EA029009B1 - Применение полипептида профилина растений в неспецифической иммунотерапии аллергии - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к применению полипептида для подавления иммунного ответа по типу гиперчувствительности у индивидуума, где иммунный ответ вызван непрофилиновым аллергеном содержащей профилин пыльцы отряда растений, выбранного из Poales, Asterales, Fagales и Lamiales, где полипептид представляет собой профилин и содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 75% идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1. Также изобретение относится к полипептиду, представляющему собой профилин и имеющему аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 для подавления иммунного ответа по типу гиперчувствительности, вызываемого непрофилиновым аллергеном содержащей профилин пыльцы растений, в котором 1 остаток или 2 остатка цистеина заменены аминокислотой, выбранной из аланина, глицина и/или серина. Также изобретение относится к выделенной нуклеиновой кислоте, кодирующей указанный полипептид.

Description

Изобретение относится к применению полипептида для подавления иммунного ответа по типу гиперчувствительности у индивидуума, где иммунный ответ вызван непрофилиновым аллергеном содержащей профилин пыльцы отряда растений, выбранного из Роа1ез, Аз1ета1ез, Рада1ез и Ьаш1а1ез, где полипептид представляет собой профилин и содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 75% идентичностью с аминокислотной последовательностью 8Ер ΙΌ NО:1. Также изобретение относится к полипептиду, представляющему собой профилин и имеющему аминокислотную последовательность 8Ер ГО NО:1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 для подавления иммунного ответа по типу гиперчувствительности, вызываемого непрофилиновым аллергеном содержащей профилин пыльцы растений, в котором 1 остаток или 2 остатка цистеина заменены аминокислотой, выбранной из аланина, глицина и/или серина. Также изобретение относится к выделенной нуклеиновой кислоте, кодирующей указанный полипептид.

029009

Область техники

Изобретение относится к области медицинской науки и иммунологии, более конкретно к области аллергии, иммунотерапии и неспецифической толерантности.

Уровень техники

Аллергенспецифическая иммунотерапия (81Т) представляет собой гипосенсибилизирующую иммунотерапию, внедренную в клиническую медицину почти столетие назад для лечения иммунного ответа по типу гиперчувствительности 1 типа.

Гипосенсибилизирующая иммунотерапия состоит в повторяющемся введении специфического аллергена(ов), к которому индивидуум(ы) является сенсибилизированным, или введении перекрестно реагирующего с ним аллергена, обычно либо путем подкожного введения, либо путем сублингвального введения. Повторяющееся введение обычно проводят раз в сутки, раз в неделю или раз в месяц в течение более длительного периода, обычно в течение более чем одного года, так, чтобы обеспечивалась своего рода иммунологическая толерантность к конкретному аллергену с последующим исчезновением симптомов аллергии (Л11ег§еи8 апб А11ег§еп 1ттипо1йегару 4'¹' Εά, 2008, Εά Ьу К. Ьоекеу апб Ό. ЬебГогб, 1пГогта НеаННсаге). Гипосенсибилизирующая иммунотерапия, как правило, ассоциирована с образованием специфических 1§О4-антител и сниженными уровнями специфических 1дЕ.

Однако одной из проблем, встречающихся в случае 81Т, является то, что необходимо идентифицировать специфический аллерген и что риск индукции серьезных неблагоприятных явлений может ограничить общее применение 81Т при лечении иммунного ответа по типу гиперчувствительности.

Таким образом, существует потребность в улучшении лечения иммунного ответа по типу гиперчувствительности.

Концепция лечения индивидуума с помощью одного антигена при подавлении иммунного ответа по типу гиперчувствительности, вызываемого другим неродственным антигеном, была продемонстрирована более 20 лет назад. МШег е1 а1. (1991) продемонстрировали, что периферическая толерантность к антигену (МВР) (основной белок миелина) может быть достигнута у наивных крыс, которым многократно проводили внутрижелудочное введение ОУА. Однако толерантность к МВР достигалась только в том случае, если крыс подвергали совместному воздействию как МРВ, так и ОУА во время иммунизации крыс посредством МВР для развития ЕАЕ. Эта концепция была далее исследована ПаЫтап-Нод1ииб е1 а1. (1995) и МППпдЮп е1 а1. (2004), которые показали, что у наивных крыс, которых кормили первым антигеном, могло быть предотвращено развитие иммунного ответа по типу гиперчувствительности, запускаемого вторым антигеном, если крыс подвергали воздействию как первого антигена, так и второго антигена, во время иммунизации животного вторым антигеном. Ойуеиа С.К. е1 а1. (2005) предположили, что неспецифический эффект может быть представляющим интерес механизмом контроля сенсибилизации к новому аллергену у индивидуумов, уже сенсибилизированных к одному аллергену.

Профилины представляют собой встречающиеся в природе полипептиды, как правило, состоящие из 125-135 аминокислот и встречающиеся во всех организмах от дрожжей до человека (8ап1о8 апб Уаи Кее 2011). Они присутствуют в высоких концентрациях в цитоплазме клеток позвоночных, растений и т.д. и специфически связывают актин, поли-Ь-пролин (РЬР) и фосфатидилинозитол-4,5-бифосфат (Р1Р₂). Профилины могут быть подразделены на четыре различных класса в зависимости от их источника: а) растения, Ь) млекопитающие, с) вирусы, ά) другие эукариоты. Между различными классами гомология аминокислотных последовательностей является низкой (~30%), однако гомология в пределах класса является более высокой, такой как приблизительно от 50 до 90% (Тйогп е1 а1., 1997).

Некоторые профилины растений идентифицированы в качестве аллергенов (МагОпе/ А. е1 а1., 2002), однако распространенность аллергических пациентов, чувствительных к профилинам растений, является низкой, хотя и переменной. Например, было выявлено, что приблизительно 5-15% пациентов с аллергией на аллергены пыльцы травы являются аллергичными к профилину пыльцы травы, в то время как приблизительно 24% пациентов с аллергией на пыльцу оливковых деревьев имеют 1дЕ, распознающий профилин пыльцы оливы (О1е е 2).

Сущность изобретения

В противоположность специфической иммунотерапии аллергеном настоящее изобретение относится к неспецифической иммунотерапии для лечения/профилактики иммунного ответа по типу гиперчувствительности, вызываемого непрофилиновым аллергеном содержащего профилин растительного материала.

Авторы настоящего изобретения представили доказательства того, что иммунный ответ по типу гиперчувствительности, такой как астма, запускаемый воздействием непрофилинового аллергена содержащего профилин растительного материала, может подавляться через неспецифическую толерантность у наивных мышей, а также у сенсибилизированных мышей, которых лечили посредством сублингвального введения профилина содержащего профилин растительного материала. Кроме того, было продемонстрировано, что то же лечение также может подавлять иммунный ответ по типу гиперчувствительности, вызываемый другим содержащим профилин растительным материалом, что, таким образом, указывает на то, что обеспечение неспецифической толерантности к одному полипептиду профилина может быть реактивировано другим полипептидом профилина, вызывающим иммунологическое событие, которое, в

- 1 029009

свою очередь, подавляет иммунный ответ по типу гиперчувствительности. В соответствии с предшествующими исследованиями неспецифической толерантности, подавление могло быть продемонстрировано, только когда мышей во время воздействия непрофилинового аллергена также подвергали совместному воздействию полипептида/профилина.

Таким образом, данные, представленные в настоящем описании, указывают на то, что иммунный ответ по типу гиперчувствительности, вызываемый первым антигеном, может подавляться путем введения индивидууму второго и отличающегося антигена при условии, что индивидуум подвергается воздействию как первого, так и второго антигена или альтернативного второго антигена, когда индивидуум подвергается воздействию "запускающего заболевание" первого антигена.

Известно, что повторяющееся введение индуцирующего толерантность антигена индивидууму приведет к ослаблению иммунного ответа, вызываемого агрессивным и отличающимся антигеном, таким как аллерген, при условии, что оба из этих двух антигенов присутствуют в то время, когда индивидуума подвергают воздействию агрессивного антигена.

Предусматривается, что индивидуум становится толерантным к индуцирующему толерантность антигену и, когда материал, являющийся источником аллергена, контактирует со слизистой оболочкой дыхательных путей этого индивидуума, аллерген и индуцирующий толерантность антиген высвобождаются в одно и то же время и в одном и том же месте, и этот индуцирующий толерантность антиген будет активировать ранее индуцированный иммунологический ответ толерантности, который в свою очередь подавляет иммунный ответ по типу гиперчувствительности на высвобожденные поблизости аллергены.

Таким образом, настоящая терапия включает введение первого антигена, к которому индивидуум становится толерантным, и при воздействии являющегося источником аллергена материала, содержащего как аллерген, запускающий иммунный ответ по типу гиперчувствительности, так и индуцирующий толерантность антиген, иммунный ответ по типу гиперчувствительности, возникновение которого в ином случае ожидается, будет подавляться либо полностью, либо частично.

Полагают, что Т-клетки, такие как клетки Тгед, и, вероятно, также клетки ТН-2, важны для обеспечения неспецифической толерантности. Например, колокализация антигенпредставляющих клеток (АРС), клеток Тгед и клеток ТН-2 в дренирующих лимфатических узлах может быть важной. Толерогенные АРС и продукция регуляторных цитокинов в эпителиальной ткани также может вносить вклад в индукцию толерантности.

В настоящее время известно, что полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 60% идентичностью и/или сходством с профилином вида растений РН1еит рта1епке, можно использовать при иммунотерапии для подавления иммунного ответа по типу гиперчувствительности, вызываемого непрофилиновым аллергеном содержащего профилин растительного материала.

Таким образом, первый аспект изобретения относится к применению полипептида для получения фармацевтической композиции для подавления иммунного ответа по типу гиперчувствительности у индивидуума, где иммунный ответ по типу гиперчувствительности вызван непрофилиновым аллергеном содержащей профилин пыльцы отряда растений, выбранного из группы, состоящей из Роа1ек, Ак1ета1е5, Рада1ек и Ьат1а1е5, где указанный полипептид представляет собой профилин и содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 75% идентичностью с аминокислотной последовательностью 8ЕО ГО N0: 1.

Растения отряда Роа1ек относятся к роду, выбранному из группы, состоящей из Ап1Нохап1Нит, Супобоп, Оас1у118, РекШса, Но1сик, Ногбеит, ЬоНит, Огу/а, Ракра1ит, РНа1аг15, РН1еит, Роа, 8еса1е, 8огдНит, ТпНсит и 2еа.

Растения отряда Ак1ега1е5 относятся к роду, выбранному из группы, состоящей из АтЬгок1а и Аг1ет181а.

Растения отряда Рада1ек относятся к роду, выбранному из группы, состоящей из Ве1и1а, А1пик, Сатршик, Согу1ик, 0кНуа, Радик, Оиегсик, Сак1апеа, 1ид1ап8 и Сагуа.

Растения отряда Ьат1а1ек относятся к роду 01еа.

В предпочтительном варианте полипептид имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0: 1-10, 15-18, 21-23 и 40, или представляет собой вариант профилина, который содержит аминокислоту, выбранную из А (аланина), С (глицина) или 8 (серина), в положении 13 и/или в положении 115 8Е0 ГО N0: 1.

В предпочтительном варианте аминокислотная последовательность 8Е0 ГО N0: 1-10, 15-18, 21-23 и 40 не содержит метионин на Оконце.

Предпочтительно индивидуум, подлежащий лечению, не является сенсибилизированным к профилину пыльцы до введения первой дозы полипептида. Таким образом, указанный иммунный ответ по типу гиперчувствительности может не быть вызван профилином указанного содержащего профилин растительного материала. Предпочтительно часть полипептида имеет аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью с с аминокислотной последовательностью указанного полипептида 8Е0 ГО N0: 43.

Аминокислотная последовательность 8Е0 ГО N0: 1 представляет собой один из биологических

- 2 029009

изомеров профилина РЫ р 12, встречающегося в пыльце травы вида РЫеиш рга1еп8е. Другие биологические изомеры, имеющие аминокислотную последовательность по меньшей мере с 95%, например приблизительно 98% идентичностью или сходством с 8ЕР ГО N0: 1, представлены в настоящем описании как 8ЕС) ГО N0: 2-10.

Второй аспект изобретения относится к варианту полипептида по настоящему изобретению, имеющему аминокислотную последовательность 8ЕР ГО N0: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 для подавления иммунного ответа по типу гиперчувствительности, вызываемого непрофилиновым аллергеном содержащей профилин пыльцы растений, в котором 1 остаток или 2 остатка цистеина в положении 13 и/или 115 заменен/заменены аминокислотой, выбранной из А (аланина), О (глицина) и/или 8 (серина), например полипептид, обладающий аминокислотной последовательностью 8ЕР ГО N0: 44 или 45. Примечательно, что 8ЕР ГО N0: 1-10 и 44 и 45 имеют метионин в качестве первой аминокислоты на Оконце (положение 1), который может быть удален путем ферментативной деградации в клетке-хозяине, продуцирующей последовательности рекомбинантными способами. Таким образом, следует понимать, что вариант с замещенным цистеином имеет аминокислотную последовательность 8ЕР ГО N0: 44 и 45, но где группа метионина в положении 1 отсутствует. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность 8ЕР ГО N0: 44 и/или 45 не содержит метионин в положении 1. Более того, второй аспект изобретения также относится к выделенной нуклеиновой кислоте, кодирующей белок 8ЕР ГО N0: 44 или 45, такой как выделенная нуклеиновая кислота, имеющая нуклеотидную последовательность 8ЕР ГО N0: 46 или 47.

Полипептид для применения для подавления иммунного ответа по типу гиперчувствительности у индивидуума, вызванного непрофилиновым аллергеном содержащего профилин растительного материала, где указанный полипептид представляет собой профилин растений, выбранный из группы, состоящей из профилина

Сгу 3 ,

РЪо <3 2, Апа с 1, Суп <3 12, Тгд а 12, Миз а 1, Αρί д 4, Баи с

4,	АшЬ а	8,	АгР	V	4	, Не1	а 2, Ага Р	8, 3ίη а 4,	Аша г 2,	ВеРа ν
2,	Ске е	2,	3а1	к	4	, АсР	3 9, Сис ш	2, Ага к 5,	, С31у ш 3,	. ВеР ν
2,	Сог а	2,	О1е	е	2	, Ηεν	к 8, Мег а	12, Р1а а 3	, Рга а 4,	, Ма1 3
4,	Раг з	3,	Рги	аν	4, Рги Зи 4, Рги	р 4, Руг с	4, С1Р 3	2, ЫР
С	1, Сар	а	2 и	Ьус	е 1

или указанный полипептид представляет собой вариант указанного профилина.

Полипептид для применения для подавления иммунного ответа по типу гиперчувствительности у

индивидуума, вызванного непрофилиновым аллергеном содержащего профилин растительного материала, где указанный полипептид представляет собой профилин растений, выбранный из группы, состоящей из профилина

Сгу з ,

Рко 3 2, Апа с 1, Суп 3 12, Тгх а 12, Миз а 1, Αρί д 4, Оаи с

4, АтЬ а 8, АгР ν 4, Не1 а 2, Ага Р 8, 3ίη а 4, Аша г 2, ВеРа ν

2, Ске е 2, 5а1 к 4, АсР 3 9, Сис т 2, Ага к 5, С1у т 3, ВеР ν

2, Сог а 2, 01е е 2, Ηβν Ь 8, Мег а 12, Р1а а 3, Рга а 4, Ма1 <3

4, Раг з 3, Рги аν 4, Рги <3и 4, Рги р 4, Руг с 4, СИ; з 2, ЫР

с 1, Сар а 2 и Ьус е 1

или указанный полипептид представляет собой вариант указанного профилина; и где указанный иммунный ответ по типу гиперчувствительности вызван непрофилиновым аллергеном, выбранным из группы, состоящей из

	Ска о 1, Ска о 2, Сгу з 1,	Сгу з 2,	Сир	а 1,	Сир з
1,	Сир з	3,	Тип а 1, Тип а 2, Тип а 3,	Тип о 4,	Тип	з 1,	Тип ν
1,	Тип ν	3, .	Апа с 2, АпР о 1, Азра о 1,	Сго з 1,	Сго	з 2,	Суп 3
1,	Суп 3	7,	Суп 3 15, Суп 3 22ад, Суп 3	23, Суп	3 24	, Бас	9 1/
Бас	д 2,	Бас	д 3, Бас д 4, Бас д 5, Рез	р 4, Ηοΐ 1 1	, Но1	1 5,
Ног	ν 1,	Ног	ν 5, Ног ν 12, Ног ν 15, Ног ν 16,	Ног V	17,	Ног V
21,	Ьо1 р 1,	Ьо1 р 2, Ьо1 р 3, Ьо1 р 4,	Ьо1 р 5	, Ьо1	р 11	, Миз

- 3 029009

а 2,	Миз а 3,	Миз а 4, Миз а 5, Огу	з 1,	Огу з 12, Раз	η 1, РЪа
а 1,	РЬа а 5,	РЪ1 р 1, РЪ1 р 2, РН1	Р 4	, РН1 р 5, РН1	р 6, РЬ1
Р 7,	РЪ1 р 11	, РЪ1 р 12, РЪ1 р 13,	РЬо	ά 2, Роа р 1,	Роа р 5,
Зес	с 1, Зес <	? 5, Зес с 20, Зог Ъ 1	, Τγϊ а 14, Τγϊ а	15, Τγϊ а
18,	ТГ1 а 19,	Тг1 а 21, Τγι а 25, Тгт а	26, Τγι а 27,	Τγϊ а 28,
ТГ1	а 29, Τγϊ	а 30, Τγϊ а 31, Тгт а	32,	Τγϊ а 33, Τγϊ	а 34, Τγϊ

а 35, Τγϊ а 36, Τγϊ а 37, геа т 1, 2еа т 12, геа т 14, геа т 25, АсЬ с 5, АсЬ с 8, АсЪ с 10, АсЪ ά 1, АсЪ ά 2, АсЬ с1 3, АсЪ ά 4, АсЪ ά 5, Ас£ ά б, АсЪ ά 7, АсЁ. <3 8, АсЪ ά 10, АсЪ (3 11,

А1п

д

1,

А1п

9 4,

АтЪ а 1,

АтЪ

а 2, АтЪ

а 3,

АтЪ

а 4,

АтЪ

а

5,

АтЪ

а

б,

АтЪ

а 7,

АтЪ а 9,

АтЪ

а 10, АтЬ

1 р 5,

АтЪ

Ъ 5,

Апа

о

1,

Апа

о

2,

Апа

О 3 ,

Αρί д 1,

Αρί

д 2, Αρί

д з,

Αρί

д 5,

Αρί

д

6,

Ага

Ъ

1,

Ага

Ъ 2,

Ага Ъ 3,

Ага

Ъ 4, Ага

Ъ 6,

Ага

ь 7,

Ага

Ъ

9,

Ага

Ъ

10,

Ага Ъ 11, АгЬ ν

1, АгЪ ν 2, АгЪ ν

3, АгЬ ν

5, .

АгЪ

V

6, Вег

е

1, :

Вег е

2, Ве£а ν 1,

ВеЪ ν 1,

Ве£ ν

3,

ВеЪ ν

4,

Ве£

V

6, ВеЪ

V

7,

Вга з

1, Вга п

1,

Вга о 3,

Вга г

1,

Вга г

2,

Сар

а

1м,

Саг Ъ

' 1,

Саг ί

1, Саг ί

• 4,

Саз з 1,

Саз з

5,

Саз з

8,

Саз

3

9, СаЪ

г

1,

СЪе а

1, СЪе а

3,

СгЪ 1 3,

СхЪ г

3,

СгЪ з

1,

Сг£

г

3 , Со£

а

1,

Сог а

1, Сог а

8,

Сог а 9,

Сог а

ю,

Сог ,

а 11, Сог

а 12

Сог а

13, Сог а 14,

Сис

т 1, Сис

т 3,

Баи

с 1,

Рад

е

2,

Рад

£

2,

Рад

з 1,

Рга а 1,

Рга

а 3, Рга

е 1,

О1у

т 1,

<31у

т

2,

О1у

ш

4,

С1у

т 5,

С1у т 6,

Не1

а 1, Не1

а 3,

Ηβν

Ъ 1,

Ηβν

Ъ

2,

Ηβν

Ь

3,

Ηβν

Ь 4,

Ηβν Ъ 5,

Ηβν

Ъ 6, Ηβν

Ъ 7,

Ηβν

Ь 9,

Ηβν

Ъ 10,

Ηβν

Ъ

11,

Ηβν Ъ 12, Ηβν Ъ 13, Ηβν Ъ 14,

Нит з

1,

Оид п

1,

□ ид

п

2, СГид

Г

1,

□ ид г

2, СГид г

3,

СГид г 4,

Ьас з

1,

Ьеп с

1,

Ьеп

с

2, Ьеп

с

з, :

Ыд ν

1, Ьир ап 1,

Ьус е 2,

Ьус е

3,

Ьус е

4,

Ма1

ά

1, Ма1

а

2,

Ма1 а

3, Мап е

5,

Мег а 1,

Мог п

3,

О1е е

1,

О1е

е

3, О1е

е

4,

О1е е

5, О1е е

б,

О1е е 7,

О1е е

8,

О1е е

9,

О1е

е

ю,

О1е е

! 11, ОзС

с 1, Раг

3 1,

. Раг з 2,

Раг

7 4,

Раг

о 1,

Регз

а 1,

РЪа

ν 3, ΡΪ3

ν 1, Ргз

ν 2

, ΡΪ3 ν 3

, Ргз

V 4

, Ρίβ

ν 5

, Ргз

з 1,

ΡΪ3

з 2, Р1а

1 1, Р1а а

1, Р1а а

2, Р1а ог 1, :

Р1а

ог

2,

Р1а

ог

3,

Рги аг 1, Рги аг

3 , Рги βν 1,

Рги βν 2,

Рги

βν 3, Рги

<3 3,

Рги

аи

3, Рги аи 5, Рги аи 6, Рги

Р 1,

Рги

Р 2,

Рги

Р

3,

Руг

с

1,

Руг

с 3,

Руг с 5,

Оие

а 1, Βίο

с 1,

ЕиЪ

ί 1,

ЕиЪ

ί

3,

5а1

к

1,

8а1

к 2,

3а1 к 3,

3а1

к 5, Зез

ί 1,

Зез

ί 2,

Зез

ί

3,

Зез

ί

4,

Зез

1 5,

Зез ί 6,

Зез

ί 7, 3ίη

а 1,

3ίη

з 2 ,

Згп

а

3,

Зо1а

ь

1,

Зо1а Ь 2,

, Зо1а ύ 3, Зо1а £ 4, Зуг ν :

1, Зуг ν :

ί, Угд ί

1, νίΐ ν 1 и Ζίζ т 1

- 4 029009

Описание чертежей

Фиг. 1. Представлен процент эозинофилов, выделенных из жидкости ВЛЬ мышей, которым вводили РЫ р 12 и которых иммунизировали ОУА + РЫ р 12 или ОУЛ отдельно.

Фиг. 2. Тот же эксперимент, что и на фиг. 1, однако результаты показаны в отношении пролиферации клеток селезенки ίη νίίτο при добавлении ОУА.

Фиг. 3. Представлен процент эозинофилов, выделенных из жидкости ВАЬ мышей, которым вводили РЫ р 12 и которых иммунизировали экстрактом РЫ р, содержащим РЫ р 12, или экстрактом РЫ р, из которого удален РЫ р 12.

Фиг. 4. Тот же эксперимент, что и на фиг. 3, однако результаты представлены в отношении стимуляции ίη νίίτο клеток цервикального лимфатического узла при добавлении экстракта РЫ р.

Фиг. 5. Тот же эксперимент, что и на фиг. 3, однако результаты представлены в отношении уровней цитокина 1Ь-5 в клетках цервикального лимфатического узла при добавлении экстракта РЫ р.

Фиг. 6. Представлен процент эозинофилов, выделенных из жидкости ВАЬ мышей, сенсибилизированных ОУА, а затем обработанных РЫ р 12, а затем иммунизированных посредством ОУА + РЫ р 12 или ОУА отдельно.

Фиг. 7. Тот же эксперимент, что и на фиг. 6, однако результаты представлены в отношении пролиферации клеток селезенки ίη νίίτο при добавлении ОУА.

Фиг. 8. Представлены уровни цитокина 1Ь-5 в культуре клеток селезенки, где клетки селезенки выделены из мышей, которым вводили РЫ р 12, которых сенсибилизировали ОУА и подвергали совместному воздействию ОУА + Вс1 ν 2.

Фиг. 9. Тот же эксперимент, что и на фиг. 8, однако результаты представлены в отношении уровней цитокина 1Ь-13.

Фиг. 10. Диаграмма С1Е для экстрактов, полученных после экстракции в течение 20 с (А), 60 с (В) и 2 мин (С) необработанной пыльцы РЫеит рга1сп5С.

Фиг. 11. Диаграмма С1Е для экстрактов, полученных после экстракции в течение 5 мин (А), 10 мин

(B) и 20 мин (С) необработанной пыльцы РЫеит рга1еп5С.

Фиг. 12. Диаграмма РТЕ для экстрактов, полученных после экстракции в течение 20 с, 60 с, 2 мин, 5 мин, 10 мин и 20 мин необработанной пыльцы РЫеит ргаЫпке: А) РЫ р 12, В) РЫ р 5), С) РЫ р 1.

Фиг. 13. Количества РЫ р 12, РЫ р 1 и РЫ р 5, высвобожденные после экстракции в течение 20 с, 60 с, 2 мин, 5 мин, 10 мин и 20 мин необработанной пыльцы РЫеит ргаЫпке и проанализированные с использованием ЕЫ8А.

Фиг. 14. Диаграмма С1Е для экстрактов, полученных после экстракции в течение 20 с (А) и 60 с (В) и 2 мин (С) обезжиренной пыльцы РЫеит ргаЫпке.

Фиг. 15. С1Е для экстрактов, полученных после экстракции в течение 5 мин (А), 10 мин (В) и 20 мин (С) обезжиренной пыльцы РЫеит ргаЫпке.

Фиг. 16. Р1Е для экстрактов, полученных после экстракции в течение 20 с, 60 с, 2 мин, 5 мин, 10 мин и 20 мин обезжиренной пыльцы (РЫеит ргаЫпке) А) РЫ р 12, В) РЫ р 5), С) РЫ р 1.

Фиг. 17. Количества РЫ р 12, РЫ р 1 и РЫ р 5, высвобожденные после экстракции в течение 20 с, 60 с, 2 мин, 5 мин, 10 мин и 20 мин обезжиренной пыльцы РЫеит ргаЫпке и проанализированные способом ЕЫ8А.

Фиг. 18. 8Ό8 РАСЕ для экстрактов, полученных после экстракции в течение 20 с, 40 с, 60 с, 2, 5, 10 и 20 мин А) необработанной и В) обезжиренной пыльцы РЫеит ргаЫпке, соответственно.

Фиг. 19. С1Е для экстрактов, полученных после экстракции в течение 20 с, 60 с и 2 мин обезжиренной пыльцы ВыЫа уеггнсо^а.

Фиг. 20. С1Е для экстрактов, полученных после экстракции в течение 5 (А), 10 (В) и 20 (В) мин обезжиренной пыльцы ВыЫа уеггнсо^а.

Фиг. 21. Р1Е для экстрактов, полученных после экстракции в течение 20 с, 60 с, 2 мин, 5 мин, 10 мин и 20 мин обезжиренной пыльцы ВеЫ1а уеггнсо^а А) ВЫ ν 2 (профилин) и В) ВЫ ν 1 (основной аллерген).

Фиг. 22. Р1Е для экстрактов, полученных после экстракции в течение 20 с, 60 с, 2 мин, 5 мин, 10 мин и 20 мин обезжиренной пыльцы АтЬго81а аПетРнГоНа А) АтЬ а 8 (профилин) и В) АтЬ а 1 (основной аллерген).

Фиг. 23. Р1Е для экстрактов пыльцы АтЬгоыа аПетРнГоПа (А), ВеЫ1а уеггнсо^а (В), Согу1и8 агеИапа

(C) и РЫеит ргаЫпке (Е) ЛПениыа уЫдапх (Р), СгурЮтепа _)аротса (С), Ннтн1н5 |арошси5 (I), и экстрактов тел клещей ОегтаЮрЫщоЫех рЮгопу^ыпщ (Ό), экстракта кошачьей перхоти (Н) и экстракта Ма1н5 ДошекДсик (яблоки) (свежеприготовленный) (Л), где чашки обрабатывают поликлональными 1дСантителами, индуцированными против профилина ВЫ ν 2.

Фиг. 24. Р1Е для тех же экстрактов, что и на фиг. 23, однако Р1Е проведен с помощью поликлональных 1§С-антител, индуцированных против профилина РЫ р 2.

Фиг. 25. Представлена пролиферация клеток селезенки ш уйго при стимуляции экстрактом ВЫ ν клеток селезенки, выделенных из наивных мышей 8ЫТ, которым вводили РЫ р 12 и которых затем сенсибилизировали экстрактом ЬЫ ν.

- 5 029009

Фиг. 26. Тот же эксперимент, что и на фиг. 25, однако в нем представлен результат стимуляции ίη νίίτο цервикальных клеток лимфатических узлов при стимуляции экстрактом Вс1 ν.

Фиг. 27. представлена пролиферация клеток селезенки ίη νίίτο при стимуляции экстрактом Ве1 ν клеток селезенки, выделенных из мышей, сенсибилизированных экстрактом ЬеТ ν, а затем подвергнутых обработке 8ПТ с РЬ1 р 12.

Фиг. 28. Тот же эксперимент, что и на фиг. 27, однако в нем показан результат стимуляции ίη νίίτο клеток цервикальных лимфатических узлов при стимуляции экстрактом Веί ν.

Фиг. 29. Представлены уровни цитокина 1Ь-5, высвобожденного при пролиферации клеток селезенки ίη νίίτο, при стимуляции экстрактом клеток селезенки РЬ1 р, выделенным из наивных мышей, подвергнутых обработке 8Ь1Т с О1е е 2, а затем сенсибилизированных экстрактом Р1т1 р.

Фиг. 30. Тот же эксперимент, что и на фиг. 29, однако в нем представлен результат высвобождения цитокина 1Ь-5 при стимуляции ίη νίίτο клеток цервикальных лимфатических узлов.

Фиг. 31. Представлена пролиферация клеток селезенки ίη νίίτο при стимуляции посредством ОУА клеток селезенки, выделенных из наивных мышей, подвергнутых обработке 8Ь1Т с РЬ1 р 12, а затем сенсибилизированных ОУА.

Фиг. 32. Представлена активация Т-клеток, индуцированная молекулами профилина, оцененная по включению НЗ-тимидина (количество импульсов в минуту, СРМ, ось X). А и В представляют собой линии Т-клеток, полученные из клеток двух пациентов с аллергией на траву, а: тРЫ р 12, Ь: иРЬ1 р 12, д: гО1е е 2, ά: контроль в виде среды. Планками погрешности указаны стандартные отклонения для четырех реплик.

Подробное описание

Определения.

Следующие термины и выражения имеют следующее значение.

Форма единственного числа относится к неопределенному количеству и ее следует интерпретировать не только как "один", но также и в значении "некоторые" или "несколько".

Термины "белок", "полипептид" и "аминокислотная последовательность" используют в настоящем описании взаимозаменяемо. В настоящем описании используют общепринятые однобуквенные и трехбуквенные коды для аминокислотных остатков. Трехбуквенные коды для аминокислот определены в соответствии с ШРАС-ШВ Ιοίηί Сοтт^δδ^οη οη Вюсйетгса1 Nοтеηс1аίи^е (1ΟΒΝ).

Термин "вариант" или "варианты" относится к полипептидам, которые содержат модификации/мутации по сравнению с "исходной последовательностью". Термин "вариант" может быть использован взаимозаменяемо с термином "мутант".

Термин "исходная последовательность" или "исходный полипептид" определяет полипептид, на котором основан любой из вариантов полипептида. Если нет иных указаний, 8ЕО ГО NО: 1, или альтернативно 8ЕО ГО NО: 2-42, или альтернативно любой профилин, упомянутый в табл. 1-4, следует считать исходной последовательностью. Следует понимать, что 8ЕО ГО NО: 1-42 представлены с метионином в положении 1, который в некоторых вариантах осуществления может не присутствовать, поскольку метионин может быть удален ферментативно, либо естественным образом клеткой-хозяином при рекомбинантной продукции, либо ех νίνο. Также следует понимать, что метионин может не полностью удаляться, так что приблизительно 2-10% рекомбинантно продуцированных полипептидов содержат метионин в положении 1. "Исходная нуклеиновая кислота" означает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую исходный полипептид.

Термин "идентичность последовательностей" определяет долю аминокислот, которые являются одинаковыми в паре последовательностей при выравнивании последовательностей. Выравнивание и сравнение последовательностей можно проводить визуально, однако обычно его проводят с помощью свободно доступных компьютерных программ для сравнения последовательностей, и результатом является процентная идентичность, вычисленная с помощью компьютерной программы.

Термин "сходство последовательностей" определяет долю аминокислот, которые являются одинаковыми или гомологичными в паре последовательностей при выравнивании последовательностей. Наиболее часто для вычисления используют компьютерную программу, и результатом является показатель, который вычислен с использованием некоторой матрицы сходства, составляющей часть компьютерной программы.

Выражение "аллерген" следует интерпретировать как один или несколько аллерген(ов).

Термин "аллерген" означает белковое вещество, способное индуцировать иммунный ответ по типу гиперчувствительности у индивидуума, такого как животное, такое как человек. Аллерген может представлять собой сенсибилизирующий аллерген или перекрестно реагирующий аллерген.

Термин "сенсибилизирующий аллерген" означает белковое вещество, способное запускать продукцию иммунной системой 1дЕ-антител у индивидуума.

Термин "перекрестно реагирующий аллерген" определяет белковое вещество, которое может распознаваться 1дЕ-антителами, первоначально образовавшимися против сенсибилизирующего аллергена. Иными словами, перекрестно реагирующий аллерген представляет собой аллерген, способный индуцировать иммунный ответ по типу гиперчувствительности, когда он распознается и связывается с перекре- 6 029009

стно реагирующими 1дЕ-антителами, индуцированными сенсибилизирующим аллергеном. Например, аллерген Ма1 ά 1, встречающийся в яблоках, представляет собой белок, гомологичный Вс1 ν 1, встречающемуся в пыльце березы, и он способен индуцировать иммунный ответ по типу гиперчувствительности у индивидуума, сенсибилизированного аллергеном Вс1 ν 1, вследствие его способности запускать перекрестное связывание и индуцировать грануляцию в тучных клетках, нагруженных 1дЕ против Вс1 ν 1.

Термин "основной аллерген" означает аллерген, который обеспечивает сенсибилизацию в более чем 50% средней популяции (случайно выбранных) пациентов, имеющих иммунный ответ по типу гиперчувствительности, запускаемый посредством воздействия материала, являющегося источником аллергена, содержащего указанный аллерген.

Термин "минорный аллерген" означает аллерген, который обеспечивает сенсибилизацию у менее чем 50% средней популяции пациентов (случайно выбранной), имеющей иммунный ответ по типу гиперчувствительности, запускаемый посредством воздействия материала, являющегося источником аллергена, содержащего указанный аллерген.

Термин "неспецифическое подавление" или "неспецифическая толерантность", как правило, охватывает способность подавлять иммунную реакцию у индивидуума в отношении одного антигена (А) при введении индивидууму другого неродственного антигена (В).

Термин "иммунотерапия" охватывает терапию, где терапевтически активное вещество (в настоящем описании полипептид) представляет собой антиген (антигенный белок) или иммуногенный пептид. Иммунотерапия обычно охватывает многократное введение достаточной дозы антигена, обычно в количествах порядка микрограммов, в течение длительного периода времени, обычно в течение месяцев или в течение лет, где антиген или иммуногенный пептид вводят раз в сутки, несколько раз в неделю, раз в две недели или раз в месяц.

Термин "индивидуум" означает млекопитающее, имеющее адаптивную иммунную систему, такое как человек, домашнее животное, такое как собака, кошка, лошадь или крупный рогатый скот.

Выражение "индивидуум, нуждающийся в этом", охватывает индивидуума, имеющего иммунный ответ по типу гиперчувствительности, индивидуума, сенсибилизированного аллергеном, а также индивидуума, имеющего риск сенсибилизации аллергеном и риск развития иммунного ответа по типу гиперчувствительности. У индивидуума клинически могут присутствовать симптомы иммунного ответа по типу гиперчувствительности, или индивидуум может быть только сенсибилизирован аллергеном, и у него еще могут отсутствовать клинические симптомы иммунного ответа по типу гиперчувствительности. Индивидуум, имеющий риск сенсибилизации аллергеном, может быть идентифицирован по наличию атопических заболеваний в семье.

Выражение "профилактическое лечение" охватывает лечение, например, посредством иммунотерапии, индивидуума с целью индуцировать ответ, который частично или полностью предотвратит у индивидуума развитие иммунного ответа по типу гиперчувствительности. Профилактическое лечение, такое как профилактическая иммунотерапия, таким образом, начинают до того, как индивидуум становится сенсибилизированным к аллергену. Это можно осуществить путем начала иммунотерапии до того, как у индивидуума индуцируются поддающиеся обнаружению сывороточные 1дЕ-антитела, способные специфично связываться с сенсибилизирующим аллергеном, или до того, как любой другой биохимический маркер, указывающий на иммунный ответ по типу гиперчувствительности, может быть обнаружен в биологических образцах, выделенных от индивидуума. Более того, профилактическая иммунотерапия также означает иммунотерапию, начатую до того, как у индивидуума развились клинические симптомы заболевания, такие как симптомы аллергического ринита, аллергической астмы или атопического дерматита.

Термин "лечение" относится к любому типу лечения или профилактики, который обеспечивает пользу у индивидуума, страдающего или имеющего риск развития иммунного ответа по типу гиперчувствительности на представляющий интерес аллерген, включая улучшение состояния индивидуума (например, одного или нескольких симптомов), отсрочивание возникновения симптомов, замедление прогрессирования симптомов или индукцию модификации заболевания и т.д. Как используют в рамках изобретения, "лечение" не обязательно означает излечение или полное устранение симптомов, а относится к любому типу лечения, которое обеспечивает пользу пациенту.

Выражение "терапевтически эффективное количество" означает количество, эффективное для лечения, такое как количество, достаточное для достижения желаемого эффекта. Например, терапевтически эффективное количество представляет собой накопленную дозу неродственного антигена, введенного в ходе иммунотерапии для достижения намеченной эффективности или максимальной дозы, переносимой в данный период. Общая доза может быть подразделена на единичные дозы, введенные раз в сутки, два раза в неделю или более, раз в неделю, раз в две недели или раз в четыре недели, или раз в месяц в зависимости от пути введения. Общую дозу можно вводить в различных концентрациях. Ожидается, что одна доза находится в диапазоне порядка микрограммов, таком как диапазон от 5 до 500 мкг, в зависимости от антигена.

Выражение "сенсибилизированный к аллергену" обычно означает, что индивидуум был подвергнут

- 7 029009

воздействию аллергена так, что адаптивная иммунная система индивидуума обладает памятью в отношении аллергена, например имеет индуцированные поддающиеся обнаружению 1дЕ-антитела против аллергена, или что Т-клетки, стимулированные ίη νίίτο, способны пролиферировать в присутствии сенсибилизирующего аллергена.

Термин "адъювант" относится к веществу, которое усиливает иммунный ответ на антиген. В зависимости от природы адъюванта он может стимулировать либо клеточно-опосредуемый иммунный ответ, либо гуморальный иммунный ответ, либо их комбинацию.

Лечение/профилактика иммунного ответа по типу гиперчувствительности.

Следует понимать, что полипептид по изобретению предназначен для применения для лечения/профилактики иммунного ответа по типу гиперчувствительности. Иммунный ответ по типу гиперчувствительности по настоящему изобретению считается ассоциированным с аллергическим заболеванием/аллергическим иммунным ответом, таким как, в основном, иммунный ответ по типу гиперчувствительности 1 типа или 4 типа или их комбинация, например, как правило, иммунный ответ, обычно ассоциированный с продукцией 1дЕ-антител, такой как опосредуемая 1дЕ аллергия. Типичными примерами заболеваний, опосредуемых иммунным ответом по типу гиперчувствительности, являются, но не ограничиваются ими, аллергические заболевания, такие как атопический дерматит, крапивница, контактный дерматит, аллергический конъюнктивит, аллергический ринит, аллергическая астма, анафилаксия, пищевая аллергия и аллергия на лекарственные средства. Типичными примерами заболеваний, опосредуемых иммунной реакцией по типу гиперчувствительности 1 типа, являются, но не ограничиваясь ими, аллергические заболевания, такие как атопический дерматит, аллергический конъюнктивит, аллергический ринит, аллергическая астма, анафилаксия, пищевая аллергия и сенная лихорадка. Примером заболевания, опосредуемого иммунной реакцией по типу гиперчувствительности 4 типа, является контактный дерматит.

Полипептид можно вводить любым способом введения, однако предпочтительно его вводят на слизистую оболочку или эпителий, например, вводят на слизистую оболочку и/или эпителий дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта и полости. В принципе, введение на кожу, такое как путем подкожного введения, накожного введения или трансдермального введения, находится в пределах объема введения полипептида по изобретению, и его можно использовать в некоторых вариантах осуществления. Однако в других вариантах осуществления изобретения полипептид предпочтительно не вводят местно на кожу, трансдермальными способами или путем инъекции, как, например, подкожно и накожно.

После нанесения полипептида на эпителий и/или слизистую оболочку полипептид может захватываться антигенпредставляющей клеткой и в отсутствие "сигналов опасности", как в случае аллергенов, обычное иммунологическое событие, происходящее на поверхности слизистых оболочек в физиологических условиях, приведет к явлению, называемому "оральной толерантностью", которая является нормальным признаком иммунной системы слизистой оболочки, который может быть достигнут посредством орального (в том числе перорального), назального введения, введения через дыхательные пути и сублингвального введения антигена.

Механизмы, лежащие в основе индукции оральной толерантности, все еще не до конца ясны, за исключением того, что широко признается, что орально вводимые антигены приводят к образованию антигенспецифических регуляторных Т-клеток после представления антигена ассоциированными с кишечником АРС. Такое представление предпочтительно индуцирует Т-клетки, которые секретируют регуляторные цитокины, такие как ТОР-бета и 1Ь-10. Эти антигенспецифические регуляторные клетки могут мигрировать в лимфоидные органы, подавляя иммунные ответы путем ингибирования образования эффекторных клеток, и в органы-мишени, подавляя заболевание посредством высвобождения не специфичных к антигену цитокинов. Недавно было предположено, что образование регуляторных клеток в иммунной системе слизистой оболочки опосредуется специализированной подгруппой дендритных клеток, экспрессирующих поверхностный маркер СЭ103. Также было предположено, что пероральное введение антигена индуцирует функцию неотвечаемости Т-клеток в основном посредством анергии или элиминации. Считается, что эти механизмы, индукция клеток Тгед, анергия и элиминация, могут не исключать друг друга и что они могут в значительной степени перекрываться.

Таким образом, следует понимать, что введение антигена на слизистую оболочку полости рта индивидуума, который предпочтительно не является предварительно сенсибилизированным антигеном, может индуцировать антигенспецифические клетки Тгед, которые активируются при последующем воздействии антигена и начинают продуцировать неспецифические регуляторные цитокины, и если антиген совместно воздействует с аллергеном, неспецифические регуляторные цитокины могут подавлять иммунный ответ на другие типы специфичности, которые существуют в микроокружении, такой как иммунный ответ по типу гиперчувствительности.

Таким образом, следует понимать, что для индукции пероральной толерантности, полипептид по изобретению предпочтительно вводят на слизистую оболочку дыхательных путей, в полость рта и желудочно-кишечный тракт. Таким образом, в предпочтительных вариантах осуществления изобретения полипептид вводят путем ингаляции, назального введения, буккального введения (введение через щеку или полость рта), орального введения (введение через желудочно-кишечный тракт), такого как предпочти- 8 029009

тельно сублингвальное введение. Ожидается, что введение на слизистую оболочку полости рта можно проводить путем местной доставки антигена на поверхность эпителия полости рта, откуда антиген всасывается через слизистую оболочку и подслизистую оболочку. Например, антиген вводят на эпителий сублингвальной части, включая дно ротовой полости, откуда антиген всасывается в слизистую оболочку и подслизистую оболочку. При буккальном введении целью является нанесение подходящего фармацевтического состава полипептида на эпителий полости рта, такой как эпителий, расположенный на нижней или верхней поверхности языка, на десне или на щеках, чтобы позволить полипептиду всасываться через слизистую оболочку и подслизистую оболочку, и где целью не является доставка полипептида в желудочно-кишечный тракт. Таким образом, в более предпочтительных вариантах осуществления изобретения антиген вводят на эпителий и/или слизистую оболочку полости рта, например, путем сублингвального введения, предпочтительно, где индивидуума инструктируют не сглатывать в течение периода, составляющего по меньшей мере 1 мин после введения, такого как более предпочтительно через 2 мин, 3 мин, 4 мин или 5 мин после введения полипептида.

Полипептид можно вводить многократно в достаточных дозах, обычно в однократных дозах в количествах порядка микрограммов, в течение длительного периода времени, обычно в течение двух недель, месяцев или в течение лет до достижения эффекта. Обычно полипептид вводят раз в сутки, раз в неделю, раз в две недели или раз в месяц в зависимости от пути введения, состава и/или конкретного полипептида. Ожидается, что полипептид необходимо будет вводить, непрерывно или с перерывом из одного или нескольких периодов без введения, в течение периода, составляющего от по меньшей мере 4 недель до приблизительно 4-6 месяцев, но что введение необходимо будет продолжить на несколько месяцев или лет.

Примечательно, следует понимать, что достижение неспецифической толерантности наиболее вероятно требует, чтобы формировалась оральная толерантность и/или специфические клетки Тгед. Оральная толерантность будет формироваться, по меньшей мере, путем введения полипептида на слизистую оболочку полости рта. Однако биомаркеры, демонстрирующие, что оральная толерантность (Т-клеточная толерантность) была достигнута, нелегко идентифицировать. Толерантность у сенсибилизированных пациентов с аллергией обычно связана с продукцией 1дО4 и продукцией цитокинов 1Ь-10 и 1Ь-4. Однако полагают, что прямое исследование Т-клеточных ответов на толерогенный антиген может приводить к клеткам Тгед, продуцирующим ГЛ-10 и/или ТОР-Ь, в то время как в группе плацебо должна наблюдаться полная неотвечаемость или ответы ТН1/ТН2. Чтобы далее это обосновать, необходимо проводить исследования ίη νίίτο одновременной стимуляции клеток Тгед толерогенным полипептидом и исследуемым антигеном, например, аллергеном, для подавления ответа специфичных к исследуемому антигену Тклеток. В качестве альтернативы одновременная иммунизация кожи толерогенным полипептидом и исследуемым антигеном, таким как столбнячный токсоид (ТТ), может имитировать стимуляцию ίη νίίτο и включает все иммунологические элементы ситуации ίη νίνο. В этой ситуации будет ожидаться отсутствие ответа в виде гиперчувствительности замедленного типа на ТТ в присутствии толерогенного антигена в группе активного лечения, в то время как стимуляция ТТ без толерогенного антигена должна привести к кожному ответу.

Более того, достижение неспецифической толерантности также требует, чтобы тот же полипептид, или альтернативно модификация полипептида, присутствовал вместе с непрофилиновым аллергеном в органе-мишени (например, дыхательных путях), который подвергается воздействию содержащего профилин растительного материала. Таким образом, в дополнение к введению полипептида с целью обеспечения оральной толерантности, способы обеспечения совместного воздействия полипептида или его модифицированного полипептида и непрофилинового аллергена также являются необходимыми для достижения неспецифической толерантности.

Под термином "совместное воздействие" подразумевают, что полипептид предоставляется/обеспечивается доступ к тому же органу, на который нацелен непрофилиновый аллерген во время естественного воздействия не содержащего профилин растительного материала, например предоставляется/обеспечивается доступ к тому же органу-мишени в течение периода времени, по меньшей мере частично или полностью совпадающего с воздействием на индивидуума указанного непрофилинового аллергена. Как правило, органом-мишенью воздушного аллергена являются дыхательные пути, органоммишенью пищевого аллергена является желудочно-кишечный тракт или полость рта, и мишенью воздушных аллергенов, пищевых аллергенов и контактных аллергенов является кожа.

Таким образом, в дополнение к введению полипептида многократно в дыхательные пути, желудочно-кишечный тракт и/или полость рта (чтобы достигнуть оральной толерантности/индукции клеток Тгед), должны быть предоставлены средства для обеспечения совместного присутствия/совместного воздействия полипептида и непрофилинового аллергена в органе-мишени в течение периода времени, частично или полностью перекрывающегося с периодом воздействия аллергена.

Авторы настоящего изобретения далее обнаружили, что совместное воздействие может быть обеспечено путем выбора в качестве "индуцирующего толерантность антигена" антигена, который естественным образом воздействует на тот же орган-мишень, что и аллерген, запускающий иммунный ответ по типу гиперчувствительности. Соответственно "индуцирующий толерантность антиген" по своему суще- 9 029009

ству достигает того же органа-мишени, что и "запускающий" непрофилиновый аллерген при естественном воздействии содержащего профилин растительного материала. Преимущественно отсутствует необходимость в предоставлении дополнительных средств для обеспечения совместного воздействия запускающего аллергена (непрофилиновый аллерген) и "индуцирующего толерантность антигена" (полипептид).

