KR20230065986A

KR20230065986A - Bcl-2 억제제로서의 헤테로시클릭 화합물

Info

Publication number: KR20230065986A
Application number: KR1020237007712A
Authority: KR
Inventors: 노먼 샹롱 콩; 차오 주; 지샹 정
Original assignee: 베이징 이노케어 파마 테크 씨오., 엘티디.
Priority date: 2020-08-06
Filing date: 2021-08-02
Publication date: 2023-05-12
Also published as: MX2023001618A; CN116419753A; AU2021319597A1; JP2023537032A; US20230271959A1; CA3190686A1; WO2022028353A1; CN114057728A; EP4194454A1

Abstract

본 발명은 화합물, 그를 함유하는 제약 조성물, 그의 제조 방법, 및 BCL-2 억제제로서의 그의 용도에 관한 것이다. 화합물은 화학식 (I)에 의해 나타내어진 화합물 또는 그의 이성질체, 전구약물, 용매화물, 안정성 동위원소 유도체 또는 제약상 허용되는 염이다. 본 발명은 또한 BCL-2에 의해 매개되는 관련 질환, 예컨대 종양을 치료 또는 예방하기 위한 화합물의 용도, 및 상기 질환을 치료하기 위한 그의 사용 방법에 관한 것이다.

Description

BCL-2 억제제로서의 헤테로시클릭 화합물

본 발명은 화합물, 그를 함유하는 제약 조성물, 및 B-세포 림프종-2 (BCL-2) 억제제로서의 그의 용도에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 BCL-2 억제제로서의 신규 화합물, 기재된 화합물을 함유하는 제약 조성물, 및 BCL-2-매개 질환 및 기능장애의 치료 또는 예방에서의 기재된 화합물의 용도를 제공한다. 이러한 질환은 예를 들어 종양이다. 본 발명은 또한 기재된 화합물을 제조하는 방법에 관한 것이다.

BCL-2 단백질 패밀리는 내부 세포내 신호 또는 외부 환경 스트레스 신호, 예컨대 영양적 스트레스 또는 저산소 스트레스, DNA 손상, 발암 유전자의 과도한 활성화, 내형질 세망 스트레스 등을 수신 및 전달할 수 있는, 아폽토시스 (프로그램화된 세포 사멸로도 불림)의 핵심 조절 메카니즘 중 하나이며, 주로 내인성 아폽토시스 경로 (내인성 경로)에서 주요 역할을 한다. BCL-2 (B-세포 림프종-2) 단백질은 1986년에 처음 발견되었고, BCL-2 유전자에 의해 발현된다. BCL-2 유전자는 원종양유전자이고, 이것이 발현하는 단백질은 BCL-2 패밀리 단백질로 불린다. 인간 신체에 총 27종의 BCL-2 패밀리 단백질이 존재하며, 이는 기능 및 서열 분석에 따라 3종의 하위부류로 나뉠 수 있다. 제1 하위부류는 항아폽토시스성, 예를 들어 BCL-XL, BCL-2, BCL-W, MCL-1, BFL-1이며, 이는 주로 미토콘드리아 상에 국재화되고, 미토콘드리아를 유해 손상으로부터 보호한다. 다른 2가지 하위부류는 아폽토시스-촉진성이고, 1가지 하위부류는 미토콘드리아 손상의 궁극적인 실행자로, 예를 들어 BAX 및 BAK이다. 나머지는 다양한 세포 스트레스 신호를 직접 감지할 수 있는 BH3 하위부류에 속한다. 아폽토시스를 길항하고 촉진하는 단백질 사이의 상호작용의 동적 균형은 세포의 삶 및 사멸 운명을 결정한다. 아폽토시스를 길항하는 BCL-2 단백질은 종양과 밀접하게 관련된다. 종양 (예컨대 백혈병, 직장암, 전립선암 등)의 약 50%는 BCL-2 패밀리 단백질의 비정상적 과다발현을 가지며, 여기서 BCL-2의 비정상적 활성은 혈액 종양에 광범위하게 존재한다. 다중 신호전달 경로, 예컨대 JAK-STAT, NFkB 및 UPP (유비퀴틴-프로테아솜)는 아폽토시스를 길항하는 BCL-2 단백질의 과다발현을 유발할 수 있다.

BCL-2 패밀리 항아폽토시스 단백질의 높은 발현은 다양한 종양의 약물 내성과 관련된다. 예를 들어, BCL-2 항아폽토시스 단백질의 과다발현은 종양 세포가 항종양 약물에 의해 유발된 아폽토시스를 벗어나게 하여, 약물 내성을 유발할 수 있다. 연구는 BCL-2 패밀리 단백질의 억제가 종양 혈관신생을 억제하여 종양 전이를 억제할 수 있음을 보여주었다 (문헌 [Benjamin, D.; Isaac, J. et al. J. Clin. Oncol. 2008, 26(25), 4180]). 따라서, BCL-2 패밀리 항아폽토시스 단백질의 표적화된 억제는 종양의 발병, 발생 및 약물 내성을 억제할 수 있다.

BCL-2 패밀리를 표적화하는 20종 초과의 소분자 억제제가 보고되었지만, 이들 중 매우 소수가 임상 시험에 진입하였다. 테바(Teva)의 오바토클락스(Obatoclax) 치료를 받는 26명의 만성 림프구성 백혈병 (CLL) 환자 중에 단지 한 건의 부분 반응이 있었다. 동시에, 이는 강한 신경독성을 갖는다. 2013년에 오바토클락스의 개발이 종결되었다. 아브비(AbbVie)의 나비토클락스(Navitoclax, ABT-263)는 재발성 또는 불응성 림프성 악성종양을 갖는 환자에서 I상 용량 증량에서 50%의 탁월한 반응을 나타내지만, 또한 BCL-XL과 관련된 매우 강한 표적화 독성: 예컨대 혈소판감소증 및 중증 빈혈을 나타낸다. 아브비 및 로슈(Roche)에 의해 함께 개발된 베네토클락스(Venetoclax, ABT-199)는 고도로 선택적인 BCL-2 억제제이다 (문헌 [Andrew, J.; Joel, D. et al. Nature Medicine, 2013, 19(2), 202]). 이브루티닙과의 조합 요법에 의해 재발성/불응성 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 외투 세포 림프종 (MCL), 다발성 골수종 (MM) 등의 치료에서 객관적 반응률 (ORR) 및 완전 완화율 (CR)이 크게 개선되었다 (문헌 [Valentin, R.; Grablow, S. et al. Blood, 2018, 132(12), 1248]). 그럼에도 불구하고, 독성 부작용, 예컨대 백혈구감소증 및 혈소판감소증, 빈혈, 설사, 어지럼증, 피로, 감염에 대한 감수성, 및 심각한 독성 부작용, 예컨대 폐렴, 빈혈, 고열 등이 있다. 따라서, 높은 활성을 가지며 덜 독성인 부작용을 갖는 BCL-2 선택적 억제제를 개발할 필요가 있다.

본 발명은 하기 화학식 (I)의 화합물 및 그의 이성질체, 전구약물, 용매화물, 안정성 동위원소 유도체 또는 제약상 허용되는 염을 제공한다:

여기서

X¹은 N, O, S로부터 선택된 1 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 임의로 치환된 6-원 포화 헤테로시클릭 기로부터 선택되고, 여기서 임의적인 치환기는 N, O 및 S로부터 선택된 1 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 4-원 포화 헤테로시클릭 기로부터 선택되고; 바람직하게는, X¹은 N, O로부터 선택된 1 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 임의로 치환된 6-원 포화 헤테로시클릭 기로부터 선택되고, 여기서 임의적인 치환기는 옥세타닐로부터 선택되고; 추가로 바람직하게는, X¹은 1,4-디옥사닐, 테트라히드로피라닐, N-옥세타닐 피페리디닐, N-옥세타닐모르폴리닐로부터 선택되고; 가장 바람직하게는, X¹은 (S)-1,4-디옥산-2-일, (R)-1,4-디옥산-2-일, 테트라히드로피란-4-일, 1-(옥세탄-3-일)피페리딘-4-일, (S)-4-(옥세탄-3-일)모르폴린-2-일로부터 선택되고;

X²는 1 또는 2개의 N 원자를 함유하는 5-6원 헤테로시클릴렌 기로부터 선택되고, 여기서 헤테로시클릴렌 기의 고리는 1 또는 2개의 C1-C4 알킬 기에 의해 임의로 치환될 수 있고; 바람직하게는, X²는 1 또는 2개의 N 원자를 함유하는 6-원 헤테로시클릴렌 기로부터 선택되고, 여기서 헤테로시클릴렌 기의 고리는 1 또는 2개의 C1-C4 알킬 기에 의해 임의로 치환될 수 있고; 추가로 바람직하게는, X²는

로부터 선택되고, 여기서 고리는 1개의 C1-C4 알킬에 의해 임의로 치환될 수 있고; 가장 바람직하게는, X²는

로부터 선택되고;

R⁰은 수소, 할로겐으로부터 선택되고; 바람직하게는, R⁰은 수소, 플루오린, 염소로부터 선택되고; 가장 바람직하게는, R⁰은 수소, 플루오린으로부터 선택되고;

R¹, R², R³, R⁴는 각각 독립적으로 수소, C1-C6 알킬로부터 선택되고, 여기서 R¹ 및 R² 또는 R³ 및 R⁴는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 3-6원 시클로알킬을 형성할 수 있고; 바람직하게는, R¹, R², R³, R⁴는 각각 독립적으로 수소, C1-C4 알킬로부터 선택되고, 여기서 R¹ 및 R² 또는 R³ 및 R⁴는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 3-4원 시클로알킬을 형성할 수 있고; 보다 바람직하게는, R¹, R², R³, R⁴는 각각 독립적으로 수소 또는 메틸로부터 선택되고, R¹, R², R³, R⁴는 모두 수소는 아니고, 여기서 R¹ 및 R² 또는 R³ 및 R⁴는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 조합되어 시클로프로필 기를 형성할 수 있고; 가장 바람직하게는, R¹, R², R³, R⁴는 각각 독립적으로 수소 또는 메틸로부터 선택되고, R¹, R², R³, R⁴는 모두 수소는 아니고, 여기서 R³ 및 R⁴는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 시클로프로필 기를 형성할 수 있다.

바람직하게는, 본 출원은

X¹이 N, O로부터 선택된 1 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 임의로 치환된 6-원 포화 헤테로시클릭 기로부터 선택되고, 여기서 임의적인 치환기는 옥세타닐 기로부터 선택되고;

X²가 1 또는 2개의 N 원자를 함유하는 6-원 헤테로시클릴렌 기로부터 선택되고; 여기서, 6-원 헤테로시클릴렌 기의 고리는 1 또는 2개의 C1-C4 알킬 기에 의해 임의로 치환될 수 있고;

R⁰이 수소, 할로겐으로부터 선택되고;

R¹, R², R³, R⁴가 각각 독립적으로 수소, C1-C4 알킬로부터 선택되고, 여기서 R¹ 및 R² 또는 R³ 및 R⁴는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 3- 내지 4-원 시클로알킬 기를 형성할 수 있는 것인

상기 언급된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 및 그의 이성질체, 전구약물, 용매화물, 안정성 동위원소 유도체 또는 제약상 허용되는 염에 관한 것이다.

