ES2618421T3

ES2618421T3 - Moduladores espiro-lactama del receptor NMDA y usos de los mismos

Info

Publication number: ES2618421T3
Application number: ES14703750.1T
Authority: ES
Inventors: John A. Lowe; M. Amin Khan
Original assignee: Aptinyx Inc
Current assignee: Aptinyx Inc
Priority date: 2013-01-29
Filing date: 2014-01-29
Publication date: 2017-06-21
Anticipated expiration: 2034-01-29
Also published as: EP2951185B1; AU2014212501A1; US20150368254A1; US20180127430A1; WO2014120800A1; JP2016506962A; BR112015018094A2; MX2015009785A; PE20151436A1; CN105308049A; SG11201505862TA; IL240164A0; KR20150110784A; EP2951185A1; PH12015501598A1; CA2899191A1; EA201591405A1; US10316041B2; US9708335B2

Abstract

Un compuesto representado por la fórmula I:**Fórmula** o una sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero o N-óxido del mismo, en la que Rb se selecciona entre el grupo que consiste en H, halógeno, hidroxilo, ciano y alquilo C1-C6; R es H, alquilo C1-C6 o -C(O)-alquilo C1-C6; R1 es H o alquilo C1-C6; R2 es H o alquilo C1-C6; R3 es alquilo C1-C6; alcoxi C1-C6; -O-alquilen C1-C6-fenilo; alquenilo C2-C6; alquinilo C2-C6; cicloalquilo C3-C6; fenilo; o heteroarilo que incluye de 5 a 6 átomos de anillo, en el que 1, 2 o 3 de los átomos del anillo se seleccionan independientemente entre el grupo que consiste en N, NH, N(alquilo C1-C3), O y S; en el que R3 está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en amino, amino protegido, halógeno, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, hidroxilo, fenilo (opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes cada uno seleccionado independientemente entre Ra), bencilo (opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes cada uno seleccionado independientemente entre Ra), y -alquilen C1-C6-cicloalquilo C3-C6 (opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente entre halógeno y alquilo C1-C6); Ra se selecciona entre el grupo que consiste en halógeno, alquilo C1-C6 (opcionalmente sustituido con uno, dos o tres halógenos), cicloalquilo C3-C6 (opcionalmente sustituido con uno, dos o tres halógenos), y alcoxi C1-C6 (opcionalmente sustituido con uno, dos o tres halógenos); R4 es H o alquilo C1-C6; R5 es H o alquilo C1-C6; X se selecciona entre el grupo que consiste en: H; alquilo C1-C6; -OH; alcoxi C1-C6; -CO2H; -C(O)NRcRd; y heteroarilo que incluye de 5 a 6 átomos de anillo, en el que 1, 2 o 3 de los átomos del anillo se seleccionan independientemente entre el grupo que consiste en N, NH, N(alquilo C1-C3), O y S, en el que el anillo heteroarilo puede estar opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en halógeno, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, hidroxilo y fenilo; y Rc y Rd se seleccionan cada uno independientemente entre el grupo que consiste en H, alquilo C1-C6, o fenilo, o Rc y Rd, junto con el nitrógeno al que están unidos, forman un heterociclilo que incluye de 4 a 6 átomos de anillo; en el que el heterociclilo no incluye más de dos heteroátomos de anillo (incluyendo el átomo de nitrógeno unido a Rc y Rd), y el segundo heteroátomo de anillo, cuando está presente, se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en N, NH, N(alquilo C1-C3), O y S; y en el que el heterociclilo está opcionalmente sustituido con 1-3 sustituyentes seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en halógeno, ciano, oxo y alquilo C1-C6.

Description

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R3 es alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C6, fenilo, o un heteroarilo de 4-6 miembros con uno, dos o tres heteroátomos cada uno seleccionado entre O, S o N, en el que R3 puede estar opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes cada uno seleccionado entre el grupo que consiste en amino, halógeno, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, hidroxilo, fenilo (opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes cada uno seleccionado independientemente entre Ra) o bencilo (opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes cada uno seleccionado independientemente entre Ra);

Ra se selecciona entre el grupo que consiste en halógeno, alquilo C1-C6 (opcionalmente sustituido con uno, dos o tres halógenos), cicloalquilo C3-C6 (opcionalmente sustituido con uno, dos o tres halógenos), o alcoxi C1-C6 (opcionalmente sustituido con uno, dos o tres halógenos);

R4 es H o alquilo C1-C6;

R5 es H o alquilo C1-C6;

X se selecciona entre el grupo que consiste en: H, alquilo C1-C6, -OH, alcoxi C1-C6, -CO2H, -C(O)NRcRd, y un anillo heteroarilo de 4 a 6 miembros con uno, dos o tres heteroátomos cada uno seleccionado entre O, S o N, en el que el anillo heteroarilo puede estar opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes cada uno seleccionado entre el grupo que consiste en halógeno, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, hidroxilo y fenilo; y

Rc y Rd se seleccionan cada uno independientemente entre el grupo que consiste en H, alquilo C1-C6, o fenilo, o junto con el nitrógeno al que están unidos, forman un anillo heterocíclico de 4-6 miembros, que puede tener un heteroátomo adicional seleccionado entre O, S, o N; en el que el anillo heterocíclico de 4-6 miembros puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo que consiste en halógeno, ciano, oxo y alquilo C1-C6;

o en otras realizaciones, las variables expuestas en la fórmula (I) se definen de la siguiente manera:

Rb se selecciona entre el grupo que consiste en H, halógeno, hidroxilo, ciano y alquilo C1-C6 (por ejemplo, H);

R es H, alquilo C1-C6 o -C(O)-alquilo C1-C6;

R1 es H o alquilo C1-C6;

R2 es H o alquilo C1-C6;

R3 es alquilo C1-C6; alcoxi C1-C6; -O-alquilen C1-C6-fenilo; alquenilo C2-C6; alquinilo C2-C6; cicloalquilo C3-C6; fenilo;

o heteroarilo que incluye de 5 a 6 átomos de anillo, en el que 1, 2 o 3 de los átomos del anillo se seleccionan independientemente entre el grupo que consiste en N, NH, N(alquilo C1-C3), O y S, en el que R3 está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en amino, amino protegido, halógeno, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, hidroxilo, fenilo (opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes cada uno seleccionado independientemente entre Ra), bencilo (opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes cada uno seleccionado independientemente entre Ra), y -alquilen C1-C6-cicloalquilo C3-C6 (opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente entre halógeno y alquilo C1-C6);

Ra se selecciona entre el grupo que consiste en halógeno, alquilo C1-C6 (opcionalmente sustituido con uno, dos o tres halógenos), cicloalquilo C3-C6 (opcionalmente sustituido con uno, dos o tres halógenos), y alcoxi C1-C6 (opcionalmente sustituido con uno, dos o tres halógenos);

R4 es H o alquilo C1-C6;

R5 es H o alquilo C1-C6;

X se selecciona entre el grupo que consiste en: H; alquilo C1-C6; -OH; alcoxi C1-C6; -CO2H; -C(O)NRcRd; y heteroarilo que incluye de 5 a 6 átomos de anillo, en el que 1, 2 o 3 de los átomos del anillo se seleccionan independientemente entre el grupo que consiste en N, NH, N(alquilo C1-C3), O y S, en el que el anillo heteroarilo puede estar opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en halógeno, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, hidroxilo y fenilo; y

Rc y Rd se seleccionan cada uno independientemente entre el grupo que consiste en H, alquilo C1-C6, o fenilo, o Rc y Rd junto con el nitrógeno al que están unidos, forman un heterociclilo que incluye de 4 a 6 átomos de anillo; en el que el heterociclilo no incluye más de dos heteroátomos de anillo (incluyendo el átomo de nitrógeno unido a Rc y Rd), y el segundo heteroátomo de anillo, cuando está presente, se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en N, NH, N(alquilo C1-C3), O y S; y en el que el heterociclilo está opcionalmente sustituido con 1-3

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10 Los compuestos de la presente divulgación y formulaciones de los mismos pueden tener una pluralidad de centros quirales. Cada centro quiral puede ser independientemente R, S, o cualquier mezcla de R y S. Por ejemplo, en algunas realizaciones, un centro quiral puede tener una proporción de R:S de entre aproximadamente 100:0 y aproximadamente 50:50, entre aproximadamente 100:0 y aproximadamente 75:25, entre aproximadamente 100:0 y aproximadamente 85:15, entre aproximadamente 100:0 y aproximadamente 90:10, entre aproximadamente 100:0 y

15 aproximadamente 95:5, entre aproximadamente 100:0 y aproximadamente 98:2, entre aproximadamente 100:0 y aproximadamente 99:1, entre aproximadamente 0:100 y 50:50, entre aproximadamente 0:100 y aproximadamente

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25:75, entre aproximadamente 0:100 y aproximadamente 15:85, entre aproximadamente 0:100 y aproximadamente 10:90, entre aproximadamente 0:100 y aproximadamente 5:95, entre aproximadamente 0:100 y aproximadamente 2:98, entre aproximadamente 0:100 y aproximadamente 1:99, entre aproximadamente 75:25 y 25:75, y aproximadamente 50:50. Las formulaciones de los compuestos desvelados que comprende una proporción mayor de uno o más isómeros (es decir, R y/o S) pueden poseer características terapéuticas mejoradas en relación a formulaciones racémicas de compuestos o mezclas de compuestos desvelados. En algunos casos, las fórmulas químicas contienen el descriptor "-(R)-" o "-(S)-" que está unido adicionalmente a una cuña sólida o una cuña de puntos. Este descriptor está destinado a mostrar un carbono de metino (CH) que está unido a tres sustituyentes diferentes y tiene también la configuración R o S indicada (véase, por ejemplo, la Tabla 1).

Los compuestos divulgados pueden proporcionar la apertura eficaz del canal de cationes en el receptor NMDA, por ejemplo, pueden unirse o asociarse con el sitio de glutamato del receptor NMDA para ayudar en la apertura del canal de cationes. Los compuestos divulgados pueden utilizarse para regular (activar o desactivar) el receptor NMDA a través de la acción como agonistas.

Los compuestos según se describen en el presente documento pueden ser agonistas parciales del sitio de glicina del receptor NMDA. Un agonista parcial, como se utiliza en este contexto, se entenderá que significa que a una concentración baja el análogo actúa como un agonista y a una concentración alta el análogo actúa como un antagonista. La unión de la glicina no está inhibida por el glutamato o por los inhibidores competitivos del glutamato, y tampoco se une al mismo sitio que el glutamato en el receptor NMDA. Existe en el receptor NMDA un segundo sitio de unión separado. El canal de iones abierto por ligando del receptor NMDA está, por lo tanto, bajo el control de al menos estos dos sitios alostéricos distintos. Los compuestos divulgados pueden tener la capacidad de unirse o asociarse con el sitio de unión a glicina del receptor NMDA. En algunas realizaciones, los compuestos divulgados pueden poseer una potencia que es 10 veces o más que la actividad de los agonistas parciales del sitio de glicina del receptor NMDA existentes.

Los compuestos divulgados pueden presentar un alto índice terapéutico. El índice terapéutico, como se utiliza en el presente documento, se refiere a la proporción de la dosis que produce toxicidad en el 50 % de la población (es decir, la DT50) con respecto a la dosis mínima eficaz para el 50 % de la población (es decir, la DE50). Por lo tanto, el índice terapéutico = (DT50):(DE50). En algunas realizaciones, un compuesto divulgado puede tener un índice terapéutico de al menos aproximadamente 10:1, de al menos aproximadamente 50:1, de al menos aproximadamente 100:1, de al menos aproximadamente 200:1, de al menos aproximadamente 500:1 o de al menos aproximadamente 1000:1.

Composiciones

En otros aspectos, se proporcionan formulaciones y composiciones que comprenden los compuestos divulgados y, de forma opcional, un excipiente farmacéuticamente aceptable. En algunas realizaciones, una formulación contemplada comprende una mezcla racémica de uno o más de los compuestos divulgados.

Para su uso, las formulaciones contempladas pueden prepararse en cualquiera de una diversidad de formas. A modo de ejemplo, y sin limitación, los compuestos pueden prepararse en una formulación adecuada para la administración oral, la inyección subcutánea u otros métodos de administración de un agente activo a un animal, conocidos en la técnica farmacéutica.

Las cantidades de un compuesto divulgado, como se describe en el presente documento, en una formulación, pueden variar de acuerdo a factores tales como la patología, edad, sexo y peso del individuo. Los regímenes de dosificación pueden ajustarse para proporcionar la respuesta terapéutica óptima. Por ejemplo, puede administrarse un único bolo, pueden administrarse a lo largo del tiempo varias dosis divididas o la dosis puede reducirse o aumentarse de forma proporcional según indican las exigencias de la situación terapéutica. Es especialmente ventajoso formular composiciones parentales en formas farmacéuticas unitarias para facilitar la administración y la uniformidad de la dosificación. La fórmula farmacéutica unitaria, como se utiliza en el presente documento, se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para los sujetos mamíferos a tratar; conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de compuesto activo, calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el vehículo farmacéutico necesario.

La especificación para las formas farmacéuticas unitarias de la invención están estipuladas por, y dependen de forma directa de, (a) las características exclusivas del compuesto seleccionadas y el efecto terapéutico particular a conseguir y (b) las limitaciones inherentes a la técnica de preparación de tal compuesto activo para el tratamiento de la sensibilidad en individuos.

Las composiciones terapéuticas normalmente deben ser estériles y ser estables en las condiciones de fabricación y almacenamiento. La composición puede formularse como una solución, microemulsión, liposoma u otra estructura ordenada adecuada para una alta concentración del fármaco. El vehículo puede ser un disolvente o medio de dispersión que contenga, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido, y similares), y mezclas adecuadas de los mismos. La fluidez apropiada puede mantenerse, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula necesario en el caso de

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una dispersión y mediante el uso de tensioactivos. En muchos casos, será preferible incluir en la composición agentes isotónicos, por ejemplo azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol o cloruro de sodio. Puede lograrse la absorción prolongada de las composiciones inyectables incluyendo en la composición un agente que retarde la absorción, por ejemplo, sales de monoestearato y gelatina.

Los compuestos pueden administrarse en una formulación de liberación prolongada, por ejemplo en una composición que incluya un polímero de liberación lenta. Los compuestos pueden prepararse con vehículos que protejan al compuesto frente a la liberación rápida, tales como una formulación de liberación controlada, incluyendo implantes y sistemas de suministro microencapsulados. Pueden utilizarse polímeros biodegradables biocompatibles, tales como acetato de etilenvinilo, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres, ácido poliláctico y copolímeros poliláctico-poliglicólico (PLG). En general, los expertos en la materia conocen muchos métodos para la preparación de tales formulaciones.

Las soluciones inyectables estériles pueden prepararse incorporando el compuesto en la cantidad necesaria en un disolvente apropiado, a un ingrediente, o una combinación de los ingredientes enumerados anteriormente, según se necesite, seguido de esterilización por filtración. En general, las dispersiones se preparan incorporando el compuesto activo en el vehículo estéril que contiene un medio de dispersión básico y los otros ingredientes necesarios de los enumerados anteriormente. En el caso de los polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos preferentes de preparación son el secado al vacío y la liofilización, lo que produce un polvo del principio activo más cualquier ingrediente adicional deseado, a partir de una solución previamente filtrada en esterilidad de los mismos.

En conformidad con un aspecto alternativo de la invención, para potenciar la solubilidad del compuesto el mismo puede formularse con uno o más compuestos adicionales.

Métodos

Se divulga un compuesto de la invención para su uso en métodos para el tratamiento de una afección en un paciente que lo necesite, mediante la administración una dosis terapéuticamente eficaz de dicho compuesto. En algunas realizaciones, la afección puede ser una afección mental. Por ejemplo, puede tratarse una enfermedad mental. En otro aspecto, puede tratarse una afección del sistema nervioso. Por ejemplo, puede tratarse una afección que afecta al sistema nervioso central, el sistema nervioso periférico y/o al ojo. En algunas realizaciones, pueden tratarse enfermedades neurodegenerativas.

En algunas realizaciones, los métodos divulgados incluyen la administración de un compuesto para tratar pacientes que padecen autismo, ansiedad, depresión, trastorno bipolar, trastorno por déficit de atención, trastorno por déficit de atención e hiperactividad (TDAH), esquizofrenia, un trastorno psicótico, un síntoma psicótico, aislamiento social, trastorno obsesivo-compulsivo (TOC), fobia, síndrome de estrés postraumático, un trastorno de conducta, un trastorno del control de impulsos, un trastorno por abuso de sustancias (por ejemplo, un síntoma de abstinencia, adicción a opiáceos, adicción a la nicotina y adicción al etanol), un trastorno del sueño, un trastorno de la memoria (por ejemplo, un déficit o pérdida de la capacidad, o una capacidad reducida para elaborar nuevas memorias), un trastorno del aprendizaje, incontinencia urinaria, atrofia multisistémica, parálisis supranuclear progresiva, ataxia de Friedrich, síndrome de Down, síndrome del cromosoma X frágil, esclerosis tuberosa, atrofia olivopontocerebelosa, parálisis cerebral, neuritis óptica inducida por fármacos, retinopatía isquémica, retinopatía diabética, glaucoma, demencia, demencia asociada al SIDA, enfermedad de Alzheimer, corea de Huntington, espasticidad, mioclonia, espasmo muscular, síndrome de Tourette, epilepsia, isquemia cerebral, ictus, un tumor cerebral, lesión cerebral traumática, parada cardíaca, mielopatía, lesión de la médula espinal, neuropatía periférica, dolor neuropático agudo y dolor neuropático crónico.

En algunas realizaciones, se divulgan métodos para el tratamiento de un trastorno de la memoria asociado con el envejecimiento, la esquizofrenia, los trastornos del aprendizaje especiales, ataques epilépticos, convulsiones postictus, isquemia cerebral, hipoglucemia, parada cardíaca, epilepsia, migraña, demencia asociada al SIDA, corea de Huntington, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer en su fase inicial y enfermedad de Alzheimer.

En determinadas realizaciones, puede utilizarse un compuesto en los métodos para el tratamiento de la esquizofrenia. Por ejemplo, pueden tratarse utilizando los métodos y composiciones contemplados en el presente documento la esquizofrenia paranoide, la esquizofrenia desorganizada (es decir, esquizofrenia hebefrénica), la esquizofrenia catatónica, la esquizofrenia indiferenciada, la esquizofrenia residual, la depresión postesquizofrénica y la esquizofrenia simple. También pueden tratarse utilizando las composiciones contempladas en el presente documento los trastornos psicóticos tales como los trastornos psicoafectivos, los trastornos delirantes, los trastornos psicóticos breves, los trastornos psicóticos compartidos y los trastornos psicóticos con delirios o alucinaciones.

La esquizofrenia paranoide puede caracterizarse cuando están presentes delirios o alucinaciones auditivas, pero el trastorno del pensamiento, el comportamiento desorganizado o el aplanamiento afectivo no lo son. Los delirios puede ser persecutorios y/o de grandeza, pero además de estos también pueden estar presentes otros temas tales como los celos, la religiosidad o la somatización. La esquizofrenia desorganizada puede caracterizarse cuando están presentes

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También se divulgan en el presente documento métodos para el tratamiento de una afección en pacientes resistentes a tratamiento, por ejemplo, pacientes que padecen una afección mental o del sistema nervioso central que no responden y/o no ha respondido a tratamientos adecuados con al menos uno, o al menos dos, de otros compuestos o productos terapéuticos. Por ejemplo, se divulga en el presente documento un método para el tratamiento de la

5 depresión en un paciente resistente al tratamiento, que comprende a) identificar de forma opcional al paciente como resistente al tratamiento y b) administrar a dicho paciente una dosis eficaz de un compuesto.

En algunas realizaciones, se divulga un compuesto para su uso para el cuidado agudo de un paciente. Por ejemplo, se puede administrar a un paciente un compuesto para tratar un episodio particular (por ejemplo, un episodio grave) de 10 una afección contemplada en el presente documento.

También se contemplan en el presente documento politerapias que comprenden un compuesto en combinación con uno o más de otros agentes activos. Por ejemplo, puede combinarse un compuesto con uno o más antidepresivos, tales como antidepresivos tricíclicos, los IMAO, los ISRS y los inhibidores de recaptación doble o triple y/o los fármacos 15 ansiolíticos. Los fármacos ejemplares que pueden utilizarse en combinación con un compuesto incluyen Anafranil, Adapin, Aventyl, Elavil, Norpramin, Pamelor, Pertofrane, Sinequan, Surmontil, Tofranil, Vivactil, Parnate, Nardil, Marplan, Celexa, Lexapro, Luvox, Paxil, Prozac, Zoloft, Wellbutrin, Effexor, Remeron, Cymbalta, Desyrel (trazodona) y Ludiomill. En otro ejemplo, puede combinarse un compuesto con una medicación antipsicótica. Los ejemplos no limitativos de antipsicóticos incluyen butirofenonas, fenotiazinas, tioxantenos, clozapina, olanzapina, risperidona,

20 quetiapina, ziprasidona, amisulprida, asenapina, paliperidona, iloperida, zotepina, sertindol, lurasidona y aripiprazol. Debe entenderse que puede utilizarse combinaciones de un compuesto y de uno o más de los productos terapéuticos anteriores para el tratamiento de cualquier afección adecuada, y no se limitan a su uso como antidepresivos o antipsicóticos.

25 Ejemplos

La Tabla 1 siguiente muestra algunos compuestos ejemplares de la divulgación y proporciona características fisicoquímicas de los compuestos. Tabla 1.

Compuesto: Estructura Peso molecular (Da) cLogP tPSA

Compuesto A: 385 -4,42 179

Compuesto B: 525 -0,79 169,8

Compuesto C: 393 -3,47 163,7

Compuesto D: 447 -2,61 141

Compuesto: Estructura Peso molecular (Da) cLogP tPSA

Compuesto E: 418 -2,66 159,6

Compuesto F: 418 -3,36 159,6

Compuesto G: 428 -2,14 146,4

Compuesto H: 326 -3,44 133

Compuesto I: imagen13 380 -2,59 110,3

Compuesto J: 351 -2,63 128,9

Compuesto K: 351 -3,33 159,6

Compuesto: Estructura Peso molecular (Da) cLogP tPSA

Compuesto L: 361 -1,88 115,7

6S-FNL-6: 499,4388 -4,42387 179,29

6S-FNL-2: 460,4803 -0,65328 148,34

6S-FNL-4: imagen14 418,4436 -1,09441 142,27

6S-FNL-3: imagen15 326,3483 -2,60699 130,83

6S-FNL-5: imagen16 284,3116 -3,04811 124,76

Compuesto: Estructura Peso molecular (Da) cLogP tPSA

6S-FNL-24: 525,5569 0,786001 169,82

6S-FNL-8: imagen17 393,3977 -3,46511 163,75

6S-FNL-9: 447,4882 -2,61196 140,97

6S-FNL-12: 418,4072 -3,35707 159,58

6S-FNL-21: 428,4451 -2,14114 146,44

6S-FNL-7-F1, 6S-FNL-7-F2: 326,3483 -3,43817 133,04

Compuesto: Estructura Peso molecular (Da) cLogP tPSA

6S-FNL-10: 380,4387 -2,58502 110,26

6S-FNL-16: 351,3577 -2,63355 128,87

6S-FNL-14: 351,3577 -3,33013 128,87

6S-FNL-19: 361,3956 -1,88186 115,73

6S-FNL-25: 543,5474 0,643299 169,82

6S-FNL-26: 555,5829 0,943672 179,05

Compuesto: Estructura Peso molecular (Da) cLogP tPSA

6S-FNL-27: 539,5835 -0,27258 169,82

6S-FNL-28: 543,5474 0,643299 169,82

6S-FNL-29: 543,5474 0,643299 169,82

6S-FNL-30: 531,6046 0,396191 169,82

6S-FNL-31: 517,578 -0,84076 169,82

Compuesto: Estructura Peso molecular (Da) cLogP tPSA

6S-FNL-23: 384,4274 -1,76492 142,27

6S-FNL-22: 354,4014 -2,19465 133,04

6S-FNL-18: 409,4369 0,960294 138,1

6S-FNL-17: 379,4109 -1,39002 128,87

6S-FNL-11: imagen18 309,3211 -2,94007 120,59

Compuesto: Estructura Peso molecular (Da) cLogP tPSA

6S-FNL-15: 409,4369 -1,65688 138,1

6S-FNL-13: imagen19 379,4109 -2,08661 128,87

6S-FNL-20: 419,4748 -0,35934 124,96

6S-1: imagen20 485,5313 -2,93177 191,6

6S-3: 338,402 -2,19496 101,98

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CLEM 93,32 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6) : δ 4,33 -4,28 (m, 1H), 4,23-4,19 (m, 4H), 4,05-4,01 (m, 1H), 3,91-3,87 (m, 1H), 3,71-3,65 (m, 2H), 3,55-3,49 (m, 1H), 2,30-2,24 (m, 2H), 2,02-1,97 (m, 2H), 1,27 (t, J = 4,0 Hz, 3H), 1,15 (t, J = 5,5 Hz, 3H). CLEM m/z: 386,3 [M++1]

Síntesis de ácido (S)-1-((benciloxi)carbonil)pirrolidin-2-carboxilílico (Int A):

A una solución en agitación de L-prolina (250 g, 2,17 mol) en agua (1 l) se le añadió Na2CO3 (576 g, 5,43 mol) y se agitó durante 1 h. Después de enfriarse a 0 ºC, se añadió gota a gota cloroformiato de bencilo (al 50 % en PhCH3) (444 g, 2,61 mol) a la mezcla de reacción y se agitó de nuevo durante 1 h. La mezcla de reacción resultante se calentó a TA y se agitó adicionalmente durante 24 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la reacción se diluyó con agua (1 l) y éter (1,5 l). La capa acuosa separada se trató con PhCH3 (1,5 l) y se acidificó con HCl 6 N. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 1,5 l), los extractos orgánicos combinados se lavaron salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para proporcionar Int A (450 g, 84 %) en forma de un jarabe de color amarillo. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6) : δ 12,71 (s a, 1H), 7,37-7,26 (m, 5H), 5,07-4,99 (m, 2H), 4,25-4,15 (m, 1H), 3,45-3,34 (m, 2H), 2,25-2,14 (m, 1H), 1,94-1,79 (m, 3H) CLEM m/z: 250,4 [M++1]

Síntesis de 2-(clorocarbonil)pirrolidin-1-carboxilato de (S)-bencilo (Int-B)

A una solución en agitación de Int-A (2,5 g, 0,01 mol) en CH2Cl2 (50 ml) se le añadió SOCl2 (2,7 g, 0,02 mol) a 0 ºC y se agitó durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida para proporcionar Int-B en forma de un material en bruto. Este material se usó directamente para la siguiente etapa sin purificación adicional.

