia en el lugar donde se ha producido una herida o haya perdida de sangre a traves de la formacion de un coagulo, y (c) asegurar la eliminacion del coagulo cuando la herida se ha curado. Habitualmente, en la hemostasia intervienen cinco elementos, a saber: los vasos sanguineos, las plaquetas (componente celular), los factores de la coagulacion, los inhibidores de la coagulacion y el sistema fibrinolitico. La hemostasia, pues, involucra un grupo de fuerzas que deben interactuar en un perfecto equilibrio, las fuerzas procoagulantes y anticoagulantes. Este equilibrio esta controlado por varias proteinas, algunas de ellas conocidas como factores de coagulacion. Es un equilibrio muy delicado y en caso de desequilibrio, podria generar un estado protrombotico o un trastorno hemorragico.
Es muy importante medir de forma precisa el funcionamiento de la coagulacion, porque si existen deficiencias, pudieran amenazar la vida. Este hecho adquiere especial interes en el caso de pacientes sometidos a terapia de coagulacion en condiciones tromboemboliticas.
El papel del laboratorio de hemostasia es detectar y conocer las alteraciones fisiologicas en enfermedades hemorragicas y tromboticas. Para ello se utilizan diferentes ensayos tales como ensayos de hemostasia primaria, coagulometricos e inmunologicos, que permiten obtener informacion util para guiar a los profesionales de la salud hacia un diagnostico preciso y su tratamiento adecuado.
Los ensayos de hemostasia se pueden dividir en dos grupos diferentes: evaluacion inicial de la hemostasia, en el que se pueden incluir el tiempo de protrombina (PT), el tiempo de tromboplastina parcial activada (aPTT), la determinacion de la concentracion de fibrinogeno y tiempo de trombina (TT); en el otro grupo se pueden incluir ensayos especiales tales como el tiempo de reptilasa (RT), el tiempo de coagulacion activada (ACT), la determinacion de la concentracion de antitrombina (AT), de Proteina C, de Proteina S, de factor de von Willebrand, de plasminogeno y de a2-antiplasmina (inhibidor de plasmina).
En los laboratorios de hemostasia, muestras de pacientes son analizadas para una gran variedad de cribados de hemostasia y ensayos especiales durante toda la jornada de trabajo. En estos ensayos, el control metodologico de las variables que intervienen en la eficiencia y eficacia de los ensayos de hemostasia son esenciales para un diagnostico correcto. Dentro de estos controles de calidad internos seguidos por los laboratorios, el uso de plasmas de control juega un papel muy importante.
Es extremadamente recomendable utilizar un control en el rango de tiempo de coagulacion normal y otro en el rango anormal, en intervalos regulares para asegurar el funcionamiento correcto de los reactivos y dispositivos utilizados en el laboratorio de hemostasia. Existen recomendaciones publicadas en relacion con la frecuencia de ensayo de los materiales de control para algunos ensayos de coagulacion. Por ejemplo, el CLSI (siglas en ingles del Instituto de Estandares de Laboratorios Clinicos) ha publicado documentos de guia en relacion con los ensayos PT y aPTT. En dicho documento, se recomienda ensayar, como minimo, dos niveles de materiales de control cada 8 horas, o mas frecuentemente si ocurre un procesado de muestras de forma continua, tal como ocurre en muchos laboratorios. Este documento de CLSI tambien indica que el primer ensayo realizado despues de cambios o incorporacion de nuevos reactivos o de un cambio importante de instrumentos debe ser con la muestra de control. Los controles permiten evaluar la precision y la desviacion analitica de los ensayos de coagulacion en el sistema empleado de coagulometro y reactivos utilizados.
