ES2623050T3 - Polipéptidos profilinas vegetales para su uso en inmunoterapia de alergia inespecífica - Google Patents

Abstract

Un polipéptido para su uso en el tratamiento de una respuesta immune de hipersensibilidad en un individuo, en el que la respuesta immune de hipersensibilidad está causada por un alérgeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina, en el que dicho polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 60 % de identidad con SEQ ID NO: 1.

Description

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Polipeptidos profilinas vegetales para su uso en inmunoterapia de alergia inespedfica Campo tecnico

La invencion pertenece al campo de las ciencias medicas y la inmunologfa, mas concretamente, al campo de las alergias, la inmunoterapia y la tolerancia presencial.

Antecedentes

La inmunoterapia espedfica del alergeno (SIT) es una inmunoterapia de hipersensibilidad introducida en la medicina clmica hace casi un siglo para el tratamiento de las respuestas inmunes de hipersensibilidad de tipo I. La inmunoterapia de hipersensibilidad consiste en administrar repetitivamente uno o varios alergenos espedficos a los que el/los individuo/s esta/n sensibilizado/s o administrar un alergeno de reaccion cruzada con los mismos, normalmente bien mediante administracion subcutanea o mediante administracion sublingual. La administracion repetida normalmente se realiza diaria, semanal o mensualmente durante un penodo mas largo, normalmente durante mas de un ano, para conseguir una clase de tolerancia inmunologica hacia el alergeno espedfico con la consiguiente desaparicion de los smtomas alergicos (“Allergens and Allergen Immunotherapy” 4a Ed, 2008, Ed. por R. Lockey y D. Ledford, Informa healthcare). La inmunoterapia de hiposensibilizacion normalmente se asocia con la generacion de anticuerpos IgG4 espedficos y niveles reducidos de IgE espedfica.

Sin embargo, uno de los retos encontrados con la SIT es que es necesario identificar el alergeno espedfico y que el riesgo de provocar efectos adversos graves puede limitar la aplicacion general de la SIT en el tratamiento de una respuesta inmune de hipersensibilidad.

Por lo tanto, existe la necesidad de mejorar el tratamiento de las respuestas inmunes de hipersensibilidad.

El concepto de tratamiento de un individuo con un antfgeno en la supresion de una respuesta inmune de hipersensibilidad causada por otro antfgeno no relacionado se demostro hace mas de 20 anos. Miller y col (1991) mostraron que se podna obtener la tolerancia periferica a un antfgeno (MBP) (protema basica de mielina) en ratas no tratadas previamente tratadas repetidamente mediante la administracion intragastrica de OVA. Sin embargo, la tolerancia a MBP solo se obtuvo cuando las ratas se expusieron simultaneamente tanto a MPB como a OVA en el momento de la exposicion de las ratas a la MBP para que desarrollaran EAE. El concepto ha sido investigado en mayor profundidad por Dahlman-Hoglund y col (1995) y Millington y col (2004), que mostraron que se pudo evitar el desarrollo de una respuesta inmune de hipersensibilidad en ratas no tratadas previamente que recibieron un primer antfgeno, provocada por un segundo antfgeno al exponer a las ratas tanto al primer antfgeno como al segundo antfgeno en el momento de la exposicion del animal al segunda antfgeno. Oliveira C. R. y col (2005) han sugerido que el efecto presencial puede ser un interesante mecanismo para controlar la sensibilizacion a un nuevo alergeno en personas ya sensibilizadas a un alergeno.

Las profilinas son polipeptidos de origen natural que normalmente consisten en 125-135 aminoacidos y que se encuentran en todas partes en los organismos desde la levadura al ser humano (Santos y Van Ree 2011). Estan presentes a altas concentraciones en el citoplasma de las celulas de vertebrados, plantas, etc., y se unen espedficamente a actina, poli-L-prolina (PLP) y fosfatidilinositol-4,5-bifosfato (PIP2). Las profilinas se pueden dividir en cuatro clases diferentes dependiendo de su fuente a) planta), b) mairnferos, c) virus, d) otros eucariotas. Entre las diferentes clases, la homologfa de la secuencia de aminoacidos es baja (~0 %), pero la homologfa dentro de la clase es mucho mas alta, tal como del aproximadamente 50 al 90 % (Thorn y col, 1997).

Algunas profilinas vegetales se identifican como alergenos (Martinez A. y col, 2002), pero la frecuencia de pacientes alergicos sensibilizados a las profilinas vegetales es baja, aunque variable. Por ejemplo, aproximadamente del 5 al 15 % de los pacientes alergicos a los alergenos del polen de las grammeas resultaron ser alergicos a una profilina del polen de las grammeas, mientras que aproximadamente el 24 % de los pacientes alergicos al polen del olivo tiene la IgE que reconoce a una profilina del polen del olivo (Ole e 2).

Sumario de la invencion

En contraste con la inmunoterapia de alergenos espedficos, la presente invencion se refiere a la inmunoterapia inespedfica para el tratamiento/la prevencion de una respuesta inmune de hipersensibilidad causada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina.

Los presentes inventores han proporcionado pruebas de que es posible suprimir una respuesta inmune de hipersensibilidad, tal como el asma, provocada por la exposicion a un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina a traves de la tolerancia presencial en ratones sin tratamiento previo, asf como en ratones sensibilizados tratados por administracion sublingual de una profilina del material vegetal que contiene profilina. Ademas, se demostro que el mismo tratamiento tambien puede suprimir una respuesta inmune de hipersensibilidad causada por otro material vegetal que contenga profilina, indicando asf que es posible reactivar la creacion de la tolerancia presencial a un polipeptido profilina mediante otro polipeptido profilina para producir un

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episodio inmunologico que, a su vez, regule negativamente una respuesta immune de hipersensibilidad. De acuerdo con estudios anteriores de tolerancia presencial, la supresion solo se pudo demostrar cuando los ratones en el momento de la exposicion al alergeno distinto de la profilina tambien se expusieron simultaneamente al polipeptido/profilina.

Asf pues, los datos proporcionados en el presente documento indican que es posible suprimir una respuesta immune de hipersensibilidad causada por un primer antigeno mediante el tratamiento de un individuo con un segundo antigeno diferente, siempre que el individuo se exponga tanto al primer como al segundo antigeno o a un segundo antigeno alternativo, cuando el individuo se expone al primer antfgeno "desencadenante de la enfermedad".

Se ha reconocido que la administracion repetida de un antfgeno que induce tolerancia a un individuo conducira a la atenuacion de una respuesta inmune causada por un antfgeno ofensivo y diferente, tal como un alergeno, siempre que los dos antfgenos esten presentes en el momento en que el individuo se expone al antfgeno ofensivo. Se preve que el individuo se hace tolerante al antfgeno que induce tolerancia y cuando un material fuente de alergeno como el polen entra en contacto con la mucosa de las vfas respiratorias de ese individuo, el alergeno y el antfgeno que induce tolerancia se liberan al mismo tiempo y en la misma ubicacion, y el antfgeno que induce tolerancia activara la respuesta de tolerancia inmunologica inducida previamente que, a su vez, regulara negativamente la respuesta inmune de hipersensibilidad hacia los alergenos liberados cercanos.

Por lo tanto, la presente terapia comprende la administracion de un primer antfgeno hacia el que el individuo se vuelve tolerante, y al exponerlo a un material de fuente de alergeno que contiene tanto el alergeno desencadenante de la respuesta inmune de hipersensibilidad como el antfgeno que induce tolerancia, la respuesta inmune de hipersensibilidad, que, de lo contrario, se espera que se produzca, se suprimira bien completa o parcialmente.

Se cree que los linfocitos T como los linfocitos Treg y, probablemente, tambien los linfocitos Th-2, son importantes en la obtencion de esta tolerancia presencial. Por ejemplo, la ubicacion conjunta de las celulas presentadoras de antfgeno (APC), los linfocitos Treg y los linfocitos Th-2 en los ganglios linfaticos de drenaje puede ser importante. Las APC y la produccion de citocinas reguladoras en el tejido epitelial tambien pueden contribuir a la induccion de tolerancia.

Ahora, se ha reconocido que un polipeptido que tiene una secuencia de aminoacidos que tiene al menos un 60 % de identidad y/o similitud con la profilina de la especie vegetal Phleum pratense se puede usar en inmunoterapia para la supresion de una respuesta inmune de hipersensibilidad causada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina.

Por consiguiente, un primer aspecto de la invencion se refiere a un polipeptido para su uso en el tratamiento o en la prevencion, tal como mediante inmunoterapia, de una respuesta inmune de hipersensibilidad en un individuo hacia un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina, en el que

dicho polipeptido tiene/consiste en, consiste esencialmente en/comprende una secuencia de aminoacidos que tiene al menos un 60 % de identidad con la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1.

Preferentemente, el individuo que se va a tratar no es, al menos cuando se administra la primera dosis del polipeptido, alergico ni sensibilizado a la profilina del material vegetal que contiene profilina y/o al polipeptido. Por lo tanto, dicha respuesta inmune de hipersensibilidad no puede ser causada por una profilina de dicho material vegetal que contiene profilina. Tambien se preve que la secuencia de aminoacidos de la profilina del material vegetal que contiene profilina y la secuencia de aminoacidos del polipeptido que se administra tienen una identidad y/o una similitud al menos del 60 %.

Por lo tanto, en un subaspecto, la invencion se refiere a un polipeptido para su uso en el tratamiento o en la prevencion, tal como mediante inmunoterapia, de una respuesta inmune de hipersensibilidad en un individuo hacia un alergeno distingo de la profilina de un material vegetal que contiene profilina, en el que:

dicho polipeptido tiene/consiste en, consiste esencialmente en/comprende una secuencia de aminoacidos que tiene al menos un 60 % de identidad con la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1;

dicho individuo no esta, al menos cuando se administra la primera dosis del polipeptido, sensibilizado a la profilina del material vegetal que contiene profilina y, preferentemente, tampoco esta sensibilizado al polipeptido; preferentemente, la secuencia de aminoacidos de la profilina del material vegetal que contiene profilina tiene una identidad y/o similitud al menos del 60 % con la secuencia de aminoacidos de dicho polipeptido.

La invencion, por tanto, proporciona un procedimiento de tratamiento o prevencion, tal como mediante inmunoterapia, de una respuesta inmune de hipersensibilidad en un individuo hacia un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina que comprende administrar una cantidad terapeuticamente eficaz de un polipeptido que tiene/que consiste en, que consiste esencialmente en/que comprende una secuencia de aminoacidos que tiene al menos un 60 % de identidad con la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1; en el que, preferentemente,

dicho individuo no esta sensibilizado a una profilina de dicho material vegetal que contiene profilina ni/o a dicho

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La invencion tambien permite el uso de un polipeptido para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento o la prevencion, tal como mediante inmunoterapia, de una respuesta inmune de hipersensibilidad en un individuo hacia un alergeno distinto de la profilina de una material vegetal que contiene profilina, en el que:

dicho polipeptido tiene/consiste en, consiste esencialmente en/comprende una secuencia de aminoacidos que tiene al menos un 60 % de identidad con la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1; y, preferentemente, dicho individuo no esta sensibilizado a la profilina del material vegetal que contiene profilina ni/o a dicho polipeptido; y

preferentemente, en el que el polipeptido tiene una secuencia de aminoacidos que tiene al menos un 60 % de similitud o identidad con la secuencia de aminoacidos de la profilina del material vegetal que contiene profilina.

La secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1 es uno de los isomeros biologicos de la profilina de Phl p 12 que se encuentra en el polen de grammea de la especie Phleum pratense. Otros isomeros biologicos que tienen una secuencia de aminoacidos con al menos el 95 %, tal como aproximadamente el 98 %, de identidad o similitud con SEQ ID NO: 1 se presentan en el presente documento como SEQ ID NO: 2-10.

Un segundo aspecto de la invencion se refiere a una variante de sustitucion de cistema de un polipeptido de la presente invencion, tal como a un polipeptido que tiene una secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 , 9 o 10, en la que 1 o 2 restos de cistema estan sustituidos con un aminoacido seleccionado entre A, G y/o S, tal como para un polipeptido que tiene una secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1, 2 , 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10, en el que el aminoacido cistema de la posicion 13 y/o 115 se ha sustituido con un aminoacido seleccionado del grupo que comprende A (alanina), G (glicina) y S (serina), tal como un polipeptido que tiene una secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 44 o 45. En particular, las SEQ ID NO: 1 a 10 y 44 y 45 tienen una metionina como el primer aminoacido en el extremo N-terminal (posicion 1), que se puede eliminar mediante degradacion enzimatica en una celula huesped que produce las secuencias mediante tecnicas recombinantes. Por lo tanto, debe entenderse que la variante de sustitucion de cistema tiene una secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 44 y 45, pero en la que el grupo metionina de la posicion 1 no esta presente. Por lo tanto, en algunas realizaciones, la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 44 y/o 45 no contiene metionina en la posicion 1. Ademas, un segundo aspecto de la misma se refiere tambien a un acido nucleico aislado que codifica la protema de SEQ ID NO: 44 o 45, tal como un acido nucleico aislado que tiene la secuencia de nucleotidos de SEQ ID NO: 46 o 47.

La obtencion de un polipeptido adecuado para su uso en el tratamiento, a traves de la tolerancia presencial, de una respuesta inmune de hipersensibilidad causada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina, puede implicar el aislamiento de un polipeptido inmunogenico de dicho material vegetal que contiene profilina o la produccion recombinante de dicho polipeptido inmunogenico, habiendose identificado dicho polipeptido inmunogenico en y, opcionalmente, aislado de un extracto preparado mediante la suspension del material vegetal que contiene profilina en una solucion acuosa que tiene un pH en el intervalo de 6 a 8 durante un penodo que vana de 1 a 30 minutos. Preferentemente, el extracto tambien contiene un alergeno distinto de la profilina de dicho material vegetal que contiene profilina, es decir, un alergeno distinto de la profilina extrafdo junto con el polipeptido inmunogenico.

Un polipeptido adecuado para su uso en el tratamiento, a traves de la tolerancia presencial, de una respuesta inmune de hipersensibilidad causada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina se puede obtener mediante el aislamiento de un polipeptido inmunogenico a partir de dicho material vegetal que contiene profilina o la produccion de forma recombinante de dicho polipeptido inmunogenico, habiendose identificado dicho polipeptido inmunogenico en y, opcionalmente, aislado de un extracto preparado mediante la suspension del material vegetal que contiene profilina en una solucion acuosa que tiene un pH en el intervalo de 6 a 8 durante un penodo que vana de 1 a 30 minutos. Preferentemente, el extracto tambien contiene un alergeno distinto de la profilina de dicho material vegetal que contiene profilina, es decir, un alergeno distinto de la profilina extrafdo junto con el polipeptido inmunogenico.

A continuacion, se presentan realizaciones adicionales de la invencion y redaccion alternativa de la invencion:

• Un polipeptido para el uso de la invencion en el tratamiento o la prevencion de una respuesta inmune de hipersensibilidad en un individuo causada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina, en el que dicho polipeptido es una profilina de un material vegetal que contiene profilina de un orden de plantas seleccionado del grupo que consiste en Pinales, Arecales, Asparagales, Poales, Zingiberales, Apiales, Asterales, Brassicalis, Curcurbitales, Ericales, Fabales, Fagales, Gentianales, Lamiales, Laurales, Malvales, Malpighiales, Myrtales, Proteales, Rosales, Sapindales, Solanales y Vitales o dicho polipeptido es una variante de dicha profilina; y

en el que dicha respuesta inmune de hipersensibilidad es causada por un alergeno distinto de la profilina de una planta que contiene profilina procedente de un orden de plantas seleccionado del grupo que consiste en

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Pinales, Arecales, Asparagales, Poales, Zingiberales, Apiales, Asterales, Brassicalis, Curcurbitales, Ericales, Fabales, Fagales, Gentianales, Lamiales, Laurales, Malvales, Malpighiales, Myrtales, Proteales, Rosales, Sapindales, Solanales y Vitales.

• Un polipeptido para el uso de la invencion en el tratamiento o la prevencion de una respuesta immune de hipersensibilidad en un individuo causada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina, en el que dicho polipeptido es una profilina de un material vegetal que contiene profilina de una familia de plantas seleccionada del grupo que consiste en Cupressaceae, Arecaceae, Asparagaceae, Iridaceae, Bromeliaceae, Poaceae, Musaceae, Zingiberaceae, Apiaceae, Araliaceae, Asteraceae, Brassicaceae, Amaranthaceae, Caryophyllaceae, Polygonaceae, Cucurbitaceae, Actinidiaceae, Lecythidaceae, Theaceae, Fabaceae, Betulaceae, Fagaceae, Juglandaceae, Myricaceae, Nothofagaceae, Ticodendraceae, Apocynaceae, Rubiaceae, Oleaceae, Pedaliacae, Plantaginaceae, Lauraceae, Malvaceae, Euphorbiaceae, Lythraceae, Platanaceae, Cannabaceae, Rosaceae, Ulmaceae, Urticaceae, Anacardiaceae, Rutaceae, Sapindaceae, Solanaceae y Vitaceae o dicho polipeptido es una variante de dicha profilina; y

en el que dicha respuesta immune de hipersensibilidad es causada por un alergeno distinto de la profilina de una planta que contiene profilina de una familia de plantas seleccionada del grupo que consiste en Cupressaceae, Arecaceae, Asparagaceae, Iridaceae, Bromeliaceae, Poaceae, Musaceae, Zingiberaceae, Apiaceae, Araliaceae, Asteraceae, Brassicaceae, Amaranthaceae, Caryophyllaceae, Polygonaceae, Cucurbitaceae, Actinidiaceae, Lecythidaceae, Theaceae, Fabaceae, Betulaceae, Fagaceae, Juglandaceae, Myricaceae, Nothofagaceae, Ticodendraceae, Apocynaceae, Rubiaceae, Oleaceae, Pedaliacae, Plantaginaceae, Lauraceae, Malvaceae, Euphorbiaceae, Lythraceae, Platanaceae,

Cannabaceae, Rosaceae, Ulmaceae, Urticaceae, Anacardiaceae, Rutaceae, Sapindaceae, Solanaceae y Vitaceae.

• Un polipeptido para el uso de la invencion en el tratamiento o la prevencion de una respuesta immune de hipersensibilidad en un individuo causada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina, en el que dicho polipeptido es una profilina de un material vegetal que contiene profilina de un genero seleccionado del grupo que consiste en Chamaecyparis, Cryptomeria, Cupressus, Juniperus, Phoenix, Asparagus, Crocus, Ananas, Anthoxanthum, Cynodon, Dactylis, Festuca, Holcus, Hordeum, Lolium, Oryza, Paspalum, Phalaris, Phleum, Poa, Secale, Sorghum, Triticum, Zea, Musa, Apium, Daucus, Ambrosia, Artemisia, Helianthus, Lactuca, Arabidopsis, Brassica, Sinapis, Amaranthus, Beta, Chenopodium, Fagopyrum, Salsola, Cucumis, Actinidia, Bertholletia, Arachis, Glycine, Lens, Lupinus, Phaseolus, Pisum, Vigna, Alnus, Betula, Carpinus, Carya, Castanea, Corylus, Fagus, Juglans, Ostrya, Quercus, Catharanthus, Coffea, Fraxinus, Ligustrum, Olea, Plantago, Sesamum, Syringa, Persea, Gossypium, Hevea, Manihot, Mercurialis, Popolus, Ricinus, Sonneratia, Platanus, Fragaria, Humulus, Malus, Morus, Parietaria, Prunus, Pyrus, Rubus, Ziziphus, Anacardium, Citrus, Litchi, Mangifera, Pistacia, Capsicum, Lycopersicon, Solanum y Vitis o dicho polipeptido es una variante de dicha profilina; y

en el que dicha respuesta immune de hipersensibilidad es causada por un alergeno distinto de la profilina de una planta que contiene profilina de un genero de plantas seleccionado del grupo que consiste en Chamaecyparis, Cryptomeria, Cupressus, Juniperus, Phoenix, Asparagus, Crocus, Ananas,

Anthoxanthum, Cynodon, Dactylis, Festuca, Holcus, Hordeum, Lolium, Oryza, Paspalum, Phalaris, Phleum, Poa, Secale, Sorghum, Triticum, Zea, Musa, Apium, Daucus, Ambrosia, Artemisia, Helianthus, Lactuca, Arabidopsis, Brassica, Sinapis, Amaranthus, Beta, Chenopodium, Fagopyrum, Salsola, Cucumis, Actinidia, Bertholletia, Arachis, Glycine, Lens, Lupinus, Phaseolus, Pisum, Vigna, Alnus, Betula, Carpinus, Carya, Castanea, Corylus, Fagus, Juglans, Ostrya, Quercus, Catharanthus, Coffea, Fraxinus, Ligustrum, Olea, Plantago, Sesamum, Syringa, Persea, Gossypium, Hevea, Manihot, Mercurialis, Popolus, Ricinus, Sonneratia, Platanus, Fragaria, Humulus, Malus, Morus, Parietaria, Prunus, Pyrus, Rubus, Ziziphus, Anacardium, Citrus, Litchi, Mangifera, Pistacia, Capsicum, Lycopersicon, Solanum y Vitis.

• Un polipeptido para el uso de la invencion en el tratamiento o la prevencion de una respuesta inmune de hipersensibilidad en un individuo causada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina, en el que dicho polipeptido es una profilina de un material vegetal que contiene profilina de un genero seleccionado del grupo que consiste en Chamaecyparis, Cryptomeria, Cupressus, Juniperus, Phoenix, Asparagus, Crocus, Ananas, Anthoxanthum, Cynodon, Dactylis, Festuca, Holcus, Hordeum, Lolium, Oryza, Paspalum, Phalaris, Phleum, Poa, Secale, Sorghum, Triticum, Zea, Musa, Apium, Daucus, Ambrosia, Artemisia, Helianthus, Lactuca, Arabidopsis, Brassica, Sinapis, Amaranthus, Beta, Chenopodium, Fagopyrum, Salsola, Cucumis, Actinidia, Bertholletia, Arachis, Glycine, Lens, Lupinus, Phaseolus, Pisum, Vigna, Alnus, Betula, Carpinus, Carya, Castanea, Corylus, Fagus, Juglans, Ostrya, Quercus, Catharanthus, Coffea, Fraxinus, Ligustrum, Olea, Plantago, Sesamum, Syringa, Persea, Gossypium, Hevea, Manihot, Mercurialis, Popolus, Ricinus, Sonneratia, Platanus, Fragaria, Humulus, Malus, Morus, Parietaria, Prunus, Pyrus, Rubus, Ziziphus, Anacardium, Citrus, Litchi, Mangifera, Pistacia, Capsicum, Lycopersicon, Solanum y Vitis o dicho polipeptido es una variante de dicha profilina; y

en el que dicho alergeno distinto de la profilina se selecciona del grupo que consiste en Cha o 1, Cha o 2, Cry j 1, Cry j 2, Cup a 1, Cup s 1, Cup s 3, Jun a 1, Jun a 2, Jun a 3, Jun o 4, Jun s 1, Jun v 1, Jun v 3, Ana c 2,

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Ant o 1, Aspa o 1, Cro s 1, Cro s 2, Cyn d 1, Cyn d 7, Cyn d 15, Cyn d 22w, Cyn d 23, Cyn d 24, Dac g 1, Dac g 2, Dac g 3, Dac g 4, Dac g 5, Fes p 4, Hol l 1, Hol l 5, Hor v 1, Hor v 5, Hor v 12, Hor v 15, Hor v 16, Hor v 17, Hor v 21, Lol p 1, Lol p 2, Lol p 3, Lol p 4, Lol p 5, Lol p 11, Mus a 2, Mus a 3, Mus a 4, Mus a 5, Ory s 1, Ory s 12, Pas n 1, Pha a 1, Pha a 5, Phl p 1, Phl p 2, Phl p 4, Phl p 5, Phl p 6, Phl p 7, Phl p 11, Phl p 12, Phl p 13, Pho d 2, Poa p 1, Poa p 5, Sec c 1, Sec c 5, Sec c 20, Sor h 1, Tri a 14, Tri a 15, Tri a 18, Tri a 19, Tri a 21, Tri a 25, Tri a 26, Tri a 27, Tri a 28, Tri a 29, Tri a 30, Tri a 31, Tri a 32, Tri a 33, Tri a 34, Tri a 35, Tri a 36, Tri a 37, Zea m 1, Zea m 12, Zea m 14, Zea m 25, Act c 5, Act c 8, Act c 10, Act d 1, Act d 2, Act d 3, Act d 4, Act d 5, Act d 6, Act d 7, Act d 8, Act d 10, Act d 11, Aln g 1, Aln g 4, Amb a 1, Amb a 2, Amb a 3, Amb a 4, Amb a 5, Amb a 6, Amb a 7, Amb a 9, Amb a 10, Amb p 5, Amb t 5, Ana o 1, Ana o 2, Ana o 3, Api g 1, Api g 2, Api g 3, Api g 5, Api g 6, Ara h 1, Ara h 2, Ara h 3, Ara h 4, Ara h 6, Ara h 7, Ara h 9, Ara h 10, Ara h 11, Art v 1, Art v 2, Art v 3, Art v 5, Art v 6, Ber e 1, Ber e 2, Beta v 1, Bet v 1, Bet v 3, Bet v 4, Bet v 6, Bet v 7, Bra j 1, Bra n 1, Bra o 3, Bra r 1, Bra r 2, Cap a 1w, Car b 1, Car i 1, Car i 4, Cas s 1, Cas s 5, Cas s 8, Cas s 9, Cat r 1, Che a 1, Che a 3, Cit l 3, Cit r 3, Cit s 1, Cit s 3, Cof a 1, Cor a 1, Cor a 8, Cor a 9, Cor a 10, Cor a 11, Cor a 12, Cor a 13, Cor a 14, Cuc m 1, Cuc m 3, Dau c 1, Fag e 2, Fag t 2, Fag s 1, Fra a 1, Fra a 3, Fra e 1, Gly m 1, Gly m 2, Gly m 4, Gly m 5, Gly m 6, Hel a 1, Hel a 3, Hev b 1, Hev b 2, Hev b 3, Hev b 4, Hev b 5, Hev b 6, Hev b 7, Hev b 9, Hev b 10, Hev b 11, Hev b 12, Hev b 13, Hev b 14, Hum j 1, Jug n 1, Jug n 2, Jug r 1, Jug r 2, Jug r 3, Jug r 4, Lac s 1, Len c 1, Len c 2, Len c 3, Lig v 1, Lup an 1, Lyc e 2, Lyc e 3, Lyc e 4, Mal d 1, Mal d 2, Mal d 3, Man e 5, Mer a 1, Mor n 3, Ole e 1, Ole e 3, Ole e 4, Ole e 5, Ole e 6, Ole e 7, Ole e 8, Ole e 9, Ole e 10, Ole e 11, Ost c 1, Par j 1, Par j 2, Par j 4, Par o 1, Pers a 1, Pha v 3, Pis v 1, Pis v 2, Pis v 3, Pis v 4, Pis v 5, Pis s 1, Pis s 2, Pla l 1, Pla a 1, Pla a 2, Pla or 1, Pla or 2, Pla or 3, Pru ar 1, Pru ar 3, Pru av 1, Pru av 2, Pru av 3, Pru d 3, Pru du 3, Pru du 5, Pru du 6, Pru p 1, Pru p 2, Pru p 3, Pyr c 1, Pyr c 3, Pyr c 5, Que a 1, Ric c 1, Rub i 1, Rub i 3, Sal k 1, Sal k 2, Sal k 3, Sal k 5, Ses i 1, Ses i 2, Ses i 3, Ses i 4, Ses i 5, Ses i 6, Ses i 7, Sin a 1, Sin a 2, Sin a 3, Sola t 1, Sola t 2, Sola t 3, Sola t 4, Syr v 1, Syr v 3, Vig r 1, Vit v 1 y Ziz m 1.

• Un polipeptido para el uso de la invencion en el tratamiento o la prevencion de una respuesta inmune de hipersensibilidad en un individuo causada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina, en el que dicho polipeptido es una profilina vegetal seleccionada del grupo que consiste en profilina Cry j, Pho d 2, Ana c 1, Cyn d 12, Tri a 12, Mus a 1, Api g 4, Dau c 4, Amb a 8, Art v 4, Hel a 2, Ara t 8, Sin a 4, Ama r 2, Beta v 2, Che e 2, Sal k 4, Act d 9, Cuc m 2, Ara h 5, Gly m 3, Bet v 2, Cor a 2, Ole e 2, Hev b 8, Mer a 12, Pla a 3, Fra a 4, Mal d 4, Par j 3, Pru av 4, Pru du 4, Pru p 4, Pyr c 4, Cit s 2, Lit c 1, Cap a 2 y Lyc e 1 o dicho polipeptido es una variante de dicha profilina; y

en el que dicha respuesta inmune de hipersensibilidad es causada por un alergeno distinto de la profilina de una planta que contiene profilina de un genero seleccionado del grupo que consiste en Chamaecyparis, Cryptomeria, Cupressus, Juniperus, Phoenix, Asparagus, Crocus, Ananas, Anthoxanthum, Cynodon, Dactylis, Festuca, Holcus, Hordeum, Lolium, Oryza, Paspalum, Phalaris, Phleum, Poa, Secale, Sorghum, Triticum, Zea, Musa, Apium, Daucus, Ambrosia, Artemisia, Helianthus, Lactuca, Arabidopsis, Brassica, Sinapis, Amaranthus, Beta, Chenopodium, Fagopyrum, Salsola, Cucumis, Actinidia, Bertholletia, Arachis, Glycine, Lens, Lupinus, Phaseolus, Pisum, Vigna, Alnus, Betula, Carpinus, Carya, Castanea, Corylus, Fagus, Juglans, Ostrya, Quercus, Catharanthus, Coffea, Fraxinus, Ligustrum, Olea, Plantago, Sesamum, Syringa, Persea, Gossypium, Hevea, Manihot, Mercurialis, Popolus, Ricinus, Sonneratia, Platanus, Fragaria, Humulus, Malus, Morus, Parietaria, Prunus, Pyrus, Rubus, Ziziphus, Anacardium, Citrus, Litchi, Mangifera, Pistacia, Capsicum, Lycopersicon, Solanum y Vitis.

• Un polipeptido para el uso de la invencion en el tratamiento o la prevencion de una respuesta inmune de hipersensibilidad en un individuo causada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina, en el que dicho polipeptido es una profilina vegetal seleccionada del grupo que consiste en profilina Cry j, Pho d 2, Ana c 1, Cyn d 12, Tri a 12, Mus a 1, Api g 4, Dau c 4, Amb a 8, Art v 4, Hel a 2, Ara t 8, Sin a 4, Ama r 2, Beta v 2, Che e 2, Sal k 4, Act d 9, Cuc m 2, Ara h 5, Gly m 3, Bet v 2, Cor a 2, Ole e 2, Hev b 8, Mer a 12, Pla a 3, Fra a 4, Mal d 4, Par j 3, Pru av 4, Pru du 4, Pru p 4, Pyr c 4, Cit s 2, Lit c 1, Cap a 2 y Lyc e 1 o dicho polipeptido es una variante de dicha profilina; y en el que dicha respuesta inmune de hipersensibilidad es causada por un alergeno distinto de la profilina seleccionado del grupo que consiste en Cha o 1, Cha o 2, Cry j 1, Cry j 2, Cup a 1, Cup s 1, Cup s 3, Jun a 1, Jun a 2, Jun a 3, Jun o 4, Jun s 1, Jun v 1, Jun v 3, Ana c 2, Ant o 1, Aspa o 1, Cro s 1, Cro s 2, Cyn d 1, Cyn d 7, Cyn d 15, Cyn d 22w, Cyn d 23, Cyn d 24, Dac g 1, Dac g 2, Dac g 3, Dac g 4, Dac g 5, Fes p 4, Hol l 1, Hol l 5, Hor v 1, Hor v 5, Hor v 12, Hor v 15, Hor v 16, Hor v 17, Hor v 21, Lol p 1, Lol p 2, Lol p 3, Lol p 4, Lol p 5, Lol p 11, Mus a 2, Mus a 3, Mus a 4, Mus a 5, Ory s 1, Ory s 12, Pas n 1, Pha a 1, Pha a 5, Phl p 1, Phl p 2, Phl p 4, Phl p 5, Phl p 6, Phl p 7, Phl p 11, Phl p 12, Phl p 13, Pho d 2, Poa p 1, Poa p 5, Sec c 1, Sec c 5, Sec c 20, Sor h 1, Tri a 14, Tri a 15, Tri a 18, Tri a 19, Tri a 21, Tri a 25, Tri a 26, Tri a 27, Tri a 28, Tri a 29, Tri a 30, Tri a 31, Tri a 32, Tri a 33, Tri a 34, Tri a 35, Tri a 36, Tri a 37, Zea m 1, Zea m 12, Zea m 14, Zea m 25, Act c 5, Act c 8, Act c 10, Act d 1, Act d 2, Act d 3, Act d 4, Act d 5, Act d 6, Act d 7, Act d 8, Act d 10, Act d 11, Aln g 1, Aln g 4, Amb a a 1, Amb a 2, Amb a 3, Amb a 4, Amb a 5, Amb a 6, Amb a 7, Amb a 9, Amb a 10, Amb p 5, Amb t 5, Ana o 1, Ana o 2, Ana o 3, Api g 1, Api g 2, Api g 3, Api g 5, Api g 6, Ara h 1, Ara h 2, Ara h 3, Ara h 4, Ara h 6, Ara h 7, Ara h 9, Ara h 10, Ara h 11, Art v 1, Art v 2, Art v 3, Art v 5, Art v 6, Ber e 1, Ber e 2, Beta v 1, Bet v 1, Bet v 3, Bet v 4, Bet v 6, Bet v 7, Bra j 1, Bra n 1, Bra o 3, Bra r 1, Bra r 2, Cap a 1w, Car b 1, Car i 1, Car i 4, Cas s 1, Cas s 5, Cas s 8, Cas s 9, Cat r 1, Che a 1, Che a 3, Cit l 3, Cit r 3, Cit s 1, Cit s 3, Cof a 1, Cor a 1, Cor a 8, Cor a 9, Cor a 10, Cor a 11, Cor a 12, Cor a 13, Cor a 14, Cuc m 1, Cuc m 3,

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Dau c 1, Fag e 2, Fag t 2, Fag s 1, Fra a 1, Fra a 3, Fra e 1, Gly m 1, Gly m 2, Gly m 4, Gly m 5, Gly m 6, Hel a 1, Hel a 3, Hev b 1, Hev b 2, Hev b 3, Hev b 4, Hev b 5, Hev b 6, Hev b 7, Hev b 9, Hev b 10, Hev b 11, Hev b 12, Hev b 13, Hev b 14, Hum j 1, Jug n 1, Jug n 2, Jug r 1, Jug r 2, Jug r 3, Jug r 4, Lac s 1, Len c 1, Len c 2, Len c 3, Lig v 1, Lup an 1, Lyc e 2, Lyc e 3, Lyc e 4, Mal d 1, Mal d 2, Mal d 3, Man e 5, Mer a 1, Mor n 3, Ole e 1, Ole e 3, Ole e 4, Ole e 5, Ole e 6, Ole e 7, Ole e 8, Ole e 9, Ole e 10, Ole e 11, Ost c 1, Par j 1, Par j 2, Par j 4, Par o 1, Pers a 1, Pha v 3, Pis v 1, Pis v 2, Pis v 3, Pis v 4, Pis v 5, Pis s 1, Pis s 2, Pla l 1, Pla a 1, Pla a 2, Pla or 1, Pla or 2, Pla or 3, Pru ar 1, Pru ar 3, Pru av 1, Pru av 2, Pru av 3, Pru d 3, Pru du 3, Pru du 5, Pru du 6, Pru p 1, Pru p 2, Pru p 3, Pyr c 1, Pyr c 3, Pyr c 5, Que a 1, Ric c 1, Rub i 1, Rub i 3, Sal k 1, Sal k 2, Sal k 3, Sal k 5, Ses i 1, Ses i 2, Ses i 3, Ses i 4, Ses i 5, Ses i 6, Ses i 7, Sin a 1, Sin a 2, Sin a 3, Sola t 1, Sola t 2, Sola t 3, Sola t 4, Syr v 1, Syr v 3, Vig r 1, Vit v 1 y Ziz m 1.

Leyendas de las figuras

Figura 1. Muestra el porcentaje de eosinofilos aislados de fluido BAL de ratones tratados con Phl p 12 y expuestos a OVA + Phl p 12 o solo OVA.

Figura 2. Mismo experimento que en la Figura 1, pero los resultados se muestran con respecto a la proliferacion de celulas del bazo in vitro tras la adicion de OVA.

Figura 3. Muestra el porcentaje de eosinofilos aislados de fluido BAL de ratones tratados con Phl p 12 y expuestos a extracto de Phl p que contiene Phl p 12 o extracto de Phl p empobrecido en Phl p 12.

Figura 4. Mismo experimento que en la Figura 3, pero los resultados se muestran con respecto a la estimulacion in vitro de celulas de ganglios linfaticos cervicales tras la adicion de extracto de Phl p.

Figura 5. Mismo experimento que en la Figura 3, pero los resultados se muestran con respecto a los niveles de citocina IL-5 en celulas de ganglios linfaticos cervicales tras la adicion de extracto de Phl p.

Figura 6. Muestra el porcentaje de eosinofilos aislados de fluido BAL de ratones sensibilizados a OVA, tratados luego con Phl p 12 y, posteriormente, expuestos a OVA + Phl p 12 o solo OVA.

Figura 7. Mismo experimento que en la Figura 6, pero los resultados se muestran con respecto a la proliferacion de celulas de bazo in vitro tras la adicion de OVA.

Figura 8. Muestra niveles de citocina IL-5 en cultivo de celulas de bazo, en los que las celulas del bazo se afslan de ratones tratados con Phl p 12, sensibilizados a OVA y expuestos simultaneamente a OVA + Bet v 2.

Figura 9. Mismo experimento que en la Figura 8, pero los resultados se muestran con respecto a los niveles de citocina IL-13.

Figura 10. Diagrama de CIE de extractos obtenidos en 20 s (A), 60 s (B) y en 2 min (C) de extraccion de polen sin procesar de Phleum pratense.

Figura 11. Diagrama de CIE de extractos obtenidos en 5 min (A), 10 min (B) y 20 min (C) de extraccion de polen sin procesar de Phleum pratense.

Figura 12. Diagrama de RIE de extractos obtenidos en 20 s, 60 s, 2 min, 5 min, 10 min y 20 min de extraccion de polen sin procesar de Phleum pratense: A) Phl p 12, B) Phl p 5), C) Phl p 1.

Figura 13. Cantidades de Phl p 12, Phl p 1 y Phl p 5 liberadas tras 20 s, 60 s, 2 min, 5 min, 10 min y 20 min de extraccion de polen sin procesar de Phleum pratense y analizadas mediante el uso de ELISA.

Figura 14. Diagrama de CIE de extractos obtenidos en 20 s (A) y 60 s (B) y 2 min (C) de extraccion de polen desgrasado de Phleum pratense.

Figura 15. CIE de extractos obtenidos en 5 min (A), 10 min (B) y 20 min (C) de extraccion de polen desgrasado de Phleum pratense.

Figura 16. RIE de extractos obtenidos en 20 s, 60 s, 2 min, 5 min, 10 min y 20 min de extraccion de polen desgrasado (Phleum pratense) A) Phl p 12, B) Phl p 5), C) Phl p 1.

Figura 17. Cantidades de Phl p 12, Phl p 1 y Phl p 5 liberadas en 20 s, 60 s, 2 min, 5 min, 10 min y en 20 min de extraccion de polen desgrasado de Phleum pratense y analizados por ELISA.

Figura 18. SDS-PAGE de extractos obtenidos en 20 s, 40 s, 60 s, 2, 5, 10 y 20 min de extraccion de A) polen sin procesar y B) polen desgrasado de Phleum pratense, respectivamente.

Figura 19. CIE de extractos obtenidos en 20 s, 60 s y 2 min de extraccion de polen desgrasado de Betula verrucosa.

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Figura 20. CIE de extractos obtenidos en 5 (A), 10 (B) y 20 (B) min de extraccion de polen desgrasado de Betula verrucosa.

Figura 21. RIE de extractos obtenidos en 20 s, 60 s, 2 min, 5 min, 10 min y 20 min de extraccion de polen desgrasado de Betula verrucosa A) Bet v 2 (profilina) y B) Bet v 1 (alergeno principal).

Figura 22. RIE de extractos obtenidos en 20 s, 60 s, 2 min, 5 min, 10 min y 20 min de extraccion de polen desgrasado de Ambrosia artemisifolia A) Amb a 8 (profilina) y B) Amb a 1 (alergeno principal).

Figura 23. RIE de extractos de polen de Ambrosia artemisifolia (A), Betula verrucosa (B), Corylus avellana (C) y Phleum pratense (E), Artemisia vulgaris (F), Cryptomeria japonica (G), Humulus japonicus (I), y extractos de cuerpos de los acaros Dermatophagoides pteronyssinus (D), extracto de caspa de gato (H) y extracto de Malus domesticus (manzana) (recien preparado) (J), en el que las placas se tratan con anticuerpos IgG policlonales contra la profilina Bet v 2.

Figura 24. RIE de los mismos extractos que la Figura 23, pero RIE realizado con anticuerpos IgG policlonales contra la profilina de Phl p 2.

Figura 25. Muestra la proliferacion de celulas de bazo in vitro tras la estimulacion con extracto Bet v de celulas de bazo aisladas de ratones ITSL sin tratamiento previo tratados con Phl p 12 y, posteriormente, sensibilizados a extracto de bet v.

Figura 26. Mismo experimento que el mencionado en la Figura 25, pero que muestra el resultado de la estimulacion in vitro de celulas de ganglios linfaticos cervicales tras la estimulacion con extracto de Bet v.