보다 바람직하게는, 본 출원은

X²가

이고; 여기서 X²의 고리는 1개의 C1-C4 알킬 기에 의해 임의로 치환될 수 있고;

R⁰이 수소, 플루오린, 염소로부터 선택되고;

추가로 바람직하게는, 본 출원은

X¹이 1,4-디옥사닐, 테트라히드로피라닐, N-옥세타닐피페리디닐, N-옥세타닐모르폴리닐로부터 선택되고;

X²가

R⁰이 수소, 플루오린, 염소로부터 선택되고;

R¹, R², R³, R⁴가 각각 독립적으로 수소 또는 메틸로부터 선택되고, R¹, R², R³, R⁴는 모두 수소는 아니며, 여기서 R¹ 및 R² 또는 R³ 및 R⁴는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 시클로프로필 기를 형성할 수 있는 것인

추가로 바람직하게는, 본 출원은

X²가

로부터 선택되고;

R⁰이 수소, 플루오린으로부터 선택되고;

추가로 바람직하게는, 본 출원은

X¹이 (S)-1,4-디옥산-2-일, (R)-1,4-디옥산-2-일, 테트라히드로피란-4-일, 1-(옥세탄-3-일)피페리딘-4-일, (S)-4-(옥세탄-3-일)모르폴린-2-일로부터 선택되고;

X²가

로부터 선택되고;

R⁰이 수소, 플루오린으로부터 선택되고;

R¹, R², R³, R⁴가 각각 독립적으로 수소 또는 메틸로부터 선택되고, R¹, R², R³, R⁴는 모두 수소는 아니며, 여기서 R³ 및 R⁴는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 시클로프로필 기를 형성할 수 있는 것인

추가로 바람직하게는, 본 출원은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된, 상기 언급된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 및 그의 이성질체, 전구약물, 용매화물, 안정성 동위원소 유도체 또는 제약상 허용되는 염에 관한 것이다:

본 발명은 또한 BCL-2 억제제로서의 의약의 제조에서의 본 발명의 실시양태 중 어느 하나에 따른 화학식 (I)의 화합물, 그의 이성질체, 전구약물, 용매화물, 안정성 동위원소 유도체 또는 제약상 허용되는 염의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 또한 혈액 악성종양 (특히 급성 림프모구성 백혈병), 폐암, 유방암, 난소암, 전립선암, 직장암, 췌장암, 신경교종으로부터 선택된 종양과 같은 BCL-2-매개 질환의 치료 또는 예방을 위한 의약의 제조에서의 본 발명의 실시양태 중 어느 하나에 따른 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 이성질체, 전구약물, 용매화물, 안정성 동위원소 유도체 또는 제약상 허용되는 염의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 추가로 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 이성질체, 전구약물, 용매화물, 안정성 동위원소 유도체 또는 제약상 허용되는 염, 임의로 1종 이상의 다른 BCL-2 억제제, 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 및 부형제를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 혈액 악성종양 (특히 급성 림프모구성 백혈병), 폐암, 유방암, 난소암, 전립선암, 직장암, 췌장암, 신경교종으로부터 선택된 종양과 같은 BCL-2-매개 질환의 치료 또는 예방을 위한 의약의 제조에서의 본 발명에 따른 제약 조성물의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 또한 BCL-2에 의해 매개되는 질환의 치료 또는 예방을 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 본 발명의 실시양태 중 어느 하나에 기재된 바와 같은 화합물 또는 그의 이성질체, 전구약물, 용매화물, 안정성 동위원소 유도체 또는 제약상 허용되는 염; 또는 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, BCL-2에 의해 매개되는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이며, 상기 질환, 예컨대 종양은 혈액 악성종양 (특히 급성 림프모구성 백혈병), 폐암, 유방암, 난소암, 전립선암, 직장암, 췌장암, 신경교종으로부터 선택된다.

본 발명의 또 다른 측면은 BCL-2에 의해 매개되는 질환, 예컨대 혈액 악성종양 (특히 급성 림프모구성 백혈병), 폐암, 유방암, 난소암, 전립선암, 직장암, 췌장암, 신경교종으로부터 선택된 종양을 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한, 본 발명의 실시양태 중 어느 하나에 기재된 바와 같은 화합물 또는 그의 이성질체, 전구약물, 용매화물, 안정성 동위원소 유도체 또는 제약상 허용되는 염에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 측면은 BCL-2에 의해 매개되는 질환, 예컨대 혈액 악성종양 (특히 급성 림프모구성 백혈병), 폐암, 유방암, 난소암, 전립선암, 직장암, 췌장암, 신경교종으로부터 선택된 종양을 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한, 본 발명의 실시양태 중 어느 하나에 기재된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 이성질체, 전구약물, 용매화물, 안정성 동위원소 유도체 또는 제약상 허용되는 염, 임의로 1종 이상의 다른 BCL-2 억제제, 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 및 부형제를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 측면은 BCL-2-매개 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 본 발명의 실시양태 중 어느 하나에 기재된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 이성질체, 전구약물, 용매화물, 안정성 동위원소 유도체 또는 제약상 허용되는 염에 관한 것이다. BCL-2-매개 질환은 예컨대 종양이고, 종양은 혈액 악성종양 (특히 급성 림프모구성 백혈병), 폐암, 유방암, 난소암, 전립선암, 직장암, 췌장암, 신경교종으로부터 선택된다.

본 발명에 따르면, 의약은 정제, 캡슐, 용액, 동결건조 투여 형태 및 주사를 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 제약 투여 형태일 수 있다.

본 발명의 제약 제제는 투여 단위당 미리 결정된 양의 활성 성분을 함유하는 투여 단위 형태로 투여될 수 있다. 이러한 단위는 치료될 상태, 투여 방법 및 환자의 연령, 체중 및 상태에 따라, 예를 들어 0.5 mg 내지 1 그램, 바람직하게는 1 mg 내지 700 mg, 특히 바람직하게는 5 mg 내지 300 mg의 본 발명의 화합물을 함유할 수 있다. 제제는 투여 단위당 미리 결정된 양의 활성 성분을 함유하는 투여 단위 형태로 투여될 수 있다. 바람직한 투여 단위 제제는 활성 성분의 상기 나타낸 바와 같은 1일 용량 또는 하위-용량, 또는 그의 상응하는 분획을 함유하는 것이다. 또한, 이러한 유형의 제약 제제는 제약 기술분야에 널리 공지된 방법을 사용하여 제조될 수 있다.

본 발명의 제약 제제는 임의의 목적하는 적합한 방법, 예컨대 경구 (협측 또는 설하 포함), 직장, 비강, 국소 (협측, 설하 또는 경피 포함), 질 또는 비경구 (피하, 근육내, 정맥내 또는 피내 포함) 투여 방법에 의한 투여에 적합할 수 있다. 이러한 제제는, 예를 들어 제약 분야의 관련 기술분야에 공지된 모든 방법을 사용하여 활성 성분을 1종 이상의 부형제 또는 1종 이상의 아주반트와 조합함으로써 제조될 수 있다.

제조 반응식

본 발명은 또한 상기 화합물의 제조 방법을 제공한다.

반응식 1

R⁰ 및 X¹의 정의는 상기 기재된 바와 같다;

단계 1:

화합물 (I)을 클로로술폰산 중에 용해시키고, 오일 조 (120-150℃)에서 가열하고, 10-20시간 동안 반응시키고, 실온으로 냉각시키고, 빙수로 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 상을 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 무수 테트라히드로푸란 중에 용해시키고, 수성 암모니아를 저온 (-80~-60℃)에서 적가하고, 교반을 1-5시간 동안 계속하고, 반응 혼합물을 염산으로 산성화시켜 화합물 (II)를 수득하였다;

단계 2:

화합물 (II) 및 상응하는 아민을 용매 (예컨대 아세토니트릴) 중에 용해시키고, 염기 (예컨대 트리에틸아민 또는 디이소프로필에틸아민 등)를 첨가하고, 불활성 기체 (예컨대 질소 또는 아르곤)의 보호 하에, 반응 혼합물을 25-60℃의 온도에서 10-20시간 동안 교반하여 화합물 (III)을 수득하였다;

반응식 2

R¹, R², R³ 및 R⁴의 정의는 상기 기재되어 있다;

단계 1:

옥시염화인을 질소 보호 하에 빙조에서 디클로로메탄 중 N,N-디메틸포름아미드의 용액에 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 다시 0℃로 냉각시키고, 디클로로메탄 중 화합물 (IV)의 용액을 상기 혼합물에 적가하고, 실온 내지 60℃의 온도에서 10-24시간 동안 유지하여 화합물 (V)를 수득하였다;

단계 2:

질소 보호 하에, 화합물 (V), (p)-클로로벤젠보론산, 염기 예컨대 탄산칼륨, 상 이동 촉매 예컨대 테트라-n-부틸암모늄 브로마이드 및 촉매 예컨대 아세트산팔라듐을 용매 예컨대 물에 첨가하였다. 시스템을 배기시키고, 질소로 3회 대체하고, 40-100℃로 가열하고, 2-10시간 동안 반응시켜 화합물 (VI)을 수득하였다;

단계 3:

화합물 (VI)을 용매 예컨대 테트라히드로푸란 및 메탄올 중에 용해시키고, 환원제 예컨대 수소화붕소나트륨을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1-5시간 동안 교반하여 화합물 (VII)을 수득하였다;

단계 4:

화합물 (VII)을 용매 예컨대 디클로로메탄 중에 용해시키고, 염소화 시약 예컨대 티오닐 클로라이드를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 10-24시간 동안 교반하여 화합물 (VIII)을 수득하였다.

반응식 3.

R⁰, R¹, R², R³, R⁴ 및 X¹의 정의는 상기 기재되어 있다;

단계 1:

화합물 (IX) (합성은 WO 2017212431을 참조할 수 있음) (0.51 g, 2.00 mmol) 및 (R)-tert-부틸 3-메틸피페라진-1-카르복실레이트를 용매 예컨대 디메틸 술폭시드 중에 용해시키고, 염기 예컨대 인산수소이칼륨을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 90-120℃의 온도에서 12-48시간 동안 교반하여 화합물 (X)을 수득하였다;

단계 2:

화합물 (X)을 1,4-디옥산 중의 산 예컨대 염화수소의 용액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1-3시간 동안 교반하여 화합물 (XI)을 수득하였다;

단계 3:

화합물 (XI) 및 화합물 (VIII)을 용매 예컨대 아세토니트릴에 용해시키고, 염기 예컨대 N,N-디이소프로필에틸아민을 첨가하고, 60-90℃로 가열하고, 2-8시간 동안 교반하여 화합물 (XII)를 수득하였다;

단계 4:

화합물 (XII)를 용매 예컨대 2-부탄올 중에 용해시키고, 염기 예컨대 수산화나트륨을 첨가하고, 90-120℃로 가열하고, 혼합물을 12-36시간 동안 교반한 후, 산 예컨대 염산으로 산성화시켜 화합물 (XIII)을 수득하였다;

단계 5:

화합물 (XIII), 화합물 (III), 축합제 예컨대 1-에틸-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 히드로클로라이드, 염기 예컨대 4-디메틸아미노피리딘을 용매 예컨대 디클로로메탄 중에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 12-36시간 동안 교반하여 화합물 (XIV)를 수득하였다.

반응식 4

R⁰, R¹, R², R³, R⁴ 및 X¹의 정의는 상기 기재되어 있다;

단계 1:

화합물 (XV) (합성은 문헌 [Journal of Organic Chemistry, 84(8), 4814-4829; 2019]을 참조할 수 있음) (0.51 g, 2.00 mmol) 및 (R)-2-메틸피페라진을 용매 예컨대 디메틸피페라진 중에 용해시키고, 염기 예컨대 N,N-디이소프로필에틸아민을 실온에서 첨가하고, 혼합물을 50-100℃의 온도에서 12-24시간 동안 교반하여 화합물 (XVI)을 수득하였다;

단계 2:

화합물 (XVI) 및 화합물 (VIII)을 용매 예컨대 아세토니트릴에 용해시키고, 염기 예컨대 N,N-디이소프로필에틸아민을 첨가하고, 혼합물을 50-90℃로 가열하고, 8-24시간 동안 교반하여 화합물 (XVII)을 수득하였다;

단계 3:

화합물 (XVII)을 용매 예컨대 물, 메탄올 및 테트라히드로푸란 중에 용해시키고, 염기 예컨대 수산화리튬을 첨가하고, 혼합물을 50-90℃로 가열하고, 1-5시간 동안 교반하였다. 이어서 혼합물을 산 예컨대 염산으로 산성화시켜 화합물 (XVIII)을 수득하였다;

단계 4:

화합물 (XVIII), 화합물 (III), 축합제 예컨대 1-에틸-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 히드로클로라이드, 염기 예컨대 4-디메틸아미노피리딘을 용매 예컨대 디클로로메탄 중에 용해시켰다. 혼합물을 실온에서 12 내지 36시간 동안 교반하여 화합물 (XIX)를 수득하였다.

본 발명의 상세한 설명

정의

달리 언급되지 않는 한, 명세서 및 청구범위에 사용된 하기 용어는 하기 의미를 갖는다. 본 발명에서 구체적으로 정의되지 않은 기는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 관련 기술분야에 일반적으로 나타낸 의미를 갖는다.

본 발명에 사용된 "Cx-Cy"는 탄소 원자의 범위를 나타내며, 여기서 x 및 y는 둘 다 정수이고, 예를 들어 C3-C8 시클로알킬은 3-8개의 탄소 원자를 갖는 시클로알킬 기를 지칭하고, -C0-C2 알킬은 0-2개의 탄소 원자를 갖는 알킬 기를 지칭하며, 여기서 -C0 알킬은 화학적 단일 결합을 지칭한다.