Síntesis de ácido (2S,3R)-2-((terc-butoxicarbonil) amino)-3-hidroxibutanoico (Int-C)

A una solución en agitación de ácido (2S,3R)-2-amino-3-hidroxibutanoico (MP-2) (30 g, 0,25 mol) en THF (150 ml) y agua (150 ml) se le añadió NaHCO3 (65 g, 0,75 mol), seguido de Boc-anhídrido (66 ml, 0,302 mol) a 0 ºC. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se extrajo con EtOAc (2 x 150 ml). La capa acuosa se acidificó usando HCl 2 N y después se extrajo con MeOH al 10 %/CH2Cl2. Los extractos orgánicos separados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío para proporcionar Int-C (30 g, 63 %). RMN 1H: (400 MHz, CDCl3): δ 5,92-5,70 (m, 2H), 5,55 (d, 1H), 4,42 (s a, 1H), 4,29 (d, 1H), 1,47 (s, 9H), 1,25 (d, 3H). CLEM m/z: 218 [M+-1]

Síntesis de 2-amino-3-hidroxibutanoato de (2S,3R)-metilo (Int-D)

A una solución en agitación de L-treonina (200 g, 1,68 mol) en metanol (1,2 l) se le añadió gota a gota SOCl2 (244 ml, 3,36 mol) a 0 ºC y se agitó durante 1 h. La mezcla de reacción resultante se sometió a reflujo durante 24 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se calentó a TA, se concentró al vacío y se decantó con n-hexano (2 x 50 ml). El residuo se disolvió en EtOH (1 l) y se neutralizó con Et3N (471 ml, 3,36 mol) y se agitó de nuevo durante 2 h. El sólido precipitado se retiró por filtración; el filtrado obtenido se concentró al vacío para proporcionar Int-D (195 g, 80 %). RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6) : δ 8,51 (s a, 3H), 4,13-4,10 (m, 1H), 3,91 (s a, 1H), 1,20 (d, 3H) CLEM m/z: 134,1 [M++1]

Síntesis de (2S,3R)-2-amino-3-hidroxibutanamida (Int-E)

Una solución de Int-D (190 g, 1,35 mol) en IPA (2 l) se recogió en un autoclave y se purgó con gas de NH3 (7-8 kg) y se agitó a 35 ºC durante 24 h. Después se retiró el gas de NH3 y la mezcla de reacción se concentró a presión reducida, se le añadió CH2Cl2 y se filtró. El sólido obtenido se sometió a reflujo en EtOH durante 1 h a 78 ºC. La masa de reacción se filtró en condiciones de calentamiento y se añadió n-hexano al filtrado y se agitó de nuevo durante 4 h más. El sólido precipitado obtenido se filtró y se secó al vacío para proporcionar Int-E (160 g, 47 %). RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6) : δ 7,38 (s a, 1H), 7,02 (s a, 1H), 4,66 (s a, 1H), 3,77-3,70 (m, 1H), 2,93 (d, 1H), 2,72 (m a, 1H), 1,05 (d, 3H) CLEM m/z: 119,1 [M++1] UPLC (pureza de ELSD): 99,9 %

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40 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7,90 (s, 1H), 7,36-7,29 (m, 5H), 5,10 (s, 2H), 3,53 (d, J = 4,5 Hz, 2H), 3,36-3,30 (m, 1H), 3,17, 3,13 (dd, J = 5,0 Hz, 5,0 Hz, 1H), 2,17-2,10 (m, 2H), 1,82-1,76 (m, 2H) CLEM m/z: 261 [M++1]

Síntesis de 2-(2-etoxi-2-oxoetil)-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octano-5-carboxilato de bencilo (4)

A una solución agitada de 3 (10,0 g, 38,46 mmol) en acetonitrilo (100 ml) se le añadieron Cs2CO3 (31,34 g, 96,19 mmol) y 2-bromoacetato de etilo (6,42 ml, 57,60 mmol) a TA y se agitó durante 16 h a TA. Los volátiles se evaporaron a presión reducida. El residuo se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml). La capa orgánica separada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El material en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con EtOAc al 80 %/Hexano para proporcionar 4 (10,0 g, 75 %) en forma de un jarabe de color pardo. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6) : δ 7,35 -7,30 (m, 5H), 5,06 (s, 2H), 4,21 (s, 1H), 4,18 (s, 1H), 4,13-4,10 (m, 2H), 3,69 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 3,47-3,44 (m, 3H), 2,16 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 1,87-1,80 (m, 2H), 1,21-1,14 (m, 3H) CLEM m/z: 261 [M++1]

Síntesis de ácido 2-(5-((benciloxi)carbonil)-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)acético (5)

A una solución agitada de 4 (6,0 g, 17,34 mmol) en THF: H2O (75 ml/40 ml) se le añadió LiOH.H2O (1,82 g, 43,33 mmol) a TA y se agitó durante 2 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), los volátiles se evaporaron a presión reducida. El residuo se diluyó con agua, se lavó con éter, la capa acuosa se acidificó a pH~2 usando HCl 2 N y se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Las capas orgánicas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida para proporcionar 5 (4,5 g, 88,2 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6) : δ 12,5 (s a, 1H), 7,35-7,30 (m, 5H), 5,06 (s, 2H), 4,21 (s, 1H), 4,18 (s, 1H), 3,69 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 3,47-3,44 (m, 3H), 2,16 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 1,87-1,80 (m, 2H) CLEM m/z: 319 [M++1]

Síntesis de 2-(2-(((2S,3R)-3-acetoxi-1-amino-1-oxobutan-2-il)amino)-2-oxoetil)-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octano5-carboxilato de 2-bencilo (6)

A una solución en agitación de 5 (10 g, 31,44 mmol) en DMF (120 ml) se le añadió N,N-diisopropiletilamina (14,48 ml, 78,6 mmol), Int-F (5,95 g, 37,7 mmol), seguido de HATU (14,33 g, 37,7 mmol) a 0 ºC y se agitaron a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con una solución saturada de NaHCO3. La capa orgánica separada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar un producto en bruto, que se purificó por cromatografía en columna con MeOH al 1 %/DCM para proporcionar 6 (5,5 g, 38,1 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6) : δ 7,97 -7,88 (m, 1H), 7,49-7,46 (m, 5H), 7,35 (s, 1H), 7,17 (s, 1H), 5,11 (s, 2H), 5,08-5,02 (m, 1H), 4,41 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,21-4,11 (m, 1H), 3,87-3,79 (m, 4H), 3,13 (s, 1H), 2,18-2,21 (m, 2H), 1,98 (s, 3H), 1,90-1,84 (m, 2H), 1,81-1,10 (m, 3H) CLEM m/z: 483,5 [M++Na].

Síntesis de acetato de (2R,3S)-4-amino-4-oxo-3-(2-(1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)acetamido)butan-2-ilo (7)

A una solución en agitación de 6 (5,5 g, 11,95 mmol) en metanol (50 ml) se le añadió Pd al 10 %/C al 50 % de humedad (2,0 g) y se agitó en una atmósfera de H2 (presión de globo) durante 4 h a TA. La mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de celite y se trituró con metanol (5 ml). El filtrado se concentró a presión reducida para dar 7 (3,80 g, 97,6 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,97 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 5,19-5,13 (m, 1H), 4,46-4,41 (m, 1H), 4,03-3,90 (m, 2H), 3,39-3,30 (m, 3H), 2,91 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 1,97 (s, 3H), 1,78-1,70 (m, 2H), 1,29-1,15 (m, 3H), 1,50-1,10 (m, 2H). CLEM m/z: 327,3 [M++1]

Síntesis de acetato de (2R,3S)-4-amino-3-(2-(5-(1-bencil-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-carbonil)-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)acetamido)-4-oxobutan-2-ilo (Compuesto B)

A una solución en agitación de Int-H2 (4,0 g, 18,43 mmol) en CH2Cl2 (20 ml), DMF (0,1 ml) se le añadió cloruro de oxalilo (3,34 ml, 36,86 mmol) a 0 ºC. La mezcla de reacción se calentó a TA y se agitó durante 2 h. Los volátiles se evaporaron a presión reducida en presencia de una atmósfera de N2 para proporcionar cloruro de ácido. A una solución agitada del cloruro de ácido en DCM (40 ml) se le añadió d 7 (3,8 g, 11,65 mmol), N,N-diisopropiletilamina (6,44 ml, 37,04 mmol) a 0 ºC. La mezcla de reacción resultante se agitó a TA durante 2 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (30 ml) y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 30 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con NaHCO3 (2 x 25 ml). Los extractos orgánicos separados se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida para dar un producto en bruto, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con MeOH al 2 %/CH2Cl2 para proporcionar el Compuesto B

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(2,6 g, 42,5 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7,87, 7,89 (dd, J = 8,5 Hz, J = 8,5 Hz, 1H), 7,47 (d, J = 11,0 Hz, 2H), 7,38-7,31 (m, 2H), 7,17 (t, 3H), 5,63 (s, 2H), 5,20-5,16 (m, 1H), 4,43-4,41 (m, 1H), 4,24-4,14 (m, 1H), 4,02 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 3,84 (s, 3H), 3,38-3,33 (m, 1H), 2,20-2,14 (m, 2H), 1,97 (s, 3H), 1,92-1,80 (m, 5H), 1,16 (t, J = 7,5 Hz, 3H) CLEM m/z: 526,6 [M++1]; HPLC: 51,34 % y 46,08 % (enantiómeros)

Síntesis de ácido (S)-1-((benciloxi)carbonil)pirrolidin-2-carboxílico (Int-A)

A una solución en agitación de L-prolina (250 g, 2,17 mol) en agua (1 l) se le añadió Na2CO3 (576 g, 5,43 mol) y se agitó durante 1 h. Después de enfriarse a 0 ºC, se añadió gota a gota cloroformiato de bencilo (al 50 % en PhCH3) (444 g, 2,61mol) a la mezcla de reacción y se agitó de nuevo durante 1 h. La mezcla de reacción resultante se calentó a TA y se agitó adicionalmente durante 24 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la reacción se diluyó con agua (1 l) y éter (1,5 l). La capa acuosa separada se trató con PhCH3 (1,5 l) y se acidificó usando HCl 6 N. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 1,5 l), los extractos orgánicos combinados se lavaron salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para proporcionar Int-A (450 g, 84 %) en forma de un jarabe de color amarillo claro. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6) : δ 12,71 (s a, 1H), 7,37-7,26 (m, 5H), 5,07-4,99 (m, 2H), 4,25-4,15 (m, 1H), 3,45-3,34 (m, 2H), 2,25-2,14 (m, 1H), 1,94-1,79 (m, 3H). CLEM m/z: 250,4 [M++1]

Síntesis de 2-(clorocarbonil)pirrolidin-1-carboxilato de (S)-bencilo (Int-B)

Síntesis de ácido (2S,3R)-2-(((benciloxi)carbonil)amino)-3-hidroxibutanoico (Int-C)

A una solución en agitación de NaHCO3 (529 g, 6,30 mol) en agua (1 l) se le añadió L-treonina (MP-2) (250 g, 2,10 mol) a TA y se agitó durante 30 min. La mezcla de reacción se enfrió a 0 ºC. Se añadió gota a gota Cbz-Cl (850 ml, 2,52 mol, 50 % en PhCH3) y se agitó durante 1 h. La mezcla de reacción se calentó a TA y se agitó de nuevo durante 28 h. A esta se le añadió MTBE (1 l) y se agitó durante 20 min. La capa acuosa separada en tolueno se agitó durante 20 min. La capa acuosa se acidificó con HCl 1 N (pH~1-2) y se extrajo con EtOAc (3 x 1,5 l). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El material en bruto se agitó con diciclohexilamina (819 ml, 4,20 mol) durante 4 h para obtener un sólido de color blanco, se filtró y se secó. El sólido obtenido se sometió a reflujo con EtOAc (1,5 l) durante 1 h y después se filtró. El material sólido se disolvió en agua (1 l) y se acidificó con H2SO4 dil. y se agitó de nuevo durante 30 min. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 1 l). La capa orgánica separada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El material en bruto obtenido se trituró con n-hexano para proporcionar Int-C (230 g, 43 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,55 (m a, 1H), 7,37-7,30 (m, 5H), 6,94 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,05 (s, 2H), 4,08-3,94 (m, 2H), 1,02 (d, J = 6,4 Hz, 3H) pureza de ELSD: 84,66 %

Síntesis de ((2S,3R)-1-amino-3-hidroxi-1-oxobutan-2-il)carbamato de bencilo (Int-D)

A una solución de Int-C (25 g, 98,8 mmol) en DCM (250 ml) se le añadió cloruro de amonio (7,86 g, 147 mmol), HATU (45 g, 118 mmol), N,N-diisopropiletilamina (45,5 ml, 261 mmol) y se agitó a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la capa orgánica se lavó con una solución saturada de bicarbonato sódico (1 x 150 ml), seguido de HCl 2 N (1 x 100 ml). Después de separar la capa orgánica, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El material en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna eluyendo con MeOH al 2 %/DCM para proporcionar Int-D (16 g, 66 %) en forma de un sólido de color blanquecino. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6) : δ 7,36 -7,32 (m, 5H), 7,04 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 5,03 (s, 2H), 4,75 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 3,95-3,92 (m, 1H), 3,86-3,83 (m, 1H), 1,27-1,23 (m, 1H), 1,04 (d, J = 6,5 Hz, 3H) CLEM m/z: 253,3 [M++1]

Síntesis de acetato de (2R,3S)-4-amino-3-(((benciloxi)carbonil)amino)-4-oxobutan-2-ilo (Int-E)

A una solución en agitación de Int-D (16 g, 63,4 mmol) en CH2Cl2 (250 ml) se le añadieron Et3N (10,5 ml, 76,0 mmol) y DMAP (773 mg, 6,34 mmol), Ac2O (7,12 ml, 76,0 mmol) a 0 ºC y se agitó a TA durante 2 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la capa orgánica se lavó con agua (1 x 150 ml), seguido de lavado con salmuera (1 x 100 ml). Después de separar la capa orgánica, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El material en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna eluyendo con MeOH al 1 %/DCM para proporcionar Int-E (15 g, 80,3 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,45 (s, 1H), 7,35-7,30 (m, 5H), 7,24 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,17 (s, 1H), 5,09-5,05 (m, 1H), 5,01 (s, 2H), 4,14-4,10 (m, 1H), 1,93 (s, 3H), 1,14 (d, J = 6,4 Hz, 3H)

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CLEM m/z: 295,1 [M++1]

Síntesis de acetato de (2R,3S)-3,4-diamino-4-oxobutan-2-ilo (Int-F)

A una solución en agitación de Int-E (15 g, 51 mmol) en metanol (500 ml) se le añadió Pd al 10 %/C al 50 % de humedad (4 g) y se agitó en una atmósfera de H2 (presión de globo) a TA durante 4 h. La mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de celite y se trituró con metanol (50 ml). El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar Int-F (7,5 g, 91,9 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,59 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,16 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 4,78 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,10 (m, 1H), 4,00-3,96 (m, 1H), 1,89 (s, 3H), 1,01 (d, J = 6,4 Hz, 3H). CLEM m/z: 161,5 [M++1]

Síntesis de (azidometil)benceno (MP-4)

A una solución en agitación de bromuro de bencilo (30 g, 175 mmol) en dimetilformamida (300 ml) se le añadió azida sódica (45,6 g, 701 mmol) a TA en una atmósfera inerte. La mezcla de reacción resultante se agitó a 70 ºC durante 16

h. Después de la finalización de la reacción (supervisado por TLC), la mezcla de reacción se dejó a TA; los volátiles se diluyeron con agua (300 ml) y éter (200 ml). La capa orgánica separada se lavó con (3 x 200 ml) de agua enfriada. La capa orgánica separada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar el compuesto MP-4 (18 g, en bruto) en forma de un sólido de color blanquecino. RMN 1H: (400 MHz, CDCl3): δ 7,40-7,29 (m, 5H), 4,32 (s, 2H).

Síntesis de 1-bencil-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-carboxilato de etilo (Int-G1 e Int-G2)

A una solución en agitación de MP-3 (8,0 g, 71,3 mmol) en tolueno (80 ml) se le añadió MP4 (12,0 g, 107 mmol) a TA en una atmósfera inerte. La mezcla de reacción resultante se calentó a 100 ºC y se agitó durante 16 h. La mezcla de reacción se dejó a TA; los volátiles se evaporaron a presión reducida, el residuo en bruto se purificó por cromatografía en columna eluyendo con EtOAc al 40 %/hexano para proporcionar dos isómeros Int-G1 (8 g) e Int-G2 (8,2 g). RMN 1H (Int-G1): (400 MHz, CDCl3): δ 7,30-7,26 (m, 5H), 5,86 (s, 2H), 4,34 (c, J = 7,2 Hz, 2H), 2,53 (s, 3H), 1,33 (t, J = 7,2 Hz, 3H) CLEM m/z: 246,3 [M++1]. RMN 1H (Int-G2): (400 MHz, CDCl3): δ 7,36-7,31 (m, 3H), 7,16 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 5,53 (s, 2H), 4,43 (c, J = 7,2 Hz, 2H), 2,45 (s, 3H), 1,41 (t, J = 7,2 Hz, 3H) CLEM m/z: 246,3 [M++1]

Síntesis de ácido 1-bencil-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-carboxílico (Int-H2)

A una solución en agitación del compuesto Int-G2 (8,2 g, 33,4 mmol) en THF/H2O (82 ml/82 ml, 1:1) se le añadió LiOH.H2O (4,2 g, 0,40 mmol) a TA y se agitó durante 16 h. Después de la finalización de la reacción (según TLC), los volátiles se evaporaron a presión reducida. El residuo se acidificó con HCl acuoso 2 N y el sólido precipitado se filtró y se lavó con agua (25 ml), se secó a presión reducida para proporcionar el compuesto Int-H2 (7,0 g, 97,2 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H (H2): (400 MHz, DMSO-d6) : δ 13,01 (s a, 1H), 7,40-7,32 (m, 5H), 5,63 (s, 2H), 2,45 (s, 3H). CLEM m/z: 218,3 [M++1].

Ejemplo 3 -Síntesis del Compuesto C

Esquema 3.

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5 Síntesis de 1,3,5-tris(4-metoxibencil)-1,3,5-triazinano (1)

A una solución en agitación de (4-metoxifenil) MP de metanamina (200 g, 1,46 mol) en EtOH (600 ml) a temperatura ambiente se le añadió gota a gota formaldehído (ac. al 33 %, 105 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura

10 ambiente durante 1 h. Después del consumo del material de partida (según se determinó por TLC), la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (100 ml) y se lavó con agua (100 ml), seguido de salmuera. La capa orgánica separada se concentró a presión reducida para obtener un material en bruto; que finalmente se lavó con n-hexano para proporcionar 1 (200 g, 30,6 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7,18 (d, 6H), 6,84 (d, 6H), 3,73 (s, 9H), 3,50 (s, 6H), 3,29 (s, 6H).

15 Síntesis de 2-(clorocarbonil)pirrolidin-1-carboxilato de bencilo (Int-B)

A una solución en agitación de Int-A (100 g, 0,40 mol) en CH2Cl2 (500 ml) se le añadió una cantidad catalítica de DMF (1 ml) y la mezcla de reacción se enfrió a 0 ºC. A esta se le añadió gota a gota cloruro de oxalilo (112,3 ml, 0,60 mol) y

20 la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para proporcionar Int-B (100 g) como un material en bruto. Este material se usó directamente para la siguiente etapa sin purificación adicional.

Síntesis de 2-(4-metoxibencil)-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octano-5-carboxilato de bencilo (2)

25 A una solución en agitación de Int-B (100 g, 0,37 mol) en CH2Cl2 seco (500 ml) enfriada a -40 ºC se le añadió gota a gota Et3N (210,2 ml, 1,50 mol). La mezcla de reacción se agitó a -40 ºC durante 45 min. A esta, se le añadió gota a gota una mezcla del compuesto 1 (50 g, 0,12 mol) en CH2Cl2 (150 ml) y BF3·OEt2 (47,6 g, 0,33 mol) a -40 ºC. La mezcla de reacción resultante se dejó en agitación a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida

30 (según TLC), la mezcla de reacción se lavó con una solución saturada de NaHCO3, seguido de salmuera. La capa orgánica separada se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El material en bruto se disolvió en EtOAc y se mantuvo en el refrigerador para cristalización. Los cristales obtenidos se filtraron y se lavaron con EtOAc frío y se secaron a presión reducida para proporcionar 2 (82 g, 58 %) en forma de un sólido cristalino de color blanco. RMN 1H: (400 MHz, CDCl3): δ 7,35 (d, 5H), 7,20 (d, 1H), 7,00 (d, 1H), 6,85 (d, 1H), 6,75 (d, 1H), 5,15-5,10 (m, 2H), 4,29

35 (d, 1H), 3,79 (d, 3H), 3,59 (d, 1H), 3,57-3,49 (m, 2H), 3,10 (dd, 1H), 2,41-2,30 (m, 1H), 2,09-2,00 (m, 2H), 1,70-1,65 (m, 1H), 1,37 (t, 1H). CLEM (m/z): 381 [M++1]

Síntesis de 1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octano-5-carboxilato de bencilo (3)

40 Una solución en agitación de 2 (60 g, 0,16 mol) en MeCN (200 ml) y H2O (30 ml) se enfrió a 0 ºC y se añadió una solución de CAN (86,5 g, 0,16 mol) en H2O (30 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La masa resultante se vertió en agua enfriada con hielo y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 75 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO3 saturado, seguido de salmuera, se secaron sobre Na2SO4

45 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para obtener un material en bruto. El material obtenido se

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purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con EtOAc al 70 %/n-hexano; finalmente, el material obtenido se trituró con EtOAc al 10 %/n-hexano para proporcionar 3 (15 g, 36,5 %). RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,99 (d, 1H), 7,42-7,30 (m, 5H), 5,19-5,00 (m, 2H), 3,55 (d, 1H), 3,50-3,32 (m, 2H), 3,19 (dd, 1H), 2,18-2,00 (m, 2H), 1,91-1,79 (m, 2H) CLEM (m/z): 261 [M++1]

A una solución agitada de 3 (5 g, 19,23 mmol) en acetonitrilo (100 ml) se le añadió Cs2CO3 (8,1 g, 24,99 mmol) y 2-bromoacetato de etilo (3,2 ml, 28,84 mmol) a TA y se continuó agitando durante 10 h a TA. Los volátiles se evaporaron a presión reducida. El residuo se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). La capa orgánica separada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El material en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con EtOAc al 20 %/n-hexano para proporcionar 4 (4,4 g, 66 %) en forma de un jarabe. RMN 1H: (500 MHz, CDCl3): δ 7,38 (d, 5H), 5,19-5,04 (m, 2H), 4,49-3,17 (m, 8H), 2,47-2,39 (m, 1H), 2,25-2,21 (m, 1H). 2,05-2,01 (m, 1H), 1,95-1,92 (m, 1H), 1,30-1,25 (m, 3H). CLEM (m/z): 345 [M++1]

Síntesis de ácido 2-(5-((benziloxi)carbonil)-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)acético (5)

A una solución agitada de 4 (0,2 g, 0,63 mmol) en THF: H2O (6 ml, 5:1) se le añadió LiOH.H2O (66 mg, 1,57 mmol) a TA y se agitó durante 2 h. Después del consumo completo del material de partida (según TLC), los volátiles se evaporaron a presión reducida. El residuo se diluyó con agua, se lavó con éter, la capa acuosa se acidificó a pH~2 usando HCl 2 N y se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Las capas orgánicas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida para proporcionar 5 (0,1 g). RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7,41 (d, 5H), 5,07-5,04 (m, 2H), 4,49-3,17 (m, 8H), 2,21-2,09 (m, 2H), 1,95-1,92 (m, 2H), CLEM (m/z): 319,4 [M++1]

Síntesis de 2-amino-3-hidroxibutanoato de (2S,3R)-metilo (Int-D)

