ES2623393T3 - Identificación de la forma extracelular de PTEN que puede usarse para tratar tumores - Google Patents

Identificación de la forma extracelular de PTEN que puede usarse para tratar tumores Download PDF

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ES2623393T3 ES10744058.8T ES10744058T ES2623393T3 ES 2623393 T3 ES2623393 T3 ES 2623393T3 ES 10744058 T ES10744058 T ES 10744058T ES 2623393 T3 ES2623393 T3 ES 2623393T3
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Abstract

Un polipéptido aislado, cuya secuencia consta de la secuencia de restos de aminoácidos 1 a 576 de SEQ ID NO: 1 para su uso en el tratamiento de un tumor sólido.

Description

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Un método para inducir la apoptosis de una célula epitelial vascular de un vaso sanguíneo en un tumor sólido en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad de una fosfatasa humana y un polipéptido largo homólogo de tensina (PTEN-largo) que comprende los restos de aminoácidos consecutivos que tienen la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 1, o un fragmento (no reivindicado) de la misma que comprende los restos 22 a 516 de SEQ ID NO: 1, o un análogo de la misma que comprende los restos de aminoácidos consecutivos que tienen la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 5, eficaz para inducir la apoptosis de la célula epitelial vascular en el vaso sanguíneo en el tumor sólido en el sujeto.
En una realización de los métodos descritos en el presente documento el tumor es un tumor canceroso. En una realización de los métodos descritos en el presente documento el tumor canceroso es un tumor de las células gliales, próstata, ovarios, útero, endometrio, mama, melanocitos, riñón, pulmón, colon, cabeza, cuello o páncreas del sujeto.
En una realización de los métodos descritos en el presente documento el tumor canceroso está activado por PTEN o por una ruta de PI3K o es negativo a PTEN.
En una realización de los métodos descritos en el presente documento el PTEN-largo, o análogo del mismo, o el fragmento de PTEN-largo, se administra al sujeto por introducción directa en el tumor sólido. En una realización de los métodos descritos en el presente documento el PTEN-largo, o el análogo del mismo, o el fragmento de PTENlargo se inyecta en el tumor sólido. En una realización de los métodos descritos en el presente documento el PTENlargo, o el análogo del mismo, o el fragmento de PTEN-largo se introduce directamente en el tumor sólido mediante un catéter. En una realización de los métodos descritos en el presente documento, el PTEN-largo, o el análogo del mismo, o el fragmento de PTEN-largo se administra al sujeto mediante introducción directa en un vaso sanguíneo proporcionándolo al tumor sólido. En una realización de los métodos descritos en el presente documento el PTENlargo, o el análogo del mismo, o el fragmento de PTEN-largo se inyecta en el vaso sanguíneo proporcionándolo al tumor sólido. En una realización de los métodos descritos en el presente documento el PTEN largo, o el análogo del mismo, o el fragmento de PTEN-largo se introduce directamente mediante un catéter en el vaso sanguíneo que se proporciona al tumor sólido. En una realización de los métodos descritos en el presente documento el PTEN-largo, o el análogo del mismo, o el fragmento de PTEN-largo, se administra al sujeto por vía intravenosa. En una realización de los métodos descritos en el presente documento, el PTEN-largo, o el análogo del mismo, o el fragmento de PTEN-largo se administra al sujeto por vía subcutánea.
(No reivindicado:)
Un método para el tratamiento de un tumor sólido en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad de un vector de expresión que codifica fosfatasa humana y un polipéptido largo homólogo de tensina (PTEN-largo) que comprende la SEQ ID NO: 1, o un fragmento de la misma que comprende los restos 22 a 516 de SEQ ID NO: 1, o un análogo de la misma que comprende SEQ ID NO: 5, para expresar PTEN-largo, el fragmento de PTEN-largo o el análogo del mismo, en células del tumor sólido en una cantidad eficaz para tratar el tumor sólido en un sujeto.
Una fosfatasa humana y un polipéptido largo homólogo de tensina (PTEN-largo) que comprende la SEQ ID NO: 1 o un fragmento (no reivindicado) de la misma que comprende los restos 22 a 516 de SEQ ID NO: 1, o un análogo de la misma que comprende SEQ ID NO: 5 para su uso en el tratamiento de un tumor sólido en un sujeto, para la inhibición del crecimiento de un tumor sólido en un sujeto, para inducción de la apoptosis de una célula epitelial vascular en un tumor sólido en un sujeto o para inhibir la angiogénesis en un tumor sólido en un sujeto.
