ES2618783T5 - Construcción de ADN inmunomodulador no codificante - Google Patents
Construcción de ADN inmunomodulador no codificante Download PDFInfo
- Publication number
- ES2618783T5 ES2618783T5 ES11805869T ES11805869T ES2618783T5 ES 2618783 T5 ES2618783 T5 ES 2618783T5 ES 11805869 T ES11805869 T ES 11805869T ES 11805869 T ES11805869 T ES 11805869T ES 2618783 T5 ES2618783 T5 ES 2618783T5
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- nucleotides
- dna
- conformation
- cells
- motif
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 title claims description 10
- 238000010276 construction Methods 0.000 title description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 137
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 17
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 claims description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 170
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 169
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 44
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 41
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 31
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 28
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 28
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 25
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 25
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- PYMYPHUHKUWMLA-MROZADKFSA-N aldehydo-L-ribose Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-MROZADKFSA-N 0.000 description 19
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 18
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 18
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 17
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 17
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 15
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 14
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 13
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 13
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 13
- 102000008235 Toll-Like Receptor 9 Human genes 0.000 description 12
- 108010060818 Toll-Like Receptor 9 Proteins 0.000 description 12
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 12
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 11
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 11
- 210000004544 dc2 Anatomy 0.000 description 11
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 11
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 11
- 210000005134 plasmacytoid dendritic cell Anatomy 0.000 description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 9
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 9
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 9
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 9
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 8
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 8
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 8
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 8
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 8
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 8
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 8
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 7
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 6
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 5
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 5
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 5
- OGIAAULPRXAQEV-UHFFFAOYSA-N odn 2216 Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(O)=O)C(OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)O)C1 OGIAAULPRXAQEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 5
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 4
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 4
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 4
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 229940044655 toll-like receptor 9 agonist Drugs 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 108700012434 CCL3 Proteins 0.000 description 3
- 102000000013 Chemokine CCL3 Human genes 0.000 description 3
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 3
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 3
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 3
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 3
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 3
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 3
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 3
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 3
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 2
- 102000001326 Chemokine CCL4 Human genes 0.000 description 2
- 108010055165 Chemokine CCL4 Proteins 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 2
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 2
- 238000011238 DNA vaccination Methods 0.000 description 2
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 2
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 2
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 2
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 2
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 2
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 2
- 125000003376 L-ribosyl group Chemical group C1([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O1)CO)* 0.000 description 2
- 102000009571 Macrophage Inflammatory Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010009474 Macrophage Inflammatory Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000014962 Monocyte Chemoattractant Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010064136 Monocyte Chemoattractant Proteins Proteins 0.000 description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N acetaldehyde Diethyl Acetal Natural products CCOC(C)OCC DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001241 acetals Chemical class 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N aldehydo-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- 201000009961 allergic asthma Diseases 0.000 description 2
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 2
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 2
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000013528 metallic particle Substances 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 1-beta-D-Xylofuranosyl-NH-Cytosine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 208000026872 Addison Disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004550 Angiostatic Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017551 Angiostatic Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 208000023328 Basedow disease Diseases 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091028026 C-DNA Proteins 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 description 1
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N Cytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 208000002699 Digestive System Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000701867 Enterobacteria phage T7 Species 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 description 1
- 208000028782 Hereditary disease Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101000851054 Homo sapiens Elastin Proteins 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 150000001100 L-ribose derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 206010027457 Metastases to liver Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 208000031662 Noncommunicable disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091081548 Palindromic sequence Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Natural products C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 229920006397 acrylic thermoplastic Polymers 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- 150000004705 aldimines Chemical class 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000003587 angiostatic protein Substances 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006023 anti-tumor response Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000003399 chemotactic effect Effects 0.000 description 1
- 208000025302 chronic primary adrenal insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 229940028617 conventional vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000315 cryotherapy Methods 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N cytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical class NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000021045 exocrine pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000010749 gastric carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 102000054289 human ELN Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000000899 immune system response Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003136 immunomodifying effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000013383 initial experiment Methods 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000003448 neutrophilic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229940127073 nucleoside analogue Drugs 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 229920001748 polybutylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 1
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 244000000040 protozoan parasite Species 0.000 description 1
- 239000013014 purified material Substances 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 201000002314 small intestine cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 201000000498 stomach carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- ISXSCDLOGDJUNJ-UHFFFAOYSA-N tert-butyl prop-2-enoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)C=C ISXSCDLOGDJUNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical class [H]S* 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/117—Nucleic acids having immunomodulatory properties, e.g. containing CpG-motifs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/711—Natural deoxyribonucleic acids, i.e. containing only 2'-deoxyriboses attached to adenine, guanine, cytosine or thymine and having 3'-5' phosphodiester links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0008—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/17—Immunomodulatory nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/315—Phosphorothioates
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Oncology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
DESCRIPCIÓN
Construcción de ADN inmunomodulador no codificante
CAMPO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se refiere a una molécula de ácido nucleico y a su uso para la modulación del sistema inmunitario.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
Una estrategia emergente para combatir enfermedades complejas, tales como el cáncer, enfermedades infecciosas, alergia y asma, es utilizar el sistema inmunitario del paciente. Se sabe que el sistema inmunitario o su actividad puede modularse mediante secuencias de ADN específicas. Las secuencias cortas de ADN inmunomodificadoras más conocidas contienen un motivo de citosina y guanina (motivo CG) no metilado que han descrito Krieg et al. (Nature 1995 374: 6522 546-549). La existencia de motivos CG no metilados está sustancialmente suprimida en el genoma de eucariotas en comparación con procariotas o virus. Por lo tanto, moléculas de ADN que contienen dicho motivo han evolucionado como una "señal de peligro" natural y activan el sistema inmunitario en la lucha contra patógenos procariotas o víricos. Esto puede explotarse terapéutica o profilácticamente para tratar o prevenir infecciones, así como enfermedades no infecciosas.
Las construcciones de ADN que comprenden motivos CG no metilados son capaces de provocar un efecto fisiológico considerable estimulando fuertemente células efectoras del sistema inmunitario innato incluyendo células dendríticas, macrófagos, células citolíticas naturales (NK) y NKT. Los motivos CG no metilados se detectan por el receptor de reconocimiento de patrones inmunitarios innatos receptor tipo Toll (TLR) 9. Aunque el mecanismo de reconocimiento exacto aún no se ha comprendido completamente, se han hecho progresos significativos en desentrañar las vías subyacentes (A. Krieg, Nat. Rev. Drug Disc., 5:471-484, 2006). Se asume que tras la unión de construcciones de ADN que contienen CG no metilados al receptor, se activan múltiples cascadas de señales en células respondedoras. Regulando positivamente las moléculas superficiales características y la secreción de citoquinas, se induce inmunidad adaptativa con un patrón Th1 predominante. Dichas construcciones pueden usarse en combinación con, por ejemplo, anticuerpos, quimioterapia o radioterapia, vacunas o citoquinas. Las enfermedades alérgicas y el asma están principalmente mediadas por Th2. Aumentando la proporción de Th1/Th2, se atenúan las respuestas mediadas por Th2 y de este modo estos tipos de enfermedades pueden tratarse o prevenirse.
Las moléculas superficiales incluyen, por ejemplo, CD40, CD69, CD80 o CD86, dependiendo del tipo celular específico analizado. La secreción de citoquinas también es característica para distintos tipos celulares; las citoquinas incluyen, por ejemplo, proteínas inflamatorias de macrófagos (MIP)-1alfa, MIP-1beta, interleuquina (IL)-6, IL-8, interferón (IFN)-alfa, factor de necrosis tumoral (TNF)-alfa, IFN-gamma, proteína quimiotáctica de monocitos (MCP)-1 o proteína inducida por IFN-gamma de 10 kDa (IP-10).
Para prevenir o tratar enfermedades, se ha demostrado que la vacunación es un enfoque muy eficaz. Para asegurar una respuesta inmunitaria fuerte y duradera, habitualmente se administran adyuvantes capaces de estimular células presentadoras de antígenos tales como células dendríticas, junto con el antígeno, y para ese propósito se ha demostrado que los antagonistas de TLR9 son potentes inmunoestimuladores.
Independientemente de cualquier explicación de los mecanismos subyacentes por los cuales los motivos CG no metilados influyen o modulan una respuesta inmunitaria, se desarrollaron muchos enfoques para la modulación del sistema inmunitario usando dichos motivos. El documento WO 1998/018810 desvela que secuencias inmunoestimuladoras que contienen motivos CG no metilados son incluso más eficaces cunado son parte de una hebra sencilla. Sin embargo, la administración de una molécula de ADN monocatenaria de cadena abierta no es practicable debido a la rápida degradación de ácidos nucleicos monocatenarios. Por consiguiente, se desarrollaron diferentes métodos para la protección de construcciones de ADN mono o bicatenarias que comprenden un motivo CG no metilado.
Para conseguir resistencia contra la degradación por nucleasas de ADN frecuentemente se modifican los enlaces fosfodiéster en el esqueleto de un polímero de ácido nucleico en fosforotioatos. Además de una actividad algo menos estimuladora de dichos ácidos nucleicos protegidos con fosforotioato, los ensayos clínicos en los últimos años mostraron que la toxicidad de una protección con fosforotioato excluye o limita gravemente dichos ácidos nucleicos de cualquier uso en composiciones farmacéuticas o medicamentos.
Otro enfoque para proteger secuencias de ADN que comprenden un motivo CG se desvela, por ejemplo, en el documento EP 1196178. Este documento desvela cortas moléculas de ácido desoxirribonucleico, que comprenden una secuencia parcialmente monocatenaria, con forma de mancuerna, covalentemente cerrada de restos de nucleótidos que comprenden motivos CG ("dSLIM"). De acuerdo con la divulgación del documento EP 1196178 los motivos CG están localizados dentro de los bucles monocatenarios en ambos extremos del tronco bicatenario de la molécula descrita o dentro del tronco bicatenario. Los bucles de horquilla monocatenarios protegen a un tronco bicatenario de la degradación por nucleasas de ADN dentro o fuera de la célula.
El documento WO 2010/039137 desvela oligonucleótidos reguladores inmunitarios como antagonistas para enfermedades mediadas por TLR que tienen una o más modificaciones químicas en la secuencia que flanquea un motivo inmunoestimulador y/o en un motivo oligonucleotídico que sería inmunoestimulador salvo por la modificación. Por tanto, la intención de los oligonucleótidos desvelados del documento WO 2010/039137 es suprimir una respuesta inmunitaria causada por TLR.
