ES2633359T3 - Derivados de antraquinona tetracíclica - Google Patents

Derivados de antraquinona tetracíclica Download PDF

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ES2633359T3
ES2633359T3 ES13847102.4T ES13847102T ES2633359T3 ES 2633359 T3 ES2633359 T3 ES 2633359T3 ES 13847102 T ES13847102 T ES 13847102T ES 2633359 T3 ES2633359 T3 ES 2633359T3
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ES
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ethyl
propyl
piperazin
pyridin
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Hesheng Zhang
Aihong Huo
Zhenzhong Li
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Tianjin Hemay Oncology Pharmaceutical Co Ltd
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Tianjin Hemay Oncology Pharmaceutical Co Ltd
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    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/044—Pyrrole radicals
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives

Abstract

Un compuesto representado por la fórmula (I) y una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,**Fórmula** en la que: R1 se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo C1-4, alcoxi C1-4; R2 se selecciona entre el grupo que consiste en H, metilo, etilo, (morfolinilmetil)fenilo, 4-((morfolin-1-il)metil)fenilo, (dimetilaminometil)fenilo, 4-((dimetilamino)metil)fenilo, 2-(2-(dimetilamino)etoxi)etilo, morfolin-1-ilo, piperidin-1-ilo, tetrahidropirrol-1-ilo, 4-(2-hidroxietil)piperazin-1-ilo, (4-metilpiperazin)-1-ilo, (4-etilpiperazin)-1-ilo, 2- (tetrahidropirrol-1-il)etilo, 3-(tetrahidropirrol-1-il)propilo, (2-(morfolin-1-il)piridin)-4-ilo, (2-(morfolin-1-il)piridin)-5-ilo, piridin-2-ilo, piridin-3-ilo, piridin-4-ilo, (piridin-4-il)metilo, (piridin-3-il)metilo, (piridin-2-il)metilo, 2-(piridin-4-il)etilo, 2- (piridin-3-il)etilo, 2-(piridin-2-il)etilo, 2-(piridin-4-il)propilo, 2-(piridin-3-il)propilo, 2-(piridin-2-il)propilo, 2-((4- sulfamido)fenil)etilo, (3-(dimetilamino)propil)piperazin-1-ilo, 3-((4-sulfamido)fenil)propilo, 3-((4-metil)piperazin-1- il)propilo, 3-((4-etil)piperazin-1-il)propilo, 3-((4-propil)piperazin-1-il)propilo, 2-((4-metil)piperazin-1-il)etilo, 2-((4- etil)piperazin-1-il)etilo, 2-((4-propil)piperazin-1-il)etilo, 2-(dimetilamino)etilo, 2-(dietilamino)etilo, 2- (dipropilamino)etilo, 2-(piperidin-1-il)etilo, 2-(morfolin-1-il)etilo, 2-(tetrahidropirrol-1-il)etilo, 3-(dimetilamino)propilo, 3-(dietilamino)propilo, 3-(dipropilamino)propilo, 3-(piperidin-1-il)propilo, 3-(morfolin-1-il)propilo, 3-(tetrahidropirrol- 1-il)propilo, 4-(dimetilamino)butilo, 4-(dietilamino)butilo, 4-(dipropilamino)butilo, 4-(piperidin-1-il)butilo, 4-(morfolin- 1-il)butilo, 4-(tetrahidropirrol-1-il)butilo, 2-(2-(2-(2-(dimetilamino)etoxi)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(2- (dietilamino)etoxi)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(2-(dipropilamino)etoxi)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(2-(piperidin-1- il)etoxi)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(2-(morfolin-1-il)etoxi)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(2-(tetrahidropirrol-1- il)etoxi)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(dimetilamino)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(dietilamino)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2- (dipropilamino)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(piperidin-1-il)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(morfolin-1-il)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2- (2-(tetrahidropirrol-1-il)etoxi)etoxi)etilo, 6-purinilo, mesilo, bencenosulfonilo, pirazin-2-ilo, pirimidin-2-ilo, 2- hidroxietilo, 2-(2-hidroxietoxi)etilo, 2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2- hidroxietoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2- hidroxietoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2- hidroxietoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2- metoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etilo, y 2-(2-(2-(2-hidroxietoxi)etoxi)etoxi)etilo; R3 se selecciona entre el grupo que consiste en H, metilo, etilo, (morfolinilmetil)fenilo, 4-((morfolin-1-il)metil)fenilo, (dimetilaminometil)fenilo, 4-((dimetilamino)metil)fenilo, 2-(2-(dimetilamino)etoxi)etilo, morfolin-1-ilo, piperidin-1-ilo, tetrahidropirrol-1-ilo, 4-(2-hidroxietil)piperazin-1-ilo, (4-metilpiperazin)-1-ilo, (4-etilpiperazin)-1-ilo, 2- (tetrahidropirrol-1-il)etilo, 3-(tetrahidropirrol-1-il)propilo, (2-(morfolin-1-il)piridin)-4-ilo, (2-(morfolin-1-il)piridin)-5-ilo, piridin-2-ilo, piridin-3-ilo, piridin-4-ilo, (piridin-4-il)metilo, (piridin-3-il)metilo, (piridin-2-il)metilo, 2-(piridin-4-il)etilo, 2- (piridin-3-il)etilo, 2-(piridin-2-il)etilo, 2-(piridin-4-il)propilo, 2-(piridin-3-il)propilo, 2-(piridin-2-il)propilo, 2-((4- sulfamido)fenil)etilo, (3-(dimetil-amino)propil)piperazin-1-ilo, 3-((4-sulfamido)fenil)propilo, 3-((4-metil)piperazin-1- il)propilo, 3-((4-etil)piperazin-1-il)propilo, 3-((4-propil)piperazin-1-il)propilo, 2-((4-metil)piperazin-1-il)etilo, 2-((4- etil)piperazin-1-il)etilo, 2-((4-propil)piperazin-1-il)etilo, 2-(dimetilamino)etilo, 2-(dietilamino)etilo, 2- (dipropilamino)etilo, 2-(piperidin-1-il)etilo, 2-(morfolin-1-il)etilo, 2-(tetrahidropirrol-1-il)etilo, 3- (dimetilamino)propilo,3-(dietilamino)propilo, 3-(dipropilamino)propilo, 3-(piperidin-1-il)propilo, 3-(morfolin-1- il)propilo, 3-(tetrahidropirrol-1-il)propilo, 4-(dimetilamino)butilo, 4-(dietilamino)butilo, 4-(dipropilamino)butilo, 4- (piperidin-1-il)butilo, 4-(morfolin-1-il)butilo, 4-(tetrahidropirrol-1-il)butilo, 2-(2-(2-(2- (dimetilamino)etoxi)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(2-(dietilamino)etoxi)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(2- (dipropilamino)etoxi)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(2-(piperidin-1-il)etoxi)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(2-(morfolin-1- il)etoxi)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(2-(tetrahidropirrol-1-il)etoxi)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(dimetilamino)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(dietilamino)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(dipropilamino)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(piperidin-1-il)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(morfolin-1-il)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(tetrahidropirrol-1-il)etoxi)etoxi)etilo, 6-purinilo, mesilo, bencenosulfonilo, pirazin-2-ilo, pirimidin-2-ilo, 2-hidroxietilo, 2-(2-hidroxietoxi)etilo, 2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2- (2-hidroxietoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2- hidroxietoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2- hidroxietoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etilo, 2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2- metoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etilo, y 2-(2-(2-(2-hidroxietoxi)etoxi)etoxi)etilo; o NR2R3 se selecciona entre el grupo que consiste en piperidin-1-ilo, morfolin-1-ilo, tetrahidropirrol-1-ilo, (4-(2- hidroxietil))piperazin-1-ilo, (4-metil)piperazin-1-ilo, (4-etil)piperazin-1-ilo, (4-propil)piperazin-1-ilo, 4-(3- hidroxipropil)piperazin-1-ilo, adenin-1-ilo, (4-(3-(dimetilamino)propil)piperazin)-1-ilo, (4-(2- (dimetilamino)etil)piperazin)-1-ilo, (4-(3-(dietilamino)propil)piperazin)-1-ilo, (4-(2-(dietilamino)etil)piperazin)-1-ilo, (4-(2-(piperidin-1-il)etil)piperazin)-1-ilo, (4-(3-(piperidin-1-il)propil)piperazin)-1-ilo, (4-(2-(morfolin-1- il)etil)piperazin)-1-ilo, (4-(3-(morfolin-1-il)propil)piperazin)-1-ilo, (4-(2-(tetrahidropirrol-1-il)etil)piperazin)-1-ilo, y (4- (3-(tetrahidropirrol-1-il)propil)piperazin)-1-ilo; W es O; R4 se selecciona entre el grupo que consiste en H, F y alquilo C1-4; R5 es OR6, en el que R6 se selecciona entre el grupo que consiste en H y tetrahidropiran-2-ilo; y n se selecciona entre el grupo que consiste en 2 y 3.