Figura 27. Muestra la proliferacion de celulas de bazo in vitro tras la estimulacion con extracto de Bet v de celulas de bazo aisladas de ratones sensibilizados al extracto bet v y, posteriormente, SLIT tratados con Phl p 12.

Figura 28. Mismo experimento que el mencionado en la Figura 27, pero que muestra el resultado de la estimulacion in vitro de celulas de ganglios linfaticos cervicales tras la estimulacion con extracto de Bet v.

Figura 29. Muestra los niveles de citocina IL-5 liberada de la proliferacion de celulas de bazo in vitro tras a estimulacion con extracto de Phl p de celulas de bazo aisladas de ratones ITSL sin tratamiento previo tratados con Ole e 2 y, posteriormente, sensibilizados al extracto de Phl p.

Figura 30. Mismo experimento que el mencionado en la Figura 29, pero que muestra el resultado de la citocina IL-5 liberada de la estimulacion in vitro de celulas de los ganglios linfaticos cervicales.

Figura 31. Muestra la proliferacion in vitro de celulas de bazo tras la estimulacion con OVA de celulas de bazo aisladas de ratones sin tratamiento previo tratados mediante SLIT con Phl p 12 y, posteriormente, sensibilizados a OVA.

Figura 32. Muestra la activacion de los linfocitos T inducida por moleculas de profilina evaluadas mediante la incorporacion de H3-timidina (cuentas por minuto, CPM, eje X). A y B son lmeas de linfocitos T establecidas a partir de dos pacientes alergicos a las grammeas. A: rPhl p 12, b: p nPhl 12, g: rOle e 2, d: control del medio. Las barras de error indican las desviaciones tfpicas de cuatro repeticiones.

Descripcion detallada

Definiciones

Los siguientes terminos y expresiones tendran el siguiente significado.

Los terminos “un”, “uno” o “una” se refieren a un numero indefinido y no deberan interpretarse solo como “uno/a”, sino que tambien deben interpretarse en el sentido de “algunos/as” o “varios/as”.

Los terminos "protema" y "polipeptido", y la expresion "secuencia de aminoacidos" se usan indistintamente en el presente documento. En el presente documento, se usan los codigos convencionales de una letra y de tres letras para los restos de aminoacidos. Los codigos de tres letras para los aminoacidos se definen de acuerdo con la Comision Conjunta de la IUPAC-IUB sobre Nomenclatura Bioqmmica (JCBN).

El termino "variante" o "variantes" se refiere a polipeptidos que contienen modificaciones/mutaciones en comparacion con la "secuencia original". El termino "variante" se puede usar indistintamente con el termino "mutante".

Las expresiones "secuencia precursora" o "polipeptido precursor" pretenden definir un polipeptido en el que se basan cualquiera de los polipeptidos variantes. A menos que se indique lo contrario, SEQ ID NO: 1 o, como alternativa, SEQ ID NO: 2-42, o, como alternativa, cualquier profilina mencionada en las Tablas 1 a 4, se ha de considerar la secuencia precursora. Se ha de entender que las SEQ ID NO: 1 a 42 se muestran con una metionina

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en la posicion 1, que, en algunas realizaciones, puede no estar presente, pues la metionina puede eliminarse enzimaticamente, bien de forma natural por la celula huesped en la produccion recombinante o ex vivo. Tambien se ha de entender que la metionina no se puede eliminar por completo, de modo que aproximadamente el 2 %-10 % de los polipeptidos producidos de manera recombinante contiene metionina en la posicion 1. Un "acido nucleico precursor" significa una secuencia de acido nucleico que codifica el polipeptido precursor.

La expresion "identidad de secuencia" pretende definir la fraccion de aminoacidos que es la misma entre un par de secuencias tras la alineacion de las secuencias. Las alineaciones de secuencia y las comparaciones pueden realizarse a ojo, pero, por lo general, se realizan con la ayuda de programas informaticos de comparacion de secuencias facilmente disponibles, siendo el resultado un porcentaje de identidad calculado por el programa informatico.

La expresion "similitud de secuencia" pretende definir la fraccion de aminoacidos que es la misma u homologa entre un par de secuencias en la alineacion de las secuencias. Lo mas a menudo, se usa un programa informatico para el calculo, y el resultado es una puntuacion que se calcula usando alguna matriz de similitud que forma parte del programa informatico.

La expresion “un alergeno” debera interpretarse como uno o mas alergenos.

El termino “alergeno” pretende designar una sustancia proteica capaz de generar una respuesta inmune de hipersensibilidad en un individuo, tal como en un animal, tal como en un ser humano. El alergeno puede ser un alergeno sensibilizante o un alergeno con reaccion cruzada.

La expresion “alergeno sensibilizante” pretende designar una sustancia proteica capaz de desencadenar la produccion de anticuerpos IgE por parte del sistema inmunitario en un individuo.

La expresion “alergeno con reaccion cruzada” define una sustancia proteica que puede ser reconocida por anticuerpos IgE originalmente creados contra un alergeno sensibilizante. Es decir, un alergeno con reaccion cruzada es un alergeno capaz de generar una respuesta inmune de hipersensibilidad cuando es reconocido por y unido a anticuerpos IgE con reaccion cruzada inducidos por un alergeno sensibilizante. Por ejemplo, el alergeno Mal d 1, que se encuentra en las manzanas, es una protema homologa a Bet v 1, que se encuentra en el polen del abedul y que es capaz de generar una respuesta inmune de hipersensibilidad en un individuo previamente sensibilizado contra el alergeno Bet v 1 debido a su capacidad para desencadenar la union cruzada e inducir la granulacion de los mastocitos en los mastocitos cargados con IgE anti-Bet v 1.

La expresion “alergeno principal” debera significar un alergeno que causa la sensibilizacion en mas del 50 % de una poblacion media (seleccionada aleatoriamente) de pacientes que tienen una respuesta inmune de hipersensibilidad desencadenada por la exposicion a un material fuente de alergenos que comprende dicho alergeno.

La expresion “alergeno minoritario” significara un alergeno que causa la sensibilizacion en menos del 50 % de una poblacion media (seleccionada aleatoriamente) de pacientes que tienen una respuesta inmune a la hipersensibilidad desencadenada por la exposicion a un material fuente de alergenos que comprende dicho alergeno.

La expresion “supresion presencial” o “tolerancia presencial” significa, en general, que engloba la capacidad de suprimir una reaccion inmune en un individuo hacia un antfgeno (A) mediante el tratamiento del individuo con otro antfgeno no relacionado (B).

El termino “inmunoterapia” pretende englobar la terapia en la que el agente terapeuticamente activo (en el presente documento, el polipeptido) es un antfgeno (protema antigenica) o un peptido inmunogenico. Normalmente, la inmunoterapia engloba la administracion repetitiva de una dosis suficiente del antfgeno, normalmente en cantidades de microgramos, durante un penodo de tiempo prolongado, normalmente durante meses o anos, en el que el antfgeno o peptido inmunogenico se administra diariamente, varias veces a la semana, semanalmente, bisemanalmente o mensualmente.

La expresion “un individuo” pretende designar a un mairnfero que tiene un sistema inmune adaptativo, tal como un ser humano, una mascota, tal como un perro, un gato, un caballo o ganado.

La expresion “un individuo que lo necesite” pretende englobar un individuo que tenga una respuesta inmune de hipersensibilidad, un individuo sensibilizado contra un alergeno, asf como un individuo que esta en riesgo de sensibilizarse contra un alergeno o que esta en riesgo de desarrollar una respuesta inmune de hipersensibilidad. El individuo, puede presentar clmicamente smtomas de una respuesta inmune de hipersensibilidad o el individuo solamente puede sensibilizarse contra un alergeno y no presentar todavfa clmicamente smtomas de una respuesta inmune de hipersensibilidad. Un individuo que esta en riesgo de sensibilizarse contra un alergeno puede identificarse gracias a las enfermedades atopicas de la familia.

La expresion “tratamiento profilactico” pretende englobar el tratamiento, tal como inmunoterapia, de un individuo con el objetivo de inducir una respuesta que impida parcial o completamente que el individuo desarrolle una respuesta inmune de hipersensibilidad. El tratamiento profilactico, tal como inmunoterapia profilactica, se inicia, por tanto, antes

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de que el individuo se haya sensibilizado a un alergeno. Esto puede realizarse iniciando la inmunoterapia antes de que el individuo haya alcanzado niveles detectables de anticuerpos IgE en suero capaces de unirse espedficamente con el alergeno sensibilizante o antes de que cualquier otro marcador bioqmmico, indicativo de una respuesta inmune de hipersensibilidad, se pueda detectar en muestras biologicas aisladas del individuo. Ademas, la inmunoterapia profilactica tambien debera designar inmunoterapia iniciada antes de que el individuo haya desarrollado smtomas clmicos de la enfermedad, tales como smtomas de rinitis alergica, asma alergica o dermatitis atopica.

El termino “tratamiento” se refiere a cualquier tipo de tratamiento o prevencion que confiere un beneficio a un sujeto que padece una enfermedad o que esta en riesgo de desarrollar una respuesta inmune de hipersensibilidad contra un alergeno de interes, incluyendo la mejona de la afeccion del sujeto (por ejemplo, en uno o mas smtomas), el retraso de la aparicion de los smtomas, la ralentizacion del avance de los smtomas o la induccion de la modificacion de la enfermedad, etc. Como se usa en el presente documento, “tratamiento” no significa necesariamente que implique la curacion o la anulacion completa de los smtomas, sino que se refiere a cualquier tipo de tratamiento que confiera un beneficio a un paciente.

La expresion “cantidad terapeuticamente eficaz” pretende designar una cantidad eficaz para un tratamiento, tal como una cantidad suficiente para conseguir el efecto deseable. Por ejemplo, una cantidad terapeuticamente eficaz es la dosis total de un antfgeno no relacionado que se administra en el transcurso de la inmunoterapia para conseguir la eficacia deseada o la dosis maxima tolerada dentro de un penodo de tiempo dado. La dosis total se puede dividir en dosis unicas administradas diariamente, dos veces a la semana o mas, semanalmente, cada dos o cuatro semanas o mensualmente, dependiendo de la via de administracion. La dosis total puede administrarse a diferentes concentraciones. Se espera que una sola dosis este en el intervalo de microgramos, tal como en el intervalo de 5 a 500 microgramos dependiendo del antfgeno.

La expresion “sensibilizado contra un alergeno”, en general, pretende englobar que el individuo se ha expuesto a un alergeno de una manera que el sistema inmunoadaptativo del individuo presente memoria contra el alergeno, de manera que se hayan generado anticuerpos IgE detectables contra el alergeno o que los linfocitos T estimulados in vitro pueden proliferar en presencia del alergeno sensibilizante.

El termino “adyuvante” se refiere a una sustancia que potencia la respuesta inmune contra un antfgeno. Dependiendo de la naturaleza del adyuvante, este puede potenciar una respuesta inmune mediada por celulas, una respuesta inmune humoral o una mezcla de ambas.

Tratamiento/prevencion de una respuesta inmune de hipersensibilidad

Se ha de entender que un polipeptido de la invencion es para su uso en el tratamiento/la prevencion de una respuesta inmune de hipersensibilidad. Una respuesta inmune de hipersensibilidad de la presente invencion se considera que esta asociada con una enfermedad alergica/respuesta inmune alergica, tal como, normalmente, una respuesta inmune de hipersensibilidad de tipo 1 o de tipo 4, o mezclas de las mismas, tal como, normalmente, una respuesta inmune habitualmente asociada con la produccion de anticuerpos IgE, tal como alergia mediada por IgE. Los ejemplos tfpicos de enfermedades mediadas por una respuesta inmune de hipersensibilidad son, pero sin limitacion, enfermedades alergicas como la dermatitis atopica, urticaria, dermatitis de contacto, conjuntivitis alergica, rinitis alergica, asma alergica, anafilaxis, alergia alimentaria y alergia a medicamentos. Los ejemplos tfpicos de enfermedades mediadas por una reaccion inmune de hipersensibilidad de tipo 1 son, pero sin limitacion, enfermedades alergicas como dermatitis atopica, conjuntivitis alergica, rinitis alergica, asma alergica, anafilaxia, alergia alimentaria y la fiebre del heno. Un ejemplo de una enfermedad mediada por una reaccion inmune de hipersensibilidad de tipo 4 es la dermatitis de contacto.

El polipeptido se puede administrar por cualquier via de administracion, pero preferentemente se administra en una mucosa o epitelio, por ejemplo, se administra en una mucosa y/o los epitelios de las vfas respiratorias, del tracto gastrointestinal y de la cavidad oral. En principio, la administracion en la piel, tal como mediante la administracion subcutanea, administracion epicutanea o administracion transdermica, esta dentro del alcance de la administracion de un polipeptido de la invencion, y se puede usar en algunas realizaciones. Sin embargo, en otras realizaciones de la invencion, el polipeptido se administra preferentemente por via topica en la piel, por medio transdermico o por inyeccion, tal como por via subcutanea y epicutanea.

Tras la administracion del polipeptido en un epitelio y/o mucosa, el polipeptido puede ser captado por una celula presentadora de antfgeno y en ausencia de "senales de peligro" como se observa con los alergenos, el episodio inmunologico predeterminado que tiene lugar en las superficies mucosas en condiciones fisiologicas dara lugar al fenomeno denominado "tolerancia oral", que es una caractenstica normal del sistema inmune de la mucosa, ya que se puede generar a traves de la administracion oral (incluyendo peroral), nasal, por vfas respiratorias y sublingual de un antfgeno.

Todavfa no se entienden por completo los mecanismos que subyacen a la induccion de la tolerancia oral, excepto que es ampliamente reconocido que los antfgenos administrados por via oral dan lugar a la generacion de linfocitos T reguladores espedficos del antfgeno tras la presentacion del antfgeno por las APC asociadas al intestino. Dicha

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presentacion preferentemente inducina a los linfocitos T a secretar citocinas reguladoras tales como el TGF-beta y la IL-10. Estas celulas reguladoras espedficas del antigeno pueden migrar a organos linfoides, suprimiendo las respuestas inmunes mediante la inhibicion de la generacion de celulas efectoras, y a los organos diana, suprimiendo la enfermedad mediante la liberacion de citocinas no espedficas del antfgeno. Recientemente, se ha sugerido que la generacion de celulas reguladoras en el sistema inmune de la mucosa esta mediada por un subconjunto especializado de celulas dendnticas que expresan el marcador de superficie CD103. Tambien se ha sugerido que la administracion oral de antfgeno induce la falta de respuesta de la funcion de los linfocitos T principalmente a traves de la anergia o la eliminacion. Se considera que los mecanismos, la induccion de linfocitos Treg, la anergia y la eliminacion no pueden excluirse entre sf, y se pueden superponer considerablemente.

Por lo tanto, se ha de entender que la administracion de un antfgeno en la mucosa oral a un individuo que preferentemente no esta presensibilizado al antfgeno puede inducir a linfocitos Treg espedficos del antfgeno a activarse tras la siguiente exposicion al antfgeno y a iniciar la produccion de citocinas reguladoras inespedficas, y si el antfgeno se expone junto con un alergeno, las citocinas reguladoras inespedficas pueden suprimir la respuesta inmune hacia otras especificidades que estan en curso en el microambiente, tales como una respuesta inmune de hipersensibilidad.

Asf pues, para inducir la tolerancia oral, se ha de entender que un polipeptido de la invencion, se administra preferentemente en una mucosa de las vfas respiratorias, la cavidad oral y el tracto gastrointestinal. Por lo tanto, en realizaciones preferidas de la invencion, el polipeptido se administra por inhalacion, administracion nasal, administracion bucal (administracion en las mejillas o la cavidad bucal), administracion oral (administracion en el tracto gastrointestinal), tal como preferentemente por administracion sublingual. Se preve que la administracion en una mucosa de la cavidad oral se puede realizar mediante el suministro por via topica del antfgeno en la superficie de un epitelio de la cavidad oral desde donde el antfgeno es absorbido en la mucosa y la submucosa. Por ejemplo, el antfgeno se administra en el epitelio de la parte sublingual, incluyendo el suelo de la boca, de donde el antfgeno es absorbido en la mucosa y la submucosa. Mediante administracion bucal, se pretende aplicar una formulacion farmaceutica adecuada del polipeptido en un epitelio de la cavidad oral, tal como en un epitelio situado en la superficie inferior o superior de la lengua, en la enda o en las mejillas, para permitir que el polipeptido se absorba en la mucosa y la submucosa, no pretendiendose suministrar el polipeptido en el tracto gastrointestinal. Por lo tanto, en realizaciones mas preferibles de la invencion, el antfgeno se administra en el epitelio y/o la mucosa de la cavidad oral, tal como por administracion sublingual, advirtiendose preferentemente al individuo que no trague antes de un penodo de al menos 1 minuto tras la administracion, tal como, mas preferentemente tras 2 minutos, 3 minutos, 4 minutos o 5 minutos de la administracion del polipeptido.

El polipeptido se puede administrar repetidamente en dosis suficientes, por lo general, en dosis individuales de cantidades en microgramos, durante un penodo prolongado de tiempo, en general, durante semanas, meses o anos antes de que se alcance el efecto. Normalmente, el polipeptido se administra diariamente, semanalmente, cada dos semanas o mensualmente - dependiendo de la via de administracion, de la formulacion y/o del polipeptido espedfico. Se espera que el polipeptido debe administrarse, de forma continua o interrumpido por uno o mas penodos de no administracion, durante un penodo de al menos 4 semanas a aproximadamente 4 a 6 meses, pero que la administracion debe continuar durante varios meses o anos.

En particular, se ha de entender que, lo mas probablemente, para lograr la tolerancia presencial, se requiere la creacion de tolerancia oral y/o linfocitos Treg espedficos. La tolerancia oral se creara, al menos, mediante la administracion del polipeptido a una mucosa oral. Sin embargo, los biomarcadores que muestran que se ha obtenido la tolerancia oral (tolerancia de los linfocitos T) no se identifican facilmente. La tolerancia en pacientes alergicos sensibilizados suele estar vinculada a la produccion de IgG4 y la produccion de las citocinas IL-10 e IL-4. Sin embargo, se cree que el examen directo de las respuestas de los linfocitos T hacia el antfgeno tolerogenico puede dar lugar a linfocitos Treg productores de IL-10 y/o TGF-b, mientras que se debena observar la falta total de respuesta o respuestas de Th1/Th2 en el grupo de placebo. Para fundamentar aun mas esto, los estudios in vitro de estimulacion simultanea de las linfocitos Treg con el polipeptido tolerogenico y un antfgeno de ensayo, por ejemplo, un alergeno, debenan conducir a la supresion de la respuesta de los linfocitos T espedficos del antfgeno de ensayo. Como alternativa, el desaffo simultaneo en la piel con el polipeptido tolerogenico y un antfgeno de ensayo como el toxoide tetanico (TT) podna imitar la estimulacion in vitro e incluir todos los elementos inmunologicos de una situacion in vivo. En esta situacion, cabna esperar la falta de una respuesta de hipersensibilidad de tipo retardado hacia el TT en presencia del antfgeno tolerogenico en el grupo tratado activamente, mientras que la estimulacion con el TT sin el antfgeno tolerogenico conducina a una respuesta de la piel.

Ademas, la obtencion de la tolerancia presencial tambien requiere que el mismo polipeptido o, como alternativa, una modificacion del polipeptido, este presente junto con el alergeno distinto de la profilina en el organo diana (por ejemplo, en las vfas respiratorias) que esta sujeto a la exposicion del material vegetal que contiene profilina. Por lo tanto, ademas de la administracion del polipeptido con el fin de lograr la tolerancia oral, los medios para proporcionar la exposicion conjunta del polipeptido o un polipeptido modificado del mismo, y el alergeno distinto de la profilina tambien son esenciales para lograr la tolerancia presencial.

La expresion "exposicion conjunta" pretende significar que el polipeptido se presenta/se vuelve disponible al mismo organo diana al que se ha dirigido el alergeno distinto de la profilina durante la exposicion natural al material vegetal

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que no contiene profilina, tal como se presenta/se vuelve disponible al mismo organo diana en un penodo que coincida al menos parcialmente o completamente con la exposicion del individuo a dicho alergeno distinto de la profilina. Por lo general, el organo diana de un alergeno aereo son las vfas respiratorias, el organo diana de un alergeno alimentario es el tracto gastrointestinal o la cavidad oral, y los alergenos aereos, los alergenos alimentarios y los alergenos de contacto se dirigen a la piel.

Asf pues, ademas de administrar el polipeptido varias veces en las vfas respiratorias, el tracto gastrointestinal y/o la cavidad bucal (para lograr la tolerancia oral/ induccion de linfocitos Treg), se han de proporcionar medios para garantizar la presencia conjunta/exposicion conjunta del polipeptido y el alergeno distinto de la profilina en el organo diana en un penodo parcial o completamente superpuesto con el penodo de exposicion al alergeno.

Los presentes inventores han descubierto ahora que se puede proporcionar la exposicion conjunta mediante la seleccion como "antfgeno que induce tolerancia" de un antfgeno expuesto de forma natural al mismo organo diana que el alergeno desencadenante de la respuesta inmune de hipersensibilidad. Como tal, el "antfgeno que induce tolerancia" alcanza inherentemente el mismo organo diana que el alergeno distinto de la profilina “desencadenante” tras la exposicion natural al material vegetal que contiene profilina. Ventajosamente, no hay necesidad de proporcionar medios adicionales que garanticen la exposicion conjunta al alergeno desencadenante (alergeno distinto de la profilina) y al "antfgeno que induce tolerancia" (polipeptido).

De acuerdo con la presente invencion, la tolerancia presencial se logra mediante la administracion de un polipeptido, tal como la profilina Phl p 12, a un individuo que necesita ser tratado de una respuesta inmune de hipersensibilidad causada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina. Se considera que la tolerancia presencial se logra, al menos, cuando el polipeptido tiene una secuencia de aminoacidos que tiene al menos un 60 %, tal como al menos un 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de similitud y/o identidad con la secuencia de aminoacidos de la profilina del material vegetal que contiene profilina. Es decir, que el polipeptido no tiene que ser identico a la profilina del material vegetal que contiene profilina siempre que exista una cierta identidad y/o similitud entre el polipeptido como se administra y la profilina a la que se realiza la exposicion de forma natural.

Sin embargo, cuando el polipeptido de la invencion, por algunas razones, no proporciona suficiente tolerancia presencial de una respuesta inmune de hipersensibilidad, el polipeptido tambien se puede administrar al organo diana sujeto a la exposicion natural de un material vegetal que contiene profilina, tal como se administra en las vfas respiratorias, el tracto gastrointestinal o la piel en un penodo que coincida al menos en parte o en su totalidad con la exposicion natural del individuo a dicho material vegetal que contiene profilina.

La expresion "el polipeptido tambien se administra al organo diana sujeto a la exposicion natural de un material vegetal que contiene profilina en un penodo que coincida al menos en parte o en su totalidad con la exposicion natural del individuo a dicho material vegetal que contiene profilina" pretende significar que el polipeptido se administra al organo diana al menos durante todo el penodo de exposicion al alergeno o se puede administrar en una parte de ese penodo incluyendo un penodo previo al inicio de la exposicion natural.

Se preve que, en algunas realizaciones de la invencion, el polipeptido se administra a un epitelio/mucosa de las vfas respiratorias (preferentemente, administracion nasal), de la cavidad oral (preferentemente, administracion sublingual) o del tracto gastrointestinal, con el objetivo de lograr la tolerancia oral hacia ese polipeptido. Ademas y preferentemente, una vez lograda la tolerancia oral hacia el polipeptido, el mismo polipeptido o, como alternativa, un polipeptido modificado del mismo, se administra al organo diana sujeto a la exposicion natural al material vegetal que contiene profilina de forma simultanea, de forma contemporanea, por separado o secuencialmente, en cualquier orden, para el penodo de exposicion natural al material vegetal que contiene profilina.

Por ejemplo, cuando el organo diana es las vfas respiratorias, como es lo mas relevante para los alergenos aereos (polen), el polipeptido se administra repetidamente a la cavidad oral (por ejemplo, por via sublingual) diaria o semanalmente en un penodo que vana de 4 semanas a 12 meses o mas (para lograr la tolerancia oral/linfocitos Treg), y el mismo polipeptido o un polipeptido modificado del mismo se administra a las vfas respiratorias, tal como por administracion nasal o por inhalacion, en un penodo que se solapa total o parcialmente con el penodo de la exposicion natural.

Del mismo modo, cuando el organo diana es el tracto gastrointestinal, como es lo mas relevante para los alergenos alimentarios, el polipeptido se administra de forma repetida (por ejemplo, por via sublingual), tal como diaria o semanalmente en un penodo que vana de 4 semanas a 12 meses o mas, y el mismo polipeptido o un polipeptido modificado del mismo (variante del mismo) se administra en el tracto gastrointestinal, tal como por ingestion o administracion oral, en un penodo que se solapa total o parcialmente con el penodo de la exposicion natural.

Individuos

Ya que se espera que la induccion de la tolerancia oral se vea facilitada por la falta de sensibilizacion alergica hacia el polipeptido, el individuo que necesita el presente tratamiento preferentemente no esta sensibilizado a una profilina de dicho material vegetal que contiene profilina. Es decir, la respuesta inmune de hipersensibilidad preferentemente no se debe a una profilina de dicho material vegetal que contiene profilina. Por otra parte, cuando el polipeptido no es identico a la profilina del material vegetal que contiene profilina, el individuo preferentemente no esta sensibilizado

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al polipeptido.

As^ pues, en realizaciones preferidas de la invencion, el individuo no esta, al menos no antes de administrar la primera dosis, sensibilizado a una profilina de dicho material vegetal que contiene profilina y/o dicho polipeptido, de modo que tampoco esta sensibilizado, al menos no antes de administrar la primera dosis, a una profilina de dicho material vegetal que contiene profilina ni a dicho polipeptido.

Por lo tanto, se puede determinar si la profilina del material vegetal que contiene profilina y/o dicho polipeptido se une a o se asocia de otro modo con los anticuerpos IgE (por ejemplo, anticuerpos IgE en suero) obtenidos del individuo que se va a tratar. Con este fin, se pueden aplicar varios ensayos, cada uno con diversos lfmites de deteccion y cuantificacion. Por lo tanto, se puede entender que la profilina del material vegetal que contiene profilina y/o dicho polipeptido no se une a o se asocia de otro modo con anticuerpos IgE (por ejemplo, anticuerpos IgE en suero) a niveles detectables y/o niveles cuantificables.

La presencia de anticuerpos IgE espedficos hacia la profilina y/o el polipeptido en un individuo se puede analizar mediante procedimientos bien conocidos en la tecnica, tales como mediante el uso del ensayo RAST, que es un radioinmunoensayo para detectar anticuerpos IgE espedficos a los alergenos sospechosos o conocidos. En estos ensayos, el alergeno sospechoso se une a un material insoluble y se anade el suero del paciente u otros fluidos corporales que contengan IgE (por ejemplo, saliva). Si el suero/los fluidos corporales contienen anticuerpos contra el alergeno, dichos anticuerpos se uniran o se asociaran de otra manera al alergeno. Se anade anticuerpo anti-IgE humana radiomarcado donde se une o se asocia de otro modo a dichos anticuerpos IgE ya unidos al material insoluble. Los anticuerpos anti-IgE humana no unidos se retiran mediante lavado. La cantidad de radiactividad es proporcional a la IgE en suero para el alergeno. En los ultimos anos, se aplica un ensayo superior denominado "analisis sangumeo de IgE espedfico ImmunoCAP" con el mismo fin, que en la literatura tambien se puede describir como: CAP RAST, CAP FEIA (Fluoroenzimoinmunoensayo) y Pharmacia CAP. El lfmite de deteccion cuantitativo de dichos ensayos puede ser tan bajo como de aproximadamente 0,1 kU/l. Para el uso en el contexto de la presente invencion, el lfmite de deteccion cuantitativo puede estar por debajo de 1 kU/l, tal como por debajo de 0,5 kU/l, tal como por debajo de 0,3 kU/I donde se usa el analisis sangumeo de IgE espedfico ImmunoCAP® o un ensayo comparable.

Como es evidente, la profilina y/o el polipeptido pueden no inducir una reaccion inmune de hipersensibilidad en el individuo que necesita tratamiento. Por ejemplo, la profilina y/o el polipeptido no inician, al menos no antes de administrar la primera dosis de polipeptido, una reaccion cutanea inmediata ni/o una reaccion cutanea retardada en el individuo que necesita tratamiento en la realizacion de pruebas de puncion cutanea con diversas concentraciones de profilina/polipeptido.

Como alternativa, se puede comprobar si la profilina y/o el polipeptido inducen la liberacion de histamina en un ensayo in vitro de basofilos/mastocitos usando la sangre del individuo que se vaya a tratar.

Como otra alternativa mas, se puede determinar si la profilina y/o el polipeptido no se unen a ni se asocian de otra manera con, al menos no a niveles detectables, los anticuerpos IgG, por ejemplo, anticuerpos de conejo anti-IgG, generados tras la inmunizacion de un animal, tal como un conejo, con uno o mas de los alergenos distintos de la profilina del material que contiene profilina o con un extracto acuoso del material que contiene profilina.

Se ha de entender que un individuo que necesita el presente tratamiento, puede ser un individuo ya sensibilizado a un alergeno distinto de la profilina de un material que contiene profilina. Dicho individuo puede presentar clmicamente smtomas de una respuesta inmune de hipersensibilidad o el individuo puede estar solo sensibilizado al alergeno distinto de la profilina y, sin embargo, no presentar clmicamente smtomas de una respuesta inmune de hipersensibilidad. Ademas, se ha de entender que un individuo puede beneficiarse de este tratamiento, incluso cuando no este sensibilizado al alergeno distinto de la profilina. Dicho individuo puede ser un individuo en riesgo de estar sensibilizado a un alergeno distinto de la profilina, tal como en riesgo de desarrollar una respuesta inmune de hipersensibilidad al alergeno distinto de la profilina. Un individuo en riesgo de estar sensibilizado a un alergeno se puede identificar debido al historial familiar de enfermedades atopicas.

Por lo tanto, la presente invencion tambien se refiere al "tratamiento profilactico" que se inicia antes de que el individuo haya generado anticuerpos IgE en suero detectables hacia un alergeno distinto de la profilina del material que contiene profilina o que se inicia antes de que cualquier otro marcador bioqmmico indicativo de una respuesta inmune de hipersensibilidad se pueda detectar en muestras biologicas aisladas del individuo. Ademas, la inmunoterapia profilactica tambien puede incluir el tratamiento iniciado antes de que el individuo haya desarrollado los smtomas clmicos de la enfermedad, tales como los smtomas de la rinitis alergica o asma alergica.

Como se ha mencionado, el polipeptido de la invencion se puede usar en el tratamiento de una respuesta inmune de hipersensibilidad. La pauta de dosificacion de relevancia puede ser la aplicada normalmente en el campo de la inmunoterapia espedfica con alergenos, por ejemplo, en terminos de dosis seleccionada, numero de dosis al dfa, duracion del tratamiento y frecuencia de administracion. Por lo tanto, se puede prever que el polipeptido se administre frecuentemente durante un penodo mas largo antes de alcanzarse el efecto deseable, tal como administrarse diariamente en la mucosa de la cavidad oral (por ejemplo, la mucosa sublingual) durante un penodo

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de al menos 2 a 6 meses. Tambien se preve que, cuando la respuesta immune de hipersensibilidad esta causada por un alergeno estacional, la primera dosis puede administrarse antes de la temporada del alergeno. Tambien se preve que el tratamiento se inicia mediante una fase de dosificacion creciente, en la que el polipeptido se administra a dosis crecientes durante un dfa, o con dfas o semanas hasta que se alcanza una dosis de mantenimiento.

Se ha de entender que el polipeptido es preferentemente el unico principio terapeuticamente activo que se administra. En particular, cabe senalar que el polipeptido se debe administrar en ausencia de alergenos para evitar mecanismos inmunologicos competitivos, la produccion de senales de peligro y/o la inflamacion. Por lo tanto, el alergeno distinto de la profilina al que el individuo tiene anticuerpos IgE espedficos no se debera administrar junto con el polipeptido, al menos no en el penodo de establecimiento de la tolerancia oral al polipeptido. Tambien se ha de entender que el polipeptido no se administra junto con un modulador de la via de senalizacion de Notch, como un preparado combinado para uso simultaneo, contemporaneo, separado o secuencial para la modulacion del sistema inmune como se describe en la solicitud de patente WO 2004/082710.

Polipeptidos, alergenos distintos de la profilina y materiales vegetales que contienen profilina

Un polipeptido para su uso en la presente invencion puede ser la profilina (Phl p 12) de la especie vegetal Phleum pratense, que existe en diversas isoformas tales como las que tienen una secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1 a 10, opcionalmente, en las que la metionina no esta presente en la posicion 1. En particular, este profilina se presenta inherentemente de forma concomitante con un alergeno distinto de la profilina, tal como Phl p 1, 5 o 6, cuando el individuo se expone al polen de grammeas del orden de plantas Poales durante la estacion del polen de grammeas.

Se ha de entender que los polipeptidos que incluso difieren de la secuencia de aminoacidos de la profilina Phl p 12 pueden reemplazar la Phl p 12 como un antfgeno presencial utilizable en la supresion de una respuesta inmune de hipersensibilidad causada por un alergeno distinto de la profilina de polen de grammea. Por ejemplo, las profilinas homologas a Phl p 12, tales como la profilina del polen de abedul, Bet v 2, o la profilina del polen del olivo, Ole e 2, se pueden usar en la supresion de una respuesta inmune de hipersensibilidad causada por un alergeno distinto de la profilina del polen de grammeas del orden de plantas Poales. Tambien se preve que debido a la similitud de alto peso molecular, tal como al menos el 60 % de identidad entre las secuencias de aminoacidos de Phl p 12 y Bet v 2 u Ole e 2, se establecio suficiente reactividad cruzada inmunologica entre Phl p 12 y Bet v 2 u Ole e 2, de modo que el tratamiento con Phl p 12 genero una respuesta de tolerancia que puede ser activada por el polipeptido homologo Bet v 2 u Ole e 2 tras la exposicion al polen de abedul o al polen del olivo, conduciendo a una regulacion negativa concomitante de una respuesta inmune de hipersensibilidad causada por un alergeno distinto de la profilina de polen de abedul y/o grammeas. Del mismo modo, el tratamiento de un individuo con la profilina Bet v 2 puede dar lugar a una respuesta de tolerancia que puede activarse por la exposicion al polipeptido homologo Phl p 12 u Ole e 2 tras la exposicion al polen de grammea o de olivo, respectivamente, lo que lleva a la regulacion negativa concomitante de una respuesta inmune de hipersensibilidad causada por un alergeno distinto de la profilina del polen de abedul y/o del polen de grammeas y/o del polen del olivo.

Por lo tanto, un polipeptido para su uso en la presente invencion tiene, consiste en, consiste esencialmente en, comprende una secuencia de aminoacidos que tiene una identidad y/o similitud de al menos un 60 %, tal como una identidad y/o similitud de al menos 70 %, 75, 80, 85, 90 , 95 y 98 % con una secuencia de aminoacidos mostrada en SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10, opcionalmente, sin metionina en la posicion 1 (extremo N-terminal).

Los ejemplos tfpicos de polipeptidos que tienen una secuencia de aminoacidos de identidad y/o similitud de al menos un 60 % con la secuencia de aminoacidos mostrada en SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 son profilinas de otros materiales vegetales que contienen profilina.

Las Tablas 1-4 muestran profilinas ilustrativas de un material vegetal que contiene profilina (identificado por su numero de UniProt, extrafdo de http\:uniprot.org y su porcentaje de identidad con Phl p 12 (SEQ ID N°: 1) en el que el porcentaje de identidad en la secuencia de aminoacidos se ha determinado usando alineacion con BLAST (Base de datos = UniProtKB, Umbral = 10, Matriz = auto, Filtrado = Ninguno, Hueco = 500, Aciertos = 500). Hay un grado notablemente alto de identidad entre las profilinas de diversas especies vegetales, tal como una identidad de al menos un 60 % entre las secuencias de aminoacidos de SEQ ID NO: 1 y los profilinas mostradas en la Tabla 4. En particular, el porcentaje de identidad del grupo de las grammeas y los cereales (orden Poales, por ejemplo, genero Cynodon (grama comun), Hordeum (cebada), Oryza (arroz), Phleum pratense (hierba timotea), Sorghum (hierba), Triticum (trigo duro) y Zea (mafz) que pertenecen a las clase de plantas monocotiledoneas es alto, tal como superior al 80 %. Ademas, profilinas de arboles (polen de los arboles) tienen alta identidad con la profilina Phl p 12, tal como en un 70 % a 82 % (Orden Fagales, por ejemplo, genero Betula (abedul), genero Corylus (avellana); orden Arecales, por ejemplo, genero Elaeis (palmera); orden Malvales, por ejemplo, genero Gossypium (algodonero); orden Malpighiales, por ejemplo, genero Hevea (arbol del latex), orden Mercuriales, por ejemplo, genero Ricinus; orden Lamiales, por ejemplo, genero Olea (olivo), genero Populus (alamo), orden Myrtales, por ejemplo, genero Sonneratia. Las profilinas del polen de las malas hierbas tienen un porcentaje de identidad en un 75 a 81 % (orden Asterales, por ejemplo, genero Ambrosia (ambrosia corta), genero Artemisia del genero Helianthus (girasol).

Tambien las frutas, los frutos secos y las legumbres del orden Apiales, Fabales, Rosales, Solanales y Vitales tienen

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un alto porcentaje de identidad con Phl p 12, tal como en el 70 % al 82 % (orden Apiales, por ejemplo, genero Apium (apio), genero Daucus (zanahoria), genero Petroselinum (perejil); orden Fabales, por ejemplo, genero Arachis (cacahuete); orden Rosales, por ejemplo, genero Glycine (soja), genero Fragaria (fresa), genero Humulus, genero Malus (manzana), genero Parietaria, genero Prunus (melocotonero, albaricoquero, cerezo, almendro), genero Pyrus (pera); orden Solanales, por ejemplo, genero Capsicum (chile), genero Nicotiana (tabaco), genero Lycopersicon (tomate), genero Solanum (patata), orden Vitales, por ejemplo, genero Vitis (uva).

Otros profilinas interesantes son del orden Brassicales, por ejemplo, genero Arabidopsis, Brassica (colza), orden Caryoplyllales, por ejemplo, genero Chenopodium, orden Sapindales, por ejemplo, genero Citrus (naranja), genero Litchi; orden Curcubitales, por ejemplo, genero Cucumis (pepino, melon).

Por lo tanto, los ejemplos tipicos de materiales vegetales que contienen profilina que tienen al menos un 80 % de identidad con SEQ ID NO: 1 son de un genero de plantas seleccionado de Amaranthus, Ambrosia, Brassica, Chenopodium, Corylus, Cynodon, Elaeis, Helianthus, Hevea, Hordeum, Litchi, Mercurialis, Nicotiana, Olea, Oryza, Phleum, Phoenix, Solanum, Sonneratia, Sorghum, Triticum y Zea.

Los ejemplos tfpicos de materiales vegetales que contiene profilina que tienen al menos un 70 % de identidad con SEQ ID NO: 1 son de un genero de plantas seleccionado de Amaranthus, Ambrosia, Ananas, Apium, Arabidopsis, Arachis, Artemisia, Betula, Brassica, Capsicum, Caryota, Chenopodium, Citrus, Corylus, Cucumis, Cynodon, Elaeis, Fragaria, Glycine, Helianthus, Hevea, Hordeum, Humulus, Litchi, Malus, Mercurialis, Musa, Nicotiana, Olea, Oryza, Parieraria, Petroselinum, Phaseolus, Phleum, Phoenix, Picea, Pinus, Plantago, Populus, Prunus, Pyrus, Ricinus, Salsola, Solanum, Sonneratia, Sorghum, Triticum, Vitis y Zea.

Por lo tanto, parece que hay una alta conservacion en las secuencias de aminoacidos de las profilinas de especies vegetales de las clases vegetales Plantae Pinopsida (anteriormente conocida como Coniferopsida), Plantae monocotiledoneae (tambien conocidas como monocotiledoneas y denominadas anteriormente Liliopsida) y Plantae Magnoliopsida.

Por lo tanto, un polipeptido para su uso en la presente invencion puede ser una profilina de un material vegetal que contiene profilina de una clase de plantas seleccionada del grupo que comprende Plantae Pinopsida, Plantae monocotiledoneae y Plantae Magnoliopsida, por ejemplo, de un orden de plantas, familia de plantas, genero de plantas o especie vegetal que se muestran en las Tablas 1, 2 y 3. Como se describe mas adelante, un polipeptido de la invencion puede ser, ademas de los de origen natural, una variante de una profilina natural.

De acuerdo con el concepto de tolerancia presencial de la presente invencion, se deduce que la respuesta inmune de hipersensibilidad es generada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina que bien es de la misma especie vegetal o de otra especie vegetal, genero de plantas, orden de plantas o clase de plantas que el material vegetal que contiene profilina del que se deriva la molecula de profilina. Por lo tanto, una respuesta inmune de hipersensibilidad es generada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina de una clase de plantas seleccionada del grupo que comprende Plantae Pinopsida, Plantae monocotiledoneae y Plantae Magnoliopsida, por ejemplo, de un orden de plantas, familia de plantas, genero de plantas o especie vegetal que se muestran en las Tablas 1, 2 y 3.