El documento WO 2005/042018 describe los nuevos oligonucleótidos llamados CpG de clase C, en el que un oligonucleótido de clase C se caracteriza por secuencias CpG, generalmente posicionadas en o cerca del extremo 5' o el extremo 3' de la molécula, y un motivo palíndromo rico en GC, generalmente posicionado en o cerca del otro extremo de la molécula. El documento desvela variaciones de la secuencia palindrómica de un ADN de clase C. El documento DE 102 11 558 A1 desvela una molécula de ARN que comprende al menos un L-nucleótido. Las moléculas de ARN se usan para la activación de cascadas de señales específicas, respectivamente la activación de factores de transcripción.
En el documento US 2008/260820 se desvelan polipéptidos resistentes a proteasa, que pueden administrarse en combinación con L-nucleósidos para el tratamiento de infecciones víricas. Los L-nucleósidos (que son análogos nucleosídicos) se usan simplemente como aditivos en combinación con el polipéptido. No se incorporan en una construcción de ADN. El contenido del documento US 2008/260820 solamente desvela un método de tratamiento de una enfermedad que comprende la administración de un polipéptido modificado.
El documento EP 2333091 A2 desvela vectores/fragmentos de ADN que contienen uno o más elementos de ARN inmunoestimuladores. Los plásmidos eliminan todas las secuencias ajenas, incorporan un novedoso marcador detectable basado en ARN corto libre de antibiótico, aumentan la expresión eucariota usando un novedoso promotor quimérico, mejoran el rendimiento y la estabilidad durante la producción bacteriana y mejoran la inmunoestimulación. Estos vectores se utilizan en inmunización para provocar respuestas inmunitarias mejoradas o terapia para inducir producción de interferón de tipo 1.
En el documento US 2002/095033 A1 se desvelan L-nucleósidos y métodos de su fabricación. Aunque estos L-nucleósidos pueden usarse para tratar infecciones o cáncer, por ejemplo, este documento no centra su interés en las construcciones de ADN que contienen CG.
El documento EP 2 246 433 A1 desvela una molécula de ADN concatemérica que comprende secuencias CG usadas para inmunomodulación. Este documento desvela una estructura que comprende varias subunidades, que están unidas covalentemente entre sí.
BREVE SUMARIO DE LA DIVULGACIÓN
Con respecto al estado de la técnica un objetivo de la presente divulgación es proporcionar construcciones alternativas de ADN inmunomodulador que sean estables después de transferencia en células eucariotas y que eviten efectos secundarios dañinos.
La presente divulgación muestra una construcción de ADN de acuerdo a la reivindicación 1 .
Como realización adicional la construcción comprende pares de bases inter y/o intramoleculares y al menos una región monocatenaria desapareada.
Además, se proporciona una construcción multimérica, en la que al menos dos construcciones que comprenden pares de bases inter y/o intramoleculares y al menos una región monocatenaria desapareada se ligan entre sí. Además, la construcción puede comprender al menos un nucleótido en conformación L o D que está modificado con un grupo funcional seleccionado entre el grupo que comprende los grupos carboxilo, amina, amida, almidina, cetal, acetal, éster, éter, disulfuro, tiol y aldeido.
El nucleótido modificado puede ligarse a un compuesto seleccionado entre el grupo que comprende péptidos, proteínas, carbohidratos, anticuerpos, moléculas sintéticas, polímeros, microproyectiles, partículas metálicas, nanopartículas, micelas, vehículos lipídicos, o una fase sólida.
Las construcciones de acuerdo con la presente divulgación pueden usarse para el tratamiento de cáncer o enfermedades autoinmunitarias o para la modulación del sistema inmunitario.
Como realización adicional de la presente divulgación se proporciona una composición farmacéutica que comprende una construcción de ADN descrita anteriormente. La composición farmacéutica también puede comprender un agente quimioterapéutico.
Además, se proporciona una vacuna que comprende una construcción de ADN descrita anteriormente. En la misma, la construcción de ADN puede estar comprendida como adyuvante.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA DIVULGACIÓN
Dentro del significado de la presente divulgación, una secuencia de ADN de cadena abierta lineal se denomina como construcción de ADN. Dicha secuencia de ADN puede ser monocatenaria o parcial o completamente bicatenaria. El término construcción de ADN no indica una limitación de la longitud de la secuencia de ADN correspondiente. Las unidades monoméricas de construcciones de ADN son nucleótidos.
Una construcción de ADN puede fabricarse sintéticamente o ser parcial o completamente de origen biológico, en la que un origen biológico incluye métodos basados genéticamente de fabricación de secuencias de ADN.
ADN-L o nucleótidos en conformación L se refiere a nucleótidos, que comprenden L-desoxirribosa como el resto de azúcar en lugar de la D-desoxirribosa de origen natural. La L-desoxirribosa es enantiómero (imagen especular) de D-desoxirribosa. Las construcciones de ADN constan parcial o completamente de nucleótidos en conformación L pueden ser parcial o completamente mono o bicatenarias; sin embargo, los nucleótidos en conformación L no pueden hibridar con nucleótidos en conformación D (Hauser et al., Nucleic Acid Res. 2006 34: 5101-11). El ADN-L es igualmente soluble y selectivo que el ADN-D. Además, el ADN-L es resistente a degradación por enzimas de origen natural, especialmente exonucleasas, de modo que el ADN-L está protegido contra degradación biológica (Urata et al., Nucleic Acids Res. 199220: 3325-32). Por lo tanto, el ADN-L es ampliamente aplicable.
Un "tronco" de acuerdo con la presente divulgación debe entenderse como una doble hebra de ADN formada por apareamiento de bases dentro de la misma molécula de ADN (que entonces es parcialmente auto-complementaria) o dentro de diferentes moléculas de ADN (que son parcial o completamente complementarias). El apareamiento de bases intramolecular designa un apareamiento de bases dentro de la misma molécula y un apareamiento de bases entre diferentes moléculas de ADN se llama como apareamiento de bases intermolecular.
Un "bucle" dentro del significado de la presente divulgación deberá entenderse como una región monocatenaria desapareada dentro de o en el extremo de una estructura de tronco. Una "horquilla" es una combinación distinta de un tronco y un bucle, que sucede cuando dos regiones autocomplementarias de la misma molécula de ADN hibridan para formar un tronco con un bucle desapareado. Una forma de mancuerna describe una construcción de ADN lineal con horquillas y ambos extremos flanqueando una región de tronco. Por tanto, una "construcción de ADN lineal" dentro del contexto de la presente divulgación describe una construcción de ADN de cadena abierta lineal que comprende ADN mono o bicatenario o una construcción de ADN con forma de mancuerna lineal que comprende bucles monocatenarios en ambos extremos de un tronco de ADN bicatenario.
La expresión "extremo de ADN", ya sea indicando un extremo 5' o 3' de una hebra sencilla de ADN, se refiere no solamente al nucleótido terminal, sino que comprende los cinco nucleótidos terminales o incluso los tres últimos nucleótidos con respecto al extremo de ADN respectivo. Una modificación de un extremo de ADN se refiere a al menos uno de los nucleótidos respectivos.
Un "tramo G" deberá entenderse dentro del significado de la presente divulgación como una secuencia de al menos tres desoxiguanosinas consecutivas.
Una "fase sólida" a la cual los nucleótidos se adhieren covalente o no covalentemente se refiere a, aunque sin restricción, como a una columna, una matriz, perlas, vidrio incluyendo vidrio modificado o funcionalizado, sílice o materiales basados en sílice incluyendo silicio y silicio modificado, plásticos (comprendiendo polipropileno, polietileno, poliestireno y copolímeros de estireno y otros materiales, acrílicos, polibutileno, poliuretanos, etc.), nylon o nitrocelulosa, resinas, polisacáridos, carbono así como vidrios inorgánicos, metales, nanopartículas, y plásticos. Por tanto, las placas de microtitulación también están dentro del ámbito de una fase sólida de acuerdo con la presente divulgación.
La inmunomodulación de acuerdo con la presente divulgación se refiere a inmunoestimulación e inmunosupresión. La inmunoestimulación significa preferentemente que las células efectoras del sistema inmunitario se estimulan para proliferar, migrar, diferenciarse o llegar a ser activas en cualquier otra forma. La proliferación de células B por ejemplo puede inducirse sin señales co-estimuladoras por moléculas de ADN inmunoestimuladoras, que normalmente requieren una señal co-estimuladora de células T auxiliares.
La inmunosupresión por otro lado deberá entenderse como la reducción de la activación o eficacia del sistema inmunitario. La inmunosupresión se induce generalmente de forma deliberada para evitar por ejemplo el rechazo de un órgano trasplantado, para tratar la enfermedad de injerto contra hospedador después de un trasplante de médula ósea, o para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias tales como, por ejemplo, artritis reumatoide o enfermedad de Crohn.
En este contexto, inmunomodulación también puede hacer referencia la influencia de la naturaleza o el carácter de una reacción inmunitaria, afectando a una reacción inmunitaria que aún se está desarrollando o madurando o modulando el carácter de una reacción inmunitaria establecida.
El término "vacunación" usado en esta divulgación se refiere a la administración de un material antigénico (una vacuna) para producir inmunidad contra una enfermedad. Las vacunas pueden prevenir o mejorar los efectos de infección por muchos patógenos tales como virus, hongos, parásitos protozoarios, bacterias, pero también para enfermedades alérgicas y asma, así como de tumores. Las vacunas normalmente contienen uno o más adyuvantes, por ejemplo, ácidos nucleicos inmunoestimuladores, usados para reforzar la respuesta inmunitaria. La vacunación se considera generalmente que es el método más eficaz y más rentable para prevenir enfermedades infecciosas y otras enfermedades.
El material administrado puede ser, por ejemplo, formas vivas pero debilitadas de patógenos (bacterias o virus), formas muertas o inactivadas de estos patógenos, materiales purificados tales como proteínas, ácidos nucleicos que codifican antígenos, o células tales como células tumorales o células dendríticas. En particular, la vacunación con ADN se ha desarrollado recientemente. La vacunación con ADN funciona por inserción (y expresión, activando el reconocimiento del sistema inmunitario) de ADN que codifica antígenos en células humanas o animales. Algunas células del sistema inmunitario que reconocen las proteínas expresadas montarán un ataque contra estas proteínas y contra las células que las expresan. Una ventaja de las vacunas con ADN es que son muy fáciles de producir y almacenar. Además, las vacunas de ADN tienen varias ventajas sobre las vacunas convencionales, incluyendo la capacidad de inducir un intervalo más amplio de tipos de respuesta inmunitaria.