Description

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77) acetato de 10-((3’-(pirrol-1-il)-2’,3’,6’-tridesoxi-alfal-L-lixo-hexilpiranil)oxi)-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11-trihidroxi13-oxo-14-(4-((4-(2-hidroxi)etil)piperazin-1-il)-4-oxo-butirato)-1-metoxi-5,12-naftalenodiona; 78) acetato de 10-((3’-(pirrol-1-il)-2’,3’,6’-tridesoxi-alfal-L-lixo-hexilpiranil)oxi)-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11-trihidroxi
5 13-oxo-14-(4-((3-(morfolin-1-il)propil)amino)-4-oxo-butirato)-1-metoxi-5,12-naftalenodiona; 79) acetato de 10-((3’-(pirrol-1-il)-2’,3’,6’-tridesoxi-alfal-L-lixo-hexilpiranil)oxi)-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11-trihidroxi13-oxo-14-(4-((4-metil)piperazin-1-il)amino)-4-oxo-butirato)-1-metoxi-5,12-naftalenodiona; 80) acetato de 10-((3’-(pirrol-1-il)-2’,3’,6’-tridesoxi-alfal-L-lixo-hexilpiranil)oxi)-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11-trihidroxi13-oxo-14-(4-(4-etilpiperazin-1-il)-4-oxo-butirato)-1-metoxi-5,12 -naftalenodiona;
10 81) acetato de 10-((3’-(pirrol-1-il)-2’,3’,6’-tridesoxi-alfal-L-lixo-hexilpiranil)oxi)-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11-trihidroxi13-oxo-14-(4-((3-(4-metilpiperazin-1-il)propil)amino)-4-oxo-butirato)-1-metoxi-5,12-naftalenodiona; 82) acetato de 10-((3’-(pirrol-1-il)-2’,3’,6’-tridesoxi-alfal-L-lixo-hexilpiranil)oxi)-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11-trihidroxi13-oxo-14-(4-((piridin-4-il)metil)amino)-4-oxo-butirato)-1-metoxi-5,12-naftalenodiona; 83) acetato de 10-((3’-(pirrol-1-il)-2’,3’,6’-tridesoxi-alfal-L-lixo-hexilpiranil)oxi)-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11-trihidroxi
15 13-oxo-14-(4-((piridin-3-il)metil)amino)-4-oxo-butirato)-1-metoxi-5,12-naftalenodiona; 84) acetato de 10-((3’-(pirrol-1-il)-2’,3’,6’-tridesoxi-alfal-L-lixo-hexilpiranil)oxi)-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11-trihidroxi13-oxo-14-(4-(2-(piridin-2-il)etil)amino)-4-oxo-butirato)-1-metoxi-5,12-naftalenodiona; 85) acetato de 10-((3’-(pirrol-1-il)-2’,3’,6’-tridesoxi-alfal-L-lixo-hexilpiranil)oxi)-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11-trihidroxi13-oxo-14-(4-(2-(piridin-3-il)etil)amino)-4-oxo-butirato)-1-metoxi-5,12-naftalenodiona;
20 86) acetato de 10-((3’-(pirrol-1-il)-2’,3’,6’-tridesoxi-alfal-L-lixo-hexilpiranil)oxi)-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11-trihidroxi13-oxo-14-(4-(2-(piridin-4-il)etil)amino)-4-oxo-butirato)-1-metoxi-5,12-naftalenodiona; 87) acetato de 10-((3’-(pirrol-1-il)-2’,3’,6’-tridesoxi-alfal-L-lixo-hexilpiranil)oxi)-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11-trihidroxi13-oxo-14-(4-(4-(3-(dimetilamino)propil)piperazin-1-il)-4-oxo-butirato)-1-metoxi-5,12-naftalenodiona acetato; 89) acetato de 10-((3’-(pirrol-1-il)-2’,3’,6’-tridesoxi-alfal-L-lixo-hexilpiranil)oxi)-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11-trihidroxi
25 13-oxo-14-(4-((2-(morfolin-1-il)etil)amino)-4-oxo-butirato)-1-metoxi-5,12-naftalenodiona; 96) fosfato de 10-((3’-(pirrol-1-il)-2’,3’,6’-tridesoxi-alfal-L-lixo-hexilpiranil)oxi)-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11-trihidroxi13-oxo-14-(4-((2-(morfolin-1-il)etil)amino)-4-oxo-butirato)-1-metoxi-5,12-naftalenodiona fosfato; y 99) clorhidrato de 10-((3’-(pirrol-1-il)-2’,3’,6’-tridesoxi-alfal-L-lixo-hexilpiranil)oxi)-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11trihidroxi-13-oxo-14-(4-((2-(morfolin-1-il)etil)amino)-4-oxo-butirato)-1-metoxi-5,12-naftalenodiona.
30 Además otro aspecto de la presente solicitud se refiere a un procedimiento para preparar un compuesto representado por la fórmula (I), que comprende:
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en la que W es O, R1 es OCH3, R4 es CH3, R5 es OH, n y NR2R3 son como se muestran en la siguiente tabla:
N.º
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grupo protector de amino en el extremo N-terminal, y está sometido a una reacción de desprotección para obtener el compuesto representado por la fórmula (I).