Los ejemplos interesantes tfpicos de un material vegetal que contiene profilina son de un orden de plantas seleccionado del grupo que comprende Pinales, Arecales, Asparagales, Poales, Zingiberales Apiales, Asterales, Brassicalis, Curcurbitales, Ericales, Fabales, Fagales, Gentianales, Lamiales, Laurales, Malvales, Malpighiales, Myrtales, Proteales, Rosales, Sapindales, Solanales y Vitales, preferentemente Pinales, Poales, Arecales, Apiales, Asterales, Brassicalis, Caryophyllales, Fabales, Fagales, Lamiales, Malphighialis, Proteales, Rosales, Sapindales y Solanales, mas preferentemente, Pinales, Arecales, Poales, Asterales, Brassicalis, Caryophyllales, Fagales, Lamiales, Rosales y Solanales, lo mas preferentemente Poales, Asterales, Fagales y Lamialis, incluso mas preferentemente Poales.

Mas espedficamente, un material vegetal que contiene profilina es de una familia de plantas seleccionada del grupo que comprende Cupressaceae, Arecaceae, Asparagaceae, Iridaceae, Bromeliaceae, Poaceae, Musaceae, Zingiberaceae, Apiaceae, Araliaceae, Asteraceae, Brassicaceae, Amaranthaceae, Caryophyllaceae, Polygonaceae, Cucurbitaceae, Actinidiaceae, Lecythidaceae, Theaceae, Fabaceae, Betulaceae, Fagaceae, Juglandaceae, Myricaceae, Nothofagaceae, Ticodendraceae, Apocynaceae, Rubiaceae, Oleaceae, Pedaliacae, Plantaginaceae, Lauraceae, Malvaceae, Euphorbiaceae, Lythraceae, Platanaceae, Cannabaceae, Rosaceae, Ulmaceae, Urticaceae, Anacardiaceae, Rutaceae, Sapindaceae, Solanaceae, Vitaceae, preferentemente Cupressaceae, Arecaceae, Bromeliaceae, Poaceae, Apiaceae, Asteraceae, Brassicaceae, Amaranthaceae, Caryophyllaceae, Fabaceae, Betulaceae, Fagaceae, Oleaceae, Euphorbiaceae, Platanaceae, Cannabaceae, Rosaceae y Solanaceae, lo mas preferentemente Poaceae, Asteraceae, Betulaceae y Oleaceae.

Incluso mas espedficamente, un material vegetal que contiene profilina es de un genero de plantas seleccionado del grupo que comprende Chamaecyparis, Cryptomeria, Cupressus, Juniperus, Phoenix, Asparagus, Crocus, Ananas, Anthoxanthum, Cynodon, Dactylis, Festuca, Holcus, Hordeum, Lolium, Oryza, Paspalum, Phalaris, Phleum, Poa, Secale, Sorghum, Triticum, Zea, Musa, Apium, Daucus, Ambrosia, Artemisia, Helianthus, Lactuca,

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Arabidopsis, Brassica, Sinapis, Amaranthus, Beta, Chenopodium, Fagopyrum, Salsola, Cucumis, Actinidia, Bertholletia, Arachis, Glycine, Lens, Lupinus, Phaseolus, Pisum, Vigna, Alnus, Betula, Carpinus, Carya, Castanea, Corylus, Fagus, Juglans, Ostrya, Quercus, Catharanthus, Coffea, Fraxinus, Ligustrum, Olea, Plantago, Sesamum, Syringa, Persea, Gossypium, Hevea, Manihot, Mercurialis, Popolus, Ricinus, Sonneratia, Platanus, Fragaria, Humulus, Malus, Morus, Parietaria, Prunus, Pyrus, Rubus, Ziziphus, Anacardium, Citrus, Litchi, Mangifera, Pistacia, Capsicum, Lycopersicon, Solanum y Vitis, mas preferentemente Cryptomeria, Ananas, Anthoxanthum, Cynodon, Dactylis, Festuca, Holcus, Hordeum, Lolium, Oryza, Paspalum, Phalaris, Phleum, Poa, Secale, Sorghum, Triticum, Zea, Apium, Daucus, Ambrosia, Artemisia, Helianthus, Chenopodium, Salsola, Arachis, Glycine, Alnus, Betula, Carpinus, Carya, Castanea, Corylus, Fagus, Juglans, Ostrya, Quercus, Fraxinus, Olea, Plantago, Hevea, Mercurialis, Platanus, Humulus, Malus, Parietaria, Prunus, Pyrus, Rubus, Capsicum, Lycopersicon y Solanum, incluso mas preferentemente Cryptomeria, Anthoxanthum, Cynodon, Dactylis, Festuca, Holcus, Hordeum, Lolium, Oryza, Phleum, Poa, Secale, Sorghum, Triticum, Zea, Ambrosia, Artemisia, Helianthus, Chenopodium, Salsola, Betula, Corylus, Olea, Parietaria y Solanum.

Todavfa mas espedficamente, un material vegetal que contiene profilina contiene un alergeno distinto de la profilina seleccionado del grupo que comprende Cha o 1, Cha o 2, Cry j 1, Cry j 2, Cup a 1, Cup s 1, Cup s 3, Jun a 1, Jun a 2, Jun a 3, Jun o 4, Jun s 1, Jun v 1, Jun v 3, Ana c 2, Ant o 1, Aspa o 1, Cro s 1, Cro s 2, Cyn d 1, Cyn d 7, Cyn d 15, Cyn d 22w, Cyn d 23, Cyn d 24, Dac g 1, Dac g 2, Dac g 3, Dac g 4, Dac g 5, Fes p 4, Hol l 1, Hol l 5, Hor v 1, Hor v 5, Hor v 12, Hor v 15, Hor v 16, Hor v 17, Hor v 21, Lol p 1, Lol p 2, Lol p 3, Lol p 4, Lol p 5, Lol p 11, Mus a 2, Mus a 3, Mus a 4, Mus a 5, Ory s 1, Ory s 12, Pas n 1, Pha a 1, Pha a 5, Phl p 1, Phl p 2, Phl p 4, Phl p 5, Phl p 6, Phl p 7, Phl p 11, Phl p 13, Pho d 2, Poa p 1, Poa p 5, Sec c 1, Sec c 5, Sec c 20, Sor h 1, Tri a 14, Tri a 15, Tri a 18, Tri a 19, Tri a 21, Tri a 25, Tri a 26, Tri a 27, Tri a 28, Tri a 29, Tri a 30, Tri a 31, Tri a 32, Tri a 33, Tri a 34, Tri a 35, Tri a 36, Tri a 37, Zea m 1, Zea m 12, Zea m 14, Zea m 25, Act c 5, Act c 8, Act c 10, Act d 1, Act d 2, Act d 3, Act d 4, Act d 5, Act d 6, Act d 7, Act d 8, Act d 10, Act d 11, Aln g 1, Aln g 4, Amb a 1, Amb a 2, Amb a 3, Amb a 4, Amb a 5, Amb a 6, Amb a 7, Amb a 9, Amb a 10, Amb p 5, Amb t 5, Ana o 1, Ana o 2, Ana o 3, Api g 1, Api g 2, Api g 3, Api g 5, Api g 6, Ara h 1, Ara h 2, Ara h 3, Ara h 4, Ara h 6, Ara h 7, Ara h 9, Ara h 10, Ara h 11, Art v 1, Art v 2, Art v 3, Art v 5, Art v 6, Ber e 1, Ber e 2, Beta v 1, Bet v 1, Bet v 3, Bet v 4, Bet v 6, Bet v 7, Bra j 1, Bra n 1, Bra o 3, Bra r 1, Bra r 2, Cap a 1 w, Car b 1, Car i 1, Car i 4, Cas s 1,

Cas s 5, Cas s 8, Cas s 9, Cat r 1, Che a 1, Che a 3, Cit l 3, Cit r 3, Cit s 1, Cit s 3, Cof a 1, Cor a 1, Cor a 8,

Cor a 9, Cor a 10, Cor a 11, Cor a 12, Cor a 13, Cor a 14, Cuc m 1, Cuc m 3, Dau c 1, Fag e 2, Fag t 2, Fag s 1,

Fra a 1, Fra a 3, Fra e 1, Gly m 1, Gly m 2, Gly m 4, Gly m 5, Gly m 6, Hel a 1, Hel a 3, Hev b 1, Hev b 2, Hev b

3, Hev b 4, Hev b 5, Hev b 6, Hev b 7, Hev b 9, Hev b 10, Hev b 11, Hev b 12, Hev b 13, Hev b 14, Hum j 1, Jug

n 1, Jug n 2, Jug r 1, Jug r 2, Jug r 3, Jug r 4, Lac s 1, Len c 1, Len c 2, Len c 3, Lig v 1, Lup an 1, Lyc e 2, Lyc e

3, Lyc e 4, Mal d 1, Mal d 2, Mal d 3, Man e 5, Mer a 1, Mor n 3, Ole e 1, Ole e 3, Ole e 4, Ole e 5, Ole e 6, Ole e

7, Ole e 8, Ole e 9, Ole e 10, Ole e 11, Ost c 1, Par j 1, Par j 2, Par j 4, Par o 1, Pers a 1, Pha v 3, Pis v 1, Pis v

2, Pis v 3, Pis v 4, Pis v 5, Pis s 1, Pis s 2, Pla l 1, Pla a 1, Pla a 2, Pla or 1, Pla or 2, Pla or 3, Pru ar 1, Pru ar

3, Pru av 1, Pru av 2, Pru av 3, Pru d 3, Pru du 3, Pru du 5, Pru du 6, Pru p 1, Pru p 2, Pru p 3, Pyr c 1, Pyr c

3, Pyr c 5, Que a 1, Ric c 1, Rub i 1, Rub i 3, Sal k 1, Sal k 2 Sal k 3, Sal k 5, Ses i 1, Ses i 2, Ses i 3, Ses i 4, Ses i 5, Ses i 6, Ses i 7, Sin a 1, Sin a 2, Sin a 3, Sola t 1, Sola t 2, Sola t 3, Sola t 4, Syr v 1, Syr v 3, Vig r 1, Vit v 1 y Ziz m 1.

El alergeno distinto de la profilina es preferentemente un alergeno importante, tal como seleccionado del grupo que comprende Cha o 1, Cry j 1, Cry j 2, Cup a 1, Cup s 1, Jun a 1, Jun s 1, Jun v 1, Ana c 1, Ant o 1, Aspa o 1, Cro s 1, Cyn d 1, Dac g 1, Dac g 5, Fes p 4, Hol l 1, Hol l 5, Hor v 1, Hor v 5, Hor v 12, Hor v 15, Hor v 16, Hor v 17, Hor v 21,

Lol p 1, Lol p 5, Mus a 1, Ory s 1, Pas n 1, Pha a 1, Pha a 5, Phl p 1, Phl p 5, Phl p 6, Pho d 2, Poa p 1, Poa p 5, Sec c

1, Sec c 5, Sor h 1, Tri a 12, Zea m 1, Zea m 12, Zea m 14, Zea m 25, Act c 5, Act d 1, Act d 2, Aln g 1, Aln g 4, Ama

r 2, Amb a 1, Amb a 2, Amb p 5, Amb t 5, Ana o 1, Ana o 2, Api g 1, Api g 5, Ara h 1, Art v 1, Ber e 1, Beta v 1, Bet v

1, Bra j 1, Bra n 1, Bra o 3, Bra r 1, Cap a 1w, Cap a 2, Car b 1, Car i 1, Cas s 1, Cat r 1, Che a 1, Cit l 3, Cit r 3, Cit s 1, Cof a 1, Cor a 1, Cor a 2, Cuc m 1, Dau c 1, Fag e 2, Fag t 2, Fag s 1, Fra a 1, Fra e 1, Gly m 1, Gly m 2, Hel a 1,

Hel a 3, Hev b 1, Hum j 1, Jug n 1, Jug r 1, Lac s 1, Len c 1, Lig v 1, Lit c 1, Lup an 1, Lyc e 1, Lyc e 2, Mal d 1, Ole e

1, Ole e 2, Ost c 1, Par j 1, Par o 1, Pers a 1, Pha v 3, Pis v 1, Pis s 1, Pla l 1, Pla a 1, Pla a 2, Pla or 1, Pla or 2, Pru ar 1, Pru av 1, Pru p 1, Pyr c 1, Que a 1, Ric c 1, Rub i 1, Sal k 1, Ses i 1, Sin a 1, Sola t 1, Syr v 1, Vig r 1, Vit v 1 and Ziz m 1, tal como, preferentemente, Cry j 1, Cry j 2, Cyn d 1, Dac g 1, Dac g 5, Fes p 4, Hol l 1, Hol l 5, Hor v 1,

Hor v 5, Hor v 12, Hor v 15, Hor v 16, Hor v 17, Hor v 21, Lol p 1, Lol p 5, Ory s 1, Pas n 1, Pha a 1, Pha a 5, Phl p 1,

Phl p 5, Phl p 6, Poa p 1, Poa p 5, Sec c 1, Sec c 5, Sor h 1, Tri a 12, Zea m 1, Zea m 12, Zea m 14, Zea m 25, Aln g

1, Aln g 4, Amb a 1, Amb a 2, Amb p 5, Amb t 5, Api g 1, Api g 5, Ara h 1, Art v 1, Bet v 1, Bra j 1, Bra n 1, Bra o 3, Bra r 1, Cap a 1w, Cap a 2, Car b 1, Car i 1, Cas s 1, Cat r 1, Che a 1, Cor a 1, Cor a 2, Cuc m 1, Dau c 1, Gly m 1, Gly m

2, Hel a 1, Hel a 3, Hev b 1, Hum j 1, Lit c 1, Lyc e 1, Lyc e 2, Mal d 1, Ole e 1, Ole e 2, Par j 1, Par o 1, Pla l 1, Pla a

1, Pla a 2, Pla or 1, Pla or 2, Pru ar 1, Pru av 1, Pru p 1, Pyr c 1, Que a 1, Ric c 1, Rub i 1, Sal k 1, Sin a 1 y Sola t 1.

Por lo general, el material vegetal que contiene profilina es polen, tal como polen de grammea, de grano, de arbol o de mala hierba, pero tambien puede ser un alimento o un ingrediente alimentario, como un cereal, un fruto seco, una fruta o un vegetal.

En algunas realizaciones preferidas de la invencion, el alergeno distinto de la profilina es de un polen de un genero de plantas seleccionado del grupo que comprende Cryptomeria, Anthoxanthum, Cynodon, Dactylis, Festuca, Holcus, Hordeum, Lolium, Oryza, Paspalum, Phalaris, Phleum, Poa, Secale, Sorghum, Triticum, Zea, Ambrosia,

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Artemisia, Alnus, Betula, Carpinus, Carya, Castanea, Corylus, Fagus, Juglans, Ostrya, Quercus, Fraxinus, Ligustrum, Olea, Salsola, Plantago, Platanus, Humulus y Parietaria, tal como un alergeno distinto de la profilina seleccionado del grupo que comprende Cry j 1, Cry j 2, Ant o 1, Cyn d 1, Cyn d 7, Cyn d 15, Cyn d 22w, Cyn d 23, Cyn d 2, Dac g 1, Dac g 2, Dac g 3, Dac g 4, Dac g 5, Fes p 4; Hol l 1, Hol l 5, Hor v 1, Hor v 5, Lol p 1, Lol p 2, Lol p 3, Lol p 4, Lol p 5, Lol p 11, Ory s 1, Pas n 1, Pha a 1, Pha a 5, Phl p 1, Phl p 2, Phl p 4, Phl p 5, Phl p 6, Phl p 7, Phl p 11, Phl p 13, Poa p 1, Poa p 5, Sec c 1, Sec c 5, Sor h 1, Tri a 15, Tri a 21, Tri a 27, Tri a 28, Tri a 29, Tri a 30, Tri a 31, Tri a 32, Tri a 33, Tri a 34, Tri a 35, Zea m 1, Zea m 12, Amb a 1, Amb a 2, Amb a 3, Amb a 4, Amb a 5, Amb a 6, Amb a 7, Amb a 9, Amb a 10, Amb p 5, Amb t 5, Art v 1, Art v 2, Art v 3, Art v 5, Art v 6, Sal k 1, Sal k 2, Sal k 3, Sal k 5, Aln g 1, Aln g 4, Bet v 1, Bet v 3, Bet v 4, Bet v 6, Bet v 7, Car b 1, Car i 1, Car i 4, Cas s 1, Cas s 5, Cas s 8, Cas s 9, Cor a 10, Fag e 2, Fag t 2, Fag s 1, Jug n 1, Jug n 2, Jug r 1, Jug r

2, Jug r 3, Jug r4, Ost c 1, Que a 1, Fra e 1, Lig v 1, Ole e 1, Ole e 3, Ole e 4, Ole e 5, Ole e 6, Ole e 7, Ole e 8, Ole e 9, Ole e 10 and Ole e 11, Pla l 1, Pla a 1, Pla a 2, Pla a 3, Pla or 1, Pla or 2, Hum j 1; Par j 1, Par j 2, Par j 4 y Par o 1.

En otras realizaciones preferidas de la invencion, el alergeno distinto de la profilina es de un alimento o ingrediente alimentario de un genero de plantas seleccionado del grupo que comprende Hordeum, Oryza, Secale, Triticum, Zea, Apium, Daucus, Petroselinum, Helianthus, Lactuca, Arabidopsis, Brassica, Sinapsis, Cucumis, Fagopyrum, Actinidia, Betholletim, Glycine, Lens, Lupinus, Phaseolus, Juglans, Fragaria, Malus, Morus, Pyrus, Rubus, Ziziphus, Anacardium, Citrus, Mangifera, Litchi, Pistacia, Capsicum Lycopersicon, Nicotiana, Solanaum y Vitis. Mas espedficamente, el material que contiene profilina contiene un alergeno distinto de la profilina seleccionado del grupo que comprende Hor v 12, Hor v 15, Hor v 16, Hor v 17, Hor v 21, Ory s 12, Sec c 20, Tri a 12, Tri a 14,

Tri a 18, Tri a 19, Tri a 21, Tri a 25, Tri a 26, Tri a 36, Zea m 14, Zea m 25, Api g 1, Api g 2, Api g 3, Api g 4, Api

g 5, Api g 6, Dau c 1, Dau c 4, Hel a 3, Lac s 1, Bra j 1, Bra n 1, Bra o 3, Bra r 1, Bra r 2, Sin a 1, Sin a 2, Sin a

3, Sin a 4, Cuc m 1, Cuc m 2, Cuc m 3, Fag e 2, Act c 5, Act c 8, Act c 10, Act d 1, Act d 2, Act d 3, Act d 4, Act d

5, Act d 6, Act d 7, Act d 8, Act d 9, Act d 10, Act d 11, Ber e 1, Ber e 2, Ara h 1, Ara h 2, Ara h 3, Ara h 4, Ara h 5, Ara h 6, Ara h 7, Ara h 8, Ara h 9, Ara h 10, Ara h 11, Gly m 1, Gly m 2, Gly m 3, Gly m 4, Gly m 5, Gly m 6s Len c 1, Len c 2, Len c 3s Lup an 1 Pha v 3, Pis v 1, Pis v 2, Pis v 3, Pis v 4, Pis v 5, Pis s 1, Pis s 2, Vig r 1, Vig r6, Cor a 1, Cor a 2, Cor a 8, Cor a 9, Cor a 11, Cor a 12, Cor a 13 and Cor a 14, Jug n 1 and Jug n 2, Jug r 1, Jug r 2, Jug r 3, Jug r 4, Pru du 3, Pru du 4, Pru du 5, Pru du 6, Fra a 1, Fra a 3, Fra a 4, Mal d 1, Mal d 2,

Mal d 3, Mal d 4, Mor n 3, Pru ar 1, Pru ar 3, Pru av 1, Pru av 2, Pru av 3, Pru av 4, Pru d 3, Pru p 1, Pru p 2,

Pru p 3, Pru p 4, Pyr c 1, Pyr c 3, Pyr c 4, Pyr c 5, Rub i 1, Rub i 3, Ziz m 1, Ana o 1, Ana o 2, Ana o 3, Cit l 3,

Cit r 3, Cit s 1, Cit s 2, Cit s 3, Lit c 1, Man e 5, Pis v 1, Pis v 2, Pis v 3, Pis v 4, Pis v 5, Cap a 1w, Cap a 2, Lyc

e 1, Lyc e 2, Lyc e 3, Lyc e 4, Sola t 1, Sola t 2, Sola t 3, Sola 14 y Vit v 1.

Los ejemplos tfpicos de polen de grammeas son del orden Poales, tal como, en particular, de la familia de plantas Poaceae, tales como, en particular, de un genero de plantas de Anthoxanthum, Cynodon, Dactylis, Festuca, Holcus, Hordeum, Lolium, Oryza, Paspalum, Phalaris, Phleum, Poa, Secale, Sorghum, Triticum y Zea. Por lo general, el polen de las malas hierbas deriva del orden de plantas Asterales, tal como de la familia Asteraceae, tal como del genero Ambrosia y Artemisia. Por lo general, el polen de los arboles deriva del orden de plantas Fagales (tal como de las familias Betulaceae (Betula, Alnus, Carpinus, Corylus, Ostrya), Fagaceae (Fagus, Quercus, Castanea) y Juglandaceae (Juglans y Carya); del orden de plantas Lamiales (tal como de la familia Oleacea, tal como del genero Olea); del orden de plantas Pinales (tal como de la familia Cupressaceae, tal como del genero Juniperus).

Los alimentos o ingredientes alimentarios derivan normalmente del orden de plantas Apiales (tal como, por ejemplo, de la familia Apiaceae, tal como del genero Apium y Daucus); Fabales (tal como la familia Fabaceae comunmente conocida como familia de las leguminosas, de los guisante o de los frijoles), incluyendo entre otros Glycine max (soja) y Arachis hypogaea (cacahuete); Rosales (tal como la familia Rosaceae que incluye, entre otras, manzanos, albaricoqueros, ciruelos, cerezos, melocotoneros, perales, frambueso y freson); Poales (tal como la familia Poaceae, que, entre otros, incluye cebada, mafz, mijo, arroz y trigo).

Por otra parte, el material vegetal que contiene profilina puede derivar del genero de plantas Hevea (familia de latex), que es relevante en el tratamiento de una respuesta inmune de hipersensibilidad hacia un alergeno distinto de la profilina de latex o cualquier material que contenga latex.

Como se ha de entender, se considera que cualquier polipeptido que tenga una secuencia de aminoacidos que tenga al menos un 60 % de identidad y/o similitud, tal como al menos un 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad y/o similitud con la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1 se puede usar para el tratamiento de una respuesta inmune de hipersensibilidad causada por un alergeno distinto de la profilina de un material que contiene profilina mencionado en las Tablas 1, 2 o 3. Sin embargo, para garantizar la reactividad cruzada inmunologica en el momento de la exposicion al material vegetal que contiene profilina, es deseable que el polipeptido usado en la fase de tratamiento (tal como el usado como un antfgeno que induce tolerancia) tenga una secuencia de aminoacidos que tenga al menos un 60 % de identidad con la secuencia de aminoacidos de la profilina presente en el material que contiene profilina al que esta expuesto el individuo y que contiene el alergeno distinto de la profilina causante de la respuesta inmune de hipersensibilidad. Por lo tanto, un polipeptido de la invencion tambien puede tener una secuencia de aminoacidos que tenga una identidad y/o similitud de al menos el 60 %, tal como una identidad y/o similitud de al menos el 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % con la secuencia de aminoacidos de la

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profilina a la que el individuo se expone al exponerlo al alergeno distinto de la profilina del material vegetal que contiene profilina.

Asf pues, en realizaciones preferidas de la invencion, el material vegetal que contiene profilina es de una familia de plantas seleccionada del grupo que comprende Poaceae, Asteraceae, Betulaceae, Fagaceae, Juglandaceae, Oleacea, Apiaceae, Rosaceae y Euphorbiaceae o una variante de las mismas, preferentemente teniendo la variante y la profilina una secuencia de aminoacidos que tenga al menos un 60 % de identidad con la secuencia de aminoacidos de la profilina del material vegetal que contiene profilina.

Por lo tanto, el polipeptido es una profilina de una especie vegetal de una familia de plantas seleccionada del grupo que comprende Poaceae, Asteraceae, Betulaceae, Fagaceae, Juglandaceae, Oleacea, Apiaceae, Rosaceae y Euphorbiaceae o una variante de las mismas, preferentemente teniendo la variante y la profilina una secuencia de aminoacidos que tenga al menos un 60 % de identidad con la secuencia de aminoacidos de la profilina del material vegetal que contiene profilina, y preferentemente estando la respuesta inmune de hipersensibilidad causada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina de una especie vegetal de una familia de plantas seleccionada del grupo que comprende Poaceae, Asteraceae, Betulaceae, Fagaceae, Juglandaceae, Oleacea, Apiaceae, Rosaceae y Euphorbiaceae.

Mas concretamente, en realizaciones preferidas de la invencion, el polipeptido es una profilina de una especie vegetal de un genero de plantas seleccionado del grupo que comprende Anthoxanthum, Cynodon, Dactylis, Festuca, Holcus, Hordeum, Lolium, Oryza, Paspalum, Phalaris, Phleum, Poa, Secale, Sorghum, Triticum, Zea, Apium, Daucus, Ambrosia, Artemisia, Arachis, Glycine, Alnus, Betula, Corylus, Fagus, Quercus, Olea, Plantago, Malus, Parietaria, Prunus, Lycopersicon y Solanum, o una variante de las mismas, preferentemente teniendo la variante y la profilina una secuencia de aminoacidos que tenga al menos un 60 % de identidad con la secuencia de aminoacidos de la profilina del material vegetal que contiene profilina, y preferentemente estando la respuesta inmune de hipersensibilidad causada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina de una especie vegetal de un genero de plantas seleccionado del grupo que comprende de Anthoxanthum, Cynodon, Dactylis, Festuca, Holcus, Hordeum, Lolium, Oryza, Paspalum, Phalaris, Phleum, Poa, Secale, Sorghum, Triticum, Zea, Apium, Daucus, Ambrosia, Artemisia, Arachis, Glycine, Alnus, Betula, Corylus, Fagus, Quercus, Olea, Plantago, Malus, Parietaria, Prunus, Lycopersicon y Solanum.

Incluso mas concretamente, en realizaciones preferidas de la invencion, el polipeptido tiene una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que comprende SEQ ID NO: 11 a 43, que son secuencias de aminoacidos ilustrativas de las profilinas del orden Poales (SEQ ID NO: 11 -15, 40), del orden Lamiales (SEQ ID NO: 16), del orden Fagales (SEQ ID NO: 17), del orden Fagales (SEQ ID NO: 17-18), del orden Fabales (SEQ ID NO: 19-20), del orden Asterales (SEQ ID NO: 21 23), del orden Malpighiales (SEQ ID No: 24), del orden Rosales (SEQ ID NO: 2523), del orden Asterales (SEQ ID NO: 21-23), del orden Asterales (SEQ ID NO: 24-31), del orden Arecales (SEQ NO: 32), del orden Caryophyllales (SEQ ID NO: 33-35), del orden Apiales (SEQ ID NO: 36-37), del orden Cucurbitales (sEq ID NO: 38), del orden Solanales (SEQ ID NO: 39), del orden Asparagales (SEQ ID NO: 41), del orden Zingiberales (SEQ ID NO: 42) o siendo el polipeptido una variante de dicha profilina, como se define en mayor profundidad mas adelante.

En particular, las SEQ ID NO: 1-42 tienen una metionina como el primer aminoacido en el extremo N-terminal (posicion 1), que se puede eliminar mediante degradacion enzimatica en una celula huesped productora de las secuencias mediante tecnicas recombinantes. Por lo tanto, se ha de entender que, en cualquiera de las secuencias de aminoacidos mencionadas en el presente documento (SEQ ID NO: 1-42), el grupo metionina de la posicion 1 no esta presente. Por lo tanto, en algunas realizaciones, las secuencias de aminoacidos de SEQ ID NO: 1-42 no contienen metionina en la posicion 1.

Un polipeptido tambien se puede seleccionar de profilinas conocidas, tales como profilinas seleccionadas del grupo que comprende profilina Cry j, Pho d 2, Ana c 1 ,Cyn d 12, Tri a 12, Mus a 1, Api g 4, Dau c 4, Amb a 8, Art v 4, Hel a 2, Ara t 8, Sin a 4, Ama r 2, Beta v 2, Che e 2, Sal k 4, Act d 9, Cuc m 2, Ara h 5, Gly m 3, Bet v 2, Cor a 2, Ole e 2, Hev b 8, Mer a 12, Pla a 3, Fra a 4, Mal d 4, Par j 3, Pru av 4, Pru du 4, Pru p 4, Pyr c 4, Cit s 2, Lit c 1, Cap a 2, Lyc e 1 o una variante de la misma.

Por otra parte, en realizaciones preferidas de la invencion, el polipeptido tiene una alta similitud con cualquiera de las profilinas que se muestran en SEQ ID NO: 1-42, de modo que al menos un 60 %, tal como al menos un 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % y 95 % de la secuencia de aminoacidos se solapa con la secuencia de aminoacidos de una profilina seleccionada del grupo de SEQ ID NO: 1-42.

El polipeptido se puede usar en su forma de origen natural incluyendo o excluyendo diversas isoformas, se puede extraer/aislar de un material vegetal que contiene profilina o se puede reproducir mediante el uso de procedimientos biologicos (por ejemplo, tecnicas recombinantes) o procedimientos sinteticos como es bien conocido en la tecnica.

Por lo tanto, en algunas realizaciones, un polipeptido usado en la presente invencion esta en una forma purificada y/o forma aislada, mientras que, en otras realizaciones, un polipeptido de la invencion puede ser una variante de una profilina natural de un material vegetal que contiene profilina mencionado en el presente documento. Por ejemplo, el

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polipeptido precursor (el polipeptido de origen natural) se puede modificar por razones de solubilidad inadecuada, biodisponibilidad, seguridad, toxicolog^a o estabilidad, tal como mediante cualquier procedimiento qmmico y/o biologico.

Los ejemplos tfpicos de modificaciones qmmicas son glicosilacion ligada a N o a O, o derivatizacion del extremo N- terminal o de los grupos tiol. Los ejemplos tfpicos de modificaciones biologicas son modificaciones posteriores a la traduccion tales como, por ejemplo; glicosilacion, acetilacion, alquilacion (metilacion, etilacion), biotinilacion, glutamilacion, glicilacion, isoprenilacion, lipoilacion, fosfopanteteinilacion, fosforilacion, sulfatacion, selenacion y amidacion C-terminal. El polipeptido tambien se puede modificar mediante el tratamiento con formaldehudo o glutaraldehudo.

En general, se ha de entender que el termino "variante" o "variantes" se refiere a polipeptidos que contienen modificaciones/mutaciones en comparacion con la secuencia de aminoacidos del "polipeptido precursor", que se considera que es una profilina natural de un material vegetal que contiene profilina mencionado en el presente documento o al menos un polipeptido que tiene/que comprende una secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1 o, como alternativa, SEQ ID No: 2-42.

Por lo tanto, la presente invencion engloba el uso de variantes polipeptfdicas y derivados de cualquier secuencia de aminoacidos de un polipeptido como se define en el presente documento, en particular, las de SEQ ID NO: 1 a 10 o las de SEQ ID NO: 11 a 42 como se define a continuacion.

Las variantes polipeptfdicas de la invencion pueden tener modificaciones/mutaciones tales como inserciones, sustituciones, eliminaciones, duplicaciones, insercion-eliminacion, cambios de fase, transversiones, truncamientos y/o inversiones en uno o mas lugares del polipeptido precursor, tales como donde un aminoacido o varios aminoacidos, tal como 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 o 50 aminoacidos del polipeptido precursor se han sometido a sustitucion, eliminacion, duplicacion, insercion-eliminacion, cambio de fase, transversiones, truncamientos y/o inversiones, preferentemente en el que el numero de aminoacidos en la secuencia de aminoacidos de la variante polipeptfdica esta en el intervalo del 50 % al 150 %, tal como en el intervalo del 75 % al 125 % del numero de aminoacidos del polipeptido precursor.

Las profilinas nativas normalmente contienen una longitud de cadena de aminoacidos de aproximadamente 120 a 170 aminoacidos, normalmente de aproximadamente 130 a 135 aminoacidos. El peso molecular es normalmente de aproximadamente 14 a 16 kDa. Se considera que un polipeptido (precursor, asf como una variante del mismo) tiene una longitud de cadena de aminoacidos que vana entre 65 y 195 aminoacidos, tal como entre 70 y 190; 75 y 185; 80 y 180; 85 y 175; 90 y 170; 95 y 165; 100 y 160; 105 y 155; 110 y 150; 115 y 145; 120 y 140 aminoacidos.

Por lo tanto, las variantes polipeptfdicas ilustrativas pueden ser variantes de sustitucion, variantes de eliminacion, variantes de duplicacion, variantes de insercion, variantes de insercion-eliminacion, variantes de cambio de fase, variantes de transversion, variantes de truncamiento y/o variantes de inversion o cualquier otras variantes adecuadas, preferentemente en las que el numero de aminoacidos de la secuencia de aminoacidos de la variante polipeptfdica esta en el intervalo del 50 % al 150 %, tal como en el intervalo del 55 % al 145 %, del 60 % al 140 %, del 65 % al 135 %, del 70 % al 130 %, del 75 % al 125 %, del 80 % al 120 %, del 85 % al 115 % o del 90 % al 110% o del 95 % al 105 % en comparacion con el numero de aminoacidos del polipeptido precursor.

La variante polipeptfdica puede ser un polipeptido que tenga un cierto porcentaje de identidad y/o similitud, por ejemplo, un 60 %, 65 %, 66 %, 68 %, 70 %, 72 %, 74 %, 76 %, 78 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % de identidad de secuencia de aminoacidos con SEQ ID NO: 1 o, como alternativa, SEQ ID NO: 2-42.

La alineacion de secuencias es una manera de organizar las secuencias de ADN, ARN o proterna mediante lo que las secuencias se pueden comparar. Por lo tanto, es posible identificar regiones de identidad, similitud u homologfa. La identidad, similitud u homologfa puede ser una consecuencia de las relaciones funcionales, estructurales o evolutivas entre las secuencias o puede ser una coincidencia.

Los programas informaticos disponibles en el mercado para determinar la identidad de secuencia usan algoritmos complejos de comparacion para alinear dos o mas secuencias que reflejen mejor los eventos evolutivos que podrian haber llevado a la/s diferencia/s entre las dos o mas secuencias. Por lo tanto, estos algoritmos funcionan con un sistema de puntuacion que recompensa la alineacion de aminoacidos identicos o similares y penaliza la insercion de huecos, extensiones de hueco y alineacion de aminoacidos no similares. El sistema de puntuacion de los algoritmos de comparacion incluye: i) la asignacion de una puntuacion de penalizacion cada vez que se inserta un hueco (puntuacion de penalizacion por hueco); ii) la asignacion de una puntuacion de penalizacion cada vez que se amplfa un vacfo existente con una posicion adicional (puntuacion de penalizacion por extension); iii) la asignacion de puntuaciones altas tras la alineacion de aminoacidos identicos; e iv) la asignacion de puntuaciones variables tras la alineacion de aminoacidos no identicos.

La mayoria de los programas de alineacion permiten la modificacion de las penalizaciones por hueco. Sin embargo, se prefieren usar los valores por defecto cuando se usa dicho software para las comparaciones de secuencias. Las puntuaciones dadas para la alineacion de los aminoacidos no identicos se asignan de acuerdo con una matriz de

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puntuacion tambien denominada matriz de sustitucion. Las puntuaciones previstas en dichas matrices de sustitucion reflejan el hecho de que la probabilidad de un aminoacido sustituido con otro durante la evolucion vana y depende de la naturaleza ffsica/qmmica del aminoacido que se va a sustituir. Por ejemplo, la probabilidad de un aminoacido polar que esta sustituido con otro aminoacido polar es mayor en comparacion con la sustitucion con un aminoacido hidrofobo. Por lo tanto, la matriz de puntuacion asignara la puntuacion mas alta de los aminoacidos identicos, una puntuacion inferior para los aminoacidos no identicos, pero similares, e incluso una puntuacion mas baja para los aminoacidos no identicos y no similares. Los programas se pueden encontrar en httpVncbi.nlm.nih.gov.

Una vez que el software ha producido una alineacion, se puede calcular la similitud de secuencias y la identidad de secuencias. Por lo general, el software hace esto como parte de la comparacion de secuencias, y genera un resultado numerico. Al comparar las secuencias a simple vista, se puede usar un diagrama de Venn. El diagrama ilustra que aminoacidos pertenecen a que conjunto o subconjunto teniendo, por lo tanto, una o mas propiedades similares (estructurales o qmmicas). Preferentemente, la identidad y la similitud de aminoacidos se calculan a traves de la secuencia de aminoacidos de longitud completa o para el acido nucleico con un polinucleotido correspondiente que codifica la respectiva secuencia de aminoacidos de longitud completa.

Por ejemplo, la identidad y la similitud de secuencias se pueden determinar mediante la comparacion de dos secuencias de aminoacidos alineadas en una ventana de comparacion, comparandose preferentemente secuencias de aminoacidos de longitud completa, pudiendo comprender la variante polipeptfdica adiciones o eliminaciones (por ejemplo, huecos o salientes) en comparacion con el polipeptido precursor para la alineacion optimo de las dos secuencias. El porcentaje de identidad se calcula determinando el numero de posiciones en las que tiene lugar el resto de aminoacido identico en ambas secuencias, proporcionando el numero de posiciones coincidentes, dividiendo el numero de posiciones coincidentes entre el numero total de aminoacidos en la ventana de comparacion y multiplicando el resultado por 100, proporcionando el porcentaje de identidad de secuencias. La alineacion optima de secuencias para la comparacion puede realizarse mediante implementaciones informatizadas de algoritmos (GAP, BESTFIT, BLAST, PASTA y TFASTA) o por inspeccion. Dado que dos secuencias se han identificado para la comparacion, GAP y BESTFIT se emplean preferentemente para determinar su alineacion optima. Por lo general, se usan los valores por defecto de 5,00 para el peso de hueco y 0,30 para la longitud del peso del hueco.

Cuando la modificacion/mutacion es una sustitucion (variante de sustitucion), la sustitucion puede ser conservativa (dentro del mismo conjunto o subconjunto) o pueden ser no conservativas (entre conjuntos o subconjuntos). Las sustituciones pueden producir un cambio silencioso y dar como resultado un polipeptido funcionalmente equivalente. Las sustituciones de aminoacidos deliberadas pueden realizarse basandose en la similitud, es decir, sustitucion de similar con similar, tal como de base con base, de acido con acido, polar con polar, etc.

La sustitucion no conservativa tambien puede ocurrir, es decir, a partir de un conjunto o subconjunto de restos a otro, como alternativa, implicando la inclusion de aminoacidos no naturales tales como ornitina (denominada de aqrn en adelante Z), ornitina del acido diaminobutmco (denominada de aqrn en adelante B), ornitina de norleucina (denominada de aqrn en adelante 0), pirilalanina, tienilalanina, naftilalanina y fenilglicina.

En cuanto a las sustituciones conservativas y similares, en la Tabla 6, se encuentra una tabla basada en el diagrama de Venn, que agrupa los aminoacidos de acuerdo con su similitud en las caractensticas estructurales y funcionales en conjuntos (polar/hidrofobo/pequeno) y subconjuntos (aromatico/alifatico/carga/diminuto o no). Las sustituciones se consideran conservativas si el cambio es entre los aminoacidos del mismo conjunto, y similares si el cambio es entre los aminoacidos del mismo subconjunto (pero no el mismo conjunto) como se especifica en la Tabla 7. El hecho de que la sustitucion tiene que estar dentro de un conjunto o solo dentro de un subconjunto para ser una sustitucion conservativa o similar depende de la ubicacion en la estructura de la protema. Depende de si el aminoacido espedfico esta en una region o posicion de particular importancia o no, por ejemplo, plegamiento, sitio de union, sitio activo. El experto en la materia podna considerar el uso de las grnas de sustitucion mostradas en la Tabla 7 como primera opcion y aplicar la orientacion proporcionada por la Tabla 8 en un nuevo intento.

A continuacion, se enumeran la/s posicion/es y sustituciones con referencia a SEQ ID NO: 1 a menos que se indique lo contrario. Se pueden encontrar posiciones equivalentes en otra secuencia mediante la alineacion de esta secuencia con SEQ ID NO: 1 para encontrar una alineacion con el mayor porcentaje de identidad y, posteriormente, determinar que aminoacido se alinea con y/o se corresponde con un aminoacido de una posicion espedfica de SEQ ID NO: 1. Dicha alineacion y el uso de una secuencia como una primera referencia es simplemente una cuestion de rutina para el experto habitual en la materia, y no deben limitar el alcance de la invencion.

Los presentes inventores han descubierto que las profilinas vegetales conocidas tienen un alto grado de identidad de secuencia en las posiciones correspondientes a las posiciones 71-127 de SEQ ID NO: 1. Para facilitar la referencia, esta secuencia se conoce como sEq ID NO: 43. Por consiguiente, un polipeptido de acuerdo con la invencion tiene al menos un 60 %, preferentemente al menos un 65 %, 70 %, 75 % de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 1 y al menos un 80 %, preferentemente un 85 %, 90 %, mas preferentemente al menos un 95 % de identidad de secuencia con SEQ iD NO: 43.

En una realizacion, una variante polipeptfdica de la invencion incluye variantes en las que uno y hasta 25 aminoacidos se ha/n anadido o eliminado con respecto a SEQ ID NO: 1.

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En algunas realizaciones, la variante polipeptfdica de la invencion tiene la secuencia de 1, en la que se ha sustituido cualquier numero en el intervalo de 1 y 25 aminoacidos.

En algunas realizaciones, la variante polipeptfdica de la invencion tiene la secuencia de 1, en la que se ha sustituido cualquier numero en el intervalo de 1 y 12 aminoacidos.

En algunas realizaciones, la variante polipeptfdica de la invencion tiene la secuencia de 1, en la que se ha sustituido cualquier numero en el intervalo de 3 y 9 aminoacidos.