В соответствии с настоящим изобретением неспецифическая толерантность обеспечивается путем введения полипептида, такого как профилин РЬ1 р 12, индивидууму, нуждающемуся в лечении от иммунного ответа по типу гиперчувствительности, вызываемого непрофилиновым аллергеном содержащего профилин растительного материала. Считается, что неспецифическая толерантность обеспечивается, по меньшей мере, тогда, когда полипептид имеет аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 60%, как, например, по меньшей мере 65, 70, 75, 80%, 85, 90 или 95% сходством и/или идентичностью с аминокислотной последовательностью профилина содержащего профилин растительного материала. Иными словами, полипептид не должен быть идентичен профилину содержащего профилин растительного материала при условии, что существует некоторая идентичность и/или сходство между введенным полипептидом и профилином, воздействующим естественным образом.

Однако, когда полипептид по изобретению по некоторым причинам не обеспечивает достаточной неспецифической толерантности к иммунному ответу по типу гиперчувствительности, полипептид также можно вводить в орган-мишень, подвергающийся естественному воздействию содержащего профилин растительного материала, например вводить в дыхательные пути, желудочно-кишечный тракт или на кожу в течение периода времени, по меньшей мере частично или полностью совпадающего с естественным воздействием на индивидуума указанного содержащего профилин растительного материала.

Выражение "полипептид также вводят в орган-мишень, подвергающийся естественному воздействию содержащего профилин растительного материала в течение периода времени, по меньшей мере частично или полностью совпадающего с естественным воздействием на индивидуума указанного содержащего профилин растительного материала" означает, что полипептид вводят в орган-мишень, по меньшей мере, во время всего периода воздействия аллергена или его можно вводить в течение части этого периода, включая период перед началом естественного воздействия.

Предусматривается, что в некоторых вариантах осуществления изобретения полипептид вводят на эпителий/слизистую оболочку дыхательных путей (предпочтительно назальное введение), полость рта (предпочтительно сублингвальное введение) или желудочно-кишечный тракт с целью обеспечения оральной толерантности к этому полипептиду. Кроме того и предпочтительно, после достижения пероральной толерантности к полипептиду, тот же полипептид или альтернативно модифицированный полипептид вводят в орган-мишень, подвергающийся естественному воздействию содержащего профилин растительного материала совместно, одновременно, по отдельности или последовательно, в любом порядке, с периодом естественного воздействия содержащего профилин растительного материала.

Например, когда органом-мишенью являются дыхательные пути, что в наибольшей степени относится к воздушным аллергенам (пыльца), полипептид многократно вводят в полость рта (например, сублингвально) раз в сутки или раз в неделю в течение периода в диапазоне от 4 недель до 12 месяцев или более (для достижения пероральной толерантности/клеток Тгед), и тот же полипептид или модифицированный полипептид вводят в дыхательные пути, например, путем назального введения или путем ингаляции, в течение периода времени, полностью или частично перекрывающегося с периодом естественного воздействия. Аналогично, когда органом-мишенью является желудочно-кишечный тракт, что в наибольшей степени относится к пищевым аллергенам, полипептид многократно вводят (например, сублингвально), например, раз в сутки или раз неделю, в течение периода в диапазоне от 4 недель до 12 месяцев или более, и тот же полипептид или модифицированный полипептид (его вариант) вводят в желудочнокишечный тракт, например, путем проглатывания или орального введения, в течение периода времени, полностью или частично перекрывающегося с периодом естественного воздействия.

Индивидуумы.

Поскольку ожидается, что индукции пероральной толерантности способствует отсутствие аллергической сенсибилизации полипептида, индивидуум, нуждающийся в лечении по настоящему изобретению, предпочтительно не является сенсибилизированным к профилину указанного содержащего профилин растительного материала. Иными словами, иммунный ответ по типу гиперчувствительности предпочтительно не вызывается профилином указанного содержащего профилин растительного материала. Более того, когда полипептид не является идентичным профилину содержащего профилин растительного материала, индивидуум предпочтительно не является сенсибилизированным к полипептиду.

Таким образом, в предпочтительных вариантах осуществления изобретения индивидуум не является, по меньшей мере, до введения первой дозы, сенсибилизированным к профилину указанного содержащего профилин растительного материала и/или указанному полипептиду, например, он не сенсибилизирован, по меньшей мере, до введения первой дозы, ни к профилину указанного содержащего профилин растительного материала, ни к указанному полипептиду.

Таким образом, можно определять, связывается ли или ассоциирует ли иным образом профилин содержащего профилин растительного материала и/или указанный полипептид с 1§Е-антителами (напри- 10 029009

мер, сывороточные 1дЕ-антитела), полученными от индивидуума, подвергаемого лечению. Для этой цели можно использовать несколько анализов, каждый из которых имеет различные пределы обнаружения и количественного определения. Таким образом, может быть понятно, что профилин содержащего профилин растительного материала и/или указанный полипептид не связываются или иным образом не ассоциируют с 1дЕ-антителами (например, сывороточные 1дЕ-антитела) на поддающихся обнаружению уровнях и/или поддающихся количественному определению уровнях.

Присутствие специфических 1§Е-антител к профилину и/или полипептиду у индивидуума можно исследовать способами, хорошо известными в данной области, например, с использованием исследования ΚΆ8Τ, которое представляет собой исследование с использованием радиоиммунного анализа для обнаружения специфических 1дЕ-антител к предполагаемым или известным аллергенам. В этих исследованиях предполагаемый аллерген связывают с нерастворимым материалом и добавляют сыворотку пациента или другие жидкости организма, содержащие 1дЕ (например, слюну). Если сыворотка/жидкости организма содержит антитела к аллергену, эти антитела будут связываться или иным образом ассоциировать с аллергеном. Добавляют меченное радиоактивной меткой антитело против 1дЕ человека, где оно связывается или иным образом ассоциирует с 1дЕ-антителами, уже связанными с нерастворимым материалом. Несвязанные антитела против 1дЕ человека смывают. Величина радиоактивности пропорциональна сывороточному 1дЕ против аллергена. В последние годы для той же цели используют усовершенствованное исследование под названием "исследование крови на специфические 1дЕ 1ттипоСАР", которое в литературе также может быть описано как САР КА8Т, САР РЕ1А (флуороферментный иммуноанализ) и РЬаттас1а САР. Предел количественного обнаружения таких исследований может составлять уже приблизительно 0,1 кЕд/л. Для применения в контексте настоящего изобретения предел количественного обнаружения может находиться ниже 1 кЕд/л, как, например, ниже 0,5 кЕд/л, как, например, ниже 0,3 кЕд/л, когда используют исследование крови на специфические 1дЕ 1ттипоСАР® или сходное исследование.

Очевидно, что профилин и/или полипептид могут не индуцировать иммунную реакцию по типу гиперчувствительности у индивидуума, нуждающегося в лечении. Например, профилин и/или полипептид не инициируют, по меньшей мере, до введения первой дозы полипептида, немедленную кожную реакцию и/или замедленную кожную реакцию у индивидуума, нуждающегося в лечении, при проведении кожной скарификационной пробы с различными концентрациями профилина/полипептида.

Альтернативно, можно установить, индуцирует ли профилин и/или полипептид высвобождение гистамина в анализе базофилов/тучных клеток ίη νίίτο с использованием крови от индивидуума, подлежащего лечению.

Более альтернативно, можно установить, что профилин и/или полипептид не связывается или иным образом не ассоциирует, по меньшей мере, не на поддающихся обнаружению уровнях, с 1дС-антителами, например, 1§С-антителами кролика, индуцированными после иммунизации животного, такого как кролик, одним или несколькими непрофилиновым аллергеном(ами) содержащего профилин материала или водным экстрактом содержащего профилин материала.

Следует понимать, что индивидуум, нуждающийся в настоящем лечении, может представлять собой индивидуума, уже сенсибилизированного к непрофилиновому аллергену содержащего профилин материала. У такого индивидуума клинически могут присутствовать симптомы иммунного ответа по типу гиперчувствительности, или индивидуум может быть только сенсибилизирован к непрофилиновому аллергену, но у него еще могут не присутствовать клинические симптомы иммунного ответа по типу гиперчувствительности. Более того, следует понимать, что индивидууму может быть полезно это лечение, даже когда он не сенсибилизирован к непрофилиновому аллергену. Такой индивидуум может представлять собой индивидуума, имеющего риск сенсибилизации к непрофилиновому аллергену, например имеющего риск развития иммунного ответа по типу гиперчувствительности на непрофилиновый аллерген. Индивидуум, имеющий риск сенсибилизации к аллергену, может быть идентифицирован по атопическим заболеваниям в семейном анамнезе.

Таким образом, настоящее изобретение также относится к "профилактическому лечению", которое начинается до того, как у индивидуума будут индуцированы поддающиеся обнаружению сывороточные 1дЕ-антитела к непрофилиновому аллергену содержащего профилин материала, или оно начинается до того, как любой другой биохимический маркер, указывающий на иммунный ответ по типу гиперчувствительности, может быть выявлен в биологических образцах, выделенных от индивидуума. Более того, профилактическая иммунотерапия также может включать лечение до развития у индивидуума клинических симптомов заболевания, таких как симптомы аллергического ринита или аллергической астмы.

Как упоминалось, полипептид по изобретению можно использовать для лечения иммунного ответа по типу гиперчувствительности. Соответствующий режим дозирования может представлять собой режим, обычно используемый в области специфической иммунотерапии аллергеном, например, с точки зрения выбора доз, количества доз в сутки, длительности лечения и частоты введения. Таким образом, может предусматриваться, что полипептид вводят часто в течение более длительного периода времени до достижения желаемого эффекта, например, вводят каждые сутки на слизистую оболочку полости рта (например, сублингвальную слизистую оболочку) в течение периода по меньшей мере 2-6 месяцев. Так- 11 029009

же предусматривается, что, когда иммунный ответ по типу гиперчувствительности вызывается сезонным аллергеном, первую дозу можно вводить до начала сезона аллергена. Также предусматривается, что лечение начинают с фазы возрастающего дозирования, где полипептид вводят возрастающими дозами в течение одних суток или нескольких суток или недель до достижения поддерживающей дозы.

Следует понимать, что полипептид предпочтительно является единственным вводимым терапевтически активным ингредиентом. В частности, отмечается, что полипептид необходимо вводить в отсутствие аллергенов во избежание конкурирующих иммунологических механизмов, формирования сигналов опасности и/или воспаления. Таким образом, непрофилиновый аллерген, к которому индивидуум имеет специфичные 1дЕ-антитела, не следует вводить совместно с полипептидом, по меньшей мере, не в течение периода установления оральной толерантности к полипептиду.

Следует понимать, что полипептид не вводят вместе с модулятором каскада передачи сигнала Νοίαΐι в качестве комбинированного препарата для совместного, одновременного, раздельного или последовательного применения для модулирования иммунной системы, как описано в патентной заявке \νϋ 2004/082710.

Полипептиды, непрофилиновые аллергены и содержащие профилин растительные материалы.

Полипептид для применения в рамках настоящего изобретения может представлять собой профилин (РЫ1 р 12) вида растений РЫеит рта1еи8е, который существует в различных изоформах, таких как изоформы, имеющие аминокислотную последовательность 5>ЕС ГО ΝΟ: 1-10, необязательно, где метионин не присутствует в положении 1. Примечательно, что этот профилин по своей природе присутствует одновременно с непрофилиновым аллергеном, таким как РЫ1 р 1, 5 или 6, когда индивидуум подвергается воздействию пыльцы травы отряда растений Роа1е8 в сезон пыления травы.

Следует понимать, что полипептиды, даже отличающиеся от аминокислотной последовательности профилина РЫ1 р 12, могут заменять РЫ р 12 в качестве пригодного неспецифического антигена при подавлении иммунного ответа по типу гиперчувствительности, вызываемого непрофилиновым аллергеном пыльцы травы. Например, профилины, гомологичные РЫ1 р 12, такие как профилин пыльцы березы Ве1 ν 2 или профилин пыльцы оливкового дерева О1е е 2, можно использовать для подавления иммунного ответа по типу гиперчувствительности, вызываемого непрофилиновым аллергеном пыльцы травы отряда растений Роа1е§. Также предусматривается, что вследствие высокого молекулярного сходства, такого как по меньшей мере 60%, идентичность между аминокислотными последовательностями РЫ1 р 12 и Ве1 ν 2 или О1е е 2, существует установленная достаточная иммунологическая перекрестная реактивность между РЫ р 12 и Ве1 ν 2 или О1е е 2 так, что введение РЫ р 12 приводит к ответу в виде толерантности, который может активироваться гомологичным полипептидом Ве1 ν 2 или О1е е 2 после воздействия пыльцы березы или пыльцы оливкового дерева, приводящего к сопутствующему подавлению иммунного ответа по типу гиперчувствительности, вызванного непрофилиновым аллергеном пыльцы березы и/или травы. Аналогично, введение индивидууму профилина Ве1 ν 2 может приводить к ответу в виде толерантности, который может активироваться под действием гомологичного полипептида РЫ р 12 или О1е е 2 после воздействия пыльцы травы или оливкового дерева, приводящего к сопутствующему подавлению иммунного ответа по типу гиперчувствительности, вызванного непрофилиновым аллергеном пыльцы березы, и/или пыльцы травы, и/или пыльцы оливкового дерева.

Таким образом, полипептид для применения в рамках настоящего изобретения имеет, состоит из, по существу состоит из, содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 60% идентичностью и/или сходством, такими как по меньшей мере 70, 75, 80, 85, 90, 95 и 98% идентичность и/или сходство, с аминокислотной последовательностью, представленной в 5>ЕС ГО NΟ: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10, необязательно без метионина в положении 1 (Ν-конец).

Типичными примерами полипептидов, имеющих аминокислотную последовательность по меньшей мере с 60% идентичностью и/или сходством с аминокислотной последовательностью, представленной в 5>ЕС ГО NΟ: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10, являются профилины других содержащих профилин растительных материалов.

В табл. 1-4 представлены иллюстративные профилины содержащего профилин растительного материала (идентифицированные по их номеру иЫРго!, установленному из Ы1р/:ишрто1.ог£, и их процентной идентичности с РЫ1 р 12 (5>ЕС ГО NΟ: 1), где процентная идентичность аминокислотной последовательности определена с использованием выравнивания ВЬЛБТ (база данных = ИшРгоЖВ, порог = 10, матрица автоматическая, фильтрация = отсутствует, пропуск = 500, совпадение = 500). Существует в значительной мере высокая степень идентичности между профилинами различных видов растений, такая как по меньшей мере 60% идентичность между аминокислотными последовательностями 5>ЕС ГО NΟ: 1, и профилинами, представленными в табл. 4. В частности, процентная идентичность в группе трав и злаков (отряд Роа1е8, например, род Супобоп (бермудская трава), Ногбеит (ячмень), Огу/а (рис), РЫ1еит рга1еи8е (тимофеевка луговая), БотдЫит (трава), ТгШсит (дурум или пшеница) и 2еа (кукуруза), принадлежащих классу однодольных растений, является высокой, такой как выше 80%. Более того, профилины деревьев (пыльца деревьев) обладают высокой идентичностью с профилином РЫ1 р 12, такой как в пределах от 70 до 82% (отряд Рада1е§, например, род Ве1и1а (береза), род Согу1и8 (лесной орех); отряд Лтеса1е8, например, род Е1ае18 (пальма); отряд МаЫа1е§, например, род Ооккуршт (хлопковое дерево); отряд Ма1рщЫа- 12 029009

1ек, например, род Неуеа (каучуковое дерево), отряд Метсшта1ек, например, род Ктсшик; отряд Ьат1а1ек, например, род О1еа (оливковое дерево), род Рори1ик (тополь), отряд Муг1а1ек, например, род 8оппетаЬа. Профилины пыльцы сорной травы обладают процентной идентичностью в пределах от 75 до 81% (отряд Лк1ета1ек, например, род ЛтЬгоыа (карликовая амброзия), род Лиепима или род НеЬайЬик (подсолнечник)).

Также профилин плодов, орехов и бобов отряда Лр1а1ек, РаЬа1ек, Рока1ек, 8о1апа1ек и УЬа1ек обладает высокой процентной идентичностью с РЬ1 р 12, такой как в пределах от 70 до 82% (отряд Лр1а1ек, например, род Лршт (сельдерей), род Паисик (морковь), род Ре1гоке1пшт (петрушка); отряд РаЬа1ек, например, род ЛтасЫк (арахис); отряд Кока1ек, например, род О1усше (соя), род Ргадапа (клубника), род Нити1ик, род Ма1ик (яблоня), род Рапе1аг1а, род Ргипик (персик, абрикос, вишня, миндаль), род Ругик (груша); отряд 8о1апа1ек, например, род Сарысит (чилийский перец), род №соДапа (табак), род Ьусоретк1соп (томат), род 8о1апит (картофель), отряд УЬа1ек, например, род УШк (виноград).

Другими представляющими интерес профилинами являются профилины отряда Втакыса1ек, например, род ЛтаЫДорык, Втакыса (капуста декоративная), отряда Сагуор1у11а1ек, например, род СЬепороДшт, отряда 8аршДа1ек, например, род Сйгак (апельсин), род ЬЬсЫ; отряда СитсиЬЬа1ек, например, род Сисиппк (огурец, дыня).

Таким образом, типичные примеры содержащих профилин растительных материалов, обладающих по меньшей мере 80% идентичностью с 8ЕО ГО N0: 1, представляют собой содержащие профилин растительные материалы из рода растений, выбранного из Лтатап1йик, ЛтЬтоыа, Вгакыса, СЬепороДшт, Согу1ик, СупоДоп, Е1ае1к, НеЬайЬик, Неуеа, НогДеит, ЬЬсЫ, МетсштаЪк, №соДапа, О1еа, Огу/а, РЫеит, РЬоейх, 8о1апит, 8оппегаЬа, 8огдЬит, ТгШсит и 2еа.

Типичными примерами содержащих профилин растительных материалов, обладающих по меньшей мере 70% идентичностью с 8Е0 ГО N0: 1, представляют собой содержащие профилин растительные материалы из рода растений, выбранного из ЛтатайЬик, ЛтЬтоыа, Апапак, Лршт, ЛтаЬШорык, ЛтасЫк, Ат1ет1к1а, Ве1и1а, Вгакыса, Сарысит, Сатуо1а, СЬепороДшт, СЬтик, Согу1ик, Сисиппк, СупоДоп, Е1ае1к, Ргадапа, О1усше, НеЬайЬик, Неуеа, НогДеит, Нити1ик, ЬЬсЫ, Ма1ик, МегсшгаЬк, Мика, №соЬапа, 01еа, Огу/а, Рапегапа, РеЬокеЬпит, РЬакео1ик, РЫеит, РЬоетх, Рюеа, Ртик, Р1ап1адо, Рори1ик, Ргипик, Ругик, Ктсшик, 8а1ко1а, 8о1апит, 8оппегаЬа, 8огдЬит, ТгШсит, УШк и 2еа.

Таким образом, по-видимому, существует высокая консервативность аминокислотных последовательностей профилинов видов растений из классов растений Р1ап1ае РШорыДа (ранее известный как СоШГеторыДа), Р1айае Мопосо1к (также известный как однодольные и ранее называемый ЬШорыДа) и Р1ап1ае МадпоЬорыДа.

Таким образом, полипептид для применения в рамках настоящего изобретения может представлять собой профилин содержащего профилин растительного материала класса растений, выбранного из группы, включающей Р1ап1ае РШорыДа, Р1ап1ае Мопосо1к и Р1ап1ае МадпоЬорыДа, например, отряда растений, семейства растений, рода растений или вида растений, представленных в табл. 1, 2 и 3. Как дополнительно описано ниже, полипептид по изобретению может в дополнение к встречающимся в природе полипептидам представлять собой вариант встречающегося в природе профилина.

В соответствии с идеей неспецифической толерантности по настоящему изобретению следует, что иммунный ответ по типу гиперчувствительности запускается непрофилиновым аллергеном содержащего профилин растительного материала, который происходит либо из того же вида растений, либо из другого вида растений, рода растений, отряда растений или класса растений, что и содержащий профилин растительный материал, из которого происходит молекула профилина. Таким образом, иммунный ответ по типу гиперчувствительности запускается непрофилиновым аллергеном содержащего профилин растительного материала класса растений, выбранного из группы, включающей Р1айае РШорыДа, Р1айае Мопосо!к и Р1айае МадпоЬорыДа, например, отряда растений, семейства растений, рода растений или вида растений, представленных в табл. 1, 2 и 3.

Типичными представляющими интерес примерами содержащего профилин растительного материала являются содержащие профилин растительные материалы отряда растений, выбранного из группы, включающей Рша1ек, Лгеса1ек, Лкрагада1ек, Роа1ек, 2ШдШета1ек Лр1а1ек, Лк1ета1ек, ВгаккюаЬк, СитсигЬЬа1ек, Епса1ек, РаЬа1ек, Рада1ек, СепЬапа1ек, Ьат1а1ек, Ьаига1ек, Ма1уа1ек, Ма1р1дЫа1ек, Мут1а1ек, Рто1еа1ек, Кока1ек, 8аршДа1ек, 8о1апа1ек и УЬа1ек, предпочтительно Рша1ек, Роа1ек, Лгеса1ек, Лр1а1ек, Лк1ета1ек, ВгаккюаЬк, СагуорЬу11а1ек, РаЬа1ек, Рада1ек, Ьат1а1ек, Ма1рЫдЫаЪк, Рто1еа1ек, Кока1ек, 8аршДа1ек и 8о1апа1ек, более предпочтительно, Рша1ек, Лгеса1ек, Роа1ек, Лк1ета1ек, ВтакысаЪк, СагуорЬу11а1ек, Рада1ек, Ьат1а1ек, Кока1ек и ко1апа1ек, наиболее предпочтительно Роа1ек, Лк1ета1ек, Рада1ек и Ьат1аИк, еще более предпочтительно Роа1ек.

Более конкретно, содержащий профилин растительный материал представляет собой содержащий профилин растительный материал семейства растений, выбранного из группы, включающей Сиргеккасеае, Лгесасеае, Лкрагадасеае, ЫДасеае, ВтотеЬасеае, Роасеае, Микасеае, 2ШдШетасеае, Лр1асеае, ЛтаИасеае, Лк1етасеае, Вгаккюасеае, ЛтатаЫЬасеае, СагуорЬу11асеае, Ро1удопасеае, СиситЬЬасеае, ЛсЬЫДЬ асеае, Ьесу1ЫДасеае, ТЬеасеае, РаЬасеае, Ве1и1асеае, Радасеае, 1ид1апДасеае, Мупсасеае, ШШоГадасеае, ТюоДепДтасеае, Лросупасеае, КиЫасеае, О1еасеае, РеДаИасае, Р1ап1ад1пасеае, Ьаигасеае, Ма1уасеае, Еи- 13 029009

рЕогЫасеае, ЬуШгаееае, Р1а1апасеае, СаппаЬаееае, Козасеае, Шшаееае, игЕсасеае, АпасагШасеае, Ки1асеае, Зартбасеае, Зо1апасеае, Уйасеае, предпочтительно Сиргеззаееае, Агееаееае, ВготеНасеае, Роаееае, Ар1аееае, Аз1егасеае, Вгазз1сасеае, АтагапИасеае, СагуорЕуЕаееае, РаЬаееае, ВеШ1аееае, Радасеае, О1еаееае, ЕирЕогЫасеае, Р1а1апасеае, СаппаЬаееае, Козасеае и Зо1апаееае, наиболее предпочтительно Роаееае, Аз1егасеае, ВеШ1аееае и О1еаееае.

Еще более конкретно, содержащий профилин растительный материал представляет собой содержащий профилин растительный материал рода растений, выбранного из группы, включающей СИатаесурапз, Сгур1отепа, Сиргеззиз, 1итрегиз, РЕоешх, Азрагадиз, Сгосиз, Апапаз, АшИохатИнт, Супобоп, Вас1уНз, РезШеа, Но1еиз, Ногбеит, Еойит, Огу/а, Разра1ит, РЕа1апз, РИ1еит, Роа, Зееа1е, ЗогдЕит, ТпЕсит, 2еа, Миза, Арщт, Ваисиз, АтЬгоз1а, Аг1ет1з1а, НейапШиз, Еастса, АгаЫборз1з, Вгазз1са, Зтар1з, АтагапНиз, Ве1а, СЕепоробтт, Радоругит, За1зо1а, Сисит1з, АсНшЛа, Вег1Ео11еЕа, АгасЫз, О1уете, Еепз, Еиртиз, РИазео1из, Р1зит, У!дпа, А1пиз, Ве1и1а, Сагртиз, Сагуа, Саз1апеа, Согу1из, Радиз, 1ид1апз, Оз1гуа, Риегсиз, СаШагапШиз, Сойеа, Ргахтиз, Е1диз1гит, О1еа, Р1ап1адо, Зезатит, Зуппда, Регзеа, Ооззурщт, Неуеа, МатЕо!, МегсипаНз, Роро1из, К1стиз, Зоппегайа, Р1а1апиз, Ргадапа, Нити1из, Ма1из, Могиз, Рапе1апа, Ргипиз, Ругиз, КиЬиз, ХлхлрИиз, Апасагбтт, С1'1гиз, I а1сИр МапдЕега, Р1з1ае1'а, Сарз1сит, Йусорегз1соп, Зо1апит и УЕз, более предпочтительно Сгур1отепа, Апапаз, АтИохаШИат, Супобоп, Вас1уПз, РезЩса, Но1еиз, Ногбеит, ЕоЕит, Огу/а, Разра1ит, РЕа1апз, РИ1еит, Роа, Зееа1е, ЗогдЕит, ТпЕеит, 2еа, Арщт, Ваисиз, АтЬгоз1а, Аг1ет1з1а, НеНап1Еиз, СЕепоробтт, За1зо1а, АгасИз, О1уете, А1пиз, Ве1и1а, Сагртиз, Сагуа, Саз1апеа, Согу1из, Радиз, 1ид1апз, ОзЕуа, Риегсиз, Ргахтиз, О1еа, Р1ап1адо, Неуеа, МегсипаНз, Р1а1апиз, Нити1из, Ма1из, Рапе1апа, Ргипиз, Ругиз, КиЬиз, Сарз1сит, Русорегз1соп и Зо1апит, еще более предпочтительно Сгур1отепа, АтИохаЩИит, Супобоп, Вас1уПз, РезШеа, Но1еиз, Ногбеит, ЕоЕит, Огу/а, РИ1еит, Роа, Зееа1е, ЗогдЕит, ТпЕеит, 2еа, АтЬгоз1а, Аг1ет1з1а, НеНапНиз, СЕепоробтт, За1зо1а, Ве1и1а, Согу1из, О1еа, Рапе1апа и Зо1апит.

Еще более конкретно, содержащий профилин растительный материал содержит непрофилиновый аллерген, выбранный из группы, включающей

СЬа о 1, СЬа о 2, Сгу д 1, Сгу д 2, Сир а 1, Сир з 1, Сир з 3, Лип а 1, Лип а 2, Лип а 3, Лип о 4, Лип з 1, Лип ν

1, Лип ν 3, Апа с 2, АпР о 1, Азра о 1, Сго з 1, Сго з 2, Суп ά

1, Суп ά 7, Суп ά 15, Суп ά 22νζ, Суп ά 23, Суп ά 24, Пас д 1,

Бас д 2, Пас д 3, Пас д 4, Пас д 5, Рез р 4, Ηοΐ 1 1, Ηοΐ 1 5,

Ног ν 1, Ног ν 5, Ног ν 12, Ног ν 15, Ног ν 16, Ног ν 17, Ног ν 21, Ьо1 р 1, Ьо1 р 2, Ьо1 р 3, Ьо1 р 4, Ьо1 р 5, Ьо1 р 11, Миз а 2, Миз а 3, Миз а 4, Миз а 5, Огу з 1, Огу з 12, Раз η 1, РЬа

а 1, РЬа а 5, РЬ1 р 1, РЬ1 р 2, РЬ1 р 4, РЬ1 р 5, РЬ1 р б, РЬ1

р 7, РЬ1 р 11, РЬ1 р 13, РЬо ά 2, Роа р 1, Роа р 5, Зес с 1,

Зес с 5, Зес с 20, Зог Ь 1, Тгх а 14, Тгх а 15, Тгх а 13, Тгх а 19, Тгх а 21, Ίΐί а 25, Ίΐί а 26, Ίΐί а 27, Ίΐί а 28, Ίΐί а 29,

Ίΐί а 30, Ίΐί а 31, Ίΐί а 32, Ίΐί а 33, Ίΐί а 34, Ίΐί а 35, Ίΐί

а 36, Тгх а 37, геа т 1, геа т 12, геа т 14, геа т 25, АсР с 5,

АсР с 8, АсР с 10, АсР ά 1, АсР ά 2, АсР ά 3, Аср ά 4, АсР ά 5,

аср а б,	АсР а 7,	Аср а 8,	аср а ю	, АсР а 11, А1п д	1, А1п д
4, АтЬ а	1, АтЬ а	2, АтЬ а	3, АтЬ а	4, АтЬ а 5, АтЬ а	б, АтЬ а
7, АтЬ а	9, АтЬ а	10, АтЬ р	5, АтЬ Р	5, Апа о 1, Апа о	2, Апа о
3, Αρί д	1, Αρί д	2, Αρί д	3, Αρί д	5, Арх д б, Ага Ь	1, Ага Ь
2, Ага Ь	3, Ага Ь	4, Ага Ь	6, Ага Ь '	7, Ага Ь 9, Ага Ь	10, Ага Ь
11, АгР ν	1, АгР ν	2, АгР ν	3, АгР ν	5, АгР ν б, Вег е	1, Вег е
2, ВеРа ν	1, Вер ν	1, ВеР ν	3, ВеР ν	4, Вер ν б, ВеР ν	7, Вга д
1, Вга п	1, Вга о	3, Вга г	1, Вга г	2, Сар а 1 ад, Саг	Ь 1, Саг
ί 1, Саг	ί 4, Саз	з 1, Саз	з 5, Саз	з 8, Саз з 9, СаР	г 1, СЬе
а 1, СЬе	а 3, СхР	1 3, СхР	г 3, СхР	з 1, СхР з 3, Со£	а 1, Сог
а 1, Сог	а 8, Сог	а 9, Сог	а 10, Сог а 11, Сог а 12, <	Сог а 13,
Сог а 14,	Сис т 1,	Сис т 3,	Паи с 1,	Рад е 2, Рад Р 2,	Рад з 1,
Рга а 1,	Рга а 3,	Рга е 1,	С1у т 1,	О1у т 2, С1у т 4,	С1у т 5,

- 14 029009

С1у т 6,

Не1

а 1,

Не1

а 3,

Ηβν Ь

1,

Ηβν Ь 2,

Ηβν Ь 3,

Ηβν Ь 4,

Ηβν

Ь 5,

Ηβν

Ь б,

Ηβν

Ь 7,

Ηβν 1

э 9,

Ηβν

Ь 10

, Ηβν

ь :

11,

Ηβν Ь

12,

Ηβν к

> 13,

Ηβν

Ь 14

, Нит

3 1ζ

Дид

п 1

, Дид

п 2,

Дид

г

1,

Дид

г 2,

Дид

г 3,

Дид

г 4,

Ьас

з 1,

Ьеп

с 1,

Ьеп

с 2,

Ьеп

с

3,

Ыд

ν 1,

Ьир

ап 1

, Ьус

е 2

, Ьус

е 3,

Ьус

е 4

, Ма1

ά 1,

Ма1

а

2,

Ма1

а з,

Мап

е 5,

Мег

а 1,

Мог

п 3,

О1е

е 1,

О1е

е 3,

О1е

е

4,

О1е

е 5,

О1е

е б, О1е

е 7

, О1е

! е 8,

О1е е

9, О1е е 10, О1е

е

! 11,

ОзС

с 1,

Раг

3 1,

Раг

3 2,

Раг з

4, :

Раг <

э 1, Регз а

1,

РЬа

ν 3,

Ρΐ3

ν 1,

ΡΪ8

ν 2,

Ρί3

ν 3,

Ρί3 ν

4,

ΡΪ3

ν 5,

Р13 3

1,

ΡΪ3

з 2,

Р1а

1 1,

Р1а

а 1,

Р1а

а 2,

Р1а ог 1,

Р1а

ог 2,

, Р1а

ог

3,

Рги аг

1, Рги	аг 3, Рги аν	1, Рги βν	• 2, Рги βν 3, Рги	а 3, Рги	аи 3,
Рги аи	5 , Рги аи 6 ,	Рги р 1,	Рги р	2 , Рги р 3,	Руг с 1,	Руг с
3, Руг	с 5, Сие а 1,	Είο с 1,	ЕиЬ ί	1, ЕиЬ ί 3,	3а1 к 1,	5а1 к
2, 5а1	к 3, 3а1 к 5,	Зез ί 1,	Зез ί	2, Зез ί 3,	Зез ί 4,	Зез ί
5, Зез	ί 6, Зез ί 7,	3ίη а 1,	3ίη а	2, 3ίη а 3,	Зо1а ϋ 1,	, 5о1а
Г 2, Зо1а 1 3, Зо1а	Г 4, Зуг	ν 1, Зуг ν 3, νίς	х 1, νίΐ	ν 1 и
Ζίζ т 1

Непрофилиновый аллерген предпочтительно представляет собой основной аллерген, такой как аллерген, выбранный из группы, включающей

СЬа о :

1, 1

сгу з :

1,

Сгу з 2,

Сир

а

1,

Сир

3

1,

Дип

а

1,

Дип

3

1,

Дип ν

1,

Апа с

1,

АпЬ о 1,

Азра

о

1,

Сго

3

1,

Суп

а

1,

Ьас

д

1,

Оас д

5,

Рез р

4,

Но1 1 1,

, Но1

1

5,

Ног

V

1,

Ног

V

5,

Ног

V

12,

, Ног

V 15, Ног

V

16, Ног

ν 17,

Ног

ν 21

,

Ьо1

Р :

1,

Ьо1

Р 5

,

Миз а 1,

Огу з 1,

Раз η 1, РЬа а 3

- /

РЬа а 5

РЬ1

Р

1,

РЬ1

Р 5

РЫ

- р 6,

рьо а 2,

Роа р 1, Роа р Е

Зес с 1,

Зес

! С )

5,

Зог Ь 1

,

ТГ1

. а 12,

геа т 1,

геа т 12,

Иеа т

14,

геа т :

25,

АсЬ

с

5,

Ас£

а

1,

Ась а

2,

А1п д

1,

А1п д 4,

, Ата

г

2,

АтЬ

а

1,

АтЬ

а

2,

АтЬ

Р

5,

АтЬ Ь

5,

Апа о

1,

Апа о 2,

- Αρί

д

1,

Αρϊ

д

5,

Ага

Ь

1,

АН:

V

1,

Вег е

1,

Вера ν

1,

, Век ν 1

, Вга

3

1,

Вга

п

1,

Вга

о

3,

Вга

г

1,

Сар а

1те,

Сар а

2,

, Саг Ь 1

, Саг

ί

1,

Саз

3

1,

СаЬ

г

1,

СЬе

а

1,

С1Ь 1

3,

Ск г

3,

СЫ з 1,

, Со£

а

1,

Сог

а

1,

Сог

а

2,

Сис

т

1,

Оаи с

1,

Рад е

2,

Рад Ь 2,

, Рад

3

1,

Рга

а

1,

Рга

е

1,

О1у

т

1,

С1у т

2,

Не1 а

1,

Не1 а 3,

, Ηβν

Ь

1,

Нит

3

1,

Дид

п

1,

Дид

г

1,

Ьас з

1,

Ьеп с

1,

Ыд ν 1,

ЫС <

1,

Ьир ап

1,

Ьус

е

1,

Ьус

е

2,

Ма1 а

1,

О1е е

1,

О1е е 2,

. озе

с

1,

Раг

3

1,

Раг

о

1,

Регз

а

ί 1,

РЬа ν 3,

Ρί3 ν

1,

, ΡΪ3 з 1

, Р1а

1

1,

Р1а

а

1,

Р1а

а

- 15 029009

2, Р1а ог 1,	Р1а	ог 2,	Рги аг	1, Рги аν 1,	Рги	р	1,	Руг	с	1,
<2ие а 1, Егс	с 1,	РиЬ ί	1, 8а1 :	к 1, Вез ί 1,	8ίη	а	1,	Зо1а	ь	1,
5уг ν 1, νίς	г 1,	νίΐ ν	1 и Ζίζ ш 1, такие как предпочтительно
Сгу з 1, Сгу	Ϊ 2,	суп а	1, Цас	д 1, Оас д 5,	Рез	Р	4,	Но1	1	1,
Ηοΐ 1 5, Ног	ν 1,	Ног V	5, Ног	ν 12, Ног ν 15, Ног	V	16, Ног ν
17, Ног ν 21,	Ьо1	р 1, Ьо1 р 5,	Огу з 1, Раз	η 1	, РЬа	а 1,	РЬа
а 5, РЬ1 р 1,	РЬ1	р 5, РЬ1 р б,	Роа р 1, Роа	Р 5	/ 1	Зес	с 1,	Зес
с 5, Зог Ь 1,	Тг1	а 12,	геа т 1	., геа т 12, Иеа т	14,	Йеа т	25,
А1п д 1, А1п	д 4,	АтЬ а	1, АтЬ	а 2, АтЬ р 5,	АтЬ	Ь	5,	Αρί	д	1,
Αρί д 5, Ага	Ь 1,	АгЬ ν	1, ВеЬ	ν 1, Вга ό 1,	Вга	η	1,	Вга	о	3,
Вга г 1, Сар	а 1м,	Сар а	2, Саг	Ь 1, Саг ί 1,	Саз	3	1,	СаЬ	г	1,
СЬе а 1, Сог	а 1,	Сог а	2, Сис	т 1, Цаи с 1,	С1у	т	1,	С1у	т	2,
Не1 а 1, Не1	а 3,	Ηβν Ь	1, Нит	3 1, ЫЬ с 1,	Ьус	е	1,	Ьус	е	2,
Ма1 а 1, О1е	е 1,	О1е е	2, Раг	3 1, Раг о 1,	Р1а	1	1,	Р1а	а	1,
Р1а а 2, Р1а	ог 1,	Р1а ог 2, Рги аг 1, Рги ач	1,	Рги р	ί 1, Руг с
1, £)ие а 1, Κίο с	1, КиЬ	ί 1, 3а1 к 1, 3ίη а	1 и :	Зо1а	к 1.

Как правило, содержащий профилин растительный материал представляет собой пыльцу, такую как пыльца травы, злаков, деревьев или сорной травы, однако также он может представлять собой продукт питания или ингредиент продукта питания, такого как крупа, орех, плод или овощ.

В некоторых предпочтительных вариантах осуществления изобретения непрофилиновый аллерген происходит из пыльцы рода растений, выбранного из группы, включающей Сгур1ошепа, Ап1йохап1йиш, Супобоп, Эас1уН8, РезШса, Но1сиз, Ногйеиш, Бойиш, 0гу/а, Разра1иш, Р1а1апз, РЫеиш, Роа, 8еса1е, Зогд1иш, Тпйсиш, 2еа, АшЪгоз1а, Аг1еш1з1а, А1пиз, Ве1и1а, Сагртиз, Сагуа, Саз1апеа, Согу1из, Радиз, 1ид1апз, 0з1гуа, Риегсиз, Ргахтиз, ЫдизЬиш, 01еа, 8а1зо1а, Р1ап1адо, Р1а1апиз, Ниши1из и Рапе1апа, такой как непрофилиновый аллерген, выбранный из группы, включающей

Сгу з 1, Сгу

3 2

, АпЬ

О 1

, 1

Суп

а ί,

Суп

а 7,

Суп

а 15,

Суп

. а 22м, Суп а 23,

Суп

а

2,

Бас

д

1,

Оас

д 2,

Бас

д з,

Оас д

4,

Оас д 5, Рез р 4;

Но1

1

1,

Но1

1

5,

Ног

ν 1,

Ног

V 5,

Ьо1 р

1,

Ьо1 р 2, Ьо1 р 3,

Ьо1

Р

4,

Ьо1

Р

5,

Ьо1

Р 11,

Огу

Б 1 ,

Раз п

1,

РЬа а 1, РЬа а 5,

РЬ1

Р

1,

РЬ1

Р

2,

РЬ1

Р 4,

ры

Р 5,

РЬ1 &

) б,

РЬ1 р 7, РЬ1 р 11, :

РЬ1

Р

13,	Роа р 1,	Роа р 5, Зес с 1,	Зес с 5,	Зог Ь 1,	Тгг а 15,	Тгг
а 21, Тг1 а	27, ТГ1 а 28, Тгх	а 29, Тгг	а 30, Тгг а 31, Тгг а
32,	ΤΓΪ а 33	, Тгг а 34, Тг± а	35, геа т	1, геа т	12, АтЬ	а 1,
АтЬ	а 2, АтЬ	а 3, АтЬ а 4, АтЬ	а 5, АтЬ	а б, АтЬ	а 7, АтЬ	а 9,
АтЬ	а 10, АтЬ р 5, АтЬ Ь 5, АгЬ	ν 1, АгЬ	ν 2, АгЬ	ν 3, АгЬ	ν 5,
АгЬ	ν б, 3а1	к 1, 5а1 к 2, 5а1	к 3, 3а1	к 5, А1п	д 1, А1п	д 4,
ВеЬ	ν 1, ВеЬ	ν 3, ВеЬ ν 4, ВеЬ	ν 6, ВеЬ	ν 7, Саг	Ь 1, Саг	г 1,
Саг	ί 4, Саз	з 1, Саз з 5, Саз	з 8, Саз !	з 9, Сог а 10, Рад	е 2,
Рад	Ь 2, Рад	з 1, Сид η 1, Сид	п 2, Сид	г 1, Сид	г 2, Сид	г 3,
Сид	г 4, ОзЪ	с 1, <Эие а 1, Рга	е 1, Ыд	ν 1, О1е	е 1, О1е	е 3,
О1е	е 4, О1е	е 5, О1е е 6, О1е	е 7, О1е	е 8, О1е	е 9, О1е	е 10
и О1е е 11,	Р1а 1 1, Р1а а 1,	Р1а а 2,	Р1а а 3,	Р1а ог 1,	Р1а
ог 2	Нит з	ί; Раг з 1, Раг з 2	, Раг з 4	и Раг о 1

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретения непрофилиновый аллерген происходит из продукта питания или ингредиента продукта питания рода растений, выбранного из группы, включающей Ногйеиш, 0гу/а, Зеса1е, Тпйсиш, 2еа, Лршш, Баисиз, РейозеНпиш, НеНапЫиз, ЬасШса, АгаЪЫорз1з, Вгаззюа, Зтарз1з, Сисиш1з, Радоругиш, АсйтЫа, Ве1йо11ейш, О1усте, Бепз, Биртиз, Р1азео1из, 1ид1апз, Ргадапа, Ма1из, Могиз, Ругиз, КиЪиз, /1/1р1шз, Апасагйшш, С11гиз, МапдП’ега, I л1с1ы, 1Пз1ас1а, Сарзюиш Бусорегзюоп, №сойапа, Зо1апаиш и νι'11'з. Более конкретно, содержащий профилин растительный

- 16 029009

материал содержит непрофилиновый аллерген, выбранный из группы, включающей

Ног V

12,	Ног ν 15,	Ног	ν 16, Ног ν 17, Ног ν 21, Огу з	12,	Зес с	20,
Тгх	а 12, Тгх	а 14	, Тгх а 18, Тгх а 19, Тгх а 21,	ТГХ	а 25,	Тгх
а 26, Тгх а 36, геа т 14, геа т 25, Αρί д 1, Αρί	9 2,	Αρί д	3,
Αρί	д 4, Αρί	д 5,	Αρί д б, Ьаи с 1, Раи с 4, Не1	а 3,	Ьас з	1,
Вга	3 1, Вга	η 1,	Вга о 3, Вга г 1, Вга г 2, 3ίη	а 1,	3ίη а	2,
Зхп	а 3, Зхп	а 4,	Сис т 1, Сис т 2, Сис т 3, Рад	е 2,	Асе с	5,
Αού	с 8, Асе	с 10,	Асе а 1, Асе а 2, Асе а з, Асе	а 4,	Асе а	5,
Асе	а 6, Асе	а 7,	Асе а 8, Асе а э, Асе а ю, Асе а	11, Вег е
1, :	Вег е 2, Ага й	1, Ага Й 2, Ага й 3, Ага й 4, Ага й	5, Ага й
б, .	Ага й 7, Ага й	8, Ага й 9, Ага й 10, Ага й 11,	, С1у	т 1,	О1у

т 2, О1у ш 3, С1у т 4, С1у т 5, С1у т 6з Ьеп с 1, Ьеп с 2, Ьеп с Зз Ьир ап 1 Рйа ν 3, Рхз ν 1, Рхз ν 2, Рхз ν 3, Рхз ν 4, Рхз ν 5, Рхз з 1, Рхз з 2, Ухд г 1, Ухд г 6, Сог а 1, Сог а 2, Сог а 8, Сог а 9, Сог а 11, Сог а 12, Сог а 13 и Сог а 14, Лид η 1 и Лид п 2, Лид г 1, Лид г 2, Лид г 3, Лид г 4, Рги йи 3, Рги Йи

4,	Рги аи 5	, Рги аи 6, Рга	а 1, Рга а	3, Рга	а	4, Ма1	а 1, Ма1
а	2, Ма1 а	3, Ма1 а 4, Мог	η 3, Рги аг 1, Рги	аг 3, Рги ау 1,
Рги ау 2, Рги ау 3, Рги ау	4, Рги а 3,	Рги р	1,	Рги р	2, Рги р
3,	Рги р 4,	Руг с 1, Руг с	3, Руг с 4,	Руг с	5,	ЕиЬ ί	1, ЕиЬ х
3,	Ζίζ т 1,	Апа о 1, Апа о	2, Апа о 3,	схе 1	3,	схе г	3, Схе з
1,	С1е з 2,	схе з з, ые с	1, Мап е 5,	ΡΪ3 V	1,	Ρί3 V	2, Рхз ν
3,	Рхз ν 4,	ΡΪ3 ν 5, Сар а	1м, Сар а 2,	Ьус е	1,	Ьус е	2, Ьус е
з,	Ьус е 4,	Зо1а е 1, Зо1а	е 2, Зо1а е	3, Зо1а	. е	4 и Ухе ν 1.

Типичными примерами пыльцы травы являются пыльца отряда Роа1ез, в частности, такая как пыльца семейства растений Роасеае, в частности, например, рода растений АпШохапШит, Супойоп, ΟααΙγΙΐ^, РезШса, Но1сиз, Ногйеиш, Ьойиш, 0гу/а, Разра1ит, Рйа1апз, РЫеиш, Роа, 8ееа1е, Зогдйит, Тпйеиш и 2еа. Как правило, пыльца сорной травы происходит из отряда растений Аз1ега1ез, такого как семейство Аз1егасеае, такое как род АтЬгоз1а и Аг1еш131а. Как правило, пыльца деревьев происходит из отряда растений Рада1ез (такого как семейства Ве1и1асеае (Ве1и1а, А1пиз, Сагртиз, Согу1из, 0з1гуа), Радасеае (Радиз, Онегсиз, Саз1апеа) и 1ид1апйасеае (1ид1апз и Сагуа); отряда растений Ьаш1а1ез (такого как семейство 01еасеа, такое как род 01еа); из отряда растений Рта1ез (такого как семейство Сиргеззаееае, такое как род 1ишрегиз).

Продукты питания или ингредиенты продуктов питания происходят, как правило, из отряда растений Ар1а1ез (такого как семейство Ар1асеае, такое как род Аршш и Баисиз); РаЬа1ез (такого как семейство РаЬасеае, широко известное как семейство фасоли, гороха или бобов), включая, среди прочих, С1усше тах (соя) и АгасЫз йуродаеа (арахис); Коза1ез (такого как семейство Козасеае, включающее, среди прочих, яблоки, абрикосы, сливы, вишни, персики, груши, малину и клубнику); Роа1ез (такого как семейство Роасеае, которое, среди прочих, включает ячмень, кукурузу, просо, рис и пшеницу).

Более того, содержащий профилин растительный материал может происходить из рода растений Неуеа (семейство каучуконосных растений), которые применимы для лечения иммунного ответа по типу гиперчувствительности на непрофилиновый аллерген латекса или любого содержащего латекс материала.

Следует понимать, что считается, что любой полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 60% идентичностью и/или сходством, такими как по меньшей мере 65, 70, 75, 80, 85, 90 или 95% идентичность и/или сходство, с аминокислотной последовательностью ВЕС) ΙΌ N0: 1, является пригодным для лечения иммунного ответа по типу гиперчувствительности, вызванного непрофилиновым аллергеном содержащего профилин материала, упомянутого в табл. 1, 2 или 3. Однако для обеспечения иммунологической перекрестной реактивности во время воздействия содержащего профилин растительного материала желательно, чтобы полипептид, используемый в фазу лечения (используемый в качестве индуцирующего толерантность антигена), имел аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 60% идентичностью с аминокислотной последовательностью профилина, присутствующего в содержащем профилин материале, воздействию которого подвергается индивидуум и который содержит непрофилиновый аллерген, вызывающий иммунный ответ по типу гиперчувствительности. Таким образом, полипептид по изобретению также может иметь аминокислот- 17 029009

ную последовательность, обладающую по меньшей мере 60% идентичностью и/или сходством, такими как по меньшей мере 65, 70, 75, 80, 85, 90% идентичность и/или сходство, с аминокислотной последовательностью профилина, воздействию которого подвергается индивидуум при стимуляции непрофилиновым аллергеном содержащего профилин растительного материала.

Таким образом, в предпочтительных вариантах осуществления изобретения содержащий профилин растительный материал происходит из семейства растений, выбранного из группы, включающей Роасеае, А81егасеае, Бе1и1асеае, Тадасеае, 1ид1аийасеае, О1еасеа, Лр1асеае, Козасеае и ЕирйогЫасеае, или он является их вариантом, предпочтительно, где вариант и профилин имеют аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 60% идентичностью с аминокислотной последовательностью профилина содержащего профилин растительного материала.