En algunas realizaciones, el procedimiento para preparar un compuesto representado por la fórmula (I) comprende 5 adicionalmente la adición de un activador.
Los ejemplos de activadores a modo de ejemplo que se pueden usar en el procedimiento para preparar un compuesto representado por la fórmula (I) de acuerdo con la presente solicitud incluyen, pero no se limitan a, Nhidroxisuccinimida (HOSu), 1-hidroxi-7-azobenzotriazol (HOAt), 1-hidroxibenzotriazol (HOBt), N-hidroxiftalimida 10 (NHPI), N-hidroxi-1,8-naftalimida (NHNI), pentafluorofenol (PFPOH), hexafluorofosfato de 2-(7-azobenzotriazol)N,N,N’,N’-tetrametiluronio (HATU), hexafluorofosfato de benzotriazol-N,N,N’,N’-tetrametiluronio (HBTU), hexafluorofosfato de 6-clorobenzotriazol-1,1,3,3-tetrametiluronio (HCTU), hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol1-il)-di(tetrahidropirrolil)carbenio (HAPyU), hexafluorofosfato de O-(benzotriazol-1-il)-di(tetrahidropirrolil)carbenio (HBPyU), tetrafluoroborato de O-benzotriazol-N,N,N’,N’-tetrametiluronio (TBTU), tetrafluoroborato de 2-succinimido15 1,1,3,3-tetrametiluronio (TSTU), sal de amonio cuaternario de tetrafluoroborato de 2-(5-norbornen-2,3dicarboximido)-1,1,3,3-tetrametiluronio (TNTU), hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitri(dimetilamino)fosfonio (BOP), hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxitripirrolidino-fosfonio (PyBOP), hexafluorofosfato de (3H-1,2,3triazolo[4,5-b]piridin-3-oxi)tri-1-pirrolidinil-fosfonio (PyAOP), cloruro de difenilfosfinilo (DPP-Cl), azida de difenil fosforilo (DPPA), cianodietilfosfato (DECP), cloruro de bis(2-oxo-3-oxazolidinil)fosfinilo (BOP-Cl) y una mezcla de los
20 mismos.
Los ejemplos de agentes de condensación a modo de ejemplo que se pueden usar en el procedimiento para preparar un compuesto representado por la fórmula (I) de acuerdo con la presente solicitud incluyen, pero no se limitan a, diciclohexilcarbodiimida (DCC), diisopropilcarbodiimida (DIC), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida 25 (EDCI), hexafluorofosfato de 2-(7-azobenzotriazol)-N,N,N’,N’-tetrametiluronio (HATU), hexafluorofosfato de benzotriazol-N,N,N’,N’-tetrametiluronio (HBTU), hexafluorofosfato de 6-clorobenzotriazol-1,1,3,3-tetrametiluronio (HCTU), hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-di(tetrahidropirrolil)carbenio (HAPyU), hexafluorofosfato de O-(benzotriazol-1-il)-di(tetrahidropirrolil)carbenio (HBPyU), tetrafluoroborato de O-benzotriazol-N,N,N’,N’tetrametiluronio (TBTU), tetrafluoroborato de 2-succinimido-1,1,3,3-tetrametiluronio (TSTU), sal de amonio
30 cuaternario de tetrafluoroborato de 2-(5-norbornen-2,3-dicarboximido)-1,1,3,3-tetrametiluronio (TNTU), hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitri(dimetilamino)fosfonio (BOP), hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitripirrolidino-fosfonio (PyBOP), hexafluorofosfato de (3H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridin-3-oxi)tri-1-pirrolidinilfosfonio (PyAOP), cloruro de difenilfosfinilo (DPP-Cl), azida de difenil fosforilo (DPPA), cianodietilfosfato (DECP), cloruro de bis(2-oxo-3-oxazolidinil)fosfinilo (BOP-Cl) y una mezcla de los mismos.
35 En algunas realizaciones, el procedimiento para preparar un compuesto representado por la fórmula (I) comprende adicionalmente la adición de un catalizador.
Los ejemplos de catalizadores a modo de ejemplo que se pueden usar en el procedimiento para preparar un
40 compuesto representado por la fórmula (I) de acuerdo con la presente solicitud incluyen, pero no se limitan a, 4dimetilaminopiridina, 4-pirrolidinilpiridina y una mezcla de los mismos.
Los ejemplos de grupos protectores de nitrógeno a modo de ejemplo que se pueden usar en el procedimiento para preparar un compuesto representado por la fórmula (I) de acuerdo con la presente solicitud incluyen, pero no se
45 limitan a, Fmoc (fluorenilmetoxicarbonilo), Boc (t-butiloxicarbonilo), CBZ (carbobenzoxi), Tr (tritilo) o Alloc (aliloxicarbonilo), Teoc (trimetilsililetoxicarbonilo), metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, Pht (ftaloílo), Tos (tosilo), Ns (o/pnitrobencenosulfonilo), Tfa (trifluoroacetilo), pivaloílo, benzoílo, Trt (tritilo), Dmb (2,4-dimetoxibencilo), PMB (pmetoxibencilo), y Bn (bencilo).
50 Los ejemplos de reactivos de desprotección a modo de ejemplo que se pueden usar en el procedimiento para preparar un compuesto representado por la fórmula (I) de acuerdo con la presente solicitud incluyen, pero no se limitan a, gas hidrógeno, NH3, aminoetanol, dimetilamina, dietilamina, piperidina, piperazina, DBU, ácido clorhídrico, ácido fosfórico, ácido acético, ácido fórmico, ácido trifluoroacético, ácido metanosulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido p-toluenosulfónico y una mezcla de los mismos.