En una realización del compuesto para los usos descritos en el presente documento el tumor es un tumor canceroso. En una realización de los métodos descritos en el presente documento, el tumor canceroso es un tumor glial, de próstata, de mama, de endometrio, de melanocitos, de riñón o de pulmón.
En una realización del compuesto para los usos descritos en el presente documento el tumor canceroso se activa por PTEN mediante una ruta PI3K o es negativo a PTEN.
Una composición que comprende la fosfatasa humana y el polipéptido largo homólogo de tensina (PTEN-largo) que comprende SEQ ID NO: 1, o un fragmento de la misma que comprende los restos 22 a 516 de SEQ ID NO: 1, o un análogo de la misma que comprende SEQ ID NO: 5, unido a un agente no peptídico que aumenta la semivida plasmática de PTEN-largo, fragmento de PTEN-largo o el análogo de los mismos respectivamente.
En una realización, las composiciones descritas en el presente documento comprenden adicionalmente un transportador farmacéutico. En una realización de las composiciones descritas en el presente documento el agente no peptídico que aumenta la semivida plasmática es polietilenglicol (PEG). En una realización de las composiciones descritas el PEG está unido a un extremo C o a un extremo N de PTEN-largo, fragmento de PTEN-largo o el análogo de los mismos. En una realización de las composiciones descritas el agente no peptídico que aumenta la semivida plasmática es 9-fluorenilmetil cloroformiato (Fmoc) o (7-sulfo)-9-fluorenilmetoxicarbonilo.
(No reivindicado:)
Un ácido nucleico aislado que codifica una fosfatasa humana y un polipéptido largo homólogo de tensina (PTENlargo) comprende SEQ ID NO: 1, o que codifica un fragmento de la misma que comprende los restos 22 a 516 de 5 SEQ ID NO: 1, o que codifica un análogo de la misma que comprende SEQ ID NO: 5.
(No reivindicado:)
En una realización el ácido nucleico comprende los nucleótidos consecutivos que tienen la secuencia expuesta en
10 SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 6. En una realización el ácido nucleico comprende los restos de nucleótidos consecutivos 503 a 2243 de la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 6. En una realización el ácido nucleico comprende nucleótidos consecutivos que tienen la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 7. En una realización el ácido nucleico comprende los restos de nucleótidos consecutivos 503 a 2243 de la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 7. En una realización el ácido nucleico es ARN. En una realización el
15 ácido nucleico es ADN. En una realización el ácido nucleico es ADNc.
(No reivindicado:)
Un vector de expresión que comprende un ácido nucleico que codifica fosfatasa humana y polipéptido largo
20 homólogo de tensina (PTEN-largo) que comprende SEQ ID NO: 1, o un fragmento de la misma que comprende los restos 22 a 516 de SEQ ID NO: 1, o un análogo de la misma que comprende SEQ ID NO: 5.
(No reivindicado:)
25 Una célula transformada que puede expresar la fosfatasa humana y el polipéptido largo homólogo de tensina (PTEN-largo) que comprende SEQ ID NO: 1, o un fragmento de la misma que comprende los restos 22 a 516 de SEQ ID NO: 1, o un análogo de la misma que comprende SEQ ID NO: 5, en el que la célula tiene integrado en su genoma un ADN recombinante que codifica PTEN-largo o un análogo del mismo.
30 (No reivindicado:)
Una célula hospedadora que puede expresar la fosfatasa humana y el polipéptido largo homólogo de tensina (PTENlargo) que comprende SEQ ID NO: 1, o un fragmento de la misma que comprende los restos 22 a 516 de SEQ ID NO: 1, o un análogo de la misma que comprende SEQ ID NO: 5, en el que la célula hospedadora comprende un
35 plásmido que codifica PTEN-largo o un análogo del mismo.
(No reivindicado:)
En una realización la célula hospedadora es una célula bacteriana. En una realización la célula hospedadora es una 40 célula de mamífero.