La vacunación puede usarse como enfoque profiláctico, lo que conduce a inmunidad contra el antígeno en el individuo vacunado sano tras la exposición al antígeno. Como alternativa, una vacunación terapéutica puede causar una respuesta mejorada del sistema inmunitario del individuo vacunado enfermo, guiando al sistema inmunitario del individuo hacia los antígenos. Tanto la vacunación profiláctica como la terapéutica pueden aplicarse a seres humanos, así como a animales.
La expresión "terapia génica" usada en esta divulgación se refiere a la modificación genética transitoria o permanente (por ejemplo, inserción, alteración o eliminación de genes) de las células de un individuo y/o los tejidos biológicos para tratar enfermedades, tales como tumores o enfermedades autoinmunitarias. La forma más habitual de terapia génica implica la inserción de genes funcionales en una localización genómica no especificada para reemplazar un gen mutado, pero otras formas implican corregir directamente la mutación o modificar un gen normal que posibilite una infección vírica o incluso transferir un gen o un fragmento génico a una célula para su transcripción.
"Terapia génica autóloga" se refiere a usar tejidos o células del propio individuo. Las células o tejidos aislados se modificarán por terapia génica y se reintroducirán en el donante. En contraste, la "terapia génica alogénica" se refiere a usar células para terapia génica de un individuo diferente al individuo aceptor. Tras la modificación genética, las células alogénicas se introducen en el aceptor.
La expresión "terapia génicaex-vivo"se refiere a un enfoque terapéutico en el cual las células de un individuo, por ejemplo, células madre hematopoyéticas o células progenitoras hematopoyéticas, se modifican genéticamenteex vivoy posteriormente se introducen en el individuo a tratar. La expresión "terapia génicain-vivo"se refiere a un enfoque terapéutico en el cual las células de un individuo, por ejemplo, células madre hematopoyéticas o células progenitoras hematopoyéticas, se modifican géticamentein vivo,usando vectores víricos u otras construcciones de expresión, por ejemplo.
La terapia génica también puede clasificarse en "terapia génica de línea germinal" y "terapia génica somática". En el caso de "terapia génica de línea germinal", las células germinales, es decir, espermatozoides u óvulos, se modifican genéticamente. Los cambios genéticos se integran de forma ordinaria en sus genomas. Por lo tanto, el cambio debido a la terapia sería heredable y pasaría a las generaciones posteriores. Este enfoque es útil para el tratamiento de trastornos genéticos y enfermedades hereditarias. En el caso de "terapia génica somática", los genes terapéuticos se transfieren a las células somáticas de un individuo. Cualquier modificación y efecto se restringirá al individuo solamente, y no se heredará por la descendencia del individuo o las generaciones posteriores.
El término "cáncer" comprende enfermedades cancerosas o un tumor que se está tratando o previniendo que se selecciona entre el grupo que comprende, aunque sin limitación, carcinomas mamarios, melanoma, neoplasias cutáneas, linfoma, leucemia, tumores gastrointestinales, incluyendo carcinomas de colon, carcinomas de estómago, carcinomas pancreáticos, cáncer de colon, cáncer del intestino delgado, carcinomas de ovario, carcinomas cervicales, cáncer pulmonar, cáncer de próstata, carcinomas de células renales y/o metástasis hepáticas.
Las enfermedades autoinmunitarias de acuerdo con la presente divulgación comprenden artritis reumatoide, enfermedad de Crohn, lupus sistémico (SLE), tiroiditis autoinmunitaria, tiroiditis de Hashimoto, esclerosis múltiple, enfermedad de Graves, miastenia grave, enfermedad celiaca y enfermedad de Addison.
La presente divulgación proporciona una secuencia de ADN de cadena abierta lineal que comprende al menos un motivo CG y al menos un nucleótido en conformación L. Debido a la conformación L/parcial el ADN no puede actuar como sustrato para enzimas degradantes de ADN específicas de conformación D de origen natural. De este modo, las construcciones de ADN de la presente invención están protegidas contra degradación enzimática sin tener que usar un esqueleto fosforotioato que ha demostrado ser tóxico. Además, las construcciones de ADN solamente constan de una cantidad mínima de nucleótidos que las hacen pequeñas y de este modo mejoran significativamente su captación por las células del paciente.
El efecto de las construcciones de ADN que contienen CG depende de su interacción con TLR9, y la interacción ADN-proteína depende de la conformación tanto del ADN como de la proteína. Como la capacidad quiral de las moléculas individuales es decisiva para la conformación del polímero resultante no se sabía si una molécula de ADN en conformación L parcial o completa sería capaz de unirse a y activar TLR9. Los datos experimentales demuestran que dichas moléculas de ADN protegidas son sorprendentemente adecuadas para la inducción de una respuesta inmunitaria. Como se muestra en los ejemplos y figuras, al menos un cambio parcial en la capacidad quiral de los nucleótidos individuales obviamente aún permite la unión a y activación de TLR9. Por lo tanto, las moléculas de ADN con motivos CG y los nucleótidos en conformación L pueden usarse para inmunomodulación.
Sorprendentemente, el patrón de estimulación inducido difiere del patrón de estimulación inducido por la molécula desvelada en el documento EP 1196178 que desvela la molécula con forma de mancuerna que comprende motivos CG en los bucles monocatenarios en ambos extremos de la molécula o en el tronco bicatenario ("dSLIM"), como puede observarse en las figuras, incluso cuando se emplean secuencias idénticas de nucleótidos.
La construcción de ADN puede ser monocatenaria o parcial o completamente bicatenaria. Esto incluye apareamiento de bases dentro de la misma molécula (intramolecular) o dentro de diferentes moléculas (intermolecular) o cualquier combinación de los mismos. También es posible que la construcción comprenda al menos una región monocatenaria desapareada. Como realización adicional, se incluyen estructuras de horquilla. Debido a la conformación L parcial o completa, se asegura una semi-vida más larga de la construcción ya que los nucleótidos en conformación L no se someten a degradación.
También se pretende que al menos dos moléculas, que son monocatenarias o parcial o completamente bicatenarias pueden ligar entre sí para formar construcciones multiméricas. Estas construcciones multiméricas incorporan por tanto al menos tantos motivos CG como patrones de ligamiento, empaquetados firmemente dentro de una molécula, y por lo tanto se espera que provoquen una respuesta inmunitaria considerable. Las construcciones multiméricas resultantes monocatenarias o parcial o completamente bicatenarias pueden estar covalentemente cerradas comprendiendo nucleótidos en conformación L dentro de la molécula o construcciones multiméricas abiertas comprendiendo nucleótidos en conformación L en o cerca del extremo 5' y/o 3' para su protección contra degradación enzimática.
De acuerdo con la presente divulgación, el motivo o motivos CG están localizados dentro de la región monocatenaria y/o bicatenaria de la construcción. Como se ha desvelado en el documento EP 1 196 178, los motivos CG son capaces de provocar una respuesta inmunitaria ya sea incluidos dentro de la región monocatenaria o dentro de la región bicatenaria de la molécula.
La divulgación comprende adicionalmente modificaciones químicas de al menos un nucleótido en conformación L o D con un grupo funcional seleccionado entre el grupo que comprende grupos carboxilo, amina, amida, aldimina, cetal, acetal, éster, éter, disulfuro, tiol y aldehído. Esto permite el acoplamiento de la construcción de ADN a un compuesto seleccionado entre el grupo que comprende péptidos, proteínas, lípidos, vesículas, micelas, carbohidratos, anticuerpos, moléculas sintéticas, polímeros, microproyectiles, partículas metálicas, nanopartículas o una fase sólida mediante, por ejemplo, adsorción, unión covalente o iónica. La modificación puede seleccionarse específicamente para el propósito respectivo. La construcción de este modo puede usarse, por ejemplo, para transportar otras moléculas a la célula específica que responde al motivo o motivos CG incorporados. Además, es posible mediante dichas modificaciones acoplar la construcción a microproyectiles que pueden usarse para transferir la construcción al interior de la célula. La construcción también puede acoplarse a una fase sólida, por ejemplo, una placa de microtitulación.
La activación Th1-desviada implica la activación de células NK y células T citotóxicas y estas respuestas inmunitarias puede explorarse para la terapia contra el cáncer. Como las construcciones de ADN que contienen motivos CG no metilados preferiblemente conducen a activación Th1, las construcciones de la presente divulgación pueden usarse para tratar el cáncer. Están en curso numerosos ensayos clínicos que implican agonistas de TLR9 para el tratamiento del cáncer. Dichas moléculas se han administrado de forma eficaz solas o en combinación con, por ejemplo, radioterapia, cirugía, quimioterapia y crioterapia (Krieg, J. Clin. Invest. 2007 117: 1184-94). Debido a su potente inmunomodulación, su pequeño tamaño y su estabilidad, se espera que las construcciones de la presente divulgación sean muy ventajosas a este respecto. Además, su distinto perfil inmunológico las distingue de otros ligandos de TLR9 menos ventajosos, y este perfil puede explotarse para tratamiento específico contra el cáncer.
Por otro lado, los agonistas de TLR9 también están implicados en la generación de células T reguladoras y por tanto pueden usarse para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias. La vía de administración parece ser una variable que determina el efecto de las construcciones de ADN que contienen motivos CGin vivo(Krieg, J. Clin. Invest. 2007117: 1184-94).
El efecto inmunoestimulador de dichas moléculas de ADN que contienen motivos CG ha demostrado mejorar la eficacia de enfoques terapéuticos convencionales tales como agentes quimioterapéuticos, en terapia contra el cáncer. Por lo tanto, también se proporcionan composiciones farmacéuticas, que comprenden las construcciones de la presente divulgación. De nuevo, las características ventajosas de las construcciones de la presente divulgación en comparación con los agonistas de TLR9 del estado de la técnica hacen de las construcciones de la presente divulgación herramientas prometedoras para el tratamiento de enfermedades tales como el cáncer, enfermedades infecciosas, alergias y asma. El tratamiento de alergias y asma (principalmente Th2-mediadas) de este modo se beneficia de la preferencia de la activación Th1.