En realizaciones adicionales de las mismas, se han sustituido al menos dos, tal como al menos tres, tal como al menos cinco aminoacidos de SEQ ID NO: 1.

Se han analizado y se han comparado profilinas de tres fuentes distintas (plantas, mairnferos, eucariotas inferiores) en el artmulo “the crystal structure of a major allergen from plants" de Thorn y col. (1997), se identificaron 18 aminoacidos que estaban conservados en el 80 % de las 35 secuencias de profilina analizadas. Con referencia a SEQ ID NO: 1, los aminoacidos K87 y G113 participan en la union a la actina, los aminoacidos W3, Y6, I25, G27, W33, A34, Y125 y L126 participan en la union a poli-L-Prolina (PLP), y los aminoacidos A23, A24, E46, G64, G69 y T97 participan en la conservacion del pliegue.

Por consiguiente, en una realizacion de la invencion, la variante polipeptfdica de la invencion tiene al menos un 60 %, preferentemente al menos un 65 % o 70 %, y mas preferentemente al menos un 75 %, 80 %, 85 % y 90 % de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 1, y comprende los aminoacidos correspondientes a K87 y G113 de SEQ ID NO: 1. Una ventaja de dichas variantes es que el sitio de union a la actina se puede usar en la purificacion de la variante polipeptfdica.

En otra realizacion, la variante polipeptfdica de la invencion tiene al menos un 60 %, preferentemente al menos un 65 % o 70 %, y mas preferentemente al menos un 75 %, 80 %, 85 % y 90 % de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 1, y comprende los aminoacidos que corresponden a W3, Y6, I25, G27, W33, A34, Y125 y L126 de SEQ ID NO: 1. Una ventaja de dichas variantes es que el sitio de union a PLP se puede usar en la purificacion de la variante polipeptfdica.

En otra realizacion mas, la variante polipeptfdica de la invencion tiene al menos un 60 %, preferentemente al menos un 65 % o 70 %, y mas preferentemente al menos un 75 %, 80 %, 85 % y 90 % de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 1, y comprende los aminoacidos que corresponden a A23, A24, E46, G64, G69 y T97 de SEQ ID NO: 1. Una ventaja de dichas variantes es que se conserva el plegamiento.

En una realizacion de la invencion, la variante polipeptfdica de la invencion tiene al menos un 60 %, preferentemente al menos un 65 % o 70 %, y mas preferentemente al menos un 75 %, 80 %, 85 % y 90 % de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 1, y comprende un aminoacido seleccionado de A, G o S (aminoacidos diminutos) en una posicion correspondiente a la posicion 13 y/o 115 de SEQ ID NO: 1. Un variante polipeptfdica preferida de la invencion comprende A en una posicion correspondiente a la posicion 13 y/o 115 de SEQ ID NO: 1. Otro variante polipeptfdica preferida de la invencion comprende S en una posicion correspondiente a la posicion 13 y/o 115 de SEQ ID NO: 1.

En otra realizacion de la invencion, la variante polipeptfdica de la invencion tiene al menos un 60 %, preferentemente al menos un 65 % o 70 %, y mas preferentemente al menos un 75 %, 80 %, 85 % y 90 % de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 1, y tiene todos los restos de cistema del polipeptido precursor sustituidos con uno de los otros aminoacidos diminutos A, G o S.

Se sabe que la sustitucion de triptofano (W) suele tener una gran influencia en la protema. Por consiguiente, una variante polipeptfdica preferida de la invencion tiene al menos un 60 %, preferentemente al menos un 65 % o 70 %, y mas preferentemente al menos un 75 %, 80 %, 85 % y 90 % de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 1, y comprende los aminoacidos que corresponden a W3 y W33 de SEQ ID NO: 1. Cabe destacar que el presencia de triptofano es importante, pues dichos polipeptidos pueden tener fluorescencia, facilitando el trabajo analftico.

Cuando se alinean las secuencias de SEQ ID NO: 1 a 42 de la invencion usando, por ejemplo, el programa BLAST, se pueden observar algunas sustituciones conservativas espedficas entre las diversas profilinas. Los ejemplos tfpicos de las posiciones con referencia a SEQ ID NO: 1 que se pueden someter a variacion de los aminoacidos se muestran en la Tabla 5. Por lo tanto, cualquier aminoacido mencionado en la columna de "variacion de aminoacido" constituye un ejemplo tfpico de aminoacidos que pueden sustituir un aminoacido del polipeptido precursor (SEQ ID NO: 1) con el fin de hacer una de sus variantes.

Un segundo aspecto de la invencion se refiere a un polipeptido que tiene una secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10, en el que 1 o 2 restos de cistema esta/n sustituido/s con un aminoacido seleccionado de A, G o S, ya sea el mismo aminoacido reemplazando ambas cistemas o diferentes. Dichas variantes pueden ser menos susceptibles a la oxidacion y, por lo tanto, menos propensas a la dimerizacion, polimerizacion o a formar agregados. Dichos polipeptidos se pueden producir de forma recombinante o sintetizarse de forma alternativa.

aminoacidos de SEQ ID NO: aminoacidos de SEQ ID NO: aminoacidos de SEQ ID NO:

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En particular, se proporciona una variante de un polipeptido de SEQ ID NO: 1 o, como alternativa, SEQ ID NO: 2-10 en la que al menos 1,2 o todos los restos de cistema han sido sustituidos con un aminoacido seleccionado de A, G o S. En particular, esta variante polipepffdica tiene una secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1, pero en la que el aminoacido cistema de la posicion 13 y/o 115 se ha sustituido con un aminoacido seleccionado del grupo que comprende A (alanina), G (glicina) y S (serina), para producir las variantes C13A, C115A, C13G, C115G, C13s, C115S y mezclas de las mismas, tales como C13A y C115S. Un ejemplo ffpico de dicha variante tiene una secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 44 (dos sustitutos de cistema con serina, es decir, C13S, C115S) o 45 (dos sustitutos de cistema con alanina, es decir, C13A, C115A), preferentemente en la que la metionina no esta presente en la posicion 1, o al menos solo esta presente en el 5% de los polipeptidos producidos de manera recombinante.

Ventajosamente, dichos polipeptidos de SEQ ID NO: 44 y 45 son estables, en particular, con respecto a la autooxidacion y la agregacion. Ademas, dichos polipeptidos pueden unirse a actina humana hasta un menor grado que la Phl p 12 nativa.

Ademas, la estructura terciaria del polipeptido que tiene la SEQ ID NO: 45 era mas estable que el polipeptido que tiene la SEQ ID NO: 44. Por lo tanto, la sustitucion con alanina de la cistema estabiliza la estructura molecular de mas de la sustitucion con serina.

Se preve que la variante de sustitucion de cistema de SEQ ID NO: 44 y 45, ademas de usarse en la inmunoterapia no espedfica (la tolerancia presencial) tambien se puede usar en la inmunoterapia espedfica del alergeno, en la que la respuesta inmune de hipersensibilidad esta causada por una profilina alergenica de un material vegetal que contiene profilina, o un alergeno de reaccion cruzada con los anticuerpos IgE espedficos de dicha profilina. Cabe destacar que, en dichas realizaciones, el individuo, en general, esta sensibilizado a la profilina.

Como anffgeno proteico, el polipeptido puede poseer propiedades inmunogenicas y puede ser reconocido por el sistema inmunologico del individuo como foraneo. Por lo tanto, un polipeptido de la invencion es un polipeptido inmunogenico. Puede inducir anticuerpos IgG espedficos o anticuerpos IgM o IgA capaces de unirse a, formar complejos con o asociarse de otro modo con el polipeptido.

Una profilina se caracteriza, en general, por la capacidad para unirse a poli-L-prolina. Por ejemplo, esta propiedad se usa de manera ventajosa en la purificacion/el aislamiento de profilinas de materiales que contienen profilina de manera que uno de sus extractos, por ejemplo, un extracto acuoso, se anade a la perla de cromatograffa de afinidad de poli-L-Pro, tal como poli-L-prolina inmovilizada sobre perlas de agarosa. La asociacion es fuerte y, por lo general, se requiere al menos 6 M de urea para eluir la profilina unida de la columna. Por lo general, una profilina se eluye de la columna con urea 6-8 M, se renaturaliza mediante dialisis contra un tampon de baja fuerza ionica sin urea y, opcionalmente, se separa mas de otros componentes del extracto por cromatograffa de intercambio cationico/anionico y/o filtracion en gel (Amnuaycheewa y Gonzalez de Mejia, 2010 y Vidali y col, 1995). El mismo procedimiento se puede usar en la purificacion de un polipeptido de la invencion producido mediante tecnicas recombinantes.

Una profilina se puede caracterizar ademas por su capacidad para unirse a una actina. La profilina se une a la actina monomerica (actina G), ocupando de esta manera un sitio de contacto actina-actina, siendo el efecto el secuestro de la actina G de la agrupacion de actina monomerica y la subsiguiente prevencion de la polimerizacion de la actina (para formar actina F). Por lo tanto, en una mezcla de actina, profilina y nucleotidos (ADP y ATP), la actina se polimerizara en cierta medida, que se puede estimar por la ley de accion de masas. La capacidad de un polipeptido para asociarse con la actina, tal como actina humana o vegetal, se puede ensayar mediante el estudio de la incorporacion de la actina G (preferentemente marcada con fluorescencia) en el polipeptido en presencia de la actina F en tanto en cuanto la mezcla de actina F y la mezcla de actina G se pueden separar por centrifugacion. Hay kits comerciales para ensayar la union a la actina en Cytoskeleton Inc. Como alternativa, el polipeptido se puede unir a perlas de sefarosa y poli-L-prolina e incubarse con actina G, y se puede determinar la concentracion de la actina G no unida en el sobrenadante. Se pueden encontrar mas detalles sobre los ensayos de union a la actina en los documentos cienffficos de Lu y Pollard (2001) y Fechheimer y Zigmond (1993). Un polipeptido de la invencion se une preferentemente a o se asocia con una actina vegetal, pero no con un actina humana.

Un polipeptido para su uso en la presente invencion, incluyendo una variante polipepffdica, se puede producir mediante tecnicas de ADN recombinante de acuerdo con procedimientos conocidos en la tecnica. Como celulas huesped se puede usar cualquier celula modificada geneticamente que comprenda bien una secuencia de nucleotidos que codifique un polipeptido de la invencion o un vector de expresion, tal como una celula geneticamente modificada de una celula eucariota (tal como la levadura Pichia) o no eucariota (por ejemplo, E coli). En una realizacion, la celula huesped es una celula bacteriana, preferentemente E. coli. Una ventaja de usar las celulas bacterianas es que las celulas bacterianas no producen profilinas de forma nativa. La profilina es, por lo tanto, heterologa a las celulas bacterianas. En particular, es heterologa con respecto a E. coli. Por lo tanto, la purificacion/el aislamiento del polipeptido recombinante no es complicado al interferir protemas nativas.

Las cepas de E. coli ilustrativas adecuadas para producir el polipeptido de la invencion son BL21 (DE3), BL21 (DE3)pLysS o Rosetta(DE3)pLysS (todas disponibles en el mercado en Novagen) o BL21(DE3)gold (disponible en el

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mercado en Agilent Technologies).

Tras haberse producido el polipeptido en una celula huesped usando los plasmidos y los ADNc apropiados, el polipeptido se afsla mediante la separacion de la/s celula/s del caldo durante o tras la fermentacion de manera que el polipeptido permanece en el caldo. El polipeptido se puede purificar adicionalmente a partir del caldo de manera que quede esencialmente exento de otros componentes del medio de cultivo en el que se produce por cualquier procedimiento adecuado, preferentemente procedimientos cromatograficos (por ejemplo, cromatograffa de afinidad, cromatograffa de exclusion por tamano, cromatograffa de intercambio anionico o cationico, opcionalmente en combinacion con dialisis).

Procedimiento de deteccion/suministro de un polipeptido de la invencion

Para detectar los polipeptidos que mas probablemente estaran presentes en el organo diana de manera concomitante con el alergeno distinto de la profilina, un procedimiento de exploracion para un polipeptido (por ejemplo, una profilina) adecuado para su uso en la presente invencion implica:

i) extraer un material vegetal que contenga profilina en una solucion acuosa que tenga un pH en el intervalo de 6 a 8 durante un penodo que vana de 1 a 30 minutos; ii) explorar el extracto para determinar el contenido de un alergeno distinto de la profilina y de una profilina; iii) opcionalmente, aislar la profilina; e iv) opcionalmente, identificar la profilina; de modo que cuando el extracto contenga tanto un alergeno distinto de la profilina como una profilina, dicha profilina se pueda seleccionar como el polipeptido para su uso de acuerdo con la presente invencion.

Tras haber identificado la profilina, la profilina o una variante tal como se define en el presente documento pueden producirse mediante tecnicas recombinantes bien conocidas en la materia.

La obtencion de un polipeptido (por ejemplo, profilina) que se pueda usar en la presente invencion puede implicar:

i) extraer un material vegetal que contenga profilina en una solucion acuosa que tenga un pH en el intervalo de 6 a 8 durante un penodo que vana de 1 a 30 minutos; ii) explorar el extracto para determinar el contenido de un alergeno distinto de la profilina y de una profilina; iii) identificar la profilina, opcionalmente, de modo que la profilina se aisle; y vi) producir, opcionalmente, el polipeptido o una variante del mismo mediante tecnicas recombinantes, de modo que cuando el extracto contenga tanto un alergeno distinto de la profilina como una profilina, dicha profilina se pueda seleccionar como el polipeptido para su uso de acuerdo con la presente invencion y dicha profilina se pueda modificar ademas para la obtencion de una de sus variantes.

Un procedimiento de obtencion de un polipeptido (por ejemplo, una profilina), adecuado para su uso en el tratamiento a traves de la tolerancia presencial a una respuesta inmune de hipersensibilidad causada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina comprende el aislamiento de un polipeptido inmunogenico de dicho material vegetal que contiene profilina o la produccion recombinante de dicho polipeptido inmunogenico, en el que

dicho polipeptido inmunogenico se ha identificado en y, opcionalmente, aislado de un extracto preparado mediante la suspension del material vegetal que contiene profilina en una solucion acuosa que tiene un pH en el intervalo de 6 a 8 durante un penodo que vana de 1 a 30 minutos. Preferentemente, el extracto tambien contiene un alergeno distinto de la profilina de dicho material vegetal que contiene profilina, es decir, un alergeno distinto de la profilina extrafdo junto con el polipeptido inmunogenico.

Un polipeptido (por ejemplo, una profilina) adecuado para su uso en el tratamiento a traves de la tolerancia presencial a una respuesta inmune de hipersensibilidad causada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina se puede obtener mediante el aislamiento de un polipeptido inmunogenico de dicho material vegetal que contiene profilina o la produccion recombinante de dicho polipeptido inmunogenico, en el que

dicho polipeptido inmunogenico se ha identificado en y, opcionalmente, aislado de un extracto preparado mediante la suspension del material vegetal que contiene profilina en una solucion acuosa que tiene un pH en el intervalo de 6 a 8 durante un penodo que vana de 1 a 30 minutos. Preferentemente, el extracto tambien contiene un alergeno distinto de la profilina de dicho material vegetal que contiene profilina, es decir, un alergeno distinto de la profilina extrafdo junto con el polipeptido inmunogenico.

Es decir, un polipeptido de la invencion (por ejemplo, una profilina) se puede extraer junto con un alergeno distinto de la profilina del material vegetal que contiene profilina al extraer el material vegetal que contiene profilina en una solucion acuosa que tiene un pH en el intervalo de 6 a 8 durante un penodo que vana de 1 a 30 minutos. Ademas, se hace hincapie en que el polipeptido de la invencion (por ejemplo, una profilina) se puede obtener mediante un procedimiento que comprende aislar una profilina de dicho material vegetal que contiene profilina o la produccion recombinante de dicha profilina, en el que dicha profilina se ha identificado en un extracto preparado mediante la suspension del material vegetal que contiene profilina en una solucion acuosa que tiene un pH en el intervalo de 6 a 8 durante un penodo que vana de 1 a 30 minutos.

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La extraccion se puede llevar a cabo en condiciones que simulan las condiciones fisiologicas del organo diana, tales como en las condiciones fisiologicas presentes en el fluido nasal. Por lo tanto, la solucion de extraccion es esencialmente una solucion acuosa que tiene un pH en el intervalo de 5,5 a 8,5, tal como en el intervalo de 6 a 8, preferentemente aproximadamente a pH 7, y la osmolalidad corresponde preferentemente a la de una solucion de 0,90 % p/v de NaCl que tiene aproximadamente 300 mOsm/l. La temperature de extraccion esta preferentemente en el intervalo de 20 °C a 400 °C. La solucion acuosa comprende preferentemente al menos un 60 % de agua, tal como preferentemente al menos un 70, 75, 80, 85, 90 y 95 % de agua. Ademas, la solucion acuosa puede contener ftquidos miscibles en agua no acuosos, tales como alcanoles inferiores (por ejemplo, que tienen de 1 a 6 atomos de carbono tales como etanol, propanol), arilalcanoles (por ejemplo, que tienen de 5 a 10 atomos de carbono en los anillos tal como alcohol bendlico), polioles (por ejemplo, que tienen de 2 a 6 atomos de carbono, tales como glicerol, propilenglicol o sorbitol), n-metilpirrolidona, polialquilenglicoles (por ejemplo, polietilenglicol, propilenglicol y similares), poliglicerina, triacetina, dimetilacetimida y sulfoxido de dimetilo.

Para controlar el pH, la solucion acuosa se puede tamponar, tal como mediante la adicion de un agente/sistema tampon como el acido ascorbico, acido cftrico, sistemas portadores de tampon de fosfato, TRIS (tris(hidroximetil)aminometano), carbonato de amonio, y en el que el pH deseado se consigue opcionalmente mediante la adicion de unas cuantas gotas de HCl o NaOH. Por lo tanto, la solucion acuosa puede comprender un agente tampon, tal como acido ascorbico, acido cftrico, sistemas portadores de tampon de fosfato, TRIS, sistema tampon de carbonato de amonio/bicarbonato de amonio.

Para controlar la osmolalidad/fuerza ionica, se pueden anadir veldculos isotonicos a la solucion acuosa, tal como para lograr una osmolalidad correspondiente a la de las condiciones fisiologicas del organo diana. Por lo tanto, la solucion acuosa puede comprender ademas un agente que proporciona osmolalidad, tal como acido borico, cloruro de sodio, cloruro de potasio, citrato de sodio, acetato de sodio y similares. Por lo general, la fuerza ionica esta en el intervalo de 10 mM a 1.000 mM, tal como preferentemente en el intervalo de 20 a 800 mM, tal como de 20 mM a 500 mM, tal como de 50 mM a 500 mM, tal como de 20 mM a 400 mM, tal como de 50 mM a 400 mM, tal como de 20 mM a 300 mM, tal como de 50 mM a 300 mM. Mas preferentemente, la fuerza ionica esta en el intervalo de 150 a 180 mM, tal como de aproximadamente 160 a 170 mM. Preferentemente, la osmolalidad se encuentra en el intervalo de 50 a 600 mOsm/l, tal como en el intervalo de 50 a 500 mOsm/l, tal como en el intervalo de 100 a 400 mOsm/l, tal como aproximadamente 300 mOsm/l.

Ademas, la viscosidad puede ajustarse mediante la adicion de agentes gelificantes tales como materiales de alquilcelulosa (por ejemplo carboximetilcelulosa, carboxietilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, hidroxipropiletilcelulosa, etc.), carbopol, alcohol polivirnlico, polivinilpirrolidona y miristato de isopropilo.

Un ejemplo tfpico de una solucion acuosa tamponada es el tampon de PBS, que tiene un pH de 7,2 y una fuerza ionica (|j) de 165,8 mM (“0,17 M) y que consiste en cloruro de sodio (NaCl) en una cantidad de 8 g/l (137 mM), cloruro de potasio (KCl) en una cantidad de 0,2 g/l (2,7 mM), hidrogenofosfato de dinatrio (Na2HPO4, 2H2O) en una cantidad de 1,44 g/l (8,2 mM), dihidrogeno fosfato de potasio en una cantidad de 0,2 g/l (1,5 mM), el pH resultante es 7,2 y la fuerza ionica total resultante (j) es de 165,8 mM (“ 0,17 M).

Se considera probable que una profilina capaz de ser extrafda junto con un alergeno distinto de la profilina en un corto penodo de tiempo de extraccion se pueda usar como el polipeptido de la invencion, ya que esto indica que el polipeptido puede eluir junto con el alergeno distinto de la profilina en el organo diana. Dado que el material vegetal que contiene profilina solo puede residir brevemente en el epitelio/la mucosa del organo diana en un corto penodo de tiempo antes de ser eliminado mediante procesos fisiologicos, se considera aun mas predictivo aplicar un tiempo de extraccion inferior a 30 minutos, tal como inferior a 20 minutos, mas preferentemente inferior a 15, 10, 8, 7, 6, 5, 3 y 2 minutos. Por otra parte, la extraccion puede llevarse a cabo a temperaturas en el intervalo de 15 a 45 °C, mas preferentemente en el intervalo de 18 a 37 °C, tal como a una temperatura fisiologica o inferior, tal como a temperature ambiente. Sin embargo, si hay problemas de estabilidad, la extraccion puede llevarse a cabo a temperaturas mas bajas, tales como inferiores a 100°C, tal como aproximadamente 3-5 °C.

Una vez completada la extraccion, se explora el extracto para determinar el contenido de un alergeno distinto de la profilina y una profilina mediante procedimientos bien conocidos en la tecnica. Por lo general, se producen varios extractos que tienen diferentes duraciones del tiempo de extraccion (por ejemplo, 2, 5, 10 y 20 minutos) o, como alternativa, se toman varias muestras de la misma solucion de extraccion en diferentes puntos (por ejemplo, 2, 5, 10 y 20 minutos), y esas muestras se someten a procedimientos inmunoqmmicos como CIE (inmunoelectroforesis cruzada), RIE (inmunoelectroforesis Rocket), SDS-PAGE (electroforesis en gel de dodecilsulfato de sodio y poliacrilamida), ELISA (ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas) y/o EM (espectrometna de masas).

Ademas, la profilina se puede reconocer por su capacidad para unirse a la actina y/o PLP. Las profilinas inmunogenicas se pueden encontrar mediante la realizacion de un CIE con anticuerpos policlonales generados en conejos contra un extracto purificado del material vegetal que contiene profilina. Ademas, el CIE se puede realizar usando anticuerpos policlonales generados contra una profilina conocida mencionada en el presente documento, tal como Phl p 12 (SEQ ID NO: 1-10), para identificar polipeptidos inmunogenicos que reaccionen con anticuerpos espedficos contra la profilina conocida y, por lo tanto, un polipeptido inmunogenico cualificado como un polipeptido con reactividad cruzada inmunologica contra la profilina conocida. Los alergenos se pueden detectar mediante la

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realizacion de un CIE con suero de un individuo alergico/sensibilizado a un alergeno distinto de la profilina de dicho material vegetal que contiene profilina. Las descripciones y los protocolos detallados de los procedimientos de CIE y otros procedimientos inmunoqmmicos se pueden encontrar en el capttulo 13 (“Immuno-electrophoresis for the characterisation of allergen extracts”, autores Gitte Nordskov Hansen y J0rgen Nedergaard Larsen) del libro “Allergy Methods and Protocols” (Methods in Molecular Medicine) de Penny Lympany (2008); ISBN: 9780896038967.

Por lo tanto, un polipeptido de la invencion es capaz de unirse a anticuerpos dirigidos contra una profilina seleccionada de profilina Cry j, Pho d 2, Ana c 1 ,Cyn d 12, Tri a 12, Mus a 1, Api g 4, Dau c 4, Amb a 8, Art v 4, Hel a 2, Ara t 8, Sin a 4, Ama r 2, Beta v 2, Che e 2, Sal k 4, Act d 9, Cuc m 2, Ara h 5, Gly m 3, Bet v 2, Cor a 2, Ole e 2, Hev b 8, Mer a 12, Pla a 3, Fra a 4, Mal d 4, Par j 3, Pru av 4, Pru du 4, Pru p 4, Pyr c 4, Cit s 2, Lit c 1, Cap a 2 y Lyc e 1, tal como generados contra un polipeptido que tiene la SEQ ID NO: 1 o, como alternativa, SEQ ID NO: 2-42. Los anticuerpos pueden ser policlonales o monoclonales y, normalmente, se generan en conejos.

Una vez identificada la profilina que se puede extraer junto con un alergeno distinto de la profilina, tal como preferentemente un alergeno principal que no sea profilina, la profilina puede caracterizarse ademas ya sea directamente en el mismo extracto o tras el aislamiento y, opcionalmente, la purificacion de acuerdo con procedimientos bien conocidos en la tecnica.

Por ejemplo, la profilina se puede aislar mediante el uso de poli-L-prolina, por ejemplo, una perla de cromatograffa de afinidad de poli-L-Pro, tal como poli-L-prolina inmovilizada sobre perlas de agarosa o mediante otros procedimientos cromatograficos conocidos en la tecnica, entre otros, cromatograffa de exclusion por tamano, cromatograffa de fase inversa, cromatograffa de intercambio anionico/cationico o combinaciones de las mismas.

Una vez aislada la profilina, se puede analizar adicionalmente para dilucidar la secuencia de aminoacidos mediante procedimientos conocidos en la tecnica, tales como la secuenciacion de aminoacidos y/o mediante espectrometffa de masas, opcionalmente, tras la digestion del polipeptido por enzimas proteolfficas tales como la tripsina.

Por ultimo, una vez identificada la profilina de origen natural, la secuencia de aminoacidos puede modificarse para obtenerse una variante de la misma (una variante polipepffdica como se ha descrito anteriormente) tal como una variante de reemplazo de cistema de la misma, y producirse la variante o la profilina precursora (natural) mediante tecnicas recombinantes bien conocidas en la materia.

Formulaciones

Cuando el polipeptido presenta una mala estabilidad en los jugos gastricos, el polipeptido se administra preferentemente en una forma que evite el contacto con los jugos gastricos, tal como en una forma que impida la degradacion del anffgeno no relacionado en los jugos gastricos. Esto se puede realizar mediante la incorporacion del anffgeno no relacionado en formulaciones farmaceuticas resistentes a los jugos gastricos o mediante la incorporacion de otras tecnicas de administracion farmaceutica capaz de evitar la degradacion de protemas en los jugos gastricos.

El polipeptido de la invencion se puede formular junto con los ingredientes terapeuticamente inactivos y/o agentes inmunomodificadores como adyuvantes. Por lo general, la formulacion es una forma de dosificacion solida, tal como un comprimido de disgregacion rapida o un lfquido que incluye una solucion, una suspension, una dispersion, un lfquido gelificado. Como alternativa, la formulacion es una emulsion, o un polvo, granulado o liofilizado resoluble, que se pueda disolver para formar un lfquido antes de su administracion.

Los excipientes para su uso en formulaciones son bien conocidos por el experto en la materia, e incluyen disolventes, emulsionantes, agentes humectantes, plastificantes, sustancias colorantes, cargas, conservantes, agentes de ajuste de la viscosidad, agentes tampon, agentes de ajuste del pH, agentes de ajuste de la isotonicidad, sustancias mucoadhesivas y similares. Los ejemplos de estrategias de formulacion son bien conocidos por el experto en la materia.

El adyuvante puede ser cualquier adyuvante convencional, incluyendo sales de metales que contienen oxfgeno, por ejemplo, hidroxido de aluminio, quitosano, enterotoxina labil al calor (LT), toxina del colera (CT), subunidad B de la toxina del colera (CTB), liposomas polimerizados, toxinas mutantes, por ejemplo, LTK63 y LTR72, microcapsulas, interleucinas (por ejemplo, IL-1 BETA, IL-2, IL-7, IL-12, INFGAMMA), GM-CSF, derivados de MDF, oligonucleotidos CpG, LPS, MPL, fosfofacenos, Adju-Phos(R), glucano, formulacion de anffgeno, liposomas, DDE, DHEA, DMPC, DMPG, Complejo de DOC/Alum, adyuvante incompleto de Freund, ISCOM(R), adyuvante oral LT, dipeptido de muramilo, lfpido A de monofosforilo, peptido de muramilo y fosfatidiletanolamina.

Las realizaciones de la invencion, que se pueden combinar en cualquier orden, son:

• un polipeptido para su uso en el tratamiento de una respuesta inmune de hipersensibilidad en un individuo causada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina, en el que dicho polipeptido tiene/consiste en/consiste esencialmente en/comprende una secuencia de aminoacidos que tiene al menos un 60 % de identidad con la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1, en el que, opcionalmente, la metionina no esta presente en la secuencia de aminoacidos en el extremo N-terminal; y

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• en el que dicho polipeptido, como alternativa, tiene/consiste en/consiste esencialmente en/comprende una secuencia de aminoacidos que tiene al menos un 60 % (tal como al menos un 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 %) de identidad con la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 2-10;

• en el que el polipeptido tiene una secuencia de aminoacidos que tiene al menos un 60 % (tal como al menos un 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 %) de identidad con la secuencia de aminoacidos de la profilina del material vegetal que contiene profilina;

• en el que el polipeptido es una profilina de un material vegetal que contiene profilina de una clase de plantas seleccionada del grupo que consiste en Plantae Pinopsida, Plantae monocotiledoneae y Plantae Magnoliopsida o es una variante de dicha profilina;

• en el que la respuesta inmune de hipersensibilidad esta causada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina de una clase de plantas seleccionada del grupo que consiste en Plantae Pinopsida, Plantae monocotiledoneae y Plantae Magnoliopsida;

• en el que el polipeptido es una profilina de un material vegetal que contiene profilina de un orden de plantas seleccionado del grupo que consiste en Pinales, Arecales, Asparagales, Poales, Zingiberales Apiales, Asterales, Brassicalis, Curcurbitales, Ericales, Fabales, Fagales, Gentianales, Lamiales, Laurales, Malvales, Malpighiales, Myrtales, Proteales, Rosales, Sapindales, Solanales y Vitales o es una variante de dicha profilina;

• en el que la respuesta inmune de hipersensibilidad esta causada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina de un orden de plantas seleccionado del grupo que consiste en Pinales, Arecales, Asparagales, Poales, Zingiberales, Apiales, Asterales, Brassicalis, Curcurbitales, Ericales, Fabales, Fagales, Gentianales, Lamiales, Laurales, Malvales, Malpighiales, Myrtales, Proteales, Rosales, Sapindales, Solanales y Vitales;

• en el que el polipeptido es una profilina de un material vegetal que contiene profilina de una familia de plantas seleccionada del grupo que consiste en Cupressaceae, Arecaceae, Asparagaceae, Iridaceae, Bromeliaceae, Poaceae, Musaceae, Zingiberaceae, Apiaceae, Araliaceae, Asteraceae, Brassicaceae, Amaranthaceae, Caryophyllaceae, Polygonaceae, Cucurbitaceae, Actinidiaceae, Lecythidaceae, Theaceae, Fabaceae, Betulaceae, Fagaceae, Juglandaceae, Myricaceae, Nothofagaceae, Ticodendraceae, Apocynaceae, Rubiaceae, Oleaceae, Pedaliacae, Plantaginaceae, Lauraceae, Malvaceae, Euphorbiaceae, Lythraceae, Platanaceae, Cannabaceae, Rosaceae, Ulmaceae, Urticaceae, Anacardiaceae, Rutaceae, Sapindaceae, Solanaceae y Vitaceae o es una variante de dicha profilina;

• en el que la respuesta inmune de hipersensibilidad esta causada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina de una familia de plantas seleccionada del grupo que consiste en Cupressaceae, Arecaceae, Asparagaceae, Iridaceae, Bromeliaceae, Poaceae, Musaceae, Zingiberaceae, Apiaceae, Araliaceae, Asteraceae, Brassicaceae, Amaranthaceae, Caryophyllaceae, Polygonaceae, Cucurbitaceae, Actinidiaceae, Lecythidaceae, Theaceae, Fabaceae, Betulaceae, Fagaceae, Juglandaceae, Myricaceae, Nothofagaceae, Ticodendraceae, Apocynaceae, Rubiaceae, Oleaceae, Pedaliacae, Plantaginaceae, Lauraceae, Malvaceae, Euphorbiaceae, Lythraceae, Platanaceae, Cannabaceae, Rosaceae, Ulmaceae, Urticaceae, Anacardiaceae, Rutaceae, Sapindaceae, Solanaceae y Vitaceae;

• en el que el polipeptido es una profilina de un material vegetal que contiene profilina de un genero de plantas seleccionado del grupo que consiste en Chamaecyparis, Cryptomeria, Cupressus, Juniperus, Phoenix, Asparagus, Crocus, Ananas, Anthoxanthum, Cynodon, Dactylis, Festuca, Holcus, Hordeum, Lolium, Oryza, Paspalum, Phalaris, Phleum, Poa, Secale, Sorghum, Triticum, Zea, Musa, Apium, Daucus, Ambrosia, Artemisia, Helianthus, Lactuca, Arabidopsis, Brassica, Sinapis, Amaranthus, Beta, Chenopodium, Fagopyrum, Salsola, Cucumis, Actinidia, Bertholletia, Arachis, Glycine, Lens, Lupinus, Phaseolus, Pisum, Vigna, Alnus, Betula, Carpinus, Carya, Castanea, Corylus, Fagus, Juglans, Ostrya, Quercus, Catharanthus, Coffea, Fraxinus, Ligustrum, Olea, Plantago, Sesamum, Syringa, Persea, Gossypium, Hevea, Manihot, Mercurialis, Popolus, Ricinus, Sonneratia, Platanus, Fragaria, Humulus, Malus, Morus, Parietaria, Prunus, Pyrus, Rubus, Ziziphus, Anacardium, Citrus, Litchi, Mangifera, Pistacia, Capsicum, Lycopersicon, Solanum y Vitis o es una variante de dicha profilina;

• en el que la respuesta inmune de hipersensibilidad esta causada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina de un genero de plantas seleccionado del grupo que consiste en Chamaecyparis, Cryptomeria, Cupressus, Juniperus, Phoenix, Asparagus, Crocus, Ananas, Anthoxanthum, Cynodon, Dactylis, Festuca, Holcus, Hordeum, Lolium, Oryza, Paspalum, Phalaris, Phleum, Poa, Secale, Sorghum, Triticum, Zea, Musa, Apium, Daucus, Ambrosia, Artemisia, Helianthus, Lactuca, Arabidopsis, Brassica, Sinapis, Amaranthus, Beta, Chenopodium, Fagopyrum, Salsola, Cucumis, Actinidia, Bertholletia, Arachis, Glycine, Lens, Lupinus, Phaseolus, Pisum, Vigna, Alnus, Betula, Carpinus, Carya, Castanea, Corylus, Fagus,

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Juglans, Ostrya, Quercus, Catharanthus, Coffea, Fraxinus, Ligustrum, Olea, Plantago, Sesamum, Syringa, Persea, Gossypium, Hevea, Manihot, Mercurialis, Popolus, Ricinus, Sonneratia, Platanus, Fragaria, Humulus, Malus, Morus, Parietaria, Prunus, Pyrus, Rubus, Ziziphus, Anacardium, Citrus, Litchi, Mangifera, Pistacia, Capsicum, Lycopersicon, Solanum y Vitis, en el que el polipeptido es una profilina que tiene una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ iD NO: 1-42 o una variante de dicha profilina;

• en el que las secuencias de aminoacidos de SEQ ID NO: 1-42 no contienen metionina en la posicion 1 del extremo N-terminal;

• en el que el polipeptido es una profilina seleccionada del grupo que consiste en profilina Cry j, Pho d 2, Ana c 1, Cyn d 12, Tri a 12, Mus a 1, Api g 4, Dau c 4, Amb a 8, Art v 4, Hel a 2, Ara t 8, Sin a 4, Ama r 2, Beta v 2, Che e 2, Sal k 4, Act d 9, Cuc m 2, Ara h 5, Gly m 3, Bet v 2, Cor a 2, Ole e 2 , Hev b 8, Mer a 12, Pla a 3, Fra a 4, Mal d 4, Par j 3, Pru av 4, Pru du 4, Pru p 4, Pyr c 4, Cit s 2, Lit c 1, Cap a 2 y Lyc e 1 o una variante de dicha profilina;

• en el que la respuesta inmune de hipersensibilidad esta causada por un alergeno distinto de la profilina seleccionado del grupo que consiste en Cha o 1, Cha o 2, Cry j 1, Cry j 2, Cup a 1, Cup s 1, Cup s 3, Jun a 1, Jun a 2, Jun a 3, Jun o 4, Jun s 1, Jun v 1, Jun v 3, Ana c 2, Ant o 1, Aspa o 1, Cro s 1, Cro s 2, Cyn d 1, Cyn d 7, Cyn d 15, Cyn d 22w, Cyn d 23, Cyn d 24, Dac g 1, Dac g 2, Dac g 3, Dac g 4, Dac g 5, Fes p 4, Hol l 1, Hol l 5, Hor v 1, Hor v 5, Hor v 12, Hor v 15, Hor v 16, Hor v 17, Hor v 21, Lol p 1, Lol p 2, Lol p 3, Lol p 4, Lol p 5, Lol p 11, Mus a 2, Mus a 3, Mus a 4, Mus a 5, Ory s 1, Ory s 12, Pas n 1, Pha a 1, Pha a 5, Phl p 1, Phl p 2, Phl p 4, Phl p 5, Phl p 6, Phl p 7, Phl p 11, Phl p 13, Pho d 2, Poa p 1, Poa p 5, Sec c 1, Sec c 5, Sec c 20, Sor h 1, Tri a 14, Tri a 15, Tri a 18, Tri a 19, Tri a 21, Tri a 25, Tri a 26, Tri a 27, Tri a 28, Tri a 29, Tri a 30, Tri a 31, Tri a 32, Tri a 33, Tri a 34, Tri a 35, Tri a 36, Tri a 37, Zea m 1, Zea m 12, Zea m 14, Zea m 25, Act c 5, Act c 8, Act c 10, Act d 1, Act d 2, Act d 3, Act d 4, Act d 5, Act d 6, Act d 7, Act d 8, Act d 10, Act d 11, Aln g 1, Aln g 4, Amb a 1, Amb a 2, Amb a 3, Amb a 4, Amb a 5, Amb a 6, Amb a 7, Amb a 9, Amb a 10, Amb p 5, Amb t 5, Ana o 1, Ana o 2, Ana o 3, Api g 1, Api g 2, Api g 3, Api g 5, Api g 6, Ara h 1, Ara h 2, Ara h 3, Ara h 4, Ara h 6, Ara h 7, Ara h 9, Ara h 10, Ara h 11, Art v 1, Art v 2, Art v 3, Art v 5, Art v 6, Ber e 1, Ber e 2, Beta v 1, Bet v 1, Bet v 3, Bet v 4, Bet v 6, Bet v 7, Bra j 1, Bra n 1, Bra o 3, Bra r 1, Bra r 2, Cap a lw, Car b 1, Car i 1, Car i 4, Cas s 1, Cas s 5, Cas s 8, Cas s 9, Cat r 1, Che a 1, Che a 3, Cit l 3, Cit r 3, Cit s 1, Cit s 3, Cof a 1, Cor a 1, Cor a 8, Cor a 9, Cor a 10, Cor a 11, Cor a 12, Cor a 13, Cor a 14, Cuc m 1, Cuc m 3, Dau c 1, Fag e 2, Fag t 2, Fag s 1, Fra a 1, Fra a 3, Fra e

1, Gly m 1, Gly m 2, Gly m 4, Gly m 5, Gly m 6, Hel a 1, Hel a 3, Hev b 1, Hev b 2, Hev b 3, Hev b 4, Hev b 5, Hev b 6, Hev b 7, Hev b 9, Hev b 10, Hev b 11, Hev b 12, Hev b 13, Hev b 14, Hum j 1, Jug n 1, Jug n 2, Jug r 1, Jug r

2, Jug r 3, Jug r 4, Lac s 1, Len c 1, Len c 2, Len c 3, Lig v 1, Lup an 1, Lyc e 2, Lyc e 3, Lyc e 4, Mal d 1, Mal d 2, Mal d 3, Man e 5, Mer a 1, Mor n 3, Ole e 1, Ole e 3, Ole e 4, Ole e 5, Ole e 6, Ole e 7, Ole e 8, Ole e 9, Ole e 10, Ole e 11, Ost c 1, Par j 1, Par j 2, Par j 4, Par o 1, Pers a 1, Pha v 3, Pis v 1, Pis v 2, Pis v 3, Pis v 4, Pis v 5, Pis s

1, Pis s 2, Pla l 1, Pla a 1, Pla a 2, Pla or 1, Pla or 2, Pla or 3, Pru ar 1, Pru ar 3, Pru av 1, Pru av 2, Pru av 3, Pru d 3, Pru du 3, Pru du 5, Pru du 6, Pru p 1, Pru p 2, Pru p 3, Pyr c 1, Pyr c 3, Pyr c 5, Que a 1, Ric c 1, Rub i 1, Rub i 3, Sal k 1, Sal k 2, Sal k 3, Sal k 5, Ses i 1, Ses i 2, Ses i 3, Ses i 4, Ses i 5, Ses i 6, Ses i 7, Sin a 1, Sin a

2, Sin a 3, Sola t 1, Sola t 2, Sola t 3, Sola t 4, Syr v 1, Syr v 3, Vig r 1, Vit v 1 y Ziz m 1;

• en el que la variante de profilina tiene inserciones, sustituciones, eliminaciones, duplicaciones, insercion- eliminacion, cambios de fase, transversiones, truncamientos y/o inversiones en uno o mas lugares en comparacion con una profilina de origen natural de una cualquiera de las realizaciones precedentes;