Таким образом, полипептид представляет собой профилин вида растений из семейства растений, выбранного из группы, включающей Роасеае, Лз1егасеае, Бе1и1асеае, Тадасеае, 1ид1аийасеае, О1еасеа, Лр1асеае, Козасеае и ЕирйогЫасеае, или их вариант, предпочтительно, где вариант и профилин имеют аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 60% идентичностью с аминокислотной последовательностью профилина содержащего профилин растительного материала, и предпочтительно, где иммунный ответ по типу гиперчувствительности вызван непрофилиновым аллергеном содержащего профилин растительного материала вида растений из семейства растений, выбранного из группы, включающей Роасеае, Лз1егасеае, Бе1и1асеае, Тадасеае, 1ид1аийасеае, О1еасеа, Лр1асеае, Козасеае и ЕирйогЫасеае.

Более конкретно, в предпочтительных вариантах осуществления изобретения полипептид представляет собой профилин вида растений из рода растений, выбранного из группы, включающей Аи1йохаи1йиш, Суиойои, Бас1уЙ8, ТезШса, Но1си8, Ногйеиш, Бойиш, Огуха, Ра8ра1иш, Рйа1ап8, Рй1еиш, Роа, Зеса1е, Зогдйиш, Тпйсиш, /еа, Аршш, Баиси8, АшЬго81а, Аг1еш181а, АгасЫз, О1усте, А1ии8, Бе1и1а, Согу1из, Тадиз, Оиегсш, О1еа, Р1аи1адо, Ма1и8, Рапе1апа, Ргиииз, Бусорегзюои и Зо1аииш, или их вариант, предпочтительно, где вариант и профилин имеют аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 60% идентичностью с аминокислотной последовательностью профилина содержащего профилин растительного материала, и предпочтительно, где иммунный ответ по типу гиперчувствительности вызван непрофилиновым аллергеном содержащего профилин растительного материала вида растений из рода растений, выбранного из группы, включающей Ап1йохап1йиш, Суиойои, Бас1уЙ8, ТезШса, Но1сиз, Ногйеиш, Бойиш, Огуха, Ра8ра1ит, Рйа1ап8, Рй1еиш, Роа, 8еса1е, Зогдйиш, Тпйсиш, /еа, Аршш, Баиси8, АшЬго81а, Аг1еш181а, Агасй18, О1усте, А1ии8, Бе1и1а, Согу1и8, Тади8, Риегси8, О1еа, Р1аи1адо, Ма1и8, Рапе1апа, Ргипи8, Бусорегеюои и 8о1аииш.

Еще более конкретно, в предпочтительных вариантах осуществления изобретения полипептид имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей ЗЕР 1Б ΝΌ: 11-43, которые представляют собой иллюстративные аминокислотные последовательности профилинов отряда Роа1е8 (ЗЕР ГО 11-15, 40), отряда Баш1а1е8 (ЗЕР ГО 16), отряда Тада1е8 (ЗЕР ГО 17), отряда Тада1е8 (ЗЕР ГО ^О: 17-18), отряда ТаЬа1е8 (ЗЕР ГО ^О: 19-20), отряда А81ега1е8 (ЗЕР ГО ^О: 21-23), отряда Ма1р1дй1а1е8 (ЗЕР ГО ^О: 24), отряда Ко8а1е8 (ЗЕР ГО ^О: 25-23), отряда А81ега1е8 (ЗЕР ГО ^О: 2123), отряда А81ега1е8 (ЗЕР ГО ΝΦ 24-31), отряда Агеса1е8 (ЗЕР ^О: 32), отряда Сагуорйу11а1е8 (ЗЕР ГО ^О: 33-35), отряда Ар1а1е8 (ЗЕР ГО ΝΌ: 36-37), отряда СисигЬйа1е8 (ЗЕР ГО ΝΌ: 38), отряда Зо1аиа1е8 (ЗЕР ГО ΝΌ: 39), отряда А8рагада1е8 (ЗЕР ГО ΝΌ: 41), отряда 7тд1Ьега1е8 (ЗЕР ГО ΝΌ: 42), или полипептид представляет собой вариант указанного профилина, как дополнительно определено ниже.

Примечательно, что ЗЕР ГО Ν^ 1-42 имеют метионин в качестве первой аминокислоты на Ν-конце (положение 1), которая может удаляться путем ферментативной деградации в клетке-хозяине, продуцирующей последовательности рекомбинантными способами. Таким образом, следует понимать, что в любой из аминокислотных последовательностей, упомянутых в настоящем описании (ЗЕР ГО Ν^ 1-42), группа метионина в положении 1 отсутствует. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления аминокислотные последовательности ЗЕР ГО Ν^ 1-42 не содержат метионина в положении 1.

Полипептид также может быть выбран из известных профилинов, таких как профилины, выбранные из группы, включающей профилин

Сгу з , РНо ά 2, Апа с 1 , Суп ά 12, Τγϊ а

12, Миз а 1, Αρί д 4, Баи с 4, АтЬ а 8, АгБ ν 4, Не1 а 2, Ага Б

8, 3ίη а 4, Ата г 2, ВеБа ν 2, СНе е 2, 5а1 к 4, АсБ ά 9, Сис т 2, Ага Н 5, О1у т 3, ВеБ ν 2, Сог а 2, О1е е 2, Ηβν Ь 8, Мег а 12, Р1а а 3, Рга а 4, Ма1 ά 4, Раг д 3, Рги βν 4, Рги с1и 4, Рги

р 4, Руг с 4, СгБ з 2, ЫБ с 1, Сар а 2, Ьус е 1

или их вариант.

Более того, в предпочтительных вариантах осуществления изобретения полипептид обладает сходством с любым из профилинов, представленных в ЗЕР ГО Ν^ 1-42, так, чтобы по меньшей мере 60%,

- 18 029009

например по меньшей мере 65, 70, 75, 80, 85, 90 и 95% аминокислотной последовательности перекрывалось с аминокислотной последовательностью профилина, выбранного из группы 8ЕО ГО N0: 1-42.

Полипептид можно использовать в его встречающейся в природе форме, включая или исключая различные изоформы, он может быть экстрагирован/выделен из содержащего профилин растительного материала, или он может быть воспроизведен с использованием биологических способов (например, рекомбинантные способы) или способов синтеза, как хорошо известно в данной области.

Таким образом, в некоторых вариантах осуществления полипептид, используемый в рамках настоящего изобретения, находится в очищенной форме и/или выделенной форме, в то время как в других вариантах осуществления полипептид по изобретению может представлять собой вариант встречающегося в природе профилина из содержащего профилин растительного материала, упомянутого в настоящем описании. Например, исходный полипептид (встречающийся в природе полипептид) может быть модифицированным ввиду ненадлежащей растворимости, биодоступности, безопасности, токсикологии или стабильности, например, любым химическим и/или биологическим способом.

Типичными примерами химических модификаций являются Ν- или О-связанное гликозилирование или дериватизация Ν-конца или тиольных групп. Типичными примерами биологических модификаций являются посттрансляционные модификации, например, такие как гликозилирование, ацетилирование, алкилирование (метилирование, этилирование), биотинилирование, глутамилирование, глицилирование, изопренилирование, липоилирование, фосфопантетеинилирование, фосфорилирование, сульфатирование, селенирование и С-концевое амидирование. Полипептид также может быть модифицирован посредством обработки формальдегидом или глутаральдегидом.

Главным образом, должно быть понятно, что термин "вариант" или "варианты" относится к полипептидам, которые содержат модификации/мутации по сравнению с аминокислотной последовательностью "исходного полипептида", который считается встречающимся в природе профилином из содержащего профилин растительного материала, упомянутого в настоящем описании, или по меньшей мере полипептидом, имеющим/содержащим аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 1 или альтернативно 5>Е0 ГО N0: 2-42.

Таким образом, настоящее изобретение охватывает применение полипептидных вариантов и производных любой аминокислотной последовательности полипептида, как определено в настоящем описании, в частности, полипептидных вариантов и производных 8Е0 ГО N0: 1-10 или 8Е0 ГО N0: 11-42, как определено ниже.

Варианты полипептидов по изобретению могут иметь модификации модификации/мутации, такие как инсерции, замены, делеции, дупликации, инсерции-делеции, сдвиги рамки считывания, трансверсии, укорочения и/или инверсии в одном или нескольких положениях в исходном полипептиде, например, где одна аминокислота или несколько аминокислот, как, например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 аминокислот исходного полипептида, были подвергнуты замещению, делеции, дупликации, инсерции-делеции, сдвигу рамки считывания, трансверсиям, укорочениям и/или инверсиям, предпочтительно, где количество аминокислот в аминокислотной последовательности варианта полипептида находится в диапазоне от 50 до 150%, например в диапазоне от 75 до 125% от количества аминокислот исходного полипептида.

Нативные профилины обычно содержат аминокислотную цепь длиной приблизительно от 120 до 170 аминокислот, как правило, приблизительно от 130 до 135 аминокислот. Молекулярная масса, как правило, составляет приблизительно 14-16 кДа. Считается, что полипептид (исходный полипептид, а также его вариант) имеет длину аминокислотной цепи в диапазоне от 65 до 195 аминокислот, например от 70 до 190; от 75 до 185; от 80 до 180; от 85 до 175; от 90 до 170; от 95 до 165; от 100 до 160; от 105 до 155; от 110 до 150; от 115 до 145; от 120 до 140 аминокислот.

Таким образом, иллюстративные варианты полипептидов могут представлять собой варианты с заменой, варианты с делецией, варианты с дупликацией, варианты с инсерцией, варианты с инсерциейделецией, варианты со сдвигом рамки считывания, варианты с трансверсией, варианты с укорочением и/или варианты с инверсией или любые другие подходящие варианты, предпочтительно, где количество аминокислот в аминокислотной последовательности варианта полипептида находится в диапазоне от 50 до 150%, например в диапазоне от 55 до 145%, от 60 до 140%, от 65 до 135%, от 70 до 130%, от 75 до 125%, от 80 до 120%, от 85 до 115% или от 90 до 110% или 95-105% по сравнению с количеством аминокислот в исходном полипептиде.

Вариант полипептида может представлять собой полипептид, имеющий определенную процентную идентичность и/или сходство, например, 60, 65, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичность аминокислотной последовательности с 8ЕО ГО N0: 1 или альтернативно 8ЕО ГО N0: 2-42.

Выравнивание последовательностей представляет собой способ размещения последовательностей ДНК, РНК или белка так, чтобы последовательности можно было сравнивать. Таким образом, является возможной идентификация областей идентичности, сходства или гомологии. Идентичность, сходство или гомология могут быть следствием функциональных, структурных или эволюционных взаимосвязей между последовательностями, или они могут быть совпадением.

- 19 029009

В коммерчески доступных компьютерных программах для определения идентичности последовательностей используются комплексные алгоритмы сравнения для выравнивания двух или более последовательностей, которые наилучшим образом отражают эволюционные события, которые могли привести к различию(ям) между двумя или более последовательностями. Таким образом, эти алгоритмы функционируют с оценочной системой, поощряющей выравнивание идентичных или сходных аминокислот и штрафующей за вставку пропусков, продолжение пропусков и выравнивание несходных аминокислот. Оценочная система алгоритмов сравнения включает: ί) присвоение штрафа каждый раз, когда встраивается пропуск (штраф за пропуск), ίί) присвоение штрафа каждый раз, когда существующий пропуск удлиняется на дополнительное положение (штраф за продолжение пропуска), ίίί) присвоение высоких баллов при выравнивании идентичных аминокислот и ίν) присвоение варьирующих баллов при выравнивании неидентичных аминокислот.

Большинство программ выравнивания позволяют модификацию штрафов за пропуск. Однако при использовании такого программного обеспечения для сравнения последовательностей предпочтительно использовать величины по умолчанию. Баллы, присваиваемые за выравнивание неидентичных аминокислот, присваивают в соответствии с оценочной матрицей, также называемой матрицей замен. Баллы, предоставленные в таких матрицах замен, отражают тот факт, что вероятность замены одной аминокислоты другой аминокислотой во время эволюции варьирует и зависит от физической/химической природы аминокислоты, подлежащей замене. Например, вероятность замены полярной аминокислоты другой полярной аминокислотой является более высокой по сравнению с заменой гидрофобной аминокислотой. Таким образом, оценочная матрица будет присваивать наиболее высокий показатель для идентичных аминокислот, более низкий показатель для неидентичных, но сходных аминокислот и еще более низкий показатель для неидентичных и несходных аминокислот. Программы могут быть найдены на ΙιΙιΙΙρ/: исЫ. ηΐιη.ηίΐι. §ον.

После проведения выравнивания программным обеспечением можно вычислить сходство последовательностей и идентичность последовательностей. Программное обеспечение, как правило, осуществляет это в качестве части сравнения последовательностей и генерирует числовой результат. При визуальном сравнении можно использовать диаграмму Венна. Диаграмма иллюстрирует, какие аминокислоты принадлежат к какой группе или подгруппе и, таким образом, обладают одним или несколькими сходными свойствами (структурными или химическими). Предпочтительно идентичность и сходство аминокислот вычисляют по полноразмерной аминокислотной последовательности или в случае нуклеиновой кислоты по соответствующему полинуклеотиду, который кодирует соответствующую полноразмерную аминокислотную последовательность.

Например, идентичность и сходство последовательностей можно определять путем сравнения двух выровненных аминокислотных последовательностей на протяжении окна сравнения, предпочтительно путем сравнения полноразмерных аминокислотных последовательностей, где вариант полипептида может содержать вставки или делеции (например, пропуски или выступающие концы) по сравнению с исходным полипептидом для оптимального выравнивания двух последовательностей. Процентную идентичность вычисляют путем определения количества положений, в которых в обеих последовательностях находится идентичная аминокислота, с получением количества совпавших положений, деления количества совпавших положений на общее количество аминокислот в окне сравнения и умножения результата на 100 с получением процента идентичности последовательностей.

Оптимальное выравнивание последовательностей для сравнения можно проводить с помощью компьютерных воплощений алгоритмов (СЛР, ВЕ8ТР1Т, ВЬАЗТ, РА8ТА и ТРА8ТА) или путем визуального исследования. Учитывая, что для сравнения было идентифицировано две последовательности, САР и ВЕ8ТР1Т предпочтительно используют для проведения их оптимального выравнивания. Как правило, используют величины по умолчанию, составляющие 5,00 для веса пропуска и 0,30 для веса продолжения пропуска.

Когда модификация/мутация представляет собой замену (вариант с заменой), замена может быть консервативной (в той же группе или подгруппе), или она может быть неконсервативной (между группами или подгруппами). Замены могут приводить к молчащему изменению и приводить к функционально эквивалентному полипептиду. Можно вносить преднамеренные аминокислотные замены, исходя из сходства, т.е. замены подобного на подобное, такой как замены основной на основную, кислотной на кислотную, полярной на полярную и т.д.

Также может происходить неконсервативная замена, т.е. с одной группы или подгруппы остатков на другую или альтернативно вовлекающая включение неприродных аминокислот, таких как орнитин (далее обозначаемый как Ζ), диаминомасляная кислота-орнитин (далее обозначаемый как В), норлейцинорнитин (далее обозначаемый как 0), пириилаланин, тиенилаланин, нафтилаланин и фенилглицин. Что касается консервативных и сходных замен, таблица на основе диаграммы Венна может быть найдена в табл. 6, в которой аминокислоты распределены в соответствии со сходством их структурных и функциональных характеристик на группы (полярные/гидрофобные/небольшие) и подгруппы (ароматические/алифатические/заряд/очень маленькие или нет). Замены считаются консервативными, если замена находится между аминокислотами одной и той же группы, и сходными, если замена находится между

- 20 029009

аминокислотами одной и той же подгруппы (но не той же группы), как указано в табл. 7. То, должна ли замена находиться в группе или только в подгруппе, чтобы быть консервативной или сходной заменой, зависит от положения в структуре белка. Это зависит от того, находится ли конкретная аминокислота в области или положении, имеющих особую важность, или нет, например сворачивание, участок связывания, активный центр. Квалифицированный специалист учтет использование руководства по заменам, представленного в табл. 7, в качестве первого выбора и применит руководство, предоставленное в табл. 8, при дальнейшей попытке.

Далее положение(я) и замены приведены в отношении 8Е0 ГО N0: 1, если нет иных указаний. Эквивалентные положения в другой последовательности могут быть найдены путем выравнивания этой последовательности с 8Е0 ГО N0: 1 для проведения выравнивания с наиболее высокой процентной идентичностью, а затем определения того, какая аминокислота выравнивается с и/или соответствует аминокислоте в соответствующем положении 8Е0 ГО N0: 1. Такое выравнивание и использование одной последовательности в качестве первого эталона является обычным действием для специалиста в данной области и не должно ограничивать объем изобретения.

Авторы настоящего изобретения открыли, что известные профилины растений обладают высокой степенью идентичности последовательностей в положениях, соответствующих положениям 71-127 8Е0 ГО N0: 1. Для простоты указания эту часть последовательности обозначают как 8Е0 ГО N0: 43. Таким образом, полипептид в соответствии с изобретением обладает по меньшей мере 60%, предпочтительно по меньшей мере 65, 70, 75% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0: 1 и по меньшей мере 80%, предпочтительно 85, 90%, более предпочтительно по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0: 43.

В одном варианте осуществления вариант полипептида по изобретению включает варианты, где одна и вплоть до 25 аминокислот добавлена/добавлены или удалены относительно 8Е0 ГО N0: 1.

В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида по изобретению имеет аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 1, где заменено любое количество аминокислот в диапазоне от 1 до 25.

В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида по изобретению имеет аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 1, где заменено любое количество аминокислот в диапазоне от 1 до 12.

В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида по изобретению имеет аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 1, где заменено любое количество аминокислот в диапазоне от 3 и 9.

В следующих вариантах осуществления заменено по меньшей мере две, например по меньшей мере три, например по меньшей мере пять аминокислот 8Е0 ГО N0: 1.

Профилины из трех различных источников (растения, млекопитающие, низшие эукариоты) были проанализированы и сравнены в статье "1Не сгу51а1 51гис1иге оГ а та)ог а11егдеп Ггот р1ай8", ТНогп е1 а1. (1997), было идентифицировано 18 аминокислот, которые являются консервативными в 80% из 35 проанализированных последовательностей профилина. Что касается 8Е0 ГО N0: 1, аминокислоты К87 и О113 вовлечены в связывание актина, аминокислоты ^3, Υ6, 125, О27, \У33, А34, Υ125 и Ь126 вовлечены в связывание поли-Ь-пролина (РЬР), и аминокислоты А23, А24, Е46, О64, О69 и Т97 вовлечены в сохранение укладки.

Таким образом, в одном варианте осуществления изобретения вариант полипептида по изобретению обладает по меньшей мере 60%, предпочтительно по меньшей мере 65 или 70% и более предпочтительно по меньшей мере 75, 80, 85 и 90% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0: 1 и содержит аминокислоты, соответствующие К87 и О113 8Е0 ГО N0: 1. Преимущество таких вариантов состоит в том, что при очистке варианта полипептида можно использовать участок связывания актина.

В другом варианте осуществления вариант полипептида по изобретению обладает по меньшей мере 60%, предпочтительно по меньшей мере 65 или 70% и более предпочтительно по меньшей мере 75, 80, 85 и 90% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0: 1 и содержит аминокислоты, соответствующие ^3, Υ6, 125, О27, \У33, А34, Υ125 и Ь126 8Е0 ГО N0: 1. Преимущество таких вариантов состоит в том, что для очистки варианта полипептида можно использовать участок связывания РЬР.

В другом варианте осуществления вариант полипептида по изобретению обладает по меньшей мере 60%, предпочтительно по меньшей мере 65 или 70% и более предпочтительно по меньшей мере 75, 80, 85 и 90% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0: 1 и содержит аминокислоты, соответствующие А23, А24, Е46, О64, О69 и Т97 8Е0 ГО N0: 1. Преимущество таких вариантов состоит в том, что сохраняется укладка.

В одном варианте осуществления изобретения вариант полипептида по изобретению обладает по меньшей мере 60%, предпочтительно по меньшей мере 65 или 70% и более предпочтительно по меньшей мере 75, 80, 85 и 90% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0: 1 и содержит аминокислоту, выбранную из А, О или 8 (очень маленькие аминокислоты) в положении, соответствующем положению 13 и/или 115 8Е0 ГО N0: 1. Предпочтительный вариант полипептида по изобретению содержит А в положении, соответствующем положению 13 и/или 115 8Е0 ГО N0: 1. Другой предпочтительный вариант полипептида по изобретению содержит 8 в положении, соответствующем положению 13 и/или 115 8Е0

- 21 029009

ΙΌ N0: 1.

В другом варианте осуществления изобретения вариант полипептида по изобретению обладает по меньшей мере 60%, предпочтительно по меньшей мере 65 или 70% и более предпочтительно по меньшей мере 75, 80, 85 и 90% идентичностью последовательности с 8ЕО ГО N0: 1 и имеет все остатки цистеина исходного полипептида, замененные одной из других очень маленьких аминокислот А, О или 8.

Известно, что замена триптофана (А) часто оказывает значительное влияние на белок. Таким образом, предпочтительный вариант полипептида по изобретению обладает по меньшей мере 60%, предпочтительно по меньшей мере 65 или 70% и более предпочтительно по меньшей мере 75, 80, 85 и 90% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0: 1 и содержит аминокислоты, соответствующие А3 и \У33 8Е0 ГО N0: 1. Примечательно, что присутствие триптофана является важным, поскольку такие полипептиды могут обладать флуоресценцией, что упрощает аналитическую работу.

При выравнивании последовательностей с 8Е0 ГО N0: 1-42 по изобретению с использованием, например, программы ВЬА8Т, можно наблюдать некоторые определенные консервативные замены среди различных профилинов. Типичные примеры положений в отношении 8Е0 ГО N0: 1, которые могут подвергаться изменению аминокислот, представлены в табл. 5. Таким образом, любая аминокислота, упомянутая в столбце "изменение аминокислот" является типичным примером аминокислот, которые могут заменять аминокислоту исходного полипептида (8Еф ГО N0: 1) для получения их варианта.

Второй аспект изобретения относится к полипептиду, имеющему аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10, где 1 или 2 остатка цистеина заменены аминокислотой, выбранной из А, О или 8, либо одной и той же аминокислотой, заменяющей оба остатка цистеина, либо различными аминокислотами. Такие варианты могут быть менее подверженными окислению и, таким образом, менее склонными к димеризации, полимеризации и формированию агрегатов. Такие полипептиды можно получать рекомбинантными способами или альтернативно синтезировать.

В частности, предусматривается вариант полипептида 8Е0 ГО N0: 1 или альтернативно 8Еф ГО N0: 2-10, где по меньшей мере 1, 2 или все из остатков цистеина заменены аминокислотой, выбранной из А, О или 8. В частности, этот вариант полипептида имеет аминокислотную последовательность 8Еф ГО N0: 1, но где аминокислота цистеин в положении 13 и/или 115 заменена аминокислотой, выбранной из группы, включающей А (аланин), О (глицин) и 8 (серин), чтобы получить варианты С13А, С115А, С13О, С115О, С138, С1158 и их смеси, такие как С13А и С1158. Типичный пример такого варианта имеет аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 44 (два остатка цистеина заменены серином, т.е. С138, С1158) или 45 (два остатка цистеина замещены аланином, т.е. С13А, С115А), предпочтительно, где метионин отсутствует в положении 1, или, по меньшей мере, присутствует только в 5% полипептидов, полученных рекомбинантными способами.

Преимущественно такие полипептиды 8Еф ГО N0: 44 и 45 являются стабильными, в частности, в отношении аутоокисления и агрегации. Кроме того, такие полипептиды могут связывать актин человека в меньшей степени, чем нативный РЬ1 р 12.

Более того, третичная структура полипептида, имеющего 8Е0 ГО N0: 45, была более стабильной, чем у полипептида, имеющего 8Е0 ГО N0: 44. Таким образом, замена цистеина на аланин стабилизирует молекулярную структуру в большей степени, чем замена на серин.

Предусматривается, что вариант 8Е0 ГО N0: 44 и 45 с заменой цистеина в дополнение к использованию в неспецифической иммунотерапии (неспецифическая толерантность), также можно использовать в специфической иммунотерапии аллергеном, где иммунный ответ по типу гиперчувствительности вызывается аллергенным профилином содержащего профилин растительного материала или аллергеном, перекрестно реагирующим с 1дЕ-антителами, специфичными к указанному профилину. Примечательно, в таких вариантах осуществления индивидуум обычно сенсибилизируется к профилину.

В качестве белкового антигена полипептид может обладать иммуногенными свойствами и может распознаваться иммунной системой индивидуума как чужеродный. Таким образом, полипептид по изобретению представляет собой иммуногенный полипептид. Он может индуцировать специфические 1дОантитела, 1дМ-антитела или 1дА-антитела, способные связываться, образовывать комплексы или иным образом ассоциировать с полипептидом.

Профилин обычно характеризуется способностью связывать поли-Ь-пролин. Например, это свойство преимущественно используют для очистки/выделения профилинов из содержащих профилин материалов, так что их экстракт, например их водный экстракт, добавляют к аффинным хроматографическим гранулам из поли-Ь-Рго, таким как агарозные гранулы с иммобилизованным на них поли-Ь-пролином. Связывание является прочным, и, как правило, по меньшей мере 6М мочевина требуется для элюирования связанного профилина с колонки. Как правило, профилин элюируют с колонки с 6-8М мочевиной, ренатурируют посредством диализа против буфера с низкой ионной силой без мочевины и, необязательно, далее отделяют от других компонентов экстракта посредством катионообменной/анионообменной хроматографии и/или гель-фильтрации (АтпиаусНее^а апб Сои/а1е/ бе Мера, 2010 и У1баЕ е! а1, 1995). Тот же способ можно использовать для очистки полипептида по изобретению, полученного рекомбинантными способами.

Профилин может быть далее охарактеризован по его способности связывать актин. Профилин свя- 22 029009

зывается с мономерным актином (О-актин), тем самым оккупируя участок контакта актин-актин, результатом чего является секвестрация О-актина из совокупности мономерного актина и последующее предотвращение полимеризации актина (с образованием Р-актина). Таким образом, в смеси актина, профилина и нуклеотидов (ΑΌΡ и АТР), актин полимеризуется до определенной степени, что можно оценивать с помощью закона действия масс. Способность полипептида ассоциировать с актином, таким как актин человека или растений, можно исследовать путем исследования включения О-актина (предпочтительно меченного флуоресцентной меткой) в полипептиде в присутствии Р-актина, поскольку совокупность Рактина и совокупность О-актина можно разделять центрифугированием. Коммерческие наборы для исследования связывания актина доступны от СуЮ5ке1еЮп 1пс. Альтернативно, полипептид можно связывать с гранулами из поли-Ь-пролинсефарозы и инкубировать с О-актином, и концентрацию несвязанного О-актина можно определять в супернатанте. Дополнительные детали анализов связывания актина могут быть найдены в научных статьях Ьц и Ро11атй (2001) и Ресййеипег и 21§топй (1993). Полипептид по изобретению предпочтительно связывается или ассоциирует с актином растений, но не с актином человека.

Полипептид для применения в рамках настоящего изобретения, включая вариант полипептида, можно получать способами рекомбинантных ДНК в соответствии с известными в данной области способами. В качестве клеток-хозяев можно использовать любую генетически модифицированную клетку, которая содержит либо нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид по изобретению, либо экспрессирующий вектор, такой как генетически модифицированная эукариотическая (такая как дрожжи Р1сЫа) или неэкукариотическая клетка (такая как Е. сой). В одном варианте осуществления клетка-хозяин представляет собой бактериальную клетку, предпочтительно Е. сой. Преимущество использования бактериальных клеток состоит в том, что бактериальные клетки не продуцируют профилины естественным образом. Таким образом, профилин является гетерологичным для бактериальных клеток. В частности, он является гетерологичным для Е. сой. Таким образом, очистка/выделение рекомбинантного полипептида не осложняется мешающими нативными белками.

Иллюстративными штаммами Е. сой, пригодными для продукции полипептида по изобретению, являются ВЙ21(ОЕ3). ВЬ21(ОЕ3)р1у8§ или Во5е11а(ОЕ3)р1у55> (все из них коммерчески доступны от N0νΑΟΕΝ) или ВЬ21(ПЕ3)§о1й (коммерчески доступный от ЛдПеШ Тесйпо1од1е§).

После продукции полипептида в клетке-хозяине с использованием соответствующих плазмид и кДНК, полипептид выделяют путем отделения клетки(-ок) от бульона во время или после ферментации так, что полипептид остается в бульоне. Полипептид можно далее очищать из бульона так, чтобы он был по существу свободен от других компонентов культуральной среды, в которой он был продуцирован, любыми подходящими способами, предпочтительно хроматографическими способами (например, аффинная хроматография, эксклюзионная хроматография, анионнобменная или катионообменная хроматография, необязательно в комбинации с диализом).

Способ обнаружения/предоставления полипептида по изобретению.

В соответствии с представляющим интерес аспектом изобретения, предусматривается способ обнаружения, а также предоставления полипептида по изобретению. Целью является обнаружение полипептидов, которые наиболее вероятно будут присутствовать в органе-мишени одновременно с непрофилиновым аллергеном.

Аспект относится к способу скрининга полипептида (например, профилина), пригодного для применения в рамках настоящего изобретения, включающему: ί) экстракцию содержащего профилин растительного материала в водном растворе, имеющем рН в диапазоне 6-8, в течение периода в диапазоне от 1 до 30 мин; и) скрининг экстракта в отношении содержания непрофилинового аллергена и профилина; ίίί) необязательно выделение профилина и ίν) необязательно идентификацию профилина; где, когда экстракт содержит как непрофилиновый аллерген, так и профилин, указанный профилин может быть выбран в качестве полипептида для применения в соответствии с настоящим изобретением.

После идентификации профилина профилин или вариант, идентифицированные в настоящем описании, можно продуцировать рекомбинантными способами, хорошо известными в данной области.

Таким образом, следующий аспект изобретения относится к способу получения полипептида (например, профилина), пригодного в рамках настоящего изобретения, включающему: ί) экстракцию содержащего профилин растительного материала в водном растворе, имеющем рН в диапазоне 6-8, в течение периода времени в диапазоне от 1 до 30 мин; и) скрининг экстракта в отношении содержания непрофилинового аллергена и профилина; ίίί) идентификацию профилина, необязательно, где профилин является выделенным; и νί) необязательно продуцирование полипептида или его варианта рекомбинантными способами, где, когда экстракт содержит как непрофилиновый аллерген, так и профилин, указанный профилин может быть выбран в качестве полипептида для применения в соответствии с настоящим изобретением, и указанный профилин может быть далее модифицирован для получения его варианта.

В следующих аспектах изобретение относится к способу получения полипептида (например, профилина), пригодного для применения для лечения с помощью неспецифической толерантности иммунного ответа по типу гиперчувствительности, вызванного непрофилиновым аллергеном содержащего профилин растительного материала, включающему выделение иммуногенного полипептида из указанного содержащего профилин растительного материала или рекомбинантную продукцию указанного имму- 23 029009

ногенного полипептида, где указанный иммуногенный полипептид идентифицирован в и необязательно выделен из экстракта, полученного путем суспендирования содержащего профилин растительного материала в водном растворе, имеющем рН в диапазоне 6-8, в течение периода времени, находящегося в диапазоне от 1 до 30 мин. Предпочтительно экстракт также содержит непрофилиновый аллерген указанного содержащего профилин растительного материала, т.е. непрофилиновый аллерген, коэкстрагированный с иммуногенным полипептидом.

Его следующие аспекты относятся к полипептиду (например, профилину), пригодному для применения для лечения с помощью неспецифической толерантности иммунного ответа по типу гиперчувствительности, вызванного непрофилиновым аллергеном содержащего профилин растительного материала, получаемого способом, включающим выделение иммуногенного полипептида из указанного содержащего профилин растительного материала или рекомбинантное продуцирование указанного иммуногенного полипептида, где указанный иммуногенный полипептид идентифицирован в и необязательно выделен из экстракта путем суспендирования содержащего профилин растительного материала в водном растворе, имеющем рН в диапазоне 6-8, в течение периода времени в диапазоне от 1 до 30 мин. Предпочтительно экстракт также содержит непрофилиновый аллерген указанного содержащего профилин растительного материала, т.е. непрофилиновый аллерген, коэкстрагированный с иммуногенным полипептидом.

Иными словами, полипептид по изобретению (например, профилин) совместно экстрагируется с непрофилиновым аллергеном содержащего профилин растительного материала при экстракции содержащего профилин растительного материала в водном растворе, имеющем рН в диапазоне 6-8, в течение периода времени в диапазоне от 1 до 30 мин. Более того, подчеркивается, что полипептид по изобретению (например, профилин) можно получать способом, включающим выделение профилина из указанного содержащего профилин растительного материала или рекомбинантное продуцирование указанного профилина, где указанный профилин идентифицирован в экстракте, полученном суспендированием содержащего профилин растительного материала в водном растворе, имеющем рН в диапазоне 6-8, в течение периода времени в диапазоне от 1 до 30 мин.

Экстракцию можно проводить в условиях, имитирующих физиологические условия органамишени, например в физиологических условиях, присутствующих в назальной жидкости. Таким образом, раствор для экстракции представляет собой, по существу, водный раствор, имеющий рН в диапазоне 5,5-8,5, например в диапазоне 6-8, предпочтительно приблизительно рН 7, и осмолярность предпочтительно соответствует осмолярности раствора 0,90% мас./об. №С1, имеющего приблизительно 300 мОсм/л. Температура экстракции предпочтительно находится в диапазоне от 2 до 40°С. Водный раствор предпочтительно содержит по меньшей мере 60% воды, например предпочтительно по меньшей мере 70, 75, 80, 85, 90 и 95% воды. Кроме того, водный раствор может содержать неводные смешивающиеся с водой жидкости, такие как низшие алканолы (например, имеющие от 1 до 6 атомов углерода; такие как этанол, пропанол), арилалканолы (например, имеющие от 5 до 10 атомов углерода в кольцах; такие как бензиловый спирт), полиолы (например, имеющие от 2 до 6 атомов углерода; такие как глицерин, пропиленгликоль или сорбит), н-метилпирролидон, полиалкиленгликоли (например, полиэтиленгликоль, пропиленгликоль и т.п.), полиглицерин, триацетин, диметилацетимид и диметилсульфоксид.

Для контроля рН водный раствор можно забуферивать, например, путем добавления буферного агента/системы, таких как аскорбиновая кислота, лимонная кислота, системы носителей на основе фосфатного буфера, ТК18 (трис(гидроксиметил)аминометан), карбонат аммония, и где желаемого значения рН необязательно достигают посредством добавления нескольких капель НС1 или №ЮН. Таким образом, водный раствор может содержать буферное средство, такое как аскорбиновая кислота, лимонная кислота, системы носителей на основе фосфатного буфера, ТК18, буферная система карбонат аммония/гидрокарбонат аммония.

Для контроля осмолярности/ионной силы, к водному раствору можно добавлять изотонические носители, например, для обеспечения осмолярности, соответствующей физиологическим условиям в органе-мишени. Таким образом, водный раствор дополнительно может содержать средство, обеспечивающее осмолярность, такое как борная кислота, хлорид натрия, хлорид калия, цитрат натрия, ацетат натрия и т.п. Как правило, ионная сила находится в диапазоне от 10 до 1000 мМ, например предпочтительно в диапазоне от 20 до 800 мМ, таком как от 20 до 500 мМ, например от 50 до 500 мМ, например от 20 до 400 мМ, например от 50 до 400 мМ, например от 20 до 300 мМ, например от 50 до 300 мМ. Более предпочтительно ионная сила находится в диапазоне от 150 до 180 мМ, например приблизительно от 160 до 170 мМ. Предпочтительно осмолярность находится в диапазоне от 50 до 600 мОсм/л, например в диапазоне от 50 до 500 мОсм/л, например в диапазоне от 100 до 400 мОсм/л, например приблизительно 300 мОсм/л.

Более того, вязкость можно корректировать посредством добавления гелеобразующих агентов, таких как вещества на основе алкилцеллюлозы (например, карбоксиметилцеллюлоза, карбоксиэтилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, гидроксипропилэтилцеллюлоза и т.д.), карбопол, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон и изопропилмиристат.

Типичным примером забуференного водного раствора является буфер РВ8, имеющий рН 7,2 и ионную силу (μ) 165,8 мМ (»0,17М) и состоящий из хлорида натрия (№С1) в количестве 8 г/л (137 мМ), хло- 24 029009

рида калия (КС1) в количестве 0,2 г/л (2,7 мМ), гидрофосфата натрия (№₂НРО₄, 2Н₂О) в количестве 1,44 г/л (8,2 мМ), гидрофосфата калия в количестве 0,2 г/л (1,5 мМ), полученное значение рН составляет 7,2, и полученная общая ионная сила (μ) составляет 165,8 мМ («0,17 М).

Считается вероятным, что профилин, который может коэкстрагироваться с непрофилиновым аллергеном в течение короткого периода времени экстракции, является пригодным в качестве полипептида по изобретению, поскольку это указывает на то, что полипептид может совместно элюироваться с непрофилиновым аллергеном в органе-мишени. Поскольку содержащий профилин растительный материал может находиться в эпителии/слизистой оболочке органа-мишени только в течение короткого периода времени до выведения посредством физиологических процессов, считается еще более предсказательным использование времени экстракции менее 30 мин, например менее 20 мин, более предпочтительно менее 15, 10, 8, 7, 6, 5, 3 и 2 мин. Более того, экстракцию можно проводить при температурах в диапазоне от 15 до 45°С, более предпочтительно в диапазоне 18-37°С, например при физиологической температуре или ниже, например при комнатной температуре. Однако в случае проблем со стабильностью экстракцию можно проводить при более низких температурах, например при температурах ниже 10°С, таких как приблизительно 3-5°С.

После завершения экстракции экстракт подвергают скринингу в отношении содержания непрофилинового аллергена и профилина способами, хорошо известными в данной области. Как правило, получают несколько экстрактов, имеющих различную продолжительность экстракции (такую как 2, 5, 10 и 20 мин) или альтернативно проводят взятие нескольких образцов из того же раствора для экстракции в различные моменты времени (такие как 2, 5, 10 и 20 мин), и эти образцы подвергают иммунологическим способам, таким как С1Е (перекрестный иммунный электрофорез), ΚΙΕ (ракетный иммуноэлектрофорез), 808-Раде (полиакриламидный гель-электрофорез с додецилсульфатом натрия), ЕБ18А (твердофазный иммуноферментный анализ) и/или М8 (масс-спектрометрия).

Более того, профилин может быть распознан по его способности связывать актин и/или РЬР. Иммунногенные профилины могут быть выявлены посредством проведения С1Е с поликлональными антителами, индуцированными у кроликов, против очищенного экстракта содержащего профилин растительного материала. Также С1Е можно получать с использованием поликлональных антител, индуцированных против известного профилина, упомянутого в настоящем описании, такого как РЫ р 12, (8Ер ГО N0: 1-10), чтобы идентифицировать иммуногенные полипептиды, реагирующие с антителами, специфичными к известному профилину, и, таким образом, иммуногенный полипептид, подходящий под определение полипептида с иммунологической перекрестной реактивностью в отношении известного профилина. Аллергены можно обнаруживать путем проведения С1Е с сывороткой от индивидуума, аллергичного/сенсибилизированного к непрофилиновому аллергену указанного содержащего профилин растительного материала. Детальное описание и протоколы способов С1Е и других иммунологических способов могут быть найдены в главе 13 (иммуноэлектрофорез для охарактеризации экстрактов аллергена, авторы Сше ^гйзкоу Напзеп апб 1нгдеп №йегдаагй Багзеп) книги А11егду МеЫойз апб Рго1:осо18 (МеЫойз т Мо1еси1аг МеЫсте), Реппу Бутрапу (2008); Ι8ΒΝ: 9780896038967.

Таким образом, полипептид по изобретению способен связываться с антителами, индуцированными против профилина, выбранного из профилина

такими как антитела, индуцированные против полипептида, имеющего 8ЕР ГО N0: 1 или альтернативно 8ЕР ГО N0: 2-42. Антитела могут быть поликлональными или моноклональными, и, как правило, они индуцируются у кроликов.

После идентификации профилина, который коэкстрагируется с непрофилиновым аллергеном, таким как предпочтительно основной аллерген, который не является профилином, профилин может быть далее охарактеризован либо прямо в том же экстракте, либо после выделения и необязательно очистки способами, хорошо известными в данной области.

Например, профилин можно выделять с использованием поли-Б-пролина, например, используемых при проведении аффинной хроматографии гранул на основе поли-Б-Рго, таких как поли-Б-пролин, иммобилизованный на агарозных гранулах, или другими хроматографическими способами, известными в данной области, среди прочих эксклюзионной хроматографией, обращенно-фазовой хроматографией, анионообменной/катионообменной хроматографией или их комбинацией.

После выделения профилина его можно далее анализировать для установления аминокислотной последовательности способами, известными в данной области, такими как секвенирование аминокислот

- 25 029009

и/или масс-спектрометрия, необязательно с последующим расщеплением полипептида протеолитическими ферментами, такими как трипсин.

Наконец, после идентификации встречающегося в природе профилина аминокислотную последовательность можно модифицировать для получения ее варианта (полипептидный вариант, как описано выше), такого как вариант с заменой на цистеин, и получения варианта или исходного (природного) профилина рекомбинантными способами, хорошо известными в данной области.

Составы.

Когда полипептид проявляет плохую устойчивость к желудочному соку, полипептид предпочтительно вводят в форме, обеспечивающей избегание контакта с желудочным соком, например в форме, препятствующей деградации неродственного антигена в желудочном соке. Это может быть осуществлено путем включения неродственного антигена в фармацевтические составы, устойчивые к желудочному соку, или путем включения других фармацевтических способов доставки, способных предотвратить деградацию белков в желудочном соке.

Полипептид по изобретению можно составлять вместе с терапевтически неактивными ингредиентами и/или модифицирующими иммунитет агентами, такими как адъюванты. Как правило, состав представляет собой твердую дозированную форму, такую как таблетка для быстрого рассасывания, или жидкость, включающую раствор, суспензию, дисперсию, желатинизированную жидкость. Альтернативно, состав представляет собой эмульсию или повторно растворяющийся порошок, гранулят или лиофилизат, которые можно растворять перед введением с получением жидкости.

Эксципиенты для применения в составах хорошо известны специалисту в данной области и включают растворители, эмульгаторы, смачивающие вещества, пластификаторы, красители, наполнители, консерванты, корректирующие вязкость средства, буферные средства, корректирующие рН средства, обеспечивающие изотоничность средства, мукоадгезивные вещества и т.п. Примеры стратегий составления хорошо известны специалисту в данной области.

Адъювант может представлять собой любой общепринятый адъювант, включая кислородсодержащие соли металлов, например гидроксид алюминия, хитозан, термостабильный энтеротоксин (ЬТ), холерный токсин (СТ), субъединицу В холерного токсина, (СТВ), полимеризованные липосомы, мутантные токсины, например ЬТК63 и ЬТК72, микрокапсулы, интерлейкины (например, ГО-1 ВЕТА, 1Ь-2, 1Ь-7, 1Ь12, ЮТСАММА), СМ-С8Р, производные МЭР, олигонуклеотиды СрС, ЬР8, МРЬ, фосфофазены, Аб|иРНок(К), глюкан, антигенный состав, липосомы, ΌΌΕ, ЭНЕЛ, ЭМРС, ЭМРС, комплекс Э0С/квасцы, неполный адъювант Фрейнда, 18С0Мк(К), пероральный адъювант ЬТ, мурамилдипептид, монофосфориллипид А, мурамилпептид и фосфатидилэтаноламин.