Como los agonistas de TLR9 han demostrado ser potentes adyuvantes en vacunas, también se proporcionan vacunas que comprenden las construcciones de ADN de la presente divulgación. Las construcciones de la presente divulgación solamente comprenden las secuencias relevantes para la estimulación de TLR9 y son estables debido a la modificación de nucleótidos L. Por lo tanto, pueden evitarse los efectos secundarios debidos a secuencias no relevantes. La semi-vida más larga de la molécula asegura una estimulación eficaz de modo que se espera una fuerte respuesta inmunitaria.
Las moléculas de ADN de la presente divulgación se produjeron usando una columna de síntesis y los nucleótidos respectivos (Beta-L-desoxi "NT" (n-bz) CED fosforamidita; "NT" significa adenosina, citidina, guanosina o timidina). Las moléculas de ADN se purificaron posteriormente por HPLC.
Para poner de manifiesto el efecto de usar ADN con L-ribosa en lugar de D-ribosa, se usaron las siguientes moléculas de ADN para los experimentos iniciales descritos en este documento (Tabla 1).
Tabla 1:Secuencias de las construcciones de ADN inmunoestimuladoras no codificantes los controles.
Los experimentos usando las secuencias de la Tabla 1 mostraron que las secuencias lineales protegidas con L-ribosa que contenían motivos CG son capaces de estimular el sistema inmunitario y la respuesta inmunitaria inducida difiere claramente de la respuesta inmunitaria inducida por dSLIM como se desvela en el documento EP 1 196 178. Por tanto, una secuencia modificada llamada ODN2216 (GGGGGACGATCGTCGGGGGG; SEC ID 6) y modificaciones de la misma se usaron para investigar la influencia de la diferencia estructural como la influencia de los tramos G con respecto a su presencia, longitud y posición, el espaciado entre los motivos CG y la distancia entre tramos G con nucleótidos de L-ribosa y motivos CG respectivamente.
La Tabla 2 resume las secuencias usadas y su efecto sobre la secreción de IFN-alfa e IP-10 en comparación con ODN2216 que tiene los dos primeros y los seis últimos nucleótidos modificados con fosforotioato, donde las letras en negrita representan nucleótidos que comprenden L-ribosa, las letras en cursiva se refieren a un tramo G y las letras subrayadas se refiere a un motivo CG. Una raya situará a la secuencia respectiva en su sitio para la comparación con CKm508, pero no indica una modificación estructural ni una modificación funcional de la secuencia.
Tabla 2: Efecto de las secuencias indicadas sobre la secreción de IFN-alfa e IP-10 en comparación con ODN2216 DN221 i n l rim r l i lim n l i m ifi n f f r i .
Se obtuvieron buenos resultados con secuencias que tienen al menos un tramo G, especialmente en o cerca del extremo 3'. La estimulación es también dependiente de la presencia de motivos CG (CKm477), demostrando de nuevo que la estimulación no es un efecto de la L-ribosa, sino de los motivos CG.
Los resultados obtenidos con secuencias modificadas de ODN 2216 que identifican componentes estructurales positivos se transfirieron a la secuencia de ADN de CKm374. La Tabla 3 muestras los resultados de emplear las secuencias modificadas en comparación con dSLIM con forma de mancuerna como se devela en el documento EP 1 196 178. De nuevo, las letras en negrita representan nucleótidos que comprenden L-ribosa, las letras en cursiva se refieren a un tramo G, las letras con doble subrayado representan nucleótidos modificados con fosforotioato y las letras subrayadas se refieren a un motivo GC.
Como puede extraerse de los resultados de la tabla 3, un tramo G localizado directamente en el extremo 5' parece ser ventajoso (comp. CKm532 y CKm499). Además, el uso de cuatro en lugar de tres desoxiguanosinas en el extremo 5' aumenta adicionalmente la estimulación de IFN-alfa e IP-10 (comp. CKm501 y CKm532).
La adición de un tramo G adicional entre motivos CG parecer ser también beneficioso (comp. CKm532 y CKm520). La distancia entre el primer y el segundo tramo G influye adicionalmente en la eficacia de la molécula de ADN. Además, el empleo de desoxinucleótidos que comprenden L-ribosa solamente en o cerca del extremo 3' parece producir un grado suficiente de estabilización de la molécula de ADN. Puede observarse una buena estimulación de IFN-alfa e IP-10, que es lo que se pretende (véase a continuación). Como IL-8 ha demostrado ser responsable de la inducción de neo-angiogénesis, parece ser beneficioso que la secreción de IL-8 se induzca solamente en pequeñas cantidades.
Claramente, la presencia y la posición cuidadosamente elegida de los tramos G en combinación con el efecto estabilizador de los desoxinucleótidos que contienen L-ribosa permite la producción de una molécula de ADN que supera la eficacia estimuladora de la molécula dSLIM.
Tabla 3: Comparación del efecto de las secuencias indicadas sobre la secreción de IFN-alfa, IP-10 e IL-8 en com aración con dSLIM.
BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS
La divulgación se ilustrará adicionalmente mediante ejemplos y figuras sin limitarse las realizaciones desveladas. Muestra:
Fig. 1 Electroforesis en gel de agarosa de construcciones de ADN después de digestión enzimática.
Fig. 2 Intensidad de GFP después de estimulación de una línea celular de macrófagos de ratón.
Fig. 3 Concentración de MIP-1alfa después de estimular células dendríticas plasmacitoides (PDC).
Fig. 4 Concentración de MIP-1beta después de estimular PDC.
Fig. 5 Concentración de IL-8 después de estimular PDC.
Fig. 6 Concentración de IL-6 después de estimular PDC.
Fig. 7 Concentración de IFN-alfa después de estimular PDC.
Fig. 8 Concentración de TNF-alfa después de estimular PDC.
Fig. 9 Concentración de MCP-1 e IL-8 después de estimular células mononucleares de sangre periférica (PBMC).
Fig. 10 Frecuencia de células T activadas después de estimular PBMC.
Secreción de IFN-alfa, IP-10 e IL-8 de PBMC.
Fig. 13 Efecto de desoxinucleótidos terminales modificados con L-ribosa sobre la estimulación de células ELAM9.
Fig. 14 Estimulación inmunitaria de células B y PDC por CKm532 y dSLIM, en comparación con el estado no estimulado.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS FIGURAS
La Figura 1 muestra un gel de todas las construcciones de ADN que se están sometiendo a digestión por la T7-polimerasa del bacteriógafo T7. Se incubaron 6 |ig de cada construcción de ADN con 10 unidades de T7-polimerasa (volumen de reacción total: 20 |il). Después de 0, 1, 2, 5, 30, y 1500 minutos, se retiró una alícuota de 3 |il de mezcla de incubación de la muestra y se diluyó con 5 |il de colorante Sanger que contenía formamida. Todas las alícuotas se cargaron en un gel de agarosa al 3 %, que se procesó a 100 voltios durante 40 minutos.
Se descubrió que la molécula de ADN no modificada lin-30L2 (carril 2) estaba completamente digerida tras una incubación de 5 minutos con T7-polimerasa, mientras que la construcción de acuerdo con la presente invención (CKm337; carril 3), así como dSLIM (carril 1) y las construcciones modificadas con fosforotioato CKm338 (carril 4) y CKm339 (carril 5) retenían presencia significativa incluso después de 1500 minutos de incubación. De hecho, CKm337 mostró la mayor estabilidad de todas las moléculas ensayadas. Debido a su estabilidad insuficiente, Lin 30L2 se excluyó de estudios adicionales.
La Figura 2 muestra la estimulación de células ELAM9 con diferentes construcciones de ADN estimuladoras. Las células ELAM9 son células macrófagos murinas TLR9-positivas (RAW264) que se transfectaron de forma estable con d1-eGFP bajo el control del promotor de la elastina humana (hELAM) que contienen varios elementos de respuesta a NFkB. Un día después de sembrar las células, se estimularon con las construcciones de ADN representadas (3 |iM) durante 7 h. La media geométrica de la intensidad de GFP se midió por citometría de flujo. La construcción de ADN con todos los nucleótidos en conformación L excepto la última T (CKm336) no tenía capacidad estimuladora. Sin embargo, la construcción de ADN con nucleótidos en conformación L en ambos extremos (CKm337) estimuló la expresión de GFP. Esto fue bastante inesperado ya que no se sabía si las construcciones de ADN que contienen motivos CG con nucleótidos en conformación L serían capaces de unirse a y activar TLR9. Además, se espera que CKm337 sea captada por las células más fácilmente que dSLIM (molécula desvelada en el documento EP 1196178), y sea menos tóxica que las construcciones modificadas con fosforotioato (CKm338 y CKm339).
La Figura 3 a la Figura 8 muestran los efectos de las construcciones de ADN sobre pDC respecto las quimioquinas y citoquinas secretadas. Las pDC se enriquecieron a partir de PBMC purificadas en Ficoll usando un procedimiento de clasificación combinado de Miltenyi, kit Diamond PDC: primero, se agotaron las PBMC de las no pDC usando el cóctel de Biotina-anticuerpo pDC del kit de Miltenyi, después las células se clasificaron positivamente para las pDC usando las microperlas de diamante CD304 (BDCA-4) del kit PDC Diamond. Las PDC se sembraron a 2,5 x 105/ml con 10 ng/ml de IL-3 en el medio (RPMI1640, suero de ternera fetal al 10 %, 100 unidades/ml de penicilina, 100 unidades/ml de estreptomicina glutamina 2 mM, 37 °C, CO<2>al 5 %), y se estimularon durante 2 días por construcciones individuales aplicadas a 3 |iM.
Para la determinación de la cantidad de compuestos secretados tras la estimulación celular, se recogió el sobrenadante aclarado de las células estimuladas y se analizó usando un sistema múltiplex (FlowCytomix de eBioscience/Bender MedSystems) o ELISA.
Sorprendentemente, las pDC estimuladas con CKm337 mostraron un efecto similar sobre la secreción de MIP-1alfa, -1beta e IL-8 en comparación con la estimulación con dSLIM. La secreción de MIP-1alfa, -1beta e IL-8 tras la estimulación con lin CKm338 y CKm339 fue ligeramente mayor (Figura 3, 4 y 5). Sin embargo, todas las construcciones modificadas con fosforotioato heredan varias desventajas como se ha descrito anteriormente.