A una solución en agitación de ácido (2S,3R)-2-amino-3-hidroxibutanoico (200 g, 1,68 mol) en metanol (1,2 l) se le añadió gota a gota SOCl2 (244 ml, 3,36 mol) a 0 ºC y se agitó durante 1 h. La mezcla de reacción resultante se sometió a reflujo durante 24 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se calentó a TA y se concentró a presión reducida y se lavó con n-hexano (2 x 50 ml). El residuo se disolvió en EtOH (1 l) y se neutralizó con Et3N (471 ml, 3,36 mol) y se agitó de nuevo durante 2 h. El sólido precipitado se retiró por filtración, y el filtrado obtenido se concentró a presión reducida para proporcionar Int-D (195 g, 80 %). RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6) : δ 8,51 (s a, 3H), 4,13-4,10 (m, 1H), 3,91 (s a, 1H), 1,20 (d, 3H). CLEM (m/z): 134,1 [M++1]

Síntesis de (2S,3R)-2-amino-3-hidroxibutanamida (Int-E)

Una solución de Int-D (190 g, 1,35 mol) en IPA (2 l) se recogió en un autoclave y se purgó con gas de NH3 (7-8 kg) y se agitó a 35 ºC durante 24 h. Después se retiró el gas de NH3 y la mezcla de reacción se concentró a presión reducida, se le añadió CH2Cl2 y se filtró. El sólido obtenido se sometió a reflujo en EtOH durante 1 h a 78 ºC. La masa de reacción se filtró en condiciones de calentamiento y se añadió n-hexano al filtrado y se agitó de nuevo durante 4 h más. El sólido precipitado se filtró y se secó a presión reducida para proporcionar Int-E (160 g, 47 %). RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6) : δ 7,38 (s a, 1H), 7,02 (s a, 1H), 4,66 (s a, 1H), 3,77-3,70 (m, 1H), 2,93 (d, 1H), 2,72 (m a, 1H), 1,05 (d, 3H). CLEM (m/z): 119,1 [M++1] UPLC (pureza de ELSD): 99,9 %

Síntesis de 2-(2-(((2S,3R)-1-amino-3-hidroxi-1-oxobutan-2-il) amino)-2-oxoetil)-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octano5-carboxilato de bencilo (6)

A una solución en agitación de 5 (1 g, 3,13 mmol) en CH2Cl2 (50 ml) se le añadió HATU (1,4 g, 3,70 mmol), seguido de DIPEA (1,5 ml, 7,82 mmol) e Int-E (443 mg, 3,76 mmol) a 0 ºC. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la reacción se interrumpió con agua y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 100 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó por cromatografía en columna para proporcionar 6 (0,6 g, 46 %). RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6) : δ 7,82 -7,65 (m, 1H), 7,41-7,38 (m, 5H), 7,27 (d, 1H), 7,12 (d, 1H), 5,10-5,01 (m, 2H), 4,89-4,85 (m, 1H), 4,25-3,99 (m, 3H), 3,94-3,90 (m, 1H), 3,74-3,69 (m, 1H), 3,52-3,45 (m, 2H), 2,22-2,09 (m, 2H), 1,92-1,79 (m, 2H), 1,27-1,25 (m, 1H), 1,09-1,01 (m, 3H). CLEM (m/z): 419,3 [M++1]

Síntesis de (2S,3R)-3-hidroxi-2-(2-(1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)acetamido)butanamida (7)

A una solución en agitación de 6 (0,6 g, 1,43 mmol) en CH3OH (20 ml) se le añadió Pd/C (0,15 g) y se agitó en una atmósfera de H2 a TA durante 6 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se

5 filtró a través de un lecho de celite y se lavó con MeOH. El filtrado obtenido se concentró a presión reducida para proporcionar 7 (0,3 g, 74 %). CLEM (m/z): 339,3 [M++1]

Síntesis de ácido 1-metil-1H-1,2,4-triazol-5-carboxílico (Int-C)

10 Una solución de MP 1 de 1-metil-1H-1,2,4-triazol (1 g, 12,0 mmol) en THF seco (10 ml) se enfrió a -78 ºC en una atmósfera de N2 y se añadió lentamente n-BuLi (7,5 ml, 12,0 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 1 h, la mezcla de reacción se inactivó con hielo seco y se agitó durante 30 min y después se diluyó con agua y EtOAc (10 ml). La capa orgánica separada se concentró a presión reducida para proporcionar Int-C (0,8 g, 53 %).

15 RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7,80 (s, 1H), 4,09 (s, 4H). CLEM (m/z): 128,1 [M++1]

Síntesis de (2S,3R)-3-hidroxi-2-(2-(5-(1-metil-1H-1,2,4-triazol-5-carbonil)-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan2-il)acetamido)butanamida (Compuesto C)

20 A una solución en agitación de 7 (0,25 g, 0,88 mmol) en CH2Cl2 (20 ml) se le añadió HOBt (178 mg, 1,32 mmol), EDCI.HCl (0,2 g, 1,00 mmol), seguido de DIPEA (0,4 ml, 2,20 mmol) e Int-C (134 mg, 1,05 mmol) a 0 ºC. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para obtener un producto en bruto. Este material se purificó por cromatografía en

25 columna, seguido de purificación por HPLC prep. para proporcionar el Compuesto C (0,07 g, 21 %). RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 8,09 (s, 1H), 7,89 (t, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,12 (t, 1H), 4,93 (s, 1H), 4,19-4,15 (m, 2H), 4,03 (s, 3H), 3,96-3,91 (m, 4H), 3,44 (d, 1H), 2,25-2,20 (m, 3H), 1,97-1,91 (m, 2H), 1,07 (s, 3H). CLEM (m/z): 394,2 [M++1] Pureza de HPLC: 93 %

30 Ejemplo 4 -Síntesis del Compuesto D

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Síntesis de 1,3,5-tris (4-metoxibencil)-1,3,5-triazinano (1)

A una solución en agitación de (4-metoxifenil) MP de metanamina (200 g, 1,46mol) en EtOH (600 ml) a temperatura ambiente se le añadió gota a gota formaldehído (ac. al 33 %, 105 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (100 ml) y se lavó con agua (100 ml), seguido de salmuera. La capa orgánica separada se concentró a presión reducida para obtener un producto en bruto, que finalmente se lavó con n-hexano para proporcionar 1 (200 g, 30,6 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7,18 (d, 6H), 6,84 (d, 6H), 3,73 (s, 9H), 3,50 (s, 6H), 3,29 (s, 6H).

Síntesis de 2-(clorocarbonil)pirrolidin-1-carboxilato de bencilo (Int-B)

A una solución en agitación de Int-A (100 g, 0,40 mol) en CH2Cl2 (500 ml) se le añadió una cantidad catalítica de DMF (1 ml) y la mezcla de reacción se enfrió a 0 ºC. A esta se le añadió gota a gota cloruro de oxalilo (112,3 ml, 0,60 mol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para proporcionar Int-B (100 g). Este material se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional.

A una solución en agitación de Int-B (100 g, 0,37 mol) en CH2Cl2 seco (500 ml) enfriada a -40 ºC se le añadió gota a gota Et3N (210,2 ml, 1,50 mol). La mezcla de reacción se agitó a -40 ºC durante 45 min. Una mezcla de 1 (50 g, 0,12 mol) en CH2Cl2 (150 ml) y BF3OEt2 (47,6 g, 0,33 mol) se añadió gota a gota -40 ºC. La mezcla de reacción resultante se dejó en agitación a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según se determinó por TLC), la mezcla de reacción se lavó con una solución saturada de NaHCO3, seguido de salmuera. La capa orgánica separada se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El material en bruto se disolvió en EtOAc y se mantuvo en el refrigerador para cristalización. Los cristales obtenidos se filtraron y se lavaron con EtOAc frío y se secaron a presión reducida para proporcionar 2 (82 g, 58 %) en forma de un sólido cristalino de color blanco. RMN 1H: (400 MHz, CDCl3): δ 7,35 (d, 5H), 7,20 (d, 1H), 7,00 (d, 1H), 6,85 (d, 1H), 6,75 (d, 1H), 5,15-5,10 (m, 2H), 4,29 (d, 1H), 3,79 (d, 3H), 3,59 (d, 1H), 3,57-3,49 (m, 2H), 3,10 (dd, 1H), 2,41-2,30 (m, 1H), 2,09-2,00 (m, 2H), 1,70-1,65 (m, 1H), 1,37 (t, 1H). CLEM (m/z): 381 [M++1]

Síntesis de 1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octano-5-carboxilato de bencilo (3)

Una solución en agitación de 2 (60 g, 0,16 mol) en MeCN (200 ml) y H2O (30 ml) se enfrió a 0 ºC y se añadió una solución de CAN (86,5 g, 0,16 mol) en H2O (30 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La masa resultante se vertió en agua enfriada con hielo y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 75 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO3 saturado, seguido de salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para obtener un material en bruto. El material obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con EtOAc al 70 %/n-hexano. El material purificado se trituró con EtOAc al 10 %/n-hexano para proporcionar 3 (15 g, 36,5 %). RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,99 (d, 1H), 7,42-7,30 (m, 5H), 5,19-5,00 (m, 2H), 3,55 (d, 1H), 3,50-3,32 (m, 2H), 3,19 (dd, 1H), 2,18-2,00 (m, 2H), 1,91-1,79 (m, 2H) CLEM (m/z): 261 [M++1]

A una solución agitada de 3 (5 g, 19,23 mmol) en acetonitrilo (100 ml) se le añadió Cs2CO3 (8,1 g, 24,99 mmol) y 2-bromoacetato de etilo (3,2 ml, 28,84 mmol) a TA y se continuó agitando durante 10 h a TA. Los volátiles se evaporaron a presión reducida. El residuo se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). La capa orgánica separada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El material en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con EtOAc al 20 %/n-hexano para proporcionar 4 (4,4 g, 66 %) en forma de un jarabe. RMN 1H: (500 MHz, CDCl3): δ 7,38 (d, 5H), 5,19-5,04 (m, 2H), 4,49-3,17 (m, 8H), 2,47-2,39 (m, 1H), 2,25-2,21 (m, 1H), 2,05-2,01 (m, 1H), 1,95-1,92 (m, 1H), 1,30-1,25 (m, 3H). CLEM (m/z): 345 [M++1]

A una solución agitada de 4 (0,2 g, 0,63 mmol) en THF: H2O (6 ml, 5:1) se le añadió LiOH.H2O (66 mg, 1,57 mmol) a TA y se agitó durante 2 h. Después del consumo completo del material de partida (según TLC), los volátiles se evaporaron a presión reducida. El residuo se diluyó con agua, se lavó con éter, la capa acuosa se acidificó a pH~2 usando HCl 2 N y se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Las capas orgánicas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida para proporcionar 5 (0,1 g). RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7,41 (d, 5H), 5,07-5,04 (m, 2H), 4,49-3,17 (m, 8H), 2,21-2,09 (m, 2H), 1,95-1,92 (m,

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2H), CLEM (m/z): 319,4 [M++1]

Síntesis de ácido (2S,3R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-hidroxibutanoico (Int-D)

A una solución en agitación de ácido (2S,3R)-2-amino-3-hidroxibutanoico (MP 2) (10 g, 83,9 mmol) en 1,4-dioxano/agua (100 ml, 1: 1)) se le añadió NaHCO3 (21,1 g, 0,25 mol), seguido de Boc-anhídrido (21,9 ml, 0,101 mol) a 0 ºC. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con EtOAc. La capa acuosa se acidificó usando una solución de ácido cítrico (pH ~3-4) y después se extrajo con CH2Cl2 (2 x 150 ml). Los extractos orgánicos separados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para proporcionar Int-D (15 g, en bruto). Este material se usó directamente sin purificación adicional.

Síntesis de ((2S,3R)-3-hidroxi-1-oxo-1-(pirrolidin-1-il)butan-2-il)carbamato de terc-butilo (Int-E)

A una solución en agitación de Int-D (5 g, 22,8 mmol) en CH2Cl2 (50 ml) se le añadió EDCI.HCI (5,2 g, 27,3 mmol), HOBt (4,6 g, 34,2 mmol), seguido de DIPEA (10,5 ml, 57 mmol) y pirrolidina (1,945 g, 27,3 mmol) en una atmósfera de N2 a 0 ºC. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con DCM y se lavó con agua, seguido de NaHCO3 saturado y ácido cítrico. La capa orgánica separada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para obtener un producto en bruto. Este material se purificó por cromatografía en columna, eluyendo con MeOH al 2 %/DCM para proporcionar Int-E (3 g, 48 %). RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 6,41 (d, 1H), 4,71 (d, 1H), 4,15 (t, 1H), 3,94 (c, 1H), 3,63-3,42 (m, 2H), 3,24 (c, 1H), 1,90-1,81 (m, 4H), 1,38 (s, 9H), 1,04 (s, 3H). CLEM (m/z): 273,2 [M++1]

Síntesis de (2S,3R)-2-amino-3-hidroxi-1-(pirrolidin-1-il)butan-1-ona (Int-F)

A una solución agitada de Int-E (3 g, 11,0 mmol) en DCM (10 ml) se le añadió éter-HCl (20 ml) a 0 ºC en una atmósfera de N2. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 4 h. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida para obtener un producto en bruto, que se lavó con éter para proporcionar Int-F (2,0 g, 87 %). RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6) : δ 8,19 (s a, 3H), 3,98-3,91 (m, 2H), 3,62-3,59 (m, 1H), 3,49-3,42 (m, 1H), 3,39-3,35 (m, 2H), 1,96-1,90 (m, 4H), 1,17 (d, 3H). CLEM (m/z): 173,3 [M++1]

Síntesis de 2-(2-(((2S,3R)-3-hidroxi-1-oxo-1-(pirrolidin-1-il) butan-2-il) amino)-2-oxoetil)-1-oxo-2,5-diazaespiro [3,4] octano-5-carboxilato de bencilo (6)

A una solución en agitación de 5 (1 g, 3,14 mmol) en CH2Cl2 (50 ml) se le añadió EDCI (719 mg, 3,76 mmol), HOBt (635 mg, 4,71 mmol), seguido de DIPEA (2,8 ml, 15,7 mmol) y C (784 mg, 3,77 mmol) y a 0 ºC. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la reacción se interrumpió con agua y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 50 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó por cromatografía en columna para proporcionar 6 (0,8 g, 54 %). CLEM (m/z): 473,4 [M++1]

Síntesis de N-((2S,3R)-3-hidroxi-1-oxo-1-(pirrolidin-1-il) butan-2-il)-2-(1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)acetamida

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A una solución en agitación de 6 (0,8 g, 1,69 mmol) en CH3OH (60 ml) se le añadió Pd/C (0,4 g) en una atmósfera de N2. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 4 h en una atmósfera de H2. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de celite y se lavó con MeOH. El filtrado obtenido se concentró a presión reducida para proporcionar 7 (0,5 g) en forma de un material en bruto. Este material se usó directamente para la siguiente etapa sin purificación adicional. CLEM (m/z): 339,3 [M++1]

Síntesis de ácido 1-metil-1H-1,2,4-triazol-5-carboxílico (Int-C)

Una solución de MP 1 de 1-metil-1H-1,2,4-triazol (1 g, 12,0 mmol) en THF seco (10 ml) se enfrió a -78 ºC y se añadió lentamente n-BuLi (7,5 ml, 12,0 mmol) en una atmósfera de N2. La mezcla de reacción se agitó durante 1 h, se inactivó con hielo seco y se agitó durante 30 min y después se diluyó con agua y EtOAc (10 ml). La capa orgánica separada se concentró a presión reducida para proporcionar Int-C (0,8 g, 53 %). RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7,80 (s, 1H), 4,09 (s, 3H). CLEM (m/z): 128,1 [M++1]

Síntesis de N-((2S,3R)-3-hidroxi-1-oxo-1-(pirrolidin-1-il)butan-2-il)-2-(5-(1-metil-1H-1,2,4-triazol-5-carbonil)1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4] octan-2-il)acetamida (Compuesto D)

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A una solución en agitación de 7 (0,315 g, 2,48 mmol) en CH2Cl2 (60 ml) se le añadió EDCI.HCl (336 mg, 1,76 mmol), HOBt (297 mg, 2,20 mmol), DIPEA (0,67 ml, 3,67 mmol) e Int-C (0,5 g, 1,47 mmol) a 0 ºC. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con DCM y se lavó con agua. La capa orgánica separada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para obtener un producto en bruto. Este material se purificó por cromatografía en columna, seguido de purificación por HPLC prep. para proporcionar el Compuesto D (80 mg, 12 %). RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,09 (s, 1H), 4,55-4,51 (m, 1H), 4,08 (d, 2H), 3,97 (s, 2H), 3,87-3,84 (m, 3H), 3,70-3,55 (m, 2H), 3,45 (t, 1H), 3,35-3,31 (m, 2H), 2,75 (s, 3H), 2,27-2,24 (m, 2H), 1,98-1,92 (m, 4H), 1,85-1,84 (m, 2H), 1,19 (d, 3H), CLEM (m/z): 448 [M++1] Pureza de HPLC: 94 %

Ejemplo 5 -Síntesis del Compuesto F

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Síntesis de 1,3,5-tris (4-metoxibencil)-1,3,5-triazinano (1)

A una solución en agitación de MP (200 g, 1,46 mol) en EtOH (600 ml) a temperatura ambiente se le añadió gota a gota formaldehído (ac. al 33 %, 105 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (100 ml) y se lavó con agua (100 ml), seguido de salmuera. La capa orgánica separada se concentró a presión reducida para obtener un material en bruto; que se trituró con n-hexano para proporcionar 1 (200 g, 30,6 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7,18 (d, J = 8,0 Hz, 6H), 6,81 (d, J = 8,0 Hz, 6H), 3,71 (s, 9H), 3,50 (s, 6H), 3,29 (s, 6H).

A una solución en agitación de 1 (45 g, 100 mmol) en CH2Cl2 (150 ml) se le añadió gota a gota BF3.OEt2 (37 ml, 301 mmol) a -40 ºC. A la solución en agitación anterior se le añadió gota a gota Int-B (95 g, 342 mmol) en CH2Cl2 seco (500 ml), seguido de Et3N (210,2 ml, 1,50 mol). La mezcla de reacción se agitó a -40 ºC durante 45 min. La mezcla de reacción resultante se dejó en agitación a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se lavó con una solución saturada de NaHCO3 (1 x 150 ml), seguido de salmuera. La capa orgánica separada se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El material en bruto se disolvió en EtOAc y se mantuvo en el refrigerador para cristalización. Los cristales obtenidos se filtraron y se lavaron con EtOAc frío (50 ml) y se secaron al vacío para proporcionar 2 (90 g, 65 %) en forma de un sólido cristalino de color blanco. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): 7,36-7,30 (m, 5H), 7,24 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,81 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,09 (s, 2H), 4,29 (s, 1H), 4,13, 3,96 (dd, J = 15,5 Hz, 15,0 Hz, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,11 (t,

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J = 5,0 Hz, 2H), 2,16-2,09 (m, 2H), 1,83-1,77 (m, 2H), 1,20-1,15 (m, 2H) CLEM m/z: 381 [M++1]

Síntesis de 1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octano-5-carboxilato de bencilo (3)

A una solución en agitación de 2 (46 g, 121 mmol) en MeCN (460 ml) y H2O (200 ml) se enfrió a 0 ºC y se añadió una solución de CAN (199 g, 0,23 mol) en H2O (460 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La masa resultante se vertió en agua enfriada con hielo (100 ml) y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 200 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO3 saturado (1 x 150 ml), seguido de salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para proporcionar un material en bruto, que se purificó por cromatografía de gel de sílice, eluyendo con EtOAc para obtener 3 (12 g, 38 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7,90 (s, 1H), 7,36-7,29 (m, 5H), 5,10 (s, 2H), 3,53 (d, J = 4,5 Hz, 2H), 3,36-3,30 (m, 1H), 3,17, 3,13 (dd, J = 5,0 Hz, 5,0 Hz, 1H), 2,17-2,10 (m, 2H), 1,82-1,76 (m, 2H) CLEM m/z: 261 [M++1]

A una solución agitada de 3 (12 g, 46,1 mmol) en acetonitrilo (120 ml) se le añadió Cs2CO3 (37,6 g, 115,2 mmol) y 2-bromoacetato de etilo (7,7 ml, 69,2 mmol) a TA y se agitó durante 16 h. Después de la finalización de la reacción (según TLC), los volátiles se evaporaron a presión reducida. El residuo se diluyó con agua (50 ml) y se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml). La capa orgánica separada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El material en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con EtOAc al 80 %/hexano para proporcionar 4 (12,5 g, 78,6 %) en forma de un jarabe de color pardo. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6) : δ 7,35 -7,30 (m, 5H), 5,06 (s, 2H), 4,21 (s, 1H), 4,18 (s, 1H), 4,13-4,10 (m, 2H), 3,69 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 3,47-3,44 (m, 3H), 2,16 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 1,87-1,80 (m, 2H), 1,21-1,14 (m, 3H) CLEM m/z: 369,3 [M++Na].

Síntesis de ácido 2-(5-((benciloxi) carbonil)-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)acético (5)

A una solución agitada de 4 (9,0 g, 26,0 mmol) en THF/H2O (80 ml/30 ml) se le añadió LiOH.H2O (2,73 g, 65,0 mmol) a TA y se agitó durante 3 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), los volátiles se evaporaron a presión reducida. El residuo se diluyó con agua (25 ml), se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). La capa acuosa separada se acidificó a pH~3 usando HCl 2 N y se extrajo con EtOAc (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida para proporcionar 5 (7,0 g, 85,3 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6) : δ 12,5 (s a, 1H), 7,35-7,30 (m, 5H), 5,06 (s, 2H), 4,21 (s, 1H), 4,18 (s, 1H), 3,69 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 3,47-3,44 (m, 3H), 2,16 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 1,87-1,80 (m, 2H)

Síntesis de 2-(2-(((1S,2R)-2-hidroxi-1-(1,3,4-oxadiazol-2-il)propil)amino)-2-oxoetil)-1-oxo-2,5-di-azaespiro [3,4]octano-5-carboxilato de bencilo (6)

A una solución en agitación del compuesto 5 (600 mg, 4,19 mmol) en DCM (20 ml) se le añadió N,N-diisopropiletilamina (1,93 ml, 10,4 mmol), Int-I (1,60 g, 5,02 mmol), seguido de HATU (1,91 g, 5,02 mmol) a 0 ºC y se agitaron a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (20 ml). La capa orgánica separada se lavó con una solución saturada de NaHCO3 (1x30 ml), seguido de una solución de salmuera (1 x 20 ml). La capa orgánica separada se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida para proporcionar 6 (600 mg, 33,3 %) en forma de un jarabe de color amarillo. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 9,21 (s, 1H), 7,35-7,32 (m, 5H), 5,13 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 5,13 (s, 2H), 5,09-5,00 (m, 1H), 4,12-3,94 (m, 2H), 3,70-3,33 (m, 6H), 2,16-2,11 (m, 4H), 1,08 (d, J = 6,5 Hz, 3H) CLEM m/z: 444,5 [M++1]

Síntesis de N-((1S,2R)-2-hidroxi-1-(1,3,4-oxadiazol-2-il) propil)-2-(1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)acetamida (7)

A una solución en agitación de 6 (600 mg, 1,35 mmol) en MeOH (10 ml) se le añadió (al 50 % de humedad) Pd al 10 %/C (200 mg) y se agitó en una atmósfera de H2 (presión de globo) durante 3 h a TA. Después de la finalización de la reacción (según TLC), la mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de celite y se trituró con EtOAc/MeOH (10 ml/10 ml). El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar 7 (400 mg, en bruto) en forma de un jarabe de color amarillo. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 9,21 (s, 1H), 8,68 (s, 1H), 5,29-5,07 (m, 1H), 4,10-3,91 (m, 2H), 3,61 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 3,40-3,31 (m, 1H), 3,16-2,93 (m, 2H), 2,02-1,91 (m, 2H), 1,80-1,76 (m, 2H), 1,32-1,28 (m, 1H), 1,24 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 1,09 (d, J = 6,5 Hz, 3H) CLEM m/z: 310,2 [M++1];

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4,09-4,05 (m, 2H), 3,64 (s, 3H), 1,09 (d, J = 6,0 Hz, 3H) CLEM m/z: 268,2 [M++1]

Síntesis de 2-(((benciloxi)carbonil)amino)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)butanoato de (2S,3R)-metilo (Int-E)

A una solución en agitación de Int-D (40 g, 149 mmol) en DMF (300 ml) se le añadieron DIPEA (69 ml, 374 mmol) TBDMS-Cl (30,91 ml, 179 mmol) a 0 ºC y se agitó a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la masa de reacción se diluyó con éter (200 ml). La capa orgánica separada se lavó con (2 x 200 ml) de una solución saturada de NaHCO3, seguido de una solución de salmuera (2 x 100 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar un material en bruto, que se purificó por cromatografía en columna eluyendo con EtOAc al 10 %/hexano para proporcionar Int-E (40 g, 70,1 %) en forma de un jarabe incoloro. RMN 1H: (400 MHz, CDCl3): δ 7,39-7,32 (m, 5H), 5,43 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 5,14 (s, 2H), 4,45-4,43 (m, 1H), 4,29-4,26 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 1,21 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 0,83 (s, 9H), 0,09 (s, 6H) CLEM m/z: 382,2 [M++1]

Síntesis de ((2S,3R)-3-((terc-butildimetilsilil) oxi)-1-hidrazinil-1-oxobutan-2-il)carbamato de bencilo

Una solución de Int-E (20 g, 52,4 mmol) en EtOH (200 ml) se añadió a hidrato de hidrazina (13,12 ml, 262 mmol), a TA y se agitó a 90 ºC durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), se evaporó etanol a presión reducida. El residuo en bruto se diluyó con agua (100 ml) y éter dietílico (200 ml). La capa orgánica separada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El material en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna eluyendo con EtOAc al 15 %/hexano para proporcionar Int-F (4,0 g, 20 %) en forma de un jarabe espeso e incoloro. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 9,10 (s, 1H), 7,36-7,30 (m, 5H), 6,83 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 5,02 (s, 2H), 4,19 (s, 2H), 4,05-4,02 (m, 1H), 3,97-3,93 (m, 1H), 1,05 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 0,81 (s, 9H), 0,01 (s, 6H)

Síntesis de ((1S,2R)-2-((terc-butildimetilsilil) oxi)-1-(1,3,4-oxadiazol-2-il)propil)carbamato de bencilo (Int-G)

Una solución de Int-F (4 g, 10,4 mmol) en ortoformiato de trietilo (40 ml) se añadió a p-TSA (catalítico, 40 mg) a TA y después se agitó a 120 ºC durante 3 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), se evaporó ortoformiato de trietilo a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por cromatografía en columna eluyendo con EtOAc al 10 %/hexano para proporcionar Int-G (2,8 g, 68 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 9,22 (s, 1H), 7,85 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 7,36-7,31 (m, 5H), 5,05 (s, 2H), 4,96-4,93 (m, 1H), 4,25 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 1,23 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 0,80 (s, 9H), 0,10 (s, 6H) CLEM m/z: 392,4 [M++1]

Síntesis de (1S,2R)-2-((terc-butildimetilsilil)oxi)-1-(1,3,4-oxadiazol-2-il)propan-1-amina (Int-H)

A una solución en agitación de Int-G (2,8 g, 7,16 mmol) en metanol (30 ml) se le añadió Pd al 10 %/C al 50 % de humedad (1,4 g) y se agitó en una atmósfera de H2 (presión de globo) durante 2 h a TA. La mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de celite y se trituró con metanol (10 ml). El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar Int-H (1,7 g, 92 %) en forma de un jarabe incoloro. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 9,15 (s, 1H), 4,11 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,03 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 2,05 (s a, 2H), 1,17 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 0,76 (s, 9H), 0,02 (s, 6H) CLEM m/z: 258,3 [M++1]

Síntesis de (1S,2R)-1-amino-1-(1,3,4-oxadiazol-2-il)propan-2-ol (Int-I)

A una solución en agitación de Int-H (500 mg, 1,94 mmol) en THF (6 ml) se le añadió lentamente TBAF (1,01 ml) a 0 ºC y se agitó a TA durante 3 h. Después de la finalización de la reacción (según TLC), la mezcla de reacción se evaporó y se diluyó con EtOAc/H2O (10 ml/2 ml). La capa orgánica separada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar Int-I (120 mg, en bruto) en forma de un jarabe espeso e incoloro. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 9,12 (s, 1H), 3,94 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 3,85 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 3,17-3,13 (m, 3H), 1,05 (d, J = 6,0 Hz, 3H).