55 En algunas realizaciones, el compuesto representado por la fórmula (III) en el procedimiento para preparar un compuesto representado por la fórmula (I) se obtiene mediante una reacción de un compuesto representado por la fórmula (IV) con HNR7R8,
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ÁCIDO 4-(2-(4-(AMINOSULFONIL)FENIL)ETILAMINO)-4-OXOBUTANOICO PREPARACIÓN 62:
5 ÁCIDO 5-(2-(4-(AMINOSULFONIL)FENIL)ETILAMINO)-5-OXOPENTANOICO PREPARACIÓN 63: ÁCIDO 4-(4-ETILPIPERAZIN-1-IL)-4-OXOBUTANOICO
10 PREPARACIÓN 64: ÁCIDO 5-(4-ETILPIPERAZIN-1-IL)-5-OXOPENTANOICO 15 PREPARACIÓN 65: ÁCIDO 4-(PURINAMINO)-4-OXOBUTANOICO PREPARACIÓN 66: 20 ÁCIDO 5-(PURINAMINO)-5-OXOPENTANOICO PREPARACIÓN 67: 25 ÁCIDO 4-(4-(3-(DIMETILAMINO)PROPIL)PIPERAZIN-1-IL)-4-OXOBUTANOICO PREPARACIÓN 68: ÁCIDO 5-(4-(3-(DIMETILAMINO)PROPIL)PIPERAZIN-1-IL)-5-OXOPENTANOICO 30 PREPARACIÓN 69: ÁCIDO 4-(3-(4-METILPIPERAZIN-1-IL)PROPILAMINO)-4-OXOBUTANOICO 35 PREPARACIÓN 70: ÁCIDO 5-(3-(4-METILPIPERAZIN-1-IL)PROPILAMINO)-5-OXOPENTANOICO PREPARACIÓN 71: 40 ÁCIDO 4-(2-(DIMETILAMINO)ETILAMINO)-4-OXOBUTANOICO PREPARACIÓN 72: 45 ÁCIDO 5-(2-(DIMETILAMINO)ETILAMINO)-5-OXOPENTANOICO PREPARACIÓN 73: ÁCIDO 4-(DI(2-(DIMETILAMINO)ETIL)AMINO)-4-OXOBUTANOICO 50 PREPARACIÓN 74: ÁCIDO 5-(DI(2-(DIMETILAMINO)ETIL)AMINO)-5-OXOPENTANOICO PREPARACIÓN 75: 55 ÁCIDO 4-(2-(2-(2-(2-(DIMETILAMINO)ETOXI)ETOXI)ETOXI)ETILAMINO)-4-OXOBUTANOICO PREPARACIÓN 76: 60 ÁCIDO 5-(2-(2-(2-(2-(DIMETILAMINO)ETOXI)ETOXI)ETOXI)ETILAMINO)-5-OXOPENTANOICO PREPARACIÓN 77: ÁCIDO 4-((PIRAZIN-2-IL)AMINO)-4-OXOBUTANOICO 65
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Tabla 1
Ejemplos
n NR2R3 Espectros de Masas (MS)
2
2
imagen57 MS: 868,1 (M+1)
3
3
MS: 882,3 (M+1)
4
2 MS+ 825,9
5
3 MS: 840,3 (M+1)
6
2 MS806,2 (M-1) MS+ 808,3 (M+1))
Ejemplos
n NR2R3 Espectros de Masas (MS)
7
3 imagen58 MS+ 822,3 (M+1)
8
2 imagen59 MS+ 806,1 (M+1)
9
3 MS+ 820,1 (M+1)
10
2 MS-: 775,8 (M-1)
11
3 MS+: 791,2 (M+1)
12
2 MS+: 820,4 (M+1) MS-: 818,6 (M-1)
13
3 MS+: 834,8 (M+1)
14
2 MS-: 788,9 (M-1)
15
3 MS+: 805,8 (M+1)
16
2 MS+ 790,3 (M+1)
17
3 MS+ 804,4 (M+1)
18
2 MS+: 804,1 (M+1)
Ejemplos
n NR2R3 Espectros de Masas (MS)
19
3 imagen60 MS+: 817,2 (M+1)
20
2 MS-: 853,3 (M-1) MS+: 855,4 (M+1)
21
3 MS+: 869,3 (M+1)
22
2 MS+: 770,0 (M+1) MS-: 767,7 (M-1)
23
3 MS+: 784,7 (M+1)
24
2 MS+: 770,1 (M+1)
25
3 MS+: 784,6 (M+1)
26
2 MS+: 784,0 (M+1)
27
3 MS+: 798,2 (M+1)
28
2 MS+: 783,9 (M+1) MS-: 781,8 (M-1)
29
3 MS+: 798,9 (M+1)
Ejemplos
n NR2R3 Espectros de Masas (MS)
30
2 imagen61 MS+: 784,1 (M+1)
31
3 MS+: 798,1 (M+1)
32
2 MS+: 798,0 (M+1)
33
3 MS+: 812,1 (M+1)
34
2 MS+: 798,0 (M+1)
35
3 MS+: 812,3 (M+1)
36
2 MS+: 798,0 (M+1)
37
3 MS+: 812,1 (M+1)
38
2 MS-: 873,7 (M-1)
39
3 MS-: 888,1 (M-1)
Ejemplos
n NR2R3 Espectros de Masas (MS)
40
2 imagen62 MS+: 790,1 (M+1)
41
3 MS+: 804,3 (M+1)
42
2 MS+: 811,0 (M+1) MS-: 809,2 (M-1)
43
3 MS+: 825,4 (M+1)
44
2 MS+: 847,1 (M+1) MS-: 845,0 (M-1)
45
3 MS+: 860,3 (M+1)
46
2 MS+: 833,1 (M+1)
47
3 MS+: 847,2 (M+1)
48
2 MS+: 764,1 (M+1)
49
3 MS+: 778,1 (M+1)
Ejemplos
n NR2R3 Espectros de Masas (MS)
50
2 imagen63 MS+: 835,2 (M+1)
51
3 MS+: 849,2 (M+1)
52
2 MS+ 896,1 (M+1)
53
3 MS+ 909,8 (M+1)
54
2 MS+ 771,2 (M+1)
55
3 MS+ 784,1 (M+1)
56
2 MS+ 770,1 (M+1)
57
3 MS+ 784,1 (M+1)
58
2 MS+ 770,1 (M+1)
59
3 MS+ 784,1 (M+1)
Ejemplos
n NR2R3 Espectros de Masas (MS)
60
2 imagen64 MS-: 735,2 (M-1) MS+: 759,3 (M+Na+)
61
3 MS-: 750,7 (M-1)
62
2 MS+: 803,3 (M+Na+)
63
3 MS-: 793,6 (M-1)
64
2 MS+: 803,2 (M+Na+) MS-: 779,2 (M-1)
65
3 MS+: 795,2 (M+1)
66
2 NH2 MS+: 693,1 (M+1)
67
3 NH2 MS+: 707,2 (M+1)
68
2 NHCH3 MS-: 705,6 (M-1)
69
3 NHCH3 MS+: 721,1 (M+1)
70
2 N(CH3)2 MS+: 721,1 (M+1 )
71
3 N(CH3)2 MS+: 735,6 (M+1)
72
2 MS+: 763,2 (M+1)
73
3 MS+: 777,1 (M+1)
74
2 MS+ :761,3 (M+1)
Ejemplos
n NR2R3 Espectros de Masas (MS)
75
2 imagen65 MS+: 746,9 (M+1)
88
2 imagen66 MS+: 806,2 (M+1)
90
2
91
2
92
2
93
2
94
2 MS+ : 771 (M+1)
95
2 MS+: 833 (M+1)
97
3
98
2
Los datos de los espectros de RMN 1H del compuesto en el Ejemplo 28 fueron:
δ = 1,145 ppm (d, 3H), δ = 1,664 ppm (m, 1H), δ = 2,110 ppm (m, 1H), δ = 2,336 ppm (d, 1H), δ = 2,415 ppm (m, 1H), δ = 2,505 ppm (m, 2H), δ = 2,675 ppm (t, 2H), δ = 2,917 ppm (d, 1H), δ = 3,008 ppm (d, 1H), δ = 3,546 ppm (s, 1H), δ = 3,943 ppm (s, 4H), δ = 4,303 ppm (m, 5H), δ = 4,982 ppm (s, 1H), δ = 5,189 ppm (d, 1H), δ = 5,253 ppm (d, 1H),
47
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Tabla 3: Actividad de Inhibición del Crecimiento a 2000 nM de Algunos Compuestos en los Ejemplos en Células BxPc-3
Compuestos
Proporción de Inhibición (%) Compuestos Proporción de Inhibición (%) Compuestos Proporción de Inhibición (%)
Ejemplo 1
82,5 Ejemplo 3 81,2 Ejemplo 8 82,6
Ejemplo 10
85 Ejemplo 12 74,9 Ejemplo 14 81,8
Ejemplo 18
70,7 Ejemplo 20 84,1 Ejemplo 22 82
Ejemplo 24
84,7 Ejemplo 26 82,7 Ejemplo 28 84,7
Ejemplo 30
85,2 Ejemplo 32 83,4 Ejemplo 34 84
Ejemplo 35
81,3 Ejemplo 38 82,4 Ejemplo 40 76,5
Ejemplo 44
78,5 Ejemplo 60 83,4 Ejemplo 62 82,5
Ejemplo 64
83,7 Ejemplo 66 83,1 Ejemplo 76 77,1
Ejemplo 77
83,3 Ejemplo 81 80,7 Ejemplo 94 84,9
Ejemplo 95
80,6
EJEMPLO 3: Ensayo de Inhibición del Crecimiento de Células NCI-H446 (Ensayo de MTT) 5
I. Materiales del Ensayo
Cepas celulares: NCI-H446 (cepas de células de cáncer de pulmón de células pequeñas humano); MTT; compuestos antitumorales; DMSO.