Respecto a la secreción de IL-6, dSLIM, CKm337 y CKm338 tuvieron un efecto similar sobre las pDC. CKm339 fue ligeramente más eficaz (Figura 6).
Es de observar que CKm337 tuvo un efecto sorprendentemente más fuerte sobre la secreción de IFN-alfa de pDC en comparación con todas las demás construcciones lineales (Figura 7).
dSLIM, CKm337, CKm338 y CKm339 tuvieron todas un efecto similar sobre la secreción de TNF-alfa de pDC (Figura 8).
Las PBMC se aislaron de capas leuco-plaquetarias humanas mediante un gradiente de densidad de Ficoll. Para el análisis funcional, se estimularon 106 células/ml en medio (RPMI1640, suero de ternera fetal al 10 %, 100 unidades/ml de penicilina, 100 unidades/ml de estreptomicina glutamina 2 mM, 37 °C, CO<2>al 5 %) durante 2 días por los compuestos individuales aplicados a las concentraciones indicadas (2-3 |iM).
La Figura 9 (A y B) muestra el efecto de las construcciones de ADN representadas (3 |iM cada una) sobre PBMC respecto a la secreción de MCP-1 e IL-8. Como se esperaba a partir de los experimentos con pDC, la construcción de ADN con todos los nucleótidos en conformación L (CKm336) no tuvo capacidad estimuladora cuando se aplicaba a PBMC. Sin embargo, CKm337 fue eficaz en provocar la secreción tanto de MCP-1 como de IL-8. Sorprendentemente, su efecto respecto a la secreción de IL-8 fue más fuerte en comparación con dSLIM y menos fuerte respecto a la secreción de MCP-1.
Para la determinación de subpoblaciones celulares y el estado de activación de las mismas, se marcaron marcadores superficiales característicos con anticuerpos selectivos marcados con fluoróforo. La tinción con anticuerpo se realizó con 106 células/serie de tinción; cada serie se incubó con hasta 4 anticuerpos diferentes acoplados a grupos fluoróforos, finalmente se resuspendieron en 400 |il de tampón FACS y se analizaron por citometría de flujo sobre al menos 100.000 células vivas. La estrategia de abertura para la determinación de células T y las células activadas en las mismas fue CD3+/CD56- con el marcador de activación CD69.
La Figura 10 muestra el efecto de las construcciones de ADN representadas (2 |iM cada una) sobre la frecuencia de células T activadas dentro de la población de PBMC. Las cinco construcciones tuvieron una capacidad estimuladora comparable. Las células T no expresan TLR9. Por lo tanto, tras la estimulación con las construcciones de ADN, se activaron las células dentro de la población de PBMC que a su vez fueron capaces de activar las células T.
La optimización de las secuencias reveló que la introducción de tramos G aumenta la eficacia de los oligonucleótidos después de la transfección. La eficacia es además dependiente de la distancia entre motivos CG. Las secuencias de ADN lineales pueden protegerse suficientemente contra la degradación mediante el uso de desoxinucleótidos que comprenden L-ribosa en el extremo 3' el oligonucleótido (comp. tabla 2 y 3). Los oligos CKm501 (SEQ ID NO: 33), CKm527 (SEQ ID NO: 32), CK 532 (SEQ ID NO: 31) y CKm534 (SEQ ID NO: 34) mostraron inesperados buenos resultados, como puede extraerse de la tabla 3. Las Figuras 11 y 12 muestran el efecto de las construcciones de ADN indicadas sobre la secreción de las citoquinas IFN-alfa (parte superior), IP-10 (centro) e IL-8 (parte inferior) en PBMC. Los experimentos se realizaron como ya se ha descrito anteriormente.
La Figura 11 muestra que CKm501 y CKm527 causan elevados niveles de secreción de IFN-alfa y CKm527 aumenta la secreción de IP-10 también en comparación con dSLIM con forma de mancuerna. La secreción de IL-8 es baja comparable con respecto a dSLIM, pero inferior en comparación con CKm339, que es la secuencia de bucles monocatenarios de dSLIM con forma de mancuerna protegida en ambos extremos con desoxinucleótidos modificados con fosforotioato.
Como puede extraerse de la figura 12, CKm532 muestra una inducción elevada significativa e inesperada de secreción de IFN-alfa e IP-10, pero una inducción baja comparable de secreción de IL-8. Por tanto, CKm532 confirma que el elemento estructural de un tramo G localizado directamente en el extremo 5' y un tramo G adicional localizado entre dos motivos CG (segundo y tercer motivo GC) parece ser ventajoso. La comparación de CKm520 y CKm532 en la Tabla 3 indica que la localización de un tramo G entre el segundo y tercer motivo CG en CKm532 es responsable del aumento pretendido en la secreción de IFN-alfa e IP-10, mientras que CKm520 aumenta principalmente la secreción de IL-8. Además, la protección del oligo solamente con dos desoxinucleótidos que comprenden L-ribosa en el extremo 3' parece ser suficiente.
El acortamiento del tramo G en el extremo 5' provoca una reducción de la eficacia como puede extraerse de la comparación de CKm532 y CKm 534 en la Figura 12. De nuevo, CKm532 demuestra las ventajas de los componentes estructurales identificados con respecto a una secreción aumentada de IFN-alfa e IP-10 y una baja secreción de IL-8.
La Figura 13 muestra en la parte superior los resultados de la estimulación de células ELAM9 con las construcciones de ADN indicadas, que comprenden desoxinucleótidos con un grado diferente de modificaciones de L-ribosa. Los nucleótidos que comprenden L-ribosa se representan en las secuencias en la parte inferior de la figura 13 en letras en negrita. Los experimentos se hicieron por duplicado (L-dSLIM032 y L-dSLIM030).
El grado y posición de desoxinucleótidos que comprenden L-ribosa tiene influencia sobre la estimulación de las células ELAM9. Una secuencia completa en conformación L (CKm 336; SEQ ID NO: 2) no tiene ningún efecto estimulador en absoluto, lo que está de acuerdo con la divulgación del documento WO 2010/039137. Se obtienen buenos efectos usando oligos que comprenden motivo CG protegidos por desoxinucleótidos que comprenden L-ribosa en el extremo 3' y 5', mientras que una larga extensión de los desoxinucleótidos que comprenden L-ribosa en el extremo 5' es contraproducente (comp. CKm489 y CKm490). Además, la modificación de los motivos CG con desoxinucleótidos que comprenden L-ribosa conduce a una pérdida de efecto. Por tanto, para conseguir buenos efectos estimuladores, los motivos CG no deben comprender L-ribosa y la extensión de desoxinucleótidos modificados con L-ribosa en ambos extremos debe estar restringida, concretamente no más de ocho desoxinucleótidos terminales en el extremo 5' y el máximo de desoxinucleótidos 3' terminales tras el último motivo CG.
La Figura 14 muestra la estimulación inmunitaria por CKm532 y dSLIM, en comparación con el estado no estimulado. Se realizaron experimentos FACS de acuerdo con el protocolo empleado para los experimentos descritos en la Figura 10 y adaptado a células B (estrategia de abertura: CD19 positivas,<c>D86 como marcador de activación) y PDC (estrategia de abertura: linaje negativo, células HLA-DR positivas, CD123 positivas, CD40 y HLA-DR como marcador de activación), respectivamente. Los datos mostrados se basan en las mediciones de tres preparaciones diferentes de capa leuco-plaquetaria.
La parte superior de la Figura 14 muestra la estimulación de células B, como se evidencia por el marcador CD86. Claramente, CKm532 causa una estimulación aumentada de células B, en comparación con dSLIM y el estado no estimulado. Esto muestra el aumento en la maduración de células B, tales como células productoras de anticuerpos, que es una característica importante de la estimulación inmunitaria.
La parte inferior de la Figura 14 muestra la estimulación de PDC, detectada usando el marcador HLA-DR. HLA-DR es parte de las moléculas MHC, y por tanto parte de los procesos de presentación de antígeno del sistema inmunitario. De nuevo, CKm532 muestra un aumento más fuerte de esta característica inmunoestimuladora, que dSLIM o las células no estimuladas.
En conclusión, CKm337 (construcción de ADN D con nucleótidos en conformación L en ambos extremos) sorprendentemente tuvo un efecto estimulador tanto sobre PBMC como sobre pDC aisladas mientras que la construcción de ADN con todos los nucleótidos en conformación L (CKm336) no tuvo efecto. Aparentemente, la conformación de CKm337 aún permite la unión a TLR9, y CKm336 es estéricamente incapaz de unirse a o estimular TLR9.
Inesperadamente, el patrón de estimulación inducido por CKm337 en comparación con dSLIM con forma de mancuerna y oligos modificados con fosforotioato, fue único en comparación con todas las demás construcciones. CKm337 indujo las cantidades mayores de IFN-alfa secretado por pDC. La secreción de IL-8 por PBMC fue más débil en comparación con moléculas modificadas con fosforotioato, pero más fuerte en comparación con dSLIM. En contraste, dSLIM indujo una mayor cantidad de MCP-1 secretada por PBMC, pero Ckm337 fue comparable a las moléculas modificadas con fosforotioato.
Fue posible aumentar los efectos observados con CKm337 introduciendo los llamados tramos G directamente en el extremo 5' de la molécula de ADN lineal. Además, resultó que la mera protección contra la degradación mediante desoxinucleótidos que comprenden L-ribosa en el extremo 3' es suficiente para estabilizar el oligo. Las características estructurales identificadas de tramo G, motivos CG, espaciado de los motivos CG y protección usando diferentes grados y posiciones de desoxinucleótidos modificados con L-ribosa permite una modulación del efecto inmunoestimulador de oligonucleótidos que comprenden L-ribosa. Parece bastante obvio que la presente divulgación pone de manifiesto nuevas herramientas para la construcción de construcciones de ADN inmunoestimuladoras para una estimulación dirigida de células o el sistema inmunitario.