Un proceso que comprende mezclar (1) fosfatasa humana y polipéptido largo homólogo de tensina (PTEN-largo) que comprende SEQ ID NO: 1, o un fragmento de la misma que comprende los restos 22 a 516 de SEQ ID NO: 1, o un análogo de la misma que comprende SEQ ID NO: 5, y (2) un agente no peptídico que aumenta la semivida
45 plasmática de PTEN-largo o el análogo del mismo, para preparar PTEN-largo que comprende SEQ ID NO: 1, o el fragmento del mismo que comprende los restos 22 a 516 de SEQ ID NO: 1, o el análogo del mismo que comprende SEQ ID NO: 5, unido al agente no peptídico que aumenta la semivida plasmática del PTEN-largo, fragmento de PTEN-largo o análogo de los mismos respectivamente.
50 (No reivindicado:)
Una molécula de ácido nucleico aislada que consta de al menos un fragmento de 20 nucleótidos de la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 6 o un complemento de las mismas que se hibrida específicamente en condiciones rigurosas con un complemento de la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 6,
55 o conSEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 6.
(No reivindicado:)
Un anticuerpo aislado, o fragmento del mismo, en el que el anticuerpo o fragmento del mismo se une a (1)
60 polipéptido PTEN-largo que comprende los restos de aminoácido 1-173 de SEQ ID NO: 1 o (2) un análogo de la misma que comprende SEQ ID NO: 5 o (3) los aminoácidos que tienen la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 3 o (4) un fragmento de PTEN-largo que comprende los restos 22 a 516 de SEQ ID NO: 1.
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En una realización el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal. En una realización el anticuerpo es un fragmento de anticuerpo. En una realización el fragmento de anticuerpo es Fab, Fab’, F(ab’)2 o fragmento Fv. En una realización el fragmento de anticuerpo es un anticuerpo monocatenario. En una realización el anticuerpo es un anticuerpo humanizado.
(No reivindicado:)
Un anticuerpo aislado o fragmento del mismo, en el que el anticuerpo o fragmento del mismo se une a un epítopo conformacional de PTEN-largo, en el que PTEN largo comprende la secuencia expuesta en los restos 1-173 de SEQ ID NO: 1, pero en el que el anticuerpo no se une a PTEN.
(No reivindicado:)
En una realización el anticuerpo se une a un epítopo que comprende cualquiera de los restos 153-173 de SEQ ID NO: 1.
(No reivindicado:)
Un anticuerpo aislado o fragmento del mismo, en el que el anticuerpo o fragmento del mismo se une a un epítopo de un PTEN-largo, en el que el PTEN-largo comprende la secuencia expuesta en los restos 1-173 de SEQ ID NO: 1, pero en el que el anticuerpo no se une a PTEN.
(No reivindicado:)
En una realización el anticuerpo se une a los restos 153-173, o a una parte de los mismos, de SEQ ID NO: 1.
(No reivindicado:)
Un fragmento peptídico de SEQ ID NO: 1, o SEQ ID NO: 5, cuyo fragmento tiene una actividad antitumoral, antiangiogénica o antiapoptótica. En una realización el péptido comprende 5-10, 10-20, 20-30 o 30-40 aminoácidos. En una realización el péptido comprende los aminoácidos 1-173 de SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 5. En una realización el péptido comprende los restos de aminoácidos consecutivos 22 a 516 de SEQ ID NO: 1. En una realización el péptido no comprende los restos de aminoácido consecutivos 174 a 576 de SEQ ID NO: 1 ni SEQ ID NO: 5.
Como se usa en el presente documento, una cantidad “profilácticamente eficaz” de una sustancia es una cantidad efectiva para prevenir o retrasar la aparición de una afección patológica determinada en un sujeto al cual se le administra la sustancia.
Como se usa en el presente documento, una cantidad “terapéuticamente eficaz” de una sustancia es una cantidad eficaz para tratar, mejorar o disminuir un síntoma o causa de una afección patológica determinada en un sujeto que padece la misma, sujeto al que se le administra la sustancia.
En una realización, la cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz es de aproximadamente 1 mg de agente/sujeto a aproximadamente 1 g de agente/sujeto por dosificación. En otra realización, la cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz es de aproximadamente 10 mg de agente/sujeto a 500 mg de agente/sujeto. En una realización adicional, la cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz es de aproximadamente 50 mg de agente/sujeto a 200 mg de agente/sujeto. En una realización adicional, la cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz es de aproximadamente 100 mg de agente/sujeto. En otra realización adicional más, la cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz se selecciona de 50 mg de agente/sujeto, 100 mg de agente/sujeto, 150 mg de agente/sujeto, 200 mg de agente/sujeto, 250 mg de agente/sujeto, 300 mg de agente/sujeto, 400 mg de agente/sujeto y 500 mg de agente/sujeto.