Ejemplo 6 -Síntesis del Compuesto G

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A una solución agitada de 3 (12 g, 46,1 mmol) en acetonitrilo (120 ml) se le añadió Cs2CO3 (37,6 g, 115,2 mmol) y 2-bromoacetato de etilo (7,7 ml, 69,2 mmol) a TA y se agitó durante 16 h a TA. Después de la finalización de la reacción (según TLC), los volátiles se evaporaron a presión reducida. El residuo se diluyó con agua (50 ml) y se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml). La capa orgánica separada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El material en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con EtOAc al 80 %/hexano para proporcionar 4 (12,5 g, 78,6 %) en forma de un jarabe de color pardo. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6) : δ 7,35 -7,30 (m, 5H), 5,06 (s, 2H), 4,21 (s, 1H), 4,18 (s, 1H), 4,13-4,10 (m, 2H), 3,69 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 3,47-3,44 (m, 3H), 2,16 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 1,87-1,80 (m, 2H), 1,21-1,14 (m, 3H) CLEM m/z: 369,3 [M++Na].

Síntesis de 2-(2-((2-((terc-butildimetilsilil)oxi)-1-(pirimidin-2-il)propil)amino)-2-oxoetil)-1-oxo-2,5diazaespiro[3,4]octano-5-carboxilato de bencilo (6)

A una solución en agitación de 5 (1,3 g, 4,08 mmol) en DCM (30 ml) se le añadieron N,N-diisopropiletilamina (2,1 ml, 12,2 mmol), Int J (1,09 g, 4,08 mmol), seguido de HOBt (938 mg, 6,13 mmol), EDCI.HCl (1,1 g, 6,13 mmol) a 0 ºC y se agitaron a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (30 ml). La capa orgánica separada se lavó con una solución de salmuera (1 x 50 ml). La capa orgánica separada se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida para proporcionar un material en bruto, que se purificó por cromatografía en columna eluyendo con MeOH al 4 %/DCM para obtener 6 (1,5 g, 65 %) en forma de un jarabe espeso de color amarillo. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6) : δ 8,80 -8,74 (m, 2H), 7,39-7,34 (m, 6H), 5,09 (s, 2H), 4,93 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 4,38-4,19 (m, 1H), 4,05-3,68 (m, 2H), 3,49-3,39 (m, 4H), 2,20-2,11 (m, 2H), 1,86-1,85 (m, 2H), 1,19-1,10 (m, 4H), 0,65 (s, 9H), -0,07 (s, 3H), -0,03 (s, 3H) CLEM m/z: 568 [M++1]

Síntesis de N-(2-((terc-butildimetilsilil)oxi)-1-(pirimidin-2-il)propil)-2-(1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)acetamida (7)

A una solución en agitación de 6 (500 mg, 0,88 mmol) en EtOAc (25 ml) se le añadió (al 50 % de humedad) Pd al 10 %/C (250 mg) y se agitó en una atmósfera de H2 (presión de globo) a TA durante 7 h. Después de la finalización de la reacción (según TLC), la mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de celite. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar 7 (320 mg, en bruto) en forma de un jarabe espeso de color amarillo. Este compuesto se usó directamente para la siguiente etapa sin ninguna purificación. CLEM m/z: 434,5 [M++1]

Síntesis de N-(2-((terc-butildimetilsilil)oxi)-1-(pirimidin-2-il)propil)-2-(5-(1-metil-1H-1,2,4-triazol-5-carbonil)-1-oxo2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)acetamida (8)

A una solución en agitación de Int-C (93 mg, 0,73 mmol) en DCM (20 ml) se le añadió N,N-diisopropiletilamina (0,4 ml, 2,21 mmol), el compuesto 7 (320 mg, 0,73 mmol), seguido de EDCI.HCl (211 mg, 1,10 mmol), HOBt (170 mg, 1,10 mmol) a 0 ºC y se agitaron a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se evaporó a presión reducida y el material en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna eluyendo con MeOH al 4 %/DCM para proporcionar 8 (210 mg, en bruto) en forma de un jarabe espeso de color amarillo. Este compuesto se usó directamente para la siguiente etapa sin ninguna purificación. CLEM m/z: 543,5 [M++1]

Síntesis de N-(2-hidroxi-1-(pirimidin-2-il)propil)-2-(5-(1-metil-1H-1,2,4-triazol-5-carbonil)-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)acetamida (Compuesto G)

A una solución en agitación del compuesto 8 (210 mg, 0,38 mmol) en THF (5 ml) se le añadió TBAF en THF (0,77 ml, 0,76 mmol) a 0 ºC y se agitaron a TA durante 3 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se evaporó a presión reducida y el material en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna eluyendo con MeOH al 4 %/DCM, seguido de TLC preparativa para proporcionar el Compuesto G (70 mg, 42 %) en forma de un jarabe espeso de color amarillo. RMN 1H: (400 MHz, CD3OD): δ 8,75-8,70 (m, 2H), 7,95 (s, 1H), 7,36-7,30 (m, 1H), 5,16-5,13 (m, 1H), 4,53 (s, 1H), 4,41-4,43 (m, 2H), 4,29-4,03 (m, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,96-3,81 (m, 2H),

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Síntesis de (2-((terc-butildimetilsililoxi)-1-(pirimidin-2-il)propan-1-ona (Int-H)

A una solución en agitación de Int-G (5,5 g, 36 mmol) en DCM (150 ml) se le añadió imidazol (4,9 g, 72 mmol), DMAP (880 mg, 0,72 mmol) a 0 ºC y se agitó durante 10 min. Después se añadió TBDMS-C1 (8,1 g, 54 mmol) a 0 ºC y se

5 agitó a TA durante 6 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la masa de reacción se diluyó con H2O (50 ml). La capa orgánica separada se lavó con una solución de salmuera (2 x 50 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar un material en bruto, que se purificó por cromatografía en columna eluyendo con EtOAc al 30 %/hexano para proporcionar Int-H (3 g, 31 %) en forma de un sólido blanquecino.

10 RMN 1H: (400 MHz, CDCl3): δ 9,00 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 7,71 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 5,47-5,42 (m, 1H), 1,35 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,79 (s, 9H), 0,05 (s, 6H).

Síntesis de (2-((terc-butildimetilsilil)oxi)-1-(pirimidin-2-il)propan-1-amina (Int-I)

15 A una solución en agitación de Int-H (3 g, 11,2 mmol) en MeOH (50 ml) se le añadieron acetato sódico (1,8 g, 22,5 mmol), carbonato de amonio (8,8 g, 56,3 mmol), AcOH (0,6 ml, 11,2 mmol) a TA y se agitó a 70 ºC durante 2 h. La mezcla de reacción se enfrió a TA y se añadió cianoborohidruro sódico (1,39 g, 22,5 mmol) y se agitó a 70 ºC durante 6 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), se evaporó MeOH y el residuo en bruto se diluyó con DCM/H2O (50 ml/50 ml). La capa orgánica separada se lavó con salmuera (2 x 50 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro,

20 se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar un material en bruto, que se purificó por cromatografía en columna eluyendo con MeOH al 5 % /DCM para proporcionar Int-I (2,4 g, 80 %) en forma de un semisólido. RMN 1H: (400 MHz, CDCl3): δ 8,83 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 7,40 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 4,13 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,90 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 1,12 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 0,70 (s, 9H), 0,02 (s, 6H).

25 Síntesis de ácido 1-metil-1H-1,2,4-triazol-5-carboxílico (C)

A una solución agitada de MP-1 (2,0 g, 24,0 mmol) en THF (20 ml) se le añadió gota a gota n-butil·litio (19 ml, 12,0 mmol) a -78 ºC y se agitó durante 2 h, y después se inactivó mediante la adición de CO2 sólido (2 g) a -78 ºC. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 16 h. Después del consumo del

30 material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se trató con agua (3 ml) y el sólido obtenido se filtró. El sólido se trituró con éter dietílico/n-pentano (10 ml/10 ml), se secó al vacío para proporcionar Int-C (2,0 g, 65,7 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7,70 (s, 1H), 4,01 (s, 3H). CLEM m/z: 128,3 [M++1]

35 Ejemplo 7 -Síntesis del Compuesto H

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40 Síntesis de 1,3,5-tris(4-metoxibencil)-1,3,5-triazinano (1)

A una solución en agitación de (4-metoxifenil) MP de metanamina (200 g, 1,46mol) en EtOH (600 ml) a temperatura ambiente se le añadió gota a gota formaldehído (ac. al 33 %, 105 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura

45 ambiente durante 1 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (100 ml) y se lavó con agua (100 ml), seguido de salmuera. La capa orgánica separada se concentró a presión reducida para obtener un material en bruto; que se lavó con n-hexano para proporcionar 1 (200 g, 30,6 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7,18 (d, 6H), 6,84 (d, 6H), 3,73 (s, 9H), 3,50 (s, 6H), 3,29 (s, 6H).

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A una solución en agitación de Int-D (100 g, 0,37 mol) en CH2Cl2 (500 ml) enfriada a -40 ºC se le añadió gota a gota Et3N (210,2 ml, 1,50 mol). La mezcla de reacción se agitó a -40 ºC durante 45 min. A esta, se le añadió gota a gota una mezcla del compuesto 1 (50 g, 0,12 mol) en CH2Cl2 (150 ml) y BF3.OEt2 (47,6 g, 0,33 mol) a -40 ºC. La mezcla de reacción resultante se dejó en agitación a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se lavó con una solución saturada de NaHCO3, seguido de salmuera. La capa orgánica separada se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El material en bruto se disolvió en EtOAc y se mantuvo en el refrigerador para cristalización. Los cristales obtenidos se filtraron y se lavaron con EtOAc frío y se secaron al vacío para proporcionar 2 (82 g, 58 %) en forma de un sólido cristalino de color blanco. RMN 1H: (400 MHz, CDCl3): δ 7,35 (d, 5H), 7,20 (d, 1H), 7,00 (d, 1H), 6,85 (d, 1H), 6,75 (d, 1H), 5,15-5,10 (m, 2H), 4,29 (d, 1H), 3,79 (d, 3H), 3,59 (d, 1H), 3,57-3,49 (m, 2H), 3,10 (dd, 1H), 2,41-2,30 (m, 1H), 2,09-2,00 (m, 2H), 1,70-1,65 (m, 1H), 1,37 (t, 1H) CLEM m/z: 381 [M++1]

Síntesis de 1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octano-5-carboxilato de bencilo (3)

Una solución en agitación de 2 (60 g, 0,16 mol) en MeCN (200 ml) y H2O (30 ml) se enfrió a 0 ºC y se añadió una solución de CAN (86,5 g, 0,48 mol) en H2O (30 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La masa resultante se vertió en agua enfriada con hielo y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 75 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO3 saturado, seguido de salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para obtener un material en bruto. El material obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con EtOAc 70 %/hexano; el material obtenido se trituró con EtOAc al 10 %/hexano para proporcionar 3 (15 g, 36,5 %). RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,99 (d, 1H), 7,42-7,30 (m, 5H), 5,19-5,00 (m, 2H), 3,55 (d, 1H), 3,50-3,32 (m, 2H), 3,19 (dd, 1H), 2,18-2,00 (m, 2H), 1,91-1,79 (m, 2H) CLEM m/z: 261 [M++1]

A una solución agitada de 3 (5 g, 19,23 mmol) en acetonitrilo (100 ml) se le añadió Cs2CO3 (15,6 g, 48 mmol) y 2-bromoacetato de etilo (3,2 ml, 28,84 mmol) a TA y se continuó agitando a TA durante 10 h. Los volátiles se evaporaron a presión reducida. El residuo se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). La capa orgánica separada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El material en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con EtOAc al 30 %/hexano para proporcionar 4 (3,7 g, 56 %) en forma de un jarabe de color amarillo. RMN 1H: (500 MHz, CDCl3): δ 7,38 (d, 5H, 5,19-5,04 (m, 2H), 4,49-3,17 (m, 8H), 2,47-2,39 (m, 1H), 2,25-2,21 (m, 1H), 2,05-2,01 (m, 1H), 1,95-1,92 (m, 1H), 1,30-1,25 (m, 3H) CLEM (m/z): 345 [M++1].

A una solución agitada de 4 (2 g, 5,783 mmol) en THF: H2O (24 ml, 5:1) se le añadió LiOH.H2O (606 mg, 14,4 mmol) a TA y se agitó durante 4 h. Después del consumo completo del material de partida (según TLC), los volátiles se evaporaron a presión reducida. El residuo se diluyó con agua, se lavó con éter, la capa acuosa se acidificó a pH~3-4 usando ácido cítrico y se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Las capas orgánicas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida para proporcionar 5 (1,5 g, 83 %) en forma de un jarabe de color amarillo. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7,41 (d, 5H), 5,07-5,04 (m, 2H), 4,49-3,17 (m, 8H), 2,21-2,09 (m, 2H), 1,95-1,92 (m, 2H). CLEM (m/z): 319,4 [M++1]

Síntesis de 2-(2-(((2S,3R)-1-amino-3-hidroxi-1-oxobutan-2-il)amino)-2-oxoetil)-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octano5-carboxilato de bencilo (6)

A una solución en agitación de 5 (1 g, 3,13 mmol) en CH2Cl2 (50 ml) se le añadió HATU (1,4 g, 3,70 mmol), seguido de DIPEA (1,5 ml, 7,82 mmol) y Int-B (443 mg, 3,76 mmol) a 0 ºC. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la reacción se interrumpió con agua y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 100 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró al vacío. El material en bruto se purificó por cromatografía en columna para proporcionar 6 (0,6 g, 46 %). RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6) : δ 7,82 -7,65 (m, 1H), 7,41-7,38 (m, 5H), 7,27 (d, 1H), 7,12 (d, 1H), 5,10-5,01 (m, 2H), 4,89-4,85 (m, 1H), 4,25-3,99 (m, 3H), 3,94-3,90 (m, 1H), 3,74-3,69 (m, 1H), 3,52-3,45 (m, 2H), 2,22-2,09 (m, 2H), 1,92-1,79 (m, 2H), 1,27-1,25 (m, 1H), 1,09-1,01 (m, 3H) CLEM m/z: 419,3 [M++1]

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Ejemplo 8 -Síntesis del Compuesto I Esquema 8.

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Síntesis de 1,3,5-tris(4-metoxibencil)-1,3,5-triazinano (1)

A una solución en agitación de (4-metoxifenil) MP de metanamina (200g, 1,46mol) en EtOH (600 ml) a temperatura ambiente se le añadió gota a gota formaldehído (ac. al 33 %, 105 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (100 ml) y se lavó con agua (100 ml), seguido de salmuera. La capa orgánica separada se concentró a presión reducida para obtener un material en bruto; que finalmente se lavó con n-hexano para proporcionar 1 (200 g, 30,6 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7,18 (d, 6H), 6,84 (d, 6H), 3,73 (s, 9H), 3,50 (s, 6H), 3,29 (s, 6H).

A una solución en agitación de Int-B (100 g, 0,37 mol) en CH2Cl2 seco (500 ml) enfriada a -40 ºC se le añadió gota a gota Et3N (210,2 ml, 1,50 mol). La mezcla de reacción se agitó a -40 ºC durante 45 min. A esta, se le añadió gota a gota una mezcla de 1 (50 g, 0,12 mol) y BF3OEt2 (47,6 g, 0,33 mol) en CH2Cl2 (150 ml) a -40 ºC. La mezcla de reacción resultante se dejó en agitación a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se lavó con una solución saturada de NaHCO3, seguido de salmuera. La capa orgánica separada se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El material en bruto se disolvió en EtOAc y se mantuvo en el refrigerador para cristalización. Los cristales obtenidos se filtraron y se lavaron con EtOAc frío y se secaron al vacío para proporcionar 2 (82 g, 58 %) en forma de un sólido cristalino de color blanco. RMN 1H: (400 MHz, CDCl3): δ 7,35 (d, 5H), 7,20 (d, 1H), 7,00 (d, 1H), 6,85 (d, 1H), 6,75 (d, 1H), 5,15-5,10 (m, 2H), 4,29 (d, 1H), 3,79 (d, 3H), 3,59 (d, 1H), 3,57-3,49 (m, 2H), 3,10 (dd, 1H), 2,41-2,30 (m, 1H), 2,09-2,00 (m, 2H), 1,70-1,65 (m, 1H), 1,37 (t, 1H) CLEM m/z: 381 [M++1]

Síntesis de 1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octano-5-carboxilato de bencilo (3)

A una solución en agitación de 2 (60 g, 0,16 mol) en MeCN (200 ml) y H2O (30 ml) enfriada a 0 ºC se le añadió una solución de CAN (86,5 g, 0,48 mol) en H2O (30 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La masa resultante se vertió en agua enfriada con hielo y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 75 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO3 saturado, seguido de salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para obtener un material en bruto. El material obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con EtOAc 70 %/hexano; finalmente, el material obtenido se trituró con EtOAc al 10 %/hexano para proporcionar 3 (15 g, 36,5 %). RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,99 (d, 1H), 7,42-7,30 (m, 5H), 5,19-5,00 (m, 2H), 3,55 (d, 1H), 3,50-3,32 (m, 2H), 3,19 (dd, 1H), 2,18-2,00 (m, 2H), 1,91-1,79 (m, 2H) CLEM m/z: 261 [M++1]

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proporcionar Int-E (3 g, 48 %). RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 6,41 (d, 1H), 4,71 (d, 1H), 4,15 (t, 1H), 3,94 (c, 1H), 3,63-3,42 (m, 2H), 3,24 (c, 1H), 1,90-1,81 (m, 4H), 1,38 (s, 9H), 1,04 (s, 3H) CLEM m/z: 273,2 [M++1]

5 Síntesis de (2S,3R)-2-amino-3-hidroxi-1-(pirrolidin-1-il)butan-1-ona (Int-F):

A una solución en agitación de Int-E (3 g, 11,0 mmol) en DCM (10 ml) se le añadió éter-HCl (20 ml) a 0 ºC en una atmósfera de N2. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 4 h. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida para obtener un producto en bruto, que se lavó con éter para proporcionar Int-F (2,0 g, 87 %).

10 RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6) : δ 8,19 (s a, 3H), 3,98-3,91 (m, 2H), 3,62-3,59 (m, 1H), 3,49-3,42 (m, 1H), 3,39-3,35 (m, 2H), 1,96-1,90 (m, 4H), 1,17 (d, 3H) CLEM m/z: 173,3 [M++1]

15 A una solución en agitación de L-Prolina (250 g, 2,17 mol) en agua (1 l) se le añadió Na2CO3 (576 g, 5,43 mol) y se agitó durante 1 h. Después de enfriarse a 0 ºC, se añadió gota a gota cloroformiato de bencilo (al 50 % en PhCH3) (444 g, 2,61mol) a la mezcla de reacción y se agitó de nuevo durante 1 h. La mezcla de reacción resultante se calentó a TA y se agitó adicionalmente durante 24 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la reacción se

20 diluyó con agua (1 l) y éter (1,5 l). La capa acuosa separada se trató con PhCH3 (1,5 l) y se acidificó usando HCl 6 N. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 1,5 l), los extractos orgánicos combinados se lavaron salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para proporcionar Int-A (450 g, 84 %) en forma de un jarabe de color amarillo claro. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6) : δ 12,71 (s a, 1H), 7,37-7,26 (m, 5H), 5,07-4,99 (m, 2H), 4,25-4,15 (m, 1H), 3,45-3,34

25 (m, 2H), 2,25-2,14 (m, 1H), 1,94-1,79 (m, 3H) CLEM m/z: 250,4 [M++1]

Síntesis de 2-(clorocarbonil)pirrolidin-1-carboxilato de bencilo (Int-B)

30 A una solución en agitación de Int-A (100 g, 0,40 mol) en CH2Cl2 (500 ml) se le añadió una cantidad catalítica de DMF (1 ml) y la mezcla de reacción se enfrió a 0 ºC. A esta se le añadió gota a gota cloruro de oxalilo (112,3 ml, 0,60 mol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para proporcionar Int-B (100 g) como un material en bruto. Este material se usó directamente para la siguiente etapa sin purificación adicional.

35 Ejemplo 9 -Síntesis del Compuesto J

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40 Síntesis de 1,3,5-tris(4-metoxibencil)-1,3,5-triazinano (1)

A una solución en agitación de (4-metoxifenil)metanamina (MP) (200 g, 1,46 mol) en EtOH (600 ml) a temperatura ambiente se le añadió gota a gota formaldehído (ac. al 33 %, 105 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura

45 ambiente durante 1 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (100 ml) y se lavó con agua (100 ml), seguido de salmuera. La capa orgánica separada se concentró a presión

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9H), 1,24 (d, 3H) CLEM (IEN): 159,1 [(M++1)-Boc]

Síntesis de 4-(((dimetilamino)metilen)carbamoil)-2,2,5-trimetiloxazolidin-3-carboxilato de (Z)-terc-butilo (Int-G)

5 Una solución de Int-F (13 g, 50,3 mmol) en DMF.DMA (130 ml) se agitó a la temperatura de reflujo durante 3 h en una atmósfera de N2. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para proporcionar Int-G (15,7 g, en bruto). Este material en bruto se recogió directamente para la siguiente etapa sin purificación adicional.

10 Síntesis de 2,2,5-trimetil-4-(1,2,4-oxadiazol-5-il)oxazolidin-3-carboxilato de terc-butilo (Int-H)

A una solución en agitación de Int-G (15,7 g, 50,09 mmol) en etanol (157 ml) se le añadió clorhidrato de hidroxilamina (6,96 g, 0,10 mol) en una atmósfera de N2. La mezcla de reacción se calentó a reflujo y se agitó durante 2 h. Después

15 del consumo del material de partida (según TLC), se añadió ácido acético (28,6 ml, 0,50 mol) a la mezcla de reacción a TA, y después se sometió reflujo durante 16 h. Los disolventes de la mezcla de reacción se evaporaron al vacío para dar un material en bruto; que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con EtOAc al 10 %/Hexano para proporcionar Int-H (4,5 g, 32 %). RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 6,35 (s, 2H), 4,61 (d, 1H), 4,22-4,15 (m, 1H), 1,55 (s, 6H), 1,37 (s, 2H), 1,25 (d, 3H),

20 1,21 (s, 6H) CLEM (IEN): 284 [M++1]

Síntesis de 1-amino-1-(1,2,4-oxadiazol-5-il)propan-2-ol (Int-I)

25 A una solución en agitación de Int-H (5 g, 17,6 mmol) en agua (25 ml) se le añadió ácido trifluoroacético (25 ml). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 5 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo se disolvió en agua y se neutralizó con NaHCO3 acuoso. Los disolventes de la mezcla de reacción se evaporaron al vacío y se extrajeron con MeOH al 5 %/CH2Cl2 (4 x 150 ml). La capa orgánica se concentró a presión reducida para proporcionar Int-I (2,5 g, en bruto).