• en el que la variante de profilina se hace a partir de dicha profilina de origen natural sometiendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 o 50 aminoacidos de la profilina de origen natural de una cualquiera de las realizaciones precedentes a sustitucion, eliminacion, duplicacion, insercion-eliminacion, cambio de fase, transversiones, truncamientos y/o inversiones;

• en el que la variante de profilina de una cualquiera de las realizaciones mencionadas en el presente documento tiene una secuencia de aminoacidos que tiene al menos un 60 % de identidad de secuencia, tal como al menos un 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 1 o, como alternativa, SEQ ID NO: 2-42;

• en el que el polipeptido o la variante del mismo (variante de profilina) comprende una secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 43;

• en el que el polipeptido o la variante del mismo (variante de profilina) comprende una secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 43 y tiene al menos un 60 % de identidad de secuencia, tal como al menos un 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 1;

• en el que la variante es una variante de SEQ ID NO: 1-42 o cualquier otra profilina de origen natural mencionada en el presente documento, en la que se anaden o se eliminan 1 y hasta 25 aminoacidos en comparacion con la secuencia de aminoacidos precursora de SEQ ID NO: 1-42 o dicha profilina de origen natural;

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

• en el que la variante es una variante de SEQ ID NO: 1-42 o cualquier otra profilina de origen natural mencionada en el presente documento, en el que 1 y hasta 25 aminoacidos estan sustituidos con otro aminoacido en comparacion con la secuencia de aminoacidos precursora de SEQ ID NO: 1-42 o dicha profilina de origen natural;

• en el que la variante tiene al menos un 60 % de identidad de secuencia, tal como al menos un 70 %, 75 %, 80 %, 85%, 90% o 95% de identidad de secuencia, con la SEQ ID NO: 1, y comprende los aminoacidos correspondientes a K87 y G113 de SEQ ID NO: 1;

• en el que la variante tiene al menos un 60 % de identidad de secuencia, tal como al menos un 70 %, 75 %, 80 %, 85%, 90% o 95% de identidad de secuencia, con SEQ ID NO: 1, y comprende los aminoacidos que corresponden a W3, Y6, I25, G27, W33, A34, Y125 y L126 de SEQ ID NO: 1;

• en el que la variante polipeptfdica tiene al menos un 60 % de identidad de secuencia, tal como al menos un

70%, 75%, 80%, 85%, 90% o 95% de identidad de secuencia, con la SEQ ID NO: 1, y comprende los

aminoacidos correspondientes a A23, A24, E46, G64, G69 y T97 de SEQ ID NO: 1;

• en el que la variante polipeptfdica tiene al menos un 60 % de identidad de secuencia, tal como al menos un

70%, 75%, 80%, 85%, 90% o 95% de identidad de secuencia, con la SEQ ID NO: 1, y comprende un

aminoacido seleccionado entre A, G o S en una posicion correspondiente a la posicion 13 y/o 115 de SEQ ID NO: 1;

• en el que la variante polipeptfdica tiene al menos un 60 % de identidad de secuencia, tal como al menos un 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad de secuencia, con la SEQ ID NO: 1, y tiene todos los restos de cistema del polipeptido precursor sustituidos con un aminoacido seleccionado entre A, G y/o S;

• en el que el polipeptido o la variante del mismo tiene una longitud de cadena de aminoacidos que vana entre 65 y 195 aminoacidos;

• en el que el numero de aminoacidos de la secuencia de aminoacidos de la variante esta en el intervalo del 50 % al 150 % en comparacion con el numero de aminoacidos de la secuencia de aminoacidos precursora de SEQ ID NO: 1-42 o una profilina de origen natural mencionada en el presente documento;

• en el que el polipeptido o la variante del mismo se modifica por glicosilacion, acetilacion, alquilacion, biotinilacion, glutamilacion, glicilacion, isoprenilacion, lipoilacion, fosfopanteteinilacion, fosforilacion, sulfatacion, selenacion, amidacion C-terminal y derivatizacion de grupo tiol;

• en el que el polipeptido o la variante del mismo es un polipeptido inmunogenico;

• en el que el polipeptido o la variante del mismo se une a o forma complejos con la poli-L-prolina;

• en el que el polipeptido o la variante del mismo se une a o forma complejos con la actina;

• en el que el polipeptido o la variante del mismo no se une ni forma complejos con la actina humana;

• en el que el polipeptido se puede extraer junto con un alergeno distinto de la profilina del material vegetal que contiene profilina al extraer el material vegetal que contiene profilina en una solucion acuosa que tiene un pH en el intervalo de 6 a 8 durante un penodo que vana de 1 a 30 minutos;

• en el que el polipeptido se puede obtener mediante un procedimiento que comprende aislar una profilina de dicho material vegetal que contiene profilina o producir de forma recombinante dicha profilina, en el que dicha profilina se ha identificado en un extracto fabricado mediante la suspension del material vegetal que contiene profilina en una solucion acuosa que tiene un pH en el intervalo de 6 a 8 para un penodo que vana de 1 a 30 minutos;

• en el que la respuesta inmune de hipersensibilidad es una respuesta inmune de hipersensibilidad de tipo 1;

• en el que la respuesta inmune de hipersensibilidad se selecciona del grupo que consiste en dermatitis atopica, urticaria, dermatitis de contacto, conjuntivitis alergica, rinitis alergica, asma alergica, anafilaxia y alergia alimentaria;

• en el que el polipeptido se administra en una mucosa o un epitelio seleccionado del grupo que consiste en una mucosa o un epitelio de las vfas respiratorias, del tracto gastrointestinal y de la cavidad oral;

• en el que el polipeptido se administra por inhalacion, administracion nasal, administracion bucal, administracion oral, administracion sublingual;

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

• en el que la primera dosis de dicho polipeptido se administra por inhalacion, administracion nasal, administracion bucal, administracion oral, administracion sublingual;

• en el que el polipeptido se administra por inhalacion, administracion nasal, administracion bucal, administracion oral, administracion sublingual en un penodo de tiempo suficiente para establecer la tolerancia oral a dicho polipeptido;

• en el que el polipeptido se administra ademas en el organo diana sujeto a la exposicion natural de un material vegetal que contiene profilina, en el que el organo diana se selecciona del grupo que consiste en las vfas respiratorias, el tracto gastrointestinal y la piel, en un penodo que coincida al menos en parte o en su totalidad con la exposicion natural del individuo a dicho material vegetal que contiene profilina;

• en el que el polipeptido se administra por administracion sublingual en un penodo de tiempo suficiente para establecer la tolerancia oral a dicho polipeptido y en el que el polipeptido o una variante del mismo se administra posteriormente en la cavidad nasal, en el tracto gastrointestinal y/o en la piel en un penodo de forma simultanea, de forma contemporanea, por separado o secuencialmente, en cualquier orden, con respecto al penodo de exposicion al material vegetal que contiene profilina;

• en el que la respuesta inmune de hipersensibilidad no esta causada por una profilina de dicho material vegetal que contiene profilina;

• en el que el individuo esta, al menos no antes de administrar la primera dosis de dicho polipeptido, sensibilizado a una profilina de dicho material vegetal que contiene profilina y/o dicho polipeptido;

• en el que el individuo no esta, al menos no antes de administrar la primera dosis de dicho polipeptido, sensibilizado a una profilina de dicho material vegetal que contiene profilina ni a dicho polipeptido;

• en el que el polipeptido o la profilina del material vegetal que contiene profilina no induce una respuesta inmune de hipersensibilidad en el individuo, al menos no antes de administrar la primera dosis de polipeptido;

• en el que el polipeptido o la profilina del material vegetal que contiene profilina no induce, al menos no antes de administrar la primera dosis de polipeptido, una reaccion cutanea inmediata ni/o una reaccion cutanea retardada en el individuo tras la realizacion de las pruebas cutaneas con diversas concentraciones de la profilina del material vegetal que contiene profilina y/o dicho polipeptido;

• en el que el polipeptido o la profilina del material vegetal que contiene profilina no induce, al menos no antes de administrar la primera dosis de polipeptido, la liberacion de histamina en un ensayo in vitro de basofilos/mastocitos usando la sangre del individuo que se vaya a tratar;

• en el que el individuo se ha expuesto a un material vegetal que contiene profilina antes de la administracion de la primera dosis de dicho polipeptido;

• en el que el individuo no esta sensibilizado a un alergeno distinto de la profilina del material vegetal que contiene profilina, al menos no antes de la administracion de la primera dosis de dicho polipeptido;

• en el que el individuo no tiene anticuerpos IgE en suero detectables capaces de unirse a o asociarse de otro modo con un alergeno distinto de la profilina del material que contiene profilina, al menos no antes de administrar la primera dosis de dicho polipeptido;

• en el que el individuo no tiene smtomas clmicos de una respuesta inmune de hipersensibilidad cuando se expone a un material vegetal que contiene profilina, al menos no antes de administrar la primera dosis de dicho polipeptido;

• en el que el polipeptido es el unico polipeptido administrado;

• en el que el polipeptido no se administra junto con un alergeno distinto de la profilina.

• Un polipeptido que tiene una secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10, en el que 1 o 2 restos de cistema estan sustituidos con un aminoacido seleccionado de A (alanina), G (glicina) y S (serina).

• Un polipeptido que tiene una secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10, en el que el aminoacido cistema de la posicion 13 y/o 115 se ha sustituido con un aminoacido seleccionado del grupo que comprende A, G y/o S.

• Un polipeptido que tiene una secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 44 o 45, en el que, opcionalmente, la secuencia de aminoacidos no contiene metionina en la posicion 1.

• Un acido nucleico aislado que codifica la protema de SEQ ID NO: 44 o 45;

5

en el que el acido nucleico aislado que tiene las SEQ ID NO: 46 o 47.

Listado de tablas

10

Orden [Familial________

Pinales [Cupressaceae y Pinaceae]

Tabla 1

Plantae Pinopsida

Genero___________________

Chamaecyparis, Cryptomeria, Cupressus, Juniperus Picea Pinus

____Especies [nombre de profilina]_____

Chamaecyparis obtusa (cipres japones), Cryptomeria japonica (cedro japones) [profilina Cry j], Cupressus arizonica (cipres), Cupressus sempervirens (cipres comun), Juniperus ashei (cedro de la montana), Juniperus oxycedrus (enebro), Juniperus sabinoides (cedro de la montana) y Juniperus virginiana (cedro

rojo oriental), Picea sitchencis (pino),

Pinus sylvestris (pino)

Tabla 2 Plantas Monocotyledoneae

Orden [Familia]

Genero Especies [nombre de profilina]

Arecales Elais, Phoenix Elais guineensis (palmera); Phoenix dactylifera (palmera

[Arecaceae]

datilera) [Pho d 2]

Asparagales [Asparaqaceae e Iridaceael

Asparagus

Crocus

Asparagus officinalis (esparrago)

Crocus sativus (Saffron crocus) [Cro s 2]

Poales

[Bromeliaceae y Poaceae]

Zingiberales /Musaceaea y Zingiberaceae)

Ananas, Anthoxanthum, Cynodon, Dactylis, Festuca, Holcus, Hordeum, Lolium, Oryza, Paspalum,

Phalaris, Phleum, Poa, Secale,

Sorghum, Triticum, Zea Musa

Ananas comosus (pina) [Ana c 1], Anthoxanthum odoratum (pasto vernal dulce), Cynodon dactylon (grama comun) [Cyn d 12], Dactylis glomerata (pasto ovillo), Festuca pratensis (festuca de los prados), Holcus lanatus (saboya), Hordeum vulgare (cebada), Lolium perenne (rye-grass), Oryza sativa (arroz), Paspalum notatum (pasto Bahia), Phalaris aquatica (alpiste),

Phleum pratense (hierba timotea) [Phl p 12], Poa pratensis (pasto azul de Kentucky), Secale cereale (rye),

Sorghum halepense (hierba Johnson), Triticum aestivum (trigo) [Tri a 12], Zea mays (mafz)

Musa acuminata (platano) [Mus a 1], Musa x paradisiaca (platano) [Mus xp 1].

Orden [Familial______

Apiales [Apiaceae y [Araliaceae]

Asterales [Asteraceae]

Brassicalis

[Brassicaceae, pueden incluir Cleomaceae y Caricaceae Caryophyllales [Amaranthaceae, Caryophyllaceae y Polygonaceae]

Tabla 3

Plantae Magnoliopsida

Genero_________

Apium, Daucus

Ambrosia, Artemisia Helianthus, Lactuca

Arabidopsis, Brassica, Sinapsis

______________Especies [nombre de profilina]____________

Apium graveolens (apio) [Api g 4], Daucus carota (zanahoria) [Dau c 4], Petroselinum crispum (perejil)

Ambrosia artemisiifolia (estafiate) [Amb a 8], Ambrosia psilostachya (ambrosia occidental), Artemisia vulgaris (artemisa) [Art v 4], Ambrosia trifida (ambrosia gigante), Helianthus annuus (girasol) [Hel a 2], Lactuca sativa (lechuga cultivada)

Arabidopsis Lyrata, Arabidopsis thaliana [Ara t 8], Brassica juncea (mostaza castana), Brassica napus (semilla de colza), Brassica oleracea (col y otras), Brassica rapa (nabo) y Sinapis alba (mostaza blanca) [Sin a 4]

Amaranthus, Beta, Amaranthus retroflexus (abredujo) [Ama r 2], Beta vulgaris

Chenopodium, (remolacha azucarera) [Beta v 2], Chenopodium album

Fagopyrum Salsola (cenizo) [Che e 2], Fagopyrum esculentum (trigo sarraceno comun), Fagopyrum tataricum (trigo sarraceno tartaro), Salsola kali (cardo ruso) [Sal k 4]

Curcurbitales [Cucurbitaceae] Order Ericales [Actinidiaceae, Lecythidaceae, y Theaceae]

Fabales [Fabaceae, Quillajaceae, Polygalaceae y Surianaceae]

Cucumis Cucumis melo (melon) [Cuc m 2]

Actinidia, Betholletia Actinidia chinensis (kiwi dorado), Actinidia deliciosa (kiwi) [Act d 9], Bertholletia excelsa (castana)

Arachis, Glycine,Lens, Arachis hypogaea (cacahuete) [Ara h 5]

Lupinus, Phaseolus Glycine max (soja) [Gly m 3], Lens culinaris (lenteja), Lupinus angustifolius (altramuz azul de hoja estrecha), Phaseolus vulgaris (frijol verde, habichuela), Pisum sativum (guisante) Vigna radiata (frijol mungo)

Fagales [Betulaceae, Fagaceae, Juglandaceae, Myricaceae, Nothofagaceae y Ticodendraceae] Gentianales [Aoocvnaceae y Rubiaceael Lamiales [Oleaceae, Pedaliacae y Plantaginaceae]

Alnus,Betula,Carpinus, Carya, Castanea, Corylus, Fagus, Juglans, Ostrya Quercus

Alnus glutinosa (aliso), Betula verrucosa (abedul) [Bet v 2], Carpinus betulus (carpe), Carya illinoinensis (pacana), Castanea sativa (castana), Corylus avellana (avellano) [Cor a 2], Fagus sylvatica (haya europea), Juglans nigra (nogal negro), Juglans regia (nogal ingles), Ostrya carpinifolia (carpe negro), Quercus alba (roble blanco)

Catharanthus, Coffea Catharanthus roseus (vinca de Madagascar), Coffee arabica (cafeto arabigo)

Fraxinus, Ligustrum, Fraxinus excelsior (fresno comun), Ligustrum vulgare

Olea, Plantago, (aligustre), Olea europea (olivo) [Ole e 2], Plantago lanceolata

Sesamum Syringa, (llanten menor), Sesamum indicum (sesamo), Syringa

vulgaris (lilo)

Laurales [Lauraceae] Persea

Malvales [Malvaceae] Gossypium

Persea americana (aguacate)

Gossypium arboretum, Gossypium barbadense, Gossypium darwinii, Gossypium herbaceum, Gossypium hirsutism, Gossypium raimondii

Malpighiales

[Euphorbiaceae]

Myrtales [Lythraceae] Proteales [Platanaceae]

Hevea, Manihot, Mercurialis, Popolus, Ricinus

Sonneratia

Platanus

Hevea brasiliensis (arbol del caucho (latex) [Hev b 8], Manihot esculenta (yuca, mandioca), Mercurialis annua (mercurial) [Mer a l], Popolus trichocarpa (alamo) Ricinus communis (ricino)

Sonneratia alba, Sonneratia caseolaris

Platanus orientalis (platano oriental), Platanus acerifolia

(acerifolia)[Pla a 3]

Orden [Familia]______

Rosales [Cannabaceae. Rosaceae, Ulmaceae y

Urticaceael

Sapindales [Anacardiaceae, Rutaceae and Sapindaceae]

Solanales [Solanaceael

Orden Vitales,[Vitaceae]

Genero___________

Fragaria,

Humulus,Malus,Morus, Parietaria, Prunus, Pyrus, Rubus, Ziziphus

Anacardium, Citrus, Litchi, Mangifera, Pistacia

Capsicum,

Lycopersicon, Solanum

Vitis

______________Especies [nombre de profilina]____________

Fragaria ananassa (fresa) [Fra a 4], Humulus japonicus (lupulo japones), Malus domestica (manzano) [Mal d 4], Morus nigra (morera), Parietaria judaica (pelosilla) [Par j 3], Parietaria officinalis (albahaca de culebra), Prunus armeniaca (albaricoquero), Prunus avium (cerezo dulce) [Pru av 4], Prunus domestica (ciruelo europeo), Prunus dulcis (almendro) [Pru du 4], Prunus persica (melocotenero) [Pru p 4], Pyrus communis (Pear) [Pyr c 4], Rubus idaeus (frambueso), Ziziphus mauritiana (datil chino)

Anacardium occidentale (anacardo), Citrus limon (limonero), Citrus reticulata (mandarino), Citrus sinensis (naranjo dulce) [Cit s 2], Litchi chinensis (licbd) [Lit c 1], Mangifera indica, Pistacia vera (pistacho)

Capsicum annuum (chile) [Cap a 2], Lycopersicon esculentum (tomatera) [Lyc e 1], Nicotiana tabacum (tabaco de Virginia), Solanum tuberosum (patata)

Vitis vinifera (uva)___________________________________

Tabla 4

Entrada

Nombre de la entrada Planta Identidad Valor E

Q68HB4

PROF2_PHLPR Phleum pratense (hierba timotea) 100,00 % 3,00E-72

F4Q4X7

PROF1_PHLPR Phleum pratense (hierba timotea) 99,00 % 1,00E-71

F0ZIL9

PROF3 PHLPR Phleum pratense (hierba timotea) 97,00 % 2,00E-70

B7SA43

A4KA31_PHLPR Phleum pratense (hierba timotea) 96,00 % 1,00E-69

B6EF35

A4KA32_PHLPR Phleum pratense (hierba timotea) 96,00 % 3,00E-70

A8IJA8

A4KA33_PHLPR Phleum pratense (hierba timotea) 96,00 % 2,00E-70

Q5VMJ3

A4KA34_PHLPR Phleum pratense (hierba timotea) 96,00 % 3,00E-70

P83647

A4KA36_PHLPR Phleum pratense (hierba timotea) 96,00 % 7,00E-70

Q84WD4

A4KA37_PHLPR Phleum pratense (hierba timotea) 96,00 % 1,00E-69

D0PRB5

A4KA38_PHLPR Phleum pratense (hierba timotea) 96,00 % 2,00E-69

A4KA61

A4KA49_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 96,00 % 1,00E-69

A4KA54

A4KA50_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 96,00 % 6,00E-70

Q9M7M8

A4KA52_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 96,00 % 1,00E-69

Q2PQ57

A4KA53_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 96,00 % 6,00E-70

G9B5Q4

G9I6G4_9POAL Triticum turgidum subsp. durum x Secale cereale 96,00 % 6,00E-70

Q9XF10

F2EK80_HORVD Hordeum vulgare var. distichum (cebada de dos hileras) 95,00 % 8,00E-69

B4FTX3

A4GFC3_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 94,00 % 3,00E-67

P49233

A4KA43_CORAV Corylus avellana (Avellano europeo) (Corylus maxima) 94,00 % 2,00E-68

A1KXK1

A4KA51_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 94,00 % 2,00E-68

D6BRE6

A4GFC0_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 93,00 % 3,00E-67

022655

A4GFB8_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 90,00 % 3,00E-64

Q9SNW5

F2CT70_HORVD Hordeum vulgare var. distichum (cebada de dos hileras) 90,00 % 6,00E-66

A4KA37

A2Z5Y9_ORYSI Oryza sativa subsp. indica (arroz) 89,00 % 4,00E-65

Entrada

Nombre de la entrada Planta Identidad Valor E

A4KA31

A3C3I5_ORYSJ Oryza sativa subsp. japonica (arroz) 89,00 % 4,00E-65

F5HFQ1

PROFA_ORYSJ Oryza sativa subsp. japonica (arroz) 89,00 % 4,00E-65

Q5EF31

C5XJ77_SORBI Sorghum bicolor (Sorgo) (Sorghum vulgare) 87,00 % 1,00E-64

Q9ST98

C5Z1D7_SORBI Sorghum bicolor (Sorgo) (Sorghum vulgare) 87,00 % 4,00E-65

A4GDU2

B4FCP0_MAIZE Zea mays (mafz) 86,00 % 7,00E-63

B0D663

Q6RG01_CAPAN Capsicum annuum (chile) 86,00 % 2,00E-19

A8IJ92

A4KA58 MAIZE Zea mays (mafz) 85,00 % 2,00E-62

C6SVT2

A5HNY4_MAIZE Zea mays (mafz) 85,00 % 3,00E-62

Q93YI9

B6T699_MAIZE Zea mays (mafz) 85,00 % 7,00E-63

A1BQK7

PROF3_MAIZE Zea mays (mafz) 85,00 % 7,00E-63

A8IJA4

A4KA55_MAIZE Zea mays (mafz) 84,00 % 2,00E-62

A8IJA0

A4KA56_MAIZE Zea mays (mafz) 84,00 % 6,00E-62

P0C0Y3

A4KA59_MAIZE Zea mays (mafz) 84,00 % 4,00E-62

Q3BCT0

B6TEN9_MAIZE Zea mays (mafz) 84,00 % 7,00E-62

Q9XG85

F2E5Q1_HORVD Hordeum vulgare var. distichum (cebada de dos hileras) 84,00 % 3,00E-62

Q9FE63

G7KQH7_MEDTR Medicago truncatula (trebol barril) (Medicago tribuloides) 84,00 % 2,00E-61

ABIJB6

A4KA54_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 83,00 % 5,00E-60

Q84V37

A4KA60_MAIZE Zea mays (mafz) 83,00 % 5,00E-61

P49231

A4KA61_MAIZE Zea mays (mafz) 83,00 % 5,00E-60

Q9XF40

B6T6Y5_MAIZE Zea mays (mafz) 83,00 % 6,00E-62

A4GCS1

E2GJB9_WHEAT Triticum aestivum (trigo) 83,00 % 7,00E-62

G9B5Q0

G9I6G5_9POAL Triticum turgidum subsp. durum x Secale cereale 83,00 % 3,00E-62

B3H795

PROF_CYNDA Cynodon dactylon (grama comun) (Panicum dactylon) 83,00 % 1,00E-62

A8PUB8

PROF1_HORVU Hordeum vulgare (cebada) 83,00 % 5,00E-61

Q29PL9

PROF1_MAIZE Zea mays (mafz) 83,00 % 5,00E-63

B4JC19

PROF2_MAIZE Zea mays (mafz) 83,00 % 6,00E-62

C5P4B7

Q38HU3_SOLTU Solanum tuberosum (patata) 83,00 % 1,00E-61

B8RIF3

Q38M47_SOLTU Solanum tuberosum (patata) 83,00 % 3,00E-62

A8IJ96

A4KA57_MAIZE Zea mays (mafz) 82,00 % 5,00E-61

A4GFC4

A4ZX86_BRACM Brassica campestris (nabo silvestre) 82,00 % 3,00E-61

D3K177

A5H0M3_NICBE Nicotiana benthamiana 82,00 % 1,00E-46

Q41344

A8IJ88_RAPSA Raphanus sativus (rabano) 82,00 % 2,00E-61

081982

A8IJB2_BRAJU Brassica juncea var. Multiceps 82,00 % 2,00E-61

A4GD57

C0PNL3_MAIZE Zea mays (mafz) 82,00 % 4,00E-62

A9XNJ7

PROF_HELAN Helianthus annuus (girasol comun) 82,00 % 3,00E-59

Entrada

Nombre de la entrada Planta Identidad Valor E

A9XNJ5

PROF_MERAN Mercurialis annua (mercurial) 82,00 % 1,00E-61

Q4Q5N1

Q9SMC0_TOBAC Nicotiana tabacum (tabaco de Virginia) 82,00 % 1,00E-60

024650

A0MEN1_ARATH Arabidopsis thaliana (oreja de raton) 81,00 % 1,00E-61

A4KA32

A1KXK0_ELAGV Elaeis guineensis var. tenera (palma aceitera) 81,00 % 9,00E-60

G9I6G4

A1KXK1_ELAGV Elaeis guineensis var. tenera (palma aceitera) 81,00 % 5,00E-60

Q8L5D8

A4KA44_CORAV Corylus avellana (avellano europeo) (Corylus maxima) 81,00 % 8,00E-59

A5A5J9

B7FGT8_MEDTR Medicago truncatula (trebol barril) (Medicago tribuloides) 81,00 % 1,00E-59

024171

C5Z4B6_SORBI Sorghum bicolor (sorgo) (Sorghum vulgare) 81,00 % 5,00E-59

A4GDS0

DOPRB5_WHEAT Triticum aestivum (trigo) 81,00 % 3,00E-60

G7L7E2

PROF_BRANA Brassica napus (colza) 81,00 % 2,00E-60

B4NZS9

PROF1_SOLLC Solanum lycopersicum (tomatera) (Lycopersicon esculentum) 81,00 % 3,00E-59

B4I1N3

PROF1_TOBAC Nicotiana tabacum (tabaco de Virginia) 81,00 % 2,00E-59

C3YHE9

PROF3_AMBAR Ambrosia artemisiifolia (estafiate) 81,00 % 2,00E-59

Q94KS3

PROF3_ARATH Arabidopsis thaliana (oreja de raton) 81,00 % 1,00E-60

C1BUS4

PROF3_HEVBR Hevea brasiliensis (arbol del caucho) (Siphonia brasiliensis) 81,00 % 1,00E-62

A5J297

PROF4_ARATH Arabidopsis thaliana (oreja de raton) 81,00 % 1,00E-61

D3BLB6

Q1PF40_ARATH Arabidopsis thaliana (oreja de raton) 81,00 % 1,00E-61

F8QBC0

Q29PU0_ARATH Arabidopsis thaliana (oreja de raton) 81,00 % 1,00E-60

A4KA34

A1KXJ9_ELAGV Elaeis guineensis var. tenera (palma aceitera) 80,00 % 6,00E-59

B6T699

A4GDQ6_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 80,00 % 8,00E-59

Q38M47

A4GDR8_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 80,00 % 5,00E-59

A9PHX4

A4GFC4_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 80,00 % 9,00E-60

B7E355

A4KA39_CORAV Corylus avellana (avellano europeo) (Corylus maxima) 80,00 % 2,00E-58

P49232

A4KA40_CORAV Corylus avellana (avellano europeo) (Corylus maxima) 80,00 % 2,00E-58

B6T7X9

A4KA45_CORAV Corylus avellana (avellano europeo) (Corylus maxima) 80,00 % 6,00E-59

Q9AXH4

A8IJ92_BRAOC Brassica oleracea var. capitata (col) 80,00 % 7,00E-60

Q5EEP6

A8IJ96_BRARA Brassica rapa (nabo) 80,00 % 7,00E-60

G7L7D9

A8IJA0_BRAOA Brassica oleracea var. alboglabra (brecol chino) (Brassica alboglabra) 80,00 % 7,00E-60

B4FV68

A8IJA8_BRARC Brassica rapa var. Purpuraria 80,00 % 2,00E-60

Q64LH2

A8IJB6_BRANA Brassica napus (colza) 80,00 % 7,00E-60

Q5EEP8

A9XNJ4_9MYRT Sonneratia alba 80,00 % 1,00E-26

Entrada

Nombre de la entrada Planta Identidad Valor E

A4KA44

A9XNJ5_9MYRT Sonneratia caseolaris 80,00 % 1,00E-26

A4GDQ6

A9XNJ6_9MYRT Sonneratia ovate 80,00 % 1,00E-26

Q9M7M9

A9XNJ7_9MYRT Sonneratia apetala 80,00 % 1,00E-26

A4GDQ9

B4FTX3_MAIZE Zea mays (mafz) 80,00 % 2,00E-60

A4GDR7

B6EF35_WHEAT Triticum aestivum (trigo) 80,00 % 2,00E-60

Q5EEP7

B6T7X9_MAIZE Zea mays (mafz) 80,00 % 5,00E-60

C9E9Z7

B7E355_ORYSJ Oryza sativa subsp. japonica (arroz) 80,00 % 3,00E-60

A4GE44

B7SA43_BRANI Brassica nigra (mostaza negra) (Sinapis nigra) 80,00 % 2,00E-60

A4GE47

C3W2Q7_AMARE Amaranthus retroflexus (amaranto) (abredujo) 80,00 % 9,00E-58

A4GDT9

D7L6H0_ARALL Arabidopsis lyrata subsp. lyrata (berro de hoja en forma de lira) 80,00 % 3,00E-61

A4GCR5

D7MCM9_ARALL Arabidopsis lyrata subsp. lyrata (berro de hoja en forma de lira) 80,00 % 2,00E-60

G9B5S5

PROF_CHEAL Chenopodium album (cenizo) 80,00 % 9,00E-60

A9XNJ6

PROF_LITCN Litchi chinensis (Nclif) 80,00 % 5,00E-60

P25843

PROF1_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 80,00 % 1,00E-58

E2APZ9

PROF1_WHEAT Triticum aestivum (trigo) 80,00 % 4,00E-60

B4MUZ7

PROF2_AMBAR Ambrosia artemisiifolia (estafiate) 80,00 % 3,00E-59

F4PC86

PROF2_SOLLC Solanum lycopersicum (tomatera) (Lycopersicon esculentum) 80,00 % 6,00E-59

Q6QEJ7

PROF2_TOBAC Nicotiana tabacum (tabaco de Virginia) 80,00 % 1,00E-58

E9H2U7

PROF2_WHEAT Triticum aestivum (trigo) 80,00 % 5,00E-60

E7A2J9

PROF4_MAIZE Zea mays (mafz) 80,00 % 2,00E-60

P68696

PROFX_ORYSI Oryza sativa subsp. indica (arroz) 80,00 % 3,00E-60

D3B642

PROFX_ORYSJ Oryza sativa subsp. japonica (arroz) 80,00 % 3,00E-60

Q013H6

Q2LD52_CINCA Cinnamomum camphora (alcanforero) (Laurus camphora) 80,00 % 1,00E-60

HOEVP8

Q2PQ57_LITCN Litchi chinensis (lichn) 80,00 % 7,00E-60

B9W8I5

Q84WD4_ARATH Arabidopsis thaliana (oreja de raton) 80,00 % 3,00E-60

C3Z897

Q8L5D8_PHODC Phoenix dactylifera (palmera datilera) 80,00 % 5,00E-60

A3LQH2

Q8VWR0_SOLLC Solanum lycopersicum (tomatera) (Lycopersicon esculentum) 80,00 % 2,00E-59

G2Q4F1

Q9ZTM2_PETHY Petunia hybrida (petunia) 80,00 % 2,00E-53

F2EK80

A4GCR3_0LEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 7,00E-58

A4KA43

A4GCR6_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 1,00E-57

C5Z1D7

A4GD52_0LEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 2,00E-58

A3C3I5

A4GD53_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 7,00E-58

A2Z5Y9

A4GD54_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 4,00E-58

Entrada

Nombre de la entrada Planta Identidad Valor E

P35081

A4GD57_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 7,00E-58

B4FCP0

A4GDQ8_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 1,00E-57

Q9M7N0

A4GDQ9_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 2,00E-58

A4KA55

A4GDR4_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 1,00E-57

A5HNY4

A4GDR7_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 3,00E-58

C0PNL3

A4GDSO_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 2,00E-57

A4KA59

A4GDS6_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 3,00E-58

P35082

A4GDS7_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 5,00E-58

B6T6Y5

A4GDS9_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 3,00E-57

E2GJB9

A4GDT 1_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 2,00E-58

A0MEN1

A4GDU2_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 2,00E-58

ABIJB2

A4GDU5_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 1,00E-57

P52184

A4GE42_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 1,00E-57

A4KA60

A4GE44_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 4,00E-58

Q38904

A4GE47_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 1,00E-57

Q2LD52

A4GE50_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 3,00E-58

Q29PU0

A4GE53_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 3,00E-58

A5ASF9

A4GE54_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 1,00E-57

Q9SNW7

A4GE55_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 2,00E-58

Q9FUB8

A4GFB7_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 6,00E-59

B9RKF5

A4GFC2_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 2,00E-60

D7MCM9

A4K9Z8_BETPN Betula pendula (abedul europeo) (Betula verrucosa) 79,00 % 1,00E-58

Q941H7

A4KA41_CORAV Corylus avellana (avellano europeo) (Corylus maxima) 79,00 % 2,00E-59

A1KXK0

A5A5J7_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 2,00E-57

B7FGT8

A5A5J9_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 4,00E-58

B6CQV0

A5AQ89_VITVI Vitis vinifera (uva) 79,00 % 2,00E-58

Q64LH0

A5ASF9_VITVI Vitis vinifera (uva) 79,00 % 1,00E-60

P41372

A5BLM8_VITVI Vitis vinifera (uva) 79,00 % 2,00E-58

B9RKF4

A8IJA4_BRARP Brassica rapa subsp. pekinensis (col china) (Brassica pekinensis) 79,00 % 7,00E-60

A4KA45

A9PHX4_POPTR Populus trichocarpa (alamo) (Populus balsamifera subsp. trichocarpa) 79,00 % 2,00E-60

P49234

A9XNJ8_9MYRT Sonneratia alba 79,00 % 2,00E-25

Q9ST99

A9XNJ9_9MYRT Sonneratia caseolaris 79,00 % 1,00E-25

A4K9Z8

A9XNK0_9 MYRT Sonneratia ovata 79,00 % 1,00E-25

Q5FX67

B9RKF5_RICCO Ricinus communis (ricino) 79,00 % 2,00E-60

A9P8K3

C6SVT2_SOYBN Glycine max (soja) (Glycine hispida) 79,00 % 2,00E-59

A4GDT5

D3K177_ARAHY Arachis hypogaea (cacahuete) 79,00 % 2,00E-59

Entrada

Nombre de la entrada Planta Identidad Valor E

A4GE48

D6BRE6_9ROSI Jatropha curcas 79,00 % 2,00E-60

A4GDU3

E4MXD3_THEHA Thellungiella halophila (berro de agua salada) 79,00 % 5,00E-58

Q8H2C7

G7L7D9_MEDTR Medicago truncatula (trebol barril) (Medicago tribuloides) 79,00 % 3,00E-59

Q8H123

G7L7E2_MEDTR Medicago truncatula (trebol barril) (Medicago tribuloides) 79,00 % 6,00E-35

G9B5S6

PROF_CAPAN Capsicum annuum (chile) 79,00 % 4,00E-58

Q3LVF0

PROF_FRAAN Fragaria ananassa (freson) 79,00 % 9,00E-60

P26199

PROF1 AMBAR Ambrosia artemisiifolia (estafiate) 79,00 % 2,00E-58

E0VF14

PROF1JJLLO Lilium longiflorum (azucena blanca) 79,00 % 1,00E-60

B3N5A1

PROF1 PHAVU Phaseolus vulgaris (frijol verde) (habichuela) 79,00 % 9,00E-60

Q3YMV5

PROFIjRICCO Ricinus communis (ricino) 79,00 % 2,00E-60

D3B3P0

PROF2_HEVBR Hevea brasiliensis (arbol del caucho) (Siphonia brasiliensis) 79,00 % 2,00E-59

D3TQD6

PROF2_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 79,00 % 7,00E-58

P26200

PROF3_TOBAC Nicotiana tabacum (tabaco de Virginia) 79,00 % 2,00E-57

E9C081

PROF3_WHEAT Triticum aestivum (trigo) 79,00 % 1,00E-58

C5MCP8

Q2KN24_AMBAR Ambrosia artemisiifolia (estafiate) 79,00 % 6,00E-57

A4KA51

A4GCR5_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 78,00 % 3,00E-57

A4GFC3

A4GCR7_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 78,00 % 2,00E-57

A4GFC0

A4GCR8_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 78,00 % 2,00E-57

F2CT70

A4GCS1_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 78,00 % 6,00E-57

C5XJ77

A4GD55_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 78,00 % 6,00E-57

A4GFB8

A4GD56_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 78,00 % 3,00E-57

004725

A4GDR1_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 78,00 % 2,00E-57

F2E5Q1

A4GDR6_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 78,00 % 4,00E-57

G9I6G5

A4GDR9_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 78,00 % 2,00E-57

A4KA56

A4GDT0_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 78,00 % 9,00E-58

B6TEN9

A4GDT3_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 78,00 % 6,00E-57

049894

A4GDT5_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 78,00 % 2,00E-57

Q38905

A4GDT9_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 78,00 % 3,00E-57

Q1PF40

A4GDU0_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 78,00 % 6,00E-57

A8IJ88

A4GDU6_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 78,00 % 6,00E-57

D7L6H0

A4GE38_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 78,00 % 9,00E-58

A4ZX86

A4GE39_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 78,00 % 1,00E-57

A4KA57

A4GE45_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 78,00 % 2,00E-57

Entrada

Nombre de la entrada Planta Identidad Valor E

Q9SMC0

A4GE48_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 78,00 % 3,00E-57

082572

A4GFB9_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 78,00 % 2,00E-59

Q9LEI8

A7XZJ9_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 78,00 % 8,00E-56

Q9XF38

A9P7F0_GOSHI Gossypium hirsutum (algodonero de tierras altas) (Gossypium mexicanum) 78,00 % 2,00E-58

Q3BCS8

A9PBI2_POPTR Populus trichocarpa (alamo) (Populus balsamifera subsp. trichocarpa) 78,00 % 2,00E-59

Q9XF41

B0B0M7_MALDO Malus domestics (manzano) (Pyrus malus) 78,00 % 9,00E-60

A4GD52

B4FV68_MAIZE Zea mays (mafz) 78,00 % 3,00E-59

A4GDS6

B6CQV0_9ROSA Prunus dulcis x Prunus persica 78,00 % 1,00E-59

Q5EEP5

B7VFP6_MALDO Malus domestica (manzano) (Pyrus malus) 78,00 % 2,00E-48

A4GDS7

B9RKF4_RICCO Ricinus communis (ricino) 78,00 % 3,00E-59

024170

B9RQD3_RICCO Ricinus communis (ricino) 78,00 % 1,00E-58

A5A5J7

C9E9Z7_9MAGN Akebia trifoliata 78,00 % 4,00E-58

A4GCR7

D3U1G2_GOSRA Gossypium raimondii (algodonero del nuevo mundo) 78,00 % 2,00E-58

Q27HX6

D3U1G3_GOSAR Gossypium arboreum (algodonero arboreo) (Gossypium nanking) 78,00 % 2,00E-58

B6CQU8

E6Y2MO_SINAL Sinapis alba (mostaza blanca) (Brassica hirta) 78,00 % 6,00E-57

D7MCM8

F4YF99_CAMSI Camellia sinensis (planta del te) 78,00 % 5,00E-58

G9B5S9

PROF_BETPN Betula pendula (abedul europeo) (Betula verrucosa) 78,00 % 1,00E-57

A9UR87

PROF1_HEVBR Hevea brasiliensis (arbol del caucho) (Siphonia brasiliensis) 78,00 % 7,00E-58

B4KGG2

PROF2_LILLO Lilium lonqiflorum (azucena blanca) 78,00 % 2,00E-57

F8QWX6

PROF3_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 78,00 % 2,00E-57

B3RIX1

PROF5_MAIZE Zea mays (mafz) 78,00 % 3,00E-59

B8RIF9

QOPPS3_SOYBN Glycine max (soja) (Glycine hispida) 78,00 % 2,00E-58

F8P9Y4

Q2KN23_AMBAR Ambrosia artemisiifolia (estafiate) 78,00 % 4,00E-56

E9D690

Q2XPH2_MANIN Mangifera indica (mango) 78,00 % 5,00E-58

G0N7P8

Q5EEP5_PETCR Petroselinum crispum (perejil) (Petroselinum hortense) 78,00 % 5,00E-58

F9X7B2

Q5EEP7_PETCR Petroselinum crispum (perejil) (Petroselinum hortense) 78,00 % 4,00E-58

C7Z4J3

Q5XXQ5_ARAHY Arachis hypogaea (cacahuete) 78,00 % 2,00E-55

F0ZJC6

Q64LH3_HUMSC Humulus scandens (lupulo japones) (Humulopsis scandens) 78,00 % 1,00E-60

Q9FUD1

A4GD50_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 77,00 % 4,00E-57

P35083

A4GD58_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 77,00 % 2,00E-56

Entrada

Nombre de la entrada Planta Identidad Valor E

A4KA58

A4GDR3_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 77,00 % 2,00E-56

Q38HU3

A4GDT4_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 77,00 % 2,00E-56

G7KQH7

A4GDU3_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 77,00 % 7,00E-57

Q64LH3

A4GE49_OLEEU Olea europaea (olivo comun) 77,00 % 3,00E-56

A4GFB9

A7XZJ7_SOYBN Glycine max (soja) (Glycine hispida) 77,00 % 2,00E-58

Q84RR7

A8VT60_AMAVI Amaranthus viridis (amaranto verde) 77,00 % 2,00E-57

Q9AXH5

A9P8N4_POPTR Populus trichocarpa (alamo) (Populus balsamifera subsp. trichocarpa) 77,00 % 4,00E-57