본 발명에서, 용어 "알킬"은 1 내지 20개의 탄소 원자의 선형 및 분지형 쇄 기, 예를 들어 1 내지 18개의 탄소 원자, 1 내지 12개의 탄소 원자, 1 내지 8개의 탄소 원자, 1 내지 6개의 탄소 원자 또는 1 내지 4개의 탄소 원자의 선형 및 분지형 쇄 기를 포함한 포화 지방족 탄화수소 기를 지칭한다. 비제한적 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, tert-부틸, sec-부틸, n-펜틸, 1,1-디메틸프로필, 1,2-디메틸프로필, 2,2-디메틸프로필, 1-에틸프로필, 2-메틸부틸, 3-메틸부틸, n-헥실, 1-에틸-2-메틸프로필, 1,1,2-트리메틸프로필, 1,1-디메틸부틸, 1,2-디메틸부틸, 2,2-디메틸부틸, 1,3-디메틸부틸, 2-에틸부틸, 및 그의 다양한 분지형 이성질체 등을 포함한다. 알킬 기는 임의로 치환 또는 비치환될 수 있다.

본 발명에서, 용어 "시클로알킬"은 3 내지 12개의 고리 원자, 예컨대 3 내지 12개, 3 내지 10개, 3 내지 8개 또는 3 내지 6개의 고리 원자를 포함하는 포화 모노시클릭 또는 폴리시클릭 탄화수소 기를 지칭하거나, 또는 3-, 4-, 5- 또는 6-원 고리일 수 있다. 모노시클릭 기의 비제한적 예는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 시클로옥틸 등을 포함한다. 시클로알킬 기는 임의로 치환 또는 비치환될 수 있다.

본 발명에서, 용어 "헤테로시클릴"은 3 내지 20개의 고리 원자, 예를 들어 3 내지 16개, 3 내지 12개, 3 내지 10개, 3 내지 8개 또는 3 내지 6개의 고리 원자를 포함하며, 고리 원자 중 1개 이상은 -O-O-, -O-S- 또는 -S-S-의 고리 모이어티를 제외한 헤테로원자, 예컨대 질소, 산소 또는 S(O)m (여기서 m은 0 내지 2의 정수임)으로부터 선택되고, 나머지 고리 원자는 탄소인 포화 또는 부분 불포화 모노시클릭 또는 폴리시클릭 탄화수소 기를 지칭한다. 이는 바람직하게는 3 내지 12개의 고리 원자를 함유하며, 이들 중 1 내지 4개는 헤테로원자이고, 보다 바람직하게는 헤테로시클릴 고리는 3 내지 10개의 고리 원자, 보다 바람직하게는 3 내지 8개의 고리 원자, 가장 바람직하게는 5- 또는 6-원 고리를 함유하며, 이들 중 1-4개의 고리 원자는 헤테로원자이고, 보다 바람직하게는 1-3개의 고리 원자는 헤테로원자이고, 가장 바람직하게는 1-2개의 고리 원자는 헤테로원자이다. 모노시클릭 헤테로시클릴 기의 비제한적 예는 옥세타닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 4-피페리디닐, 피페라지닐, 1,4-디옥사닐, 모르폴리닐, 2-모르폴리닐, 4-모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 피라닐, 테트라히드로피라닐, 4-테트라히드로피라닐, 호모피페라지닐, 디옥사닐, 2-디옥사닐 등을 포함한다. 폴리시클릭 헤테로시클릴은 스피로, 융합된 및 가교된 헤테로시클릴을 포함한다. 헤테로시클릴 기는 임의로 치환 또는 비치환될 수 있다.

본 발명에서, 용어 "헤테로시클릴렌"은 2개의 말단 원자 각각으로부터 1개의 수소 원자를 제거함으로써 수득된, 2개의 말단 1가 기 코어를 갖는 치환 또는 비치환된 헤테로시클릴을 지칭한다. 헤테로시클릴 기는 상기 기재된 의미를 갖는다. "헤테로시클릴렌"의 비제한적 예는 피롤리딜렌, 피페리디닐렌, 피페라지닐렌, 모르폴리닐렌 등을 포함한다.

본 발명에서, 용어 "할로겐"은 플루오린, 염소, 브로민 또는 아이오딘을 지칭한다.

본 발명에서, "임의적인" 또는 "임의로"는 후속적으로 기재된 사건 또는 상황이 발생할 수 있으나 반드시 발생하는 것은 아님을 의미하고, 기재는 사건 또는 상황이 발생하는 경우 또는 발생하지 않는 경우를 포함한다. 예를 들어, "알킬 기로 임의로 치환된 헤테로시클릭 기"는 알킬 기가 존재할 수 있지만 반드시 존재하지는 않는 것을 의미하고, 기재는 헤테로시클릭 기가 알킬 기로 치환된 경우 및 헤테로시클릭 기가 알킬 기로 치환되지 않은 경우를 포함한다.

본 발명에서, "치환된"은 기 내의 1개 이상의 수소 원자, 바람직하게는 5개 이하, 보다 바람직하게는 1 내지 3개의 수소 원자가 서로 독립적으로 상응하는 개수의 치환기에 의해 치환된 것을 의미한다. 치환기는 단지 그의 가능한 화학적 위치에 있고, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 과도한 노력 없이 (실험적으로 또는 이론적으로) 가능하거나 불가능한 치환을 결정할 수 있다는 것은 말할 필요도 없다. 예를 들어, 유리 수소를 갖는 아미노 또는 히드록실 기는 불포화 (예를 들어, 올레핀계) 결합을 갖는 탄소 원자와 조합될 때 불안정할 수 있다.

치환기는 상기 기재된 바와 같은 다양한 기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

본 발명에 청구된 화합물은 화합물 그 자체 뿐만 아니라, 그의 이성질체, 전구약물, 용매화물, 안정성 동위원소 유도체 또는 제약상 허용되는 염을 포함한다.

본 발명의 "제약 조성물"은 본 출원의 화합물, 그의 이성질체, 전구약물, 용매화물, 안정성 동위원소 유도체 또는 제약상 허용되는 염 중 1종 이상 및 다른 화학적 성분을 포함하는 혼합물을 지칭한다. 다른 성분, 예컨대 제약상 허용되는 담체, 희석제 및 부형제. 제약 조성물의 목적은 유기체에 대한 투여를 용이하게 하고, 활성 성분의 흡수를 용이하게 한 다음, 생물학적 활성을 발휘하는 것이다.

본 명세서에서 사용될 때, 용어 "포함하는"은 "이루어진"을 포함한다.

본 발명에서 "실온"은 15-30℃를 지칭한다.

본 발명의 "안정성 동위원소 유도체"는 화학식 (I)의 임의의 수소 원자를 1-5개의 중수소 원자로 대체함으로써 수득된 동위원소 치환된 유도체, 화학식 (I)의 임의의 탄소 원자를 1-3개의 탄소-14 원자로 대체함으로써 수득된 동위원소 치환된 유도체, 또는 화학식 (I)의 임의의 산소 원자를 1-3개의 산소-18 원자로 대체함으로써 수득된 동위원소 치환된 유도체를 포함한다.

본 발명에 따른 "제약상 허용되는 염"은 문헌 [Berge, et al., "Pharmaceutically acceptable salts", J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977)]에서 논의되었고, 의약 화학자에게 명백하다. 염은 실질적으로 비-독성이고, 목적하는 약동학적 특성, 식미성, 흡수, 분포, 대사 또는 배출 등을 제공한다.

본 발명의 제약상 허용되는 염은 일반적인 화학적 방법에 의해 합성될 수 있다.

일반적으로, 염은 적합한 용매 또는 용매 조성물 중에서 유리 염기 또는 산을 등가 또는 과량의 산 (무기 또는 유기) 또는 염기와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

본 발명에서 "전구약물"은 체내에서 대사 후에 원래의 활성 화합물로 변환되는 화합물을 지칭한다. 전형적으로, 전구약물은 불활성 물질이거나, 또는 활성 모 화합물보다 덜 활성이지만, 조작, 투여의 용이성 또는 개선된 대사 특성을 제공할 수 있다.

본원에 사용된 "이성질체"는 본 발명의 화학식 (I)의 화합물의 호변이성질체, 이성질체, 라세미체, 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및 그의 혼합물을 지칭한다. 입체이성질체 및 기하 이성질체를 비롯한 모든 이들 이성질체가 본 발명에 포함된다. 기하 이성질체는 시스 및 트랜스 이성질체를 포함한다.

본원에 사용된 "용매화물"은 1개 이상의 용매 분자와 본 발명의 화합물 또는 그의 염의 회합을 지칭한다. 제약상 허용되는 용매화물을 형성하는 용매의 예는 물, 이소프로판올, 에탄올, 메탄올, 에틸 아세테이트, 아세트산 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

본 발명은 화합물 또는 그의 염의 임의의 다형체, 뿐만 아니라 임의의 수화물 또는 다른 용매화물을 포함한다.

본 발명에서, 용어 "환자"는 일반적으로 포유동물, 특히 인간을 지칭한다.

본 발명에서, 용어 "종양"은 양성 종양 및 악성 종양, 예컨대 암을 포함한다.

본 발명에서, 용어 "암"은 혈액 악성종양 (특히 급성 림프모구성 백혈병), 폐암, 유방암, 난소암, 전립선암, 직장암, 췌장암, 뇌 신경교종을 포함하나 이에 제한되지는 않는, BCL-2에 의해 매개되는 다양한 종양을 포함한다.

본 발명에서, 용어 "치료 유효량"은 BCL-2 매개 질환을 치료 또는 예방하는 데 효과적인 본 발명의 화합물의 양을 포함하는 것으로 의도된다.

실시예

본 발명은 예로서 하기에 추가로 기재되지만, 본 발명은 기재된 실시예의 범주에 의해 제한되는 것으로 의도되지 않는다. 하기 실시예에서 구체적 조건을 명시하지 않는 실험 방법은 통상적인 방법 및 조건에 따라 수행되거나, 또는 제품 설명에 따라 선택된다.

본 발명의 모든 화합물의 구조는 핵 자기 공명 (¹H NMR) 및/또는 질량 분광측정법 (MS)에 의해 확인될 수 있다.

¹H NMR 화학적 이동 (δ)은 ppm (백만분율)으로 보고된다. NMR은 브루커 아반스 (Bruker AVANCE) III-400 MHz 분광계 상에서 수행하였다. 적합한 용매는 중수소화 클로로포름 (CDCl₃), 중수소화 메탄올 (CD₃OD), 중수소화 디메틸 술폭시드 (DMSO-d⁶) 등으로부터 선택되며, 내부 표준물 (TMS)로서 테트라메틸실란을 사용한다.

저해상도 질량 스펙트럼 (MS)은 애질런트 1260 HPLC/6120 질량 분광계에 의해 애질런트 조르박스 (Agilent ZORBAX) XDB-C18, 4.6 x 50 mm, 3.5 μm을 사용하여 결정하였다.

구배 용리 조건 1: 0: 95% 용매 A1 및 5% 용매 B1, 1-2: 5% 용매 A1 및 95% 용매 B1; 2.01-2.50: 95% 용매 A1 및 5% 용매 B1. 백분율은 총 용매 부피 중 용매의 부피 퍼센트이다. 용매 A1: 0.01% 포름산 수용액; 용매 B1: 아세토니트릴 중 0.01% 포름산; 백분율은 용액 중 용질의 부피 백분율임.

박층 실리카 겔 플레이트는 양타이 후앙하이(Yantai Huanghai) HSGF254 또는 칭다오(Qingdao) GF254 실리카 겔 플레이트이다. 양타이 옐로우 시 (Yantai Yellow Sea) 100-200 또는 200-300 메쉬 실리카 겔이 일반적으로 칼럼 크로마토그래피에서 담체로서 사용된다.

정제용 액체 크로마토그래피 (정제용 HPLC)는 워터스 SQD2 질량 분광계-가이드 고압 액체 크로마토그래피, 엑스브리지-C18; 30 x 150mm 정제용 칼럼, 5 μm를 사용하여 수행하였다;

방법 1: 아세토니트릴-물 (0.2% 포름산), 유량 25mL/분;

방법 2: 아세토니트릴-물 (0.8% 중탄산암모늄), 유량 25mL/분;

본 발명의 공지된 출발 물질은 관련 기술분야에 공지된 방법을 채택하거나 또는 그에 따라 합성될 수 있거나, 또는 아크로스 오가닉스 (Acros Organics), 알드리치 케미칼 캄파니 (Aldrich Chemical Company), 액셀라 켐바이오 인크 (Accela ChemBio Inc), 상하이 바이드 메디신 (Shanghai Bide Medicine), 상하이 알라틴 케미칼 (Shanghai Allatin Chemical), 상하이 메리어 케미칼 (Shanghai Meryer Chemical), J&K 사이언티픽 (J&K Scientific), 에너지 케미칼 (Energy Chemical) 및 다른 회사로부터 구입할 수 있다. 베네토클락스를 욱시 랩네트워크 (우한) 케미칼 테크놀로지 캄파니, 리미티드(Wuxi labnetwork (Wuhan) Chemical Technology Co., Ltd.)로부터 구입하였다.