“Administración” de un agente puede efectuarse o realizarse usando cualquiera de los diversos métodos y sistemas de suministro conocidos por el experto en la técnica. La administración puede ser, por ejemplo, intravenosa, oral, nasal, intraperitoneal, mediante el líquido cefalorraquídeo, mediante implante, transmucosa, transdérmica, intramuscular, intravascular, intraarterial, intracoronaria, intramiocárdica o subcutánea.
La expresión “análogo de PTEN-largo” incluye polipéptidos que tienen uno o más aminoácidos modificados, pero que conservan al menos 90 % de similitud de secuencia con SEQ ID NO: 1, y que conservan o mejoran la actividad de la inhibición del crecimiento tumoral medida mediante el estudio in vivo descrito a continuación en el presente documento. El propio PTEN (es decir el polipéptido definido solo por los restos 174-576 de SEQ ID NO: 1) se excluye expresamente.
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Bowen y enfermedad de Paget; cáncer de hígado; cáncer de pulmón; linfomas, incluyendo enfermedad de Hodgkin y linfomas linfocíticos; neuroblastomas; cáncer oral, incluyendo carcinoma de células escamosas; cáncer de ovario, incluyendo los que surgen de células epiteliales, células estromales, células germinales y células mesenquimáticas; cáncer de páncreas; cáncer de próstata; cáncer colorrectal; sarcomas, incluyendo leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, liposarcoma, fibrosarcoma y osteosarcoma; cáncer de piel, incluyendo melanoma, sarcoma de Kaposi, cáncer basocelular y cáncer de células escamosas; cáncer testicular, incluyendo tumores germinales (seminoma, no seminoma [teratomas, coriocarcinomas]), tumores estromales y tumores de células germinales; cáncer tiroideo, incluyendo adenocarcinoma tiroideo y carcinoma medular; y cáncer renal incluyendo adenocarcinoma y tumor de Wilms, pero excluye tumores de tejidos no sólidos tales como leucemias y otros neoplasmas hematológicos, incluyendo leucemia linfocítica aguda y mielógena; mieloma múltiple; leucemias asociadas con SIDA y linfoma de leucemia de linfocitos T adultos.
La SEQ ID NO: 1 del listado de secuencias es la secuencia de la proteína PTEN-largo de longitud completa. Los restos de aminoácidos 1 a 173 de SEQ ID NO: 1 representan los nuevos restos de PTEN-largo que están codificados por la secuencia de ARNm de la ATR 5’ (véase la descripción de SEQ ID NO: 2 más adelante). La metionina iniciadora canónica de PTEN es el resto de aminoácido 174 de SEQ ID NO: 1.
La SEQ ID NO: 2 es la secuencia de ARNm de PTEN-largo de longitud completa. La secuencia ATR 5’ de PTENlargo comienza en el nucleótido 513 de SEQ ID NO: 2, el codón de inicio CUG no canónico y finaliza en el nucleótido 1031 de SEQ ID NO: 2. La ATR 5’ está en fase con la fase de lectura abierta de PTEN, que comienza en el codón de inicio AUG canónico en el nucleótido 1032 de SEQ ID NO: 2 y acaba en el nucleótido 2243 de SEQ ID NO: 2. Por tanto, la fase de lectura abierta de PTEN-largo se extiende desde el nucleótido 513 de SEQ ID NO: 2 al nucleótido 2243 de SEQ ID NO: 2 y conduce a la adición de 173 aminoácidos en el extremo N de PTEN. La proteína se denomina PTEN-largo.
SED ID NO: 3 es el ADNc que corresponde a la secuencia de ARNm de PTEN-largo de longitud completa.
SEQ ID NO: 4 es el péptido de la secuencia de la proteína PTEN-largo que comprende los restos de aminoácido 153 a 173 de SEQ ID NO: 1. Este único péptido representa un único epítopo procedente de PTEN-largo que no se encuentra en PTEN.
SEQ ID NO: 5 es una secuencia de proteína análoga de PTEN-largo de longitud completa. El resto de aminoácido 1 de PTEN-largo se ha cambiado de Leu a Met en el análogo para aumentar las producciones de la proteína.