10
II. Reactivos y Materiales Consumibles
Medio de cultivo: RPMI-1640 al 90 % + FBS al 10 %; Pancreatina (la solución al 0,25 % (p/v) se formuló con PBS, en la formulación se añadió 0,53 mM de EDTA); PBS; placa de cultivo de 96 pocillos.
15
III. Procedimiento del Ensayo
1.
Se recogió una placa (10 cm) de células en fase de crecimiento logarítmico que se cultivaron normalmente;
2.
La solución de cultivo se retiró por succión. La placa se lavó con 5 ml de PBS una o dos veces;
20 3. El PBS se retiró por succión. Se añadieron 1,5 ml de pancreatina al 0,25 % para infiltrar las células;
4.
La placa de cultivo se puso en una incubadora. La digestión se realizó durante aproximadamente 3 min a 37 ºC;
5.
Se añadieron 3 ml de solución de cultivo completa a la placa de cultivo para parar la digestión. Las células se frotaron con cuidado con micropipeta (1 ml) para dar una suspensión celular uniforme. La suspensión se implantó
25 en un disco de cultivo celular de 96 pocillos a 4000 células/100 µl por pocillo. La placa de cultivo se incubó durante una noche en atmósfera de CO2 al 5 % a 37 ºC. En el día 2, se añadieron en cada pocillo 100 µl de solución de cultivo que comprendía un compuesto. La placa se incubó adicionalmente durante 70 h en atmósfera de CO2 al 5% a37ºC;
6. La solución de cultivo se retiró por succión;
30 7. En cada pocillo se añadieron 100 µl de solución de cultivo sin suero que contenía 0,5 mg/ml de MTT. La placa se incubó durante 3 h;
8.
La solución de cultivo se retiró por succión con cuidado;
9.
En cada pocillo se añadieron 100 µl de DMSO y se sometió a vibración para disolver;
10. Los valores de la DO se determinaron a 490 nM. 35
IV. Resultados y Tratamientos
1. Cálculo de la Proporción de Inhibición Relativa
40 La proporción de inhibición de un compuesto en el crecimiento celular = (PC-n)/(PC-NC) x 100 % en la que:
PC: Valores de la DO de células después de crecimiento normal en pocillos de control sin un compuesto;
n: Valores de la DO de células después de crecimiento en pocillos de ensayo con un compuesto; 52
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IV. Resultados y Tratamientos
1. Cálculo de la Proporción de Inhibición Relativa
5 La proporción de inhibición de un compuesto en el crecimiento celular = (PC-n)/(PC-NC) x 100 % en la que: PC: Valores de la DO de células después de crecimiento normal en pocillos de control sin un compuesto;
n: Valores de la DO de células después de crecimiento en pocillos de ensayo con un compuesto; NC: Valores de la DO de fondo de pocillos en blanco sin un compuesto y células.
Tabla 5: Actividad de Inhibición del Crecimiento a 2000 nM de Algunos Compuestos en los Ejemplos en Células MDA-MB-453
Compuestos
Proporción de Inhibición (%) Compuestos Proporción de Inhibición (%) Compuestos Proporción de Inhibición (%)
Ejemplo 1
77,7 Ejemplo 3 73,9 Ejemplo 8 75,3
Ejemplo 10
78,5 Ejemplo 12 73,7 Ejemplo 14 74,4
Ejemplo 20
82,4 Ejemplo 22 71,1 Ejemplo 24 79,8
Ejemplo 26
79,9 Ejemplo 28 81,9 Ejemplo 30 79,9
Ejemplo 32
78,3 Ejemplo 34 80,5 Ejemplo 35 77,1
Ejemplo 38
75,8 Ejemplo 40 73 Ejemplo 44 68,5
Ejemplo 60
76,3 Ejemplo 62 83,7 Ejemplo 64 73,5
Ejemplo 66
73,9 Ejemplo 76 62,7 Ejemplo 77 79,7
Ejemplo 81
72 Ejemplo 94 75,8 Ejemplo 95 68,2
EJEMPLO 5: Ensayo de Inhibición del Crecimiento de Células 22Rv1 (Ensayo de SRB) 15
I. Materiales del Ensayo
Cepas celulares: 22Rv1 (cepas de células de cáncer de próstata humana); SRB: la solución de trabajo al 0,4 % (p/v) se formuló con ácido acético glacial al 1 %, se reservó a 4 ºC; compuestos antitumorales; DMSO.
20
II. Reactivos y Materiales Consumibles
Medio de cultivo: RPMI-1640 al 90 % + FBS al 10 %; Pancreatina (la solución al 0,25 % (p/v) se formuló con PBS, en la formulación se añadió 0,53 mM de EDTA); PBS; placa de cultivo de 96 pocillos.
25
III. Procedimiento del Ensayo
1.
Se recogió una placa (10 cm) de células en fase de crecimiento logarítmico que se cultivaron normalmente;
2.
La solución de cultivo se retiró por succión. La placa se lavó con 5 ml de PBS una o dos veces;
30 3. Se añadieron 1,5 ml de pancreatina al 0,25 % para infiltrar las células;
4.
La pancreatina se retiró por succión. La placa de cultivo se puso en una incubadora. La digestión se realizó durante aproximadamente 3 min a 37 ºC;
5.