Existe literatura publicada en relacion con la preparacion de plasma de control de la coagulacion y actualmente estan comercialmente disponibles algunos de ellos. Sin embargo, la mayoria de los metodos descritos requieren mucho tiempo e incluyen etapas costosas para absorber factores proteicos criticos del plasma para obtener las propiedades de coagulacion anormales. Un metodo para preparar plasma de control anormal de coagulacion comprende la incubacion de plasma normal con hidroxido de aluminio y su posterior centrifugacion. El sedimento contiene varios factores de coagulacion y el sobrenadante resultante se puede emplear como plasma de control patologico. Los tiempos de coagulacion anormales se consiguen mediante la eliminacion de los factores de coagulacion del plasma. Sin embargo, el plasma de control de la coagulacion obtenido de esta manera no es completamente satisfactorio, porque se obtienen resultados anormales en algunos ensayos, pero en otros la actividad esta en el rango normal, por ejemplo, factor VIII, XI y XII, asi como en otros ensayos de hemostasia tales como TT y RT.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Otro metodo para generar un control anormal de la coagulacion es diluir el plasma normal. Dicho metodo se describe en una gufa internacional (NCCLS H30-A2), en la que se menciona como preparar un plasma de control anormal para la determinacion de fibrinogeno segun el metodo Clauss. Ademas, se describe que se puede diluir un conjunto de plasmas normales con tampon barbital para obtener plasma con un resultado anormal (bajo contenido en fibrinogeno). El resultado final de la dilucion de un conjunto de plasmas normales resulta anormal para la mayona de los ensayos de hemostasia. Sin embargo, este plasma de control de la coagulacion no es anormal, por ejemplo, para TT y RT. El mismo resultado se obtiene mediante la dilucion de plasma normal con otras soluciones tal como una solucion de albumina al 4%.
Song Wang y otros: “The anticoagulant ability of ferulic acid and its applications for improving the blood compatibility of silk fibroin, BIOMEDICAL MATERIALS, INSTITUTE OF PHYSICS PUBLISHING, BRISTOL, GB, vol. 3, ne 4, 1 Diciembre 2008 (2008-12-01), pag. 44106; da a conocer que el acido felurico tiene actividad anticoagulante.
Wee Jae Joon y otros: “Identification of Anticoagulant Components in Korean Red Ginseng”, JOURNAL OF GINSENG RESEARCH, vol 34, n° 4, Diciembre 2010 (2010-12), pag. 355-362, da a conocer que los compuestos feluricos, que comprenden acido ferulico, en el ginseng rojo coreano, tienen actividad anticoagulante que contribuye al efecto cardiovascular del ginseng rojo coreano.
La solicitud de Patente en Estados Unidos N° US 2001/004641 da a conocer ensayos de tiempo de protombina (PT) y el tiempo de tromboplastina parcial activado (aPPT) con una composicion de control de la coagulacion que comprende plasma humano y un anticoagulante.
La presente invencion da a conocer un plasma de control anormal de la coagulacion que supera todos los inconvenientes mencionados anteriormente. El plasma de control anormal de la presente invencion garantiza resultados en el rango anormal en un gran numero de ensayos de hemostasia, incluyendo TT, RT y la determinacion de actividad de los factores especfficos de la coagulacion. Los presentes inventores han descubierto, sorprendentemente, que mediante la adicion de acido ferulico en una solucion isotonica a un plasma normal se puede obtener un plasma de control anormal que puede ser utilizado de forma eficaz en la mayona de los ensayos de hemostasia.
Sin estar asociados a ninguna teorfa en particular, es posible que esta propiedad del acido ferulico se obtenga por una propiedad caracterfstica anticoagulante de dicha sustancia. No obstante, el hecho de que una sustancia posea propiedades anticoagulantes, no indica que sea apropiada para generar un plasma anormal. Por ejemplo, la warfarina es uno de los anticoagulantes mas utilizados en sanidad para tratar los pacientes con riesgo trombotico y lleva mas de 50 anos utilizandose como medicamento. Sin embargo, este compuesto no es util para ser anadido en un plasma y generar un control anormal de la coagulacion, ya que su mecanismo de accion se basa en la inhibicion de la smtesis de los factores de coagulacion dependientes de la vitamina K. Como anticoagulante requiere de un sistema in vivo completo.
Otros compuestos con actividad anticoagulante, como la heparina o el acido etilendiaminotetraacetico (EDTA), sf que pueden ser anadidos a plasma normal y generar tiempos anormales en los ensayos de hemostasia. Sin embargo, los presentes inventores no han obtenido resultados similares con los anticoagulantes heparina o EDTA. Ambos anticoagulantes no son idoneos para generar un plasma anormal, ya que presentan un efecto desigual sobre los ensayos de hemostasia. Es decir, la concentracion optima para obtener un tiempo anormal en un ensayo es insuficiente o excesiva para otro ensayo. Por ejemplo, en el caso de la heparina, provoca un alargamiento del ensayo aPTT pero no afecta al ensayo PT o lo hace en menor medida. Ademas, la heparina no provoca el alargamiento del ensayo RT, o sea no genera un plasma anormal para RT. Un caso similar ocurre con el EDTA, a una concentracion determinada, puede provocar un alargamiento en el ensayo de RT pero no afectar, o hacerlo de una manera muy suave, a los resultados de los ensayos de PT, aPTT y TT.