024169

B0B0N5_MALDO Malus domestica (manzano) (Pyrus malus) 77,00 % 2,00E-57

B9RQD3

B0B0N6_MALDO Malus domestica (manzano) (Pyrus malus) 77,00 % 1,00E-56

A4GE53

B6CAT2_GERHY Gerbera hybrida (margarita) 77,00 % 5,00E-58

A4GD54

B7VFP4_MALDO Malus domestica (manzano) (Pyrus malus) 77,00 % 5,00E-58

Q84RR5

C6JT04_9MYRT Sonneratia alba 77,00 % 1,00E-29

A4GE45

D3GC01_9ROSI Jatropha curcas 77,00 % 2,00E-58

A4GDS9

D7L6H1_ARALL Arabidopsis lyrata subsp. lyrata (berro de hoja en forma de lira) 77,00 % 3,00E-54

E6Y2M0

E0XJL2_GOSHI Gossypium hirsutum (algodonero de tierras altas) (Gossypium mexicanum) 77,00 % 4,00E-58

G9B5V1

G9B5U3_GOSRA Gossypium raimondii (algodonero del nuevo mundo) 77,00 % 5,00E-37

G9B5U3

G9B5U8_GOSAR Gossypium arboreum (algodonero arboreo) (Gossypium nanking) 77,00 % 5,00E-37

G9B617

G9B5U9_GOSHE Gossypium herbaceum (algodonero herbaceo) (algodonero arabe) 77,00 % 5,00E-37

G9B615

G9B5V0_GOSHE Gossypium herbaceum subsp. africanum 77,00 % 5,00E-37

G9B613

G9B5V1_GOSBA Gossypium barbadense (algodonero de islas marinas) (algodonero egipcio) 77,00 % 5,00E-37

G9B612

G9B5V2_GOSDA Gossypium darwinii (algodonero de Darwin) 77,00 % 5,00E-37

G9B611

G9B5V4_GOSHI Gossypium hirsutum (algodonero de tierras altas) (Gossypium mexicanum) 77,00 % 5,00E-37

G9B5P7

PROF_ANACO Ananas comosus (pina) (Ananas ananas) 77,00 % 7,00E-58

E1ZQQ4

PROF_CROSA Crocus sativus (azafran) 77,00 % 2,00E-57

C0Z2Z0

PROF_CUCME Cucumis melo (melon) 77,00 % 7,00E-58

A9XNJ9

PROF_PRUPE Prunus persica (melocotonero) (Amygdalus persica) 77,00 % 5,00E-59

A9XNJ8

PROF_PYRCO Pyrus communis (peral) (Pyrus domestica) 77,00 % 6,00E-59

D8U668

PROF1_ARATH Arabidopsis thaliana (oreja de raton) 77,00 % 9,00E-55

A1YQX7

PROF1_ARTVU Artemisia vulgaris (artemisa) 77,00 % 7,00E-55

C1BP76

PROF1_MALDO Malus domestica (manzano) (Pyrus malus) 77,00 % 4,00E-58

B4LR73

PROF1_SOYBN Glycine max (soja) (Glycine hispida) 77,00 % 3,00E-58

D5ABJ3

PROF2_MALDO Malus domestica (manzano) (Pyrus malus) 77,00 % 1,00E-58

Entrada

Nombre de la entrada Planta Identidad Valor E

D3TKT4

PROF2_PARJU Parietaria judaica (pelosilla) (Parietaria diffusa) 77,00 % 4,00E-55

Q8T938

PROF2_SOYBN Glycine max (soja) (Glycine hispida) 77,00 % 5,00E-58

C1DYP0

PROF3_MALDO Malus domestica (manzano) (Pyrus malus) 77,00 % 2,00E-57

Q95VF7

PROF4_HEVBR Hevea brasiliensis (arbol del caucho) (Siphonia brasiliensis) 77,00 % 1,00E-58

B3MMQ1

PROF5_HEVBR Hevea brasiliensis (arbol del caucho) (Siphonia brasiliensis) 77,00 % 7,00E-60

F4RL03

Q27HX6_MANIN Mangifera indica (mango) 77,00 % 3,00E-57

D2D5E4

Q3BCS2_MALDO Malus domestica (manzano) (Pyrus malus) 77,00 % 2,00E-57

B2ZRT3

Q3BCS4_MALDO Malus domestica (manzano) (Pyrus malus) 77,00 % 5,00E-59

B4G6L5

Q3BCS6_MALDO Malus domestica (manzano) (Pyrus malus) 77,00 % 3,00E-59

A7XZK1

Q3BCS8_MALDO Malus domestica (manzano) (Pyrus malus) 77,00 % 6,00E-59

F1LBX8

Q3BCT0_MALDO Malus domestica (manzano) (Pyrus malus) 77,00 % 4,00E-58

Q6CPT8

Q5XWE1_CITLA Citrullus lanatus (sandfa) (Citrullus vulgaris) 77,00 % 8,00E-59

E4V5P8

Q84MM5_CUCMN Cucumis melo var. cantalupensis (melon) (Cucumis melo var. reticulatus) 77,00 % 2,00E-58

A5DT33

Q84RR5_MALDO Malus domestica (manzano) (Pyrus malus) 77,00 % 2,00E-57

B8RIF7

Q84RR6_MALDO Malus domestica (manzano) (Pyrus malus) 77,00 % 2,00E-58

G8BA18

Q84RR7_MALDO Malus domestica (manzano) (Pyrus malus) 77,00 % 5,00E-59

C5FGJ6

Q9AXH4_CORAV Corylus avellana (avellano europeo) (Corylus maxima) 77,00 % 3,00E-59

Q86RQ5

Q9AXH5_CORAV Corylus avellana (avellano europeo) (Corylus maxima) 77,00 % 6,00E-59

A4KA36

A1Z292_COCNU Cocos nucifera (coco) 76,00 % 2,00E-57

A4KA49

A1Z294_CARMI Caryota mitis (palmera de cola de pez) 76,00 % 3,00E-57

A7XZJ7

B3TLV2_ELAGV Elaeis guineensis var. tenera (palma aceitera) 76,00 % 3,00E-57

Q2XPH2

B8BG75_ORYSI Oryza sativa subsp. indica (arroz) 76,00 % 9,00E-52

B0B0N5

C6JWH0_SALKA Salsola kali (cardo ruso) 76,00 % 3,00E-55

A4GD56

D7MCM8_ARALL Arabidopsis lyrata subsp. lyrata (berro de hoja en forma de lira) 76,00 % 4,00E-55

A1Z294

D7MLU1_ARALL Arabidopsis lyrata subsp. lyrata (berro de hoja en forma de lira) 76,00 % 7,00E-55

A9P8N4

D7TBE7_VITVI Vitis vinifera (uva) 76,00 % 7,00E-57

A7XZJ9

F2EGC6 HORVD Hordeum vulgare var. distichum (cebada de dos hileras) 76,00 % 1,00E-56

G9B603

PROF_APIGR Apium graveolens (apio) 76,00 % 2,00E-58

G9B5Z9

PROF ARAHY Arachis hypogaea (cacahuete) 76,00 % 9,00E-57

C6JT04

PROF_DAUCA Daucus carota (zanahoria) 76,00 % 8,00E-59

A9XNJ4

PROF_MUSAC Musa acuminata (platano) (Musa cavendishii) 76,00 % 2,00E-55

B8RIF1

PROF1_PARJU Parietaria judaica (pelosilla) (Parietaria diffusa) 76,00 % 5,00E-56

P19984

PROF3_LILLO Lilium longiflorum (azucena blanca) 76,00 % 5,00E-56

Entrada

Nombre de la entrada Planta Identidad Valor E

Q5KNQ6

PROF6_HEVBR Hevea brasiliensis (arbol del caucho) (Siphonia brasiliensis) 76,00 % 3,00E-59

D2DSN5

Q5EEP6_PETCR Petroselinum crispum (perejil) (Petroselinum hortense) 76,00 % 3,00E-59

E9E950

Q5EEP8_PETCR Petroselinum crispum (perejil) 76,00 % 8,00E-59

(Petroselinum hortense)

P53696

Q7E369 CUCMN Cucumis melo var. cantalupensis (melon) (Cucumis melo var. reticulatus) 76,00 % 1,00E-57

A4HK30

Q9XF10_9ASPA Variedad cultivada h^brida Phalaenopsis 76,00 % 2,00E-55

P35079

A1BQK7_CUCSA Cucumis sativus (pepino) 75,00 % 5,00E-18

A4KA52

A1Z293_ROYRE Roystonea regia (palmera real) 75,00 % 3,00E-56

A4GE50

B6CQU8_9ROSA Prunus dulcis x Prunus persica 75,00 % 9,00E-57

A4GCR3

C0Z3G0_ARATH Arabidopsis thaliana (oreja de raton) 75,00 % 9,00E-55

A9XNK0

PROF_PRUDU Prunus dulcis (almendro) (Prunus amygdalus) 75,00 % 9,00E-57

B0W2U6

PROF2 ARATH Arabidopsis thaliana (oreja de raton) 75,00 % 9,00E-55

Q6RG01

PROF2 ARTVU Artemisia vulgaris (artemisa) 75,00 % 1,00E-53

P39825

Q5EEP4 PETCR Petroselinum crispum (perejil) (Petroselinum hortense) 75,00 % 5,00E-55

E7D158

Q64LH4_HUMSC Humulus scandens (lupulo japones) (Humulopsis scandens) 75,00 % 2,00E-57

A7S5R6

Q8GT40_PRUPE Prunus persica (melocotenero) (Amygdalus persica) 75,00 % 7,00E-57

Q93YG7

A9P8K3 POPTR Populus trichocarpa (alamo) (Populus balsamifera subsp. trichocarpa) 74,00 % 2,00E-57

A4GDT1

B4FK52_MAIZE Zea mays (mafz) 74,00 % 6,00E-35

E0XJL2

B6TJ90 MAIZE Zea mays (mafz) 74,00 % 2,00E-36

B7VFP5

PROF_PRUAV Prunus avium (cerezo) 74,00 % 4,00E-56

P18322

PROF5_ARATH Arabidopsis thaliana (oreja de raton) 74,00 % 6,00E-53

A1KYY2

Q7X9Q0_CUCME Cucumis melo (melon) 74,00 % 2,00E-55

A1KXJ2

Q7Y253_GOSHI Gossypium hirsutum (algodonero de tierras altas) (Gossypium mexicanum) 74,00 % 2,00E-56

Q5A786

Q8H123_ARATH Arabidopsis thaliana (oreja de raton) 74,00 % 6,00E-53

C4YDM2

Q8H2C7_ARATH Arabidopsis thaliana (oreja de raton) 74,00 % 6,00E-53

F1A3K2

Q8LCJ1_ARATH Arabidopsis thaliana (oreja de raton) 74,00 % 4,00E-54

Q8GT39

A8VT57_AMAVI Amaranthus viridis (amaranto verde) 73,00 % 3,00E-54

Q3BCS4

A9NMR7_PICSI Picea sitchensis (pfcea de Sitka) (Pinus sitchensis) 73,00 % 3,00E-51

P22271

PROF1_CITSI Citrus sinensis (naranjo dulce) (Citrus aurantium var. sinensis) 73,00 % 1,00E-54

D3U1G3

B3H795_ARATH Arabidopsis thaliana (oreja de raton) 72,00 % 9,00E-31

F4YF99

B8RIF1_PINSY Pinus sylvestris (pino silvestre) 72,00 % 2,00E-20

E4MXD3

B8RIF3_PINSY Pinus sylvestris (pino silvestre) 72,00 % 8,00E-14

Entrada

Nombre de la entrada Planta Identidad Valor E

B6CAT2

B8RIF9_PINSY Pinus sylvestris (pino silvestre) 72,00 % 6,00E-16

A4GD53

C0Z2Z0_ARATH Arabidopsis thaliana (oreja de raton) 72,00 % 9,00E-31

A4GE54

C5J3U0_CHEAL Chenopodium album (cenizo) 72,00 % 3,00E-50

A4GD55

E2D0Y9_SALKA Salsola kali (cardo ruso) 72,00 % 4,00E-52

D2XTC1

Q3LVF0_TAROF Taraxacum officinale (achicoria amarga) (Leontodon taraxacum) 72,00 % 1,00E-26

065810

B7VFP5_MALDO Malus domestica (manzano) (Pyrus malus) 70,00 % 2,00E-26

A4S1F7

Q1EMQ3_PLAMJ Plantago major (llanten mayor) 70,00 % 6,00E-53

C5Z4B6

A9NNS7_PICSI Picea sitchensis (pfcea de Sitka) (Pinus sitchensis) 68,00 % 6,00E-51

A4GDR8

A9P2A1_PICSI Picea sitchensis (pfcea de Sitka) (Pinus sitchensis) 68,00 % 2,00E-50

B3TLV2

D5ABJ3_PICSI Picea sitchensis (pfcea de Sitka) (Pinus sitchensis) 67,00 % 3,00E-19

Q9STB6

A5AW47_VITVI Vitis vinifera (uva) 65,00 % 2,00E-24

Tabla 5

Posicion

Variacion de aminoacidos Posicion Variacion de aminoacidos

5

T o A 59 H o Y o T o F o S

8

D o Y o N 63 T o I

9

D o E 65 M o L

12

M o C o L 66 F o L o I o H o Y

14

E o D 67 V o I o L

15

I o V 68 A o G

16

E o D 69 G o A o T o S o P

18

H o L o Q o N 70 A o T

19

HQ 81 A o R o V

20

LH 83 I o T

21

A o S o T o G 89 A o S o T o P

22

S o A 92 I o V

23

A o T 94 L o I o V

26

F o L o I o V o A 98 G o N

28

H o Q 99 Q o M

29

D o G o A 100 A o S

31

T o A o S 101 L o M

32

V o T o A 102 V o I

37

A o T o P o S 103 L o I o V

38

D o A o T o N 105 I o V

41

Q o S o E o A o L 107 D o E

43

K o A o G 110 M o L

Posicion

Variacion de aminoacidos Posicion Variacion de aminoacidos

44

P o T o A 116 N o S o D

45

E o A o N 117 M o L

46

E o D 118 V o I

47

I o M o V 119 V o I

48

T o A o S 120 E o G

49

G o N o A 121 R o K

50

I o V 127 V o L o M

51

M o I 128 E o K

52

K o N 131 M o L o Q o F

55

D o A

_____________________________Tabla 6__________

CONJUNTO SUBCONJUNTO

Hidrofobo FWYHKMILVTAGC Aromatico

Alifatico

Polar WYHKREDCSTNQ Cargado

Cargado positivamente Cargado negativamente

Pequeno VCAGSpTND Diminuto

FWYH

ILV

HKRED

HKR

ED

AGCS

Tabla 7

His (H)

aromatico, polar, hidrofilo, cargado (+) (Arg, Lys)

Thr (T)

polar, hidrofilo, neutro, pequeno Ser, Cys

Ile(I)

alifatico, hidrofobo, neutro Leu, Val

His (H)

aromatico, polar, hidrofilo, cargado (+) (Arg, Lys)

Val (V)

alifatico, hidrofobo, neutro Leu, Ile

Lys (K)

polar, hidrofilo, cargado (+) Arg

Trp (W)

aromatico, polar, hidrofobo, neutro Tyr, Phe

Leu (L)

alifatico, hidrofobo, neutro Ile, Val

Tyr (Y)

aromatico, polar, hidrofobo Trp, Phe

5 Tabla 8

Codigos de aminoacidos

Propiedades (ffsicas, qmmicas, estructurales) Sustituciones conservativas adecuadas

Ala (A)

alifatico, hidrofobo, neutro, pequeno -

Met (M)

hidrofobo, neutro -

Cys (C)

polar, hidrofobo, neutro, pequeno Ser, Thr

Asn(N)

polar, hidrofilo, neutro, pequeno Gln

Asp(D)

polar, hidrofilo, cargado (-) Glu

Pro (P)

hidrofobo, neutro, pequeno (Thr)

Glu (E)

polar, hidrofilo, cargado (-) Asp

5

10

Codigos de aminoacidos

Propiedades (ffsicas, qmmicas, estructurales) Sustituciones conservativas adecuadas

Gln (Q)

polar, hidrofilo, neutro Asn

Phe (F)

aromatico, hidrofobo, neutro Tyr, Trp

Arg (R)

polar, hidrofilo, cargado (+) Lys

Giy (G)

alifatico, hidrofobo, neutro, pequeno -

Ser (S)

polar, hidrofilo, neutro, pequeno Thr, Cys

His (H)

aromatico, polar, hidrofilo, cargado (+) (Arg, Lys)

Thr (T)

polar, hidrofilo, neutro, pequeno Ser, Cys

Ile (I)

alifatico, hidrofobo, neutro Leu, Val

Val (V)

alifatico, hidrofobo, neutro Leu, Ile

Lys (K)

polar, hidrofilo, cargado (+) Arg

Trp (W)

aromatico, polar, hidrofobo, neutro Tyr, Phe

Leu (L)

alifatico, hidrofobo, neutro Ile, Val

Tyr (Y)

aromatico, polar, hidrofobo Trp, Phe

Listado de secuencias

SEQ ID NO: 1: >sp|024650|PROF2_PHLPR Profilina-2/4 OS = Phleum pratense GN = PRO2 PE = 1 SV = 1

MSWQTYVDEHLMCEIEGHHLASAAILGHDGTVWAQSADFPQFKPEEITGIMKDFDEPGHLAPTGMFVAG

AKYMVrQGEPGAVIRGKKGAGGITIKKTGQALWGIYDEPMTPGQCNMWERLGDYLVEQGM

SEQ ID NO: 2: >sp|024282|PROF3_PHLPR Profilina-3 OS = Phleum pratense GN = PRO3 PE = 1 SV = 1

MSWQTYVDEHLMCEIEGHHLASAAIFGHDGTVWAQSADFPQFKPEEITGIMKDLDEPGHLAPTGMFVAA

AKYMVIQGEPGAVIRGKKGAGGITIKKTGQALWGIYDEPMTPGQCNMWERLGDYLVEQGM

SEQ ID NO: 3: >sp|P35079|PROF1_PHLPR Profilina-1 OS = Phleum pratense GN = PRO1 PE = 1 SV = 1

MSWQTYVDEHLMCEEEGHHLASAAILGHDGTVWAQSADFPQFKPEEITGIMKDFDEPGHLAPTGMFVAG

AKYMVIQGEPGRVIRGKKGAGGITIKKTGQALWGIYDEPMTPGQCNMWERLGDYLVEQGM

SEQ ID NO: 4: >tr|A4KA31|A4KA31_PHLPR Profilina OS = Phleum pratense PE = 2 SV = 1

MSWQAYVDEHLMCEIEGHHLASAAILGHDGTVWAQSADFPQFKPEEITGIMKDFDEPGHLAPTGMFVAT

AKYMVIQGEPGAVIRGKKGAGGITIKKTGQALWGIYDEPMTPGQCNMWERLGDYLLKQGL

SEQ ID NO: 5: >tr|A4KA32|A4KA32_PHLPR Profilina OS = Phleum pratense PE = 2 SV = 1

MSWQAYVDEHLMCEIEGHHLASAAILGHDGTVWAQSADFPQFKPEEITGIMKDFDEPGHLAPTGMFVAA

AKYMVIQGEPGAVIRGKKGAGGITIKKTGQALWGIYDEPMTPGQCNMWERLGDYLVKQGL

SEQ ID NO: 6: >tr|A4KA33|A4KA33_PHLPR Profilina OS = Phleum pratense PE = 2 SV = 1

5

10

15

imagen1

SEQ ID NO: 7: >tr|A4KA34|A4KA34_PHLPR Profilina OS = Phleum pratense PE = 2 SV = 1

MSWQTYVDEHLMCEIEGHHLASAAILGHDGTVWAQSADFPQFKPEEITGIMKDFDEPGHLAPTGMFVAT

AKYMVIQGEPGAVIRGKKGAGGITIKKTGQALWGIYDEPMTPGQCNMWERLGDYLLKQGL

SEQ ID NO: 8: >tr|A4KA36|A4KA36_PHLPR Profilina OS = Phleum pratense PE = 2 SV = 1

MSWQAYVDEHLMCEIEGHHLASAAILGHDGTVWAQSADFPQFKPEEITGIMKDFDEPGHLAPTGMFVAA

AKYMVIQGEPGAVIRGKKGAGGITIKKTGQALWGIYDEPMTPGQCNMWERLGDYLLKQGL

SEQ ID NO: 9: >tr|A4KA37|A4KA37_PHLPR Profilina OS = Phleum pratense PE = 2 SV = 1

MSWQAYVDEHLMCEIEGHHLASAAILGHDGTVWAQSADFPQFKPEEITGIMKDFDEPGHLAPTGMFVAA

AKYMVIQGEPGAVTRGKKGAGGITIKKTGQALWGIYDEPMTPGQCNMWERLGDYLVKQGL

SEQ ID NO: 10: >tr|A4KA38|A4KA38_PHLPR Profilina OS = Phleum pratense PE = 2 SV = 1

MSWQAYVDEHLMCEIEGHHLASAAILGHDGTVWAQSADFPQFKPEEITGIMKDFDEPGHLAPTGMFVAT AKYMVIQGEPGAVIRGKKGAGGITIKKTGQALVVGIYDEPMTPGQCSMWERLGDYLVKQGL

SEQ ID NO: 11: Tri a 12.0101 (4 isoformas en allergen.org) (Trigo, (Poales) >sp|P49232|PROF1_WHEAT Profilina-1 (Fragmento) OS = Triticum aestivum GN = PRO1 PE = 2 SV = 1

MSWQTYVDDHLCCEIDGQHLTSAAILGHDGSVWTESPNFPKFKPEEIAGIVKDFEEPGHLAPTGLFLGGT

KYMVIQGEPGWIRGKKGTGGITIKKTGMALILGIYDEPMTPGQCNLWERLGDYLIDQGYWVPSSNS

SEQ ID NO: 12: Hor v 12.0101 (Cebada (Poales)) >sp|P52184|PROF1_HORVU Profilina-1 OS = Hordeum vulgare GN = PRO1 PE = 2 SV = 1

MSWQTYVDDHLCCEIDGQHLTSAAILGHDGRVWVQSPNFPQFKPEEIAGIIKDFDEPGHLAPTGLFLGGT

KYMVIQGEPGWIRGKKGTGGITIKKTGMPLILGIYDEPMTPGQCNLWERLGDYLVEQGF

SEQ ID NO: 13: Ory s 12.0101 (Arroz (Poales)) >sp|Q9FUD1|PROFA_ORYSJ Profilina-A OS = Oryza sativa subsp. japonica GN = Os10g0323600 PE = 2 SV = 1

MSWQTYVDEHLMCEIEGHHLTSAAIVGHDGTVWAQSAAFPQFKPEEMTNIMKDFDEPGFLAPTGLFLGP

TKYMVIQGEPGAVIRGKKGSGGITVKKTGQALWGIYDEPMTPGQCNMWERLGDYLVEQGL

SEQ ID NO: 14: Zea m 12.0101 (Mafz (Poales))) >sp|P35081|PROF1_MAIZE Profilina-1 OS = Zea mays GN = PRO1 PE = 1 SV = 1

MSWQTYVDEHLMCEIEGHHLTSAAIVGHDGATWAQSTAFPEFKPEEMAAIMKDFDEPGHLAPTGLILGG

TKYMVIQGEPGAVIRGKKGSGGITVKKTGQSLIIGIYDEPMTPGQCNLVVERLGDYLLEQGM

SEQ ID NO: 15: Cyn d 12.0101 (Grama comun (Poales)) >sp|004725|PROF_CYNDA Profilina OS = Cynodon dactylon GN = PRO1 PE = 1 SV = 1

5

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SEQ ID NO: 16: Ole e 2.0101 (Olivo (Lamiales) >sp|024169|PROF1-OLEEU Profilina-1 OS = Olea europea GN = PRO1 PE = 1 SV = 1

MSWQAYVDDHLMCDIEGHEDHRLTAAAIVGHDGSVWAQSATFPQFKPEEMNGIMTDFNEPGHLAPTGL

HLGGTKYMVIQGEAGAVIRGKKGSGGITIKKTGQALVFGIYEEPVTPGQCNMWERLGDYLVEQGM

SEQ ID NO: 17: Cor a 2.0101 (Avellano europeo (Fagales)) >tr|Q9AXH5|Q9AXH5_CORAV Profilina OS = Corylus avellana PE = 2 SV = 1

MSWQTYGDEHLMCEIEGNRLAAAAIIGHDGSVWAQSSTFPQLKPEEITGVMNDFNEPGSLAPTGLYLGG

TKYMVIQGEPGAVIRRKKGPGGVTVKKTSQALIIGIYDEPMTPGQCNMIVERLGDYLIDQGL

SEQ ID NO: 18: Bet v 2.0101 (Fagales) >sp|P25816|PROF_BETPN Profilina OS = Betula pendula GN = BETVII PE = 1 SV = 1

MSWQTYVDEHLMCDIDGQASNSLASAIVGHDGSVWAQSSSFPQFKPQEITGIMKDFEEPGHLAPTGLHL

GGIKYMVIQGEAGAVIRGKKGSGGITIKKTGQALVFGIYEEPVTPGQCNMWERLGDYLIDQGL

SEQ ID NO: 19: Ara h 5.0101 (cacahuete (Fabales) >sp|Q9SQI9|PROF_ARAHY Profilina OS = Arachis hypogaea PE = 1 SV = 1

MSWQTYVDNHLLCEIEGDHLSSAAILGQDGGVWAQSSHFPQFKPEEITAIMNDFAEPGSLAPTGLYLGGT

KYMVIQGEPGAIIPGKKGPGGVTIEKTNQALIIGIYDKPMTPGQCNMIVERLGDYLIDTGL

SEQ ID NO: 20: Gly m 3.0101 (soja (Fabales) >sp|065809|PROF1_SOYBN Profilina-1 OS = Glycine max GN = PRO1 PE = 1 SV = 1

MSWQAYVDDFILLCDIEGNHLTHAAIIGQDGSVWAQSTDFPQFKPEEITAIMNDFNEPGSLAPTGLYLGGT

KYMVIQGEPGAVIRGKKGPGGVTVKKTGAALIIGIYDEPMTPGQCNMWERPGDYLIDQGY

SEQ ID NO: 21: Amb a 8.0101 (estafiate (Asterales)) >tr|Q2KN24|Q2KN24_AMBAR Profilina OS = Ambrosia artemisiifolia PE = 2 SV = 1

MSWQTYVDEHLMCDIEGTGQHLASAAIFGTDGNVWAKSSSFPEFKPDEINAIIKEFSEPGALAPTGLFLA

GAKYMVIQGEPGAVIRGKKGAGGICIKKTGQAMVFGIYEEPVNPGQCNMWERLGDYLVDQGM

SEQ ID NO: 22: Hel a 2.0101 (girasol (Asterales)) >sp|081982|PROF_HELAN Profilina OS = Helianthus annuus PE = 1 SV = 1

MSWQAYVDEHLMCDIEGTGQHLTSAAILGLDGTVWAQSAKFPQFKPEEMKGIIKEFDEAGTLAPTGMFIA

GAKYMVLQGEPGAVIRGKKGAGGICIKKTGQAMIMGIYDEPVAPGQCNMWERLGDYLLEQGM

SEQ ID NO: 23: Art v 4.0101 (Asterales)) >sp|Q8H2C9|PROF1_ARTVU Profilina-1 OS = Artemisia vulgaris PE = 1 SV = 3

MSWQTYVDDHLMCDIEGTGQHLTSAAIFGTDGTVWAKSASFPEFKPNEIDAIIKEFNEAGQLAPTGLFLG

GAKYMVIQGEAGAVIRGKKGAGGICIKKTGQAMVFGIYDEPVAPGQCNMWERLGDYLLDQGM

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SEQ ID NO: 24: Hev b 8.0101 (Malpighiales) >sp|065812|PROF1_HEVBR Profilina-1 OS = Hevea brasiliensis PE = 1 SV = 1

MSWQTYVDERLMCEIEGNHLTAAAIIGQDGSVWAQSSNFPQFKSEEITAIMSDFDEPGTLAPTGLHLGGT

KYMVIQGEAGAVIRGKKGPGGVTVRKTNQALIIGIYDEPMTPGQCNMIVERLGDYLLEQGM

SEQ ID NO: 25: Fra a 4 (Rosales)) >sp|P0C0Y3|PROF_FRAAN Profilina OS = Fragaria ananassa PE = 1 SV = 1

MSWQTYVDDHLMCEIEGNHLSAAAIIGQDGSVWAQSATFPQLKPEEVTGIVRDFDEPGTLAPTGLYLGG

TKYMVIQGEPGAVIRGKKGPGGVTVKKTTLALLIGIYDEPMTPGQCNMIVERLGDYLVEQGL

SEQ ID NO: 26: Mal d 4.0101 (Rosales)) >sp|Q9XF42|PROF3_MALDO Profilina-3 OS = Malus domestica PE = 1 SV = 1

MSWQAYVDDHLMCDIDGNRLTAAAILGQDGSVWSQSASFPAFKPEEIAAILKDFDQPGTLAPTGLFLGG

TKYMVIQGEPGAVIRGKKGSGGITIKKTSQALLIGIYDEPVTPGQCNIWERLGDYLIEQGL

SEQ ID NO: 27: Pru av 4.0101 (Cerezo (Rosales)) >sp|Q9XF39|PROF_PRUAV Profilina OS = Prunus avium PE = 1 SV = 1

MSWQAYVDDHLMCDIDGNRLTAAAILGQDGSVWSQSATFPAFKPEEIAAILKDLDQPGTLAPTGLFLGGT

KYMVIQGEAGAVIRGKKGSGGITVKKTNQALIIGIYDEPLTPGQCNMIVERLGDYLIEQGL

SEQ ID NO: 28: Pru du 4.0101 (almendro (Rosales)) >sp|Q8GSL5|PROF_PRUDU Profilina OS = Prunus dulcis PE = 1 SV = 1

MSWQQYVDDHLMCDIDGNRLTAAAILGQDGSVWSQSATFPAFKPEEIAAILKDFDQPGTLAPTGLFLGG

TKYMVIQGEAGAVIRGKKGSGGITVKKTNQALIIGIYDEPLTPGQCNMIVERLGDYLIEQGL

SEQ ID NO: 29: Pru p 4.0101 (melocotonero, (Rosales)) >tr|Q8GT40|Q8GT40_PRUPE Profilina OS = Prunus persica PE = 2 SV = 1

MSWQAYVDDFILMCDIDGNRLTAAAILGQDGSVWSQSATFPAFKPEEIAAILKDFDQPGTLAPTGLFLGGT KYMVIQGEAGAVIRGKKGSGGITVKKTNQALIIGIYDEPLTPGQCNMIVERLGDYLIEQGL

SEQ ID NO: 30: Pyr c 4.0101 (peral (Rosales)) >sp|Q9XF38|PROF_PYRCO Profilina OS = Pyrus communis PE = 1 SV = 1

MSWQAYVDDHLMCDIDGHHLTAAAILGHDGSVWAQSSTFPKFKPEEITAIMKDFDEPGSLAPTGLHLGG

TKYMVIQGEGGAVIRGKKGSGGVTVKKTSQALVFGIYEEPLTPGQCNMIVERLGDYLIDQGL

SEQ ID NO: 31: Par j 3.0101) >sp|Q9XG85|PROF1_PARJU Profilina-1 OS = Parietaria judaica GN = PRO1 PE = 1 SV = 1

MSWQAYVDDHLMCDVGDGNTPASAAIIGHDGSVWAQSANFPQLKPEEVTGIMNDFNEAGFLAPTGLFL

GGTKYMVIQGESGAVIRGKKGSGGATLKKTGQAIVIGIYDEPMTPGQCNLWERLGDYLLEQGL

SEQ ID NO: 32: Pho d 2.0101 (palmera datilera (Arecales)) >tr|Q8L5D8|Q8L5D8_PHODC Profilina OS = Phoenix dactylifera GN = pro PE = 2 SV = 1

MSWQAYVDEHLMCEIDGHFILTAAAILGHDGSVWAQSSSFPQFKSEEITNIMNDFNEPGSLAPTGLYLGS

TKYMVIQGEPGAVIRGKKGSGGVTVKKTNQALIFGIYEEPMTPGQCNMWERLGDYLIEQGM

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SEQ ID NO: 33: Che a 2.0101 (Caryophyllales) >sp|Q84V37|PROF_CHEAL Profilina OS = Chenopodium album PE = 1 SV = 1

MSWQTYVDDHLMCDIEGNHLSSAAILGHDGTVWAQSPSFPQLKPEEVSAIMKDFNEPGSLAPTGLHLGG

TKYMVIQGEPGDVIRGKKGPGGVTIKKTNQALIIGIYGEPMTPGQCNMWERIGDYLVEQGM

SEQ ID NO: 34: Sal k 4.0101 (Caryophyllales) >tr|C6JWH0|C6JWH0_SALKA Profilina (Fragmento) OS = Salsola kali PE = 2 SV = 1

MSWQTYVDDHLMCEIEGTNNHLTAAAILGVDGSVWAQSANFPQFKPDEISAWKEFDEAGTLAPTGLHL

GGTKYMVIQGEAGQVIRGKKGPGGICVKKTGQALIFGIYDEPVTPGQCNMIVERLGDYLVEQGM

SEQ ID NO: 35: Ama r 2.0101 (abredujo (Caryophyllales)) >tr|C3W2Q7|C3W2Q7_AMARE Profilina (Fragmento) OS = Amaranthus retroflexus pE = 2 sV = 1

MSWQAYVDDHLMCEIEGTTNHLTGAAILGLDGSVWAQSADFPQFKPDEIAAIVEDFDEPGTLAPTGLHLG

GTKYMVIQGEPGAVIRGKKGAGGICVKKTGQALVMGIYDEPVTPGQCNMIVERLGDYLIEQGY

SEQ ID NO: 36: Dau c 4.0101 (Zanohoria, (Apiales) >sp|Q8SAE6|PROF_DAUCA Profilina OS = Daucus carota PE = 1 SV = 1

MSWQTYVDDHLMCEVDGNPGQQLSAAAIIGHDGSVWAQSSTFPKFKPEEITGIMKNFDEPGHLAPTGLY

LGGTKYMVIQGEPIAVIRGKKGSGGVTIKKTGQALVFGVYDEPVTPGQCNLIVERLGDYLIEQGL

SEQ ID NO: 37: Api g 4.0101 (Apio, (Apiales)) >sp|Q9XF37|PROF_APIGR Profilina OS = Apium graveolens PE = 1 SV = 1

MSWQAYVDDHLMCEVEGNPGQTLTAAAIIGHDGSVWAQSSTFPQIKPEEIAGIMKDFDEPGHLAPTGLY

LGGAKYMVIQGEPNAVIRGKKGSGGVTIKKTGQALVFGVYDEPVTPGQCNVIVERLGDYLIDQGL

SEQ ID NO: 38: Cuc m 2.0101 (melon, Cucurbitales) >sp|Q5FX67|PROF_CUCME Profilina OS = Cucumis melo PE = 1 SV = 1

MSWQVYVDEHLMCEIEGNHLTSAAIIGQDGSVWAQSQNFPQLKPEEVAGIVGDFADPGTLAPTGLYIGG

TKYMVIQGEPGAVIRGKKGPGGATVKKTGMALVIGIYDEPMTPGQCNMIVERLGDYLIDQGL

SEQ ID NO: 39: Cap a 2.0101 (chile, Solanales) >sp|Q93YI9|PROF_CAPAN Profilina OS = Capsicum annuum PE = 1 SV = 1

MSWQTYVDDHLMCEIEGNRLTSAAIIGQDGSVWAQSATFPQFKPEEITAIMNDFAEPGTLAPTGLYLGGT

KYMVIQGEAGAVIRGKKGPGGITVKKTNQALIIGIYDEPMTPGQCNMIVERLGDYLIEQSL

SEQ ID NO: 40: Ana c 1.0101 (pina, Poales) >sp|Q94JN2|PROF_ANACO Profilina OS = Ananas comosus PE = 1 SV = 1

MSWQAYVDDHLMCEIDGQHLSSAAILGHDSTVWAQSPNFPQFKPEEISAILNDFENPGSLAPTGLYLGGT

KYMVIQGEPGWIRGKKGTGGITVKKTNLALIIGVYDEPMTPGQCNMWERLGDYLLEQGF

SEQ ID NO: 41: Cro s 2. (Asparagales)) >sp|Q5EF31|PROF_CROSA Profilina OS = Crocus sativus PE = 1 SV = 1

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MSWQTV'VDEHLMCDMDGHVLTSAAILGHDGSVWAQSAGFPELKPAEITAILNDFNEPGSLAPTGMYING AKYMVIQGEPGWIRGKKGSGGVTIKKSNMALIFGLYDEPMTPGQCNLWERLGDYLIEQGY

SEQ ID NO: 42: Mus a 1.0101 (Platano (Zingiberales)) >sp|Q94N3|PROF_MUSAC Profilina OS = Musa acuminata PE = 1 SV = 1

MSWQAYVDDHLLCDIDGQCLTAAAIVGHDGSVWAQSDAFPQCKPEEIAAIMKDFDEPGSLAPTGLYLGG

TKYMVIQGEPGAVIRGKKGSGGVTIKKTNLALIIGIYNEPMTPGQCNMWERLGDYLFDQGF

SEQ ID NO: 43: Recombinante (posiciones 71-127 de SEQ ID NO: 1)

YMVIQGEPGAVIRGKKGAGGITIKKTGQALVVGIYDEPMTPGQCNMVVERLGDYLV

SEQ ID NO: 44: Recombinante (SEQ ID NO 1 con sustituciones C13S y C115S)

SEQ ID NO: 45: Recombinante (SEQ ID NO 1 con sustituciones C13A y C115A)

MSWQTYVDEHLMSEIEGHHLASAAILGHDGTVWAQSADFPQFKPEEITGIMKDFDEPGHLAPTGMFVAG

AKYMVIQGEPGAVIRGKKGAGGITIKKTGQALWGIYDEPMTPGQSNMWERLGDYLVEQGM

SEQ ID NO: 46: secuencia de nucleotidos para producir SEQ ID NO 44: > V1rPhl p 12_ALK_IP1002

atgagctggcaaacgtatgtcgatgaacacctgatgagcgaaattgaaggtcaccacctggcgtcggcggctattctgggtcacgat

ggcaccgtttgggcacagagcgctgattttccgcaattcaaaccggaagaaattaccggcatcatgaaggattttgacgaaccgggt

catctggcaccgacgggcatgttcgtcgcaggtgccaaatatatggtgattcagggtgaaccgggtgcagtcatccgtggcaaaaa

gggtgccggcggtattaccatcaaaaagacgggccaagccctggtggttggtatttacgacgaaccgatgacgccgggtcaaagc

aacatggtggtggaacgtctgggcgactatctggtggaacagggtatgTAG

SEQ ID NO: 47: secuencia de nucleotidos para producir SEQ ID NO: 45: > V2rPhl p 12_ALK_IP1003

atgtcctggcaaacgtatgtcgatgaacacctgatggcggaaattgaaggtcaccacctggcgtcggcagcgattctgggtcacgat

ggcaccgtttgggcacagagcgctgattttccgcaattcaaaccggaagaaattaccggcatcatgaaggattttgacgaaccgggt

catctggcaccgacgggcatgttcgtcgcaggtgccaaatatatggtgattcagggtgaaccgggtgcagtcatccgtggcaaaaa

gggtgccggcggtattaccatcaaaaagacgggccaagccctggtggttggtatttacgacgaaccgatgacgccgggtcaagca

aacatggtggtggaacgtctgggtgattatctggtggaacagggtatgTAG

Listado de referencias

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Ejemplos

Los Ejemplos 1 (Fig. 1 y 2), 2 (Fig. 3, 4 y 5), 4 (Fig. 8 y 9), 8 (Fig. 25 y 26), 10 (Fig. 29 y 30) y 11 (Fig. 31) se refieren a la investigacion de supresion presencial en un modelo de tratamiento profilactico con ratones no sensibilizados. En resumen, se tratan los ratones diariamente mediante administracion sublingual con un polipeptido de la invencion durante un penodo (normalmente dos semanas) con el fin de inducir tolerancia frente al polipeptido. Posteriormente, se sensibilizan los ratones hacia un antigeno mediante administracion i.p. para inducir una respuesta inmune de hipersensibilidad y, opcionalmente, se exponen tambien a los ratones al antigeno sensibilizante mediante administracion intranasal para inducir la inflamacion alergica en las vfas respiratorias. Por ultimo, se sacrifican los ratones, y se extraen sangre, lfquido broncoalveolar (BAL) y el bazo para su analisis. A continuacion, se determina la supresion presencial mediante la comparacion de la fraccion de eosinofilos en el fluido BAL de ratones expuestos tanto al antigeno que induce tolerancia como al antigeno sensibilizante con la fraccion de eosinofilos de ratones solo expuesta al antigeno sensibilizante. Como alternativa, o ademas, las celulas del bazo y/o los ganglios linfaticos cervicales se afslan, se cultivan y se estimulan con el alergeno sensibilizante. Se miden la proliferacion celular o la produccion de citocinas (IL-5, IL-13), y se determina la supresion presencial comparando la proliferacion celular o la produccion de citocinas de las muestras tomadas de ratones expuestos tanto al antigeno inductor de tolerancia como al antigeno sensibilizante con la proliferacion celular o la produccion de citocinas de las muestras de los ratones solo expuestos al antigeno sensibilizante.