실시예에서 특별한 지침이 없는 경우, 반응에 사용된 용매는 무수 용매이며, 여기서 무수 테트라히드로푸란은 상업적으로 입수가능한 테트라히드로푸란을 수분 스캐빈저로서의 나트륨 블록, 지시약으로서의 벤조페논을 사용하여 처리하고, 용액이 청색-자주색을 나타낼 때까지 아르곤 보호 하에 환류시킴으로써 수득한 다음, 무수 테트라히드로푸란을 증류에 의해 수집하고, 아르곤 보호 하에 실온에서 저장하였다. 다른 무수 용매는 에너지 케미칼스 및 J&K 사이언티픽으로부터 구입하였다. 모든 무수 용매의 전달 및 사용은 달리 명시되지 않는 한 아르곤 보호 하에 수행하여야 한다.

실시예에서 달리 명시되지 않는 한, 반응은 모두 아르곤 분위기 또는 질소 분위기에서 수행하였다.

아르곤 또는 질소 분위기는 반응 플라스크가 약 1 L의 부피를 갖는 아르곤 또는 질소 풍선에 연결된 것을 의미한다.

수소 분위기는 반응 플라스크가 약 1 L의 부피를 갖는 수소 풍선에 연결된 것을 의미한다.

수소화 반응은 통상적으로 배기시키고 수소로 충전하고, 작업을 3회 반복한다.

실시예에서 달리 명시되지 않는 한, 반응 온도는 실온이고, 온도 범위는 15℃-30℃이다.

실시예에서 반응 진행의 모니터링은 박층 크로마토그래피 (TLC)를 채택하고, 반응에 사용된 용리액의 시스템은 A: 디클로로메탄 및 메탄올 시스템; B: 석유 에테르 및 에틸 아세테이트 시스템이다. 용매의 부피 비는 화합물의 극성에 따라 조정된다.

화합물을 정제하는 데 사용된 칼럼 크로마토그래피를 위한 용리액 시스템 및 박층 크로마토그래피를 위한 용리액은 A: 디클로로메탄 및 메탄올 시스템; B: 석유 에테르 및 에틸 아세테이트 시스템을 포함한다. 용매의 부피 비는 화합물의 극성에 따라 조정되고, 또한 소량의 트리에틸아민 및 산성 또는 염기성 시약을 첨가함으로써 조정될 수 있다.

중간체 1

3-플루오로-5-니트로-4-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)벤젠술폰아미드

단계 1:

3,4-디플루오로-5-니트로벤젠술폰아미드

1,2-디플루오로-3-니트로벤젠 (10.00 g, 62.89 mmol)을 클로로술폰산 (21 mL) 중에 용해시켰다. 혼합물을 150℃로 가열하고, 환류 하에 10시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 포화 수성 중탄산나트륨 용액을 빙조에서 반응 혼합물에 첨가하여 pH를 약 7로 조정하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄 (100 mLx3)으로 추출하고, 유기 상을 염수 (100 mLx2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 생성물 3,4-디플루오로-5-니트로벤젠술포닐 클로라이드를 수득하였다. 1000mL 3구 플라스크에, 이소프로판올 (200mL) 및 수성 암모니아 (5mL, 37%)를 첨가하고, 혼합물을 -78℃에서 10분 동안 교반하였다. 수득된 조 3,4-디플루오로-5-니트로벤젠술포닐 클로라이드를 이소프로판올 (30mL) 중에 용해시켰다. 생성된 용액을 -78℃에서 이소프로판올 및 수성 암모니아의 상기 혼합물에 천천히 적가하였다. 이어서 혼합물을 첨가 후 -78℃에서 2시간 동안 교반하였다. 묽은 염산 (1N)을 반응 혼합물에 첨가하여 pH를 약 6으로 조정하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 감압 하에 농축시켜 대부분의 이소프로판올 용매를 제거하였다. 물을 첨가하고, 고체를 침전시켰다. 조 고체 생성물을 여과에 의해 수득하였다. 조 생성물을 디클로로메탄으로 연화처리하여 목적 생성물 3,4-디플루오로-5-니트로벤젠술폰아미드 (4.90 g, 황색 고체)를 수득하였다. 수율: 33%.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d⁶) δ 8.38-8.36 (m, 1H), 8.29-8.26 (m, 1H), 7.84 (s, 2H).

단계 2:

3,4-디플루오로-5-니트로벤젠술폰아미드 (1.55 g, 6.51 mmol), (테트라히드로-2H-피란-4-일)메탄아민 (0.89 g, 7.73 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (3.91 g, 30.31 mmol) 및 아세토니트릴 (20.0 mL)을 혼합하고, 40℃에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시켰다. 잔류물을 물 50 mL로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (60 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (50 mLx3)로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 건조시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=1:1)에 의해 정제하여 목적 생성물 3-플루오로-5-니트로-4-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노) 벤젠술폰아미드 (1.66 g, 황색 고체)를 수득하였다. 수율: 76%.

MS m/z (ESI): 334 [M+1];

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d⁶) δ 8.33-8.30 (m, 2H), 7.76-7.74 (m, 1H), 7.45 (s, 2H), 3.86-3.84 (m, 2H), 3.50-3.45 (m, 2H), 3.29-3.23 (m, 3H), 1.59-1.57 (m, 2H), 1.25-1.20 (m, 2H).

중간체 2의 합성은 중간체 1의 합성을 참조할 수 있다.

중간체 3

3-플루오로-5-니트로-4-(((1-(3-옥세타닐)피페리딘-4-일)메틸)아미노)벤젠술폰아미드

단계 1:

3-플루오로-5-니트로-4-((피페리딘-4-일메틸)아미노)벤젠술폰아미드

tert-부틸 4-(((2-플루오로-6-니트로-4-술파모일페닐)아미노)메틸)피페리딘-1-카르복실레이트 (합성을 위한 중간체 1의 합성 절차를 참조함) (0.49 g, 1.12 mmol), 트리플루오로아세트산 (3 mL) 및 디클로로메탄 (9 mL)을 혼합하고, 실온에서 30분 동안 교반하였다. 용매를 증발시켰다. 잔류물을 트리에틸아민을 사용하여 중성으로 조정하고, 용매를 다시 증발시켜 조 3-플루오로-5-니트로-4-((피페리딘-4-일메틸)아미노)벤젠술폰아미드 (0.35 g, 황색 오일)를 수득하였다. 이 조 물질을 직접 후속 반응에 추가 정제 없이 사용하였다. MS m/z (ESI): 333 [M+1].

단계 2:

3-플루오로-5-니트로-4-(((1-(3-옥세타닐)피페리딘-4-일)메틸) 아미노)벤젠술폰아미드

3-플루오로-5-니트로-4-((피페리딘-4-일메틸)아미노)벤젠술폰아미드 (0.35 g, 1.05 mmol), 옥세탄-3-온 (0.23 g , 3.15 mmol), 소듐 시아노보로히드라이드 (0.23 g, 5.23 mmol) 및 메탄올 (8 mL)을 혼합하고, 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 10 mL로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (10 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL)로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 회전 증발에 의해 건조시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=3:1)에 의해 정제하여 목적 생성물 3-플루오로-5-니트로-4-(((1-(3-옥세타닐)피페리딘-4-일)메틸)아미노)벤젠술폰아미드 (0.32 g, 황색 고체)를 수득하였다. 수율: 78%.

MS m/z (ESI): 389 [M+1];

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.47-8.46(m, 1H), 7.72-7.70 (m, 1H), 4.68-4.65 (m, 2H), 4.60-4.59 (m, 2H), 3.57-3.55 (m, 2H), 3.49-3.45 (m, 1H), 2.83-2.80 (m, 2H), 1.89-1.78 (m, 3H), 1.42-1.20 (m, 4H).

중간체 4

(R)-4'-클로로-6-(클로로메틸)-3-메틸-2,3,4,5-테트라히드로-1,1'-비페닐

단계 1:

(R)-2-클로로-4-메틸시클로헥스-1-엔-1-카르브알데히드

N,N-디메틸포름아미드 (0.59 g, 8.00 mmol)를 디클로로메탄 (10 mL) 중에 용해시키고, 빙조에서 0℃로 냉각시키고, 포스포릴 트리클로라이드 (0.92 g, 6.00 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반한 다음, 실온으로 가온하고, 추가로 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 디클로로메탄 (5 mL) 중 (R)-3-메틸시클로헥산-1-온 (합성에 대한 참조: 문헌 [Tetrahedron 73 (2017) 3202-3212]) (0.45 g, 4.0 mmol)의 용액을 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 천천히 가온하고, 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 중탄산나트륨 (10 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 농축시켜 디클로로메탄을 제거하고, 에틸 아세테이트 (25 mL) 및 물 (15 mL)을 첨가하였다. 유기 상을 분리하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (25 mLx2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (20 mLx2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 목적 화합물 (R)-2-클로로-4-메틸시클로헥스-1-엔-1-카르브알데히드 (0.45 g, 담황색 액체)를 조 생성물로서 수득하였다.

MS m/z(ESI): 159 & 161 [M+1];

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 10.20 (s, 0.8H), 10.18 (s, 0.2H), 2.63-2.47 (m, 2H), 2.29-2.26 (m, 1H), 2.24-2.15 (m, 1H) ), 1.90-1.77 (m, 2H), 1.27-1.21 (m, 1H), 1.03 (d, J = 6.4 Hz, 3H).

단계 2:

(R)-4'-클로로-5-메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-카르브알데히드

1구 플라스크에, (R)-2-클로로-4-메틸시클로헥스-1-엔-1-카르브알데히드 (0.45 g, 2.80mmol), p-클로로페닐보론산 (0.44 g, 2.80mmol), 테트라부틸 암모늄 브로마이드 (0.91 g, 2.80 mmol), 탄산칼륨 (1.17 g, 8.50 mmol), 아세트산팔라듐 (0.16 g, 0.70 mmol) 및 물 (15 mL)을 순차적으로 첨가하였다. 반응물을 질소로 3회 플러싱하고, 45℃로 가열하고, 이 온도에서 4시간 동안 유지하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트 (25 mL)를 첨가하고, 유기 상을 분리하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (25 mL)로 추출하고, 합한 유기 추출물을 포화 염수 (15 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 증발시키고, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=96:4)에 의해 정제하여 목적 화합물 (R)-4'-클로로-5-메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-카르브알데히드 (0.45 g, 연황색 오일), 수율 67.5%를 수득하였다.

MS m/z(ESI): 235 & 237 [M+1];

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.41(s, 0.9H), 9.37(s, 0.1H), 7.30-7.24 (m, 2H), 7.10-7.08(m, 2H), 2.54-2.47(m, 2H) ), 2.16-2.03 (m, 2H), 1.82-1.75 (m, 2H), 1.21-1.15 (m, 1H), 0.96 (d, J = 6.4 Hz, 3H).

단계 3:

(R)-(4'-클로로-5-메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메탄올

(R)-4'-클로로-5-메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-카르브알데히드 (0.23 g, 1.00 mmol)를 테트라히드로푸란 (2 mL) 중에 용해시키고, 수소화붕소나트륨 (57 mg, 1.50 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 수성 염화암모늄 (10 mL)을 적가함으로써 켄칭하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (10 mL)로 추출하고, 유기 상을 포화 염수 (10 mL)로 세척하고, 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 농축시켜 조 (R)-(4'-클로로-5-메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메탄올 (0.24 g, 연황색 오일)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 정제 없이 사용하였다. MS m/z (ESI): 237 & 239 [M-17].