Por lo tanto, la presente invencion da a conocer una composicion para su utilizacion como control anormal de la coagulacion en ensayos in vitro, que comprende plasma humano, solucion tamponada isotonica al plasma normal y acido ferulico, caracterizada por que dicho plasma humano ha sido obtenido mediante metodos conocidos de extraccion de plasma humano y por que dicha solucion tamponada isotonica tiene un pH entre 6,5 y 8,5, en la que la concentracion de plasma humano esta en el intervalo de 15% (v/v) a 75% (v/v), la cantidad de dicha solucion isotonica esta en el intervalo de 40% (v/v) a 70% (v/v); y en la que la concentracion de acido ferulico esta en el intervalo de 0,01% (p/v) a 1% (p/v).
En la composicion de la presente invencion, el termino plasma humano se refiere a la parte lfquida de la sangre a la que se le han extrafdo los hematfes, los globulos blancos y las plaquetas. Ademas, el plasma humano que se utiliza en la composicion de la presente invencion es un plasma que tiene un tiempo normal de coagulacion en los distintos ensayos y, por tanto, es posible su utilizacion como control normal en ensayos de coagulacion. Dicho plasma se puede obtener por cualquiera de los metodos conocidos en la tecnica, por ejemplo, mediante plasmaferesis.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Una ventaja adicional de la composicion para el control anormal de la coagulacion en ensayos de hemostasia de la presente invencion es que dicha composicion se puede congelar o liofilizar, y permanece estable despues que se descongela o reconstituye.
Para lograr una composicion para el control anormal de la coagulacion en ensayos de hemostasia, es preferible que se utilice un conjunto (“pool”) de plasma normal que contiene plasma de 2 o mas donantes humanos sanos. Dicho conjunto de plasma se puede preparar mediante mezclado suave en un recipiente adecuado.
La solucion isotonica de la presente invencion puede ser cualquier solucion isotonica conocida en la tecnica anterior. Preferentemente, la solucion isotonica de la presente invencion es un tampon que mantiene un pH alrededor del valor fisiologico entre 6,5 y 8,5 (por ejemplo, Tris, HEPES, MOPS o CHAPS).
Ademas, opcionalmente la composicion para el control anormal de la coagulacion en ensayos de hemostasia de la presente invencion puede comprender un agente estabilizador de factores de coagulacion. Un estabilizador de factores de coagulacion puede proporcionar una estabilidad adicional a dicha composicion. Preferentemente, dicho estabilizador de factores de coagulacion es glicina, y mas preferentemente, dicha glicina esta presente en la composicion para el control anormal de la coagulacion en ensayos de hemostasia de la presente invencion en una cantidad de aproximadamente 0,1% a aproximadamente 4% (p/v).
La composicion para el control anormal de la coagulacion en ensayos de hemostasia de la presente invencion tambien puede comprender opcionalmente un agente estabilizante de proteinas o aditivo proteico y/o agente de carga, y un conservante. Dicho agente estabilizante tiene como funcion principal conservar la funcionalidad de las proteinas una vez liofilizadas las mismas. Dicho agente estabilizante puede ser cualquier agente estabilizante conocido por un experto en la materia.
Por ultimo, la presente invencion da a conocer el uso de acido ferulico en la preparacion de un control anormal de la coagulacion en ensayos de hemostasia.
A continuacion, se describe en mas detalle la presente invencion en referencia a ejemplos ilustrativos, que no constituyen una limitacion de la presente invencion, y en referencia a las figuras en las que:
La figura 1 muestra el efecto del acido ferulico con respecto a muestras de control en el ensayo de hemostasia PT.
La figura 2 muestra el efecto de la heparina con respecto a muestras de control en el ensayo de hemostasia PT.
La figura 3 muestra el efecto del EDTA con respecto a muestras de control en el ensayo de hemostasia PT.
La figura 4 muestra el efecto del acido ferulico con respecto a muestras de control en el ensayo de hemostasia aPTT.
La figura 5 muestra el efecto de la heparina con respecto a muestras de control en el ensayo de hemostasia aPTT.
La figura 6 muestra el efecto del EDTA con respecto a muestras de control en el ensayo de hemostasia aPTT.