Se añadieron 4 ml de solución de cultivo completa a la placa de cultivo para parar la digestión. Las células se frotaron con cuidado con micropipeta (1 ml) para dar una suspensión celular individual uniforme. La suspensión
35 se implantó en una placa de cultivo celular de 96 pocillos a 7000 células/100 µl por pocillo. La placa de cultivo se incubó durante una noche en atmósfera de CO2 al 5 % a 37 ºC. En el día 2, se añadieron en cada pocillo 100 µl de solución de cultivo que comprendía un compuesto. La placa se incubó adicionalmente durante 73 h en atmósfera de CO2 al 5 % a 37 ºC;
6. La solución de cultivo se retiró por succión. A cada pocillo se añadieron 100 ul de células fijadas con TCA que 40 se diluyeron a un 10 %. La placa se mantuvo en un refrigerador durante 1 h a 4 ºC.
7.
El líquido estacionario de TCA se retiró por succión. Cada pocillo se lavó con 150 µl de ddH2O cinco veces;
8.
Después de limpiar el líquido estacionario, la placa se secó en el aire a la temperatura ambiente;
9.
En cada pocillo se añadieron 60 µl de solución de tinción de SRB. El pocillo se tiñó durante 15 min a la temperatura ambiente;
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de CO2 al 5% a37ºC;
6.
La solución de cultivo se retiró por succión;
7.
En cada pocillo se añadieron 100 µl de solución de cultivo sin suero que contenía 0,5 mg/ml de MTT. La placa se incubó durante 3 h;
5 8. La solución de cultivo se retiró por succión con cuidado;
9.
En cada pocillo se añadieron 100 µl de DMSO y se sometió a vibración para disolver;
10.
Los valores de la DO se determinaron a 490 nM.
IV. Resultados y Tratamientos 10
1. Cálculo de la Proporción de Inhibición Relativa
La proporción de inhibición de un compuesto en el crecimiento celular = (PC-n)/(PC-NC) x 100 % en la que: 15 PC: Valores de la DO de células después de crecimiento normal en pocillos de control sin un compuesto;
n: Valores de la DO de células después de crecimiento en pocillos de ensayo con un compuesto; NC: Valores de la DO de fondo de pocillos en blanco sin un compuesto y células.
20 Tabla 7: Actividad de Inhibición del Crecimiento de Algunos Compuestos en los Ejemplos en Células A375
Compuestos
Actividad de Inhibición (CI50/nM) Compuestos Actividad de Inhibición (CI50/nM) Compuestos Actividad de Inhibición (CI50/nM)
Compuesto A
207 Ejemplo 6 67 Ejemplo 89 48
Ejemplo 81
67 Ejemplo 97 28 Ejemplo 99 35
EJEMPLO 7: Ensayo de Inhibición del Crecimiento de Células A431 (Ensayo de MTT)
I. Materiales del Ensayo
25 Cepas celulares: A431 (cepas de células de carcinoma epidérmico humano); MTT: nitroazul de tetrazolio; compuestos antitumorales; compuesto A: monoéster del ácido 3’-pirrolildoxorrubicina-14-oxo-succínico; DMSO.
II. Reactivos y Materiales Consumibles
30 Medio de cultivo: DMEM al 45 % + F12 al 45 % + FBS al 10 % (suero bovino fetal); la pancreatina (la solución al 0,25 % (p/v) se formuló con PBS, en la formulación se añadió 0,53 mM de EDTA); PBS; placa de cultivo de 96 pocillos.
35 III. Procedimiento del Ensayo
1.
Se recogió una placa (10 cm) de células en fase de crecimiento logarítmico que se cultivaron normalmente;
2.
La solución de cultivo se retiró por succión. La placa se lavó con 5 ml de PBS una o dos veces;
3. El PBS se retiró por succión. Se añadieron 1,5 ml de pancreatina al 0,25 % para infiltrar las células durante 40 1 min;
4.
La placa de cultivo se puso en una incubadora. La digestión se realizó durante aproximadamente 5 min a 37 ºC;
5.
Se añadieron 3 ml de solución de cultivo completa a la placa de cultivo para parar la digestión. Las células se frotaron con cuidado con micropipeta (1 ml) para dar una suspensión celular uniforme. La suspensión se implantó
45 en un disco de cultivo celular de 96 pocillos a 2500 células/100 µl por pocillo. La placa de cultivo se incubó durante una noche en atmósfera de CO2 al 5 % a 37 ºC. En el día 2, se añadieron en cada pocillo 100 µl de solución de cultivo que comprendía un compuesto. La placa se incubó adicionalmente durante 72 h en atmósfera de CO2 al 5% a37ºC;
6. La solución de cultivo se retiró por succión;
50 7. En cada pocillo se añadieron 100 µl de solución de cultivo sin suero que contenía 0,5 mg/ml de MTT. La placa se incubó durante 3 h;
8.
La solución de cultivo se retiró por succión con cuidado;
9.
En cada pocillo se añadieron 100 µl de DMSO y se sometió a vibración para disolver;
10. Los valores de la DO se determinaron a 490 nM. 55
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III. Procedimiento del Ensayo
1.
Se recogió una placa (10 cm) de células en fase de crecimiento logarítmico que se cultivaron normalmente;
2.
La solución de cultivo se retiró por succión. La placa se lavó con 5 ml de PBS una o dos veces;
5 3. El PBS se retiró por succión. Se añadieron 1,5 ml de pancreatina al 0,25 % para infiltrar las células durante 1 min;
4.
La placa de cultivo se puso en una incubadora. La digestión se realizó durante aproximadamente 1 min a 37 ºC;
5.
Se añadieron 3 ml de solución de cultivo completa a la placa de cultivo para parar la digestión. Las células se frotaron con cuidado con micropipeta (1 ml) para dar una suspensión celular uniforme. La suspensión se implantó en un disco de cultivo celular de 96 pocillos a 2500 células/100 µl por pocillo. La placa de cultivo se incubó durante una noche en atmósfera de CO2 al 5 % a 37 ºC. En el día 2, se añadieron en cada pocillo 100 µl de solución de cultivo que comprendía un compuesto. La placa se incubó adicionalmente durante 72 h en atmósfera de CO2 al 5% a37ºC;
15 6. La solución de cultivo se retiró por succión;
7.
En cada pocillo se añadieron 100 µl de solución de cultivo sin suero que contenía 0,5 mg/ml de MTT. La placa se incubó durante 3 h;
8.
La solución de cultivo se retiró por succión con cuidado;
9.
En cada pocillo se añadieron 100 µl de DMSO y se sometió a vibración para disolver;
10.
Los valores de la DO se determinaron a 490 nM.
IV. Resultados y Tratamientos
1. Cálculo de la Proporción de Inhibición Relativa
25 La proporción de inhibición de un compuesto en el crecimiento celular = (PC-n)/(PC-NC) x 100 % en la que:
PC: Valores de la DO de células después de crecimiento normal en pocillos de control sin un compuesto;
n: Valores de la DO de células después de crecimiento en pocillos de ensayo con un compuesto; NC: Valores de la DO de fondo de pocillos en blanco sin un compuesto y células.