단계 4:

(R)-(4'-클로로-5-메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메탄올 (0.24 g, 1.00 mmol)을 디클로로메탄 (2 mL) 중에 용해시키고, 티오닐 클로라이드 (0.24 g, 1.50 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 수성 중탄산나트륨 (10 mL)을 적가하여 켄칭하였다. 혼합물을 디클로로메탄 (10 mL)으로 추출하였다. 유기 상을 포화 염수 (10 mL)로 세척하고, 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 농축시켜 조 (R)-4'-클로로-6-(클로로메틸)-3-메틸-2,3,4,5-테트라히드로-1,1'-비페닐 (0.26 g, 연황색 오일)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 정제 없이 사용하였다.

중간체 5-7의 합성은 중간체 4의 합성 절차를 참조할 수 있다.

중간체 8

5-(클로로메틸)-6-(4-클로로페닐)-8,8-디메틸스피로[2.5]옥트-5-엔

단계 1:

7,7-디메틸-8-메틸렌-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸

메틸트리페닐포스핀 브로마이드 (14.00 g, 39.20 mmol)를 무수 테트라히드로푸란 (120 mL)에 첨가하고, 혼합물을 -40℃로 냉각시켰다. n-헥산 중 n-부틸리튬의 용액 (2.5 M, 39.2 mmol, 15.6 mL)을 질소 보호 하에 적가하였다. 첨가한 후, 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 이어서 7,7-디메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-온 (6.00 g, 32.60 mmol)을 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 포화 수성 염화암모늄 (200 mL)으로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (100 mLx2)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 포화 염수 (200 mL)로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (0-10% 에틸 아세테이트/석유 에테르)에 의해 정제하여 생성물 7,7-디메틸-8-메틸렌-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸 (3.80 g, 무색 오일)을 수득하였다. 수율: 64%.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.73(s, 2H), 3.98-3.94 (m, 4H), 2.43-2.36 (m, 2H), 1.73-1.68 (m, 2H), 1.62 (s, 2H), 1.16 (s, 6H).

단계 2:

4,4-디메틸-7,10-디옥사비스피로[2.2.4⁶.2³]도데칸

7,7-디메틸-8-메틸렌-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸 (0.90 g, 4.94 mmol)을 디클로로메탄 (20 mL) 중에 용해시키고, 톨루엔 중 디에틸아연의 용액 (2M, 14.80 mmol, 7.4 mL)을 질소 보호 하에 0℃에서 적가하였다. 첨가 후에 반응 혼합물을 0.5시간 동안 교반하였다. 이어서 클로로아이오도메탄 (5.20 g, 29.60 mmol)을 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 포화 수성 염화암모늄 (30 mL)을 첨가하여 반응물을 켄칭하고, 유기 상을 분리하였다. 수성 상을 디클로로메탄 (30 mLx2)으로 추출하고, 합한 유기 상을 물 (30 mLx2) 및 포화 염수 (20 mL)로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 조 4,4-디메틸-7,10-디옥사비스피로[2.2.4⁶.2³]도데칸 (1.50 g, 황색 오일)을 수득하였다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 3.96-3.91(m, 4H), 1.69-1.62 (m, 2H), 1.55 (s, 2H), 1.44-1.40 (m, 2H), 0.83 (s, 6H), 0.50-0.46 (m, 2H), 0.11-0.08 (m, 2H).

단계 3:

4,4-디메틸스피로[2.5]옥탄-6-온

4,4-디메틸-7,10-디옥사비스피로[2.2.4⁶.2³]도데칸 (1.50 g, 단계 2로부터의 조 생성물, 4.94 mmol)을 염산 및 테트라히드로푸란의 혼합물 (2 M, 14.00 mmol, 7 mL)에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 중탄산나트륨 (30 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (30 mL)로 추출하였다. 유기 상을 물 (30 mLx2) 및 포화 염수 (30 mL)로 각각 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 조 4,4-디메틸스피로[2.5]옥탄-6-온 (0.70 g, 황색 오일)을 수득하였다. 수율: 93.2%. MS m/z (ESI): 153 [M+1].

단계 4:

6-클로로-8,8-디메틸스피로[2.5]옥트-5-엔-5-카르브알데히드

옥시염화인 (1.10 g, 6.90 mmol)을 질소 보호 하에 빙조에서 디클로로메탄 (30 mL) 중 N,N-디메틸포름아미드 (0.67 g, 9.20 mmol)의 용액에 적가하였다. 첨가한 후, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 다시 0℃로 냉각시키고, 디클로로메탄 (5 mL) 중 4,4-디메틸스피로[2.5]옥탄-6-온 (0.70 g, 4.60 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응을 실온에서 밤새 수행하였다. 물 (30 mL)을 첨가하여 반응물을 켄칭하고, 유기 상을 분리하였다. 유기 상을 포화 수성 중탄산나트륨 (30 mL) 및 포화 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (100% 석유 에테르)에 의해 정제하여 6-클로로-8,8-디메틸스피로[2.5]옥트-5-엔-5-카르복스알데히드 (0.34 g, 연황색 오일)를 수득하였다. 수율: 37.2%. MS m/z (ESI): 199 & 201 [M+1].

단계 5:

6-(4-클로로페닐)-8,8-디메틸스피로[2.5]옥트-5-엔-5-카르브알데히드

질소 보호 하에, 6-클로로-8,8-디메틸스피로[2.5]옥트-5-엔-5-카르브알데히드 (0.34 g, 1.70 mmol), p-클로로페닐보론산 (0.41 g, 2.60 mmol), 탄산칼륨 (0.70 g, 5.10 mmol), 테트라-n-부틸암모늄 브로마이드 (0.55 g, 1.70 mmol) 및 아세트산팔라듐 (77 mg, 0.34 mmol)을 물 (15 mL)에 첨가하였다. 반응 시스템을 배기시키고, 질소로 3회 플러싱하였다. 온도를 50℃로 상승시키고, 이 온도에서 4시간 동안 유지하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트 (20 mLx2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 포화 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (0-5% 에틸 아세테이트/석유 에테르)에 의해 정제하여 6-(4-클로로페닐)-8,8-디메틸스피로[2.5]옥트-5-엔-5-카르브알데히드 (0.18 g, 연황색 오일)를 수득하였다.

수율: 38.2%. MS m/z (ESI): 275 & 277 [M+1].

단계 6:

(6-(4-클로로페닐)-8,8-디메틸스피로[2.5]옥트-5-엔-5-일)메탄올

6-(4-클로로페닐)-8,8-디메틸스피로[2.5]옥트-5-엔-5-카르브알데히드 (0.18 g, 0.66mmol)를 테트라히드로푸란-메탄올의 혼합물 (v/v= 6/1, 7 mL) 중에 용해시키고, 수소화붕소나트륨 (75 mg, 1.78 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 포화 수성 염화암모늄 (20 mL)을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mLx2)로 추출하고, 합한 유기 상을 포화 염수 (20 mL)로 세척하고, 유기 상을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 (6-(4-클로로페닐)-8,8-디메틸스피로[2.5]옥트-5-엔-5-일)메탄올 (0.16 g, 무색 오일)을 수득하였다. 수율: 88.2%. MS m/z (ESI): 260 & 262 [M-17].

단계 7:

(6-(4-클로로페닐)-8,8-디메틸스피로[2.5]옥트-5-엔-5-일)메탄올 (0.16 g, 0.58 mmol)을 디클로로메탄 (10 mL) 중에 용해시키고, 티오닐 클로라이드 (0.21 g, 1.74 mmol)를 여기에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 감압 하에 농축시켜 조 5-(클로로메틸)-6-(4-클로로페닐)-8,8-디메틸 스피로[2.5]옥트-5-엔 (0.17 g, 황색 오일)을 수득하였다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.36-7.29(m, 2H), 7.20-7.13(m, 2H), 3.88(s, 2H), 2.20-2.11(m, 2H), 1.64-1.53(m, 2H) ), 0.85 (s, 6H), 0.63-0.57 (m, 2H), 0.24-0.16 (m, 2H).

중간체 9

7,7,8,8-테트라메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸

7,7,8,8-테트라메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸

4,4-디메틸-7,10-디옥사비스피로[2.2.4⁶.2³]도데칸 (중간체 8의 단계 2 참조) (4.30 g, 21.9 mmol) 및 이산화백금 (1.00 g, 4.40 mmol)을 아세트산 (30 mL)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 배기시키고, 수소로 대체한 다음, 40℃로 가열하고, 밤새 유지하였다. 이어서 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트 (30 mL)로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 필터 케이크를 에틸 아세테이트 (20 mL)로 세척하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 조 7,7,8,8-테트라메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸 (4.50 g, 무색 오일)을 수득하였다. MS m/z (ESI): 199 [M+1].

중간체 10의 합성은 중간체 8의 합성을 참조할 수 있다.

실시예 1:

(R)-2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((4'-클로로-5,5-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)-N-((3-플루오로-5-니트로-4-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)페닐)술포닐)벤즈아미드

단계 1:

(R)-메틸 2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(3-메틸피페라진-1-일)벤조에이트

메틸 2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-플루오로벤조에이트 (합성은 문헌 [Journal of Organic Chemistry, 84(8), 4814- 4829; 2019]을 참조할 수 있음) (2.86 g, 10.00 mmol), (R)-2-메틸피페라진 (3.00 g, 30.00 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (3.12 g, 24.18 mmol) 및 디메틸 술폭시드 (20 mL)를 혼합하고, 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 50 mL로 희석하고, 에틸 아세테이트 (60 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 포화 염수 (50 mLx3)로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하여 건조제를 제거하고, 조 생성물을 감압 하에 용매를 제거함으로써 수득하였다. 칼럼 크로마토그래피 (디클로로메탄/메탄올=90:10)에 의해 정제하여 목적 생성물을 수득하였다.

(R)-메틸 2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(3-메틸피페라진-1-일)벤조에이트 (2.55 g, 황색 고체). 수율: 70%.

MS m/z (ESI): 367[M+1];

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.92 (s, 1H), 8.19 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 2.4 Hz, 1H) ), 7.36-7.35(m, 1H), 6.66-6.63(m, 1H), 6.43(d, J =1.6 Hz, 1H), 6.34(d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.79(s, 3H), 3.54-3.48(m, 2H), 3.05-3.02(m, 1H), 2.93-2.84(m, 2H), 2.77-2.71(m, 1H), 2.42-2.37(m, 1H), 1.08(d, J=6.4 Hz, 3H).

단계 2:

(R)-메틸 2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((4'-클로로-5,5-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)벤조에이트

(R)-메틸 2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(3-메틸피페라진-1-일)벤조에이트 (34mg, 0.09mmol), 4'-클로로-6-(클로로메틸)-3,3-디메틸-2,3,4,5-테트라히드로-1,1'-비페닐 (합성은 US 20100298323을 참조할 수 있음) (30 mg, 0.11 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (36 mg, 0.28 mmol) 및 아세토니트릴 (5.0 mL)을 합하고, 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 10 mL로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (10 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mLx2)로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하여 건조제를 제거하고, 조 생성물을 감압 하에 용매를 제거함으로써 수득하였다. 조 생성물을 정제용 플레이트 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1:1)에 의해 정제하여 목적 생성물 (R)-메틸 2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((4'-클로로-5,5-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)벤조에이트 (28 mg, 무색 오일)를 수득하였다. 수율: 50%. MS m/z (ESI): 599 & 601 [M+1].

단계 3:

(R)-2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((4'-클로로-5,5-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)벤조산

(R)-메틸 2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((4'-클로로-5,5-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)벤조에이트 (28 mg, 0.05 mmol), 수산화리튬 (20 mg, 0.83 mmol), 메탄올 (1 mL), 테트라히드로푸란 (1 mL) 및 물 (1 mL)을 혼합하고, 60℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 1N 염산을 사용하여 중성으로 조정하고, 에틸 아세테이트 (10 mLx2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL)로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하여 건조제를 제거하고, 조 생성물 (R)-2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((4'-클로로-5,5-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)벤조산 (25.6 mg, 조 물질)을 감압 하에 용매를 제거함으로써 수득하였다. 이 조 생성물을 직접 후속 반응에 정제 없이 사용하였다. MS m/z (ESI): 585 & 587 [M+1].

단계 4:

(R)-2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((4'-클로로-5,5-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)벤조산 (26 mg, 0.04 mmol), 3-플루오로-5-니트로-4-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)벤젠술폰아미드 (중간체 1) (15 mg, 0.04 mmol), 4-디메틸아미노피리딘 (11 mg, 0.09 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (17 mg, 0.09 mmol) 및 디클로로메탄 (2.5 mL)을 합하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 10 mL로 켄칭하고, 디클로로메탄 (10 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 포화 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 조 생성물을 감압 하에 용매를 제거함으로써 수득하였다. 조 생성물을 정제용 실리카 겔 플레이트 (디클로로메탄/메탄올=15:1)를 사용하여 정제하여 목적 생성물 (R)-2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((4'-클로로-5,5-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)-N-((3-플루오로-5-니트로-4-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)페닐)술포닐)벤즈아미드1 (15.7 mg, 황색 고체)을 수득하였다. 수율: 38%.