La figura 7 muestra el efecto del acido ferulico con respecto a muestras de control en el ensayo de hemostasia TT.
La figura 8 muestra el efecto de la heparina con respecto a muestras de control en el ensayo de hemostasia TT.
La figura 9 muestra el efecto del EDTA con respecto a muestras de control en el ensayo de hemostasia TT.
La figura 10 muestra el efecto del acido ferulico con respecto a muestras de control en el ensayo de hemostasia RT. La figura 11 muestra el efecto de la heparina con respecto a muestras de control en el ensayo de hemostasia RT.
La figura 12 muestra el efecto del EDTA con respecto a muestras de control en el ensayo de hemostasia RT.
EJEMPLOS
EJEMPLO 1. Preparacion de las composiciones control anormal de plasma para los ensayos de hemostasia
Para evaluar el efecto de diferentes anticoagulantes en diferentes ensayos de hemostasia, se prepararon diferentes composiciones de plasma. Se utilizo plasma normal humano citratado (16 mM de citrato) conservado a una temperatura inferior a -70 °C y se descongelo en bano a 37 °C. A continuacion, se anadio HEPES hasta una concentracion final de 40 mM y el pH fue ajustado hasta 7,4 - 7,6 con NaOH 1N. Se prepararon diferentes composiciones de plasma. A la primera no se anadio ningun anticoagulante y se utilizo como control. En las otras, se anadieron concentraciones crecientes de los anticoagulantes analizados: acido ferulico (0,5% 1% y 1,5%), heparina (0,1 UI/mL, 0,5 UI/mL y 1 UI/mL) y EDTA (0,5 mg/mL, 1 mg/mL, 1,5 mg/mL). Cada composicion de plasma fue analizada para los ensayos PT, aPTT, TT y RT mencionados anteriormente en Q Haemostasis Analyzer (Diagnostic Grifols, Espana) usando los reactivos DG-PT, DG-APTT Synth, DG-TT L Human y DG-Fibroclotin de Diagnostic Grifols.
EJEMPLO 2. Efecto de las composiciones que comprenden anticoagulantes en el ensayo de PT.
En las figuras 1-3 se muestran los resultados obtenidos en el ensayo de PT con los diferentes anticoagulantes, en las que se relaciona el tiempo obtenido en el ensayo de PT, segun la concentracion de anticoagulante presente en el plasma. En triangulos se representa el control (plasma sin anticoagulante) y en cuadrados las composiciones que tienen acido ferulico, heparina y EDTA. Se puede observar que el acido ferulico (figura 1) y el EDTA (figura 3)
5
10
15
20
25
30
35
generan una disminucion en el % de actividad de PT de manera proporcional a la cantidad de anticoagulante presente en el plasma. En cambio, la heparina (figura 2) no provoca un resultado diferente al del plasma sin anticoagulante. Es decir, en las concentraciones ensayadas, la heparina no afecta el ensayo PT. En cambio, el acido ferulico y el EDTA anadidos en un plasma normal, si que generan una disminucion en el % de actividad de PT.
EJEMPLO 3. Efecto de las composiciones que comprenden anticoagulantes en el ensayo de aPTT.
Los mismos plasmas preparados en el Ejemplo 1 fueron ensayados en el ensayo de aPTT (figuras 4-6). En este ensayo, todos los anticoagulantes anadidos al plasma, a saber acido ferulico (figura 4), heparina (figura 5) y EDTA (figura 6), provocan un alargamiento del aPTT. Ademas, el alargamiento en el resultado del ensayo, es proporcional a la cantidad de anticoagulante presente en el plasma analizado.
EJEMPLO 4. Efecto de las composiciones que comprenden anticoagulantes en el ensayo de TT.
Los mismos plasmas preparados en el Ejemplo 1 fueron ensayados en el ensayo de TT. En las figuras 7-9 se muestran los resultados de TT obtenidos al ensayar los plasmas preparados. De los tres anticoagulantes analizados, el EDTA (figura 9) no alarga el resultado del ensayo; es decir, no genera un TT anormal. En cambio, tanto la heparina (figura 8) como el acido ferulico (figura 7), si que generan un TT anormal.
EJEMPLO 5. Efecto de las composiciones que comprenden anticoagulantes en el ensayo de RT.