Варианты осуществления изобретения, которые можно комбинировать в любом порядке: полипептид для применения для лечения иммунного ответа по типу гиперчувствительности у индивидуума, вызванного непрофилиновым аллергеном содержащего профилин растительного материала,

где указанный полипептид имеет/состоит из/по существу, состоит из/содержит аминокислотную

последовательность, обладающую по меньшей мере 60% идентичностью с аминокислотной последовательностью 8ЕЭ ГО N0: 1, где метионин необязательно не присутствует в аминокислотной последовательности на Оконце;

где указанный полипептид альтернативно имеет/состоит из/по существу, состоит из/содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 60% идентичностью (например, по меньшей мере 65, 70, 75, 80, 85, 90 или 95% идентичностью) с аминокислотной последовательностью 8ЕО ГО N0: 2-10;

где полипептид имеет аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 60% идентичностью (например, по меньшей мере 65, 70, 75, 80, 85, 90 или 95% идентичностью) с аминокислотной последовательностью профилина содержащего профилин растительного материала;

где полипептид представляет собой профилин содержащего профилин растительного материала класса растений, выбранного из группы, состоящей из Р1ап1ае Ршорыба, Р1ап1ае МопосоЬ и Р1айае МадпоНорыба, или представляет собой вариант указанного профилина;

где иммунный ответ по типу гиперчувствительности вызван непрофилиновым аллергеном содержащего профилин растительного материала класса растений, выбранного из группы, состоящей из Р1ап1ае Ршорыба, Р1айае МопосоЬ и Р1ап1ае Мадпойорк1ба;

где полипептид представляет собой профилин содержащего профилин растительного материала отряда растений, выбранного из группы, состоящей из Рша1ек, Агеса1ек, Акрагада1ек, Роа1ек, 2тд1Ьета1ек Ар1а1ек, Ак1ета1ек, Втакасайк, СитсигЬйа1ек, Епса1ек, РаЬа1ек, Рада1ек, Сепйапа1ек, Ьат1а1ек, Ьаита1ек, Ма1уа1ек, Ма1р1дЫа1ек, Муг1а1ек, Рго1еа1ек, Кока1ек, 8аршба1ек, 8о1апа1ек и Уйа1ек, или представляет собой вариант указанного профилина;

где иммунный ответ по типу гиперчувствительности вызван непрофилиновым аллергеном содержащего профилин растительного материала отряда растений, выбранного из группы, состоящей из Р1па1ек, Агеса1ек, Акрагада1ек, Роа1ек, 2шд1Ьега1ек, Ар1а1ек, Ак1ета1ек, Втакысайк, СитсигЬйа1ек, Епса1ек, РаЬа1ек, Рада1ек, Сепйапа1ек, Ьат1а1ек, Ьаита1ек, Ма1уа1ек, Ма1р1дЫа1ек, Мут1а1ек, Рго1еа1ек, Кока1ек, 8аршба1ек, 8о1апа1ек и Уйа1ек;

- 26 029009

где полипептид представляет собой профилин содержащего профилин растительного материала семейства растений, выбранного из группы, состоящей из Сирге88асеае, Агесасеае, А8рагадасеае, Ийасеае, Бготейасеае, Роасеае, Ми8асеае, /тдЫегасеае, Ар1асеае, АгаНасеае, Аз(егасеае, Вга88юасеае, АтагаЫйасеае, Сагуорйуйасеае, Ро1удопасеае, СисигЪйасеае, АсйшЫасеае, БесуйЫйасеае, Тйеасеае, РаЪасеае, БеШ1асеае, Радасеае, Йид1апйасеае, Мупсасеае, ЦоЫоГадасеае, Тюойепйгасеае, Аросупасеае, КиЫасеае, О1еасеае, РейаНасае, Р1аЫадтасеае, Баигасеае, МаЫасеае, ЕирйогЫасеае, БуЫгасеае, Р1а(апасеае, СаппаЪасеае, Ко8асеае, Штасеае, Цгйсасеае, АпасагЛасеае, Кийасеае, Зартйасеае, Зо1апасеае и Уйасеае, или представляет собой вариант указанного профилина;

где иммунный ответ по типу гиперчувствительности вызван непрофилиновым аллергеном содержащего профилин растительного материала семейства растений, выбранного из группы, состоящей из Сирге88асеае, Агесасеае, Азрагадасеае, Ийасеае, Бготейасеае, Роасеае, Мизасеае, /тдЫегасеае, Ар1асеае, АгаНасеае, Аз(егасеае, Вга88юасеае, АтагаЫйасеае, Сагуорйуйасеае, Ро1удопасеае, СисигЪйасеае, АсйЫЫасеае, БесуйЫйасеае, Тйеасеае, РаЬасеае, Бе1и1асеае, Радасеае, йид1апйасеае, Мупсасеае, ЦоЫоГадасеае, Тюойепйгасеае, Аросупасеае, КиЫасеае, О1еасеае, РейаНасае, Р1аЫадтасеае, Баигасеае, МаЫасеае, ЕирйогЫасеае, БуЫгасеае, Р1а(апасеае, СаппаЪасеае, Козасеае, Штасеае, Цгйсасеае, АпасагЫасеае, Кийасеае, Зартйасеае, Зо1апасеае и Уйасеае;

где полипептид представляет собой профилин содержащего профилин растительного материала рода растений, выбранного из группы, состоящей из Сйатаесурап8, Сгурйотепа, Сирге88И8, Йип1реги8, Рйоешх, А8рагади8, Сгоси8, Апапа8, АпЫохапЫит, Супойоп, Цас(уН8, Ре8(иса, Но1си8, Ногйеит, Бойит, Огуха, Ра8ра1ит, РНа1аЙ8, РЫеит, Роа, 8еса1е, Зогдйит, Тпйсит, /еа, Ми8а, Аршт, Цаиси8, АтЪго81а, Аг1ет181а, НеНаЫйи8, БасЫса, АгаЫйор818, Вга881са, Зтар18, АтагапЫш, Вейа, Сйепоройшт, Радоругит, За18о1а, Сисит18, АсйшЫа, ВегййоНейа, АгасЫ8, Шусте, Беп8, Бирти8, Рйа8ео1и8, Р18ит, У1дпа, А1пи8, ВеЫ1а, Сагрти8, Сагуа, Са8йапеа, Согу1и8, Ради8, Йид1ап8, О8йуа, Циегсш, Саййагапййи8, Сойеа, Ргахти8, Пди8Ыит, О1еа, Р1апйадо, Зе8атит, Зуйпда, Рег8еа, Оо88уршт, Неνеа, Машйой, МегсипаЙ8, Роро1и8, Шсй пи8, Зоппегайа, Р1а(апи8, Ргадайа, Нити1и8, Ма1и8, Моги8, Райейапа, Ргипи8, Руги8, КиЪи8, /171рйи8, Апасагйшт, Сйги8, 1.йс1п, Мапдйега, Р181асаа, Сар8юит, Бусорегасоп, Зо1апит и У'11'18, или представляет собой вариант указанного профилина;

где иммунный ответ по типу гиперчувствительности вызван непрофилиновым аллергеном содержащего профилин растительного материала рода растений, выбранного из группы, состоящей из Сйатаесураг18, Сгурйотейа, Сирге88И8, Йип1реги8, Рйоешх, А8рагади8, Сгоси8, Апапа8, Апййохапййит, Супойоп, Бас1уН8, Ре8йиса, Но1си8, Ногйеит, Бойит, Огуха, Ра8ра1ит, Рйа1ап8, Рй1еит, Роа, Зеса1е, Зогдйит, Тпйсит, /еа, Ми8а, Аршт, Баиси8, АтЪго81а, Агйет181а, НеНаЫйи8, Басйиса, АгаЫйор818, Вга881са, Зтар18, АтагаЫйш, Вейа Сйепоройшт, Радоругит, За18о1а, Сисит18, АсйшЫа, ВегЙоПейа, АгасЫ8, Шусте, Беп8, Бирти8, Рйа8ео1и8, Р18ит, У1дпа, А1пи8, ВеШ1а, Сагрти8, Сагуа, Са8(апеа, Согу1и8, Ради8, йид1ап8, О8йуа, Циегеш, СаЙагапЫш, СоПеа, Ргахти8, Б1ди8йит, О1еа, Р1аЫадо, Зе8атит, Зуппда, Рег8еа, Оо88уршт, Неνеа, Мапйой МегсипаЙ8, Роро1и8, Шсти8, Зоппегайа, Р1айапи8, Ргадапа, Нити1и8, Ма1и8, Моги8, Рапейпаа, Ргипи8, Руги8, КиЪи8, /1Х1р1ш8, Апасагйшт, Сйги8, РНейа Мапдйега, Р181ас1а, Сар81сит, Бусорег81соп, Зо1апит и У1Й8, где полипептид представляет собой профилин, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из ЗЕР ГО ЦО: 1-42, или представляет собой вариант указанного профилина;

где аминокислотные последовательности ЗЕР ГО ЦО: 1-42 не содержат метионин в положении 1 на Ν-конце;

где полипептид представляет собой профилин, выбранный из группы, состоящей из профилина Сгу ] , РЬо ά 2, Апа с 1, Суп ά

12,	Тг1 а 12, Миз	а	1-	, Αρί	д	4, Оаи с	4, АтЬ а	8,	Агй ν 4	, Не1
а 2,	Ага й 8, 3ίη	а	4,	Ата	г	2, Вейа ν	2, СЬе е	2,	3а1 к 4	, Асй
а 9,	Сис т 2, Ага	Ь	5,	С1у	т	3, Вей ν	2, Сог а 2	Л	О1е е 2	, Ηβν
Ь 8,	, Мег а 12, Р1а	а	3, Рга	а 4, Ма1	ά 4, Раг	3	3, Рги	аν 4,

Рги с1и 4, Рги р 4, Руг с 4, Сйй з 2, Ый с 1, Сар а 2 и Бус е

1 , или вариант указанного профилина;

где иммунный ответ по типу гиперчувствительности вызван непрофилиновым аллергеном, выбранным из группы, состоящей из

- 27 029009

СЬа о	1,	СЬа о 2,	Сгу : 1,	Сгу з 2, Сир а 1,	Сир з 1,	Сир з 3,
«Тип а	1,	Лип а 2,	Лип а 3,	Сип о 4, Сип з 1,	Иип ν 1,	Сип ν 3,
Апа с	2,	АпР о 1,	Азра о 1,	Сго з 1, Сго з 2,	Суп ά 1,	Суп а 7,
Суп а	15	, Суп а 22м, Суп а	23, Суп ά 24, Оас	д 1, Оас	д 2, Оас
д з, ]	Оас	д 4, Оас	д 5, Рез	р 4, Ηοΐ 1 1, Но1	1 5, Ног	V 1, Ног
ν 5, Ног	ν 12, Ног ν 15, Ног ν 16, Ног ν 17,	Ног ν 21,	Ьо1 р 1,
Ьо1 р	2,	Ьо1 р 3,	Ьо1 р 4,	Ьо1 р 5, Ьо1 р 11,	Миз а 2,	Миз а 3,
Миз а	4,	Миз а 5,	Огу з 1,	Огу з 12, Раз η 1,	РЬа а 1,	РЬа а 5,
РЬ1 р	1,	РЫ р 2,	РЫ р 4,	РЫ р 5, РЫ р 6,	РЫ р 7,	РЫ р 11,
РЫ р	13	, РЬо <3 2	, Роа р 1, Роа р 5, Зес с	1, Зес с	5, Зес с
20, Зог Ь 1, Тгх а 14, Тгх	а 15, Тгх а 18, Тгх а 19,	Тгх а 21,
Тгх а	25,	, Тгх а 26	, Тгх а 27, Тгх а 28, Тгх а	. 29, Тгх	а 30, Тгх
а 31,	Тгх а 32, Тгх а 33,	Тгх а 34, Τχ'ί а 35, Тгх а	36, Тгх а
3 7, геа	т 1, геа	т 12, геа т 14, геа т 25,	АсР с 5,	АсР с 8,
АсР с	ю,	, АсР ά 1,	АсР <3 2,	АсР а 3, АсР а 4,	АсР ά 5,	АсР а 6,
АсР а	7,	АсР ά 8,	АсР ά 10	, АсР <3 11, А1п д	1, А1п д	4, АтЬ а

1, АтЬ а 2, АтЬ а 3, АтЬ а 4, АтЬ а 5, АтЬ а 6, АтЬ а 7, АтЬ а

9, АтЬ а 10, АтЬ р 5, АтЬ Р 5, Апа о 1, Апа о 2, Апа о 3, Αρί д

1, Αρί д 2, Αρί д 3, Αρί д 5, Αρί д б, Ага Ь 1, Ага Н 2, Ага Ь

3, Ага Ь 4, Ага Ь б, Ага Ь 7, Ага Ь 9, Ага Ь 10, Ага Ь 11, АгР

ν 1

, АгР

ν 2,

АгР ν 3,

АгР ν 5, АгР

у 6, Вег е 1,

Вег е 2,

Вера

ν 1

, Вер

ν 1,

ВеР

ν 3,

ВеР

ν 4, ВеР

ν 6, ВеР

V

7,

Вга

: ί

, Вга

п 1

, Вга

О 3,

Вга

г 1,

Вга

г 2, Сар

а 1м, Саг

Ь

1,

Саг

х 1

, Саг

х 4

, Саз

з 1,

Саз

з 5,

Саз

з 8, Саз

з 9, СаР

г

1,

СЬе

а 1

, СЬе

а 3

, СхР

1 з,

СхР

г 3,

СхР

з 1, СхР

з 3, Со£

а

1,

Сог

а 1

, Сог

а 8

, Сог

а 9,

Сог

а 10

, Сог

а 11, Сог а 12, Сог

а

13,

Сог

а 14,

Сис

т 1,

Сис

т 3,

Оаи

с 1,

Рад е 2,

Рад Р 2,

Рад

з 1,

Рга

а 1,

Рга

а 3,

Рга

е 1,

О1у

т 1,

С1у т 2,

С1у т 4,

О1у

т 5,

О1у

т 6,

Не1

а 1,

Не1

а 3,

Неу

Ь 1,

Неу Ь 2,

Неу Ь 3,

Неу

Ь 4,

Неу

Ь 5,

Неу

Ь 6,

Неу

Ь 7,

Неу

Ь 9,

Неу Ь 10

, Неу Ь 11,

Неу Ь

12, :

Неу Ь

13,

Неу Ь

> 14,

Нит

3 1/

□ид

η 1, «Гид

п 2, СГид

г

1,

Сид

г 2

, СГид

г 3

, Иид

г 4 ,

, Ьас

з 1,

Ьеп

с 1, Ьеп

с 2, Ьеп

с

3,

Ьхд

у 1

, Ьир

ап

1, Ьус

е 2

:, Ьус

е 3

, ьус

е 4, Ма1

ά 1, Ма1

а

2,

Ма1

а з

, Мап

е 5

, Мег

а 1,

, Мог

п 3,

О1е

е 1, О1е

е 3, О1е

е

4,

О1е

е 5

, О1е

е 6

, О1е

е 7

, О1е

е 8

, О1е

: е 9, О1е е 10, О1е

е

11,

ОзР

с 1,

Раг

0 1/

Раг

3 2,

Раг

3 4,

Раг о 1,

Регз а 1,

РЬа

ν 3,

Рхз

ν 1,

РХЗ

ν 2,

РХЗ

у з,

Ρί3

ν 4,

Рхз ν 5,

Рхз з 1,

Рхз

з 2,

Р1а

1 1,

Р1а

а 1,

Р1а

а 2,

Р1а

ог 1

, Р1а ог

2, Р1а ог

3

/

Рги ;

аг 1

, Рги

аг

3, Рги ау

1, Рги ау 2 ,

Рги ау 3,

Рги а 3,

Рги

аи :

3, Рги аи

5,

Рги аи

• 6,

Рги р

' 1,

Рги р

2, Рги р

* 3, Руг с

1,

Руг с

3,

Руг с

5,

<2ие а

1, Ехс с

1, ЕиЬ ί

1, ЕиЬ х

3, 3а1 к

1,

3а1 к

2,

5а1 к

3,

5а1 к

5, Зез ί

1, Зез ί

2, Зез х

3, Зез х

4,

Зез х

5,

Зез х

6,

Зез ί

7, 3ίη а

1, 3ίη а

2, Зхп а

3, Зо1а Р

1,

Зо1а

Р 2,

5о1а

ί 3, Зо1а ί

4, Зуг ν 1, Зуг ν 3, Ухд г 1, νίΡ

V

1

и Ζχζ т

1;

где вариант профилина имеет инсерции, замены, делеции, дупликации, инсерции-делеции, сдвиги рамки считывания, трансверсии, укорочения и/или инверсии в одном или нескольких положениях по сравнению со встречающимся в природе профилином согласно любому из предшествующих вариантов

- 28 029009

осуществления;

где вариант профилина получен из указанного встречающегося в природе профилина посредством замены, делеции, дупликации, инсерции-делеции, сдвига рамки считывания, трансверсии, укорочения и/или инверсии 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 аминокислот встречающегося в природе профилина согласно любому из предшествующих вариантов осуществления;

где вариант профилина согласно любому из вариантов осуществления, упомянутых в настоящем описании, имеет аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 60% идентичностью последовательности, такой как по меньшей мере 70, 75, 80, 85, 90 или 95% идентичность последовательности с 8ЕО ГО N0: 1 или альтернативно 8Е0 ГО N0: 2-42;

где полипептид или его вариант (вариант профилина) содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 43;

где полипептид или его вариант (вариант профилина) содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 43 и обладает по меньшей мере 60% идентичностью последовательности, такой как по меньшей мере 70, 75, 80, 85, 90 или 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0: 1;

где вариант представляет собой вариант 8Е0 ГО N0: 1-42 или любой другой встречающийся в природе профилин, упомянутый в настоящем описании, где от 1 и вплоть до 25 аминокислот добавлены или удалены по сравнению с исходной аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0: 1-42 или указанным встречающимся в природе профилином;

где вариант представляет собой вариант 8Е0 ГО N0: 1-42 или любой другой встречающийся в природе профилин, упомянутый в настоящем описании, где от 1 и вплоть до 25 аминокислот заменены другой аминокислотой по сравнению с исходной аминокислотной последовательностью 8Е0 ГО N0: 1-42 или указанным встречающимся в природе профилином;

где вариант обладает по меньшей мере 60% идентичностью последовательности, такой как по меньшей мере 70, 75, 80, 85, 90 или 95% идентичность последовательности, с 8Е0 ГО N0: 1 и содержит аминокислоты, соответствующие К87 и 0113 8Е0 ГО N0: 1;

где вариант обладает по меньшей мере 60% идентичностью последовательности, такой как по меньшей мере 70, 75, 80, 85, 90 или 95% идентичность последовательности, с 8Е0 ГО N0: 1 и содержит аминокислоты, соответствующие ^3, Υ6, 125, 027, \У33. А34, Υ125 и Ь126 8Е0 ГО N0: 1;

где вариант полипептида обладает по меньшей мере 60% идентичностью последовательности, такой как по меньшей мере 70, 75, 80, 85, 90 или 95% идентичность последовательности, с 8Е0 ГО N0: 1 и содержит аминокислоты, соответствующие А23, А24, Е46, 064, 069 и Т97 8Е0 ГО N0: 1;

где вариант полипептида обладает по меньшей мере 60% идентичностью последовательности, такой как по меньшей мере 70, 75, 80, 85, 90 или 95% идентичность последовательности, с 8Е0 ГО N0: 1 и содержит аминокислоту, выбранную из А, 0 или 8, в положении, соответствующем положению 13 и/или 115 8ЕО ГО N0: 1;

где вариант полипептида обладает по меньшей мере 60% идентичностью последовательности, такой как по меньшей мере 70, 75, 80, 85, 90 или 95% идентичность последовательности, с 8Е0 ГО N0: 1 и имеет все остатки цистеина исходного полипептида, замещенные аминокислотой, выбранной из А, 0 и/или 8;

где полипептид или его вариант имеет длину аминокислотной цепи в диапазоне от 65 до 195 аминокислот;

где количество аминокислот в аминокислотной последовательности варианта находится в диапазоне от 50 до 150% по сравнению с количеством аминокислот исходной аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0: 1-42 или встречающегося в природе профилина, упомянутого в настоящем описании;

где полипептид или его вариант модифицирован путем гликозилирования, ацетилирования, алкилирования, биотинилирования, глутамилилирования, глицилирования, изопренилирования, липоилирования, фосфопантетеинилирования, фосфорилирования, сульфатирования, селенирования, С-концевого амидирования и дериватизации тиольной группы;

где полипептид или его вариант представляет собой иммуногенный полипептид;

где полипептид или его вариант связывается или образует комплексы с поли-Ь-пролином;

где полипептид или его вариант связывается или образует комплексы с актином;

где полипептид или его вариант не связываются или не образуют комплекса с актином человека;

где полипептид совместно экстрагируется с непрофилиновым аллергеном содержащего профилин

растительного материала при экстракции содержащего профилин растительного материал в водном растворе, имеющем рН в диапазоне 6-8 в течение периода времени в диапазоне от 1 до 30 мин;

где полипептид можно получать способом, включающим выделение профилина из указанного содержащего профилин растительного материала или рекомбинантное продуцирование указанного профилина, где указанный профилин идентифицирован в экстракте, полученном путем суспендирования содержащего профилин растительного материала в водном растворе, имеющем рН в диапазоне 6-8 в течение периода времени в диапазоне от 1 до 30 мин;

где иммунный ответ по типу гиперчувствительности представляет собой иммунный ответ по типу гиперчувствительности 1 типа;

- 29 029009

где иммунный ответ по типу гиперчувствительности выбран из группы, состоящей из атопического дерматита, крапивницы, контактного дерматита, аллергического конъюнктивита, аллергического ринита, аллергической астмы, анафилаксии и пищевой аллергии;

где полипептид вводят в слизистую оболочку или эпителий, выбранный из группы, состоящей из слизистой оболочки или эпителия дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта и полости рта;

где полипептид вводят путем ингаляции, назального введения, буккального введения, орального введения, сублингвального введения;

где первую дозу указанного полипептида вводят путем ингаляции, назального введения, буккального введения, орального введения, сублингвального введения;

где полипептид вводят путем ингаляции, назального введения, буккального введения, орального введения, сублингвального введения в течение периода времени, достаточного для установления оральной толерантности к указанному полипептиду;

где полипептид, кроме того, вводят в орган-мишень, подвергающийся естественному воздействию содержащего профилин растительного материала, где орган-мишень выбран из группы, состоящей из дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта и кожи, в течение периода, по меньшей мере частично или полностью совпадающего с естественным воздействием на индивидуума указанного содержащего профилин растительного материала;

где полипептид вводят путем сублингвального введения в течение периода времени, достаточного для установления оральной толерантности к указанному полипептиду, и где полипептид или его вариант затем вводят в назальную полость, желудочно-кишечный тракт и/или кожу в течение периода времени совместно, одновременно, по отдельности или последовательно, в любом порядке, с периодом воздействия содержащего профилин растительного материала;

где иммунный ответ по типу гиперчувствительности не вызван профилином указанного содержащего профилин растительного материала;

где индивидуум не является сенсибилизированным, по меньшей мере, до введения первой дозы указанного полипептида, к профилину указанного содержащего профилин растительного материала и/или к указанному полипептиду;

где индивидуум не является сенсибилизированным, по меньшей мере, до введения первой дозы указанного полипептида, ни к профилину указанного содержащего профилин растительного материала, ни к указанному полипептиду;

где полипептид или профилин содержащего профилин растительного материала не индуцирует иммунный ответ по типу гиперчувствительности у индивидуума, по меньшей мере, до введения первой дозы полипептида;

где полипептид или профилин содержащего профилин растительного материала не индуцирует, по меньшей мере, до введения первой дозы полипептида, немедленную кожную реакцию и/или замедленную кожную реакцию у индивидуума при проведении кожной скарификационной пробы с различными концентрациями профилина содержащего профилин растительного материала и/или указанного полипептида;

где полипептид или профилин содержащего профилин растительного материала не индуцируют, по меньшей мере, до введения первой дозы полипептида, высвобождение гистамина в анализе базофилов/тучных клеток ш уйго с использованием крови от индивидуума, подвергаемого лечению;

где индивидуум подвергался воздействию содержащего профилин растительного материала до введения первой дозы указанного полипептида;

где индивидуум не является сенсибилизированным к непрофилиновому аллергену содержащего профилин растительного материала, по меньшей мере, до введения первой дозы указанного полипептида;

где индивидуум не обладает поддающимися обнаружению сывороточными 1дЕ-антителами, способными связываться или иным образом ассоциировать с непрофилиновым аллергеном содержащего профилин материала, по меньшей мере, до введения первой дозы указанного полипептида;

где индивидуум не имеет клинических симптомов иммунного ответа по типу гиперчувствительности при воздействии содержащего профилин растительного материала, по меньшей мере, до введения первой дозы указанного полипептида;

где полипептид представляет собой единственный введенный полипептид;

где полипептид не вводят совместно с непрофилиновым аллергеном; полипептид, имеющий аминокислотную последовательность 8Е0 ГО ЫО: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10, где 1 или 2 остатка цистеина заменены аминокислотой, выбранной из А (аланин), С (глицин) и 8 (серин); полипептид, имеющий аминокислотную последовательность 8ЕО ГО ЫО: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10, где аминокислота цистеин в положении 13 и/или 115 заменена аминокислотой, выбранной из группы, содержащей А, С и/или 8; полипептид, имеющий аминокислотную последовательность 8ЕО ГО ЫО: 44 или 45, необязательно, где аминокислотная последовательность не содержит метионин в положении 1;

выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая белок 8ЕО ГО ЫО: 44 или 45; где выделенная нуклеиновая кислота имеет 8ЕО ГО ЫО: 46 или 47;

- 30 029009

способ получения полипептида, пригодного для применения для лечения, посредством неспецифической толерантности, иммунного ответа по типу гиперчувствительности, вызванного непрофилиновым аллергеном содержащего профилин растительного материала, включающий выделение иммуногенного полипептида из указанного содержащего профилин растительного материала, или рекомбинантного получения указанного иммуногенного полипептида, где указанный иммуногенный полипептид был идентифицирован в и необязательно выделен из экстракта, полученного путем суспендирования содержащего профилин растительного материала в водном растворе, имеющем рН в диапазоне 6-8, в течение периода времени в диапазоне от 1 до 30 мин; полипептид, пригодный для применения для лечения, посредством неспецифической толерантности, иммунного ответа по типу гиперчувствительности, вызванного непрофилиновым аллергеном содержащего профилин растительного материала, получаемого способом, включающим выделение иммуногенного полипептида, из указанного содержащего профилин растительного материала или рекомбинантное продуцирование указанного иммуногенного полипептида, где указанный иммуногенный полипептид был идентифицирован и необязательно выделен из экстракта, полученного путем суспендирования содержащего профилин растительного материала в водном растворе, имеющем рН в диапазоне 6-8, в течение периода времени в диапазоне от 1 до 30 мин;

где экстракт также содержит непрофилиновый аллерген указанного содержащего профилин растительного материала;

где указанный иммуногенный полипептид является совместно экстрагируемым с непрофилиновым аллергеном указанного содержащего профилин растительного материала;

способ лечения или профилактики иммунного ответа по типу гиперчувствительности у индивидуума к непрофилиновому аллергену содержащего профилин растительного материала, включающий введение терапевтически эффективного количества полипептида, имеющего аминокислотную последовательность по меньшей мере с 60% идентичностью с аминокислотной последовательностью ЗЕР ГО N0: 1;

применение полипептида для изготовления лекарственного средства для лечения или профилактики иммунного ответа по типу гиперчувствительности у индивидуума к непрофилиновому аллергену содержащего профилин растительного материала, где указанный полипептид имеет/содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 60% идентичностью с аминокислотной последовательностью ЗЕР ГО N0: 1.

Перечень таблиц

Таблица 1

Р1апСае Рз.порзз.с1а

Отряд

[семейство]

Р1па1ез [Сиргеззасеае и Рхпасеае]

Род Вид [название профилина]

Опатаесурагз. з, СгурЬотегта, Сиргеззиз, Сипърегиз, Рз.сеа, Р1пиз

СЪатаесурагзз оЫзиза (японский кипарис), Сгур£отег1а ]ароп1са (японский кедр) [профилин Сгу 3) , Сиргеззиз агггопзса (кипарис), Сиргеззиз зешре^1гепз (обычный кипарис) , (Типгрегиз азЪез (можжевельник мексиканский), Сипзрегиз охуседгиз (можжевельник красный) , Сипзрегиз заЫпоз.с1ез (можжевельник мексиканский) и Сипгрегиз уггдгпгапа (можжевельник восточный красный) , Рзсеа вИзсЬепсъв (сосна), Ртпиз ву1уез£г1в (сосна)

- 31 029009

Однодольные растения

Отряд [семейство]	Род	Вид [название профилина]
Агеса1ез	Е1а1з,	Е1а13 ди±пеепз13 (пальмовое
[Агесасеае]	РРоеЫх	дерево); Рйоепгх Рас£уИ£ега (финиковая пальма) [РНо ά 2]
Азрагада1ез	Азрагадиз	Азрагадиз о££1С1паИз (спаржа)
[Азрагадасеае и 1г1Расеае]	Сгосиз	Сгосиз за£1^из (шафран посевной) [Сго з 2]
Роа1ез	Апапаз,	Апапаз сотозиз (ананас) [Апа с
[ВгошеИасеае,	АпЬРохапкЬит,	1], Ап££юхап£Рит оРогаЬит
и Роасеае]	СупоРоп, Рас£уИз, РезЬиса, Но1сиз, НогРеит, ЬоПит, Огуга, Разра1ит, РЬа1аг15, РЫеиш, Роа, 5еса1е, ЗогдНиш, ТггЫсит, геа	(душистый колосок), СупоРоп Рас£у1оп (бермудская трава) [Суп ά 12] , РасруИз д1отега£а (ежа сборная), Рез£иса рга^епзгз (овсяница луговая) , Но1сиз 1апаБиз (бухарник шерстистый) , НогРеит пПдгаге (ячмень) , ЬоНит регеппе (плевел) , Огуга заЫлга (рис) , Разра1ит по£а£ит (гречка заметная), РРа1аг1з адиакгса (канареечник) , РЫеит рга£епзе (тимофеевка) [РЬ1 р 12], Роа ргаЪепзгз (мятлик луговой), Зеса1е сегеа1е (рожь), ЗогдЬит На1ерепзе (джонсонова трава), ТгНЫсит аевЫуит (пшеница) [Τγϊ а 12], Иеа тауз (кукуруза)
г1пдИэега1ез [Мизасеаеа и ггпдИэегасеае]	Миза	Миза аситз.па£а (банан) [Миз а 1], Миза х рагаРгзгаса (банан) [Миз хр 1] ,

Таблица 2

Таблица 3

Р1ап£ае МадпоИорзгРа

Отряд

[семейство]

„ „ Вид растении [название

Род растении , ,

профилина]

Ар1а1ез Аргит, Раисиз

[Ар1асеае и АгаНасеае]

АзСега1ез

[АзЪегасеае]

АтЪгозга, Аг£ет131а, НеИапЬкиз, ЬасЬиса

Ар гит дгауео1епз (сельдерей) [Αρί д 4], Раисиз саго£а (морковь) [Баи с 4] , РеЪгозеИпит сггзрит (петрушка)

АтЪгозга агЬепмзШоНа (карликовая амброзия) [АтЬ а 8] , АтРгозга рзЫоз^асРуа (амброзия голометельчатая), Аг£етз.з±а уЫдаггз (полынь обыкновенная) [АгБ ν 4], АшЬгозга £г1£1Ра (гигантская амброзия) , НеИапБЬиз аппииз (подсолнечник) [Не1 а 2], БасБиса заБгуа (культурный салат-латук)

- 32 029009

ВгаззгсаИз [Вгаззтсасеае, может включать С1еотасеае и Саг1сасеае

АгаЫдорзгз, Вгаззхса, 31парз1з

АгаЫдорзгз Ьуга£а, АгаЫдорзхз ЫгаНапа [Ага е 8], Вгаззгса ^ипсеа (восточная горчица), Вгазз1са париз (рапс), Вгаззхса о1егасеа (капуста и прочие), Вгаззтса гара (репа) и Згпаргз а1Ьа (желтая горчица) [3ϊη а 4]

Са гуорку11а1ез [Атагап£Ъасеае, Сагуорку11асеае и Ро1удопасеае]

Атагап£Ъ.из, ВеЪа, СЬепоросНит, Радоругит За1зо1а

Атагап£1гиз ге£го£1ехиз (щирица колосистая) [Аша г 2], Веса ^и1даг1з (свекла сахарная) [Веба ν 2] , СЬелоройхшп а1Ъит (иван-чай) [Сйе е 2], Радоругит езси1еп£ит (гречиха посевная), Радоругит £а£агз.сит (гречиха татарская), За1зо1а каИ (солянка русская) [5а1 к 4]

СигсигЫ£а1ез Сиситхз [СисигЫ £асеае]

Сиситгз те1о (дыня мускусная) [Сис т 2]

Огйег Ег1са1ез [Ас£.з.П1(Иасеае, Ьесу£Ыдасеае,

и Ткеасеае]

АсЫп1<Иа,

ВеЫюИеЫа

АсЫптсИа сп1пепз1з (золотой киви), АсЫп1<На ЗеИс1Оза (киви) [Асе ά 9], Вег£Ьо11е£1а ехсе1за (бразильский орех)

РаЬа1ез [РаЬасеае, (ЗиШазасеае, Ро1уда1асеае и Зиг1апасеае]

АгасЫз, С1ус1пе, Ьепз, Ьиргпиз, РЬ.азео1из

АгасЫз Ьуродаеа

(арахис) [Ага Ь. 5] , О1ус1пе тах (соя) [О1у ш 3] , Ьепз сиИпаг13 (чечевица), Ьиръпиз апдиз£ΐ£о11из

(узколистный синий люпин), РЬазео1из уи1даг1з (зеленая фасоль, фасоль обыкновенная), Ргзит за£з^ит (горох) , У1дпа гасИа£а (фасоль золотистая)

- 33 029009

Рада1ез [Ве£и1асеае, Радасеае, Зид1апдасеае, Муг1сасеае, ΝοΐΙ-юРадасеае и Т1сойепс1гасеае]

А1пиз, Ве£и1а, Сагргпиз, Сагуа, Саз£апеа, Согу1из, Радиз, Зид1апз, ОзЬгуа Оиегсиз

А1пиз д1и£гпоза (ольха), Ве£и1а уеггисоза (береза) [Вер ν 2], Сагргпиз Ъе£и1из (граб), Сагуа Шгпогпепзгз (пекан) , СазЬапеа зэ£Р?а (каштан), Согу1из ауеПапа (фундук) [Сог а 2] , Радиз зу1уа£гса (бук европейский), Сид1апз пгдга (черный орех), Зид1апз гедга (грецкий орех), ОзЬгуа сагргпг£о1га (хмелеграб обыкновенный) , <2иегсиз а1Ьа (дуб белый)

СепР1апа1ез [Аросупасеае и КиЬгасеае]

СаЫаагапЪЪиз, Со££еа

СаЬЬагаШЯиз гозеиз (борвинок), Со££ее агаЫса (кофейное дерево арабское)

Ьаш1а1ез [О1еасеае, РейаНасае и Р1ап1;адгпасеае]

Ргахгпиз,

Ыдиз^гиш, О1еа, Р1аШ:адо, Зезашит Зуггпда

Ргахгпиз ехсе1згог (ясень) , ЫдизЪгит

(бирючина) , О1еа еигореа (олива) [О1е е 2] , Р1ап£адо 1апсео1а£а (подорожник

ланцетолистный), Зезатит гпсИсит (кунжут) ,

Зуггпда уи1даггз (сирень)

Ьаига1ез [Ьаигасеае]	Регзеа	Регзеа атеггсапа (авокадо)
Ма1^а1ев [Ма1уасеае]	Соззургит	Соззургит агЪогеЬит, Соззургит ЪагЪадепзе,

Совзургит дагпгпгг, Совзургит ЬегЬасеит, Соззургит ЪггзиЫзт, Соззургит гагтопдгг

- 34 029009

Ма1р1дЫа1ез ΗθνθΒ, МапНю£, [ЕирЬогЫасеае] МегсигтаИз,

Роро1из, К.1С1пиз

Муг£а1ез

[ЬуЫагасеае]

Рго£еа1ев

[Р1а£апасеае]

ЗоппегаЫа

Р1а£апиз

Коза1ез [СаппаЪасеае, Розасеае, и1тпасеае и игЫсасеае]

Ргадагта,

Нити1из,Ма1из, Могиз, РагтеЪагга, Ргипиз, Ругиз, КиЪиз, ΖίζίρΙηΐΒ

3ар1п<3а1ез [АпасагсИасеае, Ки£асеае и Зартпдасеае]

АпасагсИит, Сз.£гиз, Ы£сМ, Мапд1£ега, Р1з1:ас1а

Зо1апа1ез

[Зо1апасеае]

Сарз1сит, Ьусорегз!соп, Зо1апит

Огдег У1£а1ев, [УИ;асеае]

νϊίίβ

Неуеа ЪгазШепзтз (гевея бразильская (латексная) [Ηβν Ь 8] , МапИюЬ езси1еШ:а (кассава, маниока), МегсигтаИз аппиа (пролесник однолетний) [Мег а 1], Роро1из £г1с1юсагра (тополь) Р1с1пиз сопопип1з (клещевина обыкновенная)

Зоппега£1а а1Ьа, ЗоппегаЫа сазео1аг1з

Р1а£апиз ог1еп£аИв

(платан восточный),

Р1а£апиз асег1£оИа (платан кленолисткый дерево)[Р1а а 3]

Ргадаг±а апапазза (клубника) [Рга а 4], Нити1из дароптсиз (хмель японский), Ма1из ^отез^гса (яблоня) [Ма1 64], Могиз пгдга (шелковица), РагФебагга З'исЗагса (постенница аптечная) [Раг з 3], Раггебагга о££1С1паИз (постенница), Ргипиз агтепгаса (абрикос), Ргипиз аУ1ит (вишня птичья) [Рги βν 4], Ргипиз ЗотезЫса (слива европейская), Ргипиз (2и1с13 (миндаль) [Рги би 4], Ргипиз регзтса (персик) [Рги р 4] ,

Ругиз соттиптз (груша) [Руг с 4], РиЬиз 10аеиз (малина обыкновенная), ΖίζίρΙηΐΒ таигИ;1апа (китайский финик)

АпасагсИит осс1&еп£а1е (кэшью) , аьгиз Итоп (лемон), СгСгиз геСгси1а£а (мандарин), СИ:гиз З1пепз1з (апельсин сладкий) [СП: з 2] , ЫСсйг сЫпепзгз (личи) [Ыб с 1] , Мапдз.£ега гпсИса, Р1зЁас1а

(фисташковое дерево)

Сарзтсит аппиит

(болгарский перец) [Сар а 2], Ьусорегз1соп езси1еп£ит (томат) [Ьус е 1] , ЫсобФала СаЬасит (табак настоящий), Зо1апит ЬиЪегозит (картофель)

νϋ:ί3 У1П1£ега

(виноград)

- 35 029009

Таблица 4

Элемент	Название элемента	Растение	Идентичность	Величина Е
«268НВ4	РЕОР2_РНЬРЕ	РЫеит ргабепзе (тимофеевка луговая)	100,00%	3,00Е-72
Р404Х7	РЕОР1_РНЬРЕ	РЫеит ргабепзе (тимофеевка луговая)	99,00%	1,ООЕ-71
Ρ0ΖΙΣ9	РЕОРЗ_РНЬРЕ	РЫеит ргабепзе (тимофеевка луговая)	97,00%	2,00Е-70
В73А43	А4КАЗ1_РНЬРЕ	РЫеит ргабепзе (тимофеевка луговая)	96,00%	1,00Е-69
В6ЕР35	А4КАЗ2_РНЬРЕ	РЫеит ргаРепзе (тимофеевка луговая)	96,00%	3,00Е-70
А8иА8	А4КАЗЗ_РНЬРЕ	РЫеит ргабепзе (тимофеевка луговая)	96,00%	2,00Е-70

<25Уьиз	А4КА34_РНЬРЕ	РЫеит ргабепзе (тимофеевка луговая)	96,00%	3,00Е-70
Р83647	А4КА36_РНЬРЕ	РЫеит ргаРепзе (тимофеевка луговая)	96,00%	7,00Е-70
<284Μϋ4	А4КА37_РНЬРЕ	РЫеит ргабепзе (тимофеевка луговая)	96,00%	1,00Е-69
Ό0ΡΕΒ5	А4КА38_РНЬРЕ	РЫеит ргабепзе (тимофеевка луговая)	96,00%	2,00Е-69
А4КА61	А4КА49_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	96,00%	1,00Е-69
А4КА54	А4КА50_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	96,00%	6,00Е-70
09М7М8	А4КА52_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	96,00%	1,00Е-69
02Ρζ)57	А4КА53_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	96,00%	6,00Е-70
С9В5<24	С916О4_9РОАЬ	ТгФРФсит РигдЫит зиЪзр. бигит х Зеса1е сегеа1е	96,00%	6,00Е-70
Ω9ΧΡ10	Ρ2ΕΚ80_ΗΟΕνΏ	НогЗеит νβΓ. ЫзЫсНит (ячмень двухрядный)	95,00%	8,00Е-69
В4РТХЗ	А4ОРСЗ_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	94,00%	3,00Е-67
Р49233	А4КА43_СОЕАУ	Согу1из βνείίβηβ (лещина обыкновенная) (Согу1из тахФта)	94,00%	2,00Е-68
А1КХК1	А4КА51_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	94,00%	2,00Е-68

- 36 029009

Ό6ΒΕΕ6	А4ОРС0_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	93,00%	3,00Е-67
022655	А4ОРВ8_ОЬЕЕи	01еа еигораеа (олива европейская)	90,00%	3,00Е-64
Ω93ΝΝ5	Ρ2ΟΤ70_ΗΟΡ.νϋ	Ногдеит νа^. дгзбгсЬит (ячмень двурядный)	90,00%	6,00Е-66
А4КА37	Α2Ζ5Υ9_ΟΕΥ3Ι	Огуга забава зиЬзр. гпсЛса (рис)	89,00%	4,00Е-65
А4КА31	Α3Ο3Ι5_ΟΕΥ3σ	Огуга заЫуа зиЬзр. заропхса (рис)	89,00%	4,00Е-65
Г5НР01	ΡΚ0ΡΑ_0ΕΥ3σ	Огуга забз^а зиЬзр. ]ароп1са (рис)	89,00%	4,00Е-65
О5ЕР31	Ο5Χσ77_3ΟΕΒΙ	ЗогдЬит Ысо1ог (сорго обыкновенное) (ЗогдНит уи1даге)	87,00%	1,00Е-64
Ω93Τ98	Ο5Ζ1Ό7_3ΟΕΒΙ	ЗогдНит Ысо1ог (сорго обыкновенное) (ЗогдНит νη]^3Γβ)	87,00%	4,00Е-65
Α40ϋϋ2	Β4ΡΟΡΟ_ΜΑΙΖΕ	геа тауз (кукуруза)	86,00%	7,00Е-63
Β0ϋ663	<26ΚΟ01_ΟΑΡΑΝ	Сар31сит аппиит (болгарский перец)	86,00%	2,00Е-19
Α8ΚΓ92	Α4ΚΑ58_ΜΑΙΖΕ	геа тауз (кукуруза)	85,00%	2,00Е-62
С63УТ2	Α5ΗΝΥ4_ΜΑΙΖΕ	геа тауз (кукуруза)	85,00%	3,00Е-62
<293ΥΙ9	Β6Τ699_ΜΑΙΖΕ	геа тауз (кукуруза)	85,00%	7,00Е-63
Α1ΒΟΚ7	ΡΚΌΡ3_ΜΑΙΖΕ	геа тауз (кукуруза)	85,00%	7,00Е-63
Α8υΑ4	Α4ΚΑ55_ΜΑΙΖΕ	геа тауз (кукуруза)	84,00%	2,00Е-62
А8ЫА0	Α4ΚΑ56_ΜΑΙΖΕ	геа тауз (кукуруза)	84,00%	6,00Е-62
Р0С0УЗ	Α4ΚΑ59_ΜΑΙΖΕ	геа тауз (кукуруза)	84,00%	4,00Е-62
03ВСТ0	Β6ΤΕΝ9_ΜΑΙΖΕ	геа тауз (кукуруза)	84,00%	7,00Е-62
09X085	Ρ2Ε501_ΗΟΕνϋ	Ногдеит νи1да^е νа^. с1±5б1сНит (ячмень двурядный)	84,00%	3,00Е-62
09ΡΕ63	Ο7Κ<2Η7_ΜΕΌΤΚ	МесИсадо бгипсаби1а (люцерна трибулосовидная) (МесНсадо бГ1Ьи1огдез)	84,00%	2,00Е-61
А8ивб	А4КА54_ОЬЕЕи	01еа еигораеа (олива европейская)	83,00%	5,00Е-60
084У37	Α4ΚΑ60_ΜΑΙΖΕ	геа тауз (кукуруза)	83,00%	5,00Е-61
Ρ49231	Α4ΚΑ61_ΜΑΙΖΕ	геа тауз (кукуруза)	83,00%	5,00Е-60
09ΧΡ40	Β6Τ6Υ5_ΜΑΙΖΕ	Ζеа тауз (кукуруза)	83,00%	6,00Е-62
А4СС31	Ε20σΒ9_ΝΗΕΑΤ	Тг1б1сит аезбгуит (пшеница)	83,00%	7,00Е-62
Ο9Β500	О916О5_9РОАЬ	ТгБЫсит бигдЫит зиЬзр. дигит х 5еса1е сегеа1е	83,00%	3,00Е-62
Β3Η795	ΡΕΟΡ_ΟΥΝΏΑ	Суподоп дасбу1оп (бермудская трава) (Рапгсит дасбу1оп)	83,00%	1,00Е-62
Α8ΡυΒ8	ΡΕΟΡ1_ΗΟΕνυ	Ногдеит νи1да^е (ячмень)	83,00%	5,00Е-61
029РБ9	ΡΕΟΡ1_ΜΑΙΖΕ	геа тауз (кукуруза)	83,00%	5,00Е-63

- 37 029009

В4СГС19	ΡΕΟΡ2_ΜΑΙΖΕ	геа тауз (кукуруза)	83,00%	6,00Е-62
С5Р4В7	038низ_зоьти	Зо1апит РиЬегозит (картофель)	83,00%	1,00Е-61
Β8ΕΙΡ3	038М47_ЗОЬТи	Зо1апиш РиЬегозит (картофель)	83,00%	3,00Е-62
А8и96	Α4ΚΑ57_ΜΑΙΖΕ	геа шауз (кукуруза)	82,00%	5,00Е-61
А4СРС4	Α4ΖΧ86_ΒΕΑΟΜ	ВгаззФса сатрезРгдз (горчица полевая)	82,00%	3,00Е-61
Ό3Κ177	Α5ΗΟΜ3_ΝΙΟΒΕ	ШсоЫапа ЬепРЬатдапа	82,00%	1,00Е-46
<241344	Α8υ88_ΕΑΡ3Α	ЕарЬапиз з а Р ί чи з (редька)	82,00%	2,00Е-61
081982	Α8υΒ2_ΒΕΑσυ	Вгазз1са ]ипсеа чаг. ти1Р1серз	82,00%	2,00Е-61
Α4ΟΏ57	ΟΟΡΝΣ3_ΜΑΙΖΕ	геа шауз (кукуруза)	82,00%	4,00Е-62
А9ХШ7	ΡΕΟΡ_ΗΕΒΑΝ	НеНапРЬиз аппииз (подсолнечник обыкновенный)	82,00%	3,00Е-59
А9ХШ5	ΡΕΟΡ_ΜΕΕΑΝ	МегсиггаНз аппиа (пролесник однолетний)	82,00%	1,00Е-61
<24<25Ν1	<293МСО_ТОВАС	ЫгсоЫапа РаЬасит (табак настоящий)	82,00%	1,00Е-60
024650	Α0ΜΕΝ1_ΑΕΑΊΉ	АгаЫсЯорз13 РЬаНапа (резуховидка таля)	81,00%	1,00Е-61
Α4ΚΑ32	А1КХКО_ЕЬАОУ	Е1ае13 ди1пеепз13 чаг. Репега (масличная пальма)	81,00%	9,00Е-60
<391604	А1КХК1_ЕЬАОУ	Е1ае1з дитпеепзтз чаг. Репега (масличная пальма)	81,00%	5,00Е-60

<28Ь5О8	А4КА44_СОЕАУ	Согу1из аνе11аηа (лещина обыкновенная) (Согу1из тахгта)	81,00%	8,ООЕ-59
А5А5Д9	Β7Ρ<3Τ8_ΜΕϋΤΕ	МеШсадо РгипсаРи1а (люцерна трибулосовидная) (МесИсадо Ргз.Ъи1о10ез)	81,00%	1,00Е-59
024171	Ο5Ζ4Β6_3ΟΕΒΙ	ЗогдЬит Ысо1ог (сорго обыкновенное) (ЗогдЬит чи1даге)	81,00%	5,ООЕ-59
Α4ΟΌ30	Ό0ΡΕΒ5_ΝΗΕΑΤ	Тг1р1сит аезРччит (пшеница)	81,00%	3,00Е-60
<37Ь7Е2	ΡΕΟΡ_ΒΕΑΝΑ	Вгаззгса париз (рапс)	81,00%	2,00Е-60
Β4ΝΖ39	РЕОР1_ЗОЬЬС	Зо1апит 1усорегз1сит (томат) (Ьусорегз1соп езси1епРит)	81,00%	3,ООЕ-59
Β4Ι1Ν3	РЕОР1_ТОВАС	ГЛсоРгапа РаЬасит (табак настоящий)	81,00%	2,ООЕ-59
СЗУНЕ9	РЕОРЗ_АМВАЕ	АтЬгоз1а агРетъзНРоНа (карликовая амброзия)	81,00%	2,00Е-59
<294X33	РЕОРЗ_АЕАТН	АгаЫйорзгз РЬаНапа (резуховидка таля)	81,00%	1,00Е-60
С1Ви34	РЕОРЗ_НЕУВЕ	Нечеа ЬгазФНепзФз (гевея бразильская) (ЗгрЬопга ЬгазШепз1з)	81,00%	1,00Е-62
А5Д297	РЕОР4_АЕАТН	АгаЫ<1орз1з РЬаНапа (резуховидка таля)	81,00%	1,00Е-61

- 38 029009

БЗВЬВб	01РЕ40_АЕАТН	АгаЬгборзгз РЬаЫапа (резуховидка таля)	81,00%	1,00Е-61
Р8ОВС0	О29РиО_АЕАТН	АгаЬгборзгз РЬаНапа (резуховидка таля)	81,00%	1,00Е-60
А4КА34	Α1ΚΧσ9_ΕΙιΑΘν	Е1аегз дигпеепзгз ν3Γ. Репега (масличная пальма)	80,00%	б,00Е-59
В6Т699	А4СБ06_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	80,00%	8,00Е-59
Ω38Μ47	А4СВЕ8_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	80,00%	5,00Е-59
А9РНХ4	А4СРС4_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	80,00%	9,00Е-60
В7Е355	А4КАЗ9_СОЕАУ	Согу1из ауе11апа (лещина обыкновенная) (Согу1из тахгта)	80,00%	2,00Е-58
Р49232	А4КА40_СОЕАУ	Согу1из ауе11апа (лещина обыкновенная) (Согу1из тахгта)	80,00%	2,00Е-58
В6Т7Х9	А4КА45_СОЕАУ	Согу1из 3νε1ΐ3Π3 (лещина обыкновенная) (Согу1из тахгта)	80,00%	6,00Е-59
О9АХН4	А8и92_ВЕАОС	Вгаззгса о1егасеа ν3Γ. саргРаРа (капуста)	80,00%	7,00Е-60
О5ЕЕР6	А8и96_ВЕАЕА	Вгаззгса гара (репа)	80,00%	7,00Е-60
С7Ь7Б9	А8ЫАО_ВЕАОА	Вгаззгса о1егасеа ν3Γ. а1Ьод1аЬга (капуста декоративная) (Вгаззгса а1Ьод1аЬга)	80,00%	7,00Е-60
В4РУ68	А8иА8_ВЕАЕС	Вгаззгса гара ν3Γ. ригригагга	80,00%	2,00Е-60
<264ЬН2	Α8υΒ6_ΒΕΑΝΑ	Вгаззгса париз (рапс)	80,00%	7,00Е-60
О5ЕЕР8	А9ХШ4_9МУЕТ	ЗоппегаРга а1Ьа	80,00%	1,00Е-26
А4КА44	А9ХШ5_9МУЕТ	ЗоппегаРга сазео1аггз	80,00%	1,00Е-26
А4СБ<26	А9ХШб_9МУЕТ	ЗоппегаРга ον3Ρ3	80,00%	1,00Е-26
<29М7М9	А9ХШ7_9МУЕТ	ЗоппегаРга ареРа1а	80,00%	1,00Е-26
Α4ΟΌ09	Β4ΡΤΧ3_ΜΑΙΖΕ	геа тауз (кукуруза)	80,00%	2,00Е-60
А4ОБЕ7	В6ЕРЗ5_МНЕАТ	ТггРгсит аезРз^ит (пшеница)	80,00%	2,00Е-60
<25ЕЕР7	Β6Τ7Χ9_ΜΑΙΖΕ	геа тауз (Маг2е)	80,00%	5,00Е-60
Ο9Ε9Ζ7	В7Е355_ОЕУЗБ	Огуга заРгча зиЬзр. заропгса (рис)	80,00%	3,00Е-60
А4СЕ44	Β73Α43_ΒΕΑΝΙ	Вгаззгса пгдга (горчица черная) (Згпаргз пгдга)	80,00%	2,00Е-60
А4СЕ47	СЗМ2<27_АМАЕЕ	АтагапРЬиз геРго£1ехиз (щирица запрокинутая) (щирица колосистая)	80,00%	9,00Е-58
Α4ΟΌΤ9	Б7Ь6Н0_АЕАЬЬ	АгаЫЬорзгз 1угаРа зиЬзр. 1угаРа (кардаминопсис лиролистный песчаный)	80,00%	3,ООЕ-61
А4ССЕ5	Б7МСМ9_АЕАЬЬ	АгаЬгЬорзгз 1угаРа зиЬзр. 1угаРа (кардаминопсис лиролистный песчаный)	80,00%	2,00Е-60
С9В535	РЕОР_СНЕАЬ	СНепороДгит а1Ьит (марь белая)	80,00%	9,00Е-60