IFN-alfa se ha conocido como una citoquina antivírica durante muchos años. Estimula el desarrollo de células Th1, promoviendo por lo tanto los efectos de moléculas de ADN que contienen CG. IFN-alfa también muestra actividad antitumoral en neoplasias de ratón y humanas y es capaz de disminuir la tumorigenicidad de células tumorales transplantadas, parcialmente mediante la activación de células T citotóxicas y de este modo aumentando la probabilidad de citolisis de las células tumorales. La actividad de células<n>K y macrófagos, ambas también importantes para la citotoxicidad antitumoral, también se aumentan por IFN-alfa (Brassard et al., J. Leukoc. Biol.
2002 71: 565-81). Por lo tanto, se espera que el aumento en la cantidad de IFN-alfa tras la estimulación con las construcciones de ADN de la presente divulgación sea beneficioso para el tratamiento del cáncer.
IP-10 ha demostrado recientemente ser una potente proteína angiostática in vivo. Por tanto, la inducción de IP-10 especialmente en el tratamiento de enfermedades tumorales parece ser también ventajosa.
IL-8 es una citoquina proinflamatoria, que se sabe que media la activación y migración de neutrófilos en tejido de sangre periférica. La infiltración neutrofílica resultante puede ser parcialmente responsable de la inhibición del crecimiento tumoral como se ha demostrado para cáncer de ovario (Lee et al., J. Immunol. 2000 164: 2769-75). Además, IL-8 también es quimiotáctico para células T y basófilos. Por lo tanto, para el tratamiento o prevención de al menos algunos tipos de tumores es ventajoso regular positivamente de forma selectiva IL-8 en respuesta a construcciones de ADN que contienen CG. Por otro lado, se ha establecido que IL-8 activa la angiogénesis, de modo que la inducción de la secreción de IL-8 podría ser contraproducente. Por tanto, los diferentes grados de inducción de IL-8 por las diferentes moléculas de a Dn de la presente invención podrían permitir una adaptación de la molécula para los efectos terapéuticos deseados.
Se sabe que MCP-1 desempeña una tarea en el reclutamiento de monocitos/macrófagos a sitios de lesión e infección y de este modo está posiblemente implicada en la estimulación de respuestas antitumorales del hospedador. Se ha demostrado que MCP-1 puede activar monocitos para que sean más citostáticos contra varios tipos de células tumorales humanasin vitro(Zachariae et al., J. Exp. Med. 1990 171: 2177-82). Por lo tanto, de forma similar a IL-8 es beneficioso modular la expresión de MCP-1 dependiendo del contexto tumoral específico. Por tanto, el patrón de citoquinas específico inducido es beneficioso para el tratamiento y prevención de distintos tipos de tumor. Obviamente, el contexto específico en que se presenta el motivo CG no metilado a TLR9 determina el patrón de estimulación respectivo individual inducido en las células respondedoras.
LISTADO DE SECUENCIAS
<110> MOLOGEN AG
<120> Construcción de ADN inmunomodulador no codificante
<130> 80523WO
<160> 52
<170> PatentIn versión 3.5
<210> 1
<211> 30
<212>ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, lin 30L2
<400> 1
tcattggaaa acgttcttcg gggcgttctt 30
<210> 2
<211> 27
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm336
<220>
<221> misc_feature
<223> completamente en conformación L, excepto para la última T <400> 2
tggaaaacgt tcttcggggc gttcttt 27
<210> 3
<211> 31
<212>ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm337
<220>
<221> misc_feature
<223> 1, 2, 29 y 30 en conformación L
<400> 3
tcattggaaa acgttcttcg gggcgttctt t 31
<210> 4
<211> 31
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm338
<220>
<221> misc_feature
<223> todos salvo los últimos enlaces fosfodiéster modificados en fosforotioatos <400> 4
tcattggaaa acgttcttcg gggcgttctt t 31
<210> 5
<211> 31
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223>oligodesoxinucleótido sintético, CKm339
<220>
<221> misc_feature
<223> los dos primeros así como del segundo y tercero hasta el último enlace fosfodiéster modificados en fosforotioatos
<400> 5
tcattggaaa acgttcttcg gggcgttctt t 31
<210>6
<211> 21
<212>ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, ODN2216
<220>
<221> misc_feature
<223> todos los enlaces fosfodiéster modificados en fosforotioatos
<400> 6
gggggacgat cgtcgggggg t 21
<210>7
<211> 25
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm508
<220>
<221> misc_feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 23-24: en conformación L Nucleótidos 3-7 y 17-22: tramo G Nucleótidos 9-10, 13-14 y 16-17: motivo CG
<400> 7
gggggggacg atcgtcgggg ggggt 25
<210> 8
<211> 21
<212>ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm458
<220>
<221> misc_feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 19-20: en conformación L Nucleótidos 4-5 y 15-18: tramo G Nucleótidos G 7-8, 11-12 y 14-15: motivo CG
<400> 8
ggaggacgat cgtcgggggg t 21
<210> 9
<211> 20
<212>ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm481
<<>220<>>
<221> misc_feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 18-19: en conformación L Nucleótidos 3-5 y 15-17: tramo G Nucleótidos G 7-8, 11-12 y 14-15: motivo CG
<400> 9
gggggacgat cgtcgggggt 20
<210> 10
<211> 21
<212>ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm461
<220>
<221> misc_feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 19-20: en conformación L Nucleótidos 5 y 15-18: tramo G Nucleótidos G 7-8, 11-12 y 14-15: motivo CG
<400> 10
ggaagacgat cgtcgggggg t 21
<210> 11
<211> 21
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm361-2
<220>
<221> misc_feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 19-20: en conformación L Nucleótidos 3-5 y 15-18: tramo G Nucleótidos G 7-8, 11-12 y 14-15: motivo CG
<400> 11
gggggacgat cgtcgggggg t 21
<210> 12
<211> 22
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm479
<220>
<221> misc_feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 20-21: en conformación L Nucleótidos 3-6 y 16-19: tramo G Nucleótidos G 8-9, 12-13 y 15-16: motivo CG
<400> 12
ggggggacga tcgtcggggg gt 22
<210> 13
<211> 25
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm503
<220>
<221> misc feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 23-24: en conformación L Nucleótidos 3-7 y 17-22: tramo G Nucleótidos G 9-10, 13-14 y 16-17: motivo CG
<400> 13
aagggggacg atcgtcgggg ggaat 25
<210> 14
<211> 25
<212>ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm507
<220>
<221> misc_feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 23-24: en conformación L Nucleótidos 3-7 y 17-22: tramo G Nucleótidos G 9-10, 13-14 y 16-17: motivo CG
<400> 14
ttgggggacg atcgtcgggg ggttt 25
<210> 15
<211> 21
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm459
<220>
<221> misc_feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 19-20: en conformación L Nucleótidos 3-5, 15-16 y 18: tramo G Nucleótidos G 7-8, 11 12 y 14-15: motivo CG
<400> 15
gggggacgat cgtcggaggg t 21
<210> 16
<211> 22
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm506
<220>
<221> misc_feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 20-21: en conformación L Nucleótidos 3-5 y 16-19: tramo G Nucleótidos G 7-8, 11-12 y 15-16: motivo CG
<400> 16
gggggacgat cgtgcggggg gt 22
<210> 17
<211> 21
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm478
<220>
<221> misc_feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 19-20: en conformación L Nucleótidos 3-5 y 15-16: tramo G Nucleótidos G 7-8, 11-12 y 14-15: motivo CG
<400> 17
ggggggcgat cgtcggaagg t 21
<210> 18
<211> 21
<212>ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinudeótido sintético, CKm480
<220>
<221> misc_feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 19-20: en conformación L Nucleótidos 3-5 y 15-18: tramo G Nucleótidos G 7-8 y 14 15: motivo CG
<400> 18
gggggacgat gctcgggggg t 21
<210> 19
<211> 21
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinudeótido sintético, CKm462
<220>
<221> misc_feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 19-20: en conformación L Nucleótidos 3-5 y 15-16: tramo G Nucleótidos G 7-8, 11-12 y 14-15: motivo CG
<400> 19
gggggacgat cgtcggaagg t 21
<210> 20
<211> 21
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm505
<220>
<221> misc_feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 19-20: en conformación L Nucleótidos 3-5 y 16-18: tramo G Nucleótidos G 7-8, 11-12 y 15-16: motivo CG
<400> 20
gggggacgat cgtgcggggg t 21
<210> 21
<211> 22
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm476
<220>
<221> misc_feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 20-21: en conformación L Nucleótidos 3-5 y 16-17: tramo G Nucleótidos G 8-9, 12-13 y 15-16: motivo CG
<400> 21
gggggaacga tcgtcggaag gt 22
<210> 22
<211> 21
<212>ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinudeótido sintético, CKm464
<220>
<221> misc_feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 19-20: en conformación L Nucleótidos 15-18: tramo G Nucleótidos G 7-8, 11-12 y 14 15: motivo CG
<400> 22
ggcccccgat cgtcgggggg t 21
<210> 23
<211> 22
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm476
<220>
<221> misc_feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 20-21: en conformación L Nucleótidos 3-5 y 16-17: tramo G Nucleótidos G 8-9, 12-13 y 15-16: motivo CG