Los mismos plasmas preparados en el Ejemplo 1 fueron ensayados en el ensayo de RT. En referencia a los resultados del ensayo de RT (figuras 10-12), el unico anticoagulante que no genera un resultado anormal tras ser anadido a un pool de plasma normal es la heparina (figura 11). En ninguna de las concentraciones ensayadas, la heparina provoca un alargamiento del RT. Los plasmas que contienen los anticoagulantes acido ferulico (figura 10) y EDTA (figura 12), si que generan un resultado anormal para RT.
A raiz de los resultados mostrados en los ejemplos y figuras anteriores, se puede apreciar el poder anticoagulante del acido ferulico y su capacidad, tras ser anadido a un plasma normal, de provocar resultados anormales en todos los ensayos de hemostasia. Ademas, genera un alargamiento en los tiempos de los tests de una manera equilibrada, haciendolo asi adecuado para la fabricacion de plasma de control anormal.
Si bien la invencion se ha descrito con respecto a ejemplos de realizaciones preferentes, estos no se deben considerar limitativos de la invencion, que se definira por la interpretacion mas amplia de las siguientes reivindicaciones.

Claims (7)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    REIVINDICACIONES
    1. Composicion para su utilizacion como plasma de control anormal de la coagulacion en ensayos in vitro, comprendiendo dicha composicion: plasma humano, solucion tamponada isotonica al plasma normal y acido ferulico, caracterizada por que dicho plasma humano se ha obtenido mediante metodos conocidos de extraccion de plasma humano y por que dicha solucion isotonica tamponada tiene un pH entre 6,5 y 8,5, en la que la concentracion de plasma humano esta en el intervalo de 15% (v/v) a 75% (v/v), la cantidad de dicha solucion isotonica tamponada esta en el intervalo de 40% (v/v) a 70% (v/v); y en la que la cantidad de acido ferulico esta en el intervalo de 0,01% (p/v) a 1% (p/v).
  2. 2. Composicion, segun la reivindicacion 1, caracterizada por que el plasma humano es un plasma que presenta un valor de tiempo normal de coagulacion en diferentes ensayos de coagulacion.
  3. 3. Composicion, segun la reivindicacion 1 o 2, caracterizada por que el plasma humano es un conjunto (“pool”) de plasma normal que contiene plasma de 2 o mas donantes humanos sanos.
  4. 4. Composicion, segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada por que ademas comprende un agente estabilizador de factores de coagulacion.
  5. 5. Composicion, segun la reivindicacion 4, caracterizada por que el estabilizador de factores de coagulacion es glicina.
  6. 6. Composicion, segun la reivindicacion 5, caracterizada por que la glicina esta presente en dicha composicion en una cantidad de 0,1% (p/v) a 4% (p/v).
  7. 7. Composicion, segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada por que ademas comprende un agente estabilizante de proteinas y un conservante.
ES15382091.5T 2014-03-13 2015-03-03 Composición para su utilización como plasma de control anormal de la coagulación en ensayos in vitro Active ES2639445T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES201430343 2014-03-13
ES201430343A ES2475492B1 (es) 2014-03-13 2014-03-13 Composición para su utilización como plasma de control anormal de la coagulación en ensayos in vitro

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2639445T3 true ES2639445T3 (es) 2017-10-26

Family

ID=51063211

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES201430343A Expired - Fee Related ES2475492B1 (es) 2014-03-13 2014-03-13 Composición para su utilización como plasma de control anormal de la coagulación en ensayos in vitro
ES15382091.5T Active ES2639445T3 (es) 2014-03-13 2015-03-03 Composición para su utilización como plasma de control anormal de la coagulación en ensayos in vitro

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES201430343A Expired - Fee Related ES2475492B1 (es) 2014-03-13 2014-03-13 Composición para su utilización como plasma de control anormal de la coagulación en ensayos in vitro

Country Status (11)

Country Link
US (1) US9482679B2 (es)
EP (1) EP2919014B1 (es)
JP (1) JP6215245B2 (es)
CN (1) CN104914256B (es)
AR (1) AR099753A1 (es)
AU (1) AU2015201260B2 (es)
BR (1) BR102015005628A8 (es)