Tabla 12: Actividad de Inhibición del Crecimiento de Algunos Compuestos en los Ejemplos en Células B16
Compuesto
Actividad de Inhibición (CI50/nM) Compuesto Actividad de Inhibición (CI50/nM) Compuesto Actividad de Inhibición (CI50/nM)
Compuesto A
32 Ejemplo 62 3 Ejemplo 89 3
35 EJEMPLO 12: Ensayo de Inhibición del Crecimiento de Células 786-O (Ensayo de MTT)
I. Materiales del Ensayo
Cepas celulares: 786-O (cepas de células de adenocarcinoma de células trasparentes humano); MTT: nitroazul de tetrazolio; compuestos antitumorales; compuesto A: monoéster del ácido 3’-pirrolildoxorrubicina-14-oxo-succínico; DMSO.
II. Reactivos y Materiales Consumibles
45 Medio de cultivo: RPMI 1640 al 90 % + FBS al 10 % (suero bovino fetal); la pancreatina (la solución al 0,25 % (p/v) se formuló con PBS, en la formulación se añadió 0,53 mM de EDTA); PBS; placa de cultivo de 96 pocillos.
III. Procedimiento del Ensayo
1.
Se recogió una placa (10 cm) de células en fase de crecimiento logarítmico que se cultivaron normalmente;
2.
La solución de cultivo se retiró por succión. La placa se lavó con 5 ml de PBS una o dos veces;
3.
El PBS se retiró por succión. Se añadieron 1,5 ml de pancreatina al 0,25 % para infiltrar las células durante 1 min;
4. La placa de cultivo se puso en una incubadora. La digestión se realizó durante aproximadamente 1 min a 55 37 ºC;
5. Se añadieron 3 ml de solución de cultivo completa a la placa de cultivo para parar la digestión. Las células se frotaron con cuidado con micropipeta (1 ml) para dar una suspensión celular uniforme. La suspensión se implantó en un disco de cultivo celular de 96 pocillos a 2000 células/100 µl por pocillo. La placa de cultivo se incubó durante una noche en atmósfera de CO2 al 5 % a 37 ºC. En el día 2, se añadieron en cada pocillo 100 µl de
solución de cultivo que comprendía un compuesto. La placa se incubó adicionalmente durante 72 h en atmósfera de CO2 al 5% a37ºC;
6. La solución de cultivo se retiró por succión;
7. En cada pocillo se añadieron 100 µl de solución de cultivo sin suero que contenía 0,5 mg/ml de MTT. La placa 5 se incubó durante 3 h;
8.
La solución de cultivo se retiró por succión con cuidado;
9.
En cada pocillo se añadieron 100 µl de DMSO y se sometió a vibración para disolver;
10.
Los valores de la DO se determinaron a 490 nM.
10 IV. Resultados y Tratamientos
1. Cálculo de la Proporción de Inhibición Relativa
La proporción de inhibición de un compuesto en el crecimiento celular = (PC-n)/(PC-NC) x 100 % 15 en la que:
PC: Valores de la DO de células después de crecimiento normal en pocillos de control sin un compuesto;
n: Valores de la DO de células después de crecimiento en pocillos de ensayo con un compuesto; NC: Valores de la DO de fondo de pocillos en blanco sin un compuesto y células.
20 Tabla 13: Actividad de Inhibición del Crecimiento de Algunos Compuestos en los Ejemplos en Células 786-O
Compuesto
Actividad de Inhibición (CI50/nM) Compuesto Actividad de Inhibición (CI50/nM) Compuesto Actividad de Inhibición (CI50/nM)
Compuesto A
180 Ejemplo 62 110 Ejemplo 90 90

EJEMPLO 13: Ensayo de Inhibición del Crecimiento de Células DU-145 (Ensayo de MTT)
25 I. Materiales del Ensayo
Cepas celulares: DU-145 (cepas de células de cáncer de próstata); MTT: nitroazul de tetrazolio; compuestos antitumorales; compuesto A: monoéster del ácido 3’-pirrolildoxorrubicina-14-oxo-succínico; DMSO.
30 II. Reactivos y Materiales Consumibles
Medio de cultivo: EMEM al 90 % + FBS al 10 % (suero bovino fetal); la pancreatina (la solución al 0,25 % (p/v) se formuló con PBS, en la formulación se añadió 0,53 mM de EDTA); PBS; placa de cultivo de 96 pocillos.
35 III. Procedimiento del Ensayo
1.
Se recogió una placa (10 cm) de células en fase de crecimiento logarítmico que se cultivaron normalmente;
2.
La solución de cultivo se retiró por succión. La placa se lavó con 5 ml de PBS una o dos veces;
3. El PBS se retiró por succión. Se añadieron 1,5 ml de pancreatina al 0,25 % para infiltrar las células durante 40 1 min;
4.
La placa de cultivo se puso en una incubadora. La digestión se realizó durante aproximadamente 1 min a 37 ºC;
5.
Se añadieron 3 ml de solución de cultivo completa a la placa de cultivo para parar la digestión. Las células se frotaron con cuidado con micropipeta (1 ml) para dar una suspensión celular uniforme. La suspensión se implantó
45 en un disco de cultivo celular de 96 pocillos a 4000 células/100 µl por pocillo. La placa de cultivo se incubó durante una noche en atmósfera de CO2 al 5 % a 37 ºC. En el día 2, se añadieron en cada pocillo 100 µl de solución de cultivo que comprendía un compuesto. La placa se incubó adicionalmente durante 72 h en atmósfera de CO2 al 5% a37ºC;
6. La solución de cultivo se retiró por succión;
50 7. En cada pocillo se añadieron 100 µl de solución de cultivo sin suero que contenía 0,5 mg/ml de MTT. La placa se incubó durante 3 h;
8.
La solución de cultivo se retiró por succión con cuidado;
9.
En cada pocillo se añadieron 100 µl de DMSO y se sometió a vibración para disolver;
10. Los valores de la DO se determinaron a 490 nM. 55
IV. Resultados y Tratamientos
1. Cálculo de la Proporción de Inhibición Relativa
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2) Resultados del Ensayo
(1)
Los efectos en los pesos de los animales experimentales se muestran en la Fig. 2.
(2)
Los efectos en la proporción de supervivencia de los animales experimentales se muestran en la Tabla 18. Tabla 18
Número de Tasa de
Dosificación Tiempos de Dosificación Total Número de Animales por
Animales Muertos Mortalidad
(mg/kg) Administración (mg/kg) Grupo ♂/♀
♂/♀ (%)
40
5 200 6/6 0/1 8,33
45
5 225 6/6 0/0 (1/2a) 0
50
5 250 6/6 0/0 (1/1a) 0
55
5 275 6/6 5/4 (5/3a) 25
60
5 300 6/6 3/4 53,85
Nota: ♂: ratón macho; ♀: ratón hembra a representa que el animal experimental murió inmediatamente después de la inyección del fármaco en lugar de que la muerte la produjera la citotoxicidad. En el cálculo de la tasa de mortalidad no se hacía el recuento del animal que moría inmediatamente después de la administración (tasa de mortalidad = el número de animales experimentales que no morían inmediatamente después de la inyección/(el número de animales en el grupo -el número de animales experimentales que morían inmediatamente) x 100 %).