- 39 029009

А9ХШ6	РЕОР_ЫТСЫ	ЫРсЫ сЫпепзФз (личи)	80,00%	5,00Е-60
Р25843	РЕОР1_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	80,00%	1,00Е-58
Ε2ΑΡΖ9	ΡΕΟΡ1_ΜΉΕΑΤ	ТгФРФсит аезРФчит (пшеница)	80,00%	4,00Е-60
Β4ΜΠΖ7	РЕОР2_АМВАЕ	АтЬгозФа агРетФзФФРоНа (амброзия карликовая)	80,00%	3,00Е-59
Р4РС86	РЕОР2_ЗОЬЬС	Зо1апит ФусорегзФсит (томат) (ЬусорегзФсоп езсиФепРит)	80,00%	6,00Е-59
060ЕД7	РЕОР2_ТОВАС	ЫФсоЫапа РаЬасит (табак настоящий)	80,00%	1,00Е-58
Ε9Η2υ7	ΡΕΟΡ2_ΜΉΕΑΤ	ТгФРФсига аезРФчит (пшеница)	80,00%	5,00Е-60
Е7А2Д9	ΡΕ0Ρ4_ΜΑΙΖΕ	геа тауз (кукуруза)	80,00%	2,00Е-60
Ρ68696	ΡΕΟΡΧ_ΟΕΥ3Ι	Огуга зарфча зиЬзр. тпйФса (рис)	80,00%	3,00Е-60
ϋ3Β642	ΡΕΟΡΧ_ΟΕΥ3σ	Огуга забз^а зиЬзр. оаропхса (рис)	80,00%	3,00Е-60
«2013Η6	ф2ЬО52_С1ЫСА	СФппатотига сатрНога (коричник камфорный) (Ьаигиз сатрЬога)	80,00%	1,00Е-60
Н0ЕУР8	02Р057_ЫТСЫ	ЫбсЫ сЫпепзФз (личи)	80,00%	7,00Е-60
Β9Ν8Ι5	ф84Ж)4_АЕАТН	АгаЫдорзФз ЬЬаНапа (резуховидка таля)	80,00%	3,00Е-60
Ο3Ζ897	<28Ь5О8_РНСЮС	РЬоепФх басбу1Ф£ега (финиковая пальма)	80,00%	5,00Е-60
АЗЬ<2Н2	08УМЕО_ЗОЬЬС	Зо1апит ФусорегзФсит (томат) (ЬусорегзФсоп езсиФепбит)	80,00%	2,00Е-59
С204Р1	<29ΖΤΜ2_ΡΕΤΗΥ	РебипФа ЬуЬгФба (петуния)	80,00%	2,00Е-53
Ρ2ΕΚ80	А4ОСЕЗ_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	7,00Е-58
Α4ΚΑ43	А4ССЕ6_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	1,00Е-57
65Ζ1Ό7	Α4ΟΌ52_ΟΣΕΕυ	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	2,00Е-58
АЗС315	А4СГО53_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	7,00Е-58
Α2Ζ5Υ9	А4СГО54_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	4,00Е-58
Ρ35081	А4СО57_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	7,00Е-58
В4РСР0	А4СО<28_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	1,00Е-57
«29Μ7Ν0	Α4Οϋζ29_ΟΏΕΕυ	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	2,00Е-58
Α4ΚΑ55	А4СГОЕ4_С)ЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	1,00Е-57
Α5ΗΝΥ4	А4СОЕ7_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	3,00Е-58
СОРЫЬЗ	А4СОЗО_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	2,00Е-57

- 40 029009

А4КА59	А4СГО56_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	3,00Е-58
Р35082	А4СГО37_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	5,00Е-58
Β6Τ6Υ5	А4СГО39_ОЬЕЕи	01еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	3,00Е-57
Е2СДВ9	А4СОТ1_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	2,00Е-58
Α0ΜΕΝ1	А4СОи2_ОЬЕЕи	01еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	2,00Е-58
А8иВ2	А4СОи5_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	1,00Е-57
Р52184	А4ОЕ42_ОЬЕЕи	01еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	1,00Е-57
А4КА60	А4ОЕ44_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	4,00Е-58
038904	А4ОЕ47_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	1,00Е-57
«22Ы352	А4СЗЕ50_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	3,00Е-58
Ο29ΡΌ0	А4СЕ53_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	3,00Е-58
А5АЗР9	А4СЕ54_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	1,00Е-57
095ΝΝ7	А4СЕ55_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	2,00Е-58

09РиВ8	А4ОРВ7_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	6,00Е-59
В9ЕКР5	А4СРС2_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	2,00Е-60
О7МСМ9	Α4Κ9Ζ8_ΒΕΤΡΝ	Ве£и1а репс1и1а (береза повислая) (Ве£и1а уеггиеоза)	79,00%	1,00Е-58
Ώ941Η7	А4КА41_СОЕАУ	Согу1из ауеИапа (лещина обыкновенная) (Согу1из тахгта)	79,00%	2,00Е-59
А1КХК0	А5А5Д7_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	2,00Е-57
В7РСТ8	А5А5Д9_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	4,00Е-58
Ββοςνο	А5А089_У1ТУ1	νίϋί3 У1П1£ега (виноград)	79,00%	2,00Е-58
О64ЬН0	Α5Α3Ρ9_νΐΤνΐ	νίϋϊδ У1П1£ега (виноград)	79,00%	1,00Е-60
Р41372	А5ВЬМ8_У1ТУ1	νί£Ϊ3 У1П1£ега (виноград)	79,00%	2,00Е-58
В9ЕКР4	А8иА4_ВКАКР	Вгазз1са гара зиЬзр. рекгпепзгз (китайская капуста) (Вгаззгса рекз.пепз1з)	79,00%	7,00Е-60
А4КА45	А9РНХ4_РОРТЕ	Рори1из бггсЬосагра (бальзамический тополь западный) (Рори1из Ьа1запи£ега зиЬзр. ОггсЬосагра)	79,00%	2,00Е-60
Р49234	А9ХШ8_9МУЕТ	ЗоппегаЫа а1Ьа	79,00%	2,00Е-25
<293Т99	А9ХШ9_9МУЕТ	Зоппегабга сазеоТагхз	79,00%	1,00Е-25

- 41

029009

Α4Κ9Ζ8	Α9ΧΝΚ0_9ΜΥΕΤ	ЗоппегаЫа оуаРа	79,00%	1,00Е-25
05РХ67	В9ЕКР5_Е1ССО	ЕтсФпиз соштиптз (клещевина обыкновенная)	79,00%	2,00Е-60
Α9Ρ8Κ3	Ό63νΤ2_3ΟΥΒΝ	С1усз.пе тах (соя) (С1ус1пе НтзрЫа)	79,00%	2,00Е-59
Α40ϋΤ5	ϋ3Κ177_ΑΕΑΗΥ	АгасЫз Ьуродаеа (арахис)	79,00%	2,00Е-59
А4СЕ48	ϋ6ΒΕΕ6_9ΕΟ3Ι	^ЫорНа сигсаз	79,00%	2,00Е-60
Α40ϋυ3	Ε4ΜΧΌ3_ΤΗΕΗΑ	ТНеНипдФеИа Ьа1орНз.1а (клоповник солевой)	79,00%	5,00Е-58
08Н2С7	Ο7Β7Ό9_ΜΕΌΤΕ	МеЛсадо РгипсаРи1а (люцерна трибулосовидная) (МесНсадо бГ1Ъи1о1йез)	79,00%	3,00Е-59
<28Η123	О7Ь7Е2_МЕОТЕ	Мейтсадо РгипсаРи1а (люцерна трибулосовидная) (МесИсадо бг1Ьи1о10ез)	79,00%	6,00Е-35
С9В536	РЕОР_САРАЛ	СарзФсит аппиит (болгарский перец)	79,00%	4,00Е-58
<23ЬУР0	ΡΕΟΡ_ΡΕΑΑΝ	РгадагФа апапазза (клубника)	79,00%	9,00Е-60
Ρ26199	ΡΕΟΡ1_ΑΜΒΑΕ	АтЬгозФа агбет1311£о11а (амброзия карликовая)	79,00%	2,00Е-58
Е0УР14	РЕОР1_ЫЬЬО	Ы1тит 1опд1£1огит (ричардия)	79,00%	1,00Е-60
Β3Ν5Α1	ΡΕΟΡ1_ΡΗΑνυ	РНазео1из уи1даг1з (фасоль обыкновенная) (РгепсН Ьеап)	79,00%	9,00Е-60

03УМУ5	РЕОР1_Е1ССО	Е1С1пиз соттиптз (клещевина обыкновенная)	79,00%	2,00Е-60
Ό3Β3Ρ0	РЕОР2_НЕУВЕ	Нечеа ЬгазШепзтз (гевея бразильская) (31р1юп1а ЬгазШегшз)	79,00%	2,00Е-59
Ό3ΤΟΌ6	РЕОР2_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	79,00%	7,00Е-58
Р26200	РЕОРЗ_ТОВАС	ШсоРтапа РаЬасит (табак настоящий)	79,00%	2,00Е-57
Е9С081	ΡΕΟΡ3_ΝΗΕΑΤ	Тгз.£1сит аезРгчит (пшеница)	79,00%	1,00Е-58
С5МСР8	02ΚΝ24_ΑΜΒΑΕ	АтЬгоз1а агРетьзИРоНа (амброзия карликовая)	79,00%	6,00Е-57
А4КА51	А4ОСЕ5_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	78,00%	3,00Е-57
А4СРСЗ	А4ССЕ7_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	78,00%	2,00Е-57
А4ОРС0	А4ССЕ8_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	78,00%	2,00Е-57
Р2СТ70	А4СС31_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	78,00%	6,00Е-57
С5ХД77	Α4Οϋ55_ΟΙιΕΕυ	О1еа еигораеа (олива европейская)	78,00%	6,00Е-57
А4СРВ8	А4СГО5б_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	78,00%	3,00Е-57
004725	А4СГОВ1_О1|ЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	78,00%	2,00Е-57

- 42 029009

Ρ2Ε5Ω1	Α4ΟϋΕ6_ΟΏΕΕυ	О1еа еигораеа (олива европейская)	78,00%	4,00Е-57
Ο9Ι6Ο5	А4ООЕ9_ОЬЕЕи	01еа еигораеа (олива европейская)	78,00%	2,00Е-57
А4КА56	А4СОТО_ОЬЕЕи	01еа еигораеа (олива европейская)	78,00%	9,00Е-58
Β6ΤΕΝ9	А4ООТЗ_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	78,00%	6,00Е-57
049894	А4СОТ5_ОЬЕЕи	01еа еигораеа (олива европейская)	78,00%	2,00Е-57
038905	Α4ΟΌΤ9_ΟΙιΕΕυ	01еа еигораеа (олива европейская)	78,00%	3,00Е-57
01РР40	А4ООи0_ОЬЕЕи	01еа еигораеа (олива европейская)	78,00%	6,00Е-57
А8Ы88	Α4ΟΏυ6_ΟΏΕΕυ	01еа еигораеа (олива европейская)	78,00%	6,00Е-57
Ο7Ώ6Η0	А4ОЕ38_ОЬЕЕи	01еа еигораеа (олива европейская)	78,00%	9,00Е-58
Α4ΖΧ86	А4ОЕ39_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	78,00%	1,00Е-57
А4КА57	А4ОЕ45_ОЬЕЕи	01еа еигораеа (олива европейская)	78,00%	2,00Е-57
095МСО	А4ОЕ48_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	78,00%	3,00Е-57
082572	А4ОРВ9_ОЬЕЕи	01еа еигораеа (олива европейская)	78,00%	2,00Е-59
О9ЬЕ18	Α7ΧΖσ9_ΟΣΕΕυ	01еа еигораеа (олива европейская)	78,00%	8,00Е-56
09ХР38	А9Р7РО_СОЗН1	Соззуртиш Ыгзибит (хлопчатник шерстистый) (Соззургига техъсапит)	78,00%	2,00Е-58
03ВС58	А9РВ12_РОРТЕ	Рори1из Ьг1с1юсагра (бальзамический тополь западный) (Рори1из Ьа1заш1£ега зиЬзр. бг1сЬ.осагра)	78,00%	2,00Е-59
09ХР41	ВОВОМ7_МАЫЗО	Ма1из бошезЫса (яблоня) (Ругиз та1из)	78,00%	9,00Е-60
Α4ΟΏ52	Β4Ρν68_ΜΑΙΖΕ	геа тауз (кукуруза)	78,00%	3,00Е-59
Α4ΟΌ36	В6СОУО_9ЕОЗА	Ргипиз би1с13 х Ргипиз регз1са	78,00%	1,00Е-59
05ЕЕР5	Β7νΡΡ6_ΜΑ13ΌΟ	Ма1из ботезЫса (яблоня) (Ругиз та1из)	78,00%	2,00Е-48
Α4ΟΌ57	В9ЕКР4_Е1ССО	Е1С1Пиз соттипгз (клещевина обыкновенная)	78,00%	3,00Е-59
024170	Β9Ε0Ό3_ΕΙΟΟΟ	Е1с1пиз соттип13 (клещевина обыкновенная)	78,00%	1,00Е-58
А5А567	Ο9Ε9Ζ7_9ΜΑΟΝ	АкеЫа £г1£о11а£а	78,00%	4,00Е-58
А4ССЕ7	Ό3υΐΟ2_ΟΟ3ΕΑ	Соззуртит гагтопбЫ (хлопчатник новосветский)	78,00%	2,00Е-58
027НХ6	ϋ3υΐΟ3_ΟΟ3ΑΕ	Соззуртит агЬогеит (многолетний хлопчатник) (Соззуртиш папка, пд)	78,00%	2,00Е-58

- 43 029009

вбсоив	Ε6Υ2Μ0_5ΙΝΑΙι	Зхпаргз а1Ъа (горчица белая) (Вгазз1са Ыгба)	78,00%	б,00Е-57
О7МСМ8	Ρ4ΥΡ99_ΟΑΜ3Ι	СатеШа 31пепз1з (чай)	78,00%	5,00Е-58
С9В539	ΡΕΟΡ_ΒΕΤΡΝ	Ве£и1а реп<3и1а (береза повислая) (Ве£и1а уеггисоза)	78,00%	1,00Е-57
А9иК87	РЕОР1_НЕУВЕ	Ηβνβ3 ЬгазШепзгз (гевея бразильская) (ЗгрЬопга ЬгазШепз1з)	78,00%	7,00Е-58
В4КОО2	РЕОР2_ЫЬЬО	ЬШит 1опд1£1огиш (ричардия)	78,00%	2,00Е-57
Ρ8ΩΝΧ6	РЕОРЗ_ОЬЕЕи	01еа еигораеа (олива европейская)	78,00%	2,00Е-57
Β3ΕΙΧ1	ΡΕΟΡ5_ΜΑΙΖΕ	геа тауз (кукуруза)	78,00%	3,00Е-59
Β8ΕΙΡ9	00ΡΡ33_3ΟΥΒΝ	О1ус1пе тах (соя) ((31ус1пе Ызр10а)	78,00%	2,00Е-58
Ρ8Ρ9Υ4	<22ΚΝ23_ΑΜΒΑΕ	АтЬгозга аЛепизШоПа (амброзия карликовая)	78,00%	4,00Е-56
Ε9Ό690	<22ΧΡΗ2_ΜΑΝΙΝ	Мапдг£ега гпЫса (манго)	78,00%	5,00Е-58
ΟΟΝ7Ρ8	05ЕЕР5_РЕТСЕ	РебгозеИпит сггзрига (петрушка) (РебгозеИпит Ьогбепзе)	78,00%	5,00Е-58
Р9Х7В2	<25ЕЕР7_РЕТСЕ	РебгозеИпит сггзрит (петрушка) (РебгозеИпит ЬогЕепзе)	78,00%	4,00Е-58
Ο7Ζ4σ3	<25ΧΧ05_ΑΕΑΗΥ	АгасЫз Ьуродаеа (арахис)	78,00%	2,00Е-55
рогдсб	<264ЬНЗ_НЦМ5С	Нити1из зсапЬепз (хмель) (Нити1орз13 зсапЗепз)	78,00%	1,ООЕ-бО
09Р1ГО1	Α4ΟΌ50_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	77,00%	4,00Е-57
Р35083	Α4ΟΏ58_ΟΏΕΕυ	О1еа еигораеа (олива европейская)	77,00%	2,00Е-56
А4КА58	А4СГОЕЗ_ОЬЕЕи	01еа еигораеа (олива европейская)	77,00%	2,00Е-56
038низ	Α4ΘϋΤ4_ΟΙ3ΕΕυ	О1еа еигораеа (олива европейская)	77,00%	2,00Е-56
С7ВД7	Α4ΟΌυ3_ΟΙιΕΕυ	01еа еигораеа (олива европейская)	77,00%	7,00Е-57
О64ЬНЗ	А4СЕ49_ОЬЕЕи	О1еа еигораеа (олива европейская)	77,00%	3,00Е-56
А4СРВ9	Α7ΧΖσ7_3ΟΥΒΝ	С1ус1пе шах (соя) (О1ус1пе Ызр10а)	77,00%	2,00Е-58
Ω84ΕΕ7	Α8νΤ60_ΑΜΑνΐ	АтагапбНиз νίτίάίΒ (щирица тонкая)	77,00%	2,00Е-57
«29АХН5	Α9Ρ8Ν4_ΡΟΡΤΕ	Рори1из ЪгхсЬосагра (тополь бальзамический западный) (Рори1из Ьа1заш1£ега зиЬзр. Рг1с1юсагра)	77,00%	4,00Е-57
024169	ΒΟΒΟΝ5_ΜΑ1ιΏΟ	Ма1из ЬошезЫса (яблоня) (Ругиз та1из)	77,00%	2,00Е-57
Β9Ε<2ϋ3	ВОВОЫб_МАЬОО	Ма1из (Зошезбгса (яблоня) (Ругиз та1из)	77,00%	1,00Е-56
А4СЕ53	Β6ΟΑΤ2_ΟΕΕΗΥ	ОегЬега ЬуЬггЬа (ромашка)	77,00%	5,00Е-58

- 44 029009

А4СО54	В7УРР4_МАЫ)О	МаФиз ботезбФса (яблоня) (Ругиз та1из)	77,00%	5,00Е-58
О84ЕЕ5	С6ДТ04_9МУЕТ	ЗоппегабФа а1Ьа	77,00%	1,00Е-29
А4СЕ45	ОЗСС01_9ЕО31	ДабгорНа сигсаз	77,00%	2,00Е-58
А4СЮ39	П7Ь6Н1_АЕАЬЬ	АгаЪФЗорзФз Фугаба зиЬзр. Фугаба (кардаминопсис песчаный лиролистный)	77,00%	3,00Е-54
Ε6Υ2Μ0	ЕОХДЬ2_СОЗН1	СоззурФит ЬФгзибит (хлопчатник шерстистый) (СоззурФит техФсапит)	77,00%	4,00Е-58
С9В5У1	С9В5иЗ_СОЗЕА	СоззурФит гаФтотФФФ (хлопчатник новосветский)	77,00%	5,00Е-37
С9В5иЗ	С9В5и8_СОЗАЕ	СоззурФит агЬогеит (многолетний хлопчатник) (СоззурФит папкФпд)	77,00%	5,00Е-37
С9В617	С9В5и9_СОЗНЕ	СоззурФит ЬегЬасеит (хлопчатник травянистый) (АгаЬФап соббоп)	77,00%	5,00Е-37
С9В615	С9В5УО_СОЗНЕ	СоззурФит ЬегЬасеит зиЬзр. а£гФсапит	77,00%	5,00Е-37
С9В613	С9В5У1_СОЗВА	СоззурФит ЬагЬаЬепзе (хлопчатник барбадосский) (ЕдурбФап соббоп)	77,00%	5,00Е-37
С9В612	Ο9Β5ν2_ΘΟ3ΌΑ	СоззурФит ЬагмФпФФ (дарвинский хлопчатник)	77,00%	5,00Е-37

С9В611	С9В5У4_СОЗН1	СоззурФит ЬФгзибит (хлопчатник шерстистый) (СоззурФит техФсапит)	77,00%	5,00Е-37
С9В5Р7	РЕОР_АЫАСО	Апапаз сотозиз (ананас) (Апапаз апапаз)	77,00%	7,00Е-58
Ε1Ζ004	РЕОР_СЕОЗА	Сгосиз забфуиз (шафран)	77,00%	2,00Е-57
ΟΟΖ2ΖΟ	РЕОР_СиСМЕ	СиситФз те1о (дыня мускусная)	77,00%	7,00Е-58
А9ХШ9	РЕОР_РЕиРЕ	Ргипиз регзФса (персик) (АтудйаФиз регзФса)	77,00%	5,00Е-59
А9ХШ8	РЕОР_РУЕСО	Ругиз соттипФз (груша) (Ругиз ЬотезбФса)	77,00%	б,00Е-59
Ό8ϋ668	РЕОР1_АЕАТН	АгаЬФсФорзФз бЬаФФапа (резуховидка таля)	77,00%	9,00Е-55
Α1ΥΩΧ7	ΡΕΟΡ1_ΑΕΤνυ	АгбетФзФа УиФдагФз (полынь обыкновенная)	77,00%	7,00Е-55
С1ВР76	РЕОР1_МА1ГОО	МаФиз ЬотезбФса (яблоня) (Ругиз таФиз)	77,00%	4,00Е-58
В4БЕ73	ΡΕΟΡ1_3ΟΥΒΝ	СФусФпе тах (соя) (СФусФпе ЬФзрФсФа)	77,00%	3,00Е-58
Ό5ΑΒσ3	РЕОР2_МАЫЭО	МаФиз «ФотезбФса (яблоня) (Ругиз таФиз)	77,00%	1,00Е-58
Ό3ΤΚΤ4	ΡΕΟΡ2_ΡΑΕιΐυ	РагФебагФа зисФаФса (постенница аптечная) (РагФебагФа <ФФ££иза)	77,00%	4,00Е-55
08Т938	ΡΕΟΡ2_5ΟΥΒΝ	СФусФпе тах (соя) (СФусФпе ЬФзрФЗа)	77,00%	5,00Е-58

- 45 029009

СЮУРО	РЕОРЗ_МАЬОО	Ма1из ЬотезРгса (яблоня) (Ругиз та1из)	77,00%	2,ООЕ-57
<295УР7	РЕ0Р4_НЕУВЕ	Ηеνеа ЬгазШепзгз (гевея бразильская) (ЗгрЬопга ЬгазШепзгз)	77,00%	1,00Е-58
Β3ΜΜΩ1	РЕ0Р5_НЕУВЕ	Немеа ЬгазШепзгз (гевея бразильская) (ЗгрЬопга ЬгазШепзхз)	77,00%	7,00Е-60
Р4ЕБ03	Ω27ΗΧ6_ΜΑΝΙΝ	Мапдл.£ега гпйгса (манго)	77,00%	3,00Е-57
Ό2Ό5Ε4	<23ВС32_МА1ЮО	Ма1из СотезЫса (яблоня) (Ругиз та1из)	77,00%	2,ООЕ-57
Β2ΖΕΤ3	03ВС34_МАЫЭО	Ма1из СотезЫса (яблоня) (Ругиз та1из)	77,00%	5,00Е-59
В4С6Б5	ОЗВСЗб_МАЬОО	Ма1из СотезРгса (яблоня) (Ругиз та1из)	77,00%	3,00Е-59
Α7ΧΖΚ1	<23ВС38_МАЫЮ	Ма1из СотезЫса (яблоня) (Ругиз та1из)	77,00%	6,00Е-59
Р1БВХ8	<23ВСТО_МАЬОО	Ма1из СотезРгса (яблоня) (Ругиз та1из)	77,00%	4,00Е-58
06СРТ8	<25ХЮЕ1_С1ТЬА	СгРгиНиз 1апаРиз (арбуз) (СгРгиНиз ми1даггз)	77,00%	8,00Е-59
Е4У5Р8	<284ММ5_СиСМЫ	Сиситгз те1о маг. сапРа1ирепз!3 (дыня мускусная сетчатая) (Сиситгз те1о маг. геР1си1аРиз)	77,00%	2,00Е-58
Α5ΌΤ33	084ΕΕ5_ΜΑΣϋΟ	Ма1из СотезРгса (яблоня) (Ругиз та1из)	77,00%	2,00Е-57

Β8ΕΙΡ7	<284ЕЕ6_МАЫЮ	Ма1из СотезЫса (яблоня) (Ругиз та1из)	77,00%	2,00Е-58
О8ВА18	084ЕЕ7_МА1ЛЗО	Ма1из ЬотезРхса (яблоня) (Ругиз та1из)	77,00%	5,00Е-59
С5РСС6	<29АХН4_СОЕАУ	Согу1из аме11апа (лещина обыкновенная) (Согу1из тахгта)	77,00%	3,00Е-59
Ώ86ΕΟ5	09АХН5_СОЕАУ	Согу1из амеИапа (лещина обыкновенная) (Согу1из тахгта)	77,00%	6,00Е-59
А4КА36	Α1Ζ292_ΟΟΟΝυ	Сосоз пис1£ега (кокос)	76,00%	2,ООЕ-57
А4КА4 9	Α1Ζ294_ΟΑΕΜΙ	СагуоРа тгРгз (пальма жгучая бирманская)	76,00%	3,ООЕ-57
Α7ΧΖσ7	ВЗТЬУ2_ЕЬАСУ	Е1ае1з дигпеепзгз маг. Репега (масличная пальма)	76,00%	3,ООЕ-57
02ХРН2	В8ВС75_ОЕУ31	Огуга заРгма зиЬзр. 1п01са (рис)	76,00%	9,00Е-52
Β0Β0Ν5	С6ДМН0_ЗАЬКА	За1зо1а каИ (солянка русская)	76,00%	3,00Е-55
А4СГО56	О7МСМ8_АЕАЬЬ	АгаЫСорзгз 1угаРа зиЬзр. 1угаРа (кардаминопсис лиролистный песчаный)	76,00%	4,00Е-55
Α1Ζ294	Ό7 МЛи1_АЕАЬЬ	АгаЬгСорзгз 1угаРа зиЬзр. 1угаРа (кардаминопсис лиролистный песчаный)	76,00%	7,00Е-55
Α9Ρ8Ν4	ϋ7ΤΒΕ7_νΐΤνΐ	νίΡΪ3 мгпгРега (виноград)	76,00%	7,ООЕ-57

- 46 029009

Α7ΧΖσ9	Ρ2ΕΟ06_Η0ΕνΌ	НогЗеит чи1даге νβΓ. с1тзбхсНит (ячмень двурядный)	76,00%	1,00Е-56
С9В603	ΡΕΟΡ_ΑΡΙΟΕ	Архит дгауео1епз (сельдерей)	76,00%	2,00Е-58
Ο9Β5Ζ9	ΡΕΟΡ_ΑΕΑΗΥ	АгасЬхз Нуродаеа (арахис)	76,00%	9,ООЕ-57
С6СГТ04	ΡΕ0Ρ_ΌΑυ0Α	Оаисиз сагоба (морковь)	76,00%	8,ООЕ-59
А9ХШ4	ркор_мизАс	Миза аситхпаба (банан) (Миза саνеηά^зϊ1^^)	76,00%	2,ООЕ-55
Β8ΕΙΡ1	ρκορι_ΡΑκσυ	Рагхебагха зиЗахса (постенница аптечная) (Рагхебагха йх££иза)	76,00%	5,00Е-56
Ρ19984	РЕОРЗ_ЫЬЬО	ЬШит 1опдх£1огит (ричардия)	76,00%	5,00Е-56
Ο5ΚΝΟ6	РЕОР6_НЕУВЕ	Немеа ЬгазхИепзхз (гевея бразильская) (ЗхрНопха ЬгазхИепзхз)	76,00%	3,ООЕ-59
Ό2Ό3Ν5	<25ЕЕРб_РЕТСЕ	РебгозеИпиш сгхзрит (петрушка) (РебгозеИпиш Ногбепзе)	76,00%	3,ООЕ-59
Ε9Ε950	<25ЕЕР8_РЕТСЕ	РебгозеИпиш сгхзрит (петрушка) (РебгозеИпиш Ногбепзе)	76,00%	8,ООЕ-59
Ρ53696	07Е369_СиСМЫ	Сиситхз те1о νηΓ. сапба1ирепзхз (дыня мускусная сетчатая) (Сиситхз те1о νа^. гебхси1абиз)	76,00%	1,ООЕ-57
Α4ΗΚ30	09ΧΡ10_9Α3ΡΑ	гибридный культивар РЬа1аепорзхз	76,00%	2,ООЕ-55
Ρ35079	А1В<2К7_СиС5А	Сиситхз забхчиз (огурец)	75,00%	5,ООЕ-18
Α4ΚΑ52	Α1Ζ293_ΕΟΥΕΕ	Еоузбопеа гедха (пальма кубинская королевская)	75,00%	3,00Е-56
Α4ΟΕ50	Β60<2ϋ8_9Ε03Α	Ргипиз с1и1схз х Ргипиз регзхса	75,00%	9,ООЕ-57
А4ССЕЗ	Ο0Ζ3Ο0_ΑΕΑΤΗ	АгаЪхборзхз бНаПапа (резуховидка таля)	75,00%	9,ООЕ-55
Α9ΧΝΚ0	ΡΕ0Ρ_ΡΕυυυ	Ргипиз с1и1схз (миндаль) (Ргипиз атудс1а1из)	75,00%	9,ООЕ-57
В0М2иб	РЕОР2_АЕАТН	АгаЫдорвъз ЬЪаНапа (резуховидка таля)	75,00%	9,ООЕ-55
<26ЕС01	ΡΕΟΡ2_ΑΕΤνυ	Агбетхзха νи1да^^з (ПОЛЫНЬ обыкновенная)	75,00%	1,00Е-53
Ρ39825	05ЕЕР4_РЕТСЕ	РебгозеИпиш сгхзрит (петрушка) (РебгозеИпиш Ногбепзе)	75,00%	5,ООЕ-55
Ε7Ό158	<264ЬН4_НЦМ5С	Нигаи1из зсап0епз (хмель) (Нити1орзхз зсапдепз)	75,00%	2,ООЕ-57
Α735Ε6	<28ОТ4 О_РЕиРЕ	Ргипиз регзхса (персик) (Ашудйа1из регзхса)	75,00%	7,ООЕ-57
Ω93ΥΟ7	А9Р8КЗ_РОРТЕ	Рори1из бгхсНосагра (тополь западный бальзамический) (Рори1из Ьа1затх£ега зиЬзр. бгхсНосагра)	74,00%	2,ООЕ-57
Α40ϋΤ1	Β4ΡΚ52_ΜΑΙΖΕ	геа тауз (кукуруза)	74,00%	6,00Е-35

- 47 029009

Е0ХЛЬ2	Β6Ί\190_ΜΑΙΖΕ	геа тауз (кукуруза)	74,00%	2,ООЕ-Зб
В7УРР5	ΡΡΟΡ_ΡΕϋΑν	Ргипиз ачхит (вишня)	74,00%	4,00Е-56
Р18322	ΡΕΟΡ5_ΑΕΑΤΗ	АгаЬхЬорзхз РЬаЫапа (резуховидка таля)	74,00%	6,00Е-53
Α1ΚΥΥ2	07Х9<20_СиСМЕ	Сиситхз те1о (дыня мускусная)	74,00%	2,ООЕ-55
А1КХЛ2	07Υ253_003ΗΙ	Соззурхит ЬхгзиРит (хлопчатник шерстистый) (Соззурхит теххсапит)	74,00%	2,00Е-56
«25А786	<28Η123_ΑΕΑΊΉ	АгаЬхйорзхз РЬаЫапа (резуховидка таля)	74,00%	6,00Е-53
Ο4ΥΌΜ2	<28Н2С7_АЕАТН	АгаЪхс1орзхз РЬаЫапа (резуховидка таля)	74,00%	6,00Е-53
Ρ1Α3Κ2	О8ЬСЛ_АЕАТН	АгаЬхйорзхз РЬа Папа (резуховидка таля)	74,00%	4,ООЕ-54
Ω8ΟΤ39	А8УТ57_АМАУ1	АтагапРЬиз чхгхЛз (щирица тонкая)	73,00%	3,ООЕ-54
03ВС34	Α9ΝΜΕ7_ΡΙΟ3Ι	Рхсеа зхРсЬепзхз (ель ситхинская) (Рхпиз зхРсЬепзхз)	73,00%	3,00Е-51
Ρ22271	РЕ0Р1_С1Т31	СхРгиз зхпепзхз (апельсин сладкий) (СхРгиз аигапРхит чаг. зхпепзхз)	73,00%	1,ООЕ-54
ϋ3υΐΟ3	Β3Η795_ΑΕΑΤΗ	АгаЪхс1орзхз РЬаЫапа (Резуховидка таля)	72,00%	9,00Е-31
Ρ4ΥΡ99	Β8ΕΙΡ1__ΡΙΝ3Υ	Рхпиз зу1чезРгхз (сосна обыкновенная)	72,00%	2,00Е-20

Е4МХОЗ	Β8ΕΙΡ3_ΡΙΝ3Υ	Рхпиз зу1чезРгхз (сосна обыкновенная)	72,00%	8,00Е-14
В6САТ2	Β8ΕΙΡ9_ΡΙΝ3Υ	Рхпиз зу1чезРгхз (сосна обыкновенная)	72,00%	6,00Е-16
Α4ΟΏ53	ΟΟΖ2ΖΟ_ΑΕΑΤΗ	АгаЬхдорзхз РЬаЫапа (резуховидка таля)	72,00%	9,00Е-31
А4СЕ54	С5ЛЗиО_СНЕАЬ	СЬепоросЫит а1Ьит (марь белая)	72,00%	3,00Е-50
А4СЮ55	Ε2Ό0Υ9_3Α]3ΚΑ	За1зо1а ка1х (солянка русская)	72,00%	4,00Е-52
О2ХТС1	<23ЬУР0_ТАЕОР	Тагахасит о££хсхпа1е (одуванчик лекарственный) (ЬеопРойоп Рагахасит)	72,00%	1,00Е-26
065810	Β7νΡΡ5_ΜΑ]3ΌΟ	Ма1из йотезРхса (яблоня) (Ругиз та1из)	70,00%	2,00Е-26
А431Р7	01ЕМ<23_РЬАМЛ	Р1апРадо тадог (подорожник большой)	70,00%	6,00Е-53
Ο5Ζ4Β6	Α9ΝΝ37_ΡΙΟ3Ι	Рхсеа зхРсЬепзхз (ель ситхинская) (Рхпиз зхРсЬепзхз)	68,00%	6,00Е-51
Α4ΟΏΕ8	А9Р2А1_Р1С31	Рхсеа зхРсЬепзхз (ель ситхинская) (Рхпиз зхРсЬепзхз)	68,00%	2,00Е-50
ВЗТЬУ2	О5АВЛЗ_Р1С31	Рхсеа зхРсЬепзхз (ель ситхинская) (Рхпиз зхРсЬепзхз)	67,00%	3,00Е-19
093ТВ6	Α5ΑΜ47_νΐΤΥΙ	УхРхз чхпх£ега (виноград)	65,00%	2,ООЕ-24

- 48 029009

Таблица 5

Положение №	Аминокислотные вариации	Положение №	Аминокислотные вариации
5	Т или А	59	Н или Υ или Т, или Р или 3
8	Ό или Υ или N	63	Т или I
9	Ό или Е	65	М или Ь
12	М или С или Ь	66	Р или Ь или I, или Н или Υ
14	Е или ϋ	67	V или I, или Ь
15	I или V	68	А или С
16	Е или Ό	69	<3 или А или Т, или 3 или Р
18	Н или Ь или 0 или N	70	А или Т
19	НО	81	А или Е, или V
20	ьн	83	I или Т
21	А или 3, или Т, или С	89	А или 3, или Т, или Р
22	3 или А	92	I или V
23	А или Т	94	Ь или I, или V
26	Р или Ь, или I, или V, или А	98	С или N
28	Н или 0	99	0 или М
29	ϋ или 0, или А	100	А или 3
31	Т или А, или 3	101	Ь или М
32	V или Т, или А	102	V или I
37	А или Т, или Р, или 3	103	Ь или I, или V
38	Ό или А, или Т, или N	105	I или V

41	0 или 3, или Е, или А, или Ь	107	Ό или Е
43	К или А, или 0	110	М или Ь
44	Р или Т, или А	116	N или 3, или Ό
45	Е или А, или N	117	М или Ь
46	Е или ϋ	118	V или I
47	I или М, или V	119	V или I
48	Т или А, или 3	120	Е или С
49	С или Ν, или А	121	Е или К
50	I или V	127	V или Ь, или М
51	М или I	128	Е или К
52	К или N	131	М или Ь, или 0, или Р
55	ϋ или А

- 49 029009

Таблица 6

	ГРУППА	ПОДГРУППА
Гидрофобные	РМУНКМГЬУТАСС	Ароматические Алифатические	ΡΜΥΗ 1ЬУ
		Заряженные	ΗΚΕΕΏ
Полярные	ΝΥΗΚΕΕϋΟ3ΤΝ0	Положительно заряженные	НКЕ
		Отрицательно заряженные	ΕΌ
Небольшие	νΟΑΟΒΡΤΝϋ	Очень маленькие	АССЗ

Таблица 7

ΗΪ3 (Н)	ароматический, полярный, гидрофобный, заряженный (+)	(Агд, Ьуз)
ТПг (Т)	полярный, гидрофобный, нейтральный, небольшой	Зег, Суз
Не (I)	алифатический, гидрофобный, нейтральный	Ьеи, Уа1
Уа1 (V)	алифатический, гидрофобный, нейтральный	Ьеи, 11е
Ьуз (К)	полярный, гидрофильный, заряженный (+)	Агд
Тгр (Ю	ароматический, полярный, гидрофобный, нейтральный	Туг, РНе
Ьеи (Ь)	алифатический, гидрофобный, нейтральный	Не, Уа1
Туг (Υ)	ароматический, полярный, гидрофобный	Тгр, РПе

Таблица 8

Коды аминокислот	Свойства (физические, химические, структурные)	Подходящие консервативные замены
А1а (А)	алифатический, гидрофобный, нейтральный, небольшой	-
Мер (М)	гидрофобный, нейтральный	-
Суз (С)	полярный, гидрофобный, нейтральный, небольшой	Зег, ТПг
Азп (Ν)	полярный, гидрофильный, нейтральный, небольшой	О1п
Азр (Ό)	полярный, гидрофильный, заряженный (-)	С1и
Рго (Р)	гидрофобный, нейтральный, небольшой	(ТЬг)
С1и (Е)	полярный, гидрофильный, заряженный (-)	Азр

- 50 029009

С1п (0)	полярный, гидрофильный, нейтральный	Азп
РЬе (Р)	ароматический, гидрофобный, нейтральный	Туг, Тгр
Агд (К)	полярный, гидрофильный, заряженный (+)	Ьуз
С1у (О	алифатический, гидрофобный, нейтральный, небольшой	-
Зег (3)	полярный, гидрофильный, нейтральный, небольшой	ТЬг, Суз
Н1з (Н)	ароматический, полярный, гидрофильный, заряженный (+)	(Агд, Ьуз)
ТЬг (Т)	полярный, гидрофильный, нейтральный, небольшой	Зег, Суз
Не (I)	алифатический, гидрофобный, нейтральный	Ьеи, Уа1
Уа1 (V)	алифатический, гидрофобный, нейтральный	Ьеи, Не
Ьуз (К)	полярный, гидрофильный, заряженный (+)	Агд
Тгр (Ν)	ароматический, полярный, гидрофобный, нейтральный	Туг, РЬе
Ьеи (Ь)	алифатический, гидрофобный, нейтральный	11е, Уа1
Туг <¥)	ароматический, полярный, гидрофобный	Тгр, РЬе

Список последовательностей

ЗЕ<2 ΙΌ N0:1:

>зр|024650|РЕОР2_РНЬРЕ РгоНПп-2/4 05 = РЪ1еит ргаЬепве ΟΝ=ΡΕΟ2 РЕ=1 ЗУ=1

МЗМОТУУОЕНЬМСЕ1ЕСННЬА5АА1ЬСНОСТ7НАОЗАВРРОРКРЕЕ1ТС1МКОРОЕРСНЬАРТ

ΟΜΡνΑΟΑΚΥΜνίΟΟΕΡΟΑνίΕΘΚΚσΑΟΘΙΤΙΚΚΤΘΟΑΙ,ννΟΙΥΟΕΡΜΤΡΟΟΟΝΜννΕΕΙ,ΟΟΥΙ,

УЕОСМ

- 51 029009

8Ε<2 Ιϋ N0:2:

>зр|024282|РЕОРЗ_РНЬРЕ ΡΓθίίΙίη-З ОЗ = РЫешп рга£епзе ΟΝ=ΡΕΟ3 РЕ=1 ЗУ=1

МЗМОТУУБЕНЬМСЕ1ЕСННЬАЗАА1РСНООТУМАОЗАОРРОРКРЕЕ1ТС1МКОЬОЕРОНЬАРТ

СМРУАААКУМУ10ОЕРСАУ1ЕСККОАОС1Т1ККТОСАЬУУС1УОЕРМТРО0СПМУУЕЕЬСО¥Ь

УЕОСМ

ЗЕ<2 ΙΌ N0:3:

>зр|Р35079|РЕ0Р1_РНЬРЕ ΡΓθ£ί1ίη-1 08=РЪ1еит рга£епзе ΟΝ=ΡΕΟ1 РЕ=1 ЗУ=1

МЗЮОТУУОЕНЬМСЕ1ЕСННЬАЗАА1ЬСНБСТУ1ЛАОЗАОРРОРКРЕЕ1ТС1МКОРОЕРОН1,АРТ

ΟΜΡνΑΟΑΚΥΜνίςΟΕΡΟΕνίΕΟΚΚΟΑΟΟΙΤΙΚΚΤΟΟΑΕλ/νΟΙΥϋΕΡΜΤΡΟΩΟΝΜννΕΕΕΟΌΥΕ

УЕ<2СМ

ЗЕО ΙΌ N0:4:

>£г|А4КА31|А4КА31_РНЬРЕ ΡΓοίίΙίη 03=РЫешп ргаСепзе РЕ=2 ЗУ=1 Μ5ΜΟΑΥνΌΕΗ1ιΜΟΕΙΕΟΗΗΙ,Α3ΑΑΙ1ιΘΗΟΟΤνΜΑζ)3ΑΌΡΡΟΡΚΡΕΕΙΤΟΙΜΚΟΡΌΕΡΟΗΙ±ΑΡΤ ΟΜΡνΑΤΑΚΥΜνίΟΟΕΡΟΑνίΕΟΚΚΟΑΟΟΙΤΙΚΚΤΟΟΑΣννΟΙΥΟΕΡΜΤΡαΟΟΝΜννΕΕΕΟΟΥΕ ЬКООЬ

ЗЕО Ιϋ N0:5:

>ег |А4КА32 |А4КА32_РНЬРЕ ΡΓθ£ί1ίη 05 = РЫеит рга£епзе РЕ=2 ЗУ=1 МЗМОАУУБЕНЬМСЕ1ЕОННЬАЗАА1ЬСНООТУМАОЗАОРРОРКРЕЕ1ТС1МКОРОЕРСНЬАРТ ΟΜΡνΑΑΑΚΥΜνίΟΟΕΡΟΑνίΕΟΚΚΟΑΟσίΤΙΚΚΤΟΟΑΕννΟΙΥΌΕΡΜΤΡαΟΟΝΜννΕΕΕΟϋΥΕ УКОСЬ

3Εζ) ΙΏ N0:6:

>£г|А4КАЗЗ|А4КАЗЗ_РНЬРЕ ΡΓθ£ί1ίη 05=РЪ1еит рга£епзе РЕ=2 ЗУ=1 МЗМОТУУБЕНЬМСЕ1ЕСННЬАЗАА1ЬОНЕСТУМАОЗАОРР<2РКРЕЕ1ТС1МКЕРОЕРСНЬАРТ ΟΜΡνΑΑΑΚΥΜνίΟΟΕΡαΑνίΕΟΚΚΟΑΟΟΙΤΙΚΚΤΟΟΑΙΛ/νΟΙΥϋΕΡΜΤΡΟΟΟΝΜννΕΕΙισΟΥΕ ЬКОСЬ.