<400> 23
gggggaacga tcgtcggaag gt 22
<210> 24
<211> 21
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm460
<220>
<221> misc_feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 19-20: en conformación L Nucleótidos 4-5, 15-16 y 18: tramo G Nucleótidos G 7-8, 11 12 y 14-15: motivo CG
<400> 24
ggaggacgat cgtcggaggg t 21
<210> 25
<211> 22
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm475
<220>
<221> misc_feature
<223> Nucleótidos 1-7 y 17-21: en conformación L Nucleótidos 15-16: tramo G Nucleótidos G 7-8, 11-12 y 14 15: motivo CG
<400> 25
cccccccgat cgtcgggggg gt 22
<210> 26
<211> 22
<212>ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinudeótido sintético, CKm477
<220>
<221> misc_feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 20-21: en conformación L Nucleótidos 3-5 y 16-19: Tramo G
<400> 26
gggggagcat gctgcggggg gt 22
<210> 27
<211> 21
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm463
<220>
<221 > misc_feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 19-20: en conformación L Nucleótidos 5 y 15-16: tramo G Nucleótidos G 7-8, 11-12 y 14-15: motivo CG
<400> 27
ggaagacgat cgtcggaagg t 21
<210> 28
<211> 21
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm504
<220>
<221> misc_feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 19-20: en conformación L Nucleótidos 3-5 y 15-18: tramo G Nucleótidos G 11-12 y 14 15: motivo CG
<400> 28
gggggagcat cgtcgggggg t 21
<210> 29
<211> 20
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm510
<220>
<221> misc_feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 18-19: en conformación L Nucleótidos 3-5, 14-15 y 17: tramo G Nucleótidos G 6-7, 10 11 y 13-14: motivo CG
<400> 29
gggggcgatc gtcggagggt 20
<210> 30
<211> 24
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223>oligodesoxinucleótido sintético, CKm509
<220>
<221> misc_feature
<223> Nucleótidos 1-6 y 19-23: en conformación L Nucleótidos 3-5 y 17-18: tramo G Nucleótidos G 9-10, 13-14 y 16-17: motivo CG
<400> 30
ccccccctcg atcgtcgggg gggt 24
<210> 31
<211> 34
<212>ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm532
<220>
<221 > misc_feature
<223> Nucleótidos 32-33: en conformación L Nucleótidos 1-4 y 21-24: tramo G Nucleótidos G 13-14, 20-21 y 25-26: motivo CG
<400> 31
ggggtcatta aacgttcttc ggggcgttct tttt 34
<210> 32
<211> 35
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm527
<220>
<221 > misc_feature
<223> Nucleótidos 33-34: en conformación L Nucleótidos 1-4, 21-24 y 26-30: tramo G Nucleótidos G 13-14, 20 21 y 25-26: motivo CG
<400> 32
ggggtcatta aacgttcttc ggggcggggg ttttt 35
<210> 33
<211> 33
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm501
<220>
<221 > misc_feature
<223> Nucleótidos 31-32: en conformación L Nucleótidos 1-3 y 20-23: tramo G Nucleótidos G 12-13, 19-20 y 24-25: motivo CG
<400> 33
gggtcattaa acgttcttcg gggcgttctt ttt 33
<210> 34
<211> 34
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm534
<220>
<221 >misc_feature
<223> Nucleótidos 32-33: en conformación L Nucleótidos 1-3 y 21-24: tramo G Nucleótidos G 13-14, 20-21 y 25-26: motivo CG
<400> 34
gggtcattaa aacgttcttc ggggcgttct tttt 34
<210> 35
<211> 37
<212>ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm520
<220>
<221 > misc_feature
<223> Nucleótidos 35-36: en conformación L Nucleótidos 1-4 y 28-32: tramo G Nucleótidos G 13-14, 20-21 y 27-28: motivo CG
<400> 35
ggggtcatta aacgttcttc gttcttcggg ggttttt 37
<210> 36
<211> 31
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm535
<220>
<221 > misc_feature
<223> Nucleótidos 29-30: en conformación L Nucleótidos 17-20 y 22-26: tramo G Nucleótidos G 9-10, 16-17 y 21-22: motivo CG
<400> 36
tcattaaacg ttcttcgggg cgggggtttt t 31
<210> 37
<211> 33
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm528
<220>
<221> misc_feature
<223> Nucleótidos 31-32: en conformación L Nucleótidos 1-3 y 20-23: tramo G Nucleótidos G 13-14, 19-20 y 24-25: motivo CG
<400> 37
gggtcattaa aacgttctcg gggcgttctt ttt 33
<210> 38
<211> 30
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm339
<220>
<221> misc feature
<223> Nucleótidos 6-7 y 20-23: tramo G Nucleótidos G 12-13, 19-20 y 24-25: motivo CG Nucleótidos 1-2 y 29 30: enlaces fosforotioato
<400> 38
tcattggaaa acgttcttcg gggcgttctt 30
<210> 39
<211> 36
<212>ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm498
<220>
<221 > misc_feature
<223> Nucleótidos 34-35: en conformación L Nucleótidos 6-7 y 27-33: tramo G Nucleótidos G 12-13, 19-20 y 26-27: motivo CG
<400> 39
tcattggaaa acgttcttcg ttcttcgggg gggttt 36
<210> 40
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm536
<220>
<221 > misc_feature
<223> Nucleótidos 26-27: en conformación L Nucleótidos 1-3 y 16-19: tramo G Nucleótidos G 8-9, 15-16 y 20 21: motivo CG
<400> 40
gggaaaacgt tcttcggggc gttctttt 28
<210> 41
<211> 33
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm499
<220>
<221 > misc_feature
<223> Nucleótidos 31-32: en conformación L Nucleótidos 6-8 y 20-23: tramo G Nucleótidos G 12-13, 19-20 y 24-25: motivo CG
<400> 41
tcattgggaa acgttcttcg gggcgttctt ttt 33
<210> 42
<211> 33
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm533
<220>
<221 > misc_feature
<223> Nucleótidos 31-32: en conformación L Nucleótidos 1-3, 15-17 y 20-23: tramo G Nucleótidos G 12-13, 19 20 y 24-25: motivo CG
<400> 42
gggtcattaa acgtgggtcg gggcgttctt ttt 33
<210> 43
<211> 33
<212>ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinudeótido sintético, CKm500
<220>
<221 > misc_feature
<223> Nucleótidos 31-32: en conformación L Nucleótidos 9-11 y 20-23: tramo G Nucleótidos G 12-13, 19-20 y 24-25: motivo CG
<400> 43
tcattaaagg gcgttcttcg gggcgttctt ttt 33
<210> 44
<211> 25
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinudeótido sintético, CKm521
<220>
<221 > misc_feature
<223> Nucleótidos 23-24: en conformación L Nucleótidos 1-3 y 14-17: tramo G Nucleótidos G 6-7, 13-14 y 18 19: motivo CG
<400> 44
gggaacgttc ttcggggcgt ctttt 25
<210> 45
<211> 23
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm502
<220>
<221 > misc_feature
<223> Nucleótidos 21-22: en conformación L Nucleótidos 1-3 y 12-15: tramo G Nucleótidos G 4-5, 11-12 y 16 17: motivo CG
<400> 45
gggcgttctt cggggcgtct ttt 23
<210> 46
<211> 31
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm374
<220>
<221 > misc_feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 29-30: en conformación L Nucleótidos 6-7 y 20-23: tramo G Nucleótidos G 12-13, 19 20 y 24-25: motivo CG
<400> 46
tcattggaaa acgttcttcg gggcgttctt t 31
<210> 47
<211> 33
<212>ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinudeótido sintético, CKm497
<220>
<221 > misc_feature
<223> Nucleótidos 31-32: en conformación L Nucleótidos 6-7 y 27-30: tramo G Nucleótidos G 12-13, 19-20 y 26-27: motivo CG
<400> 47
tcattggaaa acgttcttcg ttcttcgggg ttt 33
<210> 48
<211> 33
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm524
<220>
<221 > misc_feature
<223> Nucleótidos 31-32: en conformación L Nucleótidos 1-3 y 21-24: Tramo G
<400> 48
gggtcattaa agcttcttgc ggggcttctt ttt 33
<210> 49
<211> 31
<212>ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm525
<220>
<221 > misc_feature
<223> Nucleótidos 1-2 y 29-30: en conformación L Nucleótidos 6-7 y 21-24: Tramo G
<400> 49
tcattggaaa agcttcttgc ggggcttctt t 31
<210> 50
<211> 27
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm526
<220>
<221 > misc_feature
<223> Nucleótidos 25-26: en conformación L Nucleótidos 1-3 y 15-18: tramo G Nucleótidos G 7-8, 14-15 y 19 20: motivo CG
<400> 50
gggaaacgtt cttcggggcg ttctttt 27
<210> 51
<211> 35
<212>ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinudeótido sintético, CKm537
<220>
<221 > misc_feature
<223> Nucleótidos 33-34: en conformación L Nucleótidos 1-4, 16-18, 21-24 y 26-30: tramo G Nucleótidos G 13 14, 20-21 y 25-26: motivo CG
<400> 51
ggggtcatta aacgtgggtc ggggcggggg ttttt 35
<210> 52
<211> 32
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> oligodesoxinucleótido sintético, CKm538
<220>
<221 > misc_feature
<223> Nucleótidos 30-31: en conformación L Nucleótidos 1-4, 9-12, 16-19 y 23-27: tramo G Nucleótidos G 8-9, 15-16 y 22-23: motivo CG
<400> 52
ggggaaacgg ggttcggggt tcgggggttt tt 32
Claims (1)
1. Una construcción de ADN monocatenaria de cadena abierta no codificante para inmunomodulación que consiste de una secuencia seleccionada el grupo que consiste en SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SeQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34 y SEQ ID NO: 35
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB201021867 | 2010-12-23 | ||
GBGB1021867.5A GB201021867D0 (en) | 2010-12-23 | 2010-12-23 | Non-coding immunomodulatory DNA construct |
PCT/EP2011/074033 WO2012085291A1 (en) | 2010-12-23 | 2011-12-23 | Non-coding immunomodulatory dna construct |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2618783T3 ES2618783T3 (es) | 2017-06-22 |
ES2618783T5 true ES2618783T5 (es) | 2024-04-09 |
Family
ID=43598913
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES11805869T Active ES2618783T5 (es) | 2010-12-23 | 2011-12-23 | Construcción de ADN inmunomodulador no codificante |
Country Status (18)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20140010830A1 (es) |