MS m/z(ESI): 900&902[M+1];

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8.49(s, 1H), 8.08-8.05 (m, 1H), 7.71-7.64 (m, 2H), 7.50(s, 1H), 7.44 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.36-7.34 (m, 2H), 7.09-7.07 (m, 2H), 6.77(d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.42-6.36 (m, 2H), 4.04-3.93 (m, 3H), 3.71-3.67 (m, 2H), 3.52-3.38 (m, 5H), 3.28-3.26 (m, 2H), 3.08-3.02 (m, 1H), 2.96-2.93 (m, 1H), 2.65-2.63 (m, 1H), 2.24-2.15 (m, 2H), 2.06-2.04 (m, 1H), 1.93-1.89 (m, 1H), 1.85 (d, J=4.0 Hz, 3H), 1.70-1.64 (m, 3H), 1.58-1.56 (m, 2H), 1.39-1.28 (m, 2H), 1.01 (s, 3H), 0.90 (s, 3H).

실시예 2 내지 7의 합성 절차는 실시예 1의 절차를 참조할 수 있다.

실시예 8:

(R)-2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((4'-클로로-5,5-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메틸)-2-메틸피페라진-1-일)-N-((3-니트로-4-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)페닐)술포닐)벤즈아미드

단계 1:

(R)-tert-부틸 4-(3-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-시아노페닐)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트

2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-플루오로벤조니트릴 (합성은 WO 2017212431을 참조할 수 있음) (0.51 g, 2.00 mmol) 및 (R)-tert-부틸 3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.20 g, 6.00mmol)를 디메틸 술폭시드 (15mL) 중에 용해시키고, 인산수소칼륨 (1.05 g, 6.00 mmol)을 실온에서 첨가하고, 110℃에서 36시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고, 에틸 아세테이트 (30 mLx2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (30 mLx2)로 세척하고, 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=3:1)에 의해 정제하여 (R)-tert-부틸 4-(3-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-시아노페닐)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (0.35 g, 백색 고체)를 수득하였다, 수율: 41%.

MS m/z (ESI): 434[M+1];

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.29 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.49 (d, J =8.8 Hz, 1H), 7.42-7.40 (m, 1H), 6.53-6.49 (m, 2H), 6.08 (s, 1H), 40.5-3.83 (m, 3H), 3.21-3.20 (m, 2H), 3.04-2.95 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.02 (d, J = 6.4 Hz, 3H).

단계 2:

(R)-2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(2-메틸피페라진-1-일)벤조니트릴

(R)-tert-부틸 4-(3-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-시아노페닐)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (0.35 g, 0.81 mmol)를 디옥산 중 염산의 용액 (4 M, 20.00 mmol, 5 mL) 중에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발시켜 조 (R)-2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(2-메틸피페라진-1-일)벤조니트릴 (0.38 g, 조 물질)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 정제 없이 사용하였다. MS m/z (ESI): 334 [M+1].

단계 3:

(R)-2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((4'-클로로-5,5-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메틸)-2-메틸피페라진-1-일)벤조니트릴

(R)-2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(2-메틸피페라진-1-일)벤조니트릴 (0.38 g, 조 물질) 및 4'-클로로-6-(클로로메틸)-3,3-디메틸-2,3,4,5-테트라히드로-1,1'-비페닐 (0.21 g, 0.80 mmol) (합성은 US 20100298323을 참조할 수 있음)을 아세토니트릴 (10 mL) 중에 용해시키고, N,N-디이소프로필에틸아민 (0.31 g, 2.40 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 4시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고, 에틸 아세테이트 (20 mLx2)로 추출하고, 합한 유기 상을 포화 염수 (20 mL)로 세척하였다. 유기 상을 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 칼럼 (석유 에테르:에틸 아세테이트=2:1)에 의해 정제하여 (R)-2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((4'-클로로-5,5-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메틸)-2-메틸피페라진-1-일)벤조니트릴 (0.30 g, 백색 고체), 수율: 66%를 수득하였다.

MS m/z(ESI): 566 & 568 [M+1];

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.40 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.43 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.42-7.40 (m, 1H), 7.23 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.92 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.52-6.45 (m, 2H), 6.04 (s, 1H), 3.81-3.78 (m, 1H), 3.16-3.13 (m, 1H), 2.98-2.95 (m, 1H), 2.69-2.65 (m, 3H), 2.54-2.51 (m, 1H), 2.21-2.14 (m, 2H), 2.04-1.97 (m, 2H), 1.89-1.76 (m, 2H), 1.43-1.40 (m, 2H), 1.07 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.93 (s, 3H).

단계 4:

(R)-2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((4'-클로로-5,5-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메틸)-2-메틸피페라진-1-일)벤조산

(R)-2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((4'-클로로-5,5-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메틸)-2-메틸피페라진-1-일)벤조니트릴 (0.11 g, 0.20 mmol)을 2-부탄올 (3 mL) 중에 용해시키고, 수산화나트륨 (160 mg, 4.00 mmol)을 90℃에서 첨가하였다. 혼합물을 105℃로 가열하고, 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 증발시키고, 1N 수성 염산 (4 mL)을 잔류물에 첨가하고, 에틸 아세테이트 (10 mLx2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL)로 세척하고, 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 정제용 실리카 겔 플레이트 (디클로로메탄:메탄올=10:1)에 의해 정제하여 (R)-2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((4'-클로로-5,5-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메틸)-2-메틸피페라진-1-일)벤조산 (90 mg, 백색 고체), 수율:77%를 수득하였다. MS m/z (ESI): 585 & 587 [M+1].

단계 5:

합성을 실시예 1의 절차의 최종 단계에 따라 수행하여, 목적 생성물 (R)-2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((4'-클로로-5,5-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메틸)-2-메틸피페라진-1-일)-N-((3-니트로-4-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노) 페닐)술포닐)벤즈아미드 8을 수득하였다.

MS m/z(ESI): 882 & 884 [M+1];

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 10.13 (s, 1H), 9.29 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.53-8.50 (m, 1H), 8.22-8.16 (m, 2H), 7.94 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.47-7.45 (m, 1H), 7.22 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.93-6.89 (m, 3H), 6.56-6.49 (m, 2H), 5.94 (s, 1H), 4.05-4.01 (m, 2H), 3.78-3.74 (m, 1H), 3.45-3.39 (m, 2H), 3.28-3.25 (m, 2H), 3.15 -3.12 (m, 1H), 2.96-2.89 (m, 1H), 2.73-2.62 (m, 3H), 2.51-2.48 (m, 1H), 2.20-2.11 (m, 2H), 1.99-1.95 (m, 3H), 1.86-1.83 (m, 1H), 1.79-1.72 (m, 3H), 1.45-1.39 (m, 4H), 1.03 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.93 (s, 3H), 0.92 (s, 3H).

실시예 9 내지 13의 합성 절차는 실시예 8의 절차를 참조할 수 있다.

실시예 14 내지 22의 합성 절차는 실시예 1의 절차를 참조할 수 있다.

실시예 23 내지 26의 합성 절차는 실시예 8의 절차를 참조할 수 있다.

실시예 27 내지 30의 합성 절차는 실시예 1의 절차를 참조할 수 있다.

실시예 31

(R)-2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((6-(4-클로로페닐)-8,8- 디메틸스피로[2.5]옥트-5-엔-5-일)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)-N-((3-니트로-4-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)페닐)술포닐)벤즈아미드

단계 1:

(R)-메틸 2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((6-(4-클로로페닐)-8,8- 디메틸스피로[2.5]옥트-5-엔-5-일)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)벤조에이트

5-(클로로메틸)-6-(4-클로로페닐)-8,8-디메틸스피로[2.5]옥트-5-엔 (중간체 8) (0.17 g, 0.58 mmol), (R)-메틸 2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(3-메틸피페라진-1-일)벤조에이트 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.37 g, 2.90 mmol)을 아세토니트릴 (15 mL) 중에 용해시키고, 환류 하에 3시간 동안 가열하였다. 냉각시킨 후, 이를 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (30 mL) 중에 용해시키고, 물 (30 mLx3) 및 염수 (30 mL)로 각각 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (10%-40% 에틸 아세테이트/석유 에테르)에 의해 정제하여 (R)-메틸 2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((6-(4-클로로페닐)-8,8- 디메틸스피로[2.5]옥트-5-엔-5-일)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)벤조에이트 (0.10 g, 백색 고체)를 수득하였다. 수율: 27.7%. MS m/z (ESI): 625 & 627 [M+1].

단계 2:

(R)-2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((6-(4-클로로페닐)-8,8- 디메틸스피로[2.5]옥트-5-엔-5-일)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)벤조산

(R)-메틸 2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((6-(4-클로로페닐)-8,8- 디메틸스피로[2.5]옥트-5-엔-5-일)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)벤조에이트 (0.10 g, 0.16 mmol)를 에탄올 (3 mL) 및 수성 수산화나트륨 (2N, 6.00 mmol, 3 mL) 중에 용해시켰다. 혼합물을 70℃로 가열하고, 2시간 동안 교반하였다. 냉각시킨 후, 물 (20 mL)을 첨가하여 반응 혼합물을 희석하고, 1N 묽은 염산을 첨가하여 pH를 약 5로 조정하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (20 mLx2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (20 mL)로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 (R)-2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((6-(4-클로로페닐)-8,8- 디메틸스피로[2.5]옥트-5-엔-5-일)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)벤조산 (80 mg, 백색 고체)을 수득하였다. 수율: 81.8%. MS m/z (ESI): 611 & 613 [M+1].

단계 3:

(R)-2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((6-(4-클로로페닐)-8,8- 디메틸스피로[2.5]옥트-5-엔-5-일)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)-N-((3-니트로-4-((((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)페닐)술포닐)벤즈아미드

(R)-2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((6-(4-클로로페닐)-8,8-디메틸스피로[2.5]옥트-5-엔-5-일)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)벤조산 (20 mg, 0.03 mmol), 3-니트로-4-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)벤젠메탄술폰아미드 (합성은 WO 2018041248A1을 참조할 수 있음) (10 mg, 0.03 mmol), 1-에틸-(3-디메틸아미노) 프로필)카르보디이미드 히드로클로라이드 (31 mg, 0.17 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘 (8 mg, 0.07 mmol)을 디클로로메탄 (5 mL) 중에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 디클로로메탄 (20 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 물 (20 mLx3) 및 염수 (20 mL)로 각각 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 박층 크로마토그래피 (디클로로메탄/메탄올=15/1)에 의해 정제하여 목적 생성물 (R)-2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-(4-((6-(4-클로로페닐)-8,8- 디메틸스피로[2.5]옥트-5-엔-5-일)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)-N-((3-니트로-4-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)페닐)술포닐)벤즈아미드 31 (16.6 mg, 황색 고체)을 수득하였다, 수율: 55.7%

MS m/z(ESI): 908 & 910 [M+1];

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 10.14 (brs, 1H), 9.70 (s, 1H), 8.96-8.82 (m, 1H), 8.57-8.48 (m, 1H), 8.27-8.09 (m, 2H), 8.00-7.90 (m, 1H), 7.75-7.63 (m, 1H), 7.50-7.43 (m, 1H), 7.25-7.19 (m, 2H), 7.01-6.85 (m, 3H), 6.59-6.49 (m, 2H), 5.98 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.10-3.95 (m, 2H), 3.48-3.38 (m, 2H), 3.32-3.17(m, 4H), 3.12-3.03 (m, 1H) ), 2.87-2.73 (m, 1H), 2.70-2.45 (m, 3H), 2.18-2.04 (m, 3H), 2.03-1.83 (m, 3H), 1.50-1.19 (m, 6H), 0.93-0.78 (m, 8H), 0.60-0.48 (m, 2H), 0.15-0.02 (m, 2H).

실시예 32 내지 34의 합성 절차는 실시예 31의 절차를 참조할 수 있다.

실시예 35 내지 38의 합성 절차는 실시예 1의 절차를 참조할 수 있다.

실시예 39 내지 42의 합성 절차는 실시예 31의 절차를 참조할 수 있다.

실시예 43 내지 46의 합성 절차는 실시예 8의 절차를 참조할 수 있다.

실시예 47 내지 56의 합성 절차는 실시예 1의 절차를 참조할 수 있다.