CA (1) CA2883260C (es)
CL (1) CL2015000469A1 (es)
ES (2) ES2475492B1 (es)
MX (1) MX362870B (es)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108169467B (zh) * 2017-11-27 2019-09-20 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 一种血栓弹力图仪质控品及其制备方法和应用
CN109239373A (zh) * 2018-08-15 2019-01-18 迪瑞医疗科技股份有限公司 一种组织因子酯化物试剂及其制备方法与应用
CN110346582B (zh) * 2019-07-15 2022-10-25 三诺生物传感股份有限公司 一种凝血复合质控品及其制备方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5705395A (en) * 1994-11-14 1998-01-06 The Scripps Research Institute Method for diagnosis of thrombotic disorders
US6194394B1 (en) * 1998-07-01 2001-02-27 Sigma-Aldrich Co. Coagulation controls for prothrombin time (PT) and activated partial thromboplastin time (APTT) assays
WO2001007921A2 (en) * 1999-07-23 2001-02-01 Medical Analysis Systems, Inc. Stabilized coagulation control reagent
CN103626653B (zh) * 2013-08-14 2015-06-24 河南大学 冬凌草促凝血有效成分及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
BR102015005628A2 (pt) 2016-04-26
JP6215245B2 (ja) 2017-10-18
AR099753A1 (es) 2016-08-17
JP2015175850A (ja) 2015-10-05
EP2919014B1 (en) 2017-08-16
CA2883260A1 (en) 2015-09-13
EP2919014A1 (en) 2015-09-16
MX2015003192A (es) 2015-10-29
MX362870B (es) 2019-02-20
AU2015201260B2 (en) 2018-05-10
CN104914256A (zh) 2015-09-16
US9482679B2 (en) 2016-11-01
BR102015005628A8 (pt) 2022-07-05
CL2015000469A1 (es) 2015-10-02
ES2475492B1 (es) 2015-01-15
ES2475492A1 (es) 2014-07-10
US20150260740A1 (en) 2015-09-17
CA2883260C (en) 2019-02-19
AU2015201260A1 (en) 2015-10-01
CN104914256B (zh) 2018-04-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2636318T3 (es) Procedimiento para la monitorización de una terapia anticoagulante
ES2599929T3 (es) Método diagnóstico in vitro para evaluar la enfermedad de von Willebrand y un mayor riesgo hemorrágico asociado con la enfermedad de von Willebrand y los trastornos adquiridos o congénitos de la función trombocítica
Solomon et al. Effect of haematocrit on fibrin-based clot firmness in the FIBTEM test
ES2907190T3 (es) Detección de la reversión de un anticoagulante mediante pruebas de coagulación por ecarina y factor Xa
BR112014031509B1 (pt) Para a determinação simultânea in vitro em tempo real do curso da atividade da enzima proteolítica e da resistência do coágulo de fibrina, reômetro rotativo e uso de um reômetro rotativo
Gudmundsdottir et al. Critical role of factors II and X during coumarin anticoagulation and their combined measurement with a new Fiix-prothrombin time
ES2639445T3 (es) Composición para su utilización como plasma de control anormal de la coagulación en ensayos in vitro
Tiede et al. Acquired bleeding disorders
Görlinger et al. Whole blood assay: thromboelastometry
JP5947085B2 (ja) 血小板活性試験のための対照及びキット
Tripodi et al. Lupus anticoagulant testing: activated partial thromboplastin time (APTT) and silica clotting time (SCT)
Xu et al. Blockade of extracellular high-mobility group box 1 attenuates systemic inflammation and coagulation abnormalities in rats with acute traumatic coagulopathy
Vainer et al. A useful photometric test for the diagnosis of von Willebrand's disease
Fabbro II et al. Coagulation and transfusion updates from 2021
Avwioro et al. Prothrombin time and activated partial thromboplastin time in pregnant women in Southern Nigeria
Ma et al. Evaluation of the bleeding patient
Görlinger et al. Whole blood assay: thromboelastometry–basics
Palsgaard-Van Lue et al. Cellular, hemostatic, and inflammatory parameters of the surgical stress response in pigs undergoing partial pericardectomy via open thoracotomy or thoracoscopy
Kornblith et al. Response: the whole is greater than the sum of its parts: hemostatic profiles of whole-blood variants
US11906532B2 (en) Hemostasis measurement device quality control formulations
SU1508169A1 (ru) Способ определени активности антитромбина- @ в плазме крови
Raynard et al. PF4-R, a Novel Heparin Neutralizing Reagent Suitable for Automated Coagulometers: Comparison with Heparinase in Routine Coagulation Tests
Francey Hemostatic disorders in renal diseases.
DeLoughery Liver and renal disease
Wang et al. Comparison of Citrated Whole Blood and Native Whole Blood Samples for Rapid Thromboelastographic Analysis in Healthy Dogs