Los Ejemplos 3 (Fig. 6 y 7) y 9 (Fig. 27 y 28) se refieren a la investigacion de la supresion presencial en un modelo de tratamiento terapeutico con los ratones sensibilizados. En resumen, la configuracion experimental es ligeramente diferente al modelo profilactico en tanto en cuanto los ratones se sensibilizan inicialmente mediante administracion i.p. con el alergeno sensibilizante y los ratones se tratan posteriormente con el antigeno inductor de tolerancia (polipeptido para SLIT). Todas las etapas subsiguientes son similares al modelo profilactico.

A continuacion, se da una vision general de los ejemplos que se refiere a los datos de ratones sobre la supresion presencial, (P) se refiere al modelo profilactico y (T) al modelo terapeutico:

Ejemplo

Polipeptido para el tratamiento SLIT (antigeno inductor de la tolerancia) Antigeno para la sensibilizacion mediante administracion i.p. Antigeno para la exposicion nasal

1 (P)

Phl p 12 OVA OVA

OVA + Phl p 12

2 (P)

Phl p 12 Extracto de Phl p (sin y con Phl p 12) Extracto de Phl p con Phl p 12)

3 (T)

Phl p 12 OVA OVA

Phl p 12

4 (P)

Phl p 12 OVA OVA

OVA + Bet v2

8 (P)

Phl p 12 Extracto de Bet v Extracto de Bet v

9 (T)

Phl p 12 Extracto de Bet v Extracto de Bet v

10 (P)

Ole e 2 Extracto de Phl p Ninguno

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(continuacion)

Ejemplo

Polipeptido para el tratamiento SLIT (antfgeno inductor de la tolerancia) Antfgeno para la sensibilizacion mediante administracion i.p. Antigeno para la exposicion nasal

11 (P)

Phl p 12 OVA + Phl p 12 Ninguno

OVA + Bet v 2

OVA

Ejemplo 1

Supresion presencial de una respuesta inmune de hipersensibilidad (asma) causada por el antfgeno OVA en ratones sin tratamiento previo tratados con Phl p 12.

Procedimientos: se aislo Phl p 12 de extractos acuosos de polen de Phleum pratense mediante el uso de agarosa PLP o se produjo de forma recombinante basandose en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1.

Animales: se criaron internamente ratones BALB/cJ de 6-10 semanas de vida, hembras, y se mantuvieron en una dieta definida que no contema componentes de reaccion cruzada con antisueros de conejo para Phleum pratense (Phl p). Cada grupo experimental consistfa en 7-8 animales.

Experimentos con animales: se trataron los ratones sin tratamiento previo 5 dfas a la semana mediante inmunoterapia sublingual (SLIT) con 50 o 200 |jg de Phl p 12 durante 2 semanas (fase de tratamiento), seguidas de dos inyecciones i.p. semanales de una mezcla de 10 jg de OVA y 10 jg de Phl p 12 o 10 jg de OVA sola adsorbida en hidroxido de aluminio (fase de exposicion para sensibilizar a los ratones). Posteriormente, se expusieron los ratones por via intranasal con 50 jg de OVA durante cuatro dfas (induccion de la respuesta inmune de hipersensibilidad tal como asma). Se sacrificaron los ratones un dfa despues de la ultima exposicion, y se extrajeron sangre, fluido broncoalveolar (BAL) y el bazo para su analisis.

Recuento diferencial de fluido BAL: se centrifugo el fluido BAL y se elimino el sobrenadante. Se volvio a suspender el sedimento en PBS y se determino la fraccion de eosinofilos mediante un contador de celulas automatizado (Sysmex).

Ensayo de proliferacion de linfocitos T: se hilacharon los bazos en suspension de celulas individuales y se lavaron tres veces en medio. Se contaron las celulas y se anadieron 3 x 105 celulas a cada pocillo de una placa de cultivo de 96 pocillos, de fondo plano, y se estimularon mediante 0, 5, 25 y 125 jg/ml de OVA. Se cultivaron las celulas durante 6 dfas a 37 °C y CO2 al 5 %. Se midio la proliferacion mediante la adicion de 0,5 jCi de 3H-timidina a cada pocillo durante las ultimas 18 horas del penodo de cultivo, seguido de la recogida de las celulas y el recuento del radiomarcador incorporado.

Resultados:

En este experimento, se examino si se podfa prevenir en ratones no sensibilizados tratados mediante un polipeptido de la invencion (por ejemplo, Profilina Phl p 12) el desarrollo de una respuesta inmune de hipersensibilidad inducida por un alergeno distinto de la profilina (OVA) o si, al menos, se podfa suprimir una respuesta inmune de hipersensibilidad (por ejemplo, asma) inducida por un alergeno distinto de la profilina (OVA), por ejemplo, si se podfa suprimir/evitar una respuesta inmune de hipersensibilidad como la inducida por OVA por medio de la supresion presencial lograda mediante la administracion de un antfgeno no relacionado; la profilina Phl p 12. La Figura 1 muestra que los ratones tratados con Phl p 12 presentaron una fraccion reducida de eosinofilos en el fluido BAL en comparacion con los ratones tratados con tampon, pero solo cuando los ratones se expusieron/sensibilizaron tanto a OVA como a Phl p 12, y no solo a OVA. La Figura 2 indica los mismos hallazgos que en la Figura 1, pero con respecto a la proliferacion in vitro de celulas de bazo; la proliferacion in vitro espedfica de OVA de celulas de bazo se regula negativamente en ratones tratados con Phl p 12, pero solo en los ratones expuestos/ sensibilizados simultaneamente tanto a Phl p 12 como a OVA, y no solo a OVA.

Ejemplo 2

Supresion presencial de una respuesta inmune de hipersensibilidad (asma) causada por alergenos distintos de la profilina de polen de Phleum pratense mediante el tratamiento de ratones sin tratamiento previo con Phl p 12.

Experimentos con animales: la Phl p 12 se obtuvo como en el Ejemplo 1 y se usaron animales similares. Se trataron los ratones sin tratamiento previo mediante inmunoterapia sublingual (SLIT) con 50 o 100 jg de Phl p 12 durante 2 semanas (fase de tratamiento), seguidas de tres inyecciones i.p. semanales bien de 8 jg de extracto de Phl p u 8 jg de extracto de Phl p agotado para Phlp 12, ambos adsorbidos en hidroxido de aluminio (fase de exposicion para sensibilizar a los ratones). Posteriormente, se expusieron los ratones por via intranasal bien a 8 jg de extracto de Phl p o a la misma dosis de extracto agotado para Phl p12 (induccion de la respuesta inmune de hipersensibilidad tal como asma). Se sacrificaron los ratones un dfa despues de la ultima exposicion, y se extrajeron sangre, fluido broncoalveolar (BAL) y los ganglios linfaticos cervicales para su analisis.

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Recuento diferencial de fluido BAL: mismo procedimiento que se presenta en el Ejemplo 1.

Ensayo de proliferacion de linfocitos T: mismo procedimiento que se presenta en el Ejemplo 1, pero se contaron las celulas y se ajustaron a 1,67 x 106 celulas/ml, y se anadieron 3 x 105 celulas a cada pocillo de una placa de cultivo de fondo plano, de 96 pocillos, y las celulas se estimularon mediante 0, 5 y 40 pg/ml de extracto de Phl p. Los sobrenadantes de cultivo de celulas para el analisis de citocinas se recogieron el quinto dfa.

Resultados:

En este experimento, se examino si se podfa prevenir en ratones no sensibilizados tratados mediante un polipeptido de la invencion (por ejemplo, Profilina Phl p l2) el desarrollo de una respuesta inmune de hipersensibilidad inducida por alergenos distintos de la profilina de Phleum pratense (por ejemplo, alergenos Phl p 1, Phl p 5, Phl p 6) o si, al menos, se podfa suprimir una respuesta inmune de hipersensibilidad (por ejemplo, asma) inducida por dichos alergenos distintos de la profilina, por ejemplo, si se podfa suprimir/evitar una respuesta inmune de hipersensibilidad como la inducida por alergenos distintos de la profilina de polen de Phleum pratense, por medio de la tolerancia presencial lograda mediante la administracion de un antigeno no relacionado; la profilina Phl p 12. Esto se realizo mediante el tratamiento SLIT de ratones sin tratamiento previo con Phl p 12 o tampon. Tras el tratamiento SLIT, se indujo asma alergica mediante la sensibilizacion IP (extracto de p Phl con y sin Phl p 12), seguido de la exposicion intranasal con extracto de polen de grammea de Phleum pratense (extracto de Phl p que contiene al menos los alergenos Phl p 1, 5 y 6 y la profilina de Phl p 12) o extracto de polen de grammea con el contenido de la profilina agotado (extracto de Phl p agotado en Phl p 12). Como se ve en la Figura 3, los ratones tratados con Phl p 12 tienen un numero reducido de eosinofilos en el fluido BAL en comparacion con los ratones tratados con tampon, y este efecto solo se logra cuando los ratones se exponen tanto a los alergenos distintos de la profilina como a Phl p 12 (extracto de Phl p que contiene Phl p 12), pero no cuando los ratones se expusieron al extracto de Phl p agotado en Phl p 12. Estos resultados fueron confirmados por la estimulacion in vitro de celulas de ganglios linfaticos cervicales. Aunque las diferencias no fueron significativas, las Figuras 4 y 5 muestran que la proliferacion y la produccion de la citocina asociada a Th2 IL-5, respectivamente, se regulan negativamente en los ratones tratados con Phl p 12 de la misma manera que se ha descrito anteriormente.

Ejemplo 3

Supresion presencial de una respuesta inmune de hipersensibilidad (asma) en ratones sensibilizados con OVA tratados con Phl p 12.

Experimentos con animales: la Phl p 12 se obtuvo como en el Ejemplo 1, y se usaron animales similares. Se sensibilizaron los ratones mediante dos inyecciones i.p. semanalmente de 10 pg de OVA adsorbida en hidroxido de aluminio (fase de sensibilizacion). Tras ellos, se trataron los ratones con SLIT con 0, 50 o 150 pg de Phl p 12 durante 6 semanas (fase de tratamiento) y posteriormente se expusieron por via intranasal durante 4 dfas con 40 pg de OVA junto con 40 pg de Phl p o solo con OVA (fase de exposicion). Los ratones se sacrificaron un dfa despues de la ultima exposicion, y se extrajeron sangre, fluido broncoalveolar (BAL), el bazo y los ganglios linfaticos cervicales para su analisis.

Recuento diferencial de fluido BAL: el mismo procedimiento que se presenta en el Ejemplo 1 Ensayo de proliferacion de linfocitos T: el mismo procedimiento que se presenta en el Ejemplo 1.

Resultados:

En este conjunto de experimentos, se investigo si se podfa evitar en ratones sensibilizados con OVA tratados con Phl p 12 el desarrollo o la supresion de los signos clmicos e inmunologicos del asma alergica tras la exposicion al alergeno OVA “desencadenante”. Como se muestra en la Figura 6, se redujo significativamente la fraccion de eosinofilos del fluido BAL en ratones sensibilizados a OVA tratados con Phl p 12 en comparacion con los ratones sensibilizados a OVA tratados con tampon tras exponerlos al alergeno distinto de la profilina (OVA) por via intranasal (exposicion a las vfas respiratorias). En particular, esta regulacion negativa de los eosinofilos no se pudo observar al exponer a los ratones solo a OVA, es decir, sin la exposicion junto con Phl p 12. Ademas, como se ve en la Figura 7, la proliferacion in vitro espedfica de OVA de celulas de bazo se regula negativamente en ratones tratados con Phl p 12, pero solo en los ratones expuestos/sensibilizados simultaneamente tanto a Phl p 12 como a OVA, y no solo a OVA.

Ejemplo 4

Supresion presencial de una respuesta inmune de hipersensibilidad (asma) causada por un alergeno distinto de la profilina (OVA) mediante el tratamiento de ratones sin tratamiento previo con Phl p 12 y la exposicion de los ratones a OVA y a una profilina Bet v 2 diferente.

Procedimientos: la Phl p 12 se obtuvo como se ha descrito anteriormente y Bet v 2 se aislo de extracto de polen de Betula verrucosa.

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Experimentos con animales: se trataron ratones sin tratamiento previo (del mismo tipo que en el Ejemplo 1) 5 d^as a la semana mediante inmunoterapia sublingual (SLIT) con 75 |jg de Phl p 12 durante 2 semanas (fase de tratamiento), seguidos de dos inyecciones i.p. semanales de bien una mezcla de 10 jg de OVA y 10 jg de Bet v 2 o 10 jg de solo OVA adsorbida en hidroxido de aluminio (fase de exposicion para sensibilizar a los ratones). Posteriormente, se expusieron los ratones por via intranasal con 40 jg de OVA durante 4 dfas (induccion de la respuesta inmune de hipersensibilidad tal como asma). Se sacrificaron los ratones un dfa despues de la ultima exposicion, y se extrajo sangre, fluido broncoalveolar (BAL) y el bazo para su analisis.

Ensayo de activacion de linfocitos T: se hilacharon los bazos en una suspension unicelular y se lavaron tres veces en el medio. Las celulas se contaron y, a cada pocillo de una placa de cultivo de fondo plano de 96 pocillos, se anadieron 3 x 105 celulas, y las celulas se estimularon con 0, 5, 25 y 125 jg/ml de OVA. Las celulas se cultivaron durante 5 dfas a 37 °C y con CO2 al 5 %. Los sobrenadantes de cultivo de celulas para el analisis de citocinas se recogieron el quinto dfa.

Resultados:

En este experimento, se examino si se podna evitar en ratones no sensibilizados tratados con un polipeptido de la invencion (por ejemplo, profilina Phl p 12) el desarrollo de una respuesta inmune de hipersensibilidad inducida por un alergeno distinto de la profilina (OVA) o si al menos se podna suprimir una respuesta inmune de hipersensibilidad (por ejemplo, asma) inducida por un alergeno distinto de la profilina (OVA). Por otra parte, y ademas del Ejemplo 1, se ensayo si la exposicion conjunta a OVA y a Bet v 2 (profilina que tiene aproximadamente un 78 % de identidad de secuencia de aminoacidos con Phl p 12) podna sustituir a la exposicion conjunta a OVA y a Phl p 12, para investigar si la profilina de otro material vegetal que contema profilina puede reactivar los linfocitos Treg que son espedficos de Phl p 12 para producir citocinas reguladoras no espedficas y, por lo tanto, suprimir una respuesta alergica causada por OVA.

Como se muestra en las Figuras 8 y 9, el tratamiento con Phl p 12 es capaz de regular negativamente la produccion de las citocinas asociadas a Th2 IL-5 e IL-13, respectivamente, en comparacion con los ratones tratados con tampon. Sin embargo, esta regulacion negativa solo se observo cuando los ratones se expusieron simultaneamente a Bet v 2 y a OVA en el momento de la sensibilizacion y la exposicion intranasal. Por lo tanto, los datos indican que se podna evitar una respuesta inmune de hipersensibilidad causada por alergenos de otro material vegetal que contiene profilina (Phl p que contiene Phl p 12) tras la exposicion de los ratones tanto al alergeno desencadenante (OVA) como a Bet v 2 en ratones tratados con Phl p 12.

Ejemplo 5

Deteccion de polipeptidos extrafdos simultaneamente y alergenos distintos de la profilina en materiales vegetales que contienen profilina.

Materiales para la extraccion:

• polen de grammea en bruto de la especie Phleum pratense (congelado justo tras la cosecha), polen desgrasado de la especie Phleum pratense, Betula verrucosa, Ambrosia artemisifolia, Corylus avellana, Artemisia vulgaris, Cryptomeria japonica, Humulus japonicas, caspa de gato, cuerpos de acaros y heces de Dermatophagoides pteronyssinus y manzanas;

• botes de vidrio (100 ml) para la extraccion;

• columnas PD-10 con soporte de lecho de PE combinado con jeringa de 10 ml con tubo de silicona;

• unidades de filtracion (Millex 5 jm + Millex 0,8 jm);

• tubos de ensayo;

• bano de hielo, pipetas, rotadores de muestras, cilindro de medicion, cronometro;

• tampon PBS, pH 7,2, que contiene las siguientes sales:

Sal PMp (g/mol) Conc. g/l Conc. mM

Cloruro de sodio

NaCl 58,44 8,0 137

Cloruro de potasio

KCl 74,55 0,2 2 7

Fosfato de Na

Na2HPO4, 2H2O175,98 1,44 8 2

Fosfato de K

KH2PO4 136,09 0,2 1, ,5

Conc. de fosfato

+ CM CO 5 = fosfato 9,7 mM

NaCl:

j = k * (137 * 12 + 137 * 12) = 137 mM

KCl:

j = k * (2,7 * * 12 + 2,7 * 12) = 2,7 mM

Na2HPO4:

j = k * ((8,2 * 2 * 12) + (8,2* 22)) = 24,6 mM

KH2PO4:

j = k * (115 * 12) + (1,5 * 12)) = 1,5 mM

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__________________________(continuacion)

Fuerza ionica total: p = 165,8 mM “ 0,17 M

Procedimiento de extraccion (a temperatura ambiente, 21-24 °C):

Se pesan 50,0 g de polen/cuerpos de acaros/heces del acaro/caspa de gato en un frasco de vidrio, y se anaden 50 ml de PBS, y se hace girar la botella de immediate, los 5 primeros minutes con la mano y, posteriormente, se hace girar en un rotador de muestras durante toda la extraccion.

Se retiran 5 ml de suspension tras 20 s, se transfieren a una columna con un filtro de lecho y se arrastran a traves del filtro con una jeringa. Se transfiere la jeringa de immediate a una unidad de filtracion y se empuja el extracto a traves de los filtros combinados en un tubo de ensayo etiquetado. Se almacena el tubo en un bano de hielo hasta que la muestra se pipetea en alteuotas para su posterior analisis y se congela. Se retiran 5,2 ml de la suspension en los puntos de tiempo de 40 s, 60 s, 2 min, 5 min, 10 min y 20 min. Se exprimen las manzanas, y se analiza el zumo resultante de inmediato por CIE/RIE.

Determinacion de alergeno distinto de la profilina y de profilina eluidos/extra^dos simultaneamente

Se analizan las muestras para determinar el contenido de alergenos distintos de la profilina y de profilina mediante el uso de uno mas de los procedimientos de CIE (inmunoelectroforesis cruzada), RIE (inmunoelectroforesis Rocket), SDS PAGE (electroforesis en gel de poliacrilamida y dodecilsulfato de sodio), ELISA (ensayo de inmunoabsorcion ligado a enzimas) y/o EM (espectrometna de masas).

CIE (inmunoelectroforesis cruzada)

Materiales para CIE/ RIE

• Aparato de electroforesis (2 vasos de tamponamiento, 2 electrodos, superficie refrigerada, camara).

• Placas de vidrio (tamanos convencionales, por ejemplo, 5x5, 5x7, 10x7 cm).

• Tampon para los recipientes de electrodos y gel de agarosa (fuerza ionica de 0,02, pH 8,6) acido 5.5-

dietilbarbiturico (Veronal) 112,1 g; Tris (Sigma 7-9) 221,5 g; lactato de calcio (purum) 2,7 g; agua purificada hasta

5 l. Diluir 1 + 4 antes de su uso.

• Placas de agarosa: se prepara agarosa Litex de tipo HSA al 1 % (p/v) (Mr = -0,13), usando el "tampon de gel de

agarosa", la agarosa se calienta bajo agitacion y se hierve durante dos minutos, y se mantiene lfquida en un bano de agua a 56 °C. A continuacion, se aplica el gel en placas (aproximadamente 5 ml).

• Solucion de tincion: azul brillante de Coomassie R-250 5 g, 450 ml de etanol al 96 %, 500 ml de agua purificada,

50 ml de acido glacial acido. Se disuelve durante la noche por agitacion y se filtra.

• Solucion decolorante: 450 ml de etanol al 96 %, 500 ml de agua purificada, 50 ml de acido glacial acido.

• Anticuerpos policlonales de conejo. Se inmunizan los conejos repetidamente con el polipeptido, por ejemplo, extracto acuoso que contiene profilina del material vegetal que contiene profilina, tal como Phl p nativo 12, en los dfas 0, 2, 4, 6, 10, 14 y 18, y se recoge la sangre en los dfas 8, 12, 16, 20 y 24. Se obtiene la fraccion de IgG tras la precipitacion con sulfato de amonio (NH4)2SO4(“ 1,75 M) y se lavo en (NH4)2SO41,75 M. Se purifico ademas mediante dialisis frente a agua purificada y tampon de acetato a pH 5,0. Se almaceno a +5 °C en NaCl al 0,9 % con NaN3 al 0,09 % e inhibidor de la proteasa (Trasylol) para su conservacion.

Procedimiento: se perforan los pocillos de las placas de gel de agarosa y se anade la muestra de extraccion. La electroforesis se realiza durante 25-30 minutos en un aparato que funcionaba a 150 °C y a 10 V/cm. Se retira el gel, y se vierte el gel de agarosa bien mezclado con los anticuerpos policlonales sobre el lado catodico y el lado anodico. Se realiza la electroforesis durante la noche a tension de 2 V/cm. A continuacion, se lavan los pocillos con agua destilada y con NaCl 0,1 M durante 15-30 minutos y, a continuacion, se secan las placas en una corriente de aire caliente. Se tinen las placas durante aproximadamente 5 minutos en solucion de tincion azul brillante de Coomassie, despues se lavan en agua destilada durante unos segundos, se destinen y, finalmente, se secan en aire caliente.

Los polipeptidos reconocidos por los anticuerpos se ven como bandas intensas azules en la placa de CIE. Para identificar adicionalmente los polipeptidos, las bandas se pueden cortar de la placa de CIE y analizar por espectrometna de masas y/u otros procedimientos inmunoqmmicos y/o analisis de aminoacidos.

RIE

Se preparan placas de gel de agarosa que contienen los anticuerpos policlonales pertinentes sobre placas de vidrio. Se perforan los pocillos a aproximadamente 1,5 cm del borde inferior de la placa, se colocan las placas en un aparato de electroforesis, se anaden muestras de extraccion y se prosigue con la electroforesis durante una noche a la tension de 2 V/cm. Se lavan las placas/se presionan y se tinen con solucion de tincion de azul brillante de Coomassie como se ha descrito anteriormente para CIE.

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SDS-PAGE:

Materiales: tampon de muestra (x4) NuPage®; Invitrogen NP0007, SDS-PAGE de Bis-Tris al 10 % NuPAGE®; Invitrogen NP0302, tampon de migracion de MES SDS NuPAGE® (x20); Invitrogen NP0002 02, Marcador: patron Plus2Prestained SeeBlue®; Invitrogen LC5925.

SDS-PAGE (en condiciones reducidas o no reducidas) se realizo de acuerdo con la informacion general y los protocolos de la Gma Tecnica NuPAGE® para el uso del sistema de electroforesis NuPAGE® con fecha de revision:

29 de octubre de 2010; Parte del Manual n.° IM-1001.

Como alternativa, la electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio se puede usar de acuerdo con procedimientos conocidos en la tecnica.

Tras la electroforesis, se puede tenir el gel (lo mas comunmente con azul brillante de Coomassie R-250 o tincion de plata), lo que permite la visualizacion de las protemas separadas o procesadas adicionalmente (por ejemplo, transferencia Western). Tras la tincion, las diferentes protemas apareceran como bandas distintas dentro del gel. Se puede anadir un marcador del tamano de peso molecular de peso molecular conocido en un carril separado en el gel, con el fin de calibrar el gel y determinar la masa molecular aproximada de protemas desconocidas mediante la comparacion de la distancia recorrida en relacion con el marcador.

ELISA

Materiales: los anticuerpos monoclonales (mAb) se obtienen mediante la inmunizacion de conejos repetidamente con un solo polipeptido sin contenido de isomeros en los dfas 0, 2, 4, 6, 10, 14 y 18, y la sangre se recoge en los dfas 8, 12, 16, 20 y 24. Se obtiene la fraccion de IgG tras la precipitacion con sulfato de amonio ((NH4)2SO4“ 1,75 M) y se lava en (NH4)2SO41,75 M. Se purifica adicionalmente mediante dialisis frente a agua purificada y tampon de acetato a pH 5,0. Se almacena a +5 °C en NaCl al 0,9 % con NaN3 al 0,09 % e inhibidor de la proteasa (Trasylol) para su conservacion.

Determinacion de los antfgenos individuales: Phl p 12: se recubrieron placas con 2,5 ug/ml de anticuerpos monoclonales (mAb) de Pho d 2 (profilina de palmera datilera) durante la noche a 4 °C. Tras la saturacion durante 30 minutos a temperatura ambiente, se purifico nPhl p 12 (patron de referencia) y se diluyeron las muestras de extraccion con el fin de obtener las curvas sigmoideas completas (dilucion en serie 1/3, 8 puntos) y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Tras el lavado, se detecto la Phl p 12 unida por incubacion con anticuerpo policlonal de conejo anti-Pho d 2 en dilucion/4.000 durante 1 hora a temperatura ambiente. Tras lavados, se anadio anticuerpo anti-IgG de conejo policlonal de cabra conjugado con peroxidasa durante 1 hora a TA y, entonces, se revelo la senal mediante la adicion de OPD junto con H2O2. Tras 30 minutos, se detuvo la reaccion con HCl 2 N y se leyeron las placas a 490 nm.

Determinacion de los antfgenos individuales: Phl p 5: se recubrieron placas con mAb contra Phl p 5 y Lol p 5 durante la noche a 40 °C, se saturaron y se secaron. El dfa de la cuantificacion, se rehidrataron las placas y se diluyeron muestras de extraccion en consecuencia con el fin de obtener las curvas sigmoideas completas (dilucion en serie 1/3), y se incubaron en las placas durante 1 hora a TA. Tras los lavados, se detecto la Phl p 5 unida tras la incubacion durante 1 hora a TA con un anticuerpo policlonal de conejo dirigido contra una mezcla de polen de grammea a 1/10.000. Tras los lavados, se anadio anticuerpo anti-IgG de conejo policlonal de cabra conjugado con peroxidasa durante 1 hora a TA y, a continuacion, se revelo la senal mediante la adicion de OPD junto con H2O2. Tras 30 minutos, se detuvo la reaccion con HCl 2 N y se leyeron las placas a 490 nm.

Determinacion de los antfgenos individuales: Phl p 1: se recubrieron placas con 2,5 ug/ml de mAb contra Phl p 1, 5 ug/ml de mAb contra Phl p 1 y 5 ug/ml de mAb contra Phl p 1durante la noche a 40 °C. Tras la saturacion durante

30 minutos a TA, se diluyeron las muestras de extraccion en consecuencia con el fin de obtener las curvas sigmoideas completas (dilucion en serie 1/3), y se incubaron en las placas durante 1 hora a TA. Tras los lavados, se detecto la Phl p 1 unida mediante la incubacion con un anticuerpo policlonal de conejo anti-P. pratense a 1/10.000 durante 1 hora a TA. Tras los lavados, se anadio anticuerpo anti-IgG de conejo policlonal de cabra conjugado con peroxidasa durante 1 hora a TA y, a continuacion, se revelo la senal mediante la adicion de OPD junto con H2O2. Tras 30 minutos, se detuvo la reaccion con HCl 2 N y se leyeron las placas a 490 nm.

Espectrometria de masas

Tampones/soluciones para la reduccion, alquilacion y digestion de la muestra:

urea 8 M en NH4HCO3 0,4 M

se prepara nuevo a partir de la reserva congelada 1,0 M: 45 pl de DTT 1 M +

955 pl de agua

se prepara una nueva solucion, yodoacetamida 100 mM,

Sigma T6567, se disuelve un vial en 20 pl de HCl 1 mM. Estos resultados en una solucion que contiene 1 pg/pl de tripsina. Tras la reconstitucion en HCl 1 mM, se pueden almacenar almuotas congeladas durante hasta 4 semanas.

Tampon de muestra: DTT (45 mM): Yodoacetamida (IAA): Tripsina:

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Digestion enzimatica con tripsina en solucion de espectrometna de masas: se diluye la muestra seca en 5 pl de agua, se anaden 15 pl de tampon de muestra (urea 8 M en NH4HCO3 0,4 M), se anaden 5 pl de TDT 45 mM, se incuba a 56 °C durante 15 minutes, se enfna hasta la temperatura ambiente, se anaden 5 pl de yodoacetamida 100 mM, se incuba a oscuras a temperatura ambiente durante 15 minutos, se anaden 90 pl de agua para disminuir la concentracion de urea <1-2 M, se anade 1 pg de tripsina, se incuba a 37 °C durante la noche.

Cromatograffa: la cromatograffa de fase inversa (Ultimate 3000 HPLC, Dionex) se realizo con una columna preanafftica y anafftica C18. Se pulverizaron los peptidos de elucion directamente en un espectrometro de masas ESI-QTOF (MaXis, Bruker). Tras lavar la columna de la trampa con acido formico al 0,05 % v/v durante 5 minutos con un caudal de 30 pl/min, se eluyeron los peptidos con un gradiente de acetonitrilo a un caudal de 2 pl/min usando disolvente A: acido formico al 0,05 % v/v y disolvente B: acetonitrilo al 80 % v/v/acido formico al 0,04 % v/v, y el gradiente: B al 4-50 % en 200 minutos; B al 50-80 % en 10 minutos; B al 100 % en 10 min, B al 4 % en 5 min.

Los espectros se adquirieron en el intervalo de masas 50 a 2.599 m/z y una tasa espectral de 1,5 Hz. El instrumento se ajusto y se calibro usando mezcla de ajuste a baja concentracion ESl-L de Agilent Technology.

La adquisicion de datos y el control instrumental se llevaron a cabo con Bruker Compass HyStar 3.2. El procesamiento de datos se realizo mediante DataAnalysis 4.0 (Bruker). La identificacion de protemas se realizo usando el programa Biotools3.2 (Bruker) y dos bases de datos diferentes, es decir, Swiss prot y NCBInr. Los conjuntos de datos de EM/EM para la digestion tnptica se analizaron usando los siguientes parametros; tolerancia al peptido 10 ppm y tolerancia a fragmento de 0,05 Da.

Procedimiento: se evaporaron todas las muestras de extraccion (50 pl) y se volvieron a suspender en 5 pl de agua. A continuacion, se redujo la muestra, se sometio a alquilacion y se digirio con tripsina. Los peptidos resultantes se separan y se identifican mediante cromatograffa en fase inversa seguida de EM/EM.

Resultados:

Los resultados relativos a la extraccion del polen en bruto de Phleum pratense se muestran en:

• Figura 10 (CIE de extractos de 20 s, 60 s y 2 min usando anticuerpos policlonales generados contra el extracto de polen de Phleum pratense).

• Figura 11 (CIE de extractos de 5, 10 y 20 min usando anticuerpos policlonales generados contra el extracto de polen de Phleum pratense).

• Figura 12 (RIE de extractos de 20 s, 60 s, 2 min, 5 min, 10 min y 20 min usando anticuerpos policlonales contra Phl p 12 (A), Phl p 5 (B) y Phl p 1 (C) purificadas).

• Figura 13 (cantidades de Phl p 12, Phl p 1 y Phl p 5 liberadas tras los tiempos de extraccion de 20 s, 60 s, 2 min, 5 min, 10 min y 20 min, y se analizaron mediante el uso de ELISA).

Todos los resultados indican que la profilina Phl p 12, de hecho, se extrae junto con los alergenos principales de Phleum pratense (Phl p 1 y Phl p 5) en la misma franja de tiempo e incluso en los 10 primeros minutos de extraccion, lo que indica que la profilina se presentara al organo diana en la misma franja de tiempo que los alergenos principales que causan la respuesta inmune de hipersensibilidad tras la exposicion de los individuos a un material vegetal que contiene profilina. Los extractos tambien se analizaron mediante analisis de espectrometna de masas, y se pudo demostrar que Phl p 12 se extrajo junto con una serie de protemas, entre otras, los alergenos Phl p 1, 5 y 6.

Los resultados relativos a la extraccion de polen desgrasado de Phleum pratense se muestran en las figuras:

• Figura 14 (CIE de extractos de 20 s, 60 s y 2 min usando anticuerpos policlonales generados contra el extracto de polen de Phleum pratense).

• Figura 15 (CIE de extractos de 5, 10 y 20 min usando anticuerpos policlonales generados contra el extracto de polen de Phleum pratense).

• Figura 16 (RIE de extractos de 20 s, 60 s, 2 min, 5 min, 10 min y 20 min usando anticuerpos policlonales contra Phl p 12 (A), Phl p 5 (B) y Phl p 1 (C) purificadas).

• Figura 17 (cantidades de Phl p 12, Phl p 1 y Phl p 5 liberadas tras los tiempos de extraccion de 20 s, 60 s, 2 min, 5 min, 10 min y 20 min, y se analizaron mediante el uso de ELISA mediante el uso de anticuerpos monoclonales generados en conejos contra Phl p 12, Phl p 1 y Phl p 5).

• Figura 18 (SDS-PAGE de los extractos de A) polen en bruto y B) polen desgrasado, se muestran de izquierda a derecha extractos obtenidos en extracciones de 20 s, 40 s, 60 s, 2 min, 5 min, 10 min y 20 min).

Todos los resultados indican que se puede usar polen desgrasado en lugar de polen en bruto en la deteccion de profilina y alergenos distintos de la profilina extrafdos simultaneamente de un material vegetal que contiene profilina.

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Los resultados relativos a la extraccion del polen desgrasado de Betula verrucosa se muestran en las figuras:

• Figura 19 (CIE de extractos de 20 s, 60 s y 2 min usando anticuerpos policlonales generados contra el extracto de polen de Betula verrucosa).

• Figura 20 (CIE de extractos de 5, 10 y 20 min usando anticuerpos policlonales generados contra el extracto de polen de Betula verrucosa).

• Figura 21 (RIE de extractos de 20 s, 60 s, 2 min, 5 min, 10 min y 20 min usando los anticuerpos policlonales contra Bet v 2 (profilina) (A) y Bet v 1 (alergeno principal) (B) purificados.

Los resultados indican que Bet v 2 (profilina) se extrae junto con el alergeno principal (Bet v 1) del polen de abedul tan pronto como 1 minuto despues de iniciarse la extraccion.

Los resultados relativos a la extraccion de polen desgrasado de Ambrosia artemisifolia se muestran en la Figura 22, que muestra RIE de extractos de 20 s, 60 s, 2 min, 5 min, 10 min y 20 min usando anticuerpos policlonales contra Amb a 8 (profilina) (A) y Amb a 1 (alergeno principal) (B) purificados. Los resultados indican que Amb a 8 se extrae junto con el alergeno principal Amb a 1 tan pronto como 1 minuto despues de iniciarse la extraccion.

Se estudio la capacidad de diversas profilinas vegetales para reconocer anticuerpos generados contra las profilinas Bet v 2 y Phl p 12 mediante RIE usando extractos de polen de Ambrosia artemisifolia, Betula verrucosa, Corylus avellana, Phleum pratense, Artemisia vulgaris, Cryptomeria japonica, Humulus japonicas, caspa de gato, cuerpos de acaros y jugo de manzana recien preparado y anticuerpos policlonales de conejo generados contra Phl p 12 y Bet v 2 purificadas, respectivamente.

Los resultados (Figuras 23 y 24) indican que las profilinas de plantas de otras especies que no sean Phleum pratense y Betula verrucosa son capaces de unirse a anticuerpos IgG espedficos de Phl p 12 y Bet v 2, lo que indica que el tratamiento de un individuo con Phl p 12 o Bet v 2 puede suprimir una respuesta inmune de hipersensibilidad causada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina que no contiene Phl p 12 o Bet v 1, pero al menos la profilina del genero Ambrosia, Corylus, Cryptomeria, Humulus y Malus.

Ejemplo 6

Produccion recombinante de un polipeptido de acuerdo con la invencion

En el presente ejemplo, se produjo una variante polipeptfdica que tema las variaciones C13A y C115A en comparacion con SEQ ID NO: 1. La secuencia completa se da en la SEQ ID NO: 44.

Materiales: plasmido: p-RSETB (disponible en el mercado en Invitrogen - Life Technologies); cepa de E. coli: BL21(DE3), disponible en NOVAGEN; tampon de lisis: tampon de fosfato 10 mM, NaCl 30 mM, EDTA 10 mM, benzamidina 1 mM, 10 pg/ml de SBTI (inhibidor de tripsina de soja), PMSF 3 mM (fenilmetanosulfonilfluoruro), y azida de sodio al 0,02 % p/p; medio LB: triptona al 1 %, extracto de levadura al 0,5 %, NaCl al 0,5 %, pH 7.0; tampon de equilibrado de la columna: PBS a pH 7,2; columna de PLP-Sefarosa: la columna se preparo siguiendo las instrucciones del fabricante de la Sefarosa 4B activada con CNBr (GE Healthcare, ref 17-0430-01), y usando poli-L Prolina (Sigma, ref. P2129) como el ligando; columna Superdex75: columna preenvasada de Ge Healthcare; membrana de dialisis: membrana MWCO de 3.500 Da.

Procedimiento: se sintetizo un ADNc de SEQ ID NO: 46 codificante de un polipeptido de SEQ ID NO: 44 y el codon se optimizo en funcion de la preferencia de E. coli (seleccion de nucleotidos correspondientes a los ARNt presentes de manera mas regular y abundante en E. coli); se introdujo el ADNc en el plasmido-RSETB cortado por NdeI/PstI, que es inducible por IPTg (isopropil-beta-D-tiogalactopiranosido); el plasmido se transformo en la cepa de E. coli BL21(DE3); se cultivaron las celulas recien transformadas a 37 °C en 1 l de medio LB que contema ampicilina en matraces de cultivo agitados a 250 rpm, hasta que se alcanzo una DO600 de 0,6, y luego se indujeron a 18 °C; el cultivo celular se indujo mediante la adicion de IPTG a una concentracion de 0,3 mM y se dejo durante aproximadamente 16 horas a 18 °C (como alternativa, la induccion se puede realizar a temperaturas mas altas, por ejemplo, a 37 °C, induciendo durante 3-4 horas, a partir de una DO600 de 0,4); se mantuvo el cultivo de E. coli en un bano de agua con hielo durante al menos 5 minutos antes de la cosecha por centrifugacion (por ejemplo, 12.000 rpm a 40 °C durante 20 min); se volvieron a suspender las celulas asf sedimentadas, inducidas, en 50 ml de tampon de lisis y despues se rompieron por sonicacion; la fraccion soluble que contema el producto citoplasmatico soluble se recogio por centrifugacion (12.000 rpm a 40 °C durante 20 min) y se aclaro el sobrenadante y luego se sometio a dialisis frente a PBS (pH 7,2).

Se purifico el polipeptido recombinante en dos etapas cromatograficas mediante: cromatograffa de afinidad en columna de PLP-sefarosa equilibrada con tampon de equilibrado de la columna; elucion con urea 6 M, que se debe eliminar de inmediato por dialisis a traves de la membrana de dialisis a PBS (el tampon de equilibrado de la columna), y luego cromatograffa de exclusion por tamano en una columna Superdex 75 equilibrada con tampon de equilibrado de la columna con el fin de obtener el producto polipeptfdico recombinante monomerico que consiste en aproximadamente 99 % de protema (peso/peso de materia seca).

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

La identidad del polipeptido recombinante se determino por SDS-PAGE (reducido y no reducido; tincion de plata y tincion de Coomassie), la secuenciacion N-terminal y el analisis de aminoacidos, asf como el analisis de EM (para analizar las impurezas y confirmar su identidad mediante identificacion genetica).

Se confirmo que el polipeptido recombinante producido tema la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 44. La metionina N-terminal parecio eliminarse en aproximadamente el 95 % del producto polipeptfdico producido. Solo aproximadamente el 5 % del polipeptido producido pareda aun llevar a la metionina N-terminal.

A continuacion, se sometio el polipeptido a analisis de dicrofsmo circular (DC) con el fin de explorar el plegamiento de la protema recombinante. El procedimiento sera capaz de verificar que la mayona de la protema se pliega correctamente. Los espectros de DC (260 a 184 nm) se determinaron en un espectropolariometro OLIS DSM-10 usando cubetas cuadradas de longitud de la trayectoria de luz de 0,1 cm a 15 °C. Todos los espectros se obtuvieron en tampon de fosfato de sodio 10 mM pH 7,2 y cada muestra se exploro cinco veces. Se recogio el espectro de datos en bruto para la absorcion de tampon y todos los espectros se normalizaron a DC_senal_A260 = 0. Se convirtieron los datos en bruto (mDeg) en valores de Ae (elipticidad) usando las siguientes ecuaciones (mDeg = 32980 * AA; Ae = AA/(c*l)), donde "c" es las concentraciones molares de la muestra y "I "es la longitud de la trayectoria de la luz en cm.

Ademas de los experimentos 15 °C, tambien se realizo un experimento de calentamiento con la muestra escaneada a diferentes temperaturas con intervalos de 5 °C de 15 a 90 °C. Este analisis se realizo con el fin de examinar la estabilidad/desplegamiento de la protema.

El polipeptido que tiene la sustituciones C13A y C115A mostro sorprendentemente una estabilidad de plegamiento superior a la del peptido precursor (el 50 % del polipeptido de SEQ ID NO: 44 se habfa desplegado a aproximadamente 61 °C, mientras que el 50 % del polipeptido de SEQ ID NO: 1 se habfa desplegado a aproximadamente 51 °C).

Ejemplo 7

En el presente ejemplo, se produjo un variante polipeptfdica que tema las variaciones C13S y C115S en comparacion con SEQ ID NO: 1. La secuencia completa se da en SEQ ID NO: 45.

Esta variante polipeptfdica se produjo como se describe en el ejemplo A, a excepcion de que el ADNc usado tema la SEQ ID NO: 47 codificante del polipeptido de SEQ ID NO: 45.

Se confirmo que el polipeptido recombinante producido tema la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 45. La metionina N-terminal pareda estar eliminada en aproximadamente el 95 % del producto polipeptfdico producido. Solo aproximadamente el 5 % del polipeptido producido pareda portar todavfa la metionina N-terminal.