실시예 57:

2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-((4aR,8aR)-4-((4'-클로로-5,5-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메틸)옥타히드로퀴녹살린-1(2H)-일)-N-((3-니트로-4-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)페닐)술포닐)벤즈아미드

실시예 57의 합성을 실시예 1의 합성 절차를 참조하여 수행하였으며, 여기서 단계 2에서, (R)-2-메틸피페라진을 (4aR, 8aR)-데카히드로퀴녹살린 (합성은 문헌 [European Journal of Organic Chemistry, 2012(34), 6752-6759; 2012]을 참조할 수 있음)으로 대체하여 목적 화합물을 수득하였다.

2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-((4aR,8aR)-4-((4'-클로로-5,5-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메틸)옥타히드로퀴녹살린-1(2H)-일)-N-((3-니트로-4-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)페닐)술포닐)벤즈아미드 57.

MS m/z(ESI): 822 & 824 [M+1];

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 10.21 (s, 1H), 8.93-8.92 (m, 1H), 8.88-8.87 (m, 1H), 8.57-8.53 (m, 1H), 8.20-8.18 (m, 2H) ), 8.01(d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.71(d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.46-7.44(m, 1H), 7.20(d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.93 (m, 1H), 6.89 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.73-6.70 (m, 1H), 6.57-6.56 (m, 1H), 6.17 (d, J =1.6 Hz, 1H), 4.06-4.02 (m, 2H), 3.45-3.41 (m, 3H), 3.29-3.26 (m, 2H), 3.19-3.16 (m, 1H), 3.04-3.01 (m, 1H), 2.81-2.69 (m, 2H), 2.49-2.43 (m, 2H), 2.22-2.19 (m, 1H), 1.98-1.96 (m, 4H), 1.96-1.92 (m, 4H), 1.85-1.82 (m, 1H), 1.76-1.73 (m, 3H), 1.47-1.44 (m, 3H), 1.41-1.35 (m, 4H), 0.96 (s, 3H), 0.93 (s, 3H).

실시예 58:

2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-((2R,5R)-4-((4'-클로로-5,5-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-N-((3-니트로-4-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)페닐)술포닐)벤즈아미드

실시예 58의 합성을 실시예 1의 합성 절차를 참조하여 수행하였으며, 여기서 단계 2에서, (R)-2-메틸피페라진을 (2R,5R)-2,5-디메틸피페라진 (합성은 문헌 [Organic Chemistry Frontiers, 5(23), 3402-3405; 2018]을 참조할 수 있음)으로 대체하여 목적 화합물 2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-((2R,5R)-4-((4'-클로로-5,5-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-N-((3-니트로-4-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)페닐)술포닐)벤즈아미드 58을 수득하였다.

MS m/z(ESI): 896 & 898 [M+1];

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 10.10 (s, 1H), 9.25 (s, 1H), 8.88 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.53-8.51 (m, 1H), 8.20 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.19-8.02 (m, 1H), 7.94 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.48-7.42 (m, 1H), 7.22 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.99-6.87 (m, 2H), 6.59-6.52 (m, 1H), 6.50-6.40 (m, 1H), 5.95 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 4.10 -4.01 (m, 2H), 3.70-3.60 (m, 2H), 3.47-3.37 (m, 2H), 3.33-3.21 (m, 2H), 3.19-3.03 (m, 2H), 2.59-2.50 (m, 2H), 2.39-2.31 (m, 2H), 1.97-1.90 (m, 3H), 1.82-1.71 (m, 2H), 1.46-1.33 (m, 3H), 1.28-1.20 (m, 3H), 1.25-1.15 (m, 4H), 1.02-1.00 (m, 2H), 0.95 (s, 3H), 0.93 (s, 3H).

실시예 59:

N-((4-((((S)-1,4-디옥산-2-일)메틸)아미노)-3-니트로페닐)술포닐)-2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-((3R,5R)-4-((4'-클로로-5,5-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메틸)-3,5-디메틸피페라진-1-일)벤즈아미드

실시예 59의 합성을 실시예 1의 합성 절차와 관련하여 수행하였으며, 여기서 단계 2에서, (R)-2-메틸피페라진을 (2R,6R)-2,6-디메틸피페라진으로 대체하여 목적 화합물 N-((4-((((S)-1,4-디옥산-2-일)메틸)아미노)-3-니트로페닐)술포닐)-2-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일)옥시)-4-((3R,5R)-4-((4'-클로로-5,5-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-[1,1'-비페닐]-2-일)메틸)-3,5-디메틸피페라진-1-일)벤즈아미드 59를 수득하였다.

MS m/z(ESI): 898 & 890 [M+1];

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.16 (s, 1H), 8.86 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.22-8.13 (m, 2H), 7.91 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.67-7.60 (m, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.23 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.93 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.88 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.60-6.48 (m, 2H), 5.94-5.90 (m, 1H), 3.97-3.85 (m, 2H), 3.85-3.74 (m, 2H), 3.67-3.60 (m, 2H), 3.55-3.29 (m, 3H), 3.13-3.02 (m, 2H), 2.79-2.70 (m, 2H), 2.69-2.59 (m, 2H), 2.24-2.15- (m, 2H), 2.12- 2.05 (m, 4H), 2.05-1.86 (m, 2H), 0.93-0.91 (m, 6H), 0.69 (s, 3H), 0.67 (s, 3H).

생물학적 시험

BCL-2 생물학적 활성의 억제 시험

형광 편광 검정을 사용하여 BCL-2의 생물학적 활성에 대한 본 발명의 화합물의 효과를 평가하였다.

실험 방법을 하기와 같이 요약하였다:

형광 편광의 원리에 기초한 친화도 검정 방법을 사용하여 백혈병 아폽토시스촉진 단백질 (BIM)에 대한 BCL-2의 결합 활성에 대한 화합물의 효과를 결정함으로써 BCL-2의 생물학적 활성에 대한 화합물의 효과를 평가하였다. 반응 완충제는 하기 성분을 포함하였다: PBS (pH 7.4, 3mM Na₂HPO₄, 155mM NaCl, 1mM KH₂PO₄), 1mM DTT; 인간 재조합 Bcl-2 단백질 (항목 번호 10195-H08E) (베이징 이퀴아오 셴조우 바이오테크놀로지 캄파니, 리미티드 (Beijing Yiqiao Shenzhou Biotechnology Co., Ltd.)로부터 구입함)을 반응 완충제로 5 nM로 희석하고; FITC-표지된 BIM 폴리펩티드 (난징 젠스크립트 바이오테크놀로지 캄파니, 리미티드 (Nanjing GenScript Biotechnology Co., Ltd.)로부터 구입함)를 반응 완충제로 5 nM로 희석하였다.

화합물을 100% DMSO 중에 용해시키고, 0.1, 1, 10 μM로 희석한 다음, DMSO로 0.0061, 0.061, 0.61 nM의 최소 농도로 4배 연속 희석하고, 각각의 농도 지점을 반응 완충제로 추가로 50배 희석하였다.

화합물을 함유하는 용액 3 μL 및 BCL-2를 함유하는 용액 12 μL을 흑색 384-웰 검정 플레이트에 첨가하고, 잘 혼합하고, 실온에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 후속적으로, FITC-BIM 용액 15 μL을 첨가하고, 반응 혼합물을 암실에서 실온에서 30분 동안 인큐베이션한 다음, 여기 파장으로서 480 nm 및 방출 파장으로서 535 nm을 사용하여 엔비전 다중-모드 판독기 (퍼킨 엘머(Perkin Elmer)) 상에서 형광 편광을 즉시 검출하였다. 이 실험에서, BCL-2 단백질이 없는 군을 음성 대조군 (100% 억제)으로서 사용하였고, BCL-2 단백질은 있지만 화합물은 없는 군을 양성 대조군 (0% 억제)으로서 사용하였다. BCL-2의 친화도에 대한 화합물의 억제 백분율을 하기 식을 사용하여 계산할 수 있다:

화합물의 IC₅₀을 XLfit (ID 비지니스 솔루션즈 리미티드 (ID Business Solutions Ltd.), 영국) 소프트웨어를 사용하여 하기 식에 의해 8개의 농도 포인트로부터 계산하였다:

Y=하단+(상단-하단)/(1+10^((logIC₅₀-X)*기울기 인자))

여기서 Y는 억제 백분율이고, X는 시험될 화합물의 농도의 로그이고, 하단은 최대 억제 백분율이고, 상단은 최소 억제 백분율이고, 기울기 인자는 곡선의 기울기 계수이다.

BCL-XL 생물학적 활성의 억제에 대한 시험

형광 편광 검정을 사용하여 BCL-XL의 생물학적 활성에 대한 본 발명의 화합물의 효과를 평가하였다.

실험 방법을 하기와 같이 요약하였다:

형광 편광의 원리에 기초한 친화도 검정 방법을 사용하여 BIM에 대한 BCL-XL의 결합 활성에 대한 화합물의 효과를 결정함으로써 BCL-XL의 생물학적 활성에 대한 화합물의 효과를 평가하였다. 반응 완충제는 하기 성분을 함유하였다: PBS (pH 7.4, 3mM Na₂HPO₄, 155mM NaCl, 1mM KH₂PO₄), 1mM DTT; 인간 재조합 Bcl-XL 단백질 (항목 번호 10455-H08E) (베이징 이퀴아오 셴조우 바이오테크놀로지 캄파니, 리미티드로부터 구입함)을 반응 완충제로 10 nM로 희석하고; FITC-표지된 BIM 폴리펩티드 (난징 젠스크립트 바이오테크놀로지 캄파니, 리미티드로부터 구입함)를 반응 완충제로 10 nM로 희석하였다.

화합물을 100% DMSO 중에 용해시키고, 1 μM로 희석한 다음, DMSO 중에서 0.061 nM의 최소 농도로 4배 연속 희석하고, 각각의 농도 지점을 반응 완충제로 추가로 50배 희석하였다.

화합물을 함유하는 용액 3 μL 및 BCL-XL을 함유하는 용액 12 μL을 흑색 384-웰 검정 플레이트에 첨가하고, 잘 혼합하고, 실온에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 후속적으로, FITC-BIM 용액 15 μL을 첨가하고, 반응 혼합물을 암실에서 실온에서 30분 동안 인큐베이션한 다음, 여기 파장으로서 480 nm 및 방출 파장으로서 535 nm을 사용하여 엔비전 다중-플레이트 판독기 (퍼킨 엘머) 상에서 형광 편광을 즉시 검출하였다. 이 실험에서, BCL-XL 단백질이 없는 군을 음성 대조군 (100% 억제)으로서 사용하였고, BCL-XL 단백질은 있지만 화합물은 없는 군을 양성 대조군 (0% 억제)으로서 추가하였다. BCL-XL의 친화도에 대한 화합물의 억제 백분율을 하기 식을 사용하여 계산할 수 있다:

화합물의 IC₅₀을 XLfit (ID 비지니스 솔루션즈 리미티드, 영국) 소프트웨어를 사용하여 하기 식에 의해 8개의 농도 포인트로부터 계산하였다:

Y=하단+(상단-하단)/(1+10^((logIC₅₀-X)*기울기 인자))

RS4;11 세포 (급성 림프모구성 백혈병 세포)의 절반 유효 억제 농도 IC₅₀의 결정

RS4;11 세포의 증식에 대한 본 발명의 화합물의 효과를 발광 세포 생존율 검정을 사용하여 평가하였다.

실험 방법을 하기와 같이 요약하였다:

셀틸터-글로 (CellTilter-Glo, CTG) 검정 키트를 사용하여, 독특하고 고도로 민감하며 안정한 루시페라제를 통해, 살아있는 세포의 대사의 핵심 지표인 ATP를 검출하였다. 검정에서 생성된 발광 신호는 배지 중 생존 세포의 수에 비례하며, 따라서 RS4;11의 세포 증식을 결정할 수 있다.

셀틸터-글로 시약 (프로메가, G7572)은 셀틸터-글로 동결건조된 분말 및 셀틸터-글로 완충제로 구성되고, 동결건조된 분말은 사용을 위해 완충제 중에 용해될 수 있다.