30 RMN 1H: (400 MHz, D2O): δ 8,84 (s, 1H), 4,05 (d, 1H), 3,98-3,95 (m, 1H), 3,67 (s, 1H), 3,58 (d, 1H), 1,15 (d, 3H), 1,12 (d, 3H) CLEM (IEN): 144,1 [M++1].

Ejemplo 10 -Síntesis del Compuesto K 35

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presión reducida. El residuo se diluyó con agua (25 ml), se extrajo con éter (2 x 50 ml). La capa acuosa separada se acidificó a pH ~2 usando HCl 2 N y se extrajo con MeOH al 5 %/DCM (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida para proporcionar 6 (6,5 g, 91,5 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6) : δ 12,5 (s a, 1H), 4,12 (s, 1H), 3,70 (s, 1H), 3,66-3,64 (m, 2H), 3,53-3,51 (m, 2H), 3,53-3,51 (m, 2H), 3,42 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 2,73, 2,63 (dd, J = 16,0 Hz, J = 15 Hz, 2H), 2,10-2,07 (m, 1H) CLEM m/z: 227,2 [M++1]

Síntesis de 2-(5-acetil-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)-N-((1S,2R)-2-hidroxi-1-(1,3,4-oxadiazol-2il)propil)acetamida (Compuesto K)

A una solución en agitación de 6 (200 mg, 1,39 mmol) en DCM (10 ml) se le añadieron N,N-diisopropiletilamina (0,64 ml, 3,47 mmol), Int-I (5,95 g, 1,68 mmol), seguido de HATU (637 mg, 1,68 mmol) a 0 ºC y se agitaron a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para dar un producto en bruto, que se purificó por cromatografía en columna con MeOH al 8 %/DCM para proporcionar un jarabe de color amarillo, que se purificó adicionalmente por HPLC preparativa para proporcionar el Compuesto K (100 mg, 20,4 %) en forma de un líquido incoloro. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 9,18 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 8,54 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 5,15-5,06 (m, 2H), 4,16-4,12 (m, 1H), 4,05, 4,00 (dd, J = 4,4 Hz, 4,4 Hz, 1H), 3,89-3,82 (m, 1H), 3,72 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 3,61-3,56 (m, 1H), 3,51-3,45 (m, 1H), 3,37-3,33 (m, 1H), 2,18-2,08 (m, 2H), 2,02 (s, 3H), 1,93-1,90 (m, 2H), 1,10 (t, J = 6,4 Hz, 3H) CLEM m/z: 352,3 [M++1] UPLC: 47,2 % y 44,3 %

A una solución en agitación de L-prolina (250 g, 2,17 mol) en agua (1 l) se le añadió Na2CO3 (576 g, 5,43 mol) y se agitó durante 1 h. Después de enfriarse a 0 ºC, se añadió gota a gota cloroformiato de bencilo (50 % en PhCH3) (444 g, 2,61 mol) a la mezcla de reacción y se agitó de nuevo durante 1 h. La mezcla de reacción resultante se calentó a TA y se agitó adicionalmente durante 24 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la reacción se diluyó con agua (1 l) y éter (1,5 l). La capa acuosa separada se trató con PhCH3 (1,5 l) y se acidificó con HCl 6 N. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 1,5 l), los extractos orgánicos combinados se lavaron salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para proporcionar Int-A (450 g, 84 %) en forma de un jarabe de color amarillo. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6) : δ 12,71 (s a, 1H), 7,37-7,26 (m, 5H), 5,07-4,99 (m, 2H), 4,25-4,15 (m, 1H), 3,45-3,34 (m, 2H), 2,25-2,14 (m, 1H), 1,94-1,79 (m, 3H) CLEM m/z: 250,4 [M++1]

Síntesis de 2-(clorocarbonil)pirrolidin-1-carboxilato de (S)-bencilo (Int-B)

Síntesis de 2-amino-3-hidroxibutanoato de (2S,3R)-metilo (Int-C)

A una solución en agitación de L-Thr-OH (60 g, 504 mmol) en CH3OH (400 ml) se le añadió cloruro de tionilo (70 ml, 972 mmol) a 0 ºC y se agitó a 75 ºC durante 6 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para proporcionar Int-C (60 g, en bruto). Este material se usó directamente para la siguiente etapa sin purificación adicional. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 8,45 (s, 2H), 5,70 (s, 1H), 4,12-4,10 (m, 1H), 3,90 (s, 1H), 3,73 (s, 3H), 1,20 (d, J = 6,5 Hz, 3H).

Síntesis de 2-(((benciloxi)carbonil)amino)-3-hidroxibutanoato de (2S,3R)-metilo (Int-D)

A una solución en agitación de NaHCO3 (89 g, 1,065 mol) en agua/1,4-dioxano (150 ml/450 ml) se le añadió Int-C (60 g, 355 mmol) a TA y se agitó durante 30 min. La mezcla de reacción se enfrió a 0 ºC. Se añadió gota a gota Cbz-Cl (60,7 ml, 426 mmol) y se agitó durante 1 h. La mezcla de reacción se agitó a TA y se agitó durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la masa de reacción se diluyó con EtOAc (300 ml). La capa orgánica separada se lavó con (2 x 200 ml) de una solución saturada de NaHCO3, seguido de una solución de salmuera (2 x 100 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar un material en bruto, que se trituró con n-hexano y éter dietílico (50 ml/50 ml) para proporcionar Int-D (60 g, 63,8 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6) : δ 7,37 -7,30 (m, 5H), 7,20 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,06 (s, 2H), 4,78 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 4,09-4,05 (m, 2H), 3,64 (s, 3H), 1,09 (d, J = 6,0 Hz, 3H) CLEM m/z: 268,2 [M++1]

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Síntesis de 2-((benciloxil)carbonil)amino)-3-(terc-butildimetilsilil) oxi)butanoato de (2S,3R)-metilo (Int-E)

A una solución en agitación de Int-D (40 g, 149 mmol) en DMF (300 ml) se le añadieron DIPEA (69 ml, 374 mmol), TBDMS-Cl (30,91 ml, 179 mmol) a 0 ºC y se agitó a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la masa de reacción se diluyó con éter (200 ml). La capa orgánica separada se lavó con (2 x 200 ml) de una solución saturada de NaHCO3, seguido de una solución de salmuera (2 x 100 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar un material en bruto, que se purificó por cromatografía en columna eluyendo con EtOAc al 10 %/hexano para proporcionar Int-E (40 g, 70,1 %) en forma de un jarabe incoloro. RMN 1H: (400 MHz, CDCl3): δ 7,39-7,32 (m, 5H), 5,43 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 5,14 (s, 2H), 4,45-4,43 (m, 1H), 4,29-4,26 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 1,21 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 0,83 (s, 9H), 0,09 (s, 6H) CLEM m/z: 382,2 [M++1].

Síntesis de ((2S,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)-1-hidrazinil-1-oxobutan-2-il)carbamato de bencilo (Int F):

Una solución de Int-E (20 g, 52,4 mmol) en EtOH (200 ml) se añadió a hidrato de hidrazina (13,12 ml, 262 mmol), a TA y se agitó a 90 ºC durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), se evaporó etanol a presión reducida. El residuo en bruto se diluyó con agua (100 ml) y éter dietílico (200 ml). Después de separar la capa orgánica, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El material en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna eluyendo con EtOAc al 15 %/hexano para proporcionar Int-F (4,0 g, 20 %) en forma de un jarabe espeso e incoloro. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 9,10 (s, 1H), 7,36-7,30 (m, 5H), 6,83 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 5,02 (s, 2H), 4,19 (s, 2H), 4,05-4,02 (m, 1H), 3,97-3,93 (m, 1H), 1,05 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 0,81 (s, 9H), 0,01 (s, 6H)

Síntesis de ((1S,2R)-2-((terc-butildimetilsilil)oxi)-1-(1,3,4-oxadiazol-2-il)propil)carbamato de bencilo (Int-G)

Síntesis de (1S,2R)-1-amino-1-(1,3,4-oxadiazol-2-il)propan-2-ol (Int-I)

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Síntesis de 2-(5-acetil-1oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)acetato de etilo (5)

A una solución en agitación de 4 (12,5 g, 36 mmol) en EtOAc (100 ml) se le añadió anhídrido acético (7,36 g, 72,2 mmol), Pd al 10 %/C (5,0g) al 50 % de humedad y se agitó en una atmósfera de H2 (presión de globo) durante 4 h a TA. Después de la finalización de la reacción (según TLC), la mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de celite y se trituró con EtOAc (50 ml). El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar 5 (8,0 g, 87,9 %) en forma de un jarabe de color amarillo. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 4,21 (s, 1H), 4,17 (s, 1H), 4,14-4,12 (m, 1H), 3,82 (s, 1H), 3,68 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 3,56-3,51 (m, 1H), 3,46-3,43 (m, 1H), 3,29 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 2,11-2,09 (m, 1H), 1,97 (s, 2H), 1,90-1,89 (m, 3H), 1,20 (t, J = 7,2 Hz, 3H) CLEM m/z: 255 [M+-1]

Síntesis de ácido 2-(5-acetil-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)acético (6)

A una solución agitada de 5 (8,0 g, 31,49 mmol) en THF: H2O (80 ml/30 ml) se le añadió LiOH.H2O (3,30 g, 78,7 mmol) a TA y se agitó durante 2 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), los volátiles se evaporaron a presión reducida. El residuo se diluyó con agua (25 ml), se extrajo con éter (2 x 50 ml). La capa acuosa separada se acidificó a pH ~2 usando HCl 2 N y se extrajo con MeOH al 5 %/DCM (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida para proporcionar 6 (6,5 g, 91,5 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6) : δ 12,5 (s a, 1H), 4,12 (s, 1H), 3,70 (s, 1H), 3,66-3,64 (m, 2H), 3,53-3,51 (m, 2H), 3,53-3,51 (m, 2H), 3,42 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 2,73, 2,63 (dd, J = 16,0 Hz, J = 15 Hz, 2H), 2,10-2,07 (m, 1H) CLEM m/z: 227,2 [M++1]

Síntesis de 2-(5-acetil-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)-N-2-((terc-butildimetilsilil)oxi)-1-(pirimidin-2-il)propil)acetamida (7)

A una solución en agitación de 6 (400 mg, 1,77 mmol) en DCM (20 ml) se le añadió N,N-diisopropiletilamina (0,9 ml, 5,32mmol), Int-I (474 mg, 1,77mmol), HOBt (410 mg, 2,66mmol), EDCI.HCl (509 mg, 2,66 mmol) a 0 ºC y se agitaron a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para dar un producto en bruto, que se purificó por cromatografía en columna con MeOH al 4 /DCM para proporcionar 7 (300 mg, 35 %) en forma de un jarabe espeso e incoloro. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,78 (d, J = 16,0 Hz, 2H), 8,35 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 4,88 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 4,37 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 3,85 (s, 2H), 3,76 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 3,63-3,57 (m, 1H), 3,49-3,43 (m, 1H), 3,13 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 2,13-2,10 (m, 2H), 2,01 (s, 3H), 1,16 (d, J = 5,5 Hz, 3H), 0,64 (s, 9H), 0,06 (s, 6H) CLEM m/z: 474,6 [M+-1]

Síntesis de 2-(5-acetil-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)-N-((1R, 2R)-2-hidroxi-1-(pirimidin-2-il)propil)acetamida (Compuesto L)

A una solución en agitación de 7 (300 mg, 0,63 mmol) en THF (20 ml) se le añadió lentamente TBAF (1,26 ml) a 0 ºC y se agitó a TA durante 2 h. Después de la finalización de la reacción (según TLC), la mezcla de reacción se evaporó para dar un producto en bruto, que se purificó por cromatografía en columna eluyendo con MeOH al 4 %/DCM para proporcionar una mezcla (110 mg) de isómeros, que se purificó de nuevo por un método de purificación de HPLC preparativa quiral para proporcionar el Compuesto L (60 mg, 26 %) en forma de un líquido incoloro. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,76 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 8,28 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,37 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 4,91-4,79 (m, 2H), 4,15-4,10 (m, 1H), 3,92-3,78 (m, 2H), 3,67 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 3,60-3,54 (m, 1H), 3,49-3,31 (m, 2H), 2,13-2,11 (m, 2H), 2,09 (s, 3H), 2,08-1,87 (m, 2H), 1,09 (d, J = 6,4 Hz, 3H) CLEM m/z: 362,4 [M++1] HPLC: 97,5 %

Síntesis de ácido (S)-1-((benciloxi)carbonil)pirrolidin-2-carboxílico (Int-A):

A una solución en agitación de L-prolina (250 g, 2,17 mol) en agua (1 l) se le añadió Na2CO3 (576 g, 5,43 mol) y se

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a TA durante 6 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con H2O (50 ml). La capa orgánica separada se lavó con una solución de salmuera (2 x 50 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar un material en bruto, que se purificó por cromatografía en columna eluyendo con EtOAc al 30 %/hexano para proporcionar Int-H (3g, 31 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H: (400 MHz, CDCl3): δ 9,00 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 7,71 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 5,47-5,42 (m, 1H), 1,35 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,79 (s, 9H), 0,05 (s, 6H)

Síntesis de (2-((terc-butildimetilsilil)oxi)-1-(pirimidin-2-il)pronan-1-amina (Int-I)

A una solución en agitación de Int-H (3 g, 11,2 mmol) en MeOH (50 ml) se le añadieron acetato sódico (1,8 g, 22,5mmol), carbonato de amonio (8,8 g, 56,3mmol), AcOH (0,6 ml, 11,2 mmol) a TA y después la mezcla de reacción se agitó a 70 ºC durante 2 h. La temperatura de la reacción se enfrió a TA y se añadió cianoborohidruro sódico (1,39 g, 22,5 mmol) y se agitó a 70 ºC durante 6 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), se evaporó MeOH y el residuo en bruto se diluyó con DCM/H2O (50 ml/50 ml). La capa orgánica separada se extrajo con una solución de salmuera (2 x 50 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar un material en bruto, que se purificó por cromatografía en columna eluyendo con MeOH al 5 % /DCM para proporcionar Int-I (2,4 g, 80 %) en forma de un semisólido. RMN 1H: (400 MHz, CDCl3): δ 8,83 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 7,40 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 4,13 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,90 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 1,12 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 0,70 (s, 9H), 0,02 (s, 6H) CLEM m/z: 268 [M++1]

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Síntesis de ácido (2S,3R)-2-(((benciloxi)carbonil)amino)-3-hidrobutanoico (6S-A):

A una solución en agitación de NaHCO3 (529 g, 6,30 mol) en agua (1 l) se le añadió L-treonina (250 g, 2,10 mol) a TA y se agitó durante 30 min. La mezcla de reacción se enfrió a 0 ºC. Se añadió gota a gota Cbz-Cl (850 ml, 2,52 mol, 50 % de PhCH3) y se agitó durante 1 h. La mezcla de reacción se calentó a TA y se agitó de nuevo durante 28 h. A esta se le añadió MTBE (1 l) y se agitó durante 20 min. La capa acuosa separada en tolueno se agitó durante 20 min. La capa acuosa se acidificó con HCl 1 N (pH ~1-2) y se extrajo con EtOAc, (3 x 1,5 l). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El material en bruto se agitó con diciclohexilamina (819 ml, 4,20 mol) durante 4 h para obtener un sólido de color blanco, se filtró y se secó. El sólido obtenido se sometió a reflujo con EtOAc (1,5 l) durante 1 h y después se filtró. El material sólido se disolvió en agua (1 l) y se acidificó con H2SO4 dil. y se agitó de nuevo durante 30 min. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 1 l). La capa orgánica separada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El material en bruto obtenido se trituró con n-hexano para proporcionar 6S-A (230 g, 43 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,55 (m a, 1H), 7,37-7,30 (m, 5H), 6,94 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,05 (s, 2H), 4,08-3,94 (m, 2H), 1,02 (d, J = 6,4 Hz, 3H). pureza de ELSD: 84,66 %

Síntesis de ((2S,3R)-1-amino-3-hidroxi-1-oxobutan-2-il)carbamato de bencilo (6S-B):

Una solución de 6S-A (25 g, 98,8 mmol) en DCM (250 ml) se le añadió cloruro de amonio (7,86 g, 147 mmol), HATU (45 g, 118 mmol), N,N-diisopropilamina (45,5 ml, 261 mmol) y se agitó a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la capa orgánica se lavó con una solución saturada de bicarbonato sódico (1 x 150 ml), seguido de HCl 2 N (1 x 100 ml). Después de separar la capa orgánica, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El material en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna eluyendo con MeOH al 2 %/DCM para proporcionar 6S-B (16 g, 66 %) en forma de un sólido de color blanquecino. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6) : δ 7,36 -7,32 (m, 5H), 7,04 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 5,03 (s, 2H), 4,75 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 3,95-3,92 (m, 1H), 3,86-3,83 (m, 1H), 1,27-1,23 (m, 1H), 1,04 (d, J = 6,5 Hz, 3H). CLEM m/z: 253,3 [M++1]

Síntesis de acetato de (2R,3S)-4-amino-3-(((benciloxi)carbonil)amino)-4-oxobutan-2-ilo (6S-C):

A una solución en agitación de 6S-B (16 g, 63,4 mmol) en CH2Cl2 (250 ml) se le añadieron Et3N (10,5 ml, 76,0 mmol) y DMAP (773 mg, 6,34 mmol), Ac2O (7,12 ml, 76,0 mmol) a 0 ºC y se agitó a TA durante 2 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la capa orgánica se lavó con agua (1 x 150 ml), seguido de lavado con salmuera (1 x

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100 ml). Después de separar la capa orgánica, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El material en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna eluyendo con MeOH al 1 %/DCM para proporcionar 6S-C (15 g, 80,3 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,45 (s, 1H), 7,35-7,30 (m, 5H), 7,24 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,17 (s, 1H), 5,09-5,05 (m, 1H), 5,01 (s, 2H), 4,14-4,10 (m, 1H), 1,93 (s, 3H), 1,14 (d, J = 6,4 Hz, 3H) CLEM m/z: 295,1 [M++1]

Síntesis de acetato de (2R,3S)-3,4-diamino-4-oxobutan-2-ilo (6S-D):

A una solución en agitación de 6S-C (15 g, 51 mmol) en metanol (500 ml) se le añadió Pd al 10 %/C al 50 % de humedad (4 g) y se agitó en una atmósfera de H2 (presión de globo) durante 4 h a TA. La mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de celite y se trituró con metanol (50 ml). El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar 6S-D (7,5 g, 91,9 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,59 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,16 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 4,78 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,10 (m, 1H), 4,00-3,96 (m, 1H), 1,89 (s, 3H), 1,01 (d, J = 6,4 Hz, 3H). CLEM m/z: 161,5 [M++1]

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Síntesis de 2-amino-3-hidroxibutanoato de (2S,3R)-metilo (6S-E):

A una solución en agitación de ácido (2S,3R)-2-amino-3-hidroxibutanoico (200 g, 1,68 mol) en metanol (1,2 l) se le añadió gota a gota SOCl2 (244 ml, 3,36 mol) a 0 ºC y se agitó durante 1 h. La mezcla de reacción resultante se sometió a reflujo durante 24 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se calentó a TA y se concentró al vacío y se decantó con n-hexano (2 x 50 ml). El residuo se disolvió en EtOH (1 l) y se neutralizó con Et3N (471 ml, 3,36 mol) y se agitó de nuevo durante 2 h. El sólido precipitado se retiró por filtración; el filtrado obtenido se concentró al vacío para proporcionar 6S-E (195 g, 80 %). RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6) : δ 8,51 (s a, 3H), 4,13-4,10 (m, 1H), 3,91 (s a, 1H), 1,20 (d, 3H). CLEM m/z: 134,1 [M++1]

Síntesis de (2S,3R)-2-amino-3-hidroxibutanamida (6S-F):

Una solución de 6S-E (190 g, 1,35 mol) en IPA (2 l) se recogió en un autoclave y se purgó con gas de NH3 (7-8 kg) y se agitó a 35 ºC durante 24 h. Después de la finalización de la reacción, el NH3 se expulsó y la mezcla de reacción se concentró a presión reducida, se añadió CH2Cl2 y se filtró. El sólido obtenido se sometió a reflujo en EtOH durante 1 h a 78 ºC. La masa de reacción se filtró en condiciones de calentamiento y se añadió n-hexano al filtrado, y se agitó de nuevo durante 4 h más. El sólido precipitado obtenido se filtró y se secó al vacío para proporcionar 6S-F (160 g, 47 %). RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6) : δ 7,38 (s a, 1H), 7,02 (s a, 1H), 4,66 (s a, 1H), 3,77-3,70 (m, 1H), 2,93 (d, 1H), 2,72 (m a, 1H), 1,05 (d, 3H). CLEM m/z: 119,1 [M++1].

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Síntesis de ácido (S)-1-((benciloxi)carbonil)pirrolidin-2-carboxílico (6S-G);

A una solución en agitación de L-prolina (250 g, 2,17 mol) en agua (1 l) se le añadió Na2CO3 (576 g, 5,43 mol) y se agitó durante 1 h. Después de enfriarse a 0 ºC, se añadió gota a gota cloroformiato de bencilo (50 % en PhCH3) (444 g, 2,61 mol) a la mezcla de reacción y se agitó de nuevo durante 1 h. La mezcla de reacción resultante se calentó a TA y se agitó adicionalmente durante 24 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la reacción se diluyó con agua (1 l) y éter (1,5 l). La capa acuosa separada se trató con PhCH3 (1,5 l) y se acidificó usando HCl 6 N. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 1,5 l), los extractos orgánicos combinados se lavaron salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar 6S-G (450 g, 84 %) en forma de un jarabe de color amarillo claro. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6) : δ 12,71 (s a, 1H), 7,37-7,26 (m, 5H), 5,07-4,99 (m, 2H), 4,25-4,15 (m, 1H), 3,45-3,34 (m, 2H), 2,25-2,14 (m, 1H), 1,94-1,79 (m, 3H). CLEM m/z: 250,4 [M++1]

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Síntesis de 2-(clorocarbonil)pirrolidin-1-carboxilato de (S)-bencilo (6S-H):

A una solución en agitación de 6S-G (90 g, 361 mmol) en CH2Cl2 (400 ml) se le añadió cloruro de oxalilo (42 ml, 542 mmol) a 0 ºC y se agitó durante 2 h. Después de la formación completa de cloruro de ácido, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para proporcionar 6S-H (95 g, en bruto). Este material se usó directamente para la siguiente etapa sin purificación adicional.

Esquema 6S-I-4

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1,3,5-Tris (4-metoxibencil)-1,3,5-triazinano (6S-I):

A una solución en agitación de (4-metoxifenil)metanamina (200 g, 1,46 mol) en EtOH (600 ml) a temperatura ambiente se le añadió gota a gota formaldehído (ac. al 33 %, 105 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (100 ml) y se lavó con agua (100 ml), seguido de salmuera. La capa orgánica separada se concentró a presión reducida para obtener un material en bruto; que finalmente se lavó con n-hexano para proporcionar el compuesto 6S-I (200 g, 30,6 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7,18 (d, J = 8,0 Hz, 6H), 6,81 (d, J = 8,0 Hz, 6H), 3,71 (s, 9H), 3,50 (s, 6H), 3,29 (s, 6H).