EP (1) | EP2655623B2 (es) |
JP (1) | JP6027542B2 (es) |
KR (2) | KR101862271B1 (es) |
CN (3) | CN107384930B (es) |
AU (1) | AU2011347095B2 (es) |
BR (1) | BR112013015816B1 (es) |
CA (1) | CA2822377C (es) |
DK (1) | DK2655623T3 (es) |
ES (1) | ES2618783T5 (es) |
GB (1) | GB201021867D0 (es) |
IL (1) | IL227105A (es) |
MX (1) | MX343918B (es) |
PL (1) | PL2655623T3 (es) |
RU (1) | RU2583291C2 (es) |
SG (1) | SG191328A1 (es) |
WO (1) | WO2012085291A1 (es) |
ZA (1) | ZA201304999B (es) |
Families Citing this family (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB201021867D0 (en) | 2010-12-23 | 2011-02-02 | Mologen Ag | Non-coding immunomodulatory DNA construct |
AR095882A1 (es) | 2013-04-22 | 2015-11-18 | Hoffmann La Roche | Terapia de combinación de anticuerpos contra csf-1r humano con un agonista de tlr9 |
GB2514591A (en) * | 2013-05-30 | 2014-12-03 | Mologen Ag | Predictive biomarker for cancer therapy |
AR097584A1 (es) | 2013-09-12 | 2016-03-23 | Hoffmann La Roche | Terapia de combinación de anticuerpos contra el csf-1r humano y anticuerpos contra el pd-l1 humano |
EP3164113B1 (en) | 2014-06-04 | 2019-03-27 | Exicure, Inc. | Multivalent delivery of immune modulators by liposomal spherical nucleic acids for prophylactic or therapeutic applications |
JP2017537619A (ja) | 2014-11-21 | 2017-12-21 | ノースウェスタン ユニバーシティ | 球状核酸ナノ粒子複合体の配列特異的細胞内取込 |
US10347146B2 (en) * | 2014-12-23 | 2019-07-09 | International Business Machines Corporation | Managing answer feasibility |
LU92821B1 (en) * | 2015-09-09 | 2017-03-20 | Mologen Ag | Combination comprising immunostimulatory oligonucleotides |
GB2542425A (en) | 2015-09-21 | 2017-03-22 | Mologen Ag | Means for the treatment of HIV |
CN109790220A (zh) | 2016-08-25 | 2019-05-21 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 与巨噬细胞激活剂组合的抗csf-1r抗体的间歇给药 |
EP3558360A1 (en) | 2016-12-22 | 2019-10-30 | F. Hoffmann-La Roche AG | Treatment of tumors with an anti-csf-1r antibody in combination with an anti-pd-l1 antibody after failure of anti-pd-l1/pd1 treatment |
WO2018189382A1 (en) | 2017-04-14 | 2018-10-18 | Solstice Biologics, Ltd. | Immunomodulating polynucleotides, antibody conjugates thereof, and methods of their use |
EP3392345A1 (en) | 2017-04-22 | 2018-10-24 | Mologen AG | Biomarker for small cell lung cancer therapy |
WO2018209270A1 (en) | 2017-05-11 | 2018-11-15 | Northwestern University | Adoptive cell therapy using spherical nucleic acids (snas) |
SG11202001683SA (en) * | 2017-08-31 | 2020-03-30 | Mologen Ag | Tlr-9 agonists for modulation of tumor microenvironment |
WO2019066571A2 (ko) | 2017-09-28 | 2019-04-04 | 연세대학교 산학협력단 | 골수유래 면역반응 억제세포의 제조방법, 이에 의해 제조된 골수유래 면역반응 억제세포 및 그 용도 |
US10685050B2 (en) * | 2018-04-23 | 2020-06-16 | Adobe Inc. | Generating a topic-based summary of textual content |
KR20200138597A (ko) | 2019-06-01 | 2020-12-10 | 서미주 | 클렌징 마스크팩 |
Family Cites Families (27)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6207646B1 (en) | 1994-07-15 | 2001-03-27 | University Of Iowa Research Foundation | Immunostimulatory nucleic acid molecules |
IL129126A0 (en) * | 1996-10-16 | 2000-02-17 | Icn Pharmaceuticals | Monocyclic l-nucleosides analogs and uses thereof |
US6251666B1 (en) | 1997-03-31 | 2001-06-26 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Nucleic acid catalysts comprising L-nucleotide analogs |
DE19935756A1 (de) * | 1999-07-27 | 2001-02-08 | Mologen Forschungs Entwicklung | Kovalent geschlossenes Nukleinsäuremolekül zur Immunstimulation |
AU1656601A (en) * | 1999-11-12 | 2001-06-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Gapped oligomers having site specific chiral phosphorothioate internucleoside linkages |
ES2298269T3 (es) | 2000-09-26 | 2008-05-16 | Idera Pharmaceuticals, Inc. | Modulacion de la actividad inmunoestimulante de analogos oligonucleotidicos inmunoestimulantes mediante cambios quimicos posicionales. |
JP2005504020A (ja) * | 2001-07-03 | 2005-02-10 | アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド | ヌクレアーゼ耐性キメラオリゴヌクレオチド |
US7276489B2 (en) * | 2002-10-24 | 2007-10-02 | Idera Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds by optimal presentation of 5′ ends |
WO2003035836A2 (en) | 2001-10-24 | 2003-05-01 | Hybridon Inc. | Modulation of immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds by optimal presentation of 5' ends |
DE10211558A1 (de) * | 2002-03-15 | 2003-10-09 | Noxxon Pharma Ag | Neue Formen RNAi |
US8158768B2 (en) * | 2002-12-23 | 2012-04-17 | Dynavax Technologies Corporation | Immunostimulatory sequence oligonucleotides and methods of using the same |
KR20050115913A (ko) * | 2003-03-26 | 2005-12-08 | 사이토스 바이오테크놀로지 아게 | Melan―a 펩티드 유사체-바이러스-양-입자컨쥬게이트 |
SG122973A1 (en) | 2003-10-30 | 2006-06-29 | Coley Pharm Gmbh | C-class oligonucleotide analogs with enhanced immunostimulatory potency |
CA2555256A1 (en) | 2004-02-03 | 2005-08-25 | The Regents Of The University Of California | Methods of treating irritable bowel syndrome |
JP3976742B2 (ja) * | 2004-02-27 | 2007-09-19 | 江守商事株式会社 | インターフェロンアルファを誘導する免疫刺激オリゴヌクレオチド |
WO2006002038A2 (en) | 2004-06-15 | 2006-01-05 | Hybridon, Inc. | Immunostimulatory oligonucleotide multimers |
BRPI0617254A2 (pt) | 2005-01-12 | 2011-07-19 | Cancer Rec Tech Ltd | "oligonucleotìdeo de filamento único, composição farmacêutica, métodos para estimular a atividade de tlr7 em uma célula que expressa tlr7, para estimular a atividade de tlr8 em uma célula que expressa tlr8, e, para estimular uma resposta imune em um paciente |
US7879992B2 (en) | 2005-01-31 | 2011-02-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modification of MyD88 splicing using modified oligonucleotides |
ES2542989T3 (es) | 2005-10-12 | 2015-08-13 | Idera Pharmaceuticals, Inc. | Compuestos oligonucleótidos inmuno reguladores (IRO) para modular la respuesta inmune basada en receptor semejante a Toll |
EP2032144A4 (en) * | 2006-06-13 | 2011-05-04 | Bayhill Therapeutics Inc | METHODS AND COMPOSITIONS BASED ON NUCLEIC ACID MODULATORS OF THE IMMUNE SYSTEM FOR THE PREVENTION AND TREATMENT OF DISEASE |
US20080260820A1 (en) * | 2007-04-19 | 2008-10-23 | Gilles Borrelly | Oral dosage formulations of protease-resistant polypeptides |
WO2008153733A2 (en) * | 2007-05-29 | 2008-12-18 | Nature Technology Corporation | Vectors and methods for genetic immunization |
WO2009035554A2 (en) * | 2007-09-07 | 2009-03-19 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Superior structure stability and selectivity of hairpin nucleic acid probes with an l-dna stem |
KR20100068422A (ko) | 2007-10-09 | 2010-06-23 | 콜리 파마슈티칼 게엠베하 | 변경된 당 잔기를 함유하는 면역자극성 올리고뉴클레오티드 유사체 |
WO2010039137A1 (en) | 2008-10-02 | 2010-04-08 | Idera Pharmaceuticals, Inc. | Immune regulatory oligonucleotide (iro) compounds to modulate toll-like receptor based immune response |
EP2246433A1 (de) * | 2009-04-30 | 2010-11-03 | Mologen AG | Concatemere zur Immunmodulation |
GB201021867D0 (en) | 2010-12-23 | 2011-02-02 | Mologen Ag | Non-coding immunomodulatory DNA construct |
-
2010
- 2010-12-23 GB GBGB1021867.5A patent/GB201021867D0/en not_active Ceased
-
2011
- 2011-12-23 KR KR1020137019446A patent/KR101862271B1/ko active IP Right Grant
- 2011-12-23 CN CN201710517071.2A patent/CN107384930B/zh active Active
- 2011-12-23 JP JP2013545438A patent/JP6027542B2/ja active Active
- 2011-12-23 CA CA2822377A patent/CA2822377C/en active Active
- 2011-12-23 KR KR1020167025908A patent/KR102022031B1/ko active IP Right Grant
- 2011-12-23 CN CN201710516200.6A patent/CN107299101A/zh active Pending
- 2011-12-23 AU AU2011347095A patent/AU2011347095B2/en active Active
- 2011-12-23 BR BR112013015816-6A patent/BR112013015816B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2011-12-23 US US13/996,791 patent/US20140010830A1/en not_active Abandoned
- 2011-12-23 SG SG2013048673A patent/SG191328A1/en unknown
- 2011-12-23 WO PCT/EP2011/074033 patent/WO2012085291A1/en active Application Filing
- 2011-12-23 DK DK11805869.2T patent/DK2655623T3/en active
- 2011-12-23 PL PL11805869T patent/PL2655623T3/pl unknown
- 2011-12-23 MX MX2013007286A patent/MX343918B/es active IP Right Grant
- 2011-12-23 EP EP11805869.2A patent/EP2655623B2/en active Active
- 2011-12-23 CN CN2011800677990A patent/CN103370417A/zh active Pending
- 2011-12-23 RU RU2013132151/10A patent/RU2583291C2/ru active
- 2011-12-23 ES ES11805869T patent/ES2618783T5/es active Active
-
2013
- 2013-06-20 IL IL227105A patent/IL227105A/en active IP Right Grant
- 2013-07-04 ZA ZA2013/04999A patent/ZA201304999B/en unknown
-
2020
- 2020-09-11 US US17/018,088 patent/US20210340543A1/en active Pending
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2618783T5 (es) | Construcción de ADN inmunomodulador no codificante | |
ES2634002T3 (es) | Construcción covalentemente cerrada de ADN inmunomodulador no codificante | |
ES2564303T3 (es) | Compuestos de ARN inmunomodulador estabilizado (SIMRA) para TLR7 y TLR8 | |
CA2624755C (en) | Immune regulatory oligonucleotide (iro) compounds to modulate toll-like receptor based immune response | |
AU2015240567A1 (en) | Self assembling nucleic acid nanostructures | |
JP2012517226A (ja) | Tlr7の合成rnaベースのアゴニスト | |
ES2620748T3 (es) | Nuevos agonistas del receptor de tipo toll 3 y procedimientos de su utilización |