RS4;11 세포 (ATCC, CRL-1873)를 10% FBS (GBICO, 10099-141) 및 100 유닛/ml 페니실린-스트렙토마이신 용액 (써모피셔, 15140122)을 함유하는 RPMI1640 완전 배지 (써모피셔, 72400-047) 중에서 배양하고, 세포가 배양 용기의 80-90%를 덮을 때, 이들을 0.25% 트립신 (EDTA 함유) (써모피셔, 25200056)으로 소화시키고, 분산시킨 다음, 백색 384-웰 플레이트 (써모피셔, 164610)로 옮기고, 384-웰 플레이트를 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 밤새 인큐베이션하였다. 화합물을 100% DMSO 중에 용해시키고, 5 mM로 희석한 다음, DMSO로 0.061 μM의 최소 농도로 4배 연속 희석하고, 각각의 농도 지점을 FBS-무함유 RPMI1640 배지로 추가로 50배 희석하였다. 화합물의 IC₅₀가 매우 낮은 경우, 화합물의 초기 농도를 감소시킬 수 있다. 하룻밤 후, 배지 중에 희석된 화합물 3 μL을 각 웰에 첨가하고, 혼합물을 서서히 원심분리하여 혼합하였다. 세포가 없는 군을 음성 대조군 (100% 억제)으로서 사용하고, 0.2% DMSO 포함 군을 양성 대조군 (0% 억제)으로서 사용하였다. 384-웰 플레이트를 추가의 배양을 위해 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에 두었다. 48시간 후, 플레이트를 꺼내고, 실온으로 평형화시켰다. 15 μl의 CTG 시약을 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 3분 동안 부드럽게 진탕시켜 세포 용해가 완전히 수행되도록 한 다음, 플레이트를 10분 동안 유지시켜 발광 신호를 안정화시킨 다음, 발광 신호를 엔비전 (퍼킨 엘머)에 의해 판독하였다.

RS4;11 세포 증식에 대한 화합물의 억제 백분율은 하기 식을 사용하여 계산될 수 있다:

억제 백분율 = 100-100*(화합물 신호-음성 대조군 신호)/(양성 대조군 신호-음성 대조군 신호)

Y=하단+(상단-하단)/(1+10^((LogIC₅₀-X)*기울기 인자))

여기서 Y는 억제 백분율이고, 하단은 곡선의 하단 플래토 (S-형상 곡선의 하단 플래토 값)이고, 상단은 곡선의 상단 플래토 (S-형상 곡선의 상단 플래토 값)이고, X는 시험될 화합물의 농도의 로그이다.

상기 언급된 시험관내 BCL-2 및 BCL-XL 단백질 활성 검정의 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

세포 실험의 결과를 표 2에 나타내었다.

표 1: BCL-2 및 BCL-XL 단백질 활성의 검출 결과

표 2: RS4;11 세포 검정 결과

상기 시험 결과로부터 본 발명의 실시예의 화합물이 BCL-2의 활성을 효과적이고 선택적으로 억제할 수 있지만, BCL-XL에 대해서는 약한 억제를 갖는다는 것을 알 수 있다. 이들 화합물은 BCL-2 패밀리 단백질의 비정상적 과다발현에 의해 유발된 다양한 암: 혈액 악성종양 (특히 급성 림프모구성 백혈병), 폐암, 유방암, 난소암, 직장암, 전립선암, 췌장암, 뇌 신경교종을 치료하는 데 사용될 수 있다. BCL-XL 억제에 의해 유발된 독성 부작용, 예컨대 혈소판감소증을 피할 수 있었다. 일부 화합물은 또한 RS4; 11 급성 림프구 증식을 효과적으로 억제할 수 있고, 악성 혈액 질환, 예컨대 급성 림프모구성 백혈병에 대한 강한 억제 효과를 갖는다.

본 개시내용은 상기 기재된 예시적 실시양태로 제한되지 않으며, 본 개시내용의 본질적인 특징으로부터 벗어나지 않으면서 다른 구체적 형태로 실현될 수 있음이 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 따라서, 이들 실시양태는 모든 측면에서 예시적이고 비제한적인 것으로 간주되고, 상기 기재된 실시양태보다는 첨부된 청구범위를 참조해야 하고, 청구범위의 등가의 의미 및 범주 내의 모든 변화가 본 출원의 보호 범주에 포함되는 것으로 의도된다.

Claims

하기 화학식 (I)의 화합물 및 그의 이성질체, 전구약물, 용매화물, 안정성 동위원소 유도체 또는 제약상 허용되는 염:

여기서
X¹은 N, O, S로부터 선택된 1 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 임의로 치환된 6-원 포화 헤테로시클릭 기로부터 선택되고, 여기서 임의적인 치환기는 N, O 및 S로부터 선택된 1 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 4-원 포화 헤테로시클릭 기로부터 선택되고; 바람직하게는, X¹은 N, O로부터 선택된 1 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 임의로 치환된 6-원 포화 헤테로시클릭 기로부터 선택되고, 여기서 임의적인 치환기는 옥세타닐로부터 선택되고; 추가로 바람직하게는, X¹은 1,4-디옥사닐, 테트라히드로피라닐, N-옥세타닐 피페리디닐, N-옥세타닐모르폴리닐로부터 선택되고; 가장 바람직하게는, X¹은 (S)-1,4-디옥산-2-일, (R)-1,4-디옥산-2-일, 테트라히드로피란-4-일, 1-(옥세탄-3-일)피페리딘-4-일, (S)-4-(옥세탄-3-일)모르폴린-2-일로부터 선택되고;
X²는 1 또는 2개의 N 원자를 함유하는 5-6원 헤테로시클릴렌 기로부터 선택되고, 여기서 헤테로시클릴렌 기의 고리는 1 또는 2개의 C1-C4 알킬 기에 의해 임의로 치환될 수 있고; 바람직하게는, X²는 1 또는 2개의 N 원자를 함유하는 6원 헤테로시클릴렌 기로부터 선택되고, 여기서 헤테로시클릴렌 기의 고리는 1 또는 2개의 C1-C4 알킬 기에 의해 임의로 치환될 수 있고; 추가로 바람직하게는, X²는
로부터 선택되고, 여기서 고리는 1개의 C1-C4 알킬에 의해 임의로 치환될 수 있고; 가장 바람직하게는, X²는
로부터 선택되고;
R⁰은 수소, 할로겐으로부터 선택되고; 바람직하게는, R⁰은 수소, 플루오린, 염소로부터 선택되고; 가장 바람직하게는, R⁰은 수소, 플루오린으로부터 선택되고;
R¹, R², R³, R⁴는 각각 독립적으로 수소, C1-C6 알킬로부터 선택되고, 여기서 R¹ 및 R² 또는 R³ 및 R⁴는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 3-6원 시클로알킬을 형성할 수 있고; 바람직하게는, R¹, R², R³, R⁴는 각각 독립적으로 수소, C1-C4 알킬로부터 선택되고, 여기서 R¹ 및 R² 또는 R³ 및 R⁴는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 3-4원 시클로알킬을 형성할 수 있고; 보다 바람직하게는, R¹, R², R³, R⁴는 각각 독립적으로 수소 또는 메틸로부터 선택되고, R¹, R², R³, R⁴는 모두 수소는 아니고, 여기서 R¹ 및 R² 또는 R³ 및 R⁴는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 조합되어 시클로프로필 기를 형성할 수 있고; 가장 바람직하게는, R¹, R², R³, R⁴는 각각 독립적으로 수소 또는 메틸로부터 선택되고, R¹, R², R³, R⁴는 모두 수소는 아니고, 여기서 R³ 및 R⁴는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 시클로프로필 기를 형성할 수 있다.
제1항에 있어서,
X¹이 N, O로부터 선택된 1 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 임의로 치환된 6-원 포화 헤테로시클릭 기로부터 선택되고, 여기서 임의적인 치환기는 옥세타닐 기로부터 선택되고;
X²는 1 또는 2개의 N 원자를 함유하는 6-원 헤테로시클릴렌 기로부터 선택되고; 여기서, 6-원 헤테로시클릴렌 기의 고리는 1 또는 2개의 C1-C4 알킬 기에 의해 임의로 치환될 수 있고;
R⁰은 수소, 할로겐으로부터 선택되고;
R¹, R², R³, R⁴는 각각 독립적으로 수소, C1-C4 알킬로부터 선택되고, 여기서 R¹ 및 R² 또는 R³ 및 R⁴는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 3- 내지 4-원 시클로알킬 기를 형성할 수 있는 것인
화학식 (I)의 화합물 및 그의 이성질체, 전구약물, 용매화물, 안정성 동위원소 유도체 또는 제약상 허용되는 염.
제1항에 있어서,
X¹이 N, O로부터 선택된 1 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 임의로 치환된 6-원 포화 헤테로시클릭 기로부터 선택되고, 여기서 임의적인 치환기는 옥세타닐 기로부터 선택되고;
X²는
이고; 여기서 X²의 고리는 1개의 C1-C4 알킬 기에 의해 임의로 치환될 수 있고;
R⁰은 수소, 플루오린, 염소로부터 선택되고;
R¹, R², R³, R⁴는 각각 독립적으로 수소, C1-C4 알킬로부터 선택되고, 여기서 R¹ 및 R² 또는 R³ 및 R⁴는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 3- 내지 4-원 시클로알킬 기를 형성할 수 있는 것인
화학식 (I)의 화합물 및 그의 이성질체, 전구약물, 용매화물, 안정성 동위원소 유도체 또는 제약상 허용되는 염.
제1항에 있어서,
X¹이 1,4-디옥사닐, 테트라히드로피라닐, N-옥세타닐피페리디닐, N-옥세타닐모르폴리닐로부터 선택되고;
X²는
이고; 여기서 X²의 고리는 1개의 C1-C4 알킬 기에 의해 임의로 치환될 수 있고;
R⁰은 수소, 플루오린, 염소로부터 선택되고;
R¹, R², R³, R⁴는 각각 독립적으로 수소 또는 메틸로부터 선택되고, R¹, R², R³, R⁴는 모두 수소는 아니며, 여기서 R¹ 및 R² 또는 R³ 및 R⁴는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 시클로프로필 기를 형성할 수 있는 것인
화학식 (I)의 화합물 및 그의 이성질체, 전구약물, 용매화물, 안정성 동위원소 유도체 또는 제약상 허용되는 염.
제1항에 있어서,
X¹이 1,4-디옥사닐, 테트라히드로피라닐, N-옥세타닐피페리디닐, N-옥세타닐모르폴리닐로부터 선택되고;
X²는
로부터 선택되고;
R⁰은 수소, 플루오린으로부터 선택되고;
R¹, R², R³, R⁴는 각각 독립적으로 수소 또는 메틸로부터 선택되고, R¹, R², R³, R⁴는 모두 수소는 아니며, 여기서 R¹ 및 R² 또는 R³ 및 R⁴는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 시클로프로필 기를 형성할 수 있는 것인
화학식 (I)의 화합물 및 그의 이성질체, 전구약물, 용매화물, 안정성 동위원소 유도체 또는 제약상 허용되는 염.
제1항에 있어서,
X¹이 (S)-1,4-디옥산-2-일, (R)-1,4-디옥산-2-일, 테트라히드로피란-4-일, 1-(옥세탄-3-일)피페리딘-4-일, (S)-4-(옥세탄-3-일)모르폴린-2-일로부터 선택되고;
X²는
로부터 선택되고;
R⁰은 수소, 플루오린으로부터 선택되고;
R¹, R², R³, R⁴는 각각 독립적으로 수소 또는 메틸로부터 선택되고, R¹, R², R³, R⁴는 모두 수소는 아니며, 여기서 R³ 및 R⁴는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 시클로프로필 기를 형성할 수 있는 것인
화학식 (I)의 화합물 및 그의 이성질체, 전구약물, 용매화물, 안정성 동위원소 유도체 또는 제약상 허용되는 염.
제1항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식 (I)의 화합물 및 그의 이성질체, 전구약물, 용매화물, 안정성 동위원소 유도체 또는 제약상 허용되는 염:
BCL-2 억제제로서 사용하기 위한 의약의 제조에서의 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 이성질체, 전구약물, 용매화물, 안정성 동위원소 유도체 또는 제약상 허용되는 염의 용도.
BCL-2 매개 질환, 예컨대 종양, 예를 들어 혈액 악성종양, 예컨대 급성 림프모구성 백혈병, 폐암, 유방암, 난소암, 직장암, 전립선암, 췌장암, 신경교종의 치료 또는 예방을 위한 의약의 제조에서의 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 이성질체, 전구약물, 용매화물, 안정성 동위원소 유도체 또는 제약상 허용되는 염의 용도.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 이성질체, 전구약물, 용매화물, 안정성 동위원소 유도체 또는 제약상 허용되는 염, 임의로 1종 이상의 다른 BCL-2 억제제, 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 및 부형제를 포함하는 제약 조성물.