2-(4-metoxibencil)-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octano-5-carboxilato de bencilo (6S-J):

A una solución en agitación de 6S-H (100 g, 0,37 mol) en CH2Cl2 seco (500 ml) enfriada a -40 ºC se le añadió gota a gota Et3N (210,2 ml, 1,50 mol). La mezcla de reacción se agitó a -40 ºC durante 45 min. A esta se le añadió gota a gota una mezcla de 6S-I (50 g, 0,12 mol) en CH2Cl2 (150 ml) y BF3.OEt2 (47,6 g, 0,33 mol) a -40 ºC. La mezcla de reacción resultante se dejó en agitación a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se lavó con una solución saturada de NaHCO3, seguido de salmuera. La capa orgánica separada se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El material en bruto se disolvió en EtOAc y se mantuvo en el refrigerador para cristalización. Los cristales obtenidos se filtraron y se lavaron con EtOAc frío y se secaron al vacío para proporcionar 6S-J (82 g, 58 %) en forma de un sólido cristalino de color blanco. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7,36-7,30 (m, 5H), 7,24 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,81 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,09 (s, 2H), 4,29 (s, 1H), 4,13-3,96 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,11 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 2,16-2,09 (m, 2H), 1,83-1,77 (m, 2H), 1,20-1,15 (m, 2H). CLEM m/z: 381 [M++1]

1-Oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octano-5-carboxilato de bencilo (6S-K):

A una solución en agitación de 6S-J (30 g, 78,94 mmol) en MeCN (300 ml) y H2O (150 ml) enfriada a 0 ºC, se le añadió una solución de CAN (129 g, 0,23 mol) en H2O (300 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La masa resultante se vertió en agua enfriada con hielo y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 150 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO3 saturado, seguido de salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para obtener un material en bruto. El material obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con EtOAc para proporcionar 6S-K (8 g, 40 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7,90 (s, 1H), 7,36-7,29 (m, 5H), 5,10 (s, 2H), 3,53 (d, J = 4,5 Hz, 2H), 3,36-3,30 (m, 1H), 3,17-3,13 (m, 1H), 2,17-2,10 (m, 2H), 1,82-1,76 (m, 2H). CLEM m/z: 261 [M++1]

2-(2-Etoxi-2-oxoetil)-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octano-5-carboxilato de bencilo (6S-L)

A una solución agitada de 6S-K (10,0 g, 38,46 mmol) en acetonitrilo (100 ml) se le añadieron CS2CO3 (31,34 g, 96,19 mmol) y 2-bromoacetato de etilo (6,42 ml, 57,60 mmol) a TA y se agitó durante 16 h a TA. Los volátiles se evaporaron a presión reducida. El residuo se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml). La capa orgánica

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separada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El material en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con EtOAc al 80 %/Hexano para proporcionar 6S-L (10,0 g, 75 %) en forma de un jarabe de color pardo. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6) : δ 7,35 -7,30 (m, 5H), 5,06 (s, 2H), 4,21 (s, 1H), 4,18 (s, 1H), 4,13-4,10 (m, 2H), 3,69 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 3,47-3,44 (m, 3H), 2,16 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 1,87-1,80 (m, 2H), 1,21-1,14 (m, 3H). CLEM m/z: 261 [M++1]

Ácido 2-(5-((benciloxi)carbonil)-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)acético (6S-M):

A una solución agitada de 6S-L (6,0 g, 17,34 mmol) en THF: H2O (75 ml/40 ml) se le añadió LiOH.H2O (1,82 g, 43,33 mmol) a TA y se agitó durante 2 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), los volátiles se evaporaron a presión reducida. El residuo se diluyó con agua, se lavó con éter, la capa acuosa se acidificó a pH~2 usando HCl 2 N y se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Las capas orgánicas se lavaron con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida para proporcionar un compuesto, para proporcionar 6S-M (4,5 g, 88,2 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6) : δ 12,5 (s a, 1H), 7,35-7,30 (m, 5H), 5,06 (s, 2H), 4,21 (s, 1H), 4,18 (s, 1H), 3,69 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 3,47-3,44 (m, 3H), 2,16 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 1,87-1,80 (m, 2H) CLEM m/z: 319 [M++1]

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Síntesis de pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-metil 1-terc-butilo (6S-N):

A una solución en agitación de metil éster de prolina (70 g, 422 mmol) en CH2Cl2 (700 ml) se le añadió Et3N (183 ml, 1,26 mol) a 0 ºC y se agitó durante 10 min. Después, se añadió Boc-anhídrido (184 ml, 845 mmol) a 0 ºC y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la reacción se diluyó con agua (200 ml) y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 200 ml). La capa orgánica combinada se lavó con ácido cítrico (1 x 150 ml), salmuera (1 x 200 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró a presión reducida para proporcionar un compuesto en bruto, que se purificó por cromatografía en columna eluyendo con EtOAc al 50 %/n-hexano para obtener 6S-N (80 g, 83 %) en forma de un jarabe espeso. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6) : δ 4,15 -4,13 (m, 1H), 3,65 (s, 3H), 3,35-3,30 (m, 2H), 2,23-2,15 (m, 1H), 1,86-1,78 (m, 3H), 1,41 (s, 9H); CLEM (m/z): 129 [(M++1)-Boc];

Síntesis de 2-((benciloxi)metil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-metil 1-terc-butilo (6S-O):

A una solución en agitación de 6S-N (25 g, 109 mmol) en THF (250 ml) se le añadió LiHMDS (240 ml, 240 mmol) a -20 ºC y se agitó durante 2 h. A esa se le añadió gota a gota BOM-cloruro (23 ml, 163 mmol) a -30 ºC y se agitó durante 2 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la reacción se interrumpió con una solución acuosa de NH4Cl (100 ml) y se extrajo con EtOAc (2 x 200 ml). La capa orgánica combinada se lavó con agua (2 x 150 ml), seguido de una solución de salmuera (2 x 100 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró para obtener un compuesto en bruto, que se purificó por cromatografía en columna eluyendo con EtOAc al 10 %/n-hexano para proporcionar 6S-O (30 g, 79 %) en forma de un jarabe espeso. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6) : δ 7,36 -7,22 (m, 5H), 4,59-4,48 (m, 2H), 4,02-3,88 (m, 1H), 3,63 (s, 3H), 3,49-3,35 (m, 2H), 3,34-3,30 (m, 1H), 2,31-2,23 (m, 1H), 2,04-1,89 (m, 2H), 1,82-1,78 (m, 1H); CLEM (m/z): 249,4 [(M++1)-Boc]

Síntesis de ácido 2-((benciloxi)metil)-1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-2-carboxílico (6S-P):

A una solución en agitación de 6S-O (30 g, 86 mmol) en metanol (70 ml) se le añadió una solución de NaOH (6,88 g en 70 ml de H2O) a TA. La mezcla de reacción se calentó a 70 ºC durante 16 h. Después del consumo del material de

5 partida (según TLC), el disolvente de la reacción se evaporó a presión reducida y se diluyó con EtOAc (2 x 200 ml). La capa acuosa separada se acidificó usando una solución de ácido cítrico (pH ~3) y se extrajo con EtOAc (2 x 250 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 y se concentró para proporcionar un material en bruto, que se trituró con n-hexano para obtener 6S-P (25 g, 86,8 %) en forma de un sólido de color blanquecino. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6) : δ 12,35 (s a, 1H), 7,37-7,29 (m, 5H), 4,56-4,48 (m, 2H), 4,06-4,00 (m, 1H), 3,92-3,89 (m, 1H), 3,66-3,45 (m, 1H), 3,37-3,28 (m, 1H), 2,31-2,20 (m, 1H), 2,05-1,97 (m, 1H), 1,87-1,75 (m, 2H), 1,38 (s, 9H). CLEM (m/z): 335,3 [M++1]

Síntesis de ácido 1-(terc-butoxicarbonil)-2-(hidroximetil)pirrolidin-2-carboxílico (6S-Q):

15 A una solución en agitación de 6S-P (25 g, 74 mmol) en metanol (150 ml) se le añadió Pd al 10 %/C (7 g) al 50 % de humedad a TA y se agitó durante 10 h en una atmósfera de H2. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de celite y el lecho se lavó con metanol (100 ml). El filtrado obtenido se concentró a presión reducida para proporcionar 6S-Q (15 g, 82,8 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6) : δ 4,66 (s a, 1H), 3,96-3,83 (m, 1H), 3,63-3,59 (m, 1H), 3,49-3,41 (m, 1H), 3,34-3,25 (m, 1H), 2,30-2,17 (m, 1H), 1,95-1,72 (m, 3H), 1,38 (s, 9H).

Síntesis de 2-(hidroximetil)-2-((2-metoxi-2-oxoetil)carbamoil)pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (6S-R):

A una solución en agitación de 6S-Q (25 g, 102 mmol) en CH2Cl2 (250 ml) se le añadieron DIPEA (54,3 ml, 303 mmol),

25 EDCI (23,2 g, 122 mmol), HOBT (16,5 g, 122 mmol), metil éster de glicina.HCl (15,3 g, 122 mmol) a 0 ºC y se agitó a TA durante 12 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (100 ml) y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 100 ml). La capa orgánica combinada se lavó con ácido cítrico (1 x 100 ml), seguido de una solución de bicarbonato (1 x 100 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El material en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con EtOAc al 20 %/n-hexano para proporcionar 6S-R (20 g, 62,5 %) en forma de un jarabe espeso de color amarillo. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 8,02 (d, J = 19,5 Hz, 1H), 5,01 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,03-4,00 (m, 3H), 3,84-3,76 (m, 2H), 3,71-3,68 (m, 1H), 3,61 (s, 3H), 2,27-2,23 (m, 2H), 1,98-1,75 (m, 2H), 1,38 (s, 9H); Masa (IEN): m/z 217,2 [M--Boc+1]

35 Síntesis de 2-(2-metoxi-2-oxoetil)-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octano-5-carboxilato de terc-butilo (6S-S):

A una solución en agitación de trifenilfosfina (72,5 g, 276 mmol) en THF (200 ml) se le añadió DIAD (54,5 g, 276 mmol) a TA y se agitó durante 30 min. Después, se añadió lentamente 6S-R (35 g, 110 mmol) en (60 ml) THF y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la reacción se concentró a presión reducida. El material en bruto se trituró con éter dietílico al 30 %/n-hexano (2 x 500 ml). El disolvente orgánico filtrado se concentró y el residuo en bruto se purificó por cromatografía en columna, eluyendo con EtOAc al 30 %/n-hexano para proporcionar 6S-S (30 g, en bruto) en forma de un semisólido. RMN 1H: (500 MHz, CDCl3): δ 4,50-4,37 (m, 1H), 3,86 (s, 3H), 3,74-3,63 (m, 2H), 3,47-3,31 (m, 1H), 3,69-3,60 (m, 1H),

45 3,42-3,33 (m, 2H), 3,28-3,23 (m, 1H), 2,18-2,14 (m, 2H), 1,90-1,76 (m, 2H), 1,40 (s, 9H) Masa (IEN): m/z 319,3 [M++1]

Síntesis de ácido 2-(5-(terc-butoxicarbonil)-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)acético (6S-T):

A una solución en agitación de 6S-S (10 g, 33,5 mmol) en THF/H2O (100 ml) se le añadió LiOH.H2O (2,11 g, 50,2 mmol) a TA y se agitó durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la masa de reacción se evaporó a presión reducida. El material en bruto se lavó con éter dietílico (2 x 200 ml). La capa acuosa separada se acidificó usando una solución de ácido cítrico (pH ~3) y se extrajo con EtOAc (3 x 100 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 y se concentró para proporcionar 6S-T (5 g, 52,6 %)

55 RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6) : δ 12,80 (s a, 1H), 4,14-4,10 (m, 1H), 3,74-3,54 (m, 2H), 3,38-3,33 (m, 2H), 3,30-3,23 (m, 1H), 2,14-2,08 (m, 2H), 1,83-1,76 (m, 2H), 1,39 (s, 9H); CLEM (m/z): 283,3 [M--1], HPLC: 97,6 %

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Ácido (2S,3R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-hidroxibutanoico (6S-U)

A una solución en agitación de ácido (2S,3R)-2-amino-3-hidroxibutanoico (10 g, 83,9 mmol) en 1,4-dioxano/agua (100 ml, 1: 1)) se le añadió NaHCO3 (21,1 g, 0,25 mol), seguido de Boc-anhídrido (21,9 ml, 0,101 mol) a 0 ºC. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con EtOAc. La capa acuosa se acidificó usando una solución de ácido cítrico (pH ~3-4) y después se extrajo con CH2Cl2 (2 x 150 ml). Los extractos orgánicos separados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar 6S-U (15 g, en bruto). Este material se usó directamente para la siguiente etapa sin purificación adicional.

((2S,3R)-3-hidroxi-1-oxo-1-(pirrolidin-1-il)butan-2-il)carbamato de terc-butilo (6S-V):

A una solución en agitación de 6S-U (5 g, 22,8 mmol) en CH2Cl2 (50 ml) se le añadió EDCI.HCl (5,2 g, 27,3 mmol), HOBt (4,6 g, 34,2 mmol), seguido de DIPEA (10,5 ml, 57 mmol) y pirrolidina (1,945 g, 27,3 mmol) en una atmósfera de N2 a 0 ºC. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con DCM y se lavó con agua, seguido de NaHCO3 saturado y ácido cítrico. La capa orgánica separada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para obtener un producto en bruto. Este material se purificó por cromatografía en columna, eluyendo con MeOH al 2 %/DCM para proporcionar 6S-V (3 g, 48 %). RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 6,41 (d, 1H), 4,71 (d, 1H), 4,15 (t, 1H), 3,94 (c, 1H), 3,63-3,42 (m, 2H), 3,24 (c, 1H), 1,90-1,81 (m, 4H), 1,38 (s, 9H), 1,04 (s, 3H). CLEM (m/z): 273,2 [M++1]

(2S,3R)-2-amino-3-hidroxi-1-(pirrolidin-1-il)butan-1-ona (6S-W):

A una solución agitada de 6S-V (3 g, 11,0 mmol) en DCM (10 ml) se le añadió éter dietílico saturado con HCl (20 ml) a 0 ºC en una atmósfera de N2. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 4 h. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida para obtener un producto en bruto, que se lavó con éter para proporcionar 6S-W (2,0 g, 87 %). RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6) : δ 8,19 (s a, 3H), 3,98-3,91 (m, 2H), 3,62-3,59 (m, 1H), 3,49-3,42 (m, 1H), 3,39-3,35 (m, 2H), 1,96-1,90 (m, 4H), 1,17 (d, 3H). CLEM (m/z): 173,3 [M++1]

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Síntesis de 2-amino-3-hidroxibutanoato de (2S,3R)-metilo (6S-X):

A una solución en agitación de L-treonina (50 g, 420 mmol) en CH3OH (250 ml) se le añadió cloruro de tionilo (62,4 ml, 840mmol) a 0 ºC y se agitó a 75 ºC durante 6 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para proporcionar 6S-X (60 g, en bruto). Este material se usó directamente para la siguiente etapa sin purificación adicional. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 8,45 (s, 2H), 5,70 (s, 1H), 4,12-4,10 (m, 1H), 3,90 (s, 1H), 3,73 (s, 3H), 1,20 (d, J = 6,5 Hz, 3H).

Síntesis de 2-(((benciloxi)carbonil)amino)-3-hidroxibutanoato de (2S,3R)-metilo (6S-Y):

A una solución en agitación de 6S-X (60 g, 353 mmol) en agua/1,4-dioxano (150 ml/300 ml). La mezcla de reacción se enfrió a 0 ºC, se añadió NaHCO3 (88,9 g, 1,059 mol) a 0 ºC y se agitó durante 15 min. Se añadió gota a gota Cbz-Cl (60,7 ml, 426 mmol) y se agitó durante 1 h. La mezcla de reacción se agitó a TA y se agitó durante 12 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la masa de reacción se diluyó con EtOAc (300 ml). La capa orgánica separada se lavó con (2 x 200 ml) de una solución saturada de NaHCO3, seguido de una solución de salmuera (2 x 100 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar un material en bruto, que se trituró con n-hexano (500 ml) para proporcionar 6S-Y (70 g, 74 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6) : δ 7,37 -7,30 (m, 5H), 7,20 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,06 (s, 2H), 4,78 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 4,09-4,05 (m, 2H), 3,64 (s, 3H), 1,09 (d, J = 6,0 Hz, 3H).

CLEM m/z: 268,2 [M++1]

Síntesis de 2-(((benciloxi)carbonil)amino)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)butanoato de (2S,3R)-metilo (6S-Z):

A una solución en agitación de 6S-Y (50 g, 187 mmol) en DMF (400 ml) se le añadieron DIPEA (86 ml, 468 mmol), TBDMS-Cl (33,66 ml, 224 mmol) a 0 ºC y se agitó a TA durante 12 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la masa de reacción se diluyó con EtOAc (500 ml). La capa orgánica separada se lavó con (2 x 200 ml) de H2O, seguido de una solución de salmuera (2 x 100 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar un material en bruto, que se purificó por cromatografía en columna eluyendo con EtOAc al 10 %/hexano para proporcionar 6S-Z (50 g, 70,1 %) en forma de un jarabe incoloro. RMN 1H: (400 MHz, CDCl3): δ 7,39-7,32 (m, 5H), 5,43 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 5,14 (s, 2H), 4,45-4,43 (m, 1H), 4,29-4,26 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 1,21 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 0,83 (s, 9H), 0,09 (s, 6H) CLEM m/z: 382,2 [M++1]

Síntesis de ((2S,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)-1-hidrazinil-1-oxobutan-2-il)carbamato de bencilo (6S-AA):

Una solución de 6S-Z (50 g, 131 mmol) en EtOH (400 ml) se añadió a hidrato de hidrazina (32,8 g, 656 mmol), a TA y después se agitó a 90 ºC durante 24 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), se evaporó etanol a presión reducida. El residuo en bruto se diluyó con agua (100 ml) y EtOAc (500 ml). Después de separar la capa orgánica, se lavó con (2 x 100 ml) de agua, seguido de una solución de salmuera (1 x 100 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El material en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna, eluyendo con EtOAc al 20 %/hexano para proporcionar 6S-AA (25 g, 50 %) en forma de un jarabe espeso e incoloro. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 9,10 (s, 1H), 7,36-7,30 (m, 5H), 6,83 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 5,02 (s, 2H), 4,19 (s, 2H), 4,05-4,02 (m, 1H), 3,97-3,93 (m, 1H), 1,05 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 0,81 (s, 9H), 0,01 (s, 6H).

Síntesis de ((1S,2R)-2-((terc-butildimetilsilil)oxi)-1-(1,3,4-oxadiazol-2-il)propil)carbamato de bencilo (6S-AB):

Una solución de 6S-AA (25 g, 65,6 mmol) en ortoformiato de trietilo (250 ml) se añadió a p-TSA (catalítico, 250 mg) a TA y después se agitó a 80 ºC durante 3 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), se evaporó ortoformiato de trietilo a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por cromatografía en columna, eluyendo con EtOAc al 10 %/hexano para proporcionar 6S-AB (15 g, 58 %) en forma de un jarabe espeso. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 9,22 (s, 1H), 7,85 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 7,36-7,31 (m, 5H), 5,05 (s, 2H), 4,96-4,93 (m, 1H), 4,25 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 1,23 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 0,80 (s, 9H), 0,10 (s, 6H); CLEM m/z: 392,4 [M++1]

Síntesis de (1S,2R)-2-((terc-butildimetilsilil)oxi)-1-(1,3,4-oxadiazol-2-il)propan-1-amina (6S-AC):

A una solución en agitación de 6S-AB (15 g, 38,3 mmol) en metanol (200 ml) se le añadió Pd al 10 %/C al 50 % de humedad (5 g) y se agitó en una atmósfera de H2 (presión de globo) durante 4 h a TA. La mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de celite y se trituró con metanol (100 ml). El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar 6S-AC (10 g, en bruto) en forma de un jarabe espeso. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 9,15 (s, 1H), 4,11 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,03 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 2,05 (s a, 2H), 1,17 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 0,76 (s, 9H), 0,02 (s, 6H) CLEM m/z: 258,3 [M++1]

Síntesis de (1S,2R)-1-amino-1-(1,3,4-oxadiazol-2-il)propan-2-ol (6S-AD):

A una solución en agitación de 6S-AC (10 g, 38,9 mmol) en THF (100 ml) se añadió lentamente TBAF (20,3 g, 77,8 mmol) a 0 ºC y se agitó a TA durante 3 h. Después de la finalización de la reacción (según TLC), la mezcla de reacción se evaporó y se diluyó con EtOAc/H2O (200 ml/50 ml). La capa orgánica separada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por cromatografía en columna, eluyendo con MeOH al 5 %/DCM para proporcionar 6S-AD (5 g, en bruto) en forma de un jarabe espeso. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 9,12 (s, 1H), 3,94 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 3,85 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 3,17-3,13 (m, 3H), 1,05 (d, J = 6,0 Hz, 3H). CLEM m/z: 144 [M++1]

Esquema 6S-I-8:

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Síntesis de ácido 2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-hidroxibutanoico (6S-AE):

A una solución en agitación de ácido 2-amino-3-hidroxibutanoico (10 g, 83,9 mmol) en 1,4-dioxano/agua (100 ml, 1: 1)) se le añadió NaHCO3 (21,1 g, 0,25 mol), seguido de Boc-anhídrido (21,9 ml, 0,101 mol) a 0 ºC. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con EtOAc. La capa acuosa se acidificó usando una solución de ácido cítrico (pH ~3-4) y después se extrajo con CH2Cl2 (2 x 150 ml). Los extractos orgánicos separados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío para proporcionar 6S-AE (15 g, en bruto). Este material se usó directamente para la siguiente etapa sin purificación adicional.

Síntesis de ácido 3-(terc-butoxicarbonil)-2,2,5-trimetiloxazolidin-4-carboxílico (6S-AF).

A una solución en agitación de 6S-AE (15 g, 59,28 mmol) en THF (150 ml) se le añadió PPTS (1,47 g, 5,92 mmol), seguido de 2,2-dimetoxipropano (21,79 ml, 0,17 mol) a 0 ºC en una atmósfera de N2. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. La mezcla de reacción se calentó de nuevo a reflujo durante 6 h. La mezcla de reacción se diluyó con una solución acuosa de NaHCO3 y se lavó con EtOAc (1 x 100 ml). La capa acuosa se acidificó usando una solución de ácido cítrico (pH ~2) y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 100 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío para proporcionar 6S-AF (18 g, en bruto). RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6) : δ 13,25 (s a, 1H), 4,11-4,05 (m, 1H), 3,79 (d, 1H), 1,50 (s, 3H), 1,67 (s, 3H), 1,45 (s, 9H), 1,29 (d, 3H).

Síntesis de 4-carbamoil-2,2,5-trimetiloxazolidin-3-carboxilato de terc-butilo (6S-AG):

A una solución en agitación de 6S-AF (18 g, 69,4 mmol) en CH2Cl2 (180 ml) se le añadió HOBt (14,16 g, 0,104 mol), EDCI.HCl (19,88 g, 0,104 mol), seguido de NH4Cl (5,56 g, 0,104 mol) y DIPEA (31,9 ml, 0,173 mol) a 0 ºC. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se lavó con ácido cítrico acuoso, NaHCO3, seguido de salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida para dar un material en bruto; que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con MeOH al 2 %/CH2Cl2 para proporcionar 6S-AG (13 g, 72,5 %). RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6) : δ 7,51 (s a, 1H), 7,14 (s a, 1H), 3,97-3,95 (m, 1H), 3,71 (d, 1H), 1,51 (d, 6H), 1,34 (s, 9H), 1,24 (d, 3H). CLEM (IEN): 159,1 [(M++1)-Boc]

Síntesis de 4-(((dimetilamino)metilene)carbamoil)-2,2,5-trimetiloxazolidin-3-carboxilato de (Z)-terc-butilo (6S-AH):

Una solución de 6S-AG (13 g, 50,3 mmol) en DMF.DMA (130 ml) se agitó a la temperatura de reflujo durante 3 h en una atmósfera de N2. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para proporcionar 6S-AH (15,7 g, en bruto). Este material en bruto se recogió directamente para la siguiente etapa sin purificación adicional.

Síntesis de 2,2,5-trimetil-4-(1,2,4-oxadiazol-5-il)oxazolidin-3-carboxilato de terc-butilo (6S-AI):

A una solución en agitación de 6S-AH (15,7 g, 50,09 mmol) en etanol (157 ml) se le añadió clorhidrato de hidroxilamina (6,96 g, 0,10 mol) en una atmósfera de N2. La mezcla de reacción se calentó a reflujo y se agitó durante 2 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), se añadió ácido acético (28,6 ml, 0,50 mol) a la mezcla de reacción y después se sometió a reflujo durante 16 h. Los disolventes de la mezcla de reacción se evaporaron al vacío para dar un material en bruto; que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con EtOAc al 10 %/Hexano para proporcionar 6S-AI (4,5 g, 32 %). RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 6,35 (s, 2H), 4,61 (d, 1H), 4,22-4,15 (m, 1H), 1,55 (s, 6H), 1,37 (s, 2H), 1,25 (d, 3H), 1,21 (s, 6H). CLEM (IEN): 284 [M++1] Masa (m/z): 283 [M+]

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en columna eluyendo con MeOH al 5 %/DCM para proporcionar 6S-AN (5,5 g, 51 %) en forma de un líquido incoloro. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,73 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 7,55 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 5,28-5,26 (m, 1H), 1,24 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 0,99 (d, J = 6,4 Hz, 3H)

5 Síntesis de (2-((terc-butildimetilsilil)oxi)-1-(pirimidin-2-il)propan-1-ona (6S-AO):

A una solución en agitación de 6S-AN (5,5 g, 36 mmol) en DCM (150 ml) se le añadió imidazol (4,9 g, 72mmol), DMAP (880 mg, 0,72 mmol) a 0 ºC y se agitó durante 10 min. Después se añadió TBDMS-Cl (8,1 g, 54 mmol) a 0 ºC y se agitó a TA durante 6 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la masa de reacción se diluyó con H2O

10 (50 ml). La capa orgánica separada se lavó con una solución de salmuera (2 x 50 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar un material en bruto, que se purificó por cromatografía en columna eluyendo con EtOAc al 30 %/hexano para proporcionar 6S-AO (3 g, 31 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H: (400 MHz, CDCl3): δ 9,00 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 7,71 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 5,47-5,42 (m, 1H), 1,35 (d, J = 6,8 Hz,

15 3H), 0,79 (s, 9H), 0,05 (s, 6H)

Síntesis de (2-((terc-butildimetilsilil) oxi)-1-(pirimidin-2-il) propan-1-amina (6S-AP):

A una solución en agitación de 6S-AO (3 g, 11,2 mmol) en MeOH (50 ml) se le añadieron acetato sódico (1,8 g,

20 22,5 mmol), carbonato de amonio (8,8 g, 56,3 mmol), AcOH (0,6 ml, 11,2 mmol) a TA. Después, la mezcla de reacción se agitó a 70 ºC durante 2 h. La temperatura de la reacción se enfrió a TA y se añadió cianoborohidruro sódico (1,39 g, 22,5 mmol) y se agitó a 70 ºC durante 6 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), el MeOH se evaporó y el residuo en bruto se diluyó con DCM/H2O (50 ml/50 ml). La capa orgánica separada se lavó con salmuera (2 x 50 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para

25 proporcionar un material en bruto, que se purificó por cromatografía en columna eluyendo con MeOH al 5 %/DCM para proporcionar 6S-AP (2,4 g, 80 %) en forma de un semisólido. RMN 1H: (400 MHz, CDCl3): δ 8,83 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 7,40 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 4,13 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,90 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 1,12 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 0,70 (s, 9H), 0,02 (s, 6H).