ЗЕО Ιϋ N0:7:

>£г | А4КА34 | А4КА34_РНЬРЕ Рго£Шп 08=РЫеит рга£епзе РЕ=2 ЗУ=1 МЗМОТ¥УОЕНЬМСЕ1ЕСННЬАЗАА1ЬОНООТУНАОЗАОРРОРКРЕЕ1ТС1МКОРОЕРСНЬАРТ ΟΜΡνΑΤΑΚΥΜνίΟΟΕΡΟΑνίΕΟΚΚΟΑΟΟΙΤΙΚΚΤΟΟΑΒννΟΙΥϋΕΡΜΤΡΟΟΟΝΜννΕΕΕΟΟΥΕ ЬКОСЬ

ЗЕО ΙΌ N0:8:

>£г|А4КА36|А4КА36_РНЬРЕ ΡΓθ£ί1ίη 08=РЫеит рга£епве РЕ=2 ЗУ=1 МЗМОАУУОЕНЬМСЕ1ЕОННЬАЗАА1ЬОНВСТУМАОЗАОРРОРКРЕЕ1ТС1МКОРБЕРОНЬАРТ ΟΜΡνΑΑΑΚΥΜνίΟΟΕΡΟΑνίΕΟΚΚΟΑΘΟΙΤΙΚΚΤΟΟΑΕννΟΙΥϋΕΡΜΤΡΟΟΟΝΜννΕΕΙ,ΟΟΥΕ ькссь

5Е<2 Ю N0:9:

>£г | А4КА37 | А4КА37_РНЬРЕ Рго£Шп 08=РЪ1еит рга£епзе РЕ=2 ЗУ=1 МЗМСА¥УОЕНЬМСЕ1ЕСННЬАЗАА1ЬОНОСТУМА<25АЕРРСРКРЕЕ1ТО1МКОРОЕРСНЬАРТ ΟΜΡνΑΑΑΚΥΜνίΟΘΕΡΟΑνΤΕΟΚΚΘΑΘΟΙΤΙΚΚΤσΟΑΙ,ννΟίΙΥΟΕΡΜΤΡΘΟΟΝΜννΕΕΕΘΟΥΕ УКООЬ

ЗЕ<2 ΙΏ N0:10:

>£г I А4КА38 | А4КАЗ8_РНЬРЕ Рго£Шп ОЗ=РЛ2ешп рга£епзе РЕ=2 ЗУ=1 Μ3Ν2ΑΥνΏΕΗΕΜΟΕΙΕΟΗΗΕΑ3ΑΑΙΕΘΗϋΘΤνΝΑ<23ΑϋΡΡςΡΚΡΕΕΙΤΟΙΜΚΌΡΏΕΡΟΗΕΑΡΤ СМРУАТАКУМУ10СЕРСАУ1ЕОККОАОС1Т1ККТО0А1ЛЛ/С1УБЕРМТРО<2СЗМУУЕЕЬСЖУ1. УКОСЬ

ЗЕО Ю N0:11: Тгх а 12.0101 (4 изоформы на аНегдеп. огд)

(пшеница, (Роа1ез))

>зр|Р49232|ΡΕ0Ρ1_ΝΗΕΑΤ Рго£И1п-1 (Фрагмент) 05=Тг1£1сит аезИуит 0Ν=ΡΕ01 РЕ=2 ЗУ=1

Μ3Μ0ΤΥνϋΟΗΕΟ0ΕΙΟΟ0ΗΙιΤ3ΑΑΙΕΘΗϋΟ3νΝΤΕ3ΡΝΡΡΚΡΚΡΕΕΙΑΟΐνΚΟΡΕΕΡΟΗΕΑΡΤ

СЬРЬОСТК¥МУ10СЕРСУ71ЕСККОТСО1Т1ККТСМАЬ1Ьа1¥ОЕРМТРа<2СШЛЛ7ЕЕШО¥Ь

ΙΌ0ΟΥΝνΡ33Ν3

ЗЕО Ю N0:12: Ног ν 12.0101 (ячмень (Роа1ез))

>зр| Р52184 | ΡΕ0Ρ1_Η0Ενυ Рго£Шп-1 03=НогЙеит уи1даге 0Ν=ΡΕ01 РЕ=2 ЗУ=1

Μ3ΜΟΤΥνθϋΗΕΟΟΕΙΌΟΟΗΕΤ3ΑΑΙΕΟΗΟΟΕνΝνθ3ΡΝΡΡζ2ΡΚΡΕΕΙΑΟΙΙΚηΡΌΕΡΘΗΕΑΡΤ

СЬРЬСаТК¥МУ10СЕРСУУ1ЕСККСТОС1Т1ККТОМРЬ1ЬС1¥ОЕРМТРС0СНЬУУЕЕЬ(ЗП¥Ь

УЕООР

3Ε<2 Ιϋ N0:13: Огу 3 12.0101 (рис (Роа1ез))

>зр| <29РШ)1|РЕ0РА_0ЕУ5Л ΡΓθ£ί1ίη-Α ОЗ=Огуга за£1Уа зиЬзр. Заропхса <Ж=ОзЮд0323600 РЕ=2 ЗУ=1

Μ3ΝςΤΥνθΕΗΕΜΟΕΙΕσΗΗΕΤ3ΑΑΐνθΗΟΟΤνΝΑς3ΑΑΡΡςΡΚΡΕΕΜΤΝΙΜΚΟΡϋΕΡΟΡΕΑΡΤ

ОЬРЬСРТКУМУ10СЕРСАУ1НСККОЗСО1ТУККТС<2АЬУУа1УОЕРМТРСССНМУУЕЕЬСО¥Ь

УЕОСЬ

3Εζ) ΙΌ N0:14: Ива т 12.0101 (кукуруза (Роа1ез)))

>зр|Р35081|ΡΕΟΡ1_ΜΑΙΖΕ ΡΓθ£ί1ίη-1 О3=геа тауз ΟΝ=ΡΕΟ1 РЕ=1 ЗУ=1 Μ3ΝςΤΥνΌΕΗΕΜΟΕΙΕΘΗΗΕΤ3ΑΑΐνθΗϋΟΑΤΝΑΰ3ΤΑΡΡΕΡΚΡΕΕΜΑΑΙΜΚΟΡϋΕΡΟΗΕΑΡΤ еЬ1ЬССТК¥МУ10СЕРСАУ1ЕОККСЗеС1ТУККТе03Ь11С1¥ЕЕРМТРа0СМЬУУЕЕЬаО¥Ь ЬЕООМ

- 52 029009

ЗЕО ΙΒ N0:15: Суп ά 12.0101 (бермудская трава (Роа1ез) )

>зр|004725|ΡΕΟΡ_ΟΥΝΒΑ ΡΓθ£ί1ίη 03=Супо0оп <2асбу1оп ΟΝ=ΡΕΟ1 РЕ=1 ЗУ=1

МЗ№2АУУВВНЬМСЕ1ЕСННЬТ5АА11СНВСТУКАОЗААРРАРКРЕЕМА^МКВРВЕРСРЬАРТ

СЬРЬСРТКУМУ1ССЕРОАУ1КСККеЗСОУТУККТО0АЬУ1а1¥ОЕРМТРе<2С№4У1ЕКЬ(ЗО¥Ь

1Е0СМ

ЗЕО Ιϋ N0:16: О1е е 2.0101 (олива (Ват2а2ез))

>зр|024169|РЕОР1_ОЬЕЕи Рго£Шп-1 03=01еа еигораеа ΟΝ=ΡΕΟ1 РЕ=1 3ν=1

Μ3Ν0ΑΥνΒΒΗΒΜ0ΒΙΕΟΗΕΒΗΕΒΤΑΑΑΐναΗΒΟ3νΝΑ03ΑΤΡΡ0ΡΚΡΕΕΜΝΟΙΜΤΒΡΝΕΡΟΗΒ

АРТСЬНЬОСТКУМУ10ОЕАОАУ1ЕСККС5ОО1Т1ККТС0АЬУРС1УЕЕРУТРОС^МУУЕЕЬО

ΒΥΙΛ/ЕОСМ

ЗЕО ΙΒ N0:17: Сог а 2.0101 (лещина обыкновенная (Рада2ез)) >бг|09АХН5|09АХН5_СОЕАУ Рго£Шп 03=Согу1из 3νβ1^^ РЕ=2 ЗУ=1 Μ3Ν0ΤΥΟϋΕΗΕΜ0ΕΙΕΟΝΕΕΑΑΑΑΙΙΟΗΟΟ3νΝΑ033ΤΡΡ0ΕΚΡΕΕΙΤθνΜΝΟΡΝΕΡΟ3]1ΑΡΤ ΟΕΥΕΟΟΤΚΥΜνΐΟΟΕΡΟΑνΐΕΕΚΚΟΡΟθντνΚΚΤ30ΑΏΙΙΟΙΥϋΕΡΜΤΡΟθσΝΜΐνΕΕΕΟΏΥΕ 1В0СЬ

ЗЕО ΙΒ N0:18: Веб ν 2.0101 (Рада1ез)

>зр|Р25816|ΡΕΟΡ_ΒΕΤΡΝ ΡΓοίϋίη ОЗ=Веби1а реп0и1а ΘΝ=ΒΕΤνΐΙ РЕ=1 ЗУ=1

Μ3Ν0ΤΥνΒΕΗΒΜ0ΒΙΒσ0Α3Ν5ΒΑ3ΑΐνθΗΒΟ3νΝΑ0333ΡΡ0ΡΚΡ0ΕΙΤΟΙΜΚΒΡΕΕΡΟΗΙΑ

РТСВНЬСС1КУМУ10аЕАОАУ1ЕСККСЗаа1Т1ККТС0АЬУРС1УЕЕРУТРС0С1ТМУУЕЕЬСВ

уывось

ЗЕО ΙΒ N0:19: Ага Н 5.0101 (арахис (РаЬа1ез))

>зр I <293019 I ΡΕΟΡ_ΑΕΑΗΥ Рго£Шп 03=АгасЫз Ьуродаеа РЕ=1 ЗУ=1 МЗИОТУУВгаЬЬСЕ1ЕСВНЬЗЗАА1ЬСОВССУИАОЗЗНРРОРКРЕЕ1ТА1М№0РАЕРС5ЬАРТ ΘΒΥΒΟΟΤΚΥΜνΐΟΟΕΡσΑΙΙΡΟΚΚΟΡΟθνΤΙΕΚΤΝ<2ΑΒΙΙΟΙΥΏΚΡΜΤΡΟ<20ΝΜΐνΕΕΒΘΌΥΙι 1ВТСЬ

ЗЕО ΙΒ N0:20: С1у т 3.0101 (соя (РаЬа1ез))

>зр|065809|ΡΕ0Ρ1_30ΥΒΝ ΡΓθ£ί1ίη-1 ОЗ=С1ус1пе шах ΟΝ=ΡΕΟ1 РЕ=1 ЗУ=1

МЗМОАУУВВНВЬСВ1ЕС№1ЬТНАА11СОВСЗУМАОЗТВРРОРКРЕЕ1ТА1ЬШВР№РСЗВАРТ СЬΥΣΟΟΤΕΥΜνίОСЕРСАУ1ЕСККСРССУТУККТСААЫIС1ΥΒΕΡΜΤΡΟΟΟΝΜννΕΕΡΟΒΥΣ ΙΒ0ΟΥ

ЗЕО ΙΌ N0:21: АтЬ а 8.0101 (амброзия карликовая

(Аз£ега2ез))

>бг | 02ΚΝ24 | 02ΚΝ24_ΑΜΒΑΕ Рго£Шп 03=АтЬгоз1а агбет1зИ£о11а РЕ=2 ЗУ=1

Μ3ΝΟΤΥνϋΕΗΕΜΟΟΙΕαΤΟΟΗΕΑ3ΑΑΙΡΟΤϋΟΝνΝΑΚ333ΡΡΕΡΚΡΌΕΙΝΑΙΙΚΕΡ3ΕΡΟΑΕΑ ΡΤΟΣΡΙχΑΟΑΚΥΜνίОСЕРСАУIЕСККОАССIСIККТС0АМУРСIΥΕΕΡνΝΡΟΟΟΝΜννΕΕΣΟΒ УЫ/ВОСМ

ЗЕО Ιϋ N0:22: Не1 а 2.0101 (подсолнечник (Ав£ега1ез))

>зр | 081982 | ΡΕΟΡ_ΗΕΙχΆΝ Рго£Шп ОЗ=НеПапбНиз аптшз РЕ=1 ЗУ=1 Μ3Ν0ΑΥνθΕΗΕΜ0ΠΙΕΟΤΘ0ΗΒΤ3ΑΑΙΒΟΒΌΘΤνΝΑ03ΑΚΡΡ0ΡΚΡΕΕΜΚΟΙΙΚΕΡΏΕΑΟΊΈΑ РТСМР1АСАКУМУЬ0СЕРСАУ1ЕСККСАСС1С1ККТС0АМ1МС^ВЕРУАРС0СРГМУУЕЕЬСВ ΥΣΣΕΟΟΜ

ЗЕО Ю N0:23: Агб V 4.0101 (Аз£ега2ез))

>зр|08Н2С9|ΡΕΟΡ1_ΑΕΤνυ ΡΓθ£ί1ϊη-1 ОЗ=Агбет131а уи1даг1з РЕ=1 3ν=3

Μ3ΝΟΤΥνϋΌΗΒΜΟϋΙΕΟΤΟΟΗΒΤ3ΑΑΙΡΟΤϋΟΤνΝΑΚ3Α3ΡΡΕΡΚΡΝΕΙΟΑΙΙΚΕΡΝΕΑΟΟΕΑ ΡΤΟΒΡΣΟΟΑΚΥΜνίОСЕАСАУIЕСККСАССIСIККТС0АМУРС1ΥΒΕРУАРСОС^УУЕЕЬСВ УЬЬБОСМ

ЗЕО ΙΒ N0:24: Ηθν Ь 8.0101 (Ма2р2дЛ2а2ез)

>зр 10658121 РЕОР1_НЕУВЕ Рго£Шп-1 О5=Неуеа ЬгазШепзгз РЕ=1 ЗУ=1

Μ3Ν0ΤΥνθΕΕΕΜ0ΕΙΕσΝΗΕΤΑΑΑΙΙΟ0ΌΟ3νΝΑ033ΝΡΡ0ΡΚ3ΕΕΙΤΑΙΜ3ΌΡΏΕΡΟΤΙχΑΡΤ

СЬНЬССТКУМУ10СЕАСАУ1ЕаККСРССУТУККТ^АЬ11С:геВЕРМТРС0С1ЯМ1УЕЕЬСВУЬ

ЬЕОСМ

ЗЕО ΙΒ N0:25: Рга а 4 (Коза1ез)

>зр | ΡΟΟΟΥ3 | ΡΕΟΡ_ΡΕΑΑΝ Рго£Шп ОЗ=Ргадагха апапазза РЕ=1 ЗУ=1 Μ5Ν0ΤΥνΌΟΗ]1Μ0ΕΙΕΟΝΗ]13ΑΑΑΙΙΟ0ϋΟ3νΝΑ03ΑΤΡΡ0ΕΚΡΕΕνΤΟΐνΕΌΡΌΕΡΟΤΙχΑΡΤ СЬΥΏΟΟΤΚΥΜνίОСЕ РСАУ1ЕСККСРССУТУККТТЬАЬЬIС1ΥΒΕРМТРСОСЫМIУЕЕЬСВΥΏ УЕОСЬ

ЗЕО ΙΒ N0:26: Ма1 ά 4.0101 (Роза1ез}

>зр|09ХР42|РЕОРЗ_МАЬВО ΡΓθ£ί1ίη-3 03=Ма1из ЗотезЫса РЕ=1 ЗУ=1 Μ3Ν0ΑΥνΒΒΗΒΜΟΒΙΒαΝΕΒΤΑΑΑΙΒσ0Βα3νΝ303Α3ΡΡΑΡΚΡΕΕΙΑΑΙΒΚΒΡΒ0ΡσΤΒΑΡΤ θΒΡΒσστκΥΜνιοοΕΡσΑνΐΕακκο3σσιτικκτ3θΑΒΒΐαΐΥΒΕΡντροοοΝΐννΕΕΒσΒΥΒ 1Е0СЬ

- 53 029009

ЗЕ<2 ΙΒ N0:27: Рги &ν 4.0101 (вишня (Коза1ез) )

>зр|<29ХР39 |РЕОР_РЕиАУ РгоГШп 03=Ргипиз алгхит РЕ=1 ЗУ=1 МЗ№2АУУВВНЬМСВ1ВСЖЬТААА11,С<2ВС5УМЗО5АТРРАРКРЕЕ1АА1ЬКВЬВС>РСТЬАРТ ОЬРЬ(дОТКУМУ10СЕАСАУ1ЕСККСЗССг1ТУККТ№АЫ1С1¥ВЕРЬТРО0СЫМ1УЕЕЬСВУЬ 1Е<2СЬ

5Е<2 ΙΒ N0:28: Рги <3и 4,0101 (миндаль (Кова1ез) )

>зр|08ОЗЬ5 |РКОР_РКиви Рго£Шп 03=Ргипиз аи1с1з РЕ=1 ЗУ=1 ΜЗΜ^^ΥV^^Η^ΜС^I^^NΡ^ΤΑΑΑI^^^^^ЗVN3^5ΑΤΡΡΑΡΚΡΕΕIΑΑI^Κ^Ρ^^Ρ^Τ^ΑΡΤ ОЬРЬОаТКУМУ10СЕАСАУ1ЕСККСЗСС1ТУКК/га0АЬ11С1УВЕРЬТРСС^М1УЕЕ1,СВУЬ 1Е<2СЬ

ЗЕ£> ΙΒ N0:29: Рги р 4.0101 (персик (Коза1ез))

>йг |08ОТ40 |<28СТ40_РКиРЕ Рго£Шп 05=Ргипиз регзтса РЕ=2 ЗУ=1 М5М0АУУВВНЬМСВ1ВСЖКЬТААА1ЬС<2Ва5УМ305АТРРАРКРЕЕ1АА1ЬКВРВ0РОТЬАРТ СЬРЬССТКУМУ10СЕАСАУ1КСККО5ОО1ТУККТ^АЬ11С1УВЕРЬТРО<2СШ1УЕКЬОВУВ 1Е<2ОЬ

8Е<2 ΙΒ N0:30: Руг с 4.0101 (груша (Коза1ез) )

>зр|О9ХР38|РЕОР_РУЕСО РгоЕШп 03=Ругиз соттипхз РЕ=1 ЗУ=1 МЗМОАУУВВНЬМСВ1ВСННЬТААА1ЬОНВСЗУМАОЗЗТРРКРКРЕЕ1ТА1МКВРВЕРСЗЬАРТ СЬНЬССТКУМУ10СЕСОАУ1ЕаККС5ССУТУККТ30АЬУРС1УЕЕРЬТРО0С11М1УЕЕЬСВУЬ 1В0СБ

ЗЕ<2 ΙΒ N0:31: Раг } 3.0101

>зр | 09X085 | РЕОР1_РАЕСШ Рго£Шп-1 ОЗ=Раг1ейаг1а ^ийал-са ΟΝ=ΡΕΟ1 РЕ=1 ЗУ=1

Μ5ΝΟΑΥνΒΒΗΒΜΟΒνθΒΟΝΤΡΑ5ΑΑΙΙΟΗΒΘ5νΝΑ<23ΑΝΡΡ<2Ι,ΚΡΕΕνΤΟΙΜΝΒΡΝΕΑΟΡΒΑΡ

ТСЬРЬССТКУМУ1<2ОЕЗСАУ1ЕСККСЗССАТ1,ККТС<2А1У1С1УВЕРМТРС<^ЬУУЕЕЬСВУ

ЬЬЕОСЬ

5Е<2 ΙΒ N0:32: РЬо <3 2.0101 (финиковая пальма (Агеса1ез) )

>йг|08Ь5В8|08Ь5В8_РНОВС Рго£Шп 03=РЬоеп1х аасйуИ£ега ΟΝ=ρτο РЕ=2 ЗУ=1

МЗЮ0АУУВЕНЬМСЕ1ВОННЬТААА1ЬСНВСЗУИГА0533РР0РКЗЕЕ1ТММЖР^РСЗЬАРТ

СЬУБеЗТКУМУ10СЕРСАУ1ЕСККОЗССУГУК1Сга<2АЬ1Ра1УЕЕРМТРО0С№4УУЕЕЬСВУЬ

ΙΕΟΟΜ

5Ε<2 ΙΒ N0:33: СНе а 2.0101 (СагуорНу11а1ез)

>зр|084УЗ7|РЕОР_СНЕАЬ Рго£Шп 03=СНепоро01ит а1Ьит РЕ=1 ЗУ=1

МЗМОТУУВВНЬМСВ1ЕОМНЬЗЗАА1ЬСНВСТУМАОЗРЗРРОЬКРЕЕУЗА1МКВРМЕР031|АРТ

ОЬНЬООТКУМУЮОЕРОВУ1ЕОККОРООУТ1К1т10АЫ1О1УСЕРМТРО0СГО4УУЕЕ1ОВУЬ

уеосм

ЗЕ<2 ΙΒ N0:34: 3а1 к 4.0101 (СагуорНу11а1ез)

>йг | СбΰΓΝΗΟ | С6ДМН0_ЗАБКА Рго£Шп (фрагмент) О3=3а1зо1а каП РЕ=2 ЗУ=1

МЗ№2ТУУВВНЬМСЕ1ЕСТММНЬТААА1ЬОУВОЗУЮАОЗАОТРОРКРВЕ13АУУКЕРВЕАОТЬА

ΡΤΟΒΗΒΟΟΤΚΥΜνίΟΟΕΑΟΟνίΕΟΚΚΟΡΟΟΙΟνΚΚΤΟΟΑΙ,ΙΡΟΙΥΒΕΡνΤΡΟΟΟΝΜίνΕΚΙ,ΟΒ

уьуеосм

5Ε<2 Ю N0:35: Ата г 2.0101 (щирица колосистая

(СагуорЬу11а1ез))

>йг|СЗМ2О7|СЗМ207_АМАЕЕ Рго£Шп (фрагмент) 03=АтагапйНиз гейго£1ехиз РЕ=2 ЗУ=1

МЗМОАУУВВНЬМСЕ1ЕСТТОТи,ТОАА1ЬОЬВОЗУМАОЗАВРРОРКРВЕ1АА1УЕВРВЕРОТЬА

РТОЬНЬООТКУМУ10СЕРОАУ1ЕОККСАОО1СУККТС0АЬУМО1УВЕРУТРО0СММ1УЕЕЬОВ

УЫЕ0ОУ

ЗЕО ΙΒ N0:36: Ваи с 4.0101 (морковь (Ар1а1ез))

>зр |<285АЕ6 | РЕОР_ВАиСА Рго£Шп 05=Ваисиз сагойа РЕ=1 ЗУ=1 МЗЮОТУУВВНЬМСЕУВОМРОООЬЗААА11СНОСЗУЮАОЗЗТРРКРКРЕЕ1Т01М]ШРВЕРСНЬ АРТОЬУЬООТКУМУ10ОЕР1АУ1ЕОККОЗСОУТ1ККТО0АЬУРСУУВЕРУТРО0СМЫУЕЕЬС ВУЫЕООЬ

ЗЕО ΙΒ N0:37: Αρί д 4.0101 (сельдерей (Ар1а1ез))

>зр|09ХР37 | РЕОР_АР1СЕ Рго£Шп ОЗ=Аргит 9^νβθ1βΠ8 РЕ=1 ЗУ=1 МЗЖ2АУУВВНЬМСЕУЕ(ЖРОСТБТААА11аНВСЗУНАОЗЗТРРС1КРЕЕ1А01МКВРВЕРСНЬ ΑΡΤΟΒΥΒΟΟΑΚΥΜνΐ<2ΟΕΡΝΑνΐΕΟΚΚΟ5ΘθνΤΙΚΚΤΟζ5ΑΒνΡθνΥΒΕΡνΤΡΟ00ΝνΐνΕΕΙ,Ο ВУЫВООЬ

ЗЕО Ю N0:38: Сис т 2.0101 (дыня мускусная, СисигЫ£а1ез) >зр | 05РХ67 | РЕОР_СиСМЕ Рго£Шп 03=Сисиш1з те1о РЕ=1 ЗУ=1 МЗЮ0УУУВЕНЬМСЕ1ЕОМНЬТЗАА11О0ВОЗУТЛА030МРР0ЬКРЕЕУАО1УОВРАВРОТЬАРТ ΟΙ,ΥΙΟΟΤΚΥΜνίΟΟΕΡΟΑνίΚΟΚΚΟΡΟΟΑΤνΚΚΤΟΜΑΙ,νίΟΙΥΒΕΡΜΤΡΟΟΟΝΜίνΕΕΙιΟΒΥΒ 1В0СЬ

ЗЕО ΙΒ N0:39: Сар а 2.0101 (болгарский перец, Зо1апа1ез) >зр | 093ΥΙ9 | ΡΕΟΡ_ΟΑΡΑΝ РгойШп 05=Сарз1сит аппиит РЕ=1 ЗУ=1 Μ3Ν<2ΤΥνΒΒΗΙ,ΜΟΕΙΕΟΝΕΙ,Τ3ΑΑΙΙΟ0ΒΟ3νΐΛΓΑ<23ΑΤΡΡ<2ΡΚΡΕΕΙΤΑΙΜΝΒΡΑΕΡΘΤΒΑΡΤ ОЬУЬООТКУМУЮСЕАОАУ1КОККОРОО1ТУККТН0АЫ1О1УВЕРМТРО0СЫМ1УЕКЬОВУЬ 1Е03Б

- 54 029009

ЗЕО Ιϋ N0:40: Апа с 1.0101 (ананас, Роа1ез)

>зр | 094σΝ2 | ΡΕΟΡ_ΑΝΑΟΟ Рго£Шп 03=Апапаз сотозиз РЕ=1 3ν=1 МЗ^ОА¥УББНЬМСЕ1БССНЬЗЗАА1ЬСНПЗТУМАОЗРЫРРОРКРЕЕ13А1ЬЫБРЕПРОЗЬАРТ СЬ ΥΣΟΟΤΚΥΜνί <2ОЕ ΡΟννΐ КОККСТССI ΤνΚΚΤΝΙχΑΣ 11 ΟνΥϋΕΡΜΤΡΘΟΟΝΜννΕΕΙ,ΘΟ ΥΣ ЬЕОСР

ЗЕО Ιϋ N0:41: Сго з 2. (Азрагада1ез)

>зр|05ΕΡ31|РЕОР_СЕОЗА Рго£Шп 03=Сгосиз заЫуиз РЕ=1 ЗУ=1 Μ3ΝΟΤΥνθΕΗΕΜΟΌΜϋΟΗνΕΤ3ΑΑΙΕΟΗΌΘ3νΝΑ03ΑΟΡΡΕΕΚΡΑΕΙΤΑΙΕΝϋΡΝΕΡσ3ΕΑΡΤ ΟΜΥΙΝΟΑΚΥΜνΐ0ΟΕΡθννΐΕαΚΚΘ3ΟθνΤΙΚΚ3ΝΜΑΒΙΡΟΕΥΌΕΡΜΤΡσ00ΝΕννΕΚΒΟΌΥΕ ΙΕΟΟΥ

ЗЕО ΙΏ N0:42: Миз а 1.0101 (банан (2л.пдИэега1ез) )

>3ρ|<294σΝ3 |РЕОР_МиЗАС Рго£Шп 03=Миза асит1паБа РЕ=1 ЗУ=1 МЗЮ0АУУББНЬЬСБ1Бе0СЬТААА1У<ЗНБ(ЗЗУНА08ОАРР0СКРЕЕ1АА1МКОРОЕР<35ЬАРТ ΟΕΥΕθαΤΚΥΜνΐ0ΟΕΡΟΑνΐΕΟΚΚΟ3ΘθνΤΙΚΚΤΝΕΑΙ.ΙΙΟΙΥΝΕΡΜΤΡ(30ΟΝΜννΕΕ]3ΟΟΥ]3 РБООР

ЗЕО ΙΌ N0:43: рекомбинантный (положения 71-127 ЗЕО Ιϋ

N0:1)

ΥΜνίΟΘΕΡΘΑνίΕΟΚΚΟΑΟΟΙΤΙΚΚΤΟΟΑΣνναΐΥϋΕΡΜΤΡΟΟΟΝΜννΕΕΙ,αΟΥΕν

ЗЕО ΙΌ N0:44: рекомбинантный (ЗЕО ΙΌ N0:1 с заменами С133 и С1153)

Μ3Ν0ΤΥνϋΕΗΕΜ3ΕΙΕΟΗΗΕΑ3ΑΑΙΕΟΗϋΟΤνΝΑ03ΑΏΡΡ0ΡΚΡΕΕΙΤΟΙΜΚΟΡΌΕΡΟΗΕΑΡΤ

ΟΜΡνΑΟΑΚΥΜνίΟΟΕΡΟΑνίΕΟΚΚΟΑΟΟΙΤΙΚΚΤαΟΑΣνναΐΥΟΕΡΜΤΡΟΟδΝΜννΕΕΕΟΌΥΕ

УЕООМ

ЗЕО ю N0:45: рекомбинантный (ЗЕО Ιϋ N0:1 с заменами С13А и С115А)

Μ3Ν0ΤΥνθΕΗΕΜΑΕΙΕΟΗΗΕΑ3ΑΑΙΕΟΗΏστνΝΑ03ΑϋΡΡ0ΡΚΡΕΕΙΤαΐΜΚΟΡΟΕΡΟΗΣΑΡΤ

ΟΜΡνΑΟΑΚΥΜνίΟΟΕΡΟΑνίΕΘΚΚΟΑΟΟΙΤΙΚΚΤΟΟΑΕννσίΥΌΕΡΜΤΡΟΟΑΝΜννΕΕΕΟΟΥΕ

УЕОСМ

ЗЕО 1Б N0:46: нуклеотидная последовательность для

получения ЗЕО ΙΌ N0 44:

>У1гРЬ1 р 12_АЬК_1Р1002

аРдадсБддсааасдБаРдБсдаБдаасассБдаБдадсдаааББдааддБсассассБддсд

БсддсддсБаББсБдддБсасдаБддсассдБББдддсасададсдсБдаББББссдсааББс

ааассддаадаааББассддсаБсабдааддаББББдасдаассдддБсаБсБддсассдасд

ддса£дББсд£сдсаддБдссаааБа£аБдд£даББсадддБдаассдддБдсадБса£ссд£

ддсааааадддБдссддсддБаББассаБсааааадасдддссаадсссБддБддББддБаРБ

БасдасдаассдаБдасдссдддБсааадсаасаБддБддБддаасдБсБдддсдасБаБсБд

дБддаасадддбабдТАС

ЗЕО 1Б N0:47: нуклеотидная последовательность для

получения ЗЕО Ιϋ N0:45:

>У2гРН1 р 12_АЬК_1Р1003

аБдБссБддсааасдБаРдБсдаБдаасассБдаБддсддаааББдааддБсассассБддсд

БсддсадсдаББсБдддБсасдаБддсассдБББдддсасададсдсБдаББББссдсааББс

ааассддаадаааББассддсаБсаБдааддаББББдасдаассдддРсаБсБддсассдасд

ддсаБдББсдБсдсадд£дссааа£аБа£ддБда£БсадддБдаассдддБдсадБса£ссдБ

ддсааааадддРдссддсддБаРБассаБсааааадасдддссаадсссБддБддББддБаББ

БасдасдаассдаБдасдссдддБсаадсааасаБддБддБддаасдБсБдддБдаББаБсБд

д£ддаасаддд£а£дТАО

- 55 029009

Список ссылок

АтпиаусЬеема Р апд ОопгаФег де Мез ха ^Е· Ригх£хса£хоп, сЬагас£егхза£хоп, апд диап£х£хса£хоп о£ £Ье зоу аНегдеп рго£х1хп (С1у т 3) хп зоу ргодисбз, Ροοά СЬетхзЬгу 119, 16711680, 2010.

ОаЫтапп-Нод1ипд е£ а1. ВузЪапдег зирргеззхоп о£ РЬе хттипе гезропзе Ро Ьитап зегит аНэитхп хп гаРз, 1ттипо1оду 86,

128-133, 1995.

РесЬЬехтег М апд гхдтопд 3. Н., Росизхпд оп ипро1утегхгед АсРхп, ТЬе СГоигпа1 о£ Се11 Вхо1оду, Уо1ите 123, № 1, 1-5, 1993

Ьоскеу Е апд Ьед£огд Ь. АНегдепз апд АНегдеп 1ттипоРЬегару 4^й Εά, 2008, Εά Ьу Е Ьоскеу апд Ό Ьед£огд,

1п£огта Ьеа1РЬсаге.

Ьи ά апд РоИагд Т, Рго£х1хп Вхпдхпд Ро Ро1у-Ь-Рго1хпе апд АсРхп Мопотегз а1опд мхРЬ АЬИхРу Ро СаРа1уге АсРхп Ыис1еоРхде ЕхсЬапде 1з Еедихгед £ог УхаЬИхРу о£ Рхззхоп УеазР, Мо1еси1аг Вхо1оду о£ РЬе Се11, Уо1.12, 1161-1175, 2001.

МагРхпег А еР а1, ТЬе аНегдепхс ге1еуапсе о£ рго£х1хп (О1е е 2) £гот 01еа еигораеа ро11еп, АНегду, 57, зирр1.71, 1723, 2002.

Мх11ег еР а1. АпРхдеп-дгхуеп ВузРапдег Зирргеззхоп а£Рег Ога1 АдтхпхзРгаРхоп о£ АпРхдепз, Д. Ехр. Мед. 174, 791-798,

1991.

МхИхпдРоп еР а1. 1пдисРхоп о£ ВузРапдег Зирргеззхоп Ьу Реедхпд АпРхдеп Оссигз дезрхРе Ыогта1 С1опа1 Ехрапзхоп о£ РЬе ВузРапдег Т Се11 Рори1аРхоп. 1ттипо1оду, 173:6059-6064, 2004.

ОЦуехга СЕ еР а1. ВузРапдег е££есР хп зупегдх Ро апегду

хп ога1 Ро1егапсе о£ В1отха Тгорса1хз/0уа1Ьитхп Мигхпе СоЬттипхгаРхоп тоде1. ά С1хп 1ттипо1, 25, 153-161, 2005.

ЗапРоз А апд Уап Еее Е, Рго£х1хпз: Мхтхскегз о£ АНегду ог Ее1еуапР АНегдепз, 1пР АгсЬ АНегду 1ттипо1, 155, 191-204,

2011.

ТЬогп еР а1, СгузРа1 зРгисРиге о£ а тадог аНегдеп £гот р1апРз, ЗРгисРиге, νοΐ.5, № 1, 1997.

Ухда1х Ь, Η. Е. Регег, V. V. Ьорег, Е. Ыодиег, Р. гатидхо апд Р. ЗапсЬег, Ригх£хсаРхоп, СЬагасРегхгаРхоп, апд οϋΝΑ С1опхпд о£ Рго£х1хп £гот РЬазео1из уи1дагхз, Р1апР РЬузхо1оду, νοΐ.108, № 1, 115-123, 1995.

Примеры

Примеры 1 (фиг. 1 и 2), 2 (фиг. 3, 4 и 5), 4 (фиг. 8 и 9), 8 (фиг. 25 и 26), 10 (фиг. 29 и 30) и 11 (фиг. 31) относятся к исследованию неспецифического подавления в модели профилактического лечения с несенсибилизированными мышами. В кратком изложении, мышам каждые сутки проводят сублингвальное введение полипептида по изобретению в течение некоторого периода времени (как правило, две недели), чтобы индуцировать толерантность к полипептиду. Затем мышей сенсибилизируют к антигену посредством внутрибрюшинного введения для индукции иммунного ответа по типу гиперчувствительности и, необязательно, мышей также стимулируют сенсибилизирующим антигеном путем интраназального введения для индукции аллергического воспаления в дыхательных путях. Наконец, мышей умерщвляют и кровь, бронхоальвеолярную жидкость (ВЛЬ) и селезенку собирают для анализа. Затем определяют неспецифическое подавление посредством сравнения фракции эозинофилов в жидкости ВЛЬ мышей, подвергнутых воздействию как индуцирующего толерантность антигена, так и сенсибилизирующего антигена, с фракцией эозинофилов мышей, подвергнутых воздействию только сенсибилизирующего антигена. Альтернативно или дополнительно, клетки селезенки и/или цервикальных лимфатических узлов

- 56 029009

выделяют, культивируют и стимулируют сенсибилизирующим аллергеном. Пролиферацию клеток и продукцию цитокинов (ГО-5, 1ГО-13) измеряют и неспецифическое подавление определяют путем сравнения пролиферации клеток или выхода цитокинов в образцах, взятых от мышей, подвергнутых воздействию как индуцирующего толерантность антигена, так и сенсибилизирующего антигена, с пролиферацией клеток и продукцией цитокинов в образцах мышей, подвергнутых воздействию только сенсибилизирующего антигена.

Примеры 3 (фиг. 6 и 7) и 9 (фиг. 27 и 28) относятся к исследованию неспецифического подавления в модели терапевтического лечения с сенсибилизированными мышами. В кратком изложении, постановка эксперимента немного отличается от профилактической модели тем, что мышей первоначально сенсибилизируют посредством внутрибрюшинного введения сенсибилизирующего аллергена, а затем мышам вводят индуцирующий толерантность антиген (полипептид для 8ЫТ). Все последующие стадии являются сходными с профилактической моделью.

Обзор примеров в отношении данных, полученных для мышей, касающихся неспецифического подавления, приведен ниже, (Р) относится к профилактической модели и (Т) относится к терапевтической модели

Пример	Полипептид для обработки ЗЫТ (индуцирующий толерантность антиген)	Антиген для сенсибилизации посредством внутрибрюшинного введения	Антиген для назальной стимуляции
1 (Р)	РЫ р 12	ОУА	ОУА
		ОУА + РЫ р 12
2 (Р)	РЫ р 12	Экстракт РЫ р (без	Экстракт РЫ р
		и с РЫ р 12)	(с РЫ р 12)
3 (Т)	РЫ р 12	ОУА	ОУА
			РЫ р 12
4 (Р)	РЫ р 12	ОУА	ОУА
			ОУА + Веб ν2
8 (Р)	РЫ р 12	Экстракт Веб ν	Экстракт Веб ν
9 (Т)	РЫ р 12	Экстракт Веб ν	Экстракт Веб ν
Ю (Р)	О1е е 2	Экстракт РЫ р	Нет
11 (Р)	РЫ р 12	ОУА + РЫ р 12	Нет
		ОУА + Веб ν 2
		ОУА

Пример 1. Неспецифическое подавление иммунного ответа по типу гиперчувствительности (астма), вызванного антигеном 0УА, у наивных мышей, которым вводили РН1 р 12.

Способы: РН1 р 12 выделяли из водных экстрактов пыльцы РН1еит рга!епке с использованием РЬРагарозы или его получали рекомбинантным способом на основе аминокислотной последовательности 8К(Э ГО N0: 1.

Животные: самок мышей ВАЬВ/сб в возрасте 6-10 недель выращивали в собственной лаборатории и поддерживали на рационе с определенным составом, не содержащим компонентов, перекрестнореагирующих с антисывороткой кролика к РН1еит рга!епке (РН1 р). Каждая экспериментальная группа состояла из 7-8 животных.

Эксперименты на животных: нативным мышам 5 дней в неделю проводили сублингвальную иммунотерапию (8ЫТ) посредством 50 или 200 мкг РН1 р 12 в течение 2 недель (фаза лечения), а затем проводили две в/б инъекции раз в неделю, либо смеси 10 мкг 0УА и 10 мкг РН1 р 12, либо 10 мкг 0УА отдельно, адсорбированных на гидроксиде алюминия (фаза воздействия с целью сенсибилизации мышей). Затем мышей интраназально стимулировали посредством 50 мкг 0УА в течение четырех суток (индукция иммунного ответа по типу гиперчувствительности, такого как астма). Мышей умерщвляли через одни сутки после последней стимуляции и проводили взятие крови, бронхоальвеолярной жидкости (ВАЬ) и селезенок для анализа.

Дифференциальный подсчет жидкости ВАЬ: жидкость ВАЬ центрифугировали и супернатант уда- 57 029009

ляли. Осадок ресуспендировали в РВЗ и фракцию эозинофилов определяли с помощью автоматизированного цитометра (Зуктех).

Анализ пролиферации Т-клеток: селезенки измельчали на суспензию единичных клеток и промывали три раза в среде. Клетки подсчитывали и Зх10⁵ клеток добавляли в каждую лунку 96-луночного планшета и стимулировали посредством 0, 5, 25 и 125 мкг/мл ОУА. Клетки культивировали в течение 6 суток при 37°С и 5% СО₂. Пролиферацию измеряли посредством добавления 0,5 мкКи ЗН-тимидина в каждую лунку в течение последних 18 ч периода культивирования, а затем клетки собирали и подсчитывали включенную радиоактивную метку.

Результаты.

В этом эксперименте исследовали, можно ли предупреждать у несенсибилизированных мышей, которым вводили полипептид по изобретению (например, профилин РЬ1 р 12), развитие иммунного ответа по типу гиперчувствительности, индуцированного непрофилиновым аллергеном (ОУА), или, по меньшей мере, можно ли подавлять иммунный ответ по типу гиперчувствительности (например, астма), индуцированный непрофилиновым аллергеном (ОУА), например, можно ли подавлять/предупреждать иммунный ответ по типу гиперчувствительности, индуцированный ОУА, посредством неспецифического подавления, достигаемого путем введения неродственного антигена, профилина РЬ1 р 12. На фиг. 1 показано, что мыши, которым вводили РЬ1 р 12, имели сниженную фракцию эозинофилов в жидкости ВАЬ по сравнению с мышами, которым вводили буфер, но только когда мыши были подвергнуты воздействию/сенсибилизированы как к ОУА, так и к РЬ1 р 12, но не только к ОУА. На фиг. 2 указаны те же данные, что и на фиг. 1, но в отношении пролиферации ίη νίίτο клеток селезенки; ОУА-специфическая пролиферация клеток селезенки ίη νίίτο подавляется у мышей, которым вводили РЫ р 12, но только у мышей, которые были подвергнуты совместному воздействию/совместной сенсибилизации как к РЬ1 р 12, так и к ОУА, но не только к ОУА.

Пример 2. Неспецифическое подавление иммунного ответа по типу гиперчувствительности (астма), вызванного непрофилиновыми аллергенами пыльцы РЫеит рга1еп8е, при введении наивным мышам РЬ1 р 12.

Эксперименты на животных: РЬ1 р 12 получали, как в примере 1, и использовали сходных животных. Наивным мышам проводили сублингвальную иммунотерапию (8ЫТ) посредством 50 или 100 мкг РЫ р 12 в течение 2 недель (фаза лечения), а затем проводили три в/б инъекции раз в неделю, либо 8 мкг экстракта РЬ1 р, либо 8 мкг экстракта РЫ р, из которого удален РЫ р 12, оба из которых были адсорбированы на гидроксид алюминия (фаза воздействия для сенсибилизации мышей). Затем мышам проводили интраназальную стимуляцию либо 80 мкг экстракта РЫ р, либо той же дозы экстракта, из которого был удален РЫ р 12 (индукция иммунного ответа по типу гиперчувствительности, такого как астма). Мышей умерщвляли через одни сутки после стимуляции, и кровь, бронхоальвеолярную жидкость (ВАЬ) и цервикальные лимфатические узлы собирали для анализа.

Дифференциальный подсчет жидкости ВАЬ: та же методика, как и в примере 1.

Анализ пролиферации Т-клеток: та же методика, что и в примере 1, но где клетки подсчитывали и доводили до 1,67х10⁶ клеток/мл и Зх10⁵ клеток добавляли в каждую лунку 96-луночного культурального планшета с плоским дном, клетки стимулировали посредством 0, 5 и 40 мкг/мл экстракта РЫ р. Клеточные культуральные супернатанты для анализа цитокинов собирали на 5 сутки.

Результаты.

В этом эксперименте исследовали, можно ли предотвращать у несенсибилизированных мышей, которым вводили полипептид по изобретению (например, профилин РЫ р 12), развитие иммунного ответа по типу гиперчувствительности, индуцированного непрофилиновыми аллергенами пыльцы РЫеит рга1епке (например, аллергены РЫ р 1, РЫ р 5, РЫ р 6), или, по меньшей мере, можно ли подавлять иммунный ответ по типу гиперчувствительности (например, астма), индуцированный этими непрофилиновыми аллергенами, например, можно ли подавлять/предотвращать иммунный ответ по типу гиперчувствительности, индуцированный непрофилиновыми аллергенами пыльцы РЫеит рга1еп§е, посредством неспецифической толерантности, достигаемой путем введения неродственного антигена, профилина РЫ р 12. Это осуществляли посредством проведения §ЫТ у наивных мышей с помощью РЫ р 12 или буфера. После проведения §ЫТ индуцировали аллергическую астму посредством в/б сенсибилизации (экстракт РЫ р с РЫ р 12 без него), а затем проводили интраназальную нагрузку экстрактом пыльцы травы РЫеит рга1епке (экстракт РЫ р, содержащий, по меньшей мере, аллергены РЫ р 1, 5 и 6 и профилин РЫ р 12), или экстрактом пыльцы травы, из которого был удален профилин (экстракт РЫ р, из которого удален РЫ р 12). Как видно на фиг. 3, мыши, которым вводили РЫ р 12, имеют сниженное количество эозинофилов в жидкости ВАЬ по сравнению с мышами, которым вводили буфер, и этот эффект достигается только тогда, когда мышей подвергают воздействию как непрофилиновых аллергенов, так и РЫ р 12 (экстракт РЫ р, содержащий РЫ р 12), но не когда мышей подвергают воздействию экстракта РЫ р, из которого был удален РЫ р 12. Эти результаты были подтверждены посредством стимуляции ίη νίίτο клеток цервикальных лимфатических узлов. Хотя отличия не были значимыми, на фиг. 4 и 5 показано, что пролиферация и продукция ассоциированного с ТЬ2 цитокина ЬЬ-5, соответственно, подавляется у мышей, кото- 58 029009

рым вводили Рй1 р 12, таким же образом, как как описано выше.

Пример 3. Неспецифическое подавление иммунного ответа по типу гиперчувствительности (астма) у мышей, сенсибилизированных 0νΑ, которым вводили Рй1 р 12.

Эксперименты на животных: Рй1 р 12 получали, как и в примере 1, и использовали сходных животных. Мышей сенсибилизировали двумя в/б инъекциями раз в неделю 10 мкг 0νΑ, адсорбированного на гидроксиде алюминия (фаза сенсибилизации). После этого мышам проводили 8ЫТ с 0, 50 или 150 мкг Рй1 р 12 в течение 6 недель (фаза обработки), а затем им проводили интраназальную стимуляцию в течение 4 суток 40 мкг 0νΑ вместе с 40 мкг Рй1 р или с 0νΑ отдельно (фаза воздействия). Мышей умерщвляли через одни сутки после последней стимуляции и кровь, бронхоальвеолярную жидкость (ВЛЬ) селезенку и цервикальные лимфатические узлы собирали для анализа.

Дифференциальный подсчет жидкости ВЛЬ: та же методика, как и в примере 1.

Анализ пролиферации Т-клеток: та же методика, как и в примере 1.

Результаты.

В этом наборе экспериментов исследовали, можно ли у мышей, сенсибилизированных 0νΑ, которым вводили Рй1 р 12, предотвращать развитие или подавлять клинические и иммунологические признаки аллергической астмы при воздействии "пускового" аллергена 0νΑ. Как показано на фиг. 6, фракция эозинофилов в жидкости ВЛЬ была значительно снижена у мышей, сенсибилизированных 0νΑ, которым вводили Рй1 р 12, по сравнению с мышами, сенсибилизированными 0νΑ, которым вводили буфер и которых подвергали воздействию непрофилинового аллергена (0νΑ) интраназально (воздействие на дыхательные пути). Примечательно, что это подавление эозинофилов не могло наблюдаться, если мышей подвергали воздействию только 0νΑ, т.е. без совместного воздействия с Рй1 р 12. Более того, как видно на фиг. 7, 0VΑ-специфическая пролиферация клеток селезенки ίη νίΙΐΌ подавляется у мышей, которым вводят Рй1 р 12, но только у мышей, которых совместно подвергают воздействию/совместно сенсибилизируют как Рй1 р 12, так и 0νΑ, но не только 0νΑ.

Пример 4. Неспецифическое подавление иммунного ответа по типу гиперчувствительности (астма), вызванного непрофилиновым аллергеном (0νΑ), посредством введения наивным мышам Рй1 р 12 и воздействия на мышей 0νΑ и другого профилина Веί ν 2.

Способы: Рй1 р 12 получали, как описано выше, и Веί ν 2 выделяли из экстракта пыльцы Ве1и1а уеггисока.

Эксперименты на животных: наивным мышам (тот же тип, что и в примере 1), проводили 5 дней в неделю сублингвальную иммунотерапию (8Ь1Т) посредством 75 мкг Рй1 р 12 в течение 2 недель (фаза введения), а затем проводили две в/б инъекции раз в неделю либо смеси 10 мкг 0νΑ и 10 мкг Веί ν 2, либо или 10 мкг 0νΑ отдельно, адсорбированных на гидроксиде алюминия (фаза воздействия для сенсибилизации мышей). Затем мышей стимулировали интраназально посредством 40 мкг 0νΑ в течение 4 суток (индукция иммунного ответа по типу гиперчувствительности, такого как астма). Мышей умерщвляли через одни сутки после последней иммунизации и кровь, бронхоальвеолярную жидкость (ΟΑΕ) и селезенку собирали для анализа.

Анализ активации Т-клеток: селезенки разделяли на суспензию единичных клеток и промывали три раза в среде. Клетки подсчитывали и 3х10⁵ клеток добавляли в каждую лунку 96-луночного культурального планшета с плоским дном, и стимулировали посредством 0, 5, 25 и 125 мкг/мл 0νΑ. Клетки культивировали в течение 5 суток при 37°С и 5% С0₂. Клеточные культуральлные супернатанты для анализа цитокинов собирали на 5 сутки.

Результаты.

В этом эксперименте исследовали, может ли у несенсибилизированных мышей, которым вводили полипептид по изобретению (например, профилин Рй1 р 12), предотвращаться развитие иммунного ответа по типу гиперчувствительности, индуцированного непрофилиновым аллергеном (0νΑ), или, по меньшей мере, может ли подавляться иммунный ответ по типу гиперчувствительности (например, астма), индуцированный непрофилиновым аллергеном (0νΑ). Более того, и в дополнение к примеру 1, исследовали, может ли совместное воздействие 0νΑ и Веί ν 2 (профилин, обладающий приблизительно 78% идентичностью аминокислотной последовательности с Рй1 р 12) заменить совместное воздействие 0νΑ и Рй1 р 12, чтобы исследовать, может ли профилин другого содержащего профилин растительного материала реактивировать клетки Тгед, специфичные к Рй1 р 12, для продукции неспецифических регуляторных цитокинов и, таким образом, подавлять аллергический ответ, вызванный 0νΑ.

Как показано на фиг. 8 и 9, введение Рй1 р 12 способно подавлять продукцию ассоциированных с Тй2 цитокинов 1Ь-5 и 1Ь-13, соответственно, по сравнению с мышами, которым вводили буфер. Однако это подавление наблюдали только тогда, когда мышей подвергали совместному воздействию Веί ν 2 вместе с 0νΑ во время сенсибилизации и интраназальной стимуляции. Таким образом, данные указывают на то, что иммунный ответ по типу гиперчувствительности, вызванный аллергенами содержащего профилин растительного материала, отличного от (Рй1 р, содержащий Рй1 р 12), мог предотвращаться при воздействии на мышей как пускового аллергена (0νΑ), так и Веί ν 2, у мышей, которым вводили Рй1 р 12.

Пример 5. Скрининг коэкстрагированных полипептидов и непрофилиновых аллергенов в содержащих профилин растительных материалах.

- 59 029009

Материалы для экстракции:

необработанная пыльца вида РЫеиш рга!еп§е (замороженная непосредственно после сбора), обезжиренная пыльца вида РЫеиш рга!еп§е, ВеШ1а уеггисоза, ЛтЪгола аПепшнГоПа, Согу1и§ ауе11апа, Аг1епила уи1даг1§, СгурЫшепа |арошса, НишиЫз |арошсаз, кошачья перхоть, тела клещей и фекалии Оегта1орНадо1Йез р1егопу§§ти§, и яблоки;

стеклянные бутылки (100 мл) для экстракции;

колонки ΡΏ-10 с подложкой РЕ в комбинации с 10-мл шприцом с силиконовой трубкой; фильтрующие элементы (МШех, 5 мкм + МШех, 0,8 мкм); исследуемые пробирки;

ледяная баня, пипетки, устройство для вращения образцов, мерный цилиндр, секундомер; буфер РВЗ, рН 7,2, содержащий следующие соли:

Соль			Мм (г/моль)	Конц.	г/л Конц. мМ
Хлорид	натрия	ЫаС1	58,44	8,0	137
Хлорид	калия	КС1	74,55	0,2	2,7
Фосфат	Да	Ыа2НРО4, 2Н3О	175,98	1,44	8,2
Фосфат	К	КН2РО4	136,09	0,2	1,5

Концентрация фосфата: 8,2+1,5=9,7 мМ фосфат

ИаС1: μ = 1/2 х(137х12+137х12)=137 мМ,

КС1: μ = 1/2х(2,7х12+2,7х 12)=2,7 мМ,

Иа₂НРО₄: μ = 1/2х((8,2х2х12)+(8,2х22))=24, 6 мМ,

КН₂РО₄: μ = 1/2х((1,5х12)+(1,5х 12))=1,5 мМ.

Общая ионная сила: μ = 165,8 мМ « 0,17 М.

Методика экстракции (при комнатной температуре, 21-24 °С):

5,0 г пыльцы/телец клещей/фекалий клещей/кошачьей перхоти отвешивают в стеклянную бутыль и добавляют 50 мл РВЗ и бутыль сразу вращают, сначала 5 мин вручную, а затем вращают на устройстве для вращения образцов в ходе всей экстракции.

Через 20 с отбирают 5 мл взвеси, переносят в колонку с насыпным фильтром и проталкивают через фильтр с помощью шприца. Затем шприц сразу переносят в фильтрующий элемент и экстракт проталкивают через комбинированные фильтры в маркированную исследуемую пробирку. Пробирку хранят на ледяной бане, а затем образец пипетируют аликвотами для дальнейшего анализа и замораживают. 5,2 мл суспензии отбирают в моменты времени 40 с, 60 с, 2 мин, 5 мин, 10 мин и 20 мин. Яблоки отжимают и полученный сок сразу анализируют с помощью С1Е/К1Е.

Определение коэлюированного/коэкстрагированного непрофилинового аллергена и профилина.

Образцы анализируют в отношении содержания непрофилиновых аллергенов и профилина с использованием одного или нескольких способов С1Е (перекрестный иммуноэлектрофорез), К1Е (ракетный иммуноэлектрофорез), 303 Раде (подиакридамидный гель-электрофорез с додецилсульфатом натрия), НМЗЛ (твердофазный иммуноферментный анализ) и/или М3 (масс-спектрометрия).

С1Е (перекрестный промежуточный иммуноэлектрофорез).

Материалы для С1Е/К1Е.

Устройство для электрофореза (2 емкости с буфером, 2 электрода, охлажденная поверхность, камера); стеклянные чашки (стандартные размеры, например, 5х5, 5х7, 10х7 см);

буфер для электродных камер и агарозный гель (ионная сила 0,02, рН 8,6), 5,5-диэтилбарбитуровая кислота (Уегопа1) 112,1 г; Тп§ (3|дта 7-9) 221,5 г; лактат кальция (ригит) 2,7 г; очищенная вода до 5 л. Разбавить 1+4 перед применением;

агарозные чашки: 1% (мас./об.) агарозу 1д1ех типа Н3А (М_г=-0,13) получают с использованием "буфера для агарозного геля", агарозу нагревают при перемешивании и кипятят в течение двух минут и поддерживают жидкой на водяной бане при 56°С. Затем гель наносят на чашки (приблизительно 5 мл);

раствор для окрашивания: 5 г кумасси бриллиантового синего К-250, 450 мл 96% этанола, 500 мл очищенной воды, 50 мл ледяной уксусной кислоты. Растворять в течение ночи посредством перемешивания и отфильтровать;

раствор для обесцвечивания: 450 мл этанола 96%, 500 мл очищенной воды, 50 мл ледяной уксусной кислоты;

поликлональные антитела кролика; кроликов иммунизируют многократно полипептидом, например водным экстрактом, содержащим профилин содержащего профилин растительного материала, такой как нативный РЫ р 12, на сутки 0, 2, 4, 6, 10, 14 и 18, и взятие крови проводят на 8, 12, 16, 20 и 24 сутки. Фракцию 1§О получают после преципитации с сульфатом аммония («1,75 М (ИНд^ЗОд) и промывают в 1,75 М (ИН₄)₂3О₄. Дополнительно очищают посредством диализа против очищенной воды и ацетатного

- 60 029009

буфера, рН 5,0. Хранят при +5°С в 0,9% Ν;·ιΟ с 0,09% Ν;·ιΝ₃, и ингибитором протеаз (Тга5у1о1) для сохранения.