3) Resultados del Ensayo y Discusiones
10 En el grupo de dosificación de 40 mg/kg había un animal muerto. La tasa de mortalidad es de un 8,33 %. El animal muerto se diseccionó para la observación de diversos órganos. Los órganos no presentaban ninguna anomalía evidente. Sin embargo, había varias marcas de mordedura en la superficie de la piel del animal muerto. Este animal no presentaba una pérdida de peso significativa. Por lo tanto, se supone que la muerte está causada por factores de citotoxicidad en lugar de por el fármaco. Dos animales experimentales murieron inmediatamente después de la
15 quinta administración en el grupo de dosificación de 50 mg/kg. Los dos animales muertos no presentaban una pérdida de peso significativa. Se supone que la muerte está causada por factores de citotoxicidad en lugar de por el fármaco. La MTD del compuesto sometido a ensayo 2 es 50-55 mg/kg (0,0525-0,0578 mmol/kg) de acuerdo con el régimen de administración de q4d x 5.
20 3. Sustancia sometida a Ensayo 3: monoéster del ácido 3’-pirrolildoxorrubicina-14-oxo-succínico
1) Grupos de Administración
grupo I: grupo de (30 mg/kg);
25 grupo II: grupo de (40 mg/kg); grupo III: grupo de (50 mg/kg); grupo IV: grupo de (60 mg/kg).
Había cuatro grupos en total. Cada grupo consistía en cinco ratones macho y cinco ratones hembra.
30 2) Resultados del Ensayo
(1) Los efectos en los pesos de los animales experimentales se muestran en la Fig. 3.
(2) Los efectos en la proporción de supervivencia de los animales experimentales se muestran en la Tabla 19. 35
Tabla 19
Número de Tasa de
Dosificación Tiempos de Dosificación Total Número de Animales por
Animales Muertos Mortalidad
(mg/kg) Administración (mg/kg) Grupo ♂/♀
♂/♀ (%)
30
5 150 5/5 0/1 10
40
5 200 5/5 3/2 50
50
5 250 5/5 5/5 100
60
5 300 5/5 5/5 100
Nota: ♂: ratón macho; ♀: ratón hembra
3) Resultados del Ensayo y Discusiones
5 Las tasas de letalidad de los ratones de la cepa ICR son un 10 %, un 50 %, un 100 %, un 100 % respectivamente, de acuerdo con los regímenes de administración de 30 mg/kg, 40 mg/kg, 50 mg/kg, 60 mg/kg de los compuestos. Un animal experimental murió sin una pérdida de peso significativa en los animales del grupo de 30 mg/kg, lo que indica que este animal muerto en el grupo de 30 mg/kg no excluye la causa de la diferencia individual del animal. La MTD del compuesto sometido a ensayo 3 es aproximadamente 30 mg/kg (0,0433 mmol/kg) de acuerdo con el régimen de
10 administración de q4d x 5.
La descripción general mencionada anteriormente con respecto a la invención desvelada en el presente documento y la descripción de las realizaciones específicas de la misma no se puede interpretar como la limitación a las soluciones técnicas de la invención. Alguien con una experiencia habitual en la materia puede añadir, suprimir o 15 combinar las características técnicas desveladas en la descripción general y/o realizaciones específicas mencionadas anteriormente (incluyendo los Ejemplos) para formar otras soluciones técnicas dentro de la invención de acuerdo con la divulgación en el presente documento sin apartarse de los elementos constitutivos de la invención.

Claims (9)

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    2 NHCH3
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    3 NHCH3
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    2 N(CH3)2
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    3 N(CH3)2
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    imagen12
    (HBPyU), tetrafluoroborato de O-benzotriazol-N,N,N’,N’-tetrametiluronio (TBTU), tetrafluoroborato de 2-succinimido1,1,3,3-tetrametiluronio (TSTU), sal de amonio cuaternario de tetrafluoroborato de 2-(5-norbornen-2,3dicarboximido)-1,1,3,3-tetrametiluronio (TNTU), hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitri(dimetilamino)fosfonio (BOP), hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxitripirrolidino-fosfonio (PyBOP), hexafluorofosfato de (3H-1,2,3
    5 triazolo[4,5-b]piridin-3-oxi)tri-1-pirrolidinilfosfonio (PyAOP), cloruro de difenilfosfinilo (DPP-Cl), azida de difenil fosforilo (DPPA), cianodietilfosfato (DECP), cloruro de bis(2-oxo-3-oxazolidinil)fosfinilo (BOP-Cl) y una mezcla de los mismos; y/o el catalizador se selecciona entre 4-dimetilaminopiridina, 4-pirrolidinilpiridina y mezcla de los mismos.
    10 7. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, en el que el compuesto representado por la fórmula (III) se obtiene mediante una reacción de un compuesto representado por la fórmula (IV) con HNR7R8,
    imagen13
    15 en la que:
    n en el compuesto representado por la fórmula (IV) tiene los mismos significados que n en el compuesto representado por la fórmula (I); y los grupos representados por R2 y R3 en HNR7R8 son los mismos que los grupos representados por R2 y R3 en el
    20 compuesto representado por la fórmula (I).
  2. 8.
    El procedimiento de la reivindicación 7, que comprende adicionalmente la adición de un compuesto alcalino.
  3. 9.
    El procedimiento de la reivindicación 8, en el que el compuesto alcalino se selecciona entre el grupo que consiste
    25 en trietilamina, piridina, diisopropiletilamina, trimetilamina, N-metilpirrolidina, N-metilpiperidina, N-metilmorfolina, Netilpirrolidina, N-etilpiperidina, N-etilmorfolina y una mezcla de los mismos.
  4. 10. Una composición farmacéutica o una formulación, que comprende un compuesto representado por la fórmula (I)
    de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo 30 farmacéuticamente aceptable.
  5. 11.
    La composición farmacéutica o formulación de la reivindicación 10, que es una formulación para inyección.
  6. 12.
    La composición farmacéutica o formulación de la reivindicación 11, en la que la formulación para inyección es
    35 una inyección de polvo convencional, una inyección de polvo liofilizado, una hidro-inyección, una emulsión, una solución o una suspensión.
  7. 13. Un compuesto representado por la fórmula (I) de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o una sal
    farmacéuticamente aceptable del mismo; o una composición o formulación de una cualquiera de las reivindicaciones 40 10 a 12; para su uso en un método de tratamiento del cuerpo humano o animal mediante terapia.
  8. 14. Un compuesto representado por la fórmula (I) de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o una composición o formulación de una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12; para su uso en un método para tratar y/o prevenir tumor y/o cáncer.
    45
  9. 15. Un compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 14, en la que el tumor y/o cáncer se selecciona entre el grupo que consiste en cáncer de hígado, cáncer gástrico, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer intestinal, cáncer de ovarios, cáncer pancreático, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de cuello uterino, cáncer renal, melanoma, cáncer de próstata, glioma cerebral, leucemia, linfoma, y cáncer de médula ósea múltiple.
    50
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