30 Esquema 6S-I-10

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Síntesis de ácido 1-metil-1H-1,2,4-triazol-5-carboxilílico (6S-AQ):

35 A una solución agitada de 1-metil-1H-1,2,4-triazol (2,0 g, 24,0 mmol) en THF (20 ml) se le añadió gota a gota n-butil·litio (19 ml, 12,0 mmol) a -78 ºC y se agitó durante 2 h. Después, se añadió CO2 sólido (2 g) y la reacción se agitó a -78 ºC durante 1 h. La masa de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la de reacción se interrumpió con agua (3 ml) y el sólido obtenido se filtró. El sólido se trituró con éter dietílico/n-pentano (10 ml/10 ml). El sólido de color blanco se secó al vacío para proporcionar 6S-AQ (2,0 g,

40 65,7 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7,70 (s, 1H), 4,01 (s, 3H); CLEM m/z: 128,3 [M++1]

Esquema 6S-I-11 45

imagen51

Síntesis de (azidometil)benceno (6S-AR):

50 A una solución en agitación de bromuro de bencilo (30 g, 175 mmol) en dimetilformamida (300 ml) se le añadió azida sódica (45,6 g, 701 mmol) a TA en una atmósfera inerte. La mezcla de reacción resultante se agitó a 70 ºC durante 16 h. Después de la finalización de la reacción supervisada (por TLC), la mezcla de reacción se dejó a TA; los volátiles

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en forma de un sólido de color blanquecino. RMN 1H (6S-AW-2, confirmado por NOE): (500 MHz, DMSO-d6) : δ 7,44 -7,39 (m, 1H), 7,19-7,15 (m, 1H), 7,03 (dd, J = 10,5 Hz, 8,0 Hz, 2H), 5,67 (s, 2H), 4,29 (c, J = 7,5 Hz, 2H), 2,50 (s, 3H), 1,30 (t, J = 7,0 Hz, 3H); Masa m/z: 264,2 [M++1]

5 Síntesis de ácido 1-(3-fluorobencil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-carboxílico (6S-AX):

A una solución en agitación de 6S-AW-2 (1,5 g, 5,7 mmol) en THF/H2O (10 ml/5 ml, 1:1), EtOH (2 ml) se le añadió LiOH.H2O (490 mg, 11,4 mmol) a TA y se agitó durante 6 h. Después de la finalización de la reacción (según TLC), los

10 volátiles se evaporaron a presión reducida. El residuo se acidificó con HCl acuoso 2 N. El sólido precipitado se filtró y se co-destiló con tolueno (20 ml x 2), se secó a presión reducida para proporcionar 6S-AX (1,34 g, 82 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6) : δ 12,5 (s a, 1H), 4,16 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 2,50 (s, 3H), 1,84-1,79 (m, 1H), 1,68-1,49 (m, 5H), 1,21-0,96 (m, 5H); Masa m/z: 236,2 [M++1]

15

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Síntesis de 1-(azidometil)-2-fluorobenceno (6S-AY):

20 A una solución en agitación de 1-(bromometil)-2-fluorobenzeno (1 g, 5,29 mmol) en dimetilformamida (10 ml) se le añadió azida sódica (859 mg, 13,22 mmol) a TA en una atmósfera inerte. La mezcla de reacción resultante se agitó a 90 ºC durante 16 h. Después de la finalización de la reacción supervisada (por TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (100 ml) y EtOAc (100 ml). La capa orgánica separada se lavó con (3 x 100 ml) de agua enfriada y la capa

25 orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar 6S-AY (700 mg, en bruto) en forma de un jarabe de color amarillo. RMN 1H: (500 MHz, CDCl3): δ 7,35-7,31 (m, 2H), 7,18-7,08 (m, 2H), 4,40 (s, 2H); IR: 2102 (cm-1)

30 Síntesis de 1-(2-fluorobencil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-carboxilato de etilo (6S-AZ-1 y 6S-AZ-2):

A una solución en agitación de 6S-AY (1,5 g, 13,39 mmol) en tolueno (15 ml) se le añadió 6S-AS (3,03 g, 20,08 mmol) a TA en una atmósfera inerte. La mezcla de reacción resultante se calentó a 100 ºC y se agitó durante 16 h. Después de la finalización de la reacción, se dejó a TA y los volátiles se evaporaron a presión reducida para proporcionar un

35 residuo en bruto, que se purificó por cromatografía en columna eluyendo con EtOAc al 15 %/hexano para proporcionar 6S-AZ-1 (500 mg, 14,2 %) y 6S-AZ-2 (800 mg, 22,8 %) en forma de un sólido de color amarillo. RMN 1H (6S-AZ-2, confirmado por NOESY1D): (500 MHz, CDCl3): δ 7,33-7,30 (m, 1H), 7,12-7,05 (m, 3H), 5,58 (s, 2H), 4,42 (c, J = 7,0 Hz, 2H), 2,51 (s, 3H), 1,41 (t, J = 7,2 Hz, 3H);

40 Síntesis de ácido 1-(2-fluorobencil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-carboxílico (6S-BA):

A una solución en agitación de 6S-AZ-2 (800 mg, 3,04 mmol) en THF/H2O (10 ml/10 ml, 1:1) se le añadió LiOH.H2O (318 mg, 7,60 mmol) a TA y se agitó durante 16 h. Después de la finalización de la reacción (según TLC), los volátiles se evaporaron a presión reducida. El residuo se acidificó con HCl acuoso 2 N y el sólido precipitado se filtró y se lavó

45 con agua (5 ml), seguido de n-pentano (5 ml), se secó a presión reducida para proporcionar 6S-BA (600 mg, 84 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H (I2): (400 MHz, DMSO-d6) : δ 13,03 (s a, 1H), 7,45-7,39 (m, 1H), 7,28-7,16 (m, 3H), 5,65 (s, 2H), 2,50 (s, 3H); Masa m/z: 236,1 [M++1]

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Esquema 6S-1-16

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Síntesis de 1-(azidometil)-4-fluorobenceno (6S-BJ):

5 A una solución en agitación de 1-(bromometil)-4-fluorobenzeno (1 g, 5,29 mmol) en dimetilformamida (10 ml) se le añadió azida sódica (859 mg, 13,22 mmol) a TA en una atmósfera inerte. La mezcla de reacción resultante se agitó a 80 ºC durante 12 h. Después de la finalización de la reacción supervisada (por TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (100 ml) y EtOAc (100 ml). La capa orgánica separada se lavó con (3 x 100 ml) de agua enfriada y la capa

10 orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar 6S-BJ (800 mg, en bruto) en forma de un jarabe de color amarillo. IR: (2100 cm-1)

Síntesis de 1-(4-fluorobencil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-carboxilato de etilo (6S-BK-1 y 6S-BK-2):

15 A una solución en agitación de 6S-AS (500 mg, 4,46 mmol) en tolueno (5 ml) se le añadió 6S-BJ (1,01 g, 6,69 mmol) a TA en una atmósfera inerte. La mezcla de reacción resultante se calentó a 100 ºC y se agitó durante 12 h. Después de la finalización de la reacción, se dejó a TA y los volátiles se evaporaron a presión reducida para proporcionar un residuo en bruto, que se purificó por cromatografía en columna eluyendo con EtOAc al 30 %/hexano para proporcionar

20 6S-BK-1 (250 mg, 21,3 %) y 6S-BK-2 (400 mg, 34,1 %) en forma de un sólido de color amarillo. RMN 1H (6S-BK-2, confirmado por NOESY1D): (500 MHz, CDCl3): δ 7,18-7,15 (m, 2H), 7,04 (t, J = 8,5 Hz, 2H), 5,50 (s, 2H), 4,41 (c, J = 7,5 Hz, 2H), 2,46 (s, 3H), 1,41 (t, J = 7,0 Hz, 3H);

Síntesis de ácido 1-(4-fluorobencil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-carboxílico (6S-BL):

25 A una solución en agitación de 6S-BK-2 (800 mg, 3,04 mmol) en THF/H2O (5 ml/5 ml, 1:1) se le añadió LiOH.H2O (318 mg, 7,60 mmol) a TA y se agitó durante 16 h. Después de la finalización de la reacción (según TLC), los volátiles se evaporaron a presión reducida. El residuo se acidificó con HCl acuoso 2 N y el sólido precipitado se filtró y se lavó con agua (5 ml), seguido de n-pentano (5 ml), se secó a presión reducida para proporcionar 6S-BL (400 mg, 56 %) en

30 forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (6S-BL): (500 MHz, DMSO-d6) : δ 13,02 (s a, 1H), 7,28 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 7,20 (t, J = 9,0 Hz, 2H), 5,61 (s, 2H), 2,51 (s, 3H); Masa m/z: 236,1 [M++1]

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Síntesis de 1-(azidometil)-4-metoxibenceno (6S-BM):

40 A una solución en agitación de 1-(clorometil)-4-metoxibenceno (2 g, 12,7 mmol) en dimetilformamida (20 ml) se le añadió azida sódica (2,07 g, 31,7 mmol) a TA en una atmósfera inerte. La mezcla de reacción resultante se agitó a

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(2S,3R)-2-(2-(5-acetil-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)acetamido)-3-hidroxi butanamida (6S-FNL-7):

A una solución en agitación de (6S-FNL-4) (1 g, 2,39 mmol) en EtOAc (50 ml) se le añadió anhídrido acético (0,48 g, 4,78 mmol), seguido de Pd/C (0,5 g) en una atmósfera de N2. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h en una

5 atmósfera de H2. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de celite y se lavó con EtOAc (20 ml). El filtrado obtenido se concentró a presión reducida para proporcionar un compuesto en bruto, que se purificó por cromatografía en columna. La mezcla de compuesto obtenida se purificó por HPLC preparativa quiral para proporcionar (6S-FNL-7-F1) en la fracción-I (0,075 g), (6S-FNL-7-F2) en la fracción-II (0,062 g) en forma de sólidos de color blanquecino.

10 RMN 1H (Fr-I): (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,87 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 4,84 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,10-4,03 (m, 2H), 3,96 (s, 2H), 3,79 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 3,61-3,56 (m, 1H), 3,51-3,45 (m, 2H), 2,19-2,15 (m, 2H), 2,00 (s, 3H), 1,92-1,87 (m, 2H), 1,05 (d, J = 6,4 Hz, 3H). CLEM m/z: 327,3 [M++1]. Pureza de HPLC: Fr-I (91,20 %), Fr-II (97,03 %)

15 RMN 1H (Fr-II): (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,85 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 4,79 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 4,09-4,06 (m, 2H), 3,97 (s, 2H), 3,70 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 3,60-3,55 (m, 1H), 3,51-3,45 (m, 2H), 2,18-2,13 (m, 2H), 1,99 (s, 3H), 1,92-1,85 (m, 2H), 1,05 (d, J = 6,4Hz, 3H); CLEM m/z: 327,4 [M++1] Pureza de HPLC: Fr-II 97,03 %

20 (2S,3R)-3-hidroxi-2-(2-(5-(1-metil-1H-1,2,4-triazol-5-carbonil)-1-oxo-2,5-diazaespiro [3,4]octan-2-il)acetamido)butanamida (6S-FNL-8):

A una solución en agitación de (NRX-2079) (6S-FNL-5) (0,25 g, 0,88 mmol) en CH2Cl2 (20 ml) se le añadió HOBt

25 (178 mg, 1,32 mmol), EDCI.HCl (0,2 g, 1,00 mmol), seguido de DIPEA (0,4 ml, 2,20 mmol) y 6S-AQ (134 mg, 1,05 mmol) a 0 ºC. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para obtener un producto en bruto. Este material se purificó por cromatografía en columna, seguido de purificación por HPLC prep. para proporcionar NRX-2310 (6S-FNL-8) (0,07 g, 21 %).

30 RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 8,09 (s, 1H), 7,89 (t, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,12 (t, 1H), 4,93 (s, 1H), 4,19-4,15 (m, 2H), 4,03 (s, 3H), 3,96-3,91 (m, 4H), 3,44 (d, 1H), 2,25-2,20 (m, 3H), 1,97-1,91 (m, 2H), 1,07 (s, 3H). CLEM (m/z): 394,2 [M++1] Pureza de HPLC: 93 %

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5-carboxilato de bencilo (6S-2):

40 A una solución en agitación de 6S-M (1 g, 3,14 mmol) en CH2Cl2 (50 ml) se le añadió EDCI (719 mg, 3,76 mmol), HOBt (635 mg, 4,71 mmol), seguido de DIPEA (2,8 ml, 15,7 mmol) y 6S-W (784 mg, 3,77 mmol) a 0 ºC. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la reacción se interrumpió con agua y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 50 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se

45 concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó por cromatografía en columna para proporcionar 6S-2 (0,8 g, 54 %). CLEM (m/z): 473,4 [M++1]

N-((2S,3R)-3-hidroxi-1-oxo-1-(pirrolidin-1-il)butan-2-il)-2-(1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4] octan-2-il)acetamida (6S-3) 50

A una solución en agitación de 6S-2 (0,8 g, 1,69 mmol) en CH3OH (60 ml) se le añadió Pd/C (0,4 g) en una atmósfera de N2. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 4 h en una atmósfera de H2. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de celite y se lavó con MeOH. El filtrado

obtenido se concentró a presión reducida para proporcionar 6S-3 (0,5 g) en forma de un material en bruto. Este material se usó directamente para la siguiente etapa sin purificación adicional. CLEM (m/z): 339,3 [M++1]

5 N-((2S,3R)-3-hidroxi-1-oxo-1-(pirrolidin-1-il)butan-2-il)-2-(5-(1-metil-1H-1,2,4-triazol-5-carbonil)-1-oxo-2,5-diazaespiro[ 3,4]octan-2-il)acetamida (6S-FNL-9):

A una solución en agitación de 6S-3 (0,315 g, 2,48 mmol) en CH2Cl2 (60 ml) se le añadió EDCI.HCl (336 mg, 1,76 mmol), HOBt (297 mg, 2,20 mmol), DIPEA (0,67 ml, 3,67 mmol) y 6S-AQ (0,5 g, 1,47 mmol) a 0 ºC. La mezcla de

10 reacción se agitó a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con DCM y se lavó con agua. La capa orgánica separada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para obtener un producto en bruto. Este material se purificó por cromatografía en columna, seguido de purificación por HPLC prep. para proporcionar (6S-FNL-9): (80 mg, 12 %). RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,09 (s, 1H), 4,55-4,51 (m, 1H), 4,08 (d, 2H), 3,97 (s, 2H), 3,87-3,84 (m, 3H),

15 3,70-3,55 (m, 2H), 3,45 (t, 1H), 3,35-3,31 (m, 2H), 2,75 (s, 3H), 2,27-2,24 (m, 2H), 1,98-1,92 (m, 4H), 1,85-1,84 (m, 2H), 1,19 (d, 3H), CLEM (m/z): 448 [M++1] Pureza de HPLC: 94 %

Síntesis de 2-(5-acetil-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)-N-((2S,3R)-3-hidroxi-1-oxo-1-(pirrolidin-1-il)butan-220 il)acetamida (6S-FNL-10):

A una solución en agitación de 6S-2 (300 mg, 0,63 mmol) en EtOAc (20 ml) se le añadió anhídrido acético (0,13 g, 1,27 mmol), seguido de Pd/C (150 mg) en una atmósfera de N2. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h en una atmósfera de H2. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se filtró a

25 través de un lecho de celite y se lavó con EtOAc (20 ml). El filtrado obtenido se concentró a presión reducida para proporcionar un compuesto en bruto, que se purificó por cromatografía en columna, eluyendo con MeOH al 2 %/DCM para proporcionar (6S-FNL-10) (90 mg, 37,5 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,08 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 4,83-4,75 (m, 1H), 4,44-4,38 (m, 1H), 3,93-3,83 (m, 3H), 3,72-3,67 (m, 1H), 3,64-3,57 (m, 3H), 3,55-3,46 (m, 1H), 3,29-3,23 (m, 3H), 2,13-2,09 (m, 2H), 2,07 (s, 3H), 1,98-1,82

30 (m, 4H), 1,79-1,73 (m, 2H), 1,11-0,98 (m, 3H); CLEM m/z: 381,3 [M++1]; Pureza de HPLC: 94,2 %

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35 Síntesis de 2-(2-(((1S,2R)-2-hidroxi-1-(1,3,4-oxadiazol-2-il) propil)amino)-2-oxoetil)-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octano5-carboxilato de bencilo (6S-4):

A una solución en agitación de 6S-M (600 mg, 4,19 mmol) en DCM (20 ml) se le añadió N,N-diisopropiletilamina

40 (1,93 ml, 10,4 mmol), 6S-AD (1,60 g, 5,02 mmol), seguido de HATU (1,91 g, 5,02 mmol) a 0 ºC y se agitaron a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (20 ml). La capa orgánica separada se lavó con una solución saturada de NaHCO3 (1x30 ml), seguido de una solución de salmuera (1 x 20 ml). La capa orgánica separada se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida para proporcionar 6S-4 (600 mg, 33,3 %) en forma de un jarabe de color amarillo.

45 RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 9,21 (s, 1H), 7,35-7,32 (m, 5H), 5,13 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 5,13 (s, 2H), 5,09-5,00 (m, 1H), 4,12-3,94 (m, 2H), 3,70-3,33 (m, 6H), 2,16-2,11 (m, 4H), 1,08 (d, J = 6,5 Hz, 3H); CLEM m/z: 444,5 [M++1]

Síntesis de N-((1S,2R)-2-hidroxi-1-(1,3,4-oxadiazol-2-il)propil)-2-(1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)acetamida 50 (6S-FNL-11):

A una solución en agitación de 6S-4 (600 mg, 1,35 mmol) en MeOH (10 ml) se le añadió (al 50 % de humedad) Pd al

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RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,94 (s, 1H), 8,68-8,60 (m, 1H), 5,22-5,10 (m, 2H), 4,20-4,07 (m, 2H), 3,86-3,79 (m, 1H), 3,71-3,65 (m, 2H), 3,58-3,51 (m, 1H), 3,38-3,34 (m, 1H), 2,77-2,66 (m, 1H), 2,15-1,91 (m, 4H), 1,14 (d, J = 4,0 Hz, 3H), 1,03-0,97 (m, 6H); CLEM m/z: 380,4 [M++1]; UPLC: 94,01 %

Esquema 6S-9:

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Síntesis de 2-(2-(((1S,2R)-2-hidroxi-1-(1,2,4-oxadiazol-5-il)propil)amino)-2-oxoetil)-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octano10 5-carboxilato de terc-butilo (6S-FNL-18):

A una solución en agitación de 6S-T (1 g, 3,51 mmol) en DMF (10 ml) se le añadieron DIPEA (1,75 ml, 10,53 mmol), EDCI (1,0 g, 5,26 mmol), HOBT (710 mg, 5,26 mmol), seguido de 6S-AJ (602 mg, 4,21 mmol) a 0 ºC y se agitó durante 16 h a TA. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua

15 (15 ml). La capa orgánica separada se lavó con una solución de salmuera (1 x 20 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El material en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con MeOH al 2 %/DCM para proporcionar (6S-FNL-18) (150 mg, 10,5 %) en forma de un jarabe espeso. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,95 (s, 1H), 8,52 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,25 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 5,19-5,10 (m, 1H),

20 4,21-4,17 (m, 2H), 3,86-3,80 (m, 1H), 3,71-3,67 (m, 1H), 3,55 (t, J = 4,4 Hz, 2H), 3,27-3,23 (m, 1H), 2,13-2,08 (m, 2H), 1,82-1,74 (m, 2H), 1,39 (s, 9H), 1,10 (d, J = 6,4 Hz, 3H); Masa (IEN): m/z 432,4 [M++Na]; HPLC: 98,35 % (ambos isómeros)

25 Esquema 6S-10:

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2-(5-acetil-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)-N-(2-((terc-butildimetilsilil)oxi)-1-(pirimidin-2-il)propil)acetamida 30 (6S-5):

A una solución en agitación de 6S-BU (400 mg, 1,77 mmol) en DCM (20 ml) se le añadió N,N-diisopropiletilamina (0,9 ml, 5,32 mmol), 6S-AP (474 mg, 1,77 mmol), EDCI.HCl (509 mg, 2,66 mmol), HOBT (410 mg, 2,66 mmol) a 0 ºC y se agitaron a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se

35 concentró a presión reducida para dar un producto en bruto, que se purificó por cromatografía en columna con MeOH al 4 %/DCM para proporcionar 6S-5 (300 mg, 35 %) en forma de un jarabe espeso e incoloro. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,78 (d, J = 16,0 Hz, 2H), 8,35 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 4,88 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 4,37 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 3,85 (s, 2H), 3,76 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 3,63-3,57 (m, 1H), 3,49-3,43 (m, 1H), 3,13 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 2,13-2,10 (m, 2H), 2,01 (s, 3H), 1,16 (d, J = 5,5 Hz, 3H), 0,64 (s, 9H),

40 0,06 (s, 6H); CLEM m/z: 474,6 [M+-1]

Síntesis de 2-(5-acetil-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)-N-((1R, 2R)-2-hidroxi-1-(pirimidin-2-il)propil)acetamida (6S-FNL-19):

45 A una solución en agitación de 6S-5 (300 mg, 0,63 mmol) en THF (20 ml) se le añadió lentamente TBAF (1,26 ml) a 0 ºC y se agitó a TA durante 2 h. Después de la finalización de la reacción (según TLC), la mezcla de reacción se evaporó para dar un producto en bruto, que se purificó por cromatografía en columna eluyendo con MeOH al 4 %/DCM para proporcionar una mezcla (110 mg) de isómeros, que se purificó de nuevo por un método de purificación de HPLC preparativa quiral para proporcionar (6S-FNL-19) (60 mg, 26 %) en forma de un líquido incoloro. RMN 1H: (400 MHz,

50 DMSO-d6): δ 8,76 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 8,28 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,37 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 4,91-4,79 (m, 2H), 4,15-4,10 (m, 1H), 3,92-3,78 (m, 2H), 3,67 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 3,60-3,54 (m, 1H), 3,49-3,31 (m, 2H), 2,13-2,11 (m, 2H), 2,09 (s, 3H), 2,08-1,87 (m, 2H), 1,09 (d, J = 6,4 Hz, 3H); CLEM m/z: 362,4 [M++1]; HPLC: 97,5 %

55 Esquema 6S-11:

imagen68

Síntesis de 2-(2-((2-((terc-butildimetilsilil)oxi)-1-(pirimidin-2-il)propil)amino)-2-oxoetil)-1-oxo-2,55 diazaespiro[3,4]octano-5-carboxilato de terc-butilo (6S-6):

A una solución en agitación de 6S-T (300 mg, 1,05 mmol) en DCM (20 ml) se le añadieron DIPEA (0,55 ml, 3,16 mmol), 6S-AP (338 mg, 1,26 mmol), seguido de BOP (696 mg, 1,57 mmol) a 0 ºC y se agitó durante 12 h a TA. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (15 ml). La capa

10 orgánica separada se lavó con una solución de salmuera (1 x 20 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El material en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con MeOH al 2 %/DCM para proporcionar 6S-6 (150 mg, 26 %) en forma de un jarabe espeso. CLEM (m/z): 534,7 [M++1]

15 Síntesis de 2-(2-((2-hidroxi-1-(pirimidin-2-il)propil)amino)-2-oxoetil)-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octano-5-carboxilato de terc-butilo (6S-FNL-20):

A una solución en agitación de 6S-6 (300 mg, 0,56 mmol) en THF (10 ml) se le añadió TBAF (1 M en THF) (1,11 ml, 1,12 mmol) a 0 ºC en una atmósfera de N2 y se agitó a TA durante 2 h. Después del consumo del material de partida

20 (según TLC), la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para obtener un residuo en bruto, que se diluyó con agua (10 ml) y EtOAc (20 ml). La capa orgánica separada se lavó con una solución de salmuera (1 x 30 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar un compuesto en bruto, que se purificó por purificación de HPLC preparativa para obtener (6S-FNL-20) (40 mg, 17 %) en forma de un sólido de color blanco.