SEQ ID NO: 6 es la secuencia de ARNm análoga de PTEN-largo de longitud completa modificada. La secuencia ATR 5’ del análogo de PTEN-largo comienza en el nucleótido 513 de SEQ ID NO: 6 en el codón de inicio AUG modificado por ingeniería genética, y finaliza en el nucleótido 1031 de SEQ ID NO: 6.
SEQ ID NO: 7 es el ADNc modificado correspondiente a la secuencia de ARNm análoga de PTEN-largo de longitud completa modificado.
Cuando se da un intervalo en la memoria descriptiva, se entiende que el intervalo incluye todos los números enteros y 0,1 unidades dentro de ese intervalo, y cualquier subintervalo de los mismos. Por ejemplo, un intervalo de 77 a 90 % incluye 77,0 %, 77,1 %, 77,2 %, 77,3 %, 77,4 %, 77,5 %, 77,6 %, 77,7 %, 77,8 %, 77,9 %, 80,0 %, 80,1 %, 80,2 % 80,3 %, 80,4 %, 80,5 %, 80,6 %, 80,7 %, 80,8 %, 80,9 % y 90,0 %, así como el intervalo de 80 % a 81,5 %, etc.
La presente invención se entenderá mejor con referencia a los detalles experimentales a continuación.
Detalles experimentales
El supresor tumoral PTEN es uno de los genes más comúnmente alterados en cáncer. Funciona como una fosfatasa lipídica de fosfatidilinositol 3,4,5-trifosfato que a su vez suprime la señalización oncogénica de la fosfatidilinositol 3quinasa (PI3K) y Akt. La inspección del ARNm de PTEN reveló que la región no traducida (UTR) 5’ está en fase con la fase de lectura abierta (ORF) de PTEN por 770 pb. Dentro de esta ORF UTR, hay un codón de inicio CUG alternativo dentro de una secuencia Kozak débil cadena arriba de 513 pares de bases del codón de inicio AUG canónico. Aunque la expresión de la ORF de PTEN canónica genera una proteína que migra a aproximadamente 55 kDa, la expresión del ADNc de PTEN que contiene la UTR 5’ puede generar una segunda proteína de 70 kDa denominada PTEN-larga. La mutación de los sitios de inicio indica que la PTEN de 55 kDa está generada a partir de la traducción del codón de inicio canónico mientras que el PTEN-largo se inicia desde el sitio de inicio alternativo cadena arriba. La inmunotransferencia con diferentes anticuerpos PTEN demuestran la presencia endógena de PTEN largo en líneas celulares múltiples. Estudios knockdown y knockout en células SE de ratón confirmaron que esta proteína más larga era de hecho PTEN. La secuencia de la proteína N terminal añadida codificaba un péptido de señal y sitio de escisión, indicando que PTEN-largo entra en la ruta secretora. PTEN-largo se une preferentemente a la lectina concanavalina A, demostrando que está glucosilada. Además, PTEN-largo puede purificarse de medios acondicionados mediante purificación por afinidad usando tanto un anticuerpo contra PTEN
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Resultados
El ARNm de PTEN tiene un sitio de partida de inicio alternativo cadena arriba.
El ARNm de PTEN depositado en NCBI (Li y Sun 1997, Steck, Pershouse et al. 1997) contiene una UTR 5’ extensiva. Aproximadamente 770 pb de secuencia continua en la región UTR 5’ está en fase con el codón de inicio. En esta región no están codificadas metioninas; sin embargo, hay diversos codones CUG de inicio alternativos que comienzan en -519 desde el codón de inicio canónico. La traducción de esta secuencia no reveló dominios identificables de acuerdo con el scansite (scansite.mit.edu) y prosite (www.ebi.ac.uk/ppsearch). La traducción de toda esta región añadiría 173 aminoácidos a PTEN aumentando su masa molecular a aproximadamente 70 kilodalton (Figura 2 y SEQ ID NO: 1).
El alineamiento de otros ortólogos de PTEN reveló que la secuencia traducida de la UTR de Homo sapiens puede encontrarse en las fases de lectura abierta de PTEN de diversas especies. Pan troglodytes, Bos taurus, Apis mellifera y Caenorhabditis elegans todos contienen homólogo de secuencia de proteína del producto traducido de la UTR 5’ de Homo sapiens (Figura 3). Adicionalmente, el alineamiento de la UTR 5’ de Homo sapiens y de la UTR 5’ de PTEN de Mus musculus mostró una amplia homología de nucleótidos (no mostrada). La UTR 5’ de Mus musculus se tradujo en fase con el codón de inicio canónico para 522 pares de bases y reveló una secuencia de proteína altamente homóloga cuando se comparó con la traducción de la UTR 5’ de Homo sapiens (Figura 5.3). La homología de la UTR 5’ y la presencia real de la secuencia de aminoácidos precedente de la UTR 5’ de Homo sapiens en las proteínas traducidas de otras especies es indicativa de la importancia evolutiva de esta secuencia.