El polipeptido que tiene las sustituciones C13S y C115S mostro aproximadamente la misma estabilidad de plegamiento que el peptido precursor (el 50 % del polipeptido de SEQ ID NO: 45 se habfa desplegado a aproximadamente 51 °C).

Tambien se determino el punto de fusion de nPhl 12, rPhlp 12 y las dos variantes V1 (C13S y C115S) y V2 (C13A y C115A), respectivamente. Se descubrio que el punto de fusion de la variante de alanina (V2) era significativamente superior (61 °C) al punto de fusion de nPhl 12 (54 °C), rPhlp 12 (58 °C) y la variante V1 (51 °C), respectivamente.

Ejemplo 8

Supresion presencial de una respuesta inmune de hipersensibilidad (asma) causada por el extracto de Bet v (extracto de polen de Betula verrucosa) en ratones sin tratamiento previo tratados con Phl p 12.

Los procedimientos y los materiales son los mismos que en el Ejemplo 1, excepto que el extracto de Phl p se reemplaza con extracto de Bet v. Ademas, el agotamiento de Phl p 12 no esta incluido en este estudio.

Los resultados (Figuras 25 y 26) indican que una respuesta inmune de hipersensibilidad causada por alergenos de abedul se suprime en los ratones sin tratamiento previo tratados por via sublingual con la profilina de Phl p 12.

Ejemplo 9

Supresion presencial de una respuesta inmune de hipersensibilidad (asma) causada por el extracto de Bet v (extracto de polen de Betula verrucosa) en ratones sensibilizados tratados con Phl p 12.

Los procedimientos y los materiales son los mismos que en los Ejemplos 3 y 8. Los ratones se sensibilizaron hacia el extracto de Bet v (alergenos de abedul) agotados en profilina Bet v 2 en lugar de OVA y, posteriormente, tratados con Phl p 12.

Los resultados (Figuras 27 y 28) indican que una respuesta inmune de hipersensibilidad causada por alergenos de abedul se suprime en los ratones sensibilizados tratados por via sublingual con la profilina de Phl p 12.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Ejemplo 10

Supresion presencial de una respuesta immune de hipersensibilidad causada por el extracto de Phl p (extracto de polen de Phleum pratense) en ratones sin tratamiento previo tratados con Ole e 2 producida de forma recombinante (profilina del polen del olivo).

Los procedimientos y los materiales son similares a los del Ejemplo 2. Los ratones se trataron por via sublingual con Ole e 2 y los ratones se sensibilizaron posteriormente hacia los alergenos del polen de grammea (extracto de Phl p 12). Los resultados (Figuras 29 y 30) muestran que se puede suprimir una respuesta immune de hipersensibilidad causada por alergenos de grammeas en ratones sin tratamiento previo tratados por via sublingual con la profilina Ole e 2.

Ejemplo 11

Supresion presencial de una respuesta inmune de hipersensibilidad causada por OVA (exposicion conjunta, ya sea con Phl p 12 o Bet v 2) en ratones sin tratamiento previo tratados con Phl p 12.

Los procedimientos y materiales son similares a los del Ejemplo 1. Los ratones se tratan por via sublingual con Phl p 12 y, posteriormente, se sensibilizan hacia OVA, OVA bajo exposicion conjunta a Phl p 12 o a OVA bajo exposicion conjunta a Bet v 2.

El resultado (Figura 31) indica que se suprime una respuesta inmune de hipersensibilidad causada por OVA en los ratones sin tratamiento previo tratados por via sublingual con la profilina Phl p 12, cuando los ratones tambien se exponen simultaneamente a Phl p 12 o a Bet v 2. El resultado tambien muestra que la tolerancia a una profilina (Phl p 12) es suficiente para suprimir una respuesta inmune hacia un antfgeno no relacionado (OVA), incluso cuando se proporciona la exposicion conjunta mediante otra molecula de profilina distinta de Phl p 12 (en el presente documento, Bet v 2).

Ejemplo 12

Examen del reconocimiento de los linfocitos T de diversas profilinas en lmeas de linfocitos T espedficas de Phl p 12 establecidas a partir de PBMC de individuos alergicos a las grammeas.

Se aislaron PBMC de individuos alergicos a los alergenos del polen de grammeas de Phleum pratense (individuos que tienen reactividad de IgE hacia los extractos de polen de Phleum pratense).

A continuacion, se establecieron lmeas de linfocitos T reactivas hacia Phl p 12 por incubacion durante dos semanas, seguida de la reestimulacion de PBMC recien aisladas con Phl p 12 de tipo silvestre (wt) recombinante (SEQ ID NO: 1). Se estimularon las lmeas de linfocitos T establecidas posteriormente con (a) Phlp12 wt recombinante; (b) Phl p 12 purificada natural; (c) Ole e 2 recombinante (un homologo de profilina de Phl p 12) que se encuentra en el polen del olivo (SEQ ID NO: 16); y (d) el medio de crecimiento como control. Se midio la magnitud de la activacion de los linfocitos T en respuesta a la estimulacion con las profilinas de grammeas y olivo mediante la incorporacion de H3. Las Figuras A y B representan las lmeas de linfocitos T establecidas a partir de PBMC de dos individuos diferentes, respectivamente.

Los datos muestran (Figura 32) que los linfocitos T humanos de individuos alergicos a las grammeas, como era de esperar, se activan tras la exposicion al antfgeno afm (Phl p 12), pero tambien se activan tras la exposicion a la protema homologa Ole e 2. Esto demuestra claramente la posibilidad de una amplia reactividad cruzada inmunologica a nivel de linfocitos T entre las protemas homologas, pero no identicas, de especies filogeneticamente distantes. Ademas, este hallazgo constituye la base esencial para la seleccion de protemas y variantes proteicas con potencial inmunomodulador hacia diversas especies y especies distantes, lo que, a su vez, permite el desarrollo de nuevas terapias para enfermedades atopicas, incluyendo la alergia y el asma, con indicaciones menos restringidas a la especie, mas amplias.

LISTADO DE SECUENCIAS

<110> ALK-Abello A/S

<120> Polipeptidos profilinas vegetales para su uso en inmunoterapia de alergia inespedfica <130> 19190PCT00 <160> 47

<170> Patentln version 3.5

<210> 1 <211> 131

10

<212> PRT

<213> Phleum pratense <400> 1

Met Ser Trp 1

Gly His His

Trp Ala Gin 35

Gin

Thr Tyr Val Asp Glu His Leu Met Cys Glu

5 10

Leu

Ala Ser Ala Ala lie Leu Gly His Asp Gly

20

25 30

Ser

Ala Asp Phe Pro Gin Phe Lys Pro Glu Glu

lie Glu 15

Thr Val

lie Thr

40

45

Gly lie Met Lys Asp Phe Asp Glu Pro Gly His Leu Ala Pro Thr Gly 50 55 60

Met Phe Val Ala Gly Ala Lys Tyr Met Val lie Gin Gly Glu Pro Gly 65 70 75 80

Ala Val lie Arg Gly Lys Lys Gly Ala Gly Gly lie Thr lie Lys Lys 85 90 95

Thr Gly Gin Ala Leu Val Val Gly lie Tyr Asp Glu Pro Met Thr Pro 100 105 110

Gly Gin Cys Asn Met Val Val Glu Arg Leu Gly Asp Tyr Leu Val Glu 115 120 125

Gin Gly Met 130

<210>2 <211> 131 <212> PRT

<213> Phleum pratense <400> 2

Met Ser 1

Gly His

Trp Ala

Gly lie 50

Trp

Gin Thr 5 Tyr Val Asp Glu His 10 Leu Met Cys

His

Leu 20 Ala Ser Ala Ala lie 25 Phe Gly His Asp

Gin 35

Ser Ala Asp Phe Pro 40 Gin Phe Lys Pro Glu 45

Met

Lys Asp Leu Asp Glu Pro Gly His Leu Ala

Glu lie Glu 15

Gly Thr Val

30

Glu lie Thr

Pro Thr Gly

55

€0

Met 65

Phe Val Ala Ala Ala 70 Lys Tyr Met Val lie 75

Ala

Val lie Arg Gly Lys Lys Gly Ala Gly Gly

85

90

Gin Gly Glu Pro Gly

80

lie Thr lie Lys Lys 95

Thr Gly

Gly Gin

Gin

Ala 100 Leu Val Val Gly lie 105 Tyr Asp Glu Pro Met 110

Cys

Asn Met Val Val Glu Arg Leu Gly Asp Tyr Leu

Thr Pro

Val Glu

115

120

125

Gin Gly Met 130

<210>3 <211> 131 <212> PRT

<213> Phleum pratense

<400>3

Met Ser Trp Gin Thr Tyr Val Asp Glu His Leu Met Cys Glu lie Glu 15 10 15

Gly His His Leu Ala Ser Ala Ala lie Leu Gly His Asp Gly Thr Val 20 25 30

Trp Ala Gin Ser Ala Asp Phe Pro Gin Phe Lys Pro Glu Glu lie Thr 35 40 45

Gly lie Met Lys Asp Phe Asp Glu Pro Gly His Leu Ala Pro Thr Gly 50 55 60

Met Phe Val Ala Gly Ala Lys Tyr Met Val lie Gin Gly Glu Pro Gly 65 70 75 80

5

5

10

Arg Val lie Arg Gly Lys Lys Gly Ala Gly Gly lie Thr lie Lys Lys 85 90 95

Thr Gly Gin Ala Leu Val Val Gly lie Tyr Asp Glu Pro Met Thr Pro 100 105 110

Gly Gin Cys Asn Met Val Val Glu Arg Leu Gly Asp Tyr Leu Val Glu 115 120 125

Gin Gly Met 130

<210>4 <211> 131 <212> PRT

<213> Phleum pratense <400> 4

imagen2

<210> 5 <211> 131 <212> PRT

<213> Phleum pratense

<400>5

5

10

Gly His His Leu Ala Ser Ala Ala lie Leu Gly His Asp Gly Thr Val 20 25 30

Trp Ala Gin Ser Ala Asp Phe Pro Gin Phe Lys Pro Glu Glu lie Thr 35 40 45

Gly lie Met Lys Asp Phe Asp Glu Pro Gly His Leu Ala Pro Thr Gly 50 55 60

Met Phe Val Ala Ala Ala Lys Tyr Met Val lie Gin Gly Glu Pro Gly 65 70 75 80

Ala Val lie Arg Gly Lys Lys Gly Ala Gly Gly lie Thr lie Lys Lys 85 90 95

Thr Gly Gin Ala Leu Val Val Gly lie Tyr Asp Glu Pro Met Thr Pro 100 105 110

Gly Gin Cys Asn Met Val Val Glu Arg Leu Gly Asp Tyr Leu Val Lys 115 120 125

Gin Gly Leu 130

<210>6 <211> 131 <212> PRT

<213> Phleum pratense <400> 6

Gly His His Leu Ala Ser Ala Ala lie Leu Gly His Asp Gly Thr Val 20 25 30

Trp Ala Gin Ser Ala Asp Phe Pro Gin Phe Lys Pro Glu Glu lie Thr 35 40 45

Gly lie Met Lys Asp Phe Asp Glu Pro Gly His Leu Ala Pro Thr Gly 50 55 60

Met Phe Val Ala Ala Ala Lys Tyr Met Val lie Gin Gly Glu Pro Gly

65 70 75 80

Ala Val lie Arg Gly Lys Lys Gly Ala Gly Gly lie Thr lie Lys Lys 85 90 95

Thr Gly Gin Ala Leu Val Val Gly lie Tyr Asp Glu Pro Met Thr Pro 100 105 110

Gly Gin Cys Asn Met Val Val Glu Arg Leu Gly Asp Tyr Leu Leu Lys 115 120 125

Gin Gly Leu 130

<210>7 <211> 131 5 <212> PRT

<213> Phleum pratense

<400>7

5

Gly His His Leu Ala Ser Ala Ala lie Leu Gly His Asp Gly Thr Val 20 25 30

Trp Ala Gin Ser Ala Asp Phe Pro Gin Phe Lys Pro Glu Glu lie Thr 35 40 45

Gly lie Met Lys Asp Phe Asp Glu Pro Gly His Leu Ala Pro Thr Gly 50 55 60

Met Phe Val Ala Thr Ala Lys Tyr Met Val He Gin Gly Glu Pro Gly 65 70 75 80

Ala Val He Arg Gly Lys Lys Gly Ala Gly Gly He Thr He Lys Lys 85 90 95

Thr Gly Gin Ala Leu Val Val Gly lie Tyr Asp Glu Pro Met Thr Pro 100 105 110

Gly Gin Cys Asn Met Val Val Glu Arg Leu Gly Asp Tyr Leu Leu Lys 115 120 125

Gin Gly Leu 130

<210>8 <211> 131 <212> PRT

<213> Phleum pratense <400>8

Met

Ser Trp Gin Ala Tyr Val

1

5

Gly

His His Leu Ala Ser Ala

20

Trp

Ala Gin Ser Ala Asp Phe

35

Gly

lie Met Lys Asp Phe Asp

50 55

Met

Phe Val Ala Ala Ala Lys

65

70

Ala

Val lie Arg Gly Lys Lys

85

Thr Gly Gin Ala Leu Val Val 100

Gly Gin Cys Asn Met Val Val 115

Gin Gly Leu 130

<210>9 <211> 131 5 <212> PRT

<213> Phleum pratense

<400>9

Ala lie Leu Gly His Asp Gly Thr Val 25 30

Pro Gin Phe Lys Pro Glu Glu lie Thr 40 45

Glu Pro Gly His Leu Ala Pro Thr Gly

60

Tyr Met Val He Gin Gly Glu Pro Gly 75 80

Gly Ala Gly Gly lie Thr lie Lys Lys 90 95

Gly lie Tyr Asp Glu Pro Met Thr Pro 105 110

Glu Arg Leu Gly Asp Tyr Leu Leu Lys 120 125

imagen3

imagen4

<210> 10 <211> 131 <212> PRT

<213> Phleum pratense <400> 10

imagen5

5

5

10

15

<210> 11 <211>138 <212> PRT

<213> Triticum aestivum <400> 11

imagen6

<210> 12 <211> 131 <212> PRT

<213> Hordeum vulgare <400> 12

Met Ser Trp Gin Thr Tyr Val Asp Asp His Leu Cys Cys Glu lie Asp 15 10 15

Gly Gin His Leu Thr Ser Ala Ala lie Leu Gly His Asp Gly Arg Val

20 25 30

Trp Val Gin Ser Pro Asn Phe Pro Gin Phe Lys Pro Glu Glu lie Ala 35 40 45

Gly lie lie Lys Asp Phe Asp Glu Pro Gly His Leu Ala Pro Thr Gly 50 55 60

Leu Phe Leu Gly Gly Thr Lys Tyr Met Val lie Gin Gly Glu Pro Gly 65 70 75 80

Val Val lie Arg Gly Lys Lys Gly Thr Gly Gly lie Thr lie Lys Lys 85 90 95

Thr Gly Met Pro Leu lie Leu Gly lie Tyr Asp Glu Pro Met Thr Pro 100 105 110

Gly Gin Cys Asn Leu Val Val Glu Arg Leu Gly Asp Tyr Leu Val Glu 115 120 125

Gin Gly Phe 130

<210> 13 <211> 131 5 <212> PRT

<213> Oryza sativa subsp. japonica

<400> 13

imagen7

5

10

15

imagen8

<210> 14 <211> 131 <212> PRT <213> Zea mays

<400> 14

Met Ser Trp Gin Thr Tyr Val Asp Glu His Leu Met Cys Glu lie Glu 15 10 15

Gly His His Leu Thr Ser Ala Ala lie Val Gly His Asp Gly Ala Thr 20 25 30

Trp Ala Gin Ser Thr Ala Phe Pro Glu Phe Lys Pro Glu Glu Met Ala 35 40 45

Ala lie Met Lys Asp Phe Asp Glu Pro Gly His Leu Ala Pro Thr Gly 50 55 60

Leu lie Leu Gly Gly Thr Lys Tyr Met Val lie Gin Gly Glu Pro Gly 65 70 75 80

Ala Val lie Arg Gly Lys Lys Gly Ser Gly Gly lie Thr Val Lys Lys 85 90 95

Thr Gly Gin Ser Leu lie lie Gly lie Tyr Asp Glu Pro Met Thr Pro 100 105 110

Gly Gin Cys Asn Leu Val Val Glu Arg Leu Gly Asp Tyr Leu Leu Glu 115 120 125

Gin Gly Met 130

<210> 15 <211> 131 <212> PRT

<213> Cynodon dactylon <400> 15

Met Ser Trp Gin Ala Tyr Val Asp Asp His Leu Met Cys Glu lie Glu 15 10 15

Gly His His Leu Thr Ser Ala Ala lie lie Gly His Asp Gly Thr Val 20 25 30

Trp Ala Gin Ser Ala Ala Phe Pro Ala Phe Lys Pro Glu Glu Met Ala 35 40 45

Asn lie Met Ly$ Asp Phe Asp Glu Pro Gly Phe Leu Ala Pro Thr Gly 50 55 60

Leu Phe Leu Gly Pro Thr Lys Tyr Met Val lie Gin Gly Glu Pro Gly 65 70 75 80

Ala Val He Arg Gly Lys Lys Gly Ser Gly Gly Val Thr Val Lys Lys 85 90 95

Thr Gly Gin Ala Leu Val lie Gly lie Tyr Asp Glu Pro Met Thr Pro 100 105 110

Gly Gin Cys Asn Met Val lie Glu Lys Leu Gly Asp Tyr Leu lie Glu 115 120 125

Gin Gly Met 130

<210> 16 <211> 134 5 <212> PRT

<213> Olea europaea

<400> 16

imagen9

Val Thr Pro Gly Gin Cys Asn Met Val Val Glu Arg Leu Gly Asp Tyr 115 120 125

Leu Val Glu Gin Gly Met 130

<210> 17 <211> 131 <212> PRT

<213> Corylus avellana <400> 17

10

imagen10

<210> 18 <211>133 <212> PRT <213> Betula pendula

<400> 18

Gly Gin Ala Ser Asn Ser Leu Ala Ser Ala lie Val Gly His Asp Gly

20 25 30

Ser Val Trp Ala Gin Ser Ser Ser Phe Pro Gin Phe Lys Pro Gin Glu 35 40 45

lie Thr Gly lie Met Lys Asp Phe Glu Glu Pro Gly His Leu Ala Pro 50 55 60

Thr Gly Leu His Leu Gly Gly lie Lys Tyr Met Val lie Gin Gly Glu 65 70 75 80

Ala Gly Ala Val lie Arg Gly Lys Lys Gly Ser Gly Gly lie Thr lie 85 90 95

Lys Lys Thr Gly Gin Ala Leu Val Phe Gly lie Tyr Glu Glu Pro Val 100 105 110

Thr Pro Gly Gin Cys Asn Met Val Val Glu Arg Leu Gly Asp Tyr Leu 115 120 125

lie Asp Gin Gly Leu 130

<210> 19 <211> 131 5 <212> PRT

<213> Arachis hypogaea

<400> 19

imagen11

<210> 20 <211> 131 5 <212> PRT

<213> Glycine max

<400> 20

Gly Asn His Leu Thr His Ala Ala lie lie Gly Gin Asp Gly Ser Val 20 25 30

Trp Ala Gin Ser Thr Asp Phe Pro Gin Phe Lys Pro Glu Glu lie Thr 35 40 45

Ala lie Met Asn Asp Phe Asn Glu Pro Gly Ser Leu Ala Pro Thr Gly 50 55 60

Leu Tyr Leu Gly Gly Thr Lys Tyr Met Val lie Gin Gly Glu Pro Gly 65 70 75 80

Ala Val lie Arg Gly Lys Lys Gly Pro Gly Gly Val Thr Val Lys Lys 85 90 95

Thr Gly Ala Ala Leu lie lie Gly lie Tyr Asp Glu Pro Met Thr Pro 100 105 110

Gly Gin Cys Asn Met Val Val Glu Arg Pro Gly Asp Tyr Leu lie Asp 115 120 125

Gin Gly Tyr 130

<210> 21 <211> 133 5 <212> PRT

<213> Ambrosia artemisiifolia

<400> 21

10

Met Ser Trp Gin Thr Tyr Val Asp Glu His Leu Met Cys Asp lie Glu 15 10 15

5

Gly Thr Gly Gin His Leu Ala Ser Ala Ala lie Phe Gly Thr Asp Gly

20 25 30

Asn Val Trp Ala Ly$ Ser Ser Ser Phe Pro Glu Phe Lys Pro Asp Glu 35 40 45

lie Asn Ala lie lie Lys Glu Phe Ser Glu Pro Gly Ala Leu Ala Pro 50 55 60

Thr Gly Leu Phe Leu Ala Gly Ala Lys Tyr Met Val lie Gin Gly Glu 65 70 75 80

Pro Gly Ala Val lie Arg Gly Lys Lys Gly Ala Gly Gly lie Cys lie 85 90 95

Lys Lys Thr Gly Gin Ala Met Val Phe Gly lie Tyr Glu Glu Pro Val 100 105 110

Asn Pro Gly Gin Cys Asn Met Val Val Glu Arg Leu Gly Asp Tyr Leu 115 120 125

Val Asp Gin Gly Met 130

<210> 22 <211> 133 <212> PRT

<213> Helianthus annuus <400> 22

Met Ser Trp Gin Ala Tyr Val Asp Glu His Leu Met Cys Asp He Glu 15 10 15

Gly Thr Gly Gin His Leu Thr Ser Ala Ala He Leu Gly Leu Asp Gly

20 25 30

Thr Val Trp Ala Gin Ser Ala Lys Phe Pro Gin Phe Lys Pro Glu Glu 35 40 45

Met Lys Gly He He Lys Glu Phe Asp Glu Ala Gly Thr Leu Ala Pro 50 55 60

Thr Gly Met Phe He Ala Gly Ala Lys Tyr Met Val Leu Gin Gly Glu 65 70 75 80

Pro Gly Ala Val He Arg Gly Lys Lys Gly Ala Gly Gly He Cys He 85 90 95

Lys Lys Thr Gly Gin Ala Met lie Met Gly lie Tyr Asp Glu Pro Val 100 105 110

Ala Pro Gly Gin Cys Asn Met Val Val Glu Arg Leu Gly Asp Tyr Leu 115 120 125

Leu Glu Gin Gly Met 130

<210> 23 <211> 133 5 <212> PRT

<213> Artemisia vulgaris

<400> 23

10

15

Met Ser Trp Gin Thr Tyr Val Asp Asp His Leu Met Cys Asp lie Glu 15 10 15

Gly Thr Gly Gin His Leu Thr Ser Ala Ala lie Phe Gly Thr Asp Gly 20 25 30

Thr Val Trp Ala Lys Ser Ala Ser Phe Pro Glu Phe Lys Pro Asn Glu 35 40 45

lie Asp Ala lie lie Lys Glu Phe Asn Glu Ala Gly Gin Leu Ala Pro 50 55 60

Thr Gly Leu Phe Leu Gly Gly Ala Lys Tyr Met Val lie Gin Gly Glu 65 70 75 80

Ala Gly Ala Val lie Arg Gly Lys Lys Gly Ala Gly Gly lie Cys lie 85 90 95

Lys Lys Thr Gly Gin Ala Met Val Phe Gly lie Tyr Asp Glu Pro Val 100 105 110

Ala Pro Gly Gin Cys Asn Met Val Val Glu Arg Leu Gly Asp Tyr Leu 115 120 125

Leu Asp Gin Gly Met 130

<210> 24 <211> 131 <212> PRT

<213> Hevea brasiliensis <400> 24

5

imagen12

<210> 25 <211> 131 <212> PRT

<213> Fragaria ananassa <400> 25

imagen13

Leu Tyr Leu Gly Gly Thr Lys Tyr Met Val lie Gin Gly Glu Pro Gly 65 70 75 80

5

10

Ala Val He Arg Gly Lys Lys Gly Pro Gly Gly Val Thr Val Lys Lys 85 90 95

Thr Thr Leu Ala Leu Leu lie Gly lie Tyr Asp Glu Pro Met Thr Pro 100 105 110

Gly Gin Cys Asn Met lie Val Glu Arg Leu Gly Asp Tyr Leu Val Glu 115 120 125

Gin Gly lieu 130

<210> 26 <211> 131 <212> PRT

<213> Malus domestica <400> 26

imagen14

<210> 27 <211> 131 <212> PRT <213> Prunus avium

<400> 27

5

10

Gly Asn Arg Leu Thr Ala Ala Ala lie Leu Gly Gin Asp Gly Ser Val 20 25 30

Trp Ser Gin Ser Ala Thr Phe Pro Ala Phe Lys Pro Glu Glu lie Ala 35 40 45

Ala lie Leu Lys Asp Leu Asp Gin Pro Gly Thr Leu Ala Pro Thr Gly 50 55 60

Leu Phe Leu Gly Gly Thr Lys Tyr Met Val lie Gin Gly Glu Ala Gly 65 70 75 80

Ala Val lie Arg Gly Lys Lys Gly Ser Gly Gly lie Thr Val Lys Lys 85 90 95

Thr Asn Gin Ala Leu lie lie Gly lie Tyr Asp Glu Pro Leu Thr Pro 100 105 110

Gly Gin Cys Asn Met lie Val Glu Arg Leu Gly Asp Tyr Leu lie Glu 115 120 125

Gin Gly Leu 130

<210> 28 <211> 131 <212> PRT <213> Prunus dulcis

<400> 28

Met Ser Trp Gin Gin Tyr Val Asp Asp His Leu Met Cys Asp lie Asp 15 10 15

Gly Asn Arg Leu Thr Ala Ala Ala lie Leu Gly Gin Asp Gly Ser Val 20 25 30

Trp Ser Gin Ser Ala Thr Phe Pro Ala Phe Lys Pro Glu Glu lie Ala 35 40 45

Ala lie Leu Lys Asp Phe Asp Gin Pro Gly Thr Leu Ala Pro Thr Gly 50 55 60

imagen15

<210> 29 <211> 131 <212> PRT <213> Prunus persica

<400> 29

imagen16

5

5

10

15

<210> 30 <211> 131 <212> PRT

<213> Pyrus communis <400> 30

Met Ser Trp Gin Ala Tyr Val Asp Asp His Leu Met Cys Asp lie Asp 15 10 15

Gly His His Leu Thr Ala Ala Ala lie Leu Gly His Asp Gly Ser Val 20 25 30

Trp Ala Gin Ser Ser Thr Phe Pro Lys Phe Lys Pro Glu Glu lie Thr 35 40 45

Ala lie Met Lys Asp Phe Asp Glu Pro Gly Ser Leu Ala Pro Thr Gly 50 55 60

Leu His Leu Gly Gly Thr Lys Tyr Met Val He Gin Gly Glu Gly Gly 65 70 75 80

Ala Val lie Arg Gly Lys Lys Gly Ser Gly Gly Val Thr Val Lys Lys 85 90 95

Thr Ser Gin Ala Leu Val Phe Gly lie Tyr Glu Glu Pro Leu Thr Pro 100 105 110

Gly Gin Cys Asn Met lie Val Glu Arg Leu Gly Asp Tyr Leu lie Asp 115 120 125

Gin Gly lieu 130

<210> 31 <211> 132 <212> PRT

<213> Parietaria judaica <400> 31

Asp Gly Asn Thr Pro Ala Ser Ala Ala lie lie Gly His Asp Gly Ser 20 25 30

Val Trp Ala Gin Ser Ala Asn Phe Pro Gin Leu Lys Pro Glu Glu Val 35 40 45

Thr Gly lie Met Asn Asp Phe Asn Glu Ala Gly Phe Leu Ala Pro Thr

50 55 60

Gly Leu Phe Leu Gly Gly Thr Lys Tyr Met Val lie Gin Gly Glu Ser 65 70 75 80

Gly Ala Val lie Arg Gly Lys Lys Gly Ser Gly Gly Ala Thr Leu Lys 85 90 95

Lys Thr Gly Gin Ala lie Val lie Gly lie Tyr Asp Glu Pro Met Thr 100 105 110

Pro Gly Gin Cys Asn Leu Val Val Glu Arg Leu Gly Asp Tyr Leu Leu 115 120 125

Glu Gin Gly Leu 130

<210> 32 <211> 131 5 <212> PRT

<213> Phoenix dactylifera

<400> 32

imagen17

<210> 33 <211> 131 5 <212> PRT

<213> Chenopodium album

<400> 33

Gly Asn His Leu Ser Ser Ala Ala lie Leu Gly His Asp Gly Thr Val

20 25 30

Trp Ala Gin Ser Pro Ser Phe Pro Gin Leu Lys Pro Glu Glu Val Ser 35 40 45

Ala lie Met Lys Asp Phe Asn Glu Pro Gly Ser Leu Ala Pro Thr Gly 50 55 60

Leu His Leu Gly Gly Thr Lys Tyr Met Val lie Gin Gly Glu Pro Gly

65 70 75 80

Asp Val He Arg Gly Lys Lys Gly Pro Gly Gly Val Thr He Lys Lys 85 90 95

Thr Asn Gin Ala Leu He He Gly He Tyr Gly Glu Pro Met Thr Pro 100 105 110

Gly Gin Cys Asn Met Val Val Glu Arg lie Gly Asp Tyr Leu Val Glu 115 120 125

Gin Gly Met 130

<210> 34 <211> 133 5 <212> PRT

<213> Salsola kali

<400> 34

imagen18

5

lie Ser Ala Val Val Lys Glu Phe Asp Glu Ala Gly Thr Leu Ala Pro 50 55 60

Thr Gly Leu His Leu Gly Gly Thr Lys Tyr Met Val lie Gin Gly Glu 65 70 75 80

Ala Gly Gin Val lie Arg Gly Lys Lys Gly Pro Gly Gly lie Cys Val 85 90 95

Lys Lys Thr Gly Gin Ala Leu lie Phe Gly lie Tyr Asp Glu Pro Val 100 105 110

Thr Pro Gly Gin Cys Asn Met lie Val Glu Arg Leu Gly Asp Tyr Leu 115 120 125

Val Glu Gin Gly Met 130

<210> 35 <211> 133 <212> PRT

<213> Amaranthus retroflexus <400> 35

Met Ser Trp Gin Ala Tyr Val Asp Asp His Leu Met Cys Glu lie Glu 15 10 15

Gly Thr Thr Asn His Leu Thr Gly Ala Ala lie Leu Gly Leu Asp Gly 20 25 30

Ser Val Trp Ala Gin Ser Ala Asp Phe Pro Gin Phe Lys Pro Asp Glu 35 40 45

lie Ala Ala lie Val Glu Asp Phe Asp Glu Pro Gly Thr Leu Ala Pro 50 55 60

Thr Gly Leu His Leu Gly Gly Thr Lys Tyr Met Val lie Gin Gly Glu 65 70 75 80

Pro Gly Ala Val lie Arg Gly Lys Lys Gly Ala Gly Gly lie Cys Val 85 90 95

Lys Lys Thr Gly Gin Ala Leu Val Met Gly lie Tyr Asp Glu Pro Val 100 105 110

Thr Pro Gly Gin Cys Asn Met lie Val Glu Arg Leu Gly Asp Tyr Leu 115 120 125

5

10

15

<210> 36 <211> 134 <212> PRT <213> Daucus carota

imagen19

<400> 36

Met Ser Trp Gin Thr Tyr Val Asp Asp His Leu Met Cys Glu Val Asp 15 10 15

Gly Asn Pro Gly Gin Gin Leu Ser Ala Ala Ala lie lie Gly His Asp 20 25 30

Gly Ser Val Trp Ala Gin Ser Ser Thr Phe Pro Lys Phe Lys Pro Glu 35 40 45

Glu lie Thr Gly lie Met Lys Asn Phe Asp Glu Pro Gly His Leu Ala 50 55 60

Pro Thr Gly Leu Tyr Leu Gly Gly Thr Lys Tyr Met Val lie Gin Gly 65 70 75 80

Glu Pro lie Ala Val lie Arg Gly Lys Lys Gly Ser Gly Gly Val Thr 85 90 95

lie Lys Lys Thr Gly Gin Ala Leu Val Phe Gly Val Tyr Asp Glu Pro 100 105 110

Val Thr Pro Gly Gin Cys Asn Leu lie Val Glu Arg Leu Gly Asp Tyr 115 120 125

Leu lie Glu Gin Gly Leu 130

<210> 37 <211> 134 <212> PRT

<213> Apium graveolens <400> 37

Met Ser Trp Gin Ala Tyr Val Asp Asp His Leu Met Cys Glu Val Glu 15 10 15

Gly Asn Pro Gly Gin Thr Leu Thr Ala Ala Ala lie lie Gly His Asp 20 25 30

imagen20

<210> 38 <211> 131 <212> PRT <213> Cucumis melo

<400> 38

imagen21

5

10

imagen22

<210> 39 <211> 131 <212> PRT

<213> Capsicum annuum <400> 39

imagen23

<210> 40 <211> 131 <212> PRT

<213> Ananas comosus

<400> 40

Met Ser Trp Gin Ala Tyr Val Asp Asp His Leu Met Cys Glu lie Asp 15 10 15

imagen24

<210> 41 <211> 131 5 <212> PRT

<213> Crocus sativus

<400> 41

Met Ser Trp Gin Thr Tyr Val Asp Glu His Leu Met Cys Asp Met Asp 15 10 15

Gly His Val lieu Thr Ser Ala Ala lie lieu Gly His Asp Gly Ser Val 20 25 30

Trp Ala Gin Ser Ala Gly Phe Pro Glu lieu Lys Pro Ala Glu lie Thr 35 40 45

Ala lie Leu Asn Asp Phe Asn Glu Pro Gly Ser Leu Ala Pro Thr Gly 50 55 60

Met Tyr lie Asn Gly Ala Lys Tyr Met Val lie Gin Gly Glu Pro Gly 65 70 75 80

Val Val He Arg Gly Lys Lys Gly Ser Gly Gly Val Thr lie Lys Lys 85 90 95

5

10

15

imagen25

<210> 42 <211> 131 <212> PRT

<213> Musa acuminata <400> 42

imagen26

<210> 43 <211> 56 <212> PRT

<213> Phleum pratense

<220>

<221> MISC_FEATURE <222> (1)..(56)

<223> Aminoacidos 71-127 de SEQ ID NO: 1

<400> 43

imagen27

10

<210> 44 <211> 131 <212> PRT

<213> Secuencia artificial <220>

<223> SEQ ID NO: 1 con sustituciones C13S y C115S

15

<400> 44

5

Gly His His Leu Ala Ser Ala Ala lie Leu Gly His Asp Gly Thr Val 20 25 30

Trp Ala Gin Ser Ala Asp Phe Pro Gin Phe Lys Pro Glu Glu lie Thr 35 40 45

Gly lie Met Lys Asp Phe Asp Glu Pro Gly His Leu Ala Pro Thr Gly 50 55 60

Met Phe Val Ala Gly Ala Lys Tyr Met Val lie Gin Gly Glu Pro Gly 65 70 75 80

Ala Val lie Arg Gly Lys Lys Gly Ala Gly Gly lie Thr lie Lys Lys 85 90 95

Thr Gly Gin Ala Leu Val Val Gly lie Tyr Asp Glu Pro Met Thr Pro 100 105 110

Gly Gin Ser Asn Met Val Val Glu Arg Leu Gly Asp Tyr Leu Val Glu 115 120 125

Gin Gly Met 130

<210> 45 <211> 131 5 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> SEQ ID NO: 1 con sustituciones C13A y C115A

10

<400> 45

Gly His His Leu Ala Ser Ala Ala lie Leu Gly His Asp Gly Thr Val 20 25 30

Trp Ala Gin Ser Ala Asp Phe Pro Gin Phe Lys Pro Glu Glu lie Thr 35 40 45

Gly lie Met Lys Asp Phe Asp Glu Pro Gly His Leu Ala Pro Thr Gly 50 55 60

Met Phe Val Ala Gly Ala Lys Tyr Met Val lie Gin Gly Glu Pro Gly 65 70 75 80

Ala Val lie Arg Gly Lys Lys Gly Ala Gly Gly lie Thr lie Lys Lys 85 90 95

Thr Gly Gin Ala Leu Val Val Gly lie Tyr Asp Glu Pro Met Thr Pro 100 105 110

Gly Gin Ala Asn Met Val Val Glu Arg Leu Gly Asp Tyr Leu Val Glu 115 120 125

10

Gin Gly Met 130

<210> 46 <211> 396 <212> ADN

<213> Secuencia artificial <220>

<223> ADN codificante de SEQ ID NO: 44 <400> 46

atgagctggc

aaacgtatgt cgatgaacac ctgatgagcg aaattgaagg tcaccacctg 60

gcgtcggcgg

ctattctggg tcacgatggc accgtttggg cacagagcgc tgattttccg 120

caattcaaac

cggaagaaat taccggcatc atgaaggatt ttgacgaacc gggtcatctg 180

gcaccgacgg

gcatgttcgt cgcaggtgcc aaatatatgg tgattcaggg tgaaccgggt 240

gcagtcatcc

gtggcaaaaa gggtgccggc ggtattacca toaaaaagac gggccaagcc 300

ctggtggttg

gtatttacga cgaaccgatg acgcegggtc aaagcaacat ggtggtggaa 360

cgtctgggcg

actatctggt ggaacagggt atgtag 396

<210> 47 <211> 326

5

<212> ADN

<213> Secuencia artificial <220>

5 <223> ADN codificante de SEQ ID NO: 45

<400> 47

cgattctggg

tcacgatggc accgtttggg cacagagcgc tgattttccg caattcaaac 60

cggaagaaat

taccggcatc atgaaggatt ttgacgaacc gggtcatctg gcaccgacgg 120

gcatgttcgt

cgcaggtgcc aaatatatgg tgattcaggg tgaaccgggt gcagtcatcc ISO

gtggcaaaaa

gggtgccggc ggtattacca tcaaaaagac gggccaagcc ctggtggttg 240

gtatttacga

cgaaccgatg acgccgggtc aagcaaacat ggtggtggaa cgtctgggtg 300

attatctggt

ggaacagggt atgtag 326

10

Claims (20)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   40

   45

   REIVINDICACIONES

   1. Un polipeptido para su uso en el tratamiento de una respuesta immune de hipersensibilidad en un individuo, en el que la respuesta immune de hipersensibilidad esta causada por un alergeno distinto de la profilina de un material vegetal que contiene profilina, en el que dicho polipeptido comprende una secuencia de aminoacidos que tiene al menos 60 % de identidad con SEQ ID NO: 1.
2. 2. El polipeptido para el uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el polipeptido comprende una secuencia de aminoacidos que tiene al menos 75 % de identidad con SEQ ID NO: 1.
3. 3. El polipeptido para el uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que una parte del polipeptido tiene una secuencia de aminoacidos que tiene al menos 80 % de identidad con SEQ ID NO: 43.
4. 4. El polipeptido para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el polipeptido es una profilina que tiene una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1-42 o una variante de dicha profilina, en el que la variante comprende un aminoacido seleccionado de A (alanina), G (glicina) o S (serina) en la posicion 13 y/o en la posicion 115 de SEQ ID NO: 1.
5. 5. El polipeptido para el uso de acuerdo con la reivindicacion 4, en el que las secuencias de aminoacidos de SEQ ID NO: 1-42 estan sin metionina en el extremo N-terminal.
6. 6. El polipeptido para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el material vegetal que contiene profilina es de un orden de plantas seleccionado del grupo que consiste en Poales, Asterales, Fagales y Lamiales.
7. 7. El polipeptido para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el material vegetal que contiene profilina es polen.
8. 8. El polipeptido para el uso de acuerdo con la reivindicacion 7, en el que el material vegetal que contiene profilina es polen de un genero de plantas seleccionado del grupo que consiste en Anthoxanthum, Cynodon, Dactylis, Festuca, Holcus, Hordeum, Lolium, Oryza, Paspalum, Phalaris, Phleum, Poa, Secale, Sorghum, Triticum y Zea.
9. 9. El polipeptido para el uso de acuerdo con la reivindicacion 7, en el que el material vegetal que contiene profilina es polen de un genero de plantas seleccionado del grupo que consiste en Ambrosia y Artemisia.
10. 10. El polipeptido para el uso de acuerdo con la reivindicacion 7, en el que el material vegetal que contiene profilina es polen de un genero de plantas seleccionado del grupo que consiste en Betula, Alnus, Carpinus, Corylus, Ostrya, Fagus, Quercus, Castanea, Juglans y Carya.
11. 11. El polipeptido para el uso de acuerdo con la reivindicacion 7, en el que el material vegetal que contiene profilina es polen del genero de plantas Olea.
12. 12. El polipeptido para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el individuo no esta sensibilizado a la profilina del material vegetal que contiene profilina antes de la administracion de la primera dosis del polipeptido.
13. 13. El polipeptido para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, polipeptido no se administra junto con un alergeno distinto de la profilina.
14. 14. El polipeptido para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, polipeptido se administra por via sublingual.
15. 15. El polipeptido para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, respuesta inmune de hipersensibilidad esta asociada con una respuesta inmune alergica.
16. 16. Un polipeptido que tiene una secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10, en el que 1 o 2 resto/s de cistema esta/n sustituido/s con un aminoacido seleccionado de A (alanina), G (glicina) y/o S (serina).
17. 17. El polipeptido de acuerdo con la reivindicacion 16, en el que el polipeptido tiene una secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 44 o 45.
18. 18. El polipeptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 16 y 17, en el que la secuencia de aminoacidos no contiene metionina en la posicion 1.
19. 19. Un acido nucleico aislado que codifica la protema de SEQ ID NO: 44 o 45.
20. 20. El acido nucleico aislado de acuerdo con la reivindicacion 19 que tiene SEQ ID NO: 46 o 47.

    en el que el en el que el en el que la