25 RMN 1H: (400 MHz, CD3OD): 8,79-8,72 (m, 2H), 7,39-7,34 (m, 1H), 5,13-5,08 (m, 1H), 4,81-4,70 (m, 1H), 4,50-4,40 (m, 1H), 4,35-4,21 (m, 1H), 3,91-3,75 (m, 2H), 3,48-3,37 (m, 3H), 2,33-2,22 (m, 2H), 1,97-1,85 (m, 2H), 1,41 (s, 9H), 1,18-1,16 (m, 3H); CLEM (m/z): 420,5 [M++1]; HPLC: 99,3 %

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imagen69

Síntesis de 2-(2-((2-((terc-butildimetilsilil)oxi)-1-(pirimidin-2-il)propil)amino)-2-oxoetil)-1-oxo-2,5-diaza35 espiro[3,4]octano-5-carboxilato de bencilo (6S-7):

A una solución en agitación de 6S-M (1,3 g, 4,08 mmol) en DCM (30 ml) se le añadieron N,N-diisopropiletilamina (2,1 ml, 12,2 mmol), 6S-AP (1,09 g, 4,08 mmol), seguido de EDCI.HCl (1,1 g, 6,13 mmol), HOBT (938 mg, 6,13 mmol) a 0 ºC y se agitaron a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de

40 reacción se diluyó con agua (30 ml). La capa orgánica separada se lavó con una solución de salmuera (1 x 50 ml). La capa orgánica separada se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida para proporcionar un material en bruto, que se purificó por cromatografía en columna eluyendo con MeOH al 4 %/DCM para obtener 6S-7 (1,5 g, 65 %) en forma de un jarabe espeso de color amarillo. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): 88,80-8,74 (m, 2H), 7,39-7,34 (m, 6H), 5,09 (s, 2H), 4,93 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 4,38-4,19

45 (m, 1H), 4,05-3,68 (m, 2H), 3,49-3,39 (m, 4H), 2,20-2,11 (m, 2H), 1,86-1,85 (m, 2H), 1,19-1,10 (m, 4H), 0,65 (s, 9H), -0,07 (s, 3H), -0,03 (s, 3H); CLEM m/z: 568 [M++1] Síntesis de N-(2-((terc-butildimetilsilil)oxi)-1-(pirimidin-2-il)propil)-2-(1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)acetamida (6S-8):

A una solución en agitación de 6S-7 (500 mg, 0,88 mmol) en EtOAc (25 ml) se le añadió (al 50 % de humedad) Pd al

5 10 %/C (250 mg) y se agitó en una atmósfera de H2 (presión de globo) a TA durante 7 h. Después de la finalización de la reacción (según TLC), la mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de celite y se trituró con EtOAc (10 ml). El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar 6S-8 (320 mg, en bruto) en forma de un jarabe espeso de color amarillo. Este compuesto se usó directamente para la siguiente etapa sin ninguna purificación. CLEM m/z: 434,5 [M++1]

10 Síntesis de N-(2-((terc-butildimetilsilil)oxi)-1-(pirimidin-2-il)propil)-2-(5-(1-metil-1H-1,2,4-triazol-5-carbonil)-1-oxo2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)acetamida (6S-9):

A una solución en agitación de 6S-AQ (93 mg, 0,73 mmol) en DCM (20 ml) se le añadió N,N-diisopropiletilamina

15 (0,4 ml, 2,21 mmol), 6S-8 (320 mg, 0,73 mmol), seguido de EDCI.HCl (211 mg, 1,10 mmol), HOBT (170mg, 1,10 mmol) a 0 ºC y se agitaron a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se evaporó a presión reducida y el material en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna eluyendo con MeOH al 4 %/DCM para proporcionar 6S-9 (210 mg, en bruto) en forma de un jarabe espeso de color amarillo. Este compuesto se usó directamente para la siguiente etapa sin ninguna purificación. CLEM m/z: 543,5

20 [M++1]

Síntesis de N-(2-hidroxi-1-(pirimidin-2-il)propil)-2-(5-(1-metil-1H-1,2,4-triazol-5-carbonil)-1-oxo-2,5-diaza

espiro[3,4]octan-2-il)acetamida (6S-FNL-21):

25 A una solución en agitación de 6S-9 (210 mg en bruto, 0,38 mmol) en THF (5 ml) se le añadió TBAF en THF (0,77 ml, 0,76 mmol) a 0 ºC y se agitaron a TA durante 3 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se evaporó a presión reducida y el material en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna eluyendo con MeOH al 4 %/DCM, seguido de TLC preparativa para proporcionar (6S-FNL-21) (70 mg, 42 %) en forma de un jarabe espeso de color amarillo.

30 RMN 1H: (400 MHz, CD3OD): 88,75-8,70 (m, 2H), 7,95 (s, 1H), 7,36-7,30 (m, 1H), 5,16-5,13 (m, 1H), 4,53 (s, 1H), 4,41-4,43 (m, 2H), 4,29-4,03 (m, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,96-3,81 (m, 2H), 3,58-3,54 (m, 1H), 2,37-2,34 (m, 2H), 2,09-2,00 (m, 2H), 1,22 (d, J = 6,4 Hz, 3H); CLEM m/z: 429 [M++1].

Esquema 6S-13:

imagen70

Síntesis de (2S,3R)-3-hidroxi-2-(2-(5-isobutiril-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)acetamido)butanamida

(6S-FNL-22):

40 A una solución en agitación de 6S-BX (500 mg, 1,96 mmol) en DMF (3 ml) se le añadieron N,N-diisopropiletilamina (1,02 ml, 5,88 mmol), 6S-F (277mg, 2,35 mmol), seguido de HATU (893 mg, 2,35 mmol) a 0 ºC y se agitaron a TA durante 16 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se inactivó con una solución de salmuera (15 ml) y se extrajo con MeOH al 10 %/DCM (2 x 15 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar un producto en bruto, que se purificó por

45 cromatografía en columna con MeOH al 2 %/DCM para proporcionar (6S-FNL-22) (100 mg, 14,4 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H: (400 MHz, D2O): 84,37-4,34 (m, 2H), 4,08-3,96 (m, 2H), 3,84-3,79 (m, 1H), 3,72-3,68 (m, 1H), 3,67-3,61 (m, 1H), 2,93-2,86 (m, 1H), 2,37-2,25 (m, 2H), 2,11-2,02 (m, 2H), 1,38-1,29 (m, 4H), 1,14-1,09 (m, 6H); CLEM m/z: 355,5 [M++1];

50 HPLC: 99,97 %

Esquema 6S-14:

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Síntesis de 2-(2-(((2S,3R)-1-amino-3-hidroxi-1-oxobutan-2-il)amino)-2-oxoetil)-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octano5-carboxilato de terc-butilo (6S-FNL-23):

A una solución en agitación de 6S-T (2 g, 7,04 mmol) en DMF (10 ml) se le añadieron DIPEA (3,78 ml, 21,12 mmol), 6S-F (997 mg, 8,44 mmol), seguido de HATU (3,2 g, 8,44 mmol) a 0 ºC y se agitó durante 16 h a TA. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (100 ml) y se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El material en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con MeOH al 2 %/DCM para proporcionar (6S-FNL-23) (1,1 g, 40,7 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H: (400 MHz, D2O): δ 4,33-4,26 (m, 3H), 4,21-4,12 (m, 1H), 4,05-3,86 (m, 1H), 3,59-3,55 (m, 2H), 3,53-3,35 (m, 1H), 2,33-2,27 (m, 2H), 1,97-1,90 (m, 2H), 1,46 (s, 9H), 1,25-1,22 (m, 3H); Masa (IEN): m/z 383,4 [M+-1]; HPLC: 97,8 % (ambos isómeros)

imagen72

Síntesis de acetato de (2R,3S)-4-amino-3-(2-(5-(1-bencil-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-carbonil)-1-oxo2,5-diazaespiro[3,4] octan-2-il)acetamido)-4-oxobutan-2-ilo (6S-FNL-24):

A una solución en agitación de 6S-AU (4,0 g, 18,43 mmol) en CH2Cl2 (20 ml), DMF (0,1 ml) se le añadió cloruro de oxalilo (3,34 ml, 36,86 mmol) a 0 ºC. La mezcla de reacción se calentó a TA y se agitó durante 2 h. Los volátiles se evaporaron a presión reducida en presencia de una atmósfera de N2 para proporcionar un cloruro de ácido. A una solución agitada de cloruro de ácido en DCM (40 ml) se le añadió (6S-FNL-3) (3,8 g, 11,65 mmol), N,N-diisopropiletilamina (6,44 ml, 37,04 mmol) a 0 ºC. La mezcla de reacción resultante se agitó a TA durante 2 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (30 ml) y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 30 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con NaHCO3 (2 x 25 ml). Los extractos orgánicos separados se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida para dar un producto en bruto, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con MeOH al 2 %/CH2Cl2 para proporcionar el compuesto (6S-FNL-24) (2,6 g, 42,5 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7,87, 7,89 (dd, J = 8,5 Hz, J = 8,5 Hz, 1H), 7,47 (d, J = 11,0 Hz, 2H), 7,38-7,31 (m, 2H), 7,17 (t, 3H), 5,63 (s, 2H), 5,20-5,16 (m, 1H), 4,43-4,41 (m, 1H), 4,24-4,14 (m, 1H), 4,02 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 3,84 (s, 3H), 3,38-3,33 (m, 1H), 2,20-2,14 (m, 2H), 1,97 (s, 3H), 1,92-1,80 (m, 5H), 1,16 (t, J = 7,5 Hz, 3H) CLEM m/z: 526,6 [M++1]; HPLC: 51,34 % y 46,08 % (enantiómeros)

Síntesis de acetato de (2R,3S)-4-amino-3-(2-(5-(1-(4-fluorobencil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-carbonil)1-oxo-2,5-diazaespiro [3,4]octan-2-il)acetamido)-4-oxobutan-2-ilo (6S-FNL-25):

A una solución en agitación de 6S-BL (100 mg, 0,42 mmol) en CH2Cl2 (5 ml), DMF (0,1 ml) se le añadieron cloruro de oxalilo (108 mg, 0,85 mmol) a 0 ºC. La mezcla de reacción se calentó a TA y se agitó durante 2 h. Los volátiles se evaporaron a presión reducida en presencia de una atmósfera de N2 para proporcionar un cloruro de ácido (150 mg, en bruto). A una solución agitada de cloruro de ácido (150 mg, 0,59 mmol, en bruto) en DCM (10 ml) se le añadieron (6S-FNL-3) (193 mg, 0,59 mmol), N,N-diisopropiletilamina (229 mg, 1,77 mmol) a 0 ºC. La mezcla de reacción resultante se agitó a TA durante 8 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (10 ml) y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 20 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con una

imagen73

Síntesis de acetato de (2R,3S)-4-amino-3-(2-(5-(1-(2-fluorobencil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-carbonil)-1-oxo-2,5diazaespiro[3,4]octan-2-il)acetamido)-4-oxobutan-2-ilo (6S-FNL-29):

A una solución en agitación de 6S-BA (100 mg, 0,42 mmol) en CH2Cl2 (5 ml), DMF (0,1 ml) se le añadieron cloruro de oxalilo (108 mg, 0,85 mmol) a 0 ºC. La mezcla de reacción se calentó a TA y se agitó durante 2 h. Los volátiles se evaporaron a presión reducida en presencia de una atmósfera de N2 para proporcionar un cloruro de ácido (100 mg, en bruto). A una solución agitada de cloruro de ácido (100 mg, 0,39 mmol, en bruto) en DCM (5 ml) se le añadieron (6S-FNL-3) (144 mg, 0,47 mmol), N,N-diisopropiletilamina (142 mg, 1,17 mmol) a 0 ºC. La mezcla de reacción resultante se agitó a TA durante 8 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (10 ml) y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 20 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con una solución saturada de NaHCO3 (2 x 30 ml), seguido de una solución de ácido cítrico (1 x 20 ml). Los extractos orgánicos separados se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida para obtener un producto en bruto, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con MeOH al 2 %/CH2Cl2 para proporcionar el compuesto (6S-FNL-29) (120 mg, 56,8 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H: (400 MHz, DMSO-d6): 88,00-7,91 (m, 1H), 7,50-7,39 (m, 2H), 7,28-7,13 (m, 4H), 5,67 (s, 2H), 5,21-5,16 (m, 1H), 4,44-4,40 (m, 1H), 4,20 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 3,90-3,81 (m, 3H), 3,39-3,34 (m, 1H), 2,50 (s, 3H), 2,22-2,15 (m, 2H), 1,92-1,86 (m, 2H), 1,82 (s, 3H), 1,20 (d, J = 6,4 Hz, 3H); CLEM m/z: 544,6 [M++1]; HPLC: 98,6 % (ambos enantiómeros)

Síntesis de acetato de (2R,3S)-4-amino-3-(2-(5-(1-(ciclohexilmetil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-carbonil)-1-oxo-2,5diazaespiro[3,4]octan-2-il)acetamido)-4-oxobutan-2-ilo (6S-FNL-30):

A una solución agitada de 6S-BE (200 mg (en bruto), 0,82 mmol) en DCM (10 ml) se le añadieron (6S-FNL-3) (270 mg, 0,82 mmol), N,N-diisopropiletilamina (320 mg, 2,48 mmol) a 0 ºC. La mezcla de reacción resultante se agitó a TA durante 8 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (10 ml) y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 30 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con una solución de NaHCO3 (1 x 20 ml), una solución de ácido cítrico (1 x 20 ml), seguido de una solución de salmuera (2 x 30 ml). Las capas orgánicas separadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida para obtener un producto en bruto, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con MeOH al 2 %/CH2Cl2 para proporcionar el compuesto (6S-FNL-30) (86 mg, 19,7 %) en forma de un sólido blanquecino. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7,98 (dd, J = 8,8 Hz, 9,2 Hz, 1H), 7,47 (dd, J = 7,6 Hz, 1H), 7,16 (dd, J = 7,6 Hz, 10,0 Hz, 1H), 5,22-5,13 (m, 1H), 4,43-4,39 (m, 1H), 4,20-4,14 (m, 3H), 4,02-3,99 (m, 1H), 3,87 (t, J = 6,0 Hz, 4H), 2,48 (s, 3H), 2,20-2,11 (m, 2H), 2,42-2,30 (s, 1H), 1,88-1,85 (m, 2H), 1,82 (s, 3H), 1,64-1,59 (m, 4H), 1,48-1,45 (m, 2H), 1,27-1,11 (m, 4H), 0,84 (d, J = 6,8 Hz, 3H); CLEM m/z: 532,6 [M++1]; HPLC: 91,2 %.

Síntesis de acetato de (2R,3S)-4-amino-3-(2-(5-(1-(ciclopentilmetil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-carbonil)-1-oxo-2,5diazaespiro[3,4]octan-2-il)acetamido)-4-oxobutan-2-ilo (6S-FNL-31):

A una solución en agitación de 6S-BI (250 mg, 1,19 mmol) en CH2Cl2 (10 ml), DMF (0,1 ml) se le añadió cloruro de oxalilo (0,2 ml, 2,38 mmol) a 0 ºC. La mezcla de reacción se calentó a TA y se agitó durante 2 h. Los volátiles se evaporaron a presión reducida en presencia de una atmósfera de N2 para proporcionar un cloruro de ácido (300 mg, en bruto). A una solución agitada de cloruro de ácido (300 mg, en bruto) en DCM (5 ml) se le añadieron (6S-FNL-3) (358 mg, 1,19 mmol), N,N-diisopropiletilamina (0,57 ml, 3,57 mmol) a 0 ºC. La mezcla de reacción resultante se agitó a TA durante 1 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (10 ml) y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 20 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con una solución de salmuera (2 x 10 ml) y se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se concentraron a presión reducida para obtener un producto en bruto, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con MeOH al 2 %/CH2Cl2 para proporcionar el compuesto (6S-FNL-31) (100 mg, 16,2 %) en forma de un sólido de color pardo. RMN 1H: (500 MHz, DMSO-d6, D2O): 85,22-5,19 (m, 1H), 4,39-4,37 (m, 1H), 4,22-4,14 (m, 2H), 3,98-3,96 (m, 2H), 3,91-3,85 (m, 2H), 3,38-3,34 (m, 1H), 2,50 (s, 3H), 2,41 (s, 2H), 2,36-2,31 (m, 4H), 2,19 (s, 3H), 1,90 (d, J = 7,5 Hz, 3H), 1,58-1,47 (m, 4H), 1,22-1,16 (m, 4H). CLEM m/z: 518,6 [M++1]; HPLC: 90 % (ambos enantiómeros)

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Síntesis de N-(2-hidroxi-1-(pirimidin-2-il)propil)-2-(1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)acetamida (6S-10):

A una solución en agitación de (6S-FNL-20) (1 g, 2,38 mmol) en DCM (20 ml) se le añadió TFA (1,75 ml, 2,38 mmol) a 0 ºC y se agitaron a TA durante 2 h. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción

5 se concentró a presión reducida para obtener un residuo en bruto, que se trituró con n-pentano (10 ml) para proporcionar 6S-10 (1 g, en bruto) en forma de un jarabe espeso, que se usó directamente para la siguiente etapa sin ninguna purificación. RMN 1H: (400 MHz, D2O): 9,10 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,96-8,85 (m, 1H), 7,89-7,60 (m, 1H), 4,40-4,22 (m, 1H), 4,12-4,00 (m, 2H), 3,95-3,84 (m, 1H), 3,78-3,67 (m, 1H), 3,50-3,44 (m, 2H), 3,20-3,16 (m, 1H), 2,44-2,36 (m, 2H), 2,21-2,07 (m, 2H), 1,15-1,12 (m, 3H); CLEM (IEN): m/z 320,3 [M++1];

Síntesis de N-(2-hidroxi-1-(pirimidin-2-il)propil)-2-(5-isobutiril-1-oxo-2,5-diazaespiro[3,4]octan-2-il)acetamida

(6S-FNL-32):

15 A una solución en agitación del compuesto 6S-10 (1 g, 2,30 mmol) en DCM (25 ml) se le añadió TEA (0,96 ml, 6,9 mmol) a 0 ºC y se agitó a TA durante 5 min. Después, se añadió lentamente cloruro de isobutirilo (292 mg, 2,76 mmol) y se agitó durante 2 h a TA. Después del consumo del material de partida (según TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (15 ml). La capa orgánica separada se lavó con una solución de salmuera (1 x 30 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar un compuesto en bruto, que se purificó por cromatografía en columna, eluyendo con MeOH al 10 %/EtOAc para obtener (6S-FNL-32) (230 mg, 25,7 %) en forma de un jarabe espeso. RMN 1H: (500 MHz, CD3OD): 8,75 (d, J = 12,5 Hz, 2H), 7,37 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 4,52-4,45 (m, 1H), 4,22-4,00 (m, 1H), 3,96-3,66 (m, 2H), 3,64-3,57 (m, 1H), 3,47-3,33 (m, 3H), 2,84-2,65 (m, 2H), 2,31-2,24 (m, 2H), 2,06-1,99 (m, 2H),

25 1,39-1,24 (m, 3H), 1,19-1,05 (m, 6H); CLEM (IEN): m/z 390,4 [M++1]; HPLC: 98,4 %

Ejemplo 12 -Ensayo de unión de [3H] MK-801

Métodos

Se realizaron ensayos como se describe en Moskal et al. (Moskal, J.R., Kuo, A.G., Weiss, C., Wood, P.L., O’Connor Hanson, A., Kelso, S., Harris, R.B., Disterhoft, J.F., 2005. GLYX-13: a monoclonal antibody-derived peptide that acts as

35 an N-methyl-D-aspartate receptor modulator. Neuropharmacology. 49, 1077-87). Se midió la potenciación de la unión de [3H]MK-801 (5 nM, 22,5 Ci/mmol) a membranas corticales de rata bien lavadas (200 μg) en condiciones de no equilibrio (15 minutos @ 25 ºC) en presencia de concentraciones crecientes de los compuestos de ensayo y glutamato 50 μM. Los niveles cero se determinaron en ausencia de cualquier ligando glicina y en presencia de 5,7 DCKA 30 μM. La estimulación máxima se midió en presencia de glicina 1 mM y estaba presente en todas las muestras glutamato 50 μM. La facilitación de la unión de [3H]MK-801 por parte de los compuestos de ensayo se calculó utilizando una ecuación de 3 parámetros del logaritmo de agonista frente a la respuesta (Graph pad Prism, EE.UU.), y se calcularon para los compuestos de prueba la potencia (CE50, expresada en pM) y la actividad máxima (% de estimulación máxima).

45 Resultados

La potencia y la actividad máxima para los Compuestos B-D y H son como se muestra en las Tablas 2 y 3 y las Figuras 1-4.

Tabla 2.

Compuestos: pCE50 (pM) Actividad (%)

B: 6 47

C: 7 10

D: 159 5

H: 195 20

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Ejemplo 13 -Potenciación duradera en cortes de hipocampo

Métodos

Los ensayos se realizaron como se describe en Zhang et al. (Zhang, X. L., Sullivan, J. A., Moskal, J. R., Stanton, P. K., 2008. A NMDA receptor glycine site partial agonist, GLYX-13, simultaneously enhances LTP and reduces LTD at Schaffer collateral-CA1 synapses in hippocampus. Neuropharmacology. 55, 1238-50). Se anestesiaron de forma profunda con isoflurano ratas Sprague-Dawley (de 12-18 días; Taconic Farms) y se decapitaron. Los cerebros de las ratas se retiraron de forma rápida, se sumergieron en líquido cefalorraquídeo artificial enfriado en hielo (LCRA, 2-4 ºC) que contenía (en mM): NaCl 124, KCl 4, MgSO4 2, CaCl2 2, NaH2PO4 1,25, NaHCO3 26, glucosa 10; a pH 7,4, se gasearon de forma continua con O2 al 95 %/CO2 al 5 %). Los cerebros de rata se hemiseccionaron, los lóbulos frontales se cortaron y los hemisferios individuales se adhirieron utilizando adhesivo de cianoacrilato sobre una plataforma sumergida en LCRA enfriado en hielo, gaseado de forma continua con O2 al 95 %/CO2 al 5 % durante el corte. Los cortes coronales (de 400 μM de grosor) se cortaron utilizando un Vibrátomo (Leica VT1200S) y se transfirieron a una cámara de sujeción de interfaz para la incubación a temperatura ambiente durante un mínimo de una hora antes de la transferencia a una cámara de registro de interfaz de tipo Haas, perfundida de forma continua con LCRA oxigenado a 3 ml/min a 32 ± 0,5 ºC. Los electrodos de registro de baja resistencia se fabricaron de vidrio borosilicato de pared fina (1,2 MΩ después del llenado con LCRA) y se insertaron en la región dendrítica apical del campo de terminación colateral de Schaffer en el estrato radial de la región de campo CA1, para registrar los potenciales excitadores postsinápticos de campo (los fEPSP, sigla del inglés field excitatory postsynaptic potentials). Se colocó un electrodo de estimulación de acero inoxidable bipolar (FHC Co.) en las fibras comisurales-colaterales de Schaffer en el estrato radial CA3, y se ajustó la intensidad del estímulo de corriente constante para evocar aproximadamente de la mitad al máximo de los fEPSP una vez cada 30 s (50-100 pA; duración de 100 μs). La pendiente del fEPSP se midió antes y después de la inducción de la LPT (sigla del inglés long term potentiation: potenciación duradera) mediante interpolación lineal del 20 al 80 % de la deflexión negativa máxima, y las pendientes se confirmaron como estables hasta dentro de ± el 10 % durante al menos 15 minutos antes del comienzo de un experimento. La aplicación por baño del compuesto de ensayo (1 μM) se aplicó 30 min antes de la aplicación de las series de pulsos de estímulos colaterales de Schaffer para generar la LTP. La LTP se indujo mediante estimulación de los axones colaterales de Schaffer con cuatro series de estímulos en ráfaga zeta de alta frecuencia de 10 x 100 Hz/5 ráfagas de pulsos cada uno, aplicados a intervalos de 200 ms entre ráfagas. Cada serie fue de 2 segundos de duración y las series se aplicaron con diferencia de 15 segundos. Las señales se registraron utilizando un amplificador Multiclamp 700B y se digitalizaron con un Digidata 1322 (Axon Instruments, EE.UU.). Los datos se analizaron utilizando el programa informático pClamp (versión 9, Axon Instruments) en un ordenador personal compatible con IBM.

Resultados

Como se muestra en la Figura 5, el Compuesto B ensayado a 0,11 μM aumentó en las ratas la potenciación duradera tras la estimulación de alta frecuencia de los e.p.s.c.s de NMDA evocados por la vía colateral de Schaffer, registrados en las neuronas piramidales de CA1.

EQUIVALENTES

Los expertos en la materia reconocerán, o serán capaces de determinar, utilizando no más que la experimentación de rutina, muchos equivalentes a las realizaciones específicas de la invención descritas en el presente documento. Se pretende que tales equivalentes estén abarcados por las siguientes reivindicaciones.

INCORPORACIÓN POR REFERENCIA

El contenido completo de todas las patentes, solicitudes de patentes publicadas, sitios web y otras referencias citadas en el presente documento, se incorporan por la presente de forma expresa en el presente documento en su totalidad por referencia.

Claims

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98 16. Un compuesto representado por la fórmula I:

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y sales farmacéuticamente aceptables, estereoisómeros y N-óxidos de los mismos, en la que

Rb se selecciona entre el grupo que consiste en H, halógeno, hidroxilo, ciano y alquilo C1-C6; R es H, alquilo C1-C6 o -C(O)-alquilo C1-C6; R1 es H o alquilo C1-C6; R2 es H o alquilo C1-C6; R3 es alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C6, fenilo, o un heteroarilo de 4-6 miembros con uno, dos o tres heteroátomos cada uno seleccionado entre O, S o N, en el que R3 puede estar opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes cada uno seleccionado entre el grupo que consiste en amino, halógeno, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, hidroxilo, fenilo (opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes cada uno seleccionado independientemente entre Ra) o bencilo (opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes cada uno seleccionado independientemente entre Ra); Ra se selecciona entre el grupo que consiste en halógeno, alquilo C1-C6 (opcionalmente sustituido con uno, dos o tres halógenos), cicloalquilo C3-C6 (opcionalmente sustituido con uno, dos o tres halógenos), o alcoxi C1-C6 (opcionalmente sustituido con uno, dos o tres halógenos); R4 es H o alquilo C1-C6; R5 es H o alquilo C1-C6; X se selecciona entre el grupo que consiste en: H, alquilo C1-C6, -OH, alcoxi C1-C6, -CO2H, -C(O)NRcRd, y un anillo heteroarilo de 4 a 6 miembros con uno, dos o tres heteroátomos cada uno seleccionado entre O, S o N, en el que el anillo heteroarilo puede estar opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes cada uno seleccionado

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