Методика: лунки формируют в планшетах с агарозным гелем и добавляют образец для экстракции. Электрофорез проводят в течение 25-30 мин в устройстве, действующем при 15°С и при 10 В/см. Гель удаляют и агарозный гель, смешанный тщательно с поликлональными антителами, выливают на катодную сторону и на анодную сторону. Проводят электрофорез в течение ночи при напряжении 2 В/см. Затем лунки промывают дистиллированной водой и 0,1 М ΝηΟ в течение 15-30 мин, а затем планшеты сушат в потоке горячего воздуха. Чашки окрашивают в течение приблизительно 5 мин в растворе для окрашивания с кумасси бриллиантовым синим, а затем промывают в дистиллированной воде в течение нескольких секунд, обесцвечивают и, наконец, сушат в горячем воздухе.

Полипептиды, распознаваемые антителами, наблюдают в качестве синих отчетливых полос на планшете для С1Е. Для дальнейшей идентификации полипептидов полосы можно вырезать из планшета для С1Е и анализировать масс-спектрометрией и/или другими иммунохимическими способами и/или аминокислотным анализом.

К1Е.

Чашки с агарозным гелем, содержащие соответствующие поликлональные антитела, изготавливают на стеклянных планшетах. Лунки проделывают на расстоянии приблизительно 1,5 см от нижнего края планшета, планшеты помещают в устройство для электрофореза, добавляют образцы для экстракции и электрофорез продолжают в течение ночи при напряжении 2 В/см. Планшеты промывают/прессуют и окрашивают раствором кумасси бриллиантового синего для окрашивания, как описано выше для С1Е.

8Ό8 РАСЕ.

Материалы: буфер для образца (4х) NцРаде®; 1пуйгодеп ΝΈ0007, NиРАСΕ® 10% В15-Тп5 808РАСЕ; 1пуйгодеп №0302, NцРАСΕ® МЕ8 8Ό8 Кипшпд ВцГГег(20х)_; 1пуйгодеп №0002-02, Маркер: 8ееВ1ие® Р1и52Рге51атеб 81апбагб; 1пуйгодеп 6С5925 8Ό8 РАСЕ (восстанавливающие или невосстанавливающие условия) проводили в соответствии с информацией NиРАСΕ® ТесЬтса1 Сшбе Сепега1 и протоколами по использованию системы электрофореза NиРАСΕ®, дата изменения: 29 октября 2010, Мапиа1 рай по. 1М-1001.

Альтернативно можно использовать полиакриламидный гель-электрофорез с додецилсульфатом натрия в соответствии со способами, известными в данной области.

После электрофореза гель можно окрашивать (чаще всего, кумасси бриллиантовым синим К-250 или серебряной краской), обеспечивая визуализацию отделенных белков, или обрабатывать далее (например, вестерн-блоттинг). После окрашивания различные белки будут выглядеть как отдельные полосы на геле. В отдельную дорожку на геле можно добавлять маркер молекулярной массы с известной молекулярной массой, чтобы откалибровать гель и определить приблизительную молекулярную массу неизвестных белков путем сравнения расстояния, пройденного относительно маркера.

ЕЫ8А.

Материалы: моноклональные антитела (тАЬ) получают путем иммунизации кроликов многократно единичным полипептидом без содержания изомеров на 0, 2, 4, 6, 10, 14 и 18 сутки и проводят взятие образцов крови на 8, 12, 16, 20 и 24 сутки. Фракцию 1дС получают после осаждения с сульфатом аммония («1,75 М (ΝΗ₄)₂80₄), и промывают посредством 1,75 М (ΝΗ₄)₂80₄. Далее проводят очистку посредством диализа против очищенной воды и ацетатного буфера, рН 5,0. Хранят при +5°С в 0,9% №С1 с 0,09% №N3 и ингибитором протеаз (Тга5у1о1) для консервирования.

Определение единичных антигенов: Р11 р 12: планшеты покрывали 2,5 мкг/мл моноклональных антител (тАЬ) против Р1о ά 2 (профилин финиковой пальмы) в течение ночи при 4°С. После насыщения в течение 30 мин при комнатной температуре очищенный пР11 р 12 (стандарт для сравнения) и образцы для экстракции разбавляли, чтобы получить полные сигмовидные кривые (серийное разбавление 1/3, 8 точек) и инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре. После промывания связавшиеся Р11 р 12 выявляли посредством инкубации с поликлональным антителом кролика против Р1о ά 2 в разведении 1/4000 в течение 1 ч при комнатной температуре. После промывания добавляли конъюгированное с пероксидазой поликлональное антитело козы против 1дС кролика в течение 1 ч при к.т., а затем сигнал выявляли путем добавления 0ΓΌ вместе с Н₂О₂. Через 30 мин реакцию останавливали 2н. НС1 и проводили считывание планшетов при 490 нм.

Определение единичных антигенов: Р11 р 5: планшеты покрывали тАЬ против Р11 р 5 и Ьо1 р 5 в течение ночи при 4°С, насыщали и сушили. В день количественного определения планшеты регидрировали и образцы после экстракции разбавляли соответствующим образом, чтобы получить полностью сигмовидные кривые (серийное разведение 1/3), и инкубировали в планшетах в течение 1 ч при к.т. После промываний проводили обнаружение связанного Р11 р 5 после инкубации в течение 1 ч при к.т. с поликлональным антителом кролика против смеси пыльцы травы, разбавленным 1/10000. После промываний добавляли конъюгированное с пероксидазой поликлональное антитело козы против 1дС кролика в течение 1 ч при к.т., а затем выявляли сигнал посредством добавления 0ΓΌ вместе с Н₂О₂. Через 30 мин реакцию останавливали с помощью 2н. НС1 и проводили считывание планшетов при 490 нм.

- 61 029009

Определение единичных антигенов: РЫ р 1: планшеты покрывали 2,5 мкг/мл тАЬ РЫ р 1, 5 мкг/мл тАЬ РЫ р 1 и 5 мкг/мл тАЬ РЫ р 1 в течение ночи при 4°С. После насыщения в течение 30 мин при к.т. образцы после экстракции разбавляли соответствующим образом, чтобы получить полностью сигмовидные кривые (серийное разведение 1/3) и инкубировали в планшетах в течение 1 ч при к.т. После промываний связанный РЫ р 1 обнаруживали посредством инкубации с поликлональным антителом кролика против Р. рге!еп5е, разбавленным 1/10000 в течение 1 ч при к.т. После промываний добавляли конъгированное с пероксидазой поликлональное антитело козы против 1д кролика в течение 1 ч при к.т., а затем сигнал выявляли посредством добавления 0РБ вместе с Н₂О₂. Через 30 мин реакцию останавливали с помощью 2н. НС1 и проводили считывание планшетов при 490 нм.

Масс-спектрометрия.

Буферы/растворы для восстановления, алкилирования и расщепления образца:

Буфер для образца: 8 М мочевина в 0,4 М NН₄НС0з;

ЭТТ (45 мМ): Приготовить свежим из замороженного исходного раствора, 1,0 М: 45 мкл 1 М ЭТТ + 955 мкл воды;

Йодацетамид (1АА): приготовить свежий раствор, йодацетамид 100 ММ;

Трипсин: 8щта Т6567, растворить один флакон в 20 мкл 1 мМ НС1. Это дает раствор, содержащий 1 мкг/мкл трипсина. После разбавления в 1 мМ НС1 замороженные аликвоты можно хранить в течение вплоть до 4 недель.

Ферментативное расщепление трипсином в растворе для масс-спектрометрии: разбавить высушенный образец в 5 мкл воды, добавить 15 мкл буфера для образца (8 М мочевина в 0,4 М ЫН₄НС0₃), добавить 5 мкл 45 мМ ЭТТ, инкубировать при 56°С в течение 15 мин, охладить до комнатной температуры, добавить 5 мкл 100 мМ йодацетамида, инкубировать в темноте при комнатной температуре в течение 15 мин, добавить 90 мкл воды для уменьшения концентрации мочевины <1-2 М, добавить 1 мкг трипсина, инкубировать при 37°С в течение ночи.

Хроматография: обращенно-фазовую хроматографию (ВЭЖХ ИШта1е 3000, Бюпех) проводили с использованием предколонки и аналитической колонки С18. Элюирующиеся пептиды прямо впрыскивали в масс-спектрометр Е81-фТ0Р (МаХ18, Вгикег). После промывания колонки для улавливания 0,05% об./об. муравьиной кислотой в течение 5 мин со скоростью потока 30 мкл/мин пептиды элюировали с помощью градиента ацетонитрила при скорости потока 2 мкл/мин с использованием растворителя А: 0,05% об./об. муравьиная кислота, и растворителя В: 80% об./об. ацетонитрил/0,04% об./об. муравьиная кислота, и градиента: 4-50% В в течение 200 мин; 50-80% В в течение 10 мин; 100% В в течение 10 мин, 4% В в течение 5 мин.

Спектры получали в диапазоне масс 50-2599 т/ζ и частоте спектров 1,5 Гц. Инструмент настраивали и калибровали с использованием Е81-Ь Ьоте СопсеЫгаЕош Типшпд М1х от ЛдПеШ ТесЬпо1о§у.

Получение данных и контроль устройства проводили с помощью Вгикег Сотра88 Ну81аг 3.2. Обработку данных проводили с использованием Ба1аАпа1у818 4.0 (Вгикег). Идентификацию белка проводили с использованием программы Вю1оок 3.2 (Вгикег) и двух различных баз данных, т.е. 8\νί88 рго! и ХСВ1пг. Наборы данных М8/М8 для расщепления трипсином анализировали с использованием следующих параметров; допустимое отклонение для пептида 10 м.д. и допустимое отклонение для фрагмента 0,05 Да.

Методика: все образцы после экстракции упаривали (50 мкл) и ресуспендировали в 5 мкл воды. Затем образец восстанавливали, алкилировали и расщепляли трипсином. Полученные пептиды разделяли и идентифицировали обращенно-фазовой хроматографией с помощью М8/М8.

Результаты.

Результаты, касающиеся экстракции необработанной пыльцы РЫеит рга!еп8е, представлены на фиг. 10 (С1Е для экстрактов, полученных через 20 с, 60 с и 2 мин, с использованием поликлональных антител, индуцированных против экстракта пыльцы РЫеит рга1еп8е);

фиг. 11 (С1Е для экстрактов, полученных через 5, 10 и 20 мин, с использованием поликлональных

антител, индуцированных против экстракта пыльцы РЫеит рга1еп8е);

фиг. 12 (РТЕ для экстрактов, полученных через 20 с, 60 с, 2 мин, 5 мин, 10 мин и 20 мин, с использованием поликлональных антител против очищенного РЫ р 12 (А), РЫ р 5 (В) и РЫ р 1 (С));

фиг. 13 (количества РЫ р 12, РЫ р 1 и РЫ р 5, высвободившихся после времени экстракции 20 с, 60

с, 2 мин, 5 мин, 10 мин и 20 мин и проанализированных с использованием ЕЬ18А).

Все результаты указывают на то, что профилин РЫ р 12 действительно коэкстрагируется с основными аллергенами РЫеит рга1еп8е (РЫ р 1 и РЫ р 5) в пределах одного и того же временного окна и даже в пределах первых 10 мин экстракции, что, таким образом, указывает на то, что профилин представляется органу-мишени в течение того же временного окна, что и основные аллергены, вызывающие иммунный ответ по типу гиперчувствительности при воздействии на индивидуумов содержащего профилин растительного материала. Экстракты также анализировали с использованием масс-спектрометрии, и можно было продемонстрировать, что РЫ р 12 коэкстрагировался с рядом белков, среди прочих, с аллергенами РЫ р 1, 5 и 6.

Результаты, касающиеся экстракции обезжиренной пыльцы РЫеит рга1еп8е, представлены на фигурах:

- 62 029009

фиг. 14 (С1Е для экстрактов, полученных через 20 с, 60 с и 2 мин, с использованием поликлональных антител, индуцированных против экстракта пыльцы РЫеит рга1епзе);

фиг. 15 (С1Е для экстрактов, полученных через 5, 10 и 20 мин, с использованием поликлональных антител, индуцированных против экстракта пыльцы РЫеит рга1еи§е);

фиг. 16 (К1Е для экстрактов, полученных через 20 с, 60 с, 2 мин, 5 мин, 10 мин и 20 мин, с использованием поликлональных антител против очищенного РЫ р 12 (А), РЫ р 5 (В) и РЫ р 1 (С));

фиг. 17 (количества РЫ р 12, РЫ р 1 и РЫ р 5, высвободившихся после времени экстракции 20 с, 60 с, 2 мин, 5 мин, 10 мин и 20 мин, проанализированные с помощью ЕЬ18А с использованием моноклональных антител, индуцированных у кролика против очищенных РЫ р 12, РЫ р 1 и РЫ р 5);

фиг. 18 (8Ό8 раде для экстрактов А) необработанной и В) обезжиренной пыльцы, экстрактов, полученных после экстракции в течение 20 с, 40 с, 60 с, 2 мин, 5 мин, 10 мин и 20 мин, представлены слева направо).

Все результаты указывают на то, что обезжиренную пыльцу можно использовать вместо необработанной пыльцы при скрининге коэкстрагированного профилина и непрофилиновых аллергенов содержащего профилин растительного материала.

Результаты, касающиеся экстракции обезжиренной пыльцы Ве1и1а Уеггисока, представлены на фигурах

фиг. 19 (С1Е для экстрактов, полученных через 20 с, 60 с и 2 мин, с использованием поликлональных антител, индуцированных против экстракта пыльцы Ве1и1а Уеггисока);

фиг. 20 (С1Е для экстрактов, полученных через 5, 10 и 20 мин, с использованием поликлональных антител, индуцированных против экстракта пыльцы Ве1и1а Уеггисока);

фиг. 21 (К1Е для экстрактов, полученных через 20 с, 60 с, 2 мин, 5 мин, 10 мин и 20 мин, с использованием поликлональных антител против очищенного Ве1 ν 2 (профилин) (А) и Ве1 ν 1 (основной аллерген) (В).

Результаты указывают на то, что Ве1 ν 2 (профилин) коэкспрессируется с основным аллергеном (Ве1 ν 1) из пыльцы березы, уже через 1 мин после начала экстракции.

Результаты, касающиеся экстракции обезжиренной пыльцы ЛтЬгоыа Аг1ет181гГо11а, представлены на фиг. 22, на которой показан К1Е для экстрактов, полученных через 20 с, 60 с, 2 мин, 5 мин, 10 мин и 20 мин, с использованием поликлональных антител против очищенного АтЪ а 8 (профилин) (А) и АтЪ а 1 (основной аллерген) (В). Результаты указывают на то, что АтЪ а 8 коэкстрагируется с основным аллергеном АтЪ а 1 уже через 1 мин после начала экстракции.

Способность различных профилинов растений распознавать антитела, индуцированные против профилинов Ве1 ν 2 и РЪ1 р 12, исследовали с помощью К1Е с использованием экстрактов пыльцы АтЪгоыа аПеиищГоПа. Ве1и1а уеггисо^а. Согу1и8 ауе11апа. РЫеит ргаЮше. ЛПеииыа уи1дап5. СгурЮтепа .(аротса, Нити1и8 |арошса5. кошачьей перхоти, тел клещей и свежеприготовленного яблочного сока и поликлональных антител кролика, индуцированных против очищенного РЪ1 р 12 и Ве1 ν 2 соответственно.

Результаты (фиг. 23 и 24) указывают на то, что профилины растений вида, отличного от РЫеит рга1еп8е и Ве1и1а Уеггисока, способны связываться с 1дО-антителами, специфичными к РЫ р 12 и Ве1 ν 2, что, таким образом, указывает на то, что введение индивидууму РЫ р 12 или Ве1 ν 2 может подавлять иммунный ответ по типу гиперчувствительности, вызванный непрофилиновым аллергеном содержащего профилин материала, который не содержит РЫ р 12 или Ве1 ν 1, но содержит, по меньшей мере, профилин рода АтЪгоыа. Согу1и8, СгурЮтепа. Нити1и8 и Ма1и8.

Пример 6. Рекомбинантная продукция полипептида по изобретению.

В настоящем примере получали вариант полипептида, имеющий изменения С13А и С115А по сравнению с 8Еф ГО N0: 1. Полная последовательность приведена в 8Еф ГО N0: 44.

Материалы: плазмида: р-К8ЕТВ (коммерчески доступная от ИгуЦгодеп - ЫГе ТесЪпо1од1е8); штамм Е. соЪ: ВЬ21(ОЕ3), доступный от N0УАСЕN; буфер для лизиса: 10 мМ фосфатный буфер, 30 мМ №С1, 10 мМ ЕЭТА. 1 мМ бензамидин, 10 мкг/мл 8ВТ1 (ингибитор трипсина сои), 3 мМ РМ8Р (фенилметансульфонилфторид), и 0,02 мас./мас.% азид натрия; среда ЬВ: 1% триптон, 0,5% дрожжевой экстракт, 0,5% №С1, рН 7,0; буфер для уравновешивания колонки: РВ8 рН 7,2; колонка РЬР-сефароза: колонку приготавливали в соответствии с инструкциями изготовителя С'%Вг-активированной сефарозы 4В (СЕНеаНЪсаге, геГ. 17-0430-01), и с использованием поли-Ь-пролина (81дта, геГ. Р2129) в качестве лиганда; колонка 8ирегЪех75: предварительно упакованная колонка от СЕ-НеаИЪсаге; мембрана для диализа: мембрана МУС0 3500 Да.

Методика: кДНК 8Еф ГО N0: 46, кодирующую полипептид 8Еф ГО N0: 44, синтезировали и кодоны оптимизировали, исходя из предпочтений Е. соЪ (выбор нуклеотидов, соответствующих тРНК, наиболее регулярно и избыточно присутствующих в Е. соЪ); кДНК вводили в расщепленную №е1/Р8П плазмиду р-К8ЕТВ, которая индуцируется 1РТС (изопропил-бетаГО-тиогалактопиранозид); плазмиду трансформировали в штамм ВЬ21 (ЮЕ3) Е. соЪ; свежетрансформированные клетки выращивали при 37°С в 1 л среды ЬВ, содержащей ампициллин, в культуральных флаконах, встряхиваемых при 250 об./мин, до достижения 0Ό600, равной 0,6, а затем индуцировали при 18°С; клеточную культуру индуцировали добавлением 1РТС до концентрации 0,3 мМ и оставляли приблизительно на 16 ч при 18°С (альтернативно ин- 63 029009

дукцию можно проводить при более высоких температурах, например 37°С, в течение 3-4 ч, начиная при ОО600, равной 0,4); культуру Е. соП поддерживали на бане с ледяной водой в течение по меньшей мере 5 мин перед сбором посредством центрифугирования (например, 12000 об./мин при 4°С в течение 20 мин); таким образом, осажденные индуцированные клетки ресуспендировали в 50 мл лизирующего буфера, а затем разрушали обработкой ультразвуковым излучением; растворимую фракцию, содержащую растворимый цитоплазматический продукт, собирали центрифугированием (12000 об./мин при 4°С в течение 20 мин), и супернатант очищали, а затем подвергали диализу против РВ8 (рН 7,2).

Рекомбинантный полипептид очищали на двух стадиях хроматографии посредством: аффинной хроматографии на колонке с РЬР-сефарозой, уравновешенной буфером для уравновешивания колонки; элюирования 6 М мочевиной, которая должна быть удалена сразу путем диализа через мембрану для диализа в РВ8 (буфер для уравновешивания колонки), а затем эксклюзионной хроматографии на колонке 8ирегДех75, уравновешенной буфером для уравновешивания колонки для получения мономерного рекомбинантного полипептидного продукта, который состоит приблизительно из 99% белка (мас./мас. сухого вещества).

Соответствие рекомбинантного полипептида определяли с помощью 8П8-РЛСЕ (восстанавливающий и невосстанавливающий; окрашивание серебром и кумасси), Ν-концевого секвенирования и анализа аминокислот, а также анализа М8 (для анализа примесей и подтверждения его соответствия способом "отпечатков пальцев").

Было подтверждено, что полученный рекомбинантный полипептид имеет аминокислотную последовательность 8ЕО ГО NО: 44. Ν-концевой метионин, по-видимому, был элиминирован в приблизительно 95% полученного полипептидного продукта. Только приблизительно 5% полученного полипептида, по-видимому, все еще содержало Ν-концевой метионин.

Затем полипептид подвергали анализу с использованием кругового дихроизма (СО) для исследования укладки рекомбинантного белка. Способ способен подтвердить, что большая часть белка правильным образом свернута. Спектры СО (от 260 до 184 нм) определяли на спектрополяриметре ОЬ18 Э8М-10 с использованием квадратных кювет с длиной пути 0,1 см при 15°С. Все спектры получали в 10 мМ натрий-фосфатном буфере, рН 7,2, и каждый образец сканировали пять раз. В необработанные спектры данных вносили поправку на поглощение буфера, и все спектры нормализовывали к сигналу СО λ260=0. Необработанные данные (тЭед) конвертировали в величины Δε (эллиптичность) с использованием следующих уравнений (т^ед=32980xΔЛ; Δε=ΔΛΛρχ1)), где "с" представляет собой молярные концентрации образца, и "1" представляет собой длину пути света в см.

В дополнение к экспериментам при 15°С, также проводили эксперимент с нагреванием, в котором образец сканировали при различных температурах с интервалами 5°С от 15 до 90°С. Этот анализ проводили для исследования стабильности/разворачивания белка.

Полипептид, имеющий замены С13Л и С115Л, неожиданно показал более высокую стабильность при сворачивании, чем исходный пептид (50% полипептида с 8ЕО ГО NО: 44 было развернуто при приблизительно 61°С, в то время как 50% полипептида 8ЕО ГО NО: 1, было развернуто при приблизительно 51°С).

Пример 7. В настоящем примере получали вариант полипептида, имеющий изменения С138 и С1158 по сравнению с 8ЕО ГО NО: 1. Полная последовательность приведена в 8ЕО ГО NО: 45.

Этот вариант полипептида получали, как описано в примере Л, за исключением того, что использованная кДНК имела 8ЕО ГО NО: 47, кодирующую полипептид 8ЕО ГО NО: 45.

Было подтверждено, что полученный рекомбинантный полипептид имеет аминокислотную последовательность 8ЕО ГО NО: 45. Оказалось, что Ν-концевой метионин был удален в приблизительно 95% полученного полипептидного продукта. Только приблизительно 5% полученного полипептида, повидимому, все еще содержали Ν-концевой метионин.

Полипептид, имеющий замены С138 и С1158, продемонстрировал приблизительно ту же стабильность укладки, что и исходный пептид (50% полипептида с 8ЕО ГО NО: 45 было развернуто при приблизительно 51°С).

Также определяли температуру плавления пРЬ1 12, гРЬ1р 12 и двух вариантов У1 (С138 и С1158) и У2 (С13Л и С115Л), соответственно. Было обнаружено, что температура плавления варианта с аланином (У2) была значительно более высокой (61°С), чем температура плавления пРЬ1 12 (54°С), гРЬ1р 12 (58°С) и варианта У1 (51°С) соответственно.

Пример 8. Неспецифическое подавление иммунного ответа по типу гиперчувствительности (астма), вызванного экстрактом Ве1 ν (экстракт пыльцы Ве1и1а Уеггисока) у наивных мышей, которым вводили РЬ1 р 12.

Способы и материалы являются такими же, как и в примере 1, за исключением того, что экстракт РЬ1 р заменен экстрактом Ве1 ν. Кроме того, в это исследование не включено удаление РЬ1 р 12.

Результаты (фиг. 25 и 26) указывают на то, что иммунный ответ по типу гиперчувствительности, вызванный аллергенами березы, подавляется у наивных мышей, которым сублингвально вводили профилин РЬ1 р 12.

- 64 029009

Пример 9. Неспецифическое подавление иммунного ответа по типу гиперчувствительности (астма), вызванного экстрактом Ве1 ν (экстракт пыльцы ВеШ1а Уеггисока) у сенсибилизированных мышей, которым вводили Р11 р 12.

Способы и материалы являются такими же, как и в примерах 3 и 8. Мышей сенсибилизируют к экстракту Ве1 ν (аллергены березы), из которого удален профилин Ве1 ν 2, вместо 0УА, а затем обрабатывают Р11 р 12.

Результаты (фиг. 27 и 28) указывают на то, что иммунный ответ по типу гиперчувствительности, вызванный аллергенами березы, может подавляться у сенсибилизированных мышей, которым вводили профилин Р11 р 12.

Пример 10. Неспецифическое подавление иммунного ответа по типу гиперчувствительности, вызванного экстрактом Р11 р (экстракт пыльцы РЫеит ргаЗепзе) у наивных мышей, которым вводили рекомбинантно полученный 01е е 2 (профилин пыльцы оливкового дерева).

Способы и материалы являются сходными с примером 2. Мышам сублингвально вводят 01е е 2, а затем мышей сенсибилизируют к аллергенам пыльцы травы (экстракт Р11 р 12). Результаты (фиг. 29 и 30) демонстрируют, что иммунный ответ по типу гиперчувствительности, вызванный аллергенами травы, может подавляться у наивных мышей, которым сублингвально вводили профилин 01е е 2.

Пример 11. Неспецифическое подавление иммунного ответа по типу гиперчувствительности, вызванного 0УА (совместное воздействие либо с Р11 р 12, либо с Ве1 ν 2) у наивных мышей, которым вводили Р11 р 12.

Способы и материалы являются сходными с примером 1. Мышам сублингвально вводят Р11 р 12, а затем мышей сенсибилизируют к 0УА, к 0УА с совместным воздействием Р11 р 12 или к 0УА с совместным воздействием Ве1 ν 2.

Результат (фиг. 31) указывает на то, что иммунный ответ по типу гиперчувствительности, вызванный 0УА, подавляется у наивных мышей, которым сублингвально вводили профилин Р11 р 12, когда мышей также совместно подвергали воздействию Р11 р 12 или Ве1 ν 2. Результат также демонстрирует, что толерантность к одному профилину (Р11 р 12) является достаточной для подавления иммунного ответа на неродственный антиген (0УА), даже когда совместное воздействие обеспечивается молекулой профилина, отличной от Р11 р 12 (в данной случае Ве1 ν 2).

Пример 12. Исследование распознавания Т-клетками различных профилинов в линиях специфичных к Р11 р 12 Т-клеток, полученных из РВМС индивидуумов с аллергией на траву.

РВМС выделяли от индивидуумов с аллергией на аллергены пыльцы травы РЫеит ргаЗепке (индивидуумы, обладающие реактивностью 1дЕ в отношении экстрактов пыльцы РЫеит ргаЗепке).

Затем получали линии реактивных к Р11 р 12 Т-клеток посредством инкубации в течение двух недель с последующей повторной стимуляцией свежевыделенных РВМС рекомбинантным Р11 р 12 дикого типа (М) (8Еф ГО N0: 1). Затем полученные линии Т-клеток стимулировали (а) рекомбинантным \\1 Р11р 12, (Ь) природным очищенным Р11 р 12, (с) рекомбинантным 01е е 2 (гомолог профилина Р11 р 12), встречающимся в пыльце оливковых деревьев (8Еф ГО N0: 16), и (ά) средой для роста в качестве контроля. Величину активации Т-клеток в ответ на стимуляцию профилинами травы и оливы измеряли по включению Н³. На фиг. А и В представлены линии Т-клеток, полученные из РВМС от двух различных индивидуумов соответственно.

Данные демонстрируют (фиг. 32), что Т-клетки человека от индивидуумов с аллергией на траву, как и ожидалось, активируются после воздействия распознаваемого ими антигена (Р11 р 12), но также активируются после воздействия гомологичного белка 01е е 2. Это отчетливо демонстрирует возможность обширной иммунологической перекрестной реактивности на уровне Т-клеток между гомологичными, но не идентичными белками из филогенетически отдаленного вида. Более того, эти данные формируют необходимую базу для селекции белков и вариантов белков с иммуномодулирующим потенциалом в отношении различных и отдаленных видов, что, в свою очередь, позволяет разработку новых способов терапии атопических заболеваний, включая, аллергию и астму, со значительно более широкими и менее ограниченными видами показаниями.

- 65 029009

Список последовательностей

<110> А1_К-АЬеПу А/5

<120>	ПОЛИПЕПТИДЫ ПРОФИЛИНА РАСТЕНИЙ ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ ИММУНОТЕРАПИИ АЛЛЕРГИИ
<130>	19190РСТ00
<160>	47
<170>	Ратептт уегзтоп 3.5
<210>	1
<211>	131
<212>	БЕЛОК
<213>	рК!еит ргатепзе

<400> 1

мег Бег тгр 1

С1 η

тКг туг 5

Уа1

АБр С1и

Нт 5 1_еи Мег Суз С1и 10

Пе 15

С1и

С1у

НТБ

НТБ

1_еи

а! а

Бег

а! а

а! а

Пе

1_еи

С1у

НТБ

АБр

С1у

ТКг

Уа1

20

25

30

тгр

А1а

С1п

Бег

А1а

АБр

РКе

РГО

С1п

РКе

1_У5

РГО

С1и

С1и

Пе

тКг

35

40

45

С1у

Пе

мет

1_У5

АБр

РКе

АБр

С1и

РГО

С1у

НТБ

|_еи

А1а

РГО

тКг

С1у

50

55

60

мет

РКе

Уа!

а1 а

С1у

А1а

1_У5

Туг

мет

Уа!

Пе

С1п

С1у

С1и

РГО

С1у

65

70

75

80

а! а

Уа1

Пе

Агд

С1у

1_У5

1_У5

С1у

а! а

С1у

С1у

Пе

тКг

Пе

1_У5

1_У5

85

90

95

тКг

С1у

С1п

а! а

|_еи

Уа1

Уа1

С1у

Пе

туг

АБр

С1и

РГО

мет

ТКг

РГО

100

105

110

С1у

С1п

СУ5

АБП

мет

Уа!

уа!

С1и

Агд

|_еи

С1у

АБр

туг

1_еи

Уа!

С1и

115 120 125

С1п С1у Мет 130

<210> 2

<211> 131

<212> БЕЛОК

<213> РК!еит ргатепзе

<400> 2

мет Бег тгр С1п тКг туг Уа1 Азр С1и нтб 1_еи мет Суз С1и 11е С1и 15 10 15

С1у нтб нтб 1_еи А1а Бег А1а А1а Не РКе С1у нтб Азр С1у тКг Уа1 20 25 30

тгр а!а с!п

Бег а!а

АБр РКе Рго С1п РКе 40

|_у5 Рго С1и 45

с!и Пе

тКг

35

С1у

Пе

мет

1_У5

АБр

|_еи

АБр

С1ы

РГО

С!у

НТБ

1_еи

А1а

РГО

тКг

С1у

50

55

60

МеТ

РКе

Уа!

а1 а

А1 а

А1 а

1_У5

туг

мет

Уа!

Пе

С! η

С1у

С! и

РГО

С1у

65

70

75

80

Αΐ а

Уа!

Пе

Агд

С!у

1_У5

1_У5

С1у

а! а

С!у

С!у

Пе

ТКг

Пе

1_У5

1_У5

85

90

95

тКг

С1у

С1п

а1 а

|_еи

Уа1

уа!

С1у

Пе

туг

АБр

С! и

РГО

мет

ТКг

РГО

100

105

110

С1у

с!п

СуБ

АБП

мет

уа!

уа!

С1и

Агд

|_еи

С!у

АБр

туг

|_еи

Уа!

С1и

115

120

125

С1 η

С!у

мет

130

<210>

3

<211>

131

<212>

БЕЛОК

<213>

РК1еит ргаТепье

<400>

3

МеТ

Бег

тгр

С1 П

тКг

туг

уа!

АБр

С! и

НТБ

1_еи

мет

СуБ

С! и

Пе

С1и

1

5

10

15

С1у

НТ 5

НТБ

|_еи

А1а

Бег

а! а

А1а

Пе

|_еи

С!у

НТБ

АБр

С!у

тКг

Уа!

20

25

30

тгр

а! а

С1п

Бег

А1а

АБр

РКе

РГО

С! η

РКе

1_У5

РГО

С1и

С! и

Пе

тКг

35

40

45

С1у

Пе

мет

1_У5

АБр

РКе

АБр

С1ы

РГО

С!у

НТБ

|_еи

А1а

РГО

тКг

С1у

50

55

60

МеТ

РКе

Уа!

а! а

с!у

а! а

1_У5

Туг

мет

Уа!

Пе

С! η

С1у

С! и

РГО

С1у

65

70

75

80

Агд

Уа!

Пе

Агд

б1у

1_У5

1_У5

С1у

а! а

е!у

С!у

Пе

ТКг

Пе

1_У5

1_У5

85

90

95

тКг

С1у

С1п

а1 а

|_еи

Уа1

уа!

С1у

Пе

туг

АБр

С! и

РГО

мет

тКг

РГО

100

105

110

С1у

с!п

СуБ

АБП

мет

уа!

уа!

С1и

Агд

|_еи

С!у

АБр

туг

|_еи

уа!

С1и

115 120 125

66

029009

6ΐη б1у меб 130

<210> <211> <212> <213>	4 131 БЕЛОК РН1еит ргабепзе
<400>	4

меб Бег 1

тгр б!п

А1а 5

туг Уа1

Азр б1и

нтз беи меб 10

Суз

61 и

Пе 15

61 и

б1у

НТ 5

НТ 5

беи

а1 а

Бег

А1а

А1а

Пе

беи

б1у

нтз

АЗр

б1у

ТНг

Уа1

20

25

30

тгр

а1 а

6ΐη

Бег

а1 а

Азр

рНе

РГО

6ΐη

РНе

буз

РГО

б1и

б1и

Пе

тНг

35

40

45

б1у

Не

меб

бУ5

Азр

РНе

Азр

61 и

РГО

б1у

Нтз

беи

А1а

РГО

ТНг

б1у

50

55

60

меб

РНе

Уа1

А1 а

ТНг

А1а

буз

туг

меб

Уа1

Пе

61 η

б1у

б1и

РГО

б1у

65

70

75

80

А1а

Уа1

11е

Агд

б1у 85

буз

буз

б1у

А1а

б1у 90

б1у

Пе

тНг

11е

буз 95

буз

тНг

б1у

61 η

а1 а

беи

Уа1

Уа1

б1у

Пе

туг

Азр

61 и

РГО

меб

тНг

РГО

100

105

110

б1у

61 η

Суз

А5П

меб

Уа1

Уа1

61 и

Агд

беи

б1у

Азр

Туг

беи

беи

буз

115

120

125

61 η

б1у

беи

130

<210>

5

<211> .

131

<212>

БЕЛОК

<213>

рН1еит ргабепзе

<400>

5

меб

Бег

тгр

61 η

А1 а

туг

Уа1

Азр

61 и

Нтз

беи

меб

Суз

61 и

Пе

61 и

1

5

10

15

б1у

НТ 5

НТ 5

беи

А1а

Бег

А1а

А1а

11е

беи

б1у

НТЗ

Азр

б1у

ТНг

Уа1

20

25

30

т гр

А1а

61 П

Бег

А1а

Азр

РНе

РГО

6ΐη

РНе

буз

РГО

61 и

б1и

Пе

тНг

35

40

45

б!у

Пе

меб

бУ5

А5р

РНе

Азр

б!и

РГО

б1у

нтз

беи

А1а

РГО

тНг

б1у

50 55 60

меб РНе Уа1 А1а А1а 65

А1а буз 70

туг меб Уа1

Пе 75

61 η

б!у б!и Рго

б1у 80

А1а

Уа1

Пе

Агд

б1у

буз

буз

б1у

А1а

б1у

б1у

Пе

тНг

Пе

буз

буз

85

90

95

ТНг

б1у

61 η

А1 а

беи

Уа1

Уа1

б1у

Пе

туг

А5Р

61 и

РГО

меб

ТНг

РГО

100

105

110

б1у

61 η

Суз

АЗ П

меб

Уа1

Уа1

61 и

Агд

беи

б1у

Азр

туг

беи

Уа1

буз

115

120

125

6ΐη

б1у

беи

130

<210> |

6

<211> .

131

<212>

БЕЛОК

<213>

рНТеит ргабепзе

<400> |

6

Меб

Бег

тгр

61 п

тНг

туг

Уа1

Азр

61 и

нтз

беи

меб

Суз

61 и

Пе

61 и

1

5

10

15

б1у

нтз

НТЗ

беи

А1а

Бег

А1а

А1а

Пе

беи

б1у

нтз

Азр

б1у

ТНг

Уа1

20

25

30

тгр

А1а

61 η

Бег

А1а

Азр

РНе

РГО

61 η

РНе

буз

РГО

61 и

61 и

Пе

ТНг

35

40

45

б1у

Не

меб

буз

Азр

рНе

Азр

61 и

РГО

б1у

нтз

беи

А1а

РГО

тНг

б1у

50

55

60

меб

РНе

Уа1

А1а

А1а

А1а

буз

Туг

меб

Уа1

Пе

6ΐη

б1у

61 и

РГО

б1у

65

70

75

80

А1а

уа1

Не

Агд

б1у 85

буз

буз

б1у

А1а

б1у 90

б1у

Пе

тНг

Пе

буз 95

буз

тНг

б1у

61 η

А1 а

беи

Уа1

Уа1

б1у

Пе

туг

Азр

61 и

РГО

меб

ТНг

РГО

100

105

110

б!у

б!п

Суз

АЗ П

меб

Уа1

Уа1

б1и

Агд

беи

б!у

Азр

туг

беи

беи

буз

115

120

125

6ΐη б1у 1_еи 130

<210> 7

<211> 131

<212> БЕЛОК

<213> РНТеит ргабепзе

- 67 029009

<400> 7

мег 1

Бег тгр

С1п

ТКг Туг Уа1 Азр 5

С1и

НТЗ 10

1_еи Мег Суз С1и

Пе 15

С1и

С1у

НТЗ

НТЗ

1_еи

а! а

Бег

а! а

а! а

Пе

1_еи

С1у

НТЗ

Азр

С1у

ТКг

Уа1

20

25

30

Тгр

а! а

С1 η

Бег

а! а

Азр

РКе

РГО

С1п

РКе

1_У5

РГО

С1и

С1и

Пе

тКг

35

40

45

С1у

Пе

мег

1_У5

Азр

РКе

Азр

С! и

РГО

С1у

НТЗ

|_еи

а! а

РГО

ТКг

С1у

50

55

60

мег

РКе

Уа1

а! а

тКг

а! а

1_У5

Туг

мег

Уа1

Пе

С1п

С1у

С1и

РГО

С1у

65

70

75

80

а! а

Уа1

Пе

Агд

С1у

1_У5

1_У5

С1у

а! а

С1у

С1у

Пе

тКг

Пе

1_У5

1_У5

85

90

95

тКг

С1у

С1 η

а! а

1_еи

Уа1

Уа1

С1у

Пе

туг

Азр

С1и

РГО

мег

ТКг

РГО

100

105

110

С1у

С1п

СУ5

АЗП

мег

Уа!

уа!

С1и

Агд

|_еи

С1у

Азр

туг

1_еи

1_еи

1_У5

115

120

125

С1п С1у 1_еи 130

<210> 8

<211> 131

<212> БЕЛОК

<213> РК!еит ргагепзе

<400> 8

мег

Бег

тгр

С1 η

а! а

туг

уа!

Азр

С! и

НТЗ

|_еи

мег

Суз

С! и

Пе

С! и

1

5

10

15

С1у

НТЗ

НТЗ

1_еи

а! а

Бег

а! а

а! а

Пе

1_еи

С!у

НТЗ

Азр

С!у

ТКг

Уа!

20

25

30

тгр

А1а

С1п

Бег

А1а

Азр

РКе

РГО

С! η

РКе

1_У5

РГО

С! и

С! и

Пе

тКг

35

40

45

С1у

Пе

мег

1_У5

Азр

РКе

Азр

С! и

РГО

С!у

НТЗ

|_еи

А! а

РГО

тКг

С!у

50

55

60

мег

РКе

Уа1

а! а

а! а

а! а

1_У5

Туг

мег

Уа!

Пе

С! η

С!у

С! и

РГО

С!у

65

70

75

80

А1а

Уа!

Пе

Агд

С1у

1_У5

1_У5

С!у

а! а

с!у

С!у

Пе

ТКг

Пе

|_уз

|_уз

85

90

95

ТКг

С!у

С1п

А1 а

1_еи

Уа!

уа!

С!у

Пе

Туг

Азр

С! и

РГО

мег

ТКг

РГО

100

105

110

С1у

С1п

СУ5

АЗП

мег

уа!

уа!

С! и

Агд

|_еи

С!у

Азр

туг

|_еи

|_еи

|_уз

115

120

125

С1п С1у 1_еи 130

<210> 9

<211> 131

<212> БЕЛОК

<213> РЫеит ргагепзе

<400> 9

мег

Бег

Тгр

С! η

а! а

Туг

Уа!

А5р

С! и

НТЗ

1_еи

мег

Суз

С! и

Пе

С! и

1

5

10

15

С!у

НТЗ

НТЗ

|_еи 20

а! а

Бег

а! а

а! а

Пе 25

1_еи

с!у

НТ 5

Азр

б!у 30

ТКг

Уа!

тгр

а! а

с! η

Бег

а! а

Азр

РКе

РГО

С! η

РКе

|_уз

РГО

С! и

С! и

Пе

тКг

35

40

45

С!у

Пе

мег

|_уз

Азр

РКе

Азр

С! и

РГО

С!у

НТЗ

|_еи

а! а

РГО

тКг

с!у

50

55

60

мег

РКе

Уа!

а! а

а! а

а! а

ьуз

туг

мег

Уа!

Пе

С! η

б!у

С! и

РГО

б!у

65

70

75

80

А! а

уа!

тКг

Агд

с!у

|_уз

|_уз

С!у

а! а

С!у

С!у

Пе

тКг

Пе

|_уз

|_уз

85

90

95

тКг

с!у

С! η

а! а

|_еи

Уа!

Уа!

С!у

Пе

туг

Азр

С! и

РГО

мег

ТКг

РГО

100

105

110

С!у

С! η

Суз

АЗ П

мег

Уа!

Уа!

С! и

Агд

|_еи

С!у

Азр

туг

1_еи

Уа!

|_уз

115

120

125

С1п С1у 1_еи 130

<210> 10

<211> 131

<212> БЕЛОК

<213> РК!еит ргагепзе

<400> 10

мег Бег тгр

С! η

а! а

туг

Уа!

Азр

С! и

нтз

1_еи

мег

Суз

С! и

Пе

С! и

1

5

10

15

С!у Нтз Нтз

1_еи

А! а

Бег

а! а

А! а

Пе

1_еи

С!у

НТ 5

Азр

С!у

ТКг

Уа!

20 25 30^{^}

- 68 029009

тгр а!а б!п

Бег а!а

Азр РКе Рго 6ΐη РКе 40

1_уз Рго С1и 45

б!и Пе

тКг

35

С1у

Пе

мет

|_уз

Азр

РКе

Азр

б1и

РГО

С1у

НТЗ

1_еи

А1а

РГО

ТКг

С1у

50

55

60

мет

РКе

Уа1

А1 а

тКг

А1а

1_уз

туг

мет

Уа1

Пе

С1п

С1у

б1и

РГО

С1у

65

70

75

80

А1а

Уа1

Пе

Агд

С1у

|_уз

|_уз

С1у

А1а

С1у

С1у

Пе

тКг

Пе

|_уз

|_уз

85

90

95

тКг

С1у

С1п

А1а

1_еи

Уа1

Уа1

С1у

Пе

туг

Азр

61 и

РГО

мет

ТКг

РГО

100

105

110

С1у

С1п

Суз

Бег

мет

Уа1

Уа1

б1и

Агд

|_еи

С1у

Азр

туг

1_еи

Уа1

|_уз

115

120

125

С1п

С1у

1_еи

130

<210> :

11

<2ΐι> :

138

<212> 1

БЕЛОК

<213> ТгтТтсит

аезтт уигп

<400> :

11

Мет

Бег

тгр

С1п

тКг

туг

Уа1

Азр

Азр

НТЗ

1_еи

Суз

Суз

б1и

Пе

Азр

1

5

10

15

С1у

С1п

НТЗ

|_еи

ТКг

Бег

А1а

А1а

Пе

1_еи

С1у

НТЗ

Азр

С1у

Бег

Уа1

20

25

30

тгр

тКг

61 и

Бег

РГО

АЗП

РКе

РГО

|_уз

РКе

|_уз

РГО

61 и

61 и

Пе

А1а

35

40

45

С1у

Пе

Уа1

|_уз

Азр

РКе

б1и

б1и

РГО

С1у

НТЗ

|_еи

А1а

РГО

тКг

С1у

50

55

60

|_еи

РКе

|_еи

С1у

С1у

тКг

1_уз

Туг

мег

Уа1

Пе

С1п

С1у

б1и

РГО

С1у

65

70

75

80

Уа1

Уа1

Пе

Агд

С1у

|_уз

|_уз

С1у

тКг

С1у

С1у

Пе

тКг

Пе

|_уз

|_уз

85

90

95

тКг

С1у

мет

А1 а

1_еи

Пе

1_еи

С1у

Пе

туг

Азр

б1и

РГО

мет

ТКг

РГО

100

105

110

С1у

С1п

Суз

АЗ П

1_еи

Уа1

Уа1

б!и

Агд

|_еи

С1у

Азр

туг

1_еи

Пе

Азр

115 120 125

С1п с1у туг тгр Уа1 рго Бег Бег азп Бег 130 135

<210> <211> <212> <213>	12 131 БЕЛОК ногс1еит уи1даге
<400>	12

мет Бег тгр С1п тКг

туг Уа1

А5р

А5р нт5 ьеи Су5 Су5 С1и Пе А5р

1

5

10

15

б1у

С1п

НТ 5

ьеи

тКг

Бег

а1 а

а1 а

Пе

|_еи

б1у

нтз

Азр

б1у

Агд

Уа1

20

25

30

тгр

Уа1

С1п

Бег

РГО

АЗП

РКе

РГО

С1п

РКе

ьуз

РГО

61 и

61 и

Пе

а1 а

35

40

45

б1у

Пе

Пе

ьуз

А5р

РКе

А5р

б1и

РГО

б1у

нтз

|_еи

А1а

РГО

тКг

б1у

50

55

60

|_еи

РКе

|_еи

С1у

б1у

тКг

ьуз

туг

мет

Уа1

Пе

61 η

б1у

61 и

РГО

б1у

65

70

75

80

Уа1

Уа1

Пе

Агд

б1у

ьуз

ьуз

б1у

тКг

б1у

б1у

Пе

тКг

Пе

ьуз

ьуз

85

90

95

тКг

б1у

мет

РГО 100

ьеи

Пе

ьеи

б1у

Пе 105

туг

Азр

б1и

РГО

мет 110

тКг

РГО

С1у

С1п

Суз

АЗП

ьеи

уа!

Уа1

С1 и

Агд

|_еи

б1у

Азр

туг

|_еи

Уа1

61 и

115

120

125

С1п

б1у

РКе

130

<210> .

13

<211>

131

<212>

БЕЛОК

<213> 1

Эгуга заттуа

зиЬзр. зароптса

<400> .

13

МеТ

Бег

Тгр

С1 η

ТКг

Туг

Уа1

Азр

61 и

Нт 5

Ьеи

мет

Суз

61 и

Пе

61 и

1

5

10

15

б1у

НТЗ

НТ 5

ьеи

тКг

Бег

А1а

А1а

Пе

Уа1

б1у

нтз

Азр

б1у

тКг

Уа1

20

25

30

т гр

А1а

С1п

Бег

а1 а

А1 а

РКе

РГО

61 η

РКе

ьуз

РГО

61 и

61 и

мет

тКг

35

40

45

АЗП

Пе

мет

ьуз

Азр

РКе

Азр

С1 и

РГО

б!у

РКе

|_еи

А1а

РГО

тКг

б!у

50

55

60

- 69 029009

|_еи

РКе

|_еи

С1у

РГО

тКг

|_уз

туг

Мег

Уа1

Пе

С1п

С1у

С1и

РГО

С1у

65

70

75

80

А1а

Уа1

Пе

дгд

С1у

|_уз

|_уз

С1у

Вег

С1у

С1у

Пе

тКг

Уа1

|_уз

|_уз

85

90

95

тКг

С1у

С1п

А1а

1_еи

Уа1

Уа1

С1у

Пе

туг

Азр

С1и

РГО

мег

ТКг

РГО

100

105

110

С1у

С1п

Суз

АЗ П

мег

Уа1

Уа1

С1 и

дгд

|_еи

С1у

Азр

туг

1_еи

Уа1

С1и

115

120

125

С1п

С1у

1_еи

130

<210> 14

<211> 131

<212> БЕЛОК <213> геа тауз

<400> 14

мег

Вег

тгр

С1 η

тКг

Туг

Уа1

Азр

С1 и

нтз

|_еи

мег

Суз

С1и

Пе

С1и

1

5

10

15

С1у

нтз

НТЗ

1_еи

тКг

Вег

д1а

А1а

Пе

Уа1

С1у

нтз

Азр

С1у

А1а

ТКг

20

25

30

тгр

А1а

С1п

Вег

тКг

А1а

РКе

РГО

С1 и

РКе

|_уз

РГО

С1и

С1и

мег

А1а

35

40

45

А1а

Пе

мег

|_уз

Азр

РКе

Азр

С1 и

РГО

С1у

НТЗ

|_еи

А1а

РГО

тКг

С1у

50

55

60

|_еи

Пе

|_еи

С1у

С1у

тКг

1_уз

Туг

мег

Уа1

Пе

С1п

С1у

С1и

РГО

С1у

65

70

75

80

А1а

Уа1

Пе

дгд

С1у

|_уз

|_уз

С1у

вег

С1у

С1у

Пе

ТКг

Уа1

|_уз

|_уз

85

90

95

тКг

С1у

С1п

вег

1_еи

Пе

Пе

С1у

Пе

туг

Азр

С1и

РГО

мег

ТКг

РГО

100

105

110

С1у

С1п

Суз

АЗ П

1_еи

Уа!