El ARNm de PTEN puede iniciar la traducción de un sitio cadena arriba alternativo. La sobreexpresión de la ORF de PTEN generó una única banda de proteína a 55 kDa. La inclusión de la UTR 5’ dio como resultado una segunda banda de proteína más grande de aproximadamente 70 kDa. Una banda de proteína más grande en inmunotransferencias de PTEN también estaba presente en diversas líneas celulares endógenamente y fue detectable por anticuerpos monoclonales diferentes (Figura 4). Esta banda de proteína más larga también estaba presente en células ES de tipo silvestre de ratón y no estaba en células ES de ratón knockout de PTEN y disminuyó en clones ES de ratón que expresaban establemente el ARNhc de PTEN (Figura 4). El knockdown de la proteína PTEN humana en células HEK293 usando ARNic también causó un knockdown de la proteína de 70 kDa.
Expresión de un plásmido que codifica la ORF de PTEN en la línea celular PC3 PTEN nula dio como resultado la generación de una proteína de 55 kDa. Cuando los plásmidos que también codificaban la UTR 5’ se sobreexpresaban, se producía una proteína de 70 kDa. La mutación del supuesto codón de inicio cadena arriba de CTG a ATG (Figura 1, “ATG/ATG”) cambió predominantemente el patrón de inmunotransferencia a la forma de 70 kDa (Figura 4). La banda de 55 kDa también se confirmó como originaria desde el codón de inicio ATG por mutagénesis (Figura 4 “CTG/ATA”).
Por tanto, la UTR 5’ fue suficiente para iniciar la traducción de una forma más larga de PTEN. Por consiguiente, la UTR 5’ se denominó ATR 5’ por Región Alternativamente Traducida y la proteína más larga se denominó “PTENlargo”.
Se generó un anticuerpo policlonal purificado por afinidad contra aminoácidos traducidos desde la ATR 5’ y se usó para confirmar la producción de PTEN-larga recombinante en estudios de sobreexpresión así como la forma endógena en células HEK293 (Figura 4). A partir de toda de la inmunotransferencia del lisado de células completas de células HEK293 y de estudios de sobreexpresión en células PC3, aparecieron formas múltiples de PTEN-largo indicando bien posibles modificaciones postraduccionales, formas de corte y empalme no documentadas o incluso codones de inicio alternativo en la ATR 5’
PTEN-largo codifica un péptido señal N terminal
La secuencia N terminal de PTEN-largo contiene un tramo largo de alaninas que podría ser indicativo de bien una secuencia transmembrana o un péptido señal. El análisis de la secuencia traducida usando SignalIP 3.0 predijo con un grado de probabilidad alto (>95 %) que la secuencia contenía un péptido señal (Figura 5). Un péptido señal comprende característicamente aminoácidos básicos seguido de un tramo hidrófobo. La supuesta hélice transmembrana hidrófoba se rompe por una prolina y está seguida por una secuencia algo polar. También se predijo que la secuencia se escindía indicando que la proteína debía liberarse en el lumen del RE.
PTEN está glucosilada
Una de las características de las proteínas secretadas y extracelulares es la adición de residuos de azúcar complejos en el aparato de golgi, un proceso conocido como glucosilación. Los azúcares pueden añadirse a las asparaginas en la secuencia consenso N-X-S/T (X no puede ser prolina) mediante N-glucosilación (Gupta y Brunak 2002); los grupos hidroxilo de las serinas, treoninas y tirosinas también pueden ser la diana de lo que se denomina O-glucosilación (Julenius, Molgaard et al. 2005). PTEN tiene sitios de O-glucosilación múltiples, pero solo un sitio de N-glucosilación. La lectina concanavalina A, que se une a residuos de azúcar, se usó en un ensayo de
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ES10744058.8T 2009-02-17 2010-02-17 Identificación de la forma extracelular de PTEN que puede usarse para tratar tumores Active ES2623393T3 (es)

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