уа!

С1и

дгд

|_еи

С1у

Азр

туг

1_еи

1_еи

С! и

115

120

125

С1п С1у Мег 130

<210>	15
<211>	131
<212>	БЕЛОК
<213>	Супос1оп с1асгу1оп
<400>	15

мег Вег тгр С1п А1а туг Уа1 Азр Азр нтз 1_еи мег Суз С1и 11е С1и 15 10 15

С1у нтз нтз 1_еи тКг Вег А1а А1а 11е 11е С1у нтз Азр С1у тКг Уа1 20 25 30

тгр А1а С1п Вег А1а А1а РКе Рго А1а РКе 1_уз Рго С1и С1и мег д1а 35 40 45

АЗП

11 е мег 1_уз Азр 50

РКе Азр С1и 55

РГО С1у

РКе 1_еи А1а 60

РГО

ТКг С1у

|_еи

РКе

|_еи С1у

РГО

ТКг

|_уз

туг

мег Уа!

Пе

С! η

С1у

С! и

РГО

С1у

65

70

75

80

д1а Уа1	Пе	дгд	С1у 1_уз 1_уз С1у 85	Вег С1у С1у Уа1 90	тКг Уа1	|_уз 1_уз 95
тКг С1у	С1п	д1 а	|_еи Уа1 Пе С1у	Пе туг Азр С1и	рго мег	ТКг РГО
		100		105	110
С1у С1п	Суз	АЗП	мег Уа1 11е С1и	|_уз 1_еи С1у Азр	туг 1_еи	Пе С1и
	115		120		125
С1п С1у	мег
130
<210>	16
<211>	134
<212>	БЕЛОК
<213> ί	о1еа	еигораеа
<400>	16
мег Вег	тгр	С1п	А1а туг Уа1 Азр	Азр Нтз 1_еи мег	Суз Азр	Пе С1и
1			5	10		15
С1у Нтз	С1и	Азр	Нтз дгд 1_еи тКг	А1а А1а А1а Пе	Уа1 С1у	НТЗ Азр
		20		25	30
С1у Вег	Уа1	тгр	А1а С1п Вег А1а	тКг РКе Рго С1п	РКе 1_уз	Рго С1и
	35		40		45
С1и мег	АЗП	С1у	ιΐе мег тКг Азр	РКе Азп С1и Рго	С1у Нтз	|_еи А1а
50			55	60
РГО тКг	С1у	|_еи	Нтз 1_еи С1у С1у	тКг 1_уз туг мег	Уа1 11е	С1п С1у
65			70	75		80
с! и а! а	С1у	а! а	Уа1 11е Агд С1у	|_уз 1_уз С1у Вег	С1у С1у	Пе тКг
			85	90		95

- 70 029009

11е 1_у5 1_у5 тКг	С1у С1п А1а	|_еи Уа1 105	РКе	С1у	Не	Туг	61 и 110	61 и	РГО
	100
Уа1 тКг рго С1у С1п Суз азп 115 1_еи Уа1 С1и С1п С1у мер 130 <210> 17 <211> 131 <212> БЕЛОК <213> Согу1из ауеПапа <400> 17	мер Уа1 120	Уа1	61 и	Агд	|_еи 125	б1у	Азр	туг
мер Бег тгр 1	61 η	тКг туг б1у 5	Азр С1и	нт 5 10	|_еи	мер	Суз	61 и	Не 15	61 и
С1у АЗП Агд	1_еи 20	А1а А1а А1а	А1а 11 е 25	Пе	б1у	Нт 5	Азр	б1у 30	Бег	Уа1
Тгр А1а С1п 35	Бег	Бег тКг РКе	Рго С1п 40	1_еи	1_уз	РГО	61 и 45	61 и	Не	тКг
б1у Уа1 Мер 50	Азп	Азр РКе Азп 55	С1и Рго	б1у	Бег	1_еи 60	А1а	Рго	тКг	б1у
1_еи Туг 1_еи 65	б1у	С1у ТКг 1_уз 70	Туг Мер	Уа1	Пе 75	61 п	б1у	61 и	Рго	б1у 80
А1а Уа1 11е	Агд	Агд 1_уз 1_уз 85	С1у Рго	б1у 90	б1у	Уа1	тКг	Уа1	1_уз 95	1_уз
тКг Бег С1п	А1а 100	|_еи 11е 11е	б1у Пе 105	Туг	Азр	61 и	РГО	мер 110	тКг	РГО
С1у С1п Суз Азп мер 11е Уа1 115 С1п С1у 1_еи 130 <210> 18 <211> 133 <212> БЕЛОК <213> вери1а репс1и1а <400> 18	б1и Агд 120	|_еи	б1у	Азр	туг 125	|_еи	Пе	Азр
мер Бег тгр 1	С1п	тКг туг Уа1 5	Азр С1и	НТ 5 10	1_еи	мер	Суз	Азр	Пе 15	Азр
б1у С1п А1а	Бег	Азп Бег 1_еи	А1а Бег	а! а	Пе	Уа1	б!у	Нт 5	Азр	б!у

20

25

30

Бег

Уа1

тгр

а1 а

61 п

Бег

Бег

Бег

РКе

РГО

61η

РКе

|_уз

РГО

61 п

61 и

35

40

45

Пе

тКг

б1у

Пе

мер

|_уз

Азр

РКе

61 и

61 и

РГО

б1у

НТ 5

|_еи

А1а

РГО

50

55

60

тКг

б1у

1_еи

НТ 5

|_еи

б1у

б1у

Пе

1_уз

туг

мер

Уа1

Пе

61 п

б1у

61 и

65

70

75

80

А1а

б1у

А1а

уа1

Пе 85

Агд

б1у

|_уз

|_уз

б1у 90

Бег

б1у

б1у

Пе

тКг 95

Пе

|_уз

|_уз

тКг

б1у

61 п

А1а

1_еи

Уа1

РКе

б1у

Пе

туг

61 и

61 и

РГО

Уа1

100

105

110

ТКг

РГО

б1у

61 п

Суз

АЗП

мер

Уа1

Уа1

61 и

Агд

|_еи

б1у

Азр

туг

|_еи

115

120

125

Пе

Азр

61 п

б!у

1_еи

130

<210> 19

<211> 131

<212> БЕЛОК

<213> АгасКтз Куродаеа

<400> :

1.9

Мер

Бег

Тгр

61 п

тКг

туг

Уа1

Азр

АЗП

НТ 5

1_еи

1_еи

Суз

61 и

Пе

61 и

1

5

10

15

б1у

Азр

НТ 5

1_еи

Бег

Бег

А1а

А1а

Пе

1_еи

б1у

61 п

Азр

б1у

б1у

уа1

20

25

30

тгр

А1а

61 п

Бег

Бег

НТ 5

РКе

РГО

61 п

РКе

|_уз

РГО

61 и

61 и

Пе

тКг

35

40

45

А1а

Пе

мер

АЗП

Азр

РКе

А1а

61 и

РГО

б1у

Бег

|_еи

А1а

РГО

тКг

б1у

50

55

60

|_еи

Туг

|_еи

б1у

б1у

тКг

1_уз

туг

мер

Уа1

Пе

61 п

б1у

61 и

РГО

б1у

65

70

75

80

А1а

Пе

Пе

РГО

б1у

|_уз

|_уз

б1у

РГО

б1у

б1у

уа1

тКг

Пе

61 и

|_уз

85

90

95

тКг

АЗП

61 п

а1 а

1_еи

Пе

Пе

б1у

Пе

Туг

Азр

1_У5

РГО

мер

ТКг

РГО

100

105

110

б!у

61 п

Суз

АЗП

мер

Пе

Уа1

61 и

Агд

1_еи

б!у

Азр

туг

1_еи

Пе

Азр

115

120

125

- 71

029009

тКг С1у 1_еи 130

<210>	20
<211>	131
<212>	БЕЛОК
<213>	с!устпе тах
<400>	20

меб Бег тгр С1η 1 С1у Азп нтз беи

А1а туг Уа1 5

Азр А! а

Азр нтз беи беи Суз Азр 10

Пе с!и 15

ТКг

НТЗ

а! а

Пе 25

Пе

С!у

С!η Азр

С!у 30

Бег

Уа!

20

тгр

а! а

С1п

Бег

тКг

Азр

РКе

РГО

С! η

РКе

буз

РГО

С! и

С! и

Пе

тКг

35

40

45

а! а

Пе

меб

АЗП

Азр

РКе

АЗП

С! и

РГО

С!у

Бег

беи

А! а

РГО

тКг

С!у

50

55

60

беи

Туг

беи

С1у

С1у

тКг

буз

Туг

меб

Уа!

Пе

С! η

С!у

С! и

РГО

С!у

65

70

75

80

а! а

Уа1

Пе

Агд

С1у

буз

буз

С!у

РГО

С!у

С!у

Уа!

ТКг

Уа!

буз

буз

85

90

95

тКг

С1у

а! а

а! а

беи

Пе

Пе

С!у

Пе

туг

Азр

С! и

РГО

меб

ТКг

РГО

100

105

110

С1у

С1п

Суз

АЗП

меб

Уа!

Уа!

С! и

Агд

РГО

С!у

Азр

туг

беи

Пе

Азр

115

120

125

С1п

С1у

туг

130

<210>

21

<211> :

133

<212> 1

БЕЛОК

<213> АтЬгозта

агбегпт зт т То!т а

<400> \

21

меб

Бег

тгр

С1 η

тКг

туг

Уа!

Азр

С! и

НТЗ

беи

меб

Суз

Азр

Пе

С! и

1

5

10

15

С1у

тКг

С1у

С1п 20

Нтз

беи

а! а

Бег

а! а 25

а! а

Пе

РКе

С!у

тКг 30

Азр

С!у

АЗП

Уа1

тгр

а! а

буз

Бег

Бег

Бег

РКе

РГО

С!и

РКе

буз

РГО

Азр

С! и

35

40

45

Пе

АЗП

А1а

Пе

Пе

буз

С! и

РКе

Бег

С! и

РГО

с!у

а! а

беи

а! а

РГО

50

55

60

ТКг 65

с!у

беи

РКе

беи

а! а 70

С1у

а! а

буз

туг

меб 75

уа!

Пе

С1п

С!у

С! и 80

РГО

с!у

а! а

уа!

Пе 85

Агд

С1у

буз

буз

б!у 90

а! а

с!у

б!у

Пе

Суз 95

Пе

буз

буз

тКг

С1у

С! η

а! а

меб Уа1

РКе

с!у

Пе

туг

С! и

С1и

РГО

уа!

100

105

110

АЗП

РГО

С!у

С! η

Суз

АЗП

меб Уа1

уа!

С! и

Агд

беи

С!у

Азр

туг

беи

115

120

125

Уа1 Азр с! η С1у меб 130

<210>	22
<211>	133
<212>	БЕЛОК
<213>	НеПапбКиз аппииз
<400>	22

меб Бег тгр С1п А! а Туг Уа1 Азр С1и Нтз беи Меб Суз Азр IIе С1и 15 10 15

С1у ТКг С1у С1п Нтз беи ТКг Бег А1а А1а 11е беи б1у беи Азр С1у 20 25 30

ТКг

Уа1

тгр

А! а

б! η

Бег

А! а

буз

РКе

РГО

С1п

РКе

буз

Рго С!и

С! и

35

40

45

меб

буз

С!у

Пе

Пе

буз

б!и

РКе

Азр

б!и

а! а

С!у

ТКг

беи а!а

РГО

50 55 60'

ТКг

б!у меб

РКе

Пе

а! а

б!у

А1 а

буз

туг

меб

уа!

беи

С1п

С!у

С! и

65

70

75

80

РГО

С! у а! а

Уа!

Пе

Агд

б!у

буз

буз

б!у

а! а

С!у

б!у

Пе

Суз

Пе

85 90 95

буз буз

тКг

с!у с!η А!а меб Пе меб б!у Пе туг Азр с!и рго Уа!

100

105

110

а! а

РГО

с!у

С! η

Суз

азп меб

Уа1

Уа!

б!и

Агд

беи

б!у

АЗр

туг

беи

115

120

125

беи с1и с1п с1у меб 130

<210> 23

<211> 133

- 72 029009

<212> БЕЛОК

<213> Агтетт5та уи1дагт5 <400> 23

мет Бег тгр б!п тНг туг Уа1 Азр Азр нт5 ьеи мет Суз Азр 11е С1и
1 С1у	5	10	б1у	15
тНг	С1у С1п 20	нтз	|_еи тНг Бег	А1а 25	А1а	11е РНе	тНг 30	Азр б1у
тНг	Уа1	тгр А1а	|_уз	Бег А1а Бег	РНе	РГО	61 и РНе	|_уз	РГО	Азп б1и
		35		40				45
Не	А5р	А1а 11 е	Не	Ьу5 С1и РНе	А5П	61 и	А1а б1у	61 η	ьеи	А1а Рго
	50			55			60
тНг	С1у	|_еи РНе	ьеи	С1у С1у А1а	|_уз	туг	мет Уа1	Пе	61 η	б1у б1и
65				70			75			80
А1а	С1у	А1а Уа1	Пе	Агд б1у 1_уз	|_уз	б1у	А1а б1у	б1у	Пе	Суз 11е
			85			90				95
|_уз	|_уз	тНг с1у	С1 η	А1а мет Уа1	РНе	б1у	11е туг	Азр	61 и	рго Уа1
		100			105				110
А1а	РГО	б1у С1п	Суз	Азп мет Уа1	Уа1	61 и	Агд ьеи	б1у	Азр	туг 1_еи
		115		120				125
|_еи	Азр	6ΐη б1у	мет
	130
<210> \	24
<211> :	131
<212> 1	БЕЛОК
<213> 1	чеуеа ЬгазтНепзтз
<400> ;	24
мет	Бег	тгр С1п	тНг	туг Уа1 А5р	б1и	Агд	ьеи мет	Суз	61 и	Не б1и
1			5			10				15
С1у	АЗП	Нтз 1_еи	тНг	А1а А1а А1а	Пе	Пе	б1у 6ΐη	Азр	б1у	Бег Уа1
		20			25				30
тгр	А1а	С1п Бег	Бег	азп РНе Рго	С1п	РНе	|_уз Бег	б1и	61 и	Пе тНг
		35		40				45
А1а	Пе	Мет Бег	Азр	РНе Азр С1и	Рго	б1у	ТНг Ьеи	А1а	Рго	тНг б1у
	50			55			60
|_еи	нтз	|_еи С1у	С1у	тНг ьуз туг	мет	Уа1	Пе 6ΐη	б1у	61 и	А1а 61 у
65				70			75			80
А1а	Уа1	11е Агд	б1у	Ьу5 Ьу5 С1у	РГО	б1у	б!у Уа!	тНг	Уа!	Агд 1_уз
			85			90				95

тНг

Азп б1п А1а 1_еи 100

Пе Пе б1у Пе туг Азр б1и 105

Рго мет 110

ТНг

РГО

б!у

61 η

Суз

азп мет

Пе

Уа!

61 и

Агд

|_еи

б!у

Азр

туг

1_еи

1_еи

61 и

115

120

125

С1п С1у Мет 130

<210>	25
<211>	131
<212>	БЕЛОК
<213>	Егадагт а
<400>	25

мет

Бег

тгр

61 η

тНг

Туг

Уа1

Азр

Азр

НТЗ

1_еи

мет

Суз

б1и

Пе

б1и

1

5

10

15

б1у

АЗП

НТЗ

|_еи

Бег

А1а

А1а

А1а

Пе

Пе

б1у

6ΐη

Азр

б1у

Бег

Уа1

20

25

30

Тгр

А1а

61 η

Бег

А1а

ТНг

РНе

Рго

61 η

Ьеи

Ьуз

Рго

61 и

61 и

Уа1

ТНг

35

40

45

б1у

Пе

Уа1

Агд

Азр

РНе

Азр

61 и

РГО

б1у

тНг

|_еи

А1а

РГО

тНг

б1у

50

55

60

|_еи

Туг

|_еи

б1у

б1у

тНг

1_уз

Туг

мет

Уа1

Пе

61 η

б1у

61 и

РГО

б1у

65

70

75

80

А1а

Уа1

Пе

Агд

б1у

|_уз

|_уз

б1у

РГО

б1у

б1у

Уа1

тНг

Уа1

|_уз

1_уз

85

90

95

тНг

тНг

|_еи

А1а

|_еи

|_еи

Пе

б1у

Пе

туг

Азр

б1и

РГО

мет

ТНг

РГО

100

105

110

б1у

6ΐη

Суз

АЗП

мет

Пе

Уа1

61 и

Агд

|_еи

б1у

Азр

туг

|_еи

Уа1

б1и

115

120

125

6ΐη

б1у

1_еи

130

<210> .

26

<211> .

131

<212>

БЕЛОК

<213> 1

ча! из с1отезттса

<400> .

26

мет

Бег

тгр

61 п

А1а

туг

уа!

Азр

Азр

нтз

1_еи

мет

Суз

Азр

Пе

Азр

1

5

10

15

73

029009

С1у

А5п Агд беи 20

тпг

А1а А1а А1а Пе беи С1у б1п 25

А5р

б1у Бег Уа1 30

тгр

Бег

С1п

Бег

А1а

Бег

Рпе

РГО

А1а

Рпе

буз

РГО

61 и

б1и

Пе

А1а

35

40

45

а1 а

Пе

беи

буз

Азр

Рпе

Азр

С1 п

РГО

б1у

тКг

беи

А1а

РГО

тКг

б1у

50

55

60

беи

Рпе

беи

б1у

б1у

тКг

буз

туг

меб

Уа1

Пе

61 п

б1у

б1и

РГО

б1у

65

70

75

80

А1а

Уа1

Пе

Агд

С1у

буз

буз

С1у

Бег

б1у

б1у

Пе

тКг

Пе

буз

буз

85

90

95

ТКг

Бег

С1п

А1а

беи

беи

Пе

С1у

Пе

туг

Азр

61 и

РГО

Уа1

тКг

РГО

100

105

110

С1у

С1п

Суз

АЗП

Пе

Уа1

Уа1

С1и

Агд

беи

б1у

Азр

туг

беи

Пе

61 и

115

120

125

б1п

б1у

беи

130

<210> ‘

27

<2И> :

131

<212> 1

БЕЛОК

<213> 1

Ргипиз аутит

<400>

27

Меб

Бег

тгр

С1п

А1а

туг

Уа1

А5р

А5Р

ΗΊ5

беи

меб

Суз

А5р

Пе

Азр

1

5

10

15

С1у

АЗП

Агд

беи 20

тКг

А1а

А1а

А1а

Пе 25

беи

б1у

61 п

Азр

б1у 30

Бег

Уа1

Тгр

Бег

С1п

Бег

А1а

тКг

Рпе

РГО

А1а

Рпе

буз

РГО

61 и

б1и

Пе

А1а

35

40

45

А1а

Пе

беи

буз

Азр

беи

Азр

С1п

РГО

б1у

тКг

беи

А1а

РГО

тКг

б1у

50

55

60

беи

Рпе

беи

С1у

б1у

Тпг

буз

Туг

меб

Уа1

Пе

61 п

б1у

б1и

А1а

б1у

65

70

75

80

а1 а

Уа1

Пе

Агд

б1у

буз

буз

С1у

Бег

б1у

б1у

Пе

ТКг

Уа1

буз

буз

85

90

95

тКг

АЗП

С1п

а1 а

беи

Пе

Пе

С1у

Пе

туг

Азр

б1и

РГО

беи

тКг

РГО

100

105

110

С1у

б1п

Суз

А5П

меб

Пе

уа!

б1и

Агд

беи

б!у

А5р

туг

беи

Пе

61 и

115

120

125

С1п С1у 1_еи 130

<210> 28

<211> 131

<212> БЕЛОК

<213> Ргипиз с1и1 ст 5

<400> 28

мег Бег тгр С1п С1п туг Уа1 Азр Азр нтз 1_еи меб Суз Азр 11е Азр 15 10 15

С1у Азп Агд 1_еи тКг А1а А1а А1а 11е беи С1у С1п Азр С1у Бег Уа1 20 25 30

тгр Бег С1п Бег А1а тКг Рпе Рго А1а Рпе 1_уз Рго С1и С1и 11е А1а 35 40 45

А1а

Пе

беи

буз

Азр

Рпе

Азр

б1п

РГО б1у

тКг

беи

А1а

РГО

тКг

б1у

50

55

60

беи

Рпе

беи

б!у

б!у

тКг

буз

Туг

меб Уа!

Пе

б!п

б!у

б!и

а! а

б!у

65 70 75 80

А1а Уа1 IIе Агд С1у 1_уз 1_уз С1у Бег С1у С1у 11е тКг Уа1 1_уз 1_уз 85 90 95

тКг Азп С1п А1а беи 11е 11е С1у 11е туг Азр С1и Рго беи тКг Рго 100 105 110

С1у С1п Суз Азп меб IIе Уа1 С1и Агд беи С1у Азр туг беи 11е С1и 115 120 125

б1п б1у беи 130

<210>	29
<211>	131
<212>	БЕЛОК
<213>	Ргипиз регзтса
<400>	29

меб

Бег

тгр

61 п

А1а

туг

Уа1

Азр

Азр

ΗΊ5

беи

меб

Суз

Азр

Пе

Азр

1

5

10

15

б1у

АЗП

Агд

беи

ТКг

А1а

А1а

А1а

Пе

беи

б1у

б1п

Азр

б1у

Бег

Уа1

20

25

30

тгр

Бег

б!п

Бег

а! а

тКг

Рпе

РГО

а! а

Рпе

буз

РГО

б!и

б!и

Пе

а! а

35 40 45

- 74 029009

а1 а

11е беи бу5 50

А5р

РКе А5р С1п Рго С1у тКг 55

беи 60

А1а

РГО

ТКг

С1у

беи

РКе

беи

С1у

С1у

тКг

буз

туг

меб

Уа1

Пе

С1п

С1у

С1и

А1а

С1у

65

70

75

80

а1 а

Уа1

Не

Агд

С1у

буз

буз

С1у

Вег

С1у

С1у

Пе

тКг

Уа1

буз

буз

85

90

95

тКг

АЗП

С1п

А1 а

беи

Не

Не

С1у

Не

туг

Азр

С1и

РГО

беи

тКг

РГО

100

105

110

С1у

С1п

Суз

АЗП

меб

Не

Уа1

С1и

Агд

беи

С1у

Азр

туг

беи

Пе

С1и

115 120 125

С1п С1у беи 130

<210>	30
<211>	131
<212>	БЕЛОК
<213>	Ругиз соттиптз
<400>	30

меб Вег тгр С1η А1а туг Уа1 Азр Азр нтз беи меб Суз Азр 11е Азр 15 10 15

С1у нтз нтз беи тКг А1а А1а А1а 11е беи С1у нтз Азр С1у Вег Уа1 20 25 30

тгр А1а С1η Вег Вег тКг РКе Рго буз РКе буз Рго С1и С1и 11е тКг 35 40 45

А1а IIе меб буз Азр РКе Азр С1и Рго С1у Вег беи А1а Рго тКг С1у 50 55 60

беи

НТ 5

беи с1у

С1у

тКг

буз

туг

меб Уа1

Пе

С1п

С1у

С1и

С1у

С1у

65

70

75

80

а! а

Уа1

Пе Агд

С1у

буз

буз

С1у

Вег С1у

С1у

уа!

тКг

Уа1

буз

буз

85 90 95

тКг Вег С1п А1а беи Уа1 РКе С1у 11е туг С1и С1и Рго беи тКг Рго 100 105 110

С1у С1 η Суз Азп меб 11е Уа1 С1и Агд беи С1у Азр туг беи 11е Азр 115 120 125

С1η с1у беи 130

<210> 31

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Рагтебагта ]ис1атса <400> 31

меб Вег тгр С1п А1а туг Уа1 Азр Азр нтз беи меб Суз Азр Уа1 С1у 15 10 15

Азр С1у Азп тКг Рго а1а Вег А1а А1а 11е 11е С1у нтз Азр С1у Вег 20 25 30

Уа1 тгр А1а С1п Вег А1а Азп РКе Рго С1п беи буз Рго С1и С1и Уа1 35 40 45

тКг С1у IIе меб Азп Азр РКе Азп С1и А1а С1у РКе беи А1а Рго тКг 50 55 60

С1у беи РКе беи С1у С1у тКг буз туг меб Уа1 11е С1п С1у С1и Вег 65 70 75 80

С1у А1а Уа1 11е Агд С1у буз буз С1у Вег С1у С1у А1а тКг беи буз 85 90 95

буз тКг С1у С1п А1а 11е Уа1 11е С1у 11е туг Азр С1и Рго меб тКг 100 105 110

Рго С1у С1п Суз Азп беи Уа1 Уа1 С1и Агд беи С1у Азр туг беи беи 115 120 125

С1и С1п С1у беи 130

<210>	32
<211>	131
<212>	БЕЛОК
<213>	РКоептх с1асбу1 т Тега
<400>	32

меб

вег

тгр

С1 η

А1а

туг

Уа1

Азр

С1и

Нтз

беи

меб

Суз

С1 и

Пе

Азр

1

5

10

15

С1у

нтз

НТЗ

беи

тКг

А1а

А1а

А1а

Пе

беи

С1у

нтз

Азр

С1у

Вег

Уа1

20

25

30

тгр

А1а

С1п

Вег

Вег

Вег

РКе

РГО

С1п

РКе

буз

вег

С1 и

С1 и

Пе

тКг

35 40 45

Азп IIе меб Азп Азр РКе Азп С1и Рго С1у Вег беи А1а Рго тКг С1у 50 55 60

беи Туг беи С1у Вег тКг буз туг меб Уа1 11е С1п С1у С1и Рго С1у 65 70 75 80

- 75 029009

А1а

Уа1

Пе

Агд С1у буз 85

буз С1у Бег

С1у С1у Уа1 90

тКг Уа1

буз 95

буз

тКг

АЗП

С1п

А1а

беи

Пе

РКе

С1у

Пе

туг

С1и

С1 и

РГО

меб

ТКг

РГО

100

105

110

С1у

С1п

Суз

АЗП

меб

Уа1

Уа1

С1и

Агд

беи

С1у

Азр

туг

беи

Пе

С1и

115

120

125

С1п С1у меб 130

<210> 33

<211> 131

<212> БЕЛОК

<213> сКепоросНит аТЬит

<4оо> :

33

меб

Бег

тгр

С1п

тКг

туг

Уа1

Азр

Азр

НТЗ

беи

Меб

Суз

Азр

Пе

С1и

1

5

10

15

С1у

АЗП

НТЗ

беи 20

Бег

Бег

А1а

А1а

Пе 25

беи

С1у

НТЗ

Азр

С1у 30

ТКг

Уа1

Тгр

А1а

С1п

Бег

РГО

Бег

РКе

РГО

С1п

беи

буз

РГО

С1и

С1и

Уа1

Бег

35

40

45

А1а

Пе

меб

буз

Азр

РКе

АЗП

С1и

РГО

С1у

Бег

беи

А1а

РГО

тКг

С1у

50

55

60

беи

НТЗ

беи

С1у

С1у

тКг

буз

Туг

меб

Уа1

Пе

С1п

С1у

С1и

РГО

С1у

65

70

75

80

Азр

Уа1

Пе

Агд

С1у 85

буз

буз

С1у

РГО

С1у 90

С1у

Уа1

тКг

Пе

буз 95

буз

тКг

АЗП

С1п

А1 а

беи

Пе

Пе

С1у

Пе

туг

С1у

С1и

РГО

меб

ТКг

РГО

100

105

110

С1у

С1п

Суз

АЗП

меб

Уа1

Уа1

С1и

Агд

Пе

С1у

Азр

туг

беи

Уа1

С1и

115

120

125

С1п С1у меб 130

<210> <211> <212> <213>	34 133 БЕЛОК 5а1зо1а ка1т
<400>	34

меб Бег тгр С1η тКг туг Уа1 Азр Азр нтз беи меб Суз С1и 11е С1и

1

5

10

15

С1у

тКг

АЗП

АЗП

НТЗ

беи

ТКг

А1а

А1а

А1а

Пе

беи

б1у

Уа1

Азр

б1у

20

25

30

Бег

Уа1

тгр

А1 а

6ΐη

Бег

А1 а

АЗП

РКе

РГО

6ΐη

РКе

буз

РГО

Азр

61 и

35

40

45

Пе

Бег

А1а

Уа1

Уа1

буз

С1 и

РКе

Азр

61 и

А1а

б1у

ТКг

беи

А1а

Рго

50

55

60

тКг

б1у

беи

НТ 5

беи

С1у

С1у

тКг

буз

туг

меб

Уа1

Пе

С1п

б1у

б1и

65

70

75

80

А1а

б1у

С1п

уа1

Пе

Агд

б1у

буз

буз

С1у

РГО

б1у

б1у

Пе

Суз

Уа1

85

90

95

буз

буз

тКг

С1у

С1 η

А1а

беи

Не

РКе

С1у

Пе

туг

АЗр

61 и

РГО

Уа1

100

105

110

тКг

РГО

б1у

С1п

Суз

АЗП

меб

Пе

Уа1

61 и

Агд

беи

б1у

АЗр

туг

беи

115

120

125

Уа1

б1и

6ΐη

С1у

меб

130

<210>	35
<211>	133
<212>	БЕЛОК
<213>	АшагапбКиз гебгоЯехиз
<400>	35

меб

Бег

тгр

61 η

а1 а

туг

Уа1

Азр

Азр

НТ 5

беи

меб

Суз

б1и

Пе

б1и

1

5

10

15

б1у

тКг

тКг

АЗП

НТЗ

беи

тКг

б1у

а1 а

а1 а

Пе

беи

б1у

беи

АЗр

б1у

20

25

30

Бег

Уа1

тгр

а1 а

61 п

Бег

А1а

Азр

РКе

РГО

6ΐη

РКе

буз

РГО

Азр

б1и

35

40

45

Пе

А1а

А1а

Пе

уа!

б!и

Азр

РКе

Азр

б!и

РГО

б!у

ТКг

беи

А1а

РГО

50 55 60'

ТКг б1у беи 65

Нтз беи б!у б!у тКг буз Туг Меб Уа1

Пе 61 η

б1у

61 и 80

70

75

РГО

б1у

А1а

Уа1

Пе

Агд

б1у

буз

буз

б1у

А1 а

б1у

б1у

Пе

Суз

Уа1

85

90

95

буз

буз

тКг

б1у

61 η

А1а

беи

Уа1

меб

б!у

Пе

туг

Азр

61 и

РГО

уа!

100 105 110

- 76 029009

тКг Рго б1у 6ΐη Суз Азп мер 11е Уа1 С1и Агд 1_еи С1у Азр туг 1_еи 115 120 125

II е 61 и 61 η б1у Туг 130

<210> 36

<211> 134

<212> БЕЛОК

<213> Оаисиз сагоРа

<400> 36

мер

Бег

тгр

61 η

тКг

туг

Уа1

Азр

Азр

НТ 5

|_еи

мер

СУ5

б1и

Уа1

Азр

1

5

10

15

б1у

АЗП

РГО

б1у

61η

61 η

1_еи

Бег

А1а

А1а

А1а

Пе

Пе

б1у

НТ 5

АЗр

20

25

30

б1у

Бег

Уа1

тгр

А1а

6ΐη

Бег

Бег

тКг

рКе

РГО

1_У5

РКе

ьуз

РГО

б1и

35

40

45

61 и

Пе

ТКг

б1у

Пе

мер

1_уз

А5П

РКе

А5р

61 и

РГО

б1у

НТЗ

|_еи

А1а

50

55

60

РГО

тКг

б1у

|_еи

туг

|_еи

б1у

б1у

тКг

1_У5

туг

мер

Уа1

Пе

6ΐη

б1у

65

70

75

80

б1и

РГО

Пе

А1а

Уа1 85

Пе

Агд

б1у

1_У5

1_У5 90

б1у

Бег

б1у

б1у

Уа1 95

ТКг

Пе

1_У5

1_У5

ТКг

б1у

61 η

А1 а

1_еи

Уа1

РКе

б1у

Уа1

туг

Азр

61 и

РГО

100

105

по

Уа1

ТКг

РГО

б1у

61η

Су5

А5П

1_еи

Пе

Уа1

61 и

Агд

ьеи

б1у

Азр

туг

115

120

125

Ьеи

Пе

61 и

61 η

б1у

1_еи

130

<210>	37
<211>	134
<212>	БЕЛОК
<213>	Артит дгауео1епз
<400>	37

мер Бег тгр 6ΐη А1а туг Уа1 Азр Азр нт 5 1_еи мер Суз б1и Уа1 б1и 15 10 15

б1у азп Рго б1у 61η тКг 1_еи тКг А1а А1а А1а 11е 11е б1у нтз А5р 20 25 30

б1у Бег Уа1 тгр А1а 6ΐη Бег Бег тКг РКе Рго 6ΐη 11е 1_уз Рго б1и 35 40 45

61 и

11е А1а б!у Пе мер 1_уз Азр РКе Азр б!и Рго б!у

Нтз

1_еи

А1а

50

55

60

Рго

тКг

б1у

1_еи

Туг

|_еи

б1у

б1у

А1а

|_уз

туг

мер

Уа1

Пе

6ΐη

б1у

65

70

75

80

61 и

РГО

АЗП

А1 а

Уа1

Пе

Агд

б1у

|_уз

|_уз

б1у

Бег

б!у б!у

уа1

ТКг

85

90

95

Пе

|_уз

|_уз

тКг

б1у

61 η

А1а

|_еи

Уа1

РКе

б1у

уа1

туг

Азр

61 и

РГО

100

105

110

Уа1

тКг

РГО

б1у

6ΐη

Суз

АЗП

Уа1

Пе

Уа1

б!и

Агд

|_еи

б!у

Азр

туг

115

120

125

|_еи

Пе

Азр

61 η

б!у

|_еи

130

<210> 38

<211> 131

<212> БЕЛОК

<213> Сиситтз те!о

<400> 38

мер

Бег

тгр

61 η

Уа1

туг

Уа1

Азр

61 и

НТЗ

|_еи

мер

Суз

61 и

Пе

61 и

1

5

10

15

б1у

АЗП

НТЗ

1_еи

ТКг

Бег

А1а

А1а

Пе

Пе

б1у

61 η

Азр

б1у

Бег

уа1

20

25

30

тгр

А1а

6ΐη

Бег

6ΐη

АЗП

РКе

РГО

6ΐη

|_еи

|_уз

РГО

61 и

61 и

Уа1

А1а

35

40

45

б1у

Пе

Уа1

б1у

Азр

РКе

А1а

Азр

Рго

б1у

тКг

|_еи

А1а

Рго

тКг

б1у

50

55

60

|_еи

Туг

Пе

б1у

б1у

тКг

1_уз

Туг

мер

Уа1

Пе

61 η

б1у

61 и

РГО

б1у

65

70

75

80

А1а

уа1

Пе

Агд

б1у

|_уз

|_уз

б1у

РГО

б1у

б1у

А1а

тКг

уа1

|_уз

|_уз

85

90

95

тКг

б1у

мер

А1а

1_еи

Уа1

Пе

б1у

Пе

туг

Азр

61 и

РГО

мер

ТКг

РГО

100

105

110

б!у

61 η

Суз

АЗП

мер

Пе

Уа1

61 и

Агд

|_еи

б!у

Азр

туг

1_еи

Пе

Азр

115

120

125

6ΐη б1у 1_еи 130

- 77 029009

<210>	39
<211>	131
<212>	БЕЛОК
<213>	Сарзт сит
<400>	39

мер Бег тгр 1

С1п

тКг 5

туг

Уа1 Азр Азр нтз ьеи мер Суз 10

С1и

Пе 15

С1и

С1у

АЗП

Агд

Ьеи 20

ТКг

Бег

А1а

А1а

Пе 25

Пе

С1у

С1п

Азр

С1у 30

Бег

Уа1

тгр

А1а

С1п

Бег

А1а

тКг

РКе

РГО

С1п

РКе

ьуз

РГО

С1и

С1и

Пе

тКг

35

40

45

А1а

Пе

мер

АЗП

Азр

РКе

А1а

С1 и

РГО

С1у

тКг

ьеи

А1а

РГО

тКг

С1у

50

55

60

ьеи

туг

ьеи

С1у

С1у

тКг

Ьуз

Туг

мер

Уа1

Пе

С1п

С1у

С1 и

А1а

С1у

65

70

75

80

А1а

Уа1

Пе

Агд

С1у

Ьуз

ьуз

С1у

РГО

С1у

С1у

Пе

тКг

Уа1

ьуз

ьуз

85

90

95

тКг

АЗП

С1п

А1а

Ьеи

Пе

Пе

С1у

Пе

туг

Азр

С1 и

РГО

мер

тКг

РГО

100

105

110

С1у

С1п

Суз

АЗП

мер

Пе

Уа1

С1 и

Агд

ьеи

С1у

Азр

туг

ьеи

Пе

С1 и

115

120

125

С1п

Бег

Ьеи

130

<210> 40

<211> 131

<212> БЕЛОК

<213> Апапаз сотозиз

<400> 40

Мер

Бег

тгр

С1п

А1а

туг

Уа1

Азр

Азр

нтз

ьеи

мер

Суз

С1и

Пе

Азр

1

5

10

15

С1у

С1п

НТ 5

Ьеи

Бег

Бег

А1а

А1а

Пе

Ьеи

С1у

нтз

Азр

Бег

ТКг

Уа1

20

25

30

тгр

а1 а

С1п

Бег

РГО

АЗП

РКе

РГО

С1п

РКе

|_уз

РГО

С1и

С1и

Пе

Бег

35

40

45

А1а

Пе

Ьеи

АЗП

Азр

РКе

С1 и

АЗП

РГО

С1у

Бег

ьеи

А1а

РГО

ТКг

С1у

50

55

60

ьеи

туг

Ьеи

С1у

С1у

тКг

Ьуз

туг

мер

Уа1

Пе

С1п

С1у

С1 и

РГО

С1у

65

70

75

80

Уа1 Уа1 11е Агд С1у ьуз ьуз С1у тКг С1у С1у 11е тКг Уа1 ьуз ьуз 85 90 95

тКг Азп ьеи А1а ьеи 11е 11е С1у Уа1 туг Азр С1и Рго мер тКг Рго 100 105 110

С1у С1п Суз Азп мер Уа1 Уа1 С1и Агд ьеи С1у Азр туг ьеи ьеи С1и 115 120 125

С1п С1у РКе 130

<210> <211> <212> <213>	41 131 БЕЛОК Сгосиз заРтуиз
<400>	41

Мер

Бег

тгр

С1п

тКг

туг

Уа1

Азр

С1и

Нтз

Ьеи

мер

Суз

Азр

мер

Азр

1

5

10

15

С1у

нтз

Уа1

ьеи

ТКг

Бег

А1а

А1а

Пе

Ьеи

С1у

нтз

Азр

С1у

Бег

Уа1

20

25

30

тгр

а! а

С1п

Бег

А1а

С1у

РКе

РГО

С1и

Ьеи

Ьуз

РГО

А1а

С1и

Пе

тКг

35 40 45

А1а 11е ьеи Азп Азр РКе Азп С1и Рго С1у Бег ьеи А1а Рго тКг С1у 50 55 60

мер

туг

Пе

АЗП

С1у

А1а

ьуз

туг

мер Уа1

Пе

С1п

С1у

С1и

РГО

С1у

65

70

75

80

Уа1

Уа1

Пе

Агд

С1у

ьуз

ьуз

С1у

Бег С1у

С1у

Уа1

тКг

Пе

ьуз

Ьуз

85 90 95

Бег Азп мер А1а ьеи 11е РКе С1у ьеи туг Азр С1и Рго мер тКг Рго 100 105 110

С1у С1п Суз Азп ьеи Уа1 Уа1 С1и Агд ьеи С1у Азр туг ьеи 11е С1и 115 120 125

С1п С1у Туг 130

<210>	42
<211>	131
<212>	БЕЛОК
<213>	миза аситтпаРа
<400>	42

мер Бег тгр С1п А1а туг Уа1 Азр Азр нтз ьеи ьеи Суз Азр 11е Азр

- 78 029009

1

5

10

15

С1у

6ΐη

Суз

беи

тКг

А1а

А1а

а1 а

Не

Уа1

С1у

ΗΊ5

А5р

б1у

Бег

Уа1

20

25

30

тгр

а1 а

С1п

Бег

А5р

А1а

РКе

РГО

С1п

Суз

буз

РГО

С1 и

С1и

Не

а1 а

35

40

45

а1 а

Не

меб

бу 5

А5р

РКе

Азр

С1и

РГО

С1у

Бег

беи

а1 а

РГО

тКг

С1у

50

55

60

беи

туг

беи

С1у

б1у

тКг

буз

Туг

меб

Уа1

Не

С1п

С1у

С1 и

РГО

С1у

65

70

75

80

а1 а

Уа1

Не

Агд

С1у 85

буз

буз

С1у

Бег

С1у 90

С1у

Уа1

тКг

Не

буз 95

буз

тКг

АЗП

беи

А1а

беи

Не

Не

С1у

Не

туг

АЗП

С1и

РГО

меб

тКг

РГО

100

105

110

С1у

С1п

Суз

АЗП

Меб

Уа1

Уа1

С1и

Агд

беи

С1у

Азр

туг

беи

РКе

Азр

115

120

125

6ΐη б1у РКе 130

<210>	43
<211>	56
<212>	БЕЛОК
<213>	РК1еит ргабепзе
<22О>
<221>	М15С_РЕАТиКЕ
<222>	(1)..(56)
<223>	Аминокислоты 71-127 5Е0	Ю N0:1
<400>	43
туг меб Уа1 Не 6ΐη б!у С1и Рго	б!у А1а Уа1 Не Агд С1у буз бу5

15 10 15

С1у А1а С1у С1у 11е тКг 11е буз буз тКг С1у С1п А1а 1_еи Уа1 Уа1 20 25 30

С1у 11е Туг Азр С1и Рго меб тКг Рго б1у С1п Су5 А5П меб Уа1 Уа1 35 40 45

С1и Агд беи С1у А5р Туг беи Уа1 50 55

<210> 44

<211> 131

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность <220>

<223> 5Е0 Ю N0:1 с заменами С135 и С1155

<400> 44

меб 1

Бег тгр

С1 η

тКг туг Уа1 Азр С1и 5

ΗΊ5 10

беи

меб Бег

С1и

Не 15

С1и

С1у

ΗΊ5

ΗΊ5

беи

А1а

Бег

А1а

А1а

Не

беи

С1у

ΗΊ5

Азр

С1у

ТКг

Уа1

20

25

30

тгр

А1а

С1п

Бег

А1а

Азр

РКе

РГО

С1п

РКе

буз

РГО

С1и

С1и

Не

тКг

35

40

45

С1у

Не

меб

буз

Азр

РКе

Азр

С1и

РГО

С1у

ΗΊ5

беи

А1а

РГО

тКг

С1у

50

55

60

меб

РКе

Уа1

а1 а

С1у

А1а

буз

Туг

меб

Уа1

Не

С1п

С1у

С1и

РГО

С1у

65

70

75

80

А1а

Уа1

Не

Агд

С1у

буз

буз

С1у

А1а

С1у

С1у

Не

тКг

Не

буз

буз

85

90

95

тКг

С1у

С1п

А1а

беи

Уа1

Уа1

С1у

Не

туг

Азр

С1и

РГО

меб

ТКг

РГО

100

105

110

С1у

С1п

Бег

АЗП

меб

Уа1

Уа1

С1и

Агд

беи

С1у

Азр

туг

беи

Уа1

С1и

115

120

125

С1п С1у Меб 130

<210>	45
<211>	131
<212>	БЕЛОК
<213>	Искусственная	последовател ьность
<220> <223>	5Е0 ю N0:1 с	заменами С13А и С115А
<400>	45

меб Бег тгр С1η тКг туг Уа1 Азр С1и нтз беи меб А1а С1и 11е С1и 15 10 15

С1у

ΗΊ5

ΗΊ5

беи 20

А1а

Бег

А1а

А1а

Не 25

беи

С1у

ΗΊ5

Азр

С1у 30

ТКг

Уа1

тгр

А1а

С1п

Бег

А1а

Азр

РКе

РГО

С1п

РКе

буз

РГО

С1и

С1и

Не

тКг

35

40

45

С1у

Не

меб

буз

Азр

РКе

Азр

С1и

РГО

С1у

ΗΊ5

беи

А1а

РГО

тКг

С1у

50

55

60

- 79 029009

мег РКе Уа1 А1а С1у А1а ьуз туг мег Уа1 11е С1п С1у С1и Рго С1у

65 70 75 80

А1а Уа1 IIе Агд С1у ьуз ьуз С1у А1а С1у С1у 11е тКг 11е ьуз ьуз

85 90 95

тКг С1у С1п А1а ьеи Уа1 Уа1 С1у 11е туг Азр С1и Рго мег тКг Рго 100 105 110

С1у С1п А1а Азп мег Уа1 Уа1 С1и Агд ьеи С1у Азр туг ьеи Уа1 С1и 115 120 125

С1п С1у МеЬ 130

<210> 46

<211> 396

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность <220>

<223> ДНК, кодирующая 5Е0 Ю N0:44 <400> 46

агдадсгддс ааасдгагдг сдагдаасас сгдагдадсд аааььдаадд ссассассгд 60

дсдссддсдд сьаььсьддд ссасдасддс ассдьььддд сасададсдс ьдаььььссд 120

сааььсааас сддаадааас сассддсасс аьдааддаьь ььдасдаасс дддссасссд 180

дсассдасдд дсаьдььсдь сдсаддгдсс ааагагагдд ьдаььсаддд гдаассдддг 240

дсадссассс дгддсааааа дддгдссддс ддьаььасса гсааааадас дддссаадсс 300

сьддьддььд дьаьььасда сдаассдагд асдссдддгс ааадсаасаг ддгддгддаа 360

сдсссдддсд ассасссддс ддаасадддс асдсад 396

<210> 47

<211> 326

<212> ДНК

<213> искусственная последовательность <220>

<223> ДНК, кодирующая 5Е0 Ю N0:45 <400> 47

сдаььсьддд ссасдасддс ассдьььддд сасададсдс ьдаььььссд сааььсааас 60

сддаадаааг гассддсагс аьдааддаьь ььдасдаасс дддгсагсгд дсассдасдд 120

дсаьдььсдь сдсаддсдсс ааасасасдд ьдаььсаддд сдаассдддс дсадссассс 180

дгддсааааа дддгдссддс ддьаььасса гсааааадас дддссаадсс ссддсддссд 240

дьаьььасда сдаассдагд асдссдддгс аадсааасаг ддгддгддаа сдгсгдддгд 300

аььаьсьддь ддаасадддс асдсад 326

31

5βη1.ΐχΐ

1

Claims (15)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Применение полипептида для получения фармацевтической композиции для подавления иммунного ответа по типу гиперчувствительности у индивидуума, где иммунный ответ по типу гиперчувствительности вызван непрофилиновым аллергеном содержащей профилин пыльцы отряда растений, выбранного из группы, состоящей из Роа1ез, А§1ега1е§, Ба§а1е§ и Ьат1а1е§, где указанный полипептид представляет собой профилин и содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 75% идентичностью с аминокислотной последовательностью 8Ер ΙΌ N0: 1.
2. 2. Применение по п.1, где часть полипептида имеет аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью с 8Ер ΙΌ N0: 43.
3. 3. Применение по п.1, где растения отряда Роа1ез относятся к роду, выбранному из группы, состоящей из АпШохапЫит, Суподоп, Оас1уН§, Ре§1иса, Но1сиз, Ногдеит, ЬоНит, 0гу/а, Ра§ра1ит, РБа1ап§, РЫеит, Роа, 8еса1е, 8ог§Бит, ТгШсит и 2еа.
4. 4. Применение по п.1, где растения отряда А§1ега1е§ относятся к роду, выбранному из группы, состоящей из АшЪго§1а и Аг1еш1§1а.
5. 5. Применение по п.1, где растения отряда Ра§а1е§ относятся к роду, выбранному из группы, состоящей из Ве1и1а, А1пиз, Сагртиз, Согу1и§, 0§1гуа, Ра§и§, Риегсиз, Са§1апеа, Ы§1ап§ и Сагуа.
6. 6. Применение по п.1, где растения отряда Ьатхакз относятся к роду 01еа.
7. 7. Применение по п.1, где полипептид имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Ер ΙΌ N0: 1-10, 15-18, 21-23 и 40, или представляет собой вариант профилина, который содержит аминокислоту, выбранную из А (аланина), С (глицина) или 8 (серина), в положении 13 и/или в положении 115 8Ер ΙΌ N0: 1.
8. 8. Применение по п.7, где аминокислотная последовательность 8Ер ΙΌ N0: 1-10, 15-18, 21-23 и 40 не содержит метионин на Оконце.
9. 9. Применение по п.1, где индивидуум не является сенсибилизированным к профилину пыльцы до введения первой дозы полипептида.
10. 10. Применение по п.1, где иммунный ответ по типу гиперчувствительности не вызван профилином указанной пыльцы растений.
11. 11. Полипептид, представляющий собой профилин и имеющий аминокислотную последовательность 8Ер ΙΌ N0: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 для подавления иммунного ответа по типу гиперчувствительности, вызываемого непрофилиновым аллергеном содержащей профилин пыльцы растений, в котором 1 остаток или 2 остатка цистеина заменен/заменены аминокислотой, выбранной из А (аланина), С

    - 80 029009

    (глицина) и/или З (серина).
12. 12. Полипептид по п.11, имеющий аминокислотную последовательность ЗЕР Ιϋ Ν& 44 или 45.
13. 13. Полипептид по п.12, аминокислотная последовательность которого не содержит метионин в положении 1.
14. 14. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид по п.12.
15. 15. Выделенная нуклеиновая кислота по п.14, имеющая последовательность ЗЕР ГО ΝΏ 46 или 47.

    - 81 029009

